JP4791921B2 - ヒアルロン酸アミドおよびそれらの誘導体、並びにそれらの製造法 - Google Patents

Description

本発明は、医薬製剤、医用生体材料の製造のため、および医用生体材料物質のコーティングのためのヒアルロン酸アミドおよびそれらの誘導体、並びにそれらの製造法に関する。

ヒアルロン酸は、Ｄ−グルクロン酸およびＮ−アセチル−グリコサミンの改変残基を含むヘテロ多糖類である。それは直鎖のポリマーであって、その分子量はそのものを得る供給源およびそのものを得るのに使用する方法によって、５０,０００〜１３,０００,０００ダルトンの間で変わる。それは本来、細胞周囲のゲル中に、１主成分として表わされる脊椎動物の結合組織の基礎物質中に、関節の滑液中に、硝体中に、ヒト臍帯組織中に、および雄鶏の鶏冠中に存在する。

最近、薬理学的性質を有する化合物を得るために、または内科、外科および組織工学の様々な分野で使用するための様々な形態の生物分解性で且つ生物学的適合性である医用生体材料を製造可能な化合物を得るために、多くの種類のヒアルロン酸誘導体が合成されている。

当該分野の現状で報告されているアミド誘導体として、ヒアルロン酸のカルボキシル、求核体（例えば、アミン性化合物）と活性化剤（米国特許第５,７６０,２００号、米国特許第４,９３７,２７０号）との間の反応から誘導される混合物で構成された水に不溶な組成物が知られている。それらの混合物は主に外科手術後の癒着を予防するのに使用される。

米国特許第５,７３３,８９１号では、ヒアルロン酸のカルボキシル基と塩基性抗腫瘍剤との反応によって得られるヒアルロン酸のアミド誘導体を含有する医薬組成物を記載する。これらの化合物の目的は、患部組織における活性原理の作用に焦点を当てることであって、そして健康な組織に及ぼすいずれの有害な影響を制限することである。

その上、アミド結合の形成の際に架橋として働く多価化合物と結合した感光性化合物とグリコサミノグリカン（例えば、ヒアルロン酸）とのアミドが知られている（米国特許第５,４６２,９７６号）。

最後に、ヒアルロン酸の活性エステルとアミンとの反応による不溶性アミドの製造法が知られている（ＷＯ９５／２４４２９号）。

本発明の目的は、カルボキシル基、または脱アセチル化反応から生じるアミノ基と、それぞれ脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、シクロ脂肪族、ヘテロサイクリック系列のアミンまたは酸との反応によって、且つスペーサー鎖を使用せずに得られる、単離且つ確認されたヒアルロン酸のアミドまたはそれらの誘導体を提供することである。

該化合物は、酸、アミン、アミド結合のパーセンテージまたはアミドを製造するのに使用したヒアルロン酸誘導体に応じて、水溶性であったり、または不溶性であったりする。

従って、本発明の記載の生成物は、それらの水への溶解度、粘性およびアミド結合の安定性に従って多数の用途に適当である。

実際、該化合物は医薬組成物および医用生体材料の両方を製造するのに使用できる。その上、それらはアミンとの反応だけではなく、薬理学的に活性な酸との反応によっても生成可能であるという利点を有する。

本発明は、医薬製剤、医用生体材料の製造のため、および医用生体材料物質のコーティングのためのヒアルロン酸アミドおよびそれらの誘導体、並びにそれらの製造法を提供する。

本発明は、以下の一般式（Ｉ）のポリマーの繰り返し単位を含む、ヒアルロン酸アミドまたはそれらの誘導体を提供する。

［式中、
Ｒは、ＮＲ₆Ｒ₇、または脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、シクロ脂肪族、ヘテロサイクリック系列のアルコール基、ＯＨ、Ｏ−、ヒアルロン酸のアルコール基、脱アシル化ヒアルロン酸のアミノ基である。
Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄は、Ｈ、ＳＯ₃−、脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、シクロ脂肪族、ヘテロサイクリック系列のカルボン酸から誘導されるアシル基、−ＣＯ−(ＣＨ₂)₂−ＣＯＯＹ（Ｙは負電荷またはＨである）である。
Ｒ₅は、−ＣＯ−ＣＨ₃、Ｈ、ＳＯ₃−、脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、シクロ脂肪族、ヘテロサイクリック系列のカルボン酸から誘導されるアシル基、ヒアルロン酸のアシル基である。
Ｒ₆は、Ｈ、または置換もしくは無置換の脂肪族基、芳香族基、アリール脂肪族基、シクロ脂肪族基もしくはヘテロサイクリック基である。
Ｒ₇は、Ｈ、または置換もしくは無置換の脂肪族基、芳香族基、アリール脂肪族基、シクロ脂肪族基もしくはヘテロサイクリック基である。
但し、ＲまたはＲ₅の少なくとも１つはアミド基を形成する］

従って、これらはアミンとヒアルロン酸もしくはそれらの誘導体の遊離のカルボキシル基との反応によって、または酸とヒアルロン酸もしくはそれらの誘導体の脱アシル化したアミノ基との反応によって得られるアミドである。

本発明に記載のアミドを製造するのに使用可能なヒアルロン酸誘導体は、以下のものが好ましい：
一部または全てのカルボキシ官能基が、脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、シクロ脂肪族、ヘテロサイクリック系列のアルコールでエステル化された、ヒアルロン酸エステル（ＥＰ ０２１６４５３ Ｂ１）；
一部または全てのカルボキシ官能基が同じ多糖類の鎖または他の鎖のアルコール性官能基でエステル化された、ヒアルロン酸の自己架橋エステル（ＥＰ ０３４１７４５ Ｂ１）；
一部または全てのカルボキシル基が、脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、シクロ脂肪族、ヘテロサイクリック系列の多価アルコールでエステル化され、スペーサー鎖によって架橋を形成する、ヒアルロン酸の架橋化合物（ＥＰ ０２６５１１６ Ｂ１）；
ヒアルロン酸またはヒアルロン酸の部分もしくは完全エステルと、コハク酸とのヘミエステルまたはコハク酸とのヘミエステルの重金属塩（ＷＯ ９６／３５７２０７号）；
Ｏ−硫酸化誘導体（ＷＯ ９５／２５７５１号）またはＮ−硫酸化誘導体（ＰＣＴ／ＥＰ９８／０１９７３号）。

