Claims (3)
Ο/ΡZLd £§"/-.rtMr— /t^ιKφJ^J*; >*--/^Θ-fsSYS"' 3&3t>CL —&S\PS—....— BUNDESREPUBLIK DEUTSCHLAND DEUTSCHES INTERN AT. KL. C 0<C PATENTAMT AUSLEGESCHRIFT 1068 722 U5491IVb/12q ,/ANMEtDETAG: 25.JULI1958 BEKANNTMACHUNG DER ANMELDUNG UND AUSGABE DER ADSLEGESCHRIFT: 12. NOVEMBER 1959 In der Zusatzpatentanmeldung Γ 5171 IVb,'12q ist unter anderem ein Verfahren zur Herstellung von (N-Tri- I yl · L - glutamin}!) -L- asparaginyl - (S - trityl - L - cystein}!) L-prolyl-i.-leucyl-glycinmethylester durch Kondensation von L-Asparaginyl-iS-trityl-L-cysteiny^-L-prolyl-L-leucyl-glycinmethylester mit N-Trityl-L-glutamin in Gegenwart von Dicyclohexylcarbodiimid beschrieben. Aus der Zusatzpatentanmeldung U 5172 IVb/12q ist es bekannt, daß das so erhaltene Hexapeptid das Ausgangsmaterial der Wahl für die Synthese des Oxytocins von Du Vig- II eaud darstellt. Es wurde nun gefunden, daß (N-Trityl-L-glutaminyl)-L-asparaginyl-(S-trityl-L-cysteinyl)-L-prolyl-L-leucyl-glycinmethylester sehr vorteilhaft auch dadurch hergestellt werden kann, daß man das gemäß der Hauptpatentanmeldung erhaltene (N-Trity]-L-glutaminyl)-L-asparagin mit (S-Trityl-L-cysteinylJ-L-prolyl-L-leucyl-glycinmethylester kondensiert, den man gemäß Patent 1 038 053 herstellt. Die Ausbeuten der Kondensation sind ausgezeichnet, und die Ausgangssubstanzen sind besonders leicht zugänglich. Das Verfahren vorliegender Erfindung besteht demnach im wesentlichen darin, (N-Trityl-L-glutaminyl)-L-asparagin, gelost in einem geeigneten Lösungsmittel, bei tiefer Temperatur mit (S-Trityl-L-cysteinyl)-L-prolyl-L-leucyl-glycinmethylester in Gegenwart von Dicyclohexylcarbodiimid umzusetzen, den gebildeten Dicyclohetylharnstoff durch Filtrieren zu entfernen und den gesuchten N,S-Ditritylhexapeptidester nach an -.ich bekannten Methoden zu isolieren. Gemäß einer bevorzugten Durchführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird die Peptidkondensationsreaktion bei einer Temperatur zwischen — 10 und 0° C durchgeführt, wobei als Lösungsmittel fur diese Reaktion Methylenchlorid verwendet wird. Beispiel Herstellung von (N-Trityl-L-glutaminyl)-L-asparaginyl-(S-trityl-L-cysteinylJ-L-prolyl-L-leucyl-giycinmethylester Man behandelt 2,9 g rohes Diäthylaminsalz des (N-Trityl-L-glutaminyl)-L-asparagins, gelöst in 20 ecm Methylenchlorid mit 5 ecm η-Salzsäure, dekantiert und trocknet die Lösung über Natriumsulfat. In der so erhaltenen Lösung löst man 5,75 g rohes Diäthylaminsalz des (N-Trityl-]>glutaminyl)-L-asparagins und 6,81 g (S-Trityl-L-cysteinyll-L-prolyl-L-leucyl-glycinmethylester-hydrochlorid. Nach Abkühlen auf — 10° C versetzt man mit 3,2 g Dicyclohexylcarbodiimid und läßt über Nacht bei — 10c C stehen. Dann saugt man den entstandenen Dicyclohexylharnstoff ab, dampft das Filtrat im Vakuum zur Trockne ein, nimmt den Rückstand in 20 ecm absolutem Alkohol auf, setzt 200 ecm Äther zu und wäscht 6mal mit je 30 ecm wäßrigem 15°/oigem Alkohol, wobei dieser bei dem Verfahren zur Herstellung von Peptiden Zusatz zur Zusatzpatentanmeldung U5171 IVb/ 12q (Auslegeschrift 1 065 424) Anmelder: UCLAF, Paris Vertreter: Dr. F. Zumstein, Dipl.-Chem. Dr. rer. nat. E. Assmann und Dipl.-Chem. Dr. R. Koenigsberger, Patentanwälte, München 2, Bräuhausstr. 