PT1140078E

PT1140078E - Agentes de benzimidazole para problemas de vascularização

Info

Publication number: PT1140078E
Application number: PT00900294T
Authority: PT
Inventors: Peter David Davis
Original assignee: Angiogene Pharm Ltd
Priority date: 1999-01-15
Filing date: 2000-01-14
Publication date: 2007-10-25
Also published as: US20060264492A1; JP2002534452A; DK1140078T3; DE60036194D1; US7875727B2; WO2000041669A3; US20040058972A1; US6645950B1; WO2000041669A2; ATE371450T1; AU778530B2; DE60036194T2; US7081469B2; EP1140078A2; NZ512842A; CA2360415C; JP5026636B2; ES2292423T3; AU1995700A; GB9900752D0

Description

AGENTES DE BENZIMIDAZOLE PARA PROBLEMAS DE

A presente invenção tem por objecto um grupo de agentes capazes de actuar sobre a vasculatura e particularmente a utilização de benzimidazoles substituídos, novos e conhecidos, na preparação de medicamentos para o tratamento de doenças que envolvem a neovascularização. A formação de nova vasculatura por angiogénese é uma característica patológica chave de várias doenças (J Folkman, New England Journal of Medicine 333, 1757-1763 (1995)). Por exemplo, para que um tumor sólido cresça, tem de desenvolver o seu próprio fornecimento de sangue do qual depende, de forma crítica, para a provisão de oxigénio e de nutrientes; se esse fornecimento de sangue for cortado mecanicamente, o tumor sofre uma morte necrótica. A neovascularização é também uma característica clínica das lesões da pele na psoríase, do pano invasivo nas articulações dos doentes com artrite reumatóide e das placas da ateroesclerose. A neovascularização da retina é patológica na degeneração macular (lútea do olho) e na retinopatia diabética. Em todas estas doenças, espera-se que a reversão da neovascularização, por meio da danificação do endotélio vascular recentemente formado, tenha um efeito terapêutico benéfico.

Os carbamatos de benzimidazole substituídos em 5(6) são conhecidos e têm sido utilizados com agentes anti-parasíticos (P. J. Islip em Burgers Medicinal Chemistry (M. E. Wolff ed.) , Quarta Edição, Farte II, p. 481, (1979)). Exemplos desses compostos Incluem mebendiazole, fenben- dazole, oxibendazole, flubendazole, albendazole, cicloben-dazole, parbendazole, dribendazole, luxabendazole, e eti-bendazole. Crê-se que o seu modo de acção, no que respeita à sua acção anti-parasítica, envolva a ligação selectiva à tubulina do parasita alvo, embora tenha pouco efeito devido à ligação à tubulina do hospedeiro mamífero (Biochim. Biophys. Acta 630, 271-278, (1980)). Alguns destes compostos têm mostrado ser anti-micóticos para células de cancro e um em particular, o benzimidazole-2-carbamato substituído em 5(6), o nocodazole, tem sido por isso estudado como um agente anti-cancro (Câncer Research, 36, 905-916 (1976)). Não têm sido relatados efeitos na neovascularização em relação a nenhum destes compostos.

Alguns compostos que não estão relacionados estruturalmente, que se ligam à tubulina, têm mostrado ter efeitos anti-vasculares quando dados na dose máxima tolerada (DMT) (S. A. Hill et al. Eur. j Câncer, 29A, 1320-1324 (1993)) mas outros agentes que se ligam à tubulina, tal como o docetaxel, não têm actividade de danificação vascular quando administrados na DMT. A presença de propriedades de ligação à tubulina não é por isso indicadora de actividade anti-vascular.

Kruse et al. (Kruse L. I. et al., J. Med. Cham. volume 32, No. 2, Fevereiro de 1989, páginas 409-417) publicou um estudo sobre a actividade anti-neoplásica in vivo de uma série de oncodazoles substituídos com o objectivo de desenvolver um análogo solúvel em água.

De acordo com a presente invenção, providencia-se um benzimidazole-2-carbarnate, substituído na posição .. de fórmula em que

Alq representa um grupo alquilo, X representa oxigénio, enxofre, sulfinilo, sulfonilo, carbonilo (CO), tiocarbonilo (CS), sulfoniloxi, NH, iminoetileno (C=NH), N-hidroxi-iminometileno, N-alcoxi-iminometileno, dialcoximetileno, 1,3-dioxolan-2-ilo, 1,1-etenilo, um grupo CHR* ou uma ligação; E: representa hidrogénio, alquilaminocarbonilo ou alcoxicarbonilo; r2 representa hidrogénio, alcoxicarbonilo, cianometilo, cianoetilo, alcoximetilo ou acetoximetilo; R3 representa hidrogénio, hidroxi, alcoxi ou amino; A representa um anel aromático substituído ou um grupo alquilo substituído em que pelo menos um substituinte representado por Y se selecciona entre fosfato, alquilfosfato, em que R4 e R5, que podem ser iguais ou diferentes, representam, cada um, um grupo alquilo substituído com um ou mais substituintes seleccionados entre hidroxi, amino, alquilamino, guanidino, carboxilo, S03H, sulfato ou fosfato e os seus sais, solvatados e hidratos aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.

Os substituintes particulares que podem estar presentes no grupo A incluem um ou mais substituintes seleccionados de um grupo de Y, alquilo eventualmente substituído, (em que os substituintes nesse grupo alquilo podem incluir um ou mais seleccionados entre hidroxi, amino, alquilamino, dialquilamino, átomos de halogéneo, grupos carboxilo, S03H, sulfato, fosfato, alcoxicarbonilo, aralcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, aminoalquilamino-carbonilo e ciano), átomos de halogéneo, grupos hidroxi, amino, alcoxi, alquiltio, ciano, nitro, sulfato, isotiocia-nato, arilo, heteroarilo e heterocicloalquilo. Y representa um grupo seleccionado entre fosfato, alquil fosfato, C(0)R4, 0C(0)R4, NHC(0)R4, M%(0)R*, SR4, S (0) R4, SO-H, C02H e CO-R'' em que R4 representa um grupo seleccionado entre átomos de hidrogénio, grupos R5, &E::ÉS, arilo, heteroarilo ou heterocicloalquilo tal como arilo, heteroarilo ou grupos heterocicloalquilo eventualmente substituídos com um ou mais substituintes seleccionados entre alquilo, heterocicloalquilo, haloalquilo, hidroxi, nitro, ciano, amino, alquilamino, dialquilamino, átomos de halogéneo, carboxilo, S03H, sulfato e fosfato. R5 e R6, que podem ser iguais ou diferentes, representam, cada um, um grupo alquilo eventualmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados entre hidroxi, amino, alquilamino, dialquilamino, guanidino, átomos de halogéneo, grupos carboxilo, S03H, sulfato, fosfato, arilo e heteroarilo.