特に関心が持たれる、ヒアルロン酸またはそれらの誘導体のカルボキシル基でのアミンとの反応によって得られるアミドは、水溶性の化合物である。

アミドは、式−ＣＯＮ＝の基を意味する。

脂肪族とは、非環式であるか、鎖式を意味するか、または分枝である炭素化合物（例えば、アルカン、アルケンまたはアルキン）を意味する。脂肪族分子の例は、Ｃ₁〜Ｃ₂₀非環状炭化水素およびそれらの異性体（例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｔｅｒｔ−ペンチル、２−メチルブチル、１,２−ジメチルプロピル、ヘキシル、イソヘキシル、１−メチルペンチル、２−メチルペンチル、３−メチルペンチル、１,１−ジメチルブチル、１,２−ジメチルブチル、２,２−ジメチルブチル、１,３−ジメチルブチル、２,３−ジメチルブチル、３,３−ジメチルブチル、１−エチルブチル、２−エチルブチル、１,１,２−トリメチルプロピル、１,２,２−トリメチルプロピル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、セチル、ヘプタデシル、オクタデシル、ノナデシル、ステアリルなど）を含むが、これらに限定されない。

芳香族とは、１つまたはそれより多い不飽和環を有するアリール分子を意味し、各環は通常では５〜８員環を、好ましくは５〜６員環を有する。芳香族分子の例は、ベンジル、トルイル、ナフタリル、アントラセニル、フェナントリル、フルオレニル、コロネニル、トリフェニレニル、フルオランテニル、ベンゾフルオランテニル、ベンゾピレニルおよびピレニルを含むが、これらに限定されない。

シクロ脂肪族とは炭素環構造に関係し、これは通常では３〜８員環を、好ましくは５〜６員環を有するが、共鳴構造を含まない。シクロ脂肪族基の例は、シクロアルカンおよびシクロオレフィン（例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロヘキセニル（テトラヒドロベンゼニル）、シクロヘキシリデニルおよびシクロオクタジエニル）を含むが、これらに限定されない。

ヘテロサイクリック系列は環内の非類似の原子に関係する。ヘテロサイクリック基は通常では３〜８員を、好ましくは５〜６員環を有するヘテロアリール基であるか、または少なくとも１つのヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｓ、Ｎなど）を含む縮合環であって、チエニル、フラニル、ピラニル、２Ｈ−ピロリル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジル、ピリダジニル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、フラザニル、ベンゾチエニル、イソベンゾフラニル、クロメニル、インドリンジニル、イソインドリル、インドリル、プリニル、キノリジニル、イソキノリル、キノリル、フタラジニル、キナゾリル、カルバゾリル、アクリジニルおよびフェナントリジニルを含むが、これらに限定されない。

アリールアルキル基は、上記に定義する芳香族および脂肪族の両方の置換基を有する基である。アリールアルキル基の例は、エチルベンゼニル、イソブチルベンゼンニル（ｉｓｏｂｕｔｙｌｂｅｎｚｅｎｅｙｌ）、ベンジル、エチルベンジル、プロピルベンジル、イソプロピルベンジル、ブチルベンジル、イソブチルベンジル、シクロヘキシルベンジル、スチレニルおよびビフェニルを含むが、これらに限定されない。

アシル基は、ヒドロキシ基の除去によって有機酸から誘導される有機基である。アシル基の例は、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、バレリル、イソバレリル、ピバロイル、アロイル（例えば、ベンゼンスルホニル、ベンゾイル、トルオイルおよびナフトイル）、ジアシル基（例えば、オキサリルおよびコハク酸無水物）、およびヘテロアロイル（例えば、フロイル、ニコチノイル、イソニコチノイル）などを含むが、これらに限定されない。

アミドは、例えば、ゲル形態の医薬組成物の製造のために、粘弾性外科もしくは眼科外科での使用のための薬物もしくは生物学的に活性な物質の運搬および放出のために有利とするのに使用可能である。

本発明に記載のアミドは、遊離であるかまたは硫黄化したカルボキシル基上で重金属を用いて塩化することができ、重金属は元素周期表の４族、５族および６族の元素（例えば、銀、コバルト、鉄、銅、亜鉛、砒素、ストロンチウム、ジルコニウム、アンチモン、金、セシウム、タングステン、セレン、白金、ルテニウム、ビスマス、スズ、チタンおよび水銀）を意味する。該塩は、皮膚科学、眼科学、歯科学、口腔病学、リウマチ病学、泌尿器科学、婦人科学、内臓外科において、食品サプリメント、抗酸化剤、抗リウマチ剤、抗腫瘍剤、抗炎症剤、鎮痛剤、抗潰瘍剤として使用可能である。

その上、アミド誘導体は、ヒアルロン酸もしくはそれら誘導体のカルボキシルもしくは脱アシル化窒素と、それぞれアミンもしくは薬理学的に活性な酸とを反応させることによって得ることができたり、またはそれらは塩化するか、もしくはそれら化合物を単に組み合わせることもできる。

薬理学的に活性な物質は、以下の抗生物質、抗感染薬、抗菌薬、抗ウイルス薬、細胞増殖抑止剤、細胞毒性薬（cytotoxics）、抗腫瘍薬、抗炎症薬、創傷治癒薬、麻酔薬、鎮痛薬、血管収縮神経薬、コリン作動性またはアドレナリン作動性の作動薬および拮抗薬、抗血栓薬、抗凝血薬、止血薬、繊維素溶解薬、血栓溶解薬、タンパク質およびそれらのフラグメント、ペプチド、ポリヌクレオチドが好ましい。

