RS58817B1

RS58817B1 - Heterociklilamini kao inhibitori pi3k

Info

Publication number: RS58817B1
Application number: RS20190445A
Authority: RS
Inventors: Yun-Long Li; Wenqing Yao; Andrew P Combs; Eddy W Yue; Song Mei; Wenyu Zhu; Joseph Glenn; Thomas P Maduskuie Jr; Richard B Sparks; Brent Douty; Chunhong He
Original assignee: Incyte Holdings Corp
Priority date: 2011-09-02
Filing date: 2012-08-31
Publication date: 2019-07-31
Also published as: EP2751109A1; US9199982B2; IL273079A; IL231239A0; TWI619714B; LT3513793T; DK3196202T3; WO2013033569A1; MX360262B; JP2025142039A; HK1199644A1; EA028890B1; TW201639842A; AU2022291574A1; BR112014004971B1; KR20210054022A; EA201490541A1; ME03397B; ME02595B; AU2021200266A1

Description

Opis

OBLAST TEHNIKE PRONALASKA

[0001] Predmetni pronalazak obezbeđuje derivate heterociklilamina, na primer, pirazolopirimidina, koja modulišu aktivnost fosfoinozitid 3-kinaza (PI3K) i korisni su u tretmanu oboljenja sa promenjenom aktivnošću PI3K, uključujući, na primer, inflamatorne poremećaje, poremećaje u čijoj je osnovi poremećaj funkcije imunog sistema, kancer i druga oboljenja.

STANJE TEHNIKE PRONALASKA

[0002] Fosfoinozitid 3-kinaze (PI3K) pripadaju velikoj familiji kinaza lipidne signalizacije koje fosforilišu fosfoinozitide na D3 poziciji inozitolnog prstena (Cantley, Science, 2002, 296(5573):1655-7). PI3K su podeljene u tri klase (klasa I, II i III) prema njihovoj strukturi, regulaciji i specifičnosti prema supstratima. Klasa I PI3K, koja obuhvata PI3Kα, PI3Kβ, PI3Kγ i PI3Kδ, označava familiju dvojno specifičnih lipidnih i proteinskih kinaza koje katalizuju fosforilaciju fosfatidilinozito-4,5-bisfosfata (PIP2) što dovodi do obrazovanja fosfatidilinozito-3,4,5-trifosfata (PIP3). PIP3predstavljaju sekundarne glasnike koji kontrolišu brojne ćelijske procese, uključujući rast, preživljavanje, adheziju i migraciju. Sve četiri klase PI3K izoformi su prisutne u vidu heterodimera koji se sastoje od katalitičke subjedinice (p110) i čvrsto povezane regulatorne subjedinice koja kontroliše ekspresiju, aktivaciju i subćelijsku lokalizaciju kinaze. PI3Kα, PI3Kβ i PI3Kδ asociraju sa regulatornom subjedinicom označenom kao p85 i bivaju aktivirane faktorima rasta i citokinima putem tirozin kinaza-zavisnih mehanizama (Jimenez i saradnici, J Biol Chem, 2002, 277(44):41556-62) dok se PI3Kγ vezuje za dve regulatorne subjedinice (p101 i p84) i njena aktivaciija se ostvaruje aktivacijom receptora kuplovanih sa G proteinom (Brock i saradnici, J Cell Biol, 2003, 160(1):89-99). PI3Kα i PI3Kβ su široko eksprimirane. Nasuprot tome, PI3Kγ i PI3Kδ su dominantno eksprimirane u leukocitima (Vanhaesebroeck i saradnici, Trends Biochem Sci, 2005, 30(4):194-204).

[0003] Različita tkivna distribucija PI3K izoformi je od značaja za njihove različite biološke funkcije. Uklanjanje bilo PI3Kα ili PI3Kβ gena postupcima genetskog inžinjeringa vodi letalitetu u embrionalnoj fazi razvoja, ukazujući da je funkcija PI3Kα i PI3Kβ od esencijalnog i za život presudnog značaja, bar u toku razvića (Vanhaesebroeck i saradnici, 2005). Nasuprot tome, miševi kojima nedostaju PI3Kγ i PI3Kδ su vijabilni, plodni i sa normalnim životnim vekom, iako ispoljavaju poremećaje u funkcionisanju imunog sistema. Nedostatak PI3Kγ vodi poremećajima u regrutovanju makrofaga i neutrofila na mesta inflamacije, kao i poremećenoj aktivaciji T ćelija (Sasaki i saradnici, Science, 2000, 287(5455):1040-6). PI3Kδ-mutirani miševi ispoljavaju specifične deficite u B ćelijskoj signalizaciji koji vode poremećajima u razvoju B ćelija, kao i smanjenom odgovoru antitela nakon stimulacije antigenima (Clayton i saradnici, J Exp Med. 2002, 196(6):753-63; Jou i saradnici, Mol Cell Biol. 2002, 22(24):8580-91; Okkenhaug i saradnici, Science, 2002, 297(5583):1031-4).

[0004] Fenotipovi PI3Kγ i PI3Kδ-mutiranih miševa sugerišu da navedeni enzimi mogu imati ulogu u inflamaciji i drugim oboljenjima u čijoj je osnovi poremećaj funckcije imunog sistema, a navedeno je zaključeno na osnovu podataka dobijenih na pretkliničkim modelima. PI3Ki-mutirani miševi su uglavnom otporni na bolesti, što je npr slučaj kod mišijeg modela reumatoidnog artritisa (RA) i astme (Camps i saradnici, Nat Med.2005, 11(9):936-43; Thomas i saradnici, Eur J Immunol.2005, 35(4):1283-91). Pored toga, tretmanom miševa matičnog soja sa selektivnim inhibitorom PI3Kγ je pokazano da dolazi do smanjenja glomerulonefritisa i produženja vremena preživljavanja u MRL-lpr modelu nefritisa sistemskog lupusa (SLE), kao i da dolazi do supresije upale i oštećenja zgobova u modelima RA (Barber i saradnici, Nat Med.2005, 11(9):933-5; Camps i saradnici, 2005). Slično tome, pokazano je da i kod PI3Kδ-mutiranih miševa i kod njihovi nemutiranih parnjaka koji su tretirani selektivnim inhibitorom PI3Kδ, dolazi do umanjenja alergijske inflamacije disajnih puteva i prekomerne osetljivosti u mišjem modelu astme (Ali i saradnici, Nature.2004, 431(7011):1007-11; Lee i saradnici, FASEB J.2006, 20(3):455-65), kao i da dolazi do ublažavanja simptoma bolesti u mišijem modelu RA (Randis i saradnici, Eur. J. Immunol., 2008, 38(5): 1215-24).

[0005] Pored potencijalne uloge u inflamatornim oboljenjima, sve četiri klase I PI3K izoformi mogu imati ulogu i u kanceru. Gen koji kodira p110α je često mutiran u uobičajenim kancerima, uključujući rak dojke, prostate, debelog creva i endometrijuma (Samuels i saradnici, Science, 2004, 304(5670):554; Samuels i saradnici, Curr Opin Oncol. 2006, 18(1):77-82). Osamdeset posto ovakvih mutacija predstavljaju supstitucije jedne od tri aminokiseline u helikalnim ili kinaznim domenima enzima, što dovodi do značajnog povećanja aktivnosti kinaze i što dalje rezultira onkogenom transformacijom u kulturi ćelija i animalnim modelima (Kang i saradnici, Proc Natl Acad Sci USA. 2005, 102(3):802-7; Bader i saradnici, Proc Natl Acad Sci USA. 2006, 103(5):1475-9). Navedene mutacije nisu bile identifikovane kod drugih PI3K izoformi, iako postoje dokazi da one mogu doprineti razvoju i progresiji maligniteta. Konzistentna prekomerna ekspresija PI3Kδ je bilo moguće zapaziti kod akutne mijeloblastne leukemije (Sujobert i saradnici, Blood, 2005, 106(3):1063-6), dok inhibitori PI3Kδ mogu sprečiti rast leukemičnih ćelija (Billottet i saradnici, Oncogene. 2006, 25(50):6648-59). Povišena ekspresija PI3Kγ se uočava i u hroničnoj mijeloidnoj leukemiji (Hickey i saradnici, J Biol Chem.2006, 281(5):2441-50). Promene u ekspresiji PI3Kβ, PI3Kγ i PI3Kδ su takođe utvrđene kod kancera mozga, debelog creva i bešike (Benistant i saradnici, Oncogene, 2000, 19(44):5083-90; Mizoguchi i saradnici, Brain Pathol. 2004, 14(4):372-7; Knobbe i saradnici, Neuropathol Appl Neurobiol. 2005, 31(5):486-90). Pored toga, za navedene izofome je pokazano da su onkogene u kulturi ćelija (Kang i saradnici, 2006).

[0006]. Shodno navedenom, postoji stalna potreba za novim ili poboljšanim agensima za inhibiciju kinaze poput PI3K, a zarad razvoja novih i efikasnijih farmaceutika čija bi namena bila pojačavanje ili suzbijanje imunskih i inflamatornih puteva (poput imunosupresivnih agenasa za transplantaciju organa), ali i agenasa za prevenciju i tretman autoimunih oboljenja (npr multiple skleroze, reumatoidnog artritisa, astme, dijabetesa tipa Ii, inflamatorne bolesti creva, Kronove bolesti, autoimunih poremećaja štitne žlezde, Alchajmerove bolesti, nefritisa), oboljenja u kojima dolazi do prekomernog inflamatornog odgovora (npr kod ekcema), alergija, bolesti pluća, kancera (npr prostate, dojke, leukemije, multiplog mijeloma) i pojedinih imunskih reakcija (npr osipa na koži ili kontaktnog dermatitisa ili dijareje) koje mogu biti izazvane drugim terapeuticima. Jedinjenja, preparati i postupci opisani predmetnom specifikacijom su usmereni ka ovim i drugim potrebama.

IZLAGANJE SUŠTINE PRONALASKA

[0007] Predmetni pronalazak obezbeđuje, jedinjenja izabrana između:

(5R)-{3-[1-(R)-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}-1,3-oksazolidin-2-on;

(5R)-{3-[1-(S)-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}-1,3-oksazolidin-2-on;

(5S)-{3-[1-(R)-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}-1,3-oksazolidin-2-on; i

(5S)-{3-[1-(S)-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}-1,3-oksazolidin-2-on;

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

KRATAK OPIS SLIKA

[0008] Slika 1. prikazuje kristalnu strukturu jedinjenja iz Primera 269.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0009] Predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je izabrano između

ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0010] Takođe je ovde opisano, inter alia, jedinjenje Formule I:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so , gde:

X označava CR<9>ili N;

W označava CR<7>ili N;

Y označava CR<8>, CR<8a>ili N;

Z označava hemijsku vezu ili C(=O) grupu;

pod uslovom da -W=Y-Z- označava -CR<7>=CR<8>, -N=CR<8>-, -CR<7>=CR<8a>-C(=O)-, -N=CR<8a>-C(=O)- ili -CR<7>=N-C(=O)- grupu;

R<1>označava C1-3alkil grupu;

R<2>označava halogenu, C1-6alkil, C1-6alkoksi, C1-6haloalkil, C1-6haloalkoksi, fenil ili 5-6-članu heteroarilnu grupu; i što svaka navedena fenil i 5-6-člana heteroaril grupa može biti supstituisana sa 1, 2, 3 ili 4 supstituenta nezavisno izabrana iz grupe koju čine halogena, OH, CN, C1-4alkil, C1-4alkoksi i C1-4haloalkoksi grupa;

R<3>označava Cy, -(C1-3alkilen)-Cy, halogenu, CN, NO2, C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, OR<a>, SR<a>, C(=O)R, C(=O)NR<c>R<d>, C(=O)OR<a>, OC(=O)Rb, OC(=O)NR<c>R<d>, NR<c>R<d>, NR<c>C(=O)R, NR<c>=C(=O)OR, NR<c>C(=O)NR<c>R<d>, C(=NR<e>)R, C(=NR<e>)NR<c>R<d>, NR<c>C(=NR<e>)NR<c>R<d>, NR<c>S(=O)2R, NR<c>S(=O)2NR<c>R<d>, S(=O)2Rili S(=O)2NR<c>R<d>grupu; i što svaka navedena C1-6alkil, C2-6alkenil i C2-6alkinil grupa može biti supstituisana sa 1, 2, 3 ili 4 nezavisno izabrane R<3a>grupe;

R<4>označava H, halogenu, OH, CN, C1-4alkil, C1-4haloalkil, C1-4alkoksi ili C1-4haloalkoksi grupu;

R<5>označava halogenu, OH, CN, C1-4alkil, C1-4haloalkil, C1-4alkoksi, C1-4haloalkoksi ili ciklopropil grupu;

R<6>označava H, halogenu, OH, CN, C1-4alkil, C1-4haloalkil, C1-4alkoksi ili C1-4haloalkoksi grupu;

R<7>označava H ili C1-4alkil grupu;

R<8>označava H, halogenu, -OH, -CN, C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, Cy<2>, -(C1-3alkilen)-Cy<2>, OR<a2>, SR<a2>, C(=O)R<b2>, C(=O)NR<c2>R<d2>, C(=O)OR<a2>, OC(=O)R<b2>, OC(=O)NR<c2>R<d2>, NR<c2>R<d2>, NR<c2>C(=O)R<b2>, NR<c2>C(=O)OR<b2>, NR<c2>C(=O)NR<c2>R<d2>, C(=NR<e>)R<b2>, C(=NR<c>)NR<c2>R<d2>, NR<c2>C(=NR<e>)NR<c2>R<d2>, NR<c2>S(=O)R<b2>, NR<c2>S(=O)2NR<c2>R<d2>, S(=O)R<b2>ili S(=O)2NR<c2>R<d2>grupu; i što svaka navedena C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil grupa može biti supstituisana sa 1, 2, 3 ili 4 nezavisno izabrane R<11>grupe;

R<8a>označava H, halogenu, -CN, C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, Cy<2>, -(C1-3alkilen)-Cy<2>, C(=O)R<b2>, C(=O)NR<c2>R<d2>, C(=O)OR<a2>, NR<c2>R<d2>, NR<c2>C(=O)R<b2>, NR<c2>C(=O)OR<b2>, NR<c2>C(=O)NR<c2>R<d2>, NR<c2>S(=O)R<b2>, NR<c2>S(=O)2NR<c2>R<d2>, S(=O)R<b2>ili S(=O)2NR<c2>R<d2>grupu; i što svaka navedena C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil grupa može biti supstituisana sa 1, 2, 3 ili 4 nezavisno izabrane R<11>grupe;

R<9>označava H, halogenu, OH, CN, C1-4alkil, C1-4haloalkil, C1-4alkoksi ili C1-4haloalkoksi grupu;

R<10>označava H ili C1-4alkil grupu;

svaki R<a>, R, R<c>i R<d>je nezavisno izabran iz grupe koju čine H, C1-6alkil, C1-6haloalkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil i Cy grupa; i što svaka navedena C1-6alkil, C2-6alkenil i C2-6alkinil grupa može biti supstituisana sa 1, 2 ili 3 nezavisno izabrane R<3b>grupe;

ili R<c>i R<d>zajedno sa atomom N za koji su vezani može obrazovati 4-, 5-, 6- ili 7-članu heterocikloalkilnu grupu koja dalje može biti supstituisana sa -OH ili C1-3alkil grupom;

svaki R<e>je nezavisno izabran iz grupe koju čine H, CN, OH, C1-4alkil i C1-4alkoksi grupa;

svaki Cy je nezavisno izabran iz grupe koju čine C3-7cikloalkil, 4-10-člana heterocikloalkil, fenil, naftil i 5-10-člana heteroarilna grupa od kojih svaka može biti supstituisana sa 1, 2, 3 ili 4 nezavisno izabrane R<3b>grupe;

svaki R<3a>je nezavisno izabran iz grupe koju čine halogena, CN, NO2, C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, OR<a1>, SR<a1>, C(=O)R<b1>, C(=O)NR<c1>R<d1>, C(=O)OR<a1>, OC(=O)R<b1>, OC(=O)NR<c1>R<d1>, NR<c1>R<d1>, NR<c1>C(=O)R<b1>, NR<c1>C(=O)OR<b1>, NR<c1>C(=O)NR<c1>R<d1>, C(=NR<e>)R<b1>, C(=NR<e>)NR<c1>R<d1>, NR<c1>C(=NR<c>)NR<c1>R<d1>, NR<c1>S(=O)R<b1>, NR<c1>S(=O)2NR<c1>R<d1>, S(=O)2R<b1>i S(=O)2NR<c1>R<d1>grupa; i što navedene C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil grupe mogu biti supstituisane sa 1, 2 ili 3 nezavisno izabrane R<11>grupe;

svaki R<3b>je nezavisno izabran iz grupe koju čine Cy<1>, -(C1-3alkilen)-Cy<1>, halogena, CN, NO2, C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, OR<a1>, SR<a1>, C(=O)R<b1>, C(=O)NR<c1>R<d1>, C(=O)OR<a1>, OC(=O)R<b1>, OC(=O)NR<c1>R<d1>, NR<c1>R<d1>, NR<c1>C(=O)R<b1>, NR<c1>C(=O)OR<b1>, NR<c1>C(=O)NR<c1>R<d1>, C(=NR<e>)R<b1>, C(=NR<e>)NR<c1>R<d1>, NR<c1>C(=NR<e>)NR<c1>R<d1>, NR<c1>S(=O)R<b1>, NR<c1>S(=O)2NR<c1>R<d1>, S(=O)R<b1>i S(=O)2NR<c1>R<d1>grupa; i što svaka navedena C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil grupa može biti supstituisana sa 1, 2 ili 3 nezavisno izabrane R<11>grupe;

svaka Cy<1>grupa je nezavisno izabrana iz grupe koju čine C3-7cikloalkil, 4-7-člana heterocikloalkil, fenil i 5-6-člana heteroarilna grupa, pri čemu svaka od navedenih grupa može biti supstituisana sa 1, 2, 3 ili 4 nezavisno izabrane R<11>grupe;

svaki R<a1>, R<b1>, R<c1>i R<d1>je nezavisno izabran iz grupe koju čine H, C1-6alkil, C1-6haloalkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C3-7cikloalkil, 4-7-člana heterocikloalkil, fenil i 5-6-člana heteroaril grupa; i što svaka svaka navedena C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C3-7cikloalkil, 4-7-člana heterocikloalkil, fenil i 5-6-člana heteroarilna grupa može biti supstituisana sa 1, 2 ili 3 nezavisno izabrane R<11>grupe;

ili R<c1>i R<d1>zajedno sa atomom N za koji su vezani može obrazovati 4-, 5-, 6- ili 7-članu heterocikloalkil grupu koja dalje može biti supstituisana sa -OH ili C1-3alkil grupom;

svaki Cy<2>je nezavisno izabran iz grupe koju čine C3-7cikloalkil, 4-7-člana heterocikloalkil, fenil, 5-6-člana heteroaril ili 9-10-člana biciklična heteroarilna grupa od kojih svaka dalje može biti supstituisana sa 1, 2, 3 ili 4 nezavisno izabrane R<11>grupe;

svaki R<a2>, R<b2>, R<c2>i R<d2>je nezavisno izabran iz grupe koju čine H, C1-6alkil, C1-6haloalkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C3-7cikloalkil, 4-7-člana heterocikloalkil, fenil i 5-6-člana heteroarilna grupa; i što svaka od navedenih C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C3-7cikloalkil, 4-7-članih heterocikloalkil, fenil i 5-6-članih heteroaril grupa može biti supstituisana sa 1, 2 ili 3 nezavisno izabrane R<11>grupe;

ili R<c2>i R<d2>zajedno sa atomom N za koji su vezani može obrazovati 4-, 5-, 6- ili 7-članu heterocikloalkilnu grupu koja dalje može biti supstituisana sa -OH ili C1-3alkil grupom; i

svaki R<11>je nezavisno izabran iz grupe koju čine OH, NO2, CN, halogena, C1-3alkil, C2-3alkenil, C2-3alkinil, C1-3haloalkil, cijano-C1-3alkil, HO-C1-3alkil, C1-3alkoksi-C1-3alkil, C3-7cikloalkil, C1-3alkoksi, C1-3haloalkoksi, amino, C1-3alkilamino, di(C1-3alkil)amino, tio, C1-3alkiltio, C1-3alkilsulfinil, C1-3alkilsulfonil, karbamil, C1-3alkilkarbamil, di(C1-3alkil)karbamil, karboksi, C1-3alkilkarbonil, C1-3alkoksikarbonil, C1-3alkilkarbonilamino, C1-3alkilsulfonilamino, aminosulfonil, C1-3alkilaminosulfonil, di(C1-3alkil)aminosulfonil, aminosulfonilamino, C1-3alkilaminosulfonilamino, di(C1-3alkil)aminosulfonilamino, aminokarbonilamino, C1-3alkilamino-karbonilamino i di(C1-3alkil)aminokarbonilamino grupa.

[0011] Takođe je ovde opisano jedinjenje formule I:

ili njegova farmaceutski prihvatljivu so, gde:

X označava CR<9>ili N;

W označava CR<7>ili N;

Y označava CR<8>, CR<8a>ili N;

Z označava hemijsku vezu ili C(=O) grupu;

R<1>označava C1-3alkil grupu;

R<7>označava H ili C1-4alkil grupu;

R<8>označava H, halogenu, -OH, -CN, C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, Cy<2>, -(C1-3alkilen)-Cy<2>, OR<a2>, SR<a2>, C(=O)R<b2>, C(=O)NR<c2>R<d2>, C(=O)OR<a2>, OC(=O)R<b2>, OC(=O)NR<c2>R<d2>, NR<c2>R<d2>, NR<c2>C(=O)R<b2>, NR<c2>C(=O)OR<b2>, NR<c2>C(=O)NR<c2>R<d2>, C(=NR<e>)R<b2>, C(=NR<c>)NR<c2>R<d2>, NR<c2>C(=NR<e>)NR<c2>R<d2>, NR<c2>S(=O)R<b2>, NR<c2>S(=O)2NR<c2>R<d2>, S(=O)R<b2>, S(=O)2R<b2>ili S(=O)2NR<c2>R<d2>grupu; i što svaka navedena C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil grupa može biti supstituisana sa 1, 2, 3 ili 4 nezavisno izabrane R<11>grupe;

R<8a>označava H, halogenu, -CN, C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, Cy<2>, -(C1-3alkilen)-Cy<2>, C(=O)R<b2>, C(=O)NR<c2>R<d2>, C(=O)OR<a2>, NR<c2>R<d2>, NR<c2>C(=O)R<b2>, NR<c2>C(=O)OR<b2>, NR<c2>C(=O)NR<c2>R<d2>, NR<c2>S(=O)R<b2>, NR<c2>S(=O)2NR<c2>R<d2>, S(=O)R<b2>, S(=O)2R<b2>ili S(=O)2NR<c2>R<d2>grupu; i što svaka navedena C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil grupa može biti supstituisana sa 1, 2, 3 ili 4 nezavisno izabrane R<11>grupe;

R<10>označava H ili C1-4alkil grupu;

ili R<c>i Rd zajedno sa atomom N za koji su vezani može obrazovati 4-, 5-, 6- ili 7-članu heterocikloalkilnu grupu koja dalje može biti supstituisana sa -OH ili C1-3alkil grupom;

svaki R<3b>je nezavisno izabran iz grupe koju čine Cy<1>, -(C1-3alkilen)-Cy<1>, halogena, CN, NO2, C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, OR<a1>, SR<a1>, C(=O)R<b1>, C(=O)NR<c1>R<d1>, C(=O)OR<a1>, OC(=O)R<b1>, OC(=O)NR<c1>R<d1>, NR<c1>R<d1>, NR<c1>C(=O)R<b1>, NR<c1>C(=O)OR<b1>, NR<c1>C(=O)NR<c1>R<d1>, C(=NR<e>)R<b1>, C(=NR<e>)NR<c1>R<d1>, NR<c1>C(=NR<e>)NR<c1>R<d1>, NR<c1>S(=O)R<b1>, NR<c1>S(=O)2NR<c1>R<d1>, S(=O)R<b1>, S(=O)R<b1>i S(=O)2NR<c1>R<d1>grupa; i što svaka navedena C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil grupa može biti supstituisana sa 1, 2 ili 3 nezavisno izabrane R<11>grupe;

ili R<c1>i R<d1>zajedno sa atomom N za koji su vezani može obrazovati 4-, 5-, 6- ili 7-članu heterocikloalkilnu grupu koja dalje može biti supstituisana sa -OH ili C1-3alkil grupom;

[0012] U nekim izvođenjima, jedinjenje je izabrano između između

(5R)-{3-[1-(R)-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}-1,3-oksazolidin-2-ona;

(5R)-{3-[1-(S)-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}-1,3-oksazolidin-2-ona;

(5S)-{3-[1-(R)-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}-1,3-oksazolidin-2-ona; i

(5S)-{3-[1-(S)-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}-1,3-oksazolidin-2-ona;

ili farmaceutski prihvatljive soli bilo koga od pomenutih.

[0013] Nasuprot navedenom, razne karakteristike predmetnog pronalaska koje su, zarad sažetosti, opisane u kontekstu jednog primera primene, takođe mogu biti obezbeđene odvojeno ili u okviru bilo kakve pogodne pod-kombinacije.

[0014] Na raznim mestima predmetne specifikacije, opisani su dvovalentni povezujući supstituenti. Izričita je namera da svaki dvovalentni povezujući supstituent podrazumeva i ushodnu i nishodnu orjentaciju povezujućeg supstituenta. Na primer, -NR(CR'R")n- podrazumeva i oblik -NR(CR'R")n- i oblik -(CR'R")nNR-. Kada stuktura jasno zahteva povezujuću grupu, podrazumeva se da vezujuće grupe predstavljaju Markušijeve promenljive navedene za datu grupu.

[0015] Izraz "n-člani", u kome n označava ceo broj, uobičajeno predstavljaju broj atoma koji obrazuje prsten u ostatku, odnosno n označava broj atoma koji obrazuju prsten. Na primer, piperidinil grupa predstavlja primer 6-članog heterocikloalkilnog prstena, pirazolil grupa je primer 5-članog heteroarilnog prstena, piridil grupa je primer 6-članog heteroarilnog prstena, dok je 1,2,3,4-tetrahidro-naftalen primer 10-člane cikloalkilne grupe.

[0016] U kontekstu predmetnog pronalaska, izraz "može biti supstituisan" označava nesupstituisanu ili supstituisanu grupu. U kontekstu predmetnog pronalaska, izraz "supstituisan" označava da je uklonjen atom vodonika i da je taj atom zamenjen supstituentom. Jasno je da je supstituija na datom atomu ograničena valencom.

[0017] Kroz definicije, termin "Cn-m" označava opseg koji obuhvata i krajnje vrednosti i što n i m predstavljaju cele brojeve koji označavaju broj atoma ugljenika. Primeri su C1-4, C1-6i slični.

[0018] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "Cn-malkil", upotrebljen samostalno ili u kombinaciji sa drugim terminima, odnosi se na zasićene ugljovodonične grupe koje mogu biti pravog ili razgranatog lanca, sa od n do m atoma ugljenika. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, alkil grupa sadrži od 1 do 6 atoma ugljenika, od 1 do 4 atoma ugljenika, od 1 do 3 atoma ugljenika ili od 1 do 2 atoma ugljenika. Primeri alkil grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, hemijske grupe poput metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, terc-butil, izobutil, sek-butil grupa; kao i više homologe poput 2-metil-1-butil, n-pentil, 3-pentil, n-heksil, 1,2,2-trimetilpropil grupa i sličnih.

[0019] U kontekstu predmetnog pronalaska, "Cn-malkenil” se odnosi na alkil grupu sa jednom ili sa više dvostrukih veza ugljenik-ugljenik, a koja sadrži od n do m atoma ugljenika. U pojedinim primerima primene, alkenil ostatak sadrži od 2 do 6, od 2 do 4 ili od 2 do 3 atoma ugljenika. Primeri alkenil grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, etenil, n-propenil, izopropenil, n-butenil, sek-butenil grupe i slične.

[0020] U kontekstu predmetnog pronalaska, "Cn-malkinil” se odnosi na alkil grupu sa jednom ili sa više trostrukih veza ugljenik-ugljenik, a koja sadrži od n do m atoma ugljenika. Primeri alkinil grupe obuhvataju, ali nisu ograničeni na, etinil, propin-1-il, propin-2-il grupe i slične. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, alkinil ostatak sadrži od 2 do 6, od 2 do 4 ili od 2 do 3 atoma ugljenika.

[0021] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "alkilen", upotrebljen samostalno ili u kombinaciji sa drugim terminima, se odnosi na dvovalentnu alkil vezujuću grupu. Primeri alkilen grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, etan-1,2-diil, propan-1,3-diil, propan-1,2-diil, butan-1,4-diil, butan-1,3-diil, butan-1,2-diil, 2-metil-propan-1,3-diil grupe i slične.

[0022] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "Cn-malkoksi ", upotrebljen samostalno ili u kombinaciji sa drugim terminima, se odnosi na grupu formule -O-alkil, što alkil grupa sadrži od n do m atoma ugljenika. Primeri alkoksi grupa obuhvataju metoksi, etoksi, propoksi (npr n-propoksi i izopropoksi), t-butoksi grupe i slične. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, alkil grupa sadrži od 1 do 6, od 1 do 4 ili od 1 do 3 atoma ugljenika.

[0023] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "Cn-malkilamino” se odnosi na grupu formule -NH(alkil), što alkil grupa sadrži od n do m atoma ugljenika. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, alkil grupa sadrži od 1 do 6, od 1 do 4 ili od 1 do 3 atoma ugljenika.

[0024] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "Cn-malkoksikarbonil” se odnosi na grupu formule -C(O)O-alkil, što alkil grupa sadrži od n do m atoma ugljenika. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, alkil grupa sadrži od 1 do 6, od 1 do 4 ili od 1 do 3 atoma ugljenika.

[0025] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "Cn-malkilkarbonil” se odnosi na grupu formule -C(O)-alkil, što alkil grupa sadrži od n do m atoma ugljenika. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, alkil grupa sadrži od 1 do 6, od 1 do 4 ili od 1 do 3 atoma ugljenika.

[0026] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "Cn-malkilkarbonilamino" se odnosi na grupu formule -NHC(O)-alkil, što alkil grupa sadrži od n do m atoma ugljenika. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, alkil grupa sadrži od 1 do 6, od 1 do 4 ili od 1 do 3 atoma ugljenika.

[0027] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "Cn-malkilsulfonilamino” se odnosi na grupu formule -NHS(O)2-alkil, pri čemu alkil grupa sadrži od n do m atoma ugljenika. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, alkil grupa sadrži od 1 do 6, od 1 do 4 ili od 1 do 3 atoma ugljenika.

[0028] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "aminosulfonil" se odnosi na grupu formule -S(O)2NH2.

[0029] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "Cn-malkilaminosulfonil” se odnosi na grupu formule -S(O)2NH(alkil), što alkil grupa sadrži od n da m atoma ugljenika. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, alkil grupa sadrži od 1 do 6, od 1 do 4 ili od 1 do 3 atoma ugljenika.

[0030] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "di(Cn-malkil)aminosulfonil” se odnosi na grupu formule -S(O)2N(alkil)2, što svaka alkil grupa nezavisno sadrži od n do m atoma ugljenika. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, svaka alkil grupa nezavisno sadrži od 1 do 6, od 1 do 4 ili od 1 do 3 atoma ugljenika.

[0031] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "aminosulfonilamino" se odnosi na grupu formule -NHS(O)2NH2.

[0032] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "Cn-malkilaminosulfonilamino” se odnosi na grupu formule -NHS(O)2NH(alkil), što alkil grupa sadrži od n da m atoma ugljenika. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, alkil grupa sadrži od 1 do 6, od 1 do 4 ili od 1 do 3 atoma ugljenika.

[0033] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "di(Cn-malkil)aminosulfonilamino” se odnosi na grupu formule - NHS(O)2N(alkil)2, što svaka alkil grupa nezavisno sadrži od n do m atoma ugljenika. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, svaka alkil grupa nezavisno sadrži od 1 do 6, od 1 do 4 ili od 1 do 3 atoma ugljenika.

[0034] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "aminokarbonilamino", upotrebljen samostalno ili u kombinaciji sa drugim terminima, se odnosi na grupu formule -NHC(O)NH2.

[0035] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "Cn-malkilaminokarbonilamino” se odnosi na grupu formule -NHC(O)NH(alkil), što alkil grupa sadrži od n do m atoma ugljenika. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, alkil grupa sadrži od 1 do 6, od 1 do 4 ili od 1 do 3 atoma ugljenika.

[0036] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "di(Cn-malkil)aminokarbonilamino” se odnosi na grupu formule -NHC(O)N(alkil)2, što svaka alkil grupa nezavisno sadrži od n do m atoma ugljenika. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, svaka alkil grupa nezavisno sadrži od 1 do 6, od 1 do 4 ili od 1 do 3 atoma ugljenika.

[0037] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "Cn-malkilkarbamil” se odnosi na grupu formule -C(O)-NH(alkil), što alkil grupa sadrži od n do m atoma ugljenika. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, alkil grupa sadrži od 1 do 6, od 1 do 4 ili od 1 do 3 atoma ugljenika.

[0038] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "tio" se odnosi na grupu formule -SH.

[0039] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "Cn-malkiltio” se odnosi na grupu formule -S-alkil, što alkil grupa sadrži od n do m atoma ugljenika. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, alkil grupa sadrži od 1 do 6, od 1 do 4 ili od 1 do 3 atoma ugljenika.

[0040] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "Cn-malkilsulfinil” se odnosi na grupu formule -S(O)-alkil, što alkil grupa sadrži od n do m atoma ugljenika. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, alkil grupa sadrži od 1 do 6, od 1 do 4 ili od 1 do 3 atoma ugljenika.

[0041] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "Cn-malkilsulfonil” se odnosi na grupu formule -S(O)2-alkil, što alkil grupa sadrži od n do m atoma ugljenika. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, alkil grupa sadrži od 1 do 6, od 1 do 4 ili od 1 do 3 atoma ugljenika.

[0042] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "amino" se odnosi na grupu formule -NH2.

[0043] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "karbamil" se odnosi na grupu formule -C(O)NH2.

[0044] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "karbonil", upotrebljen samostalno ili u kombinaciji sa drugim terminima, se odnosi na -C(O)- grupu.

[0045] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "cijano-C1-3alkil” se odnosi na grupu formule -(C1-3alkilen)-CN.

[0046] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "HO-C1-3alkil” se odnosi na grupu formule -(C1-3alkilen)-OH.

[0047] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "C1-3alkoksi-C1-3alkil” se odnosi na grupu formule -(C1-3alkilen)-O(C1-3alkil).

[0048] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "karboksi" se odnosi na grupu formule -C(O)OH.

[0049] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "di(Cn-m-alkil)amino” se odnosi na grupu formule -N(alkil)2, što svaka od dve alkil grupe nezavisno sadrži od n do m atoma ugljenika. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, svaka alkil grupa nezavisno sadrži od 1 do 6, od 1 do 4 ili od 1 do 3 atoma ugljenika.

[0050] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "di(Cn-m-alkil)karbamil” se odnosi na grupu formule -C(O)N(alkil)2, što svaka od dve alkil grupe nezavisno sadrži od n do atoma ugljenika m. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, svaka alkil grupa nezavisno sadrži od 1 do 6, od 1 do 4 ili od 1 do 3 atoma ugljenika.

[0051] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "halogena grupa" se odnosi na F, Cl, Br ili J. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, halogena grupa označava F ili Cl.

[0052] U kontekstu predmetnog pronalaska, "Cn-mhaloalkoksi” se odnosi na grupu formule -O-haloalkil sa od n do m atoma ugljenika. Primer haloalkoksi grupa predstavlja OCF3. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, haloalkoksi grupa je samo fluorovana. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, alkil grupa sadrži od 1 do 6, od 1 do 4 ili od 1 do 3 atoma ugljenika.

[0053] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "Cn-mhaloalkil", upotrebljen samostalno ili u kombinaciji sa drugim terminima, se odnosi na alkil grupu koja sadrži od jednog atoma halogena do 2s+1 atoma halogena koji mogu biti isti ili različiti, i što je "s" označava broj ugljenikovih atoma u alkil grupi, pri čemu alkil grupa sadrži od n do m atoma ugljenika. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, haloalkil grupa je samo fluorovana. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, alkil grupa sadrži od 1 do 6, od 1 do 4 ili od 1 do 3 atoma ugljenika.

[0054] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "cikloalkil" se odnosi na nearomatične ciklične ugljovodonike, uključujući ciklčne alkil i/ili alkenil grupe. Cikloalkil grupe mogu obuhvatati mono- ili policiklične (npr sa 2, 3 ili 4 fuzionisana prstena) grupe i spirocikline. Cikloalkil grupe mogu sadržavati 3, 4, 5, 6 ili 7 atoma ugljenika koji obrazuju prsten (C3-7). Atomi ugljenika koji obrazuju prsten cikloalkil grupe mogu biti supstituisani sa okso ili sulfidnim grupama. Cikloalkil grupa obuhvata i cikloalkilidene. Primeri cikloalkil grupa obuhvataju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil, ciklopentenil, cikloheksenil, cikloheksadienil, cikloheptatrienil, norbornil, norpinil, norkarnil grupu i slične. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, cikloalkil označava ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil ili cikloheksil grupu. Definicijom cikloalkila su takođe obuhvaćene strukture sa jednim ili sa više fuzionisanih aromatičnih prstenova (tj. gde prstenovi imaju zajedničku vezu) vezanim za cikloalkilni prsten, na primer, benzo ili tienil derivate ciklopentana, cikloheksana i sličnih. Cikloalkilna grupa koja sadrži fuzionisani aromatični prsten može biti vezana za strukturu preko bilo kog atoma koji obrazuje prsten uključujući i atom fuzionisanog aromatičnog prstena koji obrzuje prsten.

[0055] U kontekstu predmetnog pronalaska, "heteroaril" se odnosi na monociklični ili policiklični aromatični heterocikl koji sadrži najmanje jedan heteroatom u prstenu, a koji je izabran iz grupe koju čine sumpor, kiseonik i azot. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, heteroarilni prsten sadrži 1, 2, 3 ili 4 heteroatoma koji obrzuju prsten, a koji su nezavisno izabrani iz grupe koju čine azot, sumpor i kiseonik. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, bilo koji atom azota koji obrazuje presten u heteroarilnoj strukturi može predstavaljati N-oksid. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, heteroaril sadži 5-10 atoma u prstenu i 1, 2, 3 ili 4 heteroatoma kao članove prstena, a koji su nezavisno izabrani iz grupe koju čine atomi azota, sumpora i kiseonika. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, heteroaril sadrži 5-6 atoma u prstenu i 1 ili 2 heteroatoma kao članove prstena, a koji su nezavisno izabrani iz grupe koju čine atomi azota, sumpora i kiseonika. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, heteroaril označava petočlani ili šestočlani heteroarilni prsten.

[0056] Petočlani heteroaril prsten označava heteroaril sa prstenom koji sadrži pet atoma u prstenu, što je jedan ili više (npr 1, 2 ili 3) atoma prstena nezavisno izabrano iz grupe koju čine N, O i S. Primeri petočlanih prstenova heteroarila su tienil, furil, pirolil, imidazolil, tiazolil, oksazolil, pirazolil, izotiazolil, izoksazolil, 1,2,3-triazolil, tetrazolil, 1,2,3-tiadiazolil, 1,2,3-oksadiazolil, 1,2,4-triazolil, 1,2,4-tiadiazolil, 1,2,4-oksadiazolil, 1,3,4-triazolil, 1,3,4-tiadiazolil i 1,3,4-oksadiazolil grupa.

[0057] Šestočlani heteroaril prsten označava heteroaril sa prstenom koji sadrži šest atoma, što je jedan ili više (npr 1, 2 ili 3) atoma u prstenu nezavisno izabrano iz grupe koju čine N, O i S. Primeri šestočlanih prstenova heteroarila su piridil, pirazinil, pirimidinil, triazinil i piridazinil grupa.

[0058] Izraz "biciklični C9-10heteroaril" podrazumeva biciklično fuzionisan heteroaril koji sadrži od 9 do 10 članova prstena.

[0059] U kontekstu predmetnog pronalaska, "heterocikloalkil" se odnosi na nearomatični monociklični ili policiklični heterocikl koji sadrži jedan ili više heteroatoma u prstenu, a koji su izabrani iz grupe koju čine O, N ili S. Definicija heterocikloalkila obuhvata i monociklične 4-, 5-, 6- i 7-člane heterocikloalkilne grupe. Heterocikloalkilne grupe mogu takođe obuhvatati spirocikline. Primeri heterocikloalkilnih grupa podrazumevaju pirolidin-2-on, 1,3-izoksazolidin-2-on, piranil, tetrahidropuran, oksetanil, azetidinil, morfolino, tiomorfolino, piperazinil, tetrahidrofuranil, tetrahidrotienil, piperidinil, pirolidinil, izoksazolidinil, izotiazolidinil, pirazolidinil, oksazolidinil, tiazolidinil, imidazolidinil, azepanil grupe, benzazapene i slične. Atomi ugljenika i heteroatoma koji obrazuju prsten heterocikloalkilne grupa mogu biti opciono supstituisani okso ili sulfido grupom (npr C(O), S(O), C(S) ili S(O)2grupom itd.). Heterocikloalkilna grupa može biti vezana preko atoma ugljenika ili heteroatoma koji obrazuje prsten. U pojedinim primerima primene, heterocikloalkilna grupa sadrži od 0 do 3 dvostruke veze. U pojedinim primerima primene, heterocikloalkilna grupa sadrži od 0 do 2 dvostruke veze. Definicijom heterocikloalkila su takođe obuhvaćeni radikali koji sadrže jedan ili više fuzionisanih aromatičnih prstenova (tj. sadrže prstenove sa zajedničkim vezama) vezane za cikloalkilni prsten, na primer, benzo ili tienil derivate piperidina, morfolina, azepina itd. Heterocikloalkilna grupa koja sadrži spojen aromatični prsten može biti vezan preko bilo kog atoma koji obrzuje prsten uključujući tu i atom fuzionisanog aromatičnog prstena koji formira prsten. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, heterocikloalkil sadrži 4-10, 4-7 ili 4-6 atoma u prstenu sa 1 ili 2 heteroatoma nezavisno izabrana iz grupe koju čine atomi azota, kiseonika ili sumpora, pri čemu grupa sarži i jedan ili više oksidisanih članova prstena.

[0060] Na određenim mestima, definicije i primeri primene pronalaska se odnose na specifične prstenove (npr prsten azetidina, prsten piridina itd). Ukoliko nije drugačije naznačeno, ovakvi prstenovi mogu biti vezani za bilo koji atom koji obrazuje prsten pod uslovom da valenca atoma nije prekoračena. Na primer, prsten azetidina može biti vezan na bilo kojoj poziciji prstena, dok je prsten azetidin-3-il grupe vezan na poziciji 3.

[0061] Jedinjenja opisana predmetnom specifikacijom mogu biti asimetrična (npr mogu imati jedan ili više stereocentara). Svi stereoizomeri, kao što su enantiomeri i dijastereomeri, predstavljaju područje pronalaska ukoliko nije drugačije naznačeno. Jedinjenja predmetnog pronalaska koja sadrže asimetrično supstituisane atome ugljenika se mogu izolovati u optički aktivnim ili racemskim oblicima. Postupci pripreme optički aktivnih oblika iz optički neaktivnih polaznih materijala su poznati u stanju tehnike, a kao što su to razdvajanje racemske smeše ili stereoselektivna sinteza. Mnogi geometrijski izomeri olefina, C=N dvostrukih veza, i sličnih, mogu takođe biti prisutni u jedinjenjima koja su opisana predmetnim pronalaskom, a svi takvi stabilni izomeri predstavljaju područje predmetnog pronalaska. Cis i trans geometrijski izomeri jedinjenja predmetnog pronalaska su takođe opisani i isti se mogu izolovati kao smeše izomera ili u vidu razdvojenih izomernih oblika. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, jedinjenje je sa (R)-konfiguracijm. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, jedinjenje je sa (S)-konfiguracijom.

