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JP3053873B2 - Ｂ細胞リンパ腫細胞および白血病細胞に特異的な免疫結合体およびヒト化抗体 - Google Patents

Ｂ細胞リンパ腫細胞および白血病細胞に特異的な免疫結合体およびヒト化抗体

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JP3053873B2
JP3053873B2 JP8507371A JP50737196A JP3053873B2 JP 3053873 B2 JP3053873 B2 JP 3053873B2 JP 8507371 A JP8507371 A JP 8507371A JP 50737196 A JP50737196 A JP 50737196A JP 3053873 B2 JP3053873 B2 JP 3053873B2
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JP
Japan
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monoclonal antibody
antibody
cells
mll2
seq
Prior art date
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JP8507371A
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English (en)
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JPH10505231A (ja
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リュン，シュイ−オン
ハンセン，ハンス
Original Assignee
イムノメディクス，インコーポレイテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
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Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 本発明は一般に癌の診断用および治療用に使用する免
疫結合体に関する。詳細には、本発明は、Ｂ細胞リンパ
腫細胞および白血病細胞に対して向けられ、組換えによ
り生産されたキメラ抗体およびヒト化モノクローナル抗
体（humanized mAb）に関し、その抗体は診断用試薬ま
たは治療用試薬に共有結合することができ、その際に、
抗体結合機能およびインターナリゼーション機能を喪失
せず、しかもヒト抗マウス抗体の産生が少ない。
非ホジキン型悪性リンパ腫（NHL）および慢性リンパ
性白血病は、依然として癌死亡率の重要な一因であるＢ
細胞悪性腫瘍である。このような悪性腫瘍は、種々の治
療に対して様々に応答する。化学療法に対する応答はか
なり良好であり、NHLの臨床的病期を適切に分類できる
場合、限局性疾患患者に関しては、部分放射線治療を使
用して満足な治療を提供することが可能である（Hall e
t al.,Radiology for the Radiologist（放射線医師の
ための放射線医学）、Lippincott,Philadelphia,1989,p
p 365−376）。しかし、化学療法に付随する中毒性の副
作用や、全身放射線療法はもとより、局所放射線療法に
よる造血系に対する毒性のため、このような治療方法の
使用は制限を受ける。患者の約半数が病気で死亡する
（Posner et al.,Blood,61:705（1983））。
放射性核種や他の細胞毒性試薬に結合したターゲッテ
ィング・モノクローナル抗体を使用すると、このような
試薬を腫瘍部位に直接送達することが可能になり、その
結果、正常組織の有毒試薬被曝が制限される（Goldenbe
rg,Semin,Nucl.Med.,19:332（1989））。近年、抗体を
基礎とする療法の可能性および、腫瘍関連抗原を正確に
定位できる可能性が実験的試験と臨床試験の両者で証明
された（例えば、Thorpe,TIBTECH,11:42（1993）;Golde
nberg,Scientific American,Science ＆ Medicine,1:64
（1994）;Baldwinら、米国特許第4,925,922号および第
4,916,213号;Young、米国特許第4918163号；米国特許第
5,204,095号;Irieら、米国特許第5,196,337号;Hellstro
mら、米国特許第5,134,075号および第5,171,665号を参
照されたい）。腫瘍による抗体取り込みは一般に低く、
総注入量の0.01％から0.001％にすぎないということも
あって、腫瘍関連マーカーに対する放射標識抗体または
放射標識抗体フラグメントの使用は、一般に治療より腫
瘍の定位の目的で成功をおさめてきた（Vaughan et a
l.,Brit.J.Radiol.,60:567（1987））。腫瘍への投与量
を増加させるために放射標識濃度を上昇させると、健常
な組織への放射能被曝も増加することになるため、一般
に逆効果である。
LL−２（EPB2）は、Ｂ細胞リンパ腫細胞およびリンパ
性白血病細胞により速やかにインターナライズ（内在
化）され、前述の困難の一部を克服することができる極
めて特異的な抗Ｂ細胞リンパ腫細胞および抗リンパ性白
血病細胞ネズミ・モノクローナル抗体（mAb）である（S
hih et al.,Int.J.Cancer,56:538（1994））。LL2は、I
gG2a抗体型であり、Raji Bリンパ腫細胞株を抗原の起源
として使用して開発された（Pawlak−Byczkowska et a
l.,Cancer Res.,49:4568（1989））。ネズミLL2（mLL
2）はCD22のエピトープと反応することが判明している
（Belisle et al.,Proc Amer.Assn.Clin.Res.,34:A2873
（1993））。CD22分子は前駆細胞および初期前Ｂ細胞の
細胞質に発現され、成熟Ｂ細胞の細胞表面に出現する。
mLL2は、細胞切片の免疫染色により、試験したＢ細胞
リンパ腫51中50と反応することが証明された。mLL2は、
放射免疫検出法で決定されるため、in vivoでＢ細胞リ
ンパ腫細胞を検出する極めて高感度の手段である（Murt
hy et al.,Eur.J.Nucl.Med.,19:394（1992））。99mTc
で標識mLL2のFabフラグメントは、Ｂ細胞リンパ腫に罹
患しているフェーズII治験患者の既知病変65中63を定位
した（Mills et al.,Proc.Amer.Assn.Cancer Res.,14:A
2857（1993））。さらに、131I標識されたmLL2は、Ｂ細
胞リンパ腫患者で治療上有効であった（Goldenberg et
al.,J.Clin.Oncol.,9:548（1991））。外毒素PE38KDEL
に結合したmLL2 Fabは、ヌードマウスで成長している
測定可能なヒト・リンパ腫異種移植片（CA−46）を完全
緩解させた（Kreitman et al.,Cancer Res.,53:819（19
93））。
mLL2の臨床使用は、他のほとんどの有望なネズミ抗体
の場合とちょうど同じ様に、ヒトでHAMA応答が発生する
ことによって制限されてきた。HAMA応答はmLL2の注射後
に必ず見られるわけではないが、かなりの数の例で、mL
L2の単回投与後に患者にHAMAが発生した。HAMA応答は、
アナフィラキシの問題があるばかりではなく、循環結合
体の大部分が循環抗マウス抗体と複合体を形成し、循環
抗マウス抗体によって封鎖されるため、このような抗体
結合体の診断上および治療上の有用性が制限される可能
性がある。このことは、約6mgのmLL2 131I−IgGを単回
注射後に、患者の約30％に低レベルのHAMA応答が発生
し、追加の注射によってほぼ全例に強いHAMA応答が発生
した１つの試験によって例証される。一方、99mTcで標
識したmLL2 Fabでは、HAMA応答は認められなかった。
一般に、このようなHAMA応答によって、mLL2抗体の診断
能力および治療能力の完全実現の障害になる可能性があ
る。
上記の通り、Ｆ（ab）２やFabのようなmLL2のフラグ
メントを使用すると、特にこれらの免疫原性の問題が緩
和または回避されるが、治療に向けて細胞免疫性を誘導
するときや、生存期間を増大した抗体が必要な場合な
ど、IgG全体の方が望ましい情況もある。
本発明の目的は、治療モダリティまたは診断モダリテ
ィとしてのmLL2 IgG抗体の価値を最大限に高めるため
に、また多回投与モダリティまたは持続投与モダリティ
での有用性を高めるために、mLL2の抗原結合特性を保持
するが、同じ物を受けた被験でのHAMA誘発がより少ない
mLL2関連のマウス／ヒト・キメラmAb（cLL2）およびヒ
ト化mAb（hLL2）を生産することにある。
本発明のまたの目的は、相補性決定領域（CDR）を含
め、cLL2 mAbおよびhLL2 mAbの軽鎖および重鎖の可変
領域のアミノ酸配列をコードするDNA配列を提供するこ
とにある。
本発明の目的は、治療モダリティまたは診断モダリテ
ィを含むhLL2 mAbおよびcLL2 mAbの結合体を提供する
ことにもある。
さらに、本発明の目的は、本発明のヒト化キメラmAb
を使用する治療方法および診断方法を提供することにあ
る。
以上の目的は、明細書および付属の特許請求の範囲に
後述する発明によって達成されている。
発明の概要 本発明の１つの態様で、ネズミ軽鎖可変領域（VK）お
よび重鎖可変領域（VH）がヒト定常軽鎖（κ）および重
鎖（IgG1）に連結されるmLL2 mAb関連のcLL2 mAbが得
られる。このキメラmAbは、親mLL2のＢリンパ腫細胞お
よび白血病細胞のターゲッティング特性およびインター
ナリゼーション（内在化）特性を保持する。
本発明のまたの態様で、mLL2 mAbの軽鎖および重鎖
の相補性決定領域（CDR）が、それぞれヒトVK領域およ
びVH領域のフレームワーク（FR）配列に連結され、その
後で、それぞれヒトκ定常部ドメインおよびIgG1定常部
ドメインに連結されるmLL2 mAb関連のhLL2 mAbが得ら
れる。このヒト化抗体は、親mmLL2 mAbのリンパ腫細胞
および白血病細胞のターゲッティング特性およびインタ
ーナリゼーション特性を保持し、より低いHAMA反応を示
すと考えられる。
また別の態様では、それぞれhLL2 mAbおよびcLL2 m
Abの、可変軽鎖および可変重鎖のアミノ酸配列をコード
するDNAを含む分離されたポリヌクレオチドが得られ
る。
それ以外の態様で、VK鎖およびVH鎖のCDRのアミノ酸
配列が得られる。
さらに別の態様で、hLL2 mAbまたはcLL2 mAbが診断
用試薬または治療用試薬に共有結合している諸結合体が
得られる。
さらに別の態様で、前述のmAb結合体を使用してＢ細
胞リンパ腫およびリンパ性白血病を診断することができ
る方法が得られる。
本発明の以上その他の態様および実施例は、以下の明
細書および添付の特許請求の範囲を検討することによっ
て明確になるであろう。
図面の説明 第１図は、ネズミLL2 VKドメインと、ヒト化LL2 VK
ドメイン（第１図Ａ配列識別番号２および６）およびVH
ドメイン（第１図Ｂ配列識別番号４、９および８）とを
比較する図である。mFR配列（ネズミと呼ばれる）と異
なるhFR配列（REIhuVKおよびEUHuVHと呼ばれる）のみを
示し、星印で明示してある。これらの位置でより多くの
残基がヒト化構造に保持されていた。CDRを枠で囲って
ある。コンピュータモデルリングによるCDR接触を示すF
R残基を下線で示す。
第２図は、LL2 CDRとそのフレームワーク領域（FR）
の隣接関係を示す図である。mLL2のVLドメインおよびVH
ドメインのエネルギー最小化モデルを別個に構築し、半
径4.5Å以内のすべてのFR残基またはあらゆるCDR原子を
潜在的CDR−FR接触と認定した。軽鎖のCDR（第２図Ａ、
L1、L2、およびL3）および重鎖（第２図Ｂ、H1、H2およ
びH3）を、それぞれ空間充填フレームワーク上に重なっ
た「ボールと棒」として表現されている。
第３図は、軽鎖ステージングベクター（VKpBR）およ
び哺乳類発現ベクター（pKH）（第３図Ａ）、ならびに
重鎖ステージングベクター（VHpBS）および哺乳類発現
ベクター（pG1g）（第３図Ｂ）を示す図である。
第４図は、LL2 VKドメインの二本鎖DNAおよびアミノ
酸配列（第４図Ａ配列識別番号１および２）ならびにLL
2 VHドメイン二本鎖DNAおよびアミノ酸配列（第４図Ｂ
配列識別番号３および４）を示す図である。対応するDN
A配列にコードされているアミノ酸配列を１文字コード
として示す。CDRアミノ酸配列を枠で囲ってある。LL2VK
のFR1に位置するAsn−グリコシル化部位（第４図Ａ配列
識別番号２）を、下線付きNVT配列として示す。
第５図Ａは、hLL2 VKドメインの二本鎖DNAおよび対
応するアミノ酸残基（配列識別番号５および６）を示す
図である。CDRアミノ酸配列を枠で囲ってある。対応す
るVHドメインのデータを第５図Ｂに示す（配列識別番号
７および８）。
第６図は、ヒト化VH領域のPCR/遺伝子合成およびステ
ージングベクターVHpBSへのサブクローニングを表す略
線図である。
第７図は、非還元条件（レーン６〜８）および還元条
件（レーン３〜５、軽鎖および重鎖）でのmLL2抗体およ
びcLL2抗体のSDS−PAGE分析を示す図である。レーン３
およびレーン６はコントロール抗体を含む。
第８図は、還元条件（レーン３〜５）および非還元条
件（レーン６〜８）でのcLL2抗体およびhLL2抗体の異な
るバージョンのSDS−PAGE分析を示す図である。
第９図は、還元条件（レーン３〜６）および非還元条
件（レーン７〜10）での混合適合化（mix−and−matc
h）cLL2抗体およびhLL2抗体のSDS−PAGE析を示す図であ
る。cLL2はコントロールの役割をする。
第10図は、トレーサー放射標識mLL2と細胞への結合を
競うmLL2抗体およびcLL2抗体を含む比較Raji細胞競合抗
体結合分析の結果を示す図である。
第11図は、ヒト化LL2/キメラLL2混合物をcLL2と比較
した比較Raji細胞競合抗体結合分析の結果（第11図
Ａ）、および２つのバージョンのhLL2をcLL2と比較した
比較Raji細胞競合抗体結合分析の結果（第11図Ｂ）を示
す図である。
第12図は、抗体インターナリゼーション：表面結合の
比率を、cLL2抗体、cLL2抗体（ＱからＶへの突然変異誘
発）、hLL2抗体およびmLL2抗体の時間の関数として比較
した図である。
第13図は、エンドグリコシダーゼＦによる脱グリコシ
ル化後のmLL2およびcLL2のSDS−PAGE分析を示す図であ
る。
第14図は、mLL2の脱グリコシル化がRaji細胞への結合
アフィニティに及ぼす影響を示す図である。
発明の詳細な説明 mLL2 mAbのVL領域およびVH領域をコードするcDNAを
分離して、それぞれヒト抗体のκ定常領域およびIgG1定
常領域をコードする遺伝子を含む哺乳類発現ベクター
に、組換えにより別々にサブクローニングした。この２
つのリコンビナントDNAを哺乳類細胞に共トランスフェ
クトすると、親mLL2 mAbと同様、Ｂリンパ腫細胞に貪
欲に結合し、Ｂリンパ腫細胞により速やかにインターナ
ライズされるcLL2 mAbを発現した。
同様に組換えによって、VK DNAおよびVH DNAのCDR
を、それぞれヒトVK領域およびVH領域のフレームワーク
（FR）配列に連結させ、その後で、上記hLL2と同様、哺
乳類細胞に発現するために、それぞれヒトκ定常領域お
よびIgG1定常領域に連結させた。
本明細書では、“cLL2"または“cLL2 mAb"という表
現は、ネズミVK領域およびVH領域を、それぞれヒト定常
軽鎖および定常重鎖に連結するかサブクローニングする
ことにより構築されたキメラ・モノクローナル抗体を指
すつもりである。“hLL2"または“hLL2 mAb"という表
現は、cLL2のネズミFR配列をヒト・フレームワーク領域
の配列と置き換えることによる、キメラ・モノクローナ
ル抗体のヒト化を指す。
先行技術の抗体結合体と比較して、Ｂ細胞リンパ腫特
異的ターゲッティングおよび白血病細胞特異的ターゲッ
ティング、標的細胞内への迅速なインターナリゼーショ
ン、診断用試薬または化学療法試薬の迅速な細胞内放出
（それによって試薬の有効性が上昇する）、および患者
でのHAMA応答のが低減する可能性という利点を備えた、
cLL2 mAbおよびcLL2 mAbと、製薬上許容できる媒体
（例えば、Remington's Pharmaceutical Science（Remi
ngtonの薬科学）、第18版,Mack Publishing Co.,Easto
n,PA,1990を参照）で調合された診断用試薬または化学
療法試薬との間で共有結合体を調製することができる。
cLL2 mAbのVK付加炭水化物部分はＢリンパ腫細胞へ
の結合に関与しないことが本明細書で明らかにされてい
るため、例えば酸化炭水化物誘導体を介するなど、この
ような炭水化物部分を介して試薬が抗体に結合している
結合体を使用する方が好ましい。例えば、引用すること
によりその内容が本明細書に組み込まれる、Shihらの米
国特許第5,057,313号、Shih et al.,Int.J.Cancer 41:8
32（1988）、および同時係属で同一所有者にかかるHans
enらの米国出願第08/162,912号で、このような結合体を
生産する方法および診断用および治療用に使用する方法
が得られる。重合キャリヤを使用せずに試薬を酸化炭水
化物に直接結合する方法が、やはり引用することにより
本明細書に組み込まれるMcKearnらの米国特許第5,156,8
40号に記述されている。
広く様々な診断用試薬および治療用試薬を本発明の抗
体に都合よく結合させることができる。この例として
