DE2362288A1

DE2362288A1 - Verfahren zur herstellung von l-glutamin

Info

Publication number: DE2362288A1
Application number: DE2362288A
Authority: DE
Inventors: Kenji Kikuchi; Shinji Okumura; Takayasu Tsuchida; Fumihiro Yoshinaga
Original assignee: Ajinomoto Co Inc
Current assignee: Ajinomoto Co Inc
Priority date: 1972-12-16
Filing date: 1973-12-14
Publication date: 1974-06-20
Also published as: GB1428497A; JPS5317675B2; JPS4981587A; FR2210663A1; US3886039A; FR2210663B1; DE2362288C2

Description

Verfaliren_zur_Hergtellung_v;on._Ii-&lutamin . Priorität: 16, 12. 1972, Nr. 126484, Japan

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von L-Glutamin, speziell ein Verfahren zur Herstellung von L-GIutamin durch bakterielle Fermentation.

L-Giutamin wird als Aminosäure klassifiziert, die für Ratten nicht essentiell ist;, sie hat jedoch. Verwendung als Rohstoff in der Kosmetik und Medizin oder als Nahrungsmittelzusatz gefunden.

Es ist bekannt, daß L-Glutamin zusammen mi't Glutaminsäure mit Hilfe eines Fermentationsyerfahrens gebildet wird, bei dem Glutaminsäure bildende Stämme der Gattungen Brevibäcterium, Bacillus, Micrococcus, Microbacterium und Escherichia verv/endet wurden (bekanntgemachte Japanische Patentanmeldungen 544-9/1964-, 7591/1964, 12474/1965 und 7595/¹⁹⁶⁷ ^

Der Erfindung liegt dagegen die Aufgäbe zugrunde, L-Glutamin in einfacherer und wirtschaftliclierer Weise herzustellen, als es

bisher möglich war.

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Es wurde nun gefunden, daß L-Glutamin in höherer Konzentration und in höheren Ausbeuten als mit Hilfe der bekannten L-Glutaminbildenden Stämme erzeugt wird, wenn unter vergleichbaren Reaktionsbedingungen Mutantenstämme verwendet werden, die Resistenz gegen mindestens eine Sulfaverbindung, insbesondere ein SuIfa-Arzneimittel haben,-wenn diese Mutantenstämme auf einem an sich üblichen Medium gezüchtet werden, das assimilierbare Quellen für" Kohlenstoff und Stickstoff, anorganische Ionen und unspezifische organische wachstumsfördernde Mittel enthält.

Gegenstand der Erfindung ist somit ein Verfahren zur Herstellung von L-Giutamin durch Züchten einer L-Glutamin-bildehden Mutante unter aeroben Bedingungen in einem wässrigen Kulturmedium, das assimilierbare Kohlenstoff- und Stickstoffquellen und anorganische Salze enthält, bis zur Anreicherung von L-Glutamin in dem Medium und Gewinnen des angereicherten L-Glutamins aus dem Kulturmedium. Dieses Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, daß eine Mutante von Brevibacterium, Corynebacterium oder Microbae— terium verwendet wird, die gegen'mindestens eine Sulfaverbindung, insbesondere ein Sulfa-Arzneimittel, resistent ist.

Die erfindungsgemäßen Mutanten werden mit Hilfe von üblichen mutagenen Mitteln, wie Ultraviolett-Licht, Röntgenstrahlen oder Gammastrahlen in mutagenen Dosen, Natriumnitrit, Ifitrosoguanidin oder Diäthylsulfat-Lösung aus Elternstämmen, die zur Bildung von Glutaminsäure befähigt sind, eines Mikroorganismus der Gattung Brevibaeterium, Corynebacterium und Microbacterium, und Selektion der so gebildeten Mutanten im Hinblick auf die erforderliche Resistenz gegenüber Wachstumshemmung durch SuIfa-Verbindungen abgeleitet. Eine solche Mutante kann auch dann, wenn die vorstehend erwähnten mutagenen Mittel nicht angewendet wurden, durch Selektion bzw. Screening von Stämmen mit Resistenz gegen Sulfa-Verbindungen aus Kolonien erhalten werden, die durch Züchtung des Elternstammes auf einem solche Sulfa-Verbindungen enthaltenden Medium, gebildet werden.

