TWI242441B

TWI242441B - Pharmaceutical composition comprising cyclic somatostatin analogs

Info

Publication number: TWI242441B
Application number: TW091115003A
Authority: TW
Inventors: Thomas D Gordon
Original assignee: Sod Conseils Rech Applic
Priority date: 1998-06-16
Filing date: 1999-06-15
Publication date: 2005-11-01
Also published as: AR021161A1; WO1999065942A8; TWI242442B; TW527361B; AU4822399A; JP2002518409A; PL345037A1; NO20006320L; HUP0102902A2; EP1086131A1; WO1999065942A1; CN1305496A; RU2242481C2; HUP0102902A3; CN1200000C; NO20006320D0; TW200410986A; CA2335184A1; AU745493B2

Description

1242441

五、發明說明（1 ) 本發明係關於含有模擬咪唑順醯胺鍵結之環狀衍生物’其選擇性結合至生長激素釋放抑制因子（下稱「生長靜止素」）受體亞型。本發明亦係關製造本發明化合物之方法。生長靜止素（SRIF)為一種環狀十四肽激素含有雙硫橋介於3位置與14位置間，且具有抑制生長激素（GH)及甲狀腺刺激激素（TSH)釋放、抑制胰島素及升糖素釋放、及減少月酸分泌等性質。生長靜止素由胺基肽解酶及叛基肽解酶代謝結果導致作用時間短。生長靜止素結合至五種分立受體（SSTR)亞型，對各亞型具有相對兩親和力。本發明之較小且較剛硬之類似物對若干受體亞型具有高度選擇性。結合至生長靜止素亞型之不同類型係與下列病情及/或疾病的治療有關^活化2型及5型係與生長激素抑制且特別與生長激素分泌性腺瘤（肢端肥大症）及甲狀腺刺激激素分泌腺瘤有關，活化第2型但非第5型則可用於治療催乳激素分泌性腺瘤。其它與活化生長靜止素亞型相關的適應症包括血管再度狹窄，抑制膜島素及/或升糖素，及特別糖尿病，高血脂，胰島素不敏感’ X症候群，血管病變，增生性視網膜病變，唐恩現象及腎病變，抑制胃酸分泌及特別胃潰瘍，腸表皮及胰表皮瘺管’激躁性腸症候群，當平氏（Dumping)症候群，水篇症候群，愛滋病關聯腹瀉，化學治療誘發腹瀉，急性或慢性胰炎及胃腸激素分泌性腫瘤；治療癌症如肝腫瘤；抑制本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) --III ί I 訂-— — 1ίιί ^赢經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 4 1242441 L· η f L· A7 五、發明說明（2 ) 血管新生，治療發炎病症如關節炎；慢血管成形術，·預防移植物血管及、體移植排斥；效劑也可用於減輕病人體重。勝出血。生長靜止素促增生生長靜止素促效劑也曾揭示用於抑制幽門螺旋桿菌發明概诚一方面，本發明提供一種式（I)化合物， p1 a-(Y)n— 或其醫藥可接受性鹽，· 其中， Y及Z於各次出現時分別為D_4L_天然或非天然Q胺基酸； η於各次出現時分別為〇至5〇，但η不可同時為〇 ; m為0或1至1〇之整數； a為Η或R1 ; b為 OH，-OR1 或-NR9R9 ; 或a與b共同形成醢胺鍵結； R1分別為Η，（CrCd烷基或芳基-(CrC4)烷基；本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）

------------Μ ·! (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂· -線- 五發明說明（3) R為Η或選擇性取代部分選自包括（c「c找基，笨基，笨基-心c4)絲及雜環基^⑽基，此處選擇性取代部分係選擇性由-或多個取代基取代，取代基分別選自包括(CVC,)烷基，(C3_C8)環烷基，_〇_R6, _s(〇)q_R7 , ，-NHC0-R6 ’ 挪⑽，_c〇2R9，_c〇NR9R9及哪nr9r9 ，此處q為Ο，1，2或3 ; R3及R4分別為Η’ _原子或選擇性取代部分選自包括㈦心)烧基，（（3夂)環垸基，芳基及芳基貌基，· 此處選擇性取代部分係選擇性由—或多個取代基取代，取代基分別選自包括OH，（CVC挑基，（c丨_C4)烧氧基，芳氧基’芳基-(CVQ)燒氧基，_NR9R9，c〇〇H , _c〇Nw 及鹵原子； … 或R3及R4與其附接之碳共同形成選擇性取代芳基，此處芳基係選擇性由一或多個取代基取代，取代基分別選自包括oh，（cvq)院基，（cvc4)燒氧基，芳氧基，芳基_(C「C4) 烧氧基’ -NR9R9，COOR5，-CONR9R9及自原子； R5於各次出現時分別為H或選擇性取代部分選自包括 (crC4)烷基及芳基_(CrC：4)烷基，此處該選擇性取代部分係選擇性由一或多個取代基取代，取代基分別選自包括 ((VQ)烧基，〇H，（C「C4)烧氧基，芳氧基，N〇2，芳基·(ίν€；4) 烷氧基，-NR9R9，COOH，-CONR9R9及處原子； R6於各次出現時分別選自包括η，（CrC4)烷基，（c「 C4)烷氧基，芳基-(Crc4)烷基及芳基_(crc4)烷氧基；當q為3時R7為H，或當q為0, 1或2時R7於各次出現時本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 6 1242441 A7 五、發明說明（4 ) 分別選自包括（crc：4)烷基，芳基或芳基-(CrC4)烷基；以及 R9於各次出現時分別選自包括H，N〇2，烷基 ’ ^'基及芳基-(CVC4)烧基。車乂佳式（I)化合物為化合物丁rp_D-Trp-Lys-Abu-Phe ψ (4-(3-甲氧苯基）咪唑）-Gly-〇H。 ' 另一方面，本發明提供一種式（II)化合物，

0 (II) 或其醫藥可接受性鹽，· 其中， Y及Z於各次出現時分別為D_*L_天然或非天然α -胺基酸； m為0或1至1〇之整數； η於各次出現時分別為〇至6 ; Rl於各次出現時分別為Η，（CrC4)烷基或芳基-(CrC4) 烧基； R2為Η或選擇性取代部分選自包括（C「C4)烷基，苯基 ’苯基-(CVC4)烷基及雜環基烷基，此處該選擇性本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 297公釐〉 --------------裝--- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -線· 7 1 1242441 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 〜— _B7 五、發明說明（5 ) 取代部分係遘擇性由-或多個取代基取代，取代基分別選自包括（CVC4)炫;基’環烧基，-0_R6，_s(〇)q_R7，_n<r9r9) ，-NHC0-R6，·ΝΗ3〇2Ϊι9，_C〇2R9，_c〇Nr9心及·s〇2Nr9r9 ’此處q為〇，1，2或3 ; R3及R4分別為Η，鹵原子或選擇性取代部分選自包括 (q-C4)烷基，環烷基，芳基及芳基_(Ci_c4)烷基；此處選擇性取代部分係選擇性由一或多個取代基取代，取代基分別選自包括OH.，（CVQ)烷基’（Ci_C4)烷氧基，芳氧基= 芳基-(CVC4)烷氧基，-NW，C00H，-C〇nr9r9及由原子；或R3及R4與其附接之碳共同形成選擇性取代芳基，此處芳基係選擇性由一或多個取代基取我，取代基分別選自包括OH ’（CVC4)：^基，（C「C4)烧氧基，芳氧基，芳基烷氧基，-NR9R9，C00R5，-CONR9R9及鹵原子； R5於各次出現時分別為Η或選擇性取代部分選自包括 (crc：4)烷基及芳基_(CrC4)烷基，此處該選擇性取代部分係選擇性由一或多個取代基取代，取代基分別選自包= (CrC4)垸基，OH，（cvc4)院氧基，芳氧基，N〇2，芳基_(C1_C4) 烷氧基，-NR9R9，coog，-CONR9m _ 原子； R6於各次出現時分別選自包括H , (Ci<4)烷基， C4)烷氧基，芳基-(Ci_C4)烷基及芳基-(Ci_C4)烷氧基；當q為3時R7為H，或當q為〇, 1或二時尺於各次出現時分別選自包括（crc：4)烷基，芳基或芳基_(Ci_C4)烷基；以及 ι (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1242441 A7 -------- —_B7____ 五、發明說明（6 ) R9於各次出現時分別選自包括Η，N02，（CVC4)烷基 ’芳基及芳基-(CrC4)烷基； X1為天然或非天然D-或L_a-胺基酸，此處當力為？“ ，Nal，Trp，Tyr，pai或His時，其芳香環係選擇性由反6取代於妷或氮，或當χι為Ser或Thr時，支鏈氧選擇性由一或多個R1取代； X2為 D-或 L-Trp，N-甲基-D-Trp或 N-甲基-L-Trp ; X3為 Lys，·α-Ν-甲基-^或 £ -N_(Ci_c4)烷基忒^或 ε -N-[芳基-(CVC4)统基]-Lys ; X4為Λ然或非天然D-或L-α胺基酸，此處當X4為Phe ，Nal，Trp，Tyr或His時，其芳香環選擇性由R8取代於碳或氮，或當X4為Ser，Tyr或Thr時，莫支鏈氧可以一或多個R1取代。 — X，X，X3及X4間之鍵結為醢胺鍵，如同X!與ζ間之鐽結，及X4及Υ之鍵結·般。一組較佳式（II)化合物標示為Α組為其中，各個η為2 ; - m為0或1至5 ; . R1於各次出現時分別為Η，甲基或芳基气CrC4)烷基 ’ R為選擇性取代部分選自包括苯基烷基及雜環基-(CrC4)烷基，此處選擇性取代部分係由一個選自包括（CrC4)烧基及-〇-R6之取代基取代；以及 R及R分別為Η，_原子，或選擇性取代部分選自包本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） --------------裝·— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 上σ i線· 9 !242441 A7 B7 五、經濟部智慧財產局員工消 t 合作社印發明說明（7) 括（CrC：4)烷墓及芳基；此處該選擇性取代部分係選擇性由一個取代基取代，該取代基係選自包括0H，（<^-(：4)烷氧基，芳氧基及鹵原子。一組較佳A組化合物標示為B組為其中 X1 為 Phe，Nal，Trp ’ Tyr，Pal 或 His，其中其芳香環係選擇性由r6取代於碳或氮上；以及 X4 為 Val，Abu，Ser，Thr，Nal，Trp，Tyr 或 His，其中Nal，Tirp，Tyr及His之芳香環係選擇性由R8取代於碳及/ 或氮，或當X4為Ser，Tyr或Thr時支鏈氧係選擇性由尺1取代。較佳一組B組化合物標示為c組為其中 X1為Phe，T卬或Tyr其中其芳香瓖係選擇性由R6取代於碳或氮； X2為 D-Trp 或 N-甲基-D-Trp ; X3 為 Lys 或 a -N-甲基-Lys ; X4 為 Va 卜 Thr，Abu，Nal 或 Tyr，其中Thr 及 Tyr 之羥基之支鏈氧係選擇性由Rl取代； R於各次出現時分別為Η，甲基或节基； R2為選擇性取代部分選自包括苯基甲基及雜環基-甲基’此處該選擇性取代部分係由—個選自包括（c「c4)烧基及-0-R6之取代基取代； R3為（(VC4)院基或選擇性取代芳| ;此處該選擇性取代芳基係由一個選自包括OH ’ (Cl-C属基，芳氧基及鹵原子之取代基取代； (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 一裝 —訂---------. 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公爱一 10 1242441 A7 _____ _B7^___ 五、發明說明（8 ) R4為Η「以及 R於各次出現時分別選自包括Η及芳基_(CrC4)烷氧基。一組較佳C組化合物標示為]^^為其中 X1 為 Phe，Trp，Tyr或 Tyr(OBzl); X4 為 Va卜 Thr，Abu，Nal 或 Tyr，其中 Thr及 Tyr 之羥 -· 基為選擇性取代苄基； m為0，2或4 ; R2為選擇性取代部分選自包括苯基甲基或3-π引哚基甲基’此處該選擇性取代部分係選擇性由-〇-R6取代；以及 R3為1，1-二曱基乙基或選擇性取代芳基；此處該選擇性取代芳基係選擇性由一個選自包祛〇H，（Ci-c4)烷氧基及鹵原子之部分取代。 — 一組較佳D組化合物標示為ε組為其中 R2為苯基曱基；· R3為1，1-二甲基乙基或選擇性取代苯基，此處該選擇性取代苯基係選擇性由〇Η或〇CH3取代；以及」 R0於各次出現時分別選自包括Η或苄基曱氧基。，一組較佳Ε組化合物標示為F組為環[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-曱氧苯基）咪唑）· Gly]，環[TyrCOBzlhD-Trp-Lys-Val-PheW (4-(3-甲氧笨基）味哇)-Gly]，環[Trp-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-甲氧苯基）咪唉）· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） --------------裝--- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂： -線· 11 1242441 A7 ___B7_ 五、發明說明（9 )

