CN103936816B - 一种模拟移动床色谱从丹参粗提物中提纯丹参酮iia的方法 - Google Patents
一种模拟移动床色谱从丹参粗提物中提纯丹参酮iia的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103936816B CN103936816B CN201410148599.3A CN201410148599A CN103936816B CN 103936816 B CN103936816 B CN 103936816B CN 201410148599 A CN201410148599 A CN 201410148599A CN 103936816 B CN103936816 B CN 103936816B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tanshinone iia
- smbc
- band
- ethanol
- tanshinone
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- HYXITZLLTYIPOF-UHFFFAOYSA-N 1,6,6-trimethyl-8,9-dihydro-7H-naphtho[1,2-g]benzofuran-10,11-dione Chemical compound O=C1C(=O)C2=C3CCCC(C)(C)C3=CC=C2C2=C1C(C)=CO2 HYXITZLLTYIPOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 84
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 36
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 title claims abstract description 6
- 240000007164 Salvia officinalis Species 0.000 title abstract description 4
- 235000005412 red sage Nutrition 0.000 title abstract 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 66
- GMWTXQKKRDUVQG-WOPPDYDQSA-N 4-amino-5-bromo-1-[(2r,3s,4s,5r)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)-3-methyloxolan-2-yl]pyrimidin-2-one Chemical compound C[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)N=C(N)C(Br)=C1 GMWTXQKKRDUVQG-WOPPDYDQSA-N 0.000 claims abstract description 45
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 34
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 24
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 18
- 238000007670 refining Methods 0.000 claims abstract description 17
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims abstract description 17
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 claims abstract description 10
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims abstract description 8
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims abstract description 4
- AIGAZQPHXLWMOJ-UHFFFAOYSA-N tanshinone IIA Natural products C1=CC2=C(C)C=CC=C2C(C(=O)C2=O)=C1C1=C2C(C)=CO1 AIGAZQPHXLWMOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 84
- AZEZEAABTDXEHR-UHFFFAOYSA-M sodium;1,6,6-trimethyl-10,11-dioxo-8,9-dihydro-7h-naphtho[1,2-g][1]benzofuran-2-sulfonate Chemical compound [Na+].C12=CC=C(C(CCC3)(C)C)C3=C2C(=O)C(=O)C2=C1OC(S([O-])(=O)=O)=C2C AZEZEAABTDXEHR-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 73