は、ドキソルビシン、メトトレキサート、タキソールな
どの諸化学療法剤、蛍光分子などの検出可能標識または
重金属や放射核種などの細胞障害剤が錯体を形成するこ
とができるDTPAなどの諸キレート化剤、Pseudomonas外
毒素などのトキシン類などがある。この結合体のうち幾
つかの実施態様を以下の実施例に記述する。
本発明で使用する細胞株および培地は、LL2（EPB−
２）ハイブリドーマ細胞（上記Pawlak−Byczkowskaら、
1989）、Sp2/0−Ag14骨髄腫細胞（ATCC,Rockville,MD）
およびRaji細胞などである。この細胞は、10％のウシ胎
仔血清（FCS）（Gibco/BRL,Gaithersburg,MA）、2mMの
Ｌ−グルタミンおよび75μg/mlのゲンタマイシンを加え
たDulbeccoの改良Eagle培地（DMEM）（完全DEME）で培
養することが望ましい。トランスフェクトーマは、10％
のFCSおよび75μg/mlのゲンタマイシンを加えたハイブ
リドーマ無血清培地であるHSFM（Gibco/BRL,Gaithersbu
rg,MA）（完全HSFM）で成長させるか、指示がある場合
には、抗生物質のみを含有するHSFMで成長させる。トラ
ンスフェクトーマの選択は、500μg/mlのハイグロマイ
シン（Calbiochem,San Diego,CA）を含有する完全HSFM
で実行することが可能である。すべての細胞株を５％の
CO2中、37℃で維持することが望ましい。
本発明の重要な態様は、抗体の可変ドメインをコンピ
ュータモデリングでモデル化できることである。（例え
ば、引用することにより本明細書に組み込まれる、Gold
enbergら編、Cancer Therapy with Radiological Antib
odies（放射標識抗体による癌治療）、CRC Press,Boca
Raton,FL,1994の中のDionを参照されたい）。一般に、m
LL22抗体とhLL2抗体の両者の三次元構造は、相同関係に
よってモデル化するのが最善の方法である。推測される
mLL2軽鎖FR領域の一次配列とヒトREI（VK）の一次配列
との間で高頻度の残基一致（75.0〜92.3％）がみられた
ため、引用することにより本明細書に組み込まれるProt
ein Data Bank（タンパク質データバンク）（PDR Code
IREI,Bernsteinら、J.Mol.Biol.112:535（1977））の結
晶学データを利用できるので、この研究が促進された。
同様に、抗体EU（VH）配列は、mLL2重鎖のFR1〜FR3コン
ピュータ相対物として選択することができ、FR4はNEWM
を基礎とした。EU配列のＸ線座標データは現在不足して
いるため、FR1〜FR4のNEWM構造データ（PDR Code 3FA
B）を使用することが可能で、必要に応じてmLL2またはE
U（hLL2）に対応するようにアミノ酸側基を置き換える
ことができる。軽鎖のCDRは、1MCP（L1およびL2）およ
び1REI（L3）の対応する配列からモデル化することがで
きる。重鎖CDRの場合、H1およびH2はそれぞれ2HFLおよ
び1MCPを基礎とすることができるが、H3は新たにモデル
化することが可能である。ＣαとＣβとの間の捻り角を
維持するように、可能な場合はいつも、側基置換を実施
する。エネルギ最小化は、AMBER分子力場（Weuner et a
l,J Amer.Chem.Sco.106:765（1984））により、収束法
を使用して遂行した。潜在的に重要なFR−CDR相互作用
は、mLL2の可変軽鎖および可変重鎖を最初にモデリング
することにより決定した。各CDR内のあらゆる原子の半
径4.5Å以内のあらゆるFR残基を同定し、それによってh
LL2の最終デザインモデルに保持することができる。
hLL2のVKドメインおよびVHドメインの配列をデザイン
すると、その後は、PCR反応で長い合成DNAオリゴヌクレ
オチドを鋳型として使用し、短いオリゴヌクレオチドを
プライマとして使用して、CDR合体を遂行することがで
きる。ほとんどの場合、VKドメインまたはVHドメインを
コードするDNAは、約350bpとなる。コドン同義性（縮
重）を利用して、コードされるアミノ酸を変化させず
に、独特な制限部位を、Ｖ遺伝子DNA配列の中央に近い
領域に容易に導入することが可能である。例えば、最初
にデザインされたアミノ酸配列を維持しながら、hLL2
VHドメインのDNAヌクレオチド157〜162位（アミノ酸53
位および54位）に、独特なAvr II部位を導入することが
できる（第４図Ｂ）。自動DNAオリゴヌクレオチド・シ
ンセサイザ（Cyclone Plus DNA Syntesizer,Milligen−
Biosearch）で、Avr II部位の２本の長い非重複１本鎖D
NAオリゴヌクレオチド（〜150bp）上流および下流を作
ることができる（例えば、以下の実施例３、オリゴＡお
よびオリゴＢを参照されたい）。オリゴＡやオリゴＢな
どの全長DNAオリゴヌクレオチドの収率は低いと予測さ
れるため、PCR反応で２組の横側オリゴヌクレオチド
（実施例３、オリゴＡはオリゴ配列識別番号10および1
1、オリゴＢはオリゴ配列識別番号12および13）により
増幅することができる。必要な制限部位を含むプライマ
をデザインして、後続のサブクローニングを容易にする
ことができる。オリゴＡのおよびオリゴＢの各プライマ
は、それぞれ結果として得られるオリゴＡおよびオリゴ
ＢのPCR産物がAvr II部位でフレーム内連結してhLL2 V
Hドメインをコードしている全長DNA配列（約350bp）を
形成することができるように、Avr II部位に重複配列を
含まなければならない。（Pst IおよびAvr IIで制限消
化した）オリゴＡのPCR産物と（Avr IIおよびBstE IIで
制限消化した）オリゴＢのPCR産物をAvr II部位で連結
させて、それらをステージングベクターVHpBSのPst II/
BstE II部位へサブクローニングすることは、１つの３
フラグメント連結ステップで完成することができる（例
えば、実施例３を参照されたい）。正しい配列がVHpBS
にサブクローニングされたことは、最初に制限消化分析
で分析し、その後で、Sanger et al.,Proc.Natl.Acad.S
ci.USA 74:5463（1977）による逐次反応で確認すること
ができる。
Igプロモーター、リーダー配列およびhLL2 VH配列を
含むHind III/BamH Iフラグメントをステージングベク
ターから切除して、pSVgptベースのベクターpG1gの対応
する部位にサブクローニングすることが可能で、このpG
1gはヒトIgG定常領域のゲノム配列、Igエンハンサーお
よびgpt選択マーカーを含み、最終発現ベクターhLL2pG1
gを形成する。同様な戦術を使用してhLL2 VL配列を構
築することができる。長いオリゴヌクレオチド（以下の
実施例オリゴＣおよびＤを参照されたい）のためのPCR
産物の連結用に選択された制限部位は、この場合Nru I
でよい。
Igプロモーター、リーダー配列およびhLL2 VK配列を
含むDNA配列をBamH1/Hind III処理によってステージン
グベクターVKpBRから切除して、pSVhygベースのベクタ
ーpKhの対応する部位にサブクローニングすることが可
能で、このpKhは、ヒトκ鎖定常領域、ハイグロマイシ
ン選択マーカー、Igおよびκエンハンサーを含み、最終
発現ベクターhLL2pKhを形成する。
ヒト化すると、アフィニティが低下したり喪失する場
合もあるため、もとのアフィニティを回復させるために
は、さらに修飾することが必要であることがある（例え
ば、引用することにより組み込まれる、Tempest et a
l.,Bio/Technology 9:266（1991）;Verhoeyen et al.,S
cience 239:1534（1988）を参照されたい）。cLL2はネ
ズミの相対物に匹敵する結合アフィニティを示すことが
判明しているため（以下の実施例５を参照）、原型のhL
L2に欠陥デザインがあればその欠陥デザインは、cLL2の
軽鎖と重鎖を混合して、ヒト化バージョンと適合させる
ことによって同定することができる。非還元条件（ジス
ルフィドＬ−Ｈ鎖連結が無傷のままである）および還元
条件（鎖が切れる）での異なる混合により適合化した
（mix−and−match）ヒト化キメラLL2のSDS−PAGE分析
で、分子の特性に関する異なる種類の軽鎖と重鎖の関係
を分析することができる。例えば、多重バンドとしての
移動、あるいはより大きいみかけの分子サイズとしての
移動は、LL2のネズミVKドメインのFR1領域でみられるＮ
結合グリコシル化部位にグリカン基が存在することに起
因する可能性がある。別の実施例では、約25kDaで移動
する不連続バンドは、予期された非グリコシル化軽鎖の
分子サイズである。
一般に、cLL2 mAbを調製するために、DNA産物および
プライマを使用してPCRクローニングで、mLL2のVH鎖お
よびVK鎖を得ることができる。（下記のOrlandiらの論
文および下記のLeungらの論文）。上記と同様、VK PCR
プライマをpBR327ベースのステージングベクター（VKpB
R）にサブクローニングすることも可能である。上記と
同様、類似したpBluescriptベースのステージングベク
ター（VHpBS）にVH PCR産物をサブクローニングするこ
とも可能である。Hind III制限エンドヌクレアーゼおよ
びBamH I制限エンドヌクレアーゼを使用して、VK配列お
よびVH配列を含むフラグメントを、プロモーター配列お
よびシグナルペプチド配列と共に、ステージングベクタ
ーから切除することができる。通常通り、VKフラグメン
ト（約600bp）を哺乳類発現ベクター（例えば、pKh）に
サブクローニングすることができる。pKhは、ヒトκ定
常領域のゲノム配列、Igエンハンサー、κエンハンサー
およびハイグロマイシン耐性遺伝子を含むpSVhygベース
の発現ベクターである。同様に、ヒトIgG1定常領域のゲ
ノム配列、Igエンハンサーおよびキサンチン−グアニン
ホスホリボシルトランスフェラーゼ（gpt）遺伝子を担
持しているpSVgptベースの発現ベクターpG1gに、約800b
pのVHフラグメントをサブクローニングすることができ
る。２つのプラスミドをエレクトロポレーションによっ
てSp2/0−Ag14細胞などの哺乳類発現細胞にトランスフ
ェクトして、ハイグロマイシン耐性を選択する。選択で
生き残ったコロニーを拡大し、上清液のcLL2抗体産生を
ELISA法でモニタリングする。約１〜106細胞のトランス
フェクション効率が望ましい。この系で、0.10〜2.5μg
/mlの抗体発現レベルが期待できる。
RNA分離、cDNA合成および増幅を次のように実施する
ことができる。引用することにより本明細書に組み込ま
れる、Sambrookら（Molecular Cloning:A Laboratory M
anual（分子クローニング：実験マニュアル）、第２
版、Cold Spring Harbor Press,1989）の方法に従っ
て、合計約107細胞を使用して、LL2ハイブリドーマ細胞
株から全細胞RNAを調製することができる。SuperScript
前増幅システム（Gibco/BRL.,Gaithersburg,MD）を使用
するなどして、通常通り、全RNAから第１鎖cDNAを逆転
写することができる。簡単に記述すると、２μｌの10×
合成緩衝液［200 mM Tris−HCl（pH 8.4）、500 mM KC
l、25 mM MgCl2、1mg/ml BSA］、１μｌの10 mM dNTP m
ix、２μｌの0.1 M DTT、および200単位のSuperScript
逆転写酵素の存在下、反応体積20μｌで、50ngのランダ
ムプライマを５μｇのRNAにアニーリングすることがで
きる。延長ステップは、最初は室温で10分間進行させ、
続いて42℃で50分間インキュベートする。反応混合物を
90℃で５分間加熱することにより反応を停止することが
できる。
引用することにより本明細書に組み込まれるOrlandi
ら（Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,86:3883（1989））の記
述通りに、cLL2またはhLL2またはhLL2のVK配列およびVH
配列を増幅することができる。プライマCK3BHおよびプ
ライマVK5−３を使用して、VK配列を増幅することも可
能である（Leung et al.,Biotechniques,15:286（199
3）、これは引用することにより本明細書に組み込まれ
る）が、ネズミIgGのCH1領域およびVHIBACKにアニーリ
ングするプライマCH1Bを使用してVH配列を増幅すること
ができる（上記のOrlamdi et al.,1989）。10μｌの第
１鎖cDNA産物、９μｌの10×PCR緩衝液［500 mM KCl、1
00 mM Tris−HCl（pH 8.3）、15 mM MgCl2、および0.01
％（w/v）ゼラチン］（Perkin Elmer Cetus,Norwalk,C
T）を含むPCR反応混合物を30サイクルのPCRにかけるこ
とができる。各PCRサイクルは、94℃で１分間の変性、5
0℃で1.5分間のアニーリング、および72℃で1.5分間の
重合から成ることが好ましい。増幅されたVKフラグメン
トおよびVHフラグメントは、２％アガロース（BioRad,R
ichmond,CA）で精製することができる。ヒト化Ｖ遺伝子
の構築に使用するオリゴＡ（149−mer）およびオリゴＢ
（140−mer）を自動Cyclone Plus DNAシンセサイザ（Mi
lligen Bioresearch）で合成する方法に関しては実施例
３を参照されたい。
Igプロモーター、シグナルペプチド配列、およびVK
PCR産物のフレーム内連結を促進するのに便利な制限部
位を含むpBR327ベースのステージングベクターVKpBRな
どのステージングベクターにVKのPCR産物をサブクロー
ニングすることができる。pBluescriptベースのVHpBSな
ど、類似したステージングベクターにVHのPCR産物をサ
ブクローニングすることができる。それぞれのPCR産物
を含む個々のクローンを、たとえば、引用することによ
り本明細書に組み込まれるSanger et al.,Proc Natl Ac
ad.Sci.,USA,74:5463（1977）の方法で配列決定すると
も可能である。
本明細書に記載のDNA配列は、あらゆる対立遺伝子、
ならびに自然発生のものであろうと誘導されたものであ
ろうと、突然変異体およびその変種を含むものと考える
べきである。
以下に記載の通り、２種類のプラスミドを適切な細
胞、例えば骨髄腫Sp2/0−Ag14に共トランスフェクトし
て、ハイグロマイシン耐性のコロニーを選択し、上清液
のcLL2抗体産生またはhLL2抗体産生を、例えばELISA法
でモニタリングすることができる。
トランスフェクション、およびELISAによる抗体分泌
クローンの分析を次の様に実施することができる。引用
することにより本明細書に組み込まれるCo et al.,J.Im
munol.,148:1149（1992）に従って、約10μｇのhLL2pKh
（軽鎖発現ベクター）および20μｇのhLL2pG1g（重鎖発
現ベクター）を使用して５×106SP2/0骨髄腫細胞をエレ
クトロポレーション（BioRad,Richmond,CA）でトランス
フェクトすることができる。トランスフェクション後、
96ウェル微量滴定プレートの完全HSFM培地（GIBCO,Gait
hersburg,MD）中、37℃、５％CO2で細胞を成長させるこ
とが可能である。最終ハイグロマイシン濃度500μg/ml
でハイグロマイシン選択培地（Calbiochem,San Diego,C
A）を加えることによって、２日後に選択過程を開始す
ることができる。コロニーは一般にエレクトロポレーシ
ョン後２〜３週間で出現する。さらに分析するため、培
養を拡大することができる。
キメラ重鎖またはヒト化重鎖の分泌陽性であるトラン
スフェクトーマ・クローンは、ELISA分析で同定するこ
とができる。簡単に記述すると、トランスフェクトーマ
培養の上清サンプル（100μｌ）を、Ｆ（ab）２フラグ
メント特異的抗体であるヤギ抗ヒト（GAH）−IgG（Jack
son ImmunoResearch,west Grove,PA）で予め被覆したEL
ISA微量滴定プレートに三重に加える。プレートを室温
で１時間インキュベートする。洗浄緩衝液（0.05％ポリ
ソルベート20を含有するPBS）で３回洗浄することによ
り、非結合タンパク質を除去する。Fcフラグメント特異
的抗体であるカラシペルオキシダーゼ（HRP）結合GAH−
IgG、（Jackson ImmunoResearch,west Grove,PA）をウ
ェルに加える（×104希釈し、非結合抗体を加えた抗体
ストック100μｌを最終濃度1.0μg/mlまで）。１時間イ
ンキュベートした後、プレートを、一般には３回、洗浄
する。反応溶液［100μｌ、167μｇのオルトフェニレン
−ジアミン（OPD）（Sigma,St.Louis,MO）を含有する、
PBS中0.025％過酸化水素］をウェルに加える。暗所で30
分間発色させる。50μの4N HCl溶液を各ウェルに加え
ることによって反応を停止してから自動ELISA読取り装
置（Bio−Tek instruments,Winooski,VT）により490nm
で吸光度を測定する。非関連キメラ抗体標準（Scotgen,
Ltd.,Edinburg,Scotlandから入手可能）を基準にして結
合キメラ抗体を測定する。
次の様に細胞培養培地から抗体を分離することができ
る。トランスフェクトーマ培養を無血清培地に適合させ
る。キメラ抗体産生用に、HSFMを使用してローラーボト
ルで500ml培養として、細胞を成長させる。培養を遠沈
し、上清を0.2ミクロン膜を通過させて濾過する。濾過
した培地を、流量1ml/minでタンパク質Ａカラム（１×3
cm）を通過させる。カラムの約10培量のPBSで樹脂を洗
浄し、10mM EDTAを含有する0.1Mグリシン緩衝液（pH3.
