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TW201438738A - 治療進展型多發性硬化症之方法 - Google Patents

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TW201438738A
TW201438738A TW103124167A TW103124167A TW201438738A TW 201438738 A TW201438738 A TW 201438738A TW 103124167 A TW103124167 A TW 103124167A TW 103124167 A TW103124167 A TW 103124167A TW 201438738 A TW201438738 A TW 201438738A
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克雷格 史密斯
彼德 史考特 加恩
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建南德克公司
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Abstract

本發明係關於治療患者之進展型多發性硬化症(multiple sclerosis;MS)之方法及用於該用途之附有說明書的製品。

Description

治療進展型多發性硬化症之方法
本發明係關於治療患者之進展型多發性硬化症(MS)之方法及用於該用途之附有說明書的製品。
本申請案主張於2008年9月16日申請之美國臨時申請案第61/097,464號之優先權，該申請案以全文引用的方式併入本文中。
多發性硬化症
多發性硬化症(MS)為一種人類中樞神經系統(CNS)之發炎性及脫髓鞘退化性疾病。其為一種在全世界範圍內存在的疾病，在美國約有300,000人患病；其為年輕人常患之疾病，其中70%至80%在20歲至40歲之間發病(Anderson等人Ann Neurology 31(3)：333-6(1992)；Noonan 等人Neurology 58：136-8(2002))。基於臨床病程、磁共振成像(MRI)掃描評估及活組織檢查及屍體解剖材料之病理學分析，MS為一種異質性病症(Lucchinetti等人Ann Neurol 47：707-17(2000))。該疾病本身表現出大量可能之缺陷組合，包括脊髓、腦幹、腦神經、小腦、大腦及認知症候群。尤其當進行為期25年之觀察時，大多數患MS之患者最終發展為殘疾。一半MS患者在疾病發作15年之內需要扶杖行走。MS為年輕人及中年人神經性殘疾之主要誘因，且直至過去的十年裏對其無已知有效的治療。MS由於非特異性臨床發現故難以診斷，致使發 展高度結構化之診斷準則，包括由MRI掃描、誘發電位及腦脊髓液(CSF)研究組成之若干技術進展。所有診斷準則均依賴於以下一般原理：中央白質中存在在不同時間出現且不能以其他病因(諸如感染、血管病症或自體免疫病症)解釋之分散病變(McDonald等人Ann Neurol 50：121-7(2001))。MS具有四種疾病型式：復發緩解型MS(RRMS；80%-85%發病病例)、原發性進展型MS(PPMS，10%-15%發病病例)、進展復發型MS(PRMS，5%發病病例)及繼發性進展型MS(SPMS)(Kremenchutzky等人Brain 122(Pt 10)：1941-50(1999)；Confavreux等人N Engl J Med 343(20)：1430-8(2000))。據估計50%患RRMS之患者會在10年內發展為SPMS；且高達90%之RRMS患者最終會發展為SPMS(Weinshenker等人Brain 112(Pt 1)：133-46(1989))。
目前，在美國有四類六種藥物批准用於治療RRMS，而無藥物批准用於治療PPMS。RRMS治療包括以下：干擾素類，IFN-β-1a(REBIF®及AVONEX®)及IFN-β-1b(BETASERON®)；乙酸格拉替雷(glatiramer acetate)(COPAXONE®)(一種多肽)；那他珠單抗(natalizumab)(TYSABRI®)；及米托蒽醌(mitoxantrone)(NOVANTRONE®)(一種細胞毒性劑)。已使用其他藥物獲得不同程度之成功，該等藥物包括皮質類固醇、甲胺喋呤(methotrexate)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、硫唑嘌呤(azathioprine)及靜脈內(IV)免疫球蛋白。目前批准之治療之益處為如兩個綜合分析所表明，RRMS之復發率相對不高(約30%)及防止殘疾(Filippini等人Lancet 361：545-52(2003))。
其他臨床研究評估MS之其他免疫調節劑，包括腫瘤壞死因子α抑制劑及經改造之肽配位體，其惡化MS而非改善MS(來那西普多發性硬化症研究組及英屬哥倫比亞大學MS/MRI(Lenercept Multiple Sclerosis Study Group and the University of British Columbia MS/MRI) Neurology 53：457-65(1999)；Bielekova等人Nat Med 2000；6：1167-75(2000)，勘誤表於Nat Med 6：1412(2000)中發表)。
MS病理生理學之主要觀點支持炎症主要由CD4+ Th1 T細胞介導。治療方法係基於以下理論，諸如IFN-β及乙酸格拉替雷減少(但未完全阻止)殘疾惡化或累積的發生。
如在MS之診斷準則中存在CSF寡選殖帶且鞘內IgG合成增加所證明，數十年來默認人類MS中存在體液組份(Siden A.J Neurol 221：39-51(1979)；McDonald等人Ann Neurol 50：121-7(2001)；Andersson等人Eur J Neurol 9：243-51(2002)；O'Connor,P.Neurology 59：S1-33(2002))。寡選殖帶之存在、游離輕鏈增加及鞘內IgM合成增加與MS疾病活性相關且可為更為嚴重結果之預測因素(Rudick等人Mult Scler 1：150-5(1995)；Zeman等人Acta Cytol 45：51-9(2001)；Izquierdo等人Acta Neurol Scand 105：158-63(2002)；Wolinsky J.J Neurol Sci 206：145-52(2003)；Villar等人Ann Neurol 53：222-6(2003))。
在患有進展型及復發型MS之患者的血清中偵測到抗髓鞘抗體(髓鞘鹼性蛋白(MBP)及髓鞘寡樹突神經膠質細胞醣蛋白(MOG))(Reindl等人Brain 122：2047-56(1999)；Egg等人Mult Scler 7(5)：285-9(2001))。亦在MS患者之CSF中偵測到抗髓鞘抗體(Reindl等人Brain 122：2047-56(1999)；Egg等人Mult Scler 7(5)：285-9(2001)；Andersson等人Eur J Neurol 9：243-51(2002))。在患有MS之患者體內觀測到其他類型之抗體，諸如抗神經結苷脂抗體或抗神經纖毛抗體(Mata等人Mult Scler 5：379-88(1999)；Sadatipour等人Ann Neurol 44：980-3(1998))。報導指示血清抗MOG及抗MBP抗體之存在為自臨床孤立脫髓鞘事件進展為明確RRMS的強有力預測因素(Berger等人N Engl J Med 349：139-45(2003))。對兩種抗體血清反應陽性之患者經歷病情惡化之調整危險比率為76.5且僅對抗MOG血清反應陽性之患者經歷病情惡化之調整危險 比率為31.6。
國際病理學協會發現在大多數患有MS之患者體內存在與髓鞘結合之抗體，亦在MS病變中發現血漿細胞及B細胞，為MS中存在體液作用提供額外證據(Prineas及Wright,Lab Invest 38：409-21(1978)；Esiri M.Neuropathol Appl Neurobiol 6：9-21(1980)；Genain等人Nat Med 5：170-5(1999)；Lucchinetti等人Ann Neurol 47：707-17(2000)；Wingerchuk等人Lab Invest 81：263-81(2001))。在患有MS之患者之CSF中可偵測到B細胞且存在相對較高比例之B細胞可預測進展為更嚴重之殘疾(Cepok等人Brain 124(Pt 11)：2169-76(2001))。
在患有RRMS或眼陣攣-肌陣攣症候群之患者體內，據報導利妥昔單抗(Rituximab)消耗所有患者體內之外周B細胞且使一些患者體內之CSF B細胞數量減少(Pranzatelli等人Neurology 60(增刊1)PO5.128：A395(2003)；Cross等人「Preliminary Results from a Phase II Trial of Rituximab in MS」(摘要)Eighth Annual Meeting of the Americas Committees for Research and Treatment in Multiple Sclerosis ACTRIMS 20-1(2003年10月)；Cross等人J.Neuroimmunol.180：63-70(2006))。亦參見Cree等人「Tolerability and Effects of Rituximab「Anti-CD20 Antibody」in Neuromyelitis Optica and Rapidly Worsening Multiple Sclerosis」Meeting of the Am.Acad.Neurol.(2004年4月)；Cree等人Neurology 64：1270-2(2005)。
CD20抗體及使用其之療法
淋巴細胞為在血細胞生成過程期間骨髓中所產生之許多類型白血球中之一種。存在兩種主要淋巴細胞群體：B淋巴細胞(B細胞)及T淋巴細胞(T細胞)。本文中特別關注之淋巴細胞為B細胞。
B細胞在骨髓中熟化且離開骨髓，在其細胞表面上表現抗原結合抗體。當原生B細胞首先遇到對其膜結合抗體具有特異性的抗原時， 細胞開始快速分裂，而其子代分化為記憶B細胞及稱為「漿細胞」之效應細胞。記憶B細胞具有較長壽命且會持續表現具有與原始母細胞相同之特異性的膜結合抗體。漿細胞不會產生膜結合抗體而是替代產生呈可分泌形式之抗體。所分泌抗體為體液免疫之主要效應分子。
CD20抗原(亦稱為人類B淋巴細胞限制性分化抗原，Bp35)為一種位於前B淋巴細胞及成熟B淋巴細胞上分子量為約35kD之疏水性跨膜蛋白(Valentine等人J.Biol.Chem.264(19)：11282-11287(1989)；及Einfeld等人EMBO J.7(3)：711-717(1988))。該抗原亦表現於超過90%之B細胞非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphomas(NHL))上(Anderson等人Blood 63(6)：1424-1433(1984))，但未見於造血幹細胞、祖B細胞、正常漿細胞或其他正常組織上(Tedder等人J.Immunol.135(2)：973-979(1985))。CD20會調控細胞週期起始及分化之活化過程之早期階段(Tedder等人，同上文)且可能充當鈣離子通道(Tedder等人J.Cell.Biochem.14D：195(1990))。
鑒於CD20在B細胞淋巴瘤中表現，因此此抗原可作為「靶向」該種淋巴瘤之候選物。本質上，該靶向概括而言如下：向患者投與對B細胞之CD20表面抗原具特異性之抗體。此等抗CD20抗體特異性結合正常B細胞及惡性B細胞(表面上)之CD20抗原；與CD20表面抗原結合之抗體可導致贅生性B細胞之破壞及消耗。此外，具有破壞腫瘤之潛力之化學藥劑或放射性標記可與抗CD20抗體結合以使得藥劑特異性「傳遞」至贅生性B細胞。無論採用何種方法，主要目的均為破壞腫瘤；可由所利用之特定抗CD20抗體來決定特定方法且因此可用以靶向CD20抗原之方法可顯著不同。
利妥昔單抗(RITUXAN®)抗體為針對CD20抗原之經遺傳工程改造之嵌合鼠類/人類單株抗體。利妥昔單抗為1998年4月7日頒予之美國專利第5,736,137號(Anderson等人)中稱為「C2B8」之抗體。 RITUXAN®指定用於治療患有復發性或難治性低級或濾泡性CD20陽性B細胞非霍奇金氏淋巴瘤之患者。作用機制之活體外研究表明RITUXAN®與人類補體結合且經由補體依賴性細胞毒性(CDC)溶解淋巴B細胞株(Reff等人Blood 83(2)：435-445(1994))。此外，其在抗體依賴性細胞毒性(ADCC)檢定中具有顯著活性。最近，已展示RITUXAN®在氚化胸苷併入檢定中具有抗增生作用且直接誘導細胞凋亡，而其他抗CD19及CD20抗體則不具有此作用(Maloney等人Blood 88(10)：637a(1996))。亦已在實驗中觀測到RITUXAN®與化學療法及毒素之間存在協同作用。詳言之，RITUXAN®使抗藥性人類B細胞淋巴瘤細胞株對小紅莓(doxorubicin)、CDDP、VP-16、白喉毒素(diphtheria toxin)及蓖麻毒素(ricin)之細胞毒性作用敏感(Demidem等人Cancer Chemotherapy & Radiopharmaceuticals 12(3)：177-186(1997))。活體內臨床前研究展示RITUXAN®可能經由補體及細胞介導之過程消耗獼猴外周血、淋巴結及骨髓之B細胞(Reff等人Blood 83(2)：435-445(1994))。
在美國於1997年11月批准利妥昔單抗以每週375mg/m2給藥四次之劑量用於治療患有復發性或難治性低級或濾泡性CD20+ B細胞非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)。在2001年4月，食品與藥物管理局(Food and Drug Administration(FDA))批准其他治療低級NHL之主張：再治療(每週給藥四次)及其他給藥方案(每週給藥八次)。已有超過300,000名患者進行利妥昔單抗的單一療法或與免疫抑制藥物或化學治療藥物之組合療法。患者亦經利妥昔單抗維持療法治療多達2年(Hainsworth等人J Clin Oncol 21：1746-51(2003)；Hainsworth等人J Clin Oncol 20：4261-7(2002))。
亦已在多種非惡性自體免疫病症中研究利妥昔單抗，在該等病症中B細胞及自體抗體似乎在疾病病理生理中起作用(Edwards等人 Biochem Soc Trans 30：824-8(2002))。已報導利妥昔單抗可能緩解以下疾病之徵兆及症狀：類風濕性關節炎(RA)(Leandro等人Ann Rheum Dis.61：883-8(2002)；Emery等人Arthritis Rheum 48(9)：S439(2003))；狼瘡(Eisenberg R.Arthritis Res Ther 5：157-9(2003)；Leandro等人Arthritis Rheum 46：2673-7(2002))；免疫血小板減少症(D'Arena等人Leuk Lymphoma 44：561-2(2003))；自體免疫貧血(Zaja等人Haematologica 87：189-95(2002)(勘誤表在Haematologica 87：336(2002)中發表)；自體免疫神經病(Pestronk等人J Neurol Neurosurg Psychiatry 74：485-9(2003))；副腫瘤眼陣攣-肌陣攣症候群(Pranzatelli等人Neurology 60(增刊1)PO5.128：A395(2003))；及復發緩解型多發性硬化症(RRMS)(Cross等人(摘要)美國多發性硬化症研究及治療委員會第8次年會(Eighth Annual Meeting of the Americas Committees for Research and Treatment in Multiple Sclerosis)20-1(2003))。
對患有類風濕性關節炎(RA)之患者進行第II期研究(WA16291)，提供關於利妥昔單抗之安全性及功效之48週隨訪資料(Emery等人Arthritis Rheum 48(9)：S439(2003)；Szczepanski等人Arthritis Rheum 48(9)：S121(2003))。將總共161名患者平均隨機化至四個治療組：甲胺喋呤、僅利妥昔單抗、利妥昔單抗加甲胺喋呤、利妥昔單抗加環磷醯胺(CTX)。利妥昔單抗之治療方案為於第1天及第15天靜脈內投與1g。在大多數患有RA之患者中輸注利妥昔單抗為大多數患者能良好耐受，其中36%之患者在其第一次輸液期間經歷至少一次不良反應(相比之下接收安慰劑之患者為30%)。總而言之，大多數不良反應之嚴重程度視為輕度至中度且在所有治療組之間良好平衡。在48週內，在四組中存在總共19次嚴重不良反應，在利妥昔單抗/CTX組中略微更為頻繁。感染之發生率在所有組中良好平衡。在此RA患者群體中嚴重感染之平均比率為每年每100名患者中4.66例，低於社區性流行病 學研究中所報導之RA患者中需要住院之感染比率(每年每100名患者9.57例)(Doran等人Arthritis Rheum 46：2287-93(2002))。
已報導利妥昔單抗在少數患有以下疾病之患者中之所報導安全性概況：神經病症，包括自體免疫神經病(Pestronk等人J Neurol Neurosurg Psychiatry 74：485-9(2003))；眼陣攣/肌陣攣症候群(Pranzatelli等人Neurology 60(增刊1)PO5.128：A395(2003))；及RRMS(Cross等人Preliminary results from a phase II trial of Rituximab in MS(摘要)美國多發性硬化症研究及治療委員會第8次年會(Eighth Annual Meeting of the Americas Committees for Research and Treatment in Multiple Sclerosis)20-1(2003))。在正在進行中之在患有RRMS之個體中對利妥昔單抗與干擾素β(IFN-β)或乙酸格拉替雷組合進行的由研究者發起之試驗(IST)中(Cross等人，同上文)，10位經治療個體中有一位在首次輸注利妥昔單抗後經歷中度發熱及寒戰後住院觀察隔夜，而其他9位個體完成四次輸液療程而未報導有任何不良反應。
關於CD20抗體、CD20結合分子及自體抗原疫苗之專利及專利公開案包括：U.S.5,776,456、5,736,137、5,843,439、6,399,061及6,682,734以及US 2002/0197255、US 2003/0021781、US 2003/0082172、US 2003/0095963、US 2003/0147885、US 2005/0186205及WO 1994/11026(Anderson等人)；U.S.6,455,043、US 2003/0026804、US 2003/0206903及WO 2000/09160(Grillo-Lopez,A.)；WO 2000/27428(Grillo-Lopez及White)；US 2004/0213784及WO 2000/27433(Grillo-Lopez及Leonard)；WO 2000/44788(Braslawsky等人)；WO 2001/10462(Rastetter,W.)；WO 2001/10461(Rastetter及White)；WO 2001/10460(White及Grillo-Lopez)；US 2001/0018041、US 2003/0180292、US 2002/0028178、WO 2001/34194及WO 2002/22212(Hanna及Hariharan)；US 2002/0006404及WO 2002/04021(Hanna及Hariharan)；US 2002/0012665、US 2005/0180975、WO 2001/74388及U.S.6,896,885(Hanna,N.)；US 2002/0058029(Hanna,N.)；US 2003/0103971(Hariharan及Hanna)；US 2005/0123540(Hanna等人)；US 2002/0009444及WO 2001/80884(Grillo-Lopez,A.)；WO 2001/97858；US 2005/0112060、US 2002/0039557及U.S.6,846,476(White,C.)；US 2002/0128448及WO 2002/34790(Reff,M.)；WO 2002/060955(Braslawsky等人)；WO 2002/096948(Braslawsky等人)；WO 2002/079255(Reff及Davies)；U.S.6,171,586及6,991,790及WO 1998/56418(Lam等人)；US 2004/0191256及WO 1998/58964(Raju,S.)；WO 1999/22764(Raju,S.)；WO 1999/51642、U.S.6,194,551、U.S.6,242,195、6,528,624及6,538,124(Idusogie等人)；U.S.7,122,637、US 2005/0118174、US 2005/0233382、US 2006/0194291、US 2006/0194290、US 2006/0194957及WO 2000/42072(Presta,L.)；WO 2000/67796(Curd等人)；WO 2001/03734(Grillo-Lopez等人)；US 2002/0004587、US 2006/0025576及WO 2001/77342(Miller及Presta)；US 2002/0197256及WO 2002/078766(Grewal,I.)；US 2003/0157108及WO 2003/035835(Presta,L.)；U.S.5,648,267、5,733,779、6,017,733及6,159,730及WO 1994/11523(Reff等人，關於表現技術)；U.S.6,565,827、6,090,365、6,287,537、6,015,542、5,843,398及5,595,721(Kaminski等人)；U.S.5,500,362、5,677,180、5,721,108、6,120,767、6,652,852及6,893,625以及WO 1988/04936(Robinson等人)；U.S.6,410,391(Zelsacher)；U.S.6,224,866及WO 2000/20864(Barbera-Guillem,E.)；WO 2001/13945(Barbera-Guillem,E.)；WO 2000/67795(Goldenberg)；U.S.7,074,403(Goldenberg及Hansen)；U.S.7,151,164(Hansen等人)；US 2003/0133930；WO 2000/74718及US 2005/0191300A1(Goldenberg及 Hansen)；US 2003/0219433及WO 2003/68821(Hansen等人)；WO 2004/058298(Goldenberg及Hansen)；WO 2000/76542(Golay等人)；WO 2001/72333(Wolin及Rosenblatt)；U.S.6,368,596(Ghetie等人)；U.S.6,306,393及US 2002/0041847(Goldenberg,D.)；US 2003/0026801(Weiner及Hartmann)；WO 2002/102312(Engleman,E.)；US 2003/0068664(Albitar等人)；WO 2003/002607(Leung,S.)；WO 2003/049694、US 2002/0009427及US 2003/0185796(Wolin等人)；WO 2003/061694(Sing及Siegall)；US 2003/0219818(Bohen等人)；US 2003/0219433及WO 2003/068821(Hansen等人)；US 2003/0219818(Bohen等人)；US 2002/0136719(Shenoy等人)；WO 2004/032828及US 2005/0180972(Wahl等人)；及WO 2002/56910(Hayden-Ledbetter)。亦參見U.S.5,849,898及EP 330,191(Seed等人)；EP 332,865A2(Meyer及Weiss)；U.S.4,861,579(Meyer等人)；US 2001/0056066(Bugelski等人)；WO 1995/03770(Bhat等人)；US 2003/0219433 A1(Hansen等人)；WO 2004/035607及US 2004/167319(Teeling等人)；WO 2005/103081(Teeling等人)；US 2006/0034835、US 2006/0024300及WO 2004/056312(Lowman等人)；US 2004/0093621(Shitara等人)；WO 2004/103404(Watkins等人)；WO 2005/000901(Tedder等人)；US 2005/0025764(Watkins等人)；US 2006/0251652(Watkins等人)；WO 2005/016969(Carr等人)；US 2005/0069545(Carr等人)；WO 2005/014618(Chang等人)；US 2005/0079174(Barbera-Guillem及Nelson)；US 2005/0106108(Leung及Hansen)；US 2005/0123546(Umana等人)；US 2004/0072290(Umana等人)；US 2003/0175884(Umana等人)；及WO 2005/044859(Umana等人)；WO 2005/070963(Allan等人)；US 2005/0186216(Ledbetter及Hayden- Ledbetter)；US 2005/0202534(Hayden-Ledbetter及Ledbetter)；US 2005/136049(Ledbetter等人)；US 2003/118592(Ledbetter等人)；US 2003/133939(Ledbetter及Hayden-Ledbetter)；US 2005/0202012(Ledbetter及Hayden-Ledbetter)；US 2005/0175614(Ledbetter及Hayden-Ledbetter)；US 2005/0180970(Ledbetter及Hayden-Ledbetter)；US 2005/0202028(Hayden-Ledbetter及Ledbetter)；US 2005/0202023(Hayden-Ledbetter及Ledbetter)；WO 2005/017148(Ledbetter等人)；WO 2005/037989(Ledbetter等人)；U.S.6,183,744(Goldenberg)；U.S.6,897,044(Braslawski等人)；WO 2006/005477(Krause等人)；US 2006/0029543(Krause等人)；US 2006/0018900(McCormick等人)；US 2006/0051349(Goldenberg及Hansen)；WO 2006/042240(Iyer及Dunussi-Joannopoulos)；US 2006/0121032(Dahiyat等人)；WO 2006/064121(Teillaud等人)；US 2006/0153838(Watkins)、CN 1718587(Chen等人)；WO 2006/084264(Adams等人)；US 2006/0188495(Barron等人)；US 2004/0202658及WO 2004/091657(Benynes,K.)；US 2005/0095243、US 2005/0163775、WO 2005/00351及WO 2006/068867(Chan,A.)；US 2006/0135430及WO 2005/005462(Chan等人)；US 2005/0032130及WO 2005/017529(Beresini等人)；US 2005/0053602及WO 2005/023302(Brunetta,P.)；US 2006/0179501及WO 2004/060052(Chan等人)；WO 2004/060053(Chan等人)；US 2005/0186206及WO 2005/060999(Brunetta,P.)；US 2005/0191297及WO 2005/061542(Brunetta,P.)；US 2006/0002930及WO 2005/115453(Brunetta等人)；US 2006/0099662及WO 2005/108989(Chuntharapai等人)；CN 1420129A(Zhongxin Guojian Pharmaceutical)；US 2005/0276803及WO 2005/113003(Chan等人)；US 2005/0271658及WO 2005/117972(Brunetta等人)；US 2005/0255527及WO 2005/11428(Yang,J.)；US 2006/0024295及WO 2005/120437(Brunetta,P.)；US 2006/0051345及WO 2005/117978(Frohna,P.)；US 2006/0062787及WO 2006/012508(Hitraya,E.)；US 2006/0067930及WO 2006/31370(Lowman等人)；WO 2006/29224(Ashkenazi,A.)；US 2006/0110387及WO 2006/41680(Brunetta,P.)；US 2006/0134111及WO 2006/066086(Agarwal,S.)；WO 2006/069403(Ernst及Yansura)；US 2006/0188495及WO 2006/076651(Dummer,W.)；WO 2006/084264(Lowman,H.)；WO 2006/093923(Quan及Sewell)；WO 2006/106959(Numazaki等人)；WO 2006/126069(Morawala)；WO 2006/130458(Gazit-Bornstein等人)；US 2006/0275284(Hanna,G.)；US 2007/0014785(Golay等人)；US 2007/0014720(Gazit-Bornstein等人)；及US 2007/0020259(Hansen等人)；US 2007/0020265(Goldenberg及Hansen)；US 2007/0014797(Hitraya)；US 2007/0224189(Lazar等人)；WO 2007/014238(Bruge及Bruger)；及WO 2008/003319(Parren及Baadsgaard)。其中某些尤其包括多發性硬化症之治療。
