PT1309597E

PT1309597E - ''polimorfos de um análogo de epotilona''

Info

Publication number: PT1309597E
Application number: PT01959536T
Authority: PT
Inventors: Denis Favreau; Jack Z Gougoutas; John D Dimarco; Imre M Vitez; Martha; Michael Galella; Timothy M Malloy; Zhenrong Guo
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 2000-08-16
Filing date: 2001-08-01
Publication date: 2007-08-22
Also published as: HUP0300826A2; EP1309597B1; HK1052010A1; UY26886A1; YU12103A; ZA200300522B; CN1468243A; DK1309597T3; US7153879B2; SI21100B; NO20030707D0; NO20030707L; RU2272039C2; IS6714A; ATE366735T1; RO123296B1; PE20020290A1; CN1269821C; LT2003017A; EP1309597A2

Description

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Descrição “Polimorfos de um análogo de epotilona”

Campo da invenção A presente invenção diz respeito a formas polimórficas cristalinas de um análogo de epotilona muito potente caracterizado por possuir melhores propriedades.

Antecedentes da invenção

As epotilonas são compostos macrólidos úteis no domínio farmacêutico. Por exemplo, é possível concluir que as epotilonas A e B que satisfazem as fórmulas estruturais:

Epotilona A R = H Epotilona B R = Me exercem efeitos estabilizadores dos microtúbulos semelhantes aos do paclitaxel (TAXOL®) e consequentemente que exibem actividade citotóxica contra células de proliferação rápida, tais como as células tumorais ou de outra doença celular hiperproliferativa, veja-se Hofle, G., et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl., Vol. 35, n° 13/14, 1567-1569 (1996); documento WO 93/10121, publicado a 27 de Maio de 1993, e documento W097/19086, publicado a 29 de Maio de 1997.

Foram já sintetizados diversos análogos de epotilona, os quais podem ser utilizados para tratar diversos tipos de cancros e outras doenças associadas a uma proliferação anormal. Tais análogos foram descritos por Hofle et al., Id.; Nicolaou, K.C., et al., Angew Chem. Int. Ed. Eng., Vol. 36, n° 19, 2097-2103 2 (1997), e Su, D.-S., et al., Anqew Chem. Int. Ed. Enq., Vol. 36 n° 19, 2093-2097 (1997).

Um dos análogos de epotilona particularmente vantajosos, sobre o qual se concluiu que possui uma actividade benéfica, é a [1S-[1R*, 3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-7, ll-di-hidroxi-8,8,10,12,16--pentametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)-etenil]-4-aza-17-oxa-biciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona. De acordo com a presente invenção, esta proporciona duas formas cristalinas do análogo de epotilona em questão. Estes polimorfos, que foram designados respectivamente por formas A e B, são novas formas cristalinas que se identificam a seguir.

Descrição abreviada dos desenhos A figura 1 é um padrão de difracção dos raios X no pó (CuKa λ = 1,5406 À à temperatura ambiente) da forma A do análogo de epotilona da presente invenção. A figura 2 é um padrão de difracção dos raios X no pó (CuKa λ = 1,5406 Ã à temperatura ambiente) da forma B do análogo de epotilona da presente invenção. A figura 3 é um padrão de difracção dos raios X no pó de uma mistura das formas A e B (CuKa λ = 1, 5406 Á à temperatura ambiente) do análogo de epotilona da presente invenção. A figura 4 é uma comparação entre os padrões de difracção dos raios X no pó simulado e real das formas A e B do análogo de epotilona da invenção. A figura 5 é um espectro de Raman da forma A do análogo de epotilona da invenção. A figura 6 é um espectro de Raman da forma B do análogo de epotilona da invenção. A figura 7 é um espectro de Raman de uma mistura das formas A e B do análogo de epotilona da invenção. A figura 8 mostra a conformação no estado sólido da forma A do análogo de epotilona da invenção. 3 A figura 9 mostra a conformação no estado sólido da forma B do análogo de epotilona da invenção.

Descrição abreviada da invenção

De acordo com a presente invenção, esta proporciona dois polimorfos cristalinos do análogo de epotilona representado pela fórmula estrutural I.

i

Concluiu-se que um destes polimorfos, designado por forma A, possui propriedades particularmente vantajosas. A presente invenção diz respeito à forma A e à forma B de polimorfos cristalinos, bem como às suas misturas. A presente invenção diz ainda respeito à utilização destas formas cristalinas para o tratamento de cancros e outras doenças proliferativas e a formulações farmacêuticas que as contêm.

Descrição minuciosa da invenção

De acordo com a presente invenção, esta proporciona polimorfos de um análogo de epotilona representado pela fórmula estrutural I seguinte

& OH 0 I 0 análogo de epotilona representado pela fórmula estrutural I tem a designação química de [IS-[IR*,3R*(E),7R*,10S*,11R*, 12R*,16S*]]- 4 -7, ll-di-hidroxi-8, 8,10,12,16-pentametil-3- [l-metil-2- (2-metil-4--tiazolil)-etenil]-4-aza-17-oxabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9--diona. Tal análogo e sua preparação encontram-se descritos no pedido de patente de invenção norte-americana com o número de série 09/170 582, depositado a 13 de Outubro de 1998, cuja descrição aqui se considera incorporada por referência. Os polimorfos do análogo representado pela fórmula estrutural I anterior são agentes estabilizadores dos microtúbulos. Como tal, são úteis para a obtenção de medicamentos para o tratamento de diversos tipos de cancro e outras doenças proliferativas, incluindo, mas sem que isso constitua qualquer limitação: - carcinoma, tal como o carcinoma da bexiga, mama, cólon, rim, fígado, pulmão, ovário, pâncreas, estômago, cérvix, tiróide e pele, incluindo o carcinoma das células escamosas; tumores hematopoiéticos de linhagem linfóide, tais como leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma das células B, linfoma das células T, linfoma de Hodgkins, linfoma não Hodgkins, linfoma das células pilosas e linfoma de Burketts; - tumores hematopoiéticos de linhagem mielóide, tais como leucemias mielogenosas aguda e crónica e leucemia promielocítica; tumores de origem mesenquimal, tais como fibrossarcoma e rabdomiossarcoma; - outros tumores, incluindo melanoma, seminoma, teratocarcinoma, neuroblastoma e glioma; - tumores do sistema nervoso central e periférico, incluindo astrocitoma, neuroblastoma, glioma e neuromas; tumores de origem mesenquimal, incluindo fibrossarcoma, rabdomiossarcoma e osteossarcoma e outros tumores, incluindo melanoma, xeroderma pigmentoso, ceratoacantoma, seminoma, cancro folicular da tiróide e teratocarcinoma .

Os polimorfos da invenção também inibem a angiogénese, afectando assim o crescimento de tumores e proporcionando tratamento 5 para tumores e distúrbios associados aos tumores. Tais propriedades anti-angiogénese também serão úteis para o tratamento de outros estados patológicos que respondem a agentes anti-angiogénicos, incluindo, mas sem que isso constitua qualquer limitação, algumas formas de cegueira associada à vascularização retinal, artrite, especialmente artrite inflamatória, esclerose múltipla, reestenose e psoriase.

Os polimorfos do análogo representado pela fórmula estrutural I induzem ou inibem a apoptose, que é um processo fisiológico de morte celular critico para o desenvolvimento normal e a homeostasia. As alterações dos circuitos apoptóticos contribuem para a patogénese de diversas doenças humanas. Os polimorfos da invenção, enquanto moduladores da apoptose, serão úteis para o tratamento de várias doenças humanas caracterizadas por deficiências na apoptose, incluindo, mas sem que isso constitua qualquer limitação, cancro e lesões precancerosas, doenças associadas à resposta imunitária, infecções virais, doenças degenerativas do sistema músculo--esquelético e doença renal.

