RS60680B1

RS60680B1 - Piperidin-4-il azetidin derivati kao inhibitori jak1

Info

Publication number: RS60680B1
Application number: RS20200725A
Authority: RS
Inventors: Taisheng Huang; Chu-Biao Xue; Anlai Wang; Ling Kong; Hai Fen Ye; Wenqing Yao; James D Rodgers; Stacey Shepard; Haisheng Wang; Lixin Shao; Hui-Yin Li; Qun Li
Original assignee: Incyte Holdings Corp
Priority date: 2010-03-10
Filing date: 2011-03-09
Publication date: 2020-09-30
Also published as: TWI531572B; KR20220015492A; EA030376B1; EP3050882A1; KR101911697B1; TWI766281B; PL3354652T3; TWI643857B; KR20180117206A; SI2545045T1; EP4036088A1; EP2545045B1; US10695337B2; DK3050882T3; KR102354472B1; US9999619B2; CR20120510A; JP2013522214A; ES2908412T3; ES2796377T3

Description

Opis

TEHNIČKA OBLAST

[0001] Prikazani pronalazak obezbeđuje jedinjenje, koje je {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril, ili njegovu farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju bolesti u vezi sa JAK.

STANJE TEHNIKE

[0002] Proteinske kinaze (PKs) regulišu raznovrsne biološke procese koju obuhvataju između ostalih, ćelijski rast, preživljavanje, diferencijaciju, obrazovanje organa, morfogenezu, neovaskularizaciju, obnavljanje tkiva i regeneraciju. Proteinske kinaze takođe imaju specijalizovane uloge kod bolesti humanog domaćina uključujući kancer. Citokini, polipeptidi ili glikoproteini niske molekulske mase, regulišu mnogo puteva koji su uključeni u inflamatorni odgovor domaćina na sepsu. Citokini utiču na ćelijsku diferencijaciju, proliferaciju i aktivaciju, i mogu modulisati i proinflamatorne i antiinflamatorne odgovore da bi se dozvolilo domaćinu da reaguje adekvatno na patogene. Signalizacija širokog opsega citokina obuhvata familiju janus-kinaza (Janus kinase family-JAKs) proteinskih tirozinskih kinaza i transduktore signala i aktivatore transkripcije (Signal Transducers and Activators of Transcription STATs). Postoje četiri poznate JAKs sisara: JAK1 (Janus-kinaza-1), JAK2, JAK3 (takođe poznata kao Janus kinaza, leukocita; JAKL; i L-JAK), i TYK2 (protein-tirozin-kinaza 2).

[0003] Imuni i inflamatorni odgovori stimulisani citokinima doprinose patogenezi bolesti: patologije kao što su ozbiljna kombinovana imunodeficijencija (severe combined immunodeficiency-SCID) koja proističe iz supresije imunog sistema, dok hiperaktivnost ili neodgovarajući imuno/inflamatorni odgovori doprinose patologiji autoimunih bolesti (npr., astma, sistemski eritemski lupus, tiroiditis, miokarditis), i bolesti kao što su skleroderma i osteoartritis (Ortmann, R. A., T. Cheng, et al. (2000) Arthritis Res 2(1): 16-32).

[0004] Deficijencije u ekspresiji JAKs su vezane za mnogo bolesnih stanja. Na primer, Jak1-/-miševi su kržljavi pri rođenju, ne sisaju, i umiru perinatalno (Rodig, S. J., M. A. Meraz, et al. (1998) Cell 93(3): 373-83). Jak2-/mišiji embrioni su anemični i umiru oko 12.5 postkoitusnog dana usled nedostatka definisane eritropoieze.

[0005] JAK/STAT put, i naročito sva četiri JAKs, se veruje da igraju ulogu u patogenezi astmatičnog odgovora, hroničnoj opstruktivnoj bolesti pluća, bronhitisu i drugim vezanim inflamatornim bolestima nižeg respiratornog trakta. Višestruki citokini koji signaliziraju preko JAKs su vezani za inflamatorne bolesti/stanja gornjeg respiratornog trakta, kao što su one koje napadaju nos i sinuse (npr., rinitis i sinuzits) bilo klasične alergijske reakcije ili ne. JAK/STAT put je takođe uključen u inflamatorne bolesti /stanja oka i hroničnih alergijskih odgovora.

[0006] Aktivacija JAK/STAT kod kancera može se javiti stimulacijom citokina (npr. IL-6 ili GM-CSF) ili redukcijom endogenskih supresora JAK signalizacije kao što je SOCS (signalizacija supresora ili citokina) ili PIAS (proteinski inhibitor aktivniranog STAT) (Boudny, V., and Kovarik, J., Neoplasm. 49:349-355, 2002). Aktivacija STAT signalizacije, kao i drugih puteva nishodno od JAKs (e.g., Akt), je u korelaciji sa slabom prognozom kod mnogih tipova kancera (Bowman, T., et al. Oncogene 19:2474-2488, 2000). Povišeni nivoi citokina u krvotoku koji signaliziraju preko JAK/STAT igraju uzročnu ulogu u kaheksija i/ili hroničnom umoru. Kao takva, JAK inhibicija može biti od koristi za pacijente koji pate od kancera ulsed razloga koji se protežu duž potencijalne antitumorne aktivnosti.

[0007] JAK2 tirozin kinaze mogu biti od koristi za pacijente sa mijeloproliferativnim poremećajima, npr., policitemija vera (PV), esencijalna trombocitemija (ET), mijeloidna metaplazija sa mijelofibrozom (MMM) (Levin, et al., Cancer Cell, vol. 7, 2005: 387-397). Inhibicija JAK2V617F kinaze smanjuje proliferaciju hematopoietskih ćelija, što sugeriše JAK2 kao potencijalnu metu za farmakološku inhibiciju kod pacijenata sa PV, ET, i MMM.

[0008] Inhibicija JAKs može biti od koristi pacijentima koji pate od imunih poremećaja kože kao što je psorijaza i osetljivost kože. Održavanje psorijaze se veruje da zavisi od brojnih inflamatornih citokina pored različitih hemokina i faktora rasta (JCI, 113:1664-1675), od kojih mnogi signaliziraju preko JAKs (Adv Pharmacol.2000;47:113-74).

[0009] US 2009/233903 opisuje azetidin i ciklobutanske derivate korisne u lečenju bolesti u vezi sa JAK, WO 2007/117494 opisuje deazapurine korisne kao inhibitore Janus-kinaza, WO2007/070514 opisuje heteroarilne supstituisane pirolo[2,3-b]piridine (I) i heteroarilne susptitusiane pirolo[2,3-b]pirimidine korisne u lečenju bolesti u vezi sa Janus-kinazom, i WO2010/039939 (objavljen April 8, 2010) opisuje kompozicije za lečenje poremećaja suvog oka i drugih bolesti očiju koji koriste JAK inhibitor.

[0010] Prema tome, nova ili poboljšana sredstava koji inhibiraju kinaze kao što su JAKs su kontinualno potrebna za razvijanje novih i efikasnijih farmaceutskih preparata koji su usmereni na povećanje ili supresiju imunih i inflamatornih puteva (kao što su imunosupresivna sredstva za transplantacije organa), kao i sredstva za prevenciju i lečenje autoimunih bolesti, bolesti koje uključuju hiperaktivan inflamatorni odgovor (npr., ekcem), alergije, kancer (npr., prostate, leukemiju, multipli mijelom), i neke imune reakcije (npr., osip kože ili kontaktni dermatitis ili diareja) izazvane drugim terapeuticima. Ovde opisana jedinjenja, kao i kompozicije i ovde opisani postupci se odnose na ove potrebe i druge ciljeve.

SUŠTINA PRONALASKA

[0011] Prikazani pronalazak obezbeđuje, inter alia, jedinjenje, koje je {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril, ili njegovu farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju bolesti u vezi sa JAK izabranih između ulceroznog kolitisa, hronične opstruktivne bolesti pluća (COPD), pemfigus vulgarisa, astme, sistemskog eritemskog lupusa, skleroderme, ankilozirajućeg spondilitisa, akutne limfoblastne leukemije (ALL), akutne mijelogenozne leukemije (AML), limfoma kožnih T-ćelija (CTCL), fungoidne mikoze, kancera debelog creva, kolorektalnog kancera, post-esencijalne trobocitemije mijelofibroze (Post-ET MF), post-policitemije vera mijelofibroze (Post-PV MF), akneoformog osipa, sarkoidoze, rinitisa, sinuzitisa, blefaritisa, konjuktivitisa, uveitisa, skleritisa, iritisa, kaheksije, sindroma sistemskog inflamatornog odgovora (SIRS), i septičkog šoka.

[0012] Detalji jednog ili više izvođenja pronalaska su dati u priloženim slikama nacrta i donjem opisu. Druge karakteristike, ciljevi i prednosti pronalaska će biti očigledne iz opisa i slika nacrta i iz patentnih zahteva.

KRATAK OPIS SLIKA

[0013]

Sl.1 prikazuje DSC termogram proizvoda iz primera 358.

Sl.2 prikazuje TGA termogram proizvoda iz primera 358.

Sl.3 prikazuje XRPD uzorak proizvoda iz primera 358.

DETALJNI OPIS PRONALASKA

[0014] Prikazani pronalazak obezbeđuje, inter alia, jedinjenje koje je {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u lečenju bolesti u vezi sa JAK izabrane između ulceroznog kolitisa, hronične opstruktivne bolesti pluća (COPD), pemfigus vulgarisa, astme, sistemskog eritemskog lupusa, skleroderme, ankilozirajućeg spondilitisa, akutne limfoblastne leukemije (ALL), akutne mijelogenozne leukemije (AML), limfoma kožnih T-ćelija (CTCL), fungoidne mikoze, kancera debelog creva, kolorektalnog kancera, post-esencijalne trobocitemije mijelofibroze (Post-ET MF), post policitemije vera mijelofibroze (Post-PV MF), akneoformog osipa, sarkoidoze, rinitisa, sinuzitisa, blefaritisa, konjuktivitisa, uveitisa, skleritisa, iritisa, kaheksije, sindroma sistemskog inflamatornog odgovora (SIRS), i septičkog šoka.

[0015] Jedinjenje koje je {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril, za upotrebu prema pronalasku može se nadalje nazivati kao "jedinjenje prema pronalasku".

[0016] U nekim izvođenjima, jedinjenje ili so za upotrebu prema pronalasku je so koja je so {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril adipinske kiseline.

[0017] Takođe su ovde opisana jedinjenja formule (I):

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ; gde:

X je N ili CR<2>;

Y je N ili CR<3>;

Z je H, cijano, halo, C1-3alkil, ili C1-3haloalkil;

L je C(R<4>)2, C(=O), C(=O)N(R<4a>), C(=O)C(R<4b>)2, S(=O)2, C(=O)O, C(=O)OC(R<4b>)2ili C(=O)N(R<4a>)C(R<4b>)2;

A je C1-6alkil, C3-14cikloalkil, C2-13heterocikloalkil, C6-14aril, ili C1-14heteroaril; gde je pomenuti C1-6alkil, C3-14cikloalkil, C2-13heterocikloalkil, C6-14aril, i C1-14heteroaril svaki opciono supstituisani sa 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 nezavisno izabranih grupa R<5>;

svaka R<1>je nezavisno, C1-4alkil, hidroksil, C1-4alkoksi, fluoro, hidroksil-C1-4alkil, ili C1-4alkoksi-C1-4alkil; ili dve R<1>grupe zajedno obrazuju most od 2-ili 3- ugljenika ili formule -CH2-O-CH2-;

R<2>je H, halo, hidroksil, cijano, C1-4alkil, C1-4haloalkil, ili C1-4alkoksi;

R<3>je H, cijano, nitro, halo, hidroksil, C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C3-7cikloalkil, C1-6haloalkil, C1-6alkoksi, C1-6haloalkoksi, amino, C1-6alkilamino, di-C1-6alkilamino, C1-6alkilsulfonil, karbamil, C1-6alkilkarbamil, di-C1-6alkilkarbamil, karboksi, C1-6alkilkarbonil, ili C1-6alkoksikarbonil;

svaki R<4>je nezavisno, H ili C1-4alkil; ili

dve R<4>grupe, zajedno sa ugljenikovim atomom za koji su vezane obrazuju 3-, 4-, 5-, ili 6-člani cikloalkil prsten;

R<4a>je H ili C1-4alkil;

svaki R<4b>je nezavisno, H ili C1-4alkil; ili

dve R<4b>grupe, zajedno sa ugljenikovim atomom za koji su vezane obrazuju 3-, 4-, 5-, ili 6-člani cikloalkil prsten;

svaki R<5>je nezavisno, halo, cijano, nitro, C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, halosulfanil, C3-10cikloalkil, C3-10cikloalkil-C1-3alkil, C2-10heterocikloalkil, C2-10heterocikloalkil-C1-3alkil, C6-10aril, C6-10arilC1-3alkil, C1-10heteroaril, C1-10heteroaril-C1-3alkil, OR<a>, SR<a>, C(O)R, C(O)NR<c>R<d>, C(O)OR<a>, OC(O)R, OC(O)NR<c>R<d>, NR<c>R<d>, NR<c>C(O)R<d>, NR<c>(O)OR<a>, NR<c>C(O)NR<c>R<d>, C(=NR<e>)R, C(=NR<e>)NR<c>R<d>, NR<c>C(=NR<e>)NR<c>R<d>, NR<c>S(O)R, NR<c>S(O)2R, NR<c>S(O)2NR<c>R<d>, S(O)R, S(O)NR<c>R<d>, S(O)2R, ili S(O)2NR<c>R<d>; gde je svaki C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, C3-10cikloalkil, C3-10cikloalkil-C1-3alkil, C2-10heterocikloalkil, C2-10heterocikloalkil-C1-3alkil, C6-10aril, C6-10aril-C1-3alkil, C1-10heteroaril, i C1-10heteroaril-C1-3alkil opciono supstituisan sa 1, 2, 3, 4, ili 5 nezavisno izabranih R<6>grupa;

svaka R<6>je nezavisno, halo, cijano, nitro, C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, halosulfanil, C3-10cikloalkil, C3-10cikloalkil-C1-3alkil, C2-10heterocikloalkil, C2-10heterocikloalkil-C1-3alkil, C6-10aril, C6-10arilC1-3alkil, C1-10heteroaril, C1-10heteroaril-C1-3alkil, OR<a1>, SR<a1>, C(O)R<b1>, C(O)NR<c1>R<d1>, C(O)OR<a1>, OC(O)R<b1>, OC(O)NR<c1>R<d1>, C(=NR<e1>)NR<c1>R<d1>, NR<c1>C(=NR<e1>)NR<c1>R<d1>, NR<c1>R<d1>, NR<c1>C(O)R<b1>, NR<c1>C(O)OR<a1>, NR<c1>C(O)NR<c1>R<d1>, NR<c1>S(O)R<b1>, NR<c1>S(O)2R<b1>, NR<c1>S(O)2NR<c1>R<d1>, S(O)R<b1>, S(O)NR<c1>R<d1>, S(O)2R<b1>, ili S(O)2NR<c1>R<d1>; gde je svaki pomenuti C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, C3-10cikloalkil, C3-10cikloalkil-C1-3alkil, C2-10heterocikloalkil, C2-10heterocikloalkil-C1-3alkil, C6-10aril, C6-10aril-C1-3alkil, C1-10heteroaril, i C1-10heteroaril-C1-3alkil opciono supstituisan sa 1, 2, 3, 4, ili 5 nezavisno izabranih R<h>grupa; svaki R<a>, R, R<c>, i R<d>je nezavisno, H, C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, C3-10cikloalkil, C3-10cikloalkil-C1-3alkil, C2-10heterocikloalkil, C2-10heterocikloalkil-C1-3alkil, C6-10aril, C6-10aril-C1-3alkil, C1-10heteroaril, ili C1-10heteroaril-C1-3alkil; gde je pomenuti C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, halosulfanil, C3-10cikloalkil, C3-10cikloalkil-C1-3alkil, C2-10heterocikloalkil, C2-10heterocikloalkil-C1-3alkil, C6-10aril, C6-10aril-C1-3alkil, C1-10heteroaril, i C1-10heteroaril-C1-3alkil opciono susptituisan sa 1, 2, 3, 4, ili 5 nezavisno izabranih R<g>grupa;

ili bilo koji R<c>i R<d>zajedno sa N atom za koji su vezani obrazuju od 3-, 4-, 5-, 6-, ili 7-članu heterocikloalkil grupu ili heteroarilnu grupu, od kojih je dvaka opciono supstituisana sa 1, 2, 3 ili 4 supstituenta nezavisno izabranih između halo, cijano, nitro, hidroksil, C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C3-7cikloalkil, C1-6haloalkil, C1-6alkoksi, C1-6haloalkoksi, amino, C1-6alkilamino, di-C1-6alkilamino, tio, C1-6alkiltio, C1-6alkilsulfinil, C1-6alkilsulfonil, karbamil, C1-6alkilkarbamil, di-C1-6alkilkarbamil, karboksi, C1-6alkilkarbonil, i C1-6alkoksikarbonil; each R<e>je nezavisno, H, C1-6alkil, CN, hidroksil, C1-6alkoksi, C1-6alkilsulfonil, karboksi, C1-6alkilkarbonil, aminosulfonil, C1-6alkilaminosulfonil, di-C1-6alkilaminosulfonil, karbamil, C1-6alkilkarbamil, ili di-C1-6alkilkarbamil;

svaki R<a1>, R<b1>, R<c1>, i R<d1>je nezavisno, H, C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, C3-10cikloalkil, C3-10cikloalkil-C1-3alkil, C2-10heterocikloalkil, C2-10heterocikloalkil-C1-3alkil, C6-10aril, C6-10aril-C1-3alkil, C1-10heteroaril, ili C1-10heteroaril-C1-3alkil; gde je pomenuti C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, halosulfanil, C3-10cikloalkil, C3-10cikloalkil-C1-3alkil, C2-10heterocikloalkil, C2-10heterocikloalkil-C1-3alkil, C6-10aril, C6-10aril-C1-3alkil, C1-10heteroaril, i C1-10heteroaril-C1-3alkil opciono supstituisan sa 1, 2, 3, 4, ili 5 nezavisno izabranih R<g’>grupa;

ili bilo koji R<c1>i R<d1>zajedno sa N atom za koji su vezani obrazuju 3-, 4-, 5-, 6-, ili 7-članu heterocikloalkil grupu ili heteroaril grupu, od kojih je svaka opciono susptituisana sa 1, 2, 3 ili 4 supstituenta nezavisno izabrana između halo, cijano, nitro, hidroksil, C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C3-7cikloalkil, C1-6haloalkil, C1-6alkoksi, C1-6haloalkoksi, amino, C1-6alkilamino, di-C1-6alkilamino, tio, C1-6alkiltio, C1-6alkilsulfinil, C1-6alkilsulfonil, karbamil, C1-6alkilkarbamil, di-C1-6alkilkarbamil, karboksi, C1-6alkilkarbonil, C1-6alkoksikarbonil, i C1-6alkilkarbonilamino;

svaki R<e1>je nezavisno, H, C1-6alkil, CN, hidroksil, C1-6alkoksi, C1-6alkilsulfonil, karboksi, C1-6alkilkarbonil, aminosulfonil, C1-6alkilaminosulfonil, di-C1-6alkilaminosulfonil, karbamil, C1-6alkilkarbamil, ili di-C1-6alkilkarbamil;

svaki R<g>, R<g’>, i R<h>je nezavisno, halo, cijano, nitro, hidroksil, C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C3-7cikloalkil, C1-6haloalkil, C1-6alkoksi, C1-6haloalkoksi, amino, C1-6alkilamino, di-C1-6alkilamino, tio, C1-6alkiltio, C1-6alkilsulfinil, C1-6alkilsulfonil, karbamil, C1-6alkilkarbamil, di-C1-6alkilkarbamil, karboksi, C1-6alkilkarbonil, C1-6alkoksikarbonil, ili C1-6alkilkarbonilamino; i

n je 0, 1, 2, 3, ili 4.

[0018] U nekim izvođenjima, jedinjenje ili so za upotrebu prema pronalasku je izabrano između:

{1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila;

ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0019] U nekim izvođenjima, so je so 1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril adipinske kiseline. U nekim izvođenjima, so je 1:11-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril : so adipinske kiseline. U nekim izvođenjima, so je ona koja je opisana u primeru 358.

[0020] U nekim izvođenjima, so je karakterisana tačkom topljenja na oko 178 °C. U nekim izvođenjima, so ima termogram diferencijalne skanirajuće kalorimetrije koji je karakterisan sa endotermnim signalom sa početnom temperaturom na oko 176 °C. U nekim izvođenjima, so ima termogram diferencijalne skanirajuće kalorimetrije koji je suštini prikazan na slici 1.

[0021] U nekim izvođenjima, so ima termogram termogravimetrisjke analize koji je u suštini prikazana na slici 2. U nekim izvođenjima, so ima uzorak difrakcije X-zraka na prahu koji sadrži karakteristične signale izražene u stepenima 2θ na oko 10.4. U nekim izvođenjima, so ima uzorak difrakcije X-zraka na prahu koji sadrži karakteristični signal izražen u 2θ na oko 6.9. U nekim izvođenjima, so ima uzorak difrakcije X-zraka na prahu koji sadrži karalteristični signal eksprimovan u stepenima 2θ na oko 21.0. U nekim izvođenjima, so ima uzorak difrakcije X-zraka na prahu koji sadrži karakterističan signal eksprimovan u stepenima 2θ na oko 23.3. U nekim izvođenjima, so ima uzorak difrakcije X-zraka koji sadrži karakteristični signal eksprimovan u stepenima 2θ na oko 6.9, 10.4, 21.0, i 23.3. U nekim izvođenjima, so ima uzorak difrakcije X-zraka na prahu u suštini kako je prikazan na slici 3.

[0022] XRPD uzorak reflekcija (signala) se tipično smatra otiskom prsta određenog kristalnog oblika. Dobro je poznato da relativni intenziteti XRPD signala mogu široko varirati u zavisnosti od, inter alia, tehnike pripremanja uzorka, rasporeda veličine kristala, različitih korišćenih filtera, postupaka montiranja uzoraka, i naročito korišćenog instrumenta. U nekim slučajevima, novi signali mogu biti primećeni ili postojeći signali mogu nestati, u zavisnosti od tipa mašine ili podešavanja (na primer, da li je korišćen Ni filter ili ne). Ovde korišćen, izraz "signal" odnosi se na refleksiju koja ima relativnu visinu/intenzitet od bar oko 4% maksimalne visine/intenziteta signala. Pored toga, varijacije instumenta i drugih faktora mogu uticati na 2-teta vrednosti. Prema tome, raspored signala, kao što su oni ovde zabeleženi, može varirati plus ili minus 0.2° (2-teta), i izraz "suštinski" koji je ovde korišćen u kontekstu XRPD ima nameru da obuhvati gore pomenute varijacije.

[0023] Na isti način, temperaturna očitavanja u vezi sa DSC, TGA, ili drugim temperaturnim eksperimentima mogu varirati oko ±3 °C u zavisnosti od instrumenta, naročito podešavanja, pripreme uzorka, itd. Prema tome, ovde zabeleženi kristalni oblik u koji ima DSC termogram "suštinski" kako je pokazan na bilo kojoj od slika se razume da obuhvata takve varijacije.

[0024] Dalje se podrazumeva da izvesne karakteristike pronalaska, koje su zbog jasnoće, opisane u kontekstu odvojenih izvođenja, mogu takođe biti obezbeđena u kombinaciji sa jednim izvođenjem. Nasuprot tome, različite karakteristike prema pronalasku koje su, zbog sažetosti, opisane u kontekstu jednog izvođenja, mogu takođe biti obezbeđene odvojeno ili u kombinaciji sa bilo kojom podkombinacijom.

[0025] Na različitim mestima u prikazanom opisu, supstituenti ovde opisanih jedinjenja su opisani u grupama i opsezima. Posebno je obuhvaćena i svaka pojedinačna podkombinacija članova takve grupe i opsega. Na primer, izraz "C1-6alkil" je specifično nameravano da pojedinočno obuhvati metil, etil, C3alkil, C4alkil, C5alkil, i C6alkil.

[0026] Na različitim mestima u prikazanoj prijavi, opisani su vezujući supstituenti. Posebno je namera da svaki supstituent koji se vezuje obuhvata i prednji i zadnji oblik vezivanja supstituenta. Na primer, -NR(CR’R")nobuhvata oba -NR(CR’R")n- i -(CR’R")nNR-. Kada struktura jasno zahteva vezujuću grupu, Markušove promenjive izlistane za tu grupu se podrazumeva da su vezujuće grupe. Na primer, ukoliko struktura zahteva vezujuće grupe i definicija Markušove grupe za promenjive navedena u listi je "alkil" ili "aril" prema tome se može razumeti da "alkil" ili "aril" predstava vezujuću alkilen grupu ili arilen grupu, respektivno.

[0027] Na različitim mestima u prikazanom opisu, opisani su prsteni (npr., "piperidinski prsten"). Osim ukoliko nije drugačije navedeno, ovi prsteni mogu biti vezani za ostatak molekula na bilo kom članu prstena kada to dozvoljava valenca. Na primer, izraz "piridinski prsten" može da se odnosi na piridin-2-il, piridin-3-il, ili piridin-4-il prsten.

[0028] Izraz "n-člani" gde je n celi broj tipično opisuje broj atoma koji obrazuju prsten u ostatku kada je broj atoma koji obrazuju prsten n. Na primer, piperidinil je primer 6-članog heterocikloalkil prstena, pirazolil je primer 5-članog heteroaril prstena, piridil je primer 6-članog heteroaril prstena, i 1,2,3,4-tetrahidro-naftalen je primer 10-člane cikloalkil grupe.

[0029] Za ovde opisana jedinjenja u kojima se promenjive javljaju više nego jednom, svaka promenjiva može biti drugačiji ostatak nezavisno izabran iz grupe definisanih promenjivih. Na primer, kada je opisana struktura koja ima dve R grupe koje su simultano prisutne na istom jedinjenju, dve R grupe mogu predstavljati ostatke nezavisno izabrane iz grupe definisane za R. U drugom primeru, kada je opcioni višestruki supstituent naznačen u obliku:

tada treba znati da supstituent R može da se javi p puta na istom prstenu, i R može biti različiti ostatak u svakom javljanju. treba da se zna da svaka R grupa može zameniti bilo koji vodenikov atom na atomu prstena, uključujući jedan ili oba (CH2)natoma vodonika. Dalje, u gornjem primeru, ako je promenjiva Q definisana da obuhvata vodonike, kao što je kada je Q CH2, NH, itd., bilo koji plutajući supstituent kao što je R u gornjem primeru, može da zameni vodonik na promenjivoj Q kao i vodonik u bilo kojoj nevarjabilnoj komponenti prstena.

[0030] Ovde korišćena fraza "opciono supstituisan" označava nesupstituisan ili supstituisan. Ovde korišćen izraz "supstituisan" označava da je vodonikov atom uklonjen i zamenjen sa susptituentom. Podrazumeva se da je supstitucija na datom atomu ograničena valencom.

[0031] Ovde korišćen izraz " Cn-malkil", kada se koristi sam ili u kombinaciji sa drugim izrazima, odnosi se na zasićeni ugljovodoničnu grupu koja može biti prava ili razgranata, koja ima n do m ugljenikovih atoma. U nekim izvođenjima, alkil grupa sadrži 1 do 6, 1 do 4 ili 1 do 3 ugljenikvoih atoma. Primeri alikl ostataka obuhvataju, ali bez ograničenja hemijske grupe kao što su metil, etil, n-propil, izopropil, nbutil, izobutil, sec-butil, terc-butil, n-pentil, 2-metil-1-butil, 3-pentil, n-heksil, 1,2,2-trimetilpropil, nheptil, n-oktil, i slično.

[0032] Ovde korišćen, "Cn-malkenil", korišćen sam ili u kombinaciji sa drugim izrazima odnosi se na alkil grupu koja ima jednu ili više ugljenik-ugljenik dvostrukih veza i n do m ugljenikovih atoma. U nekim izvođenjima, alkenil ostatak sadrži 2 do 6, ili 2 do 4 ugljenikovih atoma. Primeri alkenil grupe obuhvataju, ali nisu ograničeni na, etenil, n-propenil, izopropenil, n-butenil, sek-butenil, i slično.

[0033] Ovde korišćeni, "Cn-malkinil", korišćen sam ili u kombinaciji sa ostalim izrazima, odnosi se na alkil grupu koja ima jednu ili više ugljenik-ugljenik trostrukih veza i n do m ugljenikovih atoma. Primer alkinil grupe pobuhvata, ali bez ograničenja, etinil, propin-1-il, propin-2-il, i slično. U nekim izvođenjima, alkinil ostatak sadrži 2 do 6 ili 2 do 4 ugljenikovih atoma.

[0034] Ovdekorišćen izraz, "halo" ili "halogen", korišćen sam ili u kombinaciji sa drugim izraziva, obuhvata fluoro, hloro, bromo, i jodo.

[0035] Ovde korišćen izraz, "hidroksil" ili "hidroksi" odnosi se na grupu formule -OH.

[0036] Ovde korišćen izraz "Cn-mhaloalkil", korišćen sam ili u kombinaciji sa drugim izrazima, odnosi se na Cn-malkil grupu koja ima do {2(n do m)+1} halogenih atoma koji mogu biti ili isti ili različiti. U nekim izvođenjima, atomi halogena su fluoro atomi. U nekim izvođenjima, alkil grupa ima 1 do 6 ili 1 do 4 ugljenikovih atoma. Primer haloalkil grupe obuhvata CF3, C2F5, CHF2, CCl3, CHCl2, C2Cl5, i slično. U nekim izvođenjima, haloalkil grupa je fluoroalkil grupa.

[0037] Ovde korišćen izraz "Cn-mfluoroalkil", korišćen sam ili u kombinaciji sa drugim izrazima, odnosi se na Cn-mhaloalkil u kome atomi halogena su izabrani od fluora. U nekim izvođenjima, Cn-m-fluroalkil je fluorometil, difluorometil, ili trifluorometil.

[0038] Ovde korišćen izraz "Cn-malkoksi", korišćen sam ili u kombinaciji sa ostalim izrazima, odnosi se na grupu of formula -O-alkil, gde alkil grupa ima n do m ugljenikovih atoma. Primeri alkoksi grupe obuhvataju metoksi, etoksi, propoksi (npr., n-propoksi i izopropoksi), t-butoksi, i slično. U nekim izvođenjima, alkil grupa ima 1 do 6 ili 1 do 4 ugljenikovih atoma.

[0039] Ovde korišćen, "Cn-mhaloalkoksi", korišćen sam ili u kombinaciji sa ostalim izrazima, odnosi se na grupu formule -O-(haloalkil), gde haloalkil grupa ima n do m ugljenikovih atoma. U nekim izvođenjima, alkil grupa ima 1 do 6 ili 1 do 4 ugljenikovih atoma. Primer haloalkoksi grupe je -OCF3. U nekim izvođenjima, haloalkoksi grupa je fluoroalkoksi grupa.

[0040] Ovde korišćen izraz "Cn-mfluoroalkoksi", korišćen sam ili u kombinaciji sa ostalim izrazima, odnosi se na alkoksi grupu, gde su atomi halogena izabrani od fluora.

[0041] Ovde korišćen, "amino", korišćen sam ili u kombinaciji sa ostalim izrazima, odnosi se na -NH2.

[0042] Ovde korišćen izraz "Cn-malkilamino", korišćen sam ili u kombinaciji sa ostalim izrazima, odnosi se na grupu formule -NH(alkil), gde alkil grupa ima n do m ugljenikovih atoma. U nekim izvođenjima, alkil grupa ima 1 do 6 ili 1 do 4 ugljenikvoih atoma. Primer Cn-malkilamino grupe obuhvata metilamino, etilamino, propilamino (npr., n- propilamino i izopropilamino), i slično.

[0043] Ovde korišćen izraz "di-Cn-m-alkilamino", korišćen sam ili u kombinaciji sa ostalim izrazima, odnosi se na grupu formule -N(alkil)2, gde svaka alkil grupa ima nezavisno n do m ugljenikovih atoma. Primer di-Cn-m-alkilamino grupe obuhvata dimetilamino, dietilamino, dipropilamino (npr., di(npropil)amino i di(izopropil)amino), i slično. U nekim izvođenjima, svaka alkil grupa nezavisno ima 1 do 6 ili 1 do 4 ugljenikoviha toma.

[0044] Ovde korišćen izraz "karboksi", korišćen sam ili u kombinaciji sa ostalim izrazima, odnosi se na grupu formule -C(O)OH.

[0045] Ovde korišćen izraz "Cn-malkoksikarbonil", korišćen sam ili u kombinaciji sa ostalim izrazima, odnosi se na grupu formule -C(O)O-alkil, gde alkil grupa ima n do m ugljenikovih atoma. U nekim izvođenjima, alkil grupa ima 1 do 6 ili 1 do 4 ugljenikovih atoma.

[0046] Ovde korišćen izraz "Cn-malkilkarbonil", korišćen sam ili u kombinaciji sa ostalim izrazima, odnosi se na grupu formule -C(O)-alkil, gde alkil grupa ima n do m ugljenikovih atoma. U nekim izvođenjima, alkil grupa ima 1 do 6 ili 1 do 4 ugljenikovih atoma.

[0047] Ovde korišćen izraz "Cn-malkilkarbonilamino", korišćen sam ili u kombinaciji sa ostalim izrazima, odnosi se na grupu formule -NHC(O)-alkil, gde alkil grupa ima n do m ugljenikovih atoma. U nekim izvođenjima, alkil grupa ima 1 do 6 ili 1 do 4 ugljenikvih atoma.

[0048] Ovde korišćen izraz "karbamil", korišćen sam ili u kombinaciji sa ostalim izrazima, odnosi se na grupu formule -C(O)-NH2.

[0049] Ovde korišćen izraz "Cn-malkilkarbamil", korišćen sam ili u kombinaciji sa ostalim izrazima, odnosi se na grupu formule -C(O)-NH(alkil), gde alkil grupa ima n do m ugljenikovih atoma. U nekim izvođenjima, alkil grupa ima 1 do 6 ili 1 do 4 ugljenikovih atoma.

[0050] Ovde korišćen izraz "di-Cn-malkilkarbamil", korišćen sam ili u kombinaciji sa ostalim izrazima, odnosi se na grupu formule -C(O)-N(alkil)2, gde svaka alkil grupa nezavisno ima n do m ugljenikovih atoma. U nekim izvođenjima, alkil grupa nezavisno ima 1 do 6 ili 1 do 4 ugljenikovih atoma.

[0051] Ovde korišćen izraz "tio" odnosi se na grupu formule -SH.

[0052] Ovde korišćen izraz "Cn-malkiltio", korišćen sam ili u kombinaciji sa ostalim izrazima, odnosi se na grupu formule -S-alkil, gde alkil grupa ima n do m ugljenikovih atoma. U nekim izvođenjima, alkil grupa ima 1 do 6 ili 1 do 4 ugljenikovih atoma.

[0053] Ovde korišćen izraz "Cn-malkilsulfinil", korišćen sam ili u kombinaciji sa ostalim izrazima odnosi se na grupu formule -S(O)-alkil, gde alkil grupa ima n do m ugljenikovih atoma. U nekim izvođenjima, alkil grupa ima 1 do 6 ili 1 do 4 ugljenikovih atoma.

[0054] Ovde korišćen izraz "Cn-malkilsulfonil", korišćen sam ili u kombinaciji sa ostalim izrazima, odnosi se na grupu formule -S(O)2-alkil, gde alkil grupa ima n do m ugljenikovih atoma. U nekim izvođenjima, alkil grupa ima 1 do 6 ili 1 do 4 ugljenikovih atoma.

[0055] Ovde korišćen, "halosulfanil" odnosi se na sumpornu grupu koja ima jedan ili više halogenih supstituenata. Primer halosulfanil grupe obuhvata pentahalosulfanil grupe kao što je SF5.

[0056] Ovde korišćen izraz "2-ili 3-ugljenični most" označava da dve različite R grupe na različitim atomima članova prstena obrazuju most (-CH2-CH2- ili -CH2-CH2-CH2-) između dva atoma člana prstena, gde dva ili tri ugljenika ne obuhvataju atome članove prstena. Za neograničavajuće primere, videti primer 138, gde dve R<1>grupe obrazuju 2-ugljenični most.

[0057] Ovde korišćen izraz "most formule -CH2-O-CH2-" označava da dve različite R grupe na različitim atomima člana prstena obrazuju most između dva atoma člana prstena formule -CH2-O-CH2-, gde atomi člana prstena nisu deo formule -CH2-O-CH2-.

[0058] Ovde korišćen izraz "hidroksil-C1-4alkil" odnosi se na grupu formule -C1-4alkilen-OH.

[0059] Ovde korišćen izraz "C1-4alkoksi-C1-4alkil" odnosi se na grupu formule -C1-4alkilen-O-(C1-4alkil).

[0060] Ovde korišćen izraz "Cn-mcikloalkil", korišćen sam ili u kombinaciji sa ostalim izrazima, odnosi se na nearomatični ciklični ugljovodonik koji sadrži ciklizovane alkil, alkenil, i alkinil grupe, i koji ima n do m ugljenikovih atoma članova prstena. Cikloalkil grupe mogu da sadrže mono-ili policiklične (npr., koji imaju 2, 3, ili 4 spojene, premošćene, ili spiro prstene) prstenaste sisteme. Takođe obuhvaćeni definicijom cikloalkil su ostaci koji imaju jedan ii više aromatičnih prstenova (npr., arilni ili heteroarilni prstenovi) spojeni (tj., koji imaju zajedniču vezu) za cikloalkil prsten, na primer, benzo derivati ciklopentan, ciklopentena, cikloheksana, i slično. Ugljenikovi atomi koji obrazuju prstene cikloalkil grupa mogu biti opciono supstituisani sa okso. Cikloalkil grupe takođe obuhvataju cikloalkilidene. Izraz "cikloalkil" takođe obuhvata cikloalkil grupe u čvorovima i spirocikloalkil grupe. Ovde korišćen, "cikloalkil grupe u čvorovima" odnosi se na nearomarične ciklične ugljovodonične ostatke koji sadrže bar jedan ugljenik u čvoru, kao što je admantan-1-il. Ovde korišćen, "spirocikloalkil grupe" odnosi se na nearomatične ugljovodonične ostatke koji sadrže bar dva prstena spojena sa jednom ugljenikovom atomu, kao što je spiro[2.5]oktan i slično. U nekim izvođenjima, cikloalkil grupa ima 3 do 14 članova prstena, 3 do 10 članova prstena, ili 3 do 7 članova prstena. U nekim izvođenjima, cikloalkil grupa je monociklična, biciklična ili triciklična. U nekim izvođenjima, cikloalkilgrupa je monociklična. U nekim izvođenjima, cikloalkilgrupa je C3-7monociklična cikloalkil grupa. Jedna ili više ugljenikovih atoma koji obrazuju prsten cikloalkil grupe mogu biti oksidovani da obrazuju karbonil veze. Primeri cikloalkil grupe obuhvataju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil, ciklopentenil, cikloheksenil, cikloheksadienil, cikloheptatrienil, norbornil, norpinil, norkarnil, adamantil, tetrahidronaftalenil, oktahidronaftalenil, indanil, i slično.

[0061] Ovde korišćen izraz " Cn-mcikloalkil- Co-palkil", korišćen sam ili u kombinaciji sa ostalim izrazima, odnosi se na grupu formule -alkilen-cikloalkil, gde cikloalkil deo ima n do m ugljenikovih atoma i alkilen deo ima o do p ugljenikovih atoma. U nekim izvođenjima, alkilenski deo ima 1 do 4, 1 do 3, 1 do 2, ili 1 ugljenik(ovih) atom(a). U nekim izvođenjima, alkilen deo je metilen. U nekim izvođenjima, cikloalkil deo ima 3 do 14 ugljenikovih članova, 3 do 10 ugljenikovih članova, ili 3 do 7 ugljenikovih članova. U nekim izvođenjima, cikloalkil grupa je monociklična ili biciklična. U nekim izvođenjima, cikloalkil deo je monociklični. U nekim izvođenjima, cikloalkil deo je C3-7monociklična cikloalkil grupa.

