[go: up one dir, main page]

SK286994B6 - Tri-peptidové analógy, spôsob ich výroby, farmaceutický prostriedok s ich obsahom, ich použitie a medziprodukty - Google Patents

Tri-peptidové analógy, spôsob ich výroby, farmaceutický prostriedok s ich obsahom, ich použitie a medziprodukty Download PDF

Info

Publication number
SK286994B6
SK286994B6 SK206-2001A SK2062001A SK286994B6 SK 286994 B6 SK286994 B6 SK 286994B6 SK 2062001 A SK2062001 A SK 2062001A SK 286994 B6 SK286994 B6 SK 286994B6
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
alkyl
substituted
optionally substituted
amino
het
Prior art date
Application number
SK206-2001A
Other languages
English (en)
Other versions
SK2062001A3 (en
Inventor
Montse Llinas-Brunet
Murray D. Bailey
Dale Cameron
Anne-Marie Faucher
Elise Ghiro
Nathalie Goudreau
Teddy Halmos
Marc-Andr Poupart
Jean Rancourt
Youla S. Tsantrizos
Dominik M. Wernic
Original Assignee
Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. filed Critical Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd.
Publication of SK2062001A3 publication Critical patent/SK2062001A3/sk
Publication of SK286994B6 publication Critical patent/SK286994B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/02—Amides, e.g. chloramphenicol or polyamides; Imides or polyimides; Urethanes, i.e. compounds comprising N-C=O structural element or polyurethanes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/16—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0806—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0808—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/081—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing O or S as heteroatoms, e.g. Cys, Ser
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
    • C12P41/003—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions
    • C12P41/005—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions by esterification of carboxylic acid groups in the enantiomers or the inverse reaction

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Abstract

Sú opísané racemáty, diastereoizoméry a optické izoméry tripeptidových analógov všeobecného vzorca (I), ich farmaceuticky prijateľné soli alebo estery, farmaceutické prostriedky s ich obsahom, spôsob ich výroby a medziprodukty. Ďalej je opísané ich použitie na výrobu liečiva na liečenie infekcie vírusom hepatitídy C.