Alguns dos compostos que se podem utilizar na presente invenção são conhecidos, por exemplo os compostos que são representados pela fórmula seguinte:

Estes compostos são X A Fenbendazole s Ph Mebendazole CO Ph Albendazole s nPr Oxibendazole 0 nPr Nocodazole CO 2-tíenilo Alguns destes compostos são novos. Num enquadramento os novos compostos são os de fórmula I em que pelo menos um dos substituintes no grupo A ê um grupo Y em que Y tem o significado definido aqui antes. Particularmente preferidos são os compostos definidos pela fórmula SC r R7,

% ! ff KM

na qual alq representa um grupo alquilo, B representa um anel aromático ou heteroaromático X representa oxigénio, enxofre, sulfinilo, sulfonilo, carbonilo (CO), tiocarbonilo (CS), sulfoniloxi, NH, iminoetileno (C=NH), N-hidroxi-iminometileno, N-alcoxi-iminometileno, dialcoximetileno, 1,3-dioxolan-2~ilo, 1,1-etenilo, um grupo ou uma ligação; repmMsnta hidrogénio, alquilarninocarbonilo ou alcoxicarbonilo; R': representa hidrogénio, alcoxicarbonilo, cianometilo, cianoetilo, alcoximetilo ou acetoximetilo; hidroxi, alcoxi ou aramo; FO representa likd:í:tKph:A.ot Y tem ο significado definido aqui antes H e Rs representam, cada um, independentemente, H, alquilo, átomos de halogéneo, grupos hidroxi, amino, alquilamino, diaiquilamino, alcoxi, alquiltio, ciano, nitro ou trifluorometilo com a condição de que Y não represente NHC(0)Me e quando B representa um anel de tiofeno então Y não representa C(0)CF3 e quando B representa um anel de 5 (6)- benzimidazole então Y não representa NHC02Me ou NHC02Et e os seus sais, solvatados, hidratos e pró-fármacos.

Tal como se utiliza aqui, o termo "alquilo", sozinho ou em combinações, signifca um grupo alquilo de cadeia linear ou ramificada contendo de um a sete, preferencialmente um máximo de quatro átomos de carbono, tal como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, sec-butilo, t-butilo e pentilo. Exemplos de grupos alcoxi são metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi e t-butoxi. 0 termo "halogéneo" significa flúor, cloro, bromo ou iodo. 0 termo "arilo", tal como se utiliza aqui, a menos que seja estabelecido de outra forma, faz referência a um grupo arilo com CY·.;;; que pode, se desejado, composrtar um ou mais substituintes seleccionados entre átomos de halogéneo, grupos alquilo, halogenoalquilo, alcoxi, hidroxi, amino, nitro e ciano. 0 termo aralcoxi significa um grupo alcoxi substituído com um grupo arilo. O termo heteroarilo define-se aqui como um grupo aromático mono- ou bi-cíclico contendo de um a quatro heteroãtomos seleccionados em qualquer combinação de átomos de N, S ou O e um ni&xiPo de 9 átomos de carbono. Exemplos de grupos heteroarilo include piridilo, pirimidilo, furilo, tienilo, pirrolilo, pirazolilo, indolilo, benzofurilo, benzotienilo, benzotiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tia-zolilo, isotiazolilo, imidazolilo, triazolilo, quinolilo e isoquinolilo. 0 termo heterocicloalquilo inclui grupos heterociclo-alquilo contendo 3-6 átomos de carbono e um ou dois átomos de oxigénio, enxofre ou azoto. Exemplos particulares desses grupos incluem grupos azetidinilo, pirrolidinilo, piperi-dinilo, homopiperidinilo, piperazinilo, homopiperazinilo, morfolinilo ou tiomorfolinilo. 0 termo cicloalquilo significa um grupo cicloalifático contendo 3-10 átomos de carbono tal como, por exemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo ou ciclo-hexilo.

Um grupo de compostos particularmente preferido é o dos de fórmula II na qual Y representa um grupo fosfato.

Outro grupo de compostos particularmente preferido é o dos compostos de fórmula II na qual Y representa um grupo R5 representa um hidrogénio e R4 representa um 1-aminoalquilo que pode ainda ser substituído, por exemplo, por um grupo hidroxi.

Quando um ou mais grupos funcionais nos compostos de fórmula I ou II forem suficientemente básicos ou ácidos, é possível a formação de sais. Os sais apropriados incluem sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, por exemplo, saís de adição de ácidos incluindo cloridratos, bromidratos, fosfatos, sulfatados, hidrogeno-sulfatos, alquílsulfonatos, arilsulfonatos, acetatos, benzoatos, citratos, maleatos, fumaratos, succínatos, lactatos e tartratos, sais derivados de bases inorgânicas incluindo sais de metais alcalinos tal como sais de sódio ou de potássio, sais de metais alcalino-terrosos derivados de bases inorgânicas incluindo sais de metais alcalinos tais como sais de sódio ou de potássio, sais de metais alcalino-terrosos tal como sais de magnésio ou de cálcio e sais derivados de aminas orgânicas tal como sais de morfolina, piperidina ou dimetilamina.