[0062] Ovde korišćen izraz "Cn-mheterocikloalkil", " Cn-mheterocikloalkil prsten", ili "Cn-mheterocikloalkil grupa", korišćen sam ili u kombinaciji sa ostalim izrazima, odnosi se na nearomatični prsten ili sistem prstena, koji može opciono sadržati jedan ili više alkenilen ili alkinilen grupa kao deo prstenaste strukture, koja ima bar jedan heteroatom kao član prstena nezavisno izabran između azota, sumpora, kiseonika i fosfora, i koji ima n do m ugljenikovih atoma kao člana prstena. Heterocikloalkil grupe mogu obuhvatati mono-ili policiklične (npr., koji imaju 2, 3 ili 4 spojenih, premošćenih, ili spiro prstena) sisteme prstena. U nekim izvođenjima, heterocikloalkil grupa je monociklična ili biciklična grupa koja ima 1, 2, 3, ili 4 hetereoatoma nezvisno izabrana između azota, sumpora i kiseonika. Takođe obuhvaćeni u definiciju heterocikloalkila su ostaci koji imaju jedan ili više aromatičnih prstenova (npr., aril ili heteroaril prstenovi) spojeni (tj., koji imaju zajedničku vezu) za nearomatični prsten, na primer, 1,2,3,4-tetrahidro-hinolin i slično. Heterocikloalkil grupa može takođe obuhvatati heterocikloalkil grupe u čvorovima i spiroheterocikloalkil grupe. Ovde korišćen, "heterocikloalkil grupa u čvorovima" odnosi se na heterocikloalkil deo koji sadrži bar jedan atom u čvoru, kao što je azaadmantan-1-il i slično. Ovde korišćen, "spiroheterocikloalkil grupa" odnosi se na heterocikloalkil deo koji sadrži bar dva prstena spojena za pojedinačni atom, kao što je [1,4-dioksa-8-aza-spiro[4.5]dekan-N-il] i slično. U nekim izvođenjima, heterocikloalkil grupa ima 3 do 20 atoma koji obrazuju prsten, 3 do 14 atoma koji obrazuju prsten, 3 do 10 atoma koji obrazuju prsten, ili oko 3 do 8 atoma za obrazovanje prstena. U nekim izvođenjima, heterocikloalkil grupa ima 2 do 20 ugljenikovih atoma, 2 do 15 ugljenikovih atoma, 2 do 10 ugljenikovih atoma, ili oko 2 do 8 ugljenikovih atoma. U nekim izvođenjima, heterocikloalkil grupa ima 1 do 5 heteroatoma, 1 do 4 heteroatoma, 1 do 3 heteroatoma, ili 1 do 2 heteroatoma. Ugljenikvi atomi ili heteroatomi u prstenu(ovima) heterocikloalkil grupa mogu biti oksidovani da se obrazuje karbonil, N-oksid, ili sulfonil grupa (ili druga oksidiovana veza) ili atom azota mogu biti kvaterniziovani. U nekim izvođenjima, heterocikloalkil deo je C2-7monociklična heterocikloalkil grupa. Primeri heterocikloalkil grupe obuhvataju 1,2,3,4-tetrahidro-hinolin, azetidin, azepan, pirolidin, piperidin, piperazin, morfolin, tiomorfolin, i piran.

[0063] Ovde korišćen izraz "Cn-mheterocikloalkil-Co-palkil", korišćen sam ili u kombinaciji sa ostalim izrazima, odnosi se na grupu formule -alkilen-heterocikloalkil, gde heterocikloalkilni deo ima n do m ugljenikovih atoma i alkilen deo ima o do p ugljenikovih atoma. U nekim izvođenjima, alkilenski deo ima 1 do 4, 1 do 3, 1 do 2, ili 1 ugljenikov(e) atom(e). U nekim izvođenjima, alkilen deo je metilen. U nekim izvođenjima, heterocikloalkilni deo ima 3 do 14 članova prstena, 3 do 10 članova prstena, ili 3 do 7 članova prstena. U nekim izvođenjima, heterocikloalkil grupa je monociklična ili biciklična. U nekim izvođenjima, heterocikloalkilni deo je monocikličan. U nekim izvođenjima, heterocikloalkil deo je C2-7monociklična heterocikloalkil grupa.

[0064] Ovde korišćen izraz "Cn-maril", korišćen sam ili u kombinaciji sa ostalim izrazima, odnosi se na monociklični ili policiklični (npr., koji ima 2, 3 ili 4 spojena prstena) aromatične ugljovodonike koji imaju n do m ugljenikovih atoma članova prstena, kao što su, ali bez ograničenja samo na njih, fenil, 1-naftil, 2-naftil,antracenil, fenantrenil, i slično.U nekim izvođenjima, aril grupe imaju od 6 do 20 ugljenikovih atoma, od 6 do 14 ugljenikovih atoma, od 6 do 10 ugljenikovih atoma, ili 6 ugljenikovih atoma. U nekim izvođenjima, aril grupa je monociklična ili biciklična grupa.

[0065] Ovde korišćen izraz "Cn-maril-Co-p-alkil", korišćen sam ili u kombinaciji sa ostalim izrazima, odnosi se na grupu formule -alkilen-aril, gde aril deo ima n do m članova prstena ugljenikovih atoma i alkilen deo ima o do p ugljenikovih atoma. U nekim izvođenjima, alkilen deo ima 1 do 4, 1 do 3, 1 do 2, ili 1 ugljenikov atom. U nekim izvođenjima, alkilen deo je metilen. U nekim izvođenjima, aril deo je fenil. U nekim izvođenjima, aril grupa je monociklična ili biciklična grupa. U nekim izvođenjima, arilalkil grupa je benzil.

[0066] Ovde korišćen izraz "Cn-mheteroaril", "Cn-mheteroarilni prsten", ili "Cn-mheteroarilna grupa", korišćen sam ili u kombinaciji sa ostalim izrazima, odnosi se na monocklični ili policiklični (npr., koji ima 2, 3 ili 4 spojena prstena) aromatični ugljovodonični ostatak, koji ima jedan ili više članova heteroatoma u prstenu nezavisno izabranih između azota, sumpora i kiseonika i ima n do m ugljenikovih atoma kao članova prstena. U nekim izvođenjima, heteroaril grupa je monociklična ili biciklična grupa koja ima 1, 2, 3, ili 4 hetereoatoma nezavisno izabranih između azota, sumpora i kiseonika. Primer heteroaril grupe obuhvata, ali bez ograničenja, piridil, pirimidinil, pirazinil, piridazinil, triazinil, furil, tienil, imidazolil, tiazolil, indolil, piril, oksazolil, benztiazolil, izoksazolil, pirazolil, triazolil, tetrazolil, indazolil, 1,2,4-tiadiazolil, izotiazolil, benzotienil, purinil, karbazolil, benzimidazolil, pirolil, azolil, oksazolil, hinolinil, izohinolinil, indolil, benzotienil, benzofuranil, benzizoksazolil, imidazo[1,2-b]tiazolil ili slično. Ugljenikovi atomi ili heteroatomi u prstenu(ovma) heteroaril grupe mogu biti oksidovani da obrazuju karbonil, N-oksid, ili sulfonil grupu (ili druge oksidovane veze) ili atom azota može biti kvaternizovan, obezbeđujući da je aromatična priroda prstena očuvana. U nekim izvođenjima, heteroaril grupa ima od 1 do 20 ugljenikoviha toma, od 3 do 20 ugljenikovih atoma, od 3 do 15 ugljenikovih atoma, od 3 do 10 ugljenikovih atoma, od 3 do 8 ugljenikovih atoma, od 3 do 5 ugljenikovih atoma, od 1 do 5 ugljenikoviha toma, ili od 5 do 10 ugljenikovih atoma. U nekim izvođenjima, heteroaril grupa sadrži 3 do 14, 4 do 12, 4 do 8, 9 do 10, ili 5 do 6 atoma koji obrazuju prsten. U nekim izvođenjima, heteroaril grupa ima 1 do 4, 1 do 3, ili 1 do 2 heteroatoma.

[0067] Ovde korišćen izraz "Cn-mheteroaril-Co-p-alkil", korišćen sam ili u kombinaciji sa ostalim izrazima, odnosi se na grupu formulu -alkilen-heteroaril, gde heteroaril deo ima n do m ugljenikovih atoma članova prstena i alkilen deo ima o do p ugljenikovih atoma. U nekim izvođenjima, alkilen deo ima 1 do 4, 1 do 3, 1 do 2, ili 1 ugljenikovih atoma. U nekim izvođenjima, alkilen deo je metilen. U nekim izvođenjima, heteroaril deo je monociklična ili biciklična grupa koja ima 1, 2, 3, ili 4 hetereoatoma nezavisno izabrana između azota, sumpora i kiseonika. U nekim izvođenjima, heteroaril deo ima 5 do 10 ugljenikovih atoma.

[0068] Ovde korišćen izraz "Cn-mariloksi" odnosi se na deo formule -O-aril, gde arilni prsten ima n do m ugljenikovih atoma.

[0069] Ovde korišćen, izraz "bicikličan" ispred imena ostatka odnosi se na ostatak koji ima dva spojena prstena.

[0070] Ovde korišćen, izraz "monociklični" ispred imena ostatka odnosi se na ostatak koji ima pojedinačan prsten.

[0071] Ovde opisana jedinjenja mogu biti asimetrična (npr., imaju jedan ili više stereocentara). Svi stereoizomeri, kao što su enantiomeri i dijasteroizomeri, su obuhvaćeni ukoliko nije drugačije navedeno. Jedinjenja koja sadrže asimetrično supstituisane ugljenikove atome mogu biti izolovani u optički aktivnim ili racemskim oblicima. Postupci kako se pripremaju optički aktivni obici iz optički neaktivnih polaznih materijala je poznato u ovoj oblasti, kao što je rastvaranje racemskih smeša ili stereoselektivnim sintezama. Mnogo geometrijskih izomera olefina, C=N dvostuka veza, i slično mogu biti prisutne u ovde opisanim jedinjenjima, i svi takvi stabilni izomeri su uzeti u obzir. Cis i trans geometrijski izomeri jedinjenja su opisani i mogu biti izolovani kao smeša uzomera ili odvojenih izomernih oblika .

[0072] Razdvajanje racemskih smeša jedinjenja može biti izvedeno bilo kojim od brojnih postupaka poznatim u ovoj oblasti tehnike. Primer postupka obuhvata frakciono reciklovanje pomoću hiralne kiseline za razdvajanje koja je optički aktivna, organska kiselna koja obrazuje so. Pogodna sredstva za razvajanje za frakcionu rekristalizaciju su, na primer, optički aktivne kiseline kao što su D i L oblici vinske kiseline, diacetilvinske kiseline, dibenzoilvinske kiseline, bademove kiseline, jabučne kiseline, mlečne kiseline ili različite optički aktivne kamforsulfonske kiselina kao što je β-kamforsulfonska kiselina. Druga sredstva za razdvajanje pogodna za postupke frakcione kristalizacije obuhvataju steroizomerno čiste oblike α-metilbenzilamina (npr., S i R oblike, ili dijastereomerne čiste oblike), 2-fenilglicinol, norefedrin, efedrin, N-metilefedrin, cikloheksiletilamin, 1,2-diaminocikloheksan, i slično.

[0073] Razdvajanje racemskih smeša može takođe biti izvedeno eluiranjem na koloni spakovanoj sa optički aktivnim sredstvom za razdvajanje (npr dinitrobenzoilfenilglicin). Pogodne kompozicije rastvarača za eluiranjne mogu biti određene od strane osoba iz struke.

[0074] Jedinjenja prema pronalasku takođe obuhvataju tautomerne oblike. Tautomeri oblici su proizvod zamene jednostruke veze sa susednom dvostrukom vezom zajedno sa pratećom migracijom protona. Tautomerni oblici obuhvataju prototropske tautomere oblike koji su izomerno protonovana stanja koja imaju istu empirijsku formulu i ukupno naelektrisnje. Primeri prototropskih tautomera obuhvataju keton –enolne parove, amid –imidne kiselinske parove, laktam -laktim parove, enamin – iminske parove, i prstenaste oblike, gde proton može zauzeti dva ili više položaja heterocikličnog sistema, na primer, 1H- i 3H-imidazol, 1H-, 2H- i 4H-1,2,4-triazol, 1H-i 2H-izoindol, i 1H-i 2H-pirazol. Tautomerni oblici mogu biti u ravnoteži ili sterno zaključani u jedan oblik sa odgovarajućom supstitucijom.

[0075] Jedinjenja prema pronalasku mogu takođe obuhvatati sve izotope atoma koji se javljaju u intemedijerima ili krajnjim jedinjenjima. Izotopi obuhvataju one atome koji imaju isti atomski broj ali različite masene brojeve. Na primer, izotopi vodonika obuhvataju tricijum i deuterijum. U nekim izvođenjima, 1, 2, ili 3 CH2grupe u azetidinskom prstenu formule I su zamenjeni sa CHD ili CD2grupom. U nekim izvođenjima, 1, 2, ili 3 CH2ili CH grupe u piperidinskom prstenu formule I su zamenjeni sa CHD, CD2ili CD grupom, respektivno. U nekim izvođenjima, 1, 2, 3, 4, ili 5 CH2ili CH grupe u piperidinskom prstenu formule I su zamenjeni sa CHD, CD2ili CD grupom, respektivno.

[0076] Izraz, "jedinjenje," ovde korišćen ima nameru da obuhvati sve steroizomere, geometrijske izomere, tautomere i izotope prikazanih struktura.

[0077] Sva jedinjenja, i njegove farmaceutski prihvatljive soli, mogu biti nađeni zajedno sa drugim supstancama koji su voda i rastvarači (npr., hidrati i solvati) ili mogu biti izolovani.

[0078] U nekim izvođenjima, jedinjenja prema pronalasku, ili njihove soli, su pogono izolovana. Pod "suštinski izolovana" se misli da je jedinjenje bar parcijalno ili suštinski odvojeno od okoline u kojoj je obrazovano ili detektovano. Parcijalno odvajanje može uključivati, na primer, kompoziciju obogaćenu jedinjenjima prema pronalasku. Suštinsko odvajanje može obuhvatati kompozicije koje sadrže bar oko 50%, bar oko 60%, bar oko 70%, bar oko 80%, bar oko 90%, bar oko 95%, bar oko 97%, ili bar oko 99% u odnosu na masu jedinjenja prema pronalasku, ili njegove soli. Postupci za izolovanje jedinjenja i njihove soli su rutinski u ovoj oblasti.

[0079] Izraz "farmaceutski prihvatljiv" je ovde korišćen da se odnosi na ona jedinjenja, materijale, kompozicije, i/ili dozne oblike koji su u okviru obima priznate medicinske prakse, pogodni za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudi i životinja bez prekomerne toksičnosti, iritacija, alergijskog odgovora ili drugih problema ili komplikacija, proporcijalno sa racionalnim odnosom korist/rizik.

[0080] Izrazi, "temperatura okoline" i "sobna temperatura," ovde korišćeni, i na osnovu stanja tehnike se generalno odnose na temperaturu, npr. reakcionu temperaturu, koja je oko sobne temperature na kojoj je izvođena reakcija, na primer, temperatura od oko 20 °C do oko 30 °C.

[0081] Prikazani pronalazak takođe obuhvata farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja prema pronalasku za upotrebu prema pronalasku. Ovde korišćen, "farmaceutski prihvatljive soli" odnosi se na derivate opisanih jedinjenja gde je osnovno jedinjenje modifikovano pretvaranjem postojećeg kiselinskog ili baznog ostatka u njegov oblik soli. Primeri farmaceutski prihvatljivih soli obuhvataju, ali bez ograničenja, soli mineralnih ili organskih kiselina baznih ostataka kao što su amini; alkalne ili organske soli kiselih ostataka kao što su karboksilne kiseline; i slično. Farmaceutski prihvatljive soli za upotrebu prema prikazanom pronalasku obuhvataju netoksične soli osnovnog jedinjenja obrazovanog, na primer, iz netoksičnih neorganskih ili organskih kiselina. Farmaceutski prihvatljive soli za upotrebu prema prikazanom pronalasku mogu biti sintetizovane iz osnovnog jedinjenja koje sadrži bazni ili kiselinski ostatak sa konvencionalnim hemijskim postupcima. Generalno, takve soli mogu biti pripremljene reagovanjem slobodnih kiselina ili baznih oblika ovih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće baze ili kiseline u vodi ili organskom rastvaraču, ili u smeši dva; generalno, poželjni su nevodeni medijumi kao što je etar, etil acetat, alkoholi (npr., metanol, etanol, izo-propanol, ili butanol) ili acetonitril (ACN). Lista pogodnih soli je nađena u Remington’s Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p.1418 and Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977). U nekim izvođenjima, ovde opisna jedinjenja obuhvataju N-oksidne oblike.

Sinteze

[0082] Ovde opisana jedinjenja, uključujuću njihove soli i N-okside, mogu biti pripremljena pomoću poznatih tenika organske sinteze prema bilo kom od brojnih mogućih sintetskih puteva, kao što su oni na donjim šemama. Reakcije za dobijanje jedinjenja mogu biti izvedene u pogodnim rastvaračima koji su lako odabrani od strane stručnjaka iz oblasti organske sinteze. Pogodni rastvarači mogu biti u suštini nereaktivni sa polaznim materijalima (reaktantima), intermedijerima, ili proizvodima na temepraturama na kojima su izvođene reakcije, npr., temperaturama koje mogu biti u opsegu od temperature mržnjenja rastvarača do temperature ključanja rastvarača. Data reakcija može biti izvedena u rastvaraču ili smeši više od jednog rastvarača. U zavisnosti od određenog reakcionog koraka, pogodni rastvarači za određeni reakcioni korak mogu biti izabrani od strane stručnjaka.

[0083] Dobijanje jedinjenja ovde može uključivati zaštitu i skidanje zaštite različitih hemijskih grupa. Potreba za zaštitom i skidanjem zaštite, i odabir odgovarajuće zaštitne grupe, može biti lako određena od strane stručnjaka iz ove oblasti. Hemija zaštitnih grupa, može se na primer naći u Wuts and Greene, Protective Grupe in Organic Synthesis, 4th ed., John Wiley & Sons: New Jersey, (2007).

[0084] Reakcije mogu biti praćene prema bilo kom pogodnom postupku poznatom u ovoj oblasti. Na primer, obrazovanje proizvoda može se pratiti spektroskopskim sredstvima, kao što su nuklearna magnetna rezonanca (npr.,<1>H ili<13>C), infracrvena spektroskopija, spektrofotometrija (npr., UV-vidljiva), masena spektrometrija, ili hromatografskim postupcima kao što su visokoefikasna tečna hromatografija (HPLC) ili tankoslojna hromatografija (TLC).

[0085] Jedinjenja formule I mogu biti pripremljena pomoću postupka prikazanih i šemama 1-4. Intermedijeri formule 1-5 mogu biti sintetisani prema postupcima opisanim u šemi 1. Komercijalno dostupan polazni materijal pirolo[2,3-d]pirimidin-4-halogenid ili 5-supstituisanipirolo[2,3-b]piridin-4-halogenid (1-1) može biti konvertovan u SEM (2-(trimetilsilil)etoksimetil) zaštićeni intermedijer formule 1-2 tretiranjem sa natrijum hidridom praćenim sa 2-(trimetilsilil)etoksimetil hloridom. Suzuki kuplovanjem 1-2 sa boronskom kiselinom pirazola, kao što je 1-(1-etoksietil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol (1-3), pomoću reagensa sa paladijumom, kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0), daje intermedijer 1-4, koji in situ može biti pretvoren u željeni proizvod 1-5 posle produžavanja reakcije.

Šema 1

[0086] Intermedijeri formule 2-3 mogu biti sintetizovani prema sekvenci prikazanoj u šemi 2. SEM-zaštićeni intermedijer 1-2 je podvrgnut Suzukijevom kuplovanju sa boronskom ksielinom zaštićenog pirola, kao što je 1-(triizopropilsilil)pirol-3-boronska kiselina (2-1), pomoću reagensa sa paladijumom, kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0), u prisustvu baze. Proizvod kuplovanja formule 2-2 može se pretvoriti u željeni proizvod formule 2-3 in situ izvođenjem reakcije u toku noći u istom medijumu.

Šema 2

[0087] Intermedijeri formule 3-7 mogu biti pripremljeni prema prikazanim postupcima u šemi 3. Boczaštićeni azetidinon formule 3-1 je podvrgnut Witigovoj reakciji sa fosfonatima, kao što je dietil cijanometilfosfonat, u prisustvu baze, kao što je natrijum hidrid, da bi se obrazovali cijano derivati formule 3-2. Majklova adicija intermedijera formule 1-5 ili 2-3 za derivate formule 3-2 u prisustvu baze, kao što je DBU daje adicioni proizvod formule 3-3. Posle uklanjanja Boc grupe (npr, pomoću kiseline kao što je 4 N HCl u dioksanu), reduktivna aminacija dobijenog azetidina formule 3-4 sa N-Boc zaštićenim piperidinonom formule 3-5 pomoću redukcionog sredstva, kao što je natrijum triacetoksiborohidrid, daje jedinjenje formule 3-6. Uklanjenje Boc grupe u jedinjenju formule 3-6 (npr., korišćenjem kiseline kao što je 4 N HCl u dioksanu) daje željene intermedijere formule 3-7.

Šema 3

[0088] Intermedijeri formule 3-7 mogu biti derivatizovani na piperidinskom azotu da bi se dobile serije jedinjenja formule I kako su prikazane u šemi 4. Reakcija jedinjenja formule 3-7 sa sulfonil hloridom praćena tretiranjem sa TFA i i zatim sa etilendiaminom da bi se uklonila SEM grupa doveli su do sulfonamidnih derivata formule 4-1. Kuplovanje jedinjenja formule 3-7 sa karboksilnom kiselinom pomoću sredstva za kuplovanje kao što je BOP ili sa acil hloridom, praćena uklanjanjem SEM grupe daje jedinjenja formule 4-2. Reduktivna aminacija jedinjenja formule 3-7 sa aledhidom pomoću redukcionog sredstva, kao što je natrijum triacetoksiborohidrida, praćeno uklanjanjem SEM grupa daje N-alkil derivate formule 4-3. Reakcija jedinjenja formule 3-7 sa izocijanatom, praćena uklanjanjem SEM grupe dala je jedinjenja uree formule 4-4.

Šema 4

Postupci

[0089] Jedinjenje prema pronalasku je JAK inhibitor, i naročito JAK1 selektivni inhibitor. JAK1 selektivni inhibitor je jedinjenje koje inhibira JAK1 aktivnost pretežno u odnosu na druge Janus kinaze. Na primer, JAK1 selektivni inhibitor pretežno inhibira JAK1 u odnosu na jednu ili više JAK2, JAK3, i TYK2. U nekim izvođenjima, jedinjenja inhibiraju JAK1 preferencijalno u odnosu na JAK2 (npr., imaju JAK1/JAK2 IC50odnos >1). U nekim izvođenjima, jedinjenja su oko 10-puta selektivniji na JAK1 u odnosu na JAK2. U nekim izvođenjima, jedinjenja su oko 3-puta, oko 5-puta, oko 10-puta, oko 15-puta, ili oko 20-puta selektivnija za JAK1 u odnosu na JAK2 što je izračunato merenjem IC50pri 1 mM ATP (npr., videti Primer A).

[0090] JAK1 igra centralnu ulogu u signalnim putevima brojnih citokina i faktora rasta koji, kada su disregulisani, mogu dovesti ili doprineti bolesnim stanjima. Na primer, IL-6 nivoi su povećani kod reumatoidnog artritisa, bolesti pri kojoj je sugerisano da imaju štetne efekte (Fonesca, J.E. et al., Autoimmunity Reviews, 8:538-42, 2009). Zbog toga IL-6 signali, barem delom, preko JAK1, antagonizujućih IL-6 direktno ili indirektno preko JAK1 inhibicije se očekuje da obezbede kliničku korist (Guschin, D., N., et al Embo J 14:1421, 1995; Smolen, J. S., et al. Lancet 371:987, 2008). Pored toga, kod nekih kancera JAK1 je mutiran dovodeći do uzastopnog neželjenog rasta ćelija tumora i preživljavanja (Mullighan CG, Proc Natl Acad Sci U S A.106:9414-8, 2009; Flex E., et al.J Exp Med.

205:751-8, 2008). U drugim autoimunim bolestima i kancerima povećani sitemski nivoi inflamatornih citokina koji aktiviraju JAK1 mogu takođe doprineti bolesti i/ili sa njom u vezi simptomima. Prema tome, pacijenti sa takvim bolestima mogu imati korist od JAK1 inhibicije. Selektivni inhibitori JAK1 mogu biti efikasni dok se izbegava nepotrebni i potencijalno nepoželjni efekti inhibicije drugih JAK kinaza.

[0091] Selektivni inhibitori JAK1, u odnosu na druge JAK kinaze, mogu imati višestruke terapeutske prednosti u odnosu na manje selektivne inhibitore. U odnosu na selektivnost u odnosu na JAK2, brojni važni faktori citokina i faktora rasta signaliziraju preko JAK2 uključujući, na primer, eritropoietin (Epo) i trombopoietin (Tpo) (Parganas E, et al. Cell. 93:385-95, 1998). Epo je ključni faktor rasta za proizvodnju crvenih krvnih zrnaca; s obzirom da nedostatak Epo-zavisne signalizacije može dovesti do smanjenog broja crvenih krvnih zrnaca i anemije (Kaushansky K, NEJM 354:2034-45, 2006). Tpo, još jedan primer faktora rasta koji zavisi od JAK2, igra centralnu ulogu u kontrolisanju proliferacije i zrenja megakariocita –ćelija iz koji se proizvode krvne pločice (Kaushansky K, NEJM 354:2034-45, 2006). Kao takvo, smanjena Tpo signalizacija će smanjiti broj megakariocita (megakariocitopenija) i sniziti broj krvnih pločica u krvotoku (trombocitopenija). Ovo može dovesti do neželjenog i/ili nekontrolisanog krvarenja. Smanjena inhibicija drugih JAKs, kao što je JAK3 i Tyk2, može takođe biti poželjna kod ljudi kod kojih nedostaje funkcionalna verzija ovih kinaza za koje je pokazano da pateod brojnih bolesti kao što je ozbiljna kombinovana imunodeficijencija ili sindrom hiperimunoglobulina E (Minegishi, Y, et al. Immunity 25:745-55, 2006; Macchi P, et al. Nature. 377:65-8, 1995). Prema tome JAK1 inhibitor sa smanjenim afinitetom za druge JAKs bi imao značajene prednosti u odnosu na manje selektivna inhibitor u vezi sa smanjenim neželjenim dejstvima uključujući imunu supresiju, anemiju i trombocitopeniju.

[0092] Prikazani pronalazak se odnosi na jedinjenje prema pronalasku, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u postupcima lečenja bolesti ili poremećaja u vezi sa JAK kao što je definisano u patentnim zahtevima, kod pojedinca (npr., pacijenta) davanjem pojedincu kome je potreban takav tretman terapeutski efikasne količine ili doze jedinjenja prema prikazanom pronalasku ili njegove farmaceutske kompozicije. Bolest u vezi sa JAKmože da obuhvata bilo koju bolest, poremećaj ili stanje koje je direktno ili indirektno vezano za eksprediju ili aktivnost JAK, uključujući prekomernu ekspresiju i/ili abnormalne nivoe aktivnosti. Bolest u vezi sa JAK može takođe da obuhvata bilo koju bolest, poremećaj ili stanje koje može biti sprečeno, ublaženo ili izlečeno menjanjem aktivnosti JAK.

[0093] Primeri bolesti u vezi sa JAK obuhvataju bolesti u koje je uključen imuni sitem uključujući, na primer odbacivanje organa posle transplantacije - (npr., odbacivanje alografta i bolest kalem protiv domaćina).

[0094] Dalji primeri bolesti u vezi sa JAK obuhvataju autoimune boelsti kao što su multiple skleroza, reumatoidni artritis, juvenilni artritis, psorijatički artritis, dijabetes tipa I, lupus, psorijaza, inflamatorna bolest creva, ulcerozni kolitis, Kronova bolest, mijastenija gravis, imunoglobulinske nefropatije, miokarditis, autoimuni tireoidni poremećaji, hronična obstruktivna bolest pluća (COPD), i slično. U nekim izvođenjima, autoimuna bolest je autoimuni bulozni poremećaj kože kao što je pemfigus vulgris (PV) ili bulozni pemfigoid (BP).

[0095] Drugi primeri bolesti u vezi sa JAK -obuhvataju alergijska stanja kao što je astma, alergije na hranu, ekcematozni dermatitis, kontaktni dermatitis, atopijski dermatitis (atropijski ekcem), i rinitis. Dalji primeri bolesti u vezi sa JAK obuhvataju virusne bolesti kao što su Epštajn-Barov Virus (EBV), Hepatitis B, Hepatitis C, HIV, HTLV 1, Virus varičele-zoster (VZV) i humani papiloma virus (HPV).

[0096] Dalji primeri bolesti u vezi sa JAK obuhvataju bolesti u vezi sa razgradnjom hrskavice, na primer, giht, septički ili infektivni artritis, reaktivni artritis, refleksnu simpatičku distrofiju, algodistrofiju, Tietzeov sindrom, kostalnu artropatiju, endemski deformišući osteoartritis, Mseleni bolest, Handigodu bolest, degradacija koja je rezultat fibromijalgije, sistemski lupus eritematosus, skleroderma, ili ankilozirajući spondilitis.

[0097] Drugi primeri bolesti u vezi JAK uključuju kongenitalne deformacije hrskavice, uključujući naslednu hrondrolizu, hrondrodisplaziju, i pseudohrondrodisplazije (npr., mikrotia, enotia, i metafizna hondrodisplazija).

[0098] Dalji primeri poremećaja u vezi sa JAK bolestima ili stanjima obuhvataju poremećaje kože kao što je psorijaza (na primer, psorijaza vulgaris), atopijski dermatitis, osip kože, iritacija kože, senzibilizacija kože (npr., kontaktni dermatitis ili alergijski kontaktni dermatitis). Na primer, izvesne supstance uključujući neke farmaceutske preparate kada se lokalno nanesu mogu izazvati senzibilizaciju kože. U nekim izvođenjima, zajedničko davanje ili sekvencionalno davnje bar jednog JAK inhibitora prema pronalasku zajedno sa sredstvom koje izaziva neželjenu senzibilizaciju može biti od pomoći u lečenju takvih neželjenih senzibilizacija ili dermatititisa. U nekim izvođenjima, poremećaj kože lečne lokalnim davanjem bar jednog inhibitora JAK prema pronalsku.

[0099] U drugim izvođenjima, bolest u vezi sa JAK- je kancer koji obuhvata one koji su karakterisani kao solidni tumori (npr., kancer prostate, kancer bubrega, kancer jetre, kancer pankreasa, kancer želudca, kancer grudi, kancer pluća, kanceri glave i vrata, kancer tiroide, glioblastom, Kapošijev sarkom, Kastlemanova bolest, leijomiosarkom uterusa, melanom itd.), hematološki kanceri (npr., limfom, leukemija kao što je akutna limfoblastna leukemija (ALL), akutna mijelogenozna leukemija (AML) ili multipli mijelom), i kancer kože kao što je limfom kožnih T-ćelija (CTCL) i limfom kožnih B-ćelija. Primer CTCLs obuhvata Sezarov sindrom i fungoidne mikoze.

[0100] U nekim izvođenjima, ovde JAK inhibitori ili u kombinaciji sa nekim drugim JAK inhibitorima, kao što su oni zabeleženi u U.S. Ser. br. 11/637,545, mogu biti korišćeni za lečenje kancera u vezi sa inflamacijama. U nekim izvođenjima, kancer je u vezi sa inflamatornom bolešću creva. U nekim izvođenjima, inflamatorna bolest creva je ulcerozni kolitis. U nekim izvođenjima, inflamatorna bolest creva je Kronova bolest. U nekim izvođenjima, inflamacije u vezi sa kancerom je kolitis u vezi sa kancerom. U nekim izvođenjima, inflamacija u vezi sa kancerom je kancer debelog creva ili kolorektalni kancer. U nekim izvođenjima, kancer je kancer želudca, gastrointestinalni karcinoidni tumor, gastrointestinalni stromalni tumor (GIST), adenokarcinom, kancer tankog creva ili rektalni kancer.

[0101] Bolesti u vezi sa JAK mogu dalje obuhvatati one karakterisane ekspresijom: JAK2 mutanata kao što su oni koji imaju bar jednu mutaciju u domenu pseudo-kinaza (npr., JAK2V617F); JAK2 mutanata koji imaju bar jednu mutaciju van pseudo-kinaznog domena; JAK1 mutante; JAK3 mutante; mutante receptora eritropoietina (EPOR); ili neregulisanu ekspresiju CRLF2.

[0102] Bolesti u vezi sa JAK mogu dalje obuhvatati mijeloproliferativne poremećaje (MPDs) kao što su policitemija vera (PV), esencijalna trombocitemija (ET), mijelofibroza sa mijeloidnom metaplazijom (MMM), primarna mijelofibroza (PMF), hronična mijeloična leukemija (CML), hronična mijelomonocitna leukemija (CMML), hipereozinofilni sindrom (HES), sistemska bolest mast ćelija (SMCD), i slično. U nekim izvođenjima, mijeloproliferativni poremećaj je mijelofibroza (npr., primarna mijelofibroza (PMF) ili post policitemija vera/esencijalna trombocitemija mijelofibroza (Post-PV/ET MF)). U nekim izvođenjima, mijeloproliferativni poremećaj je post-esencijalna trombocitemija mijelofibroza (Post-ET). U nekim izvođenjima, mijeloproliferativni poremećaj je post policitemija vera mijelofibroza (Post-PV MF).

[0103] Takođe su opisani postupci lečenja psorijaze ili drugih poremećaja kože davanjem lokalne formulacije koja sadrži ovde opisano jedinjenje.

[0104] U nekim izvođenjima, ovde opisani JAK inhibitori mogu biti korišćeni za lečenje pulmonarne arterijske hipertenzije.

[0105] Takođe je opisan postupak za lečenje dermatološkog sporednog dejstva drugih farmaceutskih supstanci davanjem ovde opisanog jedinjenja. Na primer, brojna farmaceutska sredstva dovode do neželjenih alergijskih reakcija koji se mogu manifestovati kao osip u obliku akni ili slični dermatitis. Primer farmaceutskih sredstava koja imaju takvne neželjena sporedna dejstva obuhvataju lekove protiv kancera kao što su gefitinib, cetuksimab, erlotinib, i slično. Jedinjenja prema pronalasku mogu biti davana sistemski ili lokalno (npr., lokalizovano u blizini dermatitisa) u kombinaciji sa (npr., simultano ii sekvencionalno) farmaceutskim sredstvom koje ima neželjene dermatološke efekte. U nekim izvođenjima, jedinjenje prema pronalasku mogu biti davano lokalno zajedno sa jednim ili više farmaceutskih sredstava, gde druga farmaceutska sredstva kada se lokalno nanose bez jedinjenja prema pronalasku izazivaju kontaktni dermatitis, alergijsku kontaktnu sezibilizaciju, ili sličan poremećaj kože. Prema tome, kompozicije koje uključju lokalne formualcije koje sadrže jedinjenje prema pronalasku i drugo farmaceutsko sredstvo koje može da izazove dermatitis, poremećaj kože, ili slično neželjeno dejstvo.

[0106] Dalje bolesti u vezi sa JAK obuhvataju zapaljenja i inflamatorne bolesti. Primeri inflamatornih bolesti obuhvataju sarkoidozu, inflamatorne bolesti oka (npr., iritis, uveitis, skleritis, konjunktivitis, ili slične bolesti), inflamatorne bolesti respiratornog trakta (npr., gornjeg respiratornog trakta uključujući nos i sinuse kao što su rinitis ili sinuzitis ili nižeg resporatornog trakta uključujući bronhitis, hroničnu opstruktivnu bolest pluća, i slično), inflamatorna miopatija kao što je miokarditis, i druge inflamatorne bolesti. U nekim izvođenjima, inflamatorna bolest oka je blefaritis.

[0107] Ovde opisani JAK inhibitori mogu dalje biti korišćeni u lečenju ishemijskih reperfuzionih povreda ili bolesti ili stanja kao što je moždani udar ili srčani zastoj. Ovde opisani inhibitori JAK mogu biti dalje korišćeni za lečenju stanja bolesti vođenih sa endotoksinomin (npr., komplikacije posle operacije bajpasa ili hroničnih endotoksičnih stanja koja doprinose prestanku rada srca). Ovde opisani JAK inhibitori mogu biti dalje korišćeni za lečenje anoreksije, kaheksije, ili umora koji je posledica ili koji je udružen sa kancerom . Ovde opisani JAK inhibitori mogu dalje biti korišćeni za lečenje restenoza, skerlodermitisa ili fibroze. Ovde opisani JAK inhibitori mogu biti dalje korišćeni za lečenje stanja u vezi sa hipoksijom ili astrogliozom kao što je, na primer, dijabetičarska retinopatija, kancer ili neurodegeneracije. Videti npr., Dudley, A.C. et al. Biochem. J.2005, 390(Pt 2):427-36 and Sriram, K. et al. J. Biol. Chem. 2004, 279(19):19936-47. Epub 2004 Mar 2. Ovde opisani JAK inhibitori mogu biti korišćeni za lečenje Alchajmerove bolesti.

[0108] Ovde opisani JAK inhibitori mogu biti dalje korišćeni za lečenje drugih inflamtornih bolesti kao što je sindrom sistemskog inflamatornog odgovora (SIRS) i septički šok.

[0109] Ovde opisani JAK inhibitori mogu biti dalje korišćeni za lečenje gihta i povećane veličine prostate usled npr. benigne hipertrofije prostate ili benigne hiperplazije prostate.

[0110] Dalje bolesti u vezi sa JAK obuhvataju bolesti u vezi sa resprpcijom kosti kao što su -osteoporoza, osteoartritis. Resorpcija kosti može takođe biti u vezi sa drugim stanjima kao što su hormonalna neravnoteža i/ili hormonska terapija, autoimuna bolest (npr. koštana sarkoidoza), ili kancer (npr. mijelom). Redukcija resorpcije kosti usled inhibitora JAK može biti oko 10%, oko 20%, oko 30%, oko 40%, oko 50%, oko 60%, oko 70%, oko 80%, ili oko 90%.

[0111] U nekim izvođenjima, ovde opisani JAK inhibitori mogu biti dalje korišćeni za lečenje poremećaja suvog oka. Ovde korišćen, "poremećaj suvog oka" ima nameru da obuhvati bolesna stanja koja su ukratko data u skorašnjem zvaničnom izveštaju Dry Eye Workshop (DEWS), koji definiše suvo oko kao "bolest pod uticajem više faktora, u vezi sa suzama i površinom oka koja rezultuje simptomina nelagodnosti, poremećaja vida, nestabilnošću suznog filma sa potencijalnim oštećenjima očne površine. Praćen je povećanom osmolarnošću suznog filma i zapaljenjem površine oka." Lemp, "The Definition and Classification of Dry Eye Disease: Report of the Definition and Classification Subcommittee of the International Dry Eye Workshop", The Ocular Surface, 5(2), 75-92 April 2007,. U nekim izvođenjima, poremećaj suvog oka je izabran između suvog oka deficijentog sa vodenim suzama (ADDE) ili isparljivog suvog oka, ili odgovarajuće njihove kombinacije. U nekim izvođenjima, poremećaj suvog oka je Sjogrenov sindrom suvog oka (SSDE). U nekim izvođenjima, poremećaj suvog oka je ne-Sjogrenov sindrom suvog oka (NSSDE).

[0112] U drugom aspektu, opisan je postupak lečenja konjuktivitisa, uveitisa (uključujući hronični uveitis), horioditis, retinitis, ciklitis, sklieritis, episkleritis, ili iritis; lečenje zapaljenja ili bola u vezi sa transplantacijom rožnjače, LASIK (laserom potpomognuta in situ keratomileuza), fotorefraktivna keratektomija, ili LASEK (laserom potpomognuta sub-epitelijalna keratomileuza); inhibiranje gubitka oštrine vida u vezi sa transplantacijom rožnjače, LASIK, fotorefraktivna keratektomija, ili LASEK; ili inhibiranje odbacivanja transplanta kod pacijenta kome je to potrebno, koje obuhvata davanje pacijentu terapeutski efikasne količine jedinjenja prema pronalasku ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0113] Dodatno, ovde opisana jedinejnja, ili u kombinaciji sa drugim JAK inhibitorima, kao što su oni zabeleženi u U.S. Ser. br. 11/637,545, mogu biti korišćeni u lečenju respiratorne disfunkcije ili otkazivanja u vezi sa virusnom infekcijom, kao što je grip i SARS.

[0114] Jedinjenje formule I, njihove farmaceutski prihvatljive soli, kako je opsiano u bilo kom od ovih izvođenja, može biti korišćeno u postupku lečenja bilo kog od ovde opisanih poremećaja ili bolesti. Takođe je obezbeđena upotreba jedinjenja formule I kako je opisano u bilo kom od ovih izvođenja, za dobijalnje leka za upotrebu u postupku lečenja bilo koje ovde opisane bolesti ili stanja.

[0115] Jedinjenje formule I koje je ovde opisano, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, mogu biti korišćeni u postupku modulacije JAK1. Takođe je obezeđena upotreba jedinjenja formule I koje je ovde opisano, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, za pripremanje leka za upotrebu u postupku modulovanja JAK1.

[0116] Ovde korišćen izraz "dovođenje u kontakt" odnosi se na spajanje navedenih delova u in vitro sistemu ili in vivo sistemu. Na primer, "dovođenje u kontakt" JAK sa jedinjenjem obuhvata davanje jedinjenja pojedincu ili pacijentu, kao što je čovek, koji ima JAK, kao i na primer, uvođenje jedinjenja u uzorak koji sadrži ćelijski ili prečišćeni preparat koji sadrži JAK.

[0117] Ovde korišćen izraz "pojedinac" ili "pacijent," korišćen zamenjivo, odnosi se na bilo koju životinju, uklčjučujući sisara, poželjno miša, pacova, drugih glodara, zečeva, mačaka, svinja, stoke, ovaca, konja ili primata i najpoželjnije ljudi.

[0118] Ovde korišćena, fraza "terepeutski efikasna količina" odnosi se na količinu aktivnog jedinjenja ili farmaceutskog sredstva koja izaziva biološki ili medicinski odgovor koji je viđen u tkivu, sistemu, životinji, pojedincu ili čoveku od strane istraživača, veterinara, lekara ili drugog. U nekim izvođenjima, teraputski efikasna količina je oko 5 mg do oko 1000 mg, ili oko 10 mg do oko 500 mg.

[0119] Ovde korišćen izraz "lečenje" ili "treatman" odnosi se na jedan ili više (1) koji sprečavaju bolest; na primer sprečavaju bolest, stanje ili poremećaj pojedinca koji može biti predisponiran za bolest, stanje ili bolest ali još uvek nije osetio i ispoljio patologiju ili simptome bolesti; (2) inhibiranje bolesti; na primer, inhibiranje bolesti, stanja ili poremećaja kod pojedinca koji je osetio ili ispoljio patologiju ili simptome bolesti, stanja ili poremećaja (tj., zaustavljanjem daljeg razvoja patologije i/ili simptoma); i (3) ublažavanje bolesti; na primer, ublažavanjem bolesti, stanja ili poremećaja kod pojedinca koji je osetio ili ispoljio patologiju ili simptome bolesti, stanja ili poremećaja (tj., preokretanje patologije i/ili simptoma) kao što je smanjenje ozbiljnosti bolesti.