Sem pretender ficar restringido a nenhum mecanismo ou morfologia, tais formas cristalinas do análogo de epotilona representado pela fórmula estrutural também podem ser utilizadas para a obtenção de medicamentos para tratar estados patológicos que não o cancro ou outras doenças proliferativas. Tais estados patológicos incluem, mas sem que isso constitua qualquer limitação, infecções virais, tais como virus do herpes, poxvírus, vírus de Epstein-Barr, vírus de Sindbis e adenovírus; doenças de natureza autoimunitária, tais como lúpus sistémico eritematoso, glomerulo-nefrite associada ao sistema imunitário, artrite reumatóide, psoriase, doenças intestinais inflamatórias e diabetes mellitus de natureza autoimunitária; distúrbios neurodegenerativos, tais como doença de Alzheimer, demência associada à SIDA, doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, retinite pigmentosa, atrofia muscular espinal e degeneração cerebelar; SIDA; síndromas mielodisplásicas; anemia aplásica; lesão isquémica associada a 6 enfartes do miocárdio; apoplexia e lesão por reperfusão; reestenose; arritmia; aterosclerose; doenças hepáticas induzidas por toxinas ou por álcool; doenças hematológicas, tais como anemia crónica e anemia aplásica; doenças degenerativas do sistema músculo-esquelético, tais como osteoporose e artrite; rinossinusite sensível à aspirina; fibrose cística; esclerose múltipla; doenças renais e dor associada ao cancro. A quantidade eficaz dos polimorfos da invenção, em particular da forma A, pode ser determinada por um especialista na matéria e como quantidades de dosagem exemplificativas para um ser humano é possível referir quantidades entre 0,05 e 200 mg/kg/dia que podem ser administradas numa dose única ou sob a forma de doses divididas individuais, por exemplo, entre 1 e 4 vezes por dia. De preferência, os polimorfos da invenção são administrados numa dosagem inferior a 100 mg/kg/dia, numa dose única ou em 2 a 4 doses divididas. Faz-se observar que o nível de dosagem específico e a frequência de dosagem para um determinado paciente pode variar e irá depender de diversos factores, tais como a actividade do composto específico utilizado, a espécie, a idade, a massa corporal, o estado geral de saúde, o género e a dieta do paciente, o modo e o momento de administração, a taxa de excreção, a combinação de fármacos e a gravidade do estado patológico em causa. De preferência, os polimorfos da invenção são administrados por via parentérica; no entanto, são aqui contempladas outras via de administração como vias reconhecidas pelos especialistas oncológicos. Como pacientes preferidos para o tratamento refere-se os animais, mais preferencialmente mamíferos, tais como seres humanos, e animais domésticos, tais como cães, gatos e semelhantes, que padeçam dos distúrbios supramencionados. O processo para a preparação dos análogos de epotilona, representados pela fórmula estrutural I, que se encontra descrito no pedido de patente de invenção norte-americana com o n° de série 09/170 582, deu origem ao análogo de epotilona da invenção sob a forma de um óleo que pode ser submetido a cromatograf ia e 7 purificado para proporcionar um pó amorfo. Há um processo de preparação mais preferido que se encontra descrito num pedido subsequente com o n° de série 09/528 526, publicado a 20 de Março de 2000, cuja descrição aqui se considera incorporada por referência. Em tal preparação, respeitante aos análogos representados pela fórmula estrutural I, faz-se reagir a epotilona B com um agente dador de azida e um agente de tamponamento, na presença de um catalisador de paládio e de um agente de redução, para se formar um intermediário representado pela fórmula estrutural

Depois submete-se o intermediário a uma reacção de macro-lactamação para se formar o análogo representado pela fórmula estrutural I. Concluiu-se recentemente que tal análogo, na sua forma cristalina, é constituído por uma mistura das formas A e B, conforme aqui se descreveu minuciosamente. É possível retomar a forma amorfa do análogo de epotilona, representado pela fórmula estrutural I, num solvente adequado, de preferência um solvente misto, tal como acetato de etilo/ /diclorometano/trietilamina, purificá-la, por exemplo, por filtração através de uma camada de gel de sílica, e cristalizá-la por arrefecimento até uma temperatura de cerca de 5°C para formar um material cristalino que é uma mistura de forma A e forma B. O passo de purificação, utilizando uma mistura de solventes que contém um componente tal como diclorometano, permite remover os solventes residuais da síntese que poderiam interferir com o processo de cristalização.

De um modo geral, a retoma do material purificado numa quantidade limitada de acetato de etilo e o aquecimento da pasta resultante até uma temperatura entre 75°C e 80°C irá permitir a formação da forma A. O termo “expressão limitada” designa entre 8 e 16 mL e de preferência entre 8 e 12 mL de acetato de etilo por cada grama de material purificado. À medida que se aquece a solução, forma-se uma pasta fina, sobre a qual se concluiu que era predominantemente constituída pela forma B. A cerca de 75°C, a pasta sofre um espessamento material atribuível à formação da forma A.

Mantém-se a pasta a uma temperatura compreendida entre 75°C e 80°C durante cerca de uma hora para se garantir a completa formação da forma A, após o que se adiciona ciclo-hexano à pasta, numa proporção em relação ao acetato de etilo compreendida entre 1:2 e 2:2 e de preferência de 1:2, e se deixa arrefecer a mistura até à temperatura ambiente, temperatura esta à qual se mantém sob agitação durante um período compreendido entre 12 e 96 horas. A seguir arrefece-se a mistura até cerca de 5°C ao longo de cerca de duas horas, após o que se recupera os cristais de forma A do análogo de epotilona da invenção. A forma A é obtida com um bom rendimento e uma boa pureza. Há procedimentos alternativos para a preparação de forma A que compreendem a adição de cristais primários. Nas descrições subsequentes, foram utilizados cristais primários de forma A, mas também é possível utilizar cristais primários de forma B ou suas misturas. De acordo com um de tais procedimentos, retoma-se o material purificado numa quantidade limitada de acetato de etilo, conforme descrito antes, aquece-se até cerca de 75°C, adiciona-se cristais primários e mantém-se a mistura em repouso durante cerca de 30 minutos. Depois adiciona-se, gota a gota, uma quantidade de ciclo-hexano, conforme descrito antes, mantendo-se a temperatura a cerca de 70°C. A seguir arrefece-se a mistura até 20C e mantém-se sob agitação durante 18 horas, período esse ao fim do qual se arrefece até 5°C e se recupera os cristais brancos de forma A por separação física, v.g., filtração.

De acordo com um segundo procedimento, aquece-se até 75°C a solução inicial de material em acetato de etilo, pelo menos durante uma hora, até se obter uma solução. Arrefece-se a 9 solução até cerca de 50 °C ao longo de cerca de duas horas, adicionando-se os cristais primários de forma A quando a temperatura atinge cerca de 60°C. Os cristais começam a surgir a uma temperatura de cerca de 55°C. Baixa-se novamente a temperatura até cerca de 20°C ao longo de mais duas horas, durante uma hora das quais se adiciona, gota a gota, uma quantidade de ciclo-hexano tal como descrito antes. Arrefece-se novamente a pasta final ao longo de duas horas até -10°C e mantém-se a essa temperatura durante mais uma hora. A seguir filtra-se a pasta para se obter os cristais brancos de forma A.

De acordo com um outro procedimento alternativo, retoma-se o material numa quantidade superior, isto é, pelo menos cerca de 40 mL/g de acetato de etilo, e aquece-se a pasta resultante até cerca de 80°C até se formar uma solução, a qual se arrefece até cerca de 70°C ao longo de cerca de uma hora. Adiciona-se cristais primários de forma A quando a temperatura da solução atinge cerca de 70°C. Depois baixa-se a temperatura até cerca de 30°C durante mais três horas. Os cristais começam a surgir a uma temperatura de cerca de 65°C. Baixa-se a temperatura até -10°C ao longo de mais três horas e adiciona-se, gota a gota, uma quantidade de ciclo-hexano, tal como descrito antes, durante 30 minutos de tal período de três horas. Mantém-se a temperatura a -10°C durante mais uma hora. Filtra-se a pasta final para se obter cristais brancos da forma A. Os valores de rendimento e pureza da forma A, obtida por meio de tais procedimentos, são muito bons.

