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CN106573050A - 特异性结合多种癌症抗原的三特异性结合分子和其使用方法 - Google Patents

特异性结合多种癌症抗原的三特异性结合分子和其使用方法 Download PDF

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CN106573050A CN201580027889.5A CN201580027889A CN106573050A CN 106573050 A CN106573050 A CN 106573050A CN 201580027889 A CN201580027889 A CN 201580027889A CN 106573050 A CN106573050 A CN 106573050A
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Abstract

本发明涉及三特异性结合分子，其是具有三个结合结构域的多链多肽分子，因此能够介导与三个表位的协同结合。三特异性结合分子优选地特征在于具备允许其免疫特异性结合以下表位的结合结构域：(1)第一癌症抗原的表位、(2)第二癌症抗原的表位和(3)在免疫系统效应细胞的表面上表达的分子的表位，因此能够将免疫系统效应细胞定位至表达癌症抗原的细胞，以便从而利于杀伤这样的癌症细胞。

Description

特异性结合多种癌症抗原的三特异性结合分子和其使用方法
相关申请的交叉引用
本申请要求美国专利申请号62/107,824(2015年1月26日提交)、62/008,229(2014年6月5日提交；未决)和62/004,571(2014年5月29日提交；未决)的优先权，其每一篇申请通过引用以其整体并入本文。
参考序列表：
根据37C.F.R.1.821以及下面的条款，本申请包括一个或多个序列表，所述序列表以计算机可读介质(文件名：1301_0119PCT_Sequence_Listing_ST25.txt，2015年5月18日创建，并且大小为416,408字节)的形式公开，并且通过引用将所述文件以其整体并入本文文件。
本发明的背景：
技术领域：
本发明涉及三特异性结合分子，其是具有三个结合结构域的多链多肽分子，因此能够介导与三个表位的协同结合。三特异性结合分子优选地特征在于具备允许其免疫特异性结合以下表位的结合结构域：(1)第一癌症抗原的表位、(2)第二癌症抗原的表位和(3)在免疫系统效应细胞的表面上表达的分子的表位，因此能够将免疫系统效应细胞定位至表达癌症抗原的细胞，以便从而利于杀伤这样的癌症细胞。
相关技术描述：
哺乳免疫系统
哺乳动物免疫系统用作抵抗各种病况，包括例如损伤、感染和瘤形成的防御。人和其他哺乳动物发展对病原体、外源物质和癌症抗原的免疫应答的效率取决于两个特征：对抗原识别的免疫应答的精巧的特异性和当用相同的抗原再激活时允许更快和更强力应答的免疫记忆(Portolés,P.等(2009)“The TCR/CD3Complex:Opening the Gate toSuccessful Vaccination,”Current Pharmaceutical Design 15:3290-3300；Guy,C.S.等(2009)“Organization of Proximal Signal Initiation at the TCR:CD3Complex,”Immunol Rev.232(1):7-21)。
哺乳动物免疫系统由下述两个分开但是相互关联的系统介导：细胞和体液免疫系统。一般而言，体液系统由可溶性产物(抗体或免疫球蛋白)介导，所述可溶性产物具有结合并中和被系统识别为身体外源的产物的能力。相反，细胞免疫系统涉及动员某些细胞，称为“T细胞”，其具有各种治疗作用。T细胞是淋巴细胞，其源自胸腺，并且在组织、淋巴系统和循环系统之间循环。响应外源结构(抗原)的存在和识别，T细胞被“激活”，以启动免疫应答。在许多情况下，这些外源抗原由于瘤形成或感染而在宿主细胞上表达。尽管T细胞它们本身不分泌抗体，但是它们对于通过第二类淋巴细胞——B细胞(其源自骨髓)的抗体分泌通常是必要的。关键地，T细胞展示非凡的免疫特异性，以便能够区分一个抗原与另一个抗原)。两种类型的T细胞——“T辅助细胞”和“细胞毒性T细胞”尤其相关。
T辅助细胞特征在于它们的糖蛋白，CD4的表达(即，它们是“CD4+”)。CD4+T细胞是大部分哺乳动物免疫和自体免疫应答的主要组织者(Dong,C.等(2003)“Immune Regulationby Novel Costimulatory Molecules,”Immunolog.Res.28(1):39-48)。已经发现CD4+T细胞的激活通过排列于抗原呈递细胞(比如B细胞、巨噬细胞或树突细胞)的表面上的抗原：II类主要组织相容性(MHC II)分子复合物和排列于初始CD4+T细胞的表面上的两个分子——T细胞受体(“TCR”)和CD3细胞表面受体配体的复合物之间的共刺激相互作用而被介导。激活的T辅助细胞能够增殖成Th1细胞，其能够介导对靶细胞的炎症反应。
细胞毒性T细胞特征在于它们对CD8的表达(即，它们是“CD8+”以及CD3+)。已经发现CD8+T细胞的激活通过排列于靶细胞的表面上的抗原：I类主要组织相容性(MHC I)分子复合物和排列于CD8+T细胞表面上的CD8和T细胞受体复合物之间的共刺激相互作用而被介导。与仅仅由某些免疫系统细胞表达的MHC II分子不同，MHC I分子被非常广泛地表达。因此，细胞毒性T细胞能够结合各种细胞类型。激活的细胞毒性T细胞通过它们释放细胞毒素穿孔蛋白、粒酶和粒溶素(granulysin)而介导细胞杀伤。通过穿孔蛋白的作用，粒酶进入靶细胞的细胞质，并且它们的丝氨酸蛋白酶功能触发胱天蛋白酶级联，其是最终导致靶细胞的细胞凋亡(程序性细胞死亡)的一系列半胱氨酸蛋白酶。
T细胞受体(“TCR”)是α和β链的共价连接的异源二聚体(“TCRαβ”)。这些链是长度为259(α)和296(β)个氨基酸的I类膜多肽。CD3分子是T细胞共受体，由五条不同的多肽链组成(CD3γ链、CD3δ链、两条CD3ε链和两条ζ链)。独立的多肽链缔合，以形成三个二聚体的复合物(εγ、εδ、ζζ)(Wucherpfennig,K.W.等(2010)“Structural Biology Of The T CellReceptor:Insights into Receptor Assembly,Ligand Recognition,And Initiation ofSignaling,”Cold Spring Harb.Perspect.Biol.2(4):a005140；1-14页；Chetty,R.等(1994)“CD3:Structure,Function And The Role Of Immunostaining In ClinicalPractice,”J.Pathol.173:303-307；Guy,C.S.等(2009)“Organization of ProximalSignal Initiation at the TCR:CD3Complex,”Immunol Rev.232(1):7-21；Call,M.E.等(2007)“Common Themes In The Assembly And Architecture Of Activating ImmuneReceptors,”Nat.Rev.Immunol.7:841-850；Weiss,A.(1993)“T Cell Antigen ReceptorSignal Transduction:A Tale Of Tails And Cytoplasmic Protein-TyrosineKinases,”Cell 73:209-212)。CD3复合物与TCR结合以便在T淋巴细胞中产生激活信号。在缺少CD3的情况下，TCR不能适当组装，并被降解(Thomas,S.等(2010)“MolecularImmunology Lessons From Therapeutic T Cell Receptor Gene Transfer,”Immunology129(2):170–177)。发现CD3结合所有成熟T细胞的膜，并且事实上不结合其他细胞类型的膜(见，Janeway,C.A.等(2005)在以下中：Immunobiology:THE IMMUNE SYSTEM IN HEALTHAND DISEASE,”第6版，Garland Science Publishing,NY,214-216页；Sun,Z.J.等(2001)“Mechanisms Contributing To T Cell Receptor Signaling And Assembly RevealedBy The Solution Structure Of An Ectodomain Fragment Of The CD3ε:γHeterodimer,”Cell 105(7):913-923；Kuhns,M.S.等(2006)“Deconstructing The FormAnd Function Of The TCR/CD3Complex,”Immunity.2006年2月；24(2):133-139)。
TCR和CD3复合物以及CD3ζ链ζ链(也称为T细胞受体T3ζ链或CD247)包括TCR复合物(van der Merwe,P.A.等(2010年12月3日电子公开)“Mechanisms For T Cell ReceptorTriggering,”Nat.Rev.Immunol.11:47-55；Wucherpfennig,K.W.等(2010)“StructuralBiology Of The T Cell Receptor:Insights into Receptor Assembly,LigandRecognition,And Initiation of Signaling,”Cold Spring Harb.Perspect.Biol.2:a005140)。复合物非常重要，因为其包含大量的(十个)免疫受体酪氨酸基的激活基序(ITAMs)。
两种相互作用对于T细胞激活是必要的(Viglietta,V.等(2007)“Modulating Co-Stimulation,”Neurotherapeutics 4:666-675；Korman,A.J.等(2007)“CheckpointBlockade in Cancer Immunotherapy,”Adv.Immunol.90:297-339)。在第一相互作用中，细胞必须展示结合细胞主要组织相容性复合物的相关靶抗原，从而其可结合初始T淋巴细胞的T细胞受体(“TCR”)。在第二相互作用中，细胞的配体必须结合T淋巴细胞的共受体(Dong,C.等(2003)“Immune Regulation by Novel Costimulatory Molecules,”Immunolog.Res.28(1):39-48；Lindley,P.S.等(2009)“The Clinical Utility OfInhibiting CD28-Mediated Costimulation,”Immunol.Rev.229:307-321)。经历两种刺激信号的T细胞然后能够响应细胞因子(比如白介素-2和白介素-12)。在TCR结合期间缺少两种共刺激信号的情况下，T细胞进入功能上无应答的状态，称为克隆无能(Khawli,L.A.等(2008)“Cytokine,Chemokine,and Co-Stimulatory Fusion Proteins for theImmunotherapy of Solid Tumors,”Exper.Pharmacol.181:291-328)。在病理学状态下，T细胞是各种器官特异性自身免疫性疾病，比如I型糖尿病、类风湿性关节炎和多发性硬化症的关键参与者(Dong,C.等(2003)“Immune Regulation by Novel CostimulatoryMolecules,”Immunolog.Res.28(1):39-48)。
认为激活T细胞需要两种信号以便它们实现适应性免疫应答提供了这样一种机制：避免对在系统中其可能被T细胞识别的位置可能存在于抗原呈递细胞上的自体抗原的应答。在T细胞与细胞的接触导致产生两种必要的信号中的仅仅一种信号的情况下，T细胞不被激活并且不发生适应性免疫应答。
抗体和其他结合表位的分子
A.抗体
“抗体”是免疫球蛋白分子，其能够通过位于免疫球蛋白分子的可变结构域中的至少一个抗原识别位点特异性结合靶，比如碳水化合物、多核苷酸、脂质、多肽等。如本文所使用，该术语不仅仅包括完整的多克隆或单克隆抗体、骆驼源化(camelized)抗体、单链抗体和抗特应(抗Id)抗体(包括，例如，本发明抗体的抗Id和抗抗Id抗体)，而且也包括其突变体、天然存在的变体、包括具有需要的特异性的抗原识别位点的抗体部分的融合蛋白、人源化的抗体、和嵌合抗体、以及包括具有必要特异性的抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其他修饰结构。遍及本申请，抗体轻链和重链的氨基酸残基的编号是根据EU索引，如在以下中：Kabat等(1992)SEQUENCES OF PROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST，国立卫生研究院公开号91-3242。如本文所使用，“抗体的抗原结合片段”是抗体的具有至少一个抗原识别位点的部分。如本文所使用，该术语包括片段(例如，Fab、Fab’、F(ab’)2Fv)、二硫连接的双特异性Fvs(sdFv)，胞内抗体(intrabody)和单链分子(例如，scFv)。尤其地，抗体包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性片段，即，包含抗原结合位点的分子。免疫球蛋白分子可以属于任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类。
天然抗体(比如IgG抗体)由与两条重链复合的两条轻链组成。每条轻链包含可变结构域(VL)和恒定结构域(CL)。每条重链包含可变结构域(VH)、三个恒定结构域(CH1、CH2和CH3)和位于CH1和CH2结构域之间的铰链结构域。因此，天然存在的免疫球蛋白(例如，IgG)的基础结构单元是具有两条轻链和两条重链的四聚体，通常表示为约150,000Da的糖蛋白。每条链的氨基-末端(“N”)部分包括具有约100至110或更多个氨基酸的可变区，其主要负责抗原识别。每条链的羧基末端(“C”)部分限定恒定区，其中轻链具有单个恒定结构域和重链通常具有三个恒定结构域和铰链区。因此，IgG分子的轻链结构是n-VL-CL-c和IgG重链的结构是n-VH-CH1-H-CH2-CH3-c(其中H是铰链区，并且n和c分别表示多肽的N-末端和C-末端)。
完整的、未修饰的抗体(例如，IgG抗体)结合抗原的表位的能力取决于免疫球蛋白轻链和重链上是否存在可变结构域(即，分别为VL结构域和VH结构域)。抗体轻链和抗体重链的相互作用，尤其地，其VL和VH结构域的相互作用形成抗体的表位结合位点中的一个。IgG分子的可变区由互补决定区(CDR)和非CDR区段组成，所述互补决定区(CDR)包含接触表位的残基和所述非CDR区段被称为框架区段(FR)，其一般维持结构和确定CDR环的定位，以便允许这样的接触(尽管某些框架残基也可接触抗原)。因此，VL和VH结构域具有结构n-FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-c。作为(或可用作)抗体轻链的第一、第二和第三CDR的多肽在本文分别命名为CDRL1结构域、CDRL2结构域和CDRL3结构域。类似地，作为(或可用作)抗体重链的第一、第二和第三CDR的多肽在本文分别命名为CDRH1结构域、CDRH2结构域和CDRH3结构域。因此，术语CDRL1结构域、CDRL2结构域、CDRL3结构域、CDRH1结构域、CDRH2结构域和CDRH3结构域指多肽，其在掺入到蛋白质中时，使得该蛋白质能够结合特异性表位，无论这样的蛋白质是否是具有轻链和重链的抗体或双抗体或单链结合分子(例如，scFv，BiTe等)，或是另一类型的蛋白质。与这样的抗体相反，scFv构建物包括包含在单个多肽链中的抗体的VL和VH结构域，其中结构域被足够长的灵活接头分开，允许两个结构域自组装成功能性表位结合位点。在由于不足长度的接头(小于约12个氨基酸残基)而导致VL和VH结构域的自组装是不可能的情况下，两个scFv构建物可彼此相互作用形成二价分子，其中一条链的VL缔合另一条链的VH(在以下中综述：Marvin等(2005)“Recombinant Approaches ToIgG-Like Bispecific Antibodies,”Acta Pharmacol.Sin.26:649-658)。
除了它们在诊断中的已知用途，已经显示抗体可用作治疗剂。过去数十年已经看到对抗体治疗潜能的兴趣的复兴，并且抗体已经成为一类重要的源自生物技术的药物(Chan,C.E.等(2009)“The Use Of Antibodies In The Treatment Of InfectiousDiseases,”Singapore Med.J.50(7):663-666)。接近200种基于抗体的药物已经被批准使用或正在开发。
术语“单克隆抗体”指同质性(homogenous)抗体群体，其中单克隆抗体由参与抗原的选择性结合的氨基酸(天然存在的和非天然存在的)组成。单克隆抗体是高度特异性的，针对单个表位(或抗原位点)。术语“单克隆抗体”不仅仅包括完整的单克隆抗体和全长单克隆抗体，而且也包括其片段(比如Fab、Fab’、F(ab’)2Fv)、单链(scFv)，其突变体、包括抗体部分的融合蛋白、人源化的单克隆抗体、嵌合单克隆抗体和包括具有必要特异性和结合抗原能力的抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其他修饰结构。就抗体来源或制备其的方式(例如，通过杂交瘤、噬菌体选择、重组表达、转基因动物等)而言不期望受到限制。该术语包括完整的免疫球蛋白以及上面根据定义“抗体”描述的片段。制备单克隆抗体的方法是本领域已知的。可采用的一种方法是Kohler,G.等的方法(1975)“Continuous Cultures OfFused Cells Secreting Antibody Of Predefined Specificity,”Nature 256:495-497或其改良方法。典型地，单克隆抗体在小鼠、大鼠或兔子中开发。通过用包含期望的表位的免疫原量的细胞、细胞提取物或蛋白制品免疫动物而产生抗体。免疫原可以是，但不限于原代细胞、培养的细胞系、癌细胞、蛋白质、肽、核酸或组织。用于免疫的细胞可培养一段时间(例如，至少24小时)，然后它们用作免疫原。细胞可通过它们本身或结合非变性佐剂比如Ribi用作免疫原(见，例如，Jennings,V.M.(1995)“Review of Selected Adjuvants Usedin Antibody Production,”ILAR J.37(3):119-125)。
一般而言，当用作免疫原时，细胞应保持完整和优选地能存活。相比于破裂的细胞，完整的细胞可允许抗原被免疫的动物更好地检测。变性或烈性佐剂，例如，弗氏佐剂的使用，可使细胞破裂，因此，其应用受阻。免疫原可以周期性间隔被多次施用，诸如两周一次或一周一次，或者可以维持在动物(例如，在组织重组体中)中的生存力这样的方式被施用。可选地，对于期望的致病表位是免疫特异性的现有单克隆抗体和任意其他等价抗体可被测序并通过本领域中已知的任意手段重组产生。在一个实施方式中，对这样的抗体测序，然后将多核苷酸序列克隆至载体用于表达或增殖。编码感兴趣的抗体的序列可在宿主细胞中保持在载体中，并且，可然后扩张和冷冻宿主细胞用于将来的使用。这样的抗体的多核苷酸序列可被用于遗传操作，以产生嵌合抗体、人源化的抗体或犬源化(caninized)的抗体，或改善抗体的亲和性，或其他特征。术语“人源化的”抗体指一般使用重组技术制备的嵌合分子，其具有源自来自非人物种的免疫球蛋白的抗原结合位点和基于人免疫球蛋白的结构和/或序列的分子的剩余的免疫球蛋白结构。这样的抗体的可变结构域的多核苷酸序列可用于遗传操作，以产生这样的衍生物和改善这样的抗体的亲和性，或其他特征。人源化抗体的一般原理涉及保留抗体的抗原结合部分的基础序列，同时用人抗体序列交换抗体的非人剩余部分。使单克隆抗体人源化大体上有四个步骤。这些是：(1)测定起始抗体轻链和重链可变结构域的核苷酸和预测的氨基酸序列(2)设计人源化的抗体或犬源化的抗体，即，确定在人源化或犬源化过程期间使用哪个抗体框架区(3)实际人源化或犬源化方法/技术和(4)转染和表达人源化的抗体。见，例如，美国专利号4,816,567、5,807,715、5,866,692和6,331,415。
这样的抗体的表位结合结构域可包括融合在恒定结构域上的完整可变结构域或仅仅包括移植在可变结构域中适当的框架区上的互补决定区(CDR)。抗原结合位点可以是野生型的或被一个或多个氨基酸取代而修饰。这消除了恒定区在人个体中作为免疫原，但是仍存在对外源可变区的免疫应答的可能性(LoBuglio,A.F.等(1989)“Mouse/HumanChimeric Monoclonal Antibody In Man:Kinetics And Immune Response,”Proc.Natl.Acad.Sci.(美国)86:4220-4224)。另一方法不仅仅关注提供源自人的恒定区，而且也修饰可变区以便重塑它们尽可能接近人形式。已知重链和轻链二者的可变区包含三个互补决定区(CDR)，其响应所讨论的抗原而改变并且决定结合能力，其由四个框架区(FR)侧接，所述框架区在给定的物种中相对保守并且推测为CDR提供支架材料(scaffolding)。当就具体的抗原制备非人抗体时，可变区可通过将源自非人抗体的CDR移植在待修饰的人抗体中存在的FR上被“重塑”或”人源化”。下述文献已经报道了该方法应用于各种抗体：Sato,K.等(1993)Cancer Res 53:851-856.Riechmann,L.等(1988)“Reshaping HumanAntibodies for Therapy,”Nature 332:323-327；Verhoeyen,M.等(1988)“ReshapingHuman Antibodies:Grafting An Antilysozyme Activity,”Science 239:1534-1536；Kettleborough,C.A.等(1991)“Humanization Of A Mouse Monoclonal Antibody ByCDR-Grafting:The Importance Of Framework Residues On Loop Conformation,”Protein Engineering 4:773-3783；Maeda,H.等(1991)“Construction Of ReshapedHuman Antibodies With HIV-Neutralizing Activity,”Human Antibodies Hybridoma2:124-134；Gorman,S.D.等(1991)“Reshaping A Therapeutic CD4Antibody,”Proc.Natl.Acad.Sci.(美国)88:4181-4185；Tempest,P.R.等(1991)“Reshaping A HumanMonoclonal Antibody To Inhibit Human Respiratory Syncytial Virus Infection invivo,”Bio/Technology9:266-271；Co,M.S.等(1991)“Humanized Antibodies ForAntiviral Therapy,”Proc.Natl.Acad.Sci.(美国)88:2869-2873；Carter,P.等(1992)“Humanization Of An Anti-p185her2Antibody For Human Cancer Therapy,”Proc.Natl.Acad.Sci.(美国)89:4285-4289；和Co,M.S.等(1992)“Chimeric AndHumanized Antibodies With Specificity For The CD33Antigen,”J.Immunol.148:1149-1154。在一些实施方式中，人源化的抗体保留所有的CDR序列(例如，包含来自小鼠抗体的所有六个CDR的人源化的小鼠抗体)。在其他实施方式中，人源化的抗体具有序列相对于原始抗体不同的一个或多个CDR(一、二、三、四、五或六个)。
已经描述了包括源自非人免疫球蛋白的抗原结合位点的许多“人源化的”抗体分子，包括具有啮齿动物或修饰的啮齿动物V区域和它们缔合的融合至人恒定结构域的互补决定区(CDR)的嵌合抗体(见，例如，Winter等(1991)“Man-made Antibodies,”Nature 349:293-299；Lobuglio等(1989)“Mouse/Human Chimeric Monoclonal Antibody In Man:Kinetics And Immune Response,”Proc.Natl.Acad.Sci.(美国)86:4220-4224(1989)，Shaw等(1987)“Characterization Of A Mouse/Human Chimeric Monoclonal Antibody(17-1A)To A Colon Cancer Tumor-Associated Antigen,”J.Immunol.138:4534-4538和Brown等(1987)“Tumor-Specific Genetically Engineered Murine/Human ChimericMonoclonal Antibody,”Cancer Res.47:3577-3583)。其他参考文献描述啮齿动物CDR移植到人支撑框架区(FR)中，然后与适当的人抗体恒定结构域融合(见，例如，Riechmann,L.等(1988)“Reshaping Human Antibodies for Therapy,”Nature 332:323-327；Verhoeyen,M.等(1988)“Reshaping Human Antibodies:Grafting An Antilysozyme Activity,”Science239:1534-1536；和Jones等(1986)“Replacing The Complementarity-Determining Regions In A Human Antibody With Those From A Mouse,”Nature 321:522-525)。另一参考文献描述由重组形成的(veneered)的啮齿动物框架区支撑的啮齿动物CDR。见，例如，欧洲专利公开号519,596。这些“人源化的”分子被设计，以使对啮齿动物抗人抗体分子的有害的免疫应答最小化，其限制了这些部分在人接受者中的治疗性应用的持续时间和效力。也可使用的人源化抗体的其他方法由下述文献公开：Daugherty等(1991)“Polymerase Chain Reaction Facilitates The Cloning,CDR-Grafting,And RapidExpression Of A Murine Monoclonal Antibody Directed Against The CD18ComponentOf Leukocyte Integrins,”Nucl.Acids Res.19:2471-2476和美国专利号6,180,377、6,054,297、5,997,867和5,866,692。
B.双特异性抗体、多特异性双抗体和DARTTM双抗体
天然抗体仅仅能够结合一个表位种类(即，它们是“单特异性的”)，尽管它们可能够结合该种类的多个拷贝(即，它们可展示二效价或多效价)。已经开发了各种重组双特异性抗体形式(见，例如，PCT公开号WO 2008/003116、WO 2009/132876、WO 2008/003103、WO2007/146968、WO 2007/146968、WO 2009/018386、WO 2012/009544、WO 2013/070565)，其大部分使用接头肽，以将抗体核心(IgA、IgD、IgE、IgG或IgM)融合至抗体核心的或其中的进一步结合的蛋白(例如，scFv，VL VH等)，或融合多个抗体部分或将(例如两个Fab片段或scFv)融合至异源二聚化-促进结构域比如CH2-CH3结构域或可选的多肽(WO 2005/070966、WO2006/107786A WO 2006/107617A、WO 2007/046893)。典型地，这样的方法涉及折中和权衡。例如，PCT公开号WO 2013/174873、WO 2011/133886和WO 2010/136172公开了接头的使用可在治疗情形中引起问题，并且教导了三特异性抗体，其中CL和CH1结构域由它们各自的天然位置被交换以及VL和VH结构域已经被多样化(WO 2008/027236、WO 2010/108127)，以允许它们结合多于一个抗原。因此，这些文件中公开的分子用结合特异性换取结合另外抗原种类的能力。PCT公开号WO 2013/163427和WO 2013/119903公开了修饰CH2结构域，以包含包括结合结构域的融合蛋白加合物。文件叙述了CH2结构域可能在介导效应子功能中仅起到最小的作用。PCT公开号WO 2010/028797、WO2010028796和WO 2010/028795公开了重组抗体，其Fc结构域已经用另外的VL和VH结构域取代，以便形成三价结合分子。PCT公开号WO2003/025018和WO2003012069公开了重组双抗体，其单条链包含scFv结构域。PCT公开号WO2013/006544公开多价Fab分子，其作为单条多肽链被合成并且然后进行蛋白酶解以产生异源二聚结构。因此，这些文件中公开的分子用所有或一些介导效应子功能的能力换取结合另外抗原种类的能力。PCT公开号WO 2014/022540、WO 2013/003652、WO 2012/162583、WO2012/156430、WO 2011/086091、WO 2007/075270、WO 1998/002463、WO 1992/022583和WO1991/003493公开了添加另外的结合结构域或官能团至抗体或抗体部分(例如，添加双抗体至抗体的轻链，或添加另外的VL和VH结构域至抗体的轻链和重链，或添加异源融合蛋白或彼此连接的多个Fab结构域)。因此，这些文件中公开的分子用天然抗体结构换取结合另外的抗原种类的能力。
现有技术已经另外叙述了产生双抗体的能力，所述双抗体与这样的天然抗体的不同之处在于能够结合两个或更多个不同表位种类(即，除了双效价或多效价之外还展示双特异性或多特异性)(见，例如，Holliger等(1993)“‘Diabodies’:Small Bivalent AndBispecific Antibody Fragments,”Proc.Natl.Acad.Sci.(美国)90:6444-6448；US 2004/0058400(Hollinger等)；US 2004/0220388(Mertens等)；Alt等(1999)FEBS Lett.454(1-2):90-94；Lu,D.等(2005)“A Fully Human Recombinant IgG-Like Bispecific AntibodyTo Both The Epidermal Growth Factor Receptor And The Insulin-Like GrowthFactor Receptor For Enhanced Antitumor Activity,”J.Biol.Chem.280(20):19665-19672；WO 02/02781(Mertens等)；Olafsen,T.等(2004)“Covalent Disulfide-LinkedAnti-CEA Diabody Allows Site-Specific Conjugation And Radiolabeling For TumorTargeting Applications,”Protein Eng Des Sel.17(1):21-27；Wu,A.等(2001)“Multimerization Of A Chimeric Anti-CD20Single-chain Fv-Fv Fusion Protein IsMediated Through Variable Domain Exchange,”Protein Engineering 14(2):1025-1033；Asano等(2004)“A Diabody For Cancer Immunotherapy And Its FunctionalEnhancement By Fusion Of Human Fc Domain,”Abstract 3P-683,J.Biochem.76(8):992；Takemura,S.等(2000)“Construction Of A Diabody(Small RecombinantBispecific Antibody)Using A Refolding System,”Protein Eng.13(8):583-588；Baeuerle,P.A.等(2009)“Bispecific T-Cell Engaging Antibodies For CancerTherapy,”Cancer Res.69(12):4941-4944)。
双抗体的设计是基于单链可变结构域片段(scFv)的结构。这样的分子通过经短连接肽彼此连接轻链和/或重链可变结构域而制备。Bird等(1988)(“Single-Chain Antigen-Binding Proteins,”Science 242:423-426)描述了连接肽的例子，其在一个可变结构域的羧基末端和另一可变结构域的氨基末端之间桥跨约3.5nm。已经设计和使用了其他序列的接头(Bird等(1988)“Single-Chain Antigen-Binding Proteins,”Science 242:423-426)。接头可进而被修饰用于另外的功能，比如药物的附着或附着至固体载体。可经重组或经合成产生单链变体。对于合成产生scFv，可使用自动合成仪。对于重组产生scFv，包含编码scFv的多核苷酸的适当质粒可被引入适当的宿主细胞——真核细胞比如酵母细胞，植物细胞，昆虫细胞或哺乳细胞，或原核细胞比如大肠埃希氏菌(E.coli)大肠埃希氏菌。编码感兴趣scFv的多核苷酸可通过常规的操作比如多核苷酸的连接而制备。所得scFv可使用本领域已知的标准蛋白质纯化技术分离。
美国专利号7,585,952和美国专利公开号2010-0173978涉及对ErbB2免疫特异性的scFv分子。已经描述了双特异性T细胞连接子(engager)(“BiTEs”)，其是一类scFv分子(WO 05/061547；Baeuerle,P等(2008)“BiTE:A New Class Of Antibodies That RecruitT Cells,”Drugs of the Future 33:137-147；Bargou,等2008)“Tumor Regression inCancer Patients by Very Low Doses of a T Cell-Engaging Antibody,”Science 321:974-977)。这样的分子由具有两个抗原结合结构域的单个多肽链分子组成，其中一个抗原结合结构域免疫特异性结合CD3表位和其第二个免疫特异性结合靶细胞表面上存在的抗原。
提供非单特异性双抗体提供了明显的优势：共连接和共定位表达不同表位的细胞的能力。二价双抗体因此具有宽的应用范围，包括治疗和免疫诊断。二价允许在各种应用中在设计和工程化双抗体时更大的灵活性，提供对多聚体抗原的增强的抗体亲抗原性，交联不同的抗原，和依赖于两个靶抗原的存在引导靶向特定的细胞类型。由于它们增加的效价，低解离速率和从循环的快速清除(对于～50kDa或更低的小尺寸双抗体)，本领域已知的双抗体分子也已经显示在肿瘤成像领域的具体用途(Fitzgerald等(1997)“Improved TumourTargeting By Disulphide Stabilized Diabodies Expressed In Pichia pastoris,”Protein Eng.10:1221)。尤其重要的是不同细胞的共连接，例如，细胞毒性T细胞与肿瘤细胞的交联(Staerz等(1985)“Hybrid Antibodies Can Target Sites For Attack By TCells,”Nature 314:628-631，和Holliger等(1996)“Specific Killing Of LymphomaCells By Cytotoxic T-Cells Mediated By A Bispecific Diabody,”Protein Eng.9:299-305)。
双抗体表位结合结构域可以针对任何免疫效应细胞比如CD3、CD16、CD32、CD64等的表面决定簇，所述免疫效应细胞在T淋巴细胞、天然杀伤细胞(NK)细胞或其他单核细胞上表达。在许多研究中，也发现结合效应细胞决定簇例如Fcγ受体(FcγR)的双抗体激活效应细胞(Holliger等(1996)“Specific Killing Of Lymphoma Cells By Cytotoxic T-CellsMediated By A Bispecific Diabody,”Protein Eng.9:299-305；Holliger等(1999)“Carcinoembryonic Antigen(CEA)-Specific T-cell Activation In Colon CarcinomaInduced By Anti-CD3x Anti-CEA Bispecific Diabodies And B7x Anti-CEABispecific Fusion Proteins,”Cancer Res.59:2909-2916；WO 2006/113665、WO 2008/157379、WO 2010/080538、WO 2012/018687、WO 2012/162068)。通常，通过经Fc-FcγR相互作用使结合抗原的抗体结合效应细胞激发效应细胞激活；因此，在这方面，双抗体分子可展示Ig样功能，这不依赖于它们是否包括Fc结构域(例如，如在本领域已知的或本文列举的任何效应功能试验中所分析的(例如，ADCC试验))。通过交联肿瘤和效应细胞，双抗体不仅仅使效应细胞接近肿瘤细胞而且导致有效的肿瘤杀伤(见例如，Cao等(2003)“BispecificAntibody Conjugates In Therapeutics,”Adv.Drug.Deliv.Rev.55:171-197)。
例如，美国专利号6,171,586涉及如下产生双特异性抗体：通过蛋白酶解切割两个抗体，以获得它们的F(ab’)2片段，在用于防止分子间二硫键形成的条件下还原这样的片段，并且然后混合片段，以产生双特异性抗体)。美国专利号6,551,592、6,994,853和8,277,806和PCT公开号WO 2012/156430、WO 2002/020039、WO 2000/018806和WO 1998/003670涉及产生三特异性抗体，其能够同时结合肿瘤细胞上的T细胞和其他抗原，并且，经双特异性抗体的Fc部分结合具有这样的受体的细胞的Fc受体。PCT公开号WO 2000/018806、WO 1998/003670和WO 2006/072152涉及产生能够同时结合T细胞和其他抗原的三特异性抗体。美国专利公开号2008-0057054公开了双特异性缀合物，其对于针对淀粉状蛋白β寡聚物的结合元件和针对跨膜蛋白质端脑蛋白(telencephalin)的结合元件是特异性的。美国专利公开号2010-0291112涉及双特异性和三特异性单链Fv分子，其特异性结合一个(或两个)肿瘤抗原和效应细胞抗原(比如CD3、CD16、CD32、CD64等)。
PCT公开号WO 1999/042597和WO 1998/006749公开了抗体衍生物，其包括人主要组织相容性复合物结合结构域，有或没有结合的MHC结合肽。PCT公开号WO 02/072141涉及多特异性结合分子，其结合速率(on-rate)(它们结合靶分子的速率)和解离速率(off-rate)(它们释放靶分子的速率)不同，以便相比它们与另一这样的靶分子的结合优选结合一个靶。三特异性分子，例如这样的分子，其具有作为抗CD3或抗CD28抗体的单价第一部分和第二部分，所述第二部分包括发挥二价免疫功能的部分，其免疫特异性结合靶患病细胞或免疫细胞上的一个或多个靶配体。
美国专利号7,695,936和专利公开2007/0196363涉及由两个抗体的重链形成的双特异性抗体，其中一个抗体具有工程化至其重链的突出(protuberance)和其第二个具有工程化至其重链的互补的腔。这样互补的“杵(knob)”和“臼(hole)”的存在教导相对于包含相同抗体的两个重链的单特异性同源抗体，优选形成双特异性异源抗体(具有每个这样的抗体的一个重链)。提出了各种双特异性异源抗体，包括对CD3和肿瘤细胞抗原免疫特异性的那些。也提出了各种三特异性异源抗体，包括对下述免疫特异性的一些三特异性异源抗体：CD3、CD8和CD37(主要在参与T细胞增殖调节的B细胞上表达的跨膜蛋白质(Robak,T.等(2014)“Anti-CD37Antibodies For Chronic Lymphocytic Leukemia,”ExpertOpin.Biol.Ther.14(5):651-661)，但是，没有提供它们产生的机制也没有公开它们的结构。
PCT公开WO2012-162561涉及双特异性、四价结合分子，其包括两个多肽，其每个多肽包括两个双抗体结构，由间插CH2-CH3结构域分开。该文件也涉及由四个多肽链组成的四价结合分子，其中多肽链中的两个包含两个抗原的轻链可变结构域和重链可变结构域，和其中其他两个多肽链包含抗原的互补的重链可变结构域和轻链可变结构域和末端CH2-CH3结构域。通过它们各自CH2-CH3结构域的缔合形成双特异性、四价结合分子。在四个多肽链构建物中，“轻”链不是共价结合至重链，因此导致不稳定(见，Lu,D.等(2005)“A FullyHuman Recombinant IgG-Iike Bispecific Antibody To Both The Epidermal GrowthFactor Receptor And The Insulin-Like Growth Factor Receptor For EnhancedAntitumor Activity,”J.Biol.Chem.280(20):19665-19672)。该文件公开了第三构建物，其中链被改变，以提供这样的共价键合，但是代价是消除了它们的双特异性(即，分子是单特异性的)。公开了对CD2、CD3、CD4、CD8、CD161、趋化因子受体、CD95、CCR5等具有特异性的分子。未公开能够结合CD3和CD8二者的双特异性分子。
但是，上述优势需要显著的成本。形成这样的非单特异性双抗体需要成功组装两个或更多个有区别的和不同多肽(即，这样的形成需要通过异源二聚化不同的多肽链种类形成双抗体)。该事实与单特异性的双抗体相反，其通过相同多肽链的同二聚化形成。因为必须提供至少两个不同的多肽(即，两个多肽种类)以便形成非单特异性双抗体，并且因为这样的多肽的同二聚化导致无活性的分子(Takemura,S.等(2000)“Construction Of ADiabody(Small Recombinant Bispecific Antibody)Using A Refolding System,”Protein Eng.13(8):583-588)，产生这样的多肽必须以防止相同种类的多肽之间的共价结合的方式完成(Takemura,S.等(2000)“Construction Of A Diabody(Small RecombinantBispecific Antibody)Using A Refolding System,”Protein Eng.13(8):583-588)。所以现有技术教导了非共价缔合这样的多肽(见，例如，Olafsen等(2004)“CovalentDisulfide-Linked Anti-CEA Diabody Allows Site-Specific Conjugation AndRadiolabeling For Tumor Targeting Applications,”Prot.Engr.Des.Sel.17:21-27；Asano等(2004)“A Diabody For Cancer Immunotherapy And Its FunctionalEnhancement By Fusion Of Human Fc Domain,”摘要3P-683，J.Biochem.76(8):992；Takemura,S.等(2000)“Construction Of A Diabody(Small Recombinant BispecificAntibody)Using A Refolding System,”Protein Eng.13(8):583-588；Lu,D.等(2005)“AFully Human Recombinant IgG-Like Bispecific Antibody To Both The EpidermalGrowth Factor Receptor And The Insulin-Like Growth Factor Receptor ForEnhanced Antitumor Activity,”J.Biol.Chem.280(20):19665-19672)。
但是，现有技术已经认识到由非共价缔合的多肽组成的双特异性双抗体不稳定并且容易解离成非功能性单体(见，例如，Lu,D.等(2005)“A Fully Human Recombinant IgG-Like Bispecific Antibody To Both The Epidermal Growth Factor Receptor And TheInsulin-Like Growth Factor Receptor For Enhanced Antitumor Activity,”J.Biol.Chem.280(20):19665-19672)。
面对该挑战，现有技术已经成功开发了稳定、共价结合的异源二聚非单特异性双抗体，称为DARTsTM(见，例如，美国专利公开号2013-0295121、2010-0174053和2009-0060910；欧洲专利公开号EP 2714079、EP 2601216、EP 2376109、EP 2158221和PCT公开号WO 2012/162068、WO 2012/018687、WO 2010/080538；和Moore,P.A.等(2011)“ApplicationOf Dual Affinity Retargeting Molecules To Achieve Optimal Redirected T-CellKilling Of B-Cell Lymphoma,”Blood 117(17):4542-4551；Veri,M.C.等(2010)“Therapeutic Control Of B Cell Activation Via Recruitment Of Fcgamma ReceptorIIb(CD32B)Inhibitory Function With A Novel Bispecific Antibody Scaffold,”Arthritis Rheum.62(7):1933-1943；Johnson,S.等(2010)“Effector Cell RecruitmentWith Novel Fv-Based Dual-Affinity Re-Targeting Protein Leads To Potent TumorCytolysis And in vivo B-Cell Depletion,”J.Mol.Biol.399(3):436-449)。这样的双抗体包括两个或更多个共价复合的多肽并且涉及将一个或多个半胱氨酸残基工程化至每个采用的多肽种类，这允许形成二硫键并且从而共价键合两个多肽链。例如，添加半胱氨酸残基至这样的构建物的C-末端已经显示允许多肽链之间的二硫键合，稳定所得异源二聚体而不干扰二价分子的结合特征。
有许多DARTTM实施方式。最简单DARTTM实施方式的两个多肽的每一个包括三个结构域(图1)。第一多肽包括：(i)第一结构域，其包括第一免疫球蛋白的轻链可变结构域的结合区(VL1)，(ii)第二结构域，其包括第二免疫球蛋白的重链可变结构域的结合区(VH2)，和(iii)第三结构域，其包含半胱氨酸残基(或包含半胱氨酸的结构域)和异源二聚化-促进结构域，其用于促进与第二多肽链的异源二聚化。第三结构域的半胱氨酸残基(或包含半胱氨酸的结构域)用于促进双抗体的第一多肽链与第二多肽链的共价键合。第二多肽包含：(i)互补的第一结构域(包含VL2的结构域)，(ii)互补的第二结构域(包含VH1的结构域)和(iii)第三结构域，其包含半胱氨酸残基(或包含半胱氨酸的结构域)和，任选地，互补的异源二聚化-促进结构域，其与第一多肽链的异源二聚化-促进结构域复合，以便促进与第一多肽链的异源二聚化。第二多肽链的第三结构域的半胱氨酸残基(或包含半胱氨酸的结构域)用于促进双抗体的第二多肽链与第一多肽链的共价键合。这样的分子是稳定、有效力的并且能够同时结合两个或更多个抗原。它们能够促进重定向T细胞介导的表达靶抗原的细胞的杀伤。
在一个实施方式中，第一和第二多肽的第三结构域每个包含半胱氨酸残基，其用于将多肽经二硫键结合在一起。多肽中的一个或两个的第三结构域可另外具有CH2-CH3结构域的序列，使得双抗体多肽的复合形成Fc结构域，其能够结合细胞(比如B淋巴细胞、树突细胞、天然杀伤细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、嗜伊红粒细胞、嗜碱性粒细胞和肥大细胞)的Fc受体(图2A-2B)。
已经描述了这样的分子的许多变型(见，例如，美国专利公开号2013-0295121、2010-0174053和2009-0060910；欧洲专利公开号EP 2714079、EP 2601216、EP 2376109、EP2158221和PCT公开号WO 2012/162068、WO 2012/018687、WO 2010/080538)。这些具有Fc的DART可包括三条多肽链(例如，图2B)。这样的双抗体的第一多肽链包含三个结构域：(i)包含VL1的结构域，(ii)包含VH2的结构域和(iii)包含半胱氨酸残基的结构域(或包含半胱氨酸的结构域)和异源二聚化-促进结构域和(iv)半胱氨酸残基(或包含半胱氨酸的结构域和CH2-CH3结构域。这样的DARTTM的第二多肽链包含：(i)包含VL2的结构域，(ii)包含VH1的结构域和(iii)包含半胱氨酸残基的结构域(或包含半胱氨酸的结构域)和异源二聚化-促进结构域，其促进与第一多肽链的异源二聚化。第二多肽链的第三结构域的半胱氨酸残基(或包含半胱氨酸的结构域)用于促进双抗体的第二多肽链与第一多肽链的共价结合。这样的DARTTM的第三多肽包括半胱氨酸残基(或包含半胱氨酸的结构域)和CH2-CH3结构域。因此，这样的DARTTM的第一和第二多肽链缔合在一起形成能够结合表位的VL1/VH1结合位点以及能够结合第二表位的VL2/VH2结合位点。第一和第二多肽通过在它们各自第三结构域中涉及半胱氨酸残基的二硫键彼此结合。注意，第一和第三多肽链彼此复合形成经二硫键稳定的Fc结构域。这样的双抗体具有增强的效力。这样具有Fc的DARTTM可具有两个取向之一(表1)：
已经描述了甚至更复杂的DARTTM双抗体，称为Ig-DARTTM(图3A-3B)和Fc-DARTTM双抗体(图3C)(WO 2012/018687)。Fc-DARTsTM具有四条多肽链。这样的双抗体的第一和第三多肽链包含三个结构域：(i)包含VL1的结构域，(ii)包含VH2的结构域和(iii)包含CH2-CH3序列的结构域。Fc-DARTTM的第二和第四多肽包含：(i)包含VL2的结构域，(ii)包含VH1的结构域和(iii)促进与Fc-DARTTM的第一多肽链的异源二聚化和共价结合的结构域。第三和第四，以及第一和第二多肽链可以相同或不同，以便允许是单特异性的、双特异性的或四特异性的四价结合。这样更复杂的DARTTM分子也具有包含半胱氨酸的结构域，其用于形成共价结合的复合物。Fc-DARTTM双抗体包含CH1和CL结构域。
可选的构建物是本领域已知的，用于其中期望四价分子但是不需要Fc的应用，包括但不限于四价串联抗体，也称为“TandAbs”(见，例如美国专利公开号2005-0079170、2007-0031436、2010-0099853、2011-020667 2013-0189263；欧洲专利公开号EP 1078004、EP 2371866、EP 2361936和EP 1293514；PCT公开号WO 1999/057150、WO 2003/025018和WO2013/013700)，其通过两个相同链的同二聚化形成，每条链各具有VH1、VL2、VH2和VL2结构域。
但是，尽管所有现有技术的进步，仍需要可为遭受癌症或其他疾病和病况的患者提供改善的治疗价值的组合物。本发明针对该目标和其他目标。
发明内容：
本发明涉及三特异性结合分子，其是具有三个结合结构域的多链多肽分子，因此能够介导与三个表位的协同结合。三特异性结合分子优选地特征在于具备允许其免疫特异性结合以下表位的结合结构域：(1)第一癌症抗原的表位，(2)第二癌症抗原的表位和(3)在免疫系统效应细胞的表面上表达的分子的表位，因此能够将免疫系统效应细胞定位至表达癌症抗原的细胞，以便从而利于杀伤这样的癌症细胞。
详细地，本发明提供了三特异性结合分子，其能够免疫特异性结合三不同表位，所述表位是表位I、表位II和表位III，其中三个表位中的两个是癌症抗原(一个或多个)的表位和所述表位中的第三个是效应细胞抗原的表位。
本发明尤其涉及这样的三特异性结合分子的实施方式，其中分子包括共价复合在一起的四条不同的多肽链，并且包括：
(I)抗原结合结构域I，其能够免疫特异性结合第一抗原上存在的表位I，和抗原结合结构域II，其能够免疫特异性结合第二抗原上存在的表位II，其中抗原结合结构域I和抗原结合结构域II都是双抗体型结合结构域；
(II)抗原结合结构域III，其能够免疫特异性结合第三抗原上存在的表位III；和
(III)Fc结构域，其通过两个CH2-CH3结构域彼此复合而形成；
其中表位I、表位II或表位III之一是效应细胞抗原的表位，表位I、表位II或表位III中的第二个是第一癌症抗原的表位，和表位I、表位II或表位III中的第三个是第二癌症抗原的表位，并且其中结合分子的抗原结合结构域I、II和III介导表达效应细胞抗原的免疫系统效应细胞和表达第一和第二癌症抗原的癌症细胞的协同结合。
本发明尤其涉及这样的三特异性结合分子的实施方式，其中Fc结构域能够结合排列在细胞表面上的Fc受体。
本发明另外涉及这样的三特异性结合分子的实施方式，其中效应细胞抗原排列在效应细胞的表面上，并且其中癌症抗原排列在癌症细胞的表面上，并且其中免疫特异性结合足够共定位效应细胞抗原和癌症抗原，从而针对癌症细胞促进效应细胞的激活。
本发明另外涉及这样的三特异性结合分子的实施方式，其中效应细胞抗原选自：CD2、CD3、CD16、CD19、CD20、CD22、CD32B、CD64、B细胞受体(BCR)、T细胞受体(TCR)和NKG2D受体。
本发明另外涉及这样的三特异性结合分子的实施方式，其中第一和第二癌症抗原独立地选自：结肠癌抗原19.9、胃癌黏蛋白、抗原4.2、糖蛋白A33(gpA33)、ADAM-9、胃癌抗原AH6、ALCAM、恶性人淋巴细胞抗原APO-1、癌症抗原B1、B7-H3、β-联蛋白、血型ALeb/Ley、伯基特淋巴瘤抗原-38.13、结肠腺癌抗原C14、卵巢癌抗原CA125、羧肽酶M、CD5、CD19、CD20、CD22、CD23、CD25、CD27、CD30、CD33、CD36、CD45、CD46、CD52、CD79a/CD79b、CD103、CD317、CDK4、癌胚抗原(CEA)、CEACAM5、CEACAM6、CO17-1A、CO-43(血型Leb)、CO-514(血型Lea)、CTA-1、CTLA4、细胞角蛋白8、抗原D1.1、抗原D156-22、DR5、E1系列(血型B)、EGFR(表皮生长因子受体)、肝配蛋白受体A2(EphA2)、ErbB1、ErbB3、ErbB4、GAGE-1、GAGE-2、GD2/GD3/GM2、肺腺癌抗原F3、抗原FC10.2、G49、神经节苷酯GD2、神经节苷酯GD3、神经节苷酯GM2、神经节苷酯GM3、GD2、GD3、GICA 19-9、GM2、gp100、人白血病T细胞抗原Gp37、黑素瘤抗原gp75、gpA33、HER2抗原(p185HER2)、人乳脂肪球(milk fat globule)抗原(HMFG)、人乳头瘤病毒-E6/人乳头瘤病毒-E7、高分子量黑素瘤抗原(HMW-MAA)、I抗原(分化抗原)I(Ma)、整联蛋白α-V-β-6整联蛋白β6(ITGB6)、白介素-13、受体α2(IL13Rα2)、JAM-3、KID3、KID31、KS 1/4全(pan)癌抗原、人肺癌抗原L6和L20、LEA、LUCA-2、M1:22:25:8、M18、M39、MAGE-1、MAGE-3、MART、MUC-1、MUM-1、Myl、N-乙酰葡糖氨基转移酶、新糖蛋白(neoglycoprotein)、NS-10、OFA-1、OFA-2、制瘤素M、p15、黑素瘤相关的抗原p97、多态上皮粘蛋白(PEM)、多态上皮黏蛋白抗原(PEMA)、PIPA、前列腺特异性抗原(PSA)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、前列腺酸性磷酸盐、R24、ROR1、鞘脂、SSEA-1、SSEA-3、SSEA-4、sTn、源自T细胞受体的肽、T5A7、TAG-72、TL5(血型A)、TNF-α受体、TNF-β受体、TNF-γ受体、TRA-1-85(血型H)、转铁蛋白受体、肿瘤特异性移植抗原(TSTA)，胎性癌抗原-甲胎蛋白(AFP)、VEGF、VEGFR，VEP8、VEP9、VIM-D5和Y半抗原，Ley。
本发明另外涉及这样的三特异性结合分子的实施方式，其中第一和第二癌症抗原选自：CD2、CD317、CEACAM5、CEACAM6、DR5、EphA2、gpA33、Her2、B7-H3；EGF、EGFR、VEGF和VEGFR。
本发明另外涉及这样的三特异性结合分子的实施方式，其中非双抗体型结合结构域III包括Fab型结合结构域(VLIII/VHIII)，其能够免疫特异性结合表位III，其中该分子包括：
(A)第一多肽链，其在N-末端至C-末端方向包括：
(1)免疫球蛋白的轻链可变结构域，其能够结合三个表位中的第一个(VLI)；
(2)免疫球蛋白的重链可变结构域，其能够结合三个表位中的第二个(VHII)；
(3)异源二聚体-促进结构域；和
(4)IgG的CH2和CH3结构域；
(B)第二多肽链，其在N-末端至C-末端方向包括：
(1)免疫球蛋白的轻链可变结构域，其能够结合三个表位中的第二个(VLII)；
(2)免疫球蛋白的重链可变结构域，其能够结合三个表位中的第一个(VHI)；和
(3)互补的异源二聚体-促进结构域；
(C)第三多肽链，其在N-末端至C-末端方向包括：
(1)免疫球蛋白的重链可变结构域，其能够结合三个表位中的第三个(VHIII)；和
(2)IgG的CH1结构域、铰链结构域和CH2-CH3结构域；
和
(D)第四多肽链，其在N-末端至C-末端方向包括：
(1)免疫球蛋白的轻链可变结构域，其能够结合三个表位中的第三个(VLIII)；和
(2)轻链恒定结构域(CL)；
其中：
(i)VLI和VHI结构域缔合形成能够结合第一表位的结构域；
(ii)VLII和VHII结构域缔合形成能够结合第二表位的结构域；
(iii)VLIII和VHIII结构域缔合形成能够结合第三个表位的结构域；
(iv)第一多肽链的CH2-CH3结构域和第三多肽链的CH2-CH3结构域缔合形成Fc结构域；
(v)第一和第二多肽链彼此共价结合；
(vi)第一和第三多肽链彼此共价结合；和
(vii)第三和第四多肽链彼此共价结合。
本发明另外涉及这样的三特异性结合分子的实施方式，其中：
(A)异源二聚体-促进结构域是E-螺旋和互补的异源二聚体-促进结构域是K-螺旋；或
(B)异源二聚体-促进结构域是K-螺旋和互补的异源二聚体-促进结构域是E-螺旋。
本发明另外涉及这样的三特异性结合分子的实施方式，其中：
(A)第一和第三多肽链的CH2-CH3结构域每个具有序列SEQ ID NO:1，使得由它们缔合形成的Fc结构域展示正常的FcγR介导的效应子功能；或
(B)第一和第三多肽链的CH2-CH3结构域，相对于序列SEQ ID NO：1，包括至少一个氨基酸取代，使得由它们缔合形成的Fc结构域展示改变的FcγR介导的效应子功能。
本发明另外涉及这样的三特异性结合分子的实施方式，其中所述至少一个氨基酸取代包括选自下述的至少一个氨基酸取代：L235V、F243L、R292P、Y300L、V305I和P396L，其中编号是如在Kabat中的EU索引的编号。
本发明另外涉及这样的三特异性结合分子的实施方式，其中所述至少一个氨基酸取代包括：
(A)选自下述的至少一个取代：F243L、R292P、Y300L、V305I和P396L；
(B)选自下述的至少两个取代：
(1)F243L和P396L；
(2)F243L和R292P；和
(3)R292P和V305I；
(C)选自下述的至少三个取代：
(1)F243L、R292P和Y300L；
(2)F243L、R292P和V305I；
(3)F243L、R292P和P396L；和
(4)R292P、V305I和P396L；
(D)选自下述的至少四个取代：
(1)F243L、R292P、Y300L和P396L；和
(2)F243L、R292P、V305I和P396L；
或
(E)选自下述的至少五个取代：
(1)F243L、R292P、Y300L、V305I和P396L；和
(2)L235V、F243L、R292P、Y300L和P396L。
本发明另外涉及这样的三特异性结合分子的实施方式，其中第一和第三多肽链的CH2-CH3结构域彼此不同并且具有选自下述的氨基酸序列：SEQ ID NO：52和SEQ ID NO：53。
本发明另外涉及这样的三特异性结合分子的实施方式，其中：
(A)表位I、表位II和表位III分别是第一癌症抗原的表位、第二癌症抗原的表位和效应细胞抗原的表位；
(B)表位I、表位II和表位III分别是第一癌症抗原的表位、效应细胞抗原的表位和第二癌症抗原的表位；
(C)表位I、表位II和表位III分别是第二癌症抗原的表位、第一癌症抗原的表位和效应细胞抗原的表位；
(D)表位I、表位II和表位III分别是第二癌症抗原的表位、效应细胞抗原的表位和第一癌症抗原的表位；
(E)表位I、表位II和表位III分别是效应细胞抗原的表位、第一癌症抗原的表位和第二癌症抗原的表位；
和
(F)表位I、表位II和表位III分别是效应细胞抗原的表位、第二癌症抗原的表位和第一癌症抗原的表位。
本发明另外涉及这样的三特异性结合分子的实施方式，其中：
(A)效应细胞抗原的表位是抗体Lo-CD2a识别的CD2表位；
(B)效应细胞抗原的表位是抗体OKT3、M291、YTH12.5、抗CD3 mAb 1或抗CD3 mAb 2识别的CD3表位；
(C)效应细胞抗原的表位是抗体3G8或A9识别的CD16表位；
(D)效应细胞抗原的表位是抗体MD1342、MEDI-551、兰妥莫单抗(blinatumomab)或HD37识别的CD19表位；
(E)效应细胞抗原的表位是抗体利妥昔单抗(rituximab)、替伊莫单抗(ibritumomab)、奥法木单抗(ofatumumab)和托西莫单(tositumomab)抗识别的CD20表位；
(F)效应细胞抗原的表位是抗体依帕珠单抗(epratuzumab)识别的CD22表位；
(G)效应细胞抗原的表位是抗体CD32B mAb 1识别的CD32B表位；
(H)效应细胞抗原的表位是抗体CD64 mAb 1识别的CD64表位；
(I)效应细胞抗原的表位是抗体CD79mAb 1识别的BCR/CD79表位；
(J)效应细胞抗原的表位是抗体BMA 031识别的TCR表位；
或
(K)效应细胞抗原的表位是抗体KYK-2.0识别的NKG2D受体表位。
本发明另外涉及药学组合物，其包括任何上述三特异性结合分子和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
本发明另外涉及这样的药学组合物或任何这样的三特异性结合分子的实施方式，其中三特异性结合分子用于治疗癌症。
本发明另外涉及这样的药学组合物或这样的三特异性结合分子的实施方式，其中癌症特征在于存在选自下述细胞的癌症细胞：肾上腺肿瘤、AIDS相关的癌症、软组织腺泡状肉瘤、星形细胞瘤、膀胱癌、骨癌、脑癌和脊髓癌、转移性脑瘤、乳腺癌、颈动脉体瘤、宫颈癌、软骨肉瘤、脊索瘤、嫌色细胞肾细胞癌、透明细胞癌、结肠癌、结肠直肠癌、皮肤良性纤维组织细胞瘤、成纤维细胞性小圆细胞瘤、室管膜瘤、尤文氏肿瘤、骨外黏液样软骨肉瘤、不完全性骨纤维生成、骨纤维发育不良、胆囊或胆管癌、胃癌、妊娠滋养层疾病、生殖细胞瘤、头颈癌、肝细胞癌、胰岛细胞肿瘤、卡波西氏肉瘤、肾癌、白血病、脂肪瘤/良性脂肪瘤、脂肪肉瘤/恶性的脂肪瘤、肝癌、淋巴瘤、肺癌、成神经管细胞瘤、黑素瘤、脑膜瘤、多发性内分泌瘤形成、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、成神经细胞瘤、神经内分泌肿瘤、卵巢癌、胰腺癌、乳头状甲状腺癌、甲状旁腺肿瘤、儿科癌症(pediatric cancer)、末梢神经鞘瘤、嗜铬细胞瘤(phaeochromocytoma)、垂体肿瘤、前列腺癌、后眼色素层黑素瘤、罕见血液疾病、肾转移性癌、杆状(rhabdoid)肿瘤、横纹肌肉瘤(rhabdomysarcoma)、肉瘤、皮肤癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、胃癌、滑膜肉瘤、睾丸癌、胸腺癌、胸腺瘤、甲状腺转移性癌症和子宫癌。
本发明另外涉及这样的药学组合物或这样的三特异性结合分子的实施方式，其中癌症是结肠直肠癌、肝细胞癌、神经胶质瘤、肾癌、乳腺癌、多发性骨髓瘤、膀胱癌、成神经细胞瘤、肉瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、胰腺癌或直肠癌症。
本发明另外涉及这样的药学组合物或这样的三特异性结合分子的实施方式，癌症是急性髓细胞样白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性B成淋巴细胞白血病(B-ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、毛细胞白血病(HCL)、母细胞性(blastic)浆细胞样树突细胞赘生物(BPDCN)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、包括套细胞白血病(MCL)和小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、霍奇金淋巴瘤、系统性肥大细胞增生症，或伯基特淋巴瘤。
附图说明：
图1A-1B显示DARTTM双抗体的结构域的图示。图1A显示基本的DARTTM双抗体的结构域的图示。图1B提供了由两条多肽链组成的共价结合的双抗体的示意图，每条多肽链各具有识别相同表位的异源二聚体-促进结构域VL和VH结构域——使用相同的阴影显示。
图2A-2B提供了由两条多肽链组成的共价结合的双抗体的示意图，每条多肽链具有CH2和CH3结构域(图2A)或其中仅仅一条多肽链具有CH2和CH3结构域(图2B)，以便缔合的链形成Fc结构域，其包括天然存在的Fc结构域的全部或一部分。使用相同的阴影显示识别相同表位的VL和VH结构域。
图3A-3C提供了显示由两对多肽链组成的四价双抗体的示意图。所述多肽链对是不同的，因此产生双特异性分子，其对于两个表位中的每一个而言是二价的，其中一个表位是DR5的表位和另一个表位是效应细胞的表面上存在的分子的表位。每个对的一个多肽具有CH2和CH3结构域，以便缔合的链形成Fc结构域，其包括天然存在的Fc结构域的全部或一部分。使用相同的阴影显示识别相同表位的VL和VH结构域。仅仅一对表位(用相同的阴影显示)能够结合DR5。图3A显示Ig双抗体。图3B显示Ig双抗体，其包含E-螺旋和K-螺旋异源二聚体-促进结构域。图3C显示Fc-DARTTM双抗体，其包含抗体CH1和CL结构域。符号“VL1”和“VH1”分别表示结合“第一”表位的轻链可变结构域和重链可变结构域。类似地，符号“VL2”和“VH2”分别表示结合“第二”表位的轻链可变结构域和重链可变结构域。
图4A-4G提供了本发明优选的三特异性结合分子的结构域的图示。图示意性阐释了本发明优选的三特异性结合分子的实施方式的结构域的顺序和取向。图4A、4B和4G阐释了其中三特异性结合分子由四条多肽链组成的实施方式。图4C、4D、4E和4F阐释了其中结合分子由三条多肽链组成的实施方式。分子可具有铰链和/或CL结构域(图4A、4B、4C、4E)或可包含可选的接头肽(图4D、4F、4G)。
图5A-5E提供了本发明三特异性结合分子的可选实施方式的结构域的图示，其中效应细胞-结合结构域由效应细胞受体型结合结构域而不是双抗体型结合结构域或Fab型结合结构域组成。图5A和5B阐释了其中三特异性结合分子由四条多肽链组成的实施方式。图5C和图5E阐释了其中结合分子由三条多肽链组成的实施方式。图5D图解了其中结合分子由五条多肽链组成的实施方式。分子可具有铰链和/或CL结构域或可包含可选的接头肽。
图6显示抗人DR5单克隆抗体DR5 mAb 1和DR5 mAb2结合人DR5和结合食蟹猴的DR5的能力。
图7，图A-H显示DR5 mAb 1(图A和E)、DR5 mAb 2(图B和F)、DR5 mAb 3(图C和G)和DR5 mAb 4(图D和H)对于人DR 5(图A-D)和食蟹猴DR5(图E-H)的结合的动力学。
图8显示DR5 mAb 1和DR5 mAb 2出人意料的优势。通过比较具有DR5 mAb 1、DR5mAb 2、DR5 mAb 3或DR5 mAb 4的VL和VH结构域的DR5x CD3双抗体介导A549腺癌人肺泡基底上皮肿瘤细胞的细胞毒性的能力评估优势。
图9A-9C显示当本发明的三特异性结合分子的两个癌症抗原结合结构域都能够结合靶细胞时获得的在靶细胞结合方面的协同增强。图9A显示当三特异性分子：EphA2 mAb1x CD3 mAb 2x DR5 mAb 1、EphA2 mAb 1x CD3 mAb 2x gpA33mAb 1和gpA33 mAb 1x CD3mAb 2x DR5 mAb 1在存在表达EphA2的CHO细胞的情况下被孵育时达到的结合。图9B显示当这样的三特异性分子在存在表达DR5的CHO细胞的情况下被孵育时获得的结合。图9C显示当这样的三特异性分子在存在表达EphA2和DR5但是不表达gpA33的DU145人前列腺细胞的情况下被孵育时获得的结合。
图10A-10C显示当本发明的三特异性结合分子的两个癌症抗原结合结构域都能够结合靶细胞时获得的在靶细胞细胞毒性方面的协同增强。图10A显示通过在存在表达EphA2的CHO细胞和细胞毒性淋巴细胞的情况下孵育三特异性分子：EphA2 mAb 1x CD3 mAb 2xDR5 mAb 1、EphA2 mAb 1x CD3m Ab 2x gpA33 mAb 1和gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2x DR5mAb 1获得的细胞毒性百分数。图10B显示当这样的三特异性分子在存在表达DR5的CHO细胞和细胞毒性淋巴细胞的情况下被孵育时获得的细胞毒性百分数。图10C显示当这样的三特异性分子在存在DU145人前列腺细胞和细胞毒性淋巴细胞的情况下被孵育时获得的细胞毒性。DU145细胞表达EphA2和DR5，不表达gpA33。通过细胞裂解时荧光素酶的释放造成的发光增加来测量细胞毒性。
发明详述：
本发明涉及三特异性结合分子，其是具有三个结合结构域的多链多肽分子，因此能够介导与三个表位的协同结合。三特异性结合分子优选地特征在于具备允许其免疫特异性结合以下表位的结合结构域：(1)第一癌症抗原的表位、(2)第二癌症抗原的表位和(3)在免疫系统效应细胞的表面上表达的分子的表位，因此能够将免疫系统效应细胞定位至表达癌症抗原的细胞，以便从而利于杀伤这样的癌症细胞。
本发明的三特异性结合分子可包括上面讨论的抗体例如，DR5 mAb 1或DR5 mAb 2的人源化的、嵌合的或犬科化(caninized)的衍生物的表位结合结构域。
一般技术和一般定义
除非另外指出，否则本发明的实践将采用分子生物学(包括重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学的常规的技术，其在本领域的技术范围内。在下述文献中充分阐释了这样的技术，比如，MOLECULAR CLONING:A LABORATORY MANUAL,第三版(Sambrook等Eds.,2001)Cold Spring Harbor Press,Cold Spring Harbor,NY；OLIGONUCLEOTIDESYNTHESIS:METHODS AND APPLICATIONS(Methods in Molecular Biology),Herdewijn,P.,Ed.,Humana Press,Totowa,NJ；OLIGONUCLEOTIDE SYNTHESIS(Gait,M.J.,Ed.,1984)；METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY,Humana Press,Totowa,NJ；CELL BIOLOGY:A LABORATORYNOTEBOOK(Cellis,J.E.,Ed.,1998)Academic Press,New York,NY；ANIMAL CELL CULTURE(Freshney,R.I.,Ed.,1987)；INTRODUCTION TO CELL AND TISSUE CULTURE(Mather,J.P.and Roberts,P.E.,Eds.,1998)Plenum Press,New York,NY；CELL AND TISSUECULTURE:LABORATORY PROCEDURES(Doyle,A.等,Eds.,1993-8)John Wiley and Sons,Hoboken,NJ；METHODS IN ENZYMOLOGY(Academic Press,Inc.)New York,NY；WEIR’SHANDBOOK OF EXPERIMENTAL IMMUNOLOGY(Herzenberg,L.A.等Eds.1997)Wiley-BlackwellPublishers,New York,NY；GENE TRANSFER VECTORS FOR MAMMALIAN CELLS(Miller,J.M.等Eds.,1987)Cold Spring Harbor Press,Cold Spring Harbor,NY；CURRENT PROTOCOLSIN MOLECULAR BIOLOGY(Ausubel,F.M.等,Eds.,1987)Greene Pub.Associates,New York,NY；PCR:THE POLYMERASE CHAIN REACTION,(Mullis,K.等,Eds.,1994)BostonMA；CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY(Coligan,J.E.等,eds.,1991)John Wiley andSons,Hoboken,NJ；SHORT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY(John Wiley and Sons,1999)Hoboken,NJ；IMMUNOBIOLOGY 7(Janeway,C.A.等2007)Garland Science,London,UK；Antibodies(P.Finch,1997)Stride Publications,Devoran,UK；ANTIBODIES:A PRACTICALAPPROACH(D.Catty.,ed.,1989)Oxford University Press,USA,New York NY)；MONOCLONAL ANTIBODIES:A PRACTICAL APPROACH(Shepherd,P.等Eds.,2000)OxfordUniversity Press,USA,New York NY；USING ANTIBODIES:A LABORATORY MANUAL(Harlow,E.等Eds.,1998)Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY；THEANTIBODIES(Zanetti,M.等Eds.1995)Harwood Academic Publishers,London,UK)；和DEVITA,HELLMAN，AND ROSENBERG'S CANCER:PRINCIPLES&PRACTICE OF ONCOLOGY,EIGHTHEDITION,DeVita,V.等Eds.2008,Lippincott Williams&Wilkins,Philadelphia,PA。
II.本发明优选的三特异性结合分子
A.结合能力
本发明优选的三特异性结合分子能够协同和同时结合三个不同的表位。本发明优选的三特异性结合分子包括：
(I)“结合结构域I”，其能够免疫特异性结合第一抗原上存在的“表位I”，和“结合结构域II”，其能够免疫特异性结合第二抗原上存在的“表位II”，其中所述结合结构域I和所述结合结构域II都是“双抗体型结合结构域”；
(II)“结合结构域III”，其能够免疫特异性结合第三抗原上存在的“表位III”；和
(III)Fc结构域，其通过两个CH2-CH3结构域彼此复合而形成；
其中：
(A)表位I、表位II或表位III之一是第一“癌症抗原”癌症抗原的表位；
(B)表位I、表位II或表位III中的第二个是第二癌症抗原的表位；和
(C)表位I、表位II或表位III中的第三个是免疫系统效应细胞表面上表达的分子(“效应细胞抗原”)的表位；
并且，其中结合分子的结合结构域I、II和III介导免疫系统效应细胞和表达第一和第二癌症抗原的细胞的协同结合，从而共定位这样的细胞。
双抗体表位结合结构域也可针对B细胞的表面决定簇，比如CD19、CD20、CD22、CD30、CD37、CD40和CD74(Moore,P.A.等(2011)“Application Of Dual AffinityRetargeting Molecules To Achieve Optimal Redirected T-Cell Killing Of B-CellLymphoma,”Blood 117(17):4542-4551；Cheson,B.D.等(2008)“Monoclonal AntibodyTherapy For B-Cell Non-Hodgkin’s Lymphoma,”N.Engl.J.Med.359(6):613-626；Castillo,J.等(2008)“Newer monoclonal antibodies for hematologicalmalignancies,”Exp.Hematol.36(7):755-768。在许多研究中，也发现结合效应细胞决定簇例如Fcγ受体(FcγR)的双抗体激活效应细胞(Holliger等(1996)“Specific Killing OfLymphoma Cells By Cytotoxic T-Cells Mediated By A Bi-specific Diabody,”Protein Eng.9:299-305；Holliger等(1999)“Carcinoembryonic Antigen(CEA)-SpecificT-Cell Activation In Colon Carcinoma Induced By Anti-CD3x Anti-CEA Bi-specific Diabodies And B7x Anti-CEA Bi-specific Fusion Proteins,”CancerRes.59:2909-2916；WO 2006/113665；WO 2008/157379；WO 2010/080538；WO 2012/018687；WO 2012/162068)。通常，通过使结合抗原的抗体经Fc-FcγR相互作用结合效应细胞来触发效应细胞激活；因此，在这点上，双抗体分子可展示Ig样功能，这不依赖于它们是否包括Fc结构域(例如，如在本领域已知的或本文列举的任何效应子功能试验(例如，ADCC试验)中所分析的)。通过交联肿瘤和效应细胞，双抗体不仅仅使效应细胞接近肿瘤细胞，而且使得有效的肿瘤杀伤(见例如，Cao等(2003)“Bi-specific Antibody Conjugates InTherapeutics,”Adv.Drug.Deliv.Rev.55:171-197)。
尽管这样的三特异性结合分子是尤其优选的，本发明另外具体考虑这样的三特异性结合分子：其包括足以产生具有三种结合特异性的分子的结合结构域的任何组合，所述三种结合特异性中的两种是针对癌症抗原的结合特异性和所述三种结合特异性中的一种是针对效应细胞抗原的结合特异性。因此，例如，本发明考虑：三特异性结合分子，其包括三个Fab型结合结构域；三特异性结合分子，其包括一个二价、双特异性抗体结构域(通过例如复合两个不同轻链和两个不同重链形成)和一个Fab型结合结构域；三特异性结合分子，其包括两个二价、双特异性抗体结构域(通过例如复合四个不同的轻链和两个不同的重链形成)，但是使其中一个抗体结构域无活性等。
术语“多肽”、“多肽链”和“肽”在本文中可互换使用，指任何长度——但是尤其是长度大于3、5、10、15、20或25个氨基酸残基——的氨基酸的聚合物，其中两个，更优选地，所有氨基酸残基经酰胺(肽)键(-NH-C(O)-)连接。但是，聚合物可以是线性的或分支的，其可包括修饰的氨基酸，并且其可被非氨基酸中断。该术语也包括经天然修饰的或通过干预修饰的氨基酸聚合物；例如，二硫键形成、糖基化、脂质化(lipidation)、乙酰化、磷酸化或任何其他操作或修饰，比如结合标签组分。同样包括在定义中的是，例如，多肽，其包含一个或多个氨基酸的类似物(包括，例如，非天然氨基酸等)以及本领域已知的其他修饰。本发明的多肽可作为单链或复合的链存在。
“双抗体型结合结构域”是双抗体，尤其是双抗体的表位结合结构域。术语“双抗体”和“双抗体”已经在上面讨论了，其指这样的分子：其包括优选地通过共价相互作用彼此复合的至少两条多肽链，以形成至少两个表位结合位点，其可识别相同的或不同的表位。双抗体或双抗体的多肽链中的两条均包括免疫球蛋白轻链可变区和免疫球蛋白重链可变区，但是这些区域不相互作用形成表位结合位点(即，它们不是相互“互补的”)。相反，双抗体或双抗体链中的一个(例如，第一)的免疫球蛋白重链可变区与不同的(例如，第二)双抗体或双抗体多肽链的免疫球蛋白轻链可变区相互作用，形成表位结合位点。类似地，双抗体或双抗体多肽链中的一个(例如，第一)的免疫球蛋白轻链可变区与不同的(例如，第二)双抗体或双抗体多肽链的免疫球蛋白重链可变区相互作用，形成表位结合位点。双抗体分子公开在下述文献中：美国专利公开号2013-0295121、2010-0174053和2009-0060910；欧洲专利公开号EP 2714079、EP2601216、EP 2376109、EP 2158221；和PCT公开号WO 2012/162068、WO 2012/018687、WO2010/080538、WO 2006/113665、WO 2008/157379；和Moore,P.A.等(2011)“Application OfDual Affinity Retargeting Molecules To Achieve Optimal Redirected T-CellKilling Of B-Cell Lymphoma,”Blood 117(17):4542-4551；Veri,M.C.等(2010)“Therapeutic Control Of B Cell Activation Via Recruitment Of Fcgamma ReceptorIIb(CD32B)Inhibitory Function With A Novel Bispecific Antibody Scaffold,”Arthritis Rheum.62(7):1933-1943；和Johnson,S.等(2010)“Effector CellRecruitment With Novel Fv-Based Dual-Affinity Re-Targeting Protein Leads ToPotent Tumor Cytolysis And in vivo B-Cell Depletion,”J.Mol.Biol.399(3):436-449。
结合结构域III优选地是“非双抗体型”结合结构域，其旨在表示结合结构域III不具有双抗体型结合结构域的结构。优选地，结合结构域III是非双抗体型结合结构域，其是Fab型结合结构域或效应细胞受体型结合结构域。因此，在图4A-4G示例的一个实施方式中，结合结构域III是Fab型结合结构域。图5A-5E示例了其中结合结构域III是效应细胞受体型结合结构域的实施方式。如本文所使用，术语“Fab型结合结构域”指表位结合结构域，其通过免疫球蛋白轻链的VL结构域和免疫球蛋白重链互补的VH结构域的相互作用形成。Fab型结合结构域与双抗体型结合结构域的不同在于形成Fab型结合结构域的两条多肽链仅仅包括单个表位结合结构域，而形成双抗体型结合结构域的两条多肽链包括至少两个表位结合结构域。因此，如本文所使用，Fab型结合结构域与双抗体型结合结构域不同。当结合结构域是Fab型结合结构域或双抗体型结合结构域时，其由VL结构域和VH结构域组成，其可位于相同或不同的多肽链上。这样的VL和VH结构域的选择是协同的，以便结构域形成表位结合结构域。如本文所使用，术语“效应细胞受体型结合结构域”指表位结合结构域，其通过T细胞受体α链的可变结构域和T细胞受体β链的可变结构域相互作用而形成。这样的受体识别在MHC背景下展示的肽，因此能够识别细胞内表位。
因此，本发明的三特异性结合分子与四价结合分子比如由二价抗体二聚化产生的那些四价结合分子不同，并且优选地具备三个而不是四个结合结构域。如下面所讨论，本发明的三特异性分子可具有另外的结合结构域(比如白蛋白-结合结构域、FcγR-结合结构域等)。这样另外的结合结构域不旨在被视为或考虑是本发明的三特异性结合分子的三个结合结构域之一。
如本文所使用，术语“缔合(association)”或“缔合(assoiating)”，就多肽(例如，一个双抗体多肽与另一双抗体多肽缔合、免疫球蛋白轻链与免疫球蛋白重链缔合、一个CH2-CH3结构域与另一CH2-CH3结构域缔合等)而言，旨在表示多肽的非共价结合。术语”复合(complexes)”或“复合(complexing)”旨在表示多肽的共价结合。
如本文所使用，如果至少其两个结合结构域——优选地，其所有的结合结构域——能够同时结合它们各自识别的表位或结合配体，则认为本发明的结合分子的结合结构域介导“协同结合(coordinated binding)”。这样的结合可以是同时的。但是，本发明的一个方面涉及修饰这样的结合结构域结合它们识别的表位的”结合速率”和/或“解离速率”。如本文所使用，结合的“结合速率(on rate)”是对这样的结合结构域识别和启动与它们识别表位的结合的亲和性的度量。相反，结合的“解离速率”是对结合结构域：表位复合物稳定性程度的度量。结合的”结合速率”和/或“解离速率”可通过改变结合结构域的CDR的氨基酸序列而被改变。如下面所讨论，不依赖于任何CDR修饰，本发明分子的协同结合的程度可通过改变它们的结合结构域的构型来调节，从而具体的结合结构域(即，VLx/VHx结构域)作为结合结构域III而存在或作为相对于结合结构域III的内部或外部双抗体型结合结构域(下面详细讨论)而存在。
本发明的结合分子的结合结构域的结合速率和解离速率可容易通过本领域熟知的方法测量，例如通过下述方法测量：分析(Jason-Moller,L.等(2006)“OverviewOf Biacore Systems And Their Applications,”Curr.Protoc.Protein Sci.第19章:19.13单元；Swanson,S.J.(2005)“Characterization Of An Immune Response,”Dev.Biol.(Basel).122:95-101；Buijs,J.等(2005)“SPR-MS In FunctionalProteomics,”Brief Funct.Genomic Proteomic.4(1):39-47；Karlsson,R.等(2004)“SPRFor Molecular Interaction Analysis:A Review Of Emerging Application Areas,”J.Mol.Recognit.17(3):151-161；Van Regenmortel,M.H.(2003)“Improving The QualityOf BIACORE-Based Affinity Measurements,”Dev.Biol.(Basel)112:141-151；Malmqvist,M.(1999)“BIACORE:An Affinity Biosensor System For CharacterizationOf Biomolecular Interactions,”Biochem.Soc.Trans.27(2):335-340；Malmqvist,M.等(1997)“Biomolecular Interaction Analysis:Affinity Biosensor Technologies ForFunctional Analysis Of Proteins,”Curr.Opin.Chem.Biol.1(3):378-383；Fivash,M.等(1998)“Biacore For Macromolecular Interaction,”Curr.Opin.Biotechnol.9(1):97-101；Malmborg,A.C.等(1995)“Biacore As A Tool In Antibody Engineering,”J.Immunol.Methods.183(1):7-13)。本发明的结合分子的结合结构域的结合速率和解离速率可容易通过如下方式改变：编码这样的结合结构域的核酸分子的随机或定向诱变，随后针对它们编码展示这样的改变结合动力学的突变蛋白质的能力，常规筛选收获的核酸分子。
本发明的三特异性结合分子的结合结构域以“免疫特异性”方式结合表位。如本文所使用，如果其相对于可选的表位，与该表位更频繁、更快速地以更大的持续时间和/或以更大的亲和性反应或缔合，则认为抗体、双抗体或其他表位结合分子“免疫特异性”结合另一分子的区域(即，表位)。例如，免疫特异性结合病毒表位的抗体是这样的抗体：与其免疫特异性结合其他病毒表位或非病毒表位相比，所述抗体以更大的亲和性、抗体亲抗原性、更容易和/或以更持久的时间结合该病毒表位。通过阅读该定义，应理解，例如，免疫特异性结合第一靶的抗体(或部分或表位)可能或可能不特异性或优选结合第二靶。因此，“特异性结合”不一定要求(尽管其可包括)排他性结合。一般而言，但是不一定，提及结合则意味着”特异性”结合。如果，这样的结合展示受体结合它们各自配体的特异性，则认为两个分子能够彼此以“生理特异性”方式结合。
可通过产生基于抗体的多特异性分子来增强抗体的功能，所述多特异性分子可同时结合两个独立且不同的抗原(或相同抗原的不同表位)，和/或通过产生对于相同的表位和/或抗原具有更高效价(即，大于两个结合位点)的基于抗体的分子来增强抗体的功能。
因此，在它们最简单的实施方式中，本发明优选的结合分子是至少三特异性的。显著地，这样的分子具有能够结合抗原的至少三个“位点”：“外部”双抗体型结合结构域，其距离结合结构域III最远；“内部”双抗体型结合结构域，其距离结合结构域III最近；和结合结构域III本身。这样的结构域的位置分别命名为位点A、位点B和位点C(图4A-4G；图5A-5E)。
本发明的三特异性结合分子通过包括三个结合结构域，能够协同结合三个不同的表位。这样的分子的结合结构域中的两个能够结合”癌症抗原”的表位，使得分子能够结合两个不同的癌症抗原。这样的分子的第三结合结构域能够结合在免疫系统效应细胞的表面上表达的分子(即，“效应细胞抗原”)的表位。因此，本发明的三特异性结合分子能够介导与表达两个癌症抗原的癌症细胞和与表达效应细胞抗原的免疫系统效应细胞的协同和同时结合。本发明的三特异性结合分子识别的表位可以是连续的或不连续的(例如，构象的)。
由本发明的三特异性结合分子的癌症抗原结合结构域结合的第一和第二癌症抗原可选自特征性存在于癌症细胞表面上的任何分子。本发明的一个方面涉及靶向“低表达癌症抗原”(即，可在癌症细胞上以过低水平表达而不能使单特异性结合分子提供有效的癌症疗法的癌症抗原)的能力。与这样的单特异性结合分子相反，本发明的三特异性结合分子通过靶向两个癌症抗原而不是一个癌症抗原展示协同和协助增强的结合亲和力，其可弥补结合的低亲和性，因此可有利地用于靶向特征甚至在于低表达癌症抗原的癌症。本发明的第二方面涉及靶向“低特异性癌症抗原”(即，除了在癌症细胞上表达之外也可在正常细胞上表达的癌症抗原)的能力。本发明的三特异性结合分子，通过提供为两个癌症抗原协同和协助增强的结合亲和力，展示甚至对低特异性癌症抗原更高的结合亲和力，因此提供了治疗特征在于这样的癌症抗原的癌症的手段。因此，本发明的三特异性结合分子可用于提供抗癌症疗法，即使在其中靶癌症抗原中的一个或两个本身不能有效提供这样的疗法的情况下。
例如，CD32B(FcγRIIB受体)在造血细胞上广泛表达，所述造血细胞包括单核细胞、巨噬细胞、B细胞、NK细胞、嗜中性粒细胞、肥大细胞和血小板。当结合IgG Fc结构域时，CD32B抑制宿主免疫系统，从而抑制进行的免疫应答。尽管这样的抑制在帮助宿主从炎症反应恢复方面是期望的，但其可加剧遭受癌症或感染疾病的受试者的免疫缺陷。结合CD32B以便阻断IgG Fc分子结合的抗体用于防止这样的抑制，因此可用作癌症和感染疾病治疗中的辅助分子(Veri,M.C.等(2007)“Monoclonal Antibodies Capable Of DiscriminatingThe Human Inhibitory Fcgamma-Receptor IIB(CD32B)From The Activating Fcgamma-Receptor IIA(CD32A):Biochemical,Biological And Functional Characterization,”Immunology 121(3):392-404)。不幸地，CD32B也在肝窦状内皮细胞(“LSE细胞”)上表达(Shahani,T.等(2014)“Human Liver Sinusoidal Endothelial Cells But NotHepatocytes Contain Factor VIII,”J.Thromb.Haemost.12(1):36-42；Géraud,C.等(2013)“Endothelial Transdifferentiation In Hepatocellular Carcinoma:Loss OfStabilin-2Expression In Peri-Tumourous Liver Correlates With IncreasedSurvival,”Liver Int.33(9):1428-1440；Takabe,Y.等(2012)“ImmunomagneticExclusion Of E-Cadherin-Positive Hepatoblasts In Fetal Mouse Liver CellCultures Impairs Morphogenesis And Gene Expression Of Sinusoidal EndothelialCells,”J.Anat.221(3):229-239)。因此，结合CD32B的抗体攻击LSE细胞。但是，通过形成结合CD32B和结合抗原(即，第一和第二癌症抗原)的本发明的三特异性结合分子，其中所述抗原不在LSE细胞上表达，或通过这样的细胞以低水平表达(即，低表达癌症抗原(一个或多个))，或以低特异性在癌症细胞和这样的LSE细胞上表达(即，低特异性癌症抗原(一个或多个))，本发明提供了可用于阻抑CD32B介导的免疫系统抑制的组合物和方法，所述抗原。
B.示例性癌症抗原结合结构域
合适的癌症抗原的例子包括：如在结肠癌、胃癌黏蛋白中发现的19.9；；4.2；A33(结直肠癌抗原；Almqvist，Y.2006,Nucl Med Biol.Nov；33(8):991-998)；ADAM-9(美国专利公开号2006/0172350；PCT公开号WO 06/084075)；胃癌中发现的AH6；ALCAM(PCT公开号WO03/093443)；APO-1(恶性人淋巴细胞抗原)(Trauth等(1989)“Monoclonal Antibody-Mediated Tumor Regression By Induction Of Apoptosis,”Science 245:301-304)；B1(Egloff,A.M.等2006,Cancer Res.66(1):6-9)；BAGE(Bodey,B.2002Expert Opin BiolTher.2(6):577-84)；B7-H3；β-联蛋白(Prange W.等2003J Pathol.201(2):250-9)；如在结肠腺癌中发现的血型ALeb/Ley；如在结肠腺癌中发现的伯基特淋巴瘤抗原-38.13、C14；CA125(卵巢癌抗原)(Bast,R.C.Jr.等2005Int J Gynecol Cancer15Suppl 3:274-81；Yu等(1991)“Coexpression Of Different Antigenic Markers On Moieties That Bear CA125Determinants,”Cancer Res.51(2):468-475)；羧肽酶M(美国专利公开号2006/0166291)；CD5(Calin,G.A.等2006Semin Oncol.33(2):167-73；CD19(Ghetie等(1994)“Anti-CD19Inhibits The Growth Of Human B-Cell Tumor Lines In Vitro And OfDaudi Cells In SCID Mice By Inducing Cell Cycle Arrest,”Blood 83:1329-1336；Troussard,X.等1998Hematol Cell Ther.40(4):139-48)；CD20(Thomas,D.A.等2006Hematol Oncol Clin North Am.20(5):1125-36)；CD22(Kreitman,R.J.2006AAPSJ.18；8(3):E532-51)；CD23(Rosati,S.等2005Curr Top Microbiol Immunol.5；294:91-107)；CD25(Troussard,X.等1998Hematol Cell Ther.40(4):139-48)；CD27(Bataille,R.2006Haematologica 91(9):1234-40)；CD28(Bataille,R.2006Haematologica 91(9):1234-40)；CD33(Sgouros等(1993)“Modeling And Dosimetry Of Monoclonal AntibodyM195(Anti-CD33)In Acute Myelogenous Leukemia,”J.Nucl.Med.34:422-430)；CD36(Ge,Y.2005Lab Hematol.11(1):31-7)；CD40/CD154(Messmer,D.等2005Ann N Y AcadSci.1062:51-60)；CD45(Jurcic,J.G.2005Curr Oncol Rep.7(5):339-46)；CD56(Bataille,R.2006Haematologica 91(9):1234-40)；CD46(美国专利号7,148,038；PCT公开号WO 03/032814)；CD79a/CD79b(Troussard,X.等1998Hematol Cell Ther.40(4):139-48；Chu,P.G.等2001Appl Immunohistochem Mol Morphol.9(2):97-106)；CD103(Troussard,X.等1998Hematol Cell Ther.40(4):139-48)；CDK4(Lee,Y.M.等2006Cell Cycle 5(18):2110-4)；CEA(癌胚抗原)(Foon等(1995)“Immune Response To The CarcinoembryonicAntigen In Patients Treated With An Anti-Idiotype Antibody Vaccine,”J.Clin.Invest.96(1):334-42)；CEA(癌胚抗原；Mathelin,C.2006Gynecol ObstetFertil.34(7-8):638-46；Tellez-Avila,F.I.等2005Rev Invest Clin.57(6):814-9)；CO17-1A(Ragnhammar等(1993)“Effect Of Monoclonal Antibody 17-1A And GM-CSF InPatients With Advanced Colorectal Carcinoma-Long-Lasting，Complete RemissionsCan Be Induced,”Int.J.Cancer 53:751-758)；CO-43(血型Leb)；如在腺癌中发现的CO-514(血型Lea)；CTA-1；CTLA4(Peggs,K.S.等2006Curr Opin Immunol.18(2):206-13)；细胞角蛋白8(PCT公开号WO 03/024191)；D1.1；D156-22；DR5(Abdulghani,J.等(2010)“TRAILReceptor Signaling And Therapeutics,”Expert Opin.Ther.Targets 14(10):1091-1108；Andera,L.(2009)“Signaling Activated By The Death Receptors Of The TNFRFamily,”Biomed.Pap.Med.Fac.Univ.Palacky Olomouc Czech.Repub.153(3):173-180；Carlo-Stella,C.等(2007)“Targeting TRAIL Agonistic Receptors for CancerTherapy,”Clin,Cancer 13(8):2313-2317；Chaudhari,B.R.等(2006)“Following theTRAIL to Apoptosis,”Immunologic Res.35(3):249-262)；如在胰腺癌中发现的E1系列(血型B)；EGFR(表皮生长因子受体)(Adenis,A.等2003Bull Cancer.90Spec No:S228-32)；肝配蛋白受体(尤其是EphA2(美国专利号7,569,672；PCT公开号WO 06/084226)；Erb(ErbB1；ErbB3；ErbB4；Zhou,H.等2002Oncogene 21(57):8732-8740；Rimon,E.等2004Int JOncol.24(5):1325-1338)；GAGE(GAGE-1；GAGE-2；Akcakanat,A.等2006Int J Cancer.118(1):123-128)；GD2/GD3/GM2(Livingston,P.O.等2005Cancer Immunol Immunother.54(10):1018-1025)；如在肺腺癌中发现的F3；如在胚胎性癌细胞和胃腺癌中发现的FC10.2；G49、神经节苷酯GD2(Saleh等(1993)“Generation Of A Human Anti-Idiotypic AntibodyThat Mimics The GD2Antigen,”J.Immunol.,151,3390-3398)；神经节苷酯GD3(Shitara等(1993)“A Mouse/Human Chimeric Anti-(Ganglioside GD3)Antibody With EnhancedAntitumor Activities,”Cancer Immunol.Immunother.36:373-380)；神经节苷酯GM2(Livingston等(1994)“Improved Survival In Stage III Melanoma Patients With GM2Antibodies:A Randomized Trial Of Adjuvant Vaccination With GM2Ganglioside,”J.Clin.Oncol.12:1036-1044)；神经节苷酯GM3(Hoon等(1993)“Molecular Cloning Of AHuman Monoclonal Antibody Reactive To Ganglioside GM3Antigen On HumanCancers,”Cancer Res.53:5244-5250)；GD2；GD3；GICA 19-9(Herlyn等(1982)“MonoclonalAntibody Detection Of A Circulating Tumor-Associated Antigen.I.Presence OfAntigen In Sera Of Patients With Colorectal,Gastric,And PancreaticCarcinoma,”J.Clin.Immunol.2:135-140)；GM2；gp100(Lotem,M.等2006J Immunother.29(6):616-27)；Gp37(人白血病T细胞抗原)(Bhattacharya-Chatterjee等(1988)“IdiotypeVaccines Against Human T Cell Leukemia.II.Generation And Characterization OfA Monoclonal Idiotype Cascade(Ab1,Ab2,and Ab3),”J.Immunol.141:1398-1403)；gp75(黑素瘤抗原)(Vijayasardahl等(1990)“The Melanoma Antigen Gp75Is The HumanHomologue Of The Mouse B(Brown)Locus Gene Product,”J.Exp.Med.171(4):1375-1380)；gpA33；HER2抗原(p185HER2)(Kumar,Pal S等2006Semin Oncol.33(4):386-91)；人B-淋巴瘤抗原-CD20(Reff等(1994)“Depletion Of B Cells In Vivo By A Chimeric MouseHuman Monoclonal Antibody To CD20,”Blood 83:435-445)；人乳脂肪球抗原；人乳头瘤病毒-E6/人乳头瘤病毒-E7(DiMaio,D.等2006Adv Virus Res.66:125-59；HMW-MAA(高分子量黑素瘤抗原)(Natali等(1987)“Immunohistochemical Detection Of Antigen InHuman Primary And Metastatic Melanomas By The Monoclonal Antibody 140.240AndIts Possible Prognostic Significance,”Cancer 59:55-63；Mittelman等(1990)“Active Specific Immunotherapy In Patients With Melanoma.A Clinical TrialWith Mouse Antiidiotypic Monoclonal Antibodies Elicited With Syngeneic Anti-High-Molecular-Weight-Melanoma-Associated Antigen Monoclonal Antibodies,”J.Clin.Invest.86:2136-2144)；I抗原(分化抗原)(Feizi(1985)“Demonstration ByMonoclonal Antibodies That Carbohydrate Structures Of Glycoproteins AndGlycolipids Are Onco-Developmental Antigens,”Nature 314:53-57)比如胃腺癌中发现的I(Ma)；整联蛋白α-V-β-6(PCT公开号WO 03/087340)；JAM-3(PCT公开号WO 06/084078)；KID3(PCT公开号WO 05/028498)；KID31(PCT公开号WO 06/076584)；KS 1/4全癌抗原(Perez等(1989)“Isolation And Characterization Of A cDNA Encoding The Ks1/4Epithelial Carcinoma Marker,”J.Immunol.142:3662-3667；等(1991)“Bi-specific-Monoclonal-Antibody-Directed Lysis Of Ovarian Carcinoma Cells ByActivated Human T Lymphocytes,”Cancer Immunol.Immunother.33(4):210-216；Ragupathi,G.2005Cancer Treat Res.123:157-80)；L6和L20(人肺癌抗原)(等(1986)“Monoclonal Mouse Antibodies Raised Against Human Lung Carcinoma,”Cancer Res.46:3917-3923)；LEA；LUCA-2(美国专利公开号2006/0172349；PCT公开号WO06/083852)；M1:22:25:8；M18；M39；MAGE(MAGE-1；MAGE-3；(Bodey,B.2002Expert OpinBiol Ther.2(6):577-84)；MART(Kounalakis,N.等2005Curr Oncol Rep.7(5):377-82；MUC-1(Mathelin,C.2006Gynecol Obstet Fertil.34(7-8):638-46)；MUM-1(Castelli,C.等2000J Cell Physiol.182(3):323-31)；Myl；N-乙酰葡糖氨基转移酶(Dennis,J.W.1999Biochim Biophys Acta.6；1473(1):21-34)；新糖蛋白；腺癌中发现的NS-10；OFA-1；OFA-2；制瘤素M(制瘤素受体β)(美国专利号7,572,896；PCT公开号WO 06/084092)；p15(Gil,J.等2006Nat Rev Mol Cell Biol.7(9):667-77)；p97(黑素瘤相关的抗原)(Estin等(1989)“Transfected Mouse Melanoma Lines That Express Various Levels Of HumanMelanoma-Associated Antigen p97,”J.Natl.Cancer Instit.81(6):445-454)；PEM(多态上皮黏蛋白)(Hilkens等(1992)“Cell Membrane-Associated Mucins And TheirAdhesion-Modulating Property,”Trends in Biochem.Sci.17:359-363)；PEMA(多态上皮黏蛋白抗原)；PIPA(美国专利号7,405,061；PCT公开号WO 04/043239)；PSA(前列腺特异性抗原)(Henttu等(1989)cDNA Coding For The Entire Human ProstateSpecific AntigenShows High Homologies To The Human Tissue Kallikrein Genes,”Biochem.Biophys.Res.Comm.10(2):903-910；Israeli等(1993)“Molecular Cloning Of AComplementary DNA Encoding A Prostate-Specific Membrane Antigen,”CancerRes.53:227-230；Cracco,C.M.等2005Minerva Urol Nefrol.57(4):301-11)；PSMA(前列腺特异性膜抗原)(Ragupathi,G.2005Cancer Treat Res.123:157-180)；前列腺酸性磷酸盐(Tailor等(1990)“Nucleotide Sequence Of Human Prostatic Acid PhosphataseDetermined From A Full-Length cDNA Clone,”Nucl.Acids Res.18(16):4928)；黑素瘤中发现的R24；ROR1(美国专利号5,843,749)；鞘脂；SSEA-1；SSEA-3；SSEA-4；sTn(Holmberg,L.A.2001Expert Opin Biol Ther.1(5):881-91)；来自皮肤T细胞淋巴瘤的源自T细胞受体的肽(见Edelson(1998)“Cutaneous T-Cell Lymphoma：A Model For SelectiveImmunotherapy,”Cancer J Sci Am.4:62-71)；髓样细胞中发现的T5A7；TAG-72(Yokota等(1992)“Rapid Tumor Penetration Of A Single-Chain Fv And Comparison With OtherImmunoglobulin Forms,”Cancer Res.52:3402-3408)；TL5(血型A)；TNF-受体(TNF-α受体，TNF-β受体；TNF-γ受体(van Horssen,R.等2006Oncologist.11(4):397-408；Gardnerova,M.等2000Curr Drug Targets.1(4):327-64)；TRA-1-85(血型H)；转铁蛋白受体(美国专利号7,572,895；PCT公开号WO 05/121179)；TSTA(肿瘤特异性移植抗原)，比如病毒诱导的肿瘤抗原，包括T-抗原DNA肿瘤病毒和RNA肿瘤病毒的包膜抗原，胎性癌抗原-甲胎蛋白，比如结肠的CEA、膀胱肿瘤癌胚抗原(等(1985)“Monoclonal Antibodies To CellSurface Antigens Shared By Chemically Induced Mouse Bladder Carcinomas,”Cancer.Res.45:2210-2188)；VEGF受体(O’Dwyer.P.J.2006Oncologist.11(9):992-998)；VEP8；VEP9；VIM-D5；和Y半抗原，胚胎癌性细胞中发现的Ley。
