[go: up one dir, main page]

RS63125B1 - Antitela koja se specifično vezuju za pd-1 i njihova upotreba - Google Patents

Antitela koja se specifično vezuju za pd-1 i njihova upotreba

Info

Publication number
RS63125B1
RS63125B1 RS20220325A RSP20220325A RS63125B1 RS 63125 B1 RS63125 B1 RS 63125B1 RS 20220325 A RS20220325 A RS 20220325A RS P20220325 A RSP20220325 A RS P20220325A RS 63125 B1 RS63125 B1 RS 63125B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
seq
antibody
antibodies
cancer
tim
Prior art date
Application number
RS20220325A
Other languages
English (en)
Inventor
Raluca Verona
Gordon Powers
Nina Chi Sabins
Nikki A Deangelis
Sandra Santulli-Marotto
Karla R Wiehagen
Sheng-Jiun Wu
Catherine Ferrante
Enrique-Zudaire Ubani
Original Assignee
Janssen Biotech Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Janssen Biotech Inc filed Critical Janssen Biotech Inc
Publication of RS63125B1 publication Critical patent/RS63125B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C07K16/1145—
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
    • C07K16/4208—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig
    • C07K16/4241—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig against anti-human or anti-animal Ig
    • C07K16/4258—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig against anti-human or anti-animal Ig against anti-receptor Ig
    • G01N33/5758—
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Opis
LISTA SEKVENCI
[0001] Ova prijava sadrži listu sekvence dostavljenu putem tzv."EFS-Web". ASCII tzv. "text file", kreiran 28. oktobra 2016, doument je pod nazivom JBI5071WOPCT_ST25.txt i veličine je 418 kilobajta.
OBLAST PRONALASKA
[0002] Predmetni pronalazak se odnosi na antitela koja specifično vezuju PD-1, polinukleotide koji kodiraju antitela ili fragmente, i metode pravljenja i korišćenja prethodno navedenog.
POZADINA PRONALASKA
[0003] Imunološki sistem je čvrsto kontrolisan mrežom kostimulatornih i ko-inhibitornih liganada i receptora. Ovi molekuli obezbeđuju sekundarne signale za aktivaciju T ćelije i obezbeđuju izbalansiranu mrežu pozitivnih i negativnih signala za maksimiziranje imunoloških odgovora na infekcije i tumore, dok istovremeno ograničavaju imunitet na sebe (Wang et al., (Epub Mar.7, 2011) J Exp Med 208(3):577-92; Lepenies et al., (2008) Endocr Metab Immune Disord Drug Targets 8:279-288).
[0004] Terapija imunološkim kontrolnim tačkama, ciljajući ko-inhibitorne puteve u T ćelijama da bi se promovisali antitumorski imunološki odgovori, je dovela do napretka u kliničkoj nezi pacijenata sa karcinomom.
[0005] PD-1 je negativni molekul kontrolne tačke imuniteta koji potiskuje funkcije CD4<+>i CD8<+>T ćelije u mikrookruženju tumora (TME). Angažman PD-1 sa njegovim ligandima (PD-L1 i PD-L2) pokreće anergetsku aktivnost i iscrpljenost T ćelije u tumorima inhibiranjem višestrukih puteva nizvodno od signaliziranja receptora T ćelije, rezultirajući smanjenim preživljavanjem T ćelije, rastom i proliferacijom, ugroženom kompromitovanom funkcijom efektora i izmenjenim metabolizmom. Pretkliničke studije su pokazale da blokada PD-1 puta može preokrenuti iscrpljenost T ćelije i stimulisati anti-tumorski imunitet.
[0006] PD-1 put zbog toga doprinosi smanjenoj regulaciji funkcija T ćelije u (TME) i izbegavanju tumora putem imunološke destrukcije. U TME, iscrpljene T ćelije, osim što izražavaju visoke nivoe PD-1, eksprimiraju druge inhibitorne receptore uključujući CTLA-4, TIM-3, LAG-3, CD244, TIGIT i CD160 (videti npr. Pauken & Wherry; 2015, Trends in Immunology 36(4): 265-276).
[0007] TIM-3 je transmembranski receptor koji je eksprimiran na Th1 (T pomoćna ćelija 1) CD4<+>ćelijama i citotoksičnim CD8<+>T ćelijama koje luče IFN-y. TIM-3 se generalno ne eksprimira na naivnim T ćelijama, već se pojačano reguliše na aktiviranim efektorskim T ćelijama. TIM-3 ima ulogu u regulisanju imuniteta i tolerancije in vivo (videti Hastings et al., (2009) Eur J Immunol 39(9):2492-501).
[0008] PD-1 antitela su opisana na primer u: U.S. Patentu brojeva 5,897,862 i 7,488,802, i Međunarodnoj patentnoj objavi brojeva WO2004/004771, WO2004/056875, WO2006/121168, WO2008/156712, WO2010/029435, WO2010/036959, WO2011/110604, WO2012/145493, WO2014/194302, WO2014/206107, WO2015/036394, WO2015/035606, WO2015/085847, WO2015/112900, WO2014/179664, WO2015/112800, i WO2015/112805.
[0009] TIM-3 antitela su opisana na primer u: Monney et al., Nature (2002) 415(6871):536-41, i u Međunarodnoj patentnoj objavi brojeva WO2011/155607, WO2013/006490 i WO2015/117002.
[0010] Kombinacije sa TIM-3 antitelom i PD-L1 antitelom su procenjene na primer u Međunarodnoj patentnoj objavi br.
WO2011/159877.
[0011] Dok anti-PD-1/PD-L1 antitela pokazuju ohrabrujuće kliničke odgovore kod pacijenata sa više solidnih tumora, stope odgovora su još uvek prilično niske, oko 15% - 20% kod prethodno lečenih pacijenata (Swaika et al., (2015) Mol Immunol. doi: 10.1016/j.molimm.2015.02.009). BORCH TH et al, "Reorienting the immune system in the treatment of cancer by using anti-PD-1 and anti-PD-L1 antibodies", otkriće leka danas, September 2015, vol. 20, no. 9, stranice 1127-1134 razmatra upotrebu anti-PD-1 i anti-PD-L1 antitela za lečenje karcinoma, preusmeravanjem imunološkog sistema. LOTE H et al, "PD-1 and PD-L1 blockade in gastrointestinal malignancies", Cancer Treatment Reviews, September 2015, vol.41, no. 10, ISSN 0305-7372, strane 893-903 razmatra upotrebu anti-PD-1 antitela u gastrointestinalnimm karcinomima. FAGHFURI E et al., "Nivolumab and pembrolizumab as immune-modulating monoclonal antibodies targeting the PD-1 receptor to treat melanoma", Expert Review of Anticancer Therapy, January 2015, vol. 15, no. 9, ISSN 1744-8328, strane 981-93, opisuje da su nivolumab i pembrolizumab dva anti-PD-1 antitela koja je odobrila FDA za lečenje malignog melanoma. MCDERMOTT J and JIMENO A "Pembrolizumab: PD-1 inhibition as a therapeutic strategy in cancer", Drugs of Today, January 2015, vol.51, no.1, ISSN 1699-3993, strana 7, razmatra Pembrolizumab (anti-PD-1 antitelo) i njegovu primenu u lečenju karcnoma. MOREIRA DA SILVA R, "Nivolumab: Anti-PD-1 monoclonal antibody cancer immunotherapy", Drugs of the Future, January 2014, vol. 39, no. 1, ISSN 0377-8282, strane 15-24, opisuje anti-PD-1 antitelo nivolumab i njegova upotrebu u terapiji karcinoma. WANG C et al, "In vitro characterization of the anti-PD-1 antibody nivolumab, BMS-936558, and in vivo toxicology in non-human primates", Cancer Immunology Research, September 2014, vol.2, no.9, stranice 846-856, karakteriše nivolumab.
[0012] Zbog toga postoji potreba za novim terapijskim lekovima koji inhibiraju imunosupresivnu aktivnost inhibitora kontrolnih tačaka kao što su PD-1 i TIM-3, koji će se koristiti za imunoterapiju karcinoma i lečenje drugih stanja koja bi bila od koristi kod poboljšanja imunološkog odgovora, kao što su hronične infekcije.
KRATAK REZIME PRONALASKA
[0013] Pronalazak je izložen u priloženom skupu zahteva.
[0014] Konkretno, pronalazak obezbeđuje izolovano antagonističko antitelo koje se specifično vezuje za PD-1 ili antigen koji veže njegov deo, koji sadrži varijabilni region teškog lanca (VH) od SEK ID BR: 48 i varijabilni region lakog lanca (VL) od SEK ID BR: 56.
[0015] Pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži antitelo ili deo koji se vezuje na antigen pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač.
[0016] Pronalazak takođe obezbeđuje polinukleotid koji kodira antitelo VH, antitelo VL ili antitelo VH i antitelo VL pronalaska.
[0017] Pronalazak takođe obezbeđuje vektor koji sadrži polinukleotid koji kodira antitelo VH, antitelo VL ili antitelo VH i VL pronalaska.
[0018] Pronalazak takođe obezbeđuje ćeliju domaćina koja sadrži vektor pronalaska.
[0019] Pronalazak takođe obezbeđuje metod za proizvodnju antitela ili dela koji se vezuje na antigen pronalaska, obuhvatajući kultivisanje ćelije domaćina pronalaska u uslovima u kojima je antitelo eksprimirano, i obnavljanje antitela proizvedenog od strane ćelije domaćina.
[0020] Pronalazak takođe obezbeđuje antitelo ili deo koji se vezuje na antigen pronalaska za upotrebu u metodi lečenja karcinoma kod subjekta.
[0021] Pronalazak takođe obezbeđuje antitelo ili deo koji se vezuje na antigen pronalaska za upotrebu u metodu pojačavanja imunološkog odgovora kod subjekta, obuhvatajući primenjivanje terapijski efikasne količine izolovanog antitela pronalaska na subjektu kojem je to potrebno tokom vremena dovoljnog da pojača imunološki odgovor.
KRATAK OPIS CRTEŽA
[0022]
Slika 1A prikazuje da je površinska ekspresija TIM-3 povišena u tumorima nakon tretmana sa anti-PD-1 antitelima. Balb/c miševi sa utvrđenim tumorima karcinoma debelog creva CT26 su tretirani svake dve nedelje sa anti-PD-1 antitelom ili nosačem. Tumori su sakupljeni 22. dana i ekspresija TIM-3 je procenjena na T ćelijama koje infiltriraju tumor korišćenjem protočne citometrije. MFI: srednji fluorescentni intenzitet. PBS: kontrola.
Slika 1B prikazuje da je površinska ekspresija TIM-3 povišena na limfocitima infiltriranog tumora (TIL) nakon tretmana sa anti PD-1 antitelima. Balb/c miševi sa utvrđenim tumorima karcinoma debelog creva MC38 su tretirani svake dve nedelje sa anti-PD-1 antitelom ili nosačem. Geometrijski srednji fluorescentni intenzitet (gMFI) ekspresije TIM-3 na ukupnoj populaciji CD8 TIL je prikazan kod životinja tretiranih nosačem (PBS) ili anti-PD-1 antitelima (PD-1). p=0.003 nosač naspram grupa tretiranih anti-PD-1 antitelom.
Slika 1C prikazuje relativnu učestalost TIM-3<+>CD8 ćelija ukupnih CD8<+>TILa u MC38 tumorima prikupljenim iz miševa tretiranih sa nosačem (PBS) ili anti-PD-1 antitelom (PD-1). p=0.045 nosač naspram grupa tretiranih anti-PD-1 antitelom.
Slika 2A prikazuje da je površinska ekspresija CD137 (gMFI) povišena na TILa u tumorima karcinoma debelog creva MC38 kod životinja tretiranih sa anti-PD-1 antitelima (grupa PD-1) kada je upoređena sa grupom tretiranom nosačem (PBS). p=0.005 nosač u odnosu na grupe tretirane anti-PD-1 antitelom. Svaka tačka predstavlja jednog miša. Podaci su reprezentativni za najmanje 2 nezavisna eksperimenta.
Slika 2B prikazuje da je relativna učestalost CD 137<+>CD8 ćelija ukupnih CD8<+>TILa povišena u MC38 u tumorima karcinoma debelog creva kod životinja tretiranih sa anti-PD-1 antitelima (grupa PD-1) kada je upoređena sa grupom tretiranom nosačem (PBS). p=0.0475 nosač u odnosu na grupe tretirane anti-PD-1 antitelom. Svaka tačka predstavlja jednog miša. Podaci su reprezentativni za najmanje 2 nezavisna eksperimenta.
Slika 3A prikazuje da je površinska ekspresija OX40 (gMFI) povišena na TILa u tumorima karcinoma debelog creva MC38 kod životinja tretiranih sa anti-PD-1 antitelima (grupa PD-1) kada je upoređena sa grupom tretiranom nosačem (PBS).
p=0.0013 nosač u odnosu na grupe tretirane anti-PD-1 antitelom. Svaka tačka predstavlja jednog miša. Podaci su reprezentativni za najmanje 2 nezavisna eksperimenta.
Slika 3B prikazuje da je relativna učestalost OX40<+>CD8 ćelija ukupnih CD8<+>TILa povišena u tumorima karcinoma debelog creva MC38 kod životinja tretiranih sa anti-PD-1 antitelima (grupa PD-1) kada je upoređena sa grupom (PBS) tretiranom nosačem. p=0.03 nosač u odnosu na grupe tretirane anti-PD-1 antitelom. Svaka tačka predstavlja jednog miša. Podaci su reprezentativni za najmanje 2 nezavisna eksperimenta.
Slika 4A prikazuje da je površinska ekspresija GITR-a (gMFI) povišena na TILa u tumorima karcinoma debelog creva MC38 kod životinja tretiranih sa anti-PD-1 antitelima (grupa PD-1) kada je upoređena sa grupom (PBS) tretiranom nosačem. p=0.0004 nosač u odnosu na grupe tretirane anti-PD-1 antitelom. Svaka tačka predstavlja jednog miša. Podaci su reprezentativni za najmanje 2 nezavisna eksperimenta.
Slika 4B prikazuje da je relativna učestalost GITR<+>CD8 ćelija ukupnih CD8<+>TIL povišena u tumorima karcinoma debelog creva MC38 kod životinja tretiranih sa anti-PD-1 antitelima (grupa PD-1) kada je upoređena sa grupom (PBS) tretiranom nosačem. p=0.0015 nosač u odnosu na grupe tretirane anti-PD-1 antitelom. Svaka tačka predstavlja jednog miša. Podaci su reprezentativni za najmanje 2 nezavisna eksperimenta.
Slika 5 prikazuje da tretman sa anti-TIM-3 antitelima nakon tretmana anti-PD-1 antitelom dalje indukuje antigen specifičan imunološki odgovor. Antitela su testirana u CMV testu korišćenjem PBMCa od CMV pozitivnih donora, u kojem su antigen-specifični imunološki odgovori indukovani sa peptidnim skupovima pp65. Ćelije su tretirane tokom 5 dana sa anti-PD-1 antitelom PD1B244, ponovo stimulisane i tretirane tokom 24 sata sa anti-TIM-3 antitelom TM3B105. Imunološki odgovor je određen merenjem povećanja lučenja IFN-y. IgG2s Iso: kontrola izotipa IgG2sigma. CMV: uzorak tretiran peptidima p65 citomegalovirusa u odsustvu antitela.
Slika 6 prikazuje HCDR1 sekvence izabranih anti-PD-1 antitela i sekvencu roda HCDR1.
Slika 7 prikazuje HCDR2 sekvence izabranih anti-PD-1 antitela i sekvencu roda HCDR2.
Slika 8 prikazuje HCDR3 sekvence izabranih anti-PD-1 antitela i prvu sekvencu roda HCDR3.
Slika 9 prikazuje HCDR3 sekvence izabranih anti-PD-1 antitela i drugu sekvencu roda HCDR3.
Slika 10 prikazuje LCDR1 sekvence izabranih anti-PD-1 antitela i sekvencu roda LCDR1.
Slika 11 prikazuje LCDR2 sekvence izabranih anti-PD-1 antitela i sekvencu roda LCDR2.
Slika 12 prikazuje LCDR3 sekvence izabranih anti-PD-1 antitela i sekvencu roda LCDR3.
Slika 13 prikazuje HCDR1 sekvence izabranih anti-TIM-3 antitela i sekvencu roda HCDR1. Sekvenca roda je određena generisanjem molekularnih modela za sve Fv (VH/VL parove) u MOE (CCG, Montreal) korišćenjem zadatog protokola za modeliranje antitela. Za CDRe koje imaju različite dužine, ovi strukturni modeli su usklađeni na osnovu strukturno očuvanih regiona i identifikovane su strukturno ekvivalentne CDRa pozicije.
Slika 14 prikazuje HCDR2 sekvence izabranih anti-TIM-3 antitela i sekvencu roda HCDR2. Sekvenca roda HCDR2 je generisana kao što je opisano na Slici 10.
Slika 15 prikazuje HCDR3 sekvence izabranih anti-TIM-3 antitela i prvu sekvencu roda HCDR3. Sekvenca roda HCDR3 je generisana kao što je opisano na Slici 10.
Slika 16 prikazuje LCDR1 sekvence izabranih anti-TIM-3 antitela i sekvencu roda LCDR1. Sekvenca roda LCDR1 je generisana kao što je opisano na Slici 10.
Slika 17 prikazuje LCDR2 sekvence izabranih anti-TIM-3 antitela i sekvencu roda LCDR2. Sekvenca roda LCDR2 je generisana kao što je opisano na Slici 10.
Slika 18 prikazuje LCDR3 sekvence izabranih anti-TIM-3 antitela i sekvencu roda LCDR3. Sekvenca roda LCDR3 je generisana kao što je opisano na Slici 10.
Slika 19A prikazuje da je površinska ekspresija TIGIT (gMFI) povišena na TILa u tumorima karcinoma debelog creva MC38 kod životinja tretiranih sa anti-TIM-3 antitelima (TIM-3grupa) kada je upoređena sa grupom (PBS) tretiranom nosačem. p=0.0181 nosač u odnosu na grupe tretirane anti-TIM-3 antitelom. Svaka tačka predstavlja jednog miša. Podaci su reprezentativni za najmanje 2 nezavisna eksperimenta.
Slika 19B prikazuje da je relativna učestalost TIGIT<+>CD8 ćelija ukupnih CD8<+>TILa povišena u tumorima karcinoma debelog creva MC38 kod životinja tretiranih sa anti-TIM-3 antitelima (TIM-3 grupa) kada je upoređena sa grupom (PBS) tretiranom nosačem p=0.0475 nosač u odnosu na grupe tretirane anti-TIM-3 antitelom. Svaka tačka predstavlja jednog miša. Podaci su reprezentativni za najmanje 2 nezavisna eksperimenta.
Slika 20A prikazuje da je TIGIT površinska ekspresija (gMFI) povišena na TILa u tumorima CT26 karcinoma debelog creva kod životinja tretiranih sa anti-TIM-3 antitelima (TIM-3grupa ) kada je upoređena sa grupom (PBS) tretiranom nosačem. p<0.001 nosač u odnosu na grupe tretirane anti-TIM-3 antitelom. Svaka tačka predstavlja jednog miša. Podaci su reprezentativni za najmanje 2 nezavisna eksperimenta.
Slika 20B prikazuje da je relativna učestalost TIGIT<+>CD8 ćelija ukupnih CD8<+>TILa povišena u tumorima CT26 karcinoma debelog creva kod životinja tretiranih sa anti-TIM-3 antitelima (TIM-3grupa ) kada je upoređena sa grupom (PBS) tretiranom nosačem. p=0.0105 nosač u odnosu na grupe tretirane anti-TIM-3 antitelom. Svaka tačka predstavlja jednog miša. Podaci su reprezentativni za najmanje 2 nezavisna eksperimenta.
Slika 21 prikazuje pojačanu regulaciju ekspresije TIM-3 na perifernim T ćelijama kod pacijenata sa melanomom PBMCa od tretmana pacijenata sa naivnim melanomom stimulisanim peptidnim skupovima antigena melanoma (NY-ESO, gp100, MART-1) u prisustvu ili odsustvu antitela koja blokiraju funkciju anti-PD-1 ili anti -TIM-3. Ekspresija TIM-3 je određena protočnom citometrijom na restimulisanim ćelijama 6. dana.
Slika 22A prikazuje da tretman TM3B403 povećava učestalost aktiviranih NK ćelija u humanim PBMCa stimulisanim IL-2. IgG2s: kontrola izotipa. Aktivacija NK ćelije je procenjena kao procenat (%) ćelija koje eksprimiraju CD69 u stimulisanim PBMCa.
Slika 22B prikazuje da tretman TM3B403 povećava učestalost aktiviranih NK ćelija u humanim PBMCa stimulisanim IL-2. IgG2s: kontrola izotipa. Aktivacija NK ćelije je procenjena kao procenat (%) ćelija koje eksprimiraju CD25 u stimulisanim PBMCa.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0023] Podrazumeva se da je terminologija korišćena ovde samo u svrhu opisa određenih izvođenja i nije namenjena da bude ograničavajuća. Osim ako nije drugačije definisano, svi tehnički i naučni termini korišćeni ovde imaju isto značenje koje obično razume stručnjak u tehnici na koju se pronalazak odnosi.
[0024] Iako se bilo koje metode i materijali slični ili ekvivalentni onima koji su ovde opisani mogu koristiti u praksi za testiranje predmertnog pronalaska, ovde su opisani primeri materijala i metode. U opisivanju i traženju predmetnog pronalaska, koristiće se sledeća terminologija.
[0025] Kao što se koristi u ovoj specifikaciji i priloženim zahtevima, oblici jednine "a", "an" i "the" uključuju reference za množinu osim ako sadržaj jasno ne nalaže drugačije. Tako, na primer, referenca za "ćeliju" uključuje kombinaciju dve ili više ćelija i slično.
[0026] "Specifično vezivanje" ili "specifično se vezuje" ili "vezuje" se odnosi na antitelo koje se vezuje na antigen ili epitop unutar antigena sa većim afinitetom nego za druge antigene. Obično, antitelo se vezuje na antigen ili epitop unutar antigena sa ravnotežom konstante disocijacije (KD) od oko 1x10<-8>M ili manje, na primer oko 1x10<-9>M ili manje, oko 1x10<-10>M ili manje, oko 1x10<-11>M ili manje, ili oko 13x10<-12>M ili manje, obično sa KDkoja je najmanje sto puta manja od svoje KDza vezivanje na nespecifični antigen (npr. BSA, kazein). Konstanta disocijacije može biti merena korišćenjem standardnih postupaka. Antitela koja se specifično vezuju na antigen ili epitop unutar antigena mogu, međutim, imati unakrsnu reaktivnost na druge srodne antigene, na primer na isti antigen drugih vrsta (homologa), kao što je čovek ili majmun, na primjer Macaca fascicularis – Makaka rakojed ( cinomolgus, cino), Pan troglodytes (šimpanza, šimpanza) ili Callithrix jacchus (obični marmozet, marmozet). Dok monospecifično antitelo specifično vezuje jedan antigen ili jedan epitop, bispecifično antitelo specifično vezuje dva različita antigena ili dva različita epitopa.
[0027] "Antitela" se podrazumevaju u širem smislu i uključuju molekule imunoglobulina uključujući monoklonalna antitela uključujući mišja, humana, humanizovana i himerna monoklonalna antitela, fragmente koji se vežu na antigen, bispecifična ili multispecifična antitela, dimerna, tetramerna ili multimerna antitela, jednolančana antitela, domenska antitela i bilo koju drugu modifikovanu konfiguraciju molekula imunoglobulina koja sadrži mesto vezivanja antigena tražene specifičnosti. "Antitela pune dužine" se sastoje od dva teška (H) lanca i dva laka (L) lanca međusobno povezana disulfidnim vezama kao i multimerima od njih (na primer IgM). Svaki teški lanac se sastoji se od varijabilnog regiona teškog lanca (VH) i konstantnog regiona teškog lanca (sastoji se od domena CH1, zglobnog CH2 i CH3). Svaki laki lanac se sastoji od varijabilnog regiona lakog lanca (VL) i konstantnog regiona lakog lanca (CL). VH i VL regioni mogu biti dalje podeljeni na regone hipervarijabilnosti, nazvane regioni koji određuju komplementarnost (CDR), isprepleteni sa okvirnim regionima (FR). Svaki VH i VL se sastoji od tri CDRa i četiri FR segmenta, raspoređenih od aminoterminusa do karboksi-terminusa sledećim redosledom: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 i FR4.
[0028] "Regioni koji određuju komplementarnost (CDR)" su "mesta vezivanja antigena" u antitelu. CDRi mogu biti definisani korišćenjem različitih termina: (i) Regioni koji određuju komplementarnost (CDRi), tri u VH (HCDR1, HCDR2, HCDR3) i tri u VL (LCDR1, LCDR2, LCDR3) su zasnovani na varijabilnosti sekvence (Wu and Kabat, (1970) J Exp Med 132:211-50; Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991). (ii) "Hipervarijabilni regioni", "HVR" ili "HV", tri u VH (H1, H2, H3) i tri u VL (L1, L2, L3) se odnose na regione varijabilnih domena antitela koji su hipervarijabilni u strukturi kao što je definisano po Chothia and Lesk (Chothia and Lesk, (1987) Mol Biol 196:901-17). The International ImMunoGeneTics (IMGT) database (http:// www_imgt_org) obezbeđuje standardizovano numerisanje i definiciju mesta vezivanja antigena. Korespondencija između CDRi, HVi i IMGT razgraničenja je opisana u Lefranc et al., (2003) Dev Comparat Immunol 27:55-77. Termin "CDR", "HCDR1", "HCDR2", "HCDR3", "LCDR1", "LCDR2" i "LCDR3" kao što se ovde koristi uključuje CDRe definisane bilo kojom od metoda opisanih supra, Kabat, Chothia ili IMGT, osim ako je drugačije izričito navedeno u specifikaciji.
[0029] Imunoglobulini mogu biti podeljeni u pet glavnih klasa, IgA, IgD, IgE, IgG i IgM, u zavisnosti od sekvence aminokiseline konstantnog domena teškog lanca. IgA i IgG su dalje podklasifikovani kao izotipovi IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3 i IgG4. Laki lanci antitela bilo koje vrste kičmenjaka mogu se svrstati u jedan od dva jasno različita tipa, naime kappa (κ) i lambda (λ), na osnovu aminokiselinskih sekvenci njihovih konstantnih domena.
[0030] "Fragmenti antitela" ili "deo koji se vezuje na antigen" se odnosi na deo molekula imunoglobulina koji zadržava svojstva vezivanja antigena roditeljskog antitela pune dužine. Primeri delova koji se vezuju na antigen su regioni koji određuju komplementarnost teškog lanca (HCDR) 1, 2 i 3, regioni koji određuju komplementarnost lakog lanca (LCDR) 1, 2 i 3, varijabilni region teškog lanca (VH), varijabilni region lakog lanca (VL), Fab, F(ab')2, Fd i Fv fragmenti kao i antitela domena (dAb) koja se sastoje od bilo kojeg VH ili VL domena. VH i VL domeni mogu biti povezani zajedno putem sintetičkog linkera da bi se formirale različite vrste dizajna jednolančanih antitela gde se VH/VL domeni mogu upariti intramolekularno ili intermolekularno u onim slučajevima kada su VH i VL domeni izraženi odvojenim jednolančanim konstruktima antitela, za formiranje monovalentnog mesta vezivanja antigena, kao što je jednolančani Fv (scFv) ili dijabodi; opisano na primer u Međunarodnoj patentnoj objavi brojeva WO1998/44001, WO1988/01649, WO1994/13804 i WO1992/01047.
[0031] "Monoklonalno antitelo" se odnosi na populaciju antitela sa kompozicijom jedne aminokiseline u svakom teškom i svakom lakom lancu, osim mogućih dobro poznatih promena kao što je uklanjanje C-terminalnog lizina iz teškog lanca antitela. Monoklonalna antitela obično vezuju jedan antigenski epitop, osim što multispecifična monoklonalna antitela vezuju dva ili više različitih antigena ili epitopa. Bispecifična monoklonalna antitela vezuju dva različita antigenska epitopa. Monoklonalna antitela mogu imati heterogenu glikozilaciju unutar populacije antitela. Monoklonalna antitela mogu biti monospecifična ili multispecifična, ili monovalentna, dvovalentna ili multivalentna. Multispecifično antitelo, kao što je bispecifično antitelo ili trispecifično antitelo je uključeno u termin monoklonalno antitelo.
[0032] "Izolovano antitelo" se odnosi na antitelo ili fragment antitela koji je suštinski bez drugih antitela imajući različite antigenske specifičnosti (npr. izolovano antitelo koje se specifično vezuje za PD-1 je suštinaki bez antitela koja specifično vezuju antigene različite od PD-1). Izolovano antitelo koje se specifično vezuje za TIM-3 je suštinski bez antitela koja specifično vezuju antigene različite od TIM-3. U slučaju bispecifičnih PD-1/TIM-3 antitela, bispecifično antitelo specifično vezuje i PD-1 i TIM-3, i suštinski bez antitela koja specifično vezuju antigene osim PD-1 i TIM-3. "Izolovano antitelo" obuhvata antitela koja su izolovana do veće čistoće, kao što su antitela koja su 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili 100% čista.
[0033] "Humanizovana antitela" se odnose na antitela u kojima je najmanje jedaan CDR izveden iz ne-humanih vrsta, i okviri varijabilnog regiona su izvedeni iz sekvenci humanog imunoglobulina. Humanizovana antitela mogu uključivati namerno uvedene mutacije u okvirnim regionima tako da okvir ne mora biti tačna kopija eksprimiranih sekvenci humanog imunoglobulina ili gena zametne linije.
[0034] "Humano antitelo" se odnosi na antitelo koje ima varijabilne regione teškog i lakog lanca u kojima su oba okvira i svih 6 CDRa izvedeni iz sekvenci humanog porekla. Ako antitelo sadrži konstantni region ili deo konstantnog regiona, konstantni region je takođe izveden iz sekvenci humanog porekla.
[0035] Humano antitelo sadrži varijabilne regione teškog ili lakog lanca koji su "izvedeni iz" sekvenci humanog porekla ako su varijabilni regioni antitela dobijeni iz sistema koji koristi imunoglobulin humane zametne linije ili preuređene gene imunoglobulina. Takvi primeri sistema su biblioteke gena humanog imunoglobulina prikazane na fagu i transgenih ne- humanih životinja kao što su miševi ili pacovi koji nose lokus humanog imunoglobulina kao što je ovde opisano. "Humano antitelo " može sadržavati razlike u aminokiselinama u poređenju sa imunoglobulinom humane zametne linije ili preuređenim imunoglobulinskim genima zbog na primer prirodnih somatskih mutacija ili namernog uvođenja supstitucija u okvir ili mesto vezivanja antigena, ili oboje. Obično, "humano antitelo" je najmanje oko 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili 100% identično u aminokiselinskoj sekvenci prema aminokiselinskoj sekvenci kodiranoj imunoglobulinom humane zametne linije ili preuređenim imunoglobulinskim genima. U nekim slučajevima, "humano antitelo" može sadržavati konsenzus okvirne sekvence izvedene iz analiza sekvence humanog okvira, na primer kao što je opisano u Knappik et al., (2000) J Mol Biol 296:57-86, ili sintetički HCDR3 inkorporiranog u biblioteke gena humanog imunoglobulina prikazane na fagu, na primer kao što je opisano u Shi et al., (2010) J Mol Biol 397:385-96, and in Int. Patent Publ. No. WO2009/085462.
[0036] Humana antitela izvedena iz sekvenci humanog imunoglobulina mogu biti generisana korišćenjem sistema kao što je displej faga uključujući sintetičke CDRe i/ili sintetičke okvire, ili mogu biti podvrgnuta in vitro mutagenezi da bi se poboljšala svojstva antitela, rezultirajući u antitelima koja nisu eksprimirana u repertoaru humane zametne linije antitela in vivo.
[0037] "Rekombinantni" se odnosi na antitela i druge proteine koji su pripremljeni, eksprimirani, stvoreni ili izolovani pomoću rekombinantnih sredstava.
[0038] "Epitop" se odnosi na deo antigena za koji se antitelo specifično vezuje. Epitopi se obično sastoje od hemijski aktivnih (kao što su polarne, nepolarne ili hidrofobne) površinske grupe ostatataka kao što su aminokiseline ili polisaharidni bočni lanci i mogu imati specifične trodimenzionalne strukturne karakteristike, kao i specifične karakteristike naelektrisanja. Epitop može biti sastavljen od susednih i/ili nepovezanih aminokiselina koje formiraju konformacionu prostornu jedinicu. Za nepovezani epitop, aminokiseline iz različitih delova linearne sekvence antigena dolaze u neposrednu blizinu u 3-dimenzionalnom prostoru kroz savijanje proteinskog molekula. Antitelo "epitop" zavisi od metodologije korišćene za identifikaciju epitopa.
[0039] "Multispecifično" se odnosi na antitelo koje specifično vezuje najmanje dva različita antigena ili dva različita epitopa unutar antigena, na primer tri, četiri ili pet različitih antigena ili epitopa.
[0040] "Bispecifično" se odnosi na antitelo koje specifično vezuje dva različita antigena ili dva različita epitopa unutar istog antigena. Bispecifično antitelo može imati unakrsnu-reaktivnost na druge srodne antigene, na primer na isti antigen iz drugih vrsta (homologa), kao što su ljudi ili majmuni, na primjer Macaca fascicularis –Makaki rakojed (cinomolgus, cino), Pan troglodytes (šimpanza, šimp) ili Callithrix jacchus (obični marmozet, marmozet) ili može vezati epitop koji dele dva ili više različitih antigena.
[0041] "Varijanta" se odnosi na polipeptid ili polinukleotid koji se razlikuje od referentnog polipeptida ili referentnog polinukleotida sa jednom ili više modifikacija, na primer, supstitucija, insercija ili delecija.
[0042] "Vektor" se odnosi na polinukleotid koji može da se duplira unutar biološkog sistema ili koji se može premeštati između takvih sistema. Vektorski polinukleotidi obično sadrže elemente, kao što su poreklo replikacije, signal poliadenilacije ili markeri selekcije, koji funkcionišu da bi olakšali umnožavanje ili održavanje ovih polinukleotida u biološkom sistemu. Primeri takvih bioloških sistema mogu uključivati ćeliju, virus, životinju, biljku i rekonstituisane biološke sisteme koji koriste biološke komponente sposobne za dupliranje vektora. Polinukleotid koji sadrži vektor može biti molekul DNK ili RNK ili njihov hibrid.
[0043] "Vektor ekspresije" se odnosi se na vektor koji može biti upotrebljen u biološkom sistemu ili u rekonstituisanom biološkom sistemu za usmeravanje translacije polipeptida kodiranog polinukleotidnom sekvencom koja je prisutna u ekspresionom vektoru.
[0044] "Polinukleotid" se odnosi na sintetički molekul koji sadrži lanac nukleotida kovalentno povezan šećernofosfatnom okosnicom ili drugom ekvivalentnom kovalentnom hemijom. cDNA je tipičan primer polinukleotida.
[0045] "Polipeptid" ili "protein" se odnosi na molekul koji sadrži najmanje dva aminokiselinska ostatka povezana peptidnom vezom da bi se formirao polipeptid. Mali polipeptidi sa manje od 50 aminokiselina mogu se nazvati "peptidima".
[0046] PD-1 se odnosi na humani protein programirane čelijske smrti 1, PD-1. PD-1 je takođe poznat kao CD279 ili PDCD1. Aminokiselinska sekvenca zrelog humanog PD-1 (bez signalne sekvence) je prikazana u SEK ID BR: 1. Ekstracelularni domen obuhvata raspone 1-150, transmembranski domen obuhvata ostatke raspona 151-171, i citoplazmatski domen ostatke raspona 172- 268 SEK ID BR: 1. U celoj specifikaciji, "ekstracelularni domen humanog PD-1 "huPD1-ECD" se odnosi na protein koji ima aminokiselinsku sekvencu ostataka 1-149 od SEK ID BR: 1, i prikazan u SEK ID BR: 2. "PD-1" u specifikaciji se odnosi se na humani zreli PD-1, osim ako nije eksplicitno navedeno suprotno.
[0047] TIM-3 se odnosi na ćelijski receptor 2 humanog virusa hepatitisa A, takođe nazvanog HAVCR2. Aminokiselinska sekvenca zrelog humanog TIM-3 (bez signalne sekvence) je prikazana je u SEK ID BR: 138. Ekstracelularni domen obuhvata ostatke raspona 1-181, transmembranski domen ostatke raspona 182-202, i citoplazmatski domen obuhvata ostatke raspona 203- 280 SEK ID BR: 138. U celoj specifikaciji, "ekstracelularni domen humanogTIM-3 "huTIM-3-ECD" se odnosi na protein koji ima aminokiselinsku sekvencu ostataka 1-179 SEK ID BR: 138, i prikazan je u SEK ID BR: 89. TIM-3 u specifikaciji se odnosi na humani zreli TIM-3, osim ako nije eksplicitno navedeno suprotno.
[0048] "U kombinaciji sa" znači da se dva ili više terapeutika daju subjektu zajedno u smeši, istovremeno kao pojedinačni agensi ili uzastopno kao pojedinačni agensi u bilo kom redosledu.
[0049] "Prekomerno eksprimira", "prekomerno eksprimirano" i "prekomerno eksprimirajuće" se koriste naizmenično i odnose se na uzorak kao što je ćelija karcinoma, maligna ćelija ili tkivo kacinoma koje ima merljivo više nivoe PD-1, TIM-3, PD-L1, PD- L2 ili TIM-3 liganda u poređenju sa referentnim uzorkom. Prekomerna ekspresija može biti uzrokovana amplifikacijom gena ili povećanom transkripcijom ili translacijom. Ekspresija i prekomerna ekspresija proteina u uzorku može biti izmerena korišćenjem dobro poznatih testova korišćenjem na primer ELIZA test, imunofluorescenciju, protočnu citometriju ili radioimuni test na živim ili liziranim ćelijama. Ekspresija i prekomerna ekspresija polinukleotida u uzorku može biti izmerena, na primer, korišćenjem fluorescentne in situ hibridizacije, Saudern blota ili PCR tehnika. Protein ili polinukleotid je prekomerno eksprimiran kada je nivo proteina ili polinukleotida u uzorku najmanje 1.5 puta viši ili statistički značajan u poređenju sa referentnim uzorkom. Selekcija referentnog uzorka je poznata.
[0050] "Uzorak" se odnosi na kolekciju sličnih tečnosti, ćelija ili tkiva izolovanih od subjekta, kao i tečnosti, ćelija ili tkiva prisutnih unutar subjekta. Primeri uzoraka su biološke tečnosti kao što su krv, serum i serozne tečnosti, plazma, limfa, urin, pljuvačka, cistična tečnost, kapi suza, feces, sputum, sekreti sluzokože sekretornih tkiva i organa, vaginalni sekreti, ascitesne tečnosti kao što su one povezane sa ne-solidnim tumorima, tečnosti pleure, perikarda, peritonealne, trbušne i drugih telesnih šupljina, tečnosti prikupljene ispiranjem bronha, tečni rastvori u kontaktu sa subjektom ili biološkim izvorom, na primer, medijum za kulturu ćelije i organa uključujući ćelijski ili organski kondicionirani medijum uslovljen ćelijama ili organima, tečnosti za ispiranje i slično, biopsije tkiva, tanke igle aspiracije ili hirurški resecirano tumorsko tkivo.
[0051] "Ćelija karcinoma" ili "ćelija tumora" se odnosi na kanceroznu, pre-kanceroznu ili transformisanu ćeliju, bilo in vivo, ex vivo ili u kulturi tkiva, koja ima spontane ili indukovane fenotipske promene. Ove promene ne uključuju nužno preuzimanje novog genetskog materijala. Iako transformacija može nastati kao posledica infekcije sa transformirajućim virusom i inkorporacije nove genomske nukleinske kiseline, uzimanja egzogene nukleinske kiseline ili takođe može nastati spontano ili nakon izlaganja kancerogenu, čime se mutira endogeni gen. Transformacija/karcinom je ilustrovana morfološkim promenama, imortalizacijom ćelija, nenormalnom kontrolom rasta, formiranjem žarišta, proliferacijom, malignošću, modulacijom nivoa tumor specifičnih markera, invazivnošću, rastom tumora kod pogodnih životinjskih domaćina kao što su goli miševi i slično, in vitro, in vivo, i ex vivo (Freshney, Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique (3rd ed. 1994)).
[0052] "Oko" znači u okviru prihvatljivog raspona greške za određenu vrednost kako je to odredio stručnjak u ovom području tehnike, što će delimično zavisiti od toga kako se vrednost meri ili određuje, tj. ograničenja mernog sistemaa. Osim ako je eksplicitno navedeno drugačije unutar Primera ili negde drugde u specifikaciji u kontekstu određenog testa, rezultat ili izvođenje, "oko" znači u okviru jedne standardne devijacije prema praksi u tehnici, ili raspon do 5%, što je veće.
[0053] "Bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo", "PD-1/TIM-3 antitelo", "bispecifično anti-PD-1/TIM-3 antitelo" ili "anti-PD-1/TIM-3 antitelo" se odnosi na molekul koji sadrži najmanje jedan vezujući domen koji specifično vezuje PD-1 i najmanje jedan vezujući domen koji specifično vezuje TIM-3. Domeni koji specifično vezuju PD-1 i TIM-3 su obično VH/VL parovi. Bispecifično anti-PD-1/TIM-3 antitelo može biti monovalentno u smislu vezivanja na PD-1 ili TIM-3.
[0054] "Valentni" se odnosi na prisustvo određenog broja mesta vezivanja specifičnih za antigen u molekulu. Kao takvi, termini "monovalentni", "dvovalentni", "četvorovalentni" i "šestovalentni" se odnose na prisustvo jednog, dva, četiri i šest vezujućih mesta, respektivno, specifičnih za antigen u molekulu.
[0055] "Antigen specifične CD4<+>ili CD8<+>T ćelije" se odnosi na CD4<+>ili CD8<+>T ćelije aktivirane sa specifičnim antigenom ili imunostimulirajućim epitopom od njih.
[0056] "CD137" (takođe nazvan član 9 superfamilije receptora faktora nekroze tumora, TNFRSF9, 4-1BBL) se odnosi na humani molekul CD137 koja ima sekvencu aminokiseline prikazanu u SEK ID BR: 281.
SEK ID BR: 281
[0057] "TIGIT" (takođe nazan imunoreceptor T-ćelije sa Ig i ITIM domenima) se odnosi na humani molekul TIGIT koji ima aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEK ID BR: 301.
SEK ID BR: 301
[0058] "Agonist" se odnosi na molekul koji, kada se vezuje na ćelijski protein, indukuje najmanje jednu reakciju ili aktivnost koja je indukovana sa prirodnim ligandom proteina. Molekul je agonist kada je najmanje jedna reakcija aktivnosti indukovana sa najmanje oko 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85 %, 90%, 95% ili 100% više od najmanje jedne reakcije ili aktivnosti indukovane u odsustvu agonista (npr. negativna kontrola), ili kada je indukcija statistički značajna u poređenju sa indukcijom u odsustvu agonista. Agonist može biti antitelo, rasvorljivi ligand ili mali molekul. Primer agonista je agonističko antitelo koje specifično vezuje molekul koji aktivira T ćeliju.
[0059] "Antagonist" se odnosi na molekul koji, kada je vezan na ćelijski protein, potiskuje najmanje jednu reakciju ili aktivnost koja je indukovana sa prirodnim ligandom proteina. Molekul je antagonist kada je najmanje jedna reakcija ili aktivnost potisnuta za najmanje oko 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85 %, 90%, 95% ili 100% više od najmanje jedne reakcije ili aktivnosti potisnute u odsustvu antagonista (npr. negativna kontrola), ili kada je supresija statistički značajna u poređenju sa supresijom u odsustvu antagonista. Antagonist može biti antitelo, rastvorljivi ligand, mali molekul, DNK ili RNK kao što je siRNK. Primeri antagonista su antagonističko antitelo koje specifično vezuje PD-1, antagonističko antitelo koje specifično vezuje TIM-3, antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo ili antagonističko antitelo koje specifično vezuje inhibitorni molekul T ćelije. Tipična reakcija ili aktivnost koja je indukovana vezivanjem PD-1 na njegov receptor PD-L1 ili PD-L2 može biti smanjena proliferacijom CD4<+>ili CD8<+>ćelije specifične za antigen ili smanjenom produkcijom interferona-y (IFN-y) od strane T ćelija, rezultirajući supresijom imunoloških odgovora protiv, na primer tumora. Tipična reakcija ili aktivnost koja je indukovana vezivanjem TIM-3 na njegov receptor, kao što je galektin-9, može biti smanjena proliferacija CD4<+>ili CD8<+>ćelije specifične za antigen, smanjena produkcija IFN-y od strane T ćelija, ili smanjena površinska ekspresija CD137 na CD4<+>ili CD8<+>ćelija, rezultirajući supresijom imunoloških odgovora protiv, na primer, tumora. Slično, tipična reakcija ili aktivnost koja je indukovana od strane molekula inhibitora T ćelije je imunosupresija. Zbog toga, antagonističko PD-1 antitelo koje specifično vezuje PD-1, antagonističko antitelo koje se specifično vezuje za TIM-3, antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo ili antagonističko antitelo koje specifično vezuje inhibitorni molekul T ćelije indukuje imunološke odgovore inhibiranjem inhibitornih puteva.
[0060] "Subjekt" uključuje bilo koju humanu ili nehumanu životinju. "Nehumana životinja" uključuje sve kičmenjake, npr. sisare i nesisare, kao što su primati, ovce, psi, mačke, konji, krave kokoške, vodozemci, gmazavci itd. Osim kada je navedeno, termini "pacijent" ili "subjekt" se koriste naizmenično.
[0061] Numerisanje aminokiselinskih ostataka u konstantnom regionu antitela u celoj specifikaciji je prema EU indeksu kao što je opisano u Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991), osim ako nije drugačije eksplicitno navedeno.
[0062] Ovde se koriste konvencionalni jednoslovni i troslovni kodovi aminokiselina kao što je prikazano u Tabeli 1.
Tabela 1.
Antagonistička antitela koja specifično vezuju PD-1
[0063] PD-1, nakon angažovanja liganda, potiskuje funkcije T ćelija putem više mehanizama (Pauken & Wherry (2015) Trends in Immunology 36(4): 265-276). Angažovanje PD-1 direktno inhibira signaliziranje receptora T ćelija (TCR) kroz ko-lokalizaciju sa TCR i naknadnu indukciju defosforilacije TCR proksimalnih signalnih molekula, inhibiciju Ras/MEK/ERK puta što dovodi do inhibicije progresije ćelijskog ciklusa i proliferacije T ćelija, inhibicije rasta i preživljavanja ćelija i reprogramiranja metabolizma T ćelija kroz supresiju PI3K/AKT puta, dovodeći do regulacije naviše BATF transkripcijskog faktora i modulacije razvoja, održavanja i funkcije regulatornih T ćelija. Takođe je predloženo da PD-1 poveća pokretljivost T ćelija i ograniči trajanje interakcije između T ćelija i ciljnih ćelija, čime se smanjuje obim aktivacije T ćelija (Honda et al., (2014) Immunity 40(2):235-47).
[0064] Tumori su kooptirali PD-1 put da bi smanjili regulaciju funkcije T ćelije u mikrookruženju tumora (TME) i izbegli imunološko uništenje. U TME, u uslovima perzistentnog antigena i inflamacije, T ćelije postaju iscrpljene ili disfunkcionalne i progresivno gube svoju efektorsku funkciju i proliferativni kapacitet. Iscrpljene T ćelije izražavaju visoke nivoe PD-1, često zajedno sa drugim inhibitornim receptorima kao što su TIM-3 ili LAG-3 (Pauken & Wherry (2015) Trends in Immunology 36(4): 265-276). Jedan od PD-1 liganada, PD-L1, je takođe pojačan u raznim tumorima. Ekspresija PD-L1 se javlja na samim ćelijama karcinoma i/ili infiltrirajući imunološke ćelije, uključujući makrofage povezane sa tumorom, dendritske ćelije, fibroblaste i aktivirane T ćelije (Chen et al., 2012 Clin Cancer Res 18(24):6580-7). U ovoj postavci se pretpostavlja da će angažman PD-1 ograničiti odgovore antitumorske T ćelije i dovesti do poništenja imuniteta. Nedavne studije su pokazale da se veća učestalost i nivo ekspresije PD-1 javlja na limfocitima koji infiltriraju tumor (TILi) u više solidnih tumora. Važno je da su ovi PD-1<+>TILi funkcionalno oštećeni, što je vidljivo nižom proliferacijom i efektorskim funkcijama (Pauken & Wherry; 2015, Trends in Immunology 36(4): 265-276) Ovi podaci podržavaju hipotezu da PD-1 posreduje u supresiji imuniteta u TME.
[0065] Iscrpljenost T ćelija u tumorima je reverzibilna, barem delimično, blokadom puta PD-1. Pokazalo se da anti-PD-1/PD-L1 antitela poboljšavaju funkciju T ćelije i dovode do poboljšanja antitumorskog imuniteta u brojnim pretkliničkim modelima tumora. Antitela PD-1/PD-L1 su takođe pokazala ohrabrujuće kliničke odgovore kod više solidnih tumora, sa 20-40% ukupne stope odgovora (ORR) u melanomu, 10-24% u nemaloćelijskom karcinomu pluća (NSCLC), 12- 31% kod karcinoma bubrežne ćelije (RCC), 24-52% kod karcinoma mokraćne bešike i 20% kod karcinoma glave i vrata (Swaika et al., (2015) Mol Immunol 67(2 Pt A):4-17).
[0066] Pronalazak obezbeđuje izolovano antagonističko antitelo koje se specifično vezuje za PD-1 ili njegov deo koji se vezuje na antigen sadržavajući varijabilni region teškog lanca (VH) od SEK ID BR: 48 i varijabili region lakog lanca (VL) SEK ID BR: 56.
[0067] SEK ID BRi: 82, 83, 84, 85, 86, 87 i 88 predstavljaju sekvence roda HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 i LCDR3 afinitetno zrelih varijanti antagonističkih antitela koja se specifično vezuju za PD-1 koji imaju slične HCDR1, HCDR2, LCDR1, LCDR2 i LCDR3 sekvence i dve slične HCDR3 grupe sekvenci. Antitela u okviru roda vezuju PD-1 sa KDmanjim od oko 1310-7 M, kao što je manji od oko 1310-8 M, na primer manji od oko 1310-9 M, ili na primer manji od oko 1310-10 M . Antitela imaju HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 i LCDR3 amino kiselinske sekvence antitela PD1B114, PD1B149, PD1B160, PD1B162, PD1B164, PD1B11, PD1B183, PD1B184, PD1B185, PD1B187, PD1B71, PD1B177, PD1B70, PD1B175, PD1B194, PD1B195, PD1B196, PD1B197, PD1B198, PD1B199, PD1B200, PD1B201 i PD1B244 kao što je ovde opisano.
SEK ID BR: 82
X1YX2IX3,
pri čemu
X1je S ili D;
X2je V ili A; i
X3je H ili S.
SEK ID BR: 83
GIIPIX4X5TANY AQKFQG,
pri čemu
X4je Y ili F; i
X5je G ili D.
SEK ID BR: 84
PGLAAAYDTGX6LDY,
pri čemu
X6je N ili S.
SEK ID BR: 85
GX7X8X9X10TGX11LDY,
pri čemu
X7je T ili Y;
X8je L ili V;
X9je D ili R;
X10je R ili A; i
X11je H ili M.
SEK ID BR: 86
RASQSVX12X13YLA,
pri čemu
X12je S, R ili D; i
X13je S ili N.
SEK ID BR: 87
DASX14RAT,
pri čemu
X14je N, D, Y, S ili T.
SEK ID BR: 88
QQRX15X16WPL T,
pri čemu
X15je S, N, G, E, D, W or A;i
X16je N, Y, E ili A.
[0068] U nekim izvođenjima, izolovano antagonističko antitelo koje specifično vezuje PD-1 ili njegov deo koji se vezuje na antigen ima jedan, dva, tri, četiri ili pet od sledećih svojstava:
a) pojačava aktivaciju antigen specifičnih CD4<+>ili CD8<+>T ćelija na način zavisan od doze, pri čemu je aktivacija izmerena korišćenjem testa opoziva antigena citomegalovirusa (CMV test) kao što je opisano u Primeru 1;
b) vezuje humani PD-1 sa konstantom ravnoteže disocijacije (KD) manjom od oko 100 nM, pri čemu je KDizmerena korišćenjem sistema ProteOn XPR36 na 25°C;
c) vezuje humani PD-1 sa KDmanjom od oko 1 nM, pri čemu je KDizmerena korišćenjem ProteOn XPR36 sistema na 25°C;
d) vezuje cinomolgus PD-1 sa KDmanjom od oko 100 nM, pri čemu je KDizmerena korišćenjem ProteOn XPR36 sistema na 25°C, ili
e) vezuje cinomolgus PD-1 sa KDmanjom od oko 1 nM, pri čemu je KDizmerena korišćenjem ProteOn XPR36 sistema na 25°C.
[0069] Primeri takvih antitela su PD-1 antitela PD1B196 i PD1B244 kao što je ovde opisano.
[0070] U nekim izvođenjima, izolovano antagonističko antitelo koje se specifično vezuje za PD-1 ili njegov deo koji se vezuje na antigen pojačava aktivaciju antigen specifičnih CD4<+>ili CD8<+>T ćelija na način zavisan od doze, pri čemu je aktivacija izmerena korišćenjem testa opoziva antigena citomegalovirusa (CMV test) kao što je opisano u Primeru 1, i vezuje humani PD-1 sa ravnotežom konstante disocijacije (KD) manjom od oko 100 nM, pri čemu je KDizmerena korišćenjem ProteOn XPR36 sistema na 25°C.
[0071] U nekim izvođenjima, izolovano antagonističko antitelo koje se specifično vezuje za PD-1 ili njegov deo koji se vezuje za antigen pojačava aktivaciju antigen specifičnih CD4<+>ili CD8<+>T ćelija na način zavisan od doze, pri čemu je aktivacija izmerena korišćenjem testa opoziva antigena citomegalovirusa (CMV test) kao što je opisano u Primeru 1, i je KDizmerena korišćenjem ProteOn XPR36 sistema na 25°C.
[0072] U nekim izvođenjima, izolovano antagonističko antitelo koje se specifično vezuje za PD-1 ili njegov deo koji se vezuje za antigen pojačava aktivaciju antigen specifičnih CD4<+>ili CD8<+>T ćelija na način zavisan od doze, pri čemu je aktivacija izmerena korišćenjem testa opoziva antigena citomegalovirusa (CMV test) kao što je opisano u Primeru 1, i vezuje cinomolgus PD-1 sa ravnotežom konstante disocijacije (KD) manjom od oko 100 nM, pri čemu je KDizmerena korišćenjem ProteOn XPR36 sistema na 25°C.
[0073] U nekim izvođenjima, izolovano antagonističko antitelo koje se specifično vezuje za PD-1 ili njegov deo koji se vezuje za antigen pojačava aktivaciju antigen specifičnih CD4<+>ili CD8<+>T ćelija na način zavisan od doze, pri čemu je aktivacija izmerena korišćenjem testa opoziva antigena citomegalovirusa (CMV test) kao što je opisano u Primeru 1, i vezuje cinomolgus PD-1 sa ravnotežom konstante disocijacije (KD) manjom od oko 10 nM, pri čemu je KDizmerena korišćenjem ProteOn XPR36 sistema na 25°C.
[0074] Aktivacija antigen specifičnih CD4<+>ili CD8<+>T ćelija može biti procenjena merenjem povećane proliferacije T ćelija u testu Mixed Lymphocyte Reaction-Mešane limfocitne reakcije (MLR), povećanog lučenja interferona-y (IFN-y) u MLR testu, povećanog lučenja TNF-ɑ u MLR testu, povećanog lučenja IFN-y u testu antigena citomegalovirusa (CMV test) ili povećanog lučenja TNF- ɑ u testu CMV korišćenjem poznatih protokola i onih opisanih u Primeru 1. Antitela pronalaska poboljšavaju aktivaciju antigen specifočnih CD4<+>ili CD8<+>T kada je izmerena funkcionalnost T ćelija povećana sa antitelima iz pronalaska na način zavisan od doze.
[0075] Afinitet antitela na humani ili cinomolgus PD-1 može biti određen eksperimentalno korišćenjem bilo koje pogodne metode. Takve metode mogu da koriste ProteOn XPR36, Biacore 3000 ili KinExA instrumentaciju, ELIZA ili testove kompetitivnog vezivanja koji su poznati stručnjacima sa ovog područja tehnike. Izmereni afinitet interakcije određenog antitela /PD-1 može da varira ako se meri pod različitim uslovima (npr. osmolarnost, pH). Tako, merenja afiniteta i drugih parametara vezivanja (npr. KD, Kon, Koff) se obično vrše sa standardizovanim uslovima i standardizovanim puferom, kao što je pufer opisan ovde. Stručnjak u ovom području tehnike će shvatiti da interna greška za merenja afiniteta, na primer, korišćenjem Biacore 3000 ili ProteOn (mereno kao standardna devijacija, SD) može obično biti unutar 5-33% za merenja unutar tipičnih granica detekcije. Zbog toga izraz "oko" u kontekstu KDodražava tipično standardnu devijaciju u testu. Na primer, tipični SDza KDod 1x10<-9>M je do ± 0.33x10<-9>M.
[0076] Antagonističko antitelo koje se specifično vezuje za PD-1 ili njegov deo koji se vezuje za antigen prema pronalasu sadrži HCDR1, HCDR2 i HCDR3 sadržane u varijabilnom regionu teškog lanca (VH) od SEK ID BR: 48, pri čemu HCDR1, HCDR2 i HCDR3 su definisani od strane Chothia, Kabat ili IMGT.
[0077] Antagonističko antitelo koje se specifično vezuje za PD-1 ili njegov deo koji se vezuje za antigen prema pronalasu sadrži LCDR1, LCDR2 i LCDR3 sadržane u varijabilnom regionu lakog lanca (VL) od SEK ID BR: 56, pri čemu LCDR1, LCDR2 i LCDR su definisani od strane Chothia, Kabat ili IMGT.
[0078] Antagonističko antitelo koje specifično vezuje PD-1 ili njegov deo koji se vezuje za antigen prema pronalasu sadrži HCDR1, HCDR2 i HCDR3 od SEK ID BRi: 10, 14 i 17, respektivno.
[0079] Antagonističko antitelo koje specifično vezuje PD-1 ili njegov deo koji se vezuje za antigen prema pronalasu sadrži LCDR1, LCDR2 i LCDR3 SEK ID BRi: 23, 26 i 32, respektivno.
[0080] Antagonističko antitelo koje specifično vezuje PD-1 ili njegov deo koji se vezuje za antigen prema pronalasu sadrži HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 i LCDR3 od SEK ID BRi: 10, 14, 17, 23, 26 i 32,.
[0081] U nekim izvođenjima, antitelo ili njegov deo koji se vezuje za antigen vezuje humani PD-1 sa ravnotežnom konstante disocijacije (KD) manjom od oko 100 nM, opciono manjom od oko 10 nM, na primer manjom od oko 1 nM kao što je manjom od oko 500 pM, pri čemu je KDizmerena korišćenjem ProteOn XPR36 sistema na 25°C.
[0082] U nekim izvođenjima, antitelo ili njegov deo koji se vezuje za antigen vezuje cinomolgous PD-1 sa ravnotežnom konstante disocijacije (KD) manjom od oko 100 nM, opciono manjom od oko 10 nM, na primer manjom od oko 1 nM kao što je manjom od oko 500 pM, pri čemu je KDizmerena korišćenjem ProteOn XPR36 sistema na 25°C.
[0083] Antitelo ili njegov deo koji se vezuje za antigen sadrži VH od SEK ID BR: 48 i VL od SEK
ID BR: 56.
[0084] U nekim izvođenjima, VH i VL su kodirani sa polinukleotidnim sekvencama SEK ID BRi: 196 i 197, respektivno.
[0085] U nekim izvođenjima, antitelo je izotip IgG4, opciono sadržavajući supstituciju S228P u poređenju sa divljim tipom IgG4.
[0086] U nekim izvođenjima, antitelo je izotip IgG4/κ, opciono sadržavajući supstituciju S228P u poređenju sa divljim tipom IgG4.
[0087] U nekim izvođenjima, antitelo sadrži VH od SEK ID BR: 48 i VL od SEK ID BR: 56 i predstavlja IgG4 izotip, opciono sadržavajući supstituciju S228P u poređenju sa divljim tipom IgG4.
[0088] U nekim izvođenjima, antitelo sadrži VH od SEK ID BR: 48 i VL od SEK ID BR: 56 i predstavlja IgG4/κ izotip sadržavajući supstituciju S228P u poređenju sa divljim tipom IgG4.
[0089] U nekim izvođenjima, antitelo sadrži teški lanac (HC) od SEK ID BR: 72 i laki lanac (LC)
od SEK ID BR: 73.
[0090] U nekim izvođenjima, antitelo je izotip IgG2, opciono sadržavajući V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S i P331S substitucije u poređenju sa divljim tipom IgG2.
[0091] U nekim izvođenjima, antitelo je izotip IgG2/κ opciono sadržavajući V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S i P331S supstitucije u poređenju sa divljim tipom IgG2.
[0092] U nekim izvođenjima, antitelo sadrži VH od SEK ID BR: 48 i VL od SEK ID BR: 56 i predstavlja IgG4/κ izotip sadržavajući V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S i P331S supstituciju u poređenju sa divljim tipom IgG2.
[0093] U nekim izvođenjima, antitelo sadrži VH od SEK ID BR : 48 i VL od SEK ID BR: 56 i predstavlja IgG4/κ izotip obuhvatajući V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S I P331S supstitucije u poređenju sa divljim tipom IgG2.
[0094] U nekim izvođenjima, antitelo je IgG1 izotip.
[0095] U nekim izvođenjima, antitelo je IgG3 izotip.
[0096] U nekim izvođenjima, antitelo je bispecifično antitelo, kao što je bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo.
[0097] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma.
[0098] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju solidnog tumora.
[0099] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju melanoma.
[0100] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma pluća.
[0101] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju nemaloćelijskog karcinoma pluća (NSCLC).
[0102] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju skvamoznog NSCLC.
[0103] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju ne-skvamoznog NSCLC.
[0104] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju adenokarcinoma pluća.
[0105] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma bubrežne ćelije (RCC).
[0106] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju mezotelioma.
[0107] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju nazofaringealnog karcinoma (NPC).
[0108] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju kolorektalnog karcinoma.
[0109] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma prostate.
[0110] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma prostate rezistentnog na kastraciju [0111] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma stomaka.
[0112] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma jajnika.
[0113] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma želuca.
[0114] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma jetre.
[0115] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma pankreasa.
[0116] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju tiroidnog karcinoma.
[0117] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata.
[0118] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma jednjaka ili gastrointestinalnog trakta.
[0119] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma dojke.
[0120] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma jajovoda.
[0121] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma mozga.
[0122] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma uretre.
[0123] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju endometrioze.
[0124] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma grlića materice.
[0125] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju metastatske lezije karcinoma.
[0126] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju hematološkog maligniteta.
[0127] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju ne-Hodžkinovog limfoma.
[0128] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju hronične limfatične leukemije.
[0129] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma, u kombinaciji sa antagonističkim antitelom koje se specifično vezuje za TIM-3.
[0130] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma, u kombinaciji sa antagonističkim antitelom koje se specifično vezuje za TIM-3 sadržavajući VH od SEK ID BR: 146 i VL od SEK ID BR: 156.
[0131] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma, u kombinaciji sa antagonističkim antitelom koje se specifično vezuje za TIM-3 sadržavajući VH od SEK ID BR: 145 i VL od SEK ID BR: 155.
[0132] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma, u kombinaciji sa antagonističkim antitelom koje se specifično vezuje za TIM-3 sadržavajući VH od SEK ID BR: 172 i VL od SEK ID BR: 173.
[0133] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma, kao što je solidni tumor, u kombinaciji sa inhibitorom FGFR.
[0134] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma, kao što je solidni tumor, u kombinaciji sa vakcinom.
[0135] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma, kao što je solidni tumor, u kombinaciji sa agonističkim antitelom koje se specifično vezuje za GITR (SEK ID BR: 271).
[0136] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma, kao što je solidni tumor, u kombinaciji sa agonističkim antitelom koje se specifično vezuje za CD 137 (SEK ID BR : 281).
[0137] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma, kao što je solidni tumor, u kombinaciji sa agonističkim antitelom koje se specifično vezuje za OX-40 (SEK ID BR: 279).
[0138] U nekim izvođenjima, antitelo je bispecifično antitelo, kao što je bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo.
[0139] Sekvence VH, VL, HCDR i LCDR antagonističkih antitela koja specifično vezuju PD-1 su prikazane u Tabeli 2.
[0140] Iako antitela ilustrovana u Primerima sadrže parove varijabilnih regiona, jedan iz teškog lanca i jedan iz lakog lanca, iskusan stručnjak će prepoznati da alternative mogu sadržavati pojedinačne varijabilne regione teškog ili lakog lanca. Pojedinačni varijabilni region može biti korišćen za skrining za varijabilne domene sposobne za formiranje fragmenta koji se vezuju za antigen specifičan za dve domene i koji je sposoban, na primer, da se vezuje za humani PD-1. Skrining se može postići metodama skrininga sa prikazom faga korišćenjem na primer hijerarhijski dvojni kombinatorni pristup otkriven u Međunarodnoj patentnoj objavi br. No. WO1992/01047. U ovom pristupu, pojedinačna kolonija koja sadrži klon lanca ili VH ili VL se koristi da inficira kompletnu biblioteku klonova koji kodiraju drugi lanac (VL ili VH), i rezultirajući dvolančani specifični antigen-vezujući domen je izabran u skladu sa tehnikama prikaza faga koristeći poznate metode i one opisane ovde. Zbog toga su pojedinačni VH i VL polipeptidni lanci korisni u identifikovanju dodatnih antitela koja se specifično vezuju za humani PD-1 korišćenjem metoda objavljenih u Međunarodnoj patentnoj objavi br. WO1992/01047.
[0141] U nekim izvođenjima, antagonističko antitelo koje se specifično vezuje za PD-1 je multispecifično antitelo.
[0142] U nekim izvođenjima, antagonističko antitelo koje se specifično vezuje za PD-1 je bispecifično antitelo.
[0143] U nekim izvođenjima, antagonističko bispecifično antitelo specifično vezuujući PD-1 vezuje PD-L1 (SEK ID BR: 5), PD-L2 (SEK ID BR: 8), LAG-3 (SEK ID BR: 293), TIM-3 (SEK ID BR: 138), CEACAM-1 (SEK ID BR: 296), CEACAM-5 (SEK ID BR: 307), OX-40 (SEK ID BR: 279), GITR (SEK ID BR: 271), CD27 (SEK ID BR: 280), VISTA (SEK ID BR:286), CD137 (SEK ID BR: 281), TIGIT (SEK ID BR: 301) ili CTLA-4 (SEK ID BR: 292). Bispecifična i multispecifična antitela mogu biti generisana korišćenjem ovde opisanih metoda.
Tabela 2
Antitela sa konzervativnim modifikacijama
[0144] "Konzervativna modifikacija" se odnosi na modifikacije aminokiseline koje ne utiču značajno ili ne menjaju karakteristike vezivanja antitela koje sadrži sekvence aminokiseline. Konzervativne modifikacije uključuju supstitucije aminokiseline, dodavanja i brisanja. Konzervativne supstitucije su one u kojima je aminokiselina zamenjena sa aminokiselinskim ostatkom koji ima sličan bočni lanac. Familije aminokiselinskih ostataka koji imaju slične bočne lance su dobro definisane i uključuju aminokiseline sa kiselim bočnim lancima (na primer, asparaginsku kiselinu, glutaminsku kiselinu), bazične bočne lance (na primer, lizin, arginin, histidin), nepolarne bočne lance (na primer, alanin, valin, leucin, izoleucin, prolin, fenilalanin, metionin), nenaelektrisane polarne bočne lance (na primer, glicin, asparagin, glutamin, cistein, serin, treonin, tirozin, triptofan), aromatične bočne lance (na primer, fenilalanin, triptofan, histidin, tirozin), alifatične bočne lance (na primer, glicin, alanin, valin, leucin, izoleucin, serin, treonin), amide (na primer, asparagin, glutamin), beta-razgranate bočne lance (na primer, treonin, valin, izoleucin) i bočne lance koji sadrže sumpor (cistein, metionin). Pored toga, bilo koji prirodni ostatak u polipeptidu takođe može biti supstituisan sa alaninom, kao što je prethodno opisano za mutagenezu skeniranja alanina (MacLennan et al., Acta Physiol. Scand. Suppl. 643:55-67, 1998; Sasaki et al., Adv. Biophys. 35:1-24, 1998). Supstitucije aminokiselina za antitela pronalaska mogu biti napravljene sa dobro poznatim metodama, na primer sa PCR mutagenezom (US Pat. Br. 4,683,195). Alternativno, biblioteke varijanti mogu biti generisane korišćenjem poznatih metoda, na primer korišćenjem slučajnih (NNK) ili neslučajnih kodona, na primjer DVK kodona, koji kodiraju 11 aminokiselina (Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, Lys, Asn, Arg, Ser, Tyr, Trp). Rezultirajuće varijante antitela mogu biti testirane na njihove karakteristike korišćenjem ovde opisanih testova.
Antagonistička antitela koja specifično vezuju TIM-3
[0145] Domen T-ćelijskog imunoglobulina i domen mucina 3 (TIM-3, takođe poznat kao ćelijski receptor 2 virusa hepatitisa A (HAVCR2)) je ko-inhibitorni receptor imunološke kontrolne tačke za koji se pretpostavlja da negativno reguliše i adaptivni i urođeni imunološki odgovor. TIM-3 se eksprimira na specifičnim podskupovima CD4<+>i CD8<+>T ćelija i funkcioniše tako da ograniči trajanje i magnitudu odgovora T ćelije.
[0146] Višestruki dokazi podržavaju inhibitornu ulogu TIM-3 u regulisanju odgovora T ćelije. Miševi sa nedostatkom Tim-3 pokazuju defekte u indukciji i antigen-specifične i tolerancije na transplantaciju, u skladu sa TIM-3 inhibirajućim efektorskim T ćelijama tokom normalnih imunoloških odgovora (Sabatos et al., (2003) Nat Immunol 4(11):1102-1110, Sanchez-Fueyo et al., (2003) Nat Immunol 4(11):1093-1101). Anti-TIM-3 antitela pogoršavaju eksperimentalni autoimuni encefalomijelitis (EAE) na životinjskim modelima (Monney et al., (2002) Nature 415(6871):536-541). Pokazalo se da je TIM-3 kritičan pokretač nefunkcionalnog ili iscrpljenog stanja T ćelije koji se javlja kod hronične infekcije i karcinoma (Sakuishi, K. and A. C. Anderson (2014). Tim-3 Regulation of Cancer Immunity. Tumor-Induced Immune Suppression. D. I. Gabrilovich and A. A. Hurwitz, Springer New York: 239-261).
[0147] Pokazalo se da blokada TIM-3 obnavlja aktivnost u efektorskim ćelijama, kao što je sekrecija i proliferacija citokina. U virusno iscrpljenim ćelijskim populacijama, npr., ćelije inficirane HCV, ćelije koje eksprimiraju TIM-3 (TIM-3<+>ćelije) eksprimiraju manje TNF-ɑ i IFN-y citokina nego TIM-3 negativne ćelije u obe populacije efektorskih ćelija, CD4<+>i CD8<+>T ćelije (Golden-Mason et al., (2009) J Virol 83:9122). Blokada TIM-3 je obnovila proliferaciju u CD8<+>T ćelijama kod pacijenta sa HIV-om ili u ćelijama koje su rekapitulirale virusnu iscrpljenost (Jones et al., (2008) J Exp Med 205:2763), ili proliferaciju i IFN-y i/ili TNF-ɑ sekreciju u NY-ESO-1 specifičnim T ćelijama iz PBMCa od pacijenata sa metastazama (Fourcade et al., (2010) J Exp Med 207:2175). Utvrđeno je da su TIM-3<+>T ćelije koncentrisane u tumorima i doprinose imunosupresivnom okruženju tumora (Sakuishi et al., (2013) Oncoimmunology, 2:e23849).
[0148] Blokada TIM-3 (delimično samostalno i aditivno ili sinergijski u kombinaciji sa blokadom puta PD-1) pokazala je antitumorsku efikasnost u nekoliko pretkliničkih modela karcinoma, uključujući CT26 karcinom debelog creva (Sakuishi et al., (2010) J Exp Med 207(10):2187-94), WT3 sarkom i TRAMP-C1 karcinom prostate (Ngiow et al., (2011) Cancer Res 71(10):3540-3551).
[0149] Mehanizmi putem kojih TIM-3 inhibira odgovore T ćelije nisu u potpunosti shvaćeni. Citoplazmatski rep TIM-3 sadrži više ostataka tirozina (Ferris et al., (2014) J Immunol 193(4): 1525-1530) ali mu nedostaju inhibitorni signalni motivi kao što su ITIMi ili ITSMi koji se nalaze u PD-1 intracelularnom repu. Pokazalo se da se Fyn i Lck tirozin kinaze familije Src vezuju na TIM-3, iako tačne posledice ovih interakcija tek treba da budu potvrđene in vivo. Predložena su dva suprotna modela kako TIM-3 reguliše signaliziranje T ćelija. Sa jedne strane, pretpostavljeno je da TIM-3 negativno reguliše TCR signalizaciju regrutovanjem fosfataze u imunološku sinapsu i defosforilacijom Lck (Clayton, et al., (2014) J Immunol 192(2):782-791). Nasuprot tome, TIM-3 je takođe predložen da poboljša TCR signalizaciju i paradoksalno vodi T ćelije prema iscrpljenijem stanju, kroz povećanu aktivaciju aktivnosti NFAT i NFκB signalizacije.
[0150] Pored ekspresije na efektorskim T ćelijama, TIM-3 je takođe eksprimiran na regulatornim T ćelijama (T-regovi) i pokazalo se da označava supresivnu T-reg podgrupu u tumorima. Analize koje koriste primarne humane ćelije i mišji pretklinički modeli su pokazali da su TIM-3<+>T-regovi efikasniji u inhibiciji odgovora T pomoćne ćelije 1 (Th1) i T pomoćne ćelije 17 (Th17) nego TIM-3-T-regovi (Gautron et al., (2014) Eur J Immunol 44(9): 2703-2711; Sakuishi et al., (2013) Oncoimmunology, 2:e23849). Pošto je TIM-3 eksprimiran na visoko supresivnim T regovima, on može direktno inhibirati CD4<+>i CD8<+>T ćelijske odgovore. Pored toga, TIM-3<+>T regovi eksprimiraju visoke nivoe IL-10, za koji je pretpostavljeno da pokreće iscrpljenost efektorskih T ćelija u TME kao dodatni indirektni mehanizam supresije antitumorskih imunoloških odgovora ( Sakuishi et al., (2013) Oncoimmunology, 2:e23849).
[0151] TIM-3 je eksprimiran na nekoliko tipova urođene imunološke ćelije, uključujući monocite/makrofage, dendritske ćelije, i NK ćelije. Postojeći podaci su u skladu sa supresivnom ulogom za TIM-3 u ovim različitim tipovima ćelije.
[0152] TIM-3 je konstitutivno eksprimiran cirkulišućim CD14<+>monocitima kod zdravih donora, i njegova ekspresija na perifernim monocitima značajno je povećana kod pacijenata sa hroničnom inflamacijom i karcinomom (Rong et al., (2014.) Tissue Antigens 83(2):76-81). Nivoi TIM-3 su takođe povećani na makrofagima koji infiltriraju tumore hepatocelularnog karcinoma (HCC), u poređenju sa makrofagima iz suednih tkiva, i predlaže se da igraju ulogu u pokretanju polarizacije makrofaga na fenotip koji podstiče tumor M2.
[0153] Nedavno je objavljeno da se TIM-3 eksprimira na dendritskim ćelijama koje infiltriraju tumore miša. U ovom okruženju, interakcija TIM-3 sa HMBG1 je predložena da suzbije urođeni imunitet ometanjem prepoznavanja i odgovora na imunostimulirajuću nukleinsku kiselinu (Chiba et al., (2012) Immunol 13(9): 832-842). TIM-3 je takođe konstitutivno eksprimiran na NK ćelijama u perifernoj krvi. Nedavna studija je pokazala da NK ćelije pacijenata sa uznapredovalim melanomom izražavaju visoke nivoe TIM-3 na NK ćelijama u perifernoj krvi. Važno je da su TIM-3<+>NK ćelije bile funkcionalno iscrpljene, i blokada anti-TIM-3 je bila u stanju da preokrene iscrpljenost i poboljša funkcionalnost NK ćelije (da Silva et al., (2014) Cancer Immunol Res 2(5): 410-422).