Description

Oblasť techniky
Vynález sa týka tri-peptidových analógov, spôsobu ich výroby, farmaceutických prostriedkov s ich obsahom a ich použitia na liečenie vírusovej (HCV) infekcie hepatitídy C. Tento vynález tiež poskytuje postupy a medziprodukty syntézy týchto peptidových analógov.
Doterajší stav techniky
Vírus hepatitídy C (HCV) je hlavnou etiologickou príčinou post-transfuzneho a spoločenským stykom spôsobeného rozšírenia hepatitídy typu non-A-non-B. Odhaduje sa, že viac ako 150 miliónov ľudí po celom svete je infikovaných týmto vírusom. Vysoké percento nositeľov sa stáva chronicky infikovanými a mnohí postupujú ku chronickej chorobe pečene, takzvanej chronickej hepatitíde C. Táto skupina je z druhej strany vo vysokom riziku vážnej choroby pečene, ako je cirhóza pečene, hepatocelulámy karcinóm a terminálne choroby pečene vedúce k smrti.
Mechanizmus, ktorým HCV vyvoláva perzistenciu vírusu a spôsobuje vysoký stupeň chronickej choroby pečene, nebol doteraz celkom vysvetlený. Nie je známe, ako HCV interaguje a uniká imunitnému systému hostiteľa. Okrem toho sa má ešte určiť úloha celulámej a humorálnej imunitnej reakcie pri ochrane proti HCV infekcii a chorobe. Na profylaxiu s transfúziou spojenej vírusovej hepatitídy boli navrhnuté imunoglobulíny, ale „Center for Disease Controľ doteraz liečenie imunoglobulínmi na tieto účely neodporúčalo. Nedostatok účinnej ochrannej imunitnej reakcie je prekážkou vývoja vakcíny alebo primeraných postexpozičných profylaktických opatrení, takže v blízkom čase sa nádeje viažu najmä na protivírusové zásahy.
Robili sa rôzne klinické štúdie s cieľom identifikovať farmaceutické činidlá schopné účinne liečiť HCV infekcie u pacientov postihnutých chronickou hepatitídou C. Tieto štúdie zahrnovali použitie interferónu alfa, samotného a v kombinácii s inými antivírusovými činidlami. Takéto štúdie ukázali, že podstatný počet účastníkov nemá reakciu na tieto terapie a zistilo sa, že z tých, ktorí majú priaznivú reakciu, má veľká časť po ukončení liečenia recidívu.
Až donedávna bol interferón (IRN) jedinou dostupnou terapiou s preukázaným priaznivým účinkom potvrdeným klinicky u pacientov s chronickou hepatitídou C. Ale rozsah ustálenej reakcie je nízky a liečenie interferónom tiež vyvoláva vážne vedľajšie účinky (t. j. retinopatiu, tyroiditídu, akútnu pankreatitídu, depresiu), ktoré zmenšujú kvalitu života liečených pacientov. Nedávno sa zistilo, že interferón je v kombinácii s ribavirínom účinný u pacientov bez reakcie na IFN samotný. Ale touto kombinovanou terapiou nie sú zmiernené vedľajšie účinky spôsobené IFN.
Preto existuje potreba vývoja účinných antivirusových činidiel na liečenie HCV infekcie, ktoré prekonávajú obmedzenia existujúcich farmaceutických terapií.
HCV je vírus obaleného pozitívneho prameňa RNA z rodiny Flaviviridae. Jednoprameňový HCV RNA genóm má približne 9500 nuídeotidovú dĺžku a má jediný otvorený čítací rámec (ORF) kódujúci jediný veľký polyproteín asi z 3000 aminokyselín. V infikovaných bunkách sa tento polyproteín štiepi na viacerých miestach pomocou bunkových a vírusových proteáz, čím sa tvoria štrukturálne a neštrukturálne (NS) proteíny. V prípade HCV, generácia rozvinutých neštrukturálnych proteínov (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A a NS5B) je spôsobená dvoma vírusovými proteázami. Prvá, ako ešte slabo charakterizovaná, štiepi pri NS2-NS3 styku; druhým je serínová proteáza obsiahnutá v N-terminálnej oblasti NS3 (odteraz označovaná ako NS3 proteáza) a sprostredkuje všetky následné štiepenia v smere NS3, aj v cis, na NS3-NS4A štiepnom mieste, aj v trans, pre zodpovedajúce NS4A-NS4B, NS4B-NS5A, NS5A-NS5B miesta. Zdá sa, že NS4A proteín slúži pri viacerých funkciách, pôsobí ako kofaktor pre NS3 proteázu a možno napomáha membránovej lokalizácií NS3 a iných zložiek vírusovej replikázy. Tvorba komplexu NS3 proteínu s NS4A sa zdá byť potrebnou pre kroky procesov, ktoré zvyšujú proteolytickú účinnosť na všetkých týchto miestach. NS3 proteín tiež má účinnosť na nukleozidovú trifosfatázu a RNA helikázu. NS5B je RNA-závislá RNA polymeráza, ktorá je zahrnutá v replikácii HCV.
Všeobecná stratégia vývoja antivirusových činidiel je inaktivovanie vírusovo zakódovaných enzýmov, ktoré sú podstatné na replikáciu vírusu. V tomto smere, patentová prihláška WO 97/06804 opisuje (-) enantiomér nukleozidového analógu cytozín-l,3-oxatiolánu (tiež známy ako 3TC) ako aktívnu látku proti HCV. Táto látka, hoci je uvádzaná ako bezpečná v predchádzajúcich klinických skúškach proti HľV a HBV, má byť ešte klinicky overená ako látka aktívna proti HCV a má byť ešte zistený mechanizmus jej pôsobenia proti vírusu.
Intenzívne úsilie zamerané na zistenie látok, ktoré inhibujú NS3 proteázu alebo RNA helikázu HCV, viedlo k nasledujúcim zisteniam:
• US patent 5,633,388 opisuje heterocyklické-substituované karboxamidy a ich analógy ako aktívne látky proti HCV. Tieto látky sú zamerané proti helikázovej aktivite NS3 proteínu vírusu, ale klinické testy doteraz neboli uvádzané.
SK 286994 Β6 • C Chu a spol., (Tet. Lett., (1996), 7229 - 7232) sa uvádza, že fenantrén-chinón má aktivitu proti HCV NS3 proteáze in vitro. Ďalší vývoj tejto látky sa neuvádza.
• Publikácia prezentovaná na „Ninth Intemational Conference on Antiviral Research“, Urabandai, Fukyshima, Japonsko (1996) (Antiviral Research, (1996), 30,1, A23 (abstrakt 19)) uvádza, že tiazolidínové deriváty sú inhibítory HCV proteázy.
Viaceré štúdie uvádzajú látky inhibujúce iné serínové proteázy, ako napríklad ľudskú leukocytovú elastázu. Jedna rodina týchto látok sa uvádza v WO 95/33764 (Hoechst Marion Roussel, 1995). Peptidy opísané v tejto prihláške sú morfolinylkarbonyl-benzoyl-peptidové analógy, ktoré sú štrukturálne odlišné od peptidov podľa tohto vynálezu.
• WO 98/17679 od Vertex Pharmaceuticals Inc. opisuje inhibítory serínovej proteázy, zvlášť NS3 proteázy vírusovej hepatitídy C. Tieto inhibítory sú peptidové analógy založené na NS5A/5B prirodzenom substráte. Hoci sú tu opísané viaceré tripeptidy, všetky tieto peptidové analógy obsahujú ako podstatný rys C-terminálnu aktivovanú karbonylovú funkčnú skupinu. Tieto analógy boli tiež uvádzané ako látky aktívne proti inej serínovej proteáze a nie sú preto špecifické pre HCV NS3 proteázu.
• WO 99/07733 opisuje peptidové analógy na báze N-terminálneho štiepneho produktu Ac-D-D-I-V-P-C-OH NS3 proteázového substrátu, o ktorom sa zistilo, že inhibuje NS3 proteázu.
• WO 99/07733 opisuje peptidové analógy na báze N-terminálneho štiepneho produktu Ac-D-D-I-V-P-C-OH NS3 proteázového substrátu, o ktorom sa zistilo, že inhibuje NS3 proteázu.
• Hoffman LaRoche tiež uvádza hexapeptidy, ktoré sú proteínázové inhibítory užitočné ako antivírusové činidlá na liečenie HCV infekcie. Tieto peptidy obsahujú na C-zakončení aldehyd alebo kyselinu boritú.
• Steinkiihler a spol., a Ingallinella a spol., publikovali inhibíciu pre NS4A-4B produkt (Biochemistry (1998), 37, 8899 - 8905 a 8906 - 8914). Ale uvádzané peptidy a peptidové analógy nezahrnujú ani nevedú k navrhnutiu peptidov podľa tohto vynálezu.
Jednou z výhod tohto vynálezu je, že poskytuje tripeptidy, ktoré sú inhibítormi pre NS3 proteázu vírusu hepatitídy C.
Ďalšia výhoda tohto vynálezu spočíva vo fakte, že tieto peptidy špecificky inhibujú NS3 proteázu a nemajú významnú inhibičnú aktivitu pri koncentráciách do 300 pmol/l proti iným serínovým proteázam, ako je napríklad ľudská leukocytová elastáza (HLE), bravčová pankreatická elastáza (PPE), alebo hovädzí pankreatický chymotrypsín, alebo cysteínové proteázy, ako napríklad ľudský pečeňový katepsín B (Cat B).
Ďalšou výhodou tohto vynálezu je, že poskytuje malé peptidy s nízkou molekulovou hmotnosťou, ktoré môžu byť schopné prenikať bunkové membrány a môžu byť aktívne v bunkovej kultúre a in vivo s dobrým farmakokinetickým profilom.
Podstata vynálezu
V rozsahu tohto vynálezu sú zahrnuté racemáty, diastereoizoméry a optické izoméry tripeptidových analógov všeobecného vzorca (I)
kde B je H, Ce alebo Cm aryl, C7_i6 aralkyl; Het alebo (nižší alkyl)-Het, z ktorých všetky sú voliteľne substituované so substituentmi: Cj_6 alkyl; Ci_6 alkoxyl; Ci.6 alkanoyl; hydroxyl; hydroxyalkyl; halogén; halogénalkyl; nitroskupina; kyanoskupina; kyanoalkyl; aminoskupina voliteľne substituovaná s Cw alkylom; amid; alebo (nižší alkyl)amid;
alebo B je karboxyl vzorca R4-O-C(O)-; amid vzorca R4-N(R5)-C(O)-; tioamid vzorca R4-N(R5)-C(S)-; alebo sulfonyl vzorca R4-SO2, kde
R4je (i) Cwo alkyl voliteľne substituovaný s karboxylom, Cw alkanoylom, hydroxylom, Ci_6 alkoxylom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di-substituovanou s Ci.6 alkylom, amidom, alebo (nižší alkyl)amidom;
(ii) C3.7 cykloalkyl, C3.7 cykloalkoxyl, alebo C4.10 alkylcykloalkyl, všetky voliteľne substituované s hydroxylom, karboxylom, (C|.6 alkoxyjkarbonylom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di-substituovanou s C[.6 alkylom, amidom, alebo (nižší alkyl)amidom;
(iii) aminoskupina voliteľne mono- alebo di-substituovaná s Ci_6 alkylom; amido-skupina; alebo (nižší alkyl)amid;
(iv) C6 alebo C10 aryl alebo C7.i6 aralkyl, všetky voliteľne substituované s Ci_6 alkylom, hydroxylom, amidom, (nižší alkyljamidom, alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo di-substituovanou s C M alkylom; alebo (v) Het alebo (nižší alkyl)-Het, oba voliteľne substituované s Ci_6 alkylom, hydroxylom, amidom, (nižší alkyljamidom, alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo di-substituovanou s Cw alkylom;
R5 je H alebo Ci^ alkyl;
alebo B je acylderivát vzorca R4-C(O)-, v ktorom
R4je (i) Ci_10 alkyl voliteľne substituovaný s karboxylom, Cj.6 alkanoylom, hydroxylom, Ci_6 alkoxylom alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo di-substituovanou s C1.6 alkylom;
(ii) C3.7 cykloalkyl, C3.7 cykloalkoxyl, alebo C4.lo alkylcykloalkyl, všetky voliteľne substituované s hydroxylom, karboxylom, (CM alkoxyjkarbonylom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di-substituovanou s Ct.6 alkylom;
(iii) aminoskupina voliteľne mono- alebo di-substituovaná s C|.e alkylom;
(iv) C6 alebo C10 aryl alebo C7_i6 aralkyl, všetky voliteľne substituované s Ci_6 alkylom, hydroxylom alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo di-substituovanou s Cw alkylom; alebo (v) Het alebo (nižší alkyl)-Het, oba voliteľne substituované s Ci_6 alkylom, hydroxylom alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo di-substituovanou s Ci_6 alkylom;
s výhradou, že keď B je amid alebo tioamid, R4 nie je (ii) cykloalkoxyl; a
Y je H alebo alkyl;
R3jeCi_8 alkyl, C3.7 cykloalkyl alebo C4_i0 alkylcykloalkyl, všetky voliteľne substituované s hydroxylom, Ci.6 alkoxylom, Ci-6 tioalkylom, amidoskupinou, (nižší alkyľjamidoskupinou, C6 alebo C10 arylom, alebo C7_i6 aralkylom;
R2 je CH2-R20, NH-R20, O-R20 alebo S-R20, kde R20 je nasýtený alebo nenasýtený C3.7 cykloalkyl alebo C4.10 (alkylcykloalkyl), z ktorých všetky sú voliteľne mono-, di- alebo trisubstituované s R21, alebo R20 je C6 alebo Ci0 aryl alebo C7_i4 aralkyl, všetky voliteľne mono-, di- alebo tri-substituované s R21, alebo R20 je Het alebo (nižší alkyl)-Het, oba voliteľne mono-, di- alebo tri-substituované s R21, kde každý R21 je nezávisle alkyl; C].6 alkoxyl; nižší tioalkyl; sulfonyl; NO2; OH; SH; halogén; halogénalkyl; aminoskupina voliteľne mono- alebo di- substituovaná s alkylom, C6 alebo Οω arylom, C7.]4 aralkylom, Het alebo (nižší alkyl)-Het; amidoskupina voliteľne monosubstituovaná s C1.6 alkylom, C6 alebo C10 arylom, C7.j4 aralkylom, Het alebo (nižší alkyl)-Het; karboxyl; karboxy(nižší alkyl); C6 alebo Ci0 aryl, C7.14 aralkyl alebo Het, uvedený aryl, aralkyl alebo Het je voliteľne substituovaný s R22;
kde R22 je Ci_6 alkyl; C3.7 cykloalkyl; Ομ6 alkoxyl; aminoskupina voliteľne mono- alebo di-substituovaná s
C].6 alkylom; sulfonyl; (nižší alkyl)sulfonyl; NO2; OH; SH; halogén; halogénalkyl; karboxyl; amid; (nižší alkyl)amid; alebo Het voliteľne substituovaný s Ci_6 alkylom,
R1 je H, Cw alkyl, C3.7 cykloalkyl, C2.6 alkenyl, alebo C2.6 alkinyl, všetky voliteľne substituované s halogénom;
pričom (nižšíjalkyl, buď samostatne alebo v kombinácii s iným substituentom, znamená acyklické alkylové substituenty s priamym alebo rozvetveným reťazcom, obsahujúce 1 až 6 atómov uhlíka;
amino aralkyl, buď samostatne alebo v kombinácii s iným radikálom, znamená aminoskupinu substituovanú C7.i5arylkylovou skupinou;
(nižší alkyl)amid, buď samostatne alebo v kombinácii s iným radikálom, znamená amidovú skupinu monosubstituovanú s C^alkylom, karboxy(nižší) alkyl, buď samostatne alebo v kombinácii s iným radikálom, znamená karboxylovú skupinu (COOH) pripojenú prostredníctvom (nižšej)alkylovej skupiny, ako je definovaná,
Het znamená monovalentný radikál odvodený odstránením vodíka z päť-, šesť- alebo sedemčlennej nasýtenej alebo nenasýtenej vrátane aromatickej, heterocyklickej zlúčeniny obsahujúcej jeden až štyri heteroatómy vybrané zo skupiny obsahujúcej dusík, kyslík a síru, alebo heterocyklickú zlúčeninu, ako je definovaná, fuzovanú s jedným alebo viacerými inými cyklickými zlúčeniami; a (nižší alkyl)-Het znamená heterocyklický radikál, ako je definovaný pre Het, pripojený prostredníctvom reťazca alebo rozvetvenej alkylovej skupiny, pričom alkyl, ako je definovaný, obsahuje 1 až 6 atómov uhlíka; alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery.
V rozsahu tohto vynález je zahrnutý farmaceutický prostriedok obsahujúci proti vírusu hepatitídy C účinné množstvo látky vzorca (I), alebo jej farmaceutický prijateľnej soli alebo esteru, v zmesi s farmaceutický prijateľným nosičom alebo pomocným činidlom.
SK 286994 Β6
Vynález umožňuje liečenie vírusovej infekcie hepatitídy C u cicavcov pomocou podávania týmto cicavcom množstva účinného proti vírusu hepatitídy C látky vzorca (I), alebo jej terapeuticky prijateľnej soli alebo esteru alebo farmaceutického prostriedku, ako je opísaná.
Ďalej vynález umožňuje inhibovanie replikácie vírusu hepatitídy C pomocou exponovania vírusu NS3 proteázu vírusu hepatitídy C inhibujúcim množstvom látky vzorca (I), alebo jej terapeuticky prijateľnej soli alebo esteru alebo farmaceutického prostriedku, ako je opísaná.
Ďalej vynález umožňuje liečenie vírusovej infekcie hepatitídy C u cicavcov pomocou podávania množstva účinného proti vírusu hepatitídy C kombinácie látky vzorca (I), alebo jej terapeuticky prijateľnej soli alebo esteru. Podľa jedného uskutočnenia, farmaceutické prostriedky podľa tohto vynálezu zahrnujú ďalšie imunomodulačné činidlo. Príklady dodatočných imunomodulačných činidiel zahrnujú, ale nie sú na ne obmedzené, α-, β- a γ-interferóny.
Definície
V tomto dokumente sa používajú nasledujúce definície, ak to nie je uvedené inak.
S odkazom na prípady, kde sa (R) alebo (5) používa na označenie konfigurácie substituenta, napríklad R1 látky vzorca (I), označenie sa robí v kontexte látky a nie v kontexte substituenta samotného.
Prírodné aminokyseliny s výnimkou glycínu, obsahujú chirálny uhlíkový atóm. Ak to nie je vyznačené zvlášť, sú výhodné látky obsahujúce prírodné aminokyseliny s L-konfiguráciou. Prihlasovatelia však mienia, že keď je to špecifikované, niektoré aminokyseliny vzorca (1) môžu byť buď D- alebo L-konfigurácie alebo to môžu byť zmesi D- a L-izomérov vrátane racemických zmesí.
Označenie „PI, P2 a P3“, ako sa používa v tomto dokumente, označuje polohu aminokyselinových zvyškov vychádzajúc od C-terminálneho konca peptidových analógov a pokračujúc smerom k N-koncu [t. j. PI označuje polohu 1 od C-konca, P2: druhú polohu od C-konca atď.) (pozri Berger A. & Schechter I., Transactions of the Royal Society London šerieš (1970), B257,249 - 264).
Skratky α-aminokyselín použité v tejto prihláške sú uvedené v tabuľke A.
Tabuľka A
Aminokyselina Symbol
Kyselina 1 -aminocyklopropyl-karboxylová Acca
Alanin Ala
Kyselina asparágová Asp
Cysteín Cys
Cyklohexylglycín (tiež nazývaný: kyselina 2-amino-2- cyklohexyloctová) Chg
Kyselina glutámová Glu
Izoleucín Íle
Leucín Leu
Fenylalanín Phe
Prolín Pro
Valín Val
íerc-Butylglycín Tbg
V tomto dokumente sa pojem „1-aminocyklopropyl-karboxylová kyselina“ (Acca) používa tak, že označuje látku vzorca:
O
V tomto dokumente sa pojem „ŕerc-butylglycín“ používa tak, že označuje látku vzorca:
Pojem „zvyšok“ pri označení aminokyseliny alebo derivátu aminokyseliny znamená radikál odvodený od zodpovedajúcej α-aminokyseliny odtrhnutím hydroxylu karboxylovej skupiny a jedného vodíka a-aminoskupiny. Napríklad, pojmy Gin, Ala, Gly, íle, Arg, Asp, Phe, Ser, Leu, Cys, Asn, Sar a Tyr predstavujú „zvyš ky“ L-glutamínu, L-alanínu, glycinu, L-izoleucinu, L-arginínu, kyseliny L-asparágovej, L-fenylalanínu, L-serínu, L-leucínu, L-cysteinu, L-asparagínu, sarkozínu a L-tyrozínu.
Pojem „vedľajší reťazec“ pri označení aminokyseliny alebo zvyšku aminokyseliny znamená skupinu pripojenú na α-uhlíkový atóm a-aminokyseliny. Napríklad, R-skupina vedľajšieho reťazca pre glycín je vodík, pre alanín je to metyl, pre valín je to izopropyl. Špecifické R-skupiny alebo vedľajšie reťazce a-aminokyselín sú uvedené v A.L. Lehningerovej učebnici biochémie (pozri kapitolu 4).
Pojem „halogén“, ako sa používa v tomto dokumente, znamená a halogénový substituent vybraný zo skupiny bróm, chlór, fluór alebo jód.
Pojem „Cj_6 alkyl“ alebo „(nižší) alkyl“, ako sa používa v tomto dokumente, buď samotný alebo v kombinácii s ďalším substituentom, znamená acyklický, priamy alebo rozvetvený reťazec alkylových substituentov obsahujúcich od 1 do šesť uhlíkových atómov a zahrnuje napríklad metyl, etyl, propyl, butyl, terc-butyl, hexyl, 1-metyletyl, 1-metylpropyl, 2-metylpropyl, 1,1-dimetyletyl.
Pojem „C3.7 cykloalkyl“, ako sa používa v tomto dokumente, buď samotný alebo v kombinácii s ďalším substituentom, znamená cykloalkylový substituent obsahujúci od troch do sedem uhlíkových atómov a zahrnuje cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl a cykloheptyl. Tento pojem tiež zahrnuje „spiro“cyklické skupiny, ako napríklad spiro-cyklopropyl alebo spiro-cyklobutyl:
Pojem „nenasýtený cykloalkyl“ zahrnuje napríklad cyklohexenyl:
Pojem „C4.10 (alkylcykloalkyl), ako sa používa v tomto dokumente, znamená cykloalkylový radikál obsahujúci od troch do sedem uhlíkových atómov naviazaných na alkylový radikál, naviazaných na radikály obsahujúce až do desať uhlíkových atómov; napríklad cyklopropylmetyl, cyklopentyletyl, cyklohexylmetyl, cyklohexyletyl alebo cykloheptyletyl.
Pojem „C2.io alkenyl“, ako sa používa v tomto dokumente, buď samotný alebo v kombinácii s ďalším radikálom, znamená alkylový radikál, ako je definovaný, obsahujúci od 2 do 10 uhlíkových atómov, a ďalej obsahujúci najmenej jednu dvojitú väzbu. Napríklad alkenyl zahrnuje alyl a vinyl.
Pojem „Ci-6 alkanoyl“, ako sa používa v tomto dokumente, buď samotný alebo v kombinácii s ďalším radikálom, znamená priame alebo rozvetvené 1-oxoalkylové radikály obsahujúce jeden až šesť uhlíkových atómov a zahrnuje formyl, acetyl, l-oxopropyl-(propionyl), 2-metyl-l-oxopropyl, 1-oxohexyl a podobne.
Pojem „C[.6 alkoxyl“, ako sa používa v tomto dokumente, buď samotný alebo v kombinácii s ďalším radikálom, znamená radikál -O(Ci_6 alkyl), kde alkyl je definovaný, obsahujúci až do šesť uhlíkových atómov. Alkoxyl zahrnuje metoxyl, etoxyl, propoxyl, 1-metyletoxyl, butoxyl a 1,1-dimetyletoxyl. Posledne menovaný radikál je známy bežne ako terc-butoxyl.
Pojem „C3.7 cykloalkoxyl“, ako sa používa v tomto dokumente, buď samotný alebo v kombinácii s ďalším radikálom, znamená C3.7 cykloalkylovú skupinu naviazanú na kyslíkový atóm, ako napríklad:
Pojem „C6 alebo Ci0 aryl“, ako sa používa v tomto dokumente, buď samotný alebo v kombinácii s ďalším radikálom, znamená buď aromatickú monocyklickú skupinu obsahujúcu 6 uhlíkových atómov alebo aromatickú bicyklickú skupinu obsahujúcu 10 uhlíkových atómov. Napríklad, aryl zahrnuje fenyl, 1-naftyl alebo 2-naftyl.
Pojem „C7.16 aralkyl“, ako sa používa v tomto dokumente, buď samotný alebo v kombinácii s ďalším radikálom, znamená C6 alebo Cw aryl, ako je definovaný, naviazaný na alkylovú skupinu, kde alkyl je definovaný, obsahujúci od 1 do 6 uhlíkových atómov. C7.i6 aralkyl zahrnuje napríklad benzyl, butylfenyl a 1naftylmetyl.
Pojem „aminoaralkyl“, ako sa používa v tomto dokumente, buď samotný alebo v kombinácii s ďalším radikálom, znamená aminoskupinu, ktorá je substituovaná s C7_i6 aralkylovou skupinou, ako napríklad aminoaralkyl:
SK 286994 Β6
Pojem „(nižší alkyl)amid“, ako sa používa v tomto dokumente, buď samotný alebo v kombinácii s ďalším radikálom, znamená amid mono-substituovaný s C|.6 alkylom, ako napríklad:
Pojem ,,karboxy(nižší) alkyl“, ako sa používa v tomto dokumente, buď samotný alebo v kombinácii s ďalším radikálom, znamená karboxylovú skupinu (COOH) naviazanú cez skupinu (nižší) alkyl, definovanú vyššie, a zahrnuje napríklad kyselinu maslovú.
Pojem „heterocyklus“ alebo „Het“, ako sa používa v tomto dokumente, buď samotný alebo v kombinácii s ďalším radikálom, znamená monovalentný radikál odvodený odstránením vodíka z päť-, šesť-, alebo sedem-členného nasýteného alebo nenasýteného (vrátane aromatického) heterocyklu obsahujúceho od jedného do štyroch heteroatómov vybraných z dusíka, kyslíka a síry. Okrem toho „Het“, ako sa používa v tomto dokumente, znamená heterocyklus definovaný skôr kondenzovaný na jeden alebo viac ďalších cyklov, buď heterocyklov alebo akýchkoľvek ďalších cyklov. Príklady vhodných heterocyklov zahrnujú: pyrolidín, tetrahydrofurán, tiazolidín, pyrol, tiofén, diazepín, lH-imidazol, izoxazol, tiazol, tetrazol, piperidín, 1,4-dioxán,
4-morfolín, pyridín, pyrimidín, tiazolo[4,5-b]-pyridín, chinolín alebo indol, alebo nasledujúce heterocykly:
N.
N N alebo N
Pojem „(nižší alkyl)-Het“, ako sa používa v tomto dokumente, znamená heterocyklický radikál definovaný naviazaný cez reťazec alebo rozvetvenú alkylovú skupinu, kde alkyl je definovaný, a obsahuje od 1 do 6 uhlíkových atómov. Príklady skupiny (nižší alkyl)-Het zahrnujú:
alebo
Pojem „farmaceutický prijateľný ester“, ako sa používa v tomto dokumente, buď samotný alebo v kombinácii s ďalším substituentom, znamená estery látky vzorca (I), v ktorých je niektorá karboxylová funkčná skupina molekuly, ale výhodne koncový karboxyl, nahradená alkoxykarbonylovou funkčnou skupinou:
v ktorej R skupina esteru je vybraná z alkylu (napríklad metyl, etyl, n-propyl, terc-butyl, «-butyl); alkoxyalkylu (napríklad metoxymetyl); alkoxyacylu (napríklad acetoxymetyl); aralkylu (napríklad benzyl); aryloxyalkylu (napríklad fenoxymetyl); arylu (napríklad fenyl), voliteľne substituovaného s halogénom, CM alkyl alebo Cw alkoxylu. Ďalšie vhodné prekurzorové estery sa môžu nájsť v Design of prodrugs, Bundgaard, H. Ed. Elsevier (1985). Takéto farmaceutický prijateľné estery sa obvykle hydrolyzujú in vivo, keď sú injektované cicavcom a transformujú sa na kyselinovú formu látky vzorca (I).
Vzhľadom na estery opísané skôr, ak to nie je špecifikované inak, ktorákoľvek prítomná alkylová skupina výhodne obsahuje 1 až 16 uhlíkových atómov, zvlášť 1 až 6 uhlíkových atómov. Ktorákoľvek prítomná arylová skupina v takýchto esteroch výhodne zahrnuje fenylovú skupinu.
Konkrétne týmito estermi môžu byť Ci_i6 alkylester, nesubstituovaný benzylester alebo benzylester substituovaný s najmenej jedným halogénom, Ci.6 alkylom, Ci.6 alkoxylom, nitroskupinou alebo trifluórmetylom.
Pojem „farmaceutický prijateľná soľ“, ako sa používa v tomto dokumente, zahrnuje soli odvodené od farmaceutický prijateľných zásad. Príklady vhodných zásad zahrnujú cholín, etanolamin a etyléndiamín. Soli Na4, K+ a Ca44 sú tiež uvažované v rozsahu tohto vynálezu (tiež pozri Pharmaceutical salts, Birge, S. M. a spol., J. Pharm. Sci., (1977), 66, 1 - 19), uvádzané v tomto dokumente ako odkaz).
Výhodné uskutočnenia
V rozsahu tohto vynálezu sú zahrnuté látky vzorca (I), kde výhodne B je C6 alebo C10 aryl alebo C7_i6 aralkyl, všetky voliteľne substituované s Ci.6 alkylom, Ci_s alkoxylom, C].6 alkanoylom, hydroxylom, hydroxyalkylom, halogénom, halogénalkylom, nitroskupinou, kyanosku pinou, kyanoalkylom, amidoskupinou, (nižší alkyl)amidoskupinou, alebo aminoskupinou voliteľne substituovanou s CM alkylom; alebo
B je výhodne Het alebo (nižší alkyl)-Het, všetky voliteľne substituované s Ci.6 alky-lom, Cpealkoxylom, Cpealkanoylom, hydroxylom, hydioxyalkylom, halogénom, halogénalkylom, nitroskupinou, kyanoskupinou, kyanoalkylom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidoskupinou, alebo aminoskupinou voliteľne substituovanou s Cj_g alkylom.
Alternatívne je B výhodne R4-SO2, kde R4 je výhodne Cb6 alkyl; amidoskupina; (nižší alkyljamid; Ce alebo C io aryl, C7.14 aralkyl alebo Het, všetky voliteľne substituované s Cb6 alkylom.
Alternatívne je B výhodne acylový derivát vzorca R4-C(O)-, kde R4 je výhodne (i) Cmo alkyl voliteľne substituovaný s karboxylom, hydroxylom alebo Ci_6 alkoxylom alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo di-substituovanou s Cb6 alkylom;
(ii) C3.7 cykloalkyl alebo C4.i0 alkylcykloalkyl, oba voliteľne substituované s hydroxylom, karboxylom, (Cb6 alkoxyjkarbonylom alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Ci_6 alkylom;
(iv) C6 alebo C10 aryl alebo C7.]6 aralkyl, všetky voliteľne substituované s Cb6 alkylom, hydroxylom alebo aminoskupinou voliteľne substituovanou s C 1.6 alkylom;
(v) Het alebo (nižší alkyl)-Het, oba voliteľne substituované s CM alkylom, hydroxylom alebo aminoskupinou voliteľne substituovanou s Cb6 alkylom.
Alternatívne je B výhodne karboxyl vzorca R4-O-C(O)-, kde R4 je výhodne (i) Cmo alkyl, voliteľne substituovaný s karboxylom, Ομ6 alkanoylom, hydroxylom, Ci_6 alkoxylom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Cj.6 alkylom, amidoskupinou alebo (nižší alkyl)amidom;
(ii) C3.7 cykloalkyl, C4.lo alkylcykloalkyl, všetky voliteľne substituované s karboxylom, (Cb6 alkoxyjkarbonylom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s C].6 alkylom, amidoskupinou alebo (nižší alkyl)amidom;
(iv) C6 alebo C10 aryl alebo C7.16 aralkyl voliteľne substituovaný s Cb6 alkylom, hydroxylom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidoskupinou, alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s C1+ alkyl; alebo (v) Het alebo (nižší alkylj-Het, oba voliteľne substituované s Ci_6 alkylom, hydroxylom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Ci_6 alkylom, amidoskupinou alebo (nižší alkyljamidoskupinou.
Alternatívne je B výhodne amid vzorca R4-N(RS)-C(O)-, kde R4 je výhodne (i) Cmo alkyl voliteľne substituovaný s karboxylom, Cb6 alkanoylom, hydroxylom, Cb6 alkoxylom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidoskupinou, alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Ci_6 alkylom;
(ii) C3.7 cykloalkyl alebo C4.10 alkylcykloalkyl, všetky voliteľne substituované s karboxylom, (Ci.6 alkoxyjkarbonylom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidoskupinou, alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo disubstituovanou s C b6 alkylom;
(iii) aminoskupinu voliteľne mono- alebo di-substituovanú s Ci.3 alkylom;
(iv) C6 alebo C10 aryl alebo C7-16 aralkyl, všetky voliteľne substituované s Ct.6 alkylom, hydroxylom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidom, alebo aminoskupinou voliteľne substituovanou s Cb6 alkylom; alebo (v) Het alebo (nižší alkylj-Het, oba voliteľne substituované s Ci_6 alkylom, hydroxylom, aminoskupinou voliteľne substituovanou s Ci_6 alkylom, amidoskupinou alebo (nižší alkyljamidom; a
R5 je výhodne H alebo metyl.
Alternatívne je B výhodne tioamid vzorca R4-NH-C(ľ>)-; kde R4 je výhodne (i) Cmo alkyl voliteľne substituovaný s karboxylom, Cb6 alkanoylom alebo C|_6 alkoxylom;
(ii) C3_7 cykloalkyl alebo C4.10 alkylcykloalkyl, všetky voliteľne substituované s karboxylom, (Ci.6 alkoxyjkarbonylom, aminoskupinou alebo amidoskupinou.
Výhodnejšie B je C6 alebo C]o aryl voliteľne substituovaný s Ci.6 alkylom, Cj.s alkoxylom, Cb6 alkanoylom, hydroxylom, hydroxyalkylom, halogénom, halogén-alkylom, nitroskupinou, kyanoskupinou, kyanoalkylom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidom, alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s C1.6 alkylom, takže B je napríklad:
Me.
NC.
H,N.
NC'
alebo B je výhodnejšie Het voliteľne substituovaný s Ct^ alkylom, Ci.6 alkoxylom, Ci„6 alkanoylom, hydroxylom, halogénom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidom, alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Ci_6 alkylom, takže B je napríklad:
Alternatívne je B výhodnejšie R4-SO2, kde R4 je výhodne Ce alebo Cio aryl, C7.14 aralkyl alebo Het, všetky voliteľne substituované s Ci_6 alkylom; amidoskupinou, (nižší alkyljamidom, takže B je napríklad:
Alternatívne, B je výhodnejšie acylový derivát vzorca R4-C(O)-, kde R4 je výhodne (i) C no alkyl voliteľne substituovaný s karboxylom, hydroxylom alebo C w alkoxylom; alebo (ii) C3.7 cykloalkyl alebo C4_i0 alkylcykloalkyl, oba voliteľne substituované s hydroxylom, karboxylom, (C(.e alkoxyjkarbonylom, takže B je napríklad:
alebo R4 je výhodne (iv) C6 alebo Cw aryl alebo C7.i6 aralkyl, všetky voliteľne substituované s Ci_6 alkylom, hydroxylom, takže B je napríklad:
alebo R4 je výhodne (v) Het voliteľne substituovaný s C 1.6 alkylom, hydroxylom alebo aminoskupinou, takže B je napríklad:
Alternatívne je B výhodnejšie karboxyl vzorca R4-O-C(O)-, kde R4 je výhodne (i) Cmo alkyl voliteľne substituovaný s karboxylom, Ci.6 alkanoylom, hydroxylom, Ci.6 alkoxylom alebo amidoskupinou, (nižší alkyljamidom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s C w alkylom;
(ii) C3.7 cykloalkyl, C4.i0 alkylcykloalkyl, všetky voliteľne substituované s karboxylom, (Ci.6 alkoxyjkarbonylom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s C1.6 alkylom, takže B je napríklad:
SK 286994 Β6
alebo
O
alebo R4 je výhodne (iv) C6 alebo Cio aryl alebo C7.16 aralkyl, všetky voliteľne substituované s Cw alkylom, hydroxylom, aminoskupinou voliteľne substituovanou s Ci_6 alkylom; alebo (v) Het alebo (nižší alkyl)-Het, oba voliteľne substituované s Ci_6 alkylom, hydroxylom, amidoskupinou, alebo aminoskupinou voliteľne mono- substituovanou s Ci_6 alkylom, takže B je napríklad:
Alternatívne je B výhodnejšie amid vzorca R4-N(R5)-C(O)-, kde R4 je výhodne (i) Cmo alkyl voliteľne substituovaný s karboxylom, C[_6 alkanoylom, hydroxylom, Cw alkoxylom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Cw alkylom;
(ii) C3.7 cykloalkyl alebo C4.i0 alkylcykloalkyl, všetky voliteľne substituované s karboxylom, (C].6 alkoxy)karbonylom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Ci_6 alkylom; a
R5 je H alebo metyl, takže B je napríklad:
alebo R4 j e výhodne (iii) aminoskupina voliteľne mono- alebo di- substituovaná s Ci_3 alkylom, takže B je napríklad:
alebo R4 j e výhodne (iv) C6 alebo C10 aryl alebo C7.]6 aralkyl, všetky voliteľne substituované s Ci_6 alkylom, hydroxylom, aminoskupinou alebo amidoskupinou voliteľne substituovanou s C[.6 alkylom; alebo (v) Het voliteľne substituovaný s Cj.6 alkylom, hydroxylom, aminoskupinou alebo amidoskupinou, takže B je napríklad:
Alternatívne je B výhodnejšie tioamid vzorca R4-NH-C(S)-; kde R4 je výhodne R4 je (i) C|.io alkyl; alebo (ii) C3.7 cykloalkyl, takže B je napríklad:
Najvýhodnejšie je B amid vzorca R4-NH-C(O)-, kde R4 je výhodne (i) C1.10 alkyl voliteľne substituovaný s karboxylom, C|.Ď alkanoylom, hydroxylom, C].6 alkoxyamidoskupinou, (nižší alkyl)amidom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Ci_6 alkylom;
(ii) C3.7 cykloalkyl alebo C4.10 alkylcykloalkyl, všetky voliteľne substituované s karboxylom, (Ci_6 alkoxy)karbonylom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s C |_6 alkylom;
SK 286994 Β6
οζΑ β,ΆΑ ’ýA
H H · O O i i alebo alebo R4 je výhodne (iv) C6 alebo Cio aryl alebo C7_i6 aralkyl voliteľne substituovaný s Cw alkylom, hydroxylom, aminoskupinou alebo amidoskupinou, takže B je napríklad:
O
Ešte výhodnejšie je B Zerc-butoxykarbonyl (Boe) alebo
Y je výhodne H alebo metyl. Výhodnejšie Y je H.
R3 je výhodne Ci_8 alkyl, C3.7 cykloalkyl, alebo C4_i0 alkylcykloalkyl, všetky voliteľne substituované s hydroxylom, Ci_6 alkoxylom, Cw tioalkylom, acetamidoskupinou, C6 alebo Ci0 arylom, alebo C7.16 aralkylom, takže R3 je napríklad:
*
Výhodnejšie je R3 vedľajší reťazec terc-butylglycínu (Tbg), íle, Val, Chg alebo:
Najvýhodnejšie je R3 vedľajší reťazec Tbg, Chg alebo Val.
V rozsahu tohto vynálezu sú zahrnuté látky vzorca (I), kde výhodne je R2 S-R20 alebo O-R20, kde R20 je výhodne C6 alebo Clo aryl, C7_i6 aralkyl, Het alebo -CH2-Het, všetky voliteľne mono-, di- alebo tri-substituované s R21.
Výhodne je R21 Ci_6 alkyl; Ci_6 alkoxyl; nižší tioalkyl; aminoskupina alebo amidoskupina voliteľne monoalebo di- substituovaná s C].6 alkylom, C6 alebo Clo arylom, C7.16 aralkylom, Het alebo (nižší alkyl)-Het; NO2; OH; halogén; trifluórmetyl; karboxyl; C6 alebo Cio aryl, C7_i6 aralkyl, alebo Het, tento aryl, aralkyl alebo Het sú voliteľne substituované s R22. Výhodnejšie je R21 je Cw alkyl; Ci_6 alkoxyl; aminoskupina; di(nižší alkyl)aminoskupina; (nižší alkyl)amid; C6 alebo Cio aryl, alebo Het, tento aryl alebo Het sú voliteľne substituované s R22.
SK 286994 Β6
Výhodne je R22 C|.č alkyl; C3.7 cykloalkyl; C« alkoxyl; aminoskupina; mono- alebo di-(nižší alkyljaminoskupina; (nižší alkyljamid; sulfonylalkyl; NO2; OH; halogén; trifluórmetyl; karboxyl alebo Het. Výhodnejšie je R22 Ci_6 alkyl; C3.7 cykloalkyl; Cw alkoxyl; aminoskupina; mono- alebo di(nižší alkyljaminoskupina; amidoskupina; (nižší alkyljamid; halogén; trifluórmetyl alebo Het. Najvýhodnejšie je R22 Ci_6 alkylom; Ci_6 alkoxyl; halogén; aminoskupina voliteľne mono- alebo di- substituovaná s nižší alkylom; amidoskupina; (nižší alkyljamid; alebo Het. Ešte výhodnejšie je R22 metyl; etyl; izopropyl; ŕerc-butyl; metoxyl; chlór; aminoskupina voliteľne mono- alebo di- substituovaná s nižším alkylom; amidoskupina, (nižší alkyljamid; alebo (nižší alkyl) 2-tíazol.
Alternatívne je R2 výhodne vybraný zo skupiny pozostávajúcej z:
Výhodnejšie je R2 1-naftylmetoxyskupina; 2-naftylmetoxyskupina; benzýloxyskupina, 1-naftyloxyskupina; 2-naftyloxyskupina; alebo chinolínoxyskupina nesubstituovaná, mono- alebo di- substituovaná s R21 definovaným skôr. Najvýhodnejšie je R2 1-naftylmetoxyskupina; alebo chinolínoxyskupina nesubstituovaná, mono- alebo di- substituovaná s R21 definovaným skôr, takže R2 je napríklad:
Ešte výhodnejšie je R2:
Výhodnejšie, R21A je Ci_6 alkyl, ako napríklad izopropyl, íerc-butyl alebo cyklohexyl; Cb6 alkoxyl, ako napríklad metoxyl,
nižší tioalkyl, ako napríklad halogén, ako napríklad chlór;
aminoskupina voliteľne mono-substituovaná s Ci_6 alkylom; alebo C6 alebo Clo arylom, takže R21A je napríklad: dimetylaminoskupina, Ph-N(Me)-;
nesubstituovaný C6 alebo Ci0 aryl, C7.i6 aralkyl, ako napríklad fenyl alebo
alebo R21Aje výhodnejšie Het voliteľne substituovaný s R22, kde R22 je C|.6 alkyl, alkoxyl, amidoskupina, (nižší alkyljamid, aminoskupina voliteľne mono- alebo di- substituovaná s Ci_6 alkylom, alebo Het, takže R21A je napríklad:
SK 286994 Β6
Najvýhodnejšie R21 je C6, Ci0 aryl alebo Het, všetky voliteľne substituované s R22 definovaným skôr, takže R21A je napríklad:
Ešte výhodnejšie je R2:
kde R22A je výhodne Cw alkyl (ako napríklad metyl); Ci_6 alkoxyl (ako napríklad metoxyl); alebo halogén (ako napríklad chlór); R22B je výhodne Ci_6 alkyl, aminoskupina voliteľne mono-substituovaná s C w alkylom, amidoskupinou, alebo (nižší alkyljamidom; a R21B je výhodne Cw alkyl, CH alkoxyl, aminoskupina, di(nižší 10 alkyljaminoskupina, (nižší alkyl)amid, NO2, OH, halogén, trifluórmetyl, alebo karboxyl. Výhodnejšie je R21B
Ci_6 alkoxyl, alebo di(nižší alkyljaminoskupina. Najvýhodnejšie je R21B metoxyskupina.
Ako je opísané v tomto dokumente, PI segment látky vzorca (1) je cyklobutylový alebo cyklopropylový kruh, oba voliteľne substituované s R1.
Výhodne je R1 H, Ci.3 alkyl, C3.5 cykloalkyl, alebo C2.4 alkenyl voliteľne substituovaný s halogénom. Vý15 hodnejšie je R1 etyl, vinyl, cyklopropyl, 1- alebo 2-brómetyl alebo 1- alebo 2-brómvinyl. Najvýhodnejšie je R* vinyl.
Keď R1 nie je H, potom PI je výhodne cyklopropylový systém vzorca:
R1
kde C] a C2 predstavujú asymetrický uhlíkový atóm v polohách 1 a 2 cyklopropylového kruhu. Napriek ďalším možným asymetrickým centrám v ďalších segmentoch látky vzorca (I), prítomnosť týchto dvoch asymetrických centier znamená, že látky vzorca (I) môžu existovať ako racemické zmesi diastereoizomérov. Ako je ilustrované v príkladoch uvedených ďalej, racemické zmesi môžu byť pripravené a potom rozdelené na individuálne optické izoméry, alebo tieto optické izoméry môžu byť pripravené pomocou chirálnej syntézy.
Teda, látka vzorca (I) môže existovať ako racemická zmes diastereoizomérov na uhlíku 1, kde R1 na uhlíku 2 je orientovaný syn ku karbonylu v polohe 1, reprezentovanému radikálom:
alebo
alebo látka vzorca (I) môže existovať ako racemická zmes diastereoizomérov, kde R1 v polohe 2 je orientovaný anti ku karbonylu v polohe 1, reprezentovanému radikálom:
Z druhej strany, racemické zmesi môžu byť rozdelené na individuálne optické izoméry.
Najzaujímavejšie zistenie tohto vynálezu sa týka adície R1 substituenta na uhlíku 2, ako aj priestorovej orientácie PI segmentu. Zistenie sa týka konfigurácie asymetrického uhlíka 1. Výhodným uskutočnením je to, kde R1 nie je H a uhlík 1 má R konfiguráciu.
Konkrétnejšie, zavedenie substituenta (R1) v C2 má vplyv na účinnosť látky, keď R1 je zavedený takým spôsobom, že Cl má Ä konfiguráciu. Napríklad látky 901 (1R,2S) a 203 (1R,2R) majú aktivity 25 a 82 nmol/1. Pri porovnaní s nesubstituovanou cyklopropylovou látkou 111 (475 nmol/1) sa pozoroval podstatný nárast účinnosti. Navyše, ako je uvedené pre látky 901 a 203, keď uhlík 1 má R konfiguráciu, inhibícia HCV NS3 proteázy je ďalej zvýšená konfiguráciou substituenta R1 (napríklad alkylu alebo alkylénu) na uhlíku 2 cyclopropylového kruhu, napríklad látka, ktorá má R1 „syn“ ku karboxylu má vyšší účinok (25 nmol/1) než „anti enantiomér (82 nmol/1). Môžeme vidieť účinok R vs. S konfigurácie na Cl porovnaním látky 801 (1R,2S) a jej zodpovedajúceho (1S,2R) izoméru, ktoré majú účinok 6 nmol/1 a >10 pmol/l, rozdiel viac ako 1500-krát!!
Preto je najvýhodnejšou látkou optický izomér, ktorý má R1 substituent a karbonyl v syn orientácii v nasledujúcej absolútnej konfigurácii:
V prípade, kde R1 je etyl, napríklad asymetrické uhlíkové atómy v polohách 1 a 2 majú R,R konfiguráciu.
V rozsahu tohto vynálezu sú zahrnuté látky vzorca (I), kde
SK 286994 Β6
B je C6 alebo Ci0 aryl alebo C7.i6 aralkyl, všetky voliteľne substituované s alkylom, Cw alkoxylom, Ci.6 alkanoylom, hydroxylom, hydroxyalkylom, halogénom, halogénalkylom, nitroskupinou, kyanoskupinou, kyanoalkylom, amidoskupinou, (nižší alkyl)amidoskupinou, alebo aminoskupinou voliteľne substituovanou s Ο(.6 alkylom; alebo Het alebo (nižší alkyl)-Het, všetky voliteľne substituované s Cw alkylom, Ci_6 alkoxylom, C|_6 alkanoylom, hydroxylom, hydroxyalkylom, halogénom, halogénalkylom, nitroskupinou, kyanoskupinou, kyanoalkylom, amidoskupinou, (nižší alkyl)amidoskupinou, alebo aminoskupinou voliteľne substituovanou s C i_6 alkylom, alebo
B je R4-SO2, kde R4 je výhodne amidoskupina; (nižší alkyl)amid; C6 alebo Cm aryl, C7.i4 aralkyl alebo Het, všetky voliteľne substituované s Cw alkylom, alebo
B je acylový derivát vzorca R4-C(O)-, kde R4 je (i) Ci.lo alkyl voliteľne substituovaný s karboxylom, hydroxylom alebo Cw alkoxylom alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s C|.6 alkylom;
(ii) C3_7 cykloalkyl alebo C4_m alkylcykloalkyl, oba voliteľne substituované s hydroxylom, karboxylom, (Ci_6 alkoxy)karbonylom alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo di-substituovanou s Cw alkylom;
(iv) C6 alebo Cm aryl alebo C7.16 aralkyl, všetky voliteľne substituované s Ci.6 alkylom, hydroxylom alebo aminoskupinou voliteľne substituovanou s Ci_6 alkylom;
(v) Het alebo (nižší alkyl)-Het, oba voliteľne substituované s Ci.6 alkylom, hydroxylom alebo aminoskupinou voliteľne substituovanou s Ομ6 alkyl, alebo
B je karboxyl vzorca R4-O-C(O)-, kde R4 je (i) C|_m alkyl voliteľne substituovaný s karboxylom, Cw alkanoylom, hydroxylom, Ci_6 alkoxylom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Ci_6 alkyl, amidoskupinou alebo (nižší alkyl)amidom;
(ii) C3.7 cykloalkyl, C4.m alkylcykloalkyl, všetky voliteľne substituované s karboxylom, (C|_6 alkoxy)-karbonylom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Ci.6 alkylom, amidoskupinou alebo (nižší alkyljamidom;
(iv) C6 alebo Cm aryl alebo C7.i6 aralkyl voliteľne substituovaný s C,_6 alkylom, hydroxylom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidoskupinou, alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Cj.6 alkylom; alebo (v) Het alebo (nižší alkyl)-Het, oba voliteľne substituované s C^ alkylom, hydroxylom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Ci_6 alkylom, amidoskupinou alebo (nižší alkyljamidoskupinou, alebo B je amid vzorca R4-N(R5)-C(O)-, kde R4 je (i) Ci.m alkyl voliteľne substituovaný s karboxylom, Ci_6 alkanoylom, hydroxylom, Ct.6 alkoxylom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidoskupinou, alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Ci.6 alkylom;
(ii) C3.7 cykloalkyl alebo C4.m alkylcykloalkyl, všetky voliteľne substituované s karboxylom, (C,.6 alkoxyjkarbonylom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidoskupinou, alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo disubstituovanou s C i.6 alkylom;
(iii) aminoskupinu voliteľne mono- alebo di- substituovanú s C|.3 alkylom;
(iv) C6 alebo Ci0 aryl alebo C7_i6 aralkyl, všetky voliteľne substituované s C|.6 alkylom, hydroxylom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidom, alebo aminoskupinou voliteľne substituovanou s C!.6 alkylom; alebo (v) Het alebo (nižší alkyl)-Het, oba voliteľne substituované s Ci.6 alkylom, hydroxylom, aminoskupinou voliteľne substituovanou s Cj.e alkylom, amidoskupinou alebo (nižší alkyljamidom; a R5 j e výhodne H alebo metyl, alebo
B je tioamid vzorca R4-NH-C(S)-; kde R4 je (i) Ci_io alkyl voliteľne substituovaný s karboxylom, C|.6 alkanoylom alebo (ii) C3.7 cykloalkyl alebo C4.i0 alkylcykloalkyl, všetky voliteľne substituované s karboxylom, (C].6 alkoxyjkarbonylom, aminoskupinou alebo amidoskupinou;
Y je H alebo metyl;
R3 je C [.g alkyl, C3.7 cykloalkyl, alebo C4.io alkylcykloalkyl, všetky voliteľne substituované s hydroxylom, Ci_6 alkoxylom, C].6 tioalkylom, acetamidoskupinou, Ce alebo Cio arylom, alebo C7_i6 aralkylom;
R2 je S-R20 alebo O-R20, kde R20 je výhodne C6 alebo Ci0 aryl, C7.i6 aralkyl, Het alebo -CH2-Het, všetky voliteľne mono-, di- alebo tri-substituované s R21, kde
R^jeCps alkyl; CM alkoxyl; nižší tioalkyl; aminoskupina alebo amidoskupina voliteľne mono- alebo disubstituovaná s C μ 6 alkylom, C6 alebo Clo arylom, C7.i6 aralkylom, Het alebo (nižší alkyl)-Het; NO2; OH; halogén; trifluórmetyl; karboxyl; C6 alebo Clo aryl, C7.16 aralkyl, alebo Het, tento aryl, aralkyl alebo Het sú voliteľne substituované s R22, kde
R22 je C[_6 alkyl; C3.7 cykloalkyl; Cw alkoxyl; aminoskupina; mono- alebo di-(nižší alkyljaminoskupina; (nižší alkyljamid; sulfonylalkyl; NO2; OH; halogén; trifluórmetyl; karboxyl alebo Het; alebo
R2 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z:
SK 286994 Β6
alebo R2 je 1-naftylmetoxyskupina; 2-naftylmetoxyskupina; benzyloxyskupina, 1 ina; 2-naftyl-
oxyskupina; alebo chinolínoxyskupina nesubstituovaná, mono- alebo di- substituovaná s R“ definovaným skôr;
Pl segment je cyklobutylový alebo cyklopropylový kruh, oba voliteľne substituované s R1, kde R1 je H, alkyl, C3.5 cykloalkyl, alebo Cw alkenyl voliteľne substituovaný s halogénom, a tento R1 na uhlíku 2 je orientovaný syn ku karbonylu v polohe 1, reprezentovaný radikálom:
alebo
V rozsahu tohto vynálezu sú zahrnuté látky vzorca (I), kde
B je C6 alebo Cw aryl voliteľne substituovaný s Cb6 alkylom, Ci_6 alkoxylom, Ci_6 alkanoylom, hydroxylom, hydroxyalkylom, halogénom, halogénalkylom, nitroskupinou, kyanoskupinou, kyanoalkylom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidom, alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s C]_6 alkylom; alebo
B je Het voliteľne substituovaný s Ci.6 alkylom, Cw alkoxylom, alkanoylom, hydroxylom, halogénom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidom, alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Ci_6 alkylom; alebo B je R4-SO2, kde R4 je C6 alebo C10 aryl, a C7.14 aralkyl alebo Het, všetky voliteľne substituované s Ci_6 alkylom; amidoskupinou, (nižší alkyl)amidom; alebo B je acylový derivát vzorca R4-C(O)-, kde