關於使用利妥昔單抗之療法之公開案包括：Perotta及Abuel「Response of chronic relapsing ITP of 10 years duration to Rituximab」摘要編號3360 Blood 10(1)(第1-2部分)：第88B頁(1998)；Stashi等人「Rituximab chimeric anti-CD20 monoclonal antibody treatment for adults with chronic idopathic thrombocytopenic purpura」Blood 98(4)：952-957(2001)；Matthews,R.「Medical Heretics」New Scientist(2001年4月7日)；Leandro等人「Clinical outcome in 22 patients with rheumatoid arthritis treated with B lymphocyte depletion」 Ann Rheum Dis 61：833-888(2002)；Leandro等人「Lymphocyte depletion in rheumatoid arthritis：early evidence for safety,efficacy and dose response.Arthritis and Rheumatism 44(9)：S370(2001)；Leandro等人「An open study of B lymphocyte depletion in systemic lupus erythematosus」,Arthritis & Rheumatism 46(1)：2673-2677(2002)；Edwards及Cambridge「Sustained improvement in rheumatoid arthritis following a protocol designed to deplete B lymphocytes」Rhematology 40：205-211(2001)；Edwards等人「B-lymphocyte depletion therapy in rheumatoid arthritis and other autoimmune disorders」Biochem.Soc.Trans.30(4)：824-828(2002)；Edwards等人「Efficacy and safety of Rituximab,a B-cell targeted chimeric monoclonal antibody：A randomized,placebo controlled trial in patients with rheumatoid arthritis.Arthritis and Rheumatism 46(9)：S197(2002)；Levine及Pestronk「IgM antibody-related polyneuropathies：B-cell depletion chemotherapy using Rituximab」Neurology 52：1701-1704(1999)；DeVita等人「Efficacy of selective B cell blockade in the treatment of rheumatoid arthritis」Arthritis & Rheum 46：2029-2033(2002)；Hidashida等人「Treatment of DMARD-Refractory rheumatoid arthritis with Rituximab.」於美國風濕病學會科學年會(Annual Scientific Meeting of the American College of Rheumatology)；10月24-29日；New Orleans,LA 2002中發表；Tuscano,J.「Successful treatment of Infliximab-refractory rheumatoid arthritis with Rituximab」於美國風濕病學會科學年會(Annual Scientific Meeting of the American College of Rheumatology)；10月24-29日；New Orleans,LA 2002中發表；Specks等人「Response of Wegener's granulomatosis to anti-CD20 chimeric monoclonal antibody therapy」Arthritis & Rheumatism 44(12)：2836- 2840(2001)；Anolik等人「B lympocyte Depletion in the Treatment of Systemic Lupus(SLE)：Phase I/II Trial of Rituximab(RITUXAN®)in SLE」Arthritis And Rheumatism,46(9),S289-S289摘要717(2002年10月)及Albert等人「A Phase I Trial of Rituximab(Anti-CD20)for Treatment of Systemic Lupus Erythematosus」Arthritis And Rheumatism,48(12)：3659-3659，摘要LB9(2003年12月)；Martin及Chan「Pathogenic Roles of B cells in Human Autoimmunity：Insights from the Clinic」Immunity 20：517-527(2004)；Cree等人「An open label study of the effects of rituximab in neuromyelitis optica.」Neurology 64(7)：1270-2(2005)；Cross等人「Rituximab reduces B cells and T cells in cerebrospinal fluid of multiple sclerosis patients.」J Neuroimmunol,180(1-2)：63-70(2006)；Bar-Or A.等人「Safety,pharmacodynamics,and activity of Rituximab in patients with relapsing-remitting multiple sclerosis：a phase I,multicentre,open-label clinical trial.」Ann Neurol 63(3)：395-400(2008)；Hauser S.等人「B-cell depletion with Rituximab in relapsing-remitting multiple sclerosis.」NEJM,358(7)：676-88,(2008)；Hawker K等人「Efficacy and Safety of rituximab in patients with primary progressive multiple sclerosis：results of a randomized,double-blind,placebo-controlled,multicenter trial.」Multiple Sclerosis 14(1)：S299(2008)，摘要；Hawker K等人，「Efficacy and Safety of rituximab in patients with primary progressive multiple sclerosis：results of a randomized,double-blind,placebo-controlled,multicenter trial.」Neurology 72(S3)：A254(2009)，摘要。
本發明提供治療患者之進展型多發性硬化症之方法，其包含向患者投與有效量之抗CD20抗體，其中治療係基於患者具有一或多種 選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。
在一些實施例中，進展型多發性硬化症為原發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為繼發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為進展復發型多發性硬化症。在一些實施例中，在開始治療時患者未診斷患有復發緩解型多發性硬化症。
在一些實施例中，患者之樣本中進一步具有炎症跡象。在一些實施例中，樣本為腦脊髓液樣本。在一些實施例中，炎症跡象由IgG指數升高指示。在一些實施例中，炎症跡象由以等電聚焦偵測之IgG寡選殖帶指示。
在一些實施例中，患者之EDSS高於約5.0持續少於約15年。在一些實施例中，患者之EDSS小於或等於約5.0持續少於約10年。在一些實施例中，開始治療前兩年內之EDSS增加不可歸因於復發。在一些實施例中，EDSS增加為在開始治療前兩年內EDSS增加至少約1.5分。在一些實施例中，開始治療前兩年內EDSS增加至少約1.5分不可歸因於復發。在一些實施例中，患者在開始治療前兩年內進一步具有兩次或兩次以上復發。在一些實施例中，在開始治療時EDSS在約3.0與約6.5之間。
在一些實施例中，患者年齡小於約51歲。
在一些實施例中，治療縮短確診之疾病進展之時間。在一些實施例中，確診之疾病進展為持續十二週之EDSS增加。在一些實施例中，確診之疾病進展為持續二十四週之EDSS增加。
在一些實施例中，向患者投與有效量之抗CD20抗體以提供約0.3公克至約4.0公克之間的初始抗CD20抗體暴露，隨後提供約0.3公克至 約4.0公克之間的第二抗CD20抗體暴露。在一些實施例中，初始抗CD20抗體暴露及/或第二抗CD20抗體暴露在約0.3公克至約1.5公克之間。在一些實施例中，該第二暴露直至初始暴露後約16週至60週才提供。在一些實施例中，以一個劑量或兩個劑量之抗CD20抗體形式向患者提供各次抗CD20抗體暴露。
在一些實施例中，抗CD20抗體包含：a)包含SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11及SEQ ID NO：12之重鏈可變區，及b)包含SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5及SEQ ID NO：6之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗CD20抗體為奧克利珠單抗(ocrelizumab)。在一些實施例中，抗CD20抗體為利妥昔單抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為奧法土莫單抗(ofatumumab)。在一些實施例中，抗CD20抗體為TRU-015或SBI-087。在一些實施例中，抗CD20抗體為GA101。在一些實施例中，抗CD20抗體為hA20。
本發明提供治療患者之進展型多發性硬化症之方法，限制條件為發現患者具有一或多種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分，該治療包含向該患者投與有效量之抗CD20抗體。
在一些實施例中，進展型多發性硬化症為原發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為繼發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為進展復發型多發性硬化症。在一些實施例中，在開始治療時患者未診斷患有復發緩解型多發性硬化症。
在一些實施例中，患者之樣本中進一步具有炎症跡象。在一些實施例中，樣本為腦脊髓液樣本。在一些實施例中，炎症跡象由IgG指數升高指示。在一些實施例中，炎症跡象由以等電聚焦偵測之IgG 寡選殖帶指示。
在一些實施例中，患者之EDSS高於約5.0持續少於約15年。在一些實施例中，患者之EDSS小於或等於約5.0持續少於約10年。在一些實施例中，開始治療前兩年內之EDSS增加不可歸因於復發。在一些實施例中，EDSS增加為在開始治療前兩年內EDSS增加至少約1.5分。在一些實施例中，開始治療前兩年內EDSS增加至少約1.5分不可歸因於復發。在一些實施例中，患者在開始治療前兩年內進一步具有兩次或兩次以上復發。在一些實施例中，在開始治療時EDSS在約3.0與約6.5之間。
在一些實施例中，患者年齡小於約51歲。
在一些實施例中，治療縮短確診之疾病進展之時間。在一些實施例中，確診之疾病進展為持續十二週之EDSS增加。在一些實施例中，確診之疾病進展為持續二十四週之EDSS增加。
在一些實施例中，向患者投與有效量之抗CD20抗體以提供約0.3公克至約4.0公克之間的初始抗CD20抗體暴露，隨後提供約0.3公克至約4.0公克之間的第二抗CD20抗體暴露。在一些實施例中，初始抗CD20抗體暴露及/或第二抗CD20抗體暴露在約0.3公克至約1.5公克之間。在一些實施例中，該第二暴露直至初始暴露後約16週至60週才提供。在一些實施例中，以一個劑量或兩個劑量之抗CD20抗體形式向患者提供各次抗CD20抗體暴露。
在一些實施例中，抗CD20抗體包含：a)包含SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11及SEQ ID NO：12之重鏈可變區，及b)包含SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5及SEQ ID NO：6之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗CD20抗體為奧克利珠單抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為利妥昔單抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為奧法土莫單抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為TRU-015或SBI-087。在一些實施例中， 抗CD20抗體為GA101。在一些實施例中，抗CD20抗體為hA20。
本發明提供治療進展型多發性硬化症之方法，其包含：(a)選擇具有進展型多發性硬化症之患者，其中該患者具有一或多種選自由以下組成之群之特徵：(i)年齡小於約55歲；(ii)一或多個釓染色病變，(iii)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(iv)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分；及(b)向如此選擇之患者投與有效量之抗CD20抗體。
在一些實施例中，進展型多發性硬化症為原發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為繼發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為進展復發型多發性硬化症。在一些實施例中，在開始治療時患者未診斷患有復發緩解型多發性硬化症。
在一些實施例中，患者之樣本中進一步具有炎症跡象。在一些實施例中，樣本為腦脊髓液樣本。在一些實施例中，炎症跡象由IgG指數升高指示。在一些實施例中，炎症跡象由以等電聚焦偵測之IgG寡選殖帶指示。
在一些實施例中，患者之EDSS高於約5.0持續少於約15年。在一些實施例中，患者之EDSS小於或等於約5.0持續少於約10年。在一些實施例中，開始治療前兩年內之EDSS增加不可歸因於復發。在一些實施例中，EDSS增加為在開始治療前兩年內EDSS增加至少約1.5分。在一些實施例中，開始治療前兩年內EDSS增加至少約1.5分不可歸因於復發。在一些實施例中，患者在開始治療前兩年內進一步具有兩次或兩次以上復發。在一些實施例中，在開始治療時EDSS在約3.0與約6.5之間。
在一些實施例中，患者年齡小於約51歲。
在一些實施例中，治療縮短確診之疾病進展之時間。在一些實 施例中，確診之疾病進展為持續十二週之EDSS增加。在一些實施例中，確診之疾病進展為持續二十四週之EDSS增加。
在一些實施例中，向患者投與有效量之抗CD20抗體以提供約0.3公克至約4.0公克之間的初始抗CD20抗體暴露，隨後提供約0.3公克至約4.0公克之間的第二抗CD20抗體暴露。在一些實施例中，初始抗CD20抗體暴露及/或第二抗CD20抗體暴露在約0.3公克至約1.5公克之間。在一些實施例中，該第二暴露直至初始暴露後約16週至60週才提供。在一些實施例中，以一個劑量或兩個劑量之抗CD20抗體形式向患者提供各次抗CD20抗體暴露。
在一些實施例中，抗CD20抗體包含：a)包含SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11及SEQ ID NO：12之重鏈可變區，及b)包含SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5及SEQ ID NO：6之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗CD20抗體為奧克利珠單抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為利妥昔單抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為奧法土莫單抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為TRU-015或SBI-087。在一些實施例中，抗CD20抗體為GA101。在一些實施例中，抗CD20抗體為hA20。
本發明亦提供評估患有進展型多發性硬化症之患者是否對用抗CD20抗體治療有反應的方法，其包含評估一或多種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分，其中患者之一或多種該等特徵指示患者會對治療有反應。
在一些實施例中，進展型多發性硬化症為原發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為繼發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為進展復發型多發性硬化症。在一些實施例中，在開始治療時患者未診斷患有復發緩解 型多發性硬化症。
在一些實施例中，患者之樣本中進一步具有炎症跡象。在一些實施例中，樣本為腦脊髓液樣本。在一些實施例中，炎症跡象由IgG指數升高指示。在一些實施例中，炎症跡象由以等電聚焦偵測之IgG寡選殖帶指示。
在一些實施例中，患者之EDSS高於約5.0持續少於約15年。在一些實施例中，患者之EDSS小於或等於約5.0持續少於約10年。在一些實施例中，開始治療前兩年內之EDSS增加不可歸因於復發。在一些實施例中，EDSS增加為在開始治療前兩年內EDSS增加至少約1.5分。在一些實施例中，開始治療前兩年內EDSS增加至少約1.5分不可歸因於復發。在一些實施例中，患者在開始治療前兩年內進一步具有兩次或兩次以上復發。在一些實施例中，在開始治療時EDSS在約3.0與約6.5之間。
在一些實施例中，患者年齡小於約51歲。
在一些實施例中，該方法進一步包含給患者提供建議。
在一些實施例中，抗CD20抗體包含：a)包含SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11及SEQ ID NO：12之重鏈可變區，及b)包含SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5及SEQ ID NO：6之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗CD20抗體為奧克利珠單抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為利妥昔單抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為奧法土莫單抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為TRU-015或SBI-087。在一些實施例中，抗CD20抗體為GA101。在一些實施例中，抗CD20抗體為hA20。
本發明亦提供鑑別可能對抗CD20抗體治療有反應的患有進展型多發性硬化症之患者的方法，其包含：(a)評估一或多種選自由以下組成之群之特徵：(i)年齡小於約55歲，(ii)一或多個釓染色病變，(iii)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及 (iv)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分；及(b)鑑別具有一或多種選自由以下組成之群之特徵之患者：(i)年齡小於約55歲，(ii)一或多個釓染色病變，(iii)在開始抗CD20治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(iv)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。
在一些實施例中，進展型多發性硬化症為原發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為繼發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為進展復發型多發性硬化症。在一些實施例中，在開始治療時患者未診斷患有復發緩解型多發性硬化症。
在一些實施例中，患者之樣本中進一步具有炎症跡象。在一些實施例中，樣本為腦脊髓液樣本。在一些實施例中，炎症跡象由IgG指數升高指示。在一些實施例中，炎症跡象由以等電聚焦偵測之IgG寡選殖帶指示。
在一些實施例中，患者之EDSS高於約5.0持續少於約15年。在一些實施例中，患者之EDSS小於或等於約5.0持續少於約10年。在一些實施例中，開始治療前兩年內之EDSS增加不可歸因於復發。在一些實施例中，EDSS增加為在開始治療前兩年內EDSS增加至少約1.5分。在一些實施例中，開始治療前兩年內EDSS增加至少約1.5分不可歸因於復發。在一些實施例中，患者在開始治療前兩年內進一步具有兩次或兩次以上復發。在一些實施例中，在開始治療時EDSS在約3.0與約6.5之間。
在一些實施例中，患者年齡小於約51歲。
在一些實施例中，該方法進一步包含給患者提供建議。
在一些實施例中，抗CD20抗體包含：a)包含SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11及SEQ ID NO：12之重鏈可變區，及b)包含SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5及SEQ ID NO：6之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗CD20抗體為奧克利珠單抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為利妥昔單抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為奧法土莫單抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為TRU-015或SBI-087。在一些實施例中，抗CD20抗體為GA101。在一些實施例中，抗CD20抗體為hA20。
本發明進一步提供銷售用於進展型多發性硬化症患者子群之抗CD20抗體或其醫藥學上可接受之組合物的方法，該方法包含告知目標聽眾抗CD20抗體用於治療患者子群的用途，該患者子群之特徵在於該子群之患者具有一或多種選自由以下組成之群的特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。
在一些實施例中，進展型多發性硬化症為原發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為繼發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為進展復發型多發性硬化症。在一些實施例中，在開始治療時患者子群未診斷患有復發緩解型多發性硬化症。
在一些實施例中，患者子群之樣本中進一步具有炎症跡象。在一些實施例中，樣本為腦脊髓液樣本。在一些實施例中，炎症跡象由IgG指數升高指示。在一些實施例中，炎症跡象由以等電聚焦偵測之IgG寡選殖帶指示。
在一些實施例中，患者子群之EDSS高於約5.0持續少於約15年。在一些實施例中，患者子群之EDSS小於或等於約5.0持續少於約10年。在一些實施例中，開始治療前兩年內之EDSS增加不可歸因於復發。在一些實施例中，EDSS增加為在開始治療前兩年內EDSS增加至少約1.5分。在一些實施例中，開始治療前兩年內EDSS增加至少約1.5 分不可歸因於復發。在一些實施例中，患者子群在開始治療前兩年內進一步具有兩次或兩次以上復發。在一些實施例中，在開始治療時EDSS在約3.0與約6.5之間。
在一些實施例中，患者子群年齡小於約51歲。
在一些實施例中，抗CD20抗體包含：a)包含SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11及SEQ ID NO：12之重鏈可變區，及b)包含SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5及SEQ ID NO：6之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗CD20抗體為奧克利珠單抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為利妥昔單抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為奧法土莫單抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為TRU-015或SBI-087。在一些實施例中，抗CD20抗體為GA101。在一些實施例中，抗CD20抗體為hA20。
本發明提供製品，其包含包裝在一起之包含抗CD20抗體及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物及指示(亦即說明)抗CD20抗體或醫藥組合物指定用於治療患有多發性硬化症之患者的標籤，該患者具有一或多種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。
在一些實施例中，進展型多發性硬化症為原發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為繼發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為進展復發型多發性硬化症。在一些實施例中，在開始治療時患者未診斷患有復發緩解型多發性硬化症。
在一些實施例中，患者之樣本中進一步具有炎症跡象。在一些實施例中，樣本為腦脊髓液樣本。在一些實施例中，炎症跡象由IgG指數升高指示。在一些實施例中，炎症跡象由以等電聚焦偵測之IgG寡選殖帶指示。
在一些實施例中，患者之EDSS高於約5.0持續少於約15年。在一些實施例中，患者之EDSS小於或等於約5.0持續少於約10年。在一些實施例中，開始治療前兩年內之EDSS增加不可歸因於復發。在一些實施例中，EDSS增加為在開始治療前兩年內EDSS增加至少約1.5分。在一些實施例中，開始治療前兩年內EDSS增加至少約1.5分不可歸因於復發。在一些實施例中，患者在開始治療前兩年內進一步具有兩次或兩次以上復發。在一些實施例中，在開始治療時EDSS在約3.0與約6.5之間。
在一些實施例中，患者年齡小於約51歲。
在一些實施例中，包含抗CD20抗體及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物係處於容器中。在一些實施例中，容器包含約0.3公克至約4.0公克之間的抗CD20抗體。在一些實施例中容器包含約0.3公克至約1.5公克之間的抗CD20抗體。
在一些實施例中，標籤提供說明，其中說明指示向患者投與有效量之抗CD20抗體以提供約0.3公克至約4.0公克之間的初始抗CD20抗體暴露，隨後提供約0.3公克至約4.0公克之間的第二抗CD20抗體暴露。在一些實施例中，初始抗CD20抗體暴露及/或第二抗CD20抗體暴露在約0.3公克至約1.5公克之間。在一些實施例中，該第二暴露直至初始暴露後約16週至60週才提供。在一些實施例中，以一個劑量或兩個劑量之抗CD20抗體形式向患者提供各次抗CD20抗體暴露。
在一些實施例中，抗CD20抗體包含：a)包含SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11及SEQ ID NO：12之重鏈可變區，及b)包含SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5及SEQ ID NO：6之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗CD20抗體為奧克利珠單抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為利妥昔單抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為奧法土莫單抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為TRU-015或SBI-087。在一些實施例中， 抗CD20抗體為GA101。在一些實施例中，抗CD20抗體為hA20。
