WO2005021570A1

WO2005021570A1 - Ｎ−０結合性架橋構造型新規人工核酸

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Publication number: WO2005021570A1
Application number: PCT/JP2004/012173
Authority: WO
Inventors: Takeshi Imanishi; Satoshi Obika; Kazuyuki Miyashita
Original assignee: GENE DESIGN Inc
Current assignee: GENE DESIGN Inc
Priority date: 2003-08-28
Filing date: 2004-08-25
Publication date: 2005-03-10
Anticipated expiration: 2006-02-28
Also published as: US20070167387A1; ATE555118T1; JP4731324B2; EP1661905B9; DK1661905T3; ES2382807T3; EP1661905B1; EP1661905A1; US7427672B2; EP1661905A4; JPWO2005021570A1

Description

明細書

N - 0結合性架橋構造型新規人工核酸

技術分野

[0001] 本発明は、安定で優れたアンチセンスもしくはアンチジーン活性、又は特定遺伝子の検出薬若しくは増幅開始の為のプライマーなどとして優れた活性を有し、また、各種の生理'生物活性物質類、医薬品類の材料、 RNA干渉法（RNAiあるレ、は siRN A)やデコイ法用などの二重鎖オリゴヌクレオチドの機能性材料、 cDNAなど一本鎖核酸を標的とする DNAチップ、モレキュラービーコン（molecular beacon)などの機能性素材、様々なアンチセンス法（リボザィム、 DNAザィムを含む）、アンチジーン法や遺伝子相同組み換え法用途への機能性素材、蛍光や発光物質との組合せによる生体微量成分の高感度分析用材料などとして有用な、オリゴヌクレオチド類縁体及びその製造中間体であるヌクレオシド類縁体に関する。

背景技術

[0002] 1978年アンチセンスオリゴヌクレオチド（アンチセンス分子）がインフルエンザウィルスの感染を阻害したとの報告が初めてなされた。以後、ガン遺伝子発現や AIDS感染を阻害したとの報告もなされている。アンチセンスオリゴヌクレオチドが望ましくない遺伝子の発現を特異的に制御することから、医薬品として近年、最も期待されている分野のうちの一つである。

[0003] アンチセンス法とは、 DNA→mRNA→タンパク質という、いわゆるセントラノレドグマの一連の流れをアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いて制御しょうという概念に基づいている。

[0004] しかしながら、天然型 DNAや RNAオリゴヌクレオチドをアンチセンス分子としてこの方法に適用した場合、生体内の酵素により加水分解を受けたり、細胞膜透過性が高くないなどの問題が生じた。そしてこれらを解消するために核酸誘導体が数多く合成され、研究が重ねられてきた。例えば、リン原子上の酸素原子をィォゥ原子に置換したホスホロチォアート、メチル基に置換したメチルホスホナート、また最近になっては、リン原子も炭素原子で置換したものやリボースを非環式骨格にした分子も合成されている（F. Eckstein et al" Biochem. , 18, 592(1979); P.S.Miller et al. , Nucleic Acids Res. , 11， 5189 (1983); P.Herdewijn et al. , J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1， 1567 (1993); P.E. Nielsen et al. , Science, 254, 1497 (1991)) ; C.A. Stein and A.M. Krieg (ed) Applied Antisense Oligonucleotide Technology, " Willy-Liss (1998); J.J. Toulme et al. , Prog. Nucl. Acid Rev. Mol. Biol. , 67， 1 (2001)など。

[0005] し力、し、いずれの人工オリゴヌクレオチド類の場合も、一本鎖 RNAや DNAに対する二重鎖形成能、二重鎖 DNAに対する三重鎖形成能、生体内での安定性またはォリゴヌクレオチドの合成の容易さ等の点で十分に満足のいくヌクレオシドおよびオリゴヌクレオチド類縁体が得られてレ、なレ、。

発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0006] このような従来技術に鑑みて、生体内で細胞膜透過性が高ぐ酵素の加水分解を受けにくぐし力も合成が容易であり、アンチセンス法、アンチジーン法、 RNA干渉法、遺伝子相同組み換え法、デコイ法などに有用なヌクレオチド類縁体が提供されることが望まれている。

課題を解決するための手段

[0007] 本発明の発明者等は、各種の生理'生物活性物質類、医薬品類の材料、 RNA干渉法（Nature, Vol. 411 , 494-498, 2001)、デコイ用二重鎖オリゴヌクレオチドの機能性材料、 cDNAなど一本鎖核酸を標的とする DNAチップ、モレキュラービーコン（ molecular beacon)などの機能性素材、様々なアンチセンス法（リボザィム、 DNAザィムを含む）、アンチジーン法や遺伝子相同組み換え法用途への機能性素材、蛍光や発光物質との組合せによる生体微量成分の高感度分析用材料などとして有用であろう、核酸の糖部分を修飾した核酸類縁体 (人工核酸)を設計し、それを合成してその有用性を確認した。

[0008] 後の実施例及び実験例で詳細に説明するように、本発明の一種である人工核酸

2'，4'_BNA^NGユニット [一般式 (I)で、 Rと Rが水素、 Rが水素あるいはメチル基]を含

1 2 3

有する DNA若しくは RNAオリゴヌクレオチド類縁体 (Π)は下記のような優れた特性を有することが確認された。すなわち、 ( 1 )相補な RNA鎖に対する二重鎖形成能が非常に高レ、。

[0009] DNAオリゴヌクレオチド中に 2',4'-BNA^NCユニットを 1個導入する毎に（1修飾当たり )Tm値が 3— 6°C上昇する。しかも、相補な DNA鎖に対する二重鎖形成能の上昇（向上）はほとんどない。この特性は、相補な RNA鎖に対する結合親和性においては 2'，4'_BNA修飾 DNAオリゴヌクレオチド同様、飛躍的な Tm値の上昇（二重鎖形成能の格段の向上）がある一方で、相補な DNA鎖に対する二重鎖形成能においては 2'，4し BNA修飾 DNAオリゴヌクレオチドでは未修飾 DNAオリゴヌクレオチドと比べて向上が観察される（1修飾当たり Tm値力 ¾一 4°C上昇）のとは対照的に、 2',4'-BNA^NC 修飾 DNAオリゴヌクレオチドでは殆ど結合親和性の向上は認められなレ、。従って、本 2'，4'_BNA^NC修飾 DNAオリゴヌクレオチドは RNA鎖への選択的結合親和性に極めて優れている。

(2)また、 2'，4'-BNA^NC修飾 DNAオリゴヌクレオチドは二本鎖 DNA鎖に対する三重鎖形成能にも卓越している。

[0010] DNAオリゴヌクレオチド中に 2'，4'-BNA^NCユニットを 1個導入すると二本鎖 DNA鎖に対する三重鎖形成において Tm値力一 12°C上昇する。また、三重鎖形成には塩基配列を厳密に識別し、ターゲット配列にのみ結合するという配列選択性が必要とされる力 2',4'-BNA^NC修飾 DNAオリゴヌクレオチドのマッチ配列とミスマッチ配列とに対する Tm値の差は 25°C以上あり、天然型 DNAオリゴヌクレオチドを上回る優れた配列選択性を有している。

(3)ヌクレアーゼ耐性が抜群である。

[0011] 2',4'-BNA^NC修飾オリゴヌクレオチドは天然 DNAオリゴヌクレオチドよりもヌクレア一ゼ耐性が高いが、 S—オリゴ (ホスホロチォアート型オリゴヌクレオチド）よりはるかに低レ、。本発明の 2',4，-BNA^NC修飾オリゴヌクレオチドは 2，，4'_BNA修飾オリゴヌクレオチドはもとより、ヌクレアーゼ耐性の優れていることで高く評価されている S—オリゴよりもヌクレアーゼ耐性に優れており、生体内での分解が強く抵抗する特性を有している。

(4)本発明の人工核酸 2',4'-BNA^NG分子中に含まれる N_〇結合は還元試薬により緩和な条件下で選択的に開裂することができ、 NH基と OH基が遊離する。この NH基や OH基を足掛かりに別機能性分子を結合させることで、オリゴヌクレオチド類縁体調製の前後を問わず、様々な複合体 (コンジュゲート体)を得ることが容易である。別機能性分子としては、蛍光分子や化学発光分子や放射性同位原子を含む分子種などの標識用分子、様々な DNA (RNA)切断活性分子、細胞内や核内移行シグナルぺプチド類等々、が可能である。

[0012] 以上、本発明の 2'，4'_BNA^NCを様々な形態で修飾した DNAや RNAオリゴヌクレオチド類縁体は、アンチセンス法、アンチジーン法、デコイ法、遺伝子相同組み換え法、 RNA干渉法などによる遺伝子医薬品創製の高機能性素材としてのみならず、モレキュラービーコンや DNAチップなどの遺伝子診断法の基材として、また、遺伝子機能解析解明等の研究用試薬の開発素材として、極めて有用性の高いものである。図面の簡単な説明

[0013] [図 1]本発明のオリゴヌクレオチド類縁体（8)と、天然型及び非天然型のオリゴヌタレォチド類縁体をェキソヌクレアーゼで分解した時の経時変化を、 HPLC定量による未分解オリゴヌクレオチドの残存率として示すグラフである。

発明の実施の形態

[0014] 本発明のヌクレオシド類縁体は、下記一般式 (I)で表される化合物及びその塩。

[0015] [化 1]

[0016] (式中、 Baseは、置換基を有していてもよい芳香族複素環基もしくは芳香族炭化水素環基を示す。

[0017] R、 Rは、同一又は異なって、水素原子、核酸合成の水酸基の保護基、アルキル

1 2

基、アルケニル基、シクロアルキル基、ァリーノレ基、ァラルキル基、アシノレ基、スルホニル基、シリル基、リン酸基、核酸合成の保護基で保護されたリン酸基、または、 -P ( R ) R [式中、 R及び Rは、同一または異なって、水酸基、核酸合成の保護基で保護

4 5 4 5

された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数 1一 5のアルコキシ基、炭素数 1一 5のアルキルチオ基、炭素数 1一 6のシァノアルコキシ基、または、炭素数 1一 5のアルキル基で置換されたアミノ基を示す。 ]を示す。

[0018] Rは、水素原子、アルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、ァリール基、ァラ

3

ルキル基、アシノレ基、スルホニル基、及び機能性分子ユニット置換基を示す。

[0019] mは、 0 2の整数、及び nは、 1一 3の整数である。 )

本発明のオリゴヌクレオチド類縁体は、下記一般式 (II)で表されるヌクレオシド類縁体の単位構造のいずれ力 4種以上を 1または 2個以上含有する DNAオリゴヌクレオチド又は RNAオリゴヌクレオチド類縁体またはその薬理学上許容される塩である。但し、これら構造の 1種以上を 2個以上含有する場合は、当該構造間で Baseは同一または異なっていても良い。また、オリゴヌクレオチド類縁体中の各ヌクレオシド間の結合は、天然核酸と同じリン酸ジエステル結合 [一 OP (0―)〇一]以外にホスホロチォアート結

2

合 [一 OP (O) (S— )〇一]を 1又は 2個以上含有してレ、ても良レ、。

[0020] [化 2]

[0021] (式中、 Base、 R、 R、 R、 m、 nは、前に定義した通りである。 )

1 2 3

一般式 (I)及び (II)中、 Baseの芳香族複素環基とは、炭化水素環の構成原子である炭素原子を、 1個以上の窒素原子、硫黄原子もしくは酸素原子などのへテロ原子に置き換えた構造を有し、芳香族性を示す 5— 20員環のあらゆる基をいい、単環、縮合環を含む。具体的には、例えば、ピリミジンもしくはプリン核酸塩基、以下の α群力選択される置換基を 1つ以上有していてもよいピリミジンもしくはプリン核酸塩基が挙げられる。ここで、ピリミジンもしくはプリン核酸塩基には、核酸の構成成分として一般に知られる塩基 (例えば、グァニン、アデニン、シトシン、チミン、ゥラシル）、及びその他これらに類する核酸成分の塩基として作用もしくは代用し得るあらゆる化学構造が含まれる。その他、チォフェン、チアントレン、フラン、ピラン、イソべンゾフラン、クロメン、キサンテン、フエノキサチイン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、イソチアゾール、イソキサゾール、ピリダジン、インドリジン、インドール、イソインドール、イソキノリン、キノリン、ナフチリジン、キノキサリン、キナゾリン、プテリジン、カルバゾール、フェナントリジン、アタリジン、ペリミジン、フエナジン、フエナノレサジン、フエノチアジン、フラザン、フエノキサジン、ピロリジン、ピロリン、イミダゾリジン、イミダゾリン、ビラゾリジンなども含まれる。好適には、ピリミジンもしくはプリン核酸塩基、以下のひ群から選択される置換基を 1つ以上有してレ、てもよレ、ピリミジンもしくはプリン核酸塩基であり、具体的には、プリン一 9ーィル基、 2—ォキソ一ピリミジン一 1ーィル基、または下記ひ群から選択される置換基を有するプリン一 9一ィル基もしくは 2—ォキソ一ピリミジン一 1一ィル基が好適である。

α群:水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、炭素数 1一 5のアルコキシ基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、炭素数 1一 5のアルキルチオ基、アミノ基、核酸合成の保護基で保護されたァミノ基、炭素数 1一 5のアルキル基で置換されたァミノ基、炭素数 1一 5のアルキル基、および、ハロゲン原子。ここで、「置換基を有していてもよいプリン核酸塩基」として好適な基は、 6—ァミノプリン一 9ーィル (即ち、アデニニル）、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 6—アミノブリン一 9-ィル、 2, 6—ジァミノプリン一 9—ィル、 2—ァミノ一 6—クロ口プリン一 9-ィノレ、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2_アミノー 6_クロ口プリン一 9一ィル、 2—ァミノ— 6_フルォロプリン一 9一ィル、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2—ァミノ _6_ フルォロプリン _9_ィル、 2—ァミノ— 6_ブロモプリン _9_ィル、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2—ァミノ— 6_ブロモプリン _9_ィル、 2—ァミノ _6—ヒドロキシプリン一 9ーィル (即ち、グァニニル）、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2—ァミノ —6—ヒドロキシプリン—9—ィル、 6—ァミノ— 2—メトキシプリン— 9—ィル、 6—ァミノ— 2—クロ口プリン _9_ィル、 6—ァミノ— 2_フルォロプリン _9_ィル、 2, 6—ジメトキシプリン _9_ ィル、 2, 6—ジクロ口プロリン一 2—ィル又は 6—メルカプトプリン一 9ーィル基であり、さらに好適には、 6—べンゾィルァミノプリン一 9一ィル、アデニニル、 2—イソブチリルアミノー 6-ヒドロキシプリン- 9-ィル又はグァニニル基である。

[0023] また、「置換基を有してレ、てもよレ、ピリミジン核酸塩基」として好適な基は、 2—ォキソ _4—ァミノ—1 , 2—ジヒドロピリミジン— 1—ィル（即ち、シトシニル）、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2—ォキソ一 4—ァミノ—1 , 2—ジヒドロピリミジン一 1一ィル、 2—ォキソ _4—ァミノ— 5_フルオロー 1 , 2—ジヒドロピリミジン— 1_ィル、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2_ォキソ _4—ァミノ _5_フルオロー 1， 2—ジヒドロピリミジン _1—ィノレ、 4—ァミノ一 2—ォキソ一5—クロ口一 1 , 2—ジヒドロピリミジン一 1—ィル、 2—ォキソ一4—メトキシ一1 , 2—ジヒドロピリミジン _1_ィル、 2_ォキソ _4_メルカプト一 1 , 2—ジヒドロピリミジン一 1—ィル、 2—ォキソ一4—ヒドロキシ一 1， 2—ジヒドロピリミジン一 1—ィル（即ち、ゥラシ二ル）、 2—ォキソ一4—ヒドロキシ一5—メチル一1 , 2—ジヒドロピリミジン一 1—ィル（即ち、チミニル）または 4—ァミノ— 5_メチル -2—ォキソ—1, 2—ジヒドロピリミジン- 1—ィル (即ち、 5—メチルシトシニル）基であり、さらに好適には、 2_ォキソ _4_ベンゾィルアミノ— 1 , 2—ジヒドロピリミジン- 1_ィル、シトシニル、チミニル、ゥラシ二ル、 2_ォキソ _4 —ベンゾィルァミノ— 5—メチルー 1 , 2—ジヒドロピリミジン _1一ィル、又は 5—メチルシトシ二ノレ基である。