[0062] Razdvajanje racemske smeše jedinjenja se može izvesti bilo kojim od brojnih postupaka koji su poznati u stanju tehnike. Primer postupka je npr. frakciona rekristalizacija i upotreba hiralne kiseline za razdvajanje koja je optički aktivna, odnosno koja obrzuje soli organske kiseline. Pogodni agensi razdvajanja za postupke frakcione rekristalizacije su, na primer, optički aktivne kiseline poput D i L oblika vinske kiseline, diacetilvinske kiseline, dibenzoilvinske kiseline, mendelične kiselina, jabučne kiselina, mlečne kiseline ili različitih optički aktivnih kamforsulfonskih kiselina poput β-kamforsulfonske kiseline. Drugi agensi razdvajanja koji su pogodni za postupak frakcione rekristalizacije obuhvataju stereoizomerno čiste oblike a-metilbenzilamina (npr. S i R oblike ili dijastereomerno čiste oblike), 2-fenilglicinola, norefedrina, efedrina, N-metilefedrina, cikloheksiletilamina, 1,2-diaminocikloheksana i sličnih.

[0063] Razdvajanje racemske smeše se može izvesti i eluiranjem na koloni koja je napunjena optički aktivnim sredstvom za razdvajanje (npr dinitrobenzoilfenilglicinom). Pogodan sastav eluacionog rastvarača je lak za odabir odrediti od strane stručnjaka u oblasti.

[0064] Jedinjenja predmetnog pronalaska obuhvataju i tautomerne oblike. Tautomerni oblici nastaju zamenom jednostuke veze sa susednim dvostrukom vezom, što zapravo prati migracija protona. Tautomerni oblici obuhvataju prototropne tautomere koji predstavljaju stanja izomerne protonacije pri čemu empirijska formula i ukupno naelektrisanje ostaju nepromenjeni. Primeri prototropnih tautomera obuhvataju keton - enolne parove, parove amid - imidna kiselina, laktam - laktimske parove, enamin -iminske parove, kao i strukture prstena u kojima proton može zauzeti dve ili više pozicija u heterocikličnom sistemu, na primer, 1H- i 3H- imidazol, 1H-, 2H- i 4H-1,2,4 triazol, 1H- i 2H-izoindol i 1H- i 2H-pirazol. Tautomerni oblici mogu biti u ravnoteži ili sterično zaključani u jedan oblik putem odgovarajuće supstitucije.

[0065] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu takođe obuhvatati sve izotope atoma koji se dešavaju u intermedijerima ili konačnim jedinjenjima. Izotopi podrazumevaju one atome koji imaju isti atomski broj ali različite masene brojeve. Na primer, izotopi vodonika podrazumevaju tricijum i deuterijum.

[0066] Termin "jedinjenje" se, u kontekstu predmetnog pronalaska, upotrebljava tako da obuhvati sve stereoizomere, geometrijske izomere, tautomere i izotope struktura koje su opisane. Namera je i da jedinjenja, identifikovana predmetnom specifikacijom putem imena ili strukture u vidu određenog tautomernog oblika, podrazumevaju i druge tautomerne oblike, a ukoliko nije drugačije navedeno.

[0067] Sva jedinjenja, kao i njihove farmaceutski prihvatljive soli, se mogu naći zajedno sa drugim supstancama poput vode i rastvarača (npr u vidu hidrata i solvata) ili se mogu izolovati.

[0068] U pojedinim primerima primene, jedinjenja predmetnog pronalaska ili njihove soli su u suštinski izolovanom stanju. Izraz "suštinski izolovan" označava da je jedinjenje bar delimično ili značajno razdvojeno od sredine u kojoj je sintetisano ili detektovano. Delimično razdvajanje može podrazumevati, na primer, preparat obogaćen jedinjenjima pronalaska. Značano razdvajanje podrazumeva preparate koji sadrže najmanje oko 50%, najmanje oko 60%, najmanje oko 70%, najmanje oko 80%, najmanje oko 90%, najmanje oko 95%, najmanje oko 97% ili najmanje oko 99 težinskih % jedinjenja pronalaska ili njegove soli. Postupci izolacije jedinjenja i njihovih soli su rutinski u stanju tehnike.

[0069] Izraz "farmaceutski prihvatljiv" se u tekstu predmetne specifikacije upotrebljava da označi ona jedinjenja, materijale, preparate i/ili dozne oblike koji su, u okviru medicinske procene, pogodni za upotrebu, odnosno za kontakt sa tkivima ljudi i životinja bez preterane toksičnost, iritacije, alergijskog odgovora ili drugih problema ili komplikacija, pri čemu je srazmerno razuman i odnos koristi/rizika za dato jedinjenje.

[0070] Izrazi "ambijentalna temperatura" i "sobna temperatura" ili "st" se koriste, slično kao i u oblasti, da bi se upošteno označila temperatura, npr temperatura reakcije, odnosno temperatura prostorije u kojoj se reakcija izvodi, a na primer, temperaturu od oko 20°C do oko 30°C.

[0071] Predmetni pronalazak takođe obuhvata farmaceutski prihvatljive soli opisanih jedinjenja. U kontekstu predmetnog pronalaska, izraz "farmaceutski prihvatljive soli" se odnosi na derivate prijavljenih jedinjenja, što je matično jedinjenje modifikovano prevođenjem postojećeg kiselog ili baznog ostatka u njegov oblik soli. Primeri farmaceutski prihvatljivih soli obuhvataju, ali nisu ograničeni na, soli mineralnih ili organskih kiselina baznih ostataka poput amina; alkalne ili organske soli kiselih ostataka poput karboksilnih kiselina; i slične. Farmaceutski prihvatljive soli predmetnog pronalaska obuhvataju uobičajene netoksične soli matičnog jedinjenja koje su sintetisane, na primer, od netoksičnih neorganskih ili organskih kiselina. Farmaceutski prihvatljive soli predmetnog pronalaska se mogu sintetisati polazeći od matičnog jedinjenja koje sadrži baznu ili kiselu grupu uobičajenim hemijskim postupcima. Uopšteno, ovakve soli se mogu dobiti reakcijom oblika slobodne kiseline ili baze navedenih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće baze ili kiseline u vodi ili u organskom rastvaraču ili u njihovoj smeši; u principu, prioritetnima se smatraju nevodeni medijumi poput etra, etil acetata, alkohola (npr metanola, etanola, izo-propanola ili butanola) ili acetonitrila (ACN). Liste pogodnih soli se mogu pronaći u publikacijama Remingtonov pripučnik farmaceuske nauke (Remington’s Pharmaceutical Sciences, 17. izdanje, Mack Publishing Company, Easton, Pa.., 1985, str.1418) i Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977).

Sinteza

[0072] Jedinjenja predmetnog pronalaska, uključujući njihove soli, mogu biti pripremljena upotrebom poznatih tehnika organske sinteze, a sinteza se može izvesti na bilo koji od brojnih mogućih načina.

[0073] Reakcije za pripremanje jedinjenja predmetnog pronalaska se mogu izvesti u pogodnim rastvaračima koji se mogu lako odabrati od strane stručnjaka iz oblasti organske sinteze. Pogodni rastvarači mogu biti u suštini nereaktivni sa početnim materijalima (reaktantima), intermedijerima ili produktima na temperaturama na kojima se reakcije izvode, npr na temperaturama koje mogu da variraju od temperature zamrzavanja rastvarača do temperature ključanja rastvarača. Navedena reakcija može biti izvedena u jednom rastvaraču ili u smeši više od jednog rastvarača. U zavisnosti od konkretnog reakcionog koraka, odgovarajući rastvarači za određen korak reakcije mogu biti izabrani od strane iskusnog stručnjaka.

[0074] Priprema jedinjenja predmetnog pronalaska može uključivati uvođenje i uklanjanje zaštinih grupa za razne hemijske grupe. Potreba za uvođenjem i uklanjanjem, kao i izbor odgovarajućih zaštitnih grupa, lako može biti određen od strane stručnjaka iz oblasti. Hemija zaštitnih grupa se može naći, na primer, u publikaciji T. W. Greene i P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3. izdanje, Wiley & Sons, Inc., Nju Jork (1999).

[0075] Reakcije se mogu pratiti bilo kojim pogodnim postupkom koji je poznat u struci. Na primer, sinteza proizvoda se može pratiti na spektrometrijske načine kao što su to nuklearna magnetnorezonantna spektroskopija (npr<1>H ili<13>C), infracrvena spektroskopija, spektrofotometrija (npr UV-vidljiva), masena spektrometrija ili pak hromatografskim postupcima poput tečne hromatografije visoke efikasnosti (HPLC), tečne hromatografije/masene spektroskopije (LCMS) ili tankoslojne hromatografije (TLC). Jedinjenja mogu biti prečišćena od strane iskusnih stručnjaka raznim postupcima, uključujući tečnu hromatografiju visoke efikasnosti (HPLC) ("Preparative LC-MS Purification: Improved Compound Specific Method Optimization" Karl F. Blom, Brian Glass, Richard Sparks, Andrew P. Combs; J. Combi. Chem.

2004, 6(6), 874-883)) i normalno-faznu hromatografiju na silika gelu.

[0076] Na primer, jedinjenja Formule I se mogu sintetisati kao što je prikazano na Šemi I. Jedinjenje (i) može biti halogenovano N-hlorosukcinamidom, N-bromosukcinamidom ili N-jodosukcinamidom dajući jedinjenje (ii) u kome X<1>= Cl, Br ili J. Halogena grupa (ii) se može kuplovati na R<3>-M, pri čemu M označava boronsku kiselinu, estar boronske kiseline ili odgovarajući supstituisani metal (npr R<3>-M označava R<3>-B(OH)2, R<3>-Sn(Bu)4ili Zn-R<3>), a pod standardnim uslovima Suzuki reakcije ili pod standardnim uslovima Stille-ove reakcije (npr u prisustvu paladijum(0) katalizatora, kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0), kao i baze (npr bikarbonatne ili karbonatne baze)) ili pod standardnim Negishi uslovima (npr u prisustvu paladijum(0) katalizatora poput tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma(0)), a da bi se dobio derivat formule (iii). Alternativno, R<3>-M može predstavljati ciklični amin (u kome M označava H i vezan je za azot amina), pri čemu se kuplovanje na jedinjenje (ii) može sprovesti zagrevanjem u bazi ili pod Buchwald-ovim uslovima (npr u prisustvu paladijum(0) katalizatora, kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0), i baze (npr alkoksidne baze)), a da bi se dobio keton (iii). Redukcija ketona (iii) sa pogodnim reagensom, kao što je natrijum tetrahidroborat, može dovesti do sinteze alkohola (iv) koji se dalje može prevesti u derivat sa odlazećom grupom (v), (npr Lg označava hlorid u reakciji sa cijanourat hloridom ili mezilat u reakciji sa anhidridom metansulfonske kiseline). Konačno, jedinjenje (v) može reagovati sa odgovarajućim heterociklom (vi) (npr 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-aminom ili 4-aminopirido[2,3d]pirimidin-5(8H)-onom) pod baznim uslovima (npr u prisustvu NaH ili CsCO3ili K2CO3) da bi se dobilo jedinjenje Formule I (vii).

[0077] Alternativno, jedinjenja formule I se može sintetisati kao što je prikazano na Šemi II. Keton jedinjenja (i) može biti halogenovan N-hlorosukcinamidom, N-bromosukcinamidom ili N-jodosukcinamidom dajući jedinjenje (ii) u kome X<1>= Cl, Br, ili J. Keton (ii) može biti redukovan pogodnim reagensom poput natrijum tetrahidroborata, a da bi se dobio alkohol (iii) koji se dalje može prevesti u derivat sa odlazećom grupom (npr Lg označava hlorid u reakciji sa cijanourat hloridom ili mezilat u reakciji sa anhidridom metansulfonske kiseline), nakon čega se u reakciji sa heterociklilom dobija heterociklični derivat (iv). Enantiomeri jedinjenja (iv) se mogu razdvojiti upotrebom hiralne hromatografije, a da bi se dobio jedan enantiomer heterocikličnog jedinjenja (v). Konačno, halogena grupa (v) se može kuplovati na R<3>-M, pri čemu M označava boronsku kiselinu, estar boronske kiseline ili odgovarajući supstituisani metal (npr R<3>-M označava R<3>-B(OH)2, R<3>-Sn(Bu)4ili Zn-R<3>), a pod standardnim uslovima Suzuki reakcije ili pod standardnim uslovima Stille-ove reakcije (npr u prisustvu katalizatora paladijuma(0), kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0), i baze (npr bikarbonatne ili karbonatne baze)) ili pod standardnim Negishi uslovima (na primer, u prisustvu paladijum(0) katalizatora poput tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma(0)), a da bi se dobio derivat formule (vi).

[0078] Jedinjenja Formule I, što L označava O, N ili S, se mogu sintetisati kao što je prikazano na Šemi III. Tioli, fenoli ili amini (i) mogu biti alkilovani upotrebom Mitsunobu uslova (npr R'OH, DEAD, Ph3P) ili standardnih uslova za alkilovanje (R'-Lg, Lg = odlazeća grupa), a da bi se obezbedili derivati tioetra, etra ili alkilamina (ii), tim redom. Halogena grupa (ii) se može kuplovati na R<3>-M, pri čemu M označava boronsku kiselinu, estar boronske kiseline ili odgovarajući supstituisani metal (npr R<3>-M označava R<3>-B(OH)2, R<3>-Sn(Bu)4ili Zn-R<3>), a pod standardnim uslovima Suzuki reakcije ili pod standardnim uslovima Stille-ove reakcije (npr u prisustvu paladijum(0) katalizatora, kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0), i baze (npr bikarbonatne ili karbonatne baze)) ili pod standardnim Negishi uslovima (na primer, u prisustvu paladijum(0) katalizatora poput tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma(0)), a da bi se dobio derivat formule (iii). Alternativno, R<3>-M može predstavljati ciklični amin (u kome M označava H i vezan je za azot amina), pri čemu se kuplovanje na jedinjenje (ii) može sprovesti zagrevanjem u bazi ili pod Buchwald-ovim uslovima (npr u prisustvu paladijum(0) katalizatora, kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) i baze (npr alkoksidne baze)), a da bi se dobilo jedinjenje formule (iii). Keton (iii) može biti transformisano primenom sličnih postupaka kao što je prikazano na Šemama I i II, a da bi se dobilo jedinjenja Formule I (iv). Alternativno, halogeni keton (ii) se može prevesti upotrebom postupaka sličnih postupcima prikazanim na Šemama I i II, a da bi se obezbedio halogeni intermedijer (v). Suzuki, Stille-ovo, Negishi ili Buchwald-ovim kuplovanjem R<3>-M na halogeni intermedijer (v), postupcima sličnim postupcima opisanim za Šeme I i II, takođe se mogu obezbediti jedinjenja formule I (vi).

[0079] Jedinjenja Formule I se mogu sintetisati kao što je prikazano na Šemi IV. Jedinjenje (i) se može acilovati sa pogodnim reagensom za acilovanje (npr R<1>-COCl) da bi se obrazovao estar koji se dalje može preurediti pod Lewis-ovim kiselim uslovima (npr u prisustvu BF3/HOAc kompleksa), a da bi se obezbedio keton (ii). Halogenizacija ketona (ii) upotrebom NX<1>S (npr NX<1>S = N-hlorosukcinamid, Nbromosukcinamid ili N-jodosukcinamid) može dati jedinjenje (iii) u kome X<1>= Cl, Br ili J. Fenol se potom može prevesti u triflat (iv) primenom standardnih uslova (npr Tf2O). Triflatna grupa jedinjenja (iv) se može kuplovati na R<3>-M, pri čemu M označava boronsku kiselinu, estar boronske kiseline ili odgovarajući supstituisani metal (npr R<3>-M označava R<3>-B(OH)2, R<3>-Sn(Bu)4ili Zn-R<3>), a pod standardnim uslovima Suzuki reakcije ili pod standardnim uslovima Stille-ove reakcije (npr u prisustvu paladijum(0) katalizatora, kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0), i baze (npr bikarbonatne ili karbonatne baze)) ili pod standardnim Negishi uslovima (na primer, u prisustvu paladijum(0) katalizatora poput tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma(0)), a da bi se dobio derivat formule (v). Alternativno, R<3>-M može predstavljati ciklični amin (u kome M označava H i vezan je za azot amina), pri čemu se kuplovanje na jedinjenje (iv) može sprovesti zagrevanjem u bazi ili pod Buchwald-ovim uslovima (npr u prisustvu paladijum(0) katalizatora, kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) i baze (npr alkoksidne baze)), a da bi se dobilo keton (v). Halogena grupa (v) može biti kuplovana na R<3>-M, pri čemu M označava boronsku kiselinu, estar boronske kiseline ili odgovarajući supstituisani metal (npr R<3>-M označava R<3>-B(OH)2, R<3>-Sn(Bu)4ili Zn-R<3>), a pod standardnim uslovima Suzuki reakcije ili pod standardnim uslovima Stille-ove reakcije (npr u prisustvu paladijum(0) katalizatora, kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0), i baze (npr bikarbonatne ili karbonatne baze)) ili pod standardnim Negishi uslovima (na primer, u prisustvu paladijum(0) katalizatora poput tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma(0)), a da bi se dobio derivat formule (vi). Alternativno, R<3>-M može predstavljati ciklični amin (u kome M označava H i vezan je za azot amina), pri čemu se kuplovanje na jedinjenje (iv) može sprovesti zagrevanjem u bazi ili pod Buchwald-ovim uslovima (npr u prisustvu paladijum(0) katalizatora, kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) i baze (npr alkoksidne baze)), a da bi se dobio keton koji se dalje može prevesti upotrebom postupaka sličnih postupcima prikazanim na Šemama I i II za dobijanje ketona (vi). Keton (vi) se može transformisati primenom sličnih postupaka kao što su postupci prikazani na Šemama Šemi I i II, a da bi se dobilo jedinjenja Formule I (viii).

[0080] Alternativno, halo-keton (v) se može transformisati primenom postupaka sličnih postupcima prikazanim na Šemama I i II, a da bi se dobio halogeni intermedijer (vii). Suzuki, Stille-ovo, Negishi ili Buchwald-ovim kuplovanjem M-R<3>sa jedinjenjem (vii), postupcima sličnim postupcima prikazanim na Šemama I i II, se mogu dobiti jedinjenja Formule I (viii).

[0081] Ketoni koji se mogu upotrebiti u procesima prikazanim na Šemama I, II i III se mogu sintetisati kao što je prikazano na Šemi V koja sledi. Karboksilna kiselina (i) može biti aktivirana agensom za kuplovanje (npr HBTU, HATU ili EDC), a zatim ona može reagovati sa N,O-dimetilhidroksilaminom da bi se dobio derivat N-metoksi-N-metilkarboksamid (ii). Amid (ii) potom može reagovati sa Grignardovim reagensom Formule R<1>-MgX<1>(X<1>= halogeni element) da bi se dobio keton (iii). Keton (iii) se dalje može transformisati primenom postupaka sličnih postupcima prikazanim na Šemama I, II i III, a da bi se dobila jedinjenja Formule I.

[0082] Ketoni koji se mogu upotrebiti u procesima prikazanim na Šemama I, II i III se mogu sintetisati i kao što je prikazano na Šemi VI koja sledi. Karboksilna kiselina (I) može biti aktivirana agensom za kuplovanje (npr HBTU ili HATU), a zatim može reagovati sa N,O-dimetilhidroksilaminom da bi se dobio N-metoksi-N-metilkarboksamid. Tioli, fenoli ili amini dalje mogu biti alkilovani primenom Mitsunobu uslova (npr R'OH, DEAD, Ph3P) ili standardnih uslova za alkilovanje (R'-Lg, Lg = odlazeća grupa), a da bi se dobio tioetar, etar ili derivat alkilamina (ii), tim redom. Halogena grupa (ii) (X<1>označava halogenu grupu) može biti kuplovana na R<3>-M, pri čemu M označava boronsku kiselinu, estar boronske kiseline ili odgovarajući supstituisani metal (npr R<3>-M označava R<3>-B(OH)2, R<3>-Sn(Bu)4ili Zn-R<3>), a pod standardnim uslovima Suzuki reakcije ili pod standardnim Stille-ovim uslovima (npr u prisustvu paladijum(0) katalizatora poput tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma(0) i baze (npr bikarbonatne ili karbonatne baze) ili pod standardnim Negishi-ovim uslovima (npr u prisustvu paladijum(0) katalizatora poput tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma(0), a da bi se dobio derivat Formule (iii). Alternativno, R<3>-M može predstavljati ciklični amin (pri čemu M označava H i vezan je za azot amina) čije se kuplovanje za jedinjenje (ii) može sprovesti zagrevanjem u bazi ili pod Buchwald-ovim uslovima (npr u prisustvu paladijum(0) katalizatora poput tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma(0) i neke baze (npr alkoksidne bazne)), a da bi se dobio amid (iii). Potom se, reakcijom jedinjenja (iii) sa Grignardovim reagensom Formule R<1>-MgX<2>(X<2>= halogeni element), može dobiti keton (iv). Keton (iv) se dalje može transformisati primenom postupaka sličnih postupcima prikazanim na Šemama I, II i III zarad dobijanja jedinjenja Formule I.

[0083] Jedinjenja koja se mogu upotrebiti u procesima prikazanim na Šemama I-III se mogu sintetisati kao što je prikazano na Šemi VII. Halo-keton (i) (X<1>označava halogenu grupu) se može konvertovati u cijano-keton (ii) upotrebom standardnih uslova cijanacije (npr Pd(0) i Zn(CN)2). Hidroliza cijano grupe (ii) u kiselim ili baznim uslovima može dovesti do sinteze karboksilne kiseline koja dalje može biti kuplovana na amin upotrebom agensa za kuplovanje (npr HATU, HBTU, EDC) i odgovarajućih amina (HNR<c>R<d>), a da bi se obrazovao amid (iii). U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, R<c>i R<d>se, zajedno sa atomom azota za koji su vezani, mogu ciklizovati da bi se obrazovala 4-7-člana heterocikloalkilna grupa (time se obezbeđuju jedinjenja, što R<3>označava C(O)Rgrupu, što Roznačava 4-7-članu heterocikloalkil grupu). Keton amida (iii) se dalje može transformisati primenom postupaka sličnih postupcima prikazanim na Šemama I, II i III, a da bi se dobila jedinjenja Formule I.

[0084] Dodatna jedinjenja koja se mogu upotrebiti u procesima prikazanim na Šemama I-III se mogu sintetisati i kao što je prikazano na Šemi VIII. Keton (I) se može konvertovati u nitro-keton (ii) primenom standardnih uslova nitracije (npr HNO3). Redukcija nitro grupe (ii) pod standardnim uslovima (npr Fe, Zn, H2preko Pd/C) može voditi sintezi amino jedinjenja koje se dalje može acilovati odgovarajućim agensima za acilovanje (npr RC = OCI, ROC = OCI, SO2Cl, RRNC = O), a da bi se dobio keton (iii). Keton (iii) se potom može transformisati primenom postupaka sličnih postupcima prikazanim na Šemama I, II i III za dobijanje jedinjenja Formule I. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, R<c>i R<d>, zajedno sa atomom azota za koji su vezani, se mogu opciono ciklizovati tako da se obrazuje 4-7-člana heterocikloalkil grupa (time se obezbeđuju jedinjenja, što R<3>označava C(O)Rgrupu, što Roznačava 4-7-članu heterocikloalkil grupu).

[0085] Ketoni koji se mogu upotrebiti u procesima prikazanim na Šemama I, II i III se mogu sintetisati i kao što je prikazano na Šemi X koja sledi. Halogena grupa (na primer X<1>= J) označena sa (i) se može kuplovati na reagens sa cinkom formule R<3>-Zn (npr poput reakcije terc-butil 3-jodoazetidin-1-karboksilata sa Zn u prahu), pod standardnim Knochel/Negishi-ovim uslovima (npr u prisustvu paladijum(0) katalizatora kao što su to tri-(2-furil)fosfin i tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) i 1,2-dibrometan i hlorotrimetilsilan), a da bi se dobio derivat formule (ii). Dalje sa azetidina (ii) može biti uklonjena zaštitna grupa (npr Pg = Boc, upotrebom TFA), a zatim azetidin može reagovati pod alkilujućim, acilujućim ili uslovima reduktivne aminacije (npr u prisustvu RX poput R-Br, RCOCl, R-SO2Cl, RN=C=O ili RCHO i redukujućeg sredstva) da bi se sintetisali derivati ketona (iii) koje se mogu konvertovati u jedinjenja Formule I (v) postupcma sličnim postupcima prikazanim na Šemama I, II, i III). Alternativno, keton (ii) može biti redukovan pogodnim reagensima (NaBH4ili hiralni Corey-ev CBS katalizator, a da bi se predominantno dobio jedan izomer alkohola), pa dobijeni alkohol može biti konvertovan u odlazeću grupu (npr Lg označava hlorid u slučaju rekacije sa cijanourat hloridom ili mezilat za reakciju sa metansulfonskim anhidridom). Dobijeni hlorid ili mezilat dalje može reagovati sa odgovarajućom heterocikličnom grupom (npr postupcima sličnim postupcima prikazanim na Šemama i, II i III), a da bi se dobio derivat Formule (iv). Zaštitna grupa amina može biti uklonjena pod standardnim uslovima i zatim amin može reagovati pod alkilujućim, acilujućim ili uslovima reduktivne aminacije (npr u prisustvu RX poput R-Br, RCOCl, R-SO2Cl, RN = C = O ili RCHO i redukujućeg agensa) zarad dobijanja jedinjenja Formule I (v).

Jedinjenja Formule I se mogu sintetisati i kao što je prikazano na Šemi X. Jedinjenje (I) može reagovati sa halo-supstituisanim heterociklinima (ii) (npr 3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-aminom ili 4-amino-6-jodopirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-onom) u baznim uslovima (npr u prisustvu NaH ili CsCO3ili K2KO3), a da bi se dobilo jedinjenje (iii) u kome V = Cl, Br ili J. Halogena grupa (iii) dalje može biti kuplovana za R<3>-M, pri čemu M označava boronsku kiselinu, estar boronske kiseline ili odgovarajući supstituisani metal (npr R<8>-M označava R<8>-B(OH)2, R<8>-Sn(Bu)4ili Zn-R<8>), a pod standardnim uslovima Suzuki reakcije ili pod standardnim Stille-ovim uslovima (npr u prisustvu paladijum(0) katalizatora poput tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma(0) i baze (npr bikarbonatne ili karbonatne baza) ili pod standardnim Negishi-ovim uslovima (npr u prisustvu paladijum(0) katalizatora poput tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma(0)), a da bi se dobio derivat Formule (iii). Alternativno, R<8>-M može označavati ciklični amin (u kome M označava H i vezan je za azot amina) čije se kuplovanje sa jedinjenjem (iii) može sprovesti zagrevanjem u bazi ili pod Buchwald-ovim uslovima (npr u prisustvu paladijum(0) katalizatora poput tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma(0) i baze (npr alkoksidne baze)), a zarad dobijanja jedinjenja Formule I (iv).

[0086] Jedinjenja Formule I se takođe mogu sintetisati kao što je prikazano na Šemi XI. Cijano derivat (i) može biti hidrolizovan u kiselinu (npr u prisustvu kiseline ili baze) da bi se dobila odgovarajuća kiselina (ii). Karboksilna kiselina (ii) zatim može biti kuplovana sa aminom (npr HNR<c2>R<d2>označava dimetilamin) (iii) uz pomoć odgovarajućih agenasa za kuplovanje (npr HATU, HBTU, EDC) u prisustvu baze poput TEA ili DIEA, a da bi se dobio amid (iii). Karboksilna kiselina (ii) se može redukovati i do alkohola (iv), pri čemu R<t>= H, upotrebom odgovarajućeg redukujućeg sredstva (npr LAH ili NaBH4) ili se kiselina može prevesti u estar i reagovati sa Grignardovim reagensom (npr R<t>MgBr) ili alkillitijumom (npr R<t>Li) da bi se dobio sekundarni ili tercijarni alkohol (iv). Alkohol (iv) se može aktivirati prevođenjem u odlazeću grupu poput halida, reakcijom sa odgovarajućim reagensima poput cijanourat hlorida, koja zatim može reagovati sa odgovarajućim aminom (npr HNR<c2>R<d2>) zarad dobijanja jedinjenja Formule I (v). Alternativno, alkohol (iv) može reagovati pod uslovima Mitsunobu reakcije (npr u prisustvu DEAD, trifenilfosfina i jedinjenja A (npr fenola ili heteroarila sa NH, npr imidazola)), a da bi se dobila jedinjenja Formule I (vi). Ostali tipovi modifikacija će biti laki za prepoznavanje stručnjacima iz oblasti, počevši od jedinjenja koja su prikazana na Šemi XI (npr estarifikacija alkohola itd).

[0087] Jedinjenje Formule I se može sintetisati iz kiselog hlorida jedinjenja (I) kao što je to ilustrovano na Šemi XII. Kondenzacija kiselog hlorida (i) sa malononitrilom u prisustvu baze poput natrijum hidrida, može dovesti do sitneze dicijanoenolskog intermedijera, koji dalje može biti O-metilovan sa odgovarajućim reagensom poput dimetil sulfata, u prisustvu odgovarajuće baze kao što je natrijum bikarbonat, a da bi se dobio enol etra (ii). Reakcijom enol etra (ii) sa hidrazin dihidrohloridom u prisustvu pogodne baze poput trietilamina se može dobiti pirazolsko jedinjenje (iii). Jedinjenje pirazola (iii) može zatim reagovati sa formamidom da bi se dobio pirazolopirimidin (iv). Konačno, jedinjenje (iv) može da reaguje sa odgovarajućim jedinjenjem koje nosi odlazeću grupu (v) pod baznim uslovima da bi se dobilo jedinjenje Formule I (vi).

[0088] Jedinjenja Formule I mogu biti sintetisana polazeći od komercijalno dostupnog 4-aminopirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-ona (I). Halogenovanje jedinjenja (I) sa pogodnim reagensima poput N-halogenog sukcinamida (NX<1>S u kome X<1>= Cl, Br ili J) mogu obezbediti odgovarajuće halogeno jedinjenje (ii). Reakcija halogenog derivata (ii) sa jedinjenjem (iii) koji nosi odlazeću grupu, a u prisustvu pogodne baze (npr diizopropiletilamina) može dati jedinjenje (iv). Halogeno jedinjenje (iv) se dalje može kuplovati na R<8a>-M, pri čemu M označava boronsku kiseline, estar boronske kiseline ili odgovarajući supstituisani metal (npr R<8a>-M označava R<8a>-B(OH)2, R<8a>-Sn(Bu)4ili Zn-R<8a>), a pod standardnim uslovima Suzuki ili standardnim Stille-ovim uslovima (npr u prisustvu paladijum(0) katalizatora kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0), i baze (npr bikarbonatne ili karbonatne baza)) ili pod standardnim Negishi-ovim uslovima (npr u prisustvu paladijum(0) katalizatora kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0), a da bi se dobio derivat Formule (iii). Alternativno, R<8a>-M može predstavljati ciklični amin (u kome M označava H i vezan za azot amina) čije se kuplovanje sa jedinjenjem (iii) može sprovesti zagrevanjem u bazi ili pod Buchwald-ovim uslovima (npr u prisustvu paladijum(0) katalizatora kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0), i baze (npr alkoksidne baze)), a da bi se dobilo jedinjenja Formule i (v).

[0089] Jedinjenja Formule I se takođe mogu sintetisati kao što je prikazano na Šemi XIV. Halogena grupa, X<1>, jedinjenja (i) može biti kuplovana na alken (npr akrilat ili akrilamid) pod standardnim Heck-ovim uslovima (npr u prisustvu paladijum(II) katalizatora kao što je paladijum acetat) da bi se dobio alken formule (II). Reakcijom alkena (II) sa nitrometanom u prisustvu DBU se može obezbediti nitro derivat (iii) koja se dalje može redukovati pod standardnim uslovima (npr NiCl2/NaBH4) da bi se dobio slobodan amin koji reakcijom ciklizacije može obrzovati laktam (iv). Laktam može zatim biti alkilovan pod standardnim uslovima (npr R<3a>-X<2>, pri čemu X<2>= halogeni element, u prisustvu baze kao što je TEA ili NaH) pri čemu se dobija N-alkil-laktam (v). Jedinjenja Formule (v) i pirolidini izvedeni redukcijom laktama (v) sa pogodnim redukujućim agensima poput LiAlH4, se mogu prevesti u jedinjenja formule I upotrebom uslova opisanih na Šemama I, II i III.

[0090] Jedinjenja Formule I se mogu sintetisati i kao što je prikazano na Šemi XV. Halogena grupa X<1>jedinjenja (i) se može kuplovati na R<3>-M, pri čemu M označava odgovarajući supstituisani metal (npr R<3>-M označava R<3>B(OH)2; odgovarajuće, ali neograničavajući polazni materijali za sintezu R<3>-M su prikazani na Šemi XII), a pod standardnim uslovima Suzuki reakcije (npr u prisustvu paladijum(0) katalizatora kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0)) zarad dobijanja alkena formule (ii). Epoksidacija alkena (II) sa mCPBA može obezbediti epoksid (iii) koji dalje može reagovati sa sekundarnim ili primarnim aminom (amin = NHR<c>R<d>; R<c>= H za primarni amin) da bi se dobilo amino jedinjenja Formule (iv). Sekundarni ili tercijarni derivati amina (iv) mogu dalje reagovati sa karbonildiamidazolom ili fozgenom da bi se obrazovao oksazolidinon (v) ili acetil-halid (npr hloro-acetilhlorid u prisustvu baze, kao što je TEA), a da bi se dobio N-acil derivat koji se potom može prevesti u derivat morfolinona (vi) nakon tretmana sa bazom (npr NaH). Zaštitna grupa sa jedinjenja formula (iv, v i vi) se može ukloniti upotrebom standardnih uslova (npr jedinjenja sa THP zaštitnim grupama se mogu tretirati kiselinom poput TFA ili HCl), a da bi se dobila jedinjenja Formule I.

[0091] Jedinjenja Formule I se takođe mogu dobiti kao što je prikazano na Šemi XVI. Sharpless-ova amino-hidroksilacija alkena formule (i), u pogodnim uslovima (A ili B, kao što je to opisano u JACS, 2001, 123(9), 1862-1871 i J. Org. Chem, 2011, 76, 358-372) može obrazovati bilo amino-hidroksilni izomer (ii) bilo jedinjenje (iii). Jedinjenja (ii) i (iii) potom mogu reagovati sa karbonildiamidazolom ili fozgenom da bi obrazovao oksazolidinon (iv) ili acetil-halid (npr hloro-acetilhlorid u prisustvu baze kao što je TEA), a da bi se dobio N-acil derivat koji se dalje može prevesti u derivat morfolinona (v) nakon tretmana sa bazom (npr NaH). Alternativni amino-hidroksilni izomer (iii) se može prevesti u derivate oksazolidinona i morfolinona kao što je prikazano na Šemi XV.

[0092] Jedinjenja Formule I se mogu sintetisati kao što je prikazano na Šemi XVII. Halogena grupa (na primer X<1>= Cl, Br, J) (i) se može prevesti u boronatni estar (II) pod standardnim uslovima (npr pinakolski estar boronske kiseline u prisustvu paladijum(0) katalizatora kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0)). Boronat (ii) može reagovati sa arilhalidom ili heteroarilhalidom (npr R<3>-X<2>) pod uslovima Suzuki reakcije (npr u prisustvu paladijum(0) katalizatora kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) i baze kao što je Na2CO3), a da bi se dobilo jedinjenje formule (iii). Jedinjenje formule (iii) se može prevesti u jedinjenje formule I upotrebom reakcionih uslova koji su opisani na Šemama I, II ili III.

[0093] Jedinjenja Formule I, u kojim R<4>= F ili CN, se mogu sintetisati kao što je prikazano na Šemi XVIII. Jedinjenje (I) se može acilovati upotrebom pogodnog reagensa za acilovanje (npr R<1>-COCl) da bi se obrazovao estar koji se dalje može preurediti pod uslovima Levis-ove reakcije sa kiselinom (npr kompleks BF3/HOAc), a da bi se dobio keton (ii). Keton (ii) može biti halogenovan sa N-hlorosukcinamidom, N-bromosukcinamidom ili N-jodosukcinamidom da bi se sintetisao fenol (iii), u kome X<1>= Cl, Br ili J. Jedinjenje (iii) dalje može biti alkilovano (npr R<2>-X i baze kao što je NaH ili Na2CO3; ili pod Mitsunobu uslovima) da bi se dobio etar (iv). Fluoro grupa (iv) dalje može biti izmeštena (npr NaCN ili KCN) da bi se dobio cijano derivat (v). Halogena grupa (v) se može kuplovati na R<3>-M, pri čemu M označava boronsku kiseline, estar boronske kiseline ili odgovarajući supstituisani metal (npr R<3>-M označava R<3>-B(OH)2, R<3>Sn(Bu)4ili Zn-R<3>), a pod standardnim uslovima Suzuki reakcije ili pod standardnim Stille-ovim uslovima (npr u prisustvu paladijum(0) katalizatora kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) i baze (npr bikarbonatne ili karbonatne baze) ili pod standardnim Negishi-ovim uslovima (npr u prisustvu paladijum(0) katalizatora kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0)), a da bi se dobio derivat formule (vi). Alternativno, R<3>-M može predstavljati ciklični amin (u kome M označava H i vezan je za azot amina) koji se može kuplovati na jedinjenje (v) zagrevanjem u bazi ili pod Buchwald-ovim uslovima (npr u prisustvu paladijum(0) katalizatora kao što tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) i baze (npr alkoksidne baze)), a da bi se dobio keton (vi). Redukcija ketona (VI) sa pogodnim reagensom poput natrijum tetrahidroborata ili Corey-evog CBS reagensa može obezbediti alkohol koji se može prevesti u derivat sa odlazećom grupom (npr Lg označava hlorid u reakciji sa cijanourat hloridom ili mezilat u reakciji sa anhidridom metansulfonske kiseline) koji zatim može reagovati sa odgovarajućim heterociklilom (npr 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-aminom ili 4-aminopirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-onom) u baznim uslovima (npr u prisustvu NaH ili CsCO3ili K2CO3), a da bi se dobilo jedinjenje formule I (viii). Alternativno, poslednja dva koraka reacije mogu biti izmenjena tako da keton (v) može biti redukovan da bi se dobio alkohol koja se najpre prevodi u odlazeću grupu koja biva istisnuta od strane heterociklina, pa koji se zatim kuplluje pod uslovima Suzuki, Stille-ove, Negishi-ove ili Buchwald-ove reakcije kuplovanja, a da bi se dobila jedinjenja formule I (viii). Fluoro derivati (iv) se takođe mogu prevesti u jedinjenja Formule I eliminacijom koraka cijanijacije sa Šeme XVIII.

[0094] Jedinjenja Formule I se mogu sintetisani i kao što je prikazano na Šemi XIX. Jedinjenje (i) se može acilovati sa pogodnim reagensom za acilovanje (npr R<1>-COCl) da bi se obrazovao estar koji se dalje može preurediti pod uslovima Levis-ove reakcije sa kiselinom (npr AlCl3ili kompleks BF3/HOAc), a da bi se dobio keton (ii). Halogenacija ketona (ii) upotrebom NX<1>S (npr NX<1>S = N-hlorosukcinamid, N-bromosukcinamid ili N-jodosukcinamid) može dati jedinjenje (III), u kome X<1>= Cl, Br ili J. Fenol se može prevesti u etar (iv) primenom standardnih uslova (npr u prisustvu neorganske baze poput K2CO3i alkil halida poput Et-J). Halogena grupa (iv) se može kuplovati na R<3>-M, pri čemu M označava boronsku kiselinu, estar boronske kiseline ili odgovarajući supstituisani metal (npr R<3>-M označava R<3>-B(OH)2, R<3>-Sn(Bu)4ili Zn-R<3>, a R<3>označava supstituisan ili nesupstituisan olefin poput vinila) pod standardnim uslovima Suzuki reakcije ili pod standardnim Stille-ovim uslovima (npr u prisustvu paladijum(0) katalizatora kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) i baze (npr bikarbonatne ili karbonatne baza), a da bi se dobio derivat Formule (v). Alken zatim može biti dihidroksilovan upotrebom Sharpless-ovih uslova reakcije da bi se dobio diol (vi). Prevladavanje jednog enantiomera sekundarnog alkohola se može postići upotrebom standardnih postupaka Sharpless-ove asimetrične dihidroksilacije. Sekundarni alkohol se naime može prevesti u amin sa N-Boc grupama procesom od 6 koraka (npr najpre vezivanjem silil grupa (npr TBS-Cl i DIEA) za primarni alkohol, pa mezilacija sekundarnog alkohola, zamena mezilata sa NaN3, redukcija azida sa Ph3P, vezivanje Boc grupa za dobijeni primarni amin i potom uklanjanje silinih zaštitnih grupa sa primarnog alkohola sa TBAF), a da se dobio amino-alkohol (vii). Amino-alkohol (vii) se može prevesti u oksazolidinon tretiranjem sa fosgenom i potom radukcijom ketona sa odgovarajućim reagensom poput natrijum tetrahidroborata ili natrijum borohidrida, a da bi se obezbedio alkohol (viii) koji se dalje može prevesti do derivata sa odlazećom grupom (ix) (npr Lg označava hlorid u reakciji sa cijanurin hloridom ili mezilat u reakciji sa anhidridom metansulfonske kiseline). Konačno, jedinjenje (ix) može da reaguje sa odgovarajućim heterociklinom (x) (npr 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-aminom ili 4-aminopirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-onom) u baznim uslovima (npr NaH ili Cs2CO3ili K2CO3) da bi se dobilo jedinjenje formule I (xi).

Metode

[0095] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu modulisati aktivnost jedne ili više različitih kinaza, uključujući, na primer, fosfoinozitid 3-kinaze (PI3K). Termin "modulisati" treba da se odnosi na sposobnost povećavanja ili smanjenja aktivnosti jednog ili više članova familije PI3K. Shodno navedenom, jedinjenja predmetnog pronalaska se mogu upotrebljavati u postupcima modulisanja PI3K i to kontaktom PI3K bilo sa kojim ili sa više jedinjenja ili preparata opisanih predmetnim pronalskom. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, jedinjenja predmetnog pronalaska mogu da deluju kao inhibitori jedne ili više PI3K. U daljim primerima primene predmetnog pronalaska, jedinjenja predmetnog pronalaska se mogu koristiti za modulisanje aktivnosti PI3K kod pojedinca kome je modulacija receptora potrebna, primenom modulišuće količine jedinjenja predmetnog pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, modulacija označava inhibiciju.

[0096] Imajući u vidu da je rast i preživljavanje ćelija kancera pod uticajem višestrukih signalnih puteva, predmetni pronalazak je od koristi za tretman bolesnih stanja koje karakteriše prisustvo mutacija koje uzrokuju rezistentnosti na lekove. Pored toga, različiti inhibitori kinaze koji ispoljavaju različit afinitet ka kinazama čiju aktivnosti mogu da modulišu se mogu koristiti u kombinaciji. Ovakav pristup se može pokazati vrlo efikasanim u lečenju bolesnih stanja putem ciljanog dejstvom na višestruke signalne puteve, čime se zapravo smanjuje verovatnoća pojave rezistencije na lekove u ćeliji, kao i toksičnost tretmana za navedeno oboljenje.

[0097] Kinaze za koje se jedinjenja predmetnog pronalaska vezuju i/ili čiju aktivnost modulišu (npr inhibiraju) obuhvataju bilo kog člana familije PI3K. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, PI3K označava PI3Kα, PI3Kβ, PI3Kγ ili PI3Kδ. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, PI3K označava PI3Kγ ili PI3Kδ. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, PI3K označava PI3Kγ. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, PI3K označava PI3Kδ. U pojedinim primerima primene, PI3K sadrži mutaciju. Mutacija može označavati zamenu jedne aminokiseline drugom ili deleciju jedne ili više aminokiselina. U ovakvim primerima primene predmetnog pronalaska, mutacija može biti prisutna u kinaznom domenu PI3K.

[0098] U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, upotrebljava se više od jednog jedinjenja predmetnog pronalaska za inhibiciju aktivnosti jedne kinaze (npr PI3Kγ ili PI3Kδ).

[0099] U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, upotrebljava se više od jednog jedinjenja predmetnog pronalaska za inhibiciju aktivnosti više od jedne kinaze, a kao što je npr inhibicija aktivnosti najmanje dve kinaze (npr PI3Kγ i PI3Kδ).

[0100] U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, upotrebljava se jedno ili više jedinjenja u kombinaciji sa drugim inhibitorom kinaze, a da bi se inhibirala aktivnost jedne kinaze (npr PI3Kγ ili PI3Kδ).