本發明亦提供預測患有進展型多發性硬化症之個體是否會對使用用以治療多發性硬化症之藥物治療有反應的方法，該方法包含評估一或多種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分，藉此年齡、釓染色病變、開始治療前兩年內之EDDS增加、MSSS或其組合指示個體會對治療有反應。
在一些實施例中，進展型多發性硬化症為原發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為繼發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為進展復發型多發性硬化症。在一些實施例中，在開始治療時個體未診斷患有復發緩解型多發性硬化症。
在一些實施例中，個體之樣本中進一步具有炎症跡象。在一些實施例中，樣本為腦脊髓液樣本。在一些實施例中，炎症跡象由IgG指數升高指示。在一些實施例中，炎症跡象由以等電聚焦偵測之IgG寡選殖帶指示。
在一些實施例中，個體之EDSS高於約5.0持續少於約15年。在一些實施例中，個體之EDSS小於或等於約5.0持續少於約10年。在一些實施例中，開始治療前兩年內之EDSS增加不可歸因於復發。在一些實施例中，EDSS增加為在開始治療前兩年內EDSS增加至少約1.5分。在一些實施例中，開始治療前兩年內EDSS增加至少約1.5分不可歸因於復發。在一些實施例中，個體在開始治療前兩年內進一步具有兩次或兩次以上復發。在一些實施例中，在開始治療時EDSS在約3.0與約6.5之間。
在一些實施例中，個體年齡小於約51歲。
在本文中所述之任何方法或製品之一些實施例中，患者具有一或多種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，及(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分。
本發明另外提供治療患者之多發性硬化症之方法，其包含向患者投與有效量之奧克利珠單抗以提供約0.3公克至約0.6公克之間的初始奧克利珠單抗暴露，隨後提供約0.3公克至約0.6公克之間的第二奧克利珠單抗暴露，該第二暴露直至初始暴露後約16週至60週才提供，且以一個劑量或兩個劑量之奧克利珠單抗形式向患者提供各次奧克利珠單抗暴露。
在一些實施例中，初始奧克利珠單抗暴露為約0.6公克。在一些實施例中，第二奧克利珠單抗暴露為約0.6公克。在一些實施例中，該第二暴露在初始暴露後約24週投與。在一些實施例中，以一個劑量之奧克利珠單抗形式向患者提供一或多次奧克利珠單抗暴露。在一些實施例中，以兩個劑量之奧克利珠單抗形式向患者提供一或多次奧克利珠單抗暴露。在一些實施例中，初始奧克利珠單抗暴露包含第一劑量及第二劑量之奧克利珠單抗，其中奧克利珠單抗之第一劑量及第二劑量為約0.3公克。在一些實施例中，第二奧克利珠單抗暴露包含單一劑量之奧克利珠單抗，其中奧克利珠單抗之單一劑量為0.6公克。在一些實施例中，該等方法進一步包含提供第三奧克利珠單抗暴露。在一些實施例中，該等方法進一步包含提供第四奧克利珠單抗暴露。在一些實施例中，該等方法進一步包含提供第五奧克利珠單抗暴露。在任何該等方法之一些實施例中，該等方法進一步包含提供約一次至約三次之間的後續奧克利珠單抗暴露。
本發明亦提供包含以下之製品：(a)包含奧克利珠單抗之容器；及(b)具有關於治療患者之多發性硬化症之說明的藥品說明書，其中 該等說明指示向患者投與有效提供約0.3公克至約0.6公克之間的初始奧克利珠單抗暴露，隨後提供約0.3公克至約0.6公克之間的第二奧克利珠單抗暴露之量的奧克利珠單抗，該第二暴露直至初始暴露後約16至60週才投與，且以一個劑量或兩個劑量之奧克利珠單抗形式向患者提供各次奧克利珠單抗暴露。
在一些實施例中，初始奧克利珠單抗暴露為約0.6公克。在一些實施例中，第二奧克利珠單抗暴露為約0.6公克。在一些實施例中，該第二暴露在初始暴露後約24週投與。在一些實施例中，以一個劑量之奧克利珠單抗形式向患者提供一或多次奧克利珠單抗暴露。在一些實施例中，以兩個劑量之奧克利珠單抗形式向患者提供一或多次奧克利珠單抗暴露。在一些實施例中，初始奧克利珠單抗暴露包含第一劑量及第二劑量之奧克利珠單抗，其中奧克利珠單抗之第一劑量及第二劑量為約0.3公克。在一些實施例中，該等說明進一步包含提供第三奧克利珠單抗暴露。在一些實施例中，該等說明進一步包含提供第四奧克利珠單抗暴露。在一些實施例中，該等說明進一步包含提供第五奧克利珠單抗暴露。在任何該等方法之一些實施例中，該等說明進一步包含提供約一次至約三次之間的後續奧克利珠單抗暴露。
圖1A為比較各鼠類2H7(SEQ ID NO：1)、人類化2H7.v16變異體(SEQ ID NO：2)及人類κ輕鏈子群I(SEQ ID NO：3)之輕鏈可變域(VL)之胺基酸序列的序列比對。2H7及hu2H7.v16之VL的CDR如下：CDR1(SEQ ID NO：4)、CDR2(SEQ ID NO：5)及CDR3(SEQ ID NO：6)；圖1B為比較各鼠類2H7(SEQ ID NO：7)、人類化2H7.v16變異體(SEQ ID NO：8)及重鏈子群III之人類共同序列(SEQ ID NO：9)之重鏈可變域(VH)之胺基酸序列的序列比對。2H7及hu2H7.v16之VH的CDR如下：CDR1(SEQ ID NO：10)、CDR2(SEQ ID NO：11)及CDR3(SEQ ID NO：12)；在圖1A及圖1B中，如所示，各鏈之CDR1、CDR2及CDR3框在括號內，兩側為構架區FR1-FR4。2H7係指鼠類2H7抗體。兩列序列間之星號表明兩個序列之間不同的位置。殘基編號係根據Kabat等人Sequences of Immunological Interest，第5版公共衛生署(Public Health Service)，國立健康研究院(National Institutes of Health),Bethesda,Md.(1991)，其中插入展示為a、b、c、d及e；圖2展示成熟2H7.v16輕鏈之胺基酸序列(SEQ ID NO：13)；圖3展示成熟2H7.v16重鏈之胺基酸序列(SEQ ID NO：14)；圖4展示成熟2H7.v31重鏈之胺基酸序列(SEQ ID NO：15)。2H7.v31之L鏈與2H7.v16之L鏈相同；圖5展示成熟2H7.v16與2H7.v511輕鏈之比對(分別為SEQ ID NO 13及16)，使用Kabat可變域殘基編號及Eu恆定域殘基編號；圖6展示成熟2H7.v16與2H7.v511重鏈之比對(分別為SEQ ID NO 14及17)，使用Kabat可變域殘基編號及Eu恆定域殘基編號；圖7展示使用奧克利珠單抗治療復發緩解型多發性硬化症之研究設計的概述；圖8展示安慰劑組及利妥昔單抗組中個體之確診之疾病進展之時間的卡本-麥爾(Kaplan Meier)曲線；圖9展示T2病變體積自基線至第96週之中值改變。Y軸展示T2病變體積mm3；圖10展示安慰劑組及利妥昔單抗組中個體之基線特徵及危險比率之概述；圖11展示對安慰劑組及利妥昔單抗組中治療作用之年齡及基線釓(Gd)病變之相加預測作用的多變量分析。圖11A展示年齡小於51歲且基線Gd病變等於0之多變量分析。圖11B展示年齡51歲且基線Gd病變 等於0之多變量分析。圖11C展示年齡小於51歲且基線Gd病變1之多變量分析。圖11D展示年齡51歲且基線Gd病變1之多變量分析；圖12展示對安慰劑組及利妥昔單抗組中治療作用之年齡及多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)之相加預測作用的多變量分析。圖12A展示年齡55歲且MSSS小於5之多變量分析。圖12B展示年齡大於55歲且MSSS小於5之多變量分析。圖12C展示年齡55歲且MSSS5之多變量分析。圖12D展示年齡大於55歲且MSSS5之多變量分析；及圖13展示安慰劑組及利妥昔單抗組中具有以下特徵之個體之確診之疾病進展之時間的卡本-麥爾曲線：年齡55；3基線EDSS6.5；排除疾病持續時間超過10年且基線EDSS小於5或疾病持續時間超過15年且基線EDSS5之患者。
I.定義
「B細胞」為在骨髓內成熟之淋巴細胞，且包括原生B細胞、記憶B細胞或效應B細胞(漿細胞)。本文中之B細胞可為正常B細胞或非惡性B細胞。
本文之「B細胞表面標誌」或「B細胞表面抗原」為表現於可由與其結合之抗體靶向之B細胞表面上的抗原。例示性B細胞表面標誌包括CD10、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD24、CD37、CD40、CD53、CD72、CD73、CD74、CDw75、CDw76、CD77、CDw78、CD79a、CD79b、CD80、CD81、CD82、CD83、CDw84、CD85及CD86白細胞表面標誌(關於描述參見The Leukocyte Antigen Facts Book，第2版1997,Barclay等人編Academic Press,Harcourt Brace & Co.,New York)。其他B細胞表面標誌包括RP105、FcRH2、B細胞CR2、CCR6、P2X5、HLA-DOB、CXCR5、FCER2、BR3、Btig、NAG14、SLGC16270、FcRH1、IRTA2、ATWD578、FcRH3、 IRTA1、FcRH6、BCMA及239287。本文中特別關注之B細胞表面標誌較佳表現於哺乳動物之B細胞上而非其他非B細胞組織上，且於前驅B細胞及成熟B細胞上皆可表現。本文中之較佳B細胞表面標誌為CD20。
「CD20」抗原或「CD20」為可見於外周血液或淋巴器官之超過90% B細胞之表面上的約35kDa非糖基化磷蛋白。CD20存在於正常B細胞以及惡性B細胞上，但不表現於幹細胞上。文獻中CD20之其他名稱包括「B-淋巴細胞限制性抗原」及「Bp35」。CD20抗原係描述於例如Clark等人Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)82：1766(1985)中。
本文之「抗體拮抗劑」為在與B細胞上之B細胞表面標誌結合時破壞或消耗哺乳動物體內的B細胞及/或例如藉由減輕或阻止由B細胞引起之體液反應來干擾一或多種B細胞功能的抗體。抗體拮抗劑較佳能消耗用其治療之哺乳動物體內之B細胞(亦即減少循環B細胞含量)。該消耗可藉由各種機制達成，諸如抗體依賴性細胞介導之細胞毒性作用(ADCC)及/或補體依賴性細胞毒性作用(CDC)、對B細胞增殖之抑制及/或誘導B細胞死亡(例如藉由細胞凋亡)。
「抗體依賴性細胞介導之細胞毒性」及「ADCC」係指細胞介導之反應，其中表現Fc受體(FcR)之非特異性細胞毒性細胞(例如天然殺手(NK)細胞、嗜中性白血球及巨噬細胞)識別目標細胞上之結合抗體且隨後引起目標細胞溶解。介導ADCC之初級細胞NK細胞僅表現FcγRIII，而單核細胞表現FcγRI、FcγRII及FcγRIII。FcR在造血細胞上之表現概述於Ravetch及Kinet,Annu.Rev.Immunol 9：457-92(1991)第464頁上的表3中。為了評估所關注分子的ADCC活性，可進行活體外ADCC檢定，諸如美國專利第5,500,362號或第5,821,337號中所述的檢定。該等檢定之適用效應細胞包括外周血液單核細胞(PBMC)及天然殺手(NK)細胞。另外或其他，所關注分子的ADCC活性可於活體 內，例如在動物模型(諸如Clynes等人PNAS(USA)95：652-656(1998)中所揭示之動物模型)中評估。
「人類效應細胞」為表現一或多種FcR且執行效應功能之白細胞。在一些實施例中，細胞至少表現FcγRIII且執行ADCC效應功能。介導ADCC之人類白細胞之實例包括外周血液單核細胞(PBMC)、天然殺手(NK)細胞、單核細胞、細胞毒性T細胞及嗜中性白血球；其中PBMC及NK細胞較佳。
術語「Fc受體」或「FcR」用以描述與抗體之Fc區結合的受體。在一些實施例中，FcR為天然序列人類FcR。此外，較佳FcR為結合IgG抗體者(γ受體)且包括FcγRI、FcγRII及FcγRIII子類之受體，包括對偶基因變異體及此等受體之替代剪接形式。FcγRII受體包括FcγRIIA(「活化受體」)及FcγRIIB(「抑制受體」)，其具有相似但主要在細胞質域方面不同之胺基酸序列。活化受體FcγRIIA在其細胞質域中含有基於免疫受體酪胺酸之活化基元(ITAM)。抑制受體FcγRIIB之細胞質域中含有基於免疫受體酪胺酸之抑制基元(ITIM)(參見Daëron,Annu.Rev.Immunol.15：203-234(1997))。FcR回顧於Ravetch及Kinet,Annu.Rev.Immunol 9：457-92(1991)；Capel等人，Immunomethods 4：25-34(1994)及de Haas等人，J.Lab.Clin.Med.126：330-41(1995)中。其他FcR(包括有待將來鑑別之彼等FcR)皆涵蓋於本文中之術語「FcR」中。該術語亦包括新生兒受體FcRn，其負責將母親IgG轉移至胎兒(Guyer等人，J.Immunol.117：587(1976)及Kim等人，J.Immunol.24：249(1994))。
「補體依賴性細胞毒性」或「CDC」係指分子在補體存在下溶解目標之能力。補體活化路徑係藉由補體系統之第一組份(C1q)同與同源抗原複合之分子(例如抗體)結合啟始。為評估補體活化，可進行例如如Gazzano-Santoro等人，J.Immunol.Methods 202：163(1996)中所述 之CDC檢定。
「生長抑制性」抗體為彼等阻止或減少表現與該抗體結合之抗原的細胞之增殖的抗體。舉例而言，該抗體可活體外及/或活體內阻止或減少B細胞之增殖。
「誘導細胞凋亡」之抗體為例如如由標準細胞凋亡檢定(諸如磷脂結合蛋白V(annexin V)之結合、DNA碎裂、細胞收縮、內質網擴張、細胞碎裂及/或膜囊形成(稱作細胞凋亡體))所確定，誘導漸進式細胞死亡(例如B細胞死亡)之彼等抗體。
本文中之術語「抗體」以最廣泛含義使用且特別涵蓋單株抗體、多株抗體、由至少兩種完整抗體形成之多特異性抗體(例如雙特異性抗體)及抗體片段，只要其展現所要生物活性即可。
「抗體片段」包含完整抗體之一部分，該部分較佳包含其抗原結合區。抗體片段之實例包括Fab、Fab'、F(ab')2及Fv片段；雙功能抗體；線性抗體；單鏈抗體分子；及由抗體片段形成之多特異性抗體。
出於本文之目的，「完整抗體」為包含重鏈可變域及輕鏈可變域以及Fc區之抗體。
「天然抗體」通常為包含兩條相同輕(L)鏈及兩條相同重(H)鏈的約150,000道爾頓(dalton)之異質四聚體醣蛋白。各輕鏈由一個共價雙硫鍵與重鏈連接，而雙硫鍵之數目隨不同免疫球蛋白同型之重鏈而不同。各重鏈及輕鏈亦具有規則間隔之鏈內雙硫橋。各重鏈在一末端具有可變域(VH)，其後為多個恆定域。各輕鏈在一端具有可變域(VL)且在另一端具有恆定域；輕鏈之恆定域與重鏈之第一恆定域對準，且輕鏈可變域與重鏈之可變域對準。咸信特定胺基酸殘基在輕鏈可變域與重鏈可變域之間形成界面。
術語「可變」係指抗體可變域之某些部分的序列大不相同且該等部分用於各特定抗體對其特定抗原之結合及特異性。然而，可變性 在抗體之整個可變域中並非均勻分布。其集中於輕鏈可變域與重鏈可變域中三個稱作高變區之區段中。可變域之更高度保守部分稱作構架區(FR)。天然重鏈及輕鏈之可變域各包含4個FR，大部分採用β摺疊片構型，經形成環連接且在一些情況下形成β摺疊片結構之一部分的三個高變區連接。各鏈中之高變區經FR與其他鏈之高變區緊密接近保持在一起，促進抗體之抗原結合位點之形成(參見Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版公共衛生署(Public Health Service)，國立健康研究院(National Institutes of Health),Bethesda,MD.(1991))。雖然恆定域並不直接參與抗體與抗原之結合中，但其展現各種效應功能，諸如抗體參與抗體依賴性細胞毒性(ADCC)。
抗體之木瓜蛋白酶消化產生兩個稱為「Fab」片段之各自具有單一抗原結合位點的相同抗原結合片段及殘餘「Fc」片段，該名稱「Fc」片段反映其能容易地結晶。胃蛋白酶處理產生F(ab')2片段，其具有兩個抗原結合位點且仍能夠交聯抗原。
「Fv」為含有完整抗原識別及抗原結合位點之最小抗體片段。此區由一個重鏈可變域與一個輕鏈可變域緊密、非共價締合之二聚體組成。在此構型中，各可變域之三個高變區相互作用以界定VH-VL二聚體表面上之抗原結合位點。六個高變區共同使抗體具有抗原結合特異性。然而，即使單一可變域(或僅包含三個對抗原具特異性之高變區之一半Fv)亦具有識別及結合抗原之能力，但親和力比完整結合位點之親和力低。
Fab片段亦含有輕鏈之恆定域及重鏈之第一恆定域(CH1)。Fab'片段因在重鏈CH1域之羧基末端添加幾個殘基(包括一或多個來自抗體鉸鏈區之半胱胺酸)而與Fab片段不同。Fab'-SH為本文中對恆定域之半胱胺酸殘基帶有至少一個游離硫醇基之Fab'的名稱。F(ab')2抗體片 段最初以中間具有鉸鏈半胱胺酸之Fab'片段對形式產生。亦已知抗體片段之其他化學偶合。
來自任何脊椎動物物種之抗體(免疫球蛋白)的「輕鏈」基於其恆定域之胺基酸序列可歸類為兩種明顯不同類型(稱作κ及λ)之一。
根據重鏈恆定域之胺基酸序列，抗體可歸入不同類別。存在5種主要完整抗體類別：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且此等類別中之數種可進一步分成子類(同型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA及IgA2。對應於抗體之不同類別的重鏈恆定域分別稱作α、δ、ε、γ及μ。不同類別免疫球蛋白之次單位結構及三維構型為眾所周知。
「單鏈Fv」或「scFv」抗體片段包含抗體之VH域及VL域，其中此等結構域存在於單一多肽鏈中。在一些實施例中，Fv多肽在VH域與VL域之間進一步包含多肽連接子，其使scFv能夠形成抗原結合所需之結構。關於scFv之回顧參見Plückthun之The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg及Moore編，Springer-Verlag,New York，第269-315頁(1994)。
術語「雙功能抗體」係指具有兩個抗原結合位點之小抗體片段，該等片段包含在同一多肽鏈(VH-VL)中與輕鏈可變域(VL)連接之重鏈可變域(VH)。藉由使用過短以致同一鏈上之兩個結構域之間無法配對的連接子，迫使該等結構域與另一鏈之互補結構域配對且產生兩個抗原結合位點。雙功能抗體更充分描述於(例如)EP 404,097；WO 93/11161；及Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90：6444-6448(1993)中。
如本文所用之術語「單株抗體」係指自一群實質上同源之抗體獲得的抗體，亦即除在單株抗體產生期間可能出現之可能變異體(該等變異體一般以較少量存在)外，構成該群體之個別抗體均相同及/或結合相同抗原決定基。與通常包括針對不同決定子(抗原決定基)之不 同抗體的多株抗體製劑相比，各單株抗體係針對抗原上之單一決定子。除其特異性外，單株抗體亦因未受其他免疫球蛋白污染而為適宜的。修飾語「單株」指示抗體特徵為獲自實質上同源之抗體群體且不應將其視為要求藉由任何特定方法產生抗體。舉例而言，可藉由Kohler等人，Nature,256：495(1975)首先描述之融合瘤方法或可藉由重組DNA方法(參見例如美國專利第4,816,567號)製造待根據本發明使用之單株抗體。亦可使用例如Clackson等人，Nature,352：624-628(1991)及Marks等人，J.Mol.Biol.,222：581-597(1991)中描述之技術自噬菌體抗體文庫分離「單株抗體」。
本文之單株抗體尤其包括「嵌合」抗體(免疫球蛋白)，其中重鏈及/或輕鏈之一部分與來源於特定物種或屬於特定抗體類別或子類之抗體的相應序列相同或同源，而鏈之其餘部分與來源於另一物種或屬於另一抗體類別或子類之抗體的相應序列相同或同源；以及該等抗體之片段，只要其展現所需生物活性即可(美國專利第4,816,567號；Morrison等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81：6851-6855(1984))。本文中關注之嵌合抗體包括「靈長類化」抗體，其包含來源於非人類靈長類動物(例如舊大陸猴(Old World Monkey)，諸如狒狒、恆河猴或獼猴)之可變域抗原結合序列及人類恆定區序列(美國專利第5,693,780號)。
非人類(例如鼠類)抗體之「人類化」形式為含有來源於非人類免疫球蛋白之最小序列的嵌合抗體。人類化抗體主要為人類免疫球蛋白(受體抗體)，其中來自受體之高變區的殘基經來自諸如小鼠、大鼠、兔或非人類靈長類動物之非人類物種(供體抗體)之高變區且具有所需特異性、親和力及能力的殘基置換。在一些情況下，人類免疫球蛋白之構架區(FR)殘基經相應非人類殘基置換。此外，人類化抗體可包含受體抗體或供體抗體中不存在之殘基。進行此等修飾以進一步改進抗 體效能。一般而言，人類化抗體包含至少一個及通常兩個可變域中的實質上全部，其中所有或實質上所有高變環對應於非人類免疫球蛋白之彼等高變環且所有或實質上所有FR為人類免疫球蛋白序列之彼等FR，但存在上文所述之FR取代。人類化抗體視情況亦包含免疫球蛋白恆定區之至少一部分，通常為人類免疫球蛋白之恆定區。欲知詳情，請參見Jones等人，Nature 321：522-525(1986)；Riechmann等人，Nature 332：323-329(1988)；及Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2：593-596(1992)。
術語「高變區」當在本文中使用時係指負責抗原結合之抗體胺基酸殘基。高變區包含「互補決定區」或「CDR」之胺基酸殘基(例如輕鏈可變域中之殘基24-34(L1)、50-56(L2)及89-97(L3)，及重鏈可變域中之31-35(H1)、50-65(H2)及95-102(H3)；Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，公共衛生署(Public Health Service)，國立健康研究院(National Institutes of Health),Bethesda,MD.(1991))及/或「高變環」之彼等殘基(例如輕鏈可變域之殘基26-32(L1)、50-52(L2)及91-96(L3)，及重鏈可變域之26-32(H1)、53-55(H2)及96-101(H3)；Chothia及Lesk J.Mol.Biol.196：901-917(1987))。「構架」或「FR」殘基為除如本文所定義之高變區殘基以外的彼等可變域殘基。
「裸抗體」為未與諸如細胞毒性部分或放射性標記之異源分子結合之(如本文所定義之)抗體。
抗CD20抗體之實例包括：「C2B8」，現稱為「利妥昔單抗(rituximab)」(「RITUXAN®/MABTHERA®」)(U.S.5,736,137)；稱為「Y2B8」或「替伊莫單抗(Ibritumomab Tiuxetan)」(ZEVALIN®)之經釔[90]標記之2B8鼠類抗體，其可購自Biogen Idec,Inc.(例如U.S.5,736,137；1993年6月22日以寄存編號HB11388寄存之2B8)；鼠類 IgG2a「B1」，亦稱為「托西莫單抗(Tositumomab)」，視情況經131I標記以產生「131I-B1」或「碘I131托西莫單抗」抗體(BEXXARTM)，可購自Corixa(亦參見例如U.S.5,595,721)；鼠類單株抗體「1F5」(例如Press等人Blood 69(2)：584-591(1987))及其變異體，包括「經修補構架」或人類化1F5(例如WO 2003/002607,Leung,S.；ATCC寄存HB-96450)；鼠類2H7及嵌合2H7抗體(例如U.S.5,677,180)；2H7抗體(例如WO 2004/056312(Lowman等人)及如上所闡明)；HUMAX-CD20TM(奧法土莫單抗)完全人類高親和力抗體，其靶向B細胞細胞膜中之CD20分子(Genmab,Denmark；參見例如Glennie及van de Winkel,Drug Discovery Today 8：503-510(2003)及Cragg等人，Blood 101：1045-1052(2003))；WO 2004/035607及WO 2005/103081(Teeling等人，GenMab/Medarex)中闡明之人類單株抗體；US 2004/0093621(Shitara等人)中所描述具有與Fc區結合之複合N醣苷連接型糖鏈之抗體；WO 2006/106959(Numazaki等人，Biomedics Inc.)中所描述對CD20抗原之胞外抗原決定基具有高結合親和力之嵌合或人類化單株抗體；與CD20結合之單株抗體及抗原結合片段(例如WO 2005/000901，Tedder等人)，諸如HB20-3、HB20-4、HB20-25及MB20-11；與CD20結合之單鏈蛋白，包括(但不限於)TRU-015(例如US 2005/0186216(Ledbetter及Hayden-Ledbetter)；US 2005/0202534(Hayden-Ledbetter及Ledbetter)；US 2005/0202028(Hayden-Ledbetter及Ledbetter)；US 2005/136049(Ledbetter等人)；US 2005/0202023(Hayden-Ledbetter及Ledbetter)-Trubion Pharm Inc.)；如例如WO 2004/103404；US 2005/0025764及US 2006/0251652(Watkins等人，Applied Molecular Evolution,Inc.)中所闡明之CD20結合分子，諸如AME系列抗體，例如AME-133TM抗體及如例如WO 2005/070963(Allan等人，Applied Molecular Evolution,Inc.)中所闡明具有Fc突變之抗CD20抗體；CD20結合分子，諸如彼等描述於WO 2005/016969及US 2005/0069545(Carr等人)中之分子；如例如WO 2005/014618(Chang等人)中所闡明之雙特異性抗體；如以下所闡明之人類化LL2單株抗體及其他抗CD20抗體：例如U.S.7,151,164(Hansen等人，Immunomedics；US 2005/0106108(Leung及Hansen；Immunomedics)；如例如WO 2006/130458；Gazit等人，Amgen/AstraZeneca中所述針對CD20之完全人類抗體)；如例如WO 2006/126069(Morawala,Avestha Gengraine Technologies Pvt Ltd.)中所述針對CD20之抗體；如例如WO 2005/044859、US 2005/0123546、US 2004/0072290及US 2003/0175884(Umana等人；GlycArt Biotechnology AG)中所述針對CD20之嵌合或人類化B-Ly1抗體；A20抗體或其變異體，諸如嵌合或人類化A20抗體(分別為cA20、hA20)及IMMUN-106(例如US 2003/0219433,Immunomedics)；及可購自International Leukocyte Typing Workshop(例如Valentine等人，Leukocyte Typing III(McMichael編，第440頁，Oxford University Press(1987)))之單株抗體L27、G28-2、93-1B3、B-C1或NU-B2。在一些實施例中，本文中之抗CD20抗體為嵌合人類化或人類抗CD20抗體(更佳為利妥昔單抗)、2H7抗體、嵌合或人類化A20抗體(Immunomedics)及HUMAX-CD20TM人類抗CD20抗體(Genmab)。
本文之術語「利妥昔單抗」或「RITUXAN®」係指經遺傳工程改造之針對CD20抗原且在美國專利第5,736,137號中命名為「C2B8」的嵌合鼠類/人類單株抗體，包括其保留結合CD20之能力的片段。利妥昔單抗可購自Genentech。
純粹出於本文之目的且除非另外指明，否則「人類化2H7」係指結合人類CD20之人類化抗體或其抗原結合片段，其中該抗體在活體內有效消耗靈長類動物B細胞，該抗體在其H鏈可變區(VH)中包含至 少一個來自抗人類CD20抗體之SEQ ID NO：12之CDR H3序列(圖1B)及實質上人類重鏈子群III(VHIII)的人類共同構架(FR)殘基。在一些實施例中，此抗體進一步包含SEQ ID NO：10之H鏈CDR H1序列及SEQ ID NO：11之CDR H2序列，且在一些實施例中，進一步包含SEQ ID NO：4之L鏈CDR L1序列、SEQ ID NO：5之CDR L2序列、SEQ ID NO：6之CDR L3序列及實質上人類輕鏈子群I(VI)的人類共同構架(FR)殘基，其中VH區可與人類IgG鏈恆定區聯接，其中該區可為例如IgG1或IgG3。在一些實施例中，該抗體包含SEQ ID NO：8之VH序列(v16，如圖1B中所示)，視情況亦包含SEQ ID NO：2之VL序列(v16，如圖1A中所示)，其可在H鏈中具有胺基酸取代D56A及N100A及在L鏈(v96)中具有胺基酸取代S92A。在一些實施例中，抗體為完整抗體，其分別包含如圖2及3中所示之SEQ ID NO：13及14之輕鏈及重鏈胺基酸序列。在一些實施例中，抗體為2H7.v31，其分別包含如圖2及4中所示之SEQ ID NO：13及15之輕鏈及重鏈胺基酸序列。本文之抗體可進一步在Fc區中包含至少一個改良ADCC及/或CDC活性的胺基酸取代，諸如其中胺基酸取代為S298A/E333A/K334A者，且在一些實施例中為具有SEQ ID NO：15之重鏈胺基酸序列之2H7.v31(如圖4中所示)。此等任何抗體可進一步在Fc區中包含至少一個降低CDC活性的胺基酸取代，例如至少包含K322A取代。參見美國專利第6,528,624B1號(Idusogie等人)。
本文中之術語「奧克利珠單抗」係指經遺傳工程改造之針對CD20抗原且包含(a)包含SEQ ID NO：13胺基酸序列之輕鏈及(b)包含SEQ ID NO：14胺基酸序列之重鏈的人類化單株抗體，包括其保留結合CD20之能力的片段。奧克利珠單抗可自Genentech獲得。