[0024] 「置換基を有していてもよいプリンもしくはピリミジン核酸塩基」の中で、さらに好適には、 6—アミノプリン一 9ーィル (即ち、アデニニル）、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 6—ァミノプリン- 9-ィル、 2, 6—ジァミノプリン- 9-ィル、 2—ァミノ— 6_クロ口プリン一 9一ィル、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2—アミノー 6—クロ口プリン _9一ィル、 2—ァミノ _6_フルォロプリン一 9一ィル、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2—ァミノ— 6_フルォロプリン _9_ィル、 2—ァミノ— 6_ブロモプリン _9_ィル、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2_アミノー 6_ブロモプリン一 9一ィル、 2—ァミノ _6—ヒドロキシプリン一 9ーィル (即ち、グァニニル）、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2—ァミノ— 6—ヒドロキシプリン— 9—ィル、 6—ァミノ— 2—メトキシプリン— 9— ィル、 6—ァミノ一 2—クロ口プリン一 9—ィノレ、 6—ァミノ一 2—フルォロプリン一 9—ィル、 2， 6 —ジメトキシプリン _9_ィル、 2， 6—ジクロ口プリン _9_ィル、 6_メルカプトプリン— 9—ィノレ、 2—ォキソ一4—ァミノ一 1, 2—ジヒドロピリミジン一 1-ィル（即ち、シトシ二ル）、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2—ォキソ一 4一アミノー 1, 2—ジヒドロピリミジン一 1 -ィル、 2-ォキソ—4—ァミノ— 5—フルォロ— 1 , 2—ジヒドロピリミジン— 1-ィル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2—ォキソ一 4_アミノー 5—フルオロー 1， 2—ジヒドロピリミジン一 1_ィル、 4—ァミノ一 2—ォキソ一5—クロ口一 1 , 2—ジヒドロピリミジン一 1—ィル、 2_ォキソ _4—メトキシ一 1 , 2—ジヒドロピリミジン一 1_ィル、 2_ォキソ _4_メルカプト一 1 , 2—ジヒドロピリミジン一1—ィル、 2—ォキソ一4—ヒドロキシ一 1， 2—ジヒドロピリミジン一 1—ィル（即ち、ゥラシ二ル）、 2—ォキソ一 4—ヒドロキシ _5_メチル _1， 2—ジヒドロピリミジン— 1—ィル（即ち、チミ二ル）、 4—ァミノ— 5—メチル—2—ォキソ—1， 2—ジヒドロピリミジン- 1-ィル (即ち、 5-メチルシトシニル）、または、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 4—ァミノ— 5_メチル _2_ォキソ— 1 , 2—ジヒドロピリミジン _1—ィルである。一般式 (I)及び (II)中、 Baseの芳香族炭化水素環基とは、炭素数 6— 20の芳香族性を示す炭化水素環から水素原子 1個を除いた 1価の置換基を意味し、単環、縮合環を含む。具体的には、例えば、フエニル、インデニル、ナフチル、ペンタレニル、ァズレニル、ヘプタレニル、ビフエ二レニル、インダセニル、フルォレニル、フエナントリノレ、アントリルなどが挙げられる力その他本発明の目的において核酸成分の塩基部分として代用可能なあらゆる構造が含まれる。また、芳香族炭化水素環が、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、アミノ基、核酸合成の保護基で保護されたァミノ基、ハロゲン原子、低級アルキル基、アルコキシ基、カルボキシル基、ァリールォキシ基、ニトロ基、トリフルォロメチル、フエニル基等の 1種以上の基によって置換されてレ、てもよく、そのような置換されていてもよい芳香族炭化水素基としては、例えば、 4—ヒドロキシフエニル、 2—ヒドロキシフエニル、 4—ァミノフエニル、 2—ァミノフエ二ノレ、 2_メチルフエニル、 2， 6—ジメチルフエニル、 2_クロ口フエニル、 4_クロ口フエ二ノレ、 2, 4—ジクロロフエニル、 2， 5—ジクロロフエニル、 2—ブロモフエニル、 4—メトキシフエ二ノレ、 4_クロ口一 2_ニトロフエ二ノレ、 4_ニトロフエ二ノレ、 2, 4—ジニトロフエ二ノレ、ビフエニルなどが挙げられる。置換されていてもよい芳香族炭化水素環基としては、好適には、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、アミノ基、核酸合成の保護基で保護されたァミノ基、低級アルコキシ基もしくはニトロ基で置換されたフヱニル基、フエニル基などが挙げられる。

一般式 (I)または (II)中、 R 、 Rの「核酸合成の水酸基の保護基」、 R 、 R、及び α

1 2 4 5 群の「核酸合成の保護基で保護された水酸基」の保護基とは、核酸合成の際に安定して水酸基を保護し得るものであれば、特に制限はないが、具体的には、酸性又は中性条件で安定であり、加水素分解、加水分解、電気分解及び光分解のような化学的方法により開裂し得る保護基のことをいい、そのような保護基としては、例えば、ホノレミノレ、ァセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、ペンタノィル、ビバロイル、バレリル、イソバレリル、オタタノィル、ノナノィノレ、デカノィル、 3—メチルノナノィル、 8 —メチルノナノィル、 3_ェチルオタタノィル、 3, 7_ジメチルォクタノィル、ゥンデカノィル、ドデカノィノレ、トリデカノィル、テトラデカノィル、ペンタデカノィル、へキサデカノィル、 1—メチルペンタデカノィル、 14ーメチルペンタデカノィル、 13， 13—ジメチルテトラデカノィル、ヘプタデカノィル、 15—メチルへキサデカノィル、ォクタデカノィル、 1_ メチルヘプタデカノィル、ノナデカノィル、アイコサノィル及びへナイコサノィルのようなアルキルカルボニル基、スクシノィル、グルタロイル、アジボイルのようなカルボキシ化アルキルカルボニル基、クロロアセチル、ジクロロアセチル、トリクロロアセチル、トリフルォロアセチルのようなハロゲノ低級アルキルカルボニル基、メトキシァセチルのような低級アルコキシ低級アルキルカルボニル基、（Ε) _2—メチルー 2—ブテノィルのような不飽和アルキルカルボニル基のような「脂肪族ァシル基」；メチル、ェチル、 η—プロピル、イソプロピル、 η—ブチル、イソブチル、 S—ブチル、 tert—ブチル、 n—ペンチル、イソペンチル、 2—メチルブチル、ネオペンチル、 1一ェチルプロピル、 n—へキシル、ィソへキシル、 4ーメチルペンチル、 3—メチルペンチル、 2—メチルペンチル、 1ーメチノレペンチル、 3， 3—ジメチルブチル、 2, 2—ジメチルブチル、 1 , 1—ジメチルブチル、 1， 2—ジメチルブチル、 1 , 3—ジメチルブチル、 2， 3—ジメチルブチル、 2_ェチルブチルのような「低級アルキル基」；ェテュル、 1_プロぺニル、 2_プロぺニル、 1_メチル _2_ プロぺニノレ、 1—メチノレ一 1_プロぺニノレ、 2—メチノレ一 1_プロぺニノレ、 2—メチノレ _2—プロぺニノレ、 2—ェチノレ—2—プロぺニル、 1—ブテュル、 2—ブテュル、 1_メチル—2—ブテニル、 1—メチノレ—1—ブテュル、 3—メチノレ—2—ブテュル、 1—ェチノレ—2—ブテュル、 3— ブテュル、 1—メチノレ _3—ブテュル、 2—メチノレ _3—ブテュル、 1—ェチノレ _3—ブテュル、 1—ペンテニル、 2—ペンテニル、 1ーメチノレー 2—ペンテニル、 2—メチノレー 2—ペンテ二ノレ、 3—ペンテニル、 1-メチノレ一 3—ペンテニル、 2-メチノレ一 3—ペンテニル、 4-ペンテニル、 1ーメチノレー 4—ペンテニル、 2—メチノレー 4—ペンテニル、 1—へキセニル、 2—へキセニル、 3_へキセニル、 4_へキセニル、 5—へキセニルのような「低級アルケニル基」；ベンゾィル、ひ—ナフトイル、 j3—ナフトイルのようなァリールカルボニル基、 2—ブロモベンゾィル、 4_クロ口ベンゾィルのようなハロゲノアリールカルボニル基、 2， 4, 6- トリメチルベンゾィル、 4_トルオイルのような低級アルキル化ァリールカルボニル基、 4 —ァニソィルのような低級アルコキシ化ァリールカルボニル基、 2_カルボキシベンゾィノレ、 3_カルボキシベンゾィル、 4_カルボキシベンゾィルのようなカルボキシ化ァリールカルボニル基、 4_ニトロべンゾィル、 2_ニトロベンゾィルのようなニトロ化ァリールカルボニル基； 2—(メトキシカルボニル）ベンゾィルのような低級アルコキシカルボ二ル化ァリールカルボニル基、 4—フヱニルベンゾィルのようなァリール化ァリールカルボニル基のような「芳香族ァシル基」；テトラヒドロピラン一 2—ィル、 3—ブロモテトラヒドロピラン一 2-ィル、 4-メトキシテトラヒドロピラン一 4-ィル、テトラヒドロチォピラン一 4—ィル、 4ーメトキシテトラヒドロチォピラン一 4-ィルの「テトラヒドロビラニル又はテトラヒドロチオビラニル基」；テトラヒドロフラン一 2—ィル、テトラヒドロチオフラン一 2—ィルのような「テトラヒドロフラニル又はテトラヒドロチオフラニル基」；トリメチルシリル、トリェチルシリノレ

ジフエニルメチルシリル、ジフエニルブチルシリル、ジフエニルイソプロビルシリル、フェニルジイソプロビルシリルのような 1一 2個のァリール基で置換されたトリ低級アルキルシリル基のような「シリル基」；メトキシメチル、 1， 1_ジメチルー 1ーメトキシメチル、ェトキシメチル、プロポキシメチル、イソプロポキシメチル、ブトキシメチル、 t一ブトキシメチルのような「低級アルコキシメチル基」； 2—メトキシェトキシメチルのような「低級アルコキシ化低級アルコキシメチル基」； 2， 2, 2_トリクロ口エトキシメチル、ビス（2—クロ口エトキシ）メチルのような「ノヽロゲノ低級アルコキシメチル基」；1—エトキシェチル、 1_ ( イソプロポキシ）ェチルのような「低級アルコキシ化工チル基」； 2, 2, 2_トリクロロェチルのような「ノヽロゲン化工チル基」；ベンジル、ひ—ナフチルメチル、 β _ナフチルメチノレ、ジフエ二ルメチル、トリフエニルメチル、 α—ナフチルジフエニルメチル、 9一アンスリルメチルのような「1一 3個のァリール基で置換されたメチル基」；4一メチルベンジル、 2, 4, 6—トリメチルベンジル、 3, 4, 5—トリメチルベンジル、 4ーメトキシベンジル、 4一メトキシフエニルジフエニルメチル、 4， 4しジメトキシトリフエニルメチル、 2_ニトロベンジル、 4_ニトロべンジノレ、 4_クロ口ベンジル、 4_ブロモベンジル、 4_シァノベンジルのような「低級アルキル、低級アルコキシ、ハロゲン、シァノ基でァリール環が置換された 1一 3個のァリール基で置換されたメチル基」；メトキシカルボニル、エトキシカノレボニル、 t—ブトキシカルボニル、イソブトキシカルボニルのような「低級アルコキシカルボニル基」；4—クロ口フエニル、 2—フロロフエニル、 4—メトキシフエニル、 4—ニトロフエニル、 2， 4—ジニトロフエニルのような「ハロゲン原子、低級アルコキシ基又はニトロ基で置換されたァリール基」； 2, 2, 2_トリクロ口エトキシカルボニル、 2_トリメチルシリノレエトキシカルボニルのような「ハロゲン又はトリ低級アルキルシリル基で置換された低級アルコキシカルボニル基」；ビエルォキシカルボニル、ァリールォキシカルボニルのような「アルケニルォキシカルボニル基」；ベンジルォキシカルボニル、 4ーメトキシベンジルォキシカルボニル、 3, 4—ジメトキシベンジルォキシカルボニル、 2—二トロべンジノレォキシカルボニル、 4_ニトロべンジルォキシカルボニルのような 1一 2個の「低級ァルコキシ又はニトロ基でァリール環が置換されていてもよいァラルキルォキシカルボニル基」を挙げることができる。

Rおよび Rの「核酸合成の水酸基の保護基」においては、好適には、「脂肪族ァシ

1 2

ル基」、「芳香族ァシル基」、「1一 3個のァリール基で置換されたメチル基」、「低級ァルキル、低級アルコキシ、ハロゲン、シァノ基でァリール環が置換された 1一 3個のァリール基で置換されたメチル基」又は「シリル基」であり、さらに好適には、ァセチル基、ベンゾィル基、ベンジル基、 p—メトキシベンゾィル基、ジメトキシトリチル基、モノメトキシトリチル基又は tert—ブチルジフエニルシリル基であり、 R、 R、 R、 R又はひ群

4 5 6 7 の「核酸合成の保護基で保護された水酸基」の保護基においては、好適には、「脂肪族ァシル基」、「芳香族ァシル基」、「1一 3個のァリール基で置換されたメチル基」、「ハロゲン原子、低級アルコキシ基又はニトロ基で置換されたァリール基」、「低級アルキル基」又は「低級アルケニル基」であり、さらに好適には、ベンゾィル基、ベンジル基、 2—クロ口フエ二ル基、 4一クロ口フエニル基又は 2—プロぺニル基である。

[0028] 一般式（I)または（II)中、 R 、 Rおよび Rの「アルキル基」とは、炭素数 1一 20の直

1 2 3

鎖または分岐鎖状のアルキル基を示し、メチル、ェチル、 n—プロピル、イソプロピル、 n—ブチル、イソブチル、 s—ブチル、 tert—ブチル、 n—ペンチル、イソペンチル、 2—メチルブチル、ネオペンチル、 1_ェチルプロピル、 n—へキシル、イソへキシル、 4—メチノレペンチノレ、 3_メチルペンチル、 2_メチルペンチル、 1—メチルペンチル、 3, 3—ジメチルブチル、 2, 2—ジメチルブチル、 1 , 1—ジメチルブチル、 1， 2—ジメチルブチル、 1 , 3—ジメチルブチル、 2， 3—ジメチルブチル、 2_ェチルブチルのような炭素数 1一 6 の直鎖または分岐鎖状のアルキル基（本明細書においては、これらを低級アルキル基とも称す。）の他、ヘプチル、ォクチル、ノニノレ、デシルなど炭素数 7— 20の直鎖または分岐鎖状のアルキル基が含まれ、好適には、上記の炭素数 1一 6の直鎖または分岐鎖状のアルキル基である。

[0029] 一般式（I)または（II)中、 R 、 Rおよび Rの「アルケニル基」とは、炭素数 2— 20の

1 2 3

直鎖または分岐鎖状のアルケニル基を示し、ェテニル、 1一プロぺニル、 2—プロぺニノレ、 1—メチノレ一 2—プロぺニノレ、 1-メチノレ一 1—プロぺニノレ、 2-メチノレ一 1—プロぺニノレ、 2—メチルー 2_プロぺニル、 2—ェチノレー 2_プロぺニル、 1—ブテュル、 2—ブテニル、 1—メチノレ一 2—ブテュル、 1_メチル一1—ブテュル、 3_メチル一2—ブテュル、 1—ェチノレ一 2—ブテニル、 3—ブテュル、 1—メチルー 3—ブテュル、 2—メチルー 3—ブテュル、 1_ ェチノレー 3—ブテニル、 1_ペンテュル、 2_ペンテニル、 1ーメチノレー 2_ペンテニル、 2_ メチノレー 2—ペンテニル、 3—ペンテニル、 1ーメチノレー 3—ペンテニル、 2—メチルー 3—ぺンテニノレ、 4—ペンテ二ノレ、 1—メチノレ一 4—ペンテ二ノレ、 2—メチノレ一 4—ペンテ二ノレ、 1— へキセニノレ、 2_へキセニノレ、 3_へキセニノレ、 4_へキセニノレ、 5_へキセニノレのような炭素数 2— 6の直鎖または分岐鎖状のアルケニル基 (本明細書にぉレ、ては、これらを低級アルケニル基とも称す。）の他、ゲラニル、フアルネシノレなどが含まれ、好適には、上記の炭素数 2 6の直鎖または分岐鎖状のアルケニル基である。

[0030] 一般式 (I)または (II)中、 R 、 Rおよび Rの「シクロアルキル基」とは、炭素数 3 1

1 2 3

0のシクロアルキル基を示し、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロへキシル、シクロへプチル、シクロォクチル、ノルボルニル、ァダマンチルなどが挙げられ、好適には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロへキシル、シクロへプチル、シクロォクチルなどの炭素数 3— 8のシクロアルキル基である。また、「シクロアルキル基」には、上記シクロアルキル基の環上の 1つ以上のメチレンが酸素原子や硫黄原子、あるいはアルキル基で置換された窒素原子に置換された複素環基も含まれ、例えば、テトラヒドロビラニル基などが挙げられる。

[0031] 一般式 (I)または (II)中、 R、 Rおよび Rの「ァリール基」とは、芳香族炭化水素基

1 2 3

力水素原子 1個を除いた炭素数 6— 14の 1価の置換基を意味し、例えば、フエ二ノレ、インデュル、ナフチル、フエナンスレニル、アントラセニルなどが挙げられる。また、ァリール環力ハロゲン原子、低級アルキル基、水酸基、アルコキシ基、ァリールォキシ基、アミノ基、ニトロ基、トリフルォロメチル、フエニル基等の 1種以上の基によって置換されていてもよぐそのような置換されていてもよいァリール基としては、例えば、 2- メチルフエニル、 2, 6_ジメチルフヱニル、 2—クロロフヱニル、 4—クロロフヱ二ノレ、 2, 4 —ジクロ口フエ二ノレ、 2, 5—ジクロロフエ二ノレ、 2—ブロモフエ二ノレ、 4ーメトキシフエ二ノレ、 4一クロロー 2—二トロフエ二ノレ、 4一二トロフエニル、 2, 4—ジニトロフエニル、ビフエ二ノレなどが挙げられる。好適には、ハロゲン原子、低級アルコキシ基ニトロ基で置換されたフエニル基、フエニル基などが挙げられる。