Wenn diese Mutantenstämme mit Resistenz gegenüber S

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Windungen bzw. SuIfa-Arzneimitteln von Elternstämmen abgeleitet' werden, die bereits Fähigkeit zur Glutaminbildung haben, wird die Menge des gebildeten Glutamine beträchtlich erhöht.

Die für das erfindungsgemäße Verfahren verwendeten Mikroorgä- _: nismen können Mutanten sein, die andere biologische .Eigenschaften, wie einen bestimmten Nährstoffbedarf und/oder Resistenz gegenüber anderen Reagenzien zusätzlich zu der Resistenz gegenüber SuIfa-Verbindungen haben.

Die Sulfa-Verbindungen, gegen welche die erfindungsgemäß verwendeten Mutantenstämme resistent sind, haben folgende allgemeine Eigenschaften und sind allgemein als Antagonisten von p-Aminobenzoesäure bekannt.

1. Sie enthalten in ihrem Molekül eine Gruppe der allgemeinen Formel NHp- ^"^-SOoNH- und zeigen allgemein antimikrobielle Wirkung. ~"

2. Die antimikrobielle Wirkung gegen übliche Wildstämme wird durch Zugabe von p-Aminobenzoesäure unterdrückt.

Zu Beispielen für solche SuIfa-Arzneimittel, welche die vorstehenden Eigenschaften haben, gehören Sulfapyridin, Sulfathiazol, Phthalylsulfathiäzol, Sulfadiazin, SuIfaguanidin, SuIfamethazin, Sulfamerazin, Sulfadimethoxin, Sulfamethomidin, SuIfamethoxypyridazin, Sulfisomidin, Sulfisoxazol, Acetosulfamin, SuIfanylamid, Sulfisomezol,' SuIfaphenazol, Sulfamethizol, Sulfaethidol, Sulfapyrazin, Irgafen und Irgamid..

Es wurde gefunden, daß die wirksamsten Glutamin-bildenden Mutanten Brevibacterium flavum FEBM Ρ-Ίθβ^,. Brevibacterium flavum FERLi P-2371, Corynebacterium glutamicum FERHi P-23?2, Corynebacterium glutamicum FERM P-2375 und Microbacterium flavum FERM. P-2374 sind.

Kulturproben von Mikroorganismen, die durch FERM-P-Nummern be-' 409825/090 1

zeichnet sind, sind für den Fachmann durch das Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science of Technology, the Ministry of Industrial Trade and Industry, 1-8-5 * Inage Higashi, Chiba-shi, Ghiba, Japan, frei erhältlich.

Verfahren zur Herstellung von Mutantenstämmen, die Resistenz gegenüber Sulfa-Arzneimitteln zeigen, werden z.B. in den nachstehenden Versuchen beschrieben.

Versuch_1

(1) Brevibacterium flavum ATCG 14-o67 wurde 3o Minuten bei 3o°C ■ mit 2oo g/ml Nitrosoguanidin behandelt und wurde dann auf eine Agarplatte aufgeimpft, die 2 % Glucose, o,2 % Harnstoff, 1 % Ammoniumsulfat, o,3 % K₂HPO₄, o,1 % KH₂PO₄, o,,04- % MgSO₄'7H₂O, 2 ppm Fe⁺², 5o/<g/l Biotin, 35o/-ig/l Thiamin.HCl, 4-oo g/ml Sulfaguanidin und 2 % Agar enthielt und ,einen pH-Wert von 7»o hatte. Nach vier- bis zehntägiger Züchtung bei 31°C wurden Mutantenstämme mit Resistenz gegenüber Sulfa-Arzneimitteln aus etwa I00 auf der bebrüteten Agarplatte aufgetretenen Kolonien isoliert. Daraus wurden drei Mutantenstämme durch Selektion erhalten^ die zur Bildung einer großen Menge an L-Glutamin befähigt waren. Es wurde bestätigt, daß diese drei Mutantenstämme keinen spezifischen Nährstoffbedarf haben. In der vorstehend beschriebenen Weise wurden Brevibacterium flavum AJ-34-O9 (FERM P-16B4-) und AJ-3681 (FERM P-2371) erhalten.