(i) C1.10 alkyl voliteľne substituovaný s karboxylom, hydroxylom alebo C,.6 alkoxylom; alebo (ii) C3.7 cykloalkyl alebo C4.i0 alkylcykloalkyl, oba voliteľne substituované s hydroxylom, karboxylom, (Ci.6 alkoxy)karbonylom; alebo (iv) C6 alebo C10 aryl alebo C7.1S aralkyl, všetky voliteľne substituované s Ci.6 alkylom, hydroxylom; alebo (v) Het voliteľne substituovaný s C]_6 alkylom, hydroxylom, alebo aminoskupinou;
alebo B je karboxyl vzorca R4-O-C(O)-, kde R4 je (i) Calkyl voliteľne substituovaný s karboxylom, alkanoylom, hydroxylom, C3.e alkoxylom alebo amidoskupinou, (nižší alkyljamidom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Cw alkylom;
(ii) C3.7 cykloalkyl, C4_i0 alkylcykloalkyl, všetky voliteľne substituované s karboxylom, (Cw alkoxy)karbonylom, amidoskupinou, (nižší alkyl)amidom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s C3.6 alkylom; alebo (iv) C6 alebo C10 aryl alebo C-.i6 aralkyl, všetky voliteľne substituované s Ci_6 alkylom, hydroxylom, aminoskupinou voliteľne substituovanou s Ci.6 alkylom; alebo (v) Het alebo (nižší alkyl)-Het, oba voliteľne substituované s Ci_6 alkylom, hydroxylom alebo aminoskupinou voliteľne mono- substituovanou s Ci_6 alkylom;
alebo B je amid vzorca R4-N(R5)-C(O), kde R4 je (i) Ci-10 alkyl voliteľne substituovaný s karboxylom, Ci_6 alkanoylom, hydroxylom, C].6 alkoxylom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Ci_6 alkylom;
(ii) C3_7 cykloalkyl alebo C4_t0 alkylcykloalkyl, všetky voliteľne substituované s karboxylom, (Ci_6 alkoxy)karbonylom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Cm alkylom; a
R4 je (iii) aminoskupina voliteľne mono- alebo di- substituovaná s C|.3 alkylom; alebo (iv) C6 alebo Ci0 aryl alebo C7_i6 aralkyl, všetky voliteľne substituované s C1.6 alkylom, hydroxylom, aminoskupinou alebo amidoskupinou voliteľne substituovanou s Ci.6 alkylom; alebo (v) Het voliteľne substituovaný s Ci_6 alkylom, hydroxylom, aminoskupinou alebo amidoskupinou; a
R5 je H alebo metyl; alebo
B je tioamid vzorca R4-NH-C(S)-; kde R4 je:
(i) Cmo alkyl; alebo (ii) C3.7 cykloalkyl; alebo
B je amid vzorca R4-NH-C(O), kde R4 je (i) Ci.io alkyl voliteľne substituovaný s karboxylom, alkanoylom, hydroxylom, Ci_6 alkoxyamidoskupinou, (nižší alkyljamidom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Ci_6 alkylom;
(ii) C3.7 cykloalkyl alebo C4.10 alkylcykloalkyl, všetky voliteľne substituované s karboxylom, (Cj-e alkoxyjkarbonylom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Ci_6 alkylom;
(iv) Cs alebo Cw aryl alebo C7.i6 aralkyl voliteľne substituovaný s Cw alkylom, hydroxylom, aminoskupinou alebo amidoskupinou;
Y je H.;
R3 je vedľajší reťazec íerc-butylglycinu (Tbg), Íle, Val, Chg alebo:
R2je 1-naftylmetoxyskupina; alebo chinolínoxyskupma nesubstituovaná, mono- alebo di- substituovaná s R21 definovaným skôr, alebo
R2 je:
kde R2IA je Ci_6 alkyl; Ci_6 alkoxyl; C6, Cw aryl alebo Het; nižší tioalkyl; halogén; aminoskupina voliteľne mono-substituovaná s Cw alkylom; alebo C6, C]0 arylom, C7.i6 aralkylom alebo Het, voliteľne substituovaným s R22, kde R22 je Ci_6 alkyl, C)_6 alkoxyl, amidoskupina, (nižší alkyljamid, aminoskupina voliteľne mono- alebo di- substituovaná s CM alkylom, alebo Het;
PI je cyklopropylový kruh, kde uhlík 1 má Ä konfiguráciu,
jeden z a R1 je etyl, vinyl, cyklopropyl, 1- alebo 2-brómetyl, alebo 1- alebo 2-brómvinyl. Ďalej sú v rozsahu tohto vynálezu zahrnuté látky vzorca (1), kde:
B je terc-butoxykarbonyl (Boe) alebo
R3 j e vedľajší reťazec Tbg, Chg alebo Val;
R2 je:
21B
SK 286994 Β6 kde R22A je Cw alkyl (ako napríklad metyl); Ci_6 alkoxyl (ako napríklad metoxyskupina); alebo halogén (ako napríklad chlór); R22B je C|.6 alkyl, aminoskupina voliteľne mono-substituovaná s Cb6 alkylom, amidoskupinou, alebo (nižší alkyl)amidom; a R2IBjeCi.6 alkyl, C,_6 alkoxyl, aminoskupina, di(nižší alkyl)aminoskupina, (nižší alkyl)amid, NO2, OH, halogén, trifluórmetyl, alebo karboxyl;
a Pije:
Nakoniec sú v rozsahu tohto vynálezu zahrnuté všetky látky vzorca (I) uvedené v tabuľkách 1 až 10.
Podľa alternatívneho uskutočnenia, farmaceutické prostriedky podľa tohto vynálezu môžu navyše zahrnovať ďalšie anti-HCV činidlo. Príklady anti-HCV činidiel zahrnujú, a- alebo β-interferón, ribavirín a amantadín.
Podľa ďalšieho alternatívneho uskutočnenia, farmaceutické prostriedky podľa tohto vynálezu môžu navyše zahrnovať ďalšie inhibitory HCV proteázy.
Podľa ešte ďalšieho alternatívneho uskutočnenia, farmaceutické prostriedky podľa tohto vynálezu môžu navyše zahrnovať inhibítor ďalších cieľov v HCV životnom cykle vrátane, ale bez obmedzenia na ne, helikázy, polymerázy, metaloproteázy alebo vnútorného ribozómového miesta vstupu (IRES).
Farmaceutické prostriedky podľa tohto vynálezu môžu byť podávané orálne, parenterálne alebo cestou implantovaného zásobníka. Výhodné je orálne podávanie alebo podávame pomocou injekcie. Farmaceutické prostriedky podľa tohto vynálezu môžu obsahovať akékoľvek konvenčné netoxické farmaceutický prijateľné nosiče, adjuvansy alebo vehikulá. V niektorých prípadoch, pH prípravku môže byť upravené s farmaceutický prijateľnými kyselinami, zásadami alebo puframi na zvýšenie stability látky v prípravku alebo jej dávkovanej formy. Pojem parenterálny, ako sa používa v tomto dokumente, zahrnuje subkutánnu, intrakutánnu, intravenóznu, intramuskulámu, intra-artikulámu, intrasynoviálnu, intrastemálnu, intratekálnu a intraléziovú injekčnú alebo infuznu techniku.
Farmaceutické prostriedky môžu byť vo forme sterilného injektovateľného prípravku, napríklad ako sterilná injektovateľná vodná alebo olejnatá suspenzia. Táto suspenzia sa môže pripraviť pomocou technik známych v tomto odbore použitím vhodných dispergačných alebo zmáčacích činidiel (ako napríklad Tween 80) a suspenzačných činidiel.
Farmaceutické prostriedky podľa tohto vynálezu môžu byť orálne podávané v akejkoľvek orálne prijateľnej dávkovej forme vrátane, ale bez obmedzenia na ne, kapsúl, tabliet a vodných suspenzií a roztokov. V prípade tabliet na orálne použitie, nosiče, ktoré sú bežne používané, zahrnujú laktózu a obilný škrob. Typicky sa tiež pridávajú lubrikačné činidlá, ako napríklad stearan horečnatý. Na orálne podávanie vo forme kapsúl, užitočné zrieďovadlá zahrnujú laktózu a vysušený obilný škrob. Keď sa vodné suspenzie podávajú orálne, aktívna zložka sa kombinuje s emulzifikačným a suspenzačným činidlom. Ak sa to požaduje, môže sa pridať určité sladidlo a/alebo prichuť, a/alebo farbivo.
Ďalšie vhodné vehikulá alebo nosiče pre zmienené prípravky a prostriedky môžu byť nájdené v štandardných farmaceutických textoch, napríklad v „Remington's Pharmaceutical Sciences“, The Science and Pracúce of Pharmacy, 19. vyd., Mack Publishing Company, Easton, Penn., (1995).
Dávkové hladiny medzi asi 0,01 až asi 100 mg/kg telesnej hmotnosti na deň, výhodne medzi asi 0,5 až asi 75 mg/kg telesnej hmotnosti na deň proteázu inhibujúcej látky opísanej v tomto dokumente sú užitočné v monoterapii na prevenciu a liečenie HCV sprostredkovanej choroby. Typicky farmaceutické prostriedky podľa tohto vynálezu budú podávané od asi 1- do asi 5-krát za deň alebo alternatívne, ako kontinuálna infúzia. Takéto podávanie môže byť použité ako chronická alebo akútna terapia. Množstvo aktívnej zložky, ktoré môže byť kombinované s nosičovými materiálmi na výrobu samostatnej dávkovej formy sa bude meniť v závislosti od liečeného subjektu a konkrétneho spôsobu podávania. Typický prípravok bude obsahovať od asi 5 % hmotnostných do asi 95 % hmotnostných aktívnej látky. Výhodne takéto prípravky obsahujú od asi 20 % hmotnostných do asi 80 % hmotnostných aktívnej látky.
Odborník skúsený v tejto oblasti vie, že môžu byť požadované nižšie alebo vyššie dávky, než dávky uvedené skôr. Špecifické dávkovanie a liečebný režim pre konkrétneho pacienta bude závisieť od rôznych faktorov vrátane aktivity špecifickej použitej látky, veku, telesnej hmotnosti, všeobecného stavu zdravia, pohlavia, stravy, času podávania, rýchlosti vylučovania, kombinácie liečiv, rozsahu a priebehu infekcie, pacientovej dispozície ku infekcii a posúdenia lekára. Všeobecne sa liečenie začína s malými dávkami, podstatne menšími než optimálna dávka peptidu. Potom sa dávka zvyšuje malými inkrementami, kým sa nedosiahne opti málny účinok za daných podmienok. Vo všeobecnosti sa najviac požaduje podávame látky pri koncentračnej hladine, ktoré bude všeobecne poskytovať antivírusovo účinné výsledky bez spôsobenia akýchkoľvek škodlivých alebo nepriaznivých vedľajších účinkov.
Keď prostriedky podľa vynálezu zahrnujú kombináciu látky vzorca (I) a jedného alebo viacerých ďalších terapeutických alebo profylaktických činidiel, aj látka aj ďalšie činidlo by mali byť prítomné v dávkových hladinách medzi asi 10 až 100 %, a výhodnejšie medzi asi 10 a 80 % dávky normálne podávanej v režime monoterapie.
Keď sú tieto látky alebo ich farmaceutický prijateľné soli pripravené spolu s farmaceutický prijateľným nosičom, výsledný prostriedok sa môže podávať in vivo cicavcom, ako napríklad človeku, na inhibovanie HCV NS3 proteázy alebo na liečenie alebo prevenciu HCV vírusovej infekcie. Takéto liečenie môže byť tiež dosiahnuté použitím látky podľa tohto vynálezu v kombinácii s činidlami, ktoré zahrnujú, ale nie sú na ne obmedzené, imunomodulačné činidlá, ako napríklad α-, β- alebo γ-interferóny; ďalšie antivírusové činidlá, ako napríklad ribavirín, amantadín; ďalšie inhibítory HCV NS3 proteázy; inhibítory ďalších cieľov v HCV životnom cykle, ktoré zahrnujú, ale nie sú na ne obmedzené, helikázu, polymerázu, metaloproteázu, alebo interné ribozómové miesta vstupu (IRES); alebo ich kombinácie. Ďalšie činidlá môžu byť kombinované s látkami podľa tohto vynálezu tak, aby sa vytvorila jednotná dávková forma. Alternatívne sa tieto ďalšie činidlá môžu podávať oddelene cicavcom ako časť viacnásobnej dávkovej formy.
Podľa toho, vynález umožňuje inhibovanie HCV NS3 proteázovej aktivity u cicavcov pomocou podávania látky vzorca (I), kde substituenty sú definované skôr.
Výhodne vynález umožňuje zníženie aktivity HCV NS3 proteázy u cicavcov. Ak farmaceutický prostriedok zahrnuje ako aktívnu zložku len látku podľa tohto vynálezu, takéto spôsoby môžu navyše zahrnovať krok podávania týmto cicavcom činidla vybraného z imunomodulačných činidiel, antivirusových činidiel, inhibítorov HCV proteázy, alebo inhibítorov ďalších cieľov HCV životného cyklu, ako napríklad helikázy, polymerázy, alebo metaloproteázy alebo IRES. Takéto ďalšie činidlo môže byť podávané týmto cicavcom pred, súbežne, alebo následne s podávaním prostriedku podľa tohto vynálezu.
Alternatívne vynález výhodne umožňuje inhibovanie vírusovej replikácie u cicavcov. Takéto spôsoby sú užitočné na liečenie alebo prevenciu HCV choroby. Ak tieto farmaceutické prostriedky zahrnujú ako aktívnu zložku len látku podľa tohto vynálezu, takéto spôsoby môžu navyše zahrnovať krok podávania týmto cicavcom činidla vybraného z imunomodulačných činidiel, antivirusových činidiel, inhibítorov HCV proteázy, alebo inhibítorov ďalších cieľov v HCV životnom cykle. Takéto ďalšie činidlo môže byť podávané týmto cicavcom pred, súbežne, alebo následne s podávaním prostriedku podľa tohto vynálezu.
Látky uvedené v tomto dokumente môžu tiež byť použité ako laboratórne činidlá. Látky podľa vynálezu môžu tiež byť použité na liečenie alebo prevenciu vírusovej kontaminácie materiálov a teda na zníženie rizika vírusovej infekcie laboratórneho alebo nemocničného personálu alebo pacientov, ktorí prichádzajú do kontaktu s takýmito materiálmi (napríklad krv, tkanivá, chirurgické nástroje a odevy, laboratórne prístroje a odevy, a zariadenia a materiály na odber krvi).
Látky uvedené v tomto dokumente môžu byť tiež použité ako výskumné činidlá. Látky podľa tohto vynálezu môžu tiež byť použité ako pozitívna kontrola na validáciu nových náhradných na bunkových kultúrach založených skúšok alebo skúšok vírusovej replikácie in vitro alebo in vivo.
Postup prípravy
Látky podľa tohto vynálezu boli syntetizované podľa všeobecného postupu ilustrovaného na schéme I (kde CPG je a ochranná skupina karboxylu a APG je ochranná skupina aminoskupiny):
Schéma I a
P1 ---- P1-CPG + APG-P2 ► APG-P2-P1-CPG
SK 286994 Β6
Stručne povedané, Pl, P2 a P3 môžu byť naviazané pomocou dobre známych techník peptidového spájania. Pl, P2 a P3 skupiny môžu byť naviazané spolu v akomkoľvek poradí pokiaľ konečná látka zodpovedá peptidom vzorca (I). Napríklad P3 môže byť naviazaný na P2-P1; alebo Pl naviazaný na P3-P2.
Všeobecne sa peptidy predlžujú deprotekciou α-aminoskupiny N-terminálneho zvyšku a pripájaním nechránenej karboxylovej skupiny nasledujúcej vhodne N-chránenej aminokyseliny pomocou peptidovej väzby použitím opísaných spôsobov. Tento postup deprotekcie a pripájania sa opakuje dovtedy, kým sa nezíska požadovaná sekvencia. Toto pripájanie sa môže vykonať s aminokyselinami, z ktorých má byť produkt, postupným spôsobom, ako je vyznačené na schénje I, alebo pomocou peptidovej syntézy v tuhej fáze podľa spôsobu pôvodne opísaného v Merifield, J. Am. Chem. Soc., (1963), 85,2149 - 2154, ktorého zistenia sú tu začlenené ako odkaz.
Spájanie medzi dvoma aminokyselinami, aminokyselinou a peptidom, alebo dvoma peptidovými fragmentárni, sa môže vykonať použitím štandardných postupov pripájania, ako napríklad azidový spôsob, spôsob zmiešaného anhydridu kyseliny uhličitej-karboxylovej (izobutylchlórmravčan), karbodiimidového spôsobu (dicyklohexylkarbodiimid, diizopropylkarbodiimid alebo vo vode rozpustný karbodiimid), spôsobu aktívneho esteru (p-nitrofenylester, N-hydroxysukcín-imidoester), „Woodwardové činidlo“ K-spôsobu, karbonyldiimidazolového spôsobu, spôsobov s fosforovými činidlami alebo oxidačno-redukčných spôsobov. Niektoré tieto spôsoby (zvlášť karbodiimidový spôsob) môžu byť zlepšené pomocou pridania 1-hydroxybenzotriazolu. Tieto pripájacie reakcie sa môžu vykonať buď v roztoku (kvapalnej fáze), alebo tuhej fáze.
Konkrétnejšie krok pripájania zahrnuje dehydratačné pripájanie voľného karboxylu jedného reaktantu s voľnou aminoskupinou ďalšieho reaktantu v prítomnosti pripájacieho činidla, čím sa tvorí spojovacia amidová väzba. Opisy takýchto pripájacích činidiel sa nachádzajú vo všeobecných učebniciach peptidovej chémie, napríklad M. Bodanszky „Peptide Chemistry“, 2. rev. vydanie., Springer-Verlag, Berlín, Nemecko, (1993). Príklady vhodných pripájacích činidiel sú A,//'-dicyklohexylkarbodiimid, 1-hydroxybenzotriazol v prítomnosti ΛζΜ-dicyklohexyl-karbodiimidu alebo N-etyl-N-[(3-dimetylamino)propyl]karbodiimidu. Praktickým a užitočným pripájacím činidlom je komerčne dostupný (benzotriazol-l-yloxy)-tris-(dimetylamino)fosfóniumhexafluórfosfát buď samotný, alebo v prítomnosti 1-hydroxybenztriazolu. Ďalšie praktické a užitočné pripájacie činidlo je komerčne dostupný 2-(lH-benzotriazol-l-yl)-.'V,//,jV;//'-tetrametylurónium-tetrafluórboritan. Ešte ďalšie praktické a užitočné pripájacie činidlo je komerčne dostupný 0-(7-azabenzotriazol-l-y/ý-A',//,//’,//'-tetrametylurómum-hexafluórfosfát.
Pripájacia reakcia sa robí v inertnom rozpúšťadle, napríklad dichlórmetáne, acetonitrile alebo dimetylformamide. Pridá sa prebytok terciámeho amínu, napríklad diisopropyletylamínu, //-metylmorfolínu alebo N-metylpyrolidínu na udržanie reakčnej zmesi pri pH asi 8. Reakčná teplota je obvykle v rozsahu medzi 0 °C a 50 °C a reakčný čas je obvykle v rozsahu medzi 15 minútami a 24 hodinami.
Keď sa používa postup syntézy v tuhej fáze, C-terminálna karboxylová kyselina sa pripojí na nerozpustný nosič (obvykle polystyrén). Tieto nerozpustné nosiče obsahujú skupinu, ktoré budú reagovať s karboxylovou skupinou, čím sa tvorí väzba, ktorá je stabilná za podmienok predlžovania reťazca, ale ľahko sa štiepi neskôr. Ich príklady sú: chlór- alebo bróm-metylová živica, hydroxymetylová živica, trifenylmetylová živica a 2-metoxy-4-alkoxy-benzylalokonolová živica.
Mnohé z týchto živíc sú komerčne dostupné s už začlenenou požadovanou C-terminálnou aminokyselinou. Alternatívne môžu byť aminokyseliny začlenené na tuhý nosič pomocou známych spôsobov (Wang, S.-S., J Am. Chem. Soc., (1973), 95,1328; Atherton, E.; Shepard, R.C. „Solid-phase peptide synthesis; a practical approach“ IRL Press: Oxford, (1989); 131 - 148). Okrem predchádzajúcich spôsobov sú ďalšie spôsoby peptidovej syntézy opísané v Stewart a Young, „Solid-phase peptide synthesis“, 2. vydanie, Pierce Chemical Co., Rockford, IL (1984); Gross, Meienhofer, Udenfriend, Eds., „The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology“, Vol. 1, 2, 3, 5 a 9, Academic Press, New-York, (1980 - 1987); Bodansky a spol., „The Practice of Peptide Synthesis“ Springer-Verlag, New-York (1984), ktorých zistenia sú v tomto dokumente začlenené ako odkaz.
Funkčné skupiny stavebných aminokyselín všeobecne musia byť počas pripájacej reakcie chránené, aby sa zabránilo tvorbe nepožadovaných väzieb. Ochranné skupiny, ktoré môžu byť použité, sú uvedené v Greene, „Protective Groups in organic Chemistry“, John Wiley & Sons, New York (1981) a „The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology“, Vol. 3, Academic Press, New York (1981), ktorých zistenia sú v tomto dokumente začlenené ako odkaz.
α-karboxylová skupina C-terminálneho zvyšku je obvykle chránená ako ester (CPG), ktorý sa môže štiepiť, čím poskytne karboxylovú kyselinu. Ochranné skupiny, ktoré môžu byť použité, zahrnujú: 1. alkylestery ako napríklad metyl-, trimetylsilyletyl- a terc-butyl-, 2. aralkylestery, ako napríklad benzyl- a substituovaný benzyl, alebo 3. estery, ktoré sa môžu štiepiť pomocou opracovania miernymi zásadami alebo miernymi redukčnými činidlami, ako je napríklad trichlóretyl- a fenacyl-ester.
α-Aminoskupina každej aminokyseliny pripájanej pri raste peptidového reťazca musí byť chránená (APG). Môžu sa použiť akékoľvek ochranné skupiny známe v tomto odbore. Príklady takýchto skupín zahrnujú: 1. acylové skupiny, ako napríklad formyl, trifluóracetyl, ftalyl a p-toluénsulfonyl; 2. aromatické karba
SK 286994 Β6 mátové skupiny, ako napríklad benzyloxykarbonyl (Cbz alebo Z) a substituované benzyloxykarbonyly, 9-fluorenylmetyloxykarbonyl (Fmoc); 3. alifatické karbamátové skupiny, ako napríklad íerc-butyloxykarbonyl (Boe), etoxykarbonyl, diizopropylmetoxykarbonyl, alyloxykarbonyl; 4. cyklické alkylkarbamátové skupiny, ako napríklad cyklopentyloxykarbonyl a adamantyloxykarbonyl; 5. alkylové skupiny, ako napríklad trifenylmetyl a benzyl; 6. trialkylsilyl, ako napríklad trimetylsilyl; a 7. tiol obsahujúce skupiny, ako napríklad fenyltiokarbonyl a ditiasukcinoyl. Výhodnou ochrannou skupinou α-aminoskupiny je buď Boe alebo Fmoc. Mnohé aminokyselinové deriváty vhodne chránené pre peptidové syntézy sú komerčne dostupné.
Ochranná skupina α-aminoskupiny novopridaného zvyšku aminokyseliny sa štiepi pred pripájaním nasledujúcej aminokyseliny. Keď sa použije Boe skupina, vybranými spôsobmi sú kyselina trifluóroctová, čistá alebo v dichlórmetáne, alebo HCl v dioxáne, alebo v etylacetáte. Výsledná amóniová soľ sa potom neutralizuje buď pred pripájaním, alebo in situ so zásaditými roztokmi, ako napríklad vodnými puframi, alebo terciámymi amínami v dichlórmetáne alebo acetonitrile, alebo dimetylformamide. Keď sa používa Fmoc skupina, vybranými činidlami sú piperidín alebo substituovaný piperidín v dimetylformamide, ale môžu byť použité akékoľvek sekundárne amíny. Deprotekcía sa uskutočňuje pri teplote medzi 0 °C a laboratórnou teplotou (RT) obvykle 20 až 22 °C.
Akékoľvek aminokyseliny, ktoré majú vedľajšie reťazce s funkčnými skupinami, musia byť chránené počas prípravy peptidu použitím niektorej z opísaných skupín. Odborník v tejto oblasti si všimne, že výber a použitie vhodnej ochrannej skupiny pre tieto funkčné skupiny vedľajšieho reťazca závisí od aminokyseliny a prítomnosti ďalších ochranných skupín v peptide. Výber takejto ochrannej skupiny je dôležitý, lebo skupina sa nesmie odstrániť počas deprotekcie a pripájania a-aminoskupiny.
Napríklad, keď sa používa Boe ako α-aminoochranná skupina, vhodné sú nasledujúce ochranné skupiny vedľajšieho reťazca: p-toluénsulfonylové (tosyl) skupiny môžu byť použité na ochranu aminoskupiny vedľajšieho reťazca aminokyselín, ako napríklad Lys a Arg; acetamidometylové, benzylové (Bn), alebo terc-butylsulfonylové skupiny môžu byť použité na ochranu sulfid obsahujúcich vedľajších reťazcov cysteínu; benzyl (Bn) étery môžu byť použité na ochranu hydroxyl obsahujúcich vedľajších reťazcov šermu, treonínu alebo hydroxyprolínu; a benzylové estery môžu byť použité na ochranu karboxyl obsahujúcich vedľajších reťazcov kyseliny asparágovej a kyseliny glutámovej.
Keď je vybraná na ochranu α-amínu Fmoc, obvykle sú prijateľné na terc-butyle založené ochranné skupiny. Napríklad, Boe môže byť použitá pre lyzín a arginín, ŕerc-butyléter pre serín, treonin a hydroxyprolín, a terc-butyl ester pre kyselinu asparágovú a kyselinu glutámovú. Trifenylmetylová (trityl) skupina môže byť použitá na ochranu tiol obsahujúceho vedľajšieho reťazca cysteínu.
Keď sa predlžovanie peptidu ukončí, všetky ochranné skupiny sa odstránia. Keď sa používa syntéza v kvapalnej fáze, ochranné skupiny sa odstraňujú akýmkoľvek spôsobom, ktorý je diktovaný výberom ochrannej skupiny. Tieto postupy sú dobre známe odborníkom v tejto oblasti.
Keď sa používa syntéza v tuhej fáze, peptid sa štiepi zo živice simultánne s odstránením ochrannej skupiny. Keď sa pri syntéze používa Boe spôsob ochrany, opracovanie s bezvodým HF obsahujúcimi aditívami, ako napríklad dimetylsulfid, anizol, tioanizol, alebo p-krezol, pri 0 °C je výhodný spôsob štiepenia peptidu zo živice. Štiepenie peptidu sa tiež môže uskutočniť pomocou ďalších kyselinových činidiel, ako napríklad zmesou kyselina trifluórmetánsulfónová/kyselina trifluóroctová. Ak sa používa Fmoc spôsob ochrany, N-terminálna Fmoc skupina sa štiepi skôr opísanými činidlami. Iné ochranné skupiny a peptid sa štiepia od živice použitím roztoku kyseliny trifluóroctovej a rôznymi aditívami, ako napríklad anizol atď.
1. Syntéza zakončovacej skupiny B
Rôzne zakončovacie skupiny B sa zavádzajú nasledujúcim spôsobom:
1.1) Keď B je aryl, aralkyl: arylované aminokyseliny boli pripravené pomocou jedného z troch uvedených spôsobov:
a) Priame nukleofilné nahradenie na fluór-nitroarylovej skupine:
Stručne povedané, 4-fluór-3-mtrobenzotrifluorid (a) reagoval s L-aminokyselinou (b) v prítomnosti zásady, ako je napríklad uhličitan draselný pri 80 °C, čím sa poskytne požadovaná N-arylaminokyselina (c);
SK 286994 Β6
b) Meďou katalyzované pripájanie podľa Ma a spol., (JAm. Chem. Soc. 1998,120,12459 - 12467):
R3 h2n^cooh
(d) (b) (e) .
Stručne povedané, bróm-4-fluórbenzén (d) reagoval s L-aminokyselinou (b) v prítomnosti zásady, ako je napríklad uhličitan draselný, a katalytickým množstvom jodidu meďnatého pri 90 °C, čím sa poskytne požadovaná jV-arylaminokyselina (e); alebo
c) Nukleofilné nahradenie trifluórmetánsulfónanu anilínom:
(f)
(g)
R3 ^COOH
Stručne povedané, o-anizidín (f) reagoval s trifluórmetánsulfónanom (g) v prítomnosti zásady ako napríklad 2,6-lutidín pri 90 °C, čím sa poskytne benzylester (h). Hydrogenácia s 10 % Pd/C poskytla požadovanú //-aryl-aminokyselinu (i).
1.2) Keď B je aminotiazolový derivát:
a) Fmoc-N=C=S
H2N-P3-[P2-P,)-COOMe-------------Fmoc-NH-C(S)-HN-P3-[P2-P.]-COOMe
b) DBU, DMF
NH-C(S)-HN-P3-[P2-P,]-COOMe
a) Fmoc-tiokyanát pripravený podľa Keamey a spol., 1998, J. Org. Chem, 63, 196, reagoval s chráneným P3 zvyškom alebo celým peptidom, alebo peptidovým segmentom, čím sa poskytne tiomočovina.
b) Tiomočovinový derivát reaguje s príslušným brómketónom, čím sa poskytne zodpovedajúci tiazolový derivát.
1.3) Keď B je R4-C(O)-, R4-S(O)2:
Chránený P3 alebo celý peptid alebo peptidový segment sa pripája na príslušný acyl-chlorid alebo sulfonylchlorid, ktorý je buď komerčne dostupný, alebo ktorého syntéza je dobre známa.
1.4) Keď B je R4O-C(O)-:
Chránený P3 alebo celý peptid alebo peptidový segment sa pripája na príslušný chlórmravčan, ktorý je buď komerčne dostupný, alebo ktorého syntéza je dobre známa. Pre Boc-deriváty sa používa (Boc)2O.
SK 286994 Β6
Napríklad:
+ H2N-P3-[P2-PJ-COOEt
a) cyklobutanol sa opracuje s fosgénom, čím sa vytvorí zodpovedajúci chlórmravčan.
b) Tento chlórmravčan sa opracuje s požadovaným NH2-tripeptidom v prítomnosti zásady, ako je napríklad trietylamín, čím sa poskytne cyklobutylkarbamát.
1.5) Keď B je R4-N(R5)-C(O)-, alebo R4-NH-C(S)-,
Chránený P3 alebo celý peptid alebo peptidový segment sa opracuje s fosgénom, potom s aminom. Ako je opísané v Syn Lett. Feb 1995; (2); 142 - 144.
2. Syntéza P2 skupiny
2.1 Syntéza prekurzorov
A) Syntéza halogén arylmetánových derivátov.
Príprava halogénmetyl-6-chinolínu Ild sa urobila podľa postupu K.N. Campbella a spol., J. Amer. Chem. Soc., (1946), 68,1844.
(lla) (llb) (llc) (Ild)
Stručne povedané, 8-chinolínkarboxylová kyselina Ha sa konvertovala na zodpovedajúci alkohol líc pomocou redukcie zodpovedajúceho acylhalogenidu llb s redukčným činidlom, ako je napríklad hydrid hlinitolítny. Opracovanie alkoholu llb s príslušnou halogénvodíkovou kyselinou poskytuje požadovaný halogénový derivát Ild. Špecifické uskutočnenia tohto postupu sú uvedené v príklade 1.
B) Syntéza arylalkoholových derivátov
2-Fenyl-4-hydroxychinolínové deriváty Hlc boli pripravené podľa Giardina a spol. (J. Med. Chem., (1997),40, 1794- 1807).
R22 & R21B = alkyl, OH, SH, halogén, NH2, NO2.
SK 286994 Β6
Stručne povedané, benzoylacetamid (Hla) sa kondenzoval s príslušným anilínom (Illb) a získaný imín sa cyklizoval s polyfosforečnou kyselinou, čím sa poskytne zodpovedajúci 2-fenyl-4-hydroxychinolín (Hlc). Šecifické uskutočnenia tohto postupu sú uvedené v príklade 2.
Alebo alternatívne sa tento postupu môže vykonať odlišným spôsobom:
Benzoyletylester (111a) sa kondenzoval s príslušným anilínom (Illb) v prítomnosti kyseliny a získaný imín sa cyklizoval zahriatím na 260 až 280 °C, čím sa poskytne zodpovedajúci 2-fenyl-4-hydroxychinolín (Illc). Špecifické uskutočnenia tohto postupu sú uvedené v príklade 3 (látka 3e).
2.2. Syntéza P2
A) Syntéza 4-substituovaného prolínu (kde R2 sa pripojí na kruh cez uhlíkový atóm) (s uvedenou stereochémiou):
Boe
sa robí, ako je uvedené v schéme IV podľa postupov opísaných J. Ezquerraom a spol. (Tetrahedron, (1993), 38, 8665 - 8678) a C. Pedregalom a spol. (Tetrahedron Lett, (1994), 35, 2053 - 2056).
Schéma IV
(IVb)
(IVe)
Stručne povedané, kyselina Boc-pyroglutámová je chránená ako benzylester. Opracovanie so silnou zásadou, ako napríklad diizopropylamidom lítnym, po čom nasleduje prídavok alkylačného činidla (Br-R20 alebo 1-R20) poskytuje požadovanú látku IVe po redukcii amidu a deoprotekcii esteru.
B) Syntéza 0-substítuovaného-4-(J?)-hydroxyprolínu
COOH sa môže vykonať použitím rôznych opísaných postupov.
1. Keď R20 je aralkyl alebo (nižší alkyl)-Het, postup sa môže vykonať podľa postupu opísaného E.M. Smithom a spol. (J. Med. Chem. (1988), 31, 875 - 885). Stručne povedané, komerčne dostupný Boc-4-(R)-hydroxyprolín sa opracuje so zásadou ako napríklad hydridom sodným alebo fóre-butoxidom draselným a výsledný alkoxid reagoval s halogén-R20 (Br-R20,1-R20, atď...), čím sa poskytne požadovaná látka. Špecifické uskutočnenia tohto postupu sú uvedené v príkladoch 4, 5 a 7.
2. Keď R20 je aryl alebo Het, sa tieto látky môžu tiež pripraviť pomocou Mitsunobuovej reakcie (Mitsunobu (1981), Synthesis, Január, 1-28; Ráno a spol, (1995), Tet. Lett. 36(22), 3779 - 3792; Krchnak a spol, (1995), Tet. Lett. 36(5), 62193 - 6196; Richter a spol., (1994), Tet. Lett. 35(27), 4705 - 4706).
SK 286994 Β6
Stručne povedané, komerčne dostupný Boc-4/S)-hydroxyprolín-metylester sa opracuje s príslušným arylalkoholom alebo tiolom v prítomnosti trifenylfosfmu a dietylazodikarboxylátu (DEAD) a výsledný ester sa hydrolyzuje na kyselinu. Špecifické uskutočnenia tohto postupu sú uvedené v príkladoch 6 a 8.
Schéma V
OH
O (Va)
Alternatívne sa Mitsunobuova reakcia môže vykonať v tuhej fáze (schéma V).
Do 96-studnicového bloku syntetizéra Model 396 (Advanced ChemTech) sa nadávkujú alikvóty na živici naviazanej látky (Va) a rôzne arylalkoholy alebo tioly a pridajú sa príslušné činidlá. Po inkubácii sa na živici naviazané produkty (Vb) premyjú, vysušia a štiepia zo živice.
Suzuki reakcia (Miyaura a spol., (1981), Synth. Comm. 11, 513; Sato a spol., (1989), Chem. Lett., 1405; Watanabe a spol., (1992), Synlett., 207; Takayuki a spol., (1993), J. Org. Chem 58, 2201; Frenette a spol., (1994), Tet. Lett. 35(49), 9177 - 9180; Guiles a spol., (1996), J. Org. Chem. 61, 5169 - 5171) sa tiež môžu použiť na ďalšie funkčné naviazanie arylového substituenta.
3. Syntéza P1 skupín
3.1 Syntéza 4 možných izomérov 2-substituovanej 1-amino cyklopropylkarboxylovej kyseliny Syntéza sa urobila podľa schémy VI.
Schéma VI
halo
PO/X CO2P (Vla)
SK 286994 Β6
R’ syn k esteru
R' antík esteruP*
a) Stručne povedané, di-chránený malonát Vla a 1,2-dihalogénalkán VIb alebo cyklický sulfát VIc (syntetizované podľa K. Burgess a Chun-Yen KE (Synthesis, (1996), 1463 - 1467) reaguje za zásaditých podmienok, čím sa poskytne diester VId.
b) Uskutoční sa regioselektívna hydrolýza menej zabrzdeného esteru, čím sa poskytne kyselina Vie.
c) Táto kyselina Vie sa podrobí Curtiusovému prešmyku, čím sa poskytne racemická zmes derivátu 1-aminocyklopropylkarboxylovej kyseliny Vlf, pričom R1 je syn ku karboxylovej skupine. Špecifické uskutočnenia pre túto syntézu sú uvedené v príklade 9.
d, e) Alternatívne, selektívna tvorba esteru z kyseliny Vie s príslušným halogenidom (P*C1) alebo alkoholom (P*OH) tvorí diester VIg, v ktorom P* ester je kompatibilný so selektívnou hydrolýzou P esteru. Hydrolýza P esteru poskytuje kyselinu Vlh.
f) Curtiusov prešmyk Vlh poskytuje racemickú zmes derivátu kyseliny 1-amino-cyklopropylkarboxylovej Vli, pričom R1 skupina je anti ku karboxylovej skupine. Špecifické uskutočnenia tejto syntézy sú uvedené v príklade 14.
Alternatívna syntéza prípravy derivátov VHf (keď R1 je vinyl a syn ku karboxylovej skupine) je opísaná neskôr.
Schéma VII
( Vila) (Vllb)
.. CO2P Ph (Vile) vinyl syn k esteru
R = H, alkyl, aryl
vinyl syn k esteru
Opracovanie komerčne dostupných alebo ľahko získateľných imínov Vila s 1,4-dihalogénbuténom Vllb v prítomnosti zásady produkuje, po hydrolýze výsledného iminu Vile, Vlld, ktoré majú alylový substituent syn ku karboxylovej skupine. Špecifické uskutočnenia tohto postupu sú uvedené v príklade 15 a 19.
Rozlíšenie všetkých uvedených enantiomémych zmesi na uhlíku 1 (Vie a Vlld) sa môžu vykonať pomocou:
1. enzymatickej separácie (príklady 13,17 a 20);
2. kryštalizácie s chirálnou kyselinou (príklad 18); alebo
SK 286994 Β6
3. chemickej derivatizácie (príklad 10).
Po optickom rozlíšení sa určenie absolútnej stereochémie môže vykonať tak, ako je uvedené v príklade 11.
Enantioméme rozlíšenie a určenie stereochémie sa môžu vykonať rovnakým spôsobom aj pre enantioméme zmesi pri uhlíku 1, kde substituent pri C2 je anti ku karboxylovej skupine (Vii).
3.2 Syntéza kyseliny 1-amino-cyklobutylkarboxylovej
Syntéza kyseliny 1,1-amino-cyklobutánkarboxylovej sa uskutočňuje podľa „Kavin Douglas; Ramaligam Kondareddiar; Woodard Ronald, Synth. Commun. (1985), 15(4), 267 - 72.
Schéma VIII
CVIIIa)
ČVIIIb')
X ® halo
O (Vlllc)
(vnid) hci soľ
Stručne povedané, opracovanie látky Vllla so zásadou v prítomnosti Vlllb poskytuje zodpovedajúci cyklobutylový derivát Vlllc. Hydrolýza izokyanátovej a esterovej skupiny Vlllc za kyslých podmienok (HCI) poskytuje hydrochloridové soli 1-amino-cyklobutylkarboxylovej kyseliny Vllld. Karboxylová kyselina sa neskôr esterifikuje metanolom v HCI. Špecifické uskutočnenie tejto esterifikácie je opísané v príklade 21.
3.3 Syntéza 2-substituovanej 1-amino-cyklobutylkarboxylovej kyseliny
3. neutralizácia (IXe) <1X0
a) Chránený glycínesterový derivát, ako napríklad imin IXa, sa alkyluje s homoalylovým elektrofilom lXb použitím príslušnej zásady, ako je napríklad hydrid kovu, hydroxid alebo alkoxid. Užitočné odchádzajúce skupiny v lXb zahrnujú halogény (X = Cl, Br, I) alebo sulfonátové estery (mesylát, tosylát alebo trifluórmetánsulfónan). Alyl-alkoholová funkčná skupina v lXb je chránená s hydroxylovými ochrannými skupinami dobre známymi v tejto oblasti (napríklad acetát, silyl, acetály).
b) V druhom kroku sa hydroxylová funkčná skupina monoalkylovaného derivátu lXc deprotektuje a konvertuje na vhodnú elektrofilnú funkčnú skupinu X, ako je napríklad opísané pre látku lXb.
c) Cyklizácia lXd na cyklobutánový derivát IXe sa uskutočňuje opracovaním so zásadou (hydridy kovov, alkoxidy), po čom nasleduje hydrolýza použitím vodného roztoku minerálnych kyselín a neutralizácie s miernymi zásadami. V tomto stupni, syn a anň'-izoméry IXe môžu byť rozdelené rýchlou chromatografiou.
d) Voliteľne môže byť dvojitá väzba v IXe tiež hydrogenovaná za štandardných podmienok, čím sa poskytne zodpovedajúci nasýtený derivát IXf.
Vynález ďalej zahrnuje postup prípravy peptidového analógu vzorca (I), kde PI je substituovaný zvyšok amino-cyklopropylkarboxylovej kyseliny, zahrnujúci krok:
- pripájanie peptidu vybraného zo skupiny pozostávajúcej z: APG-P3-P2; alebo APG-P2;
s- PI medziproduktom vzorca:
R1
O
SK 286994 Β6 kde R1 je Cb6 alkyl, cykloalkyl alebo C2.6 alkenyl, všetky voliteľne substituované s halogénom, CPG je ochranná skupina karboxylu a APG je ochranná skupina aminoskupiny a P3 a P2 sú definované skôr.
Vynález ďalej zahrnuje postup prípravy: 1. peptidového analógu inhibítora serín-proteázy, alebo 2. peptidového analógu inhibítora HCV NS3 proteázy, tento postup zahrnuje krok:
- pripájanie (vhodne chránenej) aminokyseliny, peptidu alebo peptidového fragmentu s Pl medziproduktom vzorca:
kde R1 je Ci.6 alkyl, C3.7 cykloalkyl alebo C2_6 alkenyl, všetky voliteľne substituované s halogénom a CPG je ochranná skupina karboxylu.
Vynález preto zahrnuje postup prípravy: 1. peptidového analógu proteázového inhibítora, alebo 2. peptidového analógu serín proteázového inhibítora, tento postup zahrnuje krok pripájania (vhodne chránenej) aminokyseliny, peptidu alebo peptidového fragmentu s medziproduktom vzorca:
kde CPG je ochranná skupina karboxylu.
Vynález tiež zahrnuje použitie Pl medziproduktu vzorca:
-CPG
H2N
kde R1 je Cb6 alkyl, cykloalkyl alebo C2.6 alkenyl, všetky voliteľne substituované s halogénom, na prípravu:
1. peptidového analógu inhibítora serín-proteázy, alebo 2. peptidového analógu inhibítora HCV NS3 proteázy.
Vynález tiež zahrnuje použitie medziproduktu vzorca:
kde CPG je ochranná skupina karboxylu, na prípravu: 1. peptidového analógu proteázového inhibítora, alebo
2. peptidového analógu serín proteázového inhibítora. Vynález tiež zahrnuje použitie Pl medziproduktu vzorca:
kde R1 je Cb6 alkyl, cykloalkyl alebo C2.(, alkenyl, všetky voliteľne substituované s halogénom, na prípravu látky vzorca (I) definovanej skôr. Nakoniec, vynález tiež zahrnuje použitie prolínového analógu vzorca:
kde R21a je Ci.6 alkylom; Cw alkoxyl; nižší tioalkyl; halogén; aminoskupina voliteľne mono-substituovaná s Ci_6 alkylom; C6, Cio aryl, Ογ.16 aralkyl alebo Het, tento aryl, aralkyl alebo Het sú voliteľne substituované s R22, kde R22 je Ci.6 alkyl, Ci.6 alkoxyl, amidoskupina, (nižší alkyljamid, aminoskupina voliteľne mono- alebo di- substituovaná s C|.6 alkylom, alebo Het, a
R2lB je Cw alkyl, Ci.6 alkoxyl, aminoskupina, di(nižší alkylaminoskupina, (nižší alkyljamid, NO2, OH, halogén, trifluórmetyl alebo karboxyl;
na syntézu 1. peptidového analógu serin proteázového inhibítora. 2. peptidového analógu inhibítora HCV NS3 proteázy, alebo 3. peptidového analógu vzorca (I) definovaného skôr.
Tento vynález je ilustrovaný do ďalších podrobností pomocou nasledujúcich neobmedzujúcich príkladov.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Teploty sú dané v stupňoch Celzia, RT znamená teplotu miestnosti. Percentá roztokov vyjadrujú vzťah hmotnosti ku objemu a pomery roztokov vyjadrujú vzťah objem ku objemu, ak to nie je uvedené inak. Spektrá nukleárnej magnetickej rezonancie (NMR) boli zaznamenané pomocou Bruker 400 MHz spektrometra; chemické posuny (δ) sú uvádzané v častiach z milióna. Rýchla chromatografia sa uskutočňovala na silikagéli (SiO2) podľa Stillovej rýchlej chromatografickej techniky (W.C. Still a spol., J. Org. Chem., (1978), 43,2923).
Skratky použité v príkladoch zahrnujú Bn: benzyl; Boe: Zerc-butyloxykarbonyl (Me3COC(O)}; BSA: albumín hovädzieho séra; CHAPS: 3-[(3-cholamidopropyl)-dimetylamonio]-l-propánsulfonát; DBU: 1,8-diazabicyklo[5.4.0]undec-7-én; CH2C12 = DCM: dichlórmetán; DEAD: dietylazodikarboxylát; DIAD: diizopropylazodikarboxylát; DIEA: diizopropyletylamín; DIPEA: diizopropyletylamín; DMAP: dimetylaminopyridín; DCC: 1,3-dicyklohexylkarbodiimid; DME: 1,2-dimetyoxyetán; DMF: dimetylformamid; DMSO: dimetylsulfoxid; DTT: ditiotreitol alebo treo-l,4-dimerkapto-2,3-butándiol; DPPA: difenylfosforylazid; EDTA: kyselina etyléndiamíntetraoctová; Et: etyl; EtOH: etanol; EtOAc: etylacetát; Et2O: dietyléter; HATU: (O-7-azabenztriazol-l-yl)-l,l,3,3-tetrametylurónium-hexafluórfosfát]; HPLC: vysokoúčinná kvapalinová cbromatografia; MS: hmotnostná spektrometria (MALDI-TOF: matricová laserová desorpčná ionizácia-čas preletu, FAB: Bombardovanie rýchlymi atómami); LAH: hydrid hlinitolítny; Me: metyl; MeOH: metanol; MES: (2-{N-morfolíno)etán-sulfónová kyselina); NaHMDS: bis(trimetylsilyl)amid sodný; NMM: N-metylmorfolín; NMP: N-metylpyrolidín; Pr: propyl; Succ: 3-karboxypropanoyl; PNA: 4-nitrofenylaminoskupina alebo p-nitroanilid; TBAF: tetra-n-butylamónium-fluorid; TBTU: 2-(lH-benzotriazol-l-yl)-l,l,3,3-tetrametylurónium-tetrafluórboritan; TCEP: tris(2-karboxyetyl)fosfín-hydrochlorid; TFA: kyselina trifluóroctová; THF: tetrahydrofurán; TIS: triizopropylsilán; TLC: tenkovrstvová chromatografia; TMSE: trimetylsilyletyl; Tris/HCI: tris(hydroxymetyl)aminometán-hydrochlorid.
Stavebné bloky P2
Príklad 1
Syntéza brómmetyl-8-chinolínu (1)
Ku komerčne dostupnej kyseline 8-chinolínkarboxylovej (2,5 g, 14,4 mmol) sa pridal čistý tionylchlorid (10 ml, 144 mmol). Táto zmes sa zahrievala pri 80 °C počas 1 hodiny pred oddestilovaním prebytku tionyl chloridu za zníženého tlaku. Ku výslednej hnedastej tuhej látke sa pridal absolútny EtOH (15 ml), ktorý sa zahrieval pri 80 °C počas 1 hodiny pred tým, ako sa zakoncentroval za vákua. Zvyšok sa rozdelil medzi EtOAc a nasýtený vodný roztok NaHCO3 a organická fáza sa vysušila (MgSO4), prefiltrovala a zakoncentrovala, čím sa poskytne hnedastý olej (2,8 g). Tento materiál (asi 14,4 mmol) sa pridal po kvapkách počas 35 minút ku suspenzii LAH (0,76 g, 20,2 mmol)/Et2O, ktorá bola ochladená na -60 °C. Reakčná zmes sa pomaly zahriala na -35 °C počas 1,5 hodiny pred dokončením reakcie. Reakcia sa zastavila s MgSO4.10H2O pomaly počas 30 minút a potom vlhkým THF. Zmes sa rozdelila medzi Et2O a vodným roztokom 10 % hmotnostných NaHCCb- Organická fáza sa vysušila (MgSO4), prefiltrovala a zakoncentrovala, čím sa poskytne žltkastá tuhá látka (2,31 g, 80 % počas 2 krokov) zodpovedajúca alkoholu. Alkohol (2,3 g, 11,44 mmol) sa rozpustil v AcOH/HBr (20 ml, 30 % roztok od Aldrich) a zahrial sa na 70 °C počas 2,5 hodiny. Zmes sa zakoncentrovala za vákua dosucha, rozdelila medzi EtOAc (100 ml) a nasýtený vodný roztok NaHCO3 pred tým, ako sa vysušila (MgSO4), prefiltrovala a zakoncentrovala, čím sa poskytne požadovaná látka (1) ako hnedastá tuhá látka (2,54 g, 100 %).
Príklad 2
Syntéza 2-fenyl-4-hydroxychinolínu (2)
OH (2)
Komerčne dostupný etyl-benzoylacetát (6,00 g, 31,2 mmol) sa zahrieval pri 85 °C (uzavretá banka) v 75 ml 30 % NH4OH počas 2 hodín. Tuhá látka tvorená po ochladení sa prefiltrovala a refluxovala vo vode počas 2 hodín. Roztok sa extrahoval trikrát s CH2C12. Organické vrstvy sa spojili, vysušili nad MgSO4, prefiltrovali sa a zakoncentrovali. Žltý zvyšok sa rýchlo chromatografoval na silikagéli, eluovaním so zmesou EtO - Ac : hexán (3 : 7), čím sa poskytne zodpovedajúci amid ako biela tuhá látka 1,6 g, 31 % výťažok.
Tento amid (250 mg, 1,53 mmol) sa refluxoval použitím Dean-Starkovho prístroja s anilínom (143 mg,
1,53 mmol) a anilín.HCI (10 mg, 0,08 mmol) v toluéne (10 ml) počas 16 hodín. Roztok sa zakoncentroval, čím sa poskytne hnedý olej, ktorý sa zmiešal s kyselinou polyfosforečnou (2 g) a zahrial sa na 135 °C počas 20 minút. Reakčná zmes sa vyliala do vody a pH sa upravilo na hodnotu 8 s roztokom 5 mol/1 NaOH. Vodná suspenzia sa extrahovala dvakrát s etylacetátom. Organické vrstvy sa spojili, premyli sa so soľankou, vysušili sa nad MgSO4, prefiltrovali a zakoncentrovali. Zvyšok sa podrobil rýchlej chromatografii na silikagéli, eluovaním s roztokom 3 % MeOH v etylacetáte, čím sa poskytne 2-fenyl-4-hydroxychinolín (2), 67 mg, 20 % výťažok.
’H NMR (DMSO-dj δ 8,11 (d, J = 7Hz, 1H), 7,86 - 7,83 (m, 2H), 7,77 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,68 (dd, J = 8,7 Hz, 1H), 7,61 - 7,58 (m, 3H), 7,35 (dd, J = 8,7 Hz, 1H), 6,34 (s, 1H).
Príklad 3
Syntéza 4-hydroxy-2-fenyl-7-metoxychinolinu (3)
MeO (3a)
Ph
O O +
(3b)
OEt
N Ph H
OMe
Cl (3)
4-hydroxy-2-fenyl-7-metoxychinolín(e)
260-280’C čistý
OH
N Ph
C3e)
SK 286994 Β6
Roztok etyl-benzoylacetátu (b) (100,0 g, 0,52 mol), m-anizidínu (a) (128,1 g, 1,04 mol) a 4 mol/1 HCl/dioxán (5,2 ml) v toluéne (1,01) sa refluxoval počas 6,25 hodiny v Dean-Starkovom pristrojí. Ochladený toluénový roztok sa postupne premyl s vodným roztokom 10 % HCI (2 x 300 ml), 1 mol/1 NaOH (2 x 300 ml), H2O (300 ml) a soľankou (150 ml). Toluénová fáza sa vysušila (MgSO4), prefiltrovala sa a zakoncentrovala za zníženého tlaku, čím sa poskytne 1,2 : 1,0 zmes esteru c a amidu d (144,6 g, 45 %/38 % surový výťažok) ako tmavý hnedý olej. Surový olej sa zahrieval na 280 °C počas 80 minút, kým sa pri destilácii tvoril EtOH. Ochladená získaná tmavá tuhá látka sa rozotrela s CH2C12 (200 ml). Suspenzia sa prefiltrovala a výsledná tuhá látka sa premyla s CH2C12> čím sa poskytne e (22,6 g, 17 % z a) ako béžová tuhá látka: *H NMR (DMSO-d«) δ 8,00 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,81 - 7,82 (m, 2H), 7,57 - 7,59 (m, 3H), 7,20 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 6,94 (dd, J = 9,0, 2,2 Hz, 1H), 6,26 (s, 1H), 3,87 (s, 3H).
4-chlór-2-fenyl-7-metoxychinolm(3)
Suspenzia e (8,31 g, 33,1 mmol) v POCI3 (90 ml) sa zahrievala pod refluxom počas 2 hodín (číry roztok sa získal po zahriatí). Reakčná zmes sa zakoncentrovala za zníženého tlaku. Zvyšok sa rozdelil medzi roztok 1 mol/1 NaOH (exotermicky, pridal sa 10 mol/1 NaOH na udržanie vysokého pH) a EtOAc (500 ml). Organická vrstva sa premyla s H2O (100 ml) a soľankou (100 ml), potom sa vysušila (MgSO4), prefiltrovala a zakoncentrovala za zníženého tlaku, čím sa poskytne 3 (8,60 g, 96 %) ako bledá žltá tuhá látka: *H NMR (DMSO-de) δ 8,28 - 8,30 (m, 2H), 8,20 (s, 1H), 8,10 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,54 - 7,58 (m, 3H), 7,52 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,38 (dd, J = 9,1, 2,5 Hz, 1H), 3,98 (s, 3H). Táto reakcia sa opakovala trikrát a poskytla vždy 96 až 98 % výťažok, ktorý je významne vyšší, než 68 % výťažok uvádzaný v J. Med. Chem. 1997,40,1794.
Príklad 4
Syntéza Boc-4-(/?)-(naftalen-l-ylmetoxy)prolínu (4)
Komerčne dostupný Boc-4-(Ä)-hydroxyprolín (5,00 g, 21,6 mmol) sa rozpustil v THF (100 ml) a ochladil sa na 0 °C. Po častiach sa pridal hydrid sodný (60 % disperzia v oleji, 1,85 g, 45,4 mmol) počas 10 minút a suspenzia sa premiešavala pri RT počas 1 hodiny. Potom sa pridal l-(brómmetyl)naftalén (8,00 g, 36,2 mmol) (pripravený, ako je opísané v E.A. Dixon a spol. Can. J. Chem., (1981), 59,2629 - 2641) a zmes sa zahrievala pod refluxom počas 18 hodín. Zmes sa vyliala do vody (300 ml) a premyla sa s hexánom. Vodná vrstva sa okyslila s 10 % vodným roztokom HCI a extrahovala sa dvakrát s etylacetátom. Organické vrstvy sa spojili a premyli sa so soľankou, vysušili sa (MgSO4), prefiltrovali a zakoncentrovali. Zvyšok sa čistil pomocou rýchlej chromatografie (zmes 49:49:2 hexán: etylacetát: kyselina octová), čím sa poskytne látka z názvu tohto odseku ako bezfarebný olej (4,51 g, 56 % výťažok). *H NMR (DMSO-de) ukazovala prítomnosť dvoch rotamérov: δ 8,05 (m, 1H), 7,94 (m, 1H), 7,29 (d, J = 14 Hz, 1H), 7,55 - 7,45 (m, 4H), 4,96 (m, 2H), 4,26 (široký s, 1H), 4,12 (dd, J = J= 8 Hz, 1H), 3,54 - 3,42 (m, 2H), 2,45 - 2,34 (m, 1H), 2,07 - 1,98 (m, 1H) 1,36 (s, (3/9) 9H), 1,34 (s, (6/9) 9H).
Príklad 5
Syntéza Boc-4(/?)-(8-chinolín-metoxy)-prolinu (5)
Boc-4(R)-hydroxyprolín (1,96 g, 8,5 mmol) v bezvodom THF (20 ml) sa pridal ku suspenzii NaH (1,4 g, 60 % v oleji, 34 mmol) v THF (100 ml). Táto zmes sa premiešavala 30 minút pred tým, ako sa pridal brómmetyl-8-chinolín z príkladu 1 (2,54 g, 11,44 mmol) v THF (30 ml). Reakčná zmes sa zahrievala pri 70 °C (5 hodín) pred tým, ako sa prebytok NaH rozložil dôkladne s vlhkým THF. Reakčná zmes sa zakoncentrovala