Obtém-se a forma B do análogo de epotilona da invenção, representado pela fórmula estrutural I anterior, formando uma pasta do material impura numa quantidade superior de acetato de etilo, isto é, entre 40 mL e 50 mL por cada grama, e aquecimento a uma temperatura entre 70°C e 80°C durante uma hora para se formar uma solução que se mantém depois a essa temperatura durante cerca de trinta minutos. Arrefece-se a solução até cerca de 30°C ao longo de cerca de duas horas e os cristais começam a surgir a cerca de 38°C. Baixa-se mais a temperatura até cerca de 10 -10 °C ao longo de uma hora, período esse durante o qual se adiciona, gota a gota, uma quantidade de ciclo-hexano, tal como descrito antes, ao longo de trinta minutos. Mantém-se a pasta final a -10°C durante mais duas horas e filtra-se para se obter cristais brancos de forma B.

De acordo com um processo de preparação alternativo, amassa-se o material impuro com uma quantidade semelhante de acetato de etilo e aquece-se até cerca de 78°C para se obter uma solução que se mantém depois a essa temperatura durante cerca de trinta minutos. Arrefece-se a solução até cerca de 10°C durante cerca de duas horas e adiciona-se cristais primários de forma A quanto a temperatura atinge cerca de 10°C. Baixa-se novamente a temperatura até -10°C ao longo de mais duas horas e durante um período de trinta minutos de tais três horas adiciona-se, gota a gota, uma quantidade de ciclo-hexano tal como descrito antes. Mantém-se a temperatura a -10°C durante duas horas. Filtra-se a pasta final para se obter cristais brancos de forma B.

De acordo com um outro procedimento alternativo, retoma-se o material purificado noutro solvente, de preferência tolueno, numa quantidade compreendida entre cerca de 10 mL e 20 mL por grama, aquece-se até uma temperatura entre 75°C e 80°C durante 30 minutos, deixa-se então arrefecer até 20°C e mantém-se sob agitação durante 18 horas. Recupera-se cristais brancos de forma B por separação física a partir da pasta. Os valores de rendimento e pureza da forma B, obtida por meio de tais procedimentos, são muito bons.

As figuras 1 a 3 mostram padrões de difracção de raios X no pó respectivamente da forma A, da forma B e de uma mistura destas formas do análogo da invenção. A figura 4 mostra uma comparação dos padrões de difracção de raios X no pó simulados a partir das estruturas de cristal único das formas A e B com o padrão real de cada uma das formas. Os padrões de difracção de raios X foram gerados a partir de um dispositivo ‘Xpert’ da Philips, com uma fonte geradora de 44 kV e 40 mA e um filamento 11 de CuKa de λ = 1,5406 Á à temperatura ambiente. Nos resultados ilustrados nas figuras 1 a 4, bem como nos quadros 1 e 2 a seguir apresentados que contém um resumo dos dados, as diferenças encontradas determinam evidentemente que as formas A e B do análogo de epotilona da invenção possuem estruturas cristalinas diferentes. Nos quadros, os picos com intensidades entre 1 e 12 são classificados como muito fracos, entre 13 e 32 como fracos, entre 33 e 64 como médios, entre 65 e 87 como fortes e entre 88 e 100 como muito fortes.

Quadro 1

Valores para a forma A Posição do pico (dois teta) (CuKa λ = 1,5406 Á à temperatura ambiente) Intensidade relativa do pico Posição do pico (dois teta) Intensidade relativa do pico 5,69 Muito fraco 21,06 Muito forte 6,76 Muito fraco 21,29 Fraco 8,38 Muito fraco 22,31 Fraco 11,43 Fraco 23,02 Fraco 12,74 Muito fraco 23,66 Fraco 13,62 Muito fraco 24,18 Muito fraco 14,35 Muito fraco 24,98 Fraco 15,09 Muito fraco 25,50 Fraco 15,66 Fraco 26,23 Muito fraco 16,43 Muito fraco 26,46 Muito fraco 17,16 Muito fraco 27,59 Muito fraco 17,66 Muito fraco 28,89 Muito fraco 18,31 Fraco 29,58 Muito fraco 19,03 Fraco 30,32 Muito fraco 19,54 Médio 31,08 Muito fraco 20,57 Fraco 31,52 Muito fraco 12

Quadro 2

Valores para a forma B Posição do pico (dois teta) (CuKa λ = 1, 5406 Á à temperatura ambiente) Intensidade relativa do pico Posição do pico (dois teta) Intensidade relativa do pico 6, 17 Muito fraco 21, 73 Médio 10,72 Muito fraco 22, 48 Muito forte 12,33 Fraco 23, 34 Médio 14,17 Fraco 23, 93 Médio 14,93 Médio 24, 78 Médio 15,88 Médio 25, 15 Fraco 16,17 Médio 25, 90 Fraco 17, 11 Médio 26,63 Médio 17, 98 Fraco 27, 59 Muito fraco 19,01 Muito forte 28, 66 Fraco 19,61 Médio 29, 55 Fraco 20,38 Médio 30, 49 Fraco 21,55 Médio 31,22 Fraco

As figuras 5 a 7 mostram os resultados da espectroscopia de Raman respectivamente das formas A e B e de uma mistura destas formas do análogo da invenção. Os espectros também demonstram duas formas cristalinas diferentes, em particular as bandas a 3130 αιΓ1 e 3115 cm-1.

No quadro 3 seguinte estão indicadas caracteristicas físicas diferenciadoras das duas formas polimorfas. Determinou-se a calorimetria de dissolução utilizando um microcalorímetro ‘Thermometrics’ em etanol, a 25°C. de igual modo, também as solubilidades foram determinadas a 25°C. A partir de determinados dados, em particular do calor de dissolução, torna-se também evidente que a forma A é mais estável e consequentemente a forma A é preferida. 13

Quadro 3

Caracteristica Forma A Forma B Solubilidade em água 0,1254 0,1907 Solubilidade em Polissorbato 80 a 3% 0,2511 0,5799 (solução aquosa) Calor de dissolução 20,6 kJ/mol 9,86 kJ/mol A forma A e a forma B do análogo de epotilona representado pela fórmula estrutural I podem ainda ser caracterizadas por parâmetros de célula unitária obtidos por análise cristalográfica por raios X em cristal único, conforme adiante se indica. No capitulo 3 da obra de Stout e Jensen, ‘X-Ray structure Determination: A Practical Guide’, MacMillian Co., Nova Iorque, NY (1968), é possivel encontrar uma contagem pormenorizada de células unitárias.

Parâmetros de Dimensões celulares

Grupo espacial

Moléculas/célula unitária Densidade (calculada) (g/cm3) Ponto de fusão

Parâmetros de Dimensões celulares

Grupo espacial célula unitária da forma A a = 14,152(6) Á b = 30,72(2) Ã c = 6,212(3) Á Volume = 2701(4) A3 P2 i 2121 ortorrômbico 4 1,247 182°C-185°C (decomposição).

célula unitária da forma B a = 16,675(2) Á b = 28,083(4) Ã c = 6,054(1) Á Volume = 2835(1) A3 Ρ2χ2ι2ι ortorrômbico 14 4

Moléculas/célula unitária Densidade (calculada) (g/cm3) Ponto de fusão 1,187 191°C-199°C (decomposição).