[0101] U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, upotrebljava se jedno ili više jedinjenja u kombinaciji sa drugim inhibitorom kinaze, a da bi se inhibirala aktivnost više od jedne kinaze (npr PI3Kγ ili PI3Kδ) kao što je npr. aktivnost najmanje dve kinaze.

[0102] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti selektivna. Temin "selektivan" označava da se jedinjenje vezuje za ili da inhibira određenu kinazu sa većim afinitetom i potencijom, tim redom, nego što to čini u odnosu na drugu, najmanje jednu, kinaze. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, jedinjenja predmetnog pronalaska označavaju selektivne inhibitore PI3Kγ ili PI3Kδ, a u odnosu na PI3Kα i/ili PI3Kβ. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, jedinjenja predmetnog pronalaska označavaju selektivne inhibitore PI3Kδ (npr u odnosu na PI3Kα, PI3Kβ i PI3Kγ). U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, jedinjenja predmetnog pronalaska predstavljaju selektivne inhibitore PI3Kγ (npr u odnosu na PI3Kα, PI3Kβ i PI3Kδ). U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, stepen selektivnost može iznosti najmanje oko 2 puta, 5 puta, 10 puta, najmanje oko 20 puta, najmanje oko 50 puta, najmanje oko 10 puta, najmanje oko 200 puta, najmanje oko 500 puta ili najmanje oko 1000 puta. Selektivnost se može meriti postupcima koji su rutinski u stanju tehnike. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, selektivnost mogu biti testirana Km ATP koncentracijom za svaki enzim. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, selektivnost jedinjenja predmetnog pronalaska se može određivati esejima na ćelijama koji ukazuju na tačno određenu aktivnost PI3K kinaze.

[0103] Jedinjenja prema pronalasku mogu biti korišćena u postupcima tretmana oboljenja ili poremećaja u kojima je poremećena funkcija kinaze (kao što je PI3K) kod pojedinca (npr pacijenta) i to primenom terapijski efikasne količine ili doze jednog ili više jedinjenja predmetnog pronalaska ili njegovog farmaceutskog preparata pojedincu kome je ovakva tretman potreban. Oboljenja asocirana sa PI3K mogu uključivati bilo koju bolest, poremećaj ili stanje koje je direktno ili indirektno povezano sa promenjenjom ekspresijom ili aktivnošću PI3K, uključujući prekomernu ekspresiju i/ili abnormalne nivoe aktivnosti. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, bolest može pratiti promena u ekspresiji i/ili aktivnosti Akt (protein kinaze B), sisarskog enzima označenog kao ciljani enzim dejstva rapamicina (mTOR) ili fosfoinozitid-zavisne kinaze 1 (PDK1). U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, mTOR-asocirane bolesti mogu označavati upalu, aterosklerozu, psorijazu, restenozu, benignu hipertrofiju prostate, poremećaje kostiju, pankreatitis, angiogenezu, dijabetsku retinopatiju, aterosklerozu, artritis, imunološke poremećaje, bolest bubrega ili kancer. Oboljenja asocirana sa PI3K takođe mogu obuhvatati bilo koje oboljenje, poremećaj ili stanje koje može biti sprečeno, poboljšano ili izlečeno modulisanjem aktivnosti PI3K. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, oboljenje karakteriše abnormalna aktivnost PI3K. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, oboljenje karakteriše mutacijom izmenjena PI3K. U ovakvim primerima primene, mutacija može biti prisutna u kinaznom domenu PI3K.

[0104] Primeri PI3K-asociranih bolesti obuhvataju oboljenja u čijoj je osnovi poremećaj funkcije imunskog sistema uključujući, na primer, reumatoidni artritis, alergiju, astmu, glomerulonefritis, lupus ili inflamaciju koja prati bilo koje od prethodno navedenih jedinjenja.

[0105] Dalji primeri PI3K-asociranih oboljenja uključuju kancere kao što su kanceri dojke, prostate, debelog creva, endometrijuma, mozga, mokraćne bešike, kože, materice, jajnika, pluća, pankreasa, bubrega, želuca ili hematološki kanceri.

[0106] U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, hematološki kancer označava akutnu mijeloblastnu leukemiju (AML) ili hroničnu mijeloidnu leukemiju (CML) ili B ćelijski limfom.

[0107] Dalji primeri PI3K-asociranih oboljenja uključuju bolesti pluća kao što su akutna povreda pluća (ALI) i sindrom respiratornog distresa odraslih (ARDS).

[0108] Dalji primeri PI3K-asociranih oboljenja uključuju osteoartritis, restenozu, aterosklerozu, bolesti kostiju, artritis, dijabetičnu retinopatiju, psorijazu, benignu hipertrofiju prostate, inflamaciju, angiogenezu, pankreatitis, oboljenje bubrega, inflamatornu bolest creva, mijasteniju gravis, multiplu sklerozu ili Sjogren-ov sindrom i slična oboljenja.

[0109] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "kontaktiranje" se odnosi na dovođenje u kontakt naznačenih ostataka u in vitro ili in vivo sistemu. Na primer, "kontaktiranje" PI3K sa jedinjenjem predmetnog pronalaska podrazumeva davanje jedinjenja pronalaska pojedincu ili pacijentu koji sadrži PI3K, a kao što je to čovek, kao i, na primer, uvođenje jedinjenja pronalaska u uzorak koji sadrži ćelijski ili prečišćen preparat sa PI3K.

[0110] U kontekstu predmetnog pronalaska, termini "pojedinac" ili "pacijent" se koriste kao sinonimi, a odnose se na bilo koju životinju, uključujući sisare, prioritetno miševe, pacove, druge glodare, zečeve, pse, mačke, svinje, goveda, ovce, konje ili primate, a najprioritetnije na ljude.

[0111] U kontekstu predmetnog pronalaska, izraz "terapijski efikaasna količina" se odnosi na količinu aktivnog jedinjenja ili farmaceutskog agensa koja ispoljava biološki ili medicinski odgovor u tkivu, sistemu, životinji, pojedincu ili čoveku, a koji je procenjen kao potreban od strane istraživača, veterinara, ordinirajućeg lekara ili drugog kliničara. U pojedinim primerima primene, doza jedinjenja, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, koja se primenjuje kod pacijenta ili pojedinca iznosi od oko 1 mg do oko 2 g; od oko 1 mg do oko 1000 mg; od oko 1 mg do oko 500 mg; od oko 1 mg do oko 100 mg; od oko 1 mg do 50 mg; ili od oko 50 mg do oko 500 mg.

[0112] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "tretiranje" ili "tretman" se odnosi na jedan ili više od sledećih efekata (1) prevenciju oboljenja; na primer, prevenciju bolesti, stanja ili poremećaja kod pojedinca koji može biti sa predispozicijom za bolest, stanje ili poremećaj, a koji još uvek nije oboleo ili ispoljio patologiju ili simptomatologiju bolesti; (2) inhibiciju bolesti; na primer, inhibiciju bolesti, stanja ili poremećaja kod pojedinca koji je oboleo ili ispoljava patologiju ili simptomatologiju bolesti, stanja ili poremećaja (npr zaustavljanje daljeg razvoja patologije i/ili simptomatologije); i (3) ublažavanje bolesti; na primer, ublažavanje bolesti, stanja ili poremećaja kod pojedinca koji je oboleo ili ispoljava patologiju ili simptomatologiju bolesti, stanja ili poremećaja (npr umanjivanje patologije i/ili simptomatologije), a kao što je smanjenje težine kliničke slike oboljenja.

Kombinovane terapije

[0113] Jedan ili više dodatnih farmaceutskih agenasa kao što su, na primer, hemioterapeutici, antiinflamatorni agensi, steroidi, imunosupresanti, kao i Bcr-Abl, Flt-3, EGFR, HER2, JAK (npr JAK1 ili JAK2), c-MET, VEGFR, PDGFR, cKit, IGF-1R, RAF, FAK, Akt mTOR, PIM i AKT (npr AKT1, AKT2 ili AKT3) inhibitori kinaza, a poput onih koji su opisani u, na primer, Internacionalnom patentnom spisu WO 2006/056399, ili pak drugi angensi poput terapijskih antitela, se mogu upotrebljavati u kombinaciji sa jedinjenjima predmetnog pronalaska za tretman PI3K-asociranih oboljenja, poremećaja ili stanja. Jedan ili više dodatnih farmaceutskih agenasa se mogu primenjivati pacijentu istovremeno ili jedan za drugim u odnosu na jedinjenja predmetnog pronalaska.

[0114] Primeri antitela za upotrebu u kombinovanoj terapiji obuhvataju, ali nisu ograničeni na, Trastuzumab (npr anti-HER2), Ranibizumab (npr anti-VEGF-A), Bevacizumab (komercijalni naziv Avastin, npr anti-VEGF), Panitumumab (npr anti-EGFR), Cetuksimab (npr anti-EGFR), Rituksan (anti-CD20) i anti-c-MET antitela.

[0115] Jedan ili više od sledećih agenasa se mogu upotrebiti u kombinaciji sa jedinjenjima predmetnog pronalaska, pri čemu prikazana lista nije ograničavajuća ni na koji način: citostatski agens, cisplatina, doksorubicin, taksoter, taksol, etopozid, irinotekan, kamptostar, topotekan, paklitaksel, docetaksel, epotiloni, tamoksifen, 5-fluorouracil, metokstrekat, temozolomid, ciklofosfamid, SCH 66336, R115777, L778.123, BMS 214662, Iressa, Tarceva, antitela na EGFR, Gleevec™, intron ara-C, adriamicin, citoksan, gemcitabin, uracil mustard, hlorometin, ifosfamid, melfalan, hlorambucil, pipobroman, trietilenmelamin, trietilentiofosforamin, busulfan, karmustin, lomustin, streptozocin, dakarbazin, floksuridin, citarabin, 6-merkaptopurin, 6-tioguanin, fludarabin fosfat, oksaliplatin, leukovirin, ELOXATIN™, pentostatin, vinblastin, vinkristin, vindezin, bleomicin, daktinomicin, daunorubicin, doksorubicin, epirubicin, idarubicin, mitramicin, deoksikoformicin, mitomicin-C, L-asparaginaza, teniposide 17.alfa.-etinilestradiol, dietilstilbestrol, testosteron, prednizon, fluoksimestaron, dromostanolon propionat, testolakton, megestrolacetat, metilprednizolon, metiltestosteron, prednizolon, triamcinolon, hlorotrianizen, hidroksiprogestaron, aminoglutetimid, estramustin, medroksiprogesteronacetat, leuprolid, flutamid, toremifen, gozerelin, cisplatin, karboplatin, hidroksiurea, amsakrin, prokarbazin, mitotan, mitoksantron, levamizole, navelbene, anastrazol, letrazol, kapecitabin, reloksafin, droloksafin, heksametilmelamin, avastin, herceptin, beksar, velkad, zevalin, trizenoks, kseloda, vinorelbin, porfimer, erbituks, lipozomal, tiotepa, altretamin, melfalan, trastuzumab, lerozole, fulvestrant, eksemestan, fulvestrant, ifosfomid, rituksimab, C225, kampat, klofarabin, kladribin, afidikolon, rituksan, sunitinib, dazatinib, tezacitabin, Sml1, fludarabin, pentostatin, triapin, didoks, trimidoks, amidoks, 3-AP, MDL-101,731 i bendamustin (Treanda).

[0116] Primeri hemioterapeutika obuhvataju inhibitore proteozoma (npr bortezomib), talidomid, revlimid i agense koji oštećuju DNK poput melfalana, doksorubicina, ciklofosfamida, vinkristina, etopozida, karmustina i sličnih.

[0117] Primeri steroida uključuju kortikosteroide poput deksametazona ili prednizona.

[0118] Primeri Bcr-Abl inhibitora obuhvataju jedinjenja i njihove farmaceutski prihvatljive soli iz rodova i vrsta koji su opisani u SAD patentnom spisu br. 5,521,184, Internacionalnom patentom spisu WO 04/005281 i SAD patentnom spisu br.60/578,491.

[0119] Primeri pogodnih inhibitora Flt-3 obuhvataju jedinjenja i njihove farmaceutski prihvatljive soli koji su opisani u Internacionalnom patentim spisima WO 03/037347, WO 03/099771, i WO 04/046120.

[0120] Primeri pogodnih inhibitora RAF obuhvataju jedinjenja i njihove farmaceutski prihvatljive soli koji su opisani u Internacionalnom patentim spisima WO 00/09495 i WO 05/028444.

[0121] Primeri pogodnih inhibitora FAK obuhvataju jedinjenja i njihove farmaceutski prihvatljive soli koji su opisani u Internacionalnom patentim spisima WO 04/080980, WO 04/056786, WO 03/024967, WO 01/064655, WO 00/053595, i WO 01/014402.

[0122] Primeri pogodnih inhibitora mTOR obuhvataju jedinjenja i njihove farmaceutski prihvatljive soli koji su opisani u Internacionalnom patentom spisu WO 2011/025889.

[0123] U pojedinim primerima primene, jedinjenja predmetnog pronalaska se mogu upotrebljavati u kombinaciji sa jednim ili sa više drugih inhibitora kinaza uključujući imatinib, naročito za lečenje pacijenata rezistentnih na imatinib ili druge inhibitore kinaza.

[0124] U pojedinim primerima primene, jedinjenja predmetnog pronalaska se mogu upotrebiti u kombinaciji sa hemioterapeutikom za tretman kancera poput multiplog mijeloma, čime se može poboljšati odgovor na tretman u odnosu na odgovor koji se zapaža prilikom samostalnog tretmana hemioterapijskim agensom, a bez pogoršanja njegovih toksičnih efekata. Primeri dodatnih farmaceutskih agenasa koji se koriste u tretmanu mogu, na primer, obuhvatati, bez ograničenja, melfalan, melfalan plus prednizon [MP], doksorubicin, deksametazon i Velcade (bortezomib). Dalja dodatna sredstva koja se koriste u tretmanu multiplog mijeloma obuhvataju inhibitore Bcr-Abl, Flt-3, RAF i FAK kinaza. Aditivni ili sinergistički efekti predstavljaju poželjne ishode kombinovanja inhibitora PI3K predmetnog pronalaska sa dodatnim agensima. Pored toga, otpornost ćelija multiplog mijeloma na agense poput deksametazona se može revertovati nakon tretmana sa inhibitorom PI3K predmetnog pronalaska. Agensi se mogu kombinovati sa jedinjenjem predmetnog pronalaska u jednom ili u kontinualnom doznom obliku, ili se pak agens i jedinjenje mogu primenjivati istovremeno ili sekvencijalno u posebnim doznim oblicima.

[0125] U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, kortikosteroid poput deksametazona se primenjuje pacijentu u kombinaciji sa jedinjenjima predmetnog pronalaska, pri čemu se deksametazon primenjuje intermitentno nasuprot kontinuiranoj primeni.

[0126] U pojedinim daljim primerima primene predmetnog pronalaska, kombinacije jedinjenja pronalaska sa drugim terapijskim agensima se može primeniti kod pacijenta pre, tokom i/ili nakon transplantacije kosne srži ili transplantacije matičnih ćelija.

Farmaceutske formulacije i dozni oblici

[0127] Kada se upotrebljavaju kao farmaceutici, jedinjenja predmetnog pronalaska se mogu primenjivati u vidu farmaceutskih preparata. Navedeni preparati se mogu pripremati na način dobro poznat u farmaceutskoj struci, kao što se mogu i primeniti na različite načine u zavisnosti od toga da li je potreban lokalni ili sistemski tretman i koje se podruje tretira. Primena može biti lokalna (uključujući transdermalnu, epidermalnu, oftalmološku i primenu kroz mukozne membrane uključujući intranazalnu, vaginalnu i rektalnu isporuku), pulmonarna (npr inhalacijom ili insuflacijom praha ili aerosola, uključujući upotrebu nebulizatora; intratrahealna ili intranazalna), oralna ili parenteralna. Parenteralna primena obuhvata intravenoznu, intraarterijalnu, subkutanu, intraperitonealnu intramuskularnu ili primenu putem injekcije ili infuzije; ili intrakranijalnu, npr intratekalnu ili intraventikularnu primenu. Parenteralna primena može predstavljati primenu jedne bolus doze ili može, na primer, označavati kontinuiranu perfuziju i upotrebu pumpe. Farmaceutski preparati i formulacije za topikalnu primenu mogu podrazumevati transdermalne flastere, masti, losione, kreme, gelove, kapi, supozitorije, sprejeve, tečnosti i praškove. Mogu biti poželjni ili pak neophodni uobičajeni farmaceutski nosači, vodene, uljane ili osnove u prahu, sredstva za zgušnjavanje i slično. Predmetno pronalazak takođe obuhvata farmaceutske preparate koje sadrže, kao aktivni sastojak, jedinjenje predmetnog pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u kombinaciji sa jednim ili sa više farmaceutski prihvatljivih nosača (ekscipijenasa). U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, preparat je pogodan za topikalnu primenu. U pripremi preprarata predmetnog pronalaska, aktivni sastojak se u principu meša sa ekscipijensom, razblažuje ekscipijensom ili se zatvara unutar takvog nosača u obliku, na primer, kapsula, kesica, papirnih omotača ili drugih spremnika. Kada ekscipijens služi kao razblaživač, on može predstavljati čvrst, polu-čvrst ili tečni materijal, koji deluje kao sredstvo, nosač ili medijum za aktivni sastojak. Tako, preparati mogu biti u obliku tableta, pilula, praškova, pastila, kesica, kašeta, eliksira, suspenzija, emulzija, rastvora, sirupa, aerosola (u čvrstom ili tečnom medijumu), masti koje sadrže, na primer, do 10 težinskih %aktivnog jedinjenja, mekih i tvrdih želatinskih kapsula, supozitorija, sterilnih rastvora za injeciranje, kao i sterilno upakovanih prahova.

[0128] U pripremanju formulacije, aktivno jedinjenje može biti samleveno tako da se obezbedi odgovarajuća veličina čestica pre kombinovanja sa drugim sastojcima. Ukoliko je aktivno jedinjenje suštinski nerastvorno, ono može biti samleveno do veličine čestica manjih od 200 meša. Ukoliko je aktivno jedinjenje uglavnom rastvorljivo u vodi, veličina čestica može biti podešena mlevenjem tako da se obezbedi suštinski uniformna distribucija u formulaciji, npr oko 40 mreša.

[0129] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti usitnjena upotrebom poznatih postupaka mlevenja poput vlažnog mlevenja, a da bi se dobile čestice veličine pogodne za pripremu tablete i drugih tipova formulacija. Fino usitnjeni (sa nanočesticama) preparati jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti pripremljeni postupcima poznatim u stanju tehnike, pogledati na primerInternationalnu patentnu prijavu br. WO 2002/000196.

[0130] Pojedini primeri pogodnih ekscipijenasa podrazumevaju laktozu, dekstrozu, saharozu, sorbitol, manitol, skrobove, gumu akacija, kalcijum fosfat, alginate, tragakant, želatin, kalcijum silikat, mikrokristalnu celulozu, polivinilpirolidon, celulozu, vodu, sirup i metil celulozu. Formulacije mogu dodatno uključivati: lubrikante poput talka, magnezijum stearata i mineralnog ulja; sredstva za vlaženje; agense za emulgovanje i za resuspendovanje; konzervanse poput metil- i propilhidroksi-benzoata; zaslađivače; kao i sredstva za korigovanje ukusa. Preparati predmetnog pronalasku mogu biti formulisani i tako da obezbedi brzo, produženo ili odloženo oslobađanje aktivnog sastojka nakon davanja pacijentu, a upotrebom postupaka koji su dobro poznati u stanju tehnike.

[0131] Preparati predmetnog pronalaska mogu biti formulisani u jedinični dozni oblik, pri čemu svaka doza može sadržavati od oko 5 do oko 1000 mg (1 g), a uobičajenije od oko 100 do oko 500 mg aktivnog sastojka. Izraz "oblici dozne jedinice" se odnosi na fizički odvojene dozne jedinice koje su pogodne za jedinično doziranje kod humanih subjekata ili drugih sisara, pri čemu svaka dozna jedinica sadrži prethodno određenu količinu aktivnog materijala koja je preračunata tako da se proizvede željeni terapijski efekat i koja je udružena sa pogodnim farmaceutskim ekscipijensom.

[0132] U pojedinim primerima primene, preparati predmetnog pronalaska sadrže od oko 5 do oko 50 mg aktivnog sastojka. Prosečno iskusnom stučnjaku će biti jasno da navadeni apsekt podrazumeva da preparati mogu sadržavati od oko 5 do oko 10, od oko 10 do oko 15, od oko 15 do oko 20, od oko 20 do oko 25, od oko 25 do oko 30, od oko 30 do oko 35, od oko 35 do oko 40, od oko 40 do oko 45 ili od oko 45 do oko 50 mg aktivnog sastojka.

[0133] U pojedinim primerima primene, preparati predmetnog pronalaska sadrže od oko 50 do oko 500 mg aktivnog sastojka. Prosečno iskusnom stučnjaku će biti jasno da navadeni apsekt podrazumeva da preparati mogu sadržavati od oko 50 do oko 100, od oko 100 do oko 150, od oko 150 do oko 200, od oko 200 do oko 250, od oko 250 do oko 300, od oko 350 do oko 400 ili od oko 450 do oko 500 mg aktivnog sastojka.

[0134] U pojedinim primerima primene, preparati predmetnog pronalaska sadrže od oko 500 do oko 1000 mg aktivnog sastojka. Prosečno iskusnom stučnjaku će biti jasno da navadeni apsekt podrazumeva da preparati mogu sadržavati od oko 500 do oko 550, od oko 550 do oko 600, od oko 600 do oko 650, od oko 650 do oko 700, od oko 700 do oko 750, od oko 750 do oko 800, od oko 800 do oko 850, od oko 850 do oko 900, od oko 900 do oko 950 ili od oko 950 do oko 1000 mg aktivnog sastojka.

[0135] Moguće je upotrebljavati slične doze jedinjenja predmetnog pronalaska koje su opisane u postupcima i upotrebama predmetnog pronalaska.

[0136] Aktivno jedinjenje može biti efikasno u širokom opsegu doza, ali se u principu primenjuje u farmaceutski efikasnoj količini. Podrazumeva se, međutim, da će količina jedinjenja koja se primenjuje dobrim delom biti procenjena od strane odinirajućeg lekara, a u zavisnosti od relevantnih okolnosti, uključujući tipa stanja koje se leči, odabrani način primene, tip konkretnog jedinjenja koje se primenjuje, kao i starost, težinu i odgovor pojedinačnog pacijenta, ozbiljnost simptoma kod pacijenta i slično.

[0137] Za dobijanje čvrstih kompozicija poput tableta, glavni aktivni sastojak je mešan sa farmaceutskim ekscipijensom tako da se najpre obrazuje čvrsti predformulacijski sastav koji sadrži homogenu smešu jedinjenja predmetnog pronalaska. Navođenjem da je navedni predformulacijskog sastava homogen, podrazumeva se da je aktivni sastojak u principu bio ravnomerno dispergovan po celom preparatu, a tako da se preparat lako može podeliti na jednako efikasne oblike doznih jedinica poput tableta, pilula i kapsula. Ovakva čvrsta preformulacija je zatim deljena u jedinične doze prethodno opisanih vrsta koje su sadržavale, na primer, od oko 0,1 do oko 1000 mg aktivnog sastojka predmetnog pronalaska.

[0138] Tablete ili pilule predmetnog pronalaska mogu biti obložene ili na drugi način usložnjene tako da budu u doznom obliku čija je prednost tipa produženog delovanja. Na primer, tableta ili pilula može sadržavati dozu aktivnog sastojka kao unutrašnju ili spoljašnju komponentu doznog oblika, pri čemu spoljašnja može predstavljati omotač unutrašnje. Navedene dve komponente mogu biti razdvojene enteričkim slojem čiji je cilj sprečavanje razlaganja u stomaku, čime se zapravo omogućava da unutrašnja komponenta prođe netaknuta u duodenum ili da se odloži njeno oslobađanje. Različiti materijali se mogu upotrebljavati za pripremu navedenog enteričnog sloja ili obloge, poput brojnih polimernih kiselina i smešapolimernih kiselina sa materijalima kao što su šelak, cetil alkohol i celuloza acetat.

[0139] Tečni oblici koji sadrže jedinjenja i preparate predmetnog pronalasku, a koji mogu biti primenjeni oralno ili injekcijom, podrazumevaju vodene rastvore, sirupe prikladnog ukusa, vodene ili uljane suspenzije i aromatizovane emulzije sa jestivim uljima poput pamučnog ulja, sezamovog ulja, ulja kokosa ili ulja kikirikija, kao i eliksire i slične farmaceutske nosače.

[0140] Preparati za inhalaciju ili insuflaciju uključuju rastvore i suspenzije u farmaceutski prihvatljivim vodenim ili organskim rastvaračima, ili pak njihove smeše, kao i prahove. Tečni ili čvrsti preparati mogu sadržati pogodne farmaceutski prihvatljive ekscipijense poput onih koji su prethodno opisani. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, preparati se primenjuju oralnim ili nazalnim respiratornim putem zarad lokalnog ili sistemskog efekta. Preparati mogu biti nebulizovani upotrebom inertnih gasova. Nebulizovani rastvori mogu biti udahnuti direktno iz uređaja za raspršivanje (nebulizatora) ili uređaj za raspršivanje može biti povezan sa maskom za lice, prekrivačem ili pak mašinom sa udisanje sa intermitentnim pozitivnim pritiskom. Rastvori, suspenzije ili praškasti preparati mogu biti primenjeni oralno ili nazalno upotrebom aparata koji služi za isporuku formulacije na odgovarajući način.

[0141] Topikalne formulacije mogu sadržavati jedan ili više konvencionalnih nosača. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, masti može sadržati vodu i jedan ili više hidrofobnih nosača izabranih iz grupe koju čine, na primer, tečni parafin, polioksietilen alkil etar, propilen glikol, beli vazelin i slični. Nosači preparata u vidu krema mogu podrazumevati vodenu osnovu u kombinaciji sa glicerolom i jednim ili sa više drugih komponenata, npr glicerinmonostearatom, PEG glicerinmonostearatom i cetilstearil alkoholom. Gelovi se mogu formulisati korišćenjem izopropil alkohola i vode, a pogodno je da isti budu u kombinaciji sa drugim komponentama kao što su, na primer, glicerol, hidroksietil celuloza i slični. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, topikalne formulacije sadrže najmanje oko 0,1, najmanje oko 0,25, najmanje oko 0,5, najmanje oko 1, najmanje oko 2 ili najmanje oko 5 težinskih procenata jedinjenja pronalaska. Topikalne formulacije mogu biti upakovani u tube, na primer, tube od 100 g koje dalje mogu biti upakovane sa uputstvima za tretman odabrane indikacije, na primer, psorijaze ili nekog drugog oboljenja kože.

[0142] Količina jedinjenja ili preparata koja će se primenti pacijentu će varirati u zavisnosti od tipa jedinjenja koje se primenjuje, svrhe primene tipa profilakse ili terapijskog tretmana, kao i od stanja pacijenta, načina primene i sličnog. U terapijskim primenama, preparati se mogu primenjivati kod pacijenta koji je već oboleo, a u količini koja je dovoljna da se navedeno oboljenje izleči ili da se bar delimično zaustave simptomi bolesti i njihove komplikacije. Efektivne doze će zavisiti od težine kliničke slike oboljenja koje se tretira, kao i od procene ordinirajućeg kliničara, a opet u zavisnosti od faktora kao što su to ozbiljnost bolesti, starost, težina i opšte stanje pacijenta i slični.

[0143] Preparati koji se primenjuju pacijentu mogu biti u vidu farmaceutskih preparata koji su prethodno opisani. Navedeni preparati mogu biti sterilisani konvencionalnim tehnikama sterilizacije, ili pak mogu biti sterilisani filtriranjem. Vodeni rastvori se mogu pakovati za upotrebu kao takvi ili kao liofilizovani preparati koji se zatim mešaju sa sterilnim vodenim nosačem pre primene. Uobičajeno je da pH jedinjenja preparata bude između 3 i 11, poželjnije od 5 do 9 i prioritetno od 7 do 8. Podrazumeva se takođe da upotreba izvesnih navedenih ekscipijenasa, nosača ili stabilizatora može dovesti do obrazovanja farmaceutskih soli.

[0144] Terapijska doza jedinjenja predmetnog pronalaska može varirati shodno, na primer, tipu upotrebe za koji se tretman planira, kao i u zavisnosti od načina primene jedinjenja, zdravlja i stanja pacijenta, a što se u suštini zavisi od procene ordinirajućeg lekara. Proporcija ili koncentracija jedinjenja pronalaska u farmaceutskoj kompoziciji može varirati u zavisnosti od brojnih faktora, uključujući dozu, hemijske karakteristike (npr hidrofobnost) i načina davanja jedinjenja. Na primer, jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti obezbeđena u vidu vodenih fiziološki puferskih rastvora koji sadrže od oko 0,1 do oko 10% m/v jedinjenja za parenteralnu primenu. Neki uobičajeni opsezi doza su od oko 1 µg/kg do oko 1 g/kg telesne težine dnevno. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, opseg doza je od oko 0,01 mg/kg do oko 100 mg/kg telesne težine dnevno. Doza će verovatno biti određena u skladu sa varijablama poput tipa i stepena napredovanja bolesti ili poremećaja, opšteg zdravstvenog stanja pojedinog pacijenta, relativne biološke efikasnosti odabranog jedinjenja, formulacije ekscipijensa, kao i načina primene. Efektivne doze se mogu ekstrapolirati sa krive zavisnosti doza i biološkog odgovora koje se mogu dobiti in vitro ili u modelima test sistema na životinjama.

[0145] Preparati pronalaska dalje mogu sadržavati jedan ili više dodatnih farmaceutskih agenasa poput hemioterapeutika, steroida, anti-inflamatornih jedinjenja ili imunosupresiva, a primeri ovakvih agenasa su navedeni u prethodnom tekstu.

Obeležena jedinjenja i postupci testiranja

[0146] Drugi aspekt predmetnog pronalaska se odnosi na obeležena jedinjenja predmetnog pronalaska (radioaktivno-obeležena, fluorescentno-obeleženaitd) do koristi ne samo za tehnike medicinskih snimanje, veči za ekspeerimentalne, kako in vitro i in vivo, studije lokalizacije i i kvantifikacije PI3K u uzorcima tkiva, uključujući tkiva čoveka, kao i za identifikaciju liganada PI3K inhibicijom vezivanja obeleženog jedinjenja. Prema tome, predmetni pronalazak obuhvata PI3K eseje koji sadrže ovakva obeležena jedinjenja.

[0147] Predmetni pronalazak dalje obuhvata izotopski obeležena jedinjenja predmetnog pronalaska. Termin "izotopsko" ili "radioaktivno-obeleženo" jedinjenje podrazumeva jedinjenje predmetnog pronalaska u kome je jedan ili više atoma zamenjen ili supstituisan sa atomom koji ima atomsku masu ili maseni broj različit od atomske mase ili masenog broja atoma koji se uobičajeno nalazi u prirodi (odnosno koji se javlja u prirodi). Pogodni radionuklidi koji mogu biti inkorporisani u jedinjenjima predmetnog pronalaska podrazumevaju, ali nisu na njih ograničeni,<3>H (označen i kao T za tricijum),<11>C,<13>C,<14>C,<13>N,<15>N,<15>O,<17>O,<18>O,<18>F,<35>S,<36>Cl,<82>Br,<75>Br,<76>Br,<77>Br,<123>J,<124>J,<125>J i<131>J. Radionukleotid koji će biti inkorporisan u navedena radioaktivno-obeleženo jedinjenja će zavisiti od specifične primene tog radioaktivno-obeleženo jedinjenja. Na primer, za in vitro PI3K obeležavanje i studije kompeticije, najkorisnijim se u principu razmatraju jedinjenja koja sadrže<3>H,<14>C,<82>Br,<125>J,<131>J ili<35>S. Za primenu u medicinskim snimanjima, najkorisnijim se smatraju jedinjenja koja sadrže<11>C,<18>F,<125>J,<123>J,<124>J,<131>J,<75>Br,<76>Br ili<77>Br.

[0148] Podrazumeva se da "radioaktivno obeleženo" ili "obeleženo jedinjenje" označava jedinjenje u koje je inkorporisan bar jedan radionuklid. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, radionukleotid je izdabran iz grupe koju čine<3>H,<14>C,<125>J,<35>S ili<82>Br. U pojedinim primerima primene predmetnog pronalaska, jedan ili više H-atoma bilo kog jedinjenja koje je opisano predmetnim pronalaskom je zamenjeno atomom deuterijuma.

[0149] Predmetni pronalazak dalje može obuhvatati postupke sinteze navednih jedinjenja, odnosno ugradnju radioaktivnih izotopa u jedinjenja predmetnog pronalaska. Sintetski postupci za ugradnju radioaktivnih izotopa u organska jedinjenja su dobro poznati u stanju tehnike, a prosečno iskusan stručnjak u će biti u stanju da lako odredi postupke koji se mogu primenti za određena jedinjenja predmetnog pronalaska.

[0150] Obeleženo jedinjenje predmetnog pronalaska se može upotrebljavati u esejima skrininga za identifikaciju/procenu efikasnosti jedinjenja. Na primer, sposobnost obeleženog novosintetisanog ili već identifikovanog jedinjenje (označeno kao jedinjenje koje se testira) da se vezuje za PI3K se može proceniti praćenjem varijacija u njegovoj koncentraciji prilikom kontaktiranja sa PI3K, a posredstvom praćenja koncentracije obeleživača. Na primer, jedinjenje koje se testira (obeleženo) se može proceniti shodno njegovoj sposobnosti da smanji vezivanje drugog jedinjenja za koje je poznato da se vezuje za PI3K (tj standardnog jedinjenja). Shodno tome, sposobnost kompeticije jedinjenja koje se testira u odnosu na standarndo jedinjenje, npr u vezivanju za PI3K direktno je u korelaciji sa njegovim afinitetom vezivanja. Nasuprot navedenom, u pojedinim drugim esejima skrininga, obeležena standardna jedinjenja mogu biti obeležena, dok jedinjenja koja se testiraju koriste kao neobeležena. Tom prilikom, prati se koncentracija obeleženog standardnog jedinjenjem u cilju procene kompeticije između standardnog i jedinjenja koje se testira, a zarad određivanja relativnog afiniteta cezivanja jedinjenja koje se testira.

Komercijalna pakovanja

[0151] Predmetni pronalazak takođe obuhvata farmaceutska komercijalna pakovanja koja su korisna, na primer, u tretmanu ili prevenciji PI3K-asociranih oboljenja ili poremećaja poput kancera, pri čemu komercijalni paket sadrži jedan ili više spremnika sa farmaceutskim preparatom koji sadrži terapijski efikasnu količinu jedinjenja pronalaska. Navedni kompleti mogu dalje sadržavati, ukoliko je to potrebno, jednu ili više različitih konvencionalnih komponenti farmaceutskih kompleta, kao što su to, na primer, posude sa jednim ili sa više farmaceutski prihvatljivih nosača, dodatni spremnici itd, a što je dobro poznato stručnjacima iz oblasti. U komplet mogu biti uključena i uputstva, bilo u vidu papira ili u vidu nalepnica, koja ukazuju na količinu komponenti koja se primenjuju, a navedena uputstva mogu biti upakovana zajedno sa smernicama za primenu i/ili sa smernicama za mešanje komponenti. Predmetni pronalazak će dalje biti detaljnije opisan putem specifičnih primera. Primeri koji slede su navedeni u ilustrativne svrhe i bez namere da se predmetni pronalazak ograniči na bilo koji način. Stručnjaci iz oblasti će lako moći da izdvoje parametre koji nisu od kritične važnosti, odnosno parametre koji se mogu menjati ili modifikovati tako da se suštinski dobije isti ishod prilikom sinteze ili testiranja jedinjenja predmetnog pronalaska. Utvrđeno je da jedinjenja navedena u Primerima predmetnog pronalaska prestavljaju inhibitore PI3K, a na osnovu rezultata dobijenih u najmanje jednom testu predmetne specifikacije.

PRIMERI

[0152] Ukoliko nije drugačije navedeno u tekstu koji sledi, primeri jedinjenja koja sadrže jedan ili više hiralnih centara, pripremljeni su u vidu racemata ili izomernih smeša. Namera naznačenih stehiometrija sintetisanih soli za bilo koje od jedinjenja predmetnog pronalaska, je da se ukaže na verovatnu stehiometriju, odnosno trebalo bi je tumačiti tako da se ne isključuje mogućnost obrazovanja soli sa drugačijim stehiometrijama. Skraćenice "h" i "min" se odnose na sat(e) i minut(e), tim redom.

[0153] Jedinjenja iz primera 355-358 su jedinjenja prema pronalasku. Druga jedinjenja su opisana kao reference.

Primer 1.1-{1-[5-Hloro-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-2-metoksi-4-metilfenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin bis(tritluoroacetat)

[0154]

Korak 1.1-(5-Hloro-2-hidroksi-3-jodo-4-metilfenil)etanon

[0155]

[0156] U mešani rastvor 1-(5-hloro-2-hidroksi-4-metilfenil)etanona (firme Oakwood, 50,0 g; 271 mmol) u sirćetnoj kiselini (300 ml) je dodat N-jodosukcinimid (73,1 g; 325 mmol), pa je dobijena smeša mešana na grejaču, na temperaturi između 60 ~ 80°C tokom 3,5 sata. Smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i mešana preko noći. U smešu je Dalje je dodata voda (500 ml) u porcijama, a to je dovelo do obrazovanja tamne čvrste supstance. Nakon mešanja od 10 minuta, čvrsta supstanca je izdvojena filtriranjem, pa je isprana vodom. Svetlo do tamno smeđa čvrsta supstanca je osušena pod vakuumom tokom 4 sata i dalje na vazduhu tokom vikenda, a da bi se dobilo 81,3 g (97%) željenog proizvoda. LCMS analiza, izračunato za C9H9ClJO2(M+H)<+>: m/z = 310,9; utvrđeno: 311,0.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 13,21 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 2,65 (s, 3H), 2,63 (s, 3H) ppm.

Korak 2.1-(5-Hloro-3-jodo-2-metoksi-4-metilfenil)etanon

[0157]

[0158] Kalijum karbonat (72,4 g; 524 mmol) je dodat u smešu 1-(5-hloro-2-hidroksi-3-jodo-4-metilfenil)etanona (81,3 g; 262 mmol) i metil jodida (19,6 ml; 314 mmol) u N,N-dimetilformamidu (250 ml). Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 sata. Dalje je dodata voda (500 ml), pa je mešanje smeše nastavljeno tokom 15 minuta. Tamna čvrsta supstanca je zatim izdvojena filtriranjem i osušena in vacuo da bi se dobilo 42,3 g željenog proizvoda. Filtrat je dalje ekstrahovan sa EtOAc (4x). Spojeni filtrati su isprani vodom (2x) i koncentrovanim rastvorom soli, pa su osušeni (MgSO4), profiltrirani i koncentrovani. Čvrsta supstanca je potom osušena in vacuo i tako je dobijeno dodatnih 37,2 g željenog proizvoda. Proizvod je dalje iskorišćen bez dodatnog prečišćavanja. LCMS analiza, izračunato za C10H11CIJO2(M+H)<+>: m/z = 324,9; utvrđeno: 325,0.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7,62 (s, 1H), 3,78 (s, 3H), 2,65 (s, 3H), 2,62 (s, 3H) ppm.

Korak 3. terc-Butil 3-(3-acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)azetidin-1-karboksilat

[0159]

[0160] Cink (1,71 g; 26,2 mmol) je resuspendovan u N,N-dimetilformamidu (45,0 ml), pa je dodat 1,2-dibrometan (210 µl; 2,5 mmol). Smeša je zatim grejana na 60°C tokom 10 minuta i potom je ohlađena do sobne temperature. Dalje je dodat hlorotrimetilsilan (330 µl; 2,6 mmol), pa je smeša ponovo mešana na 60°C tokom 10 minuta i ohlađena do sobne temperature. Nakon toga, dodat je i rastvor terc-butil 3-jodoazetidin-1-karboksilata (firme Oakwood, 6,25 g; 22,1 mmol) u N,N-dimetilformamidu (5,0 ml), pa je smeša mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Zatim su dodati, redom, 1-(5-hloro-3-jodo-2-metoksi-4-metilfenil)etanon (5,00 g; 15,4 mmol), tri-(2-furil)fosfin (358 mg; 1,54 mmol) i tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (0,70 g; 0,77 mmol) i reakciona smeša je zagrejana do 70°C i mešana preko noći. Smeša je potom ohlađena do sobne temperature i preraspodeljena između etil acetata (EtOAc) i zasićenog vodenog rastvora NH4Cl. Po razdvajanju slojeva, vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x). Organski slojevi su spojeni, isprani vodom i koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom MgSO4i koncentrovani. Ostatak je prečišćen na silika gelu, eluiranjem sa 0-30% EtOAc u heksanima. Tako je dobijeno 3,0 g (55%) željenog proizvoda u vidu narandžaste čvrste supstance. LCMS analiza, izračunato za C18H24ClNO4Na (M+Na)<+>: m/z = 376,1; utvrđeno: 376,0.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7,52 (s, 1H), 4,32, (m, 2H), 4,16 (m, 3H), 3,66 (s, 3H), 2,59 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 1,45 (s, 9H) ppm.

Korak 4. terc-Butil 3-[3-hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]azetidin-1-karboksilat

[0161]

[0162] U rastvor terc-butil 3-(3-acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)azetidin-1-karboksilata (1,3 g; 3,7 mmol) u metanolu (20 ml) je, na 0°C i uz mešanje, dodat natrijum tetrahidroborat (0,167 g; 4,41 mmol), pa je smeša mešana na 0~ 5°C tokom 1 sata. Reakcija je zatim zaustavljena dodavanjem vode i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (3x). Spojeni ekstrakti su osušeni upotrebom MgSO4, profiltrirani i koncentrovani, a da bi se dobilo 1,3 g (100%) željenog proizvoda. LCMS analiza, izračunato za C18H26ClNO4Na (M+Na)<+>: m/z = 378,2; utvrđeno: 378,1.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7,37 (s, 1H), 5,10 (q, 1H), 4,30 (m, 2H), 4,14 (m, 3H), 3,63 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 1,48 (d, 3H), 1,44 (s, 9H) ppm.

Korak 5. terc-Butil 3-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]azetidin-1-karboksilat

[0163]

[0164] U laboratorijski balon je odmeren cijanurin-hlorid (firme Aldrich; 1,22 g; 6,62 mmol), pa je dodat N,N-dimetilformamid (0,512 ml; 6,62 mmol). Nakon mešanja od nekoliko minuta, dodat je rastvor tercbutil 3-[3-hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]azetidin-1-karboksilata (1,5 g; 4,2 mmol) u metilen hloridu (30 ml). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dalje je dodata voda, a zatim je smeša razblažena dihlorometanom i razdvojeni su slojevi. Organske feakcije su isprane zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa su osušene upotrebom MgSO4i koncentrovane. Dobijeni ostatak je prečišćen na silika gelu, eluiranjem sa 0-35% EtOAc u heksanima, a da bi se dobio željeni proizvod (1,36 g; 86%). LCMS analiza, izračunato za C13H17ClNO (M-CI-Boc+H)<+>: m/z = 238,1; utvrđeno: 238,1.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7,46 (s, 1H), 5,44, (q, 1H), 4,32 (m, 2H), 4,18 - 4,10 (m, 3H), 3,67 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 1,79 (d, 3H), 1,44 (s, 9H) ppm.

