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TW201201839A - Anti-human Respiratory Syncytial Virus (RSV) antibodies and methods of use - Google Patents

Anti-human Respiratory Syncytial Virus (RSV) antibodies and methods of use Download PDF

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TW201201839A
TW201201839A TW100124177A TW100124177A TW201201839A TW 201201839 A TW201201839 A TW 201201839A TW 100124177 A TW100124177 A TW 100124177A TW 100124177 A TW100124177 A TW 100124177A TW 201201839 A TW201201839 A TW 201201839A
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TW
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amino acid
seq
antibody
acid sequence
antigen
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TW100124177A
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TWI539963B (zh
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Robert Anthony Williamson
Jehangir Wadia
Gabriel Pascual
Elissa Keogh
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Calmune Corp
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Description

201201839 六、發明說明： 【相關申請案】 主張 Robert Anthony Williamson、Jehangir Wadia、 Gabriel Pascual、Elissa Keogh 於 2010 年 7 月 9 日申請的名 稱為「ANTIBODIES AGAINST HUMAN RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS (RSV) AND METHODS OF USE」之美 國臨時申請案第 61/399,310 號及 Robert Anthony Williamson、Jehangir Wadia、Gabriel Pascual 及 Elissa Keogh 於 2010年 11月 5日申請的名稱為「ANTI-HUMAN RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS (RSV) ANTIBODIES AND METHODS OF USE」之美國臨時申請案第61/456,454 號的優先權。以上提及之申請案中每一者之標的物均以全 文引用的方式併入本文中。 本申請案與2010年8月13曰申請、以US-2011-0076268 A1 公開且名稱為「ANTIBODIES AGAINST HUMAN RESPIRATORY SYNCTIAL VIRUS (RSV) AND METHODS OFUSE」之美國申請案第 12/806,498 號及2010年8月13 曰申請、以國際PCT申請案第WO 2011/020079號公開且名 稱為「ANTIBODIES AGAINST HUMAN RESPIRATORY SYNCTIAL VIRUS (RSV) AND METHODS OF USE」之國際 申請案第PCT/US10/045549號有關，這兩篇專利皆主張 2009年8月13日申請且名稱為「ANTIBODIES AGAINST HUMAN RESPIRATORY SYNCTIAL VIRUS (RSV) AND METHODS OF USE」之美國臨時申請案第61/274,395號之 201201839 優先權。 以上提及之申請案中每一去夕辦# & τ母有之橾的物均以全文引用的 方式併入本文中。 【發明所屬之技術領域】 提供免疫特異性結合於呼吸道融合性病毒（Respirat〇ry SyncytW Virus ’ RSV)之ρ蛋白及/或Rsv及/或中和_ 的抗體及其抗原結合片段。亦提供使用抗Rsv抗體及其抗 原結合片段之診斷及治療方法，該等治療方法包括投予所 提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段以預防或治療RSV感 染及/或改善RSV感染之一或多種症狀，諸如嬰兒感染及與 器S移植相關之感染。複數種本文所提供之不同抗RS V抗 體及其k原結合片段的組合及/或其與其他抗RSV抗體及其 抗原結合片段的組合可用於組合療法。亦提供含有抗RSV 抗體及其抗原結合片段之混合物的組成物。 【先前技術】 呼吸道融合性病毒（RSV)為嬰兒及幼兒重度呼吸道疾 病之首要原因且為嬰兒細支氣管炎之主要原因（Weiiiver (2003)7/^^^143:3112^ 全世界估計有 64,〇〇〇,000 例呼 吸道疾病及160,000例死亡可歸因於rsv誘發性疾病。僅 在美國’數以萬計的嬰兒由於感染副黏液病毒，諸如RSV 及副流行性感冒病毒（parainfluenza virus，PIV )( Shay等 人（1999) 282:1440-1446 )而住院。重度 RSV 感染最 常發生在兒童及嬰兒身上’尤其是早產兒。諸如慢性肺病 或先天性心臟病之潛在健康問題可能會顯著增加重病風 201201839 險。RSV感染亦會引起老年人、慢性肺病個體及免疫功能 不全成人（諸如骨髓移植接受者）患重病。 已研究出若干種預防及治療Rsv感染之方法，包括疫 苗開發、抗病毒化合物（病毒唑（ribavidn))、反物、 跳干擾技術及抗體產物（諸如免疫球蛋白或靜脈内單株 抗體）。自供者分離之靜脈内免疫球蛋白（rsv_igiv ;
RespiGam® )、及單株抗體帕利珠單抗（paHviz⑽a ) (SYNAGIS™)已獲准用於高風險兒童之Rsv防治。然而， 用於RSV之疫苗或市售治療劑仍不可使用。僅病毒唑獲准 用於治療RS V感染。為有效治療RS v感染，諸如rsv ig 及帕利珠單抗之抗體產物由於低特異性而需要高劑量、頻 繁投藥及/或體積。此外，諸如靜脈内免疫球蛋白之產物之 使用視供者可用性而定。因此，需要用於預防或治療Rsv 感染之其他藥劑。 【發明内容】 本文提供用於防治及治療呼吸道融合性病毒（RSV )感 染及RSV介導性疾病或病狀之分離之多肽' 抗體或其抗原 結合片段。本文亦提供用於診斷及/或監測RSV感染之分離 之多肽、抗體或其抗原結合片段。本文提供免疫特異性結 合於RSV及中和rsv之分離之多肽、抗體或其抗原結合片 段。在一些實例中’當本文所提供之多肽含於抗體或抗原 結合片段中時，本文所提供之多肽免疫特異性結合於RSV 及中和RSV。本文亦提供含有本文所提供之多肽的抗體及 抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段免疫特異性結 201201839 合於RSV及中和RSV。本文所提供之多肽、抗體及抗原結 合片段可特異性結合於F蛋白以及中和RSV。本文提供可 中和RSV A及B亞型之分離之多肽、抗體或其抗原結合片 段。本文提供免疫特異性結合RSV之F蛋白的分離之多肽、 抗體或其抗原結合片段。 本文提供含有以下之抗體或其抗原結合片段：vh CDR1，其具有 SEQ ID NO: 405、411、417、423、429、 437-441、458、464、470或482-484所示之胺基酸殘基序 列或與 SEQ NO: 405、411、417、423、429、437-441、 45 8、464、470 或 482-484 具有至少 80%、90%、91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高或至少約 80% ' 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98% ' 99%或更高的序列一致性之胺基酸序列；VH CDR2 ’其具有 SEQ ID NO： 406、412、418、424、430 ' 459、465 或 471 所示之胺基酸殘基序列或與SEQ ID NO: 406、412、418、 424、 430、459、465 或 471 具有至少 80%、90%、91%、92%、 93% ' 94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高或至少約 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、 99%或更高的序列一致性之胺基酸序列；Vh CDR3，其具有 SEQ ID NO: 407、413、419、425、431、460、466 或 472 所示之胺基酸殘基序列或與SEQ ID NO: 407、413、419、 425、 431、460、466 或 472 具有至少 80%、90%、91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高或至少約 80%、90%、91%、92%、93%' 94%、95%、96%、97%、98%、 201201839 99%或更高的序列一致性之胺基酸序列；VL CDRl，其具有 SEQ ID NO: 408、414、420、426、432、461、467 或 473 所示之胺基酸殘基序列或與SEQ ID NO: 408、414、420、 426、 432、46卜 467 或 473 具有至少 80°/。、90%、91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高或至少約 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、 99%或更高的序列一致性之胺基酸序列；Vl CDR2，其具有 SEQ ID NO: 409、415、421、427、433、462、468 或 474 所示之胺基酸殘基序列或與SEQ ID NO: 409、415、421、 427、 433、462、468 或 474 具有至少 80%、90%、91 %、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高或至少約 80%、90%、91%、92% ' 93%、94%、95%、96%、97%、98%、 99°/。或更高的序列一致性之胺基酸序列；及VL CDR3，其具 有 SEQ ID NO: 410、416、422、428、434、463、469 或 475 所示之胺基酸殘基序列或與SEQ ID NO: 410、416、422、 428、 434、463、469 或 475 具有至少 80%、90%、91 %、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高或至少約 80%、90%、91%、92%、93%、94% ' 95% ' 96% ' 97% ' 98% ' 99%或更高的序列一致性之胺基酸序列，其中該抗體或抗原 結合片段免疫特異性結合於呼吸道融合性病毒（RSV )融合 (F)蛋白及/或中和RSV。
詳言之，本文提供一種含有SEQ ID NO:405所示之 VHCDR1、SEQ ID NO:406 所示之 VHCDR2、SEQ ID NO:407 所示之 VHCDR3、SEQ ID NO:408 所示之 VlCDR1、SEQ ID 201201839 NO:409 所示之 VlCDR2 及 SEQ ID NO:410 所示之 VlCDR3 之抗體，或含有與SEQ ID NO: 405-410中之任一者具有至 少 80%、90%、91%、92%、93%、94% ' 95% ' 96% ' 97% ' 98%、99%或更高或約 80% ' 90%、91% ' 92%、93% ' 94%、 95%、96%、97%、98% ' 99%或更高的序列一致性之CDR 的抗體。 本文亦提供一種含有 SEQ ID NO:464 所示之 VHCDR1、SEQ ID NO:465 所示之 VHCDR2、SEQ ID NO:466 所示之 VHCDR3、SEQ ID NO:467 所示之 VLCDR1、SEQ ID NO:468 所示之 VlCDR2 及 SEQ ID NO:469 所示之 VlCDR3 之抗體，或含有與SEQ ID NO: 464-469中之任一者具有至 少 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、 98%、99%或更高或約 80%、90%、91%、92%、93%、94%、 95%、96%、97%、98% ' 99%或更高的序列一致性之CDR 的抗體。 本文亦提供一種含有SEQ IDNO:411所示之VhCDIU、 SEQ ID NO:412 所示之 VhCDR2、SEQ ID NO:413 所示之 VHCDR3、SEQ ID NO:414 所示之 VLCDR1、SEQ ID NO:415 所示之VLCDR2及SEQ ID NO:416所示之VLCDR3之抗體， 或含有與SEQ ID NO: 411-416中之任一者具有至少80%、 90% ' 91% ' 92%、93% ' 94% ' 95% ' 96%、97%、98%、99% 或更高或約 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、 97% ' 98%、99%或更高的序列一致性之CDR的抗體。 本文亦提供一種含有 SEQ ID NO:417所示之 201201839 VHCDR1、SEQ ID NO:418 所示之 VhCDR2、SEQ ID NO:419 所示之 VHCDR3、SEQ ID NO:420 所示之 VlCDRI、SEQ ID NO:421 所示之 VlCDR2 及 SEQ ID NO:422 所示之 VlCDR3 之抗體，或含有與SEQ ID NO: 417-422中之任一者具有至 少 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、 98%、99%或更高或約 80%、90%、91%、92%、93%、94%、 95%、96%、97%、98%、99%或更高的序列一致性之CDR 的抗體。 本文亦提供一種含有 SEQ ID ΝΟ··423所示之 VHCDR1、SEQ ID ΝΟ:424 所示之 VHCDR2、SEQ ID ΝΟ:425 所示之 VHCDR3、SEQ ID NO:426 所示之 VLCDR1、SEQ ID NO:427 所示之 VlCDR2 及 SEQ ID NO:428 所示之 VlCDR3 之抗體，或含有與SEQ ID NO: 423-428中之任一者具有至 少 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、 98%、99%或更高或約 80%、90%、91%、92% ' 93%、94%、 95%、96%、97%、98%、99%或更高的序列一致性之CDR 的抗體。 本文亦提供一種含有 SEQ ID NO:429所示之 VHCDR1、SEQ ID NO:430 所示之 VHCDR2、SEQ ID NO:431 所示之 VHCDR3、SEQ ID NO:432 所示之 VLCDR1、SEQ ID NO:433 所示之 VlCDR2 及 SEQ ID NO:434 所示之 VlCDR3 之抗體，或含有與SEQ ID NO: 429-434中之任一者具有至 少 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、 98%、99%或更高或約 80%、90%、91%、92%、93%、94%、 201201839 95%、96%、97%、98%、99%或更高的序列一致性之CDR 的抗體。 本文亦提供一種含有 SEQ ID NO:458 所示之 VHCDR1、SEQ ID NO:459 所示之 VHCDR2、SEQ ID NO:460 所示之 VHCDR3、SEQ ID NO:461 所示之 VlCDRI、SEQ ID NO:462 所示之 VlCDR2 及 SEQ ID NO:463 所示之 VlCDR3 之抗體，或含有與SEQ ID NO: 458-463中之任一者具有至 少 80%、90%、91%、92%、93% ' 94%、95%、96%、97%、 98%、99%或更高或約 80%、90%、91%、92%、93%、94%、 95%、96%、97%、98%、99%或更高的序列一致性之CDR 的抗體。 本文亦提供一種含有SEQ ID NO:470所示之 VHCDR1、SEQ ID NO:471 所示之 VHCDR2、SEQ ID NO:472 所示之 VHCDR3、SEQ ID NO:473 所示之 VlCDRI、SEQ ID NO:474 所示之 VlCDR2 及 SEQ ID NO:475 所示之 VlCDR3 之抗體，或含有與SEQ ID NO: 470-475中之任一者具有至 少 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、 98%、99%或更高或約 80%、90%、91°/〇、92%、93%、94°/〇、 95%、96%、97%、98%、99%或更高的序列一致性之CDR 的抗體。 在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或其抗原結 合片段含有重鏈，其具有SEQ ID N〇:396所示之胺基酸序 列。在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或抗原結合 片段含有VH域，其具有如SEQ ID NO:396之胺基酸1-121 10 201201839 所示的胺基酸序列。在一些實例中，本文所提供之分離之 抗體或其抗原結合片段含有輕鏈，其具有SEQ ID NO:395 所示之胺基酸序列。在一些實例中，本文所提供之分離之 抗體或抗原結合片段含有VL域，其具有如SEQ ID NO:395 之胺基酸1 -11 0所示的胺基酸序列。在一特定實例中，該分 離之抗體或其抗原結合片段為30D8。 本文提供分離之抗RSV抗體或其抗原結合片段，其含 有可變重（VH )鏈及可變輕（VL )鏈，其中該抗體或抗原 結合片段與含有SEQ ID NO:396所示之重鏈及SEQ ID NO:3 95所示之輕鏈的抗體或抗原結合片段免疫特異性結合 於相同的呼吸道融合性病毒（RS V )融合（F )蛋白上之抗 原決定基。 在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或其抗原結 合片段含有VH CDR1，其具有SEQ ID NO:405或437所示 之胺基酸序列；VH CDR2，其具有SEQ ID NO: 406所示之 胺基酸序列；及VH CDR3，其具有SEQ ID NO: 407所示之 胺基酸序列。 在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或其抗原結 合片段含有VL CDR1，其具有SEQ ID NO: 408所示之胺基 酸序列；VL CDR2，其具有SEQ ID NO: 409所示之胺基酸 序列；及VL CDR3，其具有SEQ ID NO: 410所示之胺基酸 序列。 在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或其抗原結 合片段含有重鏈，其具有SEQ ID NO:3 98所示之胺基酸序 11 201201839 列。在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或抗原結合 片段含有VH域，其具有如SEQ ID NO:398之胺基酸i_125 所示的胺基酸序列。在一些實例中，本文所提供之分離之 抗體或其抗原結合片段含有輕鏈，其具有SEQ ID NO:397 所示之胺基酸序列。在一些實例中，本文所提供之分離之 抗體或抗原結合片段含有VL域，其具有如SEQ ID NO:397 之胺基酸1 -107所示的胺基酸序列。在一特定實例中，該分 離之抗體或其抗原結合片段為104E5。 本文提供分離之抗RSV抗體或其抗原結合片段，其含 有可變重（VH)鏈及可變輕（VL)鏈，其中該抗體或抗原 結合片段與含有SEQ ID NO:398所示之重鏈及SEQ ID NO:397所示之輕鏈的抗體或抗原結合片段免疫特異性結合 於相同的呼吸道融合性病毒（RSV )融合（F)蛋白上之抗 原決定基。 在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或其抗原結 合片段含有VH CDR1，其具有SEQ ID NO:411或438所示 之胺基酸序列；VH CDR2，其具有SEQ ID NO: 412所示之 胺基酸序列；及VH CDR3 ’其具有SEQ ID NO: 413所示之 胺基酸序列。 在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或其抗原結 合片段含有Vl CDR1，其具有SEQ ID NO: 414所示之胺基 酸序列；Vl CDR2，其具有SEQ ID NO: 415所示之胺基酸 序列；及VL CDR3，其具有SEQ ID NO: 416所示之胺基酸 序列。 12 201201839 在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或其抗原結 合片段含有重鏈，其具有SEQ ID N0:400所示之胺基酸序 列。在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或抗原結合 片段含有VH域，其具有如SEQ ID N0:400之胺基酸1-124 所示的胺基酸序列。在一些實例中，本文所提供之分離之 抗體或其抗原結合片段含有輕鏈，其具有SEQ ID NO:399 所示之胺基酸序列。在一些實例中，本文所提供之分離之 抗體或抗原結合片段含有Vl域，其具有如SEQ ID NO:399 之胺基酸1 -108所示的胺基酸序列。在一特定實例中，該分 離之抗體或其抗原結合片段為38F10。 本文提供分離之抗RSV抗體或其抗原結合片段，其含 有可變重（VH )鏈及可變輕（VL )鏈，其中該抗體或抗原 結合片段與含有SEQ ID N0:400所示之重鏈及SEQ ID NO:399所示之輕鏈的抗體或抗原結合片段免疫特異性結合 於相同的呼吸道融合性病毒（RS V )融合（F )蛋白上之抗 原決定基。 在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或其抗原結 合片段含有VH CDR1，其具有SEQ ID NO:417或439所示 之胺基酸序列；VH CDR2，其具有SEQ ID NO: 418所示之 胺基酸序列；及VH CDR3，其具有SEQ ID NO: 419所示之 胺基酸序列。 在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或其抗原結 合片段含有VL CDR1，其具有SEQ ID NO: 420所示之胺基 酸序列；Vl CDR2，其具有SEQ ID NO·· 421所示之胺基酸 13 201201839 序列；及VL CDR3，其具有SEQ ID NO: 422所示之胺基酸 序列。 在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或其抗原結 合片段含有重鏈，其具有SEQ ID NO:402所示之胺基酸序 列。在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或抗原結合 片段含有VH域，其具有如SEQ ID NO:402之胺基酸1-125 所示的胺基酸序列。在一些實例中，本文所提供之分離之 抗體或其抗原結合片段含有輕鏈，其具有SEQ ID NO:401 所示之胺基酸序列。在一些實例中，本文所提供之分離之 抗體或抗原結合片段含有Vl域，其具有如SEQ ID NO:401 之胺基酸1 -11 3所示的胺基酸序列。在一特定實例中，該分 離之抗體或其抗原結合片段為14G3。 本文提供分離之抗RSV抗體或其抗原結合片段，其含 有可變重（VH )鏈及可變輕（VL )鏈，其中該抗體或抗原 結合片段與含有 SEQ ID NO:402所示之重鏈及SEQ ID NO:401所示之輕鏈的抗體或抗原結合片段免疫特異性結合 於相同的呼吸道融合性病毒（RS V )融合（F )蛋白上之抗 原決定基。 在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或其抗原結 合片段含有VH CDR1，其具有SEQ ID NO:423或440所示 之胺基酸序列；VH CDR2，其具有SEQ ID NO: 424所示之 胺基酸序列；及VH CDR3，其具有SEQ ID NO: 425所示之 胺基酸序列。 在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或其抗原結 14 201201839 合片段含有VL CDRl，其具有SEQ ID NO: 426所示之胺基 酸序列；VL CDR2，其具有SEQ ID ΝΟ_· 427所示之胺基酸 序列；及VL CDR3，其具有SEQ ID NO: 428所示之胺基酸 序列。 在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或其抗原結 合片段含有重鏈，其具有SEQ ID NO :404所示之胺基酸序 列。在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或抗原結合 片段含有VH域，其具有如SEQ ID NO:404之胺基酸1-123 所示的胺基酸序列。在一些實例中，本文所提供之分離之 抗體或其抗原結合片段含有輕鏈，其具有SEQ ID NO:403 所示之胺基酸序列。在一些實例中，本文所提供之分離之 抗體或抗原結合片段含有VL域，其具有如SEQ ID NO:403 之胺基酸1 -1 07所示的胺基酸序列。在一特定實例中，該分 離之抗體或其抗原結合片段為90D3。 本文提供分離之抗RSV抗體或其抗原結合片段，其含 有可變重（VH )鏈及可變輕（VL )鏈，其中該抗體或抗原 結合片段與含有 SEQ ID NO:404所示之重鏈及SEQ ID ΝΟ··403所示之輕鏈的抗體或抗原結合片段免疫特異性結合 於相同的呼吸道融合性病毒（RS V )融合（F )蛋白上之抗 原決定基。 在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或其抗原結 合片段含有VH CDR1，其具有SEQ ID ΝΟ··429或441所示 之胺基酸序列；VH CDR2，其具有SEQ ID NO: 430所示之 胺基酸序列；及VH CDR3，其具有SEQ ID NO: 431所示之 15 201201839 胺基酸.序列° 在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或其抗原結 合片段含有VL CDR1，其具有SEQ ID NO: 432所示之胺基 酸序列；VL CDR2，其具有SEQ ID NO: 433所示之胺基酸 序列；及VL CDR3 ’其具有SEQ ID NO: 434所示之胺基酸 序列。 在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或其抗原結 合片段含有重鏈，其具有SEQ ID NO :452所示之胺基酸序 列。在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或抗原結合 片段含有Vh域，其具有如SEQ ID NO:452之胺基酸1-124 所示的胺基酸序列。在一些實例中，本文所提供之分離之 抗體或其抗原結合片段含有輕鏈，其具有SEQ ID NO:453 所示之胺基酸序列。在一些實例中，本文所提供之分離之 抗體或抗原結合片段含有VL域，其具有如SEQ ID NO:453 之胺基酸1-111所示的胺基酸序列。在一特定實例中，該分 離之抗體或其抗原結合片段為56E11。 本文提供分離之抗RSV抗體或其抗原結合片段，其含 有可變重（VH)鏈及可變輕（Vl)鏈，其中該抗體或抗原 結合片段與含有SEQ ID NO:452所示之重鏈及SEQ ID NO:453所示之輕鏈的抗體或抗原結合片段免疫特異性結合 於相同的呼吸道融合性病毒（RS V )融合（ρ )蛋白上之抗 原決定基® 在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或其抗原結. 合片段含有VH CDR1，其具有SEQ ID NO:458或482所示 16 201201839 之胺基酸序列；VH CDR2，其具有SEQ ID NO: 459所示之 胺基酸序列；及VH CDR3，其具有SEQ ID NO: 460所示之 胺基酸序列。 在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或其抗原結 合片段含有VL CDR1，其具有SEQ ID NO: 461所示之胺基 酸序列；VL CDR2，其具有SEQ ID NO: 462所示之胺基酸 序列；及VL CDR3，其具有SEQ ID NO: 463所示之胺基酸 序列。 在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或其抗原結 合片段含有重鏈，其具有SEQ ID NO:454所示之胺基酸序 列。在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或抗原結合 片段含有VH域，其具有如SEQ ID NO:454之胺基酸1-133 所示的胺基酸序列。在一些實例中，本文所提供之分離之 抗體或其抗原結合片段含有輕鏈，其具有SEQ ID NO:455 所示之胺基酸序列。在一些實例中，本文所提供之分離之 抗體或抗原結合片段含有Vl域，其具有如SEQ ID NO:455 之胺基酸1 -107所示的胺基酸序列。在一特定實例中，該分 離之抗體或其抗原結合片段為1 7C9。 本文提供分離之抗RSV抗體或其抗原結合片段，其含 有可變重（VH )鏈及可變輕（VL )鏈，其中該抗體或抗原 結合片段與含有SEQ ID NO:454所示之重鏈及SEQ ID NO:455所示之輕鏈的抗體或抗原結合片段免疫特異性結合 於相同的呼吸道融合性病毒（RS V )融合（F )蛋白上之抗 原決定基。 17 201201839 在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或其抗原結 合片段含有VH CDR1，其具有SEQ ID NO:464或483所示 之胺基酸序列；VH CDR2，其具有SEQ ID NO: 465所示之 胺基酸序列；及VH CDR3，其具有SEQ ID NO: 466所示之 胺基酸序列。 在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或其抗原結 合片段含有VL CDR1，其具有SEQ ID NO: 467所示之胺基 酸序列；VL CDR2，其具有SEQ ID NO: 468所示之胺基酸 序列；及VL CDR3，其具有SEQ ID NO: 469所示之胺基酸 序列。 在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或其抗原結 合片段含有重鏈，其具有SEQ ID NO:456所示之胺基酸序 列。在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或抗原結合 片段含有VH域，其具有如SEQ ID NO:456之胺基酸1-118 所示的胺基酸序列。在一些實例中，本文所提供之分離之 抗體或其抗原結合片段含有輕鏈，其具有SEQ ID NO:457 所示之胺基酸序列。在一些實例中，本文所提供之分離之 抗體或抗原結合片段含有Vl域，其具有如SEQ ID NO:457 之胺基酸1 -109所示的胺基酸序列。在一特定實例中，該分 離之抗體或其抗原結合片段為69F6。 本文提供分離之抗RSV抗體或其抗原結合片段，其含 有可變重（VH )鏈及可變輕（VL )鏈，其中該抗體或抗原 結合片段與含有 SEQ ID NO:456所示之重鏈及SEQ ID NO:457所示之輕鏈的抗體或抗原結合片段免疫特異性結合 18 201201839 於相同的呼吸道融合性病毒（RSV )融合（F )蛋白上之抗 原決定基。 在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或其抗原結 合片段含有VH CDR1，其具有SEQ ID NO:470或484所示 之胺基酸序列；VH CDR2，其具有SEQ ID NO: 471所示之 胺基酸序列；及VH CDR3，其具有SEQ ID NO: 472所示之 胺基酸序列。 在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或其抗原結 合片段含有VL CDR1，其具有SEQ ID NO: 473所示之胺基 酸序列；Vl CDR2，其具有SEQ ID NO: 474所示之胺基酸 序列；及VL CDR3，其具有SEQ ID NO: 475所示之胺基酸 序列。 ， 本文提供分離之抗RSV抗體或其抗原結合片段，其含 有可變重（VH )鏈及可變輕（VL )鏈，其中該抗體或抗原 結合片段與含有 SEQ ID NO: 396、398、400、402、404、 452、454 或 45 6 所示之重鏈及 SEQ ID NO: 395、397、399、 401、403、453、455或457所示之輕鏈的抗體或其抗原結 合片段免疫特異性結合於相同的呼吸道融合性病毒（RSV ) 融合（F )蛋白上之抗原決定基。 在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或抗原結合 片段含有VH互補決定區1 ( CDR1 )，其具有SEQ ID NO: 405、41 卜 417、423、429、437-44卜 458、464、470 或 482-484 所示之胺基酸序列。在一些實例中，本文所提供之分離之 抗體或抗原結合片段含有VH CDR2，其具有SEQ ID NO: 19 201201839 406、412、418、424、430、45 9、465 或 471 所示之胺基酸 序列。在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或抗原結 合片段含有 VH CDR3，其具有 SEQ ID NO: 407、413、419、 42 5、43 1、460、466或472所示之胺基酸序列。在一些實 例中，本文所提供之分離之抗體或抗原結合片段含有V l CDIU，其具有 SEQ ID NO: 408、414、420、426、432、461 ' 467或473所示之胺基酸序列。在一些實例中，本文所提供 之分離之抗體或抗原結合片段含有VL CDR2，其具有SEQ ID NO: 409、415、421、427、433、462、468 或 474 所示 之胺基酸序列。在一些實例中，本文所提供之分離之抗體 或抗原結合片段含有VL CDR3，其具有SEQ ID NO: 410、 416、422 ' 428、434、463、469或475所示之胺基酸序列。 在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或其抗原結 合片段含有Vh CDR1，其中該VH CDR1之胺基酸序列如SEQ ID NO: 405、411、417、423、429、437-441、458 ' 464、 470或482-484所示；VH CDR2，其中該VH CDR2之胺基酸 序列如 SEQ ID NO: 406、412、418、424、430、459、465 或471所示；及VH CDR3，其中該VH CDR3之胺基酸序列 如 SEQ ID NO: 407、413、419、425、431、460、466 或 472 所示。在一些實例中，本文所提供之分離之抗體或其抗原 結合片段含有VL CDR1，其中該VL CDR1之胺基酸序列如 SEQ ID NO: 408、414、420、426、432、461、467 或 473 所示；VL CDR2，其中該VL CDR2之胺基酸序列如SEQ ID NO: 409、415、421、427、433、462、468 或 474 所示；及 20 201201839 VL CDR3，其中該VL CDR3之胺基酸序列如SEQ ID NO: 410、416、422、428、434、463、469 或 475 所示。 本文提供免疫特異性結合於RSV F蛋白之一部分的分 離之多肽、抗體或其抗原結合片段，該部分具有SEQ ID Ν 0:2 5所示之胺基序列。 本文提供含有抗原結合域之分離之多肽、抗體或其抗 原結合片段，該抗原結合域為人類或人類化抗體或其抗原 結合片段。在一些實例中，本文所提供之分離之多肽、抗 體或抗原結合片段為嵌合抗體。在一些實例中，分離之多 肤、抗體或抗原結合片段為单.鍵Fv (scFv)、F ab、F ab ·、 F(ab')2、Fv、dsFv、雙功能抗體、Fd或Fd'片段。在一些實 例中，本文所提供之分離之多肽、抗體或抗原結合片段含 有肽連接子。在一些實例中，該肽連接子含有約1至約5〇 個胺基酸。 在一些實例中，本文所提供之分離之多肽、抗體或其 抗原結合片段與聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG)結 合。在一些實例中，本文所提供之分離之多肽、抗體或抗 原結合片段含有治療劑或診斷劑。例示性診斷劑包括（但 不限於）酶、螢光化合物、電子轉移劑及放射性標記。 本文提供含有蛋白質轉導域之分離之多肽、抗體或其 抗原結合片段。在—些實例中，該蛋白質轉導域選自具有 SEQ ID NO:284-355所示之胺基酸序列的肽。在一些實例 中，蛋白質轉導域為HIV-TAT蛋白質轉導域。 本文提供多價抗體，其含有第一抗原結合部分，該部 21 201201839 分含有與多聚化域結合之本文所提供之多肽、抗體或其抗 原結合片段；及第二抗原結合部分，該部分含有與第二多 聚化域結合之抗病毒抗體的抗原結合片段。在該等實例 中’該第一多聚化域與該第二多聚化域為互補或相同的， 藉此該第一抗原結合部分與該第二抗原結合部分形成多價 抗體。在一些實例中’本文所提供之多價抗體含有1、2、3、 4或5個其他抗原結合部分。例示性多價抗體包括二價、三 價、四價、五價、六價或七價抗體。本文所提供之多價抗 體包括異型二價或同型二價抗體。本文所提供之多價抗體 包括多特異性抗體。在一些實例中，多特異性抗體為雙特 異性、三特異性或四特異性抗體。在一些實例中，本文所 提供之多價抗體含有抗原結合片段，其為單鏈Fv ( scFv )、
Fab、Fab’、F(ab’）2、Fv、dsFv ' 雙功能抗體、Fd 或 Fd，片段。 本文所提供之多價抗體的第一抗原結合部分及/或第二抗原 結合部分可藉由共價或非共價鍵聯與多聚化域結合。在一 些實例中’抗原結合部分經由諸如化學連接子或多肽連接 子之連接子與多聚化域結合。在—些實例中，本文所提供 之多價抗體的多聚化域選自免疫球蛋白恆定區（Fc )、白胺 酸拉鏈、互補疏水性區、互補親水性區或相容性蛋白質-蛋 白質相互作用域。在一些實例中，Fc域為IgG、IgM或IgE Fc域。 在一些實例中，本文所提供之多價抗體含有兩種或更 多種抗RSV抗體或其抗原結合片段。在一特定實例中，本 文所提供之多價抗體含有兩種或更多種抗RSV抗體或其抗 22 201201839 原結合片段。 本文提供多價抗體，其含有第一抗原結合部分，該部 分含有與多聚化域結合之本文所提供之抗RSV抗體或其抗 原結合片段’及第一抗原結合部分，該部分含有與第二多 聚化域結合之抗RSV抗體或其抗原結合片段，其選自：帕 利珠單抗、莫維珠單抗（motavizumab )、AFFF、P12f2、 P12f4、Plld4、Ale9、A12a6、A13c4、A17d4、A4B4、A8c7、 1X-493L 卜 FRH3-3F4、M3H9、Y10H6、DG、AFFF(l)、6H8、 L1-7E5、L2-15B10、A13all、Alh5、A4B4(1)、 A4B4L1FR-S28R、A4B4-F52S、rsv6、rsvll、rsvl3、rsvl9.、 rsv21、rsv22、rsv23、RF-1、RF-2 或其抗原結合片段。 本文提供多價抗體，其含有第一抗原結合部分，該部 分含有與多聚化域結合之本文所提供之抗RSV抗體或其抗 原結合片段；及第二抗原結合部分，該部分含有與第二多 聚化域結合之抗病毒抗體，其免疫特異性結合副流行性感 冒病毒（PIV )或人類偏肺病毒（human metapneumovirus， hMPV)之抗原。 本文提供組合，其含有本文所提供之分離之多肽、抗 體或其抗原結合片段或本文所提供之多價抗體及抗病毒 劑。在一些實例中，該抗病毒劑為病毒°坐。本文提供組合， 其含有本文所提供之分離之多肽、抗體或其抗原結合片段 及抗病毒劑，其經調配成單一組成物或各別組成物。 本文提供組合，其含有本文所提供之分離之多肽、抗 體或其抗原結合片段或本文所提供之多價抗體及一或多種 23 201201839 其他抗病毒抗體。在一些實例中，該組合含有兩種或更多 種不同抗RSV抗體或其抗原結合片段。在一些實例中，組 合含有兩種或更多種選自本文所提供之抗體或抗原結合片 段的不同抗RSV抗體或抗原結合片段。在一些實例中，組 合含有本文所提供之抗體或其抗原結合片段及選自以下之 抗體：帕利珠單抗、莫維珠單抗、AFFF、P12f2、P12f4、
Plld4、Ale9、A12a6、A13c4、A17d4、A4B4、A8c7、 1X-493L 卜 FRH3-3F4、M3H9、Y10H6、DG、AFFF(l)、6H8、 L1-7E5、L2-15B10、A13all、Alh5、A4B4(1)、 A4B4L1FR-S28R、A4B4-F52S、rsv6、rsvn、rsv13 ' rsvi9、 fsv21、rsv22、rsv23、RF-1、RF-2 或其抗原結合片段。在 一些實例中，組合含有本文所提供之抗體或其抗原結合片 •k及選自免疫特異性結合副流行性感冒病毒（)或人類 偏肺病毒（hMPV )之抗原的抗體或其抗原結合片段之抗 體在些貫例令’ PIV抗原為人類ριν 1型、人類ply〗 型、人類PIV3型及/或人類PIV4型抗原。在一些實例中， ΡΙν抗原選自PIV核鞘磷蛋白、PIV融合（F)蛋白、ριν 磷蛋白' PIV大（L)蛋白、PIV基質（M)蛋白、ριν血球 凝集素-神經胺酸酶（HN)醣蛋白、PIV RNA依賴性RNA 聚合酶、潰Y1蛋白、PIVD蛋白、PIVC蛋白及其對偶基 因變異體。在一些實例中，讀!>¥抗原4 hMpvA型或讀 B型抗原。在一些實例中，hMPV抗原為hMPV A1亞型、 hWVA2亞型、耐乂扪亞型或讀”贮亞型抗原。在一 些實例中，hMPV抗原選自hMpv核蛋白、黯v磷蛋白' 24 201201839 ‘ hMPV基質蛋白、hMPV小疏水性蛋白、hMPV RNA依賴性 • RNA聚合辦、hMPV F蛋白、hMPV G蛋白及其對偶基因變 異體。 本文提供組合，其含有本文所提供之分離之多肽、抗 體或其抗原結合片段或本文所提供之多價抗體及一或多種 其他抗病毒抗體’其中該一或多種其他抗病毒抗體為單鏈
Fv ( scFv)、Fab、Fab1、F(ab')2、Fv、dsFv、雙功能抗體、
Fd或Fd’片段。 本文提供醫藥組成物，其含有本文所提供之任何分離 之多肽、抗體或其抗原結合片段、本文所提供之任何多價 抗體或本文所提供之任何組合及醫藥學上可接受之載劑或 賦形劑。在一些實例中，本文所提供之醫藥組成物經調配 成凝膠、軟膏、液體、懸浮液、氣溶膠、錠劑、丸劑、散 劑或鼻用噴霧。在一些實例中，本文所提供之醫藥組成物 經調配用於經肺、鼻内或非經腸投藥。在一些實例中，本 文所提供之醫藥組成物經調配用於單次劑量投藥。在一些 實例中，本文所提供之醫藥組成物經調配用於持續釋放。 本文提供醫藥組成物，其含有本文所提供之分離之多 肽、抗體或其抗原結合片段或本文所提供之多價抗體及— 或多種其他抗病毒抗體。在一些實例中，該等醫藥組成物 含有兩種或更多種不同抗RSV抗體或其抗原結合片段。在 一些實例中，醫藥組成物含有兩種或更多種選自本文所提 供之抗體或抗原結合片段的不同抗RSV抗體或抗原結合片 丰又。在一些實例中，醫藥組成物含有本文所提供之抗體或 25 201201839 抗原結合片段及選自以下之抗體：帕利珠單抗、莫維珠單 抗、AFFF、P12f2、P12f4、Plld4、Ale9、A12a6 ' A13c4、 A17d4、A4B4、A8c7、1X-493L卜 FR H3-3F4、M3H9、Y10H6 ' DG、AFFF(l)、6H8、L1-7E5、L2-15B10、A13all、Alh5、 A4B4(1)、A4B4L1FR-S28R、A4B4-F5 2S、rsv6、rsvl 卜 rsvl3、 rsvl9、rsv21、rsv22、rsv23、RF -1、RF-2 或其抗原結合片 段。在一些實例中，醫藥組成物含有本文所提供之抗體或 其抗原結合片段及選自免疫特異性結合副流行性感冒病毒 (PIV )或人類偏肺病毒（hMPV )之抗原的抗體或其抗原結 合片段之抗體。在一些實例中，PIV抗原為人類PIV 1型、 人類PIV 2型、人類PIV 3型及/或人類PIV 4型抗原。在一 些實例中，PIV抗原選自PIV核鞘磷蛋白、PIV融合（F ) 蛋白、PIV磷蛋白、PIV大（L )蛋白、PIV基質（Μ )蛋白、 PIV血球凝集素-神經胺酸酶（ΗΝ )醣蛋白、PIV RNA依賴 性RNA聚合酶、PIV Υ1蛋白、PIV D蛋白、PIV C蛋白及 其對偶基因變異體。在一些實例中，hMPV抗原為hMPV A 型或hMPV B型抗原。在一些實例中，hMPV抗原為hMPV A1亞型、hMPV A2亞型、hMPV B1亞型或hMPV B2亞型 抗原。在一些實例中，hMPV抗原選自hMPV核蛋白、hMPV 磷蛋白、hMPV基質蛋白、hMPV小疏水性蛋白、hMPV RNA 依賴性RNA聚合酶、hMPV F蛋白、hMPV G蛋白及其對偶 基因變異體。 本文提供醫藥組成物，其含有本文所提供之分離之多 肽、抗體或抗原結合片段或本文所提供之多價抗體及一或 26 201201839 多種其他抗病毒抗體’其中該一或多種其他抗病毒抗體為 單鏈 Fv ( scFv )、Fab、Fab，、F(ab，）2、Fv、dsFv、雙功能抗 體、Fd或F士片段。 本文提供醫藥組成物，其含有本文所提供之分離之多 肽、抗體或其抗原結合片段或本文所提供之多價抗體及抗 病毒劑。在一些實例中’該抗病毒劑為病毒唑。 本文提供治療個體病毒感染之方法，其涉及向該個體 投予治療有效量之本文所提供之醫藥組成物。本文提供治 療或抑制個體病毒感染之一或多種症狀的方法，其涉及向 該個體投予治療有效量之本文所提供之醫藥組成物。本文 亦提供預防個體病毒感染之方法，其涉及向該個體投予治 療有效量之本文所提供之醫藥組成物。在一特定實例中， 该病毒感染為RSV感染。在一特定實例中，該rSv感染為 上啤吸道感染。 投藥可藉由任何適合之途徑來實現，包括（但不限於） 區域性（topically )、非經腸、局部或全身，例如鼻内、肌 肉内、皮内、腹膜内、靜脈内、皮下、經口或經肺投藥。 在一些實例中，本文所提供之醫藥組成物藉由霧化器或吸 入器來投予。本文所提供之醫藥組成物可向任何適合之個 體（諸如哺乳動物，例如人類）投予。 在一些實例中’本文所提供之醫藥組成物投予人類嬰 兒、因RSV感染而早產或處於住院風險中之人類嬰兒、老 年人、患有囊腫性纖維化、支氣管肺發育不良、先天性心 臟病、先天性免疫缺乏、後天性免疫缺乏、白血病或非霍 27 201201839 奇金淋巴瘤之人類個體、或經歷移植（例如 臟移植）之人類個體， 次肝 在一些實例中，本文所提供之醫藥組成物在Rsv 期間（例如10月至次年5月）投予一次、兩次、三次、^ 次ΐ五ΐ。在—些實例中，本文所提供之醫藥組成物在RSV 季節之前在—個月、兩個月或三個月内投予一次、兩次、 三次、四次或五次。 在一些實例中，本文所提供之醫藥組成物可與一或多 種抗病毒劑-起投予。在一些實例中，該抗病毒劑為病毒 唑。在一些實例中，醫藥組成物及抗病毒劑經調配成單一 組成物或各別組成物。在本文所提供之方法中，醫藥組成 物及抗病毒劑可依序、同時或間歇投予。 在一些實例中，本文所提供之醫藥組成物可與激素療 法、免疫療法或消炎劑一起投予。在一些實例中，本文所 提供之醫藥組成物可與一或多種其他抗病毒抗體或其抗原 結合片段一起投予。醫藥組成物及一或多種其他抗病毒抗 體經調配成單一組成物或各別組成物。醫藥組成物及一或 多種其他抗RSV抗體可依序、同時或間歇投予。在一些實 例中’抗原結合片段為單鍵Fv( scFv)、Fab、Fab'、F(ab，）2、 Fv、dsFv、雙功能抗體、Fd或Fd·片段。 在一些實例中，本文所提供之醫藥組成物可與一或多 種選自例如以下之抗RSV抗體或其抗原結合片段之其他抗 病毒抗體一起投予：帕利珠單抗、莫維珠單抗、AFFF、 P12f2、P12f4、PI ld4、Ale9、A12a6、A13c4、A17d4、A4B4、 28 201201839 A8c7、1X-493L卜 FR H3-3F4、M3H9、Y10H6、DG、AFFF(l)、 6H8、L1-7E5、L2-1 5B 1 0、A1 3a 11、A1 h5、A4B4( 1)、 A4B4L1FR-S28R、A4B4-F52S、rsv6、rsvll、rsvl3、rsvl9、 rsv21、rsv22、rsv23、RF-1、RF-2 或其抗原結合片段。 在一些實例t，本文所提供之醫藥組成物可與一或多 種選自免疫特異性結合副流行性感冒病毒（PIV )或人類偏 肺病毒（hMPV )之抗原的抗體或其抗原結合片段之其他抗 病毒抗體一起投予。在一些實例中，PIV抗原為人類PIV 1 型、人類PIV 2型、人類PIV 3型及/或人類PIV 4型抗原。 在一些實例中，PIV抗原選自PIV核鞘磷蛋白、PIV融合（F ) 蛋白、PIV磷蛋白、PIV大（L )蛋白、PIV基質（Μ )蛋白、 PIV血球凝集素-神經胺酸酶（ΗΝ )醣蛋白、PIV RNA依賴 性RNA聚合酶、PIV Υ1蛋白、PIV D蛋白、PIV C蛋白及 其對偶基因變異體。在一些實例中，hMPV抗原為hMPV A 型或hMPV B型抗原。在一些實例中，hMPV抗原為hMPV A1亞型、hMPV A2亞型、hMPV B1亞型或hMPV B2亞型 抗原。在一些實例中，hMPV抗原選自hMPV核蛋白、hMPV 磷蛋白、hMPV基質蛋白、hMPV小疏水性蛋白、hMPV RNA 依賴性RNA聚合酶、hMPV F蛋白、hMPV G蛋白及其對偶 基因變異體。
本文提供偵測RSV感染之方法，其涉及（a )使用本文 所提供之抗體或其抗原結合片段檢定流體、細胞或組織樣 品中RSV抗原之含量；（b )比較所檢定之RSV抗原含量與 對照含量，藉此與RSV抗原之對照含量相比所檢定之RSV 29 201201839 抗原含量的增加指示RSV感染。在一些實例中，該細胞或 組織樣品自人類個體獲得。在一些實例中，細胞或組織樣 品為血液、尿、唾液、肺痰、灌洗液或淋巴液樣品。 本文提供編碼本文所提供之多肽、抗體或其抗原結合 片段的分離之核酸。本文提供含有編碼本文所提供之多 肽、抗體或其抗原結合片段的核酸之載體。 本文提供含有本文所提供之抗體或其抗原結合片段' 本文所提供之核酸或本文所提供之載體的分離之細胞。本 文所提供之細胞可為例如原核或真核細胞。本文亦提供含 有本文所提供之核酸或本文所提供之載體的轉殖基因動 物。本文亦提供表現分離之抗體或其抗原結合片段的方 法，其涉及在表現所編碼之抗體的條件下或藉由自本文所 提供之轉殖基因動物分離抗體或抗原結合片段來培養本文 所提供之分離之細胞。在一些實例中，抗體或抗原結合片 段自轉殖基因動物之血清或乳汁中分離。 本文提供套組，其含有於一或多個容器中之本文所提 供之多肽、抗體或抗原結合片段、本文所提供之多價抗體 或本文所提供之組合 '及使用說明書。 本文亦提供本文所提供之抗體或其抗原結合片段用於 預防個體病毒感染的用$。本文亦提供本文所提供之抗體 或其抗原結合片段用於治療個體病毒感染的用途。本文亦 提供本文所提供之抗體或其抗原結合片段用於治療或抑制 個體病毒感染之一或多種症狀的用途。 本文亦提供本文所提供之抗體或抗原結合片段用於調 30 201201839 - 配供預防個體病毒威举少®- 级木之醫樂品的用途。本文亦提供本文 . 所提供之抗體或抗屌社人u . ’、、、、=S片奴用於調配供治療個體病毒感 染之醫樂品的用徐β女+ ‘， '本文亦提供本文所提供之抗體或抗原 結合片段用於調配供Α+ twa療或抑制個體病毒感染之一或多種 症狀之醫藥品的用途。 本文提ί、抗RSV中和抗體或其抗原結合片段，其中在 該抗體或其抗原結合片段存在下，在超過1G、U、12、13、
15丨6 17、18、19、20輪或更多輪病毒複製後，RSV 不產生逃避抗體或其抗原結合片段之中和的病毒。本文亦 提供抗RSV中和抗體或其抗原結合片段，其中在該等抗體 或，、抗原、。σ >} &存在下，在至多2G輪病毒複製後， I產生逃避抗體或其抗原結合片段之中和的病毒。在一些 貫例中k RSV抗體或其抗原結合片段與命名為之 抗體特異性結合於相同的抗原決定基。在其他實例中，抗 RSV抗體或其抗原結合片段命名為3〇D8 ^在一些實例中， 抗RS V抗體或抗原結合片段特異性結合於Rs v F蛋白。在 其他實例中，抗RSV抗體或抗原結合片段為Fab或scFv。 【實施方式】 大綱 A. 定義 B. 概述 1 ·呼吸道融合性病毒 C. 抗RSV抗體 1. 一般抗體結構及功能域 31 201201839 a. 抗體之結構及功能域 b. 抗體片段 2.例示性抗RSV抗體 a.衍生物抗體 i. 單鏈抗體 ii. 抗個體遺傳型抗體 iii. 多特異性抗體及抗體多聚化 D. 抗RSV抗體之其他修飾 1. 降低免疫原性之修飾 2. Fc修飾 3. 聚乙二醇化 4. 可偵測部分之結合 5. 治療性部分之結合 6. 改良結合特異性之修飾 E. 分離抗RSV抗體之方法 F. 產生抗RSV抗體及其經修飾或變異形式之方法及編碼抗 體之核酸 1. 核酸 2. 載體 3. 細胞表現系統 a. 原核表現 b. 酵母細胞 c. 見蟲細胞 d. 哺乳動物細胞 32 201201839 • e.植物 . 4.抗體之純化 G. 評估抗RSV抗體性質及活性 1.結合檢定 内動物模型 4.用於評估抗RSV抗體之功效的活體 H. 診斷用途 1. 病原性感染之試管内偵測 2. 病原性感染之活體内偵測 3. 監測感染 I. 防治性及治療性用途 1. 用於療法之個體 2. 劑量 3. 投藥途徑 4. 組合療法 a.用於組合療法之抗病毒抗體 i. 抗RSV抗體 ii. 針對其他呼吸道病毒之抗體 5. 基因療法 J. 醫藥組成物、組合及製品/套組 1. 醫藥組成物 2. 製品/套組 3. 組合 K. 實施例 33 iu*1 201201839 A.定義 除非另有疋義，否則本文中所使用之所有技術及科學 術語均具有如熟習本發明所屬技術者通常所瞭解的相同含 義。除非另外s主明，否則本文整個揭示案中所提及之所有 專利、專利申請案、公開申請案及公開案、GenBank序列、 資料庫、網站及其他公開材料均以全文引用的方式併入本 文中。在本文中之術語存在複數個定義的情況下，以本節 中之彼等定義為準》當提及URL·或其他該種識別符或位址 時’應瞭解該等識別符可發生改變且關於網際網路之特定 資訊可不斷變化’但等效資訊可藉由搜尋網際網路而找 到。對此之提及證明該資訊之可用性及公開傳播。 如本文中所使用，「抗體（antibody)」指免疫球蛋白及 免疫球蛋白片段’而無論天然或部分合成或完全合成（諸 如重組）產生’包括其含有免疫球蛋白分子之可變區中保 持全長免疫球蛋白之至少一部分結合特異性能力的任何片 段。因此”抗體包括具有與免疫球蛋白抗原結合域（抗體 結合部位）同源或實質上同源的結合域之任何蛋白質。抗 體包括抗體片段’諸如抗RS V抗體片段。如本文令所使用， 術語抗體因此包括合成抗體、重組產生抗體 '多特異性抗 體（例如雙特異性抗體）、人類抗體、非人類抗體、人類化 抗體、嵌合抗體、細胞内抗體及抗體片段，諸如（但不限 於）Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、Fv片段、二硫鍵連 接之Fv ( dsFv )、Fd片段、Fd’片段、單鏈Fv ( scpv )、單 鏈Fab ( scFab)、雙功能抗體、抗個體遺傳型（抗Id)抗體 34 201201839 或以上任一者之抗原結合片段。本文所提供之抗體包括任 何免疫球蛋白類型（例如IgG、IgM、IgD、IgE、IgA及IgY)、 任何種類（例如、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl 及 IgA2) 或亞類（例如IgG2a及IgG2b)之成員。 如本文中所使用，抗體之「抗體片段（antibody gment)」或「抗原結合片段（antigen-binding fragment) 才曰全長抗體之任何部分，其小於全長，但含有抗體可變區 中結合抗原且因此保持結合特異性及全長抗體之至少一部 为特定結合能力之至少一部分（例如一或多個CDR及/或一 或多個抗體結合部位）。因此，抗原結合片段指含有與衍生 付到抗體片段之抗體結合於相同的抗原之抗原結合部分的 抗體片段。抗體片段包括由酶處理全長抗體產生之抗體衍 生物，以及合成（例如重組）產生之衍生物。抗體片段包 括在抗體中。抗體片段之實例包括（但不限於）Fab、Fab，、 F(ab')2、單鏈 Fv ( scFv)、Fv、dsFv、雙功能抗體、F(i 及 Fd1片段及其他片段’包括經修飾片段（參見例如Meth〇ds in
Molecular Biology,第 207 卷：Recombinant Antibodies for Cancer Therapy Methods and Protocols (2003);第 1 章；第 3-25頁，Kipriyanov)。片段可包括連接在一起（諸如藉由二 硫橋鍵及/或藉由肽連接子）之多個鏈。抗體片段一般含有 至少50個或約50個胺基酸且典型地至少2〇〇個或約2〇〇 個胺基酸。抗原結合片段包括任何抗體片段，當其插入抗 體構架（諸如藉由置換相應區域）中時會產生免疫特異性 結合（亦即展現至少ioM〇8M-i或至少約1〇M〇8M.，之Ka) 35 201201839 於抗原之抗體。 如本文中所使用，「治療性抗體（therapeutic antibody)」 指所投予用於治療動物（包括人類）之任何抗體或其抗原 結合片段。該等抗體可藉由任何已知產生多肽之方法來製 備，且因此，包括（但不限於）重組產生抗體、合成產生 抗體及自細胞或組織及其他來源提取之治療性抗體。自任 何來源分離或所產生之治療性抗體可為長度不均一的，或 在諸如糖基化（亦即碳水化合物含量）之轉譯後修飾方面 不同。治療性抗體之不均一性亦可視治療性抗體之來源而 不同。因此，提及之治療性抗體指所產生或所分離之不均 群體。备希望均一製備時，將會如此陳述。本文中提及 之治療性抗體適當時為其單體、二聚或其他多聚形式。 如本文中所使用，「中和抗體（neutraHzing)」 為結合於病原體且干擾病原體感染細胞及/或引起個體患病 之此力的任何抗體或其抗原結合片段。例示性中和抗體為 結合：病毒、、細菌及真菌病原體之中和抗體。典型地，本 :所提供之中和抗體結合於病原體之表面。在病原體為病 ’之實例中’結合於該病毒之中和抗體典型地結合於病毒 表面上之蛋白質。視病毒種類而冑，表面蛋白質可為殼蛋 白（例如無包膜病毒之殼蛋白）&病毒包臈蛋白（例如包 膜病毒之病毒包聪；恭&、 % ’匕膜蛋白）。在-些實例中，蛋白質為醣蛋 白。病毒抑制病毒咸举六+ At丄 … x、力之力可例如藉由試管内中和檢 疋（例如使用Ver〇宿主％旳夕办 Λ · 估王細胞之空斑減少檢定）來量測。 如本文中所使用’「包膜病毒（—us)」為具 36 201201839 有卜膜或包膜之動物病#，該外膜或包膜為包圍病毒殼且 含有病毒蛋白質之脂質雙層。病毒之包膜蛋白參與感染性 粒子之組裝且亦與藉由結合於宿主細胞上存在之受體及誘 發病毒包膜與宿主細胞膜之間的融合而達成之病毒進入有 關包膜病t可呈球形或絲& (桿幻。例示性包膜病毒包 括（仁不限於）疱療病毒科（Herpesviridae )、痘病毒科 (Poxviridae )、嗜肝 DNA 病毒科（Hepadnaviridae )、彼膜病 毒科（Togaviddae)、沙粒病毒科（Arenaviridae)、黃病毒 科（Flaviviridae)、正黏液病毒科（〇rth〇myX〇viridae)、副 黏液病毒科（Paramyxoviridae )、布尼亞病毒科 (Bunyaviridae )、彈狀病毒科（Rhabd〇viridae )、絲狀病毒 科（Filoviridae )、冠狀病毒科（c〇r〇naviridae )及博爾納 病毒科（Bornaviridae)之成員。呼吸道融合性病毒（RSv) 為副黏液病毒科、肺病毒亞科（pneurn〇virinae )之負股單 股RNA包膜病毒。 如本文中所使用’「無包膜病毒（non-enveloped virus )」 或「裸病毒（naked virus)」為缺乏病毒包膜之病毒《對於 宿主細胞感染，無包膜病毒使用病毒殼之蛋白質來連接於 目標細胞。例示性無包膜病毒包括（但不限於）腺病毒科 (Adenoviridae )、乳突狀瘤病毒亞科（Papillomavirinae )、 細小病毒科 （Parvoviridae )、多瘤病毒亞科 (Polyomavirinae )、環病毒科（Circoviridae )、呼腸孤病毒 科（Reoviridae)、小核糖核酸病毒科（Picornaviridae)、杯 狀病毒科（Caliciviridae)及星狀病毒科（Astroviridae)。 37 201201839 如本文中所使用，病原體之「表面蛋白質（ protein)」為位於病原體外表面上之任何蛋白質。 扣e 質可部分或完全曝露於外部環境（亦即外表面）=白 面蛋白質為膜蛋白，例如位於病毒包膜或細菌外膜：面表 之蛋白質（例如膜醣蛋白膜蛋白可為跨臈蛋白（亦^ 過月曰質雙層之蛋白質）s戈為非跨膜細胞表面相關蛋白質之 蛋白質（例如錨定或共價連接於膜表面，諸如連接於病原 體表面上之另一蛋白質）。其他例示性表面蛋白質包括至； 部分曝露於外部環境之無包膜包膜病毒之病毒殼蛋白。夕 士本文中所使用，「單株抗體（m〇n〇cl〇nalantib〇dy)」 指相同抗體群體，意謂單株抗體群體中之各個別抗體分^ 均與其他抗體分子相同。此性質與多株抗體群體相反^該 群體含有具有複數個不同序列之抗體。單株抗體可藉由許 多熟知方法產生（Smith等人（2004) /. C/k. 57, 912-917 ;及 Nelson 等人，/ C/z„ 尸_〇/ (2〇〇〇)， 111 117 )。舉例而§，單株抗體可由b細胞之永生化產生， 例如經由與骨髓瘤細胞融合以產生融合瘤細胞系或藉由用 諸如EBV之病毒感染b細胞而產生。亦可使用重組技術以 試管内藉由用帶有編碼抗體之人造核苷酸序列的質體使宿 主細胞轉型而自宿主細胞之純系群體產生抗體。 如本文中所使用，「習知抗體（conventional antib〇dy )」 4曰含有兩個重鍵（其可以Η及Η1表示）及兩個輕鏈（其可 以L及L’表示）及兩個抗體結合部位之抗體，其中每一重 鏈可為保持抗原結合能力之全長免疫球蛋白重鏈或其任何 38 201201839 功能區（例如重鏈包括（但不限於）VH鏈、vH-CH 1鍵及 VH-CH1-CH2-CH3鏈），且每一輕鏈可為全長輕鏈或任何功能 區（例如輕鏈包括（但不限於）鏈及VL-CL鏈）。每一重 鏈（Η及H，）與一個輕鏈（分別為L及L，）配對。 如本文中所使用，全長抗體為具有兩個全長重鏈（例 如 VH-CH1-CH2-CH3 或 VH-CH1-CH2-CH3-CH4)及兩個全長輕 鏈（Vl-Cl )及较鏈區之抗體，諸如由分泌抗體之b細胞天 然產生之人類抗體及具有合成產生之相同域的抗體。 如本文中所使用，Fv抗體片段由以非共價相互作用連 接之一個可變重域（VH)及一個可變輕（yL)域構成。 如本文中所使用’ dsFv指具有經工程改造之分子間二 硫鍵的Fv，其使VH-VL對穩定。 如本文中所使用，Fd片段為抗體中含有抗體重鏈之可 變域（vH)及一個恆定區域（constant regi〇n d〇rnain)( Ch1 ) 的片段。 如本文中所使用，Fab片段為用木瓜蛋白酶消化全長免 疫球蛋白所產生之抗體片段，或具有合成產生（例如藉由 重組方法）之相同結構的片段。Fab片段含有輕鏈（含有 vL及cL)及含有重鏈之可變域（vh)及重鏈之一個恆定區 域（CH1 )的另一鏈。 如本文中所使用’ F(ab，）2片段為在PH 4.0-4.5下用胃 蛋白酶消化免疫球蛋白所產生之抗體片段，或具有合成產 生（例如藉由重組方法）之相同結構的片段。F(ab，）2片段 基本上含有兩個Fab片段，其中每一重鏈部分含有另外少 39 201201839 數胺基酸，包括形成連接兩個片段之二硫鍵聯的半胱胺酸 殘基。 如本文中所使用，Fab'片段為含有一半（一個重鏈及一 個輕鏈）F(ab〇2片段之片段。 如本文中所使用，Fd’片段為含有F(ab，)2片段之一個重 鏈部分之抗體片段。 如本文中所使用，Fv，片段為僅含有抗體分子之Vh及 V L域的片段。 如本文中所使用，hsFv指通常存在於Fab片段中之恆 疋域經雜一聚卷曲螺旋域取代而成之抗體片段（參見例如
Arndt 等人（2001) JMo/ 7:3 12:221-228 )。 如本文中所使用，scFv片段指含有以任何順序由多肽 連接子共價連接之可變輕鏈（VL )及可變重鏈（vH )的抗 體片段。.該連接子具有使得兩個可變域橋連而無實質上干 擾之長度。例示性連接子為（Gly-Ser)n殘基，一些Glu或Lys 殘基分散於整個殘基中以增加溶解性。 如本文中所使用’術語「衍生物（derivative )」指含有 抗RSV抗體或其片段之胺基酸序列的多肽，其已例如藉由 引入胺基酸殘基取代、缺失或添加，藉由使任何類型之分 子共價連接於多肽（例如藉由糖基化、乙醯化、聚乙二醇 化、磷酸化、醯胺化、藉由已知保護基/阻隔基衍生化、蛋 白水解裂解 '連接於細胞配位體或其他蛋白質）而經修飾。 抗RSV抗體或其抗原結合片段之衍生物可藉由化學修飾， 使用熟習此項技術者已知之技術來修飾，包括（但不限於） 201201839 特定\匕學裂解、乙醯化、曱醯化。此外，抗RSV抗體或其 抗原結合片段之衍生物可含有一或多個非典型胺基酸。典 型地，多肽衍生物具有與本文所提供之抗RSV抗體或其抗 原結合片段類似或相同的功能（例如中和RSV )。 如本文中所使用’當提及衍生自另一抗體（諸如單株 抗體）之抗體片段時，「衍生自（derived from )」一詞指抗 體片段（例如 Fab、F(ab')、F(ab')2、單鏈 Fv ( scFv)、Fv、 dsFv、雙功能抗體、Fd及Fd'片段）之工程改造，其保持原 始抗體之結合特異性。s亥等片段可藉由此項技術中已知之 各種方法來衍生’包括（但不限於）酶裂解、化學交聯、 重組方法或其組合。一般，所衍生之抗體片段共有相同或 實質上相同的親本抗體之重鏈可變區（VH)及輕鏈可變區 (VL )，以使得抗體片段及親本抗體結合相同抗原決定基。 如本文中所使用’「親本抗體（parent antib〇(jy )」或「來 源抗體（source antibody )」指衍生得到抗體片段（例如以匕、 F(ab，）、F(ab|)2、單鏈 Fv (scFv)、Fv、dsFv、雙功能抗體、 Fd及Fd'片段）之抗體。 如本文中所使用，術語「抗原決定基（epit〇pe)」指抗 原上結合抗體互補位之任何抗原決定子。抗原決定子典型 地含有分子之化學活性表面_(諸如胺基酸或糖側鍵）且 典型地具有特定三維結構特徵，以及荷質比特徵。 如本文中所使用，嵌合多肽指含有來自至少兩種不同 多肽或來自單一多月太之兩個不相連部分之部分的多肽。因 此，欲合多肽-般包括來自一種多肽之全部或部分的胺基 41 201201839 酸殘基序列及來自另-種不同多肽之全部或部分的胺基酸 序列。兩個部分可直接或㈣連接且可經由肽鍵、其他共
價鍵或具有足以在平衡條件及生理條件下（諸如在等張pH 7緩衝生理食鹽水中）維持後合多肽之實質部分之完整性的 強度之其他非共價相互作用連接。出於本文之目的，嵌合 多肽包括含有抗RSV抗體之全部或部分連接於另一多狀 (例如多聚化域、異源性免疫球蛋⑽定域或構架區或珍斷 性或治療性多肽）之多肽。 如本文中所使用，融合蛋白為經工程改造以含有對應 於兩種不同多狀之胺錢序歹㈣多狀，該等胺基酸序列連 接在一起，諸如自沿載體長度含有彼此極接近（例如鄰接） 之編碼兩種多肽之兩種核酸的載體表現融合蛋白。一般， 本文所提供之融合蛋白指含有具有抗體或其抗原結合片段 之胺基酸序列的多肽及具有異源多肽或肽（例如診斷性或 治療性多肽）之胺基酸序列的多肽或肽之多肽。因此，融 合蛋白指含有直接連接或經由肽鍵間接連接之兩種或更多 種蛋白為或狀或來自其之部分的嵌合蛋白。兩種分子可在 構桌體中鄰接或由連接子或間隔子多肽分隔。該間隔子可 編碼改變多肽性質（諸如溶解性或細胞内遷移）之多肽。 如本文中所使用，「連接子（linker )」或「間隔子 (spacer )」肽指連接兩個多肽序列（或編碼該胺基酸序列之 核酸）之短胺基酸序列。「肽連接子（PeptideHnker)」指連 接兩個多肽序列之短胺基酸序列。例示性多肽連接子為使 肽轉導域連接於抗體之連接子或在合成抗體片段（諸如 42 201201839 scFv片段）巾連接兩個抗體鏈之連接子。連接子為熟知的 且任何已知連接子均可用於所提供之方法中。例示性多肽 連接子為⑹y-Ser)n胺基酸序列，一些㈣或以殘基分散 於整個胺基酸序列中以增加溶解性。本文描述其他例示性 連接子Η壬何此等及其他已知連接子均可用於所提供之組 成物及方法。 如本文中所使用，「抗體鉸鏈區（antibody hinge region)」或「鉸鏈區（hinge regi〇n)j指天然存在於γ、占 及《抗體同型之重鏈中位於Ch1與Ch2域之間的多肽區， 其與其他抗體域無同源性。此區富含脯胺酸殘基且賦予 IgG、IgD及IgA抗體可撓性，允許Fab部分之兩個「臂」 (各含有一個抗體結合部位）移動’從而當其結合抗原時彼 此呈現各種角度。此可撓性允許Fab臂移動以對準抗體結 合部位，從而與細胞表面或其他抗原上之抗原決定基相互 作用。鉸鏈區中之兩個鏈間二硫鍵使兩個重鏈間之相互作 用穩定。在本文所.提供之一些具體實例中，合成產生之抗 體片段含有一或多個鉸鏈區，例如經由兩個抗體鏈間之相 互作用it尚穩定性。鼓鍵區為例示性二聚化域。 如本文中所使用’雙功能抗體為二聚scFv ;與scFv相 比，雙功能抗體典型地具有較短肽連接子，且優先二聚化。 如本文中所使用，人類化抗體指經修飾以包括「人類」 胺基酸序列以使得投予人類不會引起免疫反應之抗體。人 類化抗體典型地含有來源於非人類物種免疫球蛋白之互補 決定區（CDR)及主要來源於人類免疫球蛋白之抗體分子剩 43 201201839 餘部分。製備該等抗體之方法為已知的。舉例而言，編碼 單株抗體之DNA可藉由重組DNA技術改變以編碼非可變 區之胺基酸組成基於人類抗體之抗體。鑑別該等區域之方 法為已知的，包括電腦程式，其設計成鑑別免疫球蛋白之 可變及非可變區。 如本文中所使用，個體遺傳型指對免疫球蛋白分子之 可變區具有特異性之一或多個抗原決定子的集合。 如本文中所使用，抗個體遺傳型抗體指針對抗體或τ 細胞受體之序列之抗原特異性部分的抗體。原則上，抗個 體遺傳型抗體抑制特異性免疫反應。 如本文中所使用，Ig域為如此由熟習此項技術者識別 之域’其特徵為稱為免疫球蛋白（Ig )摺疊之結構，該結構 含有兩個/3摺疊片’各含有由環連接之胺基酸反平行0股。 Ig摺疊中之兩個β片藉由疏水性相互作用及保守性鍵内二 硫鍵而夾在一起。抗體鏈中之個別免疫球蛋白域另外可基 於功能加以區分。舉例而言，輕鏈含有一個可變區域 (variable region domain) ( VL)及一個恆定區域（cL)，而 重鏈含有一個可變區域（VH )及三個或四個恆定區域（cH )。 vL、cL、VH及CH域各為免疫球蛋白域之實例。 如本文中所使用，可變域或可變區為抗體重鏈或輕鏈 之特異性Ig域，其含有在不同抗體間變化之胺基酸序列。 每一輕鏈及每一重鏈各具有一個可變區域，分別為及 νΗ。可變域提供抗原特異性，且因此負貴抗原識別。每一 可變區含有作為抗原結合部位域及構架區（FR )之一部分 44 201201839 的 CDR。 如本文中所使用，「抗原結合域（antigen_binding d〇main )」、「抗原結合部位（antigen-binding site )」、「抗原 組合部位（antigen combining site )」及「抗體結合部位 (antibody combining site )」同義地用於指抗體中識別同源 抗原且實體上與其相互作用之域。天然習知全長抗體分子 具有兩個習知抗原結合部位’各含有重鏈可變區之部分及 輕鏈可變區之部分。習知抗原結合部位含有連接可變區域 中之反平行0股的環。抗原組合部位可含有可變區域之其 他部分。每一習知抗原結合部位各含有三個來自重鏈之高 變區及三個來自輕鏈之高變區。高變區亦稱為互補決定區 (CDR)。 如本文中所使用，「高變區（hypervariable regi〇n )」、 「HV」、「互補決定區（compiementarity_deterinining regi〇n)」 及「CDR」及「抗體CDR (antibody CDR)」可互換地用於 指每一可變區中一起形成抗體之抗原結合部位的複數個部 分之一。每一可變區域含有三個CDR，稱為CDR1、CDR2 及CDR3。三個CDR沿線性胺基酸序列為不相連的，但在 經摺疊多肽中為接近的。CDR位於連接可變域之0片之平 行股的環中。如本文所述，熟習此項技術者已知且可基於 Kabat或Chothia編號鑑別CDR (參見例如Kabat，Ε Α·等人 、\99\) Sequences of Proteins of Immunol〇gicai Interest，第
五版，U.S· Department of Health and Human Services，NIH 出版號 91-3242，及 Chothia，C·等人（1987) j μ〇/ 5ζ·〇/ 45 201201839 196:901-917 )。 如本文中所使用，構架區（FR )為抗體可變區域中位 於/3片中之域；就胺基酸序列而言，與高變區相比，pR區 之保守性相對更大。 如本文中所使用，「恆定區（constant region )」域為抗 體重鏈或輕鏈中含有與可變區域相比保守性相對更大@ $ 基酸序列之域。在習知全長抗體分子中，每一輕鏈具有單 一輕鏈恆定區（Cl)域且每一重鏈含有一或多個重鏈恆定 區（CH)域，其包括CH1、CH1、CH2、CH3及cH4。全長 IgA'IgD及IgG同型含有Ch1、Ch2、Ch3及鏡鍵區，而igE 及IgM含有CH1、Ch2、CH3及Ch4。CH1及CL域延長抗體 分子之Fab臂，因此促進與抗原之相互作用及抗體臂之旋 轉。抗體恆定區可發揮效應功能，諸如（但不限於）清除 抗體特異性結合之抗原、病原體及毒素，例如經由與各種 細胞、生物分子及組織相互作用。 如本文中所使用’抗體之功能區為抗體中含有至少抗 體之VH、VL、CH (例如CH卜CH2或CH3)、CL或鉸鏈區域 (hinge region domain)或至少其功能區的一部分。 如本文中所使用，VH域之功能區為完整Vh域中保留完 整vH域之至少一部分結合特異性（例如藉由保留完整Vh 域之一或多個CDR)的至少一部分，以使得單獨Vh域之功 能區或該功能區與另一抗體域（例如％域）或其區之組合 結合於抗原。VH域之例示性功能區為含有％域之cdri、 CDR2及/或CDR3的區。 46 201201839 • 如本文中所使用，vl域之功能區為完整VL域中保留完 ^ 整Vl域之至少一部分結合特異性（例如藉由保留完整\ 域之一或多個CDR)的至少一部分，以使得單獨vL域之功 能區或該功能區與另一抗體域（例如VH域）或其區之組合 結合於抗原。VL域之例示性功能區為含有域之CDR 1、 CDR2及/或CDR3的區。 如本文中所使用，關於抗體或其抗原結合片段，「特異 性結合」或「免疫特異性結合」在本文中可互換使用且係 指抗體或抗原結合片段與同源抗原藉由抗體之抗體結合部 位與抗原之間的非共價相互作用來形成一或多個非共價鍵 之能力。抗原可為分離之抗原或以病毒形式呈現。典型地， 免疫特異性結合（或特異性結合）於病毒抗原或病毒之抗 體為以約lxlO7 M-1或lxlO8 NT丨或更高、或ιχ1〇7 Μ·丨或 1χ10 Μ1或更高的之親和力常數Ka(或1χι〇-7μ或ΐχΐ〇-8 Μ或IxlO·8 Μ以下之解離常數（Kd))結合於病毒抗原（或 病毒中之抗原或病毒）之抗體。親和力常數可藉由用於抗 體反應之標準動力學方法來測定，例如免疫檢定、表面電 衆子共振（SPR) ( Rich 及 Myszka (2000) Cwrr.
Biotechnol 11：54 ； Englebienne (1998) Analyst. 123:1599 ) ' 等溫滴定熱量測定（ITC )或此項技術中已知之其他動力學 相互作用檢定（參見例如Paul編，Fundamental Immun〇i〇gy， 第 2 版，Raven press，New York，第 332 336 頁（1989);亦 參見美國專利第7,229,619號，其描述用於計算抗RSV抗體 之結合親和力的例示性SPR及ITC方法：^用於結合速率之 47 201201839 實時偵測及監測的儀器及方法為已知的且可購得（例如 BiaCore 2000, Biacore AB, Upsala, Sweden and GE Healthcare Life Sciences; Malmqvist (2000) Biochem. Soc. 27:335 )。免疫特異性結合於病毒抗原（或病毒）之 抗體可以相等或較低結合親和力結合於其他肽、多肽或蛋 白質或病毒。典型地，本文所提供之免疫特異性結合於RSV F蛋白（或RSV病毒）的抗體或其抗原結合片段不與其他 抗原交叉反應，或以實質上（至少10-100倍）較低親和力 與該等抗原交叉反應。免疫特異性結合於特定病毒抗原（例 如RSV F蛋白）之抗體或抗原結合片段可例如藉由免疫檢 定（諸如放射免疫檢定（RIA )、酶聯免疫吸附檢定 (ELIS A ))、表面電漿子共振或熟習此項技術者已知之其他 技術來鑑別。如使用諸如（但不限於）免疫檢定.、表面電 漿子共振或熟習此項技術者已知之其他技術的實驗技術所 測定，免疫特異性結合於RSV F蛋白上之抗原衫基的抗 體或其抗原結合片段典型地為結合於抗原決定基（蛋白質 或病’中呈現）之結合親和力高於結合於任何交又反應性 抗原決定基之結合親和力的抗體或其抗原結合片段 Γν = :Γ分離之黯蛋白(亦即重組產生蛋白)(諸如 異.…及二疋意謂抗體將展現相同的對病毒之免疫特 、匕。5及/或中和。該等量測及性 抗原結合片段斜於广主* 7測疋k體或 出於本女夕 ；病毋或如病毒中呈現之抗原的親和力。 丄\ 田描边親和力或相關術語時，將极KlI & 如分離之蛋白質或病毒的目標。 紅別造 48 201201839 如本文中所使用，術語「表面電漿子共振（surface plasmon resonance )」指允許藉由例如使用BiaCore系統（GE Healthcare Life Sciences )偵測生物感測器基質中之蛋白質 濃度變化來分析實時相互作用的光學現象。 如本文中所使用，「多價（multivalent )」抗體為含有兩 個或更多個抗原結合部位之抗體。多價抗體涵蓋二價、三 價、四價、五價、六價、七價或更高價數抗體。 如本文中所使用，「單特異性（monospecific)」為含有 兩個或更多個抗原結合部位之抗體，其中每一抗原結合部 位免疫特異性結合於相同抗原決定基。 如本文中所使用，「多特異性（multispecific)」抗體為 含有兩個或更多個抗原結合部位之抗體，其中至少兩個抗 原結合部位免疫特異性結合於不同抗原決定基。 如本文中所使用，「雙特異性（bispecific )」抗體為含 有兩個或更多個抗原結合部位且可免疫特異性結合於兩個 不同抗原決定基之多特異性抗體。「三特異性（trispecific )」 抗體為含有三個或更多個抗原結合部位且可免疫特異性結 合於三個不同抗原決定基之多特異性抗體，「四特異性 (tetraspecific )」抗體為含有四個或更多個抗原結合部位且 可免疫特異性結合於四個不同抗原決定基之多特異性抗 體，諸如此類。 如本文中所使用，「異型二價（heterobivalent )」抗體 為含有兩個抗原結合部位之雙特異性抗體，其中每一抗原 結合部位免疫特異性結合於不同抗原決定基。 49 201201839 如本文中所使用，「同型二價（homobivalent)」抗體為 含有兩個抗原結合部位之單特異性抗體，其中每一抗原結 合部位免疫特異性結合於相同抗原決定基。同型二價抗體 包括（但不.限於）習知全長抗體、工程改造或合成全長抗 體、兩個相同抗原結合片段之任何多聚體、或含有相同抗 原結合域之兩個抗原結合片段之任何多聚體。 如本文中所使用’多聚化域指提高多肽分子與一或多 種其他多肽分子之穩定相互作用的胺基酸序列，該等多肽 分子各含有互補多聚化域’其可為相同或不同多聚化域以 與第一域形成穩定多聚體。一般，多肽直接或間接連接於 多聚化域。例示性多聚化域包括免疫球蛋白序列或其一部 分、白胺酸拉鏈、疏水性區、親水性區及相容蛋白質-蛋白 質相互作用域。多聚化域例如可為免疫球蛋白恆定區或恆 定域’例如來自IgG(包括igGl、igG2、IgG3或IgG4亞型）、 IgA、IgE、IgD及IgM及其經修飾形式之Fc域或其一部分。 如本文中所使用，二聚化域為有助於兩個多肽序列（諸 如（但不限於）抗體鏈）之間相互作用的多聚化域。二聚 化域包括（但不限於）含有有助於形成兩個多肽序列之間 的二硫鍵之半胱胺酸殘基之胺基酸序列，諸如全長抗體鉸 鏈區之全部或部分：或一或多個二聚化序列，其為已知促 進多肽（例如白胺酸拉鏈、GCN4拉鏈）之間相互作用的胺 基酸序列。 如本文中所使用，「Fc」或「Fc區（Fc region)」或「Fc 域（Fc domain )」指含有抗體重鏈之恆定區的多肽，其不包 201201839 括第-恒定區免疫球蛋白域。因此，^指IgA、lgD及啡 之最後二個恆定區免疫球蛋白域，或lgE及igM之最後三 個怪定區免疫球蛋自域。視情況，Fe域可包括位於此等域 之N端的可撓性较鏈之全部或部分。對於lgA及咖，& 可包括J鏈。對於IgG之例示性Fc域，Fc含有免疫球蛋白 域C72及⑽’及視情況存在之⑼肖印之間的鼓鍵之 全部或部分。Fe區之邊界可改變，但典型地包括较鍵區之 至少一部分。另外，Fc亦包括任何對偶基因或物種變異體 或任何變異體或經修飾形式，諸如改變FcR結合或改變& 介導性效應功能之任何變異體或經修飾形式。 如本文中所使用，「Fc嵌合體（Fcchimera)」指一或多 個多肽直接或間接連接於Fc區或其衍生物而成之嵌合多 肽。典型地，Fc嵌合體組合免疫球蛋白之Fc區與另一多肽 (例如抗RSV抗體片段）。Fc多肽衍生物或經修飾Fc多肽 為熟習此項技術者所已知。 如本文中所使用’「蛋白質轉導域（㈣咖 domain)」或「PTD」為可與蛋白質（諸如本文所提供之抗 體）結合以促進蛋白質連接於目標細胞及/或攝取至目標細 胞中之肽域。 如本文中所使用，「標籤（tag)」3戈「抗原決定基標籤 (epitope tag)」指典型地添加至多肽（諸如本文所提供之抗 體）之N或C端的胺基酸序列。包括與多肽融合之標籤= 有助於多肽純化及/或偵測。典㈣，標籤或標❹：指如 下多1 :具有；I夠殘基以提供由抗體識別之抗原決定基或 51 201201839 可用則貞 >則或純化，仍足夠短以使得其不會干擾其所連接 之嵌合多肽的活性。標籤多肽典型地足夠獨特，因此特異 性結合於其之抗體並不實質上與其所連接之多肽中之抗原 決疋基父又反應。適合之標籤多肽一般具有至少5或6個 胺基酸殘基且通常為約8_5〇個胺基酸殘基，典型地為9 3〇 個殘基。標籤可連接於多聚體中之一或多個嵌合多肽且允 許偵測多聚體或其自樣品或混合物回收。該等標籤為眾所 周知的且可容易合成及設計。例示性標籤多肽包括用於親 和純化之標籤多肽，包括His標籤、流行性感冒血球凝集素 (HA)標籤多肽及其抗體i2CA5 (Field等人（1988) Μί?/
Ce//. 5ζ·〇/· 159-2165 ); c-myc 標藏及其 8F9、3C7、6Ε10、 G4' B7 及 9E1 0 抗體（參見例如 Evan 等人（1985) Mo/ecw/ar
Ce//w/ar 叹少5 :3610-3616 );及單純疱疹病毒醣蛋 白D(gD)標籤及其抗體（pab〇rsky等人（1990)尸roiez.n 心gheerkg 3:547-553 (1990))。用於偵測標記抗原決定基 之抗體的抗體在本文中典型地稱為二級抗體。 如本文中所使用’「多肽（polypeptide )」指共價連接之 兩個或更多個胺基酸。術語「多肽」及「蛋白質（protein )」 在本文中可互換使用。 如本文中所使用，「肽（peptide )」指長度為2個至約 40個或40個胺基酸之多肽。 如本文中所使用，「胺基酸（amino acid )」為含有胺基 及羧酸基之有機化合物。多肽含有兩個或更多個胺基酸。 出於本文之目的，所提供抗體中所含之胺基酸包括二十種 52 201201839 天然存在《胺基㉟（I !)、非天然胺I酸及胺基酸類似物 (例如碳具有侧鏈之胺基酸）。如本文中所使用，根據熟 知之三字母或單字母縮寫（參見表υ鑑別本文中出現之多 肽的各種胺基酸序列中存在之胺基酸。各種核酸分子及片 段中存在之核苷酸以此項技術中常用之標準單字母名稱命 名。 如本文中所使用’「月女基酸殘基（amin〇 acid residue ) _| 指多肽在其肽鍵聯處經化學消化（水解）時所形成之胺基 酸。本文所述之胺基酸殘基一般呈rL」異構形式。可用呈 「D」異構形式之殘基取代任何L_胺基酸殘基，只要多肽保 留所需功能性質即可。NH2指存在於多肽胺基端之自由胺 基。COOH指存在於多肽羧基端之自由羧基。與丄出夂 C/iew·，243:3557-59 (1968)中所述及 37 C.F.R. §§ 1.821 - 1 ·822所採用之標準多肽命名法一致，胺基酸殘基之縮寫展 示於表1中： 表1-對應表 η% -- 1字母 3字母 胺基酸 Υ Tyr 酪胺酸 G ~Gly ' 甘胺酸 F Phe 苯丙胺酸 Μ Met 甲硫胺酸 A Ala 丙胺酸 S Ser 絲胺酸 I lie — 異白胺酸 L Leu 白胺酸 T Thr 蘇胺酸 V Val 纈胺酸 P Pro 脯胺酸 53 201201839 符號 K Lys 離胺酸 Η His 組胺酸 Q Gin 麩醢胺酸 Ε Glu 麩胺酸 Ζ Glx 麩胺酸及/或麩醯胺酸 W Tip 色胺酸 R Arg 精胺酸 D Asp 天冬胺酸 Ν Asn 天冬醯胺 Β Asx 天冬胺酸及/或天冬醯胺 C Cys 半胱胺酸 X Xaa 未知或其他胺基酸 本文中由式表示之所有胺基酸殘基序列均在胺基端至 羧基端之習知方向上具有左至右位向。另外，「胺基酸殘基」 一詞經定義包括對應表（表1)中所列之胺基酸、經修飾、 非天然及罕見的胺基酸。此外，胺基酸殘基序列之開始或 末端處的虛線指示鍵結於一或多個胺基酸殘基之另一序列 或胺基端基團（諸如NH2)或羧基端基團（諸如COOH)之 肽鍵。 在肽或蛋白質中，胺基酸之適合的保守性取代為熟習 此項技術者所已知且一般可在不改變所得分子生物活性之 情況下進行。熟習此項技術者認識到，一般而言，多肽之 非必需區中的單一 i安基酸取代並不實質上改變生物活性 (參見例如 Watson 等人，Mo/ecw/ar 〇/ Me 第 4 版，1 987, The Benjamin/Cummings Pub. co.，第 224 頁）。 該等取代可根據如下表2中所陳述之例示性取代來進 行： 54 201201839 表2 原始殘基 保守性取代 Ala (A) Gly ； Ser Arg (R) Lys Asn (N) Gin ； His Cys (C) Ser Gin (Q) Asn Glu (E) Asp Gly (G) Ala ； Pro His (H) Asn ； Gin He (I) Leu ; Val Leu (L) lie ; Val Lys (K) Arg ; Gin ; Glu Met (M) Leu ; Tyr ; lie Phe (F) Met ; Leu ; Tyr Ser (S) Thr Thr (T) Ser Trp (W) Tyr Tyr (Y) Trp ； Phe Val (V) lie ; Leu 其他取代亦為允許的且可憑經驗或根據其他已知保守 性或非保守性取代來確定。 如本文中所使用，「天然存在之胺基酸（naturally occurring amino acids)」指多肽中存在之20種L-胺基酸。 如本文中所使用，術語「非天然胺基酸（.non-natural amino acid )」指具有類似於天然胺基酸之結構但結構上已 經修飾成模擬天然胺基酸之結構及活性的有機化合物。因 此，非天然存在之胺基酸包括例如除20種天然存在之胺基 酸外的胺基酸或胺基酸類似物，且包括（但不限於）胺基 酸之D-立體異構體（isostereomer )。例示性非天然胺基酸 為熟習此項技術者所已知，且包括（但不限於）2-胺基己二 酸（Aad)、3-胺基己二酸（Baad)、卜丙胺酸/j3-胺基-丙酸 55 201201839 (Bala) ' 2-胺基丁酸（Abu)、4-胺基丁酸/哌啶酸（4Abu) ' 6-胺基己酸（Acp)' 2-胺基庚酸（Ahe)、2-胺基異丁酸（Aib)、 3-胺基異丁酸（3&化）、2-胺基庚二酸（八？111)、2,4-二胺基 丁酸（Dbu)、鎖鏈素（Des)、2,2·-二胺基庚二酸（Dpm)、 2,3-二胺基丙酸（Dpr)、N-乙基甘胺酸（EtGly)、N-乙基天 冬醯胺（Et Asn )、羥離胺酸（Hyl )、別羥離胺酸（Ahyl )、 3-羥脯胺酸（3Hyp)、4-羥脯胺酸（4Hyp)、異鎖鏈素（Ide)、 別異白胺酸（Aile )、N-甲基甘胺酸、肌胺酸（MeGly )、N-甲基異白胺酸（Melle ) ' 6-N-曱基離胺酸（MeLys )、N-甲 基纈胺酸（MeVal )、正纈胺酸（Nva )、正白胺酸（Nle )及 鳥胺酸（Orn )。 如本文中所使用，「天然多肽（native p〇iypeptide )」或 「天然核酸（native nucleic acid )」分子分別為自然界中可見 之多肽或核酸分子。天然多肽或核酸分子可為多肽或核酸 分子之野生型形式。天然多肽或核酸分子可為多肽之主要 形式’或其任何對偶基因或其他天然變異體。與天然多肽 及核酸分子相比，本文所提供之變異多肽及核酸分子可具 有修飾。‘ 如本文中所使用，多肽或核酸分子之野生型形式為 基因或由基因編碼之編碼序列編碼之形式。典型地，基 或由其編碼之分子的野生型形式不含有突變或改變功能 結構之其他修飾。術語野生型亦涵蓋具有如在物種間發 之對偶基因變異的形式。如本文中所使用，多肽或核酸 子之主要形式指呈由基因產生之主要形式的分子形式。「 56 201201839 要形式（predominant f0rm )」隨來源不同而變化。舉例而言’ 不同細胞或組織類型可產生不同形式之多肽，例如藉由替 代性剪接及/或藉由替代性蛋白質加工來實現。在每一細胞 或組織類型中，不同多肽可為「主要形式」。 如本文中所使用，「對偶基因變異體（allelic vadant)」 或「對偶基因變異（allelic variati〇n)」指佔據同—染色體 基因座之基因的兩個或更多個替代形式中之任一者。對偶 基因變異經由突變天然出現，且會導致群體中之表型多形 現象。基因突變可為沉默的（所編碼之多肽無變化）或可 編碼具有改變之胺基酸序列的多肽。術語「對偶基因變異 體」亦在本文中用於表示由基因之對偶基因變異體編碼的 蛋白資典型地，基因之提及形式編碼來自物種群體或單 個提及成員之多肽的野生型形式及/或主要形式。典型地， 包括物種間之變異體的對偶基因變異體與來自同一物種之 野生型及/或主要形式典型地具有至少8〇%、85Q/。' 9〇%、％% 或更高或約80〇/〇、85%、90%、95。/。或更高的胺基酸一致性； 一致性程度視基因及比較為種間或種内而定。一般，種内 對偶基因變異體與野生型及/或主要形式具有至少8〇%、 85 /〇、90%或95%或更高的一致性或約8〇%、85〇/。、9〇%或 95%或更高的一致性，包括與多肽之野生型及/或主要形式 具有96%、97%、98%、99%或更高的一致性。本文令提及 之對偶基因變異體一般指同一物種之成員間的蛋白質變異 體。 〃 如本文中所使用，「對偶基因（aUele)」在本文十可與 57 201201839 「對偶基因變異體」互換使用，指基因或其—部分之替代形 式。對偶基因佔據同源染色體上之同一基因座或位置。當 個體具有基因之兩個相同對偶基因時，該個體稱為該基： 或對偶基因之同型接合子。當個體具有基因之兩個不：對 偶基因時，該個體稱為該基因之異形接合子。特定基因之 對偶基因可在單個核芽酸或數個核苦酸中互不相同^且可 包括核替酸之取代'缺失及插入。基因之對偶基因亦可為 含有突變之基因形式。 如本文中所使用，「物種變異體（speciesvadants)」指 不同物種間之多肽變異體，包括不同哺乳動物物種（諸： 小鼠及人類）及微生物物種（諸如病毒及細菌）。 如本文中所使用，多肽「域（domain)」為多肽中結構 上及/或功能上可區分或可定義之一部分（具有三個或更多 個、一般5個 '丨〇個或更多個胺基酸之序列）。例示性多肽 域為多肽中可形成多肽中之獨立摺疊結構的一部分，其由 一或多個結構基元（例如由環區連接之α螺旋及/或卢股之 組合）構成及/或藉由特定功能活性（諸如酶活性、二聚化 或抗原結合）識別。多肽可具有一或多個、典型地多於一 個不同域。舉例而言，多肽可具有一或多個結構域及一或 夕個功能域。單一多肽域可基於結構及功能加以區分。域 可涵蓋相連的線性胺基酸序列。或者，域可涵蓋複數個不 相連胺基酸部分，其沿多肽之線性胺基酸序列為不相連 的。典型地’多肽含有複數個域。舉例而言，抗體分子之 每一重鍵及每一輕鏈含有複數個免疫球蛋白（Ig)域，每一 58 201201839 域之長度為約11 0個胺基酸。 熟習此項技術者熟悉多肽域且可根據與其他該等域之 結構及/或功能同源性來鑑別該等域。本文中為了進行例 示，提供定義，但應瞭解以名稱識別特定域完全在此項技 術中之能力範圍内。需要時，可使用適當軟體來鑑別域。 如本文中所使用，多肽之功能區為多肽中含有至少一 個功能域（其賦予特定功能，諸如與生物分子相互作用之 能力，例如經由抗原結合、DNA、结合、配位體結合或二聚 化，或藉由酶活性，例如激酶活性或蛋白水解活性）之區 域；多肽之例示性功能區為抗體域，諸如Vh、I、cH、q /、P刀諸如CDR (包括CDR1、CDR2及CDR3 )或抗 原結合部分（諸如抗體結合部位）。 如本文中所使用，多肽之結構區為多肽中含有至少一 個結構域之區域。 匕如本文中所使用，多肽（諸如抗體）之「性質（proper)」 指多肽所展現之任何性質’包括（但不限於）結合特昱性、 結構構型或構形、蛋白質穩定性、對蛋白水解之抗性、構 形穩定性、熱耐受性及對阳值條件之耐受性。性質變化可 文欠多肽之「活性」。舉例而言，抗體多肽之結合特異性變 化可改變結合抗原之能力，及/或各種結合活性（諸如親和 力或親和性），或多肽之活體内活性。 。「士本文中所使用，多肽（諸如抗體）之「活性（」 或「功能活性（funCti〇nal activity)」指多肽所展現之任何 活性。該等活性可憑經驗確定。例示性活性包括（但不限
59 S 201201839 於）與生物分子相互作用之能力，例如經由抗原結合、dna 結合、配位體結合或二聚化'酶活性（例如激酶活性或蛋 白水解活性）。對於抗體（包括抗體片段），活性包括（但 不限於）特異性結合特定抗原之能力；抗原結合之親和力， 例如高或低親和力；抗原結合之親和性，例如高或低親和 性；締合速率；解離速率；效應功能，諸如促進抗原中和 或清除之能力；病毒中和；及活體内活性，諸如預防病原 體感染或侵襲、或促進清除、或滲透體内特定組織或流體 或細胞之能力。可使用公認之檢定來試管内或活體内評估 活性，諸如ELISA、流動式細胞測量術、表面電漿子共振 或3:測締合或解離速率之等效檢定、免疫組織化學及免疫 螢光組織學及顯微法、基於細胞之檢定、流動式細胞測量 術及結合檢定（例如淘選檢定）。舉例而言，對於抗體多肽， 可如下s平估活性：試管内量測結合親和力、親和性及/或結 合係數（例如針對締合/解離速率）及其他活性，或活體内 量測各種效應，諸如免疫效應，例如抗原清除、抗體滲透 或定位於組織中、針對疾病（例如感染）之保護 '血清或 其他流體抗體效價，或進行此項技術中熟知之其他檢定。 δ亥等檢疋之結果指示’多肽展現之活性可能與活體内多肽 活性有關，其中活體内活性可稱為治療性活性或生物活 性。經修飾多肽之活性可為未經修飾多肽之活性的任何百 分比值，包括（但不限於）與未經修飾多肽相比為活性之 1%、活性之 2%、3% ' 4%、5% ' 10% ' 20%、30%、40%、 50 /〇、60%、70%、80%、90%、91 %、92%、93%、94%、95%、 60 201201839 96%、97%、98%、99%、ι〇〇〇/〇、2〇〇〇/0、300〇/〇、400〇/〇、500〇/〇 或更高。測定經修飾（例如變異）抗體之功能或活性的檢 定為此項技術所熟知。 如本文中戶气使用’「治療性活性（therapeutic activity )」 才曰/台療性少肽之/舌體内活性。一般’治療性活性為用於治 療疾病或病狀之活性。經修飾多肽之治療性活性可為未經 修飾多肽之治療性活性的任何百分比值，包括（但不限於） 與未經修飾多肽相比為活性之1 %、治療性活性之2%、3 %、 4%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、 100%、200%、300%、400%、500%或更高。 如本文中所使用，「展現至少一種活性（exhibits at least one activity )」或「保留至少一種活性（retains at卜⑽〇此 activity)」指與不含有修飾之目標或未經修飾多肽相比，經 修飾多肽，諸如根據所提供方法產生之變異多肽，諸如經 修飾（例如變異）抗體或.其他治療性多肽（例如經修飾抗 RSV抗體或其抗原結合片段）所展現之活性。保留目標多 肽之活性的經修飾或變異多肽可展現改良之活性或維持未 經修飾多肽之活性。在一些情況下，經修飾或變異多肽可 保留與目標或未經修飾多肽相比增加之活性。在一些情況 下，經修飾或變異多肽可保留與未經修飾或目標多肽相比 降低之活性。經修飾或變異多肽之活性可為未經修倚或目 標多肽之活性的任何百分比值，包括（但不限於）與未經 修飾或目標多肽相比為活性之1%、活性之2%、3%、4%、 61 201201839 5 0/〇、1 0 %、2 0 % ' 3 0 %、4 0 %、5 0 %、6 0 %、7 0 %、8 0 %、9 0 %、 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、100%、 200%、300%、400%、500%或更高。在其他具體實例中， 活性變化為未經修飾或目標多肽之至少約2倍、3倍、4倍、 « 5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、40倍、 50 倍、60 倍、70 倍、80 倍、90 倍、1〇〇 倍、2〇〇 倍、3〇〇 倍、400 倍、500 倍、600 倍、700 倍、8〇〇 倍、900 倍、1〇〇〇 倍或更大倍數。針對活性保留之檢定視待保留之活性而 定。該等檢定可試管内或活體内進行。可例如使用此項技 術中已知及以下實施例中對於活性所述之檢定來量測活 性，諸如（但不限於）ELISA及淘選檢定。與未經修飾或 目標多肽相比，經修飾或變異多肽之活性亦可就投予多肽 後之活體内治療性或生物活性或結果進行評估。 如本文中所使用，術語「評估（assessing)」意欲包括 在獲得樣品中存在之蛋白酶或其域之活性的絕對值以及獲 得指示活性程度之指數、比率、百分比、視覺或其他值之 意義上之定量及定性測定。評估可為直接或間接的，當然， 實際偵測之化學物質不必為蛋白水解產物本身但可例如 為其衍生物或其他-些物質。舉例而纟，偵測補體蛋白之 裂解產物，諸如利用SDS_PAGE及用庫馬斯藍（Co — e blue)進行蛋白質染色。 如本文中所使用，「核酸（nucleic acid)」指至少兩個 連接之核苷酸或核皆酸衍生物，包括連接在一起（典型地 由磷酸二㈣聯）之去氧核糖核酸（DNa)與核糖核酸 62 201201839 (RNA )。術語「核酸」亦包括核酸類似物，諸如肽核酸 (PNA )、硫代磷酸酯DNA及其他該等類似物及衍生物或其 組合。核酸亦包括含有例如核苷酸類似物或除磷酸二酯鍵 外之「主鏈」鍵的DNA及RNA衍生物，該「主鏈」鍵為 例如磷酸三酯鍵、胺基磷酸酯鍵、硫代磷酸酯鍵、硫酯鍵 或肽鍵（肽核酸）。該術語亦包括作為等效物之由核苷酸類 似物、單股（有義或反義）及雙股核酸製成之RNA或DNA 的衍生物、變異體及類似物。去氧核糖核苷酸包括去氧腺 苷、去氧胞苷、去氧鳥苷及去氧胸苷。對於RNA，尿嘧啶 驗基為尿普。 核酸可含有核苷酸類似物，包括例如質量改變之核苷 酸’其允許核酸分子之質量差異；含有可偵測標記（諸如 螢光、放射性、發光或化學發光標記）之核苷酸，其允許 伯測核酸分子；或含有活性基團（諸如生物素或巯基）之 核苦酸，其有助於將核酸分子固定於固體支撐物。核酸亦 可含有一或多種可選擇性裂解之主鏈鍵，例如可以化學方 法、以酶方法或以光解方法裂解。舉例而言，核酸可包括 一或多種去氧核糖核苷酸，隨後為一或多種核糖核苷酸， 其後可為一或多種去氧核糖核苷酸，該序列可藉由鹼基水 解在核糖核苷酸序列處裂解，核酸亦可含有一或多種對裂 解具有相對抗性之鍵，例如嵌合寡核苷酸引子，其可包括 由肽核酸鍵連接之核苷酸及至少一個在3,端由磷酸二酯鍵 或其他適合之鍵連接的核苷酸，且能夠由聚合酶延長。肽 核酸序列可使用熟知方法製備（參見例如Weiler等人〇997) 63 201201839
Nucleic Acids Res. Ί5，.1Ί92-ΊΊ99、。 如本文中所使用，術語「聚核苷酸（polynucleotide)」 及「核酸分子（nucleic acid molecule )」指含有至少兩個連 接之核苷酸或核苷酸衍生物的寡聚物或聚合物，包括連接 在一起（典型地由磷酸二酯鍵聯）之去氧核糖核酸（DNA ) 與核糖核酸（RNA )。聚核苷酸亦包括含有例如核苷酸類似 物或除磷酸二酯鍵外之「主鏈」鍵的DNA及RNA衍生物， 該「主鏈」鍵為例如磷酸三酯鍵、胺基磷酸酯鍵、硫代石辨 酸酯鍵、硫酯鍵或肽鍵（肽核酸）。聚核苷酸（核酸分子） 包括單股及/或雙股聚核苷酸’諸如去氧核糖核酸（DNA ) 及核糖核酸（RNA )’以及RNA或DNA之類似物或衍生物。 該術語亦包括作為等效物之由核苷酸類似物、單股（有義 或反義）及雙股聚核苷酸製成之RNA或DNA的衍生物、 變異體及類似物。去氧核糖核苷酸包括去氧腺苷、去氧胞 苷、去氧鳥苷及去氧胸苷。對於RNA，尿喷咬驗基為尿苦。 聚核普酸可3有核皆酸類似物’包括例如質量改變之核苦 酸’其允許聚核苷酸之質量差異；含有可偵測標記（諸如 螢光、放射性、發光或化學發光標記）之核苷酸，其允許 偵測聚核苷酸；或含有活性基團（諸如生物素或酼基）之 核苷酸，其有助於將聚核苷酸固定於固體支撐物。聚核苷 酸亦可含有一或多種可選擇性裂解之主鏈鍵，例如可以化 學方法、以酶方法或以光解方法裂解。舉例而言，聚核苦 酸可包括-或多種去氧核糖核苦酸，隨後為一或多種核糖 核苷酸，其後可為一或多種去氧核糖核苷酸，該序列可藉 64 201201839 由鹼基水解在核糖核苷酸序列處裂解。聚核苷酸亦可含有 一或多種對裂解具有相對抗性之鍵，例如嵌合寡核苷酸引 子’其可包括由肽核酸鍵連接之核苷酸及至少一個在3,端 由碟酸二酯鍵或其他適合之鍵連接的核苷酸，且能夠由聚 合酶延長。肽核酸序列可使用熟知方法製備（參見例如
Weiler 等人（1997)施 c/eicJci A 25:2792-2799)。本文 所提供之例示性核酸分子（聚核苷酸）為寡核苷酸，包括 合成养核苷酸、寡核苷酸雙鏈體、引子（包括補平引子） 及寡核苦酸雙鍵體卡匿。 如本文中所使用，「DNA構築體（DNA c〇nstruct)」為 含有以自然界中未見之方式組合及鄰接之DNA區段的單股 或雙股、線性或環狀DNA分子。DNA構築體作為人類操作 之結果而存在，且包括所操作分子之純系及其他複本。 如本文中所使用，「DNA區段（DNAsegment)為具有 指定屬性之較大DNA分子的一部分。舉例而言，編碼指定 多肽之DNA區段為較長職分子之—部分，諸如質體或 質體片段’當其自5’至3’方向閱讀時編碼指定多肽之胺基 酸序列。 从艰你甘趿指 如枣文甲所使 .” π我Λ又」欢取 *酸雙鏈體’其與負股或「反義」股互補。在編瑪基因 聚核苦酸的情況下，有義股為與轉譯為多肽之錢股 致的股，而反義股與該股互補。雔 用又鍵體之正股與負股彼 互補》 如本文中所使用 遺傳7L件指編碼多肽或蛋白質或其 65 201201839 區域之基因或其任何區域。在一些實例中，遺傳元件編碼 融合蛋白。 如本文中所使用，核酸分子之調節區意謂積極或消極 地影響可操作地連接之基因之表現的順式作用核皆酸序 列。調節區包括使得基因表現可誘導（亦即需要物質或刺 激來增加轉錄）之核苷酸序列。當存在誘導物或其濃度增 加時，基因表現可增加。調節區亦包括使得基因表現受到 壓製（亦即物質或刺激降低轉錄）之序列。當存在壓製物 或其濃度增加時，基因表現可降低。已知調節區影響、調 節或控制許多活體内生物活性，包括細胞增殖、細胞生長 及死亡、細胞分化及免疫調節。調節區典型地結合於一或 多種反式作用蛋白質，此使得基因轉錄增加或減少。s 基因調節區之特定實例為啟動子及增強子。啟動子為 位於轉錄或轉譯起始部位附近之序列，典型地位於轉譯起 始部位之5'端。啟動子通常位於轉譯起始部位之丨Kb内， 但可位於更遠處，例如2 Kb、3 Kb、4 Kb、5 Kb或更遠、 至夕及包括10 Kb。已知當增強子位於基因之5,或3,端時， 或當位於外顯子或内含子中或其一部分中時，其影響基因 表現。增強子亦可在與基因間隔明顯距離處起作用，例如 間隔距離為約3Kb、5Kb、7Kb、1〇Kb、"Kb或更遠。 ^調節區除啟動子區外，亦包括（但不限於）：有助於轉 譯之序列’内含子之剪接信號，維持基因之正仙讀框架 乂允。午mRNA及終止密碼子、前導序列及融合搭配物序列 之同框轉1學，用於形成多基因或多順反子訊息之内部核糖 66 201201839 體結合部位（IRES )元件， 聚腺苷酸化的聚腺苷酸化信 況包括於表現載體中。 k供所關注基因轉錄物之適當 號，及終止密碼子，且可視情 如本文中所使用，關於核酸序列、⑤、元件或域，「可 操作地連接」意謂核酸區在功能上彼此相_。舉例而言， 編碼前導肽之《可操作地連接於編碼多肽之㈣1此 核酸可經轉錄並轉譯以表現功能性融合蛋白，#中該料 肽實現W合多肽之分泌。在—些情況下，編碼第—多狀（例 如前導肽）之核酸可操作地連接於編碼第二多肽之核酸且 該等核酸轉錄為單一 mRNA轉錄物，但⑽财轉錄物之轉 澤會導致兩種多肽中之—者得以表現。舉例而t，號#終 止密碼子可位於編碼第一多肽之核酸與編碼第二多肽之核 S文之間以使得當引入部分破ίέ抑制細胞中時，所得單— mRNA轉錄物可經轉擇以產生含有第一及第二多肽之融合 蛋白，或可經轉譯以僅產生第一多肽。在另一實例中，^ 動子可操作地連接於編碼多肽之核酸，藉此啟動子調節戋 介導核酸之轉錄。 如本文中所使用，關於例如合成核酸分子或合成基因 或合成肽，「合成（synthetic)」指藉由重組方法及/或藉由 化學合成方法產生之核酸分子或多肽分子。 如本文中所使用，藉由重組方法、藉由使用重組dna 方法產生意謂使用熟知分子生物學方法來表現由所選殖 DNA編碼之蛋白質。 如本文中所使用，「表現（exPression )」指藉由聚核苷 67 201201839 酸之轉錄及轉譯產生多肽之過程。多肽之表現量可使用此 項技術中已知之任何方法，包括例如測定由宿主細胞產生 之多肽之量的方法來評估。該等方法可包括（但不限於） 藉由ELISA、凝膠電泳後庫馬斯藍染色、洛瑞蛋白質檢定 (Lowry protein assay )及布萊德蛋白質檢定（Bradf〇rd protein assay )定量細胞溶解物中之多肽。 如本文中所使用，「宿主細胞」為用於接受、維持、再 生及擴增載體之細胞。宿主細胞亦可用於表現由載體編碼 之多肽。當宿主細胞分裂時，載體中所含之核酸複製，從 而擴增核酸。在一實例中，宿主細胞為基因封裝，其可經 誘導以在其表面上表現變異多肽。在另一實例中，宿主細 胞感染該基因封裝。舉例而言，宿主細胞可為噬菌體呈現 相容性宿主細胞，其可經噬菌體或噬菌粒載體轉型且適合 表現含有變異多肽之融合蛋白之嗟菌體的封裝。 如本文中所使用’「載體（vector)」為當轉移至適當宿 主細胞中時可表現一或多種異源蛋白質之可複製核酸。提 及之載體包括可引入編碼多肽或其片段之核酸（典型地藉 由限制性消化及接合）的彼等载體。提及之载體亦包括含 有編碼多肽之核酸的彼等載體。使用該載體將編碼多肽之 核酸引入宿主細胞中以擴增核酸或表現/呈現由核酸編碼之 多肽。載體典型地保持游離型，但可設計成實現基因或盆 一部分整合於基因組染色體中。亦涵蓋為人造染色體之載 體，諸如酵母人造染色體及哺乳動物人造染色體。該等運 載體之選擇及使用為熟習此項技術者所熟知。 68 201201839 如本文中所使用，載體亦包括「病毒載體（virus tors/viral vectors)」。病毒載體為經卫程改造之病毒，其 可操作地連接於外源基因以轉移（作為運㈣或穿梭 外源基因至細胞中。 如本文中所使用，「表現載體（6χρΓ_〇η咖㈣」包 括能夠表現與調節序列（諸如啟動子區）可操作地連接之 難且能夠實現該等魏片段之表現的載體。該等其他區 段可包括啟動子及終止子序列，且視情況可包括一或多個 複製起點、-或多個可選擇標記物、増強子、聚腺芽酸化 信號及其類似物。表現載體一般來源於質體或病毒dna， 或可含有兩者之元件。因此，表現載體指在引入適當宿主 細胞中時導致所選殖DNA表現之重組DNA或rna構築 體，諸如質體、噬菌體、重組病毒或其他載體。適當表現 載體為熟習此項技術者所熟知且包括可在真核細胞及/或原 核細胞中複製之載體及保持游離型之載體或整合於宿主細 胞基因組中之載體。 如本文中所使用，術語「寡核苷酸（〇Hg〇nucle〇tide)」 與「寡聚物（oligo)」作為同義詞使用。寡核苷酸為含有有 限數目之核苷酸長的聚核苷酸。熟習此項技術者認識到， 寡核苷酸之長度一般小於兩百五十個或約兩百五十個、典 型地小於兩百個或約兩百個、典型地小於一百個或約一百 個核苷酸。典型地，本文所提供之寡核苷酸為合成寡核苷 酸。合成寡核苷酸含有少於250或200個或約250或200 個核苷酸長，例如少於約20、30、40、50、60、70、80、 69 201201839 9〇、刚、11〇、12〇、13〇、_、15〇、16〇、17()、18()、19〇 或200個核普酸。典型地，寡核芽酸為單股寡核苦酸。結 尾「聚體（職）」可用於表示寡核普酸之長度。舉例而言， 「1〇0聚體㈤部）」可用於指含有⑽個核*酸長之寡 核芽酸。本文所提供之例示性合成寡料酸為正股及負股 寡核苦酸、隨機化寡核㈣、參考序列寡核㈣、模板寡 核苷酸及補平引子。 如本文中所使用，合成寡核芽酸為藉由化學合成產生 之寡核普酸。化學寡核^:酸合成方法為眾所周知的。任一 已知合成方法均可用於產生經設計且用於所提供方法十之 寡核苦酸。舉例而t ’合成寡核芽酸典型地藉由以化學方 法連接含有保護基之單一核苷酸單體或核苷酸三聚體來製 備。典型地，一次添加一個胺基磷酸酯（含有保護基之單 一核苷酸）。合成典型地以寡核苷酸之3,端開始。3,最末端 之胺基磷酸酯連接於固體支撐物且藉由向最後5，端添加每 一胺基磷酸酯來進行合成。每次添加後，.自最新添加之鹼 基上的5·磷酸醋基移除保護基，從而允許添加另一胺基磷 酸酯。自動化合成器一般可合成長度為至多約15〇至約2〇〇 個核苷酸之寡核苷酸。典型地，經設計且用於所提供方法 中之寡核苦酸使用標準氰基乙基化學作用由胺基磷酸酿單 體合成。藉由此標準方法產生之合成寡核苷酸可購自 Integrated DNA Technologies (IDT) ( coralville, ΙΑ) ^
TriLink Biotechnologies ( San Diego，CA)。 如本文中所使用，「引子（primer)」指可在適當條件（例 70 201201839 如存在四種不同三磷酸核苷及聚合劑，諸如DN A聚合酶、 RNA聚合酶或反轉錄酶）下在適當緩衝液中及在適合溫度 下充當模板介導核酸合成之起始點的核酸分子（更典型地 指共有序列一致性之該等分子的池）。應瞭解，特定核酸分 子可用作「探針」及「引子」。然而，引子具有用於延長之 3經基。引子可用於各種方法中，包括例如聚合酶鏈反應 (PCR)、反轉錄酶（RT) pCR、rna PCR、LCR、多重 PCR (multiplex PCR)、鍋柄式 PCR( panhandle PCR)、捕捉 pcR、 表現PCR、3’及5' RACE、原位PCR、接合介導PCR及其 他擴增方案。 如本文中所使用’「引子對（primer pair )」指一組包括 以下之引子（例如兩個引子池）：5,(上游）引子其與待 擴增（例如藉由PCR)之序列之5，端特異性雜交；。及3,(下 游）引子，其與待擴增之序列之3,端的互補序列特異性雜 父。因為「引子」可指相同核酸分子之池，所以引子對典 型地為一對兩個引子池。 如本文中所使用，「單一引子（single primer )」及「單 一引子池（primer pool)」作為同義詞指引子池，其中該池 中之每一引子含有與其他引子成員之序列一致性，例如成 員共有至少 50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、 96、97、98、99 或 100%或至少約 5〇、55、6〇、65、7〇、 75、80、85、9〇、95、96、97、％、99 或 ι〇〇%一致性之引 子池。單—引子池中之引子（全部共有序列一致性）充當 5 (上游）引子（其與待擴增（例如藉由pcR)之序列之 71 201201839 5·端特異性雜交）及3,(下游 3'&fe ίΛ 7T 引子（其與待擴增之序列之 3 4的互補序列特異性雜 因此，可使用單一引子，而 不使用其他引子，在聚合酶 擴€反應令引發互補股之合成 且擴增核酸。 士本文中所使用’關於兩個核普酸，互補性指在兩個 核酸分子雜交時兩個核普酸彼此驗基配對之能力。兩個丘 有互補性之核酸分子稱為互補核酸分子；例示性互補核酸 分子為聚核苷酸雙鏈體中之正股及負股。如本文中所使 用，當核酸分子或其區域與另一核酸分子或其區域互補 時，該兩個分子或區域彼此特異性雜交。兩個互補核酸分 子可就互補性百分比進行描述。舉例而言，彼此特異性雜 交但相對於彼此含有5個失配之兩個核酸分子（長度各為 100個核苷酸）被稱為95%互補。對於以1〇〇%互補性雜交 之兩個核酸分子，不需要沿兩個分子之整個長度存在互補 性。舉例而言，含有20個相連核苷酸長之核酸分子可與含 有500個相連核苷酸長之核酸分子的2〇個相連核苷酸部分 特異性雜交。若沿此20個核苷酸部分不存在失配，則2〇 個核苷酸分子以1 〇〇%互補性雜交。典型地，互補核酸分子 以互補核苷酸之間小於25%、20%、15%、10%、5%、4%、 3%、2%或1%的失配比對（換言之，至少75%、8〇%、85〇/。、 90%、95%、96%、97%、98%或 99%或至少約 75%、80%、 85%、90%、95%、96%、97%、98%或 99%互補性）。在另 一實例中，互補核酸分子含有50%、55%、60%、65%、70%、 75% ' 80%、85% ' 90% ' 95%、96%、97% ' 98%或 99%或 72 201201839 約 50〇/〇、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、 95%、96%、97%、98%或 99%或至少 50%、55%、60%、65%、 70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98% 或 99%或至少約 50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、 85%、90%、95%、96。/。、97%、98%或 99%互補性。在一實 例中，互補核酸分子含有少於5、4、3、2或1個失配核苦 酸。在一實例中，互補核苷酸為100%互補。必要時，將指 定互補性百分比。典型地，選擇兩個分子以使得其將在高 嚴格度條件下特異性雜交。 如本文中所使用’核酸分子之互補股指與該分子特異 性雜交之核苷酸序列（例如核酸分子），諸如聚核苷酸雙鏈 體中之核酸分子的相反股。舉例而言，在聚核苷酸雙鏈體 中，正股寡核苷酸之互補股為與雙鏈體中之正股寡核芽酸 特異性雜交之負股寡核苷酸。在所提供方法之一實例中， 使用聚合酶反應合成聚核苷酸之互補股以形成雙鏈體，典 型地由使寡核苷酸引子與聚核苷酸雜交開始。 如本文中所使用’「特異性雜交（specifically hybridizes )」指藉由互補鹼基配對使核酸分子（例如寡核苷 酸或聚核苷酸）黏著於另一核酸分子。熟習此項技術者熟 悉影響特異性雜交之試管内及活體内參數，諸如特定分子 之長度及組成。與試管内雜交尤其有關之參數另外包括黏 著及洗滌溫度、缓衝液組成及鹽濃度。不需要為了彼此特 異性雜交，兩個核酸分子展現1 〇〇%互補性。舉例而t，共 有序列互補性（諸如 99%、98%、97%、96%、95%、9〇%、 73 201201839 85%、80%、75%、70%、65%、60%、55%或 50%或約 99%、 98%、97%、96%、95%、90%、85%、80%、75%、70%、65% ' 60%、55%或 50%或至少 99%、98%、97%、96%、95%、90%、 85%、80%、75%、70%、65%、60%、55%或 50%或至少約 99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%、80%、75%、70%、 65%、60%、55%或50%互補性）之兩個互補核酸分子可彼 此特異性雜交。本文所提供之試管内雜交方法中所用之參 數（例如緩衝液組分、時間及溫度）可嚴格調整以改變兩 個核酸分子特異性雜交所需之互補性百分比。熟習此項技 術者可容易調整此等參數以達成核酸分子與適合於特定應 用之目標核酸分子之特異性雜交。 如本文中所使用’「初級序列（primary sequence )」指 多肽之胺基酸殘基序列或核酸分子之核苷酸序列。 如本文中所使用，兩種蛋白質或核酸之間的「相似性」 指蛋白質之胺基酸序列或核酸之核苷酸序列之間的相關 性。相似性可基於殘基序列之一致性程度及其中所含之殘 基°平估蛋白質或核酸之間的相似性程度之方法為熟習此 項技術者所已知。舉例而言，在一個評估序列相似性之方 法中，兩個胺基酸或核苷酸序列以得到序列之間最大一致 性值之方式比對。「一致性（identity )」指胺基酸或核苷酸 序列不變之程度。胺基酸序列及在一定程度上核芽酸序列 =比對亦可考慮胺基酸（或核苷酸.）之保守性差異及/或屢 人取代保寸性差異為保持所涉及殘基之物理化學性質的 差異。比肖可為(在整個彳列長度上心較序列之比 74 201201839 對且包括所有殘基）或局部（序列中僅包括最相似區域之 一部分的比對）。 如本文中所使用’當多肽或核酸分子或其區域與另一 多肽或核酸分子或區域含有或具有「_致性」或「同源性」 時，兩個分子及/或區域共有大於或等於40%或大於或等於 約40%序列一致性，且典型地大於或等於5 〇%或大於或等 於約50%序列一致性’諸如至少60%、65%、70%、75%、 80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99°/〇或 100%或 約 60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、 97%、98%、99%或100%序列一致性；必要時可指定精確一 致性百分比。與第—核酸分子或區域—致或同源之核酸分 子或其區域可與與該第二核酸分子或區域100%互補之核酸 分子或區域特異性雜交。或者，可比較兩個理論核苷酸或 胺基酸序列之間或核酸或多肽分子與理論序列之間的一致 性。 序列「一致性」本身具有此項技術公認之含義且兩個 核酸或多肽分子或區域之間的序列一致性百分比可使用公 開技術計算。序列一致性可沿聚核苷酸或多肽之全長或沿 分子之區域量測。（參見例如： 少，Lesk，A.Μ.編，Oxford University Press, New York, 1988 ； Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D.W.I^, Academic Press, New York, 1993 ； Computer Analysis of Sequence Data,第 I 部分，Griffin, A.M.及
