[go: up one dir, main page]

DE10021475A1 - OTR1:gen,cDNA,Expression, Aminosäureseqenz - Google Patents

OTR1:gen,cDNA,Expression, Aminosäureseqenz

Info

Publication number
DE10021475A1
DE10021475A1 DE2000121475 DE10021475A DE10021475A1 DE 10021475 A1 DE10021475 A1 DE 10021475A1 DE 2000121475 DE2000121475 DE 2000121475 DE 10021475 A DE10021475 A DE 10021475A DE 10021475 A1 DE10021475 A1 DE 10021475A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
gene
mrna
cdna
receptor
protein
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
DE2000121475
Other languages
English (en)
Inventor
Michael Brues
Heinz Boenisch
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to DE2000121475 priority Critical patent/DE10021475A1/de
Publication of DE10021475A1 publication Critical patent/DE10021475A1/de
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01KANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00Genetically modified animals
    • A01K2217/05Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

Mittels Homologiesuche in Datenbanken wurde ein Teil eines potentiellen neuen Gens, welches für einen G-Protein-gekoppelten Rezeptor kodiert, identifiziert. Aus der Partialsequenz wurden Oligonukleotid-Primer abgeleitet und für eine PCR-Amplifikation eingesetzt. Mittels dieser Primer und der Polymerasekettenreaktion konnten wir das Rezeptorgen aus humaner genomischer DNA amplifizieren und mit dieser Methode konnten wir auch die cDNA, welche für diesen Rezeptor kodiert, aus einer humanen Colon-cDNA-Bank amplifizieren. Es handelt sich um ein Intron-loses Gen, d. h. die genomische Sequenz und die cDNA sind identisch. Ferner konnten wir auf genomischer DNA zusätzlich 5' und 3' nicht-translatierte Bereiche des Gens (mittels "genome walking") identifizieren und sequenzieren.
Dargestellt und beschrieben werden das humane Gen für den von uns als "OTR1" (Opioid- type-Rezeptor 1) bezeichneten neuen G-Protein-gekoppelten Rezeptor, die cDNA, welche den Rezeptor kodiert und die von der cDNA abgeleitete Aminosäuresequenz.
Aufgrund der cDNA Amplifikation aus humaner Colon-cDNA wissen wir ferner, dass dieser neue, bisher unbekannte Rezeptor im Dickdarm exprimiert wird. Durch Datenbank-Vergleich der Gensequenz mit einer EST-Datenbank konnten wir eindeutig die Expression des Gens in folgenden Geweben identifizieren:
  • - humaner Colon
  • - humane Niere
  • - humane Leber
  • - humaner Hauttumor (squamous cell carcinoma)
1. Das Gen, inklusive 5'- und 3'-nicht-translatiertem Bereich, welches wir zur Patentierung anmelden, ist 4980 Basen groß. Der kodierende Bereich erstreckt sich von Base 1499 (Start Codon ATG) bis Base 2770 (Stop Codon TGA inklusive). Im nicht-translatierten 5'-Bereich (Base 1-1499) befindet sich der regulative Bereich dieses Gens (Promotor) mit einer TATA- Box im Bereich von Base 1194-1998. Im nicht-translatierten 3'-Bereich des Gens (Base 2851 bis 5460) befindet sich ein klassisches Polyadenylierungssignal (AATAAA) in Position 3157-3162.
2. Die cDNA, welche wir aus humaner Colon-cDNA amplifizieren konnten, erstreckt sich von Position 1482 bis 2798 des Gens und kodiert für ein Protein aus 423 Aminosäuren. Für die Amplifikation wurden folgende Primer für die Polymerase-Kettenreaktion (PCR) benutzt:
sense: 5' CTGATGAAAACCCCAGGATG 3';
antisense: 5'CACAGCGCTGCAGCCCTG3'.
PCR-Programm 94°C 1 min; 56°C 1 min; 72°C 3 min; 35 Zyklen.
Durch die Klonierung der cDNA aus humanem Gewebe ist bewiesen, dass dieser Rezeptor existiert und im menschlichen Dickdarm exprimiert wird.
3. Die Aminosäuresequenz, welche aus dem offenen Leseraster der cDNA und auch des intronlosen Gens abgeleitet werden kann, ist 423 Aminosäuren lang. Homologievergleich in Datenbanken ergibt, dass das Protein die höchste Homologie zu Opioid-Rezeptoren aufweist. Die höchsten Homologien wurden zum humanen Opioid-Rezeptor delta-1, aber auch zu Purinozeptoren (P2U und P2Y) gefunden. Weitere hohe Homologien bestehen zu Somatostatin-, Thrombin-, Angiotensin- und Bradykinin-Rezeptoren. Mit Ausnahme der Purinozeptoren handelt es sich bei den homologen Rezeptoren durchweg um Peptid- Rezeptoren, sodass es sehr wahrscheinlich ist, dass der neue "Opioid-type" Rezeptor auch ein Peptid-Rezeptor ist.
Hydrophobizitätsanalyse der Aminosäuresequenz mit dem Programm TopPred-II ergab, dass das Protein die typische Struktur von G-Protein gekoppelten Rezeptoren (GPCRs) mit sieben transmembranalen Domänen besitzt. Die Aminosäuresequenz weist zwei potentielle N- Glykosylierungsstellen in Position 44 und 175 auf. Potentielle Phosphorylierungsstellen für Protein-Kinase C befinden sich in den Positionen 21, 157, 174, 239, 249, 278 und 398. Sofern diese Phosphorylierungsstellen intrazellulär gelegen sind, können sie an der Modulation der Rezeptorfunktion durch Protein-Kinase C beteiligt sein. An den Position 348 kann potentiell durch Casein-Kinase II phosphoryliert werden. Von Aminosäure 178 bis 194 befindet sich ein für G-Protein-gekoppelte Rezeptoren typisches Sequenzmotiv:
STNRTASVVFLTAIALNRYLKVVQPHH. Dies ist ein zusätzlicher Beweis, dass es sich um einen typischen G-Protein-gekoppelten Rezeptor handelt.
4. Einordnung und potentielle Funktionen des zu patentierenden Rezeptors und seines Gens (bzw cDNA; mRNA):
Der Rezeptor gehört zur großen Genfamile der G-Protein-gekoppelten Rezeptoren (GPCRs) und innerhalb dieser Familie zu den Opioid-artigen Rezeptoren. Als solcher dürfte er - wie eine Reihe anderer Opioid-Rezeptoren - einerseits eine Rolle als präsynaptischer Rezeptor bei der Regulation der Freisetzung von Neurotransmittern (insbesondere im ZNS) spielen. Andererseits könnte er als postsynaptischer Rezeptor eine Rolle bei der Schmerzempfindung und Weiterleitung spielen. In beiden Fällen würde er einen Angriffspunkte für therapeutisch bedeutsame Pharmaka darstellen.
MBHB-Rezept-14 (OTR1; Opioid-type Rezeptor1): Gensequenz
MBHB-Rezept-14 (OTR1; Opioid-type Rezeptor1): cDNA-Sequenz
MBHB-Rezept-14 (OTR1; Opioid-type Rezeptor1): Aminosäuresequenz