As diferenças existentes entre as formas A e B do análogo de epotilona da invenção são ainda melhor ilustradas pelas suas conformações em estado sólido, conforme se ilustra respectivamente nas figuras 8 e 9, com base nas coordenadas atómicas fraccionais agrupadas nos quadros 4 a 7 seguintes. 15

Quadro 4

Coordenadas atómicas fraccionais para o análogo de epotilona de

fórmula estrutural I: forma A Átomo X Y Z Ull*10e2 Cl 0,3879 ( 3) 0, 4352 ( D 0,5503 ( 9) 60 ( 6) 01 0, 4055 ( 2) 0, 4300 ( D 0, 7435 ( 5) 68 ( 4) C2 0,2864( 3) 0, 4340 ( D 0, 4675 ( 7) 42 ( 6) C3 0,2696 ( 3) 0,4210 ( D 0,2325 ( 7) 56 ( 6) 03 0,3097( 2) 0, 4550 ( D 0,1027( 5) 71 ( 4) C4 0,1615 ( 3) 0,4154 ( D 0, 1852 ( 7) 50 ( 6) C5 0, 1289 ( 3) 0,3732 ( D 0,2895 ( 8) 58 ( 6) 05 0, 0935 ( 3) 0,3748 ( D 0,4713 ( 6) 135 ( 6) C6 0, 1343 ( 3) 0,3296 ( D 0,1769( 8) 6 6 ( 6) Cl 0, 1503 ( 3) 0,2921( D 0,3353 ( 8) 84 ( 6) 07 0,1410 ( 3) 0,2528 ( D 0,2127( 6) 127 ( 5) C8 0,2449 ( 4) 0,2936 ( D 0, 4540 ( 8) 83 ( 7) C9 0,3284 ( 4) 0,2824 ( D 0,3072 ( 9) 81 ( 7) CIO 0, 4258 ( 4) 0,2877( D 0,4141 ( 8) 76 ( 7) Cll 0,4467( 3) 0,3359 ( D 0, 4622 ( 8) 6 7 ( 6) C12 0,5220 ( 3) 0,3426 ( D 0,6294 ( 8) 53 ( 6) 012 0,6171 ( 2) 0,3288 ( D 0,5612 ( 5) 56 ( 4) C13 0,5983 ( 3) 0,3746 ( D 0,5991 ( 8) 50 ( 6) C14 0, 6099 ( 3) 0, 4053 ( D 0,4113 ( 8) 47 ( 6) C15 0,5568( 3) 0,4477( D 0, 4538 ( 8) 44 ( 6) N16 0, 4552 ( 3) 0, 4426 ( D 0, 4005 ( 6) 41 ( 5) Cl 7 0, 1482 ( 4) 0,4138 ( 2) -0, 0603 ( 8) 103 ( 7) C18 0, 1043 ( 4) 0, 4539 ( D 0,2734( 8) 62 ( 6) C19 0, 0386 ( 4) 0,3232 ( 2) 0, 0572 ( 10) 92 ( 8) C20 0,2404 ( 5) 0,2630 ( 2) 0,6482 ( 10) 145 ( 9) C21 0, 4974 ( 4) 0,3301 ( 2) 0, 8563 ( 9) 109 ( 8) C22 0,5935 ( 3) 0,4860( D 0,3281 ( 8) 48 ( 6) C23 0,5989 ( 4) 0,4815 ( 2) 0, 0875 ( 8) 132 ( 8) C24 0,6154 ( 3) 0,5222 ( D 0, 4376 ( 8) 59 ( 6) C25 0,6392 ( 3) 0,5656 ( D 0,3573 ( 8) 61 ( 6) N26 0,6786 ( 3) 0,5941 ( D 0,5076 ( 6) 75 ( 6) C27 0,6902 ( 3) 0,6325 ( 2) 0, 4255 ( 8) 59 ( 6) S28 0,6529 ( D 0,6381 ( D 0, 1655 ( 2) 92 ( 2) C29 0,6196 ( 4) 0,5846 ( 2) 0, 1632 ( 9) 85 ( 7) C30 0, 7292 ( 4) 0,6703 ( 2) 0,5523 ( 10) 106 ( 8) 16

Quadro 4 (continuação) U22*10e2 U33*10e2 Ul2*10e2 Ul3*10e2 U23*10e2 25 ( 4) 138( 8) -2 ( 4) 16 ( 5) -9 ( 4) 85 ( 4) 100( 5) 6( 3) 4 ( 3) K 3) 64 ( 5) 106( 6) 0( 4) 3 ( 4) -5 ( 4) 44 ( 5) 103( 6) -7( 4) 5 ( 4) 13 ( 4) 58 ( 3) 128( 4) -6( 3) 18 ( 3) 3 ( 3) 63 ( 5) 112( 6) -12( 4) -3 ( 4) 7 ( 4) 82 ( 6) 103( 7) -6 ( 4) -13( 5) 4 ( 5) 83 ( 4) 144( 5) -16( 4) 39 ( 4) 5 ( 3) 71 ( 5) 118 ( 6) -13 ( 5) -7 ( 4) -10 ( 4) 43 ( 5) 134( 6) -27 ( 4) -2 ( 5) -10 ( 5) 61 ( 4) 163( 5) -34( 3) -17( 4) -9 ( 3) 56 ( 5) 127( 6) -26( 5) -4 ( 5) 3 ( 5) 68 ( 5) 153( 7) -K 5) -4 ( 5) -26( 5) LO 1 vo LO 166( 8) 13 ( 5) -19 ( 5) -15( 5) 61 ( 5) 126( 7) -3 ( 4) -19( 4) -5 ( 5) 64 ( 5) 138( 7) 16 ( 4) 8 ( 5) -K 5) 61 ( 3) 155( 4) 15 ( 3) 8 ( 3) 4 ( 3) 45 ( 5) 162( 7) 3 ( 4) 2 ( 5) -8 ( 5) 63 ( 5) 159( 7) 2 ( 4) 5 ( 5) 7 ( 5) 44 ( 5) 143( 6) -4 ( 4) 7 ( 4) -K 4) 65 ( 4) 106( 5) -3 ( 3) 6( 3) -2 ( 3) 128( 7) 104( 7) -29 ( 6) -10( 5) 18 ( 5) 67 ( 5) 164( 7) 17 ( 5) 9 ( 5) 12 ( 5) 115( 7) 217( 10) -17 ( 6) -70( 7) -19( 7) 114( 7) 158( 8) -34 ( 6) -20( 6) 47 ( 6) 92 ( 6) 131( 7) 19 ( 5) 10 ( 5) 8 ( 5) 63 ( 5) 122( 6) 6 ( 4) 4 ( 5) -K 5) 78 ( 6) 116( 7) -7 ( 5) 12 ( 5) -13 ( 5) 55 ( 5) 132( 6) -6 ( 4) 9 ( 5) 7 ( 5) 65 ( 5) 127( 7) -12( 4) 8 ( 5) 5 ( 5) 58 ( 5) 129( 5) -9( 4) 4 ( 4) -5 ( 4) 69 ( 6) 128( 6) 9( 4) 2 ( 5) 7 ( 5) 79 ( 1) 163( 2) -10( 1) -3 ( 1) 20 ( 1) 78 ( 6) 161( 8) -13( 5) -9 ( 6) 3 ( 6) 75 ( 6) 186( 8) -29( 5) -5 ( 6) -10 ( 6) 17