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 30
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 26
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 26
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims description 21
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 19
- 241000304195 Salvia miltiorrhiza Species 0.000 claims description 15
- 235000011135 Salvia miltiorrhiza Nutrition 0.000 claims description 15
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 15
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 13
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 11
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 11
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 6
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 6
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 5
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 5
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 2
- 238000007654 immersion Methods 0.000 claims description 2
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 claims 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 abstract description 14
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract description 6
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 abstract description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 abstract description 2
- 238000000151 deposition Methods 0.000 abstract 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 abstract 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- WTPPRJKFRFIQKT-UHFFFAOYSA-N 1,6-dimethyl-8,9-dihydronaphtho[1,2-g][1]benzofuran-10,11-dione;1-methyl-6-methylidene-8,9-dihydro-7h-naphtho[1,2-g][1]benzofuran-10,11-dione Chemical compound O=C1C(=O)C2=C3CCCC(=C)C3=CC=C2C2=C1C(C)=CO2.O=C1C(=O)C2=C3CCC=C(C)C3=CC=C2C2=C1C(C)=CO2 WTPPRJKFRFIQKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 7
- 244000132619 red sage Species 0.000 description 7
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000010262 high-speed countercurrent chromatography Methods 0.000 description 5
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- GVKKJJOMQCNPGB-UHFFFAOYSA-N Cryptotanshinone Natural products O=C1C(=O)C2=C3CCCC(C)(C)C3=CC=C2C2=C1C(C)CO2 GVKKJJOMQCNPGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GVKKJJOMQCNPGB-JTQLQIEISA-N Cryptotanshinone Chemical compound O=C1C(=O)C2=C3CCCC(C)(C)C3=CC=C2C2=C1[C@@H](C)CO2 GVKKJJOMQCNPGB-JTQLQIEISA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930183118 Tanshinone Natural products 0.000 description 3