以下、我々は上記薬物群に属する薬理学的に活性な物質の例を報告する：
抗生物質：アミノグルコシド、マクロリド、テトラサイクリンおよびペプチド（例えば、ゲンタマイシン、ネオマイシン、ストレプトマイシン、ジヒドロストレプトマイシン、カナマイシン、アミカシン、トブラマイシン、スペクチノマイシン、エリトロマイシン、オレアンドマイシン、カルボマイシン、スピラマイシン、オキシテトラサイクリン、ロリテトラサイクリン、バシトラシン、ポリミキシンＢ、グラミシジン、コリスチン、クロラムフェニコール、リンコマイシン、バンコマイシン、ノボビオシン、リストセチン、クリンダマイシン、アンフォテリシンＢ、グリセオフルビン、ナイスタチンおよびそれらの塩）；
抗感染薬：ジエチルカルバマジン、メベンダゾル、スルファミド（例えば、スルファセタミド、スルファジアジン、スルフィソキサゾール）；
抗ウイルス薬および抗腫瘍薬：ヨードウリジン、アデニン、アデニンアラビノシド、トリフルオロチミジン、アシクロビル、エチルデオキシウリジン、ブロモビニルデオキシウリジン、５−ヨード−５^'−アミノ−２^',５^'−ジデオキシウリジン；
ステロイド性抗炎症性剤：デクサメタゾーン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン、フルオロメトロン、メドリソン（ｍｅｄｒｉｓｏｎｅ）およびそれらのエステル；
非ステロイド性抗炎症剤：インドメタシン、オキシフェンブタゾン、フルオルビプロフェン（ｆｌｕｏｒｂｉｐｒｏｆｅｎｅ）、ジクロフェナック（ｄｉｃｈｌｏｆｅｎａｃ）、イブプロフェン；
麻酔薬：ベノキシネート、プロパラカイン、ジブカイン、リドカイン、ベンゾカイン、ベンジダミン、ブピバカインおよびそれらの塩；
コリン作動薬：ピロカルピン、メタコリン、カルバミルコリン、アセクリジン、フィゾスチグミン、ネオスチグミン、デミカリウムおよびそれらの塩；
コリン作動性拮抗薬：アトロピンおよびその塩；
アドレナリン作動薬：ノルアドレナリン、アドレナリン、ナファゾリン、メトキサミンおよびそれらの塩；
アドレナリン作動性拮抗薬：プロプラノロール、チモロール、ピンドロル、ブプラノロール、アテノロール（ａｔｈｅｎｏｌｏｌ）、メトプロロール（ｍｅｔｏｐｒｏｌｏｌ）、オクスプレノール、プラクトロール、ブトキサミン、ソタロール、ブタドリン（ｂｕｔａｄｒｉｎｅ）、ラベタロールおよびそれらの塩；
抗菌薬および消毒薬：ニトロフラゾン、マフェニド、クロルヘキシジン、８−ヒドロキシキノリン誘導体およびそれらの塩；
細胞毒性薬：フルオロウラシル、メトトレキサート、ポドフィリン。

特に関心あるのは、上記物質および生物学的に活性な物質（例えば、タンパク質およびそれらのフラグメント、ペプチド、ポリヌクレオチド、増殖因子、酵素、ワクチン、並びに遺伝子欠損に関連する疾患（例えば、ある酵素の遺伝子コードの欠損に起因する酵素の活動低下状態または活動亢進状態による疾患）、奇形生成性疾患および遺伝性疾患の処置の際に使用する物質）の運搬および放出のための形態である。

造影システムおいて使用する本発明に記載のアミド誘導体は、放射性物質および非放射性物質と組み合わせて、腫瘍組織または損傷組織の確認および処置のためのインビボ診断におけるマーカーとして使用可能である。

かなり大きな利点の１つを、異なる形態の医用生体材料（例えば、スポンジ、フィルム、膜、糸、タンポン、不織布、ミクロフェア、ナノフェア、ガーゼ、ゲルおよびガイドチャンネル）にアミド化合物およびそれらの塩を加工する可能性で示す。１つまたはそれより多い関連する形態で使用する該医用生体材料は、１つまたはそれより多いアミド誘導体およびそれらの塩、および場合により他の天然、合成または半合成ポリマーと組み合わせて、および場合により生物学的に活性な物質と組み合わせて構成され得る。

使用可能な天然ポリマーの例は、コラーゲン、コラーゲンとグリコサミノグリカンとの共沈物、セルロース、ゲル形態の多糖類（例えば、キサン質、キトサン、ペプチンまたはペプチン酸、寒天、アガロース、キサン（ｘａｎｔｈａｎｅ）、ゲラン、アルギン酸またはアルギネート、ポリマンナンまたはポリグリカン、デンプンおよび天然ゴムである。

半合成ポリマーは、例えば試薬（例えば、アルデヒドまたはその前駆体、ジカルボン酸またはそのハロゲン化物、ジアミン、セルロース誘導体、ヒアルロン酸、キチン質またはキトサン、ゲラン、キサン、ペクチンまたはペクチン酸、ポリグリカン、ポリマンナン、寒天、アガロース、天然ゴムまたはグリコサミノグリカン）で架橋したコラーゲンからなる群から選ぶことができる。

最後に、使用可能な合成高分子の例は、ポリ乳酸、ポリグルコール酸、またはそれらもしくはそれら誘導体の共重合体、ポリジオキサン、ポリホスファゼン、ポリスルホン樹脂、ポリウレタン、ＰＴＦＥである。

上記医用生体材料は、多くの外科の分野（例えば、外科手術後の癒着および肥厚性瘢痕の予防における、内臓および変形性関節の外科、神経外科、吻合外科、粘弾性外科、眼外科、腫瘍学外科、形成外科、耳鼻咽喉科学外科、腹部および骨盤の外科、泌尿婦人科学外科、心血管外科）で有益となるように使用可能である。

その上、フィブリンおよび場合により、他の生物学的に活性な物質を組み合わせたアミド性化合物は、外科接着剤の製造に使用可能である。

本発明の記載の医用生体材料は、外科の分野においてだけではなく、血液透析、心臓病学、皮膚科学、眼科学、耳鼻咽喉科学、歯科学、整形外科、婦人科学、泌尿器科学において、体外血液循環および酸素加において、美容においておよび脈管学において使用できる。

多くの形態である該医用生体材料は、結合組織、腺組織および神経組織を得るために、細胞（例えば、間葉細胞または成熟細胞）を増殖させるためのスカホールドとして有益となるように使用できる。

これらの生物ポリマーは、医学分野および工業領域の両方で使用されるコーティングした物質の製法において使用でき、担体として用いられる物質の表面に新たな生物学的特性を与える。