Quadro 5

Posições dos átomos de hidrogénio: forma A Átomo X Y z U*10e2 H21 0,2475 ( 0) 0,4114( 0) 0,5659( 0) 4,86( 0) H22 0,2576 ( 0) 0, 4663 ( 0) 0, 4871 ( 0) 4, 86 ( 0) H31 0,3056 ( 0) 0,3905 ( 0) 0,2005 ( 0) 4,59( 0) H3 0,3433 ( 0) 0,4414 ( 0) -0, 0241 ( 0) LO LO LO 0) H61 0,1951 ( 0) 0,3304 ( 0) 0, 0646 ( 0) LO LO LO 0) H71 0,0960( 0) 0,2932( 0) 0,4607( 0) 5, 80 ( 0) H7 0, 1332 ( 0) 0,2276 ( 0) 0,3158 ( 0) 7,23( 0) H81 0,2588 ( 0) 0,3266 ( 0) 0,5107( 0) 5, 85 ( 0) H91 0,3274 ( 0) 0,3037( 0) 0, 1672 ( 0) 6,41( 0) H92 0,3217( 0) 0,2491 ( 0) 0,2527( 0) 6,41( 0) Hl 01 0, 4802 ( 0) 0,2743 ( 0) 0,3130 ( 0) 6,34( 0) H102 0, 4253 ( 0) 0,2697( 0) 0,5663 ( 0) 6,34( 0) Hl 11 0,4687( 0) 0,3519 ( 0) 0,3132 ( 0) 5,60( 0) H112 0,3823 ( 0) 0,3519( 0) 0,5172 ( 0) 5,60( 0) H131 0,6275 ( 0) 0,3905 ( 0) 0,7410 ( 0) 5,60( 0) H141 0,6837( 0) 0,4117( 0) 0,3814 ( 0) 5, 88 ( 0) H142 0,5803 ( 0) 0,3901 ( 0) 0,2659 ( 0) 5, 88 ( 0) H151 0,5638 ( 0) 0, 4542 ( 0) 0,6281 ( 0) 5,35( 0) H16 0, 4353 ( 0) 0,4447( 0) 0,2429 ( 0) 4,88( 0) H171 0, 1722 ( 0) 0,4437( 0) -0,1367( 0) 6,90( 0) H172 0,1919 ( 0) 0,3871 ( 0) -0, 1308 ( 0) 6,90( 0) H173 0, 0763 ( 0) 0,4077( 0) -0, 1076 ( 0) 6,90( 0) H181 0, 1273 ( 0) 0, 4835 ( 0) 0, 1956 ( 0) 6,31( 0) H182 0, 0295 ( 0) 0, 4491 ( 0) 0,2355 ( 0) 6,31( 0) H183 0,1123 ( 0) 0, 4566 ( 0) 0, 4436 ( 0) 6,31( 0) Hl 91 0, 0370 ( 0) 0,2923 ( 0) -0, 0226 ( 0) 8,78( 0) H192 -0,0186 ( 0) 0,3233 ( 0) 0, 1794 ( 0) 8,78( 0) H193 0, 0259 ( 0) 0,3491 ( 0) -0, 0525 ( 0) 8,78( 0) H201 0,3050 ( 0) 0,2635 ( 0) 0, 7355 ( 0) 8,17( 0) H202 0, 1828 ( 0) 0,2733 ( 0) 0, 7536 ( 0) 8,17( 0) H203 0,2252 ( 0) 0,2304 ( 0) 0,5923 ( 0) 8,17( 0) H211 0,4260( 0) 0,3415 ( 0) 0, 8951 ( 0) 'th co 0) H212 0, 4998 ( 0) 0,2955 ( 0) 0, 8754 ( 0) co QQ 0) 18

Quadro 6

Coordenadas atómicas fraccionais para o análogo de epotilona de

fórmula estrutural I: forma B Átomo X Y Z Ull*10e2 Cl 0,2316 (2) 0,1043(2) 0,7342(8) 56 (4) 01 0,2321(2) 0,1159(1) 0,5376(5) 131(4) C2 0,1812(2) 0,0623(1) 0,8106(7) 62(4) C3 0,1535(2) 0,0622(1) 1,0506(7) 52(4) 03 0,2226(2) 0,0539(1) 1,1856(5) 65 (3) 04 0,0876(2) 0,0237(1) 1,0903(7) 63(4) 05 0,0096(2) 0,0415(1) 0,9838(8) 57(4) 05 0132(2) 0,0252(1) 0,8117(6) 100(4) 06 -0,0409(2) 0,0796(1) 1, 1023 (6) 53(4) Cl -0,0754(2) 0,1151(1) 0,9373(9) 60(4) 07 -0,1316 (2) 0,1434(1) 1,0606(7) 79 (3) 08 -0,0135(3) 0,1468(1) 0,8213(8) 75(5) 09 0,0274(2) 0,1817(1) 0,9812(9) 80 (5) CIO 0,0946(3) 0,2107(2) 0,8766(10) 95 (5) Cll 0,1389(3) 0,2407(2) 1,0447(11) 97(5) C12 0,2065(3) 0,2688(2) 0,9440(11) 110(6) 012 0,2653(2) 0,2862(1) 1,1070(8) 124(4) C13 0,2894(3) 0,2520(2) 0,9406(10) 104(6) Cl 4 0,3190(3) 0,2049(2) 1,0281(10) 117(6) C15 0,3253(3) 0,1676(1) 0,8388(8) 86 (5) N16 0,2738(2) 0,1273(1) 0,8901(7) 64(4) Cl 7 0,0762(3) 0,0176(2) 1,3416(8) 102(6) C18 0,1109(2) -0, 0244(1) 0,9909(8) 82(5) C19 -0,1098(3) 0, 0529(2) 1,2197(10) 79(5) C20 -0,0528(3) 0,1729(2) 0, 6272 (9) 149(7) C21 0,1829(4) 0,3056(2) 0,7748(15) 175(9) C22 0,4128(3) 0,1527(2) 0,7991(8) 80 (5) C23 0,4521(4) 0,1784(3) 0,6109(13) 141(8) C24 0,4477(3) 0,1216(2) 0,9319(9) 88 (5) C25 0,5303(3) 0,1032(2) 0,9346(9) 76(5) N26 0,5822 (2) 0,1091(2) 0,7577(8) 71(5) C27 0,6498(3) 0,0890(2) 0,7986(10) 98 (6) S28 0,6565(1) 0, 0612(1) 1,0487(3) 107(1) C29 0,5605(3) 0,0785(2) 1,1053(10) 93 (6) C30 0,7206(4) 0,0891(3) 0,6410(12) 102(7) 19

Quadro 6 (continuação) U22*10e2 U33*10e2 Ul2*10e2 Ul3*10e2 U23*10e2 74(5) 86 (6) 5(4) -6(4) -16(5) 88(3) 74(4) -24(3) -13(3) -7(3) 85 (5) 68(5) -7(4) -6(4) -22 (5) 67(4) 71(5) 1(3) -19(4) -6(4) 123(4) 96(4) 7(3) -29(3) -19(4) 75(4) 63 (5) 5(4) -4(4) -10(4) 61(4) 78(5) -7(3) -2(4) -10(4) 103(4) 100(4) 19(3) -38(3) -38(4) 77(4) 92 (6) 14(4) 2(5) -17(5) 111(4) 185(5) 40(3) 22(4) -10(4) 74(5) 106 (6) 4(4) 8(5) -14(5) 69(4) 136(7) -10(4) -1(5) -19(5) 89(5) 175(8) -21(4) 15(7) -27(6) 98(6) 191(9) -22(5) 27(7) -48(7) 64(5) 208(9) -16(5) 10(7) -28 (6) 98(4) 241(7) -36(3) 30(5) -77(5) 82 (5) 169(9) -25(5) 23 (6) -38 (6) 102 (6) 160(8) -3(5) -26(6) -53(6) 74(5) 107(6) -18(4) -17(5) -15(5) 100(4) 98(5) -26(3) -13(4) -19(4) 129(6) 66 (5) -13(5) -5(5) 10(5) 58(4) 113 (6) 13(4) -11(5) -9(5) 139(7) 187(9) 1(5) 54(6) 29(7) 116 (6) 123(8) 10(6) -19(6) 22 (6) 86 (6) 338(15) -8(6) 0(11) 21(9) 80(5) 108(6) -29(4) -5(5) -6(5) 261(11) 237(13) 28(8) 54(9) 146(11) 111(6) 111(7) -5(5) 3(5) 21(6) 96 (5) 119(7) -12(4) 2(5) -2(6) 192(7) 114(6) 2(5) -6(5) 3(6) 165(7) 125(7) -5(6) -13(6) -19(7) 128(2) 173(2) 12(1) -25(2) 0(2) 122 (6) 166(9) 4(5) 3(6) 43(7) 443(17) 150(10) 45(10) 18(7) -17(12) 20