- 238000004185 countercurrent chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- ONUSCCKLNWURMA-UHFFFAOYSA-N 3,8-dimethylnaphtho[2,1-g][1]benzofuran-4,5-dione Chemical compound O=C1C(=O)C2=CC=C3C(C)=CC=CC3=C2C2=C1C(C)=CO2 ONUSCCKLNWURMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KXNYCALHDXGJSF-UHFFFAOYSA-N 4,8-dimethyl-8,9-dihydronaphtho[2,1-f][1]benzofuran-7,11-dione Chemical compound CC1=CC=CC2=C(C(C=3OCC(C=3C3=O)C)=O)C3=CC=C21 KXNYCALHDXGJSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UPCWCCRFMPIOAP-UHFFFAOYSA-N Hydroxytanshinone Chemical compound C1=CC(C(CCC2O)(C)C)=C2C(C(=O)C2=O)=C1C1=C2C(C)=CO1 UPCWCCRFMPIOAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012846 chemical reference substance Substances 0.000 description 2
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- -1 hydroxymethyl ester Chemical class 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical group CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- XDUXBBDRILEIEZ-LJQANCHMSA-N (6s)-6-(hydroxymethyl)-1,6-dimethyl-8,9-dihydro-7h-naphtho[1,2-g][1]benzofuran-10,11-dione Chemical compound O=C1C(=O)C2=C3CCC[C@](C)(CO)C3=CC=C2C2=C1C(C)=CO2 XDUXBBDRILEIEZ-LJQANCHMSA-N 0.000 description 1
- HARGZZNYNSYSGJ-UHFFFAOYSA-N 1,2 dihydrotanshinquinone Natural products C1=CC2=C(C)C=CC=C2C(C(=O)C2=O)=C1C1=C2C(C)CO1 HARGZZNYNSYSGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HARGZZNYNSYSGJ-JTQLQIEISA-N Dihydrotanshinone I Chemical compound C1=CC2=C(C)C=CC=C2C(C(=O)C2=O)=C1C1=C2[C@@H](C)CO1 HARGZZNYNSYSGJ-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- BGNQYGRXEXDAIQ-UHFFFAOYSA-N Pyrazosulfuron-ethyl Chemical compound C1=NN(C)C(S(=O)(=O)NC(=O)NC=2N=C(OC)C=C(OC)N=2)=C1C(=O)OCC BGNQYGRXEXDAIQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000017276 Salvia Nutrition 0.000 description 1
- XDUXBBDRILEIEZ-UHFFFAOYSA-N Tanshinone IIB Natural products O=C1C(=O)C2=C3CCCC(C)(CO)C3=CC=C2C2=C1C(C)=CO2 XDUXBBDRILEIEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003178 anti-diabetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003064 anti-oxidating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003472 antidiabetic agent Substances 0.000 description 1
