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TWI671081B - 用以提升轉谷氨醯胺酶１基因、角蛋白基因、水通道蛋白３基因、聚角蛋白微絲基因、葡萄糖腦苷酯酶基因、及玻尿酸合成酶基因表現之含有植物萃取物之組成物的用途 - Google Patents

用以提升轉谷氨醯胺酶１基因、角蛋白基因、水通道蛋白３基因、聚角蛋白微絲基因、葡萄糖腦苷酯酶基因、及玻尿酸合成酶基因表現之含有植物萃取物之組成物的用途 Download PDF

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TWI671081B TW107111685A TW107111685A TWI671081B TW I671081 B TWI671081 B TW I671081B TW 107111685 A TW107111685 A TW 107111685A TW 107111685 A TW107111685 A TW 107111685A TW I671081 B TWI671081 B TW I671081B
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Yung Hsiang Lin
陳怡卉
I Hui Chen
甘愷雯
Kai Wen Kan
劉復誠
Fu Chen Liu
陳巧婷
Ciao Ting Chen
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大江生醫股份有限公司
Tci Co., Ltd
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Abstract

本發明提供一種用以提升轉谷氨醯胺酶1基因、角蛋白基因、水通道蛋白3基因、聚角蛋白微絲基因、葡萄糖腦苷酯酶基因、及玻尿酸合成酶基因表現之含有植物萃取物之組成物的用途，相較於單一成分的萃取物，本發明之萃取物組合能夠有效提升皮膚保濕基因表現的作用。構成所述組成物之萃取物或組分可包括：菠菜、藍莓、普洱茶、或四季春茶的萃取物。

Description

用以提升轉谷氨醯胺酶1基因、角蛋白基因、水通道蛋白3基因、聚角蛋白微絲基因、葡萄糖腦苷酯酶基因、及玻尿酸合成酶基因表現之含有植物萃取物之組成物的用途
本發明係關於一種含有植物萃取物之組成物，尤其是關於一種用以提升轉谷氨醯胺酶1基因、角蛋白基因、水通道蛋白3基因、聚角蛋白微絲基因、葡萄糖腦苷酯酶基因、及玻尿酸合成酶基因表現之含有植物萃取物之組成物的用途。
表皮層為皮膚的最外層，由外往內依序為角質層、顆粒層、有棘層及基底層，表皮層主要由基底層中未分化之圓柱型角質細胞持續向上進行分化形成，此過程稱為角質化。角質細胞內含水量高，隨著細胞向上代謝分化，角質細胞形狀會逐漸變成扁平狀，且細胞核及胞器開始退化萎縮，並在角質層形成不具細胞核與胞器之死細胞。表皮層的主要功能為使皮膚保水，並形成皮膚屏障以抵禦各種外來傷害，其中表皮層最外層由一弱酸性的皮脂膜以及如磚牆結構的角質層所構成，此屏障能鎖住皮膚的水分和油脂、抵抗皮膚表面病菌入侵，及對抗外界異物及紫外光等傷害，對人體有非常重要的保護作用。
表皮層中的角質層，其角質細胞雖然為死細胞，但其主要成分為角蛋白(keratin)，角蛋白能吸收水分使皮膚保持濕潤，角質細胞也會分泌如玻尿酸等物質作為細胞間質，以維持表皮層皮膚屏障之結構完整，以防止皮膚水分散失及形成完整防護。當皮膚接觸過冷或過熱之環境以及照射紫外光等刺激，會導致角質細胞無法維持正常的代謝循環，並使得皮膚表皮層屏障受損，而讓皮膚變得粗糙、乾燥脫屑、脆弱易受刺激、敏感泛紅且會使皮膚保水能力下降，因此角質層的健康對於皮膚保濕以及抵禦外來傷害著實非常重要。
綜合上面所述，為了改善因角質細胞受損導致皮膚變得脆弱、易敏，以及皮膚保水能力下降的問題，開發一種能有效維持角質細胞排列、維持角質層結構完整以及使角質細胞分泌更多保濕因子，以提升皮膚屏障以及保濕功能之組成物，著實有其必要性。
然而，目前於該用途之成分或藥物有限，若為某種植物萃取物，其必須施予相當高的劑量，在使用成本上以及效果上有其侷限，因此，若能施予多種萃取物的少量組分，即可產生單一成分之高劑量效果時，對於前述功效之運用，不但可大幅提升，也同時降低了使用成本。