5）でタンパク質Ａ結合抗体をカラムから溶出させる。1
0μｌの3M Tris（pH8.6）が入っている試験管に1.0ml
の分画を採集して、280/260nmの吸光度からタンパク質
濃度を決定する。ピーク分画をプールしてPBSに対して
透析を行い、例えばCentricon 30（Amicon Beverly,M
A）で抗体を濃縮する。前記同様、ELISAで抗体濃度を決
定し、その濃度をPBSで約1mg/mlに調整する。通常通
り、0.01％（w/v）アジ化ナトリウムを保存料としてサ
ンプルに加える。
このようにして分離されたmLL2抗体、cLL2抗体および
hLL2抗体の比較結合アフィニティを直接ラジオイムノア
ッセイで測定する。クロラミンＴ法（例えば、引用する
ことにより本明細書に組み込まれるGrennwood et al.,B
iochem.J.,89:123（1963）を参照されたい）を用いてmL
L2を131Iまたは125Iで標識することができる。一般に、
ヨウ素標識抗体の比活性を約10μCi/μｇに調整する。
反応培地（１％ウマ血清および100μg/mlゲンタマイシ
ンを加えたHSFM）を使用して、非標識抗体および標識抗
体を適切な濃度に稀釈する。適切な濃度の標識抗体と非
標識抗体の両者を、合計体積を100μｌにして反応試験
管に一緒に加える。Raji細胞培養のサンプルを採取して
細胞濃度を測定する。培養を遠沈し、収集した細胞を反
応培地で１回洗浄した後、最終濃度が約107細胞/mlとな
るように反応培地に再懸濁する。あらゆる手順を４℃の
寒冷条件で実施する。細胞浮遊液100μｌを反応試験管
に加える。反応試験管を定期的に穏やかに振とうさせな
がら、反応を４℃で２時間行って細胞を懸濁させる。反
応期間後、5mlの洗浄緩衝液（１％BSAを含有するPBS）
を各試験管に加える。浮遊液を遠沈し、さらに5mlの洗
浄緩衝液で細胞ペレットを２回洗浄する。遠沈後、細胞
ペレットに残っている残存放射能の量をγカウンタ（Mi
naxi,Packard Instruments,Sterling,VA）で測定する。
フローサイトメトリ分析で評価すると、Fc部分が欠け
ている種々の濃度のmLL2 Ｆ（ab）２フラグメントを競
合物質として使用して、混合により適合化した抗体およ
び完全にヒト化した抗体のRaji細胞表面抗原結合アフィ
ニティを、cLL2と比較することができる。フローサイト
メトリーで、FITC標識抗ヒトFc特異的抗体により、ヒト
Fc部分を担持する残留表面結合LL2抗体（cLL2および混
合適合化（mix−and−match）LL2）を検出することがで
きる。混合適合化LL2抗体がcLL2と類似した抗原結合ア
フィニティを示す場合、軽鎖と重鎖の両者をヒト化する
ための最初のデザインはmLL2免疫反応性を保持すると結
論を下すことができる。
引用することにより本明細書に組み込まれるPirker e
t al.,J.Clin.Invest.,76:1261（1985）の手順に実質的
に従って、mLL2抗体、cLL2抗体およびhLL2抗体の標的細
胞内へのインターナリゼーション後に蛍光標識が可能で
ある。培養Raji細胞を遠沈し、細胞を約５×106細胞/ml
の濃度まで新鮮な培地に懸濁させる。96ウェル微量滴定
プレートの各ウェルに、100μｌの細胞浮遊液を加え
る。すべての反応を同時に停止させるため、体積100μ
ｌの40μg/ml抗体を反応ウェルに一定間隔で加える。プ
レートを37℃、CO2細胞培養インキュベータ内でインキ
ュベートする。インキュベーションの終わりに冷１％FC
S/PBSで３回洗浄することにより非結合抗体を除去す
る。次に1mlのFormaid−Fresh［10％ホルマリン溶液（F
isher,Fair Lawn,NJ）］で細胞を室温で15分間処理す
る。洗浄後、測定する抗体がネズミ、キメラ、あるいは
ヒト化であるかどうかによって、FITC標識ヤギ抗マウス
抗体（Tago,Burlingame,CA）またはFITC標識ヤギ抗ヒト
抗体（Jackson ImmunoResearch,West Grove,PA）で処理
して、細胞表面または細胞内部のいずれかに存在する抗
体を検出する。BH−２蛍光顕微鏡（Olympus,Lake Succe
ss,NY）を使用して蛍光分布を評価する。Opreskoら（J.
Biol.Chem.,262:4116（1987））に従って、放射性ヨー
ド標識抗体をトレーサとして使用して抗体インターナリ
ゼーション速度を測定することができる。簡単に記述す
ると、１％ヒト血清を含有するDMEM培地0.5mlの中で、
放射標識抗体（１×104cpm）をRaji細胞（１×106細胞/
ml）と共に４℃で２時間インキュベートする。反応間隔
後、0.5mlのDMEM培地で３回洗浄することにより、非特
異的に結合した抗体を除去する。インターナリゼーショ
ンを測定するため、各々の反応試験管に0.5mlのDMEM培
地を加えて、浮遊液を37℃でインキュベートする。三重
の細胞を一定間隔で取り出し、即座に氷浴で冷却してそ
れ以上のインタナリゼーションを停止させる。細胞を10
00×ｇで、４℃で５分間遠沈する。上清を除去して放射
能をカウントする。寒冷条件で、pH3.0、1mlの0.1mM酢
酸/0.1mMグリシン緩衝液で８分間処理することにより、
表面に結合した放射能を除去する。酸処理で除去された
放射能、および細胞と結合して残存している放射能を測
定した。インターナリゼーションCPM/表面CPMの比率を
時間に対してプロットし、勾配からインターナリゼーシ
ョンの速度を決定した。
オリゴヌクレオチド指向性突然変異誘発およびクロー
ン化DNAの突然変異のための関連技術に関する詳細なプ
ロトコルは周知である。例えば、上記Sambrookらの文献
とAusubelらの文献を参照されたい。
従来の部位指向性オリゴヌクレオチド突然変異誘発を
使用して、Asn結合グリコシル化部位を抗体に導入する
ことも可能である。例えば、κタンパク質の18位のAsn
を導入するためには、コドン18をAGGからAACに変化させ
てもよい。これを遂行するには、チミンの代わりに少数
のウラシルを含むDNA分子を得るために、抗体軽鎖配列
を含む１本鎖DNA鋳型を、E.coliの適当な菌株（例え
ば、dut−ung−）から調製する。このようなDNA鋳型
は、MI3クローニングまたはSP6プロモーターを使用し
て、in vitro転写で得ることもできる。例えば、Ausube
lら編、Current Protocols in Molecular Biology（分
子生物学における現行プロトコル）、John Wiley ＆ So
ns,NY,1987を参照されたい。突然変異した配列を含むオ
リゴヌクレオチドを通常通り合成し、１本鎖鋳型にアニ
ーリングして、生成物をT4 DNAポリメラーゼおよびT4
DNAリガーゼで処理すると、２本鎖DNA分子が生じる。
野生型E.coli（dut＋ung＋）細胞を２本鎖DNAで形質転
換すると、突然変異DNAが効率よく回収される。
その代わりに、望み通りの突然変異を含むオリゴヌク
レオチドを、VL鎖の可変領域のプライマおよびDNAクロ
ーンとして使用するか、関心事の抗体を産生する細胞由
来のRNAを鋳型として使用して、Asn連結したグリコシル
化部位を抗体軽鎖に導入することもできる。Huse、Anti
body Engineering:A Practical Guide（抗体エンジニア
リング：実践ガイド）のBoerrebaeck編、W.H.Freeman
＆ Co.,PP.103−120,1992も参照されたい。例えば、製
造業者の説明書に従ってTRANSFORMERTMキット（Clontec
h,Palo Alto,CA）を使用して、部位指向性突然変異誘発
を実施することができる。
その代わりに、望み通りの突然変異を含む、相互にプ
ライミングするオリゴヌクレオチドを含む抗体鎖を合成
することによって、グリコシル化部位を導入することが
できる。例えば、引用することにより本明細書に組み込
まれるUhlmann,Gene 71:29（1988）;Wosnick et al.,Ge
ne 60:115（1988）；上記のAusubelらの文献を参照され
たい。
上記一般記述は、抗体の18位のAsnグリコシル化部位
の導入に言及しているが、軽鎖の他所のAsn連結したグ
リコシル化部位、または重鎖可変領域の場合でも導入す
ることが可能なことは、当業者の心に浮かぶであろう。
以下に記述する代表的な実施態様は、本発明を説明す
るために使用するに過ぎない。当業者は、本材料の変化
は、請求の範囲に記載されている発明の広い全般的な範
囲内に属することを認めるであろう。本明細書で言及し
たすべての引用文献の内容は、引用することにより本明
細書に組み込まれる。
実施態様例 以下は、本願発明の実施態様例である。
1.親mLL2抗体のＢ細胞リンパ腫細胞と白血病細胞ターゲ
ティング特性及び細胞インターナリゼーション特性を実
質的に保持しているように、ヒトκ定常領域及びIgG1定
常領域にそれぞれ連結されたヒトVK及びヒトVH領域のフ
レームワーク配列とそれぞれ結合したmLL2モノクローナ
ル抗体の軽鎖と重鎖の相補性決定領域（「CDR」）を含
むhLL2モノクローナル抗体であって、 KSSQSVLYSANHKNYLA のアミノ酸配列（配列番号２の24〜40番目の残基）を含
む、LL2モノクローナル抗体のVK領域の単離された相補
性決定領域１（CDR1）のポリペプチドと、 WASTRES のアミノ酸配列（配列番号２の56〜62番目の残基）を含
む、LL2モノクローナル抗体のVK領域の単離されたCDR2
のポリペプチドと、 HQYLSSWTF のアミノ酸配列（配列番号２の95〜103番目の残基）を
含む、LL2モノクローナル抗体のVK領域の単離されたCDR
3のポリペプチドと、 SYWLH のアミノ酸配列（配列番号４の31〜35番目の残基）を含
む、LL2モノクローナル抗体のVH領域の単離されたCDR1
のポリペプチドと、 YINPRNDYTEYNQNFKD のアミノ酸配列（配列番号４の50〜66番目の残基）を含
む、LL2モノクローナル抗体のVH領域の単離されたCDR2
のポリペプチドと、 RDITTFY のアミノ酸配列（配列番号４の99〜105番目の残基）を
含む、LL2モノクローナル抗体のVH領域の単離されたCDR
3のポリペプチドとを含む前記モノクローナル抗体。
2.バリンが前記重鎖の５番目のアミノ酸の位置に挿入さ
れている実施態様例１に記載のhLL2モノクローナル抗体 3.グルタミンが前記重鎖の５番目のアミノ酸の位置に挿
入されている実施態様例１に記載のhLL2のモノクローナ
ル抗体。
4.ヒトκ定常領域及びIgG1定常領域とそれぞれ結合した
mLL2モノクローナル抗体の軽鎖と重鎖の可変領域を含む
cLL2モノクローナル抗体。
5.実施態様例１に記載のhLL2モノクローナル抗体、又
は、Ｂ細胞リンパ腫細胞及び白血病細胞と結合するその
特異的結合断片を含む、Ｂ細胞リンパ腫細胞及び白血病
細胞ターゲティング結合体であって、前記hLL2モノクロ
ーナル抗体は診断用又は治療用試薬と共有結合している
前記結合体。
6.実施態様例４に記載のcLL2モノクローナル抗体、又
は、Ｂ細胞リンパ腫細胞及び白血病細胞と結合するその
特異的結合断片を含むＢ細胞リンパ腫細胞及び白血病細
胞ターゲティング結合体であって、前記cLL2モノクロー
ナル抗体は診断用又は治療用試薬と共有結合している前
記結合体。
7.前記診断用試薬が標識を含む実施態様例５又は６に記
載の結合体。
8.前記治療用試薬が細胞傷害性剤を含む実施態様例５又
は６に記載の結合体。
9.前記治療用試薬は、前記モノクローナル抗体又はその
特異的細胞結合断片の炭水化物部分によって、前記モノ
クローナル抗体又はその特異的細胞結合断片と結合して
いる実施態様例５又は６に記載の結合体。
10.LL2モノクローナル抗体の軽鎖可変（VK）領域のアミ
ノ酸配列をコードするDNA配列を含み、かつ、LL2pKhと
名付けられた哺乳類の発現ベクターに組み込まれている
図4A（配列番号１）に記載の単離されたポリヌクレオチ
ド。
11.hLL2のVKドメインのアミノ酸配列をコードするDNA配
列を含み、かつ、hLL2pKhと名付けられた哺乳類の発現
ベクターに組み込まれている図5A（配列番号５）に記載
の単離されたポリヌクレオチド。
12.Igプロモーター、シグナルペプチドDNA配列、ヒトκ
定常領域のゲノム配列、Igエンハンサー、κエンハンサ
ー、及び、マーカー遺伝子を前記ベクターが適宜含む実
施態様例10又は11に記載のポリヌクレオチド。
13.LL2モノクローナル抗体の重鎖可変（VH）領域のアミ
ノ酸配列をコードするDNA配列を含み、かつ、hLL2pG1g
と名付けられた哺乳類の発現ベクターに組み込まれてい
る図4B（配列番号３）に記載の単離されたポリヌクレオ
チド。
14.hLL2のVHドメインのアミノ酸配列をコードするDNA配
列を含み、かつ、hLL2pK1gと名付けられた哺乳類の発現
ベクターに組み込まれている図5B（配列番号７）に記載
の単離されたポリヌクレオチド。
15.前記ベクターが、Igプロモーター、シグナルペプチ
ドDNA配列、ヒトIgG1定常領域のゲノム配列、Igエンハ
ンサー、及び、マーカー遺伝子のうち一以上をさらに含
む実施態様例13又は14に記載のポリヌクレオチド。
実施例１ LL2モノクローナル抗体をヒト化するためのヒト・フレ
ームワークの選択および配列デザイン 引用することにより組み込まれるKabatデータ（Kabat
ら、Sequences of Proteins of Immunological Interes
t（免疫学的に重要なタンパク質の配列）、第５版、連
邦保険福祉省、米国政府印刷局、Washington,D.C.）でL
L2のネズミ可変（Ｖ）領域フレームワーク（FR）をヒト
抗体の可変領域フレームワークと比較することにより、
ヒトREI配列（第１図Ａ、配列識別番号６）およびEU配
列（第１図Ｂ、配列識別番号９および10）は、それぞれ
LL2のVKドメインおよびVHドメインのフレームワークと
最高級の配列ホモロジーを示すことが確認された。した
がって、LL2 VKおよびLL2 VHのCDRを移植するヒトフ
レームワークとして、それぞれREI FRおよびEU FRを
選択した。しかし、LL2重鎖のヒト化では、EUの配列で
はなく、むしろNEWMのFR4配列を使用してEU FR4配列を
置き換えた。コンピュータモデリング試験結果（第２図
Ａおよび第２図Ｂ）に基づいて、ヒト化FR配列のデザイ
ンは、結果として得られる抗体のアフィニティおよび特
異性に影響を及ぼすと考えられる、潜在的CDR接触があ
るネズミFR残基を保持した（第１図）。
２つのバージョンのヒト化重鎖を構築した。第１のバ
ージョン（hLL2−１、配列識別番号９）で、グルタミン
（Ｑ）をアミノ酸５位（Kabatナンバリング）に導入し
てPst I制限部位を含め、ステージングベクターへのグ
ルタミンのサブクローニングを促進した。オリゴ指向性
突然変異誘発により、このネズミ残基をhLL2−２（配列
識別番号８）のヒトEU残基バリン（Ｖ）に変換した。も
とのネズミκ鎖可変配列で、18〜20位（第１図、配列識
別番号２）で潜在的Ｎ結合グリコシル化部位が同定さ
れ、炭水化物付加に使用されたことに注目すべきであ
る。このグリコシル化部位は、LL2軽鎖のヒト化に使用
したREI FR配列に含まれていなかった。
より多くのオリゴヌクレオチドの詳細に関しては、実
施例３を参照されたい。
実施例２ LL2重鎖可変領域およびLL2軽鎖可変領域のPCRクローニ
ングおよび配列解明 mLL2（1gG2a）の重鎖可変領域（VH）と軽鎖変領域（V
K）の両者を、一般には上記通りに、さらに詳細には以
下の実施例３の記載通りに、DNAプライマを使用してPCR
クローニングで獲得した。PCRは突然変異させる傾向が
あるため、重鎖または軽鎖のいずれかの多様な個々のク
ローン可変領域を、６クローンについて決定し、同一で
あることを確認してからキメラ抗体の構築に使用した。
Igプロモーターと、シグナルペプチド配列と、VK PC
R産物のフレーム内連結反応の促進に便利な制限部位と
を含む、pBR327ベースのステージングベクターであるVK
pBRに、VKのPCR産物をサブクローニングした（第３図
Ａ）。VHのPCR産物は、類似したpBluescriptベースのス
テージングベクターであるVHpBSにサブクローニングし
た（第３図Ｂ）。
上記と同様、それぞれのPCR産物を含む少なくとも６
個の個々のクローンの配列を、上記Sangerら（1977）の
方法に従って決定した。全てが同一配列を担持している
ことが証明され、LL2 VK（配列識別番号１）は第４図
Ａから、またLL2 VH（配列識別番号３）は第４図Ｂか
らわかるように、その各々の配列が解明された。欠損突
然変異は、VK領域およびVH領域をコードする配列内で１
つも同定されなかった。LL2のPCR増幅可変領域配列とKa
batデータベース（Kabatら、上記）との比較によって、
LL2のVK配列およびVH配列は、それぞれサブグループ５
および2Bに属することがわかる。ドメイン内ジスルフィ
ド結合のためのCysなど、重要な残基は適切な部位に保
持された。
VKのFR1フレームワークで、Ｎ結合炭水化物付着部
位、Asn−Val−Thrが18〜20位で同定され（第４図Ａ、
配列識別番号２）、LL2のVKはグリコシル化されている
ことが示唆された。以下に詳述する通り、還元条件での
SDS−PAGE分析で、このAsnグリコシル化部位は実際に炭
水化物付加に使用されていることが証明された。しか
し、可変領域にグリコシル化部位が存在することによ
り、抗体の免疫反応性は影響を受けないようである。競
合的ラジオイムノアッセイでmLL2の免疫反応性とcLL2の
免疫反応性を比較すると、２つの抗体の活性はほぼ同じ
であった。
実施例３ ヒト化Ｖ遺伝子のPCR/遺伝子合成 hLL2 VHドメイン用にデザインされた配列、長いオリ
ゴヌクレオチドおよびPCRによるhLL2 VHドメインの構
築、hLL2 VHドメインを含むステージングベクターVHpB
Sを、第６図に示したスケッチにまとめる。
hLL2 VHドメインの構築に関しては、オリゴＡ（149
−mer）およびオリゴＢ（140−mer）を自動CYCLONE PLU
STM DNAシンセサイザ（Milligen Bioresearch）で合成
した。
オリゴＡ（下記配列識別番号10）は、nt24〜172に相
補的なhLL2 VHドメインのマイナス鎖を表す。
オリゴＢ（下記配列識別番号11）は、nt180〜320に相
補的なhLL2 VHドメインのマイナス鎖を表す。
オリゴＡおよびＢを濃水酸化アンモニウム処理により
支持体から切断し、保護解除した。サンプルを真空乾燥
して（SpeedVac,Savant,Farmingdale,NY）、水100μｌ
に再懸濁した後、CHROMOSPIN−100TMカラム（Clonetec
h,Palo Alto,CA）による遠心分離で不完全オリゴマ（10
0−mer未満）を除去してからDNAオリゴマをPCRで増幅し
た。オリゴＡおよびオリゴＢを別々に増幅してPCRクロ
ーニングするため、横側に位置するプライマすべてを、
本質的に上記Sambrookら（1989）の方法に従って、SDS
−PAGEで精製した。
10μｌの10×PCR緩衝液（500mM KCl、100mM Tris−
HCl緩衝液、pH8.3、15mM MgCl2）および、５単位のAMP
LTAQTM DNAポリメラーゼ（Perkin Elmer Cetus,Norwal
k,CT）の存在下、５μｌの５μＭオリゴ を加えることによって、CHROMOSPIN精製オリゴＡから、
１μｌのサンプル・ストックを100μｌの反応体積でPCR
増幅した。この反応混合物を、94℃で１分間の変性、50
℃で1.5分間のアニーリング、および72℃で1.5分間の重
合から成る30サイクルのPCR反応に供した。
によりオリゴＢをPCR増幅した。
オリゴＡおよびオリゴＢの二本鎖PCR増幅産物をゲル
精製し、Pst I/Avr II（オリゴＡのPCR産物）およびBst
E II/Avr II（オリゴＢのPCR産物）で制限消化して、重
鎖ステージングベクターVhpBSの相補的Pst I/BstE II部
位にサブクローニングすると、最終的なヒトIgG1重鎖発
現ベクターhLL2pG1gが得られた。
ヒト化VK配列の全長DNAを構築する場合、オリゴＥ（1
50−mer）およびオリゴＦ（121−mer）を上記のように
合成した。
でPCR増幅した。
でPCR増幅した。
オリゴＥおよびオリゴＦのPCR増幅産物をゲル精製し
て、それぞれPvu II/Nru IおよびNru I/Bg1 IIIで制限
消化した。２つのPCRフラグメントＥおよびＦをNru I部
位で連結し、軽鎖ステージングベクターであるVKpBRの
相補的Pvu I/Bc II部位に連結した。ヒト化VK配列をpKh
にサブクローニングすると最終的なヒトκ鎖発現ベクタ
ーであるhLL2pKhが生じた。
ヒト化抗体を発現させるために、約10μｇの直鎖化hL
L2pKhと約20μｇの直鎖化hLL2pG1gを使用して、エレク
トロポレーションにより５×106のSP2/0細胞にトランス
フェクトした。トランスフェクトーマを500μg/mlのハ
イグロマイシンで選択し、分泌された抗体を１×3cmの
タンパク質Ａカラムで精製した。精製抗体をCentricon
30遠心分離機で濃縮した後、ELISAで抗体濃度を測定し
た。0.1％（w/v）アジ化ナトリウムを保存料として含有
するPBS緩衝液で最終抗体濃度を1mg/mlに調節した。
第１図でネズミLL2 VKドメインとヒト化LL2 VKドメ
イン（第１図Ａ、配列識別番号２および６）との間、お
よびネズミLL2 VHドメインとヒト化LL2 VKドメイン
（第１図Ｂ、配列識別番号４、９、８）との間で、アミ
ノ酸配列を比較する。VK鎖では、ヒトREIフレームワー
ク配列をすべてのFRに使用した。VH鎖では、ヒトEUフレ
ームワーク配列をFR1〜３に使用し、NEWM配列をFR−４
に使用した。マウスのFR配列と異なるヒトFR配列のみを
示す。星印は、対応する位置のヒトFR配列と異なるネズ
ミFR配列を示す。この星印の位置のネズミの残基は、ヒ