Os especialistas nesta técnica irão reconhecer que os compostos de fórmula I ou II podem existir como estéreo-isómeros e/ou isómeros geométricos e, de acordo com a presente invenção, incluem todos esses isómeros e as suas misturas. 0 grupo benzimidazole substituído é capaz de existir em formas tautoméricas e as fórmulas I e II pretendem representar todas as formas tautoméricas e o substituinte AX- está na posição 5(6).

Os compostos de fórmula I ou II podem ser preparados por qualquer processo conhecido por um especialista na técnica. Os compostos de fórmula I ou II podem ser preparados por um certo número de processos como está descrito a seguir, de uma forma genérica e mais especialmente nos exemplos que se seguem. Na descrição do processo que se segue, os símbolos A, X e alq, quando utilizados nas fórmulas descritas devem ser entendidos como representando esses grupos descritos antes em relação à fórmula I ou II a menos que seja indicado de outra forma. Nos esquemas descritos a seguir pode ser necessário utilizar grupos de protecção que são depois eliminados durante os estádios finais das sínteses. A utilização apropriada desses grupos de protecção e processos para a sua eliminação serão prontamente evidentes para os especialistas na matéria.

Assim, de acordo com um outro aspecto da presente invenção, os compostos de fórmulas I e II em que R~ e S'" representam átomos de hidrogénio podem ser preparados por tratamento de uma diamina de fórmula III com uma 1,3-bis(alcoxicarbonil)- S-alquil isotioureia, por exemplo 1,3-bis(metoxicarbonil)-S-metil isotioureia ou 1,3-bis(etoxi-carbonil)-S-metil isotioureia, num dissolvente tal como um álcool, por exemplo metanol ou etanol, eventualmente misturado com água, desde uma temperatura próxima da temperatura ambiente até à temperatura de refluxo do dissolvente, durante cerca de 5 minutos até 6 horas. 0 meio da reacção i preferencialmente tornado ácido por meio da adição de, por exemplo, um ácido orgânico tal como ácido acético ou ácido p-tolueno-sulfónico.

Os compostos de fórmula III ou são conhecidos ou podem ser preparados por processos convencionais.

Os compostos de fórmulas I e II podem também ser preparadosa partir de outros compostos de fórmulas I e II por modificações químicas. Exemplos dessas modificações químicas que podem ser aplicadas são reacções padrão de alquilação, acilação, redução, sulfação, halogenação aroma-tica, nitração aromática, fosforilação, hidrólise, condensação, clivagem e acoplamento. Estas reacções podem ser utilizadas para adicionar novos substituintes, modificar substituintes existentes ou para modificar outras partes das moléculas.

Assim, por exemplo, pode-se converter um composto de fórmula I ou II em que M* representa um átomo de hidrogé- nio, mos compostos correspondentes em que 1" representa alquilaminocarbonilo por tratamento com um isocianato de alquilo num dissolvente tal como tetra-hidrofurano, a uma temperatura no intervalo de 0 ® a 40 °C, normalmente à temperatura ambiente.

Num outro exemplo genérico, pode-se converter um grupo tioéter num composto de fórmula I ou II, num grupo sulfinilo, por tratamento com periodato num dissolvente aquoso de álcool tal como metanol aquoso ou em acetonitrilo aquoso a cerca de -2 0 a.C a 50 °C, durante cerca de 1 a 16 h. Alternativamente, esta conversão pode ser efectuada por tratamento com um equivalente de um perácido tal como ácido 3-cloroperbenzóico num dissolvente clorado tal como diclorometano ou clorofórmio, a uma temperatura desde cerca de -30 "C, até à temperatura ambiente.

Num outro exemplo genérico, pode-se converter um grupo tioéter num composto de fórmula I ou II, num grupo sulfonilo, por tratamento com dois ou mais equivalentes de um periácido tal como ácido 3-cloroperbenzóico num dissolvente clorado tal como diclorometano ou clorofórmio, a uma temperatura desde cerca de -30 "C, até à temperatura ambiente.

Num outro exemplo genérico, pode-se converter um grupo ceto num composto de fórmula I ou II, num grupo carbinol, por tratamento com um agente de redução por exemplo um hidreto tal como hidreto de alumínio e lítio num éter dissolvente tal como éter de dietilo ou tetra-hidrofurano, a uma temperatura desde cerca de 0 "C, tíâ à temperatura de refluxo do dissolvente.

Num outro exemplo genérico, pode-se converter um grupo ceto num composto de fórmula I ou II, num grupo imina, por tratamento com amónia num dissolvente alcoólico tal como etanol, a uma temperatura próxima da temperatura ambiente durante um período extenso, por exemplo, três semanas.

Num outro exemplo genérico, pode-se converter um grupo ceto num composto de fórmula I ou II, num grupo oxima, por tratamento com hidroxilamina num dissolvente alcoólico tal como etanol, a uma temperatura próxima da temperatura ambiente até a temperatura próxima da temperatura de refluxo do dissolvente.

Num outro exemplo genérico, pode-se converter um composto de fórmula I ou II contendo um grupo hidroxi, no correspondente éster de di-hidrogenofosfato, por tratamento com, por exemplo, dietilfosforamideto de di-terc-butilo na presença de um catalisador apropriado, por exemplo tetrazole num dissolvente tal como éter dissolvente por exemplo tetra-hidrofurano, a uma temperatura no intervalo de -40 a 40 "C, convenientemente à temperatura ambiente ou próximo dela, seguido do tratamento com um agente de oxidação, por exemplo, ácido 3-cloroperoxi-benzóico ou monoperoxiftalato de magnésio, a uma temperatura no intervalo de -78 "C a 40 "C, preferencialmente -65 a -10 "C. Trata-se o triéster de fosfato, intermédio, redultante, com um ácido, por exemplo ácido trifluoroacético num dissolvente tal como um dissolvente clorado, por exemplo, diclorometano, a uma a uma temperatura no intervalo de -30 "C a 4 0 "C, convenientemente à temperatura de 0°C ou próximo dela, para se obter o composto de fórmula I ou II contendo um éster de di-hidrogenofosfato.