[0154] TIM-3 veže ligande galektin-9 (Gal-9), fosfatidilserin (PtdSer), HMGB1 i CEACAM-1. S-tip lektin galektin-9 može inhibirati funkciju Th1 efektora povezanu sa TIM-3 i indukovati apoptozu na T-ćeljama koje eksprimiraju TIM-3 na mišjim modelima. PtdSer se obično nalazi na intracelularnoj strani plazma membrane, ali se tokom apoptoze okreće na ekstracelularnu stranu. PtdSer vezuje očuvani rascep u sva tri humana člana TIM familije (TIM-1, 3, 4). Inhibicija vezivanja PtdSer na TIM-3 može aktivirati odgovor T-ćelije. Galektin-9 luče tumorske ćelije i može doprineti izbegavanju antitumorskog imuniteta. DNK alarmin u HMGB1, za koji TIM-3 može delovati kao tzv. "sink-sliv", može sprečiti interakcije HMGB 1/RAGE koje stimulišu urođeni imunitet. CEACAM-1 može komunicirati sa TIM-3 i u cis kao heterodimer na T ćelijama i u trans kao ligand. Interakcija između CEACAM-1 i TIM-3 može pomoći u posredovanju u blokiranju signalizacije imunološkog odgovora. Ko-blokada TIM-3 i CEACAM-1 u CT26 karcinomu debelog creva je pokazala sličnu efikasnost kao kod ko-blokade PD-L1 i TIM-3.
[0155] Pronalazak obezbeđuje antagonističko bispecifično antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca (VH) SEK ID BR: 48 i varijabilni region lakog lanca (VL) SEK ID BR: 56, koji specifično vezuje PD-1 i vezuje TIM-3. Dakle, blokada TIM-3 korišćenjem bispecifičnih antitela iz pronalaska opisanih ovde koja inhibiraju funkciju TIM-3 može poboljšati imunološki odgovor protiv infekcije i antitumorski imunitet.
[0156] Inhibicija vezivanja TIM-3 za galektin-9 sa bispecifičnim antitelima iz pronalaska može biti procenjena korišćenjem kompetitivnog ELIZA testa. U primernom testu, 1 µg/ml rekombinantnog humanog Fc-TIM-3 se vezuje na jažice mikrotitarskih ploča, jažice se isperu i blokiraju i doda se 10 µg/ml testiranog antitela. Bez ispiranja, u jažice je dodato 7.5 µg/ml galektina-9 i inkubirano tokom 30 minuta, nakon čega je dodato 0.5 µg/ml antigalektin-9-biotin antitela i inkubirano tokom 30 minuta. Ploče su isprane i dodato je poliklonalno antitelo konjugata neutravidin-HRP od 0.5 µg/mL i inkubirano tokom 30 minuta. Ploče su isprane i dodat je POD hemiluminiscentni supstrat neposredno pre očitavanja signala luminiscencije. Bispecifična antitela iz pronalaska inhibiraju vezivaanje TIM-3 na galektin-9 kada je vezivanje galektina-9 smanjeno za najmanje oko 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ili 100% korišćenjem testa opisanog ovde i u Primeru 1. Primeri antitela, koja nisu deo pronalaska, koja inhibiraju vezivanje TIM-3 na galektin-9 su antitielaTM3B103, TM3B105, TM3B107, TM3B108, TM3B109, TM3B113, TM3B189, TM3B190 and TM3B196.
[0157] U nekim izvođenjima, antagonističko bispecifično antitelo koje se specifično vezuje za TIM-3 pojačava aktivaciju antigen specifičnih CD4<+>ili CD8<+>T ćelija.
[0158] U nekim izvođenjima, antagonističko bispecifično antitelo koje se specifično vezuje za TIM-3 pojačava aktivaciju antigen specifičnih CD4<+>ili CD8<+>T ćelija, pri čemu se aktivacija CD4<+>ili CD8<+>T ćelija specifičnih za antigen procenjuje merenjem statistički značajnog povećanja ekspresije CD 137 na površini na antigen specifičnim CD4<+>ili CD8<+>T ćelijama prema metodama opisanim u Primeru 14.
[0159] Upotreba CD137 kao markera antigen specifičnih CD8<+>i CD4<+>T ćelija koje se šire kao odgovor na CMV antigen stimulaciju je omogućila otkrivanje funkcionalnih efekata antagonističkih bispecifičnih TIM-3 antitela prema pronalasku.
[0160] U nekim izvođenjima, antagonističko bispecifično antitelo koje se specifično vezuje za TIM-3 vezuje TIM-3 unutar TIM-3 ostataka 32-47 (WGKGACPVFECGNVVL) (SEK ID BR: 261).
[0161] U nekim izvođenjima, antagonističko bispecifično antitelo koje se specifično vezuje za TIM-3 vezuje TIM-3 unutar TIM-3 ostataka 32-47 (WGKGACPVFECGNVVL) (SEK ID BR: 261) i ostataka 50-56 (DERDVNY) (SEK ID BR: 262).
[0162] U nekim izvođenjima, antagonističko bispecifično antitelo koje se specifično vezuje za TIM-3 vezuje TIM-3 unutar TIM-3 ostataka 90-102 (RIQIPGIMNDEKF) (SEK ID BR: 263).
[0163] U nekim izvođenjima, antagonističko bispecifično antitelo koje se specifično vezuje za TIM-3 vezuje TIM-3 unutar TIM-3 ostataka 90-102 (RIQIPGIMNDEKF) (SEK ID BR: 263) i ostataka 50-56 (DERDVNY) SEK ID BR: 262.
[0164] "Unutar" znači da se 80% ili više ostataka epitopa bispecifičnog antitela vezuje da bi se nalazilo unutar navedenih aminokiselinskih protezanja, i da se do 20% ostataka epitopa bispecifičnog antitela vezuje kako bi se nalazilo izvan navedenih protezanja aminokiselina.
[0165] Tim-3 epitop za koje se vezuje bispecifično antitelo može biti re-solved-razdvojen, na primer, korišćenjem razmene vodonik/deuterijum (H/D razmena) ili analiziranjem kristalne strukture antitela u kompleksu sa TIM-3. Ostaci epitopa su oni koji su zaštićeni antitelom sa najmanje 5% razlike u nivoima deuteracije kroz H/D razmenu ili oni površinski izloženi ostaci aminokiselina za koje je utvrđeno da vezuju antitelo u kristalnoj strukturi kompleksa bispecifičnog antitela i TIM -3. U kristalnoj strukturi kompleksa antitela i TIM-3, ostaci epitopa su oni TIM-3 ostaci koji se nalaze unutar 4 Å udaljenosti ili manje od bilo kojih od CDR ostataka antitela.
[0166] U testu H/D razmene, TIM-3 protein je inkubiran u prisustvu ili odsustvu antitela u deuterisanoj vodi tokom unapred određenog vremena, rezultirajući inkorporacijom deuterijuma na izmenjivim atomima vodonika koji nisu zaštićeni antitelom, nakon čega sledi digestija proteina proteazom i analize peptidnih fragmenata korišćenjem LCMS. U primernom testu, 5 µL testnog antitela (10 µg) ili 5 µL kompleksa TIM-3 i testnog antitela (10 i 7.35 µg respektivno) je inkubirano sa 120 µL pufera za obeležavanje deuterijum oksida (50 mM fosfata, 100 mM natrijum hlorida pri pH 7.4) tokom 0 sekundi, 60 sekundi, 300 sekundi, 1800 sekundi, 7200 sekundi i 14400 sekundi. Izmena deuterijuma je ugašena dodavanjem 63 µL od 5 M gvanidin hidrohlorida i konačni pH je 2.5. Ugašeni uzorak je podvrgnut digestiji pepsin/proteaze tipa XIII na koloni i LC-MS analizi. Za digestiju pepsina/proteaze tipa XIII, 5 µg uzoraka u 125 µL kontrolnog pufera (50 mM fosfata, 100 mM natrijum hlorida pri pH 7.4) su denaturisani dodavanjem 63 µL od 5 M gvanidin hidrohlorida (konačni pH je 2.5) i inkubiranjem smeše tokom 3 min. Zatim, smeša je podvrgnuta onkolonskoj digestiji pepsin/proteaze tipa XIII i rezultirajući peptidi su analizirani korišćenjem UPLC-MS sistema koji se sastoji od Waters Acquity UPLC coupled to a Q Exactive™ Hybrid Quadrupole-Orbitrap Mass Spectrometer (Thermo). Neobrađeni MS podaci se obrađuju pomoću HDX WorkBench, softvera za analizu MS podataka H/D razmene. Nivoi deuterijuma su izračunati korišćenjem prosečne masene razlike između deuterizovanog peptida i njegovog prirodnog oblika (t0). Identifikacija peptida je izvršena pretraživanjem MS/MS podataka u odnosu na TIM-3 sekvence sa Maskotom. Tolerancija mase za jone prekurzora i produkta je 20 ppm i 0.05 Da, respektivno.
[0167] Za rendgensku kristalografiju, TIM-3 i test antitelo su eksprimirani i pečišćeni korišćenjem standardnih protokola. Kompleks TIM-3/test antitela je inkubiran preko noći na 4°C, koncentrovan i odvojen od nekompleksiranih vrsta korišćenjem hromatografije isključivanja veličine. Kompleks je kristalizovan metodom parne difuzije iz različitih poznatih testnih rastvora, na primer rastvora koji sadrže PEG3350, amonijum citrat i 2-(N-Morfolino)etansulfonsku kiselinu (MES).
[0168] Antitela koja se vezuju unutar Tim-3 ostataka 32-47 (WGKGACPVFECGNVVL) (SEK ID BR: 261), 90-102 (RIQIPGIMNDEKF) (SEK ID BR: 263) i/ili 50-56 (DERDVNY) (SEK ID BR: 262) mogu biti generisana izolovanjem antitela koja vezuju TIM-3 korišćenjem biblioteka za prikaz faga, birajući ona antitela koja se takmiče sa referentnim antitelom TM3B105 (VH of SEK ID BR: 146 i VL of SEK ID BR: 156) ili TM3B291 (VH od SEK ID BR: 172 i VL od SEK ID BR: 173) za 100% vezivanje za TIM-3 i potvrđivanje epitopa generisanih antitela rešavanjem kristalne strukture kompleksa antitelo/TIM-3. Alternativno, miševi, pacovi ili zečevi mogu biti imunizovani korišćenjem peptida koji obuhvataju ostatke 32-47, 90-102 i/ili 50-56 TIM-3 i generisana antitela mogu biti procenjena na njihovo vezivanje unutar navedenog regiona.
[0169] SEK ID BRi: 164, 165, 166, 167, 168 i 169 predstavljaju HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 i LCDR3 sekvence roda TIM-3 antagonista izvedene iz biblioteka za prikaz faga. Sekvence roda su generisane na osnovu strukturnih modela koji su rezultirali poravnavanjem sekvenci datim na Slici 13, Slici 14, Slici 15, Slici 16, Slici 17 i Slici 18 i sažetim ovde.
SEK ID BR: 164
X17YX18MX19,
pri čemu
X17je N, S, G ili D;
X18je W ili A; i
X19je S ili H.
SEK ID BR: 165
X20IX21X22SGGSX23YYADSKG,
pri čemu
X20je A ili V;
X21je S ili K;
X22je G ili Y; i
X23je T ili K.
SEK ID BR: 166
X24X25X26X27X28X29X30X31DY,
pri čemu
X24je D, S, N, G ili E;
X25je H, P, E, T ili L;
X26je W, E, N ili obrisan;
X27je D, P ili obrisan;
X28je P, Y, D ili obrisan;
X29je N, A, D, G ili obrisan;
X30je F, P, R, W ili V; i
X31je L ili F.
SEK ID BR: 167
X32X33SQSVX34X35X36X37X38X39X40X41X42LA,
pri čemu
X32je R ili K;
X33je A ili S;
X34je S, N ili L;
X35je S, A, N ili obrisan;
X36je S ili obrisan;
X37je S ili obrisan;
X38je N ili obrisan;
X39je N ili obrisan;
X40je K ili obrisan;
X41je S, D ili N; i
X42je Y ili T.
SEK ID BR: 168
X43ASX44RX45X46,
pri čemu
X43je G, D, W ili T;
X44je S, N ili T;
X45je A ili E; i
X46je T ili S.
SEK ID BR: 169 QQX47X48X49X50PX51T (SEK ID BR: 169),
pri čemu
X47je Y, G ili S;
X48je G ili Y;
X49je S, H ili T;
X50je S, A ili T; i
X51je L, I ili W.
SEK ID BR: 78
SEK ID BR: 79
SEK ID BR: 240
SEK ID BR: 80
SEK ID BR: 81
[0170] VH, VL, HCDR i LCDR sekvence primera antagonističkih antitela koja specifično vezuju TIM-3 su prikazane u Tabeli 3.
Tabela 3.
Bispecifična anti-PD-1/TIM-3 antitela
[0171] Pronalazak takođe obezbeđuje antagonistička bispecifična PD-1/TIM-3 antitela koja sadrže varijabilni region teškog lanca (VH) od SEK ID BR: 48 i varijabilni region lakog lanca (VL) od SEK ID BR: 56.
[0172] Pronalazak takođe obezbeđuje izolovano antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo koje sadrži prvi domen koji se specifično vezuje za PD-1, sadržavajući varijabilni region teškog lanca (VH) od SEK ID BR: 48 i varijabilni region lakog lanca (VL) od SEK ID BR: 56, i drugi domen koja se specifično vezuje za TIM-3.
[0173] U nekim izvođenjima, antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo iz pronalaska pojačava aktivaciju antigenspecifičnih CD4<+>ili CD8<+>T ćelija.
[0174] U nekim izvođenjima, antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo iz pronalaska pojačava aktivaciju antigen specifičnih CD4<+>ili CD8<+>T ćelija, pri čemu je pojačana aktivacija antigen specifičnih CD4<+>ili CD8<+>T ćelija procenjena merenjem statistički značajnog povećanja površinske ekspresije CD137 na antigen-specifičnim CD4<+>ili CD8<+>T ćelijama.
[0175] U nekim izvođenjima, antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo iz pronalaska inhibira TIM-3 vezivanje za galektin-9.
[0176] U nekim izvođenjima, antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo iz pronalaska
vezuje humani PD-1 sa ravnotežnom konstantom disocijacije (KD) manjom od oko 100 nM,
pri čemu je KDizmerena korišćenjem ProteOn XPR36 sistema na 25°C;
vezuje humani PD-1 sa KDmanjom od oko 1 nM, pri čemu je KDizmerena korišćenjem ProteOn XPR36 sistema na 25°C;
vezuje cinomolgus PD-1 sa KDmanjom od oko 100 nM, pri čemu je KDizmerena korišćenjem ProteOn XPR36 sistema na 25°C; ili
vezuje cinomolgus PD-1 sa KDmanjom od oko 1 nM; pri čemu je KDizmerena korišćenjem ProteOn XPR36 sistema na 25°C.
[0177] U nekim izvođenjima, antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo iz pronalaska pojačava aktivaciju antigen specifičnih CD4<+>ili CD8<+>T ćelija, pri čemu je aktivacija antigen specifičnih CD4<+>ili CD8<+>T ćelija procenjena merenjem statistički značajnog povećanja površinske ekspresije CD137 na antigen-specifičnim CD4<+>ili CD8<+>T ćelijama i vezuje humani PD-1 sa ravnotežnom konstantom disocijacije (KD) manjom od oko 100 nM, pri čemu je KDizmerena korišćenjem ProteOn XPR36 sistema na 25°C.
[0178] U nekim izvođenjima, antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo iz pronalaska pojačava aktivaciju antigen specifičnih CD4<+>ili CD8<+>T ćelija, pri čemu je aktivacija antigen specifičnih CD4<+>ili CD8<+>T ćelija procenjena merenjem statistički značajnog povećanja površinske ekspresije CD137 na antigen-specifičnim CD4<+>ili CD8<+>T ćelijama i vezuje humani PD-1 sa ravnotežnom konstantom disocijacije (KD) manjom od oko 1 nM, pri čemu je KDizmerena korišćenjem ProteOn XPR36 sistema na 25°C.
[0179] U nekim izvođenjima, antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo iz pronalaska pojačava aktivaciju antigen specifičnih CD4<+>ili CD8<+>T ćelija, pri čemu je aktivacija antigen specifičnih CD4<+>ili CD8<+>T ćelija procenjena merenjem statistički značajnog povećanja površinske ekspresije CD137 na antigen-specifičnim CD4<+>ili CD8<+>T ćelijama i vezuje cinomolgus PD-1 sa ravnotežnom konstantom disocijacije (KD) manjom od oko 100 nM, pri čemu je KDizmerena korišćenjem ProteOn XPR36 sistema na 25°C.
[0180] U nekim izvođenjima, antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo iz pronalaska pojačava aktivaciju antigen specifičnih CD4<+>ili CD8<+>T ćelija, pri čemu je aktivacija antigen specifičnih CD4<+>ili CD8<+>T ćelija procenjena merenjem statistički značajnog povećanja površinske ekspresije CD137 na antigen-specifičnim CD4<+>ili CD8<+>T ćelijama i vezuje cinomolgus PD-1 sa ravnotežnom konstantom disocijacije (KD) manjom od oko 1 nM, pri čemu je KDizmerena korišćenjem ProteOn XPR36 sistema na 25°C.
[0181] Antagonistička bispecifična PD-1/TIM-3 antitela iz pronalaska opisana ovde mogu biti procenjena zbog njihove sposobnosti da pojačaju antigen specifičnu aktivaciju CD4<+>ili CD8<+>T ćelija, da inhibiraju TIM-3 vezivanje na galektin-9 i kinetike vezivanja na ljude ili cinomolgus PD-1 ili TIM-3 mogu biti procenjeni korišćenjem ovde opisanih metoda.
[0182] Na primer, CD137 može biti korišćen kao marker za aktivaciju antigen specifičnih CD4<+>ili CD8<+>T ćelija. Površinska ekspresija CD137 može biti izmerena na T ćelijama kultivisanim u prisustvu ili u odsustvu testnog antitela, kao što je bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo, korišćenjem anti-CD 137 antitela i sekundarnog antitela konjugovanog na primer sa fluorescentnom bojom. Procenjena je statistički značajna razlika u dobijenom signalu na T ćelijama kultivisanim u prisustvu ili u odsustvu testa na antitelo.
[0183] U nekim izvođenjima, antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo iz pronalaska vezuje TIM-3 u okviru TIM-3 ostataka 32-47 (WGKGACPVFECGNVVL) (SEK ID BR: 261).
[0184] U nekim izvođenjima, antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo iz pronalaska vezuje TIM-3 u okviru TIM-3 ostataka 32-47 (WGKGACPVFECGNVVL) (SEK ID BR: 261) i ostataka 50-56 (DERDVNY) SEK ID BR: 262.
[0185] U nekim izvođenjima, antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo iz pronalaska vezuje TIM -3 u okviru TIM-3 ostataka 90-102 (RIQIPGIMNDEKF) (SEK ID BR: 263).
[0186] U nekim izvođenjima, antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo iz pronalaska vezuje TIM-3 u okviru TIM-3 ostataka 90-102 (RIQIPGIMNDEKF) (SEK ID BR: 263) i ostataka 50-56 (DERDVNY) SEK ID BR: 262.
[0187] U nekim izvođenjima, drugi domen sadrži HCDR1, HCDR2 i HCDR3 aminokiselinske sekvence SEK ID BR i: 164, 165 i 166, respektivno.
[0188] U nekim izvođenjima, drugi domen sadrži LCDR1, LCDR2 i LCDR3 aminokiselinske sekvence SEK ID BRi: 167, 168 i 169, respektivno.
[0189] U nekim izvođenjima, drugi domen sadrži HCDR1, HCDR2 i HCDR3 aminokiselinske sekvence SEK ID BRi: 164, 165 i 166, respektivno, i LCDR1, LCDR2 i LCDR3 aminokiselinske sekvence SEK ID BRi: 167, 168 i 169 respektivno.
[0190] Prvi domen sadrži HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 i LCDR3 SEK ID BRi: 10, 14, 17, 23, 26 i 32, respektivno.
[0191] U nekim izvođenjima, drugi domen sadrži HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 i LCDR3 od
SEK ID BRi: 90, 99, 107, 117, 126 i 135, respektivno;
SEK ID BRi: 91, 99, 108, 118, 127 i 136, respektivno;
SEK ID BRi: 91, 99, 109, 119, 128 i 137, respektivno;
SEK ID BRi: 92, 100, 110, 117, 126 i135, respektivno;
SEK ID BRi: 93, 101, 111, 120, 129 i 139, respektivno;
SEK ID BRi: 94, 102, 112, 121, 130 i 140, respektivno;
SEK ID BRi: 95, 103, 113, 122, 131 i 141, respektivno;
SEK ID BRi: 96, 104, 114, 123, 132 i 142, respektivno;
SEK ID BRi: 97, 105, 115, 124, 133 i 143, respektivno; ili
SEK ID BRi: 98, 106, 116, 125, 134 i 144, respektivno;.
[0192] U nekim izvođenjima, drugi domen sadrži VH od SEK ID BRi: 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154 ili 172, VH opciono ima jedan, dva, tri, četiri, pet, šest, sedam, osam, devet, deset, jedanaest, dvanaest, trinaest, četrnaest ili petnaest konzervativnih supstitucija aminokiseline. Opciono, bilo koje supstitucije nisu unutar CDRa.
[0193] U nekim izvođenjima, drugi domen sadrži VL od SEK ID BRi: 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163 ili 173, VL opciono imajući jednu, dve, tri, četiri, pet, šest, sedam, osam, devet, deset, jedanaest, dvanaest, trinaest, četrnaest ili petnaest konzervativnih aminokiselinskih supstitucija. Opociono, bilo koje supstitucije nisu unutar CDRa.
[0194] U nekim izvođenjima, drugi domen sadrži VH od SEK ID BRi: 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154 ili 172 i VL od SEK ID BRi: 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163 ili 173, VH i VL opciono imajući jednu, dve, tri, četiri, pet, šest, sedam, osam, devet, deset, jedanaest, dvanaest, trinaest, četrnaest ili petnaest konzervativnih aminokiselinskih supstitucija. Opociono, bilo koje supstitucije nisu unutar CDRa.
[0195] Prvi domen sadrži VH od SEK ID BR: 48 i VL od SEK ID BR: 56.
[0196]Pronalazak takođe obezbeđuje izolovano antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo koje sadrži prvi domen koji se specifično vezuje za PD-1 i drugi domen koji se specifično vezuje za TIM-3, pri čemu prvi domen sadrži VH od SEK ID BR: 48 i VL od SEK ID BR: 56, i drugi domen sadrži HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 i LCDR3 od SEK ID BRi: 91, 99, 108, 118, 127 i 136, respektivno.
[0197] U nekim izvođenjima, antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo vezuje TIM-3 unutar TIM-3 ostataka 32-47 (WGKGACPVFECGNVVL) (SEK ID BR: 261).
[0198] U nekim izvođenjima, antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo vezuje TIM-3 unutar TIM-3 ostataka 32-47 (WGKGACPVFECGNVVL) (SEK ID BR: 261) i ostataka 50-56 (DERDVNY) SEK ID BR: 262.
[0199] U nekim izvođenjima, antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo inhibira vezivanje TIM-3 na galektin-9.
[0200] U nekim izvođenjima, prvi domen sadrži VH od SEK ID BR: 48 i VL od SEK ID BR: 56 i
drugi domen sadrži VH od SEK ID BR: 146 i VL od SEK ID BR: 156.
[0201] U nekim izvođenjima, antitelo je IgG1 izotip.
[0202] U nekim izvođenjima, antitelo je IgG2 izotip.
[0203] U nekim izvođenjima, antitelo je IgG2 izotip koji sadrži F405L i/ili K409R supstituciju.
[0204] U nekim izvođenjima, antitelo je IgG2 izotip, opciono sadržavajući V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S i P331S supstitucije u poređenju sa divljim tipom IgG2.
[0205] U nekim izvođenjima, antitelo je IgG3 izotip.
[0206] U nekim izvođenjima, antitelo je IgG4 izotip, opciono sadržavajući S228P supstituciju u poređenju sa divljim tipom IgG4.
[0207] U nekim izvođenjima, antitelo je IgG4 izotip, sadržavajući F405L i K409R supstituciju.
[0208] U nekim izvođenjima, antitelo je IgG4 izotip koji sadrži supstituciju teškog lanca S228P u poređenju sa divljim tipom IgG4.
[0209] U nekim izvođenjima, izolovano antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo sadrži prvi teški lanac (HC1), prvi laki lanac (LC1), drugi teški lanac (HC2) i drugi laki lanac (LC2) od SEK ID BR: 241, 188, 245 ili 194, respektivno.
[0210] U nekim izvođenjima, izolovano antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo sadrži HC1, LC1, HC2 i LC2 od SEK ID BRi: 186, 188, 191 ili 194, respektivno.
[0211] U nekim izvođenjima, izolovano antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo sadrži HC1, LC1, HC2 i LC2 od SEK ID BRi: 186, 188, 248 ili 194, respektivno.
[0212] U nekim izvođenjima, izolovano antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo sadrži HC1, LC1, HC2 i LC2 od SEK ID BRi: 243, 188, 246 ili 194, respektivno.
[0213] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma.
[0214] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju solidnog tumora.
[0215] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju melanoma.
[0216] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma pluća.
[0217] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju nemaloćelijskog karcinoma pluća (NSCLC).
[0218] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju skvamoznog NSCLC.
[0219] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju ne- skvamoznog NSCLC.
[0220] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju adenokarcinoma pluća.
[0221] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma bubrežne ćelje (RCC).
[0222] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju mezotelioma.
[0223] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju a nazofaringealnog karcinoma (NPC).
[0224] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju a kolorektalog karcinoma.
[0225] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju krcinoma prostate.
[0226] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma prostate otpornog na kastraciju.
[0227] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma stomaka.
[0228] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma jajnika.
[0229] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma želuca.
[0230] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma jetre.
[0231] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma pankreasa.
[0232] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma štitaste žlezde.
[0233] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata.
[0234] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma jednjaka ili gastrointestinalnog trakta.
[0235] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma dojke.
[0236] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma jajovoda.
[0237] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma mozga.
[0238] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma uretre.
[0239] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju endometrioze.
[0240] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju karcinoma grlića materice.
[0241] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji, na primer u lečenju metastatskih lezija karcinoma.
[0242] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji kod subjekta koji se leči ili koji je lečen sa anti-PD-1 antitelom koje sadrži VH od SEK ID BR: 230 i VL od SEK ID BR: 231. (npr. KEYTRUDA® (pembrolizumab)).
[0243] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji kod subjekta koji se leči ili koji je lečen sa anti-PD-1 antitelom koje sadrži VH od SEK ID BR: 232 i VL od SEK ID BR: 233. (npr. OPDIVO® (nivolumab)).
[0244] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji kod subjekta koji je otporan na lečenje sa anti-PD-1 antitelom koje sadrži VH od SEK ID BR: 230 i VL od SEK ID BR: 231. (npr. KEYTRUDA® (pembrolizumab)).
[0245] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji kod subjekta koji je otporan na lečenje sa anti-PD-1 antitelom koje sadrži VH od SEK ID BR: 232 i VL od SEK ID BR: 233. (npr. OPDIVO® (nivolumab)).
[0246] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji kod subjekta koji ima recidiv tumora nakon lečenja sa anti-PD-1 antitelom koje sadrži VH od SEK ID BR: 230 i VL od SEK ID BR: 231. (npr. KEYTRUDA® (pembrolizumab)).
[0247] Antitelo je pogodno za upotrebu u terapiji kod subjekta koji ima recidiv tumora nakon lečenja sa anti-PD-1 antitelom koje sadrži VH od SEK ID BR: 232 i VL od SEK ID BR: 233. (npr. OPDIVO® (nivolumab)).
[0248] Pronalazak takođe obezbeđuje izolovano antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo koje sadrži prvi domen koji se specifično vezuje za PD-1 i drugi domen koji se specifično vezuje za TIM-3, pri čemu prvi domen sadrži VH od SEK ID BR: 48 i VL od SEK ID BR: 56, i drugi domen sadrži HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 i LCDR3 od SEK ID BR: 97, 105, 115, 124, 133 i 143, respektivno.
[0249] U nekim izvođenjima, prvi domen sadrži VH od SEK ID BR: 48 i VL od SEK ID BR: 56 i drugi domen sadrži VH od SEK ID BR: 153 i VL od SEK ID BR: 156.
[0250] U nekim izvođenjima, antitelo je IgG1 izotip.
[0251] U nekim izvođenjima, antitelo je IgG2 izotip.
[0252] U nekim izvođenjima, antitelo je IgG2 izotip koji sadrži F405L i/ili K409R supstituciju.
[0253] U nekim izvođenjima, antitelo je IgG2 izotip, opciono sadržavajući V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S i P331S supstitucije u poređenju sa divljim tipom IgG2.
[0254] U nekim izvođenjima, antitelo je IgG3 izotip.
[0255] U nekim izvođenjima, antitelo je IgG4 izotip, opciono sadržavajući S228P supstituciju u poređenju sa divljim tipom IgG4.
[0256] U nekim izvođenjima, antitelo je IgG4 izotip, opciono sadržavajući F405L i K409R supstituciju.
[0257] U nekim izvođenjima, antitelo je IgG4 izotip koji sadrži supstituciju teškog lanca S228P u poređenju sa divljim tipom IgG4.
[0258] U nekim izvođenjima, izolovano bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo sadrži HC1, LC1, HC2 i LC2 od SEK ID BRi: 186, 188,
190 i 193, respektivno.
[0259] Primeri antagonističkih bispecifičnih PD-1/TIM-3 antitela iz pronalaska koja imaju određene VH, VL, HCDR i LCDR sekvence kao što je prikazano u Tabeli 4 i Tabeli 5.
Tabela 4
Tabela 5
Inžinjerisana i modifikovana antitela
[0260] Antitela iz pronalaska mogu dalje biti inženjerisana za generisanje modifikovanih antitela sa sličnim ili izmenjenim svojstvima u poređenju sa roditeljskim antitelima. VH, VL, VH i VL, konstantni regioni, VH okvira, VL okvira, ili bilo kojeg ili svih šest CDR-a mogu biti inženjerisani u antitelima iz pronalaska.
[0261] "Antitela iz pronalaska" kao što se ovde koriste se odnose na antagonistička antitela koja se specifično vezuju za PD-1 sadržavajući varijabilni region teškog lanca (VH) od SEK ID BR: 48 i varijabili region lakog lanca (VL) od SEK ID BR: 56 i antagonistička bispecifična PD-1/TIM-3 antitela koja sadrže prvi domen koja se specifično vezuje za PD-1, sadržavajući varijabilni region teškog lanca (VH) od SEK ID BR: 48 i varijabilni region lakog lanca (VL) od SEK ID BR: 56, i drugi domen koji specifično vezuje TIM-3 (npr. bispecifična PD-1/TIM-3 antitela) kao što je ovde opisano.
[0262] U nekim izvođenjima , bispecifična PD-1/TIM-3 antitela iz pronalaska sadrže HDCR1 od SEK ID BRi: 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97 ili 98, HCDR2 od SEK ID BRi: 99, 100, 101, 102, 10, 104, 105 ili 106, HCDR3 od SEK ID BRi: 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115 ili 116, i VL koji sadrži LCDR1 koji sadrži 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124 ili 125, LCDR2 od SEK ID BRi: 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133 ili 134, i/ili LCDR3 od SEK ID BRi: 135, 136, 137, 139, 140, 141, 142, 143 ili 144, pri čemu je VH okvir izveden iz sekvenci gena zametne linije humane VH osim onih iz IGHV3-23 (SEK ID BR : 174), IGHV1-02 (SEK ID BR: 175), IGHV4-30-4 (SEK ID BR: 176), IGHV1-03 (SEK ID BR: 177), IGHV2-26 (SEK ID BR: 178) ili IGHV5-51 (SEK ID BR: 179), i VL okvir je izveden iz sekvenci gena zametne linije humane VL osim onih iz IGKV3-20 (A27) (SEK ID BR: 180 ), IGKV3-11 (L6) (SEK ID BR: 171), IGKV4-1 (B3) (SEK ID BR: 181), IGKV1-39 (O12) (SEK ID BR: 182) ili IGKV1-33 (O18) (SEK ID BR: 183).
[0263] Okvirne sekvence koje će biti korišćene mogu biti dobijene iz javnih baza podataka DNK ili objavljenih referenci koje uključuju sekvence gena antitela zametne linije. Na primer, DNK zametne linije i kodiranih proteinskih sekvenci gena varijabilog regiona humanog teškog i lakog lanca mogu se naći na IMGT®, međunarodnom informacionom sistemu ImMunoGeneTics® (http://_www-imgt_org). Okvirne sekvence koje mogu biti korišćene za zamenu postojećih okvirnih sekvenci u antitelima iz pronalaska mogu biti one koje pokazuju najveći procenat identiteta sa roditeljskim okvirima preko cele dužine VH ili VL, ili preko dužine FR1, FR2, FR3 i FR4. Pored toga, pogodni okviri mogu dalje biti izabrani na osnovu VH i VL CDR1 i CDR2 dužina ili identične LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1 i HCDR2 kanonske strukture. Pogodni okviri mogu biti izabrani korišćenjem poznatih metoda, kao što je adaptacija humanog okvira opisana u U.S.Patentu br. 8,748,356 ili superhumanizacija opisana u U.S. Patent br.7,709, 226.
[0264] Okvirne sekvence roditeljskih i inženjerisanih antitela mogu dalje biti modifikovane, na primer povratnim mutacijama da bi se obnovilo i/ili poboljšalo vezivanje generisanog antitela na antigen kao što je opisano na primer u U.S. patentu br.
6,180,370. Okvirne sekvence roditeljskih ili inženjerisanih antitela mogu dalje biti modifikovane mutiranjem jednog ili više ostataka unutar okvirnog regiona, ili unutar jednog ili više CDR regiona, da bi se uklonili epitopi T-ćelije da bi se time smanjila potencijalna imunogenost antitela. Ovaj pristup se također naziva "deimunizacija" i detaljnije je opisan u U.S. Patentnoj objavi br. US20070014796.
[0265] CDR ostaci antitela iz pronalaska mogu biti mutirani kako bi se poboljšao afinitet antitela prema PD-1, TIM-3 ili PD-1 i TIM-3.
[0266] CDR ostaci antitela iz pronalaska mogu biti mutirati na primer kako bi se smanjio rizik od post-translacionih modifikacija. Ostaci aminokiselina pretpostavljenih motiva za deaminaciju (NS), hidrolizu katalizovanu kiselinom (DP), izomerizaciju (DS) ili oksidaciju (W) mogu biti supstituisani bilo kojom od aminokiselina koje se javljaju u prirodi da bi mutageni motivi, i rezultirajuća antitela mogla biti testirana na njihovu funkcionalnost i stabilnost korišćenjem ovde opisanih metoda.
[0267] Fc supstitucije se mogu izvršiti za antitela iz pronalaska da bi se modulisale efektorske funkcije antitela i farmakokinetička svojstva. U tradicionalnoj imunološkoj funkciji, interakcija kompleksa antitelo-antigen sa ćelijama imunološkog sistema rezultira širokim spektrom odgovora, u rasponu od efektorskih funkcija kao što je citotoksičnost zavisna od antitela, degranulacija mastocita i fagocitoza do imunomodulatornih signala kao što je regulacija proliferacije limfocita i lučenje antitela. Sve ove interakcije se pokreću vezivanjem Fc domena antitela ili imunoloških kompleksa na specijalizovane receptore na površini ćelije na hematopoetskim ćelijama. Raznolikost ćelijskih odgovora izazvanim antitelima i imunološkim kompleksima je rezultat strukturne heterogenosti tri Fc receptora: FcyRI (CD64), FcyRII (CD32), i FcyRIII (CD16). FcyRI (CD64), FcyRIIA (CD32A) i FcyRIII (CD16) su "aktivirajući Fcy receptori" (tj. jačanje imunološkog sistema); FcyRIIB (CD32B) je inhibirajući Fcy receptor" (tj. prigušivanje imunološkog sistema). Vezivanje na FcRn receptor modulira poluvreme raspada antitela.
[0268] U nekim izvođenjima, antagonistička antitiela iz ponalaska sadrže najmanje jednu supstituciju u Fc regionu.
[0269] U nekim izvođenjima, antagonistička antitiela iz ponalaska sadrže jedan, dva, tri, četiri, pet, šest, sedam, osam, devet, deset, jedanaest, dvanaest, trinaest, četrnaest ili
[0270] Fc pozicije koje mogu biti supstituisane za modulaciju poluvremena raspada antitela su one opisane na primer u Dall’Acqua et al., (2006) J Biol Chem 281:23514-240, Zalevsky et al., (2010) Nat Biotechnol 28:157-159, Hinton et al., (2004) J Biol Chem 279(8):6213-6216, Hinton et al., (2006) J Immunol 176:346-356, Shields et a/.(2001) J Biol Chem 276:6591-6607, Petkova et al., (2006). Int Immunol 18:1759-1769, Datta-Mannan et al., (2007) Drug Metab Dispos, 35:86-94, 2007, Vaccaro et al., (2005) Nat Biotechnol 23:1283-1288, Yeung et al., (2010) Cancer Res, 70:3269-3277 and Kim et al., (1999) Eur J Immunol 29: 2819, i uključuju pozicije 250, 252, 253, 254, 256, 257, 307, 376, 380, 428, 434 a/i 435. Primeri supstitucija koje se mogu napraviti pojedinačno ili u kombinaciji su supstitucije T250Q, M252Y, I253A, S254T, T256E, P257I, T307A, D376V, E380A, M428L, H433K, N434S, N434A, N434H, N434F, H435A i H435R. Primeri pojedinačnih ili kombinovanih supstitucija koje mogu biti izvršene da se poveća poluvreme raspada antitela su supstitucije M428L/N434S, M252Y/S254T/T256E, T250Q/M428L, N434A i T307A/E380A/N434A. Primeri pojedinačnih ili kombinovanih supstitucija koje mogu biti izvršene da se smanji poluvreme raspada antitela su supstitucije H435A, P257I/N434H, D376V/N434H, M252Y/S254T/T256E/H433K/N434F, T308P/N434A i H435R.
[0271] U nekim izvođenjima, antitela iz pronalaska sadrže najmanje jednu supstituciju u Fc antitelu na poziciji amino kiseline 250, 252, 253, 254, 256, 257, 307, 376, 380, 428, 434 ili 435.
[0272] U nekim izvođenjima, antitela iz pronalaska sadrže najmanje jednu supstituciju u Fc antitelu izabranom iz grupe koja se sastoji od T250Q, M252Y, I253A, S254T, T256E, P257I, T307A, D376V, E380A, M428L, H433K, N434S, N434A, N434H, N434F, H435A i H435R.
[0273] U nekim izvođenjima, antitela iz pronalaska sadrže najmanje jednu supstituciju u Fc antitelu izabranom iz grupe koja se sastoji od M428L/N434S, M252Y/S254T/T256E, T250Q/M428L, N434A, T307A/E380A/N434A, H435A, P257I/N434H, D376V/N434H, M252Y/S254T/T256E/H433K/N434F, T308P/N434A i H435R.
[0274] U nekim izvođenjima, antitela iz pronalaska sadrže najmanje jednu supstituciju u Fc antitelu koja smanjuje vezivanje antitela na aktivirajući Fcy receptor (FcyR) i/ili smanjuje efektorske funkcije Fc kao što je C1q vezivanje, citotoksičnost zavisna od komplementa ( CDC), citotoksičnost posredovana ćelijama zavisna od antitela (ADCC) ili fagocitoza (ADCP).
[0275] Fc pozicije koje mogu biti supstituisane da bi se smanjilo vezivanje antitela na aktivirajući FcyR i naknadno da bi se smanjila efektorska funkcija su one opisane na primer u Shields et al., (2001) J Biol Chem 276:6591-6604, Intl. Patent Publ. No. WO2011/066501, U.S. Patent Nos. 6,737,056 and 5,624,821, Xu et al., (2000) Cell Immunol, 200:16-26, Alegre et al., (1994) Transplantation 57:1537-1543, Bolt et al., (1993) Eur J Immunol 23:403-411, Cole et al., (1999)
Transplantation, 68:563-571, Rother et al., (2007) Nat Biotechnol 25:1256-1264, Ghevaert et al., (2008) J Clin Invest 118:2929-2938, An et al., (2009) mAbs, 1:572-579) i uključuju pozicije 214, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 265, 267, 268, 270, 295, 297, 309, 327, 328, 329, 330, 331 i 365. Primeri supstitucije koji mogu biti izvršeni pojedinačno ili u kombinaciji su supstitucije K214T, E233P, L234V, L234A, brisanjem G236, V234A, F234A, L235A, G237A, P238A, P238S, D265A, S267E, H268A, H268Q, Q268A, N297A, A327Q, P329A, D270A, Q295A, V309L, A327S, L328F, A330S i P331S u IgG1, IgG2, IgG3 ili IgG4. Primeri kombinacije supstitucija koje rezultiraju u antitelima sa smanjenim ADCC su supstitucije L234A/L235A na IgG1, V234A,/G237A/ P238S/H268A/V309L/A330S/P331S na IgG2, F234A/L235A na IgG4, S228P/F234A/ L235A na IgG4, N297A na svim izotipovima Ig, V234A/G237A na IgG2, K214T/E233P/ L234V/L235A/G236-izbrisani /A327G/P331A/D365E/L358M na IgG1, H268Q/V309L/ A330S/P331S na IgG2, S267E/L328F na IgG1, L234F/L235E/D265A na IgG1, L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S na IgG1, S228P/F234A/L235A/G237A/P238S na IgG4, i S228P/F234A/L235A/G236-izbrisani /G237A/P238S on IgG4. Hibrid IgG2/4 Fc domena takođe može biti korišćen, kao što je Fc sa ostacima 117-260 iz IgG2 i ostacima 261-447 iz IgG4.
[0276] Dobro poznata supstitucija S228P se može izvršiti u IgG4 antitielima da bi se poboljšala stabilnost IgG4.
[0277] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku sadrže supstituciju u najmanje jednoj poziciji ostatka 214, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 265, 267, 268, 270, 295, 297, 309, 327, 328, 329, 330, 331 ili 365, pri čemu je numerisanje ostataka prema indeksu EU.
[0278] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku sadrže najmanje jednu supstituciju izabranu iz grupe koja se sastoji od K214T, E233P, L234V, L234A, brisanje G236, V234A, F234A, L235A, G237A, P238A, P238S, D265A, S267E, H268A, H268Q, Q268A, N297A, A327Q, P329A, D270A, Q295A, V309L, A327S, L328F, A330S i P331S, pri čemu je numerisanje ostataka prema EU indeksu.
[0279] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku sadrže supstituciju u najmanje jednoj poziciji ostatka 228, 234, 235, 237, 238, 268, 330 ili 331, pri čemu je numerisanje ostataka prema EU indeksu.
[0280] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku sadrže supstituciju S228P, pri čemu je numerisanje ostataka prema EU indeksu.
[0281] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku sadrže supstituciju V234A, pri čemu je numerisanje ostataka prema EU indeksu.
[0282] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku sadrže supstituciju F234A, pri čemu je numerisanje ostataka prema EU indeksu.
[0283] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku sadrže supstituciju G237A, pri čemu je numerisanje ostataka prema EU indeksu.
[0284] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku sadrže supstituciju P238S, pri čemu je numerisanje ostataka prema EU indeksu.
[0285] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku sadrže supstituciju H268A, pri čemu je numerisanje ostataka prema EU indeksu.
[0286] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku sadrže supstituciju Q268A pri čemu je numerisanje ostataka prema EU indeksu.
[0287] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku sadrže supstituciju A330S pri čemu je numerisanje ostataka prema EU indeksu.
[0288] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku sadrže supstituciju P331S pri čemu je numerisanje ostataka prema EU indeksu.
[0289] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku sadrže supstitucije L234A, L235A, G237A, P238S, H268A, A330S i P331S, pri čemu je numerisanje ostataka prema EU indeksu.
[0290] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku sadrže supstitucije V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S i P331S, pri čemu je numerisanje ostataka prema EU indeksu.
[0291] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku sadrže supstitucije F234A, L235A, G237A, P238S i Q268A , pri čemu je numerisanje ostataka prema EU indeksu.
0292] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku sadrže supstitucije L234A, L235A ili L234A i L235A, pri čemu je numerisanje ostataka prema EU indeksu.
[0293] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku sadrže F234A, L235A ili F234A i L235A supstitucije, pri čemu je numerisanje ostataka prema EU indeksu.
[0294] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku sadrže S228P, F234A i L235A supstitucije, pri čemu je numerisanje ostataka prema EU indeksu.
[0295] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku sadrže najmanje jednu supstituciju u Fc antitelu koja pojačava vezivanje antitela na Fcy receptor (FcyR) i/ili pojačava efektorske funkcije Fc kao što je C1q vezivanje, citotoksičnost zavisna od komplementa (CDC), citotoksičnost posredovana ćelijama zavisna od antitela (ADCC) ili fagocitoza (ADCP).
[0296] Pored njihove imunomodulatorne aktivnosti, PD-1 ili TIM-3 antitela iz pronalaska mogu ubiti tumorske ćelije koje eksprimiraju PD-1 i/ili TIM-3 direktno putem efektorskih funkcija posredovanih antitelom, na primer preko ADCC, ADCP ili CDC.
[0297] Pozicije Fc koje mogu biti supstituisane da povećaju vezivanje antitela na aktivirajući Fcy i/ili pojačaju efektorske funkcije antitela su one opisane na primer u U.S. Patent br. 6,737,056, U.S. Patentnoj objavi br. 2015/0259434, Shields et al., (2001) J Biol Chem 276:6591-6604, Lazar et al., (2006) Proc Natal Acad Sci, 103:4005-4010, Stavenhagen et al., (2007) Cancer Res 67:8882-8890, Richards et al., (2008) Mol Cancer Ther 7:2517-2527, Diebolder et al., Science; objavljene na internetu 13. Marta, 2014; doi:10.1126/science.1248943, i uključuju pozicije 236, 239, 243, 256, 290, 292, 298, 300, 305, 312, 326, 330, 332, 333, 334, 345, 360, 339, 378, 396 ili 430 (numerisanje ostataka prema EU indeksu). Primeri supstitucija koje mogu biti izvršene pojedinačno ili u kombinaciji su G236A, S239D, F243L, T256A, K290A, R292P, S298A, Y300L, V305L, K326A, A330K, I332E, E333A, K334A, A339T i P396L. Primer kombinacije supstitucija koje rezultiraju u antitelima sa povećanom ADCC ili ADCP su supstitucije S239D/I332E, S298A/E333A/K334A, F243L/R292P/Y300L, F243L/R292P/Y300L/P396L, F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L i G236A/S239D/I332E na IgG1.
[0298] Pozicije Fc koje mogu biti supstituisane da povećaju CDC antitela su one opisane na primer u Međunarodnoj patentnoj prijavi WO2014/108198, Idusogie et al., (2001) J Immunol 166:2571-2575 and Moore et al., (2010) Mabs, 2:181-189, i uključuju pozicije 267, 268, 324, 326, 333, 345 i 430. Primer supstitucija koje mogu biti izvršene pojedinačno ili u kombinaciji su supstitucije S267E, H268F, S324T, K326A, K326W, E333A, E345K, E345Q, E345R, E345Y, E430S, E430F i E430T. Primer kombinacije supstitucija koje rezultiraju u antitelima sa povećanom CDC su supstitucije K326A/E333A, K326W/E333A, H268F/S324T, S267E/H268F, S267E/S324T i S267E/H268F/S324T na IgG1.
[0299] "Ćelijska citotoksičnost zavisna od antitela", "citotoksičnost posredovana ćelijama zavisna od antitela " ili "ADCC" je mehanizam za izazivanje ćelijske smrti koji zavisi od interakcije ciljnih ćelija obloženih antitelom sa efektorskim ćelijama koje poseduju litičku aktivnost, kao što su prirodni ubica ćelija, monociti, makrofagi i neutrofili preko Fc gama receptora (FcyR) eksprimiranih na efektorskim ćelijama. Na primer, NK ćelije eksprimiraju FcyRIIIa, dok monociti eksprimiraju FcyRI, FcyRII i FcyRIIIa. Smrt ciljne ćelije obložene antitelom, kao što su ćelije koje eksprimiraju PD-1 ili TIM-3, nastaje kao rezultat aktivnosti efektorske ćelije kroz sekreciju proteina i proteaza formiranjem pore u membrani. Za procenu ADCC aktivnosti antitela iz pronalaska opisanog ovde, antitelo može biti dodato ćelijama koje eksprimiraju TIM-3 ili PD-1 u kombinaciji sa imunološkim efektorskim ćelijama, koje mogu biti aktivirane kompleksima antitielo antigen rezultirajući citolizom ciljne ćelije. Citoliza može biti otkrivena oslobađanjem oznake (npr. radioaktivnih supstrata, fluorescentnih boja ili prirodnih intracelularnih proteina) iz liziranih ćelija. Primer efektorskih ćelija za takve testove uključuje mononuklearne ćelije periferne krvi (PBMC) i NK ćelije. Primer ciljnih ćelija uključuje ćelije koje eksprimiraju TIM-3 ili PD-1 bilo endogeno ili rekombinantno. U primernom testu, ciljne ćelije se koriste sa odnosom od 1 ciljne ćelije prema 50 efektorskih ćelija. Ciljne ćelije su prethodno obeležene sa BATDA (PerkinElmer) tokom 20 minuta na 37°C, isprane dvaput i resuspendovane u DMEM, 10% toplotno inaktiviranim FBS, 2 mM L-glutamina (sve iz Invitrogena). Ciljne (1x10<4>ćelije) i efektorske ćelije (0.5x10<6>ćelije) su kombinovane i 100 µl ćelija su dodate u jažice ploča sa U-dnom od 96 jažica. Dodatnih 100 µl je dodato sa ili bez test antitela. Ploče se centrifugirane na 200 g tokom 3 minuta, inkubirane na 37°C tokom 2 sata, i zatim ponovo centrifugirane na 200 g tokom 3 minuta. Ukupno 20 µl supernatanta je uklonjeno po jažici i ćelijska liza je izmerena dodatkom 200 µl reagensa na osnovu DELPHIA Europiuma (PerkinElmer). Podaci su normalizovani na maksimalnu citotoksičnost sa 0.67% Triton X-100 (Sigma Aldrich) i minimalnom kontrolom utvrđenom spontanim oslobađanjem BATDA iz ciljnih ćelija u odsustvu bilo kakvog antitela. Anitelo prema pronalasku može indukovati ADCC za oko 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ili 100%.
[0300] "Ćelijska fagocitoza zavisna od antitela" ("ADCP") se odnosi na mehanizam eliminacije ciljnih ćelija obloženih antitelom internalizacijom od strane fagocitnih ćelija, kao što su makrofagi ili dendritske ćelije. ADCP može biti procenjena korišćenjem makrofaga izvedenih iz monocita kao efektorskih ćelija i Daudi ćelija (ATCC® CCL-213™) ili B ćelije leukemije ili limfoma ili tumorskih ćelija koje eksprimiraju TIM-3 ili PD-1 kao ciljne ćelije inženjerisane za ekspresiju GFP ili drugi označeni molekul. Odnos efektor:ciljna ćelija može biti na primer 4:1. Efektorske ćelje mogu biti inkubirane sa ciljnim ćelijama tokom 4 sata sa ili bez antitela prema pronalasku. Nakon inkubacije, ćelije mogu biti odvojene pomoću akutaze. Makrofagi mogu biti identifikovani sa anti-CD 11b i anti-CD 14 antitelima spojenim sa fluorescentnom oznakom, i procenat fagocitoze može biti određen na osnovu % GFP fluorescencije u CD11<+>CD14<+>makrofagima korišćenjem standardnih metoda. Antitelo prema pronalasku može indukovati ADCP za oko 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ili 100%.
[0301] "Citotoksičnost zavisna od komplementa" ili "CDC" se odnosi na mehanizam za izazivanje ćelijske smrti u kojem Fc efektorski domen antitela vezanog na cilj vezuje i aktivira komponentu komplementa C1q koja zauzvrat aktivira kaskadu komplementa koja dovodi do smrti ciljne ćelije. Aktivacija komplementa takođe može rezultirati taloženjem komponenti komplementa na površini ciljne ćelije koje olakšavaju ADCC vezivanjem receptora komplementa (npr. CR3) na leukocite. CDC ćelija koje eksprimiraju TIM-3 ili PD-1 može biti izmerena, na primer, postavljanjem Daudi ćelija na 1 x 10<5>ćelija/jažici (50 µl/jažici) u RPMI-B (RPMI dopunjen sa 1% BSA), dodavanjem 50 µl testiranih antitela po jažici u konačnoj koncentraciji između 0-100 µg/ml, inkubirajući reakciju tokom 15 minuta na sobnoj temperaturi, dodavanjem 11 µl prikupljenog humanog seruma u jažice i inkubiranjem reakcije tokom 45 minuta na 37°C. Procenat (%) liziranih ćelija može biti detektovan kao % ćelija obojenih propidijum jodidom u FACS testu korišćenjem standardnih metoda. Antitela prema pronalasku mogu indukovati CDC za oko 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ili 100%.
[0302] Sposobnost ovde opisanih antitela prema pronalasku da indukuju ADCC može biti poboljšana inženjeriranjem njihove oligosaharidne komponente. Humani IgG1 ili IgG3 su N-glikozilirani na Asn297 sa većinom glikana u dobro poznatim biantenarnim G0, G0F, G1, G1F, G2 ili G2F oblicima. Antitela proizvedena od strane neiženjerisanih CHO ćelija obično imaju sadržaj glikanske fukoze od oko 85%. Uklanjanje jezgra fukoze iz oligosaharida biantenarnog kompleksnog tipa spojenih na Fc regione pojačava ADCC antitela putem poboljšanog vezivanja FcyRIIIa bez promene vezivanja antigena ili CDC aktivnosti. Takva mAba se mogu postići korišćenjem različitih metoda za koje se navodi da dovode do uspešne ekspresije relativno visoko defukozilovanih antitela koja nose tip biantenarnog kompleksa Fc oligosaharida kao što je kontrola osmolalnosti kulture (Konno et al., (2012) Cytotechnology 64:249-65), primena varijante CHO linije Lec13 kao ćelijske linije domaćina (Shields et al., (2002) J Biol Chem 277:26733-26740), primena varijante CHO linije EB66 kao ćeljske linije domaćina (Olivier et al., MAbs ;2(4), 2010; Epub ahead of print; PMID:20562582), primena ćelijske linije hibridoma pacova YB2/0 kao ćelijske linije domaćina (Shinkawa et al., (2003) J Biol Chem 278:3466-3473), uvođenje male interferirajuće RNK specifično protiv gena ɑ 1,6-fukoziltransferaze (FUT8) (Mori et al., (2004) Biotechnol Bioeng 88:901-908), ili koekspresija β-1,4-N-acetilglukozaminiltransferaze III i Golgi ɑ -manozidaze II ili snažnog inhibitora alfa-manozidaze I, kifunenzina (Ferrara et al., (2006) J Biol Chem 281:5032-5036, Ferrara et al., (2006) Biotechnol Bioeng 93:851-861; Xhou et al., (2008) Biotechnol Bioeng 99:652-65).
[0303] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku sadrže najmanje jednu supstituciju u Fc antitelu koja pojačava efektorsku funkciju antitela.
[0304] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku sadrže najmanje jednu supstituciju u Fc antitelu na poziciji amino kiseline 236, 239, 243, 256, 267, 268, 290, 292, 298, 300, 305, 312, 324, 326, 330, 332, 333, 334, 345, 360, 339, 378, 396 ili 430.
[0305] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku sadrže najmanje jednu supstituciju u Fc antitelu izabranom iz grupe koja se sastoji od G236A, S239D, F243L, T256A, K290A, R292P, S298A, Y300L, V305L, K326A, A330K, I332E, E333A, K334A, A339T, P396L, S267E, H268F, S324T, K326A, K326W, E333A, E345K, E345Q, E345R, E345Y, E430S, E430F i E430T.
[0306] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku sadrže najmanje jednu supstituciju u Fc antitelu izabranom iz grupe koja se sastoji od S239D/I332E, S298A/E333A/K334A, F243L/R292P/Y300L, F243L/R292P/Y300L/P396L, F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L, G236A/S239D/I332E, K326A/E333A, K326W/E333A, H268F/S324T, S267E/H268F, S267E/S324T i S267E/H268F/S324T.
[0307] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku imaju biantenarnu glikansku strukturu sa sadržajem fukoze od oko između 0% do oko 15%, na primer 15%, 14%, 13%, 12%, 11% 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% ili 0%.
[0308] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku imaju biantenarnu glikansku strukturu sa sadržajem fukoze od oko 50%, 40%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11% 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% ili 0%.
[0309] Supstitucije u Fc i smanjeni sadržaj fukoze mogu poboljšati ADCC aktivnost antagonističkih antitela koja specifično vezuju TIM-3 ili PD-1 prema pronalasku. TIM-3 ili PD-1 antitela sa pojačanom ADCC, ADCP i/ili CDC aktivnošću mogu biti korisna u lečenju pacijenata sa tumorima koji eksprimiraju TIM-3 i/ili PD-1, uključujući hem. maligne bolesti.
[0310] "Sadržaj fukoze" znači količinu fukoznog monosaharida unutar lanca šećera na Asn297. Relativna količina fukoze je procenat struktura koje sadrže fukozu u odnosu na sve glikostrukture. One se mogu okarakterisati i kvantifikovati višestrukim metodama, na primjer: 1) korišćenjem MALDI-TOF uzorka tretiranog N-glikozidazom F (npr. kompleksne, hibridne i oligo- i visoko-manozne strukture) kao što je opisano u Međunarodnoj patentnoj objavi WO2008/077546; 2) enzimskim oslobađanjem Asn297 glikana sa naknadnom derivatizacijom i detekcijom/kvantifikacijom pomoću HPLC (UPLC) sa fluorescentnom detekcijom i/ili HPLC-MS (UPLC-MS); 3) analizom intaktnog proteina nativnog ili redukovanog mAb, sa ili bez tretmana Asn297 glikana sa Endo S ili drugim enzimom koji se cepa između prvog i drugog GlcNAc monosaharida, ostavljajući fukozu spojenu za prvi GlcNAc; 4) digestijom mAb do sastavnog peptida enzimskom digestijom (npr. tripsin ili endopeptidaza Lys-C), i naknadnom separacijom, detekcijom i kvantitacijom pomoću HPLC-MS (UPLC-MS) ili 5) odvajanjem mAb oligosaharida od mAb proteina specifičnom enzimskom deglikozilacijom sa PNGase F na Asn 297. Oslobođeni oligosaharidi mogu biti označeni sa fluoroforom, razdvojeni i identifikovani sa različitim komplementarnim tehnikama koje omogućuju finu karakterizaciju glikanskih struktura, masenom spektrometrijom uz pomoć laserske desorpcije jonizacije (MALDI) uz poređenje eksperimentalnih masa sa teorijskim masama, određivanjem stepena sijalilacije jonsko izmenjivačkom HPLC (GlycoSep C ), odvajanjem i kvantifikacijom oblika oligosaharida prema kriterijumu hidrofilnosti pomoću HPLC normalne faze (GlycoSepN), i odvajanjem i kvantifikacijom oligosaharida pomoću kapilarne elektroforeze visokih preformansi-laserom indukovane fluorescencije (HPCE-LIF).
[0311] "Niska fukoze" ili "nizak sadržaj fukoze" se odnosi na antitela sa sadržajem fukoze od oko 0% - 15%.
[0312] "Normalna fukoza" ili "normalan sadržaj fukoze" se odnosi na antitela sa sadržajem fukoze od oko 50%, obično oko preko 60%, 70%, 80% ili preko 85%.
[0313] Antitela prema pronalasku mogu biti post-translaciono modifikovana procesima kao što su glikozilacija, izomerizacija, deglikozilacija ili kovalentna modifikacija koja se ne pojavljuje u prirodi, kao što je dodatak polietilen glikolnih delova (pegilacija) i lipidacija. Takve modifikacije se mogu pojaviti in vivo ili in vitro. Na primer, ovde opisana antitela iz pronalaska mogu biti konjugovana sa polietilen glikolom (PEGiliranim) kako bi se poboljšali njihovi farmakokinetički profili. Konjugacija može biti izvedena tehnikama poznatim stručnjacima u ovoj oblasti tehnike. Pokazalo se da konjugacija terapijskih antitela sa PEG-om poboljšava farmakodinamiku, dok ne ometa funkciju (Knigh et al., (2004) Platelets 15:409-18; Leong et al., (2001) Cytokine 16:106-19; Yang et al., (2003) Protein Eng 16:761-70).
[0314] Antitela prema pronalasku mogu biti modifikovana da bi se poboljšala stabilnost, selektivnost, unakrsna reaktivnost, afinitet, imunogenost ili druga poželjna biološka ili biofizička svojstva unutar obima pronalaska. Na stabilnost antitela utiču brojni faktori, uključujući (1) pakovanje jezgra pojedinačnih domena koje utiče na njihovu unutrašnju-intrinzičnu stabilnost, (2) interakcije između proteina/proteina interfejsa koje utiču na HC i LC uparivanje, (3) zakopavanje polarnih i naelektrisanih ostaka, (4) H-vezujuća mreža za polarne i naelektrisane ostatke; i (5) površinsko naelektrisanje i raspodela polarnih ostataka među ostalim intra- i inter-molekularnim silama (Worn et al., (2001) J Mol Biol 305:989-1010). Potencijalni ostaci koji destabilizuju strukturu mogu biti identifikovani na osnovu kristalne strukture antitela ili molekularnim modeliranjem u određenim slučajevima, i efekat ostataka na stabilnost antitela može biti testiran generisanjem i procenom varijanti koje sadrže mutacije u identifikovanim ostacima. Jedan od načina da se poveća stabilnost antitela je podizanje srednje tačke termičke tranzicije (Tm) kao što je izmereno diferencijalnom skenirajućom kalorimetrijom (DSC). Generalno, protein Tmje u korelaciji sa njegovom stabilnošću i obrnuto u korelaciji sa njegovom osetljivošću na odvijanje i denaturaciju u rastvoru i procesima degradacije- koji zavise od sklonosti proteina da se odvije (Remmele et al., (2000) Biopharm 13:36-46). Brojne studije su pronašle korelaciju između rangiranja fizičke stabilnosti formulacija izmerene kao termička stabilnost pomoću DSC i fizička stabilnost izmerene drugim metodama (Gupta et al., (2003) AAPS PharmSci 5E8; Zhang et al., (2004) J Pharm Sci 93:3076-89; Maa et al., (1996) Int J Pharm 140:155-68; Bedu-Addo et al., (2004) Pharm Res 21:1353-61; Remmele et al., (1997) Pharm Res 15:200-8). Studije formulacije sugerišu da Fab Tmima implikaciju na dugoročnu fizičku stabilnost odgovarajućeg mAb.
[0315] C-terminalni lizin (CTL) se može ukloniti iz ubrizganih antitela endogenim cirkulišućim karboksipeptidazama u krvotoku (Cai et al., (2011) Biotechnol Bioeng 108:404-412). Tokom proizvodnje, uklanjanje CTL-a se može kontrolisati na nivo manji od maksimalog kontrolom koncentracije ekstracelularnog Zn2<+>, EDTA ili EDTA - Fe3<+>kao što je opisano u U.S. Patentnoj objavi br. US20140273092. Sadržaj CTL u antitelima može biti izmeren korišćenjem poznatih metoda.
[0316] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku imaju C-terminalni sadržaj lizina od oko 10% do oko 90%, oko 20% do oko 80%, oko 40% do oko 70%, oko 55% do oko 70%, ili oko 60%.
[0317] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku imaju C-terminalni sadržaj lizina od oko 0%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ili 100%.
Metode generisanja homolognih antitela, antitela sa konzervativnim modifikacijama i inženjerisanih i modifikovanih antitela
[0318] Antitela prema pronalasku koja imaju promenjene aminokiselinske sekvence u poređenju sa roditeljskim antitelima mogu biti generisana korišćenjem standardnih tehnologija kloniranja i ekspresije. Na primer, mutageneza usmerena na mesto ili mutageneza posredovana PCR-om može biti izvedena da bi uvela mutaciju(e) i efekat na vezivanje antitela ili druga svojstva od interesa, mogu biti procenjena korišćenjem dobro poznatih metoda i metoda opisanih ovde u Primerima.
Alotipovi antitela
[0319] Antitelo prema pronalasku može biti IgG1, IgG2, IgG3 ili IgG4 izotip.
[0320] U nekim izvođenjima, antitelo prema pronalasku je IgG1 izotip.
[0321] U nekim izvođenjima, antitelo prema pronalasku je IgG2 izotip.
[0322] U nekim izvođenjima, antitelo prema pronalasku je IgG3 izotip.
[0323] U nekim izvođenjima, antitelo prema pronalasku je IgG4 izotip.
[0324] Imunogenost terapijskih antitela je povezana sa povećanim rizikom od reakcija na infuziju i smanjenim trajanjem terapijskog odgovora (Baert et al., (2003) N Engl J Med 348:602-08). Stepen do kojeg terapijska antitela indukuju imunološki odgovor u domaćinu može biti delimično određen alotipom antitela (Stickler et al., (2011.) Genes and Immunity 12:213-21). Alotip antitela je povezan sa varijacijama sekvence aminokiselina na specifičnim lokacijama u sekvencama konstantnog regiona antitela.
[0325] Tabela 6 prikazuje izabrane alotipove IgG1, IgG2 i IgG4.
[0326] U nekim izvođenjima, antagonistička antitela koja specifično vezuju PD-1 iz pronalaska su
G2m(n), G2m(n-), G2m(n)/(n-), nG4m(a), Glm(17) ili Glm(17,1) alotip.
[0327] U nekim izvođenjima, antagonistička antitela koja specifično vezuju TIM-3 iz pronalaska su G2m(n), G2m(n-), G2m(n)/ (n-), nG4m(a), Glm(17) ili G1m(17,1) alotip.
[0328] U nekim izvođenjima, bispecifična PD-1/TIM-3 antitela prema pronalasku su G2m(n), G2m(n-), G2m(n)/(n-), nG4m(a), Glm(17) ili Glm(17,1) alotip.
Tabela 6.
Anti-idiotipska antitela
[0329] Anti-idiotipsko antitelo se vezuje na antitelo prema pronalasku.
[0330] Izvođenje koje nije deo pronalaska je anti-idiotipsko antitelo koje specifično vezuje antitelo koje sadrži VH od SEK ID BR: 48 i VL od SEK ID BR: 56.
[0331] Anti-idiotipsko antitelo može biti korišćeno za detekciju nivoa terapijskih antitela (npr. anti-PD-1 ili bispecifičnih PD-1/TIM-3 antitela iz pronalaska opisanih ovde) u uzorku.
[0332] Anti-idiotipsko (Id) antitelo je antitelo koje prepoznaje antigenske determinante (npr. paratop ili CDR) antitela. Id antitelo može da blokira antigen ili ne-blokira antigen. Id koji blokira antigen može se koristiti za detekciju slobodnog antitela u uzorku (npr. anti-PD-1 ili bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo prema pronalasku opisano ovde). Ne-blokirajući Id se može koristiti za otkrivanje ukupnog antitela (slobodnog, delomično vezanog za antigen ili potpuno vezanog za antigen) u uzorku. Id antitelo može biti pripremljeno imunizacijom životinje sa antitelom za koje se priprema anti-Id.
[0333] Anti-Id antitelo može takođe biti korišćeno kao imunogen da izazove imunološki odgovor kod još jedne životinje, proizvodeći takozvano anti-anti-Id antitelo. Anti-anti-Id može biti epitopijski identično originalnom mAb, koji je indukovao anti-Id. Dakle, korišćenjem antitela za idiotipske determinante od mAb, moguće je identifikovati druge klonove koji eksprimiraju antitela identične specifičnosti. Anti-Id antitela mogu biti različita (na taj način se proizvode varijante anti-Id antitela) i/ili derivatizovana bilo kojom pogodnom tehnikom, kao što su one opisane negde drugde ovde u odnosu na antitela koja specifično vezuju za PD-1 ili bispecifična PD-1/TIM-3 antitela.
Imunokonjugati
[0334] "Imunokonjugat" se odnosi na antitelo prema pronalasku konjugovano sa jednim ili više heterolognih molekula (a).
[0335] U nekim izvođenjima, antitelo prema pronalasku je konjugovano sa jednim ili više citotoksičnih agenasa ili agensom za snimanje.
[0336] Primer citotoksičnih agenasa uključuje hemoterapijske agense ili lekove, agense za inhibiciju rasta, toksine (npr. proteinske toksine, enzimski aktivne toksine bakterijskog, gljivičnog, biljnog ili životinjskog porekla ili fragmente od njih) i radionuklide.
[0337] Citotoksični agens može biti jedan ili više lekova, kao što tzv."mayatansinoid" (videti, npr., U.S. Patent br. 5,208,020, 5,416,06), auristatin kao što su monometilauristatinski delovi-ostaci leka DE i DF (MMAE and MMAF) (videti, npr., U.S. Patent Bri. 5,635,483 i 5,780,588, i 7,498,298), dolastatin, a kaliheamicin ili derivati od njih (videti, npr., U.S. Patent Bri. 5,712,374, 5,714,586, 5,739, 116, 5,767,285, 5,770,701, 5,770,710, 5,773,001, i 5,877,296; Hinman et al., (1993) Cancer Res 53:3336-3342; i Lode et al.,(1998) Cancer Res 58:2925-2928); antraciklin kao što je daunomicin ili doksorubicin (videti, npr., Kratz et al., (2006) Current Med. Chem 13:477-523; Jeffrey et al., (2006) Bioorganic & Med Chem Letters 16:358-362; Torgov et al., (2005) Bioconj Chem 16:717-721; Nagy et al., (2000) Proc Natl Acad Sci USA 97:829-834; Dubowchik et al, Bioorg. & Med. Chem. Letters 12: 1529-1532 (2002); King et al., (2002) J Med Chem 45:4336-4343; i U.S. Patent Br.6,630,579), metotreksat, vindesin, taksan kao što je docetaksel, paklitaksel, larotaksel, tesetaksel, i ortataksel.
[0338] Citotoksični agens takođe može biti enzimski aktivnan toksin ili njegov fragment, kao što je lanac difterije A, nevezujući aktivni fragmenti toksina difterije, lanac egzotoksina A (iz Pseudomonas aeruginoza), lanac ricina A, lanac modecina A, alfa-sarcin, tzv. "Aleurites fordii proteini" diantini, tzv. "Phytolacca americana proteini." (PAPI, PAPII i PAPS), inhibitor gorke dinje, curcin, krotin, inhibitor sapunjače, gelonin, mitogelin, restriktocin, fenomicin, enomicin i trikoteceni.
[0339] Citotoksični agens ili agens za snimanje takođe može biti radionuklid. Primeri radionuklida uključuju Ac-225, At-211, 1-131,1-125, Y-90, Re-186, Re-188, Sm-153, Bi-212, P-32, Pb-212 i radioaktivne izotope od Lu. Kada se radiokonjugat koristi za detekciju, može sadržavati radioaktivni atom za scintigrafske studije, na primer Tc-99m ili 1-123, ili spin oznaku za nuklearnu magnetsku rezonancu (NMR) slikanje (takođe poznatu kao magnetna rezonancija, mri), kao što je 1-123, 1-131, In-111, F-19, C-13, N-15 ili O-17.
[0340] Konjugati antitela prema pronalasku heterolognog molekula mogu biti napravljeni korišćenjem raznih bifunkcionalnih proteinskih agenasa za spajanje kao što su N-sukcinimidil-3-(2-piridilditio) propionat (SPDP), sukcinimidil-4-(N-maleimidometil) cikloheksan-1-karboksilat (SMCC), iminotiolan (IT), bifunkcionalni derivati imidoestara (kao što je dimetil adipimidat HQ), aktivni estri (kao što je disukcinimidil suberat), aldehidi (kao što je glutaraldehid), bisazido jedinjenja (kao što je bis (pazidobenzoil) heksandiamin), bis-diazonijum derivati (kao što je bis-(p-diazonijumbenzoil)-etilendiamin), diizocijanati (kao što je toluen 2,6-diizocijanat) i bis-aktivna jedinjenja fluora ( kao što je 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzen). Na primer, ricin imunotoksin može biti pripremljen kao što je opisano u Vitetta et al., (1987) Science 238: 1098. Ugljenik-14-obeležena 1-izotiocijanatobenzil-3-metildietilen triaminpentasirćetna kiselina (MXDTPA) je primer helirajućeg agensa za konjugaciju radionukleotida na antitelo. Videti npr., WO94/11026. Linker može biti "odcepljivi linker" koji olakšava oslobađanje citotoksičnog leka u ćeliju. Na primer, linker labilan na kiselinu, linker osetljiv na peptidazu, fotolabilni linker, dimetil linker ili linker koji sadrži disulfid (Chari et al., (1992) Cancer Res 52: 127-131; U.S. Patent No. 5,208,020) može biti korišćen.
[0341] Konjugati antitela prema pronalasku i heterologni molekul mogu biti pripremljeni sa unakrsno povezanim reagensima kao što su BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, sulfo-EMCS, sulfo-GMBS, sulfo-KMUS, sulfo-MBS, sulfo-SIAB, sulfo-SMCC, i sulfo- SMPB, i SVSB (sukcinimidil-(4-vinilsulfon)benzoat) koji su komercijalno dostupni (npr., iz Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL., U.S.A).
[0342] Pronalazak takođe obezbeđuje imunokonjugat koji sadrži antagonističko antitelo koje se specifično vezuje za PD-1 pronalaska povezano za terapijski agens ili agens za snimanje.
[0343] Pronalazak takođe obezbeđuje imunokonjugat koji sadrži bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo iz pronalaska povezano za terapijski agens ili agens za snimanje.
Generisanje monospecifičnih antitela prema pronalasku
[0344] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku su humana.
[0345] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku su humanizovana.
[0346] Monospecifična antitela prema pronalasku opisana ovde (npr. antitela koja se specifično vezuju na PD-1, sadržavajući varijabilni region teškog lanca (VH) od SEK ID BR: 48 i varijabilni region lakog lanca (VL) od SEK ID BR: 56) mogu biti generisana korišćenjem raznih tehnologija. Na primer, metoda hibridoma Kohlera i Milsteina, Nature 256: 495, 1975 može biti korišćena da se generišu monoklonalna antitela. U metodi hibridoma, miš ili druga životinja domaćin, kao što je hrčak, pacov ili majmun, je imunizovana sa humanim ili cino PD-1 ili fragmentima PD-1, kao što je ekstracelularni domen PD-1, nakon čega sledi fuzija ćelija slezene od imunizovanih životinja sa ćelijama mijeloma korišćenjem standardnih metoda da se formiraju ćelije hibridoma (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp.59-103 (Academic Press, 1986)). Kolonije nastale iz pojedinačnih besmrtnih ćelija hibridoma su skrinovane za proizvodnju antitela sa željenim svojstvima, kao što su specifičnost vezivanja, unakrsna reaktivnost ili nedostatak iste, i afinitet za antigen.
[0347] Različite životinje domaćini se mogu koristiti za proizvodnju antitela prema pronalasku. Na primer, Balb/c miševi mogu biti korišćeni da generišu mišja anti-humana PD-1 antitela. Antitela napravljena kod Balb/c miševa i drugih ne-humanih životinja mogu biti humanizovana korišćenjem različitih tehnologija da se generišu sekvence sličnije ljudima.
[0348] Primeri tehnika humanizacije uključujući izbor okvira humanih akceptora su poznati i uključuju CDR kalemljenje (U.S. Patent No. 5,225,539), SDR kalemljenje (U.S. Patent No. 6,818,749), Ponovno nanošenje na površinu (Padlan, (1991) Mol Immunol 28:489-499), Specifičnost određivanja ostataka ponovnog nanošenja na površinu (U.S. Patent Publ. No.2010/0261620), adaptacija humanog okvira (U.S. Patent No. 8,748,356) ili superhumanizacija (U.S. Patent No. 7,709, 226). U ovim metodama, CDR-i roditeljskih antitela se prenose na humane okvire koji mogu biti izabrani na osnovu njihove sveukupne homologije sa roditeljskim okvirima, na osnovu sličnosti u dužini CDR, ili identitetu kanonske strukture, ili kombinaciji od njih.
[0349] Humanizirana antitela se mogu dalje optimizovati da bi se poboljšala njihova selektivnost ili afinitet prema željenom antigenu inkorporacijom izmenjenih ostataka za podršku okvira da bi se očuvao afinitet vezivanja (povratne mutacije) tehnikama kao što su one opisane u Međunarodnoj patentnoj objavi brojeva WO1090/007861 i WO1992/22653, ili uvođenjem varijacije na bilo kojem od CDR-a, na primer, radi poboljšanja afiniteta antitela.
[0350] Transgene životinje, kao što su miševi ili pacovi koji nose lokuse humanog imunoglobulina (Ig) u svom genomu mogu biti korišćene da generišu humana antitela protiv ciljnog proteina, i opisani su u npr.U.S. Patent Br. 6,150,584, Međunarodnoj patentnoj objavi br. WO99/45962, Međunarodnoj patentnoj objavi brojeva WO2002/066630, WO2002/43478, WO2002/043478 i WO1990/04036, Lonberg et al (1994) Nature 368:856-9; Green et al (1994) Nature Genet. 7:13-21; Green & Jakobovits (1998) Exp. Med. 188:483-95; Lonberg and Huszar (1995) Int Rev Immunol 13:65-93; Bruggemann et al., (1991) Eur J Immunol 21:1323-1326; Fishwild et al., (1996) Nat Biotechnol 14:845-851; Mendez et al., (1997) Nat Genet 15:146-156;