1.坎帕斯(Campath)-1(CD52)结合结构域(阿仑单抗(Alemtuzumab))
人源化的抗CD52抗体“阿仑单抗”的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:205)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
人源化的抗CD52抗体“阿仑单抗”的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:206)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
2.CD317(BMST2)-结合结构域
CD317(也称为骨髓基质细胞抗原2；BMST)在从乳、肺、肾、子宫内膜和皮肤分离的各种癌症细胞上过表达(Kawai,S.等(2008)“Interferon-αenhances CD317 expressionand the antitumor activity of anti-CD317monoclonal antibody in renal cellcarcinoma xenograft models,”Cancer Science 99(12):2461-2466；Cai,D.等(2009)“Up-Regulation Of Bone Marrow Stromal Protein 2(BST2)In Breast Cancer WithBone Metastasis,”BMC Cancer 9:102,pp.1-10；Wang,W.等(2009)HM1.24(CD317)Is ANovel Target Against Lung Cancer For Immunotherapy Using Anti-HM1.24Antibody,”Cancer Immunology,Immunotherapy58(6):967-976；Wang,W.等(2009)“Chimeric And Humanized Anti-HM1.24Antibodies Mediate Antibody-DependentCellular Cytotoxicity Against Lung Cancer Cells.Lung Cancer,”63(1):23-31；Sayeed,A.等(2013)“Aberrant Regulation Of The BST2(Tetherin)Promoter EnhancesCell Proliferation And Apoptosis Evasion In High Grade Breast Cancer Cells,”PLoS ONE8(6)e67191,pp.1-10；Yi,E.H.等(2013)“BST-2Is A Potential Activator OfInvasion And Migration In Tamoxifen-Resistant Breast Cancer Cells,”Biochem.Biophys.Res.Commun.435(4):685-690；Staudinger,M.(2014)“The NovelImmunotoxin HM1.24-ETA'Induces Apoptosis In Multiple Myeloma Cells,”BloodCancer J.13；4:e219,pp.1-11)。免疫特异性结合CD317的抗体是商业上可得的(NovusBiologicals LLC；BioLegend,Inc.；也见美国专利号8,834,876，其引用抗体HM1.24的重链和轻链的保藏号，为FERM BP-5644和FERM BP-5646；也见美国专利号8,394,374)。抗CD317抗体“HM1.24”的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:302)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
抗CD317抗体“HM1.24”的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:303)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
3.CEACAM5-和CEACAM6-结合结构域
已经发现癌胚抗原相关的细胞粘附分子5(CEACAM5)和6(CEACAM6)与各种类型的癌症相关，包括髓样甲状腺癌、结直肠癌、胰腺癌、肝细胞癌、胃癌、肺癌、头颈癌、膀胱癌、前列腺癌、子宫癌、子宫内膜癌、乳腺癌、造血癌(hematopoietic cancer)、白血病和卵巢癌(PCT公开号WO 2011/034660)，尤其是结直肠、胃肠道、胰腺、非小细胞肺癌(NSCL)、乳腺、甲状腺、胃、卵巢和子宫癌(Zheng,C.等(2011)“A Novel Anti-CEACAM5MonoclonalAntibody,CC4,Suppresses Colorectal Tumor Growth and Enhances NK Cells-Mediated Tumor Immunity,”PLoS One 6(6):e21146,pp.1-11)。
已经发现CEACAM5在90％的胃肠道、结直肠和胰腺癌中过表达，在70％的非小细胞肺癌细胞和50％的乳腺癌中过表达(Thompson,J.A.等(1991)“Carcinoembryonic AntigenGene Family:Molecular Biology And Clinical Perspectives,”J.Clin.Lab.Anal.5:344-366)。
过表达的癌胚抗原相关的细胞粘附分子6(CEACAM6)在各种人癌症的浸润和转移中起重要的作用，所述人癌症包括髓样甲状腺癌、结直肠癌、胰腺癌、肝细胞癌、胃癌、肺癌、头颈癌、膀胱癌、前列腺癌、子宫癌、子宫内膜癌、乳腺癌、造血癌，白血病和卵巢癌(PCT公开号WO 2011/034660；Deng,X.等(2014)“Expression Profiling Of CEACAM6AssociatedWith The Tumorigenesis And Progression In Gastric Adenocarcinoma,”Genet.Mol.Res.13(3):7686-7697；Cameron,S.等(2012)“Focal Overexpression OfCEACAM6Contributes To Enhanced Tumourigenesis In Head And Neck Cancer ViaSuppression Of Apoptosis,”Mol.Cancer 11:74,pp.1-11；Chapin,C.等(2012)“Distribution And Surfactant Association Of Carcinoembryonic Cell AdhesionMolecule 6In Human Lung,”Amer.J.Physiol.Lung Cell.Mol.Physiol.302(2):L216-L25；Riley,C.J.等(2009)“Design And Activity Of A Murine And Humanized Anti-CEACAM6Single-Chain Variable Fragment In The Treatment Of Pancreatic Cancer,”Cancer Res.69(5):1933-1940；Lewis-Wambi,J.S.等(2008)“Overexpression OfCEACAM6Promotes Migration And Invasion Of Oestrogen-Deprived Breast CancerCells,”Eur.J.Cancer 44(12):1770-1779；Blumenthal,R.D.等(2007)“ExpressionPatterns Of CEACAM5And CEACAM6In Primary And Metastatic Cancers,”BMCCancer.7:2,pp.1-15)。免疫特异性结合CEACAM5和CEACAM6的抗体是商业上可得的(SantaCruz Biotechnology,Inc.,Novus Biologicals LLC；Abnova Corporation)。人源化的抗CEACAM5/抗CEACAM6抗体16C3(EP 2585476)的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:304)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
人源化的抗CEACAM5/抗CEACAM6抗体16C3(EP 2585476)的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:305)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
人源化的抗CEACAM5/CEACAM6抗体hMN15(WO 2011/034660)的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:306)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
人源化的抗CEACAM5/CEACAM6抗体hMN15(WO 2011/034660)的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:307)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
4.DR5-结合结构域
DR5是本发明优选的癌症抗原。本发明优选的抗人DR5-结合分子具备鼠科抗人DR5单克隆抗体“DR5 mAb 1”和/或“DR5mAb 2”的VL和/或VH结构域，更优选地具备这样的抗人DR5单克隆抗体的VL结构域的1、2或所有3个CDR和/或VH结构域的1、2或所有3个CDR。可选地，可采用任何抗人DR5单克隆抗体，尤其是：卓齐妥单抗(drozitumab)(本文命名为“DR5mAb 3”)、坎妥木单抗(conatumumab)(本文命名为“DR5 mAb 4”)、替加珠单抗(tigatumumab)(本文命名为“DR5 mAb 5”)、LBY135-1(本文命名为“DR5 mAb 6”)、LBY135-2(本文命名为“DR5 mAb 7”)和KMTR2(本文命名为“DR5 mAb 8”)。
a.抗人DR5抗体DR5 mAb 1
DR5可潜在地用于治疗宽范围的癌症(例如，结直肠癌、肝细胞癌、神经胶质瘤、肾癌、乳腺癌、多发性骨髓瘤、膀胱癌、成神经细胞瘤、肉瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、胰腺癌和直肠癌。人DR5前体的氨基酸序列(NCBI序列NP_003833.4)(SEQ ID NO:2)是：
DR5 mAb 1的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:3)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
DR5 mAb 1的CDRL1(SEQ ID NO:4):RASKSVSSSGYSYMH
DR5 mAb 1的CDRL2(SEQ ID NO:5):LSSNLDS
DR5 mAb 1的CDRL3(SEQ ID NO:6):QHSRDLPPT
DR5 mAb 1的VL结构域优选地由具有下面显示的序列的多核苷酸(SEQ ID NO:7)编码(编码CDR的多核苷酸以下划线显示)：
DR5 mAb 1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:8)显示在下面(CDR残基以下划线显示)。C-末端氨基酸可用丙氨酸取代，以利于该VH结构域的亚克隆。
DR5 mAb 1的CDRH1(SEQ ID NO:9):GFDFSRYWMS
DR5 mAb 1的CDRH2(SEQ ID NO:10):EINPDSNTINYTPSLKD
DR5 mAb 1的CDRH3(SEQ ID NO:11):RAYYGNPAWFAY
DR5 mAb 1的VH结构域优选地由具有下面显示的序列的多核苷酸(SEQ ID NO:12)编码(编码CDR的多核苷酸以下划线显示)：
b.抗人DR5抗体DR5 mAb 2
(1).鼠科抗人抗体DR5 mAb 2
DR5 mAb 2的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:13)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
DR5 mAb 2的CDRL1(SEQ ID NO:14):KASQDVNTAVA
DR5 mAb 2的CDRL2(SEQ ID NO:15):WASTRHT
DR5 mAb 2的CDRL3(SEQ ID NO:16):QQHYITPWT
DR5 mAb 2的VL结构域优选地由具有下面显示的序列的多核苷酸(SEQ ID NO:17)编码(编码CDR的多核苷酸以下划线显示)：
DR5 mAb 2的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:18)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
DR5 mAb 2的CDRH1(SEQ ID NO:19):GYTFTEYILH
DR5 mAb 2的CDRH2(SEQ ID NO:20):WFYPGNNNIKYNEKFKD
DR5 mAb 2的CDRH3(SEQ ID NO:21):HEQGPGYFDY
DR5 mAb 2的VH结构域优选地由具有下面显示的序列的多核苷酸(SEQ ID NO:22)编码(编码CDR的多核苷酸以下划线显示)：
(2).人源化的DR5 mAb 2(“hDR5 mAb 2”)
上述鼠科抗人DR5抗体DR5 mAb 2被人源化，以显示人源化抗人DR5抗体的能力，从而当施用至人接受者时降低其抗原性。人源化产生四个人源化的VL结构域，其在本文命名为“hDR5 mAb 2VL-2”、“hDR5 mAb 2VL-3”、“hDR5 mAb 2VL-4”和“hDR5 mAb 2VL-5”，并产生一个人源化的VH结构域，其在本文命名为“hDR5 mAb 2VH-2”。任何人源化的VL结构域均可与人源化的VH结构域配对。因此，包含与人源化的VH结构域配对的人源化的VL结构域中的一个的任何抗体一般称为“hDR5 mAb 2”，并且人源化的VL/VH结构域的具体组合参考VL结构域命名。
hDR5 mAb 2VL-2的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:23)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
hDR5 mAb 2VL-2优选地由具有下面显示的序列的多核苷酸(SEQ ID NO:24)编码：
hDR5 mAb 2VL-3的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:25)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
hDR5 mAb 2VL-3优选地由具有下面显示的序列的多核苷酸(SEQ ID NO:26)编码：
hDR5 mAb 2VL-4的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:27)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
hDR5 mAb 2VL-4优选地由具有下面显示的序列多核苷酸(SEQ ID NO:28)编码：
hDR5 mAb 2VL-5的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:29)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
hDR5 mAb 2VL-5优选地由具有下面显示的序列多核苷酸(SEQ ID NO:30)编码：
hDR5 mAb 2VH-2的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:31)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
hDR5 mAb 2VH-2优选地由具有下面显示的序列的多核苷酸(SEQ ID NO:32)编码：
hDR5 mAb 2VL-3、hDR5 mAb 2VL-4和hDR5 mAb VL-5的VL结构域的CDR1具有氨基酸序列：RASQDVNTAVA(SEQ ID NO:196)。
c.卓齐妥单抗(“DR5 mAb 3”)
卓齐妥单抗(“DR5 mAb 3”)的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:54)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
DR5 mAb 3的CDRL1(SEQ ID NO:55):SGDSLRSYYAS
DR5 mAb 3的CDRL2(SEQ ID NO:56):GANNRPS
DR5 mAb 3的CDRL3(SEQ ID NO:57):NSADSSGNHVV
卓齐妥单抗(“DR5mAb 3”)的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:58)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
DR5 mAb 3的CDRH1(SEQ ID NO:59):GFTFDDYAMS
DR5 mAb 3的CDRH2(SEQ ID NO:60):INWQGGSTGYADSVKG
DR5 mAb 3的CDRH3(SEQ ID NO:61):ILGAGRGWYFDY
d.坎妥木单抗(“DR5 mAb 4”)
坎妥木单抗(“DR5 mAb 4”)的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:62)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
DR5 mAb 4的CDRL1(SEQ ID NO:63):RASQGISRSYLA
DR5 mAb 4的CDRL2(SEQ ID NO:64):GASSRAT
DR5 mAb 4的CDRL3(SEQ ID NO:65):QQFGSSPWT
坎妥木单抗(“DR5 mAb 4”)的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:66)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
DR5 mAb 4的CDRH1(SEQ ID NO:67):GGSISSGDYFWS
DR5 mAb 4的CDRH2(SEQ ID NO:68):HIHNSGTTYYNPSLKS
DR5 mAb 4的CDRH3(SEQ ID NO:69):DRGGDYYYGMDV
e.替加珠单抗(“DR5 mAb 5”)
替加珠单抗(“DR5 mAb 5”)的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:70)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
DR5 mAb 5的CDRL1(SEQ ID NO:71):KASQDVGTAVA
DR5 mAb 5的CDRL2(SEQ ID NO:72):WASTRHT
DR5 mAb 5的CDRL3(SEQ ID NO:73):QQYSSYRT
替加珠单抗(“DR5 mAb5”)的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:74)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
DR5 mAb 5的CDRH1(SEQ ID NO:75):GFTFSSYVMS
DR5 mAb 5的CDRH2(SEQ ID NO:76):TISSGGSYTYYPDSVKG
DR5 mAb 5的CDRH3(SEQ ID NO:77):RGDSMITTDY
f.LBY135-1(“DR5 mAb 6”)
LBY135-1(“DR5 mAb 6”)的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:78)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
DR5 mAb 6的CDRL1(SEQ ID NO:79):QDVNTAIA
DR5 mAb 6的CDRL2(SEQ ID NO:80):WASTRHT
DR5 mAb 6的CDRL3(SEQ ID NO:81):QQWSSNPLT
LBY135-1(“DR5 mAb 6”)的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:82)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
DR5 mAb 6的CDRH1(SEQ ID NO:83):GYTFTDYTIH
DR5 mAb 6的CDRH2(SEQ ID NO:84):WFYPGGGYIKYNEKFKD
DR5 mAb 6的CDRH3(SEQ ID NO:85):HEEGIYFDY
g.LBY135-2(“DR5 mAb 7”)
LBY135-2(“DR5 mAb 7”)的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:86)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
DR5 mAb 7的CDRL1(SEQ ID NO:87):KASQDVNTAIA
DR5 mAb 7的CDRL2(SEQ ID NO:88):WASTRHT
DR5 mAb 7的CDRL3(SEQ ID NO:89):QQHYTTPFT
LBY135-2(“DR5 mAb 7”)的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:90)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
DR5 mAb 7的CDRH1(SEQ ID NO:91):GYTFTDYTIH
DR5 mAb 7的CDRH2(SEQ ID NO:92):WFYPGGGYIKYNEKFKD
DR5 mAb 7的CDRH3(SEQ ID NO:93):HEEGIYFDY
h.KMTR2(“DR5 mAb 8”)
KMTR2(“DR5 mAb 8”)的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:94)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
DR5 mAb 8的CDRL1(SEQ ID NO:95):RASQSVSSYLA
DR5 mAb 8的CDRL2(SEQ ID NO:96):DASNRAT
DR5 mAb 8的CDRL3(SEQ ID NO:97):QQRSNWPLT
KMTR2(“DR5 mAb 8”)的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:98)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
DR5 mAb 8的CDRH1(SEQ ID NO:99):GYTFTNYKIN
DR5 mAb 8的CDRH2(SEQ ID NO:100):WMNPDTDSTGYPQKFQG
DR5 mAb 8的CDRH3(SEQ ID NO:101):SYGSGSYYRDYYYGMDV
5.EphA2-结合结构域
受体酪氨酸激酶，肝配蛋白A型受体2(EphA2)是本发明优选的癌症抗原。EphA2通常在成人上皮组织中细胞与细胞接触的位点表达，但是，最近研究已经显示，其也在各种类型的上皮癌中过表达，其中在转移损害中观察到最大水平的EphA2表达。在各种癌症和许多肿瘤细胞系，包括前列腺癌、乳腺癌、非小细胞肺癌和黑素瘤中已经发现高表达水平的EphA2(Xu,J.等(2014)“High Epha2Protein Expression In Renal Cell Carcinoma IsAssociated With A Poor Disease Outcome,”Oncol.Lett.Aug 2014；8(2):687-692；Miao,B.等(2014)“EphA2is a Mediator of Vemurafenib Resistance and a NovelTherapeutic Target in Melanoma,”Cancer Discov.pii:CD-14-0295。EphA2好像不仅仅是癌症的标记物，而是似乎在许多人癌症中持续过表达并且功能上被改变(Chen,P.等(2014)“Epha2Enhances The Proliferation And Invasion Ability Of Lncap ProstateCancer Cells,”Oncol.Lett.8(1):41-46)。
本发明尤其考虑选择EphA2作为癌症抗原，并且使用抗EphA2抗体，以提供本发明的三特异性结合分子的癌症抗原结合结构域。示例性抗EphA2抗体包括“EphA2 mAb 1”、“EphA2 mAb 2”和“EphA2 mAb 3”。
a.EphA2 mAb 1
优选的抗人EphA2抗体(“EphA2 mAb 1”)的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:153)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
EphA2 mAb 1的CDRL1(SEQ ID NO:154):RASQDISNYLN
EphA2 mAb 1的CDRL2(SEQ ID NO:155):YTSRLHS
EphA2 mAb 1的CDRL3(SEQ ID NO:156):QQGYTLYT
EphA2 mAb 1的VL结构域优选地由具有下面显示的序列的多核苷酸(SEQ ID NO:157)编码(编码CDR的多核苷酸以下划线显示)：
EphA2 mAb 1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:158)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
EphA2 mAb 1的CDRH1(SEQ ID NO:159):GFSLSRYSVH
EphA2 mAb 1的CDRH2(SEQ ID NO:160):MIWGGGSTDYNSALKS
EphA2 mAb 1的CDRH3(SEQ ID NO:161):KHGNYYTMDY
EphA2 mAb 1的VH结构域优选地由具有下面显示的序列的多核苷酸(SEQ ID NO:162)编码(编码CDR的多核苷酸以下划线显示)：
b.EphA2 mAb 2
第二优选的抗人EphA2抗体(“EphA2 mAb 2”)的VL结构域的氨基酸序列(SEQ IDNO:163)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
EphA2 mAb 2的CDRL1(SEQ ID NO:164):RSSQSLVHSSGNTYLH
EphA2 mAb 2的CDRL2(SEQ ID NO:165):KVSNRFS
EphA2 mAb 2的CDRL3(SEQ ID NO:166):SQSTHVPT
EphA2 mAb 2的VL结构域优选地由具有下面显示的序列的多核苷酸(SEQ ID NO:318)编码(编码CDR的多核苷酸以下划线显示)：
EphA2 mAb 2的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:167)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
EphA2 mAb 2的CDRH1(SEQ ID NO:168):GFTFTNYGMN
EphA2 mAb 2的CDRH2(SEQ ID NO:169):WINTYIGEPTYADDFKG
EphA2 mAb 2的CDRH3(SEQ ID NO:170):ELGPYYFDY
EphA2 mAb 2的VH结构域优选地由具有下面显示的序列的多核苷酸(SEQ ID NO:171)编码(编码CDR的多核苷酸以下划线显示)：
c.EphA2 mAb 3
进一步优选的抗人EphA2抗体(“EphA2 mAb 3”)的VL结构域的氨基酸序列(SEQ IDNO:172)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
EphA2 mAb 3的CDRL1(SEQ ID NO:173):KASQDVTTAVA
EphA2 mAb 3的CDRL2(SEQ ID NO:174):WASTRHA
EphA2 mAb 3的CDRL3(SEQ ID NO:175):QQHYSTPYT
EphA2 mAb 3的VL结构域优选地由具有下面显示的序列的多核苷酸(SEQ ID NO:176)编码(编码CDR的多核苷酸以下划线显示)：
EphA2 mAb 3的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:177)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
EphA2 mAb 3的CDRH1(SEQ ID NO:178):GFTFTDHYMY
EphA2 mAb 3的CDRH2(SEQ ID NO:179):TISDGGSFTSYPDSVKG
EphA2 mAb 3的CDRH3(SEQ ID NO:180):DESDRPFPY
EphA2 mAb 3的VH结构域优选地由具有下面显示的序列的多核苷酸(SEQ ID NO:319)编码(编码CDR的多核苷酸以下划线显示)：
6.gpA33-结合结构域
gpA33也是本发明优选的癌症抗原。结直肠癌是西方世界最常见的恶性肿瘤之一并且是癌症死亡的主要原因(Silverberg,E.等(1989)“Cancer Statistics,1989,”CACancer J Clin.39(1):3-20)。对于结肠癌，一个潜在有用的靶是43kD跨膜糖蛋白A33(gpA33)，其在>95％的所有结直肠癌中表达(Heath,J.K.等(1997)“The Human A33AntigenIs A Transmembrane Glycoprotein And A Novel Member Of The ImmunoglobulinSuperfamily,”Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)94(2):469-474；Ritter,G.等(1997)“Characterization Of Posttranslational Modifications Of Human A33 Antigen,ANovel Palmitoylated Surface Glycoprotein Of Human GastrointestinalEpithelium,”Biochem.Biophys.Res.Commun.236(3):682-686；Wong,N.A.等(2006)“EpCAMand gpA33Are Markers Of Barrett's Metaplasia,”J.Clin.Pathol.59(3):260-263)。通过培养针对源自人胰腺癌的细胞系ASPC1的单克隆鼠科抗体首次发现了gpA33。
本发明尤其考虑选择gpA33作为癌症抗原，并且使用抗gpA33抗体提供本发明的三特异性结合分子的癌症抗原结合结构域。示例性抗gpA33抗体是“gpA33mAb 1”。
优选的抗人gpA33抗体(“gpA33 mAb 1”)的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:181)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
gpA33 mAb 1的CDRL1(SEQ ID NO:182):SARSSISFMY
gpA33 mAb 1的CDRL2(SEQ ID NO:183):DTSNLAS
gpA33 mAb 1的CDRL3(SEQ ID NO:184):QQWSSYPLT
gpA33 mAb 1的VL结构域优选地由具有下面显示的序列的多核苷酸(SEQ ID NO:185)编码(编码CDR的多核苷酸以下划线显示)：
gpA33 mAb 1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:186)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
gpA33 mAb 1的CDRH1(SEQ ID NO:187):GYTFTGSWMN
gpA33 mAb1的CDRH2(SEQ ID NO:188):RIYPGDGETNYNGKFKD
gpA33 mAb 1的CDRH3(SEQ ID NO:189):IYGNNVYFDV
gpA33 mAb 1的VH结构域优选地由具有下面显示的序列的多核苷酸(SEQ ID NO:190)编码(编码CDR的多核苷酸以下划线显示)：
7.Her2-结合结构域
本发明也尤其考虑选择Her2作为癌症抗原，并且使用抗Her2抗体提供本发明的三特异性结合分子的癌症抗原结合结构域。示例性抗Her2抗体包括“Her2mAb 1”和曲妥珠单抗。
a.Her2 mAb 1
抗Her2抗体“Her2 mAb 1”的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:191)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
抗Her2抗体“Her2 mAb 1”的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:192)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
b.曲妥珠单抗
人源化的抗Her2抗体“曲妥珠单抗”的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:193)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
人源化的抗Her2抗体“曲妥珠单抗”的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:194)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
8.B7-H3-结合结构域
除了其在成神经细胞瘤细胞上的表达之外，还已知人B7-H3也在各种其他癌症细胞(例如，胃、卵巢和非小细胞肺癌)上表达。已经在肿瘤细胞系中经免疫组织学检测到B7-H3蛋白质表达(Chapoval,A.等(2001)“B7-H3:A Costimulatory Molecule For T CellActivation and IFN-γProduction,”Nature Immunol.2:269–274；Saatian,B.等(2004)“Expression Of Genes For B7-H3And Other T Cell Ligands By Nasal EpithelialCells During Differentiation And Activation,”Amer.J.Physiol.LungCell.Mol.Physiol.287:L217–L225；Castriconi等(2004)“Identification Of 4Ig-B7-H3As A Neuroblastoma-Associated Molecule That Exerts A Protective Role From AnNK Cell-Mediated Lysis,”Proc.Natl.Acad.Sci.(美国)101(34):12640-12645)；Sun,M.等(2002)“Characterization of Mouse and Human B7-H3Genes,”J.Immunol.168:6294-6297)。已经在心脏、肾、睾丸、肺、肝、胰腺、前列腺、结肠和成骨细胞细胞中发现了mRNA表达(Collins,M.等(2005)“The B7Family Of Immune-Regulatory Ligands,”Genome Biol.6:223.1-223.7)。在蛋白质水平，在人肝、肺、膀胱、睾丸、前列腺、乳房、胎盘和淋巴器官中发现B7-H3(Hofmeyer,K.等(2008)“The Contrasting Role Of B7-H3,”Proc.Natl.Acad.Sci.(美国)105(30):10277-10278)。
本发明也尤其考虑选择B7-H3作为癌症抗原，并且使用抗B7-H3抗体提供本发明的三特异性结合分子的癌症抗原结合结构域。示例性抗B7-H3抗体包括“B7-H3 mAb 1”、“B7-H3 mAb 2”和“B7-H3 mAb 3”。
a.B7-H3 mAb 1
抗B7-H3抗体“B7-H3 mAb 1”的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:195)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
抗B7-H3抗体“B7-H3 mAb 1”的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:196)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
b.B7-H3 mAb 2
抗B7-H3抗体“B7-H3 mAb 2”的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:197)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
抗B7-H3抗体“B7-H3 mAb 2”的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:198)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
c.B7-H3 mAb 3
抗B7-H3抗体“B7-H3 mAb 3”的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:199)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
抗B7-H3抗体“B7-H3 mAb 3”的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:200)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
9.EGF受体-结合结构域(西妥昔单抗(Cetuximab))
嵌合抗EGFR抗体“西妥昔单抗”的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:201)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
嵌合抗EGFR抗体“西妥昔单抗”的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:202)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
帕尼单抗(Panitumumab)(例如，Amgen)是可根据本发明使用的可选的EGF受体-结合抗体。
10.VEGF-结合结构域(贝伐单抗(Bevacizumab))
人源化的抗VEGF抗体“贝伐单抗”的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:203)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
人源化的抗VEGF抗体“贝伐单抗”的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:204)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
11.5T4-结合结构域
癌胚蛋白质，5T4，是肿瘤相关的蛋白质，其展示在许多癌，包括肾癌、结肠癌、前列腺癌、肺癌的细胞膜上和急性淋巴细胞白血病中(见，Boghaert,E.R.等(2008)“TheOncofetal Protein,5T4,Is A Suitable Target For Antibody-Guided Anti-CancerChemotherapy With Calicheamicin,”Int.J.Oncol.32(1):221-234；Eisen,T.等(2014)“Naptumomab Estafenatox:Targeted Immunotherapy with a Novel Immunotoxin,”Curr.Oncol.Rep.16:370，1-6页)。示例性抗5T4抗体(“5T4 mAb 1”)的轻链可变结构域的氨基酸序列显示在下面(CDR残基以下划线显示)：(SEQ ID NO:308)：
这样的示例性抗5T4抗体的重链可变结构域的氨基酸序列显示在下面(CDR残基以下划线显示)：(SEQ ID NO:309)：
第二示例性抗5T4抗体(“5T4 mAb 2”)的轻链可变结构域的氨基酸序列显示在下面(CDR残基以下划线显示)：(SEQ ID NO:310)：
这样的第二示例性抗5T4抗体的重链可变结构域的氨基酸序列显示在下面(CDR残基以下划线显示)(SEQ ID NO:311)：
12.IL13Rα2-结合结构域
白介素-13受体α2(IL13Rα2)在各种癌症中过表达，所述癌症包括恶性胶质瘤、结直肠癌、宫颈癌、胰腺癌、多发性黑素瘤、骨肉瘤、白血病、淋巴瘤、前列腺癌和肺癌(PCT公开号WO 2008/146911；
Brown,C.E.等(2013)“Glioma IL13Rα2Is Associated With MesenchymalSignature Gene Expression And Poor Patient Prognosis,”PLoS One.18；8(10):e77769；Barderas,R.等(2012)“High Expression Of IL-13ReceptorΑ2In ColorectalCancer Is Associated With Invasion,Liver Metastasis,And Poor Prognosis,”Cancer Res.72(11):2780-2790；Kasaian,M.T.等(2011)“IL-13Antibodies InfluenceIL-13Clearance In Humans By Modulating Scavenger Activity Of IL-13Rα2,”J.Immunol.187(1):561-569；Bozinov,O.等(2010)“Decreasing Expression Of TheInterleukin-13Receptor IL-13Ralpha2In Treated Recurrent Malignant Gliomas,”Neurol.Med.Chir.(Tokyo)50(8):617-621；Fujisawa,T.等(2009)“A novel role ofinterleukin-13receptor alpha2in pancreatic cancer invasion and metastasis,”Cancer Res.69(22):8678-8685)。免疫特异性结合IL13Rα2的抗体是商业上可得的(AbnovaCorporation、Biorbyt、LifeSpan BioSciences、United States Biologicals；也见PCT公开号WO2008/146911)。示例性抗IL13Rα2抗体(“hu08,”PCT公开号WO2014/072888)的轻链可变结构域的氨基酸序列显示在下面(CDR残基以下划线显示)：(SEQ ID NO:308)：
这样的示例性抗IL13Rα2抗体(“hu08,”PCT公开号WO2014/072888)的重链可变结构域的氨基酸序列显示在下面(CDR残基以下划线显示)：(SEQ ID NO:309)：
13.整联蛋白Beta6-结合结构域
整联蛋白β6(ITGB6)是整联蛋白的亚型，其专门在上皮细胞的表面上表达，并且是细胞外基质(ECM)蛋白质的受体。ITGB6表达在肿瘤组织(比如结肠癌、前列腺癌、肾癌的那些组织)中特异性表达，但是一般在健康的上皮组织中是不可检测的(Liang,B.等(2014)“Integrinβ6-targeted Immunoliposomes Mediate Tumor Specific Drug Delivery andEnhance Therapeutic Efficacy in Colon Carcinoma,”Clin.Cancer Res.Dec 30.pii:clincanres.1194.2014)。免疫特异性结合ITGB6的单克隆抗体是商业上可用的(例如，MAB2075Z克隆R6G9，EMD Millipore；也见，Weinacker,A.等(1994)“Role Of The IntegrinAlpha V Beta 6In Cell Attachment To Fibronectin.Heterologous Expression OfIntact And Secreted Forms Of The Receptor,”J.Biol.Chem.269:6940-6948)。抗ITGB6单克隆抗体3G9和8G6和其变体公开在PCT公开号WO 03/100033和WO 2007/008712中。
示例性人源化的抗ITGB6抗体(源自抗体3G9，PCT公开号WO2007/008712)的轻链可变结构域的氨基酸序列显示在下面(CDR残基以下划线显示)：(SEQ ID NO:312)：
这样的示例性人源化的抗ITGB6抗体(源自抗体3G9，PCT公开号WO2007/008712)的重链可变结构域的氨基酸序列显示在下面(CDR残基以下划线显示)：(SEQ ID NO:313)：
示例性抗ITGB6抗体(源自抗体8G6，PCT公开号WO2007/008712)的轻链可变结构域的氨基酸序列显示在下面(CDR残基以下划线显示)：(SEQ ID NO:314)：
这样的示例性抗ITGB6抗体(源自抗体8G6，PCT公开号WO2007/008712)的重链可变结构域的氨基酸序列显示在下面(CDR残基以下划线显示)：(SEQ ID NO:315)：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYAMHWVRQAPGQGLEWMGVISTYYGNTNYNQKFKGRVTMTRDTS ISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARGGLRRGDRPSLQYAMDYWGQGTLVTVSS
14.另外的抗癌症抗原结合结构域
可根据本发明使用的另外的抗癌症抗原抗体包括下述商业上可得的抗体：贝伦妥单抗(Brentuximab)(例如，)，其结合CD30；吉妥单抗(Gemtuzumab)(例如，Wyeth)，其结合CD33；和伊匹单抗(Ipilimumab)(例如，)，其结合CTLA-4。
C.示例性效应细胞-结合结构域
能够结合免疫系统效应细胞的抗体可用于提供本发明的三特异性结合分子的效应细胞-结合结构域。尤其适合的是结合以下的抗体：CD2、CD3、CD16、CD19、CD20、CD22、CD32B、CD64、B细胞受体(BCR)、T细胞受体(TCR)和NKG2D受体。
1.CD2-结合结构域
CD2是在T细胞和天然杀伤(NK)细胞的表面上发现的细胞粘附分子。可能作为NK细胞纳米管形成的启动子，CD2增强NK细胞细胞毒性(Mace,E.M.等(2014)“Cell BiologicalSteps And Checkpoints In Accessing NK Cell Cytotoxicity,”Immunol.Cell.Biol.92(3):245-255；Comerci,C.J.等(2012)“CD2Promotes Human Natural Killer CellMembrane Nanotube Formation,”PLoS One 7(10):e47664:1-12)。抗CD2抗体(Lo-CD2a；ATCC登录号：11423)的VL结构域的氨基酸序列是(SEQ ID NO:102)(CDR残基以下划线显示)：
抗CD2抗体(Lo-CD2a；ATCC登录号：11423)的VH结构域的氨基酸序列是(SEQ IDNO:103)(CDR残基以下划线显示)：
2.CD3-结合结构域
在优选的实施方式中，本发明的三特异性结合分子结合的第二表位是CD3的表位。CD3是由四条不同的链组成的T细胞共受体(Wucherpfennig,K.W.等(2010)“StructuralBiology Of The T-Cell Receptor:Insights Into Receptor Assembly,LigandRecognition,And Initiation Of Signaling,”Cold Spring Harb.Perspect.Biol.2(4):a005140；1-14页)。在哺乳动物中，复合物包含CD3γ链、CD3δ链和两条CD3ε链。这些链与称为T细胞受体(TCR)的分子缔合以便在T淋巴细胞中产生激活信号。在缺少CD3的情况下，TCR不能适当组装并且降解(Thomas,S.等(2010)“Molecular Immunology Lessons FromTherapeutic T-Cell Receptor Gene Transfer,”Immunology 129(2):170–177)。发现CD3结合所有成熟T细胞的膜，并且事实上不结合其他细胞类型的膜(见,Janeway，C.A.等(2005)在以下中：Immunobiology:THE IMMUNE SYSTEM IN HEALTH AND DISEASE,”第6版,Garland Science Publishing,NY,214-216页；Sun,Z.J.等(2001)“MechanismsContributing To T Cell Receptor Signaling And Assembly Revealed By TheSolution Structure Of An Ectodomain Fragment Of The CD3ε:γHeterodimer,”Cell105(7):913-923；Kuhns,M.S.等(2006)“Deconstructing The Form And Function Of TheTCR/CD3Complex,”Immunity.2006年2月；24(2):133-139)。
如下面所讨论，为了阐释本发明，产生双特异性抗人CD3x抗人DR5-结合分子。用于这样的构建物的抗人CD3抗体在本文命名为“CD3 mAb 2”。CD3 mAb 2的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:104)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
CD3 mAb 2的CDRL1(SEQ ID NO:105):RSSTGAVTTSNYAN
mAb 2的CDRL2CD3(SEQ ID NO:106):GTNKRAP
CD3 mAb 2的CDRL3(SEQ ID NO:107):ALWYSNLWV
CD3 mAb 2的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:108)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
CD3 mAb 2的CDRH1(SEQ ID NO:109):TYAMN
CD3 mAb 2的CDRH2(SEQ ID NO:110):RIRSKYNNYATYYADSVKS
CD3 mAb 2的CDRH3(SEQ ID NO:111):HGNFGNSYVSWFAY
在一些CD3构造中，CD3 mAb 2采用变异的VH结构域。变异的VH结构域具备D65G取代，因此具有下面显示的氨基酸序列(SEQ ID NO:112)(CDR残基以下划线显示)：
取代造成CDRH2具有氨基酸序列(SEQ ID NO:113)RIRSKYNNYATYYADSVKG。取代的位置(D65G)以双下划线显示。
本文使用的第二抗CD3抗体是抗体莫罗单抗(Muromonab)-CD3“OKT3”(Xu等(2000)“In Vitro Characterization Of Five Humanized OKT3Effector Function VariantAntibodies,”Cell.Immunol.200:16-26)；Norman,D.J.(1995)“Mechanisms Of ActionAnd Overview Of OKT3,”Ther.Drug Monit.17(6):615-620；Canafax,D.M.等(1987)“Monoclonal Antilymphocyte Antibody(OKT3)Treatment Of Acute Renal AllograftRejection,”Pharmacotherapy 7(4):121-124；Swinnen,L.J.等(1993)“OKT3 MonoclonalAntibodies Induce Interleukin-6And Interleukin-10:A Possible Cause OfLymphoproliferative Disorders Associated With Transplantation,”Curr.Opin.Nephrol.Hypertens.2(4):670-678)。OKT3的VL结构域的氨基酸序列(SEQ IDNO:114)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
OKT3的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:115)显示在下面(CDR残基以下划线显示)：
3.CD16-结合结构域
CD16是FcγRIIIA受体。CD16由嗜中性粒细胞、嗜伊红粒细胞、天然杀伤(NK)细胞和结合聚集的但是不结合单体人IgG的组织巨噬细胞表达(Peltz,G.A.等(1989)“Human FcGamma RIII:Cloning,Expression,And Identification Of The Chromosomal Locus OfTwo Fc Receptors For IgG,”Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)86(3):1013-1017；Bachanova,V.等(2014)“NK Cells In Therapy Of Cancer,”Crit.Rev.Oncog.19(1-2):133-141；Miller,J.S.(2013)“Therapeutic Applications:Natural Killer Cells InThe Clinic,”Hematology Am.Soc.Hematol.Educ.Program.2013:247-253；Youinou,P.等(2002)“Pathogenic Effects Of Anti-Fc Gamma Receptor IIIB(CD16)OnPolymorphonuclear Neutrophils In Non-Organ-Specific Autoimmune Diseases,”Autoimmun Rev.1(1-2):13-19；Peipp,M.等(2002)“Bi-specific Antibodies TargetingCancer Cells,”Biochem.Soc.Trans.30(4):507-511)。
抗CD16抗体3G8的可变轻链结构域的氨基酸序列是(SEQ ID NO:116)(CDR残基以下划线显示)：
抗CD16抗体3G8的可变重链结构域的氨基酸序列是(SEQ ID NO:117)(CDR残基以下划线显示)：
抗CD16抗体A9的可变轻链结构域的氨基酸序列是(SEQ ID NO:118)(CDR残基以下划线显示)：
抗CD16抗体A9的可变重链结构域的氨基酸序列是(SEQ ID NO:119)(CDR残基以下划线显示)：
4.CD19-结合结构域
CD19抗原是属于免疫球蛋白Ig超家族的I型跨膜糖蛋白。CD19在滤泡树突细胞和B细胞上表达。认为全B细胞标记物在整个B细胞发育中表达，但是在成熟细胞中相比在不成熟的B细胞中具有阈值更高的表达(Raufi A.等(2013)“Targeting CD19In B-CellLymphoma:Emerging Role Of SAR3419,”Cancer Manag.Res.5:225-233)。已经描述了许多CD19抗体(例如，MD1342、MEDI-551等)(Mei,H.E.等(2012)“Rationale Of Anti-CD19Immunotherapy:An Option To Target Autoreactive Plasma Cells InAutoimmunity,”Arthritis Res.Ther.14(Suppl 5):S1:1-16)。抗CD19结合分子“兰妥莫单抗”公开在EP 2186527中。
优选的抗CD19抗体(HD37)的VL结构域的氨基酸序列是(SEQ ID NO:120)(CDR残基以下划线显示)：
抗CD19抗体HD37的VH结构域的氨基酸序列是(SEQ ID NO:121)(CDR残基以下划线显示)：
5.CD20-结合结构域
CD20是B细胞特异性分化抗原，其在成熟的B细胞和大部分B细胞非霍奇金淋巴瘤上表达，但是不在早期的B细胞祖细胞或后期成熟的血浆细胞上表达(Maloney,D.G.(2012)“Anti-CD20Antibody Therapy for B-Cell Lymphomas,”N.Engl.J.Med.366:2008-2016)。利妥昔单抗是示例性抗人CD20抗体。嵌合抗CD20抗体(利妥昔单抗)的VL结构域的氨基酸序列是(SEQ ID NO:122)(CDR残基以下划线显示)：
抗CD20抗体(利妥昔单抗)的VH结构域的氨基酸序列是(SEQ ID NO:123)(CDR残基以下划线显示)：
可根据本发明使用的可选的抗CD20抗体包括下述商业上可得的抗体：替伊莫单抗(例如，Spectrum Pharmaceuticals,Inc.)、奥法木单抗(例如，SmithKlineGlaxo)和托西莫单抗(例如，GlaxoSmithKline)。
6.CD22-结合结构域
CD22是在成熟的B细胞表面上发现的糖结合跨膜蛋白质，并且，在较小程度上，在一些不成熟B细胞上被发现(WO 2011/032633；Poe,J.C.等(2012)“CD22And Siglec-G In BCell Function And Tolerance,”Trends Immunol.33(8):413-420；Chen,W.C.等(2012)“Targeting B Lymphoma With Nanoparticles Bearing Glycan Ligands Of CD22,”Leuk.Lymphoma 53(2):208-210；Walker,J.A.(2008)“CD22:An Inhibitory Enigma,”Immunology 123(3):314-325；Coleman,M.等(2003)“Epratuzumab:Targeting B-CellMalignancies Through CD22,”Clin.Cancer Res.9(10Pt 2):3991S-3994S)。
抗CD22抗体(依帕珠单抗)的VL结构域的氨基酸序列是(SEQ ID NO:124)(CDR残基以下划线显示)：
抗CD22抗体(依帕珠单抗)的VH结构域的氨基酸序列是(SEQ ID NO:125)(CDR残基以下划线显示)：
7.CD32B-结合结构域
结合人CD32B的抗体的VL结构域的优选序列是CD32B mAb 1(SEQ ID NO:126)(CDR残基以下划线显示)：
结合人CD32B的CD32B mAb 1抗体的VH结构域的优选序列是(SEQ ID NO:127)(CDR残基以下划线显示)：
8.CD64-结合结构域
CD64是FcγRI受体并且在单核细胞/巨噬细胞、树突细胞和激活粒细胞上表达。表达可通过IFN-γ刺激而上调。CD64结合IgG免疫复合物。CD64在抗原捕获、IgG/抗原复合物的吞噬和抗体-依赖性细胞毒性中发挥作用(WO 2006/002438)。
结合人CD64的抗体的VL结构域的优选序列是CD64 mAb 1(SEQ ID NO:128)(CDR残基以下划线显示)：
结合人CD64的抗体的VH结构域的优选序列是(SEQ ID NO:129)(CDR残基以下划线显示)：
9.BCR/CD79-结合结构域
BCR由膜免疫球蛋白组成，所述膜免疫球蛋白与非共价缔合的CD79的α和β亚单位(分别为“CD79a”和“CD79b”)一起形成BCR复合物。CD79a和CD79b是信号转导亚单位，其包含信号转导需要的保守的免疫受体酪氨酸基的激活基序(“ITAM”)(Dylke,J.等(2007)“RoleOf The Extracellular And Transmembrane Domain Of Ig-Alpha/Beta In Assembly OfThe B Cell Antigen Receptor(BCR),”Immunol.Lett.112(1):47-57；Cambier,J.C.(1995)“New Nomenclature For The Reth Motif(or ARH1/TAM/ARAM/YXXL),”Immunol.Today 16:110)。BCR复合物通过多价抗原的聚集启动CD79a和CD79b ITAMs的转磷酸以及受体相关的激酶的激活(DeFranco,A.L.(1997)“The Complexity Of SignalingPathways Activated By The BCR,”Curr.Opin.Immunol.9:296-308；Kurosaki,T.(1997)“Molecular Mechanisms In B Cell Antigen Receptor Signaling,”Curr.Opin.Immunol.9:309-318；Kim,K.M.等(1993)“Signalling Function Of The B-Cell Antigen Receptors,”Immun.Rev.132:125-146)。磷酸化的ITAMs募集另外的效应子比如PI3K、PLC-γ和Ras/MAPK途径的成员。这些信号传导事件是造成B细胞增殖和激活标记物(比如MHCII和CD86)的增加的表达的原因，所述激活标记物对于诱导(prime)B细胞以便它们随后与T辅助(“Th”)细胞相互作用是必要的。
结合人B细胞受体(CD79)的抗体的VL结构域的优选序列是CD79mAb 1(SEQ ID NO:130)(CDR残基以下划线显示)：
结合人B细胞受体(CD79)的CD79mAb 1抗体的VH结构域的优选序列是(SEQ ID NO:131)(CDR残基以下划线显示)：
10.T细胞受体-结合结构域
在可选的实施方式中，由本发明的三特异性结合分子结合的第二表位是T细胞受体(TCR)的表位。T细胞受体由CD4+或CD8+T细胞天然地表达，并且允许这样的细胞识别由抗原呈递细胞的I类或II类MHC蛋白结合和呈递的抗原肽。通过TCR识别pMHC(肽–MHC)复合物启动细胞免疫应答的扩展，所述细胞免疫应答导致细胞因子的产生和抗原呈递细胞的裂解(见，例如，Armstrong,K.M.等(2008)“Conformational Changes And Flexibility In T-Cell Receptor Recognition Of Peptide–MHC Complexes,”Biochem.J.415(Pt 2):183–196；Willemsen,R.(2008)“Selection Of Human Antibody Fragments Directed AgainstTumor T-Cell Epitopes For Adoptive T-Cell Therapy,”Cytometry A.73(11):1093-1099；Beier,K.C.等(2007)“Master Switches Of T-Cell Activation AndDifferentiation,”Eur.Respir.J.29:804-812；Mallone,R.等(2005)“Targeting TLymphocytes For Immune Monitoring And Intervention In Autoimmune Diabetes,”Am.J.Ther.12(6):534–550)。CD3是结合TCR的受体(Thomas,S.等(2010)“MolecularImmunology Lessons From Therapeutic T-Cell Receptor Gene Transfer,”Immunology129(2):170-177；Guy,C.S.等(2009)“Organization Of Proximal Signal Initiation AtThe TCR:CD3Complex,”Immunol.Rev.232(1):7-21；St.Clair,E.W.(Epub 2009Oct 12)“Novel Targeted Therapies For Autoimmunity,”Curr.Opin.Immunol.21(6):648-657；Baeuerle,P.A.等(Epub 2009Jun 9)“Bi-specific T-Cell Engaging Antibodies ForCancer Therapy,”Cancer Res.69(12):4941-4944；Smith-Garvin,J.E.等(2009)“T CellActivation,”Annu.Rev.Immunol.27:591-619；Renders,L.等(2003)“EngineeredCD3Antibodies For Immunosuppression,”Clin.Exp.Immunol.133(3):307-309)。
特异性结合T细胞受体的抗体包括抗TCR抗体BMA 031(EP 0403156；Kurrle,R.等(1989)“BMA 031–A TCR-Specific Monoclonal Antibody For Clinical Application,”Transplant Proc.21(1Pt 1):1017-1019；Nashan,B.等(1987)“Fine Specificity Of APanel Of Antibodies Against The TCR/CD3Complex,”Transplant Proc.19(5):4270-4272；Shearman,C.W.等(1991)“Construction,Expression,And Biologic Activity OfMurine/Human Chimeric Antibodies With Specificity For The Humanα/βT Cell,”J.Immunol.146(3):928-935；Shearman,C.W.等(1991)“Construction,Expression AndCharacterization of Humanized Antibodies Directed Against The Humanα/βT CellReceptor,”J.Immunol.147(12):4366-4373)。
抗TCR抗体BMA 031的VL结构域的氨基酸序列是(SEQ ID NO:132)(CDR残基以下划线显示)：
抗TCR抗体BMA 031的VH结构域的氨基酸序列是(SEQ ID NO:133)(CDR残基以下划线显示)：
11.NKG2D受体-结合结构域
在可选的实施方式中，由本发明的三特异性结合分子结合的第二表位是NKG2D受体的表位。NKG2D受体在所有的人(和其他哺乳动物)天然杀伤细胞上表达(Bauer,S.等(1999)“Activation Of NK Cells And T Cells By NKG2D,A Receptor For Stress-Inducible MICA,”Science 285(5428):727-729；Jamieson,A.M.等(2002)“The Role OfThe NKG2D Immunoreceptor In Immune Cell Activation And Natural Killing,”Immunity 17(1):19-29)以及在所有的CD8+T细胞上表达(Groh,V.等(2001)“Costimulation Of CD8αβT Cells By NKG2D Via Engagement By MIC Induced OnVirus-Infected Cells,”Nat.Immunol.2(3):255-260；Jamieson,A.M.等(2002)“The RoleOf The NKG2D Immunoreceptor In Immune Cell Activation And Natural Killing,”Immunity 17(1):19-29)。这样的结合配体，尤其是不在正常细胞上表达的那些，包括组织相容性60(H60)分子、视黄酸早期可诱导的基因-1(RAE-1)的产物和鼠科UL16-结合蛋白样转录体1(MULT1)(Raulet D.H.(2003)“Roles Of The NKG2D Immunoreceptor And ItsLigands,”Nature Rev.Immunol.3:781-790；Coudert,J.D.等(2005)“Altered NKG2DFunction In NK Cells Induced By Chronic Exposure To Altered NKG2D Ligand-Expressing Tumor Cells,”Blood 106:1711-1717)。特异性结合NKG2D受体的抗体包括KYK-2.0(Kwong,KY等(2008)“Generation,Affinity Maturation,And CharacterizationOf A Human Anti-Human NKG2D Monoclonal Antibody With Dual Antagonistic AndAgonistic Activity,”J.Mol.Biol.384:1143-1156；和PCT/US09/54911)。
抗NKG2D抗体KYK-1.0的VL结构域的氨基酸序列是(SEQ ID NO:134)(CDR残基以下划线显示)：
抗NKG2D抗体KYK-1.0的VH结构域的氨基酸序列是(SEQ ID NO:135)(CDR残基以下划线显示)：
抗NKG2D抗体KYK-2.0的VL结构域的氨基酸序列是(SEQ ID NO:136)(CDR残基以下划线显示)：
抗NKG2D抗体KYK-2.0的VH结构域的氨基酸序列是(SEQ ID NO:137)(CDR残基以下划线显示)：
D.本发明优选的三特异性结合分子
1.优选的Fc结构域
两条重链的CH2和CH3结构域相互作用形成Fc结构域，其是由细胞Fc受体(FcγRs)识别的结构域。如本文所使用，术语“Fc结构域”用于限定IgG重链的C-末端区域。示例性人IgG1的CH2-CH3结构域的氨基酸序列是(SEQ ID NO:1)：
遍及本说明书，IgG重链中残基的编号是如在以下文献中的EU索引的编号：Kabat等,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,Public HealthService,NH1，MD(1991)，其通过参考明确并入本文。“如在Kabat中的EU索引”指人IgG1EU抗体的编号。来自免疫球蛋白的成熟的重链和轻链的可变区的氨基酸由氨基酸在链中的位置命名。Kabat描述了很多抗体的氨基酸序列、鉴别了各亚组的氨基酸一致性序列并分配残基号给各氨基酸。通过参考保守的氨基酸比对所讨论的抗体与Kabat中的一致性序列中的一条，Kabat的编号方案可延伸到不包括在他的纲要中的抗体。用于分配残基号的这种方法已经成为领域中的标准，并容易鉴别在不同抗体中处于相等位置的氨基酸，所述抗体包括嵌合或人源化变体。例如，在人抗体轻链的位置50的氨基酸占据了与小鼠抗体轻链的位置50处的氨基酸等同的位置
尽管边界可能稍微不同，但是根据Kabat的编号系统，人IgG Fc结构域的CH2结构域通常从人IgG的氨基酸231延伸至氨基酸341。根据Kabat的编号系统，人IgG的CH3结构域通常从氨基酸342延伸至447。“铰链区”或“铰链结构域”一般定义为从人IgG1的Glu216延伸至Pro230。
在抗体恒定区中的许多不同的位置(例如，Fc位置，包括但不限于270、272、312、315、356和358位，如通过Kabat中阐释的EU索引编号)已经观察到多态性，因此在呈现的序列和现有技术中的序列之间可能存在稍微的不同。已经充分表征了人免疫球蛋白的多态形式。目前，已知18个Gm同种异型(allotype)：G1m(1、2、3、17)或G1m(a、x、f、z)、G2m(23)或G2m(n)、G3m(5、6、10、11、13、14、15、16、21、24、26、27、28)或G3m(b1、c3、b3、b0、b3、b4、s、t、g1、c5、u、v、g5)(Lefranc,等,The human IgG subclasses:molecular analysis ofstructure,function and regulation.Pergamon,Oxford,pp.43-78(1990)；Lefranc,G.等,1979,Hum.Genet.:50,199-211)。尤其考虑本发明的抗体可掺入任何任何免疫球蛋白基因的同种异型、同族同种异型(isoallotype)或单元型(haplotype)，并且不限于具有本文提供的序列的同种异型、同族同种异型或单元型。
激活和抑制信号在它们连接至Fc结构域之后通过Fc受体(FcγRs)被转导。这些完全相反的功能是由于不同受体同种型之间的结构差异造成的。受体的胞质信号转导结构域中的两个不同的结构域——称为基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAMs)或基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIMS)——是造成不同应答的原因。募集不同胞质酶到这些结构中控制了FcγR-介导的细胞应答的结果。含有ITAM的FcγR复合物包括FcγRI、FcγRIIA、FcγRIIIA，然而，含ITIM的复合物仅包括FcγRIIB。人嗜中性粒细胞表达FcγRIIA基因。通过免疫复合物或特异性抗体交联聚集的FcγRIIA用于使ITAM与促进ITAM磷酸化的受体相关的激酶聚集。ITAM磷酸化充当Syk激酶的泊靠位点，Syk激酶的激活导致下游底物(例如，PI3K)的激活。细胞激活导致促炎性介质的释放。FcγRIIB基因在B淋巴细胞上表达；其细胞外结构域与FcγRIIA是96％一致的，并且以不能区分的方式结合IgG复合物。ITIM在FcγRIIB的胞质结构域中的存在定义了FcγR的这种抑制性亚类。最近，确定了这种抑制的分子基础。当与激活FcγR共连接时，FcγRIIB中的ITIM成为磷酸化的，并且吸引肌醇聚磷酸盐5’-磷酸酶(SHIP)的SH2结构域，肌醇聚磷酸盐5’-磷酸酶(SHIP)水解由于含ITAM的FcγR介导的酪氨酸激酶激活而释放的磷酸肌醇信使，从而防止细胞内Ca++的流入。因此FcγRIIB的交联抑制对FcγR连接的激活应答并抑制细胞应答。B-细胞激活、B-细胞增殖和抗体分泌因此被中断。
本发明结合分子的Fc结构域可以是完整的Fc结构域(例如，完整的IgG Fc结构域)或仅仅是完整的Fc结构域的片段。尽管本发明的双特异性单价Fc双抗体的Fc区可具有结合于一个或多个Fc受体(例如，FcγR(s))的能力，但更优选这样的Fc结构域将导致对FcγRIA(CD64)、FcγRIIA(CD32A)、FcγRIIB(CD32B)、FcγRIIIA(CD16a)或FcγRIIIB(CD16b)的改变的结合(相对于由野生型Fc结构域的结合显示的)，或将基本上消除这样的Fc结构域结合抑制性受体(一个或多个)的能力。因此，本发明的含Fc结构域的双抗体的Fc结构域可包括完整的Fc结构域的CH2结构域中的一些或全部和/或CH3结构域中的一些或全部，或可包括变异的CH2和/或变异的CH3序列(相对于完整的Fc结构域的CH2或CH3结构域，其可包括，例如，一个或多个插入和/或一个或多个缺失)。这样的Fc结构域可包括非Fc多肽部分或可包括非天然的完整的Fc结构域的部分或可包括非天然产生的取向的CH2和/或CH3结构域(诸如例如，两个CH2结构域或两个CH3结构域，或在N-末端至C-末端方向连接至CH2结构域的CH3结构域等)。
被鉴别为改变效应子功能的Fc结构域修饰在本领域中是已知的，包括提高与激活受体(例如，FcγRIIA(CD16A)的结合的修饰和降低与抑制性受体(例如，FcγRIIB(CD32B)的结合的修饰(见，例如，Stavenhagen,J.B.等(2007)“Fc Optimization Of TherapeuticAntibodies Enhances Their Ability To Kill Tumor Cells In Vitro And ControlsTumor Expansion In Vivo Via Low-Affinity Activating Fcgamma Receptors,”CancerRes.57(18):8882-8890)。
尤其地，对于本发明的含Fc结构域的双抗体的多肽链的CH2-CH3结构域，优选显示对FcγRIA(CD64)、FcγRIIA(CD32A)、FcγRIIB(CD32B)、FcγRIIIA(CD16a)或FcγRIIIB(CD16b)降低的(或基本上没有的)结合(相对于通过野生型Fc结构域(SEQ ID NO:1)显示的结合)。能够介导这种改变的结合的Fc变体和突变体形式如上所述。在优选实施方式中，这样的双抗体的第一和/或第三多肽链的CH2-CH3结构域包括任意1、2、3、4、5、6或7个如下取代：L234A、L235A、F243L、R292P、Y300L、V305I和P396L。具有与CD32B降低的结合和/或与CD16A增加的结合的人IgG1Fc结构域的示例性变体包含F243L、R292P、Y300L、V305I或P296L取代。这些氨基酸取代可以任何组合存在于人IgG1Fc结构域中。在一个实施方式中，人IgG1Fc结构域变体包含F243L、R292P和Y300L取代。在另一实施方式中，人IgG1Fc结构域变体包含F243L、R292P、Y300L、V305I和P296L取代。在一个实施方式中，这样的双抗体的第一和/或第三多肽链的CH2-CH3结构域包括任何1、2或3个如下取代：L234A、L235A、N297G、N297Q。在另一实施方式中，人IgG1Fc结构域变体包含N297Q取代、L234A和L235A取代或D265A取代，因为这些突变消除了FcR结合。可选地，利用这样的CH2-CH3结构域，其内在地显示对FcγRIIIA(CD16a)降低的(或基本上没有的)结合和/或降低的效应物功能(相对于通过野生型IgG1Fc结构域(SEQ ID NO:1)显示的结合)。在具体实施方式中，本发明的含Fc结构域的双抗体包括IgG2Fc结构域或IgG4Fc结构域。在使用IgG4Fc结构域的情况下，本发明还包括引入稳定化突变，诸如S228P，如通过Kabat中列出的EU索引所编号的(Lu等,(2008)“The Effect Of A Point Mutation On The Stability Of Igg4As Monitored ByAnalytical Ultracentrifugation,”J Pharmaceutical Sciences 97:960-969)，以降低链交换的发生。本领域中已知的其他稳定化突变可以被引入到IgG4Fc结构域中(Peters,P等,(2012)“Engineering an Improved IgG4Molecule with Reduced Disulfide BondHeterogeneity and Increased Fab Domain Thermal Stability,”J.Biol.Chem.,287:24525-24533；PCT专利公布号：WO 2008/145142)。由于N297A、L234A、L235A和D265A取代消除了效应子功能，在期望效应子功能的情况下，优选不采用这些取代。
这样的多肽链的CH2和/或CH3结构域在序列上不需要是一致的，并且有利地被修饰以促进两条多肽链之间的复合。例如，氨基酸取代(优选用包括形成“杵”的大侧基的氨基酸例如色氨酸进行取代)可被引入CH2或CH3结构域，以便空间干扰将防止与类似的突变结构域的相互作用并将迫使突变的结构域与其中互补或适应性突变已经被工程化的结构域——即，“臼”——配对(例如，用甘氨酸取代)。这样的突变组可被工程化到三特异性结合分子的任何两个多肽中。相对于同源二聚化偏爱异源二聚化的蛋白质工程化的方法在本领域中是悉知的，尤其是关于工程化免疫球蛋白样分子，这些都包括在本文中(见例如Ridgway等(1996)“‘Knobs-Into-Holes’Engineering Of Antibody CH3Domains ForHeavy Chain Heterodimerization,”Protein Engr.9:617-621；Atwell等(1997)“StableHeterodimers From Remodeling The Domain Interface Of A Homodimer Using APhage Display Library,”J.Mol.Biol.270:26-35；和Xie等(2005)A New Format OfBispecific Antibody:Highly Efficient Heterodimerization,Expression And TumorCell Lysis,”J.Immunol.Methods 296:95-101；其均通过引用以其整体并入本文)。优选“杵”被工程化到第一多肽链的CH2-CH3结构域中和“臼”被工程化到包含CH2-CH3的其他多肽链的CH2-CH3结构域中。因此，“杵”将有助于防止第一多肽链经其CH2和/或CH3结构域而同源二聚化。CH2-CH3“携带臼的”多肽链与CH2-CH3“携带杵的”多肽链异源二聚化，并且也与本身同二聚化。优选的杵通过修饰天然IgG Fc结构域以包含修饰T366W而产生。优选的臼通过修饰天然IgG Fc结构域以包含修饰T366S、L368A和Y407V而产生。为了帮助从终三特异性结合分子纯化“携带臼的”多肽链同二聚体，“携带臼的”Fc结构域的CH2和CH3结构域的蛋白A结合位点优选地通过在435位的氨基酸取代而被突变(H435R)。因此，“携带臼的”Fc结构域同二聚体不结合蛋白A，而期望的三特异性结合分子经在第一多肽链上的蛋白A结合位点保持其结合蛋白A的能力。
本发明包含Fc结构域的双抗体的第一多肽链的CH2和CH3结构域的优选序列具有“携带杵的”序列(SEQ ID NO:52)：
具有两条多肽链的、本发明的包含Fc结构域的双抗体的第二多肽链(或具有三条多肽链的、包含Fc结构域的双抗体的第三多肽链)的CH2和CH3结构域的优选序列具有“携带臼的”序列(SEQ ID NO:53)：
如将注意的，SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:53的CH2-CH3结构域包括在234位用丙氨酸进行的取代和在235用丙氨酸进行的取代，因此形成Fc结构域，展示与FcγRIA(CD64)、FcγRIIA(CD32A)、FcγRIIB(CD32B)、FcγRIIIA(CD16a)或FcγRIIIB(CD16b)降低的(或基本上没有的)结合(相对于野生型Fc结构域(SEQ ID NO:1)展示的结合)。
优选地，第一多肽链具有“携带杵的”CH2-CH3序列，比如SEQ ID NO:52的序列。但是，如将认识到，“携带臼的”CH2-CH3结构域(例如，SEQ ID NO:53)可在第一多肽链中采用，在该情况下，“携带杵的”CH2-CH3结构域(例如，SEQ ID NO:52)将在具有两条多肽链的、本发明的包含Fc结构域的双抗体的第二多肽链(或具有三条多肽链的、包含Fc结构域的双抗体的第三多肽链)中采用。
2.优选的第一多肽链
本发明优选的结合分子的第一多肽链包括能够结合表位I的可变轻链结构域(VLI)、能够结合表位II的可变重链结构域(VHII)、异源二聚体-促进结构域和CH2-CH3结构域。
因为第一多肽的可变轻链结构域和可变重链结构域针对不同的表位，它们不能缔合在一起形成能够结合表位I或表位II的结合结构域。第一多肽的可变轻链结构域和可变重链结构域通过足够短以基本上防止这些结构域缔合的间插接头肽而彼此间隔开。示例性接头，称为“接头1”具有序列(SEQ ID NO:33)：GGGSGGGG。
第一多肽的可变重链结构域和该多肽的异源二聚体-促进结构域优选地通过包含1、2、3或更多个半胱氨酸残基的间插接头肽而彼此间隔开。优选的包含半胱氨酸的间隔肽(“接头2”)具有序列SEQ ID NO:34：GGCGGG。
可用于连接CH2-CH3结构域与本发明分子的多肽链的接头包括：ASTKG(SEQ IDNO:47)、DKTHTCPPCP(SEQ ID NO:48)、LEPKSS(SEQ ID NO:49)和APSSSPME(SEQ ID NO:50)、APSSS(SEQ ID NO:152)和GGG或GCG。SEQ ID NO:49可用于替代GGG或GCG以易于克隆。另外，SEQ ID NO:49之后可紧随SEQ ID NO:47，以形成可选接头(LEPKSSDKTHTCPPCP；SEQ ID NO:51)。
协同选择第一多肽的异源二聚体-促进结构域和第二多肽的异源二聚体-促进结构域。结构域彼此不同并且被设计为彼此缔合以便促进第一和第二多肽链的缔合。例如，异源二聚体-促进结构域中的一个被工程化以在pH 7具有负电荷，而两条多肽链中的另一条被工程化，以在pH 7具有正电荷。这样带电荷的结构域的存在促进第一和第二多肽之间的缔合，因此促进异源二聚化。哪个异源二聚体-促进结构域被提供至哪条链不重要，只要在第一和第二多肽链上采用的结构域不同以便促进这样的链之间的异源二聚化。
异源二聚体-促进结构域可以是IgG CL和CH1结构域或可以是具有氨基酸序列GVEPKSC(SEQ ID NO:35)或VEPKSC(SEQ ID NO:36)的肽，其源自人IgG的铰链结构域并且代替CL结构域，可采用人κ轻链的C-末端6个氨基酸，GFNRGEC(SEQ ID NO:37)或FNRGEC(SEQID NO:38)。
但是，更优选地，这样的双抗体的异源二聚体-促进结构域由一、二、三或四个串联重复的带相反电荷的螺旋结构域形成，所述带相反电荷的螺旋结构域包括具有至少六、至少七或至少八个带电荷的氨基酸残基的序列(Apostolovic,B.等(2008)“pH-Sensitivityof the E3/K3Heterodimeric Coiled Coil,”Biomacromolecules 9:3173–3180；Arndt,K.M.等(2001)“Helix-stabilized Fv(hsFv)Antibody Fragments:Substituting theConstant Domains of a Fab Fragment for a Heterodimeric Coiled-coil Domain,”J.Molec.Biol.312:221-228；Arndt,K.M.等(2002)“Comparison of In Vivo Selectionand Rational Design of Heterodimeric Coiled Coils,”Structure 10:1235-1248；Boucher,C.等(2010)“Protein Detection By Western Blot Via Coiled–CoilInteractions,”Analytical Biochemistry 399:138-140；Cachia,P.J.等(2004)“Synthetic Peptide Vaccine Development:Measurement Of Polyclonal AntibodyAffinity And Cross-Reactivity Using A New Peptide Capture And Release SystemFor Surface Plasmon Resonance Spectroscopy,”J.Mol.Recognit.17:540-557；DeCrescenzo,G.D.等(2003)“Real-Time Monitoring of the Interactions of Two-Stranded de novo Designed Coiled-Coils:Effect of Chain Length on the Kineticand Thermodynamic Constants of Binding,”Biochemistry 42:1754-1763；Fernandez-Rodriquez,J.等(2012)“Induced Heterodimerization And Purification Of TwoTarget Proteins By A Synthetic Coiled-Coil Tag,”Protein Science 21:511-519；Ghosh,T.S.等(2009)“End-To-End And End-To-Middle Interhelical Interactions:NewClasses Of Interacting Helix Pairs In Protein Structures,”ActaCrystallographica D65:1032-1041；Grigoryan,G.等(2008)“Structural SpecificityIn Coiled-Coil Interactions,”Curr.Opin.Struc.Biol.18:477-483；Litowski,J.R.等(2002)“Designing Heterodimeric Two-Stranded α-Helical Coiled-Coils:TheEffects Of Hydrophobicity Andα-Helical Propensity On Protein Folding,Stability,And Specificity,”J.Biol.Chem.277:37272-37279；Steinkruger,J.D.等(2012)“The d′--d--d′Vertical Triad is Less Discriminating Than the a′--a--a′Vertical Triad in the Antiparallel Coiled-coil Dimer Motif,”J.Amer.Chem.Soc.134(5):2626–2633；Straussman,R.等(2007)“Kinking the CoiledCoil–Negatively Charged Residues at the Coiled-coil Interface,”J.Molec.Biol.366:1232-1242；Tripet,B.等(2002)“Kinetic Analysis of theInteractions between Troponin C and the C-terminal Troponin I RegulatoryRegion and Validation of a New Peptide Delivery/Capture System used forSurface Plasmon Resonance,”J.Molec.Biol.323:345–362；Woolfson,D.N.(2005)“TheDesign Of Coiled-Coil Structures And Assemblies,”Adv.Prot.Chem.70:79-112；Zeng,Y.等(2008)“A Ligand-Pseudoreceptor System Based On de novo DesignedPeptides For The Generation Of Adenoviral Vectors With Altered Tropism,”J.Gene Med.10:355-367)。
这样的重复螺旋结构域可以是精确的重复或可具有取代。例如，第一多肽的异源二聚体-促进结构域链可包括具有八个带负电荷氨基酸残基的序列和第二多肽链的异源二聚体-促进结构域可包括具有八个带负电荷氨基酸残基的序列。哪个螺旋被提供至第一或第二多肽链不重要，只要具有相反电荷的螺旋用于另一多肽链。带正电荷的氨基酸可以是赖氨酸、精氨酸、组氨酸等，和/或带负电荷的氨基酸可以是谷氨酸、天冬氨酸等。带正电荷的氨基酸优选地是赖氨酸和/或带负电荷的氨基酸优选地是谷氨酸。有可能仅仅采用单个异源二聚体-促进结构域(因为这样的结构域抑制同二聚化，从而促进异源二聚化)，但是，优选本发明双抗体的第一和第二多肽链的二者均包含异源二聚体-促进结构域。
在优选的实施方式中，异源二聚体促进结构域中的一个将包括四个串联“E-螺旋”螺旋结构域(SEQ ID NO:39：EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK)，其谷氨酸盐残基将在pH7形成负电荷，而异源二聚体促进结构域中的另一个将包括四个串联“K-螺旋”结构域(SEQID NO:40：KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE)，其赖氨酸残基在pH 7形成正电荷。这样的带电结构域的存在促进第一和第二多肽之间的缔合，因此促进异源二聚体形成。尤其优选的是这样的异源二聚体促进结构域，其中SEQ ID NO:39的四个串联“E-螺旋”螺旋结构域中的一个已经被修饰成含有半胱氨酸残基：EVAACEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK(SEQ ID NO:41)。同样地，尤其优选的是这样的异源二聚体促进结构域，其中SEQ ID NO:40的四个串联“K-螺旋”螺旋结构域中的一个已经被修饰成含有半胱氨酸残基：KVAACKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE(SEQ ID NO:42)。
如WO 2012/018687中公开，为了提高双抗体的体内药代动力学性质，双抗体可以被修饰成在双抗体的一个或多个端处含有血清-结合蛋白的多肽部分。最优选地，这样的血清-结合蛋白的多肽部分将被安装在双抗体的C-末端。白蛋白是血浆中最丰富的蛋白，并且，其在人中的半衰期为19天。白蛋白具有若干小分子结合位点，其允许白蛋白非共价地结合其他蛋白，从而延长其血清半衰期。链球菌属(Streptococcus)菌株G148的蛋白G的白蛋白-结合结构域3(ABD3)由形成稳定的三-螺旋束的46个氨基酸残基组成，并具有广泛的白蛋白-结合特异性(Johansson,M.U.等(2002)“Structure,Specificity,And Mode OfInteraction For Bacterial Albumin-Binding Modules,”J.Biol.Chem.277(10):8114-8120。因此，对于提高双抗体的体内药代动力学性质，尤其优选的血清-结合蛋白的多肽部分是来自链球菌蛋白G的白蛋白-结合结构域(ABD)，更优选地，链球菌属菌株G148的蛋白G的白蛋白-结合结构域3(ABD3)(SEQ ID NO:43)：LAEAKVLANR ELDKYGVSDY YKNLIDNAKSAEGVKALIDE ILAALP。
如在WO 2012/162068(通过参考并入本文)中公开，SEQ ID NO:43“去免疫化的”变体能够减弱或消除II类MHC结合。基于组合突变结果，考虑下述取代组合是用于形成这样的去免疫化的白蛋白-结合结构域的优选取代：66S/70S+71A；66S/70S+79A；64A/65A/71A+66S；64A/65A/71A+66D；64A/65A/71A+66E；64A/65A/79A+66S；64A/65A/79A+66D；64A/65A/79A+66E。变异的ABD具有修饰L64A、I65A和D79A或修饰N66S、T70S和D79A。具有氨基酸序列：
LAEAKVLANR ELDKYGVSDY YKNA 64 A 65NNAKT VEGVKALIA 79E ILAALP(SEQ ID NO:44)，
或氨基酸序列：
LAEAKVLANR ELDKYGVSDY YKNLIS 66NAKS 70VEGVKALIA 79E ILAALP(SEQ ID NO:45)，
的变异的去免疫化的ABD是尤其优选的，因为这样的去免疫化的白蛋白-结合结构域展示基本上野生型结合，同时提供减弱的II类MHC结合。因此，这样的具有白蛋白-结合结构域的双抗体的第一多肽链含有第三接头(接头3)，其优选布置于这样的多肽链的E-螺旋(或K-螺旋)结构域的C-末端，以便间插在E-螺旋(或K-螺旋)结构域和白蛋白-结合结构域(其优选是去免疫化的白蛋白-结合结构域)之间。这样的接头3的优选的序列是SEQ ID NO:46：GGGS。
因此，总之，本发明优选的三特异性结合分子的优选的第一多肽链包括结构域和接头：(VLI结构域)─(接头1)─(VHII结构域)─(接头2)─(E-螺旋异源二聚体-促进结构域)─(接头3)─(携带杵的CH2-CH3结构域)。
3.可选的第一多肽链
在一个实施方式中，上述结构域的取向为N-末端至C-末端方向。但是，本发明也考虑其变化，其中第一多肽链的结构域的取向是：NH2-(携带杵的CH3-CH2结构域)-(VLI结构域)─(接头1)─(VHII结构域)─(接头2)─(E-螺旋异源二聚体-促进结构域)。优选地，包含半胱氨酸的肽存在于这样的CH2-CH3结构域的N-末端。示例性肽的序列是序列(SEQ ID NO:48)：DKTHTCPPCP。在该实施方式中，优选地，CH3结构域通过间插肽接头(接头4)，比如具有氨基酸序列(SEQ ID NO:152)：APSSS的肽接头，更优选地，具有氨基酸序列(SEQ ID NO:50)：APSSSPME的肽接头与VLI结构域间隔开。
4.优选的第二多肽链
这样优选的三特异性结合分子的第二多肽链在N-末端至C-末端方向包括能够结合表位II的可变轻链结构域(VLII)、能够结合表位I的可变重链结构域(VHI)和异源二聚体-促进结构域。
因为第二多肽的可变轻链结构域和可变重链结构域针对不同表位，它们不能缔合在一起形成能够结合表位I或表位II的结合结构域。第二多肽的可变轻链结构域和可变重链结构域通过足够短以基本上防止这些结构域缔合的间插接头肽而彼此间隔开。具有序列(SEQ ID NO:33)：GGGSGGGG的“接头1”是用于该目的的示例性接头。
如在第一多肽链的情况下，第二多肽的可变重链结构域和该多肽的异源二聚体-促进结构域优选地通过包含1、2、3或更多个半胱氨酸残基的间插接头肽而彼此间隔开。具有序列(SEQ ID NO:34)GGCGGG的“接头2”是用于该目的的示例性接头。这样的半胱氨酸残基可与包含半胱氨酸的间隔肽中的半胱氨酸残基形成二硫键，所述间隔肽分开第一多肽的可变重链结构域和该多肽的异源二聚体-促进结构域。因此，本发明的结合分子的第一和第二多肽彼此共价结合。