Kombinovane terapije

[0120] Jedno ili više dodatnih farmakoloških sredstava kao što su na primer, hemoterapeutici, antiinflamatorna sredstva, steroidi, imunosupresivi kao i inhibitori Bcr-Abl, Flt-3, RAF i FAK kinaze kao što su, na primer, oni opisani u WO 2006/056399, ili druga sredstva mogu biti korišćeni u kombinaciji sa ovde opisanim jedinjenjima za lečenje bolesti, poremećaja ili stanja u vezi sa JAK. Jedan ili više dodatnih farmaceutskih sredstava mogu biti davana pacijentu simultano ili sekvencionalno.

[0121] Primer hemoterapeutika obuhvata inhibitore proteozoma (npr., bortezomib), talidomida, revlimida, i DNK-oštećujuća sredstva kao što su melfalan, doksorubicin, ciklofosfamid, vinkristin, etoposid, karmustin, i slično.

[0122] Primeri steroida obuhvataju kortikosteroide kao što su deksametazon ili prednizon.

[0123] Primer Bcr-Abl inhibitora obuhvata jedinjenja , i njegove farmaceutski prihvatljive soli, roda i vrsta opisanih u U.S. Pat. No.5,521,184, WO 04/005281, i U.S. Ser. br.60/578,491.

[0124] Primer pogodnih Flt-3 inhibitora uključuju jedinjenja i njihove farmaceutski prihvaljtive soli, kako su opisana u WO 03/037347, WO 03/099771, i WO 04/046120.

[0125] Primer pogodnih RAF inhibitora obuhvata jedinjenja i njihove farmaceutski prihvatljvie soli, koja su opsiana u WO 00/09495 i WO 05/028444.

[0126 ] Primer pogodnih FAK inhibitora uključuje jedinjenja i njihove farmaceutski prihvaltjive soli, kako je opisano u WO 04/080980, WO 04/056786, WO 03/024967, WO 01/064655, WO 00/053595, i WO 01/014402.

[0127] U nekim izvođenjima, jedinjenja prema pronalasku mogu biti korišćena u kombinaciji sa jednim ili više drugih inhibitora kinaza uključujući imatinib, naročito za lečenje pacijenata koji su otporni na imatinib ili druge inhibitore kinaza.

[0128] U nekim izvođenjima, jedan ili više JAK inhibitora mogu biti korišćeni u kombinaciji sa hemoterapeuticima u lečenju kancera, kao što je multiple mijelom, i mogu poboljšati lečenje odgovora u poređenju sa odgovorom na samo hemoterepautsko sredstvo, bez pogoršavanja njegovih toksičnih efekata. Primeri dodatnih farmaceutskih sredstava korišćenih u lečenju multiple mijeloma, na primer mogu uključiti bez ograničenja, melfalan, melfalan plus prednison [MP], doksorubicin, deksametazon, i Velcade (bortezomib). Dalje dodatna sredstva korišćena u lečenju multiple mijeloma obuhvataju inhibitore Bcr-Abl, Flt-3, RAF i FAK kinaze. Aditivni ili sinergijski efekti su poželjan ishod kombinovanja inhibitora JAK sa dodatnim sredstvom. Pored toga, otpornost ćelija multiple mijeloma na sredstva kao što je deksametazon mogu biti reverzibilna posle lečenja sa JAK inhibitorom. Sredstva mogu biti kombinovana sa prikazanim jedinjenjima u jednom ili kontinualnom doznom obliku, ili sredstva mogu biti davana simultano ili sekvencionalno u odvojenim doznim oblicima.

[0129] U nekim izvođenjima, kortikosteroid kao što je deksametazon je davan pacijentu u kombinaciji sa bar jednim JAK inhibitorom gde se deksametan daje povremeno nasuprot kontinualnom.

[0130] U nekim drugim izvođenjima, kombinacije jednog ili više JAK inhibitora prema pronalasku sa drugim terapeutskim sredstvima mogu biti davana pacijentu pre, u toku i/ili posle transplantacije koštane srži ili transplantacije stem ćelija.

[0131] U nekim izvođenjima, dodatno terapeutsko sredstvo je fluocinolon acetonid (Retisert®), ili rimeksolon (AL-2178, Vexol, Alcon).

[0132] U nekim izvođenjima, dodatno terapeutsko sredstvo je ciklosporin (Restasis®).

[0133] U nekim izvođenjima, dodatno terapeutsko sredstvo je kortikosteroid. U nekim izvođenjima, kortikosteroid je triamcinolon, deksametazon, fluocinolon, kortizon, prednisolon, ili flumetolon.

[0134] U nekim izvođenjima, dodatno terapeutsko sredstvo je izrabrano između Dehydrex™ (Holles Labs), Civamid (Opko), natrijum hijaluronata (Vismed, Lantibio/TRB Chemedia), ciklosporina (ST-603, Sirion Therapeutics), ARG101(T) (testosteron, Argentis), AGR1012(P) (Argentis), ecabet natrijum (Senju-Ista), gefarnata (Santen), 15-(s)-hidroksieikosatetraenske kiseline (15(S)-HETE), cevilemin, doksiciklin (ALTY-0501, Alacrity), minociklin, iDestrin™ (NP50301, Nascent Pharmaceuticals), ciklosporin A (Nova22007, Novagali), oksitetraciklin (Duramycin, MOLI1901, Lantibio), CF101 (2S,3S,4R,5R)-3,4-dihidroksi-5-[6-[(3-jodofenil)metilamino]purin-9-il]-N-metil-oksolan-2-karbamil, Can-Fite Biopharma), voklosporin (LX212 ili LX214, Lux Biosciences), ARG103 (Agentis), RX-10045 (sintetički analog resolvina, Resolvyx), DYN15 (Dyanmis Therapeutics), rivoglitazon (DE011, Daiichi Sanko), TB4 (RegeneRx), OPH-01 (Ophtalmis Monaco), PCS101 (Pericor Science), REV1-31 (Evolutec), Lacritin (Senju), rebamipid (Otsuka-Novartis), OT-551 (Othera), PAI-2 (University of Pennsylvania and Temple University), pilokarpin, takrolimus, pimekrolimus (AMS981, Novartis), loteprednol etabonat, rituksimab, dikvafosol tetranatrijum (INS365, Inspire), KLS-0611 (Kissei Pharmaceuticals), dehidroepiandrosteron, anakinra, efalizumab, mikofenolat natrijum, etanercept (Embrel®), hidroksihlorohin, NGX267 (TorreyPines Therapeutics), aktemra, gemcitabin, oksaliplatin, L-asparaginaze, ili talidomid.

[0135] U nekim izvođenjima, dodatno terapeutsko sredstvo je anti-angiogeno sredstvo, holinergični agonist, modulator TRP--1 receptora, blokator kalcijum kanala, sekretakog mucina, MUC1 stimulant, inhibitor kalcineurina, kortikosteroid, agonist P2Y2 receptora, agonist muskarinskog receptora, mTOR inhibitor, drugačiji JAK inhibitor, Bcr-Abl kinazni inhibitor, Flt-3 kinazni inhibitor, RAF kinazni inhibitor, i FAK kinazni inhibitor kao što su, na primer, oni opisani u WO 2006/056399. U nekim izvođenjima, dodatno terapeutsko sredstvo je derivat tetraciklina (npr., minociklin ili doksiklin). U nekim izvođenjima, dodatno terepeutsko sredstvo se vezuje za FKBP12.

[0136] U nekim izvođenjima, dodatno terapeutsko sredstvo je aliklaciono sredsvo ili sredstvo za umrežavanje DNK; anti-metabolit/demetilaciono sredstvo (npr., 5-flurouracil, kapecitabin ili azacitidin); anti-hormonska terapija (npr., anstagonista hormonskih receptora, SERMs, ili inhibitora aromotaze; mitotički inhibitor (npr. vinkristin ili paclitaksel); inhibitor topoizomeraze (I ili II) (npr. mitoksantron i irinotekan); induktori apoptoze (npr. ABT-737); terapija nukleinskom kiselinom (npr. antisens ili RNKi); ligandi nuklearnog receptora (npr., agonisti i/ili antagonisti: sve-trans retinska kiselina ili beksaroten); epigenetski ciljajuća sredstva kao što su inhibitori histon deacetilaze (npr. vorinostat), hipometilaciona sredstva (npr. decitabin); regulatori stabinosti proteina kao što su Hsp90 inhibitori, ubihitin i/ili konjugujući ili dekonjugujući molekuli slični ubihitinu; ili EGFR inhibitor (erlotinib).

[0137] U nekim izvođenjima, dodatna terapeutska sredstva su blagotvorne kapi za oči (takođe poznate kao "veštačke susze"), koje obuhvataju, ali bez ograničenja, kompozicije koje sadrže polivinilalkohol, hidroksipropil metilcelulozu, glicerin, polietilen glikol (npr. PEG400), ili karboksimetil celulozu. Veštačke suze mogu pomoći u lečenju suvog oka kompenzacijom za smanjeni kapacitet vlaženja i podmazivanja suznog filma. U nekim izvođenjima, dodatno terapeutsko sredstvo je mukolitički lek, kao što je N-acetil-cistein, koji može reagovati sa mukoprotinima i prema tome smanjiti viskoznost suznog filma.

[0138] U nekim izvođenjima, dodatna terapeutska sredstva obuhvataju antibiotik, antivirusna, antigljivična, anestetična i antiinflamatorna sredstva uključujući stereoidna i nestereoidna antiinflamatorna sredstva. Primeri pogodnih lekova obuhvataju aminoglikozide kao što su amikacin, gentamicin, tobramicin, streptomicin, netilmicin, i kanamicin; fluorohinolone kao što su ciprofloksacin, norfloksacin, ofloksacin, trovafloksacin, lomefloksacin, levofloksacin, i enoksacin; naftiridin; sulfonamidi; polimiksin; hloramfenikol; neomicin; paramomicin; kolistimetat; bacitracin; vankomicin; tetraciklini; rifampin i njihovi derivati ("rifampini"); cikloserin; beta-laktami; cefalosporini; amfotericini; flukonazol; flucitozin; natamicin; mikonazol; ketokonazol; kortikosteroidi; diklofenak; flurbiprofen; ketorolak; suprofen; kromolin; lodoksamid; levokabastin; nafazolin; antazolin; feniramin; ili azalidni antibiotik.

Farmaceutske formulacije i dozni oblici

[0139] Kada je korišćeno kao farmaceutsko sredstvo, jedinjenje prema pronalasku može biti davano u obliku farmaceutskih kompozicija. Ova jedinjenja mogu biti pripremljena na dobro poznat način u oblasti farmaceutike i mogu biti davana na različite načine, u zavisnosti da li je poželjno lokalno ili sistemsko lečenje i od oblasti koja se leči. Davanje može biti lokalno (uključujući transdermalne, epidermalne, oftalmološke i mukozne membrane koje obuhvataju intranazalno, vaginalno i rektalno davanje), pulmonarno (npr., inhalacijom ili insulfatacijom praha ili aerosola, uključujući nebulizer; intratrahealno ili intranazalno ), oralno ili parenteralno. Parenteralno davanje obuhvata intravensko, intraarterijalno, subkutanozno, intraperitonealno intramuskularno ili injekcijom ili infuzijom; ili intrakranialno, npr., intratekalno ili intraventikularno, davanje. Parenteralno davanje može biti u obliku jedne bolus doze, ili može biti na primer, kontinualnom perfuzionom pumpom. Farmaceutske kompozicije i formulacije za lokalno davanje mogu obuhvatati transdermalne flastere, masti, losione, kremove, gelove, kapi, supozitorije, sprejeve, tečnosti i prahove. Konvencionalni farmaceutski nosači, vodeni, praškasti ili uljane baze, zgušnjivači i slično mogu biti neophodni ili poželjni.

[0140] Obezbeđene su farmaceutske kompozicije koje sadrže, kao aktivno sredstvo, jedinjenje prema pronalasku ili njegovu farmaceutski prihvatljiva so, u kombinaciji sa jedim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača (ekscipijenata). U nekim izvođenjima, kompozicija je pogodna za lokalno davanje. U pripremanju kompozicija, aktivno sredstvo je tipično pomešano sa ekscipijentom, razblaženo sa ekscipijentom ili obuhvaćeno sa takvim nosačem u obliku, na primer, kapsule, kesice, papira ili drugog kontejnera. Kada ekscipijent služi kao razblaživač, on može biti čvrst, polu-čvrst, ili tečni materijal, koji deluje kao sredstvo, nosač ili medijum za aktivno sredstvo. Prema tome, kompozicije mogu biti u obliku tableta, pilula, lozengi, prahova, presovanih tableta, eliksira, suspenzija, emulzija, rastvora, sirupa, aerosola (kao čvrsta supstanca u tečnom medijumu), masti koje sadrže na primer do 10% masenih aktivne materija, meke i tvrde želatinske kapusle, supozitorije, sterilne injektibilne rastvore i sterilne spakovane prahove.

[0141] U pripremanju formulacije, aktivno jedinjenje može biti samleveno da bi se dobila odgovarajuća veličina čestica pre kombinovanja sa drugim sastojcima. Ukoliko je aktivno jedinjenje u suštini nerastvorno, može biti samleveno do veličine čestica manje od 200 meša. Ukoliko je aktivno jedinjenje u suštini rastvorno u vodi, veličina čestica može biti prilagođena mlevenjem da bi se u suštini obezbedila jednoobrazna raspodela u formulaciji, npr. oko 40 meša.

[0142] Jedinjenja mogu biti samlevena pomoću postupka melevanja kao što je vlažno mlevenje da bi se dobila odgovarajuća veličina čestica za obrazovanje tablete i za druge tipove formulacija . Fino raspoređeni preparati jedinjenja (nanopartikulati) mogu biti dobijeni postupcima dobro poznatim u ovoj oblasti, npr., videti međunarodnu prijavu br. WO 2002/000196.

[0143] Neki primeri pogodnih ekscipijenata obuhvataju laktozu, dekstrozu, saharozu, sorbitol. manitol, skrobove, gama akaciju, kalcijum fosfat, alginate, tragakant, želatin, kalcijum silikat, mikrokristalnu celulozu, polivinilpirolidon, celulozu, vodu, sirup i metil celulozu. Formulacije mogu dodatno obuhvatati; lubrikanse kao što je talk, magnezijum stearat, i mineralno ulje; sredstva za kvašenje; sredstva za emulgovanje i suspendovanje; sredstva za održavanje kao što su metil- i propilhidroksibenzoati; zaslađivači; i koregensi ukusa. Kompozicije mogu biti formulisane tako da obezbeđuju brzo, održano ili odloženo oslobađanje aktivne materije posle davanja pacijentu korišćenjem postupaka poznatih u ovoj oblasti t.

[0144] U nekim izvođenjima, farmaceutska kompozicija sadrži silicificiranu mikrokristalnu celulozu (SMCC) i bar jedno ovde opisano jedinjenje, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so. U nekim izvođenjima, silicificirana mikrokristalna celuloza sadrži oko 98% mikrokristalne celuloze i oko 2% silicijum dioksida mas/mas.

[0145] U nekim izvođenjima, kompozicija je kompozicija sa neprekidnim oslobađanjem bar jednog ovde opisanog jedinjenja, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i bar jednog farmaceutski prihvatljivog nosača. U nekim izvođenjima, kompozicija sadrži bar jedno ovde opisano jedinjenje, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i bar jednu komponentu izabranu između mikrokristalne celuloze, laktoze monohidrata, hidroksipropil metilceluloza, i polietilen oksida. U nekim izvođenjima, kompozicija sadrži bar jedno ovde opisano jedinjenje, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so , i mikrokristalnu celulozu, laktoza monohidrat, i hidroksipropil metilcelulozu. U nekim izvođenjima, kompozicija sadrži bar jedno ovde opisano jedinjenje, ili njegovu farmaceutski prihvatljiva so, i mikrokristalnu celulozu, laktoza monohidrat i polietilen. U nekim izvođenjima, kompozicija dalje sadrži magnezijum stearat ili silicijum dioksid. U nekim izvođenjima, mikrokristalna celuloza je Avicel PH102™. U nekim izvođenjima, laktoza monohidrat je Fast-flo 316™. U nekim izvođenjima, hidroksipropil metilceluloza je hidroksipropil metilceluloza 2208 K4M (npr., Methocel K4 M Premier™) i/ili hidroksipropil metilceluloza 2208 K100LV (npr., Methocel K00LV™). U nekim izvođenjima, polietilen oksid je polietilen oksid WSR 1105 (npr., Polyox WSR 1105™).

[0146] U nekim izvođenjima, postupak vlažne granulacije je korišćen za proizvodnju kompozicije. U nekim izvođenjima, postupak suve granulacije je korišćen za proizvodnju kompozicije.

[0147] Kompozicije mogu biti formulisane u jedinični dozni oblik, pri čemu svaka doza sadrži od oko 5 do oko 1,000 mg (1 g), uglavnom oko 100 mg do oko 500 mg, aktivnog sastojka. U nekim izvođenjima, svaka doza sadrži oko 10 mg aktivnog sredstva. U nekim izvođenjima, svaka doza sadrži oko 50 mg aktivnog sredstva. U nekim izvođenjima, svaka doza sadrži oko 25 mg aktivne supstance. Izraz "jedinični dozni oblici" odnosi se na fizički diskretne jedinice pogodne za jedinične doze za humane subjekte i druge sisare, svaka jedinična doza sadrži prethodno određenu količinu aktivnog materijala izračunatog da izaziva željeni terapeutski efekat, zajedno sa pogodnim farmaceutskim ekscipijentom.

[0148] U nekim izvođenjima, kompozicije sadrže od oko 5 mg do oko 50 mg aktivnog sredstva. Prosečan stručnjak će znati da ova izvođenja ili kompozicije sadrže oko 5 mg do oko 10 mg, oko 10 mg do oko 15 mg, oko 15 mg do oko 20 mg, oko 20 mg do oko 25 mg, oko 25 mg do oko 30 mg, oko 30 mg do oko 35 mg, oko 35 mg do oko 40 mg, oko 40 mg do oko 45 mg, ili oko 45 mg do oko 50 mg aktivne materije.

[0149] U nekim izvođenjima, kompozicije koje sadrže od oko 50 mg do oko 500 mg aktivne materije. Prosečan stručnjak iz ove oblasti će znati da jedinjenja prema izvođenjima ili kompozicije sadrže oko 50 mg do oko 100 mg, oko 100 mg do oko 150 mg, oko 150 mg do oko 200 mg, oko 200 mg do oko 250 mg, oko 250 mg do oko 300 mg, oko 350 mg do oko 400 mg, ili oko 450 mg do oko 500 mg aktivne materije.

[0150] U nekim izvođenjima, kompozicije sadrže od oko 500 mg do oko 1,000 mg aktivne materije. Prosečna stručnjak iz ove oblasti će znati da jedinjenja prema izvođenjima ili kompozicijama sadrže oko 500 mg do oko 550 mg, oko 550 mg do oko 600 mg, oko 600 mg do oko 650 mg, oko 650 mg do oko 700 mg, oko 700 mg do oko 750 mg, oko 750 mg do oko 800 mg, oko 800 mg do oko 850 mg, oko 850 mg do oko 900 mg, oko 900 mg do oko 950 mg, ili oko 950 mg do oko 1,000 mg aktivne materije.

[0151] Aktivno jedinjenje može biti efikasno u širokom opsegu i generalno se daje u farmaceutski efikasnoj količini. Razume se, međutim, da količina jedinjenja koje se stvarno daje će uglavnom biti određena od strane lekara, prema relevantim okolnostima, uključujući stanje koje se leči, izabrani put davanja, jedinjenja koje se daje, godina, mase i odgovora pojedinačnog pacijenta, ozbiljnosti simptoma pacijenata, i slično.

[0152] Za pripremanje čvrstih kompozicija kao što su tablete, glavni aktivni sastojak je pomešan sa farmaceutskim ekscipijentom da bi se obrazovala čvrsta preformulaciona kompozicija koja sadrži homogenu smešu jedinjenja prema prikazanom pronalasku. Kada se pozivana na ove preformulacione kompozicije kao homogene, aktivna materija je tipično ravnomerno dispergovana kroz kompoziciju tako da kompozicija može biti lako podeljena u jednako efiksane jedinične dozne oblike kao što su tablete, pilule i kaspule. Ova čvrsta preformulacija je zatim podeljena u jedinične dozne oblike gore opisanog tipa koje sadrže od, na primer, oko 0.1 do oko 1000 mg aktivnog sastojka prema prikazanom pronalasku.

[0153] Tablete ili pilule mogu biti obložene ili na drugi način formulisane da bi se obezbedio dozni oblik koji daje prednosti produženog dejstva. Na primer, tableta ili pilula mogu sadržati unutrašnju dozu i spoljašnju doznu komponentu, pri čemu je poslednja u obliku koverte preko prethodne. Dve komponente mogu biti odvojene entero slojem koji služi da se odupre dezitegraciji u želudcu i omogući da unutrašnja komponenta prođe netaknuta u dvanaestopalačno crevo ili da njeno oslobađanje bude odloženo. Različiti materijali mogu biti korišćeni za entero slojeve ili obloge, takvi materijali uključuju brojne polimerne kiseline i smeše polimernih kiselina sa takvim materijalim kao što je šelak, cetil alkohol, i acetat celuloze.

[0154] Tečni oblici u kojima jedinjenja i kompozicije mogu biti uključeni za davanje oralno ili injekcijom uključuju vodene rastvore, pogodno aromatizirane sirupe, vodene ili uljane suspenzije i aromatizirane emulzije sa jestivim uljima kao što su ulje semena pamuka, susamovo ulje, kokosovo ulje, ili ulje kikirikija, kao i eliksiri i slična farmaceutska sredstva.

[0155] Kompozicije za inhalaciju ili insufaciju obuhvataju rastvore i suspenzije u farmaceutski prihvatljivim vodenim ili organskim rastvaračima, ili njihovim smešama i prahovima. Tečne ili čvrste kompozicije mogu sadržati podgodan farmaceutski prihvatljiv ekscipijent kao što je opisano supra. U nekim izvođenjima, kompozicije su davane oralnim ili nazalnim respiratornim putem za lokalne ili sistemske efekte. Kompozicije mogu biti nebulizirane upotrebom inertnih gasova. Nebulizirani rastvori mogu biti udisani direktno iz nebulizacionog uređaja ili nebulizacioni uređaj može biti vezan za masku za lice ili povremenom za mašinu za disanje sa pozitivnim pritiskom. Kompozicije u rastvoru, suspenziji ili prahu mogu biti davane oralno ili nazalno iz uređaja koji daju formulaciju na odgovarajući način.

[0156] Lokalne formulacije mogu da sadrže jedan ili više pogodnih nosača. U nekim izvođenjima, masti mogu sadržati vodu i jedan ili više hidrofobnih nosača izabranih između, na primer, tečnih parafina, polioksietilen alkil etar, propilen glikol, beli vazelin, i slično. Kompozicije nosača mogu biti kremovi koji mogu biti zasnovani na vodi u kombinaciji sa glicerolom i jednom ili više drugih komponenti, npr. glicerinmonostearat, PEG-glicerinmonostearat i cetilstearil alkohol. Gelovi mogu biti formulisani korišćenjem izopropil alkohola i vode, pogodno u kombiinaciji sa drugim komponentama kao što su, na primer, glicerol, hidroksietil celuloza i slično. U nekim izvođenjima, lokalne formulacije sadrže bar oko 0.1, bar oko 0.25, bar oko 0.5, bar oko 1, bar oko 2, ili bar oko mas. % jedinjenja prema pronalasku. U lokalnim formulacijama mogu biti pogodno spakovane u tube, na primer, 100 g koji su opciono u vezi sa uputstvom za lečenje odabranih indikacija, npr. psorijaze ili drugih poremećaja kože.

[0157] Količina jedinjenja ili kompozicije davana pacijentu će varirati u zavisnosti od toga šta se daje, svrhe davanja, kao što je profilaksa ili terapija, stanja pacijenta, načina davanja, i slično. U terepautskim primernama, kompozicije mogu biti davane pacijentu koji već pati od bolesti u količini dovoljnoj za lečenje ili bar delimično zaustavljanje simptoma bolesti i njenih komplikacija. Efikasne doze će zavisiti od stanja bolesti koja se leči kao i od odluke nadležnog kliničara u zavisnosti od faktora kao što je ozbiljnost bolesti, godine, masa i opšte stanje pacijenta, i slično.

[0158] Kompozicije davane pacijentu mogu biti u obliku gore opisanih farmaceutskih kompozicija. Ove kompozicije mogu biti sterilizovane konvencionalnim tehnikama sterilizacije, ili mogu biti sterilno ceđene. Vodeni rastvori mogu biti spakovani za upotrebu kao takvi ili liofilizirani, liofilizirani preparat se kombinuje sa sterilnom vodom pre davanja. pH preparata jedinjenja tipično je između 3 i 11, poželjnije od 5 do 9 i najpoželjnije od 7 do 8. Razume se da upotreba izvesnih navedenih ekscipijenata, nosača i stabilizatora će dovesti do obrazovanja farmaceutskih soli.

[0159] Terapeutska doza jedinjenja prema prikazanom pronalasku može varirati prema, na primer, posebnoj upotrebi za koju je tretman napravljen, načina davanja jedinjenja, zdravlja i stanja pacijenta, i odluke nadležnog lekara. Odnos ili koncentracija jedinjenja prema pronalasku u farmaceutskoj kompoziciji može varirati u zavisnosti od bojnih faktora uključujući dozu, hemijske karakteristike (npr., hidrofobnost), i način davanja. Na primer, jedinjenja prema pronalasku mogu biti dobijena u vodenom puferisanom fiziološkom rastvoru koji sadrži oko 0.1 do oko 10% mas/v jedinjenja za parenteralno davanje. Neki tipični dozni opsezi su od oko 1 µg/kg do oko 1 g/kg telesne mase po danu. U nekim izvođenjima, dozni opseg je od oko 0.01 mg/kg do oko 100 mg/kg telesna mase po danu. Doza verovatno zavisi od takih promenjivih kao što su tip i koraken napredovanja bolesti ili poremećaja, stanje celokupnog zdravlja određenog pacijenta, relativna biološka efikasnost izabranog jedinjenja, formulacija ekscipijenta i način davanja. Efikasne doze mogu biti ekstrapolirane sa kriva doza-odgovor koje potiču od in vitro ili test sistema na životinjskom modelu.

[0160] Kompozicije mogu dalje obuhvatati jedan ili više dodatnih farmaceutski sredstava kao što su hemoterapeutsko, steroidno, antiinflamatorno jedinjenje ili imunosupresiv, primeri koji su gore dati.

[0161] U nekim izvođenjima, jedinjenje ili njegova farmaceutskiih prihvatljvia so, je davana kao oftamološka kompozicija. Prema tome, u nekim izvođenjima, postupci obuhvataju davanje jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive kompozicije, i oftamološki prihvatljivog nosača. U nekim izvođenjima, oftamološka kompozicija je tečna kompozicija, polu-čvrsta kompozicija, umetak, film, mikro čestice ili nano čestice .

[0162] U nekim izvođenjima, oftamološka kompozicija je tečna kompozicija. U nekim izvođenjima, oftamološka kompozicija je polu-čvrsta kompozicija. U nekim izvođenjima, oftamološka kompozicija je lokalna kompozicija. Lokalne kompozicije obuhvataju, ali bez ograničenja tečne i polutečne kompozicije. U nekim izvođenjima, oftamološka kompozicija je lokalna kompozicija. U nekim izvođenjima, lokalna kompozicija sadrži vodeni rastvor, vodenu suspenziju, mast ili gel . U nekim izvođenjima, oftamološka kompozicija je lokalno naneta na površinu oka, ispod gornjeg kapka, na donji kapak i u unutrašnji ugao oka (’cul-de-sac’). U nekim izvođenjima, oftamološka kompozicija je sterilizovana. Sterilizacija može biti postignuta poznatim tehnikama kao sterilizacija ceđenjem rastvora ili zagrevanjem rastvora u ampuli spremnoj za upotrebu. Oftamološke kompozicije mogu dalje sadržati farmaceutske ekscipijente pogodne za pripremanje oftamoloških formulacija. Primeri takvih ekscipijenata su sredstva za održavanje, sredstva za puferovanje, sredstva za helatiranje, antioksidansi, i soli za regulisanje osmotskog pritiska.

[0163] Ovde korišćen izraz "oftamološko prihvatljiv nosač" odnosi se na bilo koji materijal koji sadrži i oslobađa jedinjenje, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i koji je kompatibilan sa okom. U nekim izvođenjima, oftamološki prihvatljiv nosač je voda ili vodeni rastvor ili suspenzija, ali takođe obuhvata ulja kao što su ona koja se koriste za dobijanje masti i polimernih matrica kao što su one korišćene kao okularni umetci. U nekim izvođenjima, kompozicija može biti vodena suspenzija koja sadrži jedinejnja, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so. Tečne oftalmološke kompozicije, uključujuću i ulja i suspenzije, mogu imati viskoznost koja je pogodna za odabrane puteve davanja. U nekim izvođenjima, oftamološka kompozicija ima viskozni opseg od oko 1,000 do oko 30,000 centipoiza.

[0164] U nekim izvođenjima, oftamološke kompozicije mogu dalje sadržati jedan ili više površinski aktivnih materija, adjuvanata, pufera, antioksidansa, podešivača toničnosti, sredstava za održavanje (npr., EDTA, BAK (benzalkonijum hlorida), natrijum hlorita, natrijum perborata, polikvaterium-1), zgušćivača i modifikatora viskoznosti (npr., karboksimetil celuloza, hidroksimetil celuloze, polivinil alkohol, polietilen glikol, glikol 400, propilen glikol hidroksimetil celuloza, hidrokspropil-guar, hijaluronska ksielina, i hidroksipropil celuloza) i slično. Aditivi u formulaciji mogu uključiti, ali bez ograničenja, natrijum hlorid, natrijum bikarbonat, sorbinsku kiselina, metil paraben, propil paraben, hlorheksidin, ricinusovo ulje, i natrijum perborat.

[0165] Vodene oftamološke kompozicije (rastvori ili suspenzije) generalno ne sadrže fiziološki ili oftalmološki štetne sastojke. U nekim izvođenjima, prečišćena ili dejonizovana voda je korišćena u kompoziciji. pH može biti prilagođen dodavanjem i fizioloških i oftamološki prihvatljivih kiselina za podešavanje pH, baza ili pufera u okviru opsega od oko 5.0 do 8.5. Oftamološki prihvatljivi primeri kiselina obuhvataju sirćetnu, bornu, limunsku, mlečnu, fosfornu, hlorovodonilčnu, slično, i primeri baza obuhvataju samo natrijum hidrokside, natrijum fosfat, natrijum borat, natrijum citrat, natrijum aceta, natrijum laktat, trometamin, trishidroksimetilamino-metan, i slično. Soli i puferi obuhvataju citrate/dekstrozu, natrijum bikarbonat, amonijum hlorid i smeše gore pomenutih kiselina i baza.

[0166] U nekim izvođenjima, postupci obuhvataju obrazovanje ili obezbeđivanje depoa terapeutskog sredstva u kontaktu sa spoljašnjom površinom oka. Depo se odnosi na izvor terepautskog sredstva koje se ne uklanja brzo sa suzama ili drugim mehanizmima klirensa. Ovo omogućava kontinuirane, održavane visoke koncentracije terapeutskog sredstva koje je prisustno u tečnosti na spoljašnjoj površini oka sa jednom primenom. Bez namere da se ograniči teorijom, veruje se da apsorpcija i prodiranje može biti zavisno do rastvorene koncentracije leka i kontakta trajanja spoljašnjeg tkiva sa tečnošću koja sadrži lek. S obzirom da se lek uklanja kliransom iz očne tečnosti i/ili apsorpcijom u tkivo oka, obezbeđeno je više leka, npr. rastvoreno, u obogaćenoj očnoj tečnosti iz depoa. Prema tome, upotreba depoa može mnogo olakšati opterećenje očnog tkiva za nerastvornije terapeutsko sredstvo. U nekim izvođenjima, depot može ostati do osam sati ili više. U nekim izvođenjima, oftamološki oblci depoa obuhvataju, ali bez ograničenja, vodene polimerne suspenzije, masti i čvrste umetke.

[0167] U nekim izvođenjima, oftamološka kompozicija je mast ili gel. U nekim izvođenjima, oftamološka kompozicija je sredstvo za davanje u obliku ulja. U nekim izvođenjima, kompozicija sadrži bazu od petroleuma ili lanolina u koju se doda aktivni sastojak, uglavnom kao 0.1 do 2%, i ekscipijenti. Uobičajene baze mogu uključivati, ali bez ograničenja, mineralna ulja, petrolatuim i njihove kombinacije. U nekim izvođenjima, mast se nanosi na traku na donji kapak.

[0168] U nekim izvođenjima, oftamološka kompozicija je oftamološki umetak. U nekim izvođenjima, oftamološki umetak je biološki inertni, mekan, bioerozivan, viskoelastičan, stabilan na sterilizaciju posle izlaganja terapeutskim sredstvima, otporan na infekcije na bakterije iz vazduha, bio-erozivan, biokompatiblan, i/ili viskoelastičan. U nekim izvođenjima, umetak sadrži oftamološki prihvatljiv matriks, npr., polimerni matriks. Matriks je tipično polimer i terapeutski sredstvo je generalno disperovano u njemu ili vezano za polimerni matriks. U nekim izvođenjima, terapeutsko sredstvo može biti polako oslobađeno iz matriksa preko rastvaranja ili hidrolize kovalene veze. U nekim izvođenjima, polimer je bioerozivan (rastvoran) i njegova brzina rastvaranja može kontrolisati brzinu oslobađanja terapeutskog sredstva koje je u njemu dispergovano. U još jednom obliku, polimerni matriks je biodegradabilni polimer koji se raspada kao na pr. hidrolizom da bi se oslobodilo za njega vezano terapeutsko sredstvo ili u njemu dispergovano. U drugim izvođenjima, matriks i terapeutsko sredstvo mogu biti okruženi sa dodatnom oblogom polimera radi dalje kontrole oslobađanja. U nekim izvođenjima, umetak se sastoji od biodegradabilnog polimera kao što je polikaprolakton (PCL), etilen/vinilni acetat kopolimer (EVA), polialkil cijanoakrilat, poliuretan, najlon, ili poli (dl-laktid-koglikolid) (PLGA), ili koplimer bilo kog od ovih. U nekim izvođenjima, terapeutsko sredstvo je disperovano u materijalu matrice ili dispergovano u kompoziciji monomera korišćenoj da bi se napravo materijal matriksa pre polimerizacije. U nekim izvođenjima, količina terapeutskog sredstva je od oko 0.1 do oko 50%, ili od oko 2 do oko 20%. U drugim izvođenjima, biodegradabilni ili bioerozioni polimerni matriks je korišćen tako da potrošena umetnuta doza ne treba biti uklonjena. Kada je biodegradibilni ili bioerozini polimer degradiran ili rastvoren, terapeutsko sredstvo je oslobođeno.

[0169] U drugim izvođenjima, oftamološki umetak sadrži polimer, uključujući ali bez ograničenja, one opisane u Wagh, et al., "Polymers used in ocular dosage form and drug delivery systems", Asian J. Pharm., strane 12-17 (Jan. 2008). U nekim izvođenjima, umetak sadrži polimer izabran između polivinilpirolidona (PVP), akrilata ili metakrilatnog polimera ili polimernog matriksa (npr., Eudragit® familija polimera iz Rohm ili Degussa), hidroksimetil celuloze, poliakrilne kiseline, poli(amidoamin) dendrimera, poli(dimetil siloksan), polietilen oksida, poli(laktid-ko-glikolid), poli(2-hidroksietilmetakrilat), poli(vinil alkohola), ili poli(propilen fumarata). U nekim izvođenjima, umetak sadrži Gelfoam® R. U nekim izvođenjima, umetak je poliakrilna kiselina 450 kDa-cistein konjugata.

[0170] U nekim izvođenjima, oftamološka kompozicija je oftamološki film. Polimeri pogodni za takve filmove obuhvataju, ali bez ograničenja, one opisane u Wagh, et al. (ibid), U nekim izvođenjima, film je meko kontaktno sočivo, kao što su one napravljena od kopolimera N,N-dietilakrilamida i metakrilne kiseline umerežene sa etilenglikol dimetakrilata.

[0171] U nekim izvođenjima, oftamološka kompozicija sadrži mikrosfere ili nanočestice. U nekim izvođenjima, mikrosfere sadrže želatin. U nekim izvođenjima, mikrosfere su injektovane u posteriorni segment oka, u hroroidalni prostor, u skleru, intravenski ili subretinalno. U nekim izvođenjima, microsfere ili nanočestice sadrže polimer koji obuhvata, ali bez ograničenja one opisane Wagh, et al. (ibid). U nekim izvođenjima, polimer je hitosan, polikarboksilna kiselina kao što je poliakrilna kiselina, albuminske čestice, estri hijaluronske kiseline, poliitakonska kiselina, poli(butil)cijanoakrilat, polikaprolakton, poli(izobutil)kaprolakton, poli(mlečna kiselina-koglikolna kiselina), ili poli(mlečna kiselina). U nekim izvođenjima, mikrosfere ili nanočestice sadrže čvrste lipidne čestice.

[0172] U nekim izvođenjima, oftamološka kompozicija sadrži jonoizmenjivačku smolu. U nekim izvođenjima, jono-izmenjivačka smola je neorganski zeolit ili sintetička organska smola. U nekim izvođenjima, jonoizmenjivačka smola obuhvata, ali bez ograničenja, one opisana u Wagh, et al. (ibid). U nekim izvođenjima, jonoizmenjivačka smola je delimično neutralizovana poliakrilnom kiselinom .

[0173] U nekim izvođenjima, oftamološka kompozicija je vodena polimerna suspenzija. U nekim izvođenjima, terapeutsko sredstvo ili polimerno sredstvo za suspendovanje je suspenodvano u vodenom medijumu. U nekim izvođenjima, vodene polimerne suspenzije mogu biti formulisane tako da zadržavaju istu ili u suštini istu viskoznost u oku koji imaju pre davanja u oko. U nekim izvođenjima, one mogu biti formulisane tako da se povećava geliranje posle kontakta sa suzom u oku.

Obeležena jedinjenja i postupci testiranja

[0174] Još jedan aspekt odnosi se na obeležena jedinjenja prema pronalasku (radioaktivno obeležana, fluorescentno obeležena, itd.) koja bi bila korisna ne samo u tehnikama snimanja, nego takođe i u testovima, i in vitro i in vivo, za lokalizaciju i kvatifikaciju JAK u uzorcima tkiva, uključujući čoveka, i za identifikovanje JAK liganada inhibicijom vezivanja obeleženog jedinjenja. Prema tome, takođe su opisani JAK testovi koji sadrže tako obeležena jedinjenja.

[0175] Ovde opisana jedinjenja mogu biti izotopski obeležena jedinjenja. "Izotopski" ili "radioaktivno obeleženo" jedinjenje je jedinjenje u kome jedan ili više atoma je zamenjeno sa atomom koji ima atomsku masu ili maseni broj koji je različit od atomske mase ili masenog broja koji se uobičajeno nalazi u prirodi (tj., koji se javlja u prirodi). Pogodni radioaktnivni nuklidi koji mogu biti ugrađeni u jedinjenja prema prikazanom pronalasku obuhvataju, ali bez ograničenja<3>H (takođe napisanog T za tricijum),<11>C,<13>C,<14>C,<13>N,<15>N,<15>O,<17>O,<18>O,<18>F,<35>S,<36>Cl,<82>Br,<75>Br,<76>Br,<77>Br,<123>I,<124>I,<125>I i<131>I. Radionuklid koji je ugrađen u trenutana radioaktivno obeležena jedinjenja će zavisiti od specifične primerne radioaktivno obeleženog jedinjenja. Na primer, za in vitro JAK obeležavanje i kompeticione testove, jedinjanja koja uključuju<3>H,<14>C,<82>Br,<125>I,<131>I,<35>S ili će generalno biti najkorisnija. Za primerne radioaktivnog snimanja<11>C,<18>F,<125>I,<123>I,<124>I,<131>I,<75>Br,<76>Br ili<77>Br će generalno biti najkorisniji.

[0176] Razume se da "radio-aktivno obeleženo" ili "obeleženo jedinjenje" je jedinjenje koje je uključeno u bar jedan radionuklid. U nekim izvođenjima radionuklid je izabran iz grupe koju čine<3>H,<14>C,<125>I,<35>S i<82>Br. U nekim izvođenjima, jedinjenje obuhvata 1, 2, ili 3 atoma deuterijuma.

[0177] Takođe opisani su sintetički postupci za ugrađivanje radioaktivnih izotopa u jedinjenja. Sintetički postupci za ugradnju radioaktivnih izotopa u organska jedinjenja su dorbo pozanti u ovoj oblasti, i ososba iz stuke će lako prepoznati postupke koji se primenjuju za jedinjenja prema pronalasku.