ト化構造においても保持された。CDRは枠で囲われてい
る。
第４図Ａ（配列識別番号１および２）に、ネズミLL2
VKドメインの二本鎖DNAおよび対応アミノ酸配列（１
文字コードで示す）を示す。CDR1〜３のアミノ酸配列は
枠で囲われている。第４図Ｂ（配列識別番号３および
４）に、対応するVHを表示する。
第５図Ａ（配列識別番号５および６）および第５図Ｂ
（配列識別番号７および８）に、それぞれヒト化LL2 V
KおよびLL2 VHの二本鎖DNA配列およびアミノ酸配列を
示す。アミノ酸配列は１文字コードで表し、CDRアミノ
酸配列は枠で囲ってある。
実施例４ キメラLL2抗体の構築、発現および精製 Hind IIIおよびBamH Iによる二重制限消化により、そ
れぞれLL2VKpBRおよびLL2VHpBSから、LL2のVK配列およ
びVH配列を含むフラグメントを、プロモーター配列およ
びシグナル・ペプチド配列と共に切除した。約600bpのV
Kフラグメントを、哺乳類発現ベクターpKhのHind III/B
amH I部位にサブクローニングした（第３図Ａ）。pKh
は、ヒトκ定常領域のゲノム配列、Igエンハンサー、κ
エンハンサーおよびハイグロマイシン耐性遺伝子を含む
pSVhygベースの発現ベクターである。同様に、pG1g、ヒ
トIgG1定常領域のゲノム配列、Igエンハンサーおよびキ
サンチン−グアニン・ホスホリボシルトランスフェラー
ゼ（gpt）遺伝子を担持するpSVgptベースの発現ベクタ
ー（第３図Ｂ）の対応するHind III/BamH I部位に約800
bpのVHフラグメントをサブクローニングした。最終発現
ベクターは、それぞれLL2pKhおよびLL2pG1gと呼ばれ
る。
２つのプラスミドをエレクトロポレーションによりSp
2/0−Ag14細胞に共トランスフェクトしてハイグロマイ
シン耐性を選択した。選択で生き残ったコロニー由来の
上清のキメラ抗体分泌をELISA検定でモニタリングした
（上記参照）。トランスフェクション効率は約１〜10×
106細胞であった。終末培養での抗体発現レベルは、0.1
0/μg/ml未満から2.5/μg/mlまでの範囲で様々であっ
た。
第７図は、タンパク質Ａ精製したmLL2（レーン４およ
び７）およびcLL2（レーン５および８）を、それぞれ還
元条件および非還元条件でSDS−PAGE分析した結果示す
図である。「HMW」は高分子量タンパク質マーカーを表
し、「LMW」は低分子量マーカーを表す。mmL2の軽鎖もc
LL2の軽鎖も（レーン４および５）主としてダブレット
・バンドとして泳動し、予期されたみかけの分子量より
大きかった。cLL2のヒトκ定常領域は潜在的グリコシル
化部位を含むことが判明しており、LL2 VKドメインのF
R1領域で同定された潜在的グリコシル化部位が利用され
たと推理される。
第８図は、異なるバージョンのhLL2抗体およびcLL2抗
体を、還元条件および非還元条件でSDS−PAGE分析した
結果を示す図である。上記と同様、LMWおよびHMWは分子
量マーカーである。レーン３および６は、cLL2抗体であ
る。レーン４および７は、VHドメインにネズミFR残基が
７個含まれているhLL2である（hLL2−１）。レーン５お
よび８は、VHドメインにネズミFR残基が６個含まれてい
るhLL2である（hLL2−２）。ヒト化軽鎖はキメラ軽鎖と
比較して、より迅速に、しかもより不連続のバンドとし
て泳動する。
第９図は還元および非還元の両条件で、混合適合化
（mix−and−match）抗体およびcLL2抗体およびhLL2抗
体のSDS−PAGE分析成績を示す図である。レーン１およ
び２は、分子量マーカーである。レーン３および７はcL
L2である。レーン４および８は、ヒト化軽鎖およびキメ
ラ重鎖を含む混合適合化したものであり［（hL/cH）LL
2）］。レーン５および９は、キメラ軽鎖およびヒト化
重鎖（バージョン１）であり［（cL/hH）LL2−１）］。
レーン６および10はキメラ軽鎖およびヒト化重鎖（バー
ジョン２）である［（cL/hH）LL2−２］。ヒト化LL2バ
ージョン１はVHドメインにネズミFR残基７個を含むが、
バージョン２はVHドメインにネズミFR残基６個を含む。
（hL/cH）LL2）（レーン４）の軽鎖の位置は他の位置と
異なることは注目に値し、ヒト化LL2軽鎖への炭水化物
付着がないことが示唆される。
実施例５ cLL2抗体のRaji細胞表面抗原への結合 競合細胞結合分析を実施して、親mLL2を基準としたcL
L2の免疫反応性を評価した。プローブとして131I標識mL
L2（0.025μg/ml）を使用して、Raji細胞を抗体と共に
インキュベートし、細胞結合した標識mLL2の量から細胞
への相対的結合を求めた（上記参照）。第10図に示した
競合分析からわかるように、mLL2抗体もcLL2抗体も類似
した結合活性を示した。
フローサイトメトリに基づく第２競合分析で結果を確
認した。簡単に記述すると、前述と同様、Raji細胞を使
用して、前述と同様、１つの抗体濃度を他と比較して変
化させながら、結合したmLL2またはcLL2の量を、FITC標
識抗マウスFc抗体または抗ヒトFc抗体で測定し、続いて
フローサイトメトリを使用して分析する。
実施例６ hLL2抗体のRaji細胞への結合 実施例５と類似した実験で、混合適合化LL2またはヒ
ト化LL2の異なる３種類の組み合わせの抗原結合アフィ
ニティとcLL2の抗原結合アフィニティを、フローサイト
メトリで比較した。
簡単に記述すると、１％FCSおよび0.01％アジ化ナト
リウムを加えた最終体積100μｌのPBS緩衝液中に様々な
濃度のmLL2 Ｆ（ab′）２フラグメント（競合体とし
て）が存在する条件下、１μｇのcLL2抗体、混合適合化
cLL2抗体、hLL2−１抗体またはhLL2−２抗体を108のRaj
i細胞と共にインキュベートした。混合液を４℃で30分
間インキュベートした後、PBSで３回洗浄して非結合抗
体を除去した。抗体にヒトFc部分が存在することを利用
して、20×希釈FITC標識ヤギ抗体ヒトIgG1、Fcフラグメ
ント特異的抗体（Jackson ImmunoResearch,West Grove
PA）を加えることにより、抗体の結合レベルを評価し
た。細胞をPBSで３回洗浄し、FACSCAN蛍光活性化細胞選
別装置（Becton−Dickinson,Bedford,MA）で蛍光強度を
測定した。結果を第11図Ａに示す。
同じ方法を使用して、cLL2を２つのバージョンのhLL2
と比較した（第11図Ｂ）。
第11図ＡおよびＢに示した結果から、cLL2の免疫反応
性は、ヒト化抗体または混合適合化抗体の免疫反応性と
同様または同じであることが明らかである。cLL2とmLL2
の比較（第10図）も考慮すると、得られたキメラVKおよ
びVHならびにヒト化VKおよびVHの配列の信憑性が証明さ
れ、cLL2およびhLL2の機能性が確認される。
実施例７ Raji細胞によるmLL2およびcLL2のインターナリゼーショ
ン LL2抗体独特の特性は、Raji細胞に結合するとすぐに
速やかにインターナライズすることである（上記、Shih
ら、1994）。インターナリゼーション後のネズミLL2
は、速やかにゴルジ装置に輸送され、そこから広く様々
な生化学物質の分解を担当する細胞小器官であるリソソ
ームに輸送される（Keisariら、Immunochem.,10:565（1
973））。
抗体インターナリゼーション速度は、上記Opreskoら
（1987）に従って測定した。細胞内CPM/表面CPMの比率
は、時間の関数として求めた。
LL2抗体インターナリゼーション速度は、１％ヒト血
清を含有するDMEM緩衝液0.5ml中で、放射標識LL2抗体
（１×106cpm）を0.5×106Raji細胞と共に４℃で２時間
インキュベートすることによって測定した。Fc受容体を
介した非抗原特異的インターナリゼーションを排除する
かまたは最小限に抑えるために、Raji細胞表面Fc受容体
を飽和させるため、過剰なヒト血清が含まれていた。４
℃のDMEM0.5mlで３回洗浄することにより、結合されて
いない放射標識LL2抗体を細胞から除去した。次に細胞
を37℃でインキュベートし、一定時間後に、インターナ
リゼーションを停止させるために細胞浮遊液の一部を移
して氷で冷却した。３つの部分標本中の細胞を1,000×
ｇで５分間遠沈して分離し、表面に結合している放射標
識LL2を、1mlの0.1M酢酸グリシン緩衝液、pH3を用いて
４℃で８分間除去した。このようにして得られた放射能
（表面CPM）および細胞内に残存している放射能（細胞
内CPM）を測定した。インターナリゼーション速度を、
細胞内：表面放射能比のプロットの勾配から時間の関数
として算出した。
第12図からわかるように、mLL2抗体、cLL2抗体、cLL2
Q抗体およびhLL2抗体は、類似した速度でインターナラ
イズされた（Ke＝0.170（mLL2）〜0.1221（cLL2Q、NVT
からQVTへの突然変異）。この数値から、10分で表面結
合抗体の約50％がインターナライズされると考えられ
た。結果から、mLL2抗体のキメラ化もヒト化も脱グリコ
シル化も、インターナリゼーション速度を低下させない
ことがわかる。
mLL2、cLL2およびhLL2のインターナリゼーションの様
式も、本明細書に記載のFITC標識第２抗体プローブを使
用して、時間経過ベースで蛍光検鏡法によりモニタリン
グした。両抗体のインターナリゼーションは、測定可能
な最も初期の時点で確認された。５分で、抗体は細胞表
面上でも、膜に隣接した領域内に細胞質小胞としてイン
ターナライズされた状態でも見られた。インキュベーシ
ョン後15分で、膜内周囲に散在した細かい点が、ゴルジ
装置であると考えられる位置の顆粒群に溶けこみ始め
た。30分間インキュベートした後、さらに多くの抗体が
インターナライズされるにつれて、抗体が分解されるリ
ソソームであると考えられる離ればなれの位置に、群れ
をなした抗体が再分布するのが確認された。インキュベ
ーション後２時間に、抗体のほとんどが細胞内部で認め
られた。LL2を氷上で20分間インキュベートすると、強
い表面染色のみが確認された。mLL2もcLL2も、類似した
様式でインターナライズされた。非関連コントロール・
ヒト化抗体は鈍感な表面染色にすぎないことが証明され
たため、LL2のインターナリゼーションは抗原−抗体結
合と特に関連していた。
A103抗体（あらゆるヒト上皮細胞の表面に結合する
が、効率よくインターナライズしないIgG2a抗体（Matte
sら、Hybridoma,2:253（1983））は、２時間まで強い膜
染色を示したが、抗トランスフェリン受容体抗体（5F
9）はLL2と同様、すみやかにインターナライズした。
実施例８ LL2VK配列のFR1領域におけるグリコシル化部位の役割 特に発明としての関心事は、LL2 NVT軽鎖配列のFR1
領域内の18〜20位にあるAsnグリコシル化部位の同一性
である（第４図Ａ配列識別番号２）。上記の通り、還元
条件でのSDS−PAGE分析から、Asnグリコシル化部位は炭
水化物付加に使用されることが示唆される。
実施例８では、18〜20位の炭水化物部分が軽鎖の機能
的活性に及ぼす影響を試験した。
ネズミLL2軽鎖およびキメラLL2軽鎖をエンドグリコシ
ダーゼＦで（＋）処理するか、通常通りエンドグリコシ
ダーゼＦを使用せずに（−）処理して、その抗体産物を
還元条件および非還元条件でSDS−PAGEにより試験した
（第13図）。電気泳動的挙動に関して抗体型間で違いは
なかった。両者とも、脱グリコシル化により軽鎖の移動
速度が低下した。
脱グリコシル化がmLL2抗体のRaji細胞結合アフィニテ
ィに及ぼす影響を図14に示す。エンドグリコシダーゼＦ
で炭水化物を除去しても、結合活性に対する影響はなか
った。
AsnをGlnで置き換えてLL2Q VK FR1を作るため、軽
鎖の18位に突然変異を導入した。NVTからQVTへの突然変
異によって、抗体のグリコシル化が完全に破壊されるこ
とがSDS−PAGE分析で証明された。軽鎖VKグリコシル化
を伴うcLL2と伴わないcLL2のRaji細胞結合アフィニティ
を比較すると、炭水化物部分はこれらの細胞への抗体の
結合に影響を及ぼさないことが明らであった。
可変領域に炭水化物部位があることによって、抗体の
免疫反応性は影響を受けないと結論を下すことができ
る。LL2のVK炭水化物部分をCDRから離して置くと、CDR
を支持するFR関連のβバレルのボトムループの上に「帽
子」を形成することが、コンピュータモデリング試験で
示唆された。
原型のグリコシル化部位を含めずにヒト化すると、ネ
ズミ相対物に匹敵する免疫反応性を持つCDR移植LL2抗体
を生じる。
以上の特徴は、グリコシル化部位を使用して、抗体が
Ｂリンパ腫細胞または白血球細胞に結合して細胞内にイ
ンターナライズする能力を損なわずに治療用試薬または
診断用試薬をLL2に結合させることができることを示
す。
実施例９ LL2の炭水化物担持部位における結合 可変領域炭水化物分部は、mLL2 mAb、cLL2 mAbおよ
びhLL2 mAbの機能活性に明らかに関与していないこと
から、この部分は放射性核種トキシンなどの細胞障害剤
または検出剤の付加部位として有利に使用でき、その結
果、結合体が細胞表面に結合するのを妨害する可能性が
なくなる。
Shihら、米国特許第5,057,313号（引用することによ
り本明細書に組み込まれる）に記載の手順を使用して、
抗体の酸化炭水化物部分、および種々の薬物、トキシ
ン、キレート形成剤、および検出可能標識のうちの１つ
以上と等価である重合キャリアの第一級アルカリアミノ
基を介して抗体結合物を調製すると、薬物の複数のコピ
ーを含む、付加グリカン類が欠如したドキソルビシン−
デキストランLL2抗体フラグメントが生じる。cLL2 VK
FR1領域に含まれる炭水化物部分は、Asnグリコシル化
部位に共有結合するものであった。
１つの合成で、NaIO4によるデキストランの酸化、NH2
−CH2−CHOH−CH2−NH2によるSchiff塩基形成およびNaB
H4による還元によって、デキストラン（18〜40kDa）を
アミノデキストランに変換した。次に、無水コハク酸お
よび１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）
カルボジイミドの存在化、アミノデキストランをドキソ
ルビシン（DOX）と縮合すると、DOXアミノデキストラン
を生じた。さらに、DOXアミノデキストランを、抗体フ
ラグメントの炭水化物部分をNaIO4で酸化して生じたLL2
VK FR−１のアルデヒド基と縮合させた。
１つのDOX−LL2調製で、デキストランに付着したDOX
の分子数はデキストラン１分子当たり14であり、１分子
のＦ（ab）２当たりのドキソルビシンの分子数は8.9で
あった。上記Raji細胞結合分析での免疫反応性は、コン
トロール値の約80％であった。
この結合系は、mLL2抗体に制限されない。比較試験
で、DOX15〜19分子/cLL2分子が結合していた。
結合の可能性は上記実施例でのキャリヤ・デキストラ
ンの使用に制限されない。例えば、LL2 VK FR1領域の
炭水化物部分を酸化してアルデヒド基を生成することが
できる。このアルデヒド基は、任意の薬物のアミノ基と
反応してSchiff塩基を生成することができ、このSchiff
塩基は還元されると、アルキルアミン基により抗体に安
定に連結する薬物の複数のコピーを作成する。
例えば、薬物がアミノヘキシルDTPA（キレート化剤）
である場合、キレート化剤に共有結合したLL2が生成す
る。キレート化剤を使用して、例えば、診断用または治
療用に使用できる可能性がある放射核種や常磁性金属イ
オンなどを、標的組織に送達することができる。Ｙ−90
の47.3％およびIn−111の97.4％がキレート化されてい
る、キレート化剤5.5分子／抗体分子を含むDTPA−LL2結
合体が生成された。
上記実施例は本発明の幾つかの実施態様を示すにすぎ
ず、本出願は上記の詳細な実施例によって請求の範囲が
制限されるものではないことを強調する。
本出願に引用されたあらゆる出版物および特許は、引
用することにより出願に組み込まれる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｃ０７Ｋ 16/30 Ｃ０７Ｋ 16/30 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｐ 21/08 (72)発明者 ハンセン，ハンス アメリカ合衆国、08087 ニュー・ジャ ージー、ミスティック・アイランド、ノ ース・バージー・ドライヴ 2617 (56)参考文献 Ｃａｎｃｅｒ，Ｖｏｌ．73，Ｐ．896 −899（1994) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12N 15/00 A61K 39/395 A61K 49/00 C07K 16/30 C12P 21/08 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)

Claims (6)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】親mLL2抗体のＢ細胞リンパ腫細胞と、白血
    病細胞ターゲティング特性及び細胞インターナリゼーシ
    ョン特性とを実質的に保持するような、ヒトのモノクロ
    ーナル抗体の軽鎖と重鎖の定常領域にそれぞれ繋ぎ合わ
    せた、ヒトのモノクローナル抗体の軽鎖と重鎖の可変領
    域のフレームワーク配列（「FR」）とそれぞれ結合し
    た、マウス（「ｍ」）のLL2モノクローナル抗体の軽鎖
    と重鎖の相補性決定領域（「CDR」）を含む、ヒト化
    （「ｈ」）LL2モノクローナル抗体あるいはそのフラグ
    メントであって、 KSSQSVLYSANHKNYLA のアミノ酸配列（配列番号２の24〜40番目の残基）を含
    む、mLL2モノクローナル抗体の軽鎖可変領域の単離され
    たCDR1のポリペプチドと、 WASTRES のアミノ酸配列（配列番号２の56〜62番目の残基）を含
    む、mLL2モノクローナル抗体の軽鎖可変領域の単離され
    たCDR2のポリペプチドと、 HQYLSSWTF のアミノ酸配列（配列番号２の95〜103番目の残基）を
    含む、mLL2モノクローナル抗体の軽鎖可変領域の単離さ
    れたCDR3のポリペブチドと、 SYWLH のアミノ酸配列（配列番号４の31〜35番目の残基）を含
    む、mLL2モノクローナル抗体の重鎖可変領域の単離され
    たCDR1のポリペプチドと、 YINPRNDYTEYNQNFKD のアミノ酸配列（配列番号４の50〜66番目の残基）を含
    む、mLL2モノクローナル抗体の重鎖可変領域の単離され
    たCDR2のポリペプチドと、 RDITTFY のアミノ酸配列（配列番号４の99〜105番目の残基）を
    含む、mLL2モノクローナル抗体の重鎖可変領域の単離さ
    れたCDR3のポリペプチドと を含むことを特徴とするモノクローナル抗体。
  2. 【請求項２】以下のポリヌクレオチド配列、 hLL2モノクローナル抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
    をコードするDNA配列を含む、配列番号６をコードする
    単離したポリヌクレオチドと、 hLL2モノクローナル抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列
    をコードするDNA配列を含む、配列番号８をコードする
    単離したポリヌクレオチドと、 hLL2モノクローナル抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列
    をコードするDNA配列を含む、配列番号９をコードする
    単離したポリヌクレオチドと の中から少なくとも一つを含んで成るベクターであっ
    て、 さらに、Igプロモーター、シグナルペプチドDNA配列、
    ヒトのIgG1定常領域のゲノム配列、Igエンハンサー、マ
    ーカー遺伝子のうちに１以上のを適宜に含むことを特徴
    とするベクター。
  3. 【請求項３】請求項１に記載のhLL2モノクローナル抗
    体、若しくは、Ｂ細胞リンパ腫細胞又は白血病細胞と結
    合する特異的な結合フラグメントを含む、Ｂ細胞リンパ
    腫細胞と白血病細胞を標的とする化合物であって、該hL
    L2又はフラグメントは、診断用又は治療用試薬と共有結
    合することを特徴とする化合物。
  4. 【請求項４】請求項１に記載のhLL2モノクローナル抗
    体、若しくは、Ｂ細胞リンパ腫細胞又は白血病細胞と結
    合する特異的な結合フラグメントを含む、Ｂ細胞リンパ
    腫細胞と白血病細胞を標的とする化合物であって、該hL
    L2又はフラグメントは、患者のＢ細胞リンパ腫細胞若し
    くは白血病細胞を診断または治療するために用いる、診
    断用又は治療用試薬と共有結合することを特徴とする化
    合物。
  5. 【請求項５】請求項１に記載のhLL2モノクローナル抗体
    あるいはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチ
    ド配列。
  6. 【請求項６】請求項５に記載のポリヌクレオチド配列を
    含んでなる１以上のベクター。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6887307B1 (en) 1999-07-22 2005-05-03 Warner-Lambert Company, Llc Pullulan film compositions

Families Citing this family (417)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8771694B2 (en) * 1994-08-12 2014-07-08 Immunomedics, Inc. Immunoconjugates and humanized antibodies specific for B-cell lymphoma and leukemia cells