SK 286994 Β6 za vákua a výsledný materiál sa rozpustil v EtOAc a H2O, Zásaditá vodná fáza sa oddelila a okyslila sa s 10 % roztokom vodenej HCI na pH 5 pred tým, ako sa extrahovala s EtOAc (150 ml). Organická fáza sa vysušila (MgSO4), prefiltrovala sa a zakoncentrovala, čím sa poskytne hnedý olej. Čistenie pomocou rýchlej chromatografie (eluent: zmes 10 % MeOH/CHCI3) poskytlo požadovanú látku (5) ako bledožltú tuhú látku (2,73 g, 86 %). HPLC (97,5 %); ’H-NMR (DMSO-d6) ukazuje výskyt rotamérov v 6 : 4 pomere, 5 12-11,4 (široký s, IH), 8,92 (2 x d, J = 4,14 a 4,14 Hz, IH), 8,38 (2 x d, J = 8,27 a 8,27 Hz, IH), 7,91 (d, J = 7,94 Hz, IH), 7,77 (d, J = 7,0 Hz, IH), 7,63 - 7,54 (m, 2H), 5,14 (2 x s, 2H), 4,32 - 4,29 (m, IH), 4,14 - 4,07 (m, IH), 3,52 - 3,44 (m, 2H), 2,43 - 2,27 (m, IH), 2,13 - 2,04 (m, IH), 1,36 a 1,34 (2 x s, 9H).
Príklad 6
Príprava Boc-4(7?)-(7-chlórchinolín-4-oxo)prolínu (6)
(6)
Komerčne dostupný Boc-4(S)-hydroxyprolín-metylester (500 mg, 2,04 mmol) a 7-chlór-4-hydroxychinolín (440 mg, 2,45 mmol) sa umiestnili do suchého THF (10 ml) pri 0 °C. Pridal sa trifenylfosfín (641 mg,
2,95 mmol), počom nasledoval pomalý prídavok DIAD (426 mg, 2,45 mmol). Zmes sa premiešavala pri RT počas 20 hodín. Reakčná zmes sa potom zakoncentrovala, rozpustila v etylacetáte a extrahovala sa trikrát s HCI 1 mol/1. Vodná fáza sa alkalizovala s Na2CO3 a extrahovala sa dvakrát s etylacetátom. Organické vrstvy sa spojili, vysušili sa nad MgSO4, prefiltrovali a zakoncentrovali, čím sa poskytne žltý olej. Olej sa čistil pomocou rýchlej chromatografie, čím sa poskytne metylester ako biela tuhá látka, 498 mg, 58 % výťažok.
Tento metylester (400 mg, 0,986 mmol) sa hydrolyzoval s 1 mol/1 vodným roztokom hydroxidu sodného (1,7 ml, 1,7 mmol) v metanole (4 ml), pri 0 °C, počas 3 hodín. Roztok sa zakoncentroval, čím sa odstránil metanol a neutralizoval sa s roztokom 1 mol/1 vodnej HCI. Suspenzia sa zakoncentrovala dosucha a rozpustila sa v metanole (20 ml), soli sa odfiltrovali a filtrát sa zakoncentroval, čim sa poskytne požadovaná látka (6) ako biela tuhá látka, 387 mg, kvánt, výťažok.
’H NMR (DMSO-cL) (asi 1 : 1 zmes rotamérov) δ 8,74 (d, J = 5 Hz, IH), 8,13 - 8,09 (m, IH), 7,99 a 7,98 (s, IH), 7,58 (d, J = 9 Hz, IH), 7,02 (d, J = 5 Hz, IH), 5,26 - 5,20 (m, IH), 4,10 - 4,01 (m, IH), 3,81 - 3,72 (m, IH), 3,59 (dd, J = 12,10 Hz, IH), 2,41 - 2,31 (m, 2H), 1,34 a 1,31 (s, 9H).
Príklad 7
Syntéza Boc-4(J?)-(2-Fenyl-7-metoxychinolín-4-oxo)-prolínu (7)
(7)
Boc-4(7?)-(2-fenyl-7-metoxychinolm-4-oxo)-prolm (7)
Terc-butoxid draselný (8,16 g, 72,7 mmol) sa pridal po malých častiach, počas 15 minút k roztoku Boc-4(Ä)-hydroxy-prolínu (6,73 g, 29,1 mmol) v DMSO (83 ml), pričom sa udržiaval pri 25 °C. Zmes sa premiešavala pri 25 °C počas 1,5 hodiny. Do reakčnej zmesi sa chlór-2-fenyl-7-metoxychinolín 3 (8,61 g, 32,0 mmol) pridal v 4 častiach počas 15 minút. Reakčná zmes sa premiešavala pri 25 °C počas 19 hodín. Výsledná suspenzia sa vyliala do H2O (650 ml) a zmes sa premyla s Et2O (3 x 150 ml), čím sa odstránil prebytok chlórchinolínu (EtOAc sa neskôr ukázal ako účinnejší). Vodná vrstva sa okyslila s vodným roztokom 1 mol/1 HCI (38 ml vypočítané ako 1,5 ekviv. požadovaného množstva, 43,6 ml) na pH 4 až 5. Biela tuhá látka, ktorá sa zrážala sa získala pomocou filtrácie. Vlhká tuhá látka sa vysušila za zníženého tlaku nad P2O5, čim sa poskytne prolínový derivát 7 (12,6 g, 91 %, obsahuje 2,3 % hmotnostné DMSO) ako a béžová tuhá látka:
*H NMR (DMSO-de) δ (2 : 1 zmes rotamérov) 8,27 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 8,00, 7,98 (2d, J = 9,2, 9,2 Hz, 1H),
7,48 - 7,56 (m, 3H), 7,45, 7,43 (25, 1H), 7,39 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,17 (dd, J = 9,2, 2,5 Hz, 1H), 5,53 - 5,59 (m, 1H), 4,34 - 4,41 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,76 (široký s, 2H), 2,63 - 2,73 (m, 1H), 2,32 - 2,43 (m, 1H), 1,36,
1,33 (25,9H).
Príklad 8
Syntéza Boc-4(Ä)-(2-fenyl-6-nitrochinolin-4-oxo)prolínu (8)
Dietylazodikarboxylát (0,77 ml, 4,89 mmol) sa pridal po kvapkách do premiešavaného roztoku trifenylfosfínu (1,28 g, 4,88 mmol) v 15 ml tetrahydrofúránu pri 0 °C. Po 30 minútach premiešavania pod dusíkom sa roztok Boc-4/S)-hydroxyprolínového metylester (1,00 g, 4,08 mmol) pridal v 5 ml tetrahydroíuránu, po čom nasledovala suspenzia komerčne dostupného 6-nitro-2-fenyl-4-chinolínolu (1,30 g, 4,88 mmol) v 10 ml rovnakého rozpúšťadla. Červená zmes sa premiešavala počas 15 minút pri 0 °C a pri RT počas noci. Rozpúšťadlo sa odparilo za vákua. Zostávajúci olej sa zriedil v etylacetáte a premyl sa dvakrát s hydrogenuhličitanom sodným, raz s vodou a raz so soľankou. Organická vrstva sa vysušila (MgSO4), prefiltrovala a odparila za vákua. Zvyšok sa chromatografoval na silikagéli (zmes 70 : 30 objemovo; hexány-etylacetát), čím sa poskytol požadovaný metylester ako svetlá žltá tuhá látka (1,70 g, 85 %).
’H NMR(CDC13) rotaméry = 3 : 7 δ 9,03 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,46 (dd, J = 9, 2,5 Hz, 1H), 8,18 (d, J = 9 Hz, 1H), 8,14 - 8,07 (m, 2H), 7,59 - 7,50 (m, 3H), 7,19 (s, 1H), 5,39 - 5,30 (m, 1H), 4,67 (t, J = 8 Hz, 0,3H), 4,61 (t, J = 8 Hz, 0,7H), 4,07 - 4,01 (m, 2H), 3,81 (s, 3H), 2,89 - 2,73 (m, 1H), 2,55 - 2,47 (m, 1H), 1,49 (s, 2,7H),
1,45 (s, 6,3H).
Do roztoku metylesteru (503 mg, 1,02 mmol) v zmesi THF : H2O (10 : 4 ml) sa pridal monohydrát hydroxidu lítneho (85 mg, 2,05 mmol). Pridali sa 2 ml MeOH, aby sa dosiahol homogénny roztok. Biela zrazenina vznikla za 30 minút. Výsledná suspenzia sa premiešavala pri RT počas ďalších 6 hodín. Reakčná zmes sa zriedila s vodným roztokom 10 % kyseliny citrónovej a extrahovala sa s etylacetátom. Organická vrstva sa vysušila (MgSO4), prefiltrovala sa a odparila za vákua, čím sa poskytlo 416 mg (85 %) požadovanej kyseliny (8).
’H NMR (DMSO-dfj): δ 8,92 - 8,87 (m, 1H), 8,47 (dd, J = 9,3Hz, 1H), 8,38 - 8,32 (m, 2H), 8,19 (d, J = 9Hz, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,62 - 7,55 (m, 3H), 5,73 - 5,66 (m, 1H), 4,41 (t, J = 8 Hz, 1H), 3,89 - 3,76 (m, 2H), 2,83 - 2,72 (m, 1H), 2,47 - 2,35 (m, 1H), 1,38 (s, 9H).
Stavebné bloky PI
Príklad 9
A) Syntéza zmesi (1R,2R)/(1S,2S) kyseliny l-amino-2-etylcyklopropyl-karboxylovej
a) 50%vod.NaOH
ButO2CT CO2tBu
C9a)
BnEtjNCI
b) ΏυΟΚ, H;O εξο * 0 “C až RT
HO,CZ CO,tBu <9d) 2 etyl syn k esteru cJEljN, DPPA, benzén potom 2-fnmetylsilyfetanol —----reflux
Me3Sh^/^° H (9e)
COJBu i z
SK 286994 Β6
d) 1,0 M TBAF
THF
RT až reflux
H2N CO2tBu (9f) etyl syn k esteru zmes (RR)/(SR)
a) Suspenzia benzyltrietylamóniunichloridu (21,0 g, 92,19 mmol) v 50 % vodnom roztoku NaOH (92,4 g v 185 ml H2O) sa postupne pridal di-ŕerc-butylmalonát (20,0 g, 92,47 mmol) a 1,2-dibrómbután (30,0 g, 138,93 mmol). Reakčná zmes sa prudko premiešavala počas noci pri RT, a potom sa pridala zmes ľadu a vody. Surový produkt sa extrahoval s CH2CI2 (3x) a postupne sa premyl s vodou (3x) a soľankou. Organická vrstva sa vysušila (MgSO4), prefiltrovala sa a zakoncentrovala. Zvyšok sa podrobil rýchlej chromatografii (7 cm, 2 až 4 % Et2O v hexáne), čím sa poskytne požadovaný cyklopropánový derivát 9c (19,1 g, 70,7 mmol, 76 % výťažok). *H NMR (CDClj) δ 1,78 - 1,70 (m, 1H), 1,47 (s, 9H), 1,46 (s, 9H), 1,44 - 1,39 (m, 1H), 1,26 - 1,64 (m, 3H), 1,02 (t, 3H, J = 7,6 Hz).
b) Do suspenzie ŕerc-butoxidu draselného (6,71 g, 59,79 mmol, 4,4 ekviv.) v suchom éteri (100 ml) pri 0 °C sa pridala H2O (270 μΐ, 15,00 mmol, 1,1 ekviv.). Po 5 minútach sa do suspenzie pridal diester 9c (3,675 g, 13,59 mmol) v éteri (10 ml). Reakčná zmes sa premiešavala počas noci pri RT, potom sa vyliala do zmesi ľadu a vody a premyla sa s éterom (3x). Vodná vrstva sa okyslila s vodným roztokom 10 % kyseliny citrónovej pri 0 °C a extrahovala sa s AcOEt (3x). Spojené organické vrstvy sa postupne premyli s vodou (2x) a soľankou. Po obvyklom opracovaní (Na2SO4, filtrácii, skoncentrovaní) sa požadovaná kyselina 9d izolovala ako bledý žltý olej (1,86 g, 8,68 mmol, 64 % výťažok). ’H NMR (CDCI3) δ 2,09 - 2,01 (m, 1H), 1,98 (dd, J = = 3,8, 9,2 Hz, 1H), 1,81 - 1,70 (m, 1H), 1,66 (dd, J = 3,0, J = 8,2 Hz, 1H), 1,63 - 1,56 (m, 1H), 1,51 (s, 9H), 1,0 (t, J = 7,3 Hz, 3H).
c) Do kyseliny 9d (2,017 g, 9,414 mmol) v suchom benzéne (32 ml) sa postupne pridal Et3N (1,50 ml, 10,76 mmol, 1,14 ekviv.) a DPPA (2,20 ml, 10,21 mmol, 1,08 ekviv.). Reakčná zmes sa refluxovala počas 3,5 hodiny, potom sa pridal 2-trimetylsilyletanol (2,70 ml, 18,84 mmol, 2,0 ekviv.). Reflux sa udržiaval počas noci, potom sa reakčná zmes zriedila s Et2O a postupne sa premyla s 10 % vodným roztokom kyseliny citrónovej, vodou, nasýteným vodným roztokom NaHCO3, vodou (2x) a soľankou. Po obvyklom opracovaní (MgSO4, filtrácii, skoncentrovaní) sa zvyšok čistil pomocou rýchlej chromatografie (5 cm, 10 % AcOEt-hexán), čím sa poskytne požadovaný karbamát 9e (2,60 g, 7,88 mmol, 84 % výťažok) ako bledý žltý olej. MS (FAB) 330 (MH+); ‘H NMR (CDClj) δ 5,1 (široký s, 1H), 4,18 - 4,13 (m, 2H), 1,68 - 1,38 (m, 4H), 1,45 (s, 9H), 1,24 -1,18 (m, 1H), 1,00 - 0,96 (m, 5H), 0,03 (s, 9H).
d) Do karbamátu 9e (258 mg, 0,783 mmol) sa pridal a 1,0 mol/1 TBAF roztok v THF (940 μΐ, 0,94 mmol, 1,2 ekviv.). Po 4,5 hodinách sa pridalo ďalšie množstvo 1,0 mol/1 TBAF (626 μΐ, 0,63 mmol, 0,8 ekviv.). Reakčná zmes sa premiešavala počas noci pri RT, refluxovala sa počas 30 minút a potom sa zriedila s AcOEt. Roztok sa postupne premyl s vodou (2x) a soľankou. Po obvyklom opracovaní (MgSO4, filtrácii a skoncentrovaní) sa požadovaný amín 9f izoloval (84 mg, 0,453 mmol, 58 % výťažok) ako bledá žltá kvapalina. ’H NMR (CDC13) δ 1,96 (široký s, 2H), 1,60 - 1,40 (m, 2H), 1,47 (s, 9H), 1,31 -1,20 (m, 1H), 1,14 (dd, J = 4,1,7,3Hz, 1H), 1,02 (dd, J = 4,1,9,2 Hz, 1H), 0,94 (t, J = 7,3 Hz, 3H).
Príklad 10
Chemické optické rozlíšenie terc-butyl-(/J?,2/?)/(/S,25)-l-amino-2-etylcyklopropyl-karboxylátu (z príkladu
9)
(R,R)/(S.R)
Izoméry rozdelené pomocou kolónovej chromatografie RR izomér SS izomér
SK 286994 Β6
Látka 9e z príkladu 9 (8,50 g, 25,86 mmol) sa opracovala s 1 mol/1 TBAF/THF (26 ml) pod refluxom počas 45 minút. Ochladená reakčná zmes sa zriedila s EtOAc, premyla sa s vodou (3x) a soľankou (lx), potom sa vysušila (MgSO4), prefiltrovala a odparila, čím sa poskytne voľný amín ako svetlý žltý olej. Voľný amín sa rozpustil v bezvodom CH2C12 (120 ml), postupne sa pridali NMM (8,5 ml, 77,57 mmol), látka 4 (príklad 4) (10,08 g, 27,15 mmol) a HATU (11,79 g, 31,03 mmol). Reakčná zmes sa premiešavala pri RT počas noci, potom sa spracovala, ako je opísané skôr. Surová diastereoméma zmes sa rozdelila pomocou rýchlej chromatografíe (eluent hexán: Et2O; 25 : 75), čím sa poskytne dipeptid 10a (menej polárna elučná škvrna) ako biela pena (4,42 g; 64 % teoretického výťažku) a 10b (polámejšia elučná škvrna) ako slonovinová pena (4 g, 57 % teoretického výťažku). Oba izoméry už doteraz boli rozdelené, ale absolútna stereochémia ešte nie je známa.
Príklad 11
Určenie absolútnej stereochémie látky 10a a 10b pomocou korelácie so známym terc-butyl-(/Ä-amino-27?-etylcyklopropyl-karboxylátom
Priame porovnanie pomocou TLC, HPLC a NMR
Prof. A. Charette z University of Montreal, poskytol látku 11a, ktorá má uvedenú absolútnu stereochémiu, ktorá bola určená pomocou rôntgenovej kryštalografie (J. Am. Chem. Soc., 1995, 117, 12721). Látka 11a (13,2 mg, 0,046 mmol) sa rozpustila v roztoku 1 mol/1 HCI/EtOAc (240 μΐ) a premiešavala sa približne 48 hodín. Zmes sa odparila do sucha, čím sa poskytne látka 1 lb ako svetlá žltá pasta a pripájala sa na látku 4 (18 mg, 0,049 mmol), ako je opísané v príklade 10, použitím NMM (20,3 μΐ, 0,185 mmol) a HATU (21,1 mg, 0,056 mmol) v CH2C12. Surový materiál sa čistil pomocou rýchlej chromatografie (eluent - hexán: Et2O; 50 : : 50), čím sa poskytne dipeptid 11c ako olej (7,7 mg; 31 %). Pomocou porovnania TLC, HPLC a NMR sa zistilo, že dipeptid 11c, je identický s menej polárnou látkou 10a získanou v príklade 10, čím sa identifikovala absolútna stereochémia 10a ako (1R,2R).
Príklad 12
Príprava kyselina (1R,2R)/(1S,2S) l-Boc-amino-2-etylcyklopropylkarboxylovej: (12a)
1.TFA, 0°C
2. vod. NaOH, THF (Boc)2O
N CO?H
H 2 (Se) (12a)
Karbamát 9e z príklad 9 (2,6 g, 7,88 mmol) sa premiešaval počas 40 minút v TFA pri 0 °C. Zmes sa potom zakoncentrovala a zriedila s THF (10 ml). Pridal sa vodný NaOH roztok (700 mg, 17,5 mmol v 8,8 ml H2O), počom nasledoval THF (13 ml) roztok (Boc)2O (2,06 g, 9,44 mmol, 1,2 ekviv.). Reakčná zmes sa premiešavala počas noci pri RT (pH sa pritom udržiavalo na hodnote 8 pomocou pridania 10 % vodného NaOH roztoku podľa potreby), potom sa zriedila s H2O, premyla sa s Et2O (3x) a okyslila sa pri 0 °C s 10 % vod
SK 286994 Β6 ným roztokom kyseliny citrónovej. Vodná vrstva sa extrahovala s EtOAc (3x) a postupne sa premyla s H2O (2x) a soľankou. Po obvyklom opracovaní (MgSO4, filtrácia a skoncentrovanie) sa izolovala požadovaná Boc-chránená aminokyselina (12a) (788 mg, 3,44 mmol, 44 % výťažok). *H NMR (CDC13) δ 5,18 (široký s, 1H), 1,64 - 1,58 (m, 2H), 1,55 - 1,42 (m, 2H), 1,45 (s, 9H), 1,32 - 1,25 (m, 1H), 0,99 (t, 3H, J = 7,3 Hz).
Príprava metylesteru kyseliny (1R,2R)/(1S,2S)-l-Boc-amino-2-etylcyklopropylkarboxylovej: (12b)
CO2H CH/VE^O o ----------- \ t x Et2O COsMe o° c z
(12a) (12b)
Boe derivát 12a (0,30 g, 1,31 mmol) sa rozpustil v Et2O (10 ml) a opracoval sa s čerstvo pripraveným diazometánom v Et2O pri 0 °C, kým zostávala žltá farba mierneho prebytku diazometánu. Po premiešavaní počas 20 minút pri RT sa reakčná zmes zakoncentrovala dosucha, čím sa poskytne 12b ako číry bezfarebný olej (0,32 g, 100 %). *H NMR (CDC13) δ 5,1 (široký s, 1H), 3,71 (s, 3H), 1,62 - 1,57 (m, 2H), 1,55 (s, 9H), 1,53 - 1,43 (m, 1H), 1,28 - 1,21 (m, 2H), 0,95 (t, J = 7,3 Hz, 3H).
Príklad 13
Enzymatické rozlíšenie metyl-//Ä,2Ä)///S,25)-Boc-l-amino-2-etylcyklopropyl-karboxylátu H o (12b) zmes (S,R)/(R,R)
a) alkaláza
NaOH
* Analýza pomocou HPLC použitím Chiralcel® OD-H kolóny ** Ďalšie prijateľné estery (napríklad Et)
a) Enantioméma zmes (1S,2R)!(1R,2R) metylesteru kyseliny l-Boc-amino-2-etylkarboxylovej z príkladu 10 (0,31 g, 1,27 mmol) sa rozpustila v acetóne (3 ml) a potom sa zriedila s vodou (7 ml), pričom sa rýchlo premiešavala. Hodnota pH roztoku sa upravila na 7,5 s 0,05 mol/1 vodným roztokom NaOH pred tým, ako sa pridá Alcalase® [2,4L extrakt od Novo Nordisk Industrials] (300 mg). Počas inkubácie sa pH stabilizovalo s NaOH a zariadenie pH stat sa použilo na monitorovanie pridávania NaOH roztoku. Po 40 hodinách sa zmes zriedila s EtOAc a H2O (s 5 ml nas. NaHCO3) a fázy sa rozdelili. Vodná fáza sa okyslila s 10 % vodným roztokom HCI a extrahovala sa s EtOAc, vysušila (MgSO4), prefiltrovala sa a zakoncentrovala, čím sa poskytne kyselina 13a (48,5 mg). Absolútna stereochémia sa určila použitím korelácie opísanej v príkladoch 10 a 11.
b) Opracovanie alikvótu kyseliny 13a s diazometánom v Et2O, čím sa poskytne metylester, počom nasleduje analýza pomocou HPLC použitím chirálnej kolónu [Chiralcel® OD-H, 2,5 % lzopropanol/hexán, izokraticky] ukázalo 51:1 pomer (S,S) izomérov.
SK 286994 Β6
Príklad 14
Syntéza kyseliny {1R,2S)Í{1S,2R} l-amino-2-etylcyklopropyl-karboxylovej
etyl syn k esteru
C) DBU,
----—► ch3cn RT alylO2C
(14a)
d) TFA ΟΗ,α2
RT aiyl
CO2H (14b)
f)1,OMTBAF
Thf ’
RT až reflux
e) B/t DPPA benzén potom 2-trimetylsilyletanol räflux i , alylOOC'
etyl anti ku kyseline (RS) / (SS)
Vychádzajúc z kyseliny 9d opísanej v príklade 9:
c) K 9d (1,023 g, 4,77 mmol) v CH3CN (25 ml) sa postupne pridal DBU (860 μΐ, 5,75 mmol, 1,2 ekviv.) a alylbromid (620 μΐ, 7,16 mmol, 1,5 ekviv.). Reakčná zmes sa premiešavala počas 4 hodín pri RT a potom sa zakoncentrovala. Zvyšok sa zriedil s Et2O a postupne sa premyl s 10 % vodným roztokom kyseliny citrónovej (2x), H2O, nasýteným vodným roztokom NaHCO3, H2O (2x) a soľankou. Po obvyklom opracovaní (MgSO4, filtrácia a skoncentrovanie) sa požadovaný ester 14a izoloval (1,106 g, 3,35 mmol, 91 % výťažok) ako bezfarebný olej. MS (FAB) 255 (MH+);
’H NMR (CDC13) δ 5,96 - 5,86 (m, 1H), 5,37 - 5,22 (m, 2H), 4,70 - 4,65 (m, 1H), 4,57 - 4,52 (m, 1H), 1,87 -1,79 (m, 1H), 1,47 (s, 9H), 1,45 -1,40 (m, 1H), 1,33 - 1,24 (m, 3H), 1,03 (t, J = 7,3 Hz, 3H).
d) Ku esteru 14a (1,106 g, 4,349 mmol) v suchom CH2C12 (5 ml) pri RT sa pridal TFA (5 ml). Reakčná zmes sa premiešavala počas 1,5 hodiny a potom sa zakoncentrovala, čím sa poskytne 14b (854 mg, 4,308 mmol, 99 % výťažok). MS (FAB) 199 (MH4); ‘H NMR (CDC13) δ 5,99 - 5,79 (m, 1H), 5,40 - 5,30 (m, 2H), 4,71 -
- 4,62 (m, 2H), 2,22 - 2,00 (m, 2H), 1,95 - 1,88 (m, 1H), 1,84 - 1,57 (m, 2H), 0,98 (t, J = 7,3 Hz, 3H).
e) ku kyseline 14b (853 mg, 4,30 mmol) v suchom benzéne (14,8 ml) sa postupne pridal Et3N (684 μΐ, 4,91 mmol, 1,14 ekviv.) a DPPA (992 μΐ, 4,60 mmol, 1,07 ekviv.). Reakčná zmes sa refluxovala počas 4,5 hodiny, potom sa pridal 2-trimetylsilyletanol (1,23 ml, 8,58 mmol, 2,0 ekviv.). Reflux sa udržiaval počas noci, potom sa reakčná zmes zriedila s Et2O a postupne sa premyla s 10 % vodným roztokom kyseliny citrónovej, vodou, nasýteným vodným roztokom NaHCO3, vodou (2x) a soľankou. Po obvyklom opracovaní (MgSO4, filtrácia, skoncentrovanie) sa zvyšok podrobil rýchlej chromatografii (5 cm, 10 až 15 % AcOEt-hexán), čím sa poskytne karbamát 14c (1,212 g, 3,866 mmol, 90 % výťažok) ako bledý žltý olej. MS (FAB) 314 (MH4); ’H NMR (CDC13) δ 5,93 - 5,84 (m, 1H), 5,32 - 5,20 (m, 2H), 5,05 (široký s, 1H), 4,60 - 4,56 (m, 2H), 4,20 -
- 4,11 (m, 2H), 1,71 -1,60 (m, 3H), 1,39 - 1,22 (m, 1H), 1,03 (t, J = 7,6 Hz, 3H), 0,96 - 0,86 (m, 1H), 0,04 (s, 9H).
f) Ku karbamátu 14c (267 mg, 0,810 mmol) sa pridal 1,0 mol/1 TBAF roztok v THF (1,62 ml, 1,62 mmol, 2,0 ekviv.). Reakčná zmes sa premiešavala počas noci pri RT, refluxovala sa počas 30 minút a potom sa zriedila s AcOEt. Roztok sa postupne premyl s vodou (2x) a soľankou. Po obvyklom opracovaní (MgSO4, filtrácia a skoncentrovanie) sa požadovaný amín 14d izoloval (122 mg, 0,721 mmol, 89 % výťažok) ako bledá žltá kvapalina. ’H NMR (CDC13) δ 5,94 - 5,86 (m, 1H), 5,31 - 5,22 (m, 2H), 4,58 (d, J = 5,7 Hz, 2H), 1,75 (široký s, 2H), 1,61 -1,53 (m, 2H), 1,51 -1,42 (m, 2H), 1,00 (t, J = 7,3 Hz, 3H), 0,70 - 0,62 (m, 1H).
SK 286994 Β6
Príklad 15
Syntéza etyl-(/R,25)/(75,2Ä)-l-amino-2-vinylcyklopropyl-karboxylátu
(15a)
aJ'BuOK
----------------------------fk, THF
-78 eCažO°C
/ b)1 N vod. HCI X Et2O
c) NaHCO3
d) 4N HCI/dioxán
HCIH2N COjEt (!5d) vinyl syn k esteru
a) Ku THF roztoku (180 ml) ŕerc-butoxidu draselného (4,62 g, 41,17 mmol, 1,1 ekviv.) pri -78 °C sa pridal komerčne dostupný imín 15a (10,0 g, 37,41 mmol) v THF (45 ml). Reakčná zmes sa zahriala na 0 °C a premiešavala sa pri tejto teplote počas 40 minút. Zmes sa potom ochladila späť na 78 °C na pridanie 1,4-dibrómbuténu 15b (8,0 g, 37,40 mmol) a potom sa premiešavala pri 0 °C počas 1 hodiny a ochladila sa späť na -78 °C na pridanie terc-butoxidiu draselného (4,62 g, 41,17 mmol, 1,1 ekviv.). Reakčná zmes sa nakoniec premiešavala ešte jednu hodinu pri 0 °C a zakoncentrovala sa, čím sa poskytne látka 15c.
b, c, d) 15c sa rozpustila v Et2O (265 ml) a opracovala sa s 1 mol/1 vodným roztokom HCI (106 ml). Po 3,5 hodine pri RT sa vrstvy rozdelili a vodné vrstvy sa premyli s Et2O (2x) a alkalizovali nasýteným vodným roztokom NaHCO3. Požadovaný amín sa extrahoval s Et2O (3x) a spojené organické extrakty sa premyli so soľankou. Po obvyklom opracovaní (MgSO4, filtrácia a skoncentrovanie) sa zvyšok opracoval s 4 mol/1 HCI roztokom v dioxáne (187 ml, 748 mmol). Po skoncentrovaní sa hydrochloridová soľ 15d izolovala ako hnedá tuhá látka (2,467 g, 12,87 mmol, 34 % výťažok). 'H NMR (CDC13) δ 9,17 (široký s, 3H), 5,75 - 5,66 (m, 1H), 5,39 (d, J = 17,2 Hz, 1H), 5,21 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 4,35 - 4,21 (m, 2H), 2,77 - 2,70 (m, 1H), 2,05 (dd, J = 6,4, 10,2 Hz, 1H), 1,75 (dd, J = 6,4, 8,3 Hz, 1H), 1,33 (t, J = 7,0 Hz, 3H).
Príklad 16
Príprava etylesteru kyseliny (ÍR, 2SI1S,2Ä)-‘/-Boc-amino-2-vinylcyklopropylkarboxylovej
(Boc)2O
Cl H3N+ QO2Et
Í15d)
DIPEA DMAP
THF
(16a) vinyl syn k esteru
Hydrochloridová soľ 15d (1,0 g, 5,2 mmol) a (Boc)2O (1,2 g, 5,7 mmol) sa rozpustila v THF (30 ml) a opracovala sa s DMAP (0,13 g, 1,04 mmol, 0,2 ekviv.) a diizopropyletylamínom (2,8 ml, 15,6 mmol). Reakčná zmes sa premiešavala 24 hodín pred tým, ako sa zriedila s EtOAc (40 ml) a premyla sa postupne s nasýteným NaHCO3 (aq), 5 % vodným roztokom HCI a nasýtenou soľankou. Organická fáza sa vysušila (MgS04), prefiltrovala a zakoncentrovala sa, čím sa poskytne po čistení pomocou rýchlej chromatografie (15 % EtOAc/hexán) 16a (0,29 g, 23 %). ’H NMR (CDC13) δ 5,80 - 5,72 (m, 1H), 5,29 - 5,25 (dd, J = = 17,2,17,2 Hz, 1H), 5,24 - 5,1 (široký s, 1H), 5,10 (dd, J = 9,2, 9,2 Hz, 1H), 4,22 - 4,13 (m, 2H), 2,15 - 2,04 (m, 1H), 1,85 - 1,73 (široký s, 1H), 1,55 -1,5 (m, 1H), 1,49 (s, 9H), 1,26 (t, J = 7,3 Hz, 3H).
SK 286994 Β6
Príklad 17
Enzymatické rozlíšenie etyl (1R,2S)/(1S,2R) l-amino-2-vinylcyklopropylkarboxylátu
vinyl syn k esteru (Vfa)(S,S)
* analýza pomocou HPLC použitím Chiralcel® OD-H kolóny
a) Racemický derivát 17a (0,29 g, 1,14 mmol) sa rozpustil v acetóne (5 ml) a zriedil s H2O (10 ml). Hodnota pH sa upravila s 0,2 mol/1 vodným roztokom NaOH na 7,2 pred pridaním Alcalase® (300 mg). Na udržanie konštantného pH počas inkubácie sa pridal NaOH roztok pomocou pH-stat titrátora počas 9 dní, kým sa nepridalo teoretické množstvo zásady. Nasledovala extrakcia kyselina/zásada, ako je opísané v príklade 13, izolovali sa nehydrolyzovaný ester (0,15 g, 100 %) a hydrolyzovaný materiál (0,139 g, 95 %). Analýza nehydrolyzovaného esteru pomocou HPLC použitím chirálnej kolóny ukazuje pomer 43 : 1 požadovanej látky 17c, ktorej bola priradená (R,S) stereochémia na základe chemickej korelácie, ako je opísané v príkladoch 10 a 11.
Podmienky HPLC analýzy: Chiralcel® OD-H (4,6 mm x 25 cm), izokratické podmienky použitím zmesi
2,5 % izopropanol/hexán ako mobilnej fázy.
Príklad 18
Rozlíšenie (lR,2Sy(lS,2R) l-amino-2-vinylcyklopropylkarboxylátu pomocou kryštalizácie s kyselinou dibenzoyl-D-vínnou
K roztoku surového racemického (1S,2S a 1R,2R) etyl-l-amino-2-vinylcyklopropylkarboxylátu [získaný z N-(difenylmetylén)glycín-etylesteru (25,0 g, 93,5 mol), ako je opísané v príklade 15] v EtOAc (800 ml) sa pridala kyselina dibenzoyl-D-vínna (33,5 g, 93,5 mol). Zmes sa zahrievala pod refluxom, nechala sa pri RT počas 15 minút, potom sa ochladila na 0 °C. Po 30 minútach sa získala biela tuhá látka. Tuhá látka sa prefiltrovala, premyla s EtOAc (100 ml) a vysušila na vzduchu. Tuhá látka sa suspendovala v acetóne (70 ml), opracovala sa ultrazvukom a prefiltrovala sa (3x). Tuhá látka sa následne rekryštalizovala dvakrát z horúceho acetónu (dávka A). Materský lúh sa zakoncentroval a zvyšok sa rekryštalizoval trikrát z horúceho acetónu (dávka B). Tieto dve dávky amorfnej bielej tuhej látky soli kyseliny dibenzoyl-D-vínnej sa spojili (5,53 g) a suspendovali v zmesi Et2O (250 ml) a nasýteného NaHCO3 roztoku (150 ml). Organická vrstva sa premyla so soľankou, vysušila (MgSO4) a prefiltrovala sa. Filtrát sa zriedil s 1 mol/1 HCl/Et2O (100 ml) a zakoncentroval sa za zníženého tlaku. Olejový zvyšok sa odparil s CC14, čím sa poskytne etyl-l(R)-amino-2(S)-vinyl-cyklopropánkarboxylát, hydrochlorid (940 mg, 11 % výťažok) ako biela hygroskopická tuhá látka: [a]25D +39,5 °C (c 1,14 MeOH); [a]25,365 +88,5 °C (c 1,14 MeOH); *H NMR (DMSO-de) δ 9,07 (široký s, 2H), 5,64 (ddd, J = = 17,2, 10,4, 8,7 Hz, 1H), 5,36 (dd, J = 17,2, 1,6 Hz, 1H), 5,19 (dd, J = 10,4, 1,6 Hz, 1H), 4,24 - 4,16 (m, 2H), 2,51 - 2,45 (m, piky rušené s DMSO, 1H), 1,84 (dd, J =10,0, 6,0 Hz, 1H), 1,64 (dd, J = 8,3, 6,0Hz, 1H),
1,23 (t, J = 7,1Hz, 3H); MS (ESI) m/z 156 (MH)+; enantioméma čistota sa určila ako 91 % ee pomocou HPLC analýzy (CHIRALPAK AS® kolóna, Hex:i-PrOH) Boe derivátu.
SK 286994 Β6
Príklad 19
Príprava hydrochloridu metylesteru kyseliny (JR, 2S)/(JS, 2/?)-l-amino-2-vinylcyklopropán karboxylovej (19f)
H3N*~CO2Et .HCI CHO , ’ (19a)
Na2SO4/TBME
Et3N
(19b)
19c
ĽiOtBu (2,1 ekv.) toluén / RT potom H3O*potomNaOH
(19d)
Boc-0 --1—>.
TBME
BocHN
(19e)
NaOMe
MeOH
BocHN
C19Í)
Príprava imínu 19b
Glycín-etylester, hydrochlorid 19a (1519,2 g, 10,88 mol, 1,0 ekviv.) sa suspendoval v ŕerc-butylmetyléteri (8 1). Pridal sa benzaldehyd (1155 g,10,88 mol, 1 ekviv.) a bezvodý síran sodný (773 g, 5,44 mol, 05 ekviv.) a zmes sa ochladila na 5 °C v kúpeli ľad-voda. Po kvapkách sa pridal trietylamín (2275 ml, 16,32 mol,
1,5 ekviv.) počas 15 minút (použitie 0,5 1 terc-butylmetyl-éteru na oplachy) a zmes sa premiešavala počas 40 hodín pri laboratórnej teplote. Reakcia sa potom zastavila pomocou prídavku zmesi ľad-studená voda (5 1) a organická vrstva sa oddelila. Vodná fáza sa extrahovala s ŕerc-butylmetyléterom (11) a spojené organické fázy sa premyli so zmesou nasýteného roztoku NaHCO3 (400 ml) a vody (1,6 1) a potom soľankou. Roztok sa vysušil nad MgSC>4, zakoncentroval sa za zníženého tlaku a zvyšný žltý olej sa vysušil do konštantnej hmotnosti za vákua. Imín 19b sa získal ako hustý žltý olej, ktorý tuhne pri 20 °C (2001 g, 96 % výťažok): ’H NMR (CDClj, 400 MHz) δ 8,30 (s, IH), 7,79 (m, 2H), 7,48 - 7,39 (m, 3H), 4,40 (d, J = 1,3 Hz, 2H), 4,24 (q, J = 7Hz, 2H), 1,31 (t, J = 7 Hz, 3H).
Príprava racemického hydrochloridu etylesteru kyseliny N-Boc-(lR,2S)/(lS,2R)-l-amino-2-vinylcyklopropán-karboxylovej 19e
7erc-butoxid lítny (4,203 g, 52,5 mmol, 2,1 ekviv.) sa suspendoval v suchom toluéne (60 ml). Imín 19b (5,020 g, 26,3 mmol, 1,05 ekviv.) a dibromid 19c (5,3489,25 mmol, 1 ekviv.) sa rozpustili v suchom toluéne (30 ml) a tento roztok sa pridal po kvapkách počas 30 minút do premiešavaného roztoku LiOtBu pri laboratórnej teplote. Po dokončení sa tmavočervená zmes premiešavala počas ďalších 10 minút a reakcia sa zastavila pomocou prídavku vody (50 ml) a terc-butylmetyl-éteru (TBME, 50 ml). Vodná fáza sa rozdelila a extrahovala druhýkrát s TBME (50 ml). Organické fázy sa spojili, pridal sa roztok 1 mol/1 HCI (60 ml) a zmes sa premiešavala pri laboratórnej teplote počas 2 hodín. Organická fáza sa oddelila a extrahovala sa s vodou (40 ml). Vodné fázy sa potom spojili, nasýtili soľou (35 g) a pridal sa TBME (50 ml). Premiešavaná zmes sa potom alkalizovala na pH 13 až 14 opatrným prídavkom 10 mol/1 NaOH. Organická vrstva sa oddelila a vodná fáza sa extrahovala s TBME (2 x 50 ml). Organické extrakty obsahujúce voľný amín 19d sa spojili a pridal sa di-Zerc-butyldikarbonát (5,46 g, 25 mmol, 1 ekviv.). Po premiešavaní počas noci pri laboratórnej teplote, TLC ukázala časť nezreagovaného voľného amínu. Pridal sa ďalší di-íerc-butyldikarbonát (1,09 g, 5 mmol, 0,2 ekviv.) a zmes sa refluxovala počas 2 hodín, v tomto bode TLC analýza ukazovala úplnú konverziu 19d na karbamát 19e. Roztok sa ochladil na laboratórnu teplotu, vysušil sa nad MgSO4 a zakoncentroval sa za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistil pomocou rýchlej chromatografie použitím zmesi 10 % a potom 20 % EtOAc/hexán ako eluenta. Čistený 19e sa získal ako číry žltý olej, ktorý pomaly tuhol za vákua (4,014 g, 63 % výťažok).
’H NMR (CDC13, 400 MHz) δ 5,77 (ddd, J = 17, 10, 9 Hz, IH), 5,28 (dd, J = 17, 1,5 Hz, IH), 5,18 (široký s, IH), 5,11 (dd J = 10, 1,5 Hz, IH), 4,24 - 4,09 (m, 2H), 2,13 (q, J = 8,5 Hz, IH), 1,79 (široký m, IH), 1,46 (m, IH), 1,45 (s, 9H), 1,26 (t, J = 7 Hz, 3H).
Príprava látky 19f pomocou trans-esterifikácie 19e
Etylester 19e (10,807 g, 42,35 mmol) sa rozpustil v suchom metanole (50 ml) a pridal sa roztok metoxidu sodného v MeOH (25 % hmotnostných, 9,7 ml, 42 mmol, 1 ekvivalent). Zmes sa zahrievala pri 50 °C počas 2 hodín, v tomto bode TLC analýza ukázala úplnú trans-esterifikáciu (19e Rf 0,38, 19f Rf 0,34 v zmesi 20 % EtOAc/hexán). Reakčná zmes sa ochladila na laboratórnu teplotu a okyslila sa na pH 4 použitím roztoku 4 mol/1 HCI v dioxáne. Vyzrážaný NaCI sa odstránil pomocou filtrácie (použitie íerc-butylmetyl-éteru na premytie) a prchavé zložky sa odstránili za zníženého tlaku. Ku zvyšku sa pridal ŕerc-butylmetyl-éter
SK 286994 Β6 (100 ml) a tuhá látka sa odstránila pomocou filtrácie. Odparenie filtrátu za zníženého tlaku a vysušenie za vákua poskytli čistý metylester 19f (10,11 g, 99 % výťažok).
’H NMR (CDCb, 400 MHz) δ 5,75 (ddd, J = 17, 10, 9 Hz, 1H), 5,28 (dd, J = 17, 1Hz, 1H), 5,18 (široký s, 1H), 5,11 (ddd, J = 10,1,5, 0,5 Hz, 1H), 3,71 (s, 3H), 2,14 (q, J = 9 Hz, 1H), 1,79 (široký m, 1H), 1,50 (široký m, 1 H), 1,46 (s, 9H).
Enzymatické optické rozlíšenie hydrochloridu metylesteru kyseliny (7Ä, 25)-1-ammo-2-vinylcyklopropánkarboxylovej
B
BocHN C02Me alkaläza 2,41 pH 8.2-8.5 (20a)
4N HCl-dioxán
-
(20b)
Príprava metylesteru kyseliny jV-Boc-(/R,2S)-l-amino-2-vinylcyklopropán-karboxylovej 20a
Racemický ester 19f (0,200 g, 0,83 mmol) sa rozpustil v acetóne (3 ml) a pridala sa voda (7 ml). 0,05 mol/1 roztok NaOH (1 kvapka) sa pridal na úpravu pH roztoku na asi 8 a potom sa pridal Alcalase® 2.4L (Novo Nordisk Biochem, 0,3 g v jednom ml vody). Zmes sa premiešavala prudko pri laboratórnej teplote, za udržiavania pH roztoku na hodnote 8 použitím automatického titrátora. Na začiatku dňa 4 a 5 premiešavania pri pH 8, sa pridal ďalší roztok enzýmu (2 x 0,3 g). Po celkovo 5 dňoch sa spotrebovalo celkom 8,3 ml 0,05 mol/1 NaOH. Reakčná zmes sa zriedila s EtOAc a vodou a organická fáza sa oddelila. Po premytí so soľankou sa organické extrakty vysušili (MgSO4) a zakoncentrovali za vákua. Látka 20a (0,059 g, 30 % výťažok) sa získala ako číry olej: *H NMR identické ako pri látke 19f, HPLC (Chiralcel ODH, 4,6 x 250 mm, izokraticky 1 % EtOH v hexáne, 0,8 ml/min. prietoková rýchlosť): (ÍR,2S)-2 Rf 19,3 minúty (97 %); (lS,2R)-2 Rf 17,0 minút (3 %).
Príprava hydrochloridu metylesteru kyseliny (//?,25)-l-amino-2-vinylcyklopropán-karboxylovej 20b
Látka 20a (39,96 g, 165,7 mmol) sa rozpustila v dioxáne (25 ml) a roztok sa pridal po kvapkách s premiešavaním do 4 mol/1 HCI v dioxáne (Aldrich, 250 ml). Po 45 minútach, TLC analýza ukázala úplnú deprotekciu. Prchavé zložky sa odstránili za zníženého tlaku a zvyšok sa spolu odparil dvakrát s MeOH (2 x 100 ml). Ku hnedému olejovému zvyšku sa pridal éter (300 ml) a MeOH (10 ml) a zmes sa premiešavala počas noci pri laboratórnej teplote, čo viedlo k zrážaniu polotuhej látky. Pridal sa ďalší MeOH (15 ml) a premiešavame pokračovalo počas 6 hodín, v tomto bode sa žltkastá tuhá látka oddelila pomocou filtrácie. Produkt sa premyl s roztokom 5 % MeOH v éteri (50 ml) a éterom (2 x 50 ml), a vysušil sa za vákua, čím sa poskytne látka 20b ako žltkastá tuhá látka (22,60 g, 76 % výťažok). Filtráty (vrátane premývacích roztokov) sa odparili za vákua, čím sa poskytne ďalšia látka 20b ako hnedý olej (7,82 g, 26 % výťažok). Obe frakcie boli dostatočne čisté na použitie v syntéze inhibítorov HCV proteázy: [a]D 25 +38,20 (c 1,0, MeOH).
’H NMR (400MHz, DMSO-d«) δ 9,15 (široký s, 3H), 5,65 (ddd, J = 17, 10, 9 Hz, 1H), 5,36 (dd, J = 17, 1,5 Hz, 1H), 5,19 (dd, J = 10,1,5 Hz, 1H), 3,74 (s, 3H), 2,50 (q, prekryté s DMSO signálom, J = 9 Hz, 1H), 1,86 (dd, J = 10, 6 Hz, 1H), 1,64 (dd, J = 8,6Hz, 1H).
Príklad 21
Syntéza metylesteru kyseliny 1-amino-cyklobutyl-karboxylovej
(21a) hci/ch3oh
SK 286994 Β6
Kyselina 1,1-amino-cyklobutánkarboxylová sa pripravila podľa Kavin Douglas; Ramaligam Kondareddiar; Woodard Ronald, Synth. Commun. (1985), 15 (4), 267 - 72. Soľ aminokyseliny (21a) (1,00 g, 6,6 mmol) sa premiešavala v suchom metanole (40 ml) pri -20 °C a zmes sa nasýtila so suchým chlorovodíkom, čím sa poskytne (21b). Premiešavame tejto zmesi pokračovalo počas 4 hodín. Horúci roztok sa prefiltroval a filtrát sa zakoncentroval (Rotavap, 3000), čím zostal zvyšok, ktorý po rozotretí v etyléteri poskytol biely prášok (0,907 g, 83 %) po filtrácii a vysušení. *H NMR (400 MHz, D2) δ CH3O (3H, s, 3,97 ppm) ; CH2 (2H, m, 2,70 - 2,77 ppm); CH2(2H, m, 2,45 - 2,53 ppm) a CH2(2H, m, 2,14 - 2,29 ppm).
Tripeptidy
Príklad 22
Všeobecný postup pripájacej reakcie robenej na tuhom nosiči
Syntézy sa robili na modeli paralelného syntetizéra ACT39G od Advanced ChemTech® s 96 studnicovým blokom. Typicky sa 24 peptidov syntetizovalo paralelne použitím štandardných techník v tuhej fáze. Východisková surovina kyselina (Fmoc-amino)cyklopropán(voliteľne substituovaný)karboxylová-Wang- živica bola pripravená DCC/DMAP pripájacím spôsobom (Atherton, E; Scheppard, R.C. Solid Phase Peptide Synthesis, a Practical Approach; IRL Press: Oxford (1989); str. 131 -148).
Kalíšky sa naplnili s 100 mg s východiskovou živicou (približne 0,05 mmol). Živice sa premyli postupne s 1,5 ml podielmi NMP (lx) a DMF (3x). Fmoc ochranná skupina sa odstránila pomocou opracovania s 1,5 ml roztoku 25 % objemových piperidínu v DMF počas 20 minút. Živice sa premyli s 1,5 ml podielmi DMF (4x), MeOH (3z) a DMF (3x). Pripájanie sa urobilo v DMF (350 μΐ), použitím 400 μΐ (0,2 mmol) a 0,5 mol/1 roztoku Fmoc-aminokyselina/HOBt hydrát v DMF, 400 μΐ (0,4 mmol) 1 mol/1 roztoku DIPEA v DMF a 400 μΐ (0,2 mmol) 0,5 mol/1 roztoku TBTU v DMF. Po pretrepávaní počas 1 hodiny sa kalíšky vysušili, živice sa premyli s 1,5 ml DMF a pripájame sa opakovalo ešte raz za rovnakých podmienok. Živice sa potom premyli, ako je opísané a cyklus sa opakoval s nasledujúcou aminokyselinou.
Zakončovacie skupiny boli zavedené dvoma spôsobmi:
1. Vo forme karboxylovej kyseliny použitím postupu opísaného skôr (napríklad kyselina octová) alebo
2. ako acylačné činidlo, ako napríklad anhydrid alebo chlorid kyseliny. Nasledujúci príklad ilustruje zakončovanie s anhydridom kyseliny jantárovej: Po Fmoc deprotekcii a následnom postupe premytia sa pridal DMF (350 μΐ), po čom nasledovalo 400 μΐ DMF roztoku anhydridu kyseliny jantárovej (0,5 mol/1, 0,2 mmol) a DIPEA (1,0 mol/1, 0,4 mmol). Živice sa premiešavali počas 2 hodín a uskutočnil sa repripájací krok. Na koniec syntézy sa živica premyla s 1,5 ml podielmi DCM (3x), MeOH (3x), DCM (3x), a vysušila sa za vákua počas 2 hodín. Štiepenie zo živice a súbežná deprotekcia vedľajšieho reťazca sa uskutočnili pomocou prídavku 1,5 ml zmesi TFA, H2O, DTT a TIS (92,5 : 2,5 : 2,5 : 2,5). Po pretrepávaní počas 2,5 hodiny sa živica prefiltrovala a premyla s 1,5 ml DCM. Filtráty sa spojili a zakoncentrovali sa pomocou vákuovej centriíugácie. Každá látka sa čistila pomocou preparatívnej HPLC na obrátených fázach použitím C18 kolóny (22 minút na 500 mm). Frakcie obsahujúce produkt sa identifikovali pomocou MALDI-TOF hmotnostnej spektrometrie, spojili sa a lyofilizovali.
Príklad 23
Všeobecný postup na pripájacie reakcie robené v roztoku {pozri tiež R. Knorr a spol., Tetrahedron Letters, (1989), 30,1 927}
Reaktanty, t. j. voľný amín (1 ekviv.) (alebo jeho hydrochloridová soľ) a voľná karboxylová kyselina (1 ekviv.) sa rozpustili v CH2CI2, CH3CN alebo DMF. Do premiešavaného roztoku sa pod dusíkovou atmosférou pridali štyri ekvivalenty N-metylmorfolínu a 1,05 ekvivalentu pripájacieho činidla. Po 20 minútach sa pridal jeden ekvivalent druhého reaktantu, t. j. voľnej karboxylovej kyseliny. (Praktické a účinné pripájacie činidlá na tieto účely sú (benztriazol-l-yloxy)tris(dunetylamino)fosfónium-hexafluórfosfát (HOBT) alebo výhodne 2-(lH-benzotriazol-l-y/)-VN,N,.V'-tetrametylurónium-tetrafluórboritan (TBTU) alebo O-(7-azabenzotriazol-l-yZ)-VjV,7'/,A-tetrametylurónium-tetrafluórboritan (HATU). Reakcia sa monitorovala pomocou TLC. Po dokončení reakcie sa rozpúšťadlo odparilo za zníženého tlaku. Zvyšok sa rozpustil v EtOAc. Roztok sa premyl postupne s 10 % vodným roztokom kyseliny citrónovej a nasýteným vodným roztokom NaHCO3 a soľankou. Organická fáza sa vysušila (MgSO4), prefiltrovala a zakoncentrovala sa za zníženého tlaku. Ak sa zvyšok čistil, urobilo sa to pomocou rýchlej chromatografie, ako je definované.
Príklad 24
Syntéza látky 304
zlúčenina 304
a) (R,R) izomér Boc-Et-Acca-OMe 13c (0,12 g, 0,49 mmol) získaný z enzymatického rozlíšenia (príklad 13) sa opracoval s roztokom 4 mol/1 HCI/dioxán (45 minút) pred zakoncentrovaním za vákua, čím sa poskytne biela tuhá látka. Do tejto HCI soli (asi 0,49 mmol) sa pridal TBTU (0,17 g, 0,54 mmol), Boc-4(R)-(8-chinolín-metyloxy)-prolín 5 (z príkladu 5) (0,18 g, 0,49 mmol) a DIPEA (0,3 ml, 1,7 mmol) v MeCN (10 ml). Zmes sa premiešavala pri RT počas 3,5 hodiny pred zakoncentrovaním za vákua. Výsledný materiál sa rozpustil v EtOAc a premyl sa postupne s nasýteným vodným roztokom NaHCO3 a soľankou. Vysušený (MgSO4), prefiltrovaný a zakoncentrovaný poskytne 24b ako bielu tuhú látku (0,122 g, 50 %).
b) Látka 24b (0,12 g, 0,25 mmol) sa opracovala pri RT s 4 mol/l HCI/dioxán (30 minút) pred zakoncentrovaním za vákua. Výsledná hydrochloridová soľ (Asi 0,25 mmol) sa opracovala s Boc-Chg-OH.H2O (75 mg, 0,27 mmol), TBTU (87 mg, 0,27 mmol) v MeCN (10 ml) a nakoniec pri 0 °C s DIPEA (0,15 ml, 0,87 mmol). Zvyšok sa zriedil s EtOAc, postupne premyl s nasýtený vodným roztokom NaHCO3, a soľankou, vysušil sa (MgSO4), prefiltrovala a zakoncentrovala sa, čím sa poskytne 24c ako špinavo biela tuhá látka (0,2 g). Tento materiál (0,14 g) sa rozpustil v DMSO a čistil sa pomocou preparatívnej HPLC, čím sa poskytne 24c ako biela tuhá látka po lyofilizácii (35 mg, 33 %). HPLC (98 %); MS (FAB) m/z: 637,3 (MH*); HRMS vypočítané pre C35H48N4O7 (MH*) 637,36011: nájdené 637,36250; 'H-NMR (DMSO-d«) ukazuje výskyt rotamérov, δ 8,91(2 x d, J = 4,1 a 4,1Hz, 1H), 8,40 - 8,36 (m, 2H), 7,90 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,77 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,6 -
- 7,54 (m, 2H), 6,80 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 5,18 a 5,16 (2 x s, 2H), 4,40 (široký s, 1H), 4,31 (t, J = 8,3Hz, 1H), 4,12 (d, J = 11,44Hz, 1H), 4,03 (t, J = 7,9Hz, 1H), 3,78 - 3,72 (m, 1H), 3,56 (s, 3H), 2,35 - 2,27 (m, 1H), 2,06
- 1,97 (m, 1H), 1,71 - 1,55 (m, 10H), 1,53 - 1,38 (m, 2H), 1,26 (s, 9H), 1,18 - 1,06 (m, 2H), 1,02 - 0,93 (m, 2H), 0,89, (t, J = 7,3 Hz, 3H).
látka 304:
c) Ku látke 24c (30 mg, asi 0,047 mmol) sa pridal MeOH (1 ml), THF (1 ml) a monohydrát hydroxidu lítneho (12 mg, 0,29 mmol) v H2O (1 ml). Číry roztok sa premiešaval rýchlo počas 48 hodín pred zakoncentrovaním za vákua. Surový peptid sa rozpustil v DMSO a čistil pomocou preparatívnej HPLC, čím sa poskytne látka 304 ako biela tuhá látka po lyofilizácii (21 mg, 72 %). HPLC (99 %); MS (FAB) m/z: (MH*) 623,3; HRMS vypočítané pre C34H46N4O7 (MH*) 623,34448, nájdené: 623,34630, *HNMR (DMSO-cU) ukazuje výskyt rotamérov 1:1, δ 8,90 (2 x d, J = 4,1Hz, IH), 8,37 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,89 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,77 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 7,6 - 7,53 (m, 2H), 6,88 a 6,79 (2 x d, J = 8,6 a 7,9 Hz, 1H), 5,17 a 5,16 (2 x s, 2H), 4,43 - 4,35 (široký s, 1H), 4,29 (t, J = 8,3 Hz, 1H), 3,82 - 3,71 (m, 1H), 2,35 - 2,27 (m, 1H), 2,06 - 1,97 (m, 1H), 1,72 - 1,53 (m, 10H), 1,52 -1,44 (m, 2H), 1,37 a 1,29 (2 x s, 9H), 1,18 -1,05 (m, 3H), 1,0 - 0,94 (m, 1H), 0,91 (t, J = 7,3 Hz, 3H).
SK 286994 Β6
Príklad 25
Syntéza látky 301
zlúčenina 301
a) Látka 25a (=12a) (282 mg, 1,23 mmol) sa suspendovala v bezvodom CH3CN (6 ml). Postupne sa pridali DBU (221 μΐ, 1,48 mmol) a benzylbromid (161 μΐ, 1,35 mmol) a reakčná zmes sa premiešavala počas noci pri RT. Zmes sa zakoncentrovala sa, výsledný olej sa zriedil s EtOAc a 10 % vodným roztokom kyseliny citrónovej a postupne sa premyl s roztokom 10 % kyseliny citrónovej a (2x), nasýtený vodným roztokom NaHCO3 (2x), vode (2x) a soľankou (lx). EtOAc vrstva sa vysušila (MgSO4), prefiltrovala a odparila dosucha. Surový bezfarebný olej sa čistil pomocou rýchlej chromatografie (eluent - zmes hexán: EtOAc; 95 : 5 až 90 : : 10), čím sa poskytne benzylovaný produkt 25b ako bezfarebný olej (368 mg; 93 %).
MS (FAB) 318,2 MH 320,2 MH+ 342,2 (M+Na)+ ’H NMR (CDCIj) δ 7,37 - 7,28 (m, 5H), 5,22 - 5,10 (m, 1H), 5,19 (d, J = 12 Hz, 1H), 5,16 (d, J = 12 Hz, 1H), 1,60 - 1,40 (m, 4H), 1,39 (s, 9H), 1,31 -1,22 (m, 1H), 0,91 (t J = 7,5,14,5 Hz, 3H).
b) Látka 25b (368 mg, 1,15 mmol) sa opracovala s roztokom 4 mol/1 HCI/dioxán (6 ml), ako je opísané skôr. Surová hydrochloridová soľ sa pripájala na látku 4 (z príkladu 4) (470,8 mg, 1,27 mmol) s NMM (507 μΐ,
4,61 mmol) a HATU (namiesto TBTU, 525,6 mg, 1,38 mmol) v CH2CI2 (6 ml), ako je opísané v príklade 22, čím sa poskytne surový racemický dipeptid, ako oranžový olej. Surový materiál sa čistil pomocou rýchlej chromatografie (eluent - zmes hexán: Et2O; 50 : 50), čím sa poskytne čistý dipeptid 25c (menej polárna elučná škvrna) ako biela pena (223 mg; 68 % teoretický výťažok).
MS 571,4 MH' 573,3 MH+ 595,3 (M+Na)+ ’H NMR (CDCI3), asi 1 : 1 zmes rotamérov, δ 8,03 (široký d, J = 8 Hz, 1H), 7,86 (široký d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,82 (široký d, J = 6,5 Hz, 1H), 7,61 (široký s, 0,5H), 7,57 - 7,40 (m, 4H), 7,31 - 7,21 (m, 5H), 6,48 (široký s, 0,5H), 5,22 - 5,11 (m, 1H), 5,08 - 4,81 (m, 3H), 4,41- 3,74 (m, 3H), 3,49 - 3,18 (m, 1H), 2,76 - 1,90 (m, 2H), 1,69 - 1,48 (m, 3H), 1,40 (s, 9H), 1,40 - 1,23 (m, 2H), 0,92 (t, J = 7,5, 15 Hz, 3H).
c) Dipeptid 25c (170,1 mg, 0,297 mmol) sa opracoval s roztokom 4 mol/1 HCI/dioxán (2 ml), ako je opísané skôr. Surová hydrochloridová soľ sa pripájala na Boc-Chg-OH (84,1 mg ,0,327 mmol) s NMM (130,7 μΐ,
1,19 mmol) a HATU (namiesto TBTU, 135,5 mg; 0,356 mmol) v CH2CI2 (2 ml) počas 2,75 hodín pri RT, potom sa spracovala tak, ako je opísané skôr, Čím sa poskytne surový tripeptid 25d ako slonovinová pena (Asi
211,4 mg; 100%).
MS(FAB) 712,5 MH+ látka 301:
d) Surový tripeptid 25d (asi 15,4 mg , 0,022 mmol) sa rozpustil v absolútnom etanole (2 ml) a pridalo sa odhadnuté množstvo (špička špachtle) aj 10 % Pd/C katalyzátora aj octanu amónneho. Zmes sa hydrogenovala
SK 286994 Β6 počas noci vo vodíkom naplnenej banke pri RT a atmosférickom tlaku. Reakčná zmes sa prefiltrovala cez 0,45 pm Millex® filter, odparila sa dosucha, potom sa zriedila s EtOAc a 10 % vodným roztokom kyseliny citrónovej a premyla sa znova s 10 % vodným roztokom kyseliny citrónovej (lx), vodou (2x) a soľankou (lx). Organická vrstva sa vysušila (MgSO4), prefiltrovala sa, odparila dosucha a lyofilizovala, čím sa poskytne tripeptid 301 ako biela amorfná tuhá látka (11,0 mg; 82 %).
MS (FAB) 622,5 MH+ 644,5 (M+Na)+ ’H NMR (DMSO), asi 1 : 1 zmes rotamérov, δ 8,54 & 8,27 (s, 1H), 8,06 - 7,99 (m, 1H), 7,96 - 7,91 (m, 1H), 7,87 (d, J = 8Hz, 1H), 7,57 - 7,42 (m, 4H), 6,81 (d, J = 8Hz, 1H), 4,99 (d, J = 12Hz, 1H), 4,88 (d, J = 12Hz, 1H), 4,46 - 4,19 (m, 2H), 4,17 - 4,02 (m, 2H), 3,88 - 3,67 (m, 1H), 2,28 - 2,19 (m, 1H), 2,05 - 1,93 (m, 1H),
1,73 - 1,43 (m, 8H), 1,32 - 1,07 (m, 6H), 1,28 (s, 9H), 1,03 - 0,85 (m, 2H), 0,91 (t, J = 7,5,15Hz, 3H)
Príklad 26
Syntéza látky 306
b) HCI 4N
c) Boc-CHG-OH TBTU CHjCIj
(26d) zlúčenina 306
a) Kyselina 26a (180 mg, 0,500 mmol) a amín 15d (96 mg, 0,500 mmol) sa pripájali použitím TBTU (192 mg, 0,600 mmol) a D1PEA (226 mg, 1,75 mmol) v CH2CI2 (10 ml) počas 20 hodín. Reakčná zmes sa zakoncentrovala, rozpustila v etylacetáte, premyla sa dvakrát s nasýteným NaHCO3 a raz so soľankou. Organická vrstva sa vysušila nad MgSO4, prefiltrovala sa a zakoncentrovala, čím sa poskytne 26c, ako hnedý olej, použitý bez čistenia v nasledujúcom kroku.
b, c) Surová látka 26c (asi 0,500 mmol) sa premiešavala počas 30 minút v roztoku HCI 4 mol/l/dioxán (4 ml) a zakoncentrovala sa dosucha. Tuhá látka sa rozpustila v CH2CI2 (10 ml) a pridal sa D1PEA (226 mg, 1,75 mmol), po čom nasledoval Boc-Chg-OH monohydrát (138 mg, 0,500 mmol) a TBTU (192 mg, 0,600 mmol). Roztok sa premiešaval pri RT počas 5 hodín. Reakčná zmes sa zakoncentrovala, rozpustila v etylacetáte, premyla sa dvakrát s nasýteným NaHCO3 a raz so soľankou. Organická vrstva sa vysušila nad MgSO4, prefiltrovala sa a
SK 286994 Β6 zakoncentrovala, čím sa poskytne hnedý olej, čistil sa pomocou rýchlej chromatografie, čím sa poskytne 26d ako žltý olej, 204 mg, 64 % pre dve pripájania.
’H NMR (CDCI3) δ 8,77 - 8,74 (m, 1H), 8,14 (d, J = 8 Hz, 1H), 8,02 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,69 (dd, J = 9,7Hz, 1H), 7,52 (d, J = 5Hz, 1H), 7,47 (dd, J = 8,7Hz, 1H), 6,78 (d, J = 5 Hz, 1H), 5,80 - 5,70 (m, 1H), 5,35 - 5,27 (m, 2H), 5,14 - 5,07 (m, 2H), 4,89 - 4,83 (m, 1H), 4,39 - 4,32 (m, 1H), 4,30 - 4,24 (m, 1H), 4,20 - 4,07 (m, 2H), 4,00 - 3,92 (m, 1H), 3,04 - 2,92 (m, 1H), 2,39 - 2,29 (m, 1H), 2,16 - 2,04 (m, 1H), 1,91 - 1,83 (m, 1H), 1,82 - 1,62 (m, 7H), 1,45 - 1,35 (m, 9H), 1,27 -1,07 (m, 8H).
d) Látka 26d (136 mg, 0,214 mmol) sa rozpustila v THF (4 ml) a MeOH (2 ml). Pridal sa vodný roztok (2 ml) LiOH hydrátu (72 mg, 1,72 mmol) a reakčná zmes sa premiešavala pri RT počas 20 hodín. Roztok sa zakoncentroval a čistil pomocou preparatívnej HPLC, čím sa poskytne látka 306 (menej polárny izomér) ako biela tuhá látka (25 mg).