[0178] Obeleženo jedinjenje prema pronalasku može biti korišćeno u testu skrininga za identifikovanje/procenu jedinjenja. Na primer, novositetizovano ili identifikovano jedinjenje (tj., test jedinjenje) koje je obeleženo može biti procenejno na njegovu sposobnost za vezivanje JAK praćenjem njenih varijacija kada su u kontaktu sa JAK, preko praćenja obeležavanja. Na primer, testirano jedinjenje (obeleženo) može biti procenjeno za njegovu sposobnost da smanji vezivanje za drugo jedinjenje koje je poznato da se veže za JAK (tj., standardno jedinjenje). Prema tome, sposobnost testiranog jedinejnja da se takmiči sa standardnim jedinjenjem za vezivanje za JAK u direktnoj je korelaciji sa njegovim vezujućim afinitetom. Nasupro tome, u nekim od drugim skrining testovima, standardno jedinjenje je obeleženo i testirana jedinjenje su neobeležena. Prema tome, koncentracija obeleženog standardnog jedinejnje je praćena u cilju procene kompeticije između standardnih jedinjenja i testiranih jedinjenja, i prema tome je konstatovan relativan afinitet vezivanja testiranog jedinjenja.

Kitovi

[0179] Takođe su opisani farmaceutaki kitovi korisni, na primer, u lečenju ili prevenciji bolesti ili poremećaja u vezi sa JAK, kao što je kancer, koji uključuju jedan ili više kontejnera farmaceutske kompozicije koja sadrži terapeutski efikasnu količinu jedinjenja prema pronalasku. Takvi kitovi mogu dalje obuhvatati, ukoliko je pogodno, jedan ili više različitih konvencionalnih farmaceutskih kompomentnti kita, kao, na primer, kontejneri sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, dodatnih kontejnera, itd. što će biti očigledno osobama iz struke. Instrukcije, ili kao umetci ili kao nalepnice, ukazuju na količine komponenti koje se daju, načine davanja i/ili uputstva za mešanje komponenti, mogu takođe biti obuhvaćena kitom.

[0180] Pronalazak će biti opisan većim delom preko specifičnih primera. Sledeći primeri su ponuđeni za ilustrativne svrhe, i nemaju nameru da obraničavaju pronalazak na bilo koji način. Osobe iz struke će lako prepozanti različite nekritične parametre koji mogu biti izmenjeni ili modifikovani da dovedu do suštinski istih rezultata. Jedinjenja prema primerima je ustnovljeno da su JAK inhibitori prema bar jednom od ovde opisanih testova .

PRIMERI

[0181] Jedinjenje iz primera 1 je jedinjenja za upotrebu prema pronalasku, i soli iz primera 358 i 398 su soli za upotrebu prema pronalasku. Primer 399 opisuje kompozicije soli za upotrebu prema pronalasku. Druga jedinjenja opisana u primerima su obuhvaćena kao reference.

[0182] Jedinjenja iz donjih primera koja sadrže jedan ili više hiralnih centara su dobijena u enantiomerno čistom obliku ili kao racemske smeše osim ukoliko nije drugačije navedeno.

[0183] Osim ukoliko nije drugačije navedeno, jedinjenja iz primera su prečišćena sa HPLC uključujući kisele uslove (postupak A) i dobijena su kao TFA soli ili korišćenjem baznih jedinejnja (postupak B) i dobijena su kao slobodne baze.

Postupak A:

[0184]

Kolona: Waters Sun Fire C18, 5 µm veličina čestica, 30 x 100 mm;

Mobilna faza: voda (0.1% TFA)/acetonitril

Brzina protoka: 60 mL/min

Gradijent: 5 min ili 12 min od 5% acetonitril/95% voda do 100% acetonitril

Postupak B:

[0185]

Kolona: Waters X Bridge C18, 5 μm veličina čestica, 30 x 100 mm;

Mobilna faza: voda (0.15% NH4OH)/acetonitril

Postupak C:

[0186]

Kolona: C18 kolona, 5 µm OBD

Mobilna faza: voda 0.05% NH4OH (A), CH3CN 0.05% NH4OH (B)

Gradijent: 5% B do 100% B u 15 min

Brzina protoka: 60 mL/min

Primer 1. {1-{1-[3-Fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0187]

Korak A: terc-Butil 3-Oksoazetidin-1-karboksilat

[0188]

[0189] U smešu terc-butil 3-hidroksiazetidin-1-karboksilata (10.0 g, 57.7 mmol), dimetil sulfoksida (24.0 mL, 338 mmol), trietilamina (40 mL, 300 mmol) i metilen hlorida (2.0 mL) dodat je sumpor trioksid-piridinski kompleks (40 g, 200 mmol) u porcijama na 0 °C. Smeša je mešana u toku 3 sata, zaustavljena sa rastvorom soli, i esktrahovana metilen hloridom. Spojeni ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđeni, i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni od silikagela (0-6% etil acetat (EtOAc) u heksanima) da bi se dobio terc-butil 3-oksoazetidin-1-karboksilat (5.1 g, 52% prinos).

Korak B: terc-Butil 3-(Cijanometilen)azetidin-1-karboksilat

[0190]

[0191] 4-grli balon sa okruglim dnom od 1l osušen u sušnici snabdeven je sa mešalicom, zapušačem, ulazom za azot, kapalicom od 250 ml i termoparom je napunjem sa natrijum hidridom (5.6 g, 0.14 mol) i tetrahidrofuranom (THF) (140 mL) u atmosferi azota. Smeša je ohlađena na 3 °C, i zatim je u nju sipan dietil cijanometilfosfonat (22.4 mL, 0.138 mol) u kapima preko šprica u toku 20 minuta. Rastvor je postao svetlo žuta suspenzija. Reakcija je zatim mešana u toku 75 minuta dok je zagrejavana na 18.2 °C. Pripremljen je rastvor terc-butil 3-oksoazetidin-1-karboksilata (20 g, 0.1 mol) u tetrahidrofuranu (280 mL) u balonu sa okruglim dnom osušenim u sušinici, sa kojim je napunjena kaplica preko cevčive, i zatim dodat u reakcionu smešu u toku 25 minuta. Reakcioni rastvor je postao crven. Omogućeno je da se reakcija meša u toku noći. Reakcija je proverena posle 24 sata sa TLC (70% heksan/EtOAc) i ustanovljeno je da je završena. Reakcija je razblažena sa 20% rastvorom soli i 250 mL EtOAc. Rastvor je razdeljen i vodena faza je ekstrahovana sa 250 mL EtOAc. Spojena organska faza je osušena iznad MgSO4i proceđena, uparena pod sniženim pritiskom i prečišćena fleš hromatografijom (0% do 20% EtOAc/heksani, 150 g fleš kolona) da bi se dobio željeni proizvod, terc-butil 3-(cijanometilen)azetidin-1-karboksilat (15 g, 66.1% prinos).

Korak C: 4-Hloro-7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin

[0192]

[0193] U suspenziju natrijum hidrida (36.141 g, 903.62 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (118 mL) na -5 °C (led/so kupatilo) dodat je polako tamni rastvor 4-hloropirolo[2,3-d]pirimidina (119.37 g, 777.30 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (237 mL). Balon i kapalica su isprani sa N,N-dimetilacetamidom (30 mL). Odmah je razvijena velika količina gasa. Smeša je postala blago zamućena narandžasta smeša. Smeša je mešana na 0 °C u toku 60 min da bi se dobila svetlo braon mutna smeša. U reakcionu smešu je polako dodat [2-(trimetilsilil)etoksi]metil hlorid (152.40 g, 914.11 mmol) i reakcija je mešana na 0 °C u toku 1 h. Reakciona smeša je zaustavljena sporim dodavanjem 12 mL H2O. Dodato je još vode (120 mL), a zatim metil terc-butil etar (MTBE) (120 mL). Smeša je mešana u toku 10 min. Organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ekstrahovan sa još jednim delom MTBE (120 mL). Organski ekstrakti su spojeni, isprani sa rastvorom soli (120 mL x 2) i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod 4-hloro-7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidina kao tamno ulje Prinos: 85.07 g (97%); LC-MS: 284.1 (M+H)+. Sledeća reakcija je izvedena bez prečišćavanja.

[0194]

Korak D: 4-(1H-Pirazol-4-il)-7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7Hpirolo[2,3-d]pirimidin

[0195] Balon sa okruglim dnom od 1000 mL je napunjen sa 4-hloro-7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3d]pirimidinom (10.00 g, 35.23 mmol), 1-butanolom (25.0 mL), 1-(1-etoksietil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazolom (15.66 g, 52.85 mmol), vodom (25.0 mL) i kalijum karbonatom (12.17 g, 88.08 mmol). Ovaj rastvor je degasiran 4 puta, punjenjem sa azotom svaki put. U rastvor je dodat tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (4.071 g, 3.523 mmol). Rastvor je degasiran 4 puta, punjenjem sa azotom svaki put. Smeša je mešana u toku noći na 100 °C. Pošto je ohlađena na sobnu temperaturu, smeša je proceđena preko sloja celita i celit je ispran sa etil acetatom (42 mL). Filtrat je spojen i organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom. Organski ekstrakti su spojeni i koncentrovani pod vakuumom sa temepraturom kupatila 30-70 °C da bi se dobilo krajnje jedinjenje 4-(1H-pirazol-4-il)-7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3d]pirimidin. Prinos: 78%. LC-MS: 316.2 (M+H)<+>.

Korak E: terc-Butil 3-(Cijanometil)-3-[4-(1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-]H-pirazol1-il]azetidine-1-karboksilat

[0196]

[0197] Balon sa okruglim dnom od 2 L je snabdeven sa mešalicom, zapušačem i uvodnikom azota koji je napunjen sa terc-butil 3-(cijanometilen)azetidin-1-karboksilatom (9.17 g, 0.0472 mol), 4-(1H-pirazol4-il)-7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidinom (14.9 g, 0.0472 mol) i acetonitrilom (300 mL). Dobijeni rastvor je heterogen. U rastvor je dodat 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undek-7-en (8.48 mL, 0.0567 mol) u porcijama pomoću šprica u toku 3 min na sobnoj temepraturi. Rastvor je polako postao homogen i žute boje. Omogućeno je da se reakcija meša na sobnoj temepraturi u toku 3 h. Reakcija je završena sa HPLC-om i LC/MS i koncentrovana je na rotacionom uparivaču da bi se uklonio acetonitril (∼150 mL). EtOAc (100 mL) je dodat, praćen sa 100 ml 20% rastvora soli. Dve faze su razdeljene. Vodena faza je ekstrahovana sa 150 mL EtOAC. Spojene organske faze su osušene iznad MgSO4, proceđene i koncentrovane da bi se dobilo narandžasto ulje. Prečišćavanje fleš hromatografijom (150 grama silicijum dioksida, 60% EtOAc/heksani, napunjeni sa CH2Cl2) dali su naslovno jedinjenje terc-butil 3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-karboksilat kao žuto ulje (21.1 g, 88% prinos). LC-MS: [M+H]<+>= 510.3.

Korak F: {3-[4-(7-{[2-(Trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril dihidrohlorid

[0198]

[0199] U rastvor terc-butil 3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-karboksilata(2 g, 3.9 mmol) u 10 mL THF dodato je 10 mL 4 N HC1 u dioksanu. Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 1 sata i koncentrovan in vacuo da bi se dobilo 1.9 g (99%) jedinjenja prema naslovu kao beli prah, koji je je korišćen u sledećoj reakciji bez prečišćavanja. LC-MS: [M+H]<+>= 410.3.

Korak G: terc-Butil 4-{3-(Cijanometil)-3-[4-(1-{[2-(trimetilsilil) etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1Hpirazol-1-il]azetidin-1-il)piperidin-1-karboksilat

[0200]

[0201] U rastvor {3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril dihidrohlorida (2.6 g, 6.3 mmol), terc-butil 4-okso-1-piperidinkarboksilata (1.3 g, 6.3 mmol) u THF (30 mL) dodati su N,N-diizopropiletilamin (4.4 mL, 25 mmol) i natrijum triacetoksiborohidrid (2.2 g, 10 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku noći. Posle dodavanja 20 mL rastvora soli, rastvor je ekstrahovan sa EtOAc. Ekstrakt je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan. Ostatak je prečišćen Combiflash kolonom eluiranjem sa 30-80 % EtOAc u heksanima da bi se dobilo željeni proizvod, terc-butil 4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil) etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}piperidin-1-karboksilat.

Prinos: 3.2 g (86%); LC-MS: [M+H]<+>= 593.3.

Korak H: {1-Piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il)acetonitril trihidrohlorid

[0202]

[0203] U rastvor terc-butil 4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil) etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}piperidin-1-karboksilata (3.2 g, 5.4 mmol) u 10 mL THF je dodato 10 mL 4 N HCl u dioksanu. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 2 sata. Uklanjanjem rastvarača pod sniženim pritiskom dobijeno je 3.25 g (100%) {1-piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohlorida kao belog praha koji je korišćen direktno u sledećoj reakciji. LC-MS: [M+H]<+>= 493.3.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.42 (s 1H), 9.21 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.39 (d, 1H), 5.68 (s, 2H), 4.96 (d, 2H), 4.56 (m, 2H), 4.02-3.63 (m, 2H), 3.55 (s, 2H), 3.53 (t, 2H), 3.49-3.31 (3, 3H), 2.81 (m, 2H), 2.12 (d, 2H), 1.79 (m, 2H), 0.83 (t, 2H), -0.10 (s, 9H).

Korak I: {1-{1-[3-Fluoro-2-(trfjluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0204]

[0205] Smeša {1-piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohlorida (1.22 g, 2.03 mmol), 3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinske kiseline (460 mg, 2.2 mmol), benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata (1.07 g, 2.42 mmol), i trietilamina (2.0 mL, 14 mmol) u dimetilformamidu (DMF) (20.0 mL) je mešana na sobnoj temperaturi u toku noći. LS-MS je pokazala da je reakcija završena. EtOAc (60 mL) i zasićeni vodeni rastvor NaHCO3(60 mL) su dodati u reakcionu smešu. Posle mešanja na sobnoj temperaturi u toku 10 minuta, organska faza je odvojena i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc tri puta. Spojena organska faza je isprana sa rastvorom soli, osušena iznad anhidrovanog Na2SO4proceđena i uparena pod sniženim pritiskom. Prečišćavanjem sa fleš hromatografijom dobijen je željeni proizvod {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril. LC-MS: 684.3 (M+H)<+>.

Korak J: {1-{1-[3-Fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0206]

[0207] U rastvor {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila (56 mg, 0.1 mmol) u metilen hloridu (1.5 mL) dodata je trifluorosirćetna kiselina (1.5 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 2 sata. Posle uklanjanja rastvarača u vakuumu, ostatak je rastvoren u rastvoru metanola koji sadrži 20% etilendiamina. Posle mešanja na sobnoj temperaturi u toku 1 sat, rastvor je prečišćen sa HPLC (postupkom B) da bi se dobilo naslovno jedinjenje.

LC-MS: 554.3 (M+H)<+>;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): 9.71 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.55 (d, J=4.6 Hz, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.52 (t, J=4.6 Hz, 1H), 7.39 (dd, J1=3.4 Hz, J2=1.5 Hz, 1H), 6.77 (dd, J1=3.6 Hz, J2=0.7 Hz, 1H), 4.18 (m, 1H), 3.75 (m, 2H), 3.63 (dd, J1=7.8 Hz, J2=3.7 Hz, 2H), 3.45 (m, 2H), 3.38 (s, 2H), 3.11 (m, 1H), 2.57 (m, 1H), 1.72 (m, 1H), 1.60 (m, 1H), 1.48 (m, 1H), 1.40 (m, 1H).

Primer 2. {1-[1-(3-Fluoro-4-hinolin-6-ilbenzoil)piperidin-4-il]-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0208]

Korak A: {4-[(4-{3-(Cijanometil)-3-[4-(1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil)-1H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1il]azetidin-1-il)piperidin-1-il)karbonil]-2-fluorofenil}boronska kiselina

[0209]

[0210] U rastvor {1-piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohlorida (1.0 g, 2.0 mmol) u metilen hloridu (DCM) (10 mL) dodat je benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfat (1.2 g, 2.6 mmol), N,N-diizopropiletilamin (1.1 mL, 6.1 mmol), i 4-(dihidroksiboril)-3-fluorobenzeva kiselina (0.37 g, 2.0 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temepraturi u toku noći. Rastvarači su uklonjeni pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen pomoću HPLC da bi se dobilo 0.54 g (41%) odgovarajućeg proizvoda {4-[(4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7Hpirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}piperidin-1-il)karbonil]-2-fluorophenil}boronske kiseline. LC-MS:659.3 (M+H)<+>.

Korak B: {1-[1-(3-Fluoro-4-hinolin-6-ilbenzoil)piperidin-4-il]-3-[4-(1H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0211] U rastvor {4-[(4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}piperidin-1-il)karbonil]-2-fluorofenil}boronske kiseline (50 mg, 0.08 mmol) u DMF-u (2 mL) su dodati 6-bromohinolin (15 mg, 0.076 mmol), trietilamin (0.021 mL, 0.15 mmol) i 3 kapi 2 N vodenog rastvora K2CO3. Smeša je degasirana i dodat je bis(trifenilfosfin)paladijum(II) hlorid (5.4 mg, 0.0076 mmol). Reakciona smeša je mešana na 140 °C u mikrotalasnoj pećnici u toku 25 minuta, i zatim ohlađena na sobnu temperaturu i proceđena. Filtrat je prečišćen sa HPLC da bi se dobio beli prah. Beli prah je rastvoren u 5 mL DCM/TFA (1:2). Posle mešanja na sobnoj temperaturi u toku 1 sata, rastvor je koncentrovan. Ostatak je rastvoren u 5 mL 10% etilendiamina u THF. Posle mešanja na sobnoj temperaturi u toku 2 sata, rastvor je koncentrovan. Ostatak je prečišćen sa HPLC (postupak B) da bi se dobilo naslovno jedinjenje {1-[1-(3-fluoro-4-hinolin-6-il-benzoil)piperidin-4-il]-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril. LC-MS: 612.2 (M+H)<+>.

[0212] Sledeća jedinjenja su pripremljena postupkom analognim onom iz primera 1 ili primera 2.

Primer 138. 3-[(3-{3-(Cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-8azabiciklo[3.2.1]okt-8-il)karbonil]-5-fluorobenzonitril

[0213]

Korak A: terc-Butil 3-{3-(Cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat

[0214]

[0215] U rastvor {3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril dihidrohlorida (2.6 g, 6.3 mmol) u THF (30 mL) je dodat terc-butil 3-okso-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat (1.3 g, 6.3 mmol), N,N-diizopropiletilamin (4.4 mL, 25 mmol) i natrijum triacetoksiborohidrid (2.2 g, 10 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku noći i zaustavljena dodavanjem 20 mL rastvora soli. Rastvor je ekstrahovan sa EtOAc. Ekstrakt je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4Posle uklanjanja rastvarača, ostatak je prečišćen Combiflash kolonom eluitanjem sa 30-80 % EtOAc u heksanima da bi se dobio željeni proizvod terc-butil 3-{3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin1-il}-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat. LC-MS: 619.3 (M+H)<+>.

Korak B: {1-(8-Azabiciklo[3.2.1]okt-3-il)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohlorid

[0216]

[0217] U rastvor terc-butil 3-{3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilata (123 mg, 0.2 mmol) u THF (3 mL) je dodat 4 N rastvor HCl u dioksanu (3 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi u toku 2 sata, rastvor je koncentrovan. Dobijeni ostatak je korišćen u sledećoj reakciji. LC-MS: 519.3 (M+H)<+>.

Korak C: 3-[(3-{3-(Cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-8-azabiciklo[3.2.1]okt-8-il)karbonil]-5-fluorobenzonitril

[0218] Smeša {1-(8-azabiciklo[3.2.1]okt-3-il)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila (100.0 mg, 0.193 mmol), 3-cijano-5-fluorobenzojeve kiseline (31.8 mg, 0.193 mmol), benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata (93.8 mg, 0.212 mmol), i trietilamina(0.108 mL, 0.771 mmol) u DMF (3.0 mL) je mešana na sobnoj temperaturi u toku 2 sata. Prečišćavanjem sa HPLC dobijen je kuplovan proizvod kao beli prah. LCMS nađeno: 666.3 (M+1)<+>. Beli prah je rastvor u trifluorosirćetnoj kiselini (2 mL) i metilen hloridu (2 mL). Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 1 sat. Rastvarači su upareni do suvog. Ostatak je tretiran sa metanolom (3 mL) i etilendiaminom (0.3 mL, 4 mmol) u toku 1 sata na sobnoj temperaturi. Prečišćavanjem sa HPLC-om postupkom A dobijeno je naslovno jedinjenje 3-[(3-{3-(cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-8-azabiciklo[3.2.1]okt-8-il)karbonil]-5-fluorobenzonitril kao TFA so. LCMS nađeno: 536.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.93 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.72 (m, 3H), 7.18 (s, 1H), 4.53 (m, 2H), 3.80 (m, 1H), 3.57 (m, 6H), 1.55-2.08 (m, 8H).

[0219] Sledeća jedinjenja su dobijena postupkom analognim onome iz primera 138.

Primeri 149 i 150. Diastereoizomeri {1-[1-(3-fluorobenzoil)-2-metilpiperidin-4-il]-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila

[0220]

Korak A: terc-Butil 4-{3-(Cijanometil)-3-[4-(1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-2-metilpiperidin-1-karboksilat

[0221]

[0222] U rastvor {3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril dihidrohlorida (2.6 g, 6.3 mmol) i terc-butil 2-metil-4-oksopiperidin-1-karboksilata (1.3 g, 6.3 mmol) u THF (30 mL) dodat je N,N-diizopropiletilamin (4.4 mL, 25 mmol) i natrijum triacetoksiborohidrid (2.2 g, 10 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temepraturi u toku noći. Posle dodavanja 20 mL rastvora soli, rastvor je ekstrahovan sa EtOAc. Ekstrakt je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i proceđen. Posle uklanjanja rastvarača, ostatak je prečišćen na Combiflash hromatografijom eluiranjem sa 30-80 % EtOAc u heksanima da bi se dobilo 2.6 g (81%) željenog proizovda terc-butil 4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-2-metilpiperidin-1-karboksilata. LC-MS: 607.3 (M+H)<+>.

Korak B: {1-(2-Metilpiperidin-4-il)-3-[4-(1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0223]

[0224] U rastvor terc-butil 4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-2-metilpiperidin-1-karboksilata (0.5 g) u metanolu (2 mL) dodat je 10 mL 4.0 N rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksan (40 mmol). Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku jednog sata. Rastvarači su uklonjeni pod sniženim pritiskom i dobijeno je 0.5 g (99%) 1-(2-metilpiperidin-4-il)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila kao bele čvrste supstance . LC-MS: 507.1 (M+H)<+>.

Korak C: {1-[1-(3-Fluorobenzoil)-2-metilpiperidin-4-il]-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin3-il}acetonitril

[0225] U rastvor {1-(2-metilpiperidin-4-il)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila (40 mg, 0.08 mmol) u DMF-u (3 mL) su dodati 3-fluorobenzoeva kiselina (12.51 mg, 0.0893 mmol), benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfat (53.86 mg, 0.122 mmol) i trietilamin (0.0396 mL, 0.284 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku noći i prečišćena sa prep-LC-MS da bi se dobilo 20 mg {1-[1-(3-fluorobenzoil)-2-metilpiperidin-4-il]-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila kao belog praha. LC/MS nađeno: 629.3 (M+H)<+>.

[0226] Gore pomenuti beli prah (20 mg, 0.03 mmol) je rastvoren u 2 mL trifluorosirćetne kiseline i 2 mL metilen hlorida. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku jednog sata. Rastvarači su uklonjeni pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u metanolu (2 mL) i etilendiaminu (0.03 mL, 0.4 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku jednog sata. Prečišćavanjem HPLC (postupak B) dobijeno je 4.5 mg diasteroizomera 1 (Primer 149) i 4.5 mg diastereomera 2 (Primer 150) kao bele čvrste supstance. Oba diasteroizomera su bili smeša 2 enantiomera. LC/MS nađeno: 499.3 (M+H)<+>za oba diasteroizomera.

Primer 151. {1-{1-[(4,4-difluorocikloheksil)karbonil]-2-metilpiperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0227]

[0228] Naslovno jedinjenje je pripremljeno kao smeša 4 izomera analognim postupkom onome iz primera 149 i 150. LC-MS: 523.2 (M+H)<+>.

Primer 152. {1-[1-(3-Fluorobenzoil)-4-metilpiperidin-4-il]-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0229]

Korak A: terc-Butil 4-[3-(Cijanometilen)azetidin-1-il]-4-metilpiperidin-1-karboksilat

[0230]

[0231] Balon sa okruglim dnom je napunjen sa {3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohloridom (1.0 g, 2.4 mmol), terc-butil 4-okso-1-piperidinkarboksilatom (0.49 g, 2.4 mmol), titanijum tetraizopropoksidom (0.72 mL, 2.4 mmol), trietilaminom (1.0 mL, 7.3 mmol), i 10 mL dihlorometanom. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku noći i zatim uparena do suvog i dobijen je uljasti ostatak koji je korišćen direktno u sledećem koraku.

[0232] Gornji ostatak je rastvoren u 25 mL THF. U dobijeni rastvor je dodat 1.0 M rastvor dietilaluminijum cijanida u toluenu (8.4 mL, 8.4 mmol). Smeša je mešana na 30 °C u toku 5 sati. Reakcija je zaustavljena sa 1 mL vode i 20 mL EtOAc, mešana u toku 30 min i proceđena kroz celit. Celit je ispran sa 20 mL EtOAc. Filtrat je osušen iznad Na2SO4i koncentrovan do suvog i dobijen je 1.3 g željenog proizvoda kao bezbojno ulje. MS nađeno: 618 (M+H)<+>.

[0233] Bezbojno ulje je rastvoreno u THF (20 mL) i dodat je 3 M rastvor metilmagnezijium bromida u THF (0.45 mL, 1.3 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku noći. Reakcija je zaustavljena dodavanjem 15 mL vode i 25 mL EtOAc. Posle mešanja u toku 30 min, rastvor je proceđen kroz sloj celita. Organski sloj je odvojen, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4, i uparen pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa HPLC dobijen je željeni proizvod terc-butil 4-[3-(cijanometilene)azetidin-1-il]-4-metilpiperidin-1-karboksilat. LC-MS: 292.1 (M+H)<+>.

Korak B: terc-Butil 4-{3-(Cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1Hpirazol-1-il]azetidin-1-il}-4-metilpiperidin-1-karboksilat

[0234]

[0235] Balon sa okruglim dnom od 2 L snabdeven sa mešalicom, zapušačem i uvodnikom za azot je napunjen sa terc-butil 4-[3-(cijanometilen)azetidin-1-il]-4-metilpiperidin-1-karboksilatom (9.17 g, 0.0472 mol), 4-(1H-pirazol-4-il)7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidinom (14.9 g, 0.0472 mol) i acetonitrilom (300 mL). Dobijeni rastvor je heterogen. U rastvor je dodat 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undek-7-en (8.48 mL, 0.0567 mol) u porcijama pomoću šprica u toku 3 minuta na sobnoj temepraturi. Rastvor polako postaje homogen i žute boje. Omogućeno je da se reakcija meša na sobnoj temperaturi u toku 3 sata. Rastvor je koncentrovan na rotacionom uparivaču da bi se uklonio ∼150 mL acetonitril. Posle dodavanja 100 mL EtOAc i 100 mL 20% rastvora soli, odvojena je organska faza. Vodeni sloj je ekstrahovan sa 150 mL EtOAc. Spojena organska faza je osušena iznad MgSO4, proceđena i koncentrovana da bi se dobilo narandžasto ulje. Prečišćavanje fleš hromatografijom (150 grama silicijum dioksida, 60% EtOAc/heksana, napunjenog sa CH2Cl2) dalo je naslovno jedinjenje kao beu penu. LC-MS: 607.2 (M+H)<+>.

Korak C: {1-(4-Metilpiperidin-4-il)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0236]

[0237] U rastvor terc-butil 4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-4-metilpiperidin-1-karboksilata (30 mg, 0.05 mmol) u THF (2 mL) dodat je 4 N rastvor HCl u dioksanu (2 mL). Pošto je mešan na sobnoj temperaturi u toku 2 sata, reakcija je uparena pod sniženim pritiskom da bi se dobilo naslovno jedinjenje (31 mg, 99%), koje je korišćeno u sledećoj reakciji. LCMS nađeno: 507.2 (M+H)<+>.

Korak D: {1-[1-(3-Fluorobenzoil)-4-metilpiperidin-4-il]-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0238] U rastvor {1-(4-metilpiperidin-4-il)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila (40 mg, 0.08 mmol) u DMF (3 mL) dodati su benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfat (45 mg, 0.10 mmol), N,N-diizopropiletilamin (0.041 mL, 0.24 mmol), i 3-fluorobenzojeva kiselina (11 mg, 0.079 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku noći. Prečišćavanjem sa HPLC dobijen je željeni intermedijer kao beli prah, koji je zatim tretiran sa TFA (1 mL) i DCM (1 mL) u toku 1 sata na sobnoj temperaturi. Posle uklanjanja rastvarača, ostatak je tretiran sa etilenediaminom (1 mL) u metanolu (5 mL) u toku 2 sata. Prečišćavanjem pomoću HPLC postupka A dobijen je krajni proizvod {1-[1-(3-fluorobenzoil)4-metilpiperidin-4-il]-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril kao TFA so. LCMS nađeno: 499.3 (M+H)<+>.<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 12.36 (s, 1H), 8.81-9.11 (m, 2H), 8.77 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 7.71 (t, 1H), 7.31 (m, 1H), 7.25 (dd, 2H), 7.17 (s, 1H), 4.5-4.85 (m, 4H), 3.82 (m, 2H), 3.56 (s, 4H), 3.21 (m, 1H), 2.60 (m, 1H), 1.55-1.75 (m, 2H), 1.37 (s, 3H).

Primer 153. {1-[1-(Cikloheksilkarbonil)-4-metilpiperidin-4-il]-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1Hpirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0239]

[0240] Naslovno jedinjenje je dobijeno postupkom analognim onom iz primera 152 i dobijen je kao TFA so pomoću HPLC postupaka A za prečišćavanje. LC-MS: 487.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.28(s, 1H), 8.81-9.11(m, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.55(s, 1H), 7.68 (t, 1H), 7.11 (m, 1H), 4.40-4.85 (m, 4H), 3.80-3.95 (m, 1H), 3.56 (s, 2H), 3.15 (m, 1H), 2.60 (m, 1H), 1.63 (m, 10H), 1.43 (s, 3H), 1.12-1.28 (m, 6H).

Primer 154. 4-{3-(Cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]piperidin-1-karboksamid

[0241]

Korak A: 4-{3-(Cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]piperidin-1-karboksamid

[0242]

[0243] U rastvor {1-piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1Hpirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohlorida (500 mg, 1 mmol) u tetrahidrofuranu (30 mL) dodati su trietil-amin (0.29 g, 2.8 mmol) i 4-fluoro-1-izocijanat-2-(trifluorometil)benzen (190 mg, 0.95 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 1 sat. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Prečišćavanjem sa Combiflash pomoću 30-100% EtOAc/heksani dobijen je 4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1il]azetidin-1-il}-N-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]piperidin-1-karboksamid kao prah. LC-MS: 698.1 (M+H)<+>.

Korak B: 4-{3-(Cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]piperidin-1-karboksamid

[0244] 4-{3-(Cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]piperidin-1-karboksamid (210 mg, 0.3 mmol) je rastvoren u 50 M rastvoru trifluorosirćetne kiseline u metilen hloridu (20 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi u toku jedan sat, rastvarači su uklonjeni pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u metanolu (20 mL) i etilendiaminu (1.0 g, 17 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi u toku jednog sata, smeša je pročišćena sa HPLC-om (postupak B) da bi se dobio 4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]piperidin-1-karboksamid kao beli prah. LC-MS: 568.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.10 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.55 (d, J=3.6 Hz, 1H), 7.50 (m, 1H), 7.43 (m, 1H), 7.34 (m, 1H), 7.01(d, J=3.6 Hz, 1H), 3.79 (m, 2H), 3.67 (d, J=8 Hz, 2H), 3.51 (m, 4H), 2.92(m, 2H), 2.38 (m, 1H), 1.62 (m, 2H), 1.09 (m, 2H).

Primer 155. 4-{3-(Cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-[3-(trifluorometil)piridin-4-il]piperidin-1-karboksamid

[0245]

Korak A: 4-{3-(Cijanometil)-3-[4-(1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-[3-(trifluorometil)piridin-4-il]piperidin-1-karboksamid

[0246]

[0247] Fiola od 20 mL je napunjena sa 4-(trifluorometil)piridin-3-aminom (15.6 mg, 0.0963 mmol), THF-om (2 mL), 20 M rastvorom fozgena u toluenu (0.50 mL, 1 mmol) i trietilaminom (0.017 mL, 0.12 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku jednog sata i koncentrovana. U fiolu su dodati {1-piperidin-4-il-3-[3-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohlorid (40 mg, 0.08 mmol), THF (2 mL) i trietilamin (0.025 g, 0.24 mmol). Smaša je mešana u toku dva sata i prečišćena sa HPLC da bi se dobio 4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1il]azetidin-1-il}-N-[3-(trifluorometil)piridin-4-il]piperidin-1-karboksamid kao bela čvrsta supstanca. LC-MS: 681.3 (M+H)<+>.

Korak B: 4-{3-(Cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-[3-(trifluorometil)piridin-4-il]piperidin-1-karboksamid

[0248] Fiola od 20 mL je napunjena sa 4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-[3-(trifluorometil)piridin-4-il]piperidin-1-karboksamidom (56 mg, 0.1 mmol), trifluorosirćetnom kiselinom (1.5 mL, 19 mmol) i metilen hloridom (1.5 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 1 sata i koncentrovana u vakumu. Ostatak je rastvoren u 3 mL rastvora metanola koji sadrži 20% etilendiamina. Posle mešanja na sobnoj temperaturi u toku 1 sat, HPLC prečišćavanja (postupkom B) dobijeno je naslovno jedinjenje 4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-[3-(trifluorometil)piridin-4-il]piperidin-1-karboksamid. LC-MS: 551.2 (M+H)<+>.

[0249] Sledeća jedinjenja su dobijena postupkom analognim onom iz primera 154 ili primera 155.

Ċ

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) primera 156: δ 12.10 (br, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.55 (d, 1H), 7.21 (m, 1H), 7.01 (m, 3H), 3.82 (dd, 2H), 3.70 (d, 2H), 3.54 (m, 4H), 2.94 (t, 2H), 2.38 (m, 1H), 1.64 (m, 2H), 1.11 (m, 2H).

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) primera 157: δ 12.10 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.60 (d, J=8 Hz, 1H), 7.55 (m, 2H), 7.34 (m, 2H), 7.01(d, J=3.6 Hz, 1H), 3.80 (m, 2H), 3.69 (d, J=8.4 Hz, 2H), 3.51 (m, 4H), 2.92 (m, 2H), 2.38 (m, 1H), 1.62 (m, 2H), 1.09 (m, 2H).

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) primera 158: δ 12.10 (br, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.55 (d, 1H), 7.43 (dd, 1H), 7.26 (dd, 2H), 7.12 (t, 1H), 7.01 (d, 1H), 3.81 (dd, 2H), 3.67 (d, 2H), 3.51 (m, 4H), 2.95 (t, 2H), 2.40 (m, 1H), 1.64 (m, 2H), 1.11 (m, 2H).

Primer 209. 3-[(4-{3-(Cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}piperidin-1-il)metil]-6-(dimetilamino)-2-fluorobenzonitril

[0250]

Korak A: 3-[(4-{3-(Cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}piperidin-1-il)metil]-6-(dimetilamino)-2-fluorobenzonitril

[0251]

[0252] U rastvor {1-piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1Hpirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohlorida (200 mg, 0.4 mmol) u THF (10 mL) i trietilaminu (0.1643 mL, 1.179 mmol) dodat je 6-(dimetilamino)-2-fluoro-3-formilbenzonitril (75.52 mg, 0.3929 mmol). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 30 minuta pre dodavanja natrijum triacetoksiborohidrida (249.8 mg, 1.179 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku noći. Posle dodavanja vodenog NaHCO3, i EtOAc, organski sloj je odvojen, ispran sa rastvorom soli, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan. Prečišćavanjem sa HPLC dobijeno je 150 mg proizvoda 3-[(4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}piperidin-1-il)metil]-6-(dimetilamino)-2-fluorobenzonitrila kao bele čvrste supstance. LC/MS: 669.2 (M+H)<+>.

Korak B: 3-[(4-{3-(Cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-il}piperidin-1-il)metil]6-(dimetilamino)-2-fluorobenzonitril

[0253] U reakcionu fiolu su dodati 3-[(4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}piperidin-1-il)metil]-6-(dimetilamino)-2-fluorobenzonitril (56 mg, 0.1 mmol), trifluorosirćetna kiselina (1.5 mL) i metilen hlorid (1.5 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 1 sat i koncentrovana u vakuumu. Ostatak je rastvoren u 5 mL metanolnog rastvoera koji sadrži 20% etilendiamina. Posle mešanja na sobnoj temperaturi u toku 1 sata, smeša je prečišćane sa HPLC (postupak B) da bi se dobilo naslovno jedinjenje. LC-MS: 539.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.10 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.59 (d, J=3.6 Hz, 1H), 7.42 (t, J=8.8 Hz, 1H), 7.05 (d, J=3.6 Hz, 1H), 6.78 (d, J=8.8 Hz, 1H), 3.68 (d, J=8.4 Hz, 2H), 3.51 (m, 4H), 3.38 (s, 2H), 3.01 (s, 6H), 2.67 (m, 2H), 2.17 (m, 1H), 1.97 (m, 2H), 1.63 (m, 2H), 1.15 (m, 2H).

[0254] Sledeća jedinjenja su dobijena postupkom analognim onom u primeru 209.

Primer 240. 3-[(3-{3-(Cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-8-azabiciklo[3.2.1]okt-8-il)metil]-6-(dimetilamino)-2-fluorobenzonitril

[0255]

[0256] U rastvor {1-(8-azabiciklo[3.2.1]oct-3-il)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila (40 mg, 0.08mmol) u THF (2mL) dodati su 6-(dimetilamino)-2fluoro-3-formilbenzonitril (17.2 mg, 0.089 mmol), i trietilamin (0.034 mL, 0.24 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temepraturi u toku 30 minuta pre dodavanja natrijum triacetoksiborohidrida (51.6 mg, 0.24 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku noći. Dobijeni rastvor je prečišćen sa vodenim NaHCO3i EtOAc. Organski sloj je ispran sa rastvorom soli, osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanjem sa kiselom prep-LCMS dobijeno je 25 mg (41.6%) željenog intermediejra 3-[(3-{3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-8-azabiciklo[3.2.1]okt-8-il)metil]6-(dimetilamino)-2-fluorobenzonitrila. LC/MS nađeno: 695.3 (M+H)<+>.

[0257] Gornja bela čvrsta supstanca (25 mg, 0.036 mmol) je rastvorena u 50 M rastvoru trifluorosirćetne kiseline u metilen hloridu (2mL, 100 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku jednog sata i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u metanolu (2 mL, 50 mmol) i etilendiaminu (0.03 mL, 0.4 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi u toku sata, smeša je prečišćena sa HPLC (postupkom B) da bi se dobilo oko 10 mg (50%) naslovnog jedinjenja kao bele čvrste supstance. LC/MS nađeno: 565.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.20 (s, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.71 (d, J=3.2 Hz, 1H), 7.67 (t, J=8.8 Hz, 1H), 7.15 (d, J=3.2 Hz, 1H), 6.90 (d, J=8.8 Hz, 1H), 3.65 (m, 6H), 3.48 (s, 2H), 3.12 (s, 6H), 3.07 (m, 2H), 2.60 (m, 1H), 2.05 (m, 2H), 1.96 (m, 2H), 1.80 (m, 2H), 1.57 (m, 2H).

Primer 241. {1-[8-(2-Hloro-3,6-dinuorobenzil)-8-azabicido[3.2.1]okt-3-il]-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0258]

[0259] Naslovno jedinjenje je dobijeno postupkom analogim onome iz primera 240. LC-MS: 549.1 (M+H)<+>.

Primeri 242 i 243. Diastereomeri 3-[(4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-2-metilpiperidin-1-il)metil]-6-(dimetilamino)-2-fluorobenzonitrila

[0260]

[0261] U rastvor {1-(2-metilpiperidin-4-il)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila (40 mg, 0.08 mmol) u THF (2 mL) dodati su 6-(dimetilamino)-2-fluoro3-formilbenzonitril (17.16 mg, 0.0893 mmol) i trietilamin (0.034 mL, 0.244 mmol). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 30 min pre dodavanja natrijum triacetoksiborohidrida (51.62 mg, 0.244 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku noći. Dobijena smeša je zaustavljena sa vodenim NaHCO3i EtOAc. Organski sloj je odvojen i ispran sa rastvorom soli, osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen sa kiselom prep-LCMS da bi se dobilo 25 mg (47%) intermedijera 3-[(4-{3-(cijanometil)3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-2-metilpiperidin-1-il)metil]-6-(dimetilamino)-2-fluorobenzonitrila kao bele čvrste supstance. LC/MS nađeno: 683.2 (M+H)<+>.

[0262] Gore pomenuti beli prah (25 mg, 0.037 mmol) je rastvoren u 2 mL trifluorosirćetne kiseline i 2 mL metilen hlorida. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku jednog sata. Rastvarači su uklonjeni pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u metanolu (2 mL) i etilendiaminu (0.03 mL, 0.4 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi u toku jednog sata, smeša je prečišćena sa HPLC (postupak B) da bi se dobila dva željena proizvoda primer 245 i primer 246 kao bela čvrsta supstanca: Primer 245 (7 mg) je bio diastereoizomer koji se brzo kreće na HPLC i primer 246 (7 mg) je bio stereoizomer koji se sporo kreće na HPLC. LC/MS nađeno: 553.2 (M+H)<+>za oba izomera.