Num outro exemplo genérico, pode-se clivar um grupo 0-alquilo no álcool correspondente (OH) por reacção com tribrometo de boro num dissolvente tal como um dissolvente clorado, por exemplo, diclorometano a uma temperatura baixa, por exemplo >1 volta de -7 8 "C.

Num outro exemplo genérico, pode-se alquilar um composto de fórmula I ou II por meio da reacção com um agente de alquilação apropriado tal como halogeneto de alquilo, um tolueno-sulfonato de alquilo, um metano-sulfonato de alquilo ou um triflato de alquilo. A reacção de alquilação pode ser realizada na presença de uma base por exemplo uma base inorgânica tal como carbonato, por exemplo, carbonato de césio ou potássio, um hidreto tal como hidreto de sódio ou um alcóxido tal como t-butóxido de potássio num dissolvente apropriado tal como um dissolvente aprótico, por exemplo dimetilformamida ou um dissolvente de éter tal como terta-hidrofurano a uma temperatura próxima de -10 a 80 "C.

Num outro exemplo genérico, os compostos de fórmula I ou II contendo um grupo amina, podem ser acilados pelo tratamento com um ácido carboxilico e um reagente de acoplamento, por exemplo diciclo-hexilcarbodi-imida, num dissolvente apropriado, por exemplo, um dissolvente aprótico, por exemplo dimetilformamida ou um dissolvente de éttix tal como terta-hidrofurano, um dissolvente clorado, por exemplo diclorometano ou uma mistura de dissolventes a uma temperatura no intervalo de 0 ° a 60 % preferencialmente próximo da temperatura ambiente.

Num outro exemplo genérico, um composto de fórmula 1 ou II contendo um grupo OH, pode ser convertido num carbamato por reacção com um isocianato de alquilo ou um cloreto de carbamoilo num dissolvente aprótico, por exemplo dimetilformamida ou um dissolvente de éter tal como tetra-hidrofurano, um dissolvente clorado, por exemplo dicloro-metano ou uma mistura de dissolventes na presença de uma base tal como uma base de amina terciária, por exemplo, trietilamina a uma temperatura no intervalo de -20 °C até à temperatura de refluxo do dissolvente, convenientemente à temperatura ambiente ou próxima dela.

Num outro exemplo genérico, um composto de fórmula I ou II contendo um grupo amino, pode ser convertido numa ureia por reacção com um isocianato ou um cloreto de carbamoilo num dissolvente aprótico tal como dimetil-formamida ou um dissolvente de éter tal como tetra-hidrofurano, um dissolvente clorado, por exemplo diclorometano ou uma mistura de dissolventes na presença de uma base tal como uma base de amina terciária por exemplo trietilamina, a uma temperatura no intervalo de -20 °C até à temperatura de refluxo do dissolvente, convenientemente à temperatura ambiente ou próxima dela.

Num outro exemplo genérico, um composto de fórmula I ou II contendo um grupo hidroxi, pode ser convertido num carbonato por reacção com um cloroformato num dissolvente aprótico, por exemplo dimetilformamida ou um dissolvente de éter tal como tetra-hidrofurano, um dissolvente clorado, por exemplo diclorometano ou uma mistura de dissolventes na presença de uma base tal como uma base de amina terciária, por exemplo, trietilamina a uma temperatura no intervalo de -20 "C até à temperatura de refluxo do dissolvente, preferencialmente a 0°C ou próximo dessa temperatura. A preparação de um composto de fórmula I ou TI como um enantiómero simples ou, quando apropriado, diastereómero, pode ser efectuada por síntese de um material inicial ou intermédio puro sob o ponto de vista enantiomérico ou por resolução do produto final de uma maneira convencional.

Os sais de adição de ácido dos compostos de fórmula I ou II são preparados de uma forma convencional por tratamento de uma solução ou suspensão da base livre I ou IX com cerca de um equivalente de um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico. Os sais dos compostos de fórmula I ou II derivados de bases inorgânicas ou orgânicas preparam-se de uma forma convencional tratando uma solução ou suspensão do ácido livre I ou II com cerca de um equivalente de uma base orgânica ou inorgânica aceitável sob o ponto de vista farmacêutico. Alternativamente, tanto os sais de adição de ácidos como os sais derivados de bases são preparados por tratamento do composto pai com a resina de permuta iónica apropriada, por um processo padrão. Utilizam-se a concentração convencional e as técnicas de recristalização no isolamento dos sais.

Os compostos de acordo com a presente invenção são capazes de destruir a vasculatura que tinha sido recentemente formada, por exemplo vasculatura de tumores, embora não afectem a vasculatura normal, madura. A capacidade dos compostos para actuar desta forma pode ser determinada pelos ensaios aqui descritos a seguir.

Os compostos de acordo com a presente invenção são assim de utilização particular na profilaxia e no tratamento de cancros que envolvem tumores sólidos e na profilaxia e tratamento de doenças em que ocorre uma angiogénese inapropriada tal como retinopatia diabética, psoríase, artrite reumatóide, ateroesclerose e degeneração macular.

Os compostos da presente invenção podem ser administrados como uma terapia isolada ou em combinação com outros tratamentos. Para o tratamento de tumores sólidos, podem administrar-se compostos da presente invenção em combinação com radioterapia ou em combinação com outras substâncias anti-tumor por exemplo os seleccionados emtre inibidores mitóticos, por exemplo, vinblastina, paclitaxel e docetaxel; agentes de alquilação, por exemplo, cispla-tina, carboplatina e ciclofosfamida; antimetabolitos, por exemplo 5-fluorouracilo, citosina arabinósido e hidroxi-ureia; agente de intercalação por exemplo adriamicina e bleomicina; enzimas, por exemplo aspariginase; inibidores de topoisomerase por exemplo etopósido, topotecano e irinotecano; inibidores de timidilato sintase por exemplo raltitrexed; modificadores de resposta biológica por exemplo interferão; anticorpos por exemplo edrecolomab e anticorpos contra o receptor de EGFr, receptor de HER2 ou receptor de VEGF: e anti-hormonas por exemplo tamoxifen. Esse tratamento de combinação pode envolvera aplicação simultânea ou sequencial das componentes individuais do tratamento. os compostos podem ser