[0032] 一般式（I)または（II)中、 R ァラルキル基」とは、ァリール基で置換

1、 Rおよび Rの「

2 3

された炭素数 1一 6のアルキル基を意味し、ベンジル、 α—ナフチルメチル、 β—ナフチルメチル、インデニルメチル、フエナンスレニルメチル、アントラセニルメチル、ジフェニルメチル、トリフエニルメチル、 α—ナフチルジフエニルメチル、 9一アンスリルメチルのような「1一 3個のァリール基で置換されたメチル基」や、 4一メチルベンジル、 2, 4, 6_トリメチルベンジル、 3, 4, 5_トリメチルベンジル、 4—メトキシベンジル、 4ーメトキシフエニルジフエニルメチル、 4， 4しジメトキシトリフエニルメチル、 2_ニトロべンジノレ、 4_ニトロべンジノレ、 4_クロ口べンジノレ、 4—ブロモべンジノレ、 4_シァノベンジノレのような「低級アルキル、低級アルコキシ、ハロゲン、シァノ基でァリール環が置換された 1一 3個のァリール基で置換されたメチル基」の他、 1_フヱネチル、 2_フヱネチル、 1_ナフチノレエチノレ、 2_ナフチノレエチノレ、 1_フエ二ノレプロピノレ、 2_フエ二ノレプロピノレ、 3—フエニルプロピル、 1_ナフチルプロピル、 2_ナフチルプロピル、 3—ナフチルプ口ピル、 1一フエニルブチル、 2—フエニルブチル、 3—フエニルブチル、 4一フエニルブチル、 1一ナフチルブチル、 2—ナフチルブチル、 3—ナフチルブチル、 4一ナフチルブチル、 1_フエ二ルペンチル、 2_フエ二ルペンチル、 3_フエ二ルペンチル、 4_フエ二ノレペンチノレ、 5—フエ二ルペンチル、 1_ナフチルペンチル、 2_ナフチルペンチル、 3 —ナフチルペンチル、 4_ナフチルペンチル、 5_ナフチルペンチル、 1—フエ二ルへキシル、 2—フエ二ルへキシル、 3—フエ二ルへキシル、 4—フエ二ルへキシル、 5_フエ二ノレへキシル、 6_フエ二ルへキシル、 1_ナフチルペンチル、 2_ナフチルペンチル、 3 —ナフチルペンチル、 4_ナフチルペンチル、 5_ナフチルペンチル、 6_ナフチルペンチル、などの「ァリール基で置換された炭素数 3— 6のアルキル基」などが含まれる。好適には、「1一 3個のァリール基で置換されたメチル基」、「低級アルキル、低級アルコキシ、ハロゲン、シァノ基でァリール環が置換された 1一 3個のァリール基で置換されたメチル基」であり、さらに好適には、 4—メトキシフエニルジフエニルメチル、 4, 4'- ジメトキシトリフエニルメチルである。

一般式（I)または（II)中、 R、 Rおよび Rの「ァシル基」としては、ホルミル、ァセチ

1 2 3

ノレ、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、ペンタノィル、ピバロィル、ノくレリル、イソバレリル、オタタノィル、ノナノィノレ、デカノィル、 3—メチルノナノィル、 8-メチルノナノィノレ、 3—ェチルオタタノィル、 3, 7—ジメチルォクタノィル、ゥンデカノィル、ドデカノィル、トリデカノィル、テトラデカノィル、ペンタデカノィル、へキサデカノィル、 1ーメチルぺンタデカノィル、 14ーメチルペンタデカノィル、 13, 13—ジメチルテトラデカノィル、へプタデカノィル、 15—メチルへキサデカノィル、ォクタデカノィル、 1一メチルヘプタデカノィル、ノナデカノィル、アイコサノィル及びへナイコサノィルのようなアルキルカルボニル基、スクシノィル、グルタロイル、アジボイルのようなカルボキシ化アルキルカルボニル基、クロロアセチノレ、ジクロロアセチノレ、トリクロロアセチノレ、トリフルォロアセチルのようなハロゲノ低級アルキルカルボニル基、メトキシァセチルのような低級アルコキシ低級アルキルカルボニル基、フヱノキシァセチル基のようなァリールォキシ低級アルキルカルボニル基、（E) _2—メチノレー 2—ブテノィルのような不飽和アルキルカルボニル基のような「脂肪族ァシル基」、およびべンゾィル、ひ—ナフトイル、 j3 _ナフトイノレのようなァリールカルボニル基、 2_ブロモベンゾィル、 4_クロ口ベンゾィルのようなハロゲノアリールカルボニル基、 2, 4, 6_トリメチルベンゾィル、 4_トルオイルのような低級アルキル化ァリールカルボニル基、 4ーァニソィルのような低級アルコキシ化ァリールカルボニル基、 2—カルボキシベンゾィル、 3—カルボキシベンゾィル、 4一力ノレボキシベンゾィルのようなカルボキシ化ァリールカルボニル基、 4_ニトロべンゾィル、 2_ ニトロベンゾィルのようなニトロ化ァリールカルボニル基； 2—(メトキシカルボ二ノレ）ベンゾィルのような低級アルコキシカルボ二ル化ァリールカルボニル基、 4—フヱニルベンゾィルのようなァリール化ァリールカルボニル基のような「芳香族ァシル基」が挙げられ、好適には、ホルミル、ァセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、ペンタノィノレ、ピバロィル、ベンゾィル、フエノキシァセチル基である。

[0034] 一般式（I)または（II)中、 R、 Rおよび Rの「スルホニル基」としては、メタンスルホ

1 2 3

ニル、エタンスルホニルのように炭素数が 1一 6の直鎖あるいは分岐アルキル基が置換したスルホニル基のような「脂肪族スルホニル基」、ベンゼンスルホニル、 p-トルェンスルホニルのような各種ァリール基が置換したスルホニル基のような「芳香族スルホニル基」が挙げられ、好適にはメタンスルホニル、 p-トルエンスルホニル基である。

[0035] 一般式（I)または（II)中、 R

1、 Rおよび Rの「シリル基」としては、トリメチルシリル、ト 2 3

リエチルシリル、イソプロピルジメチルシリル、 tーブチルジメチルシリル、メチルジイソプロビルシリル、メチルジー tーブチルシリル、トリイソプロピルシリノレのような「トリ低級ァノレキルシリル基」、ジフヱニルメチルシリル、ブチルジフヱニルブチルシリル、ジフエ二ノレイソプロビルシリル、フエニルジイソプロビルシリルのような「1一 2個のァリール基で置換されたトリ低級アルキルシリル基」などが挙げられ、好適には、トリメチルシリル、トリエチルシリル、トリイソプロビルシリル、 tーブチルジメチルシリル、 tーブチルジフエ二ノレシリノレであり、さらに好適にはトリメチルシリルである。

[0036] 一般式 (I)または (II)中、 Rおよび Rの「核酸合成の保護基で保護されたリン酸基」

1 2

の「保護基」とは、核酸合成の際に安定してリン酸基を保護し得るものであれば、特に限定はないが、具体的には、酸性又は中性条件で安定であり、加水素分解、加水分解、電気分解及び光分解のような化学的方法により開裂し得る保護基のことをいい、そのような保護基としては、例えば、メチノレ、ェチル、 n—プロピル、イソプロピル、 n— ブチル、イソブチル、 s—ブチル、 tert—ブチル、 n—ペンチル、イソペンチル、 2—メチルブチル、ネオペンチル、 1_ェチルプロピル、 n—へキシル、イソへキシル、 4一メチルペンチル、 3—メチルペンチル、 2—メチルペンチル、 1ーメチルペンチル、 3, 3—ジメチルブチル、 2, 2—ジメチルブチル、 1 , 1ージメチルブチル、 1 , 2—ジメチルブチル、 1, 3—ジメチルブチル、 2, 3—ジメチルブチル、 2_ェチルブチルのような「低級アルキル基」； 2—シァノエチル、 2—シァノー 1， 1—ジメチルェチルのような「シァノ化低級アルキル基」； 2_メチルジフヱニルシリルェチル、 2—トリメチルシリノレエチル、 2_トリフエニルシリルェチルのような「シリル基で置換されたェチル基」； 2， 2, 2_トリクロロェチル、 2 , 2, 2—トリブ口モェチノレ、 2， 2, 2_トリフノレ才ロェチノレ、 2， 2, 2_トリクロ口一1 , 1—ジメチルェチルのような「ノヽロゲン化低級アルキル基」；ェテュル、 1_プロぺニル、 2—プロぺニノレ、 1—メチノレ _2_プロぺニノレ、 1—メチノレ _1_プロぺニノレ、 2—メチノレ一 2—プ rぺニル、 2—ェチノレ— 2_プロぺニル、 1—ブテュル、 2—ブテュル、 1—メチノレ _2—ブテュル、 1—メチノレ _1—ブテュル、 3—メチノレ _2—ブテュル、 1—ェチノレ _2—ブテュル、 3—ブテニル、 1ーメチノレー 3—ブテニル、 2—メチノレー 3—ブテニル、 1—ェチルー 3—ブテュル、 1_ ペンテニル、 2—ペンテニル、 1—メチルー 2—ペンテニル、 2—メチルー 2—ペンテニル、 3 —ペンテニル、 1—メチルー 3—ペンテニル、 2—メチルー 3—ペンテニル、 4—ペンテニル、 1—メチノレー 4—ペンテニル、 2—メチルー 4—ペンテニル、 1—へキセニル、 2—へキセニル、 3—へキセニル、 4一へキセニル、 5—へキセニルのような「低級アルケニル基」；シクロプロピノレ、シクロプチ/レ、シクロペンチ/レ、シクロへキシノレ、シクロへプチノレ、ノノレボルニル、ァダマンチルのような「シクロアルキル基」； 2—シァノブテニルのような「シァノ化低級アルケニル基」；ベンジル、ひ一ナフチルメチル、一ナフチルメチル、インデニルメチル、フエナンスレニルメチル、アントラセニルメチル、ジフエニルメチル、トリフエニルメチル、 1—フエネチル、 2—フエネチル、 1_ナフチルェチル、 2_ナフチルェチノレ、 1—フエ二ノレプロピノレ、 2—フエ二ノレプロピノレ、 3—フエ二ノレプロピノレ、 1_ナフチノレプロピノレ、 2_ナフチルプロピル、 3_ナフチルプロピル、 1_フエニルブチル、 2_フエニルブチル、 3—フエニルブチル、 4—フエニルブチル、 1_ナフチルブチル、 2—ナフチルブチル、 3_ナフチルブチル、 4_ナフチルブチル、 1—フエ二ルペンチル、 2—フエ二ノレペンチノレ、 3—フエ二ルペンチル、 4—フエ二ルペンチル、 5—フエ二ルペンチル、 1_ ナフチルペンチル、 2_ナフチルペンチル、 3_ナフチルペンチル、 4_ナフチルペンチル、 5_ナフチルペンチル、 1_フエ二ルへキシル、 2_フエ二ルへキシル、 3_フエ二ノレへィキシノレ、 4一フエニノレへキシノレ、 5—フエ二ノレへキシノレ、 6—フエ二ノレへキシノレ、 1 一ナフチルペンチル、 2—ナフチルペンチル、 3—ナフチルペンチル、 4一ナフチルペンチル、 5_ナフチルペンチル、 6_ナフチルペンチルのような「ァラルキル基」；4—クロ口ベンジル、 2_ (4—ニトロフエ二ノレ）ェチル、 o_ニトロベンジル、 4_ニトロべンジノレ、 2， 4—ジニトロベンジル、 4_クロ口— 2_ニトロべンジルのような「ニトロ基、ハロゲン原子でァリール環が置換されたァラルキル基」；フエニル、インデュル、ナフチル、フエナンスレニノレ、アントラセニルのような「ァリール基」；2—メチルフエニル、 2， 6—ジメチルフエ二ノレ、 2—クロ口フエ二ノレ、 4—クロ口フエ二ノレ、 2, 4—ジクロロフエ二ノレ、 2， 5—ジクロロフェニノレ、 2_ブロモフエニル、 4_ニトロフエ二ノレ、 4_クロ口一 2_ニトロフエニルのような「低級アルキル基、ハロゲン原子、ニトロ基で置換されたァリール基」を挙げることができ、好適には「低級アルキル基」、「シァノ基で置換された低級アルキル基」、「ァラルキル基」、「ニトロ基、ハロゲン原子でァリール環が置換されたァラルキル基」または「低級アルキル基、ハロゲン原子、ニトロ基で置換されたァリール基」であり、さらに好適には、 2—シァノエチル基、 2, 2, 2_トリクロ口ェチル基、ベンジル基、 2_クロ口フエニル基または 4一クロ口フエニル基である。

[0037] 一般式 (I)または (II)中、 Rの「機能性分子ユニット置換基」とは、標識分子 (例えば、蛍光分子、化学発光分子、放射性同位原子を含む分子種等）、 DNAや RNA切断活性分子、細胞内や核内移行シグナルペプチド等を含む。

[0038] 一般式 (I)または (II)中、 R及び R並びに α群の「核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基」の保護基としては、核酸合成の際に安定してメルカプト基を保護し得るものであれば、特に限定はないが、具体的には、酸性又は中性条件で安定であり、加水素分解、加水分解、電気分解及び光分解のような化学的方法により開裂し得る保護基をいい、例えば、上記水酸基の保護基として挙げたものの他、メチルチオ、ェチルチオ、 tert—ブチルチオのようなアルキルチオ基、ベンジルチオのようなァリールチオ基等の「ジスルフイドを形成する基」を挙げることができ、好適には、「脂肪族ァシル基」又は「芳香族ァシル基」であり、さらに好適には、ベンゾィル基、ベンジル基である。 [0039] 一般式 (I)または（II)中、 R、 R、及び α群の「炭素数 1一 5のアルコキシ基」として

4 5

は、例えば、メトキシ、エトキシ、 η—プロポキシ、イソプロポキシ、 η—ブトキシ、イソブトキシ、 s—ブトキシ、 tert—ブトキシ、 n—ペントキシを挙げることができ、好適には、メトキシ又はエトキシ基である。

[0040] 一般式（I)または（II)中、 R、 R、及びひ群の「炭素数 1一 5のアルキルチオ基」とし

4 5

ては、例えば、メチルチオ、ェチルチオ、プロピルチオ、イソプロピルチオ、ブチルチォ、イソブチルチオ、 s—ブチルチオ、 tert_ブチルチオ、 n—ペンチルチオを挙げることができ、好適には、メチルチオ又はェチルチオ基である。

[0041] 一般式（I)または（II)中、 R 、の「炭素数 1

4、 R

5 一 6のシァノアルコキシ基」とは、上記

「炭素数 1一 5のアルコキシ基」のシァノ基が置換した基をレ、い、そのような基としては、例えば、シァノメトキシ、 2—シァノエトキシ、 3—シァノプロポキシ、 4—シァノブトキシ、 3_シァノ _2_メチルプロポキシ、又は 1—シァノメチノレー 1， 1—ジメチルメトキシを挙げること力 Sでき、好適には、 2—シァノエトキシ基である。

[0042] 一般式 (I)または（II)中、 R、 R、及び α群の「炭素数 1

4 5 一 5のアルキル基で置換されたァミノ基」としては、例えば、メチノレアミノ、ェチルァミノ、プロピルアミ入イソプロピノレアミノ、ブチルァミノ、イソブチルァミノ、 s—ブチルァミノ、 tert—ブチルァミノ、ジメチノレアミノ、ジェチルァミノ、ジプロピルァミノ、ジイソプロピルアミノ、ジブチルァミノ、ジイソブチルアミ入ジ（s-ブチル）アミ入ジ (tert—ブチル）アミノを挙げることができ、好適には、メチノレアミノ、ェチノレアミノ、ジメチルァミノ、ジェチルァミノまたはジイソプロピルァミノ基である。

[0043] α群の「炭素数 1一 5のアルキル基」としては、例えば、メチル、ェチル、プロピル、ィソプロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、 s—ブチル、 tert—ブチル、 n—ペンチルなどを挙げることができ、好適には、メチル又はェチル基である。

[0044] a群の「ノヽロゲン原子」としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はョゥ素原子を挙げることができ、好適には、フッ素原子又は塩素原子である。