緣此，本發明之一目的在提供一種植物萃取物用於製備提升轉谷氨醯胺酶1(Transglutaminase 1,TGM1)基因、角蛋白(Keratin,KRT)基因、水通道蛋白3(Aquaporin 3,AQP3)基因、聚角蛋白微絲(Filaggrin,FLG)基因、葡萄糖腦苷酯酶(Glucocerebrosidase,GBA)基因、及玻尿酸合成酶(Hyaluronan synthase,HAS)基因表現之組成物的用途，其中該植物萃取物選自於由普洱茶萃取物與藍莓萃取物、普洱茶萃取物與菠菜萃取物、四季春茶萃取物與藍莓萃取物、及四季春茶萃取物與菠菜萃取物所組成群組中至少任一組合所組成。
在本發明之一實施例中，其中該角蛋白基因包含角蛋白1(Keratin1,KRT1)基因、角蛋白10(Keratin10,KRT10)基因及角蛋白14(Keratin14,KRT14)基因；該玻尿酸合成酶基因包含玻尿酸合成酶2(Hyaluronan synthase 2,HAS2)基因及玻尿酸合成酶3(Hyaluronan synthase 3,HAS3)基因。
在本發明之一實施例中，該植物萃取物係由至少0.125mg/mL之普洱茶萃取物及至少0.125mg/mL之菠菜萃取物、至少0.125mg/mL之四季春茶萃取物及至少0.125mg/mL之菠菜萃取物、至少0.25mg/mL之普洱茶萃取物及至少0.25mg/mL之藍莓萃取物、或至少0.25mg/mL之普洱茶萃取物及至少0.25mg/mL之四季春茶萃取物所組成。
在本發明之一實施例中，該組成物具有促進皮膚保濕之功效。
在本發明之一實施例中，該組成物進一步包含一醫藥上可接受的載劑，且該組成物為粉末、顆粒、液體、膠狀或膏狀之劑型，又該組成物被製備成醫藥品或食品產品的形式。
以下將配合圖式進一步說明本發明的實施方式，下述所列舉的實施例係用以闡明本發明，並非用以限定本發明之範圍，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可做些許更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
圖1係為本發明之各植物萃取組成物的保濕分數。
實施例1 植物萃取物之製備 實施例1-1 本發明四季春茶萃取物的製備方法
四季春茶(Four Seasons Spring tea)萃取物之製備方法如下：首先，將四季春茶茶葉(leaves of Four Seasons Spring tea plant)洗淨並進行乾燥， 再以粉碎機將四季春茶茶葉進行粗碎，接著以水為溶劑對四季春茶茶葉之粗碎物進行萃取，該溶劑與四季春茶茶葉粗碎物以液固比5~20：1~5均勻混合，萃取溫度為50℃~100℃，較佳為75℃~95℃，萃取時間約為0.5~3小時，得到四季春茶之粗萃取物，將該粗萃取物冷卻至室溫後，經由400目之濾網過濾以移除殘餘固體物，再進一步於45℃~70℃進行減壓濃縮而獲得一濃縮產物，即為本發明之四季春茶萃取物。
實施例1-2 本發明菠菜萃取物的製備方法
菠菜萃取物係對菠菜(Spinacia oleracea)進行萃取而獲得，本實施例中使用之菠菜萃取物可購自弘祥農產加工廠。
實施例1-3 本發明藍莓萃取物的製備方法
藍莓萃取物係對北美藍莓(Vaccinium Cyanococcus)果實進行萃取而獲得，本實施例中使用之藍莓萃取物可購自元弘草本科研有限公司。
實施例1-4 本發明普洱茶萃取物的製備方法
普洱茶(Puerh tea)萃取物係對普洱茶茶葉(post-fermented leaves of Camellia sinensis)進行萃取而獲得，本實施例中使用之普洱茶萃取物可購自南京澤朗生物科技有限公司。
實施例2 本發明植物萃取組成物提升TGM1、KRT1、KRT10、KRT14、APQ3及FLG基因表現之效果
本發明以人類初代皮膚角質細胞(human primary epidermal keratinocytes,HPEK)進行TGM1、KRT1、KRT10、KRT14、APQ3及FLG之基因分析。該人類初級皮膚角質細胞購自CELLnTEC公司(瑞士)編號HPEK-50，將該細胞培養於無血清之角質細胞培養液(keratinocyte-SFM)(Gibco公司，編號為#10724-011，美國)。