Gly] ， · 環[Trp-D-Trp-Lys-Val-Phe¥ (4-(3-羥笨基）咪唑）-Gly]，環[Ti:p-D-Trp-Lys-Thr(OBzl)-Phe Ψ (4-(3-甲氧笨基）咪口坐）-Gly]，環[Trp-D-Trp-Lys-Thr-PheW (4-(3-經苯基）咪嗤)-Gly]，環[Trp-D-Trp-Lys-Abu-PheW (4-(3-甲氧苯基）咪唆）-Gly] 環[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(l，l-二甲基乙基) 咪峻）-Gly]，環[Phe-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-甲氧苯基）咪嗤）-Gly] 環[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Phe¥’(4-(3_ 曱氧苯基）咪唑 )-Gly]，環[Phe-D_Trp-Lys-Tyr-PheW (4-(3-曱氧苯基）口米唾）-Gly] ， … · 環[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-PheΨ (4-(3-經苯基）味吐)-Gly]，環[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-甲氧苯基）咪唑）-Gly]，環[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe¥(4-(3-羥苯基）咪唑)-Gly]，環[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Phe¥ (4-(3-經苯基）咪峻)-Gly]，環[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Phe¥ (4-(3-甲氧苯基）咪嗤）-Gly] 環[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(3-曱氧苯基）咪唾 )(.7 )-Abu]，本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ϋ ϋ ϋ n ϋ ϋ n 一：WJ· n n n n n - 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 12 1242441 A7 > _B7_ 五、發明說明（10 ) 環[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(4-甲氧苯基）咪唾 )-Gly]，環[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(苯基）σ米 σ坐）-Gly] 環[Trp-D-Trp-Lys-Tyi:(OBzl)-Phe¥ (4-(3-曱氧苯基）咪唑 — )-Gly]， • 環[Ti*p-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(3-甲氧苯基）咪唑 )-(ε)-Αίιχ]及環[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Phe¥ (4-(3-經苯基）咪峻)_ ( 7 )-Abu] ° 一組較佳F組化合物標示為G組為其中環[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-、甲氧苯基）σ米唾）-Gly] ，環[Tyr(OBzl)-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-甲氧苯基）咪唑 )-Gly]，環[丁印-0-1^-1^^-\^1-?1^¥(4-(3，甲氧苯基）咪口坐）-01;/] ’ - 環[Trp-D-Trp-Lys-Val-PheW (4-(3-羥苯基）口米唾）-Gly]，環[Trp-D-Trp-Lys-Thr(〇Bzl)-PheW (4-(3-甲氧苯基）味嗤 )-Gly]，環[Trp-D-Trp-Lys-Thr-PheW (4-(3-經苯基）咪嗤)-Gly]，環[Trp-D-Trp-Lys-Abu-PheW (4-(3-曱氧苯基）口米峻）-Gly] 環[?1^-〇-丁卬-1^5-丁740321)-?1^¥(4-(1，1-二甲基乙基）本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -------------裝--------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 13 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1242441 A7 _______B7______ 五、發明說明（11 ) 咪唑）-01}^]，- 環[Phe-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-曱氧苯基）咪唑）-Gly] 環[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-PheW(4-(3-羥苯基）咪唑）_Gly]及環[Tyr-D-Trp-Lys-Val-PheΨ (4-(3-羥苯基）咪唑）_Gly]。一組較佳G組化合物標示為Η組為環[TyrD-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-曱氧苯基）咪唑）-Gly] 環[Trp-D-Trp-Lys_Val-Phe Ψ (4-(3-甲氧苯基）咪唑）_Gly] ，環[Trp_D-Trp-Lys-Val-Phe¥(4-(3-羥苯基）咪唑）-Gly]，私*[丁印-1)-丁印-£/3^-1[111>?116见（4-(3-輕苯基）味17坐)-〇17]，環[Trp^D-Trp-Lys-Abu-Phe¥(4-(3-甲氧苯基）咪 n坐)-Gly] 1 環[Phe-D-Trp-Lys-Val-Phe¥ (4·(3-甲氧苯基）咪唑）_Gly] 或環[丁>^*-〇_丁印-1^5-\^1-?1]^¥(4-(3-經苯基）咪嗤)_(315^]0 一組較佳Η組化合物標示為I組為環[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-甲氧苯基）咪唑）-Gly]

J 環[Trp_D-Trp-Lys-Val-Phe¥(4-(3-羥苯基）咪ϋ坐)-Giy]，環[Trp-D-Trp-Lys-Thr-PheW (4-(3-羥苯基）味唑)_Gly]及環[1>1>〇-：[^-1^-\^1-?1^¥(4-(3-羥苯基）味唑)-〇17]。另一組較佳F組化合物標示為J組為本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝--------訂---------. 14 1242441 A7 _____B7__ 五、發明說明（l2 ) 環[Tyr-G-Trp-Lys-Val-PheW (4-(3-曱氧苯基）咪唑)-Gly] y 環[Trp-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-曱氧苯基）咪唾）-Gly] 壞[Trp-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-經苯基）味 ^)-Gly]，環[Trp-D-Trp-Lys-Thr(OBzl)-PheW (4-(3-甲氧苯基）咪唑 - )-Gly]，環[Trp-D-Trp-Lys-Thr-PheW (4-(3-經苯基）味嗤)-Gly]，環[Trp-D-Trp-Lys-Abu-PheW (4-(3-甲氧苯基）咪嗤)-Gly] 環[Phe-D-Trp-Lys，Tyr(0Bzl)-Phe¥(4-(l，l·二甲基乙基）味唾）-Gly]，、環[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Phe¥ (4-(3-曱氧苯基）口米嗤 )-Gly] ’ 環[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-PheW (4-(3-經苯基）咪嗤)-Gly]，環[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe¥ (4-(3-甲氧苯基）咪唑）-Gly]， - 環[Tyr-D-Trp-Lys-Val-PheW (4-(3-經苯基）口东嗤），Gly]，環[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Phe¥ (4-(3·經苯基）味唾)-Gly]，環[Phe-D-Trp-Lys-Nal-PheW (4-(3 -甲氧苯基）咪唑）-Gly] 環[Trp-D-Trp-Lys-Tyi:(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-甲氧苯基）咪唑）-Gly]，環[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(4-甲氧苯基）咪唑）- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） --------------裝--- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂：，丨線- 15 1242441 A7 B7_ 五、發明說明（13 )

Gly] ， _ 環[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe¥ (4-(苯基)咪嗤)-Gly]，環[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe¥ (4-(3-甲氧苯基）咪唾）-(ε )Ahx]及環[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-經苯基）咪唾）-( 7" )Abu] 〇一組較隹J組化合物標示為K組為環[Trp-D-Trp-Lys-Thr-PheW (4-(3-經苯基）味唾）-Gly]，環[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-PheW (4-(3-甲氧苯基）咪唾）-Gly]，環[Phe-D-Trp-Lys-Nal-PheΨ (4-(3_經苯基户米唾）-Gly]，環[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-曱氧苯基）咪唑）-Gly]，環[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe¥ (4-(4-甲氧苯基）口米口坐）-Gly]或 - 環[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-PheW (4-(苯基)味嗤)-Gly]。一組較佳K組化合物標示為L組為環[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-PheW (4-(3-甲氧苯基）口米吐）-Gly]，環[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-甲氧苯基）咪唑）-(r )Abu]，環[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-PheW (4-(4-甲氧苯基）喃嗤）-Gly]及環[1^-0-1^-1^^-丁}^(621)-?1^¥(4-(苯基)口米°坐)-01；7]。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝--------訂---------線康經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 16 1242441 A7 -—_B7五、發明說明（I4 ) 另一方面本發明提供一種醫藥組合物包含有效量之式（I)或式（II)化合物或其醫藥可接受性鹽及一種醫藥可接受性載劑。又另一方面，本發明提供一種於有需要之哺乳類提引出生長靜止素受體促效劑效果之方法，該方法包含對該哺乳類投予有效量之式（I)或式（11)化合物或其醫藥可接受性鹽。又另一方面，本發明提供一種於有需要之哺乳類提引出生長靜止素文體括抗劑效果之方法，該方法包含對咳哺乳類投予有效里之式（I)或式（II)化合物或其醫藥可接受性鹽。另一方面，本發明提供一種於有·需要之哺乳類治療下列疾病之方法：催乳激素分泌性腺瘤，血管再度縮窄，糖尿病’南脂血症’胰島素不敏感，X症候群，血管病變，增生性視網膜病變，·唐恩現象，腎病變，胃酸分泌，胃潰癌’腸表皮及騰表皮瘺管，激躁性腸症候群，當平氏症候群，水瀉症候群，愛滋病關聯性腹瀉，化學治療誘發腹瀉’急性或慢性騰炎，胃腸激素分泌性腫瘤，癌症，肝腫瘤，血管新生，發炎病疰，關節炎，慢性異體移植物排斥 ’血管成形術，移植物血管出血或胃腸道出血，該方法含對該哺乳類投予式（I)或式（II)化合物或其醫藥可接受包性 ^--- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ·- 丨線- 鹽 ’本發明提供一種於有需要之哺乳類提供 -種抑制幽門螺旋桿菌增生之方法，包含對該哺乳類投予另一方面本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 17 1242441 A7 B7 五、發明說明（i5 式（I)或式（iiy化合物或其醫藥可接受性鹽。另一方面，本發明提供一種製備下式化合物之方法

0= (i) 0 (··)

該方法包含經由割裂去除Prt基將下式化合物脫保護

一^R1 o=c R3 0 (b) 或

R3 -----:-------裝--------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製其中

Prt為胺基酸支鏈保謀基； Y及Z各自分別為D-或l-天然或非天然α-胺基駿選擇性含有經保護之支鏈，此處Η-Ν*為Υ定義之Ν-端胺基酸之胺基及0=C*為Ζ定義之c端胺基酸之羧基； η於各次出現時分別為1至5〇 ; 及所有其它變數皆定義如如上式（1)。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 18 1242441 A7 B7 五、發明說明（16 ) 其__古之面本發明提供一種製備下式化合物之方法

該方法包含：

HOOC (Z-Prt): ^R1

wr] CO

HOOC 广 rS (c·) 或 (b.) 對式（a)化合物，經由式（a，）化合物與肽偶合劑及添加劑反應形成Y定義之最末胺基酸之端末胺基與Z定義之最末胺基酸之端末羧基間之醢胺鍵；或對式（b)化合物而言’經由式（b’）化合物與肤偶合劑及添加劑反應，形成端末胺基與Z定義之最末胺基酸之端末羧基間之醯胺鍵；或對式（c)化合物而言，經由式（c’）與肽偶合劑及添加劑反應，形成γ定義之最末胺基酸之端末胺基與端末叛基間本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

19 遂^邹智慧材^奇員工消費合泎社印^ 1242441 Α7 五、發明說明（17 ) 之醯胺鍵；· 其中Prt為胺基酸支鏈保護基； Y及Z各自分別為D-或L-天然或非天然α _胺基酸選擇性含有經保護之支鏈，此處Η-Ν*為Υ定義之Ν-端胺基酸之胺基及0=C*為Ζ定義之c端胺基酸之羧基； η於各次出現時分別為1至50 ; 及所有其它變數皆定義如如上式（I) 〇又另一方面，本發明提供一種製備下式化合物之方法

該方法包含式 R Ο 化合物與式X，-CH(R3) C〇(R4) α -鹵酮於驗及極性質子惰性溶劑存在下反應至反應大致完成為止；蒸發去除極性質子惰性溶劑獲得固體；溶解固體於質子惰性有機溶劑及過量乙酸銨水溶液形成溶液；及回流溶液以及同時去除極性層獲得式（Α)化合物；其中 X為胺基保護基； X’為產原子；本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） r . ---------^--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1242441 A7 B7 發明説明（18 及所有其它變數定義如上式（1)。又另一方面本發明提供-種製備式_合物之方法，

Prt-⑺n>vRl R2

N，

R3 0) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

η->τ N

R5_pmV co2r· (B) ，，該方法含偶合式（B)化合物與Nα-經保護之胺基酸（Prt)-Y，此處經保護之胺基酸係呈其活性酯、酐或醯_形式，該反應係於驗存在下進行至反應大致完成獲得式（C)化合物為止

(Prt)-Y-N

R1 N、 Α)Λ4

R·5 .、可| R5- co2r· (C) ，使用習知脫保護反應選擇性將Na_經保護之胺基酸 (Prt)-Y之胺基脫去保護，及重複與另一Na-經保護之胺基酸進行偶合反應至獲得預定式（I)化合物； 21 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) Α4規格（210X297公釐） 1242441 A7 _______B7 五、發明說明（19 ) γ於各次出現時分別為D-aL_天然或非天然α •胺基酸選擇性有一支鏈帶有保護基；

Prt為胺基保護基； W為烧S旨或爷g旨； η為1至1〇〇 ; 及全部其它變數皆定義如上式⑴。另一方面，本發明提供一種製備式⑴化合物之方法定義如上，該方法包含偶合式（Β)化合物，式（Β)化合物被活化成其活性酯、酐或醯鹵與Ν-脫保護之肽-樹脂（a，），肽-樹脂（Α’）係藉肽合求業界人士眾所周知之方法製備，使用六氫咄啶於DMF，ΤΑΕΑ或類似鹼將Ν-端末Fmoc基脫保護，及使用強酸脫保護及由樹脂割裂所得中間物（B，）^ 全部變數皆定義如上式（I)。 —

另一方面，本發明提供一種製備式⑴化合物之方法 ’該方法包含偶合式（B)化合物（活化呈其活性酯、酐或醯齒）與N-脫保護之肽-樹脂（h)(藉肽合成業界人士眾所周知之方法製備），使用六氫毗啶於DMF及TAEA或類似鹼將N-端末Fmoc基脫保護，使用業界人士眾所周知之肽偶合反本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -— — — — — — I— ^ ·1111111· . 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 22 1242441 1丄 A7

^__BL 五、發明說明（2〇 ) 應以Ν α -Fmox-保護之胺基酸（X)醯化被釋放之N-端末胺基 ’視需要重複鹼脫保護及偶合步驟而合併額外胺基酸（X) ，使用強酸脫保護及由樹脂割裂去除所得中間物（C’）。全部變數定義如上式（I)。