Claims (1)

  1. Dieses Patent soll sich erstrecken auf folgende Daten, Techniken und Anwendungen und Entwicklungen:
    • 1. Das dargestellte Gen inklusive des 5' und 3' nichttranslatierten Bereichs.
    • 2. Transkriptionsfaktoren, RNA Polymerasen und Pharmaka sowie Chemikalien, die die Expression des Gens in positiver oder negativer Weise beeinflussen.
    • 3. Die von dem Gen transkribierte messenger RNA, inklusive davon abgeleiteter Spleißvarianten und Isoformen.
    • 4. Die von der mRNA oder von dem intronlosen Gen abgeleitete cDNA.
    • 5. Das von der mRNA (oder dem Gen oder der cDNA) abgeleitete oder hergestellte Protein.
    • 6. Antikörper oder Antiseren, welche gegen einzelne oder mehrere Epitope des Proteins oder gegen das ganze Protein hergestellt werden.
    • 7. Monoklonale Antikörper oder Antiseren, die gegen einzelne oder mehrere Epitope des Proteins oder gegen das ganze Protein hergestellt werden.
    • 8. Expressionssysteme (eukaryotische Zellinien, Hefezellen, Xenopus Oocyten, Baculovirussysteme, Insektenzellsysteme, bakterielle Expressionssysteme), welche das genannte Protein exprimieren (nativ oder recombinant).
    • 9. Ligand-Bindungsstudien und Screening-Assays an nativen oder recombinanten Rezeptoren oder Zellen oder Zellmembranen, welche diesen Rezeptor enthalten.
    • 10. Transgene Tiere und knock-out-Tiere, welche diesen Rezeptor in veränderter Dichte oder gar nicht exprimieren.
    • 11. Methoden der Gentherapie, welche sich auf diesen Rezeptor bzw. sein Gen oder seine mRNA (cDNA) erstrecken und deren Entwicklung und Anwendung.
    • 12. Sense- und Antisense-Oligonukleotide, welche von diesem Gen abgeleitet wurden, sowie deren Anwendung.
    • 13. Die Diagnose und Behandlung von Krankheiten, die mit diesem Rezeptor in direkter oder indirekter Weise in Verbindung stehen.
    • 14. Methoden zur Diagnose von Erkrankungen, die mit diesem Rezeptor (oder dessen Gen, mRNA) in direkter oder indirekter Weise in Verbindung stehen wie z. B. Hybridisierungstechniken, Sequenzierung, SSCP, RFLP, Northern Blot, Southern Blot, Western Blot, Expressions Arrays, Antikörper, Mutationsanalysen.
    • 15. Die Benutzung der Informationen, oder des Rezeptors oder Zellen, welche diesen exprimieren, zur Entwicklung neuer Pharmaka, Verbindungen und Chemikalien und die Evaluierung vorhandener Pharmaka, Verbindungen und Chemikalien sowie zur Entwicklung neuer Technologien oder Evaluierung vorhandener Technologien.
    • 16. Das Patent soll sich auch erstrecken auf die Punkte 1. bis 15. für modifizierte Proteine und Gen, cDNA- und mRNA-Sequenzen (Aminosäureaustausche, Basenaustausche).
DE2000121475 2000-05-03 2000-05-03 OTR1:gen,cDNA,Expression, Aminosäureseqenz Pending DE10021475A1 (de)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE2000121475 DE10021475A1 (de) 2000-05-03 2000-05-03 OTR1:gen,cDNA,Expression, Aminosäureseqenz