「經分離」抗體為已經鑑別且自其天然環境之組份分離及/或回收之抗體。其天然環境之污染組份為干擾抗體之診斷或治療用途之物 質，且可包括酶、激素及其他蛋白質或非蛋白質溶質。在一些實施例中，抗體將純化：(1)至如藉由勞立法(Lowry method)所測定大於95重量%抗體且在一些實施例中大於99重量%；(2)至足以藉由使用轉杯式定序儀獲得N端或內部胺基酸序列之至少15個殘基之程度；或(3)至藉由SDS-PAGE在還原或非還原條件下使用庫馬斯藍(Coomassie blue)或在一些實施例中使用銀染色測定為均質。由於抗體之天然環境之至少一種組份將不存在，所以經分離抗體包括重組細胞內之原位抗體。然而，經分離抗體通常將藉由至少一個純化步驟來製備。
本文中之「個體」或「患者」為人類個體或患者。一般而言，該個體或患者符合多發性硬化症之治療條件。出於本文中之目的，該符合條件之個體或患者為經歷、已經歷或可能經歷多發性硬化症之一或多種徵兆、症狀或其他指標之患者；已診斷患有多發性硬化症(例如最近診斷(患有「新發」MS)；先前診斷且最近復發或惡化；先前診斷且正在緩解等)及/或具有發展多發性硬化症之危險的患者。患有多發性硬化症或具有患多發性硬化症危險之患者可視情況鑑別為經篩選血清、腦脊髓液(CSF)及/或MS病變中CD20陽性B細胞之含量升高及/或使用偵測自體抗體(定性評估且較佳定量評估)之檢定篩選的患者。與多發性硬化症相關之該等例示性自體抗體包括抗髓鞘鹼性蛋白(MBP)、抗髓鞘寡樹突神經膠質細胞醣蛋白(MOG)、抗神經節醣脂及/或抗神經纖毛抗體。該等自體抗體可在個體血清、腦脊髓液(CSF)及/或MS病變中偵測到。本文中自體抗體或B細胞含量「升高」意謂該等自體抗體或B細胞之含量顯著超過無MS個體之含量。
如本文所用之「治療」為獲得有益或所需結果(包括臨床結果)之手段。出於本發明之目的，有益或所需臨床結果包括(但不限於)一或多種以下結果：減輕由疾病產生之一或多種症狀；降低疾病程度；使疾病穩定(例如預防或延緩疾病惡化)；延緩或減慢疾病進展；改善疾 病病況；減少治療疾病所需之一或多種其他藥物之劑量及/或提高生活品質。
如本文所用之「延緩」多發性硬化症之進展意謂拖延、阻礙、減慢、延遲、穩定及/或推遲疾病發展。視病史及/或所治療之個體而定，此延緩可具有不同時間長度。
如本文所用之「開始治療時」係指首次暴露於多發性硬化症藥物(諸如抗CD20抗體)時或之前的時期。在一些實施例中，「開始治療時」大致為使用多發性硬化症藥物(諸如抗CD20抗體)前一年、九個月、六個月、三個月、兩個月或一個月中之任何時間。在一些實施例中，「開始治療時」為首次暴露於多發性硬化症藥物(諸如抗CD20抗體)前即刻至同時。
如本文所用之「基於」包括(1)評估、測定或量測如本文所述之患者特徵且較佳選擇適合接受治療之患者，及(2)投與如本文所述之治療。
MS之「症狀」為個體所經歷且指示MS之結構、功能或感覺之任何病態現象或非正常現象。
「多發性硬化症」係指以進展型髓鞘受損為特徵之中樞神經系統之慢性且通常致殘的疾病。存在四種國際上公認之MS形式，亦即原發性進展型多發性硬化症(PPMS)、復發緩解型多發性硬化症(RRMS)、繼發性進展型多發性硬化症(SPMS)及進展復發型多發性硬化症(PRMS)。
如本文所用之「進展型多發性硬化症」係指原發性進展型多發性硬化症(PPMS)、繼發性進展型多發性硬化症(SPMS)及進展復發型多發性硬化症(PRMS)。在一些實施例中，進展型多發性硬化症特徵為不可歸因於臨床復發的有記錄證明之不可逆神經功能損失持續6個月。
「原發性進展型多發性硬化症」或「PPMS」特徵為疾病自發作起逐漸進展，完全無疊加復發及緩解。可能存在疾病活動性穩定之時期且可能存在數天或數週之好轉期及惡化期。PPMS因通常在將近四十或四十出頭時發作，男女發展該疾病之可能性相同且初始疾病活動性通常在脊髓中而非腦中而不同於RRMS及SPMS。PPMS通常轉移至腦中，但損傷腦區的可能性比RRMS或SPMS小。舉例而言，患有PPMS的人產生認知問題之可能性小於患有RRMS或SPMS的人。PPMS為最不可能在MRI掃描上顯示發炎性(釓增強)病變之MS子型。原發性進展型疾病形式所影響之個體在所有患多發性硬化症之個體中的10%至15%之間。PPMS可根據McDonald等人Ann Neurol 50：121-7(2001)之準則來定義。本文中所治療之患有PPMS之個體通常為具有可能或明確PPMS診斷的個體。
「復發緩解型多發性硬化症」或「RRMS」特徵為期間可出現新症狀且舊症狀重新顯現或惡化之復發(亦稱為惡化)。復發之後為緩解期，期間個體自復發期間獲得之缺損完全或部分恢復。復發可持續數天、數週或數月且恢復可為緩慢且逐漸恢復或幾乎瞬時恢復。絕大多數表現出MS的人首先診斷為RRMS。此診斷通常在其二十多歲或三十多歲時，儘管早得多或晚得多的診斷為已知的。表現出此MS子型之女性為男性的兩倍。在復發期間，髓鞘(中樞神經系統(CNS)白質區中神經纖維(神經元)周圍的保護性隔離鞘)可能在身體自體免疫系統之發炎性反應中受損。此引起多種神經症狀，視CNS受損之區域而顯著不同。復發後即刻，發炎性反應逐漸消失且CNS中特定類型之神經膠質細胞(稱為寡樹突神經膠質細胞)促使髓鞘再生(軸突周圍之髓鞘可藉以修復之過程)。可能此髓鞘再生即為緩解之原因。約50%患RRMS之患者在疾病發作10年內轉變為SPMS。30年後，此數字升至90%。在任一時刻，復發緩解型疾病佔所有患MS個體中的約55%。
「繼發性進展型多發性硬化症」或「SPMS」特徵為臨床神經損傷穩步進展，伴有或不伴有疊加復發及較少緩解及平穩期。發展SPMS的個體先前會經歷可能已持續兩年至四十年或更長時間之RRMS期。所存在之任何疊加復發及緩解傾向於隨時間逐漸減弱。自疾病之繼發性進展型階段開始，殘疾開始以比RRMS期間快得多的速度進展，儘管在一些個體中該過程可仍相當緩慢。10年後，50%患RRMS之患者會發展SPMS。25至30年後，彼數字會升至90%。SPMS傾向於以發炎性病變形成程度低於RRMS，但總疾病負擔持續進展為特徵。在任一時刻，SPMS佔所有患多發性硬化症個體中的約30%。
「進展復發型多發性硬化症」係指以臨床神經損傷穩步進展，伴有疊加復發及緩解為特徵之「PRMS」。復發後即刻即存在明顯恢復，但在復發之間存在症狀的逐漸惡化。PRMS影響所有患多發性硬化症之個體中的約5%。一些神經學家相信PRMS為PPMS之變體。
表述「有效量」係指有效改善或治療多發性硬化症之抗體(或其他藥物)的量。該有效量一般使得MS之徵兆、症狀或其他指標改良，諸如降低復發率、防止殘疾、降低腦MRI病變數量及/或體積、改善定時25步行走、減慢或延緩疾病進展，諸如延長至疾病進展之時間(例如使用擴展殘疾狀態量表，EDSS)等。
「抗體暴露」係指在約1-20天之時期內接觸或暴露於所投與之一或多個劑量的本文抗體。該等劑量可一次性給予或在此暴露時期內以固定時間間隔或無規時間間隔給予。如本文中所詳細描述，初始及稍後(例如第二或第三)抗體暴露彼此間隔一定時間。
如本文所用之術語用於輔助治療之「免疫抑制劑」係指用於抑制或遮蔽本文中所治療哺乳動物之免疫系統的物質。其將包括抑制細胞激素產生、下調或抑制自體抗原表現或遮蔽MHC抗原之物質。該等藥劑之實例包括2-胺基-6-芳基-5-取代之嘧啶(參見美國專利第 4,665,077號)；非類固醇消炎藥(NSAID)；更昔洛韋(ganciclovir)、他克莫司(tacrolimus)、諸如皮質醇或醛固酮之糖皮質激素、諸如環加氧酶抑制劑、5-脂肪加氧酶抑制劑或白三烯受體拮抗劑之消炎劑；嘌呤拮抗劑，諸如硫唑嘌呤或黴酚酸酯(mycophenolate mofetil，MMF)；烷化劑，諸如環磷醯胺；溴隱定(bromocryptine)；達那唑(danazol)；氨苯碸(dapsone)；戊二醛(如美國專利第4,120,649號中所述，其遮蔽MHC抗原)；MHC抗原及MHC片段之抗遺傳型抗體；環孢素A(cyclosporin A)；類固醇，諸如皮質類固醇或糖皮質類固醇或糖皮質激素類似物(例如強的松(prednisone)、甲潑尼龍(methylprednisolone)及地塞米松(dexamethasone))；二氫葉酸還原酶抑制劑，諸如甲胺喋呤(methotrexate)(口服或皮下)；羥基氯喹(hydroxycloroquine)；柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine)；來氟米特(leflunomide)；細胞激素或細胞激素受體拮抗劑，包括抗干擾素α、β或γ抗體、抗腫瘤壞死因子α抗體(英利昔單抗(infliximab)或阿達木單抗(adalimumab))、抗TNFα免疫黏附素(依那西普(etanercept))、抗腫瘤壞死因子β抗體、抗介白素2抗體及抗IL-2受體抗體；抗LFA-1抗體，包括抗CD11a及抗CD18抗體；抗L3T4抗體；異源抗淋巴細胞球蛋白；泛T抗體(pan-T antibody)，較佳抗CD3或抗CD4/CD4a抗體；含有LFA-3結合域之可溶性肽(7/26/90公開之WO 90/08187)；鏈球菌激酶；TGFβ；鏈球菌去氧核糖核酸酶(streptodornase)；來自宿主之RNA或DNA；FK506；RS-61443；去氧史帕胍淋(deoxyspergualin)；雷帕黴素(rapamycin)；T細胞受體(Cohen等人之美國專利第5,114,721號)；T細胞受體片段(Offner等人，Science,251：430-432(1991)；WO 90/11294；Ianeway,Nature,341：482(1989)；及WO 91/01133)；及T細胞受體抗體(EP 340,109)，諸如T10B9。
如本文所用之術語「細胞毒性劑」係指抑制或阻遏細胞功能及/ 或引起細胞破壞之物質。該術語意欲包括放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32及Lu之放射性同位素)、化學治療劑及毒素，諸如小分子毒素或細菌、真菌、植物或動物來源之酶促活性毒素或其片段。
「化學治療劑」為適用於治療癌症之化合物。化學治療劑之實例包括烷基化劑，諸如噻替哌(thiotepa)及CYTOXAN®環磷醯胺(cyclosphosphamide)；磺酸烷基酯，諸如白消胺(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶，諸如苯并多巴(benzodopa)、卡巴醌(carboquone)、麥曲多巴(meturedopa)及尤利多巴(uredopa)；伸乙基亞胺及甲基三聚氰胺，包括六甲蜜胺(altretamine)、三伸乙基三聚氰胺(triethylenemelamine)、三伸乙基磷醯胺(triethylenephosphoramide)、三伸乙基硫代磷醯胺(triethiylenethiophosphoramide)及三羥甲基三聚氰胺(trimethylolomelamine)；多聚乙醯(acetogenin)(尤其布拉他辛(bullatacin)及布拉他辛酮(bullatacinone))；喜樹鹼(camptothecin)(包括合成類似物拓朴替康(topotecan))；苔蘚抑素(bryostatin)；卡利他汀(callystatin)；CC-1065(包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)及比折來新(bizelesin)合成類似物)；念珠藻環肽(cryptophycin)(尤其念珠藻環肽1及念珠藻環肽8)；海兔毒素(dolastatin)；多卡黴素(duocarmycin)(包括合成類似物KW-2189及CB1-TM1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；潘卡替他汀(pancratistatin)；沙科地辛(sarcodictyin)；海綿素(spongistatin)；氮芥(nitrogen mustard)，諸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、膽磷醯胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、二氯甲二乙胺(mechlorethamine)、鹽酸甲氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法侖(melphalan)、新恩比 興(novembichin)、苯芥膽甾醇(phenesterine)、潑尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亞硝基脲(nitrosurea)，諸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)及拉努司汀(ranimnustine)；抗生素，諸如烯二炔抗生素(例如刺孢黴素(calicheamicin)，尤其刺孢黴素γ1I及刺孢黴素ωI1(參見例如Agnew,Chem Intl.Ed.Engl.,33：183-186(1994))；達內黴素(dynemicin)，包括達內黴素A；雙膦酸鹽，諸如氯屈膦酸鹽(clodronate)；埃斯培拉黴素(esperamicin)；以及新制癌菌素發色團(neocarzinostatin chromophore)及相關色蛋白烯二炔抗生素發色團)、阿克萊諾黴素(aclacinomysin)、放線菌素(actinomycin)、奧瑟黴素(authramycin)、偶氮絲胺酸(azaserine)、博萊黴素(bleomycin)、放線菌素C(cactinomycin)、卡洛比星(carabicin)、洋紅黴素(carminomycin)、嗜癌黴素(carzinophilin)、色黴素(chromomycinis)、放線菌素D(dactinomycin)、道諾黴素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-側氧基-L-正白胺酸、ADRIAMYCIN®小紅莓(包括嗎啉基-小紅莓、氰基嗎啉基-小紅莓、2-吡咯啉基-小紅莓及去氧小紅莓)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達比星(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素(諸如絲裂黴素C)、黴酚酸(mycophenolic acid)、諾拉黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycin)、培洛黴素(peplomycin)、博替羅黴素(potfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、三鐵阿黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑黴素(streptonigrin)、鏈脲佐菌素(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代謝物，諸如甲胺喋呤及5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)(5-FU)；葉酸類似物，諸如迪諾特寧 (denopterin)、甲胺喋呤、蝶羅呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤類似物，諸如氟達拉賓(fludarabine)、6-巰嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物，諸如安西他濱(ancitabine)、阿紮胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、雙去氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄激素，諸如卡普睾酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、環硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾內酯(testolactone)；抗腎上腺劑，諸如胺魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補充劑，諸如亞葉酸(folinic acid)；醋葡醛內酯(aceglatone)；醛磷醯胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；胺基乙醯丙酸(aminolevulinic acid)；乙炔尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；貝曲布辛(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；伊達曲仙(edatraxate)；德弗法明(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；伊弗尼辛(elfornithine)；依利醋銨(elliptinium acetate)；艾普塞隆(epothilone)；依託格魯(etoglucid)；硝酸鎵；羥基脲；蘑菇多糖(lentinan)；洛尼達寧(lonidainine)；類美登素(maytansinoid)，諸如美登素(maytansine)及安絲菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌；莫吡丹莫(mopidanmol)；尼曲伊寧(nitraerine)；噴司他丁(pentostatin)；蛋胺氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；足葉草酸(podophyllinic acid)；2-乙基醯肼；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK®多醣複合物(JHS Natural Products,Eugene,OR)；雷佐生(razoxane)；根瘤菌素(rhizoxin)；西佐喃(sizofiran)；鍺螺胺(spirogermanium)；細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2"-三氯三乙胺； 新月毒素(trichothecene)(尤其T-2毒素、費羅菌素A(verracurin A)、漆斑菌素A(roridin A)及蛇形菌素(anguidine))；烏拉坦(urethan)；長春地辛(vindesine)；達卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；瓜西托辛(gacytosine)；阿拉伯糖苷(arabinoside)(「Ara-C」)；環磷醯胺；噻替哌；紫杉醇(taxoid)，例如TAXOL®太平洋紫杉醇(paclitaxel)(Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)、ABRAXANETM不含十六醇聚氧乙烯醚之太平洋紫杉醇之白蛋白工程改造奈米顆粒調配物(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,Illinois)及TAXOTERE®多西他賽(doxetaxel)(Rhône-Poulenc Rorer,Antony,France)；氯萊布辛(chloranbucil)；GEMZAR®吉西他濱(gemcitabine)；6-硫鳥嘌呤；巰基嘌呤；甲胺喋呤；鉑類似物，諸如順鉑(cisplatin)及卡鉑(carboplatin)；長春鹼；鉑；依託泊苷(etoposide)(VP-16)；異環磷醯胺(ifosfamide)；米托蒽醌；長春新鹼；NAVELBINE®長春瑞賓(vinorelbine)；諾凡特龍(novantrone)；替尼泊甙(teniposide)；依達曲沙(edatrexate)；道諾黴素(daunomycin)；胺基喋呤(aminopterin)；希羅達(xeloda)；伊班膦酸鹽(ibandronate)；CPT-11；拓撲異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(DMFO)；類視黃素，諸如視黃酸；卡西他賓(capecitabine)；及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物。
此定義亦包括抗激素劑，其用以調節或抑制激素對腫瘤之作用，諸如抗雌激素及選擇性雌激素受體調節劑(SERM)，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)(包括NOLVADEX®他莫昔芬)、雷諾昔酚(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、雷洛昔芬鹽酸鹽(keoxifene)、LY117018、奧那司酮 (onapristone)及FARESTON-托瑞米芬(FARESTON-toremifene)；芳香酶抑制劑，其抑制調控腎上腺中雌激素產生之芳香酶，諸如4(5)-咪唑、胺基格魯米特(aminoglutethimide)、MEGASE®乙酸甲地孕酮(megestrol acetate)、AROMASIN®依西美坦(exemestane)、弗米斯坦(formestanie)、法屈唑(fadrozole)、RIVISOR®伏羅唑(vorozole)、FEMARA®來曲唑(letrozole)及ARIMIDEX®安美達錠(anastrozole)；及抗雄激素，諸如氟他胺(flutamide)、尼魯胺(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、亮丙瑞林(leuprolide)及戈舍瑞林(goserelin)；以及曲沙他濱(troxacitabine)(1,3-二氧戊環核苷胞嘧啶類似物)；反義寡核苷酸，尤其抑制異常細胞增殖中所涉及之信號傳導路徑中的基因表現之彼等反義寡核苷酸，諸如PKC-α、Ralf及H-Ras；疫苗，諸如基因療法疫苗，例如ALLOVECTIN®疫苗、LEUVECTIN®疫苗及VAXID®疫苗；PROLEUKIN® rIL-2；LURTOTECAN®拓撲異構酶1抑制劑；ABARELIX® rmRH；及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物。
術語「細胞激素」為關於由一個細胞群體所釋放並作為細胞間介體作用於另一細胞之蛋白質的通用術語。該等細胞激素之實例為淋巴因子；單核球激素；介白素(IL)，諸如IL-1、IL-1α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-11、IL-12及IL-15；腫瘤壞死因子，諸如TNF-α或TNF-β；及其他多肽因子，包括LIF及kit配位體(KL)。如本文所用之術語細胞激素包括來自天然來源或來自重組細胞培養物之蛋白質及天然序列細胞激素之生物活性等效物，包括合成產生之小分子實體及其醫藥學上可接受之衍生物及鹽。
術語「激素」係指一般由具有管道之腺器官分泌之多肽激素。激素包括例如生長激素，諸如人類生長激素、N-甲硫胺醯基人類生長激素及牛生長激素；副甲狀腺激素；甲狀腺素；胰島素；前胰島素； 鬆弛素；鬆弛素原；醣蛋白激素，諸如促濾泡激素(FSH)、促甲狀腺激素(TSH)及促黃體生成激素(LH)；促乳素、胎盤催乳激素、小鼠促性腺激素相關肽；抑制素(inhibin)；活化素(activin)；苗勒氏管抑制物質(mullerian-inhibiting substance)；及血小板生成素(thrombopoietin)。如本文所用之術語激素包括來自天然來源或來自重組細胞培養物之蛋白質，及天然序列激素之生物活性等效物，其包括合成產生之小分子實體及其醫藥學上可接受之衍生物及鹽。
術語「生長因子」係指促進生長之蛋白質，且包括(例如)肝細胞生長因子；纖維母細胞生長因子；血管內皮生長因子；神經生長因子，諸如NGF-β；血小板衍生生長因子；轉變生長因子(TGF)，諸如TGF-α及TGF-β；類胰島素生長因子I及II；紅血球生成素(EPO)；骨誘導因子；干擾素，諸如干擾素α、β及γ；及群落刺激因子(CSF)，諸如巨噬細胞-CSF(M-CSF)；粒細胞-巨噬細胞-CSF(GM-CSF)；及粒細胞-CSF(G-CSF)。如本文所用之術語生長因子包括來自天然來源或來自重組細胞培養物之蛋白質，及天然序列生長因子之生物活性等效物，包括合成產生之小分子實體及其醫藥學上可接受之衍生物及鹽。
術語「整合素」係指允許細胞結合及回應胞外基質之受體蛋白，且其參與多種細胞功能，諸如傷口癒合、細胞分化、腫瘤細胞之歸巢及細胞凋亡。其為細胞-胞外基質及細胞-細胞相互作用中所涉及之細胞黏附受體大家族的一部分。功能性整合素係由兩個非共價結合之跨膜醣蛋白次單位(稱為α及β)組成。α次單位彼此皆共有一些同源性，β次單位亦如此。受體始終含有一個α鏈及一個β鏈。實例包括α6β1、α3β1、α7β1、LFA-1、α4整合素等。如本文所用之術語整合素包括來自天然來源或來自重組細胞培養物之蛋白質，及天然序列整合素之生物活性等效物，包括合成產生之小分子實體及其醫藥學上可接受之衍生物及鹽。
本文中之「整合素拮抗劑或抗體」之實例包括LFA-1抗體，諸如可購自Genentech之依法利珠單抗(efalizumab)(RAPTIVA®)；α4整合素抗體，諸如可購自Biogen Idec/Elan Pharmaceuticals,Inc.之那他珠單抗(TYSABRI®)；二氮雜環苯丙胺酸衍生物(WO 2003/89410)；苯丙胺酸衍生物(WO 2003/70709、WO 2002/28830、WO 2002/16329及WO 2003/53926)；苯基丙酸衍生物(WO 2003/10135)；烯胺衍生物(WO 2001/79173)；丙酸衍生物(WO 2000/37444)；烷酸衍生物(WO 2000/32575)；經取代苯基衍生物(美國專利第6,677,339號及第6,348,463號)；芳族胺衍生物(美國專利第6,369,229號)；及ADAM解整合素域多肽(US 2002/0042368)、針對αvβ3整合素之抗體(EP 633945)；氮雜橋聯雙環胺基酸衍生物(WO 2002/02556)等。
出於本文之目的，「腫瘤壞死因子α(TNF-α)」係指人類TNF-α分子，其包含描述於Pennica等人，Nature,312：721(1984)或Aggarwal等人，JBC,260：2345(1985)中之胺基酸序列。
本文之「TNF-α抑制劑」為通常藉由與TNF-α結合且中和其活性而在某種程度上抑制TNF-α之生物功能之藥劑。本文中特別涵蓋之TNF抑制劑之實例為依那西普(ENBREL®)、英利昔單抗(REMICADE®)及阿達木單抗(HUMIRATM)。
「疾病改善性抗風濕藥」或「DMARD」之實例包括羥基氯喹、柳氮磺胺吡啶、甲胺喋呤、來氟米特、依那西普、英利昔單抗(加口服及皮下甲胺喋呤)、硫唑嘌呤、D-青黴胺(D-penicillamine)、金製劑(口服)、金製劑(肌肉內)、二甲胺四環素(minocycline)、環孢菌素(cyclosporine)、葡萄球菌蛋白A免疫吸附，包括其鹽及衍生物等。
「非類固醇消炎藥」或「NSAID」之實例為乙醯基水楊酸、布洛芬(ibuprofen)、萘普生(naproxen)、吲哚美辛(indomethacin)、舒林酸(sulindac)、托美汀(tolmetin)，包括其鹽及衍生物。
「皮質類固醇」係指模擬或強化天然存在之皮質類固醇之作用的具有類固醇之一般化學結構的若干合成或天然存在之物質中的任一者。合成皮質類固醇之實例包括強的松(prednisone)、潑尼松龍(prednisolone)(包括甲潑尼龍)、地塞米松、糖皮質激素及倍他米松(betamethasone)。
「藥品說明書」係用於指通常包括於治療產品之商業包裝中含有關於適應症、用法、劑量、投藥、禁忌症、待與包裝產品組合之其他治療產品及/或關於該等治療產品之使用之警告等之資訊的說明書。
本文中使用「標籤」指通常連同商業醫藥調配物包裝(包括諸如小瓶之容器及藥品說明書以及其他類型之包裝)一起包括之資訊。
本文中提及「約」某值或某參數包括(及描述)針對彼值或參數本身之變化。舉例而言，關於「約X」之描述包括對「X」之描述。
除非上下文另外明確規定，否則如在本文中及在隨附申請專利範圍中所用，單數形式「一」、「或」及「該」包括複數個指示物。應瞭解本文中描述之本發明之態樣及變型包括「由態樣及變型組成」及/或「基本上由態樣及變型組成」。
II.治療方法
本發明提供治療患者之進展型多發性硬化症之方法，其包含向患者投與有效量之抗CD20抗體。
在一些實施例中，本發明提供治療患者之進展型多發性硬化症之方法，其包含向患者投與有效量之抗CD20抗體，其中治療係基於患者具有一或多種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。
在一些實施例中，本發明提供治療患者之進展型多發性硬化症之方法，限制條件為發現患者具有一或多種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分，治療包含向該患者投與有效量之抗CD20抗體。
在一些實施例中，本發明提供治療患者之進展型多發性硬化症之方法，其包含向患者投與有效量之抗CD20抗體，其中該患者在開始治療時具有一或多種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分，藉此年齡、釓染色病變、開始治療前兩年內之EDDS增加、MSSS或其組合之證據指示個體會對用抗CD20抗體治療有反應。
在一些實施例中，本發明提供治療進展型多發性硬化症之方法，其包含：(a)選擇具有一或多種選自由以下組成之群之特徵之患者：(i)年齡小於約55歲；(ii)一或多個釓染色病變，(iii)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(iv)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分；及(b)向如此選擇之患者投與有效量之抗CD20抗體。
在一些實施例中，本發明提供治療患者之進展型多發性硬化症之方法，其包含向患者投與有效量之抗CD20抗體，且其中使用一或多種選自由以下組成之群之特徵作為選擇接受治療之患者的基礎：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分，且其中該治療包含向患者投與有效量之 抗CD20抗體。