コーティングされ得る物質の例は、カテーテル、ガイドチャンネル、消息子、心臓弁、柔組織プロテーゼ、動物器官のプロテーゼ（例えば、ブタからの心臓弁）、人工腱、骨および心臓血管プロテーゼ、コンタクトレンズ、血中酸素供給器、人工腎臓、人工心臓、人工膵臓、人工肝臓、血液嚢、注入器、外科器具、ろ過システム、実験器具、細胞培養のコンテナー、細胞および組織の再生のコンテナー、ペプチド、タンパク質および抗体の担体である。

それら物質の表面をコーティングする方法は、例えば本出願人による国際特許出願、ＷＯ９６／２４３９２に記載の、血漿コーティング法（Ｐｌａｓｍａ Ｃｏａｔｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）によって行うことができる。

ヒアルロン酸またはその脱アセチル化誘導体の窒素でのアミドの１つの製造法は、以下の工程：
脱アセチル化反応（例えば、ヒドラジン硫酸塩を用いた反応）（Ｊ．リーゼンフェルド（Ｒｉｅｓｅｎｆｅｌｄ）によるＡｎａｌｙ．Ｂｉｏｃｈ．１９９０、１８８巻、３８３−３８９頁）；
脱アセチル化合物の４級アンモニウム塩（例えば、テトラブチルアンモニウム塩）の製造；
活性化エステルの形態（例えば、アミドの生成のために選ばれた、脂肪族酸、芳香族酸、アリール脂肪族酸、シクロ脂肪族酸またはヘテロサイクリック酸のパラニトロフェニルエステル）であるアシル化剤の製造；
ヒアルロン酸またはその脱アセチル化誘導体の１つの４級アンモニウム塩と、アシル化剤間のＮ−アシル化反応；
で要約することができる。

該化合物は以下の方法：
遊離アミノ基のパーセンテージの分析：
Ｊ．Ｒｉｅｓｅｎｆｅｌｄ（Ａｎａｌｙ．Ｂｉｏｃ．１９９０、１８８巻、３８３−３８９頁）により記載の方法；
平均分子量：
ＧＰＣ（Ｓｈａｄｅｘ Ｂ−８０３およびＢ−８０６カラムの組み合わせ、およびＲＩおよびＭＡＬＬＳ装置を使用）によって測定する；
ＩＲおよびＵＶ分光学分析；
ＴＬＣ分析：
試料を水酸化ナトリウム（１ｍｏｌ）溶液中、７０℃で２〜４時間加水分解し、次いで塩酸（１ｍｏｌ）を用いて酸性とする。加水分解反応の間に放出される酸を有機溶媒で抽出する。乾燥有機抽出物をＨＰＬＣによって分析する；
Ｎ−アシル化（アミドの加水分解反応）の％：
Ｎ−アシル基のパーセンテージを測定するのに、２種類の分析法を行う。
ａ）Ｊ．Ｒｉｅｓｅｎｆｅｌｄ（Ａｎａｌｙ．Ｂｉｏｃ．１９９０、１８８巻、３８３−３８９頁）により記載の方法；
ｂ）試料を水酸化ナトリウム（１ｍｏｌ）溶液中、７０℃で２〜４時間加水分解し、次いで塩酸（１ｍｏｌ）を用いて酸性とする。加水分解反応の間に放出される酸を有機溶媒で抽出する。乾燥有機抽出物をＨＰＬＣによって分析する；
によって分析的に確認される。

ヒアルロン酸またはそれらの誘導体のカルボキシルでのアミドの製造は、酸形態または４級アンモニウム塩の形態であるそれらヒアルロン酸またはそれら誘導体の、試薬（例えば、カルボン酸をアシル化剤の反応性形態に変換する、カルボニルジイミダゾール）との反応によるカルボキシル基の活性化を含む。

該反応は、塩酸または酸樹脂を用いた触媒反応により、且つ脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、シクロ脂肪族およびヘテロサイクリック系列のアミンを用いて行うことができる。

化合物の確認は、以下の方法：
ＩＲおよびＵＶ分光学；
クロマトグラフィー分析；
試料を水酸化ナトリウム（１ｍｏｌ）溶液中、７０℃で２〜４時間加水分解し、次いで塩酸（１ｍｏｌ）を用いて酸性とする。加水分解反応の間に放出されるアミンを有機溶媒で抽出する。乾燥有機抽出物をＨＰＬＣによって分析する；
を含む。

生成物のアミド化のパーセンテージは、一般的には約１％〜約９０％の範囲であり、約５％〜約６０％の範囲がより好ましく、そして約２０％〜約５０％の範囲が最も好ましい。

ナトリウム塩形態の部分Ｎ−脱アセチル化ヒアルロン酸（ＤＨＡ／Ｎａ）の製造
平均分子量６００Ｋｄａのヒアルロン酸ナトリウム（１ｇ）を、１％ヒドラジン硫酸塩のヒドラジン・モノ水和物溶液（５０ｍＬ）に溶解する。
このものを５５℃で撹拌下、５日間（１２０時間）反応させ、その後、反応をエタノール（１００ｍｌ）を加えることによって停止させる。
そうして生成した沈殿物をグーチるつぼを通してろ過し、エタノールで洗浄、次いで減圧下、室温で乾燥させる。ヒドラジン分解による反応の間に生成するであろうヒアルロン酸のヒドラジドは、ＨＩＯ₃（ヨウ素酸）を用いた反応によって分解される。反応が非常に激しい場合は、氷水中で反応容器を冷却しながら行う。
ヒドラジン分解の生成物を５％酢酸ナトリウム（５０ｍＬ）中に溶解し、０.５Ｍヨウ素酸（２５ｍＬ）と反応させる。
反応は、攪拌下、３０分間で進行し、その後、いずれの未反応のＨＩＯ₃を分解するのに、５７％ＨＩ溶液（５ｍＬ）を加える。
生成したヨウ素はエチルエーテル（３０ｍＬ）を少なくとも３回用いて、その水溶液から抽出する（水相の完全な脱色まで）。その水溶液を、０.５Ｍ ＮａＯＨ溶液を加えることによってｐＨを中性とし、続いてエタノール（１００ｍＬ）を用いて処理する。得られた沈殿物をグーチるつぼを用いてろ過し、エタノールを用いて洗浄、次いで室温で減圧下、乾燥させる。得られた生成物を、Ｎ−脱アセチル化基のパーセンテージおよび平均分子量を測定するために、分析的に確認する。
反応の収率 ９０％
Ｎ−脱アセチル化の％ ２６％
平均分子量 １３０Ｋｄａ