另一方面，本發明提供一種製備式（I)化合物之方法，其包含偶合式（B)化合物（活化呈其活性酯、酐或醯鹵）至胺基取代樹脂例如參（烷氧）-苄基胺、樹脂（PAL樹脂），4-(2’，4’-二曱氧苯基-胺基甲基）-苯氧樹脂（N-脫保護林克樹脂），或二苯甲基胺樹脂；使用六氫咄啶於DMF，TAEA或類似鹼將N-端末Fmoc基脫保護；使用業界人士眾所周知之肽偶合反應以Ν α -Fmoc經保護之胺基酸（X)醯化被釋放之N-端末胺基；視需要重複鹼脫保護及偶合步驟而合併額外胺基酸（X);及使用強酸脫保護及由樹脂割裂去除所得中間物（D，）。全部其它變數皆定義如上式（I)。 -------------^---------^--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 23 1242441 A7 〜^—--B7____ 、發明說明（21 ) 另一方面，本發明提供一種製備式⑴化合物之方法 ’該方法包含式（B)化合物與鹼如碳酸鉋反應，所得酚系絶鹽（E’）與鹵甲基化聚笨乙烯樹脂如瑪麗菲爾肽樹脂反應，使用六氫咕啶或類似之有機鹼去除？1110(：保護基，以Να-Fmoc經保護之胺基酸（χ)使用業界人士眾所周知之肽偶合反應酿化被釋放出之Ν-端末胺基；視需要重複鹼脫保護及偶合步驟而合併額外胺基酸，使用六氩咄啶或類似有機鹼脫去Ν-端之最終經保護之肽序列及使用Tfa脫去C 端之經保護之肽序列，使用業界人士眾所周知之肽偶合反應環化所得中間物（F，），及使用強酸由樹脂割裂去除所得中間物（G’）。所有其它變數皆定義如上式。

另一方面本發明提供一種製備式（I)化合物（定義如上）之方法，該方法包含偶合式（B)化合物（活化呈其活性酯、酐或醯鹵）以N-脫保護肽-樹脂（A，）（藉業界人士眾所周知之方法製備），使用Tfa脫去N-端末Boc基之保護，及使用強酸如HF將支鏈保護基脫保護及由樹脂割裂去除所得中間物（H，）。全部變數皆定義如上式（I)。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) --------訂·丨丨丨丨丨丨丨·線. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 24 1242441 A7 B7 五、發明說明（22 Η2Ν· - (樹脂

Boc一； R2

HO--/ ^ O A，

Boc-N"R1 (CH2)m R4 0= 、R5 NH-(y)n«

H，另一方面，本發明提供一種製備式（I)化合物之方法，包含偶合式（B)化合物（活化呈其活性酯、酐或醯鹵）與藉業界人士眾所周知之方法製備的N-脫保護肽-樹脂（H)，使用Tfa脫去N-端末Boc基之保護，以、Na-Boc-經保護之胺基酸（X)使用業界人士眾所周知之肽偶合反應醯化釋放出的N-端末胺基，視需要重複Tfa脫保護及偶合步驟而合併額外胺基酸（X)，使用強酸脫保護及由樹脂割裂去除所得中間物（Γ)。全部變數皆定義如上式（I)。 Η·(χ)η—N’Rl

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）裝--- t請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •線· 25 1242441 A7 B7 五、發明說明（23 ) 另一方面，本發明提供一種製備式（I)化合物之方法，包含式（B)化合物與鹼如碳酸鉋反應，所得酚系铯鹽（Γ) 與鹵甲基化聚苯乙烯樹脂如瑪麗菲爾肽樹脂反應，使用Tfa 去除Boc保護基，以Na-Boc經保護之胺基酸（X)使用業界人士眾所周知之肽偶合反應醯化被釋放出之N-端末胺基，視需要重複Tfa脫保護及偶合步驟而合併額外胺基酸〇〇，使用Tfa脫去N-端之最終經保護之肽序列及使用無機鹼如氫氧化鋰於DMF水溶液脫去C端之最終經保護之肽序列，使用業界人士眾所周知之肽偶合反應環化所得中間物 (K’），及使用強酸由樹脂割裂去除所得中間物（L’）。全部變數皆定義如上式（I)。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Boc—N^R1 (C^)m R4

OEt

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製另一方面，本發明提供一種製備式（I)化合物之方法 ’包含偶合式（B)化合物（活化呈其活性S旨、酐或酿鹵）與N-脫保護肽，亦即藉業界人士眾所周知之方法製備之4-硝基二苯曱酮肟樹脂（M，)，使用丁fa脫去N-端末Boc基之保護，以Να -Boc經保護之胺基酸（X)使用業界人士眾所周知之肽偶合反應醯化釋放出之N-端末胺基，視需要重複Tfa脫保本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 26 1242441 A7 B7

Μ· Ν·

五、發明説明知 ) 護及偶合步驟而合併額外胺基酸（X)，使用Tfa脫去N_端末 Boc基之保護，環化及經由使用適當有機鹼割裂去除所得中間物N -脫保邊之中間物（N ’）’及使用強酸如氫氟酸去除支鏈保護基。全部.變數皆定義如上式（1)。 (CH2)m R4 NH-(x)n 詳細說明此處使用雜環一詞表示任何可出現於胺基酸支鍵之雜環。其範例包括但非限於苯并噻吩基，香豆基，。米唾基，吲哚基，嘌呤基，吼啶基，嘧啶基，喳啉基，噻唑基， σ塞吩基及三σ坐基。此處使用芳基一詞意圖表示任何各環含高達7成員之穩定單環或雙環碳環，其中至少一個環為芳香環。芳基之例包括聯苯基，四氫酰基，萘基，苯基及丨，^^四氫毡 0 本案中，若干縮寫標示用於胺基酸成分、某些較佳保護基、反應劑及溶劑。縮寫標示定義示於表1。本紙張尺度適用中關家群（CNS) Α4規格（210X297公釐） C請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} ;·裝· 27 1242441 A7 B7 五、發明説明幻 ) 細寫標不定義胺基酸 His L-組胺酸 Lys L -離胺酸 Nal L-3-(2-萘基）-丙胺酸 Phe L-苯基丙胺酸 Ser L-絲胺酸 Thr L-蘇胺酸 Trp L-色胺酸（除非另行標示） Tyr L-酪胺酸 Ahx 6-胺基己酸保護基 Boc 1，1-(二曱基乙氧）羰基 Cbz 苄氧羰基 Fmoc 9 -芴基甲氧幾基 Trt 三苯基甲基溶劑 DMF N，N-二甲基曱醯胺 THF 四氫腺喃 Λ : ' Et〇 Ac 乙酸乙酯反應劑 Tfa 三氟乙酸 NMM 4-甲基嗎啉 DIEA 二異丙基乙基胺 TEA 三乙基胺 TAEA 參（2-胺基乙基）胺 HOAT 1-羥-7-吖苯并三唑 HATU [0-(7-吖苯并三唑-1-基）-1，1，3,3-四曱基脲鏘六氟磷酸鹽 EDC 1-(3-二曱基胺基丙基）-3-乙基甲二醯亞胺鹽酸鹽 DCC 二環己基甲二醯亞胺 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 試管試驗檢定分析化合物對人類生長靜止素亞型受體1至5(分別為ssq， sst2，sst3，sst4及sst5)之親和力係經由測量抑制[125Ι-Tyrn]SRIF-14結合至CH0-K1轉移感染細胞決定。本纸張尺度適用中國國家標準（CNS) A4規格（210X297公釐） 1242441 A7 B7 五、發明説明（26 ) 人類381:1受體基因轉殖呈基因組片段。1.5 Kb PW1-Xmwl片段含有100 bp 5，-未轉譯區、1.17 Kb整體編碼區及 230 bp 3’-未轉譯區藉加入Bglll聯結子改質。所得DNA片段次轉殖於pCMV-81之位置產生哺乳類表現質體（由芝加哥大學Graeme Bell博士提供）。經由使用填酸4弓共同沉澱方法（1)轉殖感染入CHO-K1細胞（ATCC)獲得可穩定表現sst!受體之轉殖細胞系。質體pRSV-neo (ATCC)含括作為可選擇標記。轉殖細胞系係於含0.5毫克/毫升G4 18之 RPMI 1640培養基（Gibco)選擇，環化轉殖及於培養中擴增〇人類sst2生長靜止素受體基因單離呈1.7 Kb如mHI-//hi/III基因組DNA片段及次轉殖入質體載體pGEM3Z (Promega)係由（芝加哥大學）G· Bell博士善意提供。哺乳類細胞表現載體係經由將1.7 Kb 以III片段插入質體pCMV5之相容限剪核酸内切酶位置構成。轉殖細胞系係經由使用磷酸鈣共同沉澱法轉移感染入CHO-K1細胞獲得。質體pRSV-neo含括作為可選擇標記。人類sst3係於基因組片段單離，完整編碼序列包含於 2.4 Kb 片段。哺乳類表現質體pCMV-h3係於修改末端及加入EcoRl聯結子後經由將2.0 Kb iVcoI-//Μί/ΙΙΙ片段插入pCMV載體之EcoRl位置構成。穩定表現 sst3受體之轉殖細胞系係經由使用磷酸鈣共同沉澱法轉移感染入CHO-K1細胞（ATCC)獲得。質體pRSV-neo (ATCC) 含括作為可選擇標記。轉殖細胞系於含0.5亳克/毫升G418 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) Α4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ，裝丨 •、τ. 線— 29 1242441 Α7 Β7 五、發明說明（27) (Gibco)之RPMI 164〇培養基選擇，環化轉殖及於培養中擴增。人類sst4受體表現質體pCMV-HX係由（芝加哥大學 )Graeme Bell博士提供。載體含有j 4 Kb基因組片段編碼人類ss%，456 bp 5，_未轉譯區及2〇〇 bp 3，_未轉譯區’轉殖於PCMV-HX之办aUcoRl位置。可穩定表現sst4 受體之轉殖細胞系係經由使用磷酸鈣共同沉澱方法轉移感染CHO-K1細胞（ATCC)獲得。含括質體pRSV ne〇 (ATCC) 作為可選擇標記。轉殖細胞系係於含〇·5毫克/毫升G418 (Gibco)之RPMI 1640培養基選擇，環化轉殖，及於培養擴增。人類SSts基因係經由使用λ基、因組純株作為模版藉 PCR獲得且由（芝加哥大學邮咖㈣傳士善意提供。所得1·2 Kb PCR片段含有21鹼基對5，_未轉譯區、完整編碼區、及55 bp 未轉琿區。純株插入殖體pBSSK(+)之EcoRl 位置。插子回收作為Kb 片段用於次轉殖

入PCVM5哺乳類表現載體。可穩定表現s卟受體之轉殖細胞系係經由使用碟酸鈣共同沉澱法轉移感染cH〇_K1細胞 (ATCC)獲知。含括質體pRSV-ne〇 (ATCC)作為可選擇標記。轉殖細胞系於含〇·5亳克/毫升G418 (Gibc〇)tRpMI 1640 選擇，環化轉殖，及於培養擴增。可穩定表現人辦_sst受體之一的|CH0_K1細胞於RPMI 1640生長，培養基含有10%胎牛血瘠及0.4亳克/毫升健提辛（genetlcin)。細胞以〇·5 mM EDTA收集及於500 g於約4 本紙張尺度適用中國國家標準ο:ι^μ^Γ^〇χ 297公爱）乂請先閱讀背面之注意事項#<填寫本頁) ^ 裝·-------訂·！------· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 30 1242441 A7 B7 呈«Lr 卩-03 才 ln57lL.肖 ίΟτΛι 乍土 .:ΡΞ 氏五、發明說明（28 ) C離心約5分-鐘。丸粒再度懸浮於50 mM Tds，pH 7.4，於500 g於約4艺離心約5分鐘。細胞藉超音波振盪溶解且於39000 g於約4°C離心約10分鐘。丸粒再懸浮於相同缓衝液’及於5〇〇0〇 g於約4它離心約10分鐘，所得丸粒之膜儲存於。 ^ 於聚丙烯96孔平板重複兩次進行[mi-Tyr^SRIF-M之一競爭結合實驗。細胞膜（10微克蛋白質/孔）與[125I-

Tyrn]SRlF-i4 (0.05 ιιΜ)於約 37°C 於50 mM HEPES (pH 7·4)， - 〆〆—--一〜. 0.2% BSA，5 mM MgCl2，200 KIU/毫升)崔西洛（Trasylol)， 0.02亳克/亳升枯草桿菌素（bacitracin)及〇·〇2亳克/毫升苯基甲基續醯氟培育約6〇分鐘。得自游離[125I-Tyrn]SRIF-14之結舍物之分離方式係使用過濾機196 (Packard)細胞收穫機立刻通▲預先浸泡0.1 % 聚伸乙基亞胺（P.E丄）的GF/C玻璃纖維過濾板（Unifilter， Packard)過濾分離。過濾器使用50 mM HEPES於約0-4°C 洗約4秒及使用Packard頂端計數器檢定分析放射性。由總結合量扣掉非特異性結合（於〇·1 # M SRIF-14存 . 在下決定）獲得特異性結合。藉電腦輔助非線性迴歸分析 (MDL)分析結合資料並測定抑制常數（Ki)值。本發明化合物為促效劑或持抗劑係由下式檢定分析決定。功能檢定分析：抑制cAMP之胞内生產：可表現人類生長靜此素冬CH0、-K1細胞（SRIF- U)亞型受體播種於24孔組織培養多重，播種於含10% FCS及0.4 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 31 -------------裝--------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) A7 B7 1242441 五、發明說明（29 ) 毫克/毫升健提辛之RPMI 1640培養基。實驗前一天改變培養基。細胞於105細胞/孔藉0.5毫升新鮮RPMI含0.2% BSA且補充0.5 mM (1) 3-異丁基-1-甲基黃嘌呤（IBMX)洗兩次，及於約37°C培育約5分鐘。 •環狀AMP之生產係藉添加1 mM福斯克林 (forskolin)(FSK)於約 37°C 歷約 15-30 分鐘刺激。 •化合物之促效劑效果係藉同時加入FSK (1 // M)， SRIF-14 (ΙΟ·12 Μ 至 ΙΟ·6 M)及試驗化合物（ΙΟ·10 Μ 至 ΙΟ·5 M) 測量。 •化合物之拮抗劑效果係藉同時加入FSK (1/ζΜ)， SRIF-14 (1至10 ηΜ)及試驗化合物（1〇·1() Μ至ΙΟ·5 Μ)測量〇移出反應培養基及加入200毫升0.1 Ν鹽酸。使用放射性免疫檢定分析方法（套件組急速平板SMP001A，新英格蘭核公司）測量。放射性配基結合檢定分妍