[0045] 「ホスホロアミダイト基」とは、式一 P (〇R ) (NR )で表される基（式中、 R は炭素数

la lb la

1一のアルキル基又は炭素数 1一 7のシァノアルキル基を示し、 R は炭素数 1

lb 一 6のアルキル基を示す。）を意味し、好適には、式— P (〇C H CN) (N (i-Pr) )で表される基又は式- P (OCH ) (N (i-Pr) )で表される基である。

a群の「核酸合成の保護基で保護されたァミノ基」の保護基としては、核酸合成の際に安定してアミノ基を保護し得るものであれば、特に限定はないが、具体的には、酸性又は中性条件で安定であり、加水素分解、加水分解、電気分解及び光分解のような化学的方法により開裂し得る保護基をレ、い、例えば、ホルミル、ァセチル、プロピオニル、ブチリノレ、イソブチリル、ペンタノィル、ピバロィル、バレリノレ、イソバレリル、オタタノィル、ノナノィノレ、デカノィル、 3—メチノレノナノイノレ、 8—メチルノナノィル、 3_ ェチルオタタノィル、 3 , 7_ジメチルォクタノィル、ゥンデカノィル、ドデカノィノレ、トリデカノィノレ、テトラデカノィル、ペンタデカノィル、へキサデカノィル、 1ーメチルペンタデカノィノレ、 14ーメチルペンタデカノィル、 13， 13—ジメチルテトラデカノィル、ヘプタデカノィノレ、 15—メチルへキサデカノィル、ォクタデカノィル、 1一メチルヘプタデカノィル、ノナデカノィル、ノナデカノィル、アイコサノィル及びへナイコサノィルのようなアルキルカルボニル基、スクシノィル、グルタロイル、アジボイルのようなカルボキシ化アルキルカルボニル基、クロロアセチル、ジクロロアセチル、トリクロロアセチル、トリフルォロァセチルのようなハロゲノ低級アルキルカルボニル基、メトキシァセチルのような低級アルコキシ低級アルキルカルボニル基、（E) _2—メチルー 2—ブテノィルのような不飽和アルキルカルボニル基等の「脂肪族ァシル基」；ベンゾィル、 α ナフトイル、 β—ナフトイルのようなァリールカルボニル基、 2 ブロモベンゾィル、 4 クロ口ベンゾィルのようなハロゲノアリールカルボニル基、 2, 4, 6_トリメチルベンゾィル、 4_トルオイルのような低級アルキル化ァリールカルボニル基、 4ーァニソィルのような低級アルコキシ化ァリールカルボニル基、 2 カルボキシベンゾィル、 3 カルボキシベンゾィル、 4 カルボキシベンゾィルのようなカルボキシ化ァリールカルボニル基、 4_ニトロべンゾィノレ、 2_ニトロベンゾィルのようなニトロ化ァリールカルボニル基； 2—(メトキシカルボ二ノレ）ベンゾィルのような低級アルコキシカルボ二ル化ァリールカルボニル基、 4—フエニルベンゾィルのようなァリール化ァリールカルボニル基等の「芳香族ァシル基」；メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、 t—ブトキシカルボニル、イソブトキシカルボ二ルのような「低級アルコキシカルボニル基」； 2， 2, 2_トリクロ口エトキシカルボニル、 2 —トリメチルシリルエトキシカルボニルのような「ノヽロゲン又はトリ低級アルキルシリル基で置換された低級アルコキシカルボニル基」；ビエルォキシカルボニル、ァリールォキシカルボニルのような「アルケニルォキシカルボニル基」；ベンジルォキシカルボニル

、 4ーメトキシベンジルォキシカルボニル、 2—二トロべンジルォキシカルボニル、 4一二トロべンジルォキシカルボニルのような 1一 2個の「低級アルコキシ又はニトロ基でァリール環が置換されてレ、てもよレ、ァラルキルォキシカルボニル基」を挙げることができ、好適には、「脂肪族ァシル基」又は「芳香族ァシル基」であり、さらに好適には、ベンゾィル基である。

[0047] 「ヌクレオシド類縁体」とは、プリン又はピリミジン塩基と糖が結合した「ヌクレオシド」のうち非天然型のもの、並びに、プリン及びピリミジン以外の芳香族複素環及び芳香族炭化水素環でプリン又はピリミジン塩基との代用が可能なものと糖が結合したものいう。

[0048] 「オリゴヌクレオチド類縁体」とは、同一又は異なる「ヌクレオシド」又は「ヌクレオシド類縁体」がリン酸ジエステル結合で 2— 50個結合した「オリゴヌクレオチド」の非天然型誘導体をいい、そのような類縁体としては、好適には、糖部分が修飾された糖誘導体;リン酸ジエステル部分がチォエート化されたチォアート誘導体;末端のリン酸部分がエステルイ匕されたエステル体；プリン塩基上のアミノ基がアミド化されたアミド体を挙げること力 Sでき、さらに好適には、糖部分が修飾された糖誘導体を挙げることができる

[0049] 「その塩」とは、本発明の化合物（1)は、塩にすることができるので、その塩をいい、そのような塩としては、好適にはナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩のようなアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、ニッケル塩、コバルト塩等の金属塩；アンモニゥム塩のような無機塩、 tーォクチルァミン塩、ジベンジルァミン塩、モノレホリン塩、ダルコサミン塩、フヱニルダリシンアルキルエステル塩、エチレンジァミン塩、 N—メチルダルカミン塩、グァニジン塩、ジェチルァミン塩、トリエチノレアミン塩、ジシクロへキシルァミン塩、 N， N' —ジベンジルエチレンジァミン塩、クロ口プロ力イン塩、プロ力イン塩、ジエタノールアミン塩、 N—ベンジルーフエネチルァミン塩、ピぺラジン塩、テトラメチルアンモニゥム塩、トリス（ヒドロキシメチル）ァミノメタン塩のような有機塩等のアミン塩;フッ化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩のようなハロゲン原子化水素酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、リン酸塩等の無機酸塩;メタンスルホン酸塩、トリフルォロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩のような低級アルカンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、 p_トルエンスルホン酸塩のようなァリールスルホン酸塩、酢酸塩、リンゴ酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、クェン酸塩、酒石酸塩、シユウ酸塩、マレイン酸塩等の有機酸塩；及び、グリシン塩、リジン塩、アルギニン塩、オル二チン塩、グルタミン酸塩、ァスパラギン酸塩のようなアミノ酸塩を挙げることができる。

[0050] 「その薬理学上許容される塩」とは、本発明のオリゴヌクレオチド類縁体は塩にすることができるので、その塩をいい、そのような塩としては、好適にはナトリウム塩、力リウム塩、リチウム塩のようなアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩のようなァノレカリ土類金属塩、アルミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、ニッケル塩、コバルト塩等の金属塩；アンモニゥム塩のような無機塩、 tーォクチルァミン塩、ジベンジルァミン塩、モノレホリン塩、ダルコサミン塩、フエニルダリシンアルキルエステル塩、エチレンジアミン塩、 N—メチルダルカミン塩、グァニジン塩、ジェチルァミン塩、トリェチルアミン塩、ジシクロへキシルァミン塩、 N, Nしジベンジルエチレンジァミン塩、クロ口プロ力イン塩、プロ力イン塩、ジエタノールアミン塩、 N—べンジルーフエネチルァミン塩、ピぺラジン塩、テトラメチルアンモニゥム塩、トリス（ヒドロキシメチル）ァミノメタン塩のような有機塩等のアミン塩;フッ化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩のようなハロゲン原子化水素酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、リン酸塩等の無機酸塩;メタンスルホン酸塩、トリフルォロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩のような低級アルカンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、 p—トルエンスルホン酸塩のようなァリ一ルスルホン酸塩、酢酸塩、リンゴ酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、クェン酸塩、酒石酸塩、シユウ酸塩、マレイン酸塩等の有機酸塩；及び、グリシン塩、リジン塩、アルギニン塩、オル二チン塩、グルタミン酸塩、ァスパラギン酸塩のようなアミノ酸塩を挙げること力 Sできる。

[0051] 本発明の化合物（I)及びその塩のうち、好適な化合物としては、

(DRが、水素原子、脂肪族アシノレ基、芳香族アシノレ基、脂肪族あるいは芳香族ス

1

ノレホニル基、 1一 3個のァリール基で置換されたメチル基、低級アルキル、低級アルコキシ、ハロゲンもしくはシァノ基でァリール環が置換された 1一 3個のァリール基で置換されたメチル基、またはシリル基である化合物及びその塩、

(2) R 、水素原子、ァセチル基、ベンゾィル基、メタンスルホニル基、 p-トルエンス

1

ルホニル基、ベンジル基、 p—メトキシベンジル基、トリチノレ基、ジメトキシトリチノレ基、モノメトキシトリチル基又は tert—ブチルジフヱニルシリル基である化合物及びその塩

(3) Rが、水素原子、脂肪族アシノレ基、芳香族アシノレ基、脂肪族あるいは芳香族ス

2

ルホニル基、 1一 3個のァリール基で置換されたメチル基、低級アルキル、低級アルコキシ、ハロゲンもしくはシァノ基でァリール環が置換された 1一 3個のァリール基で置換されたメチル基、シリル基、ホスホロアミダイト基、ホスホニル基、リン酸基または核酸合成の保護基で保護されたリン酸基である化合物及びその塩、

(4) R力水素原子、ァセチル基、ベンゾィル基、メタンスルホニル基、 P-トルエンス

2

ルホニル基、ベンジル基、 p—メトキシベンジル基、 tert—ブチルジフヱニルシリル基、 -P (OC H CN) (N (i-Pr) )、 _P (OCH ) (N (i— Pr) )、ホスホニル基、又は、 2—ク

2 4 2 3 2

ロロフヱニルもしくは 4—クロロフヱニルリン酸基である化合物およびその塩、

(5) R 、水素原子、炭素数 1一 5のアルキル基、炭素数 1一 5のアルケニル基、炭

3

素数 6— 14のァリール基、 1一 3個のァリール基で置換されたメチル基、メタンスルホ二ル基ゃ P-トルエンスルホニル基などの低級脂肪族あるいは芳香族スルホ二ル基又はァセチル基などの炭素数 1一 5の脂肪族アシノレ基ゃフエノキシァセチル基およびベンゾィル基などの芳香族アシノレ基である化合物およびその塩、また、 Rの機能性

3 分子ユニット置換基が、蛍光あるいは化学発光標識分子、核酸切断活性官能基、又は細胞内若しくは核内移行シグナルペプチドである請求項 1一 6のいずれ力 4項に記載の化合物及びその塩、

(6) Baseが、 6—ァミノプリン— 9—ィル（即ち、アデニニル）、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 6—ァミノプリン _9_ィル、 2, 6—ジァミノプリン _9_ィル、 2—ァミノ— 6_クロ口プリン一 9一ィル、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2_アミノー 6—クロロプリン _9_ィル、 2—ァミノ— 6_フルォロプリン _9_ィル、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2—ァミノ— 6_フルォロプリン _9_ィル、 2—ァミノ— 6_ブロモプリン— 9一ィル、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2—アミノー 6—ブロモプリン一 9ーィル、 2—アミノー 6—ヒドロキシプリン一 9ーィル (即ち、グァニニル）、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2_アミノー 6—ヒドロキシプリン一 9一ィル、 6_アミノー 2—メトキシプリン一 9—ィル、 6—ァミノ一 2—クロ口プリン一 9—ィノレ、 6—ァミノ一 2—フルォロプリン一 9— ィル、 2, 6—ジメトキシプリン _9_ィル、 2, 6—ジクロ口プリン _9_ィル、 6_メルカプトプリン _9_ィル、 2_ォキソ— 4—ァミノ— 1， 2—ジヒドロピリミジン _1—ィル（即ち、シトシ二ル）、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2—ォキソ一 4一アミノー 1， 2—ジヒドロピリミジン一 1—ィル、 2—ォキソ一4—ァミノ一 5—フルォロ一 1， 2—ジヒドロピリミジン一1—ィル、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2—ォキソ一 4一アミノー 5_フルオロー 1， 2—ジヒドロピリミジン _1_ィル、 4—ァミノ一 2—ォキソ一5—クロ口一 1 , 2—ジヒドロピリミジン _1—ィノレ、 2_才キソ _4—メトキシ一 1 , 2—ジヒドロピリミジン _1—ィノレ、 2_才キソ _4—メノレカプト一 1 , 2—ジヒドロピリミジン一1—ィル、 2—ォキソ一4—ヒドロキシ _1， 2—ジヒドロピリミジン一 1-ィル（即ち、ゥラシェル）、 2—ォキソ一4—ヒドロキシ一5-メチル一1 , 2—ジヒドロピリミジン一 1—ィル（即ち、チミ二ル）、 4—ァミノ— 5—メチルー 2—ォキソ—1 , 2—ジヒド口ピリミジン一 1ーィル (即ち、 5—メチルシトシニル)基、または、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 4ーァミノ _5—メチルー 2—ォキソ一 1 , 2—ジヒドロピリミジン一 1ーィルである化合物及びその塩、

(7) Baseが、ベンゾィルァミノプリン一 9_ィル、アデニル、 2—イソブチリルアミノ _6—ヒドロキシプリン一 9_ィル、グァニニル、 2—ォキソ _4_ベンゾィルァミノ—1 , 2—ジヒドロピリミジン- 1-ィル、シトシニル、 2_ォキソ _5_メチル -4—ベンゾィルァミノ—1 , 2_ジヒド口ピリミジン一 1一ィル、 5—メチルシトシニル、ゥラシ二ル又はチミニル基である化合物及びその塩を挙げることができる。

また、上記（1)一 (2)、 (3)一 (4)または (6)一 (7)は、番号が大きくなるに従って、より好適な化合物を示し、一般式（1)において、 Rを（1)一（2)から任意に選択し、 R

1 2 を（3) （4)から任意に選択し、 Rを（5)から任意に選択し、 Baseを（6)— (7)力任

3

意に選択し、また、これらを任意に組み合わせて得られた化合物及びその塩も好適であり、特に好適な組合せは、（2)-(3)-(5)_(6)、（2)_(3)-(5)_(7)、（2)_(4)_(5)-(6)及び (2)-(4)-(5)-(7)である。 [0053] 一般式 (I)で表される化合物及びその塩で、特に好適には、下記の式で表される化合物及びその塩である。

[0054] [化 3]

DNAfRNA)

[0055] 上記群の構造式中、 Baseは前述と同じ意味を表す。

[0056] 本発明の一般式 (II)で表されるヌクレオシド類縁体の単位構造を 1または 2個以上含有するオリゴヌクレオチド類縁体及びその薬理学上許容される塩のうち、好適なものとしては、

(8) R 、水素原子、炭素数 1一 5のアルキル基、ベンジル基などのァラルキル基、

3

ァセチル基ゃベンゾィル基などの低級脂肪族あるいは芳香族アシノレ基、メタンスノレホニル基や p -トルエンスルホニル基などの脂肪族あるいは芳香族スルホニル基であるオリゴヌクレオチド類縁体及びその薬理学上許容される塩、

(9) Baseが、 6—ァミノプリン— 9—ィル（即ち、アデニニル）、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 6—ァミノプリン _9_ィル、 2, 6—ジァミノプリン _9_ィル、 2—ァミノ— 6_クロ口プリン一 9一ィル、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2_アミノー 6—クロロプリン _9_ィル、 2—ァミノ— 6_フルォロプリン _9_ィル、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2—ァミノ— 6_フルォロプリン _9_ィル、 2—ァミノ— 6_ブロモプリン— 9一ィル、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2—アミノー 6—ブロモプリン一 9ーィノレ、 2—アミノー 6—ヒドロキシプリン一 9ーィル (即ち、グァニニル）、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2_アミノー 6—ヒドロキシプリン一 9一ィル、 6_アミノー 2—メトキシプリン _9—ィル、 6—ァミノ一 2—クロ口プリン _9ーィノレ、 6—ァミノ一 2—フルォロプリン一 9— ィル、 2, 6—ジメトキシプリン一 9一ィル、 2, 6—ジクロ口プリン _9一ィル、 6—メルカプトプリン- 9-ィル、 2-ォキソ—4—ァミノ— 1 , 2—ジヒドロピリミジン- 1-ィル（即ち、シトシ二ル）、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2—ォキソ一 4一アミノー 1 , 2—ジヒドロピリミジン一 1_ィル、 2—ォキソ一4—ァミノ一 5—フルォロ一 1 , 2—ジヒドロピリミジン _1—ィノレ、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2—ォキソ一 4一アミノー 5_フルオロー 1， 2—ジヒドロピリミジン _1_ィル、 4—ァミノ一 2—ォキソ一5—クロ口一 1 , 2—ジヒドロピリミジン _1—ィノレ、 2_才キソ _4—メトキシ一 1 , 2—ジヒドロピリミジン _1—ィノレ、 2_才キソ _4—メノレカプト一 1 , 2—ジヒドロピリミジン一1—ィル、 2—ォキソ一4—ヒドロキシ _1， 2—ジヒドロピリミジン一 1—ィル（即ち、ゥラシ二ル）、 2—ォキソ一4—ヒドロキシ一 5_メチル一1 , 2—ジヒドロピリミジン—1—ィル（即ち、チミ二ル）、 4—ァミノ— 5_メチル _2_ォキソ— 1 , 2—ジヒド口ピリミジン一 1ーィル（即ち、 5—メチルシトシニル）基、または、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 4ーァミノ _5—メチルー 2—ォキソ一 1 , 2—ジヒドロピリミジン一 1ーィルであるオリゴヌクレオチド類縁体及びその薬理学上許容される塩、