Korak 6. terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-karboksilat

[0165]

[0166] Na sobnoj temperaturi, u suspenziju 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (firme ChemBridge, 0,59 g; 4,0 mmol) u N,N-dimetilformamidu (20 ml) je dodat natrijum hidrid (0,32 g; 8,0 mmol). Dobijena smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi 25 minuta, a tokom mešanja suspenzija je postajala skoro bistar rastvor. U dobijenu smešu je Dalje je dodat rastvor terc-butil 3-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]azetidin-1-karboksilata (1,35 g; 3,61 mmol; iz Primera 1, korak 5) in N,N-dimetilformamidu (10 ml). Smeša je zatim mešana na 50°C preko noći. Nakon hlađenja, smeša je razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc (2x). Spojeni ekstrakti su isprani vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa su osušeni upotrebom MgSO4i koncentrovani. Dobijeni ostatak je prečišćen na silika gelu, eluiranjem sa 0-10% MeOH u dihlorometanu i tako je dobijeno 1,03 g (59%) željenog proizvoda u vidu žute gumaste supstance. Racemski proizvodi su zatim naneti na Phenomenex Lux-Cellulose 2 kolonu (21,1 x 250 mm, veličina čestica 5 mikrona), pa su eluiranji sa 10% etanolom u heksanima (brzina protoka 18 ml/min, količina nanetog materijala od 4 mg po injeciranju, a da bi se obezbedila dva enantiomera. Retenciono vreme prvog pika je bilo 8,34 min, dok je retenciono vreme za drugi pik iznosilo 10,92 min. Pik 1 (463 mg), LCMS analiza, izračunato za C24H32ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 487,2; utvrđeno: 487,1.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8,21 (s, 1H), 7,37 (s, 1H), 6,30, (q, 1H), 5,40 (s, 2H), 4,23 (m, 2H), 4,17 ~ 4,00 (m, 3H), 3,57 (s, 3H), 2,58 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 1,76 (d, 3H), 1,37 (s, 9H) ppm.

Korak 7.1-[1-(3-Azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorid

[0167]

[0168] U rastvor terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-karboksilata (318 mg; 0,653 mmol) (prethodno navedeni pik 1) u metilen hloridu (3,2 ml) je dodat 4,0 M rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (1,6 ml; 6,5 mmol). Dobijena smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 75 minuta. Dalje su upareni rastvarači, a ostatak je osušen in vacuo i tako je dobijeno 0,30 g željenog proizvoda u vidu bis-HCl soli. LCMS analiza, izračunato za C19H24ClN6O (M+H)<+>: m/z = 387,2; utvrđeno: 387,1.

Korak 8.1-{1-[5-Hloro-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-2-metoksi-4-metilfenil]eti/}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin bis(trifluoroacetat)

[0169]

[0170] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (58 mg; 0,13 mmol), acetona (18,5 µl; 0,252 mmol) i trietilamina (54,5 µl; 0,391 mmol) u metilen hloridu (1,0 ml) je dodata smola natrijum triacetoksiborohidrida (108 mg; 0,249 mmol). Dobijena smeša je zatim mešana tokom 3 sata na sobnoj temperaturi, pa je smeša profiltrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C 18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% TFA, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobilo 50 mg (60%) željenog proizvoda u vidu TFA soli. LCMS analiza, izračunato za C22H30ClN6O (M+H)<+>: m/z = 429,2; utvrđeno: 429,1. Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8,47 (s, 1H), 7,46 (s, 1H), 6,29 (q, J = 6,9 Hz, 1H), 4,52 (m, 2H), 4,21 (m, 1H), 4,15 (t, J = 9,8 Hz, 1H), 4,06 (t, J = 9,7 Hz, 1H), 3,53 (s, 3H), 3,39 ~ 3,27 (m, 1H), 2,61 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,75 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,11 (dd, J = 6,0, 3,8 Hz, 6H) ppm.

Primer 2.1-{1-[3-(1-Acetilazetidin-3-il)-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin trifluoroacetat

[0171]

Korak 1.1-[1-(3-Azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihlorhidrat

[0172]

[0173] U rastvor racemskog terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-karboksilata (146 mg; 0,300 mmol) (racemski intermedijer iz Primera 1, korak 6) u metilen hloridu (1,5 ml) je dodat 4,0 M rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (0,75 ml; 3,0 mmol). Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 2 h, rastvarači su upareni, a dobijeni ostatak je osušen in vacuo i tako je dobijeno 138 mg željenog proizvoda u vidu HCI soli. LCMS analiza, izračunato za C19H24ClN6O (M+H)<+>: m/z = 387,2; utvrđeno: 387,1.

Korak 2.1-{1-[3-(1-Acetilazetidin-3-il)-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin trifluoroacetat

[0174]

[0175] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (20,0 mg; 0,0435 mmol; iz Primera 2, korak 1) i trietilamina (30,3 µl; 0,217 mmol) u metilen hloridu (0,20 ml), dodat je acetil hlorid (6,18 µl; 0,0870 mmol). Dobijena smeša je zatim mešana preko noći na sobnoj temperaturi, pa su rastvarači upareni, a sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% TFA, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod u vidu TFA soli. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C21H26ClN6O2(M+H)<+>: m/z = 429,2; utvrđeno: 429,1.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,35 (s, 1H), 7,34 (s, 1H), 6,26 (q, 1H), 4,50 (m, 1H), 4,28 - 4,20 (m, 2H), 4,01 (m, 1H), 3,88 (m, 1H), 3,52 (s, 3H), 2,58 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), 1,75 ~ 1,71 (m, 6H) ppm.

Primer 3.1-{1-[5-Hloro-2-metoksi-4-metil-3-(1-propionilazetidin-3-il)fenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4 amin trifluoroacetat

[0176]

[0177] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedura analognih procedurama opisanim u Primeru 2, upotrebom propanoil hlorida umesto acetil hlorida. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C22H28ClN6O2(M+H)<+>: m/z = 443,2; utvrđeno: 443,2.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,30 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 6,25 (q, 1H), 4,49 (m, 1H), 4,27 ~ 4,18 (m, 2H), 4,02 (m, 1H), 3,90 (m, 1H), 3,54 (s, 3H), 2,57 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), 2,05 (q, 2H), 1,72 (d, 3H), 0,93 (t, 3H) ppm.

Primer 4.1-(1-{5-Hloro-3-[1-(ciklopropilmetil)azetidin-3-il]-2-metoksi-4-metilfenil}etil)-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin bis(trifluoroacetat)

[0178]

[0179] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedura analognih procedurama opisanim u Primeru 1, upotrebom racemskog 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida iz Primera 2, korak 1, i ciklopropankarboksaldehida (firme Aldrich) umesto acetona. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C23H30ClN6O (M+H)<+>: m/z = 441,2; utvrđeno: 441,1.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,06 (s, 1H), 7,13 (s, 1H), 5,96 (q, 1H), 4,22 (m, 2H), 4,07 (m, 1H), 3,90 (m, 1H), 3,80 (m, 1H), 3,24 (s, 3H), 2,68 (t, 2H), 2,21 (s, 3H), 1,80 (s, 3H), 1,45 (d, 3H), 0,64 (m, 1H), 0,24 (m, 2H), 0,01 (m, 2 H) ppm.

Primer 5.1-{1-[5-Hloro-2-metoksi-4-metil-3-(1-metilazetidin-3-il)fenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0180]

[0181] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedura analognih procedurama opisanim u Primeru 1, upotrebom racemskog 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida iz Primera 2, korak 1, i formaldehida umesto acetona. Sirovi proizvod je zatim prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C20H26ClN6O (M+H)<+>: m/z = 401,2; utvrđeno: 401,2.

Primer 6.1-{1-[5-Hloro-3-(1-etilazetidin-3-il)-2-metoksi-4-metilfenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0182]

[0183] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedura analognih procedurama opisanim u Primeru 1, upotrebom racemskog 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida iz Primera 2, korak 1, i acetaldehida umesto acetona. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C21H28ClN6O (M+H)<+>: m/z = 415,2; utvrđeno: 415,1

Primer 7.1-{1-[5-Hloro-3-(1-izobutilazetidin-3-il)-2-metoksi-4-metilfenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0184]

[0185] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedura analognih procedurama opisanim u Primeru 1, upotrebom racemskog 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida iz Primera 2, korak 1, i izobutiraldehida umesto acetona. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C23H32ClN6O (M+H)<+>: m/z = 443,2; utvrđeno: 443,1.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8,29 (s, 1H), 7,38 (s, 1H), 6,37 (q, 1H), 5,37 (s, 2H), 4,01 (m, 2H), 3,87 (m, 1H), 3,57 (s, 3H), 3,05 (t, 1H), 2,86 (t, 1H), 2,64 (s, 3H), 2,18 (d, 2H), 2,11 (s, 3H), 1,82 (d, 3H), 1,62 (m, 1H), 0,89 (d, 6H) ppm.

Primer 8.1-{1-[3-(1-sek-Butilazetidin-3-il)-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0186]

[0187] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedura analognih procedurama opisanim u Primeru 1, upotrebom racemskog 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida iz Primera 2, korak 1, i 2-butanona umesto acetona. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod. Proizvod je izolovan kao smeša dijastereomera. LCMS analiza, izračunato za C23H32ClN6O (M+H)<+>: m/z = 443,2; utvrđeno: 443,1

Primer 9.1-(1-{5-Hloro-2-metoksi-3-[1-(2-metoksietil)azetidin-3-il]-4-metilfenil}etil)-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0188]

[0189] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedura analognih procedurama opisanim u Primeru 1, upotrebom racemskog 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida iz Primera 2, korak 1, i metoksiacetaldehida umesto acetona. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C22H30ClN6O2(M+H)<+>: m/z = 445,2; utvrđeno: 445,2.

Primer 10.3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N-metilazetidin-1-karboksamid

[0190]

[0191] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedura analognih procedurama opisanim u Primeru 2, upotrebom metil izocijanata umesto acetil hlorida. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C21H27ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 444,2; utvrđeno: 444,2.

Primer 11.5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0192]

Korak 1.1-(3-Bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanon

[0193]

[0194] U mešani rastvor 1-(5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanona (5,00 g; 25,2 mmol; firme Oakwood) u sirćetnoj kiselini (100 ml) je dodat N-bromosukcinimid (4,93 g; 27,7 mmol), pa je dobijena smeša grejana na 100°C tokom 18 sati. Nakon hlađenja do sobne temperature, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo. Smeša je zatim neutralisana zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, pa je filtriranjem izdvojen nerastvorljiv sukcinimid, a filtrat je ekstrahovan sa EtOAc. Organski slojevi su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, pa su osušeni upotrebom natrijum sulfata i dalje koncentrovani do suva pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen na silika gelu, eluiranjem sa 0 do 50% EtOAc u heksanima, a da bi se dobili željeni proizvodi (2,66 g; 38%). LCMS analiza, izračunato za C10H11BrClO2(M+H)<+>: m/z = 277,0; utvrđeno: 277,0.<1>H NMR (DMSO-d6, 300 MHz): 7,70 δ (1H, s), 3,77 (3H, s), 2,57 (3H, s), 2,50 (3H, s) ppm.

Korak 2.5-(3-Acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0195]

[0196] U smešu 1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanona (0,38 g; 1,4 mmol) i N,N-dimetil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-karboksamida (firme PepTech, 0,46 g; 1,6 mmol) u 1,4-dioksanu (6 ml), je dodat kalijum karbonat (0,38 g; 2,7 mmol) u vodi (2 ml). Reakciona smeša je zatem produvavana sa N2. Dalje je dodat tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (0,095 g; 0,082 mmol), pa je reakciona smeša mešana preko noći na 100°C. Smeša je zatim razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Organski slojevi su spojeni, osušeni upotrebom MgSO4, koncentrovani i prečišćeni na silika gelu (eluiranje sa 0-100% EtOAc u heksanima) da bi se dobio traženi proizvod. LCMS analiza, izračunato za C18H20ClN2O3(M+H)<+>: m/z = 347,1; utvrđeno: 347,1

Korak 3.5-[3-hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0197]

[0198] U rastvor 5-(3-acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (106 mg; 0,306 mmol) u metanolu (2 ml), ohlađenom na 0°C, dodat je natrijum tetrahidroborat (14 mg; 0,37 mmol). Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata, pa je reakcija zaustavljena dodavanjem vode i smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organski slojevi su osušeni upotrebom MgSO4, pa su koncentrovani da bi se dobio sirovi alkohol. LCMS analiza, izračunato za C18H22ClN2O3(M+H)<+>: m/z = 349,1; utvrđeno: 349,1.

Korak 4.5-(3-Hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0199]

[0200] Na sobnoj temperaturi je cijanurin-hlorid (85 mg; 0,46 mmol) dodat u N,N-dimetilformamid (0,036 ml; 0,46 mmol). Nakon obrazovanja bele čvrste supstance (10 minuta), dodat je metilen hlorid (2 ml), a zatim i 5-[3-hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid (115 mg; 0,330 mmol; iz Primera 11, korak 3). Po završenom dodavanju, smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dalje je dodata voda, a potom je smeša razblažena i dihlorometanom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, a zatim je osušena upotrebom MgSO4i koncentrovana. Ostatak je prečišćen na silika gelu (eluiranje sa 0 do 80% EtOAc u heksanima) da bi se dobio željeni proizvod (76 mg; 63%). LCMS analiza, izračunato za C18H21Cl2N2O2(M+H)<+>: m/z = 367,1; utvrđeno: 367,0.

Korak 5.5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0202] U rastvor 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (6,1 mg; 0,041 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,4 ml) je dodat natrijum hidrid (60%, 2,0 mg; 0,082 mmol) na 0°C, pa je smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta. U dobijenu smešu je zatim dodat rastvor 5-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (15,0 mg; 0,0408 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,2 ml) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Sirova smeša je prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% TFA, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod u vidu bis-TFA soli. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C24H27ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 480,2; utvrđeno: 480,1.

Primer 12.5-{3-[1-(4-Amino-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid trifluoroacetat

[0203]

[0204] U smešu 7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-amin sulfata (firme Oakwood, 20 mg; 0,086 mmol), cezijum karbonata (42 mg; 0,13 mmol) i kalijum jodida (1,4 mg; 0,0086 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,91 ml) je dodat 5-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid (32 mg; 0,086 mmol), pa je dobijena smeša mešana na 140°C tokom 1 časa. Smeša je zatim razblažena metanolom i prečiščena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% TFA, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C24H26ClN6O2(M+H)<+>: m/z = 465,2; utvrđeno: 465,1.

Primer 13.1-{1-[5-Hloro-4-fluoro-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-2-metoksifenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin bis(trifluoroacetat)

[0205]

Korak 1.1-(5-Hloro-4-fluoro-2-hidroksifenil)etanon

[0206]

[0207] U 4-hloro-3-fluorofenol (firme Aldrich, 20 g; 100 mmol) je, uz mešanje i u atmosferi N2, dodat acetil hlorid (14,1 ml; 199 mmol). Dobijena smeša je ubrzo na sobnoj temperaturi postala bistar rastvor koji je zatim grejan na 60°C tokom 2 časa. U smešu je zatim, u porcijama, dodat aluminijum trihlorid (25,0 g; 187 mmol), pa je reakciona smeša grejana na 180°C tokom 30 minuta. Čvrsta supstanca se polako rastvarala na visokoj temperaturi. Reakciona smeša je zatim ohlađena do sobne temperature, dok je posuda pažljivo rotirana da bi se unutar posude obrazovao tanak sloj čvrste supstance i reakcija je zatim polako zaustavljena dodavnjem 1,0 N HCI (300 ml), a uz hlađenje u ledenom kupatilu i mešanje preko noći. Žuti talog je ispran vodom i osušen pod vakuumom da bi se dobio željeni proizvod u vidu žute čvrste supstance (23,8 g). Proizvod je dalje direktno iskorišćen u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja.

Korak 2.1-(5-Hloro-4-fluoro-2-hidroksi-3-jodofenil)etanon

[0208]

[0209] Rastvor 1-(5-hloro-4-fluoro-2-hidroksifenil)etanona (23,8 g; 126 mmol) u sirćetnoj kiselini (100 ml) je tretiran N-jodosukcinimidom (34,1 g; 151 mmol), pa je mešan na 70°C tokom 2 sata. Reakciona smeša je zatim koncentrovana i razblažena sa EtOAc, pa je reakcija zaustavljena dodavanjem zasićenog rastvora NaHCO3dok nije došo do prestanka obrazovanja mehurića. Organski slojevi su razdvojeni, isprani vodom, osušeni upotrebom MgSO4i profiltirani da bi se dobio željeni proizvod koji je iskorišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak 3.1-(5-Hloro-4-fluoro-3-jodo-2-metoksifenil)etanon

[0210]

[0211] 1-(5-Hloro-4-fluoro-2-hidroksi-3-jodofenil)etanon (13 g; 41 mmol) je rastvoren u N,N-dimetilformamidu (41,3 ml), pa je dodat metil jodid (3,9 ml; 62 mmol). Zatim je dodat i kalijum karbonat (11 g; 83 mmol) i reakciona smeša je grejana na 60°C tokom 1 časa. Smeša je dalje ohlađena do sobne temperature i razblažena etrom. Izdvojeni su dalje organski slojevi koji su zatim i spojeni, isprani vodom, osušeni upotrebom MgSO4, koncentrovani i prečišćeni na silika gelu (eluiranje sa 0 do 10% EtOAc u heksanima) da bi se dobio traženi proizvod (10 g; 70%). LCMS analiza, izračunato za C9H8ClFIO2(M+H)<+>: m/z = 328,9; utvrđeno: 328,9.

Korak 4. terc-Butil 3-(3-acetil-5-hloro-6-fluoro-2-metoksifenil)azetidin-1-karboksilat

[0212]

[0213] Cink (0,682 g; 10,4 mmol) je resuspendovan u 1,2-dibromoetanu (0,0598 ml; 0,694 mmol) u N,N-dimetilformamidu (12 ml). Smeša je zatim grejana na 70°C tokom 10 minuta i potom je ohlađena do sobne temperature. Dalje je u kapima dodat hlorotrimetilsilan (0,088 ml; 0,69 mmol), pa je mešanje nastavljeno tokom 1 sata. Zatim je dodat rastvor terc-butil 3-jodoazetidin-1-karboksilata (2,5 g; 8,7 mmol) u N,N-dimetilformamidu (10 ml) i smeša je grejana na 40°C tokom 1 sata. Zaim su u smešu dodati 1-(5-hloro-4-fluoro-3-jodo-2-metoksifenil)etanon (3,0 g; 9,1 mmol), tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (0,16 g; 0,17 mmol) i tri-(2-furil)fosfin (0,081 g; 0,35 mmol) u N,N-dimetilformamidu (20 ml). Reakciona smeša je zatim zagrejana do 70°C i mešana preko noći. Nakon toga, smeša je ohlađena do sobne temperature i preraspodeljena između etra i zasićenog vodenog rastvora NH4Cl. Organski slojevi su isprani vodom, osušeni upotrebom MgSO4, koncentrovani i prečišćeni na silika gelu (eluiranje sa 0 do 25% EtOAc u heksanima) da bi se dobio željeni proizvod (0,8 g). LCMS analiza, izračunato za C11H21ClFNO4Na (M+Na)<+>: m/z = 380,1; utvrđeno: 380,1.

Korak 5. terc-Butil 3-[3-hloro-2-fluoro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksifenil]azetidin-1-karboksilat

[0214]

[0215] U rastvor terc-butil 3-(3-acetil-5-hloro-6-fluoro-2-metoksifenil)azetidin-1-karboksilata (0,17 g; 0,48 mmol) u metanolu (3 ml), ohlađenom na 0°C, je dodat natrijum tetrahidroborat (0,022 g; 0,57 mmol). Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata, pa je reakcija zaustavljena dodavanjem vode. Smeša je dalje ekstrahovana sa EtOAc, a organski slojevi su spojeni, osušeni upotrebom MgSO4i koncentrovani. Tako je dobijen sirovi alkohol (0,19 g). LCMS analiza, izračunato za C17H23ClFNO4Na (M+Na)<+>: m/z = 382,1; utvrđeno: 382,0.

Korak 6. terc-Butil 3-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-2-fluoro-6-metoksifenil]azetidin-1-karboksilat

[0216]

[0217] Na sobnoj temperaturi, cijanurin-hlorid (140 mg; 0,78 mmol) je dodat u N,N-dimetilformamid (0,059 ml; 0,77 mmol). Nakon obrazovanja bele čvrste supstance (približno 10 minuta), dodati su metilen hlorid (4 ml) i potom terc-butil 3-[3-hloro-2-fluoro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksifenil]azetidin-1-karboksilat (197 mg; 0,547 mmol). Po završenom dodavanju, smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dalje je dodata voda, a zatim je smeša razblažena dihlorometanom. Organske faze su isprane zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa su osušene upotrebom MgSO4i koncentrovane. Dobijeni ostatak je prečišćen na silika gelu (eluiranje sa 0 do 30% EtOAc u heksanima) da bi se dobio željeni proizvod (110 mg; 53%).

Korak 7. terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-fluoro-2-metoksifenil}azetidin-1-karboksilat

[0218]

[0219] U rastvor 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (7,9 mg; 0,053 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,6 ml) je dodat natrijum hidrid (60%, 2,5 mg; 0,11 mmol) na 0°C, pa je smeša mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta. U smešu je zatim dodat rastvor terc-butil 3-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-2-fluoro-6-metoksifenil]azetidin-1-karboksilata (20 mg; 0,053 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,3 ml). Reakciona smeša je dalje mešana na 35°C preko noći, a zatim je reakcija zaustavljena dodavanjem vode i smeša je ekstrahovana etrom. Organski slojevi su spojeni, osušeni upotrebom MgSO4i koncentrovani da bi se dobio željeni proizvod koji je direktno iskorišćen u sledećem koraku. LCMS analiza, izračunato za C23H29ClFN6O3(M+H)<+>: m/z = 491,2; utvrđeno: 491,1.

Korak 8.1-{1-[5-Hloro-4-fluoro-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-2-metoksifenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin bis(trifluoroacetat)

[0220]

[0221] Smeša terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-fluoro-2-metoksifenil}azetidin-1-karboksilata (14 mg; 0,028 mmol) u metilen hloridu (0,2 ml) je tretirana sa 4,0 M rastavorom hlorovodonika u dioksanu (0,2 ml; 0,8 mmol) na sobnoj temperaturi tokom 1 sata, a zatim je rastvarač uklonjen da bi se dobila HCI so 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-4-fluoro- 2-metoksifenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina. Potom je u smešu navedene neprečišćene HCI soli u acetonitrilu (0,1 ml)/metanolu (0,1 ml)/tetrahidrofuranu (0,1 ml) dodat N,N-diizopropiletilamin (0,1 ml; 0,6 mmol), a zatim je dodat i aceton (0,050 ml; 0,68 mmol). Smeša je dalje mešana 30 minuta pre dodavanja natrijum triacetoksiborohidrida (0,030 g; 0,14 mmol). Reakciona smeša je potom mešana na sobnoj temperaturi preko noći, pa je rekacija zaustavljena i proizvod je prečiščen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% TFA, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod u vidu TFA so. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C21H27ClFN6O (M+H)<+>: m/z = 433,2; utvrđeno: 433,1.

Primer 14.5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0222]

Korak 1.1-(5-hloro-2-etoksi-3-jodo-4-metilfenil)etanon

[0223]

[0224] 1-(5-Hloro-2-hidroksi-3-jodo-4-metilfenil)etanon (18,9 g; 60,9 mmol)(iz Primera 1, korak 1) je rastvoren u N,N-dimetilformamidu (60,8 ml). Potom je dodat jodoetan (7,3 ml; 91 mmol), a zatim je dodat i kalijum karbonat (17 g; 120 mmol), pa je reakciona smeša grejana na 60°C tokom 1 časa. Smeša je dalje ohlađena do sobne temperature i razblažena etrom. Organski slojevi su spojeni, isprani vodom, osušeni upotrebom MgSO4, koncentrovani i prečišćeni na silika gelu (eluiranje sa 0-10% EtOAc u heksanima) da bi se dobio željeni proizvod (18,9 g; 91,7%). LCMS analiza, izračunato za C11H13CIJO2(M+H)<+>: m/z = 339,0; utvrđeno: 339,0.

Korak 2.5-(3-Acetil-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0225]

[0226] U smešu 1-(5-hloro-2-etoksi-3-jodo-4-metilfenil)etanona (0,69 g; 2,0 mmol) i N,N-dimetil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-karboksamida (0,68 g; 2,4 mmol) u 1,4-dioksanu (10 ml), dodat je kalijum karbonat (0,56 g; 4,1 mmol) u vodi (3 ml; 200 mmol), pa je reakciona smeša produvavana sa N2. Zatim je dodat tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (0,24 g; 0,20 mmol) i nastavljeno je produvavanje sa N2. Reakciona smeša je nakon toga mešana na 95°C preko noći, a zatim je razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Spojeni organski slojevi su osušeni upotrebom MgSO4, koncentrovani i prečišćeni na silika gelu (eluiranje sa 0 do 90% EtOAc u heksanima) da bi se dobio željeni proizvod (0,6 g; 82%). LCMS analiza, izračunato za C19H22ClN2O3(M+H)<+>: m/z = 361,1; utvrđeno: 361,0.

Korak 3.5-[3-Hloro-6-etoksi-5-(1-hidroksietil)-2-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0227]

[0228] U rastvor 5-(3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (0,60 g; 1,7 mmol) u metanolu (10 ml) ohlađen na 0°C, dodat je natrijum tetrahidroborat (0,075 g; 2,0 mmol). Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata, pa je reakcija zaustavljena dodavanjem vode. Smeša je dalje ekstrahovana sa EtOAc, a ekstrakti su osušeni upotrebom MgSO4i koncentrovani. Tako je dobijen neprečišćen alkohol (0,6 g). LCMS analiza, izračunato za C19H24ClN2O3(M+H)<+>: m/z = 363,1; utvrđeno: 363,0.

Korak 4.5-[3-Hloro-5-(1-hloroetil)-6-etoksi-1-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0229]

[0230] Na sobnoj temperaturi, cijanurin-hlorid (0,43 g; 2,3 mmol) je dodat u N,N-dimetilformamid (0,18 ml; 2,3 mmol). Nakon obrazovanja bele čvrste supstance (10 minuta), dodat je metilen hlorid (10 ml), a zatim je dodat i 5-[3-hloro-6-etoksi-5-(1-hidroksietil)-2-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid (0,6 g; 2 mmol). Po završenom dodavanju, smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći, a zatim je smeša razblažena dihlormetanom i isprana zasićenim rastvorom NaHCO3. Organski slojevi su osušeni upotrebom MgSO4i koncentrovani. Ostatak je prečišćen na silika gelu (eluiranje sa 0 do 50% EtOAc u heksanima) da bi se dobio željeni proizvod (0,58, 90%). LCMS analiza, izračunato za C19H23Cl2NO2(M+H)<+>: m/z = 381,1; utvrđeno: 381,0.

Korak 5.5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0231]

[0232] U rastvor 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (47 mg; 0,31 mmol) u N,N-dimetilformamidu (3 ml), dodat je na 0°C natrijum hidrid (60%, 12,6 mg; 0,524 mmol), pa je dobijena smeša mešana na sobnoj temperaturi 10 minuta. U smešu je zatim dodat rastvor 5-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-etoksi-2-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (100 mg; 0,3 mmol; iz Primera 14, korak 4) u N,N-dimetilformamidu (1 ml). Reakciona smeša je potom mešana na 35°C preko noći, pa je reakcija zaustavljena i smeša je prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% TFA, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod u vidu bis-TFA soli. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C25H29ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 494,2; utvrđeno: 494,1.

Primer 15.5-{3-[1-(4-Amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0233]

[0234] U smešu 3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (firme CNH Technologies, 120 mg; 0,46 mmol), cezijum karbonata (200 mg; 0,62 mmol) i kalijum jodida (7,0 mg; 0,042 mmol) u N,N-dimetilformamidu (1 ml) dodat je 5-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-etoksi-2-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2karboksamid (160 mg; 0,42 mmol; iz Primera 14, korak 4), pa je smeša mešana na 140°C tokom 1 časa. Reakciona smeša je zatim razblažena vodom i ekstrahovana etrom. Organski slojevi su spojeni, osušeni upotrebom MgSO4, koncentrovani i prečišćeni na silika gelu (eluiranje sa 0 do 10% MeOH u dihlorometanu) da bi se dobio željeni proizvod (0,12 g; 47%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C24H26ClIN7O2(M+H)<+>: m/z = 606,1; utvrđeno: 606,0.

Primer 16.4-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0235]

Korak 1.1-(3-Bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanol

[0236]

[0237] Natrijum tetrahidroborat (0,31 g; 8,1 mmol) je dodat u smešu 1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanona (iz Primera 11, korak 1) (1,5 g; 5,4 mmol) u metanolu (25 ml) na 0°C, pa je dobijena reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Zatim je uklonjen rastvarač, a dobijeni ostatak je razblažen etil acetatom, ispran zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli. Ostatak je dalje osušen upotrebom Na2SO4, profiltriran i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen silika gel hromatografijom, eluiranjem sa 0 do 40% EtOAc u heksanima (0,30 g; 90%).

Korak 2.4-[3-Hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]piridin-2-karbonitril

[0238]

[0239] Smeša 1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanola (0,30 g; 1,1 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioksaborolan-2-il)piridin-2-karbonitrila (firme Combi-Blocks, 0,27 g; 1,2 mmol), natrijum karbonata (230 mg; 2,1 mmol) i [1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijuma(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1), (100 mg; 0,13 mmol) u acetonitrilu (8 ml)/vodi (2 ml) je degasirana i posuda je ispunjena sa N2. Reakciona smeša je zatim mešana na 95°C tokom 2 časa, pa je ohlađena i razblažena etil acetatomom, isprana zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli. Smeša je potom osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen silika gel hromatografijom, eluiranjem sa 0 do 40% EtOAc u heksanima (0,249 g; 75%). LCMS analiza, izračunato za C16H16ClN2O2(M+H)<+>: m/z = 303,1; utvrđeno: 303,0

Korak 3.4-[3-Hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]piridin-2-karbonitril

[0240]

[0241] Smeša cijanurin-hlorida (170 mg; 0,94 mmol) i N,N-dimetilformamida (73 µl; 0,94 mmol) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta, pa je dodat rastvor 4-[3-hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]piridin-2-karbonitrila (190 mg; 0,628 mmol) u metilen hloridu (4 ml). Reakciona smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je dalje razblažena metilen hloridom, isprana zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je iskorišćen direktno u sledećem koraku bez prečišćavanja (121 mg; 60%). LCMS analiza, izračunato za C16H15Cl2N2O (M+H)<+>: m/z = 321,0; utvrđeno: 321,0

Korak 4.4-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-1-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-karbonitril

[0242]

[0243] Natrijum hidrid (20 mg; 0,50 mmol) je dodat u smešu 4-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]piridin-2-karbonitrila (90 mg; 0,28 mmol) i 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (63 mg; 0,42 mmol) u N,N-dimetilformamidu (4 ml), pa je reakciona smeša mešana na 30°C preko noći. Smeša je zatim ohlađena, tretirana vodom i potom profiltrirana da bi se dobio željeni proizvod. LCMS analiza, izračunato za C22H21ClN7O (M+H)<+>: m/z = 434,1; utvrđeno: 434,2

Korak 5.4-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-karboksilna kiselina

[0244]

[0245] Natrijum hidroksid (1,0 M) u vodi (0,70 ml; 0,70 mmol) je dodat u smešu 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-karbonitrila (0,060 g; 0,14 mmol) u etanolu (1,0 ml), pa je dobijena smeša grejana na 95°C tokom 6 časova. U isto vreme, dodata je i konc. HCl da bi se pH smeše podesio na ~ 3. Zatim je uklonjen rastvarač, a ostatak je iskorišćen kao takav u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS analiza, izračunato za C22H22ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 453,1; utvrđeno: 453,2

Korak 6.4-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0246]

[0247] Najpre je 2,0 M dimetilamin u THF (0,14 ml; 0,28 mmol) dodat na sobnoj temperaturi u rastvor 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-karboksilne kiseline (9,6 mg; 0,021 mmol) i benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata (10 mg; 0,03 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,7 ml), nakon čega je dodat i trietilamin (8,8 µl; 0,064 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana 1 sat, pa je sirova smeša prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod.

Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C24H21ClN1O2(M+H)<+>: m/z = 480,2; utvrđeno: 480,2.

Primer 17.4-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-N-metilpikolinamid

[0248]

[0249] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedura analognih procedurama opisanim u Primeru 16, korak 6, upotrebom 2,0 M rastvora metilamina u THF umesto 2,0 M rastvora dimetilamina u THF. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C23H25ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 466,2; utvrđeno: 466,2.

Primer 18.4-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N-(2-hidroksietil)piridin-2-karboksamid

[0250]

[0251] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedura analognih procedurama opisanim u Primeru 16, korak 6, upotrebom etanolamina umesto 2,0 M dimetilamina u THF. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C24H27ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 496,2; utvrđeno: 496,2.

Primer 19.4-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N-(2-hidroksietil)-N-metilpiridin-2-karboksamid

[0252]

[0253] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedura analognih procedurama opisanim u Primeru 16, korak 6, upotrebom 2-(metilamino)etanola umesto 2,0 M dimetilamina u THF. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C25H29ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 510,2; utvrđeno: 510,2.

Primer 20.2-(4-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-1H-pirazol-1-il)etanol

[0254]

Korak 1.3-Bromo-1-hloro-5-(1-hloroetil)-4-metoksi-2-metilbenzen

[0255]

[0256] Smeša cijanurin-hlorida (1,7 g; 9,2 mmol) i N,N-dimetilformamida (710 µl; 9,2 mmol) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta, pa je dodat rastvor 1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanola (iz Primera 16, korak 1) (1,72 g; 6,15 mmol) u metilen hloridu (34 ml) i rekaciona smeša ej mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je zatim razblažena metilen hloridom, isprana zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen silika gel hromatografijom, eluiranjem sa 0 do 10% EtOAc u heksanima (1,01 g; 60%).

Korak 2.1-[1-(3-Bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0258] Natrijum hidrid (36 mg; 0,91 mmol) je dodat u smešu 3-bromo-1-hloro-5-(1-hloroetil)-4-metoksi-2-metilbenzena (150 mg; 0,503 mmol) i 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (110 mg; 0,76 mmol) u N,N-dimetilformamidu (8 ml), pa je reakciona smeša mešana na 30°C preko noći. Smeša je zatim razblažena metilen hloridom, isprana zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen silika gel hromatografijom, eluiranjem sa 0 do 70% EtOAc u CH2Cl2(103 mg; 50%). LCMS analiza, izračunato za C16H18BrClN5O (M+H)<+>: m/z = 410.0; utvrđeno: 410. Racemski proizvodi su zatim naneti na Phenomenex Lux-Cellulose 1 kolonu (21,1x250 mm, veličina čestica 5 mikrona, eluiranje sa 5% etanolom u heksanima brzina protoka 18 ml/min, nanošena količina ~ 13 mg po injeciranju), a da bi se obezbedila dva enantiomera.

Korak 3.1-(2-{[terc-Butil(dimetil)silil]oksi}etil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol

[0259]

[0260] Kalijum terc-butoksid (1,0 M) u THF (0,60 ml; 0,60 mmol) je dodat u rastvor 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (0,1 g; 0,5 mmol) u N,N-dimetilformamidu (1,5 ml) na 0°C. Reakciona smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi 5 minuta, pa je smeša ohlađena na 0°C i tretirana sa (2-bromoetoksi)(terc-butil) dimetilsilanom (0,2 ml; 0,8 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi preko noći, pa je razblažena etil acetatom, isprana zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, i dalje osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana. Tako je dobijen sirovi proizvod koji je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa 0 do 30% EtOAc u heksanima. LCMS analiza, izračunato za C17H34BN2O3Si (M+H)<+>: m/z = 353,2; utvrđeno: 353,1.

Korak 4.1-(4-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-1-metoksi-6-metilfenil)-1H-pirazol-1-il)etanol

[0261]

[0262] Smeša 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (0,026 g; 0,062 mmol) (hiralno čist, prvi pik iz koraka 2), 1-(2-{[terc-butil(dimetil)silil]oksi}etil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (0,024 g; 0,069 mmol), natrijum karbonata (13 mg; 0,12 mmol) i [1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijuma(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1), (6,1 mg; 0,0075 mmol) u acetonitrilu (0,5 ml)/vodi (0,1 ml) je degasirana i potom posuda ispunjena sa N2. Reakciona smeša je zatim mešana na 95°C tokom 2 časa, a potom je tretirana koncentrovanom HCI (0,1 ml) i mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Sirova smeša je dalje prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod. Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C21H25ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 442,2; utvrđeno: 442,2.

Primer 21.3'-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5'-hloro-3-fluoro-2'-metoksi-N,N,6'-trimetilbifenil-4-karboksamid trifluoroacetat

[0263]

Korak 1. Metil 3'-(7-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5'-hloro-3-fluoro-2'-metoksi-6’-metilbifenil-4-karboksilat

[0264]

[0265] Smeša 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (60 mg; 0,15 mmol; hiralno čist, iz Primera 20, korak 2, pik 1), [3-fluoro-4-(metoksikarbonil)fenil]boronske kiseline (firme Combi-Blocks, 0,041 g; 0,20 mmol), natrijum karbonata (36 mg; 0,34 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijuma(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1), (6 mg; 0,007 mmol) u acetonitrilu (1,2 ml)/vodi (0,3 ml) je degasirana pod vukuumom, pa je posuda ispunjenja sa N2. Reakciona smeša je zatim mešana na 95°C tokom 2 časa. Nakon toga, uklonjen je rastvarač, a sirova smeša je prečišćena hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa 0 do 70% EtOAc u CH2Cl2i tako je dobijen traženi proizvod (54 mg; 75%). LCMS analiza, izračunato za C24H24ClFN5O3(M+H)<+>: m/z = 484,2; utvrđeno: 484,1

Korak 2.3'-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5'-hloro-3-fluoro-2'-metoksi-6'-metilbifenil -4-karboksilna kiselina

[0266]

[0267] Litijum hidroksid, monohidrat (13 mg; 0,31 mmol), je dodat u rastvor metil 3’-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5'-hloro-3-fluoro-2'-metoksi-6'-metilbifenil-4-karboksilata koji je prethodno rastvoren (0,030 g; 0,062 mmol) u metanolu (0,2 ml)/tetrahidrofuranu (0,2 ml)/vodi (0,09 ml). Reakciona smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 1,5 sata, pa je dalje tretirana koncentrovanom HCl (60 µl) da bi se pH smeše podesio na 2. Dalje je uklonjen rastvarač i tako je dobijen sirovi proizvod koji je iskorišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS analiza, izračunato za C23H22ClFN5O3(M+H)<+>: m/z = 470,1; utvrđeno: 470,2

Korak 3.3'-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5'-hloro-3-fluoro-2'-metoksi-N,N,6’-trimetilbifenil-4-karboksamid trifluoroacetat

[0269] Najpre je 2,0 M dimetilamin u THF (0,1 ml; 0,2 mmol) dodat u rastvor 3’-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5'-hloro-3-fluoro-2'-metoksi-6'-metilbifenil-4-karboksilne kiseline (12 mg; 0,026 mmol) koji je prethodno pripremljen, pa je na sobnoj temperaturi dodat benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfat (20 mg; 0,04 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,7 ml). Zatim je dodat i trietilamin (11 µl; 0,077 mmol), pa je reakciona smeša je mešana 1 sat i dalje je tretirana vodom. Sirova smeša je potom prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% TFA, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod u vidu TFA soli. Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C25H27ClFN6O2(M+H)<+>: m/z = 497,2; utvrđeno: 497,2.

Primer 22.3'-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5'-hloro-3-fluoro-2'-metoksi-N,6’-dimetilbifenil-4-karboksamid trifluoroacetat

[0270]

[0271] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedura analognih procedurama opisanim u Primeru 21, korak 3, upotrebom 2,0 M metilamina u THF umesto 2,0 M dimetilamina u THF. Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C24H25ClFN6O2(M+H)<+>: m/z = 483,2; utvrđeno: 483,2.

Primer 23.5-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-N-(2-hidroksietil)pikolinamid trifluoroacetat

Korak 1.5-[3-Hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]piridin-2-karbonitril

[0273]

[0274] Smeša 1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanola (0,15 g; 0,54 mmol), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioksaborolan-2-il)piridin-2-karbonitrila (firme Frontier, 0,14 g; 0,59 mmol), natrijum karbonata (110 mg; 1,1 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijuma(II), kompleks sa dihlormetanom (1:1) (52 mg; 0,064 mmol) u acetonitrilu (4 ml)/vodi (1 ml) je degasirana i potom je posuda ispunjenja sa N2. Reakciona smeša je zatim mešana na 95°C tokom 2 h, pa je ohlađena, razblažena etil acetatom, isprana zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli i dalje osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen silika gel hromatografijom, eluiranjem sa 0 do 40% EtOAc u heksanima, a da bi se dobio željeni proizvod (114 mg; 70%). LCMS analiza, izračunato za C16H16ClN2O2(M+H)<+>: m/z = 303,1; utvrđeno: 303,0

Korak 2.5-[3-Hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]piridin-2-karbonitril

[0275]

[0276] Smeša cijanurin-hlorida (170 mg; 0,94 mmol) i N,N-dimetilformamida (73 µl; 0,94 mmol) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta, a zatim je dodat rastvor 5-[3-hloro-5-(1-hidroksietil)-6metoksi-2-metilfenil]piridin-2-karbonitrila (190 mg; 0,628 mmol) u metilen hloridu (4 ml) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je dalje razblažena metilen hloridom, isprana zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana. Dobijeni sirovi proizvod je iskorišćen direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja (110 mg; 55%). LCMS analiza, izračunato za C16H15Cl2N2O (M+H)<+>: m/z = 321,0; utvrđeno: 321,0

Korak 3.5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-karbonitril

[0277]

[0278] Natrijum hidrid (20 mg; 0,50 mmol) je dodat u smešu 5-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]piridin-2-karbonitrila (90 mg; 0,28 mmol) i 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (63 mg; 0,42 mmol) u N,N-dimetilformamidu (4 ml), pa je reakciona smeša mešana na 30°C preko noći. Smeša je zatim tretirana vodom, pa je profiltrirana da bi se dobio željeni proizvod. LCMS analiza, izračunato za C22H21ClN7O (M+H)<+>: m/z = 434,1; utvrđeno: 434,2

Korak 4.5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-karboksilna kiselina

[0279]

[0280] Natrijum hidroksid (1,0 M) u vodi (0,70 ml; 0,70 mmol) je dodat u smešu 5-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-karbonitrila (0,060 g; 0,14 mmol) u etanolu (1,0 ml). Reakciona smeša je zatim grejana na 95°C tokom 6 časova, pa je dodata koncentrovana HCI da bi se pH smeše podesio na ~ 3. Dalje je uklonjen rastvarač, a dobijeni ostatak je iskorišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS analiza, izračunato za C22H22ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 453,1; utvrđeno: 453,2

Korak 5.5-(3-(1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-N-(2-hidroksietil)pikolinamid trifluoroacetat

[0281]

[0282] Etanolamin (15 µl; 0,25 mmol) je dodat u rastvor 5-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-karboksilne kiseline (9,6 mg; 0,021 mmol) i benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata (10 mg; 0,03 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,7 ml) na sobnoj temperaturi, nakon čega je dodat i trietilamin (8,8 µl; 0,064 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana 1 sat, pa je reakcija zaustavljena dodavanjem vode. Sirova smeša je prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% TFA, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod u vidu TFA soli. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C24H27ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 496,2; utvrđeno: 496,2.

Primer 24.4-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N-(2-hidroksietil)-N-metilpiridin-2-karboksamid trifluoroacetat

[0283]

[0284] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedura analognih procedurama opisanim u Primeru 23, upotrebom 2-(metilamino)etanola umesto etanolamina. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C25H29ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 510,2; utvrđeno: 510,2.

Primer 25.5-{3-[1-(4-Amino-5-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(5H)-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0285]

Korak 1.5-[3-Hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0286]

[0287] Smeša cijanurin-hlorida (firme Aldrich, 690 mg; 3,7 mmol) i N,N-dimetilformamida (290 µl; 3,7 mmol) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta, pa je dodat rastvor 5-[3-hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (869 mg; 2,49 mmol) u metilen hloridu (14 ml) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je zatim razblažena metilen hloridom, isprana zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana. Proizvod je dalje prečišćen silika gel hromatografijom, eluiranjem sa 0 do 100% EtOAc u heksanima.