Primeri 244 i 245. Diastereoizomeri {1-[1-(2-hloro-6-nuorobenzil)-2-metilpiperidin-4-il]-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila

[0263]

[0264 ] Naslovna jedinjenja su dobijena postupkom analognim onom u primerima 242 i 243. Primer 247 je diasteroizomer koji se brzo kreće na HPLC i primer 248 je diastereoizomer koji se sporo kreće na HPLC. LC/MS nađeno: 519.2 (M+H)<+>za oba izomera.

Primer 246. {1-{1-[(1-Metil-1H-pirazol-5-il)sulfonil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1Hpirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0265]

Korak A: {1-{1-[(1-Metil-1H-pirazol-5-il)sulfonil]piperidin-4-il}-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0266]

[0267] Smeša {3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohlorida (44.4 mg, 0.108 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-sulfonil hlorida (19.6 mg, 0.108 mmol) i trietilamina (0.0412 mL, 0.296 mmol) u THF (10.0 mL) je mešana na sobnoj temperaturi u toku 2 sata. Prečišćavanjem na koloni od silikagela dobijen je željeni proizvod {1-{1-[(1-metil-1H-pirazol-5-il)sulfonil]piperidin-4-il}3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril. Prinos: 58.8%. LC-MS: 637.3 (M+H)<+>.

Korak B: {1-{1-[(1-Metil-1H-pirazol-5-il)sulfonil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0268] U rastvor {1-{1-[(1-metil-1H-pirazol-5-il)sulfbnil]piperidin-4-il}-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila (56 mg, 0.1 mmol) u metilen hloridu (1.5 mL) je dodata trifluorosirćetna kiselina (1.5 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 2 sata i koncentrovana in vacuo. Ostatak je rastvoren u 2 mL rastvora metanola koji sadrži 20% etilendiamina. Posle mešanja na sobnoj temperaturi u toku 1 sata, smeša je prečišćavana sa HPLC (postupkom B) da bi se dobilo 20 mg (64.5%) of {1-{1-[(1-metil1H-pirazol-5-il)sulfonil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila. LC-MS: 507.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 12.08 (brs, 1H), 8.72 (d, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.55 (d, 2H), 6.99 (d, 1H), 6.75 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.62 (dd, 2H), 3.45 (dd, 2H), 3.40 (m, 2H), 3.25 (s, 2H), 3.19 (m, 1H), 2.75 (m, 2H), 1.70 (m, 2H), 1.25 (m, 2H).

[0269] Sledeća jedinjenja su dobijena postupkom analogim onom u primeru 246.

Primer 261. {1-{1-[3-Fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[3-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0270]

Korak A: 4-(1H-Pirol-3-il)-7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin

[0271]

[0272] Balon sa okruglim dnom od 100 mL je napunjen sa 4-hloro-7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidinom (1.00 g, 3.52 mmol), 1-butanolom (25.0 mL), [1-(triizopropilsilil)-1H-pirol-3-il]boronskom kiselinom (1.41 g, 5.28 mmol), vodom (25.0 mL) i kalijum karbonatom (1.27 g, 8.8 mmol). Ovaj rastvor je degasiran 4 puta, svaki put uvođenjem azota. Tetrakis(trifenilfosfin)-paladijum(0) (0.41 g, 0.35 mmol) je dodat i smeša je degasirana 4 puta, svaki put uvođenjem azota. Reakcija je mešana u toku noći na 100 °C i ohlađena na sobnu temperaturu. Smeša je proceđena preko sloja celita i celit je ispran sa etil acetaom (42 mL). Filtrat je spojen i organski sloj je odvojen. Vodeni sloje je ekstrahovan sa etil acetatom. Organski slojevi su spojeni i koncentrovani pod vakumom sa temepraturom kupatila 30-70 °C da bi se dobilo naslovno jedinjenje 4-(1H-pirol-3-il)-7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin. Prinos: 83%; LC-MS: 315.2 (M+H)<+>.

Korak B: terc-Butil 3-(cijanometil)-3-[3-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksil]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol1il]azetidin-1-karboksilat

[0273]

[0274] Balon sa okruglim dnom od 100 mL snabdeven sa mešalicom, zapušačem i ulazom za azot je napunjena sa terc-butil-3-(cijanometilen)azetidin-1-karboksilatom (1.8 g, 9.5 mmol), 4-(1H-pirol-3-il)-7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7Hpirolo[2,3-d]pirimidina (3.0 g, 9.5 mmol) i acetonitrilom (60 mL). Dobijeni rastvor je bio heterogen. 1,8-Diazabiciklo[5.4.0]undek-7-en (1.4 mL, 9.5 mmol) je dodat u porcijama pomoću šprica u toku 3 minuta na sobnoj temepraturi. Rastvor je polako postao homogen i žute boje. Reakcija je omogućena da se meša na sobnoj temperaturi u toku 3 sata. Rastvor je koncentrovan u rotacionom uparivaču da bi se uklonio acetonitril. Dodati su EtOAc (100 mL) i rastvor soli (100 mL). Organska faza je odvojena i vodeni sloj je ekstrahovan sa 3330 mL EtOAc. Spojeni ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog MgSO4, proceđeni i koncentrovani in vacuo da bi se dobilo narandžasto ulje koje je prečišćeno fleš hromatografijom (120 grama silicijum dioksida, 30-55% EtOAc/heksan, naneto sa CH2Cl2). Željene frakcije su spojene i koncentrovane da bi se dobilo žuto ulje koje je smešteno u vakum pumpu da bi se dobilo 4 g (83%) terc-butil 3-(cijanometil)-3-[3-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol1-il]azetidin-1-karboksilata kao bele pene. LC-MS: [M+H]<+>= 509.3.

Korak C: {3-[3-(7-{[2-(Trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril dihidrochlorid

[0275]

[0276] U rastvor terc-butil 3-(cijanometil)-3-[3-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]azetidin-1-karboksilata (4 g, 7.87 mmol) u 20 mL THF dodato je 20 mL 4 N HCl u dioksanu. Posle mešanja na sobnoj temperaturi u toku 1 sat, rastvarači su uklnjeni in vacuo da bi se dobilo 3.9 g (99%) željenog proizvoda {3-[3-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril dihidrohlorida, koji je korišćen u sledećoj reakciji. LC-MS: [M+H]<+>= 409.3.

[0277]

[0278] U suspenziju {3-[3-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril dihidrohlorida (3.0 g, 7.3 mmol) u THF (30 mL) dodat je terc-butil 4-okso-1-piperidin-karboksilat (1.4 g, 7.3 mmol), N,N-diizopropiletilamin (6.4 mL, 37 mmol) i natrijum triacetoksiborohidrid (3.1 g, 15 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku noći. Dodati su rastvor soli (20 mL) i EtOAc (20 mL). Organska faza je odvojena i vodeni sloj je ekstrahovana sa EtOAc. Spojeni ekstrakti su osušeni iznad natrijum sulfata, proceđeni i upareni in vacuo. Ostatak je prečišćen pomoću combiflash kolone eluiranjem sa 20-50 % EtOAc u heksanima da bi se dobio tercbutil 4-{3-(cijanometil)-3-[3-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]azetidin-1-il}piperidin-1-karboksilat kao ulje. Prinos: 3.37 g (78%); LC-MS: [M+H]<+>= 592.3.

Korak E: {1-Piperidin-4-il-3-[3-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohlorid

[0279]

[0280] U rastvor terc-butil 4-{3-(cijanometil)-3-[3-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]azetidin-1-il}piperidin-1-karboksilata (3.3 g, 5.6 mmol) u THF (17 mL) dodat je 4 N rastvor HCl u dioksanu (17 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 2 sata i koncentrovana da bi se dobio {1-piperidin-4-il-3-[3-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohlorid kao beli prah, koji je korišćen u sledećoj reakciji. Prinos: 99%; LC-MS: [M+H]+ = 492.3.

Korak F: {1-{1-[3-Fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[3-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0281] Smeša {1-piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohlorida (1.22 g, 2.03 mmol), 3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinske kiseline (460 mg, 2.2 mmol), benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata (1.07 g, 2.42 mmol) i trietilamina (2.0 mL, 14 mmol) u DMF (20.0 mL) je mešana na sobnoj temperaturi u toku noći. LS-MS je pokazao da je reakcija završena. EtOAc (60 mL) i zasićeni NaHCO3vodeni rastvor (60 mL) su dodati u reakcionu smešu. Posle mešanja na sobnoj temperturi u toku 10 minuta, organske faze su odvojene i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc tri puta. Spojeni ekstrakti su isprani sa rastvorom soli, osušeni iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđeni i upareni pod sniženim pritiskom. Prečišćavanjem fleš hromatogarafijom je dobijen {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1il]azetidin-3-il}acetonitril kao beli čvrsti prah.

[02812] Beli prah je rastvoren u trifluorosirćetnoj kiselini (5 mL) i metilen hloridu (5 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 2 sata i koncentrovana in vacuo. Ostatak je rastvoren u 10 mL rastvora metanola koji sadrži 20% etilendiamina. Posle mešanja na sobnoj temepraturi u toku 1 sata, HPLC prečišćavanje (postupak B) je dalo naslovno jedinjenje {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[3-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril. LC-MS: 553.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 9.10 (m, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.57 (d, J=4.8 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.53 (t, J=4.7 Hz, 1H), 7.31 (dd, J1=3.6 Hz, J2=2.2 Hz, 1H), 6.97 (dd, J1=2.9 Hz, J2=1.5 Hz, 1H), 6.83 (dd, J1=3.8 Hz, J2=2.1 Hz, 1H), 6.81 (t, J=2.6 Hz, 1H), 4.17 (m, 1H), 3.76 (m, 2H), 3.50 (dd, J1=9.1 Hz, J2=7.4 Hz, 2H), 3.44 (m, 2H), 3.21 (s, 2H), 3.09 (m, 1H), 2.52 (m, 1H), 1.81 (m, 1H), 1.69 (m, 1H), 1.51 (m, 1H), 1.23 (m, 1H).

[0283] Sledeća jedinjenja su dobijena postupkom koji je analogan onome iz primera 261.

Primer 283. 4-{3-(Cijanometil)-3-[3-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]azetidin-1-il}-N-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]piperidin-1-karboksamid

[0284]

[0285] U rastvor {1-piperidin-4-il-3-[3-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1Hpirol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohlorida (500 mg, 1 mmol) u THF (30 mL) su dodati trietilamin (0.29 g, 2.8 mmol), i 4-fluoro-1-izocijanato-2-(trifluorometil)benzen (190 mg, 0.95 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku jednog sata. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Prečiščavanje na combi-flash pomoću 30-100% EtOAc/heksani dalo je proizvod kao prah. LC-MS: 697.1 (M+H)<+>.

[0286] U gore pomenutu čvrstu supstancu dodato je 50 M rastvora trifluorosirćene kiseline u metilen hloridu (20 mL, 1000 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi u toku jednog sata, uklonjen je rastvarač. Ostatak je rastvoren u metanolu (20 mL) i etilendiaminu (1.0 g, 17 mmol). Posle mešanja na sobnoj temepraturi u toku jednog sata, smeša je prečišćena sa HPLC (postupak B) da bi se dobio 4-{3-(cijanometil)-3-[3-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]azetidin1-il}-N-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]piperidin-1-karboksamid kao beli prah. LC-MS: 567.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.95 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.55 (m, 1H), 7.49 (m, 2H), 7.40 (m, 1H), 7.07 (m, 1H), 6.94 (m, 2H), 3.83 (m, 2H), 3.60 (d, J=8.0 Hz, 2H), 3.54 (d, J=8.0 Hz, 2H), 3.47 (s, 2H), 2.97 (t, J=10.4 Hz, 2H), 2.39 (m, 1H), 1.65 (m, 2H), 1.14 (m, 2H).

[0287] Sledeća jedinjenja su dobijena postupkom analognim onom iz primera 283.

Primer 294. {1-{1-[3-Fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[3-(7H-pirolo[2,3-d]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0288]

Korak A: 4-Bromo-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin

[0289]

[0290] Rastvor 4-bromo-1H-pirolo[2,3-b]piridina (10.0 g, 0.0508 mol) u DMF (40 mL) je ohlađen pod azotom na 0 °C. Dodat je natrijum hidrid (3.0 g, 0.075 mol) u porcijama. Reakcija je mešana u toku 1 sat. U ovu smešu, polako je dodat [2-(trimetilsilil)etoksi]metil hlorida (10.8 mL, 0.061 mol). Posle mešanja na 0 °C u toku 1 sata, reakcija je zaustavljena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc dva puta. Spojeni ekstrakti su isprani sa vodom, rastvorom soli, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata, proceđni i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu, eluiranjem sa 0-25% EtOAc/heksanima da bi se dobilo 15.7 g (94.5%) željenog proizvoda kao žućkasnog ulja. LC/MS nađeno: 327.1, 329.1 (M+H)<+>.

Korak B: 4-(1H-Pirazol-4il)-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin

[0291]

[0292] Smeša 4-bromo-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridina (15.70 g, 47.97 mmol), 1-(1-etoksietil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (14.04 g, 52.77 mmol), tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma(0) (2.772 g, 2.398 mmol) i natrijum karbonata (15.25 g, 143.9 mmol) u 1,4-dioksanu (150 mL) i vodi (75 mL) je mešana na 110 °C u toku 1 sati. Posle hlađenja na sobnoj temperaturi, smeša je razblažena sa EtOAc, i isprana sa vodom i rastvorom soli, osušena izanad Na2SO4i koncentrovana. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silikagelu eluiranjem sa 10-30% EtOAc/heksana. Prečišćeni intermedijer je rastvoren u THF (21 mL), vodi (90 mL) i hlorovodniku (75 mL, 240 mmol). Dobijena suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi u toku 2 sata. Smeša je podešena na pH = 9-10 sa 6 N NaOH. Dodati su heksani (150 mL). Obrazovana čvrsta supstanca je proceđena i isprana sa vodom (33) da bi se dobilo 12.9 g (85%) 4-(1H-pirazol-4-il)-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridina kao bele čvrste supstance . LC/MS nađeno: 315.2 (M+H)<+>.

Korak C: terc-Butil3-(cijanometil)-3-[4-(1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-karboksilat

[0293]

[0294] U rastvor 4-(1H-pirazol-4-il)-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridina (230 mg, 0.73 mmol) i terc-butil 3-(cijanometilen)azetidin-1-karboksilata (142 mg, 0.73 mmol) u acetonitrilu (5 mL) je dodat 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undek-7-en (0.11 mL, 0.73 mmol). Posle mešanja u toku 5 minuta na sobnoj temperaturi, smeša je postala rastvor. LC-MS je pokazao da je reakcija kompletna. Acetonitril je uparen i dodat je etil acetat. Smeša je isprana sa 1 N HCl, rastvorom soli, osušena iznad natrijum sulfata, proceđena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-80% EtOAc/heksani) i dobijeno je 341 mg terc-butil 3-(cijanometil)-3-[4-(1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-karboksilata kao bezbojnog ulja. LC/MS nađeno: 509.2 (M+H)<+>.

[0295]

[0296] Rastvoru terc-butil 3-(cijanometil)-3-[4-(1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)1H-pirazol-1-il]azetidin-1-karboksilata (341 mg, 0.67 mmol) u THF (5 mL) i metanolu (5 mL) dodat je 4.0 M rastvor hlorovodnika u 1,4-dioksanu (5 mL, 20 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 2 sata i koncentrovana da bi se dobilo 347 mg (100%) {3-[4-(1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1Hpirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila•2[HCl] kao žute čvrste supstance. LC/MS nađeno: 409.2 (M+H)<+>.

Korak E: {1-Piperidin-4-il-3-[4-(1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohlorid

[0297]

[0298] U smešu {3-[4-(1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azeti-din-3-il}acetonitrila•2[HCl] (347 mg, 0.70 mmol), terc-butil 4-okso-1-piperidinkarboksilata (134 mg, 0.70 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (0.467 mL, 2.68 mmol) u THF (10.0 mL) dodat je natrijum triacetoksiborohidrid (284 mg, 1.34 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temepraturi u toku 2 sata i zaustavljena sa rastvorom soli. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa EtOAc (2 puta). Spojeni ekstrakti su isprani sa vodom, rastvorom soli i osušeni iznad Na2SO4. Posle ceđenja i uparavanja, ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silikagelu eluiranjem sa 50-100% EtOAc/heksani. Prečišćeni intermedijer (MS: [M+H]<+>= 592.3) je rastvoren u THF (6 mL). U rastvor je dodat 4.0 M rastvor HCl u 1,4-dioksanu (6 mL, 24 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temepraturi u toku 2 sata i koncentrovana da bi se dobilo 260 mg {1-piperidin-4-il-3-[4-(1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohlorida kao žućkaste supstance. LC/MS nađeno: 492.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSOd6), δ 9.45 (s, 1H), 8.96 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.35 (d, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.33 (d, 1H), 7.81 (d, 1H), 7.50 (d, 1H), 7.10 (m, 1H), 5.69 (s, 2H), 4.93 (d, 2H), 4.54 (d, 2H), 3.75-3.60 (m, 1H), 3.55 (s, 2H), 3.55 (s, 2H), 3.52 (t, 2H), 3.49-3.37 (m, 2H), 2.81 (m, 2H), 2.12 (d, 2H), 1.80 (m, 2H), 0.82 (t, 2H), -0.11 (s, 9H).

Korak F: {1-{1-[3-Fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0299] Smeša {1-piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohlorida (1.22 g, 2.03 mmol), 3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinske kiseline (460 mg, 2.2 mmol), benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata(1.07 g, 2.42 mmol) i trietilamina (2.0 mL, 14 mmol) u DMF (10.0 mL) je mešana na sobnoj temperaturi u toku noći. LS-MS je pokazao da je reakcija završena. Dodati su EtOAc (60 mL) i zasićeni NaHCO3vodeni rastvori (60 mL) u rekacione smeše. Posle mešanja na sobnoj temperaturi u toku 10 minuta, organska faza je odvojena i vodeni sloj je ekstrahvoan sa EtOAc tri puta. Spojeni ekstrakti su isprani sa rastvorom soli, osušeni iznad anhidrovanog Na2SO4proceđeni i upareni pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen sa fleš hromatografijom da bi se dobio {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1Hpirol-1-il]azetidin-3-il} acetonitril kao beli prah. Prah je rastvoren u 10 mL of TFA/DCM (1:1). Posle mešanja na sobnoj temepraturi u toku 2 sata, rastvor je koncentrovan. Ostatak je rastvoren u 10 mL rastvora 20% etilendiamin/MeOH. Posle mešanja na sobnoj temperaturi u toku 2 sata, rastvor je koncentrovan. Prečišćavanjem sa HPLC (postupak B) dobijeno je krajnje jedinjenje {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[3-(7H-pirolo[2,3-d]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril. LC-MS: 553.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 9.42 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.57 (d, J=4.7 Hz, 1H), 8.29 (d, J=5.2 Hz, 1H), 8.06 (d, J=5.8 Hz, 1H), 7.53 (t, J=4.5 Hz, 1H), 7.38 (dd, J1=3.6 Hz, J2=2.4 Hz, 1H), 7.16 (d, J=5.1 Hz, 1H), 6.69 (dd, J1=3.7 Hz, J2=2.1 Hz, 1H), 4.21 (m, 1H), 3.76 (m, 2H), 3.63 (dd, J1=7.4 Hz, J2=5.8 Hz, 2H), 3.46(m, 2H), 3.35 (s, 2H), 3.11(m, 1H), 2.56 (m, 1H), 1.84 (m, 1H), 1.71(m, 1H), 1.49 (m, 1H), 1.40 (m, 1H).

[0300] Sledeća jedinjenja su dobijena postupkom analognim onom iz primera 294.

Primer 303. 4-{3-(Cijanometil)-3-[4-(1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]piperidin-1-karboksamid

[0301]

[0302] U rastvor {1-piperidin-4-il-3-[4-(1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohlorida (40 mg, 0.08 mmol) u THF (8 mL) dodati su trietilamin (0.025 g, 0.24 mmol), i 4-fluoro-1-izocijanato-2-(trifluorometil)benzen (18 mg, 0.086 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temepraturi u toku jednog sata i koncentrovana. Prečišćavanjem sa combiflash hromatografijom pomoću 30-100% EtOAc/heksana dobijen je praškasti proizvod. LC-MS: 697.1 (M+H)<+>.

[0303] Gornja čvrsta supstanca je rastvorena u 50 M rastvoru trifluorosirćetne kiseline u metilen hloridu (2 mL, 100 mmol). Pošto je mešana na sobnoj temperaturi u toku jednog sata, rastvarači su uklonjeni. Ostatak je rastvoren u metanolu (2 mL) i etilendiaminu (0.024 g, 0.40 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi u toku jednog sata, rastvor je prečišćen sa HPLC (postupkom B) da bi se dobio 4-{3-(cijanometil)-3-[4-(1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]piperidin-1-karboksamid kao beli prah. LC-MS: 567.2 (M+H).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.70 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.26 (m, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.18 (d, J=4.8 Hz, 1H), 7.57 (dd, J1=7.2 Hz, J2=3.2 Hz, 1H), 7.50(m, 2H), 7.41 (m, 1H), 7.32 (d, J=7.2 Hz, 1H), 6.86 (d, J=3.6 Hz, 1H), 3.86 (m, 2H), 3.73 (d, J=8.0 Hz, 2H), 3.58 (d, J=8.4 Hz, 2H), 3.52 (s, 2H), 2.99 (t, J=10.6 Hz, 2H), 2.43 (m, 1H), 1.68 (m, 2H), 1.12 (m, 2H).

[0304] Sledeća jedinjenja su dobijena analognim postupkom onom iz primera 303.

Ċ

Primer 314. (3-[4-(5-Fluoro-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]-1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}azetidin-3-il)acetonitril

[0305]

Korak A: 5-fluoro-4-jodo-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin

[0306]

[0307] U rastvor 5-fluoro-4-jodo-1H-pirolo[2,3-b]piridina (5.0 g, 0.019 mol) u DMF (30.0 mL) ohlađen na 0 °C u atmosferi azota je dodat u prcijama natrijum hidrid (1.13 g, 0.0282 mol). Reakcija je mešana u toku 1 sata. U smešu je polako dodat [β-(trimetilsilil)etoksi]metil hlorid (4.05 mL, 0.0229 mol). Reakcija je mešana na 0 °C u toku1 sata i zaustavljena sa vodom. Dobijeni rastvor je ekstrahovana sa EtOAc (2 puta). Spojeni ekstrakti su isprani sa rastvorom soli, osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu, eluiranjem sa 0-25% EtOAc/heksanima da bi se dobio 7.1 g (95%) 5-fluoro-4-jodo-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridina kao žućkasog ulja . LC/MS nađeno: 393.0 (M+H)<+>.

Korak B: 4-(1H-Pirazol-4-il)-5-fluoro-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin

[0308]

[0309] Smeša 5-fluoro-4-jodo-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridina (7.20 g, 18.4 mmol), 1-(1-etoksietil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (5.36 g, 20.1 mmol), tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (1.06 g, 0.918 mmol) i natrijum karbonata (5.84 g, 55.1 mmol) u 1,4-dioksanu (50 mL) i vodi (25 mL) je mešana na 110 °C u azotu u toku 1 sat. Pošto je ohlađena na sobnoj temepraturi, smeša je razblažena sa EtOAc, isprana sa vodom i rastvorom soli, osušena iznad Na2SO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 10-30% EtOAc/heksani. Prečišćeni intermedijer je dodat u smešu rastvora THF (8.0 mL), vode (30 mL) i hlorovodonika (30 mL, 100 mmol). Dobijena suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi u toku 2 sata. Smeša je prilagođena na pH = 9-10 sa 6 N NaOH i ekstrahovana sa EtOAc (23). Spojeni ekstrakti su isprani sa vodom, rastvorom soli i osušeni iznad anhidrovanog Na2SO4. Posle ceđenja i koncentrovanja, ostatak je dodat u smešu rastvarča heksana i EtOAc (9/1, 50 mL). Čvrsta supstanca je obrazovana proceđena i dobijeno je 4.2 g (69%) 4-(1H-pirazol-4-il)-5-fluoro-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridina kao svetlo zelene čvrste supstance. LC/MS nađeno: 333.2 (M+H)<+>.

Korak C: {3-[4-(5-Fluoro-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril•2[HCl]

[0310]

[0311] U rastvor 5-fluoro-4-(1H-pirazol-4-il)-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridina (2.00 g, 6.02 mmol) i terc-butil 3-(cijanometilen)azetidin-1-karboksilata (1.168 g, 6.02 mmol) u acetonitrilu (20 mL) dodat je 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undek-7-en (0.8996 mL, 6.02 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku noći i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-80% EtOAc/heksani) da bi se dobilo 3.05 g (96.3%) terc-butil 3-(cijanometil)-3-[4-(5-fluoro-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)1H-pirazol-1-il]azetidin-1-karboksilat kao bezbojno ulje. LC/MS nađeno: 527.3 (M+H)<+>.

[0312] U rastvor terc-butil 3-(cijanometil)-3-[4-(5-fluoro-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-karboksilata (3.05 g, 5.79 mmol) u THF (40 mL) je dodat 4.0 M rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (70 mL, 280 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 2 sata i koncentrovana je da bi se dobilo 3.08 g (99.2%) {3-[4-(5-fluoro-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila•2[HCl] kao žućkaste čvrste susptance. LC/MS nađeno: 427.2 (M+H)<+>.

Korak D: {3-[4-(5-Fluoro-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]-1-piperidin-4ilazetidin-3-il}acetonitril•3[HCl]

[0313]

[0314] U smešu {3-[4-(5-fluoro-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1il]azetidin-3-il}acetonitrila•2[HCl] (3.10 g, 5.78 mmol), terc-butil 4-okso-1-piperidinkarboksilata (1.152 g, 5.784 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (3.022 mL, 17.35 mmol) u THF (100.0 mL) je dodat natrijum triacetoksiborohidrid (2.452 g, 11.57 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temepraturi u toku 2 sata i razblažena je rastvorom soli. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa EtOAc (2 puta). Spojeni ekstrakti su isprani sa vodom, rastvorom soli i osušeni iznad Na2SO4. Posle ceđenja i uparavanja, ostatak je prečišćen sa fleš hromatografijom na silikagelu pomoću 50-100% EtOAc/hexani. Prečišćeni intermedijer ([M+H]<+>= 610.3) je rastvoren u THF (50 mL). U rastvor na 10 °C dodat je 4.0 M rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (50.0 mL, 200 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 2 sata i koncentrovana da bi se dobilo 3.57 g {3-[4-(5-fluoro-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1Hpirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]-1-piperidin-4-ilazetidin-3-il}acetonitrila•3[HCl] kao beličasta čvrsta supstanca. LC/MS nađeno: 510.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6), δ 9.41 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.35 (d, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.00 (d, 1H), 5.63 (s, 2H), 4.93 (d, 2H), 4.55 (d, 2H), 3.78-3.60 (m, 1H), 3.55 (s, 2H), 3.51 (t, 2H), 3.47-3.37 (m, 2H), 2.79 (m, 2H), 2.11 (m, 2H), 1.80 (m, 2H), 0.81 (t, 2H), -0.12 (s, 9H).

Korak E: (3-[4-(5-Fluoro-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]-1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}azetidin-3-il)acetonitril

[0315] Rastvor 3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinske kiseline (70.0 mg, 0.335 mmol), {3-[4-(5-fluoro-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]-1-piperidin-4-ilazetidin-3-il}acetonitrila•3[HCl] (207 mg, 0.335 mmol), benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata (148 mg, 0.335 mmol) i trietilamina (0.234 mL, 1.68 mmol) u metilen hloridu (2 mL) je mešan na sobnoj temeprturi u toku 1 sata. U smešu je dodata trifluorosirćetna kiselina (2 mL, 20 mmol). Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 1 sata i koncentrovan. Ostatak je rastvoren u metanolu (2 mL) i etilendiaminu (0.5 mL, 7 mmol). Pošto je mešan na sobnoj temperaturi u toku 2 sata, smeša je prečišćena sa HPLC (postupkomd B) da bi se dobilo 11.2 mg naslovnog jedinjenja kao bele čvrste supstance. LC/MS found: 571.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 11.85 (brs, 1H), 8.65 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.23 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 6.85 (s, 1H), 4.04 (m,1 H), 3.72 (m, 2H), 3.58 (m, 2H), 3.53 (m, 2H), 3.53 (m, 2H), 3.40 (m, 1H), 3.25 (m, 1H), 3.06 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 2.54 (m, 1H), 1.75 (m, 1H), 1.62 (m, 1H), 1.26 (m, 1H), 1,21 (m, 1H).

[0316] Sledeća jedinjenja su pripremljena postupkom opisanim u primeru 314.

Primer 328. 4-{3-(Cijanometil)-3-[4-(5-fluoro-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]piperidin-1-karboksamid

[0317]

[0318] U smešu {3-[4-(5-fluoro-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1il]-1-piperidin-4-ilazetidin-3-1}acetonitrila•3[HCl] (70.0 mg, 0.113 mmol) i trietilamina (41.3 uL, 0.296 mmol) u THF (4 mL) je dodat 4-fluoro-1-izocijanato-2-(trifluorometil)benzen (23.1 mg, 0.113 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 1 sat i koncentrovana. Ostatak je razblažen sa acetonitrilom (2 mL) i vodom (2 mL). Smeša je podvrgnuta prečišćavanju sa HPLC da bi se dobilo 34 mg (49%) željenog intermedijera. LC-MS nađeno: 715.3 (M+H)<+>.

[0319] Prećišćeni intermedijer je rastvoren u metilen hloridu (1 mL) i trifluorosirćetnoj kiselini (1 mL, 10 mmol). Rastvor je mešan na sobnoj temepraturi u toku 1 sata i koncentrovan. Ostatak je tretiran sa metanolom (1 mL) i etilendiaminom (0.2 mL, 3 mmol). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 1 sata i prečišćen je sa HPLC (postupak B) da bi se dobilo naslovno jedinjenje. LC-MS nađeno: 585.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 11.86 (brs, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.24 (d, J = 3.30 Hz, 1H), 8.21 (d, J = 2.40 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 3.30 Hz, 1H), 7.49 (m, 3H), 6.86 (m, 1H), 3.83 (m, 2H), 3.72 (m, 2H), 3.58 (m, 2H), 3.54 (s, 2H), 2.97 (m, 2H), 2.44 (m, 1H), 1.66 (m, 2H),1.13 (m, 2H).

[0320] Sledeća jedinjenja su dobijena pomoću postupka opisanog u primeru 328.

Primer 332. 4-[1-(3-(Cijanometil)-1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}azetidin-3-il)-1H-pirazol-4-il]-1H-pirolo [2,3-b]piridin-5-karbonitril

[0321]

Korak A: 4-Hloro-5-cijano-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin

[0322]

[0323] U suspenziju natrijum hidrida (1.8 g, 45.1 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (10 mL) na -5 °C (kupatilo led/so) polako je dodat tamni rastvor 4-hloro-5-cijano-pirolo[2,3-d]piridina (6.0 g, 39 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (10 mL). Balon i kapalica su isprani sa N,N-dimetilacetamidom (5 mL). Velika količina gasa se momentalno razvila. Smeša se pretvorila u blago zamagljenu narandžastu smešu i mešana je na 0 °C u toku 1 sata da bi se dobio svetlo braon zamućena smeša. U smešu je polako dodavan [β-(trimetilsilil)etoksi]metil hlorid (7.6 g, 45 mmol). Reakcija je mešana na 0 °C u toku1 sata i zaustavljena dodavanjem 12 mL H2O. Pošto je reakcija zaustavljena, dodata je H2O (120 mL). Praćeno je sa MTBE (120 mL). Smeša je mešana u toku 10 minuta. Organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ekstrahovan sa još jednom porcijom MTBE (120 mL). Organski ekstrakti su spojeni, isprani sa rastvorom soli, osušeni iznad natrijum suflata i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 10 g (95%) sirovog proizvoda 4-hloro-5-cijano-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridina kao tamnog ulja. LCMS: 308.1 (M+H)<+>. Sirovi proizvod je korišćen u sledećoj reakciji bez daljih prečišćavanja.

Korak B: 4-(1H-Pirazol-4-il)-5-cijano-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin

[0324]

[0325] Balon sa okruglim dnom od 250 mL je napunjen sa 4-hloro-5-cijano-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-d]piridinom (5.00 g, 17.6 mmol), 1-butanolom (25.0 mL), 1-(1-etoksietil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan2-il)-1H-pirazolom (7.06 g, 26.4 mmol), vodom (25.0 mL) i kalijum karbonatom (6.17 g, 44.08 mmol). Ovaj rastvor je degasiran 4 puta uvođenjem svaki put azota. U njega je dodat tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (2.071 g, 1.773 mmol). Rastvor je degasiran 4 puta, uvođenjem svaki put azota i mešanjem na 100 °C u toku 3 sata. Posle hlađenja na sobnu temperaturu, smeša je proceđena kroz sloj celita i celit je ispran sa etil acetatom (42 mL). Filtrati su sakupljeni i organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom. Spojeni ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđeni, upareni pod sniženim pritiskom da bi se dobio uljani ostatak koji je prečišćen sa combiflash kolonom da se dobije 3.8 g (53%) željenog intermediejra. LC-MS: 412.2 (M+H)<+>.

[0326] Smeša 3.8 g gornjeg intermedijra u 20 mL 2 N HCl vodenog rastvora i 20 mL CHCl3je mešano na sobnoj temepraturi u toku vikenda. Organski sloj je odvojen i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (3x50 mL). Spojeni ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđeni, upareni pod sniženim pritiskom i dobijeno je 2.9 g (97%) 4-(1H-pirazol-4-il)-5-cijano-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridina. LC-MS: 340.2 (M+H)<+>.

Korak C: 4-{1-[3-(Cijanometil)azetidin-3il]-1H-pirazol-4il}-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]pirid-in-5-kabonitril•2[HCl]

[0327]

[0328] U rastvor 4-(1H-pirazol-4-il)-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-karbonitrila (2.26 g, 6.66 mmol) i terc-butil 3-(cijanometilene)azetidin-1-karboksilata (1.293 g, 6.66 mmol) u acetonitrilu (40 mL) je dodat 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undek-7-en (0.996 mL, 6.66 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku noći i koncentrovana. Prečišćavanjem hromatografijom sa silikagelom (0-80% EtOAc/heksani) dobijeno je 2.20 g (62%) intermedijera terc-butil 3-(cijanometil)-3-[4-(5-cijano-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)1H-pirazol-1-il]azetidin-1-karboksilata kao bezbojnog ulja. LC-MS found: 534.3 (M+H)<+>.

[0329] U rastvor gore pomenutog uljanog intermedijera (2.20 g, 4.12 mmol) u THF (40 mL) je dodat 4.0 M rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (70 mL, 280 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temepraturi u toku 2 sata i koncentrovana da bi se dobilo 2.23 g (99.6%) željenog proizvoda kao žućkaste čvrste supstance. LC/MS nađeno: 434.2 (M+H)<+>.

Korak D: 4-{1-[3-(Cijanometil)-1-piperidin-4-ilazetidin-3-il]-1H-pirazol-4-il}-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-karbonitril•3[HCl]

[0330]

[0331] U smešu 4-{1-[3-(cijanometil)azetidin-3-il]-1H-pirazol-4-il}-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-karbonitrila•2[HCl] (2.0 g, 3.68 mmol), terc-butil 4-okso-1-piperidinkarboksilata (0.734 g, 3.68 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (3.21 mL, 18.4 mmol) u THF (70.0 mL) je dodat natrijum triacetoksiborohidrid (1.56 g, 7.37 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 2 sata i zaustavljena sa rastvorom soli. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa EtOAc (2 puta). Spojeni ekstrakti su isprani sa vodom, rastvorom soli i osušeni iznad Na2SO4. Posle ceđenja i uparavanja, ostatak je prečišćen sa fleš hroamtografijom na silikagelu eluiranjem sa 50-100% EtOAc/heksani. Prečišćeni intermedijer je rastvoren u THF (30 mL). U rastvor na 10 °C dodat je 4.0 M rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (30.0 mL, 1.20 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 2 sata i koncentrovana da bi se dobilo 2.01 g (87.2%) željenog proizvoda kao beličaste supstance. LC/MS found: 517.3 (M+H)<+>.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.29 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.97 (d, 1H), 6.97 (s, 1H), 5.69 (s, 2H), 5.94 (m, 2H), 4.55 (m, 2H), 3.73-3.56 (m, 2H), 3.63 (t, 2H), 3.52 (m, 2H), 3.47-3.35 (m, 3H), 2.81 (m, 2H), 2.10 (m, 2H), 1.75 (m, 2H), 0.82 (t, 2H), -0.11 (s, 9H).

Korak E: 4-[1-(3-(Cijanometil)-1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4il}azetidin-3il)-1H-pirazol-4-il]1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-karbonitril

[0332] Smeša 3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinske kiseline (70.0mg, 0.335mmol), 4-{1-[3-(cijanometil)-1-piperidin-4-ilazetidin-3-il]-1H-pirazol-4-il}-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-karbonitrila•3[HCl] (210 mg, 0.335 mmol), benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfat (149 mg, 0.335 mmol) i trietilamina (0.234 mL, 1.68 mmol) u DMF (2.0 mL) je mešana na sobnoj temepraturi u toku 2 sata. Smeša je razblažena sa vodom, zatim ekstrahovana sa EtOAc (2 puta). Spojeni ekstrakti su isprani sa zasićenim NaHCO3, vodom, rastvorom soli, osušena iznad Na2SO4. Posle ceđenja i uparavanja, ostatak je prečišćen sa fleš hromatografijom na silikagelu eluiranjem sa 0-10% MeOH/EtOAc da bi se dobilo 143 mg naslovnog jedinjenja. LC-MS nađeno: 708.1 (M+H)<+>.

[0333] Prečišćeni gore pomenuti intermedijer (143 mg) je rastvoren u metilen hloridu (10 mL) i trifluorosirćetnoj kiselini (10 mL, 100 mmol). Dobijeni rastvor je mešan na soboj temperaturi u toku 1 sata i koncentrovan. Ostatak je tretiran sa metanolom (10 mL) i etilendiaminom (5 mL, 70 mmol). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 1 sata. Prečišćavanjem sa fleš hromatografijom na silikagelu eluiranjem sa 5-15% MeOH/EtOAc dobijeno je 63 mg (55%) naslovnog jedinjenja kao beličaste čvrste supstance. LC/MS nađeno: 578.2 (M+1)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 12.34 (brs, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.60 (d, J = 4.80 Hz, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.84 (t, J = 4.80 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 3.60 Hz, 1H), 6.79 (d, J = 3.60 Hz, 1H), 4.01 (m, 1H), 3.68 (m, 2H), 3.54 (m, 2H), 3.49 (m, 2H), 3.36 (m, 1H), 3.22 (m, 1H), 3.03 (m, 1H), 2.50 (m, 1H), 1.69 (m, 1H), 1.57 (m, 1H), 1.16 (m, 2H).

[0334] Sledeća jedinjenja su dobijena pomoću postupaka opisanih u primeru 332.

Primer 342. {1-{1-[5-Hloro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0335]

[0336] Reakcija {1-piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohlorida sa 5-hloro-2-trifluorometilizonikotinskom kiselinom prema postupku opisanom u primeru 1, praćena prečišćavanjem sa HPLC (postupkom B) dobijeno je naslovno jedinjenje. LC-MS: 570.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 12.08 (brs, 1H),8.92 (, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.11 (d, J = 14.09 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 3.30 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 3.30 Hz, 1H), 4.07 (m, 1H), 3.73 (m, 2H), 3.56 (m, 2H), 3.52 (s, 2H), 3.26 (m, 2H), 2.98 (m, 1H), 2.53 (m, 1H), 1.69 (m, 2H), 1.25 (m, 2H).

Primer 343. {1-{1-[5-Fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0337]

[0338] Reakcija {1-piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1Hpirazol-1-il]azetidin-3-il} acetonitril trihidrohlorida sa 5-fluoro-2-trifluorometilizonikotinskom kiselinom prema postupku opisanom u primeru 1, praćena prečišćavanjem sa HPLC (postupkom B) dala je naslovno jedinjenje. LC-MS: 554.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.08 (brs, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.09 (d, J = 4.80 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 3.60 Hz, 1H), 7.00 (d, J = 3.60 Hz, 1H), 4.02 (m, 1H), 3.69 (m, 2H), 3.52 (m, 2H), 3.49 (s, 2H), 3.34 (m, 1H), 3.20 (m, 1H), 3.00 (m, 1H), 2.49 (m, 1H), 1.70 (m, 1H), 1.57 (m, 1H), 1.22 (m, 2H).

Primer 344. [3-[4-(7H-Pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]-1-(1-{[4-(trifluorometil)-1,3-tiazol-2-il]karbonil}piperidin-4-il)azetidin-3-il]acetonitril

[0339]

[0340] Reakcija {1-piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il} acetonitril trihidrohlorida sa 4-trifluorometiltiazol-2-ilkarboksilno kiselinom pomoću postupka opisanog u primeru 1, praćena prečišćavanjem sa HPLC (postupkom B) dala je naslovno jedinjenje. LC-MS: 542.2 (M+H)<+>.

Primer 345. [3-[3-(7H-Pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]-1-(1-{[2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperidin-4-il)azetidin-3-il] acetonitril

[0341]

[0342] Reakcija {1-piperidin-4-il-3-[3-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohlorida sa 2-trifluorometilpirimidin-4-karboksilnom kiselinom pomoću postupka opisanog u primeru 261, praćena prečišćavanjem sa HPLC (postupkom, B) dala je naslovno jedinjenje. LC-MS: 536.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 11.93 (brs, 1H), 9.18 (d, 1H), 8.59 (s, 1H), 7.95 (d, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.48 (d, 1H), 7.05 (d, 1H), 6.91 (d, 2H), 4.00 (m, 1H), 3.55 (d, 2H), 3.40 (d, 2H), 3.35 (m, 1H), 3.30 (s 2H), 3.23 (m, 2H), 3.11 (m, 1H), 2.58 (m, 1H), 1.80-1.52 (m, 2H), 1.22 (m, 2H).