(10) Baseが、ベンゾィルァミノプリン一 9一ィル、アデニル、 2—イソブチリルアミノー 6— ヒドロキシプリン一 9_ィル、グァニニル、 2_ォキソ _4_ベンゾィルァミノ一1 , 2—ジヒドロピリミジン一 1一ィル、シトシニル、 2—ォキソ _5—メチルー 4_ベンゾィルァミノ—1 , 2—ジヒドロピリミジン一 1-ィル、 5—メチルシトシニル、ゥラシ二ル又はチミニル基であるオリゴヌクレオチド類縁体及びその薬理学上許容される塩を挙げることができる。

[0057] また、 (9)一 (10)は、番号が大きくなるに従って、より好適なオリゴヌクレオチド類縁体を示し、 Rを（8)から任意に選択し、 Baseを（9)一（10)から任意に選択し、これら

3

を任意に組合せて得られたオリゴヌクレオチド類縁体及びその薬理学上許容される塩も好適である。一般式 (Π)における特に好適な組合せは、（8)-(9)、（8)-(10)である。

[0058] 本発明のヌクレオシド類縁体及びオリゴヌクレオチド類縁体は、実施例に記載の方法および本分野の従来技術に基づいて合成できる。

(1)ヌクレオシド類縁体の合成

一般式 (I)で表される化合物は、実施例に記載の方法および本分野の従来技術に基づいて合成できる。反応条件、保護基導入試薬、反応試薬は、具体的には実施例に記載の方法を参考にすることができるが、これに限定されず、本分野の技術常識に基づき使用可能な反応条件、試薬を適宜採用することができる。例えば、特開 20 00— 297097号公報、特開平 10-304889号公報に記載の方法を参考にすることができる。また、一般式 (I)または (II)における Baseとして種々の天然、非天然の核酸塩基およびその他の芳香族複素環や芳香族炭化水素環を有する場合についても、特開平 10—304889号公報に記載の方法を参考にして、本発明化合物の原料を合成すること力 Sできる。

(2)オリゴヌクレオチド類縁体の合成

本発明のヌクレオシド類縁体を含むオリゴヌクレオチド類縁体は、公知の DNAシンセサイザ一を用いて種々合成することができる。次いで、得られるオリゴヌクレオチド類縁体を逆相カラムを用いて精製し、生成物の純度を逆相 HPLCや

MALDI-TOF-MSで分析することにより、精製オリゴヌクレオチド類縁体の生成を確認できる。

本発明のヌクレオシド類縁体は、オリゴヌクレオチド類縁体の中に 1個以上存在させること力 Sできる。また、オリゴヌクレオチド類縁体の 2力所以上の位置に、 1又は 2以上の天然ヌクレオチドを介して隔離された状態で存在させてもょレ、。本発明によれば、本発明のヌクレオシド類縁体を必要な位置に必要な数 (長さ）で導入したオリゴヌタレォチド類縁体を合成することができる。オリゴヌクレオチド類縁体全体の長さとしてヌクレオチド単位が 2— 50、好ましくは 8— 30個である。

[0059] 本発明のオリゴヌクレオチド類縁体は、ヌクレアーゼに対して分解されにくぐ生体への投与後、長く生体内に存在することができる。そして、例えば、センス RNAと二重鎖を形成して病因となる生体内成分 (タンパク質）の mRNAへの転写を阻害する。また、感染したウィルスの増殖を阻害すると考えられる。

[0060] これらのことから、本発明のオリゴヌクレオチド類縁体は、抗腫瘍剤、抗ウィルス剤とはじめとした遺伝子の働きを阻害して疾病を治療する医薬品としての有用性が期待される。即ち、本発明によれば、安定で優れたアンチセンスもしくはアンチジーン活性、又は特定遺伝子の検出薬若しくは増幅開始の為のプライマーとして優れた活性を有する、オリゴヌクレオチド類縁体及びその製造中間体であるヌクレオシド類縁体が提供される。

[0061] 本発明のヌクレオシド類縁体の一つである 2',4'-BNA^NGモノマーを様々な形態で修飾した DNAや RNAオリゴヌクレオチド類縁体（オリゴヌクレオチド類縁体）は、各種の生理'生物活性物質類、医薬品類の材料、 RNA干渉法やデコイ法用などの二重鎖オリゴヌクレオチドの機能性材料、 cDNAなど一本鎖核酸を標的とする DNAチップ、モレキュラービーコン（molecular beacon)などの機能性素材、様々なアンチセンス法（リボザィム、 DNAザィムを含む）、アンチジーン法や遺伝子相同組み換え法用途への機能性素材、蛍光や発光物質との組合せによる生体微量成分の高感度分析用材料や遺伝子機能解析解明等の研究用試薬の開発素材として有用である。

[0062] 本発明のヌクレオシド類縁体やオリゴヌクレオチド類縁体は、例えば緩衝剤および /または安定剤等の慣用の助剤を配合して非経口投与用製剤とすることができる。また、局所用の製剤としては、慣用の医薬用担体を配合して軟膏、クリーム、液剤、または膏薬等に調剤できる。

[0063] 以下、本発明のヌクレオシド類縁体およびオリゴヌクレオチド類縁体を下記の合成スキームに従って合成した。これらの合成は実施例においてさらに詳しく説明する。化合物 16、 21、 17、 22はそれぞれ核酸塩基部分がチミンおよびメチルシトシンである BNA^NC(NMe)および BNA^NC(NH)をオリゴヌクレオチドに導入するためのアミダイト体であり、また、化合物 28からも常法（トリチル化、アミダイト化）に従ってメチルシチジン BNA^NG(NH)誘導体導入のためのアミダイト体 29が合成可能である。核酸塩基部分がチミンに代わりアデニンおよびグァニンである化合物 1の誘導体も既知であることから、本合成経路によりアデノシンおよびグアノシン BNA^NG誘導体も合成可能と考えられる。

実施例

[0064] 以下、本発明のヌクレオシド類縁体及びオリゴヌクレオチド類縁体を下記の合成スキームに従って、合成した。これらの合成は実施例において更に詳しく説明する。また、合成したオリゴヌクレオチド類縁体の特性を実験例によって測定した。 Synthesis

20% Pd(OH)₂-C

cydohexerie

EtOH. reflux, 22 h

〔〕0065

5 r

h

17

22

〔〗〔 ¾0066 [0067] [化 6]

[0068] (合成スキームをイメージ入力で取り込む) [実施例 1] ヌクレオシド類縁体 (2'，4'-BNA^NGアミダイト体）の合成

(1) 化合物 2の合成

前記の合成スキームに示す化合物 1 (49 mg, 0.073 mmol)のテトラヒドロフラン溶液（ 3.5 ml)に氷冷下、 40%メチルァミン水溶液（0.11 ml, 1.50 mmol)をカロえ、室温で 3時間撹拌した。反応溶液の溶媒を留去した後、酢酸ェチルで抽出し、有機層を水、飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒留去後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（n—へキサン:酢酸ェチル = 1 : 1)により精製し、化合物 2 ( 45 mg, 99%)を白色固体として得た。

[0069] [数 1] mp 64-66で. ^JH-NMR (CDCla) δ: 1.62 (3Η, s)， 2.43 (3H， s), 3.10 (1H, br), 3.63， 3.71 (2H, AB, J= 10 Hz), 4.18 (2H, s)， 4.24 (1H, d, J= 6 Hz), 4.33 (1H, dd, J= 5, 6 Hz), 4.52 (lH, s), 4.60， 4.67 (2H， AB, J= 12 Hz), 5.68 (lH, d, J= 5 Hz), 7.23-7.37 {13H, m)， 7.71 (2H, d, J= 8 Hz), 8.52 (1H， br).

[0070] (2) 化合物 3の合成

窒素気流下、化合物 2 (146 mg, 0.23 mmol)のピリジン溶液（1.5 ml)に氷冷下、塩化メチルスルホニル (45 (1， 0.59 mmol)をカロえ、室温で 1時間撹拌した。反応溶液に水を加え、酢酸ェチルで抽出し、有機層を飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムにて乾燥した。溶媒を減圧留去し、得られた粗成績体 3 (170 mg)は精製せず、次の反応に用いた。

[0071] [数 2]

Ή-NMR (CDCla) δ: 1.65 (3Η, s), 2.43 (3H, s), 3.07 (3H, s), 3.55, 3.81 (2H, AB， J= 10 Hz), 4.13, 4.22 (2H, AB, J= 11 Hz), 4.41 {lH, d， J= 6 Hz), 4.48 (2H， s), 4.48, 4.78 (2H, AB, J= 12 Hz), 5.32 (1H, dd, J= 4, 6 Hz), 5.91 (1H， d, J= 4Hz), 7.20.7.38 (13H, m)， 7.72 (2H， d, J = 6 Hz).

[0072] (3) 化合物 4の合成

前反応で得られた粗成績体 3 (170 mg)の水一エタノール溶液（1： 2， 6 ml)に、室温で 1M水酸化ナトリウム水溶液（0.70 ml, 0.70 mmol)を加え、 1時間撹拌した。 10%塩酸水溶液で中和後、酢酸ェチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、得られた粗成績体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロ口ホルム：メタノール = 15： 1)により精製し、化合物 4 (139 mg, 95% from 2 in 2 steps)を白色固体として得た。

[0073] [数 3] mp 73-76で. Ή-NMR (CDCb) δ: 1.65 (3Η, s), 2.38 (3H, s), 3.64, 3.70 (2H, AB, J= 9 Hz), 4.12 (1H, d, J= 2 Hz), 4.15, 4.21 (2H， AB, J= 10 Hz), 4.43, 4.64 (2H, AB, J= 11 Hz), 4.49 (2H, s)， 4.55 (1H, dd, J= 2, 4 Hz), 5.97 (1H, d, J= 4 Hz), 7.19-7.36 (13H, m), 7.73 (2H, d, J= 8 Hz), 9.72 (1H, br).

[0074] (4) 化合物 5の合成

窒素気流下、ィ匕合物 4 (0.80 g, 1.28 mmol)のエタノール溶液（10 ml)に、 20%水酸化パラジウム—炭素粉末（0.60 g)、シクロへキセン（5.2 ml, 51 mmol)を加え、 5時間加熱還流した。さらに水酸化パラジウム一炭素粉末 (0.20 g)を加え、 17時間加熱還流した。反応溶液を濾過した後、溶媒を減圧留去した。得られた粗成績体 5 (0.46 g) は、精製せず次の反応に用いた。

[0075] [数 4] mp 103-106"C. Ή-NMR (CDC1₃) 8： 1.85 (3H, d， J= 1 Hz), 2.41 (3H， s)， 3.67 (2H, s), 4.14, 4.25 (2H, AB, J= 11 Hz), 4.16 (lH, dd, J= 4， 5 Hz), 4.21 (1H, d, J= 4 Hz), 5.87 (1H， d, J = 5 Hz), 7.38 (2H， d， J; 8 Hz), 7.48 (1H, d， J= 1 Hz), 7.79 (2H， d, J= 8 Hz).

[0076] (5)化合物 6の合成

窒素気流下、化合物 5 (0.46 g)の Ν,Ν-ジメチルホルムアミド溶液（10 ml)に、 1 ,3- ジクロロ—1 , 1 ,3, 3—テトライソプロピルジシロキサン（0.45 ml, 1.41 mmol)、イミダゾーノレ（0.38 g， 5.63 mmol)をカロえ、室温にて 5時間撹拌した。反応液をエーテルで抽出し、有機層を水、飽和食塩水で洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、得られた粗成績体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (n—へキサン:酢酸ェチル= 2 : 1→1 : 1)にょり精製し、化合物 6 (0.60 g， 68% from 4 in 2 st印 s)を白色固体として得た。

[0077] [数 5] mp 97.99で. IR v _max (KBr): 3185, 3058, 2947, 2869, 1697, 1467, 1366, 1277 1182, 1036, 1081 1036 era !H-丽 R (CDCls) δ: 0.82-1.29 (28H, m), 1.86 (3H, s), 2.45 (3H, s), 3.73, 4.01 (2H AB, J= 12 Hz), 4.06, 4.29 (2H, AB, J= 11 Hz), 4.47 (lH, d, J= 7 Hz), 4.52 (1H, dd, J= 6 7 Hz), 5.98 (1H, d, J= 6 Hz), 7.28 (1H, s), 7.43 (2H, d, J= 8 Hz), 7.81 (2H d J = 8 Hz).

[0078] (6) 化合物 7の合成

窒素気流下、化合物 6 (200 mg, 0.29 mmol)のピリジン溶液（3 ml)に氷冷下、無水トリフルォロメタンスルホン酸（0.15 ml, 0.88 mmol) 4_ (ジメチルァミノ)ピリジン（7 mg, 0.06 mmol)をカ卩え、室温で 7.5時間撹拌した。反応溶液に水をカ卩え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、得られた粗成績体 7 (0.29 g)を精製せず、次の反応に用いた。

[0079] [数 6]

IR V (KBr): 3178, 3069, 2948, 2874, 1695, 1465, 1424, 1365, 1281, 1214 1143, 1088, 1038 cm Ή-NMR (CDCI3) δ: 0.81-1.26 (28Η, m), 1.92 (3H, s), 2.46 (3H, s), 3.77, 4.16 (2H, AB, J= 12 Hz), 4.15, 4.42 (2H, AB, J= 10 Hz), 5.42 (lH, d, J= 7 Hz), 5.45 (1H, d, J= 7 Hz), 6.89 (1H, s)， 7.37 (2H d J= 8 Hz), 7.82 (2H, d, J= 8 Hz), 7.92 (lH, s).

[0080] (7) 化合物 8の合成

窒素気流下、前反応で得られた粗成績体 7 (0.29 g)のァセトニトリル溶液（3 ml)に、室温で N—ヒドロキシフタルイミド（67 mg, 0.41 mmol) 1 ,8—ジァザビシクロ [5.4.0]— 7 -ゥンデセン（61 (1, 0.41 mmol)をカ卩え、室温で 12時間撹拌した。反応溶液をジクロ口メタンで抽出し、有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、得られた粗成績体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム）により精製し、化合物 8 (0.15 g 61% from 6 in 2 st印 s)を黄色固体として得た。

[0081] [数 7] mp 109-111で. Ή-NMR (CDCls) δ: 0.99-1.31 (28Η, m), 1.87 (3H, s), 1.42 (3H, s), 3.88, 4.19 (2H, AB, J= 13 Hz), 4.41, 4.91 (2H, AB, J= 12 Hz), 4.77 (lH, d, J= 6 Hz), 4.80 (lH, d, J= 6 Hz), 6.00 (1H, s), 7.32-7.37 (3H, m)， 7.74-7.90 (6H, m). [0082] (8) 化合物 9の合成

化合物 8 (1.16 g， 1.40 mmol)のエタノール溶液（35 ml)に、ヒドラジン一水和物（0.12 ml, 2.38 mmol)をカ卩え、室温で 10分間撹拌した。反応溶液の溶媒を留去した後、濾過し、濾液を酢酸ェチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去し、得られた粗成績体 9 (0.93 g)は精製せず、次の反応に用いた。

[0083] [数 8] mp 117-119Ό. Ή-NMR (CDCk) δ: 0.87-1.09 (28Η, m), 1.92 (3Η, d, J= 1 Hz), 2.45 (3H, s), 3.83, 3.91 (2H, AB, J: 12 Hz), 4.22, 4.57 (2H， AB, J= 16 Hz), 4.41 (1H, dd, J= 1, 7 Hz), 4.80 (1H， d, J= 7 Hz), 5.35 (1H, d, J= 1 Hz), 5.81 (1H, br), 7.12 (1H, d, J= 1 Hz), 7.33 (2H, d, J= 8 Hz), 7.81 (2H, d, J= 8 Hz), 8.75 (lH, s).

[0084] (9) 化合物 10の合成

窒素気流下、前反応で得られた粗成績体 9 (0.93 g)の塩化メチレン溶液（15 ml)に氷冷下、飽和重曹水（4.0 ml, 4.2 mmol)、クロロギ酸べンジノレ（0.30 ml, 2.1 mmol)を加え、 1時間撹拌した。反応溶液に飽和重曹水を加え、酢酸ェチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、得られた粗成績体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（n—へキサン：酢酸ェチル = 4 : 1)により精製し、化合物 10 (0.92 g， 94% from 8 in 2 steps)を白色固体として得た

[0085] [数 9] mp 82-84"C. IR v _raax (KBr): 3319, 3059, 2948, 2874, 1691, 1464, 1365, 1245, 1180, 1098, 1034 cm '. Ή-NMR (CDCls) δ: 0.86 (28H， m), 1.87 (3H， s), 2.43 (3H, s), 3.80, 3.88 (2H, AB, J= 11 Hz), 4.25, 4.53 (2H, AB, J= 11 Hz), 4.72 (1H， d, J= 6 Hz), 5.02 (1H, d, J= 6 Hz), 5.15, 5.20 (2H. AB, J= 12 Hz), 5.37 (1H, s)， 7.31 (2H, d, J= 8 Hz), 7.34 (5H, s)， 7.80 (2H, d, J= 8 Hz), 7.95 (1H, s), 8.48 (1H, s).