Korak 2.5-{3-[1-(4-Amino-5-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(5H)-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0288]

[0289] U smešu 4-aminopirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-ona (firme VWR, 4,8 mg; 0,030 mmol), cezijum karbonata (14 mg; 0,044 mmol) i kalijum jodida (0,50 mg; 0,0030 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,1 ml) je dodat 5-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid (11 mg; 0,030 mmol). Smeša je zatim mešana na 140°C tokom 1 časa. Reakciona smeša je dalje prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod. LCMS analiza, izračunato za C25H26ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 493,2; utvrđeno: 493,1. Racemski proizvodi su potom naneti na Phenomenex Lux-Cellulose 1 kolonu (21,1 x 250 mm, veličina čestica 5 mikrona, eluiranje sa 30% etanolom u heksanima, brzina protoka 18 ml/min, količina nanošenja 4,2 mg po injeciranju), a da bi se obezbedila dva izolovana enantiomere. Retenciono vreme prvog pika je iznosilo 15,39 min, dok je retenciono vreme drugog pika bilo 22,98. Za drugi pik:<1>H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 9,86 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 8,36 (m, 1H), 8,30 (s, 1H), 7,65~7,58 (m, 2H), 7,37 (m, 2H), 6,84 (q, J = 7,2 Hz, 1H), 6,22 (d, J = 8,0 Hz), 5,95 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 3,08 (s, 3H), 3,05 (s, 3H), 2,93 (m, 3H), 2,09 (s, 3H), 1,68 (d, J = 7,2 Hz, 3H) ppm.

Primer 26.4-Amino-8-(1-{5-hloro-2-metoksi-4-metil-3-[5-(metilsulfonil)piridin-3-il]fenil}etil)pirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-on bis(trifluoroacetat)

[0290]

Korak 1.3-Bromo-1-hloro-5-(1-hloroetil)-4-metoksi-2-metilbenzen

[0291]

[0292] Smeša cijanurin-hlorida (1,7 g; 9,2 mmol) i N,N-dimetilformamida (710 µl; 9,2 mmol) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta, pa je dodat rastvor 1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanola (1,72 g; 6,15 mmol) u metilen hloridu (34 ml) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je zatim razblažena metilen hloridom, isprana zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen silika gel hromatografijom, eluiranjem sa 0 do 10% EtOAc u heksanima.

Korak 2.4-Amino-8-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]pirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-on

[0293]

[0294] U smešu 4-aminopirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-ona (0,80 g; 4,9 mmol), cezijum karbonata (2,4 g; 7,3 mmol) i kalijum jodida (82 mg; 0,49 mmol) u N,N-dimetilformamidu (20 ml) je dodat 3-bromo-1-hloro-5-(1-hloroetil)-4-metoksi-2-metilbenzen (1,47 g; 4,93 mmol), pa je smeša mešana na 140°C tokom 1 časa. Smeša je zatim razblažena vodom i etilacetatom. Talog je prikupljen i osušen da bi se dobio željeno jedinjenje. LCMS analiza, izračunato za C17H17BrClN4O2(M+H)<+>: m/z = 423,0; utvrđeno: 423,0.

Korak 3.4-Amino-8-(1-{5-hloro-2-metoksi-4-metil-3-[5-(metilsulfonil)piridin-3-il]fenil}etil)pirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-on bis(trifluoroacetat)

[0295]

[0296] Smeša 4-amino-8-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]pirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-ona (25 mg; 0,059 mmol), 3-(metilsulfonil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridina (firme PepTech, 18 mg; 0,065 mmol), natrijum karbonata (13 mg; 0,12 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijuma(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1), (5,8 mg; 0,0071 mmol) u acetonitrilu (0,5 ml)/vodi (0,1 ml) je degasirana sa N2, pa je mešana na 90°C tokom 2 sata. Sirova smeša je zatim ohlađena i prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% trifluorosirćetne kiseline, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C23H23ClN5O4S (M+H)<+>: m/z = 500,1; utvrđeno: 500,0.

Primer 27.5-{3-[1-(4-Amino-5-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(5H)-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}nikotinonitril bis(trifluoroacetat)

[0297]

[0298] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedura analognih procedurama opisanim u Primeru 26, upotrebom pinakol estra 3-cijanopiridin-5-boronske kiseline (firme Frontier) umesto 3-(metilsulfonil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridina. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C23H20ClN6O2(M+H)<+>: m/z = 447,1; utvrđeno: 447,1.

Primer 28.4-Amino-8-[1-(5-hloro-2-metoksi-4-metil-3-piridin-3-ilfenil)etil]pirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-on bis(trifluoroacetat)

[0299]

[0300] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedura analognih procedurama opisanim u Primeru 26, upotrebom piridin-3-boronske kiseline (firme Aldrich) umesto 3-(metilsulfonil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioksaborolan-2-il)piridina. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C22H21ClN5O2(M+H)<+>: m/z = 422,1; utvrđeno: 422,0.

Primer 29.4-Amino-8-[1-(5-hloro-2-metoksi-4-metil-3-pirimidin-5-ilfenil)etil]pirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-on bis(trifluoroacetat)

[0301]

[0302] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedura analognih procedurama opisanim u Primeru 26, upotrebom pirimidin-5-boronske kiseline (firme Frontier) umesto 3-(metilsulfonil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioksaborolan-2-il)piridina. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C21H20ClN6O2(M+H)<+>: m/z = 423,1; utvrđeno: 423,0.

Primer 30.3'-[1-(4-Amino-5-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(5H)-il)etil]-5'-hloro-2'-metoksi-N,N,6’-trimetilbifenil-3-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0303]

[0304] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedura analognih procedurama opisanim u Primeru 26, upotrebom 3-(N,N-dimetilaminokarbonil)benzen boronske kiseline (firme Frontier) umesto 3-(metilsulfonil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridina. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C26H27ClN5O3(M+H)<+>: m/z = 492,2; utvrđeno: 492,1.

Primer 31.4-Amino-8-{1-[5-hloro-3-(5-fluoropiridin-3-il)-2-metoksi-4-metilfenil]etil}pirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-on bis(trifluoroacetat)

[0305]

[0306] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedura analognih procedurama opisanim u Primeru 26, upotrebom 5-fluoropiridin-3-boronske kiseline (firme Combi-Blocks) umesto 3(metilsulfonil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1, 3,2-dioksaborolan-2-il)piridina. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C22H20ClFN5O2(M+H)<+>: m/z = 440,1; utvrđeno: 440,0.

Primer 32.3'-[1-(4-Amino-5-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(5H)-il)etil]-5'-hloro-2'-metoksi-N,N,6’-trimetilbifenil-3-sulfonamid bis(trifluoroacetat)

[0307]

[0308] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedura analognih procedurama opisanim u Primeru 26, upotrebom N,N-dimetil 3-boronobenzenesulfonamida (firme Combi-Blocks) umesto 3-(metilsulfonil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridina. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C25H27ClN5O4S (M+H)<+>: m/z = 528,1; utvrđeno: 528,1.

Primer 33.5-{3-[1-(4-Amino-5-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(5H)-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N-metilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0309]

[0310] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedura analognih procedurama opisanim u Primeru 26, upotrebom pinkol estra 2-(N-metilamidokarboksi)-5-piridin boronske kiseline (firme Frontier) umesto 3-(metilsulfonil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridina. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C24H24ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 479,2; utvrđeno: 479,1.

Primer 34.4-Amino-8-{1-[5-hloro-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-2-metoksi-4-metilfenil]etil}pirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-on

[0311]

Korak 1. terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-5-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(5H)-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-karboksilat

[0312]

[0313] U smešu 4-aminopirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-ona (firme VWR) (8,6 mg; 0,053 mmol), cezijum karbonata (26 mg; 0,080 mmol) i kalijum jodida (0,89 mg; 0,0053 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,2 ml) je dodat terc-butil 3-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]azetidin-1-karboksilat (20 mg; 0,05 mmol; iz Primera 1, korak 5, racemski intermedijer). Smeša je zatim mešana na 140°C tokom 1 časa, pa je ohlađena, razblažena vodom i ekstrahovana etrom. Organski slojevi su osušeni upotrebom MgSO4, pa su koncentrovani i tako je dobijen sirovi proizvod koji je direktno iskorišćen u sledećem koraku. LCMS analiza, izračunato za C25H31ClN5O4(M+H)<+>: m/z = 500,2; utvrđeno: 500,1.

Korak 2.4-Amino-8-{1-[5-hloro-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-2-metoksi-4-metilfenil]etil}pirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-on

[0314]

[0315] Rastvor terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-5-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(5H)-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-karboksilata (27 mg; 0,053 mmol) u metilen hloridu (0,25 ml) je tretiran sa 4,0 M rastvorom hlorovodonika u dioksanu (0,13 ml; 0,50 mmol) tokom 1 sata na sobnoj temperaturi, pa je rastvor osušen do suva da bi se dobio 4-amino-8-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]pirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-on u vidu HCl soli. U smešu ovakve neprečišćene HCI soli u acetonitrilu (0,2 ml)/metanolu (0,2 ml)/tetrahidrofuranu (0,2 ml) je zatim dodat N,N-diizopropiletilamin (0,046 ml; 0,27 mmol), pa je smeša mešana na sobnoj temperaturi sve dok se čvrsta supstnca nije rastvorila u potpunosti. Nakon toga, smeša je tretirana acetonom (0,032 ml; 0,43 mmol), pa je dobijena smeša mešana 30 minuta pre dodavanja natrijum triacetoksiborohidrida (0,034 g; 0,16 mmol). Reakciona smeša je zatim ponovo mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 sata, a nakon toga reakcija je zaustavljena i proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C23H29ClN5O2(M+H)<+>: m/z = 442,2; utvrđeno: 442,1.

Primer 35.4-Amino-8-{1-[5-hloro-2-etoksi-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-4-metilfenil]etil}pirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-on bis(trifluoroacetat)

[0316]

Korak 1. Benzil 3-(3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)azetidin-1-karboksilat

[0317]

[0318] Cink (0,967 g; 14,8 mmol) je resuspendovan u 1,2-dibromoetanu (0,085 ml; 0,98 mmol) u N,N-dimetilformamidu (17 ml). Smeša je zatim grejana na 70°C tokom 10 minuta i potom je ohlađena do sobne temperature, pa je u kapima dodat hlorotrimetilsilan (0,125 ml; 0,984 mmol) i mešanje je nastavljeno tokom 1 sata. U smešu je Dalje je dodat rastvor benzil 3-jodoazetidin-1-karboksilata (firme PharmaBlock) (3,9 g; 12 mmol) u N,N-dimetilformamidu (10 ml) i smeša je grejana na 40°C tokom 1 sata. Nakon toga, u smešu su dodati 1-(5-hloro-2-etoksi-3-jodo-4-metilfenil)etanon (4,4 g; 13 mmol), tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (0,22 g; 0,24 mmol) i tri-(2-furil)fosfin (0,12 g; 0,50 mmol) u N,Ndimetilformamidu (30 ml). Reakciona smeša je zatim zagrejana do 70°C i mešana preko noći. Potom je smeša ohlađena do sobne temperature i preraspodeljena između etra i zasićenog vodenog rastvora NH4Cl. Organski slojevi su isprani vodom, osušeni upotrebom MgSO4, koncentrovani i prečišćeni na silika gelu (eluiranje sa 0 do 20% EtOAc u heksanima) da bi se dobio željeni proizvod (3,87 g; 78%). LCMS analiza, izračunato za C22H25ClNO4(M+H)<+>: m/z = 402,1; utvrđeno: 402,1.

Korak 2. Benzil 3-[3-hloro-6-etoksi-5-(1-hidroksietil)-2-metilfenil]azetidin-1-karboksilat

[0319]

[0320] U rastvor benzil 3-(3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)azetidin-1-karboksilata (0,35 g; 0,87 mmol) u metanolu (5 ml), ohlađenom na 0°C, dodat je natrijum tetrahidroborat (0,040 g; 1,0 mmol). Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 časa, a zatim je razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Organski slojevi su osušeni upotrebom MgSO4i koncentrovani da bi se dobio sirovi alkohol (0,31 g; 88%). LCMS analiza, izračunato za C22H27ClNO4(M+H)<+>: m/z = 404,2; utvrđeno: 404,0.

Korak 3. Benzil 3-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-etoksi-2-metilfenil]azetidin-1-karboksilat

[0321]

[0322] Na sobnoj temperaturi, cijanurin-hlorid (200 mg; 1,1 mmol) je dodat u N,N-dimetilformamid (0,083 ml; 1,1 mmol). Nakon obrazovanja bele čvrste supstance (približno 10 minuta), dodat je metilen hlorid (5 ml), a zatim je dodat i benzil 3-[3-hloro-6-etoksi-5-(1-hidroksietil)-2-metilfenil]azetidin-1-karboksilat (310 mg; 0,77 mmol). Nakon dodavanja, dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dalje je u smešu dodata voda, pa je smeša razblažena i dihlorometanom. Organske faze su isprane zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa su osušene upotrebom MgSO4, koncentrovane i prečišćene na silika gelu (eluiranje sa 0 do 40% EtOAc/heksani) da bi se dobio željeni proizvod (140 mg; 43%). LCMS analiza, izračunato za C22H26Cl2NO3(M+H)<+>: m/z = 422,1; utvrđeno: 422,0.

Korak 4. Benzil 3-{3-[1-(4-amino-5-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(5H)-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}azetidin-1-karboksilat

[0323]

[0324] U smešu 4-aminopirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-ona (11,5 mg; 0,0708 mmol), cezijum karbonata (34 mg; 0,10 mmol) i kalijum jodida (1,2 mg; 0,0071 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,2 ml) je dodat benzil 3-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-etoksi-2-metilfenil]azetidin-1-karboksilat (30 mg; 0,07 mmol). Smeša je zatim mešana na 140°C tokom 1 sata, pa je ohlađena i razblažena vodom i konačno ekstrahovana etrom. Organski slojevi su spojeni, osušeni upotrebom MgSO4i koncentrovani da bi se dobio sirovi proizvod koji je direktno iskorišćen u sledećem koraku. LCMS analiza, izračunato za C29H31ClN5O4(M+H)<+>: m/z = 548,2; utvrđeno: 548,2.

Korak 5.4-Amino-8-{1-[5-hloro-2-etoksi-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-4-metilfenil]etil}pirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-on bis(trifluoroacetat)

[0325]

[0326] U smešu benzil 3-{3-[1-(4-amino-5-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(5H)-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}azetidin-1-karboksilata (23 mg; 0,042 mmol) i 5% paladijuma na ugljeniku (10 mg) u metanolu (1,6 ml) je dodat 0,25 M rastvor hlorovodonika u vodi (0,42 ml; 0,10 mmol). Suspenzija je zatim hidrogenizovana u laboratorijskom balonu pod pritiskom H2na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Nakon izdvajanja katalizatora filtriranjem, filtrat je neutralisan zasićenim rastvorom NaHCO3i ekstrahovan dihlormetanom. Organski slojevi su spojeni, osušeni upotrebom MgSO4i koncentrovani da bi se dobio 4-amino-8-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etil]pirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-on (7 mg; 40%). U smešu sirovog amina u acetonitrilu (0,1 ml)/metanolu (0,1 ml)/tetrahidrofuranu (0,1 ml) je Dalje je dodat N,N-diizopropiletilamin (0,02 ml; 0,1 mmol), a zatim je dodat i aceton (0,03 ml; 0,4 mmol). Smeša je dalje mešana 30 minuta, a potom je dodat natrijum triacetoksiborohidrid (0,044 g; 0,21 mmol). Nakon ponovnog mešanja reakcione smeše na sobnoj temperaturi tokom 4 časa, reakcija je zaustavljena dodavanjem vode i smeša je prečiščena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% TFA, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod u vidu TFA soli. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C24H31ClN5O2(M+H)<+>: m/z = 456,2; utvrđeno: 456,1.

Primer 36.5-{3-[1-(4-Amino-5-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(5H)-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0327]

[0328] U smešu 4-aminopirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-ona (47 mg; 0,29 mmol), cezijum karbonata (130 mg; 0,39 mmol) i kalijum jodida (4,4 mg; 0,026 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,8 ml) je dodat 5-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-etoksi-2-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid (100 mg; 0,3 mmol; iz Primera 14, korak 4, racemski intermedijer), pa je smeša mešana na 140°C tokom 1 časa. Dobijena smeša je zatim razblažena sa MeOH i profiltrirana, pa je filtrat prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% TFA, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod u vidu TFA soli. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C16H28ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 507,2; utvrđeno: 507,1.

Primer 37.6-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-4-hloro-N-etil-3',5'-difluoro-3-metilbifenil-2-karboksamid

[0329]

Korak 1.3-Acetil-5-hloro-2-hidroksi-6-metilbenzonitril

[0330]

[0331] Smeša 1-(3-bromo-5-hloro-2-hidroksi-4-metilfenil)etanona (4,85 g; 18,4 mmol) i bakar-cijanida (2,47 g; 27,6 mmol) u N-metilpirolidinonu (15 ml) je grejana na 200°C tokom 1 h. Nakon hlađenja do sobne temperature, smeša je razblažena sa EtOAc i 1N HCI. Zatim su razdvojeni slojevi, pa je vodeni sloj ekstrahovan sa EtOAc. Organski slojevi su spojeni, isprani vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa su osušeni upotrebom magnezijum sulfata i dalje koncentrovani do suvog pod sniženim pritiskom. Ostatak je direktno iskorišćen u sledećem koraku (3,7 g; 96%). LCMS analiza, izračunato za C10H9ClNO2(M+H)<+>: m/z = 210,0; utvrđeno: 210,1.

Korak 2.6-Acetil- 4-hloro-2-cijano-3-metilfenil trifluormetansulfonat

[0332]

[0333] U smešu 3-acetil-5-hloro-2-hidroksi-6-metilbenzonitrila (3,70 g; 17,6 mmol) u metilen hloridu (70 ml) je dodat trietilamin (7,4 ml; 53 mmol), nakon čega je na -78°C dodat i trifluormetansulfonski anhidrid (4,4 ml; 26 mmol). Reakciona smeša je zatim ostavljena da se postepeno zagreje do sobne temperature, pa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Nakon zaustavljanja reakcije dodavanjem vode, smeša je ekstrahovana dihlorometanom. Organski slojevi su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom natrijum sulfata, pa su koncentrovani do suvog. Ostatak je prečišćen na silika gelu, eluiranjem sa 0 do 40% EtOAc u heksanima, a da bi se dobio željeni proizvod (2,54 g; 42%). LCMS analiza, izračunato za C11H8ClF3NO4S (M+H)<+>: m/z = 342,0; utvrđeno: 342,1.

Korak 3.6-Acetil-4-hloro-3’,5'-difluoro-3-metilbifenil-2-karbonitril

[0334]

[0335] Dvofazni rastvor 6-acetil-4-hloro-2-cijano-3-metilfenil trifluorometansulfonata (3,07 g; 8,98 mmol) i (3,5-difluorofenil)boronske kiseline (1,70 g; 10,8 mmol) u toluenu (30 ml)/0,8 M natrijum hidrogenekarbonatu u vodi (30 ml; 30 mmol) (navedni rastovr predstavlja zasićen rastvor NaHCO3u vodi) je degasiran sa N2, pa je dodat tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (0,414 g; 0,359 mmol). Smeša je zatim degasirana sa N2tokom 5 min, pa je grejana na 80°C tokom 2 h. Nakon hlađenja do sobne temperature, smeša je razblažena sa EtOAc. Dalje su razdvojeni slojevi i vodeni sloj je ekstrahovan sa dodatnim EtOAc. Ekstrakti su zatim spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom Na2SO4, pa su profiltrirani i koncentrovani do neprečiščene, tamne čvrste supstance. Supstanca je zatim rastvorena u CHCl3i prečišćena na koloni sa silika gelom, eluiranjem sa 0 do 20% EtOAc u heksanima, a da bi se dobio željeni proizvod (2,71 g; 99%). LCMS analiza, izračunato za C16H11ClF2NO (M+H)<+>: m/z = 306,0; utvrđeno: 306,1.

Korak 4.4-Hloro-3’,5'-difluoro-6-(1-hidroksietil)-3-metilbifenil-2-karbaldehid

[0336]

[0337] U smešu 6-acetil-4-hloro-3’,5'-difluoro-3-metilbifenil-2-karbonitrila (2,43 g; 7,95 mmol) u metilen hloridu (50 ml), na -78°C je dodat 1,0 M diizobutilaluminijum hidrid u heksanu (19,9 ml; 19,9 mmol). Reakciona smeša je zatim zgrejana do sobne temperature tokom 2 h uz mešanje, pa je polako dodat 5,0 M rastvor hlorovodonika u vodi (70 ml) i mešanje nastavljeno još 1 h. Dobijena smeša je dalje ekstrahovana sa EtOAc. Organski slojevi su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom natrijum sulfata pa su koncentrovani do suva. Ostatak je prečišćen na silika gelu, eluiranjem sa 0 do 50% EtOAc u heksanima, a da bi se dobio traženi proizvod (2,4 g; 97%). LCMS analiza, izračunato za C16H12ClF2O (M-OH)<+>: m/z = 293,1; utvrđeno: 293,1.

Korak 5.4-Hloro-3’,5'-difluoro-6-(1-hidroksietil)-3-metilbifenil-2-karboksilna kiselina

[0338]

[0339] U rastvor 4-hloro-3’,5'-difluoro-6-(1-hidroksietil)-3-metilbifenil-2-karbaldehida (1,00 g; 3,22 mmol) u metanolu (40 ml) je dodat 1,0 M natrijum hidroksid u vodi (16 ml; 16 mmol), a zatim je dodat i 1,0 M natrijum hidroksid u vodi. Nakon mešanja na sobnoj temperaturi preko noći, smeša je polako zakišeljena do pH 5 sa 1 N HCI, a zatim je ekstrahovana sa EtOAc. Organski slojevi su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom magnezijum sulfata, pa su koncentrovani do suva pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je direktno iskorišćen u sledećem koraku (1,05 g; 100%).

Korak 6.4-Hloro-N-etil-3’,5'-difluoro-6-(1-hidroksietil)-3-metilbifenil-2-karboksamid

[0340]

[0341] Smeša 4-hloro-3’,5'-difluoro-6-(1-hidroksietil)-3-metilbifenil-2-karboksilne kiseline (250 mg; 0,76 mmol), etilamin hidrohlorida (94 mg; 1,1 mmol) i benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata (0,51 g; 1,1 mmol) u N,N-dimetilformamidu (4 ml) je mešana na sobnoj temperaturi 10 min. U dobijenu smešu je zatim dodat N,N-diizopropiletilamin (0,40 ml; 2,3 mmol). Nakon mešanja na sobnoj temperaturi preko noći, reakcija je zaustavljena dodavanjem vodom, pa je smeša ekstrahovana sa EtOAc. Organski slojevi su spojeni, isprani vodom, koncentrovanim rastvorom soli, pa su osušeni upotrebom magnezijum sulfata i koncentrovani do suva. Ostatak je prečišćen na silika gelu, eluiranjem sa 0 do 80% EtOAc u heksanima, a da bi se dobio željeni proizvod (185 mg; 68%). LCMS analiza, izračunato za C18H19ClF2NO2(M+H)<+>: m/z = 354,1; utvrđeno: 354,0.

Korak 7.1-{4-Hloro-6-[(etilamino)karbonil]-3’,5'-difluoro-5-metilbifenil-2-il}etil metansulfonat

[0342]

[0343] U smešu 4-hloro-N-etil-3’,5'-difluoro-6-(1-hidroksietil)-3-metilbifenil-2-karboksamida (185 mg; 0,523 mmol) u metilen hloridu (3 ml) je dodat N,N-diizopropiletilamin (0,18 ml; 1,0 mmol), a zatim je dodat i metansulfonil hlorid (0,061 ml; 0,78 mmol). Reakciona smeša je dalje mešana na sobnoj temperaturi 10 min, pa je reakcija zaustavljena presipanjem smeše u ledenu vodu i smeša je ekstrahovana dihlormetanom. Organski slojevi su spojeni, isprani vodenim rastvorom natrijum bikabonata, pa su osušeni upotrebom magnezijum sulfata i uparavanjem do suva. Ostatak je direktno iskorišćen u sledećem koraku (0,226 g; 100%). LCMS analiza, izračunato za C19H21ClF2NO4S (M+H)<+>: m/z = 432,1; utvrđeno: 432,1.

Korak 8. 6-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-4-hloro-N-etil-3’,5'-difluoro-3-metilbifenil-2-karboksamid

[0344]

[0345] U smešu 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (firme ChemBridge) (26 mg; 0,17 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,5 ml) je dodat natrijum hidrid (14 mg; 0,35 mmol). Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta, u dobijenu smešu je dodata smeša 1-{4-hloro-6-[(etilamino)karbonil]-3’,5'-difluoro-5-metilbifenil-2-il}etil metansulfonata (50 mg; 0,1 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,5 ml). Reakciona smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi preko noći, pa je reakcija zaustavljena dodavanjem vode. Dobijena smeša je dalje prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C24H24ClF2N6O (M+H)<+>: m/z = 485,2; utvrđeno: 485,1

Primer 38.4-{3-[1-(4-Amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0346]

Korak 1.4-{3-[1-(4-Amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-karbonitril

[0347]

[0348] Natrijum hidrid (20 mg; 0,50 mmol) je dodat u smešu 4-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]piridin-2-karbonitrila (iz Primera 16, korak 3) (90 mg; 0,28 mmol) i 4-amino-pirazolo[3,4-d]pirimidina (firme Acros Organics) (57 mg; 0,42 mmol) u N,N-dimetilformamidu (4 ml), pa je reakciona smeša mešana na 30°C preko noći. Smeša je zatim tretirana vodom i dalje profiltrirana da bi se dobio željeni proizvod. LCMS analiza, izračunato za C21H19ClN7O (M+H)<+>: m/z = 420,1; utvrđeno: 420,1

Korak 2.4-{3-[1-(4-Amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-karboksilna kiselina

[0349]

[0350] Najpre je 1,0 M rastvor natrijum hidroksida u vodi (0,3 ml; 0,3 mmol) dodat u smešu 4-{3-[1-(4-amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-karbonitrila (60 mg; 0,14 mmol) u etanolu (0,3 ml). Reakciona smeša je zatim grejana na 95°C tokom 6 h, pa je tretirana koncentrovanom HCI da bi se pH smeše podesio na ~ 3. Dalje je pod sniženim pritiskom uklonjen rastvarač, a dobijeni ostatak je iskorišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS analiza, izračunato za C21H20ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 439,1; utvrđeno: 439,2

Korak 3.4-{3-[1-(4-Amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0351]

[0352] Dimetilamin (2,0 M) u THF (0,14 ml; 0,28 mmol) je dodat u rastvor 4-{3-[1-(4-amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-karboksilne kiseline (18,6 mg; 0,042 mmol) i benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata (10 mg; 0,03 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,7 ml) na sobnoj temperaturi, nakon čega je sledilo dodavanje i trietilamina (8,8 µl; 0,064 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana 1 sat, pa je reakcija zaustavljena dodavanjem vode.

Smeša je dalje prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min), a da bi se dobio traženi proizvod. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C23H25ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 466,2; utvrđeno: 466,2.

Primer 39.4-{3-[1-(4-Amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N-(2-hidroksietil)piridin-2-karboksamid

[0353]

[0354] Etanolamin (2,0 M) u THF (0,14 ml; 0,28 mmol) je na sobnoj temperaturi dodat u rastvor 4-{3-[1-(4-amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-karboksilne kiseline (iz Primera 38, korak 2) (18,6 mg; 0,042 mmol) i benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata (10 mg; 0,03 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,7 ml), nakon čega je sledilo dodavanje i trietilamina (8,8 µl; 0,064 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana 1 sat, pa je reakcija zaustavljena dodavanjem vode. Smeša je dalje prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min), a da bi se dobio traženi proizvod. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C23H25ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 482,2; utvrđeno: 482,2.

Primer 40.4-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-cijano-2-metoksi-6-metilfenil}-N-(2-hidroksietil)-N-metilpiridin-2-karboksamid

[0355]

[0356] Preformulacija katalizatora: Pre upotrebe, anhidrovani dimetilacetamid (DMA) je prečišćen blagom strujom N2tokom 30 minuta. Zatim je pripremljen 50 mM rastvor H2SO4upotrebom 10 ml dimetilacetamida i 26,8 µl konc. H2SO4, pa je rastvor produvavan sa N2tokom 10 minuta. U posudu zapremine 8 ml sa poklopcem na kome se nalazio septum, a u koju je bio dodat magnet za mešanje, dodati su Pd(OAc)2(22,5 Mg, 100 umol) i 2-dicikloheksilfosfino-2’,4',6'-triizopropilbifenil (95,3 mg; 200 umol). Iz posude je zatim izvučen vazduh, pa je posuda tri puta ispunjavana sa N2i izlagana blagoj struji N2tokom 10 minuta. Dalje je dodata H2SO4(2,0 ml; 50 mM u DMA) i smeša katalizatora je mešana u uljanom kupatilu na 80°C tokom 30 minuta, a da bi se dobio homogeni rastvor bolje kafe.

[0357] Navedeni katalizator (0,05 ml) je zatim dodat u smešu 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N-(2-hidroksietil)-N-metilpiridin-2-karboksamida (iz Primera 19) (4,0 mg; 0,0078 mmol), cinka (0,22 mg; 0,0034 mmol) i cink cijanida (0,92 mg; 0,0078 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (0,1 ml). Smeša je zatim degasirana, pa je reakciona smeša grejana na 120°C tokom 1,5 sata. Sirova smeša je dalje prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C26H29N8O3(M+H)<+>: m/z = 501,2; utvrđeno: 501,2

Primer 41.5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[4,3-c]piridin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0358]

Korak 1: N-(2,4-Dimetoksibenzil)-3-metil-1H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-amin

[0359]

[0360] Rastvor 4-hloro-3-metil-1H-pirazolo[4,3-c]piridina (330 mg; 1,9 mmol) i 1-(2,4-dimetoksifenil)metanamina (0,58 ml; 3,9 mmol) u 1-butanolu je grejan u mikrotalasnom reaktoru na 150°C tokom 40 minuta. Prečišćavanje preparativnim LCMS postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 60 ml/min) obezbedila je željeni proizvod (240 mg; 42%). LCMS analiza, izračunato za C16H19N4O2(M+H)<+>: m/z = 299,1; utvrđeno: 299,2.

Korak 2: 5-[3-Hloro-5-(1-{4-[(2,4-dimetoksibenzil)amino]-3-metil-1H-pirazolo[4,3-c]piridin-1-il}etil)-6-metoksi-2-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0361]

[0362] Rastvor N-(2,4-dimetoksibenzil)-3-metil-1H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-amina (110 mg; 0,37 mmol) u N,N-dimetilformamidu (2 ml) je tretiran natrijum hidridom (30 mg; 0,75 mmol) i mešan na 20°C tokom 30 minuta. Reakciona smeša je zatim tretirana rastvorom 5-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (130 mg; 0,34 mmol) u N,N-dimetilformamidu (1 ml), pa je grejana na 50°C preko noći. Reakciona smeša je dalje razblažena vodom i ekstrahovana etil acetatom (2x). Spojeni organski ekstrakti su isprani vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa su osušeni upotrebom magnezijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani do sirovog ostatka. Prečišćavanje preparativnim LCMS postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 60 ml/min) obezbedilo je željeni proizvod (110 mg; 49%). LCMS analiza, izračunato za C34H38ClN6O4(M+H)<+>: m/z = 629,3; utvrđeno: 629,1.

Korak 3: 5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[4,3-c]piridin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0363] Rastvor 5-[3-hloro-5-(1-{4-[(2,4-dimetoksibenzil)amino]-3-metil-1H-pirazolo[4,3-c]piridin-1-il}etil)-6-metoksi-2-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (85 mg; 0,14 mmol) u metilen hloridu (2 ml) je tretiran trifluorosirćetnom kiselinom (2 ml), pa je smeša mešana na 20°C tokom 3 sata i dalje na 40°C tokom 20 minuta. Prečišćavanje preparativnim LCMS postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% trifluorosirćetne kiseline, brzina protoka 60 ml/min) obezbedilo je željeni proizvod (44 mg; 46%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C25H28ClN6O2(M+H)<+>: m/z = 479,2; utvrđeno: 479,0.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 12,8 (br s, 0,5 H), 8,50 (br s, 0,5 H), 8,37 (br s, 2 H), 7,91 - 7,86 (m, 0,5 H), 7,80 - 7,75 (m, 0,5 H), 7,68 - 7,58 (m, 3 H), 7,17 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 6,19 (q, J = 6,9 Hz, 1H), 3,04 (s, 3H), 3,01 (s, 3H), 2,94 (s, 3H), 2,61 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 1,83 (d, J = 6,9 Hz, 3 H).

Primer 42.5-{3-[1-(4-Amino-5-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0364]

[0365] Traženo jedinjenje je pripremljeno praćenjem postupka iz Primera 41, korak 2, upotrebom 5-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-amina [ACES Pharma, 57974] kao polaznog materijala, a sa prinosom od 18%. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C25H28ClN6O2(M+H)<+>: m/z = 479,2; utvrđeno: 479,3.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 8,46 (br s, 1H), 8,31 (br s, 1H), 8,28 (s, 1H), 7,87 - 7,83 (m, 1H), 7,65 - 7,61 (m, 1H), 7,51 (s, 1H), 7,48 (s, 1H), 6,24 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 3,08 (s, 3H), 3,01 (s, 3H), 2,95 (s, 3H), 2,40 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 1,78 (d, J = 7,2Hz, 3H).

Primer 43.4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil[-6-hloro-3-etoksi-2-[5-(metilsulfonil)piridin-3-il]benzonitril

[0366]

Korak 1.1-(3-Bromo-5-hloro-4-fluoro-2-hidroksifenil)etanon

[0367]

[0368] U laboratorijski balon su odmereni 1-(5-hloro-4-fluoro-2-hidroksifenil)etanon (npr iz Primera 13, korak 1) (20,0 g; 101 mmol; 1,00 ekv) i 50% vodeni rastvor sumporne kiseline (120 ml). Dobijena smeša je zatim zagrejana do 60°C u vodenom kupatilu uz mešanje, pa je dodavan N-bromosukcinimid (21,52 g; 120,9 mmol; 1,20 ekv) u tri porcije [7,0 g 7,0 g 7,52 g] u intervalima od po 8 minuta. Nakon što je reakciona smeša grejana na 60°C tokom 3 časa, reakcija je zaustavljena, pa je reakciona smeša razblažena vodom (160 ml) i dihlorometanom (DCM) (300 ml) i mešana 30 min. Zatim je izdvojen organski sloj, pa je vodeni sloj ekstrahovan dihlorometanom (100 ml). Organski slojevi su spojeni, isprani sa 1 N HCI (100 ml x 2), vodom (100 ml) i koncentrovanim rastvorom soli (60 ml), pa su koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod (29,1 g) u vidu žućkaste čvrste supstance. Sirovi proizvod je zatim rastvoren u HOAc (100 ml) i dalje, uz mešanje, razblažen vodom (200 ml). Dobijena smeša je potom mešana 20 min na sobnoj temperaturi. Proizvod je prikupljen filtriranjem, pa je osušen da bi se dobio 1-(3-bromo-5-hloro-4-fluoro-2-hidroksifenil)etanon (21,8 g; 80,9%) u vidu žućkaste čvrste supstance.<1>H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 13,18 (s, 1H, -OH), 7,78 (d, J = 7,78 Hz, 1H), 2,63 (s, 3 H).

Korak 2.4-Acetil-2-bromo-6-hloro-3-etoksibenzonitril

[0369]

[0370] Najpre je 1-(3-bromo-5-hloro-4-fluoro-2-hidroksifenil)etanon (2,0 g; 7,5 mmol) pomešan sa kalijum cijanidom (0,58 g; 9,0 mmol) u N,N-dimetilformamidu (16 ml; 210 mmol), pa je smeša zagrejana do 85°C u uljanom kupatilu. Nakon grejanja od 18 časova, reakciona smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature i dalje su dodati jodoetan (0,90 ml; 11 mmol) i kalijum karbonat (2,1 g; 15 mmol). Reakciona smeša je zatim ponovo zagrejana do 65°C, pa je odvijanje reakcije praćeno upotrebom LC/MS postupka. Reakcija je zaustavljena nakon grejanja od 3 sata i smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Nakon toga, smeša je presuta u etil acetat, pa je isprana vodom, koncentrovanim rastvorom soli i osušena upotrebom magnezijum sulfata. Dobijeni rastvor je dalje koncentrovan da bi se obezbedio sirovi proizvod u vidu tamnog ulja. Proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na koloni sa silika gelom, eluiranjem sa smešom heksana i etil acetata, a da bi se dobio 4-acetil-2-bromo-6-hloro-3-etoksibenzonitril (1,15 gm, 50%) u vidu čvrstog ostatka. LCMS analiza, izračunato za C11H9BrClNO2(M+H)<+>: m/z = 301,9, 303,9; utvrđeno: (bez jonizacije)

Korak 3.2-Bromo-6-hloro-3-etoksi-4-(1-hidroksietil)benzonitril

[0371]

[0372] Natrijum tetrahidroborat (38 mg; 0,99 mmol) je dodat u smešu 4-acetil-2-bromo-6-hloro-3-etoksibenzonitrila (200 mg; 0,7 mmol) u metanolu (5 ml; 100 mmol) na 0°C. Reakciona smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi 1 sat, pa je dalje koncentrovana i preraspodeljena između vode i EtOAc. Organski slojevi su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom MgSO4, profiltrirani i koncentrovani, a da bi se dobio sirovi 2-bromo-6-hloro-3-etoksi-4-(1-hidroksietil)benzonitril u vidu bistrog ulja (0,15 g; 100%). LCMS analiza, izračunato za C11H11BrClNO2(M+H)<+>: m/z = 303,9, 305,9; utvrđeno: 304,0, 305,9.

Korak 4.2-Bromo-6-hloro-4-(1-hloroetil)-3-etoksibenzonitril

[0373]

[0374] Cijanurin-hlorid (0,11 g; 0,59 mmol) je rastvoren u N,N-dimetilformamidu (3 ml; 40 mmol). Nakon mešanja od nekoliko minuta, dodat je dodat rastvor 2-bromo-6-hloro-3-etoksi-4-(1-hidroksietil)benzonitrila (150 mg; 0,49 mmol) u metilen hloridu (3 ml; 50 mmol). Dobijena smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi preko noći, pa je preraspodeljena između vodi i dihlorometana. Organski sloj je ispran zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušen upotrebom MgSO4i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na koloni, eluiranjem sa gradijentom 0-30% smeše EtOAc i heksana, a da bi se dobio 2-bromo-6-hloro-4-(1-hloroetil)-3-etoksibenzonitril (0,12 gm, 75%) u vidu polučvrste supstance. LCMS analiza, izračunato za C11H10BrCl2NO (M+H)<+>: m/z = 323,9, 320,9; utvrđeno: (slaba jonizacija).

Korak 5.4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-bromo-6-hloro-3-etoksibenzonitril

[0375]

[0376] Natrijum hidrid (16 mg; 0,41 mmol) je dodat u smešu 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (33 mg; 0,22 mmol) u N,N-dimetilformamidu (3 ml; 40 mmol), pa je smeša mešana tokom 10 minuta. Dalje je dodat 2-bromo-6-hloro-4-(1-hloroetil)-3-etoksibenzonitril (60 mg; 0,2 mmol) u N,N-dimetilformamidu (2 ml) i reakciona smeša je mešana na 50°C preko noći. Smeša je zatim razblažena metilen hloridom, isprana zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana. Proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na koloni, eluiranjem sa 0-10% gradijentom CH2Cl2/MeOH, a da bi se dobio 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-bromo-6-hloro-3-etoksibenzonitril (0,05 gm, 60%) u vidu čvrste supstance. LCMS analiza, izračunato za C17H16BrClN6O (M+H)<+>: m/z = 437,0, 435,0; utvrđeno: 436,9, 434,7.

Korak 6.4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-[5-(metilsulfonil)piridin-3-il]benzonitril

[0377]

[0378] U smešu 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-bromo-6-hloro-3-etoksibenzonitrila (20 mg; 0,04 mmol) i 3-(metilsulfonil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridina (19 mg; 0,069 mmol) u acetonitrilu (2 ml; 40 mmol) je dodat natrijum karbonat (10 mg; 0,09 mmol) u vodi (0,5 ml; 30 mmol). Reakciona smeša je zatim degasirana produvavanjem sa azotom. Dalje je dodat kompleks [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijuma(II) sa dihlorometanom (1:1) (2 mg; 0,002 mmol), pa je smeša dodatno degasirana sa N2. Reakciona smeša je zatim grejana na 100°C tokom 2 časa. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom preparativnog LC-MS postupka (acetonitril, voda, TFA) da bi se dobio traženi proizvod (0,004 g; 20%) u vidu bele amorfne čvrste supstance. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C23H22ClN7O3S (M+H)<+>: m/z = 512,1; utvrđeno: 512,2.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 9,20 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 9,12 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 8,61 (t, J = 2,0 Hz, 1H), 8,12 (s, 1H), 7,80 (s, 1H), 6,36 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 3,54 (dt, J = 14,0, 7,0 Hz, 1H), 3,37 (s, 3H), 3,36- 3,30 (m, 1H), 2,58 (s, 3H), 1,81 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 0,92 (t, J = 6,9 Hz, 3H).

Primer 44. 5-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil)-N,N-dimetilpikolinamid

[0379]

[0380] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno na način analogan načinu opisanom u Primeru 43, korak 6, ali upotrebom N,N-dimetil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pikolinamida (Peptech, Kat. br. BE1622). Tako je dobijen sirovi proizvod koji je dalje prečišćen preparativnim LC-MS postupkom (acetonitril, voda, TFA), a da bi se dobio željeni proizvod (0,005 g; 22%) u vidu bele amorfne čvrste supstance. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C25H25ClN8O2(M+H)<+>: m/z = 505,1; utvrđeno: 505,1.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,72 (dd, J = 2,1; 0,7 Hz, 1H), 8,14- 8,12 (m, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,71 (dd, J = 8,0; 0,7 Hz, 1H), 6,35 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 3,61 - 3,48 (m, 1H), 3,42- 3,31 (m, 1H), 3,03 (s, 3H), 2,95 (s, 3H), 2,57 (s, 3H), 1,80 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 0,92 (t, J = 7,0 Hz, 3H).

Primer 45.5-{3-[1-(4-Amino-5-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(5H)-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-etoksi-fenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0381]

Korak 1.4-[1-(4-Amino-5-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(5H)-il)etil]-2-bromo-6-hloro-3-etoksibenzonitril

[0382]

[0383] Natrijum hidrid (16 mg; 0,41 mmol) je dodat u smešu 4-aminopirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-ona (36 mg; 0,22 mmol) u N,N-dimetilformamidu (3 ml; 40 mmol), pa se smeša mešana tokom 10 minuta. Zatim je dodat 2-bromo-6-hloro-4-(1-hloroetil)-3-etoksibenzonitril (Primer 43, korak 4) (60 mg; 0,2 mmol) u N,N-dimetilformamidu (2 ml) i nastavljeno je mešanje reakcione smeše na 50°C preko noći. Smeša je dalje razblažena metilen hloridom, isprana zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana. Proizvod je prečišćen upotrebom FCC postupka uz eluiranje sa CH2Cl2/MeOH (0-10%), a da bi se dobio 4-[1-(4-amino-5-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(5H)-il)etil]-2-bromo-6-hloro-3-etoksibenzonitril (0,04 g; 50%) u vidu čvrste supstance. LCMS analiza, izračunato za C18H15BrClN5O2(M+H)<+>: m/z = 450,0; 448,0; utvrđeno: 450,0; 448,0.

Korak 2.5-{3-[1-(4-Amino-5-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(5H)-i/)etil]-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0384]

[0385] U smešu 4-[1-(4-amino-5-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(5H)-il)etil]-2-bromo-6-hloro-3-etoksibenzonitrila (20 mg; 0,04 mmol) i {6-[(dimetilamino)karbonil]piridin-3-il}boronske kiseline (13 mg; 0,069 mmol) u acetonitrilu (2 ml; 40 mmol) je dodat natrijum karbonat (10 mg; 0,09 mmol) u vodi (0,5 ml; 30 mmol). Reakciona smeša je zatim degasirana produvavanjem sa azotom, pa je dodat kompleks [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijuma(II) sa dihlorometanom (1:1) (2 mg; 0,002 mmol) i smeša je dodatno degasirana sa N2. Reakciona smeša je dalje grejana na 100°C 1 h. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom preparativnog LC-MS postupka (acetonitril, voda, TFA) da bi se dobio traženi proizvod (0,005 g; 20%) u vidu bele amorfne čvrste supstance. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C26H24ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 518,1; utvrđeno: 518,1.

