NO309227B3 - Anvendelse av 5-[2-etoksy-5-(4-metyl-1-piperazinylsulfonyl)fenyl]-1-metyl-3-n-propyl-1,6-dihydro-7H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-7-on for fremstilling av et medikament for behandling av erektil dysfunksjon - Google Patents

Description

Denne oppfinnelse vedrører anvendelsen av 5-2[etoksy-5-(4-metyl-l— piperazinylsulfonyl)fenyl]-l-metyl-3-n-propyl-l,6-dihydro-7H-pyrrazolo[4,3-d]pyrimidin-7-on eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav eller en farmasøytisk sammensetning inneholdende hver enhet, for fremstilling av et medikament til helbredelse eller profylaktisk behandling av erektil dysfunksjon i et hanndyr, innbefattende menneske.

Impotens kan i bokstavelig forstand bli definert som en manns manglende evne til å kopulere og kan innbefatte en manglende evne til å oppnå penil ereksjon eller ejakulasjon eller begge deler. Mer spesifikt kan erektil impotens eller dysfunksjon defineres som manglende evne til å oppnå eller opprettholde en ereksjon som er adekvat for samleie. Dens utbredelse hevdes å være mellom 2 og 7 % av den mannlige befolkning, økende med alderen, opptil 50 år, og mellom 18 og 75 % mellom 55 og 80 års alderen. Bare i USA f.eks. er det blitt antatt at det er opptil 10 mill impotente menn, og de fleste lider av problemer av organisk og ikke psyko-genisk opprinnelse.

Rapporter om velkontrollerte kliniske forsøk hos mennesker er fåtallige, og effektiviteten av oralt administrerte medisiner er lav. Skjønt mange forskjellige medisiner har vist seg å indusere penil ereksjon, er de bare effektive etter direkte injeksjon inn i penis, f.eks. intrauretralt eller i ntra ka ve rn osa It (i.c), og de er ikke godkjent for erektil dysfunksjon. Nåværende medisinsk behandling er basert på i.c.-injeksjon av vasoaktive substanser, og det hevdes at gode resultater er blitt oppnådd med fenoksybenzamin, fentolamin, papaverin og prostaglandin Ei, enten alene eller i kombinasjon; men smerte, priapisme og fibrose i penis forbindes med i.c.-administrasjon av noen av disse midler. Kaliumkanalåpnere (KCO) og vasoak-tivt intestinalt polypeptid (VIP) har også vist seg å være aktive i.c, men omkost-ninger og stabilitetsproblemer kan begrense utviklingen av sistnevnte. Et alternativ til i.c.-ruten er å anvende glyceryltrinitrat-lapper (GTN) på penis, og dette har vist seg å være effektivt, men det frembringer bivirkninger hos både pasient og partner.

Som et generelt alternativ til farmakologisk intervensjon har et antall penile proteser vært anvendt for å underlette oppnåelsen av ereksjon. Korttidsvirkningen er god, men problemer med infeksjon og ishemi, spesielt hos diabetiske menn, gjør at denne type behandling er et siste valg og ikke den terapi som først og fremst velges.

Forbindelsen anvendt ifølge oppfinnelsen er en kraftig hemmer av cykliske guano-sin-3',5'-monofosfat-fosfodiesteraser (cGMP PDE'er) i motsetning til deres hemming av cykliske adenosin-3',5'-monofosfat-fosfodiesteraser (cAMP PDE'er). Denne selektive enzymhemming fører til forhøyde cGMP-nivåer som, i sin tur, utgjør basisen for utnyttelsene som allerede er beskrevet for de nevnte forbindelser i EP-A-0463756 og EP-A-0526004, nemlig ved behandling av stabil, ustabil og varieren-de (Prinzmetall) angina, hypertensjon, pulmonar hypertensjon, kongestiv hjerte-svikt, aterosklerose, tilstander med redusert blodkarpalens f.eks. post-perkutan transluminal koronar angioplasti (post-PTCA), perifer vaskulær sykdom, slag, bronkitt, allergisk astma, kronisk astma, allergisk rhinitt, glaukom og sykdommer som karakteriseres ved forstyrrelser av god bevegelighet f.eks. irritabelt buk-syndrom (IBS).

Uventet er det nå blitt funnet at denne beskrevne forbindelsen er nyttig ved behandling av erektil dysfunksjon. Videre kan forbindelsene administreres oralt, og derved unngås de ulemper som er forbundet med i.c.-administrasjon. Således vedrører foreliggende oppfinnelse anvendelsen av 5-2[etoksy-5-(4-metyl-l— piperazinylsulfonyl)fenyl]-l-metyl-3-n-propyl-l,6-dihydro-7H-pyrrazolo[4,3-d]pyrimidin-7-on eller et farmasøytisk aksetabelt salt derav, eller en farmasøytisk sammensetning inneholdende en av delene, for fremstilling av et medikament for helbredelse eller profylaktisk behandling av erektil dysfunksjon i et hannlig dyr, inklusive mennesket.