Para a profilaxia e tratamento da doença, podem administrar-se os compostos de acordo com a presente invenção como composições farmacêuticas seleccionadas tendo em vista a via de administração pretendida e a prática farmacêutica padrão. Essas composições farmacêuticas podem ter uma forma apropriada para administração oral, bucal, nasal, tópica, rectal ou parentêrica e podem ser preparadas de uma forma convencional utilizando excipientes convencionais. Por exemplo, para administração oral, as composições farmacêuticas podem tomar a forma de comprimidos ou cápsulas. Para administração nasal ou administração por máiãflô, convencionalmente libertados sob a forma de pó ou em solução. A administração tópica pode ser sob a forma de pomada ou creme e a administração rectal pode ser como um supositório. Para injecção parentérica (incluindo intravenosa, subcutânea, intramuscular, intravascular ou por infusão) a composição pode somar a forma, por exemplo, de uma solução esterilizada, uma suspensão ou uma emulsão. A dose de um composto da presente invenção necessária para a profilaxia ou tratamento de uma condição particular irá variar consoante o composto escolhido, a via de administração, a forma e a severidade da condição e se o composto é para ser administrado sozinho ou em combinação com outro fármaco. Assim, a dose precisa será determinada pelo médico que a vai administrar mas, em geral, as dosagens diárias podem estar no intervalo de 0,001 a 100 mg/kg, preferencialmente 0,1 a 50 mg/kg.

Utilizou-se o ensaio que se seque para demonstrar a actividade e a selectividade dos compostos de acordo com a presente invenção.

Actividade contra a vasculatura do tumor medida por meio de um corante fluorescente A experiência que se segue demonstra a capacidade dos compostos para danificar a vasculatura do tumor.

Mediu-se o volume vascular funcional do tumor em ratos portadores de tumores de CaNT, utilizando o corante fluorescente 33342 da Hoechst, de acordo com o processo de Smith et al (Brit J Câncer 57, 247-253, 1988). Dissolveu-se 0 corante fluorescente em solução salina a 6,25 mg/mL e injectou-se intravenosamente a 10 mg/kg 6 horas ou 24 horas depois do tratamento intraperitoneal com o fármaco. Um minuto mais tarde, os animais foram mortos e os tumores foram excisados e congelados; cortaram-se secções de 10 Mm em 3 níveis diferentes e observaram-se com iluminação UV utilizando um microscópio Olympus equipado com epifluorescência. Identificaram-se os vasos sanguíneos pelos seus contornos fluorescentes e quantificou-se o volume vascular utilizando um sistema de classificação dos pontos com base no descrito por Chalkley, (J Natl Câncer Inst, 4, 47-53, 1943). Todas as estimativas basearam-se na contagem de um mínimo de 100 campos das secções cortadas em 3 níveis diferentes. Os resultados estão expressos como a percentagem de redução do volume vascular comparados com os do controlo. A actividade dos compostos da presente invenção neste ensaio está indicada no quadro 1.

Quadro 1: Redução do volume vascular do tumor medindo por meio de um corante fluorescente

Composto Dose (mg/kg) i . . Tempo (h) % de redução do volume vascular 44 56 51 43 23 m

Fenbendazole Mebendazole Albendazole Oxibendazole Nocodazole Composto do Exemplo: 1 2 3 4 5 12 V?- 44 1$ «í: JÍS 43· 3 \’ vi 4 y v .·: d 40 24 43 1$ 44 43 o; SS 34 44 4 5 44 44

Os exemplos não limitativos que se seguem ilustram a presente invenção:

Exemplo de referência 1 [5(6)-(4-hidroxibenzoil)-1 H-benzimidazol-2-il]carbamato de metilo.

Tratou-se uma solução de 3,4-diamino-4'-hidroxiben-zofenona (49,6 mg, 0,21 mmole) e 1,3-bis(metoxicarbonil)-S-metil isotioureia (98 mg, 0,44 mmole) em etanol (2,5 mL) com ácido p-tolueno-sulfónico (7 mg) e aqueceu-se a mistura à temperatura de refluxo durante 10 minutos. Arrefeceu-se a mistura e recolheu-se o precipitado por filtração e lavou-se com etanol e hexano para se obter o composto do titulo (16mg) sob a forma de um sólido branco p.f. > 25®®”, RMN do (400 MHz, d6-DMSO) δ 7/80 (s, 1 H) , 7/65 (d, 2H, J= 8Hz), 7/50 (s, 1H) , 7/49 (s, 1H) , 6/89 (d, 2H, J= 3/77 (s, 3H) ppm, m/e 311 (M+) , Anal. Calculado para C, 61/73; H, 4/21; N 13,49, Encontrado: C, 61/68; H, 4/18;N 13/36,

Exemplo 2 [5 (6) - (4-fosfono-oxibenzoil) carbamato de rnetilo.

Arrefeceu-se num banho de gelo uma solução de [5-(4(di-tert-butilfosfono-oxi)benzoil)-1 H-benzlmidazol-2-il]carbamato de metilo (1,5 g, 3,0 mmole) em diclorometano (55 mL) e tratou-se com ácido trifluoroacético (6 mL) gota a gota. Deixou-se a mistura aguecer à temperatura ambiente e agitou-se durante 1 hora antes de se eliminarem os dissolventes a pressão reduzida. Triturou-se o residuo no seio de éter para se obter o composto do titulo (1.13 g) sob a forma de um sólido p.f. » 2S1®Cí RMN do 'H (300 MHz, d6-DMSO) 6: 7/84 (s, 1H) , 7/75 (d, 1H, 7/57 (d, 1H, 7/5 2 tá* J= 8Hz) , 7/33 (d, 1H, Mliz) , 3/78 (s, 3H) ppm.