látka 306: MS(FAB) 607,4 (MH+) 'H NMR (DMSO-dí) δ 9,16 (d, J = 6 Hz, 1H), 8,55 (s, 1H), 8,35 (d, J = 8 Hz, 1H), 8,12 (d, J = 9Hz, 1H), 8,05 (dd, J = 8,7Hz, 1H), 7,76 (dd, J = 8,7Hz, 1H), 7,59 (d, J = 6 Hz, 1H), 7,02 (d, J = 8Hz, 1H), 5,75 - 5,66 (m, 2 H), 5,19 (d, J = 18Hz, 1H), 5,07 (d, J = 10 Hz, 1H), 4,55 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,43 (dd, J = 10, 8 Hz, 1H), 4,03 (d, J = 10 Hz, 1H), 3,87 - 3,83 (m, 1H), 2,66 - 2,59 (m, 1H), 2,36 - 2,30 (m, 1H), 1,98 (dd, J = 18,9Hz, 1H),
1,75 - 1,56 (m, 8H), 1,38 - 1,35 (m, 1H), 1,25 - 1,22 (m, 1H), 1,09 (s, 9H), 1,12 - 0,95 (m, 3H).
Príklad 27
Syntéza látky 307
e) BocChgOH.H20 TBTU, NMM _ CH3CN, R.T.*
I) LiOH.HyO THRHjO MeOH R.T.
zlúčenina 307
SK 286994 Β6
c) Roztok kyseliny (8) z príkladu 8 (505 mg, 105 mmol) v 5 ml dichlórmetánu sa opracoval s TBTU (376 mg, 1,17 mmol). HCI soľ (R,S) vinyl-AccaOEt (18) (z príldadu 18) (279 mg, 1,46 mmol) v 7 ml dichlórmetánu obsahujúceho (0,60 ml, 5,46 mmol) N-metyl-morfolínu sa pridal do predchádzajúceho roztoku aktivovaného esteru. Výsledný roztok sa premiešaval pri RT počas noci. Rozpúšťadlo sa odparilo za vákua. Zvyšok sa zriedil s etylacetátom, premyl sa dvakrát s nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a raz so soľankou. Organická vrstva sa vysušila (MgSO4), prefiltrovala sa a odparila za vákua. Zvyšok sa chromatografoval na silikagéli (60 : 40 objemových, hexány-etylacetát), čím sa poskytne 173 mg (27 %) dipeptidu 27c.
d, e) Roztok dipeptidu 27c (70 mg, 0,114 mmol) v 3 ml chlorovodíka 4,0 mol/1 roztok v 1,4-dioxáne sa premiešaval pri RT počas 1 hodiny (a zrazenina vypadávala z reakčnej zmesi po 10 minútach). Rozpúšťadlo sa odstránilo za vákua. Hydrochloridová soľ amínu 27d (0,114 mmol), zriedená v 1,5 ml acetonitrilu, sa neutralizovala pomocou prídavku 65 μϊ (0,591 mmol) N-metylmorfolínu. Roztok Boe Chg-OH.H2O (39 mg, 0,142 mmol) v 1,5 ml acetonitrilu sa opracovala s TBTU (46 mg, 0,143 mmol) a potom sa pridal do predchádzajúceho roztoku amínu. Výsledný roztok sa premiešaval pri RT (počas 2 dní). Rozpúšťadlo sa odstránilo za vákua. Zvyšok zriedený s etylacetátom sa premyl dvakrát s nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a raz so soľankou. Organická vrstva sa vysušila (MgSO4), prefiltrovala a odparila za vákua. Získalo sa 86 mg (100 %) tripeptidu 27e. Táto surová látka sa použila v nasledujúcej reakcii bez ďalšieho čistenia.
f) Do roztoku tripeptidu 27e (86 mg, 0,114 mmol) v 5 ml zmesi THF : H2O (2,5 : 1) sa pridal monohydrát hydroxidu lítneho (22 mg, 0,524 mmol). Pridal sa ďalší 0,25 ml MeOH, aby sa dosiahol homogénny roztok. Výsledný roztok sa premiešaval pri RT počas noci pred tým, ako sa rozpúšťadlo odparilo za vákua. Zvyšok sa rozdelil medzi vodu a EtOAc. Vodná vrstva sa okyslila s 1 mol/1 HCI a potom sa extrahovala dvakrát s etylacetátom. Požadovaná látka sa našla v etylacetáte pochádzajúcom z prvej zásaditej extrakcie. Organická vrstva sa vysušila (MgSO4), prefiltrovala a odparila za vákua, čím sa poskytne 69 mg surovej kyseliny, ktorá sa čistila pomocou preparatívnej HPLC. Táto látka sa rozpustila v MeOH (4 ml) a injektovala sa na rovnovážnu Whatman Partisil 10-ODS-3 (2,2 x 50cm) C18 kolónu s obrátenými fázami, (λ = 230 nm, rozpúšťadlo A = 0,06 % TFA/H2O, rozpúšťadlo B = 0,06 % TFA/CH3CN). Čistiaci program: 20 % až 70 % rozpúšťadla B za 60 minút. Frakcie sa analyzovali pomocou analytickej HPLC. Príslušné frakcie sa odobrali a lyofilizovali, čím sa poskytne 50 mg (60 %) požadovaného tripeptidu 307 ako biela amorfná tuhá látka.
látka 307: ’H NMR (DMSO-d6) rotaméry 2:8 8 8,86 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,85 (s, 0,2H), 8,64 (s, 0,8H), 8,49 (dd, J = 9,5,3 Hz, 0,2H), 8,45 (dd, J = 9,2 Hz, 0,8H), 8,39 - 8,33 (m, 2H), 8,20 (d, J = 9,5 Hz, 0,2H), 8,18 (d, J = 9,5 Hz, 0,8H), 7,81 (s, 0,2H), 7,78 (s, 0,8H), 7,64 - 7,56 (m, 3H), 6,87 (d, J = 8 Hz, 0,8H), 6,36 (d, J = 9 Hz, 0,2H), 5,82 - 5,67 (m, 2H), 5,27 - 5,17 (m, 1H), 5,09 - 5,03 (m, 1H), 4,73 (t, J = 8Hz, 0,2H), 4,55 (dd, J = = 10,7,5 Hz, 0,8H), 4,49 - 4,40 (m, 1H), 4,00 - 3,95 (m, 1H), 3,83 - 3,76 (m, 1H), 2,87 - 2,80 (m, 0,2H), 2,69 až 2,62 (m, 0,8H), 2,39 - 2,26 (m, 1H), 2,08 - 2,00 (m, 1H), 1,75-1,41 (m, 7H), 1,37 (s, 1,8H), 1,32 -1,27 (m, 1H), 1,17 - 0,82 (m, 5H), 0,94 (s, 7,2H).
Príklad 28
Syntéza látky 311
zlúčenina 311
Látka 311 sa pripravila použitím postupu opísaného v príklade 24, ale použitím príslušných stavebných blokov.
Látka 311 ’H NMR (DMSO-d«) δ 8,98 (d, J = 6 Hz, 1H), 8,52 (s, 1H), 8,24 (d, J = 9 Hz, 1H), 8,08 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 6 Hz, 1H), 6,98 (d, J = 8 Hz, 1H), 5,75 - 5,66 (m, 1H), 5,57 (široký s, 1H), 5,24 - 5,19 (m, 1H), 5,08 - 5,01 (m; 1H), 4,57 - 4,40 (m, 2H), 4,00 - 3,96 (m, 1H), 3,82 (dd, J = = 9, 8 Hz, 1H), 2,59 - 2,54 (m, 1H), 2,32 - 2,26 (m, 1H), 1,99 (dd, J = 17, 9 Hz, 1H), 1,74 - 1,55 (m, 8H),
1,37 (s, 1H), 1,26 - 1,22 (m, 1H), 1,14 -1,08 (m, 9 H), 1,02 - 0,91 (m, 3H).
SK 286994 Β6
Príklad 29
Syntéza látky 302
blokov.
‘H NMR (DMSO-de) δ 8,34 (s, 1H), 8,04 - 8,01 (m, 1H), 7,94 - 7,92 (m, 1H), 7,87 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,54 - 7,50 (m, 3H), 7,45 (dd, J = 17, 8 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 8 Hz, 1H), 4,94 (dd, J = 55,12Hz, 2H), 4,34 (s, 1H), 427 (dd, J = 8,8 Hz, 1H), 4,16 (d, J = 11Hz, 1H), 4,07 (dd, J = 8, 8 Hz, 1H), 3,72 - 3,65 (m, 2 H), 3,59 - 3,54 (m, 1H), 2,24 - 2,18 (m, 1H), 2,02 - 1,95 (m, 2 H), 1,75 - 1,70 (m, 1H), 1,53 - 1,44 (m, 2H), 1,32 -1,27 (m, 1H), 1,21-1,17 (m, 1H), 0,96 - 0,85 (m, 10 H), 0,80 - 0,77 (m, 5H), 0,62 - 0,57 (m, 1H).
Príklad 30
Syntéza látky 308
Látka 308 sa pripravila použitím postupu opísaného v príklade 27, ale použitím príslušných stavebných blokov.
'H NMR (DMSO-d^) rotaméry 2 : 8 δ 8,77 (s, 0,2H), 8,45 (s, 0,8H), 8,13 (d, J = 8,5 Hz, 0,8H), 8,03 (d, J = = 8,5 Hz, 0,2H), 7,89 - 7,83 (m, 1H), 7,55 - 7,37 (m, 4H), 7,05 - 6,59 (m, 1H), 6,95 (d, J = 8 Hz, 0,8H), 6,26 (d, J = 8,5 Hz, 0,2H), 5,81 - 5,64 (m, 1H), 5,33 - 5,28 (m, 1H), 5,26 - 5,15 (m, 1H), 5,08 - 5,02 (m, 1H),
4,60 (t, J = 7,5 Hz, 0,2H), 4,38 - 4,27 (m, 1,8H), 4,09 - 3,91 (m, 1,8H), 3,74 (dd, J = 12,5,4 Hz, 0,2H), 2,69 = 2,60 (m, 0,2H), 2,50 - 2,40 (m, 1H), 2,36 - 2,28 (m, 0,2H), 2,23 - 2,14 (m, 0,8H), 2,05 - 1,97 (m, 0,8H),
1,76 - 1,44 (m, 7H), 1,37 (s, 1,8H), 1,29 (s, 7,2H), 1,28 - 1,20 (m, 1H), 1,16 - 0,88 (m, 5H).
Príklad 31
Syntéza látky 309
Látka 309 sa pripravila použitím postupu opísaného v príklade 27, ale použitím príslušných stavebných blokov.
'H NMR (DMSO-de) rotaméry = 2 : 8 δ 8,75 (s, 0,2H), 8,50 (s, 0,8H), 7,89 - 7,78 (m, 3H), 7,50 - 7,44 (m, 1H), 7,42 - 7,32 (m, 2H), 7,17 - 7,09 (m, 0,8H) 7,08 - 7,03 (m, 0,2H), 6,79 (d, J = 8,5 Hz, 0,8H), 6,33 (d, J =
SK 286994 Β6 = 9 Hz, 0,2H), 5,81 - 5,65 (m, 1H), 5,30 - 5,16 (m, 2H), 5,10 - 5,02 (m, 1H), 4,56 (t, J = 7,5 Hz, 0,2H), 4,33 (t, J = 8 Hz, 0,8H), 4,10 - 3,90 (m, 2,8H), 3,74 - 3,68 (m, 0,2H), 2,45 - 2,37 (m, 1H), 2,34 - 2,17 (m, 1H), 2,05 - 1,97 (m, 1H), 1,76 - 1,48 (m, 7H), 1,37 (s, 1,8H), 1,23 (s, 7,2H), 1,21 - 0,88 (m, 6H).
Príklad 32
Syntéza látky 305
Látka 305 sa pripravila použitím postupu opísaného v príklade 27, ale použitím príslušných stavebných blokov.
'H NMR (DMSO-de) rotaméry (1 : 9) δ 8,68 (s, 0,lH), 8,43 (s, 0,9H), 8,04 - 8,00 (m, 1H), 7,95 - 7,91 (m, 1H), 7,87 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,57 - 7,49 (m, 3H), 7,47 - 7,42 (m, 1H), 6,82 (d, J = 8,5 Hz, 0,9H), 6,21 (d, J = = 8,5 Hz, 0,lH), 5,80 - 5,64 (m, 1H), 5,21 (dd, J = 17, 2 Hz, 0,lH), 5,18 (dd, J = 17, 2 Hz, 0,9H), 5,06 (dd, J = 10,5, 2 Hz, 1H), 5,02 - 4,85 (m, 2H), 4,43 (t, J = 7,5 Hz, 0,lH), 4,34 (široký s, 1H), 4,23 (t, J = 8,5 Hz, 0,9H), 4,16 - 4,05 (m, 1,8H), 3,89 - 3,82 (m, 0,2H), 3,74 (dd, J = 11, 3,5 Hz, 0,9H), 3,53 (dd, J = 12,5, 4 Hz, 0,lH), 2,30 - 2,21 (m, 1H), 2,02 - 1,94 (m, 2H), 1,74 - 1,38 (m, 7H), l,36-(s, 0,9H), 1,28 (s, 8,1H), 1,25 - 0,87 (m, 6H).
Príklad 33
Syntéza látky 303
Látka 303 sa pripravila použitím postupu opísaného v príklade 27, ale použitím príslušných stavebných blokov.
’H NMR (DMSO-d5) δ 8,29 (s, 1H), 8,04 - 8,01 (m, 1H), 7,94 - 7,92 (m, 1H), 7,87 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,56 - 7,52 (m, 3H), 7,46 (dd, J = 8, 7 Hz, 1H), 7,19 (d, J = 9 Hz, 1H), 5,01 (d, J = 12Hz, 1H), 4,86 (d, J = 12Hz, 1H), 4,34 (široký 5, 1H), 4,24 (t, J = 8Hz, 1H), 4,18 - 4,09 (m, 2H), 3,74 - 3,53 (m, 3H), 2,24 - 2,18 (m, 1H), 2,04 -1,95 (m, 1H), 1,74 -1,45 (m, 10H), 1,31 -1,13 (m, 4 H), 0,96 - 0,86 (m, 7H), 0,79 - 0,76 (m, 5H).
SK 286994 Β6
Príklad 34
(34a)
1-LIOHvod CH=OHvod.
2. TBTU (19e)
L4-NHrHCI co1Ch5 DMF
a) Pripájanie P2 s PI
Metylesterový derivát látky 7 (34a) (170 mg , 0,355 mmol) sa premiešaval v zmesi 50 % THF-metanol (4 ml) a vodnom roztoku LiOH (1 mol/1, 1 ml) pri RT počas 1 hodiny. Roztok sa zakoncentroval (Rotavap, 30 °C) a zvyšok sa okyslil na pH 6 a roztok sa lyofilizoval. Výsledný prášok sa premiešaval v suchom DMF (3 ml) v prítomnosti DIEA (0,4 ml) po čom nasledoval postupný prídavok metylesteru kyseliny 1,1-amino-cyklobutylkarboxylovej, hydrochloridu (34b) (140 mg, 0,845 mmol) a TBTU (134 mg, 0,417 mmol).
Po premiešavaní počas 18 hodín pri RT sa zmes čistila pomocou rýchlej chromatografie na silikagéli (230 až 400 Mesh) použitím 1 : 2 zmesi etylacetát-hexán, čím sa poskytne oranžový olej (98 mg , 90 % čistota podľa HPLC).
b) Pripájanie P1-P2 s P3
1. HCI/dioxán
2. Boc-NH^cq^
TBTU/DIEA/DMF
-
3. KOHyop.
CHjOH
4. TFA v0(j
Dipeptid 34b (97 mg, 90 %, 0,155 mmol) sa premiešaval v roztoku 4 mol/1 HCl-dioxán (5 ml) počas 1 hodiny pri RT. Roztok sa potom zakoncentroval dosucha (Rotavap, vysoké vákuum), čím sa poskytne béžová tuhá látka. Tento materiál sa premiešaval v suchom DMF (2 ml) pri RT v prítomnosti DIEA (0,4 ml), po čom nasledoval prídavok L-Boc-Tbg (80 mg, 0,35 mmol) a TBTU (112 mg, 0,35 mmol). Po premiešavaní 2 dni pri RT sa roztok vylial do etylacetátu, čím sa uvoľnila voľná zásada použitím vodného roztoku 5 % uhličitanu draselného. Organická fáza sa spracovala, čím poskytla žltý olejový zvyšok. Tento materiál sa čistil pomocou rýchlej chromatografie na silikagélovej kolóne (230 až 400 Mesh) použitím zmesi 1 : 2 & 3 : 1 objemových etylacetát: hexán, čím sa poskytne 40 mg oleja, homogéneho podľa HPLC.
Metylester (40 mg) sa nakoniec saponifikoval v roztoku 1 mol/1 hydroxidu draselného (2 ml) v metanole (4 ml) pomocou premiešavania pri RT počas 3 hodín. Zmes sa zakoncentrovala (Rotavap, 30 °C) a okyslila na pH 4 s 2 mol/1 roztokom kyseliny chlorovodíkovej. Táto zmes sa čistila pomocou preparatívnej HPLC na C18 kolóne použitím gradienta 0 až 50 % vodného acetonitrilu (0,1 % TFA) pri 220 nmol/1. Frakcie sa spojili, zakoncentrovali sa na polovicu objemu a lyofilizovali, čím sa poskytne látka 403 ako biela páperovitá tuhá látka (10 mg).
’H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ Zmes rotamérov: NH+ (IH, s, 8,6 ppm), CH (3H, m, 8,2 ppm), Ph (5H, široký s, 7,66 & 7,53 ppm), CH (IH, široký, 722 ppm), NH (IH, d, J = 7,6 Hz, 6,71 ppm), CHO (IH, široký s,
5,76 ppm), CH (2H, m, 4,58 - 4,49 ppm), CH (IH, m, 4,04 ppm), CH3O (3H, s, 3,97 ppm), CH (IH, d, 3,86 ppm), CH (7H, veľmi široký, 1,8 - 2,6 ppm), Boe skupina (9H, s, 1,25 ppm) a terc-butylová skupina (9H, s, 0,97 ppm).
MS. ukazuje M+H' pri m/e 675 (100 %).
HPLC pík 98 % po 18,9 minútach
SK 286994 Β6
Príklad 35
Syntéza látky 333 (tabuľka 3)
Roztok m-anizidínu (35a) (9,15 ml, 81,4 mmol) a dimetylacetylén-dikarboxylátu (35b) (10,0 ml, 81,3 mmol) v 160 ml metanolu sa zahrial pod refluxom počas 2 hodín. Rozpúšťadlo sa odstránilo za vákua a zvyšok sa čistil pomocou rýchlej kolónovej chromatografie (90 : 10 hexány-etylacetát). Látka 35c (17,0 g, 79 % výťažok) sa získala ako oranžový olej.
’H NMR (CDCI3) δ 9,62 (široký s, 1H), 7,17 (dd, J = 7 a 8,5 Hz, 1H), 6,66 - 6,62 (m, 1H), 6,49 - 6,45 (m, 2H), 5,38 (s, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,74 (s, 3H), 3,71 (s, 3H).
Difenyléter (50 ml) sa zahrial v pieskovom kúpeli až na internú teplotu asi 250 °C. Diesterový adukt (35c) (7,5 g, 28,3 mmol) rozpustený v 5 ml difenyléteru sa pridal počas 2 minút do vriaceho rozpúšťadla. Zahrievanie sa udržiavalo 5 minút a reakčná zmes sa potom ponechala ochladiť na laboratórnu teplotu. Rýchlo sa vyzrážala béžová tuhá látka. Táto tuhá látka sa odfiltrovala a potom sa rozotrela s metanolom, čím sa poskytne 4,1 g (62 % výťažok) požadovanej látky 35d.
’H NMR (DMSO-dý) δ 7,97 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 2 Hz, 1H), 6,96 (dd, J = 9 a 2Hz, 1H), 6,55 (s, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,84 (s, 3H).
(35g)
Roztok cis-4-hydroxy-L-prolínového derivátu (35e) (1,71 g, 5,33 mmol), 4-hydroxychinolínového derivátu (35f) (1,25 g, 5,36 mmol) a trifenylfosfmu (2,80 g, 10,68 mmol) v 75 ml THF sa ochladil na 0 °C prídavkom kvapka po kvapke (asi 1 hodina) DEAD (1,70 ml, 10,80 mmol). Reakčná zmes sa potom ponechala zahriať sa pomaly na laboratórnu teplotu a v premiešavaní sa pokračovalo počas noci. Rozpúšťadlo sa odstránilo za vákua a zvyšok sa čistil pomocou rýchlej kolónovej chromatografie (70 : 30 etylacetát-hexány). Látka 35g (0,7 g čistej látky 35g, a 1,8 g látky 35g kontaminovanej s 50 % trifenylfosfát-oxidu) sa získala ako biela tuhá látka.
*H NMR (CDCI3) rotaméry (4 : 6) δ 8,04 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,40 - 7,32 (m, 6H),
7,23 (dd, J = 9 a 2,5 Hz, 1H), 5,33 - 5,13 (m, 3H), 4,66 (t, J = 7,5 Hz, 0,4 H), 4,54 (t, J = 8 Hz, 0,6 H), 4,07 (s, 3H), 3,94 (s, 3H), 4,04 - 3,80 (m, 2H), 2,78 - 2,65 (m, 1H), 2,47 - 2,34 (m, 1H), 1,45 (s, 3,6H), 1,37 (s, 5,4H).
SK 286994 Β6
Do prolín-benzylesterový derivát (35g) (0,70 g, 1,31 mmol) v roztoku zmesi metanol-etylacetát (10 ml - 10 ml) sa pridalo 100 mg 10 % Pd/C. Výsledná suspenzia sa premiešavala pri laboratórnej teplote pod vodíkovou atmosférou počas 1,5 hodiny. Katalyzátor sa potom prefiltroval na Millex-HV Millipore (0,45 μιη 5 filtračnej jednotke) a rozpúšťadlá sa odparili za vákua. Získal sa kvantitatívny výťažok požadovanej kyseliny 3511(0,59 g).
‘H NMR: (ODC13) rotaméry 70 : 30 δ 8,06 (d, J = 9,5 Hz, 0,3H), 8,01 (d, J = 9 Hz, 0,7H), 7,56 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,44 (široký s, 0,7 H), 7,41 (široký s, 0,3H), 7,24 (dd, J = 9 a 2,5 Hz, 1H), 5,31 - 5,25 (m, 1H), 4,67 (t, J = 7,5 Hz, 0,7 H), 4,55 (t, J = 7,5 Hz, 0,3H), 4,08 (s, 3H), 3,95 (s, 3H), 4,04 - 3,80 (m, 2H), 2,83 - 2,72 (m, 10 1H), 2,71 - 2,47 (m, 1H), 1,46 (s, 9H).
(35h) (35i) (35j)
Soľ aminu 35i (215 mg, 1,21 mmol) v 7 ml acetonitrilu sa opracovala s 0,95 ml DIEA (5,45 mmol). Tento roztok sa potom pridal do roztoku kyseliny 35h (590 mg, 1,32 mmol) a TBTU (389 mg, 1,21 mmol) v 5 ml CH3CN, výsledný roztok sa premiešaval pri laboratórnej teplote počas noci. Rozpúšťadlo sa odstránilo za vá15 kua a zvyšok sa zriedil s etylacetátom a premyl sa dvakrát s nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, raz so soľankou a vysušil sa nad MgSO4. Rozpúšťadlo sa odstránilo za vákua a zvyšok sa čistil pomocou rýchlej kolónovej chromatografie (75 : 25 AcOEt-hexány), čím sa poskytne 527 mg (70 % výťažok) požadovaného dipeptidu (35j).
'H NMR: (CDClj) δ 8,01 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,22 (dd, J = 9 a 2,5Hz, 20 1H), 5,81 - 5,71 (m, 1H), 5,36 - 5,28 (m, 2H), 5,18 - 5,12 (m, 1H), 4,61 - 4,45(m, 1H), 4,07 (s, 3H), 3,94 (s,
3H), 3,91 - 3,74 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 2,99 - 2,84 (m, 1H), 2,49 - 2,34 (m, 1H), 2,20 - 2,08 (m, 1H), 1,97 - 1,84 (m, 1H), 1,58 - 1,52 (m, 1H), 1,44 (s, 9H).
SK 286994 Β6
Diester 35j (716 mg, 1,25 mmol) v roztoku zmesi THF : MeOH (1,5 ml -1,5 ml) sa ochladil na 0 °C pred tým, ako sa opracoval s vodným roztokom NaOH 1 mol/1 (1,25 ml, 1,25 mmol). Po 1 hodine premiešavania pri 0 °C sa pridali 3 kvapky ľadovej kyseliny octovej na neutralizovanie NaOH. Rozpúšťadlá sa odstránili za vákua a táto látka sa vysušila pomocou pumpy počas niekoľkých hodín.
Roztok kyseliny 35k, sodnej soli (1,25 mmol) a Et3N (0,19 ml, 1,36 mmol) v 8 ml THF sa ochladil na 0 °C a pridal sa izobutyl-chlórmravČan (0,18 ml, 1,39 mmol). Po 40 minútach sa pridal diazometán (9 ml, 6,30 mmol) a výsledný roztok sa premiešaval pri 0 °C počas 30 minút a pri laboratórnej teplote počas 2 hodín. Rozpúšťadlá sa odstránili za vákua. Zvyšok zriedený s etylacetátom sa premyl dvakrát s nasýteným roztokom NaHCO3, raz so soľankou a vysušil sa nad MgSO4, rozpúšťadlo sa odparilo sa vákua a zvyšok sa čistil pomocou rýchlej kolónovej chromatografie (50 : 50 Hexány/AcOEt), čím sa poskytne 378 mg (52 % výťažok) očakávaného diazoketónu 351.
Ή NMR: (CDCI3) δ 8,00 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,35 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,20 (dd, J = 9 a 2,5 Hz, 1H), 6,92 (s, 1H), 5,81 - 5,71 (m, 1H), 5,35 - 5,28 (m, 3H), 5,17 - 5,13 (m, 1H), 4,61 - 4,40 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,96 - 3,74 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 2,94 - 2,38 (m, 2H), 2,18 - 2,06 (m, 1H), 1,98 - 1,84 (m, 1H), 1,57 -1,52 (m, 1H), 1,42 (s, 9H).
(351) (35m)
Do ochladeného (0 °C) roztoku diazoketónu 351 (0,37 g, 0,642 mmol) v 15 ml THF sa pridalo 0,25 ml HBr 48 %. Výsledný žltý roztok sa premiešaval pri 0 °C počas 1 hodiny. Reakčná zmes sa rozdelila medzi etylacetát a nasýtený roztok NaHCO3. Organická fáza sa premyla ešte jeden raz s NaHCO3 a vysušila s Na2SO4, Po odparení rozpúšťadiel za vákua sa izolovalo 0,36 g (90 % výťažok) abrómketónu 35m.
SK 286994 Β6
α-Brómketón 35m (170 mg, 0,271 mmol) v 10 ml izopropanolu sa opracoval s l-acetyl-2-tiomočovinou (64 mg, 0,542 mmol). Výsledný roztok sa zahrial na 75 °C počas 1 hodiny. Rozpúšťadlo sa odstránilo za vákua. Zvyšok sa zriedil s etylacetátom a premyl sa dvakrát s nasýteným roztokom NaHCO3, raz so soľankou a 5 vysušil sa s MgSO4, odparenie rozpúšťadla za vákua poskytlo 182 mg (>100 %) surového materiálu 35n.
(35p) O
Dipeptid 35n (145 mg, 0,223 mmol) sa opracoval s 3 ml 4 mol/1 roztoku HC1 v dioxáne. Výsledný roztok sa premiešaval pri laboratórnej teplote počas 1 hodiny. Rozpúšťadlá sa odstránili za vákua a zvyšok sa vysu10 šil pod pumpou.
Soľ amínu 35o v 5 ml CH3CN sa opracuje s 195 μΐ (1,12 mmol) DIEA. Tento roztok sa potom pridal do roztoku Boc-férc-butylglycínu (103 mg, 0,446 mmol) a HATU (186 mg, 0,489 mmol) v 3 ml CH3CN. Reakčná zmes sa premiešavala pri laboratórnej teplote počas noci. CH3CN sa odparil za vákua. Zvyšok sa zriedil s etylacetátom, premyl sa dvakrát s nasýteným roztokom NaHCO3, raz so soľankou a vysušil sa s MgSO4. 15 Po odstránení rozpúšťadla sa získalo 274 mg surového tripeptidu 35p (>100 %).
SK 286994 Β6
Tripeptid 35p (56 mg, 0,0733 mmol) v 4 ml 4 mol/1 roztoku HCI v dioxáne sa premiešaval pri laboratórnej teplote počas 2 hodín. Rozpúšťadlo sa odstránilo za vákua a zvyšok sa vysušil pod pumpou.
Získaná soľ amínu sa rozpustila v 4 ml CH2CI2 a opracovala sa s 0,13 ml DIEA (0,746 mmol), po čom nasledovalo 26 mg trifosgénu (0,0876 mmol). Po 3 hodinách inkubácie sa pridal 1,2,2-ttimetylpropylamm (20 mg, 0,146 mmol) (syntetizovaný, ako je opísané v Moss N., Gauthier J., Ferland J.M., Feb. 1995, SynLett. (2), 142 -144). Ľadový kúpeľ sa odstránil a reakčná zmes sa premiešavala pri laboratórnej teplote počas noci. CH2C12 sa odparil za vákua. Zvyšok sa zriedil s etylacetátom, premyl sa dvakrát s nasýteným roztokom NaHCO3, raz so
zlúčenina 333
Roztok metylesteru 35q (57 mg, 0,0721 mmol) v zmesi THF : H2O (2,5 ml: 1 ml) sa opracoval s tuhým LiOH.H2O (25 mg, 0,595 mmol) a pridal sa 1 ml MeOH, aby sa roztok vyčíril. Po premiešavaní počas 4 hodín pri laboratórnej teplote sa reakčná zmes neutralizovala pomocou prídavku 1 mol/1 roztoku HCI. Rozpúšťadlá sa odstránili za vákua a zvyšok sa čistil pomocou preparatívnej chromatografie. Táto látka sa rozpustila v 2,5 ml MeOH, injektovala sa do rovnovážnej Whatman Partisil 10-ODS-3 (2,2 x 50 cm) C18 kolóny s obrátenou fázou. Čistiaci program: Lineárny gradient s 20 ml/min., λ 220 nm, injektovanie 10 % A až 60 % A za 60 minút A: 0,06 % TFA/CH3CN; B: 0,06 %; TFA/H2O, Frakcie sa analyzovali pomocou analytickej HPLC. Produkt sa oddelil a lyofilizoval, čím sa poskytne 15 mg látky 333 ako špinavo biela tuhá látka (27 % výťažok).
‘H NMR: (DMSO-d«) δ 8,88 (s, 0,2H), 8,84 (d, J = 4,5 Hz, 0,2H), 8,68 (d, J = 8,5 Hz, 0,2H), 8,56 (s, 0,8H), 8,40 - 8,13 (m, 1,5H), 7,96 (d, J = 9,0 Hz, 0,2H), 7,72 - 7,44 (m, 2,4H), 7,35 - 7,09 (m, 1,2H), 6,98 (d, J = 9 Hz, 0,2H), 6,15 (d, J = 9Hz, 0,2H), 6,06 (d, J = 9Hz, 0,8H), 5,93 (d, J = 9,5 Hz, 0,24H), 5,86 (d, J = 9Hz, 0,8H), 5,79 - 5,67 (m, 1H), 5,69 - 5,44 (m, 1H), 5,24 - 5,14 (m, 1H), 5,09 - 5,01 (m, 1H), 4,50 - 4,35 (m, 2H),
4,24 (d, J = 9,0Hz, 0,2H), 4,20 (d, J = 9,0 Hz, 0,8H), 4,06 - 3,98 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,77 - 3,60 (m, 2H),
2,58 - 2,50 (m, 1H), 2,33 - 2,28 (m, 1H), 2,22 (s, 2,4H), 2,21 (s, 0,6H), 2,02 (q, J = 9Hz, 1H), 1,56 - 1,38 (m, 1H), 1,28 - 1,22 (m, 1H), 0,97 (s, 9H), 0,83 (d, J = 6Hz, 3H), 0,72 (s, 9H).
MS(FAB) 778,3 (m+ H)+, 776,3 (M - H)’.
Príklad 36
Klonovanie, expresia a čistenie rekombinantnej HCV NS3 proteázy typu lb
Sérum HCV-infikovaných pacientov sa získalo pomocou externej spolupráce (Bernard Budeems MD, Hopital St-Luc, Montreal, Kanada a Dr. Donald Murfy, Laboratoire de Santé Publique du Quebec, Ste-Anne de Bellevue, Kanada). Geneticky inžiniersky pripravená šablóna cDNA úplnej dĺžky HCV genómu sa skonštruovala z DNA fragmentov získaných pomocou reverznej transkripcie-PCR (RT-PCR) sérovej RNA a použitím špecifických primerov vybraných na základe homológie medzi ďalšími genotypmi lb kmeňov. Z určenia úplnej genomovej sekvencie a genotypu lb sa priradil ku HCV izolátu podľa klasifikácie Simmonds a spol. (J. Clin. Microbiol., (1993), 31, str.1493 -1503). Sekvencia aminokyselín neštrukturálnej oblasti, NS2-NS4B sa ukázala ako viac než na 93 % identická ako HCV genotyp lb (BK, JK a 483 izoláty) a na 88 % identická ako HCV genotyp la (HCV1 izolát). DNA fragment kódujúci polyproteínový prekurzor (NS3/NS4A/NS4B/NS5ANS5B) sa generoval pomocou PCR a zaviedol sa do eukaryotických vektorov expresie. Po prechodnej transfekcii, spracovanie polyproteínu sprostredkované pomocou HCV NS3 proteázy sa demonštrovalo prítomnosťou rozvinutého NS3 proteínu použitím Westem-blot analýzy. Rozvinutý NS3 proteín sa nepozoroval s expresiou polyproteínového prekurzora obsahujúceho mutáciu SI 165A, ktorá inaktivuje NS3 proteázu, čo potvrdzuje prítomnosť funkčnej skupiny HCV NS3 proteázy.
DNA fragment kódujúci rekombinantnú HCV NS3 proteázu (aminokyseliny 1027 až 1206) sa klonoval v pETlld bakteriálnom vektore expresie. Expresia NS3 proteázy u E. colli BL21 (DE3)pLysS sa indukovala pomocou inkubácie s 1 mmol/1 IPTG počas 3 hodín pri 22 °C. Typická fermentácia (181) poskytla približne 100 g vlhkej bunkovej pasty. Bunky sa resuspendovali v lýzovacom pufri (3,0 ml/g) pozostávajúcom z 25 mmol/1 fosforečnanu sodného, pH 7,5, 10 % objemových glycerolu, 1 mmol/1 EDTA, 0,01 % NP-40 a uskladnil sa pri -80 °C. Bunky sa roztopili a homogenizovali po prídavku 5 mmol/1 DTT. Potom sa pridal do homogenátu chlorid horečnatý a DN-áza s konečnými koncentráciami 20 mmol/1 a 20 pg/ml. Po 25 minútach inkubácie pri 4 °C sa homogenát opracoval s ultrazvukom a centrifugoval sa pri 15000 x g počas 30 minút pri 4 °C. Hodnota pH supematantu sa potom upravila na 6,5 použitím a roztoku 1 mol/1 fosforečnanu sodného.
Ďalší krok gélovej filtračnej chromatografie sa pridal ku 2 kroku čistiaceho postupu opísaného vo WO 95/22985 (uvádzané v tomto dokumente ako odkaz). Stručne povedané, supematant z bakteriálnych extraktov sa nadávkoval na SP HiTrap kolónu (Pharmacia), ktorá bola vopred uvedená do rovnováhy pri prietokovej rýchlosti 2 ml/min. v pufri A (50 mmol/1 fosforečnanu sodného, pH 6,5, 10 % glycerolu, 1 mmol/1 EDTA, 5 mmol/1 DTT, 0,01 % NP-40). Kolóna sa potom premyla s pufrom A obsahujúcim 0,15 mol/1 NaCI a proteáza sa eluovala pomocou 10 objemov kolóny lineárnym 0,15 až 0,3 mol/1 NaCI gradientom. NS3 proteázu-obsahujúce frakcie sa spojili a zriedili na konečnú NaCI koncentráciu 0,1 mol/1. Enzým sa ďalej čistil na HiTrap Heparin kolóne (Pharmacia) v rovnováhe s pufrom B (25 minút fosforečnanu sodného, pH 7,5, 10 % glycerolu, 5 mmol/1 DTT, 0,01 % NP-40). Vzorka sa naniesla s prietokovou rýchlosťou 3 ml/min. Kolóna sa potom premyla s pufrom B obsahujúcim 0,15 mol/1 NaCI pri prietokovej rýchlosti 1,5 ml/min. Vykonali sa dva kroky premývania v prítomnosti pufra B obsahujúceho 0,3 alebo 1 mol/1 NaCI. Proteáza sa získala v 0,3 mol/1 NaCI premývacom roztoku, zriedila sa 3-krát s pufrom B, znova sa aplikovala na HiTrap Heparin kolónu a eluovala sa pufrom B obsahujúcim 0,4 mol/1 NaCI. Nakoniec sa NS3 proteázu-obsahujúce frakcie aplikovali na Superdex 75 HiLoad 16/60 kolónu (Pharmacia) v rovnováhe s pufrom B obsahujúcim 0,3 mol/1 NaCI. Čistota HCV NS3 proteázy získanej zo spojených frakcií sa posúdila ako väčšia než 95 % podľa SDS-PAGE s denzitometrickou analýzou.
Enzým sa uskladnil pri -80 °C a rozmrazil sa a zriedil tesne pred použitím.
Príklad 37
Rádiometrická skúška rekombinantnej HCV NS3 proteáza/NS4A kofaktorového peptidu.
Enzým sa klonoval, expresoval a pripravil sa podľa postupu opísaného v príklade 36. Enzým sa uskladnil pri -80 °C, roztopil na ľade a zriedil sa tesne pred použitím v testovacom pufri obsahujúcom NS4A kofaktorový peptid.
Substrát použitý pre radiometrickú skúšku NS3 proteázu/NS4A kofaktorového peptidu, DDľVPC-SMSYTW sa štiepi medzi cysteínovými a serínovými zvyškami pomocou enzýmu. Sekvencia DD1VPC-SMSYTW zodpovedá NS5A/NS5B prirodzenému miestu štiepenia, v ktorom cysteínový zvyšok v P2 bol substituovaný za prolín. Peptidový substrát DDIVPC-SMSYTW a stopovací biotin-DDIVPC-SMS[125l-Y)TW sa inkuboval s rekombinantnou NS3 proteázou a NS4A peptidovým kofaktorom KKGSWIVGRIILSGRK (molový pomer enzým : kofaktor 1 : 100) v neprítomnosti alebo v prítomnosti inhibítorov. Oddelenie substrátu od produktov sa vykonalo pomocou pridania avidínom-pokrytých agarózových perličiek do testovanej zmesi, po čom nasledovala filtrácia. Množstvo SMS[1251-Y]TW produktu nájdené vo filtráte dovoľuje výpočet percenta konverzie substrátu percenta inhibície.
A. Činidlá
Tris a Tris-HCl (UltraPure) boli získané od Gibco-BRL. Glycerol (UltraPure), MES a BSA boli kúpené od Sigma. TCEP sa získal od Pierce, DMSO od Aldrich a NaOH od Anachemia.
Skúšobný pufer: 50 mmol/1 Tris HCI, pH 7,5, 30 % (hmotnosť/objem) glycerolu, 1 mg/ml BSA, 1 mmol/1 TCEP (TCEP sa pridal tesne pred použitím z 1 mol/1 zásobného roztoku vo vode).
Substrát: DD1VPCSMSYTW, 25 pmol/l konečnej koncentrácie (z 2 mmol/1 zásobného roztoku v DMSO uskladneného pri -20 °C, aby sa zabránilo oxidácii).
Stopovač: redukovaný monojódovaný substrát biotinu DDIVPC SMS[125I Y]TW (-1 nmol/1 konečná koncentrácia).
HCV NS3 proteáza typ 1 b, 25 nmol/1 konečná koncentrácia (zo zásobného roztoku v 50 mmol/1 fosforečnanu sodného, pH 7,5,10 % glycerol, 300 mmol/1 NaCl, 5 mmol/1 DTT, 0,01 % NP-40).
NS4A Kofaktorový peptid: KKGSWIVGRIILSGRK, 2,5 pmol/l konečná koncentrácia (z 2 mmol/1 zásobného roztoku v DMSO uskladneného pri -20 °C).
B. Postup
Skúška sa vykonávala v 96-kalíškovej polystyrénovej platni od Costar. Každý kališok obsahoval:
μΐ substrát/stopovač v testovacom pufri;
μΐ ± inhibitora v zmesi 20 % DMSO/testovací pufer;
μΐ NS3 proteázy lb/NS4 kofaktorového peptidu (molový pomer 1 : 100).
Blank (bez inhibitora a enzýmu) a kontrolná vzorka (bez inhibitora) boli tiež pripravené na tej istej skúšobnej platni.
Enzymatická reakcia sa iniciovala pomocou prídavku roztoku enzým/NS4A peptid a skúšobná zmes sa inkubovala počas 40 minút pri 23 °C za jemného trepania. Pridalo sa desať (10) μΐ 0,5 mol/1 NaOH a 10 μΐ 1 mol/1 MES, pH 5,8 sa pridalo na zastavenie enzymatickej reakcie.
Dvadsať (20) μΐ avidínom-pokrytých agarózových perličiek (kúpené od Pierce) sa pridalo na Millipore MADP N65 filtračnú platňu. Skúšobná zmes so zastavenou reakciou sa preniesla na filtračnú platňu a inkubovala sa počas 60 minút pri 23 °C za jemného pretrepávania.
Platne sa prefiltrovali použitím zariadenia „Millipore MultiScreen Vacuum Manifold Filtration“ a 40 μΐ filtrátu sa prenieslo na priehľadnú 96-kalíškovú platňu obsahujúcu 60 μΐ scintilačnej kvapaliny na kališok.
Filtráty sa odmerali pomocou Packard TopCount pristroja použitím 12SI-kvapalného postupu za 1 minútu. % inhibície sa vypočítalo pomocou nasledujúcej rovnice:
100 - [(početnosťmh - početnosťbianQ/ťpočetnosťctr-početnosťb^kjx 100)
Preloženie nelineárnej krivky s Hillovým modelom sa aplikovalo na údaje inhibícia-koncentrácia a vypočítala sa hodnota 50 % účinnej koncentrácie (IC50) použitím SAS softvéru (Statistical Soňware Systém; SAS Inštitúte, Inc. Čary, N.C.).
Príklad 38
Skúška heterodimémeho proteínu úplnej dĺžky NS3-NS4A
NS2-NS5B-3' nekódujúca oblasť sa klonovala pomocou RT-PCR do pCR®3 vektora (Invitrogén) použitím RNA extrahovanej zo séra HCV genotyp lb infikovaných jedincov (poskytnuté Dr. Bernard Budeems, Hopital St-Luc, Montreal, Quebec, Kanada). NS3-NS4A DNA oblasť sa potom subklonovala pomocou PCR do pFastBac™ HTa baculovírusového vektora expresie (Gibco/BRL). Vektorová sekvencia zahrnuje oblasť kódujúcu 28-zvyškovú N-terminálnu sekvenciu, ktorá obsahuje hexahistidínovú značku. Bac-to-Bac™ baculovírusový expresný systém (GibcoBRL) sa použil na prípravu rekombinantného baculovírusu. Rozvinutý NS3 a NS4A heterodimérový protein úplnej dĺžky (His-NS3-NS4AFL) sa expresoval pomocou očkovania 106 SÍ21 buniek/ml s rekombinantným baculovírusom pri multiplicite infekcie 0,1 až 0,2 pri 27 °C. Infikovaná kultúra sa zbierala 48 až 64 hodín neskôr pomocou centrifiigácie pri 4 °C. Bunková peleta sa homogenizovala v 50 mmol/1 Na3PO4, pH 7,5, 40 % glycerolu (hmotnosť/objem), 2 mmol/1 β-merkaptoetanolu, v prítomnosti koktailu inhibítorov proteázy. His-NS3-NS4AFL sa potom extrahoval z bunkového lyzátu s 1,5 % NP-40, 0,5 % Triton X-0 100, 0,5 mol/1 NaCl, a DN-ázové opracovanie. Po ultracentrifugácii sa rozpustný extrakt zriedil 4-krát a naviazal sa na Pharmacia Hi-Trap Ni-chelátujúcu kolónu. His-NS3-NS4AFL sa eluoval v >90 % čistej forme (podľa posúdenia pomocou SOS-PAGE), použitím 50 až 400 mmol/1 imidazolového gradienta. His-NS3-NS4AFL sa uskladnil pri -80 °C v 50 mmol/1 fosforečnanu sodného, pH 7,5, 10 % (hmotnosť/objem) glycerolu, 0,5 mol/1 NaCl, 0,25 mol/1 imidazolu, 0,1 % NP-40. Roztopil sa na ľade a zriedil sa tesne pred použitím.
Aktivita proteázy His-NS3-NS4AFL sa testovala v 50 mmol/1 Tris-HCl, pH 8,0, 0,25 mol/1 citran sodný, 0,01 % (hmotnosť/objem) n-dodecyl-3-D-maltozid, 1 mmol/1 TCEP. Päť (5) pmol/l interne zastaveného substrátu antranilyl-DDlVPAbu[C(O)-O]-AMY(3 NO2)TW-OH v prítomnosti rôznych koncentrácií inhibítora sa inkubovalo s 1,5 nmol/1 His-NS3-NS4AFL počas 45 minút pri 23 °C. Konečná DMSO koncentrácia nepresahovala 5,25 %. Reakcia sa ukončila s prídavkom 1 mol/1 MES, pH 5,8. Fluorescencia N-terminálneho produktu sa monitorovala pomocou Perkin-Elmer LS50B fluorimetra vybaveného s čítacom 96-kalíškovej platne (excitačná vlnová dĺžka: 325 nm; emisná vlnová dĺžka: 423 nm).
% inhibície sa vypočítalo pomocou nasledujúcej rovnice:
100 - [(početnosťjnh - početnosťb|ank)/(početnosťctr-početnosťbIaill:)x 100)
Preloženie nelineárnej krivky s Hillovým modelom sa aplikovalo na údaje inhibícia-koncentrácia, a vypočítala sa hodnota 50 % účinnej koncentrácie (IC50) použitím SAS softvéru (Statistical Software Systém; SAS Inštitúte, Inc. Čary, N.C.).
Príklad 39
Bunková skúška NS3 Proteázy
Táto skúška sa urobila s Huh-7 bunkami, kmeň ľudských buniek získaný z hepatómu, ko-transfekovanými s 2 DNA konštruktormi:
- jeden expresujúci polyproteín obsahujúci HCV neštrukturálne proteíny kondenzované na tTA v nasledujúcom poradí: NS3-NS4A-NS4B-NS5A-tTA (nazývaný NS3);
- ďalší expresujúci oznamovací (reportér) proteín, vylučujúci alkalickú fosfatázu, za kontroly tTA (nazývaný SEAP).
Polyproteín sa musí štiepiť NS3 proteázou, aby sa uvoľnili rozvinuté proteíny. Na uvoľnenie rozvinutých proteínov sa predpokladá, že vírusové proteíny budú tvoriť komplex v membráne endoplazmického retíkula, pričom tTA bude migrovať do jadra a transaktivovať SEAP gén. Preto by zníženie NS3 proteolytickej aktivity malo viesť ku zníženiu rozvinutej tTA hladín a súbežný pokles SEAP aktivity.
Na kontrolu ďalších účinkov látky sa urobila paralelná transfekcia, pri ktorej sa konštruktor expresujúci tTA samotný (nazývaný tTA) ko-transfekoval s SEAP konštruktorom, takže SEAP aktivita je nezávislá od NS3 proteolytickej aktivity.
Postup skúšky: Huh-7 bunky, pestované v CHO-SFMII + 10 % FCS (fetálne teľacie sérum), boli kotransfekované buď s NS3 a SEAP, alebo tTA a SEAP, použitím FuGene postupu (Boehringer Mannheim). Po 5 hodinách pri 37 °C sa bunky premyli, trypsinizovali a naniesli (80000 buniek/kalíšok) na 96-kalíškové platne obsahujúce škálu koncentrácií testovanej látky. Po 24-hodinovej inkubácii sa odobral alikvót prostredia a v tomto alikvóte sa merala SEAP aktivita s PhosPha-Light kitom (Tropix).
Analýza percenta inhibície SEAP aktivity vzhľadom na koncentráciu látky sa vykonala pomocou SAS softvéru, čím sa získali hodnoty EC50.
Toxicita látky (TC50) sa potom hodnotila použitím MTT skúšky takto:
μΐ MTT roztoku (5 mg/ml prostredia) sa pridal na kalíšok a inkubovalo sa pri 37 °C počas 4 hodín; prostredie sa odstránilo a pridalo sa 50 μΐ 0,01 mol/1 HCI + 10 % Triton X-100; po pretrepávaní pri RT počas najmenej 1 hodiny sa odčítala optická hustota v každom kalisku pri vlnovej dĺžke 595 nm.
TC50 sa vypočítalo rovnakým spôsobom ako EC50,
Príklad 40
Skúšky špecificky
Špecificita látky sa určila oproti rôznym serínovým proteázam: ľudská leukocytová elastáza, pankreatická elastáza ošípaných a hovädzí pankreatický α-chymotrypsín a jedna cysteínová proteáza: ľudský pečeňový katepsín B. Vo všetkých prípadoch sa použil postup s 96-kalíškovou platňou použitím kolorimetrického p-nitroanilínového (pNA) substrátu špecifického pre každý enzým. Každá skúška zahrnovala 1 hodinu predinkubácie enzým-inhibítor pri 30 °C, po čom nasledoval prídavok substrátu a hydrolýza na asi 30 % konverziu, podľa merania pomocou čítača mikroplatní UV Thermomax®. Substrátová koncentrácia sa udržiavala tak nízka, ako to bolo možné vzhľadom na KM, aby sa znížila konkurencia substrátu. Látková koncentrácia sa menila od 300 do 0,06 pmol/l, v závislosti od účinnosti látky.
Konečné podmienky pre každú skúšku boli nasledujúce:
mmol/1 Tris-HCI, pH 8, 0,5 mol/1 Na2S04, 50 mmol/1 NaCl, 0,1 mmol/1 EDTA, 3 % DMSO, 0,01 % Tween-20;
[100 pmol/l Succ-AAPF-pNA a 250 pmol/1 a-chymotrypsínu], [133 pmol/l Succ-AAA-pNA a 8 nmol/1 elastázy ošípaných], [133 pmol/l Succ-AAV-pNA a 8 nmol/1 leukocytovej elastáza]; alebo [100 mmol/1 Na2HPO4 pH 6, 0,1 mmol/1 EDTA, 3 % DMSO, 1 mmol/1 TCEP, 0,01 % Tween20, 30 pmoVl Z-FR-pNA a 5 nmol/1 katepsín B (zásobný enzým sa aktivoval v pufri obsahujúcom 20 mmol/1 TCEP pred použitím)].
Reprezentatívny príklad je sumarizovaný pre pankreatickú elastázu ošípaných:
Do polystyrénovej 96-kalíškovej platne s plochým dnom sa pridalo použitím Biomek dávkovača kvapalín (Beckman):
μΐ testovacieho pufra (50 minút Tris-HCI pH 8, 50 mmol/1 NaCl, 0,1 mmol/1 EDTA);
μΐ enzýmového roztoku (50 minút Tris-HCI pH 8, 50 mmol/1 NaCl, 0,1 mmol/1 EDTA, 0,02 % Tween-20, 40 nmol/1 pankreatickej elastázy ošípaných); a μΐ roztoku inhibítora (50 minút Tris-HCI, pH 8, 50 mmol/1 NaCl, 0,1 mmol/1 EDTA, 0,02 % Tween20, 1,5 mmol/1-0,3 pmol/l inhibítora, 15 % objemových DMSO).
Po 60 minútach pred-inkubácie pri 30 °C sa pridalo 20 μΐ substrátového roztoku (50 minút Tris-HCI, pH 8, 0,5 mol/1 Na2S04, 50 mmol/1 NaCl, 0,1 mmol/1 EDTA, 665 pmol/l Succ-AAA-pNA) do každého kalíška a reakčná zmes sa ďalej inkubovala pri 30 °C počas 60 minút, po tomto čase sa absorbancia odčítala pomocou UV Thermomax® čítača platní. Rady kalíškov boli obsadené kontrolnými vzorkami (bez inhibítora) a blankmi (bez inhibítora a bez enzýmu).
Sekvenčné 2-násobné zriedenia roztoku inhibítora sa vykonali na oddelenej platni pomocou dávkovača kvapalín použitím 50 mmol/1 Tris-HCI pH 8, 50 mmol/1 NaCl, 0,1 mmol/1 EDTA, 0,02 % Tween-20, 15 % DMSO, všetky ďalšie skúšky špecificity boli vykonané podobným spôsobom.
Percentá inhibície sa vypočítali použitím vzorca:
[1- ((UVw.-UVi.fanO/ÍUVcrUVbtaj,))] x 100
Preloženie nelineárnej krivky s Hillovým modelom sa aplikovalo na údaje inhibícia-koncentrácia, a vypočítala sa hodnota 50 % účinnej koncentrácie (IC5o) použitím SAS softvéru (Statistical Software Systém; SAS Inštitúte, Inc. Čary, N.C.).
Tabuľky látok
Nasledujúce tabuľky uvádzajú látky predstavujúce tento vynález. Látky podľa tohto vynálezu sa skúšali buď v jednej alebo oboch skúškach príkladov 37 a 38 a zistilo sa, že sú aktívne s IC50 pod 50 pmol/l (A); pod 5 pmol/l (B) alebo pod 0,5 pmol/1 (C).
Aktivita v bunkách a špecificita
Reprezentatívne látky podľa tohto vynálezu sa tiež testovali v náhradnej bunkovej skúške z príkladu 39, a v jednej alebo viacerých skúškach príkladu 40. Napríklad sa zistilo, že látka 601 z tabuľky 6 má IC50 50 nmol/1 v skúške z príkladu 37 a 30 nmol/1 v skúške z príkladu 38. EC5a podľa určenia pomocou skúšky z príkladu 39 je 8,2 pmol/l. V skúškach špecificity z príkladu 40 sa zistili pre tie isté látky nasledujúce aktivity: HLE >75 pmol/l; PRE >75 pmol/l; a-Chym. >75 pmol/l; Cat. B >75 pmol/l. Tieto výsledky ukazujú, že táto rodina látok je vysoko špecifická pre NS3 proteázu a aspoň niektoré členy tejto rodiny sú aktívne v náhradnom bunkovom teste.
V týchto tabuľkách sú použité nasledujúce skratky:
MS: údaje hmotnostnej spektrometrie; Ac: acetyl; Bn: benzyl; Boe: íerc-butyloxy-karbonyl; cHex: cyklohexyl; Chg: cyklohexylglycín (kyselina 2-amino-2- cyklohexyl-octová); iPr: izopropyl; O-Bn: benzyloxyskupina; Ph: fenyl: terc-Bu: íerc-butyl; Tbg: terc-butylglycín; 1- alebo 2-Np: 1- alebo 2-naftyl; 1- alebo 2NpCH20:1, alebo 2-naftylmetoxyskupina..
Tabuľka 1
R*
Tab 1 Látka č. B R3 R2 MS rozsah aktivity
101 Boe cHex -O-CH2-l-naftyl 594 A
102 cHex -O-CH2-l-naftyl 632 A
Tab 1 Látka č. B R3 R2 MS rozsah aktivity
103 cHex -O-CH2-1-naftyl 642 A
104 cHex -O-CH2-1-naftyl 728 A
105 OA cHex -O-CH2-1 -naftyl 619 A
106 Boe cHex R 702 B
107 Cl cHex -O-CH2-1 -naftyl 720 M+Na+ A
108 Boe iPr z° 662 A
109 acetyl cHex (Θ1 N _ •S©. 644 A
110 Boe i-Pr 575,1 A
111 Boe terc-Bu / o (T\ ť? 661,3 C
Tabuľka 2
R2
Tab. 2 Látka č. B R3 R2 R1 anti ku karboxylu MS Rozsah aktivity
201 Boe cyklohexyl -O-CH2-1-naftyl etyl Geden izomér) 622 A
202 Boe cyklohexyl -O-CH2-1 -naftyl etyl (ďalší izomér) 622 A
203 Boe terc-Bu vinyl 1R,2R 687,5 C
Tabuľka 3
Tab. 3 Látka č. B R3 R2 R1 syn ku karboxy MS Rozs. aktivity
301 Boe cHex -O-CH2-1-naftyl etyl 622 A
302 iPr -O-CH2-1-naftyl etyl 582 A
303 0 cHex -O-CH2-1 -naftyl etyl 622 A
304 Boe cHex β© N ^och] vinyl 623 A
305 Boe cHex -O-CHz-1 -naftyl vinyl 620 B
306 Boe cHex vinyl 607 B
307 Boe cHex vinyl 728 C
308 Boe cHex vinyl 606 B
309 Boe cHex >3© vinyl 606 B
310 Boe cHex vinyl 607 B
311 Boe cHex igfô) vinyl 641 B
312 Boe cHex (0(9 z6 vinyl 607 A
313 Boe cHex T vinyl 621 B
Tab. 3 Látka č. B R3 R2 R1 syn ku karboxy MS Rozs. aktivity
314 Boe cHex vinyl 683 C
315 Boe cHex nh, vinyl 698 B
316 Acetyl cHex vinyl 625 B
317 Boe cHex o OQa vinyl 740 C
318 CF3-C(O)- iPr vinyl 639,3 B
319 Ax cHex % A vinyl 732,3 C
320 ¥ O x 1 cHex 0χχ vinyl 704,3 B
321 Boe terc-Bu θΌΟ / vinyl 658,7 C
322 Boe terc-Bu VF’ Z vinyl 717,6 B
323 Boe terc-Bu θΌΟ Z A 672,4 B
SK 286994 Β6
Tab. 3 Látka č. B R3 R2 R* syn ku karboxy MS Rozs. aktivity
324 Boe terc-Bu Vinyl 727,5 C
325 Boe terc-Bu X/NX A 701,4 C
326 Boe terc-Bu /=\ n<. JL ľ vinyl 708,3 C
327 H terc-Bu jer vinyl 610,3 C
328 Boe terc-Bu vinyl 615,3 B
329 Boe terc-Bu vinyl 685,3 C
330 Boe terc-Bu CO^ vinyl 627,5 A
331 χΛ H terc-Bu vinyl 656,5 C
332 Boe terc-Bu etyl 689,3 C
333 ϋΆ terc-Bu Ž vinyl 778,3 C
334 terc-Bu rjer vinyl 764,4 C
SK 286994 Β6
Tabuľka 4
Tab. 4 Látka č. B R3 R2 R1 syn ku karboxy MS Rozsah aktivity
401 Boe iPr tofô] J H 589,1 A
402 Boe ŕerc-Bu W) z H 603,6 A
403 Boe ŕerc-Bu z H 675,4 C
404 Boe ŕerc-Bu z° H 675,4 C
404 Boe ŕerc-Bu Z 3-(=CH2) 687,1 B
405 Boe ŕerc-Bu LxJJLZ 2-vinyl 702;3 C
406 Boe ŕerc-Bu /° 2-Et 703,3 C
SK 286994 Β6
Tabuľka 5
O
Tab.3 Látka č. R3 MS Rozsah aktivity
501 íerc-Bu 581,3 C
502 H 639,2 A
503 Ť Ύ 625,3 B
504 o— * * * 582% B
505 o— Λ 583,2 B
506 0. Ύ 659,2 B
507 Ύ° 670,2 B
508 703,3 B
509 ý- 581,3 C
510 Ý 581,2 C
511 637,2 B
SK 286994 Β6
Tabuľka 6
Tab. 6 Látka č. R3 r2’a r21B MS Rozsah aktivity
601 i-Pr Ph 7-OMe 673,3 C
602 terc-Bu Ph 8-OMe 7-OMe 717,2 C
603 i-Pr Ph 7-etyl 671,2 C
604 terc-Bu — 7-OMe 611,2 c
605 terc-Bu Ph 7-O-iPr 715,3 c
606 terc-Bu — 7-C1 6152 c
607 i-Pr - 7-C1 601,2 c
608 CH2-iPr — 7-C1 615,3 B
609 terc-Bu o - 680,2 B
610 terc-Bu Cl — 613,3 C
611 terc-Bu Ph 7-N(Me)2 700,5 C
612 terc-Bu o. 666,4 C
613 terc-Bu <λ 650,4 B
614 terc-Bu Q, 664,5 B
615 terc-Bu — 7-N(Me)2 624,5 C
616 terc-Bu 678,4 (M-H)+ C
617 terc-Bu o- 664,5 C
618 terc-Bu Me Me— 638,5 B
619 terc-Bu r Me— 700,5 B
620 terc-Bu Me>. c< 679,5 C
621 terc-Bu “Yr 678,3 C
622 terc-Bu Mez'Ko<'^ 625,4 C
Tab. 6 Látka č. R3 R2,A r21B MS Rozsah aktivity
623 terc-Bu MeO- 611,3 C
624 terc-Bu (Me)2N- 624,4 B
625 terc-Bu Ph 7-S(Me) 703,4 C
626 terc-Bu Ph 7-Br 737,3 C
627 terc-Bu Ph 7-F 675,3 C
628 terc-Bu η!Ύτ 7-N(Me)2 764,2 C
629 terc-Bu 7-N(Me)2 764,3“ C
630 terc-Bu % 7-N(Et)2 792,3 C
Tabuľka 7
O
Tab. 7 Látka č. R3 R21A MS Rozsah aktivity
701 terc-Bu 691,3 C
702 terc-Bu Ph-- 713,4 C
703 terc-Bu 655,3 C
704 terc-Bu cPx 728,4 C
705 terc-Bu 696,4 C
706 terc-Bu čr 693,3 C
707 terc-Bu 694,3 C
708 terc-Bu Ph-N(Me)- 716,4 C
Tab. 7 Látka č. R3 R21A MS Rozsah aktivity
709 íerc-Bu 709,2 C
710 terc-Bu HOOC- 655,3 B
711 terc-Bu U 708,2 C
712 terc-Bu (Me)2N- 654,3 C
713 terc-Bu X 692,3 (M-H) C
714 terc-Bu Eiľr 722,3 C
715 terc-Bu «X 688,3 C
716 terc-Bu .N. a 688,3 C
717 terc-Bu Me \ N W 723,3
718 terc-Bu nh2 626,3 C
719 terc-Bu H N ΥΎ-Τ 751,2 C
720 terc-Bu N==/ 733,4 C
721 terc-Bu 724,1 C
722 terc-Bu 737,3 C
723 terc-Bu ύ N W 751,4 C
724 terc-Bu 708,4 c
725 terc-Bu N^N 689,4 c
726 terc-Bu i-Pr 653,3 c
SK 286994 Β6
Tab. 7 Látka č. R3 R21A MS Rozsah aktivity
727 terc-Bu a 688,3 C
728 terc-Bu 786,1 C
729 terc-Bu c? 689,3 C
730 terc-Bu Y 669,2 c
731 terc-Bu 669,2 c
732 terc-Bu 791,0 c
733 terc-Bu 765,3 c
734 terc-Bu 671,3 c
735 terc-Bu 683,3 c
736 terc-Bu /erc-Bu 667,4 c
737 terc-Bu cHex 693,4 c
Tabuľka 8
Tab. 8 Látka č. B R3 R22 MS Rozsah aktivity
801 terc-Bu - 686,7 C
Tab.8 Látka č. B R3 R22 MS Rozsah aktivity
802 ô ŕerc-Bu -- 727,7 C
803 terc-Bu - 685,7 C
804 terc-Bu - 711,7 C
805 Ac terc-Bu — 629,6 C
806 terc-Bu - 725,7 C
807 AA H terc-Bu - 672,4 C
808 Οχ H terc-Bu - 712,4 C
809 CA iPr - 649,3 C
810 terc-Bu - 749,3 C
811 Boe terc-Bu 4-C1 721,3 C
812 αχ w terc-Bu - 706,2 C
813 XA H terc-Bu - 702,2 C
814 Boe terc-Bu 2-C1 721,3 C
815 Boe terc-Bu 3-C1 721,3 C
816 H terc-Bu - 658,3 C
817 terc-Bu - 720,2 C
818 Οχ w terc-Bu - 728,3 C
819 iPr - 762,3 C
820 iPr - 732,2 C
SK 286994 Β6
Tab. 8 Látka č. B R3 R22 MS Rozsah aktivity
821 ó. iPr - 679,1 C
822 1 iPr - 663,3 C
823 Boe terc-Bu 2-OMe 717,2 C
824 Boe terc-Bu 3-OMe 719,2 C
825 Boe terc-Bu 4-OMe 719,2 C
826 OL· terc-Bu - 663,3 B
827 -TA H terc-Bu -- 673,2 C
828 terc-Bu -- 691,3 C
829 φα Me H terc-Bu -- 734,3 C
830 Uk terc-Bu - 645,3 C
831 W» ο VA terc-Bu - 701,3 C
832 M· O terc-Bu - 801,3 C
833 terc-Bu - 715,2 c
834 A iPr - 663,3 c
835 Me. JM» j? B terc-Bu - 702,5 c
836 iPr - 694,4 c
837 Xk iPr - 683,3 c
838 iPr - 679,1 c
SK 286994 Β6
Tab.8 Látka č. B R3 R22 MS Rozsah aktivity
839 O. iPr -- 667,4 C
840 xk i-Pr - 667,4 C
841 Boe ŕerc-Bu 2-Me 701,5 C
842 Boe ŕerc-Bu 3-Me 701,5 C
843 Boe ŕerc-Bu 4-Me 701,5 C
844 xA H ŕerc-Bu 4-OMe 716,6 C
845 i-Pr - 706,9 C
846 <Xk i-Pr - 693,4 C
847 Boe cHex — 713,4 c
848 Boe A - 687,5 c
849 Boe A - 701,5 c
850 Boe - 731,5 c
851 Boe Ý - 689,5 c
852 Boe O— - 689,5 c
853 Boe °Y 765,5 c
854 iPr 723,4 (M-H)+ c
855 iPr - 693,3 c
856 iPr - 688,3 c
857 H ŕerc-Bu - 716,4 c
858 aA 1 Me ŕerc-Bu - 700,4 c
SK 286994 Β6
Tab. 8 Látka č. B R3 R22 MS Rozsah aktivity
859 a iPr - 655,4 B
860 Xuo, iPr - 759,3 C
861 iPr - 688,3 C
862 Á iPr - 685,3 C
863 CO, iPr - 699,4 C
864 a iPr -- 667,3 C
865 terc-Bu - 701,4 C
866 terc-Bu -- 702,4 C
867 O,Ä terc-Bu - 701,3 C
868 OA terc-Bu - 713,3 C
869 <o. terc-Bu - 699,4 C
870 H terc-Bu - 700,4 C
871 H terc-Bu - 714,3 C
872 BA terc-Bu - 714,4 C
873 terc-Bu - 714,3 C
SK 286994 Β6
Tabuľka 9
Tab. 9 Látka č. B MS Rozsah aktivity
901 Boe 685,3 C
902 825,4 C
903 Ô' 769,3 C
904 OĎ 707,3 C
905 685,2 C
906 728,2 C
907 O-A 717,2 C
908 Z 691,2 C
909 ZV cr- 727,2 C
910 715,3 c
911 •χΖ 721,3 c
912 733,2 c
SK 286994 BŔ
Tab. 9 Látka č. B MS Rozsah aktivity
913 OA 713,3 C
914 H 805,3 C
915 692,2 C
916 94 680,3 C
Tabuľka 10
Tab. 10 Látka č. B-X- R3 Z R21B MS Rozsah aktivity
1001 Ph-N(Me)- i-Pr O H 663,3 C
1002 Boc-NH- íerc-Bu S OMe 703,4 C
1003 0^. Me i-Pr O - 663,3 C
PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (29)

1. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) vrátane racemátov, diastereoizomérov a optických izomérov kde B je H, C6 alebo Ci0 aryl, C7.i6 tuované so substituentmi: Ci_6 alkyl; Cw alkoxyl; Cw alkanoyl; hydroxyl; hydroxyalkyl; halogén; halogénalkyl; nitroskupina; kyanoskupina; kyanoalkyl; aminoskupina voliteľne substituovaná s Ct.6 alkylom; amid; alebo (nižší alkyljamid;
SK 286994 Β6 alebo B je karboxyl vzorca R4-O-C(O)-; amid vzorca R4-N(R5)-C(O)-; tioamid vzorca R4-N(R5)-C(S)-; alebo sulfonyl vzorca R4-SO2, kde
R4je (i) C140 alkyl voliteľne substituovaný s karboxylom, Ci.6 alkanoylom, hydroxylom, Ci_6 alkoxylom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di-substituovanou s alkylom, amidom, alebo (nižší alkyl)amidom;
(ii) C3.7 cykloalkyl, C3.7 cykloalkoxyl, alebo C4.io alkylcykloalkyl, všetky voliteľne substituované s hydroxylom, karboxylom, (Ci.6 alkoxyjkarbonylom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di-substituovanou s Ct.6 alkylom, amidom, alebo (nižší alkyl)amidom;
(iii) aminoskupina voliteľne mono- alebo di-substituovaná s Cw alkylom; amido-skupina; alebo (nižší alkyl)amid;
(iv) C6 alebo C10 aryl alebo C7_i6 aralkyl, všetky voliteľne substituované s Ci_6 alkylom, hydroxylom, amidom, (nižší alkyljamidom, alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo di-substituovanou s Ci_6 alkylom; alebo (v) Het alebo (nižší alkyl)-Het, oba voliteľne substituované s Ci_6 alkylom, hydroxylom, amidom, (nižší alkyljamidom, alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo di-substituovanou s Ci_6 alkylom;
R5 je H alebo Ci_6 alkyl;
alebo B je acylderivát vzorca R4-C(O)-, v ktorom
R4je (i) C|_io alkyl voliteľne substituovaný s karboxylom, Ci_6 alkanoylom, hydroxylom, Ci_6 alkoxylom alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo di-substituovanou s C alkylom;
(ii) C3.7 cykloalkyl, C3.7 cykloalkoxyl, alebo C4_io alkylcykloalkyl, všetky voliteľne substituované s hydroxylom, karboxylom, (Ci_6 alkoxyjkarbonylom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di-substituovanou s Ci.6 alkylom;
(iii) aminoskupina voliteľne mono- alebo di-substituovaná s C]_6 alkylom;
(iv) C6 alebo C10 aryl alebo C7_i6 aralkyl, všetky voliteľne substituované s C!.6 alkylom, hydroxylom alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo di-substituovanou s Cw alkylom; alebo (v) Het alebo (nižší alkyl)-Het, oba voliteľne substituované s C alkylom, hydroxylom alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo di-substituovanou s Ci_6 alkylom;
s výhradou, že keď B ie amid alebo tioamid, R4 nie je (ii) cykloalkoxyl; a
YjeHalebo Cw alkyl;
R3je C|.g alkyl, C3.7 cykloalkyl alebo C4_10 alkylcykloalkyl, všetky voliteľne substituované s hydroxylom, Ct.6 alkoxylom, Ci-6 tioalkylom, amidoskupinou, (nižší alkyl)amidoskupinou, C6 alebo Cm arylom, alebo C7_m aralkylom;
R2 je CH2-R20, NH-R20, O-R20 alebo S-R20, kde R20 je nasýtený alebo nenasýtený C3.7 cykloalkyl alebo C4.m (alkylcykloalkyl), z ktorých všetky sú voliteľne mono-, di- alebo trisubstituované s R21, alebo
R20 je C6 alebo Cm aryl alebo C7_i4 aralkyl, všetky voliteľne mono-, di- alebo tri-substituované s R21, alebo R20 je Het alebo (nižší alkyl)-Het, oba voliteľne mono-, di- alebo tri-substituované s R21, kde každý R21 je nezávisle Ci.6 alkyl; Ci_6 alkoxyl; nižší tioalkyl; sulfonyl; NO2; OH; SH; halogén; halogénalkyl; aminoskupina voliteľne mono- alebo di- substituovaná s Ci_6 alkylom, C6 alebo C10 arylom, C7.i4 aralkylom, Het alebo (nižší alkyl)-Het; amidoskupina voliteľne monosubstituovaná s Ci_6 alkylom, C6 alebo Cm arylom, C7.i4 aralkylom, Het alebo (nižší alkyl)-Het; karboxyl; karboxy(nižší alkyl); C6 alebo Cm aryl, C7.i4 aralkyl alebo Het, uvedený aryl, aralkyl alebo Het je voliteľne substituovaný s R, kde R22 je C1.6 alkyl; C3.7 cykloalkyl; Ci_6 alkoxyl; aminoskupina voliteľne mono- alebo di-substituovaná s C j.alkylom; sulfonyl; (nižší alkyl)sulfonyl; NO2; OH; SH; halogén; halogénalkyl; karboxyl; amid; (nižší alkyl)amid; alebo Het voliteľne substituovaný s Cj.6 alkylom,
R1 je H, Ct.6 alkyl, C3.7 cykloalkyl, C2.6 alkenyl, alebo C2_6 alkinyl, všetky voliteľne substituované s halogénom;
pričom (nižší)alkyl, buď samostatne alebo v kombinácii s iným substituentom, znamená acyklické alkylové substituenty s priamym alebo rozvetveným reťazcom, obsahujúce 1 až 6 atómov uhlíka;
amino aralkyl, buď samostatne alebo v kombinácii s iným radikálom, znamená aminoskupinu substituovanú C7.15arylkylovou skupinou;
(nižší alkyl)amid, buď samostatne alebo v kombinácii s iným radikálom, znamená amidovú skupinu monosubstituovanú s Ci_6alkylom, karboxy(nižší) alkyl, buď samostatne alebo v kombinácii s iným radikálom, znamená karboxylovú skupinu (COOH) pripojenú prostredníctvom (nižšej)alkylovej skupiny, ako je definovaná,
Het znamená monovalentný radikál odvodený odstránením vodíka z päť-, šesť- alebo sedemčlennej nasýtenej alebo nenasýtenej vrátane aromatickej, heterocyklickej zlúčeniny obsahujúcej jeden až štyri heteroatómy vybrané zo skupiny obsahujúcej dusík, kyslík a síru, alebo heterocyklickú zlúčeninu, ako je definovaná, fuzovanú s jedným alebo viacerými inými cyklickými zlúčeniami; a
SK 286994 Β6 (nižší alkyl)-Het znamená heterocyklický radikál, ako je definovaný vyššie pre Het, pripojený prostredníctvom reťazca alebo rozvetvenej alkylovej skupiny, pričom alkyl, ako je definovaný, obsahuje 1 až 6 atómov uhlíka;
alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery.
2. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 1, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery, kde
B je C6 alebo C10 aryl alebo C7.|6 aralkyl, všetky voliteľne substituované s Cw alkylom, alkoxylom, alkanoylom, hydroxylom, hydroxyalkylom, halogénom, halogénalkylom, nitroskupinou, kyanoskupinou, kyanoalkylom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidoskupinou, alebo aminoskupinou voliteľne substituovanou s Ci.6 alkylom; alebo
B je Het alebo (nižší alkyl)-Het, všetky voliteľne substituované s C|.6 alkylom, Ci_6 alkoxylom, Ci_« alkanoylom, hydroxylom, hydroxyalkylom, halogénom, halogénalkylom, nitroskupinou, kyanoskupinou, kyanoalkylom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidoskupinou, alebo aminoskupinou voliteľne substituovanou s Cw alkylom.
3. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 1, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery, kde B je R4-SO2, kde R4 je Ομ6 alkyl; amidoskupina; (nižší alkyljamid; C6 alebo C10 aryl, C744 aralkyl alebo Het, všetky voliteľne substituované s C,.6 alkylom.
4. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 1, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery, kde B je acylový derivát vzorca R4-C(O)- kde R4 je (i) Cj.io alkyl voliteľne substituovaný s karboxylom, hydroxylom alebo alkoxylom, alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s alkylom;
(ii) C3.7 cykloalkyl alebo C4.10 alkylcykloalkyl, oba voliteľne substituované s hydroxylom, karboxylom, (Ci_6 alkoxyjkarbonylom alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Cw alkylom;
(iv) C6 alebo C10 aryl alebo C7_i6 aralkyl, všetky voliteľne substituované s Cw alkylom, hydroxylom alebo aminoskupinou voliteľne substituovanou s Cb6 alkylom;
(v) Het alebo (nižší alkyl)-Het, oba voliteľne substituované s Cw alkylom, hydroxylom alebo aminoskupinou voliteľne substituovanou s C 1.6 alkylom.
5. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 1, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery, kde B je karboxyl vzorca R4-O-C(O)-, kde R4 je (i) Ci_io alkyl voliteľne substituovaný s karboxylom, Ci.6 alkanoylom, hydroxylom, C|.6 alkoxylom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Cw alkylom, amidoskupinou alebo (nižší alkyljamidom;
(ii) C3.7 cykloalkyl, C4.10 alkylcykloalkyl, všetky voliteľne substituované s karboxylom, (Ci_6 alkoxy)-karbonylom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s C[_6 alkyl, amidoskupinou alebo (nižší alkyl)amidom;
(iv) C6 alebo C10 aryl alebo C7.16 aralkyl voliteľne substituovaný s Ci_6 alkylom, hydroxylom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidoskupinou, alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Cw alkylom; alebo (v) Het alebo (nižší alkyl)-Het, oba voliteľne substituované s Cw alkylom, hydroxylom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Ci_6 alkylom, amidoskupinou alebo (nižší alkyljamidoskupinou.
6. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 1, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery, kde B je amid vzorca R4-N(R5)-C(O)-, kde R4 je (i) C|.io alkyl voliteľne substituovaný s karboxylom, alkanoylom, hydroxylom, Cw alkoxylom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidoskupinou, alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s C,.6 alkylom;
(ii) C3_7 cykloalkyl alebo C4.i0 alkylcykloalkyl, všetky voliteľne substituované s karboxylom, (Ci_6 alkoxyjkarbonylom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidoskupinou alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo disubstituovanou s Cb6 alkylom;
(iii) aminoskupina voliteľne mono- alebo di- substituovaná s Cj.3 alkylom;
(iv) C6 alebo C10 aryl alebo C7.ie aralkyl, všetky voliteľne substituované s C i_6 alkylom, hydroxylom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidom, alebo aminoskupinou voliteľne substituovanou s Ci_6 alkylom; alebo (v) Het alebo (nižší alkyl)-Het, oba voliteľne substituované s C].„ alkylom, hydroxylom, aminoskupinou voliteľne substituovanou s C|.6 alkylom, amidoskupinou alebo (nižší alkyljamidom;
a R5 je H alebo metyl.
7. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 1, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery, kde B je a tioamid vzorca R4-NH-O(S)-; kde R4 je (i) C|.io alkyl voliteľne substituovaný s karboxylom, Cw alkanoylom alebo Ci_6 alkoxylom;
(ii) C3.7 cykloalkyl alebo C4.i0 alkylcykloalkyl, všetky voliteľne substituované s karboxylom, (C|.6 alkoxyjkarbonylom, aminoskupinou alebo amidoskupinou.
SK 286994 Β6
8. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 2, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery, kde B je C6 alebo C]0 aryl voliteľne substituovaný s Ci_6 alkylom, Cb6 alkoxylom, C,_6 alkanoylom, hydroxylom, hydroxyalkylom, halogénom, halogénalkylom, nitroskupinou, kyanoskupinou, kyanoalkylom, amidom, (nižší alkyljamidom, alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo di-substituovanou s Cb6 alkylom.
9. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 2, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery, kde B je Het voliteľne substituovaný s Ci_6 alkylom, Ci_6 alkoxylom, Ci_6 alkanoylom, hydroxylom, halogénom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidom, alebo aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Ci_6 alkylom.
10. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 4, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery, kde B je acylový derivát vzorca R4-C(O)- kde R4 je (i) Ci.io alkyl voliteľne substituovaný s karboxylom, hydroxylom alebo Ci.6 alkoxylom; alebo (ii) C3.7 cykloalkyl alebo C4.10 alkylcykloalkyl, oba voliteľne substituované s hydroxylom, karboxylom, (Cbí alkoxyjkarbonylom, alebo (iv) C6 alebo Ci0 aryl alebo C7.i6 aralkyl, všetky voliteľne substituované s Cw alkylom, hydroxylom, alebo (v) Het voliteľne substituovaný s Cb6 alkylom, hydroxylom alebo aminoskupinou.
11. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 5, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery, kde B je karboxyl vzorca R4-O-C(O)-, kde R4 je (i) Cmo alkyl voliteľne substituovaný s karboxylom, Cb6 alkanoylom, hydroxylom, Ci.6 alkoxylom alebo amidoskupinou, (nižší alkyljamidom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Ci_6 alkylom;
(ii) C3.7 cykloalkyl, C4_i0 alkylcykloalkyl, všetky voliteľne substituované s karboxylom, (Ci.6 alkoxyjkarbonylom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Ci_6 alkylom, alebo (iv) C6 alebo C]0 aryl alebo C7.16 aralkyl, všetky voliteľne substituované s Ci.6 alkylom, hydroxylom, aminoskupinou voliteľne substituovanou s Cw alkylom; alebo (v) Het alebo (nižší alkyl)-Het, oba voliteľne substituované s Ci_6 alkylom, hydroxylom, amidoskupinou, alebo aminoskupinou voliteľne mono-substituovanou s Cb6 alkylom.
12. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 6, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery, kde B je amid vzorca R4-N(R5)-C(O)-, kde R4 je (i) Cmo alkyl voliteľne substituovaný s karboxylom, Cw alkanoylom, hydroxylom, Cμ6 alkoxylom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Ci_6 alkylom;
(ii) C3_7 cykloalkyl alebo C4.10 alkylcykloalkyl, všetky voliteľne substituované s karboxylom, (C].6 alkoxyjkarbonylom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s C 1.6 alkylom;
(iii) aminoskupina voliteľne mono- alebo di- substituovaná s Ci.3 alkylom, alebo (iv) C6 alebo Ci0 aryl alebo C7.i6 aralkyl, všetky voliteľne substituované s Cw alkylom, hydroxylom, aminoskupinou alebo amidoskupinou voliteľne substituovanou s Cb6 alkylom; alebo (v) Het voliteľne substituovaný s Ci.6 alkylom, hydroxylom, aminoskupinou alebo amidoskupinou, a R5 je H.
13. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 7, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery, kde B je tioamid vzorca R4-NH-C(S)-; kde R4 je (i) Cmoalkyl; alebo (ii) C3.7 cykloalkyl.
14. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 12, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery, kde B je amid vzorca R4-NH-C(O)-, kde R4 je (i) Cmo alkyl voliteľne substituovaný s karboxylom, Ci_6 alkanoylom, hydroxylom, Ci_6 alkoxyamidoskupinou, (nižší alkyljamidom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Cμ6 alkylom;
(ii) C3.7 cykloalkyl alebo C4_i0 alkylcykloalkyl, všetky voliteľne substituované s karboxylom, (Cb6 alkoxyjkarbonylom, amidoskupinou, (nižší alkyljamidom, aminoskupinou voliteľne mono- alebo di- substituovanou s Ci_6 alkylom;
(iv) C6 alebo C10 aryl alebo C7.16 aralkyl voliteľne substituovaný s Cb6 alkylom, hydroxylom, aminoskupinou alebo amidoskupinou.
15. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 1, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery, kde B je B terc-butoxykarbonyl - Boe, alebo
16. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 1, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery, kde Y je H alebo metyl.
17. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 16, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery, kde Y je H.
18. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 1, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery, kde R3 je C[.8 alkyl, C3.7 cykloalkyl, alebo C440 alkylcykloalkyl, všetky voliteľne substituované s hydroxylom, Ci.6 alkoxylom, Cw tioalkylom, acetamidoskupinou, C6 alebo C10 arylom, alebo C7.l6 aralkylom.
19. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 18, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery, kde R3 je vedľajší reťazec fórc-butylglycínu (Tbg), Íle, Val, Chg alebo:
20. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 19, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery, kde R3 je vedľajší reťazec Tbg, Chg alebo Val.
21. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 1, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery, kde R2 je S-R20 alebo O-R20, kde R20 je C6 alebo C10 aryl, C7_i6 aralkyl, Het alebo -CH2-Het, všetky voliteľne mono-, di- alebo trisubstituované s R21, kde
R21 je Cw alkyl; Cw alkoxyl; nižší tioalkyl; aminoskupina alebo amidoskupina voliteľne mono- alebo disubstituovaná s C1.6 alkylom, C6 alebo C10 arylom, C7.16 aralkylom, Het alebo (nižší alkyl)-Het; NO2; OH; halogén; trifluórmetyl; karboxyl; C6 alebo Cw aryl, C7.i6 aralkyl, alebo Het, tento aryl, aralkyl alebo Het sú voliteľne substituované s R22, kde
R22 je Ci_6 alkyl; C3.7 cykloalkyl; CM alkoxyl; aminoskupina; mono- alebo di-(nižší alkylaminoskupina; (nižší alkyl)amid; sulfonylalkyl; NO2; OH; halogén; trifluórmetyl; karboxyl alebo Het.
22. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 21, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery, kde R21 je Ci_6 alkyl; C1.6 alkoxyl; aminoskupina; di(nižší alkylaminoskupina; (nižší alkyl)amid; Ce alebo C10 aryl, alebo Het, tento aryl alebo Het sú voliteľne substituované s R22, kde R22 je Cw alkyl; C3.7 cykloalkyl; Ci_6 alkoxyl; aminoskupina; mono- alebo di(nižší alkyl)aminoskupina; amidoskupina; (nižší alkyl)amid; halogén; trifluórmetyl alebo Het.
23. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 22, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery, kde R22 je Cw alkyl; C|.6 alkoxyl; halogén; aminoskupina voliteľne mono- alebo di- substituovaná s nižším alkylom; amidoskupina; (nižší alkyl)amid; alebo Het.
24. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 23, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery, kde R22 je metyl; etyl; izopropyl; terc-butyl; metoxyl; chlór; aminoskupina voliteľne monoalebo di- substituovaná s nižším alkylom; amidoskupina, (nižší alkyl)amid; alebo (nižší alkyl)-2-tiazol.
25. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 21, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery, kde R2 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z:
26. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 21, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery, kde R2 je 1-naftylmetoxyskupina; 2-naftylmetoxyskupina; benzyloxyskupina, 1-naftyloxyskupina; 2-naftyloxyskupina; alebo chinolínoxyskupina nesubstituovaná, mono- alebo di- substituovaná s R21 určeným v nároku 21.
27. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 26, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery, kde R2 je 1-naftylmetoxyskupina; alebo chinolínoxyskupina nesubstituovaná, mono- alebo di-substituovaná s R21 určeným v nároku 26.
28. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 27, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery, kde R2 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z:
29. Tri-peptidové analógy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 26, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo estery, kde R2 je:
SK206-2001A 1998-08-10 1999-08-09 Tri-peptidové analógy, spôsob ich výroby, farmaceutický prostriedok s ich obsahom, ich použitie a medziprodukty SK286994B6 (sk)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US9593198P 1998-08-10 1998-08-10
US13238699P 1999-05-04 1999-05-04
PCT/CA1999/000736 WO2000009543A2 (en) 1998-08-10 1999-08-09 Hepatitis c inhibitor tri-peptides