Griffin，H.G.編，Humana Press，New Jersey, 1994 ; 75 201201839
Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic
Press，1987 ;及 Sequence Analysis Primer, Gribskov，M.及
Devereux，J.編，M Stockton Press，New York, 1991 )。雖然存 在許多量測兩個聚核苷酸或多肽之間的一致性之方法，但 術語「一致性」為熟練技術人員所熟知。（Carrillo，H.及 Lipman, D., SIAM J Applied Math ^<5:1073 (1988)) ° 沿兩個聚核苷酸或多肽之全長比較的序列一致性指沿 分子全長之一致核苷酸或胺基酸殘基的百分比。舉例而 言，若多肽A具有100個胺基酸且多肽b具有95個胺基酸， 其與多肽A之胺基酸1 -95 —致’則當與多肽b之全長相比， 沿多肽A之全長比較序列一致性時，多肽b具有9 5 % —致 性。或者’可沿各多肽之區域（諸如20個胺基酸之類似區 域）比較多肽A與多肽B之間的序列一致性。在此情況下， 若多肽A及B沿該區域具有20個一致胺基酸，則該等區域 之序列一致性為100%。或者，與另一分子之區域相比，可 沿分子之長度比較序列一致性。或者，可沿相同長度之多 肽（但存在胺基酸置換，諸如保守性胺基酸置換或非保守 性胺基酸置換）比較多肽A與多肽b之間的序列一致性》 如下文所討論且如熟習此項技術者所已知，評估一致性之 各種程式及方法為熟習此項技術者所已知β可不使用軟體 容易地測定高一致性值（諸如9 0 %或9 5 % —致性）。 無論任何兩個核酸分子具有至少6〇%、7〇%、8〇%、 85%、90%、95% ' 96%、97%、98°/〇或 99%或約 60%、70%、 80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或 99%「一 致」 76 201201839 之核苷酸序列，其可使用已知電腦演算法測定，諸如 「FASTA」程式，使用例如 Pearson 等人（1988) iVoc. Α^αί/. JcW. Sc，. 55:2444中之預設參數（其他程式包括GCG 程式包（Devereux，J.等人(19^4) Nucleic Acids Research J2(1):387 BLASTP - BLASTN ' FASTA ( Altschul, S.F.等 人(1990) J. Molec. Biol. 215:403; Guide to Huge Computers, Martin J. Bishop 編，Academic Press, San Diego，1994，及 Carrillo 等人（1988) 5人4从《/々?;?/化3 71^^/^<5:1073 ))。舉例 而言，可使用國家生物技術資訊中心（National Center for Biotechnology Information )資料庫之 BLAST 函數測定一致 性。其他商業或公開可用程式包括DNAStar「MegAlign」 程式（Madison, WI )及威斯康星大學遺傳學電腦組 (University of Wisconsin Genetics Computer Group * UWG ) 「Gap」程式（Madison WI)。蛋白質及/或核酸分子之同源性 或一致性百分比可例如藉由使用 GAP電腦程式（例如 Needleman 等人（1970) «/. Μο/. 5ζ·ο/· 48:443，如 Smith 及 Waterman 修訂（（1981) 2:482 ))比較序列 資訊來測定。簡言之，GAP程式將相似性定義為相似之比 對符號（亦即核苷酸或胺基酸）的數目除以兩個序列中較 短者之符號總數。GAP程式之預設參數可包括：（1 )Gribskov 等人（1 986) iVwc/. 14:6745 之一元比較矩陣（含 有一致性為1及非一致性為0之值）及加權比較矩陣，如 Schwanz A Oayhoff 編，ATLAS OF PROTEIN SEQUENCE AND STRUCTURE, National Biomedical Research Foundation, 77 201201839 第353-358頁（1979)所述；（2)各間隙之罰分為3.0且另 外各間隙中各符號之罰分為0· 10 ;及（3 )末端間隙無罰分。 一般而言，為測定序列一致性百分比，比對序列以使 得獲得最高階匹配（參見例如：Mo/ecw/ar 少，Lesk，A.Μ.編，Oxford University Press，New York, 1988 ； Biocomputing: Informatics and Genome Projects,
Smith, D.W.編，Academic Press，New York，1993 ; Compiler
Analysis of Sequence Data,第 I 部分、Griffin，A.M.及
Griffin，H.G.編，Humana Press, New Jersey，1994 ;
Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic
Press, 1987 ;及 Segrwe/ice 3似/少仏 Gribskov，M.及
Devereux，J.編，M Stockton Press, New York，1991 ; Carrillo 等人後1073)。對於序列一致 性，保守性胺基酸之數目藉由標準比對演算程式來測定， 且可使用由各供應商制定之預設間隙罰分。實質上同源核 酸分子典型地以中等嚴格度或以高嚴格度全部沿所關注核 酸之長度特異性雜交。亦涵蓋含有簡併密碼子以替代雜交 核酸分子中之密碼子的核酸分子。 因此，術語「一致性」在與特定數字關聯時表示第一 與第一多肽或聚核苷酸或其區域之序列之間及/或理論核苷 酸或胺基酸序列之間的比較。如本文中所使用，術語 與…至少9〇%一致」指相對於多肽之第一核酸或胺基酸 序列之一致性百分比為90至99.99。9〇%或更高的值之一致 性指示如下事實：假設出於例示之目的，比較1〇〇個胺基 78 201201839 酉文之第一及第二多肽長度，第一.多肽中不超過ι〇〇/〇 (亦即 1 〇〇個中有10個）胺基酸與第二多肽不同。可在第一與第 二聚核苷酸之間進行類似比較。第—與第二序列間之該等 差〃了表示為在整個多肽長度上隨機分佈之點突變，或其 可在不同長度至最大允許範圍之—或多個位置處叢集，例 如10/100月安基酸差異（約90%-致性）。差異定義為核皆酸 或胺基酸殘基取代、插入、添加或缺失。在超過約85_90% 之同源性或一致性值下，結果與程式及間隙參數設定無 關；該等高一致性值可容易加以評估，通常藉由不依靠軟 體手動比對來進行。 如本文中所使用，序列比對指使用同源性比對兩個或 更多個核苷酸或胺基酸序列。典型地，比對以50%或更高 的一致性相關之兩個或更多個序列。比對之一組序列指在 相應位置處比對之2個或更多個序列且可包括來源於與基 因組DNA序列比對之RNA的比對序列，諸如EST及其他 cDNA。 、 相關或變異多肽或核酸分子可藉由熟習此項技術者已 知之任何方法來比對。該等方法典型地達到最大匹配，且 包括諸如使用手動比對及使用多種可用比對程式（例如 BLASTP )及熟習此項技術者已知之其他程式的方法。藉由 比對多肽或核酸序列，熟習此項技術者可使用保守性及一 致胺基酸殘基作為導引物來鑑別類似部分或位置。此外， 熟習此項技術者亦可使用保守性胺基酸或核苷酸殘基作為 導引物以尋找人類與非人類序列之間的相應胺基酸或核苷 79 201201839 酸殘基。相應位置亦可基於結構比對，例如使用蛋白質結 構之電腦模擬比對。在其他情況下，可㈣相應區域。熟 習此項技術者亦可使用保守性胺基酸殘基作為導引物以尋 找人類與非人類序列之間的相應胺基酸殘基。 如本文中所使用’「類似（anal〇g〇us )」及「相應 (conrespoiuhng)」部分、位置或區域為在藉由使用熟習此項 技術者已知之比對方法達到最大匹配來比對兩個或更多個 相關多肽或核酸序列（包括分子序列、分子區域及/或理論 序列）以使得獲得最高階匹配時彼此比對之部分、位置或 區域。換言之，兩個類似位置（或部分或區域）在兩個或 更多個多肽或核酸序列之最佳擬合比對時比對。當比對兩 個或更多個序列時，基於沿線性核酸或胺基酸序列之位置 來鑑別類似部分/位置/區域，類似部分不必彼此共有任何序 列相似性。舉例而言’兩個同源核酸分子（長度各為1 〇〇 個核苷酸）之序列之比對（以使得達到最大匹配）可揭露 100個核苷酸中有70個為一致的。此等核酸分子中含有一 些或所有其他非一致30個胺基酸之部分為不共有序列一致 性之類似部分。或者，類似部分可彼此含有一定序列一致 性百分比，諸如 50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、 85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或約 50%、55%、 60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、 98%、99°/〇或其部分。在一實例中，類似部分為ι〇〇0/〇一致。 如本文中所使用，「修飾（modification )」係有關於多 肽之胺基酸序列或核酸分子之核苷酸序列的修飾且分別包 80 201201839 •括胺基酸及核苦酸之缺失、插入及置換。修掷多肽之方法 .對於热^此項技術者而言為常規的，諸如使用重組DNA方 法。 如本文中所使用，當提及核酸或多肽序列時，「缺失 (deletion )」指與序列（諸如目標聚核苷酸或多肽或天然或 野生型序列）相比缺失一或多個核苷酸或胺基酸。 如本文中所使用，當提及核酸或胺基酸序列時，「插入 (insertion)」描述在目標、天然、野生型或其他相關序列中 包括一或多個其他核苷酸或胺基酸。因此，與野生型序列 相比含有一或多個插入之核酸分子在序列之線性長度内含 有一或多個其他核苷酸。如本文中所使用，核酸及胺基酸 序列之「添加（additions )」描述與另一序列相比核苷酸或 胺基酸添加至任一末端上。 如本文中所使用，「取代（substitution )」指用替代性核 芽酸或胺基酸置換天然、目標、野生型或其他核酸或多肽 序列中之一或多個核苷酸或胺基酸，而不改變分子長度（如 以殘基數目所述）。因此，分子中之一或多個取代並不改變 分子之胺基酸殘基或核苷酸的數目。與特定多肽相比，取 代突變可以沿多狀序列長度之胺基酸殘基編號表示。舉例 而言’在胺基酸序列之第19位置處的胺基酸上具有修飾（用 異白胺酸（lie ; I)取代半胱胺酸（Cys ; C ))之經修飾多 肽可表示為I19C、Ilel9C或簡稱C19，以指示經修飾之第 19位置處的胺基酸為半胱胺酸。在此實例中，具有取代之 分子在未經修飾多肽之lie 19處具有修飾。 81 201201839 如本文中所使用，結合性質為與分子（例如多肽）是 否及如何結合一或多個結合搭配物有關之分子特徵·。結2 性質包括結合結合搭配物之能力、其結合於結合搭配物2 親和力（例如高親和力）、其結合於結合搭配物之親和性、 與結合搭配物形成之鍵的強度及與結合搭配物結合之特異 '性。 ' 如本文中所使用，親和力摇述兩個或更多個分子（諸 如結合搭配物）之間相互作用的強度，典型地為兩個結合 搭配物之間非共價相互作用的強度。抗體或其抗原結合片 段對於抗原決定基之親和力為單一抗體結合部位與抗原決 定基之間總的非共價相互作用的強度之度量。低親和力抗 體-抗原相互作用較弱，且分子傾向於快速解離，而高親和 力抗體-抗原結合較強且分子保持較長時間的結合。計算親 和力之方法眾所周知，諸如測定締合/解離常數之方法。親 和力可憑經驗估計或親和力可經比較，例如藉由比較一種 抗體及另一種抗體對於特定抗原之親和力來測定。 如本文中所使用，抗體親和性指多價抗體與其同源抗 原（諸如與含有多個與具有重複抗原決定基或抗原決定基 陣列之抗原相關之結合部位的抗體）之間多重相互作用的 強度。與低親和性抗體相比，高親和性抗體具有較高強度 之該等相互作用。 如本文中所使用，「結合（bind )」指分子參與與另一分 子之任何吸引性相互作用，從而產生穩定締合，其中兩個 分子彼此極為接近。結合包括（但不限於）非共價鍵、共 82 201201839 價鍵（諸如可逆及不可逆共價鍵），且包括分子之間的相互 作用’该等分子諸如（但不限於）蛋白質、核酸、碳水化 合物、脂質及小分子，諸如化合物，包括藥物。例示性鍵 為抗體-抗原相互作用及受體-配位體相互作用。當抗體「結 合」特定抗原時，結合指在抗體結合部位抗體經由同源抗 體-抗原相互作用特異性識別抗原。結合亦可包括多肽之多 個鏈的缔合，諸如經由二硫鍵相互作用之抗體鏈。 如本文中所使用，「親和力常數（affinity constant)」指 用於量測抗體對於抗原之親和力的締合常數（Ka )。親和力 常數愈高，抗體對於抗原之親和力愈大。親和力常數以莫 耳濃度之倒數單位（亦即Μ-ι)表示且可由締合_解離反應 之速率常數計算，如藉由用於抗體反應之標準動力學方法 (例如免疫檢定、表面電漿子共振或此項技術中已知之其他 動力學相互作用檢定）所量測。 如本文中所使用，當用於提及抗體結合親和力時，術 語「相同」t謂締合常數（Ka)在參考抗體之約1至ι〇〇 倍或1至10倍内（與參考抗體相比，大11〇〇倍的親和力 或小1-1GG倍的親和力’或該等範圍内之任何數值或範圍或 值）。 如本文中所使用，當用於提及締合常數（Ka)時，「實 質上相同」意謂締合常數在比參考抗體之締合常數。大約 5至5_倍或小約5至5_倍的範圍内（比參考抗體大 5-5000倍或小5-5000倍）。抗體之結合親和力 常數或Kd表示。解離常數為締合常數之倒數， 亦可以解離
Kd = 1 /Ka。 83 201201839 如本文中所使用，當用於關於另一抗體描述抗體時， 「具有相同結合特異性」一詞意謂抗體與參考抗體特異性結 合（免疫特異性結合或特異性結合於病毒）於相同的抗原 決定基之全部或一部分。因此，具有與命名為58 c5或3 0D8 之抗體相同的結合特異性之抗RSV抗體或其抗原結合片段 分別與命名為58c5或30D8之抗RSV抗體或其抗原結合片 段特異性結合於相同的抗原決定基之全部或一部分。抗原 決定基可在分離之蛋白質中或在病毒之蛋白質中。兩種抗 體結合於相同抗原決定基之能力可藉由此項技術中已知之 檢定來測定，例如表面電漿子共振檢定及抗體競爭檢定。 典型地，免疫特異性結合於相同抗原決定基之抗體可競爭 結合於s亥抗原決定基’其可例如藉由試管内結合競爭檢定 (例如競爭ELISA )使用此項技術已知之技術來量測。典型 地’與第二抗體免疫特異性結合於相同的抗原決定基之第 一抗體可以約 30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、 650/。、70%、75%、80%、85%、90%、95% ' 100%或 30%、 3 5%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、 85%、90%、95%、1〇〇%競爭結合於抗原決定基，其中競爭 百分比為所量測的第二抗體替代第一抗體結合於抗原決定 基之能力。在例示性競爭檢定中，在經標記抗體之預定限 制稀釋液（例如50-70%飽和濃度）及未經標記競爭抗體之 連續稀釋液存在下培育抗原。藉由在競爭抗體存在下量測 經標記抗體結合於抗原之任何結合降低來測定競爭。該等 檢疋之變化為此項技術所已知，包括各種標記技術及偵測 84 201201839 方法’包括例如放射量測、螢光、酶及比色偵測。第一抗 體與第二抗體結合於相同的抗原決定基之能力亦可例如藉 由病毒中和檢定使用單株抗體抗性突變體（MARM)來測 定。舉例而言，當第一抗Rsv抗體中和野生型Rsv而非特 定突變RSV時，中和野生型RSV而非特定突變Rsv之第 二抗體一般與第一抗體結合相同的RSV上之抗原決定基。 备第一抗RSV抗體中和野生型RSv而非特定突變rSV時， 中和野生型RSV及特定突變RSV之第二抗體一般並不與第 —抗體結合相同的RS V上之抗原決定基。 如本文中所使用’「單株抗體抗性突變體（m〇n〇cl〇nal antibody resistant mutant)」（MARM)亦稱為「單株抗體逃 避犬變體（monoclonal antibody escape mutant )」，為展現抵 抗中和野生型RSV病毒之單株抗體的中和之突變呼吸道融 合性病毒（RSV )。實際上，對於被認為已逃避抗體之MARM 而巨，中和50% RSV MARM所需之抗體濃度必須為中和等 畺參考野生型感染性病毒粒子所需之抗體濃度的至少約1 〇
I 倍或至少大1 0倍。 藉由在該單株抗體存在下培養野生型RSV，在抗體存 在下經連續數輪病毒複製以使得在連續每一輪病毒複製後 茜要增加抗體濃度以產生病毒中和作用來產生MARM。在 漸增濃度之抗體存在下僅觀察到細胞病變作用（cyt〇pathic effect ’ CPE )直至產生不再有效地被抗體中和之突變病毒。 若與第二抗體相比在第一抗體存在下出現Marm需要更多 輪複製’則吾人可推斷出第一抗體結合於與第二抗體所結 85 201201839 合之抗原決定基不同的抗原決定基。若第一抗體可中和針 對第二抗體所產生之MARM ’則吾人可推斷出抗體特異性 結合於不同抗原決定基或與不同抗原決定基相互作用。與 意兄爭結合檢定相比，MARM可更細緻地定位抗體之抗原結 合抗原決定基，以使得一種抗體可與另一抗體競爭結合於 抗原，但可中和其競爭者之MARM。對於一些抗體，其僅 需要幾輪選擇以產生MARM ;對於其他抗體，則需要更多 輪。對於本文所提供之特定抗體，在10、u、12、13、14、 15、20、25 ' 30輪或更多輪後不產生MARM。在一些情況 下，不可能產生MARM。 如本文中所使用，EC5〇指在試管内中和檢定中抗體可 抑制50%病毒感染之有效濃度，該檢定例如如本文所述之 病毒空斑減少檢定（例如使用Vero宿主細胞或其他宿主細 胞進行感染之空斑減少檢定）或此項技術中已知之其他病 毋中和檢定。典型地’中和病毒為在試管内中和檢定（諸 如病毒空斑減少檢定）中抑制病毒之Ec5Q為2 nM或2 nM 以下的病毒。 如本文中所使用’「結合搭配物（binding partner )」指 例如經由共價或非共價相互作用（諸如抗體與同源抗原之 相互作用）與另一分子特異性相互作用之分子（諸如多肽、 脂質、醣脂、核酸分子 '碳水化合物或其他分子）。結合搭 配物可天然或合成產生。在一實例中，使用一或多種結合 搭配物’例如使用試管内或活體内方法，選擇所需變異多 狀。例不性試管内方法包括使用偶合於固體支撐物（諸如 86 201201839 珠粒、板、管柱、基質或其他固體支撐物）之結合搭配物 進行選擇，或結合搭配物偶合於另一可選擇分子（諸如生 物素分子），隨後藉由使該另一可選擇分子偶合於固體支撐 物進行後續選擇。典型地，試管内方法包括移除未結合多 肽之洗滌步驟，隨後洗提所選變異多肽。該過程可以迭代 法重複一或多次以自所選多肽中選擇變異多肽。 如本文中所使用，二硫鍵（亦稱為s_s鍵或二硫橋鍵） 為來源於巯基偶合之單一共價鍵。蛋白質中之二硫鍵在半 胱胺酸殘基之毓基之間形成，且使多肽域（諸如抗體域） 之間的相互作用穩定。 如本文中所使用，「偶合（coupled )」或「結合 (conjugated)」意謂經由共價或非共價相互作用連接。 如本文令所使用，當提及部分連接於抗體或其抗原結 合片段（諸如診斷性或治療性部分）時，「與抗體結合 (conjugated to an antibody)」或「連接於抗體（linkedt〇an antibody )」等詞或其語法變化意謂該部分藉由用於連接肽 之任何已知方法連接於抗體或其抗原結合片段，例如使用 重組方法產生融合蛋白或使用化學方法在轉譯後產生融合 蛋白。結合可使用各種連接劑中之任一者來實現結合，包 括（但不限於）肽或化合物連接子或化學交聯劑。 如本文中所使用，「噬菌體呈現（phage display)」指多 肽在絲狀噬菌體表面上表現。 如本文中所使用，「噬菌體呈現相容性細胞 (Phage'display compatible cell)」或「噬菌體呈現相容性宿 87 201201839 主細胞（phage-display compatible host cell)」為可感染嗤 菌體且因此可支持產生呈現含有多肽（例如變異多肽）之 融合蛋白的噬菌體且因此可用於噬菌體呈現之宿主細胞， 典型地為細菌宿主細胞。例示性噬菌體呈現相容性細胞包 括（但不限於）X L1 - b 1 u e細胞。 如本文中所使用，「淘選（panning )」指用於分離呈現 對於結合搭配物具有特異性之分子的噬菌體之基於親和力 之選擇程序，該分子例如捕捉分子（例如抗原）或胺基酸 或核苷酸序列或抗原決定基、其中之區域、部分或基因座。 如本文中所使用’「呈現蛋白（display pr〇tein )」或「基 因封裝呈現蛋白（geneticpackagedisplaypr〇tein)」意謂如 下任何基因封裝多肽：用於使多肽在基因封裝上呈現，以 使得當呈現蛋白與所關注之多肽（例如需要降低表現之多 肽）融合（例如作為與該多肽之融合蛋白的一部分而包括 在内）夺β亥夕肽在基因封裝之外表面上呈現。呈現蛋白 /、5L地存在於基因封裝之外表面上或外隔室内（例如基因 1裝（例如病毒基因封裝，諸如嗟菌體）之膜、細胞壁、 外咸或其他外表面或腔室）， X紅至」以使仔在與所關注之多肽融合 時’該多肽在基因封裝上呈現。 女本文中所使用’外殼蛋白為呈現蛋白，其至少-部 刀存在於基因封裝之外表， 使传當其與所關注之多 ==該多肽在基因封裳之外表面上呈現。典型地’ 私蛋又為病毒外殼蛋白’諸如嗤菌體外殼蛋白。病毒外 -蛋白（諸如嗟菌體外殼蛋白）在於宿主細胞中組裝期間 88 201201839 〇病毋粒子締合。在_實例中，外殼蛋白在本文中用於使 夕肽在基因封裝上呈現；外殼蛋白表現為融合蛋白之部 分，其含有外殼蛋白胺基酸序列及所呈現多肽之胺基酸序 列。外殼蛋白可為全長外殼蛋白或其能夠實現多狀在基因 封裝表面上之呈現的任何部分。 例不性外殼蛋白為噬菌體外殼蛋白，諸如（但不限於） (i)絲狀噬菌體之次要外殼蛋白’諸如基因ΙΠ蛋白（ginp、 cp3 )，及（u )絲狀噬菌體之主要外殼蛋白（其以個複 本或更夕複本存在於病毒外殼中，例如數十個、數百個或 數千個複本），諸如基因VIII蛋白（gvillp、cp8 );與其他 嗟菌體外殼蛋白之融合物，諸如基因VI蛋白、基因νΠ蛋 白或基因IX蛋白（參見例如WO 00/71694);及此等蛋白質 之部分（例如域或片段），諸如（但不限於）穩定併入噬菌 體粒子中之域’何如gIIIp或gVnip之錨定域。另外，可使 用gvmp之突變體，其經最佳化以表現較大肽，諸如具有 改良之表面呈現性質的突變體，諸如突變gVIIp (參見例如 Sidhu 等人（2000) 乂 鳩厂飾,296:487 495 )。 如本文令所使用，「疾病或病症」指由包括（但不限於） 感染、後天病狀、遺傳病狀且特徵為可鑑別症狀之病因或 病狀引起的生物體病理學病狀。本文中所關注之疾病及病 症為涉及RSV感染之疾病及病症或增加RSV感染風險之疾 病及病症。 如本文中所使用’「感染（infecti〇n)」及「RSV感染（Rsv infecUon)」指在宿主中RSV生命週期之所有階段（包括（但 89 201201839 不限於）在細胞或身體組織中之RSV侵襲及RSV複製）， 以及由RSV侵襲及RSV複製引起之病理學病況。RSV侵襲 及RSV繁殖包括（但不限於）以下步驟：RSV粒子對接於 細胞、病毒與細胞膜融合、病毒遺傳資訊引入細胞中、表 現RSV蛋白、產生新RSV粒子及自細胞釋放RSV粒子。 RSV感染可為上呼吸道RSV感染（upper respiratory tract RSV infection’ URI)、下呼吸道 RSV 感染（.lower respiratory tract RSV infection，LRI )或其組合。在一些實例中，由 RSV侵襲及RSV複製引起之病理學病況為急性RSV疾病。 如本文中所使用，「急性RSV疾病」指由RSV感染引 起之肺部或下呼吸道的臨床上顯著疾病，其可表現為肺炎 及/或細支氣管炎’其中該等症狀可包括例如低氧、呼吸暫 停、呼吸窘迫、呼吸促迫、喘鳴及發紺。急性RSv疾病需 要文景> 響個體獲得醫學介入，諸如住院、給氧、插管及/或 換氣。 如本文中所使用，「治療（treating 患有疾病或病狀 之個體思明該個體之症狀部分或完全減輕，或在治療後仍 不k因此，冶療涵蓋防治、療法及/或治癒。防治指預防 潛在疾病及/或預防症狀惡化或疾病進展。治療亦涵蓋所提 ί、之任何杬體或其抗原結合片段或本文所提供之組成物的 任何醫藥用途。 如本文中所使用，「預防（preventi〇n)」或防治及其語 法等效形式指降低正發展之疾病或病狀的風險之方法。〃。 々本文中所使用，「醫藥有效劑」包括任何治療劑或生 90 201201839 物活性劑，包括（但不限於）例如麻薛劑、血管收縮劑、 分散劑、習知治療性藥物（包括小分子藥物）及治療性蛋 白質。 如本文中所使用，「治療效應（therapeuticeffect)」意 謂由於治療個體而產生之效應，其改變、典型地改良或改 善疾病或病狀之症狀或治癒疾病或病狀。 如本文中所使用，「治療有效量（therapeutically effective am_t )」或「治療有效齊j量（ effective dose)」指藥劑、化合物、物質或含有化合物之組 成物在投予個體後至少足以產生治療效應之量。因此，其 為預防、治癒、改善、抑制或部分抑制疾病或病症之症狀 所必需之量。 如本文中所使用，「治療功效（therapeutic efficacy)」 :指藥劑、化合物、物f或含有化合物之組成物在已投予該 某齊]化δ物物質或含有化合物之組成物的個體中產生 治療效應之能力。 士本文中所使用’「防治有效量（pr〇phylacHCally effective amount)」或「防治有效劑量（pr〇phylacticaUy effective dose)」指藥劑、化合物、物質或含有化合物之組 成物當向個體投予時將具有所欲防治效應之量，該f防治效 應例如預防或延遲疾病或症狀發作或復發、降低疾病或症 狀之發作或復發可能性、或降低病毒感染之發病率。完全 防治效應不一疋會在投予—次劑量後出現，且僅會在投予 -系列劑量後出現。因此’防治有效量可以—或多次投藥 〇 91 201201839 來投予。 如本文中所使用 „ ,. 用，，術語「免疫治療 C immunotherapeutically),式「Α 々 -免疫療法（immunotherapy )」 結合所提供之抗體表示防、;A ^ 丨生以及治療性投藥。因此，所 提供之治療性抗體可投予處於毕 、朵上病毒感染（例如RSV感 染）風險中之個體以降低該、左十> 耳他·•亥疾病之可能性及/或嚴重程度， 或投予已證明染上活動性病毒片 用每感染（例如rSV感染）之個 體。 如本文中所使用，藉由 > 底r # 曰田〜療（诸如藉由投予醫藥組成 物或其他治療劑）改善特定疾佐$产— 展病或病症之症狀指可歸因於 投予該組成物或治療劑或與投予該組成物或治療劑相關之 症狀的任何減輕’無論是永久或暫時、持續或短暫。 如本文中所使用，術語「診斷有效（diagn〇sticaUy effective )」量指藥劑、化合物、物質或含有可偵測化合物 之組成物在投予個體後至少足以摘測該化合物之量。一 般，投予個體以供㈣之抗RSV抗體或其抗原結合片段（諸 如可谓測標記之抗體或其抗原結合片段或可由第二藥劑债 測之抗體或其抗原結合片段）的診斷有效量為抗體或其抗 原結合片段足以使得能夠偵測具有抗體或其抗原結合片段 之特異性RSV抗原的部位之量。在使用本文所提供之抗體 進行抗原之活體内偵測時，給與診斷有效劑量之可偵測標 記之抗體或其抗原結合片段。 如本文中所使用，標記或可偵測部分為可直接或間接 連接或鍵聯於分子（例如本文所提供之抗RSV抗體或其抗 92 201201839 . 原結.合片段）或與其締合且可活體内及/或試管内偵測之可 • 偵測標記物（例如螢光分子、化學發光分子、生物發光分 子、對比劑（例如金屬）、放射性核種、發色團、可偵測肽 或催化可偵測產物形成之酶）。偵測方法可為此項技術中已 知之任何方法，包括已知活體内及/或試管内偵測方法（例 如藉由目測檢查、磁共振（MR )光譜法、超音波信號、X 射線、7射線光譜法（例如正電子發射斷層攝影法（p〇sitr〇n emission tomography，PET)掃描、單光子發射電腦斷層攝 ay /k ( single-photon emission computed tomography > SPECT))、螢光光譜學或吸收法成像）。間接偵測指量測直 接或間接結合於可偵測部分之原子、分子或組成物之物理 現象’諸如能量或粒子發射或吸收（例如偵測結合於初級 抗體（例如本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段） 之經標記二級抗體或其抗原結合片段）。 如本文中所使用，術語「個體（subject)」指動物，包 括哺乳動物，諸如人類。 如本文中所使用，患者指人類個體。 如本文中所使用’動物包括任何動物’諸如（但不限 於）靈長類動物’包括人類、大猩猩及猴；齧齒動物，諸 J鼠及大鼠’豕禽，諸如雞；反舞動物，諸如山羊、母 牛 '鹿、綿羊；豬及1 μ 4 , ^ 久其他動物。非人類動物不包括作為所 涵蓋動物之人類。本寸 +又所提供之多肽來自任何來源、動物、 植物、原核生物及直該 。大多數多肽具有動物來源，包括 哺乳動物來源。 93 201201839 士本文中所使用，「老年人（elderly)」指由於年齡而存 在免疫反應降低及對疫苗接種之反應降低的個體。典型 地’老年個體為65歲及更老之人類，更典型地為70歲及 更老。 女本文中所使用，「人類嬰兒（human infant)」指小於 24個月或約24個月（例如小於16個月或約16個月小於 12個月或約12個月、小⑤6個月或約6個月、小於”固月 或約3個月、小於2個月或約2個月或小於【個月或約^ 個月齡）之人類。典型&，人類嬰兒在超過38週胎齡時出 生。 如本文中所使用，「提前出生之人類嬰兒」指在小於40 週或約40週胎齡、典型地小於38週或約38週胎齡時出生 之人類。 如本文中所使用，「單位劑型（unit d〇se f〇m)」指適 合於人類及動物個體且如此項技術中所已知經個別包裝之 物理個別單元。 如本文中所使用，「單次劑量調配物（single如以# formulation)」指用於直接投藥之調配物。 如本文中所使用’「製品（article 〇f)」為 製造並出售之產品。如本申請案中所使用，該術語意欲涵 蓋包裝物品中所含之本文所提供之任一組成物。 如本文中所使用，「流體（fluid)」指可流動之任何組 成物。因此，流體涵蓋呈半固體、糊劑、溶液、水性混合 物、凝膠、洗劑、乳膏及其他該等組成物形式之組成物。 94 201201839 •如本文中所使用，分離或純化之多肽或蛋白質（例如 ‘ 分離之抗體或其抗原結合片段）或其生物活性部分（例如 分離之抗原結合片段）實質上不含來自得到該蛋白質之細 胞或組織的細胞物質或其他污染蛋白質，或當以化學方法 合成時，實質上不含化學前驅體或其他化學物質。製劑可 經測定為實質上不含（若其看似不含）容易偵測之雜質， 如藉由熟習此項技術者用於評估該純度之標準分析方法所 測定，諸如薄層層析（TLC )、凝膠電泳及高效液相層析 (HPLC )，或足夠純以使得進一步純化不會可偵測地改變物 質之物理及化學性質，諸如酶及生物活性。純化化合物以 產生實質上化學純之化合物的方法為熟習此項技術者所已 知。然而’實質上化學純之化合物可為立體異構體之混合 物。在該等情況下，進一步純化可能增加化合物之比活性。 如本文中所使用，「細胞提取物（cellular eXtract)」或「溶 解物（lysate )」指由溶解或破壞之細胞製成之製劑或其部 分。 如本文中所使用，分離之核酸分子為與核酸分子之天 然來源中存在的其他核酸分子分離之核酸分子。「分離」之 核酸分子（諸如cDNA分子）當藉由重組技術產生時可實 質上不含其他細胞物質或培養基，或當以化學方法合成時 實質上不含化學前驅體或其他化學物質。本文所提供之例 示性分離之核酸分子包括分離之編碼所提供之抗體或抗原 結合片段的核酸分子。 如本文中所使用，「對照（control )」指實質上與測試樣 95 201201839 品一致之樣品，除了其不以測試參數處理，或若其為血漿 樣品’則其可來自未受所關注病狀影響之正常志願者。對 照亦可為内部對照。 如本文中所使用，「組成物（composition )」指任何混 合物。其可為溶液、懸浮液、液體、散劑、糊劑、水性、 非水性或其任何組合。 如本文中所使用，「組合（c〇mbinati〇n )」指兩個或更 多個項目間之任何締合。組合可為兩個或更多個各別項 目，諸如兩種組成物或兩個集合，可為其混合物，諸如兩 個或更多個項目之單一混合物，或其任何變化形式。組合 之要素一般功能上相關或有關。 如本文中所使用，組合療法指投予兩種或更多種不同 治療劑，諸如兩種或更多種不同抗RSV抗體及/或抗 抗體及其抗原結合片段。不同治療劑可分開、依序、間歇 地提供及投予，或可以單一組成物形式提供。 如本文中所使用，套組為 其他要素（諸如其他試劑）及 明書’用於達成包括（但不限 估生物活性或性質之目的。 包裝之組合，其視情況包括 關於使用組合或其要素之說 於）活化、投藥、診斷及評 除非本文另外明痛指示，否則如本文中所使用，軍數 形式「-（a/an)J*「該（the)」包括複數個指示物。因 此，舉例而言，提及包含「免疫球蛋白域 , Je<^夕狀包括且 有一個或複數個免疫球蛋白域之多肽。 〃 除非明確地指出僅指備選者或該等備 選者互相 排斥， 96 201201839 否則如本文中所使用，術語「或（or)」用於意謂「及/或」β 如本文中所使用，範圍及量可表示為「約（about)」特 定值或範圍。約亦包括精確量。因此，「約5個胺基酸（ab〇ut 5 amino acids )」意謂「約 5 個胺基酸（ab〇ut 5 amin〇 acids )」 以及「5個胺基酸（5 amino acids )」。 如本文中所使用，「視情況存在（〇pti〇nal)」或「視情 況（optionally)」意謂隨後所述之事件或情況會發生或不會 發生且該描述包括該事件或情況發生之情形及其不會發生 之情形。舉例而言，視情況變異之部分意謂該部分為變異 或非變異的。 如本文中所使用，除非另外指示，否則任何保護基、 胺基酸及其他化合物之縮寫均依據其常見用法、公認縮寫 或IUPAC-IUB生物化學命名委員會（c〇mmissi〇n⑽ Biochemical Nomenclature )(參見 Biockem. (19Ί2) 1 1(9):1726-1732 )。 Β.概述 提供結合於呼吸道融合性病毒及中和呼吸道融合性病 毒之抗RSV抗體或其抗原結合片段。本文所提供之抗rsv 抗體為識別RSV表面上之一或多個抗原決定基的中和抗 體。詳言之，本文所提供之抗體結合於RSV融合（F)蛋白。 本文所提供之抗體可用於防治療法。本文所提供之抗體亦 可用作治療劑。 舉例而言，所提供之抗體可用於預防病原性疾病擴 散，包括（但不限於）抑制個體間之病毒傳播、抑制宿主 97 201201839 中形成病毒感染及減少個體之病毒負荷。抗體亦可用於預 防、治療及/或減輕rsv感染之一或多種症狀或用於縮短 RSV感染之持續時間。因此，用本文所提供之抗體治療患 者可降低與RSV感染相關之死亡率及/或發病率。 RSV續存與無法被抗體中和之逃避突變體的產生相 關。因此，開發治療性抗病毒抗體之主要難題為產生或鑑 別具有中和抗原決定基之抗體，該抗原決定基1 )在各種病 毒株或血清型之間為保守性的且2 )使得進化病毒難以產生 逃避突變體。本文所提供之抗體結合於各種RSV亞群及病 毒株。與先前技術中之現有抗體相比，本文所提供之抗體 亦展現改良之病毒中和活性。所提供之抗體經連續數輪複 製有效地中和病毒，其中RSV典型地將產生逃避突變體以 抵抗中和。限制MARM產生之能力意謂本文所提供之抗體 結合於不易受所產生之逃避突變體形式之變異影響的抗原 決定基。因此，此抗原決定基不同於其他已知抗Rsy抗體 之抗原決定基。因此，除防治療法外，所提供之抗rsv抗 體亦適用於治療RSV感染。目前，已知尚無批准之針對讀 感染之抗體治療劑。因6，本文所提供之抗體對於治療老 年患者（例如團體家庭或養老院中的老年患者，其中接近 增加了病毒在患者間擴散之風險）之RSV感染尤為重要。 本文所提供之k體治,療在與給藥方案產生之非順應性增 T病毒逃避之風險的情況下亦為重要，因為使用帕利珠單 (P · izumab )之rs V防治性處理中的非順應性逐漸引 起病毒抗性（參見例如Adams等人，（2(m) c/^如版 98 201201839 51(2):185-188)。 一般，本文所提供之抗RSV抗體以高親和力結合於 RS V F蛋白。與目前批准之抗rs V抗體（例如帕利珠單抗；
Synagis®)相比，本文所提供之高親和力抗RSV抗體允許 不太頻繁的投藥以預防及/或治療RSV感染，預防、治療及 /或減輕RSV感染之一或多種症狀，或縮短rsV感染之持 續時間。因此，本文所提供之抗RSV抗體適用作治療性抗 體，亦即用於治療RSV感染。不太頻繁的投藥使得更容易 與給藥方案產生順應性且因此降低導致病毒對抗.rSV抗體 之抗性增加的錯過劑量之可能性。較低劑量之免疫特異性 結合於RSV的抗體亦可降低免疫球蛋白療法之不良作用的 可能性。 —般，本文所提供之抗RSV抗體具有抑制或降低病毒 之一或多種活性（例如病毒與目標細胞膜之締合、病毒與 目糕細胞膜之融合及/或細胞進入、產生新病毒粒子）的能 力’包括抑制病毒複製或受感染細胞與另一細胞之細胞間 蛐合（亦即形成融合體）。所提供之抗RSV抗體亦可用於增 加針對RSV感染之免疫反應。 i呼吸道融合性病毒 人類RSV為副黏液病毒科之肺病毒亞科之成員。存在 兩個不同人類RSV亞群，即A群及B群。另外，每—亞型 進步分成兩個病毒株’即A1與A2，及B1與B2。RSV 為包媒、不分節段、負股RNA病毒，其基因組由編碼u 種病毒蛋白質之約15,000個核苷酸構成。 99 201201839 RSV編碼兩種主要表面醣蛋白，即醣蛋白G及醣蛋白 F。醋蛋白G或附著蛋白介導病毒結合於細胞受體，而醣蛋 白F或融合蛋白促進病毒與細胞膜融合，從而允許病毒核 糖核蛋白渗透至細胞質+ (L〇pez等人（1998) /⑹㈣少 72.6922 6928 )。蛋白F亦促進受感染細胞之膜與相鄰細 胞之膜融合，從而形成融合體。F蛋白含有兩個二硫鍵連接 之人單元即F1及F2，其藉由蛋白水解裂解失活N_糖基 化前驅體產生。G蛋白為8〇_9〇 kDa第n型跨膜醣蛋白，其 含有連接於32kDa前驅蛋白之队及〇_連接寡醣。 針對RSV F或G醣蛋白製備之抗體已顯示在試管内高 效率中和RSV且在活體内具有防治效應（參見例如 等人（1986) J. Gm. Λ/ϊποΜο/· 67:5〇5 ; Beeler 等人（1989) /ϋ 63:2941-2950, Garcia_B〇rren〇 等人（1989) 乂⑽Λ 63:925-932，Taylor 等人（1984) /wi_〇/〇g3； 52:137 142， 及美國專利第5,824,307號及第6,818,216號）。針對rSvf 蛋白之抗體亦有效抑制感染RSV之細胞與相鄰未感染細胞 的融合。 免疫特異性結合於RSV F蛋白之各種單株抗體的分析 使知鑑別出二個不重疊抗原性部位，即A、b及（3，及一個 橋部位，即 AB ( Beeler 等人（1989) J. Virol. 63:2941-2950 )。抗原性部位各含有不同抗原決定基。在一 組18個單株抗體之一項研究中，基於單株抗體逃避突變體 (MARM )鑑別抗原性部位A之5個抗原決定基、抗原性部 位B之4個抗原決定基及抗原性部位c之4個抗原決定基 100 201201839 (參見例如 Beeler 等人（1989) J. Wro/. 63:2941-2950 )。結 合於抗原性部位A抗原決定基4之單株抗體1129 ( Beeler 等人（1989) «/_ FzWogj； 63(7):2841-2950 )為產生人類化帕 利珠單抗（SYNAGIS®)之親本抗體（參見Johnson等人 (1997) J_ /n/eci. Dbeases 176:1215-1224 及美國專利第 5,824,307號）。亦已鑑別出其他RSV F蛋白抗原決定基。 舉例而言，人類抗RSV Fab片段Fab 19 (參見Barbas等人 (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10164-10168 and Crowe 等人，（1994) Proc. Λ/^ί/· dcai/ CASJ 91:1386-13 90 ) 結合於抗原性部位A中之抗原決定基，其與Beeler等人（參 見 Crowe 等人（1998) Wro/og少 252:373-375)及 Barbas 等人 (1992) Proc. *Scz·· t/M 89:10164-10168 )所鑑別 之抗原決定基不同。 在RSV A與B亞群之間RSV F蛋白展現超過91%相似 性，而在RSV A與RSV B亞群之間RSV G蛋白僅展現53% 胺基酸相似性（Sullender (2000) C/ί/ϊ. MicroMo/. 13.1-15)。因為A及B病毒亞型在大多數RSV流行病中共 循環，所以需要中和RSV之A及B亞型的抗體，諸如本文 所提供之抗RSV抗體或抗原結合片段。 類似大多數RNA病毒，人類RSV具有在選擇壓力下經 歷快速突變之能力。試管内使用單株抗體選擇RSV逃避突 變體（MARM )已付到充分證明（例如Garcia_Barren〇等人 (1989) J. Kz>o/. 63:925-932 )。舉例而言，已顯示 rSv A2 F 蛋白中之胺基酸殘基 Ν262、1266、Ν268、Κ272、S275、Ν276、 101 201201839 P3 89或R429處之單胺基酸突變、或F32及K272或A241 及K42 1處之雙胺基酸突變可實現對已知抗rSV單株抗體 之逃避（參見例如Crowe等人 （1998) Wro/oa 252:373-375 ; Zhao 等人，（2004) «/· /«/ecibw 190:1941-1946 及 Liu 等人，（2007) /ομγμ/ 4:71 )。 另外’帕利珠單抗（SYNAGIS® )已顯示試管内以及活體内 選擇用於逃避突變體，且一些分離之突變體在棉鼠（cotton rat)中完全抵抗帕利珠單抗防治（參見例如zhao等人（2005) 〜79:3962-3968 及 Zhao 等人（2004) J_ /n/eci.乃汰 190:1941-1946 )。舉例而言，已證明rsV F蛋白中之單胺基 酸突變導致逃避帕利珠單抗（參見Zhao等人，（2004) 乂 /n/ec"而Dbe㈣190:1941-1946 )〇因此，經連續數輪複製 有效中和RSV病毒而不產生逃避突變體之抗體（諸如本文 所提供之抗RSV抗體或抗原結合片段）為較佳。 呼吸道融合性病毒（RSV )感染為嬰兒及幼兒下呼吸道 疾病之主要原因。在美國，RSV感染亦為！歲以下兒童之 細支氣管炎或肺小氣管發炎及肺炎的最常見原因。另外， RSV感染亦公5忍為老年人呼吸道疾病之重要原因。與rsv 感染相關之症狀及病狀包括例如哮喘、喘鳴、反應性氣道 疾病（reactive airway disease，RAD)及慢性阻塞性肺病 (chronic obstructive pulmonary disease，COPD)。因此，如 本文所述’本文所提供之抗RSV抗體可用於防治及治療 RSV感染及/或減輕該等RSV介導性疾病之一或多種症狀。 C.抗RSV抗體 102 201201839
. 本文提供可用於治療性、防治性及診斷性用途之抗RSV .抗體或其抗原結合片段。本文所提供之抗RSV抗體或其抗 原結合片段可例如用於針對RSV使個體被動免疫或用於治 療病毒感染個體。在一實例中，本文所提供之抗RSV抗體 或其抗原結合片段用於防治（亦即預防）RSV感染。在另 一實例中，使用本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片 段作為治療性抗體，亦即用於治療RSV病毒感染。在另一 實例中，本文所提供之抗Rsv抗體或其抗原結合片段用於 針對RSV使個體被動免疫。所提供之抗RSV抗體或其抗原 結合片亦可用於偵測Rs V感染或用於試管内及活體内監 測RSV感染。 1. 一般抗體結構及功能域 抗體由B細胞以膜結合及分泌形式天然產生。抗體經 ；由同源相互作用特異性識別及結合抗原決定基。結合於同 源抗原之抗體可起始多種效應功能，其引起毒素、病原體 及其他感染劑之中和及清除。 抗體特異性之多樣性由於B細胞發育期間之重組事件 而天然發生。經由此等事件，編碼抗體分子可變區之多種 抗體V、D及J基因區段的各種組合與恆定區基因連接以產 生具有大量不同抗體之天然抗體譜系。人類抗體譜系含有 超過101G種不同抗原特異性且因此理論上可特異性識別任 何外來抗原。抗體包括該等天然產生之抗體，以及合成（亦 即重組）產生之抗體，諸如抗體片段，包括本文所提供之 抗RSV抗體或其抗原結合片段。 103 201201839 在指疊抗體多肽中，結合特異性由抗原結合部位域賦 予’該等域含有重鏈及/或輕鏈可變區域之部分。抗體分子 上之其他域藉由參與諸如信號轉導及與其他細胞'多肽及 生物刀子之相互作用的事件而發揮效應功能。此等效應功 月b引起由抗體識別之感染劑的中和及/或清除。抗體多肽之 域可根據本文中改變特定性質之方法而變化。 抗體之結構及功能域 王長抗體含有多個鏈、域及區。全長習知抗體含有兩 個重鏈及兩個輕鏈，其中每一者含有複數個免疫球蛋白（^) 域。Ig域之特徵為稱為Ig摺疊之結構，其含有兩個沒摺疊 片，各含有由環連接之反平行0股。Ig摺疊中之兩個沒片 藉由疏水性相互作用及保守性鏈内二硫鍵而夾在一起。抗 體鏈中之Ig域為可變（V)及恆定（c)區域。每一重鏈由 瓜鍵連接於輕鏈，且兩個重鏈由二硫鍵彼此連接。重鏈 之連接由重鏈中稱為鉸鏈區之可撓性區介導。 每一全長習知抗體輕鏈含有一個可變區域（Vl)及一 個恆疋區i或（cL)。每一全長習知重鏈含有一個可變區域 〔V:)及三個或四個恆定區域（Ch)且在一些情況下含有鉸 鍵區纟於上述重組事彳，編碼可變區g之核酸序列在抗 體間不同且賦予特定抗體抗原特異性m怪定區 由在抗體間保守性更大之序列編碼。此等域賦予抗體功能
性質’例如與免疫系統細胞及血清蛋白相互作用以清除感 染劑之能力。不同種類之抗體（例如IgM、IgD、IgG、IgE 及IgA) |有不同悝定區，從而使其發揮不同效應功能。 104 201201839 ，母—可變區域含有三個稱為互補決定區（CDR)或高變 V)區之部分’其由高變核酸序列編碼。CDR位於連接 可變區Ig域之，片的環内。同時，三個重鏈CDR(CDR1、 CDR2及CDR3)及三個輕键cdr r n d 罕工織 CDR ( CDRl、CDR2 及 CDR3 ) 構成抗體之習知抗® έ士人JCR & , Λ 仉原、，·°合部位（抗體結合部位），其實體上 與同源抗原相互作用日姆也 > 舰，丄 作用且k供抗體之特異性。整個抗體含有 兩個一致抗體結合部位，久ώ办 ^ t 1 谷由來自一個重鏈及一個輕鏈之 DR構成因為CDR含於連接^段之環内，所以三個 沿可變區之線性胺基酸序列為不相連的。抗體多狀摺疊 時，CDR環極接近，從而構成抗原組合部位。可變區域之沒 片形成構架區（FR)，其含有對於抗體其他性質（例如穩定 性）較為重要的保守性更大之序列。 b.抗體片段 本文所提供之抗體包括抗體片段，其為含有小於全長 抗體之完整序列但保留全長抗體之至少一部分特異性結合 能力的全長抗體之衍生物。抗體片段亦可包括抗體之可插 入抗體構架（例如嵌合抗體）中以保留親本抗體之結合親 和力的抗原結合部分^抗體片段之實例包括（但不限於） Fab、Fab'、F(ab')2、單鏈 Fv ( scFv )、Fv、dsFv、雙功能抗 體、Fd及Fd'片段及其他片段，包括經修飾片段（參見例如 Methods in Molecular Biology,第 207 卷：Recombinant Antibodies for Cancer Therapy Methods and Protocols (2003); 第1章；第3-25頁，Kipriyanov)。抗體片段可包括多個連 接在一起（諸如由二硫橋鍵）之鏈且可重組產生。抗體片 丨1:; 105 201201839 段亦可含有連接兩個或更多個域之合成連接子，諸如狀連 接子。產生抗原結合片段之方法為此項技術中所熟知且可 用於修飾本文所提供之任何抗體。抗體分子片段可例如藉 由酶裂解產生。舉例而言，由木瓜蛋白酶進行蛋白酶裂解 時，重鏈恆定區之二聚體（即以域）自兩個Fab區（亦即 含有可變區之部分）裂解。 單鏈抗體可藉由連接特異性抗體之重鏠可變區（Vh) 與輕键可變區（V L )而經重組工程改造。可變區之特定核 酸序列可藉由標準分子生物學方法’例如藉由聚合酶鏈反 應（PCR )及其他重組核酸技術進行選殖。產生sFv之方法 例如由以下描述：Whitlow 及 Filpula (1991) 2· 97-105 ; Bird 等人（1988) Science 242:423-426 ; pack 等人 (1993) Bio/Technology 1 1:1271-77;及美國專利第 4,946 778 號、第 5,840,300 號、第 5,607,988 號、第 5,658,727 號、第 5,258,498號）。單鏈抗體亦可藉由針對目標抗原結合筛選單 鏈抗體文庫來鑑別。構築及篩選該等文庫之方法為此項技 術所熟知。 2.例示性抗RSV抗體 本文提供結合於RSV及中和RSV之抗體或其抗原結合 片段。詳言之，抗體或抗原結合片段免疫特異性結合於RSV F蛋白。舉例而言’本文所提供之抗RSV抗體免疫特異性 結合於分離或純化或重組之RSV F蛋白。在其他實例中， 本文所提供之抗RSV抗體免疫特異性結合於編碼表面酿蛋 白F ( RSV F蛋白）之RSV病毒粒子或rsv病毒。 106 201201839 本文所提供之抗RSV抗體展現有利或不同於此項技術 中之抗RSV抗體的性質。舉例而言，本文所提供之抗體展 現較低或改良之對於RSV F蛋白的結合親和力，諸如較低 或改良之對於分離或純化或重組RSV F蛋白或對於表現天 然F蛋白之RSV病毒或病毒粒子的結合親和力。在其他實 例中，本文所提供之抗體展現改良或較佳之RSV中和活 性。在特定實例中，本文所提供之抗RSV抗體結合於RSV 上之抗原決定基，與其他先前技術或現有抗RSV抗體相 比，該抗原決定基不易受所產生之逃避突變體（MARM )形 式之變異影響。舉例而言，在本文所提供之抗RSV抗體（例 如抗體30D8或其全長或其他抗體片段形式）存在下，在超 過10輪病毒複製後，且一般在11、12、13、14、15、16、 17、18、19或20輪後，RSV無法產生逃避突變體。
抗RSV抗體包括抗體SC5或58c5，或其全長或其他抗 體片段形式（參見例如美國專利公開案第US2011/0076268 號及國際公開PCT申請案第W02011/020079號）。58c5為 含有具有SEQ ID ΝΟ:1所示之胺基序列的重鍵及具有SEQ ID NO:5所示之胺基酸序列的輕鏈之Fab片段。58c5之抗體 或抗原片段形式及結合於與58c5相同之抗原決定基的抗體 或抗原片段形式含有重鏈，其具有GASINSDNYYWT ( SEQ ID NO:2 )所示之互補決定區（CDR ) VH CDR1、 HISYTGNTYYTPSLKS ( SEQ ID NO:3 )所示之 VH CDR2 及 CGAYVJSNCGWFDS ( SEQ ID NO:4)所示之 VH CDR3 ;及 輕鏈，其具有 QASQDISTYLN ( SEQ ID NO:6)所示之 CDR 107 ii;： 201201839 VL CDRl、GASNLET ( SEQ ID NO:7 )所示之 VL CDR2 及 QQYQYLPYT (SEQIDNO:8)戶斤示之 VLCDR3。一般，58c5 之抗體片段形式包括具有SEQ ID NO:l之胺基酸1_125所 示之胺基酸序列的Vh域及具有SEQ ID N〇:5之胺基酸 1-107所示之胺基酸序列的VL域。sc5為含有具有SEQ ID NO:9所示之胺基酸序列的重鏈及具有SEQ ID NO: 13所示 之胺基酸序列的輕鏈之Fab片段。sc5之抗體或抗原片段形 式及結合於與sc5相同之抗原決定基的抗體或抗原片段形 式含有重鏈，其具有GDSISGSNWWN ( SEQ ID NO:10)所 示之互補決定區（CDR) VH CDRl、EIYYRGTTNYKSSLKG (SEQ ID ΝΟ:11 )所示之 VH CDR2 及 GGRSTFGPDYYYYMDV( SEQ ID NO:12)所示之 VH CDR3 ; 及輕鏈，其具有RASQNIKNYLN ( SEQ ID NO:14)所示之 CDR VL CDIU、AASTLQS( SEQ ID NO:15 )所示之 VL CDR2 及 QQSYNNQLT ( SEQ ID NO:16)所示之 VL CDR3。一般， sc5之抗體片段形式包括具有SEQ ID NO:9之胺基酸1-125 所示之胺基酸序列的VH域及具有SEQ ID ΝΟ:13之胺基酸 1 -107所示之胺基酸序列的Vl域。 本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段包括單株 抗體、多特異性抗體、雙特異性抗體、人類抗體、人類化 抗體、路轮化抗體、叙合抗體、單鏈Fv ( scFv )、單鏈抗體、 單域抗體、Fab片段、F(ab')片段、二硫鍵連接之Fv ( sdFv) 及抗個體遺傳型（抗.Id )抗體、細胞内抗體或以上任一者 之抗原結合片段。詳言之，抗體包括免疫球蛋白分子及免 108 201201839 疫球蛋白分子之免疫活性片段，亦即含有抗原結合部位之 分子。免疫球蛋白分子可為任何類型（例如IgG、IgE、IgM、
IgD、IgA 及1gY)、種類（例如 IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、 IgAl及IgA2)或亞類。 本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段可用於以 包括以下之形式治療及診斷之方法：單株抗體、多特異性 抗體、人類抗體、人類化抗體、路騎化抗體、敌合抗體、 單鏈Fv ( scFv )、單鏈抗體、單域抗體、Fab片段、F(ab') 片段、二硫鍵連接之Fv ( sdFv )及抗個體遺傳型（抗id ) 抗體、細胞内抗體或以上任一者之抗原結合片段。詳言之， 抗體包括免疫球蛋白分子及免疫球蛋白分子之免疫活性片 段’亦即含有抗原結合部位之分子。免疫球蛋白分子可為 任何類型（例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA及IgY )、種類 (例如 IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl 及 IgA2)或亞類。 本文所提供之免疫特異性結合於RSV F蛋白的例示性 抗RSV抗體或其抗原結合片段包括30D8、104E5、38F10、 14G3、90D3、56E11、17C9及69F6，其為本文別處詳細描 述之Fab片段。本文所提供之例示性抗RSV抗體或其抗原 結合片段亦包括含有以下之抗RSV抗體或其抗原結合片 段：30D8、104E5、38F10、14G3、90D3、56E11、17C9 或 69F6之重鏈，其含有可變重鏈（VH)域及恆定重鏈域1 (CH1 );及 /或 30D8、104E5、38F10、14G3、90D3、56E11、 17C9或69F6之輕鏈，其含有可變輕鏈（VL)域及恆定輕 鏈域（CL )。舉例而言，本文所提供之例示性抗RS V抗體或 109 II：： 201201839 其抗原結合片段包括含有以下之抗RSV抗體或其抗原結合 片段：具有 SEQ ID NO:396、398、400、402、404、452、 454或456所示之胺基酸序列的重鏈，及/或具有SEQ ID NO:395、397、399、401、403、453、455 或 457 所示之胺 基酸序列的輕鏈。在一特定實例中，抗RSV抗體為含有具 有SEQ ID NO: 396所示之胺基酸序列的重鏈及具有SEQ ID NO:3 95所示之胺基酸序列的輕鏈之Fab片段。在一特定實 例中，抗RSV抗體為含有具有SEQ ID NO: 398所示之胺基 酸序列的重鏈及具有SEQ ID NO:397所示之胺基酸序列的 輕鏈之Fab片段。在一特定實例中，抗RSV抗體為含有具 有SEQ ID NO: 400所示之胺基酸序列的重鏈及具有SEQ ID NO:3 99所示之胺基酸序列的輕鏈之Fab片段。在一特定實 例中，抗RSV抗體為含有具有SEQ ID NO: 402所示之胺基 酸序列的重鏈及具有SEQ ID NO:401所示之胺基酸序列的 輕鏈之Fab片段。在一特定實例中，抗RSV抗體為含有具 有SEQ ID NO: 404所示之胺基酸序列的重鏈及具有SEQ ID NO:403所示之胺基酸序列的輕鏈之Fab片段。在一特定實 例中，抗RSV抗體為含有其有SEQ ID NO: 452所示之胺基 酸序列的重鏈及具有SEQ ID NO:453所示之胺基酸序列的 輕鏈之Fab片段。在一特定實例中，抗RSV抗體為含有具 有SEQ ID NO: 454所示之胺基酸序列的重鏈及具有SEQ ID NO:455所示之胺基酸序列的輕鍵之Fab片段。在一特定實 例中，抗RSV抗體為含有具有SEQ ID NO: 456所示之胺基 酸序列的重鏈及具有SEQ ID NO:457所示之胺基酸序列的 110 201201839 輕鏈之F ab片段。 本文所提供之抗體包括30D8、104E5、38F10、14G3、 90D3、56E11、i7C9或69F6之全長抗體形式。本文所提供 之抗體亦包括含有 30D8、104E5、38F10、14G3、90D3、 5 6E11、17C9或69F6之抗原結合部位（例如CDR)的全長 抗體形式。本文所提供之全長抗RSv抗體或其抗原結合片 ί又可含有此項技術中已知之任何輕鏈及重鏈恆定區，諸如 此項技術中已知之任何人類恆定區。舉例而言，本文所提 供之全長抗體可含有輕鏈恆定區（)，即人類輕鏈&、人 類輕鏈λ。本文所提供之全長抗體可含有重鏈恆定區（Ch1_ 連接子-Ch2-Ch3 )，其為任何同型，且尤其為IgG。恆定區 可為亞類IgGl之恆定區（SEq ID n〇:356 )、IgG2之恆定區 (SEQ ID NO:3 57 )、IgG3 之恆定區（SEQ ID NO:358 )或 IgG4 ;之恆疋區（SEQ ID NO:359 )。詳言之，本文所提供之任一 抗體的全長抗體形式均含有IgG亞類IgG1之恆定區。 本文所提供之抗體包括免疫特異性結合rSV F蛋白之 30D8、104E5、38F10、14G3、90D3、56E11、17C9 及 69F6 的其他抗體片段形式。該等片段包括其任何抗原結合片段 或含有 30D8、104E5、38F10、14G3、90D3、56E11、17C9 或69F6之保留結合RSV F蛋白之能力的抗原結合片段之工 程改造抗體。該等抗體包括例如嵌合抗體、單鏈Fv( scFv )、 單鏈抗體、單域抗體、Fab片段、F(ab，）片段、二硫鍵連接 之Fv ( sdFv )、抗個體遺傳型（抗id)抗體、細胞内抗體或 以上任一者之抗原結合片段。在特定實例中，抗體為Fab 111 201201839 30D8、104E5、38F10、14G3、90D3、56E11、17C9 或 69F6。 本文所提供之例示性抗Rsv抗體或其抗原結合片段包 括含有νΗ域及/或可變輕鏈VL域之抗RSV抗體或其抗原結 合片段，該νΗ域及/或可變輕鏈VL域分別具有30D8、 104E5、38F10、14G3、90D3、56E11、17C9 或 69F6 之 VH 域及/或VL域的胺基酸序列。舉例而言，抗體或其抗原結合 片段可含有νΗ域，其具有SEQ ID NO: 398或402之胺基 酸 1-125、SEQ ID NO:396 之胺基酸 1-121、SEQ ID NO:404 之胺基酸1-123、SEQ ID NO:400或452之胺基酸1-124、 SEQ ID NO:454之胺基酸1-133或SEQ ID NO:456之胺基酸 1-118所示之胺基酸序列；及/或VL域，其具有SEQ ID NO: 3 97、403或455之胺基酸1-107、SEQ ID NO:399之胺基酸 1-108、SEQ ID NO:395 之胺基酸 1-110、SEQ ID NO:401 之 胺基酸 1-113、SEQ ID NO:453 之胺基酸 1-111 或 SEQ ID NO:457之胺基酸1-109所示之胺基酸序列。
本文所提供之例示性抗RSV抗體或其抗原結合片段包 括含有VH域及/或VL域之抗RSV抗體或其抗原結合片段， 該VH域及/或VL域分別具有與30D8' 104E5、38F10、14G3、 90D3、56E11、17C9 或 69F6 之 VH 域及/或 VL 域至少 80% 或約80%—致的胺基酸序列。舉例而言，本文所提供之抗 體或其抗原結合片段可含有VH域，其具有與SEQ ID NO: 398或402之胺基酸1-125、SEQ ID NO:396之胺基酸 1-121、SEQ ID NO:404 之胺基酸 1-123、SEQ ID NO:400 或 452 之胺基酸 1-124、SEQ ID NO:454 之胺基酸 1-133 或 SEQ 112 201201839 ID NO:456之胺基酸1-118所示之胺基酸序列80% —致的胺 基酸序列；及/或VL域，其具有SEQ ID NO: 397、403或 455 之胺基酸 1-107、SEQ ID NO:399 之胺基酸 1-108、SEQ ID NO:3 95之胺基酸卜110、SEQ ID NO:401之胺基酸 1-113、SEQ ID NO:453 之胺基酸 1-111 或 SEQ ID NO:457 之胺基酸1-109所示之胺基酸序列。 在一些實例中，本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結 合片段可含有VH域，其具有與SEQ ID NO: 398或402之 胺基酸 1-125、SEQ ID NO:396 之胺基酸 1-121、SEQ ID NO:404之胺基酸1-123、SEQ ID NO:400或452之胺基酸 1-124、SEQ ID NO:454 之胺基酸 1-133 或 SEQ ID NO:456 之胺基酸1 -11 8所示之胺基酸序列至少8 1 %或約8 1 %、至少 82%或約82%、至少83%或約83%、至少84%或約84%、至 少85%或約85%、至少86%或約86%、至少87%或約87%、 至少88%或約88%、至少89%或約89%、至少90%或約90%、 至少91%或約91%、至少92%或約92%、至少93%或約93%、 至少94%或約94%、至少95%或約95%、至少96%或約96%、 至少97%或約97%、至少98%或約98%或至少99%或約99% 一致的胺基酸序列；及/或Vl域，其具有與SEQ ID NO: 3 97、403或455之胺基酸1-107、SEQ ID NO:399之胺基酸 1-108、SEQ ID NO:3 95 之胺基酸 1-110、SEQ ID NO:401 之 胺基酸 1-113、SEQ ID NO:453 之胺基酸 1-111 或 SEQ ID NO:457之胺基酸1-109所示之胺基酸序列至少81%或約 81%、至少82%或約82%、至少83%或約83%、至少84%或 113 201201839 約84%、至少85%或約85%、至少86%或約86%、至少87% 或約87%、至少88%或約88%、至少89%或約89%、至少 90%或約90%、至少91%或約91%、至少92%或約92%、至 少93%或約93%、至少94%或約94%、至少95%或約95%、 至少96。/。或約96%、至少97%或約97%、至少98%或約98% 或至少99°/。或約99%—致的胺基酸序列。 因此，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其含有 VH域，該VH域具有與SEQ ID NO: 396之胺基酸1-121所 示之胺基酸序列至少約80%至99%或約80%至99%—致’ 例如90%至99%或至少95%—致，諸如81%、82%、83%、 84%、85%、86%、87%、8 8%、89%、90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%或99%—致的胺基酸序列；且 其含有VL域，該VL域具有與SEQ ID NO: 395之胺基酸 1-110所示之胺基酸序列至少約80%至99%或約80%至99% 一致，例如90%至99%或至少95%—致，諸如81%、82%、 83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%或 99%— 致的胺基酸序 列。 @此，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其含有 Vh域，該Vh域具有與SEQ ID NO: 398之胺基酸1-125所 示之胺基酸序列至少約80%至99%或約80%至99%—致， 例如90%至99%或至少95%一致，諸如81%、82%、83%、 84%、85%、86%、87%、88%、89% ' 90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%或"％一致的胺基酸序列；且 114 201201839 其含有VL域，該VL域具有與SEQ ID NO: 397之胺基酸 1-107所示之胺基酸序列至少約80%至99%或約80%至99% 一致，例如90%至99%或至少95%—致，諸如81%、82°/〇、 83%、84%、85% ' 86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%或 99%— 致的胺基酸序 列。 因此，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其含有 VH域，該VH域具有與SEQ ID NO: 400之胺基酸1-124所 示之胺基酸序列至少80%至99%或約80%至99%—致，例 如 90%至 99%或至少 95%—致，諸如 81%、82%、83%、84%、 85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、 95%、96%、97%、98%或99%—致的胺基酸序列；且其含 有Vl域，該VL域具有與SEQ ID NO: 399之胺基酸1-108 所示之胺基酸序列至少80%至99%或約80%至99%—致， 例如90%至99%或至少95%—致，諸如81%、82%、83%、 84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%或99%—致的胺基酸序列。 因此，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其含有 VH域，該VH域具有與SEQ ID NO: 402之胺基酸1-125所 示之胺基酸序列至少80%至99%或約80%至99%—致，例 如 90%至 99%或至少 95%—致，諸如 81%、82%、83%、84%、 85%、86%、87%、88%、89%、90%、91% ' 92%、93%、94%、 95%、96%、97%、98%或99%—致的胺基酸序列；且其含 有VL域，該VL域具有與SEQ ID NO: 401之胺基酸1-113 115 201201839 所示之胺基酸序列至少80%至99%或約80%至99%—致， 例如90%至99%或圭少95%—致，諸如81%、82%、83%、 84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92% ' 93%、 94%、95%、96%、97%、98%或99%—致的胺基酸序列。 因此，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其含有 VH域，該VH域具有與SEQ ID NO: 404之胺基酸1-123所 示之胺基酸序列至少80%至99%或約80%至99%—致，例 如 90%至 99%或至少 95%—致，諸如 81%、82%、83%、84%·、 85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、 95%、96%、97%、98%或99%—致的胺基酸序列；且其含 有VL域，該VL域具有與SEQ ID NO: 403之胺基酸1-107 所示之胺基酸序列至少80%至99%或約80%至99%—致’ 例如90%至99%或至少95%—致，諸如81%、82%、83%、 84%、85%、86%、87% ' 88%、89%、90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%或99%—致的胺基酸序列。 因此，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其含有 VH域，該VH域具有與SEQ ID NO: 452之胺基酸1-124所 示之胺基酸序列至少80%至99%或約80%至99%—致，例 如 90%至 99%或至少 95%—致，諸如 81%、82%、83%、84%、 85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、 95%、96%、97%、98%或99%—致的胺基酸序列；且其含 有VL域，該VL域具有與SEQ ID NO: 453之胺基酸1-111 所示之胺基酸序列至少80%至99%或約80%至99%—致’ 例如90%至99%或至少95%—致，諸如81%、82°/〇、83%、 116 201201839 . 84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%或99%—致的胺基酸序列。 因此，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其含有 VH域，該VH域具有與SEQ ID NO: 454之胺基酸1-133所 示之胺基酸序列至少80%至99%或約80%至99%—致，例 如 90%至 99%或至少 95%—致，諸如 81%、82%、83%、84%、 85%、86%、87%、88%、89%、90%、91% ' 92%、93%、94%、 95%、96%、97%、98%或99%—致的胺基酸序列；且其含 有VL域，該VL域具有與SEQ ID NO: 455之胺基酸1-107 所示之胺基酸序列至少80%至99%或約80%至99%—致， 例如90%至99%或至少95%—致，諸如81%、82%、83%、 84%、85%、86%、87%、8 8%、89%、90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%或99%—致的胺基酸序列。 因此，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其含有 VH域，該VH域具有與SEQ ID NO: 456之胺基酸1-118所 示之胺基酸序列至少80%至99%或約80%至99%—致，例 如 90%至 99%或至少 95%—致，諸如 81%、82%、83%、84%、 85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、 95%、96%、97%、98%或99%—致的胺基酸序列；且其含 有VL域，該VL域具有與SEQ ID NO: 457之胺基酸1-109 所示之胺基酸序列至少80%至99%或約80%至99%—致， 例如90%至99%或至少95%—致，諸如81%、82%、83%、 84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%或99%—致的胺基酸序列。 117 201201839 亦提供含有一或多個選自30D8、104E5、38F10、14G3、 90D3、56E1卜17C9或69F6之CDR的Vh互補決定區（CDR) 之抗RSV抗體或其抗原結合片段。舉例而言，抗RSV抗體 或其抗原結合片段可含有具有SEQ ID NO: 405、411、417、 423、429、435-441、458、464、470 或 482-484 所示之胺 基酸序列的VH CDR1。舉例而言，抗RS V抗體或其抗原結 合片段可含有具有以下胺基酸序列之 VH CDR1 : GFTFSGHTIA ( SEQ ID NO:405 )、GGTFDTYTIS ( SEQ ID NO:411 )、GFSITDFGIH( SEQ ID NO:417)、GASISSDNHYWS (SEQ ID NO:423 )、GFTLKNYEMN ( SEQ ID NO:429 )、 SDNYYWT ( SEQ ID NO:435 )、GSNWWN ( SEQ ID NO:436 )、GHTIA ( SEQ ID NO:437 )、TYTIS ( SEQ ID NO:438 ) ' DFGIH ( SEQ ID NO:439)、SDNHYWS ( SEQ ID NO:440 )、NYEMN ( SEQ ID NO:429 )、GVSINSNNYFWA (SEQ ID NO:458 )、GDSFNDYFWT ( SEQ ID NO:464 )、 GYSFTSYWIA ( SEQ ID NO:470)、SNNYFWA ( SEQ ID NO:482 )、DYFWT ( SEQ ID NO:483)或 SYWIA ( SEQ ID NO:484)。 在另一實例中，抗RSV抗體或其抗原結合片段可含有 具有 SEQ ID NO: 406、412、418、424、430、459、465 或 471所示之胺基酸序列的VH CDR2。舉例而言，抗RSV抗 體或其抗原結合片段可含有具有以下胺基酸序列之VH CDR2 ： WVSTNNGNTEYAQKIQG ( SEQ ID NO:406 )、 RIIPSLGETNYAHKLQG ( SEQ ID NO:412 ) ' 118 201201839 LISYNEVNIHYGESVRG ( SEQ ID NO:418 ) SIYYTGGTNYNPSLKS ( SEQ ID NO:424 ) YISSSGNVVKYVDSVQG ( SEQ ID NO:430 ) NIYYGGSTHYNASLQS ( SEQ ID NO:459 ) \ EISHSGSTNYSPSLKS ( SEQ ID NO:465 ) 或 IIFPNDSDATYSPSFQG ( SEQ ID NO:471 )0 在另一實例中，抗RSV抗體或其抗原結合片段可含有 具有 SEQ ID NO:407、413、 419、 425、 431 、 460 、 466或 472所示之胺基酸序列的VH CDR3 。舉例而言，抗 RSV抗 體或其抗原結合片段可含有具有以下胺基酸序列之 VH CDR3 ： EWLVMGGFAFDH (SEQ ID NO:407 ) RITGPVDWVWDYGMDV ( SEQ ID NO:413 ) 、 DVWEDSWLSLACFQE ( SEQ ID NO:419 ) % GLFFITARPYWYFDL ( ： SEQ ID NO:425 ) 或 GFSIDKYDSSVDEY( SEQ ID NO:431 )、SESIFWDYYYGLDV (SEQ ID NO:460 ) ' GVRSRPPPSYRGSGSPPYYHYGMDV (SEQ ID NO:466 )或 QYYLGSFES ( SEQ ID NO:472) 〇 在一特定實例中，本文所提供之抗RSV抗體或其抗原 結合片段含有具有SEQ ID NO:435所示之胺基酸序列的VH CDR1、具有SEQ ID NO:3所示之胺基酸序列的VH CDR2 及具有SEQ ID NO:4所示之胺基酸序列的VH CDR3。
在另一特定實例中，抗RSV抗體或其抗原結合片段含 有具有SEQ ID NO:436所示之胺基酸序列的VH CDR1、具 有SEQ ID ΝΟ:11所示之胺基酸序列的VH CDR2及具有SEQ 119 201201839 ID NO:12所示之胺基酸序列的VH CDR3。 在一特定實例中，抗RSV抗體或其抗原結合片段含有 具有SEQ ID NO:405所示之胺基酸序列的VH CDR1、具有 SEQ ID NO:406所示之胺基酸序列的VH CDR2及具有SEQ ID NO:407所示之胺基酸序列的VH CDR3。在另一特定實例 中，抗RSV抗體或其抗原結合片段含有具有SEQIDNO:437 所示之胺基酸序列的VH CDR1、具有SEQ ID NO:406所示 之胺基酸序列的VH CDR2及具有SEQ ID NO:407所示之胺 基酸序列的VH CDR3。 在一特定實例中，抗RSV抗體或其抗原結合片段含有 具有SEQ ID NO:411所示之胺基酸序列的VH CDR1、具有 SEQ ID NO:412所示之胺基酸序列的VH CDR2及具有SEQ ID NO:413所示之胺基酸序列的VH CDR3。在另一特定實例 中，抗RSV抗體或其抗原結合片段含有具有SEQIDNO:438 所示之胺基酸序列的VH CDR1、具有SEQ ID NO:412所示 之胺基酸序列的VH CDR2及具有SEQ ID ΝΟ··413所示之胺 基酸序列的VH CDR3。 在一特定實例中，抗RSV抗體或其抗原結合片段含有 具有SEQ ID NO:417所示之胺基酸序列的VH CDR1、具有 SEQ ID NO:418所示之胺基酸序列的VH CDR2及具有SEQ ID NO:419所示之胺基酸序列的VH CDR3。在另一特定實例 中，抗RSV抗體或其抗原結合片段含有具有SEQ ID NO:439 所示之胺基酸序列的VH CDR1、具有SEQ ID NO:418所示 之胺基酸序列的VH CDR2及具有SEQ ID NO:419所示之胺 120 201201839 基酸序列的VH CDR3。 在一特定實例中，抗RS V抗體或其抗原結合片段含有 具有SEQ ID NO:423所示之胺基酸序列的VH CDR1、具有 SEQ ID NO:424所示之胺基酸序列的VH CDR2及具有SEQ ID NO:425所示之胺基酸序列的¥^1〇0113。在另一特定實例 中，抗RSV抗體或其抗原結合片段含有具有SEQ ID NO:440 所示之胺基酸序列的VH CDR1、具有SEQ ID NO:424所示 之胺基酸序列的VH CDR2及具有SEQ ID NO:425所示之胺 基酸序列的VH CDR3。 在一特定實例中，抗RSV抗體或其抗原結合片段含有 具有SEQ ID NO:429所示之胺基酸序列的VH CDR1、具有 SEQ ID NO:430所示之胺基酸序列的VH CDR2及具有SEQ ID NO:431所示之胺基酸序列的VH CDR3。在另一特定實例 中，抗RSV抗體或其抗原結合片段含有具有SEQ ID NO:441 所示之胺基酸序列的VH CDR1、具有SEQ ID NO:430所示 之胺基酸序列的VH CDR2及具有SEQ ID NO:431所示之胺 基酸序列的VH CDR3。 在一特定實例中，抗RSV抗體或其抗原結合片段含有 具有SEQ ID NO:458所示之胺基酸序列的VH CDR1、具有 SEQ ID NO:459所示之胺基酸序列的VH CDR2及具有SEQ ID NO:460所示之胺基酸序列的VH CDR3。在另一特定實例 中，抗RSV抗體或其抗原結合片段含有具有SEQ ID NO:482 所示之胺基酸序列的VH CDR1、具有SEQ ID NO:459所示 之胺基酸序列的VHCDR2及具有SEQIDNO:460所示之胺 121 201201839 基酸序列的VH CDR3。 在一特定實例中，抗RSV抗體或其抗原結合片段含有 具有SEQ ID NO:464所示之胺基酸序列的VH CDR1、具有 SEQ ID ΝΟ··465所示之胺基酸序列的VH CDR2及具有SEQ ID NO:466所示之胺基酸序列的VH CDR3。在另一特定實例 中，抗RSV抗體或其抗原結合片段含有具有SEQ ID N0483 所示之胺基酸序列的vh CDR1、具有SEQ ID NO:465所示 之胺基酸序列的VhCDR2及具有SEQIDNO:466所示之胺 基酸序列的VH CDR3。 在一特定實例中，抗RSV抗體或其抗原結合片段含有 具有SEQ ID NO:47〇所示之胺基酸序列的Vh CDR1、具有 SEQ ID NO:471所示之胺基酸序列的Vh CDR2及具有SEQ ID NO:472所示之胺基酸序列的Vh CDR3。在另一特定實例 中，抗RSV抗體或其抗原結合片段含有具有SEQ ID N〇:484 所示之胺基酸序列的Vh CDR1、具有SEQ ID N〇:471所不 之胺基酸序列的vhcdr2及具有SEQIDNO:472所示之胺 基酸序列的VH CDR3 ° 亦提供含有〆或多個選自3〇D8、1〇4E5、38F10、14G3、 90D3、56E11、17C9 或 69F6 之 CDR 的 Vl 互補決疋區（CDR) 之抗RSV抗體或其抗原結合片段。舉例而言，抗RSV抗體 或其抗原結合片段玎含有具有SEQ ID N〇:408、414、420、 426、'432、46卜467或473所示之胺基酸序列的VlCDR1。
舉例而言，抗RSV抗體或其抗原、结合片段可含有具有以下 胺基酸序列之 VL CDR1 : GANNIGSQNVH ( SEQ ID 122 201201839 NO:408 ) 、RASQNIKTYLN ( SEQ ID NO:414 )、 RASQSISNWLA( SEQ ID NO:420 )、RSSQSLLDSDDGNTYLD (SEQ ID NO:426 ) ' RASQSISNFLN ( SEQ ID NO:432 ) > TGTSSDVGGYNYVS (SEQ ID NO:461)> RASQNINTWLA (SEQ ID NO:467 )或 QASDISNYLN ( SEQ ID NO:473 )。 在另一實例中，抗RSV抗體或其抗原結合片段可含有 具有 SEQ ID NO:409、415、421、427、433、462、468 或 474所示之胺基酸序列的VL CDR2。舉例而言，抗RSV抗 體或其抗原結合片段可含有具有以下胺基酸序列之VL CDR2 : DDRDRPS ( SEQ ID NO:409)、AVSNLQS ( SEQ ID NO:415 ) ' KASNLED( SEQ ID NO:421 )' TLSYRAS( SEQ ID NO:427 )、AASSLQG( SEQ ID NO:433 )、EVTKRPS( SEQ ID NO:462 )、EISHSGSTNYSPSLKS ( SEQ ID NO:465 )或 IIFPNDSDATYSPSFQG ( SEQ ID NO:471 )。 在另一實例中，抗RSV抗體或其抗原結合片段可含有 具有 SEQ ID NO: 410、416、422、428、434、463、469 或 475所示之胺基酸序列的Vl CDR3。舉例而言，抗RSV抗 體或其抗原結合片段可含有具有以下胺基酸序列之VL CDR3 : QVWDSSRDQAVI ( SEQ ID NO:410)、QQSFSIPLT (SEQ ID NO:416) > QQYNSYSGLS ( SEQ ID NO:422 ) ' MQRMEFPFT ( SEQ ID NO:428 )、QQTYISLYT ( SEQ ID NO:434)、SSYAGSRHVV ( SEQ ID NO:463 )、QQANSFPRT (SEQ ID NO:469 )或 QQYDDLRGGFT ( SEQ ID NO:475 )。 在一特定實例中，抗RSV抗體或其抗原結合片段含有
123 S 201201839 具有SEQ ID NO:408所示之胺基酸序列的VL CDRl、具有 SEQ ID NO:409所示之胺基酸序列的Vl CDR2及具有SEQ ID NO:4 10所示之胺基酸序列的Vl CDR3。在另一特定實例 中，抗RSV抗體或其抗原結合片段含有具有SEQ ID NO:414 所示之胺基酸序列的Vl CDRl、具有SEQ ID NO:415所示 之胺基酸序列的VL CDR2及具有SEQ ID NO:416所示之胺 基酸序列的Vl CDR3。在另一特定實例中，抗RS V抗體或 其抗原結合片段含有具有SEQ ID NO:420所示之胺基酸序 列的Vl CDR1、具有SEQ ID NO:421所示之胺基酸序列的 Vl CDR2及具有SEQ ID NO:422所示之胺基酸序列的VL CDR3。
在另一特定實例中，抗RSV抗體或其抗原結合片段含 有具有SEQ ID NO:426所示之胺基酸序列的VL CDR1、具 有SEQ ID NO:427所示之胺基酸序列的VL CDR2及具有 SEQ ID NO:428所示之胺基酸序列的VL CDR3。在另一特定 實例中，抗RSV抗體或其抗原結合片段含有具有SEQ ID NO:432所示之胺基酸序列的Vl CDRJ、具有SEQ ID NO:433 所示之胺基酸序列的VL CDR2及具有SEQ ID NO:434所示 之胺基酸序列的Vl CDR3。在另一特定實例中，抗RS V抗 體或其抗原結合片段含有具有SEQ ID NO:461所示之胺基 酸序列的VL CDR1、具有SEQ ID NO:462.所示之胺基酸序 列的Vl CDR2及具有SEQ ID NO:463所示之胺基酸序列的 Vl CDR3。在另一特定實例中，抗RSV抗體或其抗原結合 片段含有具有SEQ ID NO:467所示之胺基酸序列的 VL 124 201201839 CDRl、具有SEQ ID NO:468所示之胺基酸序列的Vl CDR2 及具有SEQ ID NO:469所示之胺基酸序列的VL CDR3。在 另一特定實例中，抗RSV抗體或其抗原結合片段含有具有 SEQ ID NO:473所示之胺基酸序列的VL CDR1、具有SEQ ID NO:474所示之胺基酸序列的 VL CDR2及具有 SEQ ID NO:475所示之胺基酸序列的Vl CDR3。 本文所提供之CDR的任何組合可選擇用於產生抗體或 其抗原結合片段，其限制條件為抗體或抗原結合片段保留 免疫特異性結合於RSV F蛋白之能力。抗RSV抗體或其抗 原結合片段可含有此項技術中已知之抗體構架區。例示性 構架區包括分離之天然存在或共同構架區，包括人類構架 區（參見例如 Chothia 等人（1998) /· Mo/· 5/〇/· 278: 45 7-479)。在一些實例中，抗體構架區為人類抗體構架區。 在一些實例中，抗體或抗原結合片段含有30D8、104E5、 3 8F10、14G3、90D3、56E11、17C9 或 69F6 之構架區。 本文所提供之例示性分離之抗RSV抗體或其抗原結合 片段包括任何抗RSV抗體或其抗原結合片段，其與本文所 提供之任一抗體免疫特異性結合於相同的呼吸道融合性病 毒（RS V )融合（F )蛋白上之抗原決定基。在一實例中， 本文提供一種與30D8結合於相同的抗原決定基之抗體，其 為含有SEQ ID NO:396所示之重鏈及SEQ ID NO:395所示 之輕鏈的抗體。在另一實例中，本文提供一種與104E5結 合於相同的抗原決定基之抗體，其為含有.SEQ ID NO:398 所示之重鏈及SEQ ID NO :397所示之輕鏈的抗體。在另一 C： 125 201201839 實例中’本文提供一種與38F10結合於相同的抗原決定基 之抗體’其為含有SEQ ID N0:400所示之重鏈及SEQ m NO:399所示之輕鏈的抗體。在另一實例中，本文提供一種 與14G3結合於相同的抗原決定基之抗體，其為含有seqid NO:402所示之重鏈及SEQIDNO:401所示之輕鏈的抗體。 在另一實例中，本文提供一種與90D3結合於相同的抗原決 定基之抗體，其為含有SEQ ID NO:404所示之重鏈及SEQ ID NO:403所示之輕鏈的抗體。在另一實例中，本文提供一 種與56E11結合於相同的抗原決定基之抗體，其為含有seq ID NO:452所示之重鏈及SEQ id NO:453所示之輕鏈的抗 體。在另一實例中，本文提供一種與17C9結合於相同的抗 原決定基之抗體，其為含有SEQ ID NO:454所示之重鍵及 SEQ ID NO:455所示之輕鏈的抗體。在另一實例中，本文提 供一種與69F6結合於相同的抗原決定基之抗體，其為含有 SEQ ID NO:456所示之重鏈及SEq id n〇:457所示之輕鏈 的抗體。典型地，該等抗體含有可變重（VH)鏈及可變輕 (V L )鏈或其抗原結合片段。 本文所提供之抗體或抗原結合片段對於RSV F蛋白抗 原決定基之結合親和力常數（Ka )為至少1 X 108 M-1或約 lx ΙΟ、·1、至少 2.5x1 〇8μ·ι 或約 2.5x108 m·1、至少 5x108 m·1 或約 5xl〇8 Μ·1、至少 ixl〇9 μ·1 或約 ΐχΐ〇9 Μ·1、至少 5χΐ〇9 Μ 或約 5χ 109 ]VT1、至少 1 χ 1 〇1 〇 μ-1 或約 1 x 1010 1VT1、至少 5xl010 Μ·1 或約.5χ1〇10 μ-1、至少 1χ10" μ·1 或約 lxl0" ^•1、至少5><1011]\1-1或約5><10111^ — 1、至少1><10丨21^-1或約 126 201201839 1X10 Μ-丨、至少 5X1012M-丨或約 5x1〇12m-丨、至少 1x1〇i3m1 或約1X10丨3M-1、至少“心^或約5xi〇i3m-〗、至少 二〇14m-i 或約 至少 5xl〇Mivrl 或約 5χΐ〇ΐ4 Μ 、至:lxi〇i5 M-1或約1χ1〇15⑻或至少5χΐ〇ΐ5 M」或 約5χ1〇 Μ 1 〇本文所提供之抗體可展現對於重組純化之f 蛋白（諸如SEqIDNO:25所示之RSVA2病毒株F蛋白的 、、’田胞外域）的結合親和力。本文所提供之抗體亦可展現對 於天然RSV F蛋白（諸如藉由細胞中RSv之感染及表現所 產生的蛋白）之結合親和力。本文所提供之抗體對於重組F 蛋白相對於天然RSV F蛋白之結合親和力可相同或不同。 舉例而言’實施例5展示30D8對於重組F蛋白之結合親和 力高於對於天然RSV F蛋白之結合親和力。相比之下，無 論RSV F蛋白為天然或重組ρ蛋白，sc5 (參見例如美國專 利公開案第US201 1/0076268號及國際公開PCT申請案第 W02011/020079號）展現類似結合親和力。 在一些實例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段對 於RS V F蛋白抗原決定基之解離常數（Kd )為小於1 X 1 〇·8 μ 或約 1χ10_8 Μ、小於 4χ1(Γ9 Μ 或約 4xl0-9 Μ、小於 2χΐ〇-9 Μ 或約 2χ 1〇-9 μ、小於 1 χ ΙΟ.9 Μ 或約 1 χ 1〇_9 Μ、小於 2χ 1〇·10 Μ 或約 2χΐ〇-10 μ、小於 1χ1(Τ10 Μ 或約 lxlO-10 Μ、小於 2x10 —丨1 Μ或約2χΗΓ丨1 Μ、小於1x10·丨丨Μ或約lxlO·11 Μ、 小於 2χ1(Τ12 μ 或約 2xl〇'12 Μ、小於 1χ1〇」2 Μ 或約 1χΐ〇-ΐ2 Μ、小於 2χΐ〇-13 Μ 或約 2χ10·13 Μ、小於 1χ1〇·13 Μ 或約 lxlO·13 Μ、小於 2χ1(Τ14 ]V[或約 2χ10-丨4 Μ、小於 Ιχΐο-14 Μ 127 201201839 或約 1χ10_14 Μ、小於 2xl〇-15 Μ 或約 2xl〇-15 Μ、小於 lxl〇-15 Μ 或約 ΙχΙΟ-15 Μ 或小於 2χ1(Τ16 Μ 或約 2χ1(Γ16 Μ。 在一些實例中’本文所提供之抗體或抗原結合片段在 試管内微量中和檢定中中和RSV之EC5〇為小於0.005 ηΜ 或約 0.005 πΜ、小於 〇 〇1 ηΜ 或約 0.01 ηΜ、小於 0.025 ηΜ 或約 0.025 ηΜ、小於 〇 〇5 ηΜ 或約 0.05 ηΜ、小於 0.075 ηΜ 或約0.075 ηΜ、小於01 ηΜ或約0.1 ηΜ、小於0.5 ηΜ或 約0.5 ηΜ、小於0.75 ηΜ或約0.75 ηΜ、小於1 ηΜ或約1 ηΜ、小於 1.25 ηΜ 或約 ι·25 ηΜ、小於 1.5 ηΜ 或約 1.5 ηΜ、 小於1_75 ηΜ或約1.75 ηΜ或小於2 ηΜ或約2 ηΜ。在特定 實例中，本文所提供之分離之抗RSV抗體或抗原結合片段 在試管内空斑減少檢定中中和RSV之EC50為小於0.005 ηΜ 或約0.005 ηΜ至小於2 ηΜ或約2 ηΜ ;小於0.005 ηΜ或約 0.005 ηΜ至小於1 ηΜ或約1 ηΜ;小於0.005 ηΜ或約0.005 ηΜ至小於0.5 ηΜ或約0.5 ηΜ ;小於0.01 ηΜ或約0.01 ηΜ 至小於1 ηΜ或約1 ηΜ ;小於0.05 ηΜ或約0·05 ηΜ至小於 1 ηΜ或約1 ηΜ ;小於0.05 ηΜ或約0.05 ηΜ至小於0.5 ηΜ 或約0.5 ηΜ ;或小於0.1 ηΜ或約〇·1 ηΜ至小於0.5 ηΜ或 約 0.5 ηΜ。 在一些實例中’在關於中和RSV之試管内微量中和檢 定中，相對於各種抗RSV抗體，本文所提供之抗RSV抗體 或其抗原結合片段中和單株抗體逃避突變體（M ARM )。在 一特定實例中，本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片 段中和MARM之中和ECS0與產生MARM之親本RSV病毒 128 201201839 株的中和EC 5〇相同或大致與產生 MARM之親本RSV症1
決定基或與不同抗原決定基相互作用 在一些實例中
毒複製後，RSV無法產生逃避突變體。在一特定實例中， 在本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段存在下，在 連續11、12、13、14、15輪或更多輪病毒複製後，RSV不 產生逃避突變體》在另一特定實例中，RSV無法逃避本文 所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段。舉例而言，實施 例11A展示在30D8存在下在12輪病毒複製後，RSV無法 逃避。相比之下’在僅7輪病毒複製後，RSV能夠逃避莫 維珠單抗®。 在一些實例中，相對於在抗RSV抗體或其抗原結合片 段不存在下RSV與其宿主細胞受體之結合，本文所提供之 抗RSV抗體或其抗原結合片段使RSv與其宿主細胞受體之 結合抑制至少99%或約99%、至少95%或約95%、至少90% 或約90%、至少85%或約85%、至少80。/。或約80%、至少 75。/。或約75%、至少70°/。或約70%、至少65%或約65%、至 少60%或約60%、至少55%或約55%、至少50%或約50%、 129 201201839 至少45%或約45%、至少40%或約40%、至少35%或約35%、 至少30%或約30%、至少25%或約25%、至少20%或約20%、 至少15%或約15%或至少10%或約10%。在一些實例中， 相對於在抗RSV抗體或其抗原結合片段不存在下之rsV複 製’本文所提供之抗RSV抗體或抗原結合片段使RSV複製 抑制至少99%或約99%、至少95%或約95%、至少90%或 約90%、至少85%或約85%、至少8〇%或約8〇%、至少75〇/〇 或約75%、至少70%或約7〇%、至少65%或約65%、至少 60%或約60% '至少55%或約55%、至少5〇%或約5〇%、至 少45%或約45%、至少40%或約40%、至少35%或約35%、 至少30。/。或約30%、至少25%或約25%、至少20%或約20%、 至少15°/。或約15°/❶或至少1〇%或約1〇〇/0。 在一些實例中’本文所提供之抗體或其抗原結合片段 之半衰期為15天或更多天、20天或更多天、25天或更多 天、30天或更多天、4〇天或更多天、45天或更多天、5〇 天或更多天、55天或更多天、60天或更多天、3個月或更 多個月、4個月或更多個月或5個月或更多個月。增加本文 所提供之抗體或其抗原結合片段的半衰期之方法為此項技 術所已知。該等方法包括例如如本文別處所述之聚乙二醇 化、糖基化及胺基酸取代。 a·衍生物抗體 本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段可用於產 生衍生物抗體，諸如嵌合抗體或其他抗原結合片段，例如 ab Fab、F(ab )2、單鏈 fv ( scfv )、fv、dsFv、雙功能抗 130 201201839 體、F d及F d丨片段0 —般，柄吐白如士 >戚 何生自親本杬體之衍生物抗體或 抗原結合片段保留親本抗體之結合特異性^抗體片段可藉 由熟習此項技術者已知之任何技術來產生。舉例而言，Fab 及F(ab’）2片段可藉由使用諸如木瓜蛋白酶（產生Fab片段） 或胃蛋白酶（產生F(aV)2片段）<酶蛋白水解裂解免疫球 蛋白分子來產生。F(ab，）2片段含有可變區、輕鏈恆定區及 重鏈之cHi域。此外，本文所提供之抗Rsv抗體或其抗原 結合片段亦可使用此項技術中已知之各種噬菌體呈現方法 來產生。在一些貫例中，本文所提供之抗RSV抗體或其抗 原結合片段的抗原結合可變區可與此項技術中已知之一或 夕個悝疋區重組融合以產生嵌合全長抗體、Fab、Fab'、 F〇b·)2或其他抗原結合片段。由抗體片段產生全長抗體之 例示性方法為此項技術所已知且在本文中提供。產生後合 ;抗體之方法為此項技術所已知（參見例如M〇rris〇]1 (1 985) iSWewce 229.1202 ’ Oi 專人（1986) 4:214 ;
Gillies 等人（1989) J. //««〇/·从125:191-202 ;及美 國專利第5,807,715號、第4,816,567號及第4,816,397號）。
包含來自本文所提供之抗RSV抗體的一或多個CDR及 來自異源免疫球蛋白分子之構架區的嵌合抗體可使用此項 技術中已知之各種技術來產生，包括例如CDR移植（EP 239,400 ; PCT公開案第WO 91/09967號；及美國專利第 5,225,539 號、第 5,530，101 號及第 5,585,089 號）、鑲飾 (veneering)或重塑（resurfacing )( EP 5 92,106 ; EP 5 19,596 ; Padlan (1991) Molecular Immunology 28(4/5):489-498 ; 131 201201839
Studnicka 等人（1994) Proiek jEwg/weer/wg 7(6):805-8 14 ; 及 Roguska 等人（1994) PAM51 91:969-973 )及鏈改組（美國 專利第5,565,332號）。 在一些實例中，抗體含有30D8之一或多個CDR (例如 SEQ ID NO: 405-410及437所示之一或多個CDR)及異源 構架區。在一些實例中，抗體含有104E5之一或多個CDR (例如SEQ ID NO: 411-416及438所示之一或多個CDR)及 異源構架區。在一些實例中，抗體含有38F10之一或多個 CDR (例如SEQ ID NO: 417-422及439所示之一或多個 CDR)及異源構架區。在一些實例中，抗體含有14G3之一 或多個CDR (例如SEQ ID NO: 423-428及440所示之一或 多個CDR)及異源構架區。在一些實例中，抗體含有90D3 之一或多個CDR (例如SEQ ID NO: 429-434及441所示之 一或多個CDR)及異源構架區。在一些實例中，抗體含有 56E11 之一或多個 CDR (例如 SEQ ID NO: 458-463 及 482 所示之一或多個CDR )及異源構架區。在一些實例中，抗 體含有17C9之一或多個CDR (例如SEQ ID NO: 464-469 及483所示之一或多個CDR)及異源構架區。在一些實例 中，抗體含有69F6之一或多個CDR (例如SEQ ID NO: 470-475及484所示之一或多個CDR)及異源構架區。構架 區中之構架殘基可經來自CDR供體抗體之相應殘基取代以 改變（諸如改良）抗原結合。此等構架取代藉由此項技術 中熟知之方法鑑別，例如模擬CDR與構架殘基之相互作用 以鑑別構架為對於抗原結合較為重要之殘基及模擬序列比 132 201201839 ’較以鑑別特定位置處之罕見構架殘基（參見例如美國專利 •第 5,585,089 號；及 Riechmann 等人（1988)心⑽己 332:323)〇 在一些實例中’衍生物抗RSV抗體或其抗原結合片段 對於RSV F蛋白抗原決定基之結合親和力常數（Ka)為至 少 ΙχΙΟ8 Μ 1 或約 1χ1〇8 Μ-ι、至少 2 5χ1〇8 M-丨或約 2 5χΐ〇8 Μ 、至少 5χΐ〇8 Μ-ι 或約 5x1〇8 Μ-ι、至少 ixl〇9 或約 1x10 Μ 1、至少 5χ1〇9 Μ-ι 或約 5χ1〇9 Μ-ι、至少 1χ1〇10 M」 或約1x10丨0 Μ_ι、至少5χ1〇ι〇 Μ-ι或約5χ1〇ι〇 M-丨、至少 ΙχΙΟ11 Μ 1 或約 lxl〇u M—丨、至少 5χ1〇11 Μ-丨或約 Μ 、至少Ιχιο^μ」或約1χΐ〇丨2μ_丨至少5χΐ〇丨2 %丨或約 5Χΐ〇12Μΐ、至少 或約 ΙχΙΟ^Μ·1、至少 54013^, 或約 5Xl〇13M-i、至少 lxlO14!^·1 或約 IxIOMm-!、至少 5Xl〇14M-1 或約 klWM·1、至少 IxlO，1 或約 lxl〇15^ 或至少 5 χ 1015 1 或約 5 χ 1 〇15 m_ 1。 在一些實例中’衍生物抗RSv抗體或其抗原結 對於RSV F蛋白抗原決定基之解離常數（Kd )為小於卜 M 或約 1X10 8 M、小於 4xl0·9 Μ 或約 4χ10_9 M、小於 2m〇_9 Μ 或約 2χ1〇·9Μ、小於 1χ1〇.9Μ 或約 lxl〇-9M、小於 ι〇 M 或約 2Xl0'10 Μ、小於 ΐχίο-Μ M 或約 ixl〇-i〇 _ 1 1 Μ、小於 2χ10 Μ 或約 2xl(rll Μ、小於 lxl〇.u Μ 或約 μ 小於2xl〇 或約2xl〇-丨2M、小於1x1〇-12m或約i2 Μ、小於2χ1〇-ΐ3 M或約2χ1〇-丨3 M 於（ _13 M或約 1Χ1(Γ Μ、小於 2χ1〇·14Μ 或約 2χ1〇-14Μ、小於 1><1〇.14馗 133 201201839 或約1 10 Μ、小於2χ ίο」5 Μ或約2x 10·丨5 Μ、小於1 X ΙΟ·15 Μ 或約 1 χ ΐ〇 Μ 或小於 2χ ΙΟ·16 μ 或約 2χ ΙΟ-16 Μ。 在些貫例令，在關於中和RSV之試管内微量中和檢 定中相對於各種抗RSV抗體，衍生物抗RSV抗體或其抗 原結合片段中和單株抗體逃避突變體（MARM)。在一特定 實例中，本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段中和 MARM之中和EC；5〇與產生MARM之親本Rsv病毒株的中 和ECw相同或大致與產生MARM之親本RSV病毒株的中 和EC50相同》 在一些實例中，衍生物抗RSV抗體或其抗原結合片段 結合於不易受所產生之逃避突變體形式之變異影響的抗原 決定基。在一些實例中，在本文所提供之衍生物抗RSV抗 體或其抗原結合片段存在下，在連續8、9、10、11、12、 13' 14、15、16' 17、18、19、20輪或更多輪病毒複製後， RSV無法產生逃避突變體。在另一特定實例中，rsv無法 逃避本文所提供之衍生物抗RSV抗體或其抗原結合片段。 在一些實例中，在關於中和RSV之試管内微量中和檢 定中，衍生物抗RS V抗體或其抗原結合片段之EC50為小於 0.005 nM 或約 0.005 ιιΜ、小於 〇·〇1 nM 或約 〇.〇1 、小於 0.025 nM 或約 0.025 nM、小於 〇.〇5 nM 或約 〇.〇5 nM、小於 0_075 nM 或約 0.075 nM、小於 0.1 nM 或約 〇.1 nM、小於 0.5 nM 或約 0.5 nM、小於 0.75 nM 或約 0.75 nM、小於 1 nM 或約1 nM、小於1.25 nM或約1.25 nM、小於1.5 nM或約 1.5 nM、小於1.75 nM或約1.75 nM或小於2 nM或約2 nM。 134 201201839 在特定實例中，衍生物抗RSV抗體或其抗原結合片段在試 管内空斑減少檢定中中和RSV之ECm為小於0.005 nM或 約0.005 nM至小於2 nM或約2 nM ;小於0.005 nM或約 〇·〇〇5ηΜ至小於lnM或約lnM;小於〇 〇〇5nM或約〇 〇〇5 nM至小於〇.5 nM或約0.5 nM ;小於〇.〇1 nM或約〇 〇1 nM 至小於1 nM或約i nM ;小於0·05 ιιΜ或約〇·05 nM至小於 1 nM或約1 nM ;小於〇 〇5 nM或約〇 〇5 nM至小於〇 5視 或約0.5 nM ;或小於（M nM或約（u nM至小於〇 5 nM或 約 0.5 nM。 本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段的任何衍 生物均可用於治療性方案、防治性療法及/或診斷性技術 中’諸如用於所提供之方法中。舉例而言，衍生物抗體或 其抗原結合片段可用於結合於RSV以治療、預防及/或偵測 Rsv感染或減輕rsv感染之一或多種症狀。 i•單鏈抗體 在特定實例中，抗RSV抗體為單鏈抗體。單鏈抗體可 由本文所提供之任一抗RSV抗體或其抗原結合片段的抗原 結合域產生。使用重組技術產生單鏈抗體之方法為此項技 術所已知，諸如以下文獻中所述之方法：例如Marasc〇等人 (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:7889-7893 « Whitlow 及 Filpula (1991) 心，2: 97_1〇5 ; Bird 等人 ο·) 242:423_426 ; Pack 等人（1993) ⑽Μ” U:1271-77;及美國專利第 4,946,778 號、第 5,84〇,3〇〇 號、 第 5,667,988 號、第 5,658,727 號。 135 201201839 單鏈抗體可含有本文所提供之任何抗rSV抗體或其抗 原結合片段的輕鏈可變（vL)域或其功能區及重鏈可變（VH) 域或其功能區。在一些實例中，單鏈抗體之Vl域或其功能 區含有本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段的互補 決定區1 ( CDR1 )、互補決定區2 ( CDR2)及/或互補決定 區3 ( CDR3 )。在一些實例中’單鏈抗體之vH域或其功能 區含有本文所提供之任何抗RSV抗體或其抗原結合片段的 互補決定區1 ( CDR1 )、互補決定區2 ( CDR2 )及互補決定 區3 ( CDR3 )。在一些實例中，單鏈抗體進一步含有肽連接 子。在該等實例中，肽連接子可位於輕鏈可變域（vL)與 重鏈可變域（VH )之間。 單鏈抗體可在抗體之一或多個域之間含有肽間隔子或 連接子。舉例而言’抗體之輕鏈可變域（VL )可經由可撓 性連接肽偶合於重鏈可變域（VH)。各種肽連接子為此項技 術所熟知且可用於所提供之方法中。肽連接子可包括一系 列甘胺酸殘基（Gly )或絲胺酸（ser )殘基。例示性多肽連 接子為具有胺基酸序列（Gly_Ser)n.、（GlymSer)n或（SermGly)n 之肽，其中爪為1至6、一般為1至4且典型地為2至4, 且η為1至30或1至10且典型地為1至4，一些麩胺酸（Glu) 或離胺酸（Lys )殘基分散於序列中以增加溶解性（參見例 如國際pct申4案第wo 96/06641號，該案提供用於結合 物中之例示性連接子八例示性肽連接子包括（但不限於） 具有以下序列之肽：GGSSRSSSSGGGGSGOOOC SEQ id NO: 267 ) . GSGRSGGGGSGGGGS ( SEQ ID NO: 268 ) ^ 136 201201839 • EGKSSGSGSESKST ( SEQ ID NO: 269 )、 , EGKSSGSGSESKSTQ ( SEQ ID NO: 270 )、 EGKSSGSGSESKVD ( SEQ ID NO: 271 )、 GSTSGSGKSSEGKG ( SEQ ID NO: 272 )、 KESGSVSSEQLAQFRSLD ( SEQ ID NO: 273 )及 ESGSVSSEELAFRSLD ( SEQ ID NO: 274)。一般，連接肽之 長度為約1 -50個胺基酸。本文中所使用之連接子亦可增加 細胞内可用性、血清穩定性、特異性及溶解性或使得可撓 性增加或緩解位阻。連接部分例如描述於Huston等人 (1988) Proc Natl Acad Sci USA 85:5879-5883 ' Whitlow % K (1993) iVoiein Ewgz’weerz'wg 6:989-995 及 Newton 等人，（1996) 5/oc/iem⑴35:545-5 53中。其他適合之肽連接子包括美國 專利第4,751,180號或第4,935,233號中所述之任一肽連接 , 子，該案以引用的方式併入本文中。 ii.抗個體遣傳型抗體 可利用本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段’ 使用熟習此項技術者熟知之技術產生抗個體遺傳型抗體’ 其「模擬」抗體免疫特異性結合之RSV F蛋白抗原（參見 例如 Greenspan 及 Bona (1989) FJiSES J· 7(5):437-444，及 .Nissinoff (1991) J. 147(8):2429-2438 )。舉例而 言，如此項技術中熟知之檢定所測定，結合於RSV之宿主 細胞受體且競爭性地抑制RSV與其宿主細胞受體結合的本 文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段可用於產生抗個 體遺傳型，其「模擬」RSV抗原且結合於RSV受體’亦即 137 201201839 與病毒競爭結合於宿主細胞’由此降低宿主細胞之病毒感 染率❶在一些實例中，抗-抗個體遺傳型可藉由熟練技術人 員熟知之技術產生。抗-抗個體遺傳型模擬抗RSV抗體或其 抗原結合片段之結合域且因此結合於RS V及中和RS V。 iii.多特異性抗體及抗體多聚化 兩種或更多種本文所提供之抗體或其抗原結合片段可 經工程改造以形成多價衍生物抗體或多聚體，諸如二價、 三價、四價、五價、六價、七價或更高價數（亦即含有2、 3、4、5、6、7個或更多個抗原結合部位）衍生物抗體《該 等多價衍生物抗體可為單特異性、雙特異性、三特異性或 更多特異性的。在一些實例中，多價衍生物抗體為單特異 性的，含有免疫特異性結合於相同抗原決定基之兩個或更 多個抗原結合域。在一些實例中，多價衍生物抗體為多特 異性的，含有免疫特異性結合於兩個或更多個不同抗原決 定基之兩個或更多個抗原結合域。在一些特定實例中，多 價衍生物抗體為二價抗體，含有兩個抗原結合域。該等二 價抗體可為同型二價或異型二價抗體，其分別免疫特異性 結合於相同或不同抗原決定基。 在一些實例中，多特異性抗體可免疫特異性結合於RSV 之兩個或更多個不同抗原決定基。工程改造多特異性抗體 之技術為此項技術所已知，且包括例如經由共價、非共價 或化學連接來連接兩個或更多個抗原結合片段。在一些情 況下，多價衍生物抗體可藉由二聚化兩種或更多種抗RSV 抗體或其抗原結合片段來形成。兩種抗RSV抗體或抗原結 138 201201839 • 合片段之間的多聚化可為自發的，或可由於兩個或更多個 • 多肽之被迫連接而發生。在一實例中，抗RSV抗體之多聚 體可由不同抗RSV抗體上之半胱胺酸殘基之間形成的二硫 鍵連接。在另一實例中，多價衍生物抗體可包括經由共價 或非共價相互作用連接於肽部分之抗RSV抗體或其抗原結 合片段’該等肽部分與抗體或其抗原結合片段融合。該等 狀可為狀連接子（間隔子），或具有促進多聚化之性質的 肽。在一些實例中’多價衍生物抗體可經由化學連接（例 如藉由使用異雙功能連接劑）在兩種抗體之間形成。 任何多特異性及/或多價衍生物抗體均可由本文所提供 之抗RSV抗體或其抗原結合片段產生，其限制條件為該抗 體為生物相容性的（例如投予動物，包括人類）且維持其 活性’諸如結合於RSV之一或多個抗原決定基及/或中和 RSV。對於本文所提供之多特異性及多價衍生物抗體，衍生 物抗體至少對於由 30D8、104E5、38F10、14G3、90D3、 5 6E11、17C9或69F6識別之抗原決定基具有免疫特異性。 本文所提供之多特異性及多價衍生物抗體亦可對於由58c5 或sc5識別之抗原決定基具有免疫特異性。 在一些實例中，多特異性及/或多價抗體含有 VH CDR1，其具有 SEQ ID NO:2、10、405、411、417、423、 429、43 5-441、45 8、464、470 或 482-484 所示之胺基酸序 列；VH CDR2，其具有 SEQ ID NO:3、11、406、412、418、 424、430、459、465或471所示之胺基酸序列；VH CDR3， 其具有 SEQ ID NO:4、12、407、413、419、425、431、460、 ϋ；： 139 201201839 466或472所示之胺基酸序列；VL CDRl，其具有SEQ ID NO:6、14、408、414、420、426、432、461、467 或 473 所示之胺基酸序列；VL CDR2，其具有SEQ ID NO:7、15、 409、415、421、427、43 3、462、468 或 474 所示之胺基酸 序列；VL CDR3，其具有 SEQ ID NO:8、16、410、416、422、 42 8、434、463、469或475所示之胺基酸序列，或其任何 組合。
在一些實例中，可產生免疫特異性結合於RSV F蛋白 (例如具有SEQ ID NO: 1527、1627或485所示之胺基酸序 列的RSV F蛋白）之兩個或更多個抗原決定基的多特異性 抗體。舉例而言，多特異性抗體可免疫特異性結合於RSV F 蛋白之A、B或C抗原性區域中的兩個或更多個不同抗原決 定基。在一些實例中，可產生免疫特異性結合於RSV F蛋 白之抗原決定基及另一 RSV抗原決定基的多特異性抗體。 舉例而言，多特異性抗體可免疫特異性結合於RSV F蛋白 之抗原決定基及另一 RSV表面醣蛋白之抗原決定基。在一 些實例中，多特異性抗體可免疫特異性結合於RSV F蛋白 之抗原決定基及選自以下之RSV蛋白之抗原決定基：RSV 附著蛋白（例如具有SEQ ID NO: 275所示之胺基酸序列）、 RSV RNA聚合酶/3次單元大結構蛋白（L蛋白）（例如具有 SEQ ID NO: 276所示之胺基酸序列）、RSV核鞘蛋白（例如 具有SEQ ID NO: 277所示之胺基酸序列）、RSV核蛋白（N) (例如具有SEQ ID NO: 278所示之胺基酸序列）、RSV磷蛋 白P (例如具有SEQ ID NO: 279所示之胺基酸序列）、RSV 140 201201839 基質蛋白（例如具有SEQ ID NO: 280所示之胺基酸序列）、 RSV小疏水性（SH )蛋白（例如具有SEQ ID NO: 28 1所示 之胺基酸序列）、RSV RNA依賴性聚合酶、RSV G蛋白（例 如具有SEQ ID NO: 282所示之胺基酸序列）或以上任一者 之對偶基因變異體。在一些實例中，多特異性抗體可免疫 特異性結合於RS V F蛋白之抗原決定基及RS V G蛋白之抗 原決定基。 在一些實例中，多特異性抗體含有衍生自30D8、 104E5、38F10、14G3、90D3、56E11、17C9 或 69F6 之抗 RS V抗原結合片段及衍生自另一抗RS V抗體之抗RS V抗原 結合片段。舉例而言，其他抗RSV抗體可為衍生自58c5或 sc5之抗體或抗原結合片段。在一些實例中，多特異性抗體 含有衍生自 30D8、104E5、38F10、14G3、90D3、56E11、 17C9或69F6之抗RS V抗原結合片段及衍生自選自帕利珠 單抗（SYNAGIS® )及其衍生物之抗RSV抗體的抗RSV抗 原結合片段，該等帕利珠單抗衍生物諸如（但不限於）莫 維珠單抗（NUMAX® )、AFFF、P12f2、P12f4、Plld4、Ale9、 A12a6、A13c4、A17d4、A4B4、A8c7、1X-493L卜 FR H3-3F4、 M3H9、Y10H6、DG、AFFF(l)、6H8、L1-7E5、L2-15B10、 A13aH、Alh5、A4B4(1)、A4B4L1FR-S28R、A4B4-F52S (參 見例如美國專利第5,824,307號及第6,818,216號）。在一些 實例中，多特異性抗體含有衍生自30D8、104E5、38F10、 14G3、90D3、56E11、17C9 或 69F6 之抗 RSV 抗原結合片 段及衍生自人類抗RSV抗體之抗RSV抗原結合片段，該人 141 201201839 類抗RSV抗體諸如（但不限於）rsv6 、rsv 11、rsv13、rsv 1 9 (亦即 Fab 19)、rsv21、rsv22、rsv23、RF-1 及 RF-2 (參見 例如美國專利第6,685,942號及第5,811,524號）。在一些實 例中，多特異性抗體含有衍生自30D8、104E5、38F10、 14G3、90D3、56E11、17C9 或 69F6 之抗 RSV 抗原結合片 段及衍生自抗RSV小鼠單株抗體之抗RSV抗原結合片段， 該抗RSV小鼠單株抗體諸如（但不限於）MAb 1153、1142、 1200、1214、1237、1129、1121、1107、1112' 1269、1269、 1243 (Beeler 等人（1989) /· Fi.ro/og少 63(7):2841-2950 )、 MAbl51 ( Mufson 等人（1987) J. Clin. Microbiol. 25:1635-1539)、MAb 43-1 及 13-1( Fernie 等人（1982) /Voc.