- 238000010923 batch production Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 230000001914 calming effect Effects 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- LQRVVHITSCAECY-UHFFFAOYSA-N dichloromethane hexane methanol hydrate Chemical compound O.OC.ClCCl.CCCCCC LQRVVHITSCAECY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004141 diterpene derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002481 ethanol extraction Methods 0.000 description 1
- STVYPZZQOXPZBX-UHFFFAOYSA-N ethanol;hexane;hydrate Chemical compound O.CCO.CCCCCC STVYPZZQOXPZBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000020764 fibrinolysis Effects 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 229930195208 isotanshinone Natural products 0.000 description 1
- QHGPIJMPUOVBOL-UHFFFAOYSA-N isotanshinone IIA Natural products O=C1C2=CC=C(C(CCC3)(C)C)C3=C2C(=O)C2=C1C(C)=CO2 QHGPIJMPUOVBOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000005906 menstruation Effects 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004237 preparative chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004262 preparative liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000011027 product recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 description 1
- 238000003815 supercritical carbon dioxide extraction Methods 0.000 description 1
- 230000002537 thrombolytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明公开了一种模拟移动床色谱从丹参粗提物中提纯丹参酮IIA的方法。该方法设置SMBC的基本区带为洗脱带、精制带和吸附带，洗脱带独立，以十八烷基硅烷键合硅胶ODS为固定相，乙醇与水的混合溶液为流动相，进行SMBC分离，从萃余液出口除去各种前杂质；从萃取液出口得到丹参酮IIA萃取液，经浓缩、水沉醇溶处理后得到纯度为98.5%丹参酮IIA产品。本发明能够用SMBC规模化、稳健和连续高效地从丹参的乙醇提取液中提纯丹参酮IIA，萃取液中丹参酮IIA最高回收率达到99.2%，HPLC纯度达到95%，固定相和流动相能反复利用，降低成本，属于绿色环保分离过程。
Description
技术领域
本发明涉及天然植物有效组分的提纯方法，尤其是一种三带模拟移动床色谱提纯丹参酮IIA的的方法。
背景技术
丹参酮IIA是丹参的有效成分之一，具有非常广阔的临床应用前景，除了传统的活血调经、祛瘀止痛、养心安神之功效外，近年药理研究表明丹参酮IIA还具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抑菌、保肝及降低血液粘度、抑制凝血、促进纤溶、抑制血小板聚集、延长血栓形成及促进血栓溶解，调节机体免疫功能，改善抗糖尿病微血管并发症等药理活性（时珍国医国药.2010，21：7，1770-1772）。
丹参酮IIA是丹参的脂溶性成分。除丹参酮IIA之外，丹参的脂溶性成分中还有其它的丹参酮型的二萜类化合物，如：丹参酮I、丹参酮IIB、隐丹参酮、羟基丹参酮、丹参羟甲酯、二氢丹参酮I，以及异丹参酮I、异丹参酮II、异隐丹参酮、二氢异丹参酮I等。
目前，获得高纯度（高于90%）丹参酮IIA单体的主要技术有：超临界二氧化碳萃取法，高速逆流色谱法，制备液相色谱法。
中国专利公开（公告）号：CN1369485，给出了“一种超临界二氧化碳萃取精制丹参酮IIA的方法”，采用超临界CO2从丹参中萃取丹参酮IIA，一次性进行萃取和分离精制，具有无毒、快速、价廉、低温操作、符合环保要求等优点，但提取高纯度（高于90%）丹参酮IIA单体时，收率低。