Utilizou-se como material inicial o [5(6)-(4-(di-terc-bu.fiifVisiono ·οχί ίbfciiioil) ·· lll-ben«$ v: diij tf&rh&íMfo de metilo que se preparou da seguinte forma:

Agitou-se em atmosfera de azoto uma solução de [5(6)-(4-hidroxibenzoil)-1 H-benzimidazol-2-illcarbamato de metilo (100 mg, 0,3 mmole) em tetra-hidrofurano anidro (1 ml) e tratou-se com dietilfosforamideto de di-terc-butilo (74 mg, 0,29 mmole) e 1H tetrazole (54 mg, 0,78 mmole) e agitou-se a mistura até a reacção mostrar estar completa através de CCF (cromatografia de camada fina) (cerca de 1 h) . Tratou-se a mistura arrefecida (-40 °C) com ácido 3-cloroperbenzóico (79 mg, 0,39 mmole) em dicloromatano (1 mL) e agitou-se durante 10 minutos antes de se deixar aquecer até à temperatura ambiente. Lavou-se a mistura com bicarbonato de sódio aquoso, saturado seguido de salmoura e secou-se (MgS04) , concentrou-se a fase orgânica a pressão reduzida. Fez-se a cromatografia do residuo em gel de sílica eluindo-se primeiro com metanol/diclorometano a 4 % e depois com metanol/diclorometano a 5 8. Obteve-se [5(6)-(4- (dl·· lerc' buí' 11Γθϊ?ίοπο··οχί) henoaiX) · I H-benzimidazoi-2- il]carbamato de metilo (35mg) sob a forma de um sólido branco p.f. 99-101 °C.

Exemplo 3 i-S (6) - (4-fosfono-oxifeniltio) lH-benzimidazol-2-il] carbamato de metilo

Tratou-se uma solução de [5 (6)-(4-(di-terc-butilfos-fono-oxi)feniltio)-1 H-benzimidazol-2-illcarbamato de metilo (180 mg) em diclorometano anidro (10 mL) a 4 °C com ácido trifluoroacético (1 ml) e agitou-se durante 1,5 h. Deixou-se a mistura arrefecer para a temperatura ambiente e concentrou-se a pressão reduzida. Adicionou-se acetato de etilo e concentrou-se novamente a mistura. Triturou-se o resíduo com éter de dietilo, lavou-se com éter de dietilo seguido de acetona/água 9:1 e secou-se para se obter o composto do título (134 mg) sob a forma de um sólido branco p.f. 190-193 °C. Anal. Calculada para . 3H20: C, 40,1; H, 4,5; N 9,3. Encontrado: C, 40,1; H, 3,9; N 9,2. Utilizou-se como material inicial [5(6)-(4-(di-terc-butilfosfono-oxi)feniltio)-1 H-benzimidazol-2-il]carbamato de metilo que se preparou como se segue:

Tratou-se uma solução de [5-(4-hidroxifeniltio)-1 H-benzimidazol-2-113 carbamato de metilo (200 mg) numa mistura de dimetilformamida anidra (2 ml) e tetra-hidrofurano anidro (2 ml) com dietilfosforamideto de di-terc-butilo (350 mg) e agitou-se a mistura durante 48 h i temperatura ambiente. Arrefeceu-se a mistura para -65 °C e tratou-se gradualmente com monoperoxiftalato de magnésio (850 mg) de modo a gue a temperatura permanecesse abaixo de -50 "C. Adicionou-se uma siuluçãe aquosa saturada de bicarbonato de sódio, mantendo a temperatura abaixo de -40 °C durante a adição e depois deixou-se a mistura aquecer para a temperatura ambiente. Extraiu-se a mistura com três porções (50 mL cada) de acetato de etilo e lavaram-se os extractos combinados com salmoura (50 mL) , secaram-se (MgS04) e concentraram-se a pressão reduzida. Purificou-se o resíduo por cromatografia radial em gel de sílica e eluiu-se com diclorometano/etanol a 9:1 para se obter [5 (6) - ( 4-(di-terc-butilfosfono-oxi)f e-niltio)-1 H-benzimidazol-2·· 111 carbamato de metilo (180 mg) sob a forma de uma espuma branca.

Exemplo de referência 4 [5(6)-(4-aminofeniltio)-l tf-benzimidazol-2-il] carbamato de metilo

Dissolveu-se [5 (6)-(4-(acetilamino)feniltio)-1 H-benzimidazol-2-il]carbamato de metilo (602 mg, 1,78 mmole) numa mistura de metanol (24 mL) e ácido clorídrico (10 %, 6 mL) e aqueceu-se à temperatura de refluxo durante 16 h. Neutralizou-se a solução com uma solução de amónia e eliminou-se o metanol a pressão reduzida. Recolheu-se por filtração o precipitado branco, lavou-se com água e secou-se in vácuo para se obter 392 mg de um sólido amarelo claro com p.f. 282-284 °C. m/e 298 (M+) .

Exemplo de referência 5 [5(6)-4-alanilaminofeniltio)-lfí-benzimidazol-2-il]carbamato de metilo

Tratou-se uma suspensão de (5 (8)-(4-(Na-terc-butoxi-carbonilalanilamino) feniltio) ·· ;iq/· · 2 il · to de metilo (250 mg) em diclorometano (20 ml) com áido trifluoroacético (4 ml). Deixou-se a mistura aquecer até I temperatura ambiente e concentrou-se a pressão reduzida. Adicionou-se acetato de etilo e concentrou-se novamente a mistura. Triturou-se o resíduo com éter de dietilo para se obter o sal de ácido trifluoroacético do composto do título (105mg) sob a forma de um sólido branco p.f. 178-182 °C. m/e 485 (M+) . Anal. Calculada para ,2C2HF302 C; 43,1, H; 3,5, N; 11,4 Encontrado C; 42,8, H; 3,8, N; 11,3 O [5(6)-(4-(Na- terc-butoxicarbonilalanilamino)f enil -tio)-lH-benzimidazol~2~il]carbamato de metilo utilizado como material inicial foi preparado como se segue:

Tratou-se uma suspensão de [5(6)-(4-aminofenyltio)-1 H-benzimidazol-2-illcarbamato de metilo (150 mg) em tetra-hidrofurano anidro (4 mL) com N-terc-butoxicar-bonilalanina (100 mg), arrefecida para -35°C e tratou-se com 1 - (3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (lOOmg). Deixou-se a mistura aquecer até â temperatura ambiente e agitou-se durante 16 h. Adicionou-se água (40 mL) e acetato de etilo (20 mL) e extraiu-se a mistura com quatro porções de acetato de etilo (50 mL de cada). Lavaram-se os extractos combinados com salmoura (50 mL) , secou-se (MgSCld e concentrou-se a pressão reduzida. Purificou-se o resíduo em gel de sílica eliundose com acetato de etilo para se obter [5(6)-(4-(Na-terc-butoxicarbonilalanilamino)feniltio)-lH-benzimidazol-2vil]carbamato de metilo (258mg) sob a forma de um sólido branco p.f. 222-224 °C. m/e 485 (M+) ..