部分Ｎ−脱アセチル化したヒアルロン酸のテトラブチルアンモニウム塩（ＤＨＡ／ＴＢＡ)の製造
部分Ｎ−脱アセチル化したヒアルロン酸ナトリウム塩（１ｇ、２.５ｍｍｏｌ）を水（６０ｍｌ）に溶解し、その溶液をカラム（テトラブチルアンモニウム塩（ＴＢＡ）形態のスルホン酸樹脂（２５ｍＬ）を充填）に浸出ろ過させる。Ｈ⁺形態のスルホン酸樹脂をＴＢＡＯＨ（４０ｗ／ｖ％）溶液を用いて活性化する。Ｎ−脱アセチル化ヒアルロン酸・ＴＢＡ塩を含有する溶出液を集め、凍結乾燥する。

安息香酸のｐ−ＮＯ₂−フェニルエステル（アシル化剤）の製造
安息香酸（１ｇ、０.０８２ｍｏｌ）をＣＨ₂Ｃｌ₂（８００ｍＬ）に溶解し、その後、ｐ−ＮＯ₂−フェノール（１１.４ｇ、０.０８２ｍｏｌ）およびＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）（１６.９ｇ、０.０８２ｍｏｌ）を加える。
続いて、生成するジシクロヘキシルウレアをろ過し、ろ過した生成物を減圧下で、回転蒸発器を用いて乾燥させる。そうして得られた生成物を酢酸エチル中で、結晶化を繰り返すことによって精製する。結晶をろ過し、減圧下、室温で乾燥するまで放置する。
該誘導体をＴＬＣ分析（溶出液：ＣＨ₂Ｃｌ₂／酢酸エチル（９０／１０）およびＲ_f＝０.７７）、ＩＲおよびＵＶ分光学によって確認する。
反応収率 ９２％

ケイ皮酸のｐ−ＮＯ₂−フェニルエステル（アシル化剤）の製造
ケイ皮酸（１２ｇ、０.０８２ｍｏｌ）をＣＨ₂Ｃｌ₂（８００ｍＬ）に溶解し、その後、ｐ−ＮＯ₂−フェノール（１１.４ｇ、０.０８２ｍｏｌ）およびＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）（１６.９ｇ、０.０８２ｍｏｌ）を加える。反応を２時間進行させ、その間、溶液は沸騰し、還流する。
続いて、ジシクロヘキスルウレアをろ過し、ろ過した生成物を減圧下、回転蒸発器を用いて乾燥させる。得られた生成物をエタノール中で結晶化を繰り返すことによって精製し、その結晶をろ過し、室温で減圧下、乾燥させる。
その誘導体をＴＬＣ分析（溶出液：ＣＨ₂Ｃｌ₂／酢酸エチル（９０／１０）、Ｒ_f＝０.７７）、ＩＲおよびＵＶ分光学によって確認する。
反応収率 ８９％

ドデカン酸のｐ−ＮＯ₂−フェニルエステル（アシル化剤）の製造
ドデカン酸（１６ｇ）をＣＨ₂Ｃｌ₂（１Ｌ）に溶解し、その後、ｐ−ＮＯ₂−フェノール（１１.４ｇ、０.０８２ｍｏｌ）およびＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）（１６.９ｇ、０.０８２ｍｏｌ）を加える。反応を２時間進行させ、その間、溶液は沸騰し、還流する。
続いて、ジシクロヘキスルウレアをろ過し、ろ過した生成物を減圧下、回転蒸発器を用いて乾燥させる。得られた生成物を酢酸エチル中で結晶化を繰り返すことによって精製し、その結晶をろ過し、室温で減圧下、乾燥させる。
その誘導体をＴＬＣ分析（溶出液：ＣＨ₂Ｃｌ₂／酢酸エチル（９０／１０）、Ｒ_f＝０.７７）およびＩＲ分光学によって確認する。
反応収率 ９３％

ステアリン酸のｐ−ＮＯ₂−フェニルエステル（アシル化剤）の製造
ステアリン酸（２３.３ｇ）をＣＨ₂Ｃｌ₂（１Ｌ）に溶解し、その後、ｐ−ＮＯ₂−フェノール（１１.４ｇ、０.０８２ｍｏｌ）およびＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）（１６.９ｇ、０.０８２ｍｏｌ）を加える。反応を２時間進行させ、その間、溶液は沸騰し、還流する。
続いて、ジシクロヘキシルウレアをろ過し、そのろ過した生成物を減圧下、回転蒸発器を用いて乾燥させる。得られた生成物を無水エタノール中で結晶化を繰り返すことによって精製し、その結晶をろ過し、室温で減圧下、乾燥させる。
その誘導体をＴＬＣ分析（溶出液：ＣＨ₂Ｃｌ₂／酢酸エチル（９０／１０）、Ｒ_f＝０.８２）およびＩＲ分光学によって確認する。
反応収率 ８７％

ｏ−アセチルサリチル酸のｐ−ＮＯ₂−フェニルエステル（アシル化剤）の製造
アセチルサリチル酸（１４.７ｇ）をＣＨ₂Ｃｌ₂（１Ｌ）に溶解し、その後、ｐ−ＮＯ₂−フェノール（１１.４ｇ、０.０８２ｍｏｌ）およびＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）（１６.９ｇ、０.０８２ｍｏｌ）を加える。反応を２時間進行させ、その間、溶液は沸騰し、還流する。
続いて、生成するジシクロヘキシルウレアをろ過し、そのろ過した生成物を減圧下、回転蒸発器を用いて乾燥させる。得られた生成物を無水エタノール中で結晶化を繰り返すことによって精製し、その結晶をろ過し、室温で減圧下、乾燥させる。
その誘導体をＴＬＣ分析（溶出液：ＣＨ₂Ｃｌ₂／酢酸エチル（９０／１０）、Ｒ_f＝０.８２）およびＩＲ分光学によって確認する。
反応収率 ８０％