Primer 46. 4-(1-(4-Amino-5-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(5H)-il)etil)-6-hloro-3-etoksi-2-(5-(metilsulfonil)piridin-3-il)benzonitril

[0386]

[0387] Jedinjenje iz naslova je dobijeno na način analogan načinu opisanom u Primeru 45, korak 2, ali upotrebom 3-(metilsulfonil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridina (firme Anisin Inc., kataloški br. CT601515-3), da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je dalje prečišćen upotrebom preparativnog LC-MS postupka (acetonitril, voda, TFA) i tako je dobijen željeni proizvod (0,005 g; 22%) u vidu bele, amorfne čvrste supstance. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C24H21ClN6O2S (M+H)<+>: m/z = 525,1; utvrđeno: 525,2.

Primer 47.5-(3-{1-[4-Amino-3-(3-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0388]

[0389] U rastvor 5-{3-[1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (iz Primera 15) (15 mg; 0,025 mmol), (3-fluorofenil)boronske kiseline (firme Aldrich) (6,9 mg; 0,050 mmol), natrijum karbonata (16 mg; 0,15 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,1 ml)/vodi (74 µl), pod parom N2je dodat tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (2,9 mg; 0,0025 mmol). Smeša je zatim grejana na 100°C preko noći. Nakon hlađenja do sobne temperature, smeša je profiltrirana i filtrat je prečiščen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% trifluorosirćetne kiseline, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod u vidu bis-TFA soli. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C30H30ClFN7O2(M+H)<+>: m/z = 574,2; utvrđeno: 574,2.

Primer 48.5-(3-{1-[4-Amino-3-(1H-pirazol-4-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0390]

[0391] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure opisane u Primeru 47, upotrebom 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (firme Aldrich) umesto (3-fluorofenil)boronske kiseline. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C27H29ClN9O2(M+H)<+>: m/z = 546,2; utvrđeno: 546,2.

Primer 49.5-(3-{1-[4-Amino-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0392]

[0393] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure opisane u Primeru 47, upotrebom 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (firme Aldrich) umesto (3-fluorofenil)boronske kiseline. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C28H31ClN9O2(M+H)<+>: m/z = 560,2; utvrđeno: 560,2.

Primer 50.5-(3-{1-[4-Amino-3-(1-metil-1H-pirazol-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0394]

[0395] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure opisane u Primeru 47, upotrebom 1-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (firme Frontier) umesto (3-fluorofenil)boronske kiseline. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C28H31ClN9O2(M+H)<+>: m/z = 560,2; utvrđeno: 560,2.

Primer 51.5-(3-{1-[4-Amino-3-(1H-pirazol-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0396]

[0397] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure opisane u Primeru 47, upotrebom 1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (firme Aldrich) umesto (3-fluorofenil)boronske kiseline. Sirova smeša je pre prečišćavanja tretirana konc. HCI (0,1 ml) na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C27H29ClN9O2(M+H)<+>: m/z = 546,2; utvrđeno: 546,2.

Primer 52.5-[3-(1-{4-Amino-3-[1-(2-hidroksietil)-1H-pirazol-4-il]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il}etil)-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0398]

[0399] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure opisane u Primeru 47, upotrebom 1-(2-{[terc-butil(dimetil)silil]oksi}etil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (iz Primera 20, korak 3) umesto (3-fluorofenil)boronske kiseline. Sirova smeša je pre prečišćavanja tretirana konc. HCI (0,1 ml) na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C29H33ClN9O3(M+H)<+>: m/z = 590,2; utvrđeno: 590,2.

Primer 53.5-{3-[1-(4-Amino-3-ciklopropil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0400]

[0401] Smeša 5-{3-[1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (11 mg; 0,018 mmol; racemski intermedijer iz Primera 15), kalijum ciklopropiltrifluoroborata (3,2 mg; 0,022 mmol), kalijum-fosfata (12 mg; 0,054 mmol) i tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma(0) (0,42 mg; 0,00036 mmol) u toluenu (0,05 ml)/vodi (0,02 ml) (v/v, 3/1) je grejana na temperaturi refluksa tokom noći. Smeša je zatim razblažena sa MeOH, pa profiltrirana. Filtrat je dalje prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% trifluorosirćetne kiseline, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod u vidu bis-TFA soli. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C27H31ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 520,2; utvrđeno: 520,2.

Primer 54.5-{3-[1-(4-Amino-3-cijano-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0402]

[0403] Smeša 5-{3-[1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (13 mg; 0,021 mmol; racemski intermedijer iz Primera 15) i bakar cijanida (12 mg; 0,13 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,2 ml) je grejana na 120°C preko noći. Smeša je zatim profiltrirana i prečiščena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C25H26ClN8O2(M+H)<+>: m/z = 505,2; utvrđeno: 505,2.

Primer 55. 5-(3-{1-[4-Amino-3-(4-fluorfenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0404]

[0405] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure opisane u Primeru 47, upotrebom 4-fluorofenilboronske kiseline (firme Aldrich) umesto (3-fluorofenil)boronske kiseline. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C30H30ClFN7O2(M+H)<+>: m/z = 574,2; utvrđeno: 574,2.

Primer 56.5-{4-Amino-1-[1-(5-hloro-3-{6-[(dimetilamino)karbonil]piridin-3-il}-2-etoksi-4-metilfenil)etil]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid tris(trifluoroacetat)

[0406]

[0407] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure opisane u Primeru 47, upotrebom N,N-dimetil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-karboksamida (firme PepTech) umesto (3-fluorofenil)boronske kiseline. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C32H35ClN9O3(M+H)<+>: m/z = 628,3; utvrđeno: 628,3.

Primer 57.5-(3-{1-[4-Amino-3-(5-cijanopiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid tris(trifluoroacetat)

[0408]

[0409] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure opisane u Primeru 47, upotrebom 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)nikotinonitrila (firme Frontier) umesto (3-fluorofenil)boronske kiseline. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C30H29ClN9O2(M+H)<+>: m/z = 582,2; utvrđeno: 582,2.

Primer 58.5-(3-{1-[4-Amino-3-(2-aminopirimidin-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid tris(trifluoroacetat)

[0410]

[0411] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure opisane u Primeru 47, upotrebom 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirimidin-2-amina umesto (3-fluorofenil)boronske kiseline. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C28H30ClN10O2(M+H)<+>: m/z = 573,2; utvrđeno: 573,2.

Primer 59.5-{3-[1-(4-Amino-3-{6-[(metilamino)karbonil]piridin-3-il}-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid tris(trifluoroacetat)

[0412]

[0413] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure opisane u Primeru 47, upotrebom N-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-karboksamida (firme Frontier) umesto (3-fluorofenil)boronske kiseline. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C31H33ClN9O3(M+H)<+>: m/z = 614,2; utvrđeno: 614,2.

Primer 60.5-{3-[1-(4-Amino-3-piridin-4-il-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid tris(trifluoroacetat)

[0414]

[0415] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure opisane u Primeru 47, upotrebom 4-piridinilboronske kiseline (firme Aldrich) umesto (3-fluorofenil)boronske kiseline. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C29H30ClN8O2(M+H)<+>: m/z = 557,2; utvrđeno: 557,2.

Primer 61.5-{3-[1-(4-Amino-3-piridin-3-il-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid tris(trifluoroacetat)

[0416]

[0417] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure opisane u Primeru 47, upotrebom 3-piridinilboronske kiseline (firme Aldrich) umesto (3-fluorofenil)boronske kiseline. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C29H30ClN8O2(M+H)<+>: m/z = 557,2; utvrđeno: 557,2.

Primer 62.5-{3-[1-(4-Amino-3-{5-[(dimetilamino)karbonil]piridin-3-il}-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid tris(trifluoroacetat)

[0418]

[0419] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure opisane u Primeru 47, upotrebom N,N-dimetil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)nikotinamida (firme PepTech) umesto (3-fluorofenil)boronske kiseline. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C32H35ClN9O3(M+H)<+>: m/z = 628,3; utvrđeno: 628,3.

Primer 63.1-{1-[5-Hloro-2-metoksi-4-metil-3-(1-oksetan-3-ilazetidin-3-il)fenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0420]

[0421] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (21 mg; 0,046 mmol; racemski intermedijer iz Primera 2, korak 1), oksetan-3-ona (firme Synthonix, 3,6 mg; 0,050 mmol), i trietilamina (20 µl; 0,14 mmol) u metilen hloridu (0,32 ml) je dodata smola natrijum triacetoksiborohidrida (40 mg; 0,091 mmol). Dobijena smeša je zatim mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Smeša je dalje profiltirana i koncentrovana, a potom prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod (2 mg; 9,9%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C22H28ClN6O2(M+H)<+>: m/z = 443,2; utvrđeno: 443,1.

Primer 64.1-(1-{5-Hloro-2-metoksi-4-metil-3-[1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)azetidin-3-il]fenil}etil)-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0422]

[0423] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (21 mg; 0,046 mmol; racemski intermedijer iz Primera 2, korak 1), tetrahidro-4H-piran-4-ona (firme Aldrich, 4,6 µl; 0,050 mmol) i trietilamina (20 µl; 0,14 mmol) u metilen hloridu (0,32 ml) je dodata smola natrijum triacetoksiborohidrida (40 mg; 0,091 mmol). Dobijena smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Smeša je zatim profiltirana i koncentrovana, pa prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C24H32ClN6O2(M+H)<+>: m/z = 471,2; utvrđeno: 471,2.

Primer 65.5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilnikotinamid

[0424]

[0425] Smeša 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (25 mg; 0,061 mmol) (hiralno čist, prvi pik iz Primera 20, korak 2), N,N-dimetil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) nikotinamida (firme PepTech) (25 mg; 0,091 mmol), natrijum karbonata (13 mg; 0,12 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijuma(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1), (9,9 mg; 0,012 mmol), u acetonitrilu (0,8 ml)/vodi (0,3 ml) je degasirana sa N2, a zatim je mešana na 95°C tokom 2 h. Smeša je dalje profiltirana, pa je filtrat prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod. Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C24H27ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 480,2; utvrđeno: 480,2.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,64 (1H, s), 8,54 (1H, br s), 8,13 (1H, s), 7,82 (1 H, m), 7,53 (1H, s), 7,42 (2H, br s), 6,28 (1H, q, J = 6,5 Hz), 3,22 (3H, s), 2,95 (6H, m), 2,58 (3H, s), 2,04 (3H, s), 1,77 (3H, d, J = 6,5Hz) ppm.

Primer 66.5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0426]

[0427] Smeša 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (25 mg; 0,061 mmol) (hiralno čist, prvi pik iz Primera 20, korak 2), N,N-dimetil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-karboksamida (25 mg; 0,091 mmol), natrijum karbonata (13 mg; 0,12 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]-dihloropaladijuma (II), kompleks sa dihlorometanom (1:1), (9,9 mg; 0,012 mmol) u acetonitrilu (0,8 ml)/vodi (0,3 ml) je degasirana sa N2, pa je mešana na 95°C tokom 2 časa. Nakon hlađenja do sobne temperature, smeša je profiltirana, a filtrat je prečiščen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% trifluorosirćetne kiseline, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod u vidu bis-TFA soli. Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C24H27ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 480,2; utvrđeno: 480,2.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ: 8,78 (2H, br s), 8,48 (1H, m), 8,36 (1H, s), 7,86 (1H, br s), 7,65 (1H, br s), 7,58 (1H, s), 6,33 (1H, q, J = 7,0 Hz), 3,19 (3H, s), 3,03 (3H, s), 2,97 (3H, s), 2,62 (3H, s), 2,06 (3H, s), 1,81 (3H, d, J = 7,0 Hz) ppm.

Primer 67.1-{1-[5-Hloro-4-fluoro-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-2-metoksifenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0428]

Korak 1.1-[1-(3-Azetidin-3-il-5-hloro-4-fluoro-2-metoksifenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorid

[0429] Najpre je terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-fluoro-2-metoksifenil}azetidin-1-karboksilat (1,6 g; 3,2 mmol; iz Primera 13, korak 7) tretiran 4,0 M rastvorom hlorovodonika u dioksanu (8,15 ml; 32,6 mmol) u metilen hloridu (17 ml) na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Smeša je zatim koncentrovana do suva da bi se dobio traženi proizvod. LCMS analiza, izračunato za C18H21ClFN6O (M+H)<+>: m/z = 391,1; utvrđeno: 391,1.

Korak 2.1-{1-[5-Hloro-4-fluoro-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-2-metoksifenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0430] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-4-fluoro-2-metoksifenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (0,90 g; 1,9 mmol; Primer 67, korak 1), acetona (1,0 ml; 14 mmol) i trietilamina (2,5 ml; 18 mmol) u metilen hloridu (20 ml) je dodata smola natrijum triacetoksiborohidrida (2,5 g; 5,8 mmol). Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h, a potom je profiltrirana, isprana vodom, osušena upotrebom MgSO4, opet profiltrirana i koncentrovana da bi se dobio sirovi proizvod (870 mg; 100%). LCMS analiza, izračunato za C21H27ClFN6O (M+H)<+>: m/z = 433,2; utvrđeno: 433,1

Korak 3. Pojedinačni enantiomer 1-{1-[5-hloro-4-fluoro-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-2-metoksifenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina

[0431] Enantiomeri 1-{1-[5-hloro-4-fluoro-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-2-metoksifenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (870 mg; 2,0 mmol) su razdvojeni na Phenomenex Lux-Cellulose 2 koloni, eluiranjem sa 10% etanolom u heksanima (brzina protoka 18 ml/min, nanošena količina ~8 mg po injeciranju), a da bi se izdvojila dva enantiomera. Retenciono vreme prvog pika je iznosilo 10,9 min, dok je za drugi pik retenciono vreme bilo 13,6 min. Frakcije prvog pika (110 mg; 13%) su koncentrovane i prečišćene primenom reverzno-faznog HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min), a da bi se dobio željeni proizvod. Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C21H21ClFN6O (M+H)<+>: m/z = 433,2; utvrđeno: 433,1

Primer 68. (2S)-1-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-fluoro-2-metoksifenil}azetidin-1-il)propan-2-ol

[0432]

[0433] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-4-fluoro-2-metoksifenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (15 mg; 0,032 mmol; iz Primera 67, korak 1) i trietilamina (18 µl; 0,13 mmol) u etanolu (0,53 ml) je dodat (S)-(-)-metiloksiran (6,8 µl; 0,097 mmol). Dobijena smeša je zatim grejana na 90°C tokom 3 h, pa je dalje prečiščena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) i tako je dobijen željeni proizvod. Enantiomeri su zatim razdvojeni upotrebom Phenomenex Lux-Cellulose C-4 kolone (5 µM, 21,2 x 250 mm), eluiranjem sa 20% etanolom u heksanima, pri brzini protoka od 18 ml/min, a da bi se dobila dva enantiomera. Retenciono vreme prvog pika (2,7 mg; 18%) je iznosilo 8,9 min; LCMS analiza, izračunato za C21H27ClFN6O2(M+H)<+>: m/z = 449,2; utvrđeno: 449,1.<1>H NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 8,11 (1H, s), 7,42 (1H, d, J = 8,5Hz), 7,25 (2H, br s), 6,21 (1H, q, J = 7,5 Hz), 4,28 (1H, d, J = 4,0 Hz), 3,82 (3H, m), 3,62 (3H, s), 3,55 (1H, m), 3,05 (1H, m), 2,97 (1H, m), 2,55 (3H, s), 2,28 (2H, m), 1,70 (2H, d, J = 7,5 Hz), 1,00 (3H, d, J = 6,0Hz) ppm. Retenciono vreme drugog pika je iznosilo 10,0 min.

Primer 71.2-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil[-5-hloro-6-fluoro-2-metoksifenil}azetidin-1-il)etanol

[0434]

[0435] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-4-fluoro-2-metoksifenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (19 mg; 0,041 mmol; racemski intermedijer iz Primera 67, korak 1) i trietilamina (28 µl; 0,20 mmol) u metanolu (0,1 ml)/acetonitrilu (0,1 ml)/tetrahidrofuranu (0,1 ml) je dodat {[terc-butil (dimetil)silil]oksi}acetaldehid (39 µl; 0,20 mmol), a zatim je dodat i natrijum triacetoksiborohidrid (22 mg; 0,10 mmol), pa je dobijena smeša mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Smeša je zatim tretirana sa 6,0 M rastvorom hlorovodonika u vodi (0,07 ml; 0,4 mmol) na sobnoj temperaturi tokom 10 min i dalje je prečiščena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod (2,5 mg; 13%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C20H25ClFN6O2(M+H)<+>: m/z = 435,2; utvrđeno: 435,1.

Primer 72.1-{1-[5-Hloro-4-fluoro-2-metoksi-3-(1-oksetan-3-ilazetidin-3-il)fenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0436]

[0437] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-4-fluoro-2-metoksifenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (19 mg; 0,041 mmol racemski intermedijer iz Primera 67, korak 1) i trietilamina (28 µl; 0,20 mmol) u metanolu (0,1 ml)/acetonitrilu (0,1 ml)/tetrahidrofuranu (0,1 ml) je dodat 37% formaldehid (15 µl; 0,20 mmol), a zatim je dodat i natrijum triacetoksiborohidrid (22 mg; 0,10 mmol). Dobijena smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Smeša je zatim prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod (1,2 mg; 6,3%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C19H23ClFN6O (M+H)<+>: m/z = 405,2; utvrđeno: 405,1.

Primer 73.1-{1-[5-Hloro-4-fluoro-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-2-metoksifenil]etil}-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0438]

Korak 1. terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-fluoro-2-metoksifenil)azetidin-1-karboksilat

[0439] U smešu terc-butil 3-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-2-fluoro-6-metoksifenil]azetidin-1-karboksilata (0,77 g; 2,0 mmol; racemski intermedijer iz Primera 13, korak 6,) i 3- jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (0,58 g; 2,2 mmol) u N,N-dimetilformamidu (6,9 ml) su dodati kalijum jodid (34 mg; 0,20 mmol) i cezijum karbonat (0,99 g; 3,0 mmol). Dobijena smeša je zatim grejana na 140°C i mešana tokom 3 sata. Nakon hlađenja, bistar rastvor je presut u smešu vode i etil acetata (EtOAc). Čvrsti ostatak je takođe razblažen smešom vode i EtOAc, pa je smeša mešana dok se supstaca nije u potpunosti rastvorila. Zatim su organski slojevi spojeni, koncentrovani i prečišćeni na silika gelu (eluiranje sa 0 do 100% EtOAc u heksanima) da bi se dobio željeni proizvod (0,55 g; 45%). LCMS analiza, izračunato za C22H26ClFIN6O3(M+H)<+>: m/z = 603,1; utvrđeno: 602,9.

Korak 2. terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-vinil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-fluoro-2-metoksifenil}azetidin-1-karboksilat

[0440] U rastvor terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-fluoro-2-metoksifenil}azetidin-1-karboksilata (0,55 g; 0,91 mmol), 4,4,5,5-tetrametil-2-vinil-1,3,2-dioksaborolana (0,281 g; 1,82 mmol) i natrijum karbonata (0,580 g; 5,47 mmol) u N,N-dimetilformamidu (5 ml)/vodi (2,73 ml), pod N2je dodat tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (0,105 g; 0,0910 mmol). Smeša je zatim grejana na 100°C preko noći. Nakon hlađenja do sobne temperature, smeša je razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Organski slojevi su zatim spojeni, koncentrovani i prečišćeni na silika gelu (eluiranje sa 0 do 100% EtOAc u heksanima nakon čega je sledilo eluiranje sa 0 do 10% MeOH u dihlorometanu) da bi se dobio željeni proizvod (0,34 g; 74%). LCMS analiza, izračunato za C24H29ClFN6O3(M+H)<+>: m/z = 503,2; utvrđeno: 503,1.

Korak 3. terc-Butil 3-(3-{1-[4-amino-3-(1,2-dihidroksietil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5- hloro-6-fluoro-2-metoksifenil)azetidin-1-karboksilat

[0441] U rastvor terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-3-vinil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-fluoro-2-metoksifenil}azetidin-1-karboksilata (340 mg; 0,680 mmol) u terc-butil alkoholu (5 ml) dodati su N-metilmorfolin N-oksid (87 mg; 0,74 mmol) i voda (2,1 ml). U ovakav rastvor je zatim dodat 4% osmijum tetraoksid (0,21 ml; 0,034 mmol). Nakon mešanja od 3 h, dodat ja još jedan ekvivalent N-metilmorfolin N-oksida. Reakciona smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Rastvor je dalje razblažen vodom i ekstrahovan sa EtOAc. Organski slojevi su spojeni, osušeni upotrebom MgSO4, profiltrirani i koncentrovani, a da bi se dobio sirovi proizvod (0,4 g; 100%) koji je direktno iskorišćen u narednom koraku. LCMS analiza, izračunato za C24H31ClFN6O5(M+H)<+>: m/z = 537,2; utvrđeno: 537,2.

Korak 4. terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-formil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-fluoro-1-metoksifenil}azetidin-1-karboksilat

[0442] U rastvor terc-butil 3-(3-{1-[4-amino-3-(1,2-dihidroksietil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-6-fluoro-2-metoksifenil)azetidin-1-karboksilata (0,40 g; 0,74 mmol) u tetrahidrofuranu (5,6 ml)/vodi (3,4 ml), na 0°C su dodati sirćetna kiselina (0,011 ml; 0,19 mmol) i natrijum perjodat (0,478 g; 2,23 mmol). Nakon mešanja od 2 h, reakciona smeša je razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Organski slojevi su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom MgSO4, profiltrirani i koncentrovani da bi se dobio željeni proizvod (0,35 g; 92%) koji je direktno iskorišćen u narednom koraku. LCMS analiza, izračunato za C23H27ClFN6O4(M+H)<+>: m/z = 505,2; utvrđeno: 505,1.

Korak 5. terc-Butil 3-(3-{1-[4-amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-6-fluoro-2-metoksifenil)azetidin-1-karboksilat

[0443] U rastvor terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-3-formil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-fluoro-2-metoksifenil}azetidin-1-karboksilata (0,35 g; 0,69 mmol) u metilen hloridu (4 ml), ohlađen na 0°C, ukapavanjem je dodat dietilaminosumpor trifluorid (0,23 ml; 1,7 mmol). Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi 2 h, pa je smeša razblažena dihlorometanom, isprana vodom, osušena upotrebom MgSO4, profiltrirana i konačno koncentrovana i prečišćena na silika gelu (eluiranje sa 0 do 100% EtOAc u heksanima) da bi se dobio željeni proizvod (0,21 g; 57%). LCMS analiza, izračunato za C23H27ClF3N6O3(M+H)<+>: m/z = 527: 2; utvrđeno: 527,2.

Korak 6.1-[1-(3-Azetidin-3-il-5-hloro-4-fluoro-2-metoksifenil)etil]-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina dihidrohlorid

[0444] Najpre je terc-butil 3-(3-{1-[4-amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-6-fluoro-2-metoksifenil)azetidin-1-karboksilat (0,21 g; 0,40 mmol) tretiran sa 4,0 M rastvorom hlorovodonika u dioksanu (1 ml; 4 mmol) u metilen hloridu (4 ml) na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Smeša je zatim koncentrovana da bi se dobio željeni proizvod (0,177 g; 89%). LCMS analiza, izračunato za C18H19ClF3N6O (M+H)<+>: m/z = 427,1; utvrđeno: 427,1.

Korak 7.1-{1-[5-Hloro-4-fluoro-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-2-metoksifenil]etil}-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin- 4-amin

[0445] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-4-fluoro-2-metoksifenil)etil]-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (45 mg; 0,090 mmol), acetona (37 mg; 0,63 mmol) i trietilamina (63 µl; 0,45 mmol) u metilen hloridu (0,9 ml) je dodata smola natrijum triacetoksiborohidrida (0,12 g; 0,27 mmol). Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h, pa je profiltrirana, koncentrovana i prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min). Tako je dobijen željeni proizvod (2,5 mg; 6,8%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C21H25ClF3N6O (M+H)<+>: m/z = 469,2; utvrđeno: 469,2.

Primer 74.2-[3-(3-{1-[4-Amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-6-fluoro-2-metoksifenil)azetidin-1-il]etanol

[0446]

[0447] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-4-fluoro-2-metoksifenil)etil]-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (45 mg; 0,090 mmol), {[tercbutil(dimetil)silil]oksi}acetaldehida (110 mg; 0,63 mmol) i trietilamina (63 µl; 0,45 mmol) u metilen hloridu (0,9 ml) je dodata smola natrijum triacetoksiborohidrida (0,12 g; 0,27 mmol). Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h, pa je profiltirana. Filtrat je dalje tretiran 6,0 M rastvorom hlorovodonika u vodi (0,2 ml; 0,9 mmol) i prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod (2,5 mg; 5,6%). LCMS analiza, izračunato za C20H23ClF3N6O2(M+H)<+>: m/z = 471,1; utvrđeno: 471,2. Racemski proizvod je izdvojen na Phenomenex Lux celuloza-4 koloni, eluiranjem sa 20% etanolom u heksanima, pri brzini protoka od 18 ml/min i sa nanetom količinom od ~4 mg po injeciranju, a da bi se razvojila dva enantiomera. Retenciono vreme prvog pika 13,1 min; Retenciono vreme drugog pika 16,3 min.

Primer 76. (2S)-1-[3-(3-{1-[4-Amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-6-fluoro-2-metoksifenil)azetidin-1-il] propan-2-ol

[0448]

[0449] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-4-fluoro-2-metoksifenil)etil]-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (51 mg; 0,10 mmol; racemski intermedijer iz Primera 73, korak 6) i trietilamina (57 µl; 0,41 mmol) u etanolu (1,7 ml) je dodat (S)-(-)-metiloksiran (18 µl; 0,26 mmol). Dobijena smeša je zatim grejana na 90°C tokom 3 h, pa je prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod (2,7 mg; 5,3%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C21H25ClF3N6O2(M+H)<+>: m/z = 485,2; utvrđeno: 485,1.

Primer 77.5-(1-(4-Amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-2-fluoro-3-(1-((S)-2-hidroksipropil)azetidin-3-il)-4-metoksibenzonitril

[0450]

[0451] U posudu za grejanje u mikrotalasnom reaktoru koja je sadržavala (2S)-1-[3-(3-{1-[4-amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-6-fluoro-2-metoksifenil)azetidin-1-il]propan2-ol (16 mg; 0,032 mmol; iz Primera 76) su dodati cink (1,0 mg; 0,016 mmol), bis(tri-tbutilfosfin)paladijum (6,5 mg; 0,013 mmol) i N-metilpirolidinon (0,20 ml; 2,0 mmol). Smeša je zatim degasirana sa N2samo nekoliko minuta pre dodavanja cink cijanida (7,5 mg; 0,064 mmol). Dobijena smeša je dalje mešana na 130°C preko noći i potom je ohlađena i prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod (1,8 mg; 11,2%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C22H25F3N7O2(M+H)<+>: m/z = 476,2; utvrđeno: 476,2

Primer 79.5-[3-(1-{4-Amino-3-[(3R)-3-hidroksibut-1-in-1-il]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il}etil)-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0452]

[0453] Smeša 5-{3-[1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (9,8 mg; 0,016 mmol; racemski intermedijer iz Primera 15) i bakar(I) jodida (0,6 mg; 0,003 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,32 ml) je tretirana sa (2R)-but-3-in-2-olom (11,3 mg; 0,162 mmol), trietilaminom (4,5 ml; 0,032 mmol) i tetrakis-(trifenilfosfin)-paladijumom(0) (1,9 mg; 0,0016 mmol) u atmosferi N2. Smeša je zatim mešana pod N2na sobnoj temperaturi tokom 1 h, pa je prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% TFA, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod u vidu bis-TFA soli (4,3 mg; 44%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C28H31ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 548,2; utvrđeno: 548,1.

Primer 80.5-[3-(1-{4-Amino-3-[(3S)-3-hidroksibut-1-in-1-il]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il}etil)-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0454]

[0455] Navedeno jedinjenje je pripremljeno primenom postupaka analognih postupcima opisanim u Primeru 79, upotrebom (2S)-but-3-in-2-ola umesto (2R)-but-3-in-2-ola. Proizvod je izolovan kao smeša dijastereomera. LCMS analiza, izračunato za C28H31ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 548,2; utvrđeno: 548,1.

Primer 81.5-{3-[1-(4-Amino-3-etil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0456]

Korak 1.5-{3-[1-(4-Amino-3-vinil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-1-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0457] Rastvoru 5-{3-[1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (130 mg; 0,21 mmol; racemski intermedijer iz Primera 15), 4,4,5,5-tetrametil-2-vinil-1,3,2-dioksaborolana (66 mg; 0,43 mmol), natrijum karbonata (136 mg; 1,29 mmol) u N,N-dimetilformamidu (1 ml)/vodi (0,64 ml) u atmosferi N2je dodat tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (25 mg; 0,021 mmol). Smeša je zatim grejana na 100°C preko noći. Nakon hlađenja do sobne temperature, smeša je razblažena vodom, pa je ekstrahovana sa dihlormetanom. Organski slojevi su koncentrovani i prečišćeni na silika gelu (eluiranje sa 0 do 100% EtOAc u heksanima nakon čega je sledilo eluiranje sa 0 do 10% MeOH u dihlorometanu) da bi se dobio željeni proizvod (94 mg; 86%). LCMS analiza, izračunato za C26H29ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 506,2; utvrđeno: 506,2.

Korak 2.5-{3-[1-(4-Amino-3-etil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1il)etil]-5-hloro-1-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0458] U smešu 5-{3-[1-(4-amino-3-vinil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (14 mg; 0,028 mmol) i 5% platine na ugljeniku (14 mg) u metanolu (1 ml) je dodat 0,25 M rastvor hlorovodonika u vodi (0,28 ml; 0,069 mmol). Suspenzija je zatim hidrogenizovana u balonu sa H2pod pritiskom, na sobnoj temperaturi, tokom 3 h. Suspenzija je dalje proprofiltirana, pa je filtrat prečiščen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod (3,9 mg; 28 %). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C26H31ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 508,2; utvrđeno: 508,3.

Primer 82.5-(3-{1-[4-Amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoracetat)

[0459]

Korak 1.5-(3-{1-[4-Amino-3-(1,2-dihidroksietil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0460] Rastvoru 5-{3-[1-(4-amino-3-vinil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (80 mg; 0,16 mmol; iz Primera 81, korak 1) u terc-butil alkoholu (1 ml) su dodati N-metilmorfolin N-oksid (20 mg; 0,17 mmol) i voda (0,50 ml). U ovakav rastvor je zatim dodat 4% osmijum tetraoksid (5,0 µl; 0,00079 mmol). Nakon 3 h mešanja, dodat je i drugig ekvivalent N-metilmorfolin N-oksida, pa je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Rastvor je dalje razblažen vodom i ekstrahovan sa EtOAc. Organski slojevi su spojeni, osušeni upotrebom MgSO4, profiltrirani i koncentrovani da bi se dobio traženi proizvod (0,64 g; 95%). LCMS analiza, izračunato za C26H31ClN7O4(M+H)<+>: m/z = 540,2; utvrđeno: 540,2.

Korak 2.5-{3-[1-(4-Amino-3-formil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0461] Rastvoru 5-(3-{1-[4-amino-3-(1,2-dihidroksietil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (70 mg; 0,13 mmol) u tetrahidrofuranu (0,98 ml) i vodi (0,59 ml) dodata su sirćetna kiselina (1,9 µl; 0,034 mmol) i natrijum perjodat (83 mg; 0,39 mmol) na 0°C. Nakon mešanja od 2 h, reakciona smeša je razblažena vodom i ekstrahovana dihlorometanom. Organski slojevi su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom MgSO4, profiltrirani i koncentrovani da bi se dobio željeni proizvod (0,059 g; 90%). LCMS analiza, izračunato za C25H27ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 508,2; utvrđeno: 508,1.

Korak 3.5-(3-{1-[4-Amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)- N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0462] Rastvoru 5-{3-[1-(4-amino-3-forinil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (8,8 mg; 0,017 mmol) u metilen hloridu (0,1 ml), ohlađenom na 0°C, u kapima je dodat dietilaminosumpor trifluorid (5,7 µl; 0,043 mmol). Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h, pa je dalje razblažena sa MeOH i prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% TFA, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod u vidu bis-TFA soli (0,7 mg; 8%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C25H27ClF2N7O2(M+H)<+>: m/z = 530,2; utvrđeno: 530,0.

Primer 83.5-(3-{1-[4-Amino-3-(hidroksimetil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0463]

[0464] Rastvor 5-{3-[1-(4-amino-3-formil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (5,6 mg; 0,011 mmol; iz Primera 82, korak 2) je tretiran natrijum tetrahidroboratom (0,5 mg; 0,01 mmol) u metanolu (0,09 ml) na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Smeša je zatim prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% TFA, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod u vidu bis-TFA soli (2,5 mg; 45 %). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C25H29ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 510,2; utvrđeno: 510,0.

Primer 84.5-[3-(1-{4-Amino-3-[(metilamino)metil]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il}etil)-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid tris(trifluoroacetat)

[0465]

[0466] Rastvoru 5-{3-[1-(4-amino-3-formil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (8,8 mg; 0,017 mmol; iz Primera 82, korak 2) u metanolu (1 ml) je dodat 2,0 M metilamin u THF (43 µl; 0,087 mmol). Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi preko noći pre dodavanja natrijum tetrahidroborata (1,3 mg; 0,035 mmol). Smeša je ponovo mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h, a zatim je razblažena sa MeOH i prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% TFA, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod u vidu TFA soli (4,2 mg; 48%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C26H32ClN8O2(M+H)<+>: m/z = 523,2; utvrđeno: 523,0

Primer 85.5-[3-(1-{4-Amino-3-](dimetilamino)metil]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il}etil)-5-hloro-2-etoksi-6- metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid tris(trifluoroacetat)

[0467]

[0468] Navedeno jedinjenje je pripremljeno postupcima analognim postupcima opisanim u Primeru 84, upotrebom 2,0 M dimetilamina u THF umesto 2,0 M metilamina u THF. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C27H34ClN8O2(M+H)<+>: m/z = 537,2; utvrđeno: 537,1.

Primer 86.5-(3-{1-[4-Amino-3-(fluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0469]

[0470] U rastvor 5-(3-{1-[4-amino-3-(hidroksimetil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (22 mg; 0,043 mmol; iz Primera 83) u metilen hloridu (0,1 ml), ohlađen na 0°C, polako je dodat 2-metoksi-N-(2-metoksietil)-N-(trifluoro-λ(4)-sulfanil)etanamin (12 µl; 0,065 mmol). Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h, pa je razblažena sa MeOH i prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% TFA, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod u vidu TFA soli (3,9 mg; 18%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C25H28ClFN7O2(M+H)<+>: m/z = 512,2; utvrđeno: 512,0.

Primer 87.3-{1-[4-Amino-3-(1H-pirazol-4-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-etoksi-N-etil-6-metilbenzamid

[0471]

Korak 1.1-(5-Hloro-2-etoksi-4-metil-3-vinilfenil)etanon

[0472] Smeša 1-(5-hloro-2-etoksi-3-jodo-4-metilfenil)etanona (1,1 g; 3,2 mmol; iz Primera 14, korak 1), 4,4,5,5-tetrametil-2-vinil-1,3,2-dioksaborolana (0,66 ml; 3,9 mmol), [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijuma(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1), (0,26 g; 0,32 mmol) i kalijum karbonata (1,3 g; 9,4 mmol) u 1,4-dioksanu (10 ml)/vodi (5 ml) je degasirana sa N2i zatim grejana na 80°C preko noći. Nakon hlađenja do sobne temperature, reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organski slojevi su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom MgSO4, profiltrirani, koncentrovani i prečišćeni na silika gelu (eluiranje sa 0 do 10% EtOAc u heksanima) da bi se dobio željeni proizvod (0,64 g; 82%). LCMS analiza, izračunato za C13H16ClO2(M+H)<+>: m/z = 239,1; utvrđeno: 239,1.

Korak 2.1-[5-Hloro-3-(1,2-dihidroksietil)-2-etoksi-4-metilfenil]etanon

[0473] U rastvor 1-(5-hloro-2-etoksi-4-metil-3-vinilfenil)etanona (0,59 g; 2,5 mmol) u terc-butil alkoholu (20 ml) su dodati N-metilmorfolin N-oksid (0,318 g; 2,72 mmol) i voda (7,8 ml). U ovakav rastvor je zatim dodat 4% osmijum tetraoksid (0,078 ml; 0,012 mmol). Nakon 3 h, dodat je i drugi ekvivalent N-metilmorfolin N-oksida. Reakciona smeša je zatim mešana još 3 h. Rastvor je dalje razblažen sa vodom i ekstrahovan sa EtOAc. Organski slojevi su spojeni, osušeni upotrebom MgSO4i koncentrovani da bi se dobio traženi proizvod (0,64 g; 95%). LCMS analiza, izračunato za C13H17ClO4Na (M+Na)<+>: m/z = 295,1; utvrđeno: 295,1.

Korak 3.3-Acetil-5-hloro-2-etoksi-6-metilbenzaldehid

[0474] U rastvor 1-[5-hloro-3-(1,2-dihidroksietil)-2-etoksi-4-metilfenil]etanona (0,64 g; 2,3 mmol) u tetrahidrofuranu (18 ml) i vodi (11 ml) na 0°C su dodati acetatna kiselina (35 µL; 0,61 mmol) i natrijum perjodat (1,50 g; 7,04 mmol). Nakon mešanja od 30 min, reakciona smeša je razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Spojeni ekstrakti su isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom MgSO4, profiltrirani i koncentrovani da bi se dobio željeni proizvod (0,58 g; 100%). LCMS analiza, izračunato za C12H14ClO3(M+H)<+>: m/z = 241,1; utvrđeno: 241,1.

Korak 4.3-Acetil-5-hloro-2-etoksi-6-metilbenzojeva kiselina

[0475] Rastvor 3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-metilbenzaldehida (0,58 g; 2,4 mmol) i monobaznog natrijumfosfat monohidrata (116 mg; 0,844 mmol) u acetonitrilu (11,8 ml) i vodi (2,5 ml) je ohlađen u ledenom kupatilu. Zatim je dodat 30% vodonik peroksid (0,98 ml; 9,6 mmol), a potom je dodat i čvrst natrijum hlorid (0,545 g; 4,82 mmol), pa je smeša mešana tokom 1 h. Smeša je dalje razblažena sa 1 M rastvorom HCI i ekstrahovana sa EtOAc. Organski slojevi su spojeni, osušeni upotrebom MgSO4, profiltrirani i koncentrovani da bi se dobio željeni proizvod (0,67 g; 100%). LCMS analiza, izračunato za C12H13ClO4Na (M+Na)<+>: m/z = 279,1; utvrđeno: 279,0.

Korak 5.3-Acetil-5-hloro-2-etoksi-N-etil-6-metil-benzamid

[0476] U rastvor 3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-metilbenzojeve kiseline (0,26 g; 1,0 mmol) u N,N-dimetilformamidu (5 ml) je dodat benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfat (0,67 g; 1,5 mmol). Nakon mešanja od 10 min, dodati su N,N-diizopropiletilamin (0,35 ml; 2,0 mmol) i 2,0 M etilamin u THF (2,5 ml; 5,1 mmol). Dobijena smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h, pa je reakcioni rastvor razblažen vodom i ekstrahovan dihlormetanom. Spojeni organski slojevi su koncentrovani i prečišćeni na silika gel koloni (eluiranjem sa 0% do 50% EtOAc u heksanima) da bi se dobio željeni proizvod (0,2 g; 70%). LCMS analiza, izračunato za C14H19ClNO3(M+H)<+>: m/z = 284,1; utvrđeno: 284,1.

Korak 6.3-Hloro-6-etoksi-N-etil-5-(1-hidroksietil)-2-metilbenzamid

[0477] Rastvor 3-acetil-5-hloro-2-etoksi-N-etil-6-metil-benzamida (0,2 g; 0,7 mmol) je tretiran natrijum tetrahidroboratom (0,032 g; 0,84 mmol) u metanolu (6 ml) na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Smeša je zatim razblažena vodom i ekstrahovana dihlorometanom. Organski slojevi su spojeni, osušeni upotrebom MgSO4, profiltrirani, pa koncentrovani da bi se dobio traženi proizvod. LCMS analiza, izračunato za C14H21ClNO3(M+H)<+>: m/z = 286,1; utvrđeno: 286,1.

Korak 7.3-Hloro-5-(1-hloroetil)-6-etoksi-N-etil-2-metilbenzamid

[0478] Smeša cijanurin-hlorida (0,15 g; 0:84 mmol) i N,N-dimetilformamida (0,065 ml; 0,84 mmol) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min, a zatim je dodat rastvor 3-hloro-6-etoksi-N-etil-5-(1-hidroksietil)-2-metilbenzamida (0,16 g; 0,56 mmol) u metilen hloridu (3,1 ml), pa je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je zatim razblažena metilen hloridom, isprana vodom i koncentrovana, pa prečišćena na silika gelu (eluiranje sa 0 do 40% EtOAc u heksanima) da bi se dobio željeni proizvod (0,13 g; 76%). LCMS analiza, izračunato za C14H20Cl2NO2(M+H)<+>: m/z = 304,1; utvrđeno: 304,1.

Korak 8.3-[1-(4-Amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-N-etil-6-metilbenzamid

[0479] Smeša 3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-etoksi-N-etil-2-metilbenzamida (130 mg; 0,43 mmol), 3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (120 mg; 0,47 mmol), cezijum karbonata (210 mg; 0,64 mmol) i kalijum jodida (7,1 mg; 0,043 mmol) u N,N-dimetilformamidu (1 ml) je grejana na 140°C tokom 1 h. Smeša je zatim razblažena etrom, isprana vodom i koncentrovana. Ostatak je prečišćen na silika gelu (eluiranje sa 0 do 100% EtOAc u heksanima) da bi se dobio željeni proizvod (0,14 g; 62%). LCMS analiza, izračunato za C19H23ClIN6O2(M+H)<+>: m/z = 529,1; utvrđeno: 528,9.

Korak 9.3-{1-[4-Amino-3-(1H-pirazol-4-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-etoksi-N-etil-6-metil-benzamid

[0480] U rastvor 3-[1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-N-etil-6-metilbenzamida (9,0 mg; 0,017 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (6,6 mg; 0,034 mmol) i natrijum karbonata (11 mg; 0,10 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,1 ml)/vodi (51 µl) u atmosferi N2je dodat tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (2,0 mg; 0,0017 mmol). Smeša je zatim grejana na 100°C preko noći. Nakon hlađenja do sobne temperature, smeša je profiltrirana i prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod (0,9 mg; 10%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C22H26ClN8O2(M+H)<+>: m/z = 469,2; utvrđeno: 469,0.

Primer 88.3-{1-[4-Amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-etoksi-N-etil-6-metilbenzamid

[0481]

[0482] Navedeno jedinjenje je pripremljeno postupcima analognim postupcima opisanim u Primeru 87, korak 9 (racemska intermedijer), upotrebom (3-fluoro-5-hidroksifenil)boronske kiseline umesto 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C25H27ClFN6O3(M+H)<+>: m/z = 513,2; utvrđeno: 513,0.

Primer 89.3-(1-(4-Amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-N-etil-6-metilbenzamid

[0483]

[0484] Navedeno jedinjenje je pripremljeno postupcima analognim postupcima opisanim u Primeru 87, korak 9 (racemska intermedijer), upotrebom 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1,3-benzoksazol-2-amina umesto 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C26H28ClN8O3(M+H)<+>: m/z = 535,2; utvrđeno: 535,0.

Primer 90.3-{1-[4-Amino-3-(2-amino-1,3-benzotiazol-6-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-etoksi-N-etil-6-metilbenzamid

[0485]

[0486] Navedeno jedinjenje je pripremljeno postupcima analognim postupcima opisanim u Primeru 87, korak 9 (racemska intermedijer), upotrebom 6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1,3-benzotiazol-2-amina umesto 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C26H28ClN8O2S (M+H)<+>: m/z = 551,2; utvrđeno: 551,0.

Primer 91.3-{1-[4-Amino-3-(1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-etoksi-N-etil-6-metilbenzamid

[0487]

[0488] Navedeno jedinjenje je pripremljeno postupcima analognim postupcima opisanim u Primeru 87, korak 9 (racemska intermedijer), upotrebom 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirolo[2,3-b]piridina umesto 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C26H28ClN8O2(M+H)<+>: m/z = 519,2; utvrđeno: 519,0.

Primer 92.3-{1-[4-Amino-3-(1H-indazol-6-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-etoksi-N-etil-6-metilbenzamid

[0489]

[0490] Navedeno jedinjenje je pripremljeno postupcima analognim postupcima opisanim u Primeru 87, korak 9 (racemska intermedijer), upotrebom 6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-indazola umesto 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C26H28ClN8O2(M+H)<+>: m/z = 519,2; utvrđeno: 519,0.

Primer 93.3-{1-[4-Amino-3-(1H-indol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-etoksi-N-etil-6-metilbenzamid

[0491]

[0492] Navedeno jedinjenje je pripremljeno postupcima analognim postupcima opisanim u Primeru 87, korak 9 (racemska intermedijer), upotrebom 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-indola umesto 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C27H29ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 518,2; utvrđeno: 518,0.

Primer 94.1-{1-[5-Hloro-2-etoksi-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-4-metilfenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin bis(trifluoroacetat)

[0493]

Korak 1. Benzil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}azetidin-1-karboksilat

[0494] Smeša benzil 3-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-etoksi-2-metilfenil]azetidin-1-karboksilata (0,375 g; 0,888 mmol; iz Primera 35, korak 3), 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (0,16 g; 1,1 mmol), cezijum karbonata (0,43 g; 1,3 mmol) i kalijum jodida (15 mg; 0,089 mmol) u N,N-dimetilformamidu (2,8 ml) je grejana na 140°C tokom 1 h. Smeša je zatim razblažena etrom i isprana vodom. Organski slojevi su koncentrovani i prečišćeni na silika gelu (eluiranje sa 0 do 100% EtOAc u heksanima) da bi se dobio željeni proizvod (0,24 g; 50%). LCMS analiza, izračunato za C28H32ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 535,2; utvrđeno: 535,0. Enantiomeri su razdvojeni na Phenomenex Lux-Cellulose C-2 koloni (5 uM, 21,2 x 250 mm), eluiranjem sa 20% etanolom u heksanima, pri brzini protoka od 18 ml/min i sa količinom koja je nanošena od ~4,5 mg po injeciranju, a da bi se razdvojila dva enantiomera. Retenciono vreme prvog pika: 21,2 min; Retenciono vreme drugog pika: 24,6 min.

Korak 2.1-[1-(3-Azelidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0495] Benzil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}azetidin-1-karboksilat (170 mg; 0,32 mmol; racemski intermedijer) i 5% paladijum (80 mg) su pomešani u metanolu (12 ml), kome je dalje dodato 0,25 M rastvor hlorovodonika u vodi (3,2 ml; 0,79 mmol). Suspenzija je zatim hidrogenizovana pod pritiskom H2u balonu na sobnoj temperaturi tokom 2 h, pa je profiltrirana. Filtrat je neutralizovan zasićenim rastvorom NaHCO3i ekstrahovan dihlormetanom. Organski slojevi su spojeni, osušeni upotrebom MgSO4, profiltrirani i koncentrovani da bi se dobio željeni proizvod (117 mg; 92%). LCMS analiza, izračunato za C20H26ClN6O (M+H)<+>: m/z = 401,2; utvrđeno: 401,1.

Korak 3.1-{1-[5-Hloro-2-etoksi-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-4-metilfenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin bis(trifluoroacetat)

[0496] Aceton (9,3 µl; 0,13 mmol) je dodat u 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (10,2 mg; 0,0254 mmol) u metanolu (0,1 ml)/tetrahidrofuranu (0,1 ml)/acetonitrilu (0,1 ml), pa je smeša mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min, a pre dodavanja natrijum triacetoksiborohidrida (16 mg; 0,076 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi 4 h, pa je prečiščena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% TFA, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod u vidu TFA soli (2,3 mg; 22%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C23H32ClN6O (M+H)<+>: m/z = 443,2; utvrđeno: 443,1.

Primer 95.2-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)etanol bis(trifluoroacetat)

[0497]

[0498] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (7,9 mg; 0,020 mmol; racemski intermedijer iz Primera 94, korak 2) u tetrahidrofuranu (0,09 ml)/acetonitrilu (0,09 ml)/metanolu (0,09 ml) je dodat {[tercbutil(dimetil)silil]oksi}acetaldehid (19 µl; 0,098 mmol), pa je smeša mešana tokom 10 min pre dodavanja natrijum triacetoksiborohidrida (12 mg; 0,059 mmol). Dobijena smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h, a potom je tretirana sa 6,0 M rastvorom hlorovodonika u vodi (30 µl; 0,2 mmol) tokom 10 min. Smeša je dalje prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% TFA, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod u vidu TFA soli (3,2 mg; 40%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C22H30ClN6O2(M+H)<+>: m/z = 445,2; utvrđeno: 445,1.

Primer 96. (2S)-1-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)propan-2-ol bis(trifluoroacetat)

[0499]

Korak 1. Benzil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}azetidin -1-karboksilat

[0500] Enantiomeri iz Primera 94, korak 1, su razdvojeni na Phenomenex Lux-Cellulose C-2 koloni (5 µM, 21,2 x 250 mm), eluiranjem sa 20% etanolom u heksanima, pri brzini protoka od 18 ml/min i sa količinom nanetom na kolonu od ~4,5 mg po injeciranju, a da bi se razdvojila dva enantiomera. Retenciono vreme prvog pika: 21,2 min; Retenciono vreme drugog pika: 24,6 min.

Korak 2.1-[1-(3-Azetidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0501] Benzil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}azetidin-1-karboksilat (hiralni intermedijer, dobijen kao prvi pik razdvajanja iz prethodnog koraka) je hidrogenizovan u prisustvu 5% paladijuma kao što je opisano u Primeru 94, korak 2, a da bi se dobio traženi hiralni proizvod. LCMS analiza, izračunato za C20H26ClN6O (M+H)<+>: m/z = 401,2; utvrđeno: 401,1.

Korak 3. (2S)-1-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-1-etoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)propan-2-ol bis(trifluoroacetat)

[0502] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (10 mg; 0,02 mmol; hiralni intermedijer iz koraka 2) i trietilamina (9 µL; 0,07 mmol) u izopropil alkoholu (0,05 ml) je dodat (S)-(-)-metiloksiran (4,5 µl; 0,064 mmol). Dobijena smeša je zatim mešana na 90°C preko noći, pa je ohlađena i prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C 18 koloni, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% TFA, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod u vidu TFA soli (3,4 mg; 34%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni dijastereomer. LCMS analiza, izračunato za C23H32ClN6O2(M+H)<+>: m/z = 459,2; utvrđeno: 459,1

Primer 99. (2S)-1-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)-1-oksopropan-2-ol trifluoroacetat

[0503]

[0504] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (9,8 mg; 0,024 mmol; racemski intermedijer iz Primera 94, korak 2), N,N,N',N'-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uronijum heksafluorofosfata (14 mg; 0,037 mmol) i trietilamina (10 µl; 0,073 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,15 ml) je dodata 85% (2S)-2-hidroksipropanska kiselina u vodi (3,2 µl; 0,037 mmol). Dobijena smeša je zatim mešana 2 h na sobnoj temperaturi, pa je prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% TFA, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod u vidu soli trifluorosirćetne kiseline (TFA) (2,9 mg; 29%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C23H30ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 473,2; utvrđeno: 473,1.

Primer 101.1-[1-(5-Hloro-2-etoksi-4-metil-3-{1-[(1-metil-1H-pirazol-4-il)karbonil]azetidin-3-il}fenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin trifluoroacetat

[0506] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (9,6 mg; 0,024 mmol; racemski intermedijer iz Primera 94, korak 2) i trietilamina (10 µl; 0,072 mmol) u metilen hloridu (0,2 ml) je dodat 1-metil-1H-pirazol-4-karbonil hlorid (5,2 mg; 0,036 mmol). Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h, pa je uparena do suva pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je razblažen sa MeOH i prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C 18 koloni, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% TFA, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod u vidu TFA soli (1,3 mg; 13%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C25H30ClN8O2(M+H)<+>: m/z = 509,2; utvrđeno: 509,1.

Primer 102. (2S)-1-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)propan-2-ol

[0507]

[0508] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (21 mg; 0,046 mmol) (Primer 1, korak 7, hiralni intermedijer pika 1) i trietilamina (20 µl; 0,1 mmol) u izopropil alkoholu (0,10 ml) je dodat (S)-(-)-metiloksiran (3,2 µl; 0,046 mmol). Dobijena smeša je zatim mešana na 90°C. Nakon 90 min, dodato je još (S)-(-)-metiloksirana (6,4 µl), pa je mešanje nastavljeno na 90°C preko noći. Nakon hlađenja, smeša je razblažena metanolom i prečišćena primenom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobilo 6 mg (30%) proizvoda. Proizvod je izolovan kao pojedinačni dijastereomer. LCMS analiza, izračunato za C22H30ClN6O2(M+H)<+>: m/z = 445,2; utvrđeno: 445,2.

Primer 104.2-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)etanol

[0509]

[0510] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (20 mg; 0,04 mmol) (Primer 1, korak 7, hiralni intermedijer pika 1), {[terc-butil(dimetil)silil]oksi}acetaldehida (8,3 mg; 0,048 mmol) i trietilamina (19 µl; 0,14 mmol) u metilen hloridu (0,3 ml) je dodata smola natrijum triacetoksiborohidrida (38 mg; 0,087 mmol). Dobijena smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi, pa je smeša profiltirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je zatim rastvoren u tetrahidrofuranu (1 ml) i rastvor je ohlađen do 0°C. Dalje je dodat 1,0 M tetra-nbutilamonijum fluorid u THF (0,44 ml; 0,44 mmol), pa je rastvor zagrejan do sobne temperature. Nakon 3 h, rastvarači su upareni. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobilo 8,1 mg (40%) željenog proizvoda. Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C21H28ClN6O2(M+H)<+>: m/z = 431,2; utvrđeno: 431,3.

Primer 105. (3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)acetonitril

[0511]

[0512] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (16 mg; 0,035 mmol; hiralni intermedijer pika 1 iz Primeru 1, korak 7) i trietilamina (14 µl; 0,10 mmol) u acetonitrilu (0,7 ml) je dodat bromoacetonitril (2,7 µl; 0,038 mmol). Dobijena smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi 2,5 sata. Smeša je dalje razblažena acetonitrilom i prečišćena upotrebom reverzno faznog HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% TFA, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod u vidu TFA soli. Čiste frakcije su delimično uparene i potom je rastvor učinjen baznim dodavanjem 1M NaOH. Vodena smeša je ekstrahovana dihlorometanom (2x). Ekstrakti su osušeni (MgSO4), profiltrirani i koncentrovani. Čvrsta supstanca je osušena in vacuo da bi se dobilo 6,9 mg (46%) željenog proizvoda. Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C21H25ClN7O (M+H)<+>: m/z = 426,2; utvrđeno: 426,0.

Primer 108.1-(1-{5-Hloro-2-metoksi-4-metil-3-[1-(2,2,2-trifluoroetil)azetidin-3-il]fenil}etil)-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0513]

[0514] Smeša 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (15 mg; 0,024 mmol; hiralni intermedijer iz prvog pika u Primera 1, korak 7), 2,2,2-trifluoroetil trifluormetansulfonata (6,8 mg; 0,029 mmol) i trietilamina (12 µl; 0,085 mmol) u metilen hloridu (0,3 ml) je mešana preko vikenda na sobnoj temperaturi. Rastvarači su zatim upareni, a sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobilo 4,5 mg (39%) željenog proizvoda. Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C21H25ClF3N6O (M+H)<+>: m/z = 469,2; utvrđeno: 469,1.

Primer 110. (2R)-2-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)-N-metilpropanamid trifluoracetat

[0515]

[0516] Smeša 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (26 mg; 0,067 mmol; hiralni intermedijer iz pika 1 Primera 1, korak 7), (2R)-2-bromopropanske kiseline (7,3 µl; 0,081 mmol) i trietilamina (19 µl; 0,13 mmol) u acetonitrilu (0,8 ml) je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakcija nije bila zavšena tako da je smeša zagrejana do 50°C. Nakon 4 h, rastvarači su upareni. U sirovi ostatak su zatim dodati metilamonijum hlorid (4,5 mg; 0,067 mmol), N,N-dimetilformamidu (0,2 ml), trietilamin (19 µl; 0,13 mmol) i benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfat (45 mg; 0,10 mmol), pa je dobijena smeša mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je zatim presuta u posudu koja je sadržavala zasićen vodeni rastvor NaHCO3, pa je ekstrahovana sa EtOAc (2x). Organske materije su dalje osušene (MgSO4), profiltrirane i koncentrovane. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% TFA, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio 1,4 mg (3,6%) željenog proizvoda u vidu TFA soli. Proizvod je izolovan kao pojedinačni dijastereomer. LCMS analiza, izračunato za C23H31ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 472,2; utvrđeno: 472,2.

Primer 113.2-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)-3,3,3-trifluoropropan-1-ol

[0517]

[0518] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (20 mg; 0,04 mmol; hiralni intermedijer pika 1 iz Primera 1, korak 7) i trietilamina (19 µl; 0,13 mmol) u acetonitrilu (0,6 ml) je dodat 2-bromo-3,3,3-trifluoropropan-1-ol (firme Synquest Labs, 9,2 mg; 0,048 mmol). Zatim je dodat N,N-dimetilformamidu (0,3 ml) i tako je dobijen bistar rastvor koji je mešan na 70°C preko noći. Smeša je dalje razblažena vodom i prečišćena primenom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobilo 6,6 mg (30%) željenog proizvoda. Proizvod je izolovan kao smeša dijastereomera. LCMS analiza, izračunato za C22H27ClF3N6O2(M+H)<+>: m/z = 499,2; utvrđeno: 499,1.

Primer 115. (2R)-3-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil[-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)-1,1,1’-trifluoropropan-2-ol

[0519]

[0520] Smeša 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (20 mg; 0,044 mmol; hiralni intermedijer pika 1 iz Primera 1, korak 7), (2R)-2-(trifluorometil)oksirana (9,4 µl; 0,11 mmol) i trietilamina (18 µl; 0,13 mmol) u etanolu (0,3 ml) je grejana na 120°C u mikrotalasnom reaktoru tokom 25 min. Smeša je zatim razblažena sa MeOH i prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobilo 6,2 mg (28%) željenog proizvoda. Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C22H27ClF3N6O2(M+H)<+>: m/z = 499,2; utvrđeno: 499,1.

Primer 117.1-[1-(5-Hloro-2-metoksi-4-metil-3-{1-[(1-metil-1H-pirazol-4-il)karbonil]azetidin-3-il}fenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0521]

[0522] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (15 mg; 0,033 mmol) (hiralna supstanca iz Primera 1, korak 7, pik 1) i trietilamina (14 µl; 0,098 mmol) u metilen hloridu (0,2 ml) je dodat 1-metil- 1H-pirazol-4-karbonil hlorid (firme Maybridge, 6,1 mg; 0,042 mmol). Dobijena smeša je zatim mešana preko noći na sobnoj temperaturi, pa su rastvarači upareni i sirovi materijal je prečišćen primenom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobilo 7,1 mg (44%) proizvoda. Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C24H28ClN8O2(M+H)<+>: m/z = 495,2; utvrđeno: 495,2.

Primer 118. (2S)-1-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil[-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)-1-oksopropan-2-ol

[0523]

[0524] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (15 mg; 0,033 mmol; hiralni intermedijer iz Primera 1, korak 7, pik 1), (2S)-2-hidroksiproionske kiseline (4,3 µl; 0,049 mmol) (L-mlečna kiselina, 85%, vodeni rastvor) i trietilamina (14 µl; 0,098 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,2 ml) je dodat N,N,N’,N'-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uronijum heksafluorofosfat (19 mg; 0,049 mmol). Dobijena smeša je zatim mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Smeša je dalje razblažena sa MeOH i prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobilo 3,0 mg (20%) željenog proizvoda. Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C22H28ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 459,2; utvrđeno: 459,2.

Primer 121. (2R)-1-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)-1-oksopropan-2-ol trifluoroacetat

[0525]

[0526] Navedeno jedinjenje je pripremljeno postupcima analognim postupcima opisanim u Primeru 118 (polazeći od hiralnog materijala iz Primera 1, korak 7, pik 1), upotrebom (R)-2-hidroksipropanske kiseline umesto (2S)-2-hidroksipropanske kiseline (4,3 µl; 0,049 mmol) i benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata umesto N,N,N’,N'-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uronijum heksafluorofosfata. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% TFA, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod u vidu TFA soli. Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C22H28ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 459,2; utvrđeno: 459,2.

Primer 125. [3-(3-{1-[4-amino-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)azetidin-1-il] acetonitril bis(trifluoroacetat)

[0527]

Korak 1. terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-bromo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-karboksilat

[0528] U smešu terc-butil 3-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]azetidin-1-karboksilata (1,0 g; 2,7 mmol) (iz Primera 1, korak 5, racemski intermedijer) i 3 bromo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (0,629 g; 2,94 mmol) u N,N-dimetilformamidu (8 ml) su dodati kalijum jodid (44 mg; 0,27 mmol) i cezijum karbonat (1,30 g; 4,01 mmol). Dobijena smeša se zatim zagrejana do 120°C, pa je mešana tokom 4 h. Nakon hlađenja, dodata je voda i smeša je kratko promešana pre nego što je filtriranjem izvojena čvrsta supstanca. Dobijena čvrsta supstanca je isprana vodom, prečišćen na silika gelu (eluiranje sa 0-10% MeOH u dihlorometanu) da bi se dobilo 1,11 g (75%) željenog proizvoda u vidu žute gumaste supstance. LCMS analiza, izračunato za C23H29BrClN6O3(M+H)<+>: m/z = 551,1; utvrđeno: 551,1.

Korak 2.1-[1-(3-Azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-bromo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0529] Trifluorosirćetna kiselina (1,2 ml; 16 mmol) je dodata u rastvor terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-3-bromo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)azetidin-1-karboksilata (224 mg; 0,407 mmol) u metilen hloridu (2,5 ml), pa je smeša mešana 2 h na sobnoj temperaturi. Smeša je zatim razblažena dihlormetanom i 1 N NaOH i brzo promešana nekoliko minuta. Slojevi su razdvojeni, pa je vodeni ekstrahovan dihlormetanom, dok su organski slojevi spojeni, osušeni (MgSO4), profiltrirani i koncentrovani. Sušenjem in vacuo je dobijeno 163 mg (91%) slobodne baze. LCMS analiza, izračunato za C18H21BrClN6O (M+H)<+>: m/z = 451,1; utvrđeno: 451,0.

Korak 3. (3-{3-[1-(4-Amino-3-bromo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1il) acetonitril

[0530] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-bromo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (100 mg; 0,2 mmol) i trietilamina (37 µl; 0,27 mmol) u acetonitrilu (3 ml) je dodat bromoacetonitril (19 µL; 0,27 mmol). Dobijena smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi. Nakon jednog sata, reakciona smeša je još uvek bila zamućena delom nerastvorenog materijala. Dodato je nekoliko kapi DMF da bi se napravio bistar rastvor, pa je smeša mešana preko noći na sobnoj temperaturi, nakon čega je većina rastvarača uparena. Dobijeni ostatak je prečišćen na silika gelu (eluiranje sa 0-10% MeOH u dihlorometanu) i tako je dobijeno 29 mg (30%) željenog proizvoda. LCMS analiza, izračunato za C20H22BrClN7O (M+H)<+>: m/z = 490,1; utvrđeno: 490,1.

Korak 4. [3-(3-{1-{4-Amino-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)azetidin-1-il] acetonitril bis(trifluoroacetat)

[0531] U posudu za mikrotalasni reaktor su odmereni (3-{3-[1-(4-amino-3-bromo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)acetonitril (14 mg; 0,029 mmol), 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol (12 mg; 0,058 mmol), tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (3,4 mg; 0,0029 mmol), N,N-dimetilformamid (0,15 ml) i 2,0 M rastvor natrijum karbonata u vodi (73 µl; 0,14 mmol). Posuda je zatim zapivena i grejana na 100°C tokom 3 h. Smeša je dalje razblažena dihlorometanom, profiltrirana i koncentrovana. Sirovi materijal je prečišćen primenom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% TFA, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobilo 4,6 mg (22%) proizvoda u vidu TFA soli. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C24H27ClN9O (M+H)<+>: m/z = 492,2; utvrđeno: 492,1.

Primer 126. [3-(3-{1-[4-Amino-3-(1H-pirazol-4-il)-1H-pirazolo|3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)azetidin-1-il] acetonitril

[0532]

[0533] U posudu za mikrotalasni reaktor su odmereni 1-(1-etoksietil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol (16 mg; 0,058 mmol) i tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (3,4 mg; 0,0029 mmol). Potom je u smešu dodat rastvor (3-{3-[1-(4-amino-3-bromo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)acetonitrila (14 mg; 0,029 mmol; racemski intermedijer iz Primera 125, korak 3) u N,N-dimetilformamidu (0,25 ml), pa je dalje dodat i 2,0 M rastvor natrijum karbonata u vodi (73 µl; 0,14 mmol). Dobijena smeša je mešana na 120°C tokom 5 h, a smeša je dalje profiltrirana i koncentrovana. U smešu sirovog kuplovanog proizvoda u tetrahidrofuranu (0,3 ml) je zatim dodat 3,0 M rastvor hlorovodonične kiseline u vodi (100 µl; 0,3 mmol) i smeša je mešana 2 h na sobnoj temperaturi. Smeša je dalje neutralisana zasićenim rastvorom NaHCO3i ekstrahovana dihlorometanom.

Organski sloj je osušen (MgSO4), profiltriran i koncentrovan, a sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobilo 1,0 mg (7,2% u 2 koraka) željenog proizvoda. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C23H25ClN9O (M+H)<+>: m/z = 478,2; utvrđeno: 478,1.

Primeri 127 i 128.1-{1-[5-Hloro-3-(3-izopropilazetidin-3-il)-2-metoksi-4-metilfenil]etil}-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin i 5-{1-[4-amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-4-metoksi-2-metilbenzonitril

[0534]

Korak 1. terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-vinil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-karboksilat

[0535] U rastvor terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-3-bromo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-karboksilata (1,1 g; 2,0 mmol; racemski intermedijer iz Primera 125, korak 1) u N,N-dimetilformamidu (10 ml) su dodati tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (230 mg; 0,20 mmol) i 4,4,5,5-tetrametil-2-vinil-1,3,2-dioksaborolan (0,68 ml; 4,0 mmol). Zatim je u smešu, u atmosferi N2, dodat 2,0 M rastvor natrijum karbonata u vodi (5,0 ml; 1,0 mmol), pa je smeša grejana na 100°C tokom 3 h i dalje mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je potom profiltrirana kroz celit i isprana sa EtOAc. Filtrati su isprani vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa su osušeni (MgSO4), profiltrirani i koncentrovani. Sirovi materijal je prečišćen na silika gelu (eluiranje sa 40-100% etil acetat u heksanu) da bi se dobilo 0,75 g (75%) željenog proizvoda. LCMS analiza, izračunato za C25H32ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 499,2; utvrđeno: 499,0 (M+H);<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8,30 (s, 1H), 7,50 - 7,40 (m, 1H), 6,99 (dd, J = 17,7; 11,3 Hz, 1H), 6,44 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 5,95 (dd, J = 17,7, 1,3 Hz, 1H), 5,83 (br s, 1H), 5,65 (dd, J = 11,3, 1,3 Hz, 1H), 4,39 - 3,96 (m, 4H), 3,63 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 2,99 - 2,78 (m, 1H), 2,22 (s, 4H), 1,84 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,43 (s, 9H).

Korak 2. terc-Butil 3-(3-{1-[4-amino-3-(1,2-dihidroksietil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2 metoksi-6-metilfenil)azetidin-1-karboksilat

[0536] U suspenziju terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-3-vinil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-karboksilata (0,87 g; 1,7 mmol) u terc-butil alkoholu (11 ml) su dodati N-metilmorfolin N-oksid (225 mg; 1,92 mmol), voda (5,5 ml) i osmijum tetraoksid (26 mg; 0,10 mmol), pa je dobijena smeša mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Zatim je u reakcionu smešu dodata voda, a dalje i EtOAc. Slojevi su razdvojeni, pa je vodeni sloj ekstrahovan sa EtOAc. Spojeni organski slojevi su isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni (Na2SO4), profiltrirani i koncentrovani da bi se dobillo 0,93 g sirovog proizvoda. LCMS analiza, izračunato za C25H34ClN6O5(M+H)<+>: m/z = 533,2; utvrđeno: 533,2.

Korak 3. terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-formil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-karboksilat

[0537] U rastvor terc-butil 3-(3-{1-[4-amino-3-(1,2-dihidroksietil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)azetidin-1-karboksilata (0,93 g; 1,7 mmol) u tetrahidrofuranu (13 ml) i vodi (8 ml), na 0°C, su dodati sirćetna kiselina (26 µl; 0,45 mmol) i natrijum perjodat (1,12 g; 5,23 mmol). Nakon mešanja uz blago zagrevanje od 3 sata, reakcija još uvek nije bila završena, pa je smeša ostavljena u frižider preko noći. Zatim je dodat voda i reakciona smeša je dalje ekstrahovana dihlorometanom (3x). Spojeni ekstrakti su isprani koncentrovanim rastvorom soli, pa su osušeni (Na2SO4), profiltrirani i koncentrovani. Sirov materijal je prečišćen na silika gelu (eluiranje sa 40-85% etil acetatom u heksanu) da bi se dobilo 0,47 g (54%) željenog proizvoda. LCMS analiza, izračunato za C24H30ClN6O4(M+H)<+>: m/z = 501,2; utvrđeno: 501,3.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 10,05 (s, 1H), 8,37 (s, 1H), 7,39 (s, 1H), 6,55 (q, J = 7,1 Hz, 1H), 5,89 (s, 1H), 4,42- 3,95 (m, 6H), 3,67 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 1,90 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,44 (s, 9H) ppm.

Korak 4. terc-Butil 3-(3-{1-[4-amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)azetidin-1-karboksilat

[0538] U rastvor terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-3-formil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-karboksilata (0,96 g; 1,9 mmol) u metilen hloridu (10 ml) uz mešanje na 0°C dodat dietilaminosumpor trifluorid (0,63 ml; 4,8 mmol). Smeša je zatim mešana na 0°C nekoliko minuta, a potom je ugrejana do sobne temperature i mešana još 2,5 sata. Dalje su dodati voda i dihlormetan i razdvojeni su slojevi. Organski sloj je ispran koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušen (MgSO4), profiltriran i koncentrovan. Sirov materijal je prečišćen na silika gelu (eluiranje sa 0-5% MeOH u dihlorometanu) da bi se dobio traženi proizvod. LCMS analiza, izračunato za C24H30ClF2N6O3(M+H)<+>: m/z = 523,2; utvrđeno: 523,2.

Korak 5.1-[1-(3-Azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorid

[0539] U smešu terc-butil 3-(3-{1-[4-amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)azetidin-1-karboksilata (30 mg; 0,057 mmol) u dihlorometanu (0,2 ml) je dodat 4,0 M rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (0,10 ml; 0,40 mmol). Dobijena smeša je mešana 3 h na sobnoj temperaturi i zatim koncentrovana. Ostatak je osušen in vacuo da bi se dobilo 27 mg (100%) proizvoda u vidu soli. LCMS analiza, izračunato za C19H22ClF2N6O (M+H)<+>: m/z = 423,1; utvrđeno: 423,0.

Korak 6.1-{1-[5-Hloro-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-2-metoksi-4-metilfenil]etil}-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin- 4-amin

[0540] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (27 mg; 0,054 mmol), acetona (4,4 µl; 0,060 mmol) i trietilamina (23,5 µl; 0,169 mmol) u metilen hloridu (0,4 ml) je dodata smola natrijum triacetoksiborohidrida (47 mg; 0,11 mmol). Dobijena smeša je zatim mešana 2 h na sobnoj temperaturi. Smeša je potom profiltrirana, koncentrovana i osušena in vacuo da bi se dobilo 22 mg sirovog proizvoda koji je dalje iskorišćen bez prečišćavanja. LCMS analiza, izračunato za C22H28ClF2N6O (M+H)<+>: m/z = 465,2; utvrđeno: 465,1.

Korak 7.5-{1-(4-Amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-3-(1-izopropilazetidin-3il)-4-metoksi-2-metilbenzonitril

[0541] U smešu 1-{1-[5-hloro-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-2-metoksi-4-metilfenil]etil}-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (22 mg; 0,047 mmol), cinka (1,3 mg; 0,021 mmol) i cink cijanida (5,6 mg; 0,047 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (0,7 ml) je dodato 0,5 ml prethodno pripremljenog katalizatora (iz Primera 40). Smeša je zatim produvana sa N2i grejana na 120°C preko noći. Reakcija je bila završena u procentu od oko 50%, a kada je zaustavljena tako da su mogla da se izoluju oba jedinjenja. Reakciona smeša se iz tog razloga dalje profiltrirana, isprana dihlorometanom i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobila oba jedinjenja iz naslova. Proizvodi su izolovani u vidu racemske smeše. Primer 126: prinos = 6,6 mg (30%); LCMS analiza, izračunato za C22H28ClF2N6O (M+H)<+>: m/z = 465,2; utvrđeno: 465,2; Primer 127: prinos = 3,0 mg (14%); LCMS analiza, izračunato za C23H28F2N7O (M+H)<+>: m/z = 456,2; utvrđeno: 456,2.

Primer 129.5-{1-[4-Amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-4-metoksi-2-metil-3-[1-(2,2,2-trifluoroetil)azetidin-3-il]benzonitril

[0542]

Korak 1. terc-Butil 3-(3-{1-(4-amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-cijano-1-metoksi-6-metilfenil)azetidin-1-karboksilat

[0543] Cink (11 mg; 0,17 mmol) i bis(tri-t-butilfosfin)paladijum (71 mg; 0,14 mmol) su odmereni u posudu za mikrotalasni reaktor, pa je dodat rastvor terc-butil 3-(3-{1-[4-amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)azetidin-1-karboksilata (182 mg; 0,348 mmol; racemski intermedijer iz Primera 127/128, korak 4) u N-metilpirolidinonu (2,0 ml). Smeša je zatim nekoliko minuta degasirana sa N2pre dodavanja cink cijanida (82 mg; 0,70 mmol). Dobijena smeša je dalje mešana na 130°C tokom 3 h. Nakon hlađenja, smeša je profiltrirana kroz sloj celita i koncentrovana. Sirov materijal je prečišćen na silika gelu, eluiranjem sa 0-5% MeOH u dihlorometanu, pri čemu je proizvod trenutno eluiran, zajedno sa NMP. Frakcije su spojene i koncentrovane, a zatim razmućene u EtOAc i isprane koncentrovanim rastvorom soli (3x). Organski sloj je osušen, profiltriran i koncentrovan da bi se dobilo 0,17 g (96%) željenog proizvoda. LCMS analiza, izračunato za C25H30F2N7O3(M+H)<+>: m/z = 514,2; utvrđeno: 514,1.

Korak 2.5-{1-[4-Amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-3-azetidin-3-il-4-metoksi-2-metilbenzonitril dihidrohlorid

[0544] U rastvor terc-butil 3-(3-{1-[4-amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-cijano-2-metoksi-6-metilfenil)azetidin-1-karboksilata (0,20 g; 0,39 mmol) u metilen hloridu (5 ml) je dodat 4,0 M rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (0,60 ml; 2,4 mmol). Dobijena smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi 3,5 h. Potom su upareni rastvarači, a ostatak je osušen in vacuo da bi se dobilo 0,23 g proizvoda u vidu HCl·soli. LCMS analiza, izračunato za C20H22F2N7O (M+H)<+>: m/z = 414,2; utvrđeno: 414,1.

Korak 3.5-{1-[4-Amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-4-metoksi-2-metil-3-[1-(2,2,2-trifluoroetil)azetidin-3-il]benzonitril

[0545] U smešu 5-{1-[4-amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-3-azetidin-3-il-4-metoksi-2-metilbenzonitril dihidrohlorida (20 mg; 0,04 mmol) i trietilamina (20 µl; 0,14 mmol) u metilen hloridu (0,3 ml) je dodat 2,2,2-trifluoroetil trifluorometansulfonat (11 mg; 0,049 mmol). Dobijena smeša je zatim mešana na 40°C tokom 3 sata, pa su upareni rastvarači, a sirovi materijal je prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min). Tako je dobijeno 3,4 mg (20%) željenog proizvoda. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C22H23F5N7O (M+H)<+>: m/z = 496,2; utvrđeno: 496,1.

Primer 130.5-{1-[4-Amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-3-[1-(2-hidroksietil)azetidin-3-il]-4-metoksi-2-metilbenzonitril

[0546]

[0547] U smešu 5-{1-[4-amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-3-azetidin-3-il-4-metoksi-2-metilbenzonitril dihidrohlorida (20 mg; 0,04 mmol; Primer 129, korak 2), {[tercbutil(dimetil)silil]oksi}acetaldehida (9,1 µl; 0,048 mmol) i trietilamina (19 µl; 0,14 mmol) u metilen hloridu (0,3 ml) je dodata smola natrijum triacetoksiborohidrida (38 mg; 0,087 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h i zatim je profiltrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je rastvoren u tetrahidrofuranu (1,0 ml), pa je dodat 1,0 M tetra-n-butilamonijum fluorid u THF (0,44 ml; 0,44 mmol) i mešanje nastavljeno na sobnoj temperaturi. Nakon 1,5 sata, rastvarači su upareni. Sirovi ostatak je prečišćen primenom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobilo 4,1 mg (20%) željenog proizvoda. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C22H26F2N7O2(M+H)<+>: m/z = 458,2; utvrđeno: 458,2.

Primer 131.5-{1-[4-Amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-3-{1-[(2S)-2-hidroksipropil]azetidin-3-il}-4-metoksi-2-metilbenzonitril

[0548]

[0549] U smešu 5-{1-[4-amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-3-azetidin-3-il-4-metoksi-2-metilbenzonitril dihidrohlorida (20 mg; 0,04 mmol; racemski intermedijer iz Primera 129, korak 2) i trietilamina (18 µl; 0,13 mmol) u izopropil alkoholu (0,1 ml) je dodat (S)-(-)-metiloksiran (9,1 µl; 0,13 mmol). Dobijena smeša je zatim mešana na 90°C tokom 5 h. Sirova smeša je prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobilo 2,5 mg (10%) željenog proizvoda. Proizvod je izolovan kao smeša dijastereomera. LCMS analiza, izračunato za C23H28F2N7O2(M+H)<+>: m/z = 472,2; utvrđeno: 472,2.

Primer 133.5-{1-[4-Amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-3-[1-(2-hidroksi-2-metilpropil)azetidin-3-il]-4-metoksi-2-metilbenzonitril

[0550]

[0551] Smeša 5-{1-[4-amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-3-azetidin-3-il-4-metoksi-2-metilbenzonitril dihidrohlorida (21 mg; 0,043 mmol; racemski intermedijer iz Primera 129, korak 2), 2,2-dimetil-oksirana (11 µl; 0,13 mmol), N,N-diizopropiletilamina (19 µl; 0,11 mmol) i etanola (0,5 ml) je grejana u mikrotalasnom reaktoru na 120°C tokom 30 min. Sirova smeša je zatim razblažena acetonitrilom i prečišćena primenom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobilo 6,1 mg (29%) željenog proizvoda. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C24H30F2N7O2(M+H)<+>: m/z = 486,2; utvrđeno: 486,2.

Primer 134. (2S)-2-[3-(3-{1-[4-Amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-cijano-2-metoksi-6-metilfenil)azetidin-1-il]-N-metilpropanamid

[0552]

Korak 1. (2S)-2-[3-(3-{1-[4-Amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-cijano-2-metoksi-6-metilfenil)azetidin-1-il] propanska kiselina

[0553] U smešu 5-{1-[4-amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-3-azetidin-3-il-4-metoksi-2-metilbenzonitril dihidrohlorida (30 mg; 0,06 mmol; racemski intermedijer iz Primera 129, korak 2) i metil (2S)-2-hloropropanoata (7,9 µl; 0,074 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,35 ml) je dodat kalijum karbonat (26 mg; 0,19 mmol). Dobijena smeša je zatim mešana na 60°C preko noći. Nakon hlađenja, dodata je i voda, pa je smeša ekstrahovana sa EtOAc (3x). Spojeni ekstrakti su osušeni (MgSO4), profiltrirani i koncentrovani. U sirovi ostatak su dalje dodati metanol (0,3 ml), voda (40 µl; 2 mmol) i litijum hidroksid monohidrat (13 mg; 0,31 mmol), pa je dobijena smeša mešana na sobnoj temperaturi 2,5 časa. Smeša je zatim koncentrovana i kao takva upotrebljena u sledećoj reakciji. LCMS analiza, izračunato za C23H26F2N7O3(M+H)<+>: m/z = 486,2; utvrđeno: 486,2.

Korak 2. (2S)-2-[3-(3-{1-[4-amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-cijano-2-metoksi-6-metilfenil)azetidin-1-il]-N-metilpropanamid

[0554] U smešu (2S)-2-[3-(3-{1-[4-amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-cijano-2-metoksi-6-metilfenil)azetidin-1-il] propanske kiseline (30 mg; 0,06 mmol), metilamonijum hlorida (6,6 mg; 0,098 mmol) i trietilamina (18 µl; 0,13 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,3 ml) je dodat benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfat (43 mg; 0,098 mmol). Dobijena smeša je zatim mešana 3 h na sobnoj temperaturi. Smeša je dalje razblažena acetonitrilom, profiltrirana i prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobilo 4,7 mg (10%, 3 koraka) željenog proizvoda. Proizvod je izolovan u vidu smeše dijastereomera. LCMS analiza, izračunato za C24H29F2N8O2(M+H)<+>: m/z = 499,2; utvrđeno: 499,1.

Primer 136.5-{1-[4-Amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-3-[1-(2,2-difluoroetil)azetidin-3-il]-4-metoksi-2-metilbenzonitril

[0555]

[0556] Smeša 5-{1-[4-amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-3-azetidin-3-il-4-metoksi-2-metilbenzonitril dihidrohlorida (21 mg; 0,043 mmol; racemski intermedijer iz Primera 129, korak 2), 2-bromo-1,1-difluoroetana (3,8 µl; 0,048 mmol) i trietilamina (18 µl; 0,13 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,3 ml) je mešana preko noći na 70°C. Smeša je zatim razblažena metanolom (MeOH) i prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C 18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobilo 3,3 mg (16 %) željenog proizvoda. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C22H24F4N7O (M+H)<+>: m/z = 478,2; utvrđeno: 478,1.

Primer 137.5-{1-[4-Amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-3-{1-[(2S)-2-hidroksipropil]azetidin-3-il}-4-metoksi-2-metilbenzonitril

[0557]

Korak 1. terc-Butil 3-(3-{1-[4-amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-cijano-2-metoksi-6-metilfenil)azetidin-1-karboksilat

[0558] Navedeno jedinjenje je pripremljeno postupcima analognim postupcima opisanim u Primeru 129, korak 1, s time da je proizvod prečišćen upotrebom Phenomenex Lux-Cellulose 1 kolone (21,1 x 250 mm, veličine čestica 5 mikrona), eluiranjem sa 10% etanolom u heksanima pri brzini protoka 18 ml/min i količinom koja je nanošena od 5 mg po injeciranju, a da bi se obezbedilo razdvajanje dva enantiomera. Za pik 1: retenciono vreme: 1,12 min; LCMS analiza, izračunato za C25H30F2N7O3(M+H)<+>: m/z = 514,2; utvrđeno: 514,1. Retenciono vreme za pik 2 je iznosilo 2,58 min.

[0559] Navedeno jedinjenje je pripremljeno postupcima analognim postupcima opisanim u Primeru 128, korak 2, upotrebom terc-butil 3-(3-{1-[4-amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-cijano-2-metoksi-6-metilfenil)azetidin-1-karboksilata (pik 1 iz koraka 1) umesto terc-butil 3-(3-{1-[4-amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-l-il]etil}-5-cijano-2-metoksi-6-metilfenil)azetidin-1-karboksilata. LCMS analiza, izračunato za C20H22F2N7O (M+H)<+>: m/z = 414,2; utvrđeno: 414,1.

Korak 3.5-{1-[4-Amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-3-{1-[(2S)-2-hidroksipropil]azetidin- 3-il}-4-metoksi-2-metilbenzonitril

[0560] U smešu 5-{1-[4-amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-3-azetidin-3-il-4-metoksi-2-metilbenzonitril dihidrohlorida (25 mg; 0,051 mmol), (2S)-2-{[tercbutil(difenil)silil]oksi}propanata (18 mg; 0,057 mmol) i trietilamina (22 µl; 0,15 mmol) u metilen hloridu (0,3 ml) je dodata smola natrijum triacetoksiborohidrida (45 mg; 0,10 mmol). Smeša je zatim mešana preko noći, pa je profiltrirana i koncentrovana. Ostatku su zatim dodati tetrahidrofuran (1,0 ml) i 1,0 M tetra-n-butilamonijum fluorid u THF (0,51 ml; 0,51 mmol). Dobijena smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi, pa je rastvarač uparen. Sirov materijal je prečišćen primenom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobilo 1,6 mg (6,6%) željenog proizvoda. Proizvod je izolovan kao pojedinačni dijastereomer. LCMS analiza, izračunato za C23H28F2N7O2(M+H)<+>: m/z = 472,2; utvrđeno: 472,2.

Primer 138.3-(1-Acetilazetidin-3-il)-5-{1-[4-amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-4-metoksi-2-metilbenzonitril

[0561]

[0562] Smeša 5-{1-[4-amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-3-azetidin-3-il-4-metoksi-2-metilbenzonitril dihidrohlorida (21 mg; 0,043 mmol; racemski intermedijer iz Primera 129, korak 2), acetil hlorida (3,4 µl; 0,048 mmol) i trietilamina (18 µl; 0,13 mmol) u metilen hloridu (0,3 ml) je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Zatim su upareni rastvarači, a sirovi materijal je prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C22H24F2N7O2(M+H)<+>: m/z = 456,2; utvrđeno: 456,2.

Primer 139. Enantiomeri 1-{1-[5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-(1-izopropilazetidin-3-il)fenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina

[0563]

Korak 1.1-(5-Hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-jodofenil)etanon

[0564] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure opisane u Primeru 13, korak 3, upotrebom 1-(5-hloro-4-fluoro-2-hidroksi-3-jodofenil)etanona i jodoetana kao polaznih materijala. LCMS analiza, izračunato za C10H10ClFIO2(M+H)<+>: m/z = 342,9; utvrđeno: 342,9.

Korak 2. terc-Butil 3-(3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)azetidin-1-karboksilat

[0565] U laboratorijski balon sa okruglim dnom i gumenim čepom, koji je bio postavljen iznad magnetne mešalice, odmeren je litijum hlorid (3,9 g; 91 mmol). Balon je zatim grejan na 140°C pod visokim vakuumom tokom 10 min, pa je nakon hlađenja do sobne temperature, balon ispunjen azotom. Zatim je dodat cink (6,0 g; 91 mmol) i smeša je ponovo grejana na 140°C pod visokim vakuumom tokom 10 min, pa je posuda nakon hlađenja do sobne temperature napunjena azotom. Dalje su špricem dodat tetrahidrofuran (THF)(38 ml) i 1,2-dibrometan (233 µl; 2,70 mmol) i smeša je grejana na 60°C tokom 10 min, a zatim ohlađena do sobne temperature. U smešu su dalje dodati hlorotrimetilsilan (68 µl; 0,54 mmol) i jod (69 mg; 0,27 mmol) u THF (1 ml), pa je dobijena smeša mešana na 60°C tokom 10 min i opet ohlađena do sobne temperature. Sledeći dodati rastvor je bio rastvor terc-butil 3-jodoazetidin-1-karboksilata (12,17 g; 42,99 mmol) u THF (10 ml). Smeša je zatim mešana na 40°C tokom 1 h i na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Iz drugog balona, napunjenog 1-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-jodofenil)etanonom (13,0 g; 38,0 mmol), paladijum acetatom (170 mg; 0,76 mmol), 2’-(dicikloheksilfosfino)-N,N,N,N'-tetrametilbifenil-2,6-diaminom (660 mg; 1,5 mmol) i toluenom (35 ml) je visokim vakuumom izvučen vazduh, pa je balon ispunjen azotom. Smeša je zatim ohlađena do 0°C i šrpicem je polako dadavam prethodno pripremljen reagens sa cinkom. Po završenom dodavanju, reakciona smeša je grejana na 50°C preko noći. Reakcioni rastvor je dalje preraspodeljen između EtOAc i zasićenog rastvora NH4Cl, pa su razdvojeni slojevi i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x). Organski slojevi su spojeni, isprani vodom i koncentrovanim rastvorom soli, a zatim su osušeni upotrebom MgSO4, i koncentrovani. Sirova smeša je prečišćena na silika gel koloni da bi se dobio željeni proizvod u vidu narandžastog ulja (6,3 g; 45%). LCMS analiza, izračunato za C18H23ClFNO4Na (M+Na)<+>: m/z = 394,1; utvrđeno: 394,1.

