DE1068722B - Verfahren zur Herstellung von Peptiden - Google Patents

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Ο/ΡZLd £§"/-.rtMr— /t^ιKφJ^J*; >*--/^Θ-fsSYS"' 3&3t>CL —&S\PS—....— BUNDESREPUBLIK DEUTSCHLAND DEUTSCHES INTERN AT. KL. C 0<C PATENTAMT AUSLEGESCHRIFT 1068 722 U5491IVb/12q ,/ANMEtDETAG: 25.JULI1958 BEKANNTMACHUNG DER ANMELDUNG UND AUSGABE DER ADSLEGESCHRIFT: 12. NOVEMBER 1959 In der Zusatzpatentanmeldung Γ 5171 IVb,'12q ist unter anderem ein Verfahren zur Herstellung von (N-Tri- I yl · L - glutamin}!) -L- asparaginyl - (S - trityl - L - cystein}!) L-prolyl-i.-leucyl-glycinmethylester durch Kondensation von L-Asparaginyl-iS-trityl-L-cysteiny^-L-prolyl-L-leucyl-glycinmethylester mit N-Trityl-L-glutamin in Gegenwart von Dicyclohexylcarbodiimid beschrieben. Aus der Zusatzpatentanmeldung U 5172 IVb/12q ist es bekannt, daß das so erhaltene Hexapeptid das Ausgangsmaterial der Wahl für die Synthese des Oxytocins von Du Vig- II eaud darstellt. Es wurde nun gefunden, daß (N-Trityl-L-glutaminyl)-L-asparaginyl-(S-trityl-L-cysteinyl)-L-prolyl-L-leucyl-glycinmethylester sehr vorteilhaft auch dadurch hergestellt werden kann, daß man das gemäß der Hauptpatentanmeldung erhaltene (N-Trity]-L-glutaminyl)-L-asparagin mit (S-Trityl-L-cysteinylJ-L-prolyl-L-leucyl-glycinmethylester kondensiert, den man gemäß Patent 1 038 053 herstellt. Die Ausbeuten der Kondensation sind ausgezeichnet, und die Ausgangssubstanzen sind besonders leicht zugänglich. Das Verfahren vorliegender Erfindung besteht demnach im wesentlichen darin, (N-Trityl-L-glutaminyl)-L-asparagin, gelost in einem geeigneten Lösungsmittel, bei tiefer Temperatur mit (S-Trityl-L-cysteinyl)-L-prolyl-L-leucyl-glycinmethylester in Gegenwart von Dicyclohexylcarbodiimid umzusetzen, den gebildeten Dicyclohetylharnstoff durch Filtrieren zu entfernen und den gesuchten N,S-Ditritylhexapeptidester nach an -.ich bekannten Methoden zu isolieren. Gemäß einer bevorzugten Durchführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird die Peptidkondensationsreaktion bei einer Temperatur zwischen — 10 und 0° C durchgeführt, wobei als Lösungsmittel fur diese Reaktion Methylenchlorid verwendet wird. Beispiel Herstellung von (N-Trityl-L-glutaminyl)-L-asparaginyl-(S-trityl-L-cysteinylJ-L-prolyl-L-leucyl-giycinmethylester Man behandelt 2,9 g rohes Diäthylaminsalz des (N-Trityl-L-glutaminyl)-L-asparagins, gelöst in 20 ecm Methylenchlorid mit 5 ecm η-Salzsäure, dekantiert und trocknet die Lösung über Natriumsulfat. In der so erhaltenen Lösung löst man 5,75 g rohes Diäthylaminsalz des (N-Trityl-]>glutaminyl)-L-asparagins und 6,81 g (S-Trityl-L-cysteinyll-L-prolyl-L-leucyl-glycinmethylester-hydrochlorid. Nach Abkühlen auf — 10° C versetzt man mit 3,2 g Dicyclohexylcarbodiimid und läßt über Nacht bei — 10c C stehen. Dann saugt man den entstandenen Dicyclohexylharnstoff ab, dampft das Filtrat im Vakuum zur Trockne ein, nimmt den Rückstand in 20 ecm absolutem Alkohol auf, setzt 200 ecm Äther zu und wäscht 6mal mit je 30 ecm wäßrigem 15°/oigem Alkohol, wobei dieser bei dem Verfahren zur Herstellung von Peptiden Zusatz zur Zusatzpatentanmeldung U5171 IVb/ 12q (Auslegeschrift 1 065 424) Anmelder: UCLAF, Paris Vertreter: Dr. F. Zumstein, Dipl.-Chem. Dr. rer. nat. E. Assmann und Dipl.-Chem. Dr. R. Koenigsberger, Patentanwälte, München 2, Bräuhausstr. 4 Beanspruchte Priorität: Frankreich vom 7. August 1957 Dr. Gaston Amiard, Noisy-le-Sec, Seine, Rene Heymes, Romainville, und Dr. Leon Velluz, Paris, (Frankreich), sind als Erfinder genannt worden ersten Waschvorgang außerdem 5 ecm η-Salzsäure enthält. Man wäscht noch 2mal mit je 30 ecm 15°/oigem wäßrigem Alkohol mit einem Gehalt von 5 ecm n-Ammoniak. Die Äther-Alkohol-Lösung trocknet man über Natriumsulfat, engt sie auf sirupöse Konsistenz ein und löst erneut in 20 ecm Methylenchlorid. Dann wäscht man mit 50 cim Wasser, trocknet über Natriumsulfat, dampft zur Trockne ein, nimmt mit Äther auf und saugt ab. Das so erhaltene Rohprodukt wird in 8 ecm Methanol gelöst und mit 250 ecm Äther ausgefällt. Man erhält so 8,7 g (80%) (N-Trityl-L-glutaminyl)-L-asparaginyl-(S-trityl-L-cysteinylJ-L-prolyl-L-leucyl-glycinmethylester, der mit einer authentischen Probe dieses Produkts vollständig identisch ist. [a]sD° = -35° ±1° (c = 1 % in Chloroform). Analyse: C64H72O9N8S; Molekul^geieicht = 1 129,35 Berechnet ... C 68,06 %, H 02 ·/* N,9,92 °/0; gefunden ... C 68,2 °/0, H <5*6 / 98 1 ' Λ T K N T \ N S 1>I{ It C. Il E

1. Abänderung des Verfahrens der Zusatzpatentanmeldung U5171IVb/12q zur Herstellung von (N-Trityl-L-glutaminylJ-L-asparaginyHS-trityl-i.-cysteinv})-L-prolyl-L-leucyl-glycinmethylester, dadurch gekennzeichnet, daß man (N-Trityl-i.-glutaminyl)-L-aspafagin, gelöst in einem geeigneten Lösungsmittel,

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bei tiefer Temperatur mit (S-Trityl-L-cysteinyty-L-pro-

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennlyl-L-leucyl-glycinmethylester in Gegenwart von Di- zeichnet, daß man die Peptidkondensation bei einer cyclohexylcarbodiimid umsetzt, den gebildeten Di- Temperatur zwischen —10 und 0° C durchführt,
cyclohexylhamstoff durch Filtrieren entfernt und den

3. Verfahren nach Anspruch 1 und 2, dadurch gegesuchten N,S-Ditritylhexapeptidester nach an sich 5 kennzeichnet, daß man als Lösungsmittel für die bekannten Methoden isoliert. Reaktion Methylenchlorid verwendet.

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