JP3053873B2 (ja) * 1994-08-12 2000-06-19 イムノメディクス，インコーポレイテッド Ｂ細胞リンパ腫細胞および白血病細胞に特異的な免疫結合体およびヒト化抗体
US5874540A (en) * 1994-10-05 1999-02-23 Immunomedics, Inc. CDR-grafted type III anti-CEA humanized mouse monoclonal antibodies
DE69729283T2 (de) 1996-03-20 2005-05-25 Immunomedics, Inc. GLYKOSYLIERTE IgG ANTIKÖRPER
DK0821006T3 (da) * 1996-07-26 2004-08-16 Aventis Pharma Gmbh Insulinderivater med öget zinkbinding
UA76934C2 (en) * 1996-10-04 2006-10-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Reconstructed human anti-hm 1.24 antibody, coding dna, vector, host cell, method for production of reconstructed human antibody, pharmaceutical composition and drug for treating myeloma containing reconstructed human anti-hm 1.24 antibody
AU6054398A (en) * 1997-02-11 1998-08-26 Immunomedics Inc. Stimulation of an immune response with antibodies labeled with the alpha-galactosyl epitope
US6183744B1 (en) * 1997-03-24 2001-02-06 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
US6306393B1 (en) 1997-03-24 2001-10-23 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
DE69831224T2 (de) * 1997-05-02 2006-03-23 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Immuntoxine, die ein onc protein enthalten, gegen bösartige zellen
JP4346116B2 (ja) * 1997-10-14 2009-10-21 中外製薬株式会社 リンパ球系腫瘍に対する抗体の作用増強剤
US20010033839A1 (en) * 1999-10-04 2001-10-25 Emilio Barbera-Guillem Vaccine and immunotherapy for solid nonlymphoid tumor and related immune dysregulation
US6224866B1 (en) 1998-10-07 2001-05-01 Biocrystal Ltd. Immunotherapy of B cell involvement in progression of solid, nonlymphoid tumors
US7696325B2 (en) 1999-03-10 2010-04-13 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Polypeptide inducing apoptosis
US20030099629A1 (en) * 1999-03-11 2003-05-29 Immunomedics, Inc. Recombinant onconase and chemical conjugates and fusion proteins of recombinant onconase
EP2039368A3 (en) 1999-04-30 2009-04-01 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Methods for preventing reactivation of latent virus and controlling virus replication
US8383081B2 (en) 1999-05-10 2013-02-26 Immunomedics, Inc. Anti-CD74 immunoconjugates and methods of use
US7829064B2 (en) 1999-05-10 2010-11-09 Immunomedics, Inc. Anti-CD74 immunoconjugates and methods
US8119101B2 (en) 1999-05-10 2012-02-21 The Ohio State University Anti-CD74 immunoconjugates and methods of use
US6221597B1 (en) 1999-05-21 2001-04-24 Rosetta Inpharmatics, Inc. Essential genes of yeast as targets for antifungal agents, herbicides, insecticides and anti-proliferative drugs
US6197517B1 (en) 1999-05-21 2001-03-06 Rosetta Inpharmatics, Inc. Essential genes of yeast as targets for antifungal agents, herbicides, insecticides and anti-proliferative drugs
US6200803B1 (en) 1999-05-21 2001-03-13 Rosetta Inpharmatics, Inc. Essential genes of yeast as targets for antifungal agents, herbicides, insecticides and anti-proliferative drugs
US6451284B1 (en) * 1999-08-11 2002-09-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Clinical parameters for determining hematologic toxicity prior to radioimmunotheraphy
ES2307526T3 (es) 1999-08-23 2008-12-01 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Potenciadores de la expresion del antigeno hm1.24.
US7118745B1 (en) 1999-09-27 2006-10-10 The Regents Of The University Of California Engineering antibodies that bind irreversibly
AU1190101A (en) * 1999-09-27 2001-04-30 Regents Of The University Of California, The Engineering antibodies that bind irreversibly
US20020028178A1 (en) * 2000-07-12 2002-03-07 Nabil Hanna Treatment of B cell malignancies using combination of B cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications
MXPA02009626A (es) * 2000-03-31 2003-05-14 Idec Pharma Corp Uso combinado de anticuerpos anti-citocina o antagonistas y anti-cd20 para el tratamiento de linfoma de celulas b.
EP1299128A2 (en) 2000-06-20 2003-04-09 Idec Pharmaceuticals Corporation Cold anti-cd20 antibody/radiolabeled anti-cd22 antibody combination
EP1297168A2 (en) * 2000-07-03 2003-04-02 Gala Design, Inc. Expression vectors
US20030224415A1 (en) * 2001-06-29 2003-12-04 Gala Design, Inc. Selection free growth of host cells containing multiple integrating vectors
US6852510B2 (en) * 2000-07-03 2005-02-08 Gala Design Inc Host cells containing multiple integrating vectors
US20040235173A1 (en) * 2000-07-03 2004-11-25 Gala Design, Inc. Production of host cells containing multiple integrating vectors by serial transduction
DE60133479T2 (de) 2000-10-20 2009-04-16 Chugai Seiyaku K.K. Modifizierter tpo-agonisten antikörper
US7090843B1 (en) * 2000-11-28 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. Recombinant anti-CD30 antibodies and uses thereof
CN100574803C (zh) 2001-01-31 2009-12-30 拜奥根Idec公司 免疫调节抗体在治疗肿瘤性疾病中的用途
US20030103971A1 (en) * 2001-11-09 2003-06-05 Kandasamy Hariharan Immunoregulatory antibodies and uses thereof
US20070065436A1 (en) * 2001-01-31 2007-03-22 Biogen Idec Inc. Anti-cd80 antibody having adcc activity for adcc mediated killing of b cell lymphoma cells alone or in combination with other therapies
US20030211107A1 (en) * 2002-01-31 2003-11-13 Kandasamy Hariharan Use of CD23 antagonists for the treatment of neoplastic disorders
US20020159996A1 (en) 2001-01-31 2002-10-31 Kandasamy Hariharan Use of CD23 antagonists for the treatment of neoplastic disorders
JP3986439B2 (ja) 2001-02-07 2007-10-03 中外製薬株式会社 造血器腫瘍の治療剤
US20030118585A1 (en) * 2001-10-17 2003-06-26 Agy Therapeutics Use of protein biomolecular targets in the treatment and visualization of brain tumors
US7321026B2 (en) * 2001-06-27 2008-01-22 Skytech Technology Limited Framework-patched immunoglobulins
US8287864B2 (en) * 2002-02-14 2012-10-16 Immunomedics, Inc. Structural variants of antibodies for improved therapeutic characteristics
WO2003068821A2 (en) 2002-02-14 2003-08-21 Immunomedics, Inc. Anti-cd20 antibodies and fusion proteins thereof and methods of use
JP2005526044A (ja) * 2002-02-21 2005-09-02 デューク ユニバーシティ 抗ｃｄ２２抗体を使用した治療方法
ATE417067T1 (de) 2002-03-01 2008-12-15 Immunomedics Inc Rs7 antikörper
EP2865688A1 (en) 2002-03-01 2015-04-29 Immunomedics, Inc. Internalizing anti-CD74 antibodies and methods of use
JP2006502091A (ja) 2002-03-01 2006-01-19 イミューノメディクス、インコーポレイテッド クリアランス速度を高めるための二重特異性抗体点変異
US9770517B2 (en) 2002-03-01 2017-09-26 Immunomedics, Inc. Anti-Trop-2 antibody-drug conjugates and uses thereof
US20160279239A1 (en) 2011-05-02 2016-09-29 Immunomedics, Inc. Subcutaneous administration of anti-cd74 antibody for systemic lupus erythematosus and autoimmune disease
AU2003209886A1 (en) * 2002-03-14 2003-09-22 Qlt Inc. Cancer associated araf1 protein kinase and its uses
US20030180292A1 (en) * 2002-03-14 2003-09-25 Idec Pharmaceuticals Treatment of B cell malignancies using anti-CD40L antibodies in combination with anti-CD20 antibodies and/or chemotherapeutics and radiotherapy
US20040038304A1 (en) * 2002-03-28 2004-02-26 Gala Design, Inc. Antibody libraries
US7384738B2 (en) * 2002-03-28 2008-06-10 Bremel Robert D Retrovirus-based genomic screening
GB0210121D0 (en) * 2002-05-02 2002-06-12 Celltech R&D Ltd Biological products
ES2593304T3 (es) 2002-05-02 2016-12-07 Wyeth Holdings Llc Conjugados de transportador derivado de caliqueamicina
KR101228124B1 (ko) * 2002-06-14 2013-01-31 이뮤노메딕스, 인코오포레이티드 단클론 항체 ｐａｍ4 및 췌장암의 진단 및 치료를 위한이들의 용도
EP2301968A3 (en) * 2002-06-14 2011-06-29 Immunomedics, Inc. Humanized monoclonal antibody HPAM4
US20060024289A1 (en) * 2002-10-02 2006-02-02 Ruggles Sandra W Cleavage of VEGF and VEGF receptor by wild-type and mutant proteases
US7939304B2 (en) * 2002-10-02 2011-05-10 Catalyst Biosciences, Inc. Mutant MT-SP1 proteases with altered substrate specificity or activity
JPWO2004033499A1 (ja) 2002-10-11 2006-02-09 中外製薬株式会社 細胞死誘導剤
ATE502051T1 (de) 2002-10-16 2011-04-15 Purdue Pharma Lp Antikörper, die an zellassoziiertes ca 125/0722p binden, und verfahren zu deren anwendung
US8034831B2 (en) * 2002-11-06 2011-10-11 Celgene Corporation Methods for the treatment and management of myeloproliferative diseases using 4-(amino)-2-(2,6-Dioxo(3-piperidyl)-isoindoline-1,3-dione in combination with other therapies
US7563810B2 (en) 2002-11-06 2009-07-21 Celgene Corporation Methods of using 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydroisoindol-2-yl)-piperidine-2,6-dione for the treatment and management of myeloproliferative diseases
US8420086B2 (en) 2002-12-13 2013-04-16 Immunomedics, Inc. Camptothecin conjugates of anti-CD22 antibodies for treatment of B cell diseases
US7534427B2 (en) * 2002-12-31 2009-05-19 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B cell malignancies and autoimmune diseases using unconjugated antibodies and conjugated antibodies and antibody combinations and fusion proteins
US7820787B2 (en) * 2003-01-23 2010-10-26 The Regents Of The University Of California Multi-functional antibodies
US7534431B2 (en) * 2003-01-31 2009-05-19 Immunomedics, Inc. Methods and compositions for administering therapeutic and diagnostic agents
JP2004279086A (ja) 2003-03-13 2004-10-07 Konica Minolta Holdings Inc 放射線画像変換パネル及び放射線画像変換パネルの製造方法
WO2004087763A1 (ja) * 2003-03-31 2004-10-14 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Ｃｄ２２に対する改変抗体およびその利用
AU2004255216B2 (en) * 2003-07-01 2010-08-19 Immunomedics, Inc. Multivalent carriers of bi-specific antibodies
EP2216342B1 (en) 2003-07-31 2015-04-22 Immunomedics, Inc. Anti-CD19 antibodies
US7902338B2 (en) * 2003-07-31 2011-03-08 Immunomedics, Inc. Anti-CD19 antibodies
DK1678314T3 (da) 2003-10-22 2012-12-03 Keck Graduate Inst Fremgangsmåde til syntetisering af heteromultimere polypeptider i gær ved anvendelse af en haploid parringsstrategi
MXPA06005104A (es) * 2003-11-05 2007-01-25 Palingen Inc Citotoxicidad de celulas b aumentada en anticuerpos de enlace a cdim.