Nach dem vorstehend beschriebenen Verfahren wurden außerdem Corynebacterium glutamicum AJ-3682 (FEBM P-2372), Gorynebacterium glutamicum AJ-35683 (I¹ERM P-2373) und Microbacterium flavum AJ-3684 (FERM P-2374·) aus den Elternstämmen Micrococcus glutamicus ATCO 21o1o (die taxonomische Bezeichnung dieses Stammes wurde in Corynebactericum glutamicum geändert) und Microbacterium flavum ATCC I034-0 erhalten. Es wurde bestätigt, daß diese Stämme Glutamin-bildende Mutanten mit Resistenz gegenüber Sulfa-Arzneimitteln sind.

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(2) Wachstumstest des Stammes Brevibacterium flavum FERM P-1684· in einem Medium, das variierende Mengen an Sülfaguanidin enthält: _;

Der Elternstamm Brevibacterium flavum ATGG 14-o67 und der Mutantenstamm FERM P-1684-, die vorher während 24- Stunden auf Schrägagar-Nährmedium gezüchtet worden wären, wurden mit einem flüssigen Medium der folgenden Zusammensetzung gewaschen und in 3 ml-Anteile des mit Sulfaguanidiri versetzten Mediums, wie in Tabelle 1 angegeben ist, eingeimpft= Die Konzentration der Mikrobenzellen, die in je-

des Medium eingeimpft wurden, wurde auf etwa 1,5 x 1o^r

eingestellt. "~ . '

Zusammensetzung des Mediums: Glucose

Harnstoff

2	%	% ■
1	%	% "■■-■
O,		%
o,		ppm
	Ά	ppm
2		g/l
2		g/l
5c	)
1oc	)

Fe++
Mn++
Bi οtin Thiamin.HCl ' (pH 7,0)

Die Züchtung wurde 4-8 Stunden bei 31,5°C durchgeführt, und das resultierende Wachstum und das relative Wachstum jedes Stammes in jedem Medium, das unterschiedliche Anteile an Sulfaguanidin enthielt, werden in der nachstehenden Tabelle 1 gezeigt» .

T a b e 1	Ie 1	Wachstum relatives Wachstum	O	1oo	2oo j 3oo j 4-OO	0,3οο■ο,οσο - : 51,7; O	ο,25ο	-.	Ο,ΟΟΟ ο ;
SuIf aguani din {μ. g/ml >	Wachstum relatives Wachstum-	o,58o 1oo	ο, 58o 1-00	o,47o 81,2	0,375 89,5		5θΟ j 600 ;	Ο,ΟΟΟ ί V - O \
Bo Flavum ATCC 14-Ο67		o,4-2o 1 oo	o,4-2o loo	0,4-18 99,5	Ο,ΟΟΟ O
B. Flavum FEBM P-1684-			0,12ο 28 _? 6

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Anmerkung

Wachstum: Je.de Kulturbrühe wurde mit; 25 Vblumteilea Wasser verdünnt, und die optische Dichte (OB), wurde als Maß für das Wachstum durch Messung der Lichtabsorption bei 562 mf*~ bestimmt.

(3) Ein Wachstumstest der Stämme Corynebacterium glutamicum FERM P-2372 und Micro-bacterium £lavum FERM P-2374 in einem Medium, das variierende Mengen an. Sulfaguanidin. und SuIfamethoxypyridazin enthielt, wurde in gleicher Weise wie in Abschnitt (2) durchgeführt.

Die Ergebnisse sind in. den nachstehenden Tabellen 2 und 3 gezeigt.