如上所讨论，选择第二多肽链的异源二聚体-促进结构域，以便与第一多肽链的异源二聚体-促进结构域协同作用。因此，在优选的实施方式中，第一多肽链的异源二聚体-促进结构域是“K-螺旋”结构域(SEQ ID NO:40)或“E-螺旋”结构域(SEQ ID NO:39)。如果在第一多肽链中采用包含半胱氨酸的E-螺旋(SEQ ID NO:41)，那么在第二多肽链中优选地采用包含半胱氨酸的K-螺旋(SEQ ID NO:42)。相反地，如果在第一多肽链中采用包含半胱氨酸的K-螺旋(SEQ ID NO:42)，那么优选地在第二多肽链中采用包含半胱氨酸的E-螺旋(SEQID NO:41)。因为第一多肽链优选地具备“E-螺旋”结构域，所以第二多肽链优选地包含“K-螺旋”结构域。
因为第一和第二多肽链是双抗体的多肽链，它们能够缔合在一起形成识别和免疫特异性结合表位I的结构域I结合结构域(VLA/VHA)，和识别和免疫特异性结合表位II的结构域II结合结构域(VLB/VHB)。
因此，总之，本发明优选的结合分子的优选第二多肽链包括结构域和接头：(VLII结构域)─(接头1)─(VHI结构域)─(接头2)─(K-螺旋异源二聚体-促进结构域)。
5.优选的第三多肽链
本发明优选的结合分子的第三多肽链是这样的多肽：其在N-末端至C-末端方向上包括结合结构域、任选的CH1-铰链结构域和CH2-CH3结构域的多肽。本发明优选的结合分子的第三多肽链的结合结构域可以是能够结合表位III的可变重链结构域(VHIII)，在该情况下，本发明优选的结合分子的第四多肽链(下面讨论)是包括能够结合表位III的可变轻链结构域(VLIII)的多肽，以便结合结构域能够免疫特异性结合具备表位III的抗原。可选地，本发明优选的结合分子的第三多肽链的结合结构域可包括效应细胞受体型结合结构域，在该情况下，本发明优选的结合分子的第四多肽链(下面讨论)是包括互补的效应细胞受体型结合结构域的多肽，以便两条多肽链的相互作用形成能够生理特异性结合在效应细胞表面上存在的分子的结合结构域。第三多肽链可分离自天然存在的抗体。可选地，其可被重组构建。示例性CH1结构域是人IgG1 CH1结构域，具有氨基酸序列(SEQ ID NO:207)：
ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKV
SEQ ID NO:207的人IgG1 CH1结构域的变体是(SEQ ID NO:208)：
ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKRV
示例性铰链结构域是人IgG1铰链结构域，其具有氨基酸序列(SEQ ID NO:209)：EPKSCDKTHTCPPCP。如将认识到，示例性铰链结构域包括多个半胱氨酸残基(Elkabetz等(2005)“Cysteines In CH1Underlie Retention Of Unassembled Ig Heavy Chains,”J.Biol.Chem.280:14402-14412)，其可参与链间共价键合。
尽管可采用野生型CH2-CH3结构域，但是，如上所述，优选采用修饰的CH2-CH3结构域，其促进与第一多肽链的CH2-CH3结构域的异源二聚化。
因此，优选地，第三多肽链的CH2-CH3结构域是“携带臼的”CH2-CH3结构域，其氨基酸序列与第一多肽中采用的“携带杵的”CH2-CH3结构域(SEQ ID NO:52)互补。如上所讨论，携带臼的CH2-CH3结构域优选地应包括在435位的取代(H435R)，以去除蛋白A结合位点。对于第三多肽，具有H435R取代的示例性“携带臼的”CH2-CH3结构域是SEQ ID NO:53。
如将认识到，在第三多肽链中可采用“携带杵的”CH2-CH3结构域(例如，SEQ IDNO:52)，在该情况下，在第一多肽链中采用“携带臼的”CH2-CH3结构域(例如，SEQ ID NO:53)。
在其中本发明优选的三特异性结合分子的第三(和第四)多肽链每个包括效应细胞受体型结合结构域的多肽链的实施方式中，产生这样的效应细胞受体型结合结构域的方法是熟知的(例如，US2012/0294874A1)。
因此，总之，本发明优选的结合分子的第三多肽链包括结构域和接头：(VHIII结构域)─(任选的CH1结构域)─(任选的铰链结构域)─(“携带臼的”CH2-CH3结构域)，或(T细胞受体型结合结构域；其第一或第二多肽)─(任选的CH1结构域)─(任选的铰链结构域)─(“携带臼的”CH2-CH3结构域)。
6.优选的第四多肽链
本发明优选的三特异性结合分子的第四多肽链是效应细胞受体型结合结构域的多肽(其中第三和第四多肽形成针对在效应细胞表面上发现的受体的配体，或更优选地，免疫特异性结合表位III的上述抗体的轻链，或其与第三多肽链的结合结构域互补。
因此，在其中第三和第四多肽形成Fab型结合结构域的情况下，这样的第四多肽链在N-末端至C-末端方向上包括能够结合表位III的可变轻链结构域(VLIII)和促进与第三多肽链共价键合的结构域，或结合结构域和促进与第三多肽链共价键合的这样的结构域。这样的结构域可以是CL结构域，或其包含半胱氨酸的部分，比如(SEQ ID NO:38)FNRGEC，或接头比如接头2(具有序列(SEQ ID NO:34)GGCGGG。与这样的接头2形成二硫键的示例性的包含半胱氨酸的肽包括氨基酸序列VEPKSC(SEQ ID NO:36)或铰链结构域。
第四多肽链可分离自天然存在的抗体。可选地，其可被重组构建。优选的CL结构域是人IgG1CLκ结构域，其具有氨基酸序列(SEQ ID NO:210)：
可选地，示例性CL结构域是人IgG1CLλ2结构域，其具有氨基酸序列(SEQ ID NO:211)：
如将注意到，第四多肽链的CL结构域或其他包含半胱氨酸的结构域包括半胱氨酸残基。这样的半胱氨酸残基能够共价结合第三多肽链的CH1结构域的半胱氨酸残基，从而彼此共价复合本发明结合分子的第三和第四多肽链。因此第三和第四多肽链彼此共价结合。
另外，第一多肽链的CH2-CH3结构域的半胱氨酸残基可与第三多肽链的CH2-CH3结构域的半胱氨酸残基形成二硫键。因此第一和第三多肽链彼此共价结合。
E.变异的Fc结构域
在传统免疫功能中，抗体-抗原复合物与免疫系统的细胞的相互作用导致各种应答，范围从效应子功能诸如抗体依赖性细胞毒性、肥大细胞脱粒和对免疫调节信号的吞噬诸如调节淋巴细胞增殖和抗体分泌。所有这些相互作用均通过抗体或免疫复合物的Fc结构域与造血细胞上的专用细胞表面受体的结合而发起。通过抗体和免疫复合物触发的细胞应答的多样性是由三个Fc受体：FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)和FcγRIII(CD16)的结构异质性造成的。FcγRI(CD64)、FcγRIIA(CD32A)和FcγRIII(CD16)是激活(即，免疫系统增强)受体；FcγRIIB(CD32B)是抑制(即，免疫系统阻遏)受体。示例性IgG1Fc结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)在上面示出。
Fc结构域的修饰通常导致改变的表型，例如改变的血清半衰期、改变的稳定性、改变的对细胞酶的易感性或改变的效应子功能。就效应子功能而言，可期望修饰本发明抗体，以便增强例如抗体治疗癌症的效力。在某些情况下，例如在作用机制涉及阻断或拮抗但是不杀伤携带靶抗原的细胞的抗体的情况下，期望降低或消除效应子功能。当针对非期望的细胞，比如肿瘤和外源细胞时，通常期望增加效应子功能，其中FcγR以低水平表达，例如，具有低水平FcγRIIB的肿瘤特异性B细胞(例如，非霍奇金淋巴瘤、CLL和伯基特淋巴瘤)。在所述实施方式中，具有赋予的或改变的效应子功能活性的本发明的分子可用于治疗和/或预防其中期望增强效应子功能活性的效力的疾病、病症或感染。
在某些实施方式中，本发明的三特异性结合分子包括Fc结构域，其具有对野生型Fc结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)的一个或多个修饰(例如，取代、缺失或插入)，这降低Fc结构域的亲和力和抗体亲抗原性，因此，降低本发明的分子对一个或多个FcγR受体亲和力和抗体亲抗原性。在其他实施方式中，本发明的分子包括Fc结构域，其具有对野生型Fc结构域的氨基酸的一个或多个修饰，这提高Fc结构域的亲和力和抗体亲抗原性，因此，提高本发明的分子对一个或多个FcγR受体的亲和力和抗体亲抗原性。在其他实施方式中，分子包括变异的Fc结构域，其中相对于不包括Fc结构域的分子或包括野生型Fc结构域的分子，所述变体赋予或介导提高的ADCC活性和/或对FcγRIIA提高的结合。在可选实施方式中，分子包括变异的Fc结构域，其中相对于不包括Fc结构域的分子或包括野生型Fc结构域的分子，所述变体赋予或介导降低的ADCC活性(或其它效应子功能)和/或对FcγRIIB提高的结合。在一些实施方式中，本发明包括三特异性结合分子，其包括变异的Fc结构域，所述变异的Fc结构域相对于包括野生型Fc结构域的可比较的分子不显示对任何FcγR的可检测的结合。在其他实施方式中，本发明包括三特异性结合分子，其包括变异的Fc结构域，所述变异的Fc结构域仅仅结合单个FcγR，优选地结合FcγRIIA、FcγRIIB或FcγRIIIA之一。任意这样的提高的亲和力和/或抗体亲抗原性均优选通过在细胞中体外测量对FcγR可检测的结合的程度或FcγR相关活性而评估，所述细胞在亲本分子(没有修饰的Fc结构域)的结合活性不能在细胞中被检测到时表达低水平FcγR，或者所述细胞以以下密度表达非FcγR受体靶抗原：30,000至20,000个分子/细胞、20,000至10,000个分子/细胞、10,000至5,000个分子/细胞、5,000至1,000个分子/细胞、1,000至200个分子/细胞或200个分子/细胞或更少(但是至少10、50、100或150个分子/细胞)。
本发明的三特异性结合分子可包括对激活和/或抑制性Fcγ受体改变的亲和性。在一个实施方式中，三特异性结合分子包括变异Fc结构域，其相对于具有野生型Fc结构域的可比较的分子，对FcγRIIB具有提高的亲和力和对FcγRIIIA和/或FcγRIIA具有降低的亲和力。在另一实施方式中，本发明的三特异性结合分子包括变异Fc结构域，其相对于具有野生型Fc结构域的可比较的分子，对FcγRIIB具有降低的亲和力和对FcγRIIIA和/或FcγRIIA具有提高的亲和力。在另外的实施方式中，本发明的三特异性结合分子包括变异Fc结构域，其相对于具有野生型Fc结构域的可比较的分子，对FcγRIIB具有降低的亲和力和对FcγRIIIA和/或FcγRIIA具有降低的亲和力。在另外的实施方式中，本发明的三特异性结合分子包括变异Fc结构域，其相对于具有野生型Fc结构域的可比较的分子，对FcγRIIB具有不改变的亲和力和对FcγRIIIA和/或FcγRIIA具有降低的(或提高的)亲和力。
在某些实施方式中，本发明的三特异性结合分子包括变异Fc结构域，其对FcγRIIIA和/或FcγRIIA具有改变的亲和力，以便免疫球蛋白具有增强的效应子功能，例如，抗体依赖性细胞介导的细胞毒性。效应细胞功能的非限制性实例包括抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性吞噬、吞噬、调理、调理吞噬、细胞结合、莲座(resetting)、C1q结合和补体依赖性细胞介导的细胞毒性。
在优选的实施方式中，相对于包括野生型Fc结构域的可比较的分子，亲和性或效应子功能的改变是至少2倍，优选地至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少50倍或至少100倍。在本发明的其他实施方式中，相对于包括野生型Fc结构域的分子，变异的Fc结构域以至少65％，优选地至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、125％、150％、175％、200％、225％或250％更大的亲和性免疫特异性结合一个或多个FcR。这样的测量可以是体内或体外分析，并且，在优选的实施方式中，是体外分析比如ELISA或表面等离子共振试验。
在不同的实施方式中，本发明的三特异性结合分子包括变异的Fc结构域，其中所述变体激动(agonize)FcγR受体的至少一种活性，或拮抗FcγR受体的至少一种活性。在优选的实施方式中，分子包括变体，其拮抗FcγRIIB的一个或多个活性，例如，B细胞受体介导的信号传导、B细胞的激活、B细胞增殖、抗体产生、B细胞的细胞内钙流入，细胞周期进程、FcγRIIB介导的FcεRI信号传导的抑制、FcγRIIB的磷酸化、SHIP募集、SHIP磷酸化和与Shc的缔合，或拮抗FcγRIIB信号转导途径中一个或多个下游分子(例如，MAP激酶、JNK、p38或Akt)的活性。在另一实施方式中，本发明的三特异性结合分子包括变体，其激动FcεRI的一个或多个活性，例如，肥大细胞激活、钙动员、脱粒、细胞因子产生或血清素释放。
在某些实施方式中，分子包括Fc结构域，其包含来自两个或更多个IgG同种型(例如，IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)的区域。各种IgG同种型展示不同的物理和功能特性，包括血清半衰期、补体活化、FcγR结合亲和力和效应子功能活性(例如ADCC、CDC等)，这是由于它们铰链和/或Fc结构域的氨基酸序列的差异，例如如在以下文献中描述的：Flesch和Neppert(1999)J.Clin.Lab.Anal.14:141-156；Chappel等(1993)J.Biol.Chem.33:25124-25131；Chappel等(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.(美国)88:9036-9040；或Brüggemann等(1987)J.Exp.Med 166:1351-1361。该类型的变异的Fc结构域可单独使用，或结合氨基酸修饰使用，以影响Fc介导的效应子功能和/或结合活性。氨基酸修饰和IgG铰链/Fc结构域的组合可展示类似的功能(例如，对于FcγRIIA的增加的亲和性)，并且可另外地或，更优选地，协同作用，以相对于本发明包括野生型Fc结构域的分子，改变本发明分子的效应子功能。在其他实施方式中，氨基酸修饰和IgG Fc结构域可展示相反的功能(例如，分别增加和降低对于FcγRIIA的亲和性)，并且可用于相对于本发明不包括Fc结构域或包括相同同种型的野生型Fc结构域的分子，选择性调和或降低本发明分子的特定功能。
在优选的具体实施方式中，本发明的三特异性结合分子包括变异的Fc结构域，其中所述变异的Fc结构域包括相对于野生型Fc结构域的至少一个氨基酸修饰，以便所述分子具有对FcR改变的亲和力，前提是所述变异的Fc结构域在基于比如Sondermann等(2000)Nature 406:267-73公开那些的Fc-FcR相互作用的晶体学和结构分析直接接触FcγR的位置没有取代。Fc结构域中直接接触FcγR的位置的例子是氨基酸残基234-239(铰链结构域)、氨基酸残基265-269(B/C环)、氨基酸残基297-299(C’/E环)和氨基酸残基327-332(F/G环)。在一些实施方式中，本发明的分子包括变异的Fc结构域，其包括基于结构和晶体学分析不直接接触FcγR——例如不在Fc-FcγR结合位点中——的至少一个残基的修饰。
变异的Fc结构域是本领域熟知的，并且任何已知的Fc变体可在本发明中使用，以赋予或改变本发明包括Fc结构域(或其部分)的分子展示的效应子功能，如在功能上分析的，例如，在NK依赖性或巨噬细胞依赖性试验中分析的。例如，在抗体工程化技术中公开了鉴定为改变效应子功能的Fc结构域变体，并且其中公开的任何合适的变体均可用于本发明的分子。
在某些实施方式中，本发明的三特异性结合分子包括变异的Fc结构域，其在一个或多个位点中具有一个或多个氨基酸修饰，所述修饰(一个或多个)改变(相对于野生型Fc结构域)变异Fc结构域与激活FcγR(诸如FcγRIIA或FcγRIIIA)相对于抑制性FcγR(诸如FcγRIIB)的亲和力比：
尤其优选的是这样的本发明的三特异性结合分子：其具备变异的Fc结构域(相对于野生型Fc结构域)，其中Fc变体的亲和力的比大于1。这样的分子在提供对其中期望增强FcγR介导的效应细胞功能(例如，ADCC)的效力的疾病、病症或感染——例如，癌症或感染疾病——的治疗性或预防性治疗或改善其症状方面尤其有用。相比之下，亲和力的比小于1的Fc变体介导降低的效应细胞功能的效力。
表1按照它们的亲和力的比是否大于或小于1列举了示例性单(single)、双(double)、三(triple)、四(quadruple)和五(quintuple)个突变。
在具体的实施方式中，在变异的Fc结构域中，任何氨基酸修饰(例如，取代)在下述任何位置：235、240、241、243、244、247、262、263、269、298、328，或330，和优选地一个或多个下述残基：A240、I240、L241、L243、H244、N298、I328或V330。在不同的具体实施方式中，在变异的Fc结构域中，任何氨基酸修饰(例如，取代)在下述任何位置：268、269、270、272、276、278、283、285、286、289、292、293、301、303、305、307、309、331、333、334、335、337、338、340、360、373、376、416、419、430、434、435、437、438或439，和优选地一个或多个下述残基：H280、Q280、Y280、G290、S290、T290、Y290、N294、K295、P296、D298、N298、P298、V298、I300或L300。
在优选的实施方式中，在以改变的亲和力结合FcγR的变异的Fc结构域中，任何氨基酸修饰(例如，取代)在下述任何位置：255、256、258、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、298、300、301、303、305、307、309、312、320、322、326、329、330、332、331、333、334、335、337、338、339、340、359、360、373、376、416、419、430、434、435、437、438或439。优选地，变异的Fc结构域具有任何下述残基：A256、N268、Q272、D286、Q286、S286、A290、S290、A298、M301、A312、E320、M320、Q320、R320、E322、A326、D326、E326、N326、S326、K330、T339、A333、A334、E334、H334、L334、M334、Q334、V334、K335、Q335、A359、A360或A430。
在不同的实施方式中，在以降低的亲和力结合FcγR(经其Fc结构域)的变异的Fc结构域中，任何氨基酸修饰(例如，取代)在下述任何位置：252、254、265、268、269、270、278、289、292、293、294、295、296、298、300、301、303、322、324、327、329、333、335、338、340、373、376、382、388、389、414、416、419、434、435、437、438或439。
在不同的实施方式中，在以增强的亲和力结合FcγR(经其Fc结构域)的变异的Fc结构域中，任何氨基酸修饰(例如，取代)在下述任何位置：280、283、285、286、290、294、295、298、300、301、305、307、309、312、315、331、333、334、337、340、360、378、398，或430。在不同的实施方式中，在以增强的亲和力结合FcγRIIA的变异的Fc结构域中，任何下述残基：A255、A256、A258、A267、A268、N268、A272、Q272、A276、A280、A283、A285、A286、D286、Q286、S286、A290、S290、M301、E320、M320、Q320、R320、E322、A326、D326、E326、S326、K330、A331、Q335、A337或A430。
优选的变体包括在下述任何位置的一个或多个修饰：228、230、231、232、233、234、235、239、240、241、243、244、245、247、262、263、264、265、266、271、273、275、281、284、291、296、297、298、299、302、304、305、313、323、325、326、328、330或332。
尤其优选的变体包括选自A-AI组的一个或多个修饰：
仍更尤其优选的变体包括选自1-105组的一个或多个修饰：
在一个实施方式中，本发明的多价DR5结合分子包括变异的Fc结构域，其在Fc结构域中具有至少一个修饰。在某些实施方式中，变异的Fc结构域包括至少一个取代，其选自L235V、F243L、R292P、Y300L、V305I和P396L，其中所述编号是如在Kabat中的EU索引的编号。
在具体的实施方式中，变异的Fc结构域包括：
(A)选自下述的至少一个取代：F243L、R292P、Y300L、V305I和P396L；
(B)选自下述的至少两个取代：
(1)F243L和P396L；
(2)F243L和R292P；和
(3)R292P和V305I；
(C)选自下述的至少三个取代：
(1)F243L、R292P和Y300L；
(2)F243L、R292P和V305I；
(3)F243L、R292P和P396L；和
(4)R292P、V305I和P396L；
(D)选自下述的至少四个取代：
(1)F243L、R292P、Y300L和P396L；和
(2)F243L、R292P、V305I和P396L；或
(E)选自下述的至少五个取代：
(1)F243L、R292P、Y300L、V305I和P396L；和
(2)L235V、F243L、R292P、Y300L和P396L。
在另一具体的实施方式中，变异的Fc结构域包括下述取代：
(A)F243L、R292P和Y300L；
(B)L235V、F243L、R292P、Y300L和P396L；或
(C)F243L、R292P、Y300L、V305I和P396L。
在其他实施方式中，本发明包括本领域已知的任何Fc变体，比如下述文献公开的那些Fc变体的用途：Jefferis,B.J.等(2002)“Interaction Sites On Human IgG-Fc ForFcgammaR:Current Models,”Immunol.Lett.82:57-65；Presta,L.G.等(2002)“Engineering Therapeutic Antibodies For Improved Function,”Biochem.Soc.Trans.30:487-90；Idusogie,E.E.等(2001)“Engineered Antibodies WithIncreased Activity To Recruit Complement,”J.Immunol.166:2571-75；Shields,R.L.等(2001)“High Resolution Mapping Of The Binding Site On Human IgG1For FcGamma RI,Fc Gamma RII,Fc Gamma RIII,And FcRn And Design Of IgG1Variants WithImproved Binding To The Fc gamma R,”J.Biol.Chem.276:6591-6604；Idusogie,E.E.等(2000)“Mapping Of The C1q Binding Site On Rituxan,A Chimeric Antibody With AHuman IgG Fc,”J.Immunol.164:4178-84；Reddy,M.P.等(2000)“Elimination Of FcReceptor-Dependent Effector Functions Of A Modified IgG4Monoclonal AntibodyTo Human CD4,”J.Immunol.164:1925-1933；Xu,D.等(2000)“In Vitro Characterizationof Five Humanized OKT3Effector Function Variant Antibodies,”Cell.Immunol.200:16-26；Armour,K.L.等(1999)“Recombinant human IgG Molecules Lacking FcgammaReceptor I Binding And Monocyte Triggering Activities,”Eur.J.Immunol.29:2613-24；Jefferis,R.等(1996)“Modulation Of Fc(Gamma)R And Human ComplementActivation By IgG3-Core Oligosaccharide Interactions,”Immunol.Lett.54:101-04；Lund,J.等(1996)“Multiple Interactions Of IgG With Its Core OligosaccharideCan Modulate Recognition By Complement And Human Fc Gamma Receptor I AndInfluence The Synthesis Of Its Oligosaccharide Chains,”J.Immunol.157:4963-4969；Hutchins等(1995)“Improved Biodistribution,Tumor Targeting,And ReducedImmunogenicity In Mice With A Gamma 4Variant Of Campath-1H,”Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)92:11980-84；Jefferis,R.等(1995)“Recognition SitesOn Human IgG For Fc Gamma Receptors:The Role Of Glycosylation,”Immunol.Lett.44:111-17；Lund,J.等(1995)“Oligosaccharide-Protein InteractionsIn IgG Can Modulate Recognition By Fc Gamma Receptors,”FASEB J.9:115-19；Alegre,M.L.等(1994)“A Non-Activating"Humanized"Anti-CD3Monoclonal AntibodyRetains Immunosuppressive Properties In Vivo,”Transplantation 57:1537-1543；Lund等(1992)“Multiple Binding Sites On The CH2Domain Of IgG For Mouse FcGamma R11,”Mol.Immunol.29:53-59；Lund等(1991)“Human Fc Gamma RI And Fc GammaRII Interact With Distinct But Overlapping Sites On Human IgG,”J.Immunol.147:2657-2662；Duncan,A.R.等(1988)“Localization Of The Binding Site For The HumanHigh-Affinity Fc Receptor On IgG,”Nature 332:563-564；美国专利号5,624,821、5,885,573、6,194,551、7,276,586和7,317,091；和PCT公开WO 00/42072和PCT WO 99/58572。
在一些实施方式中，本发明的分子进一步包括一个或多个糖基化位点，以便一个或多个碳水化合物部分共价连接于分子。优选地，与亲本抗体相比，在Fc结构域具有一个或多个糖基化位点和/或一个或多个修饰的本发明的分子赋予或具有增强的抗体介导的效应子功能，例如增强的ADCC活性。在一些实施方式中，本发明进一步包括这样的分子：其包括已知直接或间接与抗体的碳水化合物部分相互作用的一个或多个氨基酸修饰，包括但不限于在下述位置的氨基酸241，243，244，245，245，249，256，258，260，262，264，265，296，299和301。直接或间接与抗体的碳水化合物部分相互作用的氨基酸在本领域中是已知的，见，例如Jefferis等,1995Immunology Letters,44:111-7，其通过引用以其整体并入本文。
在另一实施方式中，本发明包括这样的分子，其已经通过将一个或多个糖基化位点引入到分子的一个或多个位点而被修饰，优选不改变分子的功能，例如与靶抗原或FcγR的结合活性。糖基化位点可以被引入到本发明分子的可变区和/或恒定区。如本文中使用的，“糖基化位点”包括与低聚糖(即，碳水化合物，其含有两个或多个连接在一起的单糖)特异性和共价连接的抗体中任何具体的氨基酸序列。低聚糖侧链通常经N-或O-键连接至抗体的骨架。N-连接的糖基化指将低聚糖部分连接至天冬酰胺残基的侧链。O-连接的糖基化指将低聚糖部分连接至羟基氨基酸，例如丝氨酸、苏氨酸。本发明的分子可包括一个或多个糖基化位点，包括N-连接的和O-连接的糖基化位点。对于N-连接的或O-连接的糖基化，本领域中已知的任意糖基化位点均可以根据本发明使用。可根据本发明方法使用的示例性N-连接的糖基化位点是氨基酸序列：Asn-X-Thr/Ser，其中X可以是任意氨基酸，和Thr/Ser表示苏氨酸或丝氨酸。利用本发明所属领域中已知的方法，这样的位点或多个位点可以被引入到本发明的分子中(见例如，IN VITRO MUTAGENESIS,RECOMBINANT DNA:A SHORT COURSE,J.D.Watson等,W.H.Freeman and Company,New York,1983,第8章,pp.106-116，其通过引用以其整体并入本文。用于将糖基化位点引入本发明分子的示例性方法可包括：修饰或突变分子的氨基酸序列，以便获得期望的Asn-X-Thr/Ser序列。
在一些实施方式中，本发明包括通过添加或删除糖基化位点修饰本发明分子的碳水化合物含量的方法。修饰抗体(以及包括抗体结构域的分子)的碳水化合物含量的方法是本领域中悉知的，并包括在本发明中，见，例如美国专利号6,218,149；EP 0 359 096 B1；美国公布号US 2002/0028486；WO 03/035835；美国公布号2003/0115614；美国专利号6,218,149；美国专利号6,472,511；其均通过引用以其整体并入本文。在其他实施方式中，本发明包括通过删除分子的一个或多个内源碳水化合物部分修饰本发明分子的碳水化合物含量的方法。在具体实施方式中，本发明包括通过修饰临近297的位置改变抗体的Fc结构域的糖基化位点。在具体实施方式中，本发明包括修饰位置296，以便位置296而不是位置297被糖基化。
也可通过技术诸如通过将一个或多个半胱氨酸残基引入到Fc结构域中修饰效应子功能，从而允许在该区域中发生链间二硫键形成，导致产生同二聚抗体，其可具有改进的内在化能力和/或提高的补体-介导的细胞杀伤和ADCC(Caron,P.C.等(1992)“EngineeredHumanized Dimeric Forms Of IgG Are More Effective Antibodies,”J.Exp.Med.176:1191-1195；Shopes,B.(1992)“A Genetically Engineered Human IgG Mutant WithEnhanced Cytolytic Activity,”J.Immunol.148(9):2918-2922。具有增强的抗肿瘤活性的同二聚抗体还可利用异源双功能交联剂被制备，如以下文献中描述的：Wolff,E.A.等(1993)“Monoclonal Antibody Homodimers:Enhanced Antitumor Activity In NudeMice,”Cancer Research53:2560-2565。可选地，抗体可被工程化，其具有双Fc结构域，并且，从而可具有增强的补体分解和ADCC能力(Stevenson,G.T.等(1989)“A ChimericAntibody With Dual Fc Domains(bisFabFc)Prepared By Manipulations At The IgGHinge,”Anti-Cancer Drug Design 3:219-230)。
III.示例性三特异性结合分子
F.gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2x DR5 mAb 1
构建由四条多肽链组成的示例性三特异性结合分子。三特异性结合分子包括gpA33 mAb 1的VL和VH结构域、抗体CD3 mAb 2的VL和VH结构域和DR5 mAb1的VL和VH结构域，因此命名为“gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2xDR5 mAb 1”。该三特异性结合分子的第一多肽链的氨基酸序列是(SEQ ID NO:212)：
在SEQ ID NO:212中，氨基酸残基1-106对应gpA33 mAb 1的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:181)，残基107-114对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基115-239对应具有D65G取代的CD3 mAb 2的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:112)，残基240-245对应GGCGGG接头(SEQ ID NO:34)，残基246-273对应E-螺旋结构域(SEQ ID NO:39)，残基274-276是接头GGG，残基277-286是接头DKTHTCPPCP(SEQ ID NO:48)和残基287-503是“携带杵的”CH2-CH3结构域(SEQ ID NO:52)。
编码SEQ ID NO:212的多核苷酸是SEQ ID NO:213：
gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2x DR5 mAb 1的第二多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:214)：
在SEQ ID NO:214中，氨基酸残基1-110对应CD3 mAb 2的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:104)，残基111-118对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基119-237对应gpA33 mAb 1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:186)，残基238-243对应接头GGCGGG(SEQ ID NO:34)和残基244-271是K-螺旋结构域(SEQ ID NO:40)。
编码SEQ ID NO:214的多核苷酸是(SEQ ID NO:215)：
gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2x DR5 mAb 1的第三多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:216)：
在SEQ ID NO:216中，氨基酸残基1-121对应DR5 mAb 1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:8)，残基122-219对应修饰的CH1结构域(SEQ ID NO:208)，残基220-234对应接头(SEQ ID NO:209)和残基235-451对应“携带臼的”CH2-CH3结构域(SEQ ID NO:53)。
编码SEQ ID NO:216的多核苷酸是(SEQ ID NO:217)：
gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2x DR5 mAb 1的第四多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:218)：
在SEQ ID NO:218中，氨基酸残基1-111对应DR5 mAb 1的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:3)和残基112-218对应CLκ结构域(SEQ ID NO:210)。
编码SEQ ID NO:218的多核苷酸是(SEQ ID NO:219)：
G.gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2x DR5 mAb 2
构建由四条多肽链组成的第二示例性三特异性结合分子。三特异性结合分子包括gpA33 mAb 1的VL和VH结构域、抗体CD3 mAb 2的VL和VH结构域和DR5 mAb 2的VL和VH结构域，因此命名为“gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2x DR5 mAb 2”。该三特异性结合分子的第一多肽链的氨基酸序列是(SEQ ID NO:220)：
在SEQ ID NO:220中，氨基酸残基1-106对应gpA33 mAb 1的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:181)，残基107-114对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基115-239对应具有D65G取代的CD3 mAb 2的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:112)，残基240-245对应GGCGGG接头(SEQ ID NO:34)，残基246-273对应E-螺旋结构域(SEQ ID NO:39)，残基274-276是接头GGG，残基277-286是接头DKTHTCPPCP(SEQ ID NO:48)和残基287-503是“携带杵的”CH2-CH3结构域(SEQ ID NO:52)。
编码SEQ ID NO:220的多核苷酸是(SEQ ID NO:221)：
gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2x DR5 mAb 2的第二多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:222)：
在SEQ ID NO:222中，氨基酸残基1-110对应CD3 mAb 2的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:104)，残基111-118对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基119-237对应gpA33 mAb 1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:186)，残基238-243对应接头GGCGGG(SEQ ID NO:34)和残基244-271是K-螺旋结构域(SEQ ID NO:40)。
编码SEQ ID NO:222的多核苷酸是(SEQ ID NO:223)：
gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2x DR5 mAb 2的第三多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:224)：
在SEQ ID NO:224中，氨基酸残基1-119对应DR5 mAb 2的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:18)，残基120-217对应修饰的CH1结构域(SEQ ID NO:208)，残基218-232对应接头(SEQ ID NO:209)和残基233-449对应“携带臼的”CH2-CH3结构域(SEQ ID NO:53)。
编码SEQ ID NO:224的多核苷酸是(SEQ ID NO:225)：
gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2x DR5 mAb 2的第四多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:226)：
在SEQ ID NO:226中，氨基酸残基1-107对应DR5 mAb 2的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:13)和残基108-214对应CLκ结构域(SEQ ID NO:210)。
编码SEQ ID NO:226的多核苷酸是(SEQ ID NO:227)：
H.EphA2 mAb 1x CD3 mAb 2x DR5 mAb 1
构建由四条多肽链组成的进一步示例性三特异性结合分子。三特异性结合分子包括EphA2 mAb 1的VL和VH结构域、抗体CD3 mAb 2的VL和VH结构域和DR5 mAb 1的VL和VH结构域，因此命名为“EphA2 mAb 1x CD3 mAb 2x DR5 mAb 1”。该三特异性结合分子的第一多肽链的氨基酸序列是(SEQ ID NO:228)：
在SEQ ID NO:228中，氨基酸残基1-106对应EphA2 mAb 1的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:153)，残基107-114对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基115-239对应具有D65G取代的CD3 mAb 2的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:112)，残基240-245对应GGCGGG接头(SEQ ID NO:34)，残基246-273对应E-螺旋结构域(SEQ ID NO:39)，残基274-276是接头GGG，残基277-286是接头DKTHTCPPCP(SEQ ID NO:48)和残基287-503是“携带杵的”CH2-CH3结构域(SEQ ID NO:52)。
编码SEQ ID NO:228的多核苷酸是(SEQ ID NO:229)：
EphA2 mAb 1x CD3 mAb 2x DR5 mAb 1的第二多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:230)：
在SEQ ID NO:230中，氨基酸残基1-110对应CD3 mAb 2的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:104)，残基111-118对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基119-236对应EphA2 mAb 1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:158)，残基237-242对应接头GGCGGG(SEQ ID NO:34)和残基243-270是K-螺旋结构域(SEQ ID NO:40)。
编码SEQ ID NO:230的多核苷酸是(SEQ ID NO:231)：
EphA2 mAb 1x CD3 mAb 2x DR5 mAb 1的第三多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:232)：
在SEQ ID NO:232中，氨基酸残基1-121对应DR5 mAb 1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:8)，残基122-219对应修饰的CH1结构域(SEQ ID NO:208)，残基220-234对应接头(SEQ ID NO:209)和残基235-451对应“携带臼的”CH2-CH3结构域(SEQ ID NO:53)。
编码SEQ ID NO:232的多核苷酸是(SEQ ID NO:233)：
EphA2 mAb 1x CD3 mAb 2x DR5 mAb 1的第四多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:234)：
在SEQ ID NO:234中，氨基酸残基1-111对应DR5 mAb 1的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:3)和残基112-218对应CLκ结构域(SEQ ID NO:210)。
编码SEQ ID NO:234的多核苷酸是(SEQ ID NO:235)：
I.EphA2 mAb 2x CD3 mAb 2x DR5 mAb 1
构建由四条多肽链组成的进一步示例性三特异性结合分子。三特异性结合分子包括EphA2 mAb 2的VL和VH结构域、抗体CD3 mAb 2的VL和VH结构域和DR5 mAb 1的VL和VH结构域，因此命名为“EphA2 mAb 2x CD3 mAb 2x DR5 mAb 1”。该三特异性结合分子的第一多肽链的氨基酸序列是(SEQ ID NO:236)：
在SEQ ID NO:236中，氨基酸残基1-111对应EphA2 mAb 2的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:163)，残基112-119对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基120-244对应具有D65G取代的CD3 mAb 2的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:112)，残基245-250对应GGCGGG接头(SEQ ID NO:34)，残基251-278对应E-螺旋结构域(SEQ ID NO:39)，残基279-281是接头GGG，残基282-291是接头DKTHTCPPCP(SEQ ID NO:48)和残基292-508是“携带杵的”CH2-CH3结构域(SEQ ID NO:52)。
编码SEQ ID NO:236的多核苷酸是(SEQ ID NO:237)：
EphA2 mAb 2x CD3 mAb 2x DR5 mAb 1的第二多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:238)：
在SEQ ID NO:238中，氨基酸残基1-110对应CD3 mAb 2的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:104)，残基111-118对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基119-236对应EphA2 mAb 2的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:167)，残基237-242对应接头GGCGGG(SEQ ID NO:34)和残基243-270是K-螺旋结构域(SEQ ID NO:40)。
编码SEQ ID NO:238的多核苷酸是(SEQ ID NO:239)：
EphA2 mAb 2x CD3 mAb 2x DR 5 mAb 1的第三多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:240)：
在SEQ ID NO:240中，氨基酸残基1-121对应DR5 mAb 1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:8)，残基122-219对应修饰的CH1结构域(SEQ ID NO:208)，残基220-234对应接头(SEQ ID NO:209)和残基235-451对应“携带臼的”CH2-CH3结构域(SEQ ID NO:53)。
编码SEQ ID NO:240的多核苷酸是(SEQ ID NO:241)：
EphA2 mAb 2x CD3 mAb 2x DR5 mAb 1的第四多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:242)：
在SEQ ID NO:242中，氨基酸残基1-111对应DR5 mAb 1的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:3)和残基112-218对应CLκ结构域(SEQ ID NO:210)。
编码SEQ ID NO:242的多核苷酸是(SEQ ID NO:243)：
J.EphA2 mAb 3x CD3 mAb 2x DR5 mAb 1
构建由四条多肽链组成的进一步示例性三特异性结合分子。三特异性结合分子包括EphA2 mAb 3的VL和VH结构域、抗体CD3 mAb 2的VL和VH结构域和DR5 mAb 1的VL和VH结构域，因此命名为“EphA2 mAb 3x CD3 mAb 2x DR5 mAb 1”。该三特异性结合分子的第一多肽链的氨基酸序列是(SEQ ID NO:244)：
在SEQ ID NO:244中，氨基酸残基1-107对应EphA2 mAb 3的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:172)，残基108-115对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基116-240对应具有D65G取代的CD3 mAb 2的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:112)，残基241-246对应GGCGGG接头(SEQ ID NO:34)，残基247-274对应E-螺旋结构域(SEQ ID NO:39)，残基275-277是接头GGG，残基278-287是接头DKTHTCPPCP(SEQ ID NO:48)和残基288-504是“携带杵的”CH2-CH3结构域(SEQ ID NO:52)。
编码SEQ ID NO:244的多核苷酸是(SEQ ID NO:245)：
EphA2 mAb 3x CD3 mAb 2x DR5 mAb 1的第二多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:246)：
在SEQ ID NO:246中，氨基酸残基1-110对应CD3 mAb 2的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:104)，残基111-118对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基119-236对应EphA2 mAb 3的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:177)，残基237-242对应接头GGCGGG(SEQ ID NO:34)和残基243-270是K-螺旋结构域(SEQ ID NO:40)。
编码SEQ ID NO:246的多核苷酸是(SEQ ID NO:247)：
EphA2 mAb 3x CD3 mAb 2x DR5 mAb 1的第三多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:248)：
在SEQ ID NO:248中，氨基酸残基1-121对应DR5 mAb 1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:8)，残基122-219对应修饰的CH1结构域(SEQ ID NO:208)，残基220-234对应接头(SEQ ID NO:209)和残基235-451对应“携带臼的”CH2-CH3结构域(SEQ ID NO:53)。
编码SEQ ID NO:248的多核苷酸是(SEQ ID NO:249)：
EphA2 mAb 3x CD3 mAb 2x DR5 mAb 1的第四多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:250)：
在SEQ ID NO:250中，氨基酸残基1-111对应DR5 mAb 1的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:3)和残基112-218对应CLκ结构域(SEQ ID NO:210)。
编码SEQ ID NO:250的多核苷酸是(SEQ ID NO:251)：
尽管上述示例性三特异性结合分子对于每个结合结构域包括三个轻链(VL)CDR和三个重链(VH)CDR，应认识到本发明也包括下述三特异性结合分子，其具有：
(1)任何这样的结合结构域的VL结构域的至少一个CDR；
(2)任何这样的结合结构域的VL结构域的至少两个CDR；
(3)任何这样的结合结构域的VL结构域的三个CDR；
(4)任何这样的结合结构域的VH结构域的至少一个CDR；
(5)任何这样的结合结构域的VH结构域的至少两个CDR；
(6)任何这样的结合结构域的VH结构域的三个CDR；
(7)任何这样的结合结构域的VL结构域的至少一个CDR和该结合结构域的VH结构域的至少一个CDR；
(8)任何这样的结合结构域的VL结构域的至少两个CDR和该结合结构域的VH结构域的至少两个CDR；
(9)任何这样的结合结构域的VL结构域的三个CDR和该结合结构域的VH结构域的三个CDR；
(10)任何这样的结合结构域的VL结构域；
(11)任何这样的结合结构域的VH结构域；或
(12)任何这样的结合结构域的VL和VH结构域。
K.gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2xEphA2 mAb 1
构建由四条多肽链组成的三特异性结合分子，其包括gpA33 mAb 1的VL和VH结构域、抗体CD3 mAb 2的VL和VH结构域和EphA2 mAb 1的VL和VH结构域。三特异性结合分子所以命名为“gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2x EphA2 mAb1”。该三特异性结合分子的第一多肽链的氨基酸序列是(SEQ ID NO:252)：
在SEQ ID NO:252中，氨基酸残基1-106对应gpA33 mAb 1的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:181)，残基107-114对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基115-239对应具有D65G取代的CD3 mAb 2的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:112)，残基240-245对应GGCGGG接头(SEQ ID NO:34)，残基246-273对应E-螺旋结构域(SEQ ID NO:39)，残基274-276是接头GGG，残基277-286是接头DKTHTCPPCP(SEQ ID NO:48)和残基287-503是“携带杵的”CH2-CH3结构域(SEQ ID NO:52)。
编码SEQ ID NO:252的多核苷酸是(SEQ ID NO:253)：
gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2x EphA2 mAb 1的第二多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:254)：
在SEQ ID NO:254中，氨基酸残基1-110对应CD3 mAb 2的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:104)，残基111-118对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基119-237对应gpA33 mAb 1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:186)，残基238-243对应接头GGCGGG(SEQ ID NO:34)和残基244-271是K-螺旋结构域(SEQ ID NO:40)。
编码SEQ ID NO:254的多核苷酸是(SEQ ID NO:255)：
gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2x EphA2 mAb 1的第三多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:256)：
在SEQ ID NO:256中，氨基酸残基1-118对应EphA2 mAb 1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:158)，残基119-216对应修饰的CH1结构域(SEQ ID NO:208)，残基217-231对应接头(SEQ ID NO:209)和残基232-448对应“携带臼的”CH2-CH3结构域(SEQ ID NO:53)。
编码SEQ ID NO:256的多核苷酸是(SEQ ID NO:257)：
gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2x EphA2 mAb 1的第四多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:258)：
在SEQ ID NO:258中，氨基酸残基1-106对应EphA2 mAb 1的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:153)和残基107-213对应CLκ结构域(SEQ ID NO:210)。
编码SEQ ID NO:258的多核苷酸是(SEQ ID NO:259)：
L.gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2xEphA2 mAb 2
构建由四条多肽链组成的三特异性结合分子，其包括gpA33 mAb 1的VL和VH结构域、抗体CD3 mAb 2的VL和VH结构域和EphA2 mAb 2的VL和VH结构域。三特异性结合分子所以命名为“gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2x EphA2 mAb2”。该三特异性结合分子的第一多肽链的氨基酸序列是(SEQ ID NO:260)：
在SEQ ID NO:260中，氨基酸残基1-106对应gpA33 mAb 1的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:181)，残基107-114对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基115-239对应具有D65G取代的CD3 mAb 2的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:112)，残基240-245对应GGCGGG接头(SEQ ID NO:34)，残基246-273对应E-螺旋结构域(SEQ ID NO:39)，残基274-276是接头GGG，残基277-286是接头DKTHTCPPCP(SEQ ID NO:48)和残基287-503是“携带杵的”CH2-CH3结构域(SEQ ID NO:52)。
编码SEQ ID NO:260的多核苷酸是(SEQ ID NO:261)：
gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2x EphA2 mAb 2的第二多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:262)：
在SEQ ID NO:262中，氨基酸残基1-110对应CD3 mAb 2的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:104)，残基111-118对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基119-237对应gpA33 mAb 1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:186)，残基238-243对应接头GGCGGG(SEQ ID NO:34)和残基244-271是K-螺旋结构域(SEQ ID NO:40)。
编码SEQ ID NO:262的多核苷酸是(SEQ ID NO:263)：
gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2x EphA2 mAb 2的第三多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:264)：
在SEQ ID NO:264中，氨基酸残基1-118对应EphA2 mAb 2的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:167)，残基119-216对应修饰的CH1结构域(SEQ ID NO:208)，残基217-231对应接头(SEQ ID NO:209)和残基232-448对应“携带臼的”CH2-CH3结构域(SEQ ID NO:53)。
编码SEQ ID NO:264的多核苷酸是(SEQ ID NO:265)：
gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2x EphA2 mAb 2的第四多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:266)：
在SEQ ID NO:266中，氨基酸残基1-111对应EphA2 mAb 1的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:163)和残基112-218对应CLκ结构域(SEQ ID NO:210)。
编码SEQ ID NO:266的多核苷酸是(SEQ ID NO:267)：
M.gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2xEphA2 mAb 3
构建由四条多肽链组成的三特异性结合分子，其包括gpA33 mAb 1的VL和VH结构域、抗体CD3 mAb 2的VL和VH结构域和EphA2 mAb 3的VL和VH结构域。三特异性结合分子所以命名为“gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2x EphA2 mAb3”。该三特异性结合分子的第一多肽链的氨基酸序列是(SEQ ID NO:268)：
在SEQ ID NO:268中，氨基酸残基1-106对应gpA33 mAb 1的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:181)，残基107-114对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基115-239对应具有D65G取代的CD3 mAb 2的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:112)，残基240-245对应GGCGGG接头(SEQ ID NO:34)，残基246-273对应E-螺旋结构域(SEQ ID NO:39)，残基274-276是接头GGG，残基277-286是接头DKTHTCPPCP(SEQ ID NO:48)和残基287-503是“携带杵的”CH2-CH3结构域(SEQ ID NO:52)。
编码SEQ ID NO:268的多核苷酸是(SEQ ID NO:269)：
gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2x EphA2 mAb 3的第二多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:270)：
在SEQ ID NO:270中，氨基酸残基1-110对应CD3 mAb 2的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:104)，残基111-118对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基119-237对应gpA33 mAb 1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:186)，残基238-243对应接头GGCGGG(SEQ ID NO:34)和残基244-271是K-螺旋结构域(SEQ ID NO:40)。
编码SEQ ID NO:270的多核苷酸是(SEQ ID NO:271)：
gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2x EphA2 mAb 3的第三多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:272)：
在SEQ ID NO:272中，氨基酸残基1-118对应EphA2 mAb 3的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:177)，残基119-216对应修饰的CH1结构域(SEQ ID NO:208)，残基217-231对应接头(SEQ ID NO:209)和残基232-448对应“携带臼的”CH2-CH3结构域(SEQ ID NO:53)。
编码SEQ ID NO:272的多核苷酸是(SEQ ID NO:273)：
gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2x EphA2 mAb 3的第四多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:274)：
在SEQ ID NO:274中，氨基酸残基1-107对应EphA2 mAb 3的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:172)和残基108-214对应CLκ结构域(SEQ ID NO:210)。
编码SEQ ID NO:274的多核苷酸是(SEQ ID NO:275)：
N.EphA2 mAb 1xCD3 mAb 2xgpA33 mAb 1
构建可选的EphA2/CD3/gpA33三特异性结合分子。分子由四条多肽链组成并且包括EphA2 mAb 1的VL和VH结构域、抗体CD3 mAb 2的VL和VH结构域和GpA33 mAb 1的VL和VH结构域。分子命名为“EphA2 mAb 1x CD3 mAb 2x gpA33 mAb 1”。该三特异性结合分子的第一多肽链的氨基酸序列是(SEQ ID NO:276)：
在SEQ ID NO:276中，氨基酸残基1-106对应EphA2 mAb 1的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:153)，残基107-114对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基115-239对应具有D65G取代的CD3 mAb 2的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:112)，残基240-245对应GGCGGG接头(SEQ ID NO:34)，残基246-273对应E-螺旋结构域(SEQ ID NO:39)，残基274-276是接头GGG，残基277-286是接头DKTHTCPPCP(SEQ ID NO:48)和残基287-503是“携带杵的”CH2-CH3结构域(SEQ ID NO:52)。
编码SEQ ID NO:276的多核苷酸是(SEQ ID NO:277)：
EphA2 mAb 1x CD3 mAb 2x gpA33 mAb 1的第二多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:278)：
在SEQ ID NO:278中，氨基酸残基1-110对应CD3 mAb 2的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:104)，残基111-118对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基119-236对应EphA2 mAb 1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:158)，残基237-242对应接头GGCGGG(SEQ ID NO:34)和残基243-270是K-螺旋结构域(SEQ ID NO:40)。
编码SEQ ID NO:278的多核苷酸是(SEQ ID NO:279)：
EphA2 mAb 1x CD3 mAb 2x gpA33 mAb 1的第三多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:280)：
在SEQ ID NO:280中，氨基酸残基1-119对应gpA33 mAb 1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:186)，残基120-217对应修饰的CH1结构域(SEQ ID NO:208)，残基218-232对应接头(SEQ ID NO:209)和残基233-449对应“携带臼的”CH2-CH3结构域(SEQ ID NO:53)。
编码SEQ ID NO:280的多核苷酸是(SEQ ID NO:281)：
EphA2 mAb 1x CD3 mAb 2x gpA33 mAb 1的第四多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:282)：
在SEQ ID NO:282中，氨基酸残基1-106对应gpA33mAb 1的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:181)和残基107-213对应CLκ结构域(SEQ ID NO:210)。
编码SEQ ID NO:282的多核苷酸是(SEQ ID NO:283)：
O.EphA2 mAb 2x CD3 mAb 2x gpA33 mAb 1
构建第二可选的EphA2/CD3/gpA33三特异性结合分子。分子由四条多肽链组成并且包括EphA2 mAb 2的VL和VH结构域、抗体CD3 mAb 2的VL和VH结构域和GpA33 mAb 1的VL和VH结构域。分子命名为“EphA2 mAb 2x CD3mAb 2x gpA33 mAb 1”。该三特异性结合分子的第一多肽链的氨基酸序列是(SEQ ID NO:284)：
在SEQ ID NO:284中，氨基酸残基1-111对应EphA2 mAb 2的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:163)，残基112-119对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基120-244对应具有D65G取代的CD3 mAb 2的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:112)，残基245-250对应GGCGGG接头(SEQ ID NO:34)，残基251-278对应E-螺旋结构域(SEQ ID NO:39)，残基279-281是接头GGG，残基282-291是接头DKTHTCPPCP(SEQ ID NO:48)和残基292-508是“携带杵的”CH2-CH3结构域(SEQ ID NO:52)。
编码SEQ ID NO:284的多核苷酸是(SEQ ID NO:285)：
EphA2 mAb 2x CD3 mAb 2x gpA33 mAb 1的第二多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:286)：
在SEQ ID NO:286中，氨基酸残基1-110对应CD3 mAb 2的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:104)，残基111-118对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基119-236对应EphA2 mAb 2的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:167)，残基237-242对应接头GGCGGG(SEQ ID NO:34)和残基243-270是K-螺旋结构域(SEQ ID NO:40)。
编码SEQ ID NO:286的多核苷酸是(SEQ ID NO:287)：
EphA2 mAb 2x CD3 mAb 2x gpA33 mAb 1的第三多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:288)：
在SEQ ID NO:288中，氨基酸残基1-119对应gpA33 mAb 1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:186)，残基120-217对应修饰的CH1结构域(SEQ ID NO:208)，残基218-232对应接头(SEQ ID NO:209)和残基233-449对应“携带臼的”CH2-CH3结构域(SEQ ID NO:53)。
编码SEQ ID NO:288的多核苷酸是(SEQ ID NO:289)：
EphA2 mAb 2x CD3 mAb 2x gpA33 mAb 1的第四多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:290)：
在SEQ ID NO:290中，氨基酸残基1-106对应gpA33 mAb 1的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:181)和残基107-213对应CLκ结构域(SEQ ID NO:210)。
编码SEQ ID NO:290的多核苷酸是(SEQ ID NO:291)：
P.EphA2 mAb 3x CD3 mAb 2x gpA33 mAb 1
构建第三可选的EphA2/CD3/gpA33三特异性结合分子。分子由四条多肽链组成并且包括EphA2 mAb 3的VL和VH结构域、抗体CD3 mAb 2的VL和VH结构域和GpA33 mAb 1的VL和VH结构域。分子命名为“EphA2 mAb 3x CD3mAb 2x gpA33 mAb 1”。该三特异性结合分子的第一多肽链的氨基酸序列是(SEQ ID NO:292)：
在SEQ ID NO:292中，氨基酸残基1-107对应EphA2 mAb 3的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:172)，残基108-115对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基116-240对应具有D65G取代的CD3 mAb 2的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:112)，残基241-246对应GGCGGG接头(SEQ ID NO:34)，残基247-274对应E-螺旋结构域(SEQ ID NO:39)，残基275-277是接头GGG，残基278-287是接头DKTHTCPPCP(SEQ ID NO:48)和残基288-504是“携带杵的”CH2-CH3结构域(SEQ ID NO:52)。
编码SEQ ID NO:292的多核苷酸是(SEQ ID NO:293)：
EphA2 mAb 3x CD3 mAb 2x gpA33 mAb 1的第二多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:294)：
在SEQ ID NO:294中，氨基酸残基1-110对应CD3 mAb 3的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:104)，残基111-118对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基119-236对应EphA2 mAb 3的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:177)，残基237-242对应接头GGCGGG(SEQ ID NO:34)和残基243-270是K-螺旋结构域(SEQ ID NO:40)。
编码SEQ ID NO:294的多核苷酸是(SEQ ID NO:295)：
EphA2 mAb 3x CD3 mAb 2x gpA33 mAb 1的第三多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:296)：
在SEQ ID NO:296中，氨基酸残基1-119对应gpA33 mAb 1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:186)，残基120-217对应修饰的CH1结构域(SEQ ID NO:208)，残基218-232对应接头(SEQ ID NO:209)和残基233-449对应“携带臼的”CH2-CH3结构域(SEQ ID NO:53)。
编码SEQ ID NO:296的多核苷酸是(SEQ ID NO:297)：
EphA2 mAb 3x CD3 mAb 2x gpA33 mAb 1的第四多肽链的氨基酸序列是(SEQ IDNO:298)：
在SEQ ID NO:298中，氨基酸残基1-106对应gpA33 mAb 1的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:181)和残基107-213对应CLκ结构域(SEQ ID NO:210)。
编码SEQ ID NO:298的多核苷酸是(SEQ ID NO:299)：
IV.参考抗体和双抗体
为了有助于表征本发明的三特异性结合分子，构建下述参考双抗体。
Q.DR5 mAb 1x CD3 mAb 2双抗体
构建由两条多肽链组成的示例性双特异性双抗体，其具有抗人DR5抗体DR5 mAb 1的VL和VH结构域和CD3 mAb 2的VL和VH结构域。双抗体命名为“DR5 mAb 1x CD3 mAb 2双抗体”。该双抗体的第一多肽链的氨基酸序列是(SEQ ID NO:140)：
在SEQ ID NO:140中，氨基酸残基1-111对应DR5 mAb 1的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:3)，残基112-119对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基120-244对应具有D65G取代的CD3 mAb 2的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:112)，残基245-249对应ASTKG接头(SEQ ID NO:47)和残基250-277对应包含半胱氨酸的E-螺旋结构域(SEQID NO:41)。编码SEQ ID NO:140的多核苷酸是SEQ ID NO:141：
the DR5 mAb 1x CD3 mAb 2双抗体的第二多肽链的氨基酸序列是(SEQ ID NO:142)：
在SEQ ID NO:142中，氨基酸残基1-110对应CD3 mAb 2的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:104)，残基111-118对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基119-239对应DR5 mAb 1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:8)，不同之处是SEQ ID NO:8的C-末端丝氨酸残基已经被丙氨酸残基取代)，残基240-244对应ASTKG接头(SEQ ID NO:47)和残基245-272对应包含半胱氨酸的K-螺旋结构域(SEQ ID NO:42)。编码SEQ ID NO:142的多核苷酸是SEQ ID NO:143：
R.DR5 mAb 2x CD3 mAb 2双抗体
构建由两条多肽链组成的示例性双特异性双抗体，其具有抗人DR5抗体DR 5mAb 2的VL和VH结构域和CD3 mAb 2的VL和VH结构域。双抗体命名为“DR5 mAb 2x CD3 mAb 2双抗体”。该双抗体的第一多肽链的氨基酸序列是(SEQ ID NO:144)：
在SEQ ID NO:144中，氨基酸残基1-107对应DR5 mAb 2的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:13)，残基108-115对应间插间隔肽(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基116-240对应具有D65G取代的CD3 mAb 2的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:112)，残基241-245对应ASTKG接头(SEQ ID NO:47)和残基246-273对应包含半胱氨酸的E-螺旋结构域(SEQ ID NO:41)。编码SEQ ID NO:144的多核苷酸是SEQ ID NO:145：
DR5 mAb 2x CD3 mAb 2双抗体的第二多肽链的氨基酸序列是(SEQ ID NO:146)：
在SEQ ID NO:146中，氨基酸残基1-110对应CD3 mAb 2的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:104)，残基111-118对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基119-237对应DR5 mAb 2的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:18)，残基238-242对应ASTKG接头(SEQ ID NO:47)和残基243-270对应包含半胱氨酸的K-螺旋结构域(SEQ ID NO:42)。编码SEQ ID NO:146的多核苷酸是SEQ ID NO:147：
S.DR5 mAb 3x CD3 mAb 2双抗体
构建由两条多肽链组成的示例性双特异性双抗体，其具有抗人DR5抗体DR5 mAb 3的VL和VH结构域和CD3 mAb 2的VL和VH结构域。双抗体的第一多肽链的氨基酸序列具有序列(SEQ ID NO:148)(CDR残基以下划线显示)：
在SEQ ID NO:148中，氨基酸残基1-108对应DR5 mAb 3的VL结构域(SEQ ID NO:54)，残基109-116对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基117-241对应具有D65G取代的CD3 mAb 2的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:112)，残基242-246对应ASTKG接头(SEQ ID NO:47)和残基247-275对应包含半胱氨酸的K-螺旋结构域(SEQ ID NO:42)。
双抗体的第二多肽链的氨基酸序列具有序列(SEQ ID NO:149)(CDR残基以下划线显示)：
在SEQ ID NO:149中，氨基酸残基1-110对应CD3 mAb 2的VL结构域(SEQ ID NO:104)，残基111-118对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基119-239对应DR5 mAb 3的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:58)，残基240-244对应ASTKG接头(SEQ IDNO:47)和残基245-272对应包含半胱氨酸的K-螺旋结构域(SEQ ID NO:42)。
T.DR5 mAb 4x CD3 mAb 2双抗体
构建由两条多肽链组成的示例性双特异性双抗体，其具有抗人DR5抗体DR5 mAb 4的VL和VH结构域和CD3 mAb 2的VL和VH结构域。双抗体的第一多肽链的氨基酸序列具有序列(SEQ ID NO:150)(CDR残基以下划线显示)：
在SEQ ID NO:150中，氨基酸残基1-108对应DR5 mAb 4的VL结构域(SEQ ID NO:62)，残基109-116对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基117-241对应具有D65G取代的CD3 mAb 2的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:112)，残基242-246对应ASTKG接头(SEQ ID NO:47)和残基247-275对应包含半胱氨酸的E-螺旋结构域(SEQ ID NO:41)。
双抗体的第二多肽链的氨基酸序列具有序列(SEQ ID NO:151)(CDR残基以下划线显示)：
在SEQ ID NO:151中，氨基酸残基1-110对应CD3 mAb 2的VL结构域(SEQ ID NO:104)，残基111-118对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基119-240对应DR5 mAb 4的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:66)，残基241-245对应ASTKG接头(SEQ IDNO:47)和残基246-273对应包含半胱氨酸的K-螺旋结构域(SEQ ID NO:42)。
U.参考gpA33x CD3 mAb 2双抗体
为了进一步例证本发明的双特异性三特异性结合分子，使用GpA33 mAb 1和CD3mAb 2的VL和VH结构域构建由两条多肽链组成的双抗体。双抗体的第一多肽链的氨基酸序列具有序列(SEQ ID NO:316)(CDR残基以下划线显示)：
在SEQ ID NO:316中，氨基酸残基1-106对应gpA33 mAb 1的VL结构域(SEQ ID NO:181)，残基107-114对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基115-239对应具有D65G取代的CD3 mAb 2的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:112)，残基240-244对应ASTKG接头(SEQ ID NO:47)和残基245-272对应包含半胱氨酸的E-螺旋结构域(SEQ ID NO:41)。
双抗体的第二多肽链的氨基酸序列具有序列(SEQ ID NO:317)(CDR残基以下划线显示)：
在SEQ ID NO:317中，氨基酸残基1-110对应CD3 mAb 2的VL结构域(SEQ ID NO:104)，残基111-118对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基119-237对应gpA33 mAb 1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:186)，残基238-242对应ASTKG接头(SEQID NO:47)和残基243-270对应包含半胱氨酸的K-螺旋结构域(SEQ ID NO:42)。
V.参考抗荧光素抗体
抗荧光素抗体4-4-20(Gruber,M.等(1994)“Efficient Tumor Cell LysisMediated By ABi-specific Single Chain Antibody Expressed In Escherichiacoli,”J.Immunol.152(11):5368-5374；Bedzyk,W.D.等(1989)“Comparison Of VariableRegion Primary Structures Within An Anti-Fluorescein Idiotype Family,”J.Biol.Chem.264(3):1565-1569)用在对照双抗体中。抗荧光素抗体4-4-20的可变轻链结构域和可变重链结构域的氨基酸序列如下：
抗荧光素抗体4-4-20的可变轻链结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:138)(CDR残基加下划线)：
抗荧光素抗体4-4-20的可变重链结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:139)(CDR残基加下划线)：
V.生产方法
可由对DR5、期望的癌症抗原和期望的效应细胞免疫特异性的抗体的多核苷酸和/或序列，通过本领域已知的方法例如合成或重组，产生本发明的三特异性结合分子。产生这样的肽激动剂、拮抗剂和调谐剂的一种方法涉及化学合成多肽，然后在适于获得天然构象，即，正确的二硫键键合，的氧化条件下处理。这可利用本领域技术人员悉知的方法完成(见，例如，Kelley,R.F.等(1990)在以下中：Genetic Engineering Principles and Methods,Setlow,J.K.Ed.,Plenum Press,N.Y.,12卷,1-19页；Stewart,J.M等(1984)Solid PhasePeptide Synthesis,Pierce Chemical Co.,Rockford,IL；也见美国专利号4,105,603、3,972,859、3,842,067和3,862,925)。
本发明的多肽可以利用固相肽合成被常规制备(Merrifield,B.(1986)“SolidPhase Synthesis,”Science 232(4748):341-347；Houghten,R.A.(1985)“General MethodFor The Rapid Solid-Phase Synthesis Of Large Numbers Of Peptides:SpecificityOf Antigen-Antibody Interaction At The Level Of Individual Amino Acids,”Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)82(15):5131-5135；Ganesan,A.(2006)“Solid-PhaseSynthesis In The Twenty-First Century,”Mini Rev.Med.Chem.6(1):3-10)。
在仍另一可选方案中，通过使用已经被工程化以表达特定人免疫球蛋白蛋白质的商业上可得的小鼠，可获得具有期望的抗DR5抗体、抗癌症抗原抗体或抗效应细胞抗体的一个或多个CDR的合适的抗体。被设计以产生更期望的(例如，完全人抗体)或更强大的免疫应答的转基因动物还可被用于产生人源化或人抗体。这样的技术的实例是XENOMOUSETM(Abgenix，Inc.，Fremont，CA)和HuMAb-和TC MOUSETM(二者都来自Medarex，Inc.，Princeton，NJ)。
可选地，抗体可以重组制备，并利用本领域中已知的任意方法表达。抗体可以如下重组制备：首先分离从宿主动物制得的抗体、获得基因序列和利用基因序列在宿主细胞(例如，CHO细胞)中重组表达抗体。可以应用的另外的方法是在植物{例如，烟草)或转基因奶中表达抗体序列。用于在植物或奶中重组表达抗体的合适方法已经被公开(见，例如，Peeters等(2001)“Production Of Antibodies And Antibody Fragments In Plants,”Vaccine19:2756；Lonberg,N.等(1995)“Human Antibodies From Transgenic Mice,”Int.Rev.Immunol 13:65-93；和Pollock等(1999)“Transgenic Milk As A Method ForThe Production Of Recombinant Antibodies,”J.Immunol方法s 231:147-157)。用于制备抗体衍生物例如人源化抗体、单链抗体等的合适方法在本领域中是已知的。可选地，抗体可以通过噬菌体展示技术被重组制备(见，例如，美国专利号5,565,332；5,580,717；5,733,743；6,265,150；和Winter,G.等(1994)“Making Antibodies By Phage DisplayTechnology,”Annu.Rev.Immunol.12.433-455)。
可通过Edman降解法对感兴趣的抗体或蛋白质测序，这是本领域技术人员熟知的。由质谱或Edman降解法产生的肽信息可用于设计探针或引物，其被用于克隆感兴趣的蛋白质。
克隆感兴趣的蛋白质的可选的方法是通过使用纯化的DR5和/或期望的癌症抗原和/或在期望的效应细胞的表面上表达的分子(或任何这样的分子的部分)，“淘选”表达具有一个或多个CDR的感兴趣的抗体或蛋白质的细胞，以便能够结合DR5，或这样的期望的癌症抗原或效应细胞分子。“淘选”程序可如下进行：从表达DR5的组织或细胞获得cDNA文库，在第二细胞类型中过表达cDNA，并且，在存在或不存在能够结合这样的分子的已知抗体(例如，在淘选新的抗DR5抗体等情况下的DR5 mAb 1或DR5 mAb 2)的情况下，筛选特异性结合DR5的第二细胞类型的转染的细胞。用于通过“淘选”克隆编码细胞表面蛋白质的哺乳基因的方法的详细描述可见于现有技术(见，例如，Aruffo,A.等(1987)“Molecular Cloning OfA CD28 cDNA By A High-Efficiency COS Cell Expression System,”Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)84:8573-8577和Stephan,J.等(1999)“Selective CloningOf Cell Surface Proteins Involved In Organ Development:EpithelialGlycoprotein Is Involved In Normal Epithelial Differentiation,”Endocrinol.140:5841-5854)。
含有感兴趣的多核苷酸的载体可通过一些适当手段中的任意手段被引入到宿主细胞中，所述适当手段包括电穿孔；采用氯化钙、氯化铷、磷酸钙、DEAE-葡聚糖或其他物质进行转染；微弹轰击(microprojectile bombardment)；脂转染；和感染(例如，在载体是感染剂诸如痘苗病毒的情况下)。引入载体或多核苷酸的选择常常取决于宿主细胞的特征。
能够过表达异源DNA的任何宿主细胞均可被用于分离编码感兴趣的抗体、多肽或蛋白质的基因的目的。合适的哺乳动物宿主细胞的非限制性实例包括但不限于COS、HeLa和CHO细胞。优选地，相比于宿主细胞中相应的感兴趣的内源抗体或蛋白质(如果存在)，宿主细胞以约高5-倍，更优选高10-倍，甚至更优选高20-倍的水平表达cDNA。通过免疫试验或FACS实现筛选特异性结合DR5的宿主细胞。过表达感兴趣的抗体或蛋白质的细胞可被鉴定。
本发明包括含有本发明抗体的氨基酸序列的多肽。本发明的多肽可通过本领域中已知的方法制备。可如下产生多肽：抗体的蛋白水解或其他降解、如上述的重组方法(即，单一或融合多肽)或化学合成。抗体的多肽，尤其地，上至约50个氨基酸的较短的多肽，通过化学合成常规制备。化学合成方法在本领域中是已知的，并且是商业上可得到的。例如，抗-DR5多肽可通过应用固相法的自动多肽合成仪产生。
本发明包括对以下的修饰：任何这样的抗体(或其结合DR5、癌症抗原或效应细胞的任何多肽片段，这根据具体情况而定)和这样的分子的激动剂、拮抗剂和调谐剂，包括功能上等同的抗体和不显著影响这样的分子的特性的融合多肽以及具有增强的或降低活性的变体。多肽的修饰在本领域中是常规操作，因而不需要在本文详细描述。修饰的多肽的实例包括这样的多肽，其具有氨基酸残基的保守取代、未明显有害改变功能活性的氨基酸的一个或多个缺失或添加、或使用化学类似物。可彼此保守取代的氨基酸残基包括但不限于：甘氨酸/丙氨酸；丝氨酸/苏氨酸；缬氨酸/异亮氨酸/亮氨酸；天冬酰胺/谷氨酰胺；天冬氨酸/谷氨酸；赖氨酸/精氨酸；和苯基丙氨酸/酪氨酸。这些多肽还包括糖基化和非糖基化多肽以及具有其它翻译后修饰的多肽，所述其它翻译后修饰，诸如例如，用不同糖进行糖基化、乙酰化和磷酸化。优选地，氨基酸取代是保守的，即，取代的氨基酸具有与原始氨基酸类似的化学性质。这样的保守取代在本领域中是已知的，并且已经在上文提供实例。氨基酸修饰范围可从改变或修饰一个或多个氨基酸到区域诸如可变区的完全重新设计(redesign)。可变区中的变化可改变结合亲和力和/或特异性。其它修饰方法包括利用本领域中已知的偶联技术，包括、但不限于酶促手段、氧化取代和螯合。修饰可用于例如连接免疫试验的标签，诸如连接放射性部分用于放射免疫分析。修饰的多肽利用本领域中确定的方法制备，并且可利用本领域中已知的标准实验来筛选。
本发明包括融合蛋白，其包括本发明的一个或多个多肽。在一个实施方式中，提供的融合多肽包括轻链、重链或轻链和重链二者。在另一实施方式中，融合多肽包含异源免疫球蛋白恒定区。在另一实施方式中，融合多肽包含由公共保藏的杂交瘤产生的抗体的轻链可变区和重链可变区。为了本发明的目的，抗体融合蛋白包含一个或多个多肽结构域，其特异性结合DR5，癌症抗原或效应细胞(根据具体情况而定)；和在天然分子中不与所述多肽结构域连接的另外的氨基酸序列，例如，来自另一区域的异源序列或同源的序列。
本发明的三特异性结合分子的用途
本发明的三特异性结合分子提供对于癌症的一般疗法。可通过这样的分子治疗的癌症包括特征在于存在癌症细胞，所述癌症细胞选自下述细胞：肾上腺肿瘤、AIDS相关的癌症、软组织腺泡状肉瘤、星形细胞瘤、膀胱癌、骨癌、脑癌和脊髓癌、转移性脑瘤、乳腺癌、颈动脉体瘤、宫颈癌、软骨肉瘤、脊索瘤、嫌色细胞肾细胞癌、透明细胞癌、结肠癌、结直肠癌、皮肤良性纤维组织细胞瘤、成纤维细胞性小圆细胞瘤、室管膜瘤、尤文氏肿瘤、骨外黏液样软骨肉瘤、不完全性骨纤维生成、骨纤维发育不良、胆囊或胆管癌、胃癌、妊娠滋养层疾病、生殖细胞瘤、头颈癌、肝细胞癌、胰岛细胞肿瘤、卡波西氏肉瘤、肾癌、白血病、脂肪瘤/良性脂肪瘤、脂肪肉瘤/恶性的脂肪瘤、肝癌、淋巴瘤、肺癌、成神经管细胞瘤、黑素瘤、脑膜瘤、多发性内分泌瘤形成、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、成神经细胞瘤、神经内分泌肿瘤、卵巢癌、胰腺癌、乳头状甲状腺癌、甲状旁腺肿瘤、儿科癌症、末梢神经鞘瘤、嗜铬细胞瘤、垂体肿瘤、前列腺癌、后眼色素层黑素瘤、罕见血液疾病、肾转移性癌、杆状肿瘤、横纹肌肉瘤、肉瘤、皮肤癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、胃癌、滑膜肉瘤、睾丸癌、胸腺癌、胸腺瘤、甲状腺转移性癌症和子宫癌。本发明的三特异性结合分子可用于治疗结直肠癌、肝细胞癌、神经胶质瘤、肾癌、乳腺癌、多发性骨髓瘤、膀胱癌、成神经细胞瘤、肉瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、胰腺癌和直肠癌症。
通过另外能够结合排列在这样的肿瘤细胞表面上的DR5分子，本发明的三特异性结合分子加强了由针对靶肿瘤的细胞的特有癌症抗原的抗体提供的癌症疗法。本发明的用途尤其见于其中癌症抗原的密度低的情况，或当抗癌症抗原抗体的结合动力学不理想而不能(或不足以)促进临床上足够的治疗性应答的情况。在这样的情况下，本发明的分子结合肿瘤细胞的癌症抗原和DR5的能力提供了增强的结合(经抗体亲抗原性)，其足以促进临床上足够的治疗性应答。另外，通过还具备能够结合免疫系统效应细胞表面上的分子的结合结构域，本发明的三特异性结合分子允许将这样的免疫系统细胞共定位至肿瘤细胞，从而经重定向杀伤促进针对肿瘤细胞的细胞毒素应答。
如表2中显示，具备癌症抗原结合结构域的具体组合的本发明的三特异性结合分子优选用于治疗具体的癌症。
除了它们在疗法中的用途，本发明的三特异性结合分子可被可检测地标记，和用于癌症的诊断或肿瘤和肿瘤细胞的成像。
药学组合物
本发明的组合物包括散装药物组合物(例如，不纯的或非无菌组合物)，其可用于制造药学组合物和用于制备可用于制备单位剂型的药学组合物(即，适于施用至受试者或患者的组合物)。这样的组合物包括预防或治疗有效量的本发明的三特异性结合分子，或这样的剂和药学上可接受的载体的组合。优选地，本发明的组合物包括预防或治疗有效量的本发明的三特异性结合分子和药学上可接受的载体。本发明尤其包括这样的药学组合物，其中三特异性结合分子具有以下的DR5-结合结构域：
(1)DR5 mAb 1抗体；
(2)DR5 mAb 2抗体；
(3)DR5 mAb 3抗体；
(4)DR5 mAb 4抗体；
(5)DR5 mAb 5抗体；
(6)DR5 mAb 6抗体；
(7)DR5 mAb 7抗体；或
(8)DR5 mAb 8抗体
(或任何这样的抗体的人源化的衍生物)。
本发明还尤其包括这样的药学组合物，其中三特异性结合分子具有癌症抗原结合结构域，其：
(A)结合EphA2的表位，尤其其中三特异性结合分子具有EphA2 mAb 1、EphA2 mAb2或EphA2 mAb 3或其人源化的或嵌合变体的癌症抗原结合结构域；或
(B)结合gpA33的表位，尤其其中三特异性结合分子具有gpA33 mAb 1或其人源化的或嵌合变体的癌症抗原结合结构域；或
(C)结合Her2的结合表位，尤其其中三特异性结合分子具有Her2 mAb 1或曲妥珠单抗或其人源化的或嵌合变体的癌症抗原结合结构域；或
(D)结合B7-H3的表位，尤其其中三特异性结合分子具有B7-H3 mAb 1、B7-H3 mAb2或B7-H3 mAb 3或其人源化的或嵌合变体的癌症抗原结合结构域。
本发明还尤其包括这样的药学组合物，其中三特异性结合分子具有效应细胞-结合结构域，其结合CD2、CD3、CD17、CD20、CD22、CD32B、CD64、BCR/CD79、T细胞受体或NKG2D受体。本发明还尤其包括这样的药学组合物，其中三特异性结合分子具有下述抗体的效应细胞-结合结构域：Lo-CD2a、CD3 mAb 2、OKT3、3G8、A9、HD37、利妥昔单抗、依帕珠单抗、CD32BmAb 1、CD64 mAb 1、CD79 mAb 1、BMA 031、KYK-1.0，或KYK-2.0。
本发明具体考虑三特异性结合分子、包括这样的结合分子的药学组合物和这样的三特异性结合分子的用途，其中：
(1)DR5结合结构域是任何抗DR5抗体的DR5结合结构域；
(2)癌症结合结构域是本文公开的任何癌症抗原；
和
(3)效应细胞-结合结构域结合任意下述一种或多种：CD2、CD3、CD17、CD20、CD22、CD32B、CD64、BCR/CD79、T细胞受体或NKG2D受体。
本发明进一步具体考虑三特异性结合分子、包括这样的结合分子的药学组合物和这样的三特异性结合分子的用途，其中：
(1)DR5结合结构域是任何抗DR5抗体的DR5结合结构域；
(2)癌症结合结构域是任意下述一种或多种：EphA1、gpA33、Her2或B7-H3；
和
(3)效应细胞-结合结构域结合任意下述一种或多种：CD2、CD3、CD17、CD20、CD22、CD32B、CD64、BCR/CD79、T细胞受体或NKG2D受体。
本发明尤其考虑三特异性结合分子、以及包括这样的结合分子的药学组合物和这样的三特异性结合分子的用途中的每一种，其中：
(1)DR5结合结构域是任意下述的DR5结合结构域：DR5 mAb 1抗体、DR5 mAb 2抗体、DR5 mAb 3抗体、DR5 mAb 4抗体、DR5 mAb 5抗体、DR5 mAb 6抗体、DR5 mAb 7抗体或DR5mAb 8抗体；
(2)癌症抗原结合结构域是任意下述的结合结构域：EphA 2 mAb 1、EphA2 mAb 2、EphA2 mAb 3、gpA33 mAb 1、Her2 mAb 1、曲妥珠单抗、B7-H3 mAb 1、B7-H3 mAb 2或B7-H3mAb 3；
和
(3)效应细胞-结合结构域是任意下述的结合结构域：Lo-CD2a、CD3 mAb 2、OKT3、3G8、A9、HD37、利妥昔单抗、依帕珠单抗、CD32B mAb 1、CD64 mAb1、CD79 mAb 1、BMA 031、KYK-1.0或KYK-2.0。
因为列举了8个抗DR5结合结构域抗体、9个抗癌症抗原结合结构域抗体和14个抗效应细胞-结合结构域抗体，因此这样的具体考虑包括所有(8x 9x 14＝)1,008个这样的结合结构域的组合。
本发明也包括这样的药学组合物：其另外包括对具体的癌症抗原具有特异性的第二治疗性抗体(例如，肿瘤特异性单克隆抗体)和药学上可接受的载体。
在具体实施方式中，术语“药学上可接受的”表示获得联邦政府或州政府管理机构的许可，或列于美国药典(U.S.Pharmacopeia)或其他通常获得认可的药典中，供用于动物，特别是用于人类。术语“载体”指与治疗剂一起施用的稀释剂、佐剂(例如弗氏佐剂(完全和不完全)、赋形剂或媒介。这类药学载体可以是无菌液体，如水和油，包括石油、动物油、植物油或合成来源的油，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。当静脉内施用药学组合物时，水是优选的载体。盐水溶液和含水右旋糖以及甘油溶液也可以用作液体载体，特别是对于可注射溶液而言。合适的药用赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、脱脂乳粉(dried skim milk)、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等。若需要，组合物也可以含有小量湿润剂或乳化剂或pH缓冲剂。这些组合物可以采用溶液、悬液、乳液、片剂、丸剂、胶囊、粉剂、缓释制剂等形式。
通常，本发明组合物的成分被单独提供或以单位剂型混合在一起，例如作为标明活性剂的量的密封容器中的冻干粉或无水浓缩物，所述密封容器如安瓿或小袋(sachette)。当通过输注施用组合物时，其可以用含有无菌的药学级水或盐水的输注瓶分配。当通过注射施用所述组合物时，则可以提供具有注射用无菌水或盐水的安瓿，以便可以在施用前混合所述成分。
可以将本发明的组合物配制为中性或盐形式。药学上可接受的盐包括但不限于用阴离子形成的盐以及用阳离子形成的盐，所述阴离子例如来源于盐酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等的阴离子，并且所述阳离子例如来自氢氧化纳、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙、氢氧化铁、异丙胺、三乙胺、2-乙基氨基乙醇、组氨酸、普鲁卡因等的阳离子。
本发明也提供了药学包装或试剂盒，其包括填充本发明的三特异性结合分子(更优选地，上面讨论或示例的任何特异性结合分子)的一个或多个容器。另外，用于治疗疾病的一种或多种其他预防剂或治疗剂也可以包括于所述药学包装或试剂盒中。本发明还提供了药学包装或试剂盒，其包含一个或多个容器，所述容器填充以本发明药学组合物的一种或多种成分。任选地与这类容器(一个或多个)关联的可以是管理药物或生物产品的制造、使用或销售的政府机构规定的形式的布告(notice)，所述布告反映了管理机构许可用于人类施用的制造、使用或销售。