US7259249B2 (en) 2003-12-01 2007-08-21 Immunomedics, Inc. Method for preparing conjugates of proteins and chelating agents
US20070281327A1 (en) * 2003-12-12 2007-12-06 Kiyotaka Nakano Methods of Screening for Modified Antibodies With Agonistic Activities
TW200530266A (en) * 2003-12-12 2005-09-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method of reinforcing antibody activity
JP4767016B2 (ja) * 2003-12-12 2011-09-07 中外製薬株式会社 細胞死誘導剤
TW200530269A (en) * 2003-12-12 2005-09-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-Mpl antibodies
US20050221429A1 (en) * 2004-01-16 2005-10-06 Cardinal Health Pts, Llc Host cells containing multiple integrating vectors comprising an amplifiable marker
US8491914B2 (en) * 2004-02-13 2013-07-23 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Dock-and-lock (DNL) complexes for delivery of interference RNA
US8435539B2 (en) * 2004-02-13 2013-05-07 Immunomedics, Inc. Delivery system for cytotoxic drugs by bispecific antibody pretargeting
US8652484B2 (en) 2004-02-13 2014-02-18 Immunomedics, Inc. Delivery system for cytotoxic drugs by bispecific antibody pretargeting
US20110020273A1 (en) * 2005-04-06 2011-01-27 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Bispecific Immunocytokine Dock-and-Lock (DNL) Complexes and Therapeutic Use Thereof
US8551480B2 (en) 2004-02-13 2013-10-08 Immunomedics, Inc. Compositions and methods of use of immunotoxins comprising ranpirnase (Rap) show potent cytotoxic activity
US9550838B2 (en) 2004-02-13 2017-01-24 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Dock-and-lock (DNL) complexes for therapeutic and diagnostic use
US9481878B2 (en) 2004-02-13 2016-11-01 Immunomedics, Inc. Compositions and methods of use of immunotoxins comprising ranpirnase (Rap) show potent cytotoxic activity
US20110064754A1 (en) * 2005-03-03 2011-03-17 Center For Molecular Medicine And Immunology Immunoconjugates Comprising Poxvirus-Derived Peptides and Antibodies Against Antigen-Presenting Cells for Subunit-Based Poxvirus Vaccines
US8883160B2 (en) 2004-02-13 2014-11-11 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Dock-and-lock (DNL) complexes for therapeutic and diagnostic use
EP2439284B1 (en) 2004-03-31 2019-05-08 The General Hospital Corporation Method to determine responsiveness of cancer to epidermal growth factor receptor targeting treatments
EP1757686A4 (en) * 2004-04-09 2008-03-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Cell death inducer
CA2562729C (en) * 2004-04-12 2013-11-12 Sandra Waugh Ruggles Cleavage of vegf and vegf receptor by wildtype and mutant mt-sp1
BRPI0510915A (pt) * 2004-06-04 2007-11-13 Genentech Inc método para o tratamento da esclerose múltipla e artigo manufaturado
RU2396980C2 (ru) * 2004-06-04 2010-08-20 Дженентек, Инк. Способ лечения волчанки
CN102702353A (zh) * 2004-07-09 2012-10-03 中外制药株式会社 抗-磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体
US20060062787A1 (en) * 2004-07-22 2006-03-23 Genentech, Inc. Method for treating Sjogren's syndrome
PL2213683T3 (pl) 2004-08-04 2013-10-31 Mentrik Biotech Llc WARIANTY REGIONÓW Fc
CN101087807A (zh) * 2004-10-05 2007-12-12 健泰科生物技术公司 治疗血管炎的方法
WO2006084092A2 (en) * 2005-02-03 2006-08-10 Raven Biotechnologies, Inc. Antibodies to oncostatin m receptor
US9707302B2 (en) 2013-07-23 2017-07-18 Immunomedics, Inc. Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer
US10058621B2 (en) 2015-06-25 2018-08-28 Immunomedics, Inc. Combination therapy with anti-HLA-DR antibodies and kinase inhibitors in hematopoietic cancers
JP5214252B2 (ja) 2005-03-03 2013-06-19 イミューノメディクス、インコーポレイテッド ヒト化ｌ２４３抗体
US20160355591A1 (en) 2011-05-02 2016-12-08 Immunomedics, Inc. Subcutaneous anti-hla-dr monoclonal antibody for treatment of hematologic malignancies
EP1870458B1 (en) 2005-03-31 2018-05-09 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha sc(Fv)2 STRUCTURAL ISOMERS
TWI671403B (zh) 2005-03-31 2019-09-11 中外製藥股份有限公司 控制組裝之多肽的製造方法
US8349332B2 (en) 2005-04-06 2013-01-08 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Multiple signaling pathways induced by hexavalent, monospecific and bispecific antibodies for enhanced toxicity to B-cell lymphomas and other diseases
US8475794B2 (en) 2005-04-06 2013-07-02 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy with anti-CD74 antibodies provides enhanced toxicity to malignancies, Autoimmune disease and other diseases
WO2006123724A1 (ja) * 2005-05-18 2006-11-23 The University Of Tokushima 抗hla抗体を利用した新規医薬品
AU2006251647A1 (en) * 2005-05-20 2006-11-30 Genentech, Inc. Pretreatment of a biological sample from an autoimmune disease subject
CA2610987C (en) 2005-06-10 2013-09-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Stabilizer for protein preparation comprising meglumine and use thereof
KR101360671B1 (ko) 2005-06-10 2014-02-07 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 ｓｃ（Ｆｖ）２를 함유하는 의약조성물
ES2776657T3 (es) 2005-06-14 2020-07-31 Amgen Inc Formulaciones de proteínas autotamponantes
KR20080025174A (ko) 2005-06-23 2008-03-19 메디뮨 인코포레이티드 응집 및 단편화 프로파일이 최적화된 항체 제제
WO2007016562A2 (en) * 2005-07-29 2007-02-08 Amgen Inc. Formulations that inhibit protein aggregation
US20070087005A1 (en) 2005-10-14 2007-04-19 Lazar Gregory A Anti-glypican-3 antibody
MY149159A (en) 2005-11-15 2013-07-31 Hoffmann La Roche Method for treating joint damage
EP2674440B1 (en) 2005-12-16 2019-07-03 IBC Pharmaceuticals, Inc. Multivalent immunoglobulin-based bioactive assemblies
EP1999148B8 (en) 2006-03-06 2014-03-05 Medlmmune, LLC Humanized anti-cd22 antibodies and their use in treatment of oncology, transplantation and autoimmune disease
EP2639242A3 (en) 2006-03-06 2013-10-16 MedImmune, Inc. Humanized anti-CD22 antibodies and their use in treatment of oncology, transplantation and autoimmune disease
KR100701923B1 (ko) 2006-03-15 2007-03-30 주식회사 녹십자 항- ｂ림프종 단일클론항체 및 이를 생산하는 하이브리도마세포주
DK2009101T3 (en) 2006-03-31 2018-01-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Antibody modification method for purification of a bispecific antibody
BRPI0711249A2 (pt) 2006-05-30 2012-03-13 Genentech, Inc. Anticorpos, polinucleotídeos, vetores, células hospedeira, métodos para fabricar um anticorpo, para detectar a presença de cd2 em uma amostra biológica, para tratar uma disfunção proliferativa de células b, para inibir proliferaçõa de células b, para tratar câncer, para fabricar um composto conjugado anti-corpo-droga. imunoconjugados,composições farmacêuticas, formulações farmacêuticas, conjugado anticorpo-droga, compostos conjugados anti-corpo-droga, teste para detectar células b e artigo de fabricação
AU2007307260B2 (en) 2006-07-05 2013-02-28 Catalyst Biosciences, Inc. Protease screening methods and proteases identified thereby
EP2048230A4 (en) * 2006-07-13 2010-01-20 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Cell death inducer
JP5398538B2 (ja) 2006-12-01 2014-01-29 メダレックス・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー Ｃｄ２２に結合するヒト抗体およびその使用
ES2426158T3 (es) 2007-01-22 2013-10-21 Genentech, Inc. Precipitación con polielectrolito y purificación de anticuerpos
US9023352B2 (en) 2007-02-20 2015-05-05 Tufts University Methods, compositions and kits for treating a subject using a recombinant heteromultimeric neutralizing binding protein
CL2008000719A1 (es) * 2007-03-12 2008-09-05 Univ Tokushima Chugai Seiyaku Agente terapeutico para cancer resistente a agentes quimioterapeuticos que comprende un anticuerpo que reconoce hla de clase i como ingrediente activo; composicion farmaceutica que comprende dicho anticuerpo; y metodo para tratar cancer resistente a
US7960139B2 (en) 2007-03-23 2011-06-14 Academia Sinica Alkynyl sugar analogs for the labeling and visualization of glycoconjugates in cells
KR101615715B1 (ko) 2007-05-21 2016-04-27 앨더바이오 홀딩스 엘엘씨 Ｉｌ-６에 대한 항체 및 이의 용도
US8062864B2 (en) 2007-05-21 2011-11-22 Alderbio Holdings Llc Nucleic acids encoding antibodies to IL-6, and recombinant production of anti-IL-6 antibodies
AU2008293425B2 (en) * 2007-08-31 2014-09-18 Amgen Inc. Solid-state protein formulation
EP2205280B1 (en) * 2007-09-27 2019-09-04 Amgen Inc. Pharmaceutical formulations
US8796206B2 (en) 2007-11-15 2014-08-05 Amgen Inc. Aqueous formulation of erythropoiesis stimulating protein stabilised by antioxidants for parenteral administration
US20090169550A1 (en) * 2007-12-21 2009-07-02 Genentech, Inc. Therapy of rituximab-refractory rheumatoid arthritis patients
US20090269339A1 (en) * 2008-04-29 2009-10-29 Genentech, Inc. Responses to immunizations in rheumatoid arthritis patients treated with a cd20 antibody
AU2009241589B2 (en) * 2008-04-29 2013-10-10 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
EP3002299A1 (en) 2008-06-03 2016-04-06 AbbVie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US9109026B2 (en) 2008-06-03 2015-08-18 Abbvie, Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
TW201012475A (en) 2008-07-08 2010-04-01 Abbott Lab Prostaglandin E2 dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
WO2010009271A2 (en) 2008-07-15 2010-01-21 Academia Sinica Glycan arrays on ptfe-like aluminum coated glass slides and related methods
NZ590330A (en) * 2008-07-21 2012-08-31 Immunomedics Inc Structural variants of anti-cd20 antibodies for improved therapeutic characteristics
TW201438738A (zh) 2008-09-16 2014-10-16 建南德克公司 治療進展型多發性硬化症之方法
JP5230344B2 (ja) * 2008-10-14 2013-07-10 日機装株式会社 熱交換装置
EP2376126B1 (en) 2008-11-25 2017-12-20 AlderBio Holdings LLC Antagonists of il-6 to prevent or treat thrombosis
WO2010075249A2 (en) 2008-12-22 2010-07-01 Genentech, Inc. A method for treating rheumatoid arthritis with b-cell antagonists
DK2396036T3 (en) 2009-02-13 2017-10-16 Immunomedics Inc Immune conjugates with an intracellular cleavable compound
US9238878B2 (en) 2009-02-17 2016-01-19 Redwood Bioscience, Inc. Aldehyde-tagged protein-based drug carriers and methods of use
RU2011140335A (ru) 2009-03-05 2013-04-10 Эбботт Лэборетриз Связывающие il-17 белки
AU2010289527C1 (en) * 2009-09-01 2014-10-30 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
PL2477648T3 (pl) 2009-09-15 2022-11-07 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Synergistyczna terapia anty-cd47 dla nowotworów hematologicznych
IN2012DN01663A (ja) 2009-09-16 2015-06-05 Immunomedics Inc
US20110070227A1 (en) * 2009-09-18 2011-03-24 Anna-Marie Novotney-Barry Treatment of Autoimmune and Inflammatory Diseases
BR112012008833A2 (pt) * 2009-10-15 2015-09-08 Abbott Lab imunoglobulinas de dominio variavel duplo e usos das mesmas
US9662271B2 (en) 2009-10-23 2017-05-30 Amgen Inc. Vial adapter and system
UY32979A (es) * 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
US10087236B2 (en) 2009-12-02 2018-10-02 Academia Sinica Methods for modifying human antibodies by glycan engineering
ES2978177T3 (es) 2009-12-02 2024-09-06 Immunomedics Inc Combinación de radio inmunoterapia y conjugados anticuerpo-fármaco para mejorar la terapia contra el cáncer
US11377485B2 (en) 2009-12-02 2022-07-05 Academia Sinica Methods for modifying human antibodies by glycan engineering
EP2523680A4 (en) * 2010-01-11 2013-06-19 Ct Molecular Med & Immunology REINFORCED CYTOTOXICITY OF ANTIBODIES TO CD74 AND HLA-DR WITH INTERFERON GAMMA
MX341687B (es) 2010-02-10 2016-08-30 Immunogen Inc "anticuerpos cd20 y su utilización".
KR101882523B1 (ko) 2010-03-26 2018-07-26 트러스티스 오브 다트마우스 칼리지 Ｖｉｓｔａ 조절 ｔ 세포 매개 단백질, ｖｉｓｔａ 결합제 및 그것의 용도
US10745467B2 (en) 2010-03-26 2020-08-18 The Trustees Of Dartmouth College VISTA-Ig for treatment of autoimmune, allergic and inflammatory disorders
US20150231215A1 (en) 2012-06-22 2015-08-20 Randolph J. Noelle VISTA Antagonist and Methods of Use
US10338069B2 (en) 2010-04-12 2019-07-02 Academia Sinica Glycan arrays for high throughput screening of viruses
CN104777301B (zh) 2010-05-10 2018-04-20 中央研究院 具有抗流感活性的扎那米韦膦酸酯同类物及流感病毒的奥司他韦易感性的测定
KR101539684B1 (ko) 2010-05-14 2015-07-27 애브비 인코포레이티드 Ｉｌ－１ 결합 단백질
PL2575935T5 (pl) 2010-06-07 2023-12-11 Amgen Inc. Urządzenie do podawania leku
US20130189268A1 (en) 2010-06-22 2013-07-25 Precision Biologics, Inc. Colon and pancreas cancer specific antigens and antibodies
UY33492A (es) 2010-07-09 2012-01-31 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
NZ607480A (en) 2010-08-03 2014-10-31 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
CA2807552A1 (en) 2010-08-06 2012-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
PH12013500337A1 (en) 2010-08-26 2017-08-23 Abbvie Inc Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US9068014B2 (en) 2010-09-23 2015-06-30 Precision Biologics, Inc. Colon and pancreas cancer peptidomimetics
MX2013003681A (es) 2010-10-01 2013-11-20 Moderna Therapeutics Inc Ácidos nucleicos manipulados y métodos de uso de los mismos.
KR20220070586A (ko) 2010-11-08 2022-05-31 제넨테크, 인크. 피하 투여용 항―ｉｌ―6 수용체 항체
DK2643018T3 (da) 2010-11-23 2021-01-18 Vitaeris Inc Anti-il-6-antistoffer til behandling af oral mucositis
MX359070B (es) 2010-12-01 2018-09-13 Alderbio Holdings Llc Composiciones anti-ngf y uso de las mismas.