Tabelle

Sulfaguanidin Qtg/ml)	Wachstum relatives Wachstum	⁰	loo j 2oo	o,5oo 1qo	3oo ι 4oo	5oo
Ii. glutamicus /LTCC 2I0I0	Wachstum relatives Wachstum	o,5oo I00	o,5oo I00	o*47o 97,9	o,45o,o,2oo 90 { 4o	O, OCO 0
2. glutamicum B¹EEM P-2372	o_s48o too	o,48o too	0,48o!0,47©:0,475 loo 197,9 j 95

Tabelle 3

3ulfamethoxypyridazixt (^tg/ml)	Wachstum relatives Wachstum	O j -loo	0,52o too	2oo f 3oo	4oo	5oo
Si. flavum &TCC 1o34o	Wachstum relatives Wachstum "	o_t52o * ioo	0,500 ioo	o,,5oo[o,2oo 96,2\| 38,5 ι	O₅OOO O	0,0OC O
iä.f lavum FEBM P-2374	o» 5oo	O_t49o:!o,49o 98 I 98 I	O_s5OO ; O,38O ί 1oo i 76 - ... , !

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Das Ferjaiintatiönsmedium kann ein natürliches Nährmedium oder* . ein synthetisches Nährmedium sein, das den grundlegenden Bedürfnissen der erf indungsgemaß verwendeten Mikroorganismen Rechnung trägt.

Geeigneten Kohlenstoff quellen gehören die üblichen Kohlenhydrate, wie Glucose, Fructose, Maltose, Saccharose, Stärke, Stärkehydrolysate, Melassen, sowie auch organische Säuren, insbesondere Essigsäure, Propionsäure,- Fumarsäure oder Benzoesäure und Alkohole, insbesondere Methanol und Äthanol an. Ein Medium kann auch verschiedene Kohlenstoffquellen enthalten. Einige der neuen Μμΐβηΐ en assimilieren Kohlenwasserstoffe als überwiegende oder in geringfügigem Maß verwendete Kohlenstoffquelle. ;

Stickstoff kann durch Ammoniumsalze, Mitrate, Harnstoff, Aminosäuren, Maisqueilflüssigkeit, Hefeextrakt, Fleischextrakt, Fischmehl, Pejpton, Bouillon, Caseinhydrolysäte und"Gemische solcher Substanzen sowie auch durch Ammoniak zugeführt werden.

Die erforderlichen anorganischen Ionen können durch Magnesiumsulfat, Natriumphosphat, Kalium-mono— und dihydrogenphosphat, . Eisensülfat, Manganchlori<i₄ Calciumchlorid, Natriumchlorid und andere Verbindungen zur Verfügung gestellt werden.

Um eine gute Ausbeute an Glutamin zu erzielen, sollte die Fermentation unter aeroben Bedingungen unter Belüftung und/öder Bewegen bzw. Rühren durchgeführt werden. Für eine optimale Ausbeute sollte der'pH-Wert innerhalb des Bereiches von 5»5 bis 8,5 gehalten werden. Der gewünschte pH-Wert kann durch Zugabe von gasförmigem oder wässrigem AmmQniak, Cälciumcarbonat, Alkalimet allhydroxiden, Harnstoff oder organischen oder, anorganischen Sauren zu dem Medium, die von Zeit .zu Zeit erfolgt, auf-· rechterhalten werden. Gewisse dieser Zusätze sind auch Quellen für assimilierbaren Stickstoff. Wenn die Fermentation bei einer Temperatur im Bereich von 24-°C bis 37°C durchgeführt wird·, er-< reicht die Glutamin-Konzentration in dem Medium gewöhnlich ihren Maximalwert innerhalb zwei bis fünf Tagen.

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Zum Gewinnen.; des ,angereicherten Glutamine aus der Kulturbrühe, können übliche. Methoden angewendet werden, vorzugsweise._L-na.ch:. dem Entfernen: der: Mikrobenzellen durch, .Filtration; oder .Zeiitrifugation. Das. Glutamin wird vorteilhaft? durch .Ionenaustauscher-' harze aus der; zellfreien Brühe, absorbiert. ,Kristallines; tamin wird, aus dem-Eluat nach; üblichen^,Methoden· erhalten».,.