4 Beanspruchte Priorität: Frankreich vom 7. August 1957 Dr. Gaston Amiard, Noisy-le-Sec, Seine, Rene Heymes, Romainville, und Dr. Leon Velluz, Paris, (Frankreich), sind als Erfinder genannt worden ersten Waschvorgang außerdem 5 ecm η-Salzsäure enthält. Man wäscht noch 2mal mit je 30 ecm 15°/oigem wäßrigem Alkohol mit einem Gehalt von 5 ecm n-Ammoniak. Die Äther-Alkohol-Lösung trocknet man über Natriumsulfat, engt sie auf sirupöse Konsistenz ein und löst erneut in 20 ecm Methylenchlorid. Dann wäscht man mit 50 cim Wasser, trocknet über Natriumsulfat, dampft zur Trockne ein, nimmt mit Äther auf und saugt ab. Das so erhaltene Rohprodukt wird in 8 ecm Methanol gelöst und mit 250 ecm Äther ausgefällt. Man erhält so 8,7 g (80%) (N-Trityl-L-glutaminyl)-L-asparaginyl-(S-trityl-L-cysteinylJ-L-prolyl-L-leucyl-glycinmethylester, der mit einer authentischen Probe dieses Produkts vollständig identisch ist. [a]sD° = -35° ±1° (c = 1 % in Chloroform). Analyse: C64H72O9N8S; Molekul^geieicht = 1 129,35 Berechnet ... C 68,06 %, H 02 ·/* N,9,92 °/0; gefunden ... C 68,2 °/0, H <5*6 / 98 1 ' Λ T K N T \ N S 1>I{ It C. Il EΟ / ΡZLd £ § "/ -. RtMr— / t ^ ιKφJ ^ J *;> * - / ^ Θ-fsSYS" '3 & 3t> CL - & S \ PS —....— FEDERAL REPUBLIC OF GERMANY GERMAN INTERN AT. KL. C 0 <C PATENT OFFICE AUSLEGESCHRIFT 1068 722 U5491IVb / 12q, / ANMEtDETAG: 25 JULY 1958 NOTIFICATION OF THE APPLICATION AND ISSUE OF THE ADSLEGSCHRIFT: 12 NOVEMBER 1959 In the additional patent application Γ 5171 IVb, '12q for the production of (N- Tri- I yl · L - glutamine}!) -L- asparaginyl - (S - trityl - L - cysteine}!) L-prolyl-i.-leucyl-glycine methyl ester by condensation of L-asparaginyl-iS-trityl-L- cysteiny ^ -L-prolyl-L-leucyl-glycine methyl ester with N-trityl-L-glutamine in the presence of dicyclohexylcarbodiimide described. From the additional patent application U 5172 IVb / 12q it is known that the hexapeptide obtained in this way is the starting material of choice for the synthesis of the oxytocin from Du Vig- II eaud. It has now been found that (N-trityl-L-glutaminyl) -L-asparaginyl- (S-trityl-L-cysteinyl) -L-prolyl-L-leucyl-glycine methyl ester can also be produced very advantageously by the fact that (N-Trity] -L-glutaminyl) -L-asparagine obtained according to the main patent application is condensed with (S-trityl-L-cysteinylJ-L-prolyl-L-leucyl-glycine methyl ester, which is produced according to patent 1,038,053. The yields condensation are excellent, and the starting substances are particularly easily accessible. The process of the present invention therefore essentially consists in (N-trityl-L-glutaminyl) -L-asparagine, dissolved in a suitable solvent, at low temperature with (S- Trityl-L-cysteinyl) -L-prolyl-L-leucyl-glycine methyl ester in the presence of dicyclohexylcarbodiimide, removing the dicyclohetylurea formed by filtration and isolating the sought-after N, S-ditritylhexapeptide ester by methods known per se Implementation of the erf In the process according to the invention, the peptide condensation reaction is carried out at a temperature between -10 and 0 ° C., methylene chloride being used as the solvent for this reaction. Example Preparation of (N-trityl-L-glutaminyl) -L-asparaginyl- (S-trityl-L-cysteinylJ-L-prolyl-L-leucyl-giycin methyl ester. 2.9 g of the crude diethylamine salt of (N-trityl-L -glutaminyl) -L-asparagins, dissolved in 20 ecm methylene chloride with 5 ecm η-hydrochloric acid, decanted and the solution dried over sodium sulfate ) -L-asparagins and 6.81 g (S-trityl-L-cysteinyl-L-prolyl-L-leucyl-glycine methyl ester hydrochloride. After cooling to -10 ° C., 3.2 g of dicyclohexylcarbodiimide are added and the mixture is left overnight stand at -10 ° C. The resulting dicyclohexylurea is then filtered off with suction, the filtrate is evaporated to dryness in vacuo, the residue is taken up in 20 ecm of absolute alcohol, 200 ecm of ether is added and it is washed 6 times with 30 ecm of aqueous 15% Alcohol, which in the process for the production of peptides addendum to the additional patent application U5171 IVb / 12q (Auslegeschrift 1 065 424) Registr he: UCLAF, Paris Representative: Dr. F. Zumstein, Dipl.-Chem. Dr. rer. nat. E. Assmann and Dipl.-Chem. Dr. R. Koenigsberger, Patent Attorneys, Munich 2, Bräuhausstr. 4 Claimed priority: France, August 7, 1957 Dr. Gaston Amiard, Noisy-le-Sec, Seine, Rene Heymes, Romainville, and Dr. Leon Velluz, Paris, (France), have been named as the inventor. The first washing process also contains 5 ecm η-hydrochloric acid. It is washed twice more with 30 ecm 15% aqueous alcohol each time with a content of 5 ecm n-ammonia. The ether-alcohol solution is dried over sodium sulfate, concentrated to a syrupy consistency and redissolved in 20 ecm of methylene chloride. Then it is washed with 50 ml of water, dried over sodium sulfate, evaporated to dryness, taken up with ether and filtered off with suction. The crude product obtained in this way is dissolved in 8 ecm of methanol and precipitated with 250 ecm of ether. This gives 8.7 g (80%) (N-trityl-L-glutaminyl) -L-asparaginyl- (S-trityl-L-cysteinylJ-L-prolyl-L-leucyl-glycine methyl ester, which with an authentic sample of this Product is completely identical. [A] sD ° = -35 ° ± 1 ° (c = 1% in chloroform). Analysis: C64H72O9N8S; Molecular equilibrium = 1 129.35 Calculated ... C 68.06%, H 02 · / * N, 9.92 ° / 0; found ... C 68.2 ° / 0, H <5 * 6/98 1 'Λ TKNT \ NS 1> I {It C. Il E
1. Abänderung des Verfahrens der Zusatzpatentanmeldung U5171IVb/12q zur Herstellung von
(N-Trityl-L-glutaminylJ-L-asparaginyHS-trityl-i.-cysteinv})-L-prolyl-L-leucyl-glycinmethylester,
dadurch gekennzeichnet, daß man (N-Trityl-i.-glutaminyl)-L-aspafagin,
gelöst in einem geeigneten Lösungsmittel,1. Modification of the process of the additional patent application U5171IVb / 12q for the production of
(N-Trityl-L-glutaminylJ-L-asparaginyHS-trityl-i.-cysteinv}) - L-prolyl-L-leucyl-glycine methyl ester,
characterized in that (N-trityl-i.-glutaminyl) -L-aspafagin,
dissolved in a suitable solvent,
909 648/403909 648/403
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bei tiefer Temperatur mit (S-Trityl-L-cysteinyty-L-pro- at low temperature with (S-trityl-L-cysteinyty-L-pro-
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennlyl-L-leucyl-glycinmethylester
in Gegenwart von Di- zeichnet, daß man die Peptidkondensation bei einer cyclohexylcarbodiimid umsetzt, den gebildeten Di- Temperatur zwischen —10 und 0° C durchführt,
cyclohexylhamstoff durch Filtrieren entfernt und den 2. The method according to claim 1, characterized in that gekennlyl-L-leucyl-glycine methyl ester in the presence of di- that the peptide condensation is reacted with a cyclohexylcarbodiimide, the temperature formed is between -10 and 0 ° C,
cyclohexylurea removed by filtration and the
3. Verfahren nach Anspruch 1 und 2, dadurch gegesuchten
N,S-Ditritylhexapeptidester nach an sich 5 kennzeichnet, daß man als Lösungsmittel für die
bekannten Methoden isoliert. Reaktion Methylenchlorid verwendet.3. The method according to claim 1 and 2, searched thereby
N, S-Ditritylhexapeptidester after per se 5 indicates that one is used as a solvent for the
known methods isolated. Reaction methylene chloride used.
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