高速逆流色谱法不需使用固体填料，应用两相互不混溶的溶剂系统在支撑管内高速行星运动来分离天然产物，中国专利公开（公告）号：CN1337397，“应用高速逆流色谱分离纯化丹参酮的方法”中溶剂体系为正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水，经二次HSCCC色谱仪分离后获得丹参酮IIA，每次分离时间需要5～6小时，分离时间长；中国专利公开（公告）号：CN1394870，“一种分离纯化丹参酮的方法”的溶剂体系为石油醚、乙酸乙酯、甲醇、水，采用HSCCC色谱仪，一次分离可得隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA，但获得丹参酮IIA的时间8～9小时，仍很长；Min Zhang等，在“Development of a strategy and process parameters for agreen process in counter-current chromatography:Purification of tanshinone IIA andcryptotanshinone from Salvia miltiorrhiza Bunge as a case study”（Journal ofChromatography A,2011,1218:6031–6037）一文中用正己烷-二氯甲烷-甲醇-水，及正己烷-乙醇-水的二次逆流色谱法（CCC）提取丹参酮IIA，分离时间缩短，产品纯度高，但收率很低。虽然高速逆流色谱法无不可逆吸附，但或者分离时间长，或者回收率低，效率尚需进一步提高。
在制备液相色谱法中，中国专利公开（公告）号：CN101210041，给出“一种丹参酮ⅡA化学对照品的分离制备方法”，以重量含量50～97%丹参酮IIA提取物为原料，以甲醇-水溶液为洗脱液，以C8或C18键合填料为固定相提纯丹参酮ⅡA化学对照品；中国专利公开（公告）号：CN1670019，提出的“一种丹参酮的提取方法”将丹参的醇提取液加至大孔吸附树脂柱上，分别采用一定浓度的醇梯度洗脱，得到提取物中丹参酮IIA；中国专利公开（公告）号：CN101200490，“高纯度丹参酮ⅡA的制备方法”主要将丹参总酮原料采用正相层析（以硅胶或氧化铝为固定相，石油醚/二氯甲烷为流动相），通过多功能层析系统进行分离，洗脱液浓缩，重结晶，得高纯度丹参酮IIA。这些柱色谱法都为批处理工艺，洗脱剂耗量大，不能连续自动生产。
模拟移动床色谱在制备色谱的基础上，引进了连续、逆流、精馏的运行机制，使色谱分离由间歇工作变为连续运行，能够进行自动化、规模化、高效分离，是提纯化合物的有效手段。目前尚未发现模拟移动床色谱技术分离提纯丹参酮IIA的报道。
发明内容
本发明提供了一种三带模拟移动床色谱提纯丹参酮IIA的方法，可以连续、自动、高效地提纯丹参酮IIA。
本发明提供的一种三带模拟移动床色谱提纯丹参酮IIA的方法，利用模拟移动床色谱简称SMBC从丹参粗提物中提纯丹参酮IIA，该方法的内容如下：
（1）SMBC设备
包括3～10根色谱柱、洗脱带流动相输送泵、精制带流动相输送泵、进料液输送泵、阀、多通、连接管线和储液罐；
色谱柱的固定相使用十八烷基硅烷键合硅胶ODS，10～60μm；
（2）SMBC工作条件
运行模式：设置三带SMBC，三带包括洗脱带，精制带和吸附带，a为洗脱带色谱柱数目，1≤a≤2；b为精制带色谱柱数目，1≤b≤4；c为吸附带色谱柱数目，2≤c≤4，运行模式用a-b-c表示；
流动相组成：洗脱带的流动相P为乙醇与水的混合溶液，乙醇的百分含量CP为50～100％；精制带和吸附带的流动相D为乙醇与水的混合溶液，乙醇的百分含量CD为50～80％；进样液：丹参原料药粉碎后用5～20倍质量的乙醇浸渍后得到滤液，即丹参粗提物的溶液，滤液或者直接作为进样液，或者与含乙醇0～50%的水溶液混合为进样液，所需含乙醇0～50%的水溶液体积小于2倍滤液体积；
流动相流速：在精制带和吸附带中，洗脱液D流速QD为每小时4～30倍柱体积，即4～30BV/h，当洗脱液D流速QD单位为mL/min，色谱柱半径r单位为cm，色谱柱柱长L单位为cm时，则1个BV/h相当于60QD/(πr2L)；进样液F流速QF为0.1QD～1.5QD，萃余液R流速QR=QD+QF；在洗脱带中，洗脱液P流速Qp为0.5QD～2QD，萃取液E流速QE＝Qp；
切换时间TS：9～40min；
模拟移动床操作温度：室温；
进样模式：连续进样，或者分段进样；
（3）SMBC提纯步骤
使用如（1）所述SMBC设备在如（2）所述的SMBC工作条件下，进行SMBC分离，从萃余液R出口，除去各种前杂质；从萃取液E出口，得到丹参酮IIA萃取液；
（4）萃取液后处理
将含丹参酮IIA萃取液浓缩，经水沉醇溶处理，即将浓缩液加水，得到沉淀，再加乙醇溶解沉淀，结晶，得到丹参酮IIA产品。
（5）检测方法
高效液相色谱仪：日立L-2000；分析色谱柱：Agilent Extend-C18，5μm，150mm×4.6mm I.D.；流动相：V（甲醇）:V（水）=85:15；检测波长：270nm流速：1.0mL/min；柱温：30℃。由丹参酮IIA标准品来标定待测液丹参酮IIA的含量。
所述的SMBC提纯丹参酮IIA的方法，在每个切换周期0～TS内，连续进样。
所述的SMBC提纯丹参酮IIA的方法，在每个切换周期0～TS内，分段进样，0＜t＜Ts，在0～t(min)内进样，0.25min＜Ts-t＜2min。
所述的SMBC提纯丹参酮IIA的方法，在每个切换周期0～TS内，分段进样，0＜t＜Ts，在t～TS(min)内进样，0.5min＜t＜5min。