Soc. Exp. Biol. Med. 171:266-271 )' MAb 1436C ' 1302A' 1308F 及 133 1H ( Anderson 等人（1984) «/· MicroWo/· 19:934-936 )及其人類化衍生物。可用於產生含有衍生自 30D8、104E5、38F10、14G3、90D3、56E11、17C9 或 69F6 之抗RSV抗原結合片段的多特異性抗體之其他例示性抗體 或其抗原結合片段包括（但不限於）例如以下專利中所述 之抗RSV抗體或其抗原結合片段：美國專利第6,413，771 號、第 5,840,298 號、第 5,811，524 號、第 6,656,467 號、第 6,537,809 號、第 7,364,742 號、第 7,070,786 號、第 5,955,364 號、第 7,488,477 號、第 6,818,216 號、第 5,824,307 號、第 7,364,737號、第6,685,942號及第5,762,905號及美國專利 公開案第 2007-0082002 號、第 2005-0175986 號、第 2004-0234528 號、第 2006-0198840 號、第 2009-01 10684 號、 142 201201839 第 2006-0159695 號、第 2006-0013824 號、第 2005-0288491 號、第 2005-0019758 號、第 2008-0226630 號、第 2009-0137003 號及第 2009-0092609 號。以下表 2A 及表 2B 闡述抗RSV抗體重鏈（表2A)及輕鏈（表2B)之SEQ ID NO。包括重键及輕鏈之全長序列，重鏈及輕鏈可變域之序 之序列，如所指示。 表2A.抗RSV抗體重鏈SEQ ID NO 重鍵 可變域 CDR1 CDR2 CDR3 Synagis 103 104 105 106 107 AFFF 113 114 115 116 P1212 122 123 124 125 126 P12f4 131 132 133 Plld4 137 138 139 Ale9 144 145 A12a6 149 150 151 A13c4 155 156 157 A17d4 161 162 163 A4B4 167 168 A8c7 172 173 IX-493L1FR 176 232 M3H9 179 Y10H6 185 DG 186 187 188 AFFF (1) 190 6H8 194 L1-7E5 198 L2-15B10 201 A13all 205 206 Alh5 210 A4B4 ⑴ 215 A4B4L1 219 A4B4-F25S 222 H3-3F4 226 227 A3e2 233 234 235 A14a4 239 240 241 A16b4 246 247 A17b5 252 253 A17f5 257 258 259 Rsv6/11/21/22 362 363 364 365 143 201201839
Rsvl3/19H 366 367 368 369 Rsv23 362 363 364 365 表2B.抗RSV抗體輕鏈SEQ ID NO 輕键 可變域 CDR1 CDR2 CDR3 Synagis 108 109 110 111 112 AFFF 117 118 119 120 121 P1212 127 128 129 130 P12f4 134 135 136 Plld4 140 141 142 143 Ale9 146 147 148 A12a6 152 153 154 A13c4 158 159 160 A17d4 164 165 166 A4B4 169 170 171 A8c7 174 175 IX-493L1FR 177 178 M3H9 180 181 231 Y10H6 183 184 185 DG 189 AFFF(l) 191 192 193 6H8 195 196 197 L1-7E5 199 200 L2-15B10 202 203 204 A13all 207 208 209 Alh5 211 212 213 214 A4B4 (1) 216 217 218 A4B4L1 220 221 A4B4-F25S 223 224 225 H3-3F4 228 229 A3e2 236 237 238 A14a4 242 243 244 245 A16b4 248 249 250 251 A17b5 254 255 256 A17f5 260 261 262 A17h4 263 264 265 266 Rsv6/11/21/22 370 371 372 373 Rsvl3/19H 378 379 380 381 Rsv23 374 375 376 377 在一些實例中，多特異性抗體或抗原結合片段可免疫 特異性結合於RSV F蛋白之抗原決定基及另一異源多肽之 抗原決定基或其他抗原性物質，例如固體支撐物質（參見 144 201201839 例如國際PCT公開案第wo 93/17715號、第W0 92/08802 號、第WO 91/00360號及第WO 92/05793號；美國專利第 4,474,893 號、第 4,714,681 號、第 4,925,648 號、第 5,573,920 號及第 5,601，819 號；Tutt 等人，（1991) y· 147:60-69 ;及 Kostelny 等人，（1992) «/./賴瞻Λ 148:1547-1553 )。 (1 )經由肽連接子多聚化 肽連接子可用於產生多價抗體，例如一種多聚化搭配 物為本文所k供之抗RSV抗體或其抗原結合片段的多聚 體。在一實例中，肽連接子可與第一多肽之C端及第二多 肽之N端融合。此結構可重複多次以使得至少.一個（諸如 2、3、4個或更多個）可溶性多肽在其各別末端經由肽連接 子彼此連接。舉例而言，多聚體多肽可具有序列，. 其中4及Ζ2各為抗RSV抗原結合片段（例如抗RSv單鏈 抗體；參見例如美國專利第6,759,518號，其描述單鏈抗體 之多聚化）之序列且其中X為肽連接子之序列。在一些情 況下，Z!及/或Z2為本文所提供之抗RSv抗原結合片段。 在另實例中，Ζι及Z2為不同抗RSV抗原結合片段，其中 至少Z!或Z2衍生自本文所提供之抗RSV抗體或抗原結合 片段。在一些實例中，多聚體多肽具有Ζι_χ_Ζ2_(χ_ζ)η序 列，其中「η」為任何整數，亦即一般為i或2。典型地， 肽連接子之長度足以使得每一抗RSV抗原結合片段結合其 各別抗原決定基而不會干擾抗體之結合特異性。 (2 )經由異雙功能連接劑多聚化 145 201201839 .本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段可直接或 間接連接於另一抗RSV抗體或抗原結合片段以形成多價抗 體。舉例而言，兩個或更多個抗Rsv抗體或抗原結合片段 之連接可藉由化學連接來達成，或藉由異雙功能連接劑， 諸如此項技術中已知或本文所提供之任何連接劑來促進。 用於形成胺基與巯基之間的共價鍵且將酼基引入蛋白 質中之多種異雙功能交聯劑為熟習此項技術者所已知（參 見例如 PIERCE CATALOG，ImmunoTechnology Catalog &
Handbook，1992-1993，其描述該等試劑之製備及用途並提 供5亥專试劑之商業來源，亦參見例如Cumber等人，（1 992) C7^m. 3:397-401 ; Thorpe 等人，（1987) Cancer 及es. 47:5924-5931 ; Gordon 等人，（1987) Procr.胸"· dead 84.308-312，Wa 1 deπ 專人，（1986) «/· /. Ce// /awwiw«〇/. 2:191-197; Carlsson 等人，（1978)5z.0c/iem.又 173: 723-737 ; Mahan 等人，（1987) Xm/· 5z.oc/zewi_ 162:163-170 ; Wawryznaezak 等人，（1 992) «/. Cawcer 66:361-366; Fattom 等人，（1992) /n/eciio/i ά 60:584-589 )。此等試劑可 用於形成兩個抗體之間或每一抗體與連接子之間的共價 鍵。例示性試劑包括（但不限於）：3-(2-吡啶基二硫基）丙酸 N-丁二醯亞胺酯（SPDP ;二硫化物連接劑）；6-[3-(2-吡啶 基二硫基）-丙醯胺基]己酸磺酸基丁二醯亞胺酯 (sulfo-LC-SPDP ) ; 丁二醯亞胺基氧基羰基-α-甲基苯甲基硫 代硫酸鹽（3]^81[，受阻二硫酸鹽連接劑）；6-[3-(2-吡啶基 二硫基）丙醯胺基]-己酸丁二醯亞胺酯（LC_SPDP ) ; 4-(Ν- 146 201201839 • 順丁烯二醢亞胺基甲基）環己烷-1-甲酸磺酸基丁二醯亞胺 . 酯（sulfo-SMCC ) ; 3-(2-吡啶基二硫基）丁酸丁二醯亞胺酯 (SPDB;受阻二硫鍵連接劑）；2-(7-疊氮基-4-甲基香豆素-3-乙醯胺）乙基-1，3'-二硫基丙酸磺酸基丁二醯亞胺酯 (SAED); 7-疊氮基-4-曱基香豆素-3-乙酸磺酸基丁二醢亞胺 酯（SAMCA) ; 6-[α-甲基-〇!-(2-吡啶基二硫基）曱苯醯胺基]-己酸磺酸基丁二醯亞胺酯（sulfo-LC-SMPT); 1，4-二-[3'-(2'-。比啶基二硫基）丙醯胺基]丁烷（DPDPB); 4-丁二醯亞胺基 氧基羰基-α-曱基-α-(2-吡啶基硫基）曱苯（SMPT，受阻二硫 酸鹽連接劑）；6-[〇!-甲基-〇；-(2-吡啶基二硫基）甲苯醯胺基] 己酸磺酸基丁二醢亞胺酯（sulf0_LC-SMPT );間順丁烯二 醯亞胺基苯曱醯基-N-羥基-丁二醯亞胺酯（MBS );間順丁 烯二醯亞胺基苯甲醯基-N_羥基磺酸基-丁二醯亞胺酯 (sulfo-MBS ) ; (4-碘乙醯基）胺基苯甲酸N_丁二醯亞胺酯 (SIAB ;硫醚連接劑）；（4-蛾乙醯基）胺基笨曱酸磺酸基丁二 醯亞胺酯（sulfo-SIAB ) ; 4-(對順丁烯二醢亞胺基苯基）丁酸 丁二醯亞胺酯（SMPB) ; 4-(對順丁烯二醯亞胺基苯基）丁酸 嶒酸基丁二醯亞胺酯（sulf〇_SMPB );及疊氮基苯曱醯基醯 肼（ABH)。在-些實例中，連㈣可與肽連接子，諸如增 加可橈性或溶解性之肽連接子或提供或消除位阻之肽連接 子組合使用。可‘使用熟習此項技術者已知用於使多肽分子 連接於另一分子之任何其他連接劑。 (3 )多肽多聚化域 兩個或更多個抗原結合片段相互作用以形成多價及/或
S 147 201201839 多特異性衍生物抗體可藉*其直接或間接連接於自身能夠 相互作用形成穩定結構之任何部分或其他多肽來促進。匕舉 例而言，各別所編碼之多肽鏈可藉由多聚化連接，藉此多 肽之多聚化由多聚化域介導。典型土也，多聚化域使得第一 嵌合多肽與第二嵌合多肽之間形成穩定蛋白質-蛋白質相互 作用。嵌合多肽包括例如抗體或其抗原結合片段之一個鏈 (例如可變重鏈域或可變輕鏈域）與多聚化域連接（直接或 間接典型地，多聚化域連接於抗體或其抗原結合片段之 重鏈域。該等嵌合多肽可使用使編碼抗體鏈之核酸與編碼 多聚化域之核酸融合的重組技術以融合蛋白形式產生。 對於本文所提供之多價及/或多特異性衍生物抗體，至 少—種多聚化搭配物為直接或間接連接於多聚化域之抗
Rsv抗體或其抗原結合片段。同多聚或雜多聚多肽可由各 別嵌合多肽之共表現產生。第一及第二嵌合多肽可相同或 不同。 一般，多聚化域包括能夠與另一多肽形成穩定蛋白質-蛋白質相互作用之任何多肽。多聚化域可例如經由免疫球 蛋白序列（例如F c域）、白胺酸拉鏈、疏水性區、親水性 區或形成同多聚體或雜多聚體之嵌合分子之間的分子間二 硫鍵之自由酼基相互作用。另外，多聚化域可包括胺基酸 序列’其包含與包含孔洞或凹穴之胺基酸序列互補之隆 凸，諸如在例如美國專利第5，7 3 1，16 8號中所述。該多聚化 區可經工程改造以使得空間相互作用不僅促進穩定相互作 用’而且另外促進相對於均二聚體由嵌合單體之混合物形 148 201201839 成雜二聚體。 在一些實例中’多價及/或多特異性抗體藉由兩個抗 RSV抗原結合片段經由多聚化域連接而產生。在該等實例 中，至少一個抗原結合片段衍生自本文所提供之抗Rsv抗 體或其抗原結合片段，例如58c5、SC5、30D8、104E5、38F10、 14G3、90D3、56E11、i7C9 或 69F6。 抗原結合多肽（例如抗RSV抗原結合片段）可與多聚 化域結合以形成嵌合多肽。對於含有多於一個鏈（例如可 變重鏈域及可變輕鏈域）之抗RSV抗原結合片段，多聚化 域了與個鏈（典型地為重鏈）結合。抗原結合片段典型 地經由其N端或C端連接於多聚化域之N端或（^端。典型 地’多聚化域與抗原結合片段之C端（例如單鏈抗體之^ 端或抗原結合片段之一個鏈的C端）結合。該連接可為直 接連接或經由連接劑間接連接。又’嵌合多肽可為融合蛋 白或可藉由化學連接來形成，諸如經由共價或非共價相互 作用。舉例而言’當製備含有多聚化域之丧合多肽時，編 碼抗RSV抗原結合片&之全部或部分的核酸可直接或間接 或視情況經由連接域可操作地連接於編碼多聚化域序列之 核駄典型地，構築體編碼抗RS V抗原結合片段之c端（戋 抗原結合片段之單鏈）連接於多聚化端的嵌合蛋白' 本文所提供之多價抗體含有藉由使兩個相同或不同抗 RSV抗原結合片段直接或間接連接於多聚化域所產生之兩 個嵌合蛋白。纟一些實例中，當多聚化域為多肽時，編碼 抗Rsv抗原結合片段（或抗原結合片段之單鍵）多聚化域
149 S 201201839 嵌合多肽之基因融合物插入適當表現載體中。所得抗rsv 抗原結合片段-多聚化域嵌合蛋白可在經重組表現載體轉型 之宿主細胞中表現，且組褒成多聚體，其中多聚化域相互 作用以形成多價抗體。多聚化域化學連接於抗rsv抗原結 合片段亦可使用如上文所論述之異雙功能連接劑實現。在 -些實例巾，多敍抗體為衍生自結合於不同抗原決定基之 兩個或更多個抗RSV抗原結合片段的多特異性抗體。 所得嵌合多肽及由其形成之多價抗體可藉由此項技術 中已知之任何適合方法，例如藉由蛋白A或蛋白G管柱親 和層析來純化。當編碼不同抗Rsv抗原結合嵌合多肽之兩 個核酸分子轉移至細胞中時，將形成均二聚體及雜二聚 體。表現條件可經調整以使得相對於均二聚體形成有利於 雜二聚體形成。 (a)免疫球蛋白域 多聚化域包括包含能夠與另一胺基酸序列之多聚化域 反應形成分子間二硫鍵之自由疏基部分的多聚化域。舉例 而言，多聚化域可包括免疫球蛋白分子之一部分，諸如來 自 IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgM 及 IgE 之一 部分。一般’免疫球蛋白中選擇用作多聚化域之部分為恆 定區（Fc)。製備含有多肽與抗體衍生之多肽的各種部分（包 括Fc域）融合之融合蛋白已予以描述（參見例如Ashkenazi 等人（1991)尸AM5 88: 10535 ; Byrn 等人（1990) iWUwre, 344:677 ;及 Hollenbaugh 及 Aruffo,（1992)「Construction of Immunoglobulin Fusion Proteins，」Current Protocols in 150 201201839 少，增刊 4，第 1〇·19_1-10.19.11 頁）。 在人類中’存在基於重鏈分類之五種抗體同型，稱為 δ、γ、μ、α 及 e，分別產生 igD、lgG、IgM、IgA 及 IgE 種 類抗體。IgA及IgG種類含有亞類IgA 1、IgA2、IgGl、IgG2、 IgG3及IgG4。免疫球蛋白重鏈之間的序列差異引起各種同 型，其例如在恆定（C )域之數目、鉸鏈區之存在及鏈間二 硫鍵之數目及位置方面不同。舉例而言，IgM及IgE重鏈含 有額外C域（C4 )，其替代鉸鏈區。；[g(}、IgD及IgA之Fc 區經由其Ογ3、C53及Ca3域彼此配對，而igM及lgE之 Fc區經由其Cg4及Ce4域二聚化。Ig]v[及igA形成分別具 有十個及四個抗原結合部位之多價結構。 本文所提供之抗原結合嵌合多肽包括全長免疫球蛋白 多肽（亦即包括全長免疫球蛋白之所有域）。在一些實例 中，抗原結合嵌合多肽小於全長（例如嵌合多肽可含有抗 原結合域及一或多個用於多聚化之免疫球蛋白域，其中該 嵌合多肽不為全長免疫球蛋白）。在一些實例中，抗Rsv抗 原結合嵌合多肽組裝成單價或異型多價或同型多價抗體， 諸如二價、三價、四價、五價、六價、七價或更高價數抗 體。不同結構之鏈或基本單元（例如一或多個異源恆定區 或恆定域）可用於組裝單價及異型多價及同型多價抗體。 抗RSV抗原結合嵌合多肽可容易由經適當核酸分子轉型之 哺乳動物細胞產生及分泌。在一些實例中，一種或更多種 核酸融合分子可轉移至宿主細胞中以產生多價抗體，其中 該多價抗體之抗RSV抗原結合部分相同或不同。典型地， 151 201201839 多價抗體之至少一個抗RSV抗原結合部分衍生自本文所提 供之抗RSV抗體或其抗原結合片段，例如58c5、sc5、30D8、 104E5、38F10，14G3、90D3、56E11、17C9 或 69F6。 (i) Fc 域 可用於產生含有本文所提供之抗RSV抗原結合片段的 多價及/或多特異性抗體之例示性多聚化域包括衍生自所選 免疫球蛋白分子之重鏈恆定區或恆定域的多肽。用於人類 IgG亞型之例示性重鏈恆定區序列如SEQ ID NO:356
(IgGl )、SEQIDNO:357 ( IgG2 )、SEQ ID NO:3 58 ( IgG3 ) 及SEQ ID NO:359 ( IgG4)所示。舉例而言，對於SEQ ID NO:356所示之例示性重鏈悝定區，cH 1域對應於胺基酸 1 -103 ’鉸鏈區對應於胺基酸104-119，CH2域對應於胺基酸 120-223，且CH3域對應於胺基酸224-330。 在一實例中’免疫球蛋白多肽嵌合蛋白可包括免疫球 蛋白多肽之Fc區。典型地，該融合物至少保留免疫球蛋白 重鏈之忮定區的功能活性鉸鏈、CH2及CH3域。舉例而言， IgGl之全長Fc序列包括SEQ ID NO:356所示之序列的胺基 酸104-3 30。hlgGl之例示性Fc序列如SEQ ID NO:360所 不，且含有對應於SEQ ID NO:356之胺基酸104-119的鉸鏈 序列’且Ch2及Ch3域之完整序列如SEQ ID NO:356所示。 另一例示性Fc多肽如PCT申請案w〇 93/10151中所述，且 為自人類IgGl抗體（SEQ ID NO:361 )之N端鉸鏈區延伸 至Fc區之天然c端的單鏈多肽。進行連接之準確部位並不 關鍵：特定部位為此項技術所熟知且可經選擇以最佳化抗 152 201201839 ♦ RSV抗原結合嵌合多肽之生物活性、分泌或結合特徵。舉 •例而言，其他例示性Fc多肽序列起姶於SEQ ID N〇:356所 示之序列的胺基酸C109或Pll3 (參見例如us 2〇〇6 0024298 )。 除hlgGl Fc外，其他Fc區亦可包括在本文所提供之抗 RSV抗原結合嵌合多肽中。舉例而言，Fc融合物可含有實 質上由屬於任一抗體種類之免疫球蛋白基因編碼之免疫球 蛋白序列，該等抗體包括（但不限於）IgG(包括人類亞類 IgGl、IgG2、IgG3 或 IgG4)、IgA (包括人類亞類 IgA1 及 IgA2 )、IgD、IgE及IgM種類之抗體。 在一些實例中，Fc域可基於該域之功能性質進行選 擇，例如Fc域在介導免疫反應中之效應功能。舉例而言， 當欲使由Fc/Fc7R相互作用介導之效應功能最小時，可使用 與1gG同型形成之融合物，其不佳地募集補體或效應細胞， 例如IgG2或IgG4之Fc。 經修飾Fc域亦涵蓋於本文中以用於與抗RSv抗原結合 片段形成之嵌合體中，關於例示性修飾，參見例如美國專 利第7,217,797號；及美國專利公開案第2006/0198840號、 第2006/0024298號及第2〇〇8/〇287657號；及國際專利公開 案第WO 2005/063816號。Fc域之例示性胺基酸修飾亦在本 文別處提供。 典型地’二價抗體為藉由使兩個相同或不同抗RSV抗 原結合片段直接或間接連接於Fc多版所產生之兩個嵌合蛋 白的二聚體。在一些實例中，編碼嵌合蛋白之基因融合物 153 201201839 插入適當表現載體中。所得嵌合蛋白可在經重組表現載體 轉型之宿主細胞中表現且進行組裝，其中在Fc部分之間形 成鏈間二硫鍵以得到二價抗RSV抗體。典型地，宿主細胞 及表現系統為允許嵌合蛋白糖基化之哺乳動物表現系統。 含有Fc部分及由其形成之多價抗體的所得嵌合多肽可容易 藉由蛋白A或蛋白G管柱親和層析來純化。當編碼不同抗 RSV嵌合多肽之兩個核酸轉移至細胞中時，雜二聚體之形 成必須以生物化學方法達成，因為帶有Fc域之抗RSV嵌合 分子亦將以二硫鍵連接之均二聚體形式表現。因此，均二 聚體可在有利於破壞鏈間二硫鍵但不影響鏈内二硫鍵之條 件下還原。典型地’具有不同細胞外部分之嵌合單體以等 莫耳s混合且經氧化以形成均二聚體與雜二聚體之混合 物。藉由層析技術分離此混合物之組分。 或者’可藉由遺傳工程改造及表現含有抗RSV抗原結 合片段、隨後為hlgG之Fc域、隨後為c_jun或c_f〇s白胺 酸拉鏈之抗RSV抗原結合融合分子來偏向雜二聚體之形 成。因為白胺酸拉鏈主要形成雜二聚體，所以需要時其可 用於驅動雜二聚體之形成。含有Fc區之抗RSV嵌合多肽亦 邛經工程改造成包括具有金屬螯合物或其他抗原決定基之 標籤。經標記域可用於藉由金屬_螯合物層析及/或藉由抗體 快速純化，以偵測生物檢定中之西方墨點（westernM〇ts)、 免疫沈;殿或活性耗竭/阻斷》 D.抗RSV抗趙之其他修飾 本文所提供之抗RS V抗體或其抗原結合片段可另外經 154 201201839 修飾。抗RSV抗體或抗原結合片段之修飾可改良抗體之一 或多種性質，包括（但不限於）降低抗體或抗原結合片段 之免疫原性’改良抗體或抗原結合片段之半衰期（諸如降 低對蛋白水解之易感性及/或降低對氧化之易感性），及改變 或改良抗體或其抗原結合片段之結合性質。例示性修飾包 括（但不限於）抗RSV抗體或其抗原結合片段之初級胺基 酸序列的修飾及抗RS V抗體或其抗原結合片段之轉譯後修 飾變化。例示性轉譯後修飾包括例如糖基化、乙酿化、聚 乙二醇化、磷酸化、醯胺化、用保護基/阻隔基衍生化、蛋 白水解裂解、連接於細胞配位體或其他蛋白質。其他例示 性修飾包括使一或多種異源肽連接於抗RSV抗體或抗原結 合片段以改變或改良抗體或其抗原結合片段之一或多種性 質。 一般，修飾不會導致抗體或其抗原結合片段之免疫原 性增加或顯著不利地影響抗體或其抗原結合片段與RSV之 結合。評估經修飾之抗體或其抗原結合片段與Rsv F蛋白 之結合的方法提供於本文中且為此項技術所已知。舉例而 言，可藉由諸如（但不限於）ELISA、表面電漿子共振（spR) 之方法或經由試管内微量中和檢定來檢定經修飾之抗體或 其抗原結合片段與RSV F蛋白之結合。 本文提供改良任何所提供之抗RSV.抗體或其抗原結合 ^段之半衰期的方&。增加本文所提供之抗RSV抗體或其 ，原結合片段的半衰期可增加抗Rsy抗體或其抗原結合片 奴之治療效用且允許不太頻繁地投予抗體或其抗原結合片 155 201201839 段以防治及/或治療，諸如預防或治療Rsv感染，預防、治 療及/或減輕RS V咸边；夕 _l. λ ^ Λ染之一或多種症狀，或縮短RSV感染 之持續時間。 本文所產生之抗Rsv抗體或其抗原結合片段的修飾可 包括來自親本抗體之自然突變或人類操作之一或多個胺基 酸取代、缺失或添加。修飾多狀（諸如抗體）之方法為此 項技術所已知且可用於修飾本文所提供之任何抗體或其抗 原、、S片&在些實例中，本文所提供之抗RSV抗體或 其抗原結合片段之藥物動力學性質可藉由熟習此項技術者 已知之技術經由Fc修飾而增強。可使用熟習此項技術者已 知之標準技術在編碼本文所提供之抗體或抗原結合片段的 核苦酸分子中引入突變以產生具有一或多個胺基酸取代之 多肽。引入突變之例示性技術包括（但不限於）定點突變 誘發及PCR介導性突變誘發。 本文所提供之抗RSV抗體及其抗原結合片段可藉由連 接異源肽以促進純化來修飾。一般，該等肽表現為含有抗 體在抗體或其抗原結合片段之c端或N端與肽融合之融合 蛋白。常用於純化之例示性肽包括（但不限於）六組胺酸 肽、血球凝集素（HA)肽及flag標籤肽（參見例如Wih〇n 等人（1984) Ce// 37:767 ; Witzgall 等人（1994) 223:2, 291-8 )。融合不一定需要為直接融合，而可 經由連接肽進行。在一些實例中，連接肽含有蛋白酶裂解 部位’其允許在藉由用特異性識別蛋白酶裂解部位之蛋白 酶裂解而純化後移除純化肽。 156 201201839 • 本文所提供之抗Rsv抗體及其抗原結合片段亦可藉由 . 在試管内或活體内使以抗體或抗原結合片段為目標之異源 多肽連接於特定細胞類型（例如呼吸道上皮細胞）來修飾。 在一些實例中，本文所提供之抗Rsv抗體或其抗原結合片 段可藉由使抗體或其抗原結合片段與對於特定細胞表面受 體或其他多肽具有特異性且與特異性細胞受體相互作用之 抗體融合或結合而以特定細胞類型為目標。 在一些實例中，本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結 合片段可藉由使抗體或其抗原結合片段與結合於細胞表面 醣蛋白之肽（諸如蛋白質轉導域（例如TAT肽））融合或結 合而以目標細胞表面為目標及/或由目標細胞吸收。例示性 蛋白質轉導域包括（但不限於）衍生自蛋白質之PTD ,諸 如人類免疫缺乏病毒1(HIV-1)TAT( Ruben等人（1989)/. Viro1- 63:1-8 ;例如 SEQ ID NO: 326-337 ，例如 GRKKRRQRRR ( TAT 48-57) SEQ ID NO:330))、范疹病毒 被膜蛋白 VP22 ( Elliott 及 O’Hare (1997) Ce// 88:223-233 ; 例如 SEQ ID NO: 342 )、黑腹果繩（we/awogasier ) 觸角蛋白（Antennapedia ’ Antp )之同源異型蛋白（穿透肽 (Penetratin) PTD ; Derossi 等人（1996J ·/.別〇/. CAem. 271:18188-18193 ;例如 SEQ ID NO: 311-314)、protegrin 1
(PG-1 )抗微生物月大 SynB ( 4列如 SynB 1、SynB3 及 Syn B4 ; Kokryakov 等人（1993) F五327:23 1-236;分別例如 SEQ ID NO: 323-325 )及基本纖維母細胞生長因子（Jans (1994) /^5^5 Λ 8:841-847 ;例如 SEQ ID NO: 3 07 )。PTD 157 201201839 亦包括合成PTD，諸如（但不限於）聚精胺酸肽（Futaki 等人（2003) ·/· Af〇/.及16:260-264 ; Suzuki 等人 (2001) «/_ 5ζ·ο/. C/zem. 276:5836-5840;例如 SEQ ID NO: 315-316)、細胞穿透肽（transportan )(Pooga 等人（1988) FASEB J. 12:67-77 ; Pooga 等人(2001) FASEB J. 15:145 1-1453 ;例如 SEQ ID NO: 338-341 )、MAP ( Oehlke 等人（1998) 5/oc/n’m· 1414:127-1 39 ;例如 SEQ ID NO: 305 )、KALA( Wyman 等人（1997) 36:3008-3017 ;例如SEQ ID NO: 303 )及其他陽離子性肽， 例如各種/3-陽離子性肽（Akkarawongsa等人 （2008) Antimicrob. Agents and Chemother. 52(6):2120-2129 ) ° 本文所提供之抗RSV抗體及其抗原結合片段可藉由使 診斷性及/或治療性部分連接於抗體或其抗原結合片段來修 飾。本文所提供之抗RSV抗體及其抗原結合片段可藉由使 任何類型之分子（諸如診斷性或治療性分子）共價連接於 抗體或其抗原結合片段以使得共價連接不會防止抗體或其 抗原結合片段結合於其相應抗原決定基來修飾。舉例而 s ’本文所k供之抗RS V抗體或其抗原結合片段可另外藉 由共價連接分子以使得該共價連接不會防止抗體或其抗原 結合月段結合於RSV來修飾。在一些實例中，抗體戍其^ 原結合片段可在N端或C端與異源多肽重.組融合或與異源 多肽或其他組成物以化學方法結合，包括共價及非共價、衾士 合。舉例而言’異源多肽或組成物可為診斷性多肽或其他 診斷性部分或治療性多肽或其他治療性部分。例示性診斷 158 201201839 性及治療性部分包括（但不限於）藥物、放射性核苷酸、 I素、螢光分子（參見例如國際PCT公開案第W〇 92/〇8495 號；第WO 91/14438號；第W0 89/12624號；美國專利第 5,314,995號；及第EP 396,387號）。診斷性多肽或診斷性 部分可例如用作供活體内或試管内偵測之標記。治療性多 肽或治療性部分可例如用於病毒感染（諸如RSV感染）之 療法或用於治療病毒感染之一或多種症狀。 本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段的其他融 合蛋白可經由基因改組、基元改組、外顯子改組及/或密碼 子改組（共同稱為「DNA改組」）之技術來產生^ 〇ΝΑ改 組可用於改變本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段 的活性’例如產生具有較高親和力及較低解離速率之抗體 或其抗原結合片段（一般參見美國專利第5,6〇5,793號；第 5,811，238 號；第 5,830,721 號；第 5,834,252 號；及第 5,837,458 號，及 patten 等人（1997) Cwrr· Op inion
Biotechnol. 8:724-33 » Harayama (1998) Trends Biotechnol. 16(2):76-82 ； Hansson 等人，（1999) J. Mo/. 287:265-76 ’ 及 Lorenzo 及 Blasco (1998) 24(2):308-13 ) 〇 所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段亦可連接於固 體支撐物，其適用於目標抗原之免疫檢定或純化。例示性 固體支撐物包括（但不限於）玻璃、纖維素、聚丙烯醯胺、 耐綸（nylon )、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。 1.降低免疫原性之修飾 159 201201839 在一些實例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段 可另外經修飾以降低在個體（諸如人類個體）中之免疫原 性。舉例而言，抗體或其抗原結合片段中之一或多個胺基 酸可經修飾以改變潛在用於人類τ細胞之抗原決定基，以 便當曝露於個體之免疫系統時消除或降低抗體或其抗原結 合片段之免疫原性。例示性修飾包括一或多個胺基酸之 代、缺失及插入，其消除或降低抗體或其抗原結合片段之 免疫原性。一般，該等修飾不會改變抗體或其抗原結合片 段對於其各別抗原之結合特異性。降低抗體或其抗原結合 片段之免疫原性可改良抗體或其抗原結合片段之一或多種 性質’例如改良抗體或其抗原結合片段之治療功效及/或増 加抗體或其抗原結合片段之活體内半衰期。 2. Fc修飾 本文所提供之抗RS V抗體或其抗原結合片段可含有野 生型或經修飾之Fc區。如本文別處所述，Fc區可連接於本 文所提供之抗R S V抗原結合片段，例如5 8 c 5、s c 5、3 0 D 8、 104E5、38F10、14G3、90D3、56E11、17C9 或 69F6，或衍 生自 58c5、sc5、30D8、104E5、38F10、14G3、90D3、56E11、 17C9或69F6之抗原結合片段。在一些實例中，fc區可經 修飾以改變Fc多肽之一或多種性質。舉例而言，與野生型 免疫球蛋白重鏈之Fc區的效應功能相比，FC區可經修飾以 改變（亦即或多或少）效應功能。抗體之Fc區與許多pc 受體及配位體相互作用，從而賦予稱為效應功能之一系列 重要功能性能力。Fc效應功能包括例如FC受體結合、補體 160 201201839 * 固定及T細胞耗竭活性（參見例如美國專利第6，136,31〇 . 號）。檢定T細胞耗竭活性、Fc效應功能及抗體穩定性之方 法為此項技術所已知。舉例而言，IgG分子之Fc區與FcyR 相互作用。此等受體在各種免疫細胞中表現，包括例如單 核細胞、巨嗤細胞、嗜中性白血球、樹突狀細胞、嗜伊紅 血球、肥大細胞、血小板、B細胞、大顆粒淋巴細胞、郎格
罕氏細胞（Langerhans’ cell)、自然殺手（NK)細胞及γδ T 細胞。Fc/FcyR複合物之形成可將此等效應細胞募集於所結 合抗原之部位，典型地在細胞内引起信號傳導事件及引起 重要的後續免疫反應，諸如釋放炎症介體、B細胞活化、内 攝作用、吞噬作用及細胞毒性侵襲。介導細胞毒性及吞噬 細胞效應功能之能力為抗體破壞目標細胞之潛在機制。由 表現FcyR之細胞毒性細胞識別及溶解目標細胞上所結合之 :抗體被稱為抗體依賴性細胞介導性細胞毒性（antib〇dy dependent cell-mediated cytotoxicity，A.DCC)。針對各種抗 體同型之其他卩〇受體包括1^11(1§£)、卩(：〇^(1§入）及1^/|11 (IgM )。 因此’經修飾之Fc域可具有改變之親和力，包括（但 不限於）對於Fc受體之親和力增加或較低或對於受體 無親和力。舉例而言，不同IgG亞類對於Fc/yR具有不同親 和力，其中與IgG2及igG4相比，IgGl及igG3典型地實質 上較佳地結合於爻體。另外，不同FqR介導不同效應功能。 FcyRl、Fc^yRIIa/c及Fc7RIIIa為免疫複合物引發之活化的 正凋節因子，其特徵為具有含基於免疫受體酪胺酸之活化 161 201201839 基元（immunoreceptor tyrosine-based activation motif， ITAM )之細胞内域。然而，Fc^yRIIb具有基於免疫受體酪胺 酸之抑制基元（immunoreceptor tyrosine-based inhibition motif，ITIM )且因此具有抑制性。因此，改變Fc區對於受 體之親和力可調節由F c域誘導之效應功能。 在一實例中，使用之Fc區經修飾以最佳化地結合於特 定Fc^yR以較佳地介導效應功能（例如抗體依賴性細胞毒 性，ADCC )。該等經修飾之Fc區可在一或多個胺基酸殘基 (根據 Kabat 編號方案，Kabat 等人（1 991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services )處含有修飾，包括（但不限於） 胺基酸位置 249、252、259、262、268、271、273、277、 280 、 281 、 285 、 287 、 296 、 300 、 317 、 323 、 343 ' 345 、 346、349、351、352、35 3及424。舉例而言，可進行對應 於以下之Fc區修飾：SEQ ID NO: 356所示之例示性IgG 1 序列之 G119S、G119A、S122D、S122E、S122N、S122Q、 S122T、K129H、K129Y、D132Y、R138Y、E141Y、T143H、 V147I、S150E、H151D、E155Y、E155I、E155H、K157E、 G164D、E166L、E166H、S181A、S181D、S187T、S207G、 S307I、K209T、K209E、K209D、A210D、A213Y、A213L、 A213I、I215D、I215E、I215N、I215Q、E216Y、E216A、 K217T、K217F、K217A及P279L中的任一者或多者，或其 組合。含有此等突變之經修飾Fc可增強與FcR，例如活化 受體Fcyllla之結合，及/或可減少與抑制性受體Fc<yRiib之 162 201201839 • 結合（參見例如US2006/0024298 )。經修飾以增加盘 /、 v X\. . 之結合的Fc區可更有效地促進患者體内病毒（例如) 感染細胞之破壞。 在一些實例中’本文所提供之抗體或抗原結合片段可 另外經修飾以改良抗體或其抗原結合片段與FcRn受體之相 互作用以增加抗體或其抗原結合片段之活體内半衰期及藥 物動力學（參見例如美國專利第7,217,797號、美國專利公 開案第 2006/0198840 號及第 2008/0287657 號）。pcRn 為新 生兒FcR，其結合可使内攝之抗體或其抗原結合片段自内體 再循環回到jk流中。此過程結合由於全長分子之大尺寸而 阻止腎臟過濾’可產生範圍為一至三週之有利的抗體血清 半衰期。Fc與FcRn之結合亦在抗體轉運中起作用。
Fc區之例示性修飾包括（但不限於）美國專利第 7,217,797 5虎、美國專利公開案第2006/0198840號、第 2006/0〇24298號及第2008/0287657號及國際專利公開案第 WO 2005/063816號中所述之Fc突變’諸如Fc重鍵怪定區 之CH2域中之胺基酸殘基（Kabat編號，Kabat等人（1991)) 251-256、285-90、308-314及/或CH3域中之胺基酸殘基 385-389及428-436中的一或多者處之突變，其中相對於未 經修飾之抗體或其抗原結合片段，該修飾改變Fc受體結合 親和力及/或血清半衰期。在一些實例中，igG恆定域在Fc 區中於IgG重鏈恆定區之CH2域中之胺基酸位置250、251、 252、254、255、256、263、308、309、311、312 及 314 及 / 或 CH3 域中之胺基酸位置 385、386、387、389、428、433、 163 201201839 434、436及459中的一或多者處經修飾。在3£卩10 1^0:356 所示之例示性IgG 1序列中，該等修飾對應於CH2域中之胺 基酸 Glyl20、Prol21、Serl22、Phel24、Leul25、Phel26、 Thrl33、Prol74、Argl75、Glul77、Glnl78 及 Asnl80 及 CH3 域中之胺基酸 Gln245、Val246、Ser247、Thr249、Ser283、 Gly285、Ser286、Phe288 及 Met3 11。在一些實例中，該修 飾位於一或多個表面曝露之殘基處，且該修飾為經電荷、 極性或疏水性與欲取代之殘基類似之殘基取代。 在特定實例中，Fc重鏈恆定區在胺基酸位置25卜252、 254、255及256 ( Kabat編號）中之一或多者處經修飾，其 中位置25 1經Leu或Arg取代，位置252經Tyr、Phe、Ser、 Trp或Thr取代，位置254經Thr或Ser取代，位置255經 Leu、Gly、lie 或 Arg 取代，及/或位置 256 經 Ser、Arg、 Gin、Glu、Asp、Ala、Asp 或 Thr 取代。在一些實例中，Fc 重鏈恆定區在胺基酸位置308、309、311、312及314中之 一或多者處經修飾，其中位置308經Thr或lie取代，位置 3 09經Pro取代，位置311經絲胺酸或Glu取代，位置312 經Asp取代，及/或位置314經Leu取代。在一些實例中， Fc重鍵恆定區在胺基酸位置428、433、434及436中之一 或多者處經修飾，其中位置428經Met、Thr、Leu、Phe或 Ser 取代，位置 433 經 Lys、Arg、Ser、lie、Pro、Gin 或 His 取代，位置434經Phe、Tyr.或His取代，及/或位置436經 His、Asn、Asp、Thr、Lys、Met 或 Thr 取代。在一些實例 中，Fc重鏈恆定區在胺基酸位置263及459中之一或多者 164 201201839 處經修飾，其中位置263經Gin或Glu取代及/或位置459 f 經Leu或Phe取代。 在一些實例中，Fc重鏈恆定區可經修飾以增強與補體 蛋白Clq之結合。除與FcR相互作用外，Fc亦與補體蛋白 Clq相互作用以介導補體依賴性細胞毒性（coinplement dependent cytotoxicity，CDC)。Clq 與絲胺酸蛋白酶 Clr 及C Is形成複合物以形成Cl複合物。Clq能夠結合六個抗 體，但結合於兩個IgG足以活化補體級聯反應。類似於Fc 與FcR之相互作用，不同igG亞類對於clq具有不同親和 力，其中IgGl及IgG3之結合典型地實質上優於igG2及 IgG4。因此，增加與c 1 q之結合的經修飾之Fc可介導增強 之CDC ’且可增強病毒（例如rs V)感染細胞之破壞。Fc 區中增加與C 1 q之結合之例示性修飾包括（但不限於）位
置345及353 ( Kabat編號）處之胺基酸修飾。在SEQ ID NO:356所示之例示性IgG 1序列中，例示性修飾包括對應於 K209W、K209Y 及 E216S 之修飾。 在另一實例中，具有取代以降低或除去與Fc<yR之結合 的各猹Fc突變體亦為已知的。該等突變蛋白適用於需要減 少或消除由Fc介導之效應功能的情況。通常的情況是需要 拮抗作用，而非殺死帶有目標抗原之細胞。例示性該Fc為 美國專利第5,457,035號中所述之Fc突變蛋白，其在胺基 酸位置248、249及251 ( Kabat編號）處經修傳。在SEQ m N〇:356所示之例示性IgGi序列中，胺基酸ln由修 飾為Ala ’胺基酸118由Leu修飾為Glu，且胺基酸12〇由 165 201201839
Gly修飾為Aia ^可在任何Fc序列（例如例示性Fc序列） 中產生類似突變。此突變蛋白展現對於Fc受體之親和力降 低。 本文所提供之抗體或其抗原結合片段可經工程改造以 含有經修飾之Fc區。舉例而言，使多肽與抗體之恆定區融 合或結合（亦即製備Fc融合蛋白）之方法為此項技術所已 知且描述於例如以下t :美國專利第5,336,6〇3號、第 5,622,929 號、第 5,359,046 號、第 5,349,053 號、第 5,447,85 1 號、第 5,723，125 號、第 5,783，181 號、第 5,908,626 號、第 5,844,095 號及第 5，112,946 號；EP 307,434 ; EP 367，166 ; EP 394,827，PCT 公開案 WO 91/06570、WO 96/04388、WO 96/22024、WO 97/34631 及 W0 99/04813 ; Ashkenazi 等人 (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:10535-10539 ;
Traunecker 等人（1988) Nature 33 1:84-86; Zheng 等人 (1995) 154:5590-5600;及 Vil 等人（1992)
Tto/. Ad. 89:11337-11341 (1992)，並描述於本文 別處。在一些實例中，具有一或多個修飾且增加FcRn結合 親和力及/或改良半衰期之經修飾之Fc區可與本文所提供 之抗RSV抗體或其抗原結合片段融合。 3.聚乙二醇化 本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段可與諸如 高分子量聚乙二醇（PEG )之聚合物分子結合以增加半衰期 及/或改良其藥物動力學特徵。可藉由熟習此項技術者已知 之技術進行結合。已顯示治療性抗體與PEG之結合可增強 166 201201839 藥效’同時不會干擾功能（參見例如Deckert等人，/；^./· 87: 382-390，2000 ; Knight 等人，P/we/价 15: 409-418, 2004 ; Leong 等人，Qyiohwe 16: 106-1 19, 2001 ;及
Yang 等人，/v〇 如„ 心尽 16: 761-770, 2003)。PEG 可經或不 經多功能連接子經由peg與抗體或抗原結合片段之N端或 C端之部位特異性結合或經由離胺酸殘基上存在之£胺基 而連接於抗體或抗原結合片段。可使用引起生物活性極小 損失之直鏈或分支聚合物衍生化。結合程度可藉由 SDS-PAGE及質譜法來監測以確保pEG分子與抗體之適當 結合。未反應之PEG可藉由例如尺寸排除或離子交換層析 而與抗體-PEG結合物分離。可使用熟習此項技術者已知之 方法（例如藉由本文所述之免疫檢定）測試pEG衍生之抗 體或其抗原結合片段的與RSV抗原之結合活性以及活體内 功效。 4.可偵測部分之結合 在一些實例中，本文所提供之抗RSV抗體及抗體片段 可另外藉由與可憤測部分結合來修挪。可债測部分可直接 或間接偵測q見所選可偵測部分而定，可偵測部分可活體 内及/或試管内❹卜可制部分可例如用於仙彳r s v曝露 或RSV定位之診斷方法或測定抗麟抗體或其抗原結合片 段對於RSV之結合親和力的結合檢定中。可偵測部分亦可 用於製備抗RSV抗體之方法中，例如抗體或其抗原結合片 段之純化。典型地，可偵測部分經選擇以使得可偵測部分 之結合不會干優抗體或其抗原結合片段與目標抗原決定基 167 201201839 之、、σ & 般’可偵_部分之選擇視所需敏感性、與化合 物結合之今易性'穩定性要求、可用儀器及處理規定而定。 沾％此項技術者熟悉標記且可鑑別適合於所用檢定且與該 檢疋相合之可偵測標記。用可偵測部分標記抗體之方法為 此項技術所已知且包括例如重組及化學方法。 放射性標記（例如、125丨、35 可偵測部分可為具有可偵測物理或化學性質之任何物 質。該等可偵測標記在免疫檢定領域中發展良好且一般而 σ適用於D亥等方法中之任一標記均可應用於所提供之方 法中。SUb ’標記為可藉由光譜學、光化學、生物化學、 免疫化學、電學、光學或化學方法偵測之任何組成物。適 用钻。己包括（但不限於）螢光染料（例如異硫氰酸螢光素、 克薩斯’·（ Texas red)、S丹明（rh()damine)及其類似物）、 c或32p)、尤其γ及正 14 電子發射放射性同位素（例如157Gd、55Mn、162Dy、”。及 56Fe)、金屬離子（例如mIn、9、u、”以、68&、”心、％ 及2GIti)、酶（例如辣根過氧化酶、鹼性磷酸酶及 中常用之其他酶）、電子轉移劑（例如包括金屬結合蛋白及 化口物）發光及化學發光標記（例如螢光素及2,3•二氮吹口井 二_ ’例如魯米諾（lumin〇1 ))、磁性珠粒（例如 DYNABEADStm)及比色標記（諸如膠態金或有色玻璃或塑 膠珠粒“列如聚苯乙稀、聚丙烯、乳膠等))。關於可使用 之各種& 己或L號產生系統的評述，I見例如美國專利第 4,391，904 號。 5.治療性部分之結合 168 201201839 . 在一些實例中，本文所提供之抗Rsv抗體及抗原結合 . 片段可另外藉由與治療性部分結合來修飾。例示性治療性 部分包括（但不限於）細胞毒素（例如細胞生長抑制劑或 殺細胞劑）、治療劑或放射性金屬離子（例如發射體）。 例示性細胞毒素或細胞毒性劑包括（但不限於）對細胞有 害之任何藥劑’諸如（但不限於）紫衫醇（paclitaxol)、細 胞遲緩素 B ( cytochalasin B )、短桿菌肽 d ( gramicidin D ).、 溴化乙錠（ethidiumbromide)、吐根素（emetine)、絲裂黴 素（mitomycin )、依託泊苷（et0p0side )、特諾波赛 (tenoposide )、長春新驗（vincristine )、長春驗 (vinblastine)、秋水仙鹼（colchicin)、阿黴素（doxorubicin)、 道諾黴素（daunorubicin )、二羥基炭疽菌素二酮（dihydroxy anthracin dione )、米托蒽醌（mitoxantrone )、米拉黴素 • ( mithramycin )、放線菌素 D ( actinomycin D )、1 -去氫睪固 酮（dehydrotestosterone)、糖皮質素（glucocorticoid)、普 魯卡因（procaine )、丁卡因（tetracaine )、利多卡因 (lidocaine )、普萘洛爾（propranolol )及嘌呤黴素及其類似 物或同系物。例示性治療劑包括（但不限於）抗代謝物（例 如曱胺嗓吟（methotrexate )、6-疏基嘌呤、6-硫鳥嘌呤、阿 糖胞脊（cytarabine )、5-|L 尿0密0定達卡巴卩井（decarbazine ))、 炫基化劑（例如氮芥（mechlorethamine )、°塞替D底（thioepa )、 苯丁酸氮芥（chlorambucil )、美法命（melphalan )、卡莫司 汀（carmustine )( BSNU )及洛莫司，;丁（ lomustine )( CCNU )、 環鱗醯胺（cyclothosphamide )、白消安（busulfan )、二溴 s:： 169 201201839 甘露糖醇、鍵脲菌素（streptozotocin )、絲裂黴素 C (mitomycin C )及順-二氯二胺鉑（Π) ( DDP )順舶 (cisplatin )) '蒽環黴素（anthracyclines )(例如道諾黴素（以 前為柔紅黴素（daunomycin ))及阿黴素）、抗生素（例如更 生黴素（dactinomycin )(以前為放線菌素）、博萊黴素 (bleomycin )、米拉黴素（mithramycin )及胺茴黴素 (anthramycin ) ( AMC ))、抗有絲分裂劑（例如長春新鹼及 長春鹼）及抗病毒藥，諸如（但不限於）核苷類似物，諸 如齊多夫定（zidovudine )、阿昔洛韋（acyclovir )、更昔洛 韋（gangcyclovir )、阿糖腺苷（vidarabine )、碘苷 (idoxuridine ) ' 曲氟尿皆(trifluridine )及病毒 〇坐 (ribavirin );膦曱酸（foscamet )、金剛胺（amantadine )、 金剛乙胺（rimantadine )、沙奎那韋（saqUinavir )、茚地那 韋（indinavir )、利托那韋（ritonavir )及〇：-干擾素。 在一些實例中，本文所提供之抗rSV抗體及抗原結合 片段可另外藉由與為治療性多肽之治療性部分結合來修 飾。例示性治療性多肽包括（但不限於）毒素，諸如相思 豆毒素（abrin)、蓖麻毒素A ( ricin A)、綠膿桿菌外毒素 (pseudomonas exotoxin)或白喉毒素（diphtheria t〇xin); 或免疫刺激劑，諸如細胞激素，諸如（但不限於）干擾素 (例如IFN-α、/3 ' γ、ω )、淋巴因子、造血生長因子（例如 GM-CSF (粒細胞巨嗟細胞群落刺激因子）、介白素2 (IL-2)、介白素-3( IL-3)、介白素-4( IL-4)、介白素-7( IL-7) ”白素-10( IL-10)' 介白素-12( IL-12)、介白素-14( IL-14)) 170 201201839 及腫瘤壞死因子（Tumor Necrosis Factor，TNF )。 6.改良結合特異性之修飾 所提供之抗RSV抗體及抗體片段之結合特異性可藉由 諸如噬菌體呈現之技術來改變或改良。噬菌體呈現方法一 般涉及使用絲狀噬菌體（噬菌粒）表面表現載體系統來選 殖及表現文庫之抗體種類。產生組合性文庫之各種噬菌粒 選殖系統已由其他文獻描述。參見例如如以下文獻所述之 在噬菌粒上製備組合性抗體文庫：Kang等人，（1991) Proc. iVa"· Jcad. 5c/., t/M，88:4363-4366 ; Barbas 等人，（1991) Proc. iVa"· jcac/. Sci., t/以，88:7978-7982; Zebedee 等人.， (1992) iWzi/jcai/· &ζ··, C/M，89:3175-3179 ; Kang 等 人，（1991) Pr〇c. A^/. Ad , 88:11120-11123 ;
Barbas 等人，（1992) proc. 仍木 89:4457-4461 ;及 Gram 等人，（1992) Jed. 89:3576-3 5 80，該等文獻以引用的方式併入本文中。 在特疋實例中，編碼VH及VL域之DNA序列由動物 cDNA文庫（例如人類或鼠類淋巴組織文庫）擴增。 編碼VH及VL域之DNA藉由PCR與scFv連接子一起重組 且選殖至噬菌粒載體（例如p CANTAB 6或pC〇mb 3 hss ) 中。载體電穿孔至大腸桿菌中且該大腸桿菌感染辅助嗤菌 體。此等方法中所用之噬菌體典型地為絲狀噬菌體，包括 fd及M13’且％及Vl域通常與噬菌體基因m或基因viii 重組融合。表現結合於Rsv抗原、（例& RsvFl白）之抗 原結合域的噬菌體可用抗原選擇或鑑別，例如使用經標記 171 I!：： 201201839 抗原或結合或捕捉於固體表面或珠粒上之抗原。可用於藉 由噬菌體呈現製備抗體之噬菌體呈現方法的實例包括例如 以下文獻中所揭示之方法：Brinkman等人 （1995) Immunol. Methods 182:41-50； Ames # A (1995) J. Immunol. Methods 184:177-186 ; Kettleborough 等人（1994)五«/. 24:952-958 ; Persic 等人（1997) 187:9-18 ;
Burton 等人(1994) in /mmwwo/ogy 57:191-280 ; PCT 公開案第 wo 90/02809 號、第 WO 91/10737 號、第 wo 92/01047 號、第 WO 92/18619 號、第 WO 93/1 1236 號、第 WO 95/15982 號、第 WO 95/20401 號及第 W097/13844 號； 及美國專利第5,698,426號、第5,223,409號、第5,403,484 號、第 5,580,717 號、第 5,427,908 號、第 5,750,753 號、第 5,821，047 號、第 5,571，698 號、第 5,427,908 號、第 5,516,637 號、第 5,780,225 號、第 5,658,727 號、第 5,733,743 號及第 5，969,108號；其中每一者以全文引用的方式併入本文中。 如以上參考文獻中所述，在噬菌體選擇後，來自噬菌 體之抗體編碼區可經分離且用於產生完整抗體，包括人類 抗體，或任何其他所需抗原結合片段，且在任何所需宿主 中表現’包括哺乳動物細胞、昆蟲細胞、.植物細胞、酵母 及細菌，例如如本文所述之宿主。重組產生Fab、Fab，及 F(ab’)2片段之技術亦可使用此項技術中已知之方法來利 用，諸如以下所揭示之方法：PCT公開案第w〇 92/22324 號，Mullinax 等人（1992) AoTecAwkwei 12(6):864-869 ; Sawai 專人（1995) 及/ 34:26-34;及 Better 等人（1988) 172 201201839
Science 240: IO4I-I043 〇 所得喧菌粒文座可奴 < 七„ 妗人β夕洛广 Κ乍以牦加及/或改變抗體或抗原 。&《疫特異性以產生及隨後鑑別具有改良性 (諸如與目標抗原之結合增加）之其他抗"例而言，重 鍵與^鏈編碼職中之任—者或兩者可在免疫球蛋白多肽 之可變區的互補決定區（繼）中加以誘變，且隨後針對所 需免疫反應及中和能力進行㈣。可接著在本文所述之一 或多種檢定中篩選所得抗體以測定中和能力。 對於二用途，包括抗體在人類中之活體内用途及試 管内偵測檢定’使用人類或彼合抗體。治療性處理人類個 體尤其需要完全人類抗體。人類抗體可藉纟此項技術中已 知之各種方法來製備，包括使用衍生自人類免疫球蛋白序 列或與人類免疫球蛋白序列同源之合成序列的抗體文庫之 上述噬菌體呈現方法。參見美國專利第4,444,887號及第
4,716，111 號；及 PCT 公開案第 W0 98/46645 號、第 WO 98/50433 號、第 WO 98/24893 號、第 W098/16654 號、第 WO 96/34096 號、第 WO 96/33735 號及第 WO 91/10741 號； 其中每一者以全文引用的方式併入本文中。 E.分離抗RSV抗體之方法 抗RSV抗體或其抗原結合片段可藉由此項技術中熟知 之各種技術鑑別及分離’包括（但不限於）鼠類融合瘤（參
見例如 Olsson 及 Kaplan (1980) Proc tASJ 77:5429-5431 ;該等抗體可如本文別處所述進行人類化以用 於人類）、表現人類免疫球蛋白基因之轉殖基因小鼠（參見 173 201201839 例如 Kellerman 及 Gr:een (20QQ) Curr. Opin Biotechnol. 13:593-597 )、嗟菌體呈現（參見例如 Mancini (2004) T'/'ew MicroHo/. 27:3 15-28 )及自成熟人類免疫細胞（諸如B細 胞）分離（參見例如 Banchereau 及 Rousset (1992) Ji/v Immunol. 52: 125-262，Crotty 及 Ahmed (2004) «Semi” Immunol. 16: 197-203» Carsetti (2004) Methods Mol Biol. 271: 25-35，McHeyzer-Williams 及 McHeyzer-Williams (2005) /ί««μ 23:487-5 1 3 )。在本文所提供之例示性方 法中，自人類B細胞鑑別及分離本文所提供之人類抗RSV 抗體及其抗原結合片段。 假設難以自人類抗體分泌細胞獲得穩定融合瘤，廣泛N 用於產生及分離人類抗體分泌細胞之例示性方法為用埃-巴 二氏病毒（Epstein Bair Virus，EBV )使人類B細胞永生化， 其亦已知誘導多株B細胞活化及增殖（參見例如Sugimoto 等人（2004) Cawcer Λα. 64:3361-3364 ; Bishop 及 Busch (2002) Micro办以iVz/eci. 4:85 3-857 )。抗體分泌細胞已例如藉 由人類B細胞之EBV永生化產生，諸如來自患者或可能曝 露於抗原之其他個體或使用經標記抗原預選之健康個體的 周邊金液、淋巴結、脾、爲桃體或胸膜液（參見例如Casali 等人（1986) 234:476-9，Yamaguchi 等人（1987)
Proc Natl Acad Sci USA B4:2416-2420，Posner.等人（1991) «/ 146:4325-4332，Raff 等人（1988) ·/ 五χρ 从 168:905-917，Steenbakkers 等人(\993) Hum Antibod Hybrid. 4:166-173，Steenbakkers 等人(\994) Mol Biol Rep. 174 201201839 19:125-134，Evans 等人（1988)J /mm ο / 140:941-943，及 . Wallis R 等人（1 989) J C7i« /«vew 84:214-219 )。 由於感染EBV之人類B細胞的低可轉型率、低可選殖 率及固有不穩疋性及異質性（Chan等人（1986)«/ /；72 W w « 〇 / 136:106- 1 12 ’ 及 James 及8611.(1987)*//所所《«〇/^/以/1〇心· 100:5-40 )，可使用已知技術，諸如細胞融合，例如使用骨 髓瘤細胞系（參見例如 Bron.等人 （1984)/^351 81:3214-3217 ; Yamaguchi 等人（1987) Proc jaci/ USA 84:2416-2420，Posner 等人(1991) J Immunol. 146:4325-4332，Niedbala 及 Stott (1998) Hybridoma 17:299-304，Li 等人{2006、Proc Natl Aacd Sci. USA 103:3557-62)。改良EBV永生化之其他技術包括例如在單 一過程中用致癌病毒永生化、用致癌基因轉型、微電融合 及小鼠-人類雜融合（參見例如美國專利第4,997,764號； Steenbakkers 等人（1993) //wm //少4:166-173 ;
Dessain 等人（2004) ·/ /mmwwo/ MeMoi/i. 291:109-22 )。人 類單株抗體可自在抗原存在或不存在下且藉由組合如此項 技術中所述之各種細胞培養操作而活化及永生化之B細胞 分離（參見例如 Borrebaeck 等人 tASJ 85: 3995-3999，Davenport 等人 Q992) FEMS Microbiol Immunol, 4:335-343，Laroche-Traineau 等人（1994) /iwm •厶办5:165-177，Morgenthaler 等人(\996) J. Clin 五《c/ocWwokg少.81:3155-3161，Niedbala 及 Kurpisz (1993) Immunol Lett. 35:93-100* Mulder ^ A. (1993) Hum Immunol. 175 201201839 36:186-192, Hur 等人（2005) CeZ/Pro"/. 38:35-45, Traggiai 等人（2004) Med 10:871-875，Tsuchiyama 等人（1 997) 7/wm 山8:43-47;及 PCT 公開案第 w〇 91109Π5 號、 第 WO 041076677 號、第 WO 88101642 號、第 WO 90102795 號、第 WO 96140252 號及第 WO 02146233 號）。 自成熟B細胞分離人類抗體之方法一般涉及分離成熟 B細胞群體及篩選由B細胞表現之針對特定抗原的抗體。 各種不同之抗體分泌細胞群體可自具有特定特徵之人類供 體（例如未處理、接種疫苗、近年來或多或少受感染及企 清陽性個體）及自B細胞存在且發揮其活性之不同組織（例 如血液、扁桃體、脾、淋巴結）分離（Viail及z〇uali (2005) C/h 114:17-26 )。在本文所提供之例示性方法中， 本文所k供之抗RSV抗體可自周邊血液單核細胞 (peripheral blood mononuclear cell > PBMC )之樣品分離， s亥專細胞含有B細胞’自已曝露於RSV或具有曝露於rsv 之高可能性的人類供體及/或自健康人類供體（諸如護理人 員）分離。 自生物樣品分離PBMC後’可使用此項技術中所述之 各種方法中的一者，基於表面上之細胞表面標記物及適當 時其他蛋白質的表現，以及細胞之增殖活性、代謝及/或形 態情況，特異性選擇抗體分泌細胞》詳言之，自人類樣品 純化抗體分泌細胞之各種技術對於陽性或陰性選擇使用不 同方法及條件。此等細胞更容易且更有效地藉由實體分離 表現對於表現及分泌抗體之細胞（例如人類B細胞）具有 176 201201839
. 特異性的細胞表面標記物之細胞來選擇。特定方案為已知 . 的且可見於文獻中（參見例如Callard及Kotowicz「Human B-cell responses to cytokines」 Cytokine Cell Biology： A practical Approach. Balkwill F.(編）Oxford University Press, 2000, 17-31)。 特異性免疫細胞（B細胞）之選擇典型地使用特異性結 合於B細胞特異性細胞表面蛋白且可連接於固體支撐物（例 如微珠或塑膠板）或經可使用螢光活化細胞分選 (fluorescence-activated cell sorting > FACS ) 4貞測之螢光染 料標記的抗體進行。舉例而言，已基於對於結合CD 19、CD27 及/或CD22微珠之支撐物（諸如微珠）的親和力，或針對 在EBV永生化之前缺乏對於對特定同型具有特異性之抗體 的結合親和力來選擇人類B細胞（參見例如Li等人（1995)
Aop/iys i?以 Commwn 207:985-993，Bernasconi 等 人（2003) β101:4500-4504 ’ 及 Traggiai 等人（2〇〇4)
Mec? 1 〇:87 1 -875 )。用於純化之細胞標記物的選擇可影響 永生化過程之效率，例如歸因於由選擇過程引發且可改變 細胞生長及存活力之細胞内信號。舉例而言，CD22，控制 與抗原識別及B細胞活化有關之信號轉導路徑的b細胞限 制性跨膜蛋白，為用於初始B細胞選擇之例示性分子。因 為CD22陽性群體含有表現具有不同同型及特異性之抗體 的細胞’所以其他細胞表面標記物亦可用於在刺激階段之 前或之後選擇細胞。 在一些實例中，除基於CD22之選擇外，抗體分泌細胞 177 201201839 之特定富集亦可藉由應用基於CD27之選擇來獲得。已知 CD27為用於具有體細胞突變可變區基因之人類β細胞的標 記物（B〇rst J 等人（2005) Cwrr 17:275-281 )。諸如 CD5、CD24、CD25、CD86、CD3 8、CD45、 CD70或CD69之其他標記物亦可用於耗竭或富集所需細胞 群體。因此，視諸如供體曝露於抗原（例如rsv抗原）之 經歷及抗體效價的因素而定，可選擇總的CD22富集b細胞 或其他富集B細胞亞群（諸如CD27陽性B細胞）。 在細胞選擇後且在細胞永生化前，細胞群體可曝露於 適當刺激劑。例示性刺激劑包括例如多株B細胞活化劑， 諸如（但不限於）先天免疫反應之促效劑（例如T〇ll樣受 體促效劑，諸如CpG寡核苷酸（Bernasconi等人（2003) 5/ooc? 101:4500-4504，Bernasconi 等人（2002) 298:2199-2202，Bourke 等人（2003) 5/oocM02:956-63 ;例 如 CpG 核苷酸，例如 CpG2006、CpG2395 及 CpG2395，購 自Cell Sciences，Canton, ΜΑ ));及免疫調節分子，諸如細 胞激素（例如已知具有免疫刺激活性之介白素，例如IL-2、 IL-4、IL-6、IL-10 及 IL-13(參見 Callard 及 Kotowicz「Human B-cell responses to cytokines」 Cytokine Cell Biology: A practical Approach. Balkwill F (編）Oxford University Press， 2000，17-31));及TNF受體家族之細胞膜受體的促效劑， 尤其活化B細胞中之NF-κ B路徑及增殖的促效劑，諸如（但 不限於）APRIL、B AFF、CD 40配位體（CD40L )(參見例 如 Schneider (2005) Cwrr 17:282-289，He 等 178 201201839 人（2004) «/172:3268-3279，Crax.ton 等人（2003) 5/ο〇ί/ 101:4464-4471 ，及 Tangye 等人 （2003)/ /所mw«o/. 170:261-269)。組合或依序使用EBV永生化與一或 多種多株活化劑來刺激B細胞之例示性方法為此項技術所 已知（參見例如 Traggiai 等人（2004) iVai Med 10:871-875， Tsuchiyama 等人(1997) Hum Antibodies 8:43-47 > Imadome 等人{2QQ3) Proc Natl Acad Sci USA 100:7836-7840，及 PCT 公開案第 WO 07/068758 號、第 WO 04/76677 號、第 WO 91/09115號及第WO 94/24164號）。在永生化階段之 别’刺激劑之組合可同時或依序（例如在初始細胞選擇後 立即添加第一刺激劑且在數小時或數日後添加第二刺激 劑）添加至細胞培養基中。刺激劑可直操自稀釋之儲備溶 液添加至細胞培養基中’或在經適當調配，例如使用可改 良其攝取及免疫刺激活性之脂質體或其他化合物調配後添 加（Gursel 等人（2001) J /所卿„〇/. i67:3324_3328 )。刺激 劑亦可附著於.固體基質（微珠或直接於細胞培養板上），此 可使得有效移除該（等）試劑。細胞可用新鮮培養基洗滌 一或多次且視情況維持於正常細胞培養基中（例如丨至6 天）以進一步稀釋及消除刺激劑之任何殘餘效應。刺激劑 亦可藉由將特定化合物添加至細胞培養物中加以抑制。 可在刺激細胞後，基於所表現抗體之同型進一步選擇 細胞’接著使該等經選擇且經刺激之細胞曝露於永生化劑 (亦即，選擇在刺激階段與永生化階段之間）。基於同型之 細胞選擇可藉由應用陽性（允許分離特心胞）或陰性（允 «：； Ί)*1 179 201201839 許消除不當細胞）選擇方法來進行。舉例而言，經刺激之 IgG暢性細胞群體可（藉由FACS或磁性細胞隔板）或藉由 自細胞群體耗竭表；見IgM之細胞且因此富集表玉見邮之細 胞來進行陽性選擇。使用螢総化或磁性細胞隔板分離抗 體分泌細胞之技術為文獻中已知（參見例如u等人（1995) 扪oc/zew Comwww 207:985-993，Traggiai 等人 (2004) u 10:871-875 )。視抗體分泌細胞之來源及其 最終用途而定，亦可耗竭（或富集）其他同型表現細胞， 諸如IgD或IgA表現細胞。若需要該精確選擇（例如選擇 表現IgG卜IgG2、IgG3或IgG4抗體之人類B細胞），則可 使用類似方法基於特定亞類分離細胞。 多種病毒永生化劑為此項技術所已知且可用於抗體分 泌細胞以獲得永生化之抗體分泌細胞。感染及永生化抗體 分泌細胞之病毒通常稱為嗜淋巴細胞病毒。例示性該等病 毒為Ύ類范疹病毒中所包括之病毒。此病毒家族之成員以物 種特異性方式感染淋巴細胞，且與淋巴細胞增殖病症及數 種惡性疾病之發展相關（Nicholas (2000) «/· Μο/ Ραί/ζο/. 53.222-237 及 Rickinson (2001) Ρ/π·/ο·5 TVa/ί·? i? 5 如356:595-604 )。在所提供方法中用作永生化劑之例 示性病毒包括EBV (埃-巴二氏病毒，亦稱為疱疹病毒4 ) 及HHV-8 (人類疱疹病毒8，亦稱為KSHV，卡波西氏肉瘤 相關范療病毒（Kaposi's Sarcoma associated Herpesvirus ))，其可感染及永生化人類淋巴細胞。用於該等 方法中之其他例示性病毒包括（但不限於）MHV-68 (鼠類 180 201201839 • 疮療病毒 68 )、HVS (械疮療病毒，herpesvirus Samiri )、 • RRV (怪河猴細長病毒，Rhesus Rhadinovirus )、LCV (靈 長類淋巴潛隱病毒，primate Lymphocryptovirus )、EHV-2(馬 疱疹病毒2，Equine Herpesvirus 2 ) HVA (蛛猴疱療病毒， Herpesvirus Ateles)及 AHV-1(狷羚疱疹病毒 1，Alceiaphine Herpesvirus 1)，其為具有一些在其間保守之常見基因特徵 及在不同哺乳動物宿主細胞中具有類似病原性效應之其他 致癌嗜淋巴細胞疱疹病毒。 s有來自用於永生化之病毒之特定病毒蛋白質的重組 DNA構築體亦已用於永生化b細胞（參見Daniania (2004) iWzi M/croZn’o/· 2:656-668 及 Kilger 等人（1998)五M50 丄 17:1700-1709 )。含有病毒基因之類似載體可以所提供之方 法轉導至細胞中。製備該等構築體之方法為此項技術所熟 知且包括例如使用反轉錄病毒系統或病毒樣粒子及封裝細 胞系’其提供形成該等粒子之所有必需反式作用因子。 永生化階段可持續一小時至數小時，至多2_4天。永生 化階段之長度可根據諸如細胞存活力及永生化效率之各種 因素來調整。在-些實例中，用EBV永生化細胞持續約4 小時至約24小時之時段。在一特定實例中，用EBv永生化 細胞持續約1 6小時之時段。 B細胞之EBV介導性永生化需要表現細胞表面受體 CD21，其被視為主要EBV受體。⑽丨存在於大多數B細 胞亞群上且藉由與CD19及B細胞抗原受體形成複合物來調 節B細胞反應（Fear〇n及Carr〇n (2〇〇〇)心及⑼〜細 181 201201839 18:393-422 )。用EBV使細胞轉型之能力可藉由添加B細胞 刺激劑來增強，但該等情形必須確保CD21維持於細胞表面 上，從而允許以高效率進行EBV永生化。 在永生化階段後，永生化細胞可以低密度培養於银養 細胞層上。該餵養層可由經照射之非同種周邊血液細胞製 • · · . 劑、類淋巴母細胞或纖維母細胞系、臍血淋巴細胞或不同 類型之胚細胞構成。具有該等性質之細胞系的實例為 EL4-B5，其為有效地支持b細胞生長及增殖之突變el4胸 腺瘤細胞系。其他例示性餵養細胞包括如本文別處所述之 經照射之B細胞耗竭PMBC飯養細胞。生長促進劑，諸如 用於刺激B細胞群體之生長促進劑，亦可用於維持永生化 後之永生化B細胞群體。 永生化細胞群體可用於一系列應用，尤其與抗體分 離、特性化及產生有關之應用。在一些實例中，編碼由細 胞表現之抗體或該等抗體之片段的DNA文庫可使用常見重 組技術由自龐大細胞群體分離之DNA構築。在如本文所述 之一些實例中，永生化細胞可進一步經培養且分成數個抗 體分泌細胞池。該等細胞池可例如培養於餵養細胞層上。 在一些實例中，選擇來自細胞池之細胞培養物上清液 —或多輪’以鑑別表現具有特定抗原特異性之抗體（例如 免疫特異性結合RSV F蛋白之抗體）的細胞。篩選抗體及 里測結合特異性之例示性方法在本文別處描述且為此項技 術所已知。一旦鑑別出特定抗體，則可使用熟知重組方法 將編碼抗體或其抗原結合部分之DNA自細胞池分離。如本 182 201201839 文所述’自細胞池分離之DNA可接著進行纟王見（例如在原 ^或真核生物伯主細胞中）且再經篩選以鑑別表現所需抗 體或其抗原結合片段之個別純系。表現及純化抗體之方法 為熟習此項技術者所熟知且描述於F部分中。 在如本文所述之一些實例中，永生化細胞可為使用細 胞分選儀（例如FACS)使用經標記抗原分選之單細胞。在 特疋實例中，表現抗RSV抗體之細胞可使用經Alexa Fluor 647標記以標記所需細胞之Rsv F抗原來分離。分選 後，編碼抗RSV抗體或其抗原結合片段之DNA可接著使用 熟知重組方法來分離。自細胞池分離之DNA可進行表現（例 如在原核或真核生物宿主細胞中）以證實與RSV抗原之結 合0 典型地，用於鑑別結合於特定抗原之個別抗體的篩選 方法使得鑑別出該等抗體之抗原結合部分。為由抗原結合 片段產生全長或其他衍生物抗體，可分離編碼Vh及/或Vl 鏈或其抗原結合部分之核苷酸序列且分別將其選殖至表現 VH恆定區（例如人類γ 1恆定區）、vl恆定區（例如人類κ 或λ恆定區）之载體中。及VL域亦可.選殖至表現所選恆 疋區之載體中。接著使用熟習此項技術者已知之技術將重 鏈轉化載體與輕鏈轉化載體共轉染至細胞系中以產生表現 全長抗體（例如IgG )之穩定或短暫細胞系。 F.產生抗RSV抗體及其經修飾或變異形式之方法及編碼抗 體之核酸 本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段可藉由此 183 201201839 項技術中已知用於製備抗體之任何適合方法來產生，包括 化學合成及重組表現技術《可使用宿主細胞與載體之各種 組合來接受、維持、再現及擴增核酸（例如編碼諸如所提 供之抗RSV抗體或其抗原結合片段的抗體之核酸），且表現 由該等核酸編碼之多肽。一般而言，宿主細胞及載體之選 擇視疋否需要在基因封裝（諸如嗤菌體）上擴增、多肽表 現及/或呈現而定。使宿主細胞轉型之方法眾所周知。可使 用任何已知轉型方法（例如轉型、轉染、感染 '電穿孔及 音波穿孔）用核酸使宿主細胞轉型。產生抗體之程序為此 項技術所熟知，該等抗體諸如單株抗體及抗體片段，諸如 (但不限於）F ab片段及單鏈抗體。 單株抗體可使用此項技術中已知之各種技術來製備， 包括（但不限於）使用融合瘤、重組表現、噬菌體呈現技 術或其組合。舉例而言，單株抗體可使用融合瘤技術產生， 包括此項技術中已知及例如以下文獻中所教示之技術：
Harlow 等人，Antibodies: A Lab〇rat〇ry Manual 外以吨 Harbor Laboratory press，第 2 版 1988) ; Hammeding,
Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 5630681 (Elsevier N.Y. 198 1)。 多肽（諸如本文所述之任何多肽，包括本文所提供之 抗RSV抗體或其抗原結合片段）可藉由熟習此項技術者已 知之任何方法產生，包括活體内及試管内方法。所需多肽 可在適合於產生所需量及形式之蛋白質（例如分析、投藥 及治療所需之蛋白質）的任何生物體内表現。表現宿主包 184 201201839 括原核及真核生物，諸如大腸桿菌、酵母、植物、昆蟲細 胞、哺乳動物細胞，包括人類細胞系及轉殖基因動物（例 如兔、小鼠、大鼠及家畜，諸如（但不限於）山羊、綿羊 及牛），包括在血清、乳汁及卵中產生。表現宿主可在其蛋 白質產生含量以及存在於所表現蛋白質上之轉譯後修飾的 類型方面不同》可基於諸如規章及安全考慮、生產成本及 純化需要及方法之此等及其他因素來選擇表現宿主。 1.核酸 本文提供編碼本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合 片段的分離之核酸分子。在一些實例中，分離之核酸分子 編碼抗體 30D8、104E5、38F10、14G3、90D3、56E11、17C9 或69F6。在一些實例中，分離之梭酸分子編碼3〇D8、 104E5、38F10、14G3、90D3、56E11、17C9 或 69F6 之抗體 形式或其他抗原結合片段形式。 在一些實例中’本文所提供之分離之核酸分子編碼含 有具有 SEQ ID NO: 396、398、400、402、404、452、454 或456所示之胺基酸序列之重鏈的抗體或其抗原結合片 段。在一些實例中，所提供之分離之核酸分子含有具有Seq ID NO: 443、445、447、449、451、477、479 或 481 所示 之核皆酸序列的核酸。 在一些實例中，本文所提供之分離之核酸分子編碼含 有具有 SEQ ID NO: 395、397、399、401、403、453、455 或457所不之胺基酸序列之輕鏈的抗體或其抗原結合片 段°在一些實例中’所提供之分離之梭酸分子含有具有seq 185 £ 201201839 λ#戍480所示 ID NO: 442、444、446、448、450、476、- 之核苷酸序列的核酸。 ώ八辜編瑪含有具* 在一些實例中，所提供之分離之核酸为于， < 441 ' ^58 有 SEQ ID NO: 405、4η、417、423、429、 -,rDRl的抗體 464 ' 470或482-484所示之胺基酸序列之Vh。 /v M t ί哀酸 或其抗原結合片段。在一些實例中，所提供之刀 -Q Λ94 ' 43〇 分子編碼含有具有SEQ ID NO: 406、412、418、w 45 9、465或471所示之胺基酸序列之VH CDR2的抗體或其 抗原結合片段。在一些實例中，所提供之分離之核酸分子 編碼含有具有 SEQ ID NO: 407、413、419、425、43 1、460 ' 466或472所示之胺基酸序列之VH CDR3的抗體或其抗原 結合片段。 在一些實例中，所提供之分離之核酸分子編碼含有具 有 SEQ ID NO: 408、414、420、426、432、461、467 或 473 所示之胺基酸序列之VL CDR1的抗體或其抗原結合片段。 在一些實例中，所提供之分離之核酸分子編碼含有具有SEQ ID NO:、409、415、421 ' 427、433、462、468 或 474 所示 之胺基酸序列之VL CDR2的抗體或其抗原結合片段。在一 些實例中，所提供之分離之核酸分子編碼含有具有SEQ ID NO: 410、416、422、428、434、463、469 或 475 所示之胺 基酸序列之Vl CDR3的抗體或其抗原結合片段。.