Quadro 7

Posições dos átomos de hidrogénio: forma B Átomo X Y z U*10e2 H21 0, 1283 ( 0) 0,0616 ( 0) 0, 7084 ( 0) 4,86( 0) H22 0,2159 ( 0) 0, 0306 ( 0) 0,7857( 0) 4, 86 ( 0) H31 0, 1272 ( 0) 0,0969( 0) 1,0910 ( 0) 4,51( 0) H3 0,2243 ( 0) 0, 0785 ( 0) 1,3075 ( 0) 6,11( 0) H61 -0, 0043 ( 0) 0, 0983 ( 0) 1,2199 ( 0) 4, 99 ( 0) H71 -0, 1059 ( 0) 0,0964( 0) 0,8057( 0) 5,69( 0) H7 -0, 1609 ( 0) 0, 1655 ( 0) 0, 9542 ( 0) 7,62( 0) H81 0,0313 ( 0) 0, 1244 ( 0) 0, 7484 ( 0) 5,58( 0) H91 -0,0180 ( 0) 0,2062 ( 0) 1, 0453 ( 0) O \—1 to 0) H92 0, 0520 ( 0) 0,1619 ( 0) 1,1189 ( 0) 6,10( 0) H101 0, 1365 ( 0) 0, 1874 ( 0) 0, 7953 ( 0) 7,47( 0) H102 0, 0691 ( 0) 0,2349 ( 0) 0,7527( 0) 7,47( 0) Hlll 0, 0976 ( 0) 0,2651 ( 0) 1, 1204 ( 0) 7,74( 0) H112 0, 1633 ( 0) 0,2170 ( 0) 1, 1686 ( 0) 7,74( 0) H131 0,3308 ( 0) 0,2613 ( 0) 0,8107( 0) 7,31( 0) H141 0,3779 ( 0) 0,2094 ( 0) 1,1016 ( 0) 7,61( 0) H142 0,2780 ( 0) 0, 1920 ( 0) 1, 1530 ( 0) 7,61( 0) H151 0,3046 ( 0) 0, 1836 ( 0) 0,6859 ( 0) 5,74( 0) H16 0,2693 ( 0) 0,1161( 0) 1,0487( 0) 5,71( 0) H171 0, 0304 ( 0) -0, 0088 ( 0) 1,3753 ( 0) 6,33( 0) H172 0,1318 ( 0) 0,0064( 0) 1,4171 ( 0) 6,33( 0) H173 0,0577( 0) 0,0512 ( 0) 1,4165 ( 0) 6,33( 0) Hl 81 0, 0633 ( 0) -0, 0501 ( 0) 1,0184 ( 0) 5,58( 0) H182 0,1192 ( 0) -0,0207( 0) 0,8122 ( 0) 5,58( 0) H183 0, 1655 ( 0) -0, 0370 ( 0) 1, 0628 ( 0) 5,58( 0) Hl 91 -0,1481 ( 0) 0, 0774 ( 0) 1,3099 ( 0) 8,04( 0) H192 -0, 1459 ( 0) 0, 0330 ( 0) 1, 1036 ( 0) 8,04( 0) H193 -0, 0849 ( 0) 0, 0274 ( 0) 1,3402 ( 0) 8,04( 0) H201 -0, 0094 ( 0) 0, 1955 ( 0) 0,5429 ( 0) 7,89( 0) H202 -0, 0763 ( 0) 0, 1475 ( 0) 0,5059 ( 0) 7,89( 0) H203 -0, 1024 ( 0) 0,1951 ( 0) 0,6816 ( 0) 7,89( 0) H211 0, 1596 ( 0) 0,2886 ( 0) 0,6259 ( 0) 11,47( 0) H212 0, 1382 ( 0) 0,3292 ( 0) 0, 8404 ( 0) 11,47 ( 0) H213 0,2355 ( 0) 0,3265 ( 0) 0,7267( 0) 11,47( 0) H231 0,5051 ( 0) 0, 1602 ( 0) 1, 0559 ( 0) 6,57( 0) H291 0,5291 ( 0) 0, 0702 ( 0) 1,2584 ( 0) 7,73( 0) H301 0, 7003 ( 0) 0, 0920 ( 0) 0, 4744 ( 0) 13,05 ( 0) H302 0, 7623 ( 0) 0,1165 ( 0) 0,6811 ( 0) 13,05 ( 0) H303 0, 7525 ( 0) 0, 0542 ( 0) 0,6572 ( 0) 13,05 ( 0) 21

Com base nos dados anteriores, é possível concluir que as formas A e B são entidades cristalinas únicas.

Os exemplos seguintes ilustram a prática da invenção.

Exemplo 1 [IS-[IR*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-7,11-Di-hidroxi--8,8,10,12,16-pentametil-3-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)--etenil]-4-aza-17-oxabiciclo[14.1.0]heptadecano-5, 9-diona

Num balão revestido de fundo redondo com a capacidade de 125 mL, equipado com uma agitadora mecânica, combinou-se epotilona B (5,08 g), azida de tetrabutil-amónio (BU4NN3) (3,55 g, 1,25 equivalentes), cloreto de amónio (l,07g, 2 eq.), água (1,8 mL, 10 equivalentes), tetra-hidrofurano (THF) (15 mL) e N,N-dimetil-formamida (DMP) (15 mL) . A mistura ficou inerte ao fazer-se passar azoto, subsuperficialmente, durante 15 minutos. Num segundo balão introduziu-se tetra-hidrofurano (70 mL), depois tri-metilfosfina (PMe3) (1,56 mL, 1,5 equivalentes) e a seguir um aducto de tris(dibenzilidenoacetona)-dipaládio(0) e clorofórmio (Pd2 (dba) 3CHCI3) (0,259 g, 0, 025 equivalentes). Agitou-se a mistura de catalisador durante 20 minutos à temperatura ambiente e depois adicionou-se à mistura de epotilona B. Agitou-se a mistura combinada durante 4,5 horas a 30°C. Depois de se completar a reacção, filtrou-se a mistura para se remover o cloreto de amónio sólido (NH4CI) . O filtrado continha o sal de tetrabutil--amónio do ácido (βΞ,εΚ,ζΞ,ηΞ, 2R, 3S)-3-[(2S, 3E)-2-amino-3-metil-4- (2-metil-4-tiazolil) -3-butenil] -p^-di-hidroxi-y,y,e,r|, 2-penta-metil-8-oxo-oxirano-undecanóico (1:1) com uma área de CLER de 94,1%.

Num balão com a capacidade de 500 mL combinou-se cloridrato de 1-[3-(dimetilamino)-propil]-3-etilcarbodiimida (EDCI) (3,82 g, 2 equivalentes), hidrato de l-hidroxi-7-benzotriazole (HOBt) (1,68 g, 1,1 equivalentes), carbonato de potássio (1,38 g, 1 equivalente), N,N-dimetilformamida (DMF) (40 mL) e tetra-hidrofurano (THF) (160 mL). Aqueceu-se a mistura até 35°C e adicionou-se-lhe, gota 22 a gota e ao longo de três horas, o filtrado obtido antes. Depois agitou-se a mistura durante mais 1 hora a 35°C. Destilou-se a mistura de reacção sob uma pressão hipobárica para se reduzir o seu volume até cerca de 80 mL. Repartiu-se a solução resultante entre 100 mL de acetato de etilo e 100 mL de água. Depois extraiu-se de novo a camada aquosa com 100 mL de acetato de etilo. Extraiu-se as camadas orgânicas combinadas, utilizando 50 mL de água e depois 20 mL de salmoura. Filtrou-se a solução de produto resultante através de uma camada de ‘ZetaPlus®’ e depois submeteu-se a dessorção para se obter um óleo. Dissolveu-se o óleo impuro em diclorometano (20 mL) e lavou-se com água para se remover os vestígios finais de solventes de síntese e dessorveu-se para se obter um sólido. Submeteu-se o sólido impuro a cromatografia através de gel de sílica 60 (35 mL de sílica por grama de produto teórico), utilizando um eluente constituído por 88% de diclorometano (CH2C12), 10% a 30% de acetato de etilo (EtOAc) e 2% de trietilamina (Et2N). Analisou-se as fracções por CLER, combinou-se as mais puras e dessorveu-se para se obter o sólido purificado. Amassou-se o sólido resultante, aproximadamente 2 g, em acetato de etilo (32 mL) durante 40 minutos a 75°C, depois adicionou-se lentamente ciclo-hexano (C6Hi2) (16 mL) e arrefeceu-se a mistura até 5°C. Sobre papel de filtro, recolheu-se o sólido purificado, lavou-se com acetato de etilo/ciclo-hexano frio e secou-se. Obteve-se 1,72 g (rendimento de 38%) de um sólido branco do produto [1S-[1R*, 3R*(E), 7R*,10S*,11R*,12R*, 16S*]]-7,11--di-hidroxi-8,8,10,12,16-pentametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)--etenil]-4-aza-17-oxabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona, com uma área de CLER de 99,2%. 23