試管試驗受體結合檢定分析用膜之獲得方式係均化 (Polytron，設定值6，15秒）CK0-K1細胞，表現hsst受體亞型，於冰冷50 mM Tris-HCl，及於39,000 g (10分鐘）離心兩次，中間再懸浮於新鮮培養基。最終丸粒再懸浮於1 〇 mM Tris-HCl用於檢定分析。用於hsst3，hsst4，hsst5檢定分析，各分膜製品與0,05 nM[125I_Tyrll]SRIF-14 於 50 mM HEPES (pH 7.4)於約37°C培育約30分鐘，HEPES含有BSA 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）

-------線· (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 32 1242441 A7 ____B7_ 五、發明說明（3〇 ) (10毫克/毫升·）；氯化鎂（5 mM)，崔西洛（200 KIU/毫升），枯草桿菌素（0.02毫克/毫升）及苯基甲基磺醯氟（〇.〇2毫克/ 毫升）。最終檢定分析容積為0.3毫升。用於hsst2檢定分析，採用[125Ι]ΜΚ-678 (0·05 nM)作為放射性配基及培育時間係於約25°C歷約90分鐘。使用布 •藍得過濾歧管快速通過GF/C過濾器（預先浸泡於0.3%聚伸乙基亞胺）終止培育。各管及過濾器隨後使用5毫升冰冷緩衝液洗三次。· 特異性結合定義為結合的總放射性配基減於1000 nM SRIF-14 (1^311，3,4,5)或100〇11]^]^〖-678對1153{2之結合量〇本發明化合物可於活體内檢定分析結合至生長靜止素受體之用途，包括對生長靜止素亞型受體之特異性結合，採用之方法為業界人士眾所周知例如參考下述參考文獻 :I· Shimon等人「於人類胚胎腦下垂體培養之生長靜止素受體亞型特異性」，J. Clin. Invest.，Vol. 99，No.4，pp. 789-798，1997;及C· Gilon等人「主幹-環狀，受體5-選擇 ‘ 生長靜止素類似物：合成、生物活性及核磁共振組態分析」，J· Med· Chem. 1998, 41，919-929。如業界人士眾所周知，生長靜止素促效劑及/或拮抗劑已知以及可能的用途有多種變化。生長靜止素之變化用途摘述如後：生長靜止素促較劑可用於抑制生長激素及更特別生長激素分泌性腺瘤（肢端肥大症）及TSH分泌性腺瘤；治療本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） --------------裝--------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 33 1242441 A7 B7 五、發明說明（31 ) 催乳激素分泌性腺瘤；抑制胰島素及/或升糖素更特別抑制糖导病，血管病變，增生性視網膜病變、唐恩現象及腎病變；抑制胃酸分泌及更特別胃潰瘍；腸表皮及胰表皮瘺管；激躁性腸症候群；當平氏症候群；水瀉症候群；愛滋病關聯腹瀉；化學治療誘發腹瀉；急性或慢性胰炎及胃腸激素分泌性腫瘤；治療癌症如肝腫瘤；抑制血管新生；治療發炎性病症如關節炎；視網膜病變；慢性異體移植物排斥；金管成形術；預防移植血管及胃腸出血。如此本發明之範圍包含醫藥組合物包含至少一種如此處所述本發明化合物作為活性成分結合醫藥可接受性載劑。本發明化合物可經口、腸外（例如肌肉、腹内、靜脈或皮下注射或植入）、經鼻、陰道、直腸：舌下或局部投樂途控投藥.，且可與醫藥可接受性載劑配方獲得適合用於各種投藥途徑的劑型。_ 口服投藥用之固體劑型包括膠囊劑、錠劑、丸劑、散劑及粒劑。固體劑型中，活性化合物混合至少一種惰性醫藥可接受性載劑例如蔗糖，乳糖或澱粉。此等劑型如同正常實務包含惰性稀釋劑以外之其它物質，例如潤滑劑如硬脂酸鎂。於膠囊劑、錠劑及丸劑之例，劑型也包含緩衝劑。錠劑及丸劑額外可製備成包腸衣。口服投藥用之液體劑型包括醫藥可接受性乳液劑、溶液劑、懸浮液劑、糖漿劑、酏劑含有業界常用之惰性稀釋劑如水。除了此等惰性稀釋劑外，組合物也包括佐劑如本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) --------^---------^ - 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 34 五、發明說明（32) 濕潤劑、乳化劑及懸浮劑及甜味劑、矯味劑及香味劑。根據本發明之腸外投藥用製劑包括無菌水或非水溶液劑、懸浮液劑或乳液劑。非水溶劑或媒劑之例有丙二醇 ’聚乙二醇，植物油類如橄欖油及玉米油，明膠及注射用有機酯類如油酸乙酯。此等劑型也含有佐劑例如保藏劑、濕潤劑、乳化劑及分散劑。其例如可通過細菌留滯性過濾膜過濾，攙混滅菌劑於組合物，光照射組合物，或加熱組合物等方式滅菌。也可製造呈無菌固體組合物形式，恰於使用前溶解於無菌水或若干其它無菌注射介質。直腸或陰道斧藥用之組合物較佳為栓劑，其除了活性物質外含有賦形劑如可可脂或栓劑蠟。經鼻或舌下投藥組合物也可使用、·業界之標準賦形劑製備。 · 進一步，本發明化合物可呈持續釋放組合物投藥，例如下列專利案所述，美國專利第5,672,659號教示包含生物活性劑及聚酯之持續釋放組合物。美國專利第 5,595,76G號教示包含明膠形式之生物活性劑之持續釋放組合物。美國專利申請案第〇8/929,363號申請日1997年9 月9日教示包含生物活性劑及甲絲糖之聚合物持續釋放組合物。美國專利申請案第〇8/74〇,778號申請曰”“年^ 月1日教示包含生物活性劑及環糊精至持續釋放組合物。美國專利案第09/015,394號申請日1998年j月29日教示生物活性劑之可吸收性持續釋放組合物。前述專利案及^請案之教示内容併述於此以供參考。 1242441 Α7 Β7 1、發明說明（33 ) 本發明組合物之活性成分劑量可有變化；但要求活性成分量可獲得適當劑型之量。選用劑量隨預定療效、投藥途徑及治療時間而定。通常〇.〇〇〇1至1〇〇毫克/千克體重每曰之劑量投予人類及其它動物例如哺乳類來獲得療效。較佳劑$為0.01至5·0毫克/千克體重每日可呈單劑或劃分為多劑投藥。本發明化合物可根據後文說明及反應圖I合成。於第一步驟，其α 胺基使用B〇c，cbz或其它適當基保護之胺基酸使用無機驗例如氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸奸或最佳為碳酸鉋於極性溶劑如水、DMF、THF等轉成竣酸鹽。真空去除溶劑，殘餘鹽再溶解於極性質子惰性溶劑如dmf ’於約-20 C至約100°C最佳於室溫以、、擾拌加入適當α -鹵鲷。持續攪拌約10分鐘至約24小時或攪拌至藉tlC分析證貫酯之生成完成為止，此時於約至約1〇〇艺，最佳於約 40 C至約70 C真空濃縮溶液。中間物再溶解於質子惰性有機溶劑如苯、甲苯或最佳二甲苯類及加入約5倍至約j 倍或最佳約15-20倍過量之乙酸銨。二相混合物回流加熱及極性層利用丁史塔克啡經歷約1至約4小時時間完全去除獲得粗製中間物（Α)，其可以粗製形式或藉結晶或管柱層析術純化使用。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（2】0 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---------線- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 36 1242441 A7 B7 五、發明說明（34)

反應圖I

X-N

I丨 »1 R1 Ο :例如 CBZ,BOC 1. C、C03/DMF/H20 OH 2. Br.CH(R3)CO(R4) 3. NH.OAc

X-l-N ：R

R3 (A) iS'

1.脫保護或衍生 3·選擇性衍生 .Rl

V-N

R1 ,N W 1··溶液肽4合成

R3 R2

2.環化及ji脫保護 (B) b-(Z),

N

R3 --------------裝--- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (C) 訂· 丨線- 於第二步驟，中間物使用催化氫化或強酸如HF，HC1 ，HBr或Tfa脫保護。然後α -氮使用鹼敏感保護基例如 Fmoc基使用市售Ν-(9·芴基甲氧羰基氧）丁二醯亞胺及碳酸鉀於例如乙腈及水保護。另外-Cbz_保護咪唑氮可使用經保護之叛酸酯函化物烧化，及使用催化氫化脫去α -胺基之保護獲得B，（V=H，W=-(CH2)mCR5C2OR，，此處R，表示烧基或苯甲酸酯）。咪唑氮可使用市售三苯基曱基氯及第三胺驗例如4-甲基-嗎啉，二異丙基乙基胺或三乙基胺保護獲得Fmoc經保護之中間物，其隨後使用鹼例如TAEA 脫去α -胺基之保護獲得中間物（B) (v==h，W=Trt)。另外 N-脫保護之咪t»坐b”（V=H，W=H)可未經進一步改質即供使用。於第三步驟，中間物B，B，或B”用作目標肽之連續溶本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 37 1242441 A7 _________B7 五、發明說明（35 ) 液相合成之碇繫基。如此旋繫基以每升約50-200毫莫耳濃度溶解於乙酸乙酯及加入約丨至5莫耳當量或更佳hl至15 莫耳當量>^411100經保護之胺基酸呈活化酯、酐或醯鹵形式。混合物以第二層弱鹼例如碳酸鈉水溶液或更佳礙酸氫納水浴液授拌至反應完成為止。移出水層及加入約1至1 〇毫升/毫莫耳或更佳約2-4毫升/毫莫3TAEA或六氫咄啶及此合物攪拌約30分鐘。然後溶液以飽和氣化鈉溶液洗滌（使用約30毫升/.毫莫耳洗兩次）及然後使用10%磷酸鹽缓衝溶液調整至ΡΗ=5·5 (使用約1〇毫升/毫莫耳洗滌三次）。隨後係以第一週期之方式進行隨後各週期。最終胺基酸於Ν α使用Boc或Fmoc基保護。於第四步驟，N-端末及C-端末保·護基使用鹼水溶液或強酸去除，所得肽中間物可使用傳統肽偶合技術環化，例如述於「肽合成實務」，Bodanszky及Bodanszky， Springer-Varlag，1984·。如此肽中間物溶解於質子惰性溶劑如DMF，溶液藉加入第三胺鹼如‘曱基嗎啉調整為鹼性。中間物之緩酸部分藉加入1至6倍莫耳過量之甲二醯亞胺如DCC或EDC及添加劑例如1-經苯併三^坐活化。混合物於約0°C至l〇〇°C，最佳於約室溫攪拌至反應完成。於最終步驟’經保護之肽使用催化氫化或強酸例如HF ，HC1，HBr或Tfa去除保護基獲得終產物（c)，此處…至^ ，a，b，Y，Z及η定義如上式⑴。浸潰質譜資料係於配備有ESI(電噴霧游離）來源之

Finnigan SSQ 7000光譜儀上測量。NMR資料係於300MHz 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1_1 —1 ϋ n n Ί n 訂------- ——線表經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 38 A7 1242441 ____B7___ 五、發明說明（36 )

Varian Unity光譜儀得自濃度約10-20毫克/毫升於指定溶劑之樣本。另外，本發明化合物可使用固相肽合成技術製備。如此中間物A (X=Boc)例如使用溴乙酸乙酯及適當鹼如碳酸鉀於質子惰性溶劑如DMF烷化，及所得乙基酯中間物使用驗水溶液如氫氧化鈉水解獲得中間物B (V=Boc，W=-CH2C02H)。中間物B (V=Boc，λν=-0：Η2(ΙΌ2Η)可使用已知活化技術活化.，例如述於「肽合成實務」，Bodanszky及 Bodanszky，Springer-Varlag，1984，且直接用於偶合至於固體擔體上生長的肽，或者中間物B (V=Boc，W=_ CH2C〇2H)可直接附著於固體擔體而開始固相合成。N—端末Boc基例如使用Tfa脫保護可於業界人士已知條件下繼續進行肽合成。 ^ 中間物B例如（V=Fmoc，W=-CH2C02t-Bu)可以酸如Tfa 處理去除保護羧酸之第三丁酯，所得中間物B(例如V=Fmoc ’ W=-CH2C〇2H)可使用Fmoc策略用於固相肽合成。如此中間物B (V=Fmoc，W=-CH2C02H)可使用已知活化技術活化，例如述於「肽合成實務」，Bodanszky及Bodanszky， Springer-Varlag，1984，直接用於偶合至於固體擔體上生長中的肽。N-端末Fmoc基例如使用六氫毗啶脫去保護可於業界人士已知條件下允許肽合成繼續進行。環狀類似物之固相合成也可根據如下反應圖Η進行。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -------------^ · I -------^---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 39 1242441 A7 B7 五、發明說明（37 )