編碼本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段的核 酸分子可使用熟知用於操作核酸分子之重組技術來製備 (參見例如 Sambrook 等人（1990) Molecular Cloning，A 186 201201839
Laboratory Manual，苐 2 版，Cold Spring Harbor Laboratory，
Cold Spring Harbor，N.Y.及 Ausubel 等人編（1998) Current Protocols in Molecular Bi〇l〇gy，john Wiley & s〇ns，Νγ 中所 述之技術）。在一些實例中，諸如（但不限於）重組Dna 技術、定點突變誘發及聚合酶鏈反應（pCR )之方法可用於 產生經修飾之抗體或其抗原結合片段，其具有不同胺基酸 序列，例如形成胺基酸取代、缺失及/或插入。 在一些實例中，使用常規重組DNA技術將本文所提供 之抗RSV抗體或其抗原結合片段之一或多個€〇11插入構架 區中。構架區可選自天然存在或共同構架區，包括人類構 架區（關於例示性構架區，參見例如Ch〇thia等人（1998) 乂 Μ介扪〇/_ 278: 457_479)。一般，藉由組合構架區與cdr 產生之聚核苷酸編碼維持親本抗R s V抗體或其抗原結合片 段之抗原結合特異性的抗體或其抗原結合片段。可對聚核 苷酸作出改變以改良所編碼之抗體或其抗原結合片段的一 或多種性質且該等改變在此項技術範圍内。在—些實例 中，可對聚核苷酸作出一或多種修飾以在構架區中產生胺 基酸取代，此例如改良抗體或其抗原結合片段與其抗原之 結合。另外，該等方法可用於使參與鏈内二硫鍵之一或多 個可變區半胱胺酸殘基出現胺基酸取代或缺失以產生缺乏 一或多個鏈内二硫鍵之抗體分子。 2.載體 本文提供含有編碼抗RSV抗體或其抗原結合片段之一 或多種核酸（編碼重鏈及輕鏈）的載體。—般，編碼抗體 187 !； 201201839 重鏈之核酸選殖至載體中且編碼抗體輕鏈之核酸亦選殖至 該載體中。該等基因可選殖至單一載體中以使其雙重表 現，或選殖至各別載體中。必要時，載體亦可含有編碼其 他恆定區或鉸鏈區以產生其他抗體形式之其他序列。 許多表現載體可購得且為熟習此項技術者所已知，並 可用於多肽表現。表現載體之選擇將受宿主表現系統之選 擇影響。該選擇完全在熟練技術人員之技術水準範圍内。 一般而言，表現載體可包括轉錄啟動子及視情況存在之增 強子、轉澤信號及轉錄與轉譯終止信號。用於穩定轉型之 表現載體典型地具有允許選擇及維持經轉型細胞之可選擇 標記物。在一些情況下’複製起點可用於在細胞内擴增一 定複本數目之載體。 載體亦可含有可操作地連接於接合核酸分子之其他核 苷酸序列，例如抗原決定基標籤，諸如用於定位之標籤（例 如/、his彳示鐵或myc標籤），或用於純化之標籤（例如gst 融合物）’及用於導引蛋白質分泌及/或膜締合之序列。 抗體或其抗原結合片段之表現可由此項技術中已知之 任何啟動子/增強子控制❶適合之細菌啟動子為此項技術所 熟知且在下文予以描述。其他適合於哺乳動物細胞、酵母 細胞及昆蟲細胞之啟動子為此項技術所熟知且下文例示一 些啟動子。用於直接表現異源核酸之啟動子的選擇視特定 應用而定且在熟練技術人員之技術水準範圍内。可使用之 啟動子包括（但不限於）含有SV40早期啟動子之真核表現 載體（Bernoist 及 Chambon，（1981) iVaiwre 2列:304-310)、 188 201201839 勞斯肉瘤病毒（Rous sarcoma virus )之3'長末端重複序列 中所含的啟動子 （Yamamoto 等人 (1980) Cell 22:787-797 )、疱疹胸苷激酶啟動子（ Wagner等人，（1981) i 尸roc. iW"/. Jcai 75:1441-1445 )、金屬硫蛋白基因 之調節序列（Brinster 等人，（1982) iVaii/re 2P<5:39-42);雇 核表現載體，諸如/3-内醯胺酶啟動子（jay等人，（1981) &5543 )或 tac 啟動子（DeBoer 等人， (1983)尸roc. Λ^ί/. dcai/· C/M 仰:21-25 ;亦參見「Useful Proteins from Recombinant Bacteria」：Scientific American W:79-94 (1980));含有胭脂鹼合成酶啟動子 (Herrera-Estrella 等人，（1984) 303:209-213 )或花椰 菜嵌紋病毒35S RNA啟動子（Gardner等人，（198 1) iVwc/eic
Zcz·心及es. 9:287 1 )及光合成酶二碗酸核酮糖·緩酶之啟動子 (Herrera-Estrella 等人，（1984) 仏〜3/0:115-120)之植物 表現載體；來自酵母及其他真菌之啟動子元件（諸如Gai4 啟動子）、醇去虱酶啟動子、填酸甘油激酶啟動子、驗性麟 酸酶啟動子及展現組織特異性且已用於轉殖基因動物中之 以下動物轉錄控制區：彈性蛋白酶I基因控制區，其在胰臟 腺泡細胞中具有活性（Swift等人，（1984) Ce// 35:639-646 ; Omitz 專人，{\9名6、Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol, 50:399-409 ; MacDonald，（1987)价叫0/0容少 7:425-5 15 );胰 島素基因控制區，其在胰臟冷細胞中具有活性（Hanahan等 人，（1985) 37 5:115-122);免疫球蛋白基因控制區， 其在淋巴樣細胞中具有活性（Grossche(n等人，（1984) Ce" 189 201201839 35:647-658 ； Adams f Λ, (1985) Nature 3/5:533-538 ；
Alexander 等人，（1987) Mo/. Ce// 5沁/. 7:1436-1444);小鼠 乳房腫瘤病毒控制區，其在睾丸 '乳房、淋巴樣細胞及肥 大細胞中具有活性（Leder等人，（1986) Ce// 0:485-495 ); 白蛋白基因控制區，其在肝臟中具有活性（pinckert等人， (1987) 7:268-276 ) ; α 胎蛋白基因控制區， 其在肝臟中具有活性（Krumlauf等人，（1985)Mo/. Ce//. &<?/ 5:163 9-403 ； Hammer % A, (1987) Science 255:5 3-5 8 ) ； α-1 抗胰蛋白酶基因控制區，其在肝臟中具有活性（Kelsey等 人，（1987) Gmw ⑽d Deve/. 7:161-171 ) ; /3 球蛋白基因控制 區’其在骨髓細胞中具有活性（Magram等人，（1985) 3/5.338-340 , Kollias 等人，（1986) Ce// 46:89-94);髓勒驗 性蛋白基因控制區，其在腦部募樹突神經膠質細胞中具有 活性（Readhead 等人，（1987) CW/ 45:703-712 );肌凝蛋白 輕鏈-2基因控制區，其在骨骼肌中具有活性（Shani 〇985) 30:283-286 );及性腺釋素基因控制區，其在下視丘 之激性腺素分泌細胞中具有活性（Mason等人，（1986) •SWewce 254:1372-1378 )。 除啟動子外，表現載體典型地亦含有轉錄單元或表現 卡匣，其含有在宿主細胞中表現抗體或其一部分所需之所 有其他元件《典型表現卡匣含有可操作地連接於編碼抗體 鏈之核酸序列之啟動子及有效聚腺苷酸化轉錄物所需之信 號、核糖體結合部位及轉譯終止序列❹卡匣之其他元件可 包括增強子。另外’卡匣典型地含有位於結構基因下游之 190 201201839 轉錄終止區以使得有效終止。終止區可自與啟動子序列相 同之基因獲得’或可自不同基因獲得。 a些表現系統具有提供基因擴增之標記物，諸如胸普 激酶及二氫葉酸還原酶。或者’不涉及基因擴增之高產率 表現系統㈣合’諸如在昆蟲細胞中使用桿狀病毒載體， 其具有在多角體蛋白啟動子或其他強桿狀病毒啟動子指導 下編碼生殖系抗體鏈之核酸序列。 ;本文之目的，&供含有編碼抗RSV抗體之重鏈及/ 或輕鏈可變區之核芽酸序列的载體。在—些實例中，本文 所提供之載體含有可操作地連接於編碼抗體可變區之核酸 序歹j的編碼抗體恒定區之才玄芽酸序歹q。載體可包括針對 cm、CH2、鉸鏈、CH3或CH4及/或cl中之一者或全部 的序列 般，諸如為表現Fab，載體含有針對CH1或 “或λ #鏈）之序列。怪定區或鉸鏈區之序列為熟習此項 货者所已知（參見例如美國公開巾請案第細⑼248028 號）且在本文中描述。 可使用熟習此項技術者已知用於將DNA片段插入載體 中之任何方法來構築含有編碼本文所提供之抗體或其抗原 結合片段之核酸的表現載體。此等方法可包括試管^重組 DNA及合成技術及活體内重組（遺傳重組）。插入選殖載體 中可例如藉由將DNA片段接合於具有互補黏性末端之選殖 載體中來完成。若用於將DNA分段之互補限切位點不存在 二選殖載體中，則DNA分子之末端可以酶方法進行修飾。 或者，任何所需部位均可藉由將核苷酸序列（連接子）接 191 201201839 合於DNA末端上來產生，·此蓉垃入♦、去祕7 此寺接合之連接子可含有編碼限 制性核__識別序列之特定化學合成核酸。 適用於產生本文所提供之抗體或抗原結合片段的例示 性質體載體含有強啟動子’諸如HCMV即刻早期增強子/啟 動子或MHC第I型啟動子；增強轉錄物加工之内含子，諸 如HCMV即刻早期基因内含子A ;及聚腺芽酸化（p〇iyA) 信號，諸如晚期SV4Gp()lyA信號。質體可為多順反子以使 得能夠表現抗體之全長重鏈及輕鏈、單鏈Fv片段或其他免 疫球蛋白片段。 3 ·細胞表現系統 編碼本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段的核 酸可在適合之宿主中表現。提供含有載體及編碼本文所提 供之抗RS V抗體或其抗原結合片段之核酸的細胞。一般， 可經工程改造以表現異源DNA且具有分泌性路徑之任何細 胞類塑均為適合的。表現宿主包括原核及真核生物，諸如 細菌細胞（例如大腸桿菌）、酵母細胞、真菌細胞、古細菌 (Archae )、植物細胞、昆蟲細胞及動物細胞（包括人類細 胞）。表現宿主可在其蛋白質產生含量以及存在於所表現蛋 白質上之轉譯後修飾的類型方面不同。此外，表現宿主之 選擇通常與所用之載體及轉錄與轉譯元件的選擇有關。舉 例而言’表現宿主之選擇通常（但不總是）視所用前驅序 列之選擇而定。舉例而言，許多異源信號序列僅可在相同 物種之宿主細胞中表現（亦即，昆蟲細胞信號序列最佳在 昆蟲細胞中表現）。相比之下，其他信號序列可用於異源宿 192 201201839 主中’例如在酵母、昆蟲或哺乳動物宿主細胞中正常工作 之人類血清白蛋白（hHSA)信號序列，及已證明在昆蟲及 哺乳動物細胞中具有功能之組織血纖維蛋白溶酶原活化劑 刖/原序列（Tan等人，（2002)尸ro/eh 5叹· 15:337 )。可基於 諸如規章及安全考慮、生產成本及純化需要及方法之此等 及其他因素來選擇表現宿主。因此，載體系統必須與所用 宿主細胞相容。 在真核生物宿主中之表現可包括在以下中之表現：酵 母’諸如釀酒酵母（心)及甲醇酵母 (Pzc/πα pizwoA);昆蟲細胞，諸如果蠅（乃心叩細 胞及鱗翅目（)細胞；植物及植物細胞，諸如 菸草、玉米、水稻、藻類及浮萍。用於表現之真核細胞亦 包括哺乳動物細胞系，諸如中國倉鼠卵巢（chinese hamster ovary ’ CHO )細胞或幼倉鼠腎（baby hamster kidney，ΒΗΚ) 細胞。真核生物表現宿主亦包括在轉殖基因動物中產生， 例如包括在血清、乳汁及卵中產生。 重組分子可經由例如轉型、轉染、感染、電穿孔及音 波穿孔而引入宿主細胞中，以使得產生基因序列之許多複 本。一般，使用標準轉染方法產生表現大量抗體鏈之細菌、 哺乳動物、酵母或昆蟲細胞系，接著使用標準技術加以純 化（參見例如 Colley 等人（1989) J. Ao/. CAem.， 264:17619-17622 ； Guide to Protein Purification, Methods in Enzymology，第 182 卷（Deutscher 編），1990 )。根據標準技 術進行真核細胞及原核細胞之轉型（參見例如M〇rris〇n 193 201201839 (1977) 乂 5aci. 132:349-351 ; Clark-Curtiss 及 Curtiss (1983) h 少，1〇1，347-362 )。舉例而言，可使用 將外來核苷酸序列引入宿主細胞中之任一熟知程序。此等 程序包括使用磷酸鈣轉染、凝聚胺、原生質體融合、電穿 孔、基因搶法、脂質體、顯微注射、血漿載體、病毒載體 (例如桿狀病毒、痘瘡病毒、腺病毒及其他病毒）及將經選 殖基因組DNA、cDNA、質體DNA '黏質體DNA、合成DNA 或其他外來遺傳物質引入宿主細胞中之任何其他熟知方 法。 一般，出於本文之目的’用至少編碼抗RSV抗體之vH 鏈或重鏈的第一載體及至少編碼抗RSV抗體之VL鏈或輕鏈 的第二載體轉染宿主細胞。宿主細胞亦可用編碼重鏈與輕 鏈或其一部分之單一載體轉染。 在一實例中，編碼抗體重鏈之核酸接合於第一表現載 體中且編碼抗體輕鏈之核酸接合於第二表現載體中。表現 載體可相同或不同，但一般其具有足夠相容性以允許其類 似地表現蛋白質（重鏈及輕鏈第一及第二表現載體一般 共轉染於宿主細胞中，典型地比率為1:丨。例示性載體包括 (但不限於）p7lHC 及 p/cLC ( Tiller 等人（2〇〇8) Journal of Immunological Methods，329:1 12-24)。其他表現載體包括 L 鏈表現載體PAG4622及重鏈表現載體paH4604( Coloma等 人（1992) J Immunol. Methods，152:89-104)。pAG4622 載 體含有編碼人類/c L鍵之C區域的基因組序列及gpt可選擇 標記物。PAH4604載體含有hisD可選擇標記物及編碼人類 194 201201839 Η鏈γΐ C區域之序列。
在另-實例中，重鏈及輕鏈可選殖至具有用於重鍵斑 輕鏈之表現卡㈣單一載體中。在一實例中，編碼重链及 輕鏈之基因可選殖至哺乳動物表現載體ρττ5 ( MM
Bl〇techn〇logy Research) +。在另—實例巾編碼重鍵及 輕鍵或其一部分之基因可選殖至ηΓΙ Δ τ ^ ^ PCALM (SEQ IDN〇：1〇2) 中。 為表現全長Ig，編碼Vh_Ch1省鍵之序列可 選殖至第一表現載體中且編碼Vl_Cl域之序列可選瘦至第 二表現載體中。為產生Fab，編碼Vh_Ch1之序列可選殖至 第-表現载體中且編碼Vl_Cl域之序列可選殖至第二表現 載體中。對於習知抗體，產生含輕鏈及㈣單體之重鍵對。 表現可在熟習此項技術者已知之任何細胞表現系統中 進行。用於表現之例示性細胞包括（但不限於）29奶細胞、 紐293-紐細胞或CH〇細胞。下文描述其他表現_及胃 主細胞。表現時’抗體重鏈與輕鏈由二硫鍵配對以形成全 長抗體或其片段。 a.原核表現 原核生物（尤其大腸桿菌）提供產生大量蛋白質之系 統且可⑽表現所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段。 典型地，使用大腸捍菌宿主細胞來擴增及表現所提供之變 異多肽。大腸桿菌之轉型為熟習此項技術者所熟知之簡單 且快速技術。針對大腸桿菌之表現載體可含有誘導性啟動 子’該纽動子適用於誘導高蛋白質表現量且適用於表現 195 201201839 對宿主細胞展現一些毒性之蛋白質。誘導性啟動子之實例 包括lac啟動子、trp啟動子、雜合tac啟動子、Τ7及SP6 RNA 啟動子以及溫度調節XPL啟動子。 蛋白質（諸如本文所提供之任何蛋白質）可在大腸桿 菌之細胞質環境中表現》對於一些多肽，細胞質環境會導 致形成含有蛋白質聚集體之不溶性包涵體。可使用諸如二 硫蘇糖醇及/3-巯基乙醇之還原劑及諸如胍鹽酸鹽及脲之變 性劑使蛋白質再溶解，隨後使可溶性蛋白質再摺疊。替代 方法為使蛋白質在細菌周質間隙中表現，該間隙提供氧化 環i兄及伴侣蛋白樣及二硫鍵異構酶並可產生可溶性蛋白 質。舉例而言’對於蛋白質之噬菌體呈現，將蛋白質輸出 至周質以使得其可組裝成噬菌體。典型地，前導序列與待 表現之蛋白質融合，其將蛋白質導引至周質。接著由周質 内之信號肽酶移除前導序列。以周質為目標之前導序列的 實例包括來自果膠酸鹽解離酶基因之pelB前導序列及衍生 自驗性磷·酸g母基因之前導序列。在一些情況下，周質表現 使得所表現之蛋白質洩漏至培養基中。蛋白質之分泌允許 自培養物上清液快速且簡單地純化。未分泌之蛋白質可藉 由滲透溶解自周質獲得。類似於細胞質表現，在一些情況 下，蛋白質可變成不溶性的且可使用變性劑及還原劑促進 溶解及再摺疊。誘導及生長之溫度亦可影響表現量及溶解 性，典型地使用介於25。(：與37〇C之間的溫度，典型地，細 菌產生非糖基化蛋白質。因此、若蛋白質之功能需要糖基 化，則糖基化可在自宿主細胞純化後在試管内添加。 196 201201839 b.酵母細胞 諸如釀酒酵母、粟酒裂殖酵母（ /?〇7wZ>e )、解脂耶氏酵母（y^rrc)VW’a如吻")、乳酸刻魯維 酵母（打/此沿）及甲醇酵母之酵母為可用於表 現本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段的熟知酵母 表現宿主。酵母可用游離型複製載體來轉型或藉由經同源 重組進行穩定染色體整合來轉型。典型地，使用誘導性啟 動子調節基因表現。該等啟動子之實例包括GAL1、GAL7 及GAL5以及金屬硫蛋白啟動子，諸如cupi、Α〇χι或其 他畢赤酵母（Pic/ni)或其他酵母啟動子。表現載體通常包 括用於選擇及維持經轉型DNA之可選擇標記物，諸如 LEU2、TRP1、HIS3及URA3 »在酵母中表現之蛋白質通常 為可溶性的。與諸如Bip及蛋白質：硫鍵異構酶之伴侣蛋白 共表現可改良表現量及溶解性H㈣母巾表現之蛋 白質可經導引使用分泌信號肽融合物（諸如來自釀酒酵母 之酵母配合型1-因子分泌信號）及與酵母細胞表面蛋白質 形成之融合物（諸如Aga2p配合黏著受體或^^ —葡糖殿粉酶）進行分泌。蛋白酶裂解部位（諸 如用於Kex-2蛋白酶之裂組邶μ、 聚解°MlL)可經工寿呈改造以當所表 現之多肽離開分泌路徑時自該等多肽移除融合序列。酵母 亦能夠在Asn-X-Ser/Thr基元處進行糖基化。 c.昆蟲細胞 可用於表現本文 昆蟲細胞表現高 昆蟲細胞（尤其使用桿狀病毒表現） 所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段。 197 201201839 含量之蛋白質且能夠由高級真核生物使用大部分轉譯後修 飾。桿狀病毒具有有限宿主範圍，其改良真核表現之安全 性且降低調節困擾。典型表現載體使用啟動子進行高水準 表現，諸如桿狀病毒之多角體蛋白啟動子。常用桿狀病毒 系統包括桿狀病毒’諸如苜蓿銀紋夜蛾核多角體病病毒 (AutograPha californica nuclear polyhedrosis virus. AcNPV) 及家蠶核多角體病病毒（赚z· nuclear p〇iyhedr〇sis virus，BmNPV )，及昆蟲細胞系，諸如來源於草地黏蟲 (Spodoptera frugiperda)之 Sf9、美州黏氬 unipuncta) (A7S)反黑脈金斑蝶（Danaus pUxippus) (DpN 1 )。為進行尚水準表現，將待表現分子之核苷酸序列 立即融合於病毒之多角體蛋白起始密碼子之下游。為產生 能夠表現人類抗體之桿狀病毒重組體’利用雙重表現轉 移’諸如pAcUW5 1 ( PharMingen )。哺乳動物分泌信號準確 地在昆蟲細胞中加工且可用於將所表現之蛋白質分泌至培 養基中。另外，細胞系美州黏蟲（A7S)及黑脈金斑蝶（DpNl ) 產生具有類似於哺乳動物細胞系統之糖基化模式的蛋白 質。 昆蟲細胞中之替代性表現系統係使用穩定轉型之細 胞。諸如Schnieder 2( S2 )及Kc細胞（黑腹果繩（Prosop/n/fl 及 C7 細胞（白紋，伊蚊a/h/n'ciwi·)) 之細胞系可用於表現。可在鎘或銅之重金屬誘導存在下使 用果蠅金屬硫蛋白啟動子來誘導高表現量。表現載體典型 地藉由使用諸如新黴素及潮黴素之可選擇標記物來維持。 198 201201839 用於表現抗體之例示性桿狀病毒載體為雙順反子載體 pAc-/c-Fc ( Progen，Biotechnik ;目錄號 pR3〇〇1 pAc X Fc (Progen ; PR3003 ) ; pAc-K-CH3 ( pr0gen ; PR3〇〇〇 )及 pAc-X-CH3 ( Progen ; PR3002 )。 d.哺乳動物細胞 可使用哺乳動物表現系統表現本文所提供之抗RSV抗 體或其抗原結合片段。表現構築體可藉由諸如（但不限於） 腺病毒或痘瘡病毒之病毒感染，或藉由諸如脂質體、填酸 約、DEAE-葡聚糖之直接DNA轉移及藉由諸如電穿孔及顯 微注射之物理方式轉移至哺乳動物細胞中。用於哺乳動物 細胞之表現載體典型地包括mRNA帽部位、TATA框、轉譯 起始序列（Kozak共同序列）及聚腺苷酸化元件。該等載體 通常包括用於高水準表現之轉錄啟動子-增強子，例如SV4〇 啟動子-增強子、人類細胞巨大病毒（human cytomegalovirus，CMV )啟動子及勞斯肉瘤病毒之長末端重 複序列。此等啟動子-增強子在許多細胞類型中具有活性。 組織及細胞型啟動子及增強子區亦可用於表現。例示性啟 動子/增強子區包括（但不限於）來自諸如以下之基因的區 域.彈性蛋白酶I、胰島素、免疫球蛋白、小鼠乳房腫瘤病 f、白蛋白、α胎蛋白、α1抗胰蛋白酶、0球蛋白、髓鞘鹼 性蛋白、肌凝蛋白輕鏈2及性腺釋素基因控制序列。可使 用可選擇標記物選擇及維持含表現構築體之細胞。可選擇 軚β己基因之實例包括（但不限於）潮黴素β磷酸轉移酶、 腺苷去胺酶、黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶、胺基糖苷磷 199 201201839 酸轉移酶、二氫葉酸還原酶及胸苷激酶。可使用NEOR/G41 8 系統、二氫葉酸還原酶（DHFR)系統或麩醯胺酸合成酶（GS ) 系統產生抗體》GS系統使用聯合表現載體，諸如 pEE 12/pEE6，以表現重鏈與輕鏈。與細胞表面信號傳導分 子形成之融合物（諸如TCR-f及FceRI-γ)可導引蛋白質以 活性狀態在細胞表面上表現。 許多細胞系可用於哺乳動物表現，包括小鼠、大鼠、 人類、猴、雞及倉鼠細胞。例示性細胞系包括（但不限於） CHO、Balb/3T3、BHK、海拉（HeLa)、MDCK、MT2、小 鼠NS0 (非分泌）及其他骨髓瘤細胞系、融合瘤及異源融合 瘤（heterohybridoma )細胞系、淋巴細胞、纖維母細胞、 Sp2/0、COS、NIH3T3、HEK293、W138、BT483、HS578T、 HTB2、BT20、T47D、293S、2B8 及 HKB 細胞。細胞系亦 可購得，適合於有助於自細胞培養基純化分泌性蛋白質之 無血清培養基。一種該實例為無血清EBNA-1細胞系（Pham 等人（2003) 84:332-42 ) 〇 用於表現抗體之例示性哺乳動物載體包括pTT5 ( NRC Biotechnology Research Institute)及 pCALM (如 SEQ ID NO:102 所示）。 e.植物 轉殖基因植物細胞及植物可表現多肽，諸如本文所述 之任何多肽。典型地使用直接DNA轉移（諸如微彈轟擊及 PEG介導轉移至原生質體中）及結合農桿菌介導之轉型將 表現構築體轉移至植物中。表現載體可包括啟動子及增強 200 201201839 子序列、轉錄终止元^ 、疋件及轉譯控制元件。表現載體及轉型 技術通常在雙子筆始 a 卜 为估主（諸如齐菜屬（/raZn’i/opsb)及 3、草）與單子葉植物宿主（諸如玉米及水稻）t間分配。 用；表見之植物啟動子的實例包括花椰菜嵌紋病毒啟動 子、脑脂驗合成酿敌& γ 战姆啟動子、二磷酸核糖羧酶啟動子及泛素 與UBQ3啟動子。诵杳 ^ 卞通*使用諸如潮黴素、磷酸甘露糖異構 酶及新黴素鱗^轉移酶之可選擇標記物來促進經轉型細胞 之k擇及、♦持。經轉型植物細胞可以細胞、聚集體（愈傷 組織）I式維持於培養物中或再生為完整植物。轉殖基因 植物細胞’亦可包括經工程& S以產纟蛋白酶或經修飾之蛋 白酶的藻類（參見例如Mayfield等人（屬3) p卿剔 h㈣100:438-442)。因為植物具有與哺乳動物細胞不同 的糖基化模式，所以此可影f此等宿主中所產生之蛋白質 的選擇。 4 ·抗趙之純化 自宿主細胞純化多肽（包括本文所提供之抗RSV抗體 或其抗原結合片段）之方法將視所選宿主細胞及表現系統 而疋。對於分泌之分子，一般在移除細胞後自培養基純化 蛋白質。對於細胞内表現，可溶解細胞且自萃取物純化蛋 白質。在一實例中，藉由離心及細胞溶解（例如藉由在乾 冰/乙醇浴中重複凍融），隨後離心並保留含有多肽之上清液 而自伤主細胞分離多肽。當諸如轉殖基因植物及動物之轉 殖基因生物體用於表現時，可使用組織或器官作為起始物 質來製備溶解之細胞提取物。另外，轉殖基因動物產生可 201201839 包括在可收集之乳汁或卵中產生多肽，且必要時可進一步 萃取蛋白質並進一步使用此項技術中之標準方法純化。 諸如本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段的蛋 白質可使用此項技術中已知之標準蛋白質純化技術，例如 自溶解之細胞提取物純化，該等技術包括（但不限於） SDS-PAGE、尺寸分級及尺寸排除層析、硫酸銨沈澱及離子 交換層析（諸如陰離子交換）。亦可利用親和純化技術改良 製備之效率及純度》舉例而言，親和純化可使用結合蛋白 酶之抗體、受體及其他分子。表現構築體亦可經工程改造 以將親和標籤（諸如myc抗原決定基、GST融合物或His6 ) 添加至蛋白質上並分別用myC抗體、麵胱甘肽樹脂及_ 樹脂進行親和純化。純度可藉由此項技術中已知之任何方 法進行評估，包括凝膠電泳及染色以及分光光度技術。 典型地，藉由熟習此項技術者已知之任何程序純化抗 體及其部分。可使用此項技術中已知之標準蛋白質純化技 術將抗體純化至實質純度，該等技術包括（但不限於） SDS-PAGE、尺寸分級及尺寸排除層析 '硫酸銨沈澱、螯合 物層析、離子交換層析或管柱層析。舉例而言，可藉由管 柱層析純化抗體。純化抗體之例示性方法為使用管柱層 析’其中固體支撐物管柱材料連接於蛋白G (來自鏈球菌 ()之細胞表面相關蛋白），其以高親和力結合 免疫球蛋白。抗體可純化至60%、70%、80%純度且典型地 為至少 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、
98%或99%純度。純度可藉由標準方法，諸如藉由SDSpA(}E 202 201201839 及庫馬斯染色（coomassie staining )來評估。 接著可例如藉由在凝膠（例如SDS-PAGE凝膠）上分 離、尺寸分級（例如在 Sephacryl™ s - 200 HiPrepTM 16x60 尺寸排除管柱（Amersham，來自 GE Healthcare Life Sciences, Piscataway，NJ )上分離）來分析分離之多肽。分離之多肽 亦可在結合檢定中進行分析，典型地為使用結合於固體支 撐物（例如結合於培養板（例如基於ELISA之結合檢定） 或珠粒）之結合搭配物測定其結合所需結合搭配物之能力 的結合檢定。以下部分所述之結合檢定係用於評估呈現多 肽之沈殿噬菌體的結合，亦可用於評估直接自宿主細胞溶 解物分離之多肽。舉例而言，可進行結合檢定以判定抗體 多肽是否結合於一或多個抗原，例如藉由將抗原塗佈於固 體支撐物（諸如檢定培養板之孔）上並在該固體支撐物上 培育分離之多肽，隨後洗滌及用第二試劑（例如標記酶之 抗體及受質）偵測來進行判定。 G.評估抗RSV抗鱧性質及活性 本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段可以熟習· 此項技術者熟知之各種方式進行特性化。舉例而言，可檢 定本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段免疫特異性 結t於人呼吸道融合性病毒（RSV)之F蛋白的能力。該等 檢定可如下進行：例如在溶液中（例如Houghten (1992) ⑽/加吻⑽13:412_421 )、在珠粒上（Lam (i99i) _請 354:82_84)、在晶片上（F〇d〇r (1993) 364:555_556 )、 在細菌上（美國專利第5,223,409號）、在孢子上（美國專 203 201201839 利第 5,571，698 號；第 5,403,484 號；及第 5,223,409 號）、 在質體上（Cull 等人（1992) 々以.Scz·. t/以 89:1865-1869 )或在噬菌體上（Scott 及 Smith (1990) Science 249:386-390 ； Devlin (1990) Science 249:404-406 ； Cwirla 等人（1990) Proc. Jew. Scz·· C/M 87:6378-6382 ;及 Felici (1991) J. Mo/•別〇/. 222:301-310 )。亦可檢定已鑑別 出免疫特異性結合於RSV抗原或其片段之抗體或其抗原結 合片段對於RSV抗原之特異性及親和力。結合特異性或抗 原決定基可例如藉由與其他抗RSV抗體之競爭檢定及/或使 用單株抗體抗性突變體（MARM)之病毒中和檢定來測定。 另外’使用本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段的 試管内檢定及活體内動物模型可用於量測藉由接觸或投予 抗RSV抗體或其抗原結合片段實現之RSv中和程度。 1 ·結合檢定 可藉由熟習此項技術者已知之任何方法來評估本文所 提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段結合所選目標（例如 RSV病毒或分離之RSV F蛋白）之能力及對於該等目標之 特異性。例示性檢定在實施例中提供並在下文予以描=。 結合檢定可在溶液、懸浮液中或在固體支撐物上進行。兴 例而言，目標抗原可固定於固體支撐物（例如碳或塑膠： 明、組織培養皿或晶片）上並與抗體或其抗原結合片^ ::可洗蘇除去未結合之抗體或目標蛋白質且接著可：測 〜之複合物。結合檢定可在降低非特異性結合之條 進行，諸如使用含非離子性清潔劑（例如〇 i% ⑽ 204 201201839 . 或Tween 20)及/或阻斷蛋白質（例如牛血清白蛋白或明膠） . 之尚離子濃度缓衝液（例如0.3-0.4 M NaCl )。陰性對照組 亦可作為背景結合之量測而包括在該等檢定中。結合親和 力可使用Scatchard分析（Muftson等人，（1980)4似/· 107:220 )、表面電漿子共振、等溫熱量測定或熟 習此項技術者已知之其他方法來測定。 可用於分析免疫特異性結合及交叉反應性之例示性免 疫檢定包括（但不限於）使用諸如（但不限於）以下技術 之競爭性及非競爭性檢定系統：西方墨點法、放射免疫檢 疋41^18八（酶聯免疫吸附檢定）、心8〇8(；山1：)丨8(；(^1^(则1：)， Gaithersburg，Maryiand)、r夾層」免疫檢定、免疫沈澱檢定、 ELISPOT、沈澱素反應、凝膠擴散沈澱素反應、免疫擴散檢 疋、凝集檢定、補體固定檢定、免疫放射檢定、螢光免疫 檢疋、蛋白A免疫檢定。該等檢定為常規檢定且為此項技 術所熟知（參見例如Ausubel等人編，1994，Current Protocols in Molecuiar Biology，第 j 卷，J〇hn WUey & s〇ns 公司，New Y0rk ’其以全文引用的方式併入本文中）。其他 檢定格式包括脂質體免疫檢定（LIA),其使用設計成結合 特異性分子（例如抗體）且釋放經囊封之試劑或標記物的 脂質體。接箸根據標準技術偵測所釋放之化學物質（參見
Monroe .專人 ’（1986) J㈣r. C7i«. ZVoiZ. 5:34-41 )。下文 簡單地描述不欲有所限制之例示性免疫檢定。 免疫沈殿方案一般涉及在諸如補充有蛋白質磷酸酶及/ 或蛋白酶抑制劑（例如£DTA、PMSF、抑蛋白酶肽、釩酸 205 201201839 納）之 RIPA 緩衝液（1% NP_4〇 或 Trit〇n χ·1〇〇、1%去氧 膽酸鈉、0.1% SDS、0.15 M NaC卜 0.01 Μ 磷酸鈉（pH 7.2 )、 1 %抑肽酶（Trasylol ))的溶解緩衝液中溶解細胞群體，將 所關注之抗體或其抗原結合片段添加至細胞溶解物中，在 40 C下培育一段時間（例如！至4小時），將蛋白A及/或蛋 白G瓊脂糖珠粒添加至細胞溶解物中，在4(^c下培育約一 小時或更長時間，用溶解緩衝液洗滌珠粒及使該等珠粒再 懸浮於SDS/樣品緩衝液令。所關注之抗體或其抗原結合片 段使特疋抗原免疫沈澱之能力可藉由例如西方墨點分析來 評估。熟習此項技術者對可經調節以增加抗體或其抗原結 合片段與抗原之結合並降低背景（例如用瓊脂糖珠粒預清 除細胞溶解物）之參數瞭如指掌。關於免疫沈澱方案之進 一步纣論，參見例如Ausubel等人編，1994，以爪加 Protocols in Molecular Biology，第 i 卷，J〇hnWUey&s〇ns 公司，New York, 10.16.1。 西方墨點、分析一般涉及製備蛋白質樣品，在聚丙烯醯 胺凝膠（例如8%-20〇/〇SDS-PAGE，視抗原分子量而定）中 進行蛋白質樣品電泳，將蛋白質樣品自聚丙稀醯胺凝膠轉 移至膜（諸如石肖基纖維素、PVDF或耐綸），用阻斷溶液（例 如含3 % B S A或脫脂乳之p B s )阻斷該膜，用洗滌緩衝液（例 如PBS-Tween 20)洗滌膜，用經阻斷緩衝液稀釋之初級抗 體或其抗原結合片段（亦即所關注之抗體或其抗原結合片 段）阻斷膜’用H緩衝液洗務膜，用 '經阻斷緩衝液稀釋 之與酶受質（例如辣根過氧化酶或鹼性磷酸酶）或放射性 206 201201839 分子（例如32p或125ι)結合之二級抗體（其識別初級抗體， 例如抗人類抗體）阻斷膜，用洗滌緩衝液洗滌臈及彳貞測抗 原之存在。熟習此項技術者對可經調節以增加彳貞測到之_ 號並降低背景雜訊的參數瞭如指掌。關於西方墨點方宰之 進一步討論，參見例如Ausubel等人編’ i994
Protocols in Molecular Biology，第 1 卷，j〇hn Wiley&S(ms 公司，New York，10.8.1。 ELISA涉及製備抗原，用抗原塗佈96孔微量滴定板之 孔’將與可谓測化合物（諸如酶受質（例如辣根過氧化酶 或鹼性磷酸酶））結合之所關注之抗體或其抗原結合片段添 加至孔中並培育一段時間，及偵測抗原之存在。在elisa 中’所關注之抗體或其抗原結合片段無須與可偵測化合物 結合’實情為’可將與可偵測化合物結合之第二抗體（其 識別所關注之抗體）添加至孔中。此外，可將抗體塗佈^ 孔中而非用抗原塗佈孔。在此情況下，可在將所關注之抗 原添加至經塗佈之孔後添加與可偵測化合物結合之第二抗 體。熟習此項技術者對可經調節以增加偵測到之信號的參 數以及此項技術中已知之ELISA的其他變化瞭如指掌。關 於ELISA之進一步討論，參見例如Ausubel等人編，Η%， Current Protocols in Molecular Biology，第 i 卷，J〇hn wiiey & Sons公司，New York，n.2」。實施例5及8例示用於抗 RSV抗體與RSVF蛋白之結合的結合檢定。 抗體或其抗原結合片段與抗原之結合親和力及抗體-抗 原相互作用之解離速率可例如藉由競爭性結合檢定來測 207 201201839 疋。；％爭性結合檢定之一個實例為放射免疫檢定，包含在 遞增星之未經標記抗原存在下將經標記抗原（例如3h或 125ι)與所關注之抗體或其抗原結合片段一起培育，及偵測 結合於經標記抗原之抗體或其抗原結合片段。本文所提供 之抗RSV抗體或其抗原結合片段對於RSV抗原之親和力及 結合解離速率可由Scatchard曲線圖分析之資料測定。與第 二抗體之競爭亦可使用放射免疫檢定測定。在此情況下， 在遞增塁之未經標記第二抗體存在下，將RSV抗原與結合 經標記化合物（例如3h或125ι)之本文所提供之抗RSV抗 體或其抗原結合片段一起培育。在一些實例中，可使用表 面電漿子共振（例如 BiaCore 2000、Biacore AB、Upsala、
Sweden 及 GE Healthcare Life Sciences ; Malmqvist (2〇〇〇) 扪％㈣27:335 )動力學分析測定抗體或其抗原 結合片段與RSV抗原之結合締合及解離速率。表面電漿子 共振動力學分析涉及分析RSV抗原與表面上固定有抗體或 其片段之晶片的結合及解離。 亦可使用熟習此項技術者已知之技術檢定本文所提供 之杬RSV抗體或其抗原結合片段抑制RSV與其宿主細胞受 體之結合的能力。舉例而言，可在抗體或其抗原結合片段 存在或不存在下使表現rSv受體之細胞與RSv接觸，且抗 體或其片段抑制RSV結合之能力可藉由例如流動式細胞測 置術或閃爍檢定來量測。RSV (例如RSV抗原，諸如F醣 蛋白或G醣蛋白）或抗體或抗體片段可經可偵測化合物， 諸如放射性標記（例如32p、”s及〗251)或螢光標記°(例如 208 201201839 異硫氰酸螢光素、若丹明、藻紅素、藻藍蛋白、別藻藍蛋 白、鄰苯二甲醛及螢光胺）標記以能夠偵測RSV與其宿主 細胞受體之間的相互.作用。 抗體或其抗原結合片段抑制RSV結合於其受體之能力 亦可在無細胞檢定中測定。舉例而言，可使RSV或RSV抗 原（諸如F膽蛋白）與抗體或其片段接觸且可測定抗體或 抗體片段抑制RSV或RSV抗原結合於其宿主細胞受體之能 力。在一些實例中，將抗體或抗原結合片段固定於固體支 樓物上且用可偵測化合物標記RSV或RSV抗原。在一些實 例中，將RSV或RSV抗原固定於固體支撐物上且用可偵測 化合物標記抗體或其片段。RSV或RSv抗原可經部分或完 全純化（例如部分或完全不含其他多肽）或為細胞溶解物 之一部分。在一些實例中，RSV抗原可為包含RSV抗原及 域（諸如麩胱甘肽轉移酶）之融合蛋白。在一些實例中， RSV抗原可使用熟習此項技術者所熟知之技術進行生物素 標δ己（例如生物素標記套組，pierce chemicals ; Rockford， 111.)。 2 ·結合特異性 本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段的結合特 異性或抗原決定基可藉由熟習此項技術者已知之任何檢定 來測定，包括（但不限於）表面電漿子共振檢定、競爭檢 定及使用單株抗體抗性突變體（MARM )之病毒中和檢定。 抗原決定基可在分離之蛋白質（亦即分離之F蛋白）中戋 在病毒蛋白質十。兩種抗體結合於相同抗原決定基之能力 209 201201839 可藉由此項技術中已知之檢定來測定，例如表面電聚子共 振檢定及抗體競¥*檢定。典型地，免疫特.異性結合於相同 抗原決定基之抗體可競爭結合於該抗原決定基，其可例如 藉由試管内結合競爭檢定（例如競爭ELISA)使用此項技 術已知之技術來量測。典型地，免疫特異性結合於與第二 抗體相同之抗原決定基的第一抗體可以約3〇%、35%、40%、 45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、 95〇/〇、1〇〇% 或 30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、 65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、1 〇〇%競爭結合 於抗原決定基，其中競爭百分比為所量測的第二抗體替代 第一抗體結合於抗原決定基之能力。在例示性競爭檢定 中，在經標記抗體之預定限制稀釋液（例如5〇_7〇%飽和濃 度）及未經標記競爭抗體之連續稀釋液存在下培肓抗原。 藉由在競爭抗體存在下量測經標記抗體與抗原之結合的任 何結合降低來測定競爭。該等檢定之變化形式為此^技術 所已知，包括各種標記技術及偵測方法，包括例如放射量 測、螢光、酶及比色偵測。舉例而言，如下文實施例〖〇中 所例示，抗體30D8及莫維珠單抗並不競爭結合krsvf蛋 白，由此表明抗體30D8結合與莫維珠單抗不同的抗原決定 基。 第一抗體結合於與第二抗體相同之抗原決定基的能力 亦可例如藉由使用單株抗體抗性突變體（M A R m )之病毒中 和檢定來測定。MARM為突變呼吸道融合性病# (rJ·)， 其不被中和野生型RSV病毒之單株抗體中和，亦即ΜΑ腿 210 201201839 為RSV逃避突變體。藉由在單株抗體存在下培養野生型 在抗體存在下經連續數輪病毒複製以使得在連續每一 輪病母複1後在遞增濃度之抗體存在下觀察到細胞病變效 應（CPE )直至產生不被抗體中和之突變病毒，來產生 MARM右第抗體可中和針對第二抗體所產生之财應， 則，人可推斷出抗體特異性結合於不同抗原決定基或與不 同抗原決定基相互作用。舉例而言，當第一抗rsv抗體中 和野生型RSV而非特定突變RSV (亦即MARM)時，中和 野生型RSV而非特定突變Rsv之第二抗體—般與第一抗體 結合相同的RSV上之抗原決定基。當第一抗RSV抗體中和 野生型RSV而非特定突變RSV時，中和野生型RSy及特 定犬變RSV之第二抗體一般並不與第一抗體結合相同的 RSV上之抗原決定基。 舉例而言’如下文實施例9中所例示，本文所提供之 5 8c5能夠中和先前針對各種抗RSv抗體所產生之MARM， 包括針對MAb 1129所產生之MARM 1129，MAb 1129為帕 利珠單抗及莫維珠單抗之親本抗體（參見J〇hnson等人 (1997) «/. /«/eci.识以似以^642^^224及美國專利第 5,824,307 號）；針對 Fab 19 所產生之 MARM 19(參見 Barbas 等人（1992) Proc. CAS4 89:10164-10168 ); 及針對MAb 15 1所產生之MARM 15 1 (參見Mufson等人， (1985) J. Gen_ Wro/，66:2111-2124)。因此，58c5 結合與抗 體Fab 19、MAb 151及MAb 1129不同的F蛋白上之抗原決 定基。 C： 211 201201839 如下文貫施例11中所例示，針對莫維珠單抗及IgG形 式之58c5 .產生MARM。與野生型RSV F蛋白相比，5 7輪 選擇後所產生之莫維珠單抗MARM含有單一胺基酸突變 (K272E，SEQ ID NO:486 )。胺基酸K272處之突變與破壞 莫維珠單抗之親本抗體之結合的已知突變一致（參見zha〇 等人，（2004) «/. 190:1941-1946 )。與野生 型RSV F蛋白相比，1〇輪選擇後所產生之58c5 MARM含 有3個胺基酸突變（N63K、M115K及E295G , SEQ m NO:487)。58c5 MARM中實現逃避之突變先前尚未鑑別為 免疫特異性結合於RSV F蛋白之各種單株抗體的抗原性部 位（參見例如 Beeler 等人（1989) J. Virology 63(7):2841-2950 ’ Crowe 等人（1998) Virology 151'm-vn Zh⑽蓴 k祕）J. infectious Disease 190:1941-1946 ; Liu 等人，（2007) ⑽/ 4:71 )。 在IgG形式之30D8存在下經12輪病毒複製後，RSV病毒 無法逃避中和（參見以下實施例丨丨 > 抗體3〇D8限制marm 產生之忐力意謂30D8結合於不易產生逃避突變體之抗原決 定基’且因此，抗體30D8適用作治療RSV感染之治療性 抗體。 另外’如下文實施例11中所示，30D8中和莫維珠單抗 MARM與58c5 MARM，58c5中和莫維珠單抗MARM，且莫 維珠單抗中和58c5 MARM。因此，30D8結合與58c5及莫 維珠單抗不同的RSV F蛋白之抗原決定基。另外，58c5結 合與30D8及莫維珠單抗不同的RSV F蛋白之抗原決定基❶ 212 201201839 3·用於分析抗體之病毒中和效應的試管内檢定 本文所提供之抗Rsv抗體或其抗原結合片段可藉由此 項技術中已知用於4貞測病毒中和之任何適合方法來分析。 偵測病毒中和之方法包括（但不限於）空斑檢定及針對抑 制融合體形成之檢定。5亥專檢定可用於評估例如病毒附著 之抑制、病毒進入及細胞間之病毒擴散（參見例如Burioni 等人，（1994) Proc. 91:355-359; Sanna 等人（2000) 叹少 270:386-3961;及 De Logu 等人，（1998) «7 Ch_n Micro6io/ 36:3198-3204) »熟習此項技術者可鑑別能 夠量測病毒中和之任何檢定。 標準空斑檢定包括例如空斑減少檢定、空斑尺寸減小 檢定、中和檢定及中和動力學檢定。此等檢定量測目標細 胞早層感染病毒後病毒空斑之形成（亦即經溶解細胞之面 積）。可用於空斑減少檢定中之例示性目標細胞系包括（但 不限於）Vero 細胞、MRC-5 細胞、RC-37 細胞、BHK-21/C13 細胞及HEp-2細胞。熟習此項技術者可鑑別用於空斑檢定 中之適當目標細胞系。用於空斑檢定之適當細胞系的選擇 可視已知因素而定，例如細胞感染力及病毒在目標細胞中 傳播及溶解目標細胞之能力。實施例6及9例示試管内中 和檢定。 空斑減少檢定可用於量測抗RSV抗體或其抗原結合片 段在溶液狀態下實現病毒中和之能力。在例示性空斑減少 檢定中，預培育抗體或其抗原結合片段及病毒，隨後添加 目標細胞。接著用抗體厂病毒混合物感染目標細胞且在預定 213 201201839 感染時段後進行空斑檢定。熟習此項技術者可基於此項技 術中之已知實例確定所需培育時間。感染目標細胞後所產 生之病毒空斑數目的減少指示抗體或其抗原結合片段防止 病毒結合於目標細胞之能力，其與抗體或其抗原結合片段 連接於目標細胞及/或抗體或其抗原結合片段（内化）無關。 空斑尺寸減小檢定可用於壹測抗RSV抗體或其抗原結 合片段抑制病毒在細胞間擴散之能力。在例示性空斑尺寸 減小檢定中，首先用病毒感染目標細胞持續預定感染時 段，接著將抗體或其抗原結合片段添加至受感染細胞中。 熟習此項技術者可基於此項技術中之已知實例確定所需培 育時間。病毒空斑之尺寸（亦即直徑）減小指示抗體或其 抗原結合片段能夠防止病毒在細胞間擴散。 病毒中和檢定可用於量測在病毒曝露之前抗RSv抗體 或其抗原結合片段在目標細胞表面上藉由抗體或其抗原結 合片段與目標細胞之締合來實現病毒中和之能力。在例示 性病毒中和檢定t ’預培育抗體或其抗原結合片段及目桿 細胞持續預定時間段以允許抗體或其抗原結合片段結合於 目標細胞。預培育時段後，移除未結合之抗體且用病毒感 染目標細胞。在此檢定中空斑數目之減少指示抗體或其抗 原結合片段預防病毒感染之能力’其視抗體或其抗原結合 片段連接於目標細胞及/或内化而定》此檢定亦可用於藉由 改變抗體或抗原結合片段濃度及預培育時間來量測中 力學。 抑制融合體形成之例示性檢定可用於當使用融合病毒 214 201201839 株時量測藉由阻斷融合體形成對病毒細胞病變效應之抗體 介導性抑制。熟習此項技術者可鑑別用於該檢定之適當融 合病毒株。 亦可使用熟習此項技術者已知之技術檢定本文所提供 之抗RSV抗體或其抗原結合片段抑制或調降RSV複製之能 力。舉例而言，可藉由空斑檢定來檢定RSV複製，諸如由 例如 iohnson 專 k (\99Ί) Journal of Infectious Diseases 176:1215-1224所述之檢定。亦可檢定本文所提供之抗RSV 抗體或其抗原結合片段抑制或調降RSV多肽表現之能力。 可使用包括（但不限於）西方墨點分析、北方墨點分析 (Northern blot analysis)及RT-PCR之熟習此項技術者已知 之技術量測RSV多肽之表現。 4.用於評估抗RSV抗體之功效的活體内動物模型 可使用動物模型進行活體内研究以評估本文所提供之 抗RSV抗體或其抗原結合片段的功效。可使用動物模型進 行活體内研究以評估投予該等抗體或其抗原結合片段之任 何毒性。熟習此項技術者可使用諸如使用活體内動物模型 之檢定的各種檢定來評估抗RSV抗體抑制或治療RSV病毒 感染之能力及檢定任何毒性。可使用病原性感染之動物模 型（包括病毒感染之動物模型）評估抗RSV抗體之治療效 應。該等動物模型為此項技術所已知，且包括（但不限於） 用於RSV感染之動物模型’諸如（但不限於）棉鼠、近親 繁殖小鼠、小牛、雪貂、倉鼠、天竺鼠、黑猩猩、梟猴、 恆河猴、非洲綠猴、卷尾猴、松鼠猴、帽猴、狒狒（關於
215 S 201201839 RSV感染之例示性模型’參見例如prince等人（1978) ^丄 ΡαίΑο/· 93.771-791，Prince 等人（1979) /«/eci. 26:764-766 ; Byrd 及 prince (1997) CHnical Infecti〇us Diseases 25:1363-1368，包括其中所列舉之參考文獻）。對 於抗體或抗原結合片段或組成物之毒性的活體内測試，可 使用此項技術中已知之任何動物模型系統，包括（但不限 於）大鼠、·小鼠、母牛、猴及兔。 5.用於量測抗體功效之試管内及活體内檢定 治療或預防病毒感染之功效可藉由偵測本文所提供之 抗RSV抗體或其抗原結合片段抑制病毒複製，抑制傳播或 防止病毒本身在其宿主内形成，降低RSV感染之發病率， 或預防、改善或減輕與RSV感染相關之一或多種症狀的能 力來證明。若在投予本文所提供之抗體或組成物後例如病 毒負荷減少、一或多種症狀改善、RSV感染之持續時間縮 短或死亡率及/或發病率降低，則該處理被視為治療性的。 此外，若在投予免疫特異性結合於一或多種RSV抗原之— 或多種抗體或其抗原結合片段後免疫反應增加，則該處理 被視為治療性的。 可試管内及活體内測試本文所提供之抗RSV抗體或其 抗原結合片段誘導細胞激素表現之能力，該等細胞激素諸 如 IFN_〇!、IFN-/3、IFN-γ、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、 IL-7、IL-8、IL-9、IL-10 ' IL-12 及 IL-15。可使用熟習此項 技術者已知之技術量測細胞激素之表現量。舉例而言，細 胞激素之表現量可藉由使用例如RT-PCR及北方墨點分析 216 201201839 來分析細胞激素之RNA含量，及藉由使用例如免疫沈澱 法、隨後西方墨點分析或ELISA來分析細胞激素含量而量 測。 可試管内及活體内測試本文所提供之抗RSV抗體或其 抗原結合片段調節免疫細胞之生物活性的能力，該等免疫 細胞包括人類免疫細胞（例如τ細胞、B細胞及自然殺手細 胞）。抗RSV抗體或抗原結合片段調節免疫細胞之生物活性 之能力可藉由偵測抗原之表現、偵測免疫細胞之增殖、偵 測信號傳導分子之活化、偵測免疫細胞之效應功能或偵測 免疫細胞之分化來評估。可使用熟f此項技術者已知之技 術量測此等活性。舉例而言，細胞增殖可藉由3H-胸苷併入 檢定及錐蟲藍細胞計數來檢定。抗原表現可例如藉由免疫 檢定來檢定，該等免疫檢定包括（但不限於）使用諸如以 下技術之競爭性及非競爭性檢定系統：西方墨點法、免疫 組織化學放射免疫檢定、ELISA (酶聯免疫吸附檢定）、「夾 層」免疫檢定、免疫沈澱檢定、沈澱素反應、凝膠擴散沈 澱素反應、免疫擴散檢定、凝集檢定、補體固定檢定、免 疫放射檢定、螢光免疫檢定、蛋白A免疫檢定及FACS分 析。信號傳導分子之活化可例如藉由激酶檢定及電泳位移 檢定（electrophoretic shift assay，EMSA )來檢定。 亦可在試管内、活體外及活體内檢定中測試本文所提 供之抗RSV抗體或其抗原結合片段抑制病毒複製或減少病 毒負荷之能力。亦可檢定抗RSV抗體或其抗原結合片段縮 短RSV感染時程之能力。亦可檢定抗RSV抗體或其抗原結 217 201201839 合片段使罹患RS V感染之人類的存活時段增加至少25 %或 約25%、至少50%或約50%、至少60%或約60%、至少75% 或約75%、至少85%或約85%、至少95%或約95%或至少 99%或約99%之能力。此外，可檢定抗RSV抗體或其抗原 結合片段使罹患RSV感染之人類的住院時段縮短至少6〇% 或約60%、至少75%或約75%、至少85%或約85% '至少 95%或約95%或至少99%或約99%之能力。可使用熟習此項 技術者已知之技術在活體内分析本文所提供之抗RSV抗體 或其抗原結合片段的功能。 根據本文所提供之方法及用途，為證明本文所提供之 抗RSV抗體或其抗原結合片段的防治性及/或治療性功效， 不必進行對於人類個體之臨床試驗。使用本文所提供之抗 RS V抗體或其抗原結合片段的試管内及動物模型研究可外 推於人類身上且足以證明抗rSV抗體或抗原結合片段之防 治性及/或治療性效用。 H· 診斷用途 本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段可用於偵 測、純化及/或中和RSV之診斷性檢定中。例示性診斷性檢 定包括RSV之試管内及活體内偵測。舉例而言，提供用於
疋性及定量量測分離之生物樣品（例如痰）中或活體内rSV 之含量的使用本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段 的檢定® 如本文所述’抗RSV抗體或其抗原結合片段可與可偵 測部分結合以進行試管内或活體内偵測。該等抗體可例如 218 201201839 .用於評估活體内部位（例如黏膜部位）處抗RSV抗體或其 •抗原結合片段的定位及/或持久性❶偶合於可偵測部分之抗 RSV抗體或其抗原結合片段可活體内藉由此項技術中已知 之任何適合方法來偵測◊亦可偵測分離之生物樣品（諸如 自投予抗體或其抗原結合片段之個體獲得之組織或流體樣 品）中的偶合於可偵測部分之抗RSV抗體或其抗原結合片 段。 1.病原性感染之試管内镇測 一般而言，可基於自個體或患者獲得之生物樣品（例 如血液、血清、痰、尿及/或其他適當細胞或組織）中一或 多種RSV蛋白及/或編碼該等蛋白質之聚核苷酸的存在來偵 測個體或患者體内之RSV。該等蛋白質可用作標記物以指 示個體或患者體内RSV之存在或不存在。本文所提供之抗 RSV抗體或其抗原結合片段可用於偵測生物樣品中結合於 藥劑之抗原及/或抗原決定基的含量。 一般技術者已知使用抗rsv抗體或其抗原結合片段偵 測樣品中之多肽標記物的各種檢定格式（參見例如Hari〇w and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring
Harbor Laboratory, 1988 )。一般而言，個體或患者體内RSV 之存在或不存在可藉由使自個體或患者獲得之生物樣品與 本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段接觸及偵測該 樣品中結合於抗RSV抗體或其抗原結合片段之多肽的含量 來判定。 在一些實例中，該檢定涉及使用固定於固體支撐物上 219 201201839 的本文所提供之抗rsv抗體或其抗原結合片段結合於目標 多肽及自樣品之剩餘部分移除目標多肽。接著可使用含有 信息基團（reporter group )且特異性結合於抗體/多肽複合 物之偵測劑偵測結合之多肽。該等偵測劑可含有例如特異 性結合於多肽或抗體之結合劑或特異性結合於結合劑之其 他藥劑。. 在一些實例中，在將抗RSV抗體或其抗原結合片段與 樣品一起培育後可使用競爭性檢定，其中用信息基團標記 多肽且使該多肽結合於經固定之抗rSV抗體或其抗原結合 片段。樣品之組分抑制經標記多肽與抗RSV抗體或其抗原 結合片段之結合的程度指示樣品與經固定之抗RSV抗體或 其抗原結合片段的反應性。適合用於該等檢定中之多肽包 括全長RSV F蛋白及其部分，包括RSV F蛋白之細胞外域， 如上文所述’抗RS V抗體或其抗原結合片段結合於該細胞 外域。 固體支撐物可為一般技術者已知可連接蛋白質之任何 物質。舉例而言’固體支撐物可為微量滴定板中之測試孔 或硝基纖維素或其他適合之膜。該支樓物亦可為珠粒或盤 狀物’諸如波璃、纖維玻璃' 乳膠或塑膠物質乂諸如聚笨 乙烯或聚氣乙烯）。支撐物亦可為磁性粒子或光纖感測器， 諸如在例如美國專利第5,359,681號中所揭示之支撐物。抗 RSV抗體或其抗原結合片段可使用熟習此項技術者已知之 各種技術固定於固體支撐物上。抗RSV抗體或其抗原結合 片段可藉由吸附於微量滴定板之孔中或膜上來固定。在該 220 201201839 等情況下，可藉由使適合緩衝液中之抗RSV抗體或其抗原 結合片段與固體支撐物接觸適量時間來達成吸附。該接觸 時間隨溫度而變化’但典型地介於約1小時與約1天之間。 一般而言，使塑膠微量滴定板（諸如聚苯乙烯或聚氯乙烯） 之孔與範圍為約10 ng至約1〇㈣且典型地為約100 ng至約 1 之量的抗RSV抗體或其抗原結合片段接觸即足以固定 適置抗RSV抗體或其抗原結合片段。 抗RSV抗體或其抗原結合片段共價連接於固體支撐物 一般可藉由首先使支撐物與將與該支撐物及抗RSV抗體或 其抗原結合片段上之官能基（諸如羥基或胺基）反應之雙 官能試劑反應來達成。舉例而言，抗RSV抗體或其抗原結 合片段可共價連接於具有適當聚合物塗層的支撐物，該等 塗層係使用苯醌或藉由支撐物上之醛基與結合搭配物上之 胺及活性氫縮合得到（參見例如pierce Immun〇techn〇1〇gy Catalog and Handbook, 1991, A12-A13 ) 〇 在一些實例中，以流過或條帶測試格式進行檢定，其 中抗RSV抗體或其抗原結合片段固定於諸如硝基纖維素之 膜上。在流過測試中，當樣品穿過膜時，#品内之多肽結 合於經固定之抗HSV抗體或其抗原結合片段。當含有第二 經標記結合劑之溶液流過膜時，該第二結合劑接著結合於 抗RSV抗體或其抗原結合片段_多肽複合物。 此項技術中存在適各用於所提供之Rsv蛋白或抗讀 抗體或其抗原結合片段的其他檢定方案。以上描述僅欲為 例示性的。舉例而…般技術者將顯而易見，以上方案 221 201201839 可容易經修改以使用RSV多肽偵測結合於生物樣品中之該 等多肽的抗體。該等蛋白質特異性抗體之偵測可允許鑑別 RSV感染。 為改良敏感性’可檢定既定樣品内之多種RSV蛋白標 記物。顯而易見，可在單一檢定中組合對於不同RS V多肽 具有特異性之抗RSV抗體或其抗原結合片段。.此外，可同 時使用多種引子或探針。可基於常規實驗選擇RSV蛋白標 記物以確定產生最佳敏感性之組合。另外或或者，用於本 文所提供之RSV蛋白的檢定可與用於其他已知RSv抗原之 檢定組合。 2·病原性感染之活體内偵測 本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段可用作活 體内診斷劑《舉例而言，抗RSV抗體或其抗原結合片段可 使用摘測方法提供受感染組織（例如肺部之RSV感染）之 影像，該等方法例如磁共振成像、X射線成像、電腦化發射 斷層攝影法及其他成像技術。為使RSV感染組織成像，例 如，抗RSV抗體之抗體部分一般將結合於RSV (例如結合 RS V F蛋白抗原決定基），且成像劑將為成像時可偵測之偶 合於抗RSV抗體或其抗原結合片段的試劑，諸如順磁試 劑、放射性試劑或螢光劑。一般，對於用作診斷劑，抗 抗體或其抗原結合片段直接或間接偶合於成像劑。 許多適當成像劑為此項技術所已知，如其連接於抗RSV 抗體或抗原結合片段之方法（參見例如美國專利第 5,〇21，236號及第4,472,5()9號）。例示性連接方法涉及使用 222 201201839 金屬螯合物複合物，其利用例如 ^ ^ |钱螯合劑，諸如連接於 抗體或其抗原結合片段之dtPa广M號1 ^ Α (美國專利第4,472,5〇9 唬）。抗體亦可與酶在諸如戊二酸 施 4過碘酸鹽之偶合劑存在 *猎由與異硫氰酸酯反鹿夾 製備與螢光素標記物之結合物。 … 對於活體内診斷成像，當選擇甩禪既疋放射性同位素時， 考慮可用之靖器類型。所選放射性同位素具有既定儀 器類型可偵測之衰變類型。為活體内診斷選擇放射性同位 素之另一因素為放射性同位素之半衰期，其足夠長以使得 其在被目標最大程度攝取時仍可偵測，但亦足夠短以使得 對於宿主之有害輕射減至最少。典型地，用於活體内成像 之放射性同位素將缺乏粒子發射，但產生在ι你㈣㈣範 圍内之大量光子，其可容易藉由習知γ相機偵測。 對於活體内診斷，放射性同位素可直接或藉由使用中 間物官能基間接結合於本文所提供之抗體或其抗原結合片 段。可用於使以金屬離子形式存在之放射性同位素結合於 抗體的例示性中間物官能基包括雙官能螯合劑，諸如二伸 乙基-二胺五乙酸（DTPA)及乙二胺四乙酸（edta)及類 似分子。可結合於所提供之抗Rsv抗體或其抗原結合片段 之金屬離子的貫例包括（但不限於）72砷、21 1砹、Η碳、51鉻、 123 碘、 釕〜 36氣 125碘 58 57鈷、58鈷、67鋼、152銪、。，鎵 131 碘 ' 111 銦、59 鐵、32 磷、186鍊 35硫、，鍀、2。丨鉈、⑼叙及89鍅 67 68鎵， 188銖 出於活體内診斷之目的，本文所提供之抗RSV抗體或 223 201201839 其抗原結合片段可經順磁同位素標記，如在磁共振成像 (magnetic resonance imaging，MRI )或電子自旋共振 (electron spin resonance « ESR)中。一般而言，可使用觀 測診斷成像之任何習知方法。一般，γ及正電子發射放射性 同位素用於相機成像且順磁同位素用於MRI。尤其適用於 該等技術之元素包括（但不限於）157Gd、55Mn、162Dy、52Cr 及 56Fe。 例示性順磁離子包括（但不限於）鉻（ΠΙ)、錳（II)、鐵 (III)、鐵（II)、鈷（II)、鎳（II)、銅（Π)、敍（III)、釤（III)、钂 (III)、釓（III)、飢（II)、铽（III)、鏑（III)、鈥（ΠΙ)及铒（III)。 適用於例如X射線成像之離子包括（但不限於）鑭（III)、 金（III)、鉛（II)及鉍（III)。 所投予之經可偵測標記之抗RSV抗體或其抗原結合片 段的濃度足以使得與背景相比可偵測RSV結合。此外，需 要經可偵測標記之抗RSV抗體或其抗原結合片段自循環系 統快速清除以產生最佳的目標背景信號比。 用於活體内診斷之經可偵測標記之抗RSV抗體或其抗 原結合片段的劑量將視諸如個體之年齡、性別及疾病程度 之因素而變化。人類單株抗體之劑量可例如自約0.0 i mg/m2 至約 500 mg/m2、自 0.1 mg/m2 至約 200 mg/m2、或自約 〇.lmg/m2至約1〇 mg/m2變化。該等劑量可例如視是否給予 多次注射、組織及熟習此項技術者已知之其他因素而變化。 3.監測感染 可試管内及活體内使用本文所提供之抗RSV抗體或其 224 201201839 •抗原結合片段來監測病原性疾病療法之過程。因此，舉例 .而言’可量測感染請之細胞數目的增加或減少或體二戈 各種體液中存在之RSV病毒粒子的濃度變化。使用該等方 法，抗Rsv抗體或其抗原結合片段可用於確定旨在改_ 原性疾病之特定治療性方案是否有效。 I.防治性及治療性用途 本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段及含有本 文所提供之抗HSV抗體或其抗原結合片段的醫藥組成物可 投予個體以用於防治及治療。舉例而言，可投予所提供之 抗體或其抗原結合片段以治療疾病或病狀，諸如减 染。在一些實例中，所提供之抗體或其抗原結合片段可投 予個體以用於防治性用途，諸如預防Rsv感染之擴散包 括（但不限於）抑制宿主中形成RSV感染或抑制個體間之 RSV傳播。在一些實例十，所提供之抗體或其抗原結合片 段可投予個體以降低個體之RSV病毒負荷。抗體或其抗原 結合片段亦可投予個體以預防' 治療及/或減輕RSV感染之 一或多種症狀或縮短RSV感染之持續時間。 在一些實例中，相對於在抗RSV抗體或抗原結合片段 不存在下RSV感染之發病率，投予本文所提供之抗RSV抗 體或其抗原結合片段可使RSV感染之發病率抑制至少99% 或約9 9 %、至少9 5 %或約9 5 %、至少9 0 %或約9 0 %、至少 85%或約85%、至少80%或約80%、至少75%或約75%、至 少70%或約70%、至少65%或約65%、至少60%或約60%、 至少55%或約55%、至少50%或約50%、至少45%或約45%、 225 !； 201201839 至少40%或約40%、至少35%或約35%、至少30%或約30%、 至少25%或約25%、至少20%或約20%、至少15%或約15% 或至少10%或約10%。在一些實例中，相對於在抗RSV抗 體或抗原結合片段不存在下RSV感染之一或多種症狀的嚴 重程度，投予本文所提供之抗RSV抗體或抗原結合片段可 使RSV感染之一或多種症狀的嚴重程度降低至少99%或約 99%、至少95%或約95%、至少90%或約90%、至少85%或 約85%、至少80%或約80%、至少75%或約75%、至少70% 或約70%、至少65%或約65%、至少60%或約60%、至少 55%或約55%、至少50%或約50%、至少45%或約45%、至 少40%或約40%、至少35%或約35%、至少30%或約30%、 至少25%或約25%、至少20%或約20%、至少15%或約150/〇 或至少10%或約10%。 1.用於療法之個體 用於利用本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段 之療法的個體或候選者包括（但不限於）已曝露於RSv病 毒之個體，諸如人類患者；展現RSV感染之一或多種症狀 之個體，諸如人類患者；及處於RSV感染風險中之個體， 諸如人類患者β例示性RSV病毒感染包括由RSV病毒引起 之感染，諸如（但不限於）急性RSV疾病、RSV上呼吸道 感染（URI )及/或RSV下呼吸道感染（LRI )，包括例如細 支氣管炎及肺炎。 在一些實例中，用於利用本文所提供之抗RSV抗體或 其抗原結合片段之療法之個體為哺乳動物。在一些實例 226 201201839 . 中，用於利用本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段 • 之療法之個體為靈長類動物。在特定實例中，用於利用本 文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段之療法之個體為 人類。 所k供之抗RSV抗體或其抗原結合片段可投予個體 (諸如人類患者）以治療任何RSV介導性疾病。舉例而言， 本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段可投予個體以 減輕與RSV病毒感染相關之一或多種症狀或病狀，包括（但 不限於）哮喘、喘鳴、反應性氣道疾病（RAD )及慢性阻 塞性肺病（COPD )。該等疾病及病狀為眾所周知的且容易 由醫師或一般技術者診斷。 本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段可投予具 有RSV病f感染之個體（諸如人類患者）以用於復發 病毒介導性疾病之維持或抑制療法。 所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段可投予處於 RSV病毒感染風險中之個體，諸如人類患者，包括（但不 限於）提刖出生（早產）嬰兒（例如小於3 8週胎齡出生之 人類嬰兒，例如29週、30週、31週、32週、33週、34週、 週36週或37週胎齡），嬰兒（例如超過37週胎齡出 生之人類嬰兒）；患有囊腫性纖維化、支氣管肺發育不良、 先天性心臟病、先天性免疫缺乏或後天性免疫缺乏（例如 AIDS患者）、白血病、非霍奇金淋巴瘤之個體；免疫抑制 患者，例如移植（例如骨髓移植或腎臟移植）接受者；或 老年個體，包括老人安養院或復健中心之個體。在—些實 227 201201839 本文所h供之抗rsv抗體或其抗原結合片段可投予 諸士早產嬰兒或曝露於一或多種環境風險因素之嬰 兒，5亥等因素諸如（但不限於）看護日托、具有學齡同胞、 曝露於％境空氣污染物、先天性氣道異常及/或重度神經肌 :疾：。在-些實例中，所提供之抗Rsv抗體或其抗原結 合片段可投予個體，諸如患有慢性肺病或先天性心臟病（包 括充血性心臟衰竭、肺性高血壓及紫紺型心臟病）之嬰兒 或兩歲以下兒童。 針對各種病原體及病原性感染之測試為此項技術所已 知且可用於評估個體是否為用於利用本文所提供之抗Rsv 抗體或其抗原結合片段之療法之候選者。舉例而言，針對 RSV病毒感染之測試為已知的且包括例如病毒培養物空斑 檢定、抗原偵測測試、聚合酶鏈反應（PCR)測試及各種抗 體血清測試。可對自組織獲得之樣品或流體樣品（諸如脊 髓液、血液或尿）進行針對病毒感染之測試。其他測試包 括（但不限於）胸部X射線，其可展示肺炎病徵；其他血 液測試，諸如化學反應篩選、全血細胞計數或動脈血中含 氣量（arterial blood gas，ABG)分析；及血氧測定法，其 量測血液中之氧量。 本文所k供之机RS V抗體或其抗原結合片段可投予在 一年中之特定時間期間RSV感染風險增加之個體。RSV季 節典型地自10月延續至次年5月。本文所提供之抗RSV抗 體或其抗原結合片段可在RSV季節即將到來之前及/或在 RSV季節期間投予在此期間展現對病毒感染之易感性增加 228 201201839 的個體（諸如嬰兒、老年人或免疫功能不全患者）以防治 及/或广療RSV感染。在一些實例中，在RSV季節期間投 予本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段一次、兩 次、二次、四次或五次。在一些實例中，在RSV季節前之 一個月、兩個月或三個月内投予本文所提供之抗RSV抗體 或其抗原結合片段一次、兩次、三次、四次或五次。 2.劑量 本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段的投予量 足以發揮治療性有效效應而不存在對所治療患者之不當副 作用。抗RSV抗體或其抗原結合片段之治療有效濃度可憑 經驗藉由在已知試管内及活體内系統中測試多肽，諸如藉 由使用本文所提供或此項技術中已知之檢定來測定。 待治療性投予之抗體或其抗原結合片段的有效量將視 例如治療目標、投藥途徑及患者病狀而定。另外，主治醫 師會考慮已知改變藥物作用之各種因素，包括疾病之嚴重 程度及類型，患者之健康狀況、體重、性別、膳食，投藥 日ττ間及途徑，其他藥物及其他相關臨床因素。因此，治療 員將需要以滴定方式測定抗體或其抗原結合片段之劑量並 按需要改變投藥途徑以獲得最佳治療效應。典型地，臨床 醫師將投予抗體或其抗原結合片段直至達到達成所需效應 之劑量。此療法之進展容易藉由習知檢定來監測。監測病 毒感染之治療的例示性檢定為此項技術所已知且包括例如 病毒效價檢定。 一般，投予本文戶斤提供之抗RSV抗體或其抗原結合片 229 201201839 段的劑量範圍為足夠大以產生所需效應之劑量範圍，复中 病原體介導性疾病（例如病毒性疾病）之症狀得到改善或 病毒感染之可能性降低。在—些實射，本文所提供:抗 RSV抗體或其抗原結合片段之投予量有效誘導個體之免： 反應。劑量並未大至引起不良副作用，諸如黏性過大症： 群、肺水腫或充A性心臟衰竭。_般，劑f將隨患者t _ 齡、病狀、性別及疾病程度而變化且可由熟習此項技術者 確定。劑量亦可由個別醫師在出現任何不良副作用之情況 下進行調整。預防或治療RSV感染及/或改善RSV感染之 一或多種症狀的例示性劑量包括（但不限於）約001 mg/kg 或 0.01 mg/kg 至約 300 mg/kg 或 300 mg/kg，例如約 0.01mg/kg 或 〇.〇1 mg/kg、約 〇.! mg/kg 或 〇」mg/kg、約 0.5mg/kg 或 0.5 mg/kg、約！ mg/kg 或 i mg/kg、約 5 mg/kg 或 5 mg/kg、約 1〇 mg/kg 或 l〇 mg/kg、約 15 mg/kg 或 15mg/kg、約 20mg/kg 或 20 mg/kg、約 25 mg/kg 或 25 mg/kg、 約 30 mg/kg 或 30 mg/kg、約 35 mg/kg 或 35 mg/kg、約 40mg/kg 或 40mg/kg、約 45 mg/kg 或 45 mg/kg、約 50 mg/kg 或 50 mg/kg、約 100 mg/kg 或 100 mg/kg、約 15〇 mg/kg 或 150 mg/kg、約 200 mg/kg 或 200 mg/kg、約 250 mg/kg 或 250mg/kg 或約 300 mg/kg 或 300 mg/kg。 在一些實例中，向個體投予有效達成所需血清效償之 劑量的本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段。在特 定實例中’投予一定量的本文所提供之抗RSV抗體或其抗 原結合片段以預防或治療RSV感染及/或改善rsv感染之 230 201201839 一或多種症狀，在投予第一劑量之抗體或其抗原、结合片段 後1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、 10天、15天、20天、25天、30天、35天或40天或約1 天、2天、3天、4天、5天、ό天、7天、8天、9天、1〇 天、丨5天、20天、25天、30天、35天或40天且在後續劑 量之抗體或其抗原結合片段之前，該量有效達成以下血清 效價：至少1 jng/ml或約1 jiig/ml、至少2弘g/ml或約2 Mg/ml、 至少3㈣/如或約3 pg/m卜至少4 pg/ml或約4 Mg/m卜至 少 5 pg/ml 或約 5 /xg/ml、至少 6 pg/ml 或約 6 /ig/ml、至少 7 Mg/ml 或約 7 jitg/ml、至少 8 /xg/ml 或約 8 Mg/mh 至少 9/ig/ml 或約9 jLtg/m卜至少10 jtig/ml或約1〇 Mg/m卜至少15 /ig/ml 或約 15 ^g/ml、至少 20 ^g/ml 或約 20 /xg/m卜至少 25 j^g/ml 或約 25 ^g/ml、至少 30 jitg/ml 或約 30 j^g/ml、至少 40 /ig/ml 或約 40 /ig/ml、至少 50 jitg/ml 或約 50 /ig/ml、至少 60 jtig/ml 或約 60 /ig/ml、至少 70 /ig/ml 或約 70 jiig/ml、至少 80 gg/ml 或約 80 /ig/m卜至少 90 jiig/ml 或約 90 jUg/ml、至少 100 或約 100 gg/ml。 在一些實例中，藉由經肺傳遞向個體投予在來自肺部 之插管樣品、痰或灌洗液中有效達成所需效價之劑量的本 文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段。在特定實例 中，投予一定量的本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合 片段以預防或治療RSV感染及/或改善Rsv感染之一或多 種症狀，在投予第一劑量之抗體或其抗原結合片段後 天、15天、20天、25天、30天、35天或4〇天或約1〇天、 231 201201839 15天、20天、25天、30天、35天或40天且在後續劑量之 抗體或其抗原結合片段之前，該量在來自肺部之插管樣品 或灌洗液中有效達成以下效價：10 ng/mg (抗RSV抗體或 其抗原結合片段奈克數/肺蛋白質毫克數）或約10 ng/mg、 15 ng/mg 或約 1 5 ng/mg、20 ng/mg 或約 20 ng/mg、25 ng/mg 或約 25 ng/mg、30 ng/mg 或約 30 ng/mg、40 ng/mg 或約 40ng/mg、50 ng/mg 或約 50 ng/mg、60 ng/mg 或約 60 ng/mg、 70 ng/mg 或約 70 ng/mg、80 ng/mg 或約 80 ng/mg、90 ng/mg 或約 90 ng/mg、100 ng/mg 或約 100 ng/mg、u〇 ng/mg 或約 110 ng/mg、120 ng/mg 或約 120 ng/mg、130 ng/mg 或約 130ng/mg、140 ng/mg 或約 140 ng/mg、或 150 ng/mg 或約 1 50 ng/mg ° 為治療病毒感染，抗RSV抗體或其抗原結合片段之虔 置可視疾病之類型及嚴重程度而變化。抗Rsv抗體或其老 原結合片段可以單次劑量投予，以多次各別投藥來投予 或藉由連續輸注投予。為視病狀而經數天或更長時間重名 投藥’可重複治療直至達成疾病症狀之所需抑制或達幻 者病狀之所㈤改良。重複投藥可包括增加或降低抗束 體或其抗原結合片段 |， 之里視療進展而定。亦涵蓋其4 給藥方案。 ” 在一些實例中，每日或經數天投予本文所提供之 =或其抗原結合片段一次、兩次、三次、四次、五次 二：：、八次、九次、十次或更多次。在特定實例中 又予-疋里的本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片 232 201201839 • —次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九 . 次、十次或更多次以預防或治療RSV感染及/或改善RSV 感染之一或多種症狀，在投予第一劑量、第二劑量、第三 劑量、第四劑量、第五劑量、第六劑量、第七劑量、第八 劑量、第九劑量、第十劑量之抗體或其抗原結合片段後1 天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10 天、15天、20天、25天、30天、35天或40天或約1天、 2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、1〇天、 15天、20天、25天、30天、35天或40天且在後續劑量之 抗體或其抗原結合片段之前，該量有效達成以下血清效 價：至少1 /ig/ml或約1 iig/m卜至少2 pg/ml或約2 pg/ml、 至少3 /xg/ml或約3 /ig/ml、至少4 /^g/ml或約4 /ig/m卜至 少 5 pg/ml 或約 5 /ig/ml、至少 6 Mg/ml 或約 6 jtig/ml、至少 7 gg/ml 或約 7 itig/ml、至少 8 /ig/ml 或約 8 /ig/m卜至少 9gg/ml 或約 9 gg/m卜至少 10 /ig/ml 或約 10 MS/ml、至少 15 gg/ml 或約15 /xg/m卜至少20 ^g/ml或約20 /^/m卜至少25 /Ag/ml 或約25 j^g/m卜至少30 /ig/ml或約30弘g/m卜至少40 /xg/ml 或約 40 /ig/ml、至少 50 /ig/ml 或約 5〇 Mg/ml ' 至少 60 /tg/ml 或約 60 j^g/ml、至少 70 jiig/ml 或約 7〇 弘g/ml、至少 80 jLtg/ml 或約80 j^g/m卜至少90 /^g/ml或約90弘g/m卜至少1〇〇 pg/nil 或約100 pg/ml。在一特定實例中’投予一定量的本文所提 供之抗RSV抗體或其抗原結合片段四次以預防或治療RSV 感染及/或改善RSV感染之一或多種症狀’在投予第四劑量 之抗體或其抗原結合片段後1夭、2天、3天、4天、5天、 233 201201839 6天、7天、8天、9天' 10天、15天、2〇天、25天、3〇 天、35天或40天或約i天' 2天、3天、4天、5天' 6天、 7 :、8 天、9 天、10 天、15 天、2〇 天、25 天、30 天、35 〇或4〇天且在後續劑量之抗體或其抗原結合片段之前，該 量有效達成至少72/^g/ml或約72㈣/ml之血清效價。
^ —實例中，以兩次或更多次投藥之順序投予抗RSV 抗體2其抗原結合片段，其中該等投藥間隔所選時段。在 一些實例中’所選時段為至少1天、2天' 3天、4天、5 ，天6天' 1週、2週、3週、1個月、2個月或3個月或約 1天2天、3天、4天、5天、6天、丨週、2週、3週、ι 個月、2個月或3個月。 曰在—些實例中，在RSV季節即將到來之前投予防治有 T量之本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段一或多 次二在—些實例中，在Rsv季節即將到來之前投予防治有 效量之本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段一或多 次及/或在Rsv季節期間投予一或多次。 特疋劑量或給藥方案之治療功效亦可例如藉由在投予 一或多次劑量之抗RSV抗體或其抗原結合片段之前及之後 量測個體之病毒效價來評估。劑量及/或投藥頻率可視個體 之所需病毒清除率加以調節。 如熟習此項技術者應瞭解’最佳治療方案將有變化且 其在治療方法之範疇内以在一或多個療法週期之前及之後 評估所治療疾病之情況及患者之一般健康狀況以便確定最 佳治療劑量及投藥頻率。進一步應瞭解，對於任何特定個 234 201201839 ‘ 體，特定給藥方案可隨時間根據個體需要及投予醫藥調配 .物或監督醫藥調配物投予之人的專業判斷進行調整，且本 文中所述之劑量僅為例示性的且不欲限制其範疇。投予用 於治療疾病或病狀（例如病毒感染，例如Rsv病毒感染） 之抗RSV抗體或其抗原結合片段的量可藉由標準臨床技術 (例如病毒效價或抗原偵測檢定）來測定。另外，可使用試 管内檢定及動物模型幫助鑑別最佳劑量範圍。該等檢定可 提供可外推於投予個體（諸如人類）之劑量範圍。基於動 物模型鑑別最佳劑量範圍之方法為熟習此項技術者所熟 知。 3.投藥途徑 本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段可藉由此 項技術中已知用於投予多肽之任何方法（包括例如全身或 :局部投藥）投予個體。抗RSV抗體或其抗原結合片段可藉 由諸如非經腸（例如皮内、肌肉内、腹膜内、靜脈内、皮 下或腔内）、區域性、硬膜外或黏膜（例如鼻内或經口）之 途徑來投予。抗RSV抗體或其抗原結合片段可在外部投予 個體之患病部位以發揮局部或經皮作用。含有抗Rsv抗體 或其抗原結合片段之組成物可藉由任何適宜途徑，例如藉 由輸注或快速注射、藉由經由上皮或黏膜皮膚襯裡（例如 口腔黏膜、直腸及腸黏膜）吸收來投予。含有抗Rs V抗體 或抗原結合片段之組成物可與其他生物活性劑一起投予。 投藥模式可包括組成物於身體中可與感染病毒（諸如Rsv 病毒）、受病毒污染或與病毒相關之流體、細胞或組織接觸 235 201201839 的區域上、該區域中或附近之區域性投藥或其他投藥。本 文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段可藉由區域性或 氣溶膠途徑投予以直接傳遞至目標器官，諸如肺（例如藉 由經肺氣溶膠）。在一些實例中，所提供之抗rsv抗體或其 抗原結合片段可以控制釋放調配物形式，諸如藉由果（參 見例如 Langer (1990) 249:1527-1533 ; Sefton (1987) CV". i?e/· jBwg. 14:20 ; Buchwald 等人（1980) 88:507 ;及 Saudek 等人（1989) j 3 2 1:5 7 4 )或經由使用此項技術中已知且本文別處所述之各 種聚合物來投予。在一些實例中，控制或持續釋放系統可 置於接近治療性目標（例如肺）處，因此僅需要全身劑量 之一部分（參見例如 Goodson，Medical Applications of Controlled Release,同上，第 2 卷，第 115-138 頁（1984))。 在特定實例中’所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片 段藉由經肺傳遞來投予（參見例如美國專利第6,0 19，9 6 8 號、第 5,985,320 號、第 5,985,309 號、第 5,934,272 號、第 5,874,064 號、第 5,855,913 號、第 5,290,540 號及第 4,880,078 號；及PCT公開案第WO 92/19244號、第WO 97/32572號、 第 WO 97/44013 號、第 WO 98/31346 號及第 W0 99/66903 號）。經肺傳遞之例示性方法為此項技術所已知且包括（但 不限於）氣溶膠方法，諸如吸入器（例如加壓定劑量吸入 器（pressurized metered dose inhaler，MDI )、乾粉吸入器 (dry powder inhaler，DPI )、霧化器（例如喷射或超音波霧 化器）及其他單次呼吸液體系統）、氣管内滴注及吹入。在 236 201201839 一些貫例中’經肺傳遞可藉由共投予或投予含有本文所提 供之抗RSV抗體或其抗原結合片段的共調配物及滲透增強 劑來增強，遠增強劑例如界面活性劑、脂肪酸、醣、螯合 劑及酶抑制劑（諸如蛋白酶抑制劑）。 適當傳遞方法（諸如經肺傳遞）可由熟習此項技術者 基於抗RS V抗Μ或其抗原、结合片段或含有該抗@或其抗原 結合片段之醫藥組成物的劑量性質來選擇。該等性質包括 (但不限於）溶解性、吸濕性、結晶性質、熔點、密度、黏 度、流動、穩定性及降解特徵。 在一些實例中，本文所提供之抗Rsv抗體或其抗原結 合片段可增強針對病毒之黏膜免疫功效。因此，在特定實 例中k RSV抗體或其抗原結合片段投予黏膜表面。舉例 而口抗RSV抗體或其抗原結合片段可經由諸如以下之途 徑來傳遞：經口（例如頰内、舌下）、經眼（例如經角膜、 經結膜、玻璃體内、水狀液内注射）、鼻内、經生殖器（例 如經陰道）、經直腸、經肺、經胃或經腸。本文所提供之抗 RS:抗體或其抗原結合片段可全身投予，諸如非經腸，例 ϋ以㈣藉由隨時間逐漸輸注或經腸（亦即經消化道） 又=。本文所提供之抗謂抗體或其抗原結合片段亦可經 投予’例如藉由區域性安置或施用（例如使用支氣 =或=他人造氣道進行氣管内滴注及吹人）液體溶液、 2、軟膏、散劑或藉由吸人（例如鼻用喷霧器、吸入器 器:：=劑量吸入器（MDI)、乾粉吸入器(叫霧化 J如噴射或超音波霧化器）及其他單次呼吸液體系統）） 237 201201839 投予。可在曝露於病毒之前或在曝露於病毒之後投藥。 4 ·組合療法 本文所k供之抗R S V抗體或其抗原結合片段可單獨投 予或與一或多種治療劑或療法組合投予以防治及/或治療疾 病或病狀。舉例而言，所提供之抗RSV抗體或其抗原結合 片段可與一或多種抗病毒劑組合投予以用於防治。在另一 實例中，所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段可與一或 多種抗病毒劑組合投予以治療病毒感染，諸如呼吸道病毒 感染。在一些實例中，呼吸道病毒感染為RSV感染。該等 抗病毒劑可包括減少及/或消除病原性感染之藥劑或減輕病 原性感染之一或多種症狀的藥劑。在一些實例中，複數種 抗體或其抗原結合片段（例如一或多種抗病毒抗體）亦可 組合投予，其中至少一種抗體為本文所提供之抗Rsv抗體 或其抗原結合片段。在一些實例中，複數種抗體可組合投 予以用於防治，其中至少一種抗體為本文所提供之抗rsv 抗體或其抗原結合片段。在其他實例中，複數種抗體可組 合投予以治療RSV感染或多種病毒感染，其中至少一種抗 體為本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段。在一些 實例中，所提供之抗RSV抗體可與一或多種抗病毒抗體組 合投予’ §亥4抗病毒抗體結合於病毒（諸如rsv )及中和 病毒。在一些實例中，所提供之杭Rsv抗體或其抗原結合 片段可與一或多種抗體組合投予，該等抗體可抑制或減輕 病毒感染（諸如Rsv感染）之一或多種症狀。在一些實例 中，組合投予本文所提供之兩種或更多種抗RSv抗體或其 238 201201839 抗原結合片段。 同時===可與抗，抗體或其抗原結合片段 原結合片段共投予1。該等藥劑可與抗RSV抗體或其抗 例如作為同一醫藥組成物或同一傳遞 方法之—部分。在—些實例中，藥劑可與抗RSV抗體或其 抗縣合片段共投予，其與抗RSv抗體或其抗原結合片段 同亇仁藉由不同傳遞方法投予。藥劑亦可在與投予抗RSV 抗體或其抗原結合片段不同的時間投予但時間上足夠接 近抗RSV抗體或其抗原結合片段之投予以具有組合之防治 或治療效應。在一些實例中，一或多種其他藥劑在投予抗 RSV抗體或其抗原結合片段之後或之前投予，其間隔所選 時段。在一些實例中，該時段為1天、2天' 3天、4天、5 天、6天、1週、2週、3週、1個月、2個月或3個月。在 一些實例中，投予一或多種其他藥劑多次及/或投予本文所 提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段多次。 在一些實例中，相對於在組合不存在下RSV感染之發 病率，投予組合可使RSV感染之發病率抑制至少99%或約 99%、至少95%或約95%、至少90%或約90%、至少85%或 約85%、至少80%或約80%、至少75%或約75%、至少70% 或約70%、至少65%或約65% '至少60%或約60%、至少 55%或約55%、至少50%或約50%、至少45%或約45%、至 少40%或約40%、至少35°/。或約35%、至少30%或約30%、 至少25%或約25%、至少20%或約20%、至少15%或約15% 或至少10%或約10%。在一些實例中’相對於在組合不存 239 201201839 在下RSV感染之一或多種症狀的嚴重程度，投予組合可使 RSV感染之一或多種症狀的嚴重程度降低至少99%或約 99%、至少95%或約95%、至少90%或約90%、至少85%或 約85%、至少80%或約80%、至少75%或約75°/。、至少70% 或約70%、至少65%或約65%、至少60%或約60%、至少 55%或約55%、至少50%或約5〇%、至少45%或約45%、至 少40%或約40%、至少35%或約35%、至少30%或約30%、 至少25%或約25%、至少20%或約20%、至少15%或約15% 或至少10%或約1〇%。 在一些實例中，相對於在組合不存在下RSV與其宿主 細胞受體之結合’組合可使RS V與其宿主細胞受體之結合 抑制至少99%或約99%、至少95%或約95%、至少90%或 約90%、至少85%或約85%、至少80%或約80°/❶、至少75% 或約75%、至少70%或約70%、至少65%或約65%、至少 60%或約60%、至少55%或約55%、至少50%或約50%、至 少45%或約45%、至少40%或約40%、至少35%或約35%、 至少30%或約30%、至少25%或約25%、至少20%或約20%、 至少15%或約15%或至少10%或約1〇%。在一些實例中， 相對於在組合不存在下之RSV複製’組合可使RSV複製抑 制至少99%或約99%、至少95%或約95%、至少90%或約 90%、至少85%或約85%、至少80%或約80%、至少75%或 約75%、至少70%或約70%、至少65%或約65%、至少60% 或約60%、至少55%或約55%、至少50%或約50%、至少 45%或約45%、至少40%或約40%、至少35%或約35%、至 240 201201839 f 少30%或約30%、至少25%或约25%、至少20%或約20%、 • 至少1 5%或約1 5%或至少1 〇%或約1 〇%。 已知適用於、或用於或已用於蕷防、控制、治療或改 善RSV感染或其一或多種症狀之任何療法均可與本文所提 供之抗RSV抗體或其抗原結合片段組合使用（關於已用於 或用於預防、治療、控制或改善RSV感染或其一或多種症 狀的療法（例如防治劑或治療劑）的資訊，參見例如Gilman 荨人，Goodman and Gilman's: The Pharmacological Basis of Therapeutics,第 10 版，McGraw-Hill，New York, 2001 ; The Merck Manual of Diagnosis and Therapy，Berkow，M. D.等人 (編），第 1 7 版，Merck Sharp & Dohme Research Labo.ratories， Rahway，N.J·，1999 ; Cecil Textbook of Medicine,第.20 版， Bennett 及 Plum (編），W.B. Saunders, Philadelphia，1996) 〇 該等藥劑之實例包括（但不限於）免疫調節劑、消炎劑（例 如腎上腺皮質素（adrenocorticoid )、皮質類固醇 (corticosteroid )(例如倍氣米松（beclomethasone )、布地奈 德（budesonide )、敗尼縮松（fiunis〇iide )、氟替卡松 (fluticasone )、曲安西龍（triamcinolone )、曱潑尼龍 (methylprednisolone )' 潑尼龍（prednisolone )、潑尼松 (prednisone )、氫皮質 _( hydrocortisone ))、糖皮質素、類 固醇、非類固醇消炎藥（例如阿司匹靈（aspirin )、布洛芬 (ibuprofen )、雙氣芬酸（diclofenac )及 COX-2 抑制劑））、 疼痛舒解劑、白三烯拮抗劑（例如孟魯司特（montelukast)、 甲基黃嘌呤（methyl xanthines )、紮魯司特（zafirlukast ) 241 n:; 201201839 及齊留通（zileuton ))、支氣管擴張劑（諸如jS2促效劑（例 如班布特羅（bambuterol )、比托特羅（bitolterol )、克倫特 羅（clenbuterol )、非諾特羅（fenoterol )、福莫特羅 (formoterol )、°引達卡特羅（indacaterol )、異他林 (isoetharine )、間經異丙腎上腺素（metaproterenol )、·>比布 特羅（pirbute.rol )、丙卡特羅（procaterol )、茶丙特羅 (reproterol )、利米特羅（rimiterol )、沙 丁胺醇（salbutamol ) (舒喘寧（Albuterol )、舒喘靈（Ventolin ))、左沙丁胺醇 (levosalbutamol )、沙美特羅（salmeterol )、妥布特羅 (tulobuterol)及特布他林（terbutaline)))及抗膽驗劑（例 如溴化異丙托敍（ipratropium bromide )及漠化氧托敍 (oxitropium bromide ))、柳氮確吼咬（sulphasalazine )、青 黴胺（penicillamine )、胺苯砜（dapsone )、抗組織胺 (antihistamine )、 抗瘧疾劑（例如羥氯喧 (hydroxychloroquine))及抗病毒劑。本文所提供之抗rSv 抗體或其抗原結合片段亦可與一或多種療法組合投予以治 療RSV感染’該等療法包括（但不限於）投予免疫球蛋白 之靜脈内輸注液、投予補充氧及流體或輔助呼吸。本文所 提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段亦可與一或多種調節 肺成熟及界面活性劑蛋白質表現之藥劑，諸如（但不限於） 糖皮質素、ppary配位體及血管内皮細胞生長因子（vascular endothelial cell growth factor > VEGF )組合投予。 可選擇用於與本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合 片段的組合療法之例示性抗病毒劑包括（但不限於）抗病 242 201201839 毒化合物、抗病毒蛋白、抗病毒肽、抗病毒蛋白結合物及 抗病毒肽結合物，包括（但不限於）核苷類似物、核苷酸 類似物、免疫調節劑（例如干擾素）及免疫刺激劑。涵蓋 使用抗體及/或由此提供之抗RSV抗體及抗原結合片段之組 合療法’如抗體及/或本文所提供之抗RS V抗體及抗原結合 片段與其他抗RSV抗體及抗RSV抗體及抗原結合片段之組 合。 可與本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段組合 投予的用於治療病毒感染之例示性抗病毒劑包括（但不限 於）阿昔洛早（acyclovir)、泛昔洛韋（famciclovir )、更昔 洛早（ganciclovir )、喷昔洛韋（pencici〇vir )、伐昔洛韋 (valacyclovir )、绳更昔洛韋（vaigancici〇vir )、峨苦 (idoxuridine)、曲氟尿苷（trifiuridine)、溴夫定（brivudine)、 西多福韋（cidofovir )、多可沙諾（docosanol )、福米韋生 (fomivirsen )、膦曱酸（foscarnet )、曲金剛胺 (tromantadine )、咪喹莫特（imiquimod )、鬼臼毒素 (podophyllotoxin )、恩替卡韋（entecavir )、拉米夫定 (lamivudine )、替比夫定（teibivudine )、克來夫定 (clevudine )、阿德福韋（adefovir )、替諾福韋（tenofovir )、 保斯派維（boceprevir)、泰拉派維（telaprevir)、普來可那 立（pleconaril )、阿比多爾（arbid〇1 )、金剛胺（amantadine )、 金剛乙胺（rimantadine )、奥司他韋（oseltamivir )、紮那米 韋（zanamivir )、帕拉米韋（peramivir )、肌苷（inosine )、 干擾素（例如干擾素a-2b、聚乙二醇化干擾素〇：_2a)、病毒 243 201201839 0坐/他利巴韋林（taribavirin )、阿巴卡韋（abacavir )、恩曲 他濱（emtricitabine )、拉米夫定（lamivudine )、去經肌苷 (didanosine )、齊多夫定（zidovudine )、阿立他濱 (apricitabine )、斯坦匹定（stampidine )、艾夫他濱 (elvucitabine )、拉西韋（racivir )、安道索韋（amdoxovir )、 司他夫定（stavudine)、紮西他濱（zalcitabine)、替諾福韋 (tenofovir )、依發韋俞（efavirenz )、奈韋拉平（nevirapine )、 艾特拉林（etravirine.)、瑞爾皮林（rilpivirine )、洛韋胺 (loviride)、地拉韋啶（delavirdine)、阿紮那韋（atazanavir)、 夫沙那韋（fosamprenavir)、洛匹那韋（lopinavir)、達魯那 韋 （darunavir )、奈非那韋（nelfinavir )、利托那韋 (ritonavir )、沙奎那韋（saquinavir )、替拉那韋（tipranavir ) ' 安普那韋（amprenavir ) '茚地那韋（indinavir )、恩福韋地 (enfuvirtide )、嗎拉維諾（maraviroc )、維克利諾 (vicriviroc)、PRO 140、艾巴利珠單抗（ibalizumab)、羅特 格韋（raltegravir )、艾微格韋（elvitegravir )、貝韋立馬 (bevirimat)、維康（vivecon )，包括其互變異構形式、類似 物、異構體、多晶型物、溶劑合物、衍生物或鹽。 可與本文所提供之抗RS V抗體或其抗原結合片段組合 投予的用於防治及/或治療RSV感染之例示性抗病毒劑包括 (但不限於）病毒 °坐.、NIH-35 1 ( Gemini Technologies )、重 組 RSV 疫苗（Aviron )、RSVf-2 ( Intracel) ' F-50042 ( Pierre Fabre)、T-786( Trimeris)、VP-36676( ViroPharma)、RFI-641 (American Home Products)、VP-14637( ViroPharma)、PFP-1 244 201201839
及 PFP-2 ( American Home Products )、RSV 疫苗（Avant Immunotherapeutics)、F-50077( Pierre Fabre)及其他抗 RSV 抗體或其抗原結合片段。 本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段亦可與一 或多種能夠刺激細胞免疫性（諸如細胞黏膜免疫性）之藥 劑組合投予。可使用任何能夠刺激細胞免疫性之藥劑。例 示性免疫刺激劑包括細胞激素，諸如（但不限於）干擾素 (例如IFN-a、0、γ、ω )、淋巴因子及造血生長因子（例如 GM-CSF (粒細胞巨噬細胞群落刺激因子））、介白素_2 (IL-2)、介白素-3( IL-3)、介白素-4( IL-4)、介白素-7( IL-7)、 介白素-10( IL-10)、介白素_i2( IL-12)、介白素-14( IL-14) 及腫瘤壞死因子（TNF )。 對於與抗病原性藥劑之組合療法，投予該等化合物之 劑$為此項技術所已知或可由熟習此項技術者根據已知臨 床因素（例如個體物種、體型、體表面積、年齡、性別、 免疫能力及一般健康狀況，投藥持續時間及途徑，疾病之 種類及階段，及是否正同時投予其他治療，諸如其他抗病 原性藥劑）來測定。 a·用於組合療法之抗病毒抗髗 本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段可與一或 多種其他抗體或其抗原結合片段組合投予。在一些實例 中，一或多種其他抗體為抗病毒抗體。在一些實例中，一 或多種其他抗體結合於病毒抗原。在一些實例中，一或多 種其他抗體結合於作為表面蛋白質之病毒抗原，諸如病毒 245 201201839 殼蛋白或病毒包臈蛋白。在一些實例中，一或多種其他抗 體結合於在受感染細胞之表面上表現的病毒抗原。在一此 實例中’ 一或多種其他抗體結合於在細胞内（亦即在受感 染細胞内）表現之病毒抗原。在一些實例中，一或多種其 他抗體結合於引起呼吸道疾病之病毒，諸如（但不限於） RSV、副流行性感冒病毒（PIV)或人類偏肺病毒（hMPV)。 本文亦提供含有抗體混合物之組成物。 與本文所k供之抗RS V抗體或其抗原結合片段組合使 用的抗體包括（但不限於）單株抗體、多特異性抗體、合 成抗體、人類抗體、人類化抗體、嵌合抗體、細胞内抗體、 單鏈Fv ( scFv)、單鏈抗體、Fab片段、F(ab，）片段、二硫鍵 連接之Fv ( sdFv)及抗個體遺傳型（抗Id)抗體（包括例 如本文所供之抗體的抗I d抗體）及以上任一者之抗原決 定基結合片段。與本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合 片段組合使用的抗體可為任何類型（例如IgG、igE、lgM、 IgD、IgA 及 IgY)、種類（例如 igGi、IgG2、IgG3、IgG4、 IgAi及IgA2 )或亞類之免疫球蛋白分子。 與本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段組合使 用的抗體可來自任何動物來源，包括鳥類及哺乳動物（例 如人類、鼠類、驢、綿羊、兔、山羊、天竺鼠、駱駝、馬 或雞）。典型地’與本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合 片段組合使用的抗體為人類或人類化抗體。與本文所提供 之抗RSV抗體或其抗原結合片段組合使用的抗體可為單特 異性、雙特異性、三特異性或更多特異性的抗體。 246 201201839 與本文所提供之抗Rsv抗體或其抗原結合片段組合使 用的抗體可包括例如藉由使任何類型之分子連接於抗體戋 其抗原結合片段（諸如藉由共價連接）而經修飾之衍生物 抗體。例示性抗體或其抗原結合片段衍生物包括已例如藉 由如下技術經修飾之抗體：糖基化、乙醯化、聚乙二醇化、 磷酸化、醯胺化、由已知保護基/阻隔基衍生化、蛋白水解 裂解、連接於細胞配位體或其他蛋白質、或含有對於Fcrn 受體具有較高親和力之異源Fc域（參見例如美國專利第 7,083,784號）。多種化學修飾中之任—者均可藉由已知技術 進行，該等技術.包括（但不限於）特定化學裂解、乙醯化、 曱醯化或在衣黴素（tunicamycin)存在下合成。另外，衍 生物可含有一或多種非典型胺基酸。 與本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段組合使 用的一或多種其他抗體可與抗RSV抗體或其抗原結合片段 同時、依序或間歇投^。-或多種其他抗體可與抗麟抗 體或其抗原結合片段共投予’例如作為同一醫藥組成物或 同-傳遞方法之-部分。在-些實例中’―或多種其他抗 體可與抗RSV抗體或其抗原結合片段共投予，其與抗rsv 抗體或其抗原結合片段同時但藉由不同傳遞方法投予。一 或多種其他抗體亦可在與投予本文所提供之抗Rsv抗體或 其抗原結合片段不同的時間投予，但時間上足夠接近抗rsv 抗體或其抗原結合片段的投予以具有組合之防治或治療效 應。在-些實例中，-或多種其他藥劑在投予抗讀抗體 或其抗原結合片 段之後或之 别投予，其間隔所選時段。在 247 201201839 一些實例中，該時段為1天、2天、3天、4天、5天、6天、 1週、2週、3週、1個月、2個月或3個月。在一些實例中， 投予一或多種其他抗體多次及/或投予本文所提供之抗RSV 抗體或其抗原結合片段多次。 i.抗RSV抗體 在一些實例中，一或多種其他抗病毒抗體為抗RSV抗 體或其抗原結合片段。在一些實例中，本文所提供之抗RSV 抗體或其抗原結合片段與一或多種其他抗RSV抗體或其抗 原結合片段組合投予以防治及/或治療RSV感染。用於與本 文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段之組合療法的例 示性抗RSV抗體或其抗原結合片段包括免疫特異性結合於 RSV及中和RSV之抗RSV抗體或其抗原結合片段。在一些 實例中’一或多種其他抗RSV抗體或其抗原結合片段包括 免疫特異性結合於RSV A亞型及/或RSV B亞型之抗體或其 抗原結合片段》
在一些實例中，用於與本文所提供之抗rSV抗體或抗 原結合片段之組合療法的一或多種其他抗病毒抗體包括結 合於以下之抗RSV抗體：RSV附著蛋白（例如具有seQ ID NO: 276所示之胺基酸序列）、RSV RNA聚合酶卢次單元大 結構蛋白（L蛋白）（例如具有SEQ ID NO: 276所示之胺基 酸序列）、RSV核鞘蛋白（例如具有SEq ID N〇: 277所示 之胺基酸序列）、RSV核蛋白（N )(例如具有seq ID NO: 278 所示之胺基S夂序列）、RSV磷蛋白p (例如具有seq id NO: 279所示之胺基酸序列）、RSV基質蛋白（例如具有SEq ID 248 201201839 * NO: 280所示之胺基酸序列）、RSV小疏水佳（SH )蛋白（例 . 如具有SEQ ID NO: 28 1所示之胺基酸序列）、RSv RNA依 賴性聚合酶、RSV G蛋白（例如具有SEQ ID NO: 282所示 之胺基酸序列）或以上任一者之對偶基因變異體。在特定 實例中，一或多種其他抗病毒抗體包;^結合於RSv F蛋白 之抗RSV抗體。在特定實例中，一或多種結合於rsV F蛋 白之其他抗病毒抗體結合於RS V F醣蛋白之A、B、C、I、 II、IV、V或VI抗原性部位（參見例如L〇pez等人（1998) ·/· hVo/· 72:6922-6928 )。 在一些實例中，用於與本文所提供之抗RSV抗體或其 抗原結合片段之組合療法的一或多種其他抗病毒抗體包括 (但不限於）帕利珠單抗（SYNAGIS® )、莫維珠單抗 (NUMAX® )、AFFF、P12f2、P12f4、Plld4、Ale9、A12a6、 A13c4、A17d4、A4B4、A8c7、1X-493L1、FRH3-3F4、M3H9、 Y10H6、DG、AFFF(l)、6H8、L1-7E5、L2-15B10、A13all、 Alh5、A4B4(1)、A4B4L1FR-S28R、A4B4-F5 2S (參見美國 專利第 5,824,307 號及第 6,818,216 號）、rsv6 、rsv 11、rsv 1 3、 rsvl9、rsv2卜 rsv22' rsv23(參見美國專利第 6,685,942 號）、 RF-1、RF-2 (參見美國專利第5,811，524號）或其抗原結合 片段。在一些實例中’用於組合療法之一或多種其他抗病 毒抗體包括含有具有以下各者之VH鏈及/或VL鏈的胺基酸 序列之VH鏈及/或VL鏈之抗體或其抗原結合片段：帕利珠 單抗（SYNAGIS®)、莫維珠單抗（NUMAX®)、AFFF、P12f2、 P12f4、Plld4、Ale9、A12a6、A13c4、A17d4、A4B4、A8c7、 t 249 201201839 1X-493L卜 FR H3-3F4、M3H9、Y10H6、DG、AFFF(l)、6H8、 L1-7E5 、 L2-15B10 、 A13all 、Alh5 、A4B4(1)、 A4B4L1FR-S28R、A4B4-F52S、rsv6、rsvl 1 ' rsvl3、rsvl9、 rsv21 ' rsv22、rsv23、RF-1 或 RF-2。在一些實例中，用於 組合療法之一或多種其他抗病毒抗體包括含有以下各者之 一或多個CDR的抗體或其抗原結合片段：.帕利珠單抗 (SYNAGIS® )、莫維珠單抗（NUMAX® )、AFFF、P12f2、 P12f4、PI ld4、Ale9、A12a6、A13c4、A17d4、A4B4、A8c7、 IX-493U、FR H3-3F4、M3H9、Y10H6、DG、AFFF(l)、6H8、 L1-7E5 、 L2-15B10 、A13all 、Alh5 、A4B4(1)、 A4B4L1FR-S28R、A4B4-F52S、rsv6、rsvll、rsvl3、rsvl9、 rsv21、rsv22、rsv23、RF-1 或 RF-2。在一些實例中，用於 組合療法之一或多種其他抗病毒抗體包括含有來自抗RSV 小鼠單株抗體之一或多個CDR的抗體或其抗原結合片段， 該抗RSV小鼠單株抗體諸如（但不限於）MAb 1153、1142、 1200 ' 1214、1237、1129、im、1107、1112、1269、1269、 1243 (Beeler 等人（1989) 63(7):2841-2950 )、 MAbl51 ( Mufson 等人（1987) «/. Clin. Microbiol. 25:1635-1539 )、MAb 43-1 及 13-1( Fernie 等人（1982) Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1 7 1:266-271 )、MAb . 1436C、13 02A、 1308F 及 1331H( Anderson 等人（1984)/. C/z/i.Mz.crohi?/· 19:934-936 )。可用於與本文所提供之抗rSV抗體或抗原結 合片段之組合療法的其他例示性抗體或其抗原結合片段包 括（但不限於）例如以下專利中所述之抗RSV抗體或其抗 250 201201839 * 原結合片段：美國專利第6,413,771號、第5,840,298號、 第 5,811，524 號、第 6,656,467 號、第 6,537,809 號、第 7,364,742 號、第 7,070,786 號、第 5,955,364 號、第 7,488,477 號、第 6,818,216 號、第 5,824,307 號、第 7,364,737 號、第 6,685,942號及第5,762,905號及美國專利公開案第 2007-0082002 號、第 2005-0175986 號、第 2004-0234528 號、第 2006-0198840 號、第 2009-0110684 號、第 2006-0159695 號、第 2006-0013824 號、第 2005-0288491 號、第 2005-0019758 號、第 2008-0226630 號、第 2009-0137003 號及第 2009-0092609 號。 在一些實例中’用於與本文所提供之抗RSV抗體或其 抗原結合片段之組合療法的一或多種其他抗病毒抗體包括 含有具有以下任一者所示之胺基酸序列的VH鏈之抗體或其 抗原結合片段：SEQ ID NO: 103、113、122、131、137、144、 149 、 155 、 161 、 167 、 172 、 176 、 179 、 182 、 186 、 190 、 194 、 198 、 201 、 205 、 210 、 215 、 222 、 226 、 233 、 239 、 246、252、257、362及366。在一些實例中，用於與本文 所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段之組合療法的一或 多種其他抗病毒抗體包括含有具有以下任一者所示之胺基 ’酸序列的VH域之抗體或其抗原結合片段：SEq id NO: 104、114、123、132、138、145、150、156、162、168、173、 187、206、227、232、234、240、247、253 及 258。在一 些實例中，用於與本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合 片段之組合療法的一或多種其他抗病毒抗體包括含有具有 C： 251 201201839 以下任一者所示之胺基酸序列的VH CDR1之抗體或其抗原 結合片段：SEQ ID NO: 105、115、124、363 及 367。在特 定實例中，用於與本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合 片段之組合療法的一或多種其他抗病毒抗體包括含有具有 以下胺基酸序列之VH CDR1的抗體或其抗原結合片段： TSGMSVG ( SEQ ID NO:105 )、TAGMSVG ( SEQ ID NO:115) ' AYAMS ( SEQ ID NO:363)或 GYTMH ( SEQ ID NO:367)。在一些實例中，用於與本文所提供之抗RSV抗 體或其抗原結合片段之組合療法的一或多種其他抗病毒抗 體包括含有具有以下任一者所示之胺基酸序列的VH CDR2 之抗體或其抗原結合片段：SEQ ID NO: 106、125、133、157、 23 6、25 9、364及368。在一特定實例中，用於與本文所提 供之抗RSV抗體或其抗原結合片段之組合療法的一或多種 其他抗病毒抗體包括含有具有以下胺基酸序列之VH CDR2 的抗體或其抗原結合片段：DIWWDDKKDYNPSLKS( SEQ ID NO:106)或 DIWWDDKKHYNPSLKD(SEQ ID NO:125)、 GISGSGDSTDYADSVICG ( SEQ ID NO:364 ) 或 SITGGSNFINYSDSVKG( SEQ ID NO:3 68 )。在一些實例中， 用於與本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段之組合 療法的一或多種其他抗病毒抗體包括含有具有以下任一者 所示之胺基酸序列的VH CDR3之抗體或其抗原結合片段： SEQ ID NO: 107、116、126 ' 139 ' 188、241、365 及 369。 在一特定實例中，用於與本文所提供之抗RSV抗體或其抗 原結合片段之組合療法的一或多種其他抗病毒抗體包括含 252 201201839 有具有以下胺基酸序列之VH CDR3.的抗體或其抗原結合片 段：SMITNWYFDV( SEQ ID NO:107)、DMIFNFYFDV( SEQ ID NO:126 )、HLPDYWNLDYTRFFYYMDV( SEQ ID NO:365 ) 或 APIAPPYFDH ( SEQ ID NO:369 )。
在一些實例中，用於與本文所提供之抗RSV抗體或其 抗原結合片段之組合療法的一或多種其他抗病毒抗體包括 含有具有以下任一者所示之胺基酸序列的VL鏈之抗體或其 抗原結合片段：SEQ ID NO: 108、117、127、134、140、146、 152 、 158 、 164 、 169 、 174 、 177 、 180 、 183 、 189 、 191 、 195、199、202、207、211、216、220、223、228、23 6、242、 248、254、260、263、370、374 及 378。在一些實例中， 用於與本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段之組合 療法的一或多種其他抗病毒抗體包括含有具有以下任一者 所示之胺基酸序列的Vl域之抗體或其抗原結合片段：SEQ ID NO: 109、118、128、135、141、147、153、159、165、 170 、 175 、 178 、 181 、 184 、 192 、 196 、 200 、 203 、 208 、 212 、 217 、 221 、 224 、 229 、 237 、 243 、 249 、 255 、 261 及 264 »在一些實例中，用於與本文所提供之抗RSV抗體或其 抗原結合片段之組合療法的一或多種其他抗病毒抗體包括 含有具有以下任一者所示之胺基酸序列的Vl CDR1之抗體 或其抗原結合片段：SEQ ID NO: 110、119、129、142、154、 166、244、250、265、371、375 及 379。在一特定實例中’ 用於與本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段之組合 療法的一或多種其他抗病毒抗體包括含有具有以下胺基酸 253 I!：： 201201839 序列之VL CDR1的抗體或其抗原結合片段：KCQLS VGYMH (SEQ ID NO:110)、SASSRVGYMH ( SEQ ID NO:154)、 RATQSISSNYLA ( SEQ ID NO:371 )、KASQNINDNLA ( SEQ ID NO:375 )或 RATQSVSNFLN ( SEQ ID NO:379)。在一些 實例中，用於與本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片 段之組合療法的一或多種其他抗病毒抗體包括含有具有以 下任一者所示之胺基酸序列的VL CDR2之抗體或其抗原結 合片段：SEQ ID NO: m、120、136、143、160、171、185、 218 、 225 、 230 、 238 、 245 、 251 、 256 、 262 、 266 、 372 、
3 76及3 80。在一特定實例中，用於與本文所提供之抗RSV 抗體或其抗原結合片段之組合療法的一或多種其他抗病毒 抗體包括含有具有以下胺基酸序列之VL CDR2的抗體或其 抗原結合片段：DTSKLAS( SEQ ID ΝΟ:111 )、DTLLLDS( SEQ ID NO:218)、GASNRAT( SEQ ID NO:372)、GASSRAT( SEQ ID NO:376)或 DASTSQS ( SEQ ID NO:3 80 )。在一些實例 中，用於與本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段之 組合療法的一或多種其他抗病毒抗體包括含有具有以下任 一者所示之胺基酸序列的VL CDR3之抗體或其抗原結合片 段：SEQ ID NO: 112、121、193、373、377 及 381。在一特 定實例中，用於與本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合 片段之組合療法的一或多種其他抗病毒抗體包括含有具有 以下胺基酸序列之VL CDR3的抗體或其抗原結合片段： FQGSGYPFT ( SEQ ID NO: 112 )、QQYDISPYT ( SEQ ID NO:373)、QQYGGSPYT ( SEQ ID NO:377 )或 QASINTPL 254 201201839 (SEQ ID NO:381 )。 在一些實例中，本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結 合片段可與針對抗RSV抗體富集之高免疫血清或免疫球蛋 白組合投予，例如 RSV高免疫球蛋白（RSV IVIG ; RespiGam® ; Medlmmune 公司，Gaithersburg，MD ;參見例 如 Groothius 等人（1993) 五《g.丄 329:1 524-1530 )。 ii.針對其他呼吸道病毒之抗體 在一些實例中，用於與本文所提供之抗RSV抗體或其 抗原結合片段之組合療法的一或多種其他抗病毒抗體包括 針對除RSV外之呼吸道病毒的抗體或其抗原結合片段，例 如選自此項技術中已知之抗人類偏肺病毒（hMPV )抗體、 抗副流行性感冒病毒（PIV )抗體、抗禽肺病毒（APV )抗 體或其他抗病毒抗體。 在一些實例中，用於與本文所提供之抗RSV抗體或其 抗原結合片段之組合療法的一或多種其他抗病毒抗體為抗 PIV抗體，該抗體免疫特異性結合於PIV抗原’，例如PIV 核鞘磷蛋白、PIV融合（F )蛋白、PIV磷蛋白、PIV大（L ) 蛋白、PIV基質（M)蛋白、PIV血球凝集素-神經胺酸酶（HN) 醣蛋白、PIV RNA依賴性RNA聚合酶、PIV Y1蛋白、PIV D 蛋白、PIV C蛋白或以上任一者之對偶基因變異體。在特定 實例中，PIV抗原為PIV F蛋白。在一些實例中，抗PIV抗 體為免疫特異性結合於人類PIV 1型、人類PIV 2型、人類 PIV 3型及/或人類PIV 4型之抗原的抗體。 在一些實例中，用於與本文所提供之抗RSV抗體或其 丨丨:; »>> 255 201201839 抗原結合片段之組合療法的一或多種其他抗病毒抗體為抗 hMPV抗體，該抗體免疫特異性結合於h]Vipv抗原，例如 hMPV核蛋白、hMPV磷蛋白、hMPV基質蛋白、hMPV小 疏水性蛋白、hMPV RNA依賴性RNA聚合酶、hMPV F蛋 白、hMPV G蛋白或以上任一者之對偶基因變異體。在特定 貫例中’ hMPV抗原為PIV F蛋白。在一些實例中，抗hMPV 抗體為免疫特異性結合於hMPV A型及/或hMPV B型之抗 原的抗體。在一些實例中，抗hMPV抗體為免疫特異性結 合於hMPV亞型A1及/或A2及/或hMPV亞型B 1及/或B2 之抗原的抗體。 與本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段組合投 予的抗體可為此項技術中已知之任何類型之抗體或抗原結 合片段。舉例而言，與本文所提供之抗RSV抗體或其抗原 結合片段組合投予的抗體或其抗原結合片段可包括（但不 限於）單株抗體、人類抗體、非人類抗體、重組產生之抗 體、嵌合抗體、人類化抗體、多特異性抗體（例如雙特異 性抗體）、細胞内抗體及抗體片段，諸如（但不限於）Fab 片段、Fab1片段、F(ab')2片段、Fv片段、二硫鍵連接之Fv (dsFv )、Fd 片段、Fd1 片段、單鏈 Fv ( scFv )、單鏈 Fab (scFab ) '雙功能抗體、抗個體遺傳型（抗Id )抗體或以上 任一者之抗原結合片段。與本文所提供之抗RSV抗體組合 投予的抗體可包括任何免疫球蛋白類型（例如IgG、IgM ' IgD、IgE、IgA 及 IgY )、任何種類（例如 IgGl、IgG2、IgG3、 IgG4、IgAl及IgA2)或亞類（例如IgG2a及IgG2b)之成 256 201201839 員。 在一些實例中，相對於在抗RSV抗體或抗原結合片段 不存在下RS V感染之發病率，投予抗病毒抗體或抗原結合 片段之組合可使RSV感染之發病率抑制至少99%或約 99%、至少95%或約95%、至少90%或約90%、至少85%或 約85%、至少80%或約80%、至少75%或約75%、至少7〇〇/0 或約70%、至少65%或約65%、至少60%或約60%、至少 55%或約55%、至少50%或約50%、至少45%或約45%、至 少40%或約40%、至少35%或約35%、至少30%或約30%、 至少25%或約25%、至少20%或約20%、至少15%或約15% 或至少10%或約10%。在一些實例中，相對於在抗病毒抗 體或抗原結合片段之組合不存在下RSV感染之一或多種症 狀的嚴重程度，投予抗病毒抗體或抗原結合片段之組合可 使RSV感染之一或多種症狀的嚴重程度降低至少99%或約 99%、至少95%或約95%、至少90%或約90%、至少85%或 約85%、至少80%或約80%、至少75%或約75°/。、至少70% 或約70%、至少65%或約65%、至少60%或約60%、至少 55%或約55%、至少50%或約50%、至少45%或約45%、至 少40%或約40%、至少35%或約35%、至少30%或約30%、 至少25%或約25°/❶、至少20%或約20%、至少15%或約15% 或至少10%或約10%。 在一些實例中，相對於在抗病毒抗體或抗原結合片段 之組合不存在下RSV與其宿主細胞受體之結合，抗病毒抗 體或抗原結合片段之組合可使RSV與其宿主細胞受體之結 257 201201839 合抑制至少99〇/〇或約99%、至少95%或約95%、至少90% 或約90%、至少8.5%或約85%、至少80%或約80%、至少 75%或約75%、至少70%或約70%、至少65%或約、至 少60。/。或約60%、至少55%或約55%、至少50%或約50〇/〇、 至少45%或約45%、至少40%或約40%、至少35%或約35〇//〇、 至少30%或約30%、至少25%或約25%、至少20%或約20%、 至少15%或約15%或至少1 〇%或約1 〇〇/〇。在一些實例中’ 相對於在抗病毒抗體或抗原結合片段之組合不存在下之 RSV複製，抗病毒抗體或抗原結合片段之組合可使RSV複 製抑制至少99%或約99%、至少95%或約95%、至少90% 或約90%、至少85%或約85%、至少80%或約80%、至少 75%或約75%、至少70%或約70%、至少65%或約65%、至 少60%或約60%、至少55%或約55%、至少50%或約50%、 至少45%或約45%、至少40%或約40%、至少35%或約35%、 至少30%或約30%、至少25%或約25%、至少20%或約20%、 至少15°/❶或約15%或至少1〇%或約1〇〇/0。 5·基因療法 在一些實例中’投予包含編碼抗RSV抗體、抗原結合 片段及/或其衍生物之序列的核酸以經由基因療法治療、預 防或改善一或多種與RSV感染相關之症狀。基因療法指藉 由向個體投予所表現或可表現之核酸所進行的療法。在此 實例中，核酸產生其編碼之抗體或其抗原結合片段，此介 導防治或治療效應。 此項技術中可用之基因療法之任何方法均可用於投予 258 201201839 編碼抗R S V抗體、抗原結合片段及/或其衍生物之核酸。下 文描述例示性方法。 關於基因療法方法之一般評述，參見例如Goldspiel等 人（1993) CViWca/ 12:488-505 ; Wu 及 Wu (1991)
Biotherapy 3:87-95 Ϊ Tolstoshev (1993) Rev. Pharmacol. Toxicol. 32:573-596 ； Mulligan (1993) Science 260:926-932 ；
Morgan 及 Anderson (1993) 62:191-217 ; 及7757^C// 1 1(5):155-215。可使用之此項技術中通常已知 之重組DNA技術方法描述於以下文獻中：Ausubel等人 (編），Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley & Sons, NY (1993);及 Kriegler，Gene Transfer and Expression， A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990) ° 在一些實例中，本文所提供之組成物含有編碼抗RSV 抗體、抗原結合片段及/或其衍生物之核酸，其中該等核酸 為在適合之宿主中表現抗RSV抗體、抗原結合片段及/或其 衍生物之表現載體的一部分0詳言之，該等核酸具有可操 作地連接於抗體編碼區之啟動子，諸如異源啟動子，該啟 動子為誘導性或組成性的且視情況為組織特異性的。在另 一特定具體實例中’使用如下核酸分子，其中編碼抗體之 序列及任何其他所需序列側接促進基因組中所需部位之同 源重組的區域’由此使得編碼抗體之核酸進行染色體内表 現（Koller 及 Smithies (1989)尸購· C/a <56:8932-8935 ; Zijlstra 等人（1989)漏Mre 342:435-438 )。 在一些實例中，所表現之抗體分子為單鍵抗體。在一些實 !； 259 201201839
例中，核酸序列包括編碼抗體之重鏈及輕鏈或其片段的序 列。在一特定實例中，核酸序列包括編碼抗RSV Fab片段 之序列。在一特定實例中，核酸序列包括編碼全長抗rSV 抗體之序列。在—些實例中，所編碼之抗RSV抗體為嵌合 抗體。 將核酸傳遞至個體中可直接進行，在該情況下該個體 直接曝露於核酸或帶有核酸之載體；或間接進行，在該情 況下首先在試管内用核酸使細胞轉型，隨後將細胞移植至 個體中。此兩種方法分別稱為活體内或活體外基因療法。 在一些實例中’活體内直接投予核酸序列，其中其表 現產生所編碼之產物。此可藉由此項技術中已知之多種方 法中之任一者來完成，例如將該等序列構築為適當核酸表 現載體之一部分且投予其以使得其變成細胞内的，例如藉 由使用缺陷或減毒反轉錄病毒或其他病毒載體感染（參見 美國專利第4,980,286號），或藉由直接注射裸DNA，或藉 由使用微粒轟擊（例如基因搶；Biolistic，Dupont)，或用脂 質或細胞表面受體或轉染劑塗佈，囊封於脂質體、微粒或 微膠囊中，或藉由投予連接於已知進入細胞核之肽的核 酸’藉由投予連接於經歷受體介導性内攝作用之配位體的 核酸（參見例如 Wu 及 Wu (1987) */· 5ί·σ/. CAew. 262:4429-4432 )來投予，該受體介導性内攝作用可例如用 於以特異性表現受體之細胞類型為目標。在一些實例争， 可形成核酸-配位體複合物，其中該配位體含有破壞内體之 融合病毒肽，從而使核酸避免溶酶體降解。在一些實例中， 260 201201839 細胞特異性攝取及表現可在活體内以核酸為目標，藉由以 特異性受體為目標來達成（參見例如PCT公開案WO 92/06180 ; WO 92/22635 ; WO92/203 16 ; W093/14188 及 WO 93/20221 )。或者，可將核酸引入細胞内且藉由同源重 組併入宿主細胞DNA中以進行表現（Koller及Smithies (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:8932-8935 ； Bl Zijlstra 等人（1989) 342:435-438 )。 在一些實例中，使用含有編碼抗RSV抗體、抗原結合 片段及/或其衍生物之核酸序列的病毒載體。舉例而言，可 使用反轉錄病毒載體（參見例如Miller等人（1993) MW/?. E«叮mo/. 217:581-599 )。反轉錄病毒載體含有正確封裝病毒 基因組及整合至宿主細胞DNA十所必需之組件。將編碼欲 用於基因療法中之抗體或其抗原結合片段的核酸序列選殖 至一或多種載體中，此舉有助於將基因傳遞至個體中。關 於反轉錄病毒載體之更多詳情，可例如見於Boesen等人 (1994) 6:291-302中。說明反轉錄病毒載體於基 因療法中之用途的其他參考文獻包括例如Clowes等人 (1994) </. C7i«. /«veW. 93:644-651 ; Klein 等人（1994) 5/ood 83:1467-1473 ; Salmons 及 Gunzberg (1993) //謂⑽
Therapy 4:129-141； A Grossman Wilson (1993) Curr. Opin.