EP2655417A2 (en) 2010-12-21 2013-10-30 AbbVie Inc. Il-1 -alpha and -beta bispecific dual variable domain immunoglobulins and their use
KR20140016262A (ko) 2011-01-14 2014-02-07 레드우드 바이오사이언스 인코포레이티드 알데하이드-태깅된 면역글로불린 폴리펩타이드 및 이의 사용 방법
DE12722942T1 (de) 2011-03-31 2021-09-30 Modernatx, Inc. Freisetzung und formulierung von manipulierten nukleinsäuren
CA2831100C (en) 2011-03-31 2020-02-18 Mark Dominis Holt Vial adapter and system
SI2699293T1 (sl) 2011-04-20 2019-05-31 Amgen Inc. Avtoinjekcijski aparat
AU2012250924B2 (en) 2011-05-02 2017-05-25 Immunomedics, Inc. Ultrafiltration concentration of allotype selected antibodies for small-volume administration
CA2837000C (en) 2011-05-20 2021-09-14 Alderbio Holdings Llc High-purity production of multi-subunit proteins such as antibodies in transformed microbes such as pichia pastoris
NZ732970A (en) 2011-05-20 2022-08-26 H Lundbeck As Use of anti-cgrp antibodies and antibody fragments to prevent or inhibit photophobia or light aversion in subjects in need thereof, especially migraine sufferers
RS58621B1 (sr) 2011-05-20 2019-05-31 Alderbio Holdings Llc Anti-cgrp kompozicije i njihova upotreba
JP6189832B2 (ja) 2011-05-20 2017-08-30 アルダーバイオ・ホールディングズ・エルエルシー 慢性および急性の下痢を治療または予防するための抗ｃｇｒｐ若しくは抗ｃｇｒｐ−ｒの抗体または抗体断片の使用
CN103857699B (zh) 2011-05-24 2016-08-31 泽恩格尼亚股份有限公司 多价和单价多特异性复合物及其用途
CA2837184C (en) 2011-05-25 2021-09-21 Innate Pharma, S.A. Anti-kir antibodies for the treatment of inflammatory and autoimmune disorders
BR112014003841B1 (pt) 2011-08-19 2022-02-15 H. Lundbeck A/S Método para identificar uma célula hospedeira diploide de pichia pastoris que produz um anticorpo desejado com uma maior pureza
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
SI3682905T1 (sl) 2011-10-03 2022-04-29 Modernatx, Inc. Modificirani nukleozidi, nukleotidi in nukleinske kisline ter njihove uporabe
DK3045189T3 (en) 2011-10-14 2018-06-18 Amgen Inc Injector and mounting method
SG11201401791WA (en) 2011-10-24 2014-08-28 Abbvie Inc Immunobinders directed against sclerostin
WO2013085893A1 (en) 2011-12-05 2013-06-13 Immunomedics, Inc. Therapeutic use of anti-cd22 antibodies for inducing trogocytosis
US9757458B2 (en) 2011-12-05 2017-09-12 Immunomedics, Inc. Crosslinking of CD22 by epratuzumab triggers BCR signaling and caspase-dependent apoptosis in hematopoietic cancer cells
US20130156849A1 (en) 2011-12-16 2013-06-20 modeRNA Therapeutics Modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
WO2013096455A1 (en) 2011-12-20 2013-06-27 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods for diagnosing and treating oncogenic kras-associated cancer
CA2861610A1 (en) 2011-12-30 2013-07-04 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against il-13 and/or il-17
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
HK1206601A1 (en) 2012-04-02 2016-01-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of biologics and proteins associated with human disease
US10501512B2 (en) 2012-04-02 2019-12-10 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides
US10130714B2 (en) 2012-04-14 2018-11-20 Academia Sinica Enhanced anti-influenza agents conjugated with anti-inflammatory activity
MX361533B (es) 2012-04-26 2018-12-07 Bioatla Llc Anticuerpos anti-cd22.
US10138479B2 (en) 2012-05-24 2018-11-27 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Targeting the glutamine to pyruvate pathway for treatment of oncogenic Kras-associated cancer
US9738724B2 (en) 2012-06-08 2017-08-22 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
US9890215B2 (en) 2012-06-22 2018-02-13 King's College London Vista modulators for diagnosis and treatment of cancer
EP3421486B1 (en) 2012-06-22 2023-09-27 The Trustees Of Dartmouth College Novel vista-ig constructs and the use of vista-ig for treatment of autoimmune, allergic and inflammatory disorders
TW201402608A (zh) 2012-07-12 2014-01-16 Abbvie Inc Ｉｌ－１結合蛋白質
US20150285802A1 (en) 2012-07-18 2015-10-08 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods for treating, preventing and predicting risk of developing breast cancer
EP3539563A1 (en) 2012-07-19 2019-09-18 Redwood Bioscience, Inc. Antibody specific for cd22 and methods of use thereof
CN109513003A (zh) 2012-08-14 2019-03-26 Ibc药品公司 用于治疗疾病的t-细胞重定向双特异性抗体
US9914956B2 (en) 2012-08-18 2018-03-13 Academia Sinica Cell-permeable probes for identification and imaging of sialidases
JP6211084B2 (ja) 2012-08-21 2017-10-11 アカデミア シニカＡｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ ベンゾシクロオクチン化合物およびその使用
HRP20190878T1 (hr) 2012-08-31 2019-07-26 Sutro Biopharma, Inc. Modificirane aminokiseline koje sadrže azidnu grupu
CA2884704C (en) 2012-09-07 2023-04-04 Randolph J. Noelle Vista modulators for diagnosis and treatment of cancer
PT2892550T (pt) 2012-09-07 2020-03-27 Coherus Biosciences Inc Formulações aquosas estáveis de adalimumab
PL2906251T3 (pl) 2012-10-12 2018-02-28 Adc Therapeutics Sa Koniugaty pirolobenzodiazepina-przeciwciało anty-CD22
TW201811825A (zh) 2012-11-01 2018-04-01 美商艾伯維有限公司 抗-ｖｅｇｆ／ｄｌｌ４雙重可變區域免疫球蛋白及其用途
ES2860954T3 (es) 2012-11-21 2021-10-05 Amgen Inc Dispositivo de administración de fármacos
SI2922554T1 (sl) 2012-11-26 2022-06-30 Modernatx, Inc. Terminalno modificirana RNA
US10413539B2 (en) 2012-12-13 2019-09-17 Immunomedics, Inc. Therapy for metastatic urothelial cancer with the antibody-drug conjugate, sacituzumab govitecan (IMMU-132)
US20240139324A1 (en) 2012-12-13 2024-05-02 Immunomedics, Inc. Dosages of immunoconjugates of antibodies and sn-38 for improved efficacy and decreased toxicity
DK2900277T3 (da) 2012-12-13 2022-04-04 Immunomedics Inc Doser af immunokonjugater af antistoffer og sn-38 til forbedret effektivitet og reduceret toksicitet
US9931417B2 (en) 2012-12-13 2018-04-03 Immunomedics, Inc. Antibody-SN-38 immunoconjugates with a CL2A linker
US10137196B2 (en) 2012-12-13 2018-11-27 Immunomedics, Inc. Dosages of immunoconjugates of antibodies and SN-38 for improved efficacy and decreased toxicity
WO2015012904A2 (en) 2012-12-13 2015-01-29 Immunomedics, Inc. Antibody-sn-38 immunoconjugates with a cl2a linker
US9492566B2 (en) 2012-12-13 2016-11-15 Immunomedics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
US10206918B2 (en) 2012-12-13 2019-02-19 Immunomedics, Inc. Efficacy of anti-HLA-DR antiboddy drug conjugate IMMU-140 (hL243-CL2A-SN-38) in HLA-DR positive cancers
US10744129B2 (en) 2012-12-13 2020-08-18 Immunomedics, Inc. Therapy of small-cell lung cancer (SCLC) with a topoisomerase-I inhibiting antibody-drug conjugate (ADC) targeting Trop-2
US12310958B2 (en) 2012-12-13 2025-05-27 Immunomedics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
AU2013364065B2 (en) 2012-12-21 2018-10-04 Altrubio Inc. Hydrophilic self-immolative linkers and conjugates thereof
TWI693073B (zh) 2012-12-21 2020-05-11 日商中外製藥股份有限公司 對ｇｐｃ３標的治療劑療法為有效之患者投與的ｇｐｃ３標的治療劑
EP2938633B1 (en) 2012-12-28 2018-02-07 Precision Biologics, Inc. Humanized monoclonal antibodies and methods of use for the diagnosis and treatment of colon and pancreas cancer
ES2834113T3 (es) 2013-03-15 2021-06-16 H Lundbeck As Purificación de anticuerpos y monitorización de la pureza
KR102295834B1 (ko) 2013-03-15 2021-08-30 암젠 인크 인체 윤곽 적응성을 가진 자기 주사기 장치
US10492990B2 (en) 2013-03-15 2019-12-03 Amgen Inc. Drug cassette, autoinjector, and autoinjector system
CN105121652B (zh) 2013-03-15 2020-07-28 奥尔德生物制药公司 用于在酵母和其它转化细胞中高产量表达多肽的温度变动法
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
CA2904448A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Tariq Ghayur Dual specific binding proteins directed against il-1.beta. and/or il-17
EP2968760B1 (en) 2013-03-15 2024-01-03 Amgen Inc. Drug cassette, autoinjector, and autoinjector system
BR112015023752B1 (pt) 2013-03-15 2023-11-14 Zyngenia, Inc. Domínio de reconhecimento modular (mrd), complexo compreendendo mrd e cetuximabe, usos do complexo para inibir a angiogênese e tratar câncer e composição farmacêutica compreendendo o dito complexo
CA2897825C (en) 2013-03-22 2022-05-24 Scott R. Gibson Injector and method of assembly
EP3013365B1 (en) 2013-06-26 2019-06-05 Academia Sinica Rm2 antigens and use thereof
EP3013347B1 (en) 2013-06-27 2019-12-11 Academia Sinica Glycan conjugates and use thereof
TWI712419B (zh) 2013-07-03 2020-12-11 美商艾爾德生物製藥股份有限公司 使用抗ｃｇｒｐ抗體之葡萄糖代謝的調節
ES2658039T3 (es) 2013-07-10 2018-03-08 Sutro Biopharma, Inc. Anticuerpos que comprenden múltiples residuos de aminoácidos no naturales sitio-específicos, métodos para su preparación y métodos de uso
US11253606B2 (en) 2013-07-23 2022-02-22 Immunomedics, Inc. Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, Bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer
CA2923579C (en) 2013-09-06 2023-09-05 Academia Sinica Human inkt cell activation using glycolipids with altered glycosyl groups
EP3050896B1 (en) 2013-09-27 2021-07-07 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for producing polypeptide heteromultimer
EP3052106A4 (en) 2013-09-30 2017-07-19 ModernaTX, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
US10130590B2 (en) 2013-10-01 2018-11-20 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods of treating cancer with atovaquone-related compounds
SG11201602503TA (en) 2013-10-03 2016-04-28 Moderna Therapeutics Inc Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
WO2015054658A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
AU2014340171B2 (en) 2013-10-24 2019-05-30 Amgen Inc. Injector and method of assembly
CA3168888A1 (en) 2013-10-24 2015-04-30 Amgen Inc. Drug delivery system with temperature-sensitive control
AU2014372309C1 (en) 2013-12-24 2017-12-14 Janssen Pharmaceutica Nv Anti-VISTA antibodies and fragments
US11014987B2 (en) 2013-12-24 2021-05-25 Janssen Pharmaceutics Nv Anti-vista antibodies and fragments, uses thereof, and methods of identifying same
JP6560682B2 (ja) 2014-01-08 2019-08-14 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー 小細胞肺癌に対する標的療法
AU2015206370A1 (en) 2014-01-16 2016-07-07 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
US10150818B2 (en) 2014-01-16 2018-12-11 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
WO2015119906A1 (en) 2014-02-05 2015-08-13 Amgen Inc. Drug delivery system with electromagnetic field generator
ES2978993T3 (es) 2014-02-21 2024-09-23 Ibc Pharmaceuticals Inc Terapia de enfermedades mediante la inducción de la respuesta inmunitaria a las células que expresan Trop-2
WO2015130416A1 (en) 2014-02-25 2015-09-03 Immunomedics, Inc. Humanized rfb4 anti-cd22 antibody
AU2015237864B2 (en) 2014-03-24 2020-12-03 Cancer Research Technology Limited Modified antibodies containing modified IgG2 domains which elicit agonist or antagonistic properties and use thereof
JP6562942B2 (ja) 2014-03-27 2019-08-28 アカデミア シニカＡｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ 反応性標識化合物およびその使用
WO2015149006A2 (en) 2014-03-27 2015-10-01 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Compositions and methods for modulating ncoa4-mediated autophagic targeting of ferritin
AU2015248807B2 (en) 2014-04-17 2021-07-22 Boehringer Ingelheim Rcv Gmbh & Co Kg Recombinant host cell for expressing proteins of interest
CA2948369C (en) 2014-04-17 2023-09-26 Boehringer Ingelheim Rcv Gmbh & Co Kg Recombinant host cell engineered to overexpress helper proteins
WO2015171777A1 (en) 2014-05-07 2015-11-12 Amgen Inc. Autoinjector with shock reducing elements
KR102409014B1 (ko) 2014-05-08 2022-06-14 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 Gpc3 표적 치료제 요법이 유효한 환자에게 투여되는 gpc3 표적 치료제
KR20220151036A (ko) 2014-05-27 2022-11-11 아카데미아 시니카 항-ｃｄ20 글리코항체 및 이의 용도
US10118969B2 (en) 2014-05-27 2018-11-06 Academia Sinica Compositions and methods relating to universal glycoforms for enhanced antibody efficacy
DK3149045T3 (da) 2014-05-27 2023-03-06 Academia Sinica Sammensætninger og fremgangsmåder vedrørende universelle glycoformer til forbedret antistofeffekt
US10005847B2 (en) 2014-05-27 2018-06-26 Academia Sinica Anti-HER2 glycoantibodies and uses thereof
AU2015267044A1 (en) 2014-05-28 2016-12-15 Academia Sinica Anti-TNF-alpha glycoantibodies and uses thereof
KR102416904B1 (ko) 2014-06-03 2022-07-04 암겐 인코포레이티드 약물 전달 디바이스에 의해 수집된 데이터를 원격으로 프로세싱하기 위한 시스템들 및 방법들
EP2952584A1 (en) 2014-06-04 2015-12-09 Boehringer Ingelheim RCV GmbH & Co KG Improved protein production
MX389695B (es) 2014-06-11 2025-03-20 Kathy A Green Uso de agonistas y antagonistas vista para suprimir o aumentar la inmunidad humoral.