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK2062001A3 SK2062001A3 (en) 2001-10-08
SK286994B6 true SK286994B6 (sk) 2009-09-07

Family

ID=26790767

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK50026-2009A SK288068B6 (sk) 1998-08-10 1999-08-09 Process for resolution of enantiomeric mixture
SK206-2001A SK286994B6 (sk) 1998-08-10 1999-08-09 Tri-peptidové analógy, spôsob ich výroby, farmaceutický prostriedok s ich obsahom, ich použitie a medziprodukty

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK50026-2009A SK288068B6 (sk) 1998-08-10 1999-08-09 Process for resolution of enantiomeric mixture

Country Status (43)

Country Link
US (11) US6323180B1 (sk)
EP (2) EP1105413B1 (sk)
JP (2) JP4485685B2 (sk)
KR (2) KR100631439B1 (sk)
CN (2) CN100339389C (sk)
AR (3) AR020880A1 (sk)
AT (1) ATE430158T1 (sk)
AU (1) AU769738B2 (sk)
BG (1) BG65738B1 (sk)
BR (2) BR9917805B1 (sk)
CA (2) CA2338946C (sk)
CO (1) CO5261542A1 (sk)
CY (2) CY1109291T1 (sk)
CZ (2) CZ301268B6 (sk)
DE (1) DE69940817D1 (sk)
DK (2) DK2028186T3 (sk)
EA (1) EA003906B1 (sk)
EE (1) EE05517B1 (sk)
ES (2) ES2405930T3 (sk)
HK (1) HK1040085B (sk)
HR (1) HRP20010102B1 (sk)
HU (2) HU230701B1 (sk)
ID (1) ID27839A (sk)
IL (3) IL141012A0 (sk)
IN (3) IN211493B (sk)
ME (1) ME00381B (sk)
MX (2) MX257413B (sk)
MY (1) MY127538A (sk)
NO (2) NO328952B1 (sk)
NZ (1) NZ510396A (sk)
PE (1) PE20000949A1 (sk)
PH (1) PH11999002002B1 (sk)
PL (1) PL204850B1 (sk)
PT (2) PT1105413E (sk)
RS (3) RS53562B1 (sk)
SA (1) SA99200617B1 (sk)
SI (2) SI2028186T1 (sk)
SK (2) SK288068B6 (sk)
TR (2) TR200200129T2 (sk)
TW (1) TWI250165B (sk)
UA (1) UA75026C2 (sk)
WO (1) WO2000009543A2 (sk)
ZA (1) ZA200100971B (sk)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102012016127A1 (de) 2011-08-31 2013-02-28 Daniel Elias Bioaktive, regenerative Mischung zur Herstellung eines Ergänzungsnahrungsmittels