I應圖II

R··。 R--NR

0-樹月· 烷基，苄基 588 Boc, Fmoc (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) I I 1 I I--訂· - ------· - 經濟部智慧財產局員工消賢合作社印製中間物A (X=Boc或Cbz，R3=2-甲氧笨基，3-曱氧苯基或4-甲氧苯基）可使用1M ΒΒγ3於二氣甲烷處理約i/2小時獲得自由態紛A (X=H，R3=2-經笨基，3-經苯基或4-經苯基）。然後α -氮使用酸敏感之保護基例如Boc基使用二碳酸-二-第三丁酯及鹼例如氫氧化鈉於水可溶混之有機溶劑例如二，烷與水之混合物保護。中間物A (X=Boc，R3=2-M苯基，3-羥苯基或4-羥苯基）例如使用溴乙酸乙酯及適當驗如破酸舒於質子惰性溶劑如DMF烧化獲得乙S旨中間本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 40 1242441 A7 B7 五、發明說明（38)

物D。然後申間物D藉碳酸鉋作用轉成鉋鹽。鉋鹽與瑪麗菲爾樹脂過量反應獲得中間物E。中間物E接受後芦處理，使用標準Boc固相肽合成或標準Fmoc固相合成如前述後' 續處理獲得中間物F。當構成完整胺基酸序列時，c_端乙酯使用適當鹼如氫氧化鋰於DMF水溶液脫去軍蓋，肤使用標準活化方案環化，標準活化方案例如甲二醯亞胺與例如羥苯并三唑及第三胺鹼如二異丙基乙基胺獲得中間物G 。最終支鏈脫保護及由樹脂割裂係藉加入極強酸例如氟化氫獲得本發明化合物。本發明將藉下列實例舉例說明但非限於其細節。實例1 環[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(f 甲氧苯基）咪峻）_

Gly] --------------裝— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ij·

—線- 實例1係根據下示合成反應圖1合成本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 41

I 1242441 A7 B7 五、發明說明（39 )反應圖1 ·

OH CBZN rJ Ο 3. NH4OAc 4. 6N HC1 1. Cs2C03/DMF/H20 2. Br-CH(R4)CO-R3

Fmoc-OSu/i^COj CH3CN/H20

FmocN

Trityl-Cl/NMM r3 ch2ci2

FmocN^ R3 R1 Trt

(c) 溶液合成

Fmoc-(Z)-X，-X2-X3-X4H

Tit

1. Tfe/iPr3SiH 2. Br-(CH2)mCHR5C02Et/ KHCO3/DMF (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Fm〇C-(Z)n-X丨-Χ2-Χ3-Χ4·(Υ)η々，丫 (e) WL R4广〇入0) R1 .

1. 丁AEA/£tOAc 2. NaOH/H20/McOH 3. EDC/HOBt/DMF 〒4-(Y)„—N· L R2 R3 Hj/Pd / 碳 X HOAc (CH2)m -(z)r

〇

(g) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (f)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） 42 1242441 A7 二一______B7___ 五、發明說明（4〇 ) 免驟a- : ⑻-胺基-2-苯基乙基）-4-(3-甲氧苯基）-咪口坐 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Cbz-(L)-苯基丙胺酸（10·0克，33 4毫莫耳及碳酸铯 (5.44克，16.7毫莫耳）組合於2:1/〇乂？：水（75毫升）及混合物攪動至均勻。於藏壓下去除溶劑，殘餘物溶解kDMF (7〇毫升）及加入2-溴_3’_曱氧苯乙酮（7·65克，33.4毫莫耳）於 • DMF (30毫升）。混合物於室溫攪拌3〇分鐘然後於減壓下濃縮。所得酮_.醋溶解於二曱苯（15〇毫升）及過濾去除溴化鉋。加入乙酸銨（40.0克，〇·52莫耳）及混合物回流加熱約2 小時，使用丁史塔克阱去除過量乙酸銨及釋放出的水。反應經冷卻及以飽和碳酸氫鈉溶液（5〇亳升）及餘和氯化鈉溶液（50毫升)洗務。二甲苯層以硫酸鈉脫水，過濾及真空濃殘餘物溶解於二哼烷（30毫升），加入6迓鹽酸（115毫升）及混合物回流加熱約玉小時。溶液經真空濃縮及以乙醚（4 XI00毫升）研製。殘餘物經真空脫水至恆重獲得1215克 (99%)中間物 la，質譜294.2 MH+。 ▲ 2-(l-(SH(芴基甲氧）幾基）胺基苯基乙基）_ 4-(3-曱氧笨基）-咪唑中間物la (11.8克，32·2毫莫耳）溶解於1:1/乙腈：水（200 亳升）及分成數分小心加入碳酸卸（5·38克，39毫莫耳）。加入9-苟基甲基-丁二醯亞胺基碳酸酯及所得混合物激烈攪拌約20分鐘。產物以乙酸乙酯（1〇〇毫升）萃取，乙酸乙酯層以水（2X50毫升）洗滌。乙酸乙酯層以硫酸鈉脫水，過本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 43 1242441 A7 _____B7____ 五、發明說明（41 ) 遽及真空'/農縮。產物於♦膠（15 0克）藉急速層析純化，使用2:2:1/二氣甲烷••己烷類：乙酸乙酯然後使用1:1/己虎類：乙酸乙酯溶離。匯集產物溶離分及真空濃縮獲得中間物lb呈淡黃色發泡體，14.77克（85%)。質譜516.3 MH+，NMR (300MHz，DMS0-d6)，11.8-12.0 (1H，S)，7·8-8·0 (3H，d)， 7·6-7·8 (2Η，d)，7·5 (1Η，s)，7.1-7.5 (12Η，m)，6.7-6.9 (1Η，d) 4.8-5.0 (1H，m)，4.1-4.3 (3H，m)，3.7-3.9 (3H，s)，3.0-3.4 (2H，m)· 靜c. : 2-(l-(S)-((芴基甲氧）羰基）胺基-2-苯基乙基）-4-(3-甲氧苯基)-1-三苯基甲基-咪唑中間物lb (13·9克，26.9毫莫耳）於氮下溶解於二氯甲烷（50毫升），加入4-甲基嗎啉（2.96毫#，26·9毫莫耳）及氣三苯基曱烧（7.51克，26·9毫莫耳），任溶液於室溫授拌約45 分鐘。藉過濾去除固體，濾液於矽膠（300克）藉急速層析純化，使用70:30/己烧·類：·乙酸乙酯作為溶離劑。合併產物溶離分及真空濃縮獲得中間物lc呈發泡體，18.0克（88%) 。NMR (300MHz，DMSO-d6)，7.84-7.95 (2H，d)，7.7-7.8 (1H，d)，7·6-7·7 (1H，d)，6·7-7·5 (29H，m)，4·3-4·5 (1H，m)， 3.75-3.95 (2H? m) 3.75-3.85 (3H, s), 3.6-3.7 (1H, m)5 2.65-2·85 (1H，d，d)，2.05-2.2 (1H，m)· ^^_d：2-(l-(S)-((Fmoc-Tyr(OBzl)-D-Trp-Lys(Cbz)-Val) 胺基-2-苯基乙基）-4-(3-甲氧苯基）-1-三苯基甲基-咪唑中間物lc (1.89克，2.50亳莫耳）溶解於乙酸乙酯（4〇亳升），加入參（2-胺基乙基）胺（9毫升）及混合物激烈攪拌約本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) . n n n n ϋ n I 一：口 V · ϋ ϋ n I ϋ ϋ ϋ I · 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 44 1242441 A7 ___B7____ 五、發明說明（42 ) 半小時。乙酸乙酯層以飽和氣化鈉溶液（2χ12〇毫升）洗滌 ,然後以10%磷酸鹽緩衝液調整至約ρΗ=5·5 (3Χ40毫升）洗滌。乙酸乙酯層以飽和碳酸氫鈉溶液（4〇毫升）攪拌及加入 Fmoc-Val-F (1·02克，3.00毫莫耳）。反應攪拌約H、時及去除水層。然後中間物係以類似前述Fmoc-Val-F週期所述方式循序脫去保護且與 Fmoc-Lys(Cbz)-OSu，Fmoc-D-Trp-OSu及 Fmoc-Tyr(OBzl)-OSu偶合。乙酸乙酯層以ι·5倍容積己烧類稀釋及施加至矽膠管柱藉急速層析術純化，首先使用 50:30:20/二氣甲烷：乙酸乙酯：己烷類然後使用4:1/乙酸乙酯：己烷類作溶離劑。匯集產物溶離分及真空濃縮獲得中間物1(1呈白色發泡體，19〇克，（46%)。質譜1581.2]^犯+， 1559.5 ΜΗ+. 兔麗上：Κ(2-乙氧-2-氧基）乙基）-2-(l-(SH(Fmoc-

Tyr(OBzl)-D-Trp-Lys(Cbz)-(Val)胺基-2-苯基乙基）-4-(3-甲氧笨基）-味TT坐中間物Id (519毫克，〇·33亳莫耳）溶解於Tfa (10亳升）含iPhSiH (205微升，ΐ·〇毫莫耳），混合物攪拌約15分鐘。 ' 中間物藉加入乙醚（60亳升）沉澱及過濾。質譜1316 MH+。中間物溶解於DMF (3亳升），加入碳酸氫鉀（198毫克，2.0 毫莫耳）及溴乙酸乙酯（721微升，6.5毫莫耳），及混合物於至溫授拌隔夜。混合物經真空濃縮，溶解於二氯曱烧（i 〇毫升）及以水（10毫升)洗滌。二氯曱烷層以硫酸鈉脫水，過;慮及真空遭縮獲得粗製中間物1 e (540毫克）其未經進一本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -------------裝--------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 45 1242441 A7 ----B7 五、發明說明（43 ) 步純化即供4用。步-慰•環[Tyr(0Bzl)-D-Trp-Lys(Cbz)-Val-Phe¥ (4-(3- 甲氧苯基）咪嗤:l-Glyl 中間物le (540毫克，〇·33毫莫耳）懸浮於乙酸乙酯（1〇亳升）及加入參（胺基乙基）胺（1毫升）及混合物激烈攪拌約半小時。加入乙酸乙酯（1〇毫升）及溶液以飽和氯化鈉溶液