本發明另外提供治療患者之多發性硬化症之方法，其包含向患者投與有效量之奧克利珠單抗以提供約0.3公克至約0.6公克之間的初始奧克利珠單抗暴露，隨後提供約0.3公克至約0.6公克之間的第二奧克利珠單抗暴露，該第二暴露直至初始暴露後約16週至60週才提供，且以一個劑量或兩個劑量之奧克利珠單抗形式向患者提供各次奧克利珠單抗暴露。在一些實施例中，初始奧克利珠單抗暴露為約0.6公克。在一些實施例中，第二奧克利珠單抗暴露為約0.6公克。在一些實施例中，該第二暴露在初始暴露後約24週投與。在一些實施例中，以一個劑量之奧克利珠單抗形式向患者提供一或多次奧克利珠單抗暴露。在一些實施例中，以兩個劑量之奧克利珠單抗形式向患者提供一或多次奧克利珠單抗暴露。在一些實施例中，兩個劑量之奧克利珠單抗包含約0.3公克奧克利珠單抗。
本發明亦提供評估及/或預測患有進展型多發性硬化症之患者對抗CD20抗體治療之反應性的方法。
在一些實施例中，本發明提供評估患有進展型多發性硬化症之患者是否對用抗CD20抗體治療有反應的方法，其包含評估一或多種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分，其中患者之一或多種特徵指示患者會對治療有反應。
在一些實施例中，本發明提供評估患有進展型多發性硬化症之患者是否對用抗CD20抗體治療有反應的方法，其包含：(a)評估一或多種選自由以下組成之群之特徵：(i)年齡小於約55歲；(ii)一或多個釓染色病變，(iii)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(iv)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分；及 (b)實施演算法來確定患者是否對該治療有反應，及(c)記錄所測試患者之特異性結果。
在一些實施例中，本發明提供治療患者之進展型多發性硬化症之方法，其包含：(a)評估一或多種選自由以下組成之群之特徵：(i)年齡小於約55歲，(ii)一或多個釓染色病變，(iii)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(iv)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分，其中基於患者一或多種具有選自由以下組成之群之特徵來選擇供治療的患者：(i)年齡小於約55歲，(ii)一或多個釓染色病變，(iii)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(iv)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分；及(b)藉由向該所選患者投與有效量之抗CD20抗體治療該所選患者。
在一些實施例中，本發明提供為患有進展型多發性硬化症之患者及/或患者群體選擇療法之方法，其包含：(a)評估一或多種選自由以下組成之群之特徵：(i)年齡小於約55歲，(ii)一或多個釓染色病變，(iii)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(iv)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分；及(b)在患者或患者群體具有一或多種選自由以下組成之群之特徵的情況下選擇抗CD20抗體來治療：(i)年齡小於約55歲，(ii)一或多個釓染色病變，(iii)在開始抗CD20治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(iv)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。
在一些實施例中，本發明提供預測患有進展型多發性硬化症之個體是否會對抗CD20抗體有反應之方法，該方法包含評估一或多種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分，藉此年齡、釓染色病變、開始治療前兩年內之EDDS增加、MSSS或其組合指 示患者會對抗CD20抗體有反應。
在一些實施例中，本發明提供鑑別可能對抗CD20抗體治療有反應的患有進展型多發性硬化症之患者的方法，其包含：(a)評估一或多種選自由以下組成之群之特徵：(i)年齡小於約55歲，(ii)一或多個釓染色病變，(iii)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(iv)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分；及(b)鑑別具有一或多種選自由以下組成之群之特徵之患者：(i)年齡小於約55歲，(ii)一或多個釓染色病變，(iii)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(iv)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。
在本文中所述之治療、評估及/或預測反應性之任何方法的一些實施例中，患者具有一或多種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，及(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分。
在本文中所述之評估及/或預測反應性之任何方法的一些實施例中，該等方法進一步包含給患者提供建議。
在本文中所述之治療及評估及/或預測反應性之任何方法的一些實施例中，患者具有一種以上選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。在本文中所述之治療及評估及/或預測反應性之任何方法的一些實施例中，患者具有兩種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。在一些實施例中，患者具有三種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色 病變，及(c)在開始治療前兩年內EDSS增加至少約一分。在一些實施例中，患者具有(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。
在本文中所述之治療及評估及/或預測反應性之任何方法的一些實施例中，進展型多發性硬化症為原發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為繼發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為進展復發型多發性硬化症。在一些實施例中，在開始治療時患者及/或患者群體未診斷患有復發緩解型多發性硬化症。
在本文中所述之治療及評估及/或預測反應性之任何方法的一些實施例中，患者及/或患者群體之樣本中進一步具有炎症跡象。炎症跡象藉由評估一或多個炎症指標來指示。樣本可為用以評估炎症之任何合適樣本。在一些實施例中，樣本為組織或流體。在一些實施例中，流體樣本為腦脊髓液樣本。在一些實施例中，炎症跡象由IgG指數升高指示。在一些實施例中，炎症跡象由以等電聚焦偵測之IgG寡選殖帶指示。在一些實施例中，炎症跡象由MRI偵測。在一些實施例中，炎症跡象由存在Gd增強病變或T2病變偵測。評估炎症跡象之其他方法在此項技術中已知。
在本文中所述之治療及評估及/或預測反應性之任何方法的一些實施例中，患者及/或患者群體之特徵為在一段時間內EDSS改變。在一些實施例中，患者及/或患者群體之特徵為開始抗CD20抗體治療前兩年內EDSS增加至少約1分、1.25分、1.5分、1.75分、2分、2.25分、2.5分、2.75分或3分中之任一者。在一些實施例中，EDSS增加為在開始治療前兩年內EDSS增加至少約1.5分。在一些實施例中，開始治療前兩年內之EDSS增加不可歸因於復發。在一些實施例中，患者及/或 患者群體之特徵為具有高於約5.0之EDSS持續少於約5年、6年、7年、8年、9年、10年、11年、12年、13年、14年、15年、16年、17年、18年、19年或20年中之任一者。在一些實施例中，患者及/或患者群體之特徵為具有高於約5.0之EDSS持續少於約15年。在一些實施例中，患者及/或患者群體之特徵為具有小於或等於約5.0之EDSS持續少於約5年、6年、7年、8年、9年、10年、11年、12年、13年、14年或15年中之任一者。在一些實施例中，患者及/或患者群體之特徵為具有小於或等於約5.0之EDSS持續少於約10年。
在本文中所述之治療及評估及/或預測反應性之任何方法的一些實施例中，患者及/或患者群體之特徵為具有約為1.5分至7分，1.5分至6.5分，2分至6.5分或3分至6.5分中任一者之間的EDSS。在一些實施例中，患者及/或患者群體之特徵為在開始治療時具有約3.0與約6.5之間的EDSS。
在本文中所述之治療、評估及/或預測反應性之任何方法的一些實施例中，患者及/或患者群體之特徵為具有高於約6、7、8或9中任一者之MSSS。在本文中所述之治療及評估及/或預測反應性之任何方法的一些實施例中，患者及/或患者群體之特徵為具有高於約9之MSSS。
在本文中所述之治療及評估及/或預測反應性之任何方法的一些實施例中，患者及/或患者群體之其他特徵為在開始治療前兩年內具有兩次或兩次以上復發。在一些實施例中，患者及/或患者群體之其他特徵為在開始治療前兩年內具有2次復發、3次復發、4次復發或5次復發中之任一者。
在本文中所述之治療及評估及/或預測反應性之任何方法的一些實施例中，患者及/或患者群體以年齡為特徵。在一些實施例中，患者及/或患者群體之特徵為年齡小於約55歲、54歲、53歲、52歲、51 歲或50歲中之任一者。在一些實施例中，患者及/或患者群體之特徵為年齡小於約51歲。
在本文中所述之治療及評估及/或預測反應性之任何方法的一些實施例中，治療縮短確診之疾病進展之時間。在一些實施例中，確診之疾病進展為持續約4週、8週、12週、16週、20週、24週、28週或32週中任一者之EDSS增加。在一些實施例中，確診之疾病進展為持續十二週之EDSS增加。在一些實施例中，確診之疾病進展為持續二十四週之EDSS增加。
在本文中所述之治療及評估及/或預測反應性之任何方法的一些實施例中，抗CD20抗體包含：a)包含SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11及SEQ ID NO：12之重鏈可變區，及b)包含SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5及SEQ ID NO：6之輕鏈可變區。在本文中所述之任何方法之一些實施例中，抗CD20抗體為奧克利珠單抗。在本文中所述之任何方法之一些實施例中，抗CD20抗體為利妥昔單抗。在本文中所述之任何方法之一些實施例中，抗CD20抗體為奧法土莫單抗。在本文中所述之任何方法之一些實施例中，抗CD20抗體為TRU-015或SBI-087。在本文中所述之任何方法之一些實施例中，抗CD20抗體為GA101。在本文中所述之任何方法之一些實施例中，抗CD20抗體為hA20。
本文中所述之方法可涵蓋本文中所述之實施例之任何組合。舉例而言，該等方法包括治療及評估及/或預測之方法，其中患者(a)年齡小於約55歲且(b)具有一或多個釓染色病變。
III.劑量
根據本文中所述之任何方法或製品之一些實施例，方法或說明書包含向多發性硬化症患者投與有效量之抗CD20抗體以提供約0.3公克至約4公克(較佳約0.3公克至約1.5公克，諸如約0.6公克至約1.0公克)之初始抗體暴露，隨後約0.3公克至約4公克(較佳約0.3公克至約1.5 公克，諸如約0.6公克或約1.0公克)之第二抗體暴露，該第二抗體暴露直至初始抗體暴露後約16週至約60週後才提供。出於本發明之目的，第二抗體暴露為下一次在初始抗體暴露後以抗CD20抗體治療患者，在初始暴露與第二暴露之間不存在插入抗CD20抗體治療或暴露。在一些實施例中，初始抗體暴露及/或第二抗體暴露大致為0.3公克、0.4公克、0.5公克、0.6公克、0.7公克、0.8公克、0.9公克或1.0公克中之任一者。
初始抗體暴露與第二或後續抗體暴露之間的時間間隔可自第一劑量或第二劑量之初始抗體暴露起計算，但在一些實施例中，自第一劑量之初始抗體暴露起計算。
在一些實施例中，抗體暴露大約間隔24週或6個月或大約間隔48週或12個月。
在一實施例中，第二抗體暴露直至初始暴露後約20週至約30週才提供，視情況隨後為約0.3公克至約4公克(較佳約0.3公克至約1.5公克)之第三抗體暴露，該第三暴露直至初始暴露後約46週至60週(較佳約46週至54週)才投與，且接著在一些實施例中，其他抗體暴露直至初始暴露後至少約70週至75週才提供。在一些實施例中，第三抗體暴露大致為0.3公克、0.4公克、0.5公克、0.6公克、0.7公克、0.8公克、0.9公克或1.0公克中之任一者。
在替代實施例中，第二抗體暴露直至初始暴露後約46週至60週才提供，且後續抗體暴露(若存在)直至先前抗體暴露後約46週至60週才提供。
可以單一劑量抗體或兩次分開劑量抗體(亦即構成第一劑量及第二劑量)形式向患者提供本文之任一或多次抗體暴露。各抗體暴露所採用之特定劑量數(一個或兩個)視例如所治療MS之類型、所採用抗體之類型、是否採用及採用何種類型之第二藥劑及投藥方法及頻率而 定。當投與兩次單獨劑量時，第二劑量較佳在投與第一劑量時間之後約3天至17天，更佳約6天至16天且最佳約13天至16天投與。在一些實施例中，當投與兩次單獨劑量時，第二劑量為約14天。當投與兩次單獨劑量時，抗體之第一劑量及第二劑量較佳為約0.3公克至1.5公克，更佳為約0.3公克至約1.0公克。在一些實施例中，當投與兩次單獨劑量時，抗體之第一劑量及第二劑量大致為0.3公克、0.4公克、0.5公克或0.6公克中之任一者。在一些實施例中，初始奧克利珠單抗暴露包含第一劑量及第二劑量之奧克利珠單抗，其中奧克利珠單抗之第一劑量及第二劑量為約0.3公克。在一些實施例中，第二奧克利珠單抗暴露包含單一劑量之奧克利珠單抗，其中奧克利珠單抗之單一劑量為0.6公克。
在一實施例中，向患者提供至少約三次、至少約四次或至少約五次抗體暴露，例如約3次至60次暴露及更特定言之約3次至40次暴露，最特定言之約3次至20次暴露。在任何該等方法中之一些實施例中，該等方法進一步包含提供約一次至約三次之間的後續奧克利珠單抗暴露。在一些實施例中，以各自約24週或6個月或48週或12個月之時間間隔投與該等暴露。在一實施例中，以單一劑量抗體形式提供各次抗體暴露。在一替代實施例中，以兩次單獨劑量抗體形式提供各次抗體暴露。然而，並非每次抗體暴露均需要以單一劑量或兩個單獨劑量形式提供。
抗體可為裸抗體或可與另一分子結合，諸如細胞毒性劑，諸如放射性化合物。在一些實施例中，抗體為利妥昔單抗、人類化2H7(例如包含SEQ ID NO 2及8之可變域序列)或包含SEQ ID NO 23及24之可變域序列之人類化2H7或huMax-CD20(Genmab)。在一些實施例中，抗體為奧克利珠單抗(例如包含(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO：13之輕鏈及(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO：14之重鏈)。
在一實施例中，患者先前從未經諸如免疫抑制劑之用以治療多發性硬化症的藥物治療及/或先前從未經針對B細胞表面標誌之抗體治療(例如先前從未經CD20抗體治療)。
抗體藉由任何合適方式投與，包括非經腸、局部、皮下、腹膜內、肺內、鼻內及/或病變內投藥。非經腸輸注包括肌肉內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下投藥。亦涵蓋鞘內投藥(例如參見美國專利申請案第2002/0009444號，Grillo-Lopez,A，關於CD20抗體之鞘內傳遞)。此外，可適當藉由脈衝輸注例如以遞減抗體劑量投與抗體。在一些實施例中，劑量係以靜脈內、皮下或鞘內方式給予。在一些實施例中，劑量係藉由靜脈內輸液給予。
當CD20抗體可能為向患者投與來治療多發性硬化症之唯一藥物時，可視情況連同結合B細胞表面標誌之抗體(例如連同CD20抗體)一起投與第二藥物，諸如細胞毒性劑、化學治療劑、免疫抑制劑、細胞激素、細胞激素拮抗劑或抗體、生長因子、激素、整合素、整合素拮抗劑或抗體(例如LFA-1抗體，諸如可購自Genentech之依法利珠單抗(RAPTIVA®)，或α4整合素抗體，諸如可購自Biogen Idec/Elan Pharmaceuticals,Inc之那他珠單抗(TYSABRI®))等。
在組合療法之一些實施例中，抗體與以下組合：干擾素類藥物，諸如IFN-β-1a(REBIF®及AVONEX®)或IFN-β-1b(BETASERON®)；寡肽，諸如乙酸格拉替雷(COPAXONE®)；細胞毒性劑，諸如米托蒽醌(NOVANTRONE®)、甲胺喋呤、環磷醯胺、苯丁酸氮芥、硫唑嘌呤；靜脈內免疫球蛋白(γ球蛋白)；淋巴細胞消耗療法(例如米托蒽醌、環磷醯胺、坎帕斯(Campath)、抗CD4、克拉屈濱(cladribine)、全身照射、骨髓移植)；皮質類固醇(例如甲潑尼龍、強的松、地塞米松或糖皮質激素)，包括全身皮質類固醇療法；非淋巴細胞消耗免疫抑制療法(例如黴酚酸酯(MMF)或環孢素)；「斯達汀」類降膽固醇藥， 包括西立伐他汀(cerivastatin)(BAYCOL®)、氟伐他汀(fluvastatin)(LESCOL®)、阿托伐他汀(atorvastatin)(LIPITOR®)、洛伐他汀(lovastatin)(MEVACOR®)、普伐他汀(pravastatin)(PRAVACHOL®)、辛伐他汀(Simvastatin)(ZOCOR®)；雌二醇；睪固酮(testosterone)(視情況以高劑量使用，Stuve等人Neurology 8：290-301(2002))；激素替代療法；MS之繼發性或相關性症狀(例如痙攣、失禁、疼痛、疲勞)之治療；TNF抑制劑；疾病改善性抗風濕藥(DMARD)；非類固醇消炎藥(NSAID)；血漿清除術；左旋甲狀腺素；環孢素A；生長抑素類似物；細胞激素或細胞激素受體拮抗劑；抗代謝物；免疫抑制劑；康復手術；放射性碘；甲狀腺摘除術；另一B細胞表面拮抗劑/抗體等。
第二藥劑係與CD20抗體之初始暴露及/或稍後暴露一起投與，該組合投藥包括使用單獨調配物或單一醫藥調配物共同投藥，及以任一順序連續投藥，其中較佳存在兩種(或所有)活性劑同時發揮其生物活性的一段時間。
除向患者投與抗體外，本申請案涵蓋以基因療法投與抗體。表述投與「有效量」之抗體涵蓋該投與編碼抗體之核酸。參見例如1996年3月14日公開之WO 96/07321，其係關於使用基因療法來產生胞內抗體。
存在兩種使核酸(視情況含於載體內)進入患者細胞中之主要方法；活體內及離體。對於活體內傳遞，通常在需要抗體之部位將核酸直接注射至患者體內。為進行離體治療，移除患者細胞，將核酸引入此等經分離細胞中且將經修飾細胞直接投與患者，或例如囊封於植入患者體內之多孔膜內(參見例如美國專利第4,892,538號及第5,283,187號)。存在多種可用於將核酸引入活細胞中之技術。視將核酸活體外轉移至培養細胞中或活體內轉移至預定宿主之細胞中而定，該等技術 可不同。適於將核酸活體外轉移至哺乳動物細胞中之技術包括使用脂質體、電穿孔、顯微注射、細胞融合、DEAE-葡聚糖、磷酸鈣沈澱方法等。常用於離體傳遞基因之載體為反轉錄病毒。
在一些實施例中，活體內核酸轉移技術包括以病毒載體(諸如腺病毒、單純疱疹I病毒或腺相關病毒)及基於脂質之系統(適用於脂質介導之基因轉移的脂質為例如DOTMA、DOPE及DC-Chol)轉染。在某些情況下，需要向核酸來源提供靶向目標細胞之藥劑，諸如對細胞表面膜蛋白或目標細胞具特異性之抗體、目標細胞上之受體的配位體等。若採用脂質體，則可使用結合與內飲作用相關之細胞表面膜蛋白之蛋白質以靶向及/或促進吸收例如對特定細胞類型具有向性之衣殼蛋白或其片段、在循環中經歷內化之蛋白質的抗體，及靶向胞內定位且增強胞內半衰期之蛋白質。受體介導之內飲作用之技術由例如Wu等人，J.Biol.Chem.262：4429-4432(1987)；及Wagner等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87：3410-3414(1990)描述。關於目前已知之基因標誌及基因療法方案的回顧，參見Anderson等人，Science 256：808-813(1992)。亦參見WO 93/25673及其中引用的參考文獻。
IV.抗體及其產生
本發明之方法及製品使用或併有與B細胞表面標誌結合之抗體，尤其為與CD20結合之抗體。因此，產生該等抗體之方法將在本文中描述。
用於產生或篩選抗體之B細胞表面標誌可為(例如)含有所需抗原決定基之標誌或其一部分之可溶形式。或者或另外，在細胞表面表現標誌之細胞可用於產生或篩選抗體。適用於產生抗體之B細胞表面標誌之其他形式為熟習此項技術者所明瞭。
以下描述關於產生根據本發明使用之抗體之例示性技術。
(i)多株抗體
多株抗體較佳藉由多次皮下(sc)或腹膜內(ip)注射相關抗原及佐劑而在動物體內產生。其可適用於使用雙功能劑或衍生劑將相關抗原結合至在待免疫物種中具免疫原性之蛋白質，例如匙孔螺血氰蛋白、血清白蛋白、牛甲狀腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制劑，該雙功能劑或衍生劑為例如順丁烯二醯亞胺苯甲醯磺基丁二醯亞胺酯(經由半胱胺酸殘基結合)、N-羥基丁二醯亞胺(經由離胺酸殘基)、戊二醛、丁二酸酐、SOCl2或R1N=C=NR，其中R及R1為不同烷基。
藉由將例如100μg或5μg蛋白質或結合物(分別用於兔或小鼠)與3體積之弗氏完全佐劑(Freund's complete adjuvant)組合且在多個部位皮內注射該溶液以抗原、免疫原性結合物或衍生物免疫動物。一個月後，藉由在多個部位皮下注射以弗氏完全佐劑中1/5至1/10原始量之肽或結合物來強化動物。7至14天後對動物進行放血且檢定血清之抗體力價。強化動物直至力價平穩。在一些實施例中，以相同抗原(但該抗原與不同蛋白質結合及/或經由不同交聯劑結合)之結合物強化動物。結合物亦可在重組細胞培養物中以蛋白融合體形式產生。又，諸如礬之凝聚劑適用於增強免疫反應。
(ii)單株抗體
單株抗體係獲自實質上均質抗體之群體，亦即構成群體之個別抗體除在單株抗體產生期間產生之可能變異體(該等變異體一般以較少量存在)外相同及/或結合相同抗原決定基。因此，修飾語「單株」表明該抗體不為分立抗體或多株抗體之混合物的特徵。
舉例而言，單株抗體可使用Kohler等人，Nature,256：495(1975)首先描述之融合瘤方法製備或可藉由重組DNA方法(美國專利第4,816,567號)製備。
在融合瘤方法中，如本文中所述免疫小鼠或諸如倉鼠之其他適當宿主動物以誘出產生或能夠產生將與免疫所用之蛋白質特異性結合 之抗體的淋巴細胞。或者，可活體外免疫淋巴細胞。接著使用諸如聚乙二醇之合適融合劑使淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合以形成融合瘤細胞(Goding,Monoclonal Antibodies：Principles and Practice，第59-103頁(Academic Press,1986))。
接種如此製備之融合瘤細胞且使其生長於較佳含有一或多種抑制未融合親本骨髓瘤細胞生長或存活之物質的合適培養基中。舉例而言，若親本骨髓瘤細胞缺乏次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶(HGPRT或HPRT)，則用於融合瘤之培養基通常將包括次黃嘌呤、胺基喋呤及胸苷(HAT培養基)，該等物質防止HGPRT缺陷型細胞生長。
在一些實施例中，骨髓瘤細胞為有效融合、支持所選抗體產生細胞穩定且高含量產生抗體且對諸如HAT培養基之培養基敏感的彼等骨髓瘤細胞。其中，在一些實施例中，骨髓瘤細胞株為鼠類骨髓瘤細胞株，諸如來源於可獲自索爾克研究所細胞銷售中心(Salk Institute Cell Distribution Center)(San Diego,California USA)之MOPC-21及MPC-11小鼠腫瘤的彼等細胞株及可獲自美國菌種保存中心(American Type Culture Collection)(Rockville,Maryland USA)之SP-2或X63-Ag8-653細胞。亦描述人類骨髓瘤及小鼠-人類異源骨髓瘤細胞株用於製備人類單株抗體(Kozbor,J.Immunol.,133：3001(1984)；Brodeur等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications，第51-63頁(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987))。
檢定融合瘤細胞生長之培養基中針對抗原之單株抗體的產生。在一些實施例中，藉由免疫沈澱法或藉由活體外結合檢定，諸如放射免疫檢定(RIA)或酶聯免疫吸附檢定(ELISA)來測定融合瘤細胞產生之單株抗體的結合特異性。
單株抗體之結合親和力可例如藉由Munson等人，Anal.Biochem.,107：220(1980)之史卡查分析(Scatchard analysis)來測定。
鑑別產生具有所需特異性、親和力及/或活性之抗體之融合瘤細胞後，可藉由限制稀釋程序次選殖純系且藉由標準方法培養(Goding,Monoclonal Antibodies：Principles and Practice，第59-103頁(Academic Press,1986))。用於此目的之合適培養基包括例如D-MEM或RPMI-1640培養基。此外，融合瘤細胞可在動物體內以腹水腫瘤形式活體內生長。
藉由諸如蛋白質A-瓊脂糖、羥磷灰石層析法、凝膠電泳、透析或親和力層析法之習知免疫球蛋白純化程序，將由次純系分泌之單株抗體自培養基、腹水液或血清中適當分離。
編碼單株抗體之DNA易於使用習知程序(例如藉由使用能夠與編碼鼠類抗體之重鏈及輕鏈之基因特異性結合的寡核苷酸探針)分離及定序。在一些實施例中，將融合瘤細胞用作該DNA之來源。分離後，可將DNA置於表現載體中，隨後將該等表現載體轉染至不另外產生免疫球蛋白之宿主細胞(諸如大腸桿菌(E.coli)細胞、猿猴COS細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或骨髓瘤細胞)中以獲得在重組宿主細胞中合成單株抗體。關於編碼抗體之DNA在細菌中之重組表現的回顧文章包括Skerra等人，Curr.Opinion in Immunol.,5：256-262(1993)及Plückthun,Immunol.Revs.,130：151-188(1992)。
在另一實施例中，可自使用描述於McCafferty等人，Nature,348：552-554(1990)中之技術產生之抗體噬菌體文庫分離抗體或抗體片段。Clarkson等人，Nature 352：624-628(1991)及Marks等人，J.Mol.Biol.,222：581-597(1991)分別描述使用噬菌體文庫分離鼠類及人類抗體。後續公開案描述藉由鏈改組(Marks等人，Bio/Technology,10：779-783(1992))以及組合感染及活體內重組作為構築極大噬菌體文庫之策略(Waterhouse等人，Nuc.Acids.Res.,21：2265-2266(1993))來產生高親和力(nM範圍)人類抗體。因此，此等技術為用於分離單株抗 體之傳統單株抗體融合瘤技術之可行替代方法。
DNA亦可藉由例如用人類重鏈及輕鏈恆定域的編碼序列替代同源鼠類序列(美國專利第4,816,567號；Morrison等人，Proc.Natl Acad.Sci.USA,81：6851(1984))或藉由將非免疫球蛋白多肽之編碼序列的全部或部分與免疫球蛋白編碼序列共價聯接來修飾。
通常該等非免疫球蛋白多肽取代抗體恆定域，或其取代抗體之一個抗原組合位點之可變域以產生包含一個對抗原具有特異性之抗原組合位點及另一個對不同抗原具有特異性之抗原組合位點的嵌合二價抗體。
(iii)人類化抗體
已於此項技術中描述使非人類抗體人類化之方法。在一些實施例中，人類化抗體具有一或多個自非人類來源引入其中之胺基酸殘基。此等非人類胺基酸殘基通常稱為「輸入」殘基，其通常係取自「輸入」可變域。可基本上根據Winter及其同事(Jones等人，Nature,321：522-525(1986)；Riechmann等人，Nature,332：323-327(1988)；Verhoeyen等人，Science,239：1534-1536(1988))之方法，藉由以高變區序列取代人類抗體之相應序列進行人類化。因此，該等「人類化」抗體為嵌合抗體(美國專利第4,816,567號)，其中實質上小於完整人類可變域之部分經來自非人類物種之相應序列取代。實務上，人類化抗體通常為一些高變區殘基及可能一些FR殘基經來自齧齒動物抗體中之類似位點之殘基取代的人類抗體。
待用於製備人類化抗體之人類可變域(輕鏈及重鏈)之選擇對降低抗原性而言極為重要。根據所謂的「最佳匹配」法，針對整個已知人類可變域序列文庫篩選齧齒動物抗體之可變域序列。接著，接受最接近於齧齒動物序列之人類序列作為人類化抗體之人類構架區(FR)(Sims等人，J.Immunol.,151：2296(1993)；Chothia等人，J.Mol. Biol.,196：901(1987))。另一方法使用來源於特定子群輕鏈或重鏈可變區之所有人類抗體之共同序列的特定構架區。相同構架可用於數種不同人類化抗體(Carter等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89：4285(1992)；Presta等人，J.Immunol.,151：2623(1993))。
另外，經人類化抗體保留對抗原之高親和力及其他有利生物性質係重要的。為達成此目的，在該等方法之一些實施例中，藉由使用親本序列及人類化序列之三維模型來分析親本序列及各種概念性人類化產物的方法來製備人類化抗體。三維免疫球蛋白模型通常可用且為熟習此項技術者所熟知。可利用說明及呈現所選候選免疫球蛋白序列之可能三維構形結構的電腦程式。對此等呈現進行檢驗允許分析殘基在候選免疫球蛋白序列起作用過程中的可能作用，亦即分析影響候選免疫球蛋白結合其抗原之能力的殘基。以此方式，可自接受及輸入序列選擇FR殘基並將其組合，以便達成所需抗體特徵，諸如對目標抗原之親和力增加。一般而言，高變區殘基直接且大部分實質上參與影響抗原結合。