部分Ｎ−アシル化ヒアルロン酸の製造（安息香酸誘導体を使用）
ＤＨＡ／ＴＢＡ（２６％脱アセチル化）（１ｇ、１.６ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（５０ｍＬ）に溶解し、その後、１０％安息香酸ｐ−ＮＯ₂−フェニルエステルのＤＭＳＯ溶液（実施例３の記載に従って製造）のＤＭＳＯ溶液（５ｍＬ）を加える。その反応を室温で攪拌下、２４時間進行させ、その後、飽和ＮａＣｌ溶液（２.５ｍＬ）を加えることによって停止させる。このものを３０分間反応させ、次いでエタノール（１００ｍＬ）をゆっくりと加える。そうして得られた沈殿物をグーツるつぼを通してろ過し、エタノールおよびエチルエーテルを用いて洗浄し、最後に室温で減圧下、乾燥させる。
その誘導体をＴＬＣ分析（アミドの加水分解後）、比色定量分析（遊離ＮＨ₂基のパーセンテージについて）、ＩＲおよびＵＶ分光学によって分析する。
反応収率 ８５％
遊離ＮＨ₂の％ １１％
Ｎ−アシル化の％ １５％

部分Ｎ−アシル化ヒアルロン酸の製造（ケイ皮酸誘導体を使用）
ＤＨＡ／ＴＢＡ（２６％脱アセチル化）（１ｇ、１.６ｍｍｏｌ）をＮＭＰ（５０ｍＬ）に溶解し、その後、１０％ケイ皮酸ｐ−ＮＯ₂−フェニルエステル（実施例４の記載に従って製造）のＮＭＰ溶液（１０ｍＬ）を加える。その反応を室温で攪拌下、２４時間進行させ、その後、飽和ＮａＣｌ溶液（２.５ｍＬ）を加えることによって停止させる。このものを３０分間反応させ、最後にエタノール（１００ｍＬ）をゆっくりと加える。そうして得られた沈殿物をグーチるつぼを通してろ過し、エタノール／水（９：１）、エチルエーテルを用いて洗浄し、最後に室温で減圧下、乾燥させる。
その誘導体をＴＬＣ分析（アミドの加水分解後）、比色定量分析（遊離ＮＨ₂基のパーセンテージについて）、ＩＲおよびＵＶ分光学分析によって分析する。
反応収率 ８５％
遊離ＮＨ₂の％ １１％
Ｎ−アシル化の％ １５％

部分Ｎ−アシル化ヒアルロン酸の製造（ドデカン酸誘導体を使用）
ＤＨＡ／ＴＢＡ（２６％脱アセチル化）（１ｇ、１.６ｍｍｏｌ）をＮＭＰ（５０ｍＬ）に溶解し、その後、１０％ドデカン酸ｐ−ＮＯ₂−フェニルエステル（実施例５の記載に従って製造）のＮＭＰ溶液（３.２ｍＬ）を加える。その反応を室温で攪拌下、２４時間進行させ、その後、飽和ＮａＣｌ溶液（２.５ｍＬ）を加えることによって停止させる。このものを３０分間反応させ、その後、エタノール（１００ｍＬ）を徐々に加える。得られた沈殿物をグーチるつぼを通してろ過し、エタノールおよびエチルエーテルを用いて洗浄し、最後に室温で減圧下、乾燥させる。
その誘導体をＴＬＣ分析（アミドの加水分解後）、比色定量分析（遊離ＮＨ₂基のパーセンテージについて）、ＩＲおよびＵＶ分光学によって分析する。
反応収率 ８８％
遊離ＮＨ₂の％ １０％
Ｎ−アシル化の％ １６％

部分Ｎ−アシル化ヒアルロン酸の製造（ステアリン酸誘導体を使用）
ＤＨＡ／ＴＢＡ（２６％脱アセチル化）（１ｇ、１.６ｍｍｏｌ）をＮＭＰ（５０ｍＬ）に溶解し、その後、１０％ステアリン酸ｐ−ＮＯ₂−フェニルエステル（実施例６の記載に従って製造）のＮＭＰ溶液（６ｍＬ）を加える。その反応を室温で攪拌下、２４時間進行させ、その後、飽和ＮａＣｌ溶液（２.５ｍＬ）を加えることによって停止させる。このものを３０分間反応させ、次いで、エタノール（１００ｍＬ）をゆっくりと加える。そうして得られた沈殿物をグーチるつぼを通してろ過し、エタノールおよびエチルエーテルを用いて洗浄し、最後に室温で減圧下、乾燥させる。
その誘導体をＴＬＣ分析（アミドの加水分解後）、比色定量分析（遊離ＮＨ₂基のパーセンテージについて）、ＩＲおよびＵＶ分光学によって分析する。
反応収率 ８５％
遊離ＮＨ₂の％ １２％
Ｎ−アシル化の％ １４％

部分Ｎ−アシル化ヒアルロン酸の製造（アセチルサリチル酸誘導体を使用）
ＤＨＡ／ＴＢＡ（１ｇ、１.６ｍｍｏｌ）をＮＭＰ（５０ｍＬ）に溶解し、その後、１０％アセチルサリチル酸ｐ−ＮＯ₂−フェニルエステル（実施例７の記載に従って製造）のＮＭＰ溶液（３.２ｍＬ）を加える。その反応を室温で攪拌下、２４時間進行させ、その後、飽和ＮａＣｌ溶液（２.５ｍＬ）を加えることによって停止させる。このものを３０分間反応させ、最後にエタノール（１００ｍＬ）をゆっくりと加える。そうして得られた沈殿物をグーチるつぼを通してろ過し、エタノールおよびエチルエーテルを用いて洗浄し、次いで室温で減圧下、乾燥させる。
その誘導体をＴＬＣ分析（アミドの加水分解後）、比色定量分析（遊離ＮＨ₂基のパーセンテージについて）、ＩＲおよびＵＶ分光学によって分析する。
反応収率 ９０％
遊離ＮＨ₂の％ １０％
Ｎ−アシル化の％ １６％