Die Erfindung, wird dureh; die. nachstehenden·.Beispiele^erläutert k ..

Ein .Fermentationsined;3_iiam:.der' naQhstehendeiii.Zusammgn.se.tzun.g. wurde, hergestellt: -■__

Ίο; %■,, Ammoniumsulf at 1 ;-%;;,

FeSQ^.

30.0.₁ ml-I^robenrdes-Miqdiums. wurden.in. Ferme,nt;ationskplben_;iaus Glas eingeführt; undamittHitlfei von_fjDamjif,; sterilis3.ert» ^Die^Merdien-^wurdennmittBreisrib

stamm .mit_tResistenz, gegenüber__rSuIfaguanidin)\inoc,uliert^ das , vorher. aulrBoulllonnSc.hrägplattenf^^Stundenv.beii; 33'ί!ρ^-·6£Γν-züchtet ι v/orden^w^r'. , Die, .Fergi₄entatioii_riw^3?de^be.i ; 1 i2op₍ ,U^m« ,bei " 31,$!??G: wgJirendriJo. Stunden-un^eri-Belüf^1Ig₁ mit; 1/f^jVplu# Luft" pro_: Minut e_:rprp_>vVplum^e.il j der ,,Brühe- durchgeführt» Der, Wert jedes -Mediums; wurd,e₍.^dufch^Zugabp^VpnVgasform^gpm^A bei etwa _F6,,,5^:,gehalten., ₄NaGX^_;3Q_;;S_itμndιenv_jdauerndζr,.Züchiung·;^m^^ den. i in, der ν Brühe;, 3 r^'ig/dliLftGlbutaminj, aufgefunden,,,.:

m_rnEn|5|f^^

und ein Liter der überstehenden Flüssigkeit wurde durch Leiten durch eine Säule mit einem Ionenaustaüscherharz von L-Glutamin befreit. Aus der Brühe wurden mit Hilfe einer üblichen Methode 15>5 kristallines L-Glutamin gewonnen.

Andererseits fanden sich'nur o,85 g/dl L-Glutamin in der Brühe, in der Brevibacterium flavum ATCG 14-o67 in gleicher Weise wie vorstehend angegeben gezüchtet worden war. . -

Beis£iel_2

Corynebacterium glutamicum FERM P-2372, Corynebacterium gluta-· micum FERM P-2373, Microbacterium'flavum FERIl· P-2574-, .Brevi- ■ bacterium flavum FERM P-2371 und ihre Elternstämme Micrococcus glutamicus ATCG 21o1o, Brevibacterium flavum ATGC 14o67 bzw. Microbacterium flavum ATGC 1o3^o wurden in gleicher V/eise wie in Beispiel Λ gezüchtet.'

Nach 3o Stunden dauernder Züchtung hatten die in der Brühe gebildeten Mengen an L-Glutamin ,die in der folgenden Tabelle- 4 angegebenen Werte.

Tabelle 4 .■ .

verwendeter Mikroorganismus	L-Glutamin
Corynebacterium "glutamicum FERM P-2372.	^: 3,8o.
Corynebacterium glutamicum FERM P-2373	'^J 3,75
Micrococcüs glutamicus ATCC 21o1o	ο j9o ■·".·"■
Microbacterium flavum FERM P-2374 .	3,6o ^; ,-χ. i
Microbacterium flavum ATCC 1o34o	0,92
Brevibacterium flavum FERM^;P-2'371 ·	4,2o
Brevibacterium flavum ATCG 14o67"	, O j

Ein Fermentationsmedium der nachstehenden Zusammensetzung wurdehergestellt:

A.09825/0901

Glucose	1o	%
Ammoniumsulfat	7	%
KH₂PO^/	o,25	%
MgSO^.7H₂O	o,o4	mg %
FeSO... 7H_o0	1	r/i
Thiamin-hydrochlorid .	35o	ίί/ι
Biotin	5
Sojabohnenprotein—		ml/dl
Hydrolysat	0,5	%
CaCO,	4-

pH 6,5

2o ml-Anteile des Mediums wurden in 5oo ml-Schüttelkolben eingeführt und mit Hilfe von Wasserdampf sterilisiert. Die jeweiligen Medien wurden mit; den in der nachstehenden. Tabelle 5 angegebenen sechs Stämmen beimpft, die vorher 24- Stunden bei
3o°C auf Bouillon-Schrägkulturen gezüchtet worden waren. Die
Fermentation wurde 48 Stunden unter Schütteln bei 31,5 C durchgeführt.