在一些實施例中，人類化抗CD20抗體為人類化2H7抗體。在一些實施例中，人類化2H7抗體較佳包含一個、兩個、三個、四個、五個或六個以下CDR序列：CDR L1序列RASSSVSYXH，其中X為M或L(SEQ ID NO 18)，例如SEQ ID NO：4(圖1A)，CDR L2序列SEQ ID NO：5(圖1A)，CDR L3序列QQWXFNPPT，其中X為S或A(SEQ ID NO 19)，例如SEQ ID NO：6(圖1A)，CDR H1序列SEQ ID NO：10(圖1B)，CDR H2序列AIYPGNGXTSYNQKFKG，其中X為D或A(SEQ ID NO 20)，例如SEQ ID NO：11(圖1B)，及 CDR H3序列VVYYSXXYWYFDV，其中位置6之X為N、A、Y、W或D且位置7之X為S或R(SEQ ID NO 21)，例如SEQ ID NO：12(圖1B)。
上述CDR序列一般存在於人類可變輕鏈及可變重鏈構架序列內，諸如實質上人類輕鏈κ子群I(VL6I)之人類共同FR殘基，及實質上人類重鏈子群III(VHIII)之人類共同FR殘基。亦參見WO 2004/056312(Lowman等人)。
在一些實施例中，可將可變重鏈區與人類IgG鏈恆定區聯接，其中該區域可為例如IgG1或IgG3，包括天然序列及變異型恆定區。
在一些實施例中，該抗體包含可變重鏈域序列SEQ ID NO：8(v16，如圖1B所示)，視情況亦包含可變輕鏈域序列SEQ ID NO：2(v16，如圖1A所示)，其視情況在可變重鏈域中在位置56、100及/或100a包含一或多個胺基酸取代，例如D56A、N100A或N100Y及/或S100aR，且在可變輕鏈域中在位置32及/或92包含一或多個胺基酸取代，例如M32L及/或S92A。在一些實施例中，抗體為包含輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO 13或16及重鏈胺基酸序列SEQ ID NO 14、15、17、22或25之完整抗體。在一些實施例中，人類化2H7抗體為奧克利珠單抗(Genentech)。
在該等實施例中，人類化2H7為包含以下可變輕鏈序列： (SEQ ID NO：2)； 及以下可變重鏈序列： (SEQ ID NO：8)之完整抗體或抗體片段。
在一些實施例中，人類化2H7抗體為完整抗體，在一些實施例中，其包含輕鏈胺基酸序列： (SEQ ID NO：13)；及重鏈胺基酸序列： (SEQ ID NO：14)或重鏈胺基酸序列： (SEQ ID NO：15)。
在一些實施例中，人類化2H7抗體包含2H7.v511可變輕鏈域序列： (SEQ ID NO：23)及2H7.v511可變重鏈域序列： (SEQ ID NO.24)。
在一些實施例中，人類化2H7.v511抗體為完整抗體，其可包含輕鏈胺基酸序列： (SEQ ID NO：16)及重鏈胺基酸序列SEQ ID NO 17或： (SEQ ID NO.25)。
在一些實施例中，本文中之抗體可進一步在Fc區中包含改良ADCC活性之至少一個胺基酸取代，諸如胺基酸取代在位置298、333及334之胺基酸取代，較佳S298A、E333A及K334A(使用重鏈殘基之Eu編號)。亦參見Presta之美國專利第6,737,056B1號。任何此等抗體可在Fc區中包含改良FcRn結合或血清半衰期之至少一個取代，例如重鏈位置434之取代，諸如N434W。亦參見Presta之美國專利第6,737,056B1號。任何此等抗體可進一步在Fc區中包含增加CDC活性之至少一個胺基酸取代，例如在位置326包含至少一個取代，較佳K326A或K326W。亦參見美國專利第6,528,624B1號(Idusogie等人)。
在一些實施例中，人類化2H7變異體為包含SEQ ID NO：2之可變輕鏈域及SEQ ID NO：8之可變重鏈域的彼等變異體，包括在Fc區(若存在)中具有或不具有取代之彼等變異體，及包含具有改變N100A；或D56A及N100A；或D56A、N100Y及S100aR之SEQ ID NO：8的可變重鏈域，及具有改變M32L；或S92A；或M32L及S92A之SEQ ID NO：2的可變輕鏈域的彼等變異體。2H7.v16之可變重鏈域中之M34經鑑別為可能的抗體穩定性來源且為另一可能取代候選者。
在本發明之一些實施例中，基於2H7.v16之變異體之可變區在除下表所指出之胺基酸取代位置以外之處包含v16胺基酸序列。除非另外指出，否則2H7變異體將具有與v16相同的輕鏈。
(iv)人類抗體
作為人類化之替代選擇，可產生人類抗體。舉例而言，現有可能產生免疫後能在不產生內源免疫球蛋白之情況下產生全套人類抗體譜系之轉殖基因動物(例如小鼠)。舉例而言，已描述在嵌合及生殖系突變型小鼠中同型接合缺失抗體重鏈接合區(JH)基因導致內源性抗體產生之完全抑制。將人類生殖系免疫球蛋白基因陣列轉移至該生殖系突變型小鼠體內將會在抗原激發後導致人類抗體產生。例如參見Jakobovits等人，Proc.Natl.Acad.Sci USA,90：2551(1993)；Jakobovits等人，Nature,362：255-258(1993)；Bruggermann等人，Year in Immuno.,7：33(1993)及美國專利第5,591,669號、第5,589,369號及第5,545,807號。
或者，可使用噬菌體呈現技術(McCafferty等人，Nature 348：552-553(1990))自未免疫供體之免疫球蛋白可變(V)域基因譜系活體外產生人類抗體及抗體片段。根據此技術，將抗體V域基因同框選殖入絲 狀噬菌體之主要或次要鞘蛋白基因(諸如M13或fd)中，且以功能性抗體片段形式呈現於噬菌體粒子之表面上。由於絲狀粒子含有噬菌體基因組之單鏈DNA複本，因此基於抗體之功能性質進行選擇亦引起對編碼展現彼等性質之抗體之基因的選擇。因此，噬菌體模擬B細胞之一些性質。噬菌體呈現可以多種形式進行；關於其回顧參見例如Johnson,Kevin S.及Chiswell,David J.,Current Opinion in Structural Biology 3：564-571(1993)。可使用數種V基因區段來源進行噬菌體呈現。Clackson等人，Nature,352：624-628(1991)自來源於經免疫小鼠脾臟之V基因之小隨機組合文庫分離抗噁唑酮抗體之不同陣列。可構築來自未經免疫人類供體之V基因譜系，且可基本上按照Marks等人，J.Mol.Biol.222：581-597(1991)或Griffith等人，EMBO J.12：725-734(1993)所述之技術分離針對不同抗原陣列(包括自體抗原)之抗體。亦參見美國專利第5,565,332號及第5,573,905號。
人類抗體亦可藉由活體外活化B細胞產生(參見美國專利第5,567,610號及第5,229,275號)。
(v)抗體片段
已研發出各種技術用於產生抗體片段。傳統上，此等片段係藉由完整抗體之蛋白水解消化而產生(參見例如Morimoto等人，Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24：107-117(1992)及Brennan等人，Science,229：81(1985))。然而，現可直接藉由重組宿主細胞產生此等片段。舉例而言，抗體片段可自以上論述之抗體噬菌體文庫分離。或者，可直接自大腸桿菌回收Fab'-SH片段且使其化學偶合以形成F(ab')2片段(Carter等人，Bio/Technology 10：163-167(1992))。根據另一方法，F(ab')2片段可自重組宿主細胞培養物直接分離。產生抗體片段之其他技術將為熟練從業者所明瞭。在其他實施例中，所選抗體為單鏈Fv片段(scFv)。參見WO 93/16185；美國專利第5,571,894號及 美國專利第5,587,458號。抗體片段亦可為「線抗體」，例如美國專利5,641,870中所述。該等線抗體片段可為單特異性或雙特異性抗體。
(vi)雙特異性抗體
雙特異性抗體為對至少兩種不同抗原決定基具有結合特異性之抗體。例示性雙特異性抗體可與B細胞表面標誌之兩個不同抗原決定基結合。其他該等抗體可結合B細胞表面標誌且進一步結合第二不同B細胞表面標誌。或者，抗B細胞表面標誌結合臂可與結合白血球上之觸發分子(諸如T細胞受體分子(例如CD2或CD3))或IgG之Fc受體(FcγR)(諸如FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)及FcγRIII(CD16))的臂組合以便使細胞防禦機制集中於B細胞。亦可使用雙特異性抗體使細胞毒性劑定位於B細胞。此等抗體具有B細胞表面標誌結合臂及結合細胞毒性劑(例如沙伯甯(saporin)、抗干擾素-α、長春花生物鹼(vinca alkaloid)、蓖麻毒素A鏈、甲胺喋呤或放射性同位素半抗原)之臂。雙特異性抗體可以全長抗體或抗體片段(例如F(ab')2雙特異性抗體)形式製備。
用於製造雙特異性抗體之方法在此項技術中已知。全長雙特異性抗體之傳統製備係基於兩個免疫球蛋白重鏈/輕鏈對之共同表現，其中兩條鏈具有不同特異性(Millstein等人，Nature,305：537-539(1983))。由於免疫球蛋白重鏈及輕鏈隨機搭配，所以此等融合瘤(四重融合瘤(quadromas))產生10種不同抗體分子之潛在混合物，其中僅一種分子具有正確的雙特異性結構。通常藉由親和力層析步驟進行之正確分子之純化相當繁瑣，且產物產量較低。類似程序揭示於WO 93/08829及Traunecker等人，EMBO J.,10：3655-3659(1991)中。
根據不同方法，將具有所需結合特異性(抗體-抗原組合位點)之抗體可變域與免疫球蛋白恆定域序列融合。在一些實施例中，與免疫球蛋白重鏈恆定域(包含鉸鏈、CH2及CH3區之至少一部分)融合。在 一些實施例中，含有為輕鏈結合所必需之位點的第一重鏈恆定區(CH1)存在於至少一個該等融合體中。將編碼免疫球蛋白重鏈融合體及必要時編碼免疫球蛋白輕鏈之DNA插入獨立表現載體中且共轉染至合適宿主生物體中。在該構築中所使用之三個多肽鏈之不等比率提供最佳產量的實施例中，此舉提供調節三個多肽片段之相互比例的高靈活性。然而，當等比率之至少兩個多肽鏈之表現產生高產量時或當比率不具有特別重要性時，可能在一個表現載體中插入兩個或所有三個多肽鏈之編碼序列。
在此方法之一些實施例中，雙特異性抗體在一臂中包含具有第一結合特異性之雜交免疫球蛋白重鏈及在另一臂中包含雜交免疫球蛋白重鏈輕鏈對(提供第二結合特異性)。發現此不對稱結構促進自不需要的免疫球蛋白鏈組合中分離所需雙特異性化合物，此係因為僅一半雙特異性分子中存在免疫球蛋白輕鏈提供容易的分離方式。此方法揭示於WO 94/04690中。關於產生雙特異性抗體之其他詳情，參見例如Suresh等人，Methods in Enzymology,121：210(1986)。
根據在美國專利第5,731,168中描述之另一方法，一對抗體分子間之界面可經工程改造以使自重組細胞培養物回收之雜二聚體之百分比最大。在一些實施例中，該界面包含抗體恆定域之CH3域之至少一部分。在此方法中，用較大側鏈(例如酪胺酸或色胺酸)置換第一抗體分子之界面之一或多個小胺基酸側鏈。藉由用較小側鏈(例如丙胺酸或蘇胺酸)置換大胺基酸側鏈，在第二抗體分子之界面上產生與大側鏈具有相同或相似大小之補償「空穴」。此提供使雜二聚體之產量增加超過其他不需要之最終產物(諸如均二聚體)的機制。
雙特異性抗體包括交聯或「異源結合」抗體。舉例而言，一個呈異源結合物形式之抗體可與抗生物素蛋白偶合，另一者與生物素偶合。已提出該等抗體例如使免疫系統細胞靶向不需要之細胞(美國專 利第4,676,980號)，且用於治療HIV感染(WO 91/00360、WO 92/200373及EP 03089)。可使用任何適宜交聯方法製備異源結合抗體。合適交聯劑以及許多交聯技術在此項技術中熟知且揭示於美國專利第4,676,980號中。
由抗體片段產生雙特異性抗體之技術亦已描述於文獻中。舉例而言，可使用化學鍵聯製備雙特異性抗體。Brennan等人，Science,229：81(1985)描述一種蛋白水解裂解完整抗體以產生F(ab')2片段的程序。在二硫醇錯合劑亞砷酸鈉存在下，此等片段被還原以使鄰二硫醇穩定且阻止形成分子間二硫化物。接著將所產生之Fab'片段轉化成硫代硝基苯甲酸酯(TNB)衍生物。接著藉由用巰基乙胺還原使一種Fab'-TNB衍生物再轉化成Fab'-硫醇，且將其與等莫耳量之另一Fab'-TNB衍生物混合以形成雙特異性抗體。所產生之雙特異性抗體可用作選擇性固定酶之試劑。
亦已描述多種直接自重組細胞培養物製備及分離雙特異性抗體片段之技術。舉例而言，已使用白胺酸拉鏈來產生雙特異性抗體。Kostelny等人，J.Immunol.,148(5)：1547-1553(1992)。藉由基因融合將來自Fos及Jun蛋白之白胺酸拉鏈肽與兩種不同抗體之Fab'部分連接。使抗體均二聚體在鉸鏈區還原以形成單體，且接著將其再氧化以形成抗體雜二聚體。亦可利用此方法產生抗體均二聚體。Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90：6444-6448(1993)所述之「雙功能抗體」技術已提供用於製備雙特異性抗體片段之替代機制。該等片段包含藉由過短而使同一鏈上之兩個結構域之間無法配對的連接子與輕鏈可變域(VL)連接之重鏈可變域(VH)。因此，迫使一個片段之VH域及VL域與另一片段之互補VL域及VH域配對，藉此形成兩個抗原結合位點。亦已報導利用單鏈Fv(sFv)二聚體製備雙特異性抗體片段之另一策略。參見Gruber等人，J.Immunol.,152：5368(1994)。
涵蓋具有兩價以上價數之抗體。舉例而言，可製備三特異性抗體。Tutt等人J.Immunol.147：60(1991)。
V.抗體之結合及其他修飾
本文中之方法中所用或製品中所包括之抗體視情況與細胞毒性劑結合。舉例而言，可如WO 2004/032828中所述使抗體與藥物結合。
適用於產生該等抗體-細胞毒性劑結合物之化學治療劑已於上文中描述。
本文中亦涵蓋抗體與一或多種小分子毒素(諸如卡奇黴素(calicheamicin)、美登素(maytansine)(美國專利第5,208,020號)、曲考新(trichothene)及CC1065)之結合物。在本發明之一實施例中，使抗體與一或多個美登素分子(例如每抗體分子約1至約10個美登素分子)結合。美登素可例如轉化為May-SS-Me，其可經還原為May-SH3且與經修飾抗體反應(Chari等人Cancer Research 52：127-131(1992))產生美登素-抗體結合物。
或者，使抗體與一或多個卡奇黴素分子結合。抗生素之卡奇黴素家族能夠產生次皮莫耳(sub-picomolar)濃度的雙股DNA斷裂。可使用之卡奇黴素之結構類似物包括(但不限於)γ1 I、α2 I、α3 I、N-乙醯基-γ1 I、PSAG及θI 1(Hinman等人Cancer Research 53：3336-3342(1993)及Lode等人Cancer Research 58：2925-2928(1998))。
可使用之酶促活性毒素及其片段包括白喉毒素A鏈、白喉毒素之非結合活性片段、外毒素A鏈(來自綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa))、蓖麻毒素A鏈、相思子鹼A鏈(abrin A chain)、莫迪素A鏈(modeccin A chain)、帚麴菌素(alpha-sarcin)、油桐蛋白(Aleurites fordii protein)、康乃馨蛋白(dianthin protein)、洋商陸蛋白(Phytolaca americana protein)(PAPI、PAPII及PAP-S)、苦瓜抑制劑(momordica charantia inhibitor)、麻瘋樹毒蛋白(curcin)、巴豆毒素(crotin)、肥皂草抑制劑(sapaonaria officinalis inhibitor)、白樹毒素(gelonin)、有絲分裂素(mitogellin)、侷限麴菌素(restrictocin)、酚黴素(phenomycin)、依諾黴素(enomycin)及黴菌毒素(tricothecene)。參見例如1993年10月28日公開之WO 93/21232。
本發明進一步涵蓋與具有核分解活性之化合物(例如核糖核酸酶或DNA核酸內切酶，諸如去氧核糖核酸酶；DNase)結合之抗體。
多種放射性同位素可用於產生放射性結合之抗體。實例包括At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32及Lu之放射性同位素。
抗體與細胞毒性劑之結合物可使用多種雙官能蛋白偶合劑來製備，該等雙官能蛋白偶合劑諸如為N-丁二醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫醇)丙酸酯(SPDP)、丁二醯亞胺基-4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸酯、亞胺基硫雜環戊烷(IT)、醯亞胺酯之雙官能衍生物(諸如己二醯亞胺酸二甲酯HCL)、活性酯(諸如辛二酸二丁二醯亞胺酯)、醛(諸如戊二醛)、雙疊氮基化合物(諸如雙(對疊氮基苯甲醯基)己二胺)、雙重氮鹽衍生物(諸如雙(對重氮苯甲醯基)-乙二胺)、二異氰酸酯(諸如2,6-二異氰酸甲苯酯)及雙活性氟化合物(諸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。舉例而言，蓖麻毒素免疫毒素可如Vitetta等人，Science,238：1098(1987)中所述來製備。碳14標記之1-異硫氰基苄基-3-甲基二伸乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)為用於使放射性核苷酸與抗體結合之例示性螯合劑。參見WO 94/11026。連接子可為促進細胞中細胞毒性藥物釋放之「可裂解連接子」。舉例而言，可使用酸不穩定性連接子、肽酶敏感性連接子、二甲基連接子或含二硫化物之連接子(Chari等人Cancer Research 52：127-131(1992))。
或者，可(例如)由重組技術或肽合成製備包含抗體及細胞毒性劑 之融合蛋白。
在另一實施例中，可使抗體與「受體」(諸如抗生蛋白鏈菌素)結合以用於預靶向腫瘤，其中將抗體-受體結合物投與患者，接著使用清除劑將未結合之結合物自循環中移除，且接著投與與細胞毒性劑(例如放射性核苷酸)結合之「配位體」(例如抗生物素蛋白)。
亦可使本發明抗體與使前藥(例如肽基化學治療劑，參見WO 81/01145)轉化為活性抗癌藥之前藥活化酶結合。參見例如WO 88/07378及美國專利第4,975,278號。
該等結合物之酶組份包括能夠作用於前藥以使其轉化為更具活性之細胞毒性形式的任何酶。
適用於本發明方法之酶包括(但不限於)：適用於將含磷酸酯基前藥轉化成游離藥物的鹼性磷酸酶；適用於將含硫酸酯基前藥轉化成游離藥物的芳基硫酸酯酶；適用於將無毒5-氟胞嘧啶轉化成抗癌藥物5-氟尿嘧啶的胞嘧啶脫胺酶；蛋白酶，諸如沙雷氏菌屬(serratia)蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶(thermolysin)、枯草桿菌蛋白酶(subtilisin)、羧基肽酶及組織蛋白酶(諸如組織蛋白酶B及L)，其適用於將含肽前藥轉化成游離藥物；適用於轉化含D-胺基酸取代基之前藥的D-丙胺醯基羧基肽酶；碳水化合物裂解酶，諸如適用於將糖基化前藥轉化成游離藥物的β-半乳糖苷酶及神經胺糖酸酶(neuraminidase)；適用於將經β-內醯胺衍生之藥物轉化成游離藥物的β-內醯胺酶；及青黴素醯胺酶，諸如青黴素V醯胺酶或青黴素G醯胺酶，其適用於將分別由苯氧基乙醯基或苯基乙醯基在胺氮處衍生的藥物轉化成游離藥物。或者，可使用具有酶促活性之抗體(此項技術中亦稱作「抗體酶」)以將本發明之前藥轉化成游離活性藥物(參見例如Massey,Nature 328：457-458(1987))。可如本文所述來製備抗體-抗體酶結合物以將抗體酶傳遞至腫瘤細胞群體。
可藉由此項技術中熟知之技術，諸如使用上述異基雙官能交聯試劑使本發明之酶與抗體共價結合。或者，可使用此項技術中熟知之重組DNA技術來建構包含至少本發明抗體之抗原結合區與至少本發明酶之官能活性部分連接的融合蛋白(參見例如Neuberger等人，Nature,312：604-608(1984))。
本文涵蓋其他抗體修飾。舉例而言，可將抗體連接至多種非蛋白聚合物之一，例如聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇、聚環氧烷或聚乙二醇與聚丙二醇之共聚物。在一些實施例中，將抗體片段(諸如Fab')與一或多個PEG分子連接。
本文揭示之抗體亦可調配為脂質體。含抗體之脂質體由此項技術中已知之方法製備，諸如Epstein等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,82：3688(1985)；Hwang等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77：4030(1980)；美國專利第4,485,045號及第4,544,545號及1997年10月23日公開之WO 97/38731中所述之方法。具有增強之循環時間之脂質體揭示於美國專利第5,013,556號中。
尤其適用之脂質體可藉由逆相蒸發法用包含磷脂醯膽鹼、膽固醇及PEG衍生之磷脂醯乙醇胺(PEG-PE)之脂質組合物來產生。脂質體經由具有指定孔徑之過濾器擠出以產生具有所要直徑之脂質體。可如Martin等人J.Biol.Chem.257：286-288(1982)中所述經由雙硫鍵互換反應使本發明抗體之Fab'片段與脂質體結合。在該脂質體中視情況含有化學治療劑。參見Gabizon等人，J.National Cancer Inst.81(19)1484(1989)。
涵蓋抗體之胺基酸序列修飾。舉例而言，可能需要改良抗體之結合親和力及/或其他生物特性。抗體之胺基酸序列變異體係藉由將適當核苷酸改變引入抗體核酸中或藉由肽合成來製備。該等修飾包括例如抗體之胺基酸序列內殘基之缺失及/或插入及/或取代。進行缺 失、插入及取代之任何組合以獲得最終構築體，限制條件為該最終構築體具有所需特徵。胺基酸改變亦可改變抗體之轉譯後過程，諸如改變糖基化位點之編號或位置。
適用於鑑別抗體之某些殘基或區域為突變誘發之較佳位置的方法稱作「丙胺酸掃描突變」，如Cunningham及Wells Science,244：1081-1085(1989)所述。在此，鑑別殘基或目標殘基群(例如帶電殘基，諸如arg、asp、his、lys及glu)且將其用中性或帶負電胺基酸(最佳為丙胺酸或聚丙胺酸)置換以實現胺基酸與抗原之相互作用。接著藉由在取代位點或針對取代位點引入另外或其他變異體來改進彼等對取代展示出功能敏感性之胺基酸位置。因此，雖然引入胺基酸序列變異之位點預先確定，但突變之性質自身無需預先確定。舉例而言，為分析給定位點之突變效能，在目標密碼子或區域進行ala掃描或隨機突變誘發且篩選所表現抗體變異體之所需活性。
胺基酸序列插入包括長度在一個殘基至含有一百個或更多殘基之多肽範圍內的胺基端及/或羧基端融合以及單一或多個胺基酸殘基之序列內插入。末端插入之實例包括具有N端甲硫胺醯基殘基之抗體或與細胞毒性多肽融合之抗體。抗體分子之其他插入變異體包括抗體之N-末端或C-末端與酶或多肽的融合，其增加抗體之血清半衰期。
另一類型變異體為胺基酸取代變異體。此等變異體之抗體分子中至少一個胺基酸殘基經不同殘基置換。用於抗體之取代突變誘發之最關注位點包括高變區，但亦涵蓋FR改變。保守性取代展示於表2中之「較佳取代」之標題下。若該等取代致使生物活性改變，則可引入在表2中命名為「例示性取代」之更多實質改變，且篩選產物。
對抗體生物特性之實質性修飾係藉由選擇對維持以下之影響顯著不同的取代來實現：(a)取代區域中多肽主鏈之結構，例如呈摺疊片或螺旋構形；(b)目標位點處分子之電荷或疏水性；或(c)側鏈體積。可根據側鏈性質之類似性將胺基酸分組(在A.L.Lehninger,Biochemistry，第二版，第73-75頁，Worth Publishers,New York(1975)中)。
(1)非極性：Ala(A)、Val(V)、Leu(L)、Ile(I)、Pro(P)、Phe(F)、Trp(W)、Met(M)
(2)不帶電極性：Gly(G)、Ser(S)、Thr(T)、Cys(C)、Tyr(Y)、Asn(N)、Gln(Q)
(3)酸性：Asp(D)、Glu(E)
(4)鹼性：Lys(K)、Arg(R)、His(H)
或者，天然存在殘基可基於共同的側鏈性質分組：(1)疏水性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；(2)中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；(3)酸性：Asp、Glu；(4)鹼性：His、Lys、Arg；(5)影響鏈定向之殘基：Gly、Pro；(6)芳族：Trp、Tyr、Phe。
非保守取代將需要將一個此等類別之成員換成另一類別。
亦可取代(一般以絲胺酸)不參與保持抗體適當構形之任何半胱胺酸殘基以改良分子之氧化穩定性且防止異常交聯。反之，可在抗體中添加半胱胺酸鍵以改良其穩定性(尤其在抗體為諸如Fv片段之抗體片段的情況下)。
取代變異體之尤其較佳類型涉及取代親本抗體之一或多個高變區殘基。一般而言，為進一步發展所選擇之所得變異體通常具有相對於產生其之親本抗體經改良之生物學性質。用於產生該等取代變異體之適宜方式為使用噬菌體呈現的親和力成熟。簡言之，使若干高變區位點(例如6-7個位點)突變以在每一位點產生所有可能之胺基取代。如此產生之抗體變異體以單價方式自絲狀噬菌體粒子呈現為與封裝於各粒子內之M13之基因III產物的融合體。隨後如本文中所揭示篩選噬菌體呈現變異體之生物活性(例如結合親和力)。為鑑別用於修飾之候選高變區位點，可進行丙胺酸掃描突變誘發以鑑別顯著有助於抗原結合之高變區殘基。或者或另外，分析抗原-抗體複合物之晶體結構以鑑別抗體與抗原間之接觸點可為有益的。該等接觸殘基及相鄰殘基為根據本文詳述之技術進行取代之候選殘基。產生該等變異體後，則使變 異體組經受如本文所述之篩選，且可在一或多個相關檢定中選擇具有優良性質之抗體用於進一步發展。
另一類型之抗體胺基酸變異體改變抗體之原始糖基化模式。該改變包括使一或多個存在於抗體中之碳水化合物部分缺失及/或添加一或多個不存在於抗體中之糖基化位點。
多肽之糖基化通常為N連接型或O連接型。N連接型係指碳水化合物部分與天冬醯胺殘基之側鏈連接。三肽序列天冬醯胺-X-絲胺酸及天冬醯胺-X-蘇胺酸(其中X為除脯胺酸以外之任何胺基酸)為碳水化合物部分與天冬醯胺側鏈之酶促連接的識別序列。因此，多肽中任一此等三肽序列之存在產生潛在糖基化位點。O連接型糖基化係指糖N-乙醯基半乳胺糖、半乳糖或木糖之一連接至羥基胺基酸，最通常為絲胺酸或蘇胺酸，但亦可使用5-羥基脯胺酸或5-羥基離胺酸。
在抗體中添加糖基化位點適宜藉由改變胺基酸序列，以使其含有上述三肽序列中之一或多者來實現(對於N連接型糖基化位點而言)。該改變亦可藉由在原始抗體之序列中添加一或多個絲胺酸或蘇胺酸殘基或用一或多個絲胺酸或蘇胺酸殘基進行取代來進行(對於O連接型糖基化位點而言)。
當抗體包含Fc區時，可改變與其連接之碳水化合物。舉例而言，具有缺乏與抗體Fc區連接之海藻糖之成熟碳水化合物結構的抗體描述於美國專利申請案第2003/0157108 A1號(Presta,L.)中；亦參見US 2004/0093621 A1(Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd)，其係關於CD20抗體組合物。連接至抗體Fc區之碳水化合物中具有平分型N-乙醯葡糖胺(GlcNAc)之抗體在WO 03/011878、Jean-Mairet等人及Umana等人之美國專利第6,602,684號中有所提及。連接至抗體Fc區之寡醣中具有至少一個半乳糖殘基之抗體報導於WO 97/30087(Patel等人)中；亦參見WO 98/58964(Raju,S.)及WO 99/22764(Raju,S.)，其係關於與其Fc區 連接之碳水化合物改變之抗體。
在一些實施例中，本文中之糖基化變異體包含Fc區，其中與Fc區連接之碳水化合物結構缺乏海藻糖。該等變異體具有改良之ADCC功能。視情況，Fc區進一步在其中包含一或多個進一步改良ADCC之胺基酸取代，例如在Fc區之位置298、333及/或334(殘基之Eu編號)之取代。與「去海藻糖基化」或「海藻糖缺乏」抗體相關之公開案的實例包括：Presta,L之美國專利申請案第US 2003/0157108 A1號；WO 00/61739A1；WO 01/29246A1；US 2003/0115614A1；US 2002/0164328A1；US 2004/0093621A1；US 2004/0132140A1；US 2004/0110704A1；US 2004/0110282A1；US 2004/0109865A1；WO 03/085119A1；WO 03/084570A1；WO 2005/035778；WO 2005/035586(描述海藻糖化之RNA抑制(RNAi))；Okazaki等人J.Mol.Biol.336：1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等人Biotech.Bioeng.87：614(2004)。產生去海藻糖基化抗體之細胞株之實例包括蛋白質海藻糖基化缺陷型Lec13 CHO細胞(Ripka等人，Arch.Biochem.Biophys.249：533-545(1986)；Presta,L之美國專利申請案第US 2003/0157108 A1號及Adams等人之WO 2004/056312 A1，尤其實例11)及基因剔除細胞株，諸如α-1,6-海藻糖基轉移酶基因、FUT8、基因剔除CHO細胞(Yamane-Ohnuki等人，Biotech.Bioeng.87：614(2004))。
編碼抗體之胺基酸序列變異體之核酸分子由多種此項技術中已知之方法製備。此等方法包括(但不限於)自天然來源分離(在天然存在之胺基酸序列變異體之情況下)，或由抗體之早期製備之變異體或非變異體型式的寡核苷酸介導(或定點)之突變誘發、PCR突變誘發及序列盒突變誘發製備。