Exemplo 2 [IS-[IR*,3R*(E),7R*,10S*,11R*, 12R*,16S*]]-7, 11-Di-hidroxi--8,8,10,12,16-pentametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)-etenil] -4--aza-17-oxabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona, forma A Num balão de três entradas, com a capacidade de 250 mL, introduziu-se 0,61 g do composto em epígrafe que tinha sido purificado (filtração através de uma camada de gel de sílica, utilizando EtOAc/hexano/EtsN como eluente, área de CLER de 96,88) e acetato de etilo (28 mL, 46 mL/Ι g) . Aqueceu-se a massa resultante até 75°C. Depois de se agitar a pasta a 75°C durante 60 minutos, todos os sólidos se dissolveram. Arrefeceu-se a solução resultante até uma temperatura compreendida entre 75°C e 50°C ao longo de 120 minutos e adicionou-se os cristais primários de forma A à temperatura de 60°C. Os cristais surgiram a 55°C. A seguir baixou-se a temperatura até 20°C ao longo de 120 minutos, adicionando-se ciclo-hexano (35 mL, 57 mL/Ι g) à mistura, gota a gota e ao longo de 60 minutos. Arrefeceu-se a pasta resultante até -10°C ao longo de 120 minutos e manteve-se a esta temperatura durante mais 60 minutos. Filtrou-se a pasta e secou-se os cristais brancos resultantes para se obter 0,514 g do composto em epígrafe, forma A, com um rendimento de 84,3% e uma área de CLER de 99,4.

Forma A - Procedimento alternativo Num balão de três entradas, com a capacidade de 250 mL, introduziu-se 0,51 g do composto em epígrafe que tinha sido purificado (filtração através de uma camada de gel de sílica, utilizando EtOAc/hexano/Et3N como eluente, área de CLER de 96) e acetato de etilo (8,5 mL, 16,7 mL/Ι g) . Aqueceu-se a massa resultante até 80°C. Arrefeceu-se a solução resultante de 80°C até 70°C ao longo de 60 minutos e adicionou-se os cristais primários de forma A à temperatura de 70°C. A seguir baixou-se a temperatura até 30°C ao longo de 180 minutos. Os cristais surgiram a 65°C. Arrefeceu-se novamente a solução até -10°C ao 24 longo de 180 minutos, enquanto se adicionava ciclo-hexano (10,2 mL, 20 mL/1 g) à mistura, gota a gota e ao longo de 30 minutos. Arrefeceu-se a pasta resultante e manteve-se em repouso durante mais 60 minutos. Filtrou-se a pasta e secou-se os cristais brancos resultantes para se obter 0,43 g do composto em epígrafe, forma A, com um rendimento de 84,3% e com uma área de CLER de 99,7.

Forma A - Procedimento alternativo Num balão de três entradas, com a capacidade de 500 mL, introduziu-se 18,3 g de uma mistura das formas A e B que tinham sido purificadas (filtração através de uma camada de gel de sílica, utilizando EtOAc/diclorometano/EtsN como eluente, área de CLER de 99) e acetato de etilo (183 mL, 10 mL/Ι g). Aqueceu-se a massa resultante até 75, adicionou-se cristais primários de forma A e manteve-se a temperatura durante 30 minutos. Adicionou-se ciclo-hexano (90,2 mL, 5 mL/Ι g) à mistura, gota a gota, mantendo a temperatura a 70°C. Depois de se completar a adição, baixou-se a temperatura até 20°C e manteve-se a mistura sob agitação durante mais 18 horas. A seguir baixou-se a temperatura até 5°C e manteve-se durante 5 horas. Filtrou-se a pasta e secou-se os cristais brancos resultantes para se obter 16,1 g do composto em epígrafe, forma A, com um rendimento de 88% e com uma área de CLER de 99,49.

Exemplo 3 [IS-[IR*,3R*(E),7R*,10S*,11R*, 12R*,16S*]]-7, 11-Di-hidroxi--8,8,10,12,16-pentametliil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)--etenil]-4-aza-17-oxabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona, forma B Num balão de três entradas, com a capacidade de 250 mL, introduziu-se 0,108 g do composto em epígrafe que não tinha sido purificado, conforme descrito no exemplo 2, N,N-dimetilformamida (0,0216 g) e acetato de etilo (5 mL, 46 mL/Ι g) . Aqueceu-se a pasta resultante até 80°C e agitou-se durante 30 minutos para se 25 dissolver todos os sólidos. Arrefeceu-se a solução resultante desde 80°C até 30°C ao longo de 120 minutos e os cristais surgiram a 38°C. Adicionou-se ciclo-hexano (7,5 mL, 69,5 mL/1 g) à mistura, gota a gota e ao longo de 30 minutos, enquanto se reduzia a temperatura até -10°C ao longo de 60 minutos, e assim se manteve durante mais 120 minutos. Filtrou-se a pasta e secou-se os cristais brancos resultantes para se obter 0,082 g do composto em epígrafe, forma B, com um rendimento de 76% e com uma área de CLER de 99,6.

Forma B - Procedimento alternativo Num balão de três entradas, com a capacidade de 250 mL, introduziu-se 0,458 g do composto em epígrafe que não tinha sido purificado, conforme descrito no exemplo 2, e que continha cerca de 6% de N,N-dimetilformamida e acetato de etilo (10 mL, 21,8 mL/Ι g). Aqueceu-se a pasta resultante até 78°C e agitou-se durante 30 minutos para se dissolver todos os sólidos. Arrefeceu-se a solução resultante desde 78°C até 10°C ao longo de 120 minutos. Adicionou-se cristais primários de forma A a 10°C. Adicionou-se ciclo-hexano (20 mL, 43,7 mL/Ι g) à mistura, gota a gota e ao longo de 60 minutos, enquanto se reduzia a temperatura até -10°C ao longo de 120 minutos, e assim se manteve durante mais 120 minutos. Filtrou-se a pasta e secou-se os cristais brancos resultantes para se obter 0,315 g do composto em epígrafe, forma B, com um rendimento de 68,8% e com uma área de CLER de 98,2.

Forma B - Procedimento alternativo Num balão de Wheaton com a capacidade de 5 mL introduziu-se 250 mg do composto em epígrafe que não tinha sido purificado, conforme descrito no exemplo 2, e tolueno (3,75 mL, 15 mL/g), aqueceu-se a pasta resultante até 75°C e manteve-se a essa temperatura durante 30 minutos. Deixou-se a suspensão resultante arrefecer até 20°C e manteve-se sob agitação a essa temperatura durante 18 horas. Filtrou-se a pasta e secou-se os cristais brancos 26 26 forma resultantes para se obter 150 mg do composto em epígrafe, B, com um rendimento de 60% e com uma área de CLER de 99,2.

Lisboa, 09 de Agosto de 2007

O AGENTE OFICIAL

Claims

1 Reivindicações 1. Polimorfo cristalino de um análogo de epotilona representado pela fórmula estrutural

I o qual compreende a forma A caracterizada por: parâmetros da célula unitária aproximadamente iguais aos que a seguir se indicam dimensões celulares a = 14,152(6) Á b = 30, 72(2) Á c = 6,212(3) Â Volume = 2701(4) A3 grupo espacial P2i2i2i ortorrômbico moléculas/célula unitária 4 densidade (calculada) (g/cm3) 1,247 ponto de fusão 182°C-185°C (decomposição); e picos característicos no padrão de difracção dos raios X no pó para valores de 2Θ (CuKa λ = 1,5406 Á a 22°C) : 5,69, 6,76, 8,38, 11 ,43, 12, 74, 13,62, 14,35, 15,09, 15,66, 16,43, 17,16, 17,66, 18,31, 19,03, 19,54, 20, 57, 21, 06, 21,29, 22,31, 23,02, 23,66, 24,18, 14,98, 25,50, 26,23, 26,23, 26,46, 27,59, 28,89, 29,58, 30, 32, 31, 08 e 31,52; ou a forma B caracterizada por: parâmetros da célula unitária aproximadamente iguais aos que a seguir se indicam dimensões celulares a = 16,675(2) Á b = 28,083(4) Á Volume = 2835(1) A3 grupo espacial P2i2i2i ortorrômbico moléculas/célula unitária 4 densidade (calculada) (g/cm3) 1,187 ponto de fusão 191°C-199°C (decomposição); e picos caracteristicos no padrão de difracção dos raios X no pó para valores de 2Θ (CuKa λ = 1,5406 Â a 22°C) : 6,17, 10,72, 12,33, 14,17, 14,93, 15,88, 16,17, 17,11, 17,98, 19,01, 19,61, 20,38, 21,55, 21,73, 22,48, 23,34, 23,93, 24,78, 25,15, 25,90, 26,63, 27,59, 28,66, 29, 55, 30, 49 e 31,22. Polimorfo cristalino de um análogo de epotilona representado pela fórmula estrutural

o qual compreende a forma A caracterizada por uma difracção dos raios X no pó praticamente conforme ilustrada na figura 1 seguinte e um espectro de Raman praticamente conforme ilustrado na figura 5 seguinte; ou a forma B caracterizada por uma difracção dos raios X no pó praticamente conforme ilustrada na figura 2 seguinte e um espectro de Raman praticamente conforme ilustrado na figura 6 seguinte: 3