Green (1999) J Immunol Methods 231:11-23; Yang et al., (1999) Cancer Res 59:1236-1243; Bruggemann and Taussig (1997) Curr Opin Biotechnol 8:455-458. Endogeni imunoglobulinski lokusi kod takve životinje mogu biti poremećeni ili izbrisani, i najmanje jedan kompletan ili delimični lokus humanog imunoglobulina može se umetnuti u genom životinje korišćenjem homologne ili nehomologne rekombinacije, korišćenjem transhromozoma ili korišćenjem minigena. Kompanije kao što su Regeneron (http://_www_regeneron_com), Harbour Antibodies (http://_www_harbourantibodies_com), Open Monoclonal Technology, Inc. (OMT) (http://_www_omtinc_net), KyMab (http://_www_kymab_com), Trianni (http://_ www.trianni_com) i Ablexis (http://_www_ablexis_com) mogu biti angažovane da obezbede humana antitela usmerena protiv izabranog antigena korišćenjem tehnologija kao što je opisano iznad.
[0351] Humana antitela mogu biti izabrana iz biblioteke prikaza faga, gde je fag inženjerisan da eksprimira humane imunoglobuline ili delove od njih kao što su Fabs, jednolančana antitela (scFv) ili neuparena ili uparena antitela varijabilnog regiona (Knappik et al., (2000) J Mol Biol 296:57-86; Krebs et al., (2001) J Immunol Meth 254:67-84; Vaughan et al., (1996) Nature Biotechnology 14:309-314; Sheets et al., (1998) PITAS (USA) 95:6157-6162; Hoogenboom i Winter (1991) J Mol Biol 227:381; Marks et al., (1991) J Mol Biol 222:581). Antitela prema pronalasku mogu biti izolovana, na primer, iz biblioteke prikaza faga koji eksprimira varijabilne regione teškog i lakog lanca antitela kao fuzione proteine sa proteinom omotača bakteriofaga pIX kao što je opisano u Shi et al., (2010) J Mol Biol 397:385-96, i Međunarodnoj patentnoj objavi br. WO09/085462). Bublioteke mogu biti skrinovane za humani/ili cino PD-1 koji vezuje fag i dobijeni pozitivni klonovi mogu biti dalje okarakterisani, Fabi izolovani iz lizata klona, i eksprimirani kao IgGi pune dužine. Takve metode prikaza faga za izolovanje humanih antitela su opisane u na primer: U.S. Patent Bri. 5,223,409, 5,403,484, 5,571,698, 5,427,908, 5, 580,717, 5,969,108, 6,172,197, 5,885,793; 6,521,404; 6,544,731; 6,555,313; 6,582,915 and 6,593,081.
[0352] Priprema imunogenih antigena i proizvodnja monoklonalnih antitela mogu biti izvedene bilo kojom pogodnom tehnikom, kao što je proizvodnja rekombinantnog proteina. Imunogenski antigeni mogu biti primenjeni na životinji u obliku prečišćenog proteina ili smeše proteina uključujući cele ćelije ili ekstrakte ćelija ili tkiva, ili se antigen može biti formiran de novo u telu životinje iz nukleinskih kiselina koje kodiraju navedeni antigen ili njegov deo.
Generisanje bispecifičnih PD-1/TIM-3 antitela prema pronalasku
[0353] Bispecifična PD-1/TIM-3 antitela prema pronalasku (npr. bispecifična antitela koja sadrže prvi domen koji se specifično vezuje za PD-1, sadržavajući varijabilni region teškog lanca (VH) od SEK ID BR: 48 i varijabilni region lakog lanca ( VL) od SEK ID BR: 56, i drugi domen koji se specifično vezuje za TIM-3) mogu biti generisana kombinovanjem PD-1 vezivanja VH/VL domena sa TIM-3 vezujućim VH/VL domenima izolovanim i ovde naznačenim. Alternativno, bispecifična PD-1/TIM-3 antitela mogu biti inženjerisana korišćenjem VH/VL domena iz javno dostupnih monospecifičnih anti-PD-1 i anti-TIM-3 antitela, i/ili mešanjem podudaranjem PD-1 ili TIM-3 vezujućeg VH/VL domena identifikovane ovde sa javno dostupnim PD-1 ili TIM-3 vezujućim VH/VL domenom.
[0354] Primer anti-PD-1 antitela koja mogu biti korišćena za inženjerisanje bispecifičnih PD-1/TIM-3 molekula su, na primer, ona opisana u U.S. Patent Bri. 5,897,862 i 7,488,802, i Međunarodnoj patentnoj objavi brojeva WO2004/004771, WO2004/056875, WO2006/121168, WO2008/156712, WO2010/029435, WO2010/036959, WO2011/110604, WO2012/145493, WO2014/194302, WO2014/206107, WO2015/036394, WO2015/035606, WO2015/085847, WO2015/112900 i WO2015/112805. Na primer, VH/VL domeni od KEYTRUDA® (pembrolizumab) i OPDIVO ® (nivolumab) mogu biti korišćeni. Ovi PD-1 VH/VL domeni mogu biti inkorporisani u bispecifična antitela koja sadrže TIM-3 vezujuće VH/VL domene opisane ovde i u Tabeli 3. Na primer, VH/VL domeni od TIM-3 antitela TM3B103, TM3B105, TM3B107, TM3B108, TM3B109, TM3B113, TM3B189, TM3B190 i TM3B196 opisani ovde mogu biti korišćeni da generišu bispecifična PD-1/TIM-3 antitela.
[0355] Slično, primeri anti-TIM-3 antitela koja mogu biti korišćena za inženjering bispecifičnih PD-1ATIM-3 molekula su na primer ona opisana u Međunarodnoj patentnoj objavi brojeva WO2011/155607, WO2013/006490, i WO2015/117002. Ovi TIM-3 VH/VL domeni mogu biti inkorporisani u bispecifična antitela koja sadrže PD-1 vezujuće VH/VL domene opisane ovde i u Tabeli 2. Na primer, VH/VL domeni od PD-1 antitiela PD1B114, PD1B149, PD1B160, PD1B162, PD1B164, PD1B11, PD1B183, PD1B184, PD1B185, PD1B187, PD1B192, PD1B71, PD1B177, PD1B70, PD1B175, PD1B194, PD1B195, PD1B196, PD1B197, PD1B198, PD1B199, PD1B200, PD1B201, PD1B131 i PD1B132 opisani ovde mogu biti korišćeni da generišu bispecifična PD-1/TIM-3 antitela.
[0356] Generisana bispecifična PD-1/TIM-3 antitela mogu biti testirana na njihovo vezivanje za PD-1 i TIM-3, i za njihove željene funkcionalne karakteristike, kao što je poboljšanje aktivacije antigen specifičnih CD4<+>i CD4<+>T ćelija korišćenjem ovde opisanih metoda.
[0357] Bispecifična antitela prema pronalasku sadrže antitela koja imaju strukturu antitela pune dužine.
[0358] Bispecifična antitela pune dužine mogu biti generisana, na primer, korišćenjem Fab razmene kraka (npr. razmenom pola molekula, razmenjivanjem na paru teški lanac - laki lanac) između dva monospecifična bivalentna antitela uvođenjem mutacija na tzv. "interfejsu" teškog lanca CH3 u svakoj polovini molekula u korist formacije heterodimera od dva polumolekula antitela koji imaju izrazitu specifičnost bilo in vitro u okruženju bez ćelija ili korišćenjem koekspresije. Fab reakcija zamene kraka je rezultat reakcije izomerizacije disulfidne veze i disocijacije-asocijacije CH3 domena. Disulfidne veze teškog lanca u regionima kraka roditeljskih monospecifičnih antitela su smanjene. Rezultirajući slobodni cisteini jednog od roditeljskih monospecifičnih antitela formiraju disulfidnu vezu između teškog lanca sa cisteinskim ostacima drugog molekula roditeljskog monospecifičnog antitela i istovremeno CH3 domeni roditeljskih antitela se oslobađaju i reformišu disocijacijom-asocijacijom. CH3 domeni Fab krakova mogu biti inženjerisani tako da favoriziraju heterodimerizaciju u odnosu na homodimerizaciju. Rezultirajući proizvod je bispecifično antitelo koje ima dva Fab kraka pola molekula od kojih svaki veže različit epitop. Mutacije F405L u jednom teškom lancu i K409R u drugom teškom lancu mogu biti korišćene u slučaju IgG1 antitela. Za IgG2 antitela mogu se koristiti divlji tip IgG2 i IgG2 antitelo sa supstitucijama F405L i R409K. Da bi se generisala bispecifična antitela, prvo monospecifično bivalentno antitelo i drugo monospecifično bivalentno antitelo su inženjerisani tako da imaju mutaciju F405L ili K409R u Fc regionu, antitela su inkubirana zajedno pod redukcionim uslovima dovoljnim da omoguće cisteinima u regiji kraka da se podvrgnu izomerizaciji disulfidne veze; čime se generiše bispecifično antitelo zamenom Fab kraka. Uslovi inkubacije se mogu optimalno vratiti na neredukcione. Primeri redukcionih agenasa koja se mogu koristiti su 2-merkaptoetilamin (2-MEA), ditiotreitol (DTT), ditioeritritol (DTE), glutation, tris(2 karboksietil)fosfin (TCEP), L-cistein i beta-merkaptoetanol. Na primer, inkubacija tokom najmanje 90 minuta na temperaturi od najmanje 20°C u prisustvu od najmanje 25 mM 2-MEA ili u prisustvu od najmanje 0.5 mM ditiotreitola pri pH od 5-8, na primer pri pH od 7.0 ili pri pH od 7.4 može biti korišćena.
[0359] Bispecifična antitela mogu takođe biti generisana korišćenjem dizajna kao što su tzv. Knob-in-Hole (Genentech), CrossMAbs (Roche) i elektrostatički usklađeni (Chugai, Amgen, NovoNordisk, Oncomed), LUZ-Y (Genentech), Strand Exchange Engineered Domain body (SEEDbody)(EMD Serono), i Biclonic (Merus).
[0360] Strategija tzv. "knob-in-hole" (videti, npr., Međunarodnu patentnu objavu br. WO 2006/028936) se može koristiti za generisanje bispecifičnih antitela pune dužine prema pronalasku. Ukratko, izabrane aminokiseline koje formiraju tzv. interfejs CH3 domene u humanom IgG mogu biti mutirane na pozicijama koje utiču na interakcije CH3 domena da bi se promovisalo formiranje heterodimera. Aminokiselina sa malim bočnim lancem (hole -rupa) se uvodi u teški lanac antitela koji specifično vezuje prvi antigen, i aminokiselina sa velikim bočnim lancem (knob kvačica) se uvodi u teški lanac antitela koji specifično vezuje drugi antigen. Nakon ko-ekspresije dva antitela, heterodimer se formira kao rezultat preferencijalne interakcije teškog lanca sa "rupom" sa teškim lancem sa " knob-kvačicom". Primeri CH3 supstitucijskih parova koji formiraju kvačicu i rupu su (eksprimirani kao modifikovana pozicija u prvoj CH3 domeni prvog teškog lanca/ modifikovana pozicija u drugoj CH3 domeni drugog teškog lanca): T366Y/F405A, T366W/F405W, F405W/Y407A, T394W/Y407T, T394S/Y407A, T366W/T394S, F405W/T394S i T366W/T366S_L368A_Y407V.
[0361] Tehnologija tzv "CrossMAb" može biti korišćena za generisanje bispecifičnih antitela pune dužine prema pronalasku. CrossMAbs, osim što koriste strategiju tzv. "knob-in-hole" za promotersku razmenu Fab krakova, imaju u jednom od polukraka izmenjene domene CH1 i CL da bi se obezbedilo ispravno uparivanje lakog lanca rezultirajućeg bispecifičnog antitela (videti npr. U.S. Patent Br.8,242,247).
[0362] Druge unakrsne strategije mogu biti korišćene za generisanje bispecifičnih antitela pune dužine prema pronalasku razmenjivanjem varijabilnih ili konstantnih, ili oba domena između teškog lanca i lakog lanca ili unutar teškog lanca u bispecifičnim antitelima, bilo u jednom ili u oba kraka. Ove razmene uključuju na primer VH-CH1 sa VL-CL, VH sa VL, CH3 sa CL i CH3 sa CH1 kao što je opisano u Međunarodnoj patentnoj objavi brojeva WO2009/080254, WO2009/080251, WO2009/018386 i WO2009/080252.
[0363] Druge strategije kao što je promovisanje heterodimerizacije teškog lanca korišćenjem elektrostatičkih interakcija supstituisanjem pozitivno naelektrisanih ostataka na jednoj površini CH3 i negativno naelektrisanih ostataka na drugoj površini CH3 mogu biti korišćene, kao što je opisano u US Patentnoj objavi br. US2010/0015133; US Patentnoj objavi br. US2009/0182127; US Patentnoj objavi br. US2010/028637 ili US Patentnoj objavi br. US2011/0123532. U drugim strategijama, heterodimerizacija može biti promovisana sa sledećim supstitucijama (eksprimirane kao modifikovane pozicije u prvoj CH3 domeni prvog teškog lanca/modifikovana pozicija u drugom CH3 domenu drugog teškog lanca): L351Y_F405A_Y407V/T394W, T366I_K392M_T394W/F405A_Y407V,T366L_K392M_T394W/F405A_Y407V,L351Y_Y407A/T366A_K409F, L351Y_Y407A/T366V_K409F, Y407A/T366A_K409F or T350V_L351Y_F405A _Y407V/T350V_T366L _K392L_T394W kao što je opisano u U.S. Patennoj objavi br. US2012/0149876 ili u U.S. Patennoj objavi br. US2013/0195849.
[0364] LUZ-Y tehnologija može biti korišćena za generisanje bispecifičnih antitela prema pronalasku. U ovoj tehnologiji, leucinski zatvarač se dodaje u C-terminus od CH3 domena da bi se sklop heterodimera pokrenuo iz roditeljskih mAbs koji se uklanjaju nakon prečišćavanja kao što je opisano u Wranik et al., (2012) J Biol Chem 287(52): 42221-9.
[0365] Tzv. "SEEDbody" tehnologoja može biti korišćena za generisanje bispecifičnih antitela prema pronalasku. SEEDbody imaju, u svojim konstantnim domenima, izabrane IgG ostatke supstituisane sa IgA ostacima da bi promovisali heterodimerizaciju kao što je opisano u U.S. Patent br. US20070287170.
[0366] Mutacije se obično prave na nivou DNK na molekulu kao što je konstantni domen antitela korišćenjem standardnih metoda.
[0367] Antitela prema pronalasku mogu biti inženjerisana u različite dobro poznate formate antitela.
[0368] U nekim izvođenjima, bispecifična antitela uključuju rekombinantne IgG-kao molekule dvostrukog ciljanja, pri čemu svaka od dve strane molekula sadrži Fab fragment ili deo Fab fragmenta od najmanje dva različita antitela; IgG fuzione molekule, pri čemu su IgG antitela pune dužine fuzionisana sa dodatnim Fab fragmentom ili delovima Fab fragmenta; Fc fuzione molekule, pri čemu su jednolančani Fv molekuli ili stabilizovana dijatela fuzionisana sa konstantnim domenima teškog lanca, Fc-regiona ili delova od njih; Fab fuzione molekule, pri čemu su različiti Fab-fragmenti fuzionisani zajedno; ScFvand dijatela i antitela teškog lanca (npr. domenska antitela, nanotela) pri čemu su različiti jednolančani Fv molekuli ili različita dijatela ili različita antitela teškog lanca (npr. domenska antitela, nanotela) fuzionisana jedno sa drugim ili sa drugim proteinom ili nosačem molekula.
Polinukleotidi, vektori i ćelije domaćina
[0369] Pronalazak takođe obezbeđuje antagonističko antitelo koje specifično vezuje PD-1, ili PD-1 i TIM-3 imajući varijabilni region teškog lanca (VH) od SEK ID BR: 48 i varijabilni region lakog lanca (VL) od SEK ID BR: 56, pri čemu je antitelo VH kodirano sa prvim polinukleotidom, i antitelo VL je kodirano sa drugim polinukleotidom. Polinukleotid može biti komplementarna dezoksiribonukleinska kiselina (cDNK) i može biti kodon optimizovan za ekspresiju u pogodnom domaćinu. Optimizacija kodona je dobro poznata tehnologija.
[0370] Pronalazak takođe obezbeđuje izolovani polinukleotid koji kodira VH antitelo iz pronalaska, VL antitelo iz pronalaska, teški lanac antitela iz pronalaska ili laki lanac antitela iz pronalaska.
[0371] Pronalazak takođe obezbeđuje izolovani polinukleotid koji kodira VH, VL ili VH i VL antagonističkog antitela koje se specifično vezuje za PD-1 prema pronalasku.
[0372] Pronalazak takođe obezbeđuje izolovani polinukleotid koji kodira VH od SEK ID BR: 48.
[0373] Pronalazak takođe obezbeđuje izolovani polinukleotid koji kodira VL od SEK ID BR: 56.
[0374] Pronalazak takođe obezbeđuje izolovani polinukleotid koji sadrži polinukleotidnu sekvencu SEK ID BRi: 196 i 197.
[0375] Pronalazak takođe obezbeđuje izolovani polinukleotid koji kodira HC1, LC1, HC2 ili LC2 od antagonističkog bispecifičnog PD-1/TIM-3 antitela prema pronalasku.
[0376] Pronalazak takođe obezbeđuje izolovani polinukleotid koji kodira HC1 od SEK ID BRi: 186, 241, ili 243.
[0377] Pronalazak takođe obezbeđuje izolovani polinukleotid koji kodira LC1 od SEK ID BR: 188.
[0378] Pronalazak takođe obezbeđuje izolovani polinukleotid koji kodira HC2 od SEK ID BRi: 190, 191, 192, 244, 245, 246, 247 ili 248.
[0379] Pronalazak takođe obezbeđuje izolovani polinukleotid koji kodira LC2 od SEK ID BRi: 193, 194 ili 195.
[0380] Pronalazak takođe obezbeđuje izolovani polinukleotid koji sadrži polinukleotidnu sekvencu od SEK ID BRi: 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259 i 260.
SEK ID BR: 196 (PD1H170)
SEK ID BR: 197 (PD1L148)
SEK ID BR: 198 (PD1H129)
SEK ID BR: 199 (PD1L62)
SEK ID BR: 200 (PD1H163)
SEK ID BR: 201 (PD1L185)
SEK ID BR: 202 (PD1H164)
SEK ID BR: 203 (PD1L86)
SEK ID BR: 204 (TM3H24)
SEK ID BR: 205 (TM3L33)
SEK ID BR: 206 (TM3H162)
SEK ID BR: 207 (TM3L85)
SEK ID BR: 208 (TM3H21)
SEK ID BR: 209 (PH9L1)
SEK ID BR: 210 (TM3H65)
SEK ID BR: 211 (TM3L12)
[0381] Polinukleotidne sekvence koje kodiraju VH ili VL ili fragment od njih koji se vezuje na antigen antitela prema pronalasku, ili teški lanac i laki lanac antitela prema pronalasku mogu biti operativno povezani sa jednim ili više regulatornih elemenata, kao što je npr. promoter ili pojačivač, koji omogućavaju ekspresiju nukleotidne sekvence u nameravanoj ćeliji domaćinu. Polinukleotid može biti cDNK.
[0382] Pronalazak takođe obezbeđuje vektor koji sadrži polinukleotid prema pronalasku.Takvi vektori mogu biti plazmidni vektori, virusni vektori, vektori za ekspresiju bakulovirusa, vektori bazirani na transpozonu ili bilo koji drugi vektor pogodan za uvođenje sintetičkog polinukleotida prema pronalasku u dati organizam ili genetsku pozadinu na bilo koji način-bilo kojim sredstvima. Na primer, polinukleotidi koji kodiraju varijabilne regione lakog i/ili teškog lanca antitela prema pronalasku, opciono vezani na konstantne regione, su umetnuti u ekspresione vektore. Laki i/ili teški lanci mogu biti klonirani u istim ili različitim ekspresionim vektorima. Segmenti DNK koji kodiraju lance imunoglobulina mogu biti operativno povezani sa kontrolnim sekvencama u ekspresionom vektoru (vektorima) koji obezbeđuju ekspresiju polipeptida imunoglobulina. Takve kontrolne sekvence uključuju signalne sekvence, promotere (npr. prirodno povezane ili heterologne promotere), elemente pojačivača i sekvence transkripcije terminacije, i izabrane su da budu kompatibilne sa ćelijom domaćinom izabranom za ekspresiju antitela. Nakon što je vektor inkorporiran u odgovarajućeg domaćina, domaćin se održava u uslovima pogodnim za visoki nivo ekspresije proteina kodiranih sa inkorporiranim polinukleotidima.
[0383] U nekim izvođenjima, vektor sadrži polinukleotid od SEK ID BR: 196 i 197.
[0384] U nekim izvođenjima, vektor sadrži polinukleotid od SEK ID BR: 204 i 205.
[0385] U nekim izvođenjima, vektor sadrži polinukleotid od SEK ID BR: 206 i 207.
[0386] U nekim izvođenjima, vektor sadrži polinukleotid od SEK ID BR: 208 i 209.
[0387] U nekim izvođenjima, vektor sadrži polinukleotid od SEK ID BR: 210 i 211.
[0388] U nekim izvođenjima, vektor sadrži polinukleotid od SEK ID BR: 253 i 254.
[0389] U nekim izvođenjima, vektor sadrži polinukleotid od SEK ID BR: 255 i 256.
[0390] U nekim izvođenjima, vektor sadrži polinukleotid od SEK ID BR: 257 i 258.
[0391] U nekim izvođenjima, vektor sadrži polinukleotid od SEK ID BR: 259 i 260.
[0392] Pogodni ekspresioni vektori se obično mogu replicirati u organizmima domaćinima ili kao epizomi ili kao integralni deo hromozomske DNK domaćina. Uobičajeno, ekspresioni vektori sadrže selekcione markere kao što su rezistencija na ampicilin, rezistencija na higromicin, rezistencija na tetraciklin, rezistencija na kanamicin ili rezistencija na neomicin da bi se omogućilo otkrivanje onih ćelija transformisanih željenim sekvencama DNK.
[0393] Pogodni elementi promotera i pojačivača su poznati u tehnici. Za ekspresiju u eukariotskoj ćeliji, primeri promotera uključuju promoter gena imunoglobulina lakog i/ili teškog lanca i elemente pojačivača; neposredni rani promoter citomegalovirusa; promoter timidin kinaze virusa herpes simpleksa; rane i kasne SV40 promotere; promoter prisutan u dugim terminalnim ponavljanjima iz retrovirusa; mišji metalotionein-I promoter; i razne poznate tkivno specifične promotere. Selekcija odgovarajućeg vektora i promotera je unutar nivoa uobičajene veštine u tehnici.
[0394] Primeri vektora koji mogu biti korišćeni su bakterijski: pBs, phagescript, PsiX174, pBluescript SK, pBs KS, pNH8a, pNH16a, pNH18a, pNH46a (Stratagene, La Jolla, Calif., USA); pTrc99A, pKK223-3, pKK233-3, pDR540, i pRIT5 (Pharmacia, Uppsala, Sweden). Eukaryotic: pWLneo, pSV2cat, pOG44, PXR1, pSG (Stratagene) pSVK3, pBPV, pMSG and pSVL (Pharmacia), pEE6.4 (Lonza) i pEE12.4 (Lonza).
[0395] Pronalazak takođe obezbeđuje ćeliju domaćina koja sadrži jedan ili više vektora pronalaska. "Ćelija domaćina" se odnosi na ćeliju u koju je uveden vektor. Podrazumeva se da se termin ćelija domaćin ne odnosi samo na određenu ćeliju subjekta, već i na potomstvo takve ćelije, kao i na stabilnu ćelijsku liniju generisanu iz određene ćelije subjekta. Pošte se određene modifikacije mogu pojaviti u sledećim generacijama zbog mutacije ili uticaja okoline, takvo potomstvo možda neće biti identično roditeljskoj ćeliji, ali je još uvek uključeno u obim termina "ćelija domaćina" kao što se ovde koristi. Takve ćelije domaćina mogu biti eukariotske ćelije, prokariotske ćelije, biljne ćelije ili arhealne ćelije. Ešerihija koli, bacili, kao što je Bacillus subtilis, i druge enterobakterije, kao što su Salmonella, tzv. "Serratia" i razne vrste primera Pseudomonasa su primeri prokariotskih ćelija domaćina. Drugi mikrobi, kao što je kvasac, su takođe korisni za ekspresiju. Tzv."Saccharomyces (na primer, S. cerevisiae) i tzv."Pichia" su primeri pogodnih ćelija domaćina kvasca. Primeri eukariotskih ćelija mogu biti poreklom od sisara, insekata, ptica ili drugih životinja. Eukariotske ćelije sisara uključuju besmrtne ćelijske linije kao što su hibridomi ili ćelijske linije mijeloma kao SP2/0 (American Type Culture Collection (ATCC), Manassas, VA, CRL-1581), NS0 (European Collection of Cell Cultures (ECACC), Salisbury, Wiltshire, UK, ECACC No. 85110503), FO (ATCC CRL-1646) i Ag653 (ATCC CRL-1580) mišje ćelijske linije. Primer ćelijske linije humanog mijeloma je U266 (ATTC CRL-TIB-196). Ostale korisne ćelijske linije uključuju one izvedene iz ćelija jajnika kineskog hrčka (CHO), kao što je CHOK1SV (Lonza Biologics, Walkersville, MD), Potelligent® CHOK2SV (Lonza), CHO-K1 (ATCC CRL-61) ili DG44.
[0396] Pronalazak takođe obezbeđuje metod proizvodnje antitela prema pronalasku obuhvatajući kultivisanje ćelije domaćina prema pronalaku pod uslovima u kojima je antitelo eksprimirano, i obnavljanje antitela koje proizvodi ćelija domaćina. Metode stvaranja antitela i njihovog prečišćavanja su dobro poznati u tehnici. Jednom sintetizovana (hemijski ili rekombinantno), cela antitela, njihovi dimeri, pojedinačni laki i/ili teški lanci ili drugi fragmenti antitela kao što su VH i/ili VL, mogu biti prečišćeni prema standardnim postupcima, uključujući precipitaciju amonijum sulfata, afinitet kolona, kolonsku hromatografiju, prečišćavanje tečnom hromatografijom visokih performansi (HPLC), gel elektroforezu i slično (videti generalno Obime, Prečišćavanje proteina (Springer- Verlag, N.Y., (1982)). Antitelo subjekta može biti suštinski čisto, na primer, najmanje oko 80% do 85% čisto, najmanje oko 85% do 90% čisto, najmanje oko 90% do 95% čisto, ili najmanje oko 98% do 99% , ili više, čisto, na primer, bez kontaminanata kao što su ćelijski ostaci, makromolekuli, itd. osim antitela subjekta.
[0397] Polinukleotidne sekvence prema pronalasku mogu biti inkorporisane u vektore korišćenjem standardnih metoda molekularne biologije. Transformacija ćelije domaćina, kultura, ekspresija antitela i prečišćavanje su izvršeni korišćenjem dobro poznatih metoda. Drugo izvođenje pronalaska je metod proizvodnje antagonističkog antitela koje se specifično vezuje za PD-1 pronalaska, sastojeći se od:
inkorporisanja prvog polinukleotida koji kodira VH antitela i drugog polinukleotida koji kodira VL antitela u ekspresioni vektor; transformisanja ćelije domaćina sa ekspresionim vektorom; kultivisanja ćelije domaćina u medijumu kulture pri čemu su VL i VH eksprimirani i formiraju antitilo; i
izdvajanje antitela iz ćelije domaćina ili medijuma kulture.
[0398] Polinukleotidi koji kodiraju određene VH ili VL sekvence prema pronalasku opisane ovde, i u nekim izvođenjima svakog od ispod navedenih numerisanih izvođenja, mogu biti inkorporisani u vektore korišćenjem standardnih metoda molekularne biologije. Transformacija ćelije domaćina, kultura, ekspresija antitela i prečišćavanje se vrše dobro poznatim metodama.
Farmaceutske kompozicije/Primena
[0399] Pronalazak obezbeđuje farmaceutske kompozicije koje sadrže antitela prema pronalasku i farmaceutski prihvatljiv nosač. Za terapijsku upotrebu, antitela prema pronalasku mogu biti pripremljena kao farmaceutske kompozicije koji sadrže efikasnu količinu antitela kao aktivnog sastojka u farmaceutski prihvatljivom nosaču. "Nosač" se odnosi na razblaživač, adjuvans, ekscipijens ili nosač sa kojima se primenjuje antitelo pronalaska. Takvi nosači mogu biti tečnosti, kao što su voda i ulja, uključujući one od naftnog, životinjskog, biljnog ili sintetičkog porekla, kao što je ulje od kikirikija, sojino ulje, mineralno ulje, susamovo ulje i slično. Na primer, mogu biti korišćeni 0.4% fiziološki rastvor i 0.3% glicin. Ovi rastvori su sterilni i generalno bez čestica. Oni mogu biti sterilisani konvencionalnim, dobro poznatim tehnikama sterilizacije (npr. filtracije). Kompozicije mogu sadržavati farmaceutski prihvatljive pomoćne supstance koje su potrebne za približne fiziološke uslove kao što su agensi za podešavanje pH i puferovanje, agensi za stabilizaciju, zgušnjavanje, podmazivanje i bojenje, itd. Koncentracija antitela prema pronalasku u takvim farmaceutskim formulacija može varirati, od manje od oko 0.5%, obično do najmanje oko 1% do čak 15 ili 20% po težini i može biti odabrana prvenstveno na osnovu potrebne doze, zapremine tečnosti, viskoziteta itd., u skladu sa određenim izabranim načinom primene. Pogodni nosači i formulacije, uključujući druge humane proteine, npr. humani serumski albumin, opisani su, u npr. Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, Troy, D.B. ed., Lipincott Williams and Wilkins, Philadelphia, PA 2006, Part 5, Pharmaceutical Manufacturing pp 691-1092, See especially pp.958-989.
[0400] Način primene za terapijsku upotrebu atitela prema pronalasku može biti bilo koji pogodan put kojim se antitelo isporučuje domaćinu, kao što je parenteralna primena, npr. intradermalna, intramuskularna, intraperitonealna, intravenska ili potkožna, plućna, transmukozna (oralna, intranazalna, intravaginalna, rektalna), korišćenjem formulacije u tableti, kapsuli, rastvoru, prahu, gelu, čestici; i sadržano u špricu, implantiranom uređaju, osmotskoj pumpi, ulošku, mikropumpi; ili drugim sredstvima koje ceni stručnjak, koji je dobro poznat u tehnici. Lokalno specifična primena se može postići na primer intratumoralnom, intra-artikularnom, intrabronhalnom, intra-abdominalnom, intrakapsularnom, intrakartilaginoznom, intrakavitarnom, intraćelijskom, intracerebelarnom, intracerebroventrikularnom, intrakoličnom, intracervikalnom, intragastričnom, intrahepatičnom, intrakardijalnom, intraostalnom, intrapelvičnom, intraperikardijalnom, intraperitonealnom, intrapleuralnom, intraprostatičnom, intrapulmonalnom, intrarektalnom, intrarenalnom, intraretinalnom, intraspinalnom, intrasinovijalnom, intratorakalnom, intrauterinom, intravaskularnom, intravezikalnom, intralezijskom, vaginalnom, rektalnom, bukalnom, sublingvalnom, intranazalnom ili transdermalnom isporukom.
[0401] Antitela prema pronalasku mogu biti primenjena na subjektu na bilo koji pogodan način, na primer roditeljski putem intravenske (iv.) infuzije ili bolus injekcije, intramuskularno ili subkutano ili intraperitonealno. i.v. infuzija se može dati tokom na primer 15, 30, 60, 90, 120, 180 ili 240 minuta, ili od 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12 sati.
[0402] Doza data subjektu je dovoljna da ublaži ili barem delimično zaustavi bolest koja se leči ("terapijski efikasna količina") i ponekad može biti od 0.005 mg do oko 100 mg/kg, npr. oko 0.05 mg do oko 30 mg/kg ili oko 5 mg do oko 25 mg/kg, ili oko 4 mg/kg, oko 8 mg/kg, oko 16 mg/kg ili oko 24 mg/kg, ili na primer oko 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 mg/kg, ali može i više, na primer oko 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 ili 100 mg/kg.
[0403] Takođe se može dati fiksna jedinična doza, na primer, 50, 100, 200, 500 ili 1000 mg, ili se doza može biti zasnovana na površini pacijenta, npr. 500, 400, 300, 250, 200 ili 100 mg/m2. Obično između 1 i 8 doza, (npr. 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ili 8) može biti primenjeno za lečenje pacijenta, ali 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 ili više doza može biti dato.
[0404] Primena antitela prema pronalasku može biti ponovljena nakon jednog dana, dva dana, tri dana, četiri dana, pet dana, šest dana, jedne nedelje, dve nedelje, tri nedelje, jedan mesec, pet nedelja, šest nedelja, sedam nedelja, dva meseca, tri meseca, četiri meseca, pet meseci, šest meseci ili duže. Mogući su i ponovljeni kursevi lečenja, kao i hronična primena. Ponovljena primena može biti u istoj dozi ili u različitoj dozi. Na primer, antitela prema pronalasku mogu biti primenjivana i u dozi od 8 mg/kg ili 16 mg/kg u nedeljnom intervalu tokom 8 nedelja, nakon čega sledi primena u dozi od 8 mg/kg ili 16 mg/kg svaka dve nedelje tokom dodatnih 16 nedelja, nakon čega sledi primena u dozi od 8 mg/kg ili 16 mg/kg svake četiri nedelje intravenskom infuzijom.
[0405] Na primer, antitela prema pronalasku mogu biti obezbeđena kao dnevna doza u količini od oko 0.1-100 mg/kg, kao što je 0.5, 0.9, 1.0, 1.1, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90 ili 100 mg/kg, dnevno, najmanje jednog dana 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, ili 40, ili alternativno, najmanje jednu nedelju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ili 20 nakon početka lečenja, ili bilo koje kombinacije od njih, korišćenjem pojedinačnih ili podeljenih doza svakih 24, 12, 8, 6, 4 ili 2 sata, ili bilo koje kombinacije od njih.
[0406] Antitela prema pronalasku mogu takođe biti primenjena profilaktički da bi se smanjio rizik od razvoja karcinoma, odložio početak pojave događaja u progresiji karcinoma, i/ili smanjio rizik od ponovnog pojavljivanja kada je karcinom u remisiji.
[0407] Antitela prema pronalasku mogu biti liofilizovana za skladištenje i rekonstituisana u pogodnom nosaču pre upotrebe. Pokazalo se da je ova tehnika efikasna sa konvencionalnim proteinskim pripravcima i mogu biti upotrebljene dobro poznate tehnike liofilizacije i rekonstitucije.
Metode i upotrebe
[0408] Antitela prema pronalasku imaju in vitro i in vivo dijagnostičke, kao i terapijske i profilaktičke korisnosti. Na primer, antitela iz pronalaska mogu biti primenjena na ćelije u kulturi, in vitro ili ex vivo, za dijagnozu raznih poremećaja, kao što su karcinomi i infektivni poremećaji.
[0409] Pronalazak obezbeđuje antitelo prema pronalasku za upotrebu u metodu modifikovanja imunološkog odgovora na subjektu koji uključuje primenjivanje na subjektu antitela prema pronalasku u vremenu dovoljnom da modifikuje imunološki odgovor.
[0410] U nekim izvođenjima, imunološki odgovor je pojačan, stimulisan ili pojačano regulisan.
[0411] U nekim izvođenjima opisanim ovde, subjekt je humani pacijent.
[0412] U nekim izvođenjima opisanim ovde, subjekt je humani pacijent kojem je potrebno poboljšanje imunološkog odgovora.
[0413] U nekim izvođenjima subjekt je imunokompromitovan.
[0414] U nekim izvođenjima subjekt je izložen riziku da bude imunokompromitovan. Imunokompromitovan subjekt može biti podvrgnut hemoterapiji ili terapiji zračenjem ili je bio podvrgnut terapiji.
[0415] U nekom izvođenju, subjekt je ili je u opasnosti da bude imunokompromitovan kao rezultat infekcije.
[0416] Antitela prema pronalasku su pogodna za upotrebu u lečenju subjekta koji ima poremećaj koji se može lečiti povećanjem imunoloških odgovora posredovanih T-ćelijama.
[0417] U nekim izvođenjima antagonističko antitelo koje specifično vezuje PD-1 za upotrebu prema pronalasku je PD1B196 ili PD1B244. VH i VL aminokiselinske sekvence ovih antitela su prikazane u Tabeli 2.
[0418] U nekim izvođenjima, bispecifično PD-1ATIM-3 antitelo za upotrebu prema pronalasku je PTBB14, PTBB15, PTBB24, PTBB30, PTBB27, PTBB28, PTBB20 ili PTBB21. HC1, LC1, HC2 i LC2 aminokiselinske sekvence ovih antitela su prikazane u Tabeli 41 i Tabeli 42.
[0419] Antagonističko antitelo koje specifično vezuje PD-1 za upotrebu prema pronalasku sadrži VH od SEK ID BR: 48 i VL od SEK ID BR: 56.
[0420] U nekim izvođenjima, antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo koje sadrži prvi domen koji se specifično vezuje za PD-1 i drugi domen koji se specifično vezuje za TIM-3 korišćen u metodama pronalaska sadrži VH od SEK ID BR: 48 i VL od SEK ID BR: 56 u prvom domenu, i VH od SEK ID BR: 153 i VL od SEK ID BR: 162 u drugom domenu.
[0421] U nekim izvođenjima, antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo koje sadrži prvi domen koji se specifično vezuje za PD-1 i drugi domen koja se specifično vezuje za TIM-3 korišćen u metodama pronalaska sadrži VH od SEK ID BR: 48 i VL od SEK ID BR: 56 u prvom domenu, i VH od SEK ID BR: 146 i VL od SEK ID BR: 156 u drugom domenu.
[0422] U nekim izvođenjima, antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo koje sadrži prvi domen koji se specifično vezuje za PD-1 i drugi domen koji se specifično vezuje za TIM-3 korišćen u metodama pronalaska sadrži VH od SEK ID BR: 48 i VL od SEK ID BR: 56 u prvom domenu, i VH od SEK ID BR: 172 i VL od SEK ID BR: 173 u drugom domenu.
Karcinom
[0423] Blokada PD-1 može poboljšati imunološki odgovor na kancerogene ćelije kod subjekta. Ligand za PD-1, PDL1, je u izobilju eksprimiran u različitim humanim vrstama karcinoma (Dong et al., (2002) Nat Med 8:787-9). Interakcija između PD-1 i PD-L1 može rezultirati smanjenjem limfocita koji infiltriraju tumor, smanjenjem proliferacije posredovane receptorom T-ćelije i/ili imunološkim izbegavanjem ćelija karcinoma (Dong et al., (2003) J Mol Med 81:281-7; Blank et al., (2005) Cancer Immunol Immunother 54:307-314; Konishi et al., (2004) Clin Cancer Res 10:5094-100). Supresija imuniteta može se preokrenuti inhibiranjem lokalne interakcije PD-1 sa PD-L1; efekat je aditivni kada je interakcija PD-1 i drugog PD-1 liganda, PD-L2, je takođe blokiran (Iwai et al., (2002) PorcNatl Acad Sci 99:12293-7; Brown et al., (2003) J Immunol 170:1257-66). Zbog toga, inhibicija PD-1 može rezultirati povećanjem imunološkog odgovora.
[0424] TIM-3 je koinhibitorni protein eksprimiran na aktiviranom T pomoćniku 1 (Thl) CD4<+>i citotoksičnim CD8<+>T ćelijama koje luče IFN-y. TIM-3 je ko-eksprimiran na iscrpljenim T ćelijama PD-1<+>kao što je prikazano u prekliničkim modelima karcinoma i virusne iscrpljenosti. Ko-blokada ovih puteva može obnoviti funkciju efektorske T ćelije (npr. izlučivanje IFN-y, proliferaciju) u nekoliko modela, kao i humane PBMC dobijene od pacijenata sa metastatskim melanomom i pacijenata sa HIV-om ili HCV-om. TIM-3 je takođe obogaćen na Foxp3+ regulatornim T ćelijama, a pokazalo se da su Tregs koji ko-eksprimiraju TIM-3, LAG3 i CTLA4 vrlo rfikasni supresori efektorskih T ćelija (Teff) (Galuton et al., (2014) Eur J Immunol 44(9):2703-11). Ekspresija TIM-3 je povezana sa lošijom prognozom u NSCLC (Zhuang et al., (2012) Am J Clin Pathol 137(6):978-85). Limfociti iz tumorskog tkiva pacijenata sa karcinomom jajnika, kolorektalnog, grlića materice i hepatocelularnog karcinoma pokazuju veći udeo TIM-3<+>CD4 T ćelija, čije ćelije imaju smanjeni kapacitet da proizvode ILF-y (Yan et al., (2013.) PLoS One 8(3):e58006).
[0425] Pronalazak takođe obezbeđuje antitela prema pronalasku za upotrebu u metodu inhibiranja rasta tumorskih ćelija kod subjekta, sastojeći se od primenjivanja na subjektu terapijski efikasne količine antagonističkog antitela koje specifično vezuje PD-1 prema pronalasku u vremenu dovoljnom da inhibira rast tumorskih ćelija.
[0426] Pronalazak takođe obezbeđuje bispecifična antitela prema pronalasku za upotrebu u metodu inhibiranja rasta tumorskih ćelija kod subjekta, sastojeći se od primenjivanja na subjektu terapijski efikasne količine antagonističkog bispecifičnog PD-1/TIM-3 antitela prema pronalasku u vremenu dovoljnom da inhibira rast tumorskih ćelija.
[0427] Pronalazak takođe obezbeđuje antitela prema pronalasku za upotrebu u metodu lečenja karcinoma davanjem subjektu kojem je to potrebno terapijski efikasne količine antagonističkog antitela koje specifično vezuje PD-1 prema pronalasku u vremenu dovoljnom za lečenje karcinoma.
[0428] Pronalazak takođe obezbeđuje bispecifična antitela prema pronalasku za upotrebu u metodu lečenja karcinoma davanjem subjektu kojem je to potrebno terapijski efikasne količine bispecifičnog PD-1/TIM-3 antitela prema pronalasku u vremenu dovoljnom za lečenje karcinoma.
[0429] Primeri antitela koja mogu biti korišćena su antagonistička antitela koja specifično vezuju PD-1 i antagonistička bispecifična PD-1/TIM-3 antitela PD1B196, PTBB14, PTBB15, PTBB24, PTBB30, PTBB27, PTBB28, PTBB20 i PTBB21 imajući VH i VL aminokiselinske sekvence i karakteristike kao što je ovde opisano.
[0430] Karcinom može biti hiperproliferativno stanje ili poremećaj, solidni tumor, hematološki malignitet, tumor mekog tkiva ili metastatska lezija.
[0431] "Karcinom" podrazumeva sve vrste kancerogenih izraslina ili onkogenih procesa, metastatska tkiva ili maligno transformisane ćelije, tkiva ili organe, bez obzira na tip histopatologije ili stadijum invazivnosti. Primeri karcinoma uključuju solidne tumore, hematološke maligne bolesti, tumore mekog tkiva i metastatske lezije. Primeri solidnih tumora uključuju zloćudne tumore, npr. sarkome i karcinome (uključujući adenokarcinome i karcinome skvamoznih ćelija) različitih sistema organa, kao što su oni koji zahvataju jetru, pluća, dojke, limfene žlezde, gastrointestinalni (npr. debelo crevo), urogenitalni trakt (npr. bubrežne, urotelialne ćelije), prostatu i ždrelo. Adenokarcinomi uključuju maligne bolesti kao što je većina karcinoma debelog creva, karcinom rektuma, karcinom bubrežne ćelije, karcinom jetre, ne-maloćelijski karcinom pluća, karcinoma tankog creva i karcinom jednjaka. Karcinomi skvamozne ćelije uključuju maligne tumore, npr. u plućima, jednjaku, koži, regiji glave i vrata, usnoj šupljini, anusu i cerviksu.
[0432] U nekim izvođenjima, karcinom je melanom.
[0433] Metastatske lezije iznad pomenutih karcinoma mogu takođe biti lečene ili sprečene korišćenjem metoda i antitela prema pronalasku opisanih ovde.
[0434] Primeri karcinoma čiji rast može biti inhibiran ili smanjen upotrebom antitela prema pronalasku uključuju karcinome koji mogu reagovati na imunoterapiju. Primeri takvih karcinoma uključuju melanom, karcinom bubrega, karcinom prostate, karcinom dojke, karcinom debelog creva, gastrointestinalni karcinom karcinom želuca, karcinom jednjaka, karcinom pluća, metastatski maligni melanom, karcinom bistrih ćelija, hormonski refraktorni adenokarcinom prostate, ne-maloćelijski karcinom pluća ili karcinom glave i vrata. Refraktorni ili rekurentni zloćudni tumori se mogu lečiti korišćenjem ovde opisanih antitela prema pronalasku.
[0435] Primer drugih karcinoma koji se mogu lečiti antitelima prema pronalasku, npr. analni karcinom, karcinom bazalne ćelije, karcinom žučnih puteva, karcinom mokraćne bešike, karcinom kostiju, karcinomi mozga i CNS-a, karcinom jajovoda, karcinom vagine, karcinom vulve, kožni ili intraokularni maligni melanom, astroezofagealni karcinom, karcinom testisa, karcinom jajnika, karcinom pankreasa, karcinom rektuma, karcinom materice, primarni limfom CNS-a; neoplazma centralnog nervnog sistema (CNS), karcinom grlića materice, horiokarcinom, karcinom rektuma, karcinom vezivnog tkiva, karcinom digestivnog sistema, karcinom endometrijuma, karcinom oka; intraepitelna neoplazma, karcinom bubrega, karcinom grkljana, karcinom jetre; maloćelijski karcinom pluća, neuroblastom, karcinom usne šupljine (npr. usne, jezika, usta i ždrela), karcinom nazofarinksa, retinoblastom, rabdomiosarkom, karcinom respiratornog sistema, sarkom, karcinom štitaste žlezde, karcinom urinarnog sistema, hepatokarcinom, karcinom analne regije, karcinom jajovoda, karcinom vagine, karcinom vulve, karcinom tankog crijeva, karcinom endokrinog sistema, karcinom paratireoidne žlezde, karcinom nadbubrežne žlezde, sarkom mekog tkiva, karcinom uretre, karcinom penisa, solidni tumori u detinjstvu, angiogeneza tumora, tumor osovine kičme, gliom moždanog stabla, adenom hipofize, Kapošijev sarkom, krcinom Merkelovih ćelija, epidermoidni karcinom, karcinom skvamoznih ćelija, karcinom uzrokovan okolinom, uključujući one izazvane azbestom, kao i druge karcinome i sarkome i kombinacije navedenih karcinoma.
[0436] Primer hematoloških maligniteta koji se mogu lečiti sa antitelima prema pronalasku uključuju leukemiju, limfom i mijelom, kao što je prekursorska limfoblastna leukemija/limfom B-ćelije i ne-Hodžkinov limfom B-ćelije, akutnu promijelocitnu leukemiju, akutnu limfobllastičnu leukemiju (ALL), hroničnu limfocitnu leukemiju B-ćelije (CLL)/mali limfocitni limfom (SLL), akutnu limfocitnu leukemiju B-ćelije, prolimfocitnu leukemiju B-ćelije, limfoplazmacitni limfom, limfom ćelije plašta (MCL), folikularni limfom (FL), uključujući FL niskog, srednjeg i visokog stepena, kožni limfom centra folikula, B-ćelijski limfom marginalne zone (tip MALT, nodalni i tip slezine), leukemiju dlakave ćelije, difuzni limfom velike B ćelije ( DLBCL), Burkitov limfom (BL), plazmacitom, multipli mijelom (MM), leukemiju plazma ćelije, limfoproliferativni poremećaj nakon transplantacije, Waldenstromovu makroglobulinemiju, poremećaje plazma ćelije, anaplastični limfom velike ćelije (ALCL), akutnu limfocitnu leukemiju T-ćelije, primarnu sistemsku amiloidozu (npr. amiloidozu lakog lanca), pro-limfocitnu/mijelocitnu leukemiju, akutnu mijeloidnu leukemiju (AML), hroničnu mijeloidnu leukemiju (CML), veliku granularnu limfocitnu (LGL) leukemiju, leukemiju NK ćelije i Hodžkinov limfom.
[0437] "Poremećaj plazma ćelije" se odnosi na poremećaje naznačene klonalnim plazma ćelijama, i uključuje multipli mijelom, amiloidozu lakog lanca i Waldenstromovu makroglobulinemiju. Amiloidoza lakog lanca i Waldenstromova makroglobulinemija mogu nastati nezavisno od multiplog mijeloma. One se mogu takođe pojaviti istovremeno sa multiplim mijelomom i razviti se pre ili nakon razvoja multiplog mijeloma.
[0438] Primer ne-Hodžkinovih limfoma B-ćelije su limfomatoidna granulomatoza, primarni efuzioni limfom, intravaskularni limfom velike B-ćelije, medijastinalni limfom velike B-ćelije, bolesti teškog lanca (uključujući y, µ i ɑ bolesti), limfome indukovane terapijom sa imunosupresivnm agensima, kao što su limfom indukovanan ciklosporinom i limfom indukovan metotreksatom.
[0439] Pacijenti koji imaju karcinom uključujući metastatski karcinom koji eksprimira PD-L1 mogu biti lečeni antitelima prema pronalasku. Karcinom može biti melanom, karcinom bubrežnih ćelija, skvamozni ne-maloćeljski karcinom pluća (NSCLC), neskvamozni NSCLC, kolorektalni karcinom, karcinom prostate rezistentan na kastraciju, karcinom jajnika, karcinom želuca, adenokarcinom (ACA), karcinom skvamoznih ćelija (SCC), hepatocelularni karcinom (HCC), karcinom pankreasa, karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata, karcinom jednjaka, gastrointestinalnog trakta i dojke.
[0440] Pacijenti koji imaju karcinom koji eksprimira TIM-3 mogu biti lečeni antitelima prema pronalasku. Karcinomi koji eksprimiraju TIM-3 uključuju karcinom grlića mateice, karcinom pluća, NSCLC, akutnu mijeloidnu leukemiju (AML), difuzni limfom velike B ćelije (DLBCL), melanom, karcinom bubrega, karcinom bubrežnih ćelija (RCC), karcinom bistrih ćelija bubrega, karcinom papilarnih ćelija bubrega, metastatski karcinom bubrežne ćelije, karcinom skvamoznih ćeliija, karcinom skvamoznih ćelija jednjaka, karcinom nazofarinksa, kolorektalni karcinom, karcinom dojke (npr. karcinom dojke koji ne eksprimira jedan, dva ili sve estrogene receptore, progesteronski receptor ili Her2/neu, npr. trostruko negativan karcinom dojke), mezoteliom, hepatocelularni karcinom i karcinom jajnika. Karcinom koji eksprimira TIM-3 može biti metastatski karcinom.
[0441] U nekim izvođenjima, subjekt ima solidni tumor.
[0442] U nekim izvođenjima, subjekt ima hematološki malignitet.
[0443] U nekim izvođenjima, solidni tumor je melanom.
[0444] U nekim izvođenjima, solidni tumor je karcinom pluća.
[0445] U nekim izvođenjima, solidni tumor je ne-maloćelijski karcinom pluća (NSCLC).
[0446] U nekim izvođenjima, solidni tumor je skvamozni nemaloćelijski karcinom pluća (NSCLC).
[0447] U nekim izvođenjima, solidni tumor je ne-skvamozni NSCLC.
[0448] U nekim izvođenjima, solidni tumor je adenokarcinom pluća.
[0449] U nekim izvođenjima, solidni tumor je karcinom bubrežne ćelije (RCC).
[0450] U nekim izvođenjima, solidni tumor je mezoteliom.
[0451] U nekim izvođenjima, solidni tumor je nazofaringealni karcinom (NPC).
[0452] U nekim izvođenjima, solidni tumor je kolorektalni karcinom.
[0453] U nekim izvođenjima, solidni tumor je karcinom prostate.
[0454] U nekim izvođenjima, solidni tumor je karcinom prostate rezistantan na kastraciju.
[0455] U nekim izvođenjima, solidni tumor je karcinom stomaka.
[0456] U nekim izvođenjima, solidni tumor je karcinom jajnika.
[0457] U nekim izvođenjima, solidni tumor je karcinom želuca.
[0458] U nekim izvođenjima, solidni tumor je karcinom jetre.
[0459] U nekim izvođenjima, solidni tumor je karcinom pankreasa.
[0460] U nekim izvođenjima, solidni tumor je karcinom štitaste žlezde.
[0461] U nekim izvođenjima, solidni tumor je karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata.
[0462] U nekim izvođenjima, solidni tumor je karcinom ezofagusa ili gastrointestinalnog trakta.
[0463] U nekim izvođenjima, solidni tumor je karcinom dojke.
[0464] U nekim izvođenjima, solidni tumor je karcinom jajovoda.
[0465] U nekim izvođenjima, solidni tumor je karcinom mozga.
[0466] U nekim izvođenjima, solidni tumor je uretralni karcinom.
[0467] U nekim izvođenjima, solidni tumor je urogenitani karcinom.
[0468] U nekim izvođenjima, solidni tumor je endometrioza.
[0469] U nekim izvođenjima, solidni tumor je karcinom grlića materice.
[0470] U nekim izvođenjima, solidni tumor je metastatska lezija karcinoma.
[0471] U nekim izvođenjima, hematološki malignitet je limfom, mijelom ili leukemija.
[0472] U nekim izvođenjima, hematološki malignitet je limfom B ćelije.
[0473] U nekim izvođenjima, hematološki malignitet je Burkitov limfom.
[0474] U nekim izvođenjima, hematološki malignitet je Hodžkinov limfom.
[0475] U nekim izvođenjima, hematološki malignitet je ne- Hodžkinov limfom.
[0476] U nekim izvođenjima, hematološki malignitet je mijelodisplastični sindrom.
[0477] U nekim izvođenjima, hematološki malignitet je akutna mijeloidna leukemija (AML).
[0478] U nekim izvođenjima, hematološki malignitet je hronična mijeloidna leukemija (CML).
[0479] U nekim izvođenjima, hematološki malignitet je hronična mijelomoncitna leukemija (CMML).
[0480] U nekim izvođenjima, hematološki malignitet je multipli mijelom (MM).
[0481] U nekim izvođenjima, hematološki malignitet je plazmacitom.
[0482] U nekim izvođenjima, subjekt ima tumor koji eksprimira PD-L1.
[0483] U nekim izvođenjima, subjekt ima T limfocite (TILe) koji infiltriraju tumor u tumorskom tkivu.
[0484] U nekim izvođenjima, subjekt ima PD-1<+>TIM-<3+>TILe u tumorskom tkivu.
[0485] U nekim izvođenjima, subjekt ima povećan broj T limfocita (TILe) koji infiltriraju tumor PD-1<+>TIM-3<+>u tumorskom tkivu.
[0486] "Povećan broj" se odnosi na statistički značajno povećanje subjekta u poređenju sa kontrolom. "Povećani broj" se na primer odnosi na statistički značajno povećanje broja TIL-a kod subjekta (npr. pacijentu) pre i nakon tretmana sa PD-1 antielom ili drugim terapeutikom.
[0487] U nekim izvođenjima, subjekt ima povećanu ekspresiju ili aktivnost interferona-gama (IFN-y).
[0488] U nekim izvođenjima, subjekt je lečen anti-PD-1 antitelom.
[0489] U nekim izvođenjima, subjekt je otporan na lečenje anti-PD-1 antitelom.
[0490] U nekim izvođenjima, subjekt ima recidiv tumora nakon lečenja sa anti-PD-1 antitelom.
[0491] U nekim izvođenjima, subjekt je lečen sa anti-PD-1 antitelom koje sadrži VH od SEK ID
BR: 230 i VL od SEK ID BR: 231 (npr. KEYTRUDA® (pembrolizumab)).
[0492] U nekim izvođenjima, subjekt je lečen sa anti-PD-1 antitelom koje sadrži VH od SEK ID
BR: 232 i VL od SEK ID BR: 233 (e.g. OPDIVO® (nivolumab)).
[0493] U nekim izvođenjima, subjekt je otporan na lečenje sa anti-PD-1 antitelom koje sadrži VH od SEK ID BR: 230 i VL od SEK ID BR: 231 (e.g. KEYTRUDA® (pembrolizumab)).
[0494] U nekim izvođenjima, subjekt je otporan na lečenje sa anti-PD-1 antitelom koje sadrži VH od SEK ID BR: 232 i VL od SEK ID BR: 233 (e.g. OPDIVO® (nivolumab)).
[0495] U nekim izvođenjima, subjekt ima recidiv tumora nakon tretmana sa anti-PD-1 antitelom koje sadrži VH od SEK ID BR: 230 i VL od SEK ID BR: 231 (e.g. KEYTRUDA® (pembrolizumab).
[0496] U nekim izvođenjima, subjekt ima recidiv tumora nakon tretmana sa anti-PD-1 antitelom koje sadrži VH od SEK ID BR: 232 i VL od SEK ID BR: 233 (e.g. OPDIVO® (nivolumab)).
SEK ID BR: 230
SEK ID BR: 231
SEK ID BR: 232
SEK ID BR: 233
[0497] U nekim izvođenjima, subjekt je lečen ili se leči sa PD-L1 antitelom.
[0498] U nekim izvođenjima, subjekt je otporan na lečenje sa PD-L1 antitelom.
[0499] U nekim izvođenjima, subjekt ima recidiv tumora nakon lečenja sa PD-L1 antitelom.
[0500] U nekim izvođenjima, subjekt je otporan ili ima recidiv nakon lečenja sa PD-L1 antitelom durvalumabom (MEDI-4736). Durvalumab sadrži VH od SEK ID BR: 234 i VL od SEK ID BR: 235.
SEK ID BR: 234
SEK ID BR: 235
[0501] U nekim izvođenjima, subjekt je otporan ili ima recidiv nakon lečenja sa PD-L1 antitelom atezolizumabom.
Atezolizumab sadrži VH od SEK ID BR: 236 i VL od SEK ID BR: 237.
SEK ID BR: 236
SEK ID BR: 237
[0502] U nekim izvođenjima, subjekt je otporan ili ima recidiv nakon lečenja sa PD-L1 antitelom avelumabom. Avelumab sadrži VH od SEK ID BR: 238 i VL od SEK ID BR: 239.
SEK ID BR: 238
SEK ID BR: 239
[0503] U nekim izvođenjima, subjekt je otporan ili ima recidiv nakon lečenja sa PD-L1 antitelom MDX-1105.
[0504] U nekim izvođenjima, subjekt je lečen ili se leči sa PD-L2 antitelom.
[0505] U nekim izvođenjima, opisanim ovde, subjekt je otporan na lečenje sa PD-L2 antitelom.
[0506] U nekim izvođenjima, subjekt ima recidiv tumora nakon lečenja sa PD-L2 antitelom.
[0507] Različite kvalitativne i/ili kvantitativne metode mogu biti korišćene za određivanje recidiva ili prirodne otpornosti prema bolesti. Simptomi koji mogu biti povezani sa recidivom ili otpornošću su, na primer, pad ili plato dobrobiti pacijenta ili ponovno uspostavljanje ili pogoršanje različitih simptoma povezanih sa solidnim tumorima, i/ili širenje kancerogenih ćelija u telu sa jednog mesta na druge organe, tkiva ili ćelije.
[0508] Ovde je pronađeno da je ekspresija TIM-3 povišena u CD8<+>T ćelijama izolovanim iz tumora nakon tretmana anti-PD-1 antitelima. Zbog toga terapijska primena antagonističkih antitela koja specifično vezuju TIM-3 ili antagonističkih bispecifičnih PD-1/TIM-3 antitela opisanih ovde na subjektu koji je već primio ili prima terapiju anti-PD-1 antitelima, otporna na lečenje anti-PD-1 antitelima ili je došlo do recidiva nakon ili tokom lečenja anti-PD-1 antitelima može poboljšati klinički ishod pacijenata.
[0509] Pronalazak takođe obezbeđuje bispecifična antitela prema pronalasku za upotrebu u metodi lečenja karcinoma kod subjekta, koja uključuje primenjivanje na subjektu terapijski efikasne količine antagonističkog bispecifičnog PD-1/TIM-3 antitela prema pronalasku, pri čemu se subjekt leči ili je lečen sa anti-PD-1 antitelom.
[0510] Pronalazak takođe obezbeđuje bispecifična antitela prema pronalasku za upotrebu u metodi lečenja karcinoma kod subjekta, koji uključuje primenjivanje na subjektu terapijski efikasne količine antagonističkog bispecifičnog PD-1/TIM-3 antitela prema pronalasku, pri čemu se subjekt leči ili je lečen sa anti-PD-L1 antitelom.
[0511] Pronalazak takođe obezbeđuje bispecifična antitela prema pronalasku za upotrebu u metodi lečenja karcinoma kod subjekta, koji uključuje primenjivanje na subjektu terapijski efikasne količine antagonističkog bispecifičnog PD-1/TIM-3 antitela prema pronalasku, pri čemu se subjekt leči ili je lečen sa anti-PD-L2 antitelom.
[0512] Pronalazak takođe obezbeđuje bispecifična antitela prema pronalasku za upotrebu u metodi lečenja karcinoma kod subjekta, koji uključuje primenjivanje na subjektu terapijski efikasne količine antagonističkog antitela koje specifično vezuje PD-1 sadržavajući VH od SEK ID BR: 48 i VL od SEK ID BR: 56 za vreme dovoljno za lečenje karcinoma.
[0513] Bilo koje od ovde opisanih PD-1 ili bispecifičnih PD-1/TIM-3 antitela prema pronalasku može biti se korišćeno prema pronalasku.
[0514] "Lečiti" ili "lečenje" se odnosi na terapijski tretman pri čemu je cilj da se uspori (smanji) neželjena fiziološka promena ili bolest, kao što je razvoj ili širenje tumora ili tumorskih ćelija, ili da se obezbedi povoljan ili željeni klinički ishod tokom lečenja. Povoljni ili željeni klinički ishodi uključuju ublažavanje simptoma, smanjenje obima bolesti, stabilizovano (tj. ne pogoršanje) stanje bolesti, odlaganje ili usporavanje progresije bolesti, nedostatak metastaza, poboljšanje ili ublažavanje stanja bolesti i remisija (delimična ili potpuna), bez obzira da li se može detektovati ili se ne može detektovati. "Lečenje" takođe može značiti produženje preživljavanja u poređenju sa očekivanim preživljavanjem ako subjekt nije bio na lečenju. Oni kojima je potrebno lečenje uključuju one subjekte koji već imaju neželjenu fiziološku promenu ili bolesti, kao i one koji su skloni fiziološkoj promeni ili bolesti.
[0515] "Terapijski efikasna količina" se odnosi na količinu efikasnu, u dozama i tokom vremenskim perioda neophodnih za postizanje željenog terapijskog rezultata. Terapijski efikasna količina antitela prema pronalasku može varirati zavisno od faktora kao što su stanje bolesti, dob, pol i težina pojedinca, i sposobnost antitela prema pronalasku da izazove željeni odgovor kod pojedinca. Primer pokazatelja efikasnog terapeutika ili kombinacije terapeutika uključuje, na primjer, poboljšanu dobrobit pacijenta, smanjenje tumorskog opterećenja, zaustavljen ili usporen rast tumora i/ili odsustvo metastaza ćelija karcinoma na druga mesta u telu.
Kombinacija terapija za lečenje karcinoma
[0516] Antitela prema pronalasku mogu bti primenjena u kombinaciji sa drugim terapijskim agensom.
[0517] Antitela prema pronalasku mogu bti primenjena u kombinaciji sa jednim, dva, tri, četiri, pet ili šest dodatnih terapijsih agenasa.
[0518] Bilo koje od antagonističkih antitela koja specifično vezuju PD-1 ili antagonistička bispecifična PD-1ATIM-3 antitela prema pronalasku mogu biti korišćena u kombinaciji sa drugim terapijskim agensom.
[0519] Bilo koje od antagonističkih antitela koja specifično vezuju PD-1 ili antagonistička bispecifična PD-1ATIM-3 antitela prema pronalasku mogu biti korišćena u kombinaciji sa jednim, dva, tri, četiri, pet ili šest dodatnih terapijskih agenasa.
[0520] "U kombinaciji sa" se odnosi na primenjivanje antitela prema pronalasku i najmanje jednog drugog terapijskog agensa istovremeno kao pojedinačnih agenasa ili uzastopno kao pojedinačnih agenasa u bilo kom redosledu.Generalno, svaki agens će biti primenjen u dozi i/ili u vremenskom rasporedu određenom za taj agens.
[0521] U nekim izvođenjima, drug terapijski agens modulira aktivnost molekula uključenog u ciklus imuniteta na karcinom, napr. molekua uključen u stimulativne ili inhibitorne puteve koji funkcionišu u oslobađanju antigena ćelije karcinoma, prezentaciji antigena karcinoma, pripremanju i aktivaciji Tćelije, prometu T ćelija u tumore, infiltraciji T ćelija u tumore, prepoznavanju ćelija karcinoma od strane T ćelija i ubijanju ćelija karcinoma. Ciklus imuniteta na karcinom je opisan u Chen and Mellman (2013) Immunity 39:1-10. U nekim izvođenjima, drugi terapijskii agens modulira aktivnost molekula uključenog u regulaciju aktivnosti T regulatornih ćelija (Treg), kostimulativnih ili koihibitornih liganada eksprimiranim na tumorima, aktivirajućih ili inhibitornih receptora na prirodnim ćelijama ubicama (NK) ili imunosupresivnih faktora u mikrookruženju tumora. Kombinovane imunoterapije karcinoma su opisane u Manoney et al., (2015) Nature Reviews 14:561-584.
[0522] Drugi terapijski agens obično pojačava aktivnost stimulativnih molekula i potiskuje aktivnost inhibitornih molekula, kao što je dobro poznato. Dakle, "modulirati" se odnosi na poboljšanje imunološkog odgovora drugim terapijskim agensom, budući da je agen sam po sebi agonist ili antagonist specifičnog molekula.
[0523] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku se primenjuju u kombinaciji sa inhibitorom inhibitornog molekula T ćelije.
[0524] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku se primenjuju u kombinaciji sa inhibitorom inhibitornog molekula T ćelije PD-1, PD-L1, PD-L2, VISTA, BTNL2, B7-H3, B7-H4, HVEM, HHLA2, CTLA-4, LAG-3, TIM-3, BTLA, CD160, CEACAM-1, LAIR1, TGF! , IL-10, Siglec proteinom familije Siglec, KIR, CD96, TIGIT, NKG2A, CD112, CD47, SIRPA ili CD244.
[0525] U nekim izvođenjima, KIR je KIR2DL1, KIR2DL2 ili KIR2DL3.
[0526] Inhibicija inhibitornih molekula može biti izvedena inhibicijom na novou DNK, RNK ili proteina. U nekim izvođenjima, inhibitorna nukleinska kiselina (npr. dsRNA, siRNA ili shRNA) je korišćena za inhibira ekspresiju inhibitornog molekula.
[0527] U nekim izvođenjima, inhibitor inhibitornog molekula je rastvorljivi ligand inhibitornog molekula.
[0528] U nekim izvođenjima, inhibitor inhibitornog molekula je antagonističko antitelo koje specifično vezuje inhibitorni molekul.
[0529] U nekim izvođenjima, inhibitor inhibitornog molekula je CTLA-4-Fc ili TIM-3-Fc fuzioni protein.
[0530] U nekim izvođenjima, inhibitor inhibitornog molekula je antitelo ili fragment antitela koji vezuje PD-1, PD-L1, PD-L2, VISTA, BTNL2, B7-H3, B7-H4, HVEM, HHLA2, CTLA-4, LAG-3, TIM-3, BTLA, CD160, CEACAM-1, LAIR1, TGFβ, IL-10, Siglec family protein, KIR, CD96, TIGIT, NKG2A, CD112, CD47, SIRPA ili CD244.
[0531] Primeri anti-PD-1 antitela koja mogu biti korišćena u metodama prema pronalasku su ona opisana ovde i u US patentima brojeva 5,897,862 and 7,488,802, i u Međunarodnim patentnim objavama brojeva WO2004/004771, WO2004/056875, WO2006/121168, WO2008/156712, WO2010/029435, WO2010/036959, WO2011/110604, WO2012/145493, WO2014/194302, WO2014/206107, WO2015/036394, WO2015/035606, WO2015/085847, WO2015/112900 i WO2015/112805. Primer anti-PD1 antitela uključuje KEYTRUDA® (pembrolizumab) i OPDIVO® (nivolumab).
[0532] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku se primenjuju u kombinaciji sa rastvorljivim PD-1 ligandom.
[0533] U nekim izvođenjima, rastvorljiv PD-1 ligand je rastvorljiv PD-L1 ili rastvorljiv PD-L2 fuzionisan na Fc.
[0534] U nekim izvođenjima, rastvorljiv PD-1 ligand je AMP-224.
[0535] U nekim izvođenjima, antitela prema pronalasku se primenjuju u kombinaciji sa anti-PD-L1antitelom, ili njihovim fragmentima koji se vezuju za antigen..
[0536] Primer PD-L1 antitela koja mogu biti korišćena u metodama prema pronalasku su antitela
MDPL3280A (Genentech/Roche) i druga humana monoklonalna antitela objavljena u U.S. Patent Br. 7,943,743 i U.S Patentna objava br.20120039906. Drugi agensi koji vezuju anti-PD-L1 uključuju YW243.55.S70 (varijabilni regioni teškog i lakog lanca su prikazani u SEK ID BRi 20 i 21 u WO2010/077634) i MDX-1105 (takođe se odnosi na BMS-936559, i, npr., anti-PD-L1 vezujući agensi objavljeni u WO2007/005874). Ovdje su otkrivene VH i VL sekvence anti-PD-L1 antitela durvalumaba, atezolimumaba i avelumaba koje mogu biti korišćene.
[0537] Primer PD-L2 antitela koja mogu biti korišćena u metodama prema pronalasku su ona opisana u U.S. Patent Bri.
8,080,636, 8,188,238, U.S. Patentnoj objavi br.20110271358 i Međunarodnoj Patentnoj objavi br. WO2012145493.
[0538] Primer B7-H4 antitela koja mogu biti korišćena u metodama prema pronalasku su ona opisana u U.S. Patent Bri.
7,888,477, 8,609,816, 7,931,896, Evropski Patent Br. 1817055, U.S. Patenntna objava brojeva US20140037551 i US2014029486, i Međunarodnoj Patentnoj objavi brojeva WO2014/100483 i WO2014/159835.
[0539] Primer anti-CTLA-4 antitela koja mogu biti korišćena u metodama prema pronalasku su ipilimumab (MDX-010, CAS Br.
477202-00-9) i tremelimumab (IgG2 monoklonalno antitelo dostupno od Pfizera, ranije poznato kao ticilimumab, CP-675,206).
[0540] Primer anti-LAG-3 antitela koja mogu biti korišćena u metodama prema pronalasku su ona opisana na primer u Međunarodnoj Patentnoj objavi brojeva WO2008/132601 i WO2010/019570.
[0541] Primer anti-CEACAM-1 antitela koja mogu biti korišćena u metodama prema pronalasku su ona opisana u U.S. Patent Br.
8,598,322 i u U.S. Patentnoj objavi brojeva US2004/0047858, US20140271618 i US20120100158. Bez želje da bude vezan nekom posebnom teorijom, CEACAM-1 je opisan kao ligand i partner TIM-3 (videti npr. Međunarodnu Patentnu objavu br. WO2014/022332). Sinergijski in vivo efekat kombinacije anti-TIM-3 i anti-CEACAM-1 antitela su otkrivena u modelima ksenografta karcinoma (videti npr. Međunarodnu Patentnu objavu br.WO2014/022332). Tumori mogu koristiti CEACAM-1 da inhibiraju imunološki sistema. Zbog toga anti-CEACAM-1 antitela mogu biti korišćena u kombinaciji sa ovde opisanim antitelima prema pronalasku.
[0542] Primer anti-LAIRl antitela koja mogu biti korišćena u metodama prema pronalasku su ona opisana u U.S. Patent Br.
6,479,638 i Međunarodnoj Patentnoj objavi br.WO2010/078580.
[0543] Primer anti-CD96 antitela koja mogu biti korišćena u metodama prema pronalasku su ona opisana u Međunarodnoj Patentnoj objavi br. WO2015/024060.
[0544] Primer anti-TIM-3 antitela koja mogu biti korišćena u metodama prema pronalasku su ona opisana ovde i u Međunarodnoj Patentnoj objavi brojeva WO2011/155607, WO2013/006490 i WO2015/117002.
[0545] Primer anti-TIGIT antitela koja mogu biti korišćena u metodama prema pronalasku su ona opisana u U.S. Patent objavi brojeva. US20140056890 i US20150216970. Primer anti-TIGIT antitela je RG-6058 (MTIG-7192A).
[0546] Ovde je nađeno da je ekspresija TIGIT povišena u CD8<+>T ćelijama izolovanim iz tumora nakon tretmana anti-TIM-3 antitelom na životinjskim modelima karcinoma. Zbog toga, terapijska primena antagonističkih antitela koja specifično vezuju TIGIT na subjektu koji je već primio ili prima terapiju anti-TIM-3 antitelom, je otporna na lečenje anti-TIM-3 antitelom ili se ponovo javila nakon ili tokom lečenja anti-TIM-3 antitelom može poboljšati klinički ishod pacijenata.
[0547] Primer anti-BTLA antitela koja mogu biti korišćena u metodama prema pronalasku su ona opisana u U.S.Patent Br.
8,546,541, 7,479,544, 8,188,232, 8,247,537, 8,563,694 i u Međunarodnoj Patentnoj objavi brojeva WO2014184360.
[0548] Primer anti-HVEM antitela koja mogu biti korišćena u metodama prema pronalasku su ona opisana u U.S. Patentnoj objavi br.US20110280866.
[0549] Primer CD47 antitela koja mogu biti korišćena u metodama prema pronalasku su ona opisana u U.S. Patent Br.
8,101,719.
[0550] Primer CD244 antitela koja mogu biti korišćena u metodama prema pronalasku su ona opisana u U.S. Patent Br.
5,688,690.
[0551] U nekim izvođenjima, antagonistička antitela koja specifično vezuju PD-1 prema pronalasku ili antagonistička bispecifična PD-1/TIM-3 antitela prema pronalasku se primenjuju u kombinaciji sa anti-TIM-3 antitelom ili njegovim fragmentom koji vezuje antigen.
[0552] U nekim izvođenjima, antagonistička antitela koja specifično vezuju PD-1 prema pronalasku ili antagonistička bispecifična PD-1/TIM-3 antitela prema pronalasku se primenjuju u kombinaciji sa anti- PD-L1 antitelom ili njegovim fragmentom koji vezuje antigen.
[0553] U nekim izvođenjima, antagonistička antitela koja specifično vezuju PD-1 prema pronalasku ili antagonistička bispecifična PD-1/TIM-3 antitela prema pronalasku se primenjuju u kombinaciji sa anti- PD-L2 antitelom ili njegovim fragmentom koji vezuje antigen.
[0554] U nekim izvođenjima, antagonistička antitela koja specifično vezuju PD-1 prema pronalasku ili antagonistička bispecifična PD-1/TIM-3 antitela prema pronalasku se primenjuju u kombinaciji sa anti- VISTA antitelom ili njegovim fragmentom koji vezuje antigen.
[0555] U nekim izvođenjima, antagonistička antitela koja specifično vezuju PD-1 prema pronalasku ili antagonistička bispecifična PD-1ATIM-3 antitela prema pronalasku se primenjuju u kombinaciji sa anti- BTNL2 antitelom ili njegovim fragmentom koji vezuje antigen.
[0556] U nekim izvođenjima, antagonistička antitela koja specifično vezuju PD-1 prema pronalasku ili antagonistička bispecifična PD-1ATIM-3 antitela prema pronalasku se primenjuju u kombinaciji sa anti- B7-H3 antitelom ili njegovim fragmentom koji vezuje antigen.
[0557] U nekim izvođenjima, antagonistička antitela koja specifično vezuju PD-1 prema pronalasku ili antagonistička bispecifična PD-1ATIM-3 antitela prema pronalasku se primenjuju u kombinaciji sa anti- B7-H4 antitelom ili njegovim fragmentom koji vezuje antigen.
[0558] U nekim izvođenjima, antagonistička antitela koja specifično vezuju PD-1 prema pronalasku ili antagonistička bispecifična PD-1ATIM-3 antitela prema pronalasku se primenjuju u kombinaciji sa anti- HVEM antitelom ili njegovim fragmentom koji vezuje antigen.
[0559] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-HLA2 antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen [0560] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-CTLA-4 antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0561] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-LAG-3 antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0562] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-TIM-3 antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0563] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-BTLA antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0564] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-CD 160 antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0565] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-CEACAM-1 antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0566] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-LAIR1 antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0567] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-TGF• antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0568] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1/TIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-IL-10 antitelom ili fragmentom od njega koji se vezuje za antigen.
[0569] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-TIGIT antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0570] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-KIR antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0571] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-NKG2A antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0572] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-CD 112 antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0573] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1/TIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-CD47 antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0574] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-SIRPA antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0576] Molekuli koji inhibiraju imunitet mogu regulisati ili sinergistički regulisati funkcije T-ć elija da bi promovisali tumorsko imunološko bekstvo. Prema tome, kombinovane terapije sa dva ili više inhibitora inhibitornih molekula mogu pružiti poboljšanu terapiju za pacijenta u poređenju sa monoterapijom.
[0577] U nekim realizacijama, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa aktivatorom aktivirajuć eg molekula.
[0578] U nekim realizacijama, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa aktivatorom aktivirajuć eg molekula CD86, CD80, CD28, ICOS, ICOS ligandom, TMIGD2, CD40, GITR ligandom, 4-1BB ligandom, OKS40 ligandom, ligandom OKS40 , CD40L, TNFRSF25, LIGHT, GITR, OKS-40, CD27, CD137, NKG2D, CD48, CD226 ili MICA.
[0579] Aktivacija aktivirajuć ih molekula može da se izvede koriš ć enjem na primer rastvorljivih liganada ili derivata liganda aktivirajuć ih molekula, peptida ili agonističkih antitela.
[0580] U nekim realizacijama, aktivator aktivirajuć eg molekula je rastvorljivi ligand molekula koji aktivira T ć elije.
[0581] U nekim realizacijama, aktivator aktivirajuć eg molekula je agonističko antitelo koje specifično vezuje aktiviraju ć i molekul.
[0582] Primeri anti-CD40 antitela koja se mogu koristiti u metodama pronalaska uključuju CP-870,893 i humanizovani S2C6 opisani u US patentu br. 7,288,251 (antitelo 21.4.1) i US patentu br.8,303,955, respektivno, i anti- CD40 antitela opisana u Int. Patent Publ. br. VO2001/056603, VO2001/083755, VO2013/034904 i VO2014/070934.