可能需要關於效應功能來修飾本發明抗體以便例如增強抗體之抗原依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)及/或補體依賴性細胞毒性 (CDC)。此可藉由在抗體Fc區引入一或多個胺基酸取代來達成。或者或另外，可將半胱胺酸殘基引入Fc區中，藉此允許在此區域中形成鏈間雙硫鍵。由此產生之均二聚抗體可具有改良之內化能力及/或增強之補體介導之細胞殺傷及抗體依賴性細胞毒性(ADCC)。參見Caron等人，J.ExpMed.176：1191-1195(1992)及Shopes,B.J.Immunol.148：2918-2922(1992)。如Wolff等人Cancer Research 53：2560-2565(1993)中所述具有增強之抗腫瘤活性之均二聚抗體亦可使用異雙官能交聯劑製備。或者，抗體可經工程改造，使其具有雙Fc區且可進而具有增強之補體溶解及ADCC能力。參見Stevenson等人Anti-Cancer Drug Design 3：219-230(1989)。
WO 00/42072(Presta,L.)描述在人類效應細胞存在下具有改良之ADCC功能之抗體，其中該等抗體在其Fc區中包含胺基酸取代。在一些實施例中，具有改良之ADCC之抗體在Fc區之位置298、333及/或334包含取代。在一些實施例中，改變之Fc區為包含一個、二個或三個此等位置之取代或由該等取代組成之人類IgG1 Fc區。
具有改變之C1q結合及/或補體依賴性細胞毒性(CDC)之抗體描述於WO 99/51642、美國專利第6,194,551B1號、美國專利第6,242,195B1號、美國專利第6,528,624B1號及美國專利第6,538,124號(Idusogie等人)中。該等抗體在其Fc區之一或多個胺基酸位置270、322、326、327、329、313、333及/或334包含胺基酸取代。
為了增加抗體之血清半衰期，可將救助受體結合抗原決定基併入抗體(尤其為抗體片段)中，例如如美國專利5,739,277所述。如本文所用，術語「救助受體結合抗原決定基」係指IgG分子(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)之Fc區中負責增加IgG分子之活體內血清半衰期的抗原決定基。在Fc區中具有取代且具有增加之血清半衰期之抗體亦描述於WO 00/42072(Presta,L.)中。
亦涵蓋具有三個或三個以上(較佳四個)功能性抗原結合位點之經工程改造之抗體(美國專利案第US 2002/0004587 A1號，Miller等人)。
VI.醫藥調配物
根據本發明所使用之抗體之治療調配物係藉由將具有所要純度之抗體與視情況選用之醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑混合以凍乾調配物或水溶液形式製備以供儲存(Remington's Pharmaceutical Sciences第16版，Osol,A.編(1980))。可接受之載劑、賦形劑或穩定劑在所用劑量及濃度下對接受者無毒且包括：緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(諸如十八烷基二甲基苄基氯化銨；氯化六羥季銨；氯苄烷銨、苄索氯銨；苯酚、丁醇或苄醇；對羥基苯甲酸烷基酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(少於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩胺醯胺、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、二醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽相對離子，諸如鈉；金屬錯合物(例如Zn-蛋白質錯合物)；及/或非離子型界面活性劑，諸如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。
例示性抗CD20抗體調配物描述於WO 98/56418中。此公開案描述液態多次劑量調配物，其包含40mg/mL利妥昔單抗(Rituximab)、25mM乙酸鹽、150mM海藻糖、0.9%苄醇、pH值為5.0之0.02%聚山梨醇酯20，其在2-8BC下最小存放期為儲存兩年。所關注之另一抗CD20調配物包含於9.0mg/mL氯化鈉、7.35mg/mL二水合檸檬酸鈉、0.7mg/mL聚山梨醇酯80及無菌注射用水(pH 6.5)中之10mg/mL利妥昔 單抗(Rituximab)。
適於皮下投藥之凍乾調配物描述於美國專利第6,267,958號(Andya等人)中。該等凍乾調配物可以合適稀釋劑復原為高蛋白質濃度，且該經復原調配物可皮下投與本文欲治療之哺乳動物。
亦涵蓋結晶形式之抗體。參見例如US 2002/0136719A1(Shenoy等人)。
本文中之調配物亦可含有一種以上所治療之特定適應症所必需的活性化合物，在一些實施例中具有彼此並無不利影響之互補活性之活性化合物。舉例而言，可能需要進一步於調配物中提供細胞毒性劑；化學治療劑；免疫抑制劑；細胞激素；細胞激素拮抗劑或抗體；生長因子；激素；整合素；整合素拮抗劑或抗體(例如LFA-1抗體，諸如可購自Genentech之依法利珠單抗/RAPTIVA，或α4整合素抗體，諸如可購自Biogen Idec/Elan Pharmaceuticals,Inc.之那他珠單抗/TYSABRI®)；干擾素類藥物，諸如IFN-β-1a(REBIF®及AVONEX®)或IFN-β-1b(BETASERON®)；寡肽，諸如乙酸格拉替雷(COPAXONE®)；細胞毒性劑，諸如米托蒽醌(NOVANTRONE®)、甲胺喋呤、環磷醯胺、苯丁酸氮芥或硫唑嘌呤；靜脈內免疫球蛋白(γ球蛋白)；淋巴細胞消耗藥物(例如米托蒽醌、環磷醯胺、坎帕斯、抗CD4或克拉屈濱)；非淋巴細胞消耗免疫抑制藥物(例如黴酚酸酯(MMF)或環孢素)；「抑制素」類降膽固醇藥；雌二醇；睪固酮；激素替代療法；治療MS繼發性或相關性症狀(例如痙攣、失禁、疼痛、疲勞)之藥物；TNF抑制劑；疾病改善性抗風濕性藥(DMARD)；非類固醇消炎藥(NSAID)；皮質類固醇(例如甲潑尼龍、強的松、地塞米松或糖皮質激素)；左旋甲狀腺素；環孢素A；生長抑素類似物；細胞激素拮抗劑；抗代謝物；免疫抑制劑；整合素拮抗劑或抗體(例如LFA-1抗體，諸如依法利珠單抗或α4整合素抗體，諸如那他珠單抗)；或另一B細胞表面 拮抗劑/抗體等。該等其他藥劑之類型及有效量視例如存在於調配物中之抗體量、所治療多發性硬化症之類型及患者之臨床參數而定。此等量一般以與上文所用相同之劑量及投藥途徑來使用或約為迄今所用劑量之1%至99%。
亦可將活性成份夾裹於例如藉由凝聚技術或藉由界面聚合所製備之微囊中(分別為例如羥基甲基纖維素或明膠微囊及聚(甲基丙烯酸甲酯)微囊)、膠狀藥物傳遞系統(例如脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米粒子及奈米膠囊)或巨乳液中。該等技術揭示於Remington's Pharmaceutical Sciences第16版，Osol,A.編(1980)中。
可製備持續釋放製劑。持續釋放製劑之合適實例包括含有抗體之固體疏水性聚合物之半透性基質，該等基質呈成形物品之形式，例如膜或微囊。持續釋放基質之實例包括聚酯、水凝膠(例如聚(2-羥基乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚乳酸交酯(美國專利第3,773,919號)、L-麩胺酸與γ乙基-L-麩胺酸酯之共聚物、不可降解乙烯-乙酸乙烯酯、可降解乳酸-乙醇酸共聚物(諸如LUPRON DEPOTTM(由乳酸-乙醇酸共聚物及乙酸亮丙瑞林構成之可注射微球體))及聚-D-(-)-3-羥基丁酸。
待用於活體內投藥之調配物必須無菌。此可藉由經無菌濾膜過濾而容易地實現。
在一些實施例中，調配物包含由以下組成之群中之一或多者：組胺酸緩衝劑、海藻糖、蔗糖及聚山梨醇酯20。在一些實施例中，組胺酸緩衝劑為組胺酸-乙酸鹽緩衝劑(pH 6.0)。適用於投與抗CD20抗體之調配物之實例見於關於調配物之全文以引用的方式併入本文中之Andya等人之US 2006/0088523中。
例示性抗CD20抗體調配物描述於以全文引用的方式併入本文中之Andya等人之US 2006/0088523及WO 98/56418中。在一些實施例 中，調配物為包含以下之液體多次劑量調配物：40mg/mL之抗CD20抗體、25mM乙酸鹽、150mM海藻糖、0.9%苄醇、0.02%聚山梨醇酯20(pH 5.0)，其在2-8℃下最小存放期為儲存兩年。在一些實施例中，所關注之抗CD20調配物包含於9.0mg/mL氯化鈉、7.35mg/mL二水合檸檬酸鈉、0.7mg/mL聚山梨醇酯80及無菌注射用水(pH 6.5)中之10mg/mL抗體。在一些實施例中，抗CD20抗體在包含pH值為約4.8至約5.5，較佳pH值為5.5之10-30mM乙酸鈉；量為約0.01-0.1% v/v之作為界面活性劑之聚山梨醇酯；量為約2-10% w/v之海藻糖及用作防腐劑之苄醇之含水醫藥調配物中(U.S.6,171,586，全文以引用的方式併入本文中)。適用於皮下投藥之凍乾調配物描述於全文以引用的方式併入本文中之WO 97/04801中。該等凍乾調配物可以合適稀釋劑復原為高蛋白質濃度，且該經復原調配物可皮下投與本文欲治療之哺乳動物。
在一些實施例中，人類化2H7變異體調配物為於10mM組胺酸、6%蔗糖、0.02%聚山梨醇酯20(pH 5.8)中之12-14mg/mL抗體。在一特定實施例中，2H7變異體及尤其2H7.v16係調配為於10mM組胺酸硫酸鹽、60mg/ml蔗糖、0.2mg/ml聚山梨醇酯20及無菌注射用水(pH 5.8)中之20mg/mL抗體。在一特定實施例中，一種人類化2H7 v16之IV調配物為：20mM乙酸鈉、4%二水合海藻糖、0.02%聚山梨醇酯20(Tween 20TM)(pH 5.3中)之30mg/ml抗體。在一些實施例中，人類化2H7.v511變異體調配物為於10mM組胺酸硫酸鹽、60mg/ml蔗糖(6%)、0.2mg/ml聚山梨醇酯20(0.02%)及無菌注射用水(pH 5.8)中之15-30mg/ml抗體，較佳20mg/ml抗體。在另一實施例中，2H7變異體且尤其2H7.v511之調配物為用於靜脈內投藥之20mg/ml 2H7、20mM乙酸鈉、4%二水合海藻糖、0.02%聚山梨醇酯20(pH 5.5)。在一些實施例中，2H7.v 114調配物為於20mM乙酸鈉、240mM(8%)二水合海 藻糖、0.02%聚山梨醇酯20(pH 5.3)中之15-25mg/ml，較佳20mg/ml抗體。
VII.製品及製造方法
本發明提供包含以下之製品：(a)包含奧克利珠單抗之容器；及(b)具有關於治療患者之多發性硬化症之說明的藥品說明書，其中該等說明指示(例如說明)向患者投與有效提供約0.3公克至約0.6公克之間的初始奧克利珠單抗暴露，隨後提供約0.3公克至約0.6公克之間的第二奧克利珠單抗暴露之量的奧克利珠單抗，該第二暴露直至初始暴露後約16週至60週才投與，且以一個劑量或兩個劑量之奧克利珠單抗形式向患者提供各次奧克利珠單抗暴露。在一些實施例中，初始奧克利珠單抗暴露為約0.6公克。在一些實施例中，第二奧克利珠單抗暴露為約0.6公克。在一些實施例中，該第二暴露在初始暴露後約24週投與。在一些實施例中，以一個劑量之奧克利珠單抗形式向患者提供一或多次奧克利珠單抗暴露。在一些實施例中，以兩個劑量之奧克利珠單抗形式向患者提供一或多次奧克利珠單抗暴露。在一些實施例中，兩個劑量之奧克利珠單抗包含約0.3公克奧克利珠單抗。
本發明進一步提供含有適用於治療本文中所述之進展型多發性硬化症之物質的製品。在一些實施例中，提供一種製品，其包含包裝在一起之包含抗CD20抗體及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物及指示抗CD20抗體或醫藥組合物指定用於治療具有一或多種選自由以下組成之群之特徵的患多發性硬化症之患者的標籤：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。
在一些實施例中，提供一種製品，其包含包裝在一起之包含抗CD20抗體及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物及指示投與抗CD20 抗體或醫藥組合物係基於患者具有一或多種選自由以下組成之群之特徵的標籤：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。
在一些實施例中，提供一種製品，其包含包裝在一起之包含抗CD20抗體及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物及指示將醫藥組合物投與所選患者之標籤，其中所選患者具有一或多種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。
在本文中所述之任何製品之一些實施例中，患者具有一或多種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，及(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分。
在本文中所述之任何製品之一些實施例中，患者具有一種以上選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。在本文中所述之任何製品之一些實施例中，患者具有兩種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，及(c)在開始治療前兩年內EDSS增加至少約一分。在一些實施例中，患者具有三種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。在一些實施例中，患者具有(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分， 及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。
在任何製品之一些實施例中，進展型多發性硬化症為原發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為繼發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為進展復發型多發性硬化症。在一些實施例中，在開始治療時患者未診斷患有復發緩解型多發性硬化症。
在任何製品之一些實施例中，患者之樣本中進一步具有炎症跡象。在一些實施例中，樣本為腦脊髓液樣本。在一些實施例中，炎症跡象由IgG指數升高指示。在一些實施例中，炎症跡象由以等電聚焦偵測之IgG寡選殖帶指示。
在任何製品之一些實施例中，開始治療前兩年內之EDSS增加不可歸因於復發。在一些實施例中，患者之EDSS高於約5.0持續少於約15年。在一些實施例中，患者之EDSS小於或等於約5.0持續少於約10年。在一些實施例中，在開始治療時EDSS在約3.0與約6.5之間。在一些實施例中，EDSS增加為在開始治療前兩年內EDSS增加至少約1.5分。在一些實施例中，開始治療前兩年內EDSS增加1.5分不可歸因於復發。在一些實施例中，患者在開始治療前兩年內進一步具有兩次或兩次以上復發。
在本文中所述之任何製品之一些實施例中，患者及/或患者群體之特徵為具有高於約6、7、8或9中任一者之MSSS。在任何製品之一些實施例中，患者及/或患者群體之特徵為具有高於約9之MSSS。
在任何製品之一些實施例中，患者年齡小於約51歲。
在任何製品之一些實施例中，治療縮短確診之疾病進展之時間。在一些實施例中，確診之疾病進展為持續十二週之EDSS增加。在一些實施例中，確診之疾病進展為持續二十四週之EDSS增加。
在任何製品之一些實施例中，抗CD20抗體包含：a)包含SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11及SEQ ID NO：12之重鏈可變區，及b)包含SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5及SEQ ID NO：6之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗CD20抗體為奧克利珠單抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為利妥昔單抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為奧法土莫單抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為TRU-015或SBI-087。在一些實施例中，抗CD20抗體為GA101。在一些實施例中，抗CD20抗體為hA20。
該製品包含容器及在該容器上或與該容器相結合之標籤或藥品說明書。合適容器包括例如瓶子、小瓶、注射器等。容器可由諸如玻璃或塑膠之多種材料形成。容器容納或含有有效治療多發性硬化症之組合物，且可具有無菌出入孔(例如容器可為靜脈內溶液袋或具有可由皮下注射針刺穿之塞子的小瓶)。組合物中之至少一種活性劑為抗體。在一些實施例中，容器包含約0.3公克至約4.0公克之間的抗CD20抗體。在一些實施例中，容器包含約0.3公克至約1.5公克之間的抗CD20抗體。
標籤或藥品說明書指示組合物用於治療患多發性硬化症之患者之多發性硬化症，其中提供關於抗體及任何其他所提供藥物之給藥量及給藥時間間隔的特定準則。製品可進一步包含第二容器，該第二容器包含醫藥學上可接受之緩衝液，諸如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸鹽緩衝生理食鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)及右旋糖溶液。製品可進一步包括就商業及使用者之角度而言合乎需要之其他物質，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針頭及注射器。
視情況本文中之製品進一步包含含有除用於治療之抗體以外之藥劑且進一步包含關於使用該藥劑治療患者之說明的容器，該藥劑較佳為化學治療劑或免疫抑制劑；干擾素類藥物，諸如IFN-β-1a(REBIF®及AVONEX®)或IFN-β-1b(BETASERON®)；寡肽，諸如乙酸格拉替雷(COPAXONE®)；細胞毒性劑，諸如米托蒽醌 (NOVANTRONE®)、甲胺喋呤、環磷醯胺、苯丁酸氮芥或硫唑嘌呤；靜脈內免疫球蛋白(γ球蛋白)；淋巴細胞消耗藥物(例如米托蒽醌、環磷醯胺、坎帕斯、抗CD4或克拉屈濱)；非淋巴細胞消耗免疫抑制藥物(例如黴酚酸酯(MMF)或環孢素)；「抑制素」類降膽固醇藥；雌二醇；激素替代療法；治療MS繼發性或相關性症狀(例如痙攣、失禁、疼痛、疲勞)之藥物；TNF抑制劑；疾病改善性抗風濕性藥(DMARD)；非類固醇消炎藥(NSAID)；皮質類固醇(例如甲潑尼龍、強的松、地塞米松或糖皮質激素)；左旋甲狀腺素；環孢素A；生長抑素類似物；細胞激素或細胞激素受體拮抗劑；抗代謝物；免疫抑制劑；整合素拮抗劑或抗體(例如LFA-1抗體，諸如依法利珠單抗，或α4整合素抗體，諸如那他珠單抗)；或另一B細胞表面標誌抗體等。
在一些實施例中，標籤可進一步指示本文中所述之任何實施例。舉例而言，標籤可指示患者具有(a)小於約55歲之年齡，及(b)一或多個釓染色病變。
在本發明之另一實施例中，提供製造含有適用於治療本文中所述之進展型多發性硬化症之物質的方法。在一些實施例中，提供製造抗CD20抗體或其醫藥組合物之方法，其包含在包裝內組合抗CD20抗體或醫藥組合物及指示抗CD20抗體或醫藥組合物指定用於治療患進展型多發性硬化症之患者的標籤，其中該等患者具有一或多種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。
在本文中所述之任何製造方法之一些實施例中，患者具有一或多種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，及(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分。
VIII.推廣及銷售之方法
本發明亦提供推廣抗CD20抗體或其醫藥學上可接受之組合物之方法，該方法包含向目標聽眾宣傳抗CD20抗體或其醫藥組合物用於治療患進展型多發性硬化症之患者或患者群體的用途，其中該患者或患者群體具有一或多種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。
本文中亦提供銷售用於進展型多發性硬化症患者子群之抗CD20抗體或其醫藥學上可接受之組合物的方法，該方法包含告知目標聽眾抗CD20抗體用於治療患者子群的用途，該患者子群之特徵為該子群之患者具有一或多種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。
此外，本發明提供詳細說明抗CD20抗體用於進展型多發性硬化症患者子群之方法，該方法包含提供向患者子群投與抗CD20抗體或其醫藥學上可接受之組合物之說明，該患者子群之特徵為該子群具有一或多種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。
本發明進一步提供向患進展型多發性硬化症之患者提供治療選擇之方法，該方法包含將抗CD20抗體與含有治療患進展型多發性硬化症之患者之說明的藥品說明書一起包裝於小瓶中，其中該等患者具有一或多種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表 (EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。
在任何該等方法之一些實施例中，患者具有一或多種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，及(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分。
在任何該等方法之一些實施例中，患者具有兩種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。在一些實施例中，患者具有三種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。在一些實施例中，患者具有(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。
在任何該等方法之一些實施例中，進展型多發性硬化症為原發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為繼發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為進展復發型多發性硬化症。在一些實施例中，在開始治療時患者未診斷患有復發緩解型多發性硬化症。
在任何該等方法之一些實施例中，患者之樣本中進一步具有炎症跡象。在一些實施例中，樣本為腦脊髓液樣本。在一些實施例中，炎症跡象由IgG指數升高指示。在一些實施例中，炎症跡象由以等電聚焦偵測之IgG寡選殖帶指示。
在任何該等方法之一些實施例中，開始治療前兩年內之EDSS增 加不可歸因於復發。在一些實施例中，患者之EDSS高於約5.0持續少於約15年。在一些實施例中，患者之EDSS小於或等於約5.0持續少於約10年。在一些實施例中，在開始治療時EDSS在約3.0與約6.5之間。在一些實施例中，EDSS增加為在開始治療前兩年內EDSS增加至少約1.5分。在一些實施例中，開始治療前兩年內EDSS增加1.5分不可歸因於復發。在一些實施例中，患者在開始治療前兩年內進一步具有兩次或兩次以上復發。
在任何該等方法之一些實施例中，患者年齡小於約51歲。
在任何該等方法之一些實施例中，治療縮短確診之疾病進展之時間。在一些實施例中，確診之疾病進展為持續十二週之EDSS增加。在一些實施例中，確診之疾病進展為持續二十四週之EDSS增加。
在任何該等方法之一些實施例中，抗CD20抗體為奧克利珠單抗。在任何該等方法之一些實施例中，抗CD20抗體為利妥昔單抗。在任何該等方法之一些實施例中，抗CD20抗體為奧法土莫單抗。在任何該等方法之一些實施例中，抗CD20抗體為TRU-015或SBI-087。在任何該等方法之一些實施例中，抗CD20抗體為GA101。在任何該等方法之一些實施例中，抗CD20抗體為hA20。
本文中所述之方法可涵蓋本文中所述之實施例之任何組合。舉例而言，該等方法包括患者具有(a)小於約55歲之年齡及(b)一或多個釓染色病變之方法。
IX.預測對多發性硬化症治療之反應性之系統及方法
本發明亦提供分析患進展型多發性硬化症之個體及/或患者是否對使用用以治療多發性硬化症之藥物治療有反應的系統及方法。本發明提供用於分析患進展型多發性硬化症之患者對使用用以治療多發性硬化症之藥物治療之反應性的系統，其包含：(a)評估一或多種選自 由以下組成之群之特徵：(i)年齡小於約55歲；(ii)一或多個釓染色病變，(iii)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(iv)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分；(b)執行(a)之評估之硬體；及(c)執行演算法來確定患者是否易受該治療影響或對該治療有反應的計算構件。
本發明進一步提供預測患有進展型多發性硬化症之個體是否會對使用用以治療多發性硬化症之藥物治療有反應之方法，該方法包含評估一或多種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分，據此病患年齡、釓染色病變、開始治療前兩年內之EDSS增加、MSSS或其組合會顯示個體會對治療有反應。
在任何該等系統及/或方法之一些實施例中，患者具有一種以上選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，及(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分。
在本文中所述之任何該等系統及/或方法之一些實施例中，患者具有一種以上選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。在任何該等系統及/或方法之一些實施例中，患者具有兩種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。在一些實施例中，患者具有三種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態 量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。在一些實施例中，患者具有(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)在開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。
在任何該等系統及/或方法之一些實施例中，進展型多發性硬化症為原發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為繼發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為進展復發型多發性硬化症。在一些實施例中，在開始治療時患者未診斷出患有復發緩解型多發性硬化症。
在任何該等系統或方法之一些實施例中，患者樣本中進一步具有炎症跡象。在一些實施例中，樣本為腦脊髓液樣本。在一些實施例中，炎症跡象係由於IgG指數升高顯示的。在一些實施例中，炎症跡象係由於藉由等電聚焦法偵測之IgG寡選殖條紋所顯示的。
在任何該等系統及/或方法之一些實施例中，開始治療前兩年內之EDSS增加不可歸因於復發。在一些實施例中，患者之EDSS高於約5.0持續少於約15年。在一些實施例中，患者之EDSS小於或等於約5.0持續少於約10年。在一些實施例中，在開始治療時EDSS在約3.0與約6.5之間。在一些實施例中，EDSS增加為在開始治療前兩年內EDSS增加至少約1.5分。在一些實施例中，開始治療前兩年內EDSS增加1.5分不可歸因於復發。在一些實施例中，患者在開始治療前兩年內進一步具有兩次或兩次以上復發。
在任何該等系統及/或方法之一些實施例中，患者年齡小於約51歲。
在任何該等系統及/或方法之一些實施例中，系統或方法進一步包含給患者提供建議。
在任何該等系統及/或方法之一些實施例中，治療縮短確診之疾 病進展之時間。在一些實施例中，確診之疾病進展為持續十二週之EDSS增加。在一些實施例中，確診之疾病進展為持續二十四週之EDSS增加。
在任何該等系統及/或方法之一些實施例中，藥物為干擾素β-1b(例如Betaseron®)、干擾素β-1a(例如Avonex®或Rebif®)、格拉替雷(Glatiramer)(例如Copaxone®)、米托蒽醌(例如諾肖林(Novantrone))、皮質類固醇(例如乙基潑尼龍、強的松、地塞米松)、3-4二胺基吡啶、ABT-874、阿倫單抗(Alemtuzumab)、沙丁胺醇(Albuterol)(Proventil®)、ATL1102、阿托伐他汀(Lipitor®)、硫唑嘌呤、BG00012(反丁烯二酸二甲酯)、BHT-3009、肉毒桿菌毒素A(Botulinum toxin A)(Botox®)、C-105、卡納多(cannador)、屈大麻酚(dronabinol)、四氫大麻酚(tetrahydrocannabinol)、大麻二醇(cannabidiol)、CDP323、克拉屈濱、CNTO 1275、環磷醯胺、達利珠單抗(Daclizumab)、右甲嗎喃(Dextromethorphan)/奎尼丁(quinidine)(AVP-923、ZenviaTM)、多奈哌齊(Donepezil)(Aricept®)、多西環素(Doxycycline)、雌二醇、雌三醇、雌孕激素(Estroprogestins)、氨吡啶-SR(Fampridine-SR)(4-胺基吡啶，持續釋放)、芬戈莫德(Fingolimod)(FTY720)、干擾素σ、拉莫三嗪(Lamotrigine)(Lamictal®)、拉喹莫德(Laquinimod)、利多卡因(Lidocaine)+丙胺卡因(prilocaine)(EMLA)、MBP8298(合成髓鞘鹼性蛋白肽)、金剛烷胺(Memantine)(Namenda®)、甲潑尼龍、MN-166、莫達非尼(Modafinil)(Provigil®)、黴酚酸酯(Cellcept®)、納曲酮(naltrexone)、那他珠單抗(Tysabri®)、帕羅西汀(Paroxetine)(Paxil®)、PI-2301(共聚物)、吡格列酮(Pioglitazone)(Actos®)、吡仙酮(Pixantrone)(BBR 2778)、普伐他汀(Pravastatin)(Pravachol®)、普瑞巴林(Pregabalin)(Lyrica®)、孕酮 (Progesterone)、RG2077、利魯唑(Riluzole)(Rilutek®)、咯利普蘭(Rolipram)(磷酸二酯酶-4抑制劑)、RTL1000、SB-683699、辛伐他汀(Simvastatin)(Zocor®)、T細胞受體肽疫苗(NeuroVaxTM)、特立氟胺(Teriflunomide)、睪固酮凝膠(Androgel®)或甲氧苄啶(Trimethoprim)。