Primer 346. [3-[3-(7H-Pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]-1-(1-{[4-(trifluorometil)-1,3-tiazol-2-il]karbonil}piperidin-4-il)azetidin-3-il]acetonitril

[0343]

[0344] Reakcija {1-piperidin-4-il-3-[3-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohlorida sa 4-trifluorometiltiazol-2-ilkarboksilnom kiselinom prema postupku opisanom u primeru 261, praćena prečišćavanjem sa HPLC (postupkom B) dala je naslovno jedinjenje. LC-MS: 541.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 11.92 (brs, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.43 (d, 2H), 7.02 (s, 1H), 6.90 (s, 1H), 4.45 (m, 1H), 3.95 (m, 1H), 3.70 (m, 1H), 3.55 (d, 2H), 3.45 (d, 2H), 3.37 (s, 2H), 3.20 (m, 2H), 1.80-1.60 (m, 2H), 1.25 (m, 2H).

Primer 347. [3-[3-(7H-Pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]-1-(1-{[5-(trifluorometil)pirazin-2-il]karbonil}piperidin-4-il)azetidin-3-il] acetonitril

[0345]

[0346] Reakcija {1-piperidin-4-il-3-[3-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohlorida sa 5-trifluorometilpirazin-2-ilkarboksilnom kiselinom prema postupku opisanom u primeru 261, praćena prečišćavanjem sa HPLC (postupkom B) dala je naslovno jedinjenje. LC-MS: 536.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 11.99 (brs, 1H), 9.23 (s, 1H), 9.07 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.55 (d, 1H), 7.11 (s, 1H), 6.98 (d, 2H), 4.12 (m 1H), 3.65 (d, 2H), 3.55 (d, 2H), 3.41 (m, 1H), 3.31 (s, 2H), 3.15 (m, 2H), 2.60 (m,1H),1.90-1.60 (m, 2H),1.30 (m, 2H).

Primer 348. {1-[1-(Metilsulfonil)piperidin-4-il]-3-[3-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0347]

[0348] Reakcija {1-piperidin-4-il-3-[3-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohlorida sa metansulfonil hloridom prema postupku opisanom u primeru 246, praćena prečišćavanjem sa HPLC (postupkom B) dala je naslovno jedinjenje. LC-MS: 440.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 11.91 (brs, 1H), 8.55 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.01 (d, 1H), 6.88 (d, 2H), 3.52 (d, 2H), 3.47 (d, 2H), 3.30 (m, 2H), 3.27 (s, 2H), 2.80 (m, 2H), 2.75 (s, 3H), 2.27 (m, 1H), 1.65 (m, 2H), 1.23 (m, 2H).

Primer 349. [3-[4-(1H-Pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]-1-(1-{[5-(trifluorometil)pirazin-2-il]karbonil}piperidin-4-il)azetidin-3-il] acetonitril

[0349]

[0350] Reakcija {1-piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohlorida sa 5-trifluorometilpirazin-2-karboksilnom kiselinom prema postupku opisanom u primeru 294, praćena prečišćavanjem sa HPLC (postupkom B) dala je naslovno jedinjenje. LC-MS: 536.2 (M+H)<+>.

<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 12.07 (brs, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.68 (s, 2H), 8.41 (s, 2H), 7.61 (d, 1H), 7.06 (d, 1H), 4.55 (m, 1H), 4.05 (m, 1H), 3.75 (dd, 2H), 3.59 (dd, 2H), 3.55 (m, 2H), 3.32 (s, 2H), 3.30 (m, 1H), 1.80 (m, 2H), 1.30 (m, 2H).

Primer 350. [3-[4-(1H-Pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]-1-(1-{[4-(trifluorometil)-1,3-tiazol-2-il]karbonil}piperidin-4-il)azetidin-3-il]acetonitril

[0351]

[0352] Reakcija {1-piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohlorida sa 4-trifluorometiltiazol-2-karboksilnom kiselinom prema postupku opisanom u primeru 294, praćena prečišćavanjem sa HPLC (postupkom B) dala je naslovno jedinjenje. LC-MS: 541.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 12.01 (brs, 1H), 9.09 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.48 (d, 1H), 7.82 (dd, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.16 (d, 1H), 4.85 (m, 1H), 4.35 (m, 1H), 4.05 (d, 2H), 4.03 (m, 1H), 3.90 (d, 1H), 3.80 (m, 1H), 3.62 (s, 2H), 3.58 (m, 1H), 2.90 (m, 1H), 2.08 (m, 2H), 1.62 (m, 2H).

Primer 351. {1-[1-(Metilsulfonil)piperidin-4-il]-3-[4-(1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0353]

[0354] Reakcija {1-piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohlorida sa metanesulfonil hloridom pomoću postupka opisanog u primeru 246, praćena prečišćavanjem sa HPLC (postupkom B) dala je naslovno jedinjenje. LC-MS: 440.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 11.91 (brs, 1H), 8.55 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.01 (d, 1H), 6.88 (d, 2H), 3.52 (d, 2H), 3.47 (d, 2H), 3.30 (m, 2H), 3.27 (s, 2H), 2.80 (m, 2H), 2.75 (s, 3H), 2.27 (m, 1H), 1.65 (m, 2H), 1.23 (m, 2H).

Primer 352. [3-[4-(5-Fluoro-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]-1-(1-{[6-(trifluorometil)pirazin-2i]karbonil}piperidin-4-il)azetidin-3-il]acetonitril

[0355]

[0356] Reakcija {3-[4-(5-fluoro-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]1-piperidin-4-ilazetidin-3-il}acetonitrila•3[HCl] sa 6-trifluorometilpirazin-2-karboksilnom kiselinom prema postupku opisanom u primeru 314, praćena prečišćavanjem sa HPLC (postupkom B) dala je naslovno jedinjenje. LC-MS: 554.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 12.11 (brs, 1H), 9.23 (s, 1H), 9.12 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.19 (d, 1H), 8.15 (d, 1H), 7.58 (d, 1H), 6.82 (d, 1H), 4.03 (m, 1H), 3.68 (d, 2H), 3.55 (d, 2H), 3.45 (m, 1H), 3.26 (s 2H), 3.24 (m, 1H), 3.11 (m, 1H), 2.55 (m, 1H), 1.80-1.57 (m, 2H), 1.25 (m, 2H).

Primer 353. [3-[4-(5-Fluoro-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]-1-(1-{[2-(trifluorometil)pirimidin4-il]karbonil}piperidin-4-il)azetidin-3-il] acetonitril

[0357]

[0358] Reakcija {3-[4-(5-fluoro-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]1-piperidin-4-ilazetidin-3-il}acetonitrila•3[HCl] sa 2-trifluorometilpirimidin-4-karboksilnom kiselinom prema postupku opisanom u primeru 314, praćena prečišćavanjem sa HPLC (postupkom B) dala je naslovno jedinjenje. LC-MS: 554.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 11.83 (brs, 1H), 9.15 (d, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.21 (d, 1H), 8.18 (d, 1H), 7.94 (d, 1H), 7.58 (d, 1H), 6.82 (d, 1H), 4.00 (m, 1H), 3.70 (d, 2H), 3.55 (d, 2H), 3.45 (m, 1H), 3.40 (s, 2H), 3.15 (m, 1H), 3.08 (m, 1H), 2.52 (m, 1H), 1.80 -1.52 (m, 2H), 1.23 (m, 2H).

Primer 354. [3-[4-(5-Fluoro-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]-1-(1-{[5-(trifluorometil)pirazin-2-il]karbonil}piperidin-4-il)azetidin-3-il]acetonitril

[0359]

[0360] Reakcija {3-[4-(5-fluoro-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]1-piperidin-4-ilazetidin-3-il}acetonitrila•3[HCl] sa 5-trifluorometilpirazin-2-karboksilnom kiselinom prema postupku opisanom u primeru 314, praćena prečišćavanjem sa HPLC (postupkom B) dala je naslovno jedinjenje. LC-MS: 554.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 11.82 (brs, 1H), 9.16 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.20 (d, 2H), 7.59 (s, 1H), 6.82 (s, 1H), 4.05 (m, 1H), 3.70 (d, 2H), 3.55 (d, 2H), 3.45 (m, 1H), 3.35 (s, 2H), 3.15 (m, 2H), 2.59 (m, 1H), 1.80-1.55 (m, 2H), 1.22 (m, 2H).

Primer 355. {3-[4-(5-Fluoro-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1Hpirazol-1-il]-1-[1-(metilsulfonil)piperidin-4-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0361]

[0362] Reakcija {3-[4-(5-fluoro-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]-1-piperidin-4-ilazetidin-3-il}acetonitrila•3[HCl] sa metanesulfonil hloridom prema postupku opisanom u primeru 246, praćena prečišćavanjem sa HPLC (postupkom B) dala je naslovno jedinjenje. LC-MS: 458.1 (M+H)<+>.1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 11.87 (brs, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.23 (d, J = 3.60 Hz, 1H), 8.20 (d, J = 2.10 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 3.60 Hz, 1H), 6.86 (d, J = 3.30 Hz, 1H), 3.71 (m, 2H), 3.57 (m, 2H), 3.54 (s, 2H), 3.36 (m, 2H), 2.86 (m, 2H), 2.83 (s, 3H), 2.37 (m, 1H),1.73 (m, 2H), 1.30 (m, 2H).

Primer 356. 4-[1-(3-(Cijanometil)-1-{1-[5-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}azetidin-3-il)1H-pirazol-4-il]-1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-karbonitril

[0363]

[0364] Reakcija 4-{1-[3-(cijanometil)-1-piperidin-4-ilazetidin-3-il]-1H-pirazol-4-il}-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-karbonitrila•3[HCl] sa 5-fluoro-2-trifluorometilizonikotinskom kiselinom prema postupku opisanom u primeru 332, praćena prečišćavanjem sa HPLC (postupkom B) dala je naslovno jedinjenje. LC-MS: 578.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 8.84 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.09 (d, J = 4.80 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 3.60 Hz, 1H), 6.79 (d, J = 3.60 Hz, 1H), 3.99 (m, 1H), 3.69 (m, 2H), 3.54 (m, 2H), 3.49 (s, 2H), 3.42 (m, 2H), 3.00 (m, 1H), 2.51 (m, 1H), 1.69 (m, 1H), 1.57 (m, 1H), 1.20 (m, 2H).

Primer 357. 4-(1-{3-(Cijanometil)-1-[1-(metilsulfonil)piperidin-4-il]azetidin-3-il}-1H-pirazol-4-il)-1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-karbonitril

[0365]

[0366] Reakcija 4-{1-[3-(cijanometil)-1-piperidin-4-ilazetidin-3-il]-1H-pirazol-4-il}-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-karbonitrila•3[HCl] sa metanesulfonil hloridom prema postupku opisanom u primeru 246, praćena prečišćavanjem sa HPLC (postupkom B) dala je naslovno jedinjenje. LC-MS: 465.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 12.28 (brs, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.68 (d, J = 3.60 Hz, 1H), 6.79 (d, J = 3.90 Hz, 1H), 3.67 (m, 2H), 3.53 (m, 2H), 3.50 (s, 2H), 3.31 (m, 2H), 2.81 (m, 2H), 2.78 (s, 3H), 2.35 (m, 1H), 1.68(m,2H), 1.26(m,2H).

Primer 358. So {1-{1-[3-Fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila i adipinske kiseline

[0367]

[0368] Skrining: Slobodna baza 1-{1-[3-Fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila (Primer 1) je amorfna supstanca. Studija skrininga soli je izvedena pomoću farmaceutski prihvatljivih kiselina za obrazovanje kristalne soli iz primera 1. Adipinska kiselina je identifikovana da daje kristalnu adipinsku so iz primera 1. Prvobitno dobijeni čvrsti oblik soli adipinske kiseline (oblik I) primera 1 sa tačkom topljenja 178 °C je izabran za optimizaciju. Ovaj oblik je kristalni oblik koji je potvrđen difrakcijom X-zraka na prahu (XRPD), diferencijalnom skanirajućom kalorimetrijom (DSC), i termalnom gravimetriijskom analizom (TGA). Stehiometrija soli je određena da je 1:1 (slobodna baza prema adipinskoj kiselini) sa<1>H NMR spektroskopijom i elementarnom analizom.

[0369] Studija skrininga polimorfa je izvedena na adipinskoj soli primera 1. Studije fazne ekvilibracije su izvedene suspendovanjem kristala oblika I u različitim rastvaračima (MeCN, CHCl3, CH2Cl2, MIBK, MEK, aceton, toluen, heksan, heptan, THF, MTBE, EtOH, i-PrOH, n-BuOH, EtOAc, i-PrOAc na 25°C ili 50°C. Na 25°C, svi testirani rastvarači su dali isti kristalni oblik I posle suspendovanja. Na 50°C, primećeni su isti rezultati sa izuzetkom za etanol. XRPD uzorak čvrste supstance dobijen iz etanolne suspenzije pokazao je prisustvo slobodne baze koje može biti objašnjena disocijacijom jednostavne soli. Rezultati studije fazne ekvilibracije sugerišu da je oblik I stabilan kristalni oblik. Pored toga napravljene višestruke partije (na skali od grama do kilograma) adipinske soli iz primera 1 do sada je određeno da imaju isti kristalni oblik (oblik I). Zasejavanje je korišćeno da izazove obrazovanje oblika I u kristalizaciji. Međutim, takođe je primećeno da je oblik I dobijen bez zasejavanja pri kristalizaciji.

[0370] Dobijanje: Adipinska kiselina (790 g, 5.406 mol) je rastvorena u metanolu (29 L) na 16 °C. Slobodna baza 2-(3-(4-(7H-Pirolo[2,3d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-1-(1-(3-fluoro-2-(trifluorometil)-izonikotinoil)piperidin-4-il)azetidin-3-il)acetonitrila (2.85 kg, 5.149 mol) je dodata u rastvor adipinske kiselne u metanolu na 16 °C. Reakciona smeša je zagrevana pod refluksom u toku 2 sata. Dobijena reakciona smeša je ohlađena na temepraturi okoline i rastvarač je uklonjen destilacijom pod sniženim pritiskom i dobijena je sirova so adipinske kiseline. Sirova so adipinske kiseline je rastvorena u acetonu (14 L) na temepraturi okoline. n-Heptan (20 L) je dodat u toku 2 sata u sirovi rastvor soli adipinske kiseline u acetonu na 18°C da bi se staložila so. Dobijena suspenzija je mešana na 18°C u toku 1 sata. So je rastvorena ceđenjem. Vlažni kolač je ispran sa n-heptanom (6 L). Proizvod je osušen na levku sa filterom pod pritiskom u toku 18 sati da bi se dobila sirova so 2-(3-(4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-1-(1-(3-fluoro-2-(trifluorometil)-izonikotinoil)piperidin-4-il)azetidin-3-il)acetonitril adipinske kiseline (3.572 kg , 5.105 mol, 99.2% prinos) kao bela čvrsta kristalna supstanca.

[0371] Sirova so adipinske kiseline može biti dalje prečišćana rekristalizacijom. Sirova so adipinske kiseline (3.378 kg, 4.828 mol) je suspendovana u acetonu (24 L) na temepraturi u okoline. Dobijena suspenzija je zagrejana na 55°C i mešana na 50-60°C da bi se dobio bistar rastvor. Rastvor je proceđen kroz filtera u liniji da se uklone čestice . n-Heptan (24 L) je dodat u rastvor na 55°C u toku 2 sata da se staloži so. Posle kompletnog dodavanja n-heptan, suspenzija je ohlađena na 30°C u toku 3 sati. Čista so adipinske kiseline je izolovana ceđenjem. Vlažni kolač je ispran sa smešom n-heptan i aceton (2:1 v/v, 6.8 L). Proizvod je osušen na levku za ceđenje pod pritiskom u toku 15 sati i dalje osušen u vakuum sušnici na 55 °C u toku 42 sata da se dobije čista so 2-(3-(4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-1-(1-(3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil)piperidin-4-il)azetidin-3-il)acetonitril adipinske kiseline, 3.116 kg, 92.2% prinos) kao bela čvrsta kristalna supstanca.

[0372] Za so adipinske kiseline: tt 178°C;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.14 (s, 1H), 12.02 (br s, 2H), 8.81 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.66 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.90 (dd, J = 4.7, 4.7, 1H), 7.60 (dd, J = 2.3, 3.5 Hz, 1H), 7.06 (dd, J = 1.8,3.6 Hz, 1H), 4.08 (m, 1H), 3.74 (m, 2H), 3.57 (m, 2H), 3.55 (m, 2H), 3.39 (m, 1H), 3.25 (m, 1H), 3.07 (m, 1H), 2.56 (m, 1H), 2.19 (m, 4H), 1.77 (m, 1H), 1.62 (m, 1H), 1.48 (m, 4H), 1.36 -1.12 (m, 2H);<13>C NMR (100 MHz, DMSOd6) δ 174.4, 160.3, 152.2 (<1>JCF= 265.7 Hz), 152.2, 150.9, 149.6, 146.3 (<4>JCF= 5.8 Hz), 139.5, 135.0 (<2>JCF= 17.3 Hz), 134.5 (<2>JCF= 35.3, 11.9Hz), 129.2, 127.6, 126.8, 121.7, 120.6 (<1>JCF= 274.0 Hz, (<3>JCF= 4.8 Hz), 117.4, 113.0, 100.0, 61.4, 60.557.0, 44.2, 33.4, 28.6, 27.9, 27.2, 24.0;<19>F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ -64.54 (d, J = 15.8 Hz, 3F), -129.34 (m, 1F); Anal. Calcd for: C32H33F4N9O5: C, 54.93; H, 4.75; F, 10.86; N, 18.02; found: C, 54.68; H, 4.56; F, 10.94; N, 17.90. LCMS izračunato za C26H24F4N9O (M H)<+>za slobodnu bazu: m/z 554.2; nađeno: 554.2.

[0373] Hemijska čistoća određena sa HPLC-om sa reverznom fazom je bila 99.57 površine%; DSC termogram je otkrio da je glavni endotemni događaj na početku signala na 175.9°C za koji se veruje da se odnosi na topljenje jedinjenja sa signalom na 177.9°C (videti sliku 1). DSC je skeniran od početne temperature od 30°C do krajnje temperature od 280°C pomoću brzine zagrevanja 10°C/min. TGA termogram pokazuje mali gubitak težine 0.29% primećen od 20°C do 100°C, i značajan gubitak mase od 62% je primećen posle daljeg zagrevanja od 100°C do 600°C (videti sliku 2). TGA termogram je dobijen kada je uzorak zagrejan od 20°C do 600°C brzinom zagrevanja od 20°C/min. XRPD uzorak je pokazao kristalnu prirodu soli adipinske kiseline (videti sliku 3). DSC, TGA, i XRPD podaci su konzistenti sa onim oblika I.

[0374] DSC parameteri: Mettler Toledo instrument diferencijalne skanirajuće kalorimetrije (DSC), Model No.822; Aluminijumski sud za uzorak (40 μL); opšti uslovi: 30-280 °C sa 10 °C/min.

[0375] TGA parameteri: TA Instrument, Model No. Q500. Uslovi opšteg polaznog postupka su: porast 20 °C/min. do 600 °C.

[0376] XRPD uslovi: Rigaku MiniFlex instrument difraktometar X-zraka na prahu (XRPD); zračenje X-zraka je od bakra Cu na 1.054056Å sa Kβfilterom; uzorak praha je dispergovan na nosaču uzorka kompenzovanog za okolinu i opšti uslovi meranja su:

Polazni ugao -3

Zaustavni ugao -45

Uzorkovanje -0.02

Brzina skeniranja -2

Tabela 1. XRPD podaci

Primer 359. cis-{1-{(3-Metoksi-1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0377]

Korak 1. terc-Butil cis-4-[3-(cijanometilen)azetidin-1]il]-3-metoksipiperidin-1-karboksilat

[0378]

[0379] U rastvor terc-butil 3-(cijanometilene)azetidin-1-karboksilata (3.0 g, 15 mmol) u tetrahidrofuranu (8 mL) dodat je 4.0 M rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (10 mL, 40 mmol). Pošto je mešana na sobnoj temperaturi u toku dva sata, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u tetrahidrofuranu (20 mL), i dodati su terc-butil 3-metoksi-4-oksopiperidin-1-karboksilat (3.58 g, 15.62 mmol) i trietilamin (3.126 g, 30.89 mmol). Polse mešanja na sobnoj temperaturi u toku 30 minuta, dodat je natrijum triacetoksiborohidrid (8.184 g, 38.61 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku noći. Dobijeni rastvor je razblažen sa vodenim NaHCO3i EtOAc. Organski sloj je odvojen i ispran sa rastvorom soli, osušen izand Na2SO4i koncnetorvan. Prečišćavanje sa combi-flash (20-100% EtOAc u heksanima) dalo je 2.8 g (60% prinos) željenog proizvoda. LC/MS nađeno: 308.1 (M-56)<+>.

Korak 2. cis-{1-[3-Metoksipiperidin-4-il]-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1Hpirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0380]

[0381] U rastvor 4-(1H-pirazol-4-il)-7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidina (0.256 g, 0.812 mmol) u acetonitrilu (10 mL) dodat je terc-butil cis-4-[3-(cijanometilene)azetidin-1-il]-3-metoksipiperidin1-karboksilat (0.20 g, 0.68 mmol) i 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undek-7-en (0.152 mL, 1.02 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperturi u toku 5 minuta, reakciona smeša je postala bistar rastvor. Mešanje je nastavljeno na sobnoj temepraturi u toku noći. LC-MS je ukazano da je reakcija završena. Rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom i dodat je etil acetat. Dobijeni rastvor je ispran sa 1 N HCl i rastvorom soli, osušen iznad natrijum sulfata, proceđen i koncentrovan. Prečišćavanjem hromatografijom na silikagelu (20-100% EtOAc/heksani) dobijen je uljani proizvod. Proizvod je rastvoren u THF (5 mL). U njega je dodat 4 N HCl u dioksanu (5 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi u toku 2 sata, rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 0.30 g (86%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance. LCMS: 511.1 (M+1)<+>.

Korak 3. cis-{1-{(3-Metoksi-1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0382] U fiolu od 20 mL dodati su 3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinska kiselina (18.67 mg, 0.0893 mmol) u DMF (3 mL), {1-[cis-3-metoksipiperidin-4-il]-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril (50.17 mg, 0.098 mmol), benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonium heksafluorofosfat (59.25 mg, 0.134 mmol) i trietilamin (0.037 mL, 0.268 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temepraturi u toku noći i prečišćena sa prep-LCMS da bi se dobilo 20 mg željenog intermediejra kao bele čvrste supstance. Bela čvrsta susptanca je rastvorena u metilen hloridu (1 mL) i dodata je trifluorosirćetna kiselina (1 mL). Pošto je mešan na sobnoj temperaturi u toku jednog sata, rastvor je koncentrovan. Ostatak je rastvoren u metanolu (2 mL) i dodat je etilen diamin (0.1 g, 2 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku dva sata. Prečišćavanje sa prep-LCMS (pH=10, postupak C) je dalo naslovno jedinjenje kao beli prah. LCMS: 584.3 (M+1)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 12.93 (s, 1H), 9.60 (d, J=2 Hz, 1H), 9.48 (d, J=7.2 Hz, 1H), 9.46 (d, J=4.4 Hz, 1H), 9.21 (d, J=1.2 Hz, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.40 (d, J=3.6 Hz, 1H), 7.85 (d, J=3.2 Hz, 1H), 4.81 (m, 1H), 4.60 (m, 1H), 4.55 (m, 1H), 4.40 (m, 4H), 4.28 (m, 1H), 4.10 (m, 1H), 3.95 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.56 (m, 1H), 2.40 (m, 2H), 2.25 (m, 1H).

Primer 360. {1-(cis-3-Metoksi-1-{[2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperidin-4-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0383]

[0384] U fiolu od 20 mL dodat je {1-[cis-3-metoksipiperidin-4-il]-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril (660 mg, 1.3 mmol) u DMF (10 mL), 2-(trifluorometil)pirimidine-4-karboksilna kiselina (270 mg, 1.4 mmol), benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfat (610 mg, 1.4 mmol) i trietilamin (0.48 mL, 3.4 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temepraturi u toku noći i prečišćena sa combi-flash pomoću 5% metanola (MeOH)/50% EtOAc/heksana da bi se dobilo 400 mg željenog intermedijera kao bele čvrste supstance. LC/MS nađeno: 697.2 (M+1)<+>.

[0385] Gornji ostatak je rastvoren u metilen hloridu (2 mL) i dodata je trifluorosirćetna kiselina (2 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi u toku jednog sata, rastvor je koncentrovan. Ostatak je rastvoren u metanolu (5 mL) i dodat je etilendiamin (0.4 g, 7 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku dva sata. Prečišćavanje sa prep-LCMS (pH=10, postupkom C) dalo je 210 mg naslovnog jedinjenja kao belog praha. LCMS nađeno: 567.2 (M+1)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 12.93 (s, 1H), 10.00 (dd, J=5.6 & 5.2 Hz, 1H), 9.60 (s, 1H), 9.48 (s, 1H), 9.21 (s, 1H), 8.73 (dd, J=5.6 & 5.6 Hz, 1H), 8.40 (d, J=3.6 Hz, 1H), 7.85 (d, J=3.2 Hz, 1H), 4.78 (m, 1H), 4.60 (m, 1H), 4.56 (m, 1H), 4.40 (m, 4H), 4.25 (m, 1H), 4.08 (m, 1H), 3.95 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.60 (m, 1H), 2.40 (m, 2H), 2.25 (m, 1H).

Primer 361. {1-{cis-3-Fluoro-1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0386]

Korak 1. terc-Butil cis-4-[3-(cijanometilen)azetidin-1-il]-3-fluoropiperidin-1-karboksilat

[0388] U rastvor terc-butil 3-(cijanometilene)azetidin-1-karboksilata (3.0 g, 15 mmol) u tetrahidrofuranu (8 mL) dodat je 4.0 M rastvora hlorovodonika u 1,4-dioksanu (10 mL, 40 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi u toku dva sata, rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u tetrahidrofuranu (20 mL). U njega su dodati terc-butil 3-fluoro-4-oksopiperidin-1-karboksilat (3.392 g, 15.62 mmol) i trietilamin (3.126 g, 30.89 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi u toku 30 minuta, dodat je natrijum triacetoksiborohidrid (8.184 g, 38.61 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku noći i razblažena sa vodenim NaHCO3i EtOAc. Organski sloj je odvojen i ispran sa rastvorom soli, osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod vakuumom. Prečišćavanjem sa combi-flash (20-100% EtOAc u heksanima) dobijeno je 0.5 g (66% prinos) željenog proizvoda. LC/MS nađeno: 240.1 (M-56)<+>.

Korak 2. {1-[cis-3-Fluoropiperidin-4-il]-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0389]

[0390] U rastvor terc-butil cis-4-[3-(cijanometilene)azetidin-1-il]-3-fluoropiperidin-1-karboksilata (0.24 g, 0.81 mmol) i 4-(1H-pirazol-4-il)-7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidina (0.31 g, 0.98 mmol) u acetonitrilu (8 mL) su dodati 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undek-7-en (0.15 g, 0.98 mmol) sa špricom. Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temepraturi u toku 6 sati i koncentrovan je. Prečišćavanje sa combi-flash pomoću 40-100% EtOAc/heksani kao eluent dali su 0.30 g (61% prinos) željenog jedinjenja kao čvrste supstance. LCMS nađeno.611.1 (M+1)<+>.

[0391] Gore pomenuta čvrsta supstanca je rastvorena u tetrahidrofuranu (4 mL). U njega je dodat rastvor 4.0 M HCl u dioksanu (4 mL). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 2 sata i koncentrovan da bi se dobilo naslovno jedinjenje: LCMS: 511.1 (M+1)<+>.

Korak 3. {1-{cis-3-Fluoro-1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0392] U fiolu od 20 mL dodati su {1-[cis-3-fluoropiperidin-4-il]-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril (200 mg, 0.4 mmol) u DMF(3 mL), 3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinska kiselina (99 mg, 0.47 mmol), benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfat (225 mg, 0.509 mmol) i trietilamin (0.14 mL, 1.0 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku noći i prečišćena sa prep-LCMS da bi se dobilo 50 mg željenog jedinjenja kao bele čvrste supstance. LC/MS nađeno: 702.2 (M+1)<+>.

[0393] Gornji proizvod je rastvoren u metilen hloridu (2 mL). U njega je dodata triflorosirćetna kiselina (2 mL). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku jednog sata i koncentrovana. Ostatak je sakupljen metanolom (5 mL) i dodat je etilendiamin (0.5 g, 8 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temepraturi u toku dva sata. Prečišćavanjem sa prep-LCMS (pH=10, postupkom C) dobijeno je naslovno jedinjenje kao beli prah. LCMS nađeno: 572.2 (M+1)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 12.93 (s, 1H), 9.62 (s, 1H), 9.49 (s, 1H), 9.48 (d, J=4.8 Hz, 1H), 9.22 (s, 1H), 8.60 (m, 1H), 8.40 (d, J=4.0 Hz, 1H), 7.85 (d, J=3.2 Hz, 1H), 5.60 (m, 1H), 5.20 (m, 1H), 4.60 (m, 2H), 4.42 (m, 2H), 4.38 (m, 2H), 4.20 (m, 1H), 3.90 (m, 1H), 3.58 (m, 1H), 2.52 (m, 1H), 2.35 (m, 2H).

Primer 362. {1-(cis-3-Fluoro-1-{[2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperidin-4-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il] azetidin-3-il}acetonitril

[0394]

[0395] U rastvor {1-[cis-3-fluoropiperidin-4-il]-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila (200 mg, 0.4 mmol) i 2-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksilne kiseline (83 mg, 0.43 mmol) u DMF (10 mL) dodati su benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfat (5.20E2 mg, 1.17 mmol) i trietilamin (0.14 mL, 0.98 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku noći i prečišćena sa prep-LCMS da bi se dobilo 100 mg (36% prinosa) željenog jedinjenja kao bele čvrste supstance.

[0396] Gornji ostatak je rastvoren u metilen hloridu (2 mL). U njega je dodata trifluorosirćetna kiselina (2 mL). Posle mešanja na sobnoj temepraturi u toku jednog sata, rastvor je koncentrovan. Ostatak je rastvoren u metanolu (5 mL) i dodat je etilendiamin (1 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi u toku dva sata, smeša je prečišćena sa prep-LCMS (pH=10, postupkom C) da bi se dobilo 41 mg (51% prinos) naslovnog jedinjenja kao belog praha. LCMS nađeno: 555.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 12.93 (s, 1H), 10.01 (dd, J=5.2 & 1.2 Hz, 1H), 9.62 (s, 1H), 9.49 (s, 1H), 9.22 (s, 1H), 8.71 (dd, J=22.4 & 4.8 Hz, 1H), 8.40 (dd, J=3.4 & 2.4 Hz, 1H), 7.85 (dd, J=3.6 & 1.2 Hz, 1H), 5.60 (m, 1H), 5.20 (m, 1H), 4.62 (m, 2H), 4.42 (m, 2H), 4.38 (m, 2H), 4.20 (m, 1H), 3.96 (m, 1H), 3.60 (m, 1H), 2.56 (m, 1H), 2.40 (m, 2H).

Primer 363. {1-{1-[3-Fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]-4-deuteropiperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0397]

Korak 1.1-(3-Fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil)piperidin-4-on

[0398]

[0399] U rastvor piperidin-4-ona (1 g, 10 mmol) i 3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinske kiseline (2.32 g, 11.1 mmol) u DMF (20 mL) dodati su benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfat (5.62 g, 12.7 mmol) i trietilamin (4.43 mL, 31.8 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku noći i razblažena sa EtOAc. Rastvor je ispran sa rastvorom soli, osušen sa natrijum sulfatom, proceđen i koncentrovan. Prečišćavanjem na silikagelu sa 50-100% EtOAc/heksanima dobijeno je 2.1 g (70% prinos) naslovnog jedinjenja. LC/MS nađeno: 291.2 (M+1)<+>.

Korak 2. {1-{1-[3-Fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]-4-deuteropiperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d] pirimidin-4-il)1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0400] U rastvor {3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila (50 mg, 0.1 mmol) i 1-(3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil)piperidin-4-ona (39 mg, 0.13 mmol) u tetrahidrofuranu (3 mL, 40 mmol) dodat je natrijum cijanoborodeuterid (0.024 g, 0.37 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku noći. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je sakupljen sa EtOAc. Rastvor je ispran sa vodenim NaHCO3i rastvorom soli, osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanjem sa prep-LCMS dobijeno je 25 mg (36% prinos) željenog proizvoda kao čvrste supstance. LC/MS nađeno: 685.1 (M+1)<+>.

[0401] Gore pomenuta čvrsta supstanca je rastvorena u CH2Cl2(2 mL). U nju je dodata trifluorosirćetna kiselina (2 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi u toku 1 sata, rastvor je koncentrovan. Ostatak je sakupljen u metanolu (2 mL). Dodat je etilendiamin (0.1 g, 2 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku dva sata. Direktnim prečišćavanjem sa prep-LCMS (postupkom C) dobijeno je naslovno jedinjenje kao beli prah. LCMS nađeno: 555.1 (M+1)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 12.93 (s, 1H), 9.61 (s, 1H), 9.49 (s, 1H), 9.48 (d, J=4.4 Hz, 1H), 9.21 (s, 1H), 8.70 (dd, J=4.8 & 4.8 Hz, 1H), 8.40 (dd, J=3.2 & 2.4 Hz, 1H), 7.86 (d, J=2.8 Hz, 1H), 4.85 (m, 1H), 4.58 (m, 2H), 4.38 (m, 4H), 4.21 (m, 1H), 4.08 (m, 1H), 3.90 (m, 1H), 2.58 (m, 1H), 2.40 (m, 1H), 2.02 (m, 2H).

Primer 364. {1-{1-[3-Fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]3,3,4,5,5-pentadeuteropiperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il] azetidin-3-il}acetonitril

[0402]

[0403] Rastvor 1-(3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil)piperidin-4-ona (0.66 g, 2.3 mmol) i trietilamina (0.45 g, 4.4 mmol) u metanolu-d4je mešan na sobnoj temperaturi u toku noći. U njega je dodat {3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril (1.1 g, 2.7 mmol) i natrijum cijanoborodeuterid (0.45 g, 6.8 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temepraturi u toku 4 sata i koncentrovana. Rastvor je ispran sa vodenim NaHCO3i rastvorom soli, osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanjem sa prep-LCMS dobijeno je 80 mg (5% prinos) naslovnog jedinjenja. LC/MS nađeno: 589.1, (M+1)<+>.

[0404] Gore pomenuti proizvod je rastvoren u CH2Cl2(2 mL). U njega je dodata trifluorosirćetna kiselina (2 mL). Posle mešanja u toku 1 sat, rastvor je koncentrovan. Ostatak je rastvoren u metanolu (3 mL). U njega je dodat etilendiamin (0.5 g, 8 mmol). Posle mešanja u toku 2 sata, smeša je odvojena sa prep-HPLC (postupkom C) da bi se dobilo naslovno jedinjenje. LCMS nađeno: 559.1 (M+1)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): d 12.94 (s, 1H), 9.61 (s, 1H), 9.49 (s, 1H), 9.46 (d, J=4.4 Hz, 1H), 9.21 (s, 1H), 8.70 (dd, J=4.4 & 4.4 Hz, 1H), 8.40 (d, J=3.6 Hz, 1H), 7.86 (d, J=3.6 Hz, 1H), 4.82 (d, J=13.2 Hz, 1H), 4.54 (d, J=7.6 Hz, 2H), 4.39 (m, 4H), 4.20 (d, J=13.6 Hz, 1H), 4.05 (d, J=132. Hz, 1H), 3.85 (d, J=13.6 Hz, 1H).

Primer 365. {1-{7-[3-Fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]-3-oksa-7-azabiciklo[3.3.1]non-9-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il] azetidin-3-il}acetonitril

[0405]

Korak 1. {1-(3-oksa-7-azabiciklo[3.3.1]non-9-il)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-prazol-1-il]azetidin-3-il}

[0406]

[0407] U smešu {3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila (0.80 g, 1.95 mmol) i terc-butil 9-okso-3-oksa-7-azabiciklo[3.3.1]nonan-7-karboksilata (0.518 g, 2.148 mmol) u tetrahidrofuranu (20.0 mL) dodati su trietilamin (1.62 mL, 11.7 mmol) i natrijum triacetoksiborohidrid (0.828 g, 3.91 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi u toku 2 sata, reakcija je zaustavljne sa 20 mL vode i 100 mL EtOAc. Organski sloj je isrpan sa rastvorom soli, osušen iznad Na2SO4, proceđen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa combiflash (5% MeOH/CH2Cl2) dalo je 0.8 g (65% prinosa) željenog intermedijera. LCMS nađeno: 635.3 (M+1)<+>.

[0408] Gore pomenuti proizvod je rastvoren u THF (5 mL) i dodat je 4 M rastvor HCl u dioksanu (5 mL). Posle mešanja u toku 1 sata, rastvor je koncentrovan pod sniženim rptiskom i dobijeno je naslovno jedinjenje. LCMS nađeno: 535.2 (M+1)<+>.

Korak 2. {1-{1-[3-Fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]-3-oksa-1-azabiciklo[3.3.1]non-9-il}-3-[4-(1H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0409] U smešu 3-ftuoro-2-(trifluorometil)izonikotinske kiseline (50.0 mg, 0.239 mmol) i {1-(3-oksa-7-azabiciklo[3.3.1]non-9-il)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3il}acetonitrila (128 mg, 0.239 mmol) u DMF (2 mL) dodat su trietilamin (0.100 mL, 0.717 mmol) i benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata (127 mg, 0.287 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 2 sata. Direktnim prečišćavanjem sa prep-LCMS (pH=10) dobijeno je 50 mg (30% prinos) željenog proizvoda. LCMS nađeno: 696.3 (M+1)<+>.

[0410] Ovaj proizvod je rastvoren u metilen hloridu (2 mL). U njega je dodat TFA (2 mL). Posle mešanja u toku 1 sata, rastvor je koncentrovan. Ostatak je sakupljen sa rastvorom 20% etilendiamina u MeOH (2 mL). Posle mešanja u toku 2 sata, smeša je odvojena sa prep-HPLC (postupkom C) da bi se dobilo naslovno jedinjenje. LCMS nađeno: 596.1 (M+1)<+>.<1>HNMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 12.10 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.66 (d, J=6.1 Hz, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.59 (d, J=7.1 Hz, 1H), 7.05 (d, J=6.3 Hz, 1H), 4.79 (d, J=9.1 Hz, 1H), 4.44 (d, J=10.1 Hz, 1H), 4.00-3.80 (m, 2H), 3.77-3.41 (m, 4H), 3.60 (s, 2H), 3.39-3.18 (m, 4H), 3.01 (m, 1H), 1.60 (m, 2H).

Primer 366. {1-(1-{[4-[(dimetilamino)metil]-6-(trifluorometil)piridin-2-il]karbonil}piperidin-4-il)3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0411]

Korak A.4-[(dimetilamino)metil]-6-(trifluorometil)piridin-2-karboksilna kiselina

[0412]

[0413] Smeša 4-bromo-6-(trifluorometil)piridin-2-karboksilne kiseline (200 mg, 0.7 mmol, Anichem), cezijum karbonata (724 mg, 2.22 mmol), dicikloheksil(2’,4’,6’-triizopropilbifenil-2-il)fosfina (42 mg, 0.089 mmol, Aldrich), kalijum [(dimetilamino)metil](trifluoro)borata(1-) (147 mg, 0.889 mmol, Aldrich), paladijum acetata (10. mg, 0.044 mmol, Sigma-Aldrich) i THF:H2O (10:1, 4.6 mL) je degasirana uvođenjem struje azota kroz rastvor u toku 15 minuta. Reakciona fiola je zatopljena i zagrevana na 80 °C u toku noći. Sirova smeša je prečišćena pomoću HPLC (Waters XBridge C18, 5um veličina čestica, 30 x 100 mm; 5 do 25 % MeCN/H2O koja sadrži 0.15 % NH4OH u toku 5 minuta) i proizvod je detektovan sa UV apsorbancom i sakupljen. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su rotaciono uparavane i azeotropirane sa metanolom da bi se dobio proizvod. Prinos: 0.029 g (20%); LC-MS: 249.1 (M+H)<+>.