(2 X 25毫升）洗務然後使用1〇%磷酸鹽緩衝液（pH=5.5，3 X 1〇毫升）洗滌。·中間物藉加入己烷類（4〇毫升）沉澱，溶劑經傾析。殘餘物溶解於甲醇（1〇毫升）及於室通與2·5迓氫氧化納（0.5毫升）擾拌隔夜。混'合物以水稀釋至混濁及pH調整至約6·7。過濾去除脫去保護之中間物及真空脫水。固體攝取於DMF (25毫升）及加入DCC (3^0毫克，1.65毫莫耳）及HOBt (252毫克，1.65亳莫耳）。混合物於室溫攪拌約2 小時及減壓濃縮。粗產物於矽膠藉急速層析純化使用乙酸乙酯作為溶離劑。合併產物溶離分及真空濃縮獲得中間物 If呈玻璃狀物（180毫克，48%得自中間物Id)。質譜1134.5 MH+ 〇步驟 g :環[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe¥ (4-(3-甲氧苯基）咪唑）-Gly] 中間物If (180毫克，0.16毫莫耳）溶解於乙酸（10毫升）含10%鈀/碳（24毫克）及混合物於氫（25psi)於室溫振搖約8 小時。過濾去除觸媒及殘餘物經真空濃縮。粗製混合物係由全然脫去保護之物質（去除Cbz及苄基醚）及部分脫保護之物質（去除Cbz而保留苄基醚）組成。混合物於VYDAC蛋本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝--------訂---------. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -46 1242441 A7 ________B7___；五、發明說明（44 ) 白質及肽柱（雀巢集團公司，麻省南布勞）使用20%至 7〇% CH/N/O.l% Tfa梯度藉製備惟HPLC純化經歷約55分鐘。合併極性較高之峰之純溶離分，濃縮及凍乾（2><1〇亳升0.5%鹽酸，然後1Χ10毫升水）獲得實例1標題化合物，45 毫克（29%)。質譜 910.4 ΜΗ+。實例2 環[Tyr(OBzl)-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-甲氧苯基）咪口坐）-Gly] 實例2係大致根據合成圖1實例1製備，但使用適當胺基酸。合併純化lg所得極性較低峰之純溶離分，濃縮及凍乾（2X10毫升〇·5%鹽酸，然後lx 1〇毫升水）獲得實例2標題化合物，33毫克（21%)。質譜1〇〇〇·4、ΜΗ+。實例3 環[Trp-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-甲氧苯基）咪唑）· Gly] · 實例3係根據合成反應圖1大致以類似實例1之方式製備但有下列差異：步驟 d : 2-(l-(S)-((Fmoc-Trp-D-Trp-Lys(Cbz)-Val)胺基 -2-本基乙基）-4-(3 -甲氧苯基）-1-(三苯基曱基）-味嗤中間物lc (757毫克，1·0亳莫耳）溶解於乙酸乙酯（2〇 . 亳升）’加入參（2-胺基乙基）胺（3毫升）及混合物激烈授拌約半小時。乙酸乙酯層以飽和氯化鈉溶液（2 X 6〇毫升）洗滌然後使用10%磷酸鹽緩衝溶液調成至pH約5.5 (3X20毫升）。乙酸乙酯層以飽和碳酸氫鈉溶液（20毫升）攪拌及加本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝訂· •線· 47 1242441 A7 __________wr_ 五、發明說明（45 ) 入Fm〇C-Val-F(825毫克，2·33亳莫耳）。反應攪拌約j小時，及去除水層。隨後中間物脫保護及與Fmoc-Ly^Cbz^OSu，Fm〇c-D-Trp-OSu 及 Fmoc-Tyr-OSu 以類似恰如前週期之方式偶合。乙酸乙酯層以丨.5倍容積己烷類稀釋及施加至石夕膠管柱藉急速層析術純化，首先使用5〇:3〇:2〇/二氯甲烧•乙酸乙酯••己烧類然後使用4:1/乙酸乙酯：己烧類作溶離劑。匯集產物溶離分及真空濃縮獲得中間物3(1呈白色發泡體，1.02克，（68%)。質譜11492.0 MNa+，1514.2 ΜΗ、兔_-驟 e : 1((2•乙氧 _2_ 氧基）乙基）-2-(l-(SH(Fmoc-Trp-D-Trp-LyS(Cbz)-Val-)胺基 _2_笨基 '乙基曱氧苯基 )-咪唑中間物3d(1.00克’ 0.67亳莫耳）溶解於二氯甲烧（1〇亳升）’ Tfa (1毫升）及iPhSiH (205微升，1·〇毫莫耳）之混合物及混合物攪拌約20分鐘。加入1:1/乙醚：己烷類（1〇〇毫升）混合物及過濾出中間物及脫水（088克）。中間物溶解於 DMF (10亳升），加入碳酸氫鉀（2〇〇毫克，2·〇〇毫莫耳）及 >臭乙酸乙酯，反應於室溫攪拌隔夜。混合物於減壓下濃縮獲得中間物3e，其未經進一步純化即供使用。質譜1335 7 MH+ 兔驟 f ••環[TrP-D-Trp-Lys(Cbz)-Val-Phe Ψ (4-(3-甲氧笨基）喃唾）-Gly] 中間物3e(粗製，0.67毫莫耳）溶解於甲醇（1〇毫升）及本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公爱） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝.-------訂---------- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 48 1242441 A7 ____B7__ 五、發明說明（46 ) 於室溫與2·5Ν氫氧化鈉（1.0亳升）攪拌約45分鐘。混合物以水稀釋至混濁及pH調整至6.9。傾析去除溶劑及殘餘物以水研製獲得淡黃色粉末（650亳克，質譜1〇85·5 mh+)。粉末（629毫克）溶解於DMF (20亳升）然後加αΝΜΜ (22〇微升 ’ 2.0毫莫耳），EDC (192毫克，ι·0亳莫耳^H〇Bt (153毫克，1 ·0毫莫耳）。混合物於室溫擾拌約2小時及真空濃縮 ' 。粗產物溶解於一氣甲烧（15亳升）及以1 〇%填酸鹽缓衝溶液（調整至ρΗ=5·5)洗滌。二氣甲烷層以硫酸鈉脫水，過濾及濃縮至2毫升。加入乙醚沉澱產物，產物經過濾出及脫水獲得。中間物3f (44〇毫克，7.1%)。質譜1067.4 ΜΗ+。步歡:環[TrP-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4·(3-甲氧苯基）口米口坐）-Gly] 中間物3f (200毫克，0.19亳莫耳）溶解於乙酸（15毫升）含10%鈀/碳（40毫克），混合物於氫氣（25psi)於室溫振搖2 曰。過濾去除觸媒及殘餘物經真空濃縮。粗產物藉製備性 HPLC純化’於C18柱（RaininMicrosorb 80-220-C5)使用 20% 至70%乙腈/0.1% Tfa梯度溶離約55分鐘。需要第二回合使用30%至50%乙腈/0.1 % Tfa溶離約55分鐘來獲得良好分離。合併純溶離分，濃縮及凍乾（2X10毫升0.5%鹽酸然後1 X10毫升水）獲得貫例3標題化合物，26毫克（14%)。質譜 933.5 MH、實例4 環[Trp-D-Trp-Lys-Val-PheW (4-(3-羥苯基）咪唑）-Gly] 實例4係根據合成反應圖1以大致類似實例1之相同方本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） --------------裝 i I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂· -線- 49 1242441 、發明說明幻式製備但有下列差異：竟肩卫··環[Trp-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-羥苯基）咪唑）-Gly] 土 ’、中間物3f (150毫克，o.m毫莫耳）溶解於二氣曱烷（12 亳升）及於氮下加入1級三溴化硼於己烷類之溶液。所得漿液攪拌約1/2小時。加入曱醇（1〇毫升）及混合物於真空下濃縮。粗混合物藉製備性HPLC^Ci8柱純化，使用24%至 48%乙腈/〇·2%乙酸銨梯度溶離約5〇分鐘。合併純溶離分 ’波縮及凍乾（2X10毫升水）獲得實例4標題化合物，4〇毫克（29%)。質譜919.4 1^+。實例5 環[Trp-D-Trp-Lys-Thr(〇Bzl)-Phe Ψ (4-(3-甲氧苯基）咪唑）-Gly] 貫例5係根據反應圖1以大致類似實例3之方式製備，但於步驟d使用Fm〇c-Thr(OBzl)-F替代Fm〇C-Val-F。質譜 1025.5 MH+。實例6 環[Trp-D-Trp-Lys-Thr-PheW (4-(3-羥苯基）咪唑）-Gly] 實例6係根據反應圖1以大致類似實例4之方式製備，但於步驟g使用中間物5f，環[丁rp-D-Trp-LyS(CbZ)-Thr(OBzyl)-PheW (4-(3 -曱氧苯基）咪唑）-Gly]替代中間物3f 。質譜1025.5 MH+。實例7 — Η-Ίϊρ-D-Trp-Lys-Abu-Phe Ψ (4-(3-甲氧苯基）咪唑本紙張尺度適用中國國家標準（0^) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填窝本頁)

50 1242441 A7 __B7_ 五、發明説明細 )

Gly-OH (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 實例7係根據反應圖1以大致類似實例3之方式製備，但於步驟3d使用Fmoc-Abu-F替代Fmoc-Val-F及於步驟3f未執行使用曱二醯亞胺及1103〖之環化。質譜93 7.3 ^«1+。實例8 環[Trp-D-Trp-Lys-Abu-Phe Ψ (4-(3-曱氧苯基）味嗤）-

Gly] 實例8係根據反應圖1以大致類似實例3之方式製備，但於步驟3d使用Fmoc-Abu-F替代Fmoc-Val-F。質譜919.5 MH+ 〇實例9 環[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-PheW(4-(l，l-二甲基乙基）咪唑）-Gly] 實例9係根據反應圖2製備。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) A4規格（210X297公釐） 51 1242441 A7 B7 五、發明說明（49

Boot

OH O 1. Cs2C03/DMF/H20 2. Cl-CH(R4)CO(R3) 3. NH4OAc 4. MeOH^O/HCl

HN

溶液合成 R*

Fmoc-(Z)n-X1-X2-X3-X4-(Y)n-N

BrCC^^CHR^OjEt/ KHC03/DMF ·

Fmoc-(Z)n-Xl-X2-X3-X4-(Y)n-]

R· /N ⑻ wn一。lR5 0

1. Na0H/H20/Me0H 2. EDC/HOBt/DMF (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) Ώ 1

H2/Pd /碳 HOAc

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製步驟a · 2-( 1 -(S)-胺暴-2-苯基乙基）-4-(1，1-二甲基乙基 )-咪也

Boc-(L)-苯基丙二酸（5.31克，20.0毫莫耳）及碳酸铯 (3.26克，10.0毫莫耳）於1:1/DMF :水（50毫升）合併及混合物攪拌至獲得均質混合物。減壓下去除溶劑及殘餘物溶解於DMF (50毫升）及加入1-氣pinacolone (2.63毫升，20.0毫本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 52 1242441 A7 —______ B7__ 五、發明說明（5〇 ) 莫耳）。混合^勿於至溫授摔隔夜然後於減壓下濃縮。所得酮-S旨溶解於二甲苯類（100毫升）及過濾去除溴化铯。加入乙酸知:（25.0克，0.33莫耳）及混合物回流加熱約2小時同時使用丁史塔克阱去除過量乙酸錄及釋放出的水。反應經冷卻及以飽和碳酸氫鈉溶液（50毫升）洗滌，以硫酸鈉脫水， .過濾及真空濃縮。經保護中間物於矽膠使用80:20/己烷類 :乙酸乙酯作溶離劑藉急速層析純化，獲得3.45克（50%) 結晶中間物（質譜344.3 ΜΗ+)。中間物溶解於曱醇（3〇毫升）及加入濃鹽酸（5.0毫升）及混合物攪拌約3小時。溶液於真空濃縮及殘餘物由THF及乙醚沉澱。固體經真空脫水獲得 1·89克（95%)中間物 9a〇NMR (300MHz，DMSO-d6)，8.5-10.5 (3H，寬 s)，7.3-7.4 (1H，s)，7.15-7.35 0H，m)，7·0-7·1 (2H， m)，4.9-5.1 (1H，t)，3.5-3.65 (2H，d)，1·2-1·3 (9H，s). ^^_iL_ · 2-(1 - (S)-((Fmoc-Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Tyr (OBzl))-胺基-2-苯基乙·基）-4-(1，1-二甲基乙基）_iH-咪唑中間物9a (790毫克，2·50毫莫耳）溶解於乙酸乙酯（4〇毫升）’加入參（2-胺基乙基）胺（9毫升）及混合物激烈授拌約半小時。乙酸乙酯層以飽'和氣化鈉溶液（2 X 120毫升）洗滌及然後以10%磷酸鹽緩衝液調整至約ρΗ=5·5 (3 X 40亳升) 洗滌。乙酸乙酯層以飽和碳酸氫鈉溶液（4〇亳升）搜拌及加入 FmocTyr(OBzl)-OSu (1.02 克，3.00 毫莫耳）。反應攪拌約1.5小時及去除水層。中間物循序脫去保護及以類似恰如前述之Fm0C-

Tyr(OBzl)-OSu週期之方式與Fmoc-Lys(Cbz)-OSu，Fmoc· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ^--------t--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 53 1242441 A7 B7 五、發明說明（51 ) D-Trp-OSu及Fmoc-Phe-OSu偶合。乙酸乙ϊ旨層施加至石夕膠管柱用於藉急速層析使用1 %乙酸/乙酸乙酯作溶離劑純化。產物溶離分經匯集及真空濃縮。粗產物再溶解於乙酸乙酯，藉加入己烧類沉殿及過渡。固體經真空脫水獲得中間物 9h，1.67 克，（52%)。質譜 1280.7 MH+。步驟 e ： 4-(1，1-二甲基乙基）-2-(l-(S)-((Fm〇C-Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Tyr(OBzl)-)胺基-2-苯基乙基）-1-(2-乙氧-2- 氧基-乙基）-咪唑中間物9h (128毫克，0.10毫莫耳）溶解於DMF (2毫升），加入碳酸鉀（35毫克，0.25亳莫耳）及溴乙酸乙酯（28微升 ’ 0.25毫莫耳）及混合物於室溫授摔隔夜。混合物經真空濃縮，溶解於乙酸乙酯（10亳升）及以、水（10毫升）洗滌。乙酸乙酯層以硫酸鈉脫水，過濾及真空濃縮獲得粗製中間物 9e (126毫克，92%)，其未經進一步純化即供使用。 1 [phe-D-Trp-Lys(Boc)-Tyr(〇Bzl)-Phe Ψ (4-(3- 甲氧苯基）咪唑）-Gly] 中間物9e (116亳克，0.085毫莫耳）懸浮於乙酸乙酯（2 亳升）及加入參（胺基乙基）胺（〇·5毫升）及混合物激烈攪拌約1/2小時。加入乙酸乙酯（1〇亳升）及溶液以飽和氣化鈉溶液（2X5毫升）洗滌然後以1〇%磷酸鹽緩衝溶液（ρΗ=5·5， 3X5毫升）洗滌。中間物藉加入己烷類（4〇亳升）沉澱及過濾出中間物（76毫克）。殘餘物溶解於甲醇（2亳升）及於室溫與 2題氫氧化納（0.1毫升）授摔隔夜。混合物以水稀釋至混濁及ΡΗ調整至約6.0。過渡去除脫去保護之中間物及真空脫 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝--------訂--------- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 54 1242441 A7 ____B7_ 五、發明說明（52 ) --------------裝·— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 水。固體攝敢於DMF (20毫升）及加入DCC (126毫克，0.60 毫莫耳）及HOBt (90毫克，0.60毫莫耳）。混合物於室溫攪拌約6小時及真空濃縮。溶解於乙酸乙酯（5毫升）及以飽和碳酸氫鈉溶液（1 X 5毫升）及飽和氣化鈉溶液（5毫升）洗滌。以硫酸鈉脫水，過濾及真空濃縮獲得中間物9f。質譜1098.5 MH+。 ‘ 步驟 g ：環[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-PheW (4-(l，l-二甲基乙基）咪唑）-Gly] · 中間物9f(粗製，0.085毫莫耳）溶解於Tfa (9.4毫升）含 iPr3SiH及水（0.5毫升），攪拌約20分鐘及減壓濃縮。粗製混合物於C18管柱藉製備性HPLC純化，使用30%至60%乙腈/0.1 % Tfa梯度溶離約50分鐘。第二'回合使用32%至80% 乙腈/0.2 %乙酸銨溶離約50分鐘來獲得良好分離。合併純溶離分，濃縮及凍乾（2X10毫升0.5%鹽酸，然後IX 10毫升水）獲得實例9標題化合物，9毫克（10%)。質譜998.4 MH+ 〇實例10 環[Phe-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-曱氧苯基）咪唑）- - G1y] 〆實例10係根據反應圖1以類似實例3之方式製備，但於步驟 d 使用 Fmoc-Phe-OSu 替代 Fmoc-Trp-F。質譜 894.4 MH+ 實例Π 環[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(3-甲氧苯基）咪本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 55 1242441 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（53 ) 峻）-Gly] 實例J1係根據反應圖1以類似實例3之方式製備，但於步驟d使用Fmoc-Phe-OH替代Fmoc-Trp-F及使用Fmoc-Tyr(OBzl)-OH替代 Fmoc-Val-F。Fmoc-Tyr(OBzl)-OH以 DCC 及市售乙酸活化。步驟g之粗製混合物係由完全脫保護物質（Cbz及苄基醚皆被去除）及部分脫保護物質（Cbz被去除及苄基醚保留）組成。由部分脫保護所得極性較低峰獲得實例11標題化合物。質譜1(M8·5 MH+。 f例12 環[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Phe Ψ (4-(3-曱氧苯基）咪唑）-