Exemplo 6 [5(6)-(4- (metoxicarbonilamino)feniltio) -lH-benzimidazol-2-illcarbamato de metilo

Dissolveu-se [5(6)-(4-aminofeniltio)-l H-benzimidazol-2-illcarbamato de metilo(150 mg, 0,48 mmole) em dimetilformamida (2 mL) e tetra-hidrofurano (2 mL) e adicionou-se cloroformato de metilo (40 mg, 0,42 mmole) em conjunto com trietilamina (43 mg, 0,42 mmole). Agitou-se a solução a 20 °C durante 72 h e depois evaporou-se até à secagem a pressão reduzida. Purificou-se o resíduo por cromatografia em gel de sílica eluindo-se com metanol/diclorometano a 5 % para se obter o composto do título sob a forma de um sólido branco; pf > 350°C (dec.).

Exemplo 7 [5(6) -(4-fenilaminocarbonilamino)feniltio)-IH-benzimidazol-2-il]carbamato de metilo

Dissolveu-se [5(6)-(4-aminofeniltio)-lH-benzimidazol-2-il]carbamato de metilo (150 mg, 0,48 mmole) em dimetilformamida (2 ml) e tetra-hidrofurano (2 mL) e adicionou-se isocianato de fenilo (56,8 mg, 0,48 mmole) em conjunto com trietilamina (50 mg, ca. 0,5 mmole). Agitou-se a solução a 20 "C durante 12 h e eliminaram-se os dissolventes in vacuo. Purificou-se o resíduo em sílica (acetato de etilo/hexano, a 2:1) para se obter o composto do título sob a forma de um sólido branco; pf 335-340 °C (dec.),m/e 433

Exemplo 8 [5(6)-(4-(metoxicarboniloxi)benzoil)-ltf-benzimidazol-2-illcarbamato de metilo

Dissolveu-se [5 (6)-(4-hidroxibenzoil)-1H benzimidazol-2-il] carbamato de metilo (110 mg, 0,35 mmole) em dimetilformamida (3,5 mL) e trietilamina (0,5 mL) .

Arrefeceu-se a solução para 0°C e adicionou-se cloroformato de metilo (50 mg, 0,52 mmole) com agitação. Agitou-se a solução durante 0,5 h a 0 °C e durante 1 h a 20 °C e evaporou-se até à secagem. Dissolveu-se o resíduo em acetate de etilo (50 mL) e lavou-se com bicarbonato de sódio (sat., aq., 50 mL) e salmoura (50 mL) , secou-se e evaporou-se. O resíduo foi purificado por cromatografia em gel de sílica com acetato de etilo/hexano, 1:1 seguido de acetato de etilo para se obter o composto do título sob a forma de um sólido branco; pf 224-226 °C (dec) .m/e 369 (M+) .

Exemplo 9 [5(6)-( 2-metoxicarbonilfeniltio)-lff-benzimidazol-2 -il]carbamato de metilo a partir de 2-(3,4-diaminofe-niltio)benzoato de metilo (1,5 g) e 1,3-bis(metoxicar-bonil)-S-metil isotioureia (2,25 g) obteve-se o composto (1,51 g) do título sob a forma de um sólido branco; pf 228-230 m/e 357 (M+) . Anal. Calculada para : C, 57,13; H, 4/23 ;N 11 / 75 , Encontrado: C, 57,39; H, 4/13; N 11/81.

Exemplo 10

[B7 6: · ·: 3 ·· svu?:cv ybtxali£en.u.;; it) ~ 11J carbamato de metilo a partir de 3-(3,4-diaminofenil-tio)-

benzoato de metilo (246 mg) e 1 ,3-bis(metoxicarbonil)-S-metil isotioureia (371 mg) obteve-se o composto (183 mg) do título sob a forma de um sólido branco; pf 226-228 m/e 357 (M+) . Anal. Calculada para : C, 57/135 H 4/23; N 11 / 75 , Encontrado: C, 56/58;H, 4/31 ;N 11/86.

Exemplo 11 [S (S) -4 -X 2·· II] carbamato de metilo a partir de 4-(3,4-diaminofenil-tio)benzoato de metilo (830 mg) e 1,3-bis(metoxicarbonil)-S-metil isotioureia (1,25 g) obteve-se o composto do título (694 mg) sob a forma de um sólido branco sujo; pf 280-282 m/e 357 (M+) . Anal. Calculada para : C, 57/13; H, 4/23;N 11/75, Encontrado: C, 5 7/21;H, 4/31;N 11/73.

Exemplo de referência 12 1-5(6)- ( 4-hidroxifeniltio)~1 H-benzimidazol- 2-i1 ] carbamato de metilo a partir de 4-(4-hidroxifeniltio)-1,2-fenilenodiamina (4 g) e 1,3-bis(metoxicarbonil)-S-metil isotioureia (6 g) obteve-se o composto do título (2,4 g) sob a forma de um sólido branco; pf 202-204 °C m/e 315 (M+) . RMN do lH (400 MHz, d6-DMSO) δ 3/74 3H,) , 6/76e 7,2 (AA' BB' , 4H, J = 8,6 Hz), 7/03 (dd, 1H, J = 1,7, 6,6 Hz,), 7/29 (d, 1H, J - 1,4 K*,), 7/34 (d, 1H, d s 1,1 Ηΐ,Ι, 9/68 (b, H ), 11/67 (b, 2H) ppm.