Deve/. 3:110-114 。 腺病毒亦為可用於基因療法中之病毒載體。腺病毒為 用於將基因傳遞至呼吸道上皮之尤其具有吸引力的運載 體。腺病毒自然地感染呼吸道上皮，從而引起輕度疾病。 it： 261 201201839 基於腺病毒之傳遞系統的其他目標包括肝臟、中柩神經系 統、内皮細胞及肌肉》腺病毒具有能夠感染非分裂細胞之 優點。Kozarsky 及 Wilson (1993) Cwrre/ζί Gewe/z.c·? α«ί/ Deve/opmeW 3:499-503呈現基於腺病毒之基因療法的 評述。Bout 等人（1994) //wmaw Gene TTierap少 5:3-10 證明 使用腺病毒載體將基因轉移至恆河猴之呼吸道上皮。在基 因療法中使用腺病毒之其他情況可例如見於R0senfeld等人 (1991) 252:431-434; Rosenfeld 等人（1992) Ce// 68:143-155 ; Mastrangeli 等人（1993) ·/. /«v如. 91:225-234; PCT 公開案 W094/12649;及 Wang 等人（1995)
Gene 77^r叩少2:775-783中。在一特定實例中，使用腺病毒 載體傳遞編碼本文所提供之抗RSV抗體、抗原結合片段及/ 或其衍生物的核酸。 腺相關病毒（adeno-associated virus，AAV)亦可用於 基因療法中（Walsh 等人（1993) Proc. *SW·五印·仏〇/. A/ei/. 204:289-300 ;及美國專利第5,436，146號）。在一特定實例 中，使用腺相關病毒（AAV )載體傳遞編碼本文所提供之抗 RSV抗體、抗原結合片段及/或其衍生物的核酸。 另一基因療法方法涉及藉由諸如電穿孔、脂質轉染、 «約介導性轉染或病毒感染之方法將基因轉移至組織培 養物中之細胞。-般，轉移方法包括將可選擇標記物轉移 至細胞。隨後對細胞進行選擇以分離已攝取及正表現轉移 基因之彼等細胞。隨後將表現基因之細胞傳遞至個體。 在一些實例令，將編碼本文所提供之抗謂抗體、抗 262 201201839 原結合片段及/或其衍生物的核酸引入細胞中，隨後活體内 投予所得重組細胞。該引入可藉由此項技術中已知之任何 方法進行’包括（但不限於）轉染、電穿孔、顯微注射、 感染含有核酸序列之病毒或噬菌體載體、細胞融合、染色 體介導性基因轉移、微細胞介導性基因轉移及原生質球狀 體融合。此項技術中已知用於將外源基因引入細胞中之多 種技術（參見例如L〇effler& Behr (1993) 汰心叮_厂 217:599-618
Cohen 等人（1993) Me/A. Enzymol. 217:618-644 ； Cline (19S5) Pharmacol. Ther. 29:69-92) . χ 該等技術可用於投予編碼本文所提供之抗RSV抗體、抗原 結合片段及/或其衍生物的核酸，其限制條件為不能破壞接 受者細胞之必需發育及生理功能。該技術將核酸穩定轉移 至細胞，以使得核酸可被細胞表現且典型地可由其細胞子 代遺傳及表現。 所得重組細胞可藉由此項技術中已知之各種方法傳遞 至個體。可靜脈内投予重組血細胞（例如造血幹細胞或祖 細胞）。細胞之投予量視包括例如所需防治及/或治療效應及 患者病況在内之各種因素而定，且可由熟習此項技術者測 定》 出於基因療法之目的可引入核酸之細胞涵蓋任何所需 的可用細胞類型，且包括（但不限於）上皮細胞、内皮細 胞、角質細胞、纖維母細胞、肌肉細胞、肝細胞；血細胞， 諸如T淋巴細胞、；B淋巴細胞、單核細胞、巨嗤細胞、嗜中 性白血球、嗜伊紅血球、巨核細胞、粒細胞；各種幹細胞
C 263 201201839 或祖細胞，尤其為造血幹細胞或祖細胞，例如自骨髓、臍 帶血、周邊血液及胎兒肝臟獲得。在特定實例中，用於基 因療法之細胞對於個體為自體固有的β 在重組細胞用於基因療法中之一些實例中，將編碼本 文所提供之抗RSV抗體、抗原結合片段及/或其衍生物的核 酸序列引入細胞中以使得其可被細胞或其子代表現，且隨 後活體内投予重組細胞以用於治療效應。在一特定實例 中，使用幹細胞或祖細胞。可使用可試管内分離及維持之 任何幹細胞及/或祖細胞（參見例如PCT公開案w〇 94/08598 ’ Stemple 及 Anderson (1992) CW/ 7 1:973-985 ;
Rheinwald (1_)从邊 Ce// 細.21A:229 ;及叫㈣㈣及
Scott (1986) Mayo C/Wc Proc. 61:771 )。 在一特定實例中，出於基因療法之目的欲引入之核酸 含有可操作地連接於編碼區之誘導性啟動子，以使得核酸 之表現可藉由控制適當轉錄誘導物之存在或不存在來控 制。 J.醫藥組成物、組合及製品/套組 1.醫藥組成物 本文提供含有本文所提供之抗Rsv抗體或其抗原結合 片段的醫藥組成物。該醫藥組成物可用於治療性、防治性 及/或#斷性應用。本文所提供之抗Rsv抗體或其抗原結合 片段可與S藥學Λ可接受之載劑或稀㈣一起調配。一 般，該等醫藥組成物使用不顯著減弱抗體或其抗原結合片 段之生物性質的組分，該等生物性質諸如與其特異性抗原 264 201201839 決定基之結合（例如結合於RSV F蛋白上之抗原決定基）。 在與其他成为相谷且對患者無害之意義上，每一組分均為 醫藥學上及生理學上可接受的。調配物宜以單位劑型呈現 且可藉由藥劑學技術中熟知之方法來製備，包括（但不限 於）錠劑、丸劑、散劑、液體溶液或懸浮液（例如包括可 注射、可攝取及區域性調配物（例如滴眼劑、凝膠或軟膏）、 氣溶膠（例如鼻用噴霧）、脂質體、栓劑、可注射及可輸注 溶液及持續釋放形式。參見.例如Gilman等人（編，1990) Goodman and Gilman's: The Pharmacological Bases of
Therapeutics,第 8 版，Pergamon Press ;及 Remington's Pharmaceutical Sciences，第 17 版（1990)，Mack Publishing 公司，Easton，Pa. ; Avis 等人（編，1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Dekker, NY ;
Lieberman 等人（編，1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Dekker, NY ;及 Lieberman 等人（編，1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Dekker, NY。當全身投予時，治療性組成物為無菌、無熱原質、大 致不含微粒物質，且含於非經腸可接受之溶液中，該溶液 應注意pH值、等滲性及穩定性《此等條件為熟習此項技術 者所已知。製備非經腸可投予之組成物的方法為眾所周知 的或將為熟習此項技術者顯而易見，並更詳細描述於例如 「Remington: The Science and Practice of Pharmacy (Formerly Remington's Pharmaceutical Sciences)」，第 19 版，Mack Publishing 公司，.Easton，Pa· (1995)中。 265 201201839 本文所提供之醫藥組成物可呈各種形式，例如呈固 體、半固體、液體、散劑、水溶液或凍乾形式。適合之醫 萬載劑的貫例為此項技術所已知且包括（但不限於）水、 緩衝劑、生理食鹽水溶液、磷酸鹽緩衝生理食鹽水溶液、 各種類型之濕潤劑、無菌溶液、醇類、阿拉伯膠、植物油、 笨曱醇、明膠、甘油、碳水化合物（諸如乳糖、蔗糖、直 鏈澱粉或澱粉）、硬脂酸鎂、滑石、砍酸、黏性石蠟、香料 油' 脂肪酸單甘油酯及二甘油酯、季戊四醇脂肪酸酯、羥 甲基纖維素、散劑。本文所提供之醫藥組成物可含有其他 添加劑，包括例如抗氧化劑、防腐劑、抗微生物劑、止痛 劑、黏合劑、崩解劑、著色劑、稀釋劑、賦形劑、增量劑、 助流劑、增溶劑、穩定劑、滲透劑、媒劑、黏度劑、調味 劑、乳液（諸如油/水乳液）、乳化劑及懸浮劑（諸如阿拉伯 膠、瓊脂、海藻酸、海藻酸鈉、膨潤土、卡波姆（carb〇mer)、 角又菜膠、羧甲基纖維素、纖維素、膽固醇、明膠、羥乙 基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、甲基纖維 素、辛苯昔醇9(〇Ct〇xyn〇19)、油醇、聚維酮（p〇vid〇ne)、 丙二醇單硬脂酸酯、月桂基硫酸鈉、脫水山梨糖醇酯、硬 酯醇、黃蓍膠、三仙膠及其衍生物）、溶劑及其他成分，諸 如結晶纖維素、微晶纖維素、檸檬酸、糊精、右旋糖、液 體葡萄糖、乳酸、乳糖、氯化鎂、偏磷酸鉀、澱粉（一般 參見 Alf0ns0 R. Gennaro (2〇〇〇) Remingt〇n: The _
Practice of Pharmacy，第 2〇 版 Bahim〇re，md: 副“
Williams & Wilkins)。該等載劑及/或添加劑可藉由習知方 266 201201839 法調配且可以適合之劑量投予個體。諸如脂質、核酸酶抑 制劑、聚合物及螯合劑之穩定劑可防止組成物在體内降解。 適合使用之醫藥組成物包括含有有效達成所欲目的之 里的或多種抗Rsv抗體之組成物。治療.有效量之測定完 全在熟習此項技術者之能力範圍内。治療有效劑量可藉由 使用如本文所述之試管内及活體内方法來測定。因此，當 本文所提供之抗rsv抗體或其抗原結合片段呈醫藥製劑 時’其可以單位劑型呈現以用於投藥。 本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段可經凍乾 用於儲存且在使用之前用適合之載劑復原。已顯示此技術 對於習知免疫球蛋白及蛋白質製劑有效且可使用此項技術 已知之凍乾及復原技術。 本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段可以控制 釋放或持續釋放組成物形式提供。此項技術中已知用於調 配丸劑及膠囊之聚合物質，其可達成本文所提供之抗體或 其抗原結合片段的控制或持續釋放（參見例如Medical Applications of Controlled Release，Langer 及 Wise (編）， CRC Pres.，Boca Raton，Fla. (1974) ; Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen 及 Ball (編），Wiley，New York (1984) ; Ranger 及 Peppas (1983) J., Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61 ;亦參見 Levy 等人（1985) Science 228:190 ; During 等人（1989) 25:35 1 ; Howard 等人（1989)«/· 7 1:105 ;美國專利第 5,679,377 號、第 5,916,597 267 201201839 號、第 5,912,015 號、第 5,989,463 號、第 5，128,326 號；PCT 公開案第WO 99/15154號及第WO 99/20253號用於持續 釋放調配物中之聚合物的實例包括（但不限於）聚（甲基丙 烯酸2-羥基乙酯）、聚（甲基丙烯酸曱酯）、聚（丙烯酸）、聚（乙 烯-共-乙酸乙烯酯）、聚（甲基丙烯酸）、聚乙交酯（PLG )、 聚酸酐 '聚（N-乙烯基吡咯啶酮）、聚（乙烯基醇）、聚丙烯醯 月女、/衣（乙一醇）、聚丙交醋（PLA)、聚（丙.交醋-共-乙交醋） (PLGA )及聚原酸酯。一般，用於持續釋放調配物中之聚 合物為惰性物質’不含可浸出雜質，儲存穩定，無菌，且 生物可降解。可使用此項技術中已知用於產生持續釋放調 配物之任何技術產生含有本文所提供之一或多種抗RSV抗 體或抗原結合片段的持續釋放調配物。 在一些實例中，醫藥組成物含有本文所提供之抗RSV 抗體或其抗原結合片段及一或多種其他抗體。在一些實例 中，一或多種其他抗體包括（但不限於）帕利珠單抗 (SYNAGIS® )及其衍生物’諸如（但不限於）莫維珠單抗 (NUMAX® )、AFFF、P12f2、P12f4、Plld4、Ale9、A12a6、 A13c4、A17d4、A4B4、A8c7、1X-493L卜 FR H3-3F4、M3H9 ' Y10H6、DG、AFFF(l)、6H8、L1-7E5、L2-15B10、A13all、 Alh5、A4B4(1)、A4B4L1FR-S28R 及 A4B4-F52S (參見美 國專利第 5,824,307 號及第 6,818,216 號）、rsv6、rsvll、 rsvl3、rsvl9、rsv21、rsv22、rsv23 (參見例如美國專利第 5,824,307 號、第 6,685,942 號及第 6,818,216 號）；人類抗 RSV 抗體’諸如（但不限於）rsv6、rsvl 1、rsvl3、rsvl9 (亦 268 201201839 • 即 Fab 19 )、rsv21、rsv22、rsv23、RF-l、RF-2 (參見例如 - 美國專利第6,685,942號及第5,811,524號）；衍生自抗RSV 小鼠單株抗體之人類化抗體，諸如（但不限於）MAb 1153、 1142、1200、1214、1237、1129、1121、1107、1112、1269、 1269 、 1243 ( Beeler 等人 (1989) J. Virology 63(7):2841-2950)、MAM51 ( Mufson 等人(19名7) J. Clin. MzcroMo/· 25:1635-1539 )、MAb 43-1 及 13-1 ( Fern.ie 等人 (1982) Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 171:266-271 ) ' MAb 1436C、1302A、1308F 及 1331H ( Anderson 等人（1984) /. C7i«· MicroWo/. 19:934-936);或其抗原結合片段。可用於 含有本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段的醫藥組 成物中之其他例示性抗體或其抗原結合片段包括（但不限 於）例如以下專利中所述之抗RSV抗體或其抗原結合片 段：美國專利第6,413,771號、第5,840,298號、第5,811，524 號、第 6,656,467 號、第 6,537,809 號、第 7,364,742 號、第 7,070,786 號、第 5,955,364 號、第 7,488,477 號、第 6,818,216 號、第 5,824,307 號、第 7,364,737 號、.第 6,685,942 號及第 5,762,905號以及美國專利公開案第2007-0082002號、第 2005- 0175986 號、第 2004-0234528 號、第 2006-0198840 號、第 2009-0110684 號、第 2006-0159695 號、第 2006- 0013824 號、第 2005-0288491 號、第 2005-0019758 號、第 2008-0226630 號、第 2009-0137003 號及第 2009-0092609 號。 2.製品/套組 269 201201839 抗RSV抗體或編碼抗RSV抗體或其衍生物或生物活性 部分之核酸的醫藥組成物可經封裝為含有以下之製品··封 裝材料，其為有效防治（亦即接種疫苗 '被動免疫）及/或 治療RSV介導性疾病或病症之醫藥組成物，及指示將抗體 或核酸分子.S於接種疫苗及/或治療疾病或病症之標藏。醫 藥組成物可封裝於含有用於單次給藥或多次給藥之量的醫 藥組成物之單位劑型中。經封裝組成物可含有含所提供之 抗RSV抗體或其抗原結合片段的醫藥組成物之;東乾粉末， 其可在投藥之前進行復原（例如用水或生理食鹽水）。 本文所提供之製品含有封裝材料。用於封裝醫藥產品 之封裝材料為熟習此項技術者所熟知。醫藥封裝材料之實 例包括（但不限於）發泡包裝、瓶子、管、吸入器、吸入 器（例如加壓定劑量吸入器（MDI)'乾粉吸入器（Dpi)、 霧化器（例如喷射或超音波霧化器）及其他單次呼吸液體 系統）、泵、袋、小瓶、容器、注射器、瓶子及適合於所選 凋配物及所欲投藥模式及治療之任何封裝材料。醫藥組成 物亦可併入阻隔物或用於避免感染之其他保護裝置中'、'、塗 覆於其上或塗佈於其上。 ' 本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段、編碼 柷體之核酸分子、醫藥組成物或組合亦可以套組形式 供。套組可視情況包括一或多種組件，諸如使用說明書 裝置及其他試劑（例如用於稀釋組成物及/或復原凍乾^ 質之無菌水或生理食鹽水溶液），及諸如管 '容器及注射 之用於實施方法之組件。例示性套組可包括本文所提供 270 201201839 抗RSV抗體或其抗原結合片段，且可視情況包括使用說明 書、用於向個體投予抗RSV抗體或其抗原結合片段之裝 置、用於偵測個體中之抗RSV抗體或其抗原結合片段的裝 置、用於偵測自個體獲得之樣品中之抗RSV抗體或其抗原 結合片段的裝置及用於向個體投予另一治療劑之裝置。 套、、’且了視情況包括說明書。說明書典型地包括切實表 述’其描述套組中包括之抗RSV抗體或其抗原結合片段及 視情況存在之其他組分，及投藥方法，包括確定個體適當 狀況、適當劑量、給藥方案之方法及投予抗RSV抗體或其 抗原結合片段之適當投藥方法。說明書亦可包括在治療持 續時間内監測個體之指導。 套組亦可包括本文所述之醫藥組成物及用於診斷之物 。口。舉例而言，該等套組可包括用於量測個體中之所選抗 Rsv抗體或其抗原結合片段之濃度、量或活性的物品。 在一些實例中，.抗Rsv抗體或其抗原結合片段提供於
投予藥物之各種裝置中 品（例如自個體獲得之流體樣品， 、肺部插管樣品、唾液、尿或淋巴 組中。在一些實例中，該診斷套組 體戈其抗原結合片段及/或一或多種 結合抗體）之組，其中該組中之一 供之抗RSV抗體或抗原結合片段。 亦可包括用於向個體投予抗RSV抗 裝置。此項技術中已知用於向個體 之任一者均可包括在本文所提供之 271 201201839 套組中。例示性裝置包括（但不限於）吸入器（例如加遷 定劑量吸入器（麵)、乾粉吸入器（Dpi)、霧化器（例如 喷射或超音《化器）及其料切吸液㈣統）、皮下主 射針、靜脈注射針、導管㈣體分配器（諸如㈣器）。典 型地，用於投予套組之抗Rsv抗體或其抗原結合片段的裳 置將與抗RSV抗體或其抗原結合片段之所需投藥方法相 各。舉例而言’欲藉由經肺投藥傳遞之抗卿抗體或其抗 原結合片段可包括在具有吸入器或霧化器之套組中或含於 吸入器或霧化器中。 3.組合 提供本文所提供之抗RSV抗體或其抗原結合片段與諸 如第二抗RSV抗體或其抗原結合片段或其他治療劑或診斷 劑的第二藥劑之組合。組合可包括任何抗RSV抗體或其抗 原結合片段或根據本文所提供之方法用於實現其療法之試 齊卜舉例而言，組合可包括任何抗Rsv抗體或其抗原結合 片段及抗病毒劑。組合亦可包括本文所提供之抗rsv抗體 或其抗原結合片段及-或多種其他治療性抗體。所提供之 抗RSV抗體或其抗原結合片段之組合亦可含有醫藥植成 物，其含有抗RSV抗體或其抗原結合片段或含有編碼如本 文所述之抗RSV抗體或其抗原結合片段之核酸的宿主細 胞。本文所提供之組合可經調配為單一組成物或各別組成 物。 實施例 以下實施例僅出於說明性目的而包括在内且不欲限制 272 201201839 - 本發明之範疇。 . 實施例1 RSV F蛋白之表現 在此實施例中，表現來自呼吸道融合性病毒株A2之 RSV融合蛋白（F蛋白）且藉由使用抗RSV單株抗體純系 2F7捕捉於ELISA培養板上來純化，該純系識別融合醣蛋 白之F0與F1次單元。在第一實施例中，選殖重組RSV F 蛋白且使其在293F細胞中表現。在第二實施例中，藉由用 RSV A2病毒株感染HEp-2細胞來表現天然RSV F蛋白。 A.重組RSV F蛋白 在此實施例中，選殖及表現編碼來自A2 RSV病毒株之 RSV F蛋白之基因。根據GeneArt ( Burlingame，CA )之標 準DNA合成方案合成僅含有細胞外域之RSV A2 F基因 (SEQ ID NO:21 )。RSV A2 F基因經工程改造以含有Kozak 序列（SEQ ID NO:21 之核苷酸 7-16)、c-myc 序列（SEQ ID NO:21 之核苷酸 1600-1629 )及 6X-His 標籤（SEQ ID NO:21 之核苷酸 1645-417 )。另外，Nhel( SEQ ID NO:22)及 Hindlll (SEQ ID NO:23 )限切位點分別在5'及1端經工程改造以允 許選殖至表現載體中。使用標準分子生物學技術消化DNA 且將其接合於經類似消化之哺乳動物表現載體 pcDNATM3.1/myc-His(-)C(SEQIDNO:24，Invitrogen)中。 將含有RSV A2 F基因之載體轉移至電勝任XL 1-Blue細胞 (Strategene )中。選擇個別群落並使其生長，且純化質體 DNA。藉由DNA測序檢驗分離之載體中RSV A2 F基因插 273 201201839 入物之存在，且使用含有該插入物之一個純系產生DNA之 大規模製備物（Megaprep套組，Qiagen)。 根據製造商之說明書，使用Freestyle™ 293表現系統 (Invitrogen )使RS V A2 F蛋白在哺乳動物細胞中表現。簡
言之，用 30 料 RSV A2 F/pcDNA3.1/m：^-His(-) C 質體 DNA 及 5 /ig pAdVAntage (Promega)共轉染 3xl〇7 個細胞且在 3 7 °C下培育7 2小時。藉由離心使細胞集結成粒且每3 X 1 〇7 個經RSV F轉染之293-F細胞添加3 mL冷溶解緩衝液（3〇〇 mM NaCl、50 mM NaH2P〇4、1% Triton X-100、Complete™ 蛋白酶抑制劑混合物（目錄號sc-2913 1，Santa Cruz )，pH 8)。在4°C下搖動混合物30分鐘，隨後在4°C下在14,000 rpm 下離心30分鐘。將澄清上清液轉移至新管中且冷凍於_8〇°c 下直至準備使用。在捕捉於ELIS A培養板上之前，解凍上 清液，簡單離心且用含有0.8%脫脂奶粉之PBS以1:1 v/v 稀釋（最終濃度為0.4%脫脂奶粉）。 B.天然RSV F蛋白 在此實施例中，如下自感染RSV之HEp-2細胞純化來 自RSV A2病毒株之天然RSV F蛋白（SEQ ID NO:382 )。 簡言之’將HEp-2細胞接種於使用完全EMEM ( ATCC 30-2003 ;含有 10% FBS、1% L-麩醯胺酸及 1% pen-Strep) 之十層細胞培養物堆疊器（Corning 3270 )中且在37°C及 5% C02下培育。一旦細胞達到80%匯合，用RSV A2病毒 (ATCC VR-1540 )以 0.01-0.1 之感染倍率（multiplicity of infection，MOI)感染HEp-2單層。培養受感染細胞3-5天 274 201201839 直至觀察到明顯細胞融合體。用PBS洗滌受感染細胞一次 且藉由將含5 mM EDTA之500 mL PBS添加至培養物堆疊 器中並在37°C下培育1小時來收集細胞。將細胞收集至5〇 mL·錐形管中（每管5x 1〇7個細胞）且藉由離心集結成粒。 用PBS洗滌細胞集結塊2次且在1200 rpm下離心5分鐘。 將細胞集結塊儲存於-2(TC下直至進一步處理。解康經冷束 細胞且將3 mL冷溶解緩衝液（300 mM NaCl、50 mM NaH2P04、1% Triton X-100、CompleteT1^ 白酶抑制劑混合 物（目錄號sc-29131，Santa Cruz)，pH 8)添加至每一細 胞集結塊中。在4°C下搖動細胞30分鐘，隨後音波處理（3 次脈衝，持續10秒，各為10%功率）且最後在4〇c下在 14,000rpm下離心30分鐘。將澄清上清液轉移至新管中且 冷凍於-80°C下直至準備使用。在捕捉於ELISA培養板上之 前，解凍上清液，簡單離心且以1:2000稀釋。 C.用抗RSV mAb捕捉 使用每孔50 /xL含抗RSV mAb之1:400稀釋液（目錄 號 NB110-37246，純系.2F7，Novus Biologicals)的 pbs 塗 佈ELIS A培養板b移除未結合之抗體且將培養板立即用於 ELISA (參見實施例2及4 )。或者，在-20°C下冷康培養板 至多2週。 在即將使用之前，在37°C下用含4%脫脂奶粉之ixpBs 阻斷培養板2小時。用含有0.05% Tween-20 (洗滌緩衝液） 之PBS洗滌培養板兩次，隨後添加溶解物。RSV F蛋白（重 組或者天然）之捕捉藉由將50 μ]：任一以上製備之溶解物添 275 201201839 加至抗RSV mAb ELISA培養板之各孔中且在37〇c下讲育2 小時來實現。 ‘ 實施例2 自經EBV轉型之B細胞分離抗RSV Fab抗體 在此實施例中，自經刺激之埃-巴二氏病毒轉型之供體 記憶性B細胞分離抗RSV抗體，針對rsv F蛋白結合進行 篩選’隨後試管内產生抗體。部分A及B描述兩種略有不 同之程序’其產生及選殖經EBV轉型之b細胞並針對RSV F蛋白結合進行篩選。差異如下：（1)步驟1中PMBC之來 源；（2 )步驟2中IgG+ B細胞之分離（在部分a中耗竭表 現IgM、IgD及IgA之細胞且另外在部分b中耗竭CD3陽 性細胞）；及（3 )步驟3.a中經照射之b細胞耗竭餵養細胞 的製備。 A·產生及選殖經EBV轉型之B細胞並針對RSV F蛋白結合 進行筛選（程序A) 自可能經由與兒童接觸而曝露於RSV之兒童護理人員 獲得周邊血液單核細胞（PBMC ) »根據製造商之說明書， 藉由禮度離心經菲科爾泛影納（Ficoll Hypaque )分離 PBMC。 1. CD22 +分離及CD22+ B細胞之活化 使用CD22磁性珠粒（Miltenyi，目錄號130-046-401 ) 及 LS 管柱（Miltenyi，.目錄號 130-042-401 )自供體 PBMC 分離3_2xl06個CD22+ B細胞。將分離之CD22+ B細胞以 每孔1 X 106個細胞培養於48孔培養板之含有10%熱不活化 276 201201839 低 IgG 胎牛血清（FBS，Invitrogen，目錄號 16250-078 )、 1%抗生素（Hyclone，目錄號 SV30010 )、1%丙酮酸鈉 (Hyclone ’目錄號 SH30239.01 )及 1% L-麩醯胺酸 (Hyclone，目錄號 SH30034.01)的 RPMI( Hyclone，目錄 號SH30096.0 1 )中。經選擇多株B細胞刺激劑來活化分離 之B細胞以誘導增殖及抗體產生》 2. IgG+ B細胞之EBV介導性永生化 洗滌4.5><106個活化之€〇22+8細胞且在4。(：下與40弘1^ 結合 FITC 之抗 IgM( BD Biosciences，目錄號 555782 )、40jitL 結合 FITC 之抗 IgD( BDBiosciences，目錄號 555778 )及 4pL 結合 FITC 之抗 IgA ( Jacksons Immunoresearch，目錄號 309-096-043 )抗體一起培育15分鐘。用PBS(含有0.5% BSA 及2 mM EDTA )洗滌細胞1次且使細胞再懸浮於90 pL相 同緩衝液中。根據製造商之說明書，藉由使用10 /iL抗FITC 磁性珠粒（Miltenyi，目錄號 130-048-701 )及LS管柱 (Miltenyi，目錄號 130-042-401 )進行表現 IgM、IgD、IgA 之細胞的陰性選擇來富集IgG+ B細胞。 藉由將1·87χ106個IgG+、CD22+富集B細胞與0.5 ml EBV 上清液（50% v/v 於含 10% FCS 之 RMPI-1640 中，ATCC 目錄號VR-1492，來自B95-8細胞）一起培育16小時來進 行B細胞之整體永生化。感染後，洗滌細胞且再與24孔培 養板之每孔0.5xlO6個經照射之餵養細胞一起培養（106個/ 毫升）於兩個孔之每一者的含有10%熱不活化低IgG胎牛 血清（Invitrogen，目錄號 16250-078)、1%抗生素（ Hyclone， s:_ 277 201201839 目錄號SV30010 )、1%丙酮酸鈉（Hycl〇ne，目錄號 SH30239.01 )及1% L-麵醯胺酸（Hyci_，目錄號 SH30034.01 )、200 IU/ml rhIL-2( R&D Systems，#202-IL-50) 之 RPMI ( Hyclone，目錄號 SH30096.01 )中 9 天。 3 · B細胞選殖 a·製備經照射之B細胞耗竭飯養細胞以選殖b細胞 使用經照射之B細胞耗竭傲養細胞來幫助維持經EB v 轉型之B細胞的生長。藉由菲科爾分離（Fic〇u separati〇n ) 獲付來自3個健康供體之混合物的p b μ C，以3 2 5 Q拉揀 (rads )照射（在 UCSD 穆爾癌症中心（UCSD Mooreis Cancer Center))，且使用抗 CD19 磁性珠粒（Miltenyi Bi〇tec，目 錄號 130-050-301 )及 LD 管柱（Miltenyi Biotec，目錄號 130-091-509 )耗竭B細胞。簡言之，解凍自菲科爾分離獲 得之經冷/東且照射之PMBC，洗條兩次且計數。隨後在3〇〇 g下離心細胞1 〇分鐘，且抽出上清液。將細胞集結塊再懸
浮於每107個細胞80 μ MACS緩衝液（含0.5% BSA及2 mM EDTA之PBS)中且添加2〇MlCD19微珠（每1〇7個細胞）。 充分混合後，在4t下培育細胞15分鐘。隨後藉由添加u niL緩衝液（每1〇7個細胞）洗滌細胞，隨後在3〇〇 g下離 心10分鐘並抽出上清液。隨後將至多1〇8個細胞再懸浮於 5〇〇μ1緩衝液中。藉由將LD管柱（由覆蓋有塑膠塗層之鐵 磁性球體構成以允許快速且平緩地分離細胞）置於MACS 分離器之磁場中來實現磁性分離。用2 mL緩衝液洗滌ld 管柱且將細胞懸浮液施加於管柱頂部。在添加2χ 1 mL緩衝 278 201201839 液後’當其通過管柱時收集到非B細胞。 b，B細胞選殖 —使約20個經EBV轉型之B細胞與多株B細胞刺激劑 及每孔5〇,〇〇〇個經照射之B細胞耗竭傲養細胞共培養於％ 孔。養板中且生長13天。產生總共個％孔培養板。 5·針對RSV F蛋白結合篩選B細胞上清液 各孔之上仴液轉移至新的96孔培養板中，且用 H條、田胞i次並在1〇〇此含有2_疏基乙醇之rlt 緩衝液（Qiagen,目錄號79216)中冷殊於_8(rcT4 _Α 中使用该上清液以判定哪些孔產生能夠結合於rsv F蛋白 之抗體。簡言之，ELISA進行如下：⑴如實施例i中所 述’使用96孔半區培養板製備Rsv F蛋白EusA培養板， 其中修改如下：使用抗Rsv mAb (純系2F7，小鼠腹水流 體，目錄號ab43812, Abcam)作為捕捉抗體且在4。〇下將 讓F蛋白與捕捉抗體—起培育隔夜。（2)將來自2個孔之 每-者的lOgLB細胞上清液（總共囊集2”l)添加至％ 半孔EUSA培養板中且在3rc下培育2小時。使用來自血 庫供體池之血漿（在菲科爾泛影鈉分離後收集及冷凍，以 1:1〇〇〇稀釋）作為陽性對照組。⑴如上所述洗務培養板4 次且向各孔中添加50奸山羊抗人類FeIgGHRj^合抗體 (用含0.05% Tween2〇之PBS以1:1〇〇〇稀釋）並在加下 培育培養1小時。（4)如上所述洗縣培養板6次且使用 50叫1:1 v/v TMB:過氧化物溶液（pi⑽目錄號34〇21) 受質進行顯色並顯色7分鐘。藉由添加5(^L2nh2s〇4立 279 201201839 即停止反應且使用ELISA培養板讀取器量測45〇 nm下之吸 光度。由大於0.5之ΟΕ>45〇(0.5·〇.9為中等結合，>1為強 結合）及超過背景3倍之反應指示陽性結合。 為判定兩個彙集孔中何者含有抗rSV抗體，針對捕捉 之RSV F蛋白個別地再測試來自各孔之2〇 B細胞上清 液（用 PBS/0.05% Tween 20 以 1:2 v/v 稀釋）。 針對RSV F溶解物（如實施例1中純化）結合筛選總 共18個培養板（或1080個孔）。6個孔經鐘別為rsv F溶 解物之結合物。藉由額外ELIS A再次證實6個孔中之5個 且將其用於藉由PCR產生抗RS V抗體（下文所述）。 B·產生及選殖經EBV轉型之B細胞以及針對RSV F蛋白結 合進行篩選（程序B) 自San Diego血庫供體獲得周邊血液單核細胞 (PMBC )。根據製造商之說明書，藉由密度離心經菲科爾泛 影鈉分離PBMC。 1· CD22 +分離及CD22+ B細胞之活化 如上文部分A_ 1.中所述，使用CD22磁性珠粒自供體 ?6撾(：分離1〇.5><1〇6個€022+3細胞且培養分離之0〇22 + B細胞並在24孔培養板中活化。 2. IgG+ B細胞之EBV介導性永生化 a·分離igG+ B細胞 洗滌11.3xl06個活化之CD22+ B細胞且在4。(：下與11〇 μίν 生物素結合抗 IgM ( BD Biosciences，目錄號 55578 1 )、 22 /xL 生物素結合抗 IgD ( BDBiosciences，目錄號 555777 ) 280 201201839 ' 及22 /iL生物素結合抗IgA ( Invitrogen，目錄號62-7440 ) - 及220 pL生物素結合抗CD3 ( BD Bioscience，目錄號 555331)抗體一起培育15分鐘。用PBS (含有0.5% BSA 及2 mM EDTA )洗滌細胞1次且使細胞再懸浮於1.045 mL 相同緩衝液中。根據製造商之說明書，藉由使用55 /iL抗生 物素磁性珠粒（Miltenyi，目錄號130-048-701 )及LS管柱 (Miltenyi，目錄號 130-042-401 )進行表現 IgM、IgD、IgA 及CD3之細胞的陰性選擇來富集igG+ b細胞。 b. 製備經照射之餵養細胞以培養經EBV轉型之細胞 使用經照射之餵養細胞來幫助維持經EBV轉型之B細 胞的生長。獲得來自2-3個健康供體之混合物的PBMC且 藉由菲科爾分離來分離，以3300拉德照射（在UCSD穆爾 癌症中心）且以每小瓶5 X 1 0ό個細胞冷凍於含有1 〇%二甲亞 礙之FBS ( Sigma，目錄號D2650-100)中。在使用之前， 解凍一小瓶細胞且用含有1 〇%熱不活化低IgG胎牛血清 (Invitrogen，目錄號 16250-078 )、1%抗生素（Hyclone，目 錄號 SV3 0010 )、1%丙嗣酸鈉（HyCl〇ne，SH30239.01 )及 1% L-麩醢胺酸（HyClone，目錄號 SH30034.01 )之 RPMI (Hyclone’目錄號SH30096.01 )洗滌3次。計數細胞，以lxlO6 個細胞/毫升再懸浮且以48孔培養板之每孔0.25x 106個細 胞塗板。 c. EBV介導性永生化
藉由將0·58χ1〇6個igG+、CD22+富集B細胞與0.5 ml EBV 上清液（50% v/v 於含 1〇% pcs 之 RMPI-1640 中，ATCC 281 201201839 目錄號VR-1492，來自B95-8細胞）一起培育16小時來進 行B細胞之整體永生化。感染後，洗蘇細胞且與4 8孔培養 板之每孔0.5xlO6個經照射之餵養細胞一起培養（〇 58xl06 個/0.5毫升）於一個孔之含有1〇%熱不活化低IgG胎牛血清 (Invitrogen ’ 目錄號 16250-078 )、1%抗生素（Hyclone，目 錄號 SV30010 )、1%丙酮酸納（Hyclone，目錄號 SH30239.01) 及 1 % L-麵醢胺酸（Hyclone，目錄號 SH30034.01)之 RPMI (Hyclone’ 目錄號 SH30096.01 )中。48 小時後，添加 200 IU/ml rhIL-2 ( R&D Systems，目錄號 202-IL-50 )且再培養細胞 7 天0 3· B細胞選殖 a.製備經照射之B細胞耗竭餵養細胞以選殖b細胞 製備經照射之B細胞耗竭餵養細胞以選殖B細胞。獲 得來自5-6個健康供體之膚色血球層且在周圍溫度下儲存 隔夜。藉由菲科爾分離來分離PBMC，且使用抗CD19磁性 珠粒（Miltenyi Biotec，目錄號 130-050-30Γ)及 LD 管柱 (Miltenyi Biotec，目錄號 130-042-901 )耗竭 B 細胞。 簡言之，解凍自菲科爾分離獲得之經冷凍PMBC，洗；:條 兩次且計數。隨後在300 g下離心細胞10分鐘，且抽出上 清液。將細胞集結塊再懸浮於每1 〇7個細胞80 μΐ MACS緩 衝液（含0.5% BSA及2 mM EDTA之PBS)中且添加2〇 CD 1 9微珠（每1 〇7個細胞）。充分混合後，在4°C下培育細 胞1 5分鐘。隨後藉由添加1 _2 mL緩衝液（每1〇7個細胞） 洗滌細胞，隨後在300 g下離心10分鐘並抽出上清液。隨 282 201201839 後將至多l〇8個細胞再懸浮於500 μΐ緩衝液中。藉由將LD 管柱（由覆蓋有塑膠塗層之鐵磁性球體構成以允許快速且 平緩地分離細胞）置於MACS分離器之磁場中來實現磁性 分離。用2 mL緩衝液洗滌LD管柱且將細胞懸浮液施加於 管柱頂部。在添加2 X 1 mL緩衝液後，當其通過管柱時收集 到非B細胞。在300 g下離心細胞1 〇分鐘且以5x 1〇6個細 胞/毫升再懸浮於含有2%低IgG胎牛血清之PBS中。以4000 拉德照射細胞（在UCSD穆爾癌症中心），在3〇〇 g下離心 6分鐘，再懸浮於90%低IgGFBS及10%二曱亞硬（DMSO， 25χ106個細胞/毫升）中且冷凍於液氮中來儲存。 在使用之前，解練細胞且用含有10%熱不活化低IgG 胎牛血清（Invitrogen，目錄號 16250-078 )、1%抗生素 (Hyclone，目錄號 SV30010 )、1%非必需胺基酸（Hyclone， 目錄號SH30238.01 )及1% L-麩醯胺酸（Hyclone，目錄號 SH30034.01 )之伊思考夫改良杜爾貝科培養基（jscove’s Modified Dulbeccos Medium ) ( IMDM ， Hyclone #SH30228.01 )洗滌三次。 b. B細胞選殖 將約100個經EBV轉型之B細胞與多株B細胞刺激劑 及每孔50，000個經照射之B細胞耗竭餵養細胞共培養於96 孔培養板中且於含有10%熱不活化低IgG胎牛血清 (Invitrogen，目錄號 16250-078 )、1%抗生素（Hyclone，目 錄號SV30010 )、1%非必需胺基酸（Cyclone，目錄號 SH30238.01 )及1% L-楚醯胺酸（Hyclone，目錄號 283 201201839 SH30034.01 )之 IMDM ( Hyclone，目錄號 SH30228.01 )中 生長13天。產生總共12 0個9 6孔培養板。 4.針對RSV F蛋白結合篩選B細胞上清液 藉由ELISA篩選各孔之上清液以判定哪些孔產生能夠 結合於RSV F蛋白之抗體。如上文部分a 5中所述在塗佈 有RSV F蛋白之96孔半區ELISA培養板中進行Elisa(如 實施例1中所述）。如上文所述，為判定兩個彙集孔中何者 含有抗RSV抗體’針對捕捉之RSV F蛋白個別地再測試來 自各孔之20 pL B細胞上清液（用pbs/0.05% Tween 20以 l:2v/v 稀釋）。 針對RSV F溶解物（如實施例1中純化）結合篩選總 共120個培養板（或7200個孔）。29個孔經鐘別為RSV F 溶解物之結合物。藉由額外ELISA再次證實25個孔中之 10個且將其用於藉由PCR產生抗RSV抗體（下文所述）。 C.藉由PCR產生抗RSV抗體 針對產生結合於RSV F蛋白之抗體初始篩選經ebV轉 型之B細胞後’藉由PCR自B細胞RNA擴增編碼個別抗 體之基因。選擇來自上文部分A之鑑別為命中的5個孔用 於選殖。選擇上文部分B中之鑑別為命中的1〇個孔用於選 殖。 1· RNA萃取 根據製造商之說明書’使用RNeasy微套組（Qiagen， 目錄號1402-2408 )自B細胞萃取RNA (對於對應於RSV F 蛋白之陽性結合物的各孔），其中修改如下：1 )將B細胞 284 201201839
:東於1〇0 AL含心疏基乙醇（每毫升緩衝液10 /xL)之RLT 緩衝液中’ 2 )不對細胞進行均質化；3 )帛7Q%乙醇（於 無RNA酶之水中、店dm A、丄 「 ）使RNA沈殿；及4 )根據製造商之補充 方案S柱内」進行DNA酶處理。將RNA洗提至26 之最終體積。 2·第一股cDNA合成 RNA 萃取後，根據 Superscript III (lnvitrogen ;目錄 號19〇9〇_〇51 )第—股合成方案產生cDNA。簡言之，將8 μΐ RNA (如上文所述分離）、1 Ml募聚物dT引子及1 μΐ dNTP 組合於無菌0.2 mL管中且在65。〇下培育5分鐘，隨後在冰 上培月1为鐘。隨後，將2 μ1 〇」mM DTT、4 y 25
MgCl2 2/d RT 緩衝液、！ μ1 RNase〇ut 及 i ^ …⑴ RT添加至管中，且在5(rc下培育反應混合物5〇分鐘，隨 後在85 C下培月1 5分鐘。立即使用cDNA或冷凍於_8〇。〇下 以供長期儲存。 3·藉由PCR擴增分離IgG重鏈及^及人輕鏈基因 藉由PCR擴增自B細胞第一股cDNA合成反應（參見 上文）產生IgG重鏈及&及λ輕鏈。藉由單步pCR擴增《 輕鏈基因，而使用兩步、巢式pCR方法擴增重鏈基因及入 輕鏈基因。隨後使用「重疊PCR」將擴增之重鏈及輕鏈基 因連接於單一卡匣中。 步驟I.擴增IgG重鏈基因及入輕鏈基因
在步驟I，重鏈A中，使用藉由第一股合成（參見上文） 所產生之2 /iL cDNA作為模板以藉由pCR個別地擴增IgG 285 201201839 重鏈。在此步驟中，使用步驟I引子池（養 應條件如下： PCR步驟I :重鏈A : 試劑 iiL h2o 16 l〇x緩衝液 2.5 1〇χ增強劑緩衝液 2.5 dNTP (各 10 mM) 0.75 cDNA 2.0 VH池前導序列（各9 μΜ ) 0.5 VH反向池（20 μΜ) 0.25 Pfx50 〇 s 25 或者，在步驟I，重鏈B中， 使用藉由 見上文）所產生之2.5 /iL cDNA作為模板, 地擴增IgG重鏈。在此步驟中， 對於正向 步驟I引子池且使用VH γ-ΐ (a/b)反向作 見下表3 A )。反應條件如下： PCR步驟I :重鏈b : 試劑 |liL h2o 15.5 10 X緩衝液 2.5 1〇χ增強劑緩衝液 2.5 dNTP (各 10 mM) 0.75 286 201201839 cDNA 2.5 VH池前導序列（各9μΜ) 0.5 VH-gl(a/b)-REV ( 20 μΜ ) 0.25 P£x5〇_— _ 25 在步驟I，λ輕鏈中，使用藉由第一股合成（參見上文） 所產生之2.5 /xL cDNA作為模板以藉由pcr個別地擴增IgG 重鍵。在此步驟中’對於正向引子使用步驟I引子池且使用 pCALCL(T)-R作為反向引子（參見下表π) ^反應條件如 下： PCR步驟I : λ輕鏈： 試劑 ILL· η20 16 10 X緩衝液 2.5 10 X增強劑緩衝液 2.5 dNTP (各 1〇 mM) 0.75 cDNA 2.0 νλ 池（各 14.2 μΜ) 0.5 pCALCL(T).R ( 2〇 μΜ) 0.25 Pfx50 ---— 0.5 25 對於PCR反應，實施降落 方法（t η： 環儀條件如下 每個循環降低。PCR熱循 287 201201839 1 ) 94°C持續2分鐘 2) 1 0個循環： 94°C持續15秒；62t持續20秒（降落）；68°C持續1 分鐘 3) 25個循環： 94°C持續15秒；52°C持續20秒；68C持續1分鐘 4) 68°C持續3分鐘 5 )保持4°C。 所得反應混合物不經任何進一步純化即可用作步驟II (參見下文）之模板DNA。 表3A.用於擴增IgG重鏈基因之步驟I引子 VH正向引子池： SEQ ID NO VHla GGATCCTCTTCTTGGTGGCAGCAG 26 VHlb GCATCCTTTTCTTGGTGGCAGCAC 27 VHlc GGGTCTTCTGCTTGCTGGCTGTAG 28 VHld GGATCCTCTTCTTGGTGGGAGCAG 29 VH2a CTGACCATCCCTTCATGGCTCTTG 30 VH2b CTGACCACCCCTTCCTGGGTCTTG 31 VH3a GCTATTTTARAAGGTGTCCAGTGT 32 VH3b GCTCTTTTAAGAGGTGTCCAGTGT 33 VH3c GCTATTTAAAAAGGTGTCCAATGT 34 VH4a CTGGTGGCAGCTCCCAGATGGGTC 35 VH5a CTCCTGGCTGTTCTCCAAGGAGTC 36 VH反向引子池： SEQ ID NO VH-g 1- REV ACAAGATTTGGGCTCAACTTTCTTGTCC 37 VH-g 2- REV TTTGCGCTCAACTGTCTTGTCCACCTTG 38 VH-g 3- REV TTTGAGCTCAACTCTCTTGTCCACCTTG 39 VH-g 4-REV ATATTTGGACTCAACTCTCTTGTCCACC 40 反向引子： SEQ ID NO VH-gl(a/b)-REV ACAAGATTTGGGCTCAACTYTCTTGTCC 383 表3B.用於擴增λ輕鏈基因之步驟I引子 正向引子池： SEQ ID NO 5，LVX1 GGTCCTGGGCCCAGTCTGTGCTG 384 5'LVX2 GGTCCTGGGCCCAGTCTGCCCTG 385 288 201201839 表3B.用於擴增λ輕鏈基因之步驟I引子 5'LVX3 GCTCTGTGACCTCCTATGAGCTG 386 5'LVX4/5 GGTCTCTCTGSGAGCYTGTGCTG 387 5'LVX6 GTTCTTGGGCCAATTTTATGCTG 388 5，LVX7 GGTCCAATTCYCAGGCTGTGGTG 389 5'LVX8 GAGTGGATTCTCAGACTGTGGTG 390 反向引子： SEQ ID NO pCALCL(T)-R CTCCTTATTAATTAATTATGAGCATTCTGYAKGG GCMAYTGTC 80 步驟II.擴增重鏈及輕鏈基因 在步驟II中，使用來自步驟I之重鏈及λ輕鏈反應混 合物作為第二輪PCR反應之模板，該等反應使用自每一鏈 之構架1區至丨亙定區（重鍵為ChI’輕鍵為Cl)末端擴增 之正向及反向引子池。 重鏈正向引子（參見表4 )經設計成引入Sfil限切位點 (SEQIDNO:41)。反應條件如下： PCR II :重鏈 試劑 μL h20 12.75 10 x緩衝液 2.5 l〇x增強劑 2.5 dNTP (各 10 mM) 0.75 步驟I反應 2.5 pCAL24VH-F 池(2 μΜ) 2.5 CH1-R 池-Sfi ( 20 μΜ) 1 Pfx50 0.5 25 λ輕鏈正向引子（參見表6 )經設計成引入Sfil限切位 '!：： 289 201201839 點（SEQ ID NO:41 )。反應條件如下： PCR II : λ 輕鏈
試劑 jtiL H2〇 15.5 10 X緩衝液 2.5 1〇χ增強劑 2.5 dNTP (各 1〇 mM) 0.75 步驟I反應 2.5 VA 引子池（2 /ιΜ) 2 5 pCALCL(T)R ( 20 μΜ) ΐ
Pfx50______ 25 用於步驟II反應之PCR熱循環儀條件如下 1 ) 94°C持續2分鐘 ‘ 2) 30個循環·· 9代持續15#;5rc持續2"少；阶持續i分鐘 3) 6 8 C持續3分鐘 4) 保持4°C。 為擴增K輕鏈基因，使用藉由第一股合成（參見上文） 所產生之2 /^L CDNA作為模板以藉由PCR個別地擴增IgG Λ 輕鏈。使用輕鏈/c正向引子（參見表5 )作為引子池且將其 設計成引入Sfil限切位點（SEq ID Ν〇·41 )。 反應條件如下： PCR II ·· λ 輕鍵 290 201201839 試劑 jitL η2ο 16 10 X緩衝液 2.5 1〇χ增強劑 2.5 dNTP (各 10 mM) 0.75 第一股cDNA 2 Vk引子池（9.1 μΜ ) 0.5 pCALCK(G)L ( 20 μΜ ) 0.25 Pfx50 0.50 2 5 用於步驟II反應之PCR熱循環儀條件如下： 1 ) 94°C持續2分鐘 2) 35個循環： 94°C持續15秒；54°C持續20秒；68。(：持續1分鐘 3) 68°C持續3分鐘 4) 保持4°C。 擴增後，在1%瓊脂糖凝膠上分離PCR反應產物且藉由 凝膠萃取（Qiagen凝膠萃取套組；目錄號28706 )來純化對 應於重鏈（675 bp)及輕鏈（65〇 bp)之條帶。用30 μΐ洗 提PCR產物。 表4.用於擴增IgG重鏈基因之引子 ~ 正向引子池 SEQIDNO pCaBOVHla ggctttgctaccgtagcgCAGGCGGCCGCACAGGTKCAGCT GGTGCAG 42 pCaBO VHlb ggctttgctaccgtagcgCAGGCGGCCGCACAGGTCCAGCT TGTGCAG 43 pCal30 VHlc ggctttgctaccgtagcgCAGGCGGCCGCASAGGTCCAGCT 44 291 201201839 表4.用於擴增IgG重鏈基因之引子 GGTACAG pCaBO VHld ggctttgctaccgtagcgCAGGCGGCCGCACARATGCAGCT GGTGCAG 45 . pCal30 VH2a ggctttgctaccgtagcgCAGGCGGCCGCACAGATCACCTT GAAGGAG 46 pCal30 VH3a ggctttgctaccgtagcgCAGGCGGCCGCAGARGTGCAGCT GGTGGAG 47 pCal30VH4a ggctttgctaccgtagcgCAGGCGGCCGCACAGSTGCAGCT GCAGGAG 48 pCaBO VH4b ggctttgctaccgtagcgCAGGCGGCCGCACAGGTGCAGCT ACAGCAG 49 pCal30 VH5a ggctttgctaccgtagcgCAGGCGGCCGCAGARGTGCAGCT GGTGCAG 50 pCal30 VH6 ggctttgctaccgtagcgCAGGCGGCCGCACAGGTACAGCT GCAGCAG 51 pCal30 VH7 ggctttgctaccgtagcgCAGGCGGCCGCACAGGTSCAGCT GGTGCAA 52 反向引子池 SEQ ED NO VHII-gl-Rev TGCGGCCGGCCTGGCCGACCACAAGATTTGGGCT CAACTTTC 53 VHn-g2-Rev TGCGGCCGGCCTGGCCGACCTTTGCGCTCAACTG TCTTGTCC 54 VHn-g3-Rev TGCGGCCGGCCTGGCCGACCTTTGAGCTCAACTC TCTTGTCC 55 VHII-g4-Rev TGCGGCCGGCCTGGCCGACCATATTTGGACTCAAC TCTCTTG 56 表5.用於擴增κ輕鏈基因之引子 正向引子池 SEQ E) NO VKla AAggcccagccggccatggccgccggtGACATCCAGATGACCC AG 57 VKlb AAggcccagccggccatggccgccggtGACATCCAGTTGACCC AG 58 VKlc AAggcccagccggccatggccgccggtGCCATCCGGTTGACCC AG 59 VK2a AAggcccagccggccatggccgccggtGATATTGTGATGACYC AG 60 VK3a AAggcccagccggccatggccgccggtGAAATTGTGTTGACGC AG 61 VK3b AAggcccagccggccatggccgccggtGAAATTGTGTTGACAC AG 62 VK3c AAggcccagccggccatggccgccggtGAAATAGTGATGACGC AG 63 VK4a AAggcccagccggccatggccgccggtGACATCGTGATGACCC AG 64 YK5a AAggcccagccggccatggccgccggtGAAACGACACTCACG CAG 65 VK6a AAggcccagccggccatggccgccggtGAAATTGTGCTGACTC 66 292 201201839 表5.用於擴增κ輕鏈基因之引子 AG VK6b AAggcccagccggccatggccgccggtGATGTTGTGATGACAC AG 67 反向引子 SEQ ID NO pCALCK (G) L CTCCTTATTAATTAATTAGCACTCTCCCCTGTTGAA GCTCTTTG 68 表6.用於擴增λ輕鏈基因之引子 正向引子池 SEQ ID NO VL1-F AAGGCCCAGCCGGCCATGGCCGCCGGTGTTCAGT CTGTGCTGACKCAGCC 69 VL2-F AAGGCCCAGCCGGCCATGGCCGCCGGTGTTCAGT CTGCCCTGACTCAGCC 70 VL3A-F AAGGCCCAGCCGGCCATGGCCGCCGGTGTTTCCTA TGAGCTGACWCAGCY 71 VL3B-F AAGGCCCAGCCGGCCATGGCCGCCGGTGTTTCTT CTGAGCTGACTCAGGAC 72 VL3C-F AAGGCCCAGCCGGCCATGGCCGCCGGTGTTTCCTA TGWGCTGACTCAGCC 73 VL4A-F AAGGCCCAGCCGGCCATGGCCGCCGGTGTTCTGC CTGTGCTGACTCAGCCC 74 VL4B-F AAGGCCCAGCCGGCCATGGCCGCCGGTGTTCAGC YTGTGCTGACTCAATCR 75 VL5/9-F AAGGCCCAGCCGGCCATGGCCGCCGGTGTTCAGS CTGTGCTGACTCAGCCR 76 VL6-F AAGGGCCAGCCGGCCATGGCCGCCGGTGTTAATTT TATGCTGACTCAGCCC 77 VL7/8-F AAGGCCCAGCCGGCCATGGCCGCCGGTGTTCAGR CTGTGGTGACTCAGGAG 78 VL10-F AAGGCCCAGCCGGCCATGGCCGCCGGTGTTCAGG CAGGGCTGACTCAGCCA 79 反向引子 SEQ ID NO pCALCL(T)-R CTCCTTATTAATTAATTATGAGCATTCTGYAKGGGC MAYTGTC 80
步驟III.重疊PCR 在步驟III中，步驟II中f斤產生之重鏈及輕鏈DNA區 段：1 )在重疊反應中與黏接於輕鏈3'端及重鏈5'端之Fab 連接子（參見下表7)連接；及2)用SH正向及反向引子 (參見下表7)擴增，從而允許擴增含有輕鏈-連接子-重鏈 293 201201839 之1200個鹼基對（bp)的抗體片段。 使用 FabLinker-Rev 或 FabLinker-Rev-IT* 引子（參見下 表 7 )自 2gl2/pCAL 載體（SEQ ID NO:81 )擴增 FaW 連接 子。用於形成Fab κ連接子之PCR反應條件如下：
Fab κ連接子 試劑 H2〇 19.75 10 χ緩衝液 2 ·5 dNTP (各 10 mM) 〇·75 2gl2/pCAL 載體（10 ng) 1
FabLinkerCK-Fwd ( 20 μΜ) 0.25 反向引子（20 μΜ) 0.25
Pfx50___Q^i 25 自 28dll/pCAL 載體（SEQIDNO:1636)擴增 Fab\連 接子。用於形成Fab κ連接子之PCR反應條件如下：
Fab λ連接子
試劑 yJ=L H20 35.5 10 X緩衝液 5 l〇x增強劑 5 dNTP (各 10 mM) 1.5 28dll/pCAL 載體（10 ng) 1
FabLinkerCX-Fwd ( 20 μΜ ) 0.5 294 201201839
FabLinker-Rev IT* ( 弘Μ) 0.5 P f*x S 0 _ 0.5 X i Λ «J VJ x—- 25 用於形成Fab連接子之PCR熱循環儀條件如下： 1 ) 94°C持續2分鐘 2) 3 0個循環： 94°C持續15秒；54°C持續20 3) 68°C持續3分鐘 4) 保持4°C。 1秒；68°C持續1分鐘 在1%瓊脂糖凝膠上進行PCR反應且根據Qiagen凝膠 萃取方案對120 bp連接子進行凝膠萃取。每一重疊反應使 用2 μΐ經純化連接子。 用於重疊之PCR反應條件如 Sfi F/R引子添加至pCR反應中） 下（在最初15個循環後將 PCR III :重叠 試劑 ILL· h20 24.5 10 X緩衝液 5 1〇χ增強劑 5 dNTP (各 mM) 1.5 輕鏈產物 5 重鏈產物 5 連接子 2 SH F/R 引子（2〇 μΜ) 1 295 201201839
Pfx50_L 50 PCR熱循環儀條件如下： 1 ) 94°C持續2分鐘 2) 15個循環： 94°C持續15秒；68°C持續1分鐘； 添加Sfi F/R引子（1 pL)，隨後： 3) 94°C持續2分鐘 4) 30個循環： 94°C持續15秒；60°C持續20秒；68°C持續2分鐘 5) 68°C持續3分鐘 6) 保持4°C。 擴增後，在1 %瓊脂糖凝膠上分離總50 /xl PCR重疊反 應產物輕鏈-連接子-重鏈中之1 〇 μΐ以測定尺寸且藉由 Qiagen PCR純化套組（Qiagen ;目錄號28 106 )將剩餘40 μΐ PCR產物純化至30 μΐ總體積。簡言之，向PCR產物中添 加5倍PCR反應體積之PBI緩衝液。使混合物結合於QIA 旋轉管柱且用PE緩衝液洗滌兩次。用30 μΐ洗提樣品且高 速旋轉1.5分鐘以洗提所有30 μΐ。約1 gg重疊產物為每50 μΐ重疊反應之典型產量。 表7.步驟III寡核苷酸 寡核苷酸 SEQ ID NO FabLinker CK-Fwd GAGCTTCAACAGGGGAGAGTGCTAATTAATTAATAAG GAG 82 FabLinker- Rev TGCGGCCGCCTGCGCTACGGTAGCAAAGCCAGCCAGT GCCAC 83 FabLinker GACARTKGCCCMTRCAGAATGCTCATAATTAATTAATA 392 296 201201839 CX-Fwd AGGAGGATATAATTATGAAAAAG FabLinker- Rev-IT* TGCGGCCGCCTACGCTACGGTAGCAAAGCCAGCCAGT GCCAC 393 Sfi正向 TCGCggcccagccggccatggc 84 Sfi反向 TGCGGCCGGCCTGGCCGA 85 步驟IV.用Sfi消化且選殖至pCAL或pCAL IT*表現載 體中 重疊PCR反應及PCR產物純化後，用Sfil消化反應產 物。向30 μΐ洗提物（參見上文）中添加以下各物以進行消 化： 4 μ\ 反應缓衝液 2 ( New England Biolabs )
0.4 μ\ BSA 1.6 μ\ Sfil 酶（New England Biolabs ) 4 u\ 40 μΐ總體積 在37°C下培育反應物1小時。消化後，在1%瓊脂糖凝 膠上分離經消化之重疊產物且藉由凝膠萃取（Qiagen，凝膠 萃取純化套組，目錄號28706 )來純化對應於抗體（約1.45 kB)之條帶。簡言之，用500 μΐ緩衝液QC ( Qiagen)消化 凝膠切片。將150 μ異丙醇添加至消化物中且將樣品施加 於QiaSpin管柱上。用緩衝液PE ( Qiagen)洗蘇管柱兩次 且用30 μΐ EB緩衝液（Qiagen)洗提樣品。自約1 jttg PCR 重疊產物回收約1 5 ng/μΐ經消化之樣品。 最後，將經消化之重疊產物接合.於pCAL ( SEQ ID NO:86)或 pCAL IT* ( SEQ ID NO:394)細菌表現載體中。 接合反應條件如下： 丨!:: 297 201201839 25 ng 經Sfil消化之pCAL或pCAL IT*載體 25 ng 經消化之重疊產物 2 μ\ Τ4接合酶反應緩衝液 1 μΐ Τ4 接合酶（NEB 目錄號 MC202L，400,000 單 元/奎弁1_ 用H2〇調整至20 μΐ總體積。 在室溫下使樣品接合1小時。用4 μΐ Η20稀釋1 μ1接 合物，隨後進行轉移。 步驟V·轉移至大腸桿菌中 接合後，將接合產物轉移至DH5a最大效率細胞 (Invitrogen ;目錄號 18258 ;基因型：F- φ80/πΖΔΜ 15 A(lacZYA-argY) U169 recAl endkl hsdRXl (rk-} mk+) phoA λ- ί/ιζ’-l g少rA96 re/Al )中。簡言之，將 1 μΐ 接合產 物（1/5稀釋液）添加至50 μΐ DH5a中且在冰上培育30分 鐘。藉由在42°C下熱休克45秒，隨後在冰上2分鐘來實現 轉移。添加0.9 mL S〇C培養基且在3 7°C下在震盪下回收細 胞持續1小時。將細胞塗於補充有羧苄青黴素、（1〇〇 Mg/mjL) 及20 mM葡萄糖之LB培養板上。在37°C下培育培養板隔 夜。 步驟VI.選擇個別群落。 對於每次抗體擴增，選擇總共88個個別群落且使其在 37 C下於96孔培養板之1 mL補充有丄羧苄青黴素（ pg/mL )之超級肉湯（Super Broth，SB )中生長2小時。藉 由將500 μ每一培養物轉移至含500 μ1補充有4〇 mM葡萄 298 201201839 糖（最終20 mM )及100 jttg/ml羧苄青黴素之sb的另一 96 孔格式細菌培養板中來產生子培養板。向原始或母培養板 中饋送500 μΐ補充有1〇〇 gg/mi羧苄青黴素之sb。在30°C 下使原始培養板生長隔夜且在371下使子培養板（含有葡 萄糖）生長隔夜。將來自30°C培養板之細胞溶解物用於細 菌ELISA(參見以下實施例4)且將37°C培養板培養物用於 少量製備型DNA製備（Qiagen ) » 總結 使用κ輕鏈引子擴增來自上文部分a之鑑別為命中的5 個孔且將其選殖至pCAL表現載體中。用/c輕鏈引子擴增上 文部分B之鑑別為命中的1〇個孔且將其選殖至pcal IT* 表現載體中。另外用λ輕鏈引子擴增一個孔且將其選殖至 pCAL IT*表現載體中。 實施例3 藉由單細胞分選分離抗RSV Fab抗體 在此實施例中，自CD19/CD27/IgG陽性細胞分離抗 RSV抗體。藉由以下獲得CD19/CD27/IgG陽性細胞：〇 B 細胞分離；及2 ) FACS單細胞分選。隨後使用經分選之細 胞分離RNA ’將其用作試管内產生Fab抗體之模板。 B細胞分離 使用B細胞分離裔組（Miltenyi Biotec，目錄號 13 0-091-151 )自PBMC (自不記名血庫供體收集）分離B 細胞。使用該套組，藉由磁性標記及耗竭表現CD2、CD U、 CD16、CD3 6、CD43及CD23 5a之細胞（活化之b細胞、 299 201201839 血漿細胞及CD5+ B-1 a細胞）及非B細胞（例如τ細胞、 ΝΚ細胞、樹突狀細胞、巨噬細胞、粒細胞及類紅血球細胞） 來分離高純度Β細胞》根據製造商之方案，藉由使用作為 初級標記劑之生物素結合單株抗體之混合物（生物素·抗體 混合物）及作為第二標記劑之與微珠結合的抗生物素單株 抗體（抗生物素微珠）來間接地磁性標記非Β細胞。隨後 藉由磁性分離自純靜息Β細胞移除非Β細胞。 簡言之，解凍自菲科爾分離獲得之經冷凍pMBC，洗務 兩次且st數。隨後在3〇〇 g下離心細胞i 〇分鐘，且抽出上 清液。使細胞集結塊再懸浮於4〇 μΐ MACS緩衝液（每1 〇7 個細胞）中且添加丨〇 μ1生物素_抗體混合物（每1 〇7個細 胞）。充分混合後，在4。〇下培育細胞1〇分鐘。培育期後， 添加30 μΐ緩衝液（每1〇7個細胞）及2〇 y抗生物素微珠 (每10個細胞八充分混合後，在下培育細胞丨5分鐘。 蚁後藉由添加1 -2 mL緩衝液（每1 〇7個細胞）洗滌細胞， IW後在300 g下離心1〇分鐘並抽出上清液。隨後將至多i〇8 個細胞再懸浮於5〇〇 μΐ緩衝液十。 藉由將LS管柱（由覆蓋有塑膠塗層之鐵磁性球體構成 以允s午快速且平緩地分離細胞）置於macs分離器之磁場 中來實現磁性分離。用3 mL緩衝液洗滌LS管柱且將細胞 懸浮液施加於管柱頂部。在添加3x3 mL緩衝液後，當其通 過管柱時，收集未經標記之B細胞。 單細胞分選 在此實施例中，藉由抗原特異性，使用FACS Aria流式 300 201201839 細胞儀（BD Bi〇sciences )分選分離之B細胞。所選細胞呈 CD19/CD27/IgG陽性。按照製造商說明書（分子探針， A-20186 )，用 Alexa Fluor 647 標記 RSV-F 抗原。 簡言之，將分離之B細胞等分試樣至16個各別管中。 14個管接受ΐχίο5個細胞且用於測定FACSAda上之光倍增 器設置及分選參數。用Alexa Fluor 647/RSV-F以20 nM之 最終濃度標記其餘1.8xio6個細胞。在添加抗體前15分鐘， 將經標記蛋白質添加至樣品中。使用丨：2〇稀釋度之CD丄9 及CD27抗體’而使用1:5〇稀釋度之IgG抗體。添加 Fluor 647/RSV-F蛋白及抗體後，在冰上培育管3〇分鐘且隨 後洗游:兩次。使用FACSAria流式細胞儀（BD Bi〇sciences ) 實現單細胞分選。該等標記包括PE_Cy5 (抗人類CD19)、 pE-Cy7(抗人類 CD27)、PE(山羊抗人類 igGFcg)、pacific
Blue (小鼠抗人類Cd3 )、FITC (小鼠抗人類igD '小鼠抗 人類IgM、小鼠抗人類][gA及小鼠抗人類cd 14)、碘化丙 啶及Alexa Fluor 647 (經標記RSV-F蛋白）。 藉由首先去除死細胞，隨後排除CD3陽性細胞來進行 細胞分選《進一步鑑別CD19及CD27陽性細胞且在此群體 中針對IgG Fey表現對細胞進行閘控。自剩餘細胞中去除表 現IgD、IgM及IgA之細胞。最後，針對RSV-F結合分選 CD19/CD27/IgG Fey陽性細胞且使每一陽性B細胞沈積於 96孔培養板之含有2 μΐ cDNA反應緩衝液（Superscript III !〇x 緩衝液，Invitrogen ;目錄號 19090-051 )、0.5 μΐ RNaseOUT及7.5 μΐ無菌水之個別孔中。將培養板儲存於 301 201201839 -80°C下直至進一步處理。 第一股cDNA合成 分選後，根據Invitrogen第一股合成方案，在各孔中個 別地產生cDNA。簡言之，向各孔中添加〇.5 μ1 1〇% Np_4〇、 1只1寡聚物dT引子及1 dNTP且在65〇c下培育培養板5 分鐘，隨後在冰上培育丨分鐘。隨後，添加2/Udtt、4… MgCl2及1 μΐ Superscript III RT且在5(rc下培育反應混合 物1小時’ 後在85 C下培育5分鐘。立即使用cDNA或 冷凍於-80°C下以供長期儲存。
IgG重鏈及κ輕鏈擴增 隨後藉由PCR之四個連續步驟產生IgG重鏈及κ輕鏈。 步驟1.擴增
在步驟I t，使用第一股合成（參見上文）所產生之 2.5 /xL· cDNA作為模板以藉由pCR個別地擴增κ輕鏈及IgG 重鍵°在此步驟中’使用步驟I引子池（參見下表8及9 )。 反應條件如下： pcr步驟r: h2o 16 10 x緩衝液 2.5 l〇x增強劑緩衝液 2.5 dNTP (各 1 〇 ) 0.75 cDNA 2.5 步驟1池（各20 μΜ) 0,25 反向引子（20 μΜ) 0.25 302 201201839
Pfx50_0.25
25 /aL PCR熱循環儀條件如下： 1 ) 94°C持續2分鐘 2) 10個循環： 94°C持續15秒；62°C持續20秒（降落）；68°C持續1 分鐘 3 ) 40個循環： 94°C持續15秒；52°C持續20秒；68°C持續1分鐘 4) 68°C持續3分鐘 ,5)保持 4°C。 反應混合物不經任何進一步純化即可用作步驟II (參 見下文）之模板DNA。 表8.用於擴增κ輕鏈之步驟I引子 正向引子池 SEQ ID NO 5'LV/d/2 ATGAGGSTCCCYGCTCAGCTGCTGG 87 5' LVk3 CTCTTCCTCCTGCTACTCTGGCTCCCAG 88 5' LVk4 ATTTCTCTGTTGCTCTGGATCTCTG 89 反向引子 SEQ ID NO VK-Rev GCACTCTCCCCTGTTGAAGCTCTTTG 90 表9.用於擴增IgG重鏈之步驟I引子 正向引子池 SEQ ID NO 5' L-VH1 ACAGGTGCCCACTCCCAGGTGCAG 91 5' L-VH3 AAGGTGTCCAGTGTGARGTGCAG 92 5' L-VH4/6 CCCAGATGGGTCCTGTCCCAGGTGCAG 93 5' L-VH5 CAAGGAGTCTGTTCCGAGGTGCAG 94 反向引子 SEQ ID NO 3' OyCHl GGAAGGTGTGCACGCCGCTGGTC 95 303 201201839 步驟II.擴增 在步驟II中’使用來自步驟I之反應混合物作為第二 PCR反應之模板，該等反應對於輕鏈或重鏈分別使用正向 及反向引子池。此等反應自每一鏈之構架1區擴增DNA。 輕鏈正向引子（參見表1〇)經設計成引入Sfil限切位點（SEq ID ΝΟ··41 ) ^反應條件如下：
PCR II :輕鍵 h2o 15.75 10 X緩衝液 2.5 1 0 X增強劑 2.5 dNTP (各 1〇 mM) 0.75 步驟I反應 2.5 Vk引子池（9.1 μΜ) 0.5 pCALCK(G)L ( 20 μΜ) 0.25 Pfx50 0.25 25 /xL 重鏈正向引子（參見表11 )經設計成引入SalI限制性 部分（SEQ ID NO:96)。反應條件如下： PCR II :重鏈 h2o 14.25 緩衝液 2.5 l〇x增強劑 2.5 dNTP (各 10 mM) 0.75 步驟I反應 2.5 304 201201839 pCAL24VH-F 池（2 #M) 2
Sail JH-Rev 池（20 μΜ ) 0.25
Pfx50_0.25 25 PCR熱循環儀條件如下： 1 ) 94°C持續2分鐘 2) 50個循環： 94°C持續15秒；54°C持續20秒；68°C持續1分鐘 3) 68°C持續3分鐘 4) 保持4°C。 擴增後，在1%瓊脂糖凝膠上分離PCR反應產物且藉由 凝膠萃取（Qiagen)來純化對應於重鏈（400 bp)及輕鏈（650‘ bp )之條帶。 表10.用於擴增κ輕鏈之引子 正向引子池 SEQ ID NO VKla AAggcccagccggccatggccgccggtGACATCCAGATGACCCAG 57 VKlb AAggcccagccggccatggccgccggtGACATCCAGTTGACCCAG 58 VKlc AAggcccagccggccatggccgccggtGCCATCCGGTTGACCCAG 59 VK2a AAggcccagccggccatggccgccggtGATATTGTGATGACYCAG 60 VK3a AAggcccagccggccatggccgccggtGAAATTGTGTTGACGCAG 61 VK3b AAggcccagccggccatggccgccggtGAAATTGTGTTGACACAG 62 VK3c AAggcccagccggccatggccgccggtGAAATAGTGATGACGCAG 63 VK4a AAggcccagccggccatggccgccggtGACATCGTGATGACCCAG 64 VK5a AAggcccagccggccatggccgccggtGAAACGACACTCACGCAG 65 VK6a AAggcccagccggccatggccgccggtGAAATTGTGCTGACTCAG 66 VK6b AAggcccagccggccatggccgccggtGATGTTGTGATGACACAG 67 反向引子 SEQ E) NO pCALCK (G)L CTCCTTATTAATTAATTAGCACTCTCCCCTGTTGAAGCT CTTTG 68 表11.用於擴增IgG重鏈之引子 正向引子池 SEQ ID NO pCal30VHla ggctttgctaccgtagcgCAGGCGGCCGCACAGGTKCAGCT 42 305 201201839 表11.用於擴均 丨IgG重鏈之引子 GGTGCAG pCal30 VHlb ggctttgctaccgtagcgCAGGCGGCCGCACAGGTCCAGCTT GTGCAG 43 pCal30 VHlc ggctttgctaccgtagcgCAGGCGGCCGCASAGGTCCAGCTG GTACAG 44 pCal30 VHld ggctttgctaccgtagcgCAGGCGGCCGCACARATGCAGCTG GTGCAG 45 pCal30 VH2a ggctttgctaccgtagcgCAGGCGGCCGCACAGATCACCTTG AAGGAG 46 pCal30 VH3a ggctttgctaccgtagcgCAGGCGGCCGCAGARGTGCAGCT GGTGGAG 47 pCal30 VH4a ggctttgctaccgtagcgCAGGCGGCCGCACAGSTGCAGCTG CAGGAG 48 pCal30 VH4b ggctttgctaccgtagcgCAGGCGGCCGCACAGGTGCAGCTA CAGCAG 49 pCal30 VH5a ggctttgctaccgtagcgCAGGCGGCCGCAGARGTGCAGCT GGTGCAG 50 pCaBO VH6 ggctttgctaccgtagcgCAGGCGGCCGCACAGGTACAGCTG CAGCAG 51 pCaBO VH7 ggctttgctaccgtagcgCAGGCGGCCGCACAGGTSCAGCTG GTGCAA 52 反向弓丨子池 SEQ ID NO 3' SallJH 1/2/4/5 TGCGAAGTCGACGCTGAGGAGACGGTGACCAG 97 3' SalIJH3 TGCGAAGTCGACGCTGAAGAGACGGTGACCATTG 98 3, SalIJH6 TGCGAAGTCGACGCTGAGGAGACGGTGACCGTG 99
步驟III.重疊PCR 在步驟III中，步驟II中所產生之重鏈及輕鏈DNA區 段：1 )在重疊反應中與黏接於輕鏈3'端及重鏈5'端之Fab 連接子（參見下表12 )連接；及2 )用黏接於輕鏈5'端之 Sfi正向引子（參見下表12)及黏接於重鏈3'端之JH反向 引子（參見上表11 )擴增，從而允許擴增含有輕鏈-連接子 -重鏈之1200個鹼基對（bp )的抗體片段。反應條件如下（連 接子如以上實施例2中所述產生）： H2〇 24.5 l〇x緩衝液 5 306 5 201201839 10 X增強劑 1.5 5 dNTP (各 1 〇 mM ) 輕鏈 重鍵 連接子
1 20 MM)
Sfi F/JH-R弓丨子 Pfx50
PCR熱循環儀條件如下 用連接子重叠
50 gL D 9代持續2分鐘 2 ) 1 5個循環： 9 4 C持續15秒； 添加彳丨子 68°C持續 1分鐘 3) 94°C持續2分鐘 4) 30個循環： 94 C持續15秒；60。。持續20秒；68。。持續1分鐘 5 ) 68°C持續3分鐘 6)保持 4。(：。 擴増後，在1%瓊脂糖凝膠上分離PCR反應產物輕鏈_ 連接子重鏈且藉由凝膠萃取（Qiagen )純化。 步称1V.引入cHl區 重豐後’用Sal I消化經擴增之輕鏈·連接子-重鏈且將 其接合於經Sal i消化之重鏠恆定區1 ( ChW區），在重鏈恆 307 201201839 定區之3’端引入Sfil限切位點。接合反應條件如下. 2 /il接合反應緩衝液 2 μ\ Ch 1 來自步驟III之5 μΐ 1 ·2 kB凝膠純化產物 10 μΐ 水 1 /xl Τ4接合酶 在室溫下培育接合反應混合物3 〇分鐘。 接合後，藉由PCR用Sfil正向及反向引子（參見下表 12)擴增全長Fab，得到1.45 kb片段。反應條件如下： H20 31.5 1 0 X緩衝液 5 1 0 X增強劑 5 dNTP (各 10 mM) 1.5 接合反應混合物 5
Sfi F/R 引子（20 μΜ) 1
Pfx50_L
5 0 /aL PCR熱循環儀條件如下： 1 ) 94°C持續2分鐘 2) 30個循環： 94°C持續15秒；60°C持續20秒；68。(：持續1分鐘 3) 68°C持續3分鐘 4) 保持4°C。 反應產物為共同連接於單一卡匣中之輕鏈及重鏈的 308 201201839 1.45 kB 片段。 表12.步驟m及步驟IV募核苷酸 寡核苷酸 SEQ ID NO Fab連接子 GAGCTTCAACAGGGGAGAGTGCTAATTAATTAATAAGG AGGatataattatgaaaaagacagctatcgcgattgcaGTGGCACTGGCTG GCTTTGCTACCGTAGCGCAGGCGGCCGCA 100 Sfi正向 TCGCggcccagccggccatggc 84 Sfi反向 TGCGGCCGGCCTGGCCGA 85 CH1片段 gtcgaccaaaggtccgtctgttttcccgctggctccgtcttctaaatctacctctggtggtac cgctgctctgggttgcctggttaaagactacttcccggaaccggttaccgtttcttggaactc tggtgctctgacctctggtgttcacaccttcccggctgttctgcagtcttctggtctgtactctc tgtcttctgttgttaccgttccgtcttcttctctgggtacccagacctacatctgcaacgttaac cacaaaccgtctaacaccaaagttgacaagaaagttgaaccgaaatcttgcctgcgatcg cggccaggccggccgcaccatcaccatcaccatggcgcatacccgtacgacgttccgg actacgcttctactagt 101 步驟V.用Sfi消化且選殖至pCAL表現載體中 重疊PCR反應及PCR產物純化後，用SHI消化反應產 物。向30 μΐ洗提物（參見上文）中添加以下各物以進行消 化： 4 μΐ 反應緩衝液 2 (NewEnglandBiolabs)
0.4 μΐ BSA 1·6/χ1 Sfil 酶（New England. Biolabs )
4 μ]_HjO 4〇 μΐ總體積 在37°C下培育反應物1小時》消化後，在1 %瓊脂糖凝 膠上分離經消化之重疊產物且藉由凝膠萃取（Qiagen凝膠 萃取純化套組，目錄號28706 )來純化對應於抗體（約1.45 kB)之條帶。簡言之，用5〇〇 μ1緩衝液QC ( Qiagen)消化 凝膠切片。將150 μΐ異丙醇添加至消化物中且將樣品施加 309 201201839 於QiaSpin管柱上。用缓衝液PE ( Qiagen)洗滌管柱兩次 且用30 /zlEB緩衝液（Qiagen)洗提樣品。自約1 /xg PCR 重疊產物回收約1 5 ng/μΐ經消化之樣品。 最後，將經消化之重疊產物接合於pCAL細菌表現載體 (SEQIDNO:86)中。接合反應條件如下： 25 ng 經Sfil消化之pCAL載體 25 ng 經消化之重疊產物 1 Ad Τ4 接合酶（NEB 目錄號 MC202L，400,000 _輩元/亮弁） _ 20 μ\ 總體積 在室溫下使樣品接合1小時。用4 μΐ Η2Ο稀釋1 jLil接 合物，隨後進行轉移。 步驟VI.轉移至大腸桿菌中 接合後，將接合產物轉移至DH5a最大效率細胞 (Invitrogen ;目錄號 18258 ;基因型：F- 08O/acZAM15 A(lacZYA-arg¥) U169 recAl endAl hsdRll (rk-5 mk+) ph〇A sm/?E44 λ- ί；π·-1 g少rA96 re/Al )中》簡言之，將 1 μ 接合產 物（1/5稀釋液）添加至50 μΐ DH5a中且在冰上培育30分 鐘。藉由在42°C下熱休克45秒，隨後在冰上2分鐘來實現 轉移。添加0.9 mL SOC培養基且在37°C下在震盪下回收細 胞持續1小時。將細胞塗於補充有羧苄青黴素（1〇〇 Mg/mL) 及20 mM葡萄糖之LB培養板上。在3：rc下培育培養板隔 夜。 步驟VII·選擇個別群落。 310 201201839 選擇總共88個個別群落且使其在37<>c下於％孔培養 板之1 mL補充有1羧苄青黴素（100 /xg/mL)之超級肉湯 (SB)中生長2小時。藉由將5〇〇 y每一培養物轉移至含 5〇〇 μΐ補充有40 mM葡萄糖（最終2〇 mM)及1〇〇 缓节青黴素之SB的另-96孔格式細菌培養板中來產生子 培養板。向原始或母培養板中饋送5〇〇 y補充有1〇〇 pg/ml 羧苄青黴素之SB。在30°C下使原始培養板生長隔夜且在 37C下使子培養板（含有葡萄糖）生長隔夜。將來自3〇它 培養板之細胞溶解物用於細菌ELIS A (參見以下實施例4 ) 且將37C培養板培養物用於少量製備型dna製備 (Qiagen )。 實施例4 抗體結合於RSVF蛋白 在此實施例中，藉由ELISA測試實施例2及3中所產 生之Fab抗體結合於經純化之rsv F1溶解物的能力。簡言 之’將用PBS/3% BSA/0.01%'Tween20以總共1體積比3體 積稀釋之5 0 /xL細菌細胞溶解物添加至先前塗佈有rsv F1 》谷解物之9 6孔E LIS A培養板（參見以上實施例1 )中。在 3 7 C下培育該培養板2小時，或者在4 °C下培育隔夜，隨後 用洗滌緩衝液（PBS/0.05% Tween20)洗滌4次》添加用 PBS/3% BSA/0.01% Tween20 以 1:1000 稀釋之 50 i^L 山羊抗 人類 IgG F(ab)-HRP 抗體（Jacl^son Labs，目錄號 109-036-097)且在37°C下培育培養板1小時。用洗滌緩衝 液洗ί條6次後，添加50 1:1 v/v TMB:過氧化物溶液 311 201201839
(Pierce，目錄號34021 )且使其顯色7分鐘。藉由添加5〇 pL 2 N H2SO4立即停止反應且使用ELISA培養板讀取器量測 .45 0 nm下之吸光度。由大於0.5之OD450 ( 0.5-0.9為中等 結合’> 1為強結合）及超過背景3倍之反應指示陽性結合。 除結合於RSV F1溶解物外，亦使用數種陽性及陰性對 照抗原。使用來自血庫供體池之血漿（在菲科爾泛影納分 離後收集及冷凍，以1:1000稀釋）作為RSV F1溶解物結 合之陽性對照組。作為判定每一細菌細胞溶解物含有完整 Fab之陽性對照組，使用Affinipure山羊抗人類p(ab)2抗體 (1/ig/ml Jackson Immunoresearch，目錄號 109-006-097 )來 塗佈96孔ELISA培養板以捕捉完整Fab。此抗體僅結合於 IgG抗體之F(ab)部分。隨後藉由使用抗ha過氧化酶 (Roche，目錄號12013819〇〇1 ;表現Fab之細菌具有11八標 籤）伯測Fab表現。使用肌動蛋白（1 μ§/ηι1，Sigma目錄 號A3653 )作為Fab結合於任何蛋白質之陰性對照組且使用 小鼠抗肌動蛋白抗體（1.25 Mg/m卜Sigma目錄號A3853 ) 及山羊抗小鼠 IgG F(ab)-HRP 抗體（Santa Cruz Biotech ,目 錄號SC3697)作為ELISA反應之陽性對照組。亦包括小鼠 抗RSVmAb (純系2F7，小鼠腹水流體，目錄號aM3812， Abeam)作為特異性結合於RSV F蛋白之陰性對照組，因 為此抗體用於使RSV F蛋白結合於£〇3八培養板且因此在 篩選人類抗RSV抗體期間存在於ELISA培養板上。 A.細胞溶解物與由經EBV轉型之B細胞所產生的罗“（參 見實施例2，部分A及C，κ輕鏈，選殖至pCAL載體中） 312 201201839 之結合 藉由ELISA測試以上實施例2中所產生之八十八（88 ) 種細胞溶解物之以下能力：1 )結合於抗Fab抗體之能力； 及2)結合RSV F1溶解物之能力^ ELISA證實88種細胞溶 解物中有76種對於Fab產生呈陽性，而88種細胞溶解物 中有59種結合RSV F溶解物。ELISA證實揭露76種細胞 溶解物中有72種實際上產生Fab且初始59種陽性命中中 有46種再次證實為RSV F溶解物之結合物。 藉由相應DNA製備物之DNA測序鑑別出三種陽性結 合物。測序揭露其均具有同一序列，經鑑別為Fab 58c5， 其具有以下輕鏈及重鏈：
Fab 58c5 輕鏈 EIVMTQSPSSLSASIGDRVTITCQASQDISTYLNWYQQ KPGQAPRLLIYGASNLETGVPSRFTGSGYGTDFSVTISSLQP EDIATYYCQQYQYLPYTFAPGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSD EQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQES VTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSS PVTKSFNRGEC ( SEQ ID NO:5) 重鏈
QVQLVQSGPGLVKPSQTLALTCNVSGASINSDNYYWT
WIRQRPGGGLEWIGHISYTGNTYYTPSLKSRLSMSLETSQS
QFSLRLTSVTAADSAVYFCAACGAYVLISNCGWFDSWGQG
TQVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFP 313 201201839 EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSL GTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC ( SEQ ID NO:l ) B.細胞溶解物與由單細胞分選所產生之Fab(參見實施例3 ) 的結合 結果指示實施例3中所產生之88種細胞溶解物中有64 種結合RSV F1蛋白。藉由相應DNA製備物之DNA測序鑑 別出24種陽性結合物。 所鑑別之一種陽性結合物為Fab sc5，其具有以下輕鏈 及重鍵：
Fab sc5 輕鏈 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNIKNYLNWYQ QKPGKYPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQ PEDFATYSCQQSYNNQLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPS DEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQ ESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGL SSPVTKSFNRGEC ( SEQ ID NO:13) 重鍵 QVQLQESGPGLVKPSGTLSLTCTVSGDSISGSNWWNW VRQPPGKGLEWIGEIYYRGTTNYKSSLKGRVTMSVDTSKN QFSLKLTSVTAADTAVYYCARGGRSTFGPDYYYYMDVWG RGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC ( SEQ ID NO:9) 314 201201839 C·細胞溶解物與由經EBV轉型之B細胞所產生的Fab (參 見實施例2,部分B及C，k或λ輕鏈，選殖至pCAL IT* 載體中）之結合 對於以下實驗，如上文所述進行ELISA檢定，其中修 改如下：分別使用以1··3稀釋於含有3% BSA及0.01% Tween20之PBS中的表現58c5及sc5 Fab之細菌上清液作 為結合於RSV F 1溶解物（重組來源）及HEp2溶解物（天 然RSV F來源）之陽性對照組。
Fab 30D8 對於30D8，藉由ELISA測試以上實施例2中所產生之 77種細胞溶解物之以下能力：1 )結合於抗Fab抗體之能力； 及2)結合RSVF1溶解物之能力。ELISA證實70種細胞溶 解物對於Fab產生呈陽性，而77種細胞溶解物中有63種 結合RSV F溶解物。對8個純系之ELISA證實揭露8種細 胞溶解物中有8種實際上產生Fab且所測試之8種命中中 有6種再次證實為RSV F溶解物之結合物。對三種陽性結 合物測序且其均含有具有以下輕鏈及重鏈之相同抗體 (30D8)： 輕鏈
QSVLTQASSVSVAPGQTARITCGANNIGSQNVHWYQQ
KPGQAPVLVVYDDRDRPSGIPDRFSGSNSGNTATLTISRVEA
GDEADYYCQVWDSSRDQAVIFGGGTKLTVLGQPKAAPSVT
LFPPSSEELQANKATLVGLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKA
GVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHE 315 201201839 GSTVEKTIAPTECS ( SEQ ID NO:395 ) 重鏈 EVQLLQSGAELKKPGASVKISCKTSGFTFSGHTIAWVR QAPGQGLEWMGWVSTNNGNTEYAQKIQGRVTMTMDTSTS TVYMELRSLTSDDTAVYFCAREWLVMGGFAFDHWGQGTLL TVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVT VSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQ TYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC ( SEQ ID NO:396 )
Fab 104E5 對於104E5，藉由ELISA測試以上實施例2中所產生 之88種細胞溶解物之以下能力：1 )結合於抗Fab抗體之 能力；及2)結合RSV F1溶解物之能力。ELISA證實15 種細胞溶解物對於Fab產生呈陽性，而88種細胞溶解物中 有4種結合RSV F溶解物。對24個純系之ELISA證實揭露 24種細胞溶解物中有10種實際上產生Fab且所測試之24 種命中中有7種再次證實為RSV F溶解物之結合物。對兩 種陽性結合物測序且其均含有具有以下輕鏈及重鏈之相同 抗體（104E5): 輕鍵
DIQMTQSPSSLPASVGDRVTITCRASQNIKTYLNWYQQ
KPGRAPKLLISAVSNLQSGVPSRFSGTGSGTDFTLTISSLQPE
DFATYYCQQSFSIPLTFGGGAKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ
LKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVT
EQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKLYACEVTHQGLSSPV 316 201201839 TKSFNRGEC ( SEQ ID NO:397 ) 重鏈 QVQLEQSGAEVKKPGSSVKVSCKPSGGTFDTYTISWV RQAPGQRLEWLGRIIPSLGETNYAHKLQGRVTITADKATSV VYMDLSDLTSEDAAVYYCAFRITGPVDWVWDYGMDVWG QGTTVSVSSASSKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC ( SEQ ID NO:398 )
Fab 38F10 對於38F10，藉由ELISA測試以上實施例2中所產生 之88種細胞溶解物之以下能力：1 )結合於抗Fab抗體之 能力；及2)結合RSV F1溶解物之能力。ELISA證實65 種細胞溶解物對於Fab產生呈陽性，而88種細胞溶解物中 有40種結合RSV F溶解物。對16個純系之ELISA證實揭 露16種細胞溶解物中有13種實際上產生Fab，而所測試之 16種陽性命中中有13種再次證實為RSV F溶解物之結合 物。對五種陽性結合物測序且其均含有具有以下輕鏈及重 鏈之相同抗體（38F10): 輕鏈
DIQLTQSPPTLSASVGDRVSMTCRASQSISNWLAWYQ
QKPGKAPKLLIQKASNLEDGVPSRFTASGFGTEFTLTISSLQ
PDDFATYYCQQYNSYSGLSFGGGTKVDIKRTVAAPSVFIFPP
SDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNS 317 201201839 QESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQ GLSSPVTKSFNRGEC ( SEQ ID NO:399) 重鏈 EVQLLESGGDVVQPGKSLRLSCTASGFSITDFGIHWVR QAPGKGLEWVALISYNEVNIHYGESVRGRFTISRDIAKNTV YLQMNGLRPEDTGVYFCARDVWEDSWLSLACFQEWGQGS LVVVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEP VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLG TQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC ( SEQ ID N0:400)
Fab 14G3 對於14G3，藉由ELISA測試以上實施例2中所產生之 88種細胞溶解物之以下能力：1 )結合於抗Fab抗體之能力； 及2 )結合RSV F 1溶解物之能力。ELIS A證實7 1種細胞溶 解物對於Fab產生呈陽性，而88種細胞溶解物中有1 3種 結合RSV F溶解物。對16個純系之ELISA證實揭露16種 細胞溶解物中有14種實際上產生Fab，且所測試之16種陽 性命中中有5種再次證實為RSV F溶解物之結合物。對四 種陽性結合物測序且其均含有具有以下輕鏈及重鏈之相同 抗體（14G3): 輕鏈
DVVMTQTPLSLSVTPGEPASISCRSSQSLLDSDDGNTY
LDWYLQKPGQSPQLLIYTLSYRASGVPDRFSGSGSGTDFTL
KISRVEADDVGIYYCMQRMEFPFTFGQGTRLDIKRTVAAPS
VFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNAL 318 201201839 QSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACE VTHQGLSSPVTKSFNRGEC ( SEQ ID NO:401 ) 重鏈 QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGASISSDNHYWS WIRQPPGKGLEWIASIYYTGGTNYNPSLKSRLALSIDTSGD QFSLKLSSVTAADTAVYYCVRGLFFITARPYWYFDLWGRGT LVAVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEP VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLG TQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC ( SEQ ID NO:402 )
Fab 90D3 對於90D3，藉由ELISA測試以上實施例2中所產生之 88種細胞溶解物之以下能力：1 )結合於抗Fab抗體之能力； 及2)結合RSV F1溶解物之能力。ELISA證實80種細胞溶 解物對於Fab產生呈陽性，而88種細胞溶解物中有2種結 合RSV F溶解物。對8個純系之ELISA證實揭露8種細胞 溶解物中有7種實際上產生Fab且所測試之8種命中中有3 種再次證實為RSV F溶解物之結合物。對兩種陽性結合物 測序且其各含有具有以下輕鏈及重鏈之相同抗體（90D3 ): 輕鏈
AIRLTQSPSSLSASVGDRVSITCRASQSISNFLNWYQQK
PGRAPKLLISAASSLQGGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPE
DFATYYCQQTYISLYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDE
QLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQES
VTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSS C： 319 201201839 PVTKSFNRGEC ( SEQ ID NO:403 ) 重鏈 QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCVGSGFTLKNYEMNW VRQAPGQGLQYISYISSSGNVVKYVDSVQGRFTISRDNAGN SLYLQMNNLRAEDTATYYCVRGFSIDKYDSSVDEYWGQGI AVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEP VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLG TQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC ( SEQ ID NO:404) D.其他抗RSV抗體 如以上實施例2部分B及C中所述分離其他三種抗體 Fab 56E11、17C9及69F6，使用引子擴增κ或λ輕鏈。以 下闡明重鏈及輕鏈之序列。
Fab 56E11 輕鏈 QAVLTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWY QQHPGKAPRLIISEVTKRPSGVPGRFSGSKSGNTASLTVSGL QAEDEADYYCSSYAGSRHVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVT LFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKA GVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHE GSTVEKTIAPAECS ( SEQ ID NO:453 ) 重璉
EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGVSINSNNYFWAW
IRQPPGKGLEWIGNIYYGGSTHYNASLQSRVTISVDTSKSQF
SLKLNSVTSADTAVYYCAASESIFWDYYYGLDVWGQGTTV 320 201201839 TVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVT VSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQ TYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC ( SEQ ID NO:452 )
Fab 17C9 輕鍵 EIVLTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQNINTWLAWYQQ KPGKAPKLLIYAASFLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISNLQP EDFATYFCQQANSFPRTFGQGTKVEVKRTVAAPSVFIFPPSD EQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQES VTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSS PVTKSFNRGEC ( SEQ ID NO:455 ) 重鏈 QVQLQQWGAGLVRPSETLSLTCAVYGDSFNDYFWTWI RQTPGKGLEWIGEISHSGSTNYSPSLKSRVTISVDTSKNQFS LKLSAVTAADTTVYFCARGVRSRPPPSYRGSGSPPYYHYG MDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS VVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC ( SEQ ID NO:454 )
Fab 69F6 輕鏈
EIVLTQSPSSLSASVGDRVTISCQASQDISNYLNWYQQ
KPGKAPRLLIYDASYLDTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQP
EDFATYYCQQYDDLRGGFTFGPGTKVDVKRTVAAPSYFIFP 321 201201839
PSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNS
QESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQ . . · GLSSPVTKSFNRGEC ( SEQ ID NO:457 ) 重鏈 QMQLVQSGAEVRKPGESLKIACKGSGYSFTSYWIAWV RQMPGKGLEWLGIIFPNDSDATYSPSFQGQVTMSVDKSIST AYLQWNSLKASDTAVYFCARQYYLGSFESWGQGTTVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYIC NVNHKPSNTKVDKKVEPKSC ( SEQ ID NO:456 ) 分離之Fab的抗體域及CDR區提供於下表13A-13C中。
表13A.分離之Fab的抗體域及VH CDR區 Ab 重鍵 VH域 VH CDR1 VH CDR2 VH CDR3 58c5 SEQ ID NO:l SEQ ID NO: 1 之胺基酸 1-125 GASINSDNYY WT (SEQIDNO:2) HISYTGNTYY TPSLKS (SEQ ID NO:3) CGAYVLISNC GWFDS (SEQ ED NO:4) sc5 SEQ ID NO:9 SEQ ID NO:9 之胺基酸 1-125 GDSISGSNWW N (SEQ ID NO: 10) EIYYRGTTNY KSSLKG (SEQ ID NO: 11) GGRSTFGPDY YYYMDV (SEQ ID NO: 12) 30D8 SEQ ID NO:396 SEQ ID NO:396之胺 基酸1-121 GFTFSGHTIA (SEQ ID NO:405) WVSTNNGNT EYAQKIQG (SEQ ID NO:406) EWLVMGGFAF DH (SEQ ID NO:407) 104E5 SEQ ID NO:398 SEQ ED NO:398之胺 基酸1-125 GGTFDTYTIS (SEQ ID NO:411) RIIPSLGETNY AHKLQG (SEQ ID NO:412) RITGPVDWV WDYGMDV (SEQ ID NO:413) 38F10 SEQ ID N0:400 SEQ ID N0:400之胺 基酸1-124 GFSITDFGffl (SEQ ID NO:417) LISYNEVNIH YGESVRG (SEQ ID N〇:418) DVWEDSWLS LACFQE (SEQ ID NO:419) 14G3 SEQ ID NO:402 SEQ ID NO:402之胺 基酸1-125 GASISSDNHY ws (SEQ ID NO:423) SIYYTGGTNY NPSLKS (SEQ ID NO:424) GLFFITARPY WYFDL (SEQ ID NO:425) 90D3 SEQ ID SEQ ID GFTLKNYEM YISSSGNVVK GFSIDKYDSSV 322 201201839 C： NO:404 NO:404之胺 基酸1-123 N (SEQ ID NO:429) YVDSVQG (SEQ ID NO:430) DEY (SEQ ID NO:431) 56E11 SEQ ID NO:452 SEQ Π) NO:452之胺 基酸1-124 GVSINSNNYF WA (SEQ ID NO:458) NIYYGGSTHY NASLQS (SEQ ID NO:459) SESIFWDYYY GLDV (SEQ ID NO:460) 17C9 SEQ Π) NO:454 SEQ ID NO:454之胺 基酸1-133 GDSFNDYFW T (SEQ ID NO:464) EISHSGSTNYS PSLKS (SEQ ID NO:465) GVRSRPPPSY RGSGSPPYYH YGMDV (SEQ IDNO:466) 69F6 SEQ ID NO:456 SEQ ID NO:456之胺 基酸1-118 GYSFTSYWIA (SEQ ID NO:470) IIFPNDSDATY SPSFQG (SEQ ID NO:471) QYYLGSFES (SEQ ID NO:472) 表13B.分離之Fab的抗體域及VL CDR區 Ab 輕鏈 VL域 VL CDR1 VLCDR2 VLCDR3 58c5 SEQ ID NO:5 SEQ ID NO:5 之胺基酸 1-107 QASQDISTYL N (SEQ ID NO:6) GASNLET (SEQ ID NO:7) QQYQYLPYT (SEQ ID NO:8) sc5 SEQ ED NO: 13 SEQ ID NO: 13之胺基 酸 1-107 RASQNIKNYL N (SEQ ID NO: 14) AASTLQS (SEQ ID NO: 15) QQSYNNQLT (SEQ ID NO: 16) 30D8 SEQ ID NO:395 SEQ ID NO:395之胺 基酸1-110 GANNIGSQNV H (SEQ ID NO:408) DDRDRPS (SEQ ID NO.409) QVWDSSRDQ AVI (SEQ ID NO:410) 104E5 SEQ ID NO:397 SEQ ID NO:397之胺 基酸1-107 RASQNIKTYL N (SEQ ID NO:414) AVSNLQS (SEQ ID NO:415) QQSFSIPLT (SEQ ID NO:416) 38F10 SEQ ID NO:399 SEQ ID NO:399之胺 基酸1-108 RASQSISNWL A (SEQ ID NO:420) KASNLED (SEQ ID NO:421) QQYNSYSGLS (SEQ ED NO:422) 14G3 SEQ ID NO:401 SEQ ID NO:401之胺 基酸1-113 RSSQSLLDSD DGNTYLD (SEQ ID NO:426) TLSYRAS (SEQ ID NO:427) MQRMEFPFT (SEQ ID NO:428) 90D3 SEQ ID NO:403 SEQ ID NO:403之胺 基酸1-107 RASQSISNFLN (SEQ ED NO:432) AASSLQG (SEQ ID NO:433) QQTYISLYT (SEQ ID NO:434) 56E11 SEQ ID NO-.453 SEQ ID NO:453之胺 基酸1-111 TGTSSDVGGY NYVS (SEQ ID NO:461) EVTKRPS (SEQ ID NO:462) SSYAGSRHW (SEQ ID NO:463) 17C9 SEQ ID NO:455 SEQ ID NO:455之胺 *+ —«4 < Λ 一 RASQNINTWL A (SEQ ID NO:467) AASFLQS (SEQ ID NO:468) QQANSFPRT (SEQ ID NO:469) 323 201201839 基酸1-107 69F6 SEQ ED NO:457 SEQ ID NO:457之胺 基酸1-109 QASDISNYLN (SEQ ID NO:473) DASYLDT (SEQ ID NO:474) QQYDDLRGG FT (SEQ ID NO:475) 表13C.重鏈CDR1 (Kabat編號） Ab VH CDR1 Ab VH CDR1 58C5 SDNYYWT (SE〇 ID NO:435) 14G3 SDNHYWS (SEQ ID NO:440) sc5 GSNWWN (SE〇 ID NO:436) 90D3 NYEMN (SE〇 ID NO:441) 30D8 GHTIA(SEQIDNO:437) 56E11 SNNYFWA (SE〇 ID NO:482) 104E5 TYTIS (SEQ ID NO:438) 17C9 DYFWT (SEQ ID NO:483) 38F10 DFGIH (SEQ ID NO:439) 69F6 SYWIA(SEQIDNO:484) 實施例5 分離之Fab的表現及純化 在此實施例中，隨後表現藉由ELIS A使用細胞溶解物 測定為結合RSV F溶解物之個別Fab抗體且使用管柱層析 自細菌細胞純化該等抗體。 將編碼每一個別Fab抗體之DNA轉移至Top 10細胞 (Invitrogen)中以進行表現。在37°C下使每一 Fab抗體在2 L SB中生長至0.8之OD600。藉由添加1 mM IPTG誘導蛋 白質表現且使其在30°C下進行隔夜。表現後，離心細菌培 養物且使細胞集結塊再懸浮於10 mL含蛋白酶抑制劑（完 全蛋白酶抑制劑混合物，Santa Cruz Biotech，目錄號 sc-29131 )之磷酸鹽緩衝生理食鹽水（PBS)中。將溶菌酶 (0.2 mg)添加至再懸浮之細胞中且在室溫下培育混合物15 分鐘。藉由兩個凍/融循環來溶解細胞。簡言之，在乙醇/ 乾冰浴中冷凍再懸浮之細菌細胞，隨後在37°C水浴中解 凍。一旦溶解，在1 8000 rpm下離心細菌溶解物且過濾上清 324 201201839 液，並藉由穿過0.4微米過濾器來滅菌。 隨後藉由親和管柱層析純化每一個別Fab抗體。簡言 之’使經過濾之上清液緩慢通過允許Fab蛋白結合之抗Fab/ 蛋白A管柱。用50 mL PBS洗滌後，用9 mL· 0.2 Μ甘胺酸 (pH 2·2 )洗提結合之Fab且將其收集於含有i mL 2 M Tris 之錐形管中’從而中和洗提之蛋白質。隨後使用1〇κ mwCO 透析卡匡（Pierce )針對4 L PBS透析洗提之Fab在4t:下 儲存蛋白質隔夜且隨後使用1〇 kDa Amicon超濾器 (Millipore )濃縮至1 mL體積。隨後藉由ELISA (參見以 上實施例4 )再次證實每一經純化之pab抗體結合於RSv f 溶解物（重組來源，實施例1A)及HEp2溶解物（天然來 源，實施例1B )。另外，使用實施例6中所述之檢定測試每 一經純化之Fab抗體中和RSV之能力。
Fab 58c5及sc5結合於RSV F溶解物及經純化之RSV F蛋 白 藉由ELISA量測抗體58C5及sc5與來自經轉染293細 胞（重組）之經捕捉之RSV F蛋白或來自感染RSV A2之 Hep2細胞（天然）的經純化之RSV F蛋白的結合。結果指 示Fab 58c5及Fab sc5以劑量依賴性方式結合於RSV F蛋 白（重組），但僅sc5能夠識別經純化之F蛋白（天然）（參 見下表14-15)。 表14. Fab sc5及58c5結合於經捕捉之RSV F溶解物（重組） Fab [μβ/mll sc5 58c5 2 2.963 2.9165 0.4 2.827 2.9705 0.08 2.151 2.518 325 201201839 0.016 0.651 1.433 0.0032 0.3205 0.5905 0.00064 0.284 0.415 0.000128 0.337 0.3785 0.0000256 0.22 0.2485 表15. Fab sc5及58c5結合於經純化之RSV-F蛋白（天然） Fab [Mg/ml] sc5 58c5 2 2.623 0.417 0.4 2.704 0.2665 0.08 2.744 0.1505 0.016 2.66 0.098 0.0032 1.7685 0.0805 0.00064 0.6035 0.087 0.000128 0.2325 0.1065 0.0000256 0.1445 0.13
Fab 3 0D8、104E5、38F10、90D3 及 14G3 結合於 RSV F 溶 解物及經純化之RSV F蛋白
Fab 30D8、104E5、38F10、90D3 及 14G3 結合之估計 EC50如下表16中所示。Fab 30D8與14G3皆以約5 nM之 EC50 (分別為3.8 nM及8.2 nM)結合RSV F1溶解物（重 組）。Fab 104E5及90D3以約80 pM之EC50結合天然RSV 病毒株A2 F蛋白，而Fab 38F10以177 pM之EC50結合天 然RSV病毒株A2 F蛋白。 表 16. Fab 30D8、104E5、38F10、90D3 及 14G3 之估計 EC50 經純化之Fab EC50 抗原來源 30D8 3.8 nM RSV FI溶解物（重組） 104E5 80 pM HEp2溶解物（天然） 38F10 177 pM HEp2溶解物（天然） 90D3 72 pM HEp2溶解物（天然） 14G3 8.2 nM RSVF1溶解物（重組）
Fab 56E11、17C9及69F6結合於經純化之RSV F蛋白 326 201201839
Fab 5 6E11、17C9及69F6結合之估計EC50如下表16 中所示。Fab 56E11以545 pM之EC50結合RSV F1溶解物 (重組）〇Fab 17C9及69F6以分別為136 pM及135 pM之 EC50結合RSV F1溶解物（重組）。 表 16. Fab 30D8、104E5、38F10、90D3 及 14G3 之估計 EC50 經純化之Fab EC50 抗原來源 56E11 545 pM RSVF1溶解物（重組） 17C9 136 pM RSVΠ溶解物（重組） 69F6 135 pM RSVFl - 實施例6 RSV中和檢定
在此實施例中’如藉由空斑減少檢定所評估，分析抗 RS V抗體在溶液狀態下結合於RS V病毒及中和Rs v病毒之 能力。在此實驗中，在目標細胞不存在下預培育RSV病毒 及抗體。隨後將混合物添加至細胞中且藉由本文所述之標 準空斑減少檢定量測病毒感染。分析抗RSV抗體中和RSV 病毒之數種病毒株之能力，該等病毒株包括RSV A2 ( ATCC 目錄號 VR-1540)、RSV B-wash ( ATCC 目錄號 vr_1580， 病毒株 18537 )及 RSV B-l ( ATCC 目錄號 1400 )。 將 Vero 細胞（ATCC，目錄號：CCL_81 ; Manassas，VA) 用於宿主細胞感染。使Vero細胞生長於含1 〇%胎牛血清 (FBS) ( HyClone > 目錄號：SH30070.03 )、補充有 1 % L-麵 醯胺酸（HyClone，目錄號：SH30034.01 )及1 %青黴素-鏈 黴素溶液（HyClone，目錄號：SV30010)之 DMEM( HyClone， 327 201201839 目錄號：SH 30285.01 )中。將Vero細胞維持於含5% C〇2 之37°C培育箱中且每週繼代兩次。 貫驗第1天’將Vero細胞培養於24孔細胞培養板中。 以使得第2天形成細胞單層（>90%匯合）之密度（每孔約 1 X 1 06個細胞）將細胞塗板。第2天，在基礎伊格爾最低必 需培養基（Eagle’s minimal essential medium，EMEM， ATCC，目錄號：30-2003 )中連續稀釋每一抗體（所測試之 最終抗體濃度：20 jitg/ml、4 pg/m卜 0.8 Ag/ml、〇. 1 6 jttg/ml、 〇·〇32 /Ag/ml 及 0.006 /ig/ml)。亦在基礎 EMEM 中稀釋 RSV 病毒至 2χ 103 pfu/ml ( 1〇〇 pfu/50 μΐ)之濃度。接著將 π〇 μΐ 經稀釋之RS V病毒添加至11 〇 μΐ每一經稀釋之抗體溶液中 且藉由用吸管吸取而混合。對於病毒對照樣品，將丨1〇 μ1 經稀釋之RSV病毒添加至11〇 μ1基礎ΕΜΕΜ中。在37t下 培月抗體-病毒或病毒對照混合物2小時。培育後，自含有 Vero宿主細胞之24孔細胞培養板傾析培養基，且隨後將ι〇〇 W預培育之病毒-抗體或病毒對照混合物轉移至各孔中。每 一測試及對照樣品製備一式三份。隨後在37°c下在每1 5分 鐘進行混合下培育細胞1小時。 培育期後’抽出含有病毒-抗體或病毒對照混合物之培 養基且向各孔中添加1 ml覆蓋培養基（覆蓋培養基含有 EMEM、2% FBS、1% L·-麩醯胺酸、0.75%曱基纖維素）。隨 後在37°C下（在5% C〇2下）培育24孔細胞培養板約72小 時。在室溫下用10%福馬林（formalin )固定細胞培養板1 小時，用ddHaO洗滌1〇次且在37°C下用含5%脫脂奶粉 328 201201839 (NFDM)及0.05%吐溫20之PBS阻斷1小時。 培育後’傾析阻斷溶液且向各孔中添加200 μ]：小鼠抗 RSV 抗體（ablOOl 8，Abeam ’ 用 5% NFDM 以 1: 1〇〇〇 稀釋）。 在37°C下培育培養板2小時，用ddHA洗滌1 〇次且向各孔 中添加200 pL山羊抗小鼠HRP結合igG ( pierce，目錄號 31432，用5% NFDM以1:1000稀釋）。在37°C下培育培養 板2小時。用ddH2〇洗務培養板10次且向各孔中添加2〇〇叫
TrueBlue™過氧化酶受質（KPL目錄號50-78-02 )。在室溫 下使培養板顯色10分鐘。用.ddHzO洗滌培養板兩次並在紙 巾上乾燥，且計數藍色空斑數目。使用Prism ( GraphPad) 計算ED50 ( 50%中和之有效稀釋液）。根據下式計算空斑減 少率·: 空斑減少率（百分位）=(1 _每一抗體稀釋液中之平均 空斑數.目/病毒對照孔中之平均空斑數目）* 1 〇 〇 數據展示於下表17-19中。表17列出每一 Fab對於各 種RSV病毒株之ED50。表18列出在不同Fab 58c5濃度下 各種RSV病毒株之空斑計數。表19列出Fab 58c5之空斑 減少率。表20列出Fab 56E11、17C9、69F6及30D8針對 RSV A2之空斑減少率。結果指示Fab 58c5及3〇D8能夠中 和所有3種RSV病毒株，而j7ab SC5僅中和rsV A2及RSV B -1，即使在較尚抗體濃度下。基於_和檢定中所獲得之數 據及Fab片段之分子量（約5〇 kDa)，Fab 58c5對於試管内 中和RSV A2之EDjo為約320 pM，而Fab 3 0D8對於試管 内中和 RSV A2 之 ED50 為約 1/3 ( 1〇7 pM)。與 Fab 58c5 相 329 £ 201201839 比，Fab 30D8 更有效針對 RSV Β-l 及 RSV B/wash。 表17. Fab中和EDs〇數據
抗原 RSVA2 RSVB-1 RSVB/wash 58c5 320 pM Γ0.016 /ig/mL) 840 pM (0.042 Ufi/mL) 500 pM (0.025 /xg/mL) sc5 0.016 μΜ (0.8 Mg/mL) 0.042 μΜ (2.1 /tg/mL) > 0.2 μΜ (>10 Mg/mL) 30D8 107 pM (5.35 ng/mL) 51 pM (2.55 ng/mL) 112 pM (5.6 ng/mL) 104E5 580 pM (29 ng/mL) ND ND 38F10 800 pM (40 ng/mL) ND ND 14G3 3400 pM (172 ng/mL) ND ND 90D3 800 pM (40 ng/mL) 560 pM (28 ηΐβ/mL) 660 pM (33 ng/mL) 56E11 930 pM (46.5 ng/mL) ND ND 17C9 352 pM (17.6 ng/mL) ND ND 69F6 260 pM (13 ng/mL) ND ND ND :未測定 表18.用Fab 58c5中和之平均空斑計數 抗原 10 US/ml 2 MK/ml 0.4 MR/ml 0.08 MR/ml 0.016 με/ml 0.003 Mg/ml 0 Mg/ml RSVA2 0 0 0 5.7 28.7 52.3 57.7 RSV B/wash 1.3 0.7 0 5 16.3 23.3 26.3 RSV B-l 0.3 0 0 4.7 8.7 11.7 12.3 表19.用Fab58c5中和之空斑減少率（％) 抗原 10 Mg/ml 2 Mg/ml 0.4 Mg/ml 0.08 με/ml 0.016 με/ml 0.003 με/ml 0 /tg/ml RSVA2 100 100 100 90 50 9.4 0 RSV B/wash 95 97 100 81 38 11 0 RSVB-1 97.6 100 100 62 29 5 0 表20.用Fab 56E11、17C9及69F6中和RSVA2之空斑減少率(%) 10 2 0.4 0.08 0.016 0.0032 0.00064 Mg/ml itg/ml MR/ml 卵/ml Mg/ml Mg/ml Mg/ml 330 201201839 表20.用Fab 56E11、17C9及69F6中和RSVA2之空斑減少率（％) 沉體 10 2 0.4 0.08 0.016 0.0032 0.00064 Mg/ml MS/ml /ig/ml Mg/ml Mg/ml Mg/ml Mg/ml 56Ε11 100 100 98.5 65.98 20.8 0 — 17C9 100 100 99.9 91.2 46.7 3.4 — 69F6 99.7 99.8 99.6 97.5 63.0 2.3 --- 30D8 100 100 100 96.1 60.7 31.5 0.8 *使用30D8作為陽性對照組 實施例7
IgG之選殖及表現 在此實施例中，藉由選殖至pCALM哺乳動物表現載體 (SEQ ID NO:102)中使展示中和RSV之潛力的Fab抗體轉 化為IgG。產生對每一抗體具有特異性之引子且藉由PCR 擴增如最初選殖至pCAL載體（參見實施例2 )中之每一 Fab 的重鍵及輕鏈。輕鏈擴增產生650 bp片段且重鏈擴增產生 400 bp片段。另外，產生允許重鏈與輕鏈重疊之連接子。 該連接子亦包括標準重鏈恆定區。重鏈與輕鏈之重疊對於 每一抗體產生兩端具有Sfil限切位點（SEQ ID NO:41 )之 2.1 kB卡匣。用Sfil消化各卡匣且將其選殖至pCALM載體 中。在細菌中證實正確序列後，使用大量製備套組（Maxi Prep Kit ) ( Qiagen )分離用於哺乳動物轉染之DNA。 為表現每一 IgG，使用每一 pCALM載體感染約2億個 293F 細胞，產生約 200 微克 IgG。用 293fectin( Invitrogen， 目錄號51-0031 )轉染293F細胞且產生IgG持續72小時。 轉染後7 2小時後，收集細胞培養基，離心以移除細胞，且 經由0.4微米過濾元件過濾滅菌。藉由管柱層析使用蛋白A 管柱實現純化。使含有所表現之IgG的經過濾培養基通過 331 201201839 蛋白A管柱兩.次。用50 mL PBS洗滌後，用9 mL 0.2 Μ甘 胺酸（pH 2.2)洗提IgG且將其收集於2 M Tris中以實現中 和。使用10 kDa透析卡、匣（Pierce)針對4公升PBS透析 洗提物。用 10 kDa Amicon Ultra ( Millipore )將樣品漠縮 至 1 mL 〇 實施例8
IgG結合檢定 在此實施例中，藉由ELISA (參見以上實施例4 )測試 以上實施例7中所產生之IgG形式的58c5、30D8、104E5、 38F10、14G3、56E11、17C9 及 69F6、及抗 RSV 抗體莫維 珠單抗（Wu 等人（2007) ·/. Μο/. 5ζ·ο/· 368(3):652-665 )結 合於RSV F蛋白（重組）或RSV F蛋白（天然）溶解物之 能力。結合（藉由滴定每一 IgG所測定）之估計EC50如下 表21中所示。IgG形式之30D8具有最高親和力，而IgG 形式之 58c5、104E、38F10、56E11、17C9 及 69F6 具有約 小10倍之親和力。另外，IgG形式之30D8對於RSV病毒 株A2 F蛋白之親和力比莫維珠單抗大約1 0倍。 表21. IgG結合於RSV F蛋白 抗原 IgGEC5Q (估計） 抗原來源 IgG形式之58c5 24 pM RSV FI溶解物（重組） IgG形式之30D8 2.5 pM RSV FI溶解物（重組） IgG形式之104E5 14.5 pM HEp2溶解物（天然） IgG形式之38F10 35 pM HEp2溶解物（天然） IgG形式之14G3 251 pM RSVF1溶解物（重組） IgG形式之56E11 73 pM RSVF1溶解物（重組） IgG形式之17C9 59 pM HEp2溶解物（天然） IgG形式之69F6 63 pM RSVF1溶解物（重組） 莫維珠單抗 27 pM HEp2溶解物（天然） 332 201201839 實施例9
IgG RSV中和檢定 在此實施例中，測試以上實施例7中所產生之IgG形 式之 58c5、30D8、104E5、38F10、14G3、56E11、17C9 及 69F6、及抗RSV抗體莫維珠單抗（wu等人（2007) J. Mo/. 5b/· 368(3):652-665 )中和各種RSV病毒株之能力。另外， 分析IgG形式之58c5中和各種單株抗體抗性RSV逃避突變 體（MARM )之能力。MARM為不再能夠被其產生所針對 之抗體中和的突變RSV病毒株。因此，58c5中和特異性 MARM之能力指示58c5之結合抗原決定基不同於MARM 產生所針對之抗體的結合抗原決定基。 A.RSV之中和 測試 IgG 形式之 58c5、30D8、104E5、38F10、14G3、 5 6E11、17C9及69F6中和RSV之能力（如以上實施例6中 所述）。數據展示於下表22-24中。表22列出每一 RSV病 毒株之ED50 ( 50%中和之有效稀釋液）。表23列出在Ig(} 形式之58c5的不同抗體濃度下各種RSV病毒株之空斑計 數。表24列出在IgG 58c5之不同抗體濃度下各種RSV病 毒株之空斑減少率。結果指示IgG形式之58c5、3〇D8、 104E5、38F10、14G3、90D3、56Ε11 及 17C9 能夠中和所有 3種RSV病毒株，即使濃度不同。IgG形式之69F6對於RSV 病毒株A2具有選擇性。基於中和檢定中所獲得之數據及 IgG片段之分子量（約150 kDa)，IgG形式之58c5對於試 333 201201839 管内中和RSV A2之ED50為約133 pM。IgG形式之30D8 及14G3對於試管内中和RSV A2之ED50分別為89 pM及 106 pM。 比較IgG形式之30D8與抗RSV抗體莫維珠單抗（Wu 等人（2007) «/. Mo/.仍〇/. 368(3):652-665)對於三種 RSV 病毒株之中和活性，指示IgG 30D8為更有效中和抗體。對 於RSV病毒株A2, IgG形式之30D8顯示中和改良4倍（89 pM相對於360 pM)。IgG形式之30D8在中和RSV病毒株 B-1方面比莫維珠單抗好15倍。對於RSV病毒株B/wash， IgG形式之30D8顯示中和增強25倍（115 pM相對於2.9 nM)。另外顯示IgG形式之30D8中和RSV之Long與B/9320 病毒株。
表22. IgG中和數相 i (EDso) 抗原 RSVA2 RSVB-1 RSV B/wash RSVLong RSV Β/9320 IgG形式之58c5 133 pM (0.02 μ^τϊύ^) 280 ρΜ (0.042 Mg/rnL) 193 ρΜ (0.029 jug/mL) ND ND IgG形式之30D8 89 pM (13.3 ng/mL) 55 ρΜ (8.3 ng/mL) 115 ρΜ (17.2 ng/mL) 95 ρΜ 85 ρΜ IgG形式之104E5 800 pM (122 ng/mL) 1.7 ηΜ (253 ng/mL) 8ηΜ (1.2 jug/mL) ND ND IgG形式之38F10 553 pM (83 ng/mL) 1.4 ηΜ (212 ng/mL) 5.3 ηΜ (789 ng/mL) ND ND IgG形式之14G3 106 pM (16 ng/mL) 10.7'ηΜ (1.6 jitg/mL) 4.5 ηΜ (683 ng/mL) ND ND IgG形式之90D3 1.8 ηΜ (263 ng/mL) 1.4 ηΜ (211 ng/mL) 1.4 ηΜ (207 ng/mL) ND ND igG形式之56E11 853 pM 295 ρΜ 282 ρΜ ND ND IgG形式之17C9 363 pM 329 ρΜ 860 ρΜ ND ND IgG形式之69F6 225 ρΜ >67 ηΜ >67 ηΜ ND ND 蓂羅珠單抗 360 ρΜ 833 ρΜ 2.9 ηΜ ND ND 334 201201839 表23.用IgG形式之58c5中和的平均字斑钟教 抗原 10 /ig/ml 2 μκ/ml 0.4 μβ/ml 0.08 Ag/ml 0.016 /ig/ml 0.003 ug/ml 0 ue/ml RSVA2 0.3 0 0.7 16.3 31 40.3 57.7 RSV B/wash~~ 0 0 1.3 7.7 16.3 20.7 26.3 RSVB-1 0 0 0.3 4 9.3 11.7 12.3 表24.用IgG形苎之中和的空斑減少率(%) 抗原 10 MS/ml 2 Mg/ml 0.4 με/ml 0.08 Mg/ml 0.016 Mg/ml 0.003 "g/ml 0 Mg/ml RSVA2 99.5 100 99 72 46 30 0 RSV B/wash 100 100 95 71 38 21 0 RSV B-l 100 100 97.6 67.5 24 5 0 B.RSV單株抗體抗性RSV逃避突變體之中和 如以上實施例6中所述，亦測試IgG形式之58c5中和 數種單株抗體抗性RSV逃避突變體（由 Vanderbilt University之James Crowe博士提供）之能力。下表23中 所列之MARM衍生自RSV野生型病毒株A2。針對人類Fab 19產生之MARM 19 (參見例如Crowe等人，Virology, 252:3 73-3 75 (1998))含有胺基酸突變，異白胺酸266變為 曱硫胺酸。針對鼠類mAb 151產生之MARM 15 1含有胺基 酸突變，離胺酸272變為天冬醢胺《針對鼠類mAb 1129(其 為帕利珠單抗（SYNAGIS )之親本抗體）產生之MARM 11 29 含有胺基酸突變，絲胺酸275變為苯丙胺酸。 亦測試IgG形式之58c5中和數種RSV單株抗體抗性突 變體（MARM)之能力。數據展示於下表25-26中。表25 列出在不同抗體濃度下針對各種MARM之中和的空斑計 數。表26列出在不同抗體濃度下針對各種MARM·之中和的 335 201201839 空斑減少率。結果指示IgG形式之58c5能夠中和所有3種 RSV MARM。因此，IgG形式之58c5結合與Fab 19、鼠類 mAb 1129及鼠類mAb 1 5 1不同的RSv病毒株A2之抗原決 定基。 表25. IgG形式之f ;8c5中和] RSV MAE JVI之平埃 空斑計數 MARM 10 με/ml 2 Mg/ml M2/ml 0.08 Mg/ml 0.016 itg/ml 0.003 Atg/ml 0 ug/ml MARM19 0.7 16.7 72 89.3 135 143 156 MARM 151 0 15.3 64.7 112 128 151 151 MARM 1129 0 0 ~23~~~~ 5.7 11.7 17.7 22.3 表26. IgG形式之58c5中和RSV MARM之空斑減少率 "" MARM 10 Mg/ml 2 Mg/ml 0.4 MR/ml 0.08 Mg/ml 0.016 Mg/ml 0.003 /ig/ml 0 /ig/ml MARM 19 100 89 53.8 42.7 14 8 0 MARM 151 100 90 57 26 15 0 0 MARM 1129 100 100 90 74 47 21 0 實施例10 競爭檢定 在此實施例中，進行競爭檢定，其中測試Fab 58c5、 30D8、56E11、17C9及69F6與莫維珠單抗IgG ( Wu等人 (2007) J. Μο/· 5，·〇/. 368(3):652-665 )競爭結合於 RSV F 蛋 白之能力。另外測試Fab 58c5及30D8與IgG形式之17C9 及69F6競爭結合於重組RSV F蛋白之能力。另外測試Fab 56E11、17C9及69F6與IgG形式之58c5及30D8競爭結合 於重組RS V F蛋白之能力。作為競爭暢性對照組，測試IgG 形式之各種抗體與各別Fab形式之相同抗體競爭之能力。
簡言之，如以上實施例1中所述，用重組或天然RSV 336 201201839 病毒株A2F蛋白製備ELISA培養板。在37°C下用含4%脫 脂奶粉之lxPBS阻斷培養板2小時，隨後用洗滌緩衝液 (PBS/0.05% Tween20)洗滌 4 次。用 PBS/3% BSA/0.01% Tween20自9 jiig/mL至0.0001 pg/mL (所測試之實際濃度： 9、3、1、0,3、0.1、0.03、0_01、0.003 ' 0.001、0.0003、 0.0001 /Ag/mL)滴定 Fab。以 0.5 /xg/mL、0.1 jug/mL ' 0.05 jag/mL及0.01 /ig/mL之固定濃度添加IgG形式之測試抗體 及莫維珠單抗（如下表27中所指示）。如下表27中所指示， 將各50 /^L經稀釋之Fab及固定濃度之IgG同時添加至培養 板之各孔中，一式兩份，且在37°C下培育培養板2小時， 隨後用洗滌緩衝液洗滌4次。添加山羊抗人類IgG Fc-γ HRP (Jackson ImmunoResearch > 目錄號 109-035-098，以 1:1000 稀釋）且在37°C下培育培養板1小時。用洗滌緩衝液洗滌6 次後，添加50 pL 1:1 v/v TMB:過氧化物溶液（Pierce，目 錄號34021 )且使其顯色7分鐘。藉由添加50 pL 2 N H2S04 立即停止反應且使用ELIS A培養板讀取器量測45 0 nm下之 吸光度。
表27.競爭檢定 抗原 重組F蛋白 天然F蛋白 Fab 30D8 (9 至 0.0001 ^g/mL) 0.05 yg/mLIgG 形式之 30D8 0.5 /xg/mL IgG 形式之 30D8 0.05 pg/mL IgG 形式之 58c5 0.05 jUg/mLIgG 形式之 58c5 0.1 pg/mL莫維珠單抗IgG 0.01 pg/mL莫維珠單抗isg Fab 58c5 (9 至 0.0001 /ig/mL) 0.5 /xg/mLIgG 形式之 30D8 0.5 /ig/mL IgG 形式之 3〇D8 0.05 pg/mL IgG 形式之 58c5 0.05 pg/mLIgG 形式之 58c5 0.1 /ig/mL莫維珠單抗IgG 0.01 /ig/mL莫維珠單抗ieG 337 201201839 結果總結於下表28中。Fab 58C5、30D3、56E1卜17C9 及69F6不與莫維妹單抗競爭結合於RSV病毒株A2 F蛋 白。Fab 30D8不與任一測試抗體競爭結合。Fab 58C5與IgG 形式之69F6競爭結合於RSV F蛋白。Fab 56E11與69F6 皆與IgG形式之58c5競爭結合於RSV F蛋白。抗體58C5、 69F6及5 6E11共用RSV融合蛋白上之共同抗原決定基結合 部位。 表28.競爭檢定之總結 58C5 Fab 30D8 Fab 56E11 Fab 17C9 Fab 69F6 Fab 莫維珠單抗IgG 否 否 否 否 否 IgG形式之58C5 是 否 是 否 是 IgG形式之30D8 否 是 否 否 否 IgG形式之56E11 是 否 ND ND ND IgG形式之17C9 否 否 ND 是 ND IgG形式之69F6 是 否 ND ND 是 ND :未測定 實施例11 RSV MARM產生及中和檢定 在此實施例中，針對莫維珠單抗及IgG形式之58C5產 生單株抗體抗性RS V逃避突變體（MARM )。對於IgG形式 之30D8 ,進行12輪選擇且未鑑別出逃避突變體。進一步分 析莫維珠單抗、IgG形式之58C5及30D8以及Fab 56E11、 17C9及69F6中和新產生之MARM之能力。 A.MARM產生 1.莫維珠單抗 338 201201839 使RSV病毒效價降低3個對數（對應於藉由中和檢定 得知的尺3乂八2病毒之99.9%抑制）之莫維珠單抗1§(3的濃 度預先經測定為3.2 pg/mL。將RSV A2病毒粒子（2xl〇6 個）與莫維珠單抗IgG之豨釋液一起預培育且使用此混合 物感染Vero細胞單層（如以上實施例6中所述）。選擇具有 仍顯示細胞毒性效應之最高抗體濃度之孔用於另外幾輪選 擇。10輪選擇後，獲得來自在8 /ig/mL莫維珠單抗存在下 .生長之病毒的空斑。在中和檢定（如以上實施例6申所述） 中測試來自此等空斑之病毒粒子且使用RNeaSy萃取套組 (Qiagen )製備來自陽性粒子之rnA。選擇6種逃避突變體 且藉由PCR擴增F基因。對DNA測序且與親本RSV A2病 毒株（如SEQ ID NO:485所示）相比，所有6個純系均編 碼位置272處之麵胺酸變為離胺酸的單一胺基酸取代 (K272E，SEQ ID NO:486 )。 下表29展示每一輪選擇之顯示細胞病變效應（cpe ) 的最高抗體濃度。如下表29中所示，7輪選擇後鑑別出莫 維珠單抗逃避突變體，如藉由顯示CPE之抗體濃度大於對 應於如藉由中和檢定所測定Rsv A2病毒之99.9%抑制的莫 維珠單抗濃度（亦即> 3.2 Mg/mL)所鑑別。
339 201201839 8 ----- ~9 ----- 1 1〇 ' ---- 8 1 ~ 2. 58C5 使RSV病毒效價降低3個對數（對應於藉由中和檢定 得知的1^¥八2病毒之99.9%抑制）之1§0形式之5805的 濃度經測定為0.8 pg/mL。將RSV A2病毒粒子（2χ106個） 與IgG形式之58C5之稀釋液一起預培育且使用此混合物感 染Vero細胞單層（如以上實施例6中所述）。選擇具有仍顯 示細胞毒性效應之最高抗體濃度之孔用於另外幾輪選擇。 12輪選擇後’獲得來自在2 Mg/rnL IgG形式之58C5存在下 生長之病毒的空斑。在中和檢定（如以上實施例6中所述） 中測試來自此等空斑之病毒粒子且使用RNeasy萃取套組 (Qiagen )製備來自陽性粒子之rnA。選擇五種逃避突變體 且藉由PCR擴增F基因。對〇ΝΑ測序且與親本RSV A2病 毒株（如SEQ ID NO:485所示）相比，所有5個純系均編 碼三個胺基酸取代（N63K、M115K及E295G ; SEQ ID NO:487)。 下表30展示每一輪選擇之顯示細胞病變效應（CPE) 的最高抗體濃度。如下表30中所示，10輪選擇後鑑別出 58C5逃避突變體’如藉由顯示CPE之抗體濃度大於對應於 如藉由中和檢定所測定RSV A2病毒之99.9%抑制的IgG形 式之58C5的濃度（亦即> 〇.8 pg/mL)所鑑別。 340 201201839 表 30. 58C5 MARM 選擇 選擇輪數 抗趙濃度（/tg/mL) 1 ~02 2 ~02 - 3 ' 0.3 4 ~0A ' -- 5 0.6 6 ~06 7 "〇6 8 "〇6 一, — 9 ~06 ~ 10 ~L2 ' 11 T6 12 ~2 3. 30D8 使RSV病毒效價降低3個對數之IgG形式之30D8的 濃度經測定為1 pg/mL。將RSV A2病毒粒子（2x 106個） 與IgG形式之30D8之稀釋液一起預培育且使用此混合物感 染Vero細胞單層（如以上實施例6中所述而產生）。選擇具 有仍顯丨示細胞毒性效應之最高抗體濃度之孔用於另外幾輪 選擇。12輪選擇後，未鑑別出30D8逃避突變體，如下表 3 1中所示。 表 31. 30D8 MARM 選擇 選擇輪數 抗體濃度〇g/mL) T 0.2 ~2 ~ -- 0.2 3 0.3 ~4 ~ - 0.4 T ~ ~~' 0.4 ~6 - 0.4 τ —~ 0.4 1 ：- 0.4 ~9 ： — 0.4 1〇 '— 0.4 1Ί — 0.4 ~Ϊ2 — 0.4 t 341 201201839 B.中和檢定 測試莫維珠單抗、IgG形式之58C5及inna 夂30D8以及Fab 56E11、17C9及69F6中和RSV A2親本病毒株莫維珠單 抗MARM及58C5 MARM之能力。中和檢定程序如以 = 施例6中所述。數據展示於下表32 — 35中。志^ 實 T 表32列出針對 RSV A2親本病毒之中和的空斑減少率/ .干衣33列出針對莫 維珠單抗MARM之中和的空斑減少率。表34列出針對$ 、 MARM之中和的空斑減少率。表35為中和數據（ed = 5 之總結。 結果指示所有抗體均能夠中和親本Rsv A2病毒株 中IgG形式之58c5及30D8顯示最強活性（參見表32 、 35)。所有測試抗體均高度中和莫維珠單抗Marm而與親2 ，毒株相比無差異（參見表33及35)。如所預期，莫維珠 單抗在任一測試濃度下均無法中和莫維珠單抗。莫 維珠單抗、IgG形式之30D8及Fab 17〇高度中和 MARM而在中和效力方面無差異（參見表、 久如戶斤 預期，IgG形式之58c5在任一測試濃度下均無法中和58以 MARM。結果顯示IgG形式之58c5及30D8以及Fab 56EU、 17C9及69F6均中和莫維珠單抗MARM，表明無競爭。因 此，58c5、30D8、56EU、17(：9及69F6之抗原決定基不與 莫維珠單抗之抗原決定基重疊，因為未觀察到競爭（參見 以上表28 )且所有抗體均中和莫維珠單抗marm。
Fab69F6與IgG形式之58c5競爭結合於RSVF蛋白（參 見以上表28)，但仍中和58c5 MARM，即使在比中和親本 342 201201839 A2病毒株略高之ED5〇 ( 353 pM相對於256 pM)下。相比 之下，Fab 56E11與IgG形式之58c5競爭結合於RSV F蛋 白（參見以上表28 )，但在任一測試濃度下均不中和58c5 MARM。因此，56E11抗原決定基與58c5重疊，因為觀察 到兩種抗體之間存在競爭且56E11 Fab無法中和58C5 MARM。抗體69F6及17C9中和58c5 MARM，表明其抗原 決定基不與抗體58c5之抗原決定基重疊。然而，在58c5 與69F6之間觀察到競爭（參見表28 )，但因為69F6中和 58c5 MARM，所以所觀察到之競爭很可能歸因於位阻。 表32.中和RSVA2親;^ ^病毒之空斑減少率 抗體 10000 ng/ml 2000 ng/ml 400 ng/ml 80 ng/ml 16 ng/ml 3.2 ng/ml 莫維珠單抗 100.0 98.87 82.27 50.40 19.25 0.40 IgG形式之58C5 100.0 100.0 99.6 87.0 49.2 6.1 IgG形式之30D8 100.0 100.0 96.2 81.0 58.2 11.9 表33.中和莫維珠單抗MARM之空斑減少率 抗體 10000 ng/ml 2000 ng/ml 400 ng/ml 80 ng/ml 16 ng/ml 3.2 ng/ml 莫維珠單抗 13.3 1.7 0.0 0.2 3.3 0.0 IgG形式之58C5 97.6 95.8 92.0 74.6 43.0 1.5 IgG形式之30D8 98.7 98.6 98.2 91.8 55.7 8.7 表34.中和58C5 MARM之空斑減少率 抗體 10000 ng/ml 2000 ng/ml 400 ng/ml 80 ng/ml 16 ng/ml 3.2 ng/ml 莫維珠單抗 94.8 92.9 83.9 47.1 6.5 0.0 IgG形式之58C5 3.3 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 IgG形式之30D8 93.6 87.7 83.9 80.0 58.1 8.4 343 201201839
表35.中和（ED5D)值之總結 RSVA2 親本(ED50) 莫維珠單抗MARM (EDs〇) 58C5 MARM (EDs〇) 莫維珠單抗IgG 519 pM >66.7 nM 641 pM IgG形式之58C5 115 pM 173 pM >66.7 nM IgG形式之30D8 96 pM 93 pM 113 pM 56E11 1 nM 1.6 nM >200 nM 17C9 436 pM 356 pM 353 pM 69F6 256 pM 266 pM 353 pM 實施例12 58C5及30D8結合抗原決定基之定位 在此實施例中，藉由針對抗體58C5或30D8結合而篩 選RSV F蛋白之單一突變體文庫來測定與抗體58C5及 30D8之結合有關的RSV F蛋白之殘基。 使用來自 Integral Molecular ( Philadelphia，PA)之獵 搶突變誘發定位技術（Shotgun Mutagenesis Mapping Technology )產生RSV F蛋白突變體文庫。簡言之，該技術 允許表現及分析真核細胞内之大的突變目標蛋白質文庫。 為檢定單株抗體（MAb )結合或功能之變化，個別地使目 標蛋白質中之每一殘基突變，通常突變為多種其他胺基 酸。使蛋白質在哺乳動物細胞系中表現，因此可對甚至需 要真核生物轉譯或轉譯後加工之複雜蛋白質進行抗原決定 基定位。
使用人類RSV F A2病毒株（NCBI參考號FJ614814) 作為RS V F蛋白之親本質體。包括C端V5標籤以進行篩 選。使F蛋白在HEK 293細胞中表現且使用免疫發光測定 結合。使用隨機突變策略，產生含有1029個突變純系之RSV 344 201201839 F蛋白文庫。使F蛋白之所有549個胺基酸突變，其中每個 純系平均1.34個突變且每個胺基酸殘基平均2 46個突變。 每個胺基酸突變至少一次（1〇〇% )，且至少457個胺基酸 (83.2% )突變兩次。使用結合F蛋白之莫維珠單抗及多株 血清作為陽性對照組以判定所表現之F蛋白是否適當摺 疊。已知莫維珠單抗結合Rsv F蛋白之融合前與融合後構 形。另外’ 58C5與30D8均對構形變化敏感，因此亦使用 58C5作為30D8之對照物且使用3〇〇8作為58c5之對照 物。如以上實施例1〇中所示，58C5及3〇〇8結合於RSV ρ 蛋白之兩個非依賴性部位且另外皆對構形變化敏感。 使用轉染物之兩種非依賴性少量製備物（miniprep )篩 選若干次。亦使用多株抗體檢驗每一關鍵純系之表面表 見至〉、測试樣品二次。針對評估促進抗體結合之關鍵殘 基的選擇準則如下： WC5之關鍵殘基顯示結合〈3〇D8結合之2倍； 30D8之關鍵殘基顯示結合< 58C5結合之2倍； 陽性對照組（多株血清或莫維珠單抗）>2〇%發光；及 在相同部位之另一關鍵取代亦較佳。 結合於抗體58C5 果展示於下表36-37中，其展示針對58C5及3〇D8 與每F蛋白突變體之結合、莫維珠單抗及/或多株血清之 結合、58C5及30D8之值的平均值、3〇D8/58C5結合之比率 及F蛋白中之突變的至少3種樣品（si、s2&s3)之免疫 發光。如下表36_37中所示，F蛋白中之殘基腕、觀、 345 201201839 Y86、K168、V207、N371、S405 及/或 E463 之突變導致抗 體58C5無法結合。在兩種少量製備物篩選中鑑別殘基 E82。預先在58C5之逃避突變體或MARM中鑑別殘基N63。 此突變亦藉由FACS分析證實。當組合之關鍵殘基在融合前 RSV-F之3D模型上呈現時，其叢集於棘（spike )之有限區 域上，該區域與逃避突變體之棘頂部相同且說明Mab 58C5 之抗體足跡。因此，5 8C5結合構形抗原決定基。 當此等殘基在融合後RSV-F蛋白三聚體棘之X射線結 構上呈現時，殘基分佈於蛋白質表面上將不可能成為抗體 足跡之一部分的大區域内（參見例如Morton等人，（2003) 31 1:275-288 ; McLellan 等人，（2010) / F/ro/og;; 84(23):12236-12244 ;及 McLellan 等人，（2011) Mo/ 5/〇/ 409:853-866 )。58C5之抗原決定基位於當F蛋白自融合前 移至融合後狀態時經歷F蛋白之最顯著構形變化的域上。 僅融合前棘上之叢集區域與抗體足跡一致。因此，抗原決 定基之位置與如下資料一致：58C5對於融合前構形具有特 異性，其亦證實不會與莫維珠單抗、F1 01及30D8競爭。因 此，58C5不與莫維珠單抗或30D8結合相同的抗原決定基。 表36.用包括第一少量製備物之文庫篩選58C5 58C5 30D8 多株 58C5 30D8 S1 S2 S3 S1 S2 S3 S1 平均值 平均值 突變 30D8/58C5 比率 7.6 4.8 4.8 50.7 55.7 64.7 5.8 53.2 K168E 9.2 13.2 4.8 4.6 22.6 20.8 27.1 68.0 7.5 23.5 N63H 3.1 22.4 10.0 11.0 17.5 27.9 36.6 60.5 14.5 27.3 V207D 1.9 50.7 30.7 33.9 59.8 87.9 80.0 82.3 38.4 75.9 S405A 2.0 5.4 1.6 3.6 9.7 20.7 12.5 18.9 3.6 14.3 E82G 4.0 346 201201839 表37.用包括第二少量製備物之文庫篩選58C5 抗體 S1 8.6 "55^6~: 13.1 11.1 58C5 S2 8.9 Ιδί ' _10.2 7.2 S3 7.9 25.3 - 10.2 6.3 S4 2.1 1.2 2.4 S1 35.7 "74^9 9.3 17.2 30D8 S2 12 ΊΤΟ~~ 42.1 12.1 S3 12 52.3 36.6 12.1 S4 15.2 1〇 '~ 2.4 19.7 莫維珠單抗 平均值 42.1 100.9 26.9 24.8 多株 S1 37.1 137.1 14.4 7.7 58C5 平均值 6.9 37.9 8.7 6.8 30D8 平均值 18.7 79.6 22.6 15.3 E82G Ε463Α N371D Y86C 30D8/58C5 比率 2.7 ~2Λ ~ 2.6 2.3 結合於抗體30D8 結果展示於下表38-39中，其展示針對58C5及30D8 與每一 F蛋白突變體之結合、莫維珠單抗及/或多株血清之 結合、58C5及30D8之值的平均值、58C5/3〇D8結合之比率 及F蛋白中之突變的至少3種樣品（S1、§2及s3)之免疫 啦光。如下表38-39中所示’ F蛋白中殘基V278、R339、 F351、P353、M370、N371、C382、D392、M396 及/或 S403 之突變導致抗體30D8無法結合。在兩種少量製備物篩選中 鑑別殘基R3 39 » M370與C3 82之兩種不同突變導致無法使 抗體30D8結合於RSVF蛋白。如上文對於58C5所示，關 鍵殘基侷限於rSV F蛋白之一個域。當組合所有關鍵殘基 時，其均叢集於D 1域内’位於棒棒糖狀物〇〇Uip〇p )的底 部，恰好處於桿/莖區上方。根據3D模型，一些殘基為内 部殘基，而其他殘基為融合前三聚體模型中不同原聚體之 D1域之間的裂縫中之界面處之曝露叢集。當殘基在融合後 347 201201839 三聚體中呈現時’所有關鍵殘基均為内部殘基。儘管預期 D 1區之構形變化在融合前與融合後構形之間極有限，但原 聚體次單元在融合前與融合後之間重排，產生更緻密且空 隙更小的融合後結構》30D8 Mab定位於D1區與其視Rsv F 蛋白結構構形而定之結果一致。另外，關於58C5，抗原決 定基不與58C5、莫維珠單抗或抗體i〇if競爭。此與3D模 型上之位置一致。因此’ 30D8不與莫維珠單抗或58C5結 合相同的抗原決定基》 表38.用包括第一少量製備4 物之文庫祭 長選30D8 --- 抗體 S1 28.3 10 32.4 18.1 13.8 2.9 58C5 S2 — S3 28.7 23.5 31.5 43.2 26.4 6.1 S4 44.1 13.9 32.7 26.3 13.2 14.7 S1 16.8 7.3 20.1 14.1 9.3 1.4 30D8 S2 6.6 4.9 3.3 10.7 3.1 -1.4 S3 1.9 1.1 2,3 7.2 1.5 -1.3 _ S4 12.2 11.3 23.7 17.2 19.4 5 莫維珠單抗 平均值 28 多株 S1 24.8 76.3 3 75.9 13.1 3.8 58C5 平均值 32.4 17.7 33.8 32.7 19.9 7.4 30D8 平均值 9.4 6.2 12.4 12.3 8.3 0.9 突變 C382R R339W S403A P353S C382S F351S 58C5/30D8 比率 3.5 2.9 2.7 2.7 2.4 8.2 表39.用包括第二少量製備物之文庫篩選30D8 58C5 30D8 多株 58C5 30D8 S1 S2 S3 S1 S2 S3 S1 平均值 平均值 突绫 58C5/30D8 比率 27.1 29.0 41.7 10.3 9.0 3.6 118.7 32.6 7.6 R339Q 4.3 26.0 37.6 43.5 16.8 3.1 9.0 61.2 35.7 9.7 M370R 3.7 93.0 47.6 46.1 38.8 10.1 6.7 35.2 62.2 18.5 M370T 3.4 45.2 66.4 133.6 46.6 11.8 16.6 69.1 81.7 25.0 N371Y 3.3 13.0 39.4 43.9 15.3 8.3 6.4 73.5 32.1 10.0 M396V 3.2 86.1 51.2 63.6 44.0 11.2 10.3 66.8 卜67.0 ^1.9 D392N 3.1 122.1 97.6 79.6 63.6 21.0 11.6 57.5 99.8 32.1 V278M 3.1 348 201201839 因為修改對於熟習此項技術者將顯而易見，所以希望 本發明僅受隨附申請專利範圍之範疇限制。 【圖式簡單說明】 無 【主要元件符號說明】 無 349 201201839 序列表 <110>凯爾姆尼公司 威廉森，羅伯特安東尼 y 瓦迪亞，傑罕格 帕斯庫，賈布里 、 奇歐，艾莉莎 V ' <120>抗-人類呼吸道融合性病毒(RSV)抗體及其使用方法
<130> 33335.01161.TW00/1161TW <150> 61/399,310 <151> 2010-07-09 <150> 61/456,454 <151> 2010-11-05 <160> 487 <170〉FastSEQ視窗版4.0版 <210> 1 <211> 228 <212> PRT <213>智慧人 <220> <223〉58c5 Fab重鏈 <400> 1
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gin 1 5 10 15
Thr Leu Ala Leu Thr Cys Asn Val Ser Gly Ala Ser lie Asn Ser Asp 20 25 30
Asn Tyr Tyr Trp Thr Trp lie Arg Gin Arg Pro Gly Gly Gly Leu Glu 35 40 45
Trp lie Gly His lie Ser Tyr Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Thr Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Ser Met Ser Leu Glu Thr Ser Gin Ser Gin Phe 65 70 75 80
Ser Leu Arg Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Ser Ala Val Tyr Phe 85 90 95
Cys Ala Ala Cys Gly Ala Tyr Val Leu lie Ser Asn Cys Gly Trp Phe 100 105 110
Asp Ser Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 140
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys 195 200 205
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu 210 215 220
Pro Lys Ser Cys 225 <210> 2 201201839 <211> 12 <212> PRT <213>智慧人 <220> <223> 58c5 VH CDR1 <400> 2
Gly Ala Ser lie Asn Ser Asp Asn Tyr Tyr Trp Thr 15 10 <210> 3 <211> 16 <212> PRT <213>智慧人 <220> <223> 58c5 VH CDR2 <400〉 3
His lie Ser Tyr Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Thr Pro Ser Leu Lys Ser 15 10 15 人 T慧 415s > > > > 0 12 3 1 1 1 1 2 2 2 2 < < < < <220> <223> 58c5 VH CDR3 <400> 4
Cys Gly Ala Tyr Val Leu lie Ser Asn Cys Gly Trp Phe Asp Ser 15 10 15 <210> 5 <211> 214 <212> PRT <213>智慧人 <220> <223> 58c5輕鏈 <400> 5
Glu lie Val Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser 工le Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Gin Ala Ser Gin Asp lie Ser Thr Tyr 20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Thr Gly 50 55 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Ser Val Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Gin Tyr Leu Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Ala Pro Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 201201839
Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205
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Gin Ala Ser Gin Asp lie Ser Thr Tyr Leu Asn 15 10
<210> 7 <211> 7 <212> PRT <213>智慧人 . <220> <223> 58c5 VL CDR2 <400> 7
Gly Ala Ser Asn Leu Glu Thr 1 5 <210> 8 <211〉 9 <212> PRT <213>智慧人 <220> <223> 58c5 VL CDR3 <400> 8
Gin Gin Tyr Gin Tyr Leu Pro Tyr Thr 1 5 <210〉 9 <211> 228 <212> PRT <213>智慧人 <220> <223> sc5 Fab重鍵 <400> 9
Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly 15 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asp Ser lie Ser Gly Ser 20 25 30
Asn Trp Trp Asn Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
S 3 201201839 35 40 45 lie Gly Glu lie Tyr Tyr Arg Gly Thr Thr Asn Tyr Lys Ser Ser Leu 50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 80
Leu Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Gly Gly Arg Ser Thr Phe Gly Pro Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Met 100 105 110
Asp Val Trp Gly Arg Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 140
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys 195 200 205
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu 210 215 220
Pro Lys Ser Cys 225 <210> 10 <211> 11 <212> PRT <213>智慧人 <220> <223> sc5 VH CDR1 <400> 10
Gly Asp Ser lie Ser Gly Ser Asn Trp Trp Asn 15 10 <210> 11 <211> 16 <212> PRT <213>智慧人 <220> <223> sc5 VH CDR2 <400> 11
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Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asn lie Lys Asn Tyr 20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Ser Cys Gin Gin Ser Tyr Asn Asn Gin Leu 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu He Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140
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Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205
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Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser 1 5 5 201201839 <210> 16 <211> 9 <212> PRT <213>智慧人 <220> <223> sc5 VL CDR3 <400> 16