所述的SMBC提纯丹参酮IIA的方法，在每个切换周期0～TS内，分段进样，0＜t1＜t2＜Ts，在t1～t2(min)内进样，0.5min＜t1＜5min，0.25min＜Ts-t2＜2min。
所述的SMBC提纯丹参酮IIA的方法，在萃取液后处理过程中，将含丹参酮IIA萃取液浓缩后加水，得到沉淀物，用水清洗沉淀物后，加乙醇溶解沉淀物，重结晶，得到纯度≥98%的丹参酮IIA产品。
所述的SMBC提纯丹参酮IIA的方法，在SMBC工作条件中，采用甲醇与水的混合溶液作为流动相；在SMBC工作条件中，丹参原料药粉碎后用甲醇浸渍后得到滤液；在萃取液后处理过程中，采用甲醇溶解并结晶沉淀物。。
本发明与现有制备色谱分离技术相比，其显著的有益效果体现在：
三带模拟移动床色谱提纯丹参酮IIA的方法，能够规模化、稳健、连续和自动高效地从丹参中提纯丹参酮IIA，产品回收率达到99.2%，HPLC纯度达到95%，固定相和流动相能反复利用，降低了提纯成本，属于绿色环保分离工程。
附图说明
图1是丹参原料药A的进样液的HPLC谱图(4—丹参酮IIA色谱峰)。
图2是丹参原料药B的进样液的HPLC谱图(4—丹参酮IIA色谱峰)。
图3是三带模拟移动床色谱体系。
图4是SMBC萃余液的HPLC谱图。
图5是SMBC萃取液的HPLC谱图。
图6是SMBC萃取液经浓缩、水沉醇溶、重结晶处理后得到的丹参酮IIA的HPLC谱图。
具体实施方式
下面结合附图用实施例详细描述本发明。
实施例1
一种三带模拟移动床色谱提纯丹参酮IIA的方法，利用SMBC从丹参的乙醇提取物中提纯丹参酮IIA，该方法的内容如下：
（1）SMBC设备
SMBC设备由6根色谱柱、流动相D输送泵、原料液F泵、流动相P输送泵、36个自控阀、一套单片机自动控制系统、5个储液罐和多通及连接管线组成，其中原料液F泵流量和流动相P输送泵的流量均为0～10mL/min，压力均为0～30Mpa，流动相D、原料液F、流动相P、萃取液E和萃余液R各用一个储液罐；
色谱柱规格：直径1cm，长10cm；
固定相使用十八烷基硅烷键合硅胶ODS，20～30μm。
（2）SMBC工作条件
运行模式为2-2-2，即洗脱带：2根色谱柱；精制带：2根色谱柱；吸附带：2根色谱柱；
流动相组成：洗脱带的流动相P为95％乙醇；精制带和吸附带的流动相D为乙醇与水的混合溶液，乙醇的百分含量CD为75％；进样液：30g丹参原料药A用120mL乙醇提取后的滤液，其中丹参酮IIA浓度为0.42mg/mL，滤液按流动相D的配比稀释后作为进样液，进样液的HPLC谱图见图1；
流动相流速：在洗脱带中，洗脱液P流速Qp为1.5mL/min，萃取液E流速QE＝Qp；在精制带和吸附带中，洗脱液D流速QD为1.5mL/min，进样液F流速QF为0.2mL/min，萃余液R流速QR=QD+QF；
切换时间：12.1min；
模拟移动床操作温度：室温；
进样模式：连续进样，如图3所示。
（3）SMBC提纯步骤
使用如（1）所述SMBC设备在如（2）所述的SMBC工作条件下，进行SMBC提纯。从萃余液出口，即R口，除去各种前杂质，萃余液HPLC谱图如图4所示；从萃取液出口，即E口，得到丹参酮IIA萃取液，其HPLC谱图如图5所示，丹参酮IIA的色谱纯度为94.5%，收率98.8%。
（4）萃取液后处理
将含丹参酮IIA萃余液浓缩后加水，得到沉淀，用水洗涤沉淀后，用乙醇溶解沉淀，重结晶2次，得到纯度为98.7%的丹参酮IIA产品，其HPLC谱图如图6所示。
（5）检测方法
高效液相色谱仪：日立L-2000；分析色谱柱：Agilent Extend-C18，5μm，150mm×4.6mm I.D.；流动相：V（甲醇）：V（水）=85：15；检测波长：270nm流速：1.0mL/min；柱温：30℃。由丹参酮IIA标准品来标定待测液丹参酮IIA的含量。
实施例2
除下述条件外，其它条件均同实施例1；
运行模式：1-3-2；
切换时间Ts：11min；
SMBC提纯结果：萃取液丹参酮IIA的色谱纯度为93%，收率为92%。
实施例3
除下述条件外，其它条件均同实施例1；
5根色谱柱，30个自控阀；
色谱柱规格：直径2cm，长20cm；
运行模式：1-2-2；
固定相：十八烷基硅烷键合硅胶ODS，30～40μm；
流动相流速：洗脱液D流速QD为6mL/min，进样液F流速QF为0.8mL/min，洗脱液P流速Qp为6mL/min；
切换时间Ts：19min；
SMBC提纯结果：萃取液丹参酮IIA的色谱纯度为96%，收率为92.7%。
实施例4
除下述条件外，其它条件均同实施例1；
5根色谱柱，30个自控阀；
色谱柱规格：直径2cm，长20cm；
运行模式：1-2-2；
固定相：十八烷基硅烷键合硅胶ODS，30～40μm；
流动相组成：精制带和吸附带的流动相D中乙醇的百分含量CD为77％；
流动相流速：洗脱液D流速QD为6mL/min，进样液F流速QF为0.8mL/min，洗脱液P流速Qp为6mL/min；
切换时间Ts：16.5min；
SMBC分离结果：萃取液丹参酮IIA的色谱纯度为92.5%，收率为100.0%。
实施例5
除下述条件外，其它条件均同实施例1；
进样液：24g丹参原料药B用120mL乙醇提取后的滤液，直接作为进样液，进样液的HPLC谱图见图2，其中丹参酮IIA浓度为0.21mg/mL；
进样液F流速QF：0.1mL/min
切换时间Ts：10.5min；
进样模式：分段进样，1.5min至10min期间进样；
SMBC分离结果：萃取液丹参酮IIA的色谱纯度为90.6%，收率为94.6%。
实施例6