[0583] Primeri GITR agonista uključuju, npr., GITR fuzione proteine i anti-GITR antitela (npr. bivalentna anti-GITR antitela), kao što su GITR fuzioni protein opisan u US patentu br. 6,111,090, evropskom patentu br. 090505B1, US Patent br. 8,586,023, Int. Patent. Publ. br. VO2010/003118 i VO2011/090754, ili anti-GITR antitelo opisano u US patentima br. Patent Publ. VO2011 / 028683, VO2013 / 039954, VO2005 / 007190, VO2007 / 133822, VO2005 / 055808, VO1999 / 40196, VO2001 / 03720, VO2009 / 20758, VO2006 / 083289, VO2005 / 115451 i VO2011 / 051726.
[0584] Ovde je utvrđeno, na životinjskim modelima raka, da je ekspresija GITR povišena u CD8+ T ć elijama izolovanim iz tumora posle tretmana anti-PD-1. Obnavljanje ekspresije GITR na TIL anti-PD-1 tretmanom podržava da kombinovana terapija sa anti-GITR i anti-PD-1 antitelima može poboljšati klinički ishod pacijenata.
[0585] Pronalazak takođe obezbeđuje antitela prema pronalasku za upotrebu u metodi lečenja raka kod subjekta, koji obuhvata davanje subjektu kome je to potrebno terapeutski efikasne količine antagonističkog antitela koje specifično vezuje PD-1 i agonista. antitelo koje specifično vezuje GITR za vreme dovoljno za lečenje raka.
[0586] U nekim realizacijama, agonističko antitelo koje se specifično vezuje za GITR se primenjuje nakon primene antagonističkog antitela koje specifično vezuje PD-1.
[0587] U nekim realizacijama, agonističko antitelo koje specifično vezuje GITR i antagonističko antitelo koje se specifično vezuje za PD-1 daju se istovremeno kao pojedinačni agensi ili uzastopno kao pojedinačni agensi u bilo kom redosledu.
[0588] Primeri antitela OKS40 koja se mogu koristiti u postupcima pronalaska uključuju ona opisana u U.S. Patent Nos.
8,133,983, 7,960,515, U.S. Patent Publ. br.20130280275 i Int. Patent Publ. br. VO2013028231 i VO2014148895.
[0589] Primer OKS40 antitela koje se može koristiti u metodama pronalaska je antitelo koje sadrži VH SEK ID NO: 309 i VL SEK ID NO: 310.
[0590] Još jedan primer antitela OKS40 koje se može koristiti u metodama pronalaska je antitelo koje sadrži VH SEK ID NO: 311 i VL SEK ID NO: 312.
[0591] Ovde je pronađeno da je ekspresija OKS40 povišena u CD8+ T ć elijama izolovanim iz tumora posle tretmana anti-PD-1 antitelom na životinjskim modelima raka. Obnavljanje ekspresije OKS40 na TIL anti-PD-1 tretmanom podržava da kombinovana terapija sa anti-OKS40 i anti-PD-1 antitelima može poboljšati klinički ishod pacijenata.
[0592] Pronalazak takođe obezbeđuje antitela prema pronalasku za upotrebu u metodi lečenja karcinoma kod subjekta, koji obuhvata davanje subjektu kome je to potrebno terapeutski efikasne količine antagonističkog antitela koje specifično vezuje PD-1 i agonista. antitelo koje specifično vezuje OKS40 za vreme dovoljno za lečenje raka.
[0593] U nekim realizacijama, agonističko antitelo koje se specifično vezuje za OKS40 se primenjuje nakon primene antagonističkog antitela koje specifično vezuje PD-1.
[0594] U nekim realizacijama, agonističko antitelo koje se specifično vezuje za OKS40 i antagonist antitelo koje se specifično vezuje za PD-1 daju se istovremeno kao pojedinačni agensi ili uzastopno kao pojedinačni agensi u bilo kom redosledu.
[0595] Primeri CD70 antitela koja se mogu koristiti u postupcima pronalaska uključuju ona opisana u U.S. Patent Objava. broj US20130336976.
[0596] Primeri antitela na TNFRSF25 koja se mogu koristiti u postupcima pronalaska uključuju ona opisana u U.S. Patentu br.
7,708,996.
[0597] Primeri CD27 antitela koja se mogu koristiti u postupcima pronalaska uključuju ona opisana u U.S. Patent Publ. br. US20130336976.
[0598] Primeri CD137 antitela koja se mogu koristiti u postupcima pronalaska uključuju ona opisana u US patentima br. br. US20130149301.
[0599] Ovde je pronađeno da je ekspresija CD137 povišena u CD8+ T ć elijama izolovanim iz tumora posle tretmana anti-PD-1 antitelom na životinjskim modelima raka. Obnavljanje ekspresije CD137 na TIL anti-PD-1 tretmanom podržava da kombinovana terapija sa anti-CD 137 i anti-PD-1 antitelima može poboljšati klinički ishod pacijenata.
[0600] Pronalazak takođe obezbeđuje antitela prema pronalasku za upotrebu u metodi lečenja karcinoma kod subjekta, koji obuhvata davanje subjektu kome je to potrebno terapeutski efikasne količine antagonističkog antitela koje specifično vezuje PD-1 i agonist antitelo koje specifično vezuje CD137 za vreme dovoljno za lečenje raka.
[0601] U nekim realizacijama, agonist antitelo koje specifično vezuje CD137 se primenjuje nakon primene antagonističkog antitela koje specifično vezuje PD-1.
[0602] U nekim realizacijama, agonističko antitelo koje specifično vezuje CD137 i antagonističko antitelo koje se specifično vezuje za PD-1 daju se istovremeno kao pojedinačni agensi ili uzastopno kao pojedinačni agensi u bilo kom redosledu.
[0602] Primeri NKG2D antitela koja se mogu koristiti u postupcima pronalaska uključuju ona opisana u U.S. Patent Publ. br. US20110150870.
[0604] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-CD86 antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0605] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-CD80 antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0606] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-CD28 antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0607] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1/TIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-ICOS antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0608] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-ICOS ligand antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0609] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-TMIGD2 antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0610] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-CD40 antitelom ili antigenom ili njegovim vezivnim fragment.
[0611] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-GITR ligand antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0612] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1/TIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-4-1BB ligand antitelom ili antigen-vezujuć im antitelom. njegov fragment.
[0613] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-OKS40 ligand antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0614] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-CD70 antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0615] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-CD40L antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0612] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1/TIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-4-1BB ligand antitelom ili antigen-vezujuć im antitelom. njegov fragment.
[0613] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-OKS40 ligand antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0614] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-CD70 antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0615] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-CD40L antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0616] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-TNFRSF25 antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0617] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-LIGHT antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0618] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-GITR antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0619] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-OKS40 antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0620] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-CD27 antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0621] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-CD137 antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0622] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-NKG2D antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0623] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-CD48 antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0624] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-CD226 antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0625] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-MICA antitelom ili njegovim fragmentom koji se vezuje za antigen.
[0626] Kombinacija ovde navedenih antitela može se davati odvojeno, npr., kao posebna antitela, ili povezana, npr., kao bispecifični ili trispecifični molekul antitela.
[0627] Efikasnost kombinacija opisanih ovde može biti testirana na životinjskim modelima poznatim u tehnici.
[0628] Antitela pronalaska opisana ovde mogu da se primenjuju u kombinaciji sa vakcinom.
[0629] Primeri vakcina su imunogeni agensi, kao što su ć elije raka, prečiš ć eni tumorski antigeni (uključuju ć i rekombinantne proteine, epitope antigena, peptide i molekule ugljenih hidrata), tumorski antigeni koji se isporučuju pacijentu putem genske terapije, ć elije i ć elije transfektovane genima koji kodiraju imuni sistem. stimulišu ć i citokini. Primeri vakcina koje se mogu koristiti uključuju peptide antigena melanoma, kao što su peptidi gp100, MAGE antigeni, Trp-2, MART1 i/ili tirozinaza, ili tumorske ć elije transfektovane da eksprimiraju citokin GM-CSF, vakcine zasnovane na DNK, RNK- vakcine zasnovane na virusnoj transdukciji, peptide ili antigene prostate ili peptide antigena raka pluć a. Vakcina protiv raka može biti profilaktička ili terapeutska.
[0630] Osmišljene su mnoge eksperimentalne strategije za vakcinaciju protiv tumora (videti Rosenberg, S., 2000, Razvoj vakcina protiv raka, ASCO Educational Book Spring: 60-62; Logothetis, C., 2000, ASCO Educational Book Spring: 300- 302; Khaiat, D. 2000, ASCO Educational Book Spring: 414-428; Foon, K. 2000, ASCO Educational Book Spring: 730-738; vidi takođe Restifo, N. i Sznol, M., Vakcine protiv raka, Ch. 61 , str. 3023-3043 u DeVita, V. i saradnici (ur.), 1997, Rak: Principi i praksa onkologije, Peto izdanje). U jednoj od ovih strategija, vakcina se priprema korišć enjem autolognih ili alogenih tumorskih ć elija. Pokazalo se da su ove ć elijske vakcine najefikasnije kada se tumorske ć elije transduciraju da eksprimiraju GM-CSF. Pokazalo se da je GM-CSF snažan aktivator prezentacije antigena za vakcinaciju protiv tumora (Dranoff et al., (1993) Proc Natl Acad Sci U.S.A.90: 3539-43).
[0631] Ovde opisana antitela pronalaska mogu se davati u kombinaciji sa jednim ili kolekcijom rekombinantnih proteina i/ili peptida eksprimiranih u ili na tumoru da bi se stvorio imuni odgovor na ove proteine. Ove proteine imuni sistem normalno posmatra kao auto-antigene i stoga je tolerantan na njih. Tumorski antigen može takođe uključivati protein telomerazu, koji protein je neophodan za sintezu telomera hromozoma i koji se eksprimuje u više od 85% humanih karcinoma i samo u ograničenom broju somatskih tkiva (Kim et al., (1994) Nauka 266: 2011-2013). Tumorski antigeni mogu takođe biti „neoantigeni“ eksprimirani u ili na ć elijama raka kao rezultat somatskih mutacija koje menjaju sekvencu proteina ili stvaraju fuzione proteine između dve nepovezane sekvence (npr. bcr-abl u hromozomu Filadelfije), ili idiotip iz B. tumori ć elija. Tumorski antigeni mogu biti epitopi antigena prostate specifičnog antigena (PSA), mezotelina, antigena specifičnog za prostatu (PSMA), sinovijalnog sarkoma Ks2 (SSKS2), NKKS3.1, kisele fosfataze prostate (PAP) ili receptora epidermalnog faktora rasta, ili peptidi specifični za varijante EGFR kao što je dobro poznati EGFRvIII prekomerno eksprimiran na tumorskimć elijama.
[0632] Druge vakcine protiv tumora mogu uključivati proteine iz virusa koji su umešani u humani karcinom, kao što su humani papiloma virusi (HPV), virusi hepatitisa (HBV i HCV) i Kapošijev virus herpes sarkoma (KHSV) i Epstein-Barr virus (EBV). Drugi oblik tumorski specifičnih antigena koji se može koristiti u kombinaciji sa ovde opisanim antitelima prema pronalasku su prečišć eni proteini toplotnog šoka (HSP), izolovani iz samog tumorskog tkiva. HSP sadrži fragmente proteina iz tumorskih ć elija i veoma je efikasan u isporuci ć elijama koje predstavljaju antigen za izazivanje imuniteta tumora (Suot i Srivastava (1995) Science 269:1585-1588; Tamura et al., (1997) Science 278:117- 120).
[0633] Dendritične ć elije (DC) su potentne ć elije koje predstavljaju antigen i koje se mogu koristiti za primanje antigenspecifičnih odgovora. DC se mogu proizvoditi ex vivo i puniti različitim proteinskim i peptidnim antigenima, kao i ekstraktima tumorskih ć elija (Nestle et al., (1998) Nature Medicine 4: 328-332). DC se takođe mogu transducirati genetskim sredstvima za ekspresiju ovih tumorskih antigena. DC su takođe spojeni direktno sa tumorskim ć elijama u svrhu imunizacije (Kugler et al., (2000) Nature Medicine 6:332-336). Kao metod vakcinacije, DC imunizacija se može efikasno kombinovati sa ovde opisanim antitelima prema pronalasku da bi se aktivirali snažniji antitumorski odgovori.
[0634] U nekim realizacijama, vakcina je polipeptid ili njegov fragment, ili DNK ili RNK koja kodira polipeptid ili njegov fragment eksprimiran na tumorskimć elijama.
[0635] U nekim realizacijama, polipeptid ili njegov fragment eksprimiran na tumorskim ć elijama je PSMA.
[0636] U nekim realizacijama, polipeptid ili njegov fragment eksprimiran na tumorskim ć elijama je mezotelin.
[0637] U nekim realizacijama, polipeptid ili njegov fragment eksprimiran na tumorskim ć elijama je EGFR ili EGFR varijanta kao što je EGFRvIII.
[0638] U nekim realizacijama, polipeptid ili njegov fragment eksprimiran na tumorskim ć elijama je PAP.
[0639] U nekim realizacijama, polipeptid ili njegov fragment eksprimiran na tumorskim ć elijama je sinovijalni sarkom Ks2 (SSKS2).
[0640] U nekim realizacijama, polipeptid ili njegov fragment eksprimiran na tumorskim ć elijama je NKKS3.1.
[0641] U nekim realizacijama, tumorske ć elije su melanom, rak plu ć a, skvamozni karcinom plu ć a ne-malih ć elija (NSCLC), neskvamozni NSCLC, kolorektalni kancer, rak prostate, rak prostate otporan na kastraciju, rak jajnika, rak želuca, karcinom jetre, karcinom pankreasa, karcinom štitne žlezde, karcinom skvamoznih ć elija glave i vrata, karcinom jednjaka ili gastrointestinalnog trakta ilić elije raka dojke.
[0642] U nekim realizacijama, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa vakcinom protiv karcinoma bubrega (RCC).
[0643] U nekim realizacijama, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa vakcinom protiv raka pluć a.
[0644] U nekim realizacijama, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa vakcinom protiv raka prostate.
[0645] U nekim realizacijama, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa vakcinom protiv raka pluć a.
[0636] U nekim realizacijama, polipeptid ili njegov fragment eksprimiran na tumorskim ć elijama je mezotelin.
[0637] U nekim realizacijama, polipeptid ili njegov fragment eksprimiran na tumorskim ć elijama je EGFR ili EGFR varijanta, kao što je EGFRvIII.
[0638] U nekim realizacijama, polipeptid ili njegov fragment eksprimiran na tumorskim ć elijama je PAP.
[0639] U nekim realizacijama, polipeptid ili njegov fragment eksprimiran na tumorskim ć elijama je sinovijalni sarkom Ks2 (SSKS2).
[0640] U nekim realizacijama, polipeptid ili njegov fragment eksprimiran na tumorskim ć elijama je NKKS3.1.
[0641] U nekim realizacijama, tumorske ć elije su melanom, rak plu ć a, skvamozni karcinom plu ć a ne-malih ć elija (NSCLC), neskvamozni NSCLC, kolorektalni kancer, rak prostate, rak prostate otporan na kastraciju, rak jajnika, rak želuca, karcinom jetre, karcinom pankreasa, karcinom štitne žlezde, karcinom skvamoznih ć elija glave i vrata, karcinom jednjaka ili gastrointestinalnog trakta ilić elije raka dojke.
[0642] U nekim realizacijama, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa vakcinom protiv karcinoma bubrega (RCC).
[0643] U nekim realizacijama, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa vakcinom protiv raka pluć a.
[0644] U nekim realizacijama, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa vakcinom protiv raka prostate.
[0645] U nekim realizacijama, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa vakcinom protiv raka pluć a.
[0646] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1/TIM-3 antitela iz pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa tumorskom vakcinom koja sadrži peptidni fragment EGFR ili EGFRvIII, ili vektor koji kodira peptidni fragment EGFR ili EGFRvIII.
[0647] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa vakcinom protiv tumora koja sadrži peptidni fragment mezotelina, ili vektor koji kodira peptidni fragment mezotelina.
[0648] U nekim realizacijama, antagonist antitela koja specifično vezuju PD-1 pronalaska ili antagonist bispecifična PD-1ATIM-3 antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa vakcinom protiv tumora koja sadrži peptidni fragment antigena specifičnog za prostatu, ili vektor koji kodira peptidni fragment specifičnog antigena prostate.
[0649] Pogodni vektori koji se mogu koristiti u metodama pronalaska su dobro poznati i uključuju lentivirusne vektore, adenovirusne vektore, vektor minimalne nukleinske kiseline (MNAV), virusne vakcinije, virus boginja, VRP izveden iz alfa virusa, Saccharomices cerevisiae, MVA, Listeria moon , plazmid na bazi pVAKS, vidi npr. Pol et al., (2014) Oncoimmunologi 1(3):e28185.
[0650] Antitela prema pronalasku se može dati u kombinaciji sa standardnim tretmanom za lečenje raka.
[0651] Ovde opisana antitela pronalaska mogu se davati u kombinaciji sa standardnim hemoterapijskim režimima za lečenje raka. U ovim slučajevima, može biti mogu ć e smanjiti dozu primenjenog hemoterapeutskog reagensa (Mokir et al., (1998) Cancer Research 58: 5301-5304).
[0652] U nekim realizacijama, antitela pronalaska mogu da se primenjuju u kombinaciji sa jednim ili više drugih molekula antitela, hemoterapijom, drugom terapijom protiv raka (npr. ciljane terapije protiv raka, ili onkološki lekovi), citotoksičnim agensima, citokini, hirurške procedure i/ili zračenje.
[0653] Primeri citotoksičnih agenasa koji se mogu primenjivati u kombinaciji sa antitelima pronalaska uključuju antimikrotubularne agense, inhibitore topoizomeraze, antimetabolite, mitotičke inhibitore, agense za alkilovanje, antracikline, vinka alkaloide, interkalirajuć e agense, agense za interkalaciju koji mogu da interferiraju signalni put., agensi koji promovišu apoptozu, inhibitori proteozoma i zračenje (npr. lokalno ili zračenje celog tela).
[0654] Standardne terapije za negu uključuju anastrozol (Arimidex®), bikalutamid (Casodex®), bleomicin sulfat (Blenoxane®), busulfan (Myleran®), busulfan injekciju (Busulfex®), kapecitabin (Xeloda®), N4-pentoksikarbonil 5-deoksi-5-fluorocitidin, karboplatin (Paraplatin®), karmustin (BiCNU®), hlorambucil (Leukeran®), cisplatin (Platinol®), kladribin (Leustatin®), ciklofosfamid (Citoxan® ili Neosar®), citarabin, arabinozid (Cytosar-U®), injekcija liposoma citarabina (DepoCit®), dakarbazin (DTIC-Dome®), daktinomicin (Actinomicin D, Cosmegan), daunorubicin hidrohlorid (Cerubidine®), daunorubicin citrat lipozoma injekcija, (DepoCyt® ) dakarbazin (DTIC-Dome®), daktinomicin (Actinomicin D, Cosmegan), daunorubicin hidrohlorid (Cerubidine®), injekcija liposoma daunorubicin citrata (DaunoXsome®), deksametazon,docetaksel (Taxotere®), doksorubicin hidrohlorid (Adriamicin®, Rubex®), etopozid (Vepesid®), fludarabin fosfat (Fludara®), 5-fluorouracil (Adrucil®, Efudex®), flutamid (Eulexin®), tezacititi difluorodeoksicitidin), hidroksiurea (Hidrea®), idarubicin (Idamicin®), ifosfamid (IFEX®), irinotekan (Camptosar®), L-asparaginaza (ELSPAR®), leukovorin kalcijum, melfalan (Alkeran®), 6-merkaptopurin (Purinethol®), metotreksat (Folex®), mitoksantron (Novantrone®), paklitaksel (Taxol®), feniks90 (Ittrium /MKS-DTPA), pentostatin, polifeprosan 20 sa karmustinom im biljkom (Gliadel®), tamoksifen citratom (Nolvadex®), tenipozidom (Vumon®), 6-tioguaninom, tiotepom, tirapazaminom (Tirazone®), topotekan hidrohloridom za injekcije (Hycamptin ®), vinblastin (Velban®), vinkristin (Oncovin®), vinorelbin (Navelbine®), Ibrutinib, idelalisib i brentuksimab vedotin.
[0655] Primeri alkilirajućih agensa uključuju, azotne iperite, etilenimin derivative, alkil sulfonats, nitrozouree and triazene: uracil iperite (Aminouracil Mustard®, Chlorethaminacil®, Demethyldopan®, Desmethyldopan®, Haemanthamine®, Nordopan®, Uracil Nitrogen Mustard®, Uracillost®, Uracilmostaza®, Uramustin®, Uramustine®), chlormethine (Mustargen®), cyclophosphamide (Cytoxan®, Neosar®, Clafen®, Endoxan®, Procytox®, Revimmune™), ifosfamide (Mitoxana®), melphalan (Alkeran®), chlorambucil (Leukeran®), pipobroman (Amedel®, Vercyte®), triethylenemelamine (Hemel®, Hexalen®, Hexastat®), trietilenetiofosforamine, temozolomide (Temodar®), tiotepa (Thioplex®), busulfan (Busilvex®, Myleran®), karmustin (BiCNU®), lomustin (CeeNU®) i streptozocin (Zanosar®). Dodatni primeri alilirajućih agensa uključuju oksaliplatin (Eloxatin®), temozolomide (Temodar® and Temodal®), daktinomicin (poznat i kao "actinomycin-D", Cosmegen®), altretamine (poznat kao "hexamethylmelamine" (HMM), Hexalen®), bendamustin (Treanda®), karboplatin (Paraplatin®), lomustin (poznat i kao CCNU, CeeNU®), cisplatin (poznat i kao CDDP, Platinol® i Platinol®-AQ), hlorambucil (Leukeran®), prednumustin, prokarbazin (Matulane®), i tiotepa (takođe poznat i kao tiofosfoamid, TESPA i TSPA, Thioplex®).
[0656] Primeri antraciklina uključuju, e.g., dokssorubicin (Adriamycin® i Rubex®); bleomicin (Lenoxane®), daunorubicin (dauorubicin hydrochloride, daunomycin, i rubidomycin hydrochloride, Cerubidine®), daunorubicin liposomal (daunorubicin citrat liposom, DaunoXome®), mitoksantron (DHAD, Novantrone®), epirubicin (Ellence™), idarubicin (Idamycin®, Idamycin PFS®), mitomicin C (Mutamycin®), geldanamicin, herbimicin, ravidomicin, i desacetilravidomicin.
[0657] Primeri vinca alkaloida koji se mogu koristiti u kombinaciji sa antitelima pronalaska uključuju vinorelbin tartrat (Navelbine®), vincristin (Oncovin®), i vindesine (Eldisine®), vinblastin (takođe poznat kao vinblastin sulfate, vinkaleukoblastin i VLB, Alkaban-AQ® i Velban®) i vinorelbine (Navelbine®).
[0658] Primeri inhibitora proteozoma koji se mogu koristiti u kombinaciji sa antitelima pronalaska su bortezomib (Velcade®); carfilzomib (Kyprolis®), iksazomib (Ninlaro®), marizomib (NPI-0052) i delanzomib (CEP18770).
[0659] U nekim realizacijama, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa inhibitorom tirozin kinaze (npr., inhibitorom receptorske tirozin kinaze (RTK)). Primeri inhibitora tirozin kinaze uključuju inhibitor puta epidermalnog faktora rasta (EGF) (npr. inhibitor receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR)), inhibitor puta vaskularnog endotelnog faktora rasta (VEGF) (npr. receptor vaskularnog endotelnog faktora rasta (VEGFR) inhibitor (npr. inhibitor VEGFR1, inhibitor VEGFR-2, inhibitor VEGFR-3), inhibitor puta faktora rasta izvedenog iz trombocita (PDGF) (npr. inhibitor receptora faktora rasta izvedenog iz trombocita (PDGFR) (npr. PDGFRβ), inhibitor RAF-1, inhibitor KIT i RET inhibitor. U nekim realizacijama, drugi terapeutik je aksitinib (AG013736), bosutinib (SKI-606), cediranib (RECENTIN™, AZD2171), dasatinib(SPRYCEL®, BMS-354825), erlotinib (TARCEVA®), gefitinib (IRESSA®), imatinib (Gleevec®, CGP57148B, STI-571), lapatinib (TYKERB®, TYVERB®), lestaurtinib (CEP-701), neratinib (HKI-272), nilotinib (TASIGNA®), semaxanib (semaxinib, SU5416), sunitinib (SUTENT®, SU11248), toceranib (PALLADIA®), vandetanib (ZACTIMA®, ZD6474), vatalanib (PTK787, PTK/ZK), trastuzumab (HERCEPTIN®), bevacizumab (AVASTIN®), rituximab (RITUXAN®), cetuksimab (ERBITUX®), panitumumab (VECTIBIX®), ranibizumab (Lucentis®), nilotinib (TASIGNA®), sorafenib (NEXAVAR®), alemtuzumab (CAMPATH®), gemtuzumab ozogamicin (MYLOTARG®), ENMD2076, PCI-32765, AC220, dovitinib laktat (TKI258, CHIR-258), BIBW 2992 (TOVOK™), SGX523, PF-04217903, PF02341066, PF-299804, BMS-777607, ABT-869,MP470, BIBF 1120 (VARGATEF®), AP24534, JNJ-26483327, MGCD265, DCC-2036, BMS-690154, CEP-11981, tivozanib (AV-951), OSI-930, MM-121, XL-184, XL-647, XL228, AEE788, AG-490, AST-6, BMS-599626, CUDC-101, PD153035, pelitinib (EKB-569), vandetanib (zaktima), WZ3146, WZ4002, WZ8040, ABT-869 (linifanib), AEE788, AP24534 (ponatinib), AV-951 (tivozanib), axitinib, BAY 73-4506 (regorafenib), brivanib alaninate (BMS-582664), brivanib (BMS-540215), cediranib (AZD2171), CHIR-258 (dovitinib), CP 673451, CYC116, E7080, Ki8751, masitinib (AB1010), MGCD-265, motesanib difosphate (AMG-706), MP-470, OSI930, pazopanib hydrochloride, PD173074, Sorafenib Tosilat (Bay 43-9006), SU 5402, TSU-68 (SU6668), vatalanib, XL880 (GSK1363089, EXEL-2880). Odabrani inhibitori tirozin kinaze se biraju između sunitiniba, erlotiniba, gefitiniba ili sorafeniba. U nekim realizacijama, inhibitor EGFR je bispecifično EGFRc-Met antitelo (EM-1 mAb) koje sadrži teške i lake lance SEK ID NO: 249, 250, 251 i 252 (US2014/0141000).
[0660] U nekim realizacijama, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa inhibitorima receptora faktora rasta vaskularnog endotela (VEGF), uključujuć i bevacizumab (Avastin®), aksitinib (Inlyta®), brivanib alaninat (BMS582664, (S)-((R)-1-(4-(4-Fluoro-2-metil-1H-indol-5-iloksi)-5-metilpirolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6-iloksi)propan-2-il)2aminopropanoate), sorafenib (Nexavar®); Pazopanib (Votrient®), sunitinib malat (Sutent®), cediranib (AZD2171, CAS 288383-20-1), vargatef (BIBF1120, CAS 928326-83-4), foretinib (GSK1363089), telatinib (BAY57-9352, CAS 332012-40-5), apatinib (YN968D1, CAS 811803-05-1), imatinib (Gleevec®), ponatinib (AP24534, CAS 943319-70-8), tivozanib (AV951, CAS 475108-18-0), regorafenib (BAY73-4506, CAS 755037-03-7), vatalanib dihydrochloride (PTK787, CAS 212141-51-0), brivanib (BMS-540215, CAS 649735-46-6), vandetanib (Caprelsa® ili AZD6474), motesanib difos fat (AMG706, CAS 857876-30-3, N-(2,3-dihydro-3,3-dimethyl-1H-indol-6-yl)-2-[(4pirdinilmetil)amino]-3-piridinecarboksamid, opisano u PCT Objavi Br. WO 02/066470), dovitinib dilaktička kiselina (TKI258, CAS 852433-84-2), linfanib (ABT869, CAS 796967-16-3); Cabozantinib (XL184, CAS 849217-68-1), lestaurtinib (CAS 111358-88-4); N-[5-[[[5-(1,1-Dimetiletil)-2-oksazolil]metil]thio]-2-tiazolil]-4-piperidinecarboksamid (BMS38703, CAS 345627-80-7); (3R,4R)-4-Amino-1-((4-((3-methoxyphenyl)amino)pirolo[2, 1-f] [1,2,4]triazin-5 -il)metil)piperidin-3 -ol (BMS690514);
N-(3,4-Dichloro-2-fluorofenil)-6-metoksi-7-[[(3a,5β ,6a)-oktahidro-2-metilciclopenta[c]pirol-5il]
metoksi]-4-kvinazolin (XL647, CAS 781613-23-8); 4-Metil-3-[[1-metil-6-(3-piridinil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-il]amino]-N-[3-(trifluorometil)fenil]-benzamide (BHG712, CAS 940310-85-0); i aflibercept (Eylea®).
[0661] U nekim realizacijama, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa PI3K inhibitorom. U jednom aspektu, inhibitor PI3K je inhibitor delta i gama izoformi PI3K. Primeri PI3K inhibitora koji se mogu koristiti su opisani u, npr., WO 2010/036380, WO 2010/006086, WO 09/114870, WO 05/113556, GSK 2126458, GDC-0984, KSL7, 09841, GDC-09841, GDC-0984, KSL7. , PF-46915032, BKM 120, CAL-101, CAL 263, SF1126, PKS-886 i dvostruki PI3K inhibitor (npr. Novartis BEZ235).
[0662] U nekim realizacijama, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa mTOR inhibitorom, na primer, jednim ili više mTOR inhibitora izabranih između jednog ili više od rapamicina, temsirolimusa (TORISEL®), AZD8055, BEZ235, BGT226, KSL765, PF-4691502, GDC0980, SF1126, OSI-027, GSK1059615, KU-0063794, VIE-354, Palomid 529 (P529), PF-04691502 ili PKI-587. ridaforolimus (ranije poznat kao deferolimus, (1R,2R,4S)-4-[(2R)-2 [(1R,9S,12S,15R,16E,18R,19R,21R,23S,24E,26E,28Z,30S) , 32S,35R)-1,18-dihidroksi-19,30-dimetoksi15,17,21,23,29,35-heksametil-2,3,10,14,20-pentaokso-11,36-dioksa-4-azatriciklo [30.3.1.04,9] heksatriakonta16,24,26,28-tetraen-12-il]propil]-2-metoksicikloheksil dimetilfosfinat, takođe poznat kao AP23573 i MK8669, i opisan u PCT objavi br.3/VO64); everolimus (Afinitor® ili RAD001); rapamicin (AI22989, Sirolimus®); simapimod (CAS 164301-51-3); emsirolimus, (5-{2,4-Bis [(3S)-3-metilmorfolin-4-il]pirido[2,3-d]pirimidin-7-il} -2-metoksifenil)metanol (AZD8055); 2-amino-8-[trans-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil]-6-(6-metoksi-3-piridinil)-4-metil-pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)- jedan (PF04691502, CAS 1013101-36-4); i N2-[1,4-diokso-4-[[4-(4okso-8-fenil-4H-1-benzopiran-2-il)morfolinijum-4-il]metoksi]butil]-L-arginilglicil-L- a-aspartilL-serin-(SEK ID BR: 237), unutrašnja so (SF1126, CAS 936487-67-1) i KSL765.
[0663] U nekim realizacijama, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa BRAF inhibitorom, na primer, GSK2118436, RG7204, PLKS4032, GDC-0879, PLKS4720 i sorafenib tozilat (Bai 43-900).
[0664] U nekim realizacijama, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa inhibitorom MEK.
[0665] U nekim realizacijama, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa JAK2 inhibitorom, npr., CEP-701, INCB18424, CP-690550 (tasocitinib).
[0666] U nekim realizacijama, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa paklitakselom ili paklitaksel agensom, npr. TAXOL®, paklitakselom vezanim za proteine (npr. ABRAXANE®). Primeri paklitaksel agenasa uključuju paklitaksel vezan za nanočestice albumin (ABRAXANE, prodat od strane Abrakis Bioscience), paklitaksel vezan za dokozaheksaensku kiselinu (DHA-paklitaksel, taksopreksin, prodat od strane Protarga), poliglutamat vezan-paklitaksel, paclitakl-paclitak1, poliglutamat vezanpaclitak1k1, prodaje se od strane "Cell Therapeutic"), prolek koji se aktivira tumorom (TAP), ANG105 (Angiopep2 vezan za tri molekula paklitaksela, prodat od strane ImmunoGen), paklitaksel-EC-1 (paklitaksel vezan za peptid koji prepoznaje erbB2 vidi Li EC-1; al., Biopolimers (2007) 87:225-230), i paklitaksel konjugovan sa glukozom (npr. 2'paklitaksel metil2-glukopiranozil sukcinat, videti Liu etal., (2007) Bioorganic & Medicinal Chemistri Letters, 6172-17).
[0667] U nekim realizacijama, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa ć elijskom imunoterapijom (npr. Provenge (npr. Sipuleucel)), i opciono u kombinaciji sa ciklofosfamidom.
[0668] Primeri terapeutskih agenasa koji se mogu koristiti u kombinaciji sa antitelima pronalaska za lečenje karcinoma pankreasa uključuju hemoterapeutski agens, npr. paklitaksel ili paklitaksel agens (npr. formulaciju paklitaksela kao što je TAKSOL, nanočestice stabilizovane albuminom formulacija paklitaksela (npr. ABRAXANE) ili lipozomalna formulacija paklitaksela); gemcitabin (npr. gemcitabin sam ili u kombinaciji sa AKSP107-11); drugi hemoterapeutski agensi kao što su oksaliplatin, 5-fluorouracil, kapecitabin, rubitekan, epirubicin hidrohlorid, NC-6004, cisplatin, docetaksel (npr. TAXOTERE), mitomicin C, ifosfamid; interferon; inhibitor tirozin kinaze (npr. inhibitor EGFR-a (npr. erlotinib, panitumumab, cetuksimab, nimotuzumab); inhibitor HER2/neu receptora (npr. trastuzumab); dvostruki inhibitor kinaze (npr. bosutinib, saracatinib, lapatinib, vandetanib); inhibitor multikinaze (eg); , sorafenib, sunitinib, KSL184, pazopanib); VEGF inhibitor (npr. bevacizumab, AV-951, brivanib); radioimunoterapija (npr. KSR303); vakcina protiv raka (npr. GVAKS, survivin peptid); COKS-2 inhibitor (npr. celekoksib) ); inhibitor IGF-1 receptora (npr. AMG 479, MK-0646); mTOR inhibitor (npr. everolimus, temsirolimus), inhibitor IL-6 (npr. CNTO 328); inhibitor kinaze zavisan od ciklina (npr. P276-00 , UCN-01); jedinjenje usmereno na izmenjen energetski metabolizam (AEMD) (npr. CPI-613); HDAC inhibitor (npr. vorinostat); agonist TRAIL receptora 2 (TR-2) (npr. konatumumab); MEK inhibitor (npr. , AS703026, selumetinib, GSK1120212); Raf/MEK inhibitor dualne kinaze (npr. RO5126766), inhibitor Notch signalizacije (npr. MK0752), monoklonsko antitelo-antitelo fuzio n protein (npr. L19IL2), kurkumin; inhibitor HSP90 (npr. tanespimicin, STA-9090), rIL-2; denileukin diftitok; inhibitor topoizomeraze 1 (npr. irinotekan, PEP02); statin (npr. simvastatin), inhibitor faktora VIIa (npr. PCI-27483), inhibitor AKT (npr. RKS-0201), prolek koji se aktivira hipoksijom (npr. TH-302), metformin hidrohlorid, inhibitor gama-sekretaze (npr. R04929097), inhibitor ribo1 nukleotid reduktaze (npr. 3-AP), imunotoksin (npr. HuC242-DM4), PARP inhibitor (npr. KU-0059436, veliparib), CTLA-4 inhibitor (npr. CP-675,206), ipilimumab AdV-tk terapija, inhibitor proteazoma (npr. bortezomib (Velcade), NPI-0052), tiazolidindion (npr. pioglitazon), NPC-1C; Inhibitor aurora kinaze (npr. R763/AS703569), CTGF inhibitor (npr. FG-3019), siG12D LODER i terapiju zračenjem (npr. tomoterapija, stereotaktično zračenje, protonska terapija), hirurgija i njihova kombinacija. U određenim realizacijama, kombinacija paklitaksela ili paklitaksel agensa i gemcitabina se može koristiti sa antitelima prema pronalasku.
[0669] Primeri terapeutskih agenasa koji se mogu koristiti u kombinaciji sa antitelima pronalaska za lečenje karcinoma malih ć elija plu ć a (SCLC) uključuju odobrene lekove za lečenje SCLC kao što su metotreksat (Folex®, Mexate®), everolimus (Afinitor®), doksorubicin hidrohlorid, etopozid fosfat (Etopophos®), topotekan hidrohlorid (Hicamtin®), mehloretamin hidrohlorid (Mustargen®), topotekan hidrohlorid. Drugi terapeutski agensi koji se mogu koristiti su karboplatin, cisplatin, oksaliplatin, irinotekan, gemcitabin, lipozomalni SN-38, bendamustin, temozolomid, belotekan, NK012, FR901228, flavopiridol, inhibitor tirozin-egtib-EGlofita , cetuksimab, panitumumab), inhibitor multikinaze (npr. sorafenib, sunitinib), VEGF inhibitor (npr. bevacizumab, vandetanib), vakcina protiv raka (npr. GVAKS); Bcl-2 inhibitor (npr. oblimersen natrijum, ABT-263), proteazom inhibitor (npr. bortezomib (Velcade), NPI-0052), paklitaksel ili paklitaksel agens; docetaksel, inhibitor IGF-1 receptora (npr. AMG 479), HGF/SF inhibitor (npr. AMG 102, MK-0646), hlorokin , inhibitor Aurora kinaze (npr. MLN8237), radioimunoterapija (npr. TF2), inhibitor HSP90 (npr. tanespimicin, STA-9090), mTOR inhibitor (npr. everolimus), Ep-CAM/CD3-bispecifična antitela (npr. MT110) , CK-2 inhibitor (npr. CKS-4945), HDAC inhibitor (npr. belinostat), SMO antagonist (npr. BMS 833923), peptidna kancer r vakcina i radioterapija (npr. radioterapija sa modulacijom intenziteta (IMRT), hipofrakcionisana radioterapija, radioterapija vođena hipoksijom), hirurgija i njihove kombinacije.
[0670] Primeri terapeutskih agenasa koji se mogu koristiti u kombinaciji sa antitelima pronalaska za lečenje karcinoma pluć a tzv. nemalih ć elija uključuju odobrene lekove za lečenje NSCLC uključuju ć i metotreksat (Folex®, Mexate®), paklitaksel (Abraxane®), afatinib (Gilotrif®), everolimus (Afinitor®), alektinib (Alecensa®), pemetreksed dinatrijum (Alimta®), bevacizumab (Avastin®), karboplatin, ceritinib (Zykadia®), krizotinib (Xalcori®), raumicirumab (Cyramza®), docetaxel, everolimus (Afinitor®), gefitinib (Iressa®), afatinib dimaleat (Gilotrif®), gemcitabin hidrohlorid (Gmezar®), pembrolizumab (Keytruda®), mehloretamin hidrohlorid (Mustargen®), vinorelbine (Nevelbine®), necitumumab (Portrazza®), nivolumab (Opdivo®), osimertinib, paklitaksel (Taxol®), karboplatin, pemetreksed dinatrijum, ramucirumab (Ciramza®), osimertinib (Tagrisso®). Drugi terapeutski agensi koji se mogu koristiti su vinorelbin, cisplatin, docetaksel, pemetreksed dinatrijum, etopozid, gemcitabin, karboplatin, liposomski SN-38, TLK286, temozolomid, topotekan, pemetreksed dinatrijum, i safaturnocitil dinatrijum, i safaturocitil dinatrijum, a inhibitor kinaze (npr. EGFR inhibitor (npr. erlotinib, gefitinib, cetuksimab, panitumumab, necitumumab, PF-00299804, nimotuzumab, RO5083945), MET inhibitor (npr. PF-02341066, ARK 197), inhibitor PI3K kinaze (npr. KSL147, GDC-0941), Raf/MEK inhibitor dvostruke kinaze (npr. RO5126766), PI3K/mTOR inhibitor dvostruke kinaze (npr. KSL765), SRC inhibitor (npr. dasatinib), dvostruki inhibitor (npr. BIBV 2992, GSK1363089, ZD6474, AZD0530, AG-013736, lapatinib, MEHD7945A, linifanib), inhibitor multikinaze (npr. sorafenib, pazopanitinib, pazopanitinib, pazopanitinib, pazopa706 5) , BMS-690514, R935788), VEGF inhibitor (npr. endostar, endostatin, bevacizumab, cediranib, BIBF 1120, aksitinib, tivozanib, AZD2171), vakcinu protiv raka (npr. BLP25 liposoma, vakcinu za ekspresiju liposoma BLP25, vakcina za ekspresiju proteina LVA53Ks, GVA53Ks), inhibitore Bcl-2 (npr. oblimersen natrijum), inhibitore proteazoma (npr. bortezomib, karfilzomib, NPI-0052, MLN9708), paklitaksel ili paklitaksel agens, docetaksel, inhibitor IGF-1 receptora (npr. cikutumumab, MK-0 OSI 906, CP-751,871, BIIB022), hidroksihlorokin, inhibitor HSP90 (npr. tanespimicin, STA-9090, AUI922, KSL888), mTOR inhibitor (npr. everolimus, temsirolimus, ridaforolimus), Ep-CAM/CD3-bispecifična antitela (npr. MT110), CK-2 inhibitor (npr. CKS-4945), HDAC inhibitor (npr. MS 275, LBH589, vorinostat, valproičnu kiselinu, FR901228), DHFR inhibitor (npr. pralatreksat), retinoid (npr. beksaroten, tretinoin), konjugat antitelo-lek (npr. SGN-15), bisfosfonat (npr. zoledronska kiselina), vakcina protiv raka (npr. belagenpumatucel-L), heparin niske molekularne težine (LMVH) (npr. tinzaparin, enoksaparin), GSK1572932A, melatonin, talaktoferin, dimesna, inhibitor topoizomeraze (npr. amrubicin, etopozid, karenitecin), nelfinavir, cilengitid (eg, ErbB3-1 inhibitor, ErbB3-1 inhibitor -1287), inhibitor preživljavanja (npr. IM155, LI2181308), eribulin mezilat, inhibitor COKS-2 (npr. celekoksib), pegfilgrastim, inhibitor "Polo-like" kinaze 1 (npr. BI 6727), TRAIL receptor 2 (TR-2) agonist (npr. CS-1008), CNGRC peptid (SEK ID BR: 225)-TNF alfa konjugat, dihloroacetat (DCA), HGF inhibitor (npr. SCH 900105), SAR240550, PPAR-gama agonist (npr. CS-7017), inhibitor gama-sekretaze (npr. RO4929097), epigenetska terapija (npr. 5-azacitidin), nitroglicerin, inhibitor MEK (npr. AZD6244), inhibitor kinaze zavisne od ciklina (npr. UCN-01), holesterol-Fusl, antitubulinski agens (npr. E7389), inhibitor farnezil-OH-transferaze (npr. lonafarnib), imunotoksin (npr. , BB-10901, SS1 (dsFv) PE38), fondaparinuks, agens za vaskularni poremeć aj (npr. AVE8062), inhibitor PD-L1 (npr. MDKS-1105, MDKS-1106), beta-glukan, NGR-hTNF, EMD 521873 , inhibitor MEK (npr. GSK1120212), analog epotilona (npr. iksabepilon), inhibitor kinezinskog vretena (npr. 4SC-205), agens za ciljanje telomera (npr. KML-001), inhibitor P70 puta (npr. LI2584702), inhibitor AKT ( na primer, MK-2206), inhibitor angiogeneze (npr. lenalidomid), inhibitor Notch signalizacije (npr. OMP-21M18), EGFR/c-Met bispecifično antitelo EM-1 kao što je opisano u US2014/0141000A1, terapiju zračenjem, hirurgiju i kombinacije od toga.
[0671] Primeri terapeutskih agenasa koji se mogu koristiti u kombinaciji sa antitelima pronalaska za lečenje karcinoma jajnika uključuju odobrene lekove za lečenje raka jajnika, kao što su melfalan (Alkeran®), bevacizumab (Avastin®), karboplatin, ciklofosfamid (Clafen®, Citoxan®), klisplatin, doksorubicin hidrohlorid, gemcitabin hidrohlorid (Gemzar®), topotekan hidrohlorid (Hycamtin®), Olaparib (Lynparza®), karboplatin, cisplatin, paklitaksel (Taxol®), tiotepa hidrohlorid i topotepa. Drugi terapeutski agensi koji se mogu koristiti su, ifosfamid, olaparib, oksaliplatin, pemetreksed dinatrijum, SJG-136, etopozid, decitabin; imunoterapija (npr. APC8024, oregovomab, OPT821), inhibitor tirozin kinaze (npr. inhibitor EGFR (npr. erlotinib), dvostruki inhibitor (npr. E7080), inhibitor multikinaze (npr. AZD0530, JI-101, sorafenib, sunitinib), , inhibitor VEGF (npr. bevacizumab, BIBF 1120, cediranib, AZD2171), inhibitor PDGFR (npr. IMC-3G3), paklitaksel, inhibitor topoizomeraze (npr. karenitecin, irinotekan), inhibitor HDAC (npr. valproat, vorinostat), folatni receptor inhibitor (npr. farletuzumab), inhibitor angiopoetina (npr. AMG 386), analog epotilona (npr. iksabepilon), inhibitor proteasoma (npr. karfilzomib), inhibitor IGF-1 receptora (npr. OSI 906, AMG 479), PARP inhibitor (npr. npr. veliparib, AG0 14699, iniparib, MK-4827), inhibitor Aurora kinaze (npr. MLN8237,ENMD-2076), inhibitor angiogeneze (npr. lenalidomid), inhibitor DHFR (npr. pralatreksat), radioimunoterapeutski agens (npr., Hu3S193), statin (npr. lovastatin), inhibitor topoizomeraze 1 (npr. NKTR-102), vakcina protiv raka (npr. p5 Vakcina sa 3 sintetička dugačka peptida, autologna OC-DC vakcina), mTOR inhibitor (npr. temsirolimus, everolimus), BCR/ABL inhibitor (npr. imatinib), antagonist ET-A receptora (npr. ZD4054), TRAIL receptor 2 (TR- 2) agonist (npr. CS-1008), inhibitor HGF/SF (npr. AMG 102), EGEN-001, inhibitor "Polo-like" kinaze 1 (npr. BI 6727), inhibitor gama-sekretaze (npr. RO4929097), Vee -1 inhibitor (npr. MK-1775), antitubulinski agens (npr. vinorelbin, E7389), imunotoksin (npr. denileukin diftitoks), SB485232, agens za vaskularni poremeć aj (npr. AVE8062), inhibitor integrina (npr. EMD 525797), inhibitor tzv. kinezin-vretena (npr. 4SC-205), revlimid, HER2 inhibitor (npr. MGAH22), inhibitor ErrB3 (npr. MM-121), terapiju zračenjem i njihove kombinacije.
[0672] Primeri terapeutskih agenasa koji se mogu koristiti u kombinaciji sa antitelima pronalaska za lečenje mijeloma uključuju jednu ili više hemoterapije ili drugih agensa protiv raka (npr. analoge talidomida, npr. lenalidomid), HSCT (Cook, (2008) J Manag Care Pharm. 14(7 Suppl): 19-25), anti-TIM-3 antitelo (Hallett et al,. (2011) J of American Societi for Blood and Marrov Transplantation 17(8): 1133 -145), dendritičke ć elije koje pulsiraju tumorskim antigenom, fuzije (npr. elektrofuzije) tumorskih ć elija i dendritičkih ć elija, ili vakcinacija imunoglobulinskim idiotipom proizvedenim od malignih plazma ć elija (pregledano u Ii (2009) Cancer J 15(6):502- 10).
[0673] Primeri terapeutskih agenasa koji se mogu koristiti u kombinaciji sa antitelima pronalaska za lečenje karcinoma bubrega, npr. karcinoma bubrežnih ć elija (RCC) ili metastatskog RCC uključuju lekove odobrene za lečenje RCC, uključuju ć i everolimus (Afinitor®), aldesleukin, bevacizumab (Avastin®), aksitinib (Inlyta®), kabozantinib-S-malat (Cabometyx®), aldesleukin (Proleukin®), lenvatinib mezilat (Lenvima®), sorafenib tozilat (Nexavar®), pdi nivolumab (Opdivo®), pazopanib hidrohlorid (Votrient®), sorafenib tozilat, sunitinib (Sutent®), temsirolimus (Torisel®) i pazopanib hidrohlorid (Votrient®). Drugi terapeutici koji se mogu koristiti su ciljani agensi (npr. inhibitor VEGF kao što je monoklonsko antitelo na VEGF, npr. bevacizumab, inhibitor VEGF tirozin kinaze kao što je sorafenib, aksitinib i pazopanib.
[0674] Primeri terapeutskih agenasa koji se mogu koristiti u kombinaciji sa antitelima prema pronalasku za lečenje hronične mijelogene leukemije (AML) uključuju hemoterapeutike (npr. citarabin, hidroksiureju, klofarabin, melfalan, tiotepa, fludarabin, buposulbin kordicepin, pentostatin, kapecitabin, azacitidin, ciklofosfamid, kladribin, topotekan), inhibitor tirozin kinaze (npr. BCR/ABL inhibitor (npr. imatinib, nilotinib), dvostruki inhibitor (npr. dasatinib, bosutinib), inhibitor multikinaze (npr. DCC 2036, ponatinib, sorafenib, sunitinib, RGB-286638), interferon alfa, steroide, apoptotički agens (npr. omacetaksin mepesukcinat), imunoterapija (npr. alogena CD4+ memorijske "Th1-like" T ć elije/anti-CD8 vezan za mikročestice, auto-anti-CD8/log ć elije ubice indukovane citokinom (CIK), AHN-12), agens za ciljanje CD52 (npr. alemtuzumab), inhibitor HSP90 (npr. tanespimicin, STA-9090, AUI922, KSL888), mTOR inhibitor (npr. everolimus), SMO antagonist (npr. , BMS 833923) , inhibitor ribonukleotid reduktaze (npr. 3-AP), inhibitor JAK-2 (npr. INCB018424), hidroksihlorokin, retinoid (npr. fenretinid), inhibitor kinaze zavisne od ciklina (npr. UCN-01), inhibitor HDAC (npr. belinostat , vorinostat, JNJ-26481585), PARP inhibitor (npr. veliparib), MDM2 antagonist (npr. RO5045337), inhibitor Aurora B kinaze (npr. TAK-901), radioimunoterapiju (npr. aktinijum-225 obeleženo anti-CD33 antitelo HuM 195), inhibitor ježa (npr. PF-04449913), inhibitor STAT3 (npr. OPB-31121), KB004, vakcinu protiv raka (npr. AG858), transplantaciju koštane srži, transplantaciju matičnih ć elija, terapiju zračenjem i njihove kombinacije.
[0675] Primeri terapeutskih agenasa koji se mogu koristiti u kombinaciji sa antitelima pronalaska za lečenje hronične limfocitne leukemije (CLL) uključuju hemoterapeutski agens (npr. fludarabin, ciklofosfamid, doksorubicin, vinkristin, hlorammusulan, bubucilin, hlorammusucil, gemcitabin, melfalan, pentostatin, mitoksantron, 5-azacitidin, pemetreksed dinatrijum), inhibitor tirozin kinaze (npr. EGFR inhibitor (npr. erlotinib), BTK inhibitor (npr. PCI-32765 (ibrutinib (ibrutinib, MG265), inhibitor multikinaze) RGB-286638), agens za ciljanje CD-20 (npr. rituksimab, ofatumumab, RO5072759, LFB-R603), agens za ciljanje CD52 (npr. alemtuzumab), prednizolon, darbepoetin alfa, lenalidomid, inhibitor Bcl-26 (npr. ), imunoterapiju (npr., alogene CD4+ memorije Th1 slične T ć elije/anti-CD3/anti-CD28 vezane za mikročestice, autologne ć elije ubice indukovane citokinom (CIK), inhibitor HDAC (npr. vorinostat, valproinska kiselina, LBH589, JNJ-26481585, AR -42), KSIAP inhibito r (npr. AEG35156), agens za ciljanje CD-74 (npr. milatuzumab), mTOR inhibitor (npr. everolimus), AT-101, imunotoksin (npr. CAT-8015, anti-Tac(Fv)-PE38 (LMB-2) )), agens za ciljanje CD37 (npr. TRU-016), radioimunoterapiju (npr. 131-tositumomab), hidroksihlorokin, perifozin, SRC inhibitor (npr. da satinib), talidomid, PI3K delta inhibitor (npr. CAL-101), retinoid (npr. fenretinid), MDM2 antagonist (npr. RO5045337), pleriksafor, inhibitor Aurora kinaze (npr. MLN8237, TAK-901), inhibitor proteasoma (npr. bortezomib), agens za ciljanje CD19 (npr. MEDI-551, MOR208), MEK inhibitor (npr. ABT-348), inhibitor JAK-2 (npr. INCB018424), prolek koji se aktivira hipoksijom (npr. TH-302), paklitaksel ili agens paklitaksela, inhibitor HSP90, inhibitor AKT (npr. MK2206), HMG -CoA inhibitor (npr. simvastatin), GNKG186, terapiju zračenjem, transplantaciju koštane srži, transplantacija matičnih ć elija i njihova kombinacija.
[0676] Primeri terapeutskih agenasa koji se mogu koristiti u kombinaciji sa antitelima prema pronalasku za lečenje akutne limfocitne leukemije (ALL) uključuju hemoterapeutski agens (npr. prednizolon, deksametazon, vinkristin, asparaginazu, daunorufociktorabicin, tioguanin, merkaptopurin, klofarabin, lipozomalni anamicin, busulfan, etopozid, kapecitabin, decitabin, azacitidin, topotekan, temozolomid), inhibitor tirozin kinaze (npr. BCR/ABL inhibitor), (npr. imatinib, inhibitor nilotinib, nilotini9). (npr. sorafenib), agens za ciljanje CD-20 (npr. rituksimab), agens za ciljanje CD52 (npr. alemtuzumab), inhibitor HSP90 (npr. STA-9090), inhibitor mTOR (npr. everolimus, rapamicin), inhibitor JAK-2 (npr. INCB018424), inhibitor HER2/neu receptora (npr. trastuzumab), inhibitor proteazoma (npr. bortezomib), metotreksat, asparaginaza, agens za ciljanje CD-22 (npr. epratuzumab, inotuzumab), imunoterapiju (npr. autologni cit ć elije ubice indukovane okinom (CIK), AHN-12), blinatumomab, inhibitor kinaze zavisne od ciklina (npr. UCN-01), agens za ciljanje CD45 (npr. BC8), MDM2 antagonist (npr. RO5045337), imunotoksin (npr. CAT -8015, DT2219ARL), HDAC inhibitor (npr. JNJ-26481585), JVRS-100, paklitaksel ili paklitaksel agens, STAT3 inhibitor (npr. OPB-31121), PARP inhibitor (npr. veliparib), EZN-2285, terapija zračenjem, steroida, transplantacije koštane srži, transplantacije matičnih ć elija ili njihove kombinacije.
[0677] Primeri terapeutskih agenasa koji se mogu koristiti u kombinaciji sa antitelima prema pronalasku za lečenje akutne mijeloidne leukemije (AML) uključuju hemoterapeutski agens (npr. citarabin, daunorubicin, idarubicin, klofarabin, decitabin, klofarabin, klofarabin, vosarabindin, ribavirin, CPKS-351, treosulfan, elacitarabin, azacitidin), inhibitor tirozin kinaze (npr. BCR/ABL inhibitor (npr. imatinib, nilotinib), ON 01910.Na, inhibitor multikinaze (npr. midostaurin, SU 11248, sokiraratiib ), imunotoksin (npr. gemtuzumab ozogamicin), DT388IL3 fuzioni protein, HDAC inhibitor (npr. vorinostat, LBH589), pleriksafor, mTOR inhibitor (npr. everolimus), SRC inhibitor (npr. dasatinib), HSP90 inhibitor (npr. STA-90 ), retinoid (npr. beksaroten, inhibitor Aurora kinaze (npr. BI 811283), JAK-2 inhibitor (npr. INCB018424), inhibitor Polo-like kinaze (npr. BI 6727), cenersen, agens za ciljanje CD45 (npr. BC8) , inhibitor kinaze zavisne od ciklina (npr. UCN-01), MDM2 antagonist (npr. RO5045337), mTOR inhibitor (npr. everolimus), LI573636-natrijum, ZRk-101, MLN4924, lenalidomid, imunoterapija (npr. AHN-12), histamin dihidrohlorid, terapija zračenjem, transplantacija kostiju, transplantacija kostiju , i njihova kombinacija.
[0678] Primeri terapeutskih agenasa koji se mogu koristiti u kombinaciji sa antitelima prema pronalasku za lečenje multiplog mijeloma (MM) uključuju hemoterapeutski agens (npr. melfalan, amifostin, ciklofosfamid, doksorubicin, klofarabin, bendamustin, fludarabin, sib-adriamicin 0501), talidomid, lenalidomid, deksametazon, prednizon, pomalidomid, inhibitor proteazoma (npr. bortezomib, karfilzomib, MLN9708), vakcinu protiv raka (npr. GVAKS), agens za ciljanje CD-40 (npr. SGN-120,1 CHIR), perifozin, zoledronska kiselina, imunoterapiju (npr. MAGE-A3, NIESO-1, HuMak-CD38), inhibitor HDAC (npr. vorinostat, LBH589, AR-42), aplidin, inhibitor kinaze zavisne od ciklina (npr. PD-0332991, dinaciklib), arsenik trioksid, CB3304, inhibitor HSP90 (npr. KV-2478), inhibitor tirozin kinaze (npr. inhibitor EGFR (npr. cetuksimab), inhibitor multikinaze (npr. AT9283), inhibitor VEGF (npr. bevacizumab), pleriksafor, MEK inhibitor (npr. AZD6244), IPH2101, atorvastatin, imunotoksin (npr. B B-10901), NPI-0052, radioimunoterapeutskp sredstvp (npr. itrijum I 90 ibritumomab tiuksetan), STAT3 inhibitor (npr. OPB-31121), MLN4924, inhibitor Aurora kinaze (npr. ENMD-20041, IMACEGN-CK) -2 inhibitor (npr. CKS-4945), anti-CD38 antitelo (npr DARZALEX® (daratumumab), terapiju zračenjem, transplantaciju koštane srži, transplantaciju matičnih ć elija i njihovu kombinaciju.
[0679] Primeri terapetuskih agensa koji se mogu koristiti u kombinacija sa antitelima prema pronalasku za tretman kancera prostate su abiareton acetat(Zytiga®), bicalutamid (Casodex®), cabazitaxel (Jevtana®), conjugatisani estrogeni (Premarin®), stradiol (Estrace®), estradiol valerat (Delestrogen®), estrogeni, esterified (Menest®), degarelix (Firmagon®), docetaxel (Taxotere®), enzalutamid (Xtandi®), flutamid, goserelin acetat (Zoladex®), Cabazitaxel (Jevtana®), leuprolid acetat (Lupron®), mitoxantron hydrohlorid, nilutamid (Nilandron®) Sipuleucel-T (Provenge®) i radijum 223 dihlorid (Xofigo®). Ostali lekovi koji mogu biti uključeni kao hemoterapijski agensi su (e.g., carboplatin, fludarabine), hormonal therapy (npr., cyproterone acetate, ketoconazole, aminoglutethimide, abarelix, degarelix, leuprolide, triptorelin, buserelin), tyrosine kinase inhibitor (npr., dual kinase inhibitor (npr., lapatanib), multikinase inhibitor (npr., sorafenib, sunitinib), VEGF inhibitor (npr., bevacizumab), TAK-700, cancer vakcina (npr., BPX-101, PEP223), lenalidomid, TOK-001, IGF-1 receptor inhibitor (npr., cixutumumab), TRC105, Aurora A kinase inhibitor (npr., MLN8237), proteazom inhibitor (npr., bortezomib), OGX-011, radioimmunotherapy (npr., HuJ591-GS), HDAC inhibitor (npr., valproic acid, SB939, LBH589), hydroksihlorokin, mTOR inhibitor (npr., everolimus), dovitinib lactat, diindolilmetan, efavirenz, OGX-427, genistein, IMC-3G3, bafetinib, CP-675,206, radioterapiju, hirurgiju, ili njihove kombinacije.
[0680] Primeri terapeutskih agensa koji mogu biti korišćeni u kombinaciji sa antitelima prema pronalasku za tretman cancera glave i kancera skvamoznih ćelija (HNSCC) uključuju i metotreksat (Folex®, Mexate®), bleomicin (Blenoxane®), docetaksel (Taxotere®), erbituks (Cetuximab®), hidroksiureu (Hydrea®) ili pembrolizumab (Keytruda®),
[0681] U nekim realizacijama, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa TLR agonistom.
[0682] U nekim realizacijama, TLR3 agonist je TLR4 agonist.
[0683] U nekim realizacijama, TLR3 agonist je TLR7/8 agonist.
[0684] Primeri TLR agonista su Pam3Cis, TLR-1/2 agonist; CFA, agonist TLR-2; MALP2, agonist TLR-2; Pam2Cis, agonist TLR-2; FSL-1, agonist TLR-2; Hib-OMPC, agonist TLR-2; poliribozinska:poliribocitidna kiselina (Poli I:C), agonist TLR-3; poliadenozinpoliuridilna kiselina (poli AU), agonist TLR-3; Poliinozinska-policitidilna kiselina stabilizovana sa poli-L-lizinom i karboksimetilcelulozom (Hiltonol®), TLR-3 agonistom; monofosforil lipid A (MPL), agonist TLR4; LPS, agonist TLR-4; bakterijski flagelin, agonist TLR-5; sialil-Tn (STn), ugljeni hidrat povezan sa MUCI mucinom na brojnim ljudskim ć elijama raka i agonist TLR-4; imikvimod, agonist TLR-7; resikvimod, agonist TLR-7/8; loksoribin, agonist TLR-7/8; i nemetilovani CpG dinukleotid (CpG-ODN), agonist TLR-9.
[0685] Primeri TLR4 agonista su agonistička antitela koja se specifično vezuju za TLR4.
[0686] U nekim realizacijama koje su ovde opisane, antitela pronalaska se daju u kombinaciji sa antitelom koje daje CSF-1R [0687] Primeri antitela koja vezuju CSF-1R su ona opisana u Medj patentu. objava br. WO2013132044.
[0688] U nekim realizacijama opisanim ovde, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa LKSR• agonistom.
[0689] U nekim realizacijama opisanim ovde, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa DR4 agonistom.
[0690] U nekim realizacijama opisanim ovde, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa DR5 agonistom.
[0691] Pogodni DR4 i DR5 agonisti su opisani na primer u Int. Patent Publ. br. VO2014159562.
[0692] U nekim realizacijama opisanim ovde, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa antitelom protiv galektina 1.
[0693] Primeri antitela na galektin 1 koja se mogu koristiti u kombinaciji sa antitelima pronalaska su ona opisana u medjunarodnoj objavi patenta broj WO2015013389.
[0694] U jednoj varijanti koja je ovde opisana, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa BTK inhibitorom.
[0695] U nekim realizacijama, BTK inhibitor je IMBRUVICA® (ibrutinib).
[0696] U nekim realizacijama, opisanim ovde, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-HER2 antitelom.
[0697] U nekim realizacijama, opisanim ovde, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa anti-CD20 antitelom.
[0698] U nekim realizacijama, antitela pronalaska se daju zajedno sa (npr., pre, istovremeno ili posle) transplantacije koštane srži, ablativnom terapijom T ć elija. koriš ć enjem agenasa za hemoterapiju kao što je fludarabin, terapija eksternim zračenjem (KSRT), ciklofosfamid i/ili antitela kao što su OKT3 ili CAMPATH. U nekim realizacijama, antitela prema pronalasku mogu da se primenjuju nakon ablativne terapije B-ć elija, kao što su agensi koji reaguju sa CD20, npr., Ritukan. Takodje, na primer, u jednom aspektu, subjekti mogu biti podvrgnuti standardnom tretmanu sa visokim dozama hemoterapije prać enom transplantacijom matičnih ć elija periferne krvi. U određenim realizacijama, nakon transplantacije, subjekti dobijaju antitela prema pronalasku.
[0699] U nekim realizacijama opisanim ovde, antitela pronalaska se daju pre ili posle operacije.
[0700] U nekim realizacijama opisanim ovde, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa terapijom zračenjem.
[0701] Terapija zračenjem se može primeniti korišć enjem različitih metoda, uključuju ć i terapiju spoljašnjim zračenjem, internu terapiju zračenjem, zračenje implantata, stereotaktičku radiohirurgiju, sistemsku terapiju zračenjem, radioterapiju i trajnu ili privremenu intersticijalnu brahiterapiju. Terapija eksternim snopom uključuje trodimenzionalnu, konformnu terapiju zračenjem gde je oblikovano polje zračenja, lokalno zračenje (npr. zračenje usmereno na unapred odabrani cilj ili organ) ili fokusirano zračenje. Fokusirano zračenje može biti izabrano između stereotaktičke radiohirurgije, frakcionisane stereotaktičke radiohirurgije ili terapije zračenjem sa modulacijom intenziteta. Fokusirano zračenje može imati snop čestica (protonski), linearni akcelerator kobalta-60 (fotonski) (rendgenski zrak) kao izvor zračenja (videti npr. WO 2012/177624). „Brahiterapija“ se odnosi na terapiju zračenjem koju daje prostorno ograničen radioaktivni materijal ubačen u telo na ili blizu tumora ili drugog proliferativnog tkiva, na mesto bolesti i uključuje izlaganje radioaktivnim izotopima (npr. At-211, 1-131, 1-125, I-90, Re-186, Re-188, Sm-153, Bi-212, P-32 i radioaktivnim izotopi Lu). Pogodni izvori zračenja za upotrebu kao kondicionerić elija uključuju i čvrste i tečne izvore. Izvor zračenja može biti radionukllid, kao što su 1-125, 1-131, Ib-169, Ir-192 kao čvrsti izvor, 1-125 kao čvrsti izvor, ili drugi radionuklidi koji emituju fotone, beta čestice, gama zračenje, ili druge terapeutske zrake. Radioaktivni materijal takođe može biti tečnost napravljena od bilo kog rastvora radionuklida(a), npr. rastvora 1-125 ili 1-131, ili se radioaktivna tečnost može proizvesti korišć enjem suspenzije odgovaraju ć e tečnosti koja sadrži male čestice čvrste materije. radionuklidi, kao što su Au-198, I-90. Radionuklid(i) mogu biti oličeni u gelu ili radioaktivnim mikrosferama.
[0702] U nekim realizacijama, antitela pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa dekarbazinom za lečenje melanoma. Bez vezivanja bilo kakvom posebnom teorijom, veruje se da je kombinovana upotreba blokade PD-1 i/ili TIM-3 i hemoterapije olakšana smrć u ć elija koja je posledica citotoksičnog delovanja ve ć ine hemoterapeutskih jedinjenja, što može dovesti do poveć anja nivoa tumorskog antigena na putu prezentacije antigena. Druge kombinovane terapije koje mogu dovesti do sinergije sa blokadom PD-1 i/ili TIM-3 kroz ć elijsku smrt su zračenje, operacija i nedostatak hormona. Svaki od ovih protokola stvara izvor tumorskog antigena u domać inu. Inhibitori angiogeneze se takođe mogu kombinovati sa blokadom PD-1 i/ili TIM-3. Inhibicija angiogeneze dovodi do smrti tumorske ć elije koja može da unese tumorski antigen u puteve prezentacije antigena domać ina.
[0703] Monospecifična PD-1 antitela pronalaska se takođe mogu koristiti u kombinaciji sa bispecifičnim antitelima. Bispecifična antitela se mogu koristiti za ciljanje dva odvojena antigena. Na primer, bispecifična antitela za anti-Fc receptor/anti-tumorski antigen (npr. Her-2/neu) su korišć ena da ciljaju makrofage na mesta tumora. Bispecifično ciljanje može efikasnije aktivirati tumor specifične odgovore. T ć elijski krak ovih odgovora bi bio uve ć an upotrebom PD-1 i/ili TIM-3 blokade. Alternativno, antigen se može isporučiti direktno u DC upotrebom bispecifičnih antitela koja se vezuju za tumorski antigen i marker površine ć elije specifično za dendritičnu ć eliju.
[0704] Antitela pronalaska mogu da se koriste u nekonjugovanim oblicima ili konjugovana sa drugim agensom, npr., citotoksičnim lekom, radioizotopom ili proteinom, npr., proteinskim toksinom ili virusnim proteinom. Molekuli antitela se mogu koristiti za isporuku različitih terapeutskih agenasa, na primer, citotoksičnog dela, na primer, terapeutskog leka, radioizotopa, molekula biljnog, gljivičnog ili bakterijskog porekla, ili bioloških proteina (npr., proteinskih toksina) ili čestica ( na primer, rekombinantne virusne čestice, npr. preko proteina virusnog omotača), ili njihove smeše.
Zarazne bolesti
[0705] Pronalazak takođe obezbeđuje antitela pronalaska za upotrebu u metodi lečenja subjekta koji je bio izložen određenim toksinima ili patogenima sa antitelima pronalaska tokom vremena dovoljnog za lečenje subjekta.
[0706] Pronalazak takođe obezbeđuje antitela pronalaska za upotrebu u metodi lečenja subjekta koji ima infektivnu bolest, koji obuhvata davanje terapeutski efikasne količine antitela iz pronalaska subjektu kome je to potrebno tokom vremena dovoljnog za lečenje zarazne bolesti.
[0707] Pronalazak takođe obezbeđuje antitela pronalaska za upotrebu u metodi lečenja subjekta koji ima virusnu infekciju, koji obuhvata davanje terapeutski efikasne količine antitela iz pronalaska subjektu kome je to potrebno tokom vremena dovoljnog za lečenje virusne infekcije.
[0708] Pronalazak takođe obezbeđuje antitela prema pronalasku za upotrebu u metodi lečenja subjekta koji ima bakterijsku infekciju, koji obuhvata davanje terapeutski efikasne količine antitela iz pronalaska subjektu kome je to potrebno tokom vremena dovoljnog za lečenje bakterijska infekcija.
[0709] Pronalazak takođe obezbeđuje antitela pronalaska za upotrebu u metodi lečenja subjekta koji ima gljivičnu infekciju, koji obuhvata davanje terapeutski efikasne količine antitela iz pronalaska subjektu kome je to potrebno tokom vremena dovoljnog za lečenje gljivičnih infekcija.
[0710] U lečenju infekcije (npr., akutne i/ili hronične), primena antitela prema pronalasku može da se kombinuje sa konvencionalnim tretmanima, kao dodatak, ili umesto stimulisanja prirodne imunološke odbrane domać ina na infekciju. Prirodna imunska odbrana domać ina od infekcije uključuje upalu, groznicu, odbranu doma ć ina posredovanu antitelima, odbranu domać ina posredovanu T-limfocitima, uključuju ć i sekreciju limfokina i citotoksične T- ć elije (posebno tokom virusne infekcije), komplementom posredovanu lizu i opsonizaciju (olakšana fagocitoza) i fagocitoza. Sposobnost antitela pronalaska da reaktiviraju disfunkcionalne T-ć elije bila bi korisna za lečenje hroničnih infekcija, posebno onih kod kojih je ć elijski posredovan imunitet važan za potpuni oporavak.
[0711] Slično njegovoj primeni na tumore kako je gore diskutovano, antitela pronalaska mogu se koristiti sama ili kao pomoć no sredstvo, u kombinaciji sa vakcinama, da stimulišu imuni odgovor na patogene, toksine i tzv. samo-antigene. Primeri patogena za koje ovaj terapijski pristup može biti koristan uključuju patogene za koje trenutno ne postoji efikasna vakcina, ili patogene za koje su konvencionalne vakcine manje od potpuno efikasnih. To uključuje HIV, hepatitis (A, B i C), grip, herpes, giardiju, malariju, lišmaniju, stafilokokus aureus i pseudomonas aeruginosu. PD-1 i/ili TIM-3 blokada može biti korisna protiv utvrđenih infekcija agensima kao što je HIV koji predstavljaju izmenjene antigene tokom infekcije. Ovi novi epitopi su prepoznati kao strani u vreme primene antitela prema pronalasku, izazivajuć i tako jak odgovor T ć elija koji nije prigušen negativnim signalima preko PD-1 ili TIM-3.
Virusi
[0712] Za infekcije koje su rezultat virusnih uzroka, antitela pronalaska se mogu kombinovati sa standardnim terapijama za lečenje virusnih infekcija. Takve standardne terapije variraju u zavisnosti od tipa virusa, iako u skoro svim slučajevima primena humanog seruma koji sadrži antitela (npr. IgA, IgG) specifična za virus može biti efikasna.
[0713] Primeri patogenih virusa koji izazivaju infekcije koje se mogu lečiti antitelima pronalaska uključuju HIV, hepatitis (A, B ili C), virus herpesa (npr. VZV, HSV-1, HAV-6, HSV-II, i CMV, Epstein Barr virus), adenovirus, virus gripa, flavivirusi, ehovirus, rinovirus, koksaki virus, kornovirus, respiratorni sincicijalni virus, virus zauški, rotavirus, virus malih boginja, virus rubeole, parvovirus, virus vakcinije, HTLV virus, virus denga, papiloma virus, molluscum virus, poliovirus, virus besnila, JC virus i virus arbovirusnog encefalitisa.
[0714] U nekim realizacijama, virusna infekcija je infekcija virusom gripa. Infekcija gripom može dovesti do groznica, kašlja, mijalgije, glavobolje i malaksalosti, koji se često javljaju u sezonskim epidemijama. Grip je takođe povezan sa brojnim postinfektivnim poremeć ajima, kao što su encefalitis, mioperikarditis, Goodpastureov sindrom i Reieov sindrom. Infekcija gripom takođe potiskuje normalnu pluć nu antibakterijsku odbranu, tako da pacijenti koji se oporavljaju od gripa imaju pove ć an rizik od razvoja bakterijske pneumonije. Površinski proteini virusa gripa pokazuju izražene antigenske varijacije, koje su rezultat mutacije i rekombinacije. Dakle, citolitički T limfociti su primarno sredstvo domać ina za eliminaciju virusa nakon infekcije. Influenca je klasifikovana u tri osnovna tipa: A, B i C. Influenca A je jedinstvena po tome što inficira i ljude i mnoge druge životinje (npr. svinje, konje, ptice i foke) i glavni je uzrok pandemijskog gripa.Ć elija može biti inficirana sa dva različita soja gripa A, segmentirani genomi RNK dva roditeljska tipa virusa se mešaju tokom replikacije da bi se stvorili hibridni replikanti, što dovodi do novih epidemijskih sojeva. Influenca B se ne razmnožava kod životinja i stoga ima manje genetskih varijacija, a grip C ima samo jedan serotip.
[0715] Već ina konvencionalnih terapija su palijativni simptomi koji su rezultat infekcije, dok imuni odgovor doma ć ina zapravo uklanja bolest. Međutim, određeni sojevi (npr. gripa A) mogu izazvati ozbiljnije bolesti i smrt. Influenca A se može lečiti klinički i profilaktički primenom inhibitora cikličnih amina amantadina i rimantadina, koji inhibiraju replikaciju virusa. Međutim, klinička korisnost ovih lekova je ograničena zbog relativno visoke incidence neželjenih reakcija, njihovog uskog antivirusnog spektra (samo grip A) i sklonosti virusa da postane otporan. Primena serumskih IgG antitela na glavne površinske proteine gripa, hemaglutinin i neuraminidazu može sprečiti pluć nu infekciju, dok je mukozni IgA neophodan da bi se sprečila infekcija gornjih disajnih puteva i traheje. Najefikasniji trenutni tretman protiv gripa je vakcinacija primenom virusa inaktiviranim formalinom ili β -propiolaktonom.
[0716] U nekim realizacijama, infekcija je infekcija hepatitisom, npr. infekcija hepatitisom B ili C.
[0717] Virus hepatitisa B (HB-V) je najzarazniji poznati patogen koji se prenosi krvlju. To je glavni uzrok akutnog i hroničnog hepatitisa i karcinoma jetre, kao i doživotne hronične infekcije. Nakon infekcije, virus se replicira u hepatocitima, koji takođe oslobađaju površinski antigen HBsAg. Detekcija prekomernog nivoa HBsAg u serumu se koristi kao standardni metod za dijagnostikovanje infekcije hepatitisom B. Akutna infekcija se može povuć i ili se može razviti u hroničnu upornu infekciju. Trenutni tretmani za hronični HBV uključuju a-interferon, koji poveć ava ekspresiju antigena humanih leukocita klase I (HLA) na površini hepatocita, čime se olakšava njihovo prepoznavanje od strane citotoksičnih T limfocita. Pored toga, analozi nukleozida ganciklovir, famciklovir i lamivudin su takođe pokazali izvesnu efikasnost u lečenju HBV infekcije u kliničkim ispitivanjima. Dodatni tretmani za HBV uključuju pegilovani a-interferon, adenfovir, entekavir i telbivudin. Dok se pasivni imunitet može dati roditeljskom administracijom anti-HBsAg serumskih antitela, vakcinacija inaktiviranim ili rekombinantnim HBsAg takođe daje otpornost na infekciju. Antitela pronalaska mogu da se kombinuju sa konvencionalnim tretmanima za infekcije hepatitisom B radi terapijske prednosti.
[0718] Infekcija virusom hepatitisa C (HC-V) može dovesti do hroničnog oblika hepatitisa, što rezultira cirozom. Dok su simptomi slični infekcijama koje su rezultat hepatitisa B, za razliku od HB-V, inficirani domać ini mogu biti asimptomatski i 10-20 godina. Antitela prema pronalasku se mogu davati kao monoterapija ili u kombinaciji sa standardom lečenja hepatitis C infekcije. Na primer, antitela prema pronalasku se mogu primeniti sa jednim ili više od Sovaldi (sofosbuvir) Olisio (simeprevir), plus ribavirin ili pegilovani interferon. Iako su režimi koji uključuju Incivek (telaprevir) ili Victrelis (boceprevir) plus ribavirin i pegilovani interferon su takođe odobreni, oni su povezani sa poveć anim neželjenim efektima i dužim trajanjem lečenja.