首先，將1.5×105個人類初代皮膚角質細胞種植於含2mL之上述培養液之6孔培養盤中，將人類初代角質細胞分成十組各別加入：(1)0.125mg/mL之普洱茶萃取物、(2)0.125mg/mL之菠菜萃取物、(3)0.125mg/mL之四季春茶萃取物、(4)0.125mg/mL之以1：1比例混合的普洱茶萃取物與菠菜萃取物之組成物、(5)0.125mg/mL之以1：1比例混合的四季春茶萃取物與菠菜萃取物之組成物、(6)0.25mg/mL之普洱茶萃取物、(7)0.25mg/mL之藍莓萃取物、(8)0.25mg/mL之四季春茶萃取物、(9)0.25mg/mL之以1：1比例混合的普洱茶萃取物與藍莓萃取物之組成物、(10)0.25mg/mL之以1：1比例混合的四季春茶萃取物與藍莓萃取物之組成物，並以沒有加入任何萃取物之組別為空白控制組。加入植物萃取物後置於37℃培養箱，使角質細胞形成受植物萃取物刺激後之角質細胞，於第6小時與24小時更換培養液，培養液為角質細胞培養液及植物萃取液。接著，將角質細胞加入裂解液(lysis buffer)收集成管後，使用RNA萃取試劑套組(購自Geneaid公司，台灣，Lot No.FC24015-G)分別收集兩組角質細胞內之RNA，接著利用SuperScript® III反轉錄酶(購自Invitrogene公司，美國，編號18080-051)以2000ng之萃取RNA為模板並以引子產生mRNA反轉錄之相應cDNA產物，接著利用ABI StepOnePlusTM Real-Time PCR system(Thermo Fisher Scientific公司，美國)以及KAPA SYBR® FAST qPCR Kits(購自Sigma公司，美國，編號38220000000)將六組反轉錄後產物分別以表1之組合引子進行定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應(quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction)試驗，定量TGM1基因、KRT1基因、KRT10基因、KRT14基因、APQ3基因、FLG基因、GBA基因、HAS2基因及HAS3基因之mRNA表現量，條件為95℃反應1秒，60℃反應20秒，總共40個迴圈，其中定量數值係取由閾值循環數(Ct)，而目標基因的mRNA相對量係推導自方程式2- △ Ct，其中△Ct=Ct目標基因-CtACTB(β-肌動蛋白，beta-actin)，接著以SCORE法來定量該十組中個別基因表現量的分數，再將各基因的表現分數加總作為該組之保濕分數，其中SCORE 法是利用ACTB基因及基準基因(空白控制組中相應之個別基因)的循環閾值來計算。
本發明之各植物萃取組成物的保濕分數如表2及圖1所示，保濕分數越高代表保濕能力越高。先前研究指出轉谷氨醯胺酶(Transglutaminase1,TGM)會使角質化細胞之細胞膜與結構蛋白間形成強力鍵結，並能增加表皮層的強度與穩定性；角蛋白(Keratin,KRT)會形成角蛋白微絲，而聚角蛋白微絲 (Filaggrin,FLG)會幫助角蛋白微絲組裝成堅固的網絡，為皮膚提供強度和彈性；水通道蛋白(Aquaporin,AQP)則會增加角質細胞內水的通透性，以提高角質細胞的含水量；玻尿酸合成酶(Hyaluronan synthase,HAS)會促進角質細胞分泌玻尿酸的能力，並使皮膚角質層結構完整且提升皮膚屏障功能，能使皮膚保水力提升；而葡萄糖腦苷酯酶(Glucocerebrosidase,GBA)則與維持角質結構完整有關。單獨以0.125mg/mL普洱茶萃取物、四季春茶萃取物、及菠菜萃取物處理角質細胞所獲得之保濕分數分別為2.16、4.2、及2.04；然而以0.125mg/mL之1：1比例混合的普洱茶萃取物與菠菜萃取物之組成物、及四季春茶萃取物與菠菜萃取物之組成物則分別為7.2及10.2；而單獨以0.25mg/mL普洱茶萃取物、四季春茶萃取物、及藍莓萃取物處理角質細胞所獲得之保濕分數分別為3.5、3.8、及4.7；然以0.25mg/mL之1：1比例混合的普洱茶萃取物與藍莓萃取物之組成物、及四季春茶萃取物與藍莓萃取物之組成物則分別為7.4及6.6，由以上結果可知普洱茶萃取物與藍莓萃取物之組成物、普洱茶萃取物與菠菜萃取物之組成物、四季春茶萃取物與藍莓萃取物之組成物、及四季春茶萃取物與菠菜萃取物之組成物對於提升皮膚保濕基因表現之效果相當顯著，皆較單獨普洱茶萃取物、四季春茶萃取物、菠菜萃取物及藍莓萃取物更為有效地提升TGM1、KRT1、KRT10、KRT14、APQ3及FLG基因之表現，並能更有效的維持皮膚角質細胞排列，使皮膚角質層結構完整，亦能有效地提升皮膚屏障功能亦以及使皮膚形成更多保濕因子。