本发明提供可用于上述方法的试剂盒。试剂盒可包括任意本发明的三特异性结合分子。试剂盒可在一个或多个容器中进一步包括用于治疗癌症的一种或多种其他预防剂和/或治疗剂；和/或试剂盒可进一步包括结合与癌症相关的一个或多个癌抗原的一种或多种细胞毒性抗体。在某些实施方式中，其他预防剂或治疗剂是化疗剂。在其他实施方式中，预防剂或治疗剂是生物或激素治疗剂。
施用方法
通过向受试者施用有效量的本发明的融合蛋白或缀合分子或包括本发明的融合蛋白或缀合分子的药学组合物，可以提供本发明的组合物用来治疗、预防和改善与疾病、病症或感染相关的一种或多种症状。在优选的方面，这类组合物基本上是纯的(即，基本上不含限制其效果或产生不期望的副作用的物质)。在具体实施方式中，受试者是动物，优选哺乳动物，如非灵长类(例如牛、马、猫科动物、犬科动物、啮齿动物等)或灵长类(例如，猴子，如食蟹猴、人等)。在优选的实施方式中，受试者是人。
各种递送系统是已知的，并且可以用于施用本发明的组合物，例如封装于脂质体、微粒、微胶囊、能表达抗体或融合蛋白的重组细胞、受体介导的内吞作用(见，例如，Wu等(1987)“Receptor-Mediated In Vitro Gene Transformation By A Soluble DNACarrier System”J.Biol.Chem.262:4429-4432)、构建核酸作为逆转录病毒或其他载体的一部分等。
施用本发明的分子的方法包括、但不限于肠胃外施用(例如皮内、肌肉、腹腔内、静脉内以及皮下)、硬膜外以及粘膜(例如鼻内和口腔途径)。在具体实施方式中，本发明的三特异性结合分子经肌肉、静脉内或皮下施用。组合物可以通过任何方便途径施用，例如通过输注或弹丸注射、通过上皮或黏膜皮肤被覆(lining)(例如口腔粘膜、直肠和肠粘膜等)吸收，并且可以与其他生物活性剂一起施用。施用可以是全身的或局部的。另外，也可以应用肺部施用，例如通过使用吸入器或喷雾器，并且与雾化剂一起配制。见例如美国专利号6,019,968；5,985,320；5,985,309；5,934,272；5,874,064；5,855,913；5,290,540；和4,880,078；和PCT公布号WO 92/19244；WO 97/32572；WO 97/44013；WO 98/31346；和WO 99/66903，其各自通过引用以其整体并入本文。
本发明也使得本发明的三特异性结合分子被包装在密封容器中，比如指示分子的量的安瓿或小袋中。在一个实施方式中，这样的分子作为冻干无菌粉或无水浓缩物提供于密封容器中，并且可以例如用水或盐水重构至适当浓度，用于施用于受试者。优选地，本发明的三特异性结合分子作为冻干无菌粉提供于密封容器中，其单位剂量为至少5μg、更优选地至少10μg、至少15μg、至少25μg、至少50μg、至少100μg、或至少200μg。
本发明冻干的三特异性结合分子应在它们的原容器中储存在2和8℃之间，并且分子应在重构之后的12小时内，优选地6小时内、5小时内、3小时内或1小时内施用。在可选的实施方式中，这样的分子以液体形式提供在指示分子、融合蛋白或缀合分子的量和浓度的密封容器中。优选地，当以液体形式提供时，这样的三特异性结合分子提供在密封容器中，其中分子存在的浓度为至少1μg/ml，更优选地至少2.5μg/ml、至少5μg/ml、至少10μg/ml、至少50μg/ml或至少100μg/ml。
可通过标准临床技术测定本发明的组合物有效治疗、预防或改善与病症相关的一个或多个症状的量。制剂中采用的精确剂量还取决于施用的路径和病况的严重性，并且应根据从业者的判断和每个患者的情况决定。有效的剂量可从源自体外或动物模型测试系统的剂量响应曲线推断。
对于本发明包括的三特异性结合分子单价双抗体，施用给患者的剂量优选基于接受受试者的体重(kg)确定。施用的剂量通常为至少约0.3ng/kg/天至约0.9ng/kg/天、至少约1ng/kg/天至约3ng/kg/天、至少约3ng/kg/天至约9ng/kg/天、至少约10ng/kg/天至约30ng/kg/天、至少约30ng/kg/天至约90ng/kg/天、至少约100ng/kg/天至约300ng/kg/天、至少约200ng/kg/天至约600ng/kg/天、至少约300ng/kg/天至约900ng/kg/天、至少约400ng/kg/天至约800ng/kg/天、至少约500ng/kg/天至约1000ng/kg/天、至少约600ng/kg/天至约1000ng/kg/天、至少约700ng/kg/天至约1000ng/kg/天、至少约800ng/kg/天至约1000ng/kg/天、至少约900ng/kg/天至约1000ng/kg/天或至少约1,000ng/kg/天。
在另一个实施方式中，患者被施用这样的治疗方案，其包括一个或多个剂量的这类预防有效量或治疗有效量的本发明的三特异性结合分子，其中治疗方案在2天、3天、4天、5天、6天或7天内施用。在某些实施方式中，治疗方案包括间歇施用预防有效量或治疗有效量的本发明三特异性结合分子的剂量(例如，在给定周的第1天、第2天、第3天和第4天施用剂量和不施用预防有效量或治疗有效量的三特异性结合分子的剂量。
尤其包括的是在相同周的第5天、第6天和第7天施用这样的三特异性结合分子，其包括上面讨论的DR5结合结构域、癌症抗原结合结构域和效应细胞-结合结构域的任何具体的组合)。典型地，有1、2、3、4、5或更多个疗程。每个疗程可以是相同的方案或不同的方案。
在另一个实施方式中，施用的剂量在方案(一个或多个)的前四分之一、前一半、或前三分之二或四分之三内上升(例如，在四疗程的第一、第二或第三方案内)，直到达到日预防有效量或治疗有效量的三特异性结合分子。表3提供针对典型疗程的上述不同给药方案的5个实例。
本发明的三特异性结合分子的施用剂量和频率可通过修饰比如，例如脂质化，来增强分子的吸收和组织渗透而被降低或改变。
可计算施用至患者的本发明的三特异性结合分子的剂量，以用作单剂疗法。可选地，分子可组合其他治疗性组合物被使用，并且施用至患者的剂量小于当所述分子作为单试剂疗法使用时的剂量。
本发明的药学组合物可局部施用至需要治疗的区域；这可通过例如，但不限于下述方式实现：局部输注、通过注射、或通过植入物的手段，所述植入物是多孔的、非多孔的或胶状材料，包括膜，比如硅橡胶膜或纤维。优选地，当施用本发明的分子时，必须注意使用不吸收该分子的材料。
本发明的组合物可在泡状体(vesicle)，尤其是脂质体中递送(见Langer(1990)“New Methods Of Drug Delivery,”Science 249:1527-1533)；Treat等,在以下中：LIPOSOMES IN THE THERAPY OF INFECTIOUS DISEASE AND CANCER,Lopez-Berestein和Fidler(eds.),Liss,New York,353-365页(1989)；Lopez-Berestein,ibid.,3 17-327页)。
可以在控释或缓释系统中递送本发明的组合物。可以使用本领域技术人员已知的任何技术产生包括一个或多个本发明的三特异性结合分子(一种或多种)的缓释制剂。见例如美国专利号4,526,938；PCT公开物WO 91/05548；PCT公开物WO 96/20698；Ning等(1996)“Intratumoral Radioimmunotheraphy Of A Human Colon Cancer Xenograft Using ASustained-Release Gel,”Radiotherapy&Oncology 39:179-189；Song等(1995)“AntibodyMediated Lung Targeting Of Long-Circulating Emulsions,”PDA Journal ofPharmaceutical Science&Technology 50:372-397；Cleek等(1997)“BiodegradablePolymeric Carriers For A bFGF Antibody For Cardiovascular Application,”Pro.Int’l.Symp.Control.Rel.Bioact.Mater.24:853-854；和Lam等(1997)“Microencapsulation Of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody For LocalDelivery,”Proc.Int’l.Symp.Control Rel.Bioact.Mater.24:759-760，其各通过引用以其整体并入本文。在一个实施方式中，泵可用于控释系统(见Langer，上文；Sefton,(1987)“Implantable Pumps,”CRC Crit.Rev.Biomed.Eng.14:201-240；Buchwald等(1980)“Long-Term,Continuous Intravenous Heparin Administration By An Implantable InfusionPump In Ambulatory Patients With Recurrent Venous Thrombosis,”Surgery 88:507-516；和Saudek等(1989)“A Preliminary Trial Of The Programmable ImplantableMedication System For Insulin Delivery,”N.Engl.J.Med.321:574-579)。在另一个实施方式中，聚合材料可用于实现分子的控释(见例如MEDICAL APPLICATIONS OFCONTROLLED RELEASE,Langer和Wise(eds.),CRC Pres.,Boca Raton,Florida(1974)；CONTROLLED DRUG BIOAVAILABILITY,DRUG PRODUCT DESIGN AND PERFORMANCE,Smolen和Ball(eds.),Wiley,New York(1984)；Levy等(1985)“Inhibition Of Calcification OfBioprosthetic Heart Valves By Local Controlled-Release Diphosphonate,”Science228:190-192；During等(1989)“Controlled Release Of Dopamine From A PolymericBrain Implant:In Vivo Characterization,”Ann.Neurol.25:351-356；Howard等(1989)“Intracerebral Drug Delivery In Rats With Lesion-Induced Memory Deficits,”J.Neurosurg.7(1)：105-112)；美国专利号5,679,377；美国专利号5,916,597；美国专利号5,912,015；美国专利号5,989,463；美国专利号5,128,326；PCT公布号WO 99/15154；和PCT公布号WO 99/20253)。缓释制剂所用的聚合物的实例包括但不限于聚(2-甲基丙烯酸羟乙酯)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸)、乙烯-乙烯基乙酸酯共聚物(poly(ethylene-co-vinyl acetate))、聚(甲基丙烯酸)、聚乙醇酸交酯(PLG)、聚酐、聚(N-乙烯基吡咯烷酮)、聚(乙烯醇)、聚丙烯酰胺、聚(乙二醇)、聚交酯(PLA)、丙交酯-乙交酯共聚物(PLGA)以及聚原酸酯(polyorthoester)。控释系统可接近治疗靶标(例如，肺)布置，因此仅仅需要全身剂量的一部分(见例如Goodson,在MEDICAL APPLICATIONS OF CONTROLLED RELEASE中，上文，卷2,115-138页(1984))。可根据Dunn等(见U.S.5,945,155)，使用可用作控释移植物的聚合物组合物。该具体的方法基于生物活性材料从聚合物系统的原位控释的治疗效果。移植可通常发生于患者身体内需要治疗的任何地方。可使用非聚合物持续递送系统，由此受试者身体内的非聚合物移植物被用作药物递送系统。一旦移植到身体中，移植物的有机溶剂会从组合物中消散、分散或渗漏到周围组织流体中，并且非聚合物材料会逐渐凝结或沉淀，形成固体微孔基质(见U.S.5,888,533)。
控释系统在Langer(1990,“New Methods Of Drug Delivery,”Science 249:1527-1533)的综述中有论述。可以使用本领域技术人员已知的任何技术来生产包含本发明的一种或多种治疗剂的缓释制剂。见例如美国专利号4,526,938；国际公布号WO 91/05548和WO 96/20698；Ning等(1996)“Intratumoral Radioimmunotheraphy Of A Human ColonCancer Xenograft Using A Sustained-Release Gel,”Radiotherapy&Oncology 39:179-189；Song等(1995)“Antibody Mediated Lung Targeting Of Long-CirculatingEmulsions,”PDA Journal of Pharmaceutical Science&Technology 50:372-397；Cleek等(1997)“Biodegradable Polymeric Carriers For A bFGF Antibody ForCardiovascular Application,”Pro.Int’l.Symp.Control.Rel.Bioact.Mater.24:853-854；和Lam等(1997)“Microencapsulation Of Recombinant Humanized MonoclonalAntibody For Local Delivery,”Proc.Int’l.Symp.Control Rel.Bioact.Mater.24:759-760，其各通过引用以其整体并入本文。
在本发明的组合物是编码本发明的三特异性结合分子的核酸的情况下，核酸可体内施用，以通过如下方式促进其编码的三特异性结合分子的表达：通过将其构建为适当的核酸表达载体的一部分并且施用它从而其成为细胞内的，例如，通过使用逆转录病毒载体(见美国专利号4,980,286)，或通过直接注射，或通过使用微粒轰击(例如，基因枪；生物弹道技术(Biolistic)，Dupont)，或用脂质或细胞表面受体或转染试剂涂覆，或通过与已知进入核的同源框样肽一起施用(见例如Joliot等(1991)“Antennapedia Homeobox PeptideRegulates Neural Morphogenesis,”Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)88:1864-1868)等。可选地，可以将核酸引入细胞内并通过同源重组整合到宿主细胞DNA中，以进行表达。
用治疗或预防有效量的本发明的三特异性结合分子治疗受试者可包括单一治疗或，优选地，可包括一系列治疗。在优选的实施例中，用这样的双抗体每周治疗受试者一次持续约1至10周，优选地2至8周，更优选地约3至7周，和甚至更优选地约4、5或6周。本发明的药学组合物可一天施用一次、一天两次或一天三次。可选地，药学组合物可一周施用一次、一周两次、每两周一次、一个月一次、每六周一次、每两个月一次、一年两次或每年一次。应当认识到，用于治疗的分子的有效剂量可以随着具体疗程增加或降低。
实施例：
已经一般性描述了本发明，通过参考下述实施例将更容易理解本发明，所述实施例通过示例的方式被提供而不旨在限制本发明，除非指出的。针对材料和方法二者的许多更改可以被实践而不背离本公开的范围，这对于本领域技术人员来说是明显的。
W.实施例1：抗人DR5单克隆抗体DR5 mAb 1和DR5 mAb 2的表征
两个单克隆抗体由于能够免疫特异性结合于人DR5而被分离，并被授予命名“DR5mAb 1”和“DR5 mAb 2”。如上面所讨论的，发现这些抗体的CDR不同。为了确定抗体是否结合至不同DR5表位，制备了人DR5-Fc融合蛋白，并将其涂覆至固定的表面。将DR5 mAb 1(1μg/mL)生物素化，并用对照IgG或用DR5 mAb 2(10μg/mL)孵育，并且，通过测量固定的生物素化抗体的量评估IgG或DR5 mAb 2抗体与DR5 mAb 1竞争结合(至人DR5-Fc融合蛋白)的能力。另外，评估IgG或DR5 mAb 1抗体与生物素化的DR5 mAb 2竞争结合的能力。该实验的结果显示于表4中。
该实验的结果表明，生物素化抗体能够结合DR5蛋白质，即使在存在过量非生物素化抗体的情况下。因此，结果显示DR5 mAb 1和DR5 mAb 2结合DR5的不同表位。
为了进一步表征DR5 mAb 1和DR mAb 2抗体，评估其阻断DR5和TRAIL配体之间结合的能力。因此，生物素化DR5 mAb 1、生物素化DR5 mAb 2或生物素化DR5-Fc融合物(各为2μg/mL)分别用固定的DR5-Fc融合物(1μg/mL)在缓冲液或组氨酸标记的TRAIL(20μg/mL)存在下孵育。评估固定的生物素化抗体的量。该实验的结果显示于表5。
结果显示结合固定的DR5-Fc的DR5 mAb 1或DR5 mAb 2的量不受组氨酸标记的TRAIL的存在的影响，因此指示DR5 mAb 1和DR5 mAb 2都不阻断DR5的TRAIL配体结合位点。另外，两种抗体都不能够结合组氨酸标记的TRAIL配体。
X.实施例2：抗人DR5单克隆抗体DR5 mAb 1和DR5 mAb 2的物种特异性
为了评估抗人DR5单克隆抗体DR5 mAb 1和DR 5 mAb 2的物种特异性，比较抗体结合人DR5的能力与它们结合食蟹猴(Macaca fascicularis)DR5的能力。该实验的结果显示在图6中。结果显示两个抗体都能够结合食蟹猴DR5，但是它们每个展示对人DR5更高的结合亲和力。
使用Biacore分析研究结合的动力学，如图7中所显示。用His标记的DR5孵育双特异性DR5x CD3双抗体并且经Biacore分析测定结合的动力学。采用的双抗体是DR5 mAb 1xCD3 mAb 2(图7，图A和E)、DR5 mAb 2x CD3 mAb 2(图7，图B和F)、DR5 mAb 3x CD3 mAb 2(图7，图C和G)和DR5 mAb 4x CD3 mAb 2(图7，图D和H)。图7，图A-D显示人DR5的结果。图7，图E-H显示食蟹猴DR5的结果。计算的ka、kd和KD显示在表6中。
结果表明DR5 mAb 1和DR5 mAb 2展示相对于参考抗体DR5 mAb 3和DR5 mAb 4改变的结合动力学。
Y.实施例3：DR5 mAb 1和DR5 mAb 2出人意料的优势
将本发明DR5-结合分子DR5 mAb 1和DR5 mAb 2介导细胞毒性的能力与参考抗DR5抗体：DR5 mAb 3和DR5 mAb 4介导细胞毒性的能力进行比较。为了进行这样的比较，制备包含这些抗体的VL和VH结构域和CD3 mAb 2的VL和VH结构域的双特异性DR5x CD3双抗体。制备的双抗体是：DR5 mAb 1x CD3 mAb 2、DR5 mAb 2x CD3 mAb 2、DR5 mAb 3x CD3 mAb 2和DR5 mAb 4x CD3 mAb 2。
采用的对照双抗体包含抗荧光素抗体4-4-20的VL和VH结构域(分别为SEQ IDNOs:138和139)和CD3 mAb 2的VL和VH结构域(分别为SEQ ID NOs:102和108)，并且命名为抗荧光素x抗CD3对照双抗体“4-4-20x CD3 mAb 2”。双抗体由两条多肽链组成。双抗体的第一多肽链具有氨基酸序列(SEQ ID NO:300)(CDR以下划线显示)：
在SEQ ID NO:300中，氨基酸残基1-112对应抗荧光素抗体4-4-20的VL结构域(SEQID NO:138)，残基113-120对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基121-245对应CD3 mAb 2的VH结构域(SEQ ID NO:108)，残基246-251是包含半胱氨酸的间隔肽(GGCGGG)(SEQ ID NO:34)和残基252-280对应E-螺旋结构域(SEQ ID NO:39)。
双抗体的第二多肽链具有氨基酸序列(SEQ ID NO:301)(CDR以下划线显示)：
在SEQ ID NO:301中，氨基酸残基1-110对应CD3 mAb 2的VL结构域(SEQ ID NO:104)，残基111-118对应间插间隔肽GGGSGGGG(接头1)(SEQ ID NO:33)，残基119-236对应抗荧光素抗体4-4-20的VH结构域(SEQ ID NO:139)，残基237-242是包含半胱氨酸的间隔肽(GGCGGG)(SEQ ID NO:34)和残基243-270对应K-螺旋结构域(SEQ ID NO:40)。
靶肿瘤细胞用这些双抗体中的一种或用对照双抗体(4-4-20x CD3 mAb 2)在存在外周血单核细胞(PBMC)和A549腺癌人肺泡基底上皮细胞的情况下孵育24小时，效应子与靶细胞比例为20:1。通过测量受损细胞向培养基中进行的乳酸脱氢酶(LDH)的释放测定细胞毒性百分数。
该研究的结果显示在图8中。使用SKMES人肺癌细胞、DU145人前列腺癌细胞、A375人恶性黑素瘤细胞、SKBR3人HER2-过表达乳腺癌细胞和JIMT人乳腺癌细胞获得类似的结果。结果指示DR5 mAb 1和DR5 mAb 2的VL和VH结构域在诱导细胞毒性方面比参考DR5 mAbs的VL和VH结构域显著和出人意料地更有效。
Z.实施例4：三特异性结合分子介导与靶细胞的协同和同时结合
研究本发明的三特异性结合分子结合靶细胞的能力。采用的三特异性分子是：EphA2 mAb 1x CD3 mAb 2x DR5 mAb 1、EphA2 mAb 1x CD3 mAb 2x gpA33 mAb 1和gpA33mAb 1x CD3 mAb 2x DR5 mAb 1。如图9A中所显示，发现包括EphA2癌症抗原结合结构域的那些三特异性结合分子能够结合表达EphA2的CHO靶细胞。如图9B中所显示，发现包括DR5癌症抗原结合结构域的那些三特异性结合分子能够结合表达DR5的CHO靶细胞。如图9C中所显示，发现包括EphA2癌症抗原结合或DR5癌症结合结构域的那些三特异性结合分子能够结合DU145细胞。DU145细胞是人前列腺细胞系，其表达EphA2和DR5二者，但是不表达gpA33。上述参考gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2双抗体用作对照。
显著地，数据显示当本发明的三特异性结合分子的两个癌症抗原结合结构域都能够结合靶细胞时，这样的双结合与靶结合的协同(例如，5-25倍)增强相关。
AA.实施例5：三特异性结合分子介导结合的靶细胞的细胞毒性
研究本发明的三特异性结合分子在存在细胞毒性淋巴细胞的情况下介导结合的靶细胞的细胞毒性的能力。采用的三特异性分子是：EphA2 mAb 1x CD3 mAb 2x DR5 mAb1、EphA2 mAb 1x CD3 m Ab 2x gpA33 mAb 1和gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2x DR 5 mAb 1。上述参考gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2双抗体和4-4-20x CD3 mAb 2双抗体用作对照。
如图10A中所显示，包括EphA2癌症抗原结合结构域因而能够结合表达EphA2的CHO细胞的那些三特异性结合分子能够在存在细胞毒性淋巴细胞的情况下介导这样的细胞的细胞毒性。如图10B中所显示，发现包括DR5癌症抗原结合结构域因而能够结合表达DR5的CHO细胞的那些三特异性结合分子能够在存在细胞毒性淋巴细胞的情况下介导表达DR5的CHO靶细胞的细胞毒性。
如图10C中所显示，包括EphA2癌症抗原结合或DR5癌症结合结构域因而能够结合DU145细胞的那些三特异性结合分子能够在存在细胞毒性淋巴细胞的情况下介导这样的细胞的细胞毒性。显著地，数据显示当本发明的三特异性结合分子的两个癌症抗原结合结构域都能够结合靶细胞时，这样的双结合与靶结合的协同增强相关。因此，能够结合EphA2和DR5的EphA2 mAb 1x CD3 mAb 2x DR5 mAb 1，相比仅仅能够结合DU146细胞的EphA2或DR5分子(因为这样的细胞缺乏gpA33)的EphA2 mAb 1x CD3 mAb 2x gpA33 mAb 1或gpA33 mAb1x CD3 mAb 2x DR5 mAb 1，介导基本上更大的细胞毒性。
在这方面，以EphA2 mAb 1x CD3 mAb 2x DR5 mAb 1近似的EC50，对于EphA2 mAb1x CD3 mAb 2x gpA33 mAb 1或gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2x DR 5mAb 1，没有看到细胞毒性淋巴细胞应答。以EphA2 mAb 1x CD3 mAb 2x DR5 mAb 1近似的EC90，EphA2 mAb 1x CD3mAb 2x gpA33 mAb 1显示仅仅EC15和gpA33 mAb 1x CD3 mAb 2x DR5 mAb 1根本不显示细胞毒性淋巴细胞应答。
本说明书提到的所有出版物和专利通过参考并入本文，如同好像具体和单独指出每个单个出版物或专利申请通过参考以其整体并入的程度。尽管已经结合其具体实施方式描述了本发明，但是应当理解，其能够被进一步更改，并且本申请旨在覆盖大体上遵循本发明原理的本发明的任何变型、用途或改变，所述变型、用途或改变包括与本公开的这种偏离，只要其在本发明所属领域的已知或常规实施范围内和只要其可应用于上文阐释的本质特征。
序列表
<110> 宏观基因股份有限公司
E•波维尼
P•A•摩尔
李志恒
L•S•约翰逊
K•沙哈
<120> 特异性结合多种癌症抗原的三特异性结合分子和其使用方法
<130> 1301.0119PCT
<150> US 62/107,824
<151> 2015-01-26
<150> US 62/008,229
<151> 2014-06-05
<150> US 62/004,571
<151> 2014-05-29
<160> 319
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 217
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(217)
<223> 人野生型IgG CH2-CH3结构域
<400> 1
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215
<210> 2
<211> 440
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(440)
<223> 人DR5前体(NCBI序列NP_003833.4)
<400> 2
Met Glu Gln Arg Gly Gln Asn Ala Pro Ala Ala Ser Gly Ala Arg Lys
1 5 10 15
Arg His Gly Pro Gly Pro Arg Glu Ala Arg Gly Ala Arg Pro Gly Leu
20 25 30
Arg Val Pro Lys Thr Leu Val Leu Val Val Ala Ala Val Leu Leu Leu
35 40 45
Val Ser Ala Glu Ser Ala Leu Ile Thr Gln Gln Asp Leu Ala Pro Gln
50 55 60
Gln Arg Val Ala Pro Gln Gln Lys Arg Ser Ser Pro Ser Glu Gly Leu
65 70 75 80
Cys Pro Pro Gly His His Ile Ser Glu Asp Gly Arg Asp Cys Ile Ser
85 90 95
Cys Lys Tyr Gly Gln Asp Tyr Ser Thr His Trp Asn Asp Leu Leu Phe
100 105 110
Cys Leu Arg Cys Thr Arg Cys Asp Ser Gly Glu Val Glu Leu Ser Pro
115 120 125
Cys Thr Thr Thr Arg Asn Thr Val Cys Gln Cys Glu Glu Gly Thr Phe
130 135 140
Arg Glu Glu Asp Ser Pro Glu Met Cys Arg Lys Cys Arg Thr Gly Cys
145 150 155 160
Pro Arg Gly Met Val Lys Val Gly Asp Cys Thr Pro Trp Ser Asp Ile
165 170 175
Glu Cys Val His Lys Glu Ser Gly Thr Lys His Ser Gly Glu Ala Pro
180 185 190
Ala Val Glu Glu Thr Val Thr Ser Ser Pro Gly Thr Pro Ala Ser Pro
195 200 205
Cys Ser Leu Ser Gly Ile Ile Ile Gly Val Thr Val Ala Ala Val Val
210 215 220
Leu Ile Val Ala Val Phe Val Cys Lys Ser Leu Leu Trp Lys Lys Val
225 230 235 240
Leu Pro Tyr Leu Lys Gly Ile Cys Ser Gly Gly Gly Gly Asp Pro Glu
245 250 255
Arg Val Asp Arg Ser Ser Gln Arg Pro Gly Ala Glu Asp Asn Val Leu
260 265 270
Asn Glu Ile Val Ser Ile Leu Gln Pro Thr Gln Val Pro Glu Gln Glu
275 280 285
Met Glu Val Gln Glu Pro Ala Glu Pro Thr Gly Val Asn Met Leu Ser
290 295 300
Pro Gly Glu Ser Glu His Leu Leu Glu Pro Ala Glu Ala Glu Arg Ser
305 310 315 320
Gln Arg Arg Arg Leu Leu Val Pro Ala Asn Glu Gly Asp Pro Thr Glu
325 330 335
Thr Leu Arg Gln Cys Phe Asp Asp Phe Ala Asp Leu Val Pro Phe Asp
340 345 350
Ser Trp Glu Pro Leu Met Arg Lys Leu Gly Leu Met Asp Asn Glu Ile
355 360 365
Lys Val Ala Lys Ala Glu Ala Ala Gly His Arg Asp Thr Leu Tyr Thr
370 375 380
Met Leu Ile Lys Trp Val Asn Lys Thr Gly Arg Asp Ala Ser Val His
385 390 395 400
Thr Leu Leu Asp Ala Leu Glu Thr Leu Gly Glu Arg Leu Ala Lys Gln
405 410 415
Lys Ile Glu Asp His Leu Leu Ser Ser Gly Lys Phe Met Tyr Leu Glu
420 425 430
Gly Asn Ala Asp Ser Ala Met Ser
435 440
<210> 3
<211> 111
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(111)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体("DR5 mAb 1")轻链可变结构域
<400> 3
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Val Leu Ile Phe Leu Ser Ser Asn Leu Asp Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Asp Gly Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Asp Leu Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 4
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(15)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体("DR5 mAb 1")轻链可变结构域 CDRL1
<400> 4
Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Ser Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His
1 5 10 15
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(7)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体("DR5 mAb 1")轻链可变结构域 CDRL2
<400> 5
Leu Ser Ser Asn Leu Asp Ser
1 5
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(9)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体("DR5 mAb 1")轻链可变结构域 CDRL3
<400> 6
Gln His Ser Arg Asp Leu Pro Pro Thr
1 5
<210> 7
<211> 333
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(333)
<223> 编码鼠科抗-人DR5抗体("DR5 mAb 1")轻链可变结构域的多核苷酸
<400> 7
gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctcgggca gagggccacc 60
atctcatgca gggccagcaa aagtgtcagt tcctctggct atagttatat gcactggtac 120
caacagaaac caggacagcc acccaaagtc ctcatctttc tttcatccaa cctagattct 180
ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240
cctgtggagg atggggatgc tgcaacctat tactgtcagc acagtaggga tcttcctccg 300
acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaa 333
<210> 8
<211> 121
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(121)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体("DR5 mAb 1")重链可变结构域
<400> 8
Glu Val Lys Phe Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Asn Thr Ile Asn Tyr Thr Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Ala Tyr Tyr Gly Asn Pro Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 9
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(10)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体("DR5 mAb 1")重链可变结构域 CDRH1
<400> 9
Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr Trp Met Ser
1 5 10
<210> 10
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(17)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体("DR5 mAb 1")重链可变结构域 CDRH2
<400> 10
Glu Ile Asn Pro Asp Ser Asn Thr Ile Asn Tyr Thr Pro Ser Leu Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 11
<211> 12
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(12)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体("DR5 mAb 1")重链可变结构域 CDRH3
<400> 11
Arg Ala Tyr Tyr Gly Asn Pro Ala Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 12
<211> 363
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(363)
<223> 编码鼠科抗-人DR5抗体("DR5 mAb 1")重链可变结构域的多核苷酸
<400> 12
gaggtgaagt ttctcgagtc tggaggtggc ctggtgcagc ctggaggatc cctgaaactc 60
tcctgtgtag cctcaggatt cgattttagt agatactgga tgagttgggt ccggcaggct 120
ccagggaaag ggctagaatg gattggagaa attaatccag atagcaatac gataaactat 180
acgccatctc taaaggataa attcatcatc tccagagaca acgccaaaaa tacgctgtat 240
ctgcaaatga ccaaagtgag atctgaggac acagcccttt attattgtac aagaagggcc 300
tactatggta acccggcctg gtttgcttac tggggccaag ggactctggt cactgtctct 360
tcc 363
<210> 13
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(107)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体("DR5 mAb 2")轻链可变结构域
<400> 13
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Lys Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Thr Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ile Thr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 14
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(11)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体("DR5 mAb 2")轻链可变结构域 CDRL1
<400> 14
Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala
1 5 10
<210> 15
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(7)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体("DR5 mAb 2")轻链可变结构域 CDRL2
<400> 15
Trp Ala Ser Thr Arg His Thr
1 5
<210> 16
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(9)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体("DR5 mAb 2")轻链可变结构域 CDRL3
<400> 16
Gln Gln His Tyr Ile Thr Pro Trp Thr
1 5
<210> 17
<211> 321
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(321)
<223> 编码鼠科抗-人DR5抗体("DR5 mAb 2")轻链可变结构域的多核苷酸
<400> 17
gacattgtga tgacccagtc tcacaaattc atgtccactt cagtaggaga cagggtcagc 60
atcacctgca aggccagtca ggatgtgaat actgctgtag cctggtatca acaaaaacca 120
gggcaatctc ctaaactact gatttactgg gcatccaccc ggcacactgg agtccctgat 180
cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat tatacactca ccatcaaaag tgtgcaggct 240
gaagacctga cactttatta ctgtcagcaa cactatatca ctccgtggac gttcggtgga 300
ggcaccaagc tggaaatcaa a 321
<210> 18
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(119)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体("DR5 mAb 2")重链可变结构域
<400> 18
Lys Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Ile Leu His Trp Val Lys Gln Lys Ser Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Phe Tyr Pro Gly Asn Asn Asn Ile Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg His Glu Gln Gly Pro Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 19
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(10)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体("DR5 mAb 2")重链可变结构域 CDRH1
<400> 19
Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr Ile Leu His
1 5 10
<210> 20
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(17)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体("DR5 mAb 2")重链可变结构域 CDRH2
<400> 20
Trp Phe Tyr Pro Gly Asn Asn Asn Ile Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 21
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(10)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体("DR5 mAb 2")重链可变结构域 CDRH3
<400> 21
His Glu Gln Gly Pro Gly Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 22
<211> 357
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(357)
<223> 编码鼠科抗-人DR5抗体("DR5 mAb 2")重链可变结构域的多核苷酸
<400> 22
aaggtccagc tgcagcagtc tggagctgaa ctggtgaaac ccggggcatc agtgaagctg 60
tcctgcaagg cttctgggta caccttcact gagtatattt tacactgggt aaagcagaag 120
tctggacagg gtcttgagtg gattgggtgg ttttatcctg gaaataataa tataaagtac 180
aatgagaaat tcaaggacaa ggccacactg actgcggaca aatcctccag cacagtctat 240
atggaactta gtagattgac atctgaagac tctgcggtct atttctgtgc aagacacgaa 300
caaggaccag gttactttga ctactggggc caaggcacca ctctcacagt ctcctcc 357
<210> 23
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化的抗-人DR5抗体("hDR5 mAb 2 VL-2")轻链可变结构域
<400> 23
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ile Thr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 24
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码人源化的抗-人DR5抗体("hDR5 mAb 2 VL-2")轻链可变结构域的多核苷酸
<400> 24
gatattcaga tgacccagag tccctcattt ctgtccgcct ccgtcggtga ccgcgtgact 60
attacttgta aagcttctca ggatgtcaac accgccgtgg cttggtacca gcagaagccc 120
ggtaaagcac ctaagctgct gatctattgg gccagcactc ggcacaccgg agtcccatct 180
aggttctctg gcagtggatc agggacagac tttaccctga caattagctc cctgcagccc 240
gaggatgtgg ctacttacta ttgtcagcag cactacatca ctccttggac cttcggcggg 300
ggcacaaaac tggaaatcaa a 321
<210> 25
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化的抗-人DR5抗体("hDR5 mAb 2 VL-3")轻链可变结构域
<400> 25
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ile Thr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 26
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码人源化的抗-人DR5抗体("hDR5 mAb 2 VL-3")轻链可变结构域的多核苷酸
<400> 26
gatattcaga tgacccagag tccctcattt ctgtccgcct ccgtcggtga ccgcgtgact 60
attacttgtc gggcttctca ggatgtcaac accgccgtgg cttggtacca gcagaagccc 120
ggtaaagcac ctaagctgct gatctattgg gccagcactc ggcacaccgg agtcccagat 180
aggttctctg gcagtggatc agggacagac tttaccctga caattagctc cctgcagccc 240
gaggatgtgg ctacttacta ttgtcagcag cactacatca ctccttggac cttcggcggg 300
ggcacaaaac tggaaatcaa a 321
<210> 27
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠科抗-人DR5抗体("DR5 mAb 4")轻链可变结构域
<400> 27
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ile Thr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 28
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码人源化的抗-人DR5抗体("hDR5 mAb 2 VL-4")轻链可变结构域的多核苷酸
<400> 28
gatattcaga tgacccagag tccctcattt ctgtccgcct ccgtcggtga ccgcgtgact 60
attacttgtc gggcttctca ggatgtcaac accgccgtgg cttggtacca gcagaagccc 120
ggtaaagcac ctaagctgct gatctattgg gccagcactc ggcacaccgg agtcccatct 180
aggttctctg gcagtggatc agggacagac tttaccctga caattagctc cctgcagcca 240
gaggatatcg ctacatacta ttgtcagcag cactacatca ctccttggac cttcggcggg 300
ggcacaaaac tggaaatcaa a 321
<210> 29
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化的抗-人DR5抗体("hDR5 mAb 2 VL-5")轻链可变结构域
<400> 29
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ile Thr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 30
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码人源化的抗-人DR5抗体("hDR5 mAb 2 VL-5")轻链可变结构域的多核苷酸
<400> 30
gatattcaga tgacccagag tccctcattt ctgtccgcct ccgtcggtga ccgcgtgact 60
attacttgtc gggcttctca ggatgtcaac accgccgtgg cttggtacca gcagaagccc 120
ggtaaagcac ctaagctgct gatctattgg gccagcactc ggcacaccgg agtcccagat 180
aggttctctg gcagtggatc agggacagac tttaccctga caattagctc cctgcagccc 240
gaggatatcg ctacttacta ttgtcagcag cactacatca ctccttggac cttcggcggg 300
ggcacaaaac tggaaatcaa a 321
<210> 31
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化的抗-人DR5抗体("hDR5 mAb 2 VH-2")重链可变结构域
<400> 31
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Ile Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Phe Tyr Pro Gly Asn Asn Asn Ile Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Glu Gln Gly Pro Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 32
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码人源化的抗-人DR5抗体("hDR5 mAb 2 VH-2")重链可变结构域的多核苷酸
<400> 32
caggtccagc tggtgcagag tggggcagag gtgaaaaagc caggggcatc agtgaaagtg 60
tcttgtaaag catcaggtta tacatttact gagtacatcc tgcactgggt gcgacaggca 120
ccaggacagg gactggaatg gatggggtgg ttctaccctg gcaacaacaa cattaagtac 180
aacgagaagt ttaaagaccg ggtgaccatc acagcggata agtctaccag tacagtctat 240
atggagctga gctccctgag aagcgaagac accgccgtct actattgcgc tcgccacgaa 300
cagggtccag gttactttga ttattggggg cagggaactc tggtcacagt cagctcc 357
<210> 33
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头1
<400> 33
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 34
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含半胱氨酸的间隔肽("接头2")
<400> 34
Gly Gly Cys Gly Gly Gly
1 5
<210> 35
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人IgG铰链结构域的包含半胱氨酸的肽变体
<400> 35
Gly Val Glu Pro Lys Ser Cys
1 5
<210> 36
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人IgG铰链结构域的包含半胱氨酸的肽变体
<400> 36
Val Glu Pro Lys Ser Cys
1 5
<210> 37
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人IgG CL结构域的包含半胱氨酸的肽变体
<400> 37
Gly Phe Asn Arg Gly Glu Cys
1 5
<210> 38
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人IgG CL结构域的包含半胱氨酸的肽变体
<400> 38
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
1 5
<210> 39
<211> 28
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 异源二聚体促进"E-螺旋"结构域
<400> 39
Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val
1 5 10 15
Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys
20 25
<210> 40
<211> 28
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 异源二聚体促进"K-螺旋"结构域
<400> 40
Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val
1 5 10 15
Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
20 25
<210> 41
<211> 28
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含半胱氨酸的异源二聚体促进"E-螺旋"结构域
<400> 41
Glu Val Ala Ala Cys Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val
1 5 10 15
Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys
20 25
<210> 42
<211> 28
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含半胱氨酸的异源二聚体促进"K-螺旋"结构域
<400> 42
Lys Val Ala Ala Cys Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val
1 5 10 15
Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
20 25
<210> 43
<211> 46
<212> PRT
<213> 停乳链球菌(Streptococcus dysgalactiae)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(46)
<223> 链球菌属菌株G148的蛋白质G的白蛋白结合结构域 3 (ABD3)
<400> 43
Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr Gly
1 5 10 15
Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asp Asn Ala Lys Ser Ala Glu
20 25 30
Gly Val Lys Ala Leu Ile Asp Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro
35 40 45
<210> 44
<211> 46
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 链球菌属菌株G148的蛋白质G的变异的去免疫化的白蛋白结合结构域 3(ABD3)
<400> 44
Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr Gly
1 5 10 15
Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Ala Ala Asn Asn Ala Lys Thr Val Glu
20 25 30
Gly Val Lys Ala Leu Ile Ala Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro
35 40 45
<210> 45
<211> 46
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 链球菌属菌株G148的蛋白质G的变异的去免疫化的白蛋白结合结构域 3(ABD3)
<400> 45
Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr Gly
1 5 10 15
Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Ser Asn Ala Lys Ser Val Glu
20 25 30
Gly Val Lys Ala Leu Ile Ala Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro
35 40 45
<210> 46
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽接头("接头3")
<400> 46
Gly Gly Gly Ser
1
<210> 47
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽接头
<400> 47
Ala Ser Thr Lys Gly
1 5
<210> 48
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽接头
<400> 48
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 49
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽接头
<400> 49
Leu Glu Pro Lys Ser Ser
1 5
<210> 50
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽接头
<400> 50
Ala Pro Ser Ser Ser Pro Met Glu
1 5
<210> 51
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽接头
<400> 51
Leu Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10 15
<210> 52
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "携带杵的"变异的人IgG Fc结构域
<400> 52
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215
<210> 53
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "携带臼的"变异的人IgG Fc结构域
<400> 53
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215
<210> 54
<211> 108
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(108)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(曲兹妥单抗；"DR5 mAb 3")轻
链可变结构域
<400> 54
Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr
1 5 10 15
Val Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser
20 25 30
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly
35 40 45
Ala Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser
50 55 60
Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp
65 70 75 80
Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Ala Asp Ser Ser Gly Asn His Val
85 90 95
Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105
<210> 55
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(11)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(曲兹妥单抗；"DR5 mAb 3")轻
链可变结构域 CDRL1
<400> 55
Ser Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser
1 5 10
<210> 56
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(7)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(曲兹妥单抗；"DR5 mAb 3")轻
链可变结构域 CDRL2
<400> 56
Gly Ala Asn Asn Arg Pro Ser
1 5
<210> 57
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(11)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(曲兹妥单抗；"DR5 mAb 3")轻
链可变结构域 CDRL3
<400> 57
Asn Ser Ala Asp Ser Ser Gly Asn His Val Val
1 5 10
<210> 58
<211> 121
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(121)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(曲兹妥单抗；"DR5 mAb 3")重
链可变结构域
<400> 58
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Glu Arg Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Asn Trp Gln Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ile Leu Gly Ala Gly Arg Gly Trp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 59
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(10)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(曲兹妥单抗；"DR5 mAb 3")重
链可变结构域 CDRH1
<400> 59
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Met Ser
1 5 10
<210> 60
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(16)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(曲兹妥单抗；"DR5 mAb 3")重
链可变结构域 CDRH2
<400> 60
Ile Asn Trp Gln Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
<210> 61
<211> 12
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(12)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(曲兹妥单抗；"DR5 mAb 3")重
链可变结构域 CDRH2
<400> 61
Ile Leu Gly Ala Gly Arg Gly Trp Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 62
<211> 108
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(108)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(坎妥木单抗；"DR5 mAb 4")轻
链可变结构域
<400> 62
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Ser Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 63
<211> 12
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(12)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(坎妥木单抗；"DR5 mAb 4")轻
链可变结构域 CDRL1
<400> 63
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 64
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(7)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(坎妥木单抗；"DR5 mAb 4")轻
链可变结构域 CDRL2
<400> 64
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> 65
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(9)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(坎妥木单抗；"DR5 mAb 4")轻
链可变结构域 CDRL3
<400> 65
Gln Gln Phe Gly Ser Ser Pro Trp Thr
1 5
<210> 66
<211> 122
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(122)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(坎妥木单抗；"DR5 mAb 4")重
链可变结构域
<400> 66
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30
Asp Tyr Phe Trp Ser Trp Ile Arg Gln Leu Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly His Ile His Asn Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Lys Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Asp Arg Gly Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 67
<211> 12
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(12)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(坎妥木单抗；"DR5 mAb 4")重
链可变结构域 CDRH1
<400> 67
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly Asp Tyr Phe Trp Ser
1 5 10
<210> 68
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(16)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(坎妥木单抗；"DR5 mAb 4")重
链可变结构域 CDRH2
<400> 68
His Ile His Asn Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 69
<211> 12
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(12)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(坎妥木单抗；"DR5 mAb 4")重
链可变结构域 CDRH3
<400> 69
Asp Arg Gly Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 70
<211> 106
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(106)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(替加珠单抗；"DR5 mAb 5")轻
链可变结构域
<400> 70
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Arg Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 71
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(11)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(替加珠单抗；"DR5 mAb 5")轻
链可变结构域 CDRL1
<400> 71
Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala Val Ala
1 5 10
<210> 72
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(7)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(替加珠单抗；"DR5 mAb 5")轻
链可变结构域 CDRL2
<400> 72
Trp Ala Ser Thr Arg His Thr
1 5
<210> 73
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(8)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(替加珠单抗；"DR5 mAb 5")轻
链可变结构域 CDRL3
<400> 73
Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Arg Thr
1 5
<210> 74
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(119)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(替加珠单抗；"DR5 mAb 5")重
链可变结构域
<400> 74
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Val Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Asp Ser Met Ile Thr Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 75
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(10)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(替加珠单抗；"DR5 mAb 5")重
链可变结构域 CDRH1
<400> 75
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Val Met Ser
1 5 10
<210> 76
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(17)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(替加珠单抗；"DR5 mAb 5")重
链可变结构域 CDRH2
<400> 76
Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 77
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(10)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(替加珠单抗；"DR5 mAb 5")重
链可变结构域 CDRH3
<400> 77
Arg Gly Asp Ser Met Ile Thr Thr Asp Tyr
1 5 10
<210> 78
<211> 109
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(109)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(LBY135-1；"DR5 mAb 6")轻
链可变结构域
<400> 78
Asp Ile Ala Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Leu Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Tyr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala
100 105
<210> 79
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(8)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(LBY135-1；"DR5 mAb 6")轻
链可变结构域 CDRL1
<400> 79
Gln Asp Val Asn Thr Ala Ile Ala
1 5
<210> 80
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(7)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(LBY135-1；"DR5 mAb 6")轻
链可变结构域 CDRL2
<400> 80
Trp Ala Ser Thr Arg His Thr
1 5
<210> 81
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(9)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(LBY135-1；"DR5 mAb 6")轻
链可变结构域 CDRL3
<400> 81
Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr
1 5
<210> 82
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(119)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(LBY135-1；"DR5 mAb 6")重
链可变结构域
<400> 82
Lys Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Ser Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Phe Tyr Pro Gly Gly Gly Tyr Ile Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Thr Ser Glu Gly Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg His Glu Glu Gly Ile Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 83
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(10)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(LBY135-1；"DR5 mAb 6")重
链可变结构域 CDRH1
<400> 83
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Thr Ile His
1 5 10
<210> 84
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(17)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(LBY135-1；"DR5 mAb 6")重
链可变结构域 CDRH2
<400> 84
Trp Phe Tyr Pro Gly Gly Gly Tyr Ile Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 85
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(9)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(LBY135-1；"DR5 mAb 6")重
链可变结构域 CDRH3
<400> 85
His Glu Glu Gly Ile Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 86
<211> 104
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(104)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(LBY135-2；"DR5 mAb 7")轻
链可变结构域
<400> 86
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu
100
<210> 87
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(11)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(LBY135-2；"DR5 mAb 7")轻
链可变结构域 CDRL1
<400> 87
Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Ile Ala
1 5 10
<210> 88
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(7)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(LBY135-2；"DR5 mAb 7")轻
链可变结构域 CDRL2
<400> 88
Trp Ala Ser Thr Arg His Thr
1 5
<210> 89
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(9)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(LBY135-2；"DR5 mAb 7")轻
链可变结构域 CDRL3
<400> 89
Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Phe Thr
1 5
<210> 90
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(118)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(LBY135-2；"DR5 mAb 7")重
链可变结构域
<400> 90
Lys Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Ser Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Phe Tyr Pro Gly Gly Gly Tyr Ile Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg His Glu Glu Gly Ile Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 91
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(10)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(LBY135-2；"DR5 mAb 7")重
链可变结构域 CDRH1
<400> 91
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Thr Ile His
1 5 10
<210> 92
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(17)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(LBY135-2；"DR5 mAb 7")重
链可变结构域 CDRH2
<400> 92
Trp Phe Tyr Pro Gly Gly Gly Tyr Ile Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 93
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(9)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(LBY135-2；"DR5 mAb 7")重
链可变结构域 CDRH3
<400> 93
His Glu Glu Gly Ile Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 94
<211> 108
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(108)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(KMTR2；"DR5 mAb 8")轻链
可变结构域
<400> 94
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 95
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(11)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(KMTR2；"DR5 mAb 8")轻链
可变结构域 CDRL1
<400> 95
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 96
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(7)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(KMTR2；"DR5 mAb 8")轻链
可变结构域 CDRL2
<400> 96
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1 5
<210> 97
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(9)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(KMTR2；"DR5 mAb 8")轻链
可变结构域 CDRL3
<400> 97
Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu Thr
1 5
<210> 98
<211> 126
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(126)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(KMTR2；"DR5 mAb 8")重链
可变结构域
<400> 98
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Lys Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Asn Pro Asp Thr Asp Ser Thr Gly Tyr Pro Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Arg Asp Tyr Tyr Tyr Gly
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 99
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(10)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(KMTR2；"DR5 mAb 8")重链
可变结构域 CDRH1
<400> 99
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Lys Ile Asn
1 5 10
<210> 100
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(17)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(KMTR2；"DR5 mAb 8")重链
可变结构域 CDRH2
<400> 100
Trp Met Asn Pro Asp Thr Asp Ser Thr Gly Tyr Pro Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 101
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(17)
<223> 鼠科抗-人DR5抗体(KMTR2；"DR5 mAb 8")重链
可变结构域 CDRH3
<400> 101
Ser Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Arg Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp
1 5 10 15
Val
<210> 102
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(112)
<223> 鼠科抗-人CD2抗体(Lo-CD2A mAb )轻链
可变结构域
<400> 102
Asp Val Val Leu Thr Gln Thr Pro Pro Thr Leu Leu Ala Thr Ile Gly
1 5 10 15
Gln Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Thr Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Pro Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Glu Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asn Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Gly Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Phe
85 90 95
Thr His Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
<210> 103
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(118)
<223> 鼠科抗-人CD2抗体(Lo-CD2A mAb )重链
可变结构域
<400> 103
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Gln Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Lys Gln Arg Pro Lys Gln Gly Leu Glu Leu Val
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Ser Ile Asp Tyr Val Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Lys Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Lys Phe Asn Tyr Arg Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 104
<211> 110
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(110)
<223> 鼠科抗-人CD3抗体("CD3 mAb 2")轻链可变
结构域
<400> 104
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 105
<211> 14
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(14)
<223> 鼠科抗-人CD3抗体("CD3 mAb 2")轻链可变
结构域 CDRL1
<400> 105
Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn
1 5 10
<210> 106
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(7)
<223> 鼠科抗-人CD3抗体("CD3 mAb 2")轻链可变
结构域 CDRL2
<400> 106
Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro
1 5
<210> 107
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(9)
<223> 鼠科抗-人CD3抗体("CD3 mAb 2")轻链可变
结构域 CDRL3
<400> 107
Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val
1 5
<210> 108
<211> 125
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(125)
<223> 鼠科抗-人CD3抗体("CD3 mAb 2")重链可变
结构域
<400> 108
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 109
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(5)
<223> 鼠科抗-人CD3抗体("CD3 mAb 2")重链可变
结构域 CDRH1
<400> 109
Thr Tyr Ala Met Asn
1 5
<210> 110
<211> 19
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(19)
<223> 鼠科抗-人CD3抗体("CD3 mAb 2")重链可变
结构域 CDRH2
<400> 110
Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser
1 5 10 15
Val Lys Asp
<210> 111
<211> 14
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(14)
<223> 鼠科抗-人CD3 ("CD3 mAb 2")重链可变结构域
CDRH3
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(14)
<223> 鼠科抗-人CD3抗体("CD3 mAb 2")重链可变
结构域 CDRH3
<400> 111
His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 112
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含D65G (Kabat编号；在相对于SEQ ID NO:108的序列中，D68G)的鼠科抗-人CD3抗 体 ("CD3 mAb 2")变异的重链可变结构域
<400> 112
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 113
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含D65G (Kabat编号；在相对于SEQ ID NO:108的序列中，D68G)的鼠科抗-人CD3抗 体("CD3 mAb 2")变异的重链可变结构域的CDRH2
<400> 113
Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 114
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(107)
<223> 鼠科抗-人CD3抗体(OKT3)轻链可变结构域
<400> 114
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala His Phe Arg Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Gly Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn Arg
100 105
<210> 115
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(119)
<223> 鼠科抗-人CD3抗体(OKT3)重链可变结构域
<400> 115
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 116
<211> 111
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(111)
<223> 鼠科抗-人CD16抗体(3G8)轻链可变结构域
<400> 116
Asp Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Phe Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Phe Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Thr Thr Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Ala Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 117
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(118)
<223> 鼠科抗-人CD16抗体(3G8)重链可变结构域
<400> 117
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Arg Thr Ser
20 25 30
Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ala
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Ser Asn Gln Val
65 70 75 80
Phe Leu Lys Ile Ala Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Gln Ile Asn Pro Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 118
<211> 111
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(111)
<223> 鼠科抗-人CD16抗体(A9)轻链可变结构域
<400> 118
Asp Ile Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro
1 5 10 15
Gly Glu Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Asn Thr Gly Thr Val Thr
20 25 30
Thr Ser Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe
35 40 45
Thr Gly Leu Ile Gly His Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr
65 70 75 80
Gly Ala Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr
85 90 95
Asn Asn His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 119
<211> 117
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(117)
<223> 鼠科抗-人CD16抗体(A9)重链可变结构域
<400> 119
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Val Thr Ala Asp Thr Ser Ser Arg Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Val Gln Val Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Ala Ser Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Arg Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 120
<211> 108
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(108)
<223> 鼠科抗-人CD19抗体(HD37)轻链可变结构域
<400> 120
Asp Ile Leu Ile Thr Gln Ser Pro Lys Ser Met Ser Met Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Glu Asn Val Val Thr Tyr
20 25 30
Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Asp Tyr His Cys Gly Gln Gly Tyr Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 121
<211> 124
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(124)
<223> 鼠科抗-人CD19抗体(HD37)重链可变结构域
<400> 121
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 122
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 嵌合抗-人CD20抗体(利妥昔单抗(Rituximab))轻链可变结构域
<400> 122
Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile
20 25 30
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 123
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 嵌合抗-人CD20抗体(利妥昔单抗)重链可变结构域
<400> 123
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Thr Tyr Tyr Gly Gly Asp Trp Tyr Phe Asn Val Trp Gly
100 105 110
Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 124
<211> 113
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(113)
<223> 鼠科抗-人CD22抗体(Epratuzumab)轻链可变结构域
<400> 124