[0719] Konvencionalni tretman za HC-V infekciju uključuje primenu kombinacije a-interferona i ribavirina. Potencijalna terapija za HC-V infekciju koja obeć ava je inhibitor proteaze telaprevir (VKS-960). Dodatni tretmani uključuju bavituksimab (antitelo koje vezuje anjonski fosfolipidni fosfatidilserin na način zavisan od B2-glikoproteina I, Peregrine Pharmaceuticals), anti-HPV virusni omotač E2 antitela(i) (npr. ATL 6865+Ab6) Pharmaceuticals) i Civacir® (poliklonalni anti-HCV humani imuni globulin). Antitela pronalaska mogu se kombinovati sa jednim ili više ovih tretmana za infekcije hepatitisom C radi terapijske prednosti. Inhibitori proteaze, polimeraze i NS5A koji se mogu koristiti u kombinaciji sa antitelima pronalaska za specifično lečenje infekcije hepatitisom C uključujući one opisane u US 2013/0045202.
[0720] U drugom aspektu pronalaska, infekcija je virus malih boginja. Posle inkubacije od 9-11 dana, kod domać ina zaraženih virusom morbila razvija se groznica, kašalj, jezgrica i konjuktivitis. U roku od 1-2 dana razvija se eritematozni, makulopapulozni osip, koji se brzo širi po celom telu. Pošto infekcija takođe potiskuje ć elijski imunitet, doma ć in je u ve ć em riziku od razvoja bakterijskih superinfekcija, uključujuć i otitis srednjeg uha, pneumoniju i postinfektivni encefalomijelitis. Akutna infekcija je povezana sa značajnim morbiditetom i mortalitetom, posebno kod pothranjenih adolescenata.
[0721] Lečenje malih boginja uključuje pasivnu primenu udruženog humanog IgG, koji može sprečiti infekciju kod neimunih subjekata, čak i ako se daje do nedelju dana nakon izlaganja. Međutim, prethodna imunizacija živim, atenuiranim virusom je najefikasniji tretman i sprečava bolest kod više od 95% imunizovanih. Pošto postoji jedan serotip ovog virusa, jedna imunizacija ili infekcija obično rezultira doživotnom zaštitom od naknadne infekcije.
[0722] Kod malog dela inficiranih domać ina, boginje se mogu razviti u SSPE, što je hronični progresivni neurološki poreme ć aj koji je rezultat uporne infekcije centralnog nervnog sistema. S SPE je uzrokovana klonskim varijantama virusa morbila sa defektima koji ometaju sklapanje viriona i pupanje. Za ove pacijente bi bila poželjna reaktivacija T-ć elija sa antitelima prema pronalasku kako bi se olakšalo klirens virusa.
[0723] U drugom aspektu, infekcija je HIV. HIV napada CD4+ ć elije, uključuju ć i T-limfocite, monocitemakrofage, folikularne dendritičke ć elije i Langerhanove ć elije, a CD4+ pomo ć ne/induktorske ć elije su iscrpljene. Kao rezultat toga, doma ć in dobija ozbiljan defekt u ć elijskom posredovanju imuniteta. Infekcija HIV-om dovodi do AIDS-a kod najmanje 50% osoba, a prenosi se seksualnim kontaktom, davanjem zaražene krvi ili krvnih produkata, veštačkom oplodnjom inficiranim semenom, izlaganjem iglama ili špricevima koji sadrže krv i prenosom sa zaražene majke na novorođenče tokom porođaja.
[0724] Domać in inficiran HIV-om može biti asimptomatski ili može razviti akutnu bolest koja liči na mononukleozu – groznicu, glavobolju, bol u grlu, malaksalost i osip. Simptomi mogu napredovati do progresivne imunološke disfunkcije, uključujuć i upornu temperaturu, noć no znojenje, gubitak težine, neobjašnjivu dijareju, ekcem, psorijazu, seboroični dermatitis, herpes zoster, oralnu kandidijazu i oralnu dlakavu leukoplakiju. Oportunističke infekcije mnoštvom parazita su česte kod pacijenata čije se infekcije razvijaju u SIDU (AIDS).
[0725] Tretmani za HIV uključuju antivirusne terapije uključujuć i nukleozidne analoge, zidovudin (AST) sam ili u kombinaciji sa didanozinom ili zalcitabinom, dideoksiinozinom, dideoksicitidinom, lamidvudinom, stavudinom; inhibitori reverzne transkripte kao što su delavirdin, nevirapin, lovirid i inhibitori proteinaze kao što su sakvinavir, ritonavir, indinavir i nelfinavir. Tretmani za HIV uključuju EDURANT® (rilpivirin). Antitela pronalaska mogu da se kombinuju i sa konvencionalnim tretmanima za HIV infekcije, radi terapeutske prednosti.
[0726] U drugom aspektu, infekcija je infekcija citomegalovirusom (CMV). CMV infekcija je često povezana sa upornom, latentnom i rekurentnom infekcijom. CMV inficira i ostaje latentan u monocitima i granulocit-monocitnim progenitor ć elijama. Klinički simptomi CMV-a uključuju simptome slične mononukleozi (tj. groznica, otečene žlezde, malaksalost) i sklonost razvoju alergijskog osipa na koži na antibiotike. Virus se prenosi direktnim kontaktom. Virus se izlučuje urinom, pljuvačkom, semenom i u manjoj meri u drugim telesnim tečnostima. Prenos se takođe može desiti sa zaražene majke na njen fetus ili novorođenče i transfuzijom krvi i transplantacijom organa. CMV infekcija dovodi do opšteg ošteć enja ć elijskog imuniteta, koji se karakteriše poremeć enim blastogenim odgovorima na nespecifične mitogene i specifične CMV antigene i smanjenom citotoksičnom sposobnošć u.
[0727] Tretmani CMV infekcije uključuju antivirusne lekove ganciklovir, foskarnet i cidovir, ali ovi lekovi se obično prepisuju samo kod pacijenata sa oslabljenim imunitetom. Ovde opisana antitela prema pronalasku mogu se kombinovati sa konvencionalnim tretmanima za infekcije citomegalovirusom radi terapijske prednosti.
[0728] U drugom aspektu, infekcija je infekcija virusom Epstein-Barr (EBV). EBV može uspostaviti uporne i latentne infekcije i prvenstveno napada B ć elije. Infekcija sa EBV dovodi do kliničkog stanja infektivne mononukleoze, koje uključuje groznicu, bol u grlu, često sa eksudatom, generalizovanu limfadenopatiju i splenomegaliju. Prisutan je i hepatitis, koji se može razviti u žuticu.
[0729] Dok su tipični tretmani za EBV infekcije palijativni simptomi, EBV je povezan sa razvojem određenih karcinoma kao što su Burkittov limfom i rak nazofarinksa. Stoga bi uklanjanje virusne infekcije pre nego što se razviju komplikacije bilo od velike koristi. Antitela pronalaska mogu se kombinovati sa konvencionalnim tretmanima za infekcije virusom Epstein-Barr radi terapeutske prednosti.
[0730] U drugom aspektu, infekcija je infekcija virusom Herpes simplek (HSV). HSV se prenosi direktnim kontaktom sa zaraženim domać inom. Direktna infekcija može biti asimptomatska, ali obično dovodi do plikova koji sadrže infektivne čestice. Bolest se manifestuje kao ciklusi aktivnih perioda bolesti, u kojima se lezije pojavljuju i nestaju pošto virus latentno inficira nervni ganglij za naredne epidemije. Lezije mogu biti na licu, genitalijama, očima i/ili rukama. U nekim slučajevima, infekcija takođe može izazvati encefalitis.
[0731] Tretmani herpes infekcija su prvenstveno usmereni na rešavanje simptomatskih izbijanja i uključuju sistemske antivirusne lekove kao što su: aciklovir (npr. Zovirac®), valaciklovir, famciklovir, penciklovir i lokalni lekovi kao što su dokozanol (Abrevadin®), Tromantadin® i zilaktin. Otklanjanje latentnih infekcija herpesa bilo bi od velike kliničke koristi. Antitela pronalaska mogu se kombinovati sa konvencionalnim tretmanima za infekcije herpes virusom, a radi terapeutske prednosti.
[0732] U drugom aspektu, infekcija je humani T-limfotrofni virus (HTLV-1, HTLV-2). HTLV se prenosi seksualnim kontaktom, dojenjem ili izlaganjem kontaminiranoj krvi. Virus aktivira Th1 ć elije, što dovodi do njihove prekomerne proliferacije i prekomerne proizvodnje Th1 povezanih citokina (npr. IFN-a i TNF-a). Ovo zauzvrat dovodi do supresije Th2 limfocita i smanjenja proizvodnje Th2 citokina (npr. IL-4, IL-5, IL-10 i IL-13), što dovodi do smanjenja sposobnosti inficiranog domać ina da uspostavi adekvatan imuni odgovor na invazivne organizme koji zahtevaju Th2 zavisan odgovor za klirens (npr. parazitske infekcije, proizvodnja mukoznih i humoralnih antitela).
[0733] HTLV infekcije dovode do oportunističkih infekcija koje rezultiraju bronhiektazijama, dermatitisom i superinfekcijama sa Staphilococcus spp. i Strongiloides spp. što dovodi do smrti od polimikrobne sepse. HTLV infekcija takođe može dovesti direktno do leukemije/limfoma T-ć elija kod odraslih i progresivne demijeliniziraju ć e bolesti gornjih motornih neurona poznate kao HAM/TSP. Klirens HTLV latentnih infekcija bio bi od velike kliničke koristi. Antitela pronalaska mogu se kombinovati sa konvencionalnim tretmanima za HTLV infekcije radi terapeutske prednosti.
[0734] U drugom aspektu, infekcija je Humani papila virus (HPV). HPV prvenstveno utiče na keratinocite i javlja se u dva oblika: kožnom i genitalnom. Veruje se da se prenošenje dešava direktnim kontaktom i/ili seksualnom aktivnošć u. Kožna, a i genitalna HPV infekcija može dovesti do bradavica i latentnih infekcija i ponekad ponavljajuć ih infekcija, koje su kontrolisane imunitetom domać ina koji kontroliše simptome i blokira pojavu bradavica, ali ostavlja doma ć ina sposobnom da prenese infekciju na druge.
[0735] Infekcija HPV-om takođe može dovesti do određenih karcinoma, kao što su cervikalni, analni, vulvarni, penisni i orofarinalni karcinom. Ne postoje poznati lekovi za HPV infekciju, ali trenutni tretman je lokalna primena Imikvimoda, koji stimuliše imuni sistem da napadne zahvać eno područje. Klirens HPV latentnih infekcija bio bi od velike kliničke koristi. Antitela pronalaska mogu da se kombinuju sa konvencionalnim tretmanima HPV infekcija radi terapeutske prednosti.
Bakterijske infekcije
[0736] Neki primeri patogenih bakterija koje izazivaju infekcije koje se mogu lečiti antitelima prema pronalasku uključuju sifilis, klamidiju, rikecije bakterije, mikobakterije, stafilokoke, streptokoke, pneumonokoke, meningokoke i conococcie, conococciellau, legokoke, difterija, salmonela, bacili, kolera, tetanus, botulizam, antraks, kuga, leptospiroza i bakterije Lajmske bolesti. Antitela pronalaska se mogu koristiti u kombinaciji sa postojeć im modalitetima lečenja za gore navedene infekcije. Na primer, tretmani za sifilis uključuju penicilin (npr. penicilin G.), tetraciklin, doksiciklin, ceftriakson i azitromicin.
[0737] Lajmska bolest, koju izaziva Borrelia burgdorferi, prenosi se na ljude ubodom krpelja. Bolest se u početku manifestuje kao lokalizovan osip, prać en simptomima sličnim gripu, uključuju ć i slabost, groznicu, glavobolju, ukočenost vrata i artralgije. Kasnije manifestacije mogu uključivati migracioni i poliartikularni artritis, neurološke i srčane zahvać enosti sa paralizom kranijalnih nerava i radikulopatijom, miokarditisom i aritmijama. Neki slučajevi lajmske bolesti postaju uporni, što dovodi do nepovratnog ošteć enja analognog tercijarnom sifilisu. Trenutna terapija za lajmsku bolest uključuje prvenstveno davanje antibiotika. Sojevi otporni na antibiotike mogu se lečiti hidroksihlorokinom ili metotreksatom. Pacijenti otporni na antibiotike sa neuropatskim bolom mogu se lečiti gabapentinom. Minociklin može biti od pomoć i kod kasne/hronične Lajmske bolesti sa neurološkim ili drugim inflamatornim manifestacijama.
[0738] Drugi oblici borelije, kao što su oni koji su rezultat B. recurentis, B. hermsii, B. turicatae, B. parikeri, B. hispanica, B. duttonii i B. persica, kao i leptospiroza (npr. L. interrogans ), obično se spontano povlače osim ako titri u krvi ne dostignu koncentracije koje izazivaju intrahepatičnu opstrukciju.
Gljive i paraziti
[0739] Neki primeri patogenih gljiva koje izazivaju infekcije koje se mogu lečiti antitelima pronalaska uključuju Candida (albicans, krusei, glabrata, tropicalis, itd.), Criptococcus neoformans, Aspergillus (fumigatus, niger, itd.), Genus Mucorales. (mucor, absidia, rhizophus), Sporothrik schenkii, Blastomices dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis i Histoplasma capsulatum.
[0740] Neki primeri patogenih parazita koji izazivaju infekcije koje se mogu lečiti ovde opisanim antitelima prema pronalasku uključuju Entamoeba histolitica, Balantidium coli, Naegleriafovleri, Acanthamoeba sp., Giardia lambia, Criptosporidium sp., Pneumiomiaia, Pneumiomiaia, pp. , Tripanosoma cruzi, Leishmania donovani, Tokoplasma gondi i Nippostrongilus brasiliensis.
Dijagnostičke upotrebe i kompleti
Kompleti
[0741] Pronalazak takođe obezbeđuje komplet koji sadrži antagonističko antitelo koje se specifično vezuje za PD-1 pronalaska.
[0742] Pronalazak takođe obezbeđuje komplet koji sadrži antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo koje sadrži prvi domen koji se specifično vezuje za PD-1 i drugi domen koji se specifično vezuje za TIM-3 prema pronalasku.
[0743] Komplet se može koristiti za terapeutske svrhe i kao dijagnostički kompleti.
[0744] Komplet se može koristiti za detekciju prisustva PD-1, TIM-3 ili PD-1 i TIM-3 u biološkom uzorku.
[0745] U nekim realizacijama, komplet sadrži ovde opisano antitelo pronalaska i reagense za detekciju he antitela. Komplet može uključivati jedan ili više drugih elemenata uključujuć i: uputstva za upotrebu; drugi reagensi, na primer, obeleživač, terapeutski agens, ili agens koji je koristan za helovanje, ili na drugi način kuplovanje, antitela na obeleživač ili terapeutsko sredstvo, ili radioprotektivnu kompoziciju; uređaji ili drugi materijali za pripremu antitela za primenu; farmaceutski prihvatljivi nosači; i uređaji ili drugi materijali za administraciju subjektu.
[0746] U nekim realizacijama, komplet sadrži antitelo pronalaska u kontejneru i uputstva za upotrebu kompleta.
[0747] U nekim realizacijama, antitelo u kompletu je obeleženo.
[0748] U nekim realizacijama, komplet sadrži antagonističko antitelo koje se specifično vezuje za PD-1 koje sadrži VH SEK ID NO: 48 i VL SEK ID BR: 56.
[0749] U nekim realizacijama, komplet sadrži antagonističko bispecifično PD-1/TIM-3 antitelo koje sadrži HC1, LC1, HC2 i LC2 od
SEK ID BR-vi: 186, 188, 190 i 193, respektivno;
SEK ID BR-vi: 186, 188, 191 i 194, respektivno;
SEK ID BR-vi: 186, 188, 192 i 195, respektivno;
SEK ID BR-vi: 186, 188, 248 i 194, respektivno;
SEK ID BR-vi: 241, 188, 244, 195, respektivno;
SEK ID BR-vi: 241, 188, 245, 194, respektivno;
SEK ID BR-vi: 243, 188, 246, 194, respektivno; ili
SEK ID BR-vi: 243, 188, 247, 195, respektivno.
Metode detekcije PD-1, TIM-3 ili PD-1 i TIM-3
[0750] Pronalazak takođe obezbeđuje metod detekcije PD-1 u uzorku, koji obuhvata dobijanje uzorka, dovođenje u kontakt uzorka sa antagonističkim antitelom koje specifično vezuje PD-1 pronalaska, i detekciju antitela vezanog za PD-1 u uzorak.
[0751] Pronalazak takođe obezbeđuje metod detekcije PD-1 i TIM-3 u uzorku, koji obuhvata dobijanje uzorka, dovođenje u kontakt uzorka sa antagonističkim bispecifičnim PD-1/TIM-3 antitelom koje sadrži prvi domen koji se specifično vezuje za PD- 1 i drugi domen koji specifično vezuje TIM-3 pronalaska, i detektuje antitelo vezano za PD1 i TIM-3 u uzorku.
[0752] U nekim realizacijama, uzorak može biti izveden iz urina, krvi, seruma, plazme, pljuvačke, ascitesa, cirkulišuć ih ć elija, cirkulišuć ih tumorskih ć elija, ć elija koje nisu povezane sa tkivom (tj. slobodne ć elije), tkiva (npr. hirurški resecirano tumorsko tkivo, biopsije, uključujuć i aspiraciju finom iglom), histološki preparati i sl.
[0753] Antitela pronalaska vezana za PD-1, TIM-3 ili PD-1 i TIM-3 mogu se detektovati korišć enjem poznatih metoda. Primeri metoda obuhvataju direktno obeležavanje antitela korišć enjem fluorescentnih ili hemiluminiscentnih oznaka, ili radioobeležavanja, ili vezivanje za antitela prema pronalasku dela koji se lako može detektovati, kao što su biotin, enzimi ili oznake epitopa. Primeri oznaka i delova su rutenijum, 111In-DOTA, 111In-dietilentriaminpentasirć etna kiselina (DTPA), peroksidaza rena, alkalna fosfataza i beta-galaktozidaza, poli-histidin (HIS oznaka), akridin-boje, fluoridin fluorid, fluorid, fluorid, boje, rodaminske boje i Alekafluor® boje.
[0754] Antitela pronalaska mogu da se koriste u različitim testovima za detekciju PD-1, TIM-3 ili PD-1 i TIM-3 u uzorku. Primeri testova su Vestern blot analiza, radioimunoesej, površinska plazmonska rezonanca, imunoprecipitacija, ravnotežna dijaliza, imunodifuzija, elektrohemiluminiscencijski (ECL) imunoesej, imunohistohemija, fluorescentna ELI-aktivirana ć elija (FACS sortiranje) ilić elija.
[0755] Sadašnji pronalazakć e sada biti opisan u vezi sa slede ć im specifičnim, neograničavaju ć im primerima.
Primer 1. Opšte metode
Reakcija prečišć enih humanih mešovitih limfocita (MLR)
[0756] Prečišć ena humana mešovita limfocitna reakcija (MLR test) je koriš ć ena za merenje promena u proizvodnji citokina indukovano dodavanjem test antitela u ko-kulture CD4+ Tć elija i dendritskih ć elija.
[0757] Mononuklearne ć elije periferne krvi (PBMC) su izolovane iz leukopaka (Biological Specialti Corporation) koriste ć i Ficoll gradijent. CD4+ Tć elije su zatim sveže izolovane negativnom selekcijom iz PBMC pomo ć u Miltenii Perle za izolaciju AutoMACS i CD4+ Tć elija prema uputstvima proizvođača ili su komercijalno kupljene kao zamrznute CD4+ T ć elije (Hemacare Corporation). Korišć en je jedan donor dendritičnih ć elija (Hemacare Corporation). Posle izolacije ili odmrzavanje, CD4+ T ć elije i dendritske ć elije su isprane i resuspendovane u medijumu za ispitivanje (dodatak medijumu RMPI1640 sa 10% fetalnog goveđeg seruma, 1% penicilina/streptomicina, IKS neesencijalnih amino kiselina i IKS natrijum piruvata Invitrogen). Prečišć ene humane CD4+ T ć elije su razblažene do 13106 ć elija/mL i zasejane na 100,000 ć elija/100 mL/bunari ć u. Dendritične ć elije su razblažene do 0,13106 ć elija/mL i zasejane na 5,000 ć elija/50 mL/bunari ć u u ploče sa U-dnom. Testna antitela ili kontrolna antitela su pripremljena u koncentraciji od 4Ks u medijumu za ispitivanje dajuć i IKS kada je dodato 50 mL antitela do 150 mL ć elija.
[0758] Serijska razblaženja od 10 tačaka testnih ili kontrolnih antitela su dodata u bazene/posude u konačnoj koncentraciji od: 30, 10, 3,33, 1,11, 0,37, 0,12, 0,04, 0,01, 0,0046 i 00015 nM. CD4+ T ć elije plus dendritične ć elije i same dendritske ć elije su bile uključeni kao kontrole za merenje bazalne sekrecije citokina. Ć elije su održavane na 37°C, 5% CO2tokom 5 dana. Na dan 5, 100 mL supernatanta kulture tkiva je uklonjeno sa ploča za kulturu i prebačeno na ploče sa V-dnom. Supernatant je zamrznut najmanje preko noć i na -80 °C. Kumulativna proizvodnja citokina je merena u supernatantu kulture tkiva koriš ć enjem "Meso Scale Discovery" (MSD) Th1/Th2 humanih citokina 10-pleks ploča prema protokolu proizvođača. Ukratko, MSD ploče su blokirane sa 1% blokatorom B preko noć i na 4 °C. Slede ć eg dana blokator je uklonjen i ploče su postavljene oprane, pomo ć u Biotek 406 mašine za pranje ploča. Standardna kriva od 8 tačaka je pripremljena i dodata u duplikatu ploče. Odmrznuti supernatant kulture tkiva je dodat u količini od 25 mL/posudi. Ploče su zatvorene i snažno muć kane tokom 1,5 sati. Bez uklanjanja standarda ili supernatanta, 25 mL detekcionog antitela je dodato u svaki bunar. Ploče su bile zatvoreno i snažno muć kano 1,5 sat. Ploče su isprane, dodat je pufer za očitavanje i ploče su očitane korišć enjem "Meso Scale Discovery" čitač ploča.
[0759] Koncentracije citokina su izračunate pomoć u MSD softvera. Koncentracija citokina u nepoznatim uzorcima izračunava se upoređivanjem nepoznatog izlaznog signala sa izlaznim signalom i poznatim koncentracijama citokina u
standardna kriva. Izračunate koncentracije su postavljene u softver Spotfire TIBCO za vizuelizaciju. Posle vizuelnog inspekcija podataka, MAD-medijan outlier procedura sa pragom od 3,5 je korišć ena za identifikaciju i isključenje odstupanja na log transformisanim podacima. Izvršena je robusna analiza polumaksimalne efektivne koncentracije (Robust EC50), svaki citokin za svako antitelo.
CMV test
[0760] Test opoziva antigena citomegalovirusa (CMV test) je korišć en za merenje promena u proizvodnji citokina izazvanih dodavanjem test antitela u kulture mononuklearnihć elija periferne krvi (PBMC) sa celim antigenom CMV (za PD-1 antitela) ili sa skup od 138 15-mer peptida koji se preklapaju kroz fosfoprotein od 65 kd (pp65) (za TIM-3 mAbs i PD1/TIM-3 bispecifična mAbs).
[0761] Nakon odmrzavanja, PBMCs (Astarte Biologics and Hemcare Corporation) su isprani i resuspendovani u medijumu za ispitivanje (RMPI1640 medijum sa dodatkom 10% fetalnog goveđeg seruma, 1% penicilina/streptomicina, IKS neesencijalnih amino kiselina i IKS natrijuma -Invitrogen). PBMC su razblaženi do 1,53106 ć elija/mL i zasejani na 150,000 ć elija/100 mL/bunarić u. CMV antigen (Astarte Biologics) je pripremljen u 4Ks koncentraciji od 0,4 mg/mL u medijumu za ispitivanje koji daje 0,1 mg/mL kada je 50 mL antigena dodato u 100 mLć elija i 50 mL antitela. Antitela su pripremljena u koncentraciji od 4Ks u medijumu za ispitivanje koji daje IKS kada je 50 mL antitela dodatoć elijama i peptidu.
[0762] Serijska razblaženja test antitela su dodata u bazene u konačnoj koncentraciji između 150 -0,001 nM. Ć elije plus CMV antigen ili skup pp65, same ć elije i kontrola izotipa pripremljena u konačnoj koncentraciji od 50 ili 30 nM uključeni su korišćene kao kontrole za merenje bazalne sekrecije citokina. Ć elije su održavane na 37 °C, 5% CO2 tokom 6 dana. Za MSD analizu, 6. dana, 100 mL supernatanta kulture tkiva je uklonjeno sa ploča za kulturu i prebačeno na ploče sa V-dnom. Supernatant je zamrznut najmanje preko noć i na -80°C. Kumulativna proizvodnja citokina je merena u supernatantu kulture tkiva koriš ć enjem "Meso Scale Discovery" (MSD) Th1/Th2 humanih citokina 10-pleks ploča prema protokolu proizvođača. Ukratko, MSD ploče su blokirane sa 1% blokatorom B preko noć i na 4 °C. Slede ć eg dana, blokator je uklonjen i ploče su isprane pomo ć u Biotek 406 mašine za pranje ploča. Standardna kriva od 8 tačaka je pripremljena i dodata u duplikatu na ploče. Odmrznuti supernatant kulture tkiva je dodat u količini od 25 mL/posudi, ploče su zatvorene i snažno muć kane tokom 1,5 sata. Bez uklanjanja standarda ili supernatanta, 25 mL detekcionog antitela je dodato u svaki bunar. Ploče su zatvorene i snažno muć kane 1,5 sata. Ploče su isprane, dodat je pufer za očitavanje i ploče su očitane korišć enjem čitača ploča "Meso Scale Discovery".
[0763] Koncentracije citokina su izračunate pomoć u MSD softvera. Koncentracija citokina u nepoznatim uzorcima se izračunava upoređivanjem izlaznog signala nepoznatog sa izlaznim signalom i poznatim koncentracijama citokina u standardnoj krivoj. Izračunate koncentracije su postavljene u softver Spotfire TIBCO za vizuelizaciju. Nakon vizuelne inspekcije podataka, MAD-medijan outlier procedura sa pragom od 3,5 je korišć en za identifikaciju i isključenje outliera na log transformisanim podacima. Robusna analiza polumaksimalne efektivne koncentracije (Robust EC50) je sprovedena na svakom citokinu za svako antitelo.
[0764] Za TIM-3 antitela i PD 1/TIM-3 bispecifična antitela, 6-og dana, nakon što je supernatant sakupljen za MSD analizu, ć elije su jednom isprane sa PBS i zatim obojene na diskriminaciju "Živi/Mrtvi" i slede ć i markere površine ć elije : CD3, CD4, CD8, CD137, PD-1 i TIM-3. Protočna citometrija je izvedena na LSR Fortessa (BD). Podaci su analizirani korišć enjem softvera Flov Jo. i CD137+ ć elije su identifikovane na osnovu "Fluorescence Minus One" (FMO) metode na vitalnim CMV-tretiranim CD8+ i CD4+ ć elijama.
[0765] Za eksperimente sekvencijalnog tretmana, testovi opoziva CMV-a su izvedeni kao gore sa stimulacijom pp65 peptidnog skupa tokom šest dana. Šestog dana, supernatant je uklonjen i ć elije su restimulisane sa pp65 pulom u prisustvu anti-TIM-3 antitela. Dvadeset četiri sata kasnije, supernatant je uklonjen i nivoi IFN-• mereni su pomoć u MSD-a, kao što je gore opisano.
Test inhibicije PD-1 liganda
[0766] Dizajn testa inhibicije liganda je zasnovan na MSD (Mescoscale Discoveri). MSD ploča je direktno obložena ligandom (cinoPDL1-ECD, huPDL1-ECD ili huPDL2-ECD) i inkubirana preko noć i na 4°C. Slede ć eg dana, rastvor za oblaganje je uklonjen i ploča je blokirana. Fiksna koncentracija biotinilovanog PD-1 (huPD1-ECD) je prethodno inkubirana sa antitelima ili sa kontrolnim antitelom izotipa kao negativnom kontrolom. U zavisnosti od panela antitela koja se testiraju, antitela su testirana kao titracije ili u fiksnoj koncentraciji. MSD ploča je isprana i biotinilovana mešavina PD-1/antitela je dodata na MSD ploču obloženu ligandom. Ploča je isprana i biotinilovani PD-1 vezan za ligand je detektovan rutenilovanim streptavidinom. Inhibicija vezivanja PD-1 antitelom je rezultirala smanjenim signalom u MSD testu. Određeno je maksimalno vezivanje biotinilovanog PD-1 u odsustvu inhibitora i ponekad korišć eno da se podaci normalizuju na procenat maksimalnog biotinilovanog PD-1 signala. mAbs koja su bila pozitivna na inhibiciju vezivanja liganda u jednoj koncentraciji su takođe testirana u odgovorima na dozu za inhibiciju različitih PD-1 liganada.
Jurkatć elijsko vezivanje
[0767] Jurkat ć elije su stimulisane preko no ć i sa 20 ng/ml PHA, sakupljene, isprane i proverene na održivost. Ć elije su zatim inkubirane na 6-10°C tokom 45-60 minuta sa različitim koncentracijama test antitela, isprane i inkubirane na 6-10°C tokom 45-60 minuta sa FITC obeleženim kozjim anti-humanim IgG. Ć elije su isprane i fiksirane sa BD Citofik-om, ohlađene preko no ć i i analizirane na MACSKuant protočnom citometru. Procenat PD-1 pozitivnih ć elija pri svakoj koncentraciji antitela je prikazan u zavisnosti od log koncentracije antitela i vrednosti EC50 su generisane u Prism-u.
Merenje afiniteta
PD-1 mAbs
[0768] Anti-PD-1 mAbs su testirani na afinitet vezivanja za huPD1-ECD i cinoPD-1-ECD. Merenje afiniteta korišć enjem površinske plazmonske rezonance (SPR) izvedeno je korišć enjem sistema ProteOn KSPR36. Površina biosenzora je pripremljena kuplovanjem smeše anti-IgG Fc modifikovanog alginatnog polimera površine sloja GLC čipa korišć enjem uputstva proizvođača za hemiju spajanja amina. Test mAbs su uhvać eni i njihove interakcije sa analitima (huPD1-ECD ili cinoPD1-ECD) su pra ć ene u puferu na bazi PBS na 25°C. Prikupljeni podaci su obrađeni i ugrađeni u Langmuir 1:1 model vezivanja. Rezultat za svako mAb je prijavljen u formatu kon (On-rate), koff (Off-rate) i KD (ravnotežna konstanta disocijacije).
Test inhibicije TIM-3 liganda
[0769] TIM-3/galektin-9 kompetitivni ELISA testovi su rađeni vezivanjem 1 mg/ml rekombinantne ljudske Fc-TIM-3 himere (R&D Sistems-cat#: 2365-TM-05) u PBS po bunarčić u od 96 bunarči ć a Bela Makisorp ploča (Nunc). Ploče su isprane i blokirane sa StartingBlock T20 (Pierce) i u otvore je dodat inhibitor u koncentraciji od 10 mg/ml. Bez ispiranja, 7,5 mg/ml galektina-9 at je dodato u bazenčić e i inkubirano 30 min. Zatim je dodato poliklonsko antitelo anti-galektin-9-biotin (R&D Sistems) u količini od 0,5 mg/mL i inkubirano 30 minuta. Ploče su isprane i dodat je neutravidin-HRP-konjugovan (Pierce) i ploče su inkubirane dodatnih 45 minuta. Ploče su isprane i dodat je POD hemiluminiscencijski supstrat (Roche) neposredno pre očitavanja ploča i luminiscencije očitana na luminometru.
Generisanje antigena korišć enih u studiji
[0770] Kloniranje, ekspresija i prečišć avanje antigena je obavljeno koriš ć enjem standardnih metoda. Različiti fragmenti proteina su eksprimirani kao heksahistidinski tag ili Fc fuzioni proteini. Aminokiselinske sekvence korišć enih proteina bez sekvenci oznaka su prikazane u SEK ID BR: 1-9,138 i 89.
Ljudski PD1 pune dužine (huPD1); SEK ID BR: 1
Ekstracelularni domen humanog PD1 (huPD1-ECD); SEK ID BR: 2
Macaca fascicularis (cinomolgous, ovde nazvan cino) PD1 (cPD1); SEK ID BR: 3)
Ekstracelularni domen cino PD1 (cPD1-ECD); SEK ID BR: 4
Ljudski PD-L1 pune dužine (huPD-L1); SEK ID BR: 5
Ekstracelularni domen humanog PD-L1 (huPDL1-ECD) SEK ID BR: 6
Ekstracelularni domen cinomolgusa PD-L1 (cinoPDL1-ECD) SEK ID BR: 7
Ekstracelularni domen humanog PD-L2 (huPDL2-ECD) SEK ID BR: 8
Ekstracelularni domen mišjeg PD1 (musPD1-ECD) SEK ID BR: 9
Ljudski TIM-3 pune dužine, SEK ID BR: 138
Ekstracelularni domen humanog TIM-3 (huTIM-3-ECD) SEK ID BR: 89
Primer 2. Selekcija humanih anti-PD-1 antitela iz biblioteka za prikaz faga
Merenje afiniteta
PD-1 mAbs
[0768] Anti-PD-1 mAbs su testirani na afinitet vezivanja za huPD1-ECD i cinoPD-1-ECD. Merenje afiniteta korišć enjem površinske plazmonske rezonance (SPR) izvedeno je korišć enjem sistema ProteOn KSPR36. Površina biosenzora je pripremljena kuplovanjem smeše anti-IgG Fc modifikovanog alginatnog polimera površine sloja GLC čipa korišć enjem uputstva proizvođača za hemiju spajanja amina. Test mAbs su uhvać eni i njihove interakcije sa analitima (huPD1-ECD ili cinoPD1-ECD) su pra ć ene u puferu na bazi PBS na 25°C. Prikupljeni podaci su obrađeni i ugrađeni u Langmuir 1:1 model vezivanja. Rezultat za svako mAb je prijavljen u formatu kon (On-rate), koff (Off-rate) i KD (ravnotežna konstanta disocijacije).
Test inhibicije TIM-3 liganda
[0769] TIM-3/galektin-9 kompetitivni ELISA testovi su rađeni vezivanjem 1 mg/ml rekombinantne ljudske Fc-TIM-3 himere (R&D Sistems-cat#: 2365-TM-05) u PBS po bunarčić u od 96 bunarči ć a Bela Makisorp ploča (Nunc). Ploče su isprane i blokirane sa StartingBlock T20 (Pierce) i u otvore je dodat inhibitor u koncentraciji od 10 mg/ml. Bez ispiranja, 7,5 mg/ml galektina-9 at je dodato u bazenčić e i inkubirano 30 min. Zatim je dodato poliklonsko antitelo anti-galektin-9-biotin (R&D Sistems) u količini od 0,5 mg/mL i inkubirano 30 minuta. Ploče su isprane i dodat je neutravidin-HRP-konjugovan (Pierce) i ploče su inkubirane dodatnih 45 minuta. Ploče su isprane i dodat je POD hemiluminiscencijski supstrat (Roche) neposredno pre očitavanja ploča i luminiscencije očitana na luminometru.
Generisanje antigena korišć enih u studiji
[0770] Kloniranje, ekspresija i prečišć avanje antigena je obavljeno koriš ć enjem standardnih metoda. Različiti fragmenti proteina su eksprimirani kao heksahistidinski tag ili Fc fuzioni proteini. Aminokiselinske sekvence korišć enih proteina bez sekvenci oznaka su prikazane u SEK ID BR: 1-9,138 i 89.
Ljudski PD1 pune dužine (huPD1); SEK ID BR: 1
Ekstracelularni domen humanog PD1 (huPD1-ECD); SEK ID BR:
Macaca fascicularis (cinomolgous, ovde nazvan cino) PD1 (cPD1); SEK ID BR: 3)
Ekstracelularni domen cino PD1 (cPD1-ECD); SEK ID BR: 4
Ljudski PD-L1 pune dužine (huPD-L1); SEK ID BR: 5
Ekstracelularni domen humanog PD-L1 (huPDL1-ECD) SEK ID BR: 6
Ekstracelularni domen cinomolgusa PD-L1 (cinoPDL1-ECD) SEK ID BR: 7
Ekstracelularni domen humanog PD-L2 (huPDL2-ECD) SEK ID BR: 8
Ekstracelularni domen mišjeg PD1 (musPD1-ECD) SEK ID BR: 9
Ljudski TIM-3 pune dužine, SEK ID BR: 138
Ekstracelularni domen humanog TIM-3 (huTIM-3-ECD) SEK ID BR: 89
Primer 2. Selekcija humanih anti-PD-1 antitela iz biblioteka za prikaz faga
[0771] PD-1 vezujuć i Fabs odabrani su iz de novo pIKS fag displej biblioteka kao što je opisano u Shi et al., J Mol Biol 397:385-96, 2010, Int. Patent Publ. br. VO2009/085462 i U.S. Patent Publ. br. US2010/0021477. Ukratko, biblioteke su generisane diverzifikacijom ljudskih skela gde su geni VH zametne linije IGHV1-69<•>01, IGHV3-23•01 i IGHV5-51<•>01 rekombinovani sa ljudskim IGHJ-4 minigenom preko H3 petlje i VL ljudske zametne linije kapa geni 012 (IGKV1-39*01), L6 (IGKV3-11*01), A27 (IGKV3-20•01) i B3 (IGKV4-1*01) su rekombinovani sa IGKJ-1 minigenom da se sastavi kompletan VH i VL domene. Pozicije u varijabilnim regionima teškog i lakog lanca oko HI, H2, L1, L2 i L3 petlji koje odgovaraju pozicijama koje su identifikovane da su često u kontaktu sa proteinskim i peptidnim antigenima izabrane su za diversifikaciju. Raznolikost sekvenci na odabranim pozicijama bila je ograničena na ostatke koji se javljaju na svaka pozicija u porodicama gena IGHV ili IGLV zametne linije odgovarajuć ih IGHV ili IGLV gena. Raznolikost u H3 petlji je stvorena koriš ć enjem kratkih do srednjih sintetičkih petlji dužine 7-14 aminokiselina. Distribucija amino kiselina na H3 je dizajnirana da oponaša uočene varijacije aminokiselina u ljudskim antitelima. Dizajn biblioteke je detaljno opisan u Shi et al., (2010) J Mol Biol 397:385-96. Skele koje se koriste za generisanje biblioteka su nazvane prema njihovom poreklu gena za zametnu liniju VH i VL. Tri biblioteke teških lanaca su kombinovane sa četiri laka lanca zametne linije ili kombinovane sa raznovrsnim bibliotekama lakih lanaca da bi se stvorilo 12 jedinstvenih VH:VL kombinacija. Ove biblioteke su kasnije dalje kombinovane na osnovu verzija biblioteke da bi se generisale dodatne biblioteke za eksperimente pomeranja prema PD-1.
[0772] Biblioteke su analizirane protiv huPD1-ECD, cinoPD1-ECD, musPD1-ECD, huPD1-Fc i/ili musPD1Fc. Rekombinantni proteini su biotinilovani (bt) i uhvać eni na magnetnim kuglicama streptavidina (Dinal), zatim izloženi de novo pIKS Fab bibliotekama u konačnoj koncentraciji od 100 nM ili 10 nM. Nespecifični fagi su isprani u PBS-Tveen, a vezani fagi su pronađeni infekcijom ć elija MC1061F’ E. coli. Fagi su umnoženi iz ovih ć elija preko no ć i i panovanje je ponovljeno u ukupno tri ili četiri kruga. Nakon poslednje runde biopaninga, monoklonalni Fab je testiran na vezivanje za huPD1-ECD, huPD1-Fc, musPD1-Fc i/ili cinoPD1-Fc u dva ELISA formata. U Formatu 1, Fab je uhvać en na ELISA ploči pomo ć u anti-Fd antitela i različiti oblici btPD1 su dodati uhvać enom Fab, nakon čega je usledila detekcija bt-PD1 sa Streptavidin:HRP. U Formatu 2, različiti oblici btPD1 su uhvać eni na ELISA pločama pomo ć u Streptavidina i izlučeni Fab je dodat uhva ć enom antigenu, nakon čega je usledila detekcija Fab sa GoatAntiFab’2HRP. Klonovi koji su pokazali vezivanje za proteine sekvencionirani su u varijabilnim regionima teškog i lakog lanca.
[0773] Fab iz humanog PD-1 ili mišjeg PD-1 selekcije su zatim testirani na unakrsnu reaktivnost na cinoPD1-Fc izlučeno u supernatantu ć elija sisara. Fab je uhva ć en na ELISA ploči pomo ć u anti-Fd antitela i cinoPD1Fc supernatant je dodat uhva ć enom Fab, nakon čega je usledila detekcija cinoPD1-Fc sa GoatAntiHumanFc:HRP. Na osnovu karakteristika vezivanja za cinoPD1-Fc, odabrana su antitela za dalju karakterizaciju.
[0774] Odabrane Fabs su odabrane za dalju karakterizaciju i klonirane su kao IgG2sigma/k. IgG2sigma je ukinuo efektorske funkcije i ima zamene V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S i P331S u poređenju sa divljim tipom IgG2. IgG2sigma je opisan u US patentu br. 8,961,967. Antitela su procenjena na osnovu njihove sposobnosti da blokiraju vezivanje humanog PD-1 za cinomolgus PD-L1, afiniteta za humane i cinomolgusove PD-1 proteine i njihove sposobnosti da se vezuju za ć elije koje endogeno eksprimiraju humani PD-1 (Jurkat ć elije). Antitela su naknadno procenjena na njihovu sposobnost da blokiraju vezivanje humanog PD-L1 i humanog PD-L2 za huPD1.
[0775] Na osnovu rezultata, nekoliko antitela je izabrano za sazrevanje afiniteta. Karakteristike odabranih antitela odabranih za sazrevanje afiniteta prikazane su u tabeli 7.
Tabela 7
Primer 3. Sazrevanje afiniteta humanih anti-PD-1 antitela
[0776] Antitela PD1B70, PD1B71 i PD1B114 (bliski homolog PD1B11), sazrela su prema afinitetu u Fab formatu korišć enjem biblioteka za prikaz faga sa raznovrsnošć u na odabranim VL pozicijama i na HCDR1 i HCDR2. Dizajn biblioteka sazrevanja afiniteta za svaki Fab je prikazan u tabeli 8. Numerisanje ostataka je prema PD1B114 VH SEK ID BR: 41 u tabeli 8.
Tabela 8
[0777] Biblioteke su konstruisane i fag je generisan. VH i VL biblioteke faga su zatim korišć ene za panning faga protiv huPD 1-ECD i cinoPD1-ECD biotinilovanih rekombinantnih proteina. Nakon paniranja faga, rastvorljivi Fabs su testirani na vezivanje i za humani i za cino PD-1. Odabrani Fabs su klonirani kao IgG2sigma izotip i okarakterisani po vezivanju Jurkat ć elija i inhibiciji cinomolgus PD-L1 liganda u koncentracijama od 1 mg/ml i 10 mg/ml.
[0778] Tabela 9 prikazuje rezultate karakterizacije matičnih i afinitetno sazrelih antitela.
Tabela 9
[0779] Antitela sazrela afinitetom su procenjena u eksperimentima afiniteta kao što je gore opisano korišć enjem ProteOn SPR analiza za vezivanje za huPD1-ECD i cinoPD 1-ECD. Karakteristike vezivanja mAbs za cino PD-1 su prikazane u tabeli 10 i za humani PD-1 u tabeli 11. STDEV je izračunat za 3 ili više replika generisanih za humane i cino proteine. Ako je izračunato manje od 3 ponavljanja, naznačen je RANGE. RANGE se definiše kao niske i visoke vrednosti za testirane replike. Za uzorke u Tabeli 10 ili Tabeli 11 bez vrednosti naznačene u RANGE ili STDEV, izveden je samo jedan eksperiment. Varijante sa najboljim afinitetom su imale afinitet za humani i cino PD-1 u jednocifrenom opsegu nM nakon ~4-20 puta već eg afiniteta u poređenju sa njihovim roditeljskim mAbs.
Tabela 10.
Tabela 11.
Primer 4. Kombinovana varijanta proizvodnje PD-1 mAb
[0780] Nakon analize rezultata afiniteta, razmatrane su kombinatorne sekvence.
[0781] PD1B11 i PD1B114 imaju veoma slične sekvence. Pošto je PD1B11 imao približno 3 puta čvršć i afinitet prema humanom PD-1 i 2 puta već i afinitet prema cino PD-1 u poređenju sa PD1B114, napravljena su antitela koja imaju kombinacije njihovih različitih CDR-ova. HCDR3 PD1B11 je stavljen u PD1B164 i PD1B162 (varijante PD1B114 sazrele sa afinitetom), korišć enjem mutageneze usmerene na mesto, dok je HCDR2 PD1B164 (varijanta sazrela sa afinitetom PD1B114) smeštena u varijantu zrelosti PD1B114 sa afinitetom (PD1B1B11 zrelosti PD71PD1B1). Dobijeni teški lanci su upareni sa matičnim lakim lancima, što je rezultiralo novim antitelima PD1B194, PD1B195 i PD1B196, respektivno.
[0782] PD1B175 i PD1B177 su sadržali roditeljski laki lanac iako su antitela generisana korišć enjem raznovrsnih VL biblioteka tokom sazrevanja afiniteta. U pokušaju da se poveć a afinitet antitela, PD1B175 teški lanac je uparen sa lakim lancima sazrelim na afinitetu PD1L185 ili PD1L187, a teški lanac PD1B177 je uparen sa PD1L86, PD1L168 ili PD1L190 afinitetom sazrelim lakim lancima PDB21, PDB291, lakim lancima sazrelim PDB291, PDB291 PD1B201. VH i VL uparivanje antitela je prikazano u tabeli 20 u Primeru 5.
[0783] HCDR, LCDR, VH i VL sekvence ovih antitela su prikazane u tabelama 14, 15, 16, 17, 18, 19, 21 i 22 u Primeru 5. Antitela su klonirana kao IgG2sigma/k mAbs i prolazno eksprimirana u HEK293 ekspić elijama za merenja afiniteta.
[0784] Afiniteti rezultujuć ih antitela su određeni kako je gore opisano. Tabela 12 pokazuje izmerene afinitete kombinatornih varijanti mAb prema cino PD-1, a tabela 13 prikazuje afinitete prema humanom PD-1. STDEV je izračunat za 3 ili više replika generisanih za humane i cino proteine. Ako je izračunato manje od 3 ponavljanja, naznačen je RANGE. RANGE se definiše kao niske i visoke vrednosti za testirane replike. Za uzorke bez RANGE ili STDEV izveden je samo jedan eksperiment
Tabela 12.
Tabela 13.
Primer 5. Strukturna karakterizacija anti-PDl antitela dobijenih iz biblioteka displeja faga
[0785] Sekvence cDNK i translacije aminokiselina antitela su dobijene korišć enjem standardnih tehnika tokom generisanja antitela korišć enjem različitih kampanja. Nakon određivanja polipeptidne sekvence, neka cDNK antitela koje kodiraju varijabilne regione ili antitela pune dužine su optimizovane kodonima korišć enjem standardnih metoda za ekspresiju uve ć ane veličine.
Tabela 14 prikazuje HCDR1 sekvence odabranih PD-1 antitela.
Tabela 15 prikazuje HCDR2 sekvence odabranih PD-1 antitela.
Tabela 16 prikazuje HCDR3 sekvence odabranih PD-1 antitela.
Tabela 17 prikazuje LCDR1 sekvence odabranih PD-1 antitela.
Tabela 18 prikazuje LCDR2 sekvence odabranih PD-1 antitela.
Tabela 19 prikazuje LCDR3 sekvence odabranih PD-1 antitela.
Tabela 20 prikazuje uparivanje VH i VL odabranih PD-1 antitela.
Tabela 21 prikazuje VH sekvence odabranih PD-1 antitela.
Tabela 22 prikazuje VL sekvence odabranih PD-1 antitela.
Tabela 14.
Tabela 15.
Tabela 16.
Tabela 17.
Tabela 18.
Tabela 19.
Tabela 20.
Tabela 21.
Tabela 22.
[0786] Sva identifikovana anti-PD-1 antitela su imala za okvir VH1-69 (SEK ID BR: 170) and IGKV3-11 (L6) (SEQ ID BR: 171).
SEK ID BR: 170
SEK ID BR: 171
Primer 6. Generisanje i karakterizacija PD-1 antitela kod miševa
[0787] BALB/c su imunizovani intraperitonealno sa huPD1-ECD i procenjeni na specifične titre IgG. Kada se dobije dovoljan titar, splenociti su izolovani i spojeni sa FO ć elijama. Dobijeni hibridomi su postavljeni u ploče sa 96 jažica i kultivisani 10 dana. Antigen specifični klonovi su identifikovani standardnom ELISA testom za hvatanje radi vezivanja za huPD1-ECD. Humani PD-1-specifični hibridomi su dalje testirani na njihov afinitet prema humanom i cino PD-1, vezivanje za Jurkat ć elije i inhibiciju cino PD-L1. Na osnovu rezultata, klon PD1B28 je odabran za humanizaciju korišć enjem adaptacije okvira.
[0788] Proces prilagođavanja okvira je urađen kako je suštinski opisano u U.S. Patent Publ. br. 2009/0118127 i Fransson et al., (2010) J Mol Biol 398:214-231. Ukratko, sekvence teškog i lakog lanca su upoređene sa sekvencama ljudske zametne linije (samo aleli "01" od 1. oktobra 2007.) korišć enjem BLAST pretrage u odnosu na IMGT bazu podataka (Kaas, et al., (2004) Nucl Acids Res 32 , D208-D210; Lefranc et al., (2005) Nucl Acid Res 33, D593-D597). Iz ovog skupa gena ljudske zametne linije uklonjeni su redundantni geni (100% identični na nivou aminokiselina) i oni sa neuparenim ostacima cisteina. Preostali najbliži podudarni geni ljudske zametne linije u okvirima i CDR regionima izabrani su kao akceptorski ljudski okviri. Nekoliko VL i VH humanih okvira zametne linije je odabrano na osnovu ukupne homologije sekvence i CDR dužine, kao i CDR sličnosti. FR-4 je odabran na osnovu sličnosti sekvenci gena zametne linije IGHJ/IGJK. Zatim su CDR-ovi PD1B28 prebačeni u odabrane akceptorske ljudske okvire da bi se generisale HFA varijante, osim u regionu koji odgovara HCDR1 VH. Za ovaj region, kombinacija CDR i HV, ili krać i HCDR2 (koji se naziva Kabat-7, vidi US Patent Publ. No. 2009/0118127) je prebačen iz nehumanog antitela u ljudska FR jer su preostali HCDR2 ostaci nisu pronađeni u kontaktu u kompleksima antigen-antitelo poznatih struktura (Almagro, (2004) J Mol Recognit. 17:132). Backumtations su uvedene u određene pozicije ostataka u humanizovanim antitelima. Povratne mutacije PD1B131: VH: V37I_K39L_V47S_R98S, VL: I49K. PD1B132: VHV47S_R98S, VL: I49K (numeracija ostataka prema Chothia). Odabrana antitela su izražena kao IgG2sigma/k. Dobijena antitela su okarakterisana po vezivanju za rekombinantne PD-1 i PD-1 eksprimirane na ć elijama (Jurkat ć elije) i njihovoj inhibiciji liganda (cino PD-L1 i humani PDL1).
Karakteristike odabranih humanizovanih antitela su prikazane u tabeli 23. VH i VL sekvence generisanih antitela su prikazane u
tabeli 24 i tabeli 25, respektivno.
Tabela 23.
Tabela 24.
Tabela 25.
[0789] CDR sekvence od PD1B131 i PD1B132 su pirkazane niže:
HCDR1 (SEK ID BR: 66)
RYDMS
HCDR2 (SEK ID BR: 67)
YISGGGANTYYLDNVKG
HCDR3 (SEK ID BR: 68)
PYLSYFDV
LCDR1 (SEK ID BR: 69)
RASQSLSDYLH
LCDR2 (SEK ID BR: 70)
SASQSIS
LCDR3 (SEK ID BR: 71)
QNGHSFPYT
Primer 7. Efekat prebacivanja izotipa na svojstva anti-PD-1 antitela
[0790] Varijabilni regioni antitela PD1B196 i PD1B199 (izotipa IgG2sigma/•) su klonirani kao izotipovi IgG4 S228P i varijabilni regioni iz antitela PD1B132 (od IgG2) u IgG2sigma izotip moguć e razlike u funkciji.
[0791] Antitela su nazvana PD1B244 (PD1B196 VH/VL na IgG4 S228P), PD1B245 (PD1B199 VH/VL na IgG4 S228P) I PD1B243 (PD1B132 VH/VLma na Ig).
[0792] Promena izotipa nije imala konzistentan efekat na svojstva antitela, međutim, za neka od antitela, neke promene u vrednostima EC50 su uočene u CMV testu.
[0793] Primeri u nastavku su aminokiselinske sekvence teškog i lakog lanca različitih antitela. Tabela 26 prikazuje rezime VH, VL, teškog lanca i lakog lanca SEK ID BR-vi: za odabrana antitela.
Tabela 26.
SEK ID BR: 72 HC of PD1B244
SEK ID BR: 73 LC of PD1B244
SEK ID BR: 74 HC of PD1B243
SEK ID BR: 75 LC of PD1B243
SEK ID BR: 76 HC of PD1B245
SEK ID BR: 77 LC of PD1B245
SEK ID BR: 212 HC of PD1B114
SEK ID BR: 213 LC of PD1B114
SEK ID BR 214 HC of PD1B149
SEK ID BR: 215 LC of PD1B149
SEK ID BR: 216 HC of PD1B160
SEK ID BR: 217 LC of PD1B160
SEK ID BR: 218 HC of PD1B162
SEK ID BR: 219 LC of PD1B162
SEK ID BR: 220 HC of PD1B164
SEK ID BR: 221 LC of PD1B164
SEK ID BR: 222 HC of PD1B183
SEK ID BR: 223 LC of PD1B183
SEK ID BR: 224 HC of PD1B184
SEK ID BR: 225 LC of PD1B184
SEK ID BR: 226 HC of PD1B185
SEK ID BR: 227 LC of PD1B185
SEK ID BR: 228 HC of PD1B192
SEK ID BR: 229 LC or PD1B192
Primer 8. Karakterizacija PD-1 antitela u testovima zasnovanim na ć elijama
[0794] Odabrana antitela su okarakterisana u MLR i CMV testovima korišć enjem protokola opisanih u Primeru 1. Vrednosti EC50za indukciju IFN-y iz MLR i CMV testova su prikazane u Tabeli 27. U već ini slučajeva, anti-PD-1 antitela su pokazala pove ć anje nivoa IFN-y u zavisnosti od doze u MLR i CMV testovima.
Table 27.
[0795] Pored IFN-y, sekretirani nivoi dodatnih citokina su takođe bili pogođeni blokadom PD-1 u dva testa. Nakon stimulacije CMV, anti-PD-1 antitela su dovela do doze zavisne indukcije TNF-a i IL-4, dok su u MLR testu poveć ali nivoe TNF- a i IL-2.
Primer 9. Generisanje humanih anti-TIM-3 antitela korišć enjem biblioteka za prikaz faga
[0796] De novo pIKS Fab biblioteke opisane u Primeru 2 su suprotstavljene ekstracelularnom domenu rekombinantnog humanog TIM-3-Fc fuzionog proteina (R&D Sistems, #2365-TM; ostaci Ser22-Arg200 pune dužine TIM-3) ( huTIM3-Fc).
[0797] Rekombinantni protein je biotinilovan (bt) i uhvać en na magnetnim kuglicama streptavidina (Dinal), zatim izložen de novo pIKS Fab bibliotekama u konačnoj koncentraciji od 100 nM. Nespecifični fagi su isprani u PBS-Tveen, a vezani fagi su pronađeni infekcijom ć elija MC1061F’ E. coli. Fagi su amplifikovani iz ovih ć elija preko no ć i i panovanje je ponovljeno u ukupno tri kruga. Nakon poslednje runde biopaninga, monoklonalni Fab je testiran na vezivanje za biotinilovani humani TIM-3-Fc uhvać en na ELISA pločama pomo ć u streptavidina i izlučeni Fab je dodat uhva ć enom antigenu, nakon čega je usledila detekcija Fab sa kozjim anti humanim kapa:HRP. Odabrana antitela su eksprimirana i klonirana na različitim IgG izotipovima kao što je naznačeno u nastavku, i dalje okarakterisana.
Primer 10. Stvaranje anti-TIM-3 antitela kod miševa
[0798] Balb/c miševi su imunizovani rekombinantnim humanim TIM-3-Fc fuzionim proteinom (R&D Sistems, katalog #2365TM) tokom 18 dana. Sakupljene su slezine, a populacija obogać ena B ć elijama je spojena sa FO ć elijama mijeloma miša da bi se generisali hibridomi koji luče mAb. Supernatanti hibridoma su testirani na vezivanje pomoć u ELISA za TIM-3-Fc protein i irelevantan humani IgG1 Fc. TIM-3 specifični supernatanti su zatim ispitani na sposobnost vezivanja za TIM-3 eksprimirajuć e THP-1ć elije.
[0799] Odabrani mAb HC i LC v-geni su klonirani iz TIM-3 pozitivnih hibridoma korišć enjem standardnih tehnika molekularne biologije (RT-PCR prać eno ligacijom PCR fragmenta u vektore za ekspresiju plazmida). mAbs su eksprimirana rekombinantno, a ELISA je ponovljena da bi se potvrdilo TIM-3 specifično vezivanje. Molekularni modeli za sekvence mišjih antitela za prilagođavanje humanom okviru konstruisani su korišć enjem MOE (CCG, Montreal) i vizuelno pregledani. Identifikovani su potencijalni problemski položaji koji mogu uticati na vezivanje antigena, VL/VH pakovanje i/ili ostatke jezgra koji mogu uticati na stabilnost domena. I za VL i za VH, predloženi su višestruki ljudski okviri sa ili bez mutacija leđa na sekvence okvira miša ako su identifikovane problemske pozicije. Dizajnirane sekvence su klonirane u plazmide teškog i lakog lanca i eksprimirane u Ekpi293Fć elijama. Ekspresirano antitelo u supernatantima kulture je kvantifikovano i procenjeno na vezivanje za ć elije HEK293 transfektovane sa rekombinantnim humanim TIM-3.
Primer 11. Izotipovi anti-TIM-3 antitela
[0800] VH i VL izolovanih anti-TIM-3 antitela su klonirani na različite izotipove teškog lanca, opciono sa različitim supstitucijama Fc, i alotipove sa lakim lancima tokom karakterizacije antitela da bi se procenio efekat, ako ga ima, izotip uključuje funkcionalnost ili razvoj antitela. Različiti izotipovi koji se koriste su
prikazano u tabeli 28.
Tabela 28.
[0801] Različiti alotipovi korišć eni u generisanim antitelima prikazani su u tabeli 29. Neka od antitela su imala himerne alotipove. Antitela TM3B105 i TM3B403, na primer, razlikuju se po jednoj supstituciji amino kiseline u konstantnom regionu na poziciji 189. TM3B105 teški i laki lanci SEK ID BR: 240 i 79, respektivno; TM3B403 teški i laki lanci SEK ID BR: 78 i 79, respektivno. Očekuje se dać e ova dva antitela imati iste karakteristike
Tabela 29
[0802] Generalno, anti-TIM-3 antitela sa IgG2sigma Fc su imala već u aktivnost u CMV testu nego anti-TIM-3 antitela sa huIgG4 Fc. Pored toga, antitela sa huIgG2 Fc pokazala su funkcionalnost koja je bila srednja između IgG2sigma i IgG4. Alotip nije imao uticaja na aktivnost antitela.
Primer 12. Strukturna karakterizacija anti-TIM-3 antitela
[0803] Sekvence cDNK i translacije aminokiselina antitela su dobijene korišć enjem standardnih tehnika tokom generisanja antitela korišć enjem različitih kampanja. Nakon određivanja polipeptidne sekvence, neke cDNK antitela koje kodiraju varijabilne regione ili antitela pune dužine su optimizovane kodonima korišć enjem standardnih metoda za ekspresiju uve ć ane veličine. Antitela TM3B103, TM3B105, M3B108, TM3B109 i TM3B113 su izolovana iz biblioteka za prikaz faga. Antitela TM3B189, TM3B190, TM3B193, TM3B195 i TM3B196 su stvorena imunizacijom miševa
Tabela 30 prikazuje HCDR1 sekvence odabranih anti-TIM-3 antitela.
Tabela 31 prikazuje HCDR2 sekvence odabranih anti-TIM-3 antitela.
Tabela 32 prikazuje HCDR3 sekvence odabranih anti-TIM-3 antitela.
Tabela 33 prikazuje LCDR1 sekvence odabranih anti-TIM-3 antitela.
Tabela 34 prikazuje LCDR2 sekvence odabranih anti-TIM-3 antitela.
Tabela 35 prikazuje LCDR3 sekvence odabranih anti-TIM-3 antitela.
Tabela 36 prikazuje VH sekvence odabranih anti-TIM-3 antitela.
Tabela 37 prikazuje VL sekvence odabranih anti-TIM-3 antitela.
Tabela 38 prikazuje okvire odabranih anti-TIM-3 antitela.
Tabela 30.
Tabela 31.
Tabela 32.
Tabela 33.
Tabela 34.
Tabela 35.
Tabela 36
Tabela 37.
Tabela 38
IGHV3-23 SEK ID BR: 174
IGHV1-02 SEK ID BR: 175
IGHV4-30 SEK ID BR: 176
IGHV1-03 SEK ID BR: 177
IGHV2-26 SEK ID BR: 178
IGHV5-51 SEK ID BR: 179
IGKV3-20 SEK ID BR: 180
IGKV3-11 SEK ID BR: 171
IGKV4-1SEQ ID BR: 181
IGKV1-39 SEK ID BR: 182
GKV1-33 SEK ID BR: 183
Primer 13. Karakterizacija anti-TIM-3 antitela
[0804] Odabrana antitela su okarakterisana po njihovom vezivanju za humane ili cino ć elije i njihovoj sposobnosti da blokiraju vezivanje liganda galektina 9. Tabela 39 pokazuje karakteristike selektivnih antitela u ovim testovima. Podaci o vezivanjuć elija predstavljaju izračunate vrednosti EC50 vezivanja antitela za ć elije transfektovane sa naznačenim TIM-3 rekombinantnim proteinom izraženim u mg/ml jedinicama. Inhibicija galektina-9 predstavlja maksimalni nivo inhibicije vezivanja galektina-9 za humani TIM-3 uočen kod navedenih antitela. Ispitana antitela su testirana kao IgG2sigma izotipovi.
[0805] Testovi mapiranja epitopa su izvedeni premazivanjem rekombinantnog huTIM-3-Fc proteina na MSD pločama. Ploče su blokirane i isprane, nakon čega je usledilo dodavanje smeše anti-TIM-3 mAbs obeleženih MSD oznakom inkubiranih sa poveć anjem koncentracija neobeleženih anti-TIM-3 mAB. Posle inkubacije uz lagano mu ć kanje na sobnoj temperaturi, ploče su isprane i analizirane pomoć u SECTOR Imager 6000. Smatralo se da se antitela koja su se međusobno takmičila za vezivanje za humani TIM-3 vezuju za slične epitope. Pozitivna inhibicija je zabeležena ako je inhibirano >75% vezivanja. Delimična inhibicija je bila 40-75% inhibicije. < 40% inhibicije je označeno kao negativno.
Tabela 39.
Primer 14. Razvoj funkcionalnog in vitro testa za karakterizaciju anti-TIM-3 antitela
[0806] Funkcionalna procena inhibitornih receptora kao što je PD-1 može da se uradi korišć enjem T ć elija od normalnog donora koje su stimulisane alogenim dendritskim ć elijama ili specifičnim antigenima, kao što je tetanus toksoid ili CMV. U ovom okruženju, promene u funkciji Tć elija sa tretmanom antitela mogu se otkriti merenjem nivoa supernatanta citokina ili markera aktivacije T ć elija. Efekti anti-TIM-3 antitela mogu biti veoma varijabilni u ovim tipovima testova, sa malom ukupnom promenom u stanju aktivacije ili funkcionalnosti T ć elije (nespecifične za antigen). S druge strane, koriš ć enje tetramerskih pristupa za prać enje pojedinačnih subpopulacija/klonova T ć elija u ovim testovima ne daje rezoluciju potrebnu za otkrivanje funkcionalnih efekata anti-TIM-3 antitela, zbog niske frekvencije i heterogenog funkcionalnog profila ovih Klonovi Tć elija. Pored toga, ovaj pristup zahteva prethodnu identifikaciju epitopa koje prepoznaju CMV-specifične Tć elije kod svakog donora.
[0807] CD137 je nedavno opisan kao surogat marker za aktivirane antigen specifične T ć elije (Volf et al., (2007) Blood 110(1):201-210; Klinger et al., (2013) PLoS One 8(9) ): e74231). U našim testovima, korišć enje CD137 omogu ć ilo je identifikaciju antigen specifičnih CD8+ i CD4+ T ć elija koje se šire kao odgovor na stimulaciju CMV antigenom i omogu ć ilo je otkrivanje funkcionalnih efekata anti-TIM-3 antitela. Pored ekspresije CD137, sekrecija citokina od strane MSD-a je takođe procenjena u ovim testovima.
[0808] Aktivnost odabranih anti-TIM-3 antitela je testirana u CMV pp65-stimulisanim PBMC. U ovim testovima, antiTIM-3 antitela su poveć ala aktivaciju T ć elija, što je dokazano pove ć anom ekspresijom CD137 na CD8+ i CD4+ T ć elijama. Pored toga, odabrana anti-TIM-3 antitela su takođe pojačala lučenje IFN-y i TNF-a u ovom testu.
[0809] Tabela 40 prikazuje rezultate CMV testa gde je poboljšana površinska ekspresija CD137 procenjena na CD8+ ili CD4+ ć elijama za odabrana TIM-3 antitela. Tabela prikazuje p vrednosti generisane koriš ć enjem Dvostranog T-testa (nejednaka varijansa).
Tabela 40.
Primer 15. Stvaranje bispecifičnih PD-1/TIM-3 antitela
[0810] Odabrana monospecifična PD-1 i TIM-3 antitela su izražena kao IgG1/k, IgG2/k ili IgG4/k. Zamene su izvršene na pozicijama 405 i 409 (EU numeracija) u monospecifičnim antitelima da bi se unapredila naknadna in vitro razmena krakova i formiranje bispecifičnih antitela. IgG1 i IgG2 anti-PD-1 i anti-TIM-3 antitela su konstruisana da imaju supstituciju F405L i K409R, respektivno, da bi se promovisala razmena ruku i generisanje bispecifičnih antitela. Na IgG4, pozicija 409 VT je R, stoga IgG4 anti-PD-1 antitelo nije konstruisano, a IgG4 anti-TIM-3 antitelo je projektovano da ima supstitucije F405L i R409K. Pored supstitucija na poziciji 405 i 409, IgG4 mAbs su konstruisana da imaju S228P supstituciju, a IgG2 antitela su opciono konstruisana da uključuju supstituciju IgG2sigma (V234A, G237A, P238S, H268A, A, V309S i V309S).
[0811] Monospecifična antitela su eksprimirana i prečišć ena koriš ć enjem standardnih metoda koriš ć enjem kolone Protein A (HiTrap MabSelect SuRe kolona). Posle eluiranja, bazeni su dijalizovani u D-PBS, pH 7,2
[0812] Bispecifična PD-1/TIM-3 antitela su generisana kombinovanjem monospecifičnog PD-1 mAb i monospecifičnog TIM-3 mAb u in vitro razmeni Fab kraka kao što je opisano u Int. Patent Publ. br. VO2011/131746. Ukratko, pri oko 1-20 mg/ml pri molarnom odnosu 1:1 svakog antitela u PBS, pH 7-7,4 i 75 mM 2-merkaptoetanolamin (2-MEA) je pomešan zajedno i inkubiran na 25-37°C tokom 2-6 h, nakon čega sledi uklanjanje 2-MEA dijalizom, dijafiltracijom, filtracijom tangencijalnog protoka i/ili centrifugiranjem ć elija pomo ć u standardnih metoda.
[0813] Bispecifična antitela su dalje prečišć ena nakon in vitro razmene Fab-ruka koriš ć enjem hromatografije hidrofobne interakcije da bi se minimizirala rezidualna roditeljska PD-1 i TIM-3 antitela korišć enjem standardnih metoda.
[0814] Odabrana monospecifična anti-PD-1 antitela i anti-TIM-3 antitela su kombinovana u matriksu u in vitro razmeni Fab kraka da bi se generisala bispecifična antitela. Tabela 41, tabela 42 i tabela 43 prikazuju VH, VL, HC i LC sekvence generisanih bispecifičnih antitela i njihove izotipove. Alotipovi G2 antitela bili su G2m(n)/(n-) ili G2m(n-).
[0815] U nekim eksperimentima, korišć ena su kontrolna antitela koja su bila monovalentna za PD-1 ili TIM-3 sa drugim krakom koji se inertno vezuje za gp120. Ruka koja se vezuje za gp120 imala je VH od SEK ID BR: 184 i VL SEK ID NO: 185. Tabela 44 prikazuje generisana kontrolna antitela.
SEK ID BR: 184 VH of gp120 binding mAb
SEK ID BR: 185 VL of gp120 binding mAb
Tabela 41.
Tabela 42.
Tabela 43.
SEK ID BR: 186
SEK ID BR: 187
SEK ID BR: 188
SEK ID BR: 189
SEK ID BR: 190
SEK ID BR: 191
SEK ID BR: 192
SEK ID BR: 193
SEK ID BR: 194
SEK ID BR: 195
SEK ID BR: 241
SEK ID BR: 242
SEK ID BR: 243
SEK ID BR: 244
SEK ID BR: 245
SEK ID BR: 246
SEK ID BR: 247
SEK ID BR: 248
Tabela 44.
Primer 16. Karakterizacija bispecifičnih PD-1/TIM-3 antitela
[0816] Nastala antagonistička bispecifična antitela su testirana u CMV testu na njihovu sposobnost da pojačaju antigenspecifične Tć elijske odgovore. Funkcionalnost je merena procenom ekspresije CD137 na CD4+ i CD+ T ć elijama i nivoima IFN-y i TNF-a u supernatantima kulture kao što je opisano u Primeru 14. Tabela 45 i Tabela 46 sumiraju aktivnost bispecifičnog PD-1/TIM- 3 antitela u ovom testu za različita očitavanja. Kao što je prikazano u ovoj tabeli, odabrani bispecifični molekuli doveli su do značajnog poveć anja ekspresije CD137 na CD4+ i CD8+ T ć elijama i nivoa izlučenih IFN-y i TNF-a. Sve u svemu, bispecifičnosti PD-1/TIM-3 sa huIgG2sigma Fc su imale najrobusniju aktivnost, prać ene onim molekulima sa huIgG2, a zatim huIgG4.
Tabela 45.
Tabela 46
Primer 17. Anti-PDl antitela pojačavaju ekspresiju TIM-3 na tumorima
[0817] Efekat tretmana anti-PD-1 antitelom u ekspresiji TIM-3 na tumore je procenjen na CT26 ili MC38 modelu karcinoma debelog creva miša.
[0818] Balb/c miševima su subkutno implantirani 13106 CT26 tumora karcinoma debelog creva. Sedam dana nakon implantacije tumorskih ć elija, mereni su tumori i miševi su randomizirani prema veličini tumora. Tretman sa PBS ili 10 mg/kg anti-mišjim PD-1 antitelima (klon RMP1-14, BioKSCell) počeo je 7. dana nakon implantacije tumorskih ć elija i nastavio se svake dve nedelje do kraja studije. Da bi se analizirala T ć elijska ekspresija TIM-3, tumori su sakupljeni 22. dana i disocirani pomo ć u GentleMACS (Miltenii). Bojenje za protočnu citometriju je sprovedeno sa tzv. Live/Dead i markerima za CD3, CD4, CD8 i TIM-3. Protočna citometrija je izvedena na LSR Fortessa (BD). Podaci su analizirani korišć enjem softvera Flov Jo.
[0819] Ženke miševa divljeg tipa C57B1/6 su implantirane supkutano sa 53105 MC-38 ć elija karcinoma debelog creva suspendovanih u PBS. Tumori su mereni i miševi su randomizovani prema veličini tumora (50-100 mm3). Tretman sa PBS ili 10 mg/kg anti-mišjeg PD-1 (klon RMP1-14, BioKSCell) počeo je nakon randomizacije i nastavio se svake dve nedelje do kraja studije. Da bi se profilisale T ć elije koje infiltriraju tumor, tumori su sakupljeni i razdvojeni koriš ć enjem GentleMACS (Miltenii) 12, 15, 19 ili 22 dana nakon implantacije.
[0820] Bojenje za protočnu citometriju je izvedeno sa tzv. Live/Dead i markerima za CD45, Thi1, CD3, CD4, CD8, TIM3, CD137, OKS40, GITR, TIGIT. Podaci protočne citometrije su prikupljeni na LSR Fortessa (BD). Podaci su analizirani korišć enjem softvera FlovJo (v9.9.4) i vizuelizovani pomoć u GraphPad Prism. Statistiku je generisao GraphPad Prism.
[0821] Analiza ekspresije TIM-3 na CD8+ Tć elijama izolovanim iz CT26 tumora 22. dana otkrila je pove ć anje ekspresije TIM-3 u uzorcima tretiranim PD-1, u poređenju sa PBS kontrolom. Slika 1A prikazuje srednji fluorescentni intenzitet ekspresije TIM-3 u dve tretirane grupe.
[0822] Ekspresija TIM-3 je takođe poveć ana u MC-38 tumorima u uzorcima tretiranim anti-PD-1 mAb u poređenju sa PBS kontrolom. Slika 1B prikazuje srednji geometrijski fluorescentni intenzitet ekspresije TIM-3 u populaciji CD8+ TIL. Slika 1C prikazuje procenat (%) relativne frekvencije TIM-3+ CD8+ć elija od ukupnih CD8+ TIL.
[0823] Ovi podaci pokazuju da je TIM-3 poveć an kao odgovor na tretman anti-PD-1, podržavaju ć i racionalno ciljanje TIM-3 kod subjekata koji su tretirani PD-1.
[0824] Ekspresija CD137, OKS40 i GITR je takođe analizirana na CD8+ T ć elijama koje infiltriraju MC38 tumore izolovane od miševa tretiranih anti-mišjim PD-1 antitelima. Ovi rezultati su pokazali da su i učestalost i nivo (gMFI) TNF familije kostimulatornih receptora CD137, OKS40 i ekspresija GITR poveć ani nakon blokade PD-1. Slike 2A i 2B prikazuju gMFI i relativnu frekvenciju ekspresije CD137 na CD8 TIL-ovima, respektivno. Slike 3A i Slika 3B prikazuju gMFI i relativnu frekvenciju ekspresije OKS40 na CD8 TIL-ovima, respektivno, a slike 4A i Slika 4B pokazuju gMFI i relativnu ekspresiju GITR-a na CD8 TIL-ovima, respektivno.
[0825] Ovi podaci podržavaju racionalno ciljanje na CD137, OKS40 i/ili GITR kod subjekata koji su tretirani PD-1.
Primer 18. Aktivnost anti-TIM-3 antitela posle blokade PD-1
[0826] Aktivnost anti-TIM-3 antitela je takođe testirana nakon blokade anti-PD-1 antitela u CMV testu. U ovim eksperimentima, PBMC od jednog normalnog donora (pozitivan na CMV serum) su inkubirani sa pp65 peptidnim skupovima i anti-PD-1 antitelima tokom 5 dana. Petog dana, supernatanti su sakupljeni i ć elije su ponovo stimulisane pulom pp65 peptida u prisustvu bilo anti-TIM-3 ili anti-PD-1 antitela. Nivoi IFN-• u supernatantu su mereni 24 sata kasnije. Tretman anti-TIM-3 antitelima nakon 5 dana blokade anti-PD-1 rezultirao je značajnim poveć anjem nivoa IFN•. Ovaj efekat je bio značajan (p=0,0183) u poređenju sa nastavljenim tretmanom anti-PD-1. U eksperimentu su korišć eni anti-TIM3 antitelo TM3B403 i anti-PD-1 antitelo PD1B244. Slika 5 pokazuje poveć ane nivoe IFN-• u CMV testu, gde su PBMC tretirani anti-TIM-3 antitelom TM3B105 nakon 5 dana tretmana sa anti-PD1 PD1B244. Vrednosti predstavljaju prosek od šest bioloških replika korišć enih za svako stanje.
Primer 19. Mapiranje epitopa anti-TIM-3 antitela
[0827] Urađena je masena spektrometrija izmene vodonik/deuterijum (HDKS-MS) u rastvoru da bi se identifikovali vezujuć i epitopi TMB403 i TMB291. Za eksperimente, VH i VL TM3B403 i TM3B291 su klonirani kao IgG1 Fabs sa heksahistidinskom oznakom na C-terminusu. Fabs su generisani iz prolaznih transfekcija HEK293 Ekpi ć elija u bocama za mu ć kanje suspenzije. Korišć ena je TIM-3 IgG1 Fc Chimera, Ser22-Arg200 (pristupni # K8TDK0), proizvedena u ć elijskoj liniji mijeloma miša (izveden iz NS0) od R&D Sistems (katalog # 2365-TM).
[0828] Za H/D razmenu, procedure koje se koriste za analizu Fab perturbacije bile su slične onima koje su prethodno opisane (Hamuro et al., Biomolecular Technikues 14: 171-182, 2003; Horn et al., Biochemistri 45: 8488-8498 , 2006) uz izvesne izmene. Ukratko, deglikozilovani humani TIM-3/Fc fuzioni protein ili deglikozilovani humani TIM-3-Fc plus Fab smeša je inkubirana sa puferom za obeležavanje deuterijum oksida na 0°C tokom različitih vremena do 2 sata. Izmena deuterijuma je ugašena dodavanjem gvanidin hidrohlorida i ugašeni uzorak je podvrgnut digestiji pepsina na koloni i LC-MS analizi. Maseni spektri su snimljeni samo u MS režimu. Za izračunavanje inkorporacije deuterijuma, maseni spektri za dati peptid su kombinovani preko ekstrahovanog pika hromatograma jona i izračunat je ponderisani prosek m/z. Poveć anje mase od mase prirodnog peptida (0 min) do ponderisane prosečne mase odgovara nivou inkorporacije deuterijuma. Oko 98,4% proteina može biti mapirano na specifične peptide.
[0829] Nivoi deuterijuma na identifikovanim peptidima su prać eni iz promene mase na LC-MS. Odabrane krive nakupljanja deuterijuma, koje pokazuju značajnu razliku u nivoima i/ili nagibima deuterijuma, tokom vremena razmene za peptide su ucrtane. Deglikozilovani humani Tim-3/Fc fuzioni protein pokazao je značajno smanjenje unosa deuterijuma nakon vezivanja za TM3B403 na sekvencama 32VGKGACPVFECGNVVL47, (SEK ID BR: 261) i nakon vezivanja za TM3B291 na sekvencama 90RIF1KIPG2 (NDEK1BR6IM2). Ovi regioni sa značajnim smanjenjem preuzimanja deuterijuma nakon vezivanja za Fabs mogu se stoga smatrati glavnim epitopima mAbs.
[0830] Segment, 50DERDVNI56, (SEK ID BR: 263) pokazao je skromno smanjenje razmene deuterijuma nakon vezivanja za TM3B403 ili TM3B291. Ovaj region se takođe može smatrati potencijalnim epitopom za oba antitela.
[0831] Glavni vezivni epitopi za TM3B403 ili TM3B291 su različiti. Međutim, oni mogu da dele sličan skromni zaštitni region, 50DERDVNI56, (SEK ID BR: 263) na osnovu rezultata HDKS mapiranja. Da bi se pomoglo u proceni da li ovaj region doprinosi zajedničkom vezivnom epitopskom regionu za oba Fab molekula, izvršena je kompetitivna ELISA. Rekombinantni humani Tim-3/Fc protein je direktno obložen na ploče koje su zatim blokirane i isprane. Mešavina TM3B291 Fab obeleženog rutenijumom (Ru) koja je prethodno inkubirana sa različitim koncentracijama neobeleženog TM3B105 ili TM3B291. Ploče su inkubirane, isprane i MSD Read Buffer T je stavljen u svaku jažicu nakon čega je sledilo očitavanje sa SECTOR
Imager 6000 (Meso Scale Discoveri, Gaithersburg, MD).
[0832] Analiza konkurencije je pokazala da se TM3B403 takmičio za vezivanje za TIM-3 sa TM3B291. Ovaj rezultat može ukazivati na to da je skromno zaštić eni region, DERDVNI (SEK ID BR: 263) deo epitopa za oba antitela ili da antitela možda sterički blokiraju međusobno vezivanje zbog neposredne blizine njihovih epitopa.
Primer 20. Blokada TIM-3 poveć ava ekspresiju TIGIT-a na CD8+ TIL-ovima
[0833] Efekat tretmana anti-TIM-3 antitelom na ekspresiju TIGIT-a u tumorima je procenjen na CT26 i MC38 mišjim modelima karcinoma debelog creva. Studije su sprovedene kao što je opisano u Primeru 17 osim što je korišć eno 10 mg/ml antiTIM-3 antitela RMT3-23 (Biokcell).
[0834] Ekspresija TIGIT na CD8+ TIL-ovima (Slika 19A, Slika 20A) i relativna učestalost TIGIT+ TIL-ova (Slika 19B, Slika 20B) bile su povišene i kod CT26 (Slika 19A, Slika 19B) i MC38 (Slika 20A, Slika 2) tumora modeli koji prate blokadu TIM-3.
Primer 21. Ekspresija TIM-3 je poveć ana nakon ek vivo blokade PD-1 kod pacijenata sa melanomom PBMC
[0835] PBMC kod pacijenata sa melanomom koji nisu bili lečeni stimulisani su skupovima peptida antigena melanoma (NIESO, gp100, MART-1) u prisustvu antitela koja blokiraju funkciju anti-PD-1 ili anti-TIM-3. Ekspresija TIM-3 je procenjena na ć elijama restimulisanim peptidima 6. dana. Rezultati su pokazali značajno poveć anje učestalosti TIM-3+ CD8+ T ć elija u uzorcima tretiranim anti-PD-1 u poređenju sa kontrolnim ili TIM-3 tretiranim PBMCs ( Slika 21).
[0836] Dana 0, zamrznuti PBMC od pacijenata sa melanomom koji nisu bili lečeni brzo su odmrznuti u vodenom kupatilu na 37 °C.Ć elije su odmrznute, isprane i izbrojane u kompletnom RPMI medijumu (RPMI 10 % FBS 1 % natrijum piruvata 1 % NEAA 1 % pen/strep). Ć elije su bile ploče sa 200.000 ć elija po bunarči ć u u 96 bunarči ć a, ploča sa U-donom u prisustvu ili odsustvu antitela koja blokiraju funkciju anti-PD-1 ili anti-TIM-3 (PD1B244 i TM3B403, respektivno) i 1 mg/mL melanoma skupovi antigenskih peptida (NI-ESO, gp100, MART-1) tokom 6 dana na 37C. Ć elije su restimulisane peptidnim pulom 6. dana i analizirane protočnom citometrijom na ekspresiju PD-1 i TIM-3, kao i markere aktivacije i proliferacije Tć elija.
Primer 22. Anti-TIM-3 antitela poveć avaju učestalost aktiviranih NK ć elija u IL-2 stimulisanim PBMCs
[0837] Efekti anti-TIM-3 antitela TM3B403 na učestalost aktiviranih NK ć elija određeni su u testovima gde su humani PBMC stimulisani sa IL-2 (20U). Učestalost CD69 i CD25, markera aktivacije NK ć elija, procenjena je protočnom citometrijom 48 sati nakon tretmana u opsegu koncentracija mAb. TM3B403 je poveć ao učestalost aktiviranih NK ć elija kada je aktivacija procenjena procentom CD69 pozitivnih ć elija (Slika 22A) ili procentom CD25 pozitivnih ć elija (Slika 22B).

Claims (15)

Patentni zahtevi
1. Izolovano antagonist antitelo koje se specifično vezuje za PD-1 ili njegov deo koji se vezuje za antigen, obuhvatajući varijabilni region (VH) teškog lanca SEK ID BR: 48 i varijabilni region (VL) lakog lanca od SEK ID BR: 56.
2. Antitelo ili njegov deo koji se vezuje za antigen, prema patentnom zahtevu 1, obuhvatajući teški lanac (HC) od SEK ID BR: 72 i laki lanac (LC) od SEK ID BR: 73.
3. Antitelo ili njegov deo koji se vezuje za antigen prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što antitelo ima jedno, dva ili tri od sledeć ih svojstava:
a) pojačava aktivaciju CD4+ ili CD8+ T ć elija specifičnih za antigen na način zavistan od doze, pri čemu se aktivacija meri korišć enjem testa opoziva antigena citomegalovirusa (CMV test) kao što je opisano u Primeru 1;
b) vezuje humani PD-1 sa KD manjim od 1 nM, pri čemu se KD meri korišć enjem ProteOn KSPR36 sistemom, na 25°C; c) vezuje cinomolgus PD-1 od SEK ID BR: 3 sa KD manjim od 1 nM, pri čemu se KD meri korišć enjem ProteOn KSPR36 sistemom, na 25°C.
4. Antitelo ili njegov deo koji se vezuje za antigen, prema bilo kom od patentnih zahteva od 1 do 3, pri čemu je antitelo, ljudsko antitelo.
5. Antitelo ili njegov deo koji se vezuje za antigen prema bilo kom od patentnih zahteva od 1 do 4, gde je antitelo:
a) IgG4 izotip;
b) IgG1 izotip;
c) IgG2 izotip;
d) IgG3 izotip;
e) IgG4 izotip obuhvatajući S228P substituciju;
f) IgG1 izotip obuhvatajući L234A, L235A, G237A, P238S, H268A, A330S i P331S substitucije;
g) IgG2 izotip obuhvatajući V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S i P331S substitucije;
h) IgG4 izotip obuhvatajući F234A, L235A, G237A, P238S and Q268A substitucije;
i) IgG1 izotip obuhvatajući L234A, L235A ili L234A i L235A substitucije;
j) IgG4 izotip obuhvatajući F234A, L235A ili F234A i L235A substitucije;
k) IgG2 izotip obuhvatajući V234A substituciju; ili
l) IgG4 izotip obuhvatajući S228P, F234A i L235A substitucije, pri čemu je brojanje ostataka prema EU Indexu.
6. Antitelo ili njegov deo koji se vezuje za antigen, prema bilo kom od patentnih zahteva od 1 do 5, pri čemu je antitelo bispecifično antitelo, koje opciono vezuje PD-L1 (SEK ID BR: 5), PD-L2 (SEK ID BR: 8), LAG-3 (SEK ID BR: 293), TIM-3 (SEK ID BR: 138), CEACAM-1 (SEK ID BR: 296), CEACAM-5 (SEK ID BR: 307), OKS-40 (SEK ID BR: 279), GITR (SEK ID BR: 271), CD27 (SEK ID BR: 280), VISTA (SEK ID BR: 286), CD137 (SEK ID BR: 281), TIGIT (SEK ID BR: 301) ili CTLA-4 (SEK ID BR: 292).
7. Farmaceutska kompozicija koja sadrži antitelo ili njegov deo koji se vezuje za antigen prema bilo kom od patentnih zahteva od 1 do 6 i farmaceutski prihvatljiv nosač.
8. Polinukleotid:
a) kodiranje VH od SEK ID BR: 48 i VL od SEK ID BR: 56;
b) kodiranje HC od SEK ID BR: 72 i LC od SEK ID BR: 73; ili
c) obuhvatajući polinukleotid sekvence SEK ID BR-evi: 196 i 197.
9. Vektor, obuhvatajući polinukleotid iz patentnog zahteva 8.
10. Ć elija doma ć ina koja sadrži:
a) vektor prema patentnom zahtevu 9; ili
b) polinukleotid koji kodira VH od SEK ID BR: 48 ili HC od SEK ID BR: 72, ili koji sadrži polinukleotidnu sekvencu od SEK ID BR: 196; i
c) polinukleotid koji kodira VL od SEK ID BR: 56 ili LC od SEK ID BR: 73, ili koji sadrži polinukleotidnu sekvencu od SEK ID BR: 197.
11. Metod za proizvodnju antagonist antitela koje se specifično vezuje za PD-1 ili njegov deo koji se vezuje za antigen, koji obuhvata kultivisanje ć elije doma ć ina prema patentnom zahtevu 10, u uslovima u kojima je antitelo ili njegov deo koji se vezuje za antigen izražen, i obnavljanje antitela ili njegovog dela koji se vezuje za antigen, proizvedeno odć elija doma ć ina.
12. Izolovano antitelo ili njegov deo koji se vezuje za antigen prema bilo kom od patentnih zahteva od 1 do 6 ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 7 za upotrebu u postupku lečenja kancera kod subjekta.
13. Izolovano antitelo ili njegov deo koji se vezuje za antigen prema bilo kom od patentnih zahteva od 1 do 6 ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 7 za upotrebu prema patentnom zahtevu 12, pri čemu je rak:
(a) čvrsti tumor, na primer melanom, rak pluć a, karcinom skvamoznih ne-malih ć elija pluća (NSCLC), neskvamozni NSCLC, kolorektalni kancer, rak prostate, rak prostate otporan na odstranjenje, rak želuca, rak jajnika, gastritis kancer, rak jetre, rak pankreasa, rak štitne žlezde, karcinom skvamoznih ć elija glave i vrata, karcinom jednjaka ili gastrointestinalnog trakta, rak dojke, rak jajovoda, rak mozga, rak uretre, kancer genitourinarnog sistema, endometrioza, rak grlić a materice ili metastatska lezija kancera; ili
(b) hematološki malignitet, na primer limfom, mijelom ili leukemija.
14. Antitelo ili njegov deo koji se vezuje za antigen prema bilo kom od patentnih zahteva od 1 do 6 ili farmaceutska kompozicija prema patnetnom zahtevu 7, za upotrebu u metodi za pojačavanje imunog odgovora kod subjekta kome je to potrebno, za vreme dovoljno da pojača imuni odgovor, opciono pri čemu subjekt ima rak ili virusnu infekciju.
15. Antitelo ili njegov deo koji se vezuje za antigen prema bilo kom od patentnih zahteva od 1 do 6, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 7, za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva od 12 do 14, pri čemu se antitelo, njegov deo koji se vezuje za antigen, ili farmaceutska kompozicija primenjuje opciono u kombinaciji sa drugim terapeutskim agensom, pri čemu:
(A) administriraju se antitelo ili njegov deo koji se vezuje za antigen i drugi terapeutski agens
istovremeno, uzastopno ili odvojeno, i/ili
(B) drugo terapeutsko sredstvo je:
a) standardni lek za primenu za lečenje čvrstog tumora ili hematološkog maligniteta, pri čemu je standardni lek za primenu anastrozol, bikalutamid, bleomicin sulfat, busulfan, injekcija busulfana, kapecitabin, N4-pentoksikarbonil-5-deoksi-5-fluorocitidin, karboplatin, karmustin, hlorambucil, cisplatin, kladribin, ciklofosfamid, citarabin, citozin arabinozid, citarabin lipozom injekcije, dakarbazin, daktinomicin, daunorubicin hidrohlorid, daunorubicin citrat lipozom injekcija, deksametazon, docetaksel, doksorubicin hidrohlorid, etopozid, fludarabin fosfat, 5-fluorouracil, flutamid, tezacitibin, gemcitabin (difluorodeoksicitidin), hidroksiurea, idarubicin, ifosfamid, irinotekan, L-asparaginaza, leukovorin kalcijum, melfalan, 6-merkaptopurin, metotreksat, mitoksatron, pakliteksal, feniks, pentostatin, polifeprosan 20 sa kurmustin implantom, tamoksifen citrat, tenipozid, 6-tioguanin, tiotepa, tirapazamin, topotekan hidrohlorid za injekcije, vinblastin, vinkristin, vinorelbin, ibrutinib, idelalisib ili brentuksimab vedotin;
b) agonist od CD86 (SEK ID BR: 264), CD80 (SEK ID BR: 265), CD28 (SEK ID BR: 266), ICOS (SEK ID BR: 267), ICOS ligand (SEK ID BR: 268), TMIGD2 (SEK ID BR: 269), CD40 (SEK ID BR: 270), GITR (SEK ID BR: 271), 4-1BB ligand (SEK ID BR: 271), OX40 ligand (SEK ID BR: 272), CD70 (SEK ID BR: 274), CD40L (SEK ID BR: 275), TNFRSF25 (SEK ID BR: 264), LIGHT (SEK ID BR: 277), GITR ligand (SEK ID BR: 278), OX-40 (SEK ID BR: 279), CD27 (SEK ID BR: 280), CD137 (SEK ID BR: 281), NKG2D (SEK ID BR: 282), CD48 (SEK ID BR: 283), CD226 (SEK ID BR: 284), ili MICA (SEK ID BR: 285);
c) inhibitor od PD-1 (SEK ID BR: 1), PD-L1 (SEK ID BR: 5), PD-L2 (SEK ID BR: 8), VISTA (SEK ID BR: 286), BTNL2 (SEK ID BR: 287), B7-H3 (SEK ID BR: 288), B7-H4 (SEK ID BR: 289), HVEM (SEK ID BR: 290), HHLA2 (SEK ID BR: 291), CTLA-4 (SEK ID BR: 292), LAG-3 (SEK ID BR: 293), TIM-3 (SEQ ID NO: 138), BTLA (SEK ID BR: 294), CD160 (SEK ID BR: 295), CEACAM-1 (SEK ID BR: 296), LAIR1 (SEK ID BR: 297), TGFℬ (SEK ID BR: 298), IL-10 (SEK ID BR: 299), CD96 (SEK ID BR: 300), TIGIT (SEK ID BR: 301), NKG2A (SEK ID BR: 302), CD112 (SEK ID BR: 303), CD47 (SEK ID BR: 304), SIRPA (SEK ID BR: 305) ili CD244 (SEK ID BR: 306);
d) antagonist antitelo koje se specifično vezuje za TIM-3;
e) antagonist antitelo koje se specifično vezuje za TIM-3 koje sadrži VH i VL, od
i) SEK ID BR: 145 i 155, respektivno;
ii) SEK ID BR: 146 i 156, respektivno;
iii) SEK ID BR: 148 i 157, respektivno;
iv) SEK ID BR: 147 i 155, respektivno;
v) SEK ID BR: 149 i 158, respektivno;
vi) SEK ID BR: 150 i 159, respektivno;
vii) SEK ID BR: 151 i 160, respektivno;
viii) SEK ID BR: 152 i 161, respektivno;
ix) SEK ID BR: 153 i 162, respektivno;
x) SEK ID BR: 154 i 163, respektivno; ili
xi) SEK ID BR: 172 i 173, respektivno;
f) inhibitor fibroblast receptora faktora rasta (FGFR);
g) vakcina;
h) antagonist antitelo koje se specifično vezuje za GITR;
i) agonist antitelo koje se specifično vezuje za OX40;
j) agonist antitelo koje se specifično vezuje za OX40, koje sadrži VH i VL SEK ID BR: 309 i 310, respektivno; k) agonist antitelo koje se specifično vezuje za OX40, koje sadrži VH i VL SEK ID BR: 311 i 312, respektivno; l) agonist antitelo koje se specifično vezuje za CD137;
m) terapija zračenjem; ili
n) hirurgija.
RS20220325A 2015-11-03 2016-11-01 Antitela koja se specifično vezuju za pd-1 i njihova upotreba RS63125B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562250095P 2015-11-03 2015-11-03
PCT/US2016/059833 WO2017079112A1 (en) 2015-11-03 2016-11-01 Antibodies specifically binding pd-1 and their uses
EP16862773.5A EP3370768B9 (en) 2015-11-03 2016-11-01 Antibodies specifically binding pd-1 and their uses

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS63125B1 true RS63125B1 (sr) 2022-05-31

Family

ID=58634582

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20220325A RS63125B1 (sr) 2015-11-03 2016-11-01 Antitela koja se specifično vezuju za pd-1 i njihova upotreba

Country Status (41)

Country Link
US (3) US10894830B2 (sr)
EP (4) EP4046655A1 (sr)
JP (6) JP7051692B2 (sr)
KR (4) KR20250099459A (sr)
CN (5) CN114478790A (sr)
AR (1) AR106583A1 (sr)
AU (3) AU2016350700A1 (sr)
BR (3) BR112018008904A2 (sr)
CA (3) CA3004134A1 (sr)
CL (1) CL2018001177A1 (sr)
CO (1) CO2018005614A2 (sr)
CR (1) CR20180234A (sr)
CY (1) CY1125267T1 (sr)
DK (1) DK3370768T3 (sr)
EA (1) EA201891093A1 (sr)
EC (1) ECSP18041833A (sr)
ES (1) ES2908376T3 (sr)
GT (1) GT201800090A (sr)
HR (1) HRP20220436T1 (sr)
HU (1) HUE057837T2 (sr)
IL (1) IL258909B2 (sr)
JO (1) JO3798B1 (sr)
LT (1) LT3370768T (sr)
MA (1) MA43186B1 (sr)
MD (1) MD3370768T2 (sr)
MX (3) MX2018005546A (sr)
MY (1) MY198562A (sr)
NI (1) NI201800055A (sr)
PE (1) PE20181326A1 (sr)
PH (1) PH12018500906B1 (sr)
PL (1) PL3370768T3 (sr)
PT (1) PT3370768T (sr)
RS (1) RS63125B1 (sr)
SG (1) SG11201803520PA (sr)
SI (1) SI3370768T1 (sr)
SM (1) SMT202200118T1 (sr)
SV (1) SV2018005684A (sr)
TW (1) TWI772275B (sr)
UA (1) UA126896C2 (sr)
WO (3) WO2017079112A1 (sr)
ZA (1) ZA201803669B (sr)

Families Citing this family (136)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101791430B1 (ko) * 2009-11-30 2017-10-30 얀센 바이오테크 인코포레이티드 이펙터 기능이 제거된 항체 Ｆｃ 돌연변이체
US10053513B2 (en) * 2009-11-30 2018-08-21 Janssen Biotech, Inc. Antibody Fc mutants with ablated effector functions
NZ602892A (en) 2010-04-13 2014-08-29 Celldex Therapeutics Inc Antibodies that bind human cd27 and uses thereof
BR112013021562B1 (pt) 2011-03-16 2023-01-10 Argenx Bvba Anticorpos para cd70
TWI693232B (zh) 2014-06-26 2020-05-11 美商宏觀基因股份有限公司 與pd-1和lag-3具有免疫反應性的共價結合的雙抗體和其使用方法
US10391168B1 (en) 2014-08-22 2019-08-27 University Of Bern Anti-CD70 combination therapy
SMT202400420T1 (it) 2015-04-01 2024-11-15 Anaptysbio Inc Anticorpi diretti contro la proteina dell’immunoglobulina delle cellule t e della mucina 3 (tim-3)
TWI773646B (zh) 2015-06-08 2022-08-11 美商宏觀基因股份有限公司 結合lag-3的分子和其使用方法
MA42447A (fr) 2015-07-13 2018-05-23 Cytomx Therapeutics Inc Anticorps anti-pd-1, anticorps anti-pd-1 activables, et leurs procédés d'utilisation
SG10201906059VA (en) 2015-07-30 2019-08-27 Macrogenics Inc Pd-1-binding molecules and methods of use thereof
US11014983B2 (en) 2015-08-20 2021-05-25 Sutro Biopharma, Inc. Anti-Tim-3 antibodies, compositions comprising anti-Tim-3 antibodies and methods of making and using anti-Tim-3 antibodies
LT3370768T (lt) 2015-11-03 2022-05-25 Janssen Biotech, Inc. Antikūnai, specifiškai surišantys pd-1, ir jų panaudojimas
CR20180318A (es) 2015-12-14 2018-09-19 Macrogenics Inc Moléculas biespecíficas que tienen inmunorreactividad con pd-1 y ctla-4, y métodos de uso de las mismas
SG11201808821WA (en) 2016-04-18 2018-11-29 Celldex Therapeutics Inc Agonistic antibodies that bind human cd40 and uses thereof
TWI808055B (zh) 2016-05-11 2023-07-11 美商滬亞生物國際有限公司 Hdac 抑制劑與 pd-1 抑制劑之組合治療
TWI794171B (zh) 2016-05-11 2023-03-01 美商滬亞生物國際有限公司 Ｈｄａｃ抑制劑與ｐｄ-ｌ１抑制劑之組合治療
CA3024508A1 (en) 2016-05-27 2017-11-30 Agenus Inc. Anti-tim-3 antibodies and methods of use thereof
SG11201810509PA (en) 2016-06-20 2018-12-28 Kymab Ltd Anti-pd-l1 antibodies
BR112019000431A2 (pt) 2016-07-14 2019-07-09 Bristol-Myers Squibb Company anticorpos contra tim3 e usos dos mesmos
KR20190098741A (ko) 2016-11-01 2019-08-22 아납티스바이오, 아이엔씨. T 세포 면역글로불린 및 뮤신 단백질 3(tim-3)에 대한 항체
MA47206A (fr) 2017-01-09 2019-11-13 Tesaro Inc Méthodes de traitement du cancer au moyen d'anticorps anti-tim-3
WO2018156785A1 (en) * 2017-02-22 2018-08-30 Sutro Biopharma, Inc. Pd-1/tim-3 bi-specific antibodies, compositions thereof, and methods of making and using the same
EP4389226A3 (en) 2017-02-24 2024-12-18 MacroGenics, Inc. Bispecific binding molecules that are capable of binding cd137 and tumor antigens, and uses thereof
TW202428301A (zh) 2017-02-28 2024-07-16 法商賽諾菲公司 治療性rna
CN110799213A (zh) * 2017-06-01 2020-02-14 康姆普根有限公司 三联组合抗体疗法
WO2018222975A1 (en) * 2017-06-02 2018-12-06 Rgenix, Inc. Methods for the treatment of cancer
CR20190550A (es) 2017-06-05 2020-04-05 Janssen Biotech Inc Anticuerpos que se unen específicamente a pd-1 y métodos de uso
GB2567613A (en) * 2017-06-16 2019-04-24 Argenx Bvba Treatment for acute myeloid leukaemia
CA3068932A1 (en) 2017-07-06 2019-01-10 Merus N.V. Bispecific anti pd1-anti tim3 antibodies
WO2019023410A1 (en) 2017-07-28 2019-01-31 Phanes Therapeutics, Inc. ANTI-TIM-1 ANTIBODIES AND USES THEREOF
SI3661954T1 (sl) 2017-08-03 2022-05-31 Amgen Inc. Muteini interlevkina-21 in postopki zdravljenja
JP2020531854A (ja) 2017-08-28 2020-11-05 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 癌の治療および診断のためのｔｉｍ−３アンタゴニスト
WO2019061324A1 (en) 2017-09-29 2019-04-04 Curis Inc. CRYSTALLINE FORMS OF IMMUNOMODULATORS
JP7618445B2 (ja) 2017-10-11 2025-01-21 オーリジーン オンコロジー リミテッド ３－置換１，２，４－オキサジアゾールの結晶形態
AU2018355244B2 (en) 2017-10-24 2025-08-28 Crispr Therapeutics Ag Compositions and methods for the depletion of CD117+ cells
AU2018354189A1 (en) 2017-10-24 2020-04-23 Crispr Therapeutics Ag Compositions and methods for the depletion of CD117+ cells
WO2019087092A1 (en) * 2017-11-06 2019-05-09 Aurigene Discovery Technologies Limited Conjoint therapies for immunomodulation
US11312770B2 (en) 2017-11-08 2022-04-26 Xencor, Inc. Bispecific and monospecific antibodies using novel anti-PD-1 sequences
CN109971713B (zh) * 2017-12-28 2023-06-20 上海细胞治疗研究院 稳定表达PD-1抗体的Muc1特异性CAR-T细胞及其用途
UY38049A (es) 2018-01-12 2019-07-31 Amgen Inc Anti-pd-1 anticuerpos y métodos de tratamiento
US12129297B2 (en) 2018-01-12 2024-10-29 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against TIM3 and uses thereof
GB201800649D0 (en) 2018-01-16 2018-02-28 Argenx Bvba CD70 Combination Therapy
US20210363242A1 (en) 2018-01-16 2021-11-25 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating cancer with antibodies against tim3
US12398209B2 (en) * 2018-01-22 2025-08-26 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating cancers with antagonistic anti-PD-1 antibodies
JP2021512624A (ja) * 2018-02-11 2021-05-20 ベイジン・ハンミ・ファーマシューティカル・カンパニー・リミテッドＢｅｉｊｉｎｇ Ｈａｎｍｉ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．， Ｌｔｄ． 抗ｐｄ−１／抗ｖｅｇｆ天然抗体構造様ヘテロ二量体型二重特異性抗体及びその製造
CN110144011B (zh) * 2018-02-14 2020-06-23 上海洛启生物医药技术有限公司 针对t淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白3的单域抗体
US20210032334A1 (en) * 2018-02-28 2021-02-04 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods for treating cancer using combinations of anti-btnl2 and immune checkpoint blockade agents
US11242393B2 (en) 2018-03-23 2022-02-08 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against MICA and/or MICB and uses thereof
US11807683B2 (en) 2018-04-12 2023-11-07 Nanjing Leads Biolabs Co., Ltd. Antibody binding TIM-3 and use thereof
CN112292185B (zh) 2018-04-17 2025-07-29 塞德斯医疗公司 抗cd27和抗pd-l1抗体及双特异性构建体
KR20210027254A (ko) * 2018-04-24 2021-03-10 앰프소스 바이오파마 상하이 인코포레이티드 Tim-3에 대한 항체 및 그의 용도
JP2021524255A (ja) * 2018-05-24 2021-09-13 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 単一特異性及び二重特異性抗体抗−ｔｍｅｆｆ２抗体並びにそれらの使用
WO2019227490A1 (en) 2018-06-01 2019-12-05 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. Compositions and methods for imaging
CN117442717A (zh) 2018-06-01 2024-01-26 大有华夏生物医药集团有限公司 治疗疾病或病况的组合物及其用途
WO2019246110A1 (en) 2018-06-20 2019-12-26 Incyte Corporation Anti-pd-1 antibodies and uses thereof
WO2020019232A1 (en) * 2018-07-26 2020-01-30 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. Compositions and methods for imaging
MX2021001516A (es) * 2018-08-20 2021-04-19 Jiangsu Hengrui Medicine Co Uso del anticuerpo tim-3 en la preparacion de medicamentos para el tratamiento de tumores.
AU2019324170A1 (en) 2018-08-23 2021-02-18 Seagen, Inc. Anti-TIGIT antibodies
US12331320B2 (en) 2018-10-10 2025-06-17 The Research Foundation For The State University Of New York Genome edited cancer cell vaccines
AU2019371457A1 (en) * 2018-11-01 2021-05-20 Merck Patent Gmbh Anti-TIM-3 antibodies
EP3666905A1 (en) 2018-12-11 2020-06-17 Sanofi E. coli positive for pks island as marker of positive response to anti-pd1 therapy in colorectal cancer
TW202039562A (zh) * 2018-12-12 2020-11-01 大陸商上海藥明生物技術有限公司 抗tim-3抗體及其用途
TWI848030B (zh) 2018-12-18 2024-07-11 比利時商阿根思公司 Ｃｄ７０組合治療
CN111349162A (zh) * 2018-12-21 2020-06-30 神州细胞工程有限公司 人源化抗pd-1抗体及其用途
TWI852977B (zh) 2019-01-10 2024-08-21 美商健生生物科技公司 前列腺新抗原及其用途
EP3914355A1 (en) 2019-01-21 2021-12-01 Sanofi Therapeutic rna and anti-pd1 antibodies for advanced stage solid tumor cancers
US10442866B1 (en) * 2019-01-23 2019-10-15 Beijing Mabworks Biotech Co. Ltd Antibodies binding OX40 and uses thereof
CN113795511B (zh) 2019-01-23 2024-07-23 大有华夏生物医药集团有限公司 抗pd-l1双抗体及其用途
CN113272330B (zh) * 2019-03-02 2024-07-26 南通壹宸生物医药科技有限公司 一种双特异抗体
WO2020219778A2 (en) * 2019-04-24 2020-10-29 Magenta Therapeutics, Inc. Anti-cd117 antibody-drug conjugates and uses thereof
WO2020219775A1 (en) * 2019-04-24 2020-10-29 Magenta Therapeutics, Inc. Anti-cd117 antibody-drug conjugates and uses thereof
JP2022534967A (ja) 2019-05-30 2022-08-04 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 多腫瘍遺伝子シグネチャーおよびその使用
KR20220016157A (ko) 2019-05-30 2022-02-08 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 세포 국재화 시그너쳐 및 조합 요법
EP3976832A1 (en) 2019-05-30 2022-04-06 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject suitable for an immuno-oncology (i-o) therapy
WO2020255009A2 (en) 2019-06-18 2020-12-24 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Combination of hepatitis b virus (hbv) vaccines and anti-pd-1 antibody
MA56523A (fr) 2019-06-18 2022-04-27 Janssen Sciences Ireland Unlimited Co Combinaison de vaccins contre le virus de l'hépatite b (vhb) et d'anticorps anti-pd-1 ou anti-pd-l1
US20230279105A1 (en) * 2019-06-21 2023-09-07 Single Cell Technology, Inc. Anti-tim-3 antibodies
TWI809286B (zh) 2019-07-05 2023-07-21 日商小野藥品工業股份有限公司 以pd-1/cd3雙特異性蛋白質所進行之血液性癌症治療
AU2020324185A1 (en) * 2019-08-02 2022-03-03 CTTQ-Akeso (ShangHai) Biomed. Tech. Co., Ltd. Anti-PD-1 antibody and medical use thereof
EP4011918A4 (en) 2019-08-08 2023-08-23 ONO Pharmaceutical Co., Ltd. DUAL SPECIFIC PROTEIN
CA3148564A1 (en) * 2019-08-30 2021-03-04 Matthew M. Seavey Methods of treating cancer using tnfrsf25 antibodies
CN112587666A (zh) * 2019-09-17 2021-04-02 广州再极医药科技有限公司 用于治疗癌症的pd-1/pd-l1相互作用的小分子抑制剂和抗pd-1抗体的组合
US20230046904A1 (en) * 2019-09-17 2023-02-16 Guangzhou Maxinovel Pharmaceuticals Co., Ltd. Combination of small molecule inhibitor of the pd-1/pd-l1 interaction and anti-pd-1 antibody for treating cancer
US12514927B2 (en) * 2019-10-30 2026-01-06 Duke University Immunotherapy with combination therapy comprising an immunotoxin
US20220390455A1 (en) * 2019-11-05 2022-12-08 Bristol-Myers Squibb Company M-protein assays and uses thereof
TWI900527B (zh) 2020-02-12 2025-10-11 比利時商健生藥品公司 用於治療尿路上皮癌的ｆｇｆｒ酪胺酸激酶抑制劑和抗ｐｄ１藥劑
TW202144389A (zh) 2020-02-14 2021-12-01 美商健生生物科技公司 在多發性骨髓瘤中表現之新抗原及其用途
TW202144388A (zh) 2020-02-14 2021-12-01 美商健生生物科技公司 在卵巢癌中表現之新抗原及其用途
AU2021242305A1 (en) * 2020-03-26 2022-10-20 Cureimmune Therapeutics Inc. Anti-PD-1 antibodies and methods of use
CN113583127A (zh) * 2020-04-30 2021-11-02 迈威(上海)生物科技股份有限公司 一种靶向nkg2a和pd-l1的双特异性抗体及应用
EP4146654A1 (en) 2020-05-07 2023-03-15 Adorx therapeutics Limited Antagonists of the adenosine a2a receptor
CN111690070A (zh) * 2020-05-13 2020-09-22 深圳市众循精准医学研究院 一种sPD-1-Fc-sTGFβRII融合蛋白及其应用
WO2021226984A1 (zh) * 2020-05-15 2021-11-18 三生国健药业（上海）股份有限公司 一种抗pd-1和pd-l1的四价双特异性抗体
CN116209676A (zh) 2020-06-22 2023-06-02 恩格姆生物制药公司 Lair-1结合剂及其使用方法
WO2022009051A1 (en) 2020-07-06 2022-01-13 Janssen Biotech, Inc. A method for determining responsiveness to prostate cancer treatment
EP4175664A2 (en) 2020-07-06 2023-05-10 Janssen Biotech, Inc. Prostate neoantigens and their uses
CA3191901A1 (en) * 2020-07-21 2022-01-27 The Scripps Research Institute Disruption of cd28-sialoside ligand complexes to enhance t cell activation
GB202011996D0 (en) 2020-07-31 2020-09-16 Adorx Therapeutics Ltd Antagonist compounds
US20230303700A1 (en) 2020-08-31 2023-09-28 Bristol-Myers Squibb Company Cell localization signature and immunotherapy
CN114349867B (zh) * 2020-10-14 2024-05-28 广东菲鹏制药股份有限公司 融合蛋白及其应用
WO2022120179A1 (en) 2020-12-03 2022-06-09 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signatures and uses thereof
GB202019622D0 (en) 2020-12-11 2021-01-27 Adorx Therapeutics Ltd Antagonist compounds
WO2022140670A2 (en) * 2020-12-23 2022-06-30 Phenomic Ai Anti-activin antibodies and methods of using the same
MX2023007650A (es) 2020-12-28 2023-09-11 Bristol Myers Squibb Co Metodos de tratamiento de tumores.
MX2023007734A (es) 2020-12-28 2023-08-21 Bristol Myers Squibb Co Composiciones de anticuerpos y metodos de uso de las mismas.
WO2022156727A1 (zh) * 2021-01-21 2022-07-28 浙江养生堂天然药物研究所有限公司 治疗肿瘤的组合物及方法
CN117500823A (zh) * 2021-03-08 2024-02-02 沙塔克实验室有限公司 自身免疫中的嵌合蛋白
CN117177994A (zh) * 2021-03-31 2023-12-05 美勒斯公司 包含新颖pd-1结合域之多特异性结合部分
JP2024514530A (ja) 2021-04-02 2024-04-02 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 切断型ｃｄｃｐ１に対する抗体およびその使用
EP4326773A4 (en) * 2021-04-23 2025-09-24 Suzhou Neologics Bioscience Co Ltd ANTIBODIES TARGETING TIM-3 AND THEIR USES
JP2024518724A (ja) 2021-04-25 2024-05-02 江▲蘇▼恒瑞医▲薬▼股▲フン▼有限公司 抗ｍａｓｐ２抗体、その抗原結合断片および医薬用途
US20250059267A1 (en) * 2021-05-14 2025-02-20 Phenomic Ai Combination therapy for treatment of tumors comprising cancer-associated fibroblasts
GB202107994D0 (en) 2021-06-04 2021-07-21 Kymab Ltd Treatment of cancer
AU2022308201A1 (en) 2021-07-09 2024-02-22 Janssen Biotech, Inc. Manufacturing methods for producing anti-tnf antibody compositions
AU2022326557A1 (en) * 2021-08-10 2024-01-25 The Johns Hopkins University Compositions and methods for treatment of cancer
MX2024002476A (es) * 2021-08-27 2024-05-20 Janssen Biotech Inc Anticuerpos anti-psma y usos de estos.
EP4403574A4 (en) * 2021-09-15 2025-10-29 Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co Ltd PD-1-Specific Protein and Its Pharmaceutical Use
IL312606A (en) * 2021-11-09 2024-07-01 Janssen Biotech Inc Microfluidic co-encapsulation device and system and methods for identifying t-cell receptor ligands
CN119836296A (zh) 2021-12-30 2025-04-15 新免疫技术有限公司 用il-7蛋白和vegf拮抗剂的组合治疗肿瘤的方法
WO2023133496A2 (en) * 2022-01-07 2023-07-13 Trustees Of Dartmouth College Compositions and methods for preventing or ameliorating neonatal hsv infection
GB2615307A (en) 2022-01-28 2023-08-09 Adorx Therapeutics Ltd Antagonist compounds
KR20250004624A (ko) * 2022-02-10 2025-01-08 넥스트포인트 테라퓨틱스, 인코포레이티드 T 세포 및 nk 세포 인게이저
CN118786148A (zh) * 2022-03-02 2024-10-15 诺和诺德医疗保健公司 每周一次施用fviii模拟双特异性抗体的方法
WO2023178329A1 (en) 2022-03-18 2023-09-21 Bristol-Myers Squibb Company Methods of isolating polypeptides
CA3258064A1 (en) 2022-06-02 2023-12-07 Bristol-Myers Squibb Company ANTIBODY COMPOSITIONS AND THEIR METHODS OF USE
KR20250089492A (ko) 2022-11-07 2025-06-18 네오이뮨텍, 인코퍼레이티드 비메틸화된 mgmt 프로모터를 갖는 종양의 치료 방법
WO2024126750A1 (en) * 2022-12-15 2024-06-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods for treating cancer
TW202444754A (zh) 2023-01-30 2024-11-16 英商凱麥博有限公司 抗體
EP4658687A1 (en) 2023-01-31 2025-12-10 University of Rochester Immune checkpoint blockade therapy for treating staphylococcus aureus infections
WO2024215682A1 (en) 2023-04-10 2024-10-17 Taris Biomedical Llc Gemcitabine for use in methods of treating high-risk non-muscle invasive bladder cancer unresponsive to bacillus calmette-guerin therapy
WO2025038763A1 (en) 2023-08-15 2025-02-20 Bristol-Myers Squibb Company Ceramic hydroxyapatite chromatography flow through method
WO2025094087A1 (en) 2023-10-30 2025-05-08 Johnson & Johnson Enterprise Innovation Inc. Safe administration of a2a rector antagonist
WO2025098364A1 (zh) * 2023-11-06 2025-05-15 南京蓬勃生物科技有限公司 靶向人源pd-l1的全人源抗体
WO2025111989A1 (zh) * 2023-11-30 2025-06-05 华东师范大学 嵌合抗原受体及其应用
WO2025145207A1 (en) 2023-12-29 2025-07-03 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy of kras inhibitor and treg-depleting agent
WO2025195358A1 (zh) * 2024-03-19 2025-09-25 江苏恒瑞医药股份有限公司 Pd-1结合蛋白及医药用途

Family Cites Families (345)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7709A (en) 1850-10-08 Chas S Gaylord Improved spring-grapple
US226A (en) 1837-06-03 Samuel goss
US541606A (en) 1895-06-25 Sealed package
GB2116183B (en) 1982-03-03 1985-06-05 Genentech Inc Human antithrombin iii dna sequences therefore expression vehicles and cloning vectors containing such sequences and cell cultures transformed thereby a process for expressing human antithrombin iii and pharmaceutical compositions comprising it
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US4978672A (en) 1986-03-07 1990-12-18 Ciba-Geigy Corporation Alpha-heterocyclc substituted tolunitriles
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
WO1988001649A1 (en) 1986-09-02 1988-03-10 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
ATE95193T1 (de) 1987-06-17 1993-10-15 Sandoz Ag Cyclosporine und deren benutzung als arzneimittel.
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
US5770701A (en) 1987-10-30 1998-06-23 American Cyanamid Company Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US6303121B1 (en) 1992-07-30 2001-10-16 Advanced Research And Technology Method of using human receptor protein 4-1BB
US6362325B1 (en) 1988-11-07 2002-03-26 Advanced Research And Technology Institute, Inc. Murine 4-1BB gene
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US6172197B1 (en) 1991-07-10 2001-01-09 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
US6255458B1 (en) 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
US6582959B2 (en) 1991-03-29 2003-06-24 Genentech, Inc. Antibodies to vascular endothelial cell growth factor
US20030206899A1 (en) 1991-03-29 2003-11-06 Genentech, Inc. Vascular endothelial cell growth factor antagonists
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
JP4124480B2 (ja) 1991-06-14 2008-07-23 ジェネンテック・インコーポレーテッド 免疫グロブリン変異体
DE69233782D1 (de) 1991-12-02 2010-05-20 Medical Res Council Herstellung von Autoantikörpern auf Phagenoberflächen ausgehend von Antikörpersegmentbibliotheken
DE69233803D1 (de) 1992-10-28 2011-03-31 Genentech Inc Verwendung von vaskulären Endothelwachstumsfaktor-Antagonisten
ATE139900T1 (de) 1992-11-13 1996-07-15 Idec Pharma Corp Therapeutische verwendung von chimerischen und markierten antikörper gegen menschlichen b lymphozyt beschränkter differenzierung antigen für die behandlung von b-zell-lymphoma
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
DK0672142T3 (da) 1992-12-04 2001-06-18 Medical Res Council Multivalente og multispecifikke bindingsproteiner samt fremstilling og anvendelse af disse
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
US7138500B1 (en) 1993-05-07 2006-11-21 Immunex Corporation Antibodies to human 4-1BB
IL108501A (en) 1994-01-31 1998-10-30 Mor Research Applic Ltd Antibodies and pharmaceutical compositions containing them
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US5688690A (en) 1994-09-16 1997-11-18 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology Human cytotoxic lymphocyte signal transduction surface protein (P38) and monoclonal antibodies thereto
IL117645A (en) 1995-03-30 2005-08-31 Genentech Inc Vascular endothelial cell growth factor antagonists for use as medicaments in the treatment of age-related macular degeneration
AUPO591797A0 (en) 1997-03-27 1997-04-24 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation High avidity polyvalent and polyspecific reagents
US5712374A (en) 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
WO1997010354A1 (fr) * 1995-09-11 1997-03-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Anticorps de la chaine alpha du recepteur de l'interleukine 5 humaine
JP2002514895A (ja) * 1995-09-28 2002-05-21 アレクション、ファーマスーティカルズ、インコーポレーテッド ブタ細胞相互作用タンパク質
US7357927B2 (en) 1996-03-12 2008-04-15 Human Genome Sciences, Inc. Death domain containing receptors
US6111090A (en) 1996-08-16 2000-08-29 Schering Corporation Mammalian cell surface antigens; related reagents
AU4055697A (en) 1996-08-16 1998-03-06 Schering Corporation Mammalian cell surface antigens; related reagents
US6140076A (en) 1996-12-06 2000-10-31 Schering Corporation Ig superfamily `dlair` receptors expressed in monocytes
US20060280140A9 (en) * 1997-02-06 2006-12-14 Mahany Ronald L LOWER POWER WIRELESS BEACONING NETWORK SUPPORTING PROXIMAL FORMATION, SEPARATION AND REFORMATION OF WIRELESS LOCAL AREA NETWORKS (LAN's), AS TERMINALS MOVE IN AND OUT RANGE OF ONE ANOTHER
US6972323B1 (en) 1997-04-01 2005-12-06 Sankyo Company, Limited Anti-Fas antibodies
US20020032315A1 (en) 1997-08-06 2002-03-14 Manuel Baca Anti-vegf antibodies
NZ500078A (en) 1997-04-07 2001-10-26 Genentech Inc Humanized anti-VEGF antibodies and their use in inhibiting VEGF-induced angiogenesis in mammals
US6884879B1 (en) 1997-04-07 2005-04-26 Genentech, Inc. Anti-VEGF antibodies
ATE501170T1 (de) 1997-04-07 2011-03-15 Genentech Inc Verfahren zur herstellung humanisierter antikörper durch randomisierte mutagenese
ATE319745T1 (de) 1997-05-21 2006-03-15 Biovation Ltd Verfahren zur herstellung von nicht-immunogenen proteinen
CO4940418A1 (es) 1997-07-18 2000-07-24 Novartis Ag Modificacion de cristal de un derivado de n-fenil-2- pirimidinamina, procesos para su fabricacion y su uso
WO1999014353A2 (en) * 1997-09-19 1999-03-25 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Intrabody-mediated control of immune reactions
GB9722131D0 (en) 1997-10-20 1997-12-17 Medical Res Council Method
AU1102399A (en) 1997-10-21 1999-05-10 Human Genome Sciences, Inc. Human tumor necrosis factor receptor-like proteins tr11, tr11sv1, and tr11sv2
IL137409A0 (en) 1998-02-09 2001-07-24 Genentech Inc Novel tumor necrosis factor receptor homolog and nucleic acids encoding the same
DE19835635C2 (de) 1998-08-06 2000-05-25 Knorr Bremse Systeme Relaisventil für Druckluftbremssysteme von Schienenfahrzeugen
US6818749B1 (en) 1998-10-31 2004-11-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Variants of humanized anti carcinoma monoclonal antibody cc49
US7888477B2 (en) 1998-12-17 2011-02-15 Corixa Corporation Ovarian cancer-associated antibodies and kits
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US6703020B1 (en) 1999-04-28 2004-03-09 Board Of Regents, The University Of Texas System Antibody conjugate methods for selectively inhibiting VEGF
WO2001003720A2 (en) 1999-07-12 2001-01-18 Genentech, Inc. Promotion or inhibition of angiogenesis and cardiovascularization by tumor necrosis factor ligand/receptor homologs
US6808710B1 (en) 1999-08-23 2004-10-26 Genetics Institute, Inc. Downmodulating an immune response with multivalent antibodies to PD-1
DK1242438T3 (da) 1999-12-29 2007-02-12 Immunogen Inc Cytotoksiske midler omfattende modificerede doxorubiciner og daunorubiciner og deres terapeutiske anvendelse
GB0018891D0 (en) 2000-08-01 2000-09-20 Novartis Ag Organic compounds
EP1975182A1 (en) 2000-02-01 2008-10-01 PanGenetics B.V. CD40-binding APC-activating molecules
AU2001259215A1 (en) 2000-04-28 2001-11-12 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Human anti-cd40 antibodies and methods of making and using same
US6696620B2 (en) * 2000-05-02 2004-02-24 Epicyte Pharmaceutical, Inc. Immunoglobulin binding protein arrays in eukaryotic cells
CA2412377A1 (en) 2000-06-06 2001-12-13 Bristol-Myers Squibb Company B7-related nucleic acids and polypeptides and their uses for immunomodulation
AU7142201A (en) * 2000-06-22 2002-01-02 Genentech Inc Agonist anti-trk-c monoclonal antibodies
US7288390B2 (en) 2000-08-07 2007-10-30 Centocor, Inc. Anti-dual integrin antibodies, compositions, methods and uses
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
EP1916303B1 (en) 2000-11-30 2013-02-27 Medarex, Inc. Nucleic acids encoding rearranged human immunoglobulin sequences from transgenic transchromosomal mice
US6995162B2 (en) 2001-01-12 2006-02-07 Amgen Inc. Substituted alkylamine derivatives and methods of use
DE60231475D1 (de) 2001-01-12 2009-04-23 Molecules Of Man Ab Materialien und methoden zur behandlung von hepatitis c
AR036993A1 (es) 2001-04-02 2004-10-20 Wyeth Corp Uso de agentes que modulan la interaccion entre pd-1 y sus ligandos en la submodulacion de respuestas inmunologicas
US7667004B2 (en) * 2001-04-17 2010-02-23 Abmaxis, Inc. Humanized antibodies against vascular endothelial growth factor
EP1539233B1 (en) 2001-07-12 2011-04-27 FOOTE, Jefferson Super humanized antibodies
US20030226155A1 (en) 2001-08-30 2003-12-04 Biorexis Pharmaceutical Corporation Modified transferrin-antibody fusion proteins
US20040142325A1 (en) 2001-09-14 2004-07-22 Liat Mintz Methods and systems for annotating biomolecular sequences
HU230798B1 (hu) 2001-10-30 2018-06-28 Novartis Ag Staurosporin-származékok mint az FLT3 receptor tirozin-kináz aktivitás inhibitorai
AR039067A1 (es) 2001-11-09 2005-02-09 Pfizer Prod Inc Anticuerpos para cd40
EP2407473A3 (en) 2002-02-01 2012-03-21 ARIAD Pharmaceuticals, Inc Method for producing phosphorus-containing compounds
SI2275102T1 (sl) 2002-03-13 2015-12-31 Array Biopharma, Inc. N3 alkilirani benzimidazol derivati kot MEK inhibitorji
US7550140B2 (en) 2002-06-13 2009-06-23 Crucell Holland B.V. Antibody to the human OX40 receptor
US8546541B2 (en) 2002-06-20 2013-10-01 Washington University Compositions and methods for modulating lymphocyte activity
EP2206517B1 (en) 2002-07-03 2023-08-02 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Immunopotentiating compositions comprising anti-PD-L1 antibodies
GB0215676D0 (en) 2002-07-05 2002-08-14 Novartis Ag Organic compounds
US20040047858A1 (en) 2002-09-11 2004-03-11 Blumberg Richard S. Therapeutic anti-BGP(C-CAM1) antibodies and uses thereof
US7153950B2 (en) 2002-10-25 2006-12-26 Genentech, Inc. Nucleic acids encoding an immune related polypeptide
AU2003291002A1 (en) 2002-11-15 2004-06-15 Chiron Corporation Methods for preventing and treating cancer metastasis and bone loss associated with cancer metastasis
JP4511943B2 (ja) 2002-12-23 2010-07-28 ワイス エルエルシー Ｐｄ−１に対する抗体およびその使用
EA009919B1 (ru) 2003-02-11 2008-04-28 Вернэлис (Кембридж) Лимитед Соединения изоксазола
WO2004072117A2 (en) * 2003-02-13 2004-08-26 Pharmacia Corporation Antibodies to c-met for the treatment of cancers
US20070048740A1 (en) * 2003-02-14 2007-03-01 Research Association For Biotechnology Full-length cDNA
US20050009136A1 (en) * 2003-02-19 2005-01-13 Dyax Corporation PAPP-A ligands
WO2004094676A1 (en) * 2003-04-17 2004-11-04 Cytec Technology Corp. Composition and process for the solvent extraction of metals using aldoxime or ketoxime extractants
US20050025763A1 (en) * 2003-05-08 2005-02-03 Protein Design Laboratories, Inc. Therapeutic use of anti-CS1 antibodies
KR20060052681A (ko) 2003-05-23 2006-05-19 와이어쓰 Ｇｉｔｒ 리간드, ｇｉｔｒ 리간드-연관 분자, 항체 및그의 용도
US20050186208A1 (en) 2003-05-30 2005-08-25 Genentech, Inc. Treatment with anti-VEGF antibodies
KR101325023B1 (ko) * 2003-07-02 2013-11-04 노보 노르디스크 에이/에스 Ｎｋ 세포 활성을 조절하기 위한 조성물 및 방법
WO2005007190A1 (en) 2003-07-11 2005-01-27 Schering Corporation Agonists or antagonists of the clucocorticoid-induced tumour necrosis factor receptor (gitr) or its ligand for the treatment of immune disorders, infections and cancer
WO2005044853A2 (en) 2003-11-01 2005-05-19 Genentech, Inc. Anti-vegf antibodies
US7758859B2 (en) 2003-08-01 2010-07-20 Genentech, Inc. Anti-VEGF antibodies
US20050106667A1 (en) 2003-08-01 2005-05-19 Genentech, Inc Binding polypeptides with restricted diversity sequences
US7288638B2 (en) 2003-10-10 2007-10-30 Bristol-Myers Squibb Company Fully human antibodies against human 4-1BB
WO2005039549A1 (en) 2003-10-27 2005-05-06 Novartis Ag Indolyl-pyrroledione derivatives for the treatment of neurological and vascular disorders related to beta-amyloid generation and/or aggregation
PT2489364E (pt) 2003-11-06 2015-04-16 Seattle Genetics Inc Compostos de monometilvalina conjugados com anticorpos
US8101719B2 (en) 2003-11-11 2012-01-24 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Humanized anti-CD47 antibody
BRPI0417023A (pt) * 2003-11-28 2007-02-21 Astrazeneca Ab anticorpo ou fragmento de anticorpo humanos, uso dos mesmos, composição farmacêutica, métodos para tratar um paciente que sofre de um distúrbio amilóide, para diagnosticar um distúrbio amilóide em um paciente, e para detectar a presença do apoe-ctd em uma amostra de um paciente, polinucleotìdeo, vetor, célula hospedeira, vìrus, e, kit para detectar apoe-ctd
WO2005055808A2 (en) 2003-12-02 2005-06-23 Genzyme Corporation Compositions and methods to diagnose and treat lung cancer
US7626030B2 (en) 2004-01-23 2009-12-01 Amgen Inc. Compounds and methods of use
WO2005097184A2 (en) 2004-03-26 2005-10-20 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies against nogo receptor
GB0409799D0 (en) 2004-04-30 2004-06-09 Isis Innovation Method of generating improved immune response
RS55551B1 (sr) 2004-05-13 2017-05-31 Icos Corp Hinazolinoni kao inhibitori humane fosfatidilinozitol 3-kinaze delta
EP1765402A2 (en) 2004-06-04 2007-03-28 Duke University Methods and compositions for enhancement of immunity by in vivo depletion of immunosuppressive cell activity
SI1761528T1 (sl) 2004-06-11 2008-06-30 Japan Tobacco Inc 5-amino-2,4,7-triokso-3,4,7,8-tetrahidro-2H-pirido(2,3-D)pirimidinski derivati in sorodne spojine za zdravljenje raka
US7378423B2 (en) 2004-06-11 2008-05-27 Japan Tobacco Inc. Pyrimidine compound and medical use thereof
GB0512324D0 (en) 2005-06-16 2005-07-27 Novartis Ag Organic compounds
US20060009360A1 (en) 2004-06-25 2006-01-12 Robert Pifer New adjuvant composition
US20060099203A1 (en) 2004-11-05 2006-05-11 Pease Larry R B7-DC binding antibody
MX2007002856A (es) 2004-09-02 2007-09-25 Genentech Inc Metodos para el uso de ligandos receptores de muerte y anticuerpos c20.
WO2006053110A2 (en) 2004-11-10 2006-05-18 Diadexus, Inc. Ovr110 antibody compositions and methods of use
US8188232B1 (en) 2004-11-15 2012-05-29 Washington University In St. Louis Compositions and methods for modulating lymphocyte activity
JP5366406B2 (ja) * 2005-01-07 2013-12-11 レキシコン ファーマシューティカルズ インコーポレーテッド アンジオポエチン様タンパク質４（ａｎｇｐｔｌ４）に対するモノクローナル抗体
US8119385B2 (en) * 2005-03-04 2012-02-21 Bp Corporation North America Inc. Nucleic acids and proteins and methods for making and using them
JP5171611B2 (ja) * 2005-03-25 2013-03-27 ナショナル リサーチ カウンシル オブ カナダ 可溶性ポリペプチドの単離方法
CA2602777C (en) 2005-03-25 2018-12-11 Tolerrx, Inc. Gitr binding molecules and uses therefor
WO2006106905A1 (ja) 2005-03-31 2006-10-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 会合制御によるポリペプチド製造方法
PL2161336T5 (pl) 2005-05-09 2017-10-31 Ono Pharmaceutical Co Ludzkie przeciwciała monoklonalne przeciwko białku Programmed Death 1 (PD-1) oraz sposoby leczenia raka z zastosowaniem samych przeciwciał anty-PD-1 lub w połączeniu z innymi środkami immunoterapeutycznymi
BR122020016659B8 (pt) 2005-05-10 2021-07-27 Incyte Holdings Corp moduladores de 2,3-dioxigenase de indolamina e métodos de modulação de atividade de inibição e de imunossupressão
GB0510390D0 (en) 2005-05-20 2005-06-29 Novartis Ag Organic compounds
EP1885399B1 (en) 2005-05-26 2010-10-20 Seattle Genetics, Inc. Humanized anti-cd40 antibodies and their methods of use
DK1907000T4 (da) 2005-06-08 2020-03-30 The President And Fellows Of Harvard College Fremgangsmåder og sammensætninger til behandling af persisterende HIV-infektioner ved hæmning af reaktionsvejen for programmeret celledød 1 (PD-1).
JP2006345852A (ja) * 2005-06-16 2006-12-28 Virxsys Corp 抗体複合体
DE102005028778A1 (de) 2005-06-22 2006-12-28 SUNJÜT Deutschland GmbH Mehrlagige Folie mit einer Barriere- und einer antistatischen Lage
WO2007004415A1 (ja) 2005-07-01 2007-01-11 Murata Manufacturing Co., Ltd. 多層セラミック基板およびその製造方法ならびに多層セラミック基板作製用複合グリーンシート
CN104356236B (zh) 2005-07-01 2020-07-03 E.R.施贵宝&圣斯有限责任公司 抗程序性死亡配体1(pd-l1)的人单克隆抗体
PL1915398T3 (pl) 2005-07-18 2016-10-31 Ludzkie przeciwciała neutralizujące anty-B7RP1
PE20070427A1 (es) 2005-08-30 2007-04-21 Novartis Ag Compuestos derivados de benzimidazoles sustituidos como inhibidores de tirosina quinasas
EP2354160A1 (en) * 2005-08-31 2011-08-10 Schering Corporation Engineered anti-IL-23-antibodies
CA2630483C (en) 2005-12-08 2015-05-19 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to o8e
EP2343298B9 (en) 2005-12-13 2020-05-06 Incyte Holdings Corporation Heteroaryl substituted pyrrolo[2,3-b]pyridines and pyrrolo[2,3-b]pyrimidines as Janus kinase inhibitors
WO2007133822A1 (en) 2006-01-19 2007-11-22 Genzyme Corporation Gitr antibodies for the treatment of cancer
JO2660B1 (en) 2006-01-20 2012-06-17 نوفارتيس ايه جي Pi-3 inhibitors and methods of use
CN101495136A (zh) 2006-02-15 2009-07-29 英克隆系统公司 抗体配制品
PT1999154E (pt) 2006-03-24 2013-01-24 Merck Patent Gmbh Domínios proteicos heterodiméricos modificados
UA93548C2 (uk) 2006-05-05 2011-02-25 Айерем Елелсі Сполуки та композиції як модулятори хеджхогівського сигнального шляху
US20090182127A1 (en) 2006-06-22 2009-07-16 Novo Nordisk A/S Production of Bispecific Antibodies
PE20110217A1 (es) 2006-08-02 2011-04-01 Novartis Ag DERIVADOS DE 2-OXO-ETIL-AMINO-PROPIONAMIDA-PIRROLIDIN-2-IL-SUSTITUIDOS COMO INHIBIDORES DEL ENLACE DE LA PROTEINA Smac AL INHIBIDOR DE LA PROTEINA DE APOPTOSIS
AU2007285855B2 (en) 2006-08-18 2013-03-07 Novartis Ag PRLR-specific antibody and uses thereof
JP5448818B2 (ja) 2006-08-21 2014-03-19 ジェネンテック， インコーポレイテッド アザベンゾフラニル化合物および使用方法
WO2008037419A1 (en) * 2006-09-29 2008-04-03 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies against ccr5 and uses thereof
GB0620894D0 (en) 2006-10-20 2006-11-29 Univ Southampton Human immune therapies using a CD27 agonist alone or in combination with other immune modulators
AU2007334264A1 (en) 2006-11-15 2008-06-26 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to BTLA and methods of use
PL2091918T3 (pl) 2006-12-08 2015-02-27 Novartis Ag Związki i kompozycje jako inhibitory kinazy białkowej
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
AU2007339773B2 (en) 2006-12-27 2011-03-10 The Johns Hopkins University Compositions and methods for stimulating an immune response
EP1987839A1 (en) 2007-04-30 2008-11-05 I.N.S.E.R.M. Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale Cytotoxic anti-LAG-3 monoclonal antibody and its use in the treatment or prevention of organ transplant rejection and autoimmune disease
CA2691357C (en) 2007-06-18 2014-09-23 N.V. Organon Antibodies to human programmed death receptor pd-1
ES2591281T3 (es) 2007-07-12 2016-11-25 Gitr, Inc. Terapias de combinación que emplean moléculas de enlazamiento a GITR
KR20100058509A (ko) 2007-07-31 2010-06-03 메디뮨 엘엘씨 다중특이적 에피토프 결합 단백질 및 이의 용도
US9243052B2 (en) 2007-08-17 2016-01-26 Daniel Olive Method for treating and diagnosing hematologic malignancies
US8748356B2 (en) 2007-10-19 2014-06-10 Janssen Biotech, Inc. Methods for use in human-adapting monoclonal antibodies
US8163285B2 (en) * 2007-11-02 2012-04-24 Novartis Ag Nogo-A binding molecules and pharmaceutical use thereof
PT2594590E (pt) 2007-12-14 2015-01-14 Bristol Myers Squibb Co Moléculas de ligação ao recetor humano ox40
CA2710373A1 (en) 2007-12-19 2009-07-09 Ping Tsui Design and generation of human de novo pix phage display libraries via fusion to pix or pvii, vectors, antibodies and methods
CL2008003810A1 (es) 2007-12-19 2009-05-22 Genentech Inc Compuestos derivados de 5-anilino imidazol[1,5-a]piridina o pirazina, inhibidores de la actividad mek quinasa; composiciones farmaceuticas que los contienen; y su uso para tratar trastornos hiperproliferativos y una enfermedad inflamatoria.
US8227577B2 (en) 2007-12-21 2012-07-24 Hoffman-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US9266967B2 (en) 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
US8242247B2 (en) 2007-12-21 2012-08-14 Hoffmann-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US8168757B2 (en) 2008-03-12 2012-05-01 Merck Sharp & Dohme Corp. PD-1 binding proteins
WO2009114870A2 (en) 2008-03-14 2009-09-17 Intellikine, Inc. Kinase inhibitors and methods of use
AR070924A1 (es) 2008-03-19 2010-05-12 Novartis Ag Formas cristalinas y dos formas solvatadas de sales del acido lactico de 4- amino -5- fluoro-3-(5-(4-metilpiperazin-1-il ) -1h- bencimidazol-2-il) quinolin -2-(1h) - ona
FR2929946B1 (fr) * 2008-04-11 2010-05-28 Pf Medicament Nouveaux anticorps anti-cd151 et leur utilisation pour le traitement du cancer
US20110229460A1 (en) 2008-05-01 2011-09-22 Gtc Biotherapeutics, Inc. anti-cd137 antibody as an agent in the treatment of inflammatory conditions
PE20100087A1 (es) 2008-06-25 2010-02-08 Irm Llc Compuestos y composiciones como inhibidores de cinasa
AU2009266873A1 (en) 2008-07-02 2010-01-07 Emergent Product Development Seattle, Llc TGF-beta antagonist multi-target binding proteins
WO2010006086A2 (en) 2008-07-08 2010-01-14 Intellikine, Inc. Kinase inhibitors and methods of use
US20100041663A1 (en) 2008-07-18 2010-02-18 Novartis Ag Organic Compounds as Smo Inhibitors
WO2010017103A2 (en) 2008-08-04 2010-02-11 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Servic Fully human anti-human nkg2d monoclonal antibodies
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
PL2331547T3 (pl) 2008-08-22 2015-01-30 Novartis Ag Związki pirolopirymidynowe jako inhibitory CDK
RS54506B1 (sr) 2008-09-02 2016-06-30 Novartis Ag Derivati pikolinamida kao inhibitori kinaza
UA104147C2 (uk) 2008-09-10 2014-01-10 Новартис Аг Похідна піролідиндикарбонової кислоти та її застосування у лікуванні проліферативних захворювань
JPWO2010030002A1 (ja) 2008-09-12 2012-02-02 国立大学法人三重大学 外来性ｇｉｔｒリガンド発現細胞
EP2342228B1 (en) 2008-09-12 2017-09-06 Oxford University Innovation Limited Pd-1 specific antibodies and uses thereof
CA2736829C (en) 2008-09-12 2018-02-27 Isis Innovation Limited Pd-1 specific antibodies and uses thereof
CA2998281C (en) 2008-09-26 2022-08-16 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Human anti-pd-1 antobodies and uses therefor
CA2738429C (en) 2008-09-26 2016-10-25 Intellikine, Inc. Heterocyclic kinase inhibitors
KR101050829B1 (ko) 2008-10-02 2011-07-20 서울대학교산학협력단 항 ｐｄ-1 항체 또는 항 ｐｄ-ｌ1 항체를 포함하는 항암제
WO2010045340A1 (en) 2008-10-14 2010-04-22 Centocor Ortho Biotech Inc. Methods of humanizing and affinity-maturing antibodies
JO3096B1 (ar) * 2008-11-07 2017-03-15 Imclone Llc الأجسام المضادة لمستقبل ii مضاد tgfb
PT2370076T (pt) 2008-11-28 2017-03-31 Novartis Ag Combinações de inibidor hsp90
EP4331604B9 (en) 2008-12-09 2025-07-23 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-pd-l1 antibodies and their use to enhance t-cell function
US20110268741A1 (en) 2009-01-05 2011-11-03 The Johns Hopkins University Immunotherapy for Contact Dermatitis Using Co-Signal Regulation
WO2010083178A1 (en) 2009-01-16 2010-07-22 Monsanto Technology Llc Isolated novel nucleic acid and protein molecules from corn and methods of using those molecules to generate transgenic plants with enhanced agronomic traits
EP2210903A1 (en) 2009-01-21 2010-07-28 Monoclonal Antibodies Therapeutics Anti-CD160 monoclonal antibodies and uses thereof
ES2629337T3 (es) 2009-02-09 2017-08-08 Inserm - Institut National De La Santé Et De La Recherche Médicale Anticuerpos contra PD-1 y anticuerpos contra PD-L1 y usos de los mismos
UA103918C2 (en) 2009-03-02 2013-12-10 Айерем Элелси N-(hetero)aryl, 2-(hetero)aryl-substituted acetamides for use as wnt signaling modulators
AR075989A1 (es) 2009-04-10 2011-05-11 Lilly Co Eli Anticuerpo dkk -1 (dickkopf-1) humano disenado por ingenieria
WO2010129304A2 (en) 2009-04-27 2010-11-11 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Method for making heteromultimeric molecules
KR20180077322A (ko) 2009-04-30 2018-07-06 텔 하쇼머 메디컬 리서치 인프라스트럭쳐 앤드 서비시스 리미티드． 항-ｃｅａｃａｍ1 항체들과 이를 이용하는 방법들
RU2420587C2 (ru) * 2009-06-25 2011-06-10 Открытое акционерное общество "Всероссийский научный Центр молекулярной диагностики и лечения" (ОАО ВНЦМДЛ) ГУМАНИЗИРОВАННЫЕ АНТИТЕЛА И Fab, СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С АНТИГЕНОМ F1 ИЗ Yersinia pestis, И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДРОЖЖЕЙ
JP5456891B2 (ja) 2009-06-26 2014-04-02 ノバルティス アーゲー Ｃｙｐ１７阻害剤としての１，３−二置換イミダゾリジン−２−オン誘導体
CA2769473A1 (en) 2009-07-31 2011-02-03 N.V. Organon Fully human antibodies to btla
AR077975A1 (es) 2009-08-28 2011-10-05 Irm Llc Derivados de pirazol pirimidina y composiciones como inhibidores de cinasa de proteina
CA2772613C (en) 2009-09-03 2020-03-10 Schering Corporation Anti-gitr antibodies
GB0919054D0 (en) 2009-10-30 2009-12-16 Isis Innovation Treatment of obesity
CA2778714C (en) 2009-11-24 2018-02-27 Medimmune Limited Targeted binding agents against b7-h1
KR101791430B1 (ko) 2009-11-30 2017-10-30 얀센 바이오테크 인코포레이티드 이펙터 기능이 제거된 항체 Ｆｃ 돌연변이체
US8440693B2 (en) 2009-12-22 2013-05-14 Novartis Ag Substituted isoquinolinones and quinazolinones
HUE029257T2 (en) 2009-12-29 2017-02-28 Aptevo Res And Dev Llc Heterodimer binding proteins and their use
US8859736B2 (en) * 2010-02-19 2014-10-14 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Monoclonal antibodies that inhibit the wnt signaling pathway and methods of production and use thereof
UY33227A (es) 2010-02-19 2011-09-30 Novartis Ag Compuestos de pirrolopirimidina como inhibidores de la cdk4/6
SG10201604336VA (en) 2010-03-04 2016-07-28 Macrogenics Inc Antibodies Reactive With B7-H3, Immunologically Active Fragments Thereof And Uses Thereof
US8993731B2 (en) 2010-03-11 2015-03-31 Ucb Biopharma Sprl PD-1 antibody
ES2989108T3 (es) 2010-04-20 2024-11-25 Genmab As Proteínas que contienen FC de anticuerpos heterodiméricos y métodos para producir las mismas
WO2011139973A2 (en) 2010-05-03 2011-11-10 Abbott Laboratories Methods of inhibiting fibrosis using anti-pai-1 antibodies
LT3789038T (lt) 2010-05-14 2022-12-12 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Humanizuoti ir chimeriniai monokloniniai antikūnai prieš cd47
JP6158511B2 (ja) * 2010-06-11 2017-07-05 協和発酵キリン株式会社 抗ｔｉｍ−３抗体
CA2802344C (en) * 2010-06-18 2023-06-13 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Bi-specific antibodies against tim-3 and pd-1 for immunotherapy in chronic immune conditions
PL2606070T3 (pl) 2010-08-20 2017-06-30 Novartis Ag Przeciwciała dla receptora epidermalnego czynnika wzrostu 3 (her3)
NZ716369A (en) 2010-08-23 2017-05-26 Univ Texas Anti-ox40 antibodies and methods of using the same
MY177065A (en) 2010-09-09 2020-09-03 Pfizer 4-1bb binding molecules
CA2812389C (en) 2010-09-27 2019-12-31 John Kehoe Antibodies binding human collagen ii
MX362039B (es) 2010-11-04 2019-01-07 Boehringer Ingelheim Int Anticuerpos anti-il-23.
AU2011325833C1 (en) 2010-11-05 2017-07-13 Zymeworks Bc Inc. Stable heterodimeric antibody design with mutations in the Fc domain
DE102010052101A1 (de) 2010-11-20 2012-05-24 Schaeffler Technologies Gmbh & Co. Kg Lagervorrichtung mit einem Fanglager
GB201020995D0 (en) 2010-12-10 2011-01-26 Bioinvent Int Ab Biological materials and uses thereof
CN111246576B (zh) 2011-03-31 2020-12-25 华为技术有限公司 时分双工系统中子帧配置的方法、基站及用户设备
MX341076B (es) 2011-03-31 2016-08-04 Merck Sharp & Dohme Formulaciones estables de anticuerpos para el receptor humano pd-1 de meurte programada y tratamientos relacionados.
PT2699264T (pt) 2011-04-20 2018-05-23 Medimmune Llc Anticorpos e outras moléculas que ligam b7-h1 e pd-1
WO2012145568A1 (en) 2011-04-21 2012-10-26 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Antibodies to human b7x for treatment of metastatic cancer
US20140234320A1 (en) * 2011-06-20 2014-08-21 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Modulators of 4-1bb and immune responses
US9132281B2 (en) 2011-06-21 2015-09-15 The Johns Hopkins University Focused radiation for augmenting immune-based therapies against neoplasms
WO2013006490A2 (en) 2011-07-01 2013-01-10 Cellerant Therapeutics, Inc. Antibodies that specifically bind to tim3
KR20190133790A (ko) 2011-08-01 2019-12-03 제넨테크, 인크. Pd-1 축 결합 길항제 및 mek 억제제를 사용하는 암 치료 방법
CA2845810C (en) 2011-08-23 2017-03-28 Board Of Regents, The University Of Texas System Anti-ox40 antibodies and methods of using the same
GB201115280D0 (en) 2011-09-05 2011-10-19 Alligator Bioscience Ab Antibodies, uses and methods
MX348941B (es) 2011-09-07 2017-07-04 Deutsches Krebsforsch Medios y metodos para trata y/o prevenir el cancer dependiente del ligando natural de receptor de aril-hidrocarburo.
US20130108641A1 (en) 2011-09-14 2013-05-02 Sanofi Anti-gitr antibodies
WO2013054320A1 (en) 2011-10-11 2013-04-18 Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. Antibodies to carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule (ceacam)
AU2012332021B8 (en) 2011-11-04 2017-10-12 Zymeworks Bc Inc. Stable heterodimeric antibody design with mutations in the Fc domain
UY34591A (es) 2012-01-26 2013-09-02 Novartis Ag Compuestos de imidazopirrolidinona
UY34632A (es) 2012-02-24 2013-05-31 Novartis Ag Compuestos de oxazolidin- 2- ona y usos de los mismos
AR090263A1 (es) 2012-03-08 2014-10-29 Hoffmann La Roche Terapia combinada de anticuerpos contra el csf-1r humano y las utilizaciones de la misma
SG10201700698WA (en) 2012-05-15 2017-02-27 Bristol Myers Squibb Co Cancer immunotherapy by disrupting pd-1/pd-l1 signaling
BR112014027584B1 (pt) 2012-05-15 2023-01-24 Novartis Ag Uso de inibidores da atividade de abl1, abl2 e bcr-abl1, e composição farmacêutica
EA201492007A1 (ru) 2012-05-15 2015-03-31 Новартис Аг Производные бензамида для ингибирования активности abl1, abl2 и bcr-abl1
CN104379574B (zh) 2012-05-15 2017-03-01 诺华股份有限公司 用于抑制abl1、abl2和bcr‑abl1的活性的苯甲酰胺衍生物
SG11201407152XA (en) 2012-05-15 2014-11-27 Novartis Ag Benzamide derivatives for inhibiting the activity of abl1, abl2 and bcr-abl1
JO3300B1 (ar) 2012-06-06 2018-09-16 Novartis Ag مركبات وتركيبات لتعديل نشاط egfr
EP2858673A4 (en) 2012-06-06 2016-06-22 Oncomed Pharm Inc BONDING AGENT FOR MODULATING THE HIPPO PATH AND USES THEREOF
NZ622452A (en) 2012-06-21 2017-10-27 Compugen Ltd Lsr antibodies, and uses thereof for treatment of cancer
EP2879709B1 (en) 2012-07-31 2020-01-08 The Brigham and Women's Hospital, Inc. Modulation of the immune response
US20140227250A1 (en) 2012-08-23 2014-08-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Stable formulations of antibodies to tslp
JOP20200308A1 (ar) * 2012-09-07 2017-06-16 Novartis Ag جزيئات إرتباط il-18
WO2014070934A1 (en) 2012-10-30 2014-05-08 Apexigen, Inc. Anti-cd40 antibodies and methods of use
CN104994850A (zh) 2012-11-08 2015-10-21 诺华股份有限公司 包含b-raf抑制剂和组蛋白脱乙酰基酶抑制剂的药物组合以及其在治疗增生性疾病中的用途
KR20250054125A (ko) 2012-11-21 2025-04-22 얀센 바이오테크 인코포레이티드 이중특이성 EGFR/c-Met 항체
CA2891938A1 (en) 2012-11-28 2014-06-05 Novartis Ag Combination therapy
AU2013361275B2 (en) 2012-12-19 2016-11-24 Amplimmune, Inc. Anti-human B7-H4 antibodies and their uses
EA201500741A1 (ru) 2013-01-10 2016-01-29 Генмаб Б.В. ВАРИАНТЫ Fc-ОБЛАСТИ IGG1 ЧЕЛОВЕКА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
JO3519B1 (ar) 2013-01-25 2020-07-05 Amgen Inc تركيبات أجسام مضادة لأجل cdh19 و cd3
US9498532B2 (en) 2013-03-13 2016-11-22 Novartis Ag Antibody drug conjugates
EP3299391B1 (en) 2013-03-14 2019-12-04 Genentech, Inc. Anti-b7-h4 antibodies and immunoconjugates
US20160067337A1 (en) 2013-03-14 2016-03-10 Bristol-Myers Squibb Company Combination of dr5 agonist and anti-pd-1 antagonist and methods of use
WO2014159764A1 (en) * 2013-03-14 2014-10-02 Amgen Inc. Chrdl-1 antigen binding proteins and methods of treatment
US9242969B2 (en) 2013-03-14 2016-01-26 Novartis Ag Biaryl amide compounds as kinase inhibitors
ES2665619T3 (es) 2013-03-14 2018-04-26 Novartis Ag 3-Pirimidin-4-il-oxazolidin-2-onas como inhibidores de IDH mutante
ES2690047T3 (es) 2013-03-15 2018-11-19 Janssen Biotech, Inc. Procedimientos de fabricación para controlar la lisina C-terminal, la galactosa y el contenido de ácido siálico en proteínas recombinantes
EP2968985A2 (en) * 2013-03-15 2016-01-20 Amgen, Inc. Human antigen binding proteins that bind to proprotein convertase subtilisin kexin type 9
EP2976361B1 (en) 2013-03-18 2018-07-18 BiocerOX Products B.V. Humanized anti-cd134 (ox40) antibodies and uses thereof
HUE053069T2 (hu) * 2013-05-02 2021-06-28 Anaptysbio Inc Programozott halál-1 (PD-1) ellen irányuló ellenanyagok
AU2014262469B2 (en) * 2013-05-10 2019-11-14 Whitehead Institute For Biomedical Research Protein modification of living cells using sortase
WO2014183885A1 (en) 2013-05-17 2014-11-20 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Antagonist of the btla/hvem interaction for use in therapy
CA2913977C (en) 2013-05-31 2022-11-29 Sorrento Therapeutics, Inc. Antigen binding proteins that bind pd-1
CN104250302B (zh) 2013-06-26 2017-11-14 上海君实生物医药科技股份有限公司 抗pd‑1抗体及其应用
KR20160030936A (ko) 2013-07-16 2016-03-21 제넨테크, 인크. Pd-1 축 결합 길항제 및 tigit 억제제를 사용한 암을 치료하는 방법
AU2014293154A1 (en) 2013-07-24 2016-02-18 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Anti-galectin-1 monoclonal antibodies and fragments thereof
BR112016003532A8 (pt) 2013-08-22 2018-01-30 Council Queensland Inst Medical Res modulação imunorreceptora para tratar o cancer e as infecções virais
US10077305B2 (en) 2013-09-10 2018-09-18 Medimmune Limited Antibodies against PD-1 and uses thereof
PT3702373T (pt) 2013-09-13 2022-09-27 Beigene Switzerland Gmbh Anticorpos anti-pd1 e a sua utilização como agentes terapêuticos e de diagnóstico
AU2014339816B2 (en) * 2013-10-25 2020-05-28 Pharmacyclics Llc Treatment using Bruton's tyrosine kinase inhibitors and immunotherapy
CN104558177B (zh) 2013-10-25 2020-02-18 苏州思坦维生物技术股份有限公司 拮抗抑制程序性死亡受体pd-1与其配体结合的单克隆抗体及其编码序列与用途
JP2016540042A (ja) * 2013-11-05 2016-12-22 コグネート バイオサービシズ， インコーポレイテッド がんを処置するためのチェックポイント阻害剤および治療薬の組合せ
SG10201804945WA (en) 2013-12-12 2018-07-30 Shanghai hengrui pharmaceutical co ltd Pd-1 antibody, antigen-binding fragment thereof, and medical application thereof
KR20160089532A (ko) 2013-12-17 2016-07-27 제넨테크, 인크. Pd-1 축 결합 길항제 및 항-cd20 항체를 사용하여 암을 치료하는 방법
EP3083694B1 (en) 2013-12-20 2023-11-22 Intervet International B.V. Caninized murine anti-canine pd-1 antibodies
US9456612B2 (en) * 2013-12-26 2016-10-04 Zimplistic Pte. Ltd. Dry flour dispensing apparatus and using the same for a food preparation appliance
CN103721255A (zh) * 2014-01-07 2014-04-16 苏州大学 共同阻断pd-1和tim-3信号通路在抗胃癌治疗中的用途
WO2015112534A2 (en) * 2014-01-21 2015-07-30 Medimmune, Llc Compositions and methods for modulating and redirecting immune responses
TWI681969B (zh) 2014-01-23 2020-01-11 美商再生元醫藥公司 針對ｐｄ-１的人類抗體
TWI680138B (zh) 2014-01-23 2019-12-21 美商再生元醫藥公司 抗ｐｄ-ｌ１之人類抗體
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
JOP20200096A1 (ar) * 2014-01-31 2017-06-16 Children’S Medical Center Corp جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها
EP3143043B1 (en) 2014-05-16 2022-12-14 Pfizer Inc. Bispecific antibodies with engineered ch1-cl interfaces
WO2015195163A1 (en) 2014-06-20 2015-12-23 R-Pharm Overseas, Inc. Pd-l1 antagonist fully human antibody
TWI693232B (zh) 2014-06-26 2020-05-11 美商宏觀基因股份有限公司 與pd-1和lag-3具有免疫反應性的共價結合的雙抗體和其使用方法
WO2016006241A1 (ja) 2014-07-09 2016-01-14 日本全薬工業株式会社 抗イヌｐｄ－１抗体又は抗イヌｐｄ－ｌ１抗体
SG10201900571YA (en) 2014-07-22 2019-02-27 Cb Therapeutics Inc Anti-pd-1 antibodies
SG11201700672YA (en) 2014-08-05 2017-02-27 MabQuest SA Immunological reagents binding to pd-1
US9982052B2 (en) 2014-08-05 2018-05-29 MabQuest, SA Immunological reagents
GB201419084D0 (en) 2014-10-27 2014-12-10 Agency Science Tech & Res Anti-PD-1 antibodies
EP3218409A2 (en) 2014-11-11 2017-09-20 Sutro Biopharma, Inc. Anti-pd-1 antibodies, compositions comprising anti-pd-1 antibodies and methods of using anti-pd-1 antibodies
TWI595006B (zh) 2014-12-09 2017-08-11 禮納特神經系統科學公司 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法
CA2971734C (en) 2014-12-22 2025-11-18 Enumeral Biomedical Holdings Inc Anti-pd-1 antibodies
CN105061597B (zh) 2015-06-09 2016-04-27 北京东方百泰生物科技有限公司 一种抗pd-1的单克隆抗体及其获得方法
TWI773647B (zh) 2015-06-23 2022-08-11 史隆凱特林紀念癌症中心 新穎pd-1免疫調控劑
US20170044265A1 (en) * 2015-06-24 2017-02-16 Janssen Biotech, Inc. Immune Modulation and Treatment of Solid Tumors with Antibodies that Specifically Bind CD38
CN107921120A (zh) * 2015-06-24 2018-04-17 詹森生物科技公司 用特异性结合cd38的抗体免疫调节和治疗实体瘤
MA42447A (fr) 2015-07-13 2018-05-23 Cytomx Therapeutics Inc Anticorps anti-pd-1, anticorps anti-pd-1 activables, et leurs procédés d'utilisation
CN106699888B (zh) 2015-07-28 2020-11-06 上海昀怡健康科技发展有限公司 一种pd-1抗体及其制备方法和应用
SG10201906059VA (en) 2015-07-30 2019-08-27 Macrogenics Inc Pd-1-binding molecules and methods of use thereof
WO2017024465A1 (en) 2015-08-10 2017-02-16 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Pd-1 antibodies
WO2017024515A1 (en) 2015-08-11 2017-02-16 Wuxi Biologics (Cayman) Inc. Novel anti-pd-1 antibodies
WO2017040790A1 (en) 2015-09-01 2017-03-09 Agenus Inc. Anti-pd-1 antibodies and methods of use thereof
CN106999591B (zh) 2015-09-28 2021-02-23 苏州盛迪亚生物医药有限公司 一种抗pd-1抗体制剂及其在医药上的应用
CA3000638C (en) 2015-09-29 2024-02-27 Asia Biotech Pte. Ltd. Pd-1 antibodies and uses thereof
WO2017058859A1 (en) 2015-09-29 2017-04-06 Celgene Corporation Pd-1 binding proteins and methods of use thereof
EP3150636A1 (en) 2015-10-02 2017-04-05 F. Hoffmann-La Roche AG Tetravalent multispecific antibodies
CA3000564A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 Symphogen A/S Anti-pd-1 antibodies and compositions
MY192202A (en) 2015-10-02 2022-08-06 Hoffmann La Roche Bispecific antibodies specific for pd1 and tim3
KR102072317B1 (ko) 2015-10-02 2020-01-31 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-pd1 항체 및 사용 방법
CN106632674B (zh) 2015-10-30 2018-11-16 泽达生物医药有限公司 一种抗pd-1单克隆抗体、其药物组合物及其用途
LT3370768T (lt) 2015-11-03 2022-05-25 Janssen Biotech, Inc. Antikūnai, specifiškai surišantys pd-1, ir jų panaudojimas
RU2755724C2 (ru) 2015-11-18 2021-09-20 Мерк Шарп И Доум Корп. Pd1/ctla4-связывающие вещества
CN106699889A (zh) 2015-11-18 2017-05-24 礼进生物医药科技（上海）有限公司 抗pd-1抗体及其治疗用途
MA43859A (fr) 2016-01-11 2018-11-21 Novartis Ag Anticorps monoclonaux humainisés immunostimulants dirigés contre l'interleukine -2 humaine, et leurs protéines de fusion
ES2940227T3 (es) 2016-05-06 2023-05-04 Taris Biomedical Llc Método de tratamiento del cáncer urotelial del tracto inferior
WO2017196847A1 (en) 2016-05-10 2017-11-16 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Variable new antigen receptor (vnar) antibodies and antibody conjugates targeting tumor and viral antigens
WO2017214182A1 (en) 2016-06-07 2017-12-14 The United States Of America. As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Fully human antibody targeting pdi for cancer immunotherapy
WO2018026248A1 (ko) 2016-08-05 2018-02-08 주식회사 와이바이오로직스 프로그램화된 세포 사멸 단백질(pd-1)에 대한 신규 항체 및 이의 용도
WO2018027524A1 (en) 2016-08-09 2018-02-15 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Pd-1 antibody formulation
CN106977602B (zh) 2016-08-23 2018-09-25 中山康方生物医药有限公司 一种抗pd1单克隆抗体、其药物组合物及其用途
MX2019002946A (es) 2016-09-14 2019-09-26 Abbvie Biotherapeutics Inc Anticuerpos anti-pd-1 y sus usos.
EA201990672A1 (ru) 2016-09-14 2019-08-30 Бэйцзин Ханми Фарм. Ко., Лтд. Антитела, специфически связывающиеся с pd-1, и их функциональные фрагменты
DK3515938T3 (da) 2016-09-21 2025-04-07 Cstone Pharmaceuticals Monoklonale antistoffer mod programmeret død 1 (pd-1)
DE102017211373B4 (de) 2017-07-04 2025-05-08 Schaeffler Technologies AG & Co. KG Induktive Ladevorrichtung für ein elektrisch antreibbares Kraftfahrzeug und Betriebsverfahren für die Ladevorrichtung

Also Published As

Publication number Publication date
EP3370769A1 (en) 2018-09-12
MX2018005550A (es) 2019-07-18
CO2018005614A2 (es) 2018-05-31
WO2017079115A1 (en) 2017-05-11
ZA201803669B (en) 2022-01-26
EP3370768A1 (en) 2018-09-12
KR20180069071A (ko) 2018-06-22
KR20250099459A (ko) 2025-07-01
EP3370768B1 (en) 2022-01-12
HRP20220436T1 (hr) 2022-05-27
SV2018005684A (es) 2018-09-25
CN114478790A (zh) 2022-05-13
US20250215079A1 (en) 2025-07-03
BR112018008904A2 (en) 2018-11-27
MA43186B1 (fr) 2022-03-31
HUE057837T2 (hu) 2022-06-28
BR112018008867A2 (en) 2018-11-06
JP2019500891A (ja) 2019-01-17
PH12018500906B1 (en) 2024-06-14
CR20180234A (es) 2018-09-11
EP3371226A2 (en) 2018-09-12
EP4046655A9 (en) 2023-04-12
CL2018001177A1 (es) 2018-10-12
UA126896C2 (uk) 2023-02-22
EP3371226A4 (en) 2019-07-17
CA3004134A1 (en) 2017-05-11
AU2016348388B2 (en) 2023-11-30
IL258909B2 (en) 2023-06-01
AU2016348391A1 (en) 2018-05-17
BR112018008867A8 (pt) 2019-02-26
CN108430509B (zh) 2022-09-16
NI201800055A (es) 2019-03-29
CN108473584B (zh) 2022-01-14
AU2016350700A1 (en) 2018-05-17
MA43186A (fr) 2021-04-07
JP7051692B2 (ja) 2022-04-11
ECSP18041833A (es) 2018-06-30
PE20181326A1 (es) 2018-08-20
LT3370768T (lt) 2022-05-25
SI3370768T1 (sl) 2022-04-29
US20210277110A1 (en) 2021-09-09
JO3798B1 (ar) 2021-01-31
CA3004117A1 (en) 2017-05-11
BR112018008891A2 (en) 2018-11-06
PT3370768T (pt) 2022-04-21
TWI772275B (zh) 2022-08-01
IL258909A (en) 2018-06-28
KR20180072821A (ko) 2018-06-29
KR20180069070A (ko) 2018-06-22
CN108697791B (zh) 2022-08-23
NZ741953A (en) 2025-03-28
CN108697791A (zh) 2018-10-23
JP2022031666A (ja) 2022-02-22
JP2022078101A (ja) 2022-05-24
TW201730213A (zh) 2017-09-01
GT201800090A (es) 2019-11-13
PL3370768T3 (pl) 2022-06-13
CN108473584A (zh) 2018-08-31
JP2019500893A (ja) 2019-01-17
US12173064B2 (en) 2024-12-24
BR112018008891A8 (pt) 2019-02-26
CN108430509A (zh) 2018-08-21
AR106583A1 (es) 2018-01-31
EP3370769A4 (en) 2019-05-22
EA201891093A1 (ru) 2018-10-31
WO2017079116A3 (en) 2017-07-20
WO2017079116A2 (en) 2017-05-11
US20170121409A1 (en) 2017-05-04
JP7335374B2 (ja) 2023-08-29
JP2019500892A (ja) 2019-01-17
SMT202200118T1 (it) 2022-05-12
EP4046655A1 (en) 2022-08-24
KR102828417B1 (ko) 2025-07-02
EP3370768B9 (en) 2022-03-16
MD3370768T2 (ro) 2022-07-31
CA3004138A1 (en) 2017-05-11
MX2018005551A (es) 2018-11-09
CY1125267T1 (el) 2024-02-16
WO2017079112A1 (en) 2017-05-11
DK3370768T3 (da) 2022-03-21
SG11201803520PA (en) 2018-05-30
JP2022036949A (ja) 2022-03-08
ES2908376T3 (es) 2022-04-28
AU2016348388A1 (en) 2018-05-17
EP3370768A4 (en) 2019-07-24
US10894830B2 (en) 2021-01-19
MX2018005546A (es) 2019-07-18
PH12018500906A1 (en) 2018-11-05
CN116059344A (zh) 2023-05-05
MY198562A (en) 2023-09-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20250215079A1 (en) Antibodies specifically binding pd-1, tim-3 or pd-1 and tim-3 and their uses
BR122025020609A2 (pt) Anticorpos antagonistas isolados que se ligam especificamente a pd-1 ou porção de ligação ao antígeno dos mesmos, seus métodos de produção, seus usos, composições farmacêuticas, polinucleotídeos, vetores, células hospedeiras, anticorpo anti-idiotípico e kit
BR122025020631A2 (pt) Anticorpos antagonistas isolados que se ligam especificamente a pd-1 ou porção de ligação ao antígeno dos mesmos, seus métodos de produção, seus usos, composições farmacêuticas, polinucleotídeos, vetores, células hospedeiras, anticorpo anti-idiotípico e kit
EA045238B1 (ru) Антитела, специфически связывающие pd-1, и их применение