ヒアルロン酸ベンジルアミドの製造
ヒアルロン酸のテトラブチルアンモニウム塩（２ｇ、３.２ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（１００ｍｌ）に溶解する。この溶液にフミン酸（ｈｕｍｉｄ ａｃｉｄ）樹脂のＤＭＳＯ（３ｍＬ）および１,１−カルボニルジイミダゾール（７８４ｍｇ、４.８ｍｍｏｌ）を加える。このものを攪拌下、１２時間反応させ、その後、グーチるつぼを通してろ過して、該樹脂を溶出させ、そのろ過した生成物をベンジルアミン（１ｍＬ、９.６ｍｍｏｌ）を加える。このものを４８時間反応させ、次いで飽和ＮａＣｌ溶液（５ｍＬ）を加え、攪拌下、３０分間放置する。アセトン（２００ｍＬ）を加え、そうして得られた沈殿物をろ過し、減圧下で乾燥する。
乾燥誘導体を、ＴＬＣ、ＩＲおよびＨＰＬＣ分析によって確認する。
アミド化の％ ２５％

ヒアルロン酸ベンジルアミドの製造
ヒアルロン酸のテトラブチルアンモニウム塩（ＨＡ／ＴＢＡ）（２ｇ、３.２ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（１００ｍＬ）に溶解する。その溶液をＨＣｌ（１Ｍ）を用いてｐＨ３に調節し、次いで１,１−カルボニルジイミダゾール（７８４ｍｇ、４.８ｍｍｏｌ）を加える。このものを攪拌下、１２時間反応させ、次いでそのものをグーチるつぼを通してろ過して該樹脂を溶出させ、素のろ過生成物にベンジルアミン（１ｍｌ、９.６ｍｍｏｌ）を加える。このものを４８時間反応させ、次いで飽和ＮａＣｌ溶液（５ｍＬ）を加え、攪拌下、３０分間放置する。このものにアセトン（２００ｍＬ）を加え、そうして得られた沈殿物をろ過し、減圧下で乾燥させる。
乾燥誘導体をＴＬＣ、ＩＲおよびＨＰＬＣ分析によって確認する。
アミド化の％ １５％

ヒアルロン酸ベンジルアミドの製造
酸形態のヒアルロン酸（２ｇ、５.２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１００ｍＬ）に溶解する。この溶液に、１,１−カルボニルジイミダゾール（８５４ｍｇ、５.２ｍｍｏｌ）を加える。このものを攪拌下、６時間反応させ、その後、ベンジルアミン（１.１３ｍｌ、１０.４ｍｍｏｌ）を加える。反応を４８時間進行させ、次いでアセトン（２００ｍＬ）を加えることによって停止させる。そうして得られた沈殿物をろ過し、減圧下で乾燥する。
乾燥誘導体をＴＬＣ、ＩＲおよびＨＰＬＣ分析によって確認する。
アミド化の％ ６０％

ヒアルロン酸ベンジルアミドの製造
酸形態のヒアルロン酸（２ｇ、５.２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１００ｍＬ）に溶解する。この溶液にピリジン（２ｍｌ）、ｐ−ＮＯ₂−フェノール（３.６８ｇ、０.０２６ｍｏｌ）およびピリジンクロリドをｐＨが７／８に達するまで加える。最後に、ＤＣＣ（５.３、０.０２６ｍｏｌ）およびベンジルアミン（２.８、０.０２６ｍｏｌ）を加える。このものを攪拌下、１６時間反応させ、その後、反応をアセトン（２００ｍＬ）を加えることによって停止させる。そうして得られた沈殿物をろ過し、減圧下で乾燥させる。
乾燥誘導体をＴＬＣ、ＩＲおよびＨＰＬＣ分析によって確認する。
アミド化の％ ５％

ヒアルロン酸ベンジルアミドの製造
ＨＡ／ＴＢＡ（２ｇ、３.２ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（１００ｍＬ）に溶解させる。反応混合物のｐＨが４.５〜５の間に達するまで、その溶液にＨＣｌガスを吹き込む。続いて、カルボニルジイミダゾール（５１８ｍｇ、３.２ｍｍｏｌ）を加える。攪拌下、室温で１時間反応させ、その後、ベンジルアミン（０.７００ｍＬ、６.４ｍｍｏｌ）を加える。反応を１６時間〜１８時間進行させる。この後、飽和ＮａＣｌ溶液（５ｍｌ）を加える。アセトン（２００ｍＬ）を加えることによって沈降させ、そうして得られた沈殿物をろ過し、減圧下で乾燥させる。
乾燥誘導体をＴＬＣ（加水分解反応後）、ＩＲおよびＨＰＬＣ分析によって確認する。
アミド化の％ ５０％

ヒアルロン酸オクチルアミドの製造
ＨＡ／ＴＢＡ（２ｇ、３.２ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（１００ｍＬ）に溶解させる。反応混合物のｐＨが４.５〜５の間に達するまで、その溶液にＨＣｌガスを吹き込む。続いて、カルボニルジイミダゾール（２０７ｍｇ、１.２８ｍｍｏｌ）を加える。攪拌下、室温で１時間反応させ、その後、オクチルアミン（０．４１７ｍＬ、３.２ｍｍｏｌ）を加える。その反応を１６〜１８時間反応させる。この最後に、飽和ＮａＣｌ溶液（５ｍＬ）を加える。アセトン（２００ｍＬ）を加えることによって沈降させ、得られた沈殿物をろ過し、減圧下で乾燥させる。
乾燥誘導体はＴＬＣ（加水分解反応後）、ＩＲおよびＨＰＬＣ分析によって確認する。
アミド化の％ ２５％

ヒアルロン酸ドデシルアミドの製造
ＨＡ／ＴＢＡ（２ｇ、３.２ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（１００ｍＬ）に溶解させる。反応混合物のｐＨが４.５〜５の間に達するまで、その溶液にＨＣｌガスを吹き込む。続いて、カルボニルジイミダゾール（１０４ｍｇ、０.６４ｍｍｏｌ）を加える。攪拌下、室温で１時間反応させ、その後、ドデシルアミン（６００ｍｇ、３.２ｍｍｏｌ）を加える。その反応を１６〜１８時間進行させる。この後、飽和ＮａＣｌ溶液を加える。アセトン（２００ｍＬ）を加えることによって沈降させ、得られた沈殿物をろ過し、減圧下で乾燥させる。
乾燥誘導体はＴＬＣ（加水分解反応後）、ＩＲおよびＨＰＬＣ分析によって確認する。
アミド化の％ １５％