Das in ,jeder Kulturbrühe nach 48-stündiger Züchtung gebildete
L-Glutamin ist in der nachstehenden Tabelle 5 gezeigt.

Tabelle 5

verwendeter^ Mikroorganismus	gebildetes !-Glutamin (g/dl)
Brevibacterium flavum FERM P-1684 Brevibacterium flavum ATCC 14o67 Corynebacterium glutamicum FERM P-2372 Micrococcus glutamicus ATCC 21o1o Microbacterium flavum FERM P-2374- Microbacterium flavum ATCC 1o34-o	3,3o 1,5o 3,2o 2,8o 1,oo

Beispiel 4

Die fünf in der nachstehenden Tabelle 6 angegebenen Stämme wur-

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.- 11 -

den auf entsprechende. SaatkulturMedien.atifgeimpf tv sammensetzung nachstehend .angegeben; .ißt».,und -wurden den unter,führen und Belüftung bei,51^G gezüchtet»;

Zusammeiisetzung. des Saatkultiii^jiiiediTams:

Stärkehydrolysatr(berechnet als Glucose) Ammonlumacetat, Ammoniumsulfatί

οφ

MgSlD^.

PeSQ^.^

So jj aboliiienprQjbein^-Hydrο lysal; ι Thlamj n-hydrochlorid; BiotiiL

Je^ 15 ml Inipfipateriallaus- den Anfreilen des. Hauptkulturmediums ben_; gegeben-i _: Das H setzungi.,.

ne·: FerEientationskp.3;f hatte nachBtett^nd.ef>ZusaEira.e.;n-

AmmGniuniacetat^; Natriumacetat AinmpiiiuEisülfat·.

Dlee

gäbe einer 7o %-igen Lösung von Essigsäure und gasförmigem Ammoniak automatisch zwischen 7,ο und 8,0 gehalten., Nach 48 Stunden wurde festgestellt, daß jeder Stamm L-Glutamin in der betreffenden Kulturbrühe in einer Menge gebildet hatte, die in Tabelle 6 angegeben ist.

Tabelle 6

verwendeter Mikroorganismus	L-Glutamin (g/dl)-	Umwandlungsrate
Brevi. flavum FERM P-1684 Coryne.glutamicum FERM P-2372 Microc. glutamicus ATCC 21o1o Microb, flavum FERM P-2374 Microb. flavum ATCC 1o34o	. 4,25 4,00 3,5o 1,2o -	26,ο 25,0 11,o 2o,o 8,o

Die Kulturbrühe des Stammes Brevibacterium flavum FERH¹L Ρ-Ϊ684 wurde zentrifugiert, um die Zellen zu entfernen, und 7,5 g rohes kristallines L-Glutamin wurden mit Hilfe einer üblichen Methode aus 3So ml der Brühe isoliert.

Die in der nachstehenden Tabelle 7 aufgeführten sechs Stämme wurden auf Saatkulturmedien aufgeimpft, die nachstehend angegebene Zusammensetzung hatten, und wurden 18 Stunden unter Rühren und Belüften bei 3o°C gezüchtet.

Zusammensetzuug des, Saatkulturmediums:

Glucose	IiI	1 Hydrolysat	. 2	,5	%
Äthanol			0	,5	%
Ammoniumsulfat		jid	0	»15	%
KH₂PO₄			0	,14	%
MgSO₄.7HpO		7,o	0		rsg %
FeSO,, ·7Η~0		1		ml/dl
Sojabohnenprotei:		3		Kn
Biotin .	3		πι
Thiamin-hydroci: .>,<■	35o	,2
Harnstoff	0

Je 3o ml Impfmaterial aus den Saatkulturen wurden zu 3oo ml-Anteilen der Hauptkulturmedien mit der nachstehend angegebenen Zusammensetzung in Fermentationskolben aus Glas gegeben.