US9950077B2 (en) 2014-06-20 2018-04-24 Bioalliance C.V. Anti-folate receptor alpha (FRA) antibody-drug conjugates and methods of using thereof
BR112016029842A2 (pt) * 2014-06-20 2017-10-24 Abgenomics Int Inc conjugados de anticorpo anti-cd22-fármaco e métodos de uso dos mesmos
WO2015200260A1 (en) 2014-06-24 2015-12-30 Immunomedics, Inc. Anti-histone therapy for vascular necrosis in severe glomerulonephritis
WO2016040369A2 (en) 2014-09-08 2016-03-17 Academia Sinica HUMAN iNKT CELL ACTIVATION USING GLYCOLIPIDS
MA40764A (fr) 2014-09-26 2017-08-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agent thérapeutique induisant une cytotoxicité
SI3204018T1 (sl) 2014-10-07 2021-11-30 Immunomedics, Inc. Neoadjuvantna uporaba konjugatov protitelo-zdravilo
US10695506B2 (en) 2014-10-14 2020-06-30 Amgen Inc. Drug injection device with visual and audio indicators
WO2016090347A1 (en) 2014-12-05 2016-06-09 Immunext, Inc. Identification of vsig8 as the putative vista receptor and its use thereof to produce vista/vsig8 modulators
WO2016094602A1 (en) 2014-12-10 2016-06-16 Tufts University Vhh based binding antibodies for anthrax and botulinum toxins and methods of making and using therefor
US10093733B2 (en) 2014-12-11 2018-10-09 Abbvie Inc. LRP-8 binding dual variable domain immunoglobulin proteins
US11357916B2 (en) 2014-12-19 2022-06-14 Amgen Inc. Drug delivery device with live button or user interface field
US10047157B2 (en) 2014-12-19 2018-08-14 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Humanized anti-ACTH antibodies and use thereof
US10799630B2 (en) 2014-12-19 2020-10-13 Amgen Inc. Drug delivery device with proximity sensor
US10495645B2 (en) 2015-01-16 2019-12-03 Academia Sinica Cancer markers and methods of use thereof
US9975965B2 (en) 2015-01-16 2018-05-22 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
WO2016118754A1 (en) 2015-01-21 2016-07-28 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Macrophages eat cancer cells using their own calreticulin as a guide
TWI736523B (zh) 2015-01-24 2021-08-21 中央研究院 新穎聚醣結合物及其使用方法
AU2016220141B2 (en) 2015-02-17 2018-07-12 Amgen Inc. Drug delivery device with vacuum assisted securement and/or feedback
ES2905870T3 (es) 2015-02-27 2022-04-12 Amgen Inc Dispositivo de suministro de fármacos que tiene un mecanismo de protección de aguja con un umbral de resistencia ajustable al movimiento de la protección de aguja
CN107428837A (zh) 2015-04-22 2017-12-01 免疫医疗公司 循环trop‑2阳性癌细胞的分离、检测、诊断和/或鉴定
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
EP3722314A1 (en) 2015-06-24 2020-10-14 Janssen Pharmaceutica NV Anti-vista antibodies and fragments
US10195175B2 (en) 2015-06-25 2019-02-05 Immunomedics, Inc. Synergistic effect of anti-Trop-2 antibody-drug conjugate in combination therapy for triple-negative breast cancer when used with microtubule inhibitors or PARP inhibitors
CN114796501A (zh) 2015-06-25 2022-07-29 免疫医疗公司 抗体与治疗剂的组合治疗癌症的方法
EP3318879B1 (en) 2015-07-01 2020-10-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Gpc3-targeting therapeutic agent which is administered to patient for whom the gpc3-targeting therapeutic agent is effective
SI3316885T1 (sl) 2015-07-01 2021-09-30 Immunomedics, Inc. Imunokonjugati protitelo-SN-38 z linkerjem CL2A
SI4209499T1 (sl) 2015-08-13 2025-01-31 Amgen Inc. Globinsko nabito filtriranje proteinov, ki vežejo antigen
WO2017039786A1 (en) 2015-09-02 2017-03-09 Amgen Inc. Syringe assembly adapter for a syringe
US11229702B1 (en) 2015-10-28 2022-01-25 Coherus Biosciences, Inc. High concentration formulations of adalimumab
US12102689B2 (en) 2015-11-09 2024-10-01 R.P. Scherer Technologies, Llc Anti-CD22 antibody-maytansine conjugates and methods of use thereof
ES2755717T3 (es) 2015-12-09 2020-04-23 Amgen Inc Autoinyector con tapa de señalización
BR112018009312A8 (pt) 2015-12-28 2019-02-26 Chugai Pharmaceutical Co Ltd método para promover eficiência de purificação de polipeptídeo contendo região de fc
US11154661B2 (en) 2016-01-06 2021-10-26 Amgen Inc. Auto-injector with signaling electronics
CN108713026B (zh) 2016-01-08 2023-01-06 美国全心医药生技股份有限公司 四价抗psgl-1抗体及其用途
CN108601841A (zh) 2016-02-10 2018-09-28 免疫医疗公司 Abcg2抑制剂与sacituzumab govitecan(immu-132)的组合克服表达trop-2的癌中对sn-38的抗性
US10899836B2 (en) 2016-02-12 2021-01-26 Janssen Pharmaceutica Nv Method of identifying anti-VISTA antibodies
AU2017231749A1 (en) 2016-03-08 2018-09-20 Academia Sinica Methods for modular synthesis of N-glycans and arrays thereof
WO2017160799A1 (en) 2016-03-15 2017-09-21 Amgen Inc. Reducing probability of glass breakage in drug delivery devices
KR20190005873A (ko) 2016-04-15 2019-01-16 앨더 바이오파마슈티컬즈, 인코포레이티드 항-pacap 항체 및 그의 용도
KR20230119259A (ko) 2016-04-15 2023-08-16 이뮤넥스트, 인크. 항-인간 vista 항체 및 이의 용도
US11071782B2 (en) 2016-04-20 2021-07-27 Coherus Biosciences, Inc. Method of filling a container with no headspace
CN109071634A (zh) 2016-04-26 2018-12-21 R.P.谢勒技术有限责任公司 抗体偶联物及其制备和使用方法
EP3448260A4 (en) 2016-04-27 2019-10-09 Immunomedics, Inc. EFFICACY OF ANTI-TROP-2 SN-38 ANTIBODY CONJUGATES FOR THE THERAPY OF REZIDIVATED / REFRACTORY TUMORS AGAINST CHECKPOINT INHIBITORS
US11541168B2 (en) 2016-04-29 2023-01-03 Amgen Inc. Drug delivery device with messaging label
US11389588B2 (en) 2016-05-02 2022-07-19 Amgen Inc. Syringe adapter and guide for filling an on-body injector
WO2017197222A1 (en) 2016-05-13 2017-11-16 Amgen Inc. Vial sleeve assembly
EP3458988B1 (en) 2016-05-16 2023-10-18 Amgen Inc. Data encryption in medical devices with limited computational capability
EP3465124B1 (en) 2016-06-03 2026-02-11 Amgen Inc. Impact testing apparatuses and methods for drug delivery devices
EP3472197A1 (en) 2016-06-15 2019-04-24 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies with engineered ch2 domains, compositions thereof and methods of using the same
US11285266B2 (en) 2016-07-01 2022-03-29 Amgen Inc. Drug delivery device having minimized risk of component fracture upon impact events
WO2018034784A1 (en) 2016-08-17 2018-02-22 Amgen Inc. Drug delivery device with placement detection
CN109963868B (zh) 2016-08-22 2023-11-14 醣基生医股份有限公司 抗体、结合片段及使用方法
WO2018075818A1 (en) 2016-10-21 2018-04-26 Amgen Inc. Pharmaceutical formulations and methods of making the same
WO2018081234A1 (en) 2016-10-25 2018-05-03 Amgen Inc. On-body injector
EP3554515A4 (en) 2016-12-15 2020-08-26 Duke University B10 REGULATORY CELL DEPLETION ANTIBODIES AND METHODS AND THEIR USE IN COMBINATION WITH IMMUNITY CHECKPOINT INHIBITORS
US20190358411A1 (en) 2017-01-17 2019-11-28 Amgen Inc. Injection devices and related methods of use and assembly
CN110461872B (zh) 2017-01-26 2023-09-26 再鼎医药(上海)有限公司 Cd47抗原结合单元及其用途
MX2019009625A (es) 2017-02-17 2019-10-09 Amgen Inc Dispositivo de administracion de farmacos con trayectoria de flujo de fluido esteril y metodo relacionado de ensamblaje.
JP7280189B2 (ja) 2017-02-17 2023-05-23 アムジエン・インコーポレーテツド 薬物送達装置用の挿入機構
JP2020508803A (ja) 2017-03-06 2020-03-26 アムジエン・インコーポレーテツド 作動防止特徴部を備える薬物送達デバイス
IL268478B2 (en) 2017-03-07 2023-10-01 Amgen Inc Inserting a needle using super pressure
AU2018230486B2 (en) 2017-03-09 2023-05-11 Amgen Inc. Insertion mechanism for drug delivery device
CN110392570A (zh) 2017-03-27 2019-10-29 免疫医疗公司 用沙妥珠单抗格维替康和rad51抑制剂治疗表达trop-2的三阴性乳腺癌
KR20240042212A (ko) 2017-03-28 2024-04-01 암겐 인코포레이티드 플런저 로드 및 주사기 조립 시스템 및 방법
EP3606964A4 (en) 2017-04-03 2020-12-09 Immunomedics, Inc. SUBCUTANE ADMINISTRATION OF ANTIBODY DRUG CONJUGATES FOR CANCER THERAPY
CN110709121B (zh) 2017-06-08 2022-06-24 安进公司 扭矩驱动式药物递送装置
EP3634539A1 (en) 2017-06-08 2020-04-15 Amgen Inc. Syringe assembly for a drug delivery device and method of assembly
MA49447A (fr) 2017-06-22 2020-04-29 Amgen Inc Réduction des impacts/chocs d'activation d'un dispositif
US11395880B2 (en) 2017-06-23 2022-07-26 Amgen Inc. Electronic drug delivery device
ES2972207T3 (es) 2017-07-14 2024-06-11 Amgen Inc Sistema de inserción-retracción de agujas con sistema de resorte de torsión doble
EP4292576A3 (en) 2017-07-21 2024-01-17 Amgen Inc. Gas permeable sealing member for drug container and methods of assembly
US11617837B2 (en) 2017-07-25 2023-04-04 Amgen Inc. Drug delivery device with gear module and related method of assembly
WO2019023247A1 (en) 2017-07-25 2019-01-31 Immutics, Inc. TREATMENT OF CANCER BY BLOCKING THE INTERACTION OF TIM-3 AND ITS LIGAND
JP7242562B2 (ja) 2017-07-25 2023-03-20 アムジエン・インコーポレーテツド 容器アクセスシステムを有する薬物送達デバイス及び関連する組立方法
MA49838A (fr) 2017-08-09 2020-06-17 Amgen Inc Systèm de administration de médicaments avec pression hydraulique-pneumatique de chambre
MA49897A (fr) 2017-08-18 2020-06-24 Amgen Inc Injecteur sur-corps avec patch adhésif stérile
US11103636B2 (en) 2017-08-22 2021-08-31 Amgen Inc. Needle insertion mechanism for drug delivery device
WO2019070472A1 (en) 2017-10-04 2019-04-11 Amgen Inc. FLOW ADAPTER FOR MEDICATION DELIVERY DEVICE
US11813426B2 (en) 2017-10-06 2023-11-14 Amgen Inc. Drug delivery device including seal member for needle of syringe
MA50348A (fr) 2017-10-09 2020-08-19 Amgen Inc Dispositif d'administration de médicament comprenant un ensemble d'entraînement et procédé d'assemblage associé
US11305026B2 (en) 2017-11-03 2022-04-19 Amgen Inc. Systems and approaches for sterilizing a drug delivery device
EP3707075A1 (en) 2017-11-06 2020-09-16 Amgen Inc. Fill-finish assemblies and related methods
ES2994389T3 (en) 2017-11-06 2025-01-23 Amgen Inc Drug delivery device with placement and flow sensing
CA3079665A1 (en) 2017-11-10 2019-05-16 Amgen Inc. Plungers for drug delivery devices
EP3710089A1 (en) 2017-11-16 2020-09-23 Amgen Inc. Autoinjector with stall and end point detection
CA3079540A1 (en) 2017-11-16 2019-05-23 Amgen Inc. Door latch mechanism for drug delivery device
US10835685B2 (en) 2018-05-30 2020-11-17 Amgen Inc. Thermal spring release mechanism for a drug delivery device
US11083840B2 (en) 2018-06-01 2021-08-10 Amgen Inc. Modular fluid path assemblies for drug delivery devices
CN112469454B (zh) 2018-07-24 2024-01-26 安进公司 用于施用药物的输送装置
CN112351804A (zh) 2018-07-24 2021-02-09 安进公司 用于施用药物的输送装置
WO2020023336A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Amgen Inc. Hybrid drug delivery devices with grip portion
US12303677B2 (en) 2018-07-24 2025-05-20 Amgen Inc. Hybrid drug delivery devices with optional grip portion and related method of preparation
US12109389B2 (en) 2018-07-31 2024-10-08 Amgen Inc. Fluid path assembly for a drug delivery device
AU2019347710B2 (en) 2018-09-24 2025-05-08 Amgen Inc. Interventional dosing systems and methods
AU2019348440B2 (en) 2018-09-26 2024-09-12 Ascendis Pharma A/S Degradable hyaluronic acid hydrogels
AU2019350660B2 (en) 2018-09-28 2024-09-26 Amgen Inc. Muscle wire escapement activation assembly for a drug delivery device
EP3860685A1 (en) 2018-10-02 2021-08-11 Amgen Inc. Injection systems for drug delivery with internal force transmission
AR116607A1 (es) 2018-10-05 2021-05-26 Amgen Inc Dispositivo de administración de fármacos con indicador de dosis
MX2021004219A (es) 2018-10-15 2021-05-27 Amgen Inc Dispositivo de administracion de farmacos con mecanismo de amortiguacion.
EP3866889A1 (en) 2018-10-15 2021-08-25 Amgen Inc. Platform assembly process for drug delivery device
TWI831847B (zh) 2018-11-01 2024-02-11 美商安進公司 部分針頭縮回之藥物遞送裝置及其操作方法
US12485219B2 (en) 2018-11-01 2025-12-02 Amgen Inc. Drug delivery devices with partial drug delivery member retraction
MA54048A (fr) 2018-11-01 2022-02-09 Amgen Inc Dispositifs d'administration de médicament avec rétraction partielle de l'organe d'administration de médicament
JP2022523333A (ja) 2019-01-30 2022-04-22 トゥルーバインディング，インコーポレイテッド 抗ｇａｌ３抗体およびその使用
WO2020185763A1 (en) * 2019-03-11 2020-09-17 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Cd22 antibodies and methods of using the same
AU2020263289B2 (en) 2019-04-24 2025-05-22 Amgen Inc. Syringe sterilization verification assemblies and methods
EP4004044A1 (en) 2019-07-24 2022-06-01 H. Lundbeck A/S Anti-mglur5 antibodies and uses thereof
CA3148261A1 (en) 2019-08-23 2021-03-04 Amgen Inc. Drug delivery device with configurable needle shield engagement components and related methods
EP4684799A2 (en) 2019-12-06 2026-01-28 TrueBinding, Inc. Antibodies that disrupt the interaction of gal3 and insulin receptor or integrins and methods of use thereof
WO2021178597A1 (en) 2020-03-03 2021-09-10 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific glutamine tags, methods of their preparation and methods of their use
AU2020202454A1 (en) 2020-04-06 2021-10-21 H. Lundbeck A/S Treatment of most bothersome symptom (MBS) associated with migraine using anti-CGRP antibodies
EP4157338A4 (en) 2020-05-26 2024-11-13 TrueBinding, Inc. METHOD FOR TREATING INFLAMMATORY DISEASES BY GALECTIN-3 BLOCKING
WO2022006219A2 (en) 2020-07-02 2022-01-06 Trustees Of Tufts College Vhh polypeptides that bind to clostridium difficile toxin b and methods of use thereof
US20230374591A1 (en) 2020-10-08 2023-11-23 The Trustees Of Dartmouth College Methods and agents for treating, preventing, diagnosing, and evaluating therapy for fibrotic, autoimmune, and inflammatory conditions
CN117120618A (zh) 2021-02-12 2023-11-24 勃林格殷格翰 Rcv 两合公司 用于增加蛋白质分泌的信号肽
JP2024518410A (ja) 2021-05-07 2024-05-01 ビエラ バイオ インコーポレイテッド 重症筋無力症を治療するための抗ｃｄ１９抗体の使用
US20250073349A1 (en) 2021-05-10 2025-03-06 Kawasaki Institute Of Industrial Promotion Antibody having reduced binding affinity for antigen
CN117320964A (zh) 2021-05-21 2023-12-29 美国安进公司 优化药物容器的灌装方案的方法
JP2024526764A (ja) 2021-07-13 2024-07-19 トゥルーバインディング，インコーポレイテッド タンパク質凝集を防止する方法
CA3226744A1 (en) 2021-07-27 2023-02-02 Astrazeneca Ab Treatment of lupus
EP4385522A1 (en) 2021-08-13 2024-06-19 Kunshan Xinyunda Biotech Co., Ltd. Microtubule inhibitor-based antibody-drug conjugate
WO2023024949A1 (zh) 2021-08-24 2023-03-02 昆山新蕴达生物科技有限公司 一种由可断裂连接子偶联的抗体偶联药物
KR20240049275A (ko) 2021-08-27 2024-04-16 하. 룬드벡 아크티에셀스카브 항-cgrp 항체를 사용한 군발성 두통의 치료
CN118541392A (zh) 2021-09-28 2024-08-23 准星生物医药有限公司 多种形式的分子复合物
EP4429701A4 (en) 2021-11-09 2025-12-31 Truebinding Inc METHODS OF TREATMENT OR INHIBITION OF CARDIOVASCULAR DISEASES
JP2024545138A (ja) 2021-12-09 2024-12-05 クンシャン シンユンター バイオテック カンパニー，リミティド 親和性が改善された抗体薬物複合体、その調製法、及びその応用
EP4665758A1 (en) 2023-02-14 2025-12-24 H. Lundbeck A/S Treatment of opiod-induced pain
WO2024259305A1 (en) 2023-06-14 2024-12-19 The Broad Institute, Inc. Vhh polypeptides that bind to mesothelin, compositions and methods of use thereof
WO2024261733A1 (en) 2023-06-23 2024-12-26 H. Lundbeck A/S Combinational treatment
WO2025049272A1 (en) 2023-08-25 2025-03-06 The Broad Institute, Inc. Card9 variant polypeptide and antibodies directed thereto
WO2025045894A1 (en) 2023-08-28 2025-03-06 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods and kits for diagnosing cause of nephrotic syndrome and guiding therapy
WO2025262247A1 (en) 2024-06-21 2025-12-26 H. Lundbeck A/S Treatment of headache disorders and/or psychiatric symptoms using anti-cgrp antibodies, and compositions and methods related thereto
WO2026030152A1 (en) 2024-07-29 2026-02-05 Amgen Inc. System and method for assessing transferability of a fill recipe
WO2026027251A1 (en) 2024-08-01 2026-02-05 Boehringer Ingelheim Rcv Gmbh & Co Kg Signal peptides for increased protein secretion

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8308235D0 (en) * 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) * 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5807715A (en) * 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US5057313A (en) * 1986-02-25 1991-10-15 The Center For Molecular Medicine And Immunology Diagnostic and therapeutic antibody conjugates
GB8607679D0 (en) * 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5258498A (en) * 1987-05-21 1993-11-02 Creative Biomolecules, Inc. Polypeptide linkers for production of biosynthetic proteins
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5736137A (en) * 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
JP3053873B2 (ja) * 1994-08-12 2000-06-19 イムノメディクス，インコーポレイテッド Ｂ細胞リンパ腫細胞および白血病細胞に特異的な免疫結合体およびヒト化抗体
ATE233573T1 (de) * 1996-10-17 2003-03-15 Immunomedics Inc Nichtantigenes toxinkonjugat und fusionsprotein eines internalisierendes rezeptorsystems
US7321026B2 (en) * 2001-06-27 2008-01-22 Skytech Technology Limited Framework-patched immunoglobulins

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Ｃａｎｃｅｒ，Ｖｏｌ．７３，Ｐ．８９６−８９９（１９９４）

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6887307B1 (en) 1999-07-22 2005-05-03 Warner-Lambert Company, Llc Pullulan film compositions
US7267718B2 (en) 1999-07-22 2007-09-11 Warner-Lambert Company, Llc Pullulan film compositions

Also Published As

Publication number Publication date
DE69534530D1 (de) 2006-03-02
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EP0771208B1 (en) 2005-10-19
US5789554A (en) 1998-08-04
IL114909A (en) 1999-10-28
US6187287B1 (en) 2001-02-13
ATE306930T1 (de) 2005-11-15
WO1996004925A1 (en) 1996-02-22
CA2195557C (en) 2006-10-17
IL114909A0 (en) 1995-12-08
JPH10505231A (ja) 1998-05-26

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