Gly] 實例12係根據反應圖1以類似實>〗3之方式製備，但於步驟d使用Fmoc_Phe-OH替代Fmoc-Trp-F及使用Fmoc-Tyr(OBzl)-OH替代 Fmoc-Val-F。Fmoc-Tyr(OBzl)-OH 以 DCC 及市售乙·酸活化。步驟g之粗製混合物係由完全脫保護物質（Cbz及苄基醚皆被去除）及部分脫保護物質（Cbz被去除及苄基醚保留）組成。完全脫保護所得極性較高峰獲得實例12標題化合物。質譜958.4 MH+。實例13 環[Phe-D-Trp-Lys-Tyr_PheW (4-(3-羥苯基）咪唑）-Gly] 實例13係根據反應圖1以類似實例4之方式製備，但於步驟g使用中間物Ilf 環[Phe-D-Trp-Lys(Cbz)-Tyr(OBzl)-PheW (4-(3-甲氧苯基）味唑）-Gly]替代中間物3f。質譜944.6 MH+。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝--------訂---------線在 56 A7 1242441 __B7_ 五、發明說明（54 ) 實例14 - 環[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-PheW (4-(3-甲氧苯基）喃嗤 )-Gly] 實例I4係根據反應圖2以大致類似實例9之方式製備，但有下列差異：步驟h ： 2-(l-(S)-((Fmoc-Trp-D-Trp-Lys(Cbz)-Tyr(Bzl)) • -胺基）-2-苯基乙基）-4-(3-甲氧苯基）-1-(三苯基甲基）-咪唑肽合成係以類似步驟9h之方式進行，但使用Fmoc-Trp-OSu 替代 Fmoc-Phe-OSu，使用 Fmoc-Lys(Boc)-OSu 替代 Fmoc-Val-OSu及使用 Fmoc-Tyr(Bzl)-OSu 替代 Fmoc-Val_ :、 ... OSu。產率=783 毫克（57%)，質譜= 1370.6 MH+。步驟 e : 1-((2-乙氧-2-氧基）乙基）-2-( 1-(S)-((Finoc-Trp_D-Trp-Lys(Boc)-Tyr(OBzl))-胺基）-2-苯基乙基）-4-(3-甲氧苯基）-咪唑中間物14h之烷化·係以類似反應9h之方式完成，產率 =640 毫克（80%)，質譜= 1456.3 MH+。步驟 f ••環[Trp-D-Trp-Lys(Boc)-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-曱氧本基）嗦σ坐）-Gly] . 中間物14e (640毫克，0.44毫莫耳）溶解於15毫升甲醇及加入2·5Ν氫氧化鈉（1毫升，2.5毫莫耳）。混合物攪拌約半小時然後藉加入5%鹽酸溶液將pH調整至約7.0。於減壓下去除曱醇及水層經傾析。殘餘物於減壓下徹底脫水然後溶解於15毫升DMF。加入DCC (206毫克，1.0毫莫耳）及 HOBt (153亳克，1·〇毫莫耳）及任反應攪拌隔夜。反應經本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -------I ^--------^ · I I I I---- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 57 1242441 A7 __B7__ 五、發明說明（55) 真空濃縮，溶解於乙酸乙酯（1〇毫升）及以10%磷酸鹽緩衝液ρΗ=5·5洗兩次。然後乙酸乙酯層施用至矽膠管柱及產物以更大量乙酸乙酯溶離。產物溶離分經合併及濃縮得240 毫克（46%)中間物14f。步驟 g :環[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-曱氧苯基）咪唑）-Gly] 中間物14f (240毫克，0.20毫莫耳）溶解於二氣甲烷（1〇毫升）及加入Tfa (10毫升）含有iPr3SiH (205微升，0.20毫莫耳）。混合物於室溫攪拌約15分鐘。於減壓下蒸發去除二氯甲烷及粗產物藉加入醚沉澱。溶劑經傾析及殘餘物進一步於C1S管柱藉製備性HPLC純化，使用30%至50%乙腈/0.1 % Tfa梯度溶離約55分鐘。合併純溶難分，濃縮及凍乾（2 X10毫升0.5%鹽酸，然後1X10毫升水）獲得實例14標題化合物，25 毫克（11°/〇)。質譜 1087.4 MH+。實例15 · 環[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe¥ (4-(3-羥苯基）咪嗤）-Gly] 實例15係根據合成反應圖1以大致類似實例4之方式製備但有下列例外：步驟 g :環[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-經苯基）咪嗤）-Gly] 中間物If (130毫克，0.115毫莫耳）溶解於二氣甲烷（5 毫升）及於氮氣下加入1M三溴化硼於己烷類（5毫升）溶液。所得漿液攪拌約半小時然後冷卻至約0°C。加入甲醇（10 毫升）及混合物經真空濃縮。粗製混合物施加至C18管柱，本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝--------訂--------- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 58 - 1242441 A7 B7 五、發明説明和 ) 以1 %乙酸叙 >谷液洗條’以0 · 1 % T fa溶液洗務，然後使用2 〇 % 至35%乙腈/0.1% Tfa梯度溶離約50分鐘。合併純溶離分，濃縮及凍乾（2 X 10毫升0.5%鹽酸）獲得實例丨5標題化合物，60毫克（54%)。質譜896 MH+。實例16 環[Phe-D-Trp-Lys-Nal-PheW (4-(3-羥苯基）味唑）-Gly] 實例16係根據反應圖1以大致類似實例3之方式製備但有下列差異：步驟 d : 2-(l-(S)-((Fmoc-Phe-D-Trp-Lys(Cbz)-Nal-)胺基）-2-苯基乙基）-4-(3 -曱氧苯基）-1-(三苯基曱基）-cr米唾

•. V 中間物16d係以大致類似中間物Id之相同方式製備，

但使用 Fmoc-Nal-OAt替代 Fmoc-Val-F及使用 Fmoc-Phe-〇H 替代 Fmoc-Tyr(Bzl)-OH。步驟 g ••環[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-經苯基）味唾）-Gly] 步驟16g係以大致類似步驟4g之方式進行獲得實例16 化合物。質譜980.0 MHT。 umi 環[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Phe Ψ (4-(3-甲氧苯基）味哇）-

Gly] 實例17係根據反應圖1以大致類似實例1 6之方式製備但有下列例外·· 免驟 g -:環[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-曱氧苯基）咪唑）-Gly] 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) •裝丨 ’訂— -59 - 1242441 A7 --------B7 _— 一五、發明說明（57 ) 中間物17f (310亳克，〇·27毫莫耳）懸浮於茴香醚（3毫升）及懸浮液以約12毫升無水氟化氫處理。混合物於約ye 授拌約1小時。祭餾去除氟化氫及產物藉加入醚沉殿。粗產物經過濾、及進一步藉製備性HPLC純化，使用20-80%乙腈/0.1% Tfa梯度溶離約4〇分鐘。合併純溶離分，濃縮及由稀鹽酸溶液束乾兩次。產率=56毫克（19%)，質譜992.4 MH+。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝·------—訂---I-----線· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 60 1242441 A7 B7 五、發明說明（58)

CBZN

Ο 1, C^CCVDMF/I^O R2 2. Br-CH(R4)COR3 CBZ，

(0

1. Br-(CH(R5)C02tBu /KjCOj/DMF 3. NH4OAc 2.H2/Pd/碳 K4

裝--- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 線實例18 環[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe¥ (4-(3-甲氧苯基）咪唑 -(7 )Abu] 實例18係根據合成反應圖3製備。步里:2-(l-(SH苯基甲氧）羰基）-胺基-2-苯基乙基）_ 4-(4-甲氧苯基）-咪唑

L

Cbz-(L)-苯基丙二酸（1〇.〇克，33.4毫莫耳）及碳酸鉋本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 61 1242441 A7 ^_____B7____ 五、發明說明（59 ) (5.44克，16.7亳莫耳）合併於2:1/〇!^?:水（75毫升）及混合物攪拌至均質。於減壓下去除溶劑，殘餘物溶解於dmf(7〇笔升）及加入2->臭-3’-曱氧苯乙_(7.65克，33.4毫莫耳）於 DMF (30毫升）。混合物於室溫攪拌約半小時然後於減壓下濃縮。所得酮-酯溶解於二甲苯類（15〇亳升)及過濾去除溴化絶。加入乙酸銨（40·0克，〇·52莫耳）及混合物回流加熱約2小時去除過量乙酸銨及使用丁史塔克阱去除釋放出的水。反應經冷卻及以飽和碳酸氫鈉溶液（5〇亳升）及飽和氯化鈉溶液（50毫升）洗滌。二曱苯層以硫酸鈉脫水，過濾及真空濃縮獲得中間物18i呈褐色固體（13·8克，96%)。質譜428.2 (ΜΗ+) 〇 ±Al: 2-(l-(S)-胺基-2-苯基乙基）-U(4-(l，l-二甲基乙氧）-4-氧基-丁基）-4-(4-甲氧苯基）-咪唑· 中間物18i (2· 14克，5.0亳莫耳）溶解於DMF (11.5毫升）及以碳酸氫鉀（1.50克·，15.0毫莫耳）及丁酸4-溴-第三丁酯 (6.69克，30毫莫耳）分成三份處理伴以於約50°C攪拌約18 小時。混合物以醚稀釋及以飽和碳酸氫鈉溶液洗一次及以飽和氣化鈉溶液洗一次。醚層以硫酸鈉脫水，過濾及濃縮成油。於矽膠藉管柱層析使用二氣甲烷作溶離劑獲得產物呈油。粗製烷化產物使用10%鈀/碳作觸媒於乙酸氫化脫去保護。過濾去除觸媒及於減壓下蒸發去除溶劑。殘餘物溶解於乙酸乙酯及以飽和碳酸氫鈉溶液及飽和氯化鈉溶液洗滌，以硫酸鈉脫水及濃縮獲得中間物18j呈油（450毫克），本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ---------線· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 62 1242441 A7 ______B7____ 五、發明說明（6〇 ) 其未經進一步純化即用於次一步驟。步ϋ :O.OaBoc-Trp-D-Trp-LysCCbzhVal)-胺基 -2-苯基乙基）-1-((4-( 1，1-二甲基乙氧）-4-氧基-丁基）-‘(3-甲氧苯基）-咪唑溶液合成係以類似步驟Id所述合成細節之方式進行，但使用 Boc-Trp-OSu 替代 Fmoc-Tyr(OBzl)-OSu 及使用， FmooTyr(OBzl)_OAt替代Fmoc-Val-F獲得中間物 18k。產率=1.03 克（81%)。步驟 1 : 2-(l-(S)-((H-Trp-D-Trp-Lys(Cbz)-Val)-胺基-2-苯基乙基）-1-((4-羥-4-氧基-丁基）-4-(3-曱氧苯基）-咪唑中間物18k使用含（iPr)3SiH (593微升，2.90亳莫耳）於 Tfa (10毫升）之溶液處理及攪拌約一小時。反應經濃縮及以1:1醚：己烷類溶液研製獲得中間物181呈褐色固體，其未經進一步純化即用於次一步驟。質譜1267·7 MH+ 免驟 f :環[Trp-D-Trp-Lys(Cbz)-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-甲乳苯基）咪唾_(7)Abu] 中間物181溶解於DMF (20毫升）及4-甲基嗎啉（159微升’ 1·45毫莫耳），加入HOBt (196毫克，1.45毫莫耳）及EDC (278毫克，丨.45毫莫耳）及反應攪拌隔夜。反應經蒸空濃縮及於.石夕膠藉急速層析純化使用二氯甲烷：甲醇（9:1)作溶離劑獲得中間物18f。產率=220亳克（24%)。質譜1249.7 MH+ 免:環[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-甲氧苯基）咪唑-(7 )Abu] 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 x 297公釐） (請先閱讀背面之>i意事項再填寫未頁) --较：訂： ;線- 63 1242441 A7 B7 五、發明說明（61 ) 中間物l*8f (220毫克，176微莫耳）於乙酸於3〇pSi氫氣於室溫使用10%鈀/碳作觸媒部分氫化約14小時。過濾去除觸媒及濾液經真空濃縮。粗製混合物於c18管柱藉製備性HPLC純化，使用〇%至75%乙腈/〇」％丁么梯度寧離40分鐘。合併純產物溶離分峰，濃縮及凍乾（2χ10毫升〇·5%鹽酸’然後1 X 10毫升水）獲得實例18標題化合物，72毫克（37%) 。質譜1115.6]^11+。實例19 環[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe¥ (4-(4-甲氧苯基）咪唑 -Gly] 實例19係根據反應圖3以大致類似實例18之方式製備但有下列差異： … ±Μλ ·· 2-(l-(S)-胺基-2-苯基乙基）-l-(2-i，i-二甲基乙氧）-2-氧基-乙基）-4-(4-曱氧苯基）-咪唑中間物18i (854毫克，2.0毫莫耳）溶解於DMF (10亳升）及加入溴乙酸第三丁酯（646微升，4.0毫莫耳）及碳酸鉀（552 毫克，4.0毫莫耳），反應於室溫攪拌隔夜。於減壓下去除溶劑及殘餘物溶解於乙酸乙酯及以飽和氣化鈉溶液洗滌。乙酸乙酯層以硫酸鈉脫水，過濾及真空濃縮獲得丨.02克發泡體。質譜428.2 MH+，NMR (300MHz，DMSO-d6)，7.85-8.0 (1H，d)，7.6-7.75 (2H，d)，7.85-7.95 (1H，s)，7.1-7.35 (10H， m), 6.9-7.0 (2H, d), 4.75-5.05 (5H, m), 3.7-3.9 (3H, s), 3.1-3.4 (2H, m)5 1.3-1.5 (9H5 s). 中間物白色發泡體（1.02克，1.88毫莫耳）溶解於含10% 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---------線· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 64 1242441 A7 ,___B7 ___ 五、發明說明（62 ) 把/碳（50毫克，）之乙酸（5〇毫升）及室溫於30psi氫氣下氫化10 小時。過濾去除觸媒及加入2N鹽酸（940微升，1.88毫莫耳）。混合物凍乾一次然後由20%乙腈/水再凍乾獲得中間物 19j呈淺褐色固體（862毫克），其未經進一步純化即供使用。質譜408.2 MH+。步驟g :催化氫化及後續處理係以大致類似步驟18g 之方式進行，獲得標題產物（22毫克，4%)呈白色固體。質譜 1088.2 MH+ 9 實例20 環[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-PheW (4-(苯基）味吐-Gly] 實例20係根據反應圖3以大致類似實例18之方式製備，但於步驟i使用2-溴笨乙酮替代2-溴~-_3、甲氧苯乙酮。質譜 1057.4 MH+ ^ 實例21 環[Trp-D-Trp-LysTTyr(Bzl)-Phe¥ (4-(3-甲氧苯基）咪嗤 -(ε )Ahx] 實例21係根據反應圖3以大致類似實例18之方式製備，但有下列差異：免輝_1 : 2-(1-(S)-胺基-2-苯基乙基）-1-(6-(乙氧）-6-氧基 -己基）-4-(3-曱氧苯基）-咪唑中間物21i (855毫克，2.0毫莫耳）溶解於DMF (8.0毫升）及以碳酸氫鉀（200亳克，2.0毫莫耳）及6-溴己酸乙酯 (3.56毫升，20毫莫耳）於約120°C處理約8小時。混合物經濃縮及殘餘物於矽膠藉管柱層析術純化，使用2:1/己烧類本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） 65 1242441 A7 B7