Gin Gin Ser Tyr Asn Asn Gin Leu Thr 1 5 <210〉 17 <211> 702 <212> DNA <213>智慧人 <220> <223> 58c5重鏈 <400> 17 caggtccagc ttgtgcagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctggccctc 60 acctgcaatg tctctggtgc ctccatcaat agtgataatt actactggac gtggatccgt 120 cagcgcccag gggggggcct ggagtggatt ggccacatct cttacactgg gaacacctac 180 tacaccccgt cactcaagag ccgactttcc atgtcactag agacatctca gagccaattc 240 tccctgaggc tgacctctgt gactgccgcg gactcggccg tctatttctg tgcggcctgc 300 ggggcatatg ttttaatatc aaactgtggc tggttcgact cctggggcca gggaacccag 360 gtcaccgtct cctcagcctc caccaagggc ccatcggtct tccccctggc accctcctcc 420 aagagcacct ctgggggcac agcggccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa 480 ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct 540 gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc 600 ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac 660 aagaaagttg agcccaaatc ttgtggtcgg ccaggccggc eg 702 <210> 18 <211> 645 <212> DNA <213>智慧人 <220> <223> 58c5輕鏈 <400> 18 tccatcctcc ctgtctgcat ctataggaga cagagtcacc 60 ggacattagc acctatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gatetaegga gcgtccaatt tggagacagg ggtcccatca 180 tgggacagac ttctctgtca ccatcagcag cctgcagcct 240 ctgtcaacag taccaatatc tcccgtacac ttttgccccg 300 acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taaettetat 420 gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 gaaacacaaa gtctacgcct gegaagteae ccatcagggc 600 gagcttcaac aggggagagt getaa 645 gaaatagtga tgacgcagtc atcacttgcc aggegagtea gggcaagccc ctaggctcct aggttcactg gaagtggata gaagatattg caacatatta gggaccaagg tcgagatcaa tetgatgage agttgaaatc cccagagagg ccaaagtaca gagagtgtca cagagcagga ctgagcaaag cagactacga ctgagctcgc ccgtcacaaa <210> 19 <211> 687 <212> DNA <213>智籍人 <220> <223> sc5重鏈 201201839 <400> 19 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga acttgcactg tctctggtga ctccatcagc cccccaggga aggggctgga gtggattggg aagtcgtccc tcaagggtcg agtcaccatg ctgaagctga cctctgtgac cgccgcggac aggtccacct ttggtccgga ctactactac gtcaccgtct cctcagcgtc gaccaaaggt aaatctacct ctggtggtac cgctgctctg ccggttaccg tttcttggaa ctctggtgct gttctgcagt cttctggtct gtactctctg ctgggtaccc agacctacat ctgcaacgtt aagaaagttg aaccgaaatc ttgcctg <210> 20 <211> 642 <212> DNA <213>智慧人 <220> <223〉sc5輕鏈 <400> 20 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc atcacttgcc gggcaagtca gaacattaag gggaaagtcc cgaagctcct gatctatgct aggttcagtg gcagtggatc tgggacagac gaagattttg caacttactc ctgtcaacag gggaccaagg tggagatcaa acgaactgtg tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac ctggtgaagc cttcggggac cctgtccctc 60 ggctctaact ggtggaattg ggtccgccag 120 gaaatctatt atcgtgggac taccaattat 180 tcagttgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240 acggccgtat attattgtgc gagagggggg 300 tacatggacg tctggggcag agggaccacg 360 ccgtctgttt tcccgctggc tccgtcttct 420 ggttgcctgg ttaaagacta cttcccggaa 480 ctgacctctg gtgttcacac cttcccggct 540 tcttctgttg ttaccgttcc gtcttcttct 600 aaccacaaac cgtctaacac caaagttgac 660 687 ctgtctgcct ctgtaggtga cagagtcacc 60 aactatttaa attggtatca acaaaaacca 120 gcatccactt tgcagagtgg ggtcccatcg 180 ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 agttacaata accagctcac tttcggcggt 300 gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 aggggagagt gc 642 <210> 21 <211> 1665 <212> DMA <213>人造序列 <220> <223〉RSV A2 F蛋白 <400> 21 gctagcggta ccatgggcga gctcctcatc ctgaaggcca acgccatcac caccatcctg 60 accgctgtga ccttctgctt cgccagcggc cagaacatca ccgaggaatt ctaccagagc 120 acctgcagcg ccgtgagcaa gggctacctg agcgccctgc ggaccggctg gtacaccagc 180 gtgatcacca tcgagctgtc caacatcaaa gaaaacaagt gcaacggcac cgacgccaaa 240 gtgaagctga tcaagcagga actggacaag tacaagaacg ccgtgaccga gctgcagctg 300 ctgatgcaga gcaccccccc caccaacaac cgggccagaa gagaactgcc ccggttcatg 360 aactacaccc tgaacaacgc caagaaaacc aacgtgaccc tgagcaagaa gcggaagcgg 420 cggttcctgg gcttcctgct gggcgtgggc agcgccattg ccagcggcgt ggccgtgtcc 480 aaagtgctgc acctggaagg cgaagtgaac aagatcaagt ccgccctgct gtccaccaac 540 aaggccgtgg tgtccctgag caacggcgtg agcgtgctga ccagcaaggt gctggatctg 600 aagaactaca tcgacaagca gctgctgccc atcgtgaaca agcagagctg cagcatcagc 660 aacatcgaga cagtgatcga gttccagcag aagaacaacc ggctgctgga aatcacccgg 720 gagttcagcg tgaacgctgg cgtgaccacc cccgtgtcca cctacatgct gaccaactcc 780 gagctgctct ccctgatcaa tgacatgccc atcaccaacg accagaaaaa gctgatgagc 840 aacaacgtgc agatcgtgcg gcagcagagc tactccatca tgagcatcat caaagaagag 900 gtgctggcct acgtggtgca gctgcccctg tacggcgtga tcgacacccc ctgctggaag 960 ctgcacacca gccccctgtg caccaccaac accaaagagg gcagcaacat ctgcctgacc 1020 cggaccgacc ggggctggta ctgcgacaac gccggcagcg tgtcattctt cccacaagcc 1080 gagacatgca aggtgcagag caaccgggtg ttctgcgaca ccatgaacag cctgaccctg 1140 cccagcgaga tcaacctgtg caacgtggac atcttcaacc ccaagtacga ctgcaagatc 1200 atgacctcca agaccgacgt gtccagctcc gtgatcacct ccctgggcgc catcgtgtcc 1260 201201839 tgctacggca agaccaagtg caccgccagc aacaagaacc ggggcatcat caagaccttc 1320 agcaacggct gcgactacgt gtccaacaag ggcatggaca ccgtgtccgt gggcaacaca 1380 ctgtactacg tgaataagca ggaaggcaag agcctgtacg tgaagggcga gcccatcatc 1440 aacttctacg accccctggt gttccccagc gacgagttcg acgccagcat cagccaggtg 1500 aacgagaaga tcaaccagag cctggccttc atcagaaaga gcgacgagct gctgcacaat 1560 gtgaatgccg gcaagtccac caccaaccaa gcttacgtag aacaaaaact catctcagaa 1620 gaggatctga atagcgccgt cgaccatcat catcatcatc attga 1665 <210> 22 <211> 6 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> Nhel限切位點 <400> 22 gctagc 6 <210> 23 <211> 6 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> Hindlll限切位點 <400> 23 aagctt 6 <210> 24 <211> 5521 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223〉pcDNA 3.1/myc-His(-) C載體 <400> 24 gacggatcgg gagatctccc ccgcatagtt aagccagtat cgagcaaaat ttaagctaca ttagggttag gcgttttgcg gattattgac tagttattaa tggagttccg cgttacataa cccgcccatt gacgtcaata attgacgtca atgggtggag atcatatgcc aagtacgccc atgcccagta catgacctta tcgctattac catggtgatg actcacgggg atttccaagt aaaatcaacg ggactttcca gtaggcgtgt acggtgggag ctgcttactg gcttatcgaa gtttaaacgg gccctctaga accacactgg actagtggat tcagaagagg atctgaatag gtctccagct taagtttaaa tctgttgttt gcccctcccc ctttcctaat aaaatgagga gggggtgggg tggggcagga ggggatgcgg tgggctctat tatccccacg cgccctgtag gtgaccgcta cacttgccag ctcgccacgt tcgccggctt gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg 60 ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg 120 acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc 180 ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt 240 tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata 300 cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc 360 atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc 420 tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt 480 cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt 540 tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca 600 cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg 660 ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc 720 aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg 780 gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca 840 attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc 900 ctcgagcggc cgccactgtg ctggatatct gcagaattcc 960 ccgagctcgg taccaagctt acgtagaaca aaaactcatc 1020 cgccgtcgac catcatcatc atcatcattg agtttaaacg 1080 ccgctgatca gcctcgactg tgccttctag ttgccagcca 1140 cgtgccttcc ttgaccctgg aaggtgccac tcccactgtc 1200 aattgcatcg cattgtctga gtaggtgtca ttctattctg 1260 cagcaagggg gaggattggg aagacaatag caggcatgct 1320 ggcttctgag gcggaaagaa ccagctgggg ctctaggggg 1380 cggcgcatta agcgcggcgg gtgtggtggt tacgcgcagc 1440 cgccctagcg cccgctcctt tcgctttctt cccttccttt 1500 tccccgtcaa gctctaaatc gggggctccc tttagggttc 1560 8 201201839 cgatttagtg ctttacggca cctcgacccc aaaaaacttg attagggtga tggttcacgt 1620 agtgggccat cgccctgata gacggttttt cgccctttga cgttggagtc cacgttcttt 1680 aatagtggac tcttgttcca aactggaaca acactcaacc ctatctcggt ctattctttt 1740 gatttataag ggattttgcc gatttcggcc tattggttaa aaaatgagct gatttaacaa 1800 aaatttaacg cgaattaatt ctgtggaatg tgtgtcagtt agggtgtgga aagtccccag 1860 gctccccagc aggcagaagt atgcaaagca tgcatctcaa ttagtcagca accaggtgtg 1920 gaaagtcccc aggctcccca gcaggcagaa gtatgcaaag catgcatctc aattagtcag 1980 caaccatagt cccgccccta actccgccca tcccgcccct aactccgccc agttccgccc 2040 attctccgcc ccatggctga ctaatttttt ttatttatgc agaggccgag gccgcctctg 2100 cctctgagct attccagaag tagtgaggag gcttttttgg aggcctaggc ttttgcaaaa 2160 agctcccggg agcttgtata tccattttcg gatctgatca agagacagga tgaggatcgt 2220 ttcgcatgat tgaacaagat ggattgcacg caggttctcc ggccgcttgg gtggagaggc 2280 tattcggcta tgactgggca caacagacaa tcggctgctc tgatgccgcc gtgttccggc 2340 tgtcagcgca ggggcgcccg gttctttttg tcaagaccga cctgtccggt gccctgaatg 2400 aactgcagga cgaggcagcg cggctatcgt ggctggccac gacgggcgtt ccttgcgcag 2460 ctgtgctcga cgttgtcact gaagcgggaa gggactggct gctattgggc gaagtgccgg 2520 ggcaggatct cctgtcatct caccttgctc ctgccgagaa agtatccatc atggctgatg 2580 caatgcggcg gctgcatacg cttgatccgg ctacctgccc attcgaccac caagcgaaac 2640 atcgcatcga gcgagcacgt actcggatgg aagccggtct tgtcgatcag gatgatctgg 2700 acgaagagca tcaggggctc gcgccagccg aactgttcgc caggctcaag gcgcgcatgc 2760 ccgacggcga ggatctcgtc gtgacccatg gcgatgcctg cttgccgaat atcatggtgg 2820 aaaatggccg cttttctgga ttcatcgact gtggccggct gggtgtggcg gaccgctatc 2880 aggacatagc gttggctacc cgtgatattg ctgaagagct tggcggcgaa tgggctgacc 2940 gcttcctcgt gctttacggt atcgccgctc ccgattcgca gcgcatcgcc ttctatcgcc 3000 ttcttgacga gttcttctga gcgggactct ggggttcgaa atgaccgacc aagcgacgcc 3060 caacctgcca tcacgagatt tcgattccac cgccgccttc tatgaaaggt tgggcttcgg 3120 aatcgttttc cgggacgccg gctggatgat cctccagcgc ggggatctca tgctggagtt 3180 cttcgcccac cccaacttgt ttattgcagc ttataatggt tacaaataaa gcaatagcat 3240 cacaaatttc acaaataaag catttttttc actgcattct agttgtggtt tgtccaaact 3300 catcaatgta tcttatcatg tctgtatacc gtcgacctct agctagagct tggcgtaatc 3360 atggtcatag ctgtttcctg tgtgaaattg ttatccgctc acaattccac acaacatacg 3420 agccggaagc ataaagtgta aagcctgggg tgcctaatga gtgagctaac tcacattaat 3480 tgcgttgcgc tcactgcccg ctttccagtc gggaaacctg tcgtgccagc tgcattaatg 3540 aatcggccaa cgcgcgggga gaggcggttt gcgtattggg cgctcttccg cttcctcgct 3600 cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcggct gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc 3660 ggtaatacgg ttatccacag aatcagggga taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg 3720 ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg 3780 cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg 3840 actataaaga taccaggcgt ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac 3900 cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca 3960 tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt 4020 gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc 4080 caacccggta agacacgact tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag 4140 agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt cttgaagtgg tggcctaact acggctacac 4200 tagaagaaca gtatttggta tctgcgctct gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt 4260 tggtagctct tgatccggca aacaaaccac cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa 4320 gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct tttctacggg 4380 gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa 4440 aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat 4500 atatgagtaa acttggtctg acagttacca atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc 4560 gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat 4620 acgggagggc ttaccatctg gccccagtgc tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc 4680 ggctccagat ttatcagcaa taaaccagcc agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc 4740 tgcaacttta tccgcctcca tccagtctat taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag 4800 ttcgccagtt aatagtttgc gcaacgttgt tgccattgct acaggcatcg tggtgtcacg 4860 ctcgtcgttt ggtatggctt cattcagctc cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg 4920 atcccccatg ttgtgcaaaa aagcggttag ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag 4980 taagttggcc gcagtgttat cactcatggt tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt 5040 catgccatcc gtaagatgct tttctgtgac tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga 5100 atagtgtatg cggcgaccga gttgctcttg cccggcgtca atacgggata ataccgcgcc 5160 acatagcaga actttaaaag tgctcatcat tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc 5220 aaggatctta ccgctgttga gatccagttc gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc 5280 ttcagcatct tttactttca ccagcgtttc tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc 5340 cgcaaaaaag ggaataaggg cgacacggaa atgttgaata ctcatactct tcctttttca 5400 atattattga agcatttatc agggttattg tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat 5460 9 201201839 5520 5521 ttagaaaaat aaacaaatag gggttccgcg cacatttccc cgaaaagtgc cacctgacgt c <210> 25 <211> 550 <212> PRT <213〉人造序列 <220> <223〉RSV A2 F蛋白 <400> 25
Met Gly Glu Leu Leu lie Leu Lys Ala Asn Ala lie Thr Thr lie Leu 15 10 15
Thr Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gin Asn lie Thr Glu Glu 20 25 30
Phe Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala 35 40 45
Leu Arg Thr Gly Trp Tyr Thr' Ser Val lie Thr lie Glu Leu Ser Asn 50 55 60 lie Lys Glu Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Val Lys Leu lie 65 70 75 80
Lys Gin Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gin Leu 85 90 95
Leu Met Gin Ser Thr Pro Pro Thr Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Leu 100 105 110
Pro Arg Phe Met Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Lys Lys Thr Asn Val 115 120 125
Thr Leu Ser Lys Lys Arg Lys Arg Arg Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly 130 135 140
Val Gly Ser Ala lie Ala Ser Gly Val Ala Val Ser Lys Val Leu His 145 150 155 160
Leu Glu Gly Glu Val Asn Lys lie Lys Ser Ala Leu Leu Ser Thr Asn 165 170 175
Lys Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys 180 185 190
Val Leu Asp Leu Lys Asn Tyr lie Asp Lys Gin Leu Leu Pro lie Val 195 200 205
Asn Lys Gin Ser Cys Ser lie Ser Asn lie Glu Thr Val lie Glu Phe 210 215 220
Gin Gin Lys Asn Asn Arg Leu Leu Glu lie Thr Arg Glu Phe Ser Val 225 230 235 240
Asn Ala Gly Val Thr Thr Pro Val Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser 245 250 255
Glu Leu Leu Ser Leu lie Asn Asp Met Pro lie Thr Asn Asp Gin Lys 260 265 270
Lys Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser 275 280 285 lie Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu 290 295 300
Pro Leu Tyr Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser 305 310 315 320
Pro Leu Cys Thr Thr Asn Thr Lys Glu Gly Ser Asn lie Cys Leu Thr 325 330 335
Arg Thr Asp Arg Gly Trp Tyr Cys Asp Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe 340 345 350
Phe Pro Gin Ala Glu Thr Cys Lys Val Gin Ser Asn Arg Val Phe Cys 355 360 365
Asp Thr Met Asn Ser Leu Thr Leu Pro Ser Glu lie Asn Leu Cys Asn 370 375 380
Val Asp lie Phe Asn Pro Lys Tyr Asp Cys Lys lie Met Thr Ser Lys 385 390 395 400
Thr Asp Val Ser Ser Ser Val lie Thr Ser Leu Gly Ala lie Val Ser 405 410 415
Cys Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly lie 10 201201839 420 425 430 lie Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Met 435 440 445 Asp Thr Val Ser Val Gly Asn Thr Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Gin Glu 450 455 460 Gly Lys Ser Leu Tyr Val Lys Gly Glu Pro lie lie Asn Phe Tyr Asp 465 470 475 480 Pro Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin Val 485 490 495 Asn Glu Lys He Asn Gin Ser Leu Ala Phe lie Arg Lys Ser Asp Glu 500 505 510 Leu Leu His Asn Val Asn Ala Gly Lys Ser Thr Thr Asn Gin Ala Tyr 515 520 525 Val Glu Gin Lys Leu lie Ser Glu Glu Asp Leu Asn Ser Ala Val Asp 530 535 540 His His His His His His 545 550 <210> 26 <211> 24 <212> DMA <213>人造序列 <220> <223> VHla正向引子 <400> 26 ggatcctctt cttggtggca gcag <210〉 27 <211〉 24 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VHlb正向引子 24 <400> 27 gcatcctttt cttggtggca gcac <210> 28 <211> 24 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VHlc正向引子 24 <400> 28 gggtcttctg cttgctggct gtag . 24 <210> 29 <211> 24 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VHld正向引子 <400> 29 ggatcctctt cttggtggga gcag <210> 30 <211〉 24 24 C： 11 24201201839 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VH2a正向引子 <400> 30 ctgaccatcc cttcatggct cttg <210> 31 <211> 24 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VH2b正向引子 <400> 31 ctgaccaccc cttcctgggt cttg <210> 32 <211〉 24 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VH3a正向引子 <400> 32 gctattttar aaggtgtcca gtgt <210> 33 <211> 24 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VH3b正向引子 <400> 33 gctcttttaa gaggtgtcca gtgt <210> 34 <211> 24 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223〉VH3c正向引子 <400> 34 gctatttaaa aaggtgtcca atgt <210> 35 <211> 24 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VH4a正向引子 <400> 35 ctggtggcag ctcccagatg ggtc 24 24 24 24 <210> 36 12 24 24201201839
<211> 24 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VH5a正向引子 <400> 36 ctcctggctg ttctccaagg agtc <210> 37 <211> 28 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VH-g 1-REV反向引子 <400> 37 acaagatttg ggctcaactt tcttgtcc <210> 38 <211> 28 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VH-g 2-REV反向引子 <400> 38 tttgcgctca actgtcttgt ccaccttg <210> 39 <211> 28 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VH-g 3-REV反向引子 <400> 39 tttgagctca actctcttgt ccaccttg <210〉 40 <211> 28 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VH-g 4-REV反向引子 <400> 40 atatttggac tcaactctct tgtccacc <210> 41 <211> 13 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> Sfil限切位點 <220> <221> misc_feature <222> (5) .7. (9)- 28 28 28 28 13 201201839 <223> N = a或g或c或t <400> 41 ggccnnnnng gcc <210> 42 <211> 48 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> pCal30 VHla正向引子 <400> 42 ggctttgcta ccgtagcgca ggcggccgca caggtkcagc tggtgcag <210> 43 <211> 48 <212> DNA <213>人造序列 <220〉 <223> pCal30 VHlbJE向引子 <400> 43 ggctttgcta ccgtagcgca ggcggccgca caggtccagc ttgtgcag <210> 44 <211> 48 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> pCal30 VHlc正向引子 <400> 44 ggctttgcta ccgtagcgca ggcggccgca saggtccagc tggtacag <210> 45 <211> 48 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223〉pCal30 VHldlE向引子 <400〉 45 ggctttgcta ccgtagcgca ggcggccgca caratgcagc tggtgcag <210> 46 <211> 48 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> pCal30 VH2a正向引子 <400> 46 ggctttgcta ccgtagcgca ggcggccgca cagatcacct tgaaggag <210> 47 <211> 48 <212> DNA <213> 乂—序列 201201839 <220> <223〉pCal30 VH3a正向引子 <400> 47 ggctttgcta ccgtagcgca ggcggccgca gargtgcagc tggtggag <210> 48 <211> 48 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> pCal30 VH4a正向引子 <400> 48 ggctttgcta ccgtagcgca ggcggccgca cagstgcagc tgcaggag <210> 49 <211> 48 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> pCal30 VH4b正向引子 <400> 49 ggctttgcta ccgtagcgca ggcggccgca caggtgcagc tacagcag <210> 50 <211> 48 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> pCal30 VH5a正向引子 <400> 50 ggctttgcta ccgtagcgca ggcggccgca gargtgcagc tggtgcag <210> 51 <211> 48 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> pCal30 VH6正向引子 <400> 51 ggctttgcta ccgtagcgca ggcggccgca caggtacagc tgcagcag <210> 52 <211> 48 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> pCal30 VH7正向引子 <400> 52 ggctttgcta ccgtagcgca ggcggccgca caggtscagc tggtgcaa <210> 53 <211〉 42 <212> DNA <213>人造序列 15 201201839 <220> <223> VHII-gl-Rev反向引子 <400> 53 tgcggccggc ctggccgacc acaagatttg ggctcaactt tc 42 <210> 54 <211> 42 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VHII-g2-Rev反向引子 <400> 54 tgcggccggc ctggccgacc tttgcgctca actgtcttgt cc 42 <210> 55 <211> 42 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VHII-g3-Rev反向引子 <400> 55 tgcggccggc ctggccgacc tttgagctca actctcttgt cc <210> 56 <211> 42 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VHII-g4-Rev反向引子 <400> 56 tgcggccggc ctggccgacc atatttggac tcaactctct tg <210> 57 <211〉 45 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VK la正向引子 <400> 57 aaggcccagc cggccatggc cgccggtgac atccagatga cccag <210> 58 <211> 45 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VK lb正向引子 <400> 58 aaggcccagc cggccatggc cgccggtgac atccagttga cccag 42 42 45
<210〉 59 <211> 45 <212> DNA 16 45 201201839 <213>人造序列 <220> <223> VK lc正向引子 <400> 59 aaggcccagc cggccatggc cgccggtgcc atccggttga cccag <210> 60 <211> 45 <212> DMA <213>人造序列 <220> <223> VK 2a正向引子 <ύ00> 60 aaggcccagc cggccatggc cgccggtgat attgtgatga cycag <210> 61 <211> 45 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223〉VK 3a正向引子 <400> 61 aaggcccagc cggccatggc cgccggtgaa attgtgttga cgcag <210> 62 <211〉 45 <212> DNA <213>人造序列 <220〉 <223〉VK 3bJE向引子 <400> 62 aaggcccagc cggccatggc cgccggtgaa attgtgttga cacag <210> 63 <211> 45 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VK 4a正向引子 <400> 63 aaggcccagc cggccatggc cgccggtgaa atagtgatga cgcag <210〉 64 <211> 45 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VK 4a正向引子 <400> 64 aaggcccagc cggccatggc cgccggtgac atcgtgatga cccag <210> 65 <211> 45 17 201201839 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223〉VK 5a正向引子 <400> 65 aaggcccagc cggccatggc cgccggtgaa acgacactca cgcag 45 <210> 66 <211> 45 <212> DNA <213>人造序列 <220〉 <223〉VK 6a正向引子 <400> 66 aaggcccagc cggccatggc cgccggtgaa attgtgctga ctcag 45 <210> 67 <211> 45 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VK 6b正向引子 <400> 67 45 44 50 aaggcccagc cggccatggc cgccggtgat gttgtgatga cacag <210> 68 <211> 44 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> pCALCK(G)L反向引子 <400> 68 ctccttatta attaattagc actctcccct gttgaagctc tttg <210> 69 <211> 50 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VL1-F正向引子 <400> 69 aaggcccagc cggccatggc cgccggtgtt cagtctgtgc tgackcagcc <210> 70 <211〉 50 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VL2-F正向引子 <400> 70 aaggcccagc cggccatggc cgccggtgtt cagtctgccc tgactcagcc <210> 71 18 50 50 201201839 <211> 50 <212> DNA . <213〉人造序列 <220> <223> VL3A-HE向引子 <400> 71 aaggcccagc cggccatggc cgccggtgtt tcctatgagc tgacwcagcy <210> 72 <211> 51 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VL3B-F正向引子 <400> 72 aaggcccagc cggccatggc cgccggtgtt tcttctgagc tgactcagga c 51 <210> 73 <211> 50 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VL3C-F正向引子 <400> 73 aaggcccagc cggccatggc cgccggtgtt tcctatgwgc tgactcagcc 50 <210> 74 <211> 51 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VL4A-F正向引子 <400〉 74 aaggcccagc cggccatggc cgccggtgtt ctgcctgtgc tgactcagcc c 51 <210> 75 <211> 51 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VL4B-F正向引子 <400〉 75 aaggcccagc cggccatggc cgccggtgtt cagcytgtgc tgactcaatc r 51 <210> 76 <211> 51 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VL5/9-nE向引子 <400> 76 aaggcccagc cggccatggc cgccggtgtt cagsctgtgc tgactcagcc r 51 19 201201839 <210> 77 <211> 51 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VL6-FJE向引子 <400> 77 aaggcccagc cggccatggc cgccggtgtt aattttatgc tgactcagcc c 51 <210> 78 <211〉 51 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VL7/8-F正向引子 <400> 78 aaggcccagc cggccatggc cgccggtgtt cagrctgtgg tgactcagga g 51 <210> 79 <211> 51 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223〉VL10-F正向引子 <400> 79 aaggcccagc cggccatggc cgccggtgtt caggcagggc tgactcagcc a 51 <210〉 80 <211> 43 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> pCALCL(T>-R反向弓[子 <400> 80 ctccttatta attaattatg agcattctgy akgggcmayt gtc 43 <210> 81 <211> 4765 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> 2gl2/pCal載體 <400> 81 gtggcacttt tcggggaaat gtgcgcggaa cccctatttg tttatttttc taaatacatt 60 caaatatgta tccgctcatg agacaataac cctgataaat gcttcaataa tattgaaaaa 120 ggaagagtat gagtattcaa catttccgtg tcgcccttat tccctttttt gcggcatttt 180 gccttcctgt ttttgctcac ccagaaacgc tggtgaaagt aaaagatgct gaagatcagt 240 tgggtgcacg agtgggttac atcgaactgg atctcaacag cggtaagatc cttgagagtt 300 ttcgccccga agaacgtttt ccaatgatga gcacttttaa agttctgcta tgtggcgcgg 360 tattatcccg tattgacgcc gggcaagagc aactcggtcg ccgcatacac tattctcaga 420 atgacttggt tgagtactca ccagtcacag aaaagcatct tacggatggc atgacagtaa 480 gagaattatg cagtgctgcc ataaccatga gtgataacac tgcggccaac ttacttctga 540 caacgatcgg aggaccgaag gagctaaccg cttttttgca caacatgggg gatcatgtaa 600 ctcgccttga tcgttgggaa ccggagctga atgaagccat accaaacgac gagcgtgaca 660 ccacgatgcc tgtagcaatg gcaacaacgt tgcgcaaact attaactggc gaactactta 720 20 201201839 ctctagcttc ttctgcgctc gtgggtctcg ttatctacac taggtgcctc agattgattt atctcatgac aaaagatcaa caaaaaaacc ttccgaaggt cgtagttagg tcctgttacc gacgatagtt ccagcttgga gcgccacgct caggagagcg ggtttcgcca tatggaaaaa ctcacatgtt agtgagctga aagcggaaga gcagctggca tgagttagct tgtgtggaat ctgccgaccg gttgttatga acctgccgtg aaagctccga ttctctggtt gacttcgcta acccgtgttg gacgaacagc cgtgaagcta tctgttaccg tctaaagctg tcttctccgg ataattatga gcccaggcgg ggttctctga tgggttcgtc acctaccgtg gaagacttcg tgcgctcgta ggtaccgttg ccgtcttcta ttcccggaac ttcccggctg tcttcttctc aaagttgaca catcaccatc aagggtggtg ggtggtggct gctatgaccg tctgtcgcta gctaatggta ggtgacggtg caatcggttg gattgtgaca tttatgtatg taacgatcgc cggcgcatta cgccctagcg tccccgtcaa cctcgacccc gacggttttt ccggcaacaa ggcccttccg cggtatcatt gacggggagt actgattaag aaaacttcat caaaatccct aggatcttct accgctacca aactggcttc ccaccacttc agtggctgct accggataag gcgaacgacc tcccgaaggg cacgagggag cctctgactt cgccagcaac ctttcctgcg taccgctcgc gcgcccaata cgacaggttt cactcattag tgtgagcgga cagccgctgg cccagtctcc cttctcagtc' aactgctgat ctggttctgg cctaccactg aaatcaaacg tgaaatctgg aagttcagtg aacaggactc actacgaaaa ttaccaaatc aaaagacagc ccgcagaagt tcctgtcttg gtgttccggg actacgctga tttacctgca aaggttctga ttaccgtttc aatctacctc cggttaccgt ttctgcagtc tgggtaccca agaaagttga accatggcgc gctctgaggg ctggttccgg aaaatgccga ctgattacgg atggtgctac ataattcacc aatgtcgccc aaataaactt tattttctac ccttcccaac agcgcggcgg cccgctcctt gctctaaatc aaaaaacttg cgccctttga ttaatagact gctggctggt gcagcactgg caggcaacta cattggtaac ttttaattta taacgtgagt tgagatcctt gcggtggttt agcagagcgc aagaactctg gccagtggcg gcgcagcggt tacaccgaac agaaaggcgg cttccagggg gagcgtcgat gcggcctttt ttatcccctg cgcagccgaa cgcaaaccgc cccgactgga gcaccccagg taacaattga tctgctgctg gtctaccctg tatcgaaacc ctacaaggct taccgagttc ccagcactac taccgttgct taccgcttct gaaagttgac taaagactct gcacaaagtt tttcaaccgt tatcgcgatt tcagctggtt cggtgtttct tggtggtctg cgctgttaaa gatgcataaa ccgtctgtct tccggcgtcg tggtggtacc ttcttggaac ttctggtctg gacctacatc accgaaatct atacccgtac tggcggttct tgattttgat tgaaaacgcg tgctgctatc tggtgatttt tttaatgaat ttttgtcttt attccgtggt gtttgctaac agttgcgcag gtgtggtggt tcgctttctt gggggctccc attagggtga -cgttggagtc ggatggaggc ttattgctga ggccagatgg tggatgaacg tgtcagacca aaaggatcta tttcgttcca tttttctgcg gtttgccgga agataccaaa tagcaccgcc ataagtcgtg cgggctgaac tgagatacct acaggtatcc gaaacgcctg ttttgtgatg tacggttcct attctgtgga cgaccgagcg ctctccccgc aagcgggcag ctttacactt attaaggagg ctcgcggccc tctgcttctg tggctggctt tctaccctga accctgacca gctggttact gctccgtctg gttgtttgcc aacgctctgc acctactctc tacgcttgcg ggtgaatgct gcagtggcac gaatctggtg aacttccgta gaatgggttg ggtcgtttca atgcgtgttg gacaacgacc accaaaggtc gctgctctgg tctggtgctc tactctctgt tgcaacgtta tgcctgcgat gacgttccgg gagggtggcg tatgaaaaga ctacagtctg gatggtttca gctggctcta aatttccgtc ggcgctggta gtctttgcgt atactgcgta cctgaatggc tacgcgcagc cccttccttt tttagggttc tggttcacgt cacgttcttt ggataaagtt taaatctgga taagccctcc aaatagacag agtttactca ggtgaagatc ctgagcgtca cgtaatctgc tcaagagcta tactgtcctt tacatacctc tcttaccggg ggggggttcg acagcgtgag ggtaagcggc gtatctttat ctcgtcaggg ggccttttgc taaccgtatt cagcgagtca gcgttggccg tgagcgcaac tatgcttccg atataattat agccggccat ttggtgacac ggtaccagca aaaccggtgt tctctggtct ctgctacctt ttttcatctt tgctgaacaa agtctggtaa 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cgccctgtag cacttgccag tcgccggctt ctttacggca cgccctgata tcttgttcca 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1620 1680 1740 1800 1860 1920 1980 2040 2100 2160 2220 2280 2340 2400 2460 2520 2580 2640 2700 2760 2820 2880 2940 3000 3060 3120 3180 3240 3300 3360 3420 3480 3540 3600 3660 3720 3780 3840 3900 3960 4020 4080 4140 4200 4260 4320 4380 4440 4500 4560 4620 21 201201839 aactggaaca acactcaacc ctatctcggt ctattctttt gatttataag ggattttgcc gatttcggcc tattggttaa aaaatgagct gatttaacaa aaatttaacg cgaattttaa caaaatatta acgcttacaa tttag <210> 82 <211〉 40 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> FabLinkerCK-Fwd <400> 82 gagcttcaac aggggagagt gctaattaat taataaggag <210> 83 <211> 42 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> FabLinker-Rev <400> 83 tgcggccgcc tgcgctacgg tagcaaagcc agccagtgcc ac <210> 84 <211> 22 <212> DNA <213>人造序列 <220〉 <223> Sfi正向引子 <400〉 84 tcgcggccca gccggccatg gc <210> 85 <211> 18 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> Sfi反向引子 <400> 85 tgcggccggc ctggccga <210> 86 <211〉 4779 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cgcatgattg aacaagatgg attgcacgca 3360 ggttctccgg ccgcttgggt ggagaggcta ttcggctatg actgggcaca acagacaatc 3420 ggctgctctg atgccgccgt gttccggctg tcagcgcagg ggcgcccggt tctttttgtc 3480 aagaccgacc tgtccggtgc cctgaatgaa ctgcaagacg aggcagcgcg gctatcgtgg 3540 ctggccacga cgggcgttcc ttgcgcagct gtgctcgacg ttgtcactga agcgggaagg 3600 gactggctgc tattgggcga agtgccgggg caggatctcc tgtcatctca ccttgctcct 3660 gccgagaaag tatccatcat ggctgatgca atgcggcggc tgcatacgct tgatccggct 3720 acctgcccat tcgaccacca agcgaaacat cgcatcgagc gagcacgtac tcggatggaa 3780 gccggtcttg tcgatcagga tgatctggac gaagaacatc aggggctcgc gccagccgaa 3840 ctgttcgcca ggctcaaggc gagcatgccc gacggcgagg atctcgtcgt gacccatggc 3900 gatgcctgct tgccgaatat catggtggaa aatggccgct tttctggatt catcgactgt 3960 ggccggctgg gtgtggcgga ccgctatcag gacatagcgt tggctacccg tgatattgct 4020 gaagaacttg gcggcgaatg ggctgaccgc ttcctcgtgc tttacggtat cgccgctccc 4080 gattcgcagc gcatcgcctt ctatcgcctt cttgacgagt tcttctgagc gggactctgg 4140 ggttcgaaat gaccgaccaa gcgacgccca acctgccatc acgagatttc gattccaccg 4200 ccgccttcta tgaaaggttg ggcttcggaa tcgttttccg ggacgccggc tggatgatcc 4260 tccagcgcgg ggatctcatg ctggagttct tcgcccaccc tagggggagg ctaactgaaa 4320 cacggaagga gacaataccg gaaggaaccc gcgctatgac ggcaataaaa agacagaata 4380 aaacgcacgg tgttgggtcg tttgttcata aacgcggggt tcggtcccag ggctggcact 4440 27 201201839 ctgtcgatac cccaccgaga ccccattggg gccaatacgc ccgcgtttct tccttttccc 4500 caccccaccc cccaagttcg ggtgaaggcc cagggctcgc agccaacgtc ggggcggcag 4560 gccctgccat agcctcaggt tactcatata tactttagat tgatttaaaa cttcattttt 4620 aatttaaaag gatctaggtg aagatccttt ttgataatct catgaccaaa atcccttaac 4680 gtgagttttc gttccactga gcgtcagacc ccgtagaaaa gatcaaagga tcttcttgag 4740 atcctttttt tctgcgcgta atctgctgct tgcaaacaaa aaaaccaccg ctaccagcgg 4800 tggtttgttt gccggatcaa gagctaccaa ctctttttcc gaaggtaact ggcttcagca 4860 gagcgcagat accaaatact gtccttctag tgtagccgta gttaggccac cacttcaaga 4920 actctgtagc accgcctaca tacctcgctc tgctaatcct gttaccagtg gctgctgcca 4980 gtggcgataa gtcgtgtctt accgggttgg actcaagacg atagttaccg gataaggcgc 5040 agcggtcggg ctgaacgggg ggttcgtgca cacagcccag cttggagcga acgacctaca 5100 ccgaactgag atacctacag cgtgagctat gagaaagcgc cacgcttccc gaagggagaa 5160 aggcggacag gtatccggta agcggcaggg tcggaacagg agagcgcacg agggagcttc 5220 cagggggaaa cgcctggtat ctttatagtc ctgtcgggtt tcgccacctc tgacttgagc 5280 gtcgattttt gtgatgctcg tcaggggggc ggagcctatg gaaaaacgcc agcaacgcgg 5340 cctttttacg gttcctggcc ttttgctggc cttttgctca catgttcttt cctgcgttat 5400 cccctgattc tgtggataac cgtattaccg cc 5432 <210> 103 <211> 450 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> Synagis VH鍵 <_> 103
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Asp Lys Lys Asp Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Ser Met lie Thr Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175
Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 28 201201839
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu 325 330 335
Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp 370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445
Gly Lys 450 <210> 104 <211> 120 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> Synagis VH域 <400> 104
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Asp Lys Lys Asp Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Ser Met He Thr Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 105 <211> 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> Synagis VH CDR1 <400> 105
Thr Ser Gly Met Ser Val Gly 1 5
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Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Cys Gin Leu Ser VU Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 '40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140
Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu 145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210> 109 <211> 106 <212> PRT 30 201201839 <213>人造序歹『J <220> <223> Synagis VL域 <400> 109
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Cys Gin Leu Ser Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 110 <211> 10 <212> PRT <213〉人造序列 <220> <223> Synagis VL CDR1 <400> 110
Lys Cys Gin Leu Ser Val Gly Tyr Met His 15 10 <210> 111 <211> 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> Synagis VL CDR2 <400> 111
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Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 113 <211〉 450 <212> PRT * <213>人造序列 31 201201839 <220> <223> AFFF VH鏈 <400> 113 Gin Val Thr Leu 1 Thr Leu Thr Leu 20 Gly Met Ser Val 35 Trp Leu Ala Asp 50 Leu Lys Ser Arg 65 Val Leu Lys Val Cys Ala Arg Ser 100 Gly Thr Thr Val 115 Phe Pro Leu Ala 130 Leu Gly Cys Leu 145 Trp Asn Ser Gly Leu Gin Ser Ser 180 Ser Ser Ser Leu 195 Pro Ser Asn Thr 210 Lys Thr His Thr 225 Pro Ser Val Phe Ser Arg Thr Pro 260 Asp Pro Glu Val 275 Asn Ala Lys Thr 290 Val Val Ser Val 305 Glu Tyr Lys Cys Lys Thr lie Ser 340 Thr Leu Pro Pro 355 Thr Cys Leu Val 370 Glu Ser Asn Gly 385 Leu Asp Ser Asp Lys Ser Arg Trp 420 Glu Ala Leu His 435 Gly Lys 450
Arg Glu Ser Gly Pro Ala 5 10
Thr Cys Thr Phe Ser Gly 25
Gly Trp lie Arg Gin Pro 40 lie Trp Trp Asp Asp Lys 55
Leu Thr lie Ser Lys Asp 70
Thr Asn Met Asp Pro Ala 85 90
Met lie Thr Asn Phe Tyr 105
Thr Val Ser Ser Ala Ser 120
Pro Ser Ser Lys Ser Thr 135
Val Lys Asp Tyr Phe Pro 150
Ala Leu Thr Ser Gly Val 165 170
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 185
Gly Thr Gin Thr Tyr lie 200
Lys Val Asp Lys Arg Val 215
Cys Pro Pro Cys Pro Ala 230
Leu Phe Pro Pro Lys Pro 245 250
Glu Val Thr Cys Val Val 265
Lys Phe Asn Trp Tyr Val 280
Lys Pro Arg Glu Glu Gin 295
Leu Thr Val Leu His Gin 310
Lys Val Ser Asn Lys Ala 325 330
Lys Ala Lys Gly Gin Pro 345
Ser Arg Glu Glu Met Thr 360
Lys Gly Phe. Tyr Pro Ser 375
Gin Pro Glu Asn Asn Tyr 390
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 405 410
Gin Gin Gly Asn Val Phe 425
Asn His Tyr Thr Gin Lys 440
Leu Val Lys Pro Thr Gin 15
Phe Ser Leu Ser Thr Ala 30
Pro Gly Lys Ala Leu Glu 45
Lys Asp Tyr Asn Pro Ser 60
Thr Ser Lys Asn Gin Val 75 80
Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 95
Phe Asp Val Trp Gly Gin 110
Thr Lys Gly Pro Ser Val 125
Ser Gly Gly Thr Ala Ala 140
Glu Pro Val Thr Val Ser 155 160
His Thr Phe Pro Ala Val 175
Ser Val Val Thr Val Pro 190
Cys Asn Val Asn His Lys 205
Glu Pro Lys Ser Cys Asp 220
Pro Glu Leu Leu Gly Gly 235 240
Lys Asp Thr Leu Met lie 255
Val Asp Val Ser His Glu 270
Asp Gly Val Glu Val His 285
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 300
Asp Trp Leu Asn Gly Lys 315 320
Leu Pro Ala Pro lie Glu 335
Arg Glu Pro Gin Val Tyr 350
Lys Asn Gin Val Ser Leu 365
Asp lie Ala Val Glu Trp 380
Lys Thr Thr Pro Pro Val 395 400
Ser Lys Leu Thr Val Asp 415
Ser Cys Ser Val Met His 430
Ser Leu Ser Leu Ser Pro 445 32 201201839 <210> 114 <211> 120 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> AFFF VH域 <400> 114
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly 1 5
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe 20
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg 35 40
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp 50 55
Leu Lys Ser Arg Leu Thr lie Ser 65 70
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp 85
Cys Ala Arg Ser Met lie Thr Asn 100
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120
Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 10 15
Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ala 25 30
Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 45
Asp Lys Lys Asp Tyr Asn Pro Ser 60
Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 75 80
Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 90 95
Phe Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala 105 110 <210> 115 <211〉 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> AFFF VH CDR1 <400> 115
Thr Ala Gly Met Ser Val Gly 1 5 <210> 116 <211> 10 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> AFFF VH CDR3 <400> 116
Ser Met lie Thr Asn Phe Tyr Phe Asp Val 15 10 <210> 117 <211> 213 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> AETF VL鏈 <400> 117
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met 33 201201839 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Phe Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Phe Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140
Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu 145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190
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Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 118 <211> 106 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> AFFF VL域 <400> 118 Asp 1 lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 5 10 15 Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro· Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45 Asp Thr Phe Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Phe Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 119 <211> 10 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> AFFF VL CDR1 <400> 119
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Phe Gin Phe Ser Gly Tyr Pro Phe Thr <210〉 122 <211> 450 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> P1212 VH鍵 <400> 122
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Pro 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Asp Lys Lys His Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Asp Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Met lie Phe Asa Phe Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175
Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asa His Lys 195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 35 201201839
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu 325 330 335
Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp 370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415
Lys Ser Arq Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445
Gly Lys 450 <210> 123 <211> 120 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223〉 P1212 VH域 <400> 123
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Pro 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp 工le Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Asp Lys Lys His Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Asp Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Met lie Phe Asn Phe Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 124 <211> 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> P1212 VH CDR1 36 201201839 <400> 124
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Asp lie Trp Trp Asp Asp Lys Lys His Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Asp 15 10 15 <210> 126 <211> 10 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> P1212 VH CDR3 <400> 126
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Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Leu Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Phe Tyr Leu Ser Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140
Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu 145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 37 201201839 195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 128 <211> 106 <212> PRT <213〉人造序列 <220> <223〉 P1212 VL域 <400> 128
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Leu Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Phe Tyr Leu Ser Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 129 <211> 10 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> P1212 VL CDR1 <400〉 129
Ser Leu Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met His 15 10 <210> 130 <211> 7 <212> PRT <213> 乂造序列 <220> <223〉 P1212 VL CDR2 <400> 130
Asp Thr Phe Tyr Leu Ser Ser 1 5 <210> 131 <211> 450 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223〉 P12f4 VH鏈 <400> 131 38 201201839
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Pro 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Asp Lys Lys His Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Asp Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Met lie Phe Asn Phe Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ma Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175
Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu 325 330 335
Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp 370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445
Gly Lys 450 <210> 132 <211> 120 <212> PRT <213>人造序列 C： 39 201201839 <220> <223> P12f4 VH域 <400> 132
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Pro 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp lie' Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Gly Lys Lys His Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Asp Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Met lie Phe Asn Phe Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 133 <211> 16 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> P12f4 VH CDR2 <400> 133
Asp lie Trp Trp Asp Gly Lys Lys His Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Asp 15 10 15 <210> 134 <211> 208 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> P12f4 VL鏈 <400> 134
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Leu Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Arg Gly Leu Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140
Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu 145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 40 201201839 165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205 <210> 135 <211> 106 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> P12f4 VL·域 <400> 135
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Leu Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Arg Gly Leu Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 136 <211> 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> P12f4 VL CDR2 <400> 136
Asp Thr Arg Gly Leu Pro Ser 1 5 <210> 137 <211> 450 <212> PRT <213〉人造序列 <220> <223> Plld4 VH鏈 <400> 137
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly 1 5
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe 20
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg 35 40
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp 50 55
Leu Lys Asp Arg Leu Thr lie Ser 65 70
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp
Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 10 15
Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Pro 25 30
Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 45
Gly Lys Lys His Tyr Asn Pro Ser 60
Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 75 80
Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 41 201201839 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Met lie Phe Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 - 170 175
Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn' Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu 325 330 335*
Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp 370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445
Gly Lys 450 <210> 138 <211> 120 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> Plld4 VH域 <400> 138
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr .Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Pro 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Gly Lys Lys His Tyr Asn Pro Ser 42 201201839 50 55 60
Leu Lys Asp Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Met lie Phe Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 139 <211> 10 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> Plld4 VH CDR3 <400> 139
Asp Met lie Phe Asn Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 140 <211〉 213 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223〉 Plld4 VL鏈 <400> 140
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr IJ.e Thr Cys Ser Pro Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Met Arg Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140
Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu 145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210〉 141 <211> 106 43 201201839 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> Plld4 VL域 <400> 141
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Pro Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 .40 45
Asp Thr Met Arg Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 142 <211〉 10 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> Plld4 VL CDR1 <400> 142
Ser Pro Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met His 15 10 <210> 143 <211> 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> Plld4 VL CDR2 <400> 143
Asp Thr Met Arg Leu Ala Ser <210> 144 <211> 450 <212> PRT <213>人造序列 <220〉 <223> Ale9 VH鏈 <400> 144
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ala 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Gly Lys Lys His Tyr Asn Pro Ser 44 201201839 50 Leu Lys Asp Arg 65 Val Leu Lys Val Cys Ala Arg Asp 100 Gly Thr Thr Val 115 Phe Pro Leu Ala 130 Leu Gly Cys Leu 145 Trp Asn Ser Gly Leu Gin Ser Ser 180 Ser Ser Ser Leu 195 Pro Ser Asn Thr 210 Lys Thr His Thr 225 Pro Ser Val Phe Ser Arg Thr Pro 260 Asp Pro Glu Val 275 Asn Ala Lys Thr 290 Val Val Ser Val 305 Glu Tyr Lys Cys Lys Thr lie Ser 340 Thr Leu Pro Pro 355 Thr Cys Leu Val 370 Glu Ser Asn Gly 385 Leu Asp Ser Asp Lys Ser Arg Trp f 420 Glu Ala Leu His 435 Gly Lys 450 55
Leu Thr lie Ser Lys Asp 70
Thr Asn Met Asp Pro Ala 85 90
Met lie Phe Asn Trp Tyr 105
Thr Val Ser Ser Ala Ser 120
Pro Ser Ser Lys Ser Thr 135
Val Lys Asp Tyr Phe Pro 150
Ala Leu Thr Ser Gly Val 165 170
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 185
Gly Thr Gin Thr Tyr lie 200
Lys Val Asp Lys Arg Val 215
Cys Pro Pro Cys Pro Ala 230
Leu Phe Pro Pro Lys Pro 245 250
Glu Val Thr Cys Val Val 265
Lys Phe Asn Trp Tyr Val 280
Lys Pro Arg Glu Glu Gin 295
Leu Thr Val Leu His Gin 310
Lys Val Ser Asn Lys Ala 325 330
Lys Ala Lys Gly Gin Pro 345
Ser Arg Glu Glu Met Thr 360
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 375
Gin Pro Glu Asn Asn Tyr 390
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 405 410
Gin Gin Gly Asn Val Phe 425
Asn His Tyr Thr Gin Lys 440 60
Thr Ser Lys Asn Gin Val 75 80
Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 95
Phe Asp Val Trp Gly Gin 110
Thr Lys Gly Pro Ser Val 125
Ser Gly Gly Thr Ala Ala 140
Glu Pro Val Thr Val Ser 155 160
His Thr Phe Pro Ma Val 175
Ser Val Val Thr Val Pro 190
Cys Asn Val Asn His Lys 205
Glu Pro Lys Ser Cys Asp 220
Pro Glu Leu Leu Gly Gly 235 240
Lys Asp Thr Leu Met lie 255
Val Asp Val Ser His Glu 270
Asp Gly Val Glu Val His 285
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 300
Asp Trp Leu Asn Gly Lys 315 320
Leu Pro Ala Pro lie Glu 335
Arg Glu Pro Gin Val Tyr 350
Lys Asn Gin Val Ser Leu 365
Asp lie Ala Val Glu Trp 380
Lys Thr Thr Pro Pro Val 395 400
Ser Lys Leu Thr Val Asp 415
Ser Cys Ser Val Met His 430
Ser Leu Ser Leu Ser Pro 445 <210> 145 <211> 120 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> Ale9 VH域
Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 5 10 15 Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Pro <400〉 145 Gin Val Thr Leu 1
Thr Leu Thr Leu 45 20 201201839
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg 35 40
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp. Asp 50 55
Leu Lys Asp Arg Leu Thr lie Ser 65 70
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp 85
Cys Ala Arg Asp Met lie Phe Asn 100
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 25 30
Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 45
Gly Lys Lys His Tyr Asn Pro Ser 60
Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 75 80
Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 90 95
Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 105 110 <210> 146 <211> 213 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> Ale9 VL鏈 <400> 146
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro 1 5
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser 20
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly 35 - 40
Asp Thr Phe Lys Leu Ser Ser Gly 50 55
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu 65 70
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe 85
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu 100
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser 115 120
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn 130 135
Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala 145 150
Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys 165
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp 180
Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu 195 200
Asn Arg Gly Glu Cys 210
Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 10 15
Leu Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 25 30
Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 45
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 60
Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 75 80
Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 90 95 lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 105 110
Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 125
Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 140
Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu 155 160
Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 170 175
Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 185 190
Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 205 <210〉 147 <211> 106 <212> PRT <213>人造序列 <220〉 <223> Ale9 VL域 <400〉 147
Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 10 15
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro 46 201201839
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Leu Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Phe Lys Leu Ser Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 148 <211> 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> Ale9 VL CDR2 <400> 148
Asp Thr Phe Lys Leu Ser Ser 1 5 <210> 149 <211> 450 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223〉 A12a6 VH鏈 <400> 149
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ala 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Gly Lys Lys Asp Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Asp Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Met lie Phe Asn Phe Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175
Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190*
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 47 201201839 225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu 325 330 335
Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp 370 375. 380
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445
Gly Lys 450 <210> 150 <211> 120 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A12a6 VH域 <400> 150
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ala 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp lie· Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Gly Lys Lys Asp Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Asp Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Met lie Phe Asn Phe Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 151 <211> 16 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A12a6 VH CDR2 48 201201839 <400> 151
Asp lie Trp Trp Asp Gly Lys Lys Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Asp 15 10 15 <210> 152 <211> 213 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A12a6 VL鏈 <400> 152
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Ala Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu He Tyr 35 40 45
Asp Thr Phe Lys Leu Ser Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140
Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu 145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 153 <211> 106 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223〉 A12a6 VL域 <400> 153
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Ala Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Phe Lys Leu Ser Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 49 85 201201839 90 Glu lie Lys 105
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val 100 <210> 154 <211> 10 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A12a6 VL CDR1 <400> 154
Ser Ala Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met His 15 10 <210> 155 <211> 450 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223〉 A13c4 VH鍵 <400> 155
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ala 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp. Asp Gly Lys Lys Ser Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Asp Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Met lie Phe Asn Phe Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175
Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 50 201201839
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu 325 330 335
Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp 370 375 3.80
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445
Gly Lys 450 <210> 156 <211> 120 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> Al3c4 VH域 <400> 156
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ala 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Gly Lys Lys Ser Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Asp Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Met lie Phe Asn Phe Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
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Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Leu Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Met Tyr Gin Ser Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140
Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu 145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210〉 159 <211> 106 <212> PRT <213> 乂造序列 <220> <223> A13c4 VL域 <400> 159
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys· Ser Leu Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Met Tyr Gin Ser Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 160 <211〉 7 <212> PRT <213>人造序列 52 201201839 <220> <223> A13C4 VL CDR2 <400> 160
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Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ala 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Gly Lys Lys Ser Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Asp Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Met lie Phe Asn Phe Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175
Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val· Asp Val Ser His Glu 260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu 325 330 335
Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp 53 201201839 370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445
Gly Lys 450 <210> 162 <211> 120 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223〉 A17d4 VH域 <400> 162
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ala 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Gly Lys Lys Ser Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Asp Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Met lie Phe Asn Phe Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
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Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Leu Pro Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 54 201201839 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Met Tyr Gin Ser Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glri Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140
Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu 145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 165 <211> 106 <212> PRT ' <213>人造序列 <220> <223> A17d4 VL域 <400> 165
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Leu Pro Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Met Tyr Gin Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Phe Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
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Arg Glu Ser Gly Pro Ala 5 10
Thr Cys Thr Phe Ser Gly 25
Gly Trp lie Arg Gin Pro 40 lie Trp Trp Asp Asp Lys 55
Leu Thr lie Ser Lys Asp 70
Thr Asn Met Asp Pro Ala 85 90
Met lie Phe Asn Phe Tyr 105
Thr Val Ser Ser Ala Ser 120
Pro Ser Ser Lys Ser Thr 135
Val Lys Asp Tyr Phe Pro 150
Ala Leu Thr Ser Gly Val 165 170
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 185
Gly Thr Gin Thr Tyr lie 200
Lys Val Asp Lys Arg Val 215
Cys Pro Pro Cys Pro Ala 230
Leu Phe Pro Pro Lys Pro 245 250
Glu Val Thr Cys Val Val 265
Lys Phe Asn Trp Tyr Val 280
Lys Pro Arg Glu Glu Gin 295
Leu Thr Val Leu His Gin 310
Lys Val Ser Asn Lys Ala 325 330
Lys Ala Lys Gly Gin Pro 345
Ser Arg Glu Glu Met Thr 360
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 375
Gin Pro Glu Asn Asn Tyr 390
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 405 410
Gin Gin Gly Asn Val Phe 425
Asn His Tyr Thr Gin Lys 440
Leu Val Lys Pro Thr Gin 15
Phe Ser Leu Ser Thr Ala 30
Pro Gly Lys Ala Leu Glu 45
Lys His Tyr Asn Pro Ser 60
Thr Ser Lys Asn Gin Val 75 80
Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 95
Phe Asp Val Trp Gly Gin 110
Thr Lys Gly Pro Ser Val 125
Ser Gly Gly Thr Ala Ala 140
Glu Pro Val Thr Val Ser 155 160
His Thr Phe Pro Ala Val 175
Ser Val Val Thr Val Pro 190
Cys Asn Val Asn His Lys 205
Glu Pro Lys Ser Cys Asp 220
Pro Glu Leu Leu Gly Gly 235 240
Lys Asp Thr Leu Met lie 255
Val Asp Val Ser His Glu 270
Asp Gly Val Glu Val His 285
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 300
Asp Trp Leu Asn Gly Lys 315 320
Leu Pro Ala Pro lie Glu 335
Arg Glu Pro Gin Val Tyr 350
Lys Asn Gin Val Ser Leu 365
Asp lie Ala Val Glu Trp 380
Lys Thr Thr Pro Pro Val 395 400
Ser Lys Leu Thr Val Asp 415
Ser Cys Ser Val Met His 430
Ser Leu Ser Leu Ser Pro 445 56 201201839
Gly Lys 450 <210> 168 <211> 120 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223〉 A4B4 VH域 <400> 168
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 1 t 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ala 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp He Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Asp Lys Lys His Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Asp Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Met lie Phe Asn Phe Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 169 <211> 213 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223〉 A4B4 VL鏈 <400> 169
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser. Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Ala Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Phe Phe Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140
Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu 145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 57 201201839 195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 170 <211> 106 <212> PRT <213〉人造序列， <220> <223> A4B4 VL域 <400> 170
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Ala Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Phe Phe Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 171 <211> 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A4B4 VL CDR2 <400> 171
Asp Thr Phe Phe Leu Asp Ser 1 5 <210> 172 <211> 450 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A8c7 VH鍵 <400> 172
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ala 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Asp Lys Lys Ser Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Asp Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Met lie Phe Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 58 201201839 100 Gly Thr Thr Val 115 Phe Pro Leu Ala 130 Leu Gly Cys Leu 145 Trp Asn Ser Gly Leu Gin Ser Ser 180 Ser Ser Ser Leu 195 Pro Ser Asn Thr 210 Lys Thr His Thr 225 Pro Ser Val Phe Ser Arg Thr Pro 260 Asp Pro Glu Val 275 Asn Ala Lys Thr 290 Val Val Ser Val 305 Glu Tyr Lys Cys Lys Thr lie Ser 340 Thr Leu Pro Pro 355 Thr Cys Leu Val 370 Glu Ser Asn Gly 385 Leu Asp Ser Asp Lys Ser Arg Trp 420 Glu Ala Leu His 435 Gly Lys 450 105
Thr Val Ser Ser Ala Ser 120
Pro Ser Ser Lys Ser Thr 135
Val Lys Asp Tyr Phe Pro 150
Ala Leu Thr Ser Gly Val 165 170
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 185
Gly Thr Gin Thr Tyr He 200
Lys Val Asp Lys Arg Val 215
Cys Pro Pro Cys Pro Ala 230
Leu Phe Pro Pro Lys Pro 245 250
Glu Val Thr Cys Val Val 265
Lys Phe Asn Trp Tyr Val 280
Lys Pro Arg Glu Glu Gin 295
Leu Thr Val Leu His Gin 310
Lys Val Ser Asn Lys Ala 325 330
Lys Ala Lys Gly Gin Pro 345
Ser Arg Glu Glu Met Thr 360
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 375
Gin Pro Glu Asn Asn Tyr 390
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 405 410
Gin Gin Gly Asn Val Phe 425
Asn His Tyr Thr Gin Lys 440 110
Thr Lys Gly Pro Ser Val 125
Ser Gly Gly Thr Ala Ala 140
Glu Pro Val Thr Val Ser 155 160
His Thr Phe Pro Ala Val 175
Ser Val Val Thr Val Pro 190
Cys Asn Val Asn His Lys 205
Glu Pro Lys Ser Cys Asp 220
Pro Glu Leu Leu Gly Gly 235 240
Lys Asp Thr Leu Met lie 255
Val Asp Val Ser His Glu 270
Asp Gly Val Glu Val His 285
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 300
Asp Trp Leu Asn Gly Lys 315 320
Leu Pro Ala Pro lie Glu 335
Arg Glu Pro Gin Val Tyr 350
Lys Asn Gin Val Ser Leu 365
Asp lie Ala Val Glu Trp 380
Lys Thr Thr Pro Pro Val 395 400
Ser Lys Leu Thr Val Asp 415
Ser Cys Ser Val Met His 430
Ser Leu Ser Leu Ser Pro 445 <210> 173 <211> 120 <212〉 PRT <213>人造序列 <220> <223> A8c7 VH域 <400> 173 Gin Val Thr Leu 1 Thr Leu Thr Leu 20 Gly Met Ser Val 35 Trp Leu Ala Asp 50 Leu Lys Asp Arg
Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 5 10 15
Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ala 25 30
Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 40 45 lie Trp Trp Asp Asp Lys Lys Ser Tyr Asn Pro Ser 55 60
Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 59 201201839 65 70
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp 85
Cys Ala Arg Asp Met lie Phe Asn 100
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 ·120 75 80
Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 90 95
Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 105 110 <210> 174 <211> 213 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A8c7 VL鏈 <400> 174
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro 1 5
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser 20
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly 35 40
Asp Thr Arg Tyr Gin Ser Ser Gly 50 55
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu 65 70
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe 85
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu 100
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser 115 120
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn 130 135
Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala 145 150
Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys 165
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp 180
Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu 195 200
Asn Arg Gly Glu Cys 210
Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 10 15
Pro Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 25 30
Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 45
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 60
Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 75 80
Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 90 95 lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 105 110
Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 125
Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 140
Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu 155 160
Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 170 175
Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 185 190
Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 205 列 序 5 6 T造 7 o R 1 1 OL > > > > 0 12 3 IX IX ΊΧ 2 2 2 2 < < < < <220> <223> A8c7 VL域 <400> 175
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser- Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Ala Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Arg Tyr Gin Ser Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 60 201201839
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
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Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Tyr Trp 工le Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu 35 40 45
Glu Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Asp Lys Lys Asp Tyr Asn Pro 50 ' 55 60
Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin 65 70 75 80
Val Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr 85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Ser Met lie Thr Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly 100 105 110
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Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140
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Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175
Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190
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Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285
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Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser 355 360 365
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Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415
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Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
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Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110
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Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175
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Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 340 345 350
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Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190
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Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp 370 375 380
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Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415
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Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160
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Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 67 201201839
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 210 215
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Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 370 375
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Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 405
Lys Ser Arg Trp Gin Gla Gly Asn 420
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 435 440
Gly Lys 450
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 220
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 235 240
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 250 255
Val Val Val Asp Val Ser His Glu 265 270
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 285
Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 300
His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 315 320
Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu 330 335
Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 345 350
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Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp 380
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Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 410 415
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Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 445 <210〉 187 <211> 120 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> DG VH域 <400> 187
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly 1 5
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Leu Lys Ser Arg Leu Thr lie Ser 65 70
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Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120
Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 10 15
Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ala 25 30
Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 45
Asp Lys Lys Asp Tyr Asn Pro Ser 60
Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 75 80
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Asp Met lie Thr Asn Phe Tyr Phe Asp Val 15 10 <210> 189 <211> 213 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> DG VL鏈 <400> 189
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 - 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met 20 25 30
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Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110
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Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190
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Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ala 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp He Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Asp Lys Lys Asp Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 69 201201839
Leu Lys Ser Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
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Cys Ala Arg Ser Met lie Thr Asn Phe Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
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Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160
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Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 .280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu 325 330 335
Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp 370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430
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Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140
Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu 145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205
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Asp 工le Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Phe Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Phe Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
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Arg Glu Ser Gly Pro Ala 5 10
Thr Cys Thr Phe Ser Gly 25
Gly Trp lie Arg Gin Pro 40 lie Trp Trp Asp Asp Lys 55
Leu Thr lie Ser Lys Asp 70
Thr Asn Met Asp Pro Ala 85 90
Met lie Thr Asn Phe Tyr 105
Thr Val Ser Ser Ala Ser 120
Pro Ser Ser Lys Ser Thr 135
Val Lys Asp Tyr Phe Pro 150
Ala Leu Thr Ser Gly Val 165 .170
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 185
Gly Thr Gin Thr Tyr lie 200
Lys Val Asp Lys Arg Val 215
Cys Pro Pro Cys Pro Ala 230
Leu Phe Pro Pro Lys Pro 245 250
Glu Val Thr Cys Val Val 265
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Leu Thr Val Leu His Gin 310
Lys Val Ser Asn Lys Ala 325 330
Lys Ala Lys Gly Gin Pro 345
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Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 405 410
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Phe Ser Leu Ser Thr Ala 30
Pro Gly Lys Ala Leu Glu 45
Lys Asp Tyr Asn Pro Ser 60
Thr Ser Lys Asn Gin Val 75 80
Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr .95
Phe Asp Val Trp Gly Gin 110
Thr Lys Gly Pro Ser Val 125
Ser Gly Gly Thr Ala Ala 140
Glu Pro Val Thr Val Ser 155 160
His Thr Phe Pro Ala Val 175
Ser Val Val Thr Val Pro 190
Cys Asn Val Asn His Lys 205
Glu Pro Lys Ser Cys Asp 220
Pro Glu Leu Leu Gly Gly 235 240
Lys Asp Thr Leu Met lie 255
Val Asp Val Ser His Glu 270
Asp Gly Val Glu Val His 285
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 300
Asp Trp Leu Asn Gly Lys 315 320
Leu Pro Ala Pro lie Glu 335
Arg Glu Pro Gin Val Tyr 350
Lys Asn Gin Val Ser Leu 365
Asp lie Ala Val Glu Trp 380
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Ser Lys Leu Thr Val Asp 415
Ser Cys Ser Val Met His 430
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Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Phe Lys Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110.
