CN102336799A

CN102336799A - 模拟移动床色谱分离制备人参皂苷Rb1的方法

Info

Publication number: CN102336799A
Application number: CN2010102336521A
Authority: CN
Inventors: 张伟; 林炳昌; 丛景香; 唐晓丹; 王绍艳; 李芊
Original assignee: University of Science and Technology Liaoning USTL
Current assignee: University of Science and Technology Liaoning USTL
Priority date: 2010-07-22
Filing date: 2010-07-22
Publication date: 2012-02-01

Abstract

本发明公开了一种模拟移动床色谱分离制备人参皂苷Rb₁的方法，解决人参皂苷Rb₁的分离提取纯度低，无法规模化分离制备的问题。本发明以三七皂苷提取物为原料，应用模拟移动床色谱法分离制备人参皂苷Rb₁，模拟移动床色谱的固定相采用十八烷基硅烷键合硅胶，流动相采用甲醇和水的混合溶液。本发明分离制备的人参皂苷Rb₁产品的质量百分比纯度达到92％以上。由于模拟移动床分离过程的连续性，生产的自动化程度高，生产效率高，且溶剂可以回收利用，分离过程中不接触有毒溶剂，真正实现了清洁生产。

Description

模拟移动床色谱分离制备人参皂苷Rb1的方法

技术领域

本发明涉及天然药物中间体的分离提纯方法，尤其是一种模拟移动床色谱分离制备人参皂苷Rb₁的方法。

背景技术

人参皂苷Rb₁具有降低胆固醇浓度、益智、抗氧化等作用，同时还可作为抗癌药物Rg₃和Rh₂的原料，是人参皂苷及三七皂苷中的重要有效成分。由于在三七皂苷中，除了人参皂苷Rb₁，还含有其他的三七皂苷成分及人参皂苷，所以在人参皂苷Rb₁的提纯制备过程中，关键的步骤就是对其分离，目前对人参皂苷Rb₁的分离方法主要是大孔吸附树脂法和传统的甲醇、乙醇提取法，但都无法进行高纯度的规模化分离，无法满足实际的需求。

查阅公开文献，近年来采用模拟移动床的分离技术已有很多报道。其中与本发明比较相关的是：“模拟移动床色谱拆分20(S)和20(R)-人参皂苷Rg3对映体”，公开(公告)号：CN101230080，专利申请。该申请公开了一种人参皂苷Rg3对映体的模拟移动床色谱分离方法，应用模拟移动床色谱系统，采用含十八烷基硅烷键合硅胶(C18)固定相，流动相采用甲醇和水的混合溶液从20(R)-人参皂苷Rg3和20(S)-人参皂苷Rg3的混合物中分离出高纯度的20(R)-人参皂苷Rg3和20(S)-人参皂苷Rg3。但是目前未见到有关模拟移动床色谱系统分离人参皂苷Rb₁的报道。

发明内容

本发明提供了一种模拟移动床色谱分离制备人参皂苷Rb₁的方法，解决人参皂苷Rb₁的分离提取纯度低，无法规模化分离制备的问题。

本发明采用的技术方案如下：

模拟移动床色谱分离制备人参皂苷Rb₁的方法，以三七皂苷提取物为原料，应用模拟移动床色谱法分离制备人参皂苷Rb₁，模拟移动床色谱的固定相采用十八烷基硅烷键合硅胶，流动相采用甲醇和水的混合溶液，甲醇与水的体积比比例为70∶30。模拟移动床色谱系统由4～8根色谱柱组成，色谱柱分为三个带：解吸带；精制带；吸附带，，每个带由1～4根相同的色谱柱串联组成。模拟移动床色谱系统的操作参数是：进样液流速U_F为0.5～3mL/min；洗脱液流速U_D为4～60mL/min；萃取液流速U_E为2～30mL/min；萃余液流速U_R为2～30mL/min；切换时间T_S为1～6min。

上述的三七皂苷提取物通过提取纯化手段从三七药材中得到，三七皂苷提取物中人参皂苷Rb₁的质量百分比纯度为40～60％，进入模拟移动床色谱分离的三七皂苷提取物用上述模拟移动床分离的流动相溶解，溶解后三七皂苷提取物的浓度为50～200mg/mL。

上述的模拟移动床色谱系统的操作温度为15～40℃。

本发明与现有同类技术相比，其显著的有益效果体现在：

模拟移动床色谱系统分离的人参皂苷Rb₁产品的质量百分比纯度达到92％以上。由于模拟移动床分离过程的连续性，生产的自动化程度高，生产效率高，且溶剂可以回收利用，分离过程中不接触有毒溶剂，真正实现了清洁生产。

附图说明

图1为本发明模拟移动床色谱系统的结构示意图；

图2为本发明人参皂苷Rb₁产品的HPLC图谱。

具体实施方式

下面结合附图用实施例对本发明作具体说明：

1.样品溶液的配制

通过乙醇回流提取和硅胶柱层析分离，从三七饮片中制得三七皂苷提取物，三七皂苷提取物中人参皂苷Rb₁的质量百分比纯度为40～60％。将得到的三七皂苷提取物溶于流动相中，沉降，经0.45μm滤膜过滤得到浓度为200mg/mL的溶液，作为模拟移动床色谱的进样溶液。此过程可以去除部分杂质及糖类，减少了设备中色谱柱的污染，延长了色谱柱的使用寿命。

2.色谱柱的装填与流动相的组成

使用匀浆法填装8根色谱柱，色谱柱规格50mm×100mm，填料为十八烷基硅烷键合硅胶，粒径为20～40μm。经过匀浆法装填后的色谱柱对称性一致，以萘和尿嘧啶为考察物柱效为800以上。

流动相为甲醇和水的混合溶液，甲醇与水的比例为70∶30。

3.模拟移动床色谱系统及操作参数

模拟移动床色谱系统包括洗脱泵、进样泵、萃取泵、流量计、色谱柱、高压电磁阀、单向阀和单片机控制器及计算机组成。洗脱泵流量0～80mL/min，压力0～30Mpa；进样泵流量0～10mL/min，压力0～40Mpa；萃取泵流量0～80mL/min，压力0～30Mpa；色谱柱工作温度15～40℃。如图1所示，三带模拟移动床色谱系统由8根色谱柱组成，分为三个带：解吸带有1根色谱柱；精制带由4根色谱柱组成；吸附带由3根色谱柱组成，通过三带模拟移动床色谱控制系统，定时控制电磁阀的开闭，使进样口，进流动相口，萃取液出口，萃余液出口沿流动相的方向定时变换，高纯度的人参皂苷Rb₁产品从萃取液出口获得。

模拟移动床色谱系统分离制备人参皂苷Rb₁的具体操作参数为：进样液流速UF为0.5～3mL/min；洗脱液流速UD为4～60mL/min；萃取液流速UE为2～30mL/min；萃余液流速UR为2～30mL/min；切换时间T_S为1～6min。

4.产品浓缩

将从萃取液出口获得的萃取液(E)用薄膜旋转蒸发器浓缩至近干，用乙醇洗出后在真空干燥箱烘干至恒重，控制浓缩温度和烘干温度小于等于60℃，得到人参皂苷Rb₁产品。

5.产品检验

采用日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10A紫外检测器，Agilent色谱柱，色谱柱规格4.6×150mm，ODS填料，粒径5μm，流动相为乙腈和水，体积比为30∶70，流速1.0mL/min，检测波长203nm，产品检测谱图见图2。通过外标法测定产品中人参皂苷Rb₁的质量百分比纯度为92％以上。

Claims

1.一种模拟移动床色谱分离制备人参皂苷Rb₁的方法，其特征在于：该方法以三七皂苷提取物为原料，应用模拟移动床色谱分离制备人参皂苷Rb₁，模拟移动床色谱的固定相采用十八烷基硅烷键合硅胶，流动相采用甲醇和水的混合溶液，甲醇与水的体积比比例为70∶30，模拟移动床色谱系统由4～8根色谱柱组成，色谱柱分为三个带：解吸带；精制带；吸附带，每个带由1～4根相同的色谱柱串联组成，模拟移动床色谱系统的操作参数是：进样液流速U_F为0.5～3mL/min；洗脱液流速U_D为4～60mL/min；萃取液流速U_E为2～30mL/min；萃余液流速U_R为2～30mL/min；切换时间T_S为1～6min。

2.根据权利要求1所述的模拟移动床色谱分离制备人参皂苷Rb₁的方法，其特征在于：所说的的三七皂苷提取物通过提取纯化手段从三七药材中得到，三七皂苷提取物中含人参皂苷Rb₁的质量百分比纯度为40～60％，进入模拟移动床色谱分离的三七皂苷提取物用模拟移动床分离的流动相溶解，溶解后三七皂苷提取物的浓度为50～200mg/mL。

3.根据权利要求1所述的模拟移动床色谱分离制备人参皂苷Rb₁的方法，其特征在于：所说的模拟移动床色谱系统的操作温度为15～40℃。