除下述条件外，其它条件均同实施例1；
进样液：36g丹参原料药B用120mL乙醇提取后的滤液，直接作为进样液，其中丹参酮IIA浓度为0.30mg/mL；
进样液F流速QF为0.1mL/min；
切换时间Ts：10min；
进样模式：分段进样，1min至9.5min期间进样；
SMBC提纯结果：萃取液丹参酮IIA的色谱纯度为90.4%，收率为98.2%。
实施例7
除下述条件外，其它条件均同实施例1；
4根色谱柱，24个自控阀；
运行模式：1-1-2；
流动相组成：精制带和吸附带的流动相D为乙醇与水的混合溶液，乙醇的百分含量CD为60％；进样液：24g丹参原料药A用120mL乙醇提取后的滤液，其中丹参酮IIA浓度为0.33mg/mL，将滤液加水配置进样液，加水体积为1倍滤液体积；
流动相流速：洗脱液D流速QD为3mL/min，进样液F流速QF为3mL/min，洗脱液P流速Qp为3mL/min；
切换时间Ts：17min；
进样模式：分段进样，0～16.5min期间进样；
SMBC分离结果：萃取液丹参酮IIA的色谱纯度为93.9%，收率为95.1%。
实施例8
除下述条件外，其它条件均同实施例1；
色谱柱规格：直径1cm，长20cm；
进样液：24g丹参原料药B用120mL乙醇提取后的滤液，其中丹参酮IIA浓度为0.21mg/mL，直接作为进样液；
流动相组成：精制带和吸附带的流动相D中乙醇的百分含量CD为70％；
流动相流速：洗脱液D流速QD为3mL/min，进样液F流速QF为0.3mL/min，洗脱液P流速Qp为3mL/min；
切换时间Ts：13.7min；
进样模式：分段进样，4min至13.2min期间进样；
SMBC分离结果：萃取液丹参酮IIA的色谱纯度为95.0%，收率为99.2%。
Claims (6)
1.一种三带模拟移动床色谱提纯丹参酮IIA的方法，其特征是利用模拟移动床色谱简称SMBC从丹参粗提物中提纯丹参酮IIA，该方法的内容如下：
(1)SMBC设备
包括3～10根色谱柱、洗脱带流动相输送泵、精制带流动相输送泵、进料液输送泵、阀、多通、连接管线和储液罐；
色谱柱的固定相使用十八烷基硅烷键合硅胶ODS，10～60μm；
(2)SMBC工作条件
运行模式：设置三带SMBC，三带包括洗脱带，精制带和吸附带，a为洗脱带色谱柱数目，1≤a≤2；b为精制带色谱柱数目，1≤b≤4；c为吸附带色谱柱数目，2≤c≤4，运行模式用a-b-c表示；
流动相组成：洗脱带的流动相P为乙醇与水的混合溶液，乙醇的百分含量CP为50～100％；精制带和吸附带的流动相D为乙醇与水的混合溶液，乙醇的百分含量CD为50～80％；进样液：丹参原料药粉碎后用5～20倍质量的乙醇浸渍后得到滤液，即丹参粗提物的溶液，滤液或者直接作为进样液，或者与含乙醇0～50％的水溶液混合为进样液，所需含乙醇0～50％的水溶液体积小于2倍滤液体积；
流动相流速：在精制带和吸附带中，洗脱液D流速QD为每小时4～30倍柱体积，即4～30BV/h，当洗脱液D流速QD单位为mL/min，色谱柱半径r单位为cm，色谱柱柱长L单位为cm时，则1个BV/h相当于60QD/(πr2L)；进样液F流速QF为0.1QD～1.5QD，萃余液R流速QR＝QD+QF；在洗脱带中，洗脱液P流速Qp为0.5QD～2QD，萃取液E流速QE＝Qp；
切换时间TS：9～40min；
模拟移动床操作温度：室温；
进样模式：连续进样，或者分段进样；
(3)SMBC提纯步骤
使用如(1)所述SMBC设备在如(2)所述的SMBC工作条件下，进行SMBC分离，从萃余液R出口，除去各种前杂质；从萃取液E出口，得到丹参酮IIA萃取液；
(4)萃取液后处理
将含丹参酮IIA萃取液浓缩，经水沉醇溶处理，即将浓缩液加水，得到沉淀，再加乙醇溶解，结晶，得到丹参酮IIA产品。
2.根据权利要求1所述的一种三带模拟移动床色谱提纯丹参酮IIA的方法，其特征是在每个切换周期0～TS内，连续进样。
3.根据权利要求1所述的一种三带模拟移动床色谱提纯丹参酮IIA的方法，其特征是在每个切换周期0～TS内，分段进样，0＜t＜Ts，在0～t时间段内进样。
4.根据权利要求1所述的一种三带模拟移动床色谱提纯丹参酮IIA的方法，其特征是在每个切换周期0～TS内，分段进样，0＜t＜Ts，在t～TS时间段内进样。
5.根据权利要求1所述的一种三带模拟移动床色谱提纯丹参酮IIA的方法，其特征是在每个切换周期0～TS内，分段进样，0＜t1＜t2＜Ts，在t1～t2时间段内进样。
6.根据权利要求1所述的一种三带模拟移动床色谱提纯丹参酮IIA的方法，其特征是在萃取液后处理过程中，将含丹参酮IIA萃取液浓缩后加水，得到沉淀物，用水清洗沉淀物后，加乙醇溶解沉淀物，重结晶，得到纯度≥98％的丹参酮IIA产品。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410148599.3A CN103936816B (zh) | 2014-04-14 | 2014-04-14 | 一种模拟移动床色谱从丹参粗提物中提纯丹参酮iia的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410148599.3A CN103936816B (zh) | 2014-04-14 | 2014-04-14 | 一种模拟移动床色谱从丹参粗提物中提纯丹参酮iia的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103936816A CN103936816A (zh) | 2014-07-23 |