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140
Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu 145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205
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Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Phe Lys Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
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Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp He Trp Trp Asp Asp Lys Lys Asp Tyr Asn Pro Ser 50 55 . 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Met lie Thr Asn Phe Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175
Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320
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Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp 370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445
Gly Lys 450 <210> 199 <211> 213 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> L1-7E5 VL鏈 <400> 199
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Ala Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Phe Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80 "Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140
Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu 145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205
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Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Phe Arg Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 201 <211〉 450 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> L2-15B10 VH鏈 <400> 201
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ala 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Asp Lys Lys Asp Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Met lie Thr Asn Phe Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175
Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr 工le Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 76 201201839
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu 325 330 335
Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp 370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445
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Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Phe Arg Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140
Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu 145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205
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Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Phe Arg Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 204 <211> 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> L2-15B10 VL CDR2 <400> 204
Asp Thr Phe Arg Leu Ala Ser 1 5 <210> 205 <211> 450 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A13all VH鏈 <400> 205
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Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ala 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Asp Lys Lys His Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Asp Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Ser Met lie Thr Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp. Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 78 201201839
Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu 325 330 335
Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp 370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445
Gly Lys 450 <210> 206 <211> 120 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> Al3all VH域 <400> 206
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ala 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Asp Lys Lys His Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Asp Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Met lie Phe Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 79 201201839 <210〉 207 <211> 214 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A13all VL鏈 <400〉 207
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro 1 5
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser 20
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly 35 40
Asp Thr Tyr Arg His Leu Ala Ser 50 55
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr 65 70
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 85
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val 100
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro 115 120
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu 130 135.
Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn 145 150
Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser 165
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala 180
Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly 195 200
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 10 15
Pro Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 25 30
Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 45
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60
Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 75 80
Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe 90 95
Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 105 110
Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 125
Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 140
Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 155 160
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 170 175
Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 185 190
Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 205 <210> 208 <211> 106 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A13all VL域 <_> 208
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro 1 5
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser 20
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly 35 40
Asp Thr Tyr Arg His Ala Ser Gly 50 55
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu 65 70
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe 85
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 100
Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 10 15
Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met 25 30
Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 45
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 60
Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 75 80
Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 90 95 lie Lys 105 <210> 209 80 201201839 <211> 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A13all VL CDR2 <400> 209
Asp Thr Tyr Arg His Ser Ser 1 5 <210> 210 <211> 450 <212> PRT <213>人造序列 <220〉 <223〉 Alh5 VH鍵 <400> 210
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ala 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Gly Lys Lys His Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Asp Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Met lie Phe Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175
Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu 325 330 335
Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 340 345 350 81 201201839
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp 370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445
Gly Lys 450 <210> 211 <211> 213 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> Alh5 VL鏈 <400> 211
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Leu Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Phe Phe His Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu- Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140
Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu 145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190
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Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Leu Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
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Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
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Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Asp Lys Lys His Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Asp Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Met lie Phe Asn Phe Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 83 201201839 115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175
Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205
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Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu 325 330 335
Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp 370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445
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Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Ala Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Leu Leu Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 84 201201839 85 90 95
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Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140
Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu 145 150 155 160
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Leu Thr lie Ser Lys Asp 70
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Met lie Phe Asn Phe Tyr 105
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Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 185
Gly Thr Gin Thr Tyr lie 200
Lys Val Asp Lys Arg Val 215
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Leu Phe Pro Pro Lys Pro 245 250
Glu Val Thr Cys Val Val 265
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Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 405 410
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Pro Gly Lys Ala Leu Glu 45
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Thr Ser Lys Asn Gin Val 75 80
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Phe Asp Val Trp Gly Gin 110
Thr Lys Gly Pro Ser Val 125
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His Thr Phe Pro Ala Val 175
Ser Val Val Thr Val Pro 190
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Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190
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Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
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Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 185
Gly Thr Gin Thr Tyr lie 200
Lys Val Asp Lys Arg Val 215
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Leu Phe Pro Pro Lys Pro 245 250
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Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Ala Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
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Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125
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Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu 145 150 155 160
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Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190
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Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 224 <211> 106 <212> PRT , <213>人造序列 <220> <223〉 A4B4-F25S VL域 <400> 224
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His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
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Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
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Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175
Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu 325 330 335
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Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 90 201201839 355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp 370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445
Gly Lys 450 <210> 227 <211> 120 . <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> H3-3F4 VH域 <400> 227
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Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Giy Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Asp Lys Lys Asp Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
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Cys Ala Arg Asp Met lie Phe Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala 100 105 110
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Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
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Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
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Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 91 201201839
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140
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Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190
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Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Phe Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 230 <211> 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> VL CDR2 <400> 230
Asp Thr Arg Tyr Gin Ser Ser 1 5 <210> 231 <211> 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> M3H9 VL CDR2 <400> 231
Asp Thr Tyr Lys Gin Thr Ser 1 5 92 201201839 <210> 232 <211> 120 <212> PRT <213〉人造序列 <220> <223> IX-493L1FR VH域 <400> 232
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Asp Lys Lys Asp Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Ser Met lie Thr Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 233 <211> 450 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223〉 A3e2 VH鏈 <400> 233
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ala 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Gly Asp Lys Gly His Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Asp Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Met lie Phe Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175
Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 93 201201839 210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu 325 330 335
Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp 370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445
Gly Lys 450 <210> 234 <211> 120 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A3e2 VH域 <400> 234
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ala 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Gly Asp Lys Gly His Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Asp Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Met lie Phe Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 235 <211> 16 <212> PRT <213>人造序列 94 201201839 <220> <223> A3e2 VH CDR2 <400> 235
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Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro 1 5
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser 20
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Asp Thr Phe Tyr Leu His Ser Gly 50 55
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu 65 70
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe 85
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu 100
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser 115 120
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn 130 135
Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala 145 150
Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys 165
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp 180
Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu 195 200
Asn Arg Gly Glu Cys 210
Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 10 15
Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met 25 30
Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 45
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 60
Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 75 80
Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 90 95 lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 105 110
Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 125
Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 140
Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu 155 160
Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 170 175
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Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro 1 5
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser 20
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly 35 40
Asp Thr Phe Tyr Leu His Ser Gly 50 55
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu
Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 10 15
Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met 25 30
Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 45
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 60
Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 95 201201839 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 238 <211> 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A3e2 VL CDR2 <400> 238
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Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ala 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Asp Lys Lys Ser Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Asp Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Met lie Thr Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135. 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175
Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 96 201201839
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu 325 330 335
Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp 370 375 380
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Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445
Gly Lys 450 <210> 240 <211> 120 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A14a4 VH域 <400> 240
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ala 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
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Leu Lys Asp Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Met He Thr Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
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Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Leu Leu Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 15 10 15
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 20 25 30
Asp Thr Tyr Tyr Gin Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 35 40 45
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 50 55 60
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 65 70 75 80
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 85 90 95
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 100 105 110
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 115 120 125
Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu 130 135 140
Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 145 150 155 160
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 165 170 175
Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 180 185 190
Asn Arg Gly Glu Cys 195 <210> 243 <211> 106 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A14a4 VL域 <400> 243
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Leu Leu Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Tyr Tyr Gin Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 244 <211> 10 <212> PRT <213>人造序列 98 201201839 <220> <223> A14a4 VL CDR1 <400> 244
Leu Leu Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met His 15 10 <210> 245 <211> 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A14a4 VL CDR2 <400> 245
Asp Thr Tyr Tyr Gin Thr Ser 1 5 <210> 246 <211> 450 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223〉M6b4 VH鏈 <400> 246
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ala 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Asp Lys Lys His Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Asp Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Met lie Phe Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175
Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 99 201201839
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 275 280
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 290 295
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 305 310
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 325
Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly 340
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 355 360
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 370 375
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn 385 390
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 405
Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn 420
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 435 440
Gly Lys 450
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 285
Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 300
His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 315 320
Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu 330 335
Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 345 350
Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 365
Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp 380
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 395 400
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 410 415
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 425 430
Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 445 <210> 247 <211> 120 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223〉 A16b4 VH域 <400> 247
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly 1 5
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe 20
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg 35 40
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp 50 55
Leu Lys Asp Arg Leu Thr lie Ser 65 70
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp 85
Cys Ala Arg Asp Met lie Phe Asn 100
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120
Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 10 15
Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ala 25 30
Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 45
Asp Lys Lys His Tyr Asn Pro Ser 60
Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 75 80
Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 90 95
Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 105 110 <210> 248 <211〉 197 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223〉 A16b4 VL鏈 <400> 248
Leu Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 10 15 Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Leu 1 5
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly 100 201201839 20 25 30
Asp Thr Met Tyr Gin Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 35 40 45
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 50 55 60
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 65 70 75 80
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 85 90 95
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 100 105 110
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 115 120 125
Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu 130 135 140
Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 145 150 155 160
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 165 170 175
Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 180 185 190
Asn Arg Gly Glu Cys 195 <210> 249 <211> 106 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A16b4 VL域 <400> 249
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Leu Leu Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Met Tyr Gin Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 250 <211> 10 <212> PRT <213〉人造序列 <220> <223> A16b4 VL CDR1 <400> 250
Leu Leu Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met His 15 10 <210> 251 <211> 7 101 201201839 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A16b4 VL CDR2 <400> 251
Asp Thr Met Tyr Gin Ala Ser 1 5 <210> 252 <211> 450 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A17b5 VH鏈 <400> 252
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ala 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Asp Lys Lys His Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Asp Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Met lie Phe Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175
Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu 325 330 335
Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 102 201201839 355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp 370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445
Gly Lys 450 <210> 253 <211〉 120 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A17b5 VH域 <400> 253
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ala 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Asp Lys Lys His Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Asp Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Met lie Phe Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 254 <211> 213 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223〉 A17b5 VL鍵 <400〉 254
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser· Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Leu Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Tyr Tyr Leu Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 · 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 103 201201839
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140
Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu 145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 255 <211> 106 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A17b5 VL域 <400> 255
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Leu Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Tyr Tyr Leu Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 256 <211> 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A17b5 VLCDR2 <400> 256
Asp Thr Tyr Tyr Leu Pro Ser 1 5 <210> 257 <211> 450 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223〉 A17f5 VH鏈 <400> 257
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 1 5 10 15 104 201201839
Thr Leu Thr Leu 20 Gly Met Ser Val 35 Trp Leu Ala Asp 50 Leu Lys Asp Arg 65 Val Leu Lys Val Cys Ala Arg Asp 100 Gly Thr Thr Val 115 Phe Pro Leu Ala 130 Leu Gly Cys Leu 145 Trp Asn Ser Gly Leu Gin Ser Ser 180 Ser Ser Ser Leu 195 Pro Ser Asn Thr 210 Lys Thr His Thr 225 Pro Ser Val Phe Ser Arg Thr Pro 260 Asp Pro Glu Val 275 Asn Ala Lys Thr 290 Val Val Ser Val 305 Glu Tyr Lys Cys Lys Thr lie Ser 340 Thr Leu Pro Pro 355 Thr Cys Leu Val 370 Glu Ser Asn Gly 385 Leu Asp Ser Asp Lys Ser Arg Trp 420 Glu Ala Leu His 435 Gly Lys 450
Thr Cys Thr Phe Ser Gly 25
Gly Trp lie Arg Gin Pro 40 lie Trp Trp Asp Asp Lys 55
Leu Thr lie Ser Lys Asp 70
Thr Asn Met Asp Pro Ala 85 90
Met lie Phe Asn Trp Tyr 105
Thr Val Ser Ser Ala Ser 120
Pro Ser Ser Lys Ser Thr 135
Val Lys Asp Tyr Phe Pro 150
Ala Leu Thr Ser Gly Val 165 170
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 185
Gly Thr Gin Thr Tyr lie 200
Lys Val Asp Lys Arg Val 215
Cys Pro Pro Cys Pro Ala 230
Leu Phe Pro Pro Lys Pro 245 250
Glu Val Thr Cys Val Val 265
Lys Phe Asn Trp Tyr Val 280
Lys Pro Arg Glu Glu Gin 295
Leu Thr Val Leu His Gin 310
Lys Val Ser Asn Lys Ala 325 330
Lys Ala Lys Gly Gin Pro 345
Ser Arg Glu Glu Met Thr 360
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 375
Gin Pro Glu Asn Asn Tyr 390
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 405 410
Gin Gin Gly Asn Val Phe 425
Asn His Tyr Thr Gin Lys 440
Phe Ser Leu Ser Thr Ala 30
Pro Gly Lys Ala Leu Glu 45
Lys Asp Tyr Asn Pro Ser 60
Thr Ser Lys Asn Gin Val 75 80
Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 95
Phe Asp Val Trp Gly Gin 110
Thr Lys Gly Pro Ser Val 125
Ser Gly Gly Thr Ala Ala 140
Glu Pro Val Thr Val Ser 155 160
His Thr Phe Pro Ala Val 175
Ser Val Val Thr Val Pro 190
Cys Asn Val Asn His Lys 205
Glu Pro Lys Ser Cys Asp 220
Pro Glu Leu Leu Gly Gly 235 240
Lys Asp Thr Leu Met lie 255
Val Asp Val Ser His Glu 270
Asp Gly Val Glu Val His 285
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 300
Asp Trp Leu Asn Gly Lys 315 320
Leu Pro Ala Pro lie Glu 335
Arg Glu Pro Gin Val Tyr 350
Lys Asn Gin Val Ser Leu 365
Asp lie Ala Val Glu Trp 380
Lys Thr Thr Pro Pro Val 395 400
Ser Lys Leu Thr Val Asp 415
Ser Cys Ser Val Met His 430
Ser Leu Ser Leu Ser Pro 445 <210> 258 <211> 120 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A17f5 VH域 105 201201839 <_> 258
Gin Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ala 20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45
Trp Leu Ala Asp lie Trp Trp Asp Asp Lys Lys Asp Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Asp Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Met lie Phe Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 259 <211> 16 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A17f5 VH CDR2 <400> 259
Asp lie Trp Trp Asp Asp Lys Lys Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Asp 15 10 15 <210> 260 <211> 213 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A17f5 VL鏈 <400> 260
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Leu Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro· Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Phe Arg His Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140
Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu 145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 106 201201839 180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 261 <211> 106 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223〉 A17f5 VL域 <400> 261
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Leu Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Phe Arg His Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 262 <211> 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A17f5 VL CDR2 <400> 262
Asp Thr Phe Arg His Thr Ser 1 5 <210> 263 <211> 213 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A17h4 VL鏈 <400> 263
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Pro Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Tyr Tyr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr i!：： 107 201201839 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arq Glu Ala Lys 130 135 140
Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu 145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 264 <211> 106 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A17h4 VL域 <400> 264
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Pro Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met 20 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45
Asp Thr Tyr Tyr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Asp 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 265 <211> 10 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A17h4 VL CDR1 <400> 265
Ser Pro Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met His 1 5 10 <210> 266 <211> 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> A17h4 VL CDR2 108 201201839 <400> 266
Asp Thr Tyr Tyr Leu Ala Ser 1 5 <210> 267 <211> 18 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223〉連接子 <400> 267
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 10 15
Gly Gly Ser Ser Arg Ser Ser Ser Ser 1 5
Gly Gly <210> 268 <211> 15 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223>連接子 <400> 268
Gly Ser Gly Arg Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 15 10 15 <210> 269 .<211> 14 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223〉連接子 <400> 269
Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr 15 10 <210> 270 <211> 15 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223>連接子 <400> 270
Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gin 15 10 15 <210> 271 <211> 14 <212> PRT <213〉人造序列 109 <220> 201201839 <223>連接子 <400> 271
Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Val Asp 15 10 <210〉 272 <211> 14 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223〉連接子 <400〉 272
Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Ser Ser Glu Gly Lys Gly 15 10 <210> 273 <211> 18 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223>連接子
Glu Gin Leu Ala Gin Phe Arg Ser 10 15 <400> 273 Lys Glu Ser Gly 1 Leu Asp
Ser Val Ser Ser 5 <210> 274 <211> 16 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223>連接子 <400> 274
Glu Ser Gly Ser Val Ser Ser Glu Glu Leu Ala Phe Arg Ser Leu Asp 15 10 15
<210〉 275 <211> 298 <212> PRT <213>人類呼吸道融合性病毒 <400> 275
Met Ser Lys Thr Lys Asp Gin Arg Thr Ala Lys Thr Leu Glu Arg Thr 1 5 10 15
Trp Asp Thr Leu Asn His Leu Leu Phe lie Ser Ser Cys Leu Tyr Lys 20 . 25 30
Leu Asn Leu Lys Ser lie Ala Gin lie Thr Leu Ser lie Leu Ala Met 35 40 45 lie lie Ser Thr Ser Leu lie lie Ala Ala lie lie Phe lie Ala Ser 50 55 60
Ala Asn His Lys Val Thr Leu Thr Thr Ala lie lie Gin Asp Ala Thr 65 70 75 80
Asn Gin lie Lys Asn Thr Thr Pro Thr Tyr Leu Thr Gin Asn Pro Gin 110 201201839 85 90 95
Leu Gly lie Ser Phe Ser Asn Leu Ser Glu Thr Thr Ser Gin Pro lie 100 105 110
Thr lie Leu Ala Ser Thr Thr Pro Ser Ala Glu Ser Thr Pro Gin Ser 115 120 125
Thr Thr Val Lys Thr Lys Asn Thr Thr Thr Thr Gin lie Gin Pro Ser 130 135 140
Lys Ser Thr Thr Lys Gin Arg Gin Asn Lys Pro Gin Asn Lys Pro Asn 145 150 155 160
Asn Asp Phe His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Cys Ser lie Cys 165 170 175
Ser Asn Asn Pro Thr Cys Trp Ala lie Cys Lys Arg lie Pro Asn Lys 180 185 190
Lys Pro Gly Lys Lys Thr Thr Thr Lys Pro Thr Lys Lys Pro Thr lie 195 200 205
Lys Thr Thr Lys Lys Asp Leu Lys Pro Gin Thr Thr Lys Ser Lys Glu 210 215 220
Val Leu Thr Thr Lys Pro Thr Glu Lys Pro Thr lie Asn Thr Thr Lys 225 230 235 240
Thr Asn lie Arg Thr Thr Leu Leu lie Ser Asn Thr Thr Gly Asn Pro 245 250 255
Glu His Thr Ser Gin Lys Glu Thr Leu His Ser Thr Thr Ser Glu Gly 260 265 270
Asn Pro Ser Pro Ser Gin Val Tyr Thr Thr Ser Glu Tyr Leu Ser Gin 275 280 285
Ser Leu Ser Pro Ser Asn Thr Thr Tyr Tyr 290 295
<210> 276 <211> 2165 <212> PRT <213>人類呼吸道融合性病毒 <400> 276
Met Asp Pro lie lie Asn Gly Asn Ser Ala Asn Val Tyr Leu Thr Asp 1 5 10 15
Ser Tyr Leu Lys Gly Val lie Ser Phe Ser Glu Cys Asn Ala Leu Gly 20 25 30
Ser Tyr lie Phe Asn Gly Pro Tyr Leu Lys Asn Asp Tyr Thr Asn Leu 35 40 45 lie Ser Arg Gin Asn Pro Leu lie Glu His Met Asn Leu Lys Lys Leu 50 55 60
Asn lie Thr Gin Ser Leu lie Ser Lys Tyr His Lys Gly Glu lie Lys 65 70 75 80
Leu Glu Glu Pro Thr Tyr Phe Gin Ser Leu Leu Met Thr Tyr Lys Ser 85 90 95
Met Thr Ser Ser Glu Gin lie Ala Thr Thr Asn Leu Leu Lys Lys lie 100 105 110 lie Arg Arg Ala lie Glu lie Ser Asp Val Lys Val Tyr Ala lie Leu 115 120 125
Asn Lys Leu Gly Leu Lys Glu Lys Asp Lys lie Lys Ser Asn Asn Gly 130 135 140
Gin Asp Glu Asp Asn Ser Val lie Thr Thr lie lie Lys Asp Asp lie 145 150 155 160
Leu Ser Ala Val Lys Asp Asn Gin Ser His Leu Lys Ala Asp Lys Asn 165 170 175
His Ser Thr Lys Gin Lys Asp Thr lie Lys Thr Thr Leu Leu Lys Lys 180 185 190
Leu Met Cys Ser Met Gin His Pro Pro Ser Trp Leu lie His Trp Phe 195 200 205
Asn Leu Tyr Thr Lys Leu Asn Asn lie Leu Thr Gin Tyr Arg Ser Asn 210 215 220
Glu Val Lys Asn His Gly Phe Thr Leu lie Asp Asn Gin Thr Leu Ser 225 230 235 240 ' 111 201201839
Gly Phe Gin Phe lie Leu Asn Gin Tyr Gly Cys lie Val Tyr His Lys 245 250 255
Glu Leu Lys Arg lie Thr Val Thr Thr Tyr Asn Gin Phe Leu Thr Trp 260 265 270
Lys Asp lie Ser Leu Ser Arg Leu Asn Val Cys Leu lie Thr Trp lie 275 280 285
Ser Asn Cys Leu Asn Thr Leu Asn Lys Ser Leu Gly Leu Arg Cys Gly 290 295 300
Phe Asn Asn Val lie Leu Thr Gin Leu Phe Leu Tyr Gly Asp Cys lie 305 310 315 320
Leu Lys Leu Phe His Asn Glu Gly Phe Tyr lie lie Lys Glu Val Glu 325 330 335
Gly Phe lie Met Ser Leu lie Leu Asn lie Thr Glu Glu Asp Gin Phe 340 345 350
Arg Lys Arg Phe Tyr Asn Ser Met Leu Asn Asn lie Thr Asp Ala Ala 355 360 365
Asn Lys Ala Gin Lys Asn Leu Leu Ser Arg Val Cys His Thr Leu Leu 370 375 380
Asp Lys Thr Val Ser Asp Asn lie lie Asn Gly Arg Trp lie 工le Leu 385 390 395 400
Leu Ser Lys Phe Leu Lys Leu lie Lys Leu Ala Gly Asp Asn Asn Leu 405 410 415
Asn Asn Leu Ser Glu Leu Tyr Phe Leu Phe Arg lie Phe Gly His Pro 420 425 430
Met Val Asp Glu Arg Gin Ala Met Asp Ala Val Lys lie Asn Cys Asn 435 440 445
Glu Thr Lys Phe Tyr Leu Leu Ser Ser Leu Ser Met Leu Arg Gly Ala 450 455 460
Phe lie Tyr Arg lie lie Lys Gly Phe Val Asn Asn Tyr Asn Arg Trp 465 470 475 480
Pro Thr Leu Arg Asn Ala lie Val Leu Pro Leu Arg Trp Leu Thr Tyr 485 490 495
Tyr Lys Leu Asn Thr Tyr Pro Ser Leu Leu Glu Leu Thr Glu Arg Asp 500 505 510
Leu lie Val Leu Ser Gly Leu Arg Phe Tyr Arg Glu Phe Arg Leu Pro 515 520 525
Lys Lys Val Asp Leu Glu Met lie lie Asn Asp Lys Ala lie Ser Pro 530 535 540
Pro Lys Asn Leu lie Trp Thr Ser Phe Pro Arg Asn Tyr Met Pro Ser 545 550 555 560
His lie Gin Asn Tyr lie Glu His Glu Lys Leu Lys Phe Ser Glu Ser 565 570 575
Asp Lys Ser Arg Arg Val Leu Glu Tyr Tyr Leu Arg Asp Asn Lys Phe 580 585 590
Asn Glu Cys Asp Leu Tyr Asn Cys Val Val Asn Gin Ser Tyr Leu Asn 595 600 605
Asn Pro Asn His Val Val Ser Leu Thr Gly Lys Glu Arg Glu Leu Ser 610 615 620
Val Gly Arg Met Phe Ala Met Gin Pro Gly Met Phe Arg Gin Val Gin 625 630 635 640 lie Leu Ala Glu Lys Met lie Ala Glu Asn lie Leu Gin Phe Phe Pro 645 650 655
Glu Ser Leu Thr Arg Tyr Gly Asp Leu Glu Leu Gin Lys lie Leu Glu 660 665 670
Leu Lys Ala Gly lie Ser Asn Lys Ser Asn Arg Tyr Asn Asp Asn Tyr 675 680 685
Asn Asn Tyr lie Ser Lys Cys Ser lie lie Thr Asp Leu Ser Lys Phe 690 695 700
Asn Gin Ala Phe Arg Tyr Glu Thr Ser Cys lie Cys Ser Asp Val Leu 705 710 715 720
Asp Glu Leu His Gly Val Gin Ser Leu Phe Ser Trp Leu His Leu Thr 725 730 735 lie Pro His Val Thr lie lie Cys Thr Tyr Arg His Ala Pro Pro Tyr 740 745 750 lie Gly Asp His lie Val Asp Leu Asn Asn Val Asp Glu Gin Ser Gly 112 201201839 755 760 765
Leu Tyr Arg Tyr His Met Gly Gly lie Glu Gly Trp Cys Gin Lys Leu 770 775 780
Trp Thr lie Glu.Ala lie Ser Leu Leu Asp Leu lie Ser Leu Lys Gly 785 790 795 800
Lys Phe Ser lie Thr Ala Leu lie Asn Gly Asp Asn Gin Ser lie Asp 805 810 815 lie Ser Lys Pro lie Arg Leu Met Glu Gly Gin Thr His Ala Gin Ala 820 825 830
Asp Tyr Leu Leu Ala Leu Asn Ser Leu Lys Leu Leu Tyr Lys Glu Tyr 835 840 845
Ala Gly lie Gly His Lys Leu Lys Gly Thr Glu Thr Tyr lie Ser Arg 850 855 860
Asp Met Gin Phe Met Ser Lys Thr lie Gin His Asn Gly Val Tyr Tyr 865 870 875 880
Pro Ala Ser lie Lys Lys Val Leu Arg Val Gly Pro Trp lie Asn Thr 885 890 895 lie Leu Asp Asp Phe Lys Val Ser Leu Glu Ser lie Gly Ser Leu Thr 900 905 910
Gin Glu Leu Glu Tyr Arg Gly Glu Ser Leu Leu Cys Ser Leu lie Phe 915 920 925
Arg Asn Val Trp Leu Tyr Asn Gin He Ala Leu Gin Leu Lys Asn His 930 935 940
Ala Leu Cys Asn Asn Lys Leu Tyr Leu Asp lie Leu Lys Val Leu Lys 945 950 955 960
His Leu Lys Thr Phe Phe Asn Leu Asp Asn lie Asp Thr Ala Leu Thr 965 970 975
Leu Tyr Met Asn Leu Pro Met Leu Phe Gly Gly Gly Asp Pro Asn Leu 980 985 990 'Leu Tyr Arg Ser Phe Tyr Arg Arg Thr Pro Asp Phe Leu Thr Glu Ala 995 1000 1005 lie Val His Ser Val Phe lie Leu Ser Tyr Tyr Thr Asn His Asp Leu 1010 1015 1020
Lys Asp Lys Leu Gin Asp Leu Ser Asp Asp Arg Leu Asn Lys Phe Leu 1025 1030 1035 1040
Thr Cys lie lie Thr Phe Asp Lys Asn Pro Asn Ala Glu Phe Val Thr 1045 1050 1055
Leu Met Arg Asp Pro Gin Ala Leu Gly Ser Glu Arg Gin Ala Lys lie - 1060 1065 1070
Thr Ser Glu lie Asn Arg Leu Ala Val Thr Glu Val Leu Ser Thr Ala 1075 1080 1085
Pro Asn Lys lie Phe Ser Lys Ser Ala Gin His Tyr Thr Thr Thr Glu 1090 1095 1100 lie Asp Leu Asn Asp lie Met Gin Asn lie Glu Pro Thr Tyr Pro His 1105 1110 1115 1120
Gly Leu Arg Val Val Tyr Glu Ser Leu Pro Phe Tyr Lys Ala Glu Lys 1125 1130 1135 lie Val Asn Leu lie Ser Gly Thr Lys Ser lie Thr Asn lie Leu Glu 1140 1145 1150
Lys Thr Ser Ala lie Asp Leu Thr Asp lie Asp Arg Ala Thr Glu Met 1155 1160 1165
Met Arg Lys Asn lie Thr Leu Leu lie Arg lie Leu Pro Leu Asp Cys 1170 1175 1180
Asn Arg Asp Lys Arg Glu lie Leu Ser Met Glu Asn Leu Ser lie Thr 1185 1190 1195 1200
Glu Leu Ser Lys Tyr Val Arg Glu Arg Ser Trp Ser Leu Ser Asn lie 1205 1210 1215
Val Gly Val Thr Ser Pro Ser lie Met Tyr Thr Met Asp lie Lys Tyr 1220 1225 1230
Thr Thr Ser Thr lie Ser Ser Gly lie lie lie Glu Lys Tyr Asn Val 1235 1240 1245
Asn Ser Leu Thr Arg Gly Glu Arg Gly Pro Thr Lys Pro Trp Val Gly 1250 1255 1260
Ser Ser Thr Gin Glu Lys Lys Thr Met Pro Val Tyr Asn Arg Gin Val 1265 1270 1275 1280 113 201201839
Leu Thr Lys Lys Gin Arg Asp Gin lie Asp Leu Leu Ala Lys Leu Asp 1285 1290 1295
Trp Val Tyr Ala Ser lie Asp Asn Lys Asp Glu Phe Met Glu Glu Leu 1300 1305 1310
Ser lie Gly Thr Leu Gly Leu Thr Tyr Glu Lys Ala Lys Lys Leu Phe 1315 1320 1325
Pro Gin Tyr Leu Ser Val Asn Tyr Leu His Arg Leu Thr Val Ser Ser 1330 1335 1340
Arg Pro Cys Glu Phe Pro Ala Ser lie Pro Ala Tyr Arg Thr Thr Asn 1345 1350 1355 1360
Tyr His Phe Asp Thr Ser Pro lie Asn Arg lie Leu Thr Glu Lys Tyr 1365 1370 1375
Gly Asp Glu Asp lie Asp lie Val Phe Gin Asn Cys lie Ser Phe Gly 1380 1385 1390
Leu Ser Leu Met Ser Val Val Glu Gin Phe Thr Asn Val Cys Pro Asn 1395 1400 1405
Arg lie lie Leu lie Pro Lys Leu Asn Glu lie His Leu Met Lys Pro 1410 1415 1420
Pro lie Phe Thr Gly Asp Val Asp lie His Lys Leu Lys Gin Val lie 1425 1430 1435 1440
Gin Lys Gin His Met Phe Leu Pro Asp Lys lie Ser Leu Thr Gin Tyr 1445 1450 1455
Val Glu Leu Phe Leu Ser Asn Lys Thr Leu Lys Ser Gly Ser His Val 1460 1465 1470
Asn Ser Asn Leu lie Leu Ala His Lys lie Ser Asp Tyr Phe His Asn 1475 1480 1485
Thr Tyr lie Leu Ser Thr Asn Leu Ala Gly His Trp lie Leu lie lie 1490 1495 1500
Gin Leu Met Lys Asp Ser Lys Gly lie Phe Glu Lys Asp Trp Gly Glu 1505 1510 1515 · 1520
Gly Tyr lie Thr Asp His Met Phe lie Asn Leu Lys Val Phe Phe Asn 1525 1530 1535
Ala Tyr Lys Thr Tyr Leu Leu Cys Phe His Lys Gly Tyr Gly Lys Ala 1540 1545 1550
Lys Leu Glu Cys Asp Met Asn Thr Ser Asp Leu Leu Cys Val Leu Glu 1555 1560 1565
Leu lie Asp Ser Ser Tyr Trp Lys Ser Met Ser Lys Val Phe Leu Glu 1570 1575 1580
Gin Lys Val lie Lys Tyr lie Leu Ser Gin Asp Ala Ser Leu His Arg 1585 1590 1595 1600
Val Lys Gly Cys His Ser Phe Lys Leu Trp Phe Leu Lys Arg Leu Asn 1605 1610 1615
Val Ala Glu Phe Thr Val Cys Pro Trp Val Val Asn lie Asp Tyr His 1620 1625 1630
Pro Thr His Met Lys Ala lie Leu Thr Tyr lie Asp Leu Val Arg Met 1635 1640 1645
Gly Leu lie Asn lie Asp Arg lie His lie Lys Asn Lys His Lys Phe 1650 1655 1660
Asn Asp Glu Phe Tyr Thr Ser Asn Leu Phe Tyr lie Asn Tyr Asn Phe 1665 1670. 1675 1680
Ser Asp Asn Thr His Leu Leu Thr Lys His lie Arg lie Ala Asn Ser 1685 1690 1695
Glu Leu Glu Asn Asn Tyr Asn Lys Leu Tyr His Pro Thr Pro Glu Thr 1700 1705 1710
Leu Glu Asn lie Leu Ala Asn. Pro lie Lys Ser Asn Asp Lys Lys Thr 1715 1720 1725
Leu Asn Asp Tyr Cys lie Gly Lys Asn Val Asp Ser lie Met Leu Pro 1730 1735 1740
Leu Leu Ser Asn Lys Lys Leu lie Lys Ser Ser Ala Met lie Arg Thr 1745 1750 1755 1760
Asn Tyr Ser Lys Gin Asp Leu Tyr Asn Leu Phe Pro Met Val Val lie 1765 1770 1775
Asp Arg lie lie Asp His Ser Gly Asn Thr Ala Lys Ser Asn Gin Leu 1780 1785 1790
Tyr Thr Thr Thr Ser His Gin lie Ser Leu Val His Asn Ser Thr Ser 114 201201839 1795 1800 1805
Leu Tyr Cys Met Leu Pro Trp His His lie Asn Arg Phe Asn Phe Val 1810 1815 1820
Phe Ser Ser Thr Gly Cys Lys lie Ser lie Glu Tyr lie Leu Lys Asp 1825 1830 1835 1840
Leu Lys lie Lys Asp Pro Asn Cys lie Ala Phe lie Gly Glu Gly Ala 1845 1850 1855
Gly Asn Leu Leu Leu Arg Thr Val Val Glu Leu His Pro Asp lie Arg. 1860 1865 1870
Tyr lie Tyr Arg Ser Leu Lys Asp Cys Asn Asp His Ser Leu Pro lie 1875 1880 1885
Glu Phe Leu Arg Leu Tyr Asn Gly His lie Asn lie Asp Tyr Gly Glu 1890 1895 1900
Asn Leu Thr lie Pro Ala Thr Asp Ala Thr Asn Asn lie His Trp Ser 1905 1910 1915 1920
Tyr Leu His lie Lys Phe Ala Glu Pro lie Ser Leu Phe Val Cys Asp 1925 1930 1935
Ala Glu Leu Ser Val Thr Val Asn Trp Ser Lys lie lie lie Glu Trp 1940 1945 1950
Ser Lys His Val Arg Lys Cys Lys Tyr Cys Ser Ser Val Asn Lys Cys 1955 I960 1965
Met Leu lie Val Lys Tyr His Ala Gin Asp Asp lie Asp Phe Lys Leu 1970 1975 1980
Asp Asn lie Thr lie Leu Lys Thr Tyr Val Cys Leu Gly Ser Lys Leu 1985 1990 1995 2000
Lys Gly Ser Glu Val Tyr Leu Val Leu Thr lie Gly Pro Ala Asn lie 2005 2010 2015
Phe Pro Val Phe Asn Val Val Gin Asn Ala Lys Leu lie Leu Ser Arg 2020 2025 2030
Thr Lys Asn Phe lie Met Pro Lys Lys Ala Asp Lys Glu Ser lie Asp 2035 2040 2045
Ala Asn lie Lys Ser Leu lie Pro Phe Leu Cys Tyr Pro lie Thr Lys 2050 2055 2060
Lys Gly lie Asn Thr Ala Leu Ser Lys Leu Lys Ser Val Val Ser Gly 2065 2070 2075 2080
Asp lie Leu Ser Tyr Ser lie Ala Gly Arg Asn Glu Val Phe Ser Asn 2085 2090 2095
Lys Leu lie Asn His Lys His Met Asn lie Leu Lys Trp Phe Asn His 2100 2105 2110
Val Leu Asn Phe Arg Ser Thr Glu Leu Asn Tyr Asn His Leu Tyr Met 2115 2120 2125
Val Glu Ser Thr Tyr Pro Tyr Leu Ser Glu Leu Leu Asn Ser Leu Thr 2130 2135 2140
Thr Asn Glu Leu Lys Lys Leu lie Lys lie Thr Gly Ser Leu Leu Tyr 2145 2150 2155 2160
Asn Phe His Asn Glu 2165
<210> 277 <211> 391 <212> PRT <213>人類呼吸道融合性病毒 <400> 277
Met Ala Leu Ser Lys Val Lys Leu Asn Asp Thr Leu Asn Lys Asp Gin 15 10 15
Leu Leu Ser Ser Ser Lys Tyr Thr lie Gin Arg Ser Thr Gly Asp Asn 20 25 30 lie Asp Thr Pro Asn Tyr Asp Val Gin Lys His Leu Asn Lys Leu Cys 35 40 45
Gly Met Leu Leu lie Thr Glu Asp Ala Asn His Lys Phe Thr Gly Leu 50 55 60 lie Gly Met Leu Tyr Ala Met Ser Arg Leu Gly Arg Glu Asp Thr lie 65 70 75 80 115 201201839
Lys lie Leu Lys Asp Ala Gly Tyr His Val Lys Ala Asn Gly Val Asp 85 90 95 lie Thr Thr Tyr Arg Gin Asp lie Asn Gly Lys Glu Met Lys Phe Glu 100 105 110
Val Leu Thr Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu lie Gin Val Asn lie Glu 115 120 125 lie Glu Ser Arg Lys Ser Tyr Lys Lys Leu Leu Lys Glu Met Gly Glu 130 135 140
Val Ala Pro Glu Tyr Arg His Asp Ser Pro Asp Cys Gly Met lie lie 145 150 155 160
Leu Cys lie Ala Ala Leu Val lie Thr Lys Leu Ala Ala Gly Asp Arg 165 170 175
Ser Gly Leu Thr Ala Val lie Arg Arg Ala Asn Asn Val Leu Lys Asn 180 185 190
Glu lie Lys Arg Tyr Lys Gly Leu lie Pro Lys Asp lie Ala Asn Ser 195 200 205
Phe Tyr Glu Val Phe Glu Lys His Pro His Leu lie Asp Val Phe Val 210 215 220
His Phe Gly lie Ala Gin Ser Ser Thr Arg Gly Gly Ser Arg Val Glu 225 230 235 240
Gly lie Phe Ala Gly Leu Phe Met Asn Ala Tyr Gly Ser Gly Gin Val 245 250 255
Met Leu Arg Trp Gly Val Leu Ala Lys Ser Val Lys Asn lie Met Leu 260 265 270
Gly His Ala Ser Val Gin Ala Glu Met Glu Gin Val Val Glu Val Tyr 275 280 285
Glu Tyr Ala Gin Lys Leu Gly Gly Glu Ala Gly Phe Tyr His lie Leu 290 295 300
Asn Asn Pro Lys Ala Ser Leu Leu Ser Leu Thr Gin Phe Pro Asn Phe 305 310 315 320
Ser Ser Val Val Leu Gly Asn Ala Ala Gly Leu Gly lie Met Gly Glu 325 330 335
Tyr Arg Gly Thr Pro Arg Asn Gin Asp Leu Tyr Asp Ala Ala Lys Ala 340 345 350
Tyr Ala Glu Gin Leu Lys Glu Asn Gly Val lie Asn Tyr Ser Val Leu 355 360 365
Asp Leu Thr Ala Glu Glu Leu Glu Ala lie Lys His Gin Leu Asn Pro 370 375 380
Lys Glu Asp Asp Val Glu Leu 385 390
<210> 278 <211> 391 <212> PRT <213>人類呼吸道融合性病毒 <400> 278
Met Ala Leu Ser Lys Val Lys Leu Asn Asp Thr Leu Asn Lys Asp Gin 15 10 15
Leu Leu Ser Ser Ser Lys Tyr Thr lie Gin Arg Ser Thr Gly Asp Ser 20 25 30 lie Asp Thr Pro Asn Tyr Asp Val Gin Lys His lie Asn Lys Leu Cys 35 40 45
Gly Met Leu Leu lie Thr Glu Asp Ala Asn His Lys Phe Thr Gly Leu 50 55 60 lie Gly Met Leu Tyr Ala Met Ser Arg Leu Gly Arg Glu Asp Thr lie 65 70 75 80
Lys lie Leu Arg Asp Ala Gly Tyr His Val Lys Ala Asn Gly Val Asp 85 90 95
Val Thr Thr His Arg Gin Asp lie Asn Gly Lys Glu Met Lys Phe Glu 100 105 110
Val Leu Thr Leu Ser Ser Leu Thr Thr Glu lie Gin lie Asn lie Glu 115 120 125 lie Glu Ser Arg Lys Ser Tyr Lys Lys Met Leu Lys Glu Met Gly Glu 116 201201839 130 135 140
Val Ala Pro Glu Tyr Arg His Asp Ser Pro Asp Cys Gly Met lie lie 145 150 155 160
Leu Cys lie Ala Ala Leu Val lie Thr Lys Leu Ala Ala Gly Asp Arg 165 170 175
Ser Gly Leu Thr Ala Val lie Arg Arg Ala Asn Asn Val Leu Lys Asn 180 185 190
Glu Met Lys Arg Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Lys Asp lie Ala Asn Ser 195 200 205
Phe Tyr Glu Val Phe Glu Lys Tyr Pro His Phe lie Asp Val Phe Val 210 215 220
His Phe Gly lie Ala Gin Ser Ser Thr Arg Gly Gly Ser Arg Val Glu 225 230 235 240
Gly lie Phe Ala Gly Leu Phe Met Asn Ala Tyr Gly Ala Gly Gin Val 245 250 255
Met Leu Arg Trp Gly Val Leu Ala Lys Ser Val Lys Asn lie Met Leu 260 265 270
Gly His Ala Ser Val Gin Ala Glu Met Glu Gin Val Val Glu Val Tyr 275 280 285
Glu Tyr Ala Gin Lys Leu Gly Gly Glu Ala Gly Phe Tyr His lie Leu 290 295 300
Asn Asn Pro Lys Ala Ser Leu Leu Ser Leu Thr Gin Phe Pro His Phe 305 310 315 320
Ser Ser Val Val Leu Gly Asn Ala Ala Gly Leu Gly lie Met Gly Glu 325 330 335
Tyr Arg Gly Thr Pro Arg Asn Gin Asp Leu Tyr Asp Ala Ala Lys Ala 340 345 350
Tyr Ala Glu Gin Leu Lys Glu Asn Gly Val lie Asn Tyr Ser Val Leu 355 360 365
Asp Leu Thr Ala Glu Glu Leu Glu Ala lie Lys His Gin Leu Asn Pro 370 375 380
Lys Asp Asn Asp Val Glu Leu 385 390
<210> 279 <211> 241 <212> PRT <213>人類呼吸道融合性病毒 <400> 279
Met Glu Lys Phe Ala Pro Glu Phe His Gly Glu Asp Ala Asn Asn Arg 15 10 15
Ala Thr Lys Phe Leu Glu Ser lie Lys Gly Lys Phe Thr Ser Pro Lys 20 25 30
Asp Pro Lys Lys Lys Asp Ser lie lie Ser Val Asn Ser lie Asp lie 35 40 45
Glu Val Thr Lys Glu Ser Pro lie Thr Ser Asn Ser Thr lie Met Asn 50 55 60
Pro Thr Asn Glu Thr Asp Asp Thr Val Gly Asn Lys Pro Asn Tyr Gin 65 70 75 80
Arg Lys Pro Leu Val Ser Phe Lys Glu Asp Pro Met Leu Ser Asp Asn 85 90 95
Pro Phe Ser Lys Leu Tyr Lys Glu Thr lie Glu Thr Phe Asp Asn Asn 100 105 110
Glu Glu Glu Ser Ser Tyr Ser Tyr Glu Glu lie Asn Asp Gin Thr Asn 115 120 125
Asp Asn lie Thr Ala Arg Leu Asp Arg lie Asp Glu Lys Leu Ser Glu 130 135 140 lie Leu Gly Met Leu His Thr Leu Val Val Ala Ser Ala Gly Pro Thr 145 150 155 160
Ser Ala Arg Asp Gly lie Arg Asp Ala Met Val Gly Leu Arg Glu Glu 165 170 175
Met lie Glu Lys lie Arg Thr Glu Ala Leu Met Thr Asn Asn Arg Leu 180 185 190 117 201201839
Glu Ala Met Ala Arg Leu Arg Asn Glu Glu Ser Glu Lys Met Ala Lys 195 200 205
Asp Thr Ser Asp Glu Val Ser Leu Asn Pro Thr Ser Glu Lys Leu Asn 210 215 220
Asn Leu Leu Glu Gly Asn Asp Ser Asp Asp Asp Leu Ser Leu Glu Asp 225 230 235 240
Phe
<210> 280 <211> 256 <212> PRT <213>人類呼吸道融合性病毒 <400> 280
Met Glu Thr Tyr Val Asn Lys Leu His Glu Gly Ser Thr Tyr Thr Ala 15 10 15
Ala Val Gin Tyr Asn Val Leu Glu Lys Asp Asp Asp Pro Ala Ser Leu 20 25 30
Thr lie Trp Val Pro Met Phe Gin Ser Ser Met Pro Ala Asp Leu Leu 35 40 45 lie Lys Glu Leu Ala Asn Val Asn lie Leu Val Lys Gin lie Ser Thr 50 55 60
Pro Lys Gly Pro Ser Leu Arg Val Met lie Asn Ser Arg Ser Ala Val 65 70 75 80
Leu Ala Gin Met Pro Ser Lys Phe Thr lie Cys Ala Asn Val Ser Leu 85 90 95
Asp Glu Arg Ser Lys Leu Ala Tyr Asp Val Thr Thr Pro Cys Glu lie 100 105 110
Lys Ala Cys Ser Leu Thr Cys Leu Lys Ser Lys Asn Met Leu Thr Thr 115 120 125
Val Lys Asp Leu Thr Met Lys Thr Leu Asn Pro Thr His Asp lie lie 130 135 140
Ala Leu Cys Glu Phe Glu Asn lie Val Thr Ser Lys Lys Val lie lie 145 150 155 160
Pro Thr Tyr Leu Arg Ser lie Ser Val Arg Asn Lys Asp Leu Asn Thr 165 170 175
Leu Glu Asn lie Thr Thr Thr Glu Phe Lys Asn Ala lie Thr Asn Ala 180 185 190
Lys lie lie Pro Tyr Ser Gly Leu Leu Leu Val lie Thr Val Thr Asp 195 200 205
Asn Lys Gly Ala Phe Lys Tyr lie Lys Pro Gin Ser Gin Phe lie Val 210 215 220
Asp Leu Gly Ala Tyr Leu Glu Lys Glu Ser lie Tyr Tyr Val Thr Thr 225 230 235 240
Asn Trp Lys His Thr Ala Thr Arg Phe Ala lie Lys Pro Met Glu Asp 245 250 255
<210> 281 <211〉 64 <212> PRT <213>人類呼吸道融合性病毒 <400> 281
Met Glu Asn Thr Ser lie Thr lie Glu Phe Ser Ser Lys Phe Trp Pro 15 10 15
Tyr Phe Thr Leu lie His Met lie Thr Thr lie lie Ser Leu Leu lie 20 25 30 lie lie Ser lie Met lie Ala lie Leu Asn Lys Leu Cys Glu Tyr Asn 35 40 45
Ala Phe His Asn Lys Thr Phe Glu Leu Pro Arg Ala Arg lie Asn Thr 50 55 60 118 201201839
<210> 282 <211> 574 <212> PRT <213〉人類呼吸道融合性病毒 <220> <400> 282
Met Glu Leu Pro lie Leu Lys Ala Asn Ala lie Thr Thr lie Leu Ala 15 10 15
Ala Val Thr Leu Cys Phe Val Ser Ser Gin Asn lie Thr Glu Glu Phe 20 25 30
Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45
Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val lie Thr lie Glu Leu Ser Asn lie 50 55 60
Lys Glu Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Val Lys Leu lie Lys 65 70 75 80
Gin Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gin Leu Leu 85 90 95
Met Gin Ser Thr Pro Ala Ala Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Leu Pro 100 105 110
Arg Phe Met Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Thr Lys Asn Thr Asn Val Thr 115 120 125
Leu Ser.Lys Lys Arg Lys Arg Arg Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val 130 135 140
Gly Ser Ala lie Ala Ser Gly lie Ala Val Ser Lys Val Leu His Leu 145 150 155 160
Glu Gly Glu Val Asn Lys 工le Lys Ser Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys 165 170 175
Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val 180 185 190
Leu Asp Leu Lys Asn Tyr lie Asp Lys Gin Leu Leu Pro lie Val Asn 195 200 205
Lys Gin Ser Cys Ser lie Ser Asn lie Glu Thr Val lie Glu Phe Gin 210 215 220
Gin Lys Asn Asn Arg Leu Leu Glu lie Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn 225 230 235 240
Ala Gly Val Thr Thr Pro Val Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu 245 250 255
Leu Leu Ser Leu lie Asn Asp Met Pro lie Thr Asn Asp Gin Lys Lys 260 265 270
Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser lie 275 280 285
Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300
Leu Tyr Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro 305 310 315 320
Leu Cys Thr Thr Asn Thr Lys Glu Gly Ser Asn lie Cys Leu Thr Arg 325 330 335
Thr Asp Arg Gly Trp Tyr Cys Asp Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe 340 345 350
Pro Gin Ala Glu Thr Cys Lys Val Gin Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp 355 360 365
Thr Met Asn Ser Leu Thr Leu Pro Ser Glu Val Asn Leu Cys Asn Val 370 375 380
Asp lie Phe Asn Pro Lys Tyr Asp Cys Lys lie Met Thr Ser Lys Thr 385 390 395 400
Asp Val Ser Ser Ser Val lie Thr Ser Leu Gly Ala lie Val Ser Cys 405 410 415
Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly lie lie 420 425 430
Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp 435 440 445 119 201201839
Thr Val Ser Val Gly Asn Thr Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Gin Glu Gly 450 455 460
Lys Asn Leu Tyr Val Lys Gly Glu Pro lie lie Asn Phe Tyr Asp Pro 465 470 475 480
Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin Val Asn 485 490 495
Glu Lys lie Asn Gin Ser Leu Ala Phe lie Arg Lys Ser Asp Glu Leu 500 505 510
Leu His Asn Val Asn Ala Gly Lys Ser Thr Thr Asn lie Met lie Thr 515 520 525
Thr lie lie lie Val lie lie Val lie Leu Leu Ser Leu lie Ala Val 530 535 540
Gly Leu Leu Leu Tyr Cys Lys Ala Arg Ser Thr Pro Val Thr Leu Ser 545 550 555 560
Lys Asp Gin Leu Ser Gly lie Asn Asn lie Ala Phe Ser Ser 565 570
<210> 283 <211〉 83 <212> PRT <213〉人類呼吸道融合性病毒 <400> 283
Lys Arg Asp Pro Lys Thr Pro Ala Lys Met Leu Asn Lys Glu Thr Thr 15 10 15
Thr Asn Pro Thr Lys Asn Leu Thr Leu Lys Thr Thr Glu Arg Asp Thr 20 25 30
Ser Thr Ser Gin Ser Thr Val Leu Asp Thr Ser Thr Ser Lys His lie 35 40 45 lie Leu Gin Gin Ser Leu His Ser Thr Thr Pro Glu Asn Thr Pro Asn 50 55 60
Phe Thr Gin Thr Pro Thr Ala Ser Glu Pro Ser Thr Ser Asn Ser Thr 65 70 75 80
Gin Lys Thr
<210> 284 <211〉 21 <212> PRT <213〉中華擔餘（Bufo gargarizans) <220> <223>亞洲赠餘抗菌狀(Buforin) II <400〉 284
Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gin Phe Pro Val Gly Arg Val His 1 5 10 15
Arg Leu Leu Arg Lys 20 <210> 285 <211> 16 <212> PRT <213>智慧人 <220> <223> DPV3 <400> 285
Arg Lys Lys Arg Arg Arg Glu Ser Arg Lys Lys Arg Arg Arg Glu Ser 15 10 15 120 201201839 <210> 286 <211> 17 <212> PRT <213>智慧人 <220> <223> DPV6 <400> 286
Gly Arg Pro Arg Glu Ser Gly Lys Lys Arg Lys Arg Lys Arg Leu Lys <210> 287 <211> 15 <212> PRT <213>智慧人 <220> <223> DPV7 <400> 287
Gly Lys Arg Lys Lys Lys Gly Lys Leu Gly Lys Lys Arg Asp Pro 15 10 15 <210> 288 <211> 17 <212> .PRT <213>智慧人 <220> <223> DPV7b <400> 288
Gly Lys Arg Lys Lys Lys Gly Lys Leu Gly Lys Lys Arg Pro Arg Ser 15 10 15
Arg <210> 289 <211> 18 <212> PRT <213〉人造序列 <220> <223> DPV3/10 <400> 289
Arg Lys Lys Arg Arg Arg Glu Ser Arg Arg Ala Arg Arg Ser Pro Arg 1 5 10 15
His Leu <210> 290 <211> 19 <212> PRT <213>智慧人 121 <220> 201201839 <223> DPV10/6 <400> 290
Ser Arg Arg Ala Arg Arg Ser Pro Arg Glu Ser Gly Lys Lys Arg Lys 15 10 15
Arg Lys Arg <210> 291 <211> 19 <212> PRT <213>智慧人 <220> <223> DPV1047 <400> 291
Val Lys Arg Gly Leu Lys Leu Arg His Val Arg Pro Arg Val Thr Arg 15 10 15
Met Asp Val <210> 292 <211> 18 <212> PRT <213>智慧人 <220> <223> DPV1048 <400〉 292
Val Lys Arg Gly Leu Lys Leu Arg His Val Arg Pro Arg Val Thr Arg 15 10 15
Asp Val <210> 293 <211> 14 <212> PRT <213>智慧人 <220> <223> DPV10 <400〉 293
Ser Arg Arg Ala Arg Arg Ser Pro Arg His Leu Gly Ser Gly 1 5 10 <210> 294 <211> 16 <212〉 PRT <213>智慧人 <220> <223> DPV15 <400> 294
Leu Arg Arg Glu Arg Gin Ser Arg Leu Arg Arg Glu Arg Gin Ser Arg 15 10 15 122 201201839 <210> 295 <211> 22 <212> PRT <213>智慧人 <220> <223> DPV15b <400> 295
Gly Ala Tyr Asp Leu Arg Arg Arg Glu Arg Gin Ser Arg Leu Arg Arg 15 10 15
Arg Glu Arg Gin Ser Arg 20 <210> 296 <211> 30 <212> PRT <213〉人造序列 <220> <223> GALA <400> 296
Trp Glu Ala Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala Glu His 15 10 15
Leu Ala Glu Ala Leu Ala Glu Ala Leu Glu Ala Leu Ala Ala 20 25 30 <210> 297 <211> 21 <212> PRT <213>智慧人 <220> <223>人類血纖維蛋白原beta鏈 <400> 297
Lys Gly Ser Trp Tyr Ser Met Arg Lys Met Ser Met Lys lie Arg Pro 15 10 15
Phe Phe Pro Gin Gin 20 <210> 298 <211> 20 <212> PRT <213>智慧人 <220> <223〉人類血纖維蛋白原gamma鏈前驅體 <400> 298
Lys Thr Arg Tyr Tyr Ser Met Lys Lys Thr Thr Met Lys lie lie Pro 15 10 15
Phe Asn Arg Leu 20 <210> 299 <211> 20 <212> PRT <213> 乂造序列 123 201201839 <220> <223>人類血纖維蛋白原alpha鏈 <400> 299
Arg Gly Ala Asp Tyr Ser Leu Arg Ala Val Arg Met Lys lie Arg Pro 15 10 15
Leu Val Thr Gin 20 <210> 300 <211> 24 <212> PRT <213>智慧人 <220> <223〉人類hCT (9-32) <400〉 300
Leu Gly Thr Tyr Thr Gin Asp Phe Asn Lys Phe His Thr Phe Pro Gin 15 10 15
Thr Ala lie Gly Val Gly Ala Pro 20 <210> 301 <211> 12 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> HN-1 <400> 301
Thr Ser Pro Leu Asn lie His Asn Gly Gin Lys Leu 15 10
<210> 302 <211> 12 <212> PRT <213>流行性慼冒病毒 <220> <223>流行性感冒病毒核蛋白（MLS) <400> 302
Asn Ser Ala Ala Phe Glu Asp Leu Arg Val Leu Ser 15 10 <210> 303 <211> 30 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> KALA <400> 303
Trp Glu Ala Lys Leu Ala Lys Ala Leu Ala Lys Ala Leu Ala Lys His 1 5 10 15
Leu Ala Lys Ala Leu Ala Lys Ala Leu Lys Ala Cys Glu Ala 20 25 30 124 201201839 <210> 304 <211> 10 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> Ku70 <400> 304
Val Pro Met Leu Lys Pro Met Leu Lys Glu 15 10 <210> 305 <211> 18 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> MAP <_> 305
Lys Leu Ala Leu Lys Leu Ala Leu Lys Ala Leu Lys Ala Ala Leu Lys 1 5 10 15
Leu Ala <210> 306 <211> 27 <212> PRT <213>人造序列 <220>
<223> MPG <400> 306
Gly Ala Leu Phe Leu Gly Phe Leu Gly Ala Ala Gly Ser Thr Met Gly 15 10 15
Ala Trp Ser Gin Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val 20 25 <210> 307 <211> 16 <212> PRT <213>智慧人 <220> <223>人類纖維母細胞生長因子4 <400> 307
Ala Ala Val Ala Leu Leu Pro Ala Val Leu Leu Ala Leu Leu Ala Pro 15 10 15 <210> 308 <211> 9 <212> PRT <213>智慧人 <220> <223> 人類N50 (MLS of NF-kB P50) 125 201201839 <400> 308
Val Gin Arg Lys Arg Gin Lys Leu Met 1 5 <210> 309 <211> 21 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> Pep-1 <400> 309
Lys Glu Thr Trp Trp Glu Thr Trp Trp Thr Glu Trp Ser Gin Pro Lys 15 10 15
Lys Lys Arg Lys Val 20 o 列 序T造 1 5 R IV 3 1 p ^ > > > > 0 12 3 1 1 1 1 2 2 2 2 < < < < <220> <223〉 Pep-7 <400> 310
Ser Asp Leu Trp Glu Met Met Met Val Ser Leu Ala Cys Gin Tyr 15 10 15
<210> 311 <211> 16 <212> PRT <213>果蠅觸角足突變 <220〉 ’ <223> 果繩穿透狀（Penetratin) <400> 311
Arg Gin lie Lys lie Trp Phe Gin Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys 15 10 15
<210〉 312 <211> 17 <212> PRT <213>果蠅觸角足突變 <220> <223>果蠅穿透肽變異體 <400> 312
Gly Arg Gin lie Lys lie Trp Phe Gin Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys 15 10 15
Lys <210> 313 <211> 7 <212> PRT <213>果蠅觸角足突變 126 201201839 <220> <223>果繩短穿透肽 <400> 313
Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys 1 5
<210> 314 <211〉 17 <212> PRT <213>果蠅觸角足突變 <220> <223>果蠅穿透肽42-58 <400> 314
Glu Arg Gin lie Lys lie Trp Phe Gin Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys 5 10 15 <210> 315 <211> 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223>聚精胺酸R7 <400> 315
Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg 1 5 <210> 316 <211〉 9 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223>聚精胺酸R9 <400> 316
Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg 1 5 <210> 317 <211> 16 <212> PRT <213〉褐鼠 <220> <223> y^MpISL <400〉 317
Arg Val lie Arg Val Trp Phe Gin Asn Lys Arg Cys Lys Asp Lys Lys 1 5 10 15 <210> 318 <211〉 28 127 201201839 <212> PRT <213>小鼠 <220> <223>普立昂小鼠PrPcl-28 <_> 318
Met Ala Asn Leu Gly Tyr Trp Leu Leu Ala Leu Phe Val Thr Met Trp 15 10 15
Thr Asp Val Gly Leu Cys Lys Lys Arg Pro Lys Pro 20 25 <210> 319 <211> 18 <212> PRT <213>小鼠 <220> <223> /JnMpVEC <400> 319
Leu Leu lie lie Leu Arg Arg Arg lie Arg Lys Gin Ala His Ala His 15 10 15
Ser Lys <210> 320 <211> 16 <212> PRT <213>小鼠 <220> <223>小鼠pVEC變異體 <400> 320
Leu Leu lie lie Leu Arg Arg Arg lie Arg Lys Gin Ala His Ala His 15 10 15 <210> 321 <211〉 18 <212> PRT <213>人造序列 <220>
<223> SAP <400> 321 Val Arg Leu Pro 1 Pro Pro
Pro Pro Val Arg Leu Pro Pro Pro Val Arg Leu Pro 5 10 15 <210> 322 <211〉 7 <212> PRT <213>猿猴病毒 <220> <223> SV-40 (NLS) <400> 322 128 201201839
Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val 1 5 <210> 323 <211> 18 <212> PRT <213>野豬 <220> <223> 豬SynBl <400> 323
Arg Gly Gly Arg Leu Ser Tyr Ser Arg Arg Arg Phe Ser Thr Ser Thr 1 5 10 15
Gly Arg <210> 324 <211> 10 <212> PRT <213>野豬 <220> <223> ^SynB3 <400> 324
Arg Arg Leu Ser Tyr Ser Arg Arg Arg Phe 1 5 10 <210> 325 <211〉.17 <212> PRT <213〉野豬 <220> <223> ^SynB4 <400> 325
Ala Trp Ser Phe Arg Val Ser Tyr Arg Gly lie Ser Tyr Arg Arg Ser 15 10 15
Arg <210> 326 <211> 14 <212> PRT <213>人類免疫缺乏病毒 <220> <223〉 HIV第I型Tat 47-60 <400> 326
Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gin Arg Arg Arg Pro Pro Gin 15 10
<210> 327 <211> 11 <212> PRT <213>人類免疫缺乏病毒 129 201201839 <220> <223> HIV第工型Tat 47-57 <400> 327
Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gin Arg Arg Arg 15 10
<210> 328 <211> 10 <212> PRT <213>人類免疫缺乏病毒 <220> <223> HIV第I型Tat 47-56 <400> 328
Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gin Arg Arg 15 10
<210> 329 <211> 9 <212> PRT <213>人類免疫缺乏病毒 <220> <223> HIV第I型Tat 48-56 <400> 329
Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gin Arg Arg 1 5
<210> 330 <211> 10 <212> PRT <213>人類免疫缺乏病毒 <220> <223〉 HIV第I型Tat 48-57 <400> 330
Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gin Arg Arg Arg 15 10
<210> 331 <211> 9 <212> PRT <213>人類免疫缺乏病毒 <220> <223〉 HIV第I型Tat 49-57 <400> 331
Arg Lys Lys Arg Arg Gin Arg Arg Arg 1 5
<210> 332 <211> 8 <212> PRT <213>人類免疫缺乏病毒 130 201201839 <220> <223〉 HIV第I型Tat 49-56 <400> 332
Arg Lys Lys Arg Arg Gin Arg Arg 1 5
<210> 333 <211> 13 <212> PRT <213>人類免疫缺乏病毒 <220> <223> HIV第I型Tat 48-60 <400> 333
Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gin Arg Arg Arg Pro Pro Gin 15 10
<210> 334 <211> 5 <212> PRT <213>人類免疫缺乏病毒 <220> <223> HIV第I型Tat 48-52 <400> 334
Gly Arg Lys Lys Arg 1 5
<210> 335 <211> 36 <212> PRT <213>人類免疫缺乏病毒 <220> <223〉 HIV第I型Tat 37-72 <400> 335
Cys Phe lie Thr Lys Ala Leu Gly lie Ser Tyr Gly Arg Lys Lys Arg 1 5 10 15
Arg Gin Arg Arg Arg Pro Pro Gin Phe Ser Gin Thr His Gin Val Ser 20 25 30
Leu Ser Lys Gin 35
<210> 336 <211> 35 <212> PRT <213〉人類免疫缺乏病毒 <220> <223〉 HIV第I型Tat 38-72 <400> 336
Phe lie Thr Lys Ala Leu Gly lie Ser Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg 15 10 15
Gin Arg Arg Arg Pro Pro Gin Phe Ser Gin Thr His Gin Val Ser Leu 20 25 30
Ser Lys Gin 131 201201839 35
<210> 337 <211> 13 <212> PRT <213〉人類免疫缺乏病毒 <220> <223〉 HIV第I型Tat 47-59 <400> 337
Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gin Arg Arg Arg Pro Pro 1 5 10 <210> 338 <211> 27 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 細胞穿透狀（Transportan) <400> 338
Gly Trp Thr Leu Asn Ser Ala Gly Tyr Leu Leu Gly Lys lie Asn Leu 15 10 15
Lys Ala Leu Ala Ala Leu Ala Lys Lys lie Leu 20 25 <210> 339 <211> 21 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223>細胞穿透肽10 <400> 339
Ala Gly Tyr Leu Leu Gly Lys lie Asn Leu Lys Ala Leu Ala Ala Leu 15 10 15
Ala Lys Lys lie Leu 20 <210〉 340 <211> 12 <212> PRT <213〉人造序列 <220> <223〉細胞穿透肽衍生物 <400> 340
Gly Trp Thr Leu Asn Ser Ala Gly Tyr Leu Leu Gly 15 10 <210> 341 <211> 14 <212> PRT <213>人造序列 132 <220> 201201839 <223>細胞穿透肽衍生物 <400> 341 lie Asn Leu Lys Ala Leu Ala Ala Leu Ala Lys Lys lie Leu 1 5 10
<210> 342 <211> 34 <212> PRT <213>單純疱疹病毒 <220> <223〉單純疱疹病毒1 VP22 <400〉 342
Asp Ala Ala Thr Ala Thr Arg Gly Arg Ser Ala Ala Ser Arg Pro Thr 15 10 15
Glu Arg Pro Arg Ala Pro Ala Arg Ser Ala Ser Arg Pro Arg Arg Pro 20 25 30
Val Asp <210> 343 <211> 26 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> VT5 <400> 343
Asp Pro Lys Gly Asp Pro Lys Gly Val Thr Val Thr Val Thr Val Thr 1 5 10 . 15
Val Thr Gly Lys Gly Asp Pro Lys Pro Asp 20 25 <210> 344 <211> 27 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223〉基於訊號序列之肽 <400> 344
Gly Ala Leu Phe Leu Gly Trp Leu Gly Ala Ala Gly Ser Thr Met Gly 1 5 10 15
Ala Trp Ser Gin Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val 20 25 <210> 345 <211> 18 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223〉兩親媒性模型狀（Amphiphilic model peptide) <400〉 345
Lys Leu Ala Leu Lys Leu Ala Leu Lys Ala Leu Lys Ala Ala Leu Lys 15 10 15 133 201201839
Leu Ala <210> 346 <211> 10 <212> PRT <213〉人造序列 <220> <223〉細菌細胞壁滲透 <400> 346 Lys Phe Phe Lys Phe Phe Lys Phe 1 5
Phe Lys 10 <210> 347 <211> 37 <212> PRT <213>智慧人 <220〉 <223> 人類LL-37 <400> 347 Leu Leu Gly Asp Phe Phe Arg Lys 1 5 Phe Lys Arg lie Val Gin Arg lie 20 Pro Arg Thr Glu Ser 35
Ser Lys Glu Lys lie Gly Lys Glu 10 15 Lys Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val 25 30 <210> 348 <211> 31 <212> PRT <213>野猪 <220> <223> 豬天麗素(cecropin) PI <400> 348 Ser Trp Leu Ser Lys Thr Ala Lys 1 5 Arg lie Ser Glu Gly lie Ala lie 20
Lys Leu Glu Asn Ser Ala Lys Lys 10 15 Ala lie Gin Gly Gly Pro Arg 25 30 <210> 349 <211> 30 <212> PRT <213>智慧人 <220> <223> 人類alpha防鐵素（defensin) <400> 349 Ala Cys Tyr Cys Arg lie Pro Ala 1 5 Gly Thr Cys lie Tyr Gin Gly Arg 20
Cys lie Ala Gly Glu Arg Arg Tyr 10 15 Leu Trp Ala Phe Cys Cys 25 30 <210> 350 134 201201839
<211> 36 <212> PRT <213>智慧人 <220> <223〉人類beta防禦素 <400> 350
Asp His Tyr Asn Cys Val Ser Ser Gly Gly Gin Cys Leu Tyr Ser Ala 15 10 15
Cys Pro lie Phe Thr Lys lie Gin Gly Thr Cys Tyr Arg Gly Lys Ala 20 25 30
Lys Cys Cys Lys 35 <210> 351 <211> 11 <212> PRT <213〉人造序列 <220> <223〉環狀細菌素（Bactenecin) <400> 351
Arg Lys Cys Arg lie Trp lie Arg Val Cys Arg 15 10
<210> 352 <211> 42 <212> PRT <213>野豬 、 <220> <223〉緒PR-39 <400〉 352
Arg >Arg Arg Pro Arg Pro Pro Tyr Leu Pro Arg Pro Arg Pro Pro Pro 1 5 10 15
Phe Phe Pro Pro Arg Leu Pro Pro Arg lie Pro Pro Gly Phe Pro Pro 20 25 30
Arg Phe Pro Pro Arg Phe Pro Gly Lys Arg 35 40 <210> 353 <211> 13 <212> PRT <213>家牛 <220> <223> 牛抑菌素（Indolicidin) <400> 353 lie Leu Pro Trp Lys Trp Pro Trp Trp Pro Trp Arg Arg 1 5 10
<210> 354 <211> 27 <212> PRT <213>猿猴免疫缺乏病毒 135 <220> 201201839 <223> SIV MPS <400> 354
Gly Ala Leu Phe Leu Gly Trp Leu Gly Ala Ala Gly Ser Thr Met Gly 15 10 15
Ala Trp Ser Gin Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val 20 25 <210> 355 <211> 17 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> plsl <400> 355 Pro Val lie Arg Arg Val Trp Phe Gin Asn Lys Arg Cys Lys Asp Lys
Lys 10 15 <210> 356 <211> 330 <212> PRT <213>智慧人 <220> <223> hlgGl重鏈恒定 <400> 356
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 15 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val. Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr 65 70 75 80
Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175
Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190
His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220
Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 136 201201839
Pro Ser Asp lie Ala 260 Asn Tyr Lys Thr Thr 275 Leu Tyr Ser Lys Leu 290 Val Phe Ser Cys Ser 305 Gin Lys Ser Leu Ser 325 <210> 357 <211> 326 <212> PRT <213>智慧人 <220> <223> hIgG2重鏈恒[定 <400> 357 Ala Ser Thr Lys Gly 1 5 Ser Thr Ser Glu Ser 20 Phe Pro Glu Pro Val 35 Gly Val His Thr Phe 50 Leu Ser Ser Val Val 65 Tyr Thr Cys Asn Val 85 Thr，Val Glu Arg Lys 100 Pro Val Ala Gly Pro 115 Thr 'Leu Met lie Ser 130 Val Ser His Glu Asp 145 Val Glu Val His Asn 165 Ser Thr Phe Arg Val 180 Leu Asn Gly Lys Glu 195 Ala Pro lie Glu Lys 210 Pro Gin Val Tyr Thr 225 Gin Val Ser Leu Thr 245 Ala Val Glu Trp Glu 260 Thr Pro Pro Met Leu 275 Leu Thr Val Asp Lys 290 Ser Val Met His Glu 305 Ser Leu Ser Pro Gly 325
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn 265 270
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 280 285
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn 295 300
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 310 315 320
Leu Ser Pro Gly Lys 330
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 10 15
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 25 30
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 40 45
Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 55 60
Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr 70 75 80
Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 90 95
Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 105 110
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 120 125
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 135 140
Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 150 155 160
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn 170 175
Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp 185 190
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 200 205
Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu 215 220
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 230 235 240
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie 250 255
Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 265 270
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 280 285
Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys 295 300
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu 310 315 320
Lys 137 201201839 <210> 358 <211> 377 <212> PRT <213>智慧人 <220> <223> hIgG3重鏈'區定 <400> 358
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 15 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr 65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95
Arg Val Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro 100 105 110
Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg 115 120 125
Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys 130 135. 140
Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro 145 150 155 160
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 165 170 175
Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 180 185 190
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Lys Trp Tyr 195 200 205
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 210 215 220
Gin Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 225 230 235 240
Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 245 250 255
Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gin 260 265 270
Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 275 280 285
Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 290 295 300
Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gin Pro Glu Asn Asn 305 310 315 320
Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 325 330 335
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn lie 340 345 350
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gin 355 360 365
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 370 375 <210〉 359 <211〉 327 <212> PRT <213> 乂造序列 138 <220> 201201839 <223〉hIgG4重鏈極定 <400> 359
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 15 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro 100 105 110.
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125
Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140
Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe 165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp 180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205
Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg 210 215 220
Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240
Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270
Thr -Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser 305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 360 <211> 231 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> hlgGl Fc <400> 360
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 15 10 15
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 20 25 30
Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 35 40 45
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 50 55 60
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr 139 201201839 65 Asn Ser Thr Tyr Trp Leu Asn Gly 100 Pro Ala Pro lie 115 Glu Pro Gin Val 130 Asn Gin Val Ser 145 He Ala Val Glu Thr Thr Pro Pro 180 Lys Leu Thr Val 195 Cys Ser Val Met 210 Leu Ser Leu Ser 225 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp 85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 105 110
Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser 215 220
Pro Gly Lys 230 <210> 361 <211> 232 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> hlgGl Fc <400> 361 Glu Pro Arg Ser 1 Pro Glu Leu Leu 20 Lys Asp Thr Leu 35 Val Asp Val Ser 50 Asp Gly Val Glu 65 Tyr Asn Ser Thr Asp Trp Leu Asn 100 Leu Pro Ala Pro 115 Arg Glu Pro Gin 130 Lys Asn Gin Val 145 His lie Ala Val Lys Thr Thr Pro 180 Ser Lys Leu Thr 195 Ser Cys Ser Val 210 Ser Leu Ser Leu 225
Cys Asp Lys Thr His Thr 5 10
Gly Gly Pro Ser Val Phe 25
Met lie Ser Arg Thr Pro 40
His Glu Asp Pro Glu Val 55
Val His Asn Ala Lys Thr 70
Tyr Arg Val Val Ser Val 85 90
Gly Lys Asp Tyr Lys Cys 105
Met Gin Lys Thr lie Ser 120
Val Tyr Thr Leu Pro Pro 135
Ser Leu Thr Cys Leu Val 150
Glu Trp Glu Ser Asn Gly 165 170
Pro Val Leu Asp Ser Asp 185
Val Asp Lys Ser Arg Trp 200
Met His Glu Ala Leu His 215
Ser Pro Gly Lys 230
Cys Pro Pro Cys Pro Ala 15
Leu Phe Pro Pro Lys Pro 30
Glu Val Thr Cys Val Val 45
Lys Phe Asn Trp Tyr Val 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gin 75 80
Leu Thr Val Leu His Gin 95
Lys Val Ser Asn Lys Ala 110
Lys Ala Lys Gly Gin Pro 125
Ser Arg Asp Glu Leu Thr 140
Lys Gly Phe Tyr Pro Arg 155 160
Gin Pro Glu Asn Asn Tyr 175
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 190
Gin Gin Gly Asn Val Phe 205
Asn His Tyr Thr Gin Lys 220 <210> 362 140 201201839 <211> 129 <212> PRT <213〉人造序列 <220> <223〉Rsv6/ll/21/22/23重鏈 <400> 362
Gin Val Lys Leu Leu Glu Gin Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly 15 10 15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Val Thr Phe Ser Ala 20 25 30
Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45
Val Ser Gly lie Ser Gly Ser Gly Asp Ser Thr Asp Tyr Ala Asp Ser 50 55 60
Val Lys Gly Arg Leu Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu 65 70 75 80
Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala lie Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Ser His Leu Pro Asp Tyr Trp Asn Leu Asp Tyr Thr Arg Phe 100 105 110
Phe Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 125
Ser <210> 363 <211> 5 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> Rsv6/ll/21/22/23重CDR1 <400> 363
Ala Tyr Ala Met Ser 1 5 <210> 364 <211> 17 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> Rsv6/ll/21/22/23重CDR2
Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys 10 . 15 <400> 364 Gly lie Ser Gly 1 Gly
Ser Gly Asp Ser 5 <210> 365 <211〉 19 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> Rsv6/ll/21/22/23重CDR3 <400> 365 141 201201839
His Leu Pro Asp Tyr Trp Asn Leu Asp Tyr Thr Arg Phe Phe Tyr Tyr 1 5 10 15
Met Asp Val <210> 366 <211> 120 <212〉 PRT <213>人造序列 <220> <223〉Rsvl3/19H重鏈 <400> 366
Gin Val Lys Leu Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Arg Leu Ala 15 10 15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Thr Thr Leu Ser Gly 20 25 30
Tyr Thr Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45
Val Ser Ser lie Thr Gly Gly Ser Asn Phe lie Asn Tyr Ser Asp Ser 50 55 60
Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu 65 70 75 80
Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Thr Ala Pro lie Ala Pro Pro Tyr Phe Asp His Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 . 120 <210> 367 <211> 5 <212> PRT <213> 乂造序列 <220> <223> Rsvl3/19H重CDR1 <400> 367
Gly Tyr Thr Met His 1 5 <210> 368 <211> 17 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> Rsvl3/19Hfi[CDR2 <400> 368
Ser lie Thr Gly Gly Ser Asn Phe lie Asn Tyr Ser Asp Ser Val Lys 1 5 10 15
Gly <210> 369 <211> 10 <212> PRT <213>人造序列 142 201201839 <220> <223〉 Rsvl3/19H重CDR3 <400> 369
Ala Pro lie Ala Pro Pro Tyr Phe Asp His 15 10 <210> 370 <211> 109 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223〉Rsv 6m/21/22輕鏈 <400> 370
Met Ala Glu Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Thr Gin Ser lie Ser Ser Asn 20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Arg Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Ala Thr Asp lie Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asp lie Ser Pro 85 90 95
Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 100 105 <210> 371 <211> 12 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223〉 Rsv 6/11/21/22輕CDR1 <400〉 371
Arg Ala Thr Gin Ser lie Ser Ser Asn Tyr Leu Ala 15 10 <210> 372 <211〉 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> Rsv 6/11/21/22輕CDR2 <400> 372
Gly Ala Ser Asn Arg Ala Thr 1 5 <210> 373 <211> 9 <212> PRT <213>人造序列 C： 143 201201839 <220〉 <223> Rsv 6/11/21/22輕CDR3 <400> 373
Gin Gin Tyr Asp lie Ser Pro Tyr Thr 1 5 <210> 374 <211〉 109 <212> PRT <213〉人造序列 <220> <223> Rsv23輕鏈 <400> 374
Met Ala Glu Leu Thr Gin Ser Pro Val Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Val Ala Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gin Asn lie Asn Asp Asn 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Thr Arg Leu Glu Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Gly Gly Ser Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr 100 105 <210> 375 <211> 11 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> Rsv23輕CDR1 <400> 375
Lys Ala Ser Gin Asn lie Asn Asp Asn Leu Ala 15 10 <210> 376 <211> 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223〉Rsv23輕CDR2 <400> 376
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1 5
<210> 377 <211> 9 <212> PRT <213>人造序列 144 <220> 201201839 <223> Rsv23輕CDR3 <400> 377
Gin Gin Tyr Gly Gly Ser Pro Tyr Thr 1 5 <210> 378 <211> 108 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223〉Rsvl3/19輕鏈 <400> 378
Met Ala Glu Leu Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Thr Gin Ser Val Ser Asn Phe 20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Glu Ala Pro Thr Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Thr Ser Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Met Asp Phe Ser Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Met Tyr Tyr Cys Gin Ala Ser lie Asn Thr Pro Leu 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Arg lie Asp Met Arg Arg Thr 100 105 <210> 379 <211> 11 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> Rsvl3/19輕CDR1 <400> 379
Arg Ala Thr Gin Ser Val Ser Asn Phe Leu Asn 15 10 <210> 380 <211> 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223〉 Rsvl3/19輕CDR2 <400> 380
Asp Ala Ser Thr Ser Gin Ser 1 5
<210> 381 <211> 8 <212> PRT <213〉人造序列 <220> <223> Rsvl3/19輕CDR3 145 201201839 <400> 381
Gin Ala Ser lie Asn Thr Pro Leu 1 5 <210> 382 <211> 574 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223>呼吸道融合性病毒株A2 F蛋白 <400> 382
Met Glu Leu Leu lie Leu Lys Ala Asn Ala lie Thr Thr lie Leu Thr 15 10 15
Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gin Asn lie Thr Glu Glu Phe 20 25 30
Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45
Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val lie Thr lie Glu Leu Ser Asn lie 50 55 60
Lys Glu Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Val Lys Leu lie Lys 65 70 75 80
Gin Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gin Leu Leu 85 90 95
Met Gin Ser Thr Pro Pro Thr Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Leu Pro 100 105 110
Arg Phe Met Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Lys Lys Thr Asn Val Thr 115 120 125
Leu Ser Lys Lys Arg Lys Arg Arg Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val 130 135 140
Gly Ser Ala lie Ala Ser Gly Val Ala Val Ser Lys Val Leu His Leu 145 150 155 160
Glu Gly Glu Val Asn Lys lie Lys Ser Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys 165 170 175
Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val 180 185 190
Leu Asp Leu Lys Asn Tyr 工le Asp Lys Gin Leu Leu Pro lie Val Asn 195 200 205
Lys Gin Ser Cys Ser lie Ser Asn lie Glu Thr Val lie Glu Phe Gin 210 215 220
Gin Lys Asn Asn Arg Leu Leu Glu lie Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn 225 230 235 240
Ala Gly Val Thr Thr Pro Val Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu 245 250 255
Leu Leu Ser Leu lie Asn Asp Met Pro lie Thr Asn Asp Gin Lys Lys 260 265 270
Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val ^rg Gin Gin Ser Tyr Ser lie 275 280 285
Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300
Leu Tyr Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro 305 310 315 320
Leu Cys Thr Thr Asn Thr Lys Glu Gly Ser Asn lie Cys Leu Thr Arg 325 330 335
Thr Asp Arg Gly Trp Tyr Cys Asp Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe 340 345 350
Pro Gin Ala Glu Thr Cys Lys Val Gin Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp 355 . 360 365
Thr Met Asn Ser Leu Thr Leu Pro Ser Glu lie Asn Leu Cys Asn Val 370 375 380
Asp lie Phe Asn Pro Lys Tyr Asp Cys Lys lie Met Thr Ser Lys Thr 385 390 395 400 146 201201839
Asp Val Ser Ser Ser Val lie Thr Ser Leu Gly Ala lie Val Ser Cys 405 410 415
Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly lie lie 420 425 430
Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Met Asp 435 440 445
Thr Val Ser Val Gly Asn Thr Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Gin Glu Gly 450 455 460
Lys Ser Leu Tyr Val Lys Gly Glu Pro lie lie Asn Phe Tyr Asp Pro 465 470 475 480
Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin Val Asn 485 490 495
Glu Lys lie Asn Gin Ser Leu Ala Phe lie Arg Lys Ser Asp Glu Leu 500 505 510
Leu His Asn Val Asn Ala Gly Lys Ser Thr Thr Asn lie Met lie Thr 515 520 525
Thr lie lie lie Val lie lie Val lie Leu Leu Ser Leu lie Ala Val 530 535 540
Gly Leu Leu Leu Tyr Cys Lys Ala Arg Ser Thr Pro Val Thr Leu Ser 545 550 555 560
Lys Asp Gin Leu Ser Gly lie Asn Asn lie Ala Phe Ser Asn 565 570 <210> 383 <211> 28 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> VH-gl(a/b)-REV引子 <400> 383 acaagatttg ggctcaacty tcttgtcc 28 <210> 384 <211> 23 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> 5'L VLambda 1 引子 <400> 384 ggtcctgggc ccagtctgtg ctg 23 <210> 385 <211> 23 <212> DNA ' <213>人造序列 <220> <223> 5!L VLambda 2弓丨子 <400> 385 ggtcctgggc ccagtctgcc ctg 23 <210> 386 <211> 23 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> 5,L VLambda 3弓 I子 147 23 201201839 <400> 386 gctctgtgac ctcctatgag ctg <210> 387 、 <211> 23 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> 5'L VLambda 4/5弓丨子 <400> 387 ggtctctctc scagcytgtg ctg <210> 388 <211> 23 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> 5fL VLambda 6弓|子 <400> 388 gttcttgggc caattttatg ctg <210〉 389 <211> 23 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> 5’L VLambda 7引子 <400> 389 ggtccaattc ycaggctgtg gtg <210> 390 <211> 23 <212> DNA <213>人造序列 23 23 23 <220> <223> 5'L VLambda 8弓|子 <400> 390 gagtggattc tcagactgtg gtg 23 <210> 391 <211> 6822 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> 28dll/pCAL載體 <400> 391 atgcattagt tattaatagt aatcaattac ggggtcatta gttcatagcc catatatgga 60 gttccgcgtt acataactta cggtaaatgg cccgcctggc tgaccgccca acgacccccg 120 cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc catagtaacg ccaataggga ctttccattg 180 acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac tgcccacttg gcagtacatc aagtgtatca 240 tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa tgacggtaaa tggcccgcct ggcattatgc 300 ccagtacatg accttatggg actttcctac ttggcagtac atctacgtat tagtcatcgc 360 tattaccatg gtgatgcggt tttggcagta catcaatggg cgtggatagc ggtttgactc 420 acggggattt ccaagtctcc accccattga cgtcaatggg agtttgtttt ggcaccaaaa 480 tcaacgggac tttccaaaat gtcgtaacaa ctccgcccca ttgacgcaaa tgggcggtag 540 148 201201839 gcgtgtacgg tgggaggtct atataagcag agctggttta gtgaaccgtc agatccgcta 600 gcgattacgc caagctcgaa attaaccctc actaaaggga acaaaagctg gagctccacc 660 gcggtggcgg ccgcccacca tggactggac ctggcggatc ctgttcctgg tggccgcggc 720 caccggggcc cacagccagc tgcagctgca ggagtcgggc ccaggactgg tgaaggtttc 780 ggacaccctg tccctcagct gcactgtctc tggtgactcc atcaatagtt attcctggag 840 ttggatccgg cagcccccag ggaagggact tgagtggatt ggatatctct attacagtgg 900 gagctccaat tatagtccct ccctcaaggg ccgagtcacc atgtcgctag acacgtccaa 960 gaaccagttt tccctgaagc ttcactctct gaccgctgcg gacacggccg tctattactg 1020 tgcgagagga tcttgtggta gaaccacctg ctactgggaa aaccactact acatggacgt 1080 ctggggcaaa gggaccgcgg tcaccgtctc ctcacagctg cagctgcagg agtcgggccc 1140 aggactggtg aaggtttcgg acaccctgtc cctcagctgc actgtctctg gtgactccat 1200 caatagttat tcctggagtt ggatccggca gcccccaggg aagggacttg agtggattgg 1260 atatctctat tacagtggga gctccaatta tagtccctcc ctcaagggcc gagtcaccat 1320 gtcgctagac acgtccaaga accagttttc cctgaagctt cactctctga ccgctgcgga 1380 cacggccgtc tattactgtg cgagaggatc ttgtggtaga accacctgct actgggaaaa 1440 ccactactac atggacgtct ggggcaaagg gaccgcggtc accgtctcct cagctagcac 1500 caagggcccc agcgtgttcc ccctggcccc cagcagcaag agcaccagcg gcggcaccgc 1560 cgccctgggc tgcctggtga aggactactt ccccgagccc gtgaccgtga gctggaacag 1620 cggcgccctg accagcggcg tgcacacctt ccccgccgtg ctgcagagca gcggcctgta 1680 cagcctgagc agcgtggtga ccgtgcccag cagcagcctg ggcacccaga cctacatctg 1740 caacgtgaac cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag aaggtggagc ccaagagctg 1800 cgacaaaact cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa ctcctggggg gaccgtcagt I860 cttcctcttc cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac 1920 atgcgtggtg gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact ggtacgtgga 1980 cggcgtggag gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtaca acagcacgta 2040 ccgggtggtc agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaatggca aggagtacaa 2100 gtgcaaggtc tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa 2160 agggcagccc cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggatg agctgaccaa 2220 gaaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat cccagcgaca tcgccgtgga 2280 gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg tgctggactc 2340 cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg 2400 gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag 2460 cctctccctg tctccgggta aacgggccaa gcgggcaccc gtgaagcaga ccctgaactt 2520 cgacctgctg aagctggccg gcgacgtgga gagcaacccc ggccccatga ggctccctgc 2580 tcagctcctg gggctgctaa tgctctgggt ccctggctcg agtgaggttc tgcctgtgct 2640 gactcagcca ccctcagcgt ctgcgacccc cgggcagagg gtcaccatct cttgttctgg 2700 aagcagctcc aacatcgggc gtaatactgt aaactggtac cagcgtctcc caggaacggc 2760 ccccaaactc ctcatctata atactaatca gcggccctca ggggtccctg accgattctc 2820 tggctccaag tctggcacct cagccgccct ggccatcagt ggactccagt ctgaggatga 2880 ggctgagtat tactgtgcag cctgggatga cagcctgaat ggcctttctt gggtgttcgg 2940 cggagggacc aagctgaccg tcctaagtca gcccaaggct gccccctcgg tcactctgtt 3000 cccgccctcc tctgaggagc ttcaagccaa caaggccaca ctggtgtgtc tcataagtga 3060 cttctacccg ggagccgtga cagcctggaa ggcagatagc agccacgtca aggcgggagt 3120 ggagaccacc acaccctcca aacaaagcaa caacaagtac gcggccagca gctacctgag 3180 cctgacgcct gagcagtgga agtcccacaa aagctacagc tgccaggtca cgcatgaagg 3240 gagcaccgtg gagaagacaa ttgcccctac agaatgctca taaggccggg acggccggta 3300 ccaggtaagt gtacccaatt cgccctatag tgagtcgtat tacaattcac tcgatcgccc 3360 ttcccaacag ttgcgcagcc tgaatggcga atggagatcc aatttttaag tgtataatgt 3420 gttaaactac tgattctaat tgtttgtgta ttttagattc acagtcccaa ggctcatttc 3480 aggcccctca gtcctcacag tctgttcatg atcataatca gccataccac atttgtagag 3540 gttttacttg ctttaaaaaa ectcccacac ctccccctga acctgaaaca taaaatgaat 3600 gcaattgttg ttgttaactt gtttattgca gcttataatg gttacaaata aagcaatagc 3660 atcacaaatt tcacaaataa agcatttttt tcactgcatt ctagttgtgg tttgtccaaa 3720 ctcatcaatg tatcttaacg cgtaaattgt aagcgttaat attttgttaa aattcgcgtt 3780 aaatttttgt taaatcagct cattttttaa ccaataggcc gaaatcggca aaatccctta 3840 taaatcaaaa gaatagaccg agatagggtt gagtgttgtt ccagtttgga acaagagtcc 3900 actattaaag aacgtggact ccaacgtcaa agggcgaaaa accgtctatc agggcgatgg 3960 cccactacgt gaaccatcac cctaatcaag ttttttgggg tcgaggtgcc gtaaagcact 4020 aaatcggaac cctaaaggga gcccccgatt tagagcttga cggggaaagc cggcgaacgt 4080 ggcgagaaag gaagggaaga aagcgaaagg agcgggcgct agggcgctgg caagtgtagc 4140 ggtcacgctg cgcgtaacca ccacacccgc cgcgcttaat gcgccgctac agggcgcgtc 4200 aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt tctaaataca 4260 ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata accctgataa atgcttcaat aatattgaaa 4320 aaggaagaat cctgaggcgg aaagaaccag ctgtggaatg tgtgtcagtt agggtgtgga 4380 aagtccccag gctccccagc aggcagaagt atgcaaagca tgcatctcaa ttagtcagca 4440 149 201201839 accaggtgtg aattagtcag agttccgccc gccgcctccg ttttgcaaag attgcacgca acagacaatc tctttttgtc gctatcgtgg agcgggaagg ccttgctcct tgatccggct tcggatggaa gccagccgaa gacccatggc catcgactgt tgatattgct cgccgctccc gggactctgg gattccaccg tggatgatcc ctaactgaaa agacagaata ggctggcact tccttttccc ggggcggcag cttcattttt atcccttaac tcttcttgag ctaccagcgg ggcttcagca cacttcaaga gctgctgcca gataaggcgc acgacctaca gaagggagaa agggagcttc tgacttgagc agcaacgcgg cctgcgttat gaaagtcccc caaccatagt attctccgcc cctctgagct atcgatcaag ggttctccgg ggctgctctg aagaccgacc ctggccacga gactggctgc gccgagaaag acctgcccat gccggtcttg ctgttcgcca gatgcctgct ggccggctgg gaagaacttg gattcgcagc ggttcgaaat ccgccttcta tccagcgcgg cacggaagga aaacgcacgg ctgtcgatac caccccaccc gccctgccat aatttaaaag gtgagttttc atcctttttt tggtttgttt gagcgcagat actctgtagc gtggcgataa agcggtcggg ccgaactgag aggcggacag cagggggaaa gtcgattttt cctttttacg cccctgattc aggctcccca cccgccccta ccatggctga attccagaag agacaggatg ccgcttgggt atgccgccgt tgtccggtgc cgggcgttcc tattgggcga tatccatcat tcgaccacca tcgatcagga ggctcaaggc tgccgaatat gtgtggcgga gcggcgaatg gcatcgcctt gaccgaccaa tgaaaggttg ggatctcatg gacaataccg tgttgggtcg cccaccgaga cccaagttcg agcctcaggt gatctaggtg gttccactga tctgcgcgta gccggatcaa accaaatact accgcctaca gtcgtgtctt ctgaacgggg atacctacag gtatccggta cgcctggtat gtgatgctcg gttcctggcc tgtggataac gcaggcagaa actccgccca ctaatttttt tagtgaggag aggatcgttt ggagaggcta gttccggctg cctgaatgaa ttgcgcagct agtgccgggg ggctgatgca agcgaaacat tgatctggac gagcatgccc catggtggaa ccgctatcag ggctgaccgc ctatcgcctt gcgacgccca ggcttcggaa ctggagttct gaaggaaccc tttgttcata ccccattggg ggtgaaggcc tactcatata aagatccttt gcgtcagacc atctgctgct gagctaccaa gtccttctag tacctcgctc accgggttgg ggttcgtgca cgtgagctat agcggcaggg ctttatagtc tcaggggggc ttttgctggc cgtattaccg gtatgcaaag tcccgcccct ttatttatgc gcttttttgg cgcatgattg ttcggctatg tcagcgcagg ctgcaagacg gtgctcgacg caggatctcc atgcggcggc cgcatcgagc gaagaacatc gacggcgagg aatggccgct gacatagcgt ttcctcgtgc cttgacgagt acctgccatc tcgttttccg tcgcccaccc gcgctatgac aacgcggggt gccaatacgc cagggctcgc tactttagat ttgataatct ccgtagaaaa tgcaaacaaa ctctttttcc tgtagccgta tgctaatcct actcaagacg cacagcccag gagaaagcgc tcggaacagg ctgtcgggtt ggagcctatg cttttgctca cc catgcatctc aactccgccc agaggccgag aggcctaggc aacaagatgg actgggcaca ggcgcccggt aggcagcgcg ttgtcactga tgtcatctca tgcatacgct gagcacgtac aggggctcgc atctcgtcgt tttctggatt tggctacccg tttacggtat tcttctgagc acgagatttc ggacgccggc tagggggagg ggcaataaaa tcggtcccag ccgcgtttct agccaacgtc tgatttaaaa catgaccaaa gatcaaagga aaaaccaccg gaaggtaact gttaggccac gttaccagtg atagttaccg cttggagcga cacgcttccc agagcgcacg tcgccacctc gaaaaacgcc catgttcttt 4500 4560 4620 4680 4740 4800 4860 4920 4980 5040 5100 5160 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gctggctggt ttattgctga taaatctgga gccggtgagc 840 gtgggtctcg cggtatcatt gcagcactgg ggccagatgg taagccctcc cgtatcgtag 900 ttatctacac gacggggagt caggcaacta tggatgaacg aaatagacag atcgctgaga 960 taggtgcctc actgattaag cattggtaac tgtcagacca agtttactca tatatacttt 1020 agattgattt aaaacttcat ttttaattta aaaggatcta ggtgaagatc ctttttgata 1080 atctcatgac caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca ctgagcgtca gaccccgtag 1140 aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg cgtaatctgc tgcttgcaaa 1200 caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt gtttgccgga tcaagagcta ccaactcttt 1260 ttccgaaggt aactggcttc agcagagcgc agataccaaa tactgtcctt ctagtgtagc 1320 cgtagttagg ccaccacttc aagaactctg tagcaccgcc tacatacctc gctctgctaa 1380 tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg ataagtcgtg tcttaccggg ttggactcaa 1440 gacgatagtt accggataag gcgcagcggt cgggctgaac ggggggttcg tgcacacagc 1500 ccagcttgga gcgaacgacc tacaccgaac tgagatacct acagcgtgag ctatgagaaa 1560 gcgccacgct tcccgaaggg agaaaggcgg acaggtatcc ggtaagcggc agggtcggaa 1620 caggagagcg cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg gtatctttat agtcctgtcg 1680 ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg ctcgtcaggg gggcggagcc 1740 tatggaaaaa cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct ggccttttgc tggccttttg 1800 ctcaca'tgtt ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt accgcctttg I860 agtgagctga taccgctcgc cgcagccgaa cgaccgagcg cagcgagtca gtgagcgagg 1920 aagcgacacc atcgaatggc gcaaaacctt tcgcggtatg gcatgatagc gcccggaaga 1980 gagtcaattc agggtggtga atgtgaaacc agtaacgtta tacgatgtcg cagagtatgc 2040 cggtgtctct tatcagaccg tttcccgcgt ggtgaaccag gccagccacg tttctgcgaa 2100 aacgcgggaa aaagtggaag cggcgatggc ggagctgaat tacattccca accgcgtggc 2160 acaacaactg gcgggcaaac agtcgttgct gattggcgtt gccacctcca gtctggccct 2220 gcacgcgccg tcgcaaattg tcgcggcgat taaatctcgc gccgatcaac tgggtgccag 2280 cgtggtggtg tcgatggtag aacgaagcgg cgtcgaagcc tgtaaagcgg cggtgcacaa 2340 tcttctcgcg caacgcgtca gtgggctgat cattaactat ccgctggatg accaggatgc 2400 cattgctgtg gaagctgcct gcactaatgt tccggcgtta tttcttgatg tctctgacca 2460 gacacccatc aacagtatta 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Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140
Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160 157 201201839
Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 404 <211> 226 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223〉90D3 Fab重鏈 <400> 404
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Gly Ser Gly Phe Thr Leu Lys Asn Tyr 20 25 30
Glu Met Asn Trp Val Arg Gin. Ala Pro Gly Gin Gly Leu Gin Tyr lie 35 40 45
Ser Tyr lie Ser Ser Ser Gly Asn Val Val Lys Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60
Gin Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Gly Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95
Val Arg Gly Phe Ser lie Asp Lys Tyr Asp Ser Ser Val Asp Glu Tyr 100 105 110
Trp Gly Gin Gly lie Ala Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175
Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val 195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 210 215 220
Ser Cys 225 <210> 405 <211> 10 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 30D8 VH CDR1 <400> 405
Gly Phe Thr Phe Ser Gly His Thr lie Ala 1 5 10 <210〉 406 158 201201839 <211> 17 <212> PRT <213>人造序列 <220> . <223> 30D8 VH CDR2 <400> 406
Trp Val Ser Thr Asn Asn Gly Asn Thr Glu Tyr Ala Gin Lys lie Gin 15 10 15
Gly <210> 407 <211> 12 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 30D8 VH CDR3 <400> 407
Glu Trp Leu Val Met Gly Gly Phe Ala Phe Asp His 15 10 <210> 408 <211> 11 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 30D8 VL CDR1 <400> 408
Gly Ala Asn Asn lie Gly Ser Gin Asn Val His 1 5 10 <210> 409 <211> 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 30D8 VL CDR2 <400> 409
Asp Asp Arg Asp Arg Pro Ser 1 5 <210> 410 <211> 12 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 30D8 VL CDR3 <400> 410
Gin Val Trp Asp Ser Ser Arg Asp Gin Ala Val lie 15 10 159 201201839 <210> 411 <211> 10 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 104E5 VH CDR1 <400> 411
Gly Gly Thr Phe Asp Thr Tyr Thr lie Ser 15 10 <210> 412 <211> 17 <212> PRT <213>人造序列 <220〉 <223> 104E5 VH CDR2 <400> 412 Arg lie lie Pro 1 Gly
Ser Leu Gly Glu Thr Asn Tyr Ala His Lys Leu Gin 5 10 15 <210> 413 <211> 16 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 104E5 VH CDR3 <400> 413
Arg lie Thr Gly Pro Val Asp Trp Val Trp Asp Tyr Gly Met Asp Val 15 10 15 <210> 414 <211〉 11 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 104E5 VL CDR1 <400> 414
Arg Ala Ser Gin Asn lie Lys Thr Tyr Leu Asn 15 10 <210> 415 <211> 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 104E5 VL CDR2 <400> 415
Ala Val Ser Asn Leu Gin Ser 160 201201839 1 5 <210> 416 <211> 9 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 104E5 VL CDR3 <400> 416
Gin Gin Ser Phe Ser lie Pro Leu Thr 1 5 <210> 417 <211> 10 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 38F10 VH CDR1 <400> 417
Gly Phe Ser lie Thr Asp Phe Gly lie His 1 5 10 <210> 418 <211> 17 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 38F10 VH CDR2 <400> 418
Leu lie Ser Tyr Asn 1 5
Glu Val Asn lie His Tyr Gly Glu Ser Val Arg 10 15
Gly <210> 419 <211> 15 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 38F10 VH CDR3 <400> 419
Asp Val Trp Glu Asp Ser Trp Leu Ser Leu Ala Cys Phe Gin Glu 1 5 10 15 <210> 420 <211> 11 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 38F10 VL CDR1 161 201201839 <400> 420
Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Trp Leu Ala 1 5 10 <210> <211> 421 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 38F10 VL CDR2 <400> 421
Lys Ala Ser Asn Leu Glu Asp 1 5 <210> <211> <212> <213> 422 10 PRT 人造序列 <220> <223> 38F10 VL CDR3 <400> 422
Gin Gin Tyr Asn Ser Tyr Ser Gly Leu Ser 1 5 10 <210> <211> <212> <213> 423 12 PRT 人造序列 <220> <223> 14G3 VH CDR1 <400> 423
Gly Ala Ser lie Ser Ser Asp Asn His Tyr Trp Ser 1 5 10 <210> <211> 424 16 <212> PRT <213>人造序列 <220〉 <223> 14G3 VH CDR2 <400> 424
Ser lie Tyr Tyr Thr Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> <211> <212> <213> 425 15 PRT 人造序列 <220> <223> 14G3 VH CDR3 162 201201839 <400> 425
Gly Leu Phe Phe lie Thr Ala Arg Pro Tyr Trp Tyr Phe Asp Leu 1 5 10 15 <210> _ <211> <212> <213> 426 17 PRT 人造序列 <220> <223> 14G3 VL CDR1 <400> 426
Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu Asp Ser Asp Asp Gly Asn Thr Tyr Leu 1 Asp 5 10 15 <210> 427 <211> 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 14G3 VL CDR2 <400> 427
Thr Leu Ser Tyr Arg Ala Ser 1 5 <210> <211> <212> <213> 428 9 PRT 人造序列 <220> <223> 14G3 VL CDR3 <400> 428
Met Gin Arg Met Glu Phe Pro Phe Thr 1 5 <210> <211> <212> <213> 429 10 PRT 人造序列 <220> <223> 90D3 VH CDR1 <400> 429
Gly Phe Thr Leu Lys Asn Tyr Glu Met Asn 1 5 10 <210> 430 <211> 17 <212> PRT <213>人造序列 163 <220> 201201839 <223> 90D3 VH CDR2 <400> 430
Tyr lie Ser Ser Ser Gly Asn Val Val Lys Tyr Val Asp Ser Val Gin 15 10 15
Gly <210> 431 <211> 14 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 90D3 VH CDR3 <400> 431
Gly Phe Ser lie Asp Lys Tyr Asp Ser Ser Val Asp Glu Tyr 1 5 10 <210> 432 <211> 11 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 90D3 VL CDR1 <400> 432
Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Phe Leu Asn 15 10 <210> 433 <211> 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 90D3 VL CDR2 <400> 433
Ala Ala Ser Ser Leu Gin Gly 1 5 <210> 434 <211〉 9 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 90D3 VL CDR3 <400> 434
Gin Gin Thr Tyr lie Ser Leu Tyr Thr 1 5 <210> 435 <211〉 7 <212> PRT <213>人造序列 164 201201839 <220> <223> 58c5 VH CDR1 <400> 435
Ser Asp Asn Tyr Tyr Trp Thr 1 5 <210> 436 <211> 6 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> sc5 VH CDR1 <400> 436
Gly Ser Asn Trp Trp Asn 1 5 <210> 437 <211> 5 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 30D8 VH CDR1 <400> 437
Gly His Thr lie Ala 1 5 <210> 438 <211> 5 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 104E5 VH CDR1 <400> 438
Thr Tyr Thr lie Ser 1 5 <210> 439 <211> 5 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 38F10 VH CDR1 <400> 439
Asp Phe Gly lie His 1 5 <210> 440 <211> 7 <212> PRT <213〉人造序列 165 201201839 <220> <223> 14G3 VH CDR1 <400> 440
Ser Asp Asn His Tyr Trp Ser 1 5 <210> 441 <211> 5 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 90D3 VH CDR1 <400> 441
Asn Tyr Glu Met Asn 1 5 <210> 442 <211> 645 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> 30D8輕鏈 <400> 442 cagtctgtgc tgacgcaggc atcctcggtg tcagtggccc caggacagac ggccagaatt 60 acctgtgggg caaacaacat tggaagtcaa aatgttcact ggtaccagca gaagccaggc 120 caggcccctg ttttggtcgt ctatgatgat cgcgaccggc cctcagggat ccctgaccga 180 ttctctggct ccaactctgg gaatacggcc accctgacca tcagcagggt cgaggccggg 240 gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatagtagtc gtgatcaggc cgtaattttt 300 ggcggaggga ccaagctgac cgtcctaggt cagcccaagg ctgccccctc ggtcactctg 360 ttcccgccct cctctgagga gcttcaagcc aacaaggcca cactggtgtg tctcataagt 420 gacttctacc cgggagccgt gacagtggcc tggaaggcag atagcagccc cgtcaaggcg 480 ggagtggaga ccaccacacc ctccaaacaa agcaacaaca agtacgcggc cagcagctac 540 ctgagcctga cgcctgagca gtggaagtcc cacagaagct acagctgcca ggtcacgcat 600 gaagggagca ccgtggagaa gacaattgcc cctacagaat gctca 645 <210> 443 <211> 672 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> 30D8 Fab重鏈 <400> 443 gaggtgcagc tgttgcagtc tggagcagag ttgaagaagc ctggggcctc agtgaagatc 60 tcctgcaaga cttctggttt cacctttagc ggtcatacta tcgcctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggctgg gtcagcacta ataatggaaa cacagagtat 180 gcacagaaga tccagggcag agtcaccatg actatggaca catcaacgag cacagtctac 240 atggagttga ggagcctgac atctgacgac acggccgtgt atttctgtgc gagagagtgg 300 ctggtcatgg ggggcttcgc ctttgaccac tggggccagg gaaccctgct caccgtctcc 360 tcagcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420 gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480 tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gagagttgag 660 cccaaatctt gt 672 166 201201839 <210> 444 <211> 645 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223〉104E5 輕鏈 <400> 444 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgcctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gaacattaag acctatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gggagagccc ctaaactcct gatctctgct gtgtccaatt tacaaagtgg ggtcccgtca 180 aggttcagtg gcaccggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg caacttacta ctgtcagcag agtttcagta ttccgctcac tttcggcgga 300 ggggccaagg tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa ctctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gctaa 645 <210> 445 <211> 684 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> 104E5 Fab重鏈 <400> 445 caggtccaat tggaacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagc cttctggagg caccttcgac acatacacta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaac gtcttgagtg gctgggaagg atcatccctt cacttggtga aacaaactat 180 gcacacaaac tccagggcag agtcacgatt accgcggaca aagccacgag tgtcgtctat 240 atggacctga gcgacctgac atccgaggac gcggccgtct attactgtgc atttcgtata 300 actggacctg tcgactgggt ctgggactat gggatggacg tctggggcca agggaccacg 360 gtcagcgtct cgtcagcctc cagcaagggc ccatcggtct tccccctggc accctcctcc 420 aagagcacct ctgggggcac agcggccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa 480 ccggtga'cgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct 540 gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc 600 ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac 660 aagagagttg agcccaaatc ttgt 684 <210> 446 <211> 684 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> 38F10輕鏈 <400> 446 ccggccatgg ccgccggtga catccagttg acccagtctc cccccaccct gtctgcgtct 60 gtgggagaca gagtctccat gacttgccgg gccagtcaga gtattagtaa ctggttggcc 120 tggtatcagc aaaaaccagg gaaagcccct aaactcctca tccagaaggc gtccaattta 180 gaagatggcg tcccctcacg gttcaccgcc agtggatttg ggacagaatt cactctcacc 240 atcagcagcc tacagcctga tgatttcgca acttattact gtcaacagta taatagttac 300 tcaggcctca gtttcggcgg agggaccaag gtggacatca aacgaactgt ggctgcacca 360 tctgtcttca tcttcccgcc atctgatgag cagttgaaat ctggaactgc ctctgttgtg 420 tgcctgctga ataacttcta tcccagagag gccaaagtac agtggaaggt ggataacgcc 480 ctccaatcgg gtaactccca ggagagtgtc acagagcagg acagcaagga cagcacctac 540 agcctcagca gcaccctgac gctgagcaaa gcagactacg agaaacacaa agtctacgcc 600 tgcgaagtca cccatcaggg cctgagctcg cccgtcacaa agagcttcaa caggggagag 660 tgctaattaa ttaataagga ggat 684 167 201201839 <210> 447 <211> 726 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> 38F10 Fab重鏈 <400> 447 gcggccgcag aggtgcagct gttggagtct gggggagacg tggtccagcc tgggaagtcc 60 ctgagactct cctgcacagc ctctggattc agcatcactg actttggcat ccactgggtc 120 cgccaggctc caggcaaggg gctggagtgg gtggccctta tttcatataa cgaagtaaat 180 atacactatg gcgagtccgt gaggggccgc ttcaccatct ccagagacat tgccaagaac 240 acagtatatc tgcagatgaa tggcctgaga cctgaagaca cgggtgtgta tttttgtgcg 300 agggatgtct gggaggactc gtggctgtca cttgcgtgct tccaggaatg gggccagggc 360 tccctggtcg tcgtctcatc agcctccacc aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc 420 tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc 480 cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc 540 ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc 600 agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag 660 gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt ggtcggccag gccggccgca ccatcaccat 720 caccat 726 <210> 448 <211> 663 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223〉14G3 輕鏈 <400> 448 gatgttgtga tgacccagac tccactctcc ctgtccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtca gagcctcttg gatagtgatg atggaaacac ctatttggac 120 tggtacctgc agaagccagg gcagtctcca cagctcctga tctatacact ttcctatcgg 180 gcctctggag tcccagacag gttcagtggc agtgggtcag gcactgattt cacactgaaa 240 atcagcaggg tggaggctga cgatgttgga atttattact gcatgcaacg tatggagttt 300 cccttcacct tcggccaagg gacacgactg gacattaaac gaactgtggc tgcaccatct 360 gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc 420 ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc 480 caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc 540 ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc 600 gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc gtcacaaaga gcttcaacag gggagagtgc 660 taa 663 <210> 449 <211> 684 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> 14G3 Fab重鏈 <400> 449 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgc ctccatcagc agtgataatc actactggag ttggattcga 120 cagccccccg ggaagggcct ggagtggatt gcttccatct attacactgg tggcaccaac 180 tacaacccgt ccctcaagag tcgactcgcc ttatcaatag acacgtccgg ggaccagttc 240 tccttgaagc tgagctctgt gactgccgca gacacggccg tctattactg tgtcaggggc 300 ttgtttttca taacagctcg tccctactgg tacttcgatc tctggggccg tggcaccctg 360 gtcgctgtct cctcagcctc caccaagggc ccatcggtct tccccctggc accctcctcc 420 aagagcacct ctgggggcac agcggccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa 480 ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct 540 gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc 600 ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac 660 168 201201839 684 aagagagttg agcccaaatc ttgt <210> 450 <211> 642 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> 90D3輕鏈 <400> 450 gccatccggt atcacttgcc gggagagccc agattcagtg gaagattttg gggaccaaac tctgatgagc cccagagagg gagagtgtca ctgagcaaag ctgagctcgc tgacccagtc gggcaagtca cgaaactcct gcagtggatc caacttacta tggagatcaa agttgaaatc ccaaagtaca cagagcagga cagactacga ccgtcacaaa tccatcctcc gagtattagc gatctctgct tgggacagat ctgtcaacag acgaactgtg tggaactgcc gtggaaggtg cagcaaggac gaaacacaaa gagcttcaac ctgtctgcat aactttttaa gcatccagtt ttcactctca acttacattt gctgcaccat tctgttgtgt gataacgccc agcacctaca gtctacgcct aggggagagt ctgtaggaga attggtatca tgcaaggtgg ccatcagcag ccctgtacac ctgtcttcat gcctgctgaa tccaatcggg gcctcagcag gcgaagtcac gc cagagtcagc gcagaaacca ggtcccatca tctgcaacct ctttggccag cttcccgcca taacttctat taactcccag caccctgacg ccatcagggc 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 642 <210> 451 <211> 723 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> 90D3 Fab輕鏈 tggagggtcc 60 gaattgggtc 120 tggcaatgtc 180 cgccgggaat 240 ttactgtgtg 300 ccagggaatc 360 ggcaccctcc 420 ctacttcccc 480 caccttcccg 540 gccctccagc 600 caccaaggtg 660 tcaccatcac 720 723 <400> 451 gcggccgcac ctgagaetct cgccaggctc gttaagtacg tcgctgtatc agaggttttt gcggtc'accg tccaagagca gaaccggtga gctgtcctac agcttgggca gacaagaaag cat aggtgcagct cgtgtgtagg cagggcaggg tagactctgt tccaaatgaa cgatcgataa tctcctcagc cctctggggg cggtgtcgtg agtcctcagg cccagaccta ttgagcccaa ggtggagtcg ctctggattc gctacaatat gcagggccga caacctgagg gtatgatagc ctccaccaag cacagcggcc gaactcaggc actctactcc catctgcaac atcttgtggt gggggaggcc accctcaaga atttcataca ttcaccatct gccgaggaca agtgttgatg ggcccatcgg ctgggctgcc gccctgacca ctcagcagcg gtgaatcaca cggccaggcc tggtaaagcc attatgagat tcagtagcag ccagagacaa cggccactta aatactgggg tcttccccct tggtcaagga gcggcgtgca tggtgaccgt agcccagcaa ggccgcacca <210> 452 <211> 227 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 56E11 重鏈 <400> 452
Glu Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val' Lys Pro Ser Glu 15 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Val Ser 工le Asn Ser Asn 20 25 30
Asn Tyr Phe Trp Ala Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45
Trp lie Gly Asn lie Tyr Tyr Gly Gly Ser Thr His Tyr Asn Ala Ser 50 55 60
Leu Gin Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Ser Gin Phe 65 70 75 80 169 201201839
Ser Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Ser Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Ala Ser Glu Ser lie Phe Trp Asp Tyr Tyr Tyr Gly Leu Asp 100 105 110
Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly 130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser.Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 180 _ 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn 195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro 210 215 220
Lys Ser Cys 225 <210> 453 <211> 216 <212〉 PRT <213>人造序列 <220> <223〉56E11 輕鏈 <400> 453
Gin Ala Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Ala Ser Gly Ser Pro Gly Gin 15 10 15
Ser Val Thr lie Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 . 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gin Gin His Pro Gly Lys Ala Pro Arg Leu 35 40 45 lie lie Ser Glu Val Thr Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Gly Arg Phe 50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Val Ser Gly Leu 65 70 75 80
Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Ser 85 90 95
Arg His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin 100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 115 120 125
Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr 130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys 145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr 165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser His 180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys 195 200 205
Thr lie Ala Pro Ala Glu Cys Ser 210 215 <210> 454 <211> 236 <212> PRT <213>人造序列 170 201201839 <220> <223> 17C9 重鏈 <400> 454
Gin Val Gin Leu Gin Gin Trp Gly 1 5
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val 20
Phe Trp Thr Trp lie Arg Gin Thr 35 40
Gly Glu lie Ser His Ser Gly Ser 50 55
Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp 65 70
Lys Leu Ser Ala Val Thr Ala Ala 85
Arg Gly Val Arg Ser Arg Pro Pro 100
Pro Pro Tyr Tyr His Tyr Gly Met 115 120
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 130 135
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 145 150
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 165
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 180
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 195 200
Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys 210 215
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu 225 230
Ala Gly Leu Val Arg Pro Ser Glu 10 15
Tyr Gly Asp Ser Phe Asn Asp Tyr 25 30
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie 45
Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Leu Lys 60
Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 75 80
Asp Thr Thr Val Tyr Phe Cys Ala 90 95
Pro Ser Tyr Arg Gly Ser Gly Ser 105 110
Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 140
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 205
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 220
Pro Lys Ser Cys 235 <210> 455 <211> 214 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 17C9 輕鏈 <400> 455
Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro 1 5
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg 20
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 35 40
Tyr Ala Ala Ser Phe Leu Gin Ser 50 55
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 65 70
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys 85
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val 100
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro 115 120
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu 130 135
Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn
Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 10 15
Ala Ser Gin Asn lie Asn Thr Trp 25 30
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 45
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60
Leu Thr lie Ser Asn Leu Gin Pro 75 80
Gin Gin Ala Asn Ser Phe Pro Arg 90 95
Glu Val Lys Arg Thr Val Ala Ala 105 110
Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 125
Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 140
Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 171 201201839 145 150
Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp. Ser 165
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala 180
Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly 195 200
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 155 160
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 170 175
Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 185 190
Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 205 <210> 456 <211> 221 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 69F6重鏈 <400> 456
Gin Met Gin Leu Val Gin Ser Gly 1 5
Ser Leu Lys lie Ala Cys Lys Gly 20
Trp lie Ala Trp Val Arg Gin Met 35 40
Gly lie lie Phe Pro Asn Asp Ser 50 55
Gin Gly Gin Val Thr Met Ser Val 65 70
Leu Gin Trp Asn Ser Leu Lys Ala 85
Ala Arg Gin Tyr Tyr Leu Gly Ser 100
Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 115 120
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr 130 135
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 145 150
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 165
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 180
Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie 195 200
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val 210 215
Ala Glu Val Arg Lys Pro Gly Glu 10 15
Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 25 30
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 45
Asp Ala Thr Tyr Ser Pro Ser Phe 60
Asp Lys Ser lie Ser Thr Ala Tyr 75 80
Ser Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 90 95
Phe Glu Ser Trp Gly Gin Gly Thr 105 110
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 125
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 140
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 155 160
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin 170 175
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 185 190
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 205
Glu Pro Lys Ser Cys 220 <210> 457 <211> 216 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 69F6輕鏈 <400> 457
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 10 15 Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr 25 30 Gly Lys Ala Pro Arg Leu Leu lie 45
Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro 1 5
Asp Arg Val Thr lie Ser Cys Gin 20
Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 35 40 172 201201839
Tyr Asp Ala Ser Tyr Leu Asp Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asp Asp Leu Arg Gly 85 90 95
Gly Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Val Lys Arg Thr Val 100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys 115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg 130 135 140
Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn 145 150 155 160
Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser 165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys 180 185 190
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr 195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 458 <211> 12 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 56E11 VH CDR1 <400> 458
Gly Val Ser 工le Asn Ser Asn Asn Tyr Phe Trp Ala 15 10 <210> 459 <211〉1.6 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 56E11 VH CDR2 <400> 459
Asn lie Tyr Tyr Gly Gly Ser Thr His Tyr Asn Ala Ser Leu Gin Ser 15 10 15 <210> 460 <211> 14 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 56E11 VH CDR3 <400> 460
Ser Glu Ser lie Phe Trp Asp Tyr Tyr Tyr Gly Leu Asp Val 15 10 <210> 461 <211〉 14 173 201201839 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 56E11 VL CDR1 <400> 461
Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Tyr Val Ser 15 10 <210> 462 <211> 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 56E11 VL CDR2 <400> 462
Glu Val Thr Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 463 <211> 10 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 56E11 VL CDR3 <400> 463
Ser Ser Tyr Ala Gly Ser Arg His Val Val 15 10 <210> 464 <211> 10 <212> PRT <213>人造序列 <220〉 <223> 17C9 VH CDR1 <400> 464
Gly Asp Ser Phe Asn Asp Tyr Phe Trp Thr 15 10 <210> 465 <211> 16 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 17C9 VH CDR2 <400> 465
Glu lie Ser His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 466 <211〉 25 174 201201839 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 17C9 VH CDR3 <400> 466
Gly Val Arg Ser Arg Pro Pro Pro Ser Tyr Arg Gly Ser Gly Ser Pro 15 10 15
Pro Tyr Tyr His Tyr Gly Met Asp Val 20 25 <210> 467 <211> 11 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 17C9 VL CDR1 <400> 467
Arg Ala Ser Gin Asn lie Asn Thr Trp Leu Ala 15 10 <210> 468 <211> 7 <212> PRT <213>丨人造序列 <220> ; <223>、17C9 VL CDR2 <400> ：468
Ala Ala Ser Phe Leu Gin Ser 1 (- 5 <210> 469 <211> 9 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 17C9 VL CDR3 <400> 469
Gin Gin Ala Asn Ser Phe Pro Arg Thr 1 5 <210> 470 <211> 10 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 69F6 VH CDR1 <400> 470
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp lie Ala 15 10 175 201201839 <210> 471 <211> 17 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 69F6 VH CDR2 <400> 471 lie lie Phe Pro Asn Asp Ser Asp Ala Thr Tyr Ser Pro Ser Phe Gin 15 10 15
Gly <210> 472 <211> 9 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 69F6 VH CDR3 <400> 472
Gin Tyr Tyr Leu Gly Ser Phe Glu Ser 1 5 <210> 473 <211> 10 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 69F6 VL CDR1 <400> 473
Gin Ala Ser Asp lie Ser Asn Tyr Leu Asn 15 10 <210> 474 <211> 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 69F6 VL CDR2 <400> 474
Asp Ala Ser Tyr Leu Asp Thr 1 5 <210> 475 <211> 11 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 69F6 VL CDR3 <400> 475
Gin Gin Tyr Asp Asp Leu Arg Gly Gly Phe Thr 1.5 10 I c 201201839 <210> 476 <211> 648 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> 56E11 輕鍵 <400> 476 caggctgtgc tgactcagcc tccctccgcg tccgggtctc ctggacagtc agtcaccatc 60 tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt ggttataatt atgtctcctg gtaccaacaa 120 caccccggga aagcccccag actcataatt tctgaagtca ctaagcggcc ctcaggggtc 180 cctggtcgct tctccggctc caagtctggc aacacggcct ccctgaccgt ctctgggctc 240 caggctgagg atgaggctga ttattactgc agctcatatg caggcagcag gcatgtggtt 300 ttcggcggag ggaccaagtt gaccgtcctc ggtcagccca aggctgcccc ctcggtcact 360 ctgttcccgc cctcctctga ggagcttcaa gccaacaagg ccacactggt gtgtctcata 420 agtgacttct acccgggagc cgtgacagtg gcctggaagg cagatagcag ccccgtcaag 480 gcgggagtgg agaccaccac accctccaaa caaagcaaca acaagtacgc ggccagcagc 540 tacctgagcc tgacgcctga gcagtggaag tcccacagaa gctacagctg ccaggtcacg 600 catgaaggga gcaccgtgga gaagacaatt gcccctgcag aatgctca 648 <210> 477 <211> 681 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> 56E11 重鏈 <400> 477 gaggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcagtg tctctggtgt ctccatcaac agcaacaatt atttctgggc ctggatccgc 120 cagcccccag gcaaggggct ggagtggatt gggaatatct attatggtgg gagcacccac 180 tacaatgcgt ccctgcagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gagccagttc 240 tccctgaagc tgaactctgt gacctccgcc gacacggctg tgtattactg tgcggcttcc 300 gagtctatct tttgggacta ctactacggc ctggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360 accgtctcct ctgcctccac caagggccca tcggtcttcc ccctggcacc ctcctccaag 420 agcacctctg ggggcacagc ggccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg 480 gtgacggtgt cgtggaactc aggcgccctg accagcggcg tgcacacctt cccggctgtc 540 ctacagtcct caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc cagcagcttg 600 ggcacccaga cctacatctg caacgtgaat cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 660 aaagttgagc ccaaatcttg t 681 <210> 478 <211> 642 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> 17C9 輕鏈 <400> 478 gaaattgtgt tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggccagtca gaatattaat acctggttgg cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatcctttt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa cttgcagcct 240 gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctaacagtt tccctcggac cttcggccag 300 gggaccaagg tggaagtcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gc 642 177 201201839 <210> 479 <211> 708 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> 17C9 重鏈 <400> 479 . caggtacagc tgcagcagtg gggcgcagga ctggtgaggc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctatggtga ctccttcaat gattacttct ggacgtggat ccgccagacc 120 ccaggaaagg ggctggagtg gattggggaa atcagtcata gtggaagcac caactacagc 180 ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gttgacacgt ccaagaacca gttctccctg 240 aaactcagcg ctgtgaccgc cgcggacacg actgtgtatt tctgtgcgag aggtgtccgc 300 tcccgacccc ctccgagtta ccgtggctcg ggctcccccc cttactacca ttacggtatg 360 gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc gtctcctcag cctccaccaa gggcccatcg 420 gtcttccccc tggcaccctc ctccaagagc acctctgggg gcacagcggc cctgggctgc 480 ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg acggtgtcgt ggaactcagg cgccctgacc 540 agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta cagtcctcag gactctactc cctcagcagc 600 gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc acccagacct acatctgcaa cgtgaatcac 660 aagcccagca acaccaaggt ggacaagaga gttgagccca aatcttgt 708 <210> 480 <211> 648 <212> DNA <213>人—序列 <220> <223> 69F6輕鏈 cagagtcacc 60 acagaaacca 120 ggtcccatca 180 cctacagcct 240 gttcactttc 300 cttcatcttc 360 gctgaataac 420 atcgggtaac 480 cagcagcacc 540 agtcacccat 600 648 <400> 480 gaaattgtgt atctcttgcc gggaaagccc aggttcagtg gaagattttg ggccctggga ccgccatctg ttctatccca tcccaggaga ctgacgctga cagggcctga tgacccagtc aggcgagtca ctaggctcct gaagtggatc caacatatta ccaaagtgga atgagcagtt gagaggccaa gtgtcacaga gcaaagcaga gctcgcccgt tccatcctcc ggacattagc gatctacgat tgggacagat ctgtcaacaa cgtcaaacga gaaatctgga agtacagtgg gcaggacagc ctacgagaaa cacaaagagc ctgtctgcat aactatttaa gcatcctatt tttactttca tatgatgatc actgtggctg actgcctctg aaggtggata aaggacagca cacaaagtct ttcaacaggg ctgtcggaga attggtatca tggacacagg ccatcagcag tccggggggg caccatctgt ttgtgtgcct acgccctcca cctacagcct acgcctgcga gagagtgc <210> 481 <211> 663 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223> 69F6重鏈 <_> 481 cagatgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgagaaagc cgggggagtc tctgaagatc 60 gcctgtaagg gttccggata cagttttacc agctactgga tcgcctgggt gcgccagatg 120 cccgggaaag gcctggaatg gctggggatc atctttccta atgactctga tgccacatac 180 agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatg tcagtcgaca agtccatcag caccgcctac 240 ctgcagtgga acagcctgaa ggcctcggac accgccgtgt atttttgtgc gagacagtat 300 tatcttggct cgtttgaatc ctggggccaa ggaaccacgg tcaccgtctc ctcagcctcc 360 accaagggcc catcggtctt ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca 420 gcggccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 480 tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 540 tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc 600 tgcaacgtga atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agaaagttga gcccaaatct 660 tgt 663 178 201201839 <210> 482 <211〉 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 56E11 VH CDR1 <400> 482
Ser Asn Asn Tyr Phe Trp Ala 1 5 <210> 483 <211> 5 <212> PRT <213〉人造序列 <220> <223> 17C9 VH CDR1 <400> 483
Asp Tyr Phe Trp Thr 1 5 <210> 484 <211> 5 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 69F6 VH CDR1 <400> 484
Ser Tyr Trp lie Ala 1 5
<210> 485 <211> 574 <212> PRT <213>呼吸道融合性病毒 <220> <223> F蛋白 <400> 485
Met Glu Leu Leu lie Leu Lys Ala Asn Ala lie Thr Thr lie Leu Thr 1 5 10 15
Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gin Asn lie Thr Glu Glu Phe 20 25 30
Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45
Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val lie Thr lie Glu Leu Ser Asn lie 50 55 60
Lys Lys Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Ala Lys Leu lie Lys 65 70 75 80
Gin Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gin Leu Leu 85 90 95
Met Gin Ser Thr Gin Ala Thr Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Leu Pro 100 105 110
Arg Phe Met Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Lys Lys Thr Asn Val Thr 115 120 125 179 201201839
Leu Ser Lys Lys 130 Gly Ser Ala lie 145 Glu Gly Glu Val Ala Val Val Ser 180 Leu Asp Leu Lys 195 Lys Gin Ser Cys 210 Gin Lys Asn Asn 225 Ala Gly Val Thr Leu Leu Ser Leu 260 Leu Met Ser Asn 275 Met Ser lie lie 290 Leu Tyr Gly Val 305 Leu Cys Thr Thr Thr Asp Arg Gly 340 Pro Gin Ala Glu 355 Thr Met Asn Ser 370 Asp lie Phe Asn 385 ^ Asp Val Ser Ser Tyr Gly Lys Thr 420 Lys Thr Phe Ser 435 Thr Val Ser Val 450 Lys Ser Leu Tyr 465 Leu Val Phe Pro Glu Lys lie Asn 500 Leu His Asn Val 515 Thr lie lie lie 530 Gly Leu Leu Leu 545 Lys Asp Gin Leu
Arg Lys Arg Arg Phe Leu 135
Ala Ser Gly Val Ala Val 150
Asn Lys lie Lys Ser Ala 165 170
Leu Ser Asn Gly Val Ser 185
Asn Tyr lie Asp Lys Gin 200
Ser lie Ser Asn lie Glu 215
Arg Leu Leu Glu lie Thr 230
Thr Pro Val Ser Thr Tyr 245 250 lie Asn Asp Met Pro lie 265
Asn Val Gin lie Val Arg 280
Lys Glu Glu Val Leu Ala 295 lie Asp Thr Pro Cys Trp 310
Asn Thr Lys Glu Gly Ser 325 330
Trp Tyr Cys Asp Asn Ala 345
Thr Cys Lys Val Gin Ser 360
Leu Thr Leu Pro Ser Glu 375
Pro Lys Tyr Asp Cys Lys 390
Ser Val lie Thr Ser Leu 405 410
Lys Cys Thr· Ala Ser Asn 425
Asn Gly Cys Asp Tyr Val 440
Gly Asn Thr Leu Tyr Tyr 455
Val Lys Gly Glu Pro lie 470
Ser Asp Glu Phe Asp Ala 485 490
Gin Ser Leu Ala Phe lie 505 lie Ala Gly Lys Ser Thr 520
Val lie He Val He Leu 535
Tyr Cys Lys Ala Arg Ser 550
Ser Gly lie Asn Asn lie 565 570
Gly Phe Leu Leu Gly Val 140
Ser Lys Val Leu His Leu 155 160
Leu Leu Ser Thr Asn Lys 175
Val Leu Thr Ser Lys Val 190
Leu Leu Pro lie Val Asn 205
Thr Val He Glu Phe Gin 220
Arg Glu Phe Ser Val Asn 235 240
Met Leu Thr Asn Ser Glu 255
Thr Asn Asp Gin Lys Lys 270
Gin Gin Ser Tyr Ser lie 285
Tyr Val Val Gin Leu Pro 300
Lys Leu His Thr Ser Pro 315 320
Asn lie Cys Leu Thr Arg 335
Gly Ser Val Ser Phe Phe 350
Asn Arg Val Phe Cys Asp 365
Val Asn Leu Cys Asn Val 380 lie Met Thr Ser Lys Thr 395 400
Gly Ala lie Val Ser Cys 415
Lys Asn Arg Gly lie lie 430
Ser Asn Lys Gly Val Asp 445
Val Asn Lys Gin Glu Gly 460 lie Asn Phe Tyr Asp Pro 475 480
Ser lie Ser Gin Val Asn 495
Arg Lys Ser Asp Glu Leu 510
Thr Asn lie Met lie Thr 525
Leu Ser Leu lie Ala Val 540
Thr Pro Val Thr Leu Ser 555 560
Ala Phe Ser Asn <210> 486 <211> 574 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223>莫維珠單抗WARM F蛋白 180 201201839 <400> 486
Met Glu Leu Leu lie Leu Lys Ala Asn Ala lie Thr Thr lie Leu Thr 15 10 15
Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gin Asn lie Thr Glu Glu Phe 20 25 30
Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser. Ala Leu 35 40 45
Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val lie Thr lie Glu Leu Ser Asn lie 50 55 60
Lys Lys Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Ala Lys Leu lie Lys 65 70 75 80
Gin Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gin Leu Leu 85 90 95
Met Gin Ser Thr Gin Ala Thr Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Leu Pro 100 105 110
Arg Phe Met Asn Tyr Thr Leu Asa Asn Ala Lys Lys Thr Asn Val Thr 115 120 125
Leu Ser Lys Lys Arg Lys Arg Arg Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val 130 135 140
Gly Ser Ala lie Ala Ser Gly Val Ala Val Ser Lys Val Leu His Leu 145 150 155 160
Glu Gly Glu Val Asn Lys lie Lys Ser Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys 165 170 175
Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val 180 185 190
Leu Asp Leu Lys Asn Tyr lie Asp Lys Gin Leu Leu Pro lie Val Asn 195 200 205
Lys Gin Ser Cys Ser lie Ser Asn lie Glu Thr Val lie Glu Phe Gin 210 215 220
Gin Lys Asn Asn Arg Leu Leu Glu lie Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn 225 230 235 240
Ala Gly Val Thr Thr Pro Val Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn： Ser Glu 245 250 255
Leu Leu Ser Leu lie Asn Asp Met Pro lie Thr Asn Asp Gin Lys Glu 260 265 270
Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser lie 275 280 285
Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300
Leu Tyr Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro 305 310 315 320
Leu Cys Thr Thr Asn Thr Lys Glu Gly Ser Asn lie Cys Leu Thr Arg 325 330 335
Thr Asp Arg Gly Trp Tyr Cys Asp Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe 340 345 350
Pro Gin Ala Glu Thr Cys Lys Val Gin Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp 355 360 365
Thr Met Asn Ser Leu Thr Leu Pro Ser Glu Val Asn Leu Cys Asn Val 370 375 380
Asp lie Phe Asn Pro Lys Tyr Asp Cys Lys lie Met Thr Ser Lys Thr 385 390 395 400
Asp Val Ser Ser Ser Val lie Thr Ser Leu Gly Ala lie Val Ser Cys 405 410 415
Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly lie lie 420 425 430
Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp 435 440 445
Thr Val Ser Val Gly Asn Thr Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Gin Glu Gly 450 455 460
Lys Ser Leu Tyr Val Lys Gly Glu Pro lie lie Asn Phe Tyr Asp Pro 465 470 475 480
Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin Val Asn 485 490 495
Glu Lys lie Asn Gin Ser Leu Ala Phe lie Arg Lys Ser Asp Glu Leu 181 201201839 500 505 510
Leu His Asn Val lie Ala Gly Lys Ser Thr Thr Asn lie Met lie Thr 515 520 525
Thr lie lie lie Val lie He Val lie Leu Leu Ser Leu He Ala Val 530 535 540
Gly Leu Leu Leu Tyr Cys Lys Ala Arg Ser Thr Pro Val Thr Leu Ser 545 550 555 560
Lys Asp Gin Leu Ser Gly lie Asn Asn lie Ala Phe Ser Asn 565 570 <210> 487 <211> 574 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 58C5 MARM F蛋白 <400> 487
Met Glu Leu Leu lie Leu Lys Ala Asn Ala lie Thr Thr lie Leu Thr 15 10 15
Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gin Asn lie Thr Glu Glu Phe 20 25 30
Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45
Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val lie Thr lie Glu Leu Ser Lys lie 50 55 60
Lys Lys Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Ala Lys Leu lie Lys 65 70 75 80
Gin Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gin Leu Leu 85 90 95
Met Gin Ser Thr Gin Ala Thr Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Leu Pro 100 105 110
Arg Phe Lys Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Lys Lys Thr Asn Val Thr 115 120 125
Leu Ser Lys Lys Arg Lys Arg Arg Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val 130 135 140
Gly Ser Ala lie Ala Ser Gly Val Ala Val Ser Lys Val Leu His Leu 145 150 155 160
Glu Gly Glu Val Asn Lys lie Lys Ser Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys 165 170 175
Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val 180 185 190
Leu Asp Leu Lys Asn Tyr lie Asp Lys Gin Leu Leu Pro lie Val Asn 195 200 205
Lys Gin Ser Cys Ser lie Ser Asn lie Glu Thr Val lie Glu Phe Gin 210 215 220
Gin Lys Asn Asn Arg Leu Leu Glu lie Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn 225 230 235 240
Ala Gly Val Thr Thr Pro Val Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu 245 250 255
Leu Leu Ser Leu lie Asn Asp Met Pro lie Thr Asn Asp Gin Lys Lys 260 265 270
Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser lie 275 280 285
Met Ser lie lie Lys Glu Gly Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300
Leu Tyr Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro 305 310 315 320
Leu Cys Thr Thr Asn Thr Lys Glu Gly Ser Asn lie Cys Leu Thr Arg 325 330 335
Thr Asp Arg Gly Trp Tyr Cys Asp Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe 340 345 350
Pro Gin Ala Glu Thr Cys Lys Val Gin Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp 182 201201839 355 360 365
Thr Met Asn Ser Leu Thr Leu Pro Ser Glu Val Asn Leu Cys Asn Val 370 375 380
Asp lie Phe Asn Pro Lys Tyr Asp Cys Lys lie Met Thr Ser Lys Thr 385 390 395 400
Asp Val Ser Ser Ser Val lie Thr Ser Leu Gly Ala lie Val Ser Cys 405 410 415
Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly lie lie 420 425 430
Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp 435 440 445
Thr Val Ser Val Gly Asn Thr Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Gin Glu Gly 450 455 460
Lys Ser Leu Tyr Val Lys Gly Glu Pro lie lie Asn Phe Tyr Asp Pro 465 470 475 480
Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin Val Asn 485 490 495
Glu Lys lie Asn Gin Ser Leu Ala Phe lie Arg Lys Ser Asp Glu Leu 500 505 510
Leu His Asn Val lie Ala Gly Lys Ser Thr Thr Asn 工le Met lie Thr 515 520 525
Thr lie lie lie Val lie lie Val lie Leu Leu Ser Leu lie Ala Val 530 535 540
Gly Leu Leu Leu Tyr Cys Lys Ala Arg Ser Thr Pro Val Thr Leu Ser 545 550 555 560
Lys Asp Gin Leu Ser Gly lie Asn Asn lie Ala Phe Ser Asn 565 570 183

Claims (1)

  1. 201201839 七、申請專利範圍： 1.一種抗RSV抗體或其抗原結合片段，其中： 在該抗體或其抗原結合片段存在下，在超過1〇輪或 更多輪病毒複製後，RSV不產生逃避該抗體或其抗原結 合片段之中和的病毒。 2·如申請專利範圍第丨項之抗Rsv抗體或其抗原結合 片段，其中在該抗體或其抗原結合片段存在下，在超過i i、 12、13、14、15、16、17、18、19 或 20 輪病毒複製後，RSV 不產生逃避該抗體或其抗原結合片段之中和的病毒。 3.如申請專利範圍第1項之抗Rsv抗體或其抗原結合 片&，其中在該抗體或其抗原結合片段存在下，在輪病 毒複製後，RSV不產生逃避該抗體或其抗原結合片段之中 和的病毒。 4 ·如申請專利範圍第1至3項中任一項之抗RSV抗體 或抗原結合片段，其特異性結合於分離之RS V ρ蛋白或病 毒粒子中之RSV F蛋白。 5.如申請專利範圍第1至4項中任一項之抗RSV抗體 或其抗原結合片段，其中： 該抗體或抗原結合片段包含： 可變重鏈’其含有包含SEQ ID NO:405所示之胺基 酸殘基序列或與SEQ ID NO:405具有至少80%、90%、 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或更高或至少約 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、 96%、97%、98%、99%或更高的序列一致性之胺基酸序 201201839 列的VH CDRl ;包含SEQ ID NO: 406所示之胺基酸殘基 序列或與SEQ ID NO:406具有至少80%、90%、91%、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高 或至少約 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、 97%、98%、99%或更高的序列一致性之胺基酸序列的VH CDR2 ;及包含SEQ ID NO:407所示之胺基酸殘基序列或 與 SEQ ID NO:407 具有至少 80%、90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高或至少約 80〇/〇、 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、 99%或更高的序列一致性之胺基酸序列的VH CDR3 ;及 可變輕鏈，其含有包含SEQ ID NO: 408所示之胺基 酸序列或與SEQ ID NO:408昇有至少80%、90%、91%、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高 或至少約 80%、90%、91 %、92%、93%、94%、95°/〇、96%、 97%、98%、99%或更高的序列一致性之胺基酸序列的VL CDR1 ;包含SEQ IDNO:409所示之胺基酸序列或與SEQ ID NO:409 具有至少 80%、90%、91%、92%、93%、94%、 95%、96%、97%、98%、99%或更高或至少約 80%、90%、 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97% ' 98%、99% 或更高的序列一致性之胺基酸序列的VL CDR2 ;及包含 SEQ ID NO:410所示之胺基酸序列或與SEQ ID NO:410 具有至少 80%、90%、91 %、92%、93%、94%、95%、96%、 97%、98%、99%或更高或至少約 80%、90%、91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高的序列 201201839 一致性之胺基酸序列的VL CDR3 ;且 該抗體或其抗原結合片段免疫特異性結合於呼吸道 融合性病毒（Respiratory Syncytial Virus，RSV )融合（F ) 蛋白及/或中和RSV。 6. 如申請專利範圍第1至5項中任一項之抗RSV抗體 或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含： 可變重鏈，其含有包含SEQ ID NO:405所示之胺基 酸殘基序列的VH CDR1 ;包含SEQ ID NO: 406所示之胺 基酸殘基序列的VH CDR2 ;及包含SEQ ID NO:407所示 之胺基酸殘基序列的VH CDR3 ;及 可變輕鏈，其含有包含SEQ ID NO: 408所示之胺基 酸序列的VL CDR1 ;包含SEQ ID NO:409所示之胺基酸 序列的VL CDR2 ;及包含SEQ ID NO:410所示之胺基酸 序歹|J的VL CDR3。 7. 如申請專利範圍第1至6項中任一項之抗RSV抗體， 其為全長抗體。 8. 如申請專利範圍第1至7項中任一項之抗RSV抗體， 其為全長IgG抗體。 9. 如申請專利範圍第1至6項中任一項之抗RSV抗體， 其為選自 Fab、Fab'、F(ab')2、單鏈 Fv(scFv)、Fv、dsFv、 雙功能抗體、Fd及Fd’片段之抗原結合片段。 1 〇.如申請專利範圍第1至6項中任一項之抗RSV抗體 或抗原結合片段，其為Fab或scFv。 11.如申請專利範圍第1至10項中任一項之抗RSV抗 201201839 體或抗原結合片段，其包含： VH域，其中該VH域之胺基酸序列如SEQ ID NO:396 之胺基酸1-121所示或與SEQ ID NO:396之胺基酸1-121 所示之胺基酸序列至少80%、81% ' 82%、83%、84%、 85%、86% ' 87%、88% ' 89%、90% ' 91% ' 92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%或 99%或約 80%' 81%、82%、 83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、 92%、93%、94% ' 95%、96%、97%、98%或 99%—致； 及 VL域，其中該VL域之胺基酸序列如SEQ ID NO:395 之胺基酸1-110所示或與SEQ ID NO: 395之胺基酸1-110 所示之胺基酸序列至少 80%、81%、82%、83%、84%、 85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%或 99%或約 80%、81%、82%、 83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、 92%、93%、94%、95%、96% ' 97%、98%或 99%—致。 12. 如申請專利範圍第1至11項中任一項之抗RSV抗 體或抗原結合片段，其包含： VH域，其中該VH域之胺基酸序列如SEQ ID NO:396 之胺基酸1 -121所示；及 VL域，其中該VL域之胺基酸序列如SEQ ID NO:395 之胺基酸1 -11 〇所示。 13. 如申請專利範圍第1至12項中任一項之抗RSV抗 體或抗原結合片段，其包含： 4 201201839 具有SEQ ID NO:396所示之胺基酸序列的重鏈；及 具有SEQ ID NO:395所示之胺基酸序列的輕鏈。 14. 如申請專利範圍第1至13項中任一項之抗RSV抗 體或抗原結合片段，其中該抗體與命名為30D8之抗體特異 性結合於相同的抗原決定基。 15. 如申請專利範圍第9至14項中任一項之抗RSV抗 體或抗原結合片段，其命名為30D8。 1 6. —種抗RSV抗體或其抗原結合片段，其中： 該抗體或抗原結合片段包含： 可變重鏈，其含有包含SEQ ID NO:464所示之胺基 酸殘基序列或與SEQ ID NO:464具有至少80%、90%、 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或更高或至少約 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、 96%、97%、98%、99%或更高的序列一致性之胺基酸序 列的VH CDR1 ;包含SEQ ID NO: 465所示之胺基酸殘基 序列或與SEQ ID NO:465具有至少80%、90%、91%、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高 或至少約 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、 97%、98%、99%或更高的序列一致性之胺基酸序列的VH CDR2 ;及包含SEQ ID NO:466所示之胺基酸殘基序列或 與 SEQ ID NO:466 具有至少 80%、90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高或至少約 80%、 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、 99%或更高的序列一致性之胺基酸序列的VH CDR3 ;及 201201839 可變輕鍵，其含有包含SEQ ID NO: 467所示之胺基 酸序列或與SEQ ID NO:467具有至少80%、90%、91% ' 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高 或至少約 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、 97%、98%、99%或更高的序列一致性之胺基酸序列的VL CDR1 ;包含SEQ ID NO:468所示之胺基酸序列或與SEQ ID NO:468 具有至少 80%、90%、91%、92%、93%、94%、 95%、96%、97%、98%、99%或更高或至少約 80%、90%、 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或更高的序列一致性之胺基酸序列的VL CDR2 ;及包含 SEQ ID NO:469所示之胺基酸序列或與SEQ ID NO:469 具有至少 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、 97%、98%、99%或更高或至少約 80%、90%、91% ' 92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高的序列 一致性之胺基酸序列的VL CDR3 ;且 該抗體或抗原結合片段免疫特異性結合於呼吸道融 合性病毒（RSV)融合（F)蛋白及/或中和RSV。 17.如申請專利範圍第16項之抗RSV抗體或其抗原結 合片段，其中該抗體或抗原結合片段含有： 可變重鏈，其含有包含SEQ ID NO:464所示之胺基 酸殘基序列的VH CDR1 ;包含SEQ ID NO: 465所示之胺 基酸殘基序列的VH CDR2 ;及包含SEQ ID NO:466所示 之胺基酸殘基序列的VH CDR3 ;及 可變輕鏈，其含有包含SEQ ID NO: 467所示之胺基 6 201201839 酸序列的VL CDRl ;包含SEQ ID NO:468所示之胺基酸 序列的VL CDR2 ;及包含SEQ ID NO:469所示之胺基酸 序列的VL CDR3。 18. 如申請專利範圍第16或17項之抗RSV抗體，其為 全長抗體。 19. 如申請專利範圍第16至18項中任一項之抗RSV抗 體，其為全長IgG抗體》 20. 如申請專利範圍第16或17項之抗RSV抗體，其為 選自 Fab、Fab1、F(ab')2、單鏈 Fv ( scFv )、Fv、dsFv、雙 功能抗體、Fd及Fcl·片段之抗原結合片段。 2 1.如申請專利範圍第16或17項之抗RSV抗體或抗原 結合片段，其為Fab或scFv。 22.如申請專利範圍第16至21項中任一項之抗RSV抗 體或抗原結合片段，其包含： VH域，其中該VH域之胺基酸序列如SEQ ID NO:454 之胺基酸1-133所示或與SEQ ID NO:454之胺基酸1-133 所示之胺基酸序列至少80%、81%、82%、83%、84%、 85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%.、93%、 94%、95%、96%、97%、98%或 99%或約 80%、81%、82%、 83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或 99%—致； 及 VL域，其中該VL域之胺基酸序列如SEQ ID NO:455 之胺基酸1-107所示或與SEQ ID NO:455之胺基酸1-107 201201839 所示之胺基酸序列至少 80°/。、81%、82%、83%、84%、 85%、86%、87%、88% ' 89%、90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%' 98%或 99%或約 80%、81%、82%、 83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或 99%—致 ° 23. 如申請專利範圍第16至22項中任一項之抗RSV抗 體或抗原結合片段，其包含： VH域，其中該VH域之胺基酸序列如SEQ ID NO:454 之胺基酸1-133所示；及 VL域，其中該VL域之胺基酸序列如SEQ ID NO:455 之胺基酸1-107所示。 24. 如申請專利範圍第16至23項中任一項之抗RSV抗 體或抗原結合片段，其包含： 具有SEQ ID NO:454所示之胺基酸序列的重鏈；及 具有SEQ ID NO:455所示之胺基酸序列的輕鏈。 25. 如申請專利範圍第16至24項中任一項之抗RSV抗 體或抗原結合片段，其中該抗體與命名為17C9之抗體特異 性結合於相同的抗原決定基。 26. 如申請專利範圍第20至25項中任一項之抗RSV抗 體或抗原結合片段，其命名為17C9。 27. —種抗RSV抗體或其抗原結合片段，其中： 該抗體或抗原結合片段選自包含以下之抗體或抗原 結合片段： a)可變重鏈，其含有包含SEQ ID NO:411所示之胺 8 201201839 基酸殘基序列或與SEQ ID NO:411具有至少80%、90%、 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或更高或至少約 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、 96%、97%、98%、99%或更高的序列一致性之胺基酸序 列的VH CDR1 ;包含SEQ ID NO: 412所示之胺基酸殘基 序列或與SEQ ID NO:412具有至少80%、90%、91%、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高 或至少約 80%、90%、91 %、92%、93%、94%、95%、96%、 97%、98%、99%或更高的序列一致性之胺基酸序列的VH CDR2 ;及包含SEQ ID NO:413所示之胺基酸殘基序列或 與 SEQ ID NO:413 具有至少 80%、90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高或至少約 80%、 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、 99%或更高的序列一致性之胺基酸序列的VH CDR3 ;及 可變輕鏈，其含有包含SEQ ID NO: 414所示之胺基 酸序列或與SEQ ID NO:414具有至少80%、90%、91%、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高 或至少約 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、 97%、98%、99%或更高的序列一致性之胺基酸序列的VL CDR1 ;包含SEQ ID NO:415所示之胺基酸序列或與SEQ ID NO:415 具有至少 80%、90%、91%、92%、93%、94%、 95%、96%、97%、98%、99%或更高或至少約 80%、90%、 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或更高的序列一致性之胺基酸序列的VL CDR2 ;及包含 201201839 SEQ ID NO:416所示之胺基酸序列或與SEQ ID NO:416 具有至少 80%、90%、91 %、92%、93% ' 94%、95%、96%、 97%、98%、99%或更高或至少約 80%、90%、91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高的序列 一致性之胺基酸序列的VL CDR3 ; b)可變重鏈，其含有包含SEQ ID NO:417所示之胺 基酸殘基序列或與SEQ ID ΝΟ··417具有至少80%、90%、 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或更高或至少約 80%、90%' 91%、92%、93%' 94%、95%、 96%、97%、98%、99%或更高的序列一致性之胺基酸序 列的VH CDR1 ;包含SEQ ID NO: 418所示之胺基酸殘基 序列或與 SEQ ID NO:418 具有至少 80%、90%、91°/〇、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高 或至少約 80%、90%、91 %、92%、93%、94%、95%、96% ' 97%、98%、99%或更高的序列一致性之胺基酸序列的VH CDR2 ;及包含SEQ ID NO:419所示之胺基酸殘基序列或 與 SEQ ID NO:419 具有至少 80%、90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高或至少約 80%、 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、 99%或更高的序列一致性之胺基酸序列的VH CDR3 ;及 可變輕鏈，其含有包含SEQ ID NO: 420所示之胺基 酸序列或與SEQ ID NO:420具有至少80%、90%、91%、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高 或至少約 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、 10 201201839 97%、98%、99%或更高的序列一致性之胺基酸序列的VL CDR1 ;包含SEQ ID NO:421所示之胺基酸序列或與SEQ ID NO:421 具有至少 80%、90%、91%、92%、93%、94%、 95%、96%、97%、98%、99%或更高或至少約 80%、90%、 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或更高的序列一致性之胺基酸序列的VL CDR2 ;及包含 SEQ ID NO:422所示之胺基酸序列或與SEQ ID NO:422 具有至少 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、 97%、98%、99%或更高或至少約 80%、90%、91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高的序列 一致:性之胺基酸序列的VL CDR3 ; c)可變重鍵，其含有包含SEQIDNO:423所示之胺 基酸殘基序列或與SEQ ID NO:423具有至少80%、90%、 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或更高或至少約 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、 96%、97%、98%、99%或更高的序列一致性之胺基酸序 列的VH CDR1;包含SEQ ID NO: 424所示之胺基酸殘基 序列或與SEQ ID NO:424具有至少80%、90%、91%、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高 或至少約 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、 97%、98%、99%或更高的序列一致性之胺基酸序列的VH CDR2 ;及包含SEQ ID NO:425所示之胺基酸殘基序列或 與 SEQ ID NO:425 具有至少 80%、90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高或至少約 80%、 S 11 201201839 90%、91%、92% ' 93%、94%、95%、96%、97%、98% ' 99%或更高的序列一致性之胺基酸序列的VH CDR3 ;及 可變輕鏈，其含有包含SEQ ID NO: 426所示之胺基 酸序列或與SEQ ID NO:426具有至少80%、90%、91%、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高 或至少約 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、 97%、98%、99%或更高的序列一致性之胺基酸序列的VL CDR1 ;包含SEQ ID NO:427所示之胺基酸序列或與SEQ ID NO:427 具有至少 80%、90% ' 91%、92%、93%、94%、 95%、96%、97%、98%、99%或更高或至少約 80%、90%、 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或更高的序列 > 致性之胺基酸序列的乂1:0〇112;及包含 SEQ ID NO:428所示之胺基酸序列或與SEQ ID NO:428 具有至少 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96% ' 97%、98%、99% 或更高或至少約 80%、90%、91%、92%、 93% ' 94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高的序歹丨J 一致性之胺基酸序列的VL CDR3 ; d)可變重鏈，其含有包含SEQ ID NO:429所示之胺 基酸殘基序列或與SEQ ID NO:429具有至少80%、90%、 91% ' 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或更高或至少約 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、 96%、97%、98%、99%或更高的序列一致性之胺基酸序 列的VH CDR1 ;包含SEQ ID NO: 430所示之胺基酸殘基 序列或與SEQ ID NO:430具有至少80%、90%、91%、 12 201201839 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高 或至少約 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、 97%、98%、99%或更高的序列一致性之胺基酸序列的VH CDR2 ;及包含SEQ ID NO:431所示之胺基酸殘基序列或 與 SEQ ID NO:431 具有至少 80%、90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高或至少約 80%、 90% ' 91% ' 92% ' 93% ' 94% ' 95% ' 96% ' 97% ' 98% ' 99%或更高的序列一致性之胺基酸序列的VH CDR3 ;及 可變輕鏈，其含有包含SEQ ID NO: 432所示之胺基 酸序列或與SEQ ID NO:432具有至少80%、90%、91%、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高 或至少約 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、 97%、98%、99%或更高的序列一致性之胺基酸序列的VL CDR1 ;包含SEQ ID NO:433所示之胺基酸序列或與SEQ ID NO:433 具有至少 80%、90%、91%、92%、93%、94%、 95%、96%、97%、98%、99%或更高或至少約 80%、90%、 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或更高的序列一致性之胺基酸序列的VL CDR2 ;及包含 SEQ ID NO:434所示之胺基酸序列或與SEQ ID NO:434 具有至少 80%、90%、91 %、92%、93%、94%、95%、96%、 97%、98%、99%或更高或至少約 80%、90%、91%、92%、 93〇/。、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高的序列 一致性之胺基酸序列的VL CDR3 ; e)可變重鏈，其含有包含SEQ ID NO:458所示之胺 13 201201839 基酸殘基序列或與SEQ ID NO:458具有至少80%、90%、 91%、92% ' 93%、94%、95% ' 96%、97% ' 98%、99% 或更高或至少約 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、 96% ' 97%、98%、99%或更高的序列一致性之胺基酸序 列的VH CDR1 ;包含SEQ ID NO: 459所示之胺基酸殘基 序列或與 SEQ ID ΝΟ··459 具有至少 80%、90°/。、91%、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高 或至少約 80%、90% ' 91% ' 92% ' 93%、94% ' 95% ' 96%、 97%、98%、99%或更高的序列一致性之胺基酸序列的VH CDR2 ;及包含SEQ ID ΝΟ:460所示之胺基酸殘基序列或 與 SEQ ID ΝΟ:460 具有至少 80%、90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%、99%或‘更高或至少約 80%、 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、 99%或更高的序列一致性之胺基酸序列的VH CDR3 ;及 可變輕鏈，其含有包含SEQ ID NO: 461所示之胺基 酸序列或與SEQ ID NO:461具有至少80%、90%、91%、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高 或至少約 80%、90%、91%' 92%、93%、94%、95%、96%、 97%、98%、99%或更高的序列一致性之胺基酸序列的VL CDR1 ;包含SEQ ID NO:462所示之胺基酸序列或與SEQ ID NO:462 具有至少 80%、90%、91%、92%、93%、94%、 95%、96%、97%、98%、99%或更高或至少約 80%、90%、 91%、92%、93% ' 94%、95%、96%、97%、98% ' 99% 或更高的序列一致性之胺基酸序列的VL CDR2 ;及包含 14 201201839 SEQ ID NO:463所示之胺基酸序列或與SEQ ID NO:463 具有至少 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、 97%、98%、99%或更高或至少約 80%、90%、91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高的序列 一致性之胺基酸序列的VL CDR3 ;及 f)可變重鏈，其含有包含SEQ ID NO:470所示之胺 基酸殘基序列或與SEQ ID NO:470具有至少80%、90%、 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或更高或至少約 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、 96%、97%、98%、99%或更高的序列一致性之胺基酸序 列的VH CDR1 ;包含SEQ ID NO: 471所示之胺基酸殘基 序列或與SEQ ID NO:471具有至少80%、90%、91%、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高 或至少約 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、 97%、98%、99%或更高的序列一致性之胺基酸序列的VH CDR2 ;及包含SEQ ID NO:472所示之胺基酸殘基序列或 與 SEQ ID NO:472 具有至少 80%、90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高或至少約 80%、 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、 99%或更高的序列一致性之胺基酸序列的VH CDR3 ;及 可變輕鏈，其含有包含SEQ ID NO: 473所示之胺基 酸序列或與SEQ ID NO:473具有至少80%、90%、91%、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高 或至少約 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、 15 201201839 97%、98%、99%或更高的序列一致性之胺基酸序列的VL CDR1 ;包含SEQ ID NO:474所示之胺基酸序列或與SEQ ID NO:474 具有至少 80%、90%、91%、92%、93%、94%、 95%、96%、97%、98%、99%或更高或至少約 80%、90%、 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或更高的序列一致性之胺基酸序列的VL CDR2 ;及包含 SEQ ID NO:475所示之胺基酸序列或與SEQ ID NO:475 具有至少 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、 97%、98%、99%或更高或至少約 80%、90%、91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高的序列 一致性之胺基酸序列的VL CDR3 ;且 該抗體或抗原結合片段免疫特異性‘結合於呼吸道融 合性病毒（RSV)融合（F)蛋白及/或中和RSV。 28.如申請專利範圍第27項之抗RSV抗體或其抗原結 合片段，其中該抗體或抗原結合片段選自包含以下之抗體 或抗原結合片段： a)可變重鏈，其含有包含SEQ ID NO:411所示之胺 基酸殘基序列的VH CDR1 ;包含SEQ ID NO: 412所示之 胺基酸緣基序列的VH CDR2 ;及包含SEQ ID NO:413所 示之胺基酸殘基序列的VH CDR3 ;及 可變輕鏈，其含有包含SEQ ID NO: 414所示之胺基 酸序列的VL CDR1 ;包含SEQ ID NO:415所示之胺基酸 序列的VL CDR2 ;及包含SEQ ID NO:416所示之胺基酸 序列的VL CDR3 ; 16 201201839 b) 可變重鏈，其含有包含SEQ ID NO :417所示之胺 基酸殘基序列的VH CDR1 ;包含SEQ ID NO: 418所示之 胺基酸殘基序列的VH CDR2 ;及包含SEQ ID NO:419所 示之胺基酸殘基序列的VH CDR3 ;及 可變輕鏈，其含有包含SEQ ID NO: 420所示之胺基 酸序列的VL CDR1 ;包含SEQ ID NO:421所示之胺基酸 序列的VL CDR2 ;及包含SEQ ID NO:422所示之.胺基酸 序列的VL CDR3 ; c) 可變重鏈，其含有包含SEQ ID NO:423所示之胺 基酸殘基序列的YH CDR1 ;包含SEQ ID NO: 424所示之 胺基酸殘基序列的VH CDR2 ;及包含SEQ ID NO:425所 示之胺基酸殘基序列的VH CDR3 ;及 可變輕鏈，其含有包含SEQ ID NO: 426所示之胺基 酸序列的VL CDR1 ;包含SEQ ID NO:427所示之胺基酸 序列的VL CDR2 ;及包含SEQ ID NO:428所示之胺基酸 序列的VL CDR3 ; d) 可變重鏈，其含有包含SEQ ID NO:429所示之胺 基酸殘基序列的VH CDR1 ;包含SEQ ID NO: 430所示之 胺基酸殘基序列的VH CDR2 ;及包含SEQ ID NO :431所 示之胺基酸殘基序列的VH CDR3 ;及 可變輕鏈，其含有包含SEQ ID NO: 432所示之胺基 酸序列的VL CDR1 ;包含SEQ ID NO:433所示之胺基酸 序列的VL CDR2 ;及包含SEQ ID NO:434所示之胺基酸 序列的VL CDR3 ; 17 201201839 e) 可變重鏈，其含有包含SEQ ID NO:458所示之胺 基酸殘基序列的VH CDR1 ;包含SEQ ID NO: 459所示之 胺基酸殘基序列的VH CDR2 ;及包含SEQ ID NO :460所 示之胺基酸殘基序列的VH CDR3 ;及 可變輕鏈，其含有包含SEQ ID NO: 461所示之胺基 酸序列的VL CDR1 ;包含SEQ ID NO:462所示之胺基酸 序列的VL CDR2 ;及包含SEQ ID NO:463所示之胺基酸 序列的VL CDR3 ;及 f) 可變重鏈，其含有包含SEQ ID NO:470所示之胺 基酸殘基序列的VH CDR1;包含SEQ ID NO: 471所示之 胺基酸殘基序列的VH CDR2 ;及包含SEQ ID NO:472所 示之胺基酸殘基序列的VH CDR3 ;及 可變輕鏈，其含有包含SEQ ID NO: 473所示之胺基 酸序列的VL CDR1 ;包含SEQ ID NO:474所示之胺基酸 序列的VL CDR2 ;及包含SEQ ID NO:475所示之胺基酸 序列的VL CDR3。 29. 如申請專利範圍第27或28項之抗RSV抗體’其為 全長抗體。 30. 如申請專利範圍第27至29項中任一項之抗RSV抗 體，其為全長IgG抗體。 31. 如申請專利範圍第27或28項之抗RSV抗體’其為 選自 Fab、Fab，、F(ab')2、單鏈 Fv ( scFv)、Fv、dsFv、雙 功能抗體、Fd及Fd'片段之抗原結合片段。 32. 如申請專利範圍第31項之抗RSV抗體’其為Fab 18 201201839 或 scFv。 33.如申請專利範圍第27至32項中任一項之抗RSV抗 體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段選自包含 以下之抗體或抗原結合片段： a) VH域，其中該VH域之胺基酸序列如SEQ ID NO:398之胺基酸1-125所示或與SEQ ID NO:398之胺基 酸1 -125所示之胺基酸序列至少80%、8 1 %、82%、83%、 84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%或 99%或約 80%、81%、 82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或 99% 一致；及 VL域，其中該VL域之胺基酸序列如SEQ ID NO:397 之胺基酸1-107所示或與SEQ ID NO:397之胺基酸1-107 所示之胺基酸序列至少80%、81%、82%、83%、84%、 85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%或 99%或約 80%、81%、82%、 83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或 99%—致； b) VH域，其中該VH域之胺基酸序列如SEQ ID NO:400之胺基酸1-124所示或與SEQ ID NO:400之胺基 酸1-124所示之胺基酸序列至少80%、81%、82%、83%、 84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%或 99%或約 80%、81%、 19 201201839 82%、83%、84%、85%、86% ' 87% ' 88%、89% ' 90% ' 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或 99% 一致；及 VL域，其中該VL域之胺基酸序列如SEQ ID NO:399 之胺基酸1-108所示或與SEQ ID NO:399之胺基酸1-108 所示之胺基酸序列至少80%、81%、82%、83%、84%、 85% ' 86% ' 87% ' 88% ' 89% ' 90% ' 91% > 92% ' 93% > 94%、95%、96%、97%、98%或 99%或約 80%、81%、82% ' 83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或 99%—致； c) VH域，其中該VH域之胺基酸序列如SEQ ID NO: 402之胺基酸1-125所示或與SEQ ID NO :402之胺基 酸1-125所示之胺基酸序列至少80%、81%、82%、83%、 84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%或 99%或約 80%、81%、 82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89% ' 90%、 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或 99% 一致；及 VL域，其中該VL域之胺基酸序列如SEQ ID NO:401 之胺基酸1-113所示或與SEQ ID NO:401之胺基酸1-113 所示之胺基酸序列至少80%、81%、82% ' 83%、84%、 85%、86% ' 87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%或 99%或約 80%、81%、82%、 83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、 20 201201839 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或 99%—致； d) VH域，其中該VH域之胺基酸序列如SEQ ID NO:404之胺基酸1-123所示或與SEQ ID NO:404之胺基 酸1-123所示之胺基酸序列至少80%、81%、82%、83%、 84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%或 99%或約 80%、81%、 82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或 99% 一致；及 VL域，其中該VL域之胺基酸序列如SEQ ID NO:403 之胺基酸卜所示或與SEQ ID NO:403之胺基酸1-107 所示之胺基酸序列至少8〇Q/。、81%、82%、83%、84%、 85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93% ' 94%、95%、96%、97%、98%或 99%或約 80%、81%、82%、 83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或 99%—致； e) VH域，其中該VH域之胺基酸序列如SEQ ID NO:452之胺基酸1-124所示或與SEQIDNO:452之胺基 酸1 -124所示之胺基酸序列至少80%、81 %、82%、83%、 84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、 9 3 %、9 4 %、9 5 %、9 6 %、9 7 %、9 8 % 或 9 9 % 或約 8 0 %、8 1 %、 82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97。/〇、98%或 99% 一致；及 21 I!：： 201201839 VL域，其中該VL域之胺基酸序列如SEQ ID NO:453 之胺基酸1-111所示或與SEQIDNO:453之胺基酸1-111 所示之胺基酸序列至少80%、81%、82%、83%、84%、 85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98% 或 99% 或約 80%、8 1 %、82%、 83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或 99%—致； 及 f) VH域，其中該VH域之胺基酸序列如SEQ ID NO:456之胺基酸1-118所示或與SEQ ID NO:456之胺基 酸1 -11 8所示之胺基酸序列至少8 0 %、8 1 %、8 2 %、8 3 %、 84%、8-5%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%'98%或 99%或約 80%、81%、 82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97% ' 98%或 99% 一致；及 VL域，其中該VL域之胺基酸序列如SEQ ID NO:457 之胺基酸1-109所示或與SEQ ID NO:45 7之胺基酸1-109 所示之胺基酸序列至少80%、81%、82%、83%、84%、 85%、86% ' 87%、88%、89%、90% ' 91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%或 99%或約 80%、81%、82%、 83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或 99%—致 ° 34.如申請專利範圍第27至33項中任一項之抗RSV抗 22 201201839 體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段選自包含 以下之抗體或抗原結合片段： a) VH域，其中該VH域之胺基酸序列如SEQ ID NO:398之胺基酸1-125所示；及 VL域，其中該VL域之胺基酸序列如SEQ ID NO:397 之胺基酸1-107所示； b) VH域，其中該VH域之胺基酸序列如SEQ ID N0:400之胺基酸1-124所示；及 VL域，其中該VL域之胺基酸序列如SEQ ID NO:399 之胺基酸1-108所示； c) VH域，其中該VH域之胺基酸序列如SEQ ID NO:402之胺基酸1-125所示；及 VL域，其中該VL域之胺基酸序列如SEQ ID NO:401 之胺基酸1 -11 3所示； d) VH域，其中該VH域之胺基酸序列如SEQ ID NO:404之胺基酸1-123所示；及 VL域，其中該VL域之胺基酸序列如SEQ ID NO:403 之胺基酸1-107所示； e) VH域，其中該VH域之胺基酸序列如SEQ ID NO:452之胺基酸1-124所示；及 VL域，其中該VL域之胺基酸序列如SEQ ID NO:453 之胺基酸1 -111所示；及 f) VH域，其中該VH域之胺基酸序列如SEQ ID NO:456之胺基酸1-118所示；及 23 201201839 VL域，其中該VL域之胺基酸序列如SEQ ID NO:457 之胺基酸1-109所示。 35.如申請專利範圍第27至34項中任一項之抗RSV抗 體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段選自包含 以下之抗體或抗原結合片段： a) 包含SEQ ID NO:398所示之胺基酸序列的重鏈； 及 包含SEQ ID NO:397之胺基酸1-107所示之胺基酸 序列的輕鏈； b) 包含SEQ ID NO:400所示之胺基酸序列的重鏈； 及 包含SEQ ID ΝΟ:·399所示之胺基酸序列的輕鏈'； c) 包含SEQ ID ΝΟ:402所示之胺基酸序列的重鏈； 及 包含SEQ ID ΝΟ:401所示之胺基酸序列的輕鏈； d) 包含SEQIDNO:404所示之胺基酸序列的重鏈； 及 包含SEQ ID NO:403所示之胺基酸序列的輕鏈； e) 包含SEQIDNO:452所示之胺基酸序列的重鏈； 及 包含SEQ ID NO:453所示之胺基酸序列的輕鏈；及 f) 包含SEQ ID NO:456所示之胺基酸序列的重鏈； 及 包含SEQ ID NO:457所示之胺基酸序列的輕鏈。 24 201201839 36. 如申請專利範圍第27至35項中任一項之抗RSV抗 體或抗原結合片段，其中該抗體與命名為l〇4E5、38F1〇、 1403、90D3、5 6E11或69F6之抗體特異性結合於相同的人 類RSV F蛋白上之抗原決定基。 37. 如申請專利範圍第31至35項中任一項之抗RSV抗 體或抗原結合片段’其命名為1〇4E5、38F1〇、14G3、9〇D3、 56E11 或 69F6。 38·如申請專利範圍第1至37項中任一項之抗體或抗原 結合片段’其中該抗體或抗原結合片段在試管内空斑減少 檢疋中中和RSV之ECso為小於2 nM或對於分離之RSV F 蛋白或對於RSV病毒之親和力為至少1〇8 Μ-ι。 39. 如申請專利範圍第1至38項中任一項之抗體或抗原 結合片段’其中該抗體或抗原結合片段在試管内空斑減少 檢疋中中和RSV之EC50為小於2 nM或約2 nM至小於0.005 nM或約0.005 nM ;小於1 nM或約1 nM至小於0.005 nM 或約0.005 nM ;小於〇·5 nM或約〇·5 nM至小於0.005 nM 或約0.005 ηΜ ;小於1 ηΜ或約1 ηΜ至小於o.oi η]ν[或約 〇’〇1 nM ;小於1 ιιΜ或約1 nM至小於〇·〇5 nM或約0.05 nM，或小於〇·5 nM或約0.5 nM至小於〇 〇5 nM或約〇 〇5 ηΜ。 40. —種抗體或其抗原結合片段，其包含可變重（乂只） 鏈及可變輕（VL )鏈，其中該抗體或抗原結合片段與如申 請專利範圍第1至39項中任一項之抗體或抗原結合片段免 疫特異性結合於相同的人類RSV F蛋白或rSv病毒粒子上 25 201201839 之抗原決定基。 41 ·如申請專利範圍第1至4〇項中任一項之抗體或抗原 結合片段’其中該抗體或抗原結合片段免疫特異性結合於 RSV F蛋白中包含sEq id NO:25所示之胺基序列的一部 分。 42. 如申請專利範圍第1至41項中任一項之抗體或抗原 結合片段，其中和RSV。 43. 如申請專利範圍第1至42項中任一項之抗體或抗原 結合片段，其中和RSV亞型A及B。 44·如申請專利範圍第i至43項中任一項之抗體或抗原 結合片段，其為嵌合抗體。 45. —種多價抗體，其包含：， 第抗原結合部分，其包含如申請專利範圍第1至 44項中任一項之抗體或抗原結合片段或與多聚化域結合 之其抗原結合片段；及 第二抗原結合部分’其包含與第二多聚化域結合之 抗病毒抗體之抗原結合片段，其中： 該第-多聚化域與該第二多聚化域為互補或相同 的，藉此該第-抗原結合部分與第二抗原結合部分形成 多價抗體。 46·如申請專利範圍第45項之多價抗體，其中該第二抗 原結合部分包含抗RSV抗體或其抗原結合片段。 47·如申請專利範以45或46項之多^體，其中該 抗RSV抗體或抗原結合片段為如申請專利範圍第^至牝項 26 201201839 中任~~項之抗體或抗原結合片段。 48.如申請專利範圍第45至47項中任一項之多價抗 體，其中該抗病毒抗體為選自以下之抗RSV抗體或抗原結 合片段：帕利珠單抗（palivizumab )、莫維珠單抗 (motavizumab )、AFFF、P12f2、P12f4、Plld4、Ale9、A12a6、 A13c4、A17d4、A4B4、A8c7、1X-493L卜 FR H3-3F4、M3H9、 Y10H6、DG、AFFF(l)、6H8、L1-7E5、L2-15B10、A13al 1、 Alh5、A4B4(1)、A4B4L1FR-S28R、A4B4-F52S、rsv6、rsvU、 rsvl3、rsvl9、rsv21、rsv22、rsv23、RF-1、RF-2 及其抗原 結合片段。 49·如申請專利範圍第45項之多價抗體，其中該第二抗 原結合部分包含免疫特異性結合副流行性感冒病毒 (parainfluenZa Virus，PIV )或人類偏肺病毒（human metapneUm〇Virus ’ hMPV )之抗原的抗病毒抗體之抗原結合 片段。 50. —種組合，其包含： 如申請專利範圍第丄至44項中任一項之抗體或抗原 結合片段；及 抗病毒劑。 51_如申請專利範圍第50項之組合，其中該抗病毒劑為 病毒唑（ribavirin )。 52. 如申請專利筋園篦π 乾圍弟50項之組合，其中該抗病毒劑為 與該第一抗體不同之另一抗病毒抗體。 53. 如申請專利麵^之組合，其包含兩種或更多 27 201201839 種選自如申請專利範圍第1至44項中任一項之抗體或抗原 結合片段的不同抗RSV抗體或其抗原結合片段。 5 4.如申請專利範圍第5 2項之組合，其中該另一抗病毒 抗體選自帕利珠單抗、莫維珠單抗、AFFF、P1 2f2、P 1 2f4、 Plld4、Ale9、A12a6、A13c4、A17d4、A4B4、A8c7、 1X-493L1、FR H3-3F4、M3H9、Y10H6、DG、AFFF(l)、6H8、 L1-7E5、L2-15B10、A13all、Alh5、A4B4(1)、 A4B4L1FR-S28R、A4B4-F52S、rsv6、rsvl 1、rsvl3、rsvl9、 rsv21、rsv22、rsv23、RF-1、RF-2 及其抗原結合片段。 55.如申請專利範圍第52項之組合，其中該另一抗病毒 抗體選自免疫特異性結合副流行佚感冒病毒（PIV )或人類 偏肺病毒（hMPV.)<之抗原的抗體，或抗原結合片段^ . 56_ —種醫藥組成物，其包含： 如申請專利範圍第1至44項中任一項之抗體或抗原 結合片段、如申請專利範圍第45至49項中任一項之多 價抗體或如申請專利範圍第50至55項中任一項之組 合，及 醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。 5 7 ·如申凊專利範圍第5 6項之醫藥組成物，其經調配成 凝膠、軟膏、液體、懸浮液、氣溶膠、錠劑、丸劑或散劑。 5 8.如申吻專利範圍第5 6項之醫藥組成物，其經調配成 鼻用喷霧。 59.如申請專利範圍第56至58項中任—項之醫藥組成 物其經調配用於經肺、鼻内或非經腸投藥。 28 201201839 60. 如申請專利_ 5…9項中任_項之醫藥組成 物，其經調配用於單次劑量投藥。 61. 如申請專利範圍第56至60項中 κ ,丄 $ Τ任一項之醫藥組成 物’其為持續釋放調配物》 62. -種治療個體病毒感染之方法，其包含向該個體投 予治療有效量之如中請㈣範圍第56至61項中任 醫藥組成物。 染之一或多種症狀的方 量之如申請專利範圍第 去’其包含向該個體投 56至61項中任—項之 63 · —種治療或抑制個體病毒感 法，其包含向該個體投予治療有效 56至61項中任一項之醫藥組成物 64·—種預防個體病毒感染之方 予防治有效量之如申請專利範圍第 醫藥組成物。 〒洧寻利 T該病毒感染為RS V感染。 66.如申請專利範圍第65項之方法，其 D及道感染。 汉木為上呼 67.如申請專利範圍帛62至66項中任_ 中該個體為哺乳動物。 法’八 如申請專利範圍第62至67項中任 中該個體為人類。 法’其 69.如申請專利範圍第68項之方法，盆 人_ i ό m η。 Υ °亥人類個體為 兒、因RSV感染而早產或處於住院風 s? s Jkt, M 人類嬰 老年人、患有囊腫性纖維化、支氣管肺發育不良、先 29 201201839 天性心臟病、先天性免疫缺乏、後天性免疫缺乏、白灰病 或非霍奇金淋巴瘤（non_H〇dgkin lymphoma )之人類個體、 或經歷器官或組織移植或輸血之人類個體。 70. 如申請專利範圍第69項之方法，其中該移植為骨髓 移植或肝臟移植。 71. 如申請專利範圍第62至70項中任一項之方法，其 中该醫藥組成物區域性（t〇pically )、非經腸、局部或全身 投予。 72. 如申請專利範圍第62至71項中任一項之方法其 中該醫藥組成物經鼻内、肌肉内、皮内、腹膜内'靜脈内： 皮下、經口或藉由經肺投藥來投予。 73. 如申請專利範圍帛62至72項中任—項之方法盆 中該組成物由霧化器或吸入器來投予。 /、 74. 如申請專利範圍第62至73項中任—項之方法盆 中該組成物在RSV季節期間投予一次、 _ / 其 或五次。 -人、二次、四次 75·如申請專利範圍第62至74項中任— 中該組成物在RSV季節之前在一個 ，其 投予一次、兩次 月兩個月或三個月内 仅丁 人网人一-人' 四次或五次。 76. 如申請專利範圍第62至75項中 進一步包含投予一或多種抗病毒劑。 方法，其 77. 如申請專利範圍第％項之方 病毒唑。 卉中s亥抗病毒劑為 7-»“__“2至76項中任—項之方法其 30 201201839 進一步包含投予一或多種其他抗病毒抗體或其抗原結合片 段。 79. 如申請專利範圍第78項之方法，其中該一或多種其 他抗病毒抗體選自抗Rsv抗體或其抗原結合片段。 80. 如申請專利範圍第79項之方法，其中該一或多種其 他抗RSV抗體選自帕利珠單抗、莫維珠單抗、afff、pi2f2、 P12f4' Plld4、Ale9、Al2a6、A13c4、A17d4、A4B4、A8c7、 1X-493L 卜 FRH3-3F4、M3H9、Y10H6、DG、AFFF(l)、6H8、 L1-7E5、L2-15B10、A13all、Alh5、A4B4⑴、 A4B4L1FR-S2 8R、A4B4-F52S、rsv6、rsvl 1、rsvl3、rsvl9、 rsv21、rsv22、rSV23、rim、RF-2 及其抗原結合片段。 81. 如申請專利範圍第78項之方法，其中該一或多種其 他抗病毒抗體選自免疫特異性結合副流行性感冒病毒 (piv)或人類偏肺病毒（hMpv)之抗原的抗體或抗原結合 片段。 82. 如申請專利範圍第76至81項中任一項之方法，其 中該醫藥組成物及該抗病毒劑經調配成單一組成物或各別 組成物。 83. 如申請專利範圍第76至82項中任一項之方法，其 中該醫藥組成物與該抗病毒劑依序、同時或間歇投予。 84. 如申請專利範圍第62至83項中任一項之方法，其 進一步包含投予激素療法、免疫療法或消炎劑。 8 5. —種如申請專利範圍第5 6至61項中任一項之醫藥 組成物的用途，其用於調配供治療病毒感染、治療或抑制 31 201201839 病毒感染之一或多種症狀或預防病毒感染之醫藥品。 86. —種用於治療病毒感染、治療或抑制病毒感染之— 或多種症狀或預防病毒感染的如申請專利範圍第56至61 項中任一項之醫藥組成物。 87. 如申請專利範圍第85或86項之用途或醫藥組成 物，其中該病毒感染為RSV感染。 88. 如申請專利範圍第87項之用途或醫藥組成物，其為 上呼吸道感染。 89. —種偵測RSV感染之方法，其包含： (a )使用如申請專利範圍第1至44項中任一項之抗 體或抗原結合片段檢定流體、細胞或組織樣品中r S V抗 原之含量·; .... (b )比較該所檢定之rsv抗原含量與對照含量，藉 此與該RSV抗原之對照含量相比該所檢定之rSV抗原含 量的增加指示RSV感染。 90· —種包含如申請專利範圍第1至44項中任一項之抗 體或抗原結合片段的醫藥組成物之用途，其用於調配供偵 測RSV感染之醫藥品。 91.一種包含如申請專利範圍第1至44項中任一項之抗 體或抗原結合片段的醫藥組成物，其用於偵測RSV感染。 92· —種分離之核酸，其編碼如申請專利範圍第！至44 項中任一項之抗體或抗原結合片段。 93. —種分離之核酸，其編碼如申請專利範圍第1至 項中任一項之抗體的重鏈。 32 201201839 94·一種分離之核酸，其蝙喝如申& 如Τ兩專利範圍第1至44 項中任一項之抗體的輕鏈。 95. —種載體，其包含如申枝亩心# r明專利乾圍第92至94項中 任一項之核酸《» 96. —種載體，其包含編碼如· ^如申睛專利範圍第1至44項 中任一項之抗體或抗原結合片段的核酸。 、 97· 一種分離之細胞，其包含如令請專利範圍第4 44 項中任-項之抗體或抗原結合片段、如巾請專利範圍第Μ 至94項中任-項之核酸或如申請專利範圍第％或％項之 载體。 98.如申請專利範圍第97項之細胞，其中該細胞為原核 或真核細胞。 種套组’其包含於一或多個容器中之如申請專利 範圍第1至44項中任_項之抗體或抗原結合片段、如申請 專範圍第45至49項中任—項之多價抗體或如中請專利 範圍第50至55項中任-項之組合、及使用說明書。 八、圖式： (無） 33
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