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE2000121475 DE10021475A1 (de) 2000-05-03 2000-05-03 OTR1:gen,cDNA,Expression, Aminosäureseqenz

Publications (1)

Publication Number Publication Date
DE10021475A1 true DE10021475A1 (de) 2001-11-08

Family

ID=7640605

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE2000121475 Pending DE10021475A1 (de) 2000-05-03 2000-05-03 OTR1:gen,cDNA,Expression, Aminosäureseqenz

Country Status (1)

Country Link
DE (1) DE10021475A1 (de)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003078466A1 (fr) * 2002-03-19 2003-09-25 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Recepteurs couples a la proteine g et genes correspondants
US7527935B2 (en) 2002-03-19 2009-05-05 Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation G-protein coupled receptor having eicosanoid as ligand and gene thereof
US7829298B2 (en) 2001-11-27 2010-11-09 Arena Pharmaceuticals, Inc. Human G protein-coupled receptors for metabolic-related disorders

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7829298B2 (en) 2001-11-27 2010-11-09 Arena Pharmaceuticals, Inc. Human G protein-coupled receptors for metabolic-related disorders
WO2003078466A1 (fr) * 2002-03-19 2003-09-25 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Recepteurs couples a la proteine g et genes correspondants
US7527935B2 (en) 2002-03-19 2009-05-05 Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation G-protein coupled receptor having eicosanoid as ligand and gene thereof

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Nuell et al. Prohibitin, an evolutionarily conserved intracellular protein that blocks DNA synthesis in normal fibroblasts and HeLa cells
Feingold et al. An olfactory receptor gene is located in the extended human β-globin gene cluster and is expressed in erythroid cells
EP0787797A1 (de) Menschlicher 5HT1D-Rezeptor (Serotonin-Rezeptor), Verfahren zur Herstellung, seine Verwendungen, Antikörper gegen dieser Rezeptor und transgene Tiere die dieser Rezeptoren exprimieren
ES2323158T3 (es) Alk-7 (quinasa analoga a la activina), un receptor de la serina treonina quinasa.
DE69819505T2 (de) Mit smad wechselwirkende polypeptide und verwendungen davon
DE69332798T2 (de) Ikaros: ein regulatorisches gen bei der t-zell differenzierung
Steingrímsson et al. The semidominant Mi (b) mutation identifies a role for the HLH domain in DNA binding in addition to its role in protein dimerization.
DE69417223T2 (de) Ein menschlicher t-zell rezeptor der protein g-gekoppelte rezeptor familie
DE19625191A1 (de) Nierenkarzinom-spezifische T-Zellen
DE4200043A1 (de) Lymphoides cd30-antigen (ki-1), dessen protein- und die zugehoerige nucleotidsequenz, seine herstellung sowie mittel zur diagnose und untersuchung von tumoren
DE69735604T2 (de) Hypophysentumor verursachende gene und verwandte produkte
DE69924120T2 (de) Für ataxin-2-bindende proteine kodierende nukleinsäure, damit verwandten produkten und verfahren zur deren anwendung
DE69232737T2 (de) Nukleotide sequenzen die für den murin-beta-3-adrenergischen rezeptor kodieren und ihre verwendungen
DE10021475A1 (de) OTR1:gen,cDNA,Expression, Aminosäureseqenz
US5935925A (en) Methods of treating migraine and compounds useful for such methods
DE10021474A1 (de) Mar1: Gen, cDNA, Expression, Aminosäuresequenz
DE69832447T2 (de) Gen kodierend für Afadin-1
DE19937839A1 (de) OLFXY (gen, cDNA, Expression, Aminosäuresequenz)
DE19729211C2 (de) Humanes Semaphorin L (H-Sema-L) und korrespondierende Semaphorine in anderen Spezies
DE10004930A1 (de) Seralpha: Gen, cDNA, Expression, Aminosäuresequenz
EP1402034B1 (de) Identifizierung von ses-1 aus c. elegans sowie dessen verwendung
DE10019119A1 (de) LTBx: gen, cDNA, Expression, Aminosäuresequenz
DE19930285A1 (de) P2YLi: Gen, CDNA, Expression und Aminosäuresequenz
DE19928417A1 (de) RLPALR1: Gen,eDNA, Experession und Aminosäuresequenz
DE10019120A1 (de) PAFR2:gen, cDNA, Expression, Aminosäuresequenz