| CN103936816B true CN103936816B (zh) | 2015-10-21 |
Family
ID=51184720
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410148599.3A Expired - Fee Related CN103936816B (zh) | 2014-04-14 | 2014-04-14 | 一种模拟移动床色谱从丹参粗提物中提纯丹参酮iia的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103936816B (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106518940B (zh) * | 2016-11-07 | 2020-09-01 | 辽宁科技大学 | 一种提纯喜果苷的方法 |
| TWI661856B (zh) * | 2017-02-18 | 2019-06-11 | I-Shou University | 粗萃物的分離方法 |
| TWI697671B (zh) * | 2019-07-18 | 2020-07-01 | 梁明在 | 純化丹參酮類化合物的方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1394870A (zh) * | 2001-07-05 | 2003-02-05 | 北京天纯维通生物技术有限公司 | 一种分离纯化丹参酮的方法 |
| CN1161349C (zh) * | 2001-12-27 | 2004-08-11 | 广州美晨药业有限公司 | 一种超临界二氧化碳萃取精制丹参酮iia的方法 |
| CN101200490A (zh) * | 2007-12-13 | 2008-06-18 | 上海朗萨医药科技有限公司 | 高纯度丹参酮ⅱa的制备方法 |
-
2014
- 2014-04-14 CN CN201410148599.3A patent/CN103936816B/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103936816A (zh) | 2014-07-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108083989B (zh) | 一种高纯度大麻二酚的制备方法 | |
| CN103936816B (zh) | 一种模拟移动床色谱从丹参粗提物中提纯丹参酮iia的方法 | |
| CN104031013A (zh) | 一种利用高速逆流色谱分离纯化制备丹酚酸b和迷迭香酸的方法 | |
| CN103408613B (zh) | 大黄药材中蒽醌苷和二苯乙烯苷化学对照品的制备方法 | |
| CN105254500B (zh) | 一种从杜仲叶粗提物中制备高纯度绿原酸的方法 | |
| CN101274273B (zh) | 分子印迹固相萃取柱填充材料的制备方法 | |
| CN103214539A (zh) | 一种制备大戟二烯醇的方法 | |
| CN102276570B (zh) | 一种提纯表没食子儿茶素没食子酸酯（egcg）的方法 | |
| CN105949252A (zh) | 诃子药材中诃子酸、诃黎勒酸和鞣花酸三种化学对照品的制备方法 | |
| CN108017530A (zh) | 一种从菌渣中连续分离辅酶q10的方法 | |
| CN101386614B (zh) | 树脂吸附法制备表没食子儿茶素没食子酸酯的方法 | |
| CN109293509B (zh) | 一种从竹叶提取物中制备高纯度绿原酸的方法 | |
| CN103694213B (zh) | 一种五味子中木脂素单体的提取分离制备方法 | |
| CN101182346B (zh) | 一种从积雪草总皂苷出发同时制备积雪草苷a与积雪草苷b的方法 | |
| CN102617674B (zh) | 一种山莨菪根中东莨菪苷单体的制备方法 | |
| CN102336799A (zh) | 模拟移动床色谱分离制备人参皂苷Rb1的方法 | |
| CN104119245A (zh) | 一种制备高纯度辣椒碱单体的方法 | |
| CN104987285B (zh) | 一种分离纯化仙鹤草中间苯三酚类化合物的方法 | |
| CN102336792A (zh) | 三带模拟移动床色谱分离提纯芍药苷的方法 | |
| CN102381974A (zh) | 高速逆流色谱法用于忍冬中分离制备出咖啡鞣酸的方法 | |
| CN105061455B (zh) | 一种可同时大量分离高纯度藤黄酸和新藤黄酸的方法 | |
| CN103570512A (zh) | 模拟移动床色谱技术分离愈创木酚甘油醚对映体的方法 | |
| CN109336858A (zh) | 一种模拟移动色谱纯化黑芸豆皮花色苷的方法 | |
| CN103951560B (zh) | 一种制备色谱纯化α-亚麻酸乙酯的方法 | |
| CN111233811A (zh) | 采用大孔树脂一步法制备高纯度表没食子儿茶素没食子酸酯的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20151021 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |