MXPA06002155A - Plantas de arroz que tienen una tolerancia incrementada a los herbicidas de imidazolinona. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se enfoca a plantas que tienen una tolerancia incrementada a un herbicida de imidazolinona. Mas particularmente, la presente invencion incluye plantas de arroz que contienen al menos una variante de acido nucleico de AHAS como, por ejemplo, las lineas 1, 4 o 5 de IMINTA con tolerancia a la imidazolinona que comprenden una alanina en sustitucion de treonina en comparacion con AHAS de tipo silvestre. La presente invencion incluye tambien semillas producidas por estas plantas de arroz y metodo para controlar la maleza en la cercania de estas plantas de arroz.

Description

del medio tales como la preparación de la la nivelación de la diques y profundidad del la rotación de la las semillas sistemas de plantas apropiados y las fechas de Aunque estas prácticas de cultivo pueden ayudar a reducir la acumulación de semillas de malezas y el desarrollo de malezas tolerantes a los ellas imponen ciertas restricciones e incrementan el costo de A pesar de las muchas recomendaciones para una mejores prácticas de los finqueros todavía confían en ei uso de herbicidas como la mejor herramienta para el control de El usos y abuso de algunos de estos químicos ha resultado en el desarrollo de malezas tolerantes como la grama de agua crus resistente al Propanil y Butachlor En estos es conveniente tener otros herbicidas con diferentes modos de actuar y con la habilidad para controlar la mayoría de estas especies de así que su aplicación puede ser alternada con los herbicidas comúnmente La sintasa de acetohidroxiacido EC sintasa de acetolactato codificada por el ácido nucleico de es la primera enzima que cataliza la síntesis bioquímica de la cadena ramificada de amino ácidos leucina e Singh Biosíntesis de leucina e isoleucina Singh Plant Amino Marcel Dekker New New Pg 227 AHAS es el sitio de acción de cuatro familias de herbicidas diversas que incluye las sulfonilureas RA and Falco Trends las imidazolinonas et Plant las triazolopirimidinas en Whitaker Sonnet PE Biocatalysis in agricultural ACS Sumposium American Chemical pg 277 y las pirimidiloxibenzoatos et Plant 239 Los herbicidas de Imidazolinona y sulfonilurea son ampliamente empleados en la agricultura moderna debido a su efectividad con aplicaciones muy bajas y relativa no toxicidad a los Al Inhibir la actividad de estas familias de herbicidas previenen el crecimiento desarrollo de plantas susceptibles incluyendo muchas especies de Algunos ejemplos de herbicidas de imidazolinona disponibles comercialmente son PURSUIT SCEPTER y ARSENAL Ejemplos de herbicidas de sulfonilurea son el metsulfuron sulfometuron clorimuron tifesulfuron tribenuron bensulfuron etametsulfuron triflusulfuron primisulfuron pirazosulfuron etil y Debido a su alta efectividad y baja los herbicidas de imidazolinona son favorecidos para su aplicación por rociado sobre áreas amplias de La posibilidad de rociar el herbicida sobre un área amplia de vegetación disminuye el costo asociado con el establecimiento de la plantación y su y disminuye la necesidad de preparación del anterior al uso de esos El rociado sobre las especies tolerante objetivo también conduce a poder alcanzar un máximo potencial de rendimiento de las especies objetivo debido a la ausencia de especies Sin la posibilidad de usar esas técnicas de rociado depende de la presencia de especies tolerantes a la imidazolinona en la vegetación deseada en las áreas de Entre los cultivos agrícolas algunas especies tales como la soya son naturalmente resistentes a los herbicidas de imidazolinona debido a su para metabolizar rápidamente los compuestos del herbicidas Shaner y Weed Otros cultivos tales como el maíz et Plant y arroz et Crop Safeners for Academic press New 195 son susceptibles a los herbicidas de La sensitividad diferencial a los herbicidas de imidazolinona es dependiente de la naturaleza química del herbicida particular y el metabolismo diferencial compuesto de una forma tóxica a no tóxica en cada planta et Plan Brown et Otras diferencias fisiológicas de las plantas tales como absorción y translocación también juegan un papel importante en la sensitividad and Weed 471 Variedades de cultivos resistentes a las sulfonilureas y trizolopirimidinas han sido exitosamente producidos usando polen y mutagánesis de callos en Zea Brassia Glycine y Nicotiana tabacum et Crop 1403 Swanson et Newhouse et 1991 Sathasivan et 1991 Plan Mourand et J Heredity En todos los un gen nuclear parcialmente confirió la Cuatro plantas de trigo resistentes a la imidazolinona fueron también previamente aisladas siguiendo mutagénesis de semillas de Triticum aestivum Cv Fidel et Plan Estudios de herencia confirmaron que un gen nuclear parcialmente confirió la Basado en estudios los autores concluyeron que las mutaciones en las cuatro líneas identificadas fueron localizadas en el mismo Uno de los genes resistentes de la variedad Fidel fue designado et Plan Modelación basada en computador de las conformaciones tridimensionales del complejo inhibidor de AHAS predice numerosos amino ácidos en el bolsillo fijador inhibidor propuesto como sitios donde las mutaciones inducidas conferirían la resistencia selectiva a las imidazolinonas et 359 Plantas de tabaco producidas con algunas de estas mutaciones racionalmente diseñadas en los sitios de fijación propuestos de la enzima de AHAS han efectivamente exhibido una resistencia especifica a un clase singular de herbicidas ey 359 La resistencia de las a los herbicidas de imidazolinona ha sido también reportada en numerosas Patentes US No y describen en general el uso de una ácido nucleico de AHAS alterado para obtener resistencia a los herbicidas en y especialmente descubren ciertas líneas de maíz resistentes a la La Patente US No descubre plantas que exhiben resistencia a los herbicidas que poseen mutaciones en menos un amino ácido en una o mas regiones Las mutaciones descritas allí incorporan o resistencia cruzada para imidazolínona y sulfonilureas o resistencia específica para pero resistencia específica para imidazolínona no es la Patente US No y la Patente US No analizan un gen aislado que tiene una sustitución singular de amino ácido en una secuencia de amino ácido de de monocot de tipo salvaje que resulta en una resistencia específica a la Plantas de arroz trasgéníco y resistente a los herbicidas han sido también Un arroz muíante resistente al herbicida derivado por presión selectiva en tejido calloso cultivado fue donde la resistencia fue atribuida a una enzima de AHAS mutada et mutant Resistant to the herbicide Bensulfuron Methyl by in vitro Japan 1992 267 variedades de plantas de arroz resistentes a los herbicidas han sido descritas en las patentes y aplicaciones de incluyendo WO WO y las Patentes US Patente US No y La patente US No descubre una línea de plantas de arroz que tienen una resistencia a los herbicidas metabólicamente basada que interfiere con la enzima de la planta sintasa es la resistencia al herbicida de estas plantas de arroz no es debida a una enzima de AHAS La WO descubre una línea de plantas de arroz que tienen una variante de enzima de AHAS que es resistente a los herbicidas que interfiere con la enzima de planta de sintasa Esta línea de plantas de arroz fue desarrollada exponiendo las semillas de arroz al mutágeno de ester etil de ácido y separando millones de progenies resistentes al Lo que es requerido en el arte es la identificación de más líneas de arroz que incorporen genes resistentes a la También son requeridas en el arte plantas de arroz que tengan una mayor tolerancia a los herbicidas tales como imidazolinona y que contengan al menos un ácido nucleico de AHAS Son también requeridos métodos para controlar el crecimiento de las malezas alrededor de las plantas de Estos compuestos y métodos permitirán el uso de técnicas de sobre rociado para la aplicación de herbicidas a áreas de Compendio de la Invención La presente invención proporciona plantas de arroz que tienen variantes de ácidos nucleicos de las cuales tienen una mayor tolerancia a los herbicidas de imidazolinona en comparación con una variedad de la En una la planta de arroz incluye una variante de ácido nucleico de En otra la variante de ácido nucleico de AHAS codifica un variante de proteína de AHAS que incluye una sustitución de alanina a treonina en comparación a una proteína de AHAS de tipo También son proporcionadas partes de planta y semillas de la planta derivadas de plantas de arroz descritas La variante de ácido nucleico de AHAS de la presente invención puede incluir un secuencia polinucleótida seleccionada de un grupo consistente de un polinucleótido como se define en SEQ ID un polinucleótido como se define en SEQ ID un polinucleótido como se define en SEQ ID un polinucleótido como se define en SEQ ID una secuencia polinucleótida que codifica un polipéptido como se define en SEQ ID una secuencia polinucleótida que codifica un polipéptido como se define en SEQ ID una secuencia polinucleótida que codifica un polipéptido como se define en SEQ ID un polinucleótido que comprende al menos 60 nucleótidos consecutivos de cualquiera de los polinucleótidos anteriormente mencionados y un polinucleótidos complementario a cualquiera de los polinucleótidos anteriormente donde la variante de ácido nucleico de AHAS codifica un polipéptido de AHAS que confiere una mayor tolerancia a un herbicida de imidazolinona en comparación a un polipéptido de AHAS tipo Las plantas de la presente pueden ser trasgénicas o no trasgénicas En una las plantas de la presente invención son no Ejemplos de plantas no trasgénicas de arroz que tienen una mayor tolerancia a los herbicidas de imidazolinona incluyen plantas de arroz que tienen número de designación de depósito de patente NCIMB NCIMB o NICMB o un o un derivado genéticamente intervenido de una planta con NCIMB número de designación de depósito de patente NCIMB o NICMB o cualquier progenie de la planta con número de designación de depósito de patente NCIMB NCIMB o NICMB o una planta que es progenie de cualquiera de estas En adición a las composiciones de la presente muchos métodos son Descritos aquí hay métodos de modificar la tolerancia de las plantas de arroz a los herbicidas de imidazolinona que incluyen la modificación la expresión de un ácido nucleico de AHAS en la También se describen métodos para producir plantas trasgénicas que tienen un mayor tolerancia a los herbicidas de imidazolinona que transformar una célula de la planta con un vector de expresión que comprende uno o mas variedades de ácido nucleico de AHAS que codifican una variedad de proteína de AHAS y generar la planta a partir de la célula de la La invención incluye además un método para controlar malezas en la vecindad de la planta de que incluye la aplicación de un herbicida de imidazolinona a las malezas y a la planta de donde la planta de arroz tienen un mayor tolerancia al herbicida de imidazolinona en comparación una variedad tipo salvaje de arroz y donde la planta incluye uno o mas ácidos nucleicos de AHAS que codifican una variante de proteína de AHAS que incluye una sustitución de alanina a treonina al compararse con la proteína de AHAS del tipo BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS Las Figuras 1 muestran la secuencia de cADN parcial del ácido nucleico de IMINTA 1 AHAS ID y la secuencia de amino ácido deducida de ella ID Las Figuras 1 muestran la secuencia de cADN parcial del ácido nucleico de IMINTA 4 AHAS ID y la secuencia de amino ácido deducida de ella ID Las Figuras 1 muestran la secuencia de cADN parcial del ácido nucleico de IMINTA 5 AHAS ID y la secuencia de amino ácido deducida de ella ID Las Figuras 1 muestran la secuencia de cADN parcial del ácido nucleico del tipo salvaje 417 AHAS ID y la secuencia de amino ácido deducida de ella ID La Figura 2 muestra la alineamiento de la secuencia de cADN de un gen amplificado de AHAS de ADN genómico de un línea IMINTA 1 tolerante a la imidazolinona ID el gen de AHAS amplificado de ADN genómico de la línea IMINTA 4 tolerante a la imidazolinona ID el gen de AHAS amplificado de ADN genómico de la línea IMINTA 5 tolerante a la imidazolinona ID el gen de AHAS amplificado de ADN genómico de la línea de arroz IRGA 417 ID El polimorfismo nucleótido que confiere la tolerancia a la imidazolinona a la líneas IMINTA 1 y 5 es indicado en La Figura 3 muestra el alineamiento de amino ácidos de la secuencia de amino ácido deducida de la proteína codificada por el gen de AHAS de la línea IMINTA 1 tolerante a la imidazolinona ID la secuencia de amino ácido deducida de la proteína codificada por el gen de AHAS de la línea IMINTA 4 tolerante a la ID la secuencia de amino ácido deducida de la proteína codificada por el gen de AHAS de la línea I INTA 5 tolerante a la imidazolinona ID la secuencia de amino ácido deducida de la proteína codificada por el gen de AHAS de la línea de arroz salvaje IRGA ID y un secuencia de consenso de amino ácido de AHAS de arroz ID polimorfismo que confiere la tolerancia a la imidazolinona a las líneas IMINTA 1 y 5 es indicado en La Figura 4 muestra un ejemplo de cADN de longitud completa de un variante de ácido nucleico de AHAS ID 11 y la Figura 4 B muestra un ejemplo de la secuencia de amino ácidos deducida de la proteína codificada por el gen de AHAS mostrado en la Figura 4 A ID donde el polipéptido confiere tolerancia a una imidazolinona en comparación con el polipéptido de AHAS del tipo La Figura 5 es una tabla que muestra el diseño de bloque aleatorio para el ensayo de campo de la línea IMINTA 1 y la variedad IRGA La Figura 6 es una tabla que muestra la respuesta de las líneas IRGA 417 e IMINTA 1 al tratamiento con La Figura 7 es una tabla que muestra el rendimiento de grano a un 14 de humedad para las líneas IRGA 417 e IMINTA 1 después del tratamiento con La Figura 8 es una tabla que muestra al evaluación de los componentes de rendimiento en las líneas IRGA 417 e IMINTA 1 después del tratamiento con Descripción Detallada La presente invención dirigida a plantas de partes de plantas de arroz y células de plantas de arroz que tienen una mayor tolerancia a los herbicidas de La presente invención también incluye las semillas producidas por las plantas de arroz descritas aquí y los métodos para controlar las malezas en vecindades de las plantas de arroz descritas Debe entenderse que como se usa en la especificación y en las o puede significar uno o dependiendo del contexto en el cual es por referencia a puede significar que al menos una célula puede ser Como se usa el término de se refiere a una planta que es un miembro del genero Las plantas de arroz de la presente invención pueden ser miembros del genero pero no limitados y shlechterí e híbridos de Ejemplos de las subespecies de Sativa incluidos dentro de la presente invención son Japónica e Una variedad no limitante de Japónica es y un ejemplo no limitantes de Indica es la variedad El término de busca incorporar plantas de arroz en cualquier etapa de madurez de su así como cualquier tejido u órgano de tomadas o derivadas de cualquiera de tales plantas a menos que se indique claramente de otra manera por el Las partes de planta pero no se limitan a regiones tejido cultivos de protoplastos y La presente invención también incluye semillas producidas por las plantas de arroz de la presente En una las semillas son crías verdaderas de una mayor tolerancia al herbicida de imidazolinona en comparación con las variedades de semillas de planta de arroz del tipo La presente invención describe una planta de arroz que cpmprende al menos una variedad de ácido nucleico de donde la planta de arroz ha aumentado su tolerancia al herbicida de en comparación con la variedad tipo salvaje de la Como se emplea el termino del gen de se refiere a la posición de un gen de AHAS en un y los términos de y ácido nucleico de se refieren a un ácido nucleico que codifica enzima Como se emplea el termino de ácido nucleico de se refiere a un ácido nucleico de AHAS que tiene una secuencia mutada de un ácido nucleico de AHAS del tipo salvaje y que confiere a una planta en la cual esta expresada una mayor tolerancia a la Como se emplea el término de alíele de se refiere a una copia singular de un ácido nucleico de AHAS la presente invención incluye una planta de arroz que comprende una variedad de ácido nucleico de planta que tiene un mayor tolerancia al herbicida de imidazolinona en comparación a una variedad de la planta del tipo salvaje y donde la variedad de ácido nucleico de AHAS codifica una variante de la proteína de AHAS que incluye una mutación de alanina a treonina en comparación a la proteína de AHAS de tipo En una incorporación la mutación de alanina a treonina corresponde a la posición 96 de la secuencia de amino ácido de AHAS como se muestra en el SEQ ID En una incorporación la variante de ácido nucleico de AHAS es seleccionada de un grupo integrado de una secuencia polinucleótido mostrada en SEQ ID 1 una secuencia polinucleótido mostrada en SEQ ID una secuencia polinucleótido mostrada en SEQ ID una secuencia polinucleótido mostrada en SEQ ID 11 un polinucleótido que codifica el polipéptido mostrado en SEQ ID un polinucleótido que codifica el polipéptido mostrado en SEQ ID un polinucleótido que codifica el polipéptido mostrado en SEQ ID y un polinucleótido que polipéptido mostrado en SEQ ID La presente invención incluye partes de plantas de arroz que incluyen una o mas alíeles de donde las plantas de arroz han incrementado su tolerancia al herbicida de imidazolinona en comparación a una variedad de la planta del tipo Las alíeles de AHAS pueden incluir una secuencia nucleotoide seleccionada de un grupo consistente de una secuencia polinucleótido mostrada en SEQ ID 1 una secuencia polinucleótido mostrada en SEQ ID una secuencia polinucleótido mostrada en SEQ ID una secuencia polinucleótido mostrada en SEQ ID 11 un polinucleótido que codifica el polipéptido mostrado en SEQ ID un polinucleótido que codifica el polipéptido mostrado en SEQ ID un polinucleótido que codifica el polipéptido mostrado en SEQ ID y un polinucleótido que codifica el polipéptido mostrado en SEQ ID un polinucleótido que comprende al menos 60 nucleótidos consecutivos de cualquiera de los polinucleótidos anteriormente y un polinucleótido complementario de cualquiera de los polinucleótidos anteriormente En una las plantas de arroz comprenden dos variedades diferentes de ácido nucleido de En otra incorporación la planta de arroz incluye una variante de ácido nucleico de donde ácido nucleico comprende la secuencia polinucleótida de SEQ ID SEQ ID o SEQ ID al menos una de las variedades de ácido nucleico de AHAS comprende una secuencia polinucleótida seleccionada de un grupo consistente de SEQ ID SEQ ID y SEQ ID El herbicida de imidazolinona puede ser seleccionado pero no se limita a PURSUIT CADRE RAPTOR SCEPTER ASSERT ARSENAL un derivado de cualquiera de los herbicidas anteriormente o un mezcla de dos o mas de los herbicidas antes por Mas el herbicida de imidazolinona puede pero no se limita a ácido ácido ácido ácido ácido metilnicotínico y una mezcla de metil y metil El uso de ácido es particularmente Las plantas de arroz descritas aquí pueden ser o plantas de arroz trasgénico o plantas de arroz no Como se emplea aquí el término se refiere a cualquier célula de tejido de o parte de que contiene todas o al menos parte de un polinucleótido En muchos todas o parte del polinucleótido recombinado esta establemente integrado dentro de un cromosoma o un elemento así que es pasado a generaciones Para los propósitos de la el término se refiere a un polinucleótido que ha sido reárreglado o modificado por ingeniería Los ejemplos incluyen cualquier polinucleótido o que están ligados o unidos a secuencias El término no se refiere a alteraciones de polinucleótidos que resultan de eventos que ocurren tales como las mutaciones o de mutagénesis no espontánea seguida por una crianza Las plantas que mutaciones que se derivan de mutagénesis no espontánea y crianza selectiva son referidas aquí como plantas no trasgénicas y son incluidas en la presente Un ejemplo de una planta de arroz no trasgénico que comprende una variedad de ácido nucleico de AHAS es la línea de planta depositada con el NCIMB que tiene un Número NCIMB de Designación de Depósito de Patente NCIMB designado aquí como la línea de arroz AHAS IMINTA La secuencia polinucleótida al gen de AHAS IMINTA 1 es mostrado en SEQ Otro ejemplo cié una planta de arroz no trasgénico que comprende una ácido nucleico de AHAS es la línea de planta depositada con el NCI B que tiene un Número NCIMB de Designación de Depósito de Patente NCIMB designado aquí como la línea de arroz AHAS IMINTA La secuencia polinucleótida parcial que corresponde al gen de AHAS IMINTA 4 es mostrado en SEQ ID Otro ejemplo de una planta de arroz no trasgénico que comprende un ácido nucleico de AHAS es la línea de planta depositada con NCIMB que tiene un Número NCIMB de Designación de Depósito de Patente NCIMB designado aquí como la línea de arroz AHAS IMINTA La secuencia polinucleótida parcial que corresponde al gen de AHAS IMINTA 5 es mostrado en SEQ ID Depósitos separados de cerca de 2500 semillas de las líneas de trigo tolerantes a la imidazolinona fueron hechos en el UK en diciembre 22 de Estos depósitos fueron realizados de acuerdo con los términos y provisiones del Tratado de Budapest en relación con el depósito de Los depósitos fueron hechos por el término de al menos treinta años y al menos cinco años después del mas reciente requerimiento para el suministro de una muestra del depósito es recibido por el Las semillas depositadas fueron de acuerdo a los Números de Designación de Depósito de Patente NCIMB NCIMB y NCIMB La presente invención incluye las plantas de arroz que tienen un Número de Designación de Depósito de Patente NCIMB NCIMB o NCIMB un un recombinado o un derivado genéticamente intervenido de la plañía Número de Designación de Depósito de NCIMB NCIMB o NCIMB cualquier progenie de al planta con Número de Designación de Depósito de Patente NCIMB NCIMB o NCIMB y una planta la progenie de cualquiera de estas En una incorporación la planta de arroz de la presente invención adicionalmente tiene las características de tolerancia a los herbicidas de la planta con Número de Designación de Depósito de Patente NCIMB NCIMB y NCIMB También están incluidos en la presente invención híbridos de las líneas de arroz IMINTA 1 4 y 5 descritas aquí e híbridos de IMINTA 1 4 y 5 con otras planta de Los términos de cultivo y se refieren a un grupo de plantas dentro un definidos por compartir un grupo común de características o rasgos aceptados por expertos en el arte como suficientes para distinguir un de un o variedad de otro cultivo o Con ninguno de los términos se implica que todas las plantas de cualquier variedad sean genéticamente idénticas respecto del gene total o molecular o que cualquier planta dada sea un homozigus en todas las Una variedad es considerado para un rasgo particular cuando el cultivar o variedad es todos los progenies contienen el El término de o se refiere a un grupo de plantas dentro de una variedad definida por el compartir un grupo de características o rasgos aceptados por los expertos en el arte como suficientes para distinguir una línea de crianza o línea de otra línea de crianza o En ninguno de los términos se implica que todas las plantas de una línea de crianza o línea sean genéticamente idénticas al nivel del gene total o molecular o que cualquier planta sea un homozigus en todas las Una línea de crianza o línea es considerada una para un rasgo particular la línea de crianza verdadera es todos los progenies contienen el En la presente el rasgo se deriva de una mutación en un gen de AHAS de la planta de arroz o Debe entenderse que la planta de arroz de la presente invención puede incluir un ácido nucleico de tipo salvaje en adición a una variedad de ácido nucleico de Como se describe en el Ejemplo se contempla que las líneas de arroz IMINTA 1 4 y 5 contengan una mutación en solo un alíele de En la presente invención incluye una planta de arroz que comprende al menos una variedad de ácido nucleico de AHAS en adición a uno o más ácidos nucleicos de AHAS del tipo Adicionalmente a las plantas de la presente invención involucra proteínas de AHAS aisladas y ácidos nucleicos que preferiblemente confieren una mayor tolerancia a los herbicidas de imidazolinona en comparación con las proteínas de AHAS del tipo los ácidos nucleicos de AHAS aislados codifican una proteína que tienen una mutación de alanina a la mutación de alanina a treonina esta localizada en un residuo de amino ácido que corresponde a la posición 96 de la SEQ ED En una ácido nucleico aislado incluye un polinucleótido seleccionado de un grupo consistente de un polinucleótido como se define en SEQ ED un polinucleótido como se define en la SEQ ED un polinucleótido como se define en la SEQ ED un polinucleótido como se define en la SEQ ED 11 un plonucleótido que codifica un polipéptido como se definión en la SEQ ID un plonucleótido que codifica un polipéptido como se define en la SEQ un plonucleótido que codifica un polipéptido como se define en la SEQ ID un plonucleótido que codifica un polipéptido como se define en la SEQ ID un plinucleótoide que contiene al menos 60 nucleótidos consecutivos de cualquiera de los polinucleótidos anteriormente y un polinucleótido complementario de cualquiera de los polinucleótidos anteriormente En la presente el ácido nucleico de AHAS aislado incluye una secuencia polinucleótida de SEQ ID 1 SEQ ID SEQ ID 5 o SEQ ID También como se emplea el término y se refieren a RNA o ADN que es recto o de trenzado doble o simple o un híbrido de término también involucra híbridos de RNA Estos términos también involucran secuencias localizadas en ambos extremos y de la región de codificación y al menos 200 nucleótidos de secuencia por debajo del extremo de la región de codificación del Bases menos tales como hipoxantina y otras pueden ser usadas para dsRNA y emparejamiento con Por polinucleótidos que contienen propina análogos de uridina y citidina han mostrado fijar RNA con gran afinidad y ser potentes inhibidores antisentido de la expresión del Otras tales como modificaciones a la columna o el en el grupo de azúcar ribosa del RNA pueden también ser Los polinucleótidos antisentido y ribozimas pueden consistir enteramente de o pueden contener rinonucleótidos mezclados y Los polinucleótidos de la invención pueden ser producidos por cualquier incluyendo preparación preparación síntesis y transcripción o en Una molécula de ácido nucleico es una que esta sustancialmente separada de otras moléculas de ácido las cuales están presentes en la fuente natural de ácido nucleico secuencias que codifican otros un ácido nucleico esta libre de algunas de las secuencias que naturalmente flanquean el ácido nucleico secuencias localizadas en los extremos y del ácido en su replicón de ocurrencia Por un ácido nucleico clonado es considerado En varias la molécula de ácido nucleico de AHAS aislada puede contener menos de cerca de 5 4 3 2 1 kb o 01 kb de secuencias nucleótidas que naturalmente flanquean la molécula de ácido nucleico en el ADN genómico de la célula de la cual el ácido nucleico es derivado un célula de Un ácido nucleico es también considerado aislado si el ha sido alterado por intervención o colocado en unas posiciones o localizaciones que no son su sitio o si es introducido dentro de una célula o cualquier otro método de de Mas una molécula de ácido nucleico tal como una molécula puede estar libre de alguno de los otros materiales celulares con los cuales esta naturalmente o del medio de cultivo cuando es producida por técnicas de o de los precursores químicos u otros químicos cuando es químicamente Específicamente excluidos de la definición de nucleicos están los cromosomas de ocurrencia natural tales como los esparcidores de las bibliotecas de cromosomas las bibliotecas y las bibliotecas de cADN que existen o como una preparación de ácido nucleico in vitro o como una preparación de célula anfitriona donde la célula anfitriona es o una preparación heterogénea in vitro o plateada como una población heterogénea de colonias También están específicamente excluidas las bibliotecas anteriores donde un ácido nucleico específico constituye menos del de un número de insertos de ácido nucleico en las moléculas Además específicamente excluidas ADN genómico de célula completa y la preparaciones de RNA de célula completa incluyendo las preparaciones de células completas que son mecánicamente cizalladas o digeridas Aun mas excluidas específicamente están las preparaciones de célula completa encontradas o en una preparación in vitro o como una mezcla heterogénea separada por electroforesis donde el ácido nucleico de la invención no ha sido separado mas de los ácidos nucleicos heterólogos en el medio de electroforesis separando mas por escisión una banda individual de una población de banda heterogénea en un gel de agarosa o un secado de Una molécula de ácido nucleico de la presente es un molécula de ácido nucleico que contiene una secuencia nucleótida de SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID 1 o una porción de puede ser aislada usando técnicas de biología molecular estándar y la información de secuencia provista Por un ADN de AHAS de Sativa puede ser aislado de una Sativa usando una porción de la secuencia de SEQ SEQ ID SEQ ID o SEQ ID Mas molécula de ácido nucleico que involucra toda o una porción de SEQ ID SEQ ID SEQ ID o SEQ ID puede ser aislada por reacción en cadena de polimerasa usando primers de oligonucleótidos diseñados con base en esta Por mRNA puede ser aislado de células de la planta por por el procedimiento de extracción de Chirgwin et Biochemistry y cADN puede ser preparado usando transcriptasa reversa por transcriptasa reversa MLV de disponible de o transcriptasa reversa disponible de Seikagaku Petesburg Primers de oligonucleótidos sintéticos para la amplificación de la reacción en cadena de polimerasa pueden ser diseñados basado en la secuencia nucleótida mostrada en SEQ ID SEQ ID SEQ ID o SEQ ID Una molécula de ácido nucleico de la invención puede ser amplificada usando cADN ADN como una plantilla y primers de oligonucleótidos apropiados de acuerdo a las técnicas de amplificación estándar La molécula de ácido nucleico ampliada de esta manera puede ser clonada dentro de un vector apropiado y caracterizada por un análisis de secuencia de oligonucleótidos que corresponden a un secuencia nucleótida de AHAS pueden ser preparados por técnicas estándar por usando un sintetizador de ADN Los ácidos nucleicos de AHAS de la presente invención pueden incluir un secuencia que codifica una proteína de AHAS así como secuencias no traducidas y las moléculas de ácido nucleico de la presente invención pueden incluir solo las regiones codificadoras de un gen de o pueden contener fragmentos genómicos completos aislados de ADN Una región codificadora de estas secuencias es indicada como una Mas la molécula de ácido nucleico de la invención puede incluir una porción de una región de codificación de un gen de por un fragmento puede ser usado como una punta de prueba o Las secuencias nucleótidas determinadas de la clonación de los genes de AHAS de Sativa permiten la generación de puntas de prueba y primers diseñados para ser usados en la identificación clonado de homólogos de AHAS en otra tipo de células y así como homólogos de AHAS de otras plantas de arroz y especies La parte de la región codificadora puede también codificar un fragmento biológicamente activo de una proteína de Como es usado el término biológicamente activa una proteína de AHAS hace referencia a una por un de una proteína de AHAS cuando se produce en una planta incrementa la tolerancia de la planta a los herbicidas de imidazolinona en comparación con la variedad tipo salvaje de la Métodos para cuantificar el incremento de la tolerancia a los herbicidas de imidazolinona son provistos en los ejemplos que se dan mas Porciones biológicamente activas de una proteína de AHAS incluyen péptidos derivados de SEQ ID SEQ ID o SEQ ID o SEQ ID las cuales incluyen menos amino ácidos que una proteína de AHAS de longitud total e imparten una mayor tolerancia del herbicida de imidazolinona una vez se expresan en una porciones activas biológicamente por péptidos que por o mas amino ácidos en incluyen un dominio o motiff con al menos una actividad de una proteína de Mas otras partes biológicamente activas en las cuales otras regiones del polipéptido son pueden preparadas por técnicas de recombinación y evaluadas para una o mas de las actividades descritas las porciones biológicamente activas de una proteína de AHAS incluyen uno o mas dominios conservados seleccionados de un grupo consistente de un Dominio un Dominio un Dominio un Dominio D y un Dominio donde el dominio conservado contiene una La invención también proporciona quimérico de AHAS o polipéptidos Como se emplea un de AHAS o incluye un polipéptido de AHAS operativamente conectado a un polipéptido de no Un de se refiere a un polipéptido que tiene una secuencia amino ácida que no es sustancialmente idéntica a un polipéptido de por un polipéptido que no es una isoenzima de el cual desempeña una función diferente que un polipéptido de Como se emplea aquí con relación aun polipéptido el término pretende indicar que el polipéptido de AHAS y el polipéptido de no AHAS están fusionados entre sí así que ambas secuencias satisfacen la función propuesta atribuida a la secuencia El polipéptido de no AHAS puede ser fusionado a un terminal N o un terminal C de un polipéptido de Por en una el polipéptido fusión es un polipéptido fusión en cual la secuencia de AHAS es fusionada al terminal C de la secuencia Tales polipéptidos de fusión pueden facilitar la purificación de polipéptidos de AHAS En otra el polipéptido de fusión es un polipéptido de AHAS que contiene una secuencia de señal en su terminal En ciertas células anfitrionas células anfitrionas la expresión secreción de un polipéptido de AHAS puede ser incrementada a través del uso de una secuencia de señal Una molécula de ácido nucleico aislada que codifica un polipéptido de AHAS que tiene un cierto porcentaje de identidad de secuencia con un polipéptido de SEQ ID SEQ ID o SEQ ID o SEQ ID ser creada introduciendo una o mas o eliminaciones de nucleótidos dentro de la secuencia de SEQ SEQ ID SEQ ID o SEQ ID tal que una o mas de las adiciones o eliminaciones de amino ácidos son introducidas en los polipéptidos Mutaciones pueden ser introducidas en las secuencias de SEQ ID SEQ ID SEQ ID o SEQ ID por técnicas tales como mutagénesis dirigida al sitio y mutagénesis sustituciones de amino ácidos realizadas en uno mas residuos de amino ácidos no esenciales Una de amino ácido es una en la que el residuo de amino ácido es reemplazado con un residuo de amino ácido que tiene una cadena lateral Familias de amino ácidos que tienen cadenas laterales similares han sido definidas en el Estas familias incluyen amino ácidos con cadenas laterales básicas cadenas laterales ácidas ácido ácido cadenas laterales polares no cargadas cadenas laterales no polares por cadenas laterales ramificadas y cadenas laterales aromáticas un residuo de amino ácido no esencial predicho en un polipéptido de AHAS es preferiblemente reemplazado con otro residuo de amino ácido de la misma familia de cadena en otra mutaciones pueden ser introducidas aleatoriamente a lo largo de todo o parte de una secuencia codificadora de tal como por mutagénesis de y los mutantes resultantes pueden ser separados para una actividad de AHAS descrita aquí para identificar mutante que retienen actividad de Luego de la mutagénesis de la secuencia de SEQ ID SEQ ID SEQ ID o SEQ ID el polipéptido codificado puede ser expresado recombinadamente y la actividad del polipéptido puede ser determinada analizando ia tolerancia a la imidazolinona de la planta que expresa el polipéptido como se describe en los ejemplos de mas Para determinar el porcentaje de identidad de secuencia de dos secuencias de amino las secuencias son alineadas para una óptima comparación brechas pueden ser introducidas en la secuencia de un polipéptido para un alineamiento óptimo con el otro Los residuos de amino ácidos en posiciones de amino son luego Cuando una posición en una secuencia es ocupada por el mismo residuo de amino ácido que en la posición correspondiente de la otra las moléculas son idénticas en esa El mismo tipo de comparación puede ser hecha entre dos secuencias de ácido El porcentaje de identidad de secuencia entre dos secuencias es función del número de posiciones idénticas compartidas por la secuencias porcentaje de identidad de secuencia número de posiciones de posiciones totales X Para los propósitos de la el porcentaje de secuencia idéntica entre dos ácidos nucleicos o secuencias de polipéptidos es determinado usando el programa Vector NTI 7600 Wisconsin MD Una pena de abertura de brecha de 15 y una pena de extensión de brecha son usadas para determinar el porcentaje de identidad de dos ácidos Una pena de abertura de brecha de 10 y una pena de extensión de brecha de son usadas para determinar el porcentaje de identidad de dos Todos los demás parámetros son establecidos en los ajustes Debe entenderse que para el propósito de determinar la secuencia de cuando se compara una secuencia de ADN con una secuencia de un nucleótido de timidina es equivalente a un nucleótidos de los polipéptidos de AHAS aislados incluidos en la presente invención son por lo menos cerca de 50 preferiblemente al menos 60 y mas preferiblemente al menos 70 75 80 85 85 o 90 95 y mas preferiblemente cerca de 97 o mas idénticos a la integridad de la secuencia de amino ácidos mostrados en SEQ ID SEQ ID o SEQ ID o SEQ ID En otra los polipéptidos de AHAS aislados incluidos en la presente invención son al menos 50 preferiblemente al menos 60 y mas preferiblemente al menos 70 75 80 85 85 o 90 95 y mas preferiblemente cerca de 97 o mas idénticos a la integridad de la secuencia de amino ácidos mostrados en SEQ ID SEQ ID o SEQ ID o SEQ ID ácidos nucleicos de AHAS optimizados pueden un ácido nucleico de AHAS optimizado codifica en polipéptido de AHAS que modula la tolerancia de la planta a los herbicidas de y mas preferiblemente incrementa la tolerancia de la planta a los herbicidas de imidazolinona con su en la Como se emplea aquí se refiere a un ácido nucleico que es genéticamente ingeniado para incrementar sus expresión en una planta o animal Para proporcionar ácidos nucleicos de AHAS la secuencia de ADN del gen puede ser modificada a 1 incluir codones preferidos para genes de plantas expresados incluir un contenido en la composición base de nucleótido a aquel sustancialmente encontrado en plantas formar una secuencia de iniciación de eliminar secuencias que causan poliadenilación degradación y terminación de o que forman ganchos de estructura secundaria o sitios de empalme de RNA Mayores expresiones de ácidos nucleicos de AHAS en las plantas pueden ser alcanzados utilizando la distribución de frecuencia de uso de codones en plantas en general o una planta en Métodos para optimizar la expresión de ácidos nucleicos en plantas pueden ser encontrados en EPA EPA Aplicación PCT No WO Patente US Patente US et 1991 USA y Murray et Nucleic Acid Como se emplea de uso de codones se refiere a la preferencia exhibida por una célula anfitrión específica al uso de codones de nucleótidos para especificar un amino ácido Para determinar la frecuencia de uso de un codon particular en un el número de ocurrencias de tal codon en el gen es dividido por el número total de ocurrencias de todos los codones que especifican el mismo amino ácido en el la frecuencia de uso de codones preferida exhibida por una célula anfitrión puede ser calculada promediando del uso de codones preferida en una gran número de genes expresados por la célula Es preferible que este análisis se limite a genes que están altamente expresados por la célula El porcentaje de desviación de la frecuencia de uso de codones preferida para un gen sintético respecto del empleado por una célula anfitrión es calculado primero mediante la determinación del porcentaje de desviación de la frecuencia de uso de un codon singular respecto del de la célula anfitrión seguido de obtener la desviación promedio sobre todos los Como se define este calculo incluye codones únicos ATG y En términos la desviación promedio total del uso de codones de un gen optimizado respecto de aquel de la célula anfitrión es calculado usando la ecuación 1 A n X Y X veces n n n Z donde X frecuencia de uso de codones para la célula Y n n frecuencia de uso de codones n en el gen n representa un codon individual que específica un amino ácido y el número total de codones es La desviación total de la frecuencia de uso de para todos los amino ácido debe preferiblemente ser menor del y mas preferiblemente menor de Por lo un ácido nucleico de AHAS puede ser optimizado así que su distribución de uso de codones se no mas del respecto de aquella originalmente expresada en los genes de la planta mas no mas de cerca del se da consideración al porcentaje de contenido G C de la tercera base degenerada monocotiledones parecen favorecer G C en esta mientras que los dicotiledones También se reconoce que el nucleótido XCG X es o es el codon menos preferido en dicot mientras que el codon XTA es evitado en ambos monocot y Los ácidos nucleicos optimizados de esta invención también preferiblemente tienen índices de evitado doble CG y TA aproximándose cercanamente a aquellos de la planta anfitriona Oryza Más preferiblemente estos índices se desvían de aquellos en el anfitrión en no más del 10 15 En adición a las ácido nucleico que codifican los polipéptidos de AHAS dcescritos otro aspécto de la invención hace relación a moléculas de ácido nucleico aisladas que son antisentido allí Se piensa que los polinucleótidos antisentido inhiben la expresión de un polinucleótido objetivo mediante la fijación específicamente del polinucleótido objetivo e interfiriendo con la traducción estabilidad del polinucleótido Se describen métodos en el arte previo para apuntar al polinucleótido antisentido al ADN a un trascriptor RNA primario o a un mRNA las regiones objetivo incluye sitios de codones de iniciación de codones de terminación de y otras secuencias dentro del marco de lectura El término para propósitos de la presente se refiere a loa ácidos nucleicos que incluyen un polinucleótido que es suficientemente complementario a todo o a una parte del trascriptor o mRNA así que interfiere con la expresión del gen Polinucleótidos son aquellos que son capaces de emparejamiento de base de acuerdo con las reglas de complementariedad de las purinas se emparejan de base con pirimidinas para formar una combinación de guanina emparejada con citosina y adenina emparejada con cualquiera timina en el caso de o adenina emparejada con uracil en el caso de Se entiende que dos polinucleótidos pueden hibridizarce mutuamente aun si ellos no son completamente complementarios entre siempre que cada uno tenga al menos una región que sustancialmente complementaria una de la El término nucleico incluye RNA de trenzado simple así como casetes de expresión de ADN de doble trenzado que pueden ser trascritos para producir un RNA Ácidos nucleicos antisentido son moléculas de RNA antisentido que son capaces de hibridizarce selectivamente con un trascriptor primario o mRNA que codifica un polipéptido que tiene al menos de identidad de secuencia con la secuencia de polipéptido de SEQ ID SEQ ID o SEQ ID o SEQ ID En adición a los ácido nucleicos de AHAS y a los polipéptidos descritos la presente invención involucra estos ácidos nucleicos y polipéptidos anexados p un Estos moieties pero no se limitan moieties de moieties de moieties de moieties de moieties de moieties de fijación y Un grupo típico de ácidos nucleicos que tienen moieties anexados son puntas de prueba y Las puntas de prueba y primers típicamente incluyen un oligonucleótido sustancialmente El oligonucleótido típicamente incluye una región de secuencia oligonucleótida que hibridiza bajo condiciones rigurosas al menos cerca de preferiblemente cerca de mas preferiblemente cerca de 50 o 75 nucleótidos consecutivos de una trenza de sentido de la secuencia establecida en SEQ ID SEQ ID SEQ ID o SEQ ID una secuencia antisentido de la secuencia establecida en SEQ ID SEQ ID SEQ ID o SEQ ID o mutantes de ocurrencia natural de Primers basados en la secuencia nucleótida SEQ ID SEQ ID SEQ ID o SEQ ID pueden ser usados en reacciones de PCR para clonar homólogos de Puntas de prueba basadas en la secuencia de nucleótido de AHAS pueden ser usadas para detectar trascriptores o secuencias genómicas que codifican los mismos polipéptidos En incorporaciones la punta de prueba comprende un grupo marcador por ejemplo el grupo marcador puede ser un un compuesto un cofactor Tales puntas de prueba pueden ser usadas como parte de un equipo de prueba de marcador genómico para identificar células que expresan un polipéptido de tal como midiendo un nivel de ácido nucleico que codifica en una muestra por detectando niveles de AHAS mRNA o determinando si un gen de AHAS genómico ha sido mutado o La invención provee además un vector de expresión recombinado aislado que incluye ácido nucleico de AHAS como el descrito donde la expresión del vector en un célula anfitrión resulta en un incremento de la tolerancia a los herbicidas de imidazolina en comparación a una variedad del tipo salvaje de la célula Como empleado el término se refiere a una molécula de ácido nucleico capaz de trasportar otro ácido nucleico al cual ha sido Un tipo de vector es un el cual se refiere a un aro de ADN de doble trenza circular dentro del cual segmentos adicionales de ADN pueden ser Otro tipo de vector es el vector donde segmentos adicionales de ADN pueden ser ligados dentro de un genoma Ciertos vectores son capaces de replicación autónoma en una célula anfitrión en la cual han sido introducidos vectores bacteriales que tienen una replicación de origen bacterial y vectores episomales Otros vectores vectores episomales están integrados dentro del genoma de una célula anfitrión una vez introducidos dentro de la célula y en consecuencia son replicados conjuntamente con el genoma Más ciertos vectores son capaces de conducir la expresión de los genes a los cuales están operativamente Tales vectores son referidos aquí como de En los vectores de expresión de utilidad en técnicas de ADN recombinado son a menudo en la forma de En la presente y pueden ser usados de manera intercambiada ya que el plásmido es la forma de vector mas Sin el invención esta formulada para incluir otras formas de vectores de tales como los vectores virales retrovirus defectuosos de y virus los cuales sirven funciones Los vectores de expresión recombinados de la invención incluyen un ácido nucleico de la invención en un forma adecuada para la expresión del ácido nucleico en una célula lo que significa que los vectores de expresión recombinados incluyen uno o mas secuencias seleccionadas sobre la base de las células anfitrionas a ser usadas para la cual es operativamente conectada a la secuencia de ácido nucleico a ser Con respecto a un vector de expresión es usado para indicar que la secuencia nucleótida de interés es conectada a la secuencia regulatorias en una forma que permite la expresión de la secuencia nucleótida en una trascripción in de traducción o en una célula anfitrión cuando el vector introducido dentro de El término usado para incluir incrementadores y otros elementos de control de expresión ejemplo señales de Tales secuencias regulatorias son por en Gene Expression Methods in Enzymology Academic San CA y Gruber and en Methods in Plant Molecular Biology and Glick and Capítulo 89 CRC Boca incluyendo las referencias en Las secuencias reguladoras incluyen esas que conducen expresión constitutiva de una secuencia nucleótida en muchos tipos de células anfitrionas y esas que conducen expresión de una secuencia nucleótida solo en ciertas células anfitrionas o bajo ciertas Será apreciado por aquellos experimentados en el arte que el diseño de los vectores de expresión puede depender en factores tales como la escogencia de la célula anfitrión a ser el nivel de expresión de polipéptido Los vectores de expresión de la invención pueden ser introducidos dentro de células anfitrionas para así producir polipéptidos o incluyendo polipéptidos o péptidos de codificados por ácido nucleico como el descrito polipéptidos de polipéptidos de En una incorporación preferida de la presente los polipéptidos de AHAS son expresados en plantas y células de plantas tales como células de planta unicelular como Falciatore et Marine Bioltechnology 1 239 252 y referencias y células de plantas de plantas mas latas los tales como plantas de Un polinucleótido de AHAS puede ser introducido en una planta por cualquier incluyendo trasformación o bombardeo de biolistica y Métodos adecuados para transformar o trasfectar células anfitrionas incluyendo células de plantas pueden ser encontrados en Sambrook et A Laboratory Coid Spring Harbor Coid Spring Harbor Laboratory Cold Spring y otros manuales de laboratorio tales como Métodos en Biología Vol Agrobacterium Gratland and Humana New Como el incremento a la tolerancia a los herbicidas de es un rasgo general que se desea sea heredado en una amplia variedad de plantas como rapeseed y girasol y plantas solanáceas como berenjena y especies plantas arbustivas especies árboles de pastos permanentes y cultivos de estas plantas de cultivo son también plantas objetivo para una ingeniería genética como una incorporación mas de la presente En una incorporación la planta es de Cultivos de forraje pero no se limitan a pastura de bluegras hierba de pie de trébol de trébol trébol y trébol En una incorporación de la presente Trasfección de un polinucleótido de AHAS dentro de una planta es logrado por transferencia de gen mediada por Un método de trasformación conocido a aquellos expertos en el arte es el sumergir una planta florecida en una solución de donde la Agrobactería contiene el ácido nucleico de seguida por la cría de los gametos La transformación de la planta mediada por Agrobacterium puede ser realizada por el y o LBA4404 Agrobacterium tumefaciens La trasformación puede ser realizada por técnicas de trasformación estándar y regeneración et Stanton B and Robert Planta Molecular Biology 2nd Kluwer Academic In Ringbuc Zentrale BT1 1 ISBN Bernard And John Methods in Planta Molecular Biology and Boca CRC ISBN Por cañóla puede ser trasformada vía cotiledón o transformación de hipocotil et Plant Report De et 91 El uso de antibióticos para Agrobacterium y selección de la planta depende del vector binario y la variedad de Agrobacterium empleada en la La selección de cañóla es normalmente realizada usando kanamicina como un marcador de planta La transferencia de gen por Agrobacterium a la linaza puede ser realizada por una técnica descrita por Mlynarova et Plant Cell Report Adicionalmente la trasformación de la soya puede ser realizada usando por ejemplo la técnica descrita en la Patente Europea 0424 la Patente US la Patente Europea No 0397 la Patente No o la Patente US No La trasformación del maíz puede ser lograda por bombardeo de toma de ADN mediada por polietileno glicol o vía una técnica de fibra de carburo de por Freeling and Walbot maize Springer New York ISBN Un ejemplo específico de trasformación de maíz es encontrado en la Patente No y un ejemplo específico de trasformación de trigo puede ser encontrado en la aplicación PCT No WO De acuerdo a presente el polinucleótido de AHAS introducido puede ser mantenido en la célula de la planta establemente si es incorporado dentro de un replicón autónomo o integrado dentro de los cromosomas de la el polinucleótido de AHAS puede estar presente en un vector y ser expresado transientemente o transientemente En una un microoorganismo recombinado homólogo puede ser creado donde el polinucleótido de AHAS es integrado dentro de un un vector es preparado el cual contiene al menos un porción de un gen de AHAS dentro del cual una adición o sustitución ha sido introducida para así por perturbar el gen de AHAS endógeno y crear un gen de Para crear un mutación puntual vía recombinación iíbridos de pueden ser usados en una técnica conocida como quimeraplasti Strauss et Nucleic Acids Research 27 13330 abd Gene Therapy American Scientist Otros procedimientos de recombinación homologa es especies de son también conocidos en arte y son contemplados para usar En el vector de recombinación el gen de AHAS puede ser flanqueado a sus extremos y por una molécula de ácido nucleico adicional del gen de AHAS para permitir que la recombinación homologa entre el gen de AHAS exógeno trasportado por el vector y el gen de AHAS en un microorganismo o La molécula de ácido nucleico de AHAS adicional que flanquea es de suficiente longitud para una exitosa recombinación homologa con el gen cientos de parejas de base hasta kilobases de ADN ambos extremos y están incluidos en vector por Thomas and Cell 51 para una descripción de vectores de recombinación o Strepp et 4368 4373 para recombinación basada en cADN en Phycomitrella Sin puesto que el gen de AHAS normalmente difiere gen de AHAS en unos pocos amino una secuencia de flanqueo no siempre es El vector de recombinación homólogo es introducido dentro del microorganismo o célula de la planta vía ADN mediado por polietiíeno y las células en las cuales el gen de AHAS introducido se ha recombinado homólogamente con el gen de AHAS endógeno son seleccionadas usando técnicas bien En otra microorganismos recombinados pueden ser producidos conteniendo sistemas seleccionados que permiten una expresión regulada de I gen Por la inclusión de un gen de AHAS sobre un vector colocándolo bajo control del operan lac permite expresión del gen de AHAS solo en presencia de Tales sistemas regulatorios son bien conocidos en el Ya sea presente en un vector no replicante extra cromosomal o en un vector que esta integrado en un el polinucleótido de AHAS preferiblemente reside en un cásete de expresión de la Un cásete de expresión de la planta preferiblemente contiene secuencias reguladoras capaces de manejar expresiones del gen en células de la planta que están operativamente conectadas así que cada secuencia pude realizar su por la terminación de trascripción por señales de Las señales de poliadenilación preferidas son aquellas que se originan de Agrobacterium tumefaciens tal como el gen 3 conocido como octopina sintasa del pTIACH5 et J o equivalente funcionales de pero también otros destructores funcionalmente activos en plantas son Como la expresión del gen de las plantas es a menudo no limitado en niveles de un cásete de expresión de la planta contiene preferiblemente otras secuencias operativamente conectadas como ampliadoras de traducción tal como la secuencia conducida que contiene la secuencia líder no traducida del virus mosaico del tabaco ampliando la razón polipéptido por RNA et Research 1 Ejemplos de vectores de expresión de plantas incluyen esos detallados et Nuevos vectores binarios de plantas con marcadores seleccionares localizados próximos al borde Plant Binary Agrobacterium vectors for plant 8721 and Vector for Gene Trasfer in Higher Transgenic vol 1 Engineering and Kung and Academic La expresión del gen de plantas debe estar operativamente conectada a un promotor apropiado que confiera una expresión del gen en una manera tipo o Los promotores útiles en los casetes de expresión de la invención incluyen cualquier promotor que sea capaz de iniciar trascripción en una célula de una Tales promotores pero no se limitan a aquellos que pueden ser obtenidos de las virus de plantas y bacterias que contienen genes que están expresados en tal como Agrobacterium y El promotor puede ser tipo u Los promotores constitutivos son activos bajo la mayoría de las Ejemplos de promotores constitutivos incluyen los promotores CaMV 19S y 35S et Nature 810 el promotor sX Ca MV 35 S et Science 1299 el promoror Sept 1 el promotor actina de arroz et Plant cell el promotor actina Arabidopsis el promotor ubiquitina el Plan 675 pEmu et 1991 81 el promotor 35 S de virus mosaico figwort el promotor Smas et 2723 el promotor el promotor de deshidrogenasa de alcohol cinamil US No promotores del ADN de tal como manopina nopalina sintasa y octapina el promotor de la pequeña carboxiradas de bifosfato ribulosa y Los promotores inducibles son activos bajos ciertas condiciones tales como la presencia o ausencia de un nutriente o calor o ataque condiciones y Por el promotor hps80 de Brassica es inducido por impactos de el promotor PDDK es inducido por el promotor del y maíz son inducibles por infección con y el promotor Adh1 es inducido por hipoxia y tensiones de La expresión de un gen de planta puede también ser facilitada a través de un promotor inducible ver Gatz Plant Plant Mol 89 Promotores inducibles químicamente son especialmente adecuados si una expresión del gen específica en el tiempo es Ejemplos de tales promotores es un promotor de ácido salicílico PCT No WO o el promotor iducible de tetracicina Gatz el Plant y un promotor inducible de etanol PCT WO Promotores son preferencialmente expresados en ciertas etapas de Promotores tejido y incluyen esos que son preferiblemente expresados en ciertos tejidos u tales como semillas o xylem Ejemplos de promotores tejido y pero no se limitan a promotores tejido y un y Los promotores de preferido son expresados preferiblemente durante el desarrollo de la semilla Por los promotores preferidos de semilla pueden ser y cobertura de Ver Thomson et BioEssays Ejemplos de promotores de semilla preferidos pero nos se limitan a celulosa sintasa Clim 1 maíz 19 kD zein y Otros promotores adecuados u incluyen el promotor de de US el promotor USP de Vicia faba et 1991 Mol Gen 225 el promotor oleosina de Arabidopsis PCT WO el promotor faseolin de Phaseoius Vulgarís US el promotor de Brassica PCT WO y el promotor legumina B4 Baeumiein et Plant así como promotores que confieren expresiones específicas de semillas en plantas monocot como Promotores adecuados para notar son el gene Ipt2 o Ipt1 de cebada PCT WO y Aplicación PCT WO o aquellas descritas en la aplicación PCT No WO del gen hordeina de gen de gluteina de gen de orizina de gen prolamina de gen gliadina de gen gluteina de gen gluteina de gen kasirina de y gen secalina de Otros promotores útiles en el cásete de expresión de la invención pero no se limitan el promotor principal de proteína fijadora de promotores de el promotor el promotor el promotor el promotor de lectina de el promotor de zeina 15 kD de el promotor de zeina 22 el promotor de zeina 27 el promotor de zeina promotores y el promotor Zm13 US los promotores poligalacturonasa de US y y el promotor SGB6 US así como promotores sintéticos u otros Flexibilidad adicional para controlar expresión de gen heterólogo en plantas puede se obtenida usando dominios fijadores de ADN y elementos de respuesta de fuentes heterólogas dominios fijadores de ADN de fuentes que no son Un ejemplo de tal dominio fijador de ADN es el dominio fijador de ADN LexA and Cell Otro aspecto de la invención hace relación a las células anfitrionas dentro de las cuales un vector de expresión recombinado de la invención es Los términos y anfitriona son usados de manera intercambiable Se entiende que tales términos se refieren no solo a la célula objeto particular pero que también se aplican al progenie o progenie de tal Debido a que ciertas modificaciones pueden ocurrir en generaciones sucesivas debido a mutación o influencias tal progenie puede no de idéntica la célula pero están todavía incluidas dentro del alcance de los términos usados Una célula anfitrión puede ser cualquier célula procariótica o Por un polinucleótido de AHAS puede ser expresado en una célula bacterial tal como células de células de y células de mamíferos como células de ovarios de hámster Chino o células células de hongos y otros microorganismos como Otras células anfitrionas adecuadas son bien conocidas para aquellos experimentados en el Una célula anfitriona de la tal como una célula anfitriona procariótica o eucariótica en puede ser usada para producir un polinucleótido de la invención provee además métodos para producir polipéptidos de AHAS usando las células anfitriona de la En una el método comprende cultivar la célula anfitriona de la invención de la cual un vector de expresión que codifica un polipéptido de AHAS ha sido o dentro de cuyo genoma ha sido introducido un gen codificando un polipéptido de tipo salvaje o de AHAS en un medio adecuado hasta que el polipéptido de AHAS es En otra el método incluye además el aislamiento de polipéptidos de AHAS del medio o de la célula Otro aspecto de la invención hace relación a polipéptidos de AHAS y partes biológicamente activas de los Un polipéptido o o parte biológicamente activa de el esta libre de algo del material celular cuando es producido por técnicas de ADN o precursores químicos u otros químicos cuando es químicamente El lenguaje libre de material incluye preparaciones de polipéptidos de AHAS en los cuales el polipéptido es separado de alguno de los componentes celulares de la célula en la cual es natural o recombinadamente En una incorporación el lenguaje libre de material incluye la preparación de un polipéptido de AHAS que tiene menos del peso de material referido aquí como un mas preferiblemente menos de de material no todavía mas preferido menos de de material no y mas preferiblemente menos de cerca de de material no Cuando el polipéptido de o una parte biológicamente activa de es producido por esta también sustanciaimente libre del medio de es el medio de cultivo representa menos de cerca del mas preferiblemente menos y más preferiblemente menos de del volumen de la preparación de El lenguaje libre de precursores químicos y otros incluye preparaciones de polipéptidos de AHAS en los cuales el polipéptido es separado de los precursores químicos u otros químicos que están involucrados en la síntesis del En una el lenguaje libre de precursores químicos u otros incluye preparaciones de un polipéptido de AHAS que tiene menos deí peso de precursores químicos de no mas preferiblemente de cerca de de precursores químicos de no todavía mas preferido menos de de precursores químicos de no y mas preferiblemente menos de de precursores químicos de no En incorporaciones los o partes biológicamente activas de carecen de polipéptidos contaminantes del mismo organismo a partir del cual el polipéptido de AHAS es tales polipéptidos son producidos por expresiones recombinadas por un polipéptido de AHAS de Oryza sativa en plantas diferentes de Oryza sativa o microorganismos tales como lagas u Las secuencias de polipéptidos y polinucleótidos de AHAS de la invención tienen una variedad de Las secuencias de ácido nucleico y amino ácidos de la presente invención pueden ser usadas para trasformar de esta forma modulando la tolerancia de la planta a herbicidas de la invención provee un método para producir plantas trasgénicas que tienen una mayor tolerancia a los herbicidas de imidazolinona que incluyen transformar la célula de una con uno o mas vectores de expresión que incluyen uno o mas variedades de ácidos nucleicos de y generando desde la célula de la planta una planta trasgénica con una tolerancia incrementada a los herbicidas de imidazolinona en comparación a una variedad tipo salvaje de la En una la variante de ácido nucleico de AHAS codifica una variante de polipéptido de AHAS que incluye una mutación de alanina a treonina en comparación con un polipéptido del tipo La presente invención incluye métodos de modificar la tolerancia de la planta a los herbicidas de imidazolinona que incluye modificar la expresión de uno o mas variedades de ácidos nucleicos de La tolerancia de la planta a los herbicidas de imidazolinona puede ser aumentada o disminuida por el aumento o disminución de la expresión de polinucleótidos de la tolerancia de la planta a los herbicidas de imidazolinona es incrementada por el aumento de la expresión de un polinucleótido de En una la variante de ácidos nucleicos de AHAS codifica una variante de polipéptido de AHAS que incluye una mutación de alenina a treonina en comparación con un polipéptido del tipo La expresión de un polinucleótido de AHAS puede ser modificada por cualquier método conocido para aquellos expertos en el Los métodos para incrementar la expresión de polinucleótidos de AHAS pueden ser usados si la planta es trasgénica o no En los casos cuando la planta es la planta puede ser trasformada con un vector que contiene cualquiera de los antes descritos ácidos nucleicos codificando o la planta puede ser trasformada con un promotor que dirige la expresión de endógenos en la por La invención provee que tal promotor pueda ser tejido específico o regulado por el las plantas no trasgénicas pueden tener una expresión de polinucleótidos de AHAS endógenos modificada por la inducción de un promotor La expresión de polinucleótidos que incluyen una secuencia polinucleótida como se define en SEQ ID SEQ ID SEQ ID o SEQ ID en plantas objetivo puede ser lograda pero no se limita uno de los siguientes un promotor un promotor químicamente expresión por un promotor ingeniado con por ejemplo factores de trascripción derivados de dedos de Science 275 En una incorporación la trascripción de los polinucléotidos de AHAS es modulada usando factores de trascripción derivados de dedos de zinc como es descrito en Greisman an Science y manufacturado por Sangamo Estos ZFPs comprenden un dominio de reconocimiento de ADN y un dominio funcional que causa la activación o represión de un ácido nucleico objetivo tal como un ácido nucleico de En ZFPs activantes o represores pueden ser creados que reconocen específicamente los promotores de polinucleótidos de AHAS descritos antes y usados para incrementar o reducir la expresión de polinucleótidos de AHAS en una de esta manera modulando la tolerancia de la planta a los Como se describe en más detalle las plantas producidas por los métodos de la presente invención pueden ser monocot o Las plantas pueden ser seleccionadas de rapeseed y girasol y plantas solanáceas como berenjena y especies especies palma de pastos permanentes y cultivos de por En una incorporación la planta es de Cultivos de forraje pero no se limitan alpiste pastura de bluegras hierna de pie de trébol de trébol trébol y trébol En cada uno de los métodos descritos las células de la plantas pero no se limitan un una célula productora de y una célula que se regenera en una planta Como se emplea el término se refiere a cualquier célula de tejido de o parte de que contiene todo o parte de al menos un polinucleótido En muchos todo o parte del polinucleótido recombinado esta establemente integrado dentro de un cromosoma o un elemento extra cromosomal así que es pasado a generaciones Cultivo de tejidos o de varios tejidos de arroz y regeneración de plantas a partir de ellos es bien conocido y ampliamente Por referencia puede ser hecha a Use of Bridging parents high anther culturability to improve plant regeneration an breeding valué Rice Bioíechnology Quarterly R et A planta regeneration médium for rice anther culture of Southern US Rice Biotechnology Quarterly R et A novel basal médium for embryogenic callus induction of Souther US Rice Biotechnology Quaterly 19 and the Genetic Variability By Tissue Culture 33 306 cuyas exposiciones son en consecuencia incorporadas aquí en su integridad por Como se describió la presente invención enseña compuestos y métodos para incrementar la tolerancia a los herbicidas de imidazolinona de las plantas de arroz o semillas en comparación a una variedad del tipo salvaje de la planta o la En una incorporación la tolerancia a la imidazolinona de una planta de arroz o semilla es incrementada en tal forma que la planta o semilla pueden soportar una aplicación de herbicida de imidazolinona de preferiblemente aproximadamente 10 40 ha mas preferiblemente de 20 160 ha 1 y mas 40 80 ha Como se emplea una aplicación de herbicida de imidazolinona significa que la planta ni es destruida ni lesionada por la Adicionalmente se provee aquí un método de controlar malezas en la vecindad de una planta de arroz que incluye la aplicación de un herbicida de imidazolinona a las malezas y a la planta de la cual tiene un tolerancia incrementada al herbicida de imidazolinona en comparación con una variedad del tipo salvaje de la planta de y donde la planta de arroz tolerante a la imidazolinona incluye al menos una variante de ácido nucleico de AHAS que codifica una variante de polipéptido de la mutación es en un residuo de amino ácido que corresponde a la posición 69 de la secuencia mostrada en SEQ ID Al proveer una tolerancia incrementada a la imidazolinona a las plantas de una gran variedad de formulaciones pueden ser empleadas para proteger las plantas de arroz de las para así aumentar el crecimiento de la planta y reducir la competencia por los Un herbicida de imidazolinona puede ser usado por si solo para y pata control en plantación de malezas en áreas que rodean las plantas de arroz descritas aquí o una formulación de herbicida de imidazolinona puede ser usado y que contiene otros herbicida de imidazolinona puede también ser usado como un tratamiento de Los aditivos encontrados en formulaciones de herbicida de imidazolinona incluyen otros agentes de agentes de agentes estabilizantes o La formulación de herbicida de imidazolinona puede ser una preparación seca o húmeda y puede pero no se limita polvos concentrados emulsificables y concentrados El herbicida de imidazolinona y las formulaciones de herbicida de imidazolinona pueden ser aplicados de acuerdo con métodos por por o A través de estas varias publicaciones son Las exposiciones de todas estas publicaciones y esas referencias citadas dentro de esas publicaciones son aquí incorporadas en su integridad por referencia dentro de esta aplicación para describir más completamente el estado del arte con el cual se relaciona la Debe entenderse que lo anterior se relaciona con incorporaciones preferidas de la invención y que numerosos cambios pueden ser realizados a ellos sin apartarse del alcance de la La invención es ilustrada además por los siguientes que no han de ser constituidos en manera alguna como limitadores sobre el alcance de Por el debe entenderse claramente que pueden concurrirse a varias otras modificaciones y equivalente de que después de leer esta descripción pueden surgir por si mismas a aquellos expertos sin apartarse del espíritu de la presente invención el alcance de las reivindicaciones EJEMPLOS Ejemplo 1 Mutágenesis y Selección de las líneas de Arroz Tolerantes a la Imidazolinona Dos muestras de semillas g cada del la variedad de arroz fueron tratadas con una solución acuosa M de azida de sodio a un pH 3 de fosfato para producir la semilla Este tratamiento fue aplicado empapando cada muestra de semilla en un Erlenmeyer de dos litros que contenía un litro de solución de azida de bajo agitación durante 18 a temperatura Después del las semillas fueron enjuagadas en agua de la mas las semillas fueron parcialmente secadas al aire sobre hojas de papel secante para extraer la humedad de la superficie de las las semillas tratadas fueron plantadas directamente en vivero de Las semillas M1 fueron plantadas en el vivero con un sembrador experimental Wintersteiger a una tasa de 50 plantas por metro Líneas de chequeo de la variedad tipo salvaje IRGA 417 fueron plantadas con sembrador de Las líneas fueron cultivadas bajo condiciones de inundación hasta madurez de humedad de y fueron cosechadas en La semilla recogida fue secada en un secador de convección durante 14 horas a 45 Las semillas M2 fueron mantenidas en almacenamiento hasta la siguiente Las semillas de las plantas M1 fue plantada con un sembrador experimental para grandes áreas a una tasa de 50 Un estimado de 3 ha fue finalmente definido que incluía un población de 6 X 10 Líneas de chequeo de la variedad tipo salvaje IRGA147 fueron plantadas con un sembrador de La totalidad del áfea fue sometida a una presión de selección con una mezcla de dos herbicidas de Tres separaciones separadas de herbicidas de imidazolinona fueron realizadas con un rociador comercial en diferentes direcciones para prevenir cualquier escape y resultar en un tratamiento Un volumen total de 222 fue rociado a 50 con boquillas de chorros T en cada aplicación de herbicida de La tasa del tratamiento 1X fue una mezcla de Arsenal 75 g y Cadre g en una solución acuosa con un surfactante iónico a la tasa de Las aplicaciones fueron realizadas en la etapa de la cuarta hoja de las plantas de No se registró lluvia durante los 7 días después del Las observaciones fueron hechas a intervalos regulares para investigar la totalidad del Después de 90 los individuos sobrevivientes fueron marcados y transplantados a un invernadero para multiplicación asexual e incremento de la producción de Un total de 10 plantas individuales fueron y las semillas fueron cosechadas y secadas en un incubador de semilla durante 7 días a 50 Ninguna planta de las líneas de chequeo sobrevivió después del tratamiento con Las semillas de las plantas seleccionadas M2 fueron sembradas en materas individuales bajo condiciones de Un tratamiento 2X fue aplicado con un rociador de dividido en dos aplicaciones de 1X por tas de Arsenal 75 g y Cadre g en una solución acuosa con un surfactante no iónico a una tasa de Las plantas fueron cosechadas hasta madurez de humedad de y recogidas a La semilla recolectada fue sometida a un tratamiento de rompimiento en latencia de 7 días a 50 y preparado para una sesión tardía de plantado en la región Semilla de la población tres plantas tolerantes seleccionadas crecidas en el invernadero fueron plantadas en el campo en El Chaco de Las Palmas para el incremento de Las tres poblaciones identificadas como tolerantes a herbecidas de imidazolinona fueron denominadas IMINTA 1 IMINTA 4 e IMINTA Ellas fueron plantadas con un sembrador comercial de arroz a una tasa de 50 Un tratamiento de 2 X de herbicidas de Arsenal 75 g y Cadre 24 g en una solución acuosa con un surfactante no iónico a una tasa de fue aplicado a la etapa de la cuarta a quinta hoja de las plantas de Ningún síntoma fitotóxico fue observado en cualquiera de las tres Las tres poblaciones rindieron por encima del área de chequeo tratada con un herbicida No se observaron segregantes y una población altamente homogénea tanto en rasgos agronómicos y tolerancia fue Ejemplo 2 Caracterización Molecular de IMINTA 1 IMINTA 4 e IMINTA 5 ADN genómico fue extraído de las hojas de semillas crecidas en invernadero de las variedades salvaje y las líneas de arroz IMINTA 1 IMINTA 4 e IMINTA 5 y el gen de AHAS fue amplificado mediante El producto de fue secuenciado usando protocolos Los análisis de secuencia revelaron un cambio de pareja de base singular en la región de codificación del gen de AHAS que causó un cambio de amino ácido de alanina en el amino ácido 96 en el línea tipo salvaje a Treonina 96 en las líneas Esta mutación corresponde a un cambio de amino ácido en Alanina 112 en la secuencia de AHAS de Arabidopsis a Treonina La secuencia nucleótida de AHAS para IMINTA 1 IMINTA 4 e IMINTA 5 son mostradas en las Figuras 1 C y E respectivamente como SEQ ID Nos 1 3 y y las secuencias de amino ácidos de AHAS deducidas son mostradas en la Figuras 1 D y F como SEQ ID 4 y 6 Las secuencias de nucleótidos y amino ácidos de AHAS deducidos de la variedad de arroz de tipo salvaje IRGA 417 son mostradas en la Figuras 1 G y H como SEQ ID Nos 7 y Los alineamientos de las secuencias de nucleótidos y amino ácidos de AHAS para IMINTA 1 IMINTA 4 e IMINTA 5 son mostrados en las Figuras 2 y Figura 3 La secuencia de consenso del gen de AHAS de arroz es mostrada en la SEQ ID y la secuencia de amino ácido deducida de la secuencia de consenso de AHAS de arroz es mostrada como SEQ ID El polimorfismo que confiere la tolerancia a la imidazolinona a las líneas IMINTA 1 4 y 5 es indicada en Un ejemplo de un cADN de longitud completa de un ácido nucleico de AHAS que codifica un polipéptido que confiere tolerancia a los herbicidas de imidazolinona es mostrado en la SEQ ID y la secuencia de amino ácido deducida de la proteína codificada por el gen de AHAS es mostrado en la SEQ ID en la Figura Ejemplo 3 Tolerancia a AHAS Herbicidas proveída por IMINTA 1 Una prueba de campo fue realizada con la línea mutada IMINTA 1 y la línea IRGA comparando el desempeño en la presencia y ausencia del tratamiento de El tratamiento 1X de imidazolinona consistió de Arsenal 75 g y Cader g en una solución con un surfactante no iónico a la tasa de Las variedades y el tratamiento fueron establecidas como se indica en la Figura 5 como un diseño de bloque aleatorio con tres Los resultados del tratamiento son mostrados en la Figura No hubo diferencia 2 estadística entre los tratamientos en el número de plantas mostrando así que la aplicación de herbicida 3X no tuvo efectos Líneas de chequeo sembradas a lo largo de los lotes no sobrevivieron al tratamiento de El valor más alto en los lotes 3X de IMINTA después del tratamiento podía ser debido a la El rendimiento de grano y de rendimiento fueron evaluados para entender el efe to del tratamiento sobre las diferentes etapas fisiológicas y son mostrados en las figura 7 y No se encontraron diferencias estadísticas entre aunque los valores absolutos mostraron un mejor desempeño de IMINTA 1 3 El análisis de los componentes de rendimiento mostró un mayor número de panículas por metro cuadrado y en los lotes de IMINTA 1 3X que ha determinado un mas alto rendimiento que los otros un fuerte porcentaje de perturbación fue observado debido a las bajas temperaturas antes y durante el Los días y noches fríos redujeron el desarrollo de la semilla y fueron la razón para los bajos rendimientos Aunque no hubo diferencias estadísticas entre los hubo un valor mas alto rendimiento de grano de la IMINTA 1 Como se mas panículas y fue encontrado en estos Observaciones sobre otras líneas tolerantes bajo mas altos tratamientos de aplicación mostraron mas altos tallos y número de sugiriendo un posible efecto de los herbicidas en los procesos de diferenciación de tallos y flores Las variedades IMINTA 4 e IMINTA 5 fueron también ensayadas en campo en la misma manera que variedad IMINTA El rendimiento de grano y de componentes de rendimiento fueron comparables a los encontrados para la variedad IMINTA Debido a que la tolerancia en IMINTA 1 IMINTA 4 e IMINTA 5 es debida a la mutación en la enzima de AHAS haciéndola tolerante a inhibición por los herbicidas de la actividad in vitro de AHAS extraída de la variedad tipo salvaje de la planta teniendo la mutación para es comparada a la actividad in vitro de AHAS extraída de plantas tolerantes en la presencia de varias concentraciones de un herbicida de REIVINDICACIONES REIVINDICACIONES Una planta de arroz que incluye una variante de ácido nucleico de donde la variante de ácido nucleico de AHAS le confiere a planta una mayor tolerancia a un herbicida de imidazolinona en comparación a la de una variedad de la planta del tipo Donde la variante de ácido nucleico de AHAS codifica una variante de polipéptido de AHAS que incluye una sustitución de una alanina a treonina en comparación al polipéptido de AHAS del tipo La planta de arroz de la reivindicación 1 donde la sustitución de alanina a treonina corresponde a la posición 96 de la secuencia de amino ácido de AHAS como se muestra en SEQ ID La planta de arroz de la reivindicación 1 donde la variante de ácido nucleico de AHAS incluye una secuencia polinucleótida seleccionada de un grupo consistente un polinucleotóido como se define en SEQ ID SEQ ID o SEQ ID un polinucleotóido como se define en SEQ ID un polinucleotóido que codifica un polipéptido como se define en SEQ ID SEQ ID o SEQ ID un polinucleotóido que codifica un polipéptido como se define en SEQ ID un polinucleotóido que incluye al menos 60 nucleótidos consecutivos en cualquiera de hasta hasta y un polinucleótido complementario al polinucleótido de cualquiera de hasta hasta La planta de arroz de la reivindicación 1 donde la variante de ácido nucleico de AHAS una secuencia polinucleótida como se define en SEQ ID lanta de arroz de la reivindicación 1 donde al menos una variante de ácido nucleico de AHAS incluye una secuencia polinucleótida como se define en SEQ ID lanta de arroz de la reivindicación 1 donde la variante de ácido nucleico de AHAS incluye una secuencia polinucleótida como se define en SEQ ID lanta de arroz de la reivindicación 1 donde la planta no es lanta de arroz de la reivindicación 1 donde la planta tiene un Número de Designación de Depósito de Patente NCIBM NCIB o NCIBM o es un recombinado o un derivado genéticamente ingeniado de un planta con Número de Designación de Depósito de Patente NCIBM NCIBM o NCIBM o de cualquier progenie de la planta de Número de Designación de Depósito de Patente NCIBM NCIBM o NCIBM o es una planta que es una progenie de cualquiera de estas lanta de arroz de la reivindicación donde la planta tiene un Número de Designación de Depósito de Patente NCIBM NCIBM o NCIBM o es una progenie de la planta con Número de Designación de Depósito de Patente NCIBM NCIBM o NCIBM planta de arroz de la reivindicación donde la planta tiene las características de tolerancia a herbicida de la planta con un Número de Designación de Depósito de Patente NCIBM NCIBM o NCIBM La planta de arroz de la reivindicación dqnde la planta tiene un Número de Designación de Depósito de Patente NCIBM NCIBM 41207 La planta de arroz de la reivindicación 1 donde el herbicida de imidazolinona es seleccionado de un grupo consistente de ácido ácido ácido ácido ácido y una mezcla de metil y metil La planta de arroz de la reivindicación 1 donde el herbicida de imidazolinona es ácido La planta de arroz de la reivindicación 1 donde el herbicida de imidazolinona es ácido Una parte de la planta de arroz de la reivindicación Una célula de la planta de arroz de la reivindicación Una semilla producida por la planta de arroz de la reivindicación La semilla de la reivindicación donde la semilla contiene la variante de ácido nucleico de AHAS y donde la semilla es una cría verdadera para una mayor tolerancia a un herbicida de imidazolinona en comparación con una variedad de la semilla de la planta de arroz de tipo La planta de arroz de la reivindicación donde la planta es La planta trasgénica de arroz de la reivindicación donde la variante de ácido nucleico de AHAS incluye una secuencia polinucleótida seleccionada de un grupo consistente un polinucleotóido como se define en SEQ ID SEQ ID o SEQ ID un polinucleotóido como se define en SEQ ID un polinucleotóido que codifica un polipéptido como se define en SEQ ID SEQ ID o SEQ ID un polinucleotóido que codifica un polipéptido como se define en SEQ ID un polinucleotóido que incluye al menos 60 nucleótidos consecutivos en cualquiera de hasta hasta y un polinucleótido complementario al polinucleótido de cualquiera de hasta hasta La planta de arroz de la reivindicación donde la variante de ácido nucleico de AHAS incluye una secuencia polinucleótida como se define en SEQ ID La planta de arroz de la reivindicación donde la variante de ácido nucleico de AHAS incluye una secuencia polinucleótida como se define en SEQ ID La planta de arroz de la reivindicación donde la variante de ácido nucleico de AHAS incluye una secuencia polinucleótida como se define en SEQ ID Un ácido nucleico de AHAS donde el ácido nucleico incluye un polinucleótido seleccionado de un grupo integrado un polinucleotóido como se define en SEQ ID SEQ ID o SEQ ID un polinucleotóido como se define en SEQ ID un polinucleotóido que codifica un polipéptido como se define en SEQ ID SEQ ID o SEQ ID un polinucleotóido que codifica un polipéptido como se define en SEQ ID un polinucleotóido que incluye al menos 60 nucleótidos consecutivos en cualquiera de hasta hasta y un polinucleótido complementario al polinucleótido de cualquiera de hasta hasta Donde el ácido nucleico aislado codifica un polipéptido de AHAS que confiere una mayor tolerancia a un herbicida de imidazolinona en comparación a un polipéptido de AHAS de tipo El ácido nucleico de AHAS aislado de la reivindicación donde el ácido nucleico incluye un polinucleótido como se define en SEQ ID El ácido nucleico de AHAS aislado de la reivindicación donde el ácido nucleico incluye un polinucleótido como se define en SEQ ID El ácido nucleico de AHAS aislado de la reivindicación donde el ácido nucleico incluye un polinucleótido como se define en SEQ ID El ácido nucleico de AHAS aislado de la reivindicación donde el ácido nucleico incluye un polinucleótido que codifica un polipéptido como se define en SEQ ID El ácido nucleico de AHAS aislado de la reivindicación donde el ácido nucleico incluye olinucleótido que codifica un polipéptido como se define en SEQ ID ácido nucleico de AHAS aislado de la reivindicación donde el ácido nucleico incluye un polinucleótido que codifica un polipéptido como se define en SEQ ID polipéptido de AHAS donde el polipéptido es seleccionado de un grupo de secuencia de polipéptido como se definen en SEQ ID SEQ ID SEQ ID y SEQ ID donde el polipéptido confiere una mayor tolerancia a un herbicida de imidazolinona en comparación al polipéptido de AHAS del tipo polipéptido aislado de la reivindicación 31 donde el polipéptido incluye un polipéptido como se define en SEQ ID polipéptido aislado de la reivindicación 31 donde el polipéptido incluye un polipéptido como se define en SEQ polipéptido aislado de la reivindicación 31 donde el polipéptido incluye un polipéptido como se define en SEQ ID método para controlar malezas dentro de la vecindad de una planta de que comprende la aplicación de herbicida de imidazolinona a la maleza y a la donde la planta tiene una mayor tolerancia al herbicida de imidazolinona en comparación a una variedad de la planta del tipo donde la planta incluye una variedad de ácido nucleico de AHAS que codifica una variedad de polipéptido de AHAS que incluye una sustitución de alanina a treonina en comparación con el polipéptido de AHAS de tipo método de la reivindicación 31 donde la sustitución de alanina a treonina corresponde a la posición 96 de la secuencia de amino ácido de AHAS como se muestra en SEQ ID método de la reivindicación 31 donde la variedad de ácido nucleico de AHAS es seleccionada de un grupo integrado un polinucleotóido como se define en SEQ ID SEQ ID o SEQ ID un polinucleotóido como se define en SEQ ID un polinucleotóido que codifica un polipéptido como se define en SEQ ID SEQ ID o SEQ ID un polinucleotóido que codifica un polipéptido como se define en SEQ ID un polinucleotóido que incluye al menos 60 nucleótidos consecutivos en cualquiera de hasta hasta y un polinucleótido complementario al polinucleótido de cualquiera de hasta hasta Un método de producir una planta trasgénica que tiene una tolerancia al herbicida de imidazolinona incrementada que comprende Transformar una célula de la planta con uno o mas vectores de expresión que incluyen al menos una variedad de ácido nucleico que codifica una variedad del polipéptido de AHAS que incluye una sustitución alanina a treonina en comparación con un polipéptido de AHAS del tipo y Generar a partir de la célula de la planta una planta trasgénica con una tolerancia a un herbicida de imidazolinona incrementada en comparación a una variedad de la planta del tipo El método de reivindicación donde la sustitución de alanina a treonina corresponde a la posición 96 de una secuencia de amino ácido de AHAS como se muestra en la SEQ ID El método de la reivindicación donde al menos una variedad del ácido nucleico de AHAS incluye una secuencia polinuclótida seleccionada de un grupo consistente de un polinucleotóido como se define en SEQ ID SEQ ID o SEQ un polinucleotóido como se define en SEQ ID un polinucleotóido que codifica un polipéptido como se define en SEQ ID SEQ ID o SEQ ID un polinucleotóido que codifica un polipéptido como se define en SEQ ID un polinucleotóido que incluye al menos 60 nucleótidos consecutivos en cualquiera de hasta hasta y un polinucleótido complementario al polinucleótido de cualquiera de hasta hasta Figura 1 A Secuencia parcial de nucleótido de AHAS de la línea de Arroz IMINTA 1 ID CC GCTCGA RCCGTCCCGA QAATCTACCQG A CTCTATC C GAA T QAGGC CATTGACA GA CAA GCT T AC AAGAGA ATOCLAGG GG G AACCCAQG G C GATCCTGGA G OT T Figura 1 B Secuencia parcial de amino ácido de AHAS de línea de arroz IMINTA 1 ID 15 20 Figura 1 C Secuencia parcial de nucleótido de AHAS de línea de arroz I INTA 4 ID CC QCCGCCGCCGCGAC GQCCAAQACCGGCCCTAAQaACCACCAQCGACACCACGíCTTC AAGAGACCCACCGCAATATGCTAOTClAGGTGCrc TTACAAGGCAAATAGOGCGCATACATACTGGGCAACCCAGAATG GCCTATGA CCCAAGGGGGGCGGATTCAAGGACA GGCA Figura 1 D Secuencia parcial deducida de amino ácido de AHAS de línea de arroz IMINTA 4 ID 15 S S 20 Figura Secuencia parcial de nucleótido de AHAS de línea de arroz IMINTA 5 ID 5 G 10 TCCGCGCTCGCCGAC 15 GC7 20 CTGG CACGGCGCCCGATTCTCT ACAACCAC OT 30 GGGGATGOT 35 AGG TTACAAGGCAAATAGGGCGCATACATAOTQGQCAACCCAGAA G 40 AAGA GCTCGATACCCCAGGGCCATACT CAAGGACA 45 Figura F Secuencia parcial deducida de amino ácido de AHAS de línea de arroz 10 15 20 Figura G Secuencia de nucleótido de AHAS de una línea de arroz del tipo salvaje ID GGGCCAGGCCCCC0CCGCAGACG6CACCGACGCC TCCAGGAGACGC GTTGAGCTO GACGAAA G AACCCAGO GTCACAGT GAACATTCAGGAG AGGTT TACAAGGCAAATAGGGCGCATACATACT GGGCAACCCAGAAG CCAGQAGCA CA ATGT Figura Secuencia deducida de amino ácido de AHAS de una línea de arroz del tipo salvaje 147 ID NO 5 10 Figura 2 Alineamiento de una secuencia nucleótida de IMINTA 1 IMINTA 4 IMINTA 5 con secuencia de AHAS del arroz tipo salvaje 50 51 151 200 consenso ACCCCQCCG 201 250 251 300 301 350 351 400 401 450 consenso 451 501 550 551 600 601 650 7 GATG 651 700 20 C 701 750 AGCAGATGGCTG GCCAGTCI 751 800 consenso 801 850 GG CTAGTC 851 900 f 901 consenso 951 1000 consenso 1001 1050 consenso 1051 1100 consenso 1101 1150 consenso 1151 1200 liótrica AAGC consenso 1201 1250 QACCAQAGCACAACAAAQACAAG GA consenso 1251 1300 consenso 1301 1350 consenso 1401 rice consenso 1451 1500 consenso 1501 1550 consenso 1551 1600 C consenso 1601 1650 consenso 1651 1700 consenso 1701 1750 consenso QCT 1751 1800 ice consenso 1851 1900 CCAGGAGCATQ consenso 1901 1950 QA A consenso 1951 1986 TGGCAAAGCACCAGGCCQGC consenso TOGCAAAQCACCAGCCCQGC Figura 3 Alineamiento de una secuencia amino ácida de IMINTA 1 IMINTA 4 e IMINTA 5 con secuencias de AHAS del arroz tipo salvaje 1 50 LSAAAia 1 51 TPPSPAPPA 101 150 consenso 201 250 251 300 consenso S 301 350 7 351 400 RV 401 450 t consenso 101 150 consenso 151 200 consenso 201 250 consenso PPA consenso 301 350 Consensúa 451 500 5 consenso 10 501 550 consenso consenso 601 644 25 consenso Figura 4 A Secuencia de longitud completa de nucleótido de AHAS que confiere la resistencia a los herbicidas de imidazolinona ID 15 GA CTTC CCAGC 20 CC QC 25 G CCCTGCGCA QC CG 30 G TGGACCAG CCTCTGGG TC 35 AACCCAGG CA 40 CAATA AAGATGC CGATACCCCAGGGCCATACTTG TCAAGGACA GA 45 Figura 4 B deducida de longitud completa de amino ácido de AHAS que confiere la resistencia a la herbicidas de imidazolinona ID FIGURA 5 FIGURA 6 Tratamientos No de Plantas No de Plantas antes de después de tratamiento tratamiento Iminta 1 3X 171 179 Iminta 1 no 168 164 tratado IRGA 417 150 140 FIGURA 7 RENDIMIENTO DE GRANO DE HUMEDAD Rendimiento Promedio de Grano Tratamientos Iminta 1 3X 3323 a Iminta 1 prueba 2908 a IRGA 417 2796 a 763 FIGURA 8 Componentes de rendimiento Cns insufficientOCRQuality

Claims (46)

REIVINDICACIONES

1. Una plañía de arroz que contiene un ácido nucleico AHAS variante, caracterizada porque el ácido nucleico AHAS variante confiere a la planta tolerancia incrementada a un herbicida imidazolinona, en comparación con una variedad de planta de tipo silvestre, en donde el ácido nucleico AHAS variante codifica un polipéptido AHAS variante que contiene una sustitución de alanina a treonina, si se compara con el polipéptido AHAS tipo silvestre, y en donde la sustitución de alanina a treonina corresponde con la posición 96 de la secuencia de aminoácidos AHAS, como se muestra en la SEQ ID NO: 12.

2. La planta de arroz de la reivindicación, caracterizada porque el ácido nucleico AHAS variante comprende una secuencia de polinucleótidos seleccionada del grupo que consiste en: (a) un polinucleótido como se define en la SEQ ID NO:1 , SEQ ID NO:3 ó SEQ ID NO: 5. (b) Un polinucleótido como se define en la SEQ ID NO: 11. (c) Un polinucleótido que codifica para un polipéptido, como se define en la SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4 ó SEQ ID NO: 6. (d) Un polinucleótido que codifica para un polipéptido, como se define en la SEQ ID NO: 12. (e) Un polinucleótido que contiene por lo menos 60 nucleótidos consecutivos de cualquiera de los mencionados de la a) a la d) anteriores; y (f) Un polinucleótido complementario para el polinucleótido de cualquiera de los mencionados del inciso a) al e), anteriores.

3. l a planta de arroz de la reivindicación 1 , caracterizada porque el ácido nucleico AHAS variante comprende una secuencia de polinucleótidos como se define en la SEQ ID NO: 1.

4. La planta de arroz de la reivindicación 1 , caracterizada porque por lo menos un ácido nucleico AHAS variante contiene una secuencia de polinucleótidos como se define en la SEQ ID NO: 3.

5. La planta de arroz de la reivindicación 1 , caracterizada porque el ácido nucleico AHAS variante contiene una secuencia de polinucleótidos como se define en la SEQ ID NO: 5.

6. La planta de arroz de la reivindicación 1 , caracterizada porque la planta no es transgénica.

7. La planta de arroz de la reivindicación 6, caracterizada porque la planta tiene un Número de Designación en el Depósito de Patentes NCIMB 41206, NCIMB 41207 ó NCIMB 41208; o es un derivado recombinante o genéticamente manipulado de la planta que tiene el Número de Designación en el Depósito de Patentes NCIMB 41206, NCIMB 41207 ó NCIMB 41208; o de cualquier planta progenitora de la planta con el Número de Designación en el Depósito de Patentes NCIMB 41206, NCIMB 41207 ó NCIMB 41208; o es una planta que es progenitora de cualquiera de estas plantas.

8. La planta de arroz de la reivindicación 6, caracterizada porque la planta tiene un Número de Designación, en el Depósito de Patentes NCIMB 41206, NCIMB 41207 ó NCIMB 412.08, o es progenitora de la planta con el Número de Designación en ei Depósito de Patentes NCÍMB 41206, NCIMB 41207 ó NCIMB 41208.

9. La planta de arroz de la reivindicación 6, caracterizada porque la planta tiene las características de tolerancia a los herbicidas que tiene la planta con el Número de Designación en el Depósito de Patentes NCIMB 41206, NCIMB 41207 ó NCIMB 41208.

10. La planta de arroz de la reivindicación 6, caracterizada porque la planta tiene un Número de Designación en el Depósito de Patentes NCIMB 41206, NCIMB 41207 ó NCIMB 41208.

11. La planta de arroz de la reivindicación 6, caracterizada porque el herbicida imidazolinona se selecciona del grupo que consiste en: ácido 2-(4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il)-nicotínico, ácido 2-(4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il)-3-quinolincarboxílico, ácido 5-etil-2-(4-isopropil -metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il)-nicotínico, ácido 2-(4-¡sopropiI-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il)-5-(metoximetil)-nicotínico, ácido 2-(4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-iI)-5-metiln¡cotínico, y una mezcla de 6-(4-isopropii-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il)-m-toluato de metilo y 6-(4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il)-p-toluato de metilo.

12. La planta de arroz de la reivindicación 1 , caracterizada porque el herbicida imidazolinona es ácido 5-etil-2-(4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il)-nicotínico.

13. La planta de arroz de la reivindicación 1 , caracterizada porque el herbicida imidazolinona es ácido 2-(4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il)-5-(metoximetil)-nicotínico.

14. Una parte de la planta de arroz de la reivindicación 1 , caracterizada porque la parte de la planta contiene el ácido nucleico AHAS variante.

15. Una célula de la planta de arroz de la reivindicación 1 , caracterizada porque la célula de la planta contiene el ácido nucleico AHAS variante.

16. Una semilla producida por la planta de arroz de la reivindicación 1 , caracterizada porque la parte de la planta de la semilla [sic] contiene el ácido nucleico AHAS variante.

17. La semilla de la reivindicación 16, caracterizada porque la semilla contiene el ácido nucleico AHAS variante, y en donde la semilla es la reproducción real para una tolerancia aumentada a un herbicida imidazolinona, en comparación con una variedad de tipo silvestre de la semilla de la planta de arroz.

18. La planta de arroz de la reivindicación 1 , caracterizada porque la planta es transgénica.

19. La planta de arroz transgénica de la reivindicación 18, caracterizada porque el ácido nucleico AHAS variante contiene una secuencia de polinucleotidos seleccionada del grupo que consiste en: (a) un polinucleótido como se define en la SEQ ID NO:1 , SEQ ID NO:3 ó SEQ ID NO: 5. (b) Un polinucleótido como se define en la SEQ ID NO: 11. (c) Un polinucleótido que codifica para un polipéptido, como se define en la SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4 ó SEQ ID NO: 6. (d) ' Un polinucleótido que codifica para un polipéptido, como se define en la SEQ ID NO: 12. (e) Un polinucleótido que contiene por lo menos 60 nucleótidos consecutivos de cualquiera de los mencionados de la a) a la d) anteriores; y (f) Un polinucleótido complementario para el polinucleótido de cualquiera de los mencionados del inciso a) al e), anteriores.

20. La planta de arroz de la reivindicación 18, caracterizada porque el ácido nucleico AHAS variante comprende una secuencia de polinucleótidos como se define en la SEQ ID NO: 1.

21. La planta de arroz de la reivindicación 18, caracterizada porque el ácido nucleico AHAS variante contiene una secuencia de polinucleótidos como se define en la SEQ ID NO: 3.

22. La planta de arroz de la reivindicación 18, caracterizada porque el ácido nucleico AHAS variante contiene una secuencia de polinucleótidos como se define en la SEQ ID NO: 5.

23. Una planta de arroz que tiene las características de tolerancia al herbicida de la planta con el Número de Designación en el Depósito de Patentes NCIMB 41206, NCIMB 41207 ó NCIMB 41208 y en donde la planta se selecciona del grupo que consiste en: (a) una planta que tiene un Número de Designación en el Depósito de Patentes NCIMB 41206, NCIMB 41207.Ó NCIMB 41208; (b) una planta que es un derivado recombinante o genéticamente manipulado de la planta que tiene el Número de Designación en el Depósito de Patentes NCIMB 41206, NCI B 41207 ó NCIMB 41208; (c) cualquier progenitor de la planta que tiene el Número de Designación en el Depósito de Patentes NCIMB 41206, NCIMB 41207 ó NCIMB 41208; ó (d) una planta que es progenitora de cualquiera de las plantas mencionadas del inciso a) al inciso c).

24. La planta de arroz de la reivindicación 23, caracterizada porque el herbicida imidazolinona se selecciona del grupo que consiste en: ácido 2-(4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il)-nicotínico, ácido 2-(4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-¡midazolin-2-il)-3-quinolincarboxílico, ácido 5-etil-2-(4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il)-nicotínico, ácido 2-(4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il)-5-(metoximetil)-nicotínico, ácido 2-(4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il)-5-metilnicotínico, y una mezcla de 6-(4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il)-m-toluato de metilo y 6-(4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il)-p-toluato de metilo.

25. La planta de arroz de la reivindicación 23, caracterizada porque el herbicida imidazolinona es ácido 5-etil-2-(4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il)-nicotínico.

26. La planta de arroz de la reivindicación 23, caracterizada porque el herbicida imidazolinona es ácido 2-(4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il)-5-(metoximetil)-nicotínico.

27. Una parte de la planta de, arroz de la reivindicación 23, caracterizada porque la parte de la planta contiene el ácido nucleico AHAS variante.

28. Una célula de la planta de arroz de la reivindicación 23, caracterizada porque la célula de la planta contiene el ácido nucleico AHAS variante.

29. Una semilla producida por la planta de arroz de la reivindicación 23, caracterizada porque la parte de la planta de la semilla [sic] contiene el ácido nucleico AHAS variante.

30. La semilla de la reivindicación 29, caracterizada porque la semilla contiene el ácido nucleico AHAS variante, y en donde la semilla es la reproducción real para una tolerancia aumentada a un herbicida imidazolinona, en comparación con una variedad de tipo silvestre de la semilla de la planta de arroz.

31. Un ácido nucleico AHAS aislado, caracterizado porque el ácido nucleico contiene un polinucleótido seleccionado del grupo que consiste en: (a) un polinucleótido como se define en la SEQ ID NO:1 , SEQ ID NO:3 ó SEQ ID NO: 5. (b) Un polinucleótido como se define en la SEQ ID NO: 11. (c) Un polinucleótido que codifica para un polipéptido, como se define en la SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4 ó SEQ ID NO: 6. (d) Un polinucleótido que codifica para un polipéptido, como se define en la SEQ ID NO: 12. (e) Un polinucleótido que contiene por lo menos 60 nucleótidos consecutivos de cualquiera de los mencionados del inciso a) al d) anteriores; y (f) Un polinucleótido complementario para el polinucleótido de cualquie'ra de los mencionados del inciso a) al e), anteriores, en donde el ácido nucleico AHAS aislado codifica un polipéptido AHAS que confiere tolerancia aumentada a un herbicida imidazolinona, en comparación con un polipéptido AHAS tipo silvestre.

32. El ácido nucleico AHAS aislado de la reivindicación 31 , caracterizado porque el ácido nucleico comprende un polinucleótido como se define en la SEQ ID NO: 1.

33. El ácido nucleico AHAS aislado de la reivindicación 31, caracterizado porque el ácido nucleico comprende un polinucleótido como se define en la SEQ ID NO: 3.

34. El ácido nucleico AHAS aislado de la reivindicación 31 , caracterizado porque el ácido nucleico comprende un polinucleótido como se define en la SEQ ID NO: 5.

35. El ácido nucleico AHAS aislado de la reivindicación 31, caracterizado porque el ácido nucleico comprende un polinucleótido que codifica para un polipéptido como se define en la SEQ ID NO: 2.

36. El ácido nucleico AHAS aislado de la reivindicación 31 , caracterizado porque el ácido nucleico comprende un polinucleótido que codifica para un polipéptido como se define en la SEQ ID NO: 4.

37. El ácido nucleico AHAS aislado de la reivindicación 31 , caracterizado porque el ácido nucleico comprende un polinucleótido que codifica para un polipéptido como se define en la SEQ ID NO: 6.

38. El polipéptido AHAS aislado, caracterizado porque el polipéptido se selecciona del grupo de secuencias de polipéptidos definidas en las SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO:6 Y SEQ ID NO: 12, caracterizado porque el polipéptido confiere tolerancia incrementada aun herbicida imidazolinona si se compara con un polipéptido AHAS tipo silvestre.

39. El polipéptido AHAS aislado de la reivindicación 38, caracterizado porque el polipéptido comprende un polipéptido como se define en la SEQ ID NO: 1.

40. El polipéptido AHAS aislado de la reivindicación 38, caracterizado porque el polipéptido comprende un polipéptido como se define en la SEQ ID NO: 4.

41. El polipéptido AHAS aislado de la reivindicación 38, caracterizado porque el polipéptido comprende un polipéptido como se define en la SEQ ID NO: 6.

42. Un método para controlar maleza en los alrededores de una planta de arroz, el cual consiste en aplicar un herbicida imidazolinona a la maleza y la planta, caracterizado porque la planta tiene tolerancia incrementada al herbicida imidazolinona si se compara con la variedad de la planta tipo silvestre, en donde la planta contiene un ácido nucleico AHAS variante que codifica para un polipéptido AHAS variante que contiene una sustitución de alanina a treonina,- si sircompara con un polipéptido AHAS de tipo silvestre, y en donde la sustitución de alalina a treonina corresponde a la posición 96 de la secuencia del aminoácido AHAS, como se muestra en la SEQ ID NO: 12.

43. El método de la reivindicación 42, caracterizado porque el ácido nucleico AHAS variante se selecciona del grupo que consiste en: (a) un polinucleótido como se define en la SEQ ID NO:1 , SEQ ID NO:3 ó SEQ ID NO: 5. (b) Un polinucleótido como se define en la SEQ ID NO: 11. (c) Un polinucleótido que codifica para un polipéptido, como se define en la SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4 ó SEQ ID NO: 6. (d) Un polinucleótido que codifica para un polipéptido, como se define en la SEQ ID NO: 12. (e) Un polinucleótido que contiene · por lo menos 60 nucleótidos consecutivos de cualquiera de los mencionados de la a) a la d) anteriores; y (f) Un polinucleótido complementario para el polinucleótido de cualquiera de los mencionados del inciso a) al e), anteriores.

44. Un método para producir una planta transgénica que tiene tolerancia incrementada a un herbicida imidazolinona, consiste en: (a) transformar una célula de la planta con uno o más vectores de expresión que contengan por lo menos un ácido nucleico AHAS variante que codifique para un polipéptido AHAS variante que contenga una sustitución alanina a treonina si se compara con un polipéptido AHAS tipo silvestre, en donde la sustitución alanina a treonina corresponda a la posición 96 de la secuencia del aminoácido AHAS, como se muestra en la SEQ ID NO: 12; y (b) producir de la célula de La planta una planta transgénica con una tolerancia aumentada a un ..herbicida imidazolinona, si se compara con una variedad tipo silvestre de la planta. '

45. El método de la reivindicación 44, caracterizado porque por lo menos un ácido nucleico AHAS variante contiene una secuencia de polinucleótidos seleccionada del grupo que consiste en: (a) un polinucleótido como se define en la SEQ ID NO:1 , SEQ ID NO:3 ó SEQ ID NO: 5. (b) Un polinucleótido como se define en la SEQ ID NO: 11. (c) Un polinucleótido que codifica para un polipéptido, como se define en la SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4 ó SEQ ID NO: 6. (d) Un polinucleótido que codifica para un polipéptido, como se define en la SEQ ID NO: 12. (e) Un polinucleótido que contiene por lo menos 60 nucleótidos consecutivos de cualquiera de los mencionados de la a) a la d) anteriores; y (f) Un polinucleótido complementario para el polinucleótido de cualquiera de los mencionados del inciso a) al e), anteriores.

46. Un método para controlar malezas en la cercanía de una planta de arroz, consiste en aplicar un herbicida imidazolinona a las malezas y la planta, en donde la planta comprende las características de tolerancia al herbicida de la planta que tiene un Número de Designación en el Depósito de Patentes NCIMB 41206, NCIMB 41207 ó NCIMB 41208 y en donde la planta se selecciona del grupo que consiste en: (a) una planta que tiene un Número de Designación en el Depósito de Patentes NCIMB 41206, NCIMB 41207 ó NCIMB 41208; (b) una planta que es un derivado recombinante o genéticamente manipulado de la planta que tiene el Número de Designación en el Depósito de Pa'tentes NCIMB 41206, NCIMB 41207 ó NCIMB 41208; (c) cualquier progenitor de la planta que tiene el Número de Designación en el Depósito de Patentes NCIMB 41206, NCIMB 41207 ó NCIMB 41208; ó (d) una planta que es progenitora de cualquiera de las plantas mencionadas del inciso a) al inciso c).