Exemplo 13 [.¾ (6) - (4-(acetilamino)fenoxi)-1 H-benzirnidazol- 2-i 1 ] carbamato de metilo a partir de 4-(4-(acetilamino)fenoxi)-1,2-fenilenediamina (1,02 g) e 1,3-bis(metoxicarbonil) -ç-metil isotioureia (2,67 g) obteve-se o composto do titulo (0,93 g) sob a forma de um sólido branco; pf 304-306 "C m/e 315 (M+) . Anal. Calculada para : C, 60,00; H, 4/74; N 16 / 4 6 , Encontrado: C, 60,03; H, 4,72; N 16,42.

Preparado de uma forma análoga à do Exemplo 3 foi;

Exemplo 14 [5(6)-4-fosfono-oxifenoxi)-lH-benzimidazol-2-11]carba-mato de metilo a partir de [5(6)-(4-(di-terc-butilfosfono-oxi)fenoxi)-lH-benzimidazol-2-il]carbamato de metilo (200 mg) obteve-se o composto do titulo (140 mg) sob a forma de um sólido branco; p.f. 272-275 "C.

Exemplo de referência 15 [5 (6) - (4-hidroxi-Q?-hidroxi-iminobenzil) -1 H-benzimidazol-2-illcarbamato de metilo

Adicionou-se [5(6)-(4-hidroxibenzoil)-lH~benzimidazol-2-il]carbamato de metilo (100 mg, 0,32 mmole) a uma solução de hidroxilamina (0,8 mmole) em MeOH (20 mL, preparada por tratamento de cloridrato de hidroxilamina (0,64 g, 1,6 mmole) e NaOH (0,14 g, 1,6 mmole) seguido de filtração). Aqueceu-se a solução a 70 °C durante 36 h, arrefeceu-se e adicionou-se água (30 mL) . Filtrou-se a solução e lavou-se com éter e triturou-se o sólido com metanol para se obter o composto do titulo (40 mg) sob a forma de um sólido branco; pf 288-290 "C.

Os compostos conhecidos que se seguem foram preparados por processos da literatura: H-benzimidazol-

Exemplo 16: [5 (6 )-(4-(acetilamino)fenoxi)-1 2-11]carbamato de metilo

Lisboa, 15 de Outubro de 2007

Claims

1. Benzimidazole-2-carbamato substituído na posição 5(6), de fórmula

caracterizado pelo facto de Alq representar um grupo alquilo, X representar oxigénio, enxofre, sulfinilo, sulfonilo, carbonilo (CO), tiocarbonilo (CS), sulfoniloxí, NH, iminoetileno (C=NH) 5 N-hidroxi-iminometileno, N-alcoxi-iminometileno, dialcoximetileno, 1,3-dioxolan-2-ilo, 1,1-etenilo, um grupo ou uma ligação; Sr representa hidrogénio, alquilaminocarbonilo ou alcoxicarbonilo; R2 representar hidrogénio, alcoxicarbonilo, cianome-tilo, cianoetilo, alcoximetilo ou acetoximetilo; R3 representar hidrogénio, hidroxi, alcoxi ou amino; A representar um anel aromático substituído ou um grupo alquilo substituído em que pelo menos um substituinte representado por Y se selecciona entre fosfato, alquilfosfato, NHCOR4 ou em que R4 e que podem ser iguais ou diferentes, representam, cada um, um grupo alquilo substituído com um ou mais substituintes seleccionados entre hidroxi, amino, alquilamino, guanidino, carboxilo, SCiíH,, sulfato ou fosfato e os seus sais, solvatados e hidratos aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.

2 . Carbamato de acordo com a reivindicação 1, de fórmula II caracterizado pelo facto de alq representar um grupo alquilo, B representar um anel aromático X representar oxigénio, enxofre, sulfinilo, sulfonilo, carbonilo (CO), tiocarbonilo (CS), sulfoniloxi, NH, iminoetileno (C=NH)s N-hidroxi-iminometileno, N-alcoxi-iminometileno, dialcoximetileno, 1,3-dioxolan-2-ilo, 1,1-etenilo, um grupo ChR* ou uma ligação; R: representar hidrogénio, alquilaminocarbonilo ou alcoxicarbonilo; R2 representa hidrogénio, alcoxicarbonilo, cianometilo, cianoetilo, alcoximetilo ou acetoximetilo; R3 representar hidrogénio, hidroxi, alcoxi ou amino; Y se seleccionar entre fosfato, alquilfosfato, feCOR* ou em que R4 e $Lrt que podem ser iguais ou dife rentes, representam, cada um, um grupo alquilo substituído com um ou mais substituintes seleccionados entre hidroxi, amino, alquilamino, guanidino, carboxilo, S03H, sulfato ou fosfato, R? e R8 representarem, cada um, independentemente, H, alquilo, átomos de halogéneo, grupos hidroxilo, amino, alquilamino, diaiquilamino, alcoxi, alquiltio, ciano, nitro ou trifluorometilo, com a condição de que Y não represente NHC(0)Me e quando B representar um anel de tiofeno então Y não representa C [Qí h·, e quando B representar um anel de 5(6)-benzimidazole então Y nao representa NHC02Me ou NHC02Et e os seus sais, solvatados e hidratos aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.

3. Carbamato de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo facto de Y representar um grupo fosfato.

4. Carbamato de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo facto de Y representar um grupo NHCOR4 em que R4 representa um grupo 1-aminoalquilo.

5. Composição para o tratamento de doenças que envolvem a angiogénese, caracterizada pelo facto de compreender pelo menos um benzimidazole-2-carbamato substituído na posição 5(6), de fórmula I, tal como definido na reivindicação 1, numa quantidade suficiente para danificar a nova vasculatura.

6. Composição de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo facto de o carbamato ter uma fórmula II, conforme definido na reivindicação 2. Lisboa, 15 de Outubro de 2007