Forbindelsene anvendt ifølge oppfinnelsen kan også forekomme i tautomere former, og oppfinnelsen innbefatter både blandinger og separate individuelle tautomerer.

De farmasøytisk akseptable salter av forbindelsen anvendt ifølge oppfinnelsen er f.eks. ikke-toksiske syreaddisjonssalter dannet med uorganiske syrer, så som saltsyre, hydrobromsyre, svovelsyre og fosforsyre, med organo-karkoksylsyrer eller med organo-sulfonsyrer. Forbindelsen anvendt ifølge oppfinnelsen kan også tilveiebringe farmasøytisk akseptable metallsalter, spesielt ikke-toksiske alkalime-tallsalter, med baser. Eksempler innbefatter natrium- og kaliumsaltene.

Forbindelsen anvendt ifølge foreliggende oppfinnelse og deres farmasøytisk akseptable salter, fremgangsmåtene ved deres fremstilling, in vitro testmetoder for å bestemme de hemmende cGMP PDE-og cAMP PDE-aktiviteter derav, farmasøytis- ke sammensetninger derav og administrasjonsruter for bruk på mennesker, er beskrevet i EP-A-0463756 og EP-A-0526004.

En foreløpig undersøkelse ble utført med henblikk på å isolere og karakterisere de cykliske nukleotid-PDE'er i human corpus cavernosum, hvis relaksasjon fører til penil ereksjon. Studier av substratspesifisitet, respons til aktivatorer og inhibitorføl-somhet har demonstrert at human corpus cavernosum inneholder tre distinkte PDE-enzymer.

METODER

Frisk frossen human penis ble erholdt fra HAM (Pennsylvania). Vevet ble tint ved værelsestemperatur, corpus cavernosum ble dissekert fra penis og ga ca. 2-4 g vev, og følgende isolasjonsprotokoll ble fulgt. Vevet ble grovhakket i iskald isotonisk buffer (35 ml) som inneholdt 250mM sukrose, ImM EDTA, 0,5 mM PMSF og 20mM HEPES, pH 7,2, og blandingen ble utsatt for en kort behandling (1 min) med et Silversen blandings/emulgeringsapparat.

Homogenatene ble fremstilt idet man anvendte homogeniseringsrør med teflon pistiller, og løselige fraksjoner ble fremstilt ved sentrifugering ved 100.000 x g i 60 min ved 4°C. 10 ml høyhastighets supernatant ble påført en Pharmacia Mono Q anionebytter-kolonne (1 ml søylevolum) ekvilibrert med buffer inneholdende ImM EDTA, 0,5mM PMSF og 20mM HEPES, pH 7,2 (kromatografibuffer). Kolonnen ble deretter vasket med 5 søylevolumer kromatografibuffer, hvoretter PDE'ene ble eluert under anvendelse av en kontinuerlig gradient på 0-500mM NaCI (totalt volum 35 ml), og 1 ml fraksjoner ble oppsamlet.

Kolonnefraksjonene ble undersøkt med hensyn til PDE-aktivitet under anvendelse av 500nM cGMP eller 500nM cAMP som substrat. cAMP PDE-aktiviteten ble også bestemt i nærvær av en luM umerket cGMP, og PDE-aktiviteten av utvalgte fraksjoner ble bestemt i nærvær av lOmM CaCI2og 10 enheter/ml bovinhjernekal-modulin. Passende fraksjoner ble slått sammen og lagret ved 4°C under undersø-kelsens forløp.

Inhibisjonsstudier ble utført under anvendelse av en substratkonsentrasjon av 500nM gjennom hele studien. Alle inhibitorer ble oppløst i DMSO, og konsentra-sjonskurver ble fremstilt over området 3 x 10"<10>til 1 x 10"<4>M i halvlogaritmiske økninger. IC50-verdiene ble beregnet under anvendelse av sigmoidkurven som

passet biostatens algoritme.

RESULTATER

Løselige PDE'er fra human corpus cavernosum ble separert i tre distinkte aktivitets-fraksjoner. Den første, fraksjon I, (betegnet ifølge elusjonsrekkefølgen) represente-rer den hovedsakelig forekommende PDE og er sterkt selektiv for cGMP som substrat. Denne fraksjon viste seg å være upåvirkelig overfor stimulasjon av kalsium/kalmodulin, og den ble klassifisert som PDEV. Fraksjon II hydrolyserer cGMP og cAMP, og sistnevnte aktivitet stimuleres i nærvær av cGMP, og fraksjonen klassifiseres som PDEn, mens fraksjon III er cAMP-selektiv, og denne aktivitet hemmes i nærvær av cGMP, i overensstemmelse med PDEm-aktiviteten.