Zusammensetzung des Hauptkulturmediums:

Äthanol 1,5%

Amraoniumsulf at

Sojabohnenprotein-Hydrolysat Biotin

Thiamin-hydrochlorid

7,2 ■"■■;.

1	%
O	,25 %
O	,04- %
1	mg %
1	ml/dl
.5	■■■."r/i
35o	TA

-O/

Das Fermentationsgemisch wurde mit 1.2oo Upm bei 31,5 ^G S©- rührt und mit einem halben Volumteil Luft pro Minute pro Volumteil der Brühe belüftet. ■

Während der Fermentation wurde der pH-Wert Jedes Mediums durch Zugabe von gasförmigem Ammoniak zwischen 6,5-und 7,5 gehalten. Der Äthanolgehalt jedes Mediums wurde durch Gaschromatographie bestimmt, und das Äthanol wurde ergänzt, sowie der Restgehalt . an Äthanol auf etwa o,1 % abgefallen war.

Nach 4-8 Stunden wurde festgestellt, daß jeder Stamm in der entsprechenden Kulturbrühe L-Glutamin in der in Tabelle 7angegebenen Menge gebildet hatte. . '"■■_-

Tabelle

verwendeter Mikroorganismus	flavum FERM	P-1684-	L-Glutamin (g/dl)	Umv/andlungs- rate 00}
Brevi.	flavum ATCC	14-067	' 3,5o	38,5
Brevi.	. glutamicum	FERM P-2372	1,95	2o,5
Coryne	. glutamicus	ATCC 2I0I0	3,4-0	-■· 35,O
Microc	. flavum FERM . flavum ATCC	P-2374 1034-0	1,2o	12,o
Microb .Microb	3,00 1,05	^:<29,o 1o,o

.0 9825/090 1

Claims

P_a t e_n_t_a_n s_p__r ü_c_h e

fTl Verfahren zur Herstellung von L—Glutamin durch Züchten eines L-Glutamin-bildenden Mikroorganismus unter aeroben Bedingungen in einem wässrigen Kulturmedium, das assimilierbare Quellen für Kohlenstoff und Stickstoff sowie anorganische Salze enthält, und Gewinnen des angereicherten L-Glutamins aus dem Kulturmedium, dadurch gekennze ichne t, daß man als L-Glutamin-bildenden Mikroorganismus einen Mutantenstamn von Brevibacterium_? Corynebaeterium oder Microbacterium verwendet, der resistant gegenüber mindestens einer Sulfä-Verbindung ist.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennze ichne t, daß man einen Mutantenstamm verv/endet, der resistent gegenüber mindestens einem der SuIfa—Arzneimittel Sulfapyridin, Sulfathiazol, Phthalylsulfathiazol, Sulfadiazin, SuIfaguanidin, SuIfamethazin, Sulfamerazin, SuIfadimethoxin, SuI-famethoraidin, SuIfamethox^yridazin, SuIfisomidin, Sulfisoxazol, Acetosulfamin, Sulfanylamid, Sulfisomezol, SuIfaphenazol, Sulfamethizol, SuIfaäthidol, Sulfapyrazin, Irgafen und Irgamid ist.
3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß man einen Mutantenstamm von Brevibacterium flavum, Corynebacterium glutamicum oder Microbacterium flavum verwendet.

- . ■ ..■■-.- . 236228"

'-.'■ ■■■' -15-

Verfahren-naeio. Anspruch 1 oder "2, „dadurch g e k e η η-, zeichnet, daß man als L-Glutamin-bildenden Mikro-Organismus Brevibacterium flavum ΪΈΗΜ P-1684,. Brevibacterium flavum FERIi P-2J71, Cörynebacterium glutamicum. FERIä
P-2372, Goi'ynebacferiura glutamicum FERM P-2J73 oder Microbacterium flavura FEHIu P-2574 verv^endet« ^:

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