五、發明說明（63 ) :乙酸乙酯作溶離劑獲得純產物呈膠狀物（〇·94克）。粗製烧化產物使用1 0%把/碳作觸媒於乙酸藉氫化脫去保護。過濾去除觸媒及於減壓下蒸發去除溶劑。殘餘物溶解於稀鹽酸，冷凍及凍乾獲得中間物21j•呈淡黃色固體 (720毫克，91%)，其未經進一步純化即用於次一步驟。免,..發 k 及步驟 1 : 2-(l-(S)-((H-TrP-D-TrP-LyS(BOC)-Tyr(OBzl)-2-(l-(S)-胺基-2-苯基乙基）-1-(6-(乙氧）-6-氧基一己基）-4-(3-甲氧苯基）-σ米U坐

Fmoc-Tyr(〇Bzl)-OAt 之製法係混合 Fmoc-TyaoBzW OH (493毫克1.00毫莫耳），HOAt (136毫克，1·〇毫莫耳）及 DCC (206亳克，1·〇亳莫耳）於8亳升乙酸乙酯經歷约半小時然後過濾去除二環己脲製備。所得、溶液加至中間物21j (4 57毫克’ 0·9毫莫耳）於乙酸乙g旨（4毫升）之溶液，及混合物以飽和碳酸氫鈉溶液（10毫升）攪拌至藉質譜分析證實反應完成為止。水層經去除及乙酸乙酯層以硫酸鈉脫水，過濾及以參（2-胺基乙基）胺（2·7毫升）處理。混合物激烈攪拌約半小時。乙酸乙酯層以飽和氣化鈉溶液（2 X 6〇毫升）洗條然後以10%鱗酸鹽緩衝液調整至約ρΗ=5· 5 (3 X 15毫升）洗務。中間物循序脫去保護及以大致類似恰如前述之Finoc-Tyr(OBzl)-OAt週期之相同方式偶合Fm〇c-Lys(Cbz：)_〇Su，

Fmoc-D-Trp-OSu 及 Fmoc-Trp-OSu。最終Fmoc脫保護獲得 N-端末脫保護之中間物乙酯。乙酸乙酯層以硫酸鈉脫水 ’過濾及以4倍容積己烷類稀釋。傾倒去除溶劑及殘餘物本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） ---[I-------^裝--- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂· 4 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 66

1242441 五、發明說明（64 ) 以己烧類研製獲得產物呈固體（0·67克，58%)，其未經進一步純化即供使用。質譜1289.6 ΜΗ+。乙酯經由使用1.7Μ氫氧化鈉溶液（L7亳升）處理中間物於甲醇（5.0毫升）隔夜去除。混合物以5%鹽酸溶液調整至約ρΗ=8·2及於減壓下去除溶劑。殘餘物攝取mDmf，藉過滤去除氣化鈉及DMF溶液未經進一步純化即用於次一步驟。 %化及脫保護係以類似實例18之相同方式進行獲得實例21標題化合物呈白色粉末，62亳克。質譜i143.9 實例22 環[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe¥ (4-(3-羥笨基）味唑 _( 7 )Abu] … 貫例22係根據反應圖3以大致類似實例18之方式製備但有下列差異·· 免驟·1 : 2-0-0)-胯基-2-苯基乙基）-ΐ·(4-(乙氧）_4_氧基 -丁基）-4-(4-經苯基）-啼嗤中間物22i (2·0克，4.68亳莫耳）溶解於DMF (7.0毫升）及以碳酸氫卸（468毫克，4.68毫莫耳）及4-溴-丁酸乙酯（6.7〇毫升，46.8毫莫耳）處理，及於約l〇〇°c攪拌約30小時。混合物以礙稀釋及以飽和碳酸氫納溶液洗一次及以飽和氣化納溶液洗一次。醚層以硫酸鈉脫水，過濾及濃縮成油。於矽膠進行管柱層析，使用二氣曱烷作溶離劑獲得產物呈油 (2.53克，94%)。質譜542.3 MH+ 粗製烷化產物（2.53克，4.67毫莫耳）於二氣曱烷（5〇毫本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） --------------裝--- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) Ηδτ· --線· 67 1242441 A7 五、發明說明（65 ) 升）於約-1(TC以約15分鐘時間逐滴加至电三漠化爛/己烧類（23.4毫升）於二氣甲烧（25〇毫升）之溶液。任混合物溫熱至室溫及搜拌約2小時。加人乙醇（4〇毫升）及混合物濃縮至約50毫升。溶液以乙醇（1〇〇毫升）稀釋及任其於室溫攪拌隔夜。：:⑤合:物於減壓下濃縮及殘餘物分配於乙酸乙酯與，飽和碳酸氫鈉溶液。乙酸乙酯層以硫酸鈉脫水，過濾及減壓濃縮成油（1.41克，76%)，其未經保護酚即用於次一步驟。質譜394.3 MH+ HPLC滯留時問 ---------------裝--- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 實例編號 HPLC系統滯留時間（分镑） 1 A 13.65 ' 2 A 18.S〇 3 A 16.03 B 6.97^ -~~ 5 C 20.4Ϊ^™^^ 6 C 11.7? ~~ 7 D 9.53 8 B 11.02 9 E 7.69^ - 10 J 6.02 11 F 4.lT ~ 12 G 4·ΐΤ '~' 13 H 5.S〇"~ 14 G 6.16 ^ 15 I 17.03 -- 16 K 9.12 ~ ~~ ~~— 17 J 8.11 18 J 8.86 19 L 6.47 20 M 6.6? '~ 21 G 8.ΪΤ —'一 22 N 12.10 Η^τ* -線· 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 68 1242441 A7 B7 五、名务明說明（66 HPLC A ： B ： C ： D : E ：統度速測柱度速測柱度速測柱度速測柱度速測柱系梯流偵管梯流偵管梯流偵管梯流偵管梯流偵管經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 G Η 度速測柱度速測柱度速測柱度速測柱度梯流偵管梯流偵管梯流偵管梯流偵管梯 20-80% 乙腈/0.1% Tfa，24分鐘 1.0亳升/分鐘 254毫微米 * 維達克（乂丫〇人0)蛋白質及肽（：18 30-50% 乙腈/0.1% Tfa，24分鐘 1.0毫升/分鐘 254毫微米維達克蛋白質及肽C18 32-64%乙腈/0.1%乙酸銨，24分鐘 1.0毫升/分鐘 254毫微米維達克蛋白質及肽C18 20-60% 乙腈/0.1 % Tfa，24分鐘 1.0毫升/分鐘 254毫微米維達克蛋白質及肽C18 55-75% 乙腈/0.1% Tfa，24分鐘 1.0毫升/分鐘 220毫微米 Phenomenex 李可斯非(LICHROSPHERE) 5 RP18 (Phenomenex，加州多倫市第205街2320號） 60%乙腈/0.1% Tfa，等角 1.0毫升/分鐘 254毫微米維達克蛋白質及肽C18 50%乙腈/0.1% Tfa，等角 1.0毫升/分鐘 254毫微米維達克蛋白質及肽C18 38%乙腈/0.1% Tfa，等角 1.0毫升/分鐘 254毫微来維達克蛋白質及肽C18 20-40% 乙腈/0.1 % Tfa，24分鐘 1.0毫升/分鐘 254毫微米維達克蛋白質及肽C18 50%乙腈/0.1% Tfa，等角 ---^----------裝--- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ·.1 訂：本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 69 [242441 A7 B7 五、發明說明（67 )

K L M N 速測柱度速測柱度速測柱度速測柱度速測柱流偵管梯流偵管梯流偵管梯流偵管梯流偵管 1.0毫升/分鐘 254毫微米紐克李歐(NUCLEOSIL) C18，5微米(Alltech 公司，伊利諾州鹿園郡Waukegan路2051號） 40%乙腈/0.1% Tfa，等角 1.0毫升/分鐘 254毫微米紐克李歐C18，5微米 52%乙腈/0.1% Tfa，等角 1.0毫升/分鐘 254亳微米紐克李歐C18，5微米 50%乙腈/0.1% Tfa，等角 1.0毫升/分鐘 254毫微米紐克李歐C18，5微米 48%乙腈/0.1% Tfa，等角 1.0毫升/分鐘 254亳微米 … 紐克李歐C18，5微米 _ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) i訂---- 線—秦經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規烙（210x297公釐） 70

Claims

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f靖尋利範圍弟9 1 1 1 5 0 〇 3號專利巾^安& T明案申請專利範圍修正本 1. 一種於有需要之哺引 94·8·2 動物上提引出生長激素釋放扣f 因子受體促效劑哎抖3工 P制飞匕抗劑效果之醫藥組合物，J:向八一有效量之式⑴化合物，包含 a'(V)nir^R(cf )m R b*(2)n\AR5 或其醫藥可接受,j 其中， (丨） Ο 性鹽及一醫藥可接受性载劑 ________J 本經濟部智慧財產局員工诮費合作社印¾ 2· γ為 TrPm[Lys-Abu ; Z為 Gly ; n於各次出現時分別為〇至 m為〇 ; a為Η ; b 為 OH ; R1為 Η ; R2為苯曱基； R3為經烷氧基取代 R4為Η ;且 R5 為 Η。 5，但η不可同時為0 ; 之本基； -、有而要之哺乳動物上提引出因子受體促效劑幻…丨々長破素釋放抑制叫几劑效果之醫藥組合立

六經濟部智慧財產局員工消費合作社印絮 1242441 申請專利範圍一有效量之式（II)化合物， X4—mn-^Rl X3 R2^>N 3 丨 2 f (弋上R4 X—(Z)n^R5 〇 (II) 或其醫藥可接受性鹽及一醫藥可接受性載劑，其中， Y為 PheU/ ; Z為 Gly、Abu 或 Ahx ; η為1 ; m為Ο ; R丨為Η ; • R2為苯甲基； R為Η、C μ烷基或苯基，該苯基係非取代或被一曱氧基或羥基所取代； R4 為 Η ; R5 為 Η ; X1 為 Phe、Trp、Tyr 或 Tyr(OBzl); X。為 D-Ti，p ; (·； X‘’為 Lys ; X 為 Val、Thr、Thr(OBzl)、Abu、Tyr、、經 Bzl 或 OBzl取代之Tyr、或Nal。不紙治.尺.‘又：⑷Η千’曰舀家捽半（CNS)A··；規格（2j〇 297.公) 1^11,1-----«·裝----ΊΤ1 訂--------- (請先83技背面之注意事項再填寫本頁)