ヒアルロン酸ヘキサデシルアミドの製造
ＨＡ／ＴＢＡ（２ｇ、３.２ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（１００ｍＬ）に溶解させる。反応混合物のｐＨが４.５〜５の間に達するまで、その溶液にＨＣｌガスを吹き込む。続いて、カルボニルジイミダゾール（５２ｍｇ、０.３２ｍｍｏｌ）を加え、攪拌下、室温で１時間反応させ、その後、ヘキサデシルアミン（７８０ｍｇ、３.２ｍｍｏｌ）を加える。その反応を１６〜１８時間進行させる。この後、飽和ＮａＣｌ溶液（５ｍＬ）を加える。アセトン（２００ｍＬ）を加えることによって沈降させ、得られた沈殿物をろ過し、減圧下で乾燥させる。
乾燥誘導体はＴＬＣ（加水分解反応後）、ＩＲおよびＨＰＬＣ分析によって確認する。
アミド化の％ ５％

記載の本発明について、これらの方法は多数の様式に改良することができることは明らかである。それらの改良法は本発明の精神および目的を逸脱するものと考えるべきではなく、当該分野の当業者にとって明らかであろういずれの改良法も特許請求の範囲内である。

図１はヒアルロン酸アミド体とヒアルロン酸ナトリウム塩とのＩＲスペクトルの違いを示す。アミド体のスペクトルの場合、ステアレートのＣＨ₂の伸縮振動に帰属される顕著なピークが２９００ｃｍ^-1の領域に存在する。 図２のスペクトルは、ＮＨ面の変角振動（アミドバンド）に帰属される１５２７ｃｍ^-1ピークおよび芳香環の面外ＣＨの変角振動に帰属される７３０ｃｍ^-1ピークを明瞭に示す。 図３はヒアルロン酸アミド体とヒアルロン酸ナトリウム塩とのＩＲスペクトルの違いを示す。

Claims (10)

1. 以下の一般式：
   

   

   ［式中、
   Ｒは、ＮＲ_６Ｒ_７であり；
   Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４は、Ｈであり；
   Ｒ_５は、ＣＯ−ＣＨ_３であり；
   Ｒ_６は、Ｈであり；
   Ｒ_７は、無置換の、脂肪族基またはアリール脂肪族基である］
   の繰り返し単位を少なくとも１つ含む、ヒアルロン酸のアミドの水溶性化合物またはそれらの誘導体であって、
   該化合物のアミド化のパーセンテージは最大５％であり、
   該アミドは、ヒアルロン酸のカルボキシ基と、該脂肪族または該アリール脂肪族のアミノ基との反応によって得られ、
   該誘導体とは、
   ｉ）いくつかのまたはいずれかのカルボキシ基が、脂肪族アルコールまたはアリール脂肪族アルコールでエステル化された化合物、
   ii）Ｄ−グルクロン酸残基の一部のカルボキシ基が同じ多糖類の鎖または他の鎖のアルコール官能基とそれぞれ分子内エステルまたは分子間エステルを形成した架橋化合物、または
   iii）Ｄ−グルクロン酸残基の一部のカルボキシ基が、該脂肪族または該アリール脂肪族の多価アルコールと反応してスペーサー鎖による架橋を与える架橋化合物、
   である、
   該ヒアルロン酸のアミドの水溶性化合物またはそれらの誘導体。
2. Ｒ _７ がオクチル基、ドデシル基、ヘキサデシル基、またはベンジル基である、請求項１記載のヒアルロン酸のアミドの水溶性化合物またはそれらの誘導体。
3. 重金属で塩化した、請求項１または請求項２のいずれか記載のアミド化合物またはそれらの誘導体。
4. 重金属が元素周期表の４族、５族および６族の金属であって、銀、コバルト、鉄、銅、亜鉛、砒素、ストロンチウム、ジルコニウム、アンチモン、金、セシウム、タングステン、セレン、白金、ルテニウム、ビスマス、スズ、チタンおよび水銀が好ましい、請求項３記載のアミド化合物またはそれらの誘導体。
5. 薬理学的に活性な物質で塩化した、請求項１または請求項２のいずれか記載のアミド化合物またはそれらの誘導体。
6. 薬理学的に活性な物質が、抗生物質、抗感染薬、抗菌薬、抗ウイルス薬、細胞増殖抑止薬、抗腫瘍薬、抗炎症薬、創傷治癒薬、麻酔薬、コリン作動性もしくはアドレナリン作動性の作動薬もしくは拮抗薬、抗血栓薬、抗凝血薬、止血薬、繊維素溶解薬、血栓溶解薬、タンパク質もしくはそれらのフラグメント、ペプチド、またはポリヌクレオチドである、請求項５記載のアミド化合物またはそれらの誘導体。
7. 請求項１乃至請求項６のいずれか１つに記載のアミド化合物もしくはそれらの誘導体および／またはそれらの塩の少なくとも１つ、および少なくとも１つの薬理学的に活性な物質を含有する医薬組成物。
8. 薬理学的に活性な物質が、抗生物質、抗感染薬、抗菌薬、抗ウイルス薬、細胞増殖抑止薬、抗腫瘍薬、抗炎症薬、創傷治癒薬、麻酔薬、コリン作動性もしくはアドレナリン作動性の作動薬もしくは拮抗薬、抗血栓薬、抗凝血薬、止血薬、繊維素溶解薬、血栓溶解薬、タンパク質もしくはそれらのフラグメント、ペプチド、ポリヌクレオチド、増殖因子、酵素、またはワクチンである、請求項７記載の医薬組成物。
9. ヒアルロン酸またはそれらの誘導体のカルボキシル上にアミドを有する請求項１記載のアミド化合物またはそれらの誘導体の製造法であって、工程：
   ａ）酸溶液中かまたは酸樹脂上で、酸形態または４級アンモニウム塩である該ヒアルロン酸またはそれらの誘導体と活性化剤との反応による、該カルボキシ基の活性化；および
   ｂ）無置換の、脂肪族またはアリール脂肪族のアミンとの反応；
   を含む、該製造法。
10. 活性化剤が１,１−カルボニルジイミダゾールである、請求項９記載の製造法。

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