Korak B. {1-(1-{[4-[(dimetilamino)metil]-6-(trifluorometil)piridin-2-il]karbonil}piperidin-4il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3il}acetonitril

[0414] U rastvor 4-[(dimetilamino)metil]-6-(trifluorometil)piridin-2-karboksilne kiseline (0.015 g, 0.060 mmol, iz koraka A) u N,N-dimetilformamidu (1 mL) dobijen je N,N,N’,N’-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uronijum heksafluorofosfat (0.028 g, 0.072 mmol, Aldrich) i N,N-diizopropiletilamin (0.042 mL, 0.24 mmol). Ova smeša je prethodno mešana u toku 15 minuta, praćena dodavanjem {1-piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7Hpirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila (0.030 g, 0.061 mmol, pripremljenog kao što je bilo opisano u primeru 1, korak H, osim prečišćavanja da bi se dobila sirova baza). Reakcija je mešana u toku noći. Dodatni N,N-diizopropiletilamin (0.042 mL, 0.24 mmol), 4-[(dimetilamino)metil]-6-(trifluorometil)piridin-2-karboksilna kiselina (0.014 g, 0.056 mmol) u DMF (1 mL), i N,N,N’,N’-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uronijum heksafluorofosfat (0.018 g, 0.048 mmol) su dodati i reakcija je mešana u toku dodatnih 48 sati. Reakcioan smeša je zatim parcijalno razdeljena između etil acetata i vode i slojevi su odvojeni . Dodat je čvrsti NaCl da se zasiti vodeni sloje i on je ekstrahovan sa dve dodatne porcije etil acetata. Spojeni organski ekstrakti su osušeni iznad natrijum sulfata, dekantovani i koncentrovani. Sa sirovog proizvoda je skinuta zaštita mešanjem sa smešom 1:1 TFA:DCM u toku 1.5 sati, zatim je uparavan i potom je dobijeni ostatak mešan sa etilendiaminom (0.2 mL) u metanolu (4 mL). Smeša je proceđena i prečišćana sa preparativnom HPLC-MS, (C18 eluiranjem sa gradijentom MeCN/H2O koji sadrži 0.15 % NH4OH). Frakcije koje sadrže proizvod su smrznute i liofilizirane. Prinos: 0.015 g (42%); LC-MS: 593.2 (M+H)<+>. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 8.70 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.51 (d, 1H), 6.99 (d, 1H), 4.32 (ddd, 1H), 3.86-3.70 (m, 5H), 3.64 (s, 2H), 3.50 (s, 2H), 3.36-3.16 (m, 2H), 2.69-2.61 (m, 1H), 2.28 (s, 6H), 1.98-1.88 (m, 1H), 1.86-1.77 (m, 1H), 1.51-1.39 (m, 2H).<19>F NMR (400 MHz, CD3OD): δ -69.82 (s, 3F).

Primer 367. 4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-izopropilpiperidin-1-karboksamid

[0415]

[0416] U rastvor {1-piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1Hpirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila (0.075 g, 0.15 mmol, pripremljenog kako je opisano u primeru 1, korak H, osim prečišćavanja da bi se dobila slobodna baza) u metilen hloridu (2 mL) dodat je N,N-diizopropiletilamin (0.026 mL, 0.15 mmol) a zatim sa 2-izocijanatopropanom (20 µL, 0.2 mmol, Aldrich). Reakcija je nastavljana u toku 2 sata. Skinuta je zaštita sa sirovog proizvoda dodavanjem 1 mL TFA u rastvor, koji je mešan u toku 1 sata i uparen. Skidanje zaštite je upotpunjeno mešanjem sa etilenediaminom (0.2 mL) u metanolu u toku 30 minuta. Proizvod je prečišćen sa preparativnom HPLC-MS (C18 eluiranjem sa gradijentom MeCN/H2O koji sadrže 0.15 % NH4OH). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su zamrznute liofilizacijom. Prinos: 0.025 g (37%); LC-MS: 448.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 10.21 (br s, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.41 (dd, 1H), 6.79 (dd, 1H), 4.22 (d, 1H), 4.04-3.87 (m, 1H), 3.81-3.69 (m, 4H), 3.61 (d, 2H), 3.40 (s, 2H), 3.00-2.86 (dq, 2H), 2.44-2.31 (m, 1H), 1.76-1.64 (m, 2H), 1.40-1.22 (m, 2H), 1.15 (d, 6H).

Primer 368. {1-{1-[6-[(dimetilamino)metil]-3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0417]

Korak A.1-oksid 3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinske kiselne

[0418]

[0419] U rastvor 3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinske kiseline (2.00 g, 9.56 mmol, Oakwood) i adiconom jedinjenju uree i vodonik peroksida (5.00 g, 53.2 mmol, Aldrich) u metilen hloridu (50 mL) na 0 °C dodat je anhidrid trifluorosirćetne kiseline (7.51 mL, 53.2 mmol). Kupatilo je uklonjeno i omogućeno je da se reakcija zagreje do sobne temperature i meša u toku noći. Talog je proceđen. Filtrat je razblažen sa malom količinom vode i etil acetata, slojevi su odvojeni i vodeni deo je ekstrahovan sa još dve porcije etil acetata. Spojeni ekstrakti su osušeni iznad antrijum sulfata, proceđeni i koncentrovani. Rastvarač je uklonjen in vacuo da bi se dobila žuta čvrsta supstanca koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja. LC-MS: 225.9 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 8.20 (d, 1H), 8.04 (dd, 1H).

Korak B.6-hloro-3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinska kiselina

[0420]

[0421] Rastvor 1-oksida 3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinske kiseline (1.0 g, 4.4 mmol iz Koraka A) u fosforil hloridu (4 mL, 40 mmol) je zagrejan na 110 °C u toku 2 sata, zatim je ostavljen da se meša na temperaturi okoline u toku noći. POCl3je uparen, ostatak je tretiran sa natrijum bikarbonatnim rastvorom, koji je mešan u toku 1 sata. U ovu smešu je dodat tetrahidrofuran (20 mL) i litijum monohidrat (0.24 g, 5.7 mmol). Ovo je mešano u toku 3 sata. pH smeše je zatim prilagođen u opsegu pH 4-5 dodavanjem c.HCl. Proizvod je ekstrahovan sa tri porcije etil acetata. Spojeni organski ekstrakti su osušeni iznad natrijum sulfata, proceđeni i koncentrovani. Prinos: 0.54 g (50%); LC-MS: 244.1/245.9 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.07 (d, 1H).

[0422]

[0423] U fiolu koja se zatapa dodat je 6-hloro-3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinska kiselina (0.200 g, 0.821 mmol, iz koraka B), paladijum acetat (0.13 g, 0.57 mmol, Aldrich), dicikloheksil(2’,4’,6’-triizopropilbifenil-2-il)fosfin (0.55 g, 1.1 mmol, Aldrich), cezijum karbonat (0.803 g,2.46 mmol) i kalijum [(dimetilamino)metil](trifluoro)borat (1-) (0.163 g, 0.985 mmol, Aldrich) i THF:H2O (10:1, 15 mL). Reakcija je degasirana promenom vakuuma i azota u tri ciklusa. Fiola je zatopljena i zagrejana do 80 °C u toku noći. Smeša je proceđena i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Proizvod je prečišćan preparativnom HPLC-MS (C 18 eluiranjem sa gradijentom MeCN/H2O koji sadrži 0.1 % TFA). Frakcije koje sadrže proizvod su uparane rotiranjem i dobijen je ostatak koji sadrži proizvod i DMF. Maseni proizvod svake komponente je određen sa NMR i proizvod je korišćen bez daljeg prečišćavanja. Prinos: 0.077 g (35%);<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 8.26 (d, 1H), 4.60 (s, 2H), 2.98 (s, 6H).

Korak D. {1-{1-[6-[(dimetilamino)metil]-3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo [2,3d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il)acetonitril

[0424] Rastvor 6-[(dimetilamino)metil]-3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinske kiseline (0.0776 g, 0.291 mmol, iz Koraka C) u N,N-dimetilformamidu (1 mL) je tretiran sa N,N-diizopropiletilaminom (0.3 mL, 2 mmol) i benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfatom (0.15 g, 0.35 mmol) . Ova smeša je prethodno mešana u toku 1 sata, praćena dodavanjem {1-piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila (0.158 g, 0.320 mmol, pripremljenog kako je opisano u Primeru 1, Korak H, osim obrade da bi se dobila slobodna baza). Posle 3 sata, dodatni N,N-diizopropiletilamin (0.507 mL, 2.91 mmol) i benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfat (0.26 g, 0.58 mmol) su dodati i smeša je mešana u toku 48 sati. SEM-zaštićeni proizvod je prečišćen preparativnom HPLC-MS (C18 eluiranjem sa gradijentom MeCN/H2O koji sadrži 0.15 % NH4OH). Rastvarač je uklonjen iz frakcija koje sadrže željeni proizvod rotacionim uparavanjem. Skinuta je zaštita sa proizvoda mešanjem sa smešom 1:1 TFA:DCM u toku 1 sata, praćena uparavanjem, i mešanjem sa etilendiamin (0.2 mL) u metanolu u toku 30 minuta. Proizvod je prečišćen sa preparativnom HPLC-MS (C18 eluiranjem sa gradijentom MeCN/H2O koji sadrži 0.15 % NH4OH). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su zamrznute i liofilizovane. Prinos: 0.006 g (3%); LC-MS: 611.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 8.69 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.77 (d, 1H), 7.51 (d, 1H), 6.98 (d, 1H), 4.33-4.21 (m, 1H), 3.87-3.71 (m, 4H), 3.68 (s, 2H), 3.59-3.45 (m, 3H), 3.44-3.10 (m, 2H), 2.71-2.58 (m, 1H), 2.31 (s, 6H), 1.97-1.85 (m, 1H), 1.85-1.72 (m, 1H), 1.56-1.24 (m, 2H).<19>F NMR (300 MHz, CD3OD): δ -67.26 (d, 3F), -132.8 (m, 1F).

Primer 369. 3-[(4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}piperidin-1-il)karbonil]-5-[(dimetilamino)metil]benzonitril

[0425]

[0426]

Korak A. metil 3-bromo-5-[(dimetilamino)metil]benzoat

[0427] U rastvor metil 3-bromo-5-formilbenzoata (1.8 g, 7.4 mmol, pripremljen kao što je opisano u WO 2003048111 iz dimetil 5-bromoizoftalata, Alfa Aesar) u metilen hloridu (20 mL) dodat je rastvor 2.0 M dimetilamina u tetrahidrofuranu (7.4 mL, 15 mmol). Ova smeša je mešana u toku 15 minuta, praćena dodavanjem natrijum triacetoksiborohidrida (4.7 g, 22 mmol). Dobijena smeša je mešana u toku noći. Zasićeni rastvor natrijum bikarbonata je dodat i proizvod je ekstrahovan sa etil acetatom. Spojeni organski ekstrakti su isprani dva puta sa vodom, jednom sa rastvorom soli, osušeni iznad natrijum sulfata, proceđeni i koncentrovani da bi se dobilo svetlo žuto ulje. Prinos: 1.87 g (93%); LC-MS: 272.0, 274.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.06 (dd, 1H), 7.89 (dd, 1H), 7.69 (dd, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.42 (s, 2H), 2.24 (s, 6H).

Korak B.3-bromo-5-[(dimetilamino)metil]benzoeva kiselina

[0428]

[0429] Metil 3-bromo-5-[(dimetilamino)metil]benzoat (0.30 g, 1.1 mmol, iz Koraka A) je rastvoren u tetrahidrofuranu (20 mL) i dodat je litijum hidroksid monohidrat (0.555 g, 13.2 mmol) u vodi (6 mL). Posle mešanja u toku 3 sata, smeša je uparavana rotiranjem sa se ukloni THF i smanji zapremina vode. Smeša je razblažena sa ekvivalentnom zapreminom acetonitrila i proceđena. Proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC-MS (C 18 eluiranjem sa gradijentom MeCN/H2O koji sadrži 0.15 % NH4OH). Rastvarače je uklonjen iz frakcija koje sadrže željeni proizvod rotacionim uparavanjem da bi se dobila bela čvrsta supstanca. Prinos: 0.26 g (91%); LC-MS: 258.0, 260.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, DMSOd6): δ 7.86 (dd, 1H), 7.76 (dd, 1H), 7.43 (dd, 1H), 3.38 (s, 2H), 2.14 (s, 6H).

[0430] U rastvor 3-bromo-5-[(dimetilamino)metil]benzoeve kiseline (31.4 mg, 0.122 mmol, iz korak B) u tetrahidrofuranu (1.0 mL) dodat je trietilamin (0.045 mL, 0.32 mmol) i N,N,N’,N’-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol1-il)uronijum heksafluorofosfat (43.2 mg, 0.114 mmol). Smeša je prethodno mešana u toku 15 minuta, što je praćeno dodavanjem {1-piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1il]azetidin-3-il}acetonitrila (40. mg, 0.081 mmol, pripremlejnog kako je opisano u primeru 1, korak H, osim obrade da bi se dobila slobodna baza). Posle mešanja u toku dva sata, reakciona smeša je razdeljena između etil acetat i vode. Organski sloj je ispran sukcesivno sa vodom, 0.1N NaOH i zas. NaCl, osušenim iznad natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je rastvoren u N,N-dimetilformamidu (1.50 mL) i dodat je cink cijanid (57 mg, 0.49 mmol). Ostatak je degasiran pomoću struje azota kroz smešu u toku 10 minuta. Dodat je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (19 mg, 0.016 mmol), i reakcija je zagrevana na 120 °C u mikrotalasnoj u toku 30 minuta. Reakciona smeša je obrađena razdeljivanjem između vode i etil acetata. Sloj etil acetata je ispran sa vodom, jednom sa rastvorom soli, osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je mešan u smeši 1:1 DCM:TFA u toku jednog sata, zatim koncentrovan. Ostatak je rastvoren u metanolu (1 mL), i dodat je etilendiamin (0.2 mL). Posle skidanja zaštite, proizvod je izolovan preparativnom HPLC-MS (C 18 eluiranjem sa gradijentom MeCN/H2O koji sadrži 0.15 % NH4OH). Prinos: 11.7 mg (26%); LC-MS: 549.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.15 (br s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.61 (dd, 1H), 7.07 (dd, 1H), 4.14-4.03 (m, 1H), 3.80-3.28 (m, 9H), 3.22-3.02 (m, 2H), 2.59-2.51 (m, 1H), 1.83-1.71 (m, 1H), 1.69-1.58 (m, 1H), 1.35-1.15 (m, 2H).

Primer 370. {1-(1-{[6-[(dimetilamino)metil]-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperidin-4-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0431]

Korak A. etil 6-(bromometil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksilat

[0432]

[0433] Smeša etil 6-metil-2-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksilata (1.1 g, 4.5 mmol, pripremljena kao što je opisano u WO 2007/090748), N-bromosukcinimida (2.86 g, 16.1 mmol) i benzoil peroksida (0.21 g, 0.9 mmol) u ugljen tetrahloridu (9 mL) je zagrejana u sudu do 100 °C u toku noći. Smeša je razblažena sa dihlorometanom (DCM), proceđena i rastvarač je uklonjen in vacuo. Prečišćavanje pomoću preparativne HPLC-MS (C 18 eluiranjem sa gradijentom MeCN/H2O koji sadrži 0.15 % NH4OH) dobijen je proizvod, koji je posle uklanjanja rastvarača, ulje. Prinos: 0.34 g (24%); LC-MS: 313.0, 315.0 (M+H)<+>.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.48 (s, 1H), 4.91 (s, 2H), 4.44 (q, 2H), 1.36 (t, 3H).

Korak B.6-[(dimetilamino)metil]-2-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksilna kiselina

[0434]

[0435] U rastvor 2.0 M dimetilamina u THF (5.27 mL, 10.5 mmol) dodat je rastvor etil 6-(bromometil)2-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksilata (0.33 g, 1.0 mmol, iz koraka A) u metilen hloridu (5.0 mL). Reakcija je mešana na sobnoj temepraturi u toku 2 sata, zatim koncentrovana. Ostatak je rastvoren u tetrahidrofuranu (20 mL), dodata je voda (6 mL), a zatim litijum hidroksid monohidrat (0.4 g, 10 mmol). Smeša je mešana u toku jednog sata, zatim je uparavana rotacijom da bi se uklonila većina THF. pH je prilagođen na 7 dodavanjem konc. HCl. Dodat je acetonitril (10 mL), smeša je proceđena i zatim prečišćana preparativnom HPLC-MS (C18 eluiranjem sa gradijentom MeCN/H2O koji sadrži 0.15 % NH4OH) da bi se dobio proizvod kao bledo žuta čvrsta supstanca. Prinos: 0.153 g (58%); LC-MS: 250.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.02 (s, 1H), 3.70 (s, 2H), 2.27 (s, 6H).

Korak C. {1-(1-{[6-[(dimetilamino)metil]-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperidin-4-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0436] 6-[(Dimetilamino)metil]-2-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksilna kiselina (22.8 mg, 0.0913 mmol, iz koraka B) je rastvorena u tetrahidrofuranu (0.67 mL), i trietilaminu (33.9 µL, 0.244 mmol) i dodat je N,N,N’,N’-tetrametil-O-(7azabenzotriazol-1-il)uronijum heksafluorofosfat (32.4 mg, 0.0852 mmol). Smeša je mešana u toku 15 minuta, praćena dodavanjem {1-piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila (30.0 mg, 0.0609 mmol, pripremljenog kako je opisano u primeru 1, korak H, osim obrade da bi se dobila slobodna baza). Posle dva sata, reakciona smeša je razdeljena između etil acetata i vode. Organski sloj je ispran sa vodom, 0.1N NaOH i zas. NaCl, osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je mešan u smeši 1:1 DCM:TFA u toku 1 sata, koncentrovan, i mešan u metanolu (1 mL) koji sadrži etilendiamin (0.2 mL) do potpunog skidanja zaštite. Prečišćavanje pomoću preparativne HPLC-MS (C18 eluiranje sa gradijentom MeCN/H2O koji sadrži 0.15 % NH4OH), dalo je željeno jedinjenje kao beli prah. Prinos: 0.014 g (39%); LC-MS: 594.4 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.14 (br s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.61 (dd, 1H), 7.07 (dd, 1H), 4.07 (ddd, 1H), 3.77-3.72 (m, 2H), 3.70 (s, 2H), 3.63-3.48 (m, 5H), 3.31-3.22 (m, 1H), 3.16-3.07 (m, 1H), 2.60-2.53 (m, 1H), 2.25 (s, 6H), 1.85-1.73 (m, 1H), 1.71-1.59 (m, 1H), 1.37-1.18 (m, 2H).<19>F NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ -69.45 (s, 3F).

Primer 371. Trifluoroacetatna so {1-(1-{[6-[(metilamino)metil]-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il] karbonil}piperidin-4-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d] pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila

[0437]

Korak A.6-[(metilamino)metil]-2-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksilna kiselina

[0438]

[0439] Rastvor metilamina (33 mas.% u etanolu, 1.12 mmol, Aldrich) je dodat u porcijama u rastvor etil 6-(bromometil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksilata (0.150 g, 0.321 mmol, Primer 5, Korak A) u metilen hloridu (3.0 mL), do završetka reakcije. Rastvarač je uklonjen in vacuo. Ostatak je rastvoren u tetrahidrofuranu (7.0 mL) i vodi (2.0 mL), i dodat je litijum hidroksid monohidrat (0.135 g, 3.21 mmol). Posle reakcionog vremena od 5 minuta, smeša je tretirana sa 1N HCl da bi se prilagodio pH na 7, zatim je prečišćen pomoću preparativne HPLC-MS (C18 eluiranjem sa gradijentom MeCN/H2O koji sadrži 0.15% NH4OH). LC-MS: 236.1 (M+H)<+>.

Korak B. {1-(1-{[6-[(metilamino)metil]-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperidin-4-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0440] N,N,N’,N’-Tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uranijum heksafluorofosfat (32.4 mg, 0.0852 mmol) je dodat u smešu 6-[(metilamino)metil]-2-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksilne kiseline (21.5 mg, 0.0913 mmol, iz Koraka A), {1-piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1il]azetidin-3-il}acetonitrila (30.0 mg, 0.0609 mmol, pripremljen kako je opisano u primeru 1, Korak H, osim obrade da bi se dobila slobodna baza) i trietilamina (33.9 µL, 0.244 mmol) u acetonitrilu (0.30 mL) i THF (0.67 mL) i reakcija je mešana u toku noći. Reakciona smeša je razdeljena između etilacetata i vode. Organski sloj je odvojen i ispran sukcesivno sa vodom, 0.1N NaOH i zas. NaCl, osušen iznad natrijum sulfata , proceđen i koncentrovan. Ostatak je mešan u smeši 1:1 DCM:TFA u toku 1 sata, koncentrovan, i naknadno mešan sa etilenediaminom (0.2 mL) u metanolu (1 mL) do potpunog skidanja zaštite. Prečišćavanjem prvo pomoću preparativne HPLC-MS (C18 eluiranjem sa gradijentom MeCN/H2O koji sadrži 0.15% NH4OH) zatim posnovo eluiranjem sa MeCN/H2O koji sadrži 0.1% TFA dobijeno je željeno jedinjenje kao trifluoroacetatna so. Prinos: 0.0015 g (3%); LC-MS: 580.4 (M+H)<+>.

Primer 372. {1-(1-{[6-(azetidin-1-ilmetil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il] karbonil}piperidin-4-il)-3-[4-(7Hpirolo[2,3-d] pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il] azetidin-3-il}acetonitril

[0441]

[0442]

Korak A. Etil 6-(azetidin-1-ilmetil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksilat

[0443] Azetidin (0.110 mL, 1.6 mmol, Aldrich) je dodat u rastvor etil 6-(bromometil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksilata (0.78 g, 1.1 mmol, pripemljen kao u primeru 376, korak A) u DCM (11 mL). Posle mešanja u toku 20 minuta, dodat je dodatni azetidin (0.10 mL, 1 mmol). Posle 10 minuta, višak reagenasa i rastvarača je uklonjen u vakuumu. Fleš hromatografijom, eluiranjem sa gradijentom 0-5% MeOH u DCM dobijen je prečišćen proizvod. Prinos: 0.29 g (87%); LC-MS: 290.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.24 (s, 1H), 4.52 (q, 2H), 3.90 (s, 2H), 3.39 (t, 4H), 2.19 (quin, 2H), 1.45 (t, 3H).

Korak B. Hidrohloridna so 6-(azetidin-1-ilmetil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksilne kiseline

[0444]

[0445] Etil 6-(azetidin-1-ilmetil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksilat (0.34 g, 1.2 mmol, iz koraka A) je rastvoren u THF (6.0 mL) i vodi (1.5 mL) i dodat je litijum hidroksid monohidrat (0.108 g, 2.57 mmol). Posle 15 minuta, THF je uklonjen u vakuumu i smeša je tretirana sa rastvorom 1 N HCl (5.3 mL) i acetonitrila (7.0 mL). Smeša je zatim proceđena i koncentrovana da bi se dobila žuta čvrsta supstanca, pretpostavljen je teorijski prinos. LC-MS: 262.1 (M+H)<+>.

[0446] {1-Piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1il]azetidin-3-il}acetonitril (0.150 g, 0.30 mmol, pripremljen kako je opisano u primeru 1, Korak H, osim obrade da bi se dobila slobodna baza) dodat je u smešu 6-(azetidin-1-ilmetil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksilne kiseline (0.20 g, 0.46 mmol, kao hidrohloridna so iz koraka B), trietilamina (0.255 mL, 1.83 mmol) i N,N,N’,N’-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uronijum heksafluorofosfata (0.150 g, 0.396 mmol) u tetrahidrofuranu (3.0 mL) i DCM (3.0 mL) koji je prethodno mešana u toku 30 minuta. Posle mešanja u toku 2 sata, reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom i isprana sukcesivno sa vodom, 0.1 N NaOH, i rastvorom soli. Organska faza je osušena iznad natrijum sulfata, proceđena i koncentrovana. Ostatak je rastvoren u smeši 1:1 DCM:TFA, mešanoj u toku 1 sata, ponovo koncentrovanoj, zatim mešanoj sa metanolom (3 mL) koji sadrži etilendiamin (0.2 mL). Posle potpunog skidanja zaštite, proizvod je prečišćen sa preparativnom HPLC-MS (C18 eluiranjem sa gradijentom MeCN/H2O koji sadrži 0.1 % TFA) zatim ponovo eluiranjem sa MeCN/H2O koji sadrži 0.15% NH4OH da bi se dobilo željeno jedinjenje. Prinos: 0.043 g (23%); LC-MS: 606.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.15 (br s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.06 (d, 1H), 4.10-4.01 (m, 1H), 3.81 (s, 2H), 3.75 (dd, 2H), 3.62-3.44 (m, 5H), 3.31-3.21 (m, 5H), 3.14-3.05 (m, 1H), 2.60-2.52 (m, 1H), 2.04 (quin, 2H), 1.83-1.73 (m, 1H), 1.69-1.60 (m, 1H), 1.37-1.18 (m, 2H).<19>F NMR (400 MHz, CD3OD): δ -72.38 (s, 3F).

Primer 373. {1-(1-{[6-[(dietilamino)metil]-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperidin-4-il)3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0447]

Korak A.6-[(dietilamino)metil]-2-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksilna kiselina

[0448]

[0449] U rastvor etil 6-(bromometil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksilata (0.15 g, 0.32 mmol, pripremljenog kao u primeru 5, korak A) u metilen hloridu (3.0 mL) dodat je N-etiletanamin (0.13 mL, 1.3 mmol). Posle 30 minuta, rastvarač je uklonjen in vacuo. Estar je hidrolizovan mešanjem sa litijum hidroksid monohidratom (0.12 g, 3.0 mmol) u smeši tetrahidrofurana (5 mL) i vode (2 mL). Posle 1 sata, 1N HCl je dodat u kapima radi neutralizacije. Prečišćavanjem pomoću preparativne HPLC-MS (C18 eluiranjem sa gradijentom MeCN/H2O koji sadrži 0.15% NH4OH) dobijen je proizvod kao svetlo žuta čvrsta supstanca. Prinos: 0.050 g (60%); LC-MS: 278.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.97 (s, 1H), 3.74 (s, 2H), 2.52 (q, 4H), 0.99 (t, 6H).

Korak B. {1-(1-{[6-[(dietilamino)metil]-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperidin-4-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0450] {1-Piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1il]azetidin-3-il}acetonitril (30.0 mg, 0.0609 mmol, kako je opisano u primeru 1, korak H, osim obrade da bi se dobila slobodna baza) dodat je u smešu 6-[(dietilamino)metil]-2-(trifluorometil)pirimidine-4-karboksilne kiseline (22.8 mg, 0.0822 mmol, iz koraka A), trietilamin (33.9 µL, 0.244 mmol) i N,N,N’,N’-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uronijum heksafluorofosfat (28.9 mg, 0.0761 mmol) u tetrahidrofuranu (0.67 mL), koji je prethodno mešan 30 minuta. Posle mešanja u toku noći, reakciona mseša je razdeljena između etil acetata i vode. Organski sloj je ispran sukcesivno sa vodom, 0.1N NaOH i zas. NaCl, osušen iznad natrijum sulfata, proceđen i koncentrovan Ostatak je mešan u smeši 1:1 DCM:TFA u toku 1 sata, i rastvarači su uklonjeni u vakuumu. Ostatak je zatim mešan sa etilendiaminom (0.2 mL) u metanolu (1 mL) do kompletnog skidanja zaštite. Prečišćavanjem pomoću preparativne HPLC-MS (MeCN/H2O koja sadrži 0.15% NH4OH) dobijen je proizvod. Prinos: 0.0156 g (41%); LC-MS: 622.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.14 (br s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.06 (d, 1H), 4.06 (ddd, 1H), 3.82 (s, 2H), 3.75 (d, 2H), 3.62-3.46 (m, 5H), 3.31-3.21 (m, 1H), 3.16-3.06 (m, 1H), 2.55 (q, 4H), 1.85-1.74 (m, 1H), 1.70-1.60 (m, 1H), 1.37-1.18 (m, 2H), 0.98 (t, 6H).<19>F NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ -69.46 (s, 3F).

Primer 374. {1-(1-{[6-{[etil(metil)amino]metil}-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperidin-4-il)3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0451]

Korak A.6-{[etil(metil)amino]metil}-2-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksilna kiselina

[0452]

[0453] N-metiletanamin (96 µL, 1.1 mmol) je dodat u rastvor etil 6-(bromometil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksilata (0.13 g, 0.28 mmol, pripremljenog kao u primeru 5, korak A) u metilen hloridu (2.6 mL). Posle mešanja u toku 30 minuta, rastvarač je uklonjen u vakuumu. Estar je hidrolizovan mešanjem sa litijum hidroksid monohidratom (0.12 g, 2.8 mmol) u tetrahidrofuranu (4 mL) i vodi (2 mL) u toku 1 sata.1N HCl je dodat u kapima radi podešavanja pH na 7. Prečišćavanjem preparativnom HPLC-MS (C18 eluiranjem sa gradijentom MeCN/H2O koji sadrži 0.15% NH4OH) dobijen je proizvod. Prinos: 0.043 g (58%); LC-MS: 264.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 8.03 (s, 1H), 3.75 (s, 2H), 2.51 (q, 2H), 2.22 (s, 3H), 1.05 (t, 3H).

Korak B. {1-(1-{[6-{[etil(metil)amino]metil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperidin-4-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0454] Posle prethodnog mešanja smeše 6-{[etil(metil)amino]metil}-2-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksilne kiseline (40.1 mg, 0.152 mmol, iz Korak A), trietilamina (56.6 µL, 0.406 mmol) i N,N,N’,N’tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uronijum heksafluorofosfata (54.0 mg, 0.142 mmol) u tetrahidrofuranu (1.1 mL) u toku 30 minuta, {1-piperidin4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril (50.0 mg, 0.101 mmol, pripremljen kao što je opisano u primeru 1, korak H, osim obrade da bi se dobila slobodna baza) je dodat i reakcija je mešana u toku noći. Reakcina smeša je razdeljena između etil acetata i vode. Organski sloj je uspešno ispran sa vodom, 0.1N NaOH i zas. NaCl, osušen iznad natrijum sulfata, proceđen i koncentrovan. Sa proizvoda je skinuta zaštita mešanjem prvo u smeši 1:1 DCM:TFA u toku 1 sata, praćena uparavanjem i mešanjem sa etilendiaminom (0.2 mL) u metanolu (1 mL) do potpunog skidanja zaštite. Prečišćavanjem pomoću preparativne HPLC-MS (C18 eluiranjem sa gradijentom MeCN/H2O koji sadrži 0.15% NH4OH) dobijen je proizvod. Prinos: 0.025 g (41%); LC-MS: 608.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.14 (br s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.06 (d, 1H), 4.11-4.02 (m, 1H), 3.78-3.71 (m, 4H), 3.63-3.48 (m, 5H), 3.32-3.21 (m, 1H), 3.17-3.07 (m, 1H), 2.62-2.53 (m, 1H), 2.48 (q, 2H), 2.21 (s, 3H), 1.84-1.74 (m, 1H), 1.70-1.61 (m, 1H), 1.37-1.18 (m, 2H), 1.03 (t, 3H).<19>F NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ -69.45 (s, 3F).

Primer 375. {1-(1-{3-(difluorometil)-5-[(dimetilamino)metil]benzoil}piperidin-4-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0455]

Korak A. metil 3-[(dimetilamino)metil]-5-(hidroksimetil)benzoat

[0456]

[0457] U reakcionu fiolu je dodat metil 3-bromo-5-(hidroksimetil)benzoat (1.2 g, 4.9 mmol, pripremljen kao što je opisano u WO 2003048111 iz dimetil 5-bromoizoftalata, Alfa Aesar), cezijum karbonata (4.79 g, 14.7 mmol), dicikloheksil(2’,4’,6’-triizopropilbifenil-2-il)fosfina (280 mg, 0.59 mmol, Aldrich), kalijum [(dimetilamino)metil](trifluoro)borata(1-) (0.970 g, 5.88 mmol, Aldrich), paladijum acetata (66 mg, 0.29 mmol) i THF:H2O (10:1, 30 mL). Reakciona smeša je degasirana prečišćavanjem sa strujom azota u toku 10 minuta. Fiola je zatopljena i zagrevana na 80 °C u toku 17 sati. Reakciona smeša parcijalno razdeljana između vode i etil acetata. Organski sloj je ispran dva puta sa vodom. Spojeni vodeni slojevi su zasićeni sa NaCl, i proizvod je ekstrahovan sa osam porcija DCM. Ekstrakti su osušeni iznad natrijum sulfata, proceđeni i koncentrovani da se dobije proizvod kao bezbojno ulje. Prinos: 0.37 g (34%); LC-MS: 224.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.94 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 4.74 (s, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.46 (s, 2H), 2.24 (s, 6H).

Korak B. metil 3-[(dimetilamino)metil]-5-formilbenzoat

[0458]

[0459] Mangan (IV) oksid (0.72 g, 8.3 mmol) je dodat u metil 3-[(dimetilamino)metil]-5-(hidroksimetil)benzoat (0.37 g, 1.6 mmol, iz koraka A) u toluenu (15 mL). Smeša je zagrejana na 105 °C u toku 2 sata, zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i proceđena. Rastvarač je uklonjen iz filtrata in vacuo da bi se dobio proizvod kao bezbojno ulje. Prinos: 0.30 g (82%); LC-MS: 222.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 10.07 (s, 1H), 8.43 (dd, 1H), 8.25 (dd, 1H), 8.05 (dd, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.54 (s, 2H), 2.26 (s, 6H).

Korak C. metil 3-(difluorometil)-5-[(dimetilamino)metil]benzoat

[0460]

[0461] Metil 3-[(dimetilamino)metil]-5-formilbenzoat (99 mg, 0.45 mmol, iz koraka B), je mešan u DeoxoFluor® (495 μL, 2.69 mmol) koji sadrži etanol (5 μL, 0.09 mmol) u toku 24 sata. Smeša je zasustavljena dodavanjem u kapima ledeno hladnog zasićenog rastvora NaHCO3. Proizvod je izolovan ekstrakcijom pomoću DCM. Organski ekstrakti su isprani dva puta sa vodom, jednom sa rastvorom soli, osušeni iznad natrijum sulfata, proceđeni i koncentrovani da bi se dobio proizvod kao svetlo žuto ulje koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. Prinos: 0.046 g (30%); LC-MS: 244.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.09 (s, 2H), 7.69 (s, 1H), 6.68 (t, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.36 (s, 2H), 2.25 (s, 6H).

[0462]

[0463] Litijum hidroksid monohidrat (65.2 mg, 1.55 mmol) u vodi (0.7 mL) je dodat u rastvor metil 3-(difluorometil)-5-[(dimetilamino)metil]benzoata (45 mg, 0.13 mmol, iz koraka C) u tetrahidrofuranu (2 mL). Posle mešanja u toku 3.5 sata, smeša je tretirana sa 1N HCl radi podešavanja pH na 7, zatim je THF uklonjen rotacionim uparavanjem. Dodat je acetonitril da se napravi smeša 1:1 ACN:voda, smeša je proceđena i filtrat je prečišćenn preparativnom HPLC-MS (C18 eluiranjem sa gradijentom MeCN/H2O koji sadrži 0.15% NH4OH) da bi se dobio proizvod kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 0.030 g (100%); LC-MS: 230.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 7.95 (s, 2H), 7.50 (s, 1H), 7.05 (t, 1H), 3.44 (s, 2H), 2.15 (s, 6H).

Korak E. {1-(1-{3-(difluorometil)-5-[(dimetilamino)metil]benzoil}piperidin-4-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0464] Smeša 3-(difluorometil)-5-[(dimetilamino)metil]benzoeve kiseline (14.0 mg, 0.0609 mmol, iz koraka D), trietilamina (28.3 μL, 0.203 mmol) i N,N,N’,N’-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uronijum heksafluorofosfata (21.2 mg, 0.0558 mmol) u tetrahidrofuranu (0.56 mL) je mešana u toku 15 minuta. {1-piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril (25.0 mg, 0.0507 mmol, dobijem prema primeru 1, Korak H, osim obrade da bi se dobila slobodna baza) je dodat i reakcija je mešana u toku dva sata. Reakciona smeša je razdeljena između etil acetata i vode. Organski deo je ispran sa vodom, 0.1N NaOH i zas. NaCl, osušen iznad natrijum suflata, proceđen i koncentrovan. Ostatak je mešan u T 1:1 DCM:TFA u toku 1 sata, rastvarači su uklonjeni u vakuumu, i dobijeni ostatak je mešan u metanolu (1 mL) koji sadrži etilendiamin (0.2 mL) do potpunog skidanja zaštite. Prečišćavanjem pomoću preparativne HPLCMS (C18 eluiranjem sa gradijentom MeCN/H2O koji sadrži 0.15% NH4OH) dobijen je proizvod kao beli prah. Prinos: 0.012 g (40%); LC-MS: 574.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.09 (br s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.46-7.41 (m, 2H), 7.07 (t, 1H), 7.07 (d, 1H), 4.17-4.03 (m, 1H), 3.75 (d, 2H), 3.62-3.25 (m, 7H), 3.22-3.03 (m, 2H), 2.58-2.51 (m, 1H), 2.15 (s, 6H), 1.85-1.55 (m, 2H), 1.33-1.12 (m, 2H).

Primer 376. {1-(1-{[6-(pirolidin-1-ilmetil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperidin-4-il)3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril (trifluoroacetatna so: 4 TFA)

[0465]

Korak A. etil 6-(bromometil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksilat

[0466]

[0467] Rastvor etil 6-metil-2-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksilata (2.00 g, 8.54 mmol, pripremljen kao što je opisano u WO2007/090748) u sirćetnoj kiselini (12 mL) je tretiran sa bromom (1.36 g, 8.54 mmol) i reakcija je zagrejana na 80 °C u zatopljenoj fioli u toku 30 minuta, za koje vremene obezbojena. Smeša koja sadrži neizreagovan polazni materijal, željeni proizvod i bromovani proizvod, je uparena na rotacionom uparivaču i azeotropirana jednom sa toluenom. Masni procenat željene komponenete je određen sa NMR i smeša je korišćena bez daljeg prečišćavanja. Prinos: 1.62 g (61%); LC-MS: 313.0, 315.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.32 (s, 1H), 4.60 (s, 2H), 4.54 (q, 2H), 1.46 (t, 3H).

Korak B. etil 6-[(acetiloksi)metil]-2-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksilat

[0468]

[0469] Etil 6-(bromometil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksilat (1.62 g, 5.17 mmol, iz koraka A) je rastvoren u acetonitrilu (15 mL) i dodat je natrijum acetat (2.8 g, 34 mmol). Smeša je zagrejana na 80 °C u toku 4 sata, i zatim je stajala na sobnoj temperaturi u toku noći. Acetonitril je uklonjen u vakkumu. Ostatak je parcijalno raspodeljen između vode i etil acetata i vodeni sloj je ekstrahovan sa dve porcije etil acetata. Spojeni ekstrakti su isprani sa vodom, zatim rastvorom soli, osušeni iznad natrijum sulfata, proceđeni i koncentrovani. Fleš hromatografijom, eluiranjem sa gradijentom od 0-60% etil acetat/heksan dobijen je prečišćeni proizvod. Prinos: 0.95 g (63%); LC-MS: 293.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.15 (s, 1H), 5.36 (s, 2H), 4.53 (q, 2H), 2.25 (s, 3H), 1.46 (t, 3H).

[0470]

[0471] Rastvor etil 6-[(acetiloksi)metil]-2-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksilata (0.95 g, 3.2 mmol, iz koraka B) u tetrahidrofuranu (8.7 mL) na 0 °C je tretiran sa litijum hidratom, monohidratom (140 mg, 3.2 mmol) u vodi (1.3 mL). Reakcija je mešana u toku 15 minuta, zatim je tretirana sa 1N HCl do pH∼4 u ledenom kupatilu. THF je uklonjen iz smeše u vakuumu. Proizvod je ekstrahovan prvo sa etil acetatom, zatim sa nekoliko porcija 10% izopropanola u CHCl3, uključujući podešavanje pH ako je neophodno perjodnom. Ekstrakti su spojeni i osušeni iznad natrijum sulfata, proceđeni, koncentrovani da bi se dobilo žuto ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. Prinos: 0.86 g (100%); LC-MS: 265.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.25 (s, 1H), 5.35 (s, 2H), 2.23 (s, 3H).

Korak D. [6-[(4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol1-il]azetidin-1-il}piperidin-1-il)karbonil]-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]metil acetat

[0472]

[0473] {1-Piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1il]azetidin-3-il}acetonitril (0.89 g, 1.8 mmol, pripremljen kako je opisano u primeru 1, korak H, osim obrade da bi se dobila slobodna baza) i 6-[(acetiloksi)metil]-2-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksilna kiselina (0.572 g, 2.16 mmol, iz koraka C) su rastvoreni u N,N-dimetilformamidu (18 mL). Dodati su trietilamin (1.2 mL, 9.0 mmol) i benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfat (958 mg, 2.16 mmol). Reakcija je mešana u toku noći. Reakciona smeša je parcijalno raspoređena između etil acetata i vode. Vodeni sloj je ekstrahovan sa tri porcije etil acetata. Spojeni ekstrakti su isprani dva puta sa vodom i jednom sa rastvorom soli, osušeni iznad natrijum sulfata, proceđeni i koncentrovani. Fleš hromatografijom. eluiranjem sa gradijentom od 0-5% metanola u etil acetatu, dobijen je željeni proizvod. Prinos: 0.85 g (64%); LC-MS: 739.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.85 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.41 (d, 1H), 6.80 (d, 1H), 5.68 (s, 2H), 5.32 (s, 2H), 4.26-4.16 (m, 1H), 3.87-3.72 (m, 3H), 3.64 (dd, 2H), 3.55 (dd, 2H), 3.48-3.35 (m, 3H), 3.29 (ddd, 1H), 2.64-2.54 (m, 1H), 2.04 (s, 3H), 1.92-1.73 (m, 2H), 1.61-1.43 (m, 2H), 0.92 (dd, 2H), -0.06 (s, 9H).

Korak E. {1-(1-{[6-(hidroksimetil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperidin-4-il)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0474]

[0475] U rastvor [6-[(4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il)karbonil]-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]metil acetata (0.85 g, 1.15 mmol, iz koraka D) u THF (16 mL) na sobnoj temperaturi dodat je rastvor litijum hidroksida, monohidrata (0.072 g, 1.7 mmol) u vodi (4 mL). Reakcija je mešana u toku 45 minuta, zatim neutralizovana dodavanjem 1N HCl i proizvod je ekstrahovan sa etil acetatom. Ekstrakti su spojeni i osušeni iznad natrijum sulfata, dekantovani i koncentrovani da bi se dobila žuta pena, koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja. Prinos: 0.72 g (90%); LC-MS: 697.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.86 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.42 (d, 1H), 6.81 (d, 1H), 5.68 (s, 2H), 4.92 (s, 2H), 4.28-4.17 (m, 1H), 3.89-3.71 (m, 3H), 3.71-3.61 (m, 2H), 3.55 (dd, 2H), 3.47-3.34 (m, 3H), 3.33-3.21 (m, 1H), 2.68-2.53 (m, 1H), 1.93-1.68 (m, 2H), 1.60-1.41 (m, 2H), 0.92 (dd, 2H), -0.06 (s, 9H).