[0086] (10) 化合物 11の合成

窒素気流下、水素化ナトリウム（60% in oil, 0.55 g， 13.7 mmol)のテトラヒドロフラン懸濁液（25 ml)に氷冷下、化合物 10 (3.81 g， 4.57 mmol)のテトラヒドロフラン溶液（15 ml)を滴下し、 1時間撹拌した後、室温で 5時間撹拌した。飽和シユウ酸水溶液で中和後、酢酸ェチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、得られた粗成績体をシリカゲルカラムクロマトダラフィー（クロ口ホルム→クロ口ホルム：メタノール = 100： 1)により精製し、化合物 11 ( 2.87 g， 95%)を白色固体として得た。

[0087] [数 10] mp 61-64X:. IR V max (KBr): 3178， 3026, 2941, 2864, 1697, 1463, 1271, 1221, 1164, 1073 cm-i. Ή-NMR (CDCb) δ: 0.80-1.12 (28H, m), 1.92 (3H, s)， 3.62, 3.85 (2H, AB, J= 12 Hz), 3.68, 4.11 (2H, AB, J= 13 Hz), 4.11 (lH, d, J= 4 Hz), 4.55 (1H, d, J= 4 Hz), 5.21, 5.28 (2H, AB, J= 12 Hz), 5.98 (1H， s)， 7.30-7.44 (5H, m)， 7.61 (1H， s)， 8.80 (1H, br).

[0088] (11) 化合物 12の合成

窒素気流下、前反応で得られた粗成績体 11 (0.35 mg, 0.53 mmol)の塩化メチレン溶液（10 ml)に氷冷下、 1M三塩化ホウ素へキサン溶液（5.29 ml, 5.29 mmol)を加え、 1時間撹拌した。反応溶液に飽和重曹水を加え、酢酸ェチルで抽出し、有機層を水、飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、得られた粗成績体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロ口ホルム：メタノール = 50： 1)により精製し、化合物 12 (0.27 g， 96%)を白色固体として得た。

[0089] [数 11] mp 102-10413. IR レ m_ax (KBr): 4326, 3178, 3059, 2947, 2864, 1698, 1564, 1464, 1270, 1043 cm-i. Ή-NMR (CDCls) δ: 0.99.1.25 (28H, m)， 1.93 (3H, s)， 2.54, 3.68 (2H, AB, J= 13 Hz), 3.67, 4.06 (2H， AB, J= 13 Hz), 4.10 (lH, d， J= 2 Hz), 4.36 (1H, d, J= 2 Hz), 6.17 (1H, s), 7.73 (1H, s), 8.71 (1H, br).

[0090] (12) 化合物 13の合成

ィ匕合物 12 (0.19 g， 0.36 mmol) (D IM p—トルエンスルホン酸ピリジニゥム—メタノール溶液（3.6 ml)に、室温にて 20%ホルムアルデヒド水溶液（0.06 ml, 0.40 mmol)を加え、 10分間撹拌した。さらに、氷冷下シアン化水素化ホウ素ナトリウム (45 mg, 0.72 mmol)を加え、 1時間撹拌した。反応溶液を酢酸ェチルで抽出し、水、飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、得られた粗成績体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (n—へキサン:酢酸ェチル = 2 : 1)にて精製し、化合物 13 (0.19 g, 100%)を白色固体として得た。

[0091] [数 12]

IR レ _max (KBr): 2947, 2868, 1695, 1464, 1267, 1163, 1038 cm"¹. Ή-NMR (CDCls) 6： 0,94-1.12 (28H, m), 1.92 (3H， d, J= 1 Hz), 2.60, 2.91 (2H, AB, J= 11 Hz), 2.76 (3H， s), 3.67, 4.08 (2H， AB, J= 13 Hz), 3.95 (1H, d, J= 3 Hz), 4.33 (1H, d， J= 3 Hz), 6.24 (1H, s)， 7.73 (1H， d, J= 1 Hz), 8.56 (1H, br).

[0092] (13) 化合物 14の合成

化合物 13 (46 mg， 0.085 mmol)のテトラヒドロフラン溶液（2 ml)にフッ化テトラ— n— ブチルアンモニゥム（1M inテトラヒドロフラン， 0.17 ml, 0.17 mmol)を加え、室温で 5分間撹拌した。溶媒を減圧留去し、得られた粗成績体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸ェチル:メタノール = 15 : 1)により精製し、化合物 14 (25 mg, 100%)を白色固体として得た。

[0093] [数 13] rap 101-103T:. Ή-NMR (CD₃OD) δ： 1.85 (3H， d, J= 1 Hz), 2.71 (3H, s), 2.71, 2.88 (2H， AB, J= 11 Hz), 3.69, 3.76 (2H, AB, J= 12 Hz), 3.94 (1H, d, J= 3 Hz), 4.23 (lH, d, J= 3 Hz), 6.21 (1H, s), 7.99 (1H， d, J= 1 Hz).

[0094] (14) 化合物 15の合成

化合物 14 (0.16 g， 0.54 mmol)のピリジン溶液（10 ml)に塩化 4, 4'ージメトキシトリチノレ（0.22 g， 0.64 mmol)をカロえ、室温で 12時間撹拌した。反応液に飽和重曹水をカロえ、酢酸ェチルで抽出し、有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、得られた粗成績体をシリカゲルカラムクロマトグラフィ一（1%トリェチルァミン含有 n—へキサン：酢酸ェチル = 1： 2→酢酸ェチル：メタノーノレ = 30 : 1)にて精製し、化合物 15 (0.30 g, 93%)を白色固体として得た。

[0095] [数 14] mp 133.134で. Ή-NMR (CDCls) δ 1.45 (3Η, d, J= 1 Hz), 2.52 (1H, d， J= 9 Hz), 2.72 (3H, s)， 2.77 (2H, s)， 3.32, 3.37 (2H, AB, J= 11 Hz), 3.79 (6H, s), 4.23 (lH, dd, J= 3, 9 Hz), 4.35 (1H, d, J= 3 Hz), 6.35 (lH, s)， 6.84 (4H, d, J= 8 Hz), 7.22-7.46 (9H， m), 7.75 (1H, d, J= 1 Hz), 8.25 (1H, br). [0096] (15) 化合物 16の合成

化合物 15 (0.17 g， 0.28 mmol)及び 4, 5—ジシァノイミダゾール（40 mg， 0.34 mmol) のァセトニトリル溶液（6 ml)に、 2—シァノエチルー Ν,Ν,Ν',Νしテトライソプロピルホスホロアミダイト（0.13 ml, 0.42 mmol)を加え、室温で 4時間撹拌した。反応液に飽和重曹水をカ卩え、酢酸ェチルで抽出した。有機層を飽和重曹水、水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗成績体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（1%トリェチルァミン含有 n—へキサン：酢酸ェチル = 1 : 1)、ついで再沈澱 (酢酸ェチルーへキサン）により精製し、化合物 16 (0.20 g， 88%)を白色固体として得た。

[0097] [数 15] mp 65-65^. siP NMR (acetone-d₆) δ： 148.69, 149.82.

[0098] (16) 化合物 17の合成

窒素気流下、 1 ,2, 4，ートリアゾール（278 mg, 4.03 mmol)のァセトニトリル懸濁液（9 ml)に、氷冷下、塩化ホスホリル（86 ml, 0.92 mmol)を加え 10分間激しく撹拌し、さらにトリエチルァミン（0.64 ml, 4.62 mmol)を加え 35分間撹拌した。氷冷下、化合物 16 (95 mg, 0.12 mmol)のァセトニトリル溶液（3 ml)をカロえ、 5.5時間撹拌した後、室温でさらに 2.5時間撹拌した。反応液に飽和重曹水を加え、酢酸ェチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗成績体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (n—へキサン:酢酸ェチル = 1 : 2)、ついで再沈澱（酢酸ェチルーへキサン）により精製し、化合物 17 (83 mg, 83%) を白色固体として得た。

[0099] [数 16] mp 107.109"C. ³¹P'NMR (acetone de) δ： 148.24, 149.91,

[0100] (17) 化合物 18の合成

化合物 12 (100 mg, 0.19 mmol)およびトリェチルァミン（32 ml, 0.12 mmol)の塩化メチレン溶液（3 ml)に、氷冷下、塩化フエノキシァセチル（29 ml, 0.21 mmol)を加え 30 分間撹拌した。反応液に飽和重曹水を加え、酢酸ェチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗成績体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（n—へキサン：酢酸ェチル = 2 : 1)により精製し、化合物 18 (115 mg, 92%)を白色固体として得た。

[0101] [数 17] mp 124-126t:. Ή-NMR (CDCla) δ: 1.02-1.13 (28Η, m), 1.92 (3Η, s), 3.49 (1H， AB， J= 13 Hz), 3.73 (1H, AB， J= 14 Hz), 4.16 (1H, d, J= 3 Hz), 4.18 (1H, AB， J= 13 Hz), 4.23 (1H, AB, J= 14 Hz), 4.57 (1H, d, J: 3 Hz), 4.91 (1H， AB, J= 16 Hz), 5.00 (1H, AB, J= 16 Hz), 5.97 (1H， s), 6.92-7.00 (3H， m)， 7.24-7.30 (2H, m), 7.60 (1H, s)， 9.59 (1H, brs).

[0102] (18) 化合物 19の合成

窒素気流下、室温で化合物 18 (0.34 g, 0.51 mmol)のテトラヒドロフラン溶液（10 ml )にフッ化テトラ n—ブチルアンモニゥム（1 Mテトラヒドロフラン溶液， 1.0 ml, 1.0 mmol) を加え、 5分間撹拌した。溶媒を減圧留去し、得られた粗成績体をシリカゲルカラムク口マトグラフィー（酢酸ェチル：メタノール = 15 : 1)により精製し、化合物 19 (0.20 g， 95%)を白色固体として得た。

[0103] [数 18] mp 144-146 . Ή-NMR (CDaOD) δ: 1.85 (3Η, s)， 3.53 (1H， AB, J= 13 Hz), 3.77 (1H, AB, J= 13 Hz), 3.85 (1H, AB, J= 13 Hz), 4.18 (1H, AB, J= 13 Hz), 4.20 (1H, d, J= 2 Hz), 4.60 (1H, d, J= 2 Hz), 4.93 (1H， AB, J= 16 Hz), 5.04 (1H， AB, J= 16 Hz), 6.05 (lH, s), 6.91-6.97 (3H, m), 7.23-7.28 (2H, m), 7.90 (lH, s).

[0104] (19) 化合物 20の合成

窒素気流下、室温で化合物 19 (0.17 g, 0.41 mmol)のピリジン溶液（8 ml)に塩ィ匕 4， 4しジメトキシトリチル（0.25 g, 0.73 mmol)を加え、 7時間撹拌した。反応液に飽和重曹水をカ卩え、酢酸ェチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗成績体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（1%トリェチルァミン含有 n—へキサン：酢酸ェチル = 1 ： 1→酢酸ェチル：メタノール = 50 : 1)により精製し、化合物 20 (0.25 g， 86%)を白色固体として得た。

[0105] [数 19] mp 144-145T:. Ή-NMR (CDCla) δ: 1.44 (3H, s), 2.65 (IH, br), 3.40 (1H， AB, J= 11 Hz), 3.44 (1H， AB, J= 13 Hz), 3.52 (IH, AB, J= 11 Hz), 3-80 (6H， s), 4.23 (IH, AB, J= 13 Hz), 4.44 (IH, d, J= 3 Hz), 4.63 (IH, d, J= 3 Hz), 4.86 (IH, AB, J= 16 Hz), 4.99 (1H， AB, J= 16 Hz), 6.04 (1H， s), 6.83-6.98 (7H, m), 7.25-7.43 (11H, m), 7.65 (1H， s), 8.38 (IH, br).

[0106] (20) 化合物 21の合成

化合物 20 (0.25 g， 0.35 mmol)及び 4, 5—ジシァノイミダゾール（41 mg, 0.35 mmol) のァセトニトリル溶液（7 ml)に、 2—シァノエチルー Ν,Ν,Ν',Νしテトライソプロピルホスホロアミダイト（0.13 ml, 0.42 mmol)をカ卩え、室温で 3時間撹拌した。反応液に飽和重曹水をカ卩え、酢酸ェチルで抽出した。有機層を飽和重曹水、水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗成績体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（1%トリェチルァミン含有 n—へキサン：酢酸ェチル = 1 : 1)、ついで再沈澱（酢酸ェチル -へキサン）により精製し、化合物 21 (0.27 g， 85%)を白色固体として得た。

[0107] [数 20] mp 107-109T:. sip-NMR (acetone- cfe) δ: 149.79, 151.04.

[0108] (21) 化合物 22の合成

窒素気流下、 1 ,2, 4，ートリアゾール（229 mg, 3.32 mmol)のァセトニトリル懸濁液（10 ml)に、氷冷下、塩化ホスホリル（71 ml, 0.76 mmol)を加え 10分間激しく撹拌し、さらにトリエチルァミン（0.53 ml, 3.81 mmol)を加え 35分間撹拌した。氷冷下、化合物 21 (90 mg, 0.10 mmol)のァセトニトリル溶液（2 ml)をカ卩え、 5時間撹拌した。反応液に飽和重曹水を加え、酢酸ェチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗成績体を再沈澱 (酢酸ェチル -へキサン）により精製し、化合物 22 (90 mg, 95%)を白色固体として得た。

[0109] [数 21] mp 104- 106で. 3ip-NMR {acetone- d) δ: 149.58, 151.29.

[0110] (22) 化合物 23の合成窒素気流下、 1 ,2, 4，ートリアゾール（1.41 g, 20.4 mmol)のァセトニトリル懸濁液（61 ml)に、氷冷下、塩化ホスホリル（0.44 ml, 4.67 mmol)を加え 10分間激しく撹拌し、さらにトリエチルァミン（3.27 ml, 23.4 mmol)を加え 35分間撹拌した。氷冷下、化合物 1 1 (409 mg, 0.62 mmol)のァセトニトリル溶液（3 ml)をカロえ、 2時間撹拌した後、室温でさらに 3時間撹拌した。反応液に飽和重曹水を加え、酢酸ェチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗成績体 23 (497 mg)は精製せず、次の反応に用いた。

[0111] [数 22]

Ή-NMR (CDCla) δ: 0.92-1.12 (28Η, m)， 2.47 (3H, s), 3.66 (lH₍ AB, J= 12 Hz), 3.72 (1H, AB, J= 13 Hz), 3.90 (1H， AB, J= 12 Hz), 4.06 (1H， d, J= 3 Hz), 4.16 (1H, AB, J= 13 Hz), 4.73 (1H, d， J= 3 Hz), 6.11 (1H, s), 7.25-7.48 (5H, m), 8.12 (1H, s), 8.24 (1H, s), 9.32 (1H, s).

[0112] (23) 化合物 24の合成

化合物 23 (497 mg)の 1 ,4一ジォキサン溶液（10.6 ml)に、室温で 28%アンモニア水溶液（1.76 ml)を加え、 2時間撹拌した。溶媒を減圧流去し、得られた粗成績体をシリ力ゲルカラムクロマトグラフィー（クロ口ホルム：メタノーノレ = 30： 1)により精製し、化合物 24 (343 mg, 84% from 11 in 2 st印 s)を白色固体として得た。

[0113] [数 23] mp 137 139^；. Ή-NMR (CDCh) δ: 0.93-1.11 (28Η, m), 2.03 (3H, s), 3.62 (lH, AB, J= 12 Hz), 3.69 (1H, AB, J= 13 Hz), 3.85 (1H， AB, J= 12 Hz), 4.03 (1H， d， J= 3 Hz), 4.11 (1H, AB, J= 13 Hz), 4.59 (lH, d, J= 3 Hz), 5.24 (2H, s), 6.03 (1H, s), 7.26-7.45 (5H, m), 7.74 (1H, s).

[0114] (24) 化合物 25の合成

化合物 24 (175 mg, 0.26 mmol)の塩化メチレン溶液（2.6 ml)に、氷冷下、飽和重曹水（0.8 ml, 0.79 mmol)と塩化ベンゾィル（92 ml, 0.79 mmol)をカロえ、 2時間撹拌した後、室温でさらに 1.5時間撹拌した。反応液に飽和重曹水を加え、酢酸ェチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗成績体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロ口ホルム）により精製し、化合物 25 (161 mg, 80%)を白色固体として得た。 [0115] [数 24] mp 216-218 :. Ή-NMR (CDCI3) δ: 0.99-1.12 (28H, m), 2.12 (3H, s), 3.63 (1H, AB， J= 12 Hz), 3.70 (m， AB， J= 13 Hz), 3.87 (1H， AB, «/= 12 Hz), 4,11 (lH, d, J= 3 Hz), 4.13 (1H， AB, 13 Hz), 4.59 (1H, d, J: 3 Hz), 5.22 (lH, AB, J= 12 Hz), 5.29 (1H, AB, J= 12 Hz), 6.02 (1H, s), 7.31-7.53 (8H, m), 7.88 (1H, s), 8.30-8.33 (2H, m).