Families Citing this family (422)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR9712544B1 (pt) 1996-10-18 2013-10-22 Inibidores de proteases de serina, composição farmacêutica compreendendo os mesmos e seus usos
US6767991B1 (en) 1997-08-11 2004-07-27 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis C inhibitor peptides
US6323180B1 (en) * 1998-08-10 2001-11-27 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Hepatitis C inhibitor tri-peptides
UA74546C2 (en) * 1999-04-06 2006-01-16 Boehringer Ingelheim Ca Ltd Macrocyclic peptides having activity relative to hepatitis c virus, a pharmaceutical composition and use of the pharmaceutical composition
US6608027B1 (en) 1999-04-06 2003-08-19 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
ATE455855T1 (de) * 1999-06-25 2010-02-15 Paik Kwang Ind Co Ltd Gene von corynebacterium glutamicum kodierend für stoffwechselproteine
AU2001253124A1 (en) 2000-04-05 2001-10-23 Schering Corporation Macrocyclic ns3-serine protease inhibitors of hepatitis c virus comprising n-cyclic p2 moieties
IL151935A0 (en) 2000-04-19 2003-04-10 Schering Corp Macrocyclic ns3-serine protease inhibitors of hepatitis c virus comprising alkyl and aryl alanine p2 moieties
US6713502B2 (en) 2000-05-05 2004-03-30 Smithkline Beecham Corporation Anti-infectives
PE20011350A1 (es) 2000-05-19 2002-01-15 Vertex Pharma PROFARMACO DE UN INHIBIDOR DE ENZIMA CONVERTIDORA DE INTERLEUCINA-1ß (ICE)
AR029851A1 (es) 2000-07-21 2003-07-16 Dendreon Corp Nuevos peptidos como inhibidores de ns3-serina proteasa del virus de hepatitis c
AR034127A1 (es) * 2000-07-21 2004-02-04 Schering Corp Imidazolidinonas como inhibidores de ns3-serina proteasa del virus de hepatitis c, composicion farmaceutica, un metodo para su preparacion, y el uso de las mismas para la manufactura de un medicamento
MXPA03000626A (es) 2000-07-21 2004-07-30 Schering Corp Nuevos peptidos como inhibidores de ns3-serina proteasa del virus de la hepatitis c.
MY143322A (en) 2000-07-21 2011-04-15 Schering Corp Peptides as ns3-serine protease inhibitors of hepatitis c virus
SV2003000617A (es) 2000-08-31 2003-01-13 Lilly Co Eli Inhibidores de la proteasa peptidomimetica ref. x-14912m
US6846806B2 (en) 2000-10-23 2005-01-25 Bristol-Myers Squibb Company Peptide inhibitors of Hepatitis C virus NS3 protein
EP1337550B1 (en) 2000-11-20 2006-05-24 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c tripeptide inhibitors
AU3659102A (en) 2000-12-12 2002-06-24 Schering Corp Diaryl peptides as ns3-serine protease inhibitors of hepatits c virus
EP1539188B1 (en) 2001-01-22 2015-01-07 Merck Sharp & Dohme Corp. Nucleoside derivatives as inhibitors of rna-dependent rna viral polymerase
MXPA04000293A (es) 2001-07-11 2004-05-04 Vertex Pharma Inhibidores de serina proteasa biciclica de puente.
US7108092B2 (en) 2001-09-14 2006-09-19 Honda Giken Kogyo Kabushiki Kaisha Front grill impact-absorbing structure for a vehicle
AU2002348414B2 (en) 2001-10-24 2009-10-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine protease, particularly hepatitis C virus NS3-NS4A protease, incorporating a fused ring system
EP1440068A1 (en) * 2001-11-02 2004-07-28 Glaxo Group Limited Acyl dihydro pyrrole derivatives as hcv inhibitors
US6867185B2 (en) * 2001-12-20 2005-03-15 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of hepatitis C virus
TWI265927B (en) 2002-01-23 2006-11-11 Schering Corp Novel compounds as NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus
US7119072B2 (en) * 2002-01-30 2006-10-10 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
US6642204B2 (en) * 2002-02-01 2003-11-04 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
US7091184B2 (en) * 2002-02-01 2006-08-15 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
CA2369970A1 (en) * 2002-02-01 2003-08-01 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis c inhibitor tri-peptides
CA2370396A1 (en) * 2002-02-01 2003-08-01 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis c inhibitor tri-peptides
RU2004133044A (ru) 2002-04-11 2006-01-27 Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед (Us) Ингибиторы сериновых протеаз, в частности, протеазы ns3-ns4a hcv
ES2361011T3 (es) * 2002-05-20 2011-06-13 Bristol-Myers Squibb Company Inhibidores del virus de la hepatitis c.
EP1506000B9 (en) * 2002-05-20 2011-08-31 Bristol-Myers Squibb Company Heterocyclicsulfonamide hepatitis c virus inhibitors
AU2003301959A1 (en) * 2002-05-20 2004-06-03 Bristol-Myers Squibb Company Substituted cycloalkyl p1' hepatitis c virus inhibitors
MY140680A (en) * 2002-05-20 2010-01-15 Bristol Myers Squibb Co Hepatitis c virus inhibitors
KR100457857B1 (ko) * 2002-05-23 2004-11-18 (주) 비엔씨바이오팜 2-[2-(3-인돌릴)에틸아미노]피리딘 유도체, 그 제조방법및 이를 포함하는 항바이러스용 약학적 조성물
MY140819A (en) 2002-06-28 2010-01-29 Idenix Caymans Ltd Modified 2' and 3'-nucleoside prodrugs for treating flaviviridae
US20040033959A1 (en) * 2002-07-19 2004-02-19 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions for hepatitis C viral protease inhibitors
WO2004014852A2 (en) * 2002-08-12 2004-02-19 Bristol-Myers Squibb Company Iminothiazolidinones as inhibitors of hcv replication
EP1408031A1 (en) * 2002-10-09 2004-04-14 3 D Gene Pharma Pyrolidine derivatives useful in treatment of hepatitis C virus infection
TW200418848A (en) 2002-10-24 2004-10-01 Glaxo Group Ltd Compounds
US20050075279A1 (en) * 2002-10-25 2005-04-07 Boehringer Ingelheim International Gmbh Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
US7601709B2 (en) 2003-02-07 2009-10-13 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
WO2004101605A1 (en) * 2003-03-05 2004-11-25 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis c inhibiting compounds
WO2004101602A2 (en) * 2003-03-05 2004-11-25 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis c inhibitor peptide analogs
KR100960802B1 (ko) * 2003-03-08 2010-06-01 주식회사유한양행 씨형 간염바이러스 감염 치료용 엔에스3 프로테아제 억제제
EP1615947A2 (en) * 2003-04-10 2006-01-18 Boehringer Ingelheim International GmbH Process for preparing macrocyclic compounds
EP1629000B1 (en) * 2003-04-16 2009-02-18 Bristol-Myers Squibb Company Macrocyclic isoquinoline peptide inhibitors of hepatitis c virus
US7176208B2 (en) * 2003-04-18 2007-02-13 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Quinoxalinyl macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
US6846836B2 (en) 2003-04-18 2005-01-25 Bristol-Myers Squibb Company N-substituted phenylurea inhibitors of mitochondrial F1F0 ATP hydrolase
WO2004093798A2 (en) 2003-04-18 2004-11-04 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Quinoxalinyl macrocyclic hepatitis c serine protease inhibitors
EP1654261B1 (en) * 2003-05-21 2007-11-14 Boehringer Ingelheim International GmbH Hepatitis c inhibitor compounds
PL3521297T3 (pl) 2003-05-30 2022-04-04 Gilead Pharmasset Llc Zmodyfikowane fluorowane analogi nukleozydów
US7273851B2 (en) * 2003-06-05 2007-09-25 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Tri-peptide hepatitis C serine protease inhibitors
WO2004113365A2 (en) * 2003-06-05 2004-12-29 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis c serine protease tri-peptide inhibitors
US7125845B2 (en) 2003-07-03 2006-10-24 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Aza-peptide macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
BRPI0412849A (pt) * 2003-07-25 2006-09-26 Idenix Cayman Ltd compostos, composições e usos de análogos de nucleosìdeo de purina para o tratamento de flaviviridae, incluindo hepatite c
WO2005021584A2 (en) 2003-08-26 2005-03-10 Schering Corporation Novel peptidomimetic ns3-serine protease inhibitors of hepatitis c virus
US8025899B2 (en) 2003-08-28 2011-09-27 Abbott Laboratories Solid pharmaceutical dosage form
US8377952B2 (en) 2003-08-28 2013-02-19 Abbott Laboratories Solid pharmaceutical dosage formulation
UY28500A1 (es) 2003-09-05 2005-04-29 Vertex Pharma Inhibidores de proteasas de serina, en particular proteasa ns3-ns4a del vhc.
MXPA06003141A (es) * 2003-09-22 2006-06-05 Boehringer Ingelheim Int Peptidos macrociclicos activos contra el virus de la hepatitis c.
CN1894274A (zh) 2003-09-26 2007-01-10 先灵公司 丙肝病毒ns3丝氨酸蛋白酶的大环抑制剂
TW200528472A (en) 2003-10-10 2005-09-01 Vertex Pharma Inhibitors of serine proteases, particularly HCV ns3-ns4a protease
US7491794B2 (en) * 2003-10-14 2009-02-17 Intermune, Inc. Macrocyclic compounds as inhibitors of viral replication
RS20060259A (sr) 2003-10-14 2008-08-07 Intermune Inc., Makrociklične karboksilne kiseline i acilsulfonamidi kao inhibitori replikacije hcv
US8187874B2 (en) 2003-10-27 2012-05-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Drug discovery method
AU2004285019B9 (en) 2003-10-27 2011-11-24 Vertex Pharmaceuticals Incorporated HCV NS3-NS4A protease resistance mutants
EP1944042A1 (en) 2003-10-27 2008-07-16 Vertex Pharmceuticals Incorporated Combinations for HCV treatment
US20050119318A1 (en) * 2003-10-31 2005-06-02 Hudyma Thomas W. Inhibitors of HCV replication
US7132504B2 (en) 2003-11-12 2006-11-07 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
CA2546290A1 (en) * 2003-11-20 2005-06-09 Schering Corporation Depeptidized inhibitors of hepatitis c virus ns3 protease
US7135462B2 (en) 2003-11-20 2006-11-14 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7309708B2 (en) * 2003-11-20 2007-12-18 Birstol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
CA2547770A1 (en) * 2003-12-08 2005-06-23 Fabrice Gallou Removal of ruthenium by-product by supercritical fluid processing
RU2006125441A (ru) 2003-12-15 2008-01-27 Джапан Тобакко Инк. (Jp) Производные циклопропана и их фармацевтическое применение
GB0500020D0 (en) 2005-01-04 2005-02-09 Novartis Ag Organic compounds
JP4682155B2 (ja) 2004-01-21 2011-05-11 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｃ型肝炎ウイルスに対して活性な大環状ペプチド
SE0400199D0 (sv) * 2004-01-30 2004-01-30 Medivir Ab HCV Protease inhbitors
DE602005017582D1 (en) * 2004-01-30 2009-12-24 Medivir Ab Hcv ns-3 serine protease inhibitoren
EP2311851A3 (en) 2004-02-04 2011-05-25 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly HCV NS3-NS4A protease
US20050182252A1 (en) 2004-02-13 2005-08-18 Reddy K. R. Novel 2'-C-methyl nucleoside derivatives
EA200901463A1 (ru) 2004-02-20 2010-08-30 Бёрингер Ингельхайм Интернациональ Гмбх Ингибиторы вирусной полимеразы
HRP20090250T1 (hr) 2004-02-24 2009-06-30 Japan Tobacco Kondenzirani heterociklički spojevi i njihova upotreba kao inhibitora hcv polimeraze
US20070049593A1 (en) 2004-02-24 2007-03-01 Japan Tobacco Inc. Tetracyclic fused heterocyclic compound and use thereof as HCV polymerase inhibitor
AR048413A1 (es) 2004-02-27 2006-04-26 Schering Corp Compuestos prolina 3,4- (ciclopentil) - fusionados , como inhibidores de serina proteasa ns3 del virus de la hepatitis c
KR101316137B1 (ko) * 2004-02-27 2013-10-10 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 Ｃ형 간염 바이러스 ｎｓ3 세린 프로테아제의 억제제로서의황 화합물
AU2005222055A1 (en) 2004-02-27 2005-09-22 Schering Corporation Compounds as inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease
BRPI0508186A (pt) 2004-02-27 2007-08-14 Schering Corp compostos como inibidores de ns3 serina protease de vìrus da hepatite c
US7816326B2 (en) 2004-02-27 2010-10-19 Schering Corporation Sulfur compounds as inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease
CA2557301A1 (en) * 2004-02-27 2005-09-15 Schering Corporation Cyclobutenedione groups-containing compounds as inhibitors of hepatitis c virus ns3 serine protease
US7635694B2 (en) 2004-02-27 2009-12-22 Schering Corporation Cyclobutenedione-containing compounds as inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease
KR20060124725A (ko) 2004-02-27 2006-12-05 쉐링 코포레이션 Ｃ형 간염 바이러스 ｎｓ3 프로테아제의 억제제
KR20110137409A (ko) * 2004-03-12 2011-12-22 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 아스파르트산 아세탈 카스파아제 억제제의 제조를 위한 방법 및 중간체
BRPI0508867A (pt) 2004-03-15 2007-09-04 Boehringer Ingelheim Int processo para a preparação de compostos macrocìclicos
EP1749007A2 (en) * 2004-03-30 2007-02-07 Intermune, Inc. Macrocyclic compounds as inhibitors of viral replication
WO2005107742A1 (en) 2004-05-05 2005-11-17 Yale University Novel antiviral helioxanthin analogs
JP2008502718A (ja) 2004-05-20 2008-01-31 シェーリング　コーポレイション Ｃ型肝炎ウイルスｎｓ３セリンプロテアーゼのインヒビターとしての置換型プロリン
US7514557B2 (en) * 2004-05-25 2009-04-07 Boehringer Ingelheim International Gmbh Process for preparing acyclic HCV protease inhibitors
AU2005254057B2 (en) 2004-06-15 2011-02-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. C-purine nucleoside analogs as inhibitors of RNA-dependent RNA viral polymerase
WO2006012078A2 (en) 2004-06-24 2006-02-02 Merck & Co., Inc. Nucleoside aryl phosphoramidates for the treatment of rna-dependent rna viral infection
WO2006000085A1 (en) * 2004-06-28 2006-01-05 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis c inhibitor peptide analogs
US7642339B2 (en) * 2004-07-16 2010-01-05 Gilead Sciences, Inc. Antiviral compounds
UY29016A1 (es) * 2004-07-20 2006-02-24 Boehringer Ingelheim Int Analogos de dipeptidos inhibidores de la hepatitis c
WO2006007708A1 (en) * 2004-07-20 2006-01-26 Boehringer Engelheim International Gmbh Hepatitis c inhibitor peptide analogs
CN101023094B (zh) * 2004-07-21 2011-05-18 法莫赛特股份有限公司 烷基取代的2-脱氧-2-氟代-d-呋喃核糖基嘧啶和嘌呤及其衍生物的制备
JP2008513356A (ja) * 2004-08-09 2008-05-01 アリオス バイオファーマ インク． 合成高度糖鎖付加プロテアーゼ耐性ポリペプチド変異体、それを使用する経口製剤および方法
US7597884B2 (en) 2004-08-09 2009-10-06 Alios Biopharma, Inc. Hyperglycosylated polypeptide variants and methods of use
CA2577812A1 (en) 2004-08-27 2006-03-09 Schering Corporation Acylsulfonamide compounds as inhibitors of hepatitis c virus ns3 serine protease
PT3109244T (pt) * 2004-09-14 2019-06-04 Gilead Pharmasset Llc ¿preparação de ribofuranosil pirimidinas e purinas 2¿-fluoro-2¿-alquil substituídas ou outras opcionalmente substituídas e os seus derivados
WO2006030892A1 (ja) * 2004-09-17 2006-03-23 Nippon Shinyaku Co., Ltd. 複素環化合物の製造方法
KR20130083938A (ko) 2004-10-01 2013-07-23 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 Ｈｃｖ ｎｓ3-ｎｓ4ａ 프로테아제 저해
US7659263B2 (en) 2004-11-12 2010-02-09 Japan Tobacco Inc. Thienopyrrole compound and use thereof as HCV polymerase inhibitor
US7323447B2 (en) 2005-02-08 2008-01-29 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
WO2006096652A2 (en) 2005-03-08 2006-09-14 Boehringer Ingelheim International Gmbh Process for preparing macrocyclic compounds
AU2006242475B2 (en) 2005-05-02 2011-07-07 Merck Sharp & Dohme Corp. HCV NS3 protease inhibitors
US7592336B2 (en) 2005-05-10 2009-09-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
JP5030947B2 (ja) 2005-05-13 2012-09-19 ヴァイロケム・ファーマ・インコーポレーテッド フラビウイルス感染の治療及び予防のための化合物及び方法
US20060276404A1 (en) * 2005-06-02 2006-12-07 Anima Ghosal Medicaments and methods combining a HCV protease inhibitor and an AKR competitor
WO2006130686A2 (en) 2005-06-02 2006-12-07 Schering Corporation Hcv protease inhibitors in combination with food
BRPI0610737A2 (pt) * 2005-06-02 2010-07-20 Schering Corp formulações farmacêuticas e métodos de tratamento usando as mesmas
US20070237818A1 (en) * 2005-06-02 2007-10-11 Malcolm Bruce A Controlled-release formulation of HCV protease inhibitor and methods using the same
CA2611151A1 (en) 2005-06-17 2006-12-28 Novartis Ag Use of sanglifehrin in hcv
TWI449711B (zh) * 2005-06-30 2014-08-21 Virobay Inc Ｃ型肝炎病毒（ｈｃｖ）抑制劑
US7608592B2 (en) 2005-06-30 2009-10-27 Virobay, Inc. HCV inhibitors
US7601686B2 (en) 2005-07-11 2009-10-13 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7470664B2 (en) * 2005-07-20 2008-12-30 Merck & Co., Inc. HCV NS3 protease inhibitors
WO2007009227A1 (en) * 2005-07-20 2007-01-25 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis c inhibitor peptide analogs
EA019888B1 (ru) 2005-07-25 2014-07-30 Интермьюн, Инк. Промежуточное соединение для получения макроциклических ингибиторов репликации вируса гепатита с и способ его синтеза
AR055361A1 (es) 2005-07-29 2007-08-22 Medivir Ab Inhibidores macrociclicos del virus de la hepatitis c
DE602006019883D1 (de) 2005-07-29 2011-03-10 Medivir Ab Makrocyclische inhibitoren des hepatitis-c-virus
PE20070210A1 (es) 2005-07-29 2007-04-16 Tibotec Pharm Ltd Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c
PL1919899T3 (pl) 2005-07-29 2011-06-30 Tibotec Pharm Ltd Makrocykliczne inhibitory wirusa zapalenia wątroby typu C
ES2456617T3 (es) 2005-07-29 2014-04-23 Janssen R&D Ireland Inhibidores macrocíclicos del virus de la hepatitis C
JP5230416B2 (ja) 2005-07-29 2013-07-10 テイボテク・フアーマシユーチカルズ Ｃ型肝炎ウイルスの大員環状阻害剤
PE20070343A1 (es) 2005-07-29 2007-05-12 Medivir Ab Inhibidores macrociclicos del virus de la hepatitis c
BRPI0614621A2 (pt) 2005-07-29 2011-04-12 Tibotec Pharm Ltd inibidores macrocìclicos de vìrus da hepatite c
PE20070211A1 (es) 2005-07-29 2007-05-12 Medivir Ab Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c
CA2615896C (en) * 2005-08-01 2012-11-13 Merck & Co., Inc. Macrocyclic peptides as hcv ns3 protease inhibitors
EP2256113A1 (en) 2005-08-02 2010-12-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases
AU2006280175B2 (en) 2005-08-09 2011-09-01 Merck Sharp & Dohme Corp. Ribonucleoside cyclic acetal derivatives for the treatment of RNA-dependent RNA viral infection
EP1915378A4 (en) 2005-08-12 2009-07-22 Boehringer Ingelheim Int VIRUS POLYMERASE INHIBITORS
BRPI0615029A2 (pt) 2005-08-19 2009-06-16 Vertex Pharma processos e intermediários
US8399615B2 (en) 2005-08-19 2013-03-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Processes and intermediates
AR055395A1 (es) * 2005-08-26 2007-08-22 Vertex Pharma Compuestos inhibidores de la actividad de la serina proteasa ns3-ns4a del virus de la hepatitis c
US7964624B1 (en) 2005-08-26 2011-06-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases
JP5190364B2 (ja) 2005-09-09 2013-04-24 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 大環状ペプチドの調製の為の閉環メタセシス工程
KR20080056295A (ko) 2005-10-11 2008-06-20 인터뮨, 인크. Ｃ형 간염 바이러스 복제를 억제하기 위한 화합물 및 방법
US7772183B2 (en) 2005-10-12 2010-08-10 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7741281B2 (en) 2005-11-03 2010-06-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
EP2392590A3 (en) 2005-11-11 2012-03-14 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Hepatitis C virus variants
US7705138B2 (en) 2005-11-11 2010-04-27 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Hepatitis C virus variants
EP2345652A1 (en) 2005-12-21 2011-07-20 Abbott Laboratories Antiviral compounds
WO2007081517A2 (en) 2005-12-21 2007-07-19 Abbott Laboratories Anti-viral compounds
NZ569817A (en) * 2005-12-21 2011-10-28 Abbott Lab Anti-viral compounds
DE602006015861D1 (de) * 2005-12-21 2010-09-09 Abbott Lab Antivirale verbindungen
US7816348B2 (en) 2006-02-03 2010-10-19 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
US8039475B2 (en) 2006-02-27 2011-10-18 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Co-crystals and pharmaceutical compositions comprising the same
JP2009529059A (ja) 2006-03-08 2009-08-13 アキリオン ファーマシューティカルズ，インコーポレーテッド 抗ｃ型肝炎ウイルス活性を有する置換アミノチアゾール誘導体
EP2194039A1 (en) 2006-03-16 2010-06-09 Vertex Pharmceuticals Incorporated Process for preparing optically enriched compounds
EP2007789B1 (en) 2006-04-11 2015-05-20 Novartis AG Spirocyclic HCV/HIV inhibitors and their uses
GB0609492D0 (en) * 2006-05-15 2006-06-21 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic agents
WO2007137080A2 (en) 2006-05-23 2007-11-29 Irm Llc Compounds and compositions as channel activating protease inhibitors
US9526769B2 (en) 2006-06-06 2016-12-27 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocylic oximyl hepatitis C protease inhibitors
US8268776B2 (en) 2006-06-06 2012-09-18 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocylic oximyl hepatitis C protease inhibitors
US20080187516A1 (en) * 2006-06-06 2008-08-07 Ying Sun Acyclic oximyl hepatitis c protease inhibitors
US7728148B2 (en) * 2006-06-06 2010-06-01 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Acyclic oximyl hepatitis C protease inhibitors
GB0612423D0 (en) * 2006-06-23 2006-08-02 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic agents
PE20080992A1 (es) * 2006-06-26 2008-08-06 Enanta Pharm Inc Quinoxalinil macrociclicos inhibidores de serina proteasa del virus de la hepatitis c
KR20090024834A (ko) 2006-07-05 2009-03-09 인터뮨, 인크. Ｃ형 간염 바이러스 복제의 신규 억제제
EP2049474B1 (en) 2006-07-11 2015-11-04 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
US7718612B2 (en) * 2007-08-02 2010-05-18 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Pyridazinonyl macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
US7635683B2 (en) * 2006-08-04 2009-12-22 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Quinoxalinyl tripeptide hepatitis C virus inhibitors
US20090035267A1 (en) * 2007-07-31 2009-02-05 Moore Joel D Acyclic, pyridazinone-derived hepatitis c serine protease inhibitors
US20080038225A1 (en) * 2006-08-11 2008-02-14 Ying Sun Triazolyl acyclic hepatitis c serine protease inhibitors
WO2008022006A2 (en) * 2006-08-11 2008-02-21 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Arylalkoxyl hepatitis c virus protease inhibitors
US7687459B2 (en) * 2006-08-11 2010-03-30 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Arylalkoxyl hepatitis C virus protease inhibitors
EP1886685A1 (en) 2006-08-11 2008-02-13 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods, uses and compositions for modulating replication of hcv through the farnesoid x receptor (fxr) activation or inhibition
US7582605B2 (en) * 2006-08-11 2009-09-01 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Phosphorus-containing hepatitis C serine protease inhibitors
US20090098085A1 (en) * 2006-08-11 2009-04-16 Ying Sun Tetrazolyl acyclic hepatitis c serine protease inhibitors
US7605126B2 (en) * 2006-08-11 2009-10-20 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Acylaminoheteroaryl hepatitis C virus protease inhibitors
MX2009000882A (es) 2006-08-17 2009-02-04 Boehringer Ingelheim Int Inhibidores de la polimerasa virica.
US20080131398A1 (en) * 2006-08-21 2008-06-05 United Therapeutics Corporation Combination therapy for treatment of viral infections
US8138164B2 (en) * 2006-10-24 2012-03-20 Merck Sharp & Dohme Corp. HCV NS3 protease inhibitors
EP2076278B1 (en) * 2006-10-24 2015-05-06 Merck Sharp & Dohme Corp. Macrocyclic HCV NS3 protease inhibitors
AU2007309488B2 (en) * 2006-10-24 2012-10-11 Merck Sharp & Dohme Corp. HCV NS3 protease inhibitors
CN101568346B (zh) * 2006-10-27 2015-11-25 默沙东公司 Hcv ns3蛋白酶抑制剂
JP5268927B2 (ja) * 2006-10-27 2013-08-21 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション Ｈｃｖｎｓ３プロテアーゼ阻害剤
US8343477B2 (en) 2006-11-01 2013-01-01 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of hepatitis C virus
US20080108632A1 (en) * 2006-11-02 2008-05-08 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Hcv protease inhibitors
US7772180B2 (en) * 2006-11-09 2010-08-10 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
CN102250074A (zh) 2006-11-15 2011-11-23 沃泰克斯药物(加拿大)股份有限公司 用于治疗或预防黄病毒属感染的噻吩类似物
US7763584B2 (en) 2006-11-16 2010-07-27 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7888464B2 (en) 2006-11-16 2011-02-15 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US8003604B2 (en) 2006-11-16 2011-08-23 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
ES2470568T3 (es) 2006-11-17 2014-06-24 Janssen R&D Ireland Inhibidores macroc�clicos del virus de la hepatitis C
JP2010512317A (ja) * 2006-12-07 2010-04-22 シェーリング コーポレイション ｐＨ感受性マトリクス処方物
WO2008133753A2 (en) * 2006-12-20 2008-11-06 Abbott Laboratories Anti-viral compounds
AU2007335962B2 (en) * 2006-12-20 2012-09-06 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti Spa Antiviral indoles
GB0625349D0 (en) * 2006-12-20 2007-01-31 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic compounds
GB0625345D0 (en) * 2006-12-20 2007-01-31 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic compounds
WO2008074035A1 (en) * 2006-12-27 2008-06-19 Abbott Laboratories Hcv protease inhibitors and uses thereof
WO2008095058A1 (en) * 2007-02-01 2008-08-07 Taigen Biotechnology Co. Ltd. Hcv protease inhibitors
AU2008219704A1 (en) 2007-02-27 2008-09-04 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases
KR20090115970A (ko) 2007-02-27 2009-11-10 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 공-결정 및 그를 포함하는 제약 조성물
WO2008106167A1 (en) * 2007-02-28 2008-09-04 Conatus Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy comprising matrix metalloproteinase inhibitors and caspase inhibitors for the treatment of liver diseases
ATE525068T1 (de) 2007-02-28 2011-10-15 Conatus Pharmaceuticals Inc Verfahren zur behandlung von chronischer viraler hepatitis c mithilfe von ro 113-0830
WO2009008913A2 (en) * 2007-03-23 2009-01-15 Schering Corporation P1-nonepimerizable ketoamide inhibitors of hcv ns3 protease
US7964580B2 (en) 2007-03-30 2011-06-21 Pharmasset, Inc. Nucleoside phosphoramidate prodrugs
US7910587B2 (en) * 2007-04-26 2011-03-22 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Quinoxalinyl dipeptide hepatitis C virus inhibitors
US20080317712A1 (en) * 2007-04-26 2008-12-25 Deqiang Niu Arylpiperidinyl and arylpyrrolidinyl tripeptide hepatitis c serine protease inhibitors
US20080267917A1 (en) * 2007-04-26 2008-10-30 Deqiang Niu N-functionalized amides as hepatitis c serine protease inhibitors
WO2008134398A1 (en) * 2007-04-26 2008-11-06 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Oximyl dipeptide hepatitis c protease inhibitors
US8377872B2 (en) 2007-04-26 2013-02-19 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Cyclic P3 tripeptide hepatitis C serine protease inhibitors
JP2010528987A (ja) * 2007-05-03 2010-08-26 インターミューン・インコーポレーテッド Ｃ型肝炎ウイルス複製の新規大環状阻害剤
ES2381410T3 (es) 2007-05-04 2012-05-28 Vertex Pharmceuticals Incorporated Terapia de combinación paa el tratamiento de infecciones por VHC
KR20090130347A (ko) * 2007-05-09 2009-12-22 화이자 인코포레이티드 치환된 헤테로사이클릭 유도체 및 조성물 및 항균제로서의 이의 약학적 용도
BRPI0811447A2 (pt) * 2007-05-10 2014-10-29 Intermune Inc Compostos, composição farmacêutica e métodos de inibição da atividade da protease ns3/ns4, de tratamento da fibrose hepática e de intensificação da função hepática num indivíduo tendo infecção de vírus da hepatite c.
GB0709791D0 (en) * 2007-05-22 2007-06-27 Angeletti P Ist Richerche Bio Antiviral agents
CN101801925A (zh) 2007-06-29 2010-08-11 吉里德科学公司 抗病毒组合物
AU2008271116B2 (en) * 2007-06-29 2012-09-20 Gilead Sciences, Inc. Antiviral compounds
JP2010533698A (ja) * 2007-07-17 2010-10-28 イステイチユート・デイ・リチエルケ・デイ・ビオロジア・モレコラーレ・ピ・アンジエレツテイ・エツセ・ピー・アー Ｃ型肝炎感染症の治療のための大環状インドール誘導体
JP5433573B2 (ja) * 2007-07-19 2014-03-05 イステイチユート・デイ・リチエルケ・デイ・ビオロジア・モレコラーレ・ピ・アンジエレツテイ・エツセ・エルレ・エルレ 抗ウイルス剤としての大環状化合物
CA2693997C (en) 2007-08-03 2013-01-15 Pierre L. Beaulieu Viral polymerase inhibitors
ATE530546T1 (de) 2007-08-30 2011-11-15 Vertex Pharma Kokristalle und pharmazeutische zusammensetzungen damit
GB0718575D0 (en) 2007-09-24 2007-10-31 Angeletti P Ist Richerche Bio Nucleoside derivatives as inhibitors of viral polymerases
US8419332B2 (en) * 2007-10-19 2013-04-16 Atlas Bolt & Screw Company Llc Non-dimpling fastener
US20090111757A1 (en) * 2007-10-25 2009-04-30 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Hcv protease inhibitors
US8383583B2 (en) 2007-10-26 2013-02-26 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic, pyridazinone-containing hepatitis C serine protease inhibitors
MX2010005261A (es) 2007-11-14 2010-10-15 Enanta Pharm Inc Inhibidores macrocíclicos de proteasa de serina de hepatitis c de tetrazolilo.
US8263549B2 (en) * 2007-11-29 2012-09-11 Enanta Pharmaceuticals, Inc. C5-substituted, proline-derived, macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
US8030307B2 (en) * 2007-11-29 2011-10-04 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic, C5-substituted proline derivatives as inhibitors of the hepatitis C virus NS3 protease
MX2010006210A (es) * 2007-12-05 2010-08-10 Enanta Pharm Inc Inhibidores de serina proteasa de hcv de tripeptido fluorado.
WO2009076166A2 (en) * 2007-12-05 2009-06-18 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Oximyl hcv serine protease inhibitors
WO2009073780A1 (en) 2007-12-06 2009-06-11 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Process for making macrocyclic oximyl hepatitis c protease inhibitors
WO2009079353A1 (en) 2007-12-14 2009-06-25 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Triazole-containing macrocyclic hcv serine protease inhibitors
CA2708324C (en) 2007-12-19 2013-03-05 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
US8202996B2 (en) 2007-12-21 2012-06-19 Bristol-Myers Squibb Company Crystalline forms of N-(tert-butoxycarbonyl)-3-methyl-L-valyl-(4R)-4-((7-chloro-4-methoxy-1-isoquinolinyl)oxy)-N- ((1R,2S)-1-((cyclopropylsulfonyl)carbamoyl)-2-vinylcyclopropyl)-L-prolinamide
JP2011510926A (ja) * 2008-01-24 2011-04-07 エナンタ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ヘテロアリール含有トリペプチドｈｃｖセリンプロテアーゼ阻害剤
CA2713005A1 (en) * 2008-01-24 2009-07-30 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Difluorinated tripeptides as hcv serine protease inhibitors
JP5574982B2 (ja) 2008-02-04 2014-08-20 イデニク プハルマセウティカルス，インコーポレイテッド 大環状セリンプロテアーゼ阻害剤
BRPI0907729A2 (pt) * 2008-02-07 2015-07-14 Virobay Inc Métodos para tratar doenças mediadas pela catepsina b em um mamífero e para tratar um indivíduo diagnosticado tanto com hcv quanto com fribose em um mamífero
EP2268285B1 (en) 2008-02-25 2018-06-27 Merck Sharp & Dohme Corp. Therapeutic compounds
JP5490778B2 (ja) * 2008-03-20 2014-05-14 エナンタ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｃ型肝炎ウイルス阻害剤としてのフッ素化大環状化合物
TW200946541A (en) * 2008-03-27 2009-11-16 Idenix Pharmaceuticals Inc Solid forms of an anti-HIV phosphoindole compound
KR20110005869A (ko) 2008-04-15 2011-01-19 인터뮨, 인크. Ｃ형 간염 바이러스 복제의 신규한 마크로사이클릭 억제제
US8163921B2 (en) 2008-04-16 2012-04-24 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
CN102014911A (zh) * 2008-04-28 2011-04-13 默沙东公司 Hcv ns3蛋白酶抑制剂
WO2009134987A1 (en) * 2008-04-30 2009-11-05 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Difluoromethyl-containing macrocyclic compounds as hepatitis c virus inhibitors
US20090285774A1 (en) * 2008-05-15 2009-11-19 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C Virus Inhibitors
CN101580535B (zh) * 2008-05-16 2012-10-03 太景生物科技股份有限公司 丙型肝炎病毒蛋白酶抑制剂
US8044023B2 (en) 2008-05-29 2011-10-25 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7964560B2 (en) 2008-05-29 2011-06-21 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US8173621B2 (en) 2008-06-11 2012-05-08 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside cyclicphosphates
AU2009277172B2 (en) 2008-07-02 2014-05-29 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
DK2310095T3 (da) 2008-07-22 2012-12-10 Merck Sharp & Dohme Makrocykliske quinoxalinforbindelser som hcv-ns3-protease-inhibitorer
CN102099335A (zh) 2008-07-23 2011-06-15 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 杂环抗病毒化合物
US8207341B2 (en) 2008-09-04 2012-06-26 Bristol-Myers Squibb Company Process or synthesizing substituted isoquinolines
UY32099A (es) 2008-09-11 2010-04-30 Enanta Pharm Inc Inhibidores macrocíclicos de serina proteasas de hepatitis c
MY153093A (en) 2008-09-16 2014-12-31 Boehringer Ingelheim Int Crystalline forms of a 2-thiazolyl-4-quinolinyl-oxy derivative, a potent hcv inhibitor
PE20110343A1 (es) * 2008-09-17 2011-06-25 Boehringer Ingelheim Int Combinacion de inhibidor de la proteasa ns3 de hcv con interferon y ribavirina
JP2012503620A (ja) 2008-09-26 2012-02-09 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー Ｈｃｖを処置するためのピリンまたはピラジン誘導体
US8563505B2 (en) 2008-09-29 2013-10-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US8044087B2 (en) 2008-09-29 2011-10-25 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
EP3025727A1 (en) 2008-10-02 2016-06-01 The J. David Gladstone Institutes Methods of treating liver disease
EP2358736A1 (en) * 2008-10-15 2011-08-24 Intermune, Inc. Therapeutic antiviral peptides
AU2009309813A1 (en) 2008-10-30 2010-05-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Heterocyclic antiviral arylpyridone derivatives
UA105777C2 (uk) * 2008-11-21 2014-06-25 Бьорінгер Інгельхайм Інтернаціональ Гмбх Фармацевтична композиція ефективного інгібітора вгс для перорального введення
WO2010065681A1 (en) 2008-12-03 2010-06-10 Presidio Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of hcv ns5a
EA024853B1 (ru) 2008-12-03 2016-10-31 Пресидио Фармасьютикалс, Инк. Ингибиторы ns5a вгс
US20100272674A1 (en) * 2008-12-04 2010-10-28 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C Virus Inhibitors
US8283310B2 (en) 2008-12-15 2012-10-09 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
TW201034663A (en) * 2008-12-19 2010-10-01 Gilead Sciences Inc HCV NS3 protease inhibitors
AU2009330333A1 (en) 2008-12-22 2011-07-07 Gilead Sciences, Inc. Antiviral compounds
BRPI0924121A2 (pt) 2008-12-22 2019-09-24 Hoffmann La Roche compostos antivirais heterocíclicos
NZ593648A (en) 2008-12-23 2013-09-27 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside phosphoramidates
NZ617066A (en) 2008-12-23 2015-02-27 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside analogs
AU2009329872B2 (en) 2008-12-23 2016-07-07 Gilead Pharmasset Llc Synthesis of purine nucleosides
CN102271699A (zh) 2009-01-07 2011-12-07 西尼克斯公司 用于治疗hcv和hiv感染的环孢菌素衍生物
WO2010082050A1 (en) 2009-01-16 2010-07-22 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. Macrocyclic and 7-aminoalkyl-substituted benzoxazocines for treatment of hepatitis c infections
GB0900914D0 (en) 2009-01-20 2009-03-04 Angeletti P Ist Richerche Bio Antiviral agents
US8102720B2 (en) * 2009-02-02 2012-01-24 Qualcomm Incorporated System and method of pulse generation
AR075584A1 (es) 2009-02-27 2011-04-20 Intermune Inc COMPOSICIONES TERAPEUTICAS QUE COMPRENDEN beta-D-2'-DESOXI-2'-FLUORO-2'-C-METILCITIDINA Y UN DERIVADO DE ACIDO ISOINDOL CARBOXILICO Y SUS USOS. COMPUESTO.
JP5690286B2 (ja) 2009-03-04 2015-03-25 イデニク プハルマセウティカルス，インコーポレイテッド ホスホチオフェン及びホスホチアゾールｈｃｖポリメラーゼ阻害剤
BRPI1016266A2 (pt) 2009-03-06 2019-09-24 Hoffmann La Roche compostos antivirais heterocíclicos
JP2012520884A (ja) 2009-03-18 2012-09-10 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ リランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー フラビウイルス科ウイルス感染症を治療する方法および組成物
AU2010229795A1 (en) 2009-03-27 2011-10-13 Presidio Pharmaceuticals, Inc. Fused ring inhibitors of hepatitis C
US8927576B2 (en) 2009-04-06 2015-01-06 PTC Therpeutics, Inc. HCV inhibitor and therapeutic agent combinations
EP2417134B1 (en) 2009-04-08 2017-05-17 Idenix Pharmaceuticals LLC. Macrocyclic serine protease inhibitors
US20110182850A1 (en) 2009-04-10 2011-07-28 Trixi Brandl Organic compounds and their uses
US8512690B2 (en) 2009-04-10 2013-08-20 Novartis Ag Derivatised proline containing peptide compounds as protease inhibitors
AU2010240888A1 (en) 2009-04-25 2011-11-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Heterocyclic antiviral compounds
JP5639155B2 (ja) 2009-05-13 2014-12-10 エナンタ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｃ型肝炎ウイルスインヒビターとしての大環状化合物
US8618076B2 (en) 2009-05-20 2013-12-31 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside phosphoramidates
TWI576352B (zh) 2009-05-20 2017-04-01 基利法瑪席特有限責任公司 核苷磷醯胺
TWI428332B (zh) * 2009-06-09 2014-03-01 Hoffmann La Roche 雜環抗病毒化合物
AU2010264802A1 (en) 2009-06-24 2012-01-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Heterocyclic antiviral compound
US8232246B2 (en) * 2009-06-30 2012-07-31 Abbott Laboratories Anti-viral compounds
JP2012532146A (ja) * 2009-07-02 2012-12-13 ドクター・レディーズ・ラボラトリーズ・リミテッド アミノビニルシクロプロパンカルボン酸誘導体の分割のための酵素および方法
KR101685941B1 (ko) 2009-07-07 2016-12-13 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 Ｃ형 간염 바이러스 프로테아제 억제제를 위한 약제학적 조성물
US8828930B2 (en) 2009-07-30 2014-09-09 Merck Sharp & Dohme Corp. Hepatitis C virus NS3 protease inhibitors
CA2769652A1 (en) 2009-08-05 2011-02-10 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic serine protease inhibitors useful against viral infections, particularly hcv
US8742162B2 (en) 2009-08-10 2014-06-03 Sumitomo Chemical Company, Limited Method for producing optically active 1-amino-2-vinylcyclopropanecarboxylic acid ester
US8324417B2 (en) 2009-08-19 2012-12-04 Virobay, Inc. Process for the preparation of (S)-2-amino-5-cyclopropyl-4,4-difluoropentanoic acid and alkyl esters and acid salts thereof
SG179566A1 (en) * 2009-09-15 2012-05-30 Taigen Biotechnology Co Ltd Hcv protease inhibitors
US20110081315A1 (en) * 2009-09-28 2011-04-07 Intermune, Inc. Novel macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus replication
WO2011049908A2 (en) * 2009-10-19 2011-04-28 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Bismacrokyclic compounds as hepatitis c virus inhibitors
US8822496B2 (en) 2009-10-30 2014-09-02 Boehringer Ingelheim International Gmbh Dosage regimens for HCV combination therapy
US20110117055A1 (en) 2009-11-19 2011-05-19 Macdonald James E Methods of Treating Hepatitis C Virus with Oxoacetamide Compounds
JP2013512247A (ja) 2009-11-25 2013-04-11 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド フラビウイルス感染症の治療または予防のための５−アルキニル−チオフェン−２−カルボン酸誘導体およびそれらの使用
KR20120118008A (ko) 2009-12-18 2012-10-25 아이데닉스 파마슈티칼스, 인코포레이티드 5,5-융합 아릴렌 또는 헤테로아릴렌 간염 ｃ 바이러스 억제제
CN102883718A (zh) 2009-12-24 2013-01-16 顶点制药公司 用于治疗或预防黄病毒感染的类似物
US20110178107A1 (en) * 2010-01-20 2011-07-21 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Hcv protease inhibitors
EP2528922B1 (en) 2010-01-27 2017-08-02 AB Pharma Ltd Polyheterocyclic compounds as hcv inhibitors
US8530497B2 (en) 2010-03-11 2013-09-10 Boehringer Ingelheim International Gmbh Crystalline salts of a potent HCV inhibitor
CA2794145A1 (en) 2010-03-24 2011-09-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections
TW201139438A (en) 2010-03-24 2011-11-16 Vertex Pharma Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections
EP2550278A1 (en) 2010-03-24 2013-01-30 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections
TW201141857A (en) 2010-03-24 2011-12-01 Vertex Pharma Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections
ES2644990T3 (es) 2010-03-31 2017-12-01 Gilead Pharmasset Llc Síntesis estereoselectiva de principios activos que contienen fósforo
PL3290428T3 (pl) 2010-03-31 2022-02-07 Gilead Pharmasset Llc Tabletka zawierająca krystaliczny (S)-2-(((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-diokso-3,4-dihydropirymidyn-1(2H)-ylo)-4-fluoro-3-hydroksy-4-metylotetrahydrofuran-2-ylo)metoksy)(fenoksy)fosforylo)amino)propanian izopropylu
CA2795054A1 (en) 2010-04-01 2011-10-06 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
EP2575866A4 (en) 2010-05-24 2013-10-16 Presidio Pharmaceuticals Inc HCV NS5A INHIBITORS
WO2011156545A1 (en) 2010-06-09 2011-12-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Viral dynamic model for hcv combination therapy
US20130157258A1 (en) 2010-06-15 2013-06-20 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Hcv ns5b protease mutants
WO2012006070A1 (en) 2010-06-28 2012-01-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compounds and methods for the treatment or prevention of flavivirus infections
AU2011276526A1 (en) 2010-06-28 2013-01-10 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compounds and methods for the treatment or prevention of Flavivirus infections
EP2585448A1 (en) 2010-06-28 2013-05-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compounds and methods for the treatment or prevention of flavivirus infections
AU2011292040A1 (en) 2010-08-17 2013-03-07 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compounds and methods for the treatment or prevention of Flaviviridae viral infections
KR102163902B1 (ko) 2010-09-21 2020-10-12 이난타 파마슈티칼스, 인코포레이티드 매크로사이클릭 프롤린 유도된 ｈｃｖ 세린 프로테아제 억제제
PE20131397A1 (es) 2010-09-30 2014-01-04 Boehringer Ingelheim Int Terapia de combinacion para tratar infeccion por hcv
KR20130120481A (ko) 2010-10-08 2013-11-04 노파르티스 아게 술파미드 ｎｓ3 억제제의 비타민 ｅ 제제
PT3042910T (pt) 2010-11-30 2019-04-16 Gilead Pharmasset Llc 2'-espiro-nucleósidos para utilização na terapia da hepatite c
MX2013006951A (es) * 2010-12-16 2013-10-03 Abbvie Inc Compuestos antivirales.
US8937041B2 (en) 2010-12-30 2015-01-20 Abbvie, Inc. Macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
SG191759A1 (en) 2010-12-30 2013-08-30 Enanta Pharm Inc Phenanthridine macrocyclic hepatitis c serine protease inhibitors
WO2012109398A1 (en) 2011-02-10 2012-08-16 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic serine protease inhibitors, pharmaceutical compositions thereof, and their use for treating hcv infections
WO2012107589A1 (en) 2011-02-11 2012-08-16 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment and prevention of hcv infections
WO2012123298A1 (en) 2011-03-11 2012-09-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Antiviral compounds
EP2691409B1 (en) 2011-03-31 2018-02-21 Idenix Pharmaceuticals LLC. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
US20120252721A1 (en) 2011-03-31 2012-10-04 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating drug-resistant hepatitis c virus infection with a 5,5-fused arylene or heteroarylene hepatitis c virus inhibitor
US8957203B2 (en) 2011-05-05 2015-02-17 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US10201584B1 (en) 2011-05-17 2019-02-12 Abbvie Inc. Compositions and methods for treating HCV
US8691757B2 (en) 2011-06-15 2014-04-08 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
CA2857705A1 (en) 2011-06-16 2012-12-20 AB Pharma Ltd. Macrocyclic heterocyclic compounds for inhibiting hepatitis c virus and preparation and use thereof
EP2725012A1 (en) 2011-06-21 2014-04-30 Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc. 1-amino-2-vinyl cyclopropane carboxylic acid amide, salt of same, and method for producing same
WO2012175581A1 (en) 2011-06-24 2012-12-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Antiviral compounds
CN102807607B (zh) * 2011-07-22 2013-10-23 爱博新药研发(上海)有限公司 抑制丙肝病毒的稠环杂环类化合物、其中间体及其应用
WO2013016499A1 (en) 2011-07-26 2013-01-31 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Methods for preparation of thiophene compounds
WO2013016501A1 (en) 2011-07-26 2013-01-31 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Formulations of thiophene compounds
WO2013039855A1 (en) 2011-09-12 2013-03-21 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
US9403863B2 (en) 2011-09-12 2016-08-02 Idenix Pharmaceuticals Llc Substituted carbonyloxymethylphosphoramidate compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
KR101621181B1 (ko) 2011-10-10 2016-05-13 에프. 호프만-라 로슈 아게 항바이러스성 화합물
WO2013056046A1 (en) 2011-10-14 2013-04-18 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Substituted 3',5'-cyclic phosphates of purine nucleotide compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
US8492386B2 (en) 2011-10-21 2013-07-23 Abbvie Inc. Methods for treating HCV
CN104436197A (zh) 2011-10-21 2015-03-25 艾伯维公司 至少两种直接作用抗病毒剂的组合产品
US8466159B2 (en) 2011-10-21 2013-06-18 Abbvie Inc. Methods for treating HCV
AR088463A1 (es) 2011-10-21 2014-06-11 Abbvie Inc Metodos para el tratamiento de hcv
US9328138B2 (en) 2011-11-15 2016-05-03 Msd Italia S.R.L. HCV NS3 protease inhibitors
US8889159B2 (en) 2011-11-29 2014-11-18 Gilead Pharmasset Llc Compositions and methods for treating hepatitis C virus
ES3018133T3 (en) 2011-11-30 2025-05-14 Univ Emory Jak inhibitors for use in the prevention or treatment of a viral disease caused by a coronaviridae
CN104066432B (zh) 2011-12-06 2017-06-13 小利兰·斯坦福大学董事会 用于治疗病毒性疾病的方法和组合物
BR112014013972A2 (pt) 2011-12-16 2017-06-13 Hoffmann La Roche inibidores de hcv nssa
AU2012357986B2 (en) 2011-12-20 2017-02-02 Riboscience Llc 4'-Azido, 3'-fluoro substituted nucleoside derivatives as inhibitors of HCV RNA replication
SG11201403364PA (en) 2011-12-20 2014-07-30 Hoffmann La Roche 2',4'-difluoro-2'-methyl substituted nucleoside derivatives as inhibitors of hcv rna replication
WO2013106344A1 (en) 2012-01-12 2013-07-18 Ligand Pharmaceuticals, Inc. 2 '-c-methyl nucleosides containing a cyclic phosphate diester of 1, 3-propanediol (2-oxo-[1, 3, 2]-dioxaphosphorinane) at position 5'
IN2014DN05759A (sk) 2012-01-12 2015-04-10 Boehringer Ingelheim Int
WO2013133927A1 (en) 2012-02-13 2013-09-12 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions of 2'-c-methyl-guanosine, 5'-[2-[(3-hydroxy-2,2-dimethyl-1-oxopropyl)thio]ethyl n-(phenylmethyl)phosphoramidate]
BR112014015582A8 (pt) 2012-02-24 2017-07-04 Hoffmann La Roche compostos antivirais
JP2015509980A (ja) 2012-03-14 2015-04-02 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｈｃｖ−ｈｉｖ同時感染患者集団のｈｃｖ感染症を治療するための併用療法
EP2827876A4 (en) 2012-03-22 2015-10-28 Alios Biopharma Inc PHARMACEUTICAL COMBINATIONS WITH A THIONUCLEOTIDE ANALOG
WO2013147749A1 (en) 2012-03-27 2013-10-03 Boehringer Ingelheim International Gmbh Oral combination therapy for treating hcv infection in specific patient subgenotype populations
WO2013147750A1 (en) 2012-03-27 2013-10-03 Boehringer Ingelheim International Gmbh Oral combination therapy for treating hcv infection in specific patient sub-population
JP2015512900A (ja) 2012-03-28 2015-04-30 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 特別な患者の遺伝子亜型分集団のｈｃｖ感染症を治療するための併用療法
EP2852605B1 (en) 2012-05-22 2018-01-31 Idenix Pharmaceuticals LLC 3',5'-cyclic phosphate prodrugs for hcv infection
EP2852603B1 (en) 2012-05-22 2021-05-12 Idenix Pharmaceuticals LLC D-amino acid compounds for liver disease
EP2852604B1 (en) 2012-05-22 2017-04-12 Idenix Pharmaceuticals LLC 3',5'-cyclic phosphoramidate prodrugs for hcv infection
US20140010783A1 (en) 2012-07-06 2014-01-09 Hoffmann-La Roche Inc. Antiviral compounds
AU2013329521B2 (en) 2012-10-08 2018-04-19 Centre National De La Recherche Scientifique 2'-chloro nucleoside analogs for HCV infection
JP6154474B2 (ja) 2012-10-19 2017-06-28 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｃ型肝炎ウイルス阻害剤
US20140112886A1 (en) 2012-10-19 2014-04-24 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Dinucleotide compounds for hcv infection
US10723754B2 (en) 2012-10-22 2020-07-28 Idenix Pharmaceuticals Llc 2′,4′-bridged nucleosides for HCV infection
US9598433B2 (en) 2012-11-02 2017-03-21 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
EP2914598B1 (en) 2012-11-02 2017-10-18 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
US9643999B2 (en) 2012-11-02 2017-05-09 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
EP2914614B1 (en) 2012-11-05 2017-08-16 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
WO2014078436A1 (en) 2012-11-14 2014-05-22 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-alanine ester of sp-nucleoside analog
CN103804208B (zh) * 2012-11-14 2016-06-08 重庆博腾制药科技股份有限公司 一种丙肝药物中间体的制备方法
WO2014078427A1 (en) 2012-11-14 2014-05-22 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-alanine ester of rp-nucleoside analog
US9211300B2 (en) 2012-12-19 2015-12-15 Idenix Pharmaceuticals Llc 4′-fluoro nucleosides for the treatment of HCV
CA2892589A1 (en) 2013-01-23 2014-07-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Antiviral triazole derivatives
WO2014121418A1 (en) 2013-02-07 2014-08-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Tetracyclic heterocycle compounds and methods of use thereof for the treatment of hepatitis c
WO2014121417A1 (en) 2013-02-07 2014-08-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Tetracyclic heterocycle compounds and methods of use thereof for the treatment of hepatitis c
US20150065439A1 (en) 2013-02-28 2015-03-05 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pharmaceutical compositions
WO2014137930A1 (en) 2013-03-04 2014-09-12 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Thiophosphate nucleosides for the treatment of hcv
US9309275B2 (en) 2013-03-04 2016-04-12 Idenix Pharmaceuticals Llc 3′-deoxy nucleosides for the treatment of HCV
CN105008350B (zh) 2013-03-05 2018-05-08 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 抗病毒化合物
JP6342922B2 (ja) 2013-03-07 2018-06-13 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｃ型肝炎ウイルス阻害剤
WO2014138374A1 (en) 2013-03-08 2014-09-12 Boehringer Ingelheim International Gmbh Oral combination therapy for treating hcv infection in specific patient sub-population
SG11201507469RA (en) 2013-03-14 2015-10-29 Achillion Pharmaceuticals Inc Processes for producing sovaprevir
US9187515B2 (en) 2013-04-01 2015-11-17 Idenix Pharmaceuticals Llc 2′,4′-fluoro nucleosides for the treatment of HCV
SG11201509427RA (en) 2013-05-16 2015-12-30 Riboscience Llc 4'-azido, 3'-deoxy-3'-fluoro substituted nucleoside derivatives
BR112015028764B1 (pt) 2013-05-16 2022-09-27 Riboscience Llc Derivados de nucleosídeo de 4-fluoro-2-metil substituídos como inibidores de replicação de rna do hcv
US20180200280A1 (en) 2013-05-16 2018-07-19 Riboscience Llc 4'-Fluoro-2'-Methyl Substituted Nucleoside Derivatives as Inhibitors of HCV RNA Replication
EP3004130B1 (en) 2013-06-05 2019-08-07 Idenix Pharmaceuticals LLC. 1',4'-thio nucleosides for the treatment of hcv
WO2015017713A1 (en) 2013-08-01 2015-02-05 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-amino acid phosphoramidate pronucleotides of halogeno pyrimidine compounds for liver disease
NZ716840A (en) 2013-08-27 2017-06-30 Gilead Pharmasset Llc Combination formulation of two antiviral compounds
WO2015042375A1 (en) 2013-09-20 2015-03-26 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis c virus inhibitors
WO2015061683A1 (en) 2013-10-25 2015-04-30 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-amino acid phosphoramidate and d-alanine thiophosphoramidate pronucleotides of nucleoside compounds useful for the treatment of hcv
EP3063165A1 (en) 2013-11-01 2016-09-07 Idenix Pharmaceuticals LLC D-alanine phosphoramidate pronucleotides of 2'-methyl 2'-fluoro guanosine nucleoside compounds for the treatment of hcv
EP3074399A1 (en) 2013-11-27 2016-10-05 Idenix Pharmaceuticals LLC 2'-dichloro and 2'-fluoro-2'-chloro nucleoside analogues for hcv infection
US9717797B2 (en) 2013-12-05 2017-08-01 International Business Machines Corporation Polycarbonates bearing aromatic N-heterocycles for drug delivery
US10683321B2 (en) 2013-12-18 2020-06-16 Idenix Pharmaceuticals Llc 4′-or nucleosides for the treatment of HCV
EP3089757A1 (en) 2014-01-03 2016-11-09 AbbVie Inc. Solid antiviral dosage forms
EP2899207A1 (en) 2014-01-28 2015-07-29 Amikana.Biologics New method for testing HCV protease inhibition
WO2015134780A1 (en) 2014-03-05 2015-09-11 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Solid prodrug forms of 2'-chloro-2'-methyl uridine for hcv
EP3114122A1 (en) 2014-03-05 2017-01-11 Idenix Pharmaceuticals LLC Solid forms of a flaviviridae virus inhibitor compound and salts thereof
WO2015134561A1 (en) 2014-03-05 2015-09-11 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions comprising a 5,5-fused heteroarylene flaviviridae inhibitor and their use for treating or preventing flaviviridae infection
WO2015161137A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3'-substituted methyl or alkynyl nucleosides for the treatment of hcv
US11192914B2 (en) 2016-04-28 2021-12-07 Emory University Alkyne containing nucleotide and nucleoside therapeutic compositions and uses related thereto
CA3075645A1 (en) 2017-09-21 2019-03-28 Riboscience Llc 4'-fluoro-2'-methyl substituted nucleoside derivatives as inhibitors of hcv rna replication
US20220099637A1 (en) 2018-12-04 2022-03-31 Bristol-Myers Squibb Company Methods of analysis using in-sample calibration curve by multiple isotopologue reaction monitoring

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0475255A3 (en) * 1990-09-12 1993-04-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Process for the preparation of optically pure (s)-alpha-((tert-butylsulfonyl)methyl)hydro cinnamic acid
JPH05155827A (ja) * 1991-12-09 1993-06-22 Banyu Pharmaceut Co Ltd ｃｉｓ−２−アミノシクロプロパンカルボン酸誘導体の製造法
IT1272179B (it) 1994-02-23 1997-06-16 Angeletti P Ist Richerche Bio Metodologia per riprodurre in vitro l'attivita' proteolitica della proteasi ns3 del virus hcv.
CN1141591A (zh) * 1994-02-23 1997-01-29 布·安格莱荻公司分子生物学研究所 体外再生丙型肝炎病毒(hcv)ns3蛋白酶的解蛋白活性的方法
GB9517022D0 (en) 1995-08-19 1995-10-25 Glaxo Group Ltd Medicaments
IT1277914B1 (it) * 1995-08-22 1997-11-12 Angeletti P Ist Richerche Bio Procedimento per produrre - in forma pura e in quantita' elevate - polipeptidi con l'attivita' proteolitica della proteasi ns3 di hcv, e
CA2165996C (en) * 1995-12-22 2002-01-29 Murray Douglas Bailey Stereoselective preparation of 2-substituted succinic derivatives
DE19600034C2 (de) 1996-01-02 2003-12-24 Degussa 1,1,2-Trisubstituierte Cyclopropanverbindungen, Verfahren zu deren Herstellung und Dihydroxyethyl-substituierte 1-Amino-cyclopropan-1-carbonsäure
US5633388A (en) 1996-03-29 1997-05-27 Viropharma Incorporated Compounds, compositions and methods for treatment of hepatitis C
BR9712544B1 (pt) 1996-10-18 2013-10-22 Inibidores de proteases de serina, composição farmacêutica compreendendo os mesmos e seus usos
EP1001764A4 (en) 1997-05-29 2005-08-24 Merck & Co Inc HETEROCYCLIC AMIDE COMPOUNDS AS INHIBITORS OF CELL ADHESION
HUP0004853A3 (en) 1997-08-11 2001-12-28 Boehringer Ingelheim Ca Ltd Hepatitis c inhibitor peptides, process for preparation thereof, pharmaceutical compositions comprising thereof, their use and their intermediates
US6767991B1 (en) 1997-08-11 2004-07-27 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis C inhibitor peptides
SE9704543D0 (sv) * 1997-12-05 1997-12-05 Astra Ab New compounds
US6455571B1 (en) * 1998-04-23 2002-09-24 Abbott Laboratories Inhibitors of neuraminidases
DE19835120C1 (de) * 1998-08-04 1999-10-21 Westfalia Separator Ag Verfahren und Vorrichtung zum Einstellen des Flüssigkeitsgehalts des aus einer selbstentleerenden Schleudertrommel eines Separators ausgetragenen Feststoffes
US6323180B1 (en) * 1998-08-10 2001-11-27 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Hepatitis C inhibitor tri-peptides
US6277830B1 (en) * 1998-10-16 2001-08-21 Schering Corporation 5′-amino acid esters of ribavirin and the use of same to treat hepatitis C with interferon
US6608027B1 (en) 1999-04-06 2003-08-19 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
US7091184B2 (en) * 2002-02-01 2006-08-15 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
US6642204B2 (en) * 2002-02-01 2003-11-04 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
WO2004101602A2 (en) * 2003-03-05 2004-11-25 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis c inhibitor peptide analogs
WO2004101605A1 (en) * 2003-03-05 2004-11-25 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis c inhibiting compounds

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102012016127A1 (de) 2011-08-31 2013-02-28 Daniel Elias Bioaktive, regenerative Mischung zur Herstellung eines Ergänzungsnahrungsmittels
DE202012012998U1 (de) 2011-08-31 2014-06-13 Daniel Elias Bioaktive, regenerative Mischung zur Herstellung eines Ergänzungsnahrungsmittels

Also Published As

Publication number Publication date
SI2028186T1 (sl) 2013-06-28
EP2028186A3 (en) 2009-04-01
CY1109291T1 (el) 2014-07-02
BR9913646B1 (pt) 2014-12-02
HUP0105144A3 (en) 2002-11-28
RS50798B (sr) 2010-08-31
PT1105413E (pt) 2009-06-30
IL141012A (en) 2009-09-01
PL346626A1 (en) 2002-02-25
IN2001MU00127A (sk) 2005-03-04
EE05517B1 (et) 2012-02-15
CA2445938A1 (en) 2000-02-24
HUP0105144A2 (hu) 2002-04-29
WO2000009543A2 (en) 2000-02-24
SK2062001A3 (en) 2001-10-08
PH11999002002B1 (en) 2007-10-19
CZ302766B6 (cs) 2011-10-26
RS53562B1 (sr) 2015-02-27
AR073428A2 (es) 2010-11-03
HRP20010102B1 (en) 2010-07-31
BG65738B1 (bg) 2009-09-30
KR20010085363A (ko) 2001-09-07
MX257413B (es) 2008-05-27
ZA200100971B (en) 2002-06-26
US6268207B1 (en) 2001-07-31
SK288068B6 (sk) 2013-05-03
BR9917805B1 (pt) 2014-06-17
JP5021711B2 (ja) 2012-09-12
CA2338946A1 (en) 2000-02-24
NO20010683L (no) 2001-04-02
JP2002522554A (ja) 2002-07-23
IL196545A0 (en) 2011-07-31
MY127538A (en) 2006-12-29
NO328952B1 (no) 2010-06-28
MXPA01001423A (es) 2001-08-01
EE200100081A (et) 2002-08-15
US6410531B1 (en) 2002-06-25
EA003906B1 (ru) 2003-10-30
TWI250165B (en) 2006-03-01
EP1105413B1 (en) 2009-04-29
SI1105413T1 (sl) 2009-10-31
US6534523B1 (en) 2003-03-18
AU769738B2 (en) 2004-02-05
SA99200617B1 (ar) 2006-06-24
BG105232A (en) 2001-11-30
DK2028186T3 (da) 2013-03-25
CN101143892B (zh) 2010-12-08
KR100631439B1 (ko) 2006-10-09
SA99200617A (ar) 2005-12-03
KR100672229B1 (ko) 2007-02-28
ME00381B (me) 2011-10-10
US6329417B1 (en) 2001-12-11
US6329379B1 (en) 2001-12-11
US20020016442A1 (en) 2002-02-07
NO336663B1 (no) 2015-10-12
CO5261542A1 (es) 2003-03-31
IN2007MU00706A (sk) 2007-07-20
HK1040085A1 (zh) 2002-05-24
ATE430158T1 (de) 2009-05-15
CZ301268B6 (cs) 2009-12-30
NZ510396A (en) 2004-02-27
US6420380B2 (en) 2002-07-16
MEP58508A (en) 2011-05-10
HK1113164A1 (en) 2008-09-26
AU5273199A (en) 2000-03-06
NO20010683D0 (no) 2001-02-09
HUP1300080A2 (sk) 2002-04-29
ES2326707T3 (es) 2009-10-16
USRE41894E1 (en) 2010-10-26
CA2338946C (en) 2010-10-12
HRP20010102A2 (en) 2002-02-28
IL141012A0 (en) 2002-02-10
EP1105413A2 (en) 2001-06-13
BR9913646A (pt) 2001-06-05
JP2010043124A (ja) 2010-02-25
HK1040085B (zh) 2008-05-30
CY1113935T1 (el) 2016-07-27
WO2000009543A3 (en) 2000-05-25
ID27839A (id) 2001-04-26
IN211493B (sk) 2008-01-25
USRE41356E1 (en) 2010-05-25
RS20090459A (sr) 2010-06-30
CA2445938C (en) 2012-10-30
HU230701B1 (hu) 2017-10-30
EP2028186B1 (en) 2013-01-23
KR20060083992A (ko) 2006-07-21
HU229262B1 (en) 2013-10-28
ES2405930T3 (es) 2013-06-04
CN1323316A (zh) 2001-11-21
US20020037998A1 (en) 2002-03-28
PT2028186E (pt) 2013-03-27
BRPI9913646B8 (pt) 2021-05-25
TR200100432T2 (tr) 2001-09-21
PE20000949A1 (es) 2000-09-26
IL196545A (en) 2012-06-28
MX261584B (es) 2008-10-22
CN100339389C (zh) 2007-09-26
PL204850B1 (pl) 2010-02-26
NO20100004L (no) 2001-04-02
YU9401A (sh) 2003-02-28
CZ2001516A3 (cs) 2001-08-15
USRE40525E1 (en) 2008-09-30
AR069583A2 (es) 2010-02-03
EA200100228A1 (ru) 2001-10-22
UA75026C2 (en) 2006-03-15
CN101143892A (zh) 2008-03-19
USRE42164E1 (en) 2011-02-22
AR020880A1 (es) 2002-06-05
EP2028186A2 (en) 2009-02-25
TR200200129T2 (tr) 2002-06-21
US6323180B1 (en) 2001-11-27
DE69940817D1 (en) 2009-06-10
JP4485685B2 (ja) 2010-06-23
DK1105413T3 (da) 2009-08-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6323180B1 (en) Hepatitis C inhibitor tri-peptides
EP1105422B1 (en) Hepatitis c inhibitor peptides

Legal Events

Date Code Title Description
MK4A Patent expired

Expiry date: 20190809