Korak F. {1-(1-{[6-(pirolidin-1-ilmetil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperidin-4-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril (trifluoroacetatna so: 4 TFA)

[0476] U rastvor {1-(1-{[6-(hidroksimetil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperidin-4-il)3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila (0.030 g, 0.043 mmol, iz koraka E) i trietilamina (0.015 mL, 0.11 mmol) u metilen hloridu (1 mL) na 0 °C dodat je metansulfonil hlorid (0.006 mL, 0.08 mmol). Omogućeno je da se reakcija zagreje na sobnu temepraturu odmah posle dodavanja mezil hlorida (MsCl). Kada je potvrđeno da je obrazovan mezilat, rastvor mezilata je dodat u smešu pirolidina (0.017 mL, 0.20 mmol, Aldrich) i nekoliko kapi trietilamina u DCM (0.2 mL). Reakcija zamene je zagrevana na 40 °C u toku 30 minuta. Reakcija je ohlađena na sobnu temperaturu i dodata je trifluorosirćetna kiselina (1 mL). Posle mešanja u toku 1 sata, rastvarači su uklonjeni u vakuumu i zamenjeni sa metanolom (1 mL) i etilendiaminom (0.2 mL). Posle mešanja u toku 30 minuta, proizvod je prečišćen sa preparativnom HPLC-MS (Waters SunFire C18, 5 um veličina čestica, 30 x 100 mm, eluiranjem sa gradijentom 5-23% MeCN u H2O koji sadrži 0.1% TFA u toku 12 minuta). Prinos: 0.012 g (25%); LC-MS: 620.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 9.10 (s, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.83 (d, 1H), 7.29 (d, 1H), 4.95 (d, 2H), 4.85 (s, 2H), 4.77-4.66 (m, 3H), 4.02 (d, 1H), 3.95-3.15 (m, 8H), 3.12-2.99 (m, 1H), 2.31-2.03 (m, 6H), 1.77-1.51 (m, 2H).<19>F NMR (300 MHz, CD3OD): δ -72.21 (s, 3F), -77.61 (s, 12F).

Primer 377. {1-(1-{[6-{[(3S)-3-fluoropirolidin-1-il]metil}-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperidin-4-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril (trifluoroacetatna so: 4 TFA)

[0478] Pripremljen na način kao u primeru 376, pomoću (3S)-3-fluoropirolidin hidrohlorida (0.050 g, 0.40 mmol, Aldrich) i viška trietilamina u koraku F, zagrevan u toku 24 sata na 40 °C. Prinos: 0.012 g (26%); LC-MS: 638.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 9.05 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.25 (d, 1H), 5.50 (d, 1H), 4.93 (s, 2H), 4.85 (d, 2H), 4.74-4.57 (m, 3H), 4.06-3.65 (m, 7H), 3.60-3.45 (m, 1H), 3.29-3.17 (m, 1H), 3.15-3.02 (m, 1H), 2.58-2.36 (m, 2H), 2.22 (d, 1H), 2.10 (d, 1H), 1.75-1.49 (m, 2H).<19>F NMR (300 MHz, CD3OD): δ -72.24 (s, 3F), -77.59 (s, 12F), -175.45 (br, 1F).

Primer 378. {1-(1-{[6-{[(3R)-3-fluoropirolidin-1-il]metil}-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperidin-4-il)-3-[4-(7H-pirolo [2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril (trifluoroacetatna so: 4 TFA)

[0479]

[0480] Pripremljen na način kao u primeru 376, pomoću (3R)-3-fluoropirolidin hidrohlorida (0.025 g, 0.20 mmol, Oakwood). Prinos: 0.012 g (26%); LC-MS: 638.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 9.04 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.78 (d, 1H), 7.25 (d, 1H), 5.50 (d, 1H), 4.93 (s, 2H), 4.84 (d, 2H), 4.74-4.54 (m, 3H), 4.07-3.62 (m, 7H), 3.59-3.44 (m, 1H), 3.29-3.20 (m, 1H), 3.15-3.03 (m, 1H), 2.58-2.37 (m, 2H), 2.21 (d, 1H), 2.09 (d, 1H), 1.75-1.49 (m, 2H).<19>F NMR (300 MHz, CD3OD): δ -72.24 (s, 3F), -77.55 (s, 12F), -175.47 (br, 1F).

Primer 379. {1-(1-{[6-[(3,3-difluoropirolidin-1-il)metil]-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperidin-4-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril (trifluoroacetatna so: 4 TFA)

[0481]

[0482] Pripremljen na način kao u primeru 376, pomoću 3,3-difluoropirolidin hidrohlorida (0.050 g, 0.40 mmol, Matrix) i viška trietilamina u koraku F, i zagrevan je u toku 24 sata na 40 °C. Prinos: 0.012 g (25%); LC-MS: 656.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 9.07 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.81 (d, 1H), 7.26 (d, 1H), 4.95-4.87 (m, 2H), 4.76-4.62 (m, 3H), 4.24 (s, 2H), 4.04-3.92 (m, 1H), 3.71 (s, 2H), 3.65-3.50 (m, 1H), 3.40-3.14 (m, 5H), 3.12-2.99 (m, 1H), 2.44 (tt, 2H), 2.10 (d, 1H), 1.62 (dddd, 2H).<19>F NMR (300 MHz, CD3OD): δ -72.33 (s, 3F), -77.64 (s, 12F), - 95.48 (tt, 2F).

Primer 380. {1-(1-{[6-[(terc-butilamino)metil]-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperidin-4-il)3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril (trifluoroacetatna so: 3 TFA)

[0483]

[0484] Pripremljen na način kao u primeru 376, pomoću terc-butilamina (0.050 mL, 0.48 mmol, Aldrich) i viška trietilamina u koraku F, i zagrevan je u toku 24 sata na 40 °C. Prinos: 0.012 g (28%); LC-MS: 622.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 9.01 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.75 (d, 1H), 7.22 (d, 1H), 4.77 (d, 2H), 4.71-4.61 (m, 3H), 4.56 (d, 2H), 3.95 (br d, 1H), 3.69 (s, 2H), 3.56-3.39 (m, 1H), 3.30-3.20 (m, 1H), 3.17-3.04 (m, 1H), 2.19 (br d, 1H), 2.07 (br d, 1H), 1.73-1.52 (m, 2H), 1.49 (s, 9H).<19>F NMR (300 MHz, CD3OD): δ -72.02 (s, 3F), -77.47 (s, 9F).

Primer 381. {1-(1-{[6-(hidroksimetil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperidin-4-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0485]

[0486] Dodat je litijum hidroksid monohidrat (3.6 mg, 0.085 mmol) u vodi (0.10 mL) u rastvor [6-[(4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}piperidin-1-il)karbonil]-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]metil acetata (21 mg, 0.028 mmol, iz primera 376, Korak D) u tetrahidrofuranu (0.40 mL). Smeša je mešana u toku 5 minuta i zatim je tretirana sa 1N HCl radi neutralizacijeize. Rastvarač je uklonjen u vakuumu. Ostatak je mešan u rastvoru 1:1 TFA/DCM u toku jednog sata, rastvarači su uklonjeni ponovo u vakuumu. Ostatak je ponovo rastvoren MeOH (1 mL) i dodat je etilenediamin (0.2 mL). Kada je završeno skidanje zaštite, proizvod je prečišćen preparativnom HPLC-MS (C18 eluiranjem sa gradijentom MeCN/H2O koji sadrži 0.15% NH4OH). Prinos: 0.004 g (25%); LC-MS: 567.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.14 (br s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.06 (d, 1H), 5.94 (br s, 1H), 4.71 (s, 2H), 4.12-4.02 (m, 1H), 3.75 (dd, 2H), 3.63-3.46 (m, 5H), 3.31-3.22 (m, 1H), 3.17-3.07 (m, 1h), 2.61-2.53 (m, 1H), 1.84-1.75 (m, 1H), 1.71-1.61 (m, 1H), 1.37-1.18 (m, 2H).<19>F NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ -69.46 (s, 3F).

Primer 382. {1-(1-{[6-[(izopropilamino)metil]-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperidin-4-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0487]

[0488] Metansulfonil hlorid (2.8 μL, 0.036 mmol) u metilen hloridu (0.20 mL) je dodat u smešu {1-(1-{[6-(hidroksimetil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperidin-4-il)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila (21 mg, 0.030 mmol, pripremljenog kao u primeru 376, korak E) i trietilamina (8.4 μL, 0.060 mmol) u metilen hloridu (1.0 mL) na 0 °C. Posle 15 minuta, dodat je 2-propanamin (20 µL, 0.3 mmol). Smeša je zagrevana na 40 °C. Posle 1.5 sati, dodatni l 2-Propanamin (20 µL, 0.3 mmol, Aldrich) je dodat i reakcija je zagrevana u toku ukupno 3 sata na ovoj temepraturi. Smeša je koncentrovana u vakuumu. Ostatak je mešan u toku 1 sata u smeši 1:1 TFA/DCM, i zatim ponovo koncentrovan. Ostatak je ponovo rastvoren u MeOH (1.0 mL) i dodat je etilendiamin (0.2 mL). Proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC-MS (C18 eluiranjem sa gradijentom MeCN/H2O koji sadrži 0.15% NH4OH). Prinos: 11.6 mg (63%); LC-MS: 608.4 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.15 (br s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.07 (d, 1H), 41.2-4.02 (m, 1H), 3.94 (s, 2H), 3.75 (dd, 2H), 3.63-3.45 (m, 5H), 3.31-3.22 (m, 1H), 3.16-3.06 (m, 1H), 2.75 (septet, 1H), 2.61-2.53 (m, 1H), 1.84-1.75 (m, 1H), 1.70-1.60 (m, 1H), 1.36-1.19 (m, 2H), 1.01 (d, 6H).<19>F NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ -69.46 (s, 3F).

Primer 383. {1-(1-{[6-[(etilamino)metil]-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperidin-4-il)-3-[4-(7Hpirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0489]

[0490] Pripremljen postupkom prema primeru 382, pomoću etilamin (0.10 mL, 1.8 mmol, Aldrich) i izvođenjem supstitucione reakcije na sobnoj temperaturi u toku 1 sata. Prinos: 8.4 mg (47%); LC-MS: 594.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.13 (br s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.06 (d, 1H), 4.13-4.02 (m, 1H), 3.93 (s, 2H), 3.75 (dd, 2H), 3.62-3.46 (m, 5H), 3.31-3.22 (m, 1H), 3.15-3.06 (m, 1H), 2.61-2.53 (m, 3H), 1.84-1.74 (m, 1H), 1.71-1.60 (m, 1H), 1.37-1.18 (m, 2H), 1.04 (t, 3H).<19>F NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ -69.45 (s, 3F).

Primer 384. {1-(1-{[6-{[(2-metoksietil)(metil)amino]metil}-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperidin-4-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0491]

[0492] Pripremljen na način kao u primeru 382, pomoću 2-metoksi-N-metiletaneamina (0.077 g, 0.86 mmol, Oak-wood) i supstitucija je izvedena u zatopljenoj fioli na 60 °C u toku 7 sati. Prinos: 0.007 g (26%); LC-MS: 638.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 8.69 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.51 (d, 1H), 6.98 (d, 1H), 4.32-4.23 (m, 1h), 3.88 (s, 2H), 3.85-3.73 (m, 4H), 3.72-3.64 (m, 1H), 3.54 (t, 2H), 3.50 (s, 2H), 3.38-3.31 (m, 1H), 3.31 (s, 3H), 3.27-3.17 (m, 1H), 2.71 (t, 2H), 2.69-2.61 (m, 1H), 2.37 (s, 3H), 1.97-1.87 (m, 1H), 1.86-1.76 (m, 1H), 1.52-1.38 (m, 2H).<19>F NMR (300 MHz, CD3OD): δ -72.34 (s, 3F).

Primer 385. {1-(1-{[6-{[(3-hidroksipropil)(metil)amino]metil}-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperidin-4-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0493]

[0494] Pripremljen na način kao u primeru 382, pomoću 3-(metilamino)propanola (0.038 g, 0.43 mmol, TCI America) i supstitucija je izvedena na 40 °C u toku 1 sata. Prinos: 0.007 g (26%); LC-MS: 638.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 8.69 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.51 (d, 1H), 6.99 (d, 1H), 4.33-4.23 (m, 1H), 3.86-3.74 (m, 6H), 3.74-3.66 (m, 1H), 3.63 (t, 2H), 3.50 (s, 2H), 3.38-3.18 (m, 2H), 2.70-2.62 (m, 1H), 2.59 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 1.97-1.88 (m, 1H), 1.86-1.79 (m, 1H), 1.75 (tt, 2H), 1.52-1.39 (m, 2H).<19>F NMR (300 MHz, CD3OD): δ -71.88 (s, 3F).

Primer 386. Propil 4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}piperidin-1-karboksilat

[0495]

[0496] Rastvor {1-piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1Hpirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila (0.010 g, 0.020 mmol) i propil hloroformijata (3.0 µL, 0.026 mmol) u metilen hloridu (1 mL, 20 mmol) je mešan u toku 1.5 h. Dodat je TFA, 1 mL. Posle 1 sata, rastvarač je uklonjen rotacionim uparavanjem i dobijeno je ulje. Ulje je rastvoreno u 1mL MeOH i dodato je 50 mikroL etilendiamina. Posle1 sata, reakcija je prečišćena sa prep-HPLC (pH10) pomoću Waters XBridge C18, 5 μm veličina čestica, 19x100mm; sistem mobilne faze: vodeni (0.1 % NH4OH)/acetonitril; brzina protoka: 30 mL/min; separacioni gradijent: 40-60% B u 5 min da bi se dobilo 5.3 mg bele čvrste supstance (58%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO): δ 12.13 (1H, br); 8.83 (1H, s); 8.7 (1H, s); 8.42 (1H, s); 7.61 (1H, m); 7.05 (1H, m); 3.95 (2H, t); 3.75 (4H, m); 3.55 (4H, m); 3.0 (2H, br); 2.43 (1H, m); 1.65 (2H, m); 1.58 (2H, m); 1.15 (2H, m); 0.95 (3H, t). LCMS (M+1): 449.

Primer 387. Ciklobutilmetil 4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}piperidin-1-karboksilat

[0497]

[0498] U rastvor ciklobutilmetanola (11 µL, 0.12 mmol) u metilen hloridu (1 mL, 20 mmol) dodat je 2.02 M fozgen u toluenu (0.045 mL, 0.091 mmol). Posle mešanja u toku 2 sata, dodati su {1-piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril (0.020 g, 0.040 mmol) i N,N-diizopropiletilamin (0.040 mL, 0.23 mmol) i mešani u toku noći. Rastvarač je uklonjen rotacionim uparavanjem da bi se dobilo ulje. Ulje je zatim rastvoreno u 1 mL metanola i dodato je 100 mikroL etilendiamina. Posle 1 sata, reakcija je prečišćena sa prep-HPLC (pH10) pomoću Waters XBridge C18, 5 μm veličina čestica, 19x100mm; sistem mobilne faze: vodeni (0.1 % NH4OH)/acetonitril; brzina protoka: 30 mL/min; gradijent za odvajanje: 40-60% B u 5 min da bi se dobilo 15 mg bele čvrste supstance (78%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO): δ 12.08 (1H, br); 8.75 (1H, s); 8.62 (1H, s); 8.35 (1H, s); 7.55 (1H, m); 7.0 (1H, m); 3.9 (2H, d); 3.65 (4H, m); 3.5 (4H, m); 2.9 (2H, br); 2.38 (1H, m); 1.91 (2H, m); 1.77 (2H, m); 1.61 (5H, m); 1.03 (2H, m). LCMS (M+1): 475.

[0499] Sledeća jedinjenja su dobijena postupcima analogim onima u primerima 386-387.

Primer 398. Kristalne soli {1-{1-[3-Fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila

[0500]

A. Glutaratna so: Balon je napunjen sa slobodnom bazom {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila (37.85 mg, 0.068 mmol, 1 ek) i 2-propanola (0.6 mL). Reakciona smeša je mešana u toku 15 min da bi se dobio bistar rastvor praćen dodavanjem glutarne kiseline (12.1 mg, 0.092 mmol, 1.34 ek, Aldrich, Cat G3407). Reakciona smeša je mešana u toku oko 8 min da bi se dobila gusta suspenzija, i kontinualno je mešana u toku 5 h. Čvrsta smeša je sakupljena ceđenjem, isprana sa heptanom i osušena da bi se dobila glutaratna so kao beličasti kristali (39.9 mg, 85%, 1796-108).

Stehiometrijski odnos slobodne baze prema glutarnoj kiselini je određen sa<1>H NMR kao 1:1. Kristalnost glutaratne soli je potvrđena sa XRPD. DSC termogram je pokazano endoterme topljenja, sa početnom Tonsetna 206.26 °C i Tpeakna 207.63 °C. TGA je pokazao gubitak mase od 0.037% do približno 100 °C. SEM slika je ukazala da glutaratna so ima šipkasti oblik kristala.

B. Citratna so: Reaktor je napunjen sa slobodnom bazom {1-1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila (30.97 mg, 0.056 mmol, 1 ek) i etanolom (0.5 mL). U bistar rastvor dodata je limunksa ksielina (11.92 mg, 0.062 mmol, 1.1 ekviv.). Pošto je rekciona smeša mešana u toku 60 min da bi se dobila suspenzija, suspenzija je zagrejana na oko 75 °C u toku 80 min i mešana na sobnoj temperaturi u toku 4 h. Talog je sakupljen ceđenjem, ispran sa heptanom i osušen pod vakuumom da bi se dobila citratna so (38.6 mg, 91.9%) kao beličasta čvrsta supstanca. Stehiometrijski odnos soli između slobodne baze i limunske kiseline je određen sa<1>H NMR kao 1:1. Kristalnost soli je potvrđena sa XRPD i dalje podržana sa DSC. TGA je pokazao oko 0.57% gubitka mase do oko 100 °C. SEM slika je ukazala da so ima pločaste oblike kristala.

C. Benzoatna so: U rastvor slobodne baze {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila (31.41 mg, 0.0.057 mmol, 1 ek) u 2-propanolu (0.5 mL) dodata je benzoeva kiselina (16.54 mg, 0.135 mmol, 2.39 ek). Bezbojni rastvor je pretvoren u suspenziju posle mešanja u toku 20 min. Smeša je mešana na sobnoj temperautri u toku noći. Čvrsta supstanca je sakupljena ceđenjem, isprana sa heptanom (1.5 mL) i osušena u toku noći pod vakuumom da bi se dobila benzoatna so (35 mg, 91.3%) kao beličasta čvrsta supstanca.

[0501] Stehiometrijski odnos slobodne baze prema benzoevoj kiselini je određen sa<1>H NMR kao 1:1. Kristalnost benzoatne soli je potvrđen sa XRPD. DSC termogram je pokazao endoterme topljenja. TGA je pokazala gubitak mase od 0.080% do približno 100 °C. SEM slika je pokazala da je benzoatna so u obliku pločastih oblika kristala.

[0502] Korišćenjem sličnih postupaka onima gore opisanim takođe je nađeno da su maleat, salicilat, saharin, kamzilat, i nikotinske soli {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol1-il]azetidin-3-il}acetonitrila dobre kristalne soli.

Primer 399. Farmaceutske kompozicije soli adipinske kiseline {1-{1-[3-Fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila

[0503] Prototipske kapsule su proizvedene pomoću konvencionalnog postupka suvog mešanja. Početne prototipske kapsule su izvedena sa 200 mg odmerene smeše, za obe kapsule od 10 mg i 50 mg. Formulacija silifikovane mikrokristalne celuloze je izabrana na osnovu proizvodljivosti, rastvaranja i sadržaja jednoobraznih podataka dobijenih na razvijanim partijama. Adipinska so 1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1Hpirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila ("so adipinske kiseline") može biti obrazovana kao što je prikazano u primeru 358.

Kompozicija prototipa formulacije u kapsuli silifikovane mikrokristalne celuloze je data dole u tabelama A i B.

Tabela A. Komponente i sastav kapsule od 10 mg

Tabela B. Komponente i sastav kapsule od 50 mg

Formule partija za kapsule od 10 mg i 50 mg su prikazane u tabelama C i D. Kapsule su napravljene pomoću donjih koraka:

1. Prethodno je promešana potrebna količina soli adipinske kiseline i približno jednaka količine silicifikovane celuloze (SMCC).

2. Smeša iz koraka 1 je propuštena kroz pogodno sito (npr., 40 meša).

3. Prostali SMCC je prosejan pomoću istog sita korišćenog u koraku 2.

4. Prosejani SMCC iz koraka 3 je promešan sa smešom iz koraka 2 na pogodan način (npr., Turbula mešalica) u toku približno 5 minuta.

5. Smeša je napunjena u kapsule do željene mase punjenja.

Tabela C. Formula partije za 225 g smeše za kapsule od 10 mg

Tabela D. Formula partije za 936 g smeše za kapsule od 50 mg

Primer A: In vitro test JAK kinaze

[0504] Jedinjenja su ovde testirana za inhibitoru aktivnost JAK meta prema sledećen in vitro testu opisanom u Park et al., Analytical Biochemistry 1999, 269, 94-104. Katalitički domeni humanog JAK1 (a.a. 837-1142), Jak2 (a.a. 828-1132) i Jak3 (a.a. 781-1124) sa N-terminalnim His obeleživačem su eksprimvani pomoću bakulovirusa u izabranim ćelijama i prečišćeni. Katalitička aktivnost JAK1, JAK2 ili JAK3 je testirana merenjem fosforilacije biotinilovanog peptida. Fosforilovani peptid je detektovan homogenom vremenski rešenom fluorescencijom (homogenous time resolved fluorescence-HTRF). IC50jedinjenja je merena za svaku kinazu u reakcijama od 40 mikroL koje sadrže enzim, ATP i 500 nM peptid u 50 mM Tris (pH 7.8) puferu sa 100 mM NaCl, 5 mM DTT, i 0.1 mg/mL (0.01 %) BSA. Za merenja 1 mM IC50, ATP koncentracija u reakcijama je bila 1 mM. Reakcije su izvedene na sobnoj temperaturi u toku 1 hr i zaustavljene sa 20 μL 45 mM EDTA, 300 nM SA-APC, 6 nM Eu-Py20 u puferu za test (Perkin Elmer, Boston, MA). Vezivanje za antitela obeležena europijumom je trebalo 40 minuta i HTRF signal je meren na čitaču Fusion ploča (Perkin Elmer, Boston, MA). Videti tabelu 1 za podatke u vezi sa jedinjenjima prema pronalasku.

Tabela 1. Podaci IC50za enzimski JAK test (mereno na 1mM ATP)

Primer B: Testovi sa ćelijama

[0505] Ćelijske linije kancera zavisne od citokina i prema tome JAK/STAT prenošenja signala, za rast, mogu biti inokulirane pri 6000 ćelija po bunarčiću (ploče formata 96 bunarčića) u RPMI 1640, 10% FBS, i 1 nG/mL odgovarajućeg citokina. Jedinjenja mogu biti dodata u ćeije u DMSO/medijumu (krajnje koncentracije 0.2% DMSO) i inkubirane u toku 72 sata na 37 °C, 5% CO2. Efekat jedinjenja na vitalnost ćelija je procenjen pomoću testa CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay (Promega) a zatim kvantifikacijom sa TopCount (Perkin Elmer, Boston, MA). Potencijalni efekti van mete jedinjenja su mereni paralelno pomoću ćelijske linije koja nije vođena sa JAK sa istim očitavanjima testa. Svi eksperimenti su tipično izvedeni u duplikatu.

[0506] Gore pomenute ćelijske linije su takođe korišćene za ispitivanje uticaja jedinjenja na fosforilaciju JAK kinaza ili potencijalnih nishodnih supstrata kao što su STAT proteini, Akt, Shp2, ili Erk. Ovi eksperimenti mogu biti izvedeni posle celonoćnog gladovanja u odnosu na citokine, praćeni sa kratkom preinkubacijom sa jedinjenjem (2 sata ili manje) i stimulacijom citokina od približno 1 sat ili manje. Proteini su zatim ekstrahovani sa ćelijama i analizirani sa tehnikama sličnim onima koje se uče u ovoj oblasti tehnike uključjući Western blotovanje ili ELISAs pomoću antitela koja se mogu razlikovati između fosforilovanog i ukupnog proteina. Ovi eksperiemnti mogu koristiti norlmalne ili ćelije kancera da bi se ispitala aktivnost jedinjenja na preživljavanju ćelija tumora ili na medijatorima inflamatornih bolesti . Na primer, u vezi sa poslednjim, citokini kao što suIL-6, IL-12, IL-23, ili IFN mogu biti korišćeni da simuliraju aktivaciju JAK dovodeći do fosforilacije STAT proteina i potencijalno transkripcionih profila (procenjenih ’array’ ili qPCR tehnologijom) ili proizvodnjom i/ili sekrecijom proteina, kao što su IL-17. Sposobnost jedinjenja da inhibira ove efekte psoredovane citokinima mogu biti mereni pomoću tehnika uobičajenih u ovoj oblasti.

[0507] Jedinjenja ovde takođe mogu biti testirana na ćelijskim modelima napravljenim za procenu njihove jačine i aktivnosti naspram mutanata JAKs, na primer, nađena mutacija JAK2V617F u mijeloidnom proliferativnom poremećaju. Ovi eksperimeti često koriste ćelije zavisne od citokina hematoloških linija (e.g. BaF/3) u kojima prirodne ili mutantne JAK kinaze su ektopski eksprimovane (James, C., et al. Nature 434:1144-1148; Staerk, J., et al. JBC 280:41893-41899). Krajnje tačke uključuju dejstvo jedinjenja na ćelijsko pretraživanje, proliferaciju i fosforilovane JAK, STAT, Akt, ili Erk proteina.

[0508] Izvesna jedinjenja ovde mogu biti procenjena u vezi sa njihovom aktivnošću inhibiranja proliferacije T-ćelija. Takav test se može smatrati testom proliferacije vođenim drugim citokinom (tj. JAK) i takođe jednostavan test imune supresije ili inhibicije imune aktivacije. Sledeći je kratak pregled kako takvi eksperimenti mogu biti izvršeni. Periferne krvne mononuklearne ćelije (PBMCs) su pripremljene iz uzorka kompletne krvi pomoću Ficoll Hypaque postupka odvajanja i T-ćelije (frakcija 2000) mogu biti dobijene iz PBMCs pomoću elutriacije. Sveže izolvane humane T-ćelije mogu biti odražavane u medijumu za kulturu (RPMI 1640 obogaćenom sa 10% fetusnim goveđim serumom, 100 U/ml penicilin, 100 µg/ml streptomicin) pri gustini od 2 x 10<6>ćelija/ml na 37 °C u toku do 2 dana. Za IL-2 stimulisane testove ćelijske proliferacije, T-ćelije su prvo tretirane sa fitohemaglutininom (PHA) u krajnjoj koncentraciji od 10 µg/mL u toku 72h. Posle ispiranja jednom sa PBS, 6000 ćelija/bunarčiću je inokulirano na ploče sa 96-bunarčića i tretirano sa jedinjenjima pri različitim koncentracijama u medijum kulture u prisustvu 100 U/mL humanog IL-2 (ProSpec-Tany TechnoGene; Rehovot, Israel). Ploče su inkubirane na 37 °C u toku 72h i procenjivan je indeks proliferacije pomoću CellTiter-Glo Luminescent reagensa prema protokolu sugerisanom od proizvođača (Promega; Madison, WI).

Primer C: In vivo anti-tumorni efekat

[0509] Jedinjenja ovde mogu biti procenjena na modelima ksenografta humanih tumora na imuno kompromitovanim miševima. Na primer, tumorogena varjanta INA-6 plazmacitomske ćelijske linije može biti korišćena za inokulaciju SCID miša subkutanozno (Burger, R., et al. Hematol J.2:42-53, 2001). Životinje koje imaju tumor mogu biti nasumično raspoređene u grupe za tretiranje sa lekom ili nosačem i različite doze jedinjenja mogu biti davane bilo kojim uobičajenim putem uključujući oralni, i.p., ili kontinualnom infuzijom pomoću implantnih pumpi. Rast tumora je praćen pomoću šestara. Dalje, uzorci tumora mogu biti sakupljeni u bilo koje vreme posle početnog lečenja za gore opisane analize (Primer B) da bi se procenili efekti jedinjenja na JAK aktivnost i putevi nishodne signalizacije. Pored toga, selektivnost jedinjenja se može proceniti pomoću modela ksenografta tumora koji su vođeni sa drugim poznatim kinazama (npr. Bcr-Abl) kao što su K562 model tumora.

Primer D: Test odloženog odgovora kontaktne hipersenzitivnosti kože miša

[0510] Jedinjenja ovde mogu biti takođe tesitrana za njihovim efikasnošću (inhibiranjem JAK meta) na test modelu mišije odložene hiperosetljivosti vođene T-ćelijama. Odgovor kontaktne odložene hiperosetljivosti kože miša se smatra da je validan model za klinički kontaktni dermatitits , i druge imune odgovore posredovane T-limfocitima, kao što su psorijaza (Immunol Today.1998 Jan;19(1):37-44). Mišiji DTH dele karakteristike sa psorijazom, uključujući imuni infiltrat, praćen porastom u inflamatornim citokinima, i hiperproliferacijom keratinocita. Pored toga, mnogo klasa sredstava koja su efikasna u lečenju psorijaze u klinici su su takođe efikasni kao inhibitori DTH odgovora kod miša (Agents Actions.1993 Jan;38(1-2):116-21).

[0511] Dana 0 i 1 Balb/c miševi su senzitizirani lokalnom primenom na njihov obrijan abdomen antigena 2,4,dinitro-fluorobenzena (DNFB). Dana 5, merena je debljina ušiju pomoću inženjerskog mikrometra. Ovo merenje je zabeleženo i korišćeno kao osnovna linija. Oba uha životinje su zatim izazivana lokalnom primenom DNFB ukupno 20 μL (10 µL na unutrašnji deo uva i 10 μL na spoljašnji deo uha) pri koncentraciji od 0.2%. Dvadeset četiri do sedamdeset dva sata posle izazivanja, uši su ponovo merene. Tretiranje sa testiranim jedinjenjima su data preko senzitizacije i faza izazivanja (dan -1 do dan 7) ili pre i kroz fazu izazivanja (uglavnom popodne dana 4 do dana 7). Tretiranje testiranim jedinjenjima (u različitim koncentracijama) su date ili sistemski ili lokalno (lokalno davanje tretmana na uši). Efikasnost tesiranih jedinjenja je pokazana redukcijom u oticanju uha do situacije bez tretmana. Jedinjenja koja izazivaju smanjenje 20% ili više se smatraju efikasnim. U nekim eksperimentima, miševi su izazivani ali nisu senzitizirani (negativna kontrola).

[0512] Inhibitorni efekat (inhibicija aktivacije JAK-STAT puteva) testiranih jedinjenja može biti potvrđen imunohistohemijskim analizama. Aktivacija JAK-STAT puteva dovodi do obrazovanja i translokacije funkcionalnih transkripcionih faktora. Dalje, indeksi imunih ćelija i povećana proliferacija keratinocita će takođe obezbediti jedinstvene ekspresione promene profila na uhu koje mogu biti ispitivane i kvantifikovane. Delovi uha fiksirani u formalinu i smešteni u parafinu (sakupljeni posle faze izazivanja u DTH modelu) su podvrgnuti imunohistohemijskim analizama pomoću antitela koje specifično interreaguje sa fosforilovanim STAT3 (klon 58E12, Cell Signaling Technologies). Mišije uši su tretirane sa testiranim jedinjenjima, nosačem ili deksametazonom (klinički efikasnim tretmanom za psorijazu), ili bez bilo kog tretmana, na DTH modelu za upoređivanje. Testirana jedinjenja i deksametazon mogu proizvesti slične transkripcione promene i kvantitativno i kvalitativno, i oboje, testirana jedinjenja i deksametazon mogu smanjiti broj infiltriranih ćelija . Oboje, i sistemsko i lokalno davanje tesiranih jedinjenja može proizvesti inhibitorne efekte, tj., redukciju u broju infiltriranih ćelija i inhibicije transkripcionih promena.

Primer E: In vivo anti-inflamatorna aktivnost

[0513] Jedinjenja ovde mogu biti procenjena na modelima glodara ili ne-glodara napravljenim da repliciraju pojedinačan ili kompleksni inflamacioni odgovor. Na primer, modeli pacova za artritis mogu biti korišćeni za procenivanje teraputskih potencijalnih jedinjenja doziranih preventivno ili terapeutski. Ovi modeli obuhvataju, ali bez ograničenja mišiji ili pacovski artritis izazvan kolagenom, artritis pacova izazvan adjuvantima, i artritis izazvan antitelima kolagena. Autoimuna bolest obuhvata, ali bez ograničenja multiple sklerozu, šećernu bolest tipa 1, uveoretinitis, tiroditis, mijasteniju gravis, imunoglobulinske nefropatije, miokarditis, osetljivost disajnih puteva (astma), lupus, ili kolitis takođe mogu biti korišćeni da se procene terapeutski porencijal ovih jedinjenja. Ovi modeli su dobro ustanovljeni u zajednici istraživača i slični su onima u ovoj oblasti tehnike (Current Protocols in Immunology, Vol 3., Coligan, J.E. et al, Wiley Press.; Methods in Molecular Biology: Vol. 225, Inflammation Protocols., Winyard, P.G. and Willoughby, D.A., Humana Press, 2003.).

Primer F: Modeli životinja za lečenje suvog oka, uveitisa i konjuktivitisa

[0514] Sredstva mogu biti procenjena na jednom ili više predkliničkih modela suvog oka poznatim stručnjacima u ovoj oblasti uključujući, ali bez oraničenja, zečiji model suznih žlezdi konkanavalina A (ConA), mišji model skopolamina (subkutanozni ili transdermalni), Botulinski mišji model suznih žlezdi, ili bilo koje brojne sponatne autoimne bolesti glodara koji dovode so disfunkcije očnih žlezda (npr. NOD-SCID, MRL/lpr, ili NZB/NZW) (Barabino et al., Experimental Eye Research 2004, 79, 613-621 and Schrader et al., Developmental Opthalmology, Karger 2008, 41, 298-312, od kojih je svaki obuhvaćen ovde kao referenca u potpunosti). Krajnje tačke ovih modela mogu obuhvatati histopatologiju očnih žlezda i oka (rožnjača, itd.) i mogućnost klasičnog Širmerovog testa ili njegove modifikovane verzije (Barabino et al.) koja meri proizvodnju suza. Aktivnost može biti procenjena doziranjem davanjem različitim putevima (npr. sistemski ili lokalno) što može početi pre ili posle postojanja merljivih bolesti.

[0515] Sredstva mogu biti procenjena u jednom ili više predkliničkih modela uveitisa poznatim stručnjacima iz ovde oblasti. Ovo, obuhvata bez ograničenja, modele eksperimentalnog autoimunog uveitisa (EAU) i uveitisa izazvanog endotoksinom (EIU). EAU eksperimenti mogu biti izvedeni kod zeca, pacova ili miša i mogu obuhvatati pasivnu ili aktiviranu imunizaciju. Na primer, bilo koja retinalna sredstva mogu biti korišćena za senzitizaciju životinja do relevantog imunogena posle koga životinje mogu biti izazvane okularno sa istim antigenom. EIU model je akutniji i obuhvata lokalno ili sistemsko davanje liposaharida pri subletalnim dozama. Krajnje tačke EIU i EAU modela mogu obuhvatati između ostalog fundostopski test, histopatlogiju. Ovi modeli su prikazani u Smith et al. (Immunology and Cell Biology 1998, 76, 497-512, koji je ovde obuhvaćen u celini kao referenca). Aktivnost je procenjena doziranjem različitim putevima davanja (npr. sistemski ili lokalno) koje može početi pre ili posle postojanja merljive bolesti. Neki gore pomenuti modeli mogu takođe razviti skleritis/episkleritis, horioditis, ciklitis, ili iritis i prema tome su korisni u ispitivanju potencijalne aktivnosti jedinjenja za terapeutski tretman ovih bolesti.

[0516] Sredstva mogu takođe biti procenejna na jednom ili više predkliničkih modela konjuktivitisa poznatim stručnjacima u ovoj oblasti . Ovo obuhvata, ali bez ograničenja, modele glodara koji koriste zamorca, pacova ili miša. Modeli zamorca obuhvataju ona koja koriste aktivnu ili pasivnu imunizaciju i/ili protokole imunog izazivanja sa antigenima kao što su ovalbumin ili ambrozija (prikazani u Groneberg, D.A., et al., Allergy 2003, 58, 1101-1113, koji je ovde uključen u celini kao referenca). Modeli na pacovu i mišu su slični u opštem osmišljavanju onma sa zamorcima (takođe prikazani kod Groneberg). Aktivnost može biti procenjena doziranjem pomoću različitih puteva davanja (npr. sistemski ili lokalno) što može početi pre ili posle postojanja merljive bolesti. Krajnje tačke za takva ispitivanja obuhvataju,na primer, histološke, imunološke, biohemijske ili molekulske analize očnog tkiva kao što je konjuktiva.

Primer G: In vivo zaštita kosti

[0517] Jedinjenja mogu biti procenjena na različitim predkliničkim modelima osteopenije, osteoporoze, ili resorpcije kosti poznatim stručnjacima iz ove oblasti. Na primer, ovarijektomizirani glodari mogu biti korišćeni da se proceni sposobnost jedinjenja da se utiče na znakove i markere remodelovanja kosti i/ili gustine (W.S.S. Jee and W. Yao, J Musculoskel. Nueron. Interact., 2001, 1(3), 193-207, koja je ovde obuhvačena u celini kao referenca). Alternativno, gustina kosti i arhitektura mogu biti procenjivani kod kontrole ili glodara tretiranih jedinjenjem na modelima osteopenije izazvane terapijom (npr. glukokortikoid) (Yao, et al. Arthritis and Rheumatism, 2008, 58(6), 3485-3497; i id.58(11), 1674-1686. Pored toga, efekti jedinjenja na apsorpciju kosti i gustinu mogu biti procenjivani na gore diskutovanom modelu glodara (Primer E). Krajnje tačke za sve ove modele mogu varirati, ali često uključuju histološku i radiološku procenu kao imunohistologiju i odgovarajuće biohemijske markere remodelovanja kosti.

Claims

PATENTNI ZAHTEVI

1. Jedinjenje, koje je {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il{-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju bolesti u vezi sa JAK izabrane između:

(a) ulceroznog kolitisa;

(b) hronične opstruktivne bolesti pluća (COPD);

(c) pemfigus vulgarisa;

(d) astme;

(e) sistemskog eritemskog lupusa;

(f) skleroderme;

(g) ankilozirajućeg spondilitisa;

(h) akutne limfoblastne leukemije (ALL);

(i) akutne mijelogenozne leukemije (AML);

(j) limfoma kožnih T-ćelija (CTCL);

(k) fungoidne mikoze ;

(l) kancera debelog creva;

(m) kolorektalnog kancera;

(n) post-esencijalne trobocitemije mijelofibroze (Post-ET MF);

(o) post policitemije vera mijelofibroze (Post-PV MF);

(p) akneoformog osipa;

(q) sarkoidoze;

(r) rinitisa;

(s) sinuzitisa;

(t) blefaritisa;

(u) konjuktivitisa;

(v) uveitisa;

(w) skleritisa ;

(x) iritisa;

(y) kaheksije;

(z) sindroma sistemskog inflamatornog odgovora (SIRS); i

(aa) septičkog šoka.

2. Jedinjenje ili so za upotrebu prema zahtevu 1, gde je so, so adipinske kiseline {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila.

3. Jedinjenje ili so za upotrebu prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, gde je bolest u vezi sa JAK ulcerozni kolitis .

4. Jedinjenje ili so za upotrebu prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, gde je bolest u vezi sa JAK hronična opstruktivna bolest pluća (COPD).

5. Jedinjenje ili so za upotrebu prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, gde je bolest u vezi sa JAK pemfigus vulgaris.

6. Jedinjenje ili so za upotrebu prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, gde je bolest u vezi sa JAK astma.

7. Jedinjenje ili so za upotrebu prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, gde je bolest u vezi sa JAK sistemski eritemski lupus.

8. Jedinjenje ili so za upotrebu prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, gde je bolest u vezi sa JAK skleroderma.

9. Jedinjenje ili so za upotrebu prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, gde je bolest u vezi sa JAK ankilozirajući spondilitis.

10. Jedinjenje ili so za upotrebu prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, gde je bolest u vezi sa JAK akutna limfoblastna leukemija (ALL)

11. Jedinjenje ili so za upotrebu prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, gde je bolest u vezi sa JAK akutna mijelogenozna leukemija (AML).

12. Jedinjenje ili so za upotrebu prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, gde je bolest u vezi sa JAK limfom kožnih T-ćelija.

13. Jedinjenje ili so za upotrebu prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, gde je bolest u vezi sa JAK fungoidne mikoze.

14. Jedinjenje ili so za upotrebu prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, gde je bolest u vezi sa JAK kancer debelog creva.

15. Jedinjenje ili so za upotrebu prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, gde je bolest u vezi sa JAK kolorektalni kancer.