For ytterligere å karakterisere PDE-isoenzymene som forekommer i vevet, ble det utført undersøkelser under anvendelse av et stort antall inhibitorer. Inhibitorstudier med fraksjonene I og II ble utført under anvendelse av cGMP som substrat, mens fraksjon III-studiene benyttet cAMP. Disse studier fastslo at fraksjon I tilsvarer PDEV, mens fraksjon III klart ble identifisert som PDEm; fraksjon II (PDEn) var relativt upåvirkelig overfor alle undersøkte inhibitorer.

Oppsummerende identifiserte ovennevnte undersøkelse tre PDE-isoenzymer i humant corpus carvernosum vev. Den dominerende PDE er den cGMP-spesifikke PDEy, mens cGMP-stimulert cAMP PDEnog cGMP-inhibert cAMP PDEmogså er tilstede.

Forbindelsen anvendt ifølge oppfinnelsen er også blitt undersøkt in vitro. og man fant at de er kraftige og selektive inhibi-torer av den cGMP-spesifikke PDEV. F.eks. har forbindelsen anvendt ifølge oppfinnelsen en IC50= 6,8 nM overfor PDEV-enzymet, men utviser bare svak hemmende aktivitet mot PDEn- og PDEm-enzymene med IC50= >100 uM og 34 uM. Således medieres relaksasjon av corpus cavernosum vev og påfølgende penil ereksjon sannsynligvis av økning av cGMP-nivåene i nevnte vev, i kraft av den PDE-hemmende profil hos den aktuelle forbindelsen.

Videre har ikke forbindelsen anvendt ifølge oppfinnelsen, hvilken ble testet i rotte og hund, både intravenøst (i.v.) og oralt (p.o.) ved opptil 3 mg/kg, vist noen åpenbare tegn på skadelig akutt toksisitet. I mus opptrådte ingen døds-fall etter doser på opptil 100 mg/kg i.v. Den aktuelle forbindelsen viste ingen toksiske virkninger på kronisk p.o. administrasjon til rotte ved opptil 10 mg/kg og til hund ved opptil 20 mg/kg.

På mennesker er den aktuelle forbindelsen blitt testet oralt i undersøkelser med frivillige i både enkeltdoser og multiple doser. Videre har pasientunder-søkelser som hittil er blitt utført, bekreftet at en av den aktuelle forbindelsen induserer penil ereksjon i impotente menn.

Skjønt forbindelsen anvendt ifølge oppfinnelsen primært er beregnet for behandling av erektil dysfunksjon eller seksuell dysfunksjon hos menn, kan den også være nyttig ved behandling av kvinnelig seksuell dysfunksjon inklusive orgasmisk dysfunksjon relatert til klitorale forstyrrelser.

I mennesker generelt er oral administrasjon av den aktuelle forbindelsen den foretrukne rute, idet den er mest bekvem, og man unngår ulempene forbundet med i.c.-administrasjon. En foretrukken doseringskur for et normalt menneske er 5-75 mg av forbindelsen tre ganger daglig. I tilfeller hvor pasienten lider av vanskelighe-ter med å svelge eller av forringet medisinabsorpsjon etter oral administrasjon, kan medisinen administreres parenteralt f.eks. sub-lingualt eller bukalt.

For veterinær-medisinsk anvendelse administreres den aktuelle forbindelsen eller et ikke-toksisk salt derav som en egnet akseptabel formulering i henhold til normal veterinær-medisinsk praksis, og veterinæren vil bestemme doseringskuren og administrasjonsruten som vil være mest egnet for et spesielt hanndyr.

En farmasøytisk sammensetning for helbredelse eller forebyggende behandling av erektil dysfunksjon i et hanndyr, inklusive et menneske, kan fremstilles ved a formulere den aktuelle forbindelsen eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, med et farmasøytisk akseptabelt fortynningsstoff eller bærestoff.

Claims (4)

1. Anvendelse av 5-[2-etoksy-5-(4-metyl-l-piperazinylsulfonyl)fenyl]-l-metyl-3-n-propyl-l,6-dihydro-7H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-7-on eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, eller en farmasøytisk sammensetning inneholdende hver enhet, for fremstilling av et medikament til helbredende eller profylaktisk behandling av erektil dysfunksjon i et hanndyr, innbefattende menneske.

2. Anvendelse ifølge krav 1, hvor medikamentet blir fremstilt til å være egnet for oral administrasjon.

3. Anvendelse ifølge krav 1 eller 2, hvor medikamentet er egnet for helbredende eller profylaktisk behandling av erektil dysfunksjon hos menneske.

4. Anvendelse ifølge ethvert av kravene 1 til 3, hvor medikamentet er egnet for behandling av erektil dysfunksjon.