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ala Asn His Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln
85 90 95
Tyr Leu Ser Ser Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Gln Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 125
<211> 116
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(116)
<223> 鼠科抗-人CD22抗体(Epratuzumab)重链可变结构域
<400> 125
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Arg Asn Asp Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Phe Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Asp Ile Thr Thr Phe Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 126
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(107)
<223> 鼠科抗-人CD32B抗体("CD32B mAb 1")轻链可变结构域
<400> 126
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Leu Ala Ala Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Glu Ile Ser Gly Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Leu Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Glu Ser Gly Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Phe Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 127
<211> 116
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(116)
<223> 鼠科抗-人CD32B抗体("CD32B mAb 1")重链可变结构域
<400> 127
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala
20 25 30
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Glu Ile Arg Asn Lys Ala Lys Asn His Ala Thr Tyr Tyr Ala Glu
50 55 60
Ser Val Ile Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Ile Tyr
85 90 95
Tyr Cys Gly Ala Leu Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 128
<211> 109
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(109)
<223> 鼠科抗-人CD64抗体("CD64 mAb 1")轻链可变结构域
<400> 128
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Gly Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Leu Arg Ser Asn Trp Pro
85 90 95
Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 129
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(118)
<223> 鼠科抗-人CD64抗体("CD64 mAb 1")重链可变结构域
<400> 129
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Thr Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Thr Gly Asp Arg Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 130
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(112)
<223> 鼠科抗-人CD79抗体("CD794 mAb 1")轻链可变结构域
<400> 130
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Asn Ile Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Thr
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gln Gly Ser
35 40 45
Pro Asn Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Thr His Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
<210> 131
<211> 113
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(113)
<223> 鼠科抗-人CD79抗体("CD794 mAb 1")重链可变结构域
<400> 131
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Val Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Met Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Met Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 132
<211> 106
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(106)
<223> 鼠科抗-人TCR抗体(BMA 031)轻链可变结构域
<400> 132
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Thr Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 133
<211> 120
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(120)
<223> 鼠科抗-人TCR抗体(BMA 031)重链可变结构域
<400> 133
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Lys Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Val Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val His Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Phe Val Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 134
<211> 108
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(108)
<223> 鼠科抗-人NKG2D抗体(KYK-1.0)轻链可变结构域
<400> 134
Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Pro Cys Gly Gly Asp Asp Ile Glu Thr Lys Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Asp Asp Asp Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Phe Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Ser Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Asp Asn Asn Asp Glu
85 90 95
Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 135
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(118)
<223> 鼠科抗-人NKG2D抗体(KYK-1.0)重链可变结构域
<400> 135
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Lys Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Phe Gly Tyr Tyr Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 136
<211> 110
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(110)
<223> 鼠科抗-人NKG2D抗体(KYK-2.0)轻链可变结构域
<400> 136
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Ala Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Phe Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 137
<211> 121
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(121)
<223> 鼠科抗-人NKG2D抗体(KYK-2.0)重链可变结构域
<400> 137
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Gly Leu Gly Asp Gly Thr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 138
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(112)
<223> 鼠科抗-荧光素抗体4-4-20轻链可变结构域
<400> 138
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Phe Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Arg Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Val Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 139
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(118)
<223> 鼠科抗-荧光素抗体4-4-20重链可变结构域
<400> 139
Glu Val Lys Leu Asp Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Pro Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Arg Asn Lys Pro Tyr Asn Tyr Glu Thr Tyr Tyr Ser Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Val Glu Asp Met Gly Ile Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Gly Ser Tyr Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 140
<211> 277
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "DR5 mAb 1 x CD3 mAb 2双抗体"的第一多肽链
<400> 140
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Val Leu Ile Phe Leu Ser Ser Asn Leu Asp Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Asp Gly Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Asp Leu Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
130 135 140
Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro
145 150 155 160
Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn
165 170 175
Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser
180 185 190
Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys
195 200 205
Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly
210 215 220
Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
225 230 235 240
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Glu Val Ala Ala Cys Glu Lys
245 250 255
Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val
260 265 270
Ala Ala Leu Glu Lys
275
<210> 141
<211> 831
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"DR5 mAb 1 x CD3 mAb 2双抗体"的第一多肽链的多核苷酸
<400> 141
gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctcgggca gagggccacc 60
atctcatgca gggccagcaa aagtgtcagt tcctctggct atagttatat gcactggtac 120
caacagaaac caggacagcc acccaaagtc ctcatctttc tttcatccaa cctagattct 180
ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240
cctgtggagg atggggatgc tgcaacctat tactgtcagc acagtaggga tcttcctccg 300
acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaaggaggcg gatccggcgg cggaggcgag 360
gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcttg gtccagcctg gagggtccct gagactctcc 420
tgtgcagcct ctggattcac cttcagcaca tacgctatga attgggtccg ccaggctcca 480
gggaaggggc tggagtgggt tggaaggatc aggtccaagt acaacaatta tgcaacctac 540
tatgccgact ctgtgaaggg tagattcacc atctcaagag atgattcaaa gaactcactg 600
tatctgcaaa tgaacagcct gaaaaccgag gacacggccg tgtattactg tgtgagacac 660
ggtaacttcg gcaattctta cgtgtcttgg tttgcttatt ggggacaggg gacactggtg 720
actgtgtctt ccgcctccac caagggcgaa gtggccgcat gtgagaaaga ggttgctgct 780
ttggagaagg aggtcgctgc acttgaaaag gaggtcgcag ccctggagaa a 831
<210> 142
<211> 272
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "DR5 mAb 1 x CD3 mAb 2双抗体"的第二多肽链
<400> 142
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Glu Val Lys Phe Leu Glu Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly
130 135 140
Phe Asp Phe Ser Arg Tyr Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
145 150 155 160
Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Asn Thr Ile
165 170 175
Asn Tyr Thr Pro Ser Leu Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn
180 185 190
Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Thr Lys Val Arg Ser Glu Asp
195 200 205
Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Thr Arg Arg Ala Tyr Tyr Gly Asn Pro Ala
210 215 220
Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala
225 230 235 240
Ser Thr Lys Gly Lys Val Ala Ala Cys Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu
245 250 255
Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
260 265 270
<210> 143
<211> 816
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"DR5 mAb 1 x CD3 mAb 2双抗体"的第二多肽链的多核苷酸
<400> 143
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg 60
acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg ggtgcagcag 120
aagccaggac aggcaccaag gggcctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc 180
cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca 240
caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc 300
gggggtggca caaaactgac tgtgctggga ggtggtggat ccggcggcgg aggcgaggtg 360
aagtttctcg agtctggagg tggcctggtg cagcctggag gatccctgaa actctcctgt 420
gtagcctcag gattcgattt tagtagatac tggatgagtt gggtccggca ggctccaggg 480
aaagggctag aatggattgg agaaattaat ccagatagca atacgataaa ctatacgcca 540
tctctaaagg ataaattcat catctccaga gacaacgcca aaaatacgct gtatctgcaa 600
atgaccaaag tgagatctga ggacacagcc ctttattatt gtacaagaag ggcctactat 660
ggtaacccgg cctggtttgc ttactggggc caagggactc tggtcactgt ctctgcagcc 720
tccaccaagg gcaaagtggc cgcatgtaag gagaaagttg ctgctttgaa agagaaggtc 780
gccgcactta aggaaaaggt cgcagccctg aaagag 816
<210> 144
<211> 273
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "DR5 mAb 2 x CD3 mAb 2双抗体"的第一多肽链
<400> 144
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Lys Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Thr Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ile Thr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
115 120 125
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
130 135 140
Ser Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
145 150 155 160
Glu Trp Val Gly Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr
165 170 175
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser
180 185 190
Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr
195 200 205
Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val
210 215 220
Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
225 230 235 240
Ala Ser Thr Lys Gly Glu Val Ala Ala Cys Glu Lys Glu Val Ala Ala
245 250 255
Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu
260 265 270
Lys
<210> 145
<211> 819
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"DR5 mAb 2 x CD3 mAb 2双抗体"的第一多肽链的多核苷酸
<400> 145
gacattgtga tgacccagtc tcacaaattc atgtccactt cagtaggaga cagggtcagc 60
atcacctgca aggccagtca ggatgtgaat actgctgtag cctggtatca acaaaaacca 120
gggcaatctc ctaaactact gatttactgg gcatccaccc ggcacactgg agtccctgat 180
cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat tatacactca ccatcaaaag tgtgcaggct 240
gaagacctga cactttatta ctgtcagcaa cactatatca ctccgtggac gttcggtgga 300
ggcaccaagc tggaaatcaa aggaggcgga tccggcggcg gaggcgaggt gcagctggtg 360
gagtctgggg gaggcttggt ccagcctgga gggtccctga gactctcctg tgcagcctct 420
ggattcacct tcagcacata cgctatgaat tgggtccgcc aggctccagg gaaggggctg 480
gagtgggttg gaaggatcag gtccaagtac aacaattatg caacctacta tgccgactct 540
gtgaagggta gattcaccat ctcaagagat gattcaaaga actcactgta tctgcaaatg 600
aacagcctga aaaccgagga cacggccgtg tattactgtg tgagacacgg taacttcggc 660
aattcttacg tgtcttggtt tgcttattgg ggacagggga cactggtgac tgtgtcttcc 720
gcctccacca agggcgaagt ggccgcatgt gagaaagagg ttgctgcttt ggagaaggag 780
gtcgctgcac ttgaaaagga ggtcgcagcc ctggagaaa 819
<210> 146
<211> 270
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "DR5 mAb 2 x CD3 mAb 2双抗体"的第二多肽链
<400> 146
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Lys Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu
115 120 125
Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly
130 135 140
Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr Ile Leu His Trp Val Lys Gln Lys Ser Gly
145 150 155 160
Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Trp Phe Tyr Pro Gly Asn Asn Asn Ile
165 170 175
Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys
180 185 190
Ser Ser Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Arg Leu Thr Ser Glu Asp
195 200 205
Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg His Glu Gln Gly Pro Gly Tyr Phe
210 215 220
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
225 230 235 240
Lys Gly Lys Val Ala Ala Cys Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
245 250 255
Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
260 265 270
<210> 147
<211> 810
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"DR5 mAb 2 x CD3 mAb 2双抗体"的第二多肽链的多核苷酸
<400> 147
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg 60
acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg ggtgcagcag 120
aagccaggac aggcaccaag gggcctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc 180
cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca 240
caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc 300
gggggtggca caaaactgac tgtgctggga gggggtggat ccggcggcgg aggcaaggtc 360
cagctgcagc agtctggagc tgaactggtg aaacccgggg catcagtgaa gctgtcctgc 420
aaggcttctg ggtacacctt cactgagtat attttacact gggtaaagca gaagtctgga 480
cagggtcttg agtggattgg gtggttttat cctggaaata ataatataaa gtacaatgag 540
aaattcaagg acaaggccac actgactgcg gacaaatcct ccagcacagt ctatatggaa 600
cttagtagat tgacatctga agactctgcg gtctatttct gtgcaagaca cgaacaagga 660
ccaggttact ttgactactg gggccaaggc accactctca cagtctcctc cgcctccacc 720
aagggcaaag tggccgcatg taaggagaaa gttgctgctt tgaaagagaa ggtcgccgca 780
cttaaggaaa aggtcgcagc cctgaaagag 810
<210> 148
<211> 274
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "DR5 mAb 3 x CD3 mAb 2双抗体"的第一多肽链
<400> 148
Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr
1 5 10 15
Val Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser
20 25 30
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly
35 40 45
Ala Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser
50 55 60
Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp
65 70 75 80
Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Ala Asp Ser Ser Gly Asn His Val
85 90 95
Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
115 120 125
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr
130 135 140
Phe Ser Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
145 150 155 160
Leu Glu Trp Val Gly Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr
165 170 175
Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp
180 185 190
Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp
195 200 205
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr
210 215 220
Val Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
225 230 235 240
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Glu Val Ala Ala Cys Glu Lys Glu Val Ala
245 250 255
Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu
260 265 270
Glu Lys
<210> 149
<211> 272
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "DR5 mAb 3 x CD3 mAb 2双抗体"的第二多肽链
<400> 149
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Val Glu Arg Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
130 135 140
Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
145 150 155 160
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Asn Trp Gln Gly Gly Ser Thr
165 170 175
Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Asn
180 185 190
Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
195 200 205
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Ile Leu Gly Ala Gly Arg Gly Trp
210 215 220
Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala
225 230 235 240
Ser Thr Lys Gly Lys Val Ala Ala Cys Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu
245 250 255
Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
260 265 270
<210> 150
<211> 274
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "DR5 mAb 4 x CD3 mAb 2双抗体"的第一多肽链
<400> 150
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Ser Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Gly Ser Ser Pro
85 90 95
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100 105 110
Gly Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
115 120 125
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr
130 135 140
Phe Ser Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
145 150 155 160
Leu Glu Trp Val Gly Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr
165 170 175
Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp
180 185 190
Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp
195 200 205
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr
210 215 220
Val Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
225 230 235 240
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Glu Val Ala Ala Cys Glu Lys Glu Val Ala
245 250 255
Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu
260 265 270
Glu Lys
<210> 151
<211> 273
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "DR5 mAb 4 x CD3 mAb 2双抗体"的第二多肽链
<400> 151
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly
115 120 125
Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly
130 135 140
Gly Ser Ile Ser Ser Gly Asp Tyr Phe Trp Ser Trp Ile Arg Gln Leu
145 150 155 160
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly His Ile His Asn Ser Gly Thr
165 170 175
Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp
180 185 190
Thr Ser Lys Lys Gln Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala
195 200 205
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Arg Gly Gly Asp Tyr Tyr
210 215 220
Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
225 230 235 240
Ala Ser Thr Lys Gly Lys Val Ala Ala Cys Lys Glu Lys Val Ala Ala
245 250 255
Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys
260 265 270
Glu
<210> 152
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头
<400> 152
Ala Pro Ser Ser Ser
1 5
<210> 153
<211> 106
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(106)
<223> 鼠科抗-人EphA2抗体("DR5 mAb 1")轻链可变结构域
<400> 153
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Ile Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Tyr Thr Leu Tyr Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 154
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(11)
<223> 鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 1")轻链可变结构域 CDRL1
<400> 154
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 155
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(7)
<223> 鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 1")轻链可变结构域 CDRL2
<400> 155
Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser
1 5
<210> 156
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(8)
<223> 鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 1")轻链可变结构域 CDRL3
<400> 156
Gln Gln Gly Tyr Thr Leu Tyr Thr
1 5
<210> 157
<211> 318
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(318)
<223> 编码鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 1")轻链可变结构域 CDRL1的多核苷酸
<400> 157
gatatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagaatcacc 60
atcagttgca gggcaagtca ggacattagc aattatttaa actggtatca gcagaaacca 120
gatggaactg ttaaactcct gatctactac acatcaagat tacactcagg agtcccatca 180
aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccattagcaa cctggagcaa 240
gaagatattg ccacttactt ttgccaacag ggttatacgc tgtacacgtt cggagggggg 300
accaagctgg aaataaaa 318
<210> 158
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(118)
<223> 鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 1")重链可变结构域
<400> 158
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Arg Tyr
20 25 30
Ser Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Met Ile Trp Gly Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Lys His Gly Asn Tyr Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 159
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(10)
<223> 鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 1")重链可变结构域 CDRH1
<400> 159
Gly Phe Ser Leu Ser Arg Tyr Ser Val His
1 5 10
<210> 160
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(16)
<223> 鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 1")重链可变结构域 CDRH2
<400> 160
Met Ile Trp Gly Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 161
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(10)
<223> 鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 1")重链可变结构域 CDRH3
<400> 161
Lys His Gly Asn Tyr Tyr Thr Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 162
<211> 354
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(354)
<223> 编码鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 1")重链可变结构域的多核苷酸
<400> 162
caggtgcagc tgaaggagtc aggacctggc ctggtggcac cctcacagag cctgtccatc 60
acatgcactg tctctgggtt ctcattatcc agatatagtg tacactgggt tcgccagcct 120
ccaggaaagg gtctggagtg gctgggaatg atatggggtg gtggaagcac agactataat 180
tcagctctca aatccagact gagtatcagc aaggacaact ccaagagcca agttttctta 240
aaaatgaaca gtctgcaaac tgatgacaca gccatgtact actgtgccag aaaacatggt 300
aactactata ctatggacta ctggggtcaa ggaacctcag tcaccgtctc ctcc 354
<210> 163
<211> 111
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(111)
<223> 鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 2")轻链可变结构域
<400> 163
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Ser Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 164
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(16)
<223> 鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 2")轻链可变结构域 CDRL1
<400> 164
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Ser Gly Asn Thr Tyr Leu His
1 5 10 15
<210> 165
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(7)
<223> 鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 2")轻链可变结构域 CDRL2
<400> 165
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 166
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(8)
<223> 鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 2")轻链可变结构域 CDRL3
<400> 166
Ser Gln Ser Thr His Val Pro Thr
1 5
<210> 167
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(118)
<223> 鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 2")重链可变结构域
<400> 167
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Ile Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Met Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Leu Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 168
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(10)
<223> 鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 2")重链可变结构域 CDRH1
<400> 168
Gly Phe Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Met Asn
1 5 10
<210> 169
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(17)
<223> 鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 2")重链可变结构域 CDRH2
<400> 169
Trp Ile Asn Thr Tyr Ile Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 170
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(9)
<223> 鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 2")重链可变结构域 CDRH3
<400> 170
Glu Leu Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 171
<211> 354
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(354)
<223> 编码鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 2")重链可变结构域的多核苷酸
<400> 171
cagatccagt tggtgcagtc tggacctgag ctgaagaagc ctggagagac agtcaagatc 60
tcctgcaagg cttctgggtt taccttcaca aactatggaa tgaactgggt gaagcaggct 120
ccaggaaagg gtttaaagtg gatgggctgg ataaacacct atattggaga gccgacatat 180
gctgatgact tcaagggacg gtttgtcttc tctttggaaa cctctgccag cactgcctat 240
ttgcagatca acaacctcaa aaatgaggac atggccacat atttctgtgc aagagaactg 300
ggaccatact actttgacta ctggggccaa ggcaccactc tcacagtctc ctcc 354
<210> 172
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(107)
<223> 鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 3")轻链可变结构域
<400> 172
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser His Arg Ser Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Asn Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Trp Ala Ser Thr Arg His Ala Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Gly Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 173
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(11)
<223> 鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 3")轻链可变结构域 CDRL1
<400> 173
Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Thr Ala Val Ala
1 5 10
<210> 174
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(7)
<223> 鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 3")轻链可变结构域 CDRL2
<400> 174
Trp Ala Ser Thr Arg His Ala
1 5
<210> 175
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(9)
<223> 鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 3")轻链可变结构域 CDRL3
<400> 175
Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 176
<211> 321
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(321)
<223> 编码鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 3")轻链可变结构域的多核苷酸
<400> 176
gacattgtgc tgacccagtc tcacagatcc atgtccacat cagtaggaga cagggtcaac 60
atcacctgca aggccagtca ggatgtgact actgctgtag cctggtatca acaaaaacca 120
gggcaatctc ctaaattact gattttctgg gcatccaccc ggcacgctgg agtccctgat 180
cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat tttactctca ccatcagcag tgtgcaggct 240
ggagacctgg cactttatta ctgtcaacaa cattatagca caccgtacac attcggaggg 300
gggaccaagc tggaaataaa a 321
<210> 177
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(118)
<223> 鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 3")重链可变结构域
<400> 177
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp His
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Gly Gly Ser Phe Thr Ser Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Ala Lys Asn Asn Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Asp Glu Ser Asp Arg Pro Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 178
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(10)
<223> 鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 3")重链可变结构域 CDRH1
<400> 178
Gly Phe Thr Phe Thr Asp His Tyr Met Tyr
1 5 10
<210> 179
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(17)
<223> 鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 3")重链可变结构域 CDRH2
<400> 179
Thr Ile Ser Asp Gly Gly Ser Phe Thr Ser Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 180
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(9)
<223> 鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 3")重链可变结构域 CDRH3
<400> 180
Asp Glu Ser Asp Arg Pro Phe Pro Tyr
1 5
<210> 181
<211> 106
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(106)
<223> 鼠科抗-人gpA33抗体("gpA33 mAb 1")轻链可变结构域
<400> 181
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Arg Ser Ser Ile Ser Phe Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 182
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(10)
<223> 鼠科抗-人gpA33抗体("gpA33 mAb 1")轻链可变结构域 CDRL1
<400> 182
Ser Ala Arg Ser Ser Ile Ser Phe Met Tyr
1 5 10
<210> 183
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(7)
<223> 鼠科抗-人gpA33抗体("gpA33 mAb 1")轻链可变结构域 CDRL2
<400> 183
Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 184
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(9)
<223> 鼠科抗-人gpA33抗体("gpA33 mAb 1")轻链可变结构域 CDRL3
<400> 184
Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 185
<211> 318
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(318)
<223> 编码鼠科抗-人gpA33抗体("gpA33 mAb 1")轻链可变结构域的多核苷酸
<400> 185
gacattcagc tgactcagtc cccctctttt ctgtccgcat ccgtcggaga tcgagtgact 60
attacttgct ctgctaggtc ctcaatcagc ttcatgtact ggtatcagca gaagcccggc 120
aaagcaccta agctgctgat ctacgacaca agcaacctgg cctccggggt gccatctcgg 180
ttctctggca gtgggtcagg aactgagttt accctgacaa ttagctccct ggaggctgaa 240
gatgccgcta cctactattg ccagcagtgg agcagctatc ctctgacctt cggacagggg 300
actaaactgg aaatcaag 318
<210> 186
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(119)
<223> 鼠科抗-人gpA33抗体("gpA33 mAb 1")重链可变结构域
<400> 186
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Ser
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Tyr Gly Asn Asn Val Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 187
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(10)
<223> 鼠科抗-人gpA33抗体("gpA33 mAb 1")重链可变结构域 CDRH1
<400> 187
Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Ser Trp Met Asn
1 5 10
<210> 188
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(17)
<223> 鼠科抗-人gpA33抗体("gpA33 mAb 1")重链可变结构域 CDRH2
<400> 188
Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 189
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(10)
<223> 鼠科抗-人gpA33抗体("gpA33 mAb 1")重链可变结构域 CDRH3
<400> 189
Ile Tyr Gly Asn Asn Val Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 190
<211> 357
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(357)
<223> 编码鼠科抗-人gpA33抗体("gpA33 mAb 1")重链可变结构域的多核苷酸
<400> 190
caggtccagc tggtccagag cggggccgaa gtcaaaaaac ccggagcaag cgtgaaggtc 60
tcctgcaaag catcaggcta tacatttaca ggcagctgga tgaactgggt gaggcaggct 120
ccaggacagg gactggagtg gatcgggcgc atctaccctg gagacggcga aactaactat 180
aatggaaagt tcaaagaccg agtgaccatc acagccgata agtctactag taccgcctac 240
atggagctga gctccctgcg gtctgaagat accgccgtct actattgcgc tagaatttac 300
ggaaacaatg tctattttga cgtgtggggg cagggaacaa ctgtgactgt ctcctcc 357
<210> 191
<211> 109
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(109)
<223> 鼠科抗-人Her2抗体("Her2 mAb 1")轻链可变结构域
<400> 191
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
100 105
<210> 192
<211> 120
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(120)
<223> 鼠科抗-人Her2抗体("Her2 mAb 1")重链可变结构域
<400> 192
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Val Ser Arg Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Ala Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 193
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化的抗-人Her2抗体(曲妥珠单抗(Trastuzumab))轻链可变结构域
<400> 193
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 194
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化的抗-人Her2抗体(曲妥珠单抗)重链可变结构域
<400> 194
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 195
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(107)
<223> 鼠科抗-人B7-H3抗体("B7-H3 mAb 1")轻链可变结构域
<400> 195
Asp Ile Ala Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Asp Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 196
<211> 122
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(122)
<223> 鼠科抗-人B7-H3抗体("B7-H3 mAb 1")重链可变结构域
<400> 196
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Asp Ser Ser Ala Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gly Arg Gly Arg Glu Asn Ile Tyr Tyr Gly Ser Arg Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 197
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(107)
<223> 鼠科抗-人B7-H3抗体("B7-H3 mAb 2")轻链可变结构域
<400> 197
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Asp Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 198
<211> 120
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(120)
<223> 鼠科抗-人B7-H3抗体("B7-H3 mAb 2")重链可变结构域
<400> 198
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Thr Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Ile Pro Arg Leu Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 199
<211> 108
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(108)
<223> 鼠科抗-人B7-H3抗体("B7-H3 mAb 3")轻链可变结构域
<400> 199
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Thr Lys Thr Leu Pro Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Arg Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Asn Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 200
<211> 117
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(117)
<223> 鼠科抗-人B7-H3抗体("B7-H3 mAb 3")重链可变结构域
<400> 200
Glu Val Gln Gln Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Asn Ser Gly Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Leu
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Arg Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Asp Gly Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 201
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 嵌合抗-人EGFR抗体(西妥昔单抗（Cetuximab）)轻链可变结构域
<400> 201
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Val Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Asn
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Asn Trp Pro Thr
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg
100 105
<210> 202
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 嵌合抗-人EGFR抗体(西妥昔单抗)重链可变结构域
<400> 202
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Thr Pro Phe Thr
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Asn Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Phe
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Asn Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Leu Thr Tyr Tyr Asp Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 203
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化的抗-人VEGF抗体(贝伐单抗(Bevacizumab))轻链可变结构域
<400> 203
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile
35 40 45
Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 204
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化的抗-人VEGF抗体(贝伐单抗)重链可变结构域
<400> 204
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe
50 55 60
Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 205
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化的抗-CD52抗体(阿仑珠单抗（Alemtuzumab）)轻链可变结构域
<400> 205
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asp Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Asn Asn Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Ile Ser Arg Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 206
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化的抗-CD52抗体(阿仑珠单抗)重链可变结构域
<400> 206
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Phe
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Asp Lys Ala Lys Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Asn Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Val Thr Met Leu Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln
65 70 75 80
Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Glu Gly His Thr Ala Ala Pro Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 207
<211> 98
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(98)
<223> 人IgG1 CH1结构域
<400> 207
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val
<210> 208
<211> 98
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 变异的人IgG1 CH1结构域
<400> 208
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val
<210> 209
<211> 15
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(15)
<223> 人IgG1铰链结构域
<400> 209
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10 15
<210> 210
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(107)
<223> 人IgG1 CL κ结构域
<400> 210
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 211
<211> 104
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(104)
<223> 人IgG2 CL λ2结构域
<400> 211
Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu
1 5 10 15
Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe
20 25 30
Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val
35 40 45
Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
50 55 60
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
65 70 75 80
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
85 90 95
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
100
<210> 212
<211> 503
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1" 三特异性结合分子的第一多肽链
<400> 212
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Arg Ser Ser Ile Ser Phe Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly Gly
100 105 110
Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
115 120 125
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
130 135 140
Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
145 150 155 160
Trp Val Gly Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr
165 170 175
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys
180 185 190
Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala
195 200 205
Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser
210 215 220
Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly
225 230 235 240
Gly Cys Gly Gly Gly Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala
245 250 255
Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu
260 265 270
Lys Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
275 280 285
Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
290 295 300
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
305 310 315 320
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
325 330 335
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
340 345 350
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
355 360 365
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
370 375 380
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
385 390 395 400
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
405 410 415
Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
420 425 430
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
435 440 445
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
450 455 460
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
465 470 475 480
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
485 490 495
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
500
<210> 213
<211> 1509
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1" 三特异性结合分子的第一多肽链的 多核苷酸
<400> 213
gacattcagc tgactcagtc cccctctttt ctgtccgcat ccgtcggaga tcgagtgact 60
attacttgct ctgctaggtc ctcaatcagc ttcatgtact ggtatcagca gaagcccggc 120
aaagcaccta agctgctgat ctacgacaca agcaacctgg cctccggggt gccatctcgg 180
ttctctggca gtgggtcagg aactgagttt accctgacaa ttagctccct ggaggctgaa 240
gatgccgcta cctactattg ccagcagtgg agcagctatc ctctgacctt cggacagggg 300
actaaactgg aaatcaaggg tggaggatcc ggcggcggag gcgaggtgca gctggtggag 360
tctgggggag gcttggtcca gcctggaggg tccctgagac tctcctgtgc agcctctgga 420
ttcaccttca gcacatacgc tatgaattgg gtccgccagg ctccagggaa ggggctggag 480
tgggttggaa ggatcaggtc caagtacaac aattatgcaa cctactatgc cgactctgtg 540
aagggtagat tcaccatctc aagagatgat tcaaagaact cactgtatct gcaaatgaac 600
agcctgaaaa ccgaggacac ggccgtgtat tactgtgtga gacacggtaa cttcggcaat 660
tcttacgtgt cttggtttgc ttattgggga caggggacac tggtgactgt gtcttccgga 720
ggatgtggcg gtggagaagt ggccgcactg gagaaagagg ttgctgcttt ggagaaggag 780
gtcgctgcac ttgaaaagga ggtcgcagcc ctggagaaag gcggcgggga caaaactcac 840
acatgcccac cgtgcccagc acctgaagcc gcggggggac cgtcagtctt cctcttcccc 900
ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg 960
gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 1020
cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc 1080
gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc 1140
aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aagccaaagg gcagccccga 1200
gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtcagc 1260
ctgtggtgcc tggtcaaagg cttctatccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat 1320
gggcagccgg agaacaacta caagaccacg cctcccgtgc tggactccga cggctccttc 1380
ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca 1440
tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc agaagagcct ctccctgtct 1500
ccgggtaaa 1509
<210> 214
<211> 271
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1"三特异性结合分子的第二多肽链
<400> 214
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu
115 120 125
Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly
130 135 140
Tyr Thr Phe Thr Gly Ser Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
145 150 155 160
Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr
165 170 175
Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys
180 185 190
Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp
195 200 205
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ile Tyr Gly Asn Asn Val Tyr Phe
210 215 220
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys
225 230 235 240
Gly Gly Gly Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys
245 250 255
Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
260 265 270
<210> 215
<211> 813
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1" 三特异性结合分子的第二多肽链的多核苷酸
<400> 215
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg 60
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cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca 240
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gggggtggca caaaactgac tgtgctggga gggggtggat ccggcggagg tggacaggtc 360
cagctggtcc agagcggggc cgaagtcaaa aaacccggag caagcgtgaa ggtctcctgc 420
aaagcatcag gctatacatt tacaggcagc tggatgaact gggtgaggca ggctccagga 480
cagggactgg agtggatcgg gcgcatctac cctggagacg gcgaaactaa ctataatgga 540
aagttcaaag accgagtgac catcacagcc gataagtcta ctagtaccgc ctacatggag 600
ctgagctccc tgcggtctga agataccgcc gtctactatt gcgctagaat ttacggaaac 660
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gcacttaagg aaaaggtcgc agccctgaaa gag 813
<210> 216
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1" 三特异性结合分子的第三多肽链
<400> 216
Glu Val Lys Phe Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Asn Thr Ile Asn Tyr Thr Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Ala Tyr Tyr Gly Asn Pro Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn Arg Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 217
<211> 1353
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1" 三特异性结合分子的第三多肽链的多核苷酸
<400> 217
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tcctgtgtag cctcaggatt cgattttagt agatactgga tgagttgggt ccggcaggct 120
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acgccatctc taaaggataa attcatcatc tccagagaca acgccaaaaa tacgctgtat 240
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tactatggta acccggcctg gtttgcttac tggggccaag ggactctggt cactgtctct 360
tccgcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420
gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
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ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
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<210> 218
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1"三特异性结合分子的第四多肽链
<400> 218
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Val Leu Ile Phe Leu Ser Ser Asn Leu Asp Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Asp Gly Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Asp Leu Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 219
<211> 654
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1" 三特异性结合分子的第四多肽链的多核苷酸
<400> 219
gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctcgggca gagggccacc 60
atctcatgca gggccagcaa aagtgtcagt tcctctggct atagttatat gcactggtac 120
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aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 480
ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 540
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acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgt 654
<210> 220
<211> 503
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 2"三特异性结合分子的第一多肽链
<400> 220
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Arg Ser Ser Ile Ser Phe Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly Gly
100 105 110
Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
115 120 125
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
130 135 140
Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
145 150 155 160
Trp Val Gly Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr
165 170 175
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys
180 185 190
Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala
195 200 205
Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser
210 215 220
Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly
225 230 235 240
Gly Cys Gly Gly Gly Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala
245 250 255
Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu
260 265 270
Lys Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
275 280 285
Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
290 295 300
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
305 310 315 320
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
325 330 335
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
340 345 350
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
355 360 365
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
370 375 380
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
385 390 395 400
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
405 410 415
Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
420 425 430
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
435 440 445
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
450 455 460
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
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Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
485 490 495
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
500
<210> 221
<211> 1509
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 2" 三特异性结合分子的第一多肽链的多核苷酸
<400> 221
gacattcagc tgactcagtc cccctctttt ctgtccgcat ccgtcggaga tcgagtgact 60
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ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg 960
gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 1020
cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc 1080
gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc 1140
aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aagccaaagg gcagccccga 1200
gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtcagc 1260
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<210> 222
<211> 271
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 2"三特异性结合分子的第二多肽链
<400> 222
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
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35 40 45
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50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
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85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu
115 120 125
Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly
130 135 140
Tyr Thr Phe Thr Gly Ser Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
145 150 155 160
Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr
165 170 175
Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys
180 185 190
Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp
195 200 205
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ile Tyr Gly Asn Asn Val Tyr Phe
210 215 220
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys
225 230 235 240
Gly Gly Gly Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys
245 250 255
Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
260 265 270
<210> 223
<211> 813
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 2" 三特异性结合分子的第二多肽链的多核苷酸
<400> 223
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg 60
acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg ggtgcagcag 120
aagccaggac aggcaccaag gggcctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc 180
cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca 240
caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc 300
gggggtggca caaaactgac tgtgctggga gggggtggat ccggcggagg tggacaggtc 360
cagctggtcc agagcggggc cgaagtcaaa aaacccggag caagcgtgaa ggtctcctgc 420
aaagcatcag gctatacatt tacaggcagc tggatgaact gggtgaggca ggctccagga 480
cagggactgg agtggatcgg gcgcatctac cctggagacg gcgaaactaa ctataatgga 540
aagttcaaag accgagtgac catcacagcc gataagtcta ctagtaccgc ctacatggag 600
ctgagctccc tgcggtctga agataccgcc gtctactatt gcgctagaat ttacggaaac 660
aatgtctatt ttgacgtgtg ggggcaggga acaactgtga ctgtctcctc cggaggatgt 720
ggcggtggaa aagtggccgc actgaaggag aaagttgctg ctttgaaaga gaaggtcgcc 780
gcacttaagg aaaaggtcgc agccctgaaa gag 813
<210> 224
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 2" 三特异性结合分子的第三多肽链
<400> 224
Lys Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Ile Leu His Trp Val Lys Gln Lys Ser Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Phe Tyr Pro Gly Asn Asn Asn Ile Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg His Glu Gln Gly Pro Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser
355 360 365
Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn Arg Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 225
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 2" 三特异性结合分子的第三多肽链的多核苷酸
<400> 225
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tctggacagg gtcttgagtg gattgggtgg ttttatcctg gaaataataa tataaagtac 180
aatgagaaat tcaaggacaa ggccacactg actgcggaca aatcctccag cacagtctat 240
atggaactta gtagattgac atctgaagac tctgcggtct atttctgtgc aagacacgaa 300
caaggaccag gttactttga ctactggggc caaggcacca ctctcacagt ctcctccgcc 360
tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc 420
acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 480
aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 540
ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac ccagacctac 600
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tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 780
gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 840
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 900
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 960
tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020
gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg 1080
accaagaacc aggtcagcct gagttgcgca gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1200
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aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa 1347
<210> 226
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 2" 三特异性结合分子的第四多肽链
<400> 226
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Lys Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Thr Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ile Thr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 227
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 2" 三特异性结合分子的第四多肽链的多核苷酸
<400> 227
gacattgtga tgacccagtc tcacaaattc atgtccactt cagtaggaga cagggtcagc 60
atcacctgca aggccagtca ggatgtgaat actgctgtag cctggtatca acaaaaacca 120
gggcaatctc ctaaactact gatttactgg gcatccaccc ggcacactgg agtccctgat 180
cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat tatacactca ccatcaaaag tgtgcaggct 240
gaagacctga cactttatta ctgtcagcaa cactatatca ctccgtggac gttcggtgga 300
ggcaccaagc tggaaatcaa acgtacggtg gctgcaccat cggtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
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ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 228
<211> 503
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "EphA2 mAb 1 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1"三特异性结合分子的第一多肽链
<400> 228
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Ile Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Tyr Thr Leu Tyr Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly Gly
100 105 110
Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
115 120 125
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
130 135 140
Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
145 150 155 160
Trp Val Gly Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr
165 170 175
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys
180 185 190
Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala
195 200 205
Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser
210 215 220
Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly
225 230 235 240
Gly Cys Gly Gly Gly Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala
245 250 255
Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu
260 265 270
Lys Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
275 280 285
Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
290 295 300
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
305 310 315 320
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
325 330 335
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
340 345 350
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
355 360 365
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
370 375 380
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
385 390 395 400
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
405 410 415
Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
420 425 430
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
435 440 445
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
450 455 460
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
465 470 475 480
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
485 490 495
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
500
<210> 229
<211> 1508
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"EphA2 mAb 1 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1" 三特异性结合分子的第一多肽链的多核苷酸
<400> 229
gatatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagaatcacc 60
atcagttgca gggcaagtca ggacattagc aattatttaa actggtatca gcagaaacca 120
gatggaactg ttaaactcct gatctactac acatcaagat tacactcagg agtcccatca 180
aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccattagcaa cctggagcaa 240
gaagatattg ccacttactt ttgccaacag ggttatacgc tgtacacgtt cggagggggg 300
accaagctgg aaataaaagg tggaggatcc ggcggcggag gcgaggtgca gctggtggag 360
tctgggggag gcttggtcca gcctggaggg tccctgagac tctcctgtgc agcctctgga 420
ttcaccttca gcacatacgc tatgaattgg gtccgccagg ctccagggaa ggggctggag 480
tgggttggaa ggatcaggtc caagtacaac aattatgcaa cctactatgc cgactctgtg 540
aagggtagat tcaccatctc aagagatgat tcaaagaact cactgtatct gcaaatgaac 600
agcctgaaaa ccgaggacac ggccgtgtat tactgtgtga gacacggtaa cttcggcaat 660
tcttacgtgt cttggtttgc ttattgggga caggggacac tggtgactgt gtcttccgga 720
ggatgtggcg gtggagaagt ggccgcactg gagaaagagg ttgctgcttt ggagaaggag 780
gtcgctgcac ttgaaaagga ggtcgcagcc ctggagaaag gcggcgggga caaaactcac 840
acatgcccac cgtgcccagc acctgaagcc gcggggggac cgtcagtctt cctcttcccc 900
ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg 960
gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 1020
cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc 1080
gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc 1140
aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aagccaaagg gcagccccga 1200
gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtcagc 1260
ctgtggtgcc tggtcaaagg cttctatccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat 1320
gggcagccgg agaacaacta caagaccacg cctcccgtgc tggactccga cggctccttc 1380
ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca 1440
tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc agaagagcct ctccctgtct 1500
ccgggtaa 1508
<210> 230
<211> 270
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "EphA2 mAb 1 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1" 三特异性结合分子的第二多肽链
<400> 230
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly
115 120 125
Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly
130 135 140
Phe Ser Leu Ser Arg Tyr Ser Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly
145 150 155 160
Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Met Ile Trp Gly Gly Gly Ser Thr Asp
165 170 175
Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser
180 185 190
Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr
195 200 205
Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Lys His Gly Asn Tyr Tyr Thr Met Asp
210 215 220
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly
225 230 235 240
Gly Gly Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
245 250 255
Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
260 265 270
<210> 231
<211> 810
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"EphA2 mAb 1 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1" 三特异性结合分子的第二多肽链的多核苷酸
<400> 231
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg 60
acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg ggtgcagcag 120
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cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca 240
caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc 300
gggggtggca caaaactgac tgtgctggga gggggtggat ccggcggagg tggacaggtg 360
cagctgaagg agtcaggacc tggcctggtg gcaccctcac agagcctgtc catcacatgc 420
actgtctctg ggttctcatt atccagatat agtgtacact gggttcgcca gcctccagga 480
aagggtctgg agtggctggg aatgatatgg ggtggtggaa gcacagacta taattcagct 540
ctcaaatcca gactgagtat cagcaaggac aactccaaga gccaagtttt cttaaaaatg 600
aacagtctgc aaactgatga cacagccatg tactactgtg ccagaaaaca tggtaactac 660
tatactatgg actactgggg tcaaggaacc tcagtcaccg tctcctccgg aggatgtggc 720
ggtggaaaag tggccgcact gaaggagaaa gttgctgctt tgaaagagaa ggtcgccgca 780
cttaaggaaa aggtcgcagc cctgaaagag 810
<210> 232
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "EphA2 mAb 1 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1" 三特异性结合分子的第三多肽链
<400> 232
Glu Val Lys Phe Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Asn Thr Ile Asn Tyr Thr Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Ala Tyr Tyr Gly Asn Pro Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn Arg Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 233
<211> 1353
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"EphA2 mAb 1 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1" 三特异性结合分子的第三多肽链的多核苷酸
<400> 233
gaggtgaagt ttctcgagtc tggaggtggc ctggtgcagc ctggaggatc cctgaaactc 60
tcctgtgtag cctcaggatt cgattttagt agatactgga tgagttgggt ccggcaggct 120
ccagggaaag ggctagaatg gattggagaa attaatccag atagcaatac gataaactat 180
acgccatctc taaaggataa attcatcatc tccagagaca acgccaaaaa tacgctgtat 240
ctgcaaatga ccaaagtgag atctgaggac acagcccttt attattgtac aagaagggcc 300
tactatggta acccggcctg gtttgcttac tggggccaag ggactctggt cactgtctct 360
tccgcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420
gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
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tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gagagttgag 660
cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agccgcgggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag 1080
gagatgacca agaaccaggt cagcctgagt tgcgcagtca aaggcttcta tcccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc gtcagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccgctac 1320
acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353
<210> 234
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "EphA2 mAb 1 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1" 三特异性结合分子的第四多肽链
<400> 234
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Val Leu Ile Phe Leu Ser Ser Asn Leu Asp Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Asp Gly Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Asp Leu Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 235
<211> 654
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"EphA2 mAb 1 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1" 三特异性结合分子的第四多肽链的多核苷酸
<400> 235
gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctcgggca gagggccacc 60
atctcatgca gggccagcaa aagtgtcagt tcctctggct atagttatat gcactggtac 120
caacagaaac caggacagcc acccaaagtc ctcatctttc tttcatccaa cctagattct 180
ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240
cctgtggagg atggggatgc tgcaacctat tactgtcagc acagtaggga tcttcctccg 300
acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaacgtacgg tggctgcacc atcggtcttc 360
atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 420
aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 480
ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 540
agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 600
acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgt 654
<210> 236
<211> 508
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "EphA2 mAb 2 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1" 三特异性结合分子的第一多肽链
<400> 236
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Ser Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
130 135 140
Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro
145 150 155 160
Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn
165 170 175
Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser
180 185 190
Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys
195 200 205
Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly
210 215 220
Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
225 230 235 240
Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly Glu Val Ala Ala Leu Glu
245 250 255
Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu
260 265 270
Val Ala Ala Leu Glu Lys Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
275 280 285
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
290 295 300
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
305 310 315 320
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
325 330 335
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
340 345 350
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
355 360 365
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
370 375 380
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
385 390 395 400
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
405 410 415
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly
420 425 430
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
435 440 445
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
450 455 460
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
465 470 475 480
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
485 490 495
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
500 505
<210> 237
<211> 1524
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"EphA2 mAb 2 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1" 三特异性结合分子的第一多肽链的多核苷酸
<400> 237
gatgttgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60
atctcttgca gatctagtca gagccttgta cacagtagtg gaaacaccta tttacattgg 120
tacctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ctcaaagtac acatgttccc 300
acgttcggct cggggacaaa gttggaaata aaaggtggag gatccggcgg cggaggcgag 360
gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcttg gtccagcctg gagggtccct gagactctcc 420
tgtgcagcct ctggattcac cttcagcaca tacgctatga attgggtccg ccaggctcca 480
gggaaggggc tggagtgggt tggaaggatc aggtccaagt acaacaatta tgcaacctac 540
tatgccgact ctgtgaaggg tagattcacc atctcaagag atgattcaaa gaactcactg 600
tatctgcaaa tgaacagcct gaaaaccgag gacacggccg tgtattactg tgtgagacac 660
ggtaacttcg gcaattctta cgtgtcttgg tttgcttatt ggggacaggg gacactggtg 720
actgtgtctt ccggaggatg tggcggtgga gaagtggccg cactggagaa agaggttgct 780
gctttggaga aggaggtcgc tgcacttgaa aaggaggtcg cagccctgga gaaaggcggc 840
ggggacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aagccgcggg gggaccgtca 900
gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 960
acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg 1020
gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg 1080
taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac 1140
aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1200
aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga ggagatgacc 1260
aagaaccagg tcagcctgtg gtgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 1320
gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1380
tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1440
gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1500
agcctctccc tgtctccggg taaa 1524
<210> 238
<211> 270
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "EphA2 mAb 2 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1"三特异性结合分子的第二多肽链
<400> 238
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu
115 120 125
Leu Lys Lys Pro Gly Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly
130 135 140
Phe Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly
145 150 155 160
Lys Gly Leu Lys Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Ile Gly Glu Pro
165 170 175
Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Glu Thr
180 185 190
Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp
195 200 205
Met Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Glu Leu Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp
210 215 220
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly
225 230 235 240
Gly Gly Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
245 250 255
Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
260 265 270
<210> 239
<211> 810
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"EphA2 mAb 2 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1" 三特异性结合分子的第二多肽链的多核苷酸
<400> 239
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg 60
acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg ggtgcagcag 120
aagccaggac aggcaccaag gggcctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc 180
cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca 240
caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc 300
gggggtggca caaaactgac tgtgctggga gggggtggat ccggcggagg tggacagatc 360
cagttggtgc agtctggacc tgagctgaag aagcctggag agacagtcaa gatctcctgc 420
aaggcttctg ggtttacctt cacaaactat ggaatgaact gggtgaagca ggctccagga 480
aagggtttaa agtggatggg ctggataaac acctatattg gagagccgac atatgctgat 540
gacttcaagg gacggtttgt cttctctttg gaaacctctg ccagcactgc ctatttgcag 600
atcaacaacc tcaaaaatga ggacatggcc acatatttct gtgcaagaga actgggacca 660
tactactttg actactgggg ccaaggcacc actctcacag tctcctccgg aggatgtggc 720
ggtggaaaag tggccgcact gaaggagaaa gttgctgctt tgaaagagaa ggtcgccgca 780
cttaaggaaa aggtcgcagc cctgaaagag 810
<210> 240
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "EphA2 mAb 2 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1" 三特异性结合分子的第三多肽链
<400> 240
Glu Val Lys Phe Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Asn Thr Ile Asn Tyr Thr Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Ala Tyr Tyr Gly Asn Pro Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn Arg Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 241
<211> 1353
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"EphA2 mAb 2 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1" 三特异性结合分子的第三多肽链的多核苷酸
<400> 241
gaggtgaagt ttctcgagtc tggaggtggc ctggtgcagc ctggaggatc cctgaaactc 60
tcctgtgtag cctcaggatt cgattttagt agatactgga tgagttgggt ccggcaggct 120
ccagggaaag ggctagaatg gattggagaa attaatccag atagcaatac gataaactat 180
acgccatctc taaaggataa attcatcatc tccagagaca acgccaaaaa tacgctgtat 240
ctgcaaatga ccaaagtgag atctgaggac acagcccttt attattgtac aagaagggcc 300
tactatggta acccggcctg gtttgcttac tggggccaag ggactctggt cactgtctct 360
tccgcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420
gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gagagttgag 660
cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agccgcgggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag 1080
gagatgacca agaaccaggt cagcctgagt tgcgcagtca aaggcttcta tcccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc gtcagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccgctac 1320
acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353
<210> 242
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "EphA2 mAb 2 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1" 三特异性结合分子的第四多肽链
<400> 242
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Val Leu Ile Phe Leu Ser Ser Asn Leu Asp Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Asp Gly Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Asp Leu Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 243
<211> 654
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"EphA2 mAb 2 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1" 三特异性结合分子的第四多肽链的多核苷酸
<400> 243
gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctcgggca gagggccacc 60
atctcatgca gggccagcaa aagtgtcagt tcctctggct atagttatat gcactggtac 120
caacagaaac caggacagcc acccaaagtc ctcatctttc tttcatccaa cctagattct 180
ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240
cctgtggagg atggggatgc tgcaacctat tactgtcagc acagtaggga tcttcctccg 300
acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaacgtacgg tggctgcacc atcggtcttc 360
atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 420
aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 480
ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 540
agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 600
acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgt 654
<210> 244
<211> 504
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "EphA2 mAb 3 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1"三特异性结合分子的第一多肽链
<400> 244
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser His Arg Ser Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Asn Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Trp Ala Ser Thr Arg His Ala Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Gly Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
115 120 125
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
130 135 140
Ser Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
145 150 155 160
Glu Trp Val Gly Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr
165 170 175
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser
180 185 190
Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr
195 200 205
Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val
210 215 220
Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
225 230 235 240
Gly Gly Cys Gly Gly Gly Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala
245 250 255
Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu
260 265 270
Glu Lys Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
275 280 285
Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
290 295 300
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
305 310 315 320
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
325 330 335
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
340 345 350
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
355 360 365
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
370 375 380
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
385 390 395 400
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
405 410 415
Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
420 425 430
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
435 440 445
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
450 455 460
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
465 470 475 480
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
485 490 495
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
500
<210> 245
<211> 1512
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"EphA2 mAb 3 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1" 三特异性结合分子的第一多肽链的多核苷酸
<400> 245
gacattgtgc tgacccagtc tcacagatcc atgtccacat cagtaggaga cagggtcaac 60
atcacctgca aggccagtca ggatgtgact actgctgtag cctggtatca acaaaaacca 120
gggcaatctc ctaaattact gattttctgg gcatccaccc ggcacgctgg agtccctgat 180
cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat tttactctca ccatcagcag tgtgcaggct 240
ggagacctgg cactttatta ctgtcaacaa cattatagca caccgtacac attcggaggg 300
gggaccaagc tggaaataaa aggtggagga tccggcggcg gaggcgaggt gcagctggtg 360
gagtctgggg gaggcttggt ccagcctgga gggtccctga gactctcctg tgcagcctct 420
ggattcacct tcagcacata cgctatgaat tgggtccgcc aggctccagg gaaggggctg 480
gagtgggttg gaaggatcag gtccaagtac aacaattatg caacctacta tgccgactct 540
gtgaagggta gattcaccat ctcaagagat gattcaaaga actcactgta tctgcaaatg 600
aacagcctga aaaccgagga cacggccgtg tattactgtg tgagacacgg taacttcggc 660
aattcttacg tgtcttggtt tgcttattgg ggacagggga cactggtgac tgtgtcttcc 720
ggaggatgtg gcggtggaga agtggccgca ctggagaaag aggttgctgc tttggagaag 780
gaggtcgctg cacttgaaaa ggaggtcgca gccctggaga aaggcggcgg ggacaaaact 840
cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa gccgcggggg gaccgtcagt cttcctcttc 900
cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg 960
gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag 1020
gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc 1080
agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc 1140
tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc 1200
cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggagg agatgaccaa gaaccaggtc 1260
agcctgtggt gcctggtcaa aggcttctat cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 1320
aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc 1380
ttcttcctct acagcaagct caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc 1440
tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg 1500
tctccgggta aa 1512
<210> 246
<211> 270
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "EphA2 mAb 3 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1"三特异性结合分子的第二多肽链
<400> 246
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
130 135 140
Phe Thr Phe Thr Asp His Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu
145 150 155 160
Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala Thr Ile Ser Asp Gly Gly Ser Phe Thr
165 170 175
Ser Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile
180 185 190
Ala Lys Asn Asn Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp
195 200 205
Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Glu Ser Asp Arg Pro Phe Pro
210 215 220
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly
225 230 235 240
Gly Gly Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
245 250 255
Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
260 265 270
<210> 247
<211> 810
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"EphA2 mAb 3 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1" 三特异性结合分子的第二多肽链的多核苷酸
<400> 247
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg 60
acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg ggtgcagcag 120
aagccaggac aggcaccaag gggcctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc 180
cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca 240
caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc 300
gggggtggca caaaactgac tgtgctggga gggggtggat ccggcggagg tggagaagtg 360
cagctggtgg agtctggggg aggctcagtg aagcctggag ggtccctgaa actctcctgt 420
gcagcctctg gattcacttt cactgaccat tacatgtatt gggttcgcca gactccggaa 480
aagaggctgg agtgggtcgc aaccattagt gatggcggta gtttcacctc ctatccagac 540
agtgtgaagg ggcgattcac catctccaga gacattgcca agaacaacct gtacctccaa 600
atgagcagtc tgaagtctga ggacacagcc atgtattact gtacaagaga tgagagcgat 660
aggccgtttc cttactgggg ccaagggact ctggtcactg tctcctccgg aggatgtggc 720
ggtggaaaag tggccgcact gaaggagaaa gttgctgctt tgaaagagaa ggtcgccgca 780
cttaaggaaa aggtcgcagc cctgaaagag 810
<210> 248
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "EphA2 mAb 3 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1" 三特异性结合分子的第三多肽链
<400> 248
Glu Val Lys Phe Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Asn Thr Ile Asn Tyr Thr Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Ala Tyr Tyr Gly Asn Pro Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn Arg Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 249
<211> 1353
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"EphA2 mAb 3 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1" 三特异性结合分子的第三多肽链的多核苷酸
<400> 249
gaggtgaagt ttctcgagtc tggaggtggc ctggtgcagc ctggaggatc cctgaaactc 60
tcctgtgtag cctcaggatt cgattttagt agatactgga tgagttgggt ccggcaggct 120
ccagggaaag ggctagaatg gattggagaa attaatccag atagcaatac gataaactat 180
acgccatctc taaaggataa attcatcatc tccagagaca acgccaaaaa tacgctgtat 240
ctgcaaatga ccaaagtgag atctgaggac acagcccttt attattgtac aagaagggcc 300
tactatggta acccggcctg gtttgcttac tggggccaag ggactctggt cactgtctct 360
tccgcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420
gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gagagttgag 660
cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agccgcgggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag 1080
gagatgacca agaaccaggt cagcctgagt tgcgcagtca aaggcttcta tcccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc gtcagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccgctac 1320
acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353
<210> 250
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "EphA2 mAb 3 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1"三特异性结合分子的第四多肽链
<400> 250
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Val Leu Ile Phe Leu Ser Ser Asn Leu Asp Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Asp Gly Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Asp Leu Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 251
<211> 654
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"EphA2 mAb 3 x CD3 mAb 2 x DR5 mAb 1" 三特异性结合分子的第四多肽链的多核苷酸
<400> 251
gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctcgggca gagggccacc 60
atctcatgca gggccagcaa aagtgtcagt tcctctggct atagttatat gcactggtac 120
caacagaaac caggacagcc acccaaagtc ctcatctttc tttcatccaa cctagattct 180
ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240
cctgtggagg atggggatgc tgcaacctat tactgtcagc acagtaggga tcttcctccg 300
acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaacgtacgg tggctgcacc atcggtcttc 360
atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 420
aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 480
ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 540
agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 600
acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgt 654
<210> 252
<211> 503
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x EphA2 mAb 1" 三特异性结合分子的第一多肽链
<400> 252
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Arg Ser Ser Ile Ser Phe Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly Gly
100 105 110
Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
115 120 125
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
130 135 140
Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
145 150 155 160
Trp Val Gly Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr
165 170 175
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys
180 185 190
Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala
195 200 205
Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser
210 215 220
Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly
225 230 235 240
Gly Cys Gly Gly Gly Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala
245 250 255
Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu
260 265 270
Lys Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
275 280 285
Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
290 295 300
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
305 310 315 320
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
325 330 335
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
340 345 350
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
355 360 365
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
370 375 380
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
385 390 395 400
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
405 410 415
Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
420 425 430
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
435 440 445
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
450 455 460
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
465 470 475 480
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
485 490 495
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
500
<210> 253
<211> 1509
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x EphA2 mAb 1" 三特异性结合分子的第一多肽链的多核苷酸
<400> 253
gacattcagc tgactcagtc cccctctttt ctgtccgcat ccgtcggaga tcgagtgact 60
attacttgct ctgctaggtc ctcaatcagc ttcatgtact ggtatcagca gaagcccggc 120
aaagcaccta agctgctgat ctacgacaca agcaacctgg cctccggggt gccatctcgg 180
ttctctggca gtgggtcagg aactgagttt accctgacaa ttagctccct ggaggctgaa 240
gatgccgcta cctactattg ccagcagtgg agcagctatc ctctgacctt cggacagggg 300
actaaactgg aaatcaaggg tggaggatcc ggcggcggag gcgaggtgca gctggtggag 360
tctgggggag gcttggtcca gcctggaggg tccctgagac tctcctgtgc agcctctgga 420
ttcaccttca gcacatacgc tatgaattgg gtccgccagg ctccagggaa ggggctggag 480
tgggttggaa ggatcaggtc caagtacaac aattatgcaa cctactatgc cgactctgtg 540
aagggtagat tcaccatctc aagagatgat tcaaagaact cactgtatct gcaaatgaac 600
agcctgaaaa ccgaggacac ggccgtgtat tactgtgtga gacacggtaa cttcggcaat 660
tcttacgtgt cttggtttgc ttattgggga caggggacac tggtgactgt gtcttccgga 720
ggatgtggcg gtggagaagt ggccgcactg gagaaagagg ttgctgcttt ggagaaggag 780
gtcgctgcac ttgaaaagga ggtcgcagcc ctggagaaag gcggcgggga caaaactcac 840
acatgcccac cgtgcccagc acctgaagcc gcggggggac cgtcagtctt cctcttcccc 900
ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg 960
gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 1020
cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc 1080
gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc 1140
aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aagccaaagg gcagccccga 1200
gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtcagc 1260
ctgtggtgcc tggtcaaagg cttctatccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat 1320
gggcagccgg agaacaacta caagaccacg cctcccgtgc tggactccga cggctccttc 1380
ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca 1440
tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc agaagagcct ctccctgtct 1500
ccgggtaaa 1509
<210> 254
<211> 271
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x EphA2 mAb 1" 三特异性结合分子的第二多肽链
<400> 254
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu
115 120 125
Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly
130 135 140
Tyr Thr Phe Thr Gly Ser Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
145 150 155 160
Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr
165 170 175
Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys
180 185 190
Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp
195 200 205
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ile Tyr Gly Asn Asn Val Tyr Phe
210 215 220
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys
225 230 235 240
Gly Gly Gly Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys
245 250 255
Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
260 265 270
<210> 255
<211> 813
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x EphA2 mAb 1" 三特异性结合分子的第二多肽链的多核苷酸
<400> 255
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg 60
acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg ggtgcagcag 120
aagccaggac aggcaccaag gggcctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc 180
cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca 240
caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc 300
gggggtggca caaaactgac tgtgctggga gggggtggat ccggcggagg tggacaggtc 360
cagctggtcc agagcggggc cgaagtcaaa aaacccggag caagcgtgaa ggtctcctgc 420
aaagcatcag gctatacatt tacaggcagc tggatgaact gggtgaggca ggctccagga 480
cagggactgg agtggatcgg gcgcatctac cctggagacg gcgaaactaa ctataatgga 540
aagttcaaag accgagtgac catcacagcc gataagtcta ctagtaccgc ctacatggag 600
ctgagctccc tgcggtctga agataccgcc gtctactatt gcgctagaat ttacggaaac 660
aatgtctatt ttgacgtgtg ggggcaggga acaactgtga ctgtctcctc cggaggatgt 720
ggcggtggaa aagtggccgc actgaaggag aaagttgctg ctttgaaaga gaaggtcgcc 780
gcacttaagg aaaaggtcgc agccctgaaa gag 813
<210> 256
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x EphA2 mAb 1" 三特异性结合分子的第三多肽链
<400> 256
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Arg Tyr
20 25 30
Ser Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Met Ile Trp Gly Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Lys His Gly Asn Tyr Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
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Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
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210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys
355 360 365
Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
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Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn Arg Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
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<211> 1344
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x EphA2 mAb 1" 三特异性结合分子的第三多肽链的多核苷酸
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<210> 258
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x EphA2 mAb 1" 三特异性结合分子的第四多肽链
<400> 258
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1 5 10 15
Asp Arg Ile Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
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35 40 45
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115 120 125
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Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
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180 185 190
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195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 259
<211> 639
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x EphA2 mAb 1" 三特异性结合分子的第四多肽链的多核苷酸
<400> 259
gatatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagaatcacc 60
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accaagctgg aaataaaacg tacggtggct gcaccatcgg tcttcatctt cccgccatct 360
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<210> 260
<211> 503
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x EphA2 mAb 2" 三特异性结合分子的第一多肽链
<400> 260
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Arg Ser Ser Ile Ser Phe Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
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50 55 60
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115 120 125
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195 200 205
Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser
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Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly
225 230 235 240
Gly Cys Gly Gly Gly Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala
245 250 255
Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu
260 265 270
Lys Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
275 280 285
Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
290 295 300
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
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Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
325 330 335
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
340 345 350
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
355 360 365
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
370 375 380
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
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Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
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Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
420 425 430
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
435 440 445
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
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Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
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Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
485 490 495
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
500
<210> 261
<211> 1509
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x EphA2 mAb 2" 三特异性结合分子的第一多肽链的多核苷酸
<400> 261
gacattcagc tgactcagtc cccctctttt ctgtccgcat ccgtcggaga tcgagtgact 60
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ttctctggca gtgggtcagg aactgagttt accctgacaa ttagctccct ggaggctgaa 240
gatgccgcta cctactattg ccagcagtgg agcagctatc ctctgacctt cggacagggg 300
actaaactgg aaatcaaggg tggaggatcc ggcggcggag gcgaggtgca gctggtggag 360
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tcttacgtgt cttggtttgc ttattgggga caggggacac tggtgactgt gtcttccgga 720
ggatgtggcg gtggagaagt ggccgcactg gagaaagagg ttgctgcttt ggagaaggag 780
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ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg 960
gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 1020
cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc 1080
gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc 1140
aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aagccaaagg gcagccccga 1200
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ccgggtaaa 1509
<210> 262
<211> 271
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x EphA2 mAb 2" 三特异性结合分子的第二多肽链
<400> 262
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
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Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
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Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu
115 120 125
Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly
130 135 140
Tyr Thr Phe Thr Gly Ser Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
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Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr
165 170 175
Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys
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Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp
195 200 205
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ile Tyr Gly Asn Asn Val Tyr Phe
210 215 220
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys
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Gly Gly Gly Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys
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Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
260 265 270
<210> 263
<211> 813
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x EphA2 mAb 2" 三特异性结合分子的第二多肽链的多核苷酸
<400> 263
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg 60
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ggcggtggaa aagtggccgc actgaaggag aaagttgctg ctttgaaaga gaaggtcgcc 780
gcacttaagg aaaaggtcgc agccctgaaa gag 813
<210> 264
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x EphA2 mAb 2" 三特异性结合分子的第三多肽链
<400> 264
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Ile Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
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130 135 140
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145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys
355 360 365
Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn Arg Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 265
<211> 1344
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x EphA2 mAb 2" 三特异性结合分子的第三多肽链的多核苷酸
<400> 265
cagatccagt tggtgcagtc tggacctgag ctgaagaagc ctggagagac agtcaagatc 60
tcctgcaagg cttctgggtt taccttcaca aactatggaa tgaactgggt gaagcaggct 120
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accaagggcc catcggtctt ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca 420
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tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 540
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tgcaacgtga atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagttga gcccaaatct 660
tgtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aagccgcggg gggaccgtca 720
gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 780
acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg 840
gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg 900
taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac 960
aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1020
aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga ggagatgacc 1080
aagaaccagg tcagcctgag ttgcgcagtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 1140
gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1200
tccgacggct ccttcttcct cgtcagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1260
gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccgcta cacgcagaag 1320
agcctctccc tgtctccggg taaa 1344
<210> 266
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x EphA2 mAb 2" 三特异性结合分子的第四多肽链的多核苷酸
<400> 266
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Ser Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 267
<211> 654
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x EphA2 mAb 2" 三特异性结合分子的第四多肽链的多核苷酸
<400> 267
gatgttgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60
atctcttgca gatctagtca gagccttgta cacagtagtg gaaacaccta tttacattgg 120
tacctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ctcaaagtac acatgttccc 300
acgttcggct cggggacaaa gttggaaata aaacgtacgg tggctgcacc atcggtcttc 360
atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 420
aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 480
ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 540
agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 600
acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgt 654
<210> 268
<211> 503
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x EphA2 mAb 3" 三特异性结合分子的第一多肽链
<400> 268
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Arg Ser Ser Ile Ser Phe Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly Gly
100 105 110
Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
115 120 125
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
130 135 140
Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
145 150 155 160
Trp Val Gly Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr
165 170 175
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys
180 185 190
Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala
195 200 205
Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser
210 215 220
Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly
225 230 235 240
Gly Cys Gly Gly Gly Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala
245 250 255
Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu
260 265 270
Lys Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
275 280 285
Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
290 295 300
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
305 310 315 320
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
325 330 335
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
340 345 350
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
355 360 365
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
370 375 380
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
385 390 395 400
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405 410 415
Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
420 425 430
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
435 440 445
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
450 455 460
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
465 470 475 480
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
485 490 495
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
500
<210> 269
<211> 1509
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x EphA2 mAb 3" 三特异性结合分子的第一多肽链的多核苷酸
<400> 269
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gatgccgcta cctactattg ccagcagtgg agcagctatc ctctgacctt cggacagggg 300
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aagggtagat tcaccatctc aagagatgat tcaaagaact cactgtatct gcaaatgaac 600
agcctgaaaa ccgaggacac ggccgtgtat tactgtgtga gacacggtaa cttcggcaat 660
tcttacgtgt cttggtttgc ttattgggga caggggacac tggtgactgt gtcttccgga 720
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aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aagccaaagg gcagccccga 1200
gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtcagc 1260
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ccgggtaaa 1509
<210> 270
<211> 271
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x EphA2 mAb 3" 三特异性结合分子的第二多肽链
<400> 270
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu
115 120 125
Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly
130 135 140
Tyr Thr Phe Thr Gly Ser Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
145 150 155 160
Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr
165 170 175
Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys
180 185 190
Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp
195 200 205
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ile Tyr Gly Asn Asn Val Tyr Phe
210 215 220
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys
225 230 235 240
Gly Gly Gly Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys
245 250 255
Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
260 265 270
<210> 271
<211> 813
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x EphA2 mAb 3" 三特异性结合分子的第二多肽链的多核苷酸
<400> 271
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cagctggtcc agagcggggc cgaagtcaaa aaacccggag caagcgtgaa ggtctcctgc 420
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gcacttaagg aaaaggtcgc agccctgaaa gag 813
<210> 272
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x EphA2 mAb 3" 三特异性结合分子的第三多肽链
<400> 272
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp His
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Gly Gly Ser Phe Thr Ser Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
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130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
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Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys
355 360 365
Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn Arg Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 273
<211> 1344
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x EphA2 mAb 3" 三特异性结合分子的第三多肽链的多核苷酸
<400> 273
gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc tcagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60
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gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccgcta cacgcagaag 1320
agcctctccc tgtctccggg taaa 1344
<210> 274
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x EphA2 mAb 3" 三特异性结合分子的第四多肽链
<400> 274
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser His Arg Ser Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Asn Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Thr Ala
20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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180 185 190
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195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 275
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"gpA33 mAb 1 x CD3 mAb 2 x EphA2 mAb 3" 三特异性结合分子的第四多肽链的多核苷酸
<400> 275
gacattgtgc tgacccagtc tcacagatcc atgtccacat cagtaggaga cagggtcaac 60
atcacctgca aggccagtca ggatgtgact actgctgtag cctggtatca acaaaaacca 120
gggcaatctc ctaaattact gattttctgg gcatccaccc ggcacgctgg agtccctgat 180
cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat tttactctca ccatcagcag tgtgcaggct 240
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ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 276
<211> 503
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "EphA2 mAb 1 x CD3 mAb 2 x gpA33 mAb 1" 三特异性结合分子的第一多肽链
<400> 276
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Ile Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
115 120 125
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys
180 185 190
Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala
195 200 205
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210 215 220
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225 230 235 240
Gly Cys Gly Gly Gly Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala
245 250 255
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260 265 270
Lys Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
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355 360 365
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370 375 380
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
385 390 395 400
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
405 410 415
Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
420 425 430
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
435 440 445
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
450 455 460
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
465 470 475 480
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
485 490 495
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
500
<210> 277
<211> 1509
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"EphA2 mAb 1 x CD3 mAb 2 x gpA33 mAb 1" 三特异性结合分子的第一多肽链的多核苷酸
<400> 277
gatatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagaatcacc 60
atcagttgca gggcaagtca ggacattagc aattatttaa actggtatca gcagaaacca 120
gatggaactg ttaaactcct gatctactac acatcaagat tacactcagg agtcccatca 180
aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccattagcaa cctggagcaa 240
gaagatattg ccacttactt ttgccaacag ggttatacgc tgtacacgtt cggagggggg 300
accaagctgg aaataaaagg tggaggatcc ggcggcggag gcgaggtgca gctggtggag 360
tctgggggag gcttggtcca gcctggaggg tccctgagac tctcctgtgc agcctctgga 420
ttcaccttca gcacatacgc tatgaattgg gtccgccagg ctccagggaa ggggctggag 480
tgggttggaa ggatcaggtc caagtacaac aattatgcaa cctactatgc cgactctgtg 540
aagggtagat tcaccatctc aagagatgat tcaaagaact cactgtatct gcaaatgaac 600
agcctgaaaa ccgaggacac ggccgtgtat tactgtgtga gacacggtaa cttcggcaat 660
tcttacgtgt cttggtttgc ttattgggga caggggacac tggtgactgt gtcttccgga 720
ggatgtggcg gtggagaagt ggccgcactg gagaaagagg ttgctgcttt ggagaaggag 780
gtcgctgcac ttgaaaagga ggtcgcagcc ctggagaaag gcggcgggga caaaactcac 840
acatgcccac cgtgcccagc acctgaagcc gcggggggac cgtcagtctt cctcttcccc 900
ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg 960
gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 1020
cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc 1080
gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc 1140
aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aagccaaagg gcagccccga 1200
gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtcagc 1260
ctgtggtgcc tggtcaaagg cttctatccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat 1320
gggcagccgg agaacaacta caagaccacg cctcccgtgc tggactccga cggctccttc 1380
ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca 1440
tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc agaagagcct ctccctgtct 1500
ccgggtaaa 1509
<210> 278
<211> 270
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "EphA2 mAb 1 x CD3 mAb 2 x gpA33 mAb 1" 三特异性结合分子的第二多肽链
<400> 278
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly
115 120 125
Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly
130 135 140
Phe Ser Leu Ser Arg Tyr Ser Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly
145 150 155 160
Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Met Ile Trp Gly Gly Gly Ser Thr Asp
165 170 175
Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser
180 185 190
Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr
195 200 205
Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Lys His Gly Asn Tyr Tyr Thr Met Asp
210 215 220
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly
225 230 235 240
Gly Gly Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
245 250 255
Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
260 265 270
<210> 279
<211> 810
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"EphA2 mAb 1 x CD3 mAb 2 x gpA33 mAb 1" 三特异性结合分子的第二多肽链的多核苷酸
<400> 279
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg 60
acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg ggtgcagcag 120
aagccaggac aggcaccaag gggcctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc 180
cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca 240
caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc 300
gggggtggca caaaactgac tgtgctggga gggggtggat ccggcggagg tggacaggtg 360
cagctgaagg agtcaggacc tggcctggtg gcaccctcac agagcctgtc catcacatgc 420
actgtctctg ggttctcatt atccagatat agtgtacact gggttcgcca gcctccagga 480
aagggtctgg agtggctggg aatgatatgg ggtggtggaa gcacagacta taattcagct 540
ctcaaatcca gactgagtat cagcaaggac aactccaaga gccaagtttt cttaaaaatg 600
aacagtctgc aaactgatga cacagccatg tactactgtg ccagaaaaca tggtaactac 660
tatactatgg actactgggg tcaaggaacc tcagtcaccg tctcctccgg aggatgtggc 720
ggtggaaaag tggccgcact gaaggagaaa gttgctgctt tgaaagagaa ggtcgccgca 780
cttaaggaaa aggtcgcagc cctgaaagag 810
<210> 280
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "EphA2 mAb 1 x CD3 mAb 2 x gpA33 mAb 1" 三特异性结合分子的第三多肽链
<400> 280
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Ser
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Tyr Gly Asn Asn Val Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser
355 360 365
Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn Arg Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 281
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"EphA2 mAb 1 x CD3 mAb 2 x gpA33 mAb 1" 三特异性结合分子的第三多肽链的多核苷酸
<400> 281
caggtccagc tggtccagag cggggccgaa gtcaaaaaac ccggagcaag cgtgaaggtc 60
tcctgcaaag catcaggcta tacatttaca ggcagctgga tgaactgggt gaggcaggct 120
ccaggacagg gactggagtg gatcgggcgc atctaccctg gagacggcga aactaactat 180
aatggaaagt tcaaagaccg agtgaccatc acagccgata agtctactag taccgcctac 240
atggagctga gctccctgcg gtctgaagat accgccgtct actattgcgc tagaatttac 300
ggaaacaatg tctattttga cgtgtggggg cagggaacaa ctgtgactgt ctcctccgcc 360
tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc 420
acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 480
aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 540
ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac ccagacctac 600
atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagagagt tgagcccaaa 660
tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaagccgc ggggggaccg 720
tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 780
gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 840
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 900
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 960
tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020
gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg 1080
accaagaacc aggtcagcct gagttgcgca gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1200
gactccgacg gctccttctt cctcgtcagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1260
caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaaccg ctacacgcag 1320
aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa 1347
<210> 282
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "EphA2 mAb 1 x CD3 mAb 2 x gpA33 mAb 1" 三特异性结合分子的第四多肽链
<400> 282
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Arg Ser Ser Ile Ser Phe Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 283
<211> 639
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"EphA2 mAb 1 x CD3 mAb 2 x gpA33 mAb 1" 三特异性结合分子的第四多肽链的多核苷酸
<400> 283
gacattcagc tgactcagtc cccctctttt ctgtccgcat ccgtcggaga tcgagtgact 60
attacttgct ctgctaggtc ctcaatcagc ttcatgtact ggtatcagca gaagcccggc 120
aaagcaccta agctgctgat ctacgacaca agcaacctgg cctccggggt gccatctcgg 180
ttctctggca gtgggtcagg aactgagttt accctgacaa ttagctccct ggaggctgaa 240
gatgccgcta cctactattg ccagcagtgg agcagctatc ctctgacctt cggacagggg 300
actaaactgg aaatcaagcg tacggtggct gcaccatcgg tcttcatctt cccgccatct 360
gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 420
agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 480
agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 540
agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 600
agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgt 639
<210> 284
<211> 508
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "EphA2 mAb 2 x CD3 mAb 2 x gpA33 mAb 1" 三特异性结合分子的第一多肽链
<400> 284
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Ser Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
130 135 140
Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro
145 150 155 160
Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn
165 170 175
Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser
180 185 190
Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys
195 200 205
Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly
210 215 220
Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
225 230 235 240
Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly Glu Val Ala Ala Leu Glu
245 250 255
Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu
260 265 270
Val Ala Ala Leu Glu Lys Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
275 280 285
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
290 295 300
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
305 310 315 320
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
325 330 335
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
340 345 350
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
355 360 365
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
370 375 380
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
385 390 395 400
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
405 410 415
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly
420 425 430
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
435 440 445
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
450 455 460
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
465 470 475 480
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
485 490 495
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
500 505
<210> 285
<211> 1524
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"EphA2 mAb 2 x CD3 mAb 2 x gpA33 mAb 1" 三特异性结合分子的第一多肽链的多核苷酸
<400> 285
gatgttgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60
atctcttgca gatctagtca gagccttgta cacagtagtg gaaacaccta tttacattgg 120
tacctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ctcaaagtac acatgttccc 300
acgttcggct cggggacaaa gttggaaata aaaggtggag gatccggcgg cggaggcgag 360
gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcttg gtccagcctg gagggtccct gagactctcc 420
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tatgccgact ctgtgaaggg tagattcacc atctcaagag atgattcaaa gaactcactg 600
tatctgcaaa tgaacagcct gaaaaccgag gacacggccg tgtattactg tgtgagacac 660
ggtaacttcg gcaattctta cgtgtcttgg tttgcttatt ggggacaggg gacactggtg 720
actgtgtctt ccggaggatg tggcggtgga gaagtggccg cactggagaa agaggttgct 780
gctttggaga aggaggtcgc tgcacttgaa aaggaggtcg cagccctgga gaaaggcggc 840
ggggacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aagccgcggg gggaccgtca 900
gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 960
acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg 1020
gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg 1080
taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac 1140
aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1200
aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga ggagatgacc 1260
aagaaccagg tcagcctgtg gtgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 1320
gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1380
tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1440
gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1500
agcctctccc tgtctccggg taaa 1524
<210> 286
<211> 270
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "EphA2 mAb 2 x CD3 mAb 2 x gpA33 mAb 1" 三特异性结合分子的第二多肽链
<400> 286
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu
115 120 125
Leu Lys Lys Pro Gly Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly
130 135 140
Phe Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly
145 150 155 160
Lys Gly Leu Lys Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Ile Gly Glu Pro
165 170 175
Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Glu Thr
180 185 190
Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp
195 200 205
Met Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Glu Leu Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp
210 215 220
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly
225 230 235 240
Gly Gly Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
245 250 255
Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
260 265 270
<210> 287
<211> 810
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"EphA2 mAb 2 x CD3 mAb 2 x gpA33 mAb 1" 三特异性结合分子的第二多肽链的多核苷酸
<400> 287
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg 60
acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg ggtgcagcag 120
aagccaggac aggcaccaag gggcctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc 180
cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca 240
caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc 300
gggggtggca caaaactgac tgtgctggga gggggtggat ccggcggagg tggacagatc 360
cagttggtgc agtctggacc tgagctgaag aagcctggag agacagtcaa gatctcctgc 420
aaggcttctg ggtttacctt cacaaactat ggaatgaact gggtgaagca ggctccagga 480
aagggtttaa agtggatggg ctggataaac acctatattg gagagccgac atatgctgat 540
gacttcaagg gacggtttgt cttctctttg gaaacctctg ccagcactgc ctatttgcag 600
atcaacaacc tcaaaaatga ggacatggcc acatatttct gtgcaagaga actgggacca 660
tactactttg actactgggg ccaaggcacc actctcacag tctcctccgg aggatgtggc 720
ggtggaaaag tggccgcact gaaggagaaa gttgctgctt tgaaagagaa ggtcgccgca 780
cttaaggaaa aggtcgcagc cctgaaagag 810
<210> 288
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "EphA2 mAb 2 x CD3 mAb 2 x gpA33 mAb 1" 三特异性结合分子的第三多肽链
<400> 288
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Ser
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Tyr Gly Asn Asn Val Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
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130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser
355 360 365
Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn Arg Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 289
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"EphA2 mAb 2 x CD3 mAb 2 x gpA33 mAb 1" 三特异性结合分子的第三多肽链的多核苷酸
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<210> 290
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "EphA2 mAb 2 x CD3 mAb 2 x gpA33 mAb 1" 三特异性结合分子的第四多肽链
<400> 290
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Arg Ser Ser Ile Ser Phe Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Leu Thr
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
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Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
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195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 291
<211> 639
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"EphA2 mAb 2 x CD3 mAb 2 x gpA33 mAb 1" 三特异性结合分子的第四多肽链的多核苷酸
<400> 291
gacattcagc tgactcagtc cccctctttt ctgtccgcat ccgtcggaga tcgagtgact 60
attacttgct ctgctaggtc ctcaatcagc ttcatgtact ggtatcagca gaagcccggc 120
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ttctctggca gtgggtcagg aactgagttt accctgacaa ttagctccct ggaggctgaa 240
gatgccgcta cctactattg ccagcagtgg agcagctatc ctctgacctt cggacagggg 300
actaaactgg aaatcaagcg tacggtggct gcaccatcgg tcttcatctt cccgccatct 360
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<210> 292
<211> 504
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "EphA2 mAb 3 x CD3 mAb 2 x gpA33 mAb 1" 三特异性结合分子的第一多肽链
<400> 292
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser His Arg Ser Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Asn Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
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65 70 75 80
Gly Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Tyr
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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
115 120 125
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
130 135 140
Ser Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
145 150 155 160
Glu Trp Val Gly Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr
165 170 175
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser
180 185 190
Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr
195 200 205
Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val
210 215 220
Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
225 230 235 240
Gly Gly Cys Gly Gly Gly Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala
245 250 255
Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu
260 265 270
Glu Lys Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
275 280 285
Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
290 295 300
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
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Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
325 330 335
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
340 345 350
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
355 360 365
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
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385 390 395 400
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Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
420 425 430
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
435 440 445
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Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
485 490 495
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
500
<210> 293
<211> 1512
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"EphA2 mAb 3 x CD3 mAb 2 x gpA33 mAb 1" 三特异性结合分子的第一多肽链的多核苷酸
<400> 293
gacattgtgc tgacccagtc tcacagatcc atgtccacat cagtaggaga cagggtcaac 60
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gagtgggttg gaaggatcag gtccaagtac aacaattatg caacctacta tgccgactct 540
gtgaagggta gattcaccat ctcaagagat gattcaaaga actcactgta tctgcaaatg 600
aacagcctga aaaccgagga cacggccgtg tattactgtg tgagacacgg taacttcggc 660
aattcttacg tgtcttggtt tgcttattgg ggacagggga cactggtgac tgtgtcttcc 720
ggaggatgtg gcggtggaga agtggccgca ctggagaaag aggttgctgc tttggagaag 780
gaggtcgctg cacttgaaaa ggaggtcgca gccctggaga aaggcggcgg ggacaaaact 840
cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa gccgcggggg gaccgtcagt cttcctcttc 900
cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg 960
gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag 1020
gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc 1080
agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc 1140
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cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggagg agatgaccaa gaaccaggtc 1260
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<210> 294
<211> 270
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "EphA2 mAb 3 x CD3 mAb 2 x gpA33 mAb 1" 三特异性结合分子的第二多肽链
<400> 294
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
130 135 140
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145 150 155 160
Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala Thr Ile Ser Asp Gly Gly Ser Phe Thr
165 170 175
Ser Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile
180 185 190
Ala Lys Asn Asn Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp
195 200 205
Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Glu Ser Asp Arg Pro Phe Pro
210 215 220
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly
225 230 235 240
Gly Gly Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
245 250 255
Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
260 265 270
<210> 295
<211> 810
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"EphA2 mAb 3 x CD3 mAb 2 x gpA33 mAb 1" 三特异性结合分子的第二多肽链的多核苷酸
<400> 295
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg 60
acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg ggtgcagcag 120
aagccaggac aggcaccaag gggcctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc 180
cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca 240
caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc 300
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aggccgtttc cttactgggg ccaagggact ctggtcactg tctcctccgg aggatgtggc 720
ggtggaaaag tggccgcact gaaggagaaa gttgctgctt tgaaagagaa ggtcgccgca 780
cttaaggaaa aggtcgcagc cctgaaagag 810
<210> 296
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "EphA2 mAb 3 x CD3 mAb 2 x gpA33 mAb 1" 三特异性结合分子的第三多肽链
<400> 296
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Ser
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Tyr Gly Asn Asn Val Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser
355 360 365
Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn Arg Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 297
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"EphA2 mAb 3 x CD3 mAb 2 x gpA33 mAb 1" 三特异性结合分子的第三多肽链的多核苷酸
<400> 297
caggtccagc tggtccagag cggggccgaa gtcaaaaaac ccggagcaag cgtgaaggtc 60
tcctgcaaag catcaggcta tacatttaca ggcagctgga tgaactgggt gaggcaggct 120
ccaggacagg gactggagtg gatcgggcgc atctaccctg gagacggcga aactaactat 180
aatggaaagt tcaaagaccg agtgaccatc acagccgata agtctactag taccgcctac 240
atggagctga gctccctgcg gtctgaagat accgccgtct actattgcgc tagaatttac 300
ggaaacaatg tctattttga cgtgtggggg cagggaacaa ctgtgactgt ctcctccgcc 360
tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc 420
acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 480
aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 540
ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac ccagacctac 600
atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagagagt tgagcccaaa 660
tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaagccgc ggggggaccg 720
tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 780
gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 840
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 900
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 960
tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020
gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg 1080
accaagaacc aggtcagcct gagttgcgca gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1200
gactccgacg gctccttctt cctcgtcagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1260
caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaaccg ctacacgcag 1320
aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa 1347
<210> 298
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "EphA2 mAb 3 x CD3 mAb 2 x gpA33 mAb 1" 三特异性结合分子的第四多肽链
<400> 298
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Arg Ser Ser Ile Ser Phe Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 299
<211> 639
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码"EphA2 mAb 3 x CD3 mAb 2 x gpA33 mAb 1" 三特异性结合分子的第四多肽链的多核苷酸
<400> 299
gacattcagc tgactcagtc cccctctttt ctgtccgcat ccgtcggaga tcgagtgact 60
attacttgct ctgctaggtc ctcaatcagc ttcatgtact ggtatcagca gaagcccggc 120
aaagcaccta agctgctgat ctacgacaca agcaacctgg cctccggggt gccatctcgg 180
ttctctggca gtgggtcagg aactgagttt accctgacaa ttagctccct ggaggctgaa 240
gatgccgcta cctactattg ccagcagtgg agcagctatc ctctgacctt cggacagggg 300
actaaactgg aaatcaagcg tacggtggct gcaccatcgg tcttcatctt cccgccatct 360
gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 420
agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 480
agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 540
agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 600
agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgt 639
<210> 300
<211> 279
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "4-4-20 x CD3 mAb 2"双抗体的第一多肽链
<400> 300
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Phe Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Arg Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Val Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala
130 135 140
Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala
145 150 155 160
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn
165 170 175
Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile
180 185 190
Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
195 200 205
Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe
210 215 220
Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
225 230 235 240
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly Glu Val Ala Ala Leu
245 250 255
Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys
260 265 270
Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys
275
<210> 301
<211> 270
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "4-4-20 x CD3 mAb 2"双抗体的第二多肽链
<400> 301
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Glu Val Lys Leu Asp Glu Thr Gly Gly Gly
115 120 125
Leu Val Gln Pro Gly Arg Pro Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly
130 135 140
Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu
145 150 155 160
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Gln Ile Arg Asn Lys Pro Tyr Asn Tyr
165 170 175
Glu Thr Tyr Tyr Ser Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg
180 185 190
Asp Asp Ser Lys Ser Ser Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Val
195 200 205
Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Thr Gly Ser Tyr Tyr Gly Met Asp
210 215 220
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly
225 230 235 240
Gly Gly Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
245 250 255
Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
260 265 270
<210> 302
<211> 108
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(108)
<223> 鼠科抗-人CD317抗体("HM1.24 mAb 1")轻链可变结构域
<400> 302
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr
20 25 30
Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Ile Thr
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln
65 70 75 80
Ala Glu Asp Leu Ala Leu Thr Thr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro
85 90 95
Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 303
<211> 120
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(120)
<223> 鼠科抗-人CD317抗体("HM1.24 mAb 1")重链可变结构域
<400> 303
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Pro Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ser Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Ser Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ile Leu Ala Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Leu Arg Arg Gly Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 304
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠科抗-人CEACAM5 / CEACAM6抗体(16C3；EP 2585476)轻链可变结构域
<400> 304
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gly Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Gly Ala
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Trp Gly Ala Ser Asn Leu Ala Asp Gly Met Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Arg Gln Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Ser Ser Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 305
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化的抗-人CEACAM5 / CEACAM6抗体(16C3；EP 2585476)重链可变结构域
<400> 305
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Arg Pro Gly Val
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Lys Gln Ser His Ala Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Ser Thr Tyr Ser Gly Asp Thr Lys Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Asp Tyr Ser Gly Ser Arg Tyr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 306
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化的抗-人CEACAM5 / CEACAM6抗体(hMN15；WO 2011/034660)轻链可变结构域
<400> 306
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Arg Val Ser Tyr Ile
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Tyr Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 307
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化的抗-人CEACAM5 / CEACAM6抗体(hMN15；WO 2011/034660)重链可变结构域
<400> 307
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ala Leu Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Phe Ile Ala Asn Lys Ala Asn Gly His Thr Thr Asp Tyr Ser Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Phe Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Asp Met Gly Ile Arg Trp Asn Phe Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 308
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(107)
<223> 鼠科抗-人5T4抗体("5T4 mAb 1")轻链可变结构域
<400> 308
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Asp Phe Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 309
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(118)
<223> 鼠科抗-人5T4抗体("5T4 mAb 1")重链可变结构域
<400> 309
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Phe
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Asn Arg Gly Gly Thr Glu Tyr Asn Glu Lys Ala
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gly Gly Asn Pro Tyr Tyr Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 310
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(112)
<223> 鼠科抗-人5T4抗体("5T4 mAb 2")轻链可变结构域
<400> 310
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 311
<211> 127
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(127)
<223> 鼠科抗-人5T4抗体("5T4 mAb 2")重链可变结构域
<400> 311
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Thr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Arg Ala Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Asn Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Gly Pro Leu Phe Thr Thr Val Val Asp Pro Asn Ser Tyr
100 105 110
Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 312
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化的抗-人ITGB6抗体(源自抗体3G9,PCT公开号WO 2007/008712)轻链可变结构域
<400> 312
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Trp Ser Thr Tyr Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 313
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化的抗-人ITGB6抗体(源自抗体3G9,PCT公开号WO 2007/008712)重链可变结构域
<400> 313
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Arg Met Tyr Tyr Pro Phe Thr Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Ser Ile Tyr Asp Gly Tyr Tyr Val Phe Pro Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 314
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化的抗-人ITGB6抗体(源自抗体8G6；PCT公开号WO 2007/008712)轻 链可变结构域
<400> 314
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Ser Tyr Ser Tyr Met Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Asn Trp
85 90 95
Glu Ile Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 315
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化的抗-人ITGB6抗体(源自抗体8G6；PCT公开号WO 2007/008712)重链可变结构域
<400> 315
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Leu Arg Arg Gly Asp Arg Pro Ser Leu Gln Tyr Ala
100 105 110
Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 316
<211> 272
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "gpA33 x CD3 mAb 2"双抗体的第一多肽链
<400> 316
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Arg Ser Ser Ile Ser Phe Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly Gly
100 105 110
Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
115 120 125
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
130 135 140
Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
145 150 155 160
Trp Val Gly Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr
165 170 175
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys
180 185 190
Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala
195 200 205
Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser
210 215 220
Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
225 230 235 240
Ser Thr Lys Gly Glu Val Ala Ala Cys Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu
245 250 255
Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys
260 265 270
<210> 317
<211> 270
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "gpA33 x CD3 mAb 2"双抗体的第二多肽链
<400> 317
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu
115 120 125
Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly
130 135 140
Tyr Thr Phe Thr Gly Ser Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
145 150 155 160
Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr
165 170 175
Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys
180 185 190
Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp
195 200 205
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ile Tyr Gly Asn Asn Val Tyr Phe
210 215 220
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
225 230 235 240
Lys Gly Lys Val Ala Ala Cys Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
245 250 255
Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
260 265 270
<210> 318
<211> 333
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(333)
<223> 编码鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 2")轻链可变结构域的多核苷酸 (SEQID NO:163)
<400> 318
gatgttgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60
atctcttgca gatctagtca gagccttgta cacagtagtg gaaacaccta tttacattgg 120
tacctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ctcaaagtac acatgttccc 300
acgttcggct cggggacaaa gttggaaata aaa 333
<210> 319
<211> 354
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(354)
<223> 编码鼠科抗-人EphA2抗体("EphA2 mAb 3")重链可变结构域的多核苷酸(SEQID NO:177)
<400> 319
gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc tcagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcact gaccattaca tgtattgggt tcgccagact 120
ccggaaaaga ggctggagtg ggtcgcaacc attagtgatg gcggtagttt cacctcctat 180
ccagacagtg tgaaggggcg attcaccatc tccagagaca ttgccaagaa caacctgtac 240
ctccaaatga gcagtctgaa gtctgaggac acagccatgt attactgtac aagagatgag 300
agcgataggc cgtttcctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ctcc 354

Claims (20)

1.能够免疫特异性结合三个不同的表位的三特异性结合分子，所述表位是表位I、表位II和表位III，其中所述三个表位中的两个是癌症抗原(一个或多个)的表位和所述三个表位中的第三个是效应细胞抗原的表位。
2.权利要求1所述的三特异性结合分子，其能够免疫特异性结合三个不同的表位，其中所述结合分子包括共价复合在一起的四条不同的多肽链，并且包括：
(I)抗原结合结构域I，其能够免疫特异性结合第一抗原上存在的表位I，和抗原结合结构域II，其能够免疫特异性结合第二抗原上存在的表位II，其中所述抗原结合结构域I和所述抗原结合结构域II都是双抗体型结合结构域；
(II)抗原结合结构域III，其能够免疫特异性结合第三抗原上存在的表位III；和
(III)Fc结构域，其通过两个CH2-CH3结构域彼此复合而形成；
其中表位I、表位II或表位III之一是效应细胞抗原的表位，表位I、表位II或表位III的第二个表位是第一癌症抗原的表位，和表位I、表位II或表位III的第三个表位是第二癌症抗原的表位，并且其中所述结合分子的所述抗原结合结构域I、II和III介导表达所述效应细胞抗原的免疫系统效应细胞和表达所述第一和第二癌症抗原的癌症细胞的协同结合。
3.权利要求2所述的三特异性结合分子，其中所述Fc结构域能够结合到排列在细胞表面上的Fc受体。
4.权利要求1-3任一项所述的三特异性结合分子，其中所述效应细胞抗原排列在效应细胞的表面上和其中所述癌症抗原排列在癌症细胞的表面上，并且其中所述免疫特异性结合足以共定位所述效应细胞抗原和所述癌症抗原，从而促进针对所述癌症细胞的所述效应细胞的激活。
5.权利要求1-4任一项所述的三特异性结合分子，其中所述效应细胞抗原选自：CD2、CD3、CD16、CD19、CD20、CD22、CD32B、CD64、B细胞受体(BCR)、T细胞受体(TCR)和NKG2D受体。
6.权利要求1-5任一项所述的三特异性结合分子，其中所述第一癌症抗原和第二癌症抗原独立地选自：结肠癌抗原19.9、胃癌黏蛋白、抗原4.2、糖蛋白A33(gpA33)、ADAM-9、胃癌抗原AH6、ALCAM、恶性人淋巴细胞抗原APO-1、癌症抗原B1、B7-H3、β-联蛋白、血型ALeb/Ley、伯基特淋巴瘤抗原-38.13、结肠腺癌抗原C14、卵巢癌抗原CA125、羧肽酶M、CD5、CD19、CD20、CD22、CD23、CD25、CD27、CD30、CD33、CD36、CD45、CD46、CD52、CD79a/CD79b、CD103、CD317、CDK4、癌胚抗原(CEA)、CEACAM5、CEACAM6、CO17-1A、CO-43(血型Leb)、CO-514(血型Lea)、CTA-1、CTLA4、细胞角蛋白8、抗原D1.1、抗原D156-22、DR5、E1系列(血型B)、EGFR(表皮生长因子受体)、肝配蛋白受体A2(EphA2)、ErbB1、ErbB3、ErbB4、GAGE-1、GAGE-2、GD2/GD3/GM2、肺腺癌抗原F3、抗原FC10.2、G49、神经节苷酯GD2、神经节苷酯GD3、神经节苷酯GM2、神经节苷酯GM3、GD2、GD3、GICA 19-9、GM2、gp100、人白血病T细胞抗原Gp37、黑素瘤抗原gp75、gpA33、HER2抗原(p185HER2)、人乳脂肪球抗原(HMFG)、人乳头瘤病毒-E6/人乳头瘤病毒-E7、高分子量黑素瘤抗原(HMW-MAA)、I抗原(分化抗原)I(Ma)、整联蛋白α-V-β-6整联蛋白β6(ITGB6)、白介素-13、受体α2(IL13Rα2)、JAM-3、KID3、KID31、KS 1/4全癌抗原、人肺癌抗原L6和L20、LEA、LUCA-2、M1:22:25:8、M18、M39、MAGE-1、MAGE-3、MART、MUC-1、MUM-1、Myl、N-乙酰葡糖氨基转移酶、新糖蛋白、NS-10、OFA-1、OFA-2、制瘤素M、p15、黑素瘤相关的抗原p97、多态上皮黏蛋白(PEM)、多态上皮黏蛋白抗原(PEMA)、PIPA、前列腺特异性抗原(PSA)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、前列腺酸性磷酸盐、R24、ROR1、鞘脂、SSEA-1、SSEA-3、SSEA-4、sTn、源自T细胞受体的肽、T5A7、TAG-72、TL5(血型A)、TNF-α受体、TNF-β受体、TNF-γ受体、TRA-1-85(血型H)、转铁蛋白受体、肿瘤特异性移植抗原(TSTA)，胎性癌抗原-甲胎蛋白(AFP)、VEGF，VEGFR、VEP8、VEP9、VIM-D5和Y半抗原、Ley。
7.权利要求6所述的三特异性结合分子，其中所述第一癌症抗原和第二癌症抗原选自：CD2、CD317、CEACAM5、CEACAM6、DR5、EphA2、gpA33、Her2、B7-H3、EGF、EGFR、VEGF和VEGFR。
8.权利要求1-7任一项所述的三特异性结合分子，其中所述非双抗体型结合结构域III包括所述Fab型结合结构域(VLIII/VHIII)，其能够免疫特异性结合表位III，其中所述分子包括：
(A)第一多肽链，其在N-末端至C-末端方向包括：
(1)能够结合所述三个表位中的第一个表位的免疫球蛋白的轻链可变结构域(VLI)；
(2)能够结合所述三个表位中的第二个表位的免疫球蛋白的重链可变结构域(VHII)；
(3)异源二聚体-促进结构域；和
(4)IgG的CH2和CH3结构域；
(B)第二多肽链，其在N-末端至C-末端方向包括：
(1)能够结合所述三个表位中的第二个表位的免疫球蛋白的轻链可变结构域(VLII)；
(2)能够结合所述三个表位中的第一个表位的免疫球蛋白的重链可变结构域(VHI)；和
(3)互补的异源二聚体-促进结构域；
(C)第三多肽链，其在N-末端至C-末端方向包括：
(1)能够结合所述三个表位中的第三个表位的免疫球蛋白的重链可变结构域(VHIII)；和
(2)IgG的CH1结构域、铰链结构域和CH2-CH3结构域；
和
(D)第四多肽链，其在N-末端至C-末端方向包括：
(1)能够结合所述三个表位中的第三个表位的免疫球蛋白的轻链可变结构域(VLIII)；和
(2)轻链恒定结构域(CL)；
其中：
(i)所述VLI和VHI结构域缔合形成能够结合所述第一表位的结构域；
(ii)所述VLII和VHII结构域缔合形成能够结合所述第二表位的结构域；
(iii)所述VLIII和VHIII结构域缔合形成能够结合所述第三表位的结构域；
(iv)所述第一多肽链的所述CH2-CH3结构域和所述第三多肽链的所述CH2-CH3结构域缔合形成Fc结构域；
(v)所述第一多肽链和第二多肽链彼此共价结合；
(vi)所述第一多肽链和第三多肽链彼此共价结合；和
(vii)所述第三多肽链和第四多肽链彼此共价结合。
9.权利要求8所述的三特异性结合分子，其中：
(A)所述异源二聚体-促进结构域是E-螺旋，和所述互补的异源二聚体-促进结构域是K-螺旋；或
(B)所述异源二聚体-促进结构域是K-螺旋，和所述互补的异源二聚体-促进结构域是E-螺旋。
10.权利要求7-9任一项所述的三特异性结合分子，其中：
(A)所述第一多肽链和第三多肽链的所述CH2-CH3结构域每个具有序列SEQ ID NO：1，以便由它们缔合形成的Fc结构域展示正常的FcγR介导的效应子功能；或
(B)所述第一多肽链和第三多肽链的所述CH2-CH3结构域，相对于SEQ ID NO：1的序列，包括至少一个氨基酸取代，以便由它们缔合形成的Fc结构域展示改变的FcγR介导的效应子功能。
11.权利要求10所述的三特异性结合分子，其中所述至少一个氨基酸取代包括选自下述的至少一个氨基酸取代：L235V、F243L、R292P、Y300L、V305I和P396L，其中所述编号是在Kabat中的EU索引的编号。
12.权利要求10或11所述的三特异性结合分子，其中所述至少一个氨基酸取代包括：
(A)选自下述的至少一个取代：F243L、R292P、Y300L、V305I和P396L；
(B)选自下述的至少两个取代：
(1)F243L和P396L；
(2)F243L和R292P；和
(3)R292P和V305I；
(C)选自下述的至少三个取代：
(1)F243L、R292P和Y300L；
(2)F243L、R292P和V305I；
(3)F243L、R292P和P396L；和
(4)R292P、V305I和P396L；
(D)选自下述的至少四个取代：
(1)F243L、R292P、Y300L和P396L；和
(2)F243L、R292P、V305I和P396L；
或
(E)选自下述的至少五个取代：
(1)F243L、R292P、Y300L、V305I和P396L；和
(2)L235V、F243L、R292P、Y300L和P396L。
13.权利要求8-9任一项所述的三特异性结合分子，其中所述第一多肽链和第三多肽链的所述CH2-CH3结构域彼此不同，并且具有选自下述的氨基酸序列：SEQ ID NO：52和SEQ IDNO：53。
14.权利要求7-13任一项所述的三特异性结合分子，其中：
(A)所述表位I、表位II和表位III分别是所述第一癌症抗原的表位、所述第二癌症抗原的表位和所述效应细胞抗原的表位；
(B)所述表位I、表位II和表位III分别是所述第一癌症抗原的表位、所述效应细胞抗原的表位和所述第二癌症抗原的表位；
(C)所述表位I、表位II和表位III分别是第二癌症抗原的表位、所述第一癌症抗原的表位和所述效应细胞抗原的表位；
(D)所述表位I、表位II和表位III分别是所述第二癌症抗原的表位、所述效应细胞抗原的表位和所述第一癌症抗原的表位；
(E)所述表位I、表位II和表位III分别是所述效应细胞抗原的表位、所述第一癌症抗原的表位和所述第二癌症抗原的表位；
和
(F)所述表位I、表位II和表位III分别是所述效应细胞抗原的表位、第二癌症抗原的表位和所述第一癌症抗原的表位。
15.权利要求1-14任一项所述的三特异性结合分子，其中：
(A)所述效应细胞抗原的表位是被抗体Lo-CD2a识别的CD2表位；
(B)所述效应细胞抗原的表位是被抗体OKT3、M291、YTH12.5、抗CD3mAb1或抗CD3mAb 2识别的CD3表位；
(C)所述效应细胞抗原的表位是被抗体3G8或A9识别的CD16表位；
(D)所述效应细胞抗原的表位是被抗体MD1342、MEDI-551、兰妥莫单抗或HD37识别的CD19表位；
(E)所述效应细胞抗原的表位是被抗体利妥昔单抗、替伊莫单抗、奥法木单抗和托西莫单抗识别的CD20表位；
(F)所述效应细胞抗原的表位是被抗体依帕珠单抗识别的CD22表位；
(G)所述效应细胞抗原的表位是被抗体CD32B mAb 1识别的CD32B表位；
(H)所述效应细胞抗原的表位是被抗体CD64mAb 1识别的CD64表位；
(I)所述效应细胞抗原的表位是被抗体CD79mAb 1识别的BCR/CD79表位；
(J)所述效应细胞抗原的表位是被抗体BMA 031识别的TCR表位；
或
(K)所述效应细胞抗原的表位是被抗体KYK-2.0识别的NKG2D受体表位。
16.药学组合物，其包括权利要求1-15任一项所述的三特异性结合分子和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
17.权利要求1-15任一项所述的三特异性结合分子，或权利要求15所述的药学组合物，其中所述分子用于治疗癌症。
18.权利要求1-15任一项所述的三特异性结合分子，或权利要求15所述的药学组合物，其中所述癌症特征在于存在癌症细胞，所述癌症细胞选自下述的细胞：肾上腺肿瘤、AIDS相关的癌症、软组织腺泡状肉瘤、星形细胞瘤、膀胱癌、骨癌、脑癌和脊髓癌、转移性脑瘤、乳腺癌、颈动脉体瘤、宫颈癌、软骨肉瘤、脊索瘤、嫌色细胞肾细胞癌、透明细胞癌、结肠癌、结肠直肠癌、皮肤良性纤维组织细胞瘤、成纤维细胞性小圆细胞瘤、室管膜瘤、尤文氏肿瘤、骨外黏液样软骨肉瘤、不完全性骨纤维生成、骨纤维发育不良、胆囊或胆管癌、胃癌、妊娠滋养层疾病、生殖细胞瘤、头颈癌、肝细胞癌、胰岛细胞肿瘤、卡波西氏肉瘤、肾癌、白血病、脂肪瘤/良性脂肪瘤、脂肪肉瘤/恶性脂肪瘤、肝癌、淋巴瘤、肺癌、成神经管细胞瘤、黑素瘤、脑膜瘤、多发性内分泌瘤形成、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、成神经细胞瘤、神经内分泌肿瘤、卵巢癌、胰腺癌、乳头状甲状腺癌、甲状旁腺肿瘤、儿科癌症、末梢神经鞘瘤、嗜铬细胞瘤、垂体肿瘤、前列腺癌、后眼色素层黑素瘤、罕见血液疾病、肾转移性癌、杆状肿瘤、横纹肌肉瘤、肉瘤、皮肤癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、胃癌、滑膜肉瘤、睾丸癌、胸腺癌、胸腺瘤、甲状腺转移性癌症和子宫癌。
19.权利要求17-18任一项所述的三特异性结合分子或药学组合物，其中所述癌症是结直肠癌、肝细胞癌、神经胶质瘤、肾癌、乳腺癌、多发性骨髓瘤、膀胱癌、成神经细胞瘤、肉瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、胰腺癌或直肠癌症。
20.权利要求17-18任一项所述的三特异性结合分子或药学组合物，其中所述癌症是急性髓细胞样白血病(AML)；慢性骨髓性白血病(CML)；急性B成淋巴细胞白血病(B-ALL)；慢性淋巴细胞白血病(CLL)；毛细胞白血病(HCL)；母细胞性浆细胞样树突细胞赘生物(BPDCN)；非霍奇金淋巴瘤(NHL)，包括套细胞白血病(MCL)和小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)；霍奇金淋巴瘤；系统性肥大细胞增生症或伯基特淋巴瘤。
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Cited By (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107250161A (zh) * 2015-01-26 2017-10-13 宏观基因有限公司 包含dr5‑结合结构域的多价分子
CN108264561A (zh) * 2016-12-30 2018-07-10 上海近岸生物科技有限公司 一种结合cd19、cd3和t细胞负共刺激分子的三功能分子及其应用
CN109912714A (zh) * 2017-12-12 2019-06-21 深圳宾德生物技术有限公司 抗cd317单克隆抗体6h2h5及其应用
CN110129369A (zh) * 2018-02-09 2019-08-16 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心 一种嵌合抗原受体基因工程载体、免疫细胞及其应用
WO2019179424A1 (zh) * 2018-03-20 2019-09-26 鸿运华宁（杭州）生物医药有限公司 Gipr抗体及其与glp-1的融合蛋白质，以及其药物组合物和应用
CN111465618A (zh) * 2017-12-12 2020-07-28 宏观基因有限公司 双特异性cd16-结合分子及其在疾病治疗中的用途
CN111712261A (zh) * 2018-02-08 2020-09-25 豪夫迈·罗氏有限公司 双特异性抗原结合分子和使用方法
CN112074540A (zh) * 2018-04-10 2020-12-11 Y生物股份有限公司 细胞接合的结合分子
WO2020253393A1 (zh) * 2019-06-20 2020-12-24 成都恩沐生物科技有限公司 共价多特异性抗体
CN115427108A (zh) * 2020-01-10 2022-12-02 达因疗法公司 肌肉靶向复合物及其用于治疗强直性肌营养不良的用途
CN115611982A (zh) * 2021-07-14 2023-01-17 浙江大学 一种抗人MICA/Bα3区的单克隆抗体及其应用
WO2023011273A1 (zh) * 2021-08-02 2023-02-09 盛禾(中国)生物制药有限公司 一种多特异性抗原结合蛋白及其应用
WO2023020315A1 (zh) * 2021-08-19 2023-02-23 南京吉盛澳玛生物医药有限公司 靶向pd-l1/pd-1的抗体及其应用

Families Citing this family (219)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9963510B2 (en) 2005-04-15 2018-05-08 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
US12466897B2 (en) 2011-10-10 2025-11-11 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
US10851178B2 (en) 2011-10-10 2020-12-01 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
AU2014205086B2 (en) 2013-01-14 2019-04-18 Xencor, Inc. Novel heterodimeric proteins
US9701759B2 (en) 2013-01-14 2017-07-11 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US11053316B2 (en) 2013-01-14 2021-07-06 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US10968276B2 (en) 2013-03-12 2021-04-06 Xencor, Inc. Optimized anti-CD3 variable regions
US9605084B2 (en) 2013-03-15 2017-03-28 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10487155B2 (en) 2013-01-14 2019-11-26 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10131710B2 (en) 2013-01-14 2018-11-20 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
ES2790420T3 (es) 2013-03-14 2020-10-27 Scripps Research Inst Conjugados de anticuerpos y de agentes de focalización usos de los mismos
WO2014145907A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Xencor, Inc. Targeting t cells with heterodimeric proteins
US10106624B2 (en) 2013-03-15 2018-10-23 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10519242B2 (en) 2013-03-15 2019-12-31 Xencor, Inc. Targeting regulatory T cells with heterodimeric proteins
US10858417B2 (en) 2013-03-15 2020-12-08 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
HRP20240939T1 (hr) 2013-12-17 2024-10-25 Genentech, Inc. Anti-cd3 protutijela i metode uporabe
SG11201606714TA (en) * 2014-02-14 2016-09-29 Andrew S Chi Improved methods for the treatment of vascularizing cancers
JP6775422B2 (ja) 2014-03-28 2020-10-28 ゼンコー・インコーポレイテッドＸｅｎｃｏｒ、 Ｉｎｃ． Ｃｄ３８及びｃｄ３に結合する二重特異性抗体
KR102546875B1 (ko) 2014-05-02 2023-06-26 모멘타 파머슈티컬스 인코포레이티드 공학처리된 ｆｃ 작제물과 관련된 조성물 및 방법
AP2016009586A0 (en) 2014-05-29 2016-11-30 Macrogenics Inc Tri-specific binding molecules and methods of use thereof
SG11201702310QA (en) 2014-09-26 2017-04-27 Macrogenics Inc Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding cd19 and cd3, and uses thereof
MX386297B (es) 2014-09-29 2025-03-18 Univ Duke Moleculas biespecificas que comprenden un brazo orientado a la envoltura vih-1.
MX391388B (es) 2014-11-14 2025-03-21 Hoffmann La Roche Moléculas de unión a antígeno que comprenden un trímero de ligando de la familia de tnf.
AU2015353409B2 (en) 2014-11-26 2019-05-09 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
US10526417B2 (en) 2014-11-26 2020-01-07 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and CD38
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
EP3237449A2 (en) 2014-12-22 2017-11-01 Xencor, Inc. Trispecific antibodies
CA2973964A1 (en) 2015-01-16 2016-07-21 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for ror1
US10227411B2 (en) 2015-03-05 2019-03-12 Xencor, Inc. Modulation of T cells with bispecific antibodies and FC fusions
EP3277305B1 (en) 2015-03-31 2021-07-21 F. Hoffmann-La Roche AG Antigen binding molecules comprising a trimeric tnf family ligand
AU2016263808B2 (en) 2015-05-21 2019-01-03 Harpoon Therapeutics, Inc. Trispecific binding proteins and methods of use
TWI773646B (zh) 2015-06-08 2022-08-11 美商宏觀基因股份有限公司 結合lag-3的分子和其使用方法
EP3310811B1 (en) 2015-06-16 2021-06-16 Genentech, Inc. Anti-cd3 antibodies and methods of use
EP3112381A1 (en) * 2015-07-01 2017-01-04 FONDAZIONE IRCCS Istituto Nazionale dei Tumori Bispecific antibodies for use in cancer immunotherapy
WO2017011414A1 (en) * 2015-07-10 2017-01-19 Duke University Bispecific molecules comprising an hiv-1 envelope targeting arm
WO2017011413A1 (en) * 2015-07-10 2017-01-19 Duke University Bispecific molecules comprising an hiv-1 envelope targeting arm
GEAP202215554A (en) 2015-07-30 2022-06-10 Macrogenics Inc Pd-1-binding molecules and methods of use thereof
AR106188A1 (es) 2015-10-01 2017-12-20 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-cd19 humano humanizados y métodos de utilización
EP3368076B1 (en) * 2015-10-30 2025-04-30 Galaxy Biotech, LLC Highly potent antibodies binding to death receptor 4 and death receptor 5
EA201891066A1 (ru) 2015-10-30 2018-10-31 ЭнБиИ-ТЕРАПЬЮТИКС АГ Антитела к ror1
US10227410B2 (en) 2015-12-07 2019-03-12 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and PSMA
MX2018007089A (es) * 2015-12-14 2019-01-30 Macrogenics Inc Moleculas biespecificas que tienen inmunorreactividad con pd-1 y ctla-4, y metodos de uso de las mismas.
WO2017107973A1 (zh) * 2015-12-24 2017-06-29 凯惠科技发展(上海)有限公司 一种tpbg抗体及其制备方法、其偶联物和应用
UA125718C2 (uk) 2016-01-20 2022-05-25 Зе Скріппс Ресеарч Інстітьют Композиції антитіл до ror1 і пов'язані з ними способи
JP2019506158A (ja) * 2016-01-22 2019-03-07 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗ｒｏｒ１抗体、ｒｏｒ１×ｃｄ３二重特異性抗体、及びそれらの使用法
CA3013463C (en) 2016-02-04 2024-05-21 The California Institute For Biomedical Research Humanized anti-cd3 antibodies, conjugates and uses thereof
US20170233472A1 (en) 2016-02-17 2017-08-17 Macrogenics, Inc. ROR1-Binding Molecules, and Methods of Use Thereof
ES2972740T3 (es) * 2016-03-02 2024-06-14 Momenta Pharmaceuticals Inc Procedimientos relacionados con construcciones de Fc modificadas genéticamente
CA3020864A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 Macrogenics, Inc. Novel b7-h3-binding molecules, antibody drug conjugates thereof and methods of use thereof
EP3243836A1 (en) * 2016-05-11 2017-11-15 F. Hoffmann-La Roche AG C-terminally fused tnf family ligand trimer-containing antigen binding molecules
RS67145B1 (sr) 2016-05-20 2025-09-30 Harpoon Therapeutics Inc Proteini sa jednolančanim varijabilnim fragmentom koji vezuju cd3
US11623958B2 (en) 2016-05-20 2023-04-11 Harpoon Therapeutics, Inc. Single chain variable fragment CD3 binding proteins
KR102530742B1 (ko) 2016-05-20 2023-05-09 하푼 테라퓨틱스, 인크. 단일 도메인 혈청 알부민 결합 단백질
IL263211B2 (en) * 2016-05-23 2023-09-01 Momenta Pharmaceuticals Inc Compositions and methods relating to engineered fc constructs
CN109310762A (zh) 2016-06-07 2019-02-05 宏观基因有限公司 联合疗法
CN110352070B (zh) 2016-06-14 2024-09-17 Xencor股份有限公司 双特异性检查点抑制剂抗体
EP4050032A1 (en) 2016-06-28 2022-08-31 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind somatostatin receptor 2
WO2018005904A2 (en) * 2016-07-01 2018-01-04 Ludwig Institute For Cancer Research Ltd Methods and compositions for pdgf-cc inhibition
US20190233534A1 (en) * 2016-07-14 2019-08-01 Fred Hutchinson Cancer Research Center Multiple bi-specific binding domain constructs with different epitope binding to treat cancer
WO2018045110A1 (en) 2016-08-30 2018-03-08 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
US10793632B2 (en) 2016-08-30 2020-10-06 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
WO2018053328A1 (en) * 2016-09-16 2018-03-22 Duke University Bispecific molecules comprising an hiv-1 envelope targeting arm
CR20230179A (es) 2016-10-14 2023-06-12 Xencor Inc PROTEÍNAS DE FUSIÓN FC HETERODIMÉRICAS IL 15/IL15Ra (Divisional 2019-0229)
AU2017356872A1 (en) 2016-11-08 2019-05-30 University Of Miami Anti-secretogranin III (Scg3) antibodies and uses thereof
CN109923128A (zh) 2016-11-15 2019-06-21 基因泰克公司 用于用抗cd20/抗cd3双特异性抗体进行治疗的给药
KR20190087539A (ko) 2016-11-23 2019-07-24 하푼 테라퓨틱스, 인크. Psma 표적화 삼중특이성 단백질 및 사용 방법
CN110198955A (zh) 2016-11-23 2019-09-03 哈普恩治疗公司 前列腺特异性膜抗原结合蛋白质
WO2018119166A1 (en) * 2016-12-23 2018-06-28 Macrogenics, Inc. Adam9-binding molecules, and methods of use thereof
FR3061716B1 (fr) * 2017-01-06 2019-05-17 Elsalys Biotech Nouveaux composes ciblant le cd160 humain
CN110650748B (zh) 2017-01-06 2024-01-02 动量制药公司 与经工程改造的Fc构建体相关的组合物和方法
IL268554B2 (en) 2017-02-08 2025-03-01 Dragonfly Therapeutics Inc Multi-specific binding proteins for activation of natural killer cells and therapeutic uses thereof to treat cancer
SG11201907271PA (en) * 2017-02-10 2019-09-27 Dragonfly Therapeutics Inc Proteins binding psma, nkg2d and cd16
CN108456250B (zh) * 2017-02-17 2025-11-28 恺兴生命科技(上海)有限公司 靶向il-13ra2的抗体及其应用
FI3582806T3 (fi) 2017-02-20 2023-09-07 Dragonfly Therapeutics Inc Her2:ta, nkg2d:tä ja cd16:ta sitovia proteiineja
EP3583131A4 (en) * 2017-02-20 2021-03-17 Dragonfly Therapeutics, Inc. PROTEINS THAT BIND CD33, NKG2D AND CD16
MX2019009967A (es) 2017-02-24 2019-12-02 Macrogenics Inc Moleculas de union biespecificas que son capaces de unirse a cd137 y a antigenos tumorales, y usos de las mismas.
MX2019010156A (es) * 2017-02-27 2020-01-09 Dragonfly Therapeutics Inc Proteínas multiespecíficas de unión de direccionamiento a anhidrasa carbónica 9 (caix), anoctamina-1 (ano1), mesotelina, antígeno de superficie celular de trofoblasto (trop2), antígeno carcinoembrionario (cea) o claudina-18.2.
WO2018157169A1 (en) * 2017-02-27 2018-08-30 Caerus Therapeutics, Inc. Antibody constructs and methods of treating cancer
WO2018160754A2 (en) 2017-02-28 2018-09-07 Harpoon Therapeutics, Inc. Inducible monovalent antigen binding protein
CN110891974B (zh) 2017-05-12 2021-08-06 哈普恩治疗公司 间皮素结合蛋白质
AU2018265860B2 (en) 2017-05-12 2022-08-11 Harpoon Therapeutics, Inc. MSLN targeting trispecific proteins and methods of use
BR112019024654A2 (pt) * 2017-05-23 2020-06-09 Dragonfly Therapeutics Inc proteína de ligação nkg2d, cd16 e ror1 ou ror2
CA3064567A1 (en) * 2017-05-23 2018-11-29 Dragonfly Therapeutics, Inc. A protein binding nkg2d, cd16 and a tumor-associated antigen
BR112019024632A2 (pt) * 2017-05-23 2020-06-16 Dragonfly Therapeutics, Inc. A proteína de ligação nkg2d, cd16 e um tumor-antigénio associado
KR102324568B1 (ko) 2017-06-21 2021-11-10 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 HIV gp120 및 CD3을 표적화하는 다중특이적 항체
WO2019005641A1 (en) * 2017-06-25 2019-01-03 Systimmune, Inc. GUIDING AND NAVIGATION CONTROL PROTEINS AND METHODS OF PRODUCTION AND USE THEREOF
CN111132733A (zh) 2017-06-30 2020-05-08 Xencor股份有限公司 含有IL-15/IL-15Rα和抗原结合结构域的靶向异源二聚体Fc融合蛋白
GB201710835D0 (en) 2017-07-05 2017-08-16 Ucl Business Plc ROR1 Antibodies
GB201710836D0 (en) 2017-07-05 2017-08-16 Ucl Business Plc ROR1 Car T-Cells
GB201710838D0 (en) 2017-07-05 2017-08-16 Ucl Business Plc Bispecific antibodies
WO2019016381A1 (en) * 2017-07-20 2019-01-24 Nbe-Therapeutics Ag MULTISPECIFIC ANTIBODY PRODUCT BINDING TO DIFFERENT ROR1 EPITOPES
KR102486090B1 (ko) 2017-08-07 2023-01-10 엔비이-테라퓨틱스 아게 생체 내 내성이 높은 항체 약물 결합체
SG10202102251YA (en) * 2017-08-16 2021-04-29 Dragonfly Therapeutics Inc Proteins binding nkg2d, cd16, and egfr, hla-e ccr4, or pd-l1
IL315737A (en) 2017-10-13 2024-11-01 Harpoon Therapeutics Inc B-cell maturation antigen-binding proteins
CR20200196A (es) 2017-10-13 2020-06-05 Harpoon Therapeutics Inc Proteínas trispecìficas y mètodos de uso
EP3706793A1 (en) 2017-11-08 2020-09-16 Xencor, Inc. Bispecific and monospecific antibodies using novel anti-pd-1 sequences
US10981992B2 (en) 2017-11-08 2021-04-20 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
US20200362054A1 (en) * 2017-11-21 2020-11-19 Brian Granda Trispecific binding molecules against tumor-associated antigents and use thereof
CN111655718B (zh) 2017-12-19 2025-07-22 Xencor股份有限公司 经过工程化的il-2 fc融合蛋白
CN109957026A (zh) * 2017-12-22 2019-07-02 成都恩沐生物科技有限公司 共价多特异性抗体
US12247060B2 (en) 2018-01-09 2025-03-11 Marengo Therapeutics, Inc. Calreticulin binding constructs and engineered T cells for the treatment of diseases
US11884733B2 (en) 2018-02-08 2024-01-30 Dragonfly Therapeutics, Inc. Antibody variable domains targeting the NKG2D receptor
KR20200118824A (ko) 2018-02-08 2020-10-16 드래곤플라이 쎄라퓨틱스, 인크. 자연 살해 세포를 활성화시키는 다중-특이성 결합 단백질을 수반하는 암의 병용 요법
EP3752196A4 (en) 2018-02-15 2022-03-23 MacroGenics, Inc. CD3-BINDING DOMAIN VARIANTS AND THEIR USE IN COMBINATION THERAPIES FOR THE TREATMENT OF DISEASES
JP7353576B2 (ja) * 2018-02-20 2023-10-02 ドラゴンフライ セラピューティクス， インコーポレイテッド Ｃｄ３３、ｎｋｇ２ｄ、及びｃｄ１６に結合する多重特異性結合タンパク質、ならびにその使用方法
US12152073B2 (en) 2018-03-14 2024-11-26 Marengo Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to calreticulin and uses thereof
AU2019243665B2 (en) 2018-03-30 2023-06-01 Merus N.V. Multivalent antibody
US10982006B2 (en) 2018-04-04 2021-04-20 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind fibroblast activation protein
CN110357960A (zh) * 2018-04-10 2019-10-22 广州爱思迈生物医药科技有限公司 抗体及抗体改造方法
CA3097605A1 (en) * 2018-04-17 2019-10-24 Invenra Inc. Trivalent trispecific antibody constructs
JP2021521784A (ja) 2018-04-18 2021-08-30 ゼンコア インコーポレイテッド ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲａＦｃ融合タンパク質とＰＤ−１抗原結合ドメインを含むＰＤ−１標的化ヘテロダイマー融合タンパク質およびそれらの使用
US11505595B2 (en) 2018-04-18 2022-11-22 Xencor, Inc. TIM-3 targeted heterodimeric fusion proteins containing IL-15/IL-15RA Fc-fusion proteins and TIM-3 antigen binding domains
AU2019256431B2 (en) 2018-04-18 2026-01-15 Exelixis, Inc. Anti-ror antibody constructs
SG11202011330PA (en) 2018-05-14 2020-12-30 Harpoon Therapeutics Inc Binding moiety for conditional activation of immunoglobulin molecules
JP2021524451A (ja) * 2018-05-18 2021-09-13 マクロジェニクス，インコーポレーテッド 最適化済みｇｐ４１結合分子及びその使用
CN112513085B (zh) 2018-05-24 2024-06-18 詹森生物科技公司 Psma结合剂及其用途
AU2019297451A1 (en) 2018-07-03 2021-01-28 Marengo Therapeutics, Inc. Anti-TCR antibody molecules and uses thereof
MA53284A (fr) 2018-08-08 2022-01-26 Dragonfly Therapeutics Inc Protéines de liaison à nkg2d, à cd16 et à un antigène associé à une tumeur
EA202091888A1 (ru) 2018-08-08 2020-10-23 Драгонфлай Терапьютикс, Инк. Вариабельные домены антител, нацеленные на рецептор nkg2d
JP2021534096A (ja) * 2018-08-08 2021-12-09 ドラゴンフライ セラピューティクス， インコーポレイテッド Ｎｋｇ２ｄ、ｃｄ１６および腫瘍関連抗原に結合するタンパク質
WO2020033630A1 (en) 2018-08-08 2020-02-13 Dragonfly Therapeutics, Inc. Multi-specific binding proteins that bind bcma, nkg2d and cd16, and methods of use
CA3110647A1 (en) * 2018-08-28 2020-03-05 Ambrx, Inc. Anti-cd3 antibody folate bioconjugates and their uses
EP3849610A4 (en) * 2018-09-14 2022-12-07 Kindred Biosciences, Inc. ANTI-IL4 RECEPTOR ANTIBODIES FOR VETERINARY USE
US12195544B2 (en) 2018-09-21 2025-01-14 Harpoon Therapeutics, Inc. EGFR binding proteins and methods of use
WO2020069028A1 (en) 2018-09-25 2020-04-02 Harpoon Therapeutics, Inc. Dll3 binding proteins and methods of use
EP3854816A4 (en) 2018-09-30 2022-09-07 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. ANTI-B7H3 ANTIBODY EXATECAN ANALOGUE CONJUGATE AND ITS MEDICAL USE
SG11202103192RA (en) 2018-10-03 2021-04-29 Xencor Inc Il-12 heterodimeric fc-fusion proteins
JP7621948B2 (ja) * 2018-12-04 2025-01-27 ノバルティス アーゲー Ｃｄ３に対する結合分子及びその使用
KR102113302B1 (ko) * 2018-12-24 2020-05-20 원광대학교산학협력단 상보성결정부 기반 조류 인플루엔자 바이러스의 h5 아형에 특이적으로 결합하는 펩티드 및 이의 용도
CA3125345A1 (en) * 2019-01-04 2020-07-09 Marengo Therapeutics, Inc. Anti-tcr antibody molecules and uses thereof
WO2020150282A1 (en) * 2019-01-18 2020-07-23 Askgene Pharma Inc. Pd-l1 specific monoclonal antibodies for disease treatment and diagnosis
PE20212198A1 (es) 2019-01-29 2021-11-16 Juno Therapeutics Inc Anticuerpos y receptores quimericos de antigenos especificos para receptor 1 huerfano tipo receptor tirosina-cinasa (ror1)
MX2021009242A (es) * 2019-01-31 2021-10-26 Sanofi Biotechnology Anticuerpo anti-receptor de il-6 para tratar la artritis juvenil idiopatica.
AU2020224681A1 (en) 2019-02-21 2021-09-16 Marengo Therapeutics, Inc. Antibody molecules that bind to NKp30 and uses thereof
SG11202109061YA (en) 2019-02-21 2021-09-29 Marengo Therapeutics Inc Multifunctional molecules that bind to t cell related cancer cells and uses thereof
AU2020232605A1 (en) 2019-03-01 2021-10-21 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind ENPP3 and CD3
MA55717A (fr) 2019-04-19 2022-02-23 Janssen Biotech Inc Méthodes de traitement du cancer de la prostate avec un anticorps anti-psma/cd3
AU2020261431A1 (en) 2019-04-24 2021-12-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of diagnosis and treatment of rheumatoid arthritis
US11162079B2 (en) 2019-05-10 2021-11-02 The Regents Of The University Of California Blood type O Rh-hypo-immunogenic pluripotent cells
CN114245806A (zh) 2019-05-14 2022-03-25 哈普恩治疗公司 EpCAM结合蛋白及使用方法
JOP20210298A1 (ar) 2019-05-14 2023-01-30 Provention Bio Inc طرق وتركيبات للوقاية من مرض السكري من النوع الأول
CN113874398B (zh) 2019-05-21 2025-08-01 诺华股份有限公司 Cd19结合分子及其用途
TW202110892A (zh) 2019-06-04 2021-03-16 法商賽諾菲生物技術公司 治療具有類風濕性關節炎的個體中疼痛之組成物及方法
CN114258401B (zh) * 2019-07-16 2025-08-12 Inserm(法国国家健康医学研究院) 对cd38具有特异性的抗体及其用途
IL292385A (en) * 2019-10-24 2022-06-01 Novago Therapeutics Ag New anti-nogo-a antibodies
JP2023500869A (ja) * 2019-11-06 2023-01-11 アムジェン リサーチ （ミュニック） ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 増殖性疾患での使用のための多重標的化抗原結合分子
KR20220113790A (ko) 2019-12-13 2022-08-16 제넨테크, 인크. 항-ly6g6d 항체 및 사용 방법
JOP20220150A1 (ar) * 2019-12-18 2023-01-30 Janssen Biotech Inc مواد وطرق للاستهداف البيولوجي في الجسم الحي
EP4084823A4 (en) 2020-01-03 2024-05-15 Marengo Therapeutics, Inc. ANTI-TCR ANTIBODY MOLECULES AND THEIR USES
CN115867309A (zh) * 2020-02-20 2023-03-28 温疗法公司 双特异性gd2和b7h2结合分子及使用方法
KR20220144821A (ko) 2020-02-21 2022-10-27 마크로제닉스, 인크. Cd137 결합 분자 및 그것의 용도
CA3170833A1 (en) 2020-02-21 2021-08-26 Harpoon Therapeutics, Inc. Flt3 binding proteins and methods of use
CA3169301A1 (en) * 2020-03-18 2021-09-23 Shyr Jiann Li Anti-il4 receptor antibodies for veterinary use
AR122018A1 (es) 2020-05-06 2022-08-03 Dragonfly Therapeutics Inc Proteínas que se unen a nkg2d, cd16 y clec12a
WO2021231976A1 (en) 2020-05-14 2021-11-18 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (psma) and cd3
US20220106403A1 (en) 2020-05-14 2022-04-07 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind msln and cd3
WO2021252917A2 (en) 2020-06-11 2021-12-16 Provention Bio, Inc. Methods and compositions for preventing type 1 diabetes
IL300249A (en) * 2020-08-05 2023-03-01 Dragonfly Therapeutics Inc NKG2D CD16 and EGFR binding proteins
IL300666A (en) 2020-08-19 2023-04-01 Xencor Inc ANTI–CD28 COMPOSITIONS
CN116648459A (zh) * 2020-10-12 2023-08-25 格雷菲克斯公司 靶向响应SARS-CoV蛋白表达细胞的T细胞的抗体构建体、其设计和用途
KR20230086765A (ko) 2020-10-13 2023-06-15 얀센 바이오테크 인코포레이티드 분화 클러스터 iv 및/또는 viii을 조절하기 위한 바이오-조작된 t 세포 매개 면역, 물질 및 기타 방법
EP4240492A2 (en) 2020-11-04 2023-09-13 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
IL302217A (en) 2020-11-04 2023-06-01 Genentech Inc Dosage for treatment with bispecific anti-CD20/anti-CD3 antibodies and anti-CD79B drug antibody conjugates
CA3196076A1 (en) 2020-11-04 2022-05-12 Chi-Chung Li Subcutaneous dosing of anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
CR20230229A (es) * 2020-11-06 2023-09-05 Amgen Res Munich Gmbh Moléculas de unión a antígeno biespecíficas con múltiples dianas de selectividad aumentada
AU2022206324A1 (en) 2021-01-11 2023-07-20 Sana Biotechnology, Inc. Use of cd8-targeted viral vectors
KR20230137393A (ko) 2021-01-28 2023-10-04 얀센 바이오테크 인코포레이티드 Psma 결합 단백질 및 이의 용도
WO2022187539A1 (en) 2021-03-03 2022-09-09 Dragonfly Therapeutics, Inc. Methods of treating cancer using multi-specific binding proteins that bind nkg2d, cd16 and a tumor-associated antigen
JP2024511319A (ja) 2021-03-09 2024-03-13 ゼンコア インコーポレイテッド Ｃｄ３及びｃｌｄｎ６に結合するヘテロ二量体抗体
JP2024509274A (ja) 2021-03-10 2024-02-29 ゼンコア インコーポレイテッド Ｃｄ３及びｇｐｃ３に結合するヘテロ二量体抗体
AU2022242125A1 (en) * 2021-03-24 2023-11-09 Janssen Biotech, Inc. Proteins comprising cd3 antigen binding domains and uses thereof
AU2022273541A1 (en) 2021-05-14 2023-11-30 Genentech, Inc. Methods for treatment of cd20-positive proliferative disorder with mosunetuzumab and polatuzumab vedotin
CN113488112A (zh) * 2021-06-10 2021-10-08 五邑大学 一种共价结合预测方法及装置
KR20240109617A (ko) 2021-10-28 2024-07-11 라이엘 이뮤노파마, 인크. Ror1-결합 단백질을 발현하는 세포를 배양하는 방법
WO2023086772A1 (en) 2021-11-12 2023-05-19 Xencor, Inc. Bispecific antibodies that bind to b7h3 and nkg2d
CN118201960B (zh) * 2021-11-19 2025-05-16 武汉友芝友生物制药股份有限公司 双特异性抗体及其应用
WO2023114949A1 (en) 2021-12-16 2023-06-22 Sana Biotechnology, Inc. Methods and systems of particle production
WO2023133595A2 (en) 2022-01-10 2023-07-13 Sana Biotechnology, Inc. Methods of ex vivo dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses
EP4473097A1 (en) 2022-02-02 2024-12-11 Sana Biotechnology, Inc. Methods of repeat dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses
KR20240161977A (ko) 2022-02-23 2024-11-13 젠코어 인코포레이티드 항-CD28 x 항-PSMA 항체
US20230340128A1 (en) 2022-02-24 2023-10-26 Xencor, Inc. Anti-cd28 x anti-msln antibodies
EP4482865A1 (en) 2022-02-24 2025-01-01 Xencor, Inc. Anti-cd28 x anti-trop2 antibodies
US20250222027A1 (en) 2022-04-01 2025-07-10 Sana Biotechnology, Inc. Cytokine receptor agonist and viral vector combination therapies
TWI874962B (zh) 2022-04-13 2025-03-01 美商建南德克公司 莫蘇妥珠單抗之醫藥組成物及其使用方法
WO2023201309A1 (en) 2022-04-13 2023-10-19 Xencor, Inc. Antibodies that bind pd-l1, pd-l2 and/or cd28
US20260027145A1 (en) 2022-07-27 2026-01-29 Sana Biotechnology, Inc. Methods of transduction using a viral vector and inhibitors of antiviral restriction factors
JP2025528087A (ja) * 2022-08-05 2025-08-26 チマゲン・バイオサイエンシズ，リミテッド 二量体化可能な腫瘍抗原及び免疫刺激抗原を標的とする多重特異性抗体
WO2024040194A1 (en) 2022-08-17 2024-02-22 Capstan Therapeutics, Inc. Conditioning for in vivo immune cell engineering
WO2024044655A1 (en) 2022-08-24 2024-02-29 Sana Biotechnology, Inc. Delivery of heterologous proteins
EP4587064A1 (en) * 2022-09-14 2025-07-23 Mayo Foundation for Medical Education and Research Methods and materials for treating cancer
EP4590688A1 (en) 2022-09-21 2025-07-30 Sana Biotechnology, Inc. Lipid particles comprising variant paramyxovirus attachment glycoproteins and uses thereof
WO2024064958A1 (en) 2022-09-23 2024-03-28 Lyell Immunopharma, Inc. Methods for culturing nr4a-deficient cells
WO2024064952A1 (en) 2022-09-23 2024-03-28 Lyell Immunopharma, Inc. Methods for culturing nr4a-deficient cells overexpressing c-jun
WO2024077174A1 (en) 2022-10-05 2024-04-11 Lyell Immunopharma, Inc. Methods for culturing nr4a-deficient cells
WO2024102636A1 (en) 2022-11-07 2024-05-16 Xencor, Inc. Bispecific antibodies that bind to b7h3 and mica/b
WO2024119157A1 (en) 2022-12-02 2024-06-06 Sana Biotechnology, Inc. Lipid particles with cofusogens and methods of producing and using the same
JP2026502549A (ja) * 2023-01-13 2026-01-23 シャンハイ・カイジン・バイオテクノロジー，リミテッド 多重特異性ポリペプチド複合体
KR20250173599A (ko) 2023-03-14 2025-12-10 젠코어 인코포레이티드 항-cd28 조성물
US20250084186A1 (en) 2023-04-14 2025-03-13 Xencor, Inc. Anti-cd28 x anti-enpp3 antibodies
EP4695295A1 (en) 2023-04-14 2026-02-18 Xencor, Inc. Anti-cd28 x anti-trop2 antibodies
WO2024220597A2 (en) 2023-04-18 2024-10-24 Sana Biotechnology, Inc. Digital droplet based assay for detecting replication competent lentiviral vector
WO2024227930A1 (en) * 2023-05-04 2024-11-07 Affibody Ab New polypeptide
CN116970087B (zh) * 2023-05-11 2025-01-24 百葵锐(深圳)生物科技有限公司 一种可用于植物叶面定向结合及递送的蛋白rna复合物
CN121443743A (zh) 2023-05-23 2026-01-30 赛纳生物技术公司 串联融合剂和相关脂质颗粒
US12311033B2 (en) 2023-05-31 2025-05-27 Capstan Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle formulations and compositions
US20250122299A1 (en) 2023-08-28 2025-04-17 Xencor, Inc. ANTI-CD20 x ANTI-CD28 COMBINATION THERAPIES
US20250127728A1 (en) 2023-10-05 2025-04-24 Capstan Therapeutics, Inc. Constrained Ionizable Cationic Lipids and Lipid Nanoparticles
WO2025076113A1 (en) 2023-10-05 2025-04-10 Capstan Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipids with conserved spacing and lipid nanoparticles
US20250243279A1 (en) 2023-10-17 2025-07-31 Xencor, Inc. Bispecific antibodies that bind to nkp46 and mica/b
WO2025090973A2 (en) 2023-10-27 2025-05-01 Xencor, Inc. Anti-trop2 x anti-pdl1 x anti-cd28 antibodies
CN117964774B (zh) * 2024-01-30 2024-10-11 天津大学 靶向IL-23和整合素α4β7的双特异性抗体及其用途
CN117949371A (zh) * 2024-01-30 2024-04-30 广东省妇幼保健院（广东省妇产医院、广东省儿童医院） Cd3+cd4+cd38+细胞在早产儿视网膜病变诊断中的应用
US20250302763A1 (en) 2024-02-22 2025-10-02 Capstan Therapeutics, Inc. Immune engineering amplification
WO2025184529A1 (en) 2024-03-01 2025-09-04 Sana Biotechnology, Inc. Viral particles with fusogen display and related compositions and methods
TW202543585A (zh) 2024-03-08 2025-11-16 美商健臻公司 脂質奈米粒子
WO2025217398A1 (en) 2024-04-10 2025-10-16 Lyell Immunopharma, Inc. Methods for culturing cells with improved culture medium
WO2025217452A1 (en) 2024-04-11 2025-10-16 Capstan Therapeutics, Inc. Constrained ionizable cationic lipids and lipid nanoparticles
WO2025217454A2 (en) 2024-04-11 2025-10-16 Capstan Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipids and lipid nanoparticles
CN118286410B (zh) * 2024-06-06 2024-09-13 山东兴瑞生物科技有限公司 一种偶联CD8抗体的肿瘤mRNA疫苗的制备方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101802010A (zh) * 2007-07-10 2010-08-11 费里德瑞奇亚历山大大学 重组、单链、三价三特异性或双特异性抗体衍生物
CN102448985A (zh) * 2009-05-27 2012-05-09 霍夫曼-拉罗奇有限公司 三或四特异性抗体
CN103154025A (zh) * 2010-08-02 2013-06-12 宏观基因有限公司 共价双抗体及其用途
WO2013174873A1 (en) * 2012-05-24 2013-11-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Multispecific antibodies

Family Cites Families (198)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US320A (en) 1837-07-31 John dainty
US5985A (en) 1848-12-26 Pianoforte-action
US3862925A (en) 1973-07-05 1975-01-28 American Home Prod Preparation of somatotropin release inhibiting factor and intermediates therefor
US3842067A (en) 1973-07-27 1974-10-15 American Home Prod Synthesis of(des-asn5)-srif and intermediates
JPS5726506B2 (zh) 1974-03-08 1982-06-04
US4105603A (en) 1977-03-28 1978-08-08 The Salk Institute For Biological Studies Peptides which effect release of hormones
ATE37983T1 (de) 1982-04-22 1988-11-15 Ici Plc Mittel mit verzoegerter freigabe.
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US5128326A (en) 1984-12-06 1992-07-07 Biomatrix, Inc. Drug delivery systems based on hyaluronans derivatives thereof and their salts and methods of producing same
US4980286A (en) 1985-07-05 1990-12-25 Whitehead Institute For Biomedical Research In vivo introduction and expression of foreign genetic material in epithelial cells
EP0307434B2 (en) 1987-03-18 1998-07-29 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Altered antibodies
US4880078A (en) 1987-06-29 1989-11-14 Honda Giken Kogyo Kabushiki Kaisha Exhaust muffler
US5601819A (en) 1988-08-11 1997-02-11 The General Hospital Corporation Bispecific antibodies for selective immune regulation and for selective immune cell binding
EP0359096B1 (en) 1988-09-15 1997-11-05 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Antibodies having modified carbohydrate content and methods of preparation and use
CA2018248A1 (en) 1989-06-07 1990-12-07 Clyde W. Shearman Monoclonal antibodies against the human alpha/beta t-cell receptor, their production and use
AU6290090A (en) 1989-08-29 1991-04-08 University Of Southampton Bi-or trispecific (fab)3 or (fab)4 conjugates
AU6430190A (en) 1989-10-10 1991-05-16 Pitman-Moore, Inc. Sustained release composition for macromolecular proteins
AU642932B2 (en) 1989-11-06 1993-11-04 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Protein microspheres and methods of using them
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
ES2181673T3 (es) 1991-05-01 2003-03-01 Jackson H M Found Military Med Procedimiento de tratamiento de las enfermedades respiratorias infecciosas.
EP0519596B1 (en) 1991-05-17 2005-02-23 Merck & Co. Inc. A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
GB9112536D0 (en) 1991-06-11 1991-07-31 Celltech Ltd Chemical compounds
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
GB9115364D0 (en) 1991-07-16 1991-08-28 Wellcome Found Antibody
US5843749A (en) 1991-07-26 1998-12-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Ehk and Ror tyrosine kinases
CA2078539C (en) 1991-09-18 2005-08-02 Kenya Shitara Process for producing humanized chimera antibody
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
US5912015A (en) 1992-03-12 1999-06-15 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Modulated release from biocompatible polymers
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
GB9225453D0 (en) 1992-12-04 1993-01-27 Medical Res Council Binding proteins
US5934272A (en) 1993-01-29 1999-08-10 Aradigm Corporation Device and method of creating aerosolized mist of respiratory drug
US5885573A (en) 1993-06-01 1999-03-23 Arch Development Corporation Methods and materials for modulation of the immunosuppressive activity and toxicity of monoclonal antibodies
US6180377B1 (en) 1993-06-16 2001-01-30 Celltech Therapeutics Limited Humanized antibodies
UA40577C2 (uk) * 1993-08-02 2001-08-15 Мерк Патент Гмбх Біспецифічна молекула, що використовується для лізису пухлинних клітин, спосіб її одержання, моноклональне антитіло (варіанти), фармацевтичний препарат, фармацевтичний набір (варіанти), спосіб видалення пухлинних клітин
ATE252894T1 (de) 1995-01-05 2003-11-15 Univ Michigan Oberflächen-modifizierte nanopartikel und verfahren für ihre herstellung und verwendung
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US6019968A (en) 1995-04-14 2000-02-01 Inhale Therapeutic Systems, Inc. Dispersible antibody compositions and methods for their preparation and use
US6265150B1 (en) 1995-06-07 2001-07-24 Becton Dickinson & Company Phage antibodies
EP0850051A2 (en) 1995-08-31 1998-07-01 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Composition for sustained release of an agent
US5736152A (en) 1995-10-27 1998-04-07 Atrix Laboratories, Inc. Non-polymeric sustained release delivery system
US5942328A (en) 1996-02-29 1999-08-24 International Business Machines Corporation Low dielectric constant amorphous fluorinated carbon and method of preparation
PT885002E (pt) 1996-03-04 2011-07-14 Massachusetts Inst Technology Materiais e métodos para aumento da internalização celular
US5985309A (en) 1996-05-24 1999-11-16 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of particles for inhalation
US5855913A (en) 1997-01-16 1999-01-05 Massachusetts Instite Of Technology Particles incorporating surfactants for pulmonary drug delivery
US5874064A (en) 1996-05-24 1999-02-23 Massachusetts Institute Of Technology Aerodynamically light particles for pulmonary drug delivery
US5922845A (en) 1996-07-11 1999-07-13 Medarex, Inc. Therapeutic multispecific compounds comprised of anti-Fcα receptor antibodies
CA2260752A1 (en) 1996-07-23 1998-01-29 Tanox Pharma B.V. Induction of t cell tolerance using a soluble molecule that can simultaneously block two costimulatory pathways
NZ333915A (en) 1996-08-16 2000-11-24 Harvard College Soluble monovalent and multivalent MHC class II fusion proteins
EP0826696B1 (de) 1996-09-03 2002-05-29 GSF-Forschungszentrum für Umwelt und Gesundheit GmbH Verwendung bi-und trispezifischer Antikörper zur Induktion einer Tumorimmunität
PT954282E (pt) 1997-01-16 2005-06-30 Massachusetts Inst Technology Preparacao de particulas para inalacao
AU6054398A (en) 1997-02-11 1998-08-26 Immunomedics Inc. Stimulation of an immune response with antibodies labeled with the alpha-galactosyl epitope
US20020062010A1 (en) 1997-05-02 2002-05-23 Genentech, Inc. Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
DE19725586C2 (de) 1997-06-17 1999-06-24 Gsf Forschungszentrum Umwelt Verfahren zur Herstellung von Zellpräparaten zur Immunisierung mittels heterologer intakter bispezifischer und/oder trispezifischer Antikörper
US5989463A (en) 1997-09-24 1999-11-23 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Methods for fabricating polymer-based controlled release devices
SE512663C2 (sv) 1997-10-23 2000-04-17 Biogram Ab Inkapslingsförfarande för aktiv substans i en bionedbrytbar polymer
AU765378B2 (en) 1998-02-19 2003-09-18 President And Fellows Of Harvard College Monovalent, multivalent, and multimeric MHC binding domain fusion proteins and conjugates, and uses therefor
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
DE19819846B4 (de) 1998-05-05 2016-11-24 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Multivalente Antikörper-Konstrukte
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
EP1089712B1 (en) 1998-06-24 2003-05-02 Advanced Inhalation Research, Inc. Large porous particles emitted from an inhaler
ATE255420T1 (de) 1998-09-25 2003-12-15 Horst Lindhofer Verwendung von tumorzellen zeitversetzt in kombination mit intakten antikörpern zur immunisierung
WO2000018806A1 (de) 1998-09-25 2000-04-06 Horst Lindhofer Bispezifische und trispezifische antikörper, die spezifisch mit induzierbaren oberflächenantigenen als operationelle zielstrukturen reagieren
US20030009013A1 (en) 1998-12-30 2003-01-09 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
MX353234B (es) 1999-01-15 2018-01-08 Genentech Inc Variantes de polipeptidos con función efectora alterada.
AU5741001A (en) * 2000-04-28 2001-11-12 Ctl Immunotherapies Corp Epitope synchronization in antigen presenting cells
CA2410551A1 (en) 2000-06-30 2002-01-10 Vlaams Interuniversitair Instituut Voor Biotechnologie Vzw (Vib) Heterodimeric fusion proteins
AU2001293735B2 (en) 2000-08-14 2006-05-25 N.V. Organon Use of antibodies against specific MHC-peptide complexes
DE10043437A1 (de) 2000-09-04 2002-03-28 Horst Lindhofer Verwendung von trifunktionellen bispezifischen und trispezifischen Antikörpern zur Behandlung von malignem Aszites
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
JP3986439B2 (ja) 2001-02-07 2007-10-03 中外製薬株式会社 造血器腫瘍の治療剤
EP1455820A2 (en) 2001-03-09 2004-09-15 William Herman Targeted ligands
CN1294148C (zh) 2001-04-11 2007-01-10 中国科学院遗传与发育生物学研究所 环状单链三特异抗体
ITRM20010408A1 (it) 2001-07-10 2003-01-10 Univ Napoli Federico Ii Mini-anticorpo umano citotossico per cellule tumorali che esprimono il recettore erbb2.
US6833441B2 (en) 2001-08-01 2004-12-21 Abmaxis, Inc. Compositions and methods for generating chimeric heteromultimers
DE60124912T2 (de) 2001-09-14 2007-06-14 Affimed Therapeutics Ag Multimerische, einzelkettige, Tandem-Fv-Antikörper
WO2003024191A2 (en) 2001-09-21 2003-03-27 Raven Biotechnologies, Inc. Antibodies that bind to cancer-associated antigen cytokeratin 8 and methods of use thereof
JP4347694B2 (ja) 2001-10-16 2009-10-21 レイベン バイオテクノロジーズ，インコーポレイティド 癌関連抗原ｃｄ４６に結合する抗体およびその使用方法
CA2463879C (en) 2001-10-25 2012-12-04 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
GB0126378D0 (en) 2001-11-02 2002-01-02 Oxford Biomedica Ltd Antigen
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
CN102659946A (zh) 2002-03-13 2012-09-12 拜奥根Idec马萨诸塞公司 抗αvβ6抗体
EP1492870A4 (en) 2002-04-12 2005-08-03 Raven Biotechnologies Inc ANTIBODIES BINDING TO INTEGRIN-ALPHA-V-BETA-6 AND METHOD OF USE THEREOF
WO2003093443A2 (en) 2002-05-03 2003-11-13 Raven Biotechnologies, Inc. Alcam and alcam modulators
AU2003243228B2 (en) 2002-05-10 2009-03-26 Medimmune, Llc EphA2 monoclonal antibodies and methods of use thereof
AU2003232456B2 (en) 2002-05-30 2009-06-04 Macrogenics, Inc. CD16A binding proteins and use for the treatment of immune disorders
AU2003295474B2 (en) 2002-11-13 2009-07-30 Macrogenics West, Inc. Antigen PIPA and antibodies that bind thereto
US7960512B2 (en) 2003-01-09 2011-06-14 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
US7355008B2 (en) 2003-01-09 2008-04-08 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
JP4621674B2 (ja) 2003-09-18 2011-01-26 レイベン バイオテクノロジーズ，インコーポレイティド Ｋｉｄ３およびｋｉｄ３に結合するｋｉｄ３抗体
SI1691833T1 (sl) 2003-11-28 2010-06-30 Micromet Ag Zmes s polipeptidi
US7235641B2 (en) 2003-12-22 2007-06-26 Micromet Ag Bispecific antibodies
CA2550551C (en) 2004-01-16 2013-10-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Fusion polypeptides capable of activating receptors
CN100376599C (zh) * 2004-04-01 2008-03-26 北京安波特基因工程技术有限公司 基因工程重组抗cea抗cd3抗cd28线性单链三特异抗体
US7378504B2 (en) 2004-06-03 2008-05-27 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to Fc gamma receptor I (CD64)
EP1765868B1 (en) 2004-06-07 2016-04-20 MacroGenics, Inc. Transferrin receptor antibodies
DE602005015868D1 (de) 2004-08-18 2009-09-17 Vib Vzw Modulation der anzahl von pflanzenzellen
WO2006031653A2 (en) 2004-09-10 2006-03-23 Wyeth Humanized anti-5t4 antibodies and anti-5t4 antibody / calicheamicin conjugates
EP1794288A1 (en) 2004-09-13 2007-06-13 VIB vzw The modulation of phagocytosis in neurons
EP1810035A4 (en) 2004-11-10 2010-03-17 Macrogenics Inc GENERATION OF FC ANTIBODY REGIONS FOR EFFECTOR FUNCTION
BG65954B1 (bg) 2005-01-05 2010-07-30 Чавдар ВАСИЛЕВ Средство за селективно подтискане активността на патологични автореактивни в-клетки
CA2593786A1 (en) 2005-01-12 2006-07-20 Raven Biotechnologies, Inc. Kid31 and antibodies that bind thereto
CA2596115A1 (en) 2005-01-31 2006-08-10 Raven Biotechnologies, Inc. Luca2 and antibodies that bind thereto
CA2596273C (en) 2005-02-02 2017-11-14 Raven Biotechnologies, Inc. Adam-9 modulators
WO2006084078A2 (en) 2005-02-02 2006-08-10 Raven Biotechnologies, Inc. Jam-3 and antibodies that bind thereto
WO2006084092A2 (en) 2005-02-03 2006-08-10 Raven Biotechnologies, Inc. Antibodies to oncostatin m receptor
AU2006210460B2 (en) 2005-02-04 2012-04-05 Macrogenics West, Inc. Antibodies that bind to EphA2 and methods of use thereof
AU2006232310B9 (en) 2005-04-06 2011-07-21 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Improved stably tethered structures of defined compositions with multiple functions or binding specificities
CN101484182B (zh) 2005-04-06 2014-06-11 Ibc药品公司 由同二聚体、同四聚体或二聚体的二聚体组成的稳定连接复合体的生产方法及用途
US9284375B2 (en) * 2005-04-15 2016-03-15 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
ES2707152T3 (es) 2005-04-15 2019-04-02 Macrogenics Inc Diacuerpos covalentes y usos de los mismos
US9963510B2 (en) 2005-04-15 2018-05-08 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
WO2006133145A2 (en) * 2005-06-06 2006-12-14 Caprion Pharmaceuticals, Inc. Tat-007 and methods of assessing and treating cancer
CN102875681A (zh) 2005-07-08 2013-01-16 拜奥根Idec马萨诸塞公司 抗-αvβ6抗体及其用途
PL1919503T3 (pl) 2005-08-10 2015-04-30 Macrogenics Inc Identyfikacja i inżynieria przeciwciał ze zmiennymi regionami FC oraz sposoby ich stosowania
NZ612578A (en) 2005-08-19 2014-11-28 Abbvie Inc Dual variable domain immunoglobin and uses thereof
JP2012228248A (ja) * 2005-08-19 2012-11-22 Abbott Lab 二重可変ドメイン免疫グロブリン及びその使用
US7612181B2 (en) 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
CA2607056C (en) 2005-10-19 2015-11-24 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for generating bioactive assemblies of increased complexity and uses
EP1959993B1 (en) 2005-12-16 2014-11-19 IBC Pharmaceuticals, Inc. Multivalent immunoglobulin-based bioactive assemblies
MX2008010561A (es) * 2006-02-15 2009-03-02 Imclone Systems Inc Anticuerpos funcionales.
EP1820513A1 (en) * 2006-02-15 2007-08-22 Trion Pharma Gmbh Destruction of tumor cells expressing low to medium levels of tumor associated target antigens by trifunctional bispecific antibodies
SG170110A1 (en) 2006-03-10 2011-04-29 Macrogenics Inc Identification and engineering of antibodies with variant heavy chains and methods of using same
ES2712942T3 (es) 2006-03-10 2019-05-16 Wyeth Llc Anticuerpos anti-5T4 y usos de los mismos
MX363905B (es) 2006-06-12 2019-04-08 Aptevo Res & Development Llc Proteinas de union multivalentes monocatenarias con funcion efectora.
AT503889B1 (de) 2006-07-05 2011-12-15 Star Biotechnologische Forschungs Und Entwicklungsges M B H F Multivalente immunglobuline
AT503902B1 (de) 2006-07-05 2008-06-15 F Star Biotech Forsch & Entw Verfahren zur manipulation von immunglobulinen
WO2008027236A2 (en) 2006-08-30 2008-03-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
AU2007299843B2 (en) 2006-09-18 2012-03-08 Xencor, Inc Optimized antibodies that target HM1.24
EP2094730A4 (en) 2006-12-07 2010-08-04 Mayo Foundation METHOD AND MATERIALS ASSOCIATED WITH ANTI-AMYLOID ANTIBODIES
WO2008140603A2 (en) 2006-12-08 2008-11-20 Macrogenics, Inc. METHODS FOR THE TREATMENT OF DISEASE USING IMMUNOGLOBULINS HAVING FC REGIONS WITH ALTERED AFFINITIES FOR FCγR ACTIVATING AND FCγR INHIBITING
EP2666787B1 (en) 2007-05-31 2022-02-09 Genmab A/S STABLE IgG4 ANTIBODIES
JP2010190572A (ja) 2007-06-01 2010-09-02 Sapporo Medical Univ ＩＬ１３Ｒａ２に対する抗体およびこれを含む診断・治療薬
PL2158221T3 (pl) 2007-06-21 2019-02-28 Macrogenics, Inc. Kowalencyjne diaciała i ich zastosowania
EP2514762B1 (en) * 2007-07-13 2015-04-08 The Johns Hopkins University B7-DC variants
WO2009018386A1 (en) 2007-07-31 2009-02-05 Medimmune, Llc Multispecific epitope binding proteins and uses thereof
ES2719728T3 (es) 2007-09-04 2019-07-12 Compugen Ltd Polipéptidos y polinucleótidos, y usos de los mismos como una diana farmacológica para producir fármacos y agentes biológicos
AU2008339576B2 (en) 2007-12-21 2014-05-22 Medimmune Limited Binding members for interleukin-4 receptor alpha (IL-4Ralpha)
EP2113255A1 (en) 2008-05-02 2009-11-04 f-star Biotechnologische Forschungs- und Entwicklungsges.m.b.H. Cytotoxic immunoglobulin
AU2009288354A1 (en) 2008-08-26 2010-03-11 Macrogenics Inc. T-cell receptor antibodies and methods of use thereof
WO2010028796A1 (en) 2008-09-10 2010-03-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Trispecific hexavalent antibodies
WO2010028795A1 (en) 2008-09-10 2010-03-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Multivalent antibodies
WO2010028797A1 (en) 2008-09-10 2010-03-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Multivalent antibodies
AU2009335798B2 (en) 2008-12-19 2014-11-27 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
AR075896A1 (es) 2009-03-20 2011-05-04 Genentech Inc Anticuerpos anti-her (factor de crecimiento epidermico)
EP2241576A1 (en) * 2009-04-17 2010-10-20 Trion Pharma Gmbh Use of trifunctional bispecific antibodies for the treatment of tumors associated with CD133+/EpCAM+ cancer stem cells
US9316646B2 (en) 2009-04-23 2016-04-19 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Anti-human ROR1 antibodies
EP2975051B1 (en) 2009-06-26 2021-04-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Readily isolated bispecific antibodies with native immunoglobulin format
US8277919B2 (en) 2009-07-23 2012-10-02 VMO Systems, Inc. Reflective coating for an optical disc
IN2012DN01663A (zh) 2009-09-16 2015-06-05 Immunomedics Inc
US20110070227A1 (en) 2009-09-18 2011-03-24 Anna-Marie Novotney-Barry Treatment of Autoimmune and Inflammatory Diseases
UY32914A (es) 2009-10-02 2011-04-29 Sanofi Aventis Anticuerpos que se usan específicamente al receptor epha2
US20120294874A1 (en) 2009-11-19 2012-11-22 Paul Anthony Macary Method for Producing T Cell Receptor-Like Monoclonal Antibodies and Uses Thereof
GB201000467D0 (en) 2010-01-12 2010-02-24 Ucb Pharma Sa Antibodies
US20110206672A1 (en) 2010-02-25 2011-08-25 Melvyn Little Antigen-Binding Molecule And Uses Thereof
LT2361936T (lt) 2010-02-25 2016-09-12 Affimed Gmbh Antigeną rišanti molekulė ir jos panaudojimas
LT2542256T (lt) 2010-03-04 2019-10-25 Macrogenics Inc Su b7-h3 reaguojantys antikūnai, jų imunologiškai aktyvūs fragmentai ir jų naudojimas
BR112012027001A2 (pt) 2010-04-23 2016-07-19 Genentech Inc produção de proteínas heteromultiméricas
US20130189268A1 (en) 2010-06-22 2013-07-25 Precision Biologics, Inc. Colon and pancreas cancer specific antigens and antibodies
EP2407487A1 (en) * 2010-07-14 2012-01-18 F-Star Biotechnologische Forschungs - und Entwicklungsges. M.B.H. Multispecific modular antibody
US20130115215A1 (en) 2010-07-14 2013-05-09 Hongxing Zhou Domain insertion immunoglobulin
US9758586B2 (en) 2010-12-01 2017-09-12 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Chimeric rabbit/human ROR1 antibodies
GB201020995D0 (en) * 2010-12-10 2011-01-26 Bioinvent Int Ab Biological materials and uses thereof
UY33826A (es) 2010-12-22 2012-07-31 Abbott Lab Proteínas de unión con dominios trivariables y sus usos
US8587518B2 (en) * 2010-12-23 2013-11-19 Tektronix, Inc. Disparity cursors for measurement of 3D images
JP5925875B2 (ja) 2011-04-01 2016-05-25 ワイス・エルエルシー 抗体−薬剤コンジュゲート
ES2703780T3 (es) 2011-05-17 2019-03-12 Trion Res Gmbh Preparación de una vacuna que contiene anticuerpos trifuncionales con propiedades potenciadoras de la inmunogenicidad del antígeno
MY173899A (en) * 2011-05-21 2020-02-26 Macrogenics Inc Cd3-binding molecules capable of binding to human and non-human cd3
JP6145088B2 (ja) 2011-05-21 2017-06-07 マクロジェニクス，インコーポレーテッド 脱免疫化血清結合ドメイン及び血清半減期を延長するためのその使用
CN103857699B (zh) * 2011-05-24 2016-08-31 泽恩格尼亚股份有限公司 多价和单价多特异性复合物及其用途
WO2012162583A1 (en) 2011-05-26 2012-11-29 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Design and construction of novel multivalent antibodies
WO2012167067A1 (en) 2011-06-03 2012-12-06 Kraft Foods Global Brands Llc Snacks from cheese
WO2013003652A1 (en) 2011-06-28 2013-01-03 Sea Lane Biotechnologies, Llc Multispecific stacked variable domain binding proteins
EP2729488A4 (en) 2011-07-06 2015-01-14 Medimmune Llc PROCESS FOR PREPARING MULTIMANT POLYPEPTIDES
UA117901C2 (uk) * 2011-07-06 2018-10-25 Ґенмаб Б.В. Спосіб посилення ефекторної функції вихідного поліпептиду, його варіанти та їх застосування
AU2011373925B2 (en) 2011-07-22 2016-04-28 Affimed Therapeutics Ag Multivalent antigen-binding Fv molecule
EP2758438A1 (en) 2011-09-23 2014-07-30 Amgen Research (Munich) GmbH Bispecific binding molecules for 5t4 and cd3
WO2013070565A1 (en) 2011-11-07 2013-05-16 Medimmune, Llc Multispecific and multivalent binding proteins and uses thereof
WO2013068874A1 (en) 2011-11-11 2013-05-16 Pfizer Inc. Antibody-drug conjugates
AU2013216943B2 (en) 2012-02-10 2018-04-19 Research Corporation Technologies, Inc. Fusion proteins comprising immunoglobulin constant domain-derived scaffolds
WO2013163427A1 (en) 2012-04-25 2013-10-31 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Antibodies to treat hiv-1 infection
AU2013285355A1 (en) * 2012-07-06 2015-01-29 Genmab B.V. Dimeric protein with triple mutations
US20150203591A1 (en) 2012-08-02 2015-07-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mutivalent antigen-binding proteins
WO2014072888A1 (en) 2012-11-07 2014-05-15 Pfizer Inc. Anti-il-13 receptor alpha 2 antibodies and antibody-drug conjugates
WO2014116846A2 (en) 2013-01-23 2014-07-31 Abbvie, Inc. Methods and compositions for modulating an immune response
EP2839842A1 (en) * 2013-08-23 2015-02-25 MacroGenics, Inc. Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding CD123 and CD3 and uses thereof
EP2840091A1 (en) 2013-08-23 2015-02-25 MacroGenics, Inc. Bi-specific diabodies that are capable of binding gpA33 and CD3 and uses thereof
EP2930188A1 (en) 2014-04-13 2015-10-14 Affimed Therapeutics AG Trifunctional antigen-binding molecule
AP2016009586A0 (en) * 2014-05-29 2016-11-30 Macrogenics Inc Tri-specific binding molecules and methods of use thereof
TWI688572B (zh) * 2015-01-26 2020-03-21 美商宏觀基因股份有限公司 包含dr5-結合結構域的多價分子
TWI773646B (zh) * 2015-06-08 2022-08-11 美商宏觀基因股份有限公司 結合lag-3的分子和其使用方法
GEAP202215554A (en) * 2015-07-30 2022-06-10 Macrogenics Inc Pd-1-binding molecules and methods of use thereof
CN107921130A (zh) * 2015-08-17 2018-04-17 宏观基因有限公司 能够结合b7‑h3和cd3的双特异性单价双抗体及其用途
MX2019009967A (es) * 2017-02-24 2019-12-02 Macrogenics Inc Moleculas de union biespecificas que son capaces de unirse a cd137 y a antigenos tumorales, y usos de las mismas.
RU2020122822A (ru) 2017-12-12 2022-01-13 Макродженикс, Инк. Биспецифичные связывающие cd16 молекулы и их применение при лечении заболеваний
EP3752196A4 (en) 2018-02-15 2022-03-23 MacroGenics, Inc. CD3-BINDING DOMAIN VARIANTS AND THEIR USE IN COMBINATION THERAPIES FOR THE TREATMENT OF DISEASES
JP2021524451A (ja) 2018-05-18 2021-09-13 マクロジェニクス，インコーポレーテッド 最適化済みｇｐ４１結合分子及びその使用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101802010A (zh) * 2007-07-10 2010-08-11 费里德瑞奇亚历山大大学 重组、单链、三价三特异性或双特异性抗体衍生物
CN102448985A (zh) * 2009-05-27 2012-05-09 霍夫曼-拉罗奇有限公司 三或四特异性抗体
CN103154025A (zh) * 2010-08-02 2013-06-12 宏观基因有限公司 共价双抗体及其用途
WO2013174873A1 (en) * 2012-05-24 2013-11-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Multispecific antibodies

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JOHNSON S., ET AL.: "Effector Cell Recruitment with Novel Fv-based Dual-affinity Re-targeting Protein Leads to Potent Tumor Cytolysis and in Vivo B-cell Depletion", 《JOURNAL OF MOLECULAR BIOLOGY》 *

Cited By (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107250161A (zh) * 2015-01-26 2017-10-13 宏观基因有限公司 包含dr5‑结合结构域的多价分子
CN108264561A (zh) * 2016-12-30 2018-07-10 上海近岸生物科技有限公司 一种结合cd19、cd3和t细胞负共刺激分子的三功能分子及其应用
CN109912714A (zh) * 2017-12-12 2019-06-21 深圳宾德生物技术有限公司 抗cd317单克隆抗体6h2h5及其应用
CN111465618A (zh) * 2017-12-12 2020-07-28 宏观基因有限公司 双特异性cd16-结合分子及其在疾病治疗中的用途
CN109912714B (zh) * 2017-12-12 2021-02-19 深圳宾德生物技术有限公司 抗cd317单克隆抗体6h2h5及其应用
CN111712261A (zh) * 2018-02-08 2020-09-25 豪夫迈·罗氏有限公司 双特异性抗原结合分子和使用方法
CN110129369A (zh) * 2018-02-09 2019-08-16 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心 一种嵌合抗原受体基因工程载体、免疫细胞及其应用
CN110129369B (zh) * 2018-02-09 2023-10-13 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心 一种嵌合抗原受体基因工程载体、免疫细胞及其应用
US11780916B2 (en) 2018-03-20 2023-10-10 Gmax Biopharm Llc GIPR antibody and GLP-1 fusion protein thereof, and pharmaceutical composition and application thereof
WO2019179424A1 (zh) * 2018-03-20 2019-09-26 鸿运华宁（杭州）生物医药有限公司 Gipr抗体及其与glp-1的融合蛋白质，以及其药物组合物和应用
CN112074540A (zh) * 2018-04-10 2020-12-11 Y生物股份有限公司 细胞接合的结合分子
CN112074540B (zh) * 2018-04-10 2024-04-16 Y生物股份有限公司 细胞接合的结合分子
WO2020253393A1 (zh) * 2019-06-20 2020-12-24 成都恩沐生物科技有限公司 共价多特异性抗体
US12134661B1 (en) 2019-06-20 2024-11-05 Chimagen Biosciences, Ltd. Covalent multi-specific antibody
CN115427108A (zh) * 2020-01-10 2022-12-02 达因疗法公司 肌肉靶向复合物及其用于治疗强直性肌营养不良的用途
CN115611982A (zh) * 2021-07-14 2023-01-17 浙江大学 一种抗人MICA/Bα3区的单克隆抗体及其应用
CN115611982B (zh) * 2021-07-14 2024-05-10 浙江大学 一种抗人MICA/Bα3区的单克隆抗体及其应用
WO2023011273A1 (zh) * 2021-08-02 2023-02-09 盛禾(中国)生物制药有限公司 一种多特异性抗原结合蛋白及其应用
WO2023020315A1 (zh) * 2021-08-19 2023-02-23 南京吉盛澳玛生物医药有限公司 靶向pd-l1/pd-1的抗体及其应用

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