[0116] (25) 化合物 26の合成

窒素気流下、化合物 25 (115 mg, 0.15 mmol)の塩化メチレン溶液（7.5 ml)に、一 78 °C冷却下、 1 M三塩化ホウ素へキサン溶液（1.35 ml, 1.35 mmol)を加え、 1.5時間撹拌し、氷冷下でさらに 2.5時間撹拌した。反応液に飽和重曹水を加え、酢酸ェチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗成績体 26 (90 mg)は精製せず、次の反応に用いた。

[0117] [数 25]

Ή-NMR (CDCla) δ: 0.99.1.13 (28Η, m), 2.14 (3H, s), 2.57 (1H, AB, J= 13 Hz), 3.69 (1H, AB, J= 14 Hz), 3.70 (1H, AB, J= 13 Hz), 4.09 (lH, AB, J= 14 Hz), 4.11 (lH, d, J= 3 Hz), 4.42 (1H, d, J= 3 Hz), 6.22 (1H, s), 7.42-7.56 (3H, m), 7.91 (1H， s)， 8.30-8.33 (2H, m).

[0118] (26) 化合物 27の合成

窒素気流下、化合物 26 (90 mg)とトリエチルァミン（25 ml, 0.18 mmol)の塩化メチレン溶液（1.5 ml)に、氷冷下、塩化フヱノキシァセチル（23 ml, 0.17 mmol)を加え 45分間撹拌した。反応液に飽和重曹水を加え、酢酸ェチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗成績体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（n—へキサン：酢酸ェチル = 2 : 1)により精製し、化合物 27 (49 mg, 42% from 23 in 2 st印 s)を白色固体として得た。

[0119] [数 26] mp 224-226^. Ή-NMR (CDCI3) δ: 0.99.1.14 (28Η, m)， 2.13 (3H, s), 3.52 (1H， AB, J= 13 Hz), 3.75 (1H， AB, J= 13 Hz), 4.17 (1H, AB, J= 13 Hz), 4.18 (1H, d, J= 3 Hz), 4.23 (1H, AB, J= 13 Hz), 4.61 (1H, d, J= 3 Hz), 4.92 (lH, AB, J= 16 Hz), 5.05 (lH, AB, J = 16 Hz), 6.01 (1H, s), 6.95-7.02 (3H, m), 7.29 (2H, m), 7.42-7.57 (4H, m), 7.79 (1H， s), 8.30-8.33 (2H, m).

[0120] (27) 化合物 28の合成窒素気流下、室温で化合物 27 (45 mg, 0.06 mmol)のテトラヒドロフラン溶液（1.2 ml )に、フッ化テトラ n—ブチルアンモニゥム（1 Mテトラヒドロフラン溶液， 0.12 ml, 0.12 mmol)を加え、 10分間撹拌した。溶媒を減圧留去し、得られた粗成績体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（n—へキサン:酢酸ェチル = 1 : 1)により精製し、化合物 28 ( 31 mg, 100%)を白色固体として得た。

[0121] [数 27] m 148-150 :. Ή-NMR (pyridine -ds) δ: 1.94 (3H, s), 4.08 (1H, AB, J= 13 Hz), 4.23 (1H， AB, J= 12 Hz), 4.30 (lH, AB, J= 12 Hz), 4.73 (1H, AB, 13 Hz), 5.21 (1H, AB, J= 16 Hz), 5.28 UH, d, J= 3 Hz), 5.42 (lH, AB, J= 16 Hz), 5.42 (lH, d， J: 3 Hz), 6.61 (1H, s), 6.95-7.00 (1H， m), 7.27-7.36 (4H， m), 7.45-7.54 (3H, m), 7.73 (1H, s), 8.54-8.56 (2H, m).

[0122] [実施例 2] オリゴヌクレオチド類縁体の合成及び精製

(1) 2',4'-BNA^NC修飾オリゴヌクレオチドの合成

2',4'-BNA^NCモノマーユニットを含有するオリゴヌクレオチド類縁体（1)一 (22)は、標準的なホスホロアミダイトプロトコールに従って、核酸自動合成機 Expedite™ 8909 (ABI社製)により 0.2 mmolスケールで合成した。アミダイトと 5し末端の水酸基とのカツプリング時間は、天然のヌクレオシドアミダイトでは 94秒、 2'，4し BNA^NCアミダイト（16、 17および 21)では 300秒に設定した。

[0123] 5 '—末端が DMTr基保護され、固相支持された状態の 2'，4'_BNA^NG修飾オリゴヌタレォチドに対し、それぞれ、 28%アンモニア水によるカラムからの切り出し (1.5h)を行い、切り出したオリゴヌクレオチド類縁体を 28%アンモニア水中、 16h、 60°Cで反応させ、すべての保護基の脱保護を行った。

[0124] NAP- 10カラムによる簡易精製を行い、分画した各フラクションを UV分析した。

[0125] UV測定の結果をもとに、オリゴを含むフラクションを凍結乾燥し、さらに逆相

HPLC(WakoPak^R WS-DNA column, 10.0 mm x 250 mm)により精製した（条件： 0.1Mトリエチルアンモニゥム酢酸バッファー（pH7.0)中、 3 ml/min.で 30分の 8—16%ァセトニトリルのグラディエント）。合成されたオリゴヌクレオチド類縁体の純度は、逆相 HPLC (WakoPak^R WS-DNA column, 4.6 mm x 250 mm)により確認した（条件： 0.1Mトリェチルアンモニゥム酢酸バッファー（ρΗ7·0)中、 1 ml/min.で 30分の 8—16%ァセトニトリルのグラディエント）。また、分子量は、 MALDI-TOF- MASS測定により決定した。

[0126] 以下に合成したオリゴヌクレオチド類縁体（1)一（22)を示す。

[0127] [化 7]

(22) 5'- 1 I I I I I I I YT-3'

[0128] 得られた 2',4'- BNA^NG修飾オリゴヌクレオチドの収量、収率を以下に示す ₍

[0129] [表 1] 収量（nmol) 収率（％)

Oligonucleotides

① 5'-GCGTTXTrTGCT-3' 94.91 47.5

② 5'-GCG XTXTGCT-3， 118.67 59.3

③ 5'-GCGXTXTXTGCT-3' 126.12 63.1

④ 5 -GCGTTXXXTGCT-3' 66.94 33.5

⑤ 5 -GCGXXXXXXGCT-3 99.40 49.7

⑥ 5'-ΤΤ Γ「 CTXT^mCT^mCT^mCT-3， 72.44 36.2

⑦ 5'- l I I I X^mCTXT^mCX^mCT^mCT-3' 61.07 30.6

⑧ 5'- l 1 1 1 CXXX^mCT^mCT^mCT'3， 60.40 30.2

⑨ 5'-XTXTX^mCXTX^mCX^mCX^mCT-3' 41.60 20.8

⑩ 5'-TX X^mCTXT^mC)(^mCTX叮 -3' 25.40 12.7

⑪ 5'-xnrx^m ^x^mCT^mcx^mCT-3' 81.80 40.9

⑫ 5'- l 1 1 1 m I XT-3' 100.13 50.1

[0130] 更に、合成した 2'，4し BNA ^G修飾オリゴヌクレオチドの MALD卜 TOF MS測定結果を下記の表に示す。

[0131] [表 2]

Calcd.For (Μ-Η)· Found ( -H)-

Oligonucleotides

① S'-GCGTTXTTTGCT-a' 3689.47 3688.52

② 5'-GCGTTXTXTGCT-3' 3746.52 3746.89

③ 5'-GCGXTXTXTGCT-3， 3803.57 3804.93

④ 5'-GCGTTXXXTGCT-3' 3803.57 3803.18

⑤ 5 -GCGXXXXXXGCT-3' 3974.73 3975.31

⑥ 5'- l 1 1 1 1 ^mCTXT^mCT^mCT^mCT-3' 4553.11 4552.67

⑦ 5'- 1 1 1 1 X^mCTXT^mCX^mCT^mCT-3' 4667.21 4667.36

⑧ 5'- ! 1 1 1 1 ^mCXXX^mCT^mCT^mCT-3' 4667.21 4666.86

⑨ 5 -XTXTX^mCXTX^mCX^mCX^mCT-3' 4895.42 4896.42

® 5'-TXTTX^mCTXT^mCX^mCTX*T-3' 4781.32 4781.18

® 5'-X 1 1 1 X^mCTTX^mCT^mCX^mCT-3' 4724.26 4723.73

@ 5'- l 1 1 1 1 1 1 1 XT-3' 3036.06 3036.36

⑬ 5'-GCGTTYTTTGCT-3' 3675.44 3675.80

® 5'-GCG YTYTGCT-3' 3718.47 3717.15

® 5 -GCGYTYTYTGCT-3' 3761.49 3762.64

® 5 -GCGTTYYYTGCT-3' 3761.49 3761.24

⑰ 5 -GCGYYYYYYGCT-3' 3890.57 3890.62

⑱ 5'- l 1 1 I l ^mCTYT^mCT^mCT^mCT-3' 4539.08 4540.11

@ 5'- 1 1 1 1 Y^mCTYT^mCY^mCT^r CT-3' 4625.13 4625.74

⑳ 5'-TTTTT^mCYYY^mCT^mCT^mCT-3' 4625.13 4625.71

(21) 5 -YTYTY^mCYYY^mCY^mCY^mCT-3' 4797.23 4797.80

(22) 5'- 1 I I I I I I I YT-3' 3022.03 3021.93

[0132] [実験例 1] 2'，4'_BNA^N修飾オリゴヌクレオチドの融解温度 (Tm)測定（二重鎖形成能評価）

実施例で合成したオリゴヌクレオチド類縁体（1)一 (5)および（13)—（17) (アンチセンス鎖）と天然 DNAあるいは RNAオリゴヌクレオチドのセンス鎖とをアニーリング処理したものの融解温度 (Tm)を測定することにより、アンチセンス鎖の二重鎖形成能を調べた。

[0133] 終濃度をそれぞれ、 NaCI lOOmM、リン酸ナトリウム緩衝液（pH7. 2) 10mM、ァンチセンス鎖 4 μ Μ、センス鎖 4 Μとしたサンプル溶液（500 L)を沸縢水中に浴し、 10時間かけて室温まで冷却した。分光光度計（Beckman，DU-650)のセル室内に結露防止のために窒素気流を通し、サンプル溶液を 5°Cまで徐々に冷却し、さらに 2 ◦分間 10°Cに保った後、測定を開始した。温度は 90°Cまで毎分 0. 5°Cずつ上昇させ、 260nmにおける紫外部吸収を測定した。

[0134] 結果を表 3、表 4に示す。

[0135] [表 3]

D NA|g(5'-AGCAAAAAACGC-3')に対する二：重鎖形成能（Tm値評価）： °C

アンチセンス鎖 Tm ^jTm/mod.

5'-GCGTTTTTTGCT-3' 50 Natural

① 5'-GCG XTTTGCT-3' 49 -1

② 5'-GCGTTXTXTGCT-3' 49 -0.5

③ 5'-GCGXTXTXTGCT-3' 51 -0.3

④ 5'-GCGTTXXXTGCT-3' 50 0

⑤ 5'-GCGXXXXXXGCT-3' 61 +1.8

⑬ 5'-GCGTTYTTTGCT-3' 51 +1

⑭ 5'-GCGTTYTYTGCT-3' 52 +1

⑩ 5'-GCGYTYTYTGCT-3' 55 +1.7

® 5'-GCGTTYYYTGCT-3' 57 +2.3

⑰ 5'-GCGYYYYYYGCT-3' 73 +3.8

Conditions: 100 mM NaCI, 10 mM Na2HP04 buffer (pH7.2), [strand] = 4 μΜ.

Tmは 3回以上の実験の平均値

[0136] [表 :4]

RNA鎖 (5'-AGCAAAAAACGC-3')に対する.二重鎖形成能（Tm値評価）：。C

アンチセンス鎖 Tm Tm/mod.

5'-GCGTTTTTTGCT-3' 45 Natural

① 5'-GCGTTX"n GCT-3' 50 +5

② 5'-GCGTTXTXTGCT-3' 56 +5.5

③ 5'-GCGXTXTXTGCT-3' 63 +6

④ 5'-GCGTTXXXTGCT-3' 59 +4.7

⑤ 5'-GCGXXXXXXGCT-3' 80 +5.8

⑩ 5'-GCGTTYTTTGCT-3' 51 +6

⑭ 5'-GCG YTYTGCT-3' 56 +5.5

⑩ 5'-3CGYTYTYTGCT-3' 64 +6.3

® 5'-GCGTTYYYTGCT-3' 61 +5.3

⑰ 5'-GCGYYYYYYGC丁- 3' 83 +6.3

Conditions: 100 mM NaCI, 10 mM Na2HP04 buffer (pH7.2), [strand] = 4 μΜ.

Tmは 3回以上の実験の平均値以上より、本発明のヌクレオチド類縁体は、一本鎖 DNA (センス鎖）に対する二重鎖形成能に比較して一本鎖 RNA (センス鎖）に対する二重鎖形成能が格段と高ぐアンチセンス法に適するものと考えられる。

[実験例 2]2'，4'-BNA^NG修飾オリゴヌクレオチドの Tm測定 (三重鎖形成能評価）実施例で合成したオリゴヌクレオチド類縁体（6) （11)および（18)—（21)について、実験例 1と同様の方法により、下記の標的 2本鎖 DNAとの三重鎖形成能を調べた。測定の際の塩濃度や pHについては各表の下に記載してある条件を用いた。

[0138] 結果および実験条件を表 5に示す。

[0139] [表 5-1] 表 5― 1. T_m values of 2'，4'-BNA^N" oliaonucleotides with dsDNA.

5 ¹ - d (GCTAAAAAGAAAGAGAGATCG) - 3 ¹

3 ' - d (CGATTTTTCTTTCTCTCTAGC ) - 5 ' oligonucleotides T_m (A TJmodification) (°C)

5-1111 じ 11 じじじ卜 3' 33

⑥ 5'-1111 CTXT^mCT^mCT^mCT-3， 38 (+5.0)

⑦ 5'-111 I ^mCTXT^mCX^mCT^mCT-3' 47 (+4.6)

⑧ 5'-l M 1 l^mCXXX^mCT^mCT^mCT-3' 42 (+3.0)

(9) 5'-XTXTX^mCXTX^mCX^mCX^mCT-3' 59 (+3.7)

⑩ 5'-TX X^mCTXT^mCX^mCTX*T-3' 50 (+3.4)

⑪ 5'-X1TTX^mC^X^mCT^mCX^mC丁- 3' 45 (+3.0)

⑱ b'-l 111 じ 1 Y じじじ卜 3' 44 (+11.0)

⑲ 5'- 1111 Y^mCTYT^mCY^mCT^mCT-3' 60 (+9.0)

⑩ 5'-Tmr^mCYYY^mCT^mCT^mCT-3' 59 (+8.7)

(21) 5'-YTYTY^mCYTY^mCY^mCY^mCT-3' 78 (+6.4)

Conditions： 1 0 m KCI, 7 mM Na₂HP0-i buffer (pH 7.0), each strand 1.5 μ , 5°C to 90°C (0.5°C/nnin).X*:2^, _J4^,-BNA^NC(N-Me)-^mC

[0140] [表 5-2] values of 2',4'-BNA^NC oligonucleotides with dsDNA.

- d (GCTGCTAAAAAGAAAGAGAGATCGTCG) - 3 '

- d (CGACGATTTTTCTTTCTCTCTAGCAGC) - 5 '

oligonucleotides T_m (Δ T_m/modification) (°C)

b'- 11111 ^mC 11 じ l^mじ l^mじ卜; i' 43

⑥ 5'- i 1111 ^mCTXT^mCT^mCT^mCT-3' 49 (+6.0)

⑦ 5'- 1111 X^mCTXT^mCX^mCT^mCT-3' 61 (+6.0)

⑧ 5'- 11111 ^mCXXX^mCT^mCT^mCT-3' 54 (+3.6)

® 5'-XTXTX^mCXTX^mCX^mCX^mCT-3， >80 (>+5)

⑩ 5'-TX X^mCTXT^mCX^mCTX*T-3， 63 (+4.0)

⑪ 5'-XI 1 IX^mCTTX^mCT^mCX^mCT-3' 59 (+4.0)

b'-l 1 11 l^mUIYI^mCl^mUl^mCI-3' 55 (+12.0)

⑬ 5'- 1 i 11 Y^mCTYT^mCY^mCT^mCT-3' 73 (+10.0)

5'- 1 I I I 1 ^mCYYY^mCT^mCT^mCT-3， 71 (+9.3)

(21) 5'-YTYTY^mCYTY^mCY^mCY^mCT-3' >80 (>+5)

Conditions： 140 mM KCI, 10 mM MgCI₂, 7 mM Na₂HP0₄ buffer (pH 7.0), each strand 1.5 μΜ, 5°C to 90°C (0.5°C/min). X*:2',4'-BNA^NC(N-Me)-^mC

[0141] [表 5-3] 表 5— 3 · Sequence selective triplex-formation of 2' ,4'-BNA^NC oligonucleotides.

5 ' - d (TTTTT^mCTZT^mCT^mCT^raCT) - 3¹

- d (GCTAAAAAGAMAGAGAGATCG) - 3 '

- d (CGATTTTTCTNTCTCTCTAGC) - 5¹

r_m (Δ 7"_m T_m(_m|_Smat_Ch>― 7"_m<_ma'_ch) )(°C)

M N- AT G-C CG 丁- A natural-T 43 21 (-22) 25 (-18) 18 (-25)

⑥ X [2',4'-BNA^NC (N- e)] 50 24 (-26) 22 (-28) 14 (-36)

⑱ Y I2',4'-BNA^NC (N-H)] 55 30 (-25) 28 (-27) 25 (-30)

Condは ions: 140 mM KCI, 7 mM sodium phosphate buffer (pH 7,0)， each strand 1.5 μΜ, 5°C to 90°C

(0.5°C/i7iin). C: 2'-deox -5-methylcytidine.

[0142] 表 5に示すように、本発明のオリゴヌクレオチド類縁体（6)—（11)および（18)—（2 1 )には優れた三重鎖形成能が認められた。また配列選択性に関しても天然を上回つていることから、アンチ一ジーン法などにも極めて有用であると考えられる。

実験例 _{3 :}酵素耐性の測定

天然型（DNAオリゴヌクレオチド）及び非天然型の下記のオリゴヌクレオチドにつレヽて、オリゴヌクレオチドを 3 '側から分解するェキソヌクレアーゼに対する耐性を調べた

[0143] l) 10mM MgClを含む 50mM Tris— HC1バッファ一（ρΗ 8. 0) 400mL中に，

2

それぞれのオリゴヌクレオチド類と 3しェキソヌクレアーゼの蛇毒ホスホジエステラーゼ (Boehringer Mannheim)かそれぞれ 25mg/ mLと 0. 5mg/ mLになるよつにカ卩えて 37°Cに保つ。

[0144] 2)—定時間後、 HPLCで各オリゴヌクレオチド類の残存率を測定する。

[0145] 測定に用いたオリゴヌクレオチドの配列を以下に示す。

[0146] 5'-ΤΤΤΤΤΤΤΤΧΤ-3'

[0147] [化 8]

D-dlgo 2·,4'-ΒΝΑ

(このうち、 Xが DNAモノマーの場合、完全天然型 DNAオリゴヌクレオチドであり、他のヌクレオチド類縁体を含有するオリゴヌクレオチドは部分非天然型オリゴヌクレオチドである。また、 Xが 2'，4'_BNA^NC(N-Me)であるオリゴヌクレオチド類縁体が本発明のオリゴヌクレオチド類縁体である。 ) HPLCによる各オリゴヌクレオチド類の残存率の経時変化を表 6及び図 1に示した。

[0149] 表 6及び図 1中、「％ of intact oligonucleotidejとは、 0時点における未分解オリゴヌクレオチドに対する、測定時点における未分解オリゴヌクレオチドの残存率⁰ » (HPL

C定量)を示す。

[0150] [表 6]

MiHtM

. ¾ of intact oliopnudeotidc

o!>9 nucleotide ■'■ ■■■■■■■ . '"'■ '■■

Omin 5min 10min 20mtn 40min 90rnin -otigo 100 0 0 0 0 0

2，'4'·ΒΝΑ 100 37 4 S 1 0

■ S-oiigo 100 94 92 91 83 70

2^, _I4^,-BNA^NC 100 100 99 98 94 80

[0151] 表 6および図 1の結果から、本発明のオリゴヌクレオチド類縁体は、天然型及びその他の非天然型のオリゴヌクレオチドに比較して優れた酵素耐性を有していることがわかった。

Claims

請求の範囲 [1] 下記一般式 (I)で表される化合物及びその塩。

[化 1]

(式中、 Baseは、置換基を有していてもよい芳香族複素環基もしくは芳香族炭化水素環基を示す。

R、 Rは、同一又は異なって、水素原子、核酸合成の水酸基の保護基、アルキル

1 2

基、アルケニル基、シクロアルキル基、ァリーノレ基、ァラルキル基、アシノレ基、スルホニル基、シリル基、リン酸基、核酸合成の保護基で保護されたリン酸基、または、 _P ( R ) R [式中、 R及び Rは、同一または異なって、水酸基、核酸合成の保護基で保護

4 5 4 5

Rは、水素原子、アルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、ァリール基、ァラ

3

mは、 0— 2の整数、及び nは、 1一 3の整数である。 )

[2] Rが、水素原子、脂肪族アシノレ基、芳香族アシノレ基、脂肪族あるいは芳香族スルホ

1

ニル基、 1一 3個のァリール基で置換されたメチル基、低級アルキル、低級アルコキシ、ハロゲンもしくはシァノ基でァリール環が置換された 1一 3個のァリール基で置換されたメチル基、または、シリル基である、請求項 1に記載の化合物及びその塩。

[3] R力水素原子、ァセチル基、ベンゾィル基、メタンスルホニル基、 P-トルエンスルホ

1

ニル基、ベンジル基、 p—メトキシベンジル基、トリチノレ基、ジメトキシトリチル基、モノメトキシトリチル基、または、 tert-ブチルジフヱエルシリル基である、請求項 1に記載の化合物及びその塩。

[4] Rが、水素原子、脂肪族アシノレ基、芳香族アシノレ基、脂肪族あるいは芳香族スルホニル基、 1一 3個のァリール基で置換されたメチル基、低級アルキル、低級アルコキシ、ハロゲンもしくはシァノ基でァリール環が置換された 1一 3個のァリール基で置換されたメチル基、シリル基、ホスホロアミダイト基、ホスホニル基、リン酸基、または、核酸合成の保護基で保護されたリン酸基である、請求項 1一 3のいずれか 1項に記載の化合物及びその塩。

[5] R力水素原子、ァセチル基、ベンゾィル基、メタンスルホニル基、 P-トルエンスルホニル基、ベンジル基、 p—メトキシベンジル基、 tert—ブチルジフヱニルシリル基、 _P ( OC H CN) (N (i-Pr) )、 -P (OCH ) (N (i-Pr) )、ホスホニノレ基、または、 2_クロ口フエニルもしくは 4—クロロフヱ二ルリン酸基である、請求項 1一 3のいずれか 1項に記載の化合物及びその塩。

[6] R 、水素原子、フヱノキシァセチル基、炭素数 1一 5のアルキル基、炭素数 1一 5のアルケニル基、炭素数 6— 14のァリール基、 1一 3個のァリール基で置換されたメチル基、メタンスルホ二ル基ゃ P-トルエンスルホニル基などの低級脂肪族あるいは芳香族スルホニル基又はァセチル基などの炭素数 1一 5の脂肪族ァシル基やベンゾィル基などの芳香族ァシル基である請求項 1一 5のいずれか 1項に記載の化合物及びその塩。

[7] Rの機能性分子ユニット置換基が、蛍光あるいは化学発光標識分子、核酸切断活性官能基、又は細胞内若しくは核内移行シグナルペプチドである請求項 1一 6のいずれか 1項に記載の化合物及びその塩。

[8] Baseが、プリン一 9ーィル基、 2_ォキソ—ピリミジン一 1ーィル基、または下記ひ群から選択される置換基を有するプリン一 9ーィル基もしくは 2—ォキソ一ピリミジン一 1ーィル基である、請求項 1一 7のいずれか 1項に記載の化合物及びその塩。

ひ群:水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、炭素数 1一 5のアルコキシ基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、炭素数 1一 5のアルキルチオ基、アミノ基、核酸合成の保護基で保護されたァミノ基、炭素数 1一 5のアルキル基で置換されたァミノ基、炭素数 1一 5のアルキル基、および、ハロゲン原子。

Baseが、 6-ァミノプリン一 9ーィル（即ち、アデニニル）、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 6—ァミノプリン一 9一ィル、 2, 6—ジァミノプリン一 9一ィル、 2—ァミノ _6—クロロプリン一 9一ィル、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2_アミノー 6_クロロブリン _9_ィル、 2—ァミノ _6_フルォロプリン _9_ィル、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2—ァミノ— 6_フルォロプリン _9_ィル、 2—ァミノ— 6_ブロモプリン— 9—ィル、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2—ァミノ _6_ブロモプリン一 9一ィル、 2_ アミノー 6—ヒドロキシプリン一 9ーィル (即ち、グァニニル）、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2—ァミノ— 6—ヒドロキシプリン— 9—ィル、 6—ァミノ— 2—メトキシプリン— 9 —ィル、 6—ァミノ— 2_クロ口プリン _9_ィル、 6—ァミノ— 2_フルォロプリン _9_ィル、 2, 6—ジメトキシプリン _9_ィル、 2， 6—ジクロ口プリン _9_ィル、 6_メルカプトプリン _9_ ィル、 2—ォキソ—4—ァミノ— 1， 2—ジヒドロピリミジン—1—ィル（即ち、シトシニル）、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2—ォキソ一 4一アミノー 1, 2—ジヒドロピリミジン _1一ィル、 2_ォキソ _4—ァミノ一 5_フルォロ一1 , 2—ジヒドロピリミジン一 1_ィル、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2—ォキソ一 4一アミノー 5—フルオロー 1, 2—ジヒド口ピリミジン一 1-ィル、 4—ァミノ一 2—ォキソ一5—クロ口一 1 , 2—ジヒドロピリミジン一 1—ィル、 2_ォキソ _4ーメトキシ一 1 , 2—ジヒドロピリミジン一 1_ィル、 2_ォキソ _4_メルカプト —1, 2—ジヒドロピリミジン一 1_ィル、 2_ォキソ _4—ヒドロキシ一1 , 2—ジヒドロピリミジン — 1-ィル（即ち、ゥラシ二ル）、 2—ォキソ一4—ヒドロキシ一5—メチル一1 , 2—ジヒドロピリミジン一 1—ィル（即ち、チミ二ル）、 4—ァミノ— 5—メチルー 2—ォキソ—1 , 2—ジヒドロピリミジン一 1ーィル (即ち、 5—メチルシトシニル）、または、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 4—ァミノ— 5_メチル _2_ォキソ— 1 , 2—ジヒドロピリミジン _1—ィルである、請求項 1一 8のいずれか 1項に記載の化合物及びその塩。

mが 0であり、 nが 1である、請求項 1一 9のいずれ力、 1項に記載の化合物及びその塩下記一般式 (II)で表されるヌクレオシド類縁体の単位構造の 1種以上を 1または 2個以上含有する DNAオリゴヌクレオチド又は RNAオリゴヌクレオチド類縁体としてのオリゴヌクレオチド類縁体またはその薬理学上許容される塩。但し、オリゴヌクレオチド類縁体中の各ヌクレオシド間の結合形態は、天然核酸と同じリン酸ジエステル結合 [一 o

P (O―)〇-]以外にホスホロチォアート結合 [-OP (〇）（S— ) 0-]を 1又は 2個以上含

2

有していてもよぐまた、前記の構造の 1種以上を 2個以上含有する場合は、当該構造間で Baseは同一または異なることができる。

[化 2]

3

ルキル基、アシノレ基、スルホニル基、シリル基、及び機能性分子ユニット置換基を示す。

mは、 0 2の整数、及び nは、 1一 3の整数である。

[12] Rが、水素原子、脂肪族アシノレ基、芳香族アシノレ基、脂肪族あるいは芳香族スルホ

1

ニル基、 1一 3個のァリール基で置換されたメチル基、低級アルキル、低級アルコキシ、ハロゲンもしくはシァノ基でァリール環が置換された 1一 3個のァリール基で置換されたメチル基、または、シリル基である、請求項 11に記載のオリゴヌクレオチド類縁体またはその薬理学上許容される塩。

[13] R 、水素原子、ァセチル基、ベンゾィル基、メタンスルホニル基、 p-トルエンスルホ

1

ニル基、ベンジル基、 p—メトキシベンジル基、トリチノレ基、ジメトキシトリチル基、モノメトキシトリチル基、または、 tert-ブチルジフヱエルシリル基である、請求項 11に記載のオリゴヌクレオチド類縁体またはその薬理学上許容される塩。

[14] Rが、水素原子、脂肪族アシノレ基、芳香族アシノレ基、脂肪族あるいは芳香族スルホ

2

ニル基、 1一 3個のァリール基で置換されたメチル基、低級アルキル、低級アルコキシ、ハロゲンもしくはシァノ基でァリール環が置換された 1一 3個のァリール基で置換されたメチル基、シリル基、ホスホロアミダイト基、ホスホニル基、リン酸基、または、核酸合成の保護基で保護されたリン酸基である、請求項 11一 13のいずれ力 1項に記載のオリゴヌクレオチド類縁体またはその薬理学上許容される塩。

[15] R力水素原子、ァセチル基、ベンゾィル基、ベンジル基、 p—メトキシベンジル基、メタンスルホニル基、 p-トルエンスルホニル基、 tert—ブチルジフヱニルシリル基、 _P (〇 C H CN) (N (i-Pr) )、 _P (〇CH ) (N (i-Pr) )、ホスホニノレ基、または、 2_クロ口フエニルもしくは 4—クロロフヱニルリン酸基である、請求項 11一 13のいずれ力、 1項に記載のオリゴヌクレオチド類縁体またはその薬理学上許容される塩。

[16] R力水素原子、フヱノキシァセチル基、炭素数 1一 5のアルキル基、炭素数 1一 5のアルケニル基、炭素数 6— 14のァリール基、 1一 3個のァリール基で置換されたメチル基、メタンスルホ二ル基ゃ P-トルエンスルホニル基などの低級脂肪族あるいは芳香族スルホニル基又はァセチル基などの炭素数 1一 5の脂肪族ァシル基やベンゾィル基などの芳香族ァシル基である、請求項 11一 15のいずれか 1項に記載のオリゴヌクレオチド類縁体またはその薬理学上許容される塩。

[17] R の機能性分子ユニット置換基が、蛍光あるいは化学発光標識分子、核酸切断活性官能基、又は細胞内若しくは核内移行シグナルペプチドである請求項 11一 16のいずれ力 1項に記載のオリゴヌクレオチド類縁体またはその薬理学上許容される塩。

[18] Baseが、プリン一 9ーィル基、 2_ォキソ—ピリミジン一 1ーィル基、または下記 α群から選択される置換基を有するプリン一 9一ィル基もしくは 2—ォキソ一ピリミジン一 1ーィル基である、請求項 11一 17のいずれか 1項に記載のオリゴヌクレオチド類縁体またはその薬理学上許容される塩。

[19] Baseが、 6—ァミノプリン— 9—ィル (即ち、アデニニル）、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 6—ァミノプリン _9_ィル、 2, 6—ジァミノプリン _9_ィル、 2—ァミノ— 6—クロロプリン一 9一ィル、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2—アミノー 6—クロロブリン一 9一ィル、 2_アミノー 6_フルォロプリン一 9_ィル、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2_アミノー 6_フルォロプリン— 9一ィル、 2_アミノー 6_ブロモプリン一 9—ィル、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2—ァミノ _6_ブロモプリン一 9一ィル、 2_ アミノー 6—ヒドロキシプリン一 9ーィル (即ち、グァニニル）、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2—ァミノ— 6—ヒドロキシプリン— 9—ィル、 6—ァミノ— 2—メトキシプリン— 9 —ィル、 6—ァミノ— 2_クロ口プリン _9_ィル、 6—ァミノ— 2_フルォロプリン _9_ィル、 2, 6—ジメトキシプリン _9_ィル、 2， 6—ジクロ口プリン _9_ィル、 6_メルカプトプリン _9_ ィル、 2—ォキソ—4—ァミノ— 1， 2—ジヒドロピリミジン—1—ィル（即ち、シトシニル）、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2—ォキソ一 4_アミノー 1， 2—ジヒドロピリミジン _1_ィル、 2_ォキソ _4—ァミノ一 5_フルォロ _1， 2—ジヒドロピリミジン一 1_ィル、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 2—ォキソ一 4—アミノー 5—フルオロー 1， 2_ジヒド口ピリミジン一 1-ィル、 4—ァミノ一 2—ォキソ一5—クロ口一 1 , 2—ジヒドロピリミジン一 1—ィル、 2_ォキソ _4ーメトキシ一 1 , 2—ジヒドロピリミジン一 1_ィル、 2_ォキソ _4_メルカプト —1, 2—ジヒドロピリミジン一 1_ィル、 2_ォキソ _4—ヒドロキシ一1 , 2—ジヒドロピリミジン — 1-ィル（即ち、ゥラシ二ル）、 2—ォキソ一4—ヒドロキシ一5—メチル一1 , 2—ジヒドロピリミジン一 1—ィル（即ち、チミ二ル）、 4—ァミノ— 5—メチルー 2—ォキソ—1 , 2—ジヒドロピリミジン一 1ーィル (即ち、 5—メチルシトシニル）、または、ァミノ基が核酸合成の保護基で保護された 4—ァミノ— 5—メチルー 2—ォキソ—1 , 2—ジヒドロピリミジン一 1ーィルである、請求項 11一 18のいずれか 1項に記載のオリゴヌクレオチド類縁体またはその薬理学上許容される塩。

mが 0であり、 nが 1である、請求項 11一 19のいずれ力、 1項に記載のオリゴヌクレオチド類縁体またはその薬理学上許容される塩。