Fia i Intensidade de R.irn.íii

Fta 5 4

Ba z Intensidade de R.mi.tn

Fia 8 5

3. Polimorfo cristalino de um análogo de epotilona representado pela fórmula estrutural 5

o ea o I o qual compreende a forma A, caracterizada por uma solubilidade em água de 0,1254, uma solubilidade numa solução aquosa a 3% de polissorbato 80 de 0,2511, um ponto de fusão com decomposição entre 182°C e 185°C e um calor de dissolução de 20,6 kJ/mol, ou a forma B, caracterizada por uma solubilidade em água de 0,1907, uma solubilidade numa solução aquosa a 3% de polissorbato 80 de 0,5799, um ponto de fusão com decomposição entre 191°C e 199°C e um calor de dissolução de 9,86 kJ/mol.

4. Polimorfo cristalino de acordo com a reivindicação 1, 2 ou 3, em que o referido polimorfo é a forma A.

5. Polimorfo cristalino de acordo com a reivindicação 1, 2 ou 3, em que o referido polimorfo é a forma B.

6. Material cristalino que compreende uma mistura da forma A com a forma B de acordo com a reivindicação 1, 2 ou 3.

7. Processo para a produção de um polimorfo cristalino que é a forma A do análogo de epotilona representado pela fórmula estrutural I na reivindicação 1, o qual consiste em aquecer até cerca de 75°C uma pasta do referido análogo, representado pela fórmula estrutural I, em 8 a 16 mL de acetato de etilo por cada grama do referido análogo, manter tal temperatura durante cerca de uma hora, adicionar uma quantidade de ciclo-hexano numa proporção compreendida entre 1:2 e 2:2 em 6 relação à quantidade de acetato de etilo, deixar a mistura arrefecer até à temperatura ambiente, manter a mistura sob agitação durante um período compreendido entre 12 e 96 horas, arrefecer a mistura novamente até cerca de 5°C ao longo de cerca de duas horas e recuperar a forma A cristalina a partir da mesma.

8. Processo de acordo com a reivindicação 7, em que a quantidade de ciclo-hexano adicionada está numa proporção de 1:2 em relação à quantidade de acetato de etilo utilizado para formar a referida pasta.

9. Processo de acordo com a reivindicação 7, em que se aquece até cerca de 75°C a referida pasta do referido análogo, representado pela fórmula estrutural I, em acetato de etilo, se adiciona cristais primários a tal pasta e se mantém a mistura em repouso durante cerca de 30 minutos, período este ao fim do qual se adiciona a referida quantidade de ciclo--hexano, mantendo a temperatura a cerca de 70°C, se arrefece a mistura até à temperatura ambiente, se mantém a mistura sob agitação durante cerca de 18 horas, se arrefece novamente a mistura até cerca de 5°C ao longo de cerca de duas horas e se recupera a forma A cristalina a partir da mesma.

10. Processo de acordo com a reivindicação 7, em que se aquece até cerca de 75°C a referida pasta do referido análogo, representado pela fórmula estrutural I, em acetato de etilo pelo menos durante uma hora até se formar uma solução, se arrefece a referida solução até cerca de 50°C ao longo de cerca de duas horas, se adiciona os referidos cristais primários quando a temperatura atinge cerca de 60°C, se arrefece a solução até cerca de 30°C ao longo de cerca de três horas, se baixa ainda mais a temperatura da solução até -10°C ao longo de cerca de três horas, adicionando-se a referida 7 quantidade de ciclo-hexano, gota a gota, durante uma destas horas, mantendo-se depois a mistura resultante a -10~C durante cerca de uma hora e recuperando-se a forma A cristalina a partir da mesma.

11. Processo para a produção de um polimorfo cristalino que é a forma B do análogo de epotilona representado pela fórmula estrutural I na reivindicação 1, o qual consiste em aquecer uma pasta do referido análogo representado pela fórmula estrutural I, em 40 a 50 mL de acetato de etilo por cada grama do referido análogo, até uma temperatura compreendida entre 75°C e 80°C, manter tal temperatura durante cerca de uma hora para assim se formar uma solução, manter a solução a essa temperatura durante cerca de 30 minutos, arrefecer a solução até cerca de 30°C durante cerca de duas horas, baixar ainda mais a temperatura da solução até -10°C ao longo de cerca de uma hora, período esse durante o qual se adiciona, gota a gota e ao longo de cerca de 30 minutos, uma quantidade de ciclo-hexano numa proporção compreendida entre 1:2 e 2:2 em relação à quantidade de acetato de etilo, mantendo-se a mistura a resultante a -10°C durante cerca de duas horas e recuperando-se a forma B cristalina a partir da mesma.

12. Processo de acordo com a reivindicação 11, em que se aquece até cerca de 78°C a referida pasta do referido análogo, representado pela fórmula estrutural I, em acetato de etilo para assim se formar uma solução, se arrefece a solução até cerca de 10°C ao longo de cerca de duas horas, se adiciona cristais primários quanto a temperatura atinge 10°C, se baixa ainda mais a temperatura da solução até -10°C ao longo de cerca de duas horas, período esse durante o qual se adiciona a referida quantidade de ciclo-hexano, gota a gota e ao longo de cerca de 30 minutos, mantendo-se depois a mistura a resultante a -10°C durante cerca de duas horas e recuperando-se a forma B cristalina a partir da mesma.

13. Processo para a produção de um polimorfo cristalino que é a forma B do análogo de epotilona representado pela fórmula estrutural I na reivindicação 1, o qual consiste em aquecer uma pasta do referido análogo representado pela fórmula estrutural I, em 10 a 20 mL de tolueno por cada grama do referido análogo, até uma temperatura compreendida entre 75°C e 80°C, manter tal temperatura durante cerca de 30 minutos, arrefecer a mistura até cerca de 20°C, manter a mistura sob agitação à mesma temperatura durante cerca de 18 horas e recuperar a forma B cristalina a partir da mesma.

14. Composição farmacêutica que compreende uma quantidade eficaz de um polimorfo cristalino de acordo com uma das reivindicações 1, 2 ou 3, enquanto ingrediente activo, e um ou vários veiculos, excipientes ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis para tal ingrediente activo.

15. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 14, em que o referido polimorfo cristalino é a forma A.

16. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 14, em que o referido polimorfo cristalino é a forma B.

17. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 14, em que o referido polimorfo cristalino é uma mistura de forma A e forma B.

18. Utilização de um polimorfo cristalino de acordo com uma das reivindicações 1, 2 ou 3 para a produção de um medicamento para o tratamento de cancro ou outras doenças proliferativas. 9

19. Utilização de acordo com a reivindicação 18, em que o referido polimorfo cristalino é a forma A.

20. Utilização de acordo com a reivindicação 18, em que o referido polimorfo cristalino é a forma B. 21. utilização de acordo com a reivindicação 18, em que o referido polimorfo cristalino é administrado por via parentérica. Lisboa,09 de Agosto de 2007 O AGENTE OFICIAL