綜上所述，本發明之普洱茶萃取物與藍莓萃取物之組成物、普洱茶萃取物與菠菜萃取物之組成物、四季春茶萃取物與藍莓萃取物之組成物、或四季春茶萃取物與菠菜萃取物之組成物能夠產生超乎預期的相乘效果，使皮膚保濕基因之表現較單純普洱茶萃取物或四季春茶萃取物顯著增加，並能更有效地維持皮膚角質細胞排列，使皮膚角質層結構完整，並提升皮膚屏障功能以及使皮膚形成更多保濕因子。
因此，本發明之用以提升轉谷氨醯胺酶1基因、角蛋白基因、水通道蛋白3基因、聚角蛋白微絲基因、葡萄糖腦苷酯酶基因、及玻尿酸合成酶基因表現之含有植物萃取物之組成物的用途，亦可進一步添加於食品、保健食品、膳食補充品或飲品中，且也可將將本發明之植物萃取物之組成物用以製備醫藥組成物，該醫藥組成物亦可進一步加入所屬技術領域所熟知之載劑或其他輔劑，該醫藥組成物之劑型，可為但不限於溶液、膠囊、或錠劑。
<110> 大江生醫股份有限公司
<120> 用以提升轉谷氨醯胺酶1基因、角蛋白基因、水通道蛋白3基因、聚角蛋白微絲基因、葡萄糖腦苷酯酶基因、及玻尿酸合成酶基因表現之含有植物萃取物之組成物的用途
<130> 107B0131-I1
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Claims (11)

  1. 一種植物萃取物用於製備提升轉谷氨醯胺酶1(Transglutaminase 1,TGM1)基因、角蛋白(Keratin,KRT)基因、水通道蛋白3(Aquaporin 3,AQP3)基因、聚角蛋白微絲(Filaggrin,FLG)基因、葡萄糖腦苷酯酶(Glucocerebrosidase,GBA)基因、及玻尿酸合成酶(Hyaluronan synthase,HAS)基因表現之組成物的用途，其中該植物萃取物選自於由普洱茶萃取物與藍莓萃取物、普洱茶萃取物與菠菜萃取物、四季春茶萃取物與藍莓萃取物、及四季春茶萃取物與菠菜萃取物所組成群組中至少任一組合所組成。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該角蛋白(KRT)基因係包含角蛋白1(Keratin1,KRT1)基因、角蛋白10(Keratin10,KRT10)基因及角蛋白14(Keratin14,KRT14)基因。
  3. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該玻尿酸合成酶(HAS)基因包含玻尿酸合成酶2(Hyaluronan synthase 2,HAS2)基因及玻尿酸合成酶3(Hyaluronan synthase 3,HAS3)基因。
  4. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該植物萃取物係由至少0.125mg/mL之普洱茶萃取物及至少0.125mg/mL之菠菜萃取物所組成。
  5. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該植物萃取物係由至少0.125mg/mL之四季春茶萃取物及至少0.125mg/mL之菠菜萃取物所組成。
  6. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該植物萃取物係由至少0.25mg/mL之普洱茶萃取物及至少0.25mg/mL之藍莓萃取物所組成。
  7. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該植物萃取物係由至少0.25mg/mL之普洱茶萃取物及至少0.25mg/mL之四季春茶萃取物所組成。
  8. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該組成物具有促進皮膚保濕之功效。
  9. 如申請專利範圍第1項所述的用途，其中該組成物進一步包含一醫藥上可接受的載劑。
  10. 如申請專利範圍第1項所述的用途，其中該組成物為粉末、顆粒、液體、膠狀或膏狀之劑型。
  11. 如申請專利範圍第1項所述的用途，其中該組成物被製備成醫藥品的形式。
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