在任何該等系統及/或方法之一些實施例中，用以治療多發性硬化症之藥物為抗CD20抗體。在一些實施例中，抗CD20抗體包含：a)包含SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11及SEQ ID NO：12之重鏈可變區，及b)包含SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5及SEQ ID NO：6之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗CD20抗體為奧克利珠單抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為利妥昔單抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為奧法土莫單抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為TRU-015或SBI-087。在一些實施例中，抗CD20抗體為GA101。在一些實施例中，抗CD20抗體為hA20。
本文中所述之系統及/或方法可涵蓋本文中所述之實施例之任何組合。舉例而言，該等方法包括患者具有(a)小於約55歲之年齡及(b)一或多個釓染色病變之方法。
本發明之其他詳情由以下非限制性實例說明。本說明書中之所有引用文獻之揭示內容以引用的方式明確併入本文中。
實例
意欲僅用於例示本發明且因此不應視為以任何方式限制本發明之實例亦描述及詳述上文論述之本發明之態樣及實施例。上述實例及詳細描述以說明方式而非限制方式提供。
實例1：復發緩解型多發性硬化症(RRMS)中奧克利珠單抗之第II期研究
進行第II期多中心隨機化平行組部分盲法安慰劑及Avonex對照劑量發現研究來評估兩種奧克利珠單抗劑量方案在患復發緩解型多發性硬化症(RRMS)之患者中之功效(如藉由腦磁共振成像(MRI)病變所量 測)及安全性。
所研究之兩種奧克利珠單抗劑量方案如下：1)奧克利珠單抗1000mg劑量方案：由在第一治療週期兩次輸注1000mg接著在隨後治療週期單次輸注1000mg組成，及2)奧克利珠單抗600mg劑量方案：由在第一治療週期兩次輸注300mg接著在隨後治療週期單次輸注600mg組成。
如圖7中所述將符合條件之患者隨機(1：1：1：1)分入四個治療組A、B、C或D之一。研究設計概述說明於圖7中。
組A(奧克利珠單抗1000mg)：在第1治療週期兩次靜脈內(i.v.)輸注奧克利珠單抗，各次1000mg，間隔14天。接著使患者接受維持劑量方案，亦即隨後每24週治療週期單次輸注1000mg。隨後，為在第2治療週期期間維持研究雙盲，使患者接受間隔14天之兩次輸注，第一次輸注為奧克利珠單抗1000mg且第二次輸注為安慰劑。在第3及第4治療週期中，以雙盲方式在無第二次安慰劑輸注的情況下用單次1000mg輸注治療患者直至基於初始分析選出較佳劑量。
組B(奧克利珠單抗600mg)：在第1治療週期兩次靜脈內輸注奧克利珠單抗，各次300mg，間隔14天。接著使患者接受維持劑量方案，亦即隨後每24週治療週期單次輸注600mg。隨後，為在第2治療週期期間維持研究雙盲，使患者接受間隔14天之兩次輸注，第一次輸注為奧克利珠單抗600mg且第二次輸注為安慰劑。在第3及第4治療週期中，以雙盲方式在無第二次安慰劑輸注的情況下用單次600mg輸注治療患者直至基於初始分析選出較佳劑量。
組C(安慰劑)：在第1治療週期兩次靜脈內輸注安慰劑，間隔14天。其後，使患者接受600mg奧克利珠單抗劑量方案，該方案由在第2治療週期開始時間隔14天兩次雙盲靜脈內輸注奧克利珠單抗300mg開始。接著使患者接受維持劑量方案，亦即在第3及第4治療週期中以 雙盲方式投與600mg之單次輸注直至基於初始分析選出較佳劑量。
組D(Avonex)：在第1治療週期每週肌肉內(i.m.)投與30μg Avonex。其後，基於自願及開放標籤，向患者提供600mg奧克利珠單抗劑量方案，該方案由在第2治療週期開始時間隔14天兩次靜脈內輸注奧克利珠單抗300mg開始。用單次600mg輸注來治療第3及第4治療週期之患者直至基於初始分析選出較佳劑量。
對於所有組而言，在將該較佳劑量告知研究者與倫理委員會後，患者在其下一連續治療週期時以單次輸注形式接受該較佳劑量(600mg或1000mg)。
首次投與研究藥物(靜脈內輸注(奧克利珠單抗或安慰劑)或首次肌肉內注射Avonex)界定治療期之開始(第1天)。所有患者亦在研究第1天接受靜脈內輸注甲潑尼龍100mg且隨後各自接受奧克利珠單抗或安慰劑輸注或根據奧克利珠單抗輸注所需之時間點使患者接受Avonex(組D)。
存在四個治療週期，亦即週期1=基線至第24週；週期2=第24週至第48週；週期3=第48週至第72週；週期4=第72週至第96週。第1週期輸注訪問後(分別為第1天及第2週之訪問2及3)，訪問在第4週進行且其後每4週進行一次持續頭24週。在第2週期輸注訪問後(分別為第24週及第26週之訪問9及10)，在第36週進行訪問且其後每12週進行訪問直至治療及隨訪期結束。應努力將訪問安排在所提供期限內。評估潛在復發、新神經學症狀或安全性事件之額外未安排訪問可在任何時間進行。
研究群體及選擇準則
根據修訂McDonald準則(2005)診斷為復發緩解型多發性硬化症(RRMS)及滿足以下所提供之包涵/排除準則的年齡為18至55歲(包涵端點)之男性及女性符合參加研究之條件。
包涵準則：
患者必須滿足以下準則才符合參加研究之條件：1.根據修訂McDonald準則(2005)診斷為RRMS；2.年齡18-55歲(包涵端點)；3.在篩選前最後3年內至少兩次有記錄證明之復發，其中至少一次在篩選前一年內發生；4.基線擴展殘疾狀態量表(EDSS)為1.0分至6.0分；5.如下所定義負擔多發性硬化症(MS)疾病之跡象：a.基於本地讀數，在篩選前一年進行之MRI掃描中至少六個T2病變。若在上一年內未使用MRI掃描或MRI掃描顯示少於六個T2病變，則符合條件患者之篩選MRI掃描需要具有至少六個T2病變，或b.患者在篩選前一年內有2次有記錄證明之復發。
排除準則：
排除滿足以下準則之患者參加研究：1.篩選時具有繼發性或原發性進展型多發性硬化症(訪問1)；2.EDSS2.0之患者的疾病持續時間超過15年。
功效分析
此研究之主要目標為研究在第12週、第16週、第20週及第24週，以靜脈內600mg或1000mg之兩個劑量方案給予奧克利珠單抗(參見圖7)與安慰劑相比對腦MRI掃描所觀測到之釓增強T1病變之總數的影響。
此研究之次要目標為評估如以下所反映之奧克利珠單抗與安慰劑相比之功效及安全性：至第24週年度協定所定義之復發率；至第24週保持無復發之患者的比例(協定定義之復發)；第4週、第8週、第12週、第16週、第20週及第24週腦MRI掃描所觀測到的釓增強T1病變之 總數；第4週、第8週、第12週、第16週、第20週及第24週腦MRI掃描中新及/或持續釓增強T1病變之總數；自基線至第24週腦MRI掃描之T2病變總體積的改變，以評估第24週在患RRMS之患者中兩種奧克利珠單抗劑量方案與安慰劑及Avonex相比之安全性及耐受性及投與奧克利珠單抗持續多達96週之總體安全性，及研究奧克利珠單抗之藥物動力學及其他藥效學研究終點。
在此實例中，復發係定義為發生可歸因於MS之新神經症狀或惡化神經症狀且緊接著為至少30天之相對穩定或改善之神經狀態。症狀必須持續超過24小時且不應歸因於混雜臨床因素(例如發熱、感染、損傷、對伴隨使用之藥物治療的不良反應)。新神經症狀或惡化神經症狀必須伴有與EDSS增加至少半級或一種適當功能系統評分(FSS)增加2分或兩種或兩種以上適當FSS增加1分一致之客觀神經惡化。改變必須影響所選FSS(亦即錐體、步態、小腦、腦幹、感覺或視覺)。感覺改變、間歇性痙攣、疲勞、情緒改變或膀胱或腸急迫或失禁不足以確立為復發。檢查研究者確認符合以上準則之彼等復發。
此研究之探索目標包括(但不可限於)：自基線掃描至第12週腦MRI掃描中腦體積之改變；接受奧克利珠單抗之患者子群中第12週至第96週腦MRI掃描腦體積之改變；第4週、第8週、第12週、第16週、第20週及第24週腦MRI掃描所觀測之新T2病變及/或擴大T2病變之總數；至第24週保持無新釓增強T1病變之患者的比例；在24週內產生第一批新釓增強T1病變之時間；藉助於在患者子群中接受高達4個治療週期之奧克利珠單抗後48週釓增強T1病變之總數評估停止治療的效應；在各治療週期期間及第48週及第96週保持無復發(臨床及協定定義之復發)之患者的比例；在各治療週期期間及第48週及第96週需要甲潑尼龍全身性治療之MS復發患者的比例；在各治療週期期間及第48週及第96週年度臨床及協定定義之復發率；在24週內至第一次協定 定義之復發的時間；在96週內至第一次協定定義之復發的時間；持續殘疾進展發作之時間，該持續殘疾進展定義為至第96週1.0分或高於1.0分之持續EDSS惡化持續12週；持續殘疾進展發作之時間，該持續殘疾進展定義為至第96週1.0分或高於1.0分之EDSS持續惡化持續24週；研究奧克利珠單抗與Avonex相比對主要及次要研究終點之作用；研究與RRMS易感性相關之基因多態變異體及奧克利珠單抗活性及RRMS患者對奧克利珠單抗之治療反應性的相關性；研究與RRMS易感性相關之循環生物標誌及奧克利珠單抗活性及RRMS患者對奧克利珠單抗治療之治療反應性之間的關係；自基線至第24週及第48週之修正疲勞強度量表(MFIS)之改變；自基線至第24週及第48週之運動及認知功能之疲勞量表(FSMC)之改變；將基線與第24週及第48週相比，自「重度」疲勞轉為「中度」疲勞及自「中等」疲勞轉為「輕度」疲勞之患者比例的改變；自基線至第24週及第48週之流行病研究中心-憂鬱症量表(CES-D)的改變；及將基線與第24週及第48週相比，CES-D自較多抑鬱症症狀之狀態轉為較少抑鬱症症狀之狀態的患者比例之改變。
腦MRI
MRI為適用於監測MS中中樞神經系統(CNS)病變之工具。僅獲得一些患者在篩選時之腦MRI掃描(參見次要終點)及所有患者在基線時及在基線與第24週之間以四週時間間隔之腦MRI掃描。此外，在患者子群中(組A及組B)，在第96週(訪問16)及之後48週(亦即第144週)進行腦MRI掃描。
MRI包括在各時間點獲得以下掃描：T2加權MRI掃描、T1加權MRI掃描(無釓增強)及T1加權MRI掃描(具有釓增強)。
殘疾評估
由獨立檢查研究者在篩選時及在整個研究中每12週評估所有患者之由EDSS所量測的殘疾進展直至觀測期(24週後評估殘疾進展之時)。
殘疾進展係定義為當基線評分為5.0或低於5.0時，不可歸因於其他病因(例如發熱、同時併發疾病或伴隨使用之藥物治療)之自基線EDSS評分增加1.0分及當基線評分為5.5或高於5.5時0.5。當在初始記錄進展後至少12週以定期安排訪問確認EDSS增加時，認為疾病進展為持續的。持續殘疾進展之替代性定義要求在初始記錄進展後至少24週確認EDSS增加。
EDSS係基於標準神經學檢查；對代表功能系統(錐體、小腦、腦幹、感覺、腸及膀胱、視覺及大腦及/或智力，加「其他」)之七種EDSS分級且評分(總稱為為功能系統評分或FSS)。各FSS評分為0至5或6範圍內之依序臨床分級量表。接著與關於行走及輔具使用之觀測結果及資訊聯合使用此等分級來確定EDSS評分。EDSS為0.5分一級範圍為0(正常)至10(死亡)之殘疾量表。
實例2：原發性進展型多發性硬化症(PPMS)中利妥昔單抗之第II/III期研究
進行隨機化雙盲平行組安慰劑對照多中心第II/III期研究(U2786g)來評估利妥昔單抗在如McDonald等人(Ann Neurol 50：121-7(2001))所定義之患原發性進展型多發性硬化症(PPMS)之成人中的安全性及功效。
使個體以2：1比率隨機化以接受利妥昔單抗或安慰劑。將可購自Genentech之利妥昔單抗調配為於9.0mg/ml氯化鈉、0.7mg/ml聚山梨醇酯80、7.35mg/ml二水合檸檬酸鈉及無菌注射用水(pH 6.5)中之無菌產物以供靜脈內投藥。研究藥物之各時程由兩次靜脈內輸注(間隔14天)1000mg利妥昔單抗或安慰劑組成。個體在第1天及第15天接受 第一治療時程且在第24週、第48週及第72週接受額外時程。個體在開始各次輸注前30分鐘至60分鐘口服接受乙醯胺苯酚(acetaminophen)(1g)及苯海拉明HCl(diphenhydramine HCl)(50mg)或等效物。在輸注前不投與糖皮質激素。在96週之試驗持續時間中，在定期安排訪問中查看個體進行物理檢驗、神經學及MRI評估來收集不良反應及生命徵象且完成常規血液學、血清化學及尿分析實驗室測試。
意向治療(ITT)個體之基線人口統計學呈現於表3中。
兩個治療組中MS疾病持續時間類似。基線MRI結果概述於表4中。安慰劑組與利妥昔單抗組中之基線MRI特徵類似。
根據研究部位、由EDSS(4.0，>4.0)定義之基線疾病嚴重度對隨機化進行分級。基線EDSS概述於表5中。由於動態隨機化，因此各治療組中之個體百分比之所有分級因素位準類似。表5：基線分級因素，疾病嚴重度：意向治療個體
此外，兩個治療組之其他基線疾病嚴重度指標類似：EDSS、Kurtzke功能系統評分、多發性硬化症功能綜合量表(MSFCS)評分及 MSFCS組份(定時25步行走、九孔圓柱測驗及PASAT-3)。
功效結果
此試驗之初始功效分析在利妥昔單抗與安慰劑之間比較在96週治療期期間確診之疾病進展的時間。疾病進展係定義為若基線EDSS在2.0分與5.5分之間(包涵端點)，則自基線EDSS增加1.0分(Kurtzke J.Neurology 33(11)：1444-52(1983))，或若基線EDSS>5.5分則增加0.5分，其改變不可歸因於其他病因(例如發熱、同時發生之疾病、MS復發或惡化或伴隨使用之藥物治療)。
分級分析展示利妥昔單抗與安慰劑相比不顯著延緩確診之疾病進展(p=0.1442，分級對數等級)。據估算安慰劑組及利妥昔單抗組之96週內患者進展之百分比分別為38.5%及30.2%(表6)。確診之疾病進展之時間的卡本-麥爾曲線(Kaplan-Meier plot)展示於圖8中。
次要功效終點包括自基線至第96週之總T2病變體積的改變及自基線至第96週之腦體積的改變。在測試此兩個次要終點中使用Hochberg-Bonferroni程序來控制第I型誤差率。兩個治療組中自基線至第96週之腦體積改變無顯著不同(p=0.6237)。參見表7。
觀測到兩種治療之間自基線至第96週T2病變體積的改變具有顯著差異(p=0.0008)。安慰劑組與利妥昔單抗組中T2病變體積之中值增加分別為809.50mm3及301.95mm3。(參見表8及圖9)。
分析所有研究終點(除T2病變體積改變、擴大之T2病變及新T2病變以外)展示安慰劑組與利妥昔單抗組之間的差異在統計上不顯著。與安慰劑相比，利妥昔單抗組在第48週及第122週經歷顯著較小之T2病變體積增加(分別為p=0.0051及0.0222)；在第48週及第96週具有較少新T2病變(p<0.001)；在第48週及第96週具有較少擴大之T2病變數(分別為p=0.008及0.072)。
子群分析
主要終點之子群分析包括根據以下人口統計學及基線疾病特徵，確診之疾病進展的時間：部位、年齡、性別、種族、先前MS療法、基線EDSS、自MS症狀發作及基線釓(Gd)病變起之持續時間及基線多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)(患者進展快速程度之指標，參見Roxburgh等人Neurology 64；1144-1151(2005))。
子群分析結果表明對較年輕、進展較快速(較高MSSS)或具有基線Gd病變之患者的潛在治療作用(圖10)。此外，治療作用之年齡、基線Gd病變及MSSS之相加預測作用已使用多變量分析法驗證(圖11及圖12)。亦參見表9。基於此等MSSS之結果，使用修正之包涵/排除準則選擇排除疾病持續時間長且進展緩慢之較年老患者的研究群體子群(年齡55，3基線EDSS6.5，若患者基線EDSS<5，則排除疾病持續 時間>10之患者，或若患者基線EDSS5，則排除疾病持續時間>15患者)。亦展示此子群之顯著治療作用(分級對數等級檢驗P值=0.01；圖13)。
子群分析表明具有活動性疾病跡象之PPMS患者展示如藉由確診之疾病進展之時間以及EDSS、MSFC自基線的改變及腦MRI中的T2病變所量測治療相關益處之顯著臨床徵兆(資料未展示)。在安慰劑組中表現疾病進展預後且在利妥昔單抗組中可能預測治療反應之獨立因素包括以下：較年輕，尤其年齡小於51歲；腦MRI中存在基線對比度增強病變；及較高MS嚴重度評分。此等觀測結果用以產生假設，支持B細胞消耗對適當選擇之進展型發作MS患者之確診之疾病進展的潛在治療益處。
儘管此研究未能在總體PPMS群體中展現主要功效，但子群功效分析指示具有基線對比度增強之腦MRI病變的患者可能對利妥昔單抗治療有反應，其中治療組與安慰劑組相比具有57%之確診之疾病進展危險(1-HR)相對降低，其主要但並非完全由第96週中52.8%之極高安慰劑確診之疾病進展(CDP)率所促成(圖10)。年齡小於51歲之PPMS患者亦可受益，具有43%之確診之疾病進展危險相對降低及44.9%之安慰劑進展率。儘管與存在對比度增強病變及年齡<51歲相關，但對展 現兩種特徵之72名患者的事後分析揭示更顯著之明顯作用，其中確診之疾病進展危險相對降低77%(表9)。在此子群中，51.6%之安慰劑進展率不高於具有基線增強MRI病變之所有患者的比率，而利妥昔單抗組之較低進展比率(24.6%)說明治療可能較大程度降低危險。此等OLYMPUS安慰劑資料確認對PPMS患者臨床及MRI異質性之天然歷史觀測(Sastre-Garriga等人Neurology 65(4)：633-5(2005)，Ingle等人Brain 126(第11部分)：2528-36(2003)，Tremlett等人Mult Scler.14(3)：314-24(2008)，Tremlett等人Neurology 65(12)：1919-23(2005)，Kremenchutzky等人Brain 129(第3部分)：584-94.(2006))。此外，MAGNIMS臨床及MRI定群研究描述在疾病病程早期具有更多發炎性MRI活性且殘疾進展預後較差之PPMS患者子集(Ingle等人J.Neurol Neurosurg Psychiatry 76(9)：1255-8(2005))；OLYMPUS安慰劑資料似乎首次確認此等觀測結果。
實例3：進展型多發性硬化症中奧克利珠單抗之第III期研究
進行第III期隨機化雙盲平行組多中心研究來評估600mg奧克利珠單抗與安慰劑相比在患進展型MS之成人中的安全性及功效。
總共630名進展型MS患者(315名為進展型發作的MS且315名為復發型發作的MS)參加且分配(2：1隨機)至按多發性硬化症之部位及類型分級的奧克利珠單抗組或安慰劑組。此研究由應用於所有患者之以下三個時期組成：篩選期、治療期及無治療隨訪期。在第一研究時程中，在第1天及第15天投與藥物治療(300mg奧克利珠單抗或安慰劑輸注×2)。在後續治療時程中，每24週對患者給藥(單次輸注600mg奧克利珠單抗)直至最後參加之患者接受在第96週投與之其最後的治療時程。
在各研究藥物輸注前，患者接受使用鎮痛藥/退熱藥(諸如乙醯胺苯酚/撲熱息痛(paracetamol)(1公克))及靜脈內或口服抗組織胺(諸如苯 海拉明50mg)及100mg靜脈內甲潑尼龍或等效物治療以降低可能輸液反應之發生率。在不良反應常用術語標準(CTCAE)3級或更高級(嚴重)輸液反應伴有相關呼吸症狀(喘鳴、哮喘或支氣管痙攣)之患者中，可指定使用支氣管擴張藥之額外治療。
在整個研究中獲得常規實驗室研究，其中在研究藥物治療時程後進行其他測試。亦進行免疫組、血清人類抗人類抗體(HAHA)及甲狀腺測試。收集所有患者之血清樣本用於藥物動力學分析且收集血液樣本用於B細胞計數測定。監測B細胞數作為奧克利珠單抗之藥物動力學標誌。
患者群體及選擇準則
此研究之目標群體包括有或無疊加復發史之患進展型MS的患者。符合此研究條件之患進展型MS的患者之特徵為根據修訂McDonald準則(2005)之診斷及在不存在復發下有記錄證明之不可逆神經功能損失持續6個月或更長時期。使用在對進展型MS患者進行之先前臨床試驗中鑑別為潛在危險因素之準則，選擇具有活動性疾病及較快速殘疾進展之較高危險之跡象的患者。此等因素包括較年輕、腦脊髓液(CSF)中具有炎症跡象(寡選殖帶或IgG指數升高)、腦MRI中對比度增強病變、與非復發性相關進展疊加之高復發活動性及較快速之殘疾累積史。
篩選符合以下包涵及排除準則之自願且符合條件參加研究之所有患者。
包涵準則包括：
1.根據修訂McDonald準則(2005)診斷出多發性硬化症；
2.進展型MS，其特徵為有記錄證明、不可歸因於臨床復發、持續6個月之不可逆神經功能損失；
3.年齡18-55歲(包涵端點)；
4.篩選時EDSS為3.0分至6.5分。
5.由於下肢結果，致使錐體系統或步態之功能系統(FS)量表評分2.0。
6.存在在篩選期期間所獲得或在先前六個月記錄之CSF試樣中至少一種以下實驗室發現結果，如(例如)IgG指數升高及/或由等電聚集所偵測之IgG寡選殖帶所指示。
7.存在至少一種以下準則：
‧年齡<50
‧篩選時或篩選6個月內腦MRI中具有Gd+病變
‧在過去2年內不可歸因於復發之EDSS增加至少1.5分
‧過去兩年內兩次復發
排除準則包括：
1.篩選時具有復發緩解型多發性硬化症(訪問1)
2.自MS症狀發作起之疾病持續時間：對於在篩選時EDSS>5.0之患者而言為超過15年，或對於在篩選時EDSS5.0之患者而言為超過10年。
功效分析
主要功效終點為確診之疾病進展的時間。疾病進展係定義為若基線EDSS在2.0分與5.5分之間(包涵端點)，則自基線EDSS增加1.0分，或若基線EDSS>5.5分則增加0.5分，其改變不可歸因於其他病因(例如發熱、同時發生之疾病、MS復發或惡化或伴隨使用之藥物治療)。
EDSS係基於標準神經學檢查；對代表功能系統(錐體、小腦、腦幹、感覺、腸及膀胱、視覺及大腦及/或智力，加「其他」)之七種EDSS分級且評分(總稱為功能系統評分或FSS)。各FSS評分為0至5或6範圍內之依序臨床分級量表。接著與關於行走及輔具使用之觀測結果 及資訊聯合使用此等分級來確定EDSS評分。EDSS為0.5分一級範圍在0(正常)至10(死亡)內之殘疾量表。
支持主要功效終點之次要功效終點包括：在腦MRI掃描中總T2病變體積自基線至第120週之改變；25步定時行走自基線至第120週之改變；確診之疾病進展的時間，其中確認在初始疾病進展後至少24週(168天)進行。
評估復發
在整個研究中之各次訪問時由治療研究者評估患者之復發且必要時以不定時訪問來確認訪問之間所發生之復發。為滿足協定定義之復發準則，將復發定義為發生可歸因於MS之新或惡化之神經症狀且緊接著為至少30天之相對穩定或改善之神經狀態。症狀必須持續超過24小時且不應歸因於混雜臨床因素(例如發熱、感染、損傷、對伴隨使用之藥物治療的不良反應)。新神經症狀或惡化神經症狀必須伴有與EDSS增加至少半級或一種適當FSS增加2分或兩種或兩種以上適當FSS增加1分一致之客觀神經惡化。改變必須影響所選FSS(亦即錐體、步態、小腦、腦幹、感覺或視覺)。間歇性痙攣、性功能障礙、疲勞、情緒改變或膀胱或腸急迫或失禁不足以確立為復發。
腦MRI成像
在此研究期間之多個時間點(包括基線)獲得腦及頸部脊髓之磁共振成像。腦MRI包括在各時間點獲得以下掃描：T2加權MRI掃描及T1加權MRI掃描(無釓增強)。
使用變異數分級分析比較奧克利珠單抗與安慰劑之間T2病變總體積及定時25步行走自基線至第120週的改變。模型包括初始分析中所記錄之兩個分級因素。
實例4：原發性進展型多發性硬化症中奧克利珠單抗之第III期研究
進行第III期隨機化雙盲平行組多中心研究來評估兩種奧克利珠 單抗劑量方案之一與安慰劑相比在患原發性進展型MS之成人中的安全性及功效。
所研究之兩種奧克利珠單抗劑量方案如下：1)奧克利珠單抗1000mg劑量方案：由第一治療週期兩次輸注1000mg接著在隨後治療週期單次輸注1000mg組成，及2)奧克利珠單抗600mg劑量方案：由第一治療週期兩次輸注300mg接著在隨後治療週期單次輸注600mg組成。
總共630個原發性進展型MS患者參加且分配(2：1隨機化)至由多發性硬化症之部位及類型分級之奧克利珠單抗組或安慰劑組中。此研究由應用於所有患者之以下三個時期組成：篩選期、治療期及安全性隨訪期。在第一研究時程中，在第1天及第15天投與藥物治療(奧克利珠單抗或安慰劑輸注×2)。在後續治療時程中，每24週對患者給藥(單次輸注奧克利珠單抗或安慰劑)直至最後參加之患者接受在第96週投與之其最後的治療時程。
在各研究藥物輸注前，患者接受使用鎮痛藥/退熱藥(諸如乙醯胺苯酚/撲熱息痛(1公克))及靜脈內或口服抗組織胺(諸如苯海拉明50mg)及100mg靜脈內甲潑尼龍或等效物治療以降低可能輸液反應之發生率。在不良反應常用術語標準(CTCAE)3級或更高級(嚴重)輸液反應伴有相關呼吸症狀(喘鳴、哮喘或支氣管痙攣)之患者中，可指定使用支氣管擴張藥之額外治療。
在整個研究中獲得常規實驗室研究，其中在研究藥物治療時程後進行其他測試。亦進行免疫組、血清人類抗人類抗體(HAHA)及甲狀腺測試。收集所有患者之血清樣本用於藥物動力學分析且收集血液樣本用於B細胞計數測定。監測B細胞數作為奧克利珠單抗之藥物動力學標誌。
患者群體及選擇準則
此研究之目標群體包括患原發性進展型MS之患者。符合此研究 條件之患原發性進展型MS之患者特徵為根據修訂McDonald準則(2005)之診斷。使用在對進展型MS患者進行之先前臨床試驗中鑑別為潛在危險因素之準則，選擇具有活動性疾病及較快速殘疾進展之較高危險之跡象的患者。此等因素包括較年輕、腦脊髓液(CSF)中具有炎症跡象(寡選殖帶或IgG指數升高)及更快速之殘疾累積史。
篩選符合以下包涵及排除準則之自願且符合條件參加研究之所有患者：
包涵準則包括：
1.根據修訂McDonald準則(2005)診斷出原發性進展型多發性硬化症；2.年齡18-55歲(包涵端點)；3.篩選時EDSS為3.0分至6.5分；4.由於下肢結果，致使錐體系統之功能系統(FS)量表評分2.0；5.篩選時CSF試樣中具有至少一種以下實驗室發現結果之有記錄證明史或CSF試樣中存在至少一種以下實驗室發現結果，如由IgG指數升高及/或由等電聚焦所偵測之IgG寡選殖帶所指示；6.自MS症狀發作起之疾病持續時間：對於在篩選時EDSS>5.0之患者而言為少於15年，或對於在篩選時EDSS5.0之患者而言為少於10年。
排除準則包括：
1.篩選時具有復發緩解型、繼發性進展型或進展復發型多發性硬化症的歷史(訪問1)。
功效分析
主要功效終點為確診之疾病進展的時間。疾病進展係定義為若基線EDSS在2.0分與5.5分之間(包涵端點)，則自基線EDSS增加1.0分，或若基線EDSS>5.5分則增加0.5分，其改變不可歸因於其他病因 (例如發熱、同時發生之疾病、MS復發或惡化或伴隨使用之藥物治療)。
EDSS係基於標準神經學檢查；對代表功能系統(錐體、小腦、腦幹、感覺、腸及膀胱、視覺及大腦及/或智力，加「其他」)之七種EDSS分級且評分(總稱為功能系統評分或FSS)。各FSS評分為0至5或6範圍內之順序臨床分級量表。接著與關於行走及輔具使用之觀測結果及資訊聯合使用此等分級來確定EDSS評分。EDSS為0.5分一級範圍在0(正常)至10(死亡)內之殘疾量表。
支持主要功效終點之次要功效終點包括：在腦MRI掃描中總T2病變體積自基線至第120週之改變；25步定時行走自基線至第120週之改變；確診之疾病進展的時間，其中確認在初始疾病進展後至少24週(168天)進行。
評估復發
在整個研究中之各次訪問時由治療研究者評估患者之復發且必要時以不定時訪問來確認訪問之間所發生之復發。為滿足協定確認之復發準則，將復發定義為發生可歸因於MS之新或惡化之神經症狀且緊接著為至少30天之相對穩定或改善之神經狀態。症狀必須持續超過24小時且不應歸因於混雜臨床因素(例如發熱、感染、損傷、對伴隨使用之藥物治療的不良反應)。新神經症狀或惡化神經症狀必須伴有與EDSS增加至少半級或一種適當FSS增加2分或兩種或兩種以上適當FSS增加1分一致之客觀神經惡化。改變必須影響所選FSS(亦即錐體、步態、小腦、腦幹、感覺或視覺)。間歇性痙攣、性功能障礙、疲勞、情緒改變或膀胱或腸急迫或失禁不足以確立為復發。
腦MRI成像
在此研究期間之多個時間點(包括基線)獲得腦及頸部脊髓之磁共振成像。腦MRI包括在各時間點獲得以下掃描：T2加權MRI掃描及T1 加權MRI掃描(無釓增強)。
使用變異數分級分析比較奧克利珠單抗與安慰劑之間T2病變總體積及定時25步行走自基線至第120週的改變。模型包括初始分析中所記錄之兩個分級因素。
<110> 美商建南德克公司
<120> 治療進展型多發性硬化症之方法
<140> 098131063
<141> 2009-09-15
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Claims (10)

  1. 一種製備治療患者進展型多發性硬化症之抗CD20抗體之用途，其中該治療係基於該患者具有一或多種選自由以下組成之群之特徵：(a)年齡小於約55歲，(b)一或多個釓染色病變，(c)開始治療前兩年內擴展殘疾狀態量表(EDSS)增加至少約一分，及(d)多發性硬化症嚴重度評分(MSSS)高於約5分。
  2. 如請求項1之用途，其中該進展型多發性硬化症為原發性進展型多發性硬化症。
  3. 如請求項1之用途，其中該進展型多發性硬化症為繼發性進展型多發性硬化症。
  4. 如請求項1之用途，其中該進展型多發性硬化症為進展復發型多發性硬化症。
  5. 如請求項1之用途，其中該患者在開始治療時未診斷出患有復發緩解型多發性硬化症。
  6. 如請求項1之用途，其中該患者之樣本中進一步具有炎症跡象。
  7. 如請求項6之用途，其中該樣本為腦脊髓液樣本。
  8. 如請求項7之用途，其中炎症跡象係由於上升IgG指數所顯示的。
  9. 如請求項7之用途，其中炎症跡象係由於藉由等電聚焦法所偵測之IgG寡選殖條紋所顯示的。
  10. 如請求項1之用途，其中該患者在少於約15年內具有高於約5.0之EDSS。
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