Korak 3. terc-Butil 3-[3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(1-hidroksietil)fenil]azetidin-1-karboksilat

[0566] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure opisane u Primeru 13, korak 5, upotrebom terc-butil 3-(3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)azetidin-1-karboksilata i natrijum tetrahidroborata kao polaznih supstanci. LCMS analiza, izračunato za C18H25ClFNO4Na (M+Na)<+>: m/z = 396,1; utvrđeno: 396,1.

Korak 4. terc-Butil 3-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-etoksi-2-fluorofenil]azetidin-1-karboksilat

[0567] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure opisane u Primeru 13, korak 6, upotrebom terc-butil 3-[3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(1-hidroksietil)fenil]azetidin-1-karboksilata (racemskog) i cijanurin-hlorida kao polaznih supstanci.

Korak 5. terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}azetidin-1-karboksilat

[0568] U smešu 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (1,10 g; 7,37 mmol), cezijum karbonata (3,2 g; 10 mmol) i kalijum jodida (111 mg; 0,670 mmol) u DMF (20 ml) je dodat terc-butil 3-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-etoksi-2-fluorofenil]azetidin-1-karboksilat (2,63 g; 6,70 mmol), pa je smeša mešana na 90°C tokom 3 h. Rastvarač je zatim uklonjen in vacuo. Ostatak je razblažen etil acetatom i vodom, nakon čega je vodeni sloj dva puta ekstrahovan etil acetatom. Organski slojevi su spojeni, isprani vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa su osušeni upotrebom Na2SO4, profiltrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen na silika gel koloni (eluiranjem sa 100% etil acetatom) da bi se dobio željeni proizvod u vidu penaste supstance (2,15 g; 63%). LCMS analiza, izračunato za C24H31ClFN6O3(M+H)<+>: m/z = 505,2; utvrđeno: 505,2.

Korak 6.1-[1-(3-Azetidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorid

[0569] U rastvor terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}azetidin-1-karboksilata (275 mg; 0,544 mmol) u dihlorometanu (2,4 ml) je dodat 4,0 M rastvor hlorovodonika u dioksanu (1,1 ml; 4,4 mmol). Reakcioni rastvor je zatim mešan na sobnoj temperaturi tokom 6 h. Rastvarač je dalje uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod u vidu bele čvrste supstanca (250 mg; 96%). LCMS analiza, izračunato za C19H23ClFN6O (M+H)<+>: m/z = 405,2; utvrđeno: 405,1.

Korak 7.1-{1-[5-Hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-(1-izopropilazetidin-3-il)fenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0570] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (49 mg; 0,10 mmol), acetona (8,28 ml; 0,113 mmol) i trietilamina (44,3 µl; 0,318 mmol) u dihlorometanu (0,67 ml) je dodata smola natrijum triacetoksiborohidrida (89 mg; 0,20 mmol). Dobijena smeša je zatim mešana preko noći na sobnoj temperaturi, pa je profiltrirana, koncentrovana i potom prečišćena upotrebom preparativnog LCMS postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% TFA, brzina protoka 60 ml/min) da bi se dobio racemski proizvod. LCMS analiza, utvrđeno: m/z = 447,2 (M+H)<+>. Racemska smeša je zatim razdvojena hiralnim HPLC postupkom (kolona IA, eluiranje sa smešom 5% etanola i 95% heksana, brzina protoka 18 ml/min) da bi se obezbedila dva pika (izomer 1: 9,5 mg; 21%; izomer 2: 9,2 mg; 20%).

Izomer 1 (prvi eluiran, retenciono vreme: 4,4 min):<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,10 (s, 1H), 7,45 (d, 1H), 6,21 (m, 1H), 3,70. (m, 5H), 2,91 (m, 2H), 2,53 (s, 3H), 2,17 (m, 1H), 1,66 (d, 3H), 1,31 (t, 3H), 0,81 (m, 6H) ppm; LCMS analiza, izračunato za C22H29ClFN6O (M+H)<+>: m/z = 447,2; utvrđeno: 447,2.

Izomer 2 (drugi eluiran, retenciono vreme: 19,5 min): LCMS izračunata za C22H29ClFN6O (M+H)<+>: m/z = 447,2; utvrđeno: 447,2.

Primer 140.1-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}azetidin-1-il)-2-metilpropan-2-ol

[0571]

[0572] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (20 mg; 0,042 mmol; racemski intermedijer iz Primera 139, korak 6) i trietilamina (18 µl; 0,12 mmol) u etanolu (1 ml) je dodat 2,2-dimetil-oksiran (6,98 µl; 0,0837 mmol). Dobijena smeša je zatim grejana na 120°C u mikrotalasnom reaktoru tokom 45 min. Reakciona smeša je dalje razblažena metanolom i prečiščena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod u vidu bele čvrste supstance (3,4 mg; 17%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C23H31ClFN6O2(M+H)<+>: m/z = 477,2; utvrđeno: 477,3.

Primer 141.1-(1-{5-Hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-[1-(2,2,2-trifluoroetil)azetidin-3-il]fenil}etil)-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0573]

[0574] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (19 mg; 0,040 mmol; racemski intermedijer iz Primera 139, korak 6) i trietilamina (20 µl; 0,14 mmol) u dihlorometanu (0,5 ml) je dodat 2,2,2-trifluoroetil trifluormetansulfonat (11 mg; 0,048 mmol). Dobijena smeša je zatim mešana preko noći na sobnoj temperaturi, pa su rastvarači upareni pod sniženim pritiskom. Sirova smeša je dalje prečiščena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod (3,8 mg; 19%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C21H24ClF4N6O (M+H)<+>: m/z = 487,2; utvrđeno: 487,1.

Primer 149. (2S)-1-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}azetidin-1-il)propan-2-ol

[0575]

Korak 1. Enantiomeri terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}azetidin-1-karboksilata

[0576] Racemska smeša je razdvojena hiralnim HPLC postupkom (kolona IA, eluiranje smešom 5% etanol/95% heksan, bazina protoka 18 ml/min) da bi se obezbedila dva pika; Izomer 1 (prvi eluiran): retenciono vreme: 16,8 min; LCMS analiza, izračunato za C24H31ClFN6O3(M+H)<+>: m/z = 505,2; utvrđeno: 505,2; Izomer 2 (drugi eluiran): retenciono vreme: 19,5 min; LCMS analiza, izračunato za C24H31ClFN6O3(M+H)<+>: m/z = 505,2; utvrđeno: 505,2.

Korak 2.1-[1-(3-Azetidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorid

[0577] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedura analognih procedurama koje su opisane u Primeru 139, korak 6, upotrebom terc-butil 3-{3-[(1S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}azetidin-1-karboksilata (prvi pik prilikom hiralnog razdvajanja) kao polaznog materijala. LCMS analiza, izračunato za C19H23ClFN6O (M+H)<+>: m/z = 405,2; utvrđeno: 405,1.

Korak 3. (2S)-1-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi- 6-fluorofenil}azetidin-1-il)propan-2-ol

[0578] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (46 mg; 0,11 mmol) (izomera 1) i trietilamina (50 µl; 0,4 mmol) u izopropil alkoholu (0,3 ml) je dodat (S)-(-)-metiloksiran (16 µl; 0,23 mmol). Dobijena smeša je zatim mešana na 90°C tokom 3 h. Nakon hlađenja, smeša je razblažena acetonitrilom i prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod (12 mg; 23%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni dijastereomer.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,05 (s, 1H), 7,38 (d, 1H), 6,15 (m, 1H), 4,26 (d, 1H), 3,76-3,60 (m, 6H), 2,99 (m, 2H), 2,48 (s, 3H), 2,22 (m, 2H), 1,62 (d, 3H), 1,25 (t, 3H), 0,93 (d, 3H) ppm; LCMS analiza, izračunato za C22H29ClFN6O2(M+H)<+>: m/z = 463,2; utvrđeno: 463,2.

Primer 150.1-{1-[5-Hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-(1-izopropilazetidin-3-il)fenil)etil}-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0579]

Korak 1: terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}azetidin-1-karboksilat

[0580] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedura analognih procedurama koje su opisane u Primeru 139 koraku 5, upotrebom racemskog terc-butil 3-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-etoksi-2-fluorofenil]azetidin-1-karboksilata iz Primera 139, korak 4, i 3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina kao polaznih supstanci. LCMS analiza, izračunato za C23H28ClFIN6O3(M+H)<+>: m/z = 617,1; utvrđeno: 617,1 Korak 2. terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-vinil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}azetidin-1-karboksilat

[0581] Smeša terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}azetidin-1-karboksilata (1,32 g; 2,14 mmol), piridin-trivinilboroksina (1:1) (0,51 g; 2,1 mmol), [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijuma(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1), (90 mg; 0,1 mmol) i kalijum karbonata (0,89 g; 6,4 mmol) u 1,4-dioksanu (10 ml)/vodi (7 ml) je grejana na 100°C preko noći. Nakon hlađenja do sobne temperature, reakciona smeša je razblažena vodom i etil acetatom. Vodeni sloj je zatim ekstrahovan etil acetatom, dok su spojeni ekstrakti isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom MgSO4i koncentrovani, pa su prečišćeni na koloni sa silika gelom da bi se dobio željeni proizvod (0,71 g; 64%). LCMS analiza, izračunato za C25H31ClFN6O3(M+H)<+>: m/z = 517,2; utvrđeno: 517,2

Korak 3. terc-Butil 3-(3-{1-[4-amino-3-(1,2-dihidroksietil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5- hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)azetidin-1-karboksilat

[0582] U suspenziju terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-3-vinil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}azetidin-1-karboksilata (0,707 g; 1,37 mmol) u terc-butil alkohol (8,6 ml) su dodati N-metilmorfolin N-oksid (176 mg; 1,50 mmol), voda (4,3 ml) i osmijum tetraoksid (20 mg; 0,080 mmol). Dobijena smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Zatim je u reakcionu smešu dodata voda, a dalje je dodat i EtOAc, pa su razdvojeni slojevi. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc, dok su organski slojevi spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom Na2SO4, profiltirani i koncentrovani da bi se dobio sirovi proizvod. LCMS analiza, izračunato za C25H33ClFN6O5(M+H)<+>: m/z = 551,2; utvrđeno: 551,2.

Korak 4. terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-formil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}azetidin-1-karboksilat

[0583] U rastvor terc-butil 3-(3-{1-[4-amino-3-(1,2-dihidroksietil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)azetidin-1-karboksilata (0,754 g; 1,37 mmol) u THF (10 ml) i vodi (6 ml) na 0°C su dodati sirćetna kiselina (20 µl; 0,36 mmol) i natrijum perjodat (0,878 g; 4,10 mmol). Nakon mešanja preko noći, u rekacionu smešu je dodata i voda, pa je smeša ekstrahovana dihlorometanom (3x). Spojeni ekstrakti su isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom Na2SO4, profiltrirani i koncentrovani da bi se dobio sirovi proizvod. LCMS analiza, izračunato za C24H29ClFN6O4(M+H)<+>: m/z = 519,2; utvrđeno: 519,2.

Korak 5. terc-Butil 3-(3-{1-[4-amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)azetidin-1-karboksilat

[0584] U rastvor terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-3-formil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}azetidin-1-karboksilata (0,61 g; 1,2 mmol) u dihlorometanu (7 ml) na 0°C je dodat dietilaminosumpor trifluorid (0,39 ml; 2,9 mmol). Smeša je zatim mešana na 0°C nekoliko minuta, pa je zagrejana do sobne temperature i dalje mešana tokom 2,5 h. Potom su dodati voda i dihlormetan i razdvojeni su slojevi. Organski sloj je ispran koncentrovanim rastvorom soli, osušen upotrebom MgSO4, profiltriran i koncentrovan, a dobijena žuta gumasta supstanca je osušena in vacuo i tako je dobijen željeni proizvod (0,60 g; 94%). LCMS analiza, izračunato za C24H29ClF3N6O3(M+H)<+>: m/z = 541,2; utvrđeno: 541,2.

Korak 6.1-[1-(3-Azetidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil)etil]-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorid

[0585] U rastvor terc-butil 3-(3-{1-[4-amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)azetidin-1-karboksilata (0,64 g; 1,2 mmol) u dihlorometanu (5 ml) je dodat 4,0 M rastvor hlorovodonika u dioksanu (2,4 ml; 9,5 mmol). Reakcioni rastvor je zatim mešan na sobnoj temperaturi tokom 6 h, pa je uklonjen rastvarač da bi se dobio željeni proizvod u vidu bele čvrste supstance (0,61 g; 100%). LCMS analiza, izračunato za C19H21ClF3N6O (M+H)<+>: m/z = 441,1; utvrđeno: 441,1.

Korak 7.1-{1-[5-Hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-(1-izopropilazetidin-3-il)fenil]etil}-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0586] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedura analognih procedurama koje su opisane u Primeru 1, korak 8, upotrebom 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil)etil]-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida i acetona kao polaznih materijala. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C22H27ClF3N6O (M+H)<+>: m/z = 483,2; utvrđeno: 483,2

Primer 152.2-[3-(3-{1-[4-Amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)azetidin-1-il]etanol

[0587]

[0588] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedura analognih procedurama koje su opisane u Primeru 1, korak 8, upotrebom 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil)etil]-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (racemskog) i {[tercbutil(dimetil)silil]oksi}acetaldehida kao polaznih supstanci. Nakon reduktivne aminacije, dodat je tetrabutilamonijum florid zarad uklanjanja terc-butil(dimetil)sililnih grupa. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C21H25ClF3N6O2(M+H)<+>: m/z = 485,2; utvrđeno: 485,2.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 8,23 (s, 1H), 7,38 (m, 2H), 6,29 (m, 1H), 3,78-3,67 (m, 4H), 3,53 (m, 1H), 3,12 (m, 2H), 2,99-2,87 (m, 2H), 2,34 (m, 2H), 1,68 (d, 3H), 1,22 (m, 3H) ppm.

Primer 156. (2R)-2-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil[-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)propan-1-ol

[0589]

Korak 1. Metil (2S)-2-bromopropanoat

[0590] U smešu (2S)-2-bromopropanske kiseline (0,552 g; 3,61 mmol) i oksalil hlorida (0,61 ml; 7,2 mmol) u dihlorometanu (4,6 ml) na 0°C je dodat DMF (28 µl; 0,36 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi preko noći, pa je rastvarač uklonjen in vacuo. Ostatak je rastvoren u dihlorometanu i tretiran sa metanolom (1,5 ml; 36 mmol) i piridinom (0,44 ml; 5,4 mmol). Reakcioni rastvor je dalje mešan na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakcija je zaustavljena dodavanjem zasićenog rastvora natrijum bikarbonata, pa je rastvor ispran koncentrovanim rastvorom soli, osušen upotrebom Na2SO4, profiltriran i koncentrovan da bi se dobio željeni proizvod (0,51 g; 85%).

Korak 2. Metil (2R)-2-(3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)propanoat

[0591] U rastvor 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin hidrohlorida (20,1 mg; 0,0475 mmol; hiralni intermedijer iz Primera 1, korak 7) u acetonitrilu (1 ml) su dodati trietilamin (23 µl; 0,17 mmol) i metil (2S)-2-bromopropanoat (9,5 mg; 0,057 mmol). Reakcioni rastvor je zatim mešan na sobnoj temperaturi tokom 4 sata, pa je uklonjen rastvarač da bi se dobio željeni proizvod (6,2 mg; 28%). LCMS analiza, izračunato za C23H30ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 473,2; utvrđeno: 473,3

Korak 3. (2R)-2-(3-{3-[(1S)-1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)propan-1-ol

[0592] Rastvor metil (2R)-2-(3-{3-[(1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)propanoata (6,2 mg; 0,013 mmol) u dihlorometanu (0,5 ml) je tretiran na 0°C sa 1,0 M diizobutilaluminijum hidridom u toluenu (0,1 ml; 0,1 mmol) tokom 3 h. Reakcija je zaustavljena dodavanjem metanola, pa je smeša prečišćena upotrebom preparativnog RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod (0,8 mg; 14%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni dijastereomer. LCMS analiza, izračunato za C22H30ClN6O2(M+H)<+>: m/z = 445,2; utvrđeno: 445,1

Primer 158.1-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)-2-metilpropan-2-ol

[0593]

[0594] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedura analognih procedurama koje su opisane u Primeru 140, upotrebom 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin hidrohlorida (hiralni intermedijer iz Primera 1, korak 7) i 2,2-dimetiloksirana kao polaznih supstanci. Proizvod je izolovan kao pojedinačni enatiomer. LCMS analiza, izračunato za C23H32ClN6O2(M+H)<+>: m/z = 459,2; utvrđeno: 459,1.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 8,04 (s, 1H), 7,23 (bs, 2H), 7,16 (s, 1H), 6,14 (m, 1H), 3,96 (s, 1H), 3,85 (m, 3H), 3,45 (s, 3H), 2,94 (m, 1H), 2,80 (m, 1H), 2,49 (s, 3H), 2,14 (s, 2H), 2,00 (s, 3H), 1,63 (d, 3H), 0,98 (s, 6H) ppm.

Primer 159. (2R)-2-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)-N,N-dimetilpropanamid

[0595]

Korak 1. (2R)-2-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)propanska kiselina

[0596] U rastvor metil (2R)-2-(3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)propanoata (hiralni intermedijer iz Primera 156, korak 2) (13 mg; 0,027 mmol) u acetonitrilu (0,6 ml) i vodi (0,2 ml) je dodat litijum hidroksid (2,4 mg; 0,10 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakcioni rastvor je dalje razblažen etil acetatom i 1 M rastvorom HCI. Organski sloj je izdvojen, osušen upotrebom Na2SO4, profiltriran i koncentrovan da bi se dobio željeni proizvod (10,2 mg; 83%). LCMS analiza, izračunato za C22H28ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 459,2; utvrđeno: 459,1.

Korak 2. (2R)-2-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)-N,N-dimetilpropanamid

[0597] U rastvor (2R)-2-(3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)propanske kiseline (4 mg; 0,009 mmol) i benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata (4 mg; 0,009 mmol) u DMF (0,3 ml) na sobnoj temperaturi su dodati trietilamin (4 µL; 0,03 mmol) i dimetilamin hidrohlorid (0,9 mg; 0,01 mmol). Reakciona smeša je mešana 1 h, a zatim je razblažena metanolom i prečišćena preparativnim RP-HPLC postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod (2,7 mg; 63%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni dijastereomer. LCMS analiza, izračunato za C24H33ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 486,2; utvrđeno: 486,1.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 8,09 (s, 1H), 7,23 (s, 1H), 6,18 (m, 1H), 3,78 (m, 3H), 3,50 (s, 3H), 3,01 (s, 3H), 3,0-2,9 (m, 3H), 2,77 (s, 3H), 2,54 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 1,67 (d, 3H), 0,98 (d, 3H) ppm.

Primer 161. [1-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)ciklobutil]acetonitril

[0598]

[0599] U rastvor 1-[(1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (10 mg; 0,022 mmol; hiralni intermedijer iz Primera 1, korak 7) u acetonitrilu (0,1 ml) je dodat ciklobutilidenacetonitril (4,1 mg; 0,044 mmol), a zatim je dodat i 1,8-diazabiciklo[5.4.0]andek-7-en (13 µl; 0,087 mmol). Dobijena smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je dalje razblažena acetonitrilom i prečišćena preparativnim RP-HPLC postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod (4,3 mg; 41%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C25H31ClN7O (M+H)<+>: m/z = 480,2; utvrđeno: 480,0.

Primer 163.1-{1-[5-Hloro-2-metoksi-4-metil-3-(1-metilpiperidin-4-il)fenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-4-amin

Korak 1. terc-Butil 4-(3-acetil-5-hloro-1-metoksi-6-metilfenil)piperidin-1-karboksilat

[0601] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedura analognih procedurama koje su opisane u Primeru 139, korak 2, upotrebom 1-(5-hloro-3-jodo-2-metoksi-4-metilfenil)etanona i terc-butil 4-jodopiperidin-1-karboksilata kao polaznih supstanci. LCMS analiza, izračunato za C20H28ClNO4Na (M+Na)<+>: m/z = 404,1; utvrđeno: 404,1.

Korak 2. terc-Butil 4-[3-hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil] piperidin-1-karboksilat

[0602] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure opisane u Primeru 13, korak 5, upotrebom terc-butil 4-(3-acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)piperidin-1-karboksilata i natrijum tetrahidroborata kao polaznih supstanci. LCMS analiza, izračunato za C20H30ClNO4Na (M+Na)<+>: m/z = 406,1; utvrđeno: 406,1.

Korak 3. terc-Butil 4-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]piperidin-1-karboksilat

[0603] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure opisane u Primeru 13, korak 6, upotrebom terc-butil 4-[3-hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]piperidin-1-karboksilata (racemske smeše) i cijanurin-hlorida kao polaznih supstanci.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7,44 (s, 1H), 5,46 (m, 1H), 4,23 (bs, 2H), 3,73 (s, 3H), 3,29 (bs, 1H), 2,78 (bs, 2H), 2,40 (s, 3H), 2,27-2,09 (m, 2H), 1,78 (d, 3H), 1,63 (m, 2H), 1,43 (s, 9H) ppm.

Korak 4. terc-Butil 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piperidin-1-karboksilat

[0604] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure opisane u Primeru 139, korak 5, upotrebom terc-butil 4-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]piperidin-1-karboksilata i 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina kao polaznih supstanci. LCMS analiza, izračunato za C26H36ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 515,3; utvrđeno: 515,2.

Korak 5.1-[1-(5-Hloro-2-metoksi-4-metil-3-piperidin-4-ilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorid

[0605] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure opisane u Primeru 139, korak 6, upotrebom terc-butil 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piperidin-1-karboksilata kao polaznog materijala. LCMS analiza, izračunato za C21H28ClN6O (M+H)<+>: m/z = 415,2; utvrđeno: 415,2.

Korak 6.1-{1-[5-Hloro-2-metoksi-4-metil-3-(1-metilpiperidin-4-il)fenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4 amin

[0606] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure opisane u Primeru 139, korak 7, upotrebom 1-[1-(5-hloro-2-metoksi-4-metil-3-piperidin-4-ilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida i formaldehida kao polaznih supstanci. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C22H30ClN6O (M+H)<+>: m/z = 429,2; utvrđeno: 429,1.

Primer 164.1-(4-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piperidin-1-il)-2-metilpropan-2-ol

[0607]

[0608] Navedeno jedinjenje je pripremljeno procedurama analognih procedurama koje su opisane u Primeru 140, upotrebom 1-[1-(5-hloro-2-metoksi-4-metil-3-piperidin-4-ilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (racemski intermedijer iz Primera 163, korak 5) i 2,2-dimetil-oksirana kao polaznih supstanci. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C25H36ClN6O2(M+H)<+>: m/z = 487,3; utvrđeno: 487,3.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 8,05 (s, 1H), 7,24 (bs, 2H), 7,22 (s, 1H), 6,16 (m, 1H), 4,01 (bs, 1H), 3,67 (s, 3H), 2,97 (m, 3H), 2,49 (s, 3H), 2,32 (s, 3H), 2,15-2,04 (m, 6H), 1,63 (d, 3H), 1,40 (m, 2H), 1,03 (s, 6H) ppm.

Primer 165.5-(3-{1-[4-Amino-3-(cijanometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0609]

[0610] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure opisane u Primeru 47, upotrebom 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)izoksazola (firme Frontier) umesto (3-fluorofenil)boronske kiseline. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C26H28ClN8O2(M+H)<+>: m/z = 519,2; utvrđeno: 519,2.

Primer 166.3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}ciklobutanol trifluoracetat

[0611]

Korak 1.1-(5-Hloro-2-metoksi-4-metil-3-vinilfenil)etanon

[0612] Smeša 1-(5-hloro-3-jodo-2-metoksi-4-metilfenil)etanona (1,0 g; 3,2 mmol; iz Primera 1, korak 2), 4,4,5,5-tetrametil-2-inil-1,3,2-dioksaborolana (0,66 ml; 3,9 mmol), [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijuma(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1), (0,26 g; 0,32 mmol) i kalijum karbonata (1,3 g; 9,4 mmol) u 1,4-dioksanu (10 ml) i vodi (5 ml) je degasirana sa N2i zatim grejana na 80°C preko noći. Nakon hlađenja do sobne temperature, reakciona smeša je razblažena vodom i etil acetatom. Organski sloj je ispran koncentrovanim rastvorom soli, osušen upotrebom MgSO4, koncentrovan i prečišćen na silika gel koloni (eluiranjem sa 0 do 10% EtOAc u heksanima) da bi se dobio željeni proizvod (0,60 g; 82%). LCMS analiza, izračunato za C12H14ClO2(M+H)<+>: m/z = 225,1; utvrđeno: 225,1

Korak 2.3-(3-Acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)ciklobutanon

[0613] U rastvor 1-(5-hloro-2-metoksi-4-metil-3-vinilfenil)etanona (530 mg; 2,4 mmol) u etru (10 ml) je dodat kuplovan cink-bakar (1,8 g; 14 mmol). Reakciona smeša je zatim grejana na 40°C, pa su tokom 2 h polako dodavani rastvor oftrihloroacetil hlorida (1,4 ml; 13 mmol) i fosforil hlorid (1,2 ml; 13 mmol) u 1,2-dimetoksietanu (3 ml). Po završenom dodavanju, reakciona smeša je mešana na temperaturi refluksa preko noći. Reakcija je zaustavljena dodavanjem zasićenog rastvora NaHCO3, pa je smeša razblažena etrom. Organski sloj je ispran koncentrovanim rastvorom soli, osušen upotrebom Na2SO4, profiltriran i koncentrovan. Ostatak i cink (0,31 g; 4,7 mmol) u sirćetnoj kiselini (10 ml) su zatim mešani na sobnoj temperaturi tokom 2 h, a nakon toga na temperaturi refluksa preko noći. Dalje je dodat drugi deo cinka i smeša je mešana na temperaturi refluksa još 4 h. Smeša je dalje razblažena vodom i ekstrahovana etrom. Organska faza je sukcesivno isprana zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, a zatim je osušena upotrebom MgSO4i koncentrovana. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom (eluiranje sa 0 do 30% etil acetatom u heksanu) da bi se dobio željeni proizvod (0,17 g; 27%). LCMS analiza, izračunato za C14H16ClO3(M+H)<+>: m/z = 267,1; utvrđeno: 267,0

Korak 3.3-[3-Hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]ciklobutanol

[0614] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure opisane u Primeru 13, korak 5, upotrebom 3-(3-acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)ciklobutanona i natrijum tetrahidroborata kao polaznih supstanci. LCMS analiza, izračunato za C14H19ClO3Na (M+Na)<+>: m/z = 293,1; utvrđeno: 293,1.

Korak 4.3-[3-Hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil] ciklobutanol

[0615] U rastvor 3-[3-hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]ciklobutanola (170 mg; 0,628 mmol) u dimetilsulfoksidu (1 ml) je dodat cijanurin-hlorid (64 mg; 0,34 mmol). Nakon mešanja preko noći, reakciona smeša je razblažena etrom i vodom. Vodeni sloj je zatim ekstrahovan jedan put etil acetatom, dok su organski ekstrakti spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom Na2SO4, profiltrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen na silika gel koloni da bi se dobio željeni proizvod (39,6 mg; 22%). LCMS analiza, izračunato za C14H18ClO2(M-Cl)<+>: m/z = 253,1; utvrđeno: 253,2.

Korak 5.3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}ciklobutanol trifluoracetat

[0616] Navedeno jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure opisane u Primeru 139, korak 5, upotrebom 3-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]ciklobutanola i 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina kao polaznih supstanci. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C20H25ClN5O2(M+H)<+>: m/z = 402,2; utvrđeno: 402,2.

Primer 167.5-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpikolinamid bis(2,2,2-trifluoroacetat)

[0617]

Korak 1.1-(3-Bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanon

[0618] U mešani rastvor 1-(5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanona (5,00 g; 25,2 mmol; firme Oakwood) u sirćetnoj kiselini (100 ml) je dodat N-bromosukcinimid (4,93 g; 27,7 mmol), pa je dobijena smeša grejana na 100°C tokom 18 sati. Nakon hlađenja do sobne temperature, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo, a zatim je reakcija zaustavljena dodavanjem zasićenog rastvora natrijum bikarbonata. Smeša je dalje profiltrirana i izdvojen je nerastvorljiv sukcinimid. Filtrat je potom ekstrahovan sa EtOAc. Organski slojevi su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom natrijum sulfata i zatim koncentrovani do suva pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen na silika gelu, eluiranjem sa 0 do 50% EtOAc u heksanima, da bi se dobili željeni proizvodi (2,66 g; 38%). LCMS analiza, izračunato za C10H11BrClO2(M+H)<+>: m/z = 277,0; utvrđeno: 277,0.<1>H NMR (DMSO-d4300 MHz): δ 7,70 (1H, s), 3,77 (3H, s), 2,57 (3H, s), 2,50 (3H, s) ppm.

Korak 2.1-(3-Bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanol

[0619] Natrijum tetrahidroborat (0,31 g; 8,1 mmol) je na 0°C dodat u smešu 1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanona (1,5 g; 5,4 mmol) u metanolu (25 ml), pa je dobijena reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Zatim je ukolonjen rastvarač, a dobijeni ostatak je razblažen etil acetatom, ispran zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, i dalje osušen upotrebom Na2SO4, profiltriran i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen silika gel hromatografijom, eluiranjem sa 0 do 40% EtOAc u heksanima, da bi se dobio željeni proizvod (0,30 g; 90%).

Korak 3.3-Bromo-1-hloro-5-(1-hloroetil)-4-metoksi-2-metilbenzen

[0620] Smeša cijanurin-hlorida (1,7 g; 9,2 mmol) i N,N-dimetilformamida (710 µl; 9,2 mmol) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta, pa je dodat rastvor 1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanola (iz Primera 16, korak 1) (1,72 g; 6,15 mmol) u metilen hloridu (34 ml) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je zatim razblažena metilen hloridom, isprana zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen silika gel hromatografijom, eluiranjem sa 0 do 10% EtOAc u heksanima, a da bi se dobio željeni proizvod (1,01 g; 60%).

Korak 4.1-[1-(3-Bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0621] Smeša 3-bromo-1-hloro-5-(1-hloroetil)-4-metoksi-2-metilbenzena (150 mg; 0,503 mmol), 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (110 mg; 0,76 mmol; ACES Pharma lista proizvoda, kataloški br.

47024), kalijum-jodida (9,0 mg; 0,05 mmol) i cezijum karbonata (330 mg; 1,0 mmol) u N,N-dimetilformamidu (4 ml) je mešana na 140°C tokom 1 h. Smeša je zatim razblažena metilen hloridom, isprana zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen silika gel hromatografijom, eluiranjem sa 0 do 70% EtOAc u CH2Cl2, a da bi se dobio željeni proizvod (103 mg; 50%). LCMS analiza, izračunato za C16H18BrClN5O (M+H)<+>: m/z = 410,0; utvrđeno: 410,2. Racemski proizvodi su potom naneti na Phenomenex Lux-Cellulose 1 kolonu (21,1 x 250 mm, veličina čestica 5 mikrona), eluirani sa 5% etanolom u heksanima pri brzini protoka od 18 ml/min i sa nanetom količinom od ~ 13 mg po injeciranju, a da bi se dobila dva enantiomera. Pik 1, retenciono vreme: 12,35 min; Pik 2, retenciono vreme: 14,98 min.

Korak 5.5-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpikolinamid bis(2,2,2-trifluoroacetat)

[0622] Smeša 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (25 mg; 0,061 mmol) (prvi pik prethodnog koraka hiralnog razdvajanja), N,N-dimetil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-karboksamida (25 mg; 0,091 mmol; firma PepTech Corp. – Enciklopedija analoga aminokiselina i boronskih kiselina, kataloški br. BE1622-1), natrijum karbonata (13 mg; 0,12 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijuma(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1), (9,9 mg; 0,012 mmol) u acetonitrilu (0,8 ml)/vodi (0,3 ml) je degasirana sa N2, a zatim mešana na 95°C tokom 2 h. Nakon hlađenja do sobne temperature, smeša je profiltirana, pa je filtrat prečiščen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% trifluorosirćetne kiseline, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod u vidu bis-TFA soli (2,9 mg; 6,7%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C24H27ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 480,2; utvrđeno: 480,2.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ: 8,78 (2H, br s), 8,48 (1H, m), 8,36 (1H, s), 7,86 (1H, br s), 7,65 (1H, br s), 7,58 (1 H, s), 6,33 (1 H, q, J = 7,0 Hz), 3,19 (3H, s), 3,03 (3H, s), 2,97 (3H, s), 2,62 (3H, s), 2,06 (3H, s), 1,81 (3H, d, J = 7,0 Hz) ppm.

Primer 174.5-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-N-ciklopropil-N-metilnikotinamid bis(2,2,2-trifluoroacetat)

[0623]

Korak 1.5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}nikotinonitril

[0624] Smeša 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (prvi pik iz Primera 167, korak 4, hiralno razdvajanje, 106 mg; 0,25 mmol), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)nikotinonitrila (70. mg; 0,31 mmol; firme Combi-Blocks, kataloški br. PN-8893), natrijum karbonata (43 mg; 0,41 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]-dihloropaladijuma(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1), (33 mg; 0,041 mmol), u acetonitrilu (2 ml)/vodi (0,6 ml) je degasirana sa N2, a zatim mešana na 95°C tokom 2 h. Smeša je zatim razblažena metilen hloridom, isprana zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana. Proizvod (95 mg; 87%) je prečišćen eluiranjem sa CH2Cl2/MeOH (maks. MeOH 5%). LCMS analiza, izračunato za C22H21ClN7O (M+H)<+>: m/z = 434,2; utvrđeno: 434,2.

Korak 2. Dihidrohlorid 5-(3-(1-(4-amino-3-metil-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)nikotinske kiseline

[0625] U smešu 5-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}nikotinonitrila (0,090 g; 0,21 mmol) u etanolu (1,0 ml) je dodat 4,0 M rastvor natrijum hidroksida u vodi (0,3 ml; 1 mmol), pa je smeša grejana na 95°C tokom 6 sati. U isto vreme je dodata i konc. HCl da bi se pH smeše podesio na ~3. Zatim je ukolonjen rastvarač, a ostatak je iskorišćen u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. LCMS analiza, izračunato za C22H22ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 453,1; utvrđeno: 453,2.

Korak 3.5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N- ciklopropil-N-metilnikotinamid

[0626] N-metilciklopropanamin hidrohlorid (4,0 mg; 0,04 mmol) je na sobnoj temperaturi dodat u rastvor dihidrohlorida 5-(3-(1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)nikotinske kiselina (9,6 mg; 0,021 mmol) i BOP (10 mg; 0,03 mmol) u DMF (0,7 ml), nakon čega je dodat i trietilamin (13 µl; 0,10 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana 1 h. Proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% trifluorosirćetne kiseline, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod u vidu bis-TFA soli (2,6 mg; 17%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C26H29ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 506,2; utvrđeno: 506,2.

Primer 179.3-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-N-metilpropanamid 2,2,2-trifluoracetat

[0627]

Korak 1. terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}propanoat

[0628] U posudu za mikrotalasni reaktor su odmereni 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (pik 1 iz Primera 167, korak 4, hiralno razdvajanja, 35 mg; 0,085 mmol), kalijum (3-terc-butoksi-3-oksopropil)trifluoroborat (30 mg; 0,13 mmol; firme Frontier Scientific, kataloški br. P10370), kalijum fosfat (54 mg; 0,26 mmol), tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (9,8 mg; 0,0085 mmol) i toluen (0,7 ml)/vodi (0,2 ml). Posuda je zatim zaptivena, tri puta degasirana sa N2, pa je reakciona smeša grejana na 110°C tokom 20 h. Sirovi materijal se dalje profiltriran i proizvod (20 mg; 50%) je prečišćen hromatografski, eluiranjem sa CH2Cl2/MeOH (maks. MeOH 6%). LCMS analiza, izračunato za C23H31ClN5O3(M+H)<+>: m/z = 460,2; utvrđeno: 460,3.

Korak 2. Trifluoroacetat 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}propanske kiseline

[0629] U rastvor terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}propanoata (35 mg; 0,076 mmol) u metilen hloridu (0,2 ml) je dodat TFA (0,3 ml; 4 mmol), pa je smeša mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Zatim je uklonjen rastvarač, a proizvod je iskorišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS analiza, izračunato za C19H23ClN5O3(M+H)<+>: m/z = 404,1; utvrđeno: 404,0

Korak 3.3-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-N- metilpropanamid 2,2,2-trifluoracetat

[0630] U rastvor 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}propanske kiseline (8,9 mg; 0,022 mmol) i BOP (10 mg; 0,03 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,7 ml) na sobnoj temperaturi je dodat 2,0 M metilamin u THF (30 µl; 0,06 mmol), nakon čega je dodat i trietilamin (8,8 µl; 0,064 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana 1 sat, pa je proizvod prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% trifluorosirćetne kiseline, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod u vidu TFA soli (3,2 mg; 27%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C20H26ClN6O2(M+H)<+>: m/z = 417,2; utvrđeno: 417,0.

Primer 1811-(1-(5-Hloro-2-metoksi-4-metil-3-(1-(1-metilpiperidin-4-il)-1H-pirazol-4-il)fenil)etil)-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0631]

Korak 1. terc-Butil 4-(4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-1H-pirazol-1-il)piperidin-1-karboksilat

[0632] Smeša 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (pik 1 iz Primera 167, korak 4, hiralno razdvajanje, 42 mg; 0,1 mmol), terc-butil 4-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il]piperidin-1-karboksilata (48 mg; 0,13 mmol; firme Combi-Blocks, kataloški br. FM-2957), natrijum karbonata (18 mg; 0,17 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijuma(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1), (14 mg; 0,017 mmol), u acetonitrilu (2 ml)/vodi (0,4 ml) je degasirana sa N2i mešana na 95°C tokom 2 h. Smeša je zatim razblažena metilen hloridom, isprana zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana. Proizvod je prečišćen hromatografijom, eluiranjem sa CH2Cl2/MeOH (maks. MeOH 5%). LCMS analiza, izračunato za C29H38ClN8O3(M+H)<+>: m/z = 581,2; utvrđeno: 581,3.

Korak 2.1-(1-(5-Hloro-2-metoksi-4-metil-3-(1-(piperidin-4-il)-1H-pirazol-4-il)fenil)etil)-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0633] U rastvor terc-butil 4-(4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-1H-pirazol-1-il)piperidin-1-karboksilata (30 mg; 0,052 mmol) u metilen hloridu (0,2 ml) na sobnoj temperaturi je dodat TFA (0,3 ml; 4 mmol), pa je smeša mešana 1 h. Sirovi proizvod je zatim prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod. LCMS analiza, izračunato za C24H30ClN8O (M+H)<+>: m/z = 481,2; utvrđeno: 481,1

Korak 3.1-(1-{5-Hloro-2-metoksi-4-metil-3-[1-(1-metilpiperidin-4-il)-1H-pirazol-4-il]fenil}etil)-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0634] Rastvor formaldehida u vodi (12,0 M; 0,01 ml; 0,2 mmol) je dodat u smešu 1-{-1-[5-hloro-2-metoksi-4-metil-3-(1-piperidin-4-il-1H-pirazol-4-il)fenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (8,0 mg; 0,017 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (0,012 ml; 0,066 mmol) u metilen hloridu (0,2 ml) na 0°C. Reakciona smeša je zatim mešana 10 min, pa je za to vreme dodat natrijum triacetoksiborohidrid (5,3 mg; 0,025 mmol) i nastavljeno je mešanje smeše na 0°C još 1 sat. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod (2,0 mg; 24%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C25H32ClN8O (M+H)<+>: m/z = 495,2; utvrđeno: 495,0

Primer 182.1-(1-{3-[1-(1-Acetilpiperidin-4-il)-1H-pirazol-4-il]-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil}etil)-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0635]

[0636] Acetil hlorid (2,4 µl; 0,033 mmol) je na 0°C dodat u rastvor 1-{1-[5-hloro-2-metoksi-4-metil-3-(1-piperidin-4-il-1H-pirazol-4-il)fenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (8,0 mg; 0,017 mmol; hiralni intermedijer iz Primera 181, korak 2) i N,N-diizopropiletilamina (14 µl; 0,083 mmol) u metilen hloridu (0,3 ml), pa je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi 15 min. Sirovi proizvod je zatim prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min), a da bi se dobio željeni proizvod (1,0 mg; 7,8%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C26H32ClN8O2(M+H)<+>: m/z = 523,2; utvrđeno: 523,2.

Primer 183.1-[1-(5-Hloro-3-{1-[2-(dimetilamino)etil]-1H-pirazol-4-il}-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0637]

Korak 1.1-(2-Hloroetil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H -pirazol

[0638] Smeša 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (firme 0,39 g; 2,0 mmol), 1-bromo-2-hloroetana (0,3 ml; 3 mmol) i cezijum karbonata (1,3 g; 4,0 mmol) u acetonitrilu (6 ml) je mešana na 75°C tokom 5 h. Smeša je zatim razblažena etil acetatom, isprana zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana. Dobijeni proizvod (0,45g, 88%) je prečišćen hromatografijom, eluiranjem sa smešaom heksana i EtOAc (maks. EtOAc 30%). LCMS analiza, izračunato za C11H19BClN2O2(M+H)<+>: m/z = 257,1; utvrđeno: 257,0

Korak 2. N,N-Dimetil-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1il]-iletanamin

[0639] Smeša 1-(2-hloroetil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol (0,10 g; 0,39 mmol), natrijum jodida (58 mg; 0,39 mmol) i 2,0 M dimetilamina u THF (1,0 ml; 2,0 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,5 ml) je mešana na 80°C preko noći. Zatim je uklonjen rastvarač, a da bi se dobio željeni proizvod koji je kao takav iskorišćen u sledećem koraku. LCMS analiza, izračunato za C13H25BN3O2(M+H)<+>: m/z = 266,2; utvrđeno: 266,3

Korak 3.1-[1-(5-Hloro-3-{1-[2-(dimetilamino)etil]-1H-pirazol-4-il}-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0640] Smeša 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (pik 1 iz Primera 167, korak 4, 10 mg; 0,024 mmol), N,N-dimetil-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il]-etanamina (8,6 mg; 0,036 mmol), natrijum karbonata (5,2 mg; 0,049 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijuma(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1), (4,0 mg; 0,0049 mmol) u acetonitrilu (0,5 ml)/vodi (0,1 ml) je degasirana upotrebom N2, pa mešana na 95°C tokom 2 h. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod (3,1 mg; 28%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C23H30ClN8O (M+H)<+>: m/z = 469,2; utvrđeno: 469,2.

Primer 184.2-[(5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-il)amino]etanol

[0641]

Korak 1.1-{1-[5-Hloro-3-(6-fluoropiridin-3-il)-2-metoksi-4-metilfenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0642] Smeša 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (pik 1 iz Primera 167, korak 4, 25,0 mg; 0,06 mmol), 2-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridina (20 mg; 0,088 mmol), natrijum karbonata (12 mg; 0,12 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijuma(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1), (9,5 mg; 0,012 mmol) u acetonitrilu (1 ml)/vodi (0,3 ml) je degasiran sa N2i mešana na 95°C tokom 2 h. Smeša je zatim razblažena metilen hloridom, isprana zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana. Proizvod je prečišćen hromatografijom, eluiranjem sa CH2Cl2/MeOH (maks. MeOH 5%). LCMS analiza, izračunato za C21H21ClFN6O (M+H)<+>: m/z = 427; utvrđeno: 427,2.

Korak 2.2-[(5-{3-{1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-il)amino]etanol

[0643] Smeša 1-{1-[5-hloro-3-(6-fluoropiridin-3-il)-2-metoksi-4-metilfenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (10 mg; 0,023 mmol) i etanolamina (0,10 ml) u 1-butanolu (1 ml) je mešana na 130°C tokom 5 h. Sirovi proizvod je zatim prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod (1,6 mg; 15%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C23H27ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 468,2; utvrđeno: 468,2.

Primer 188.2-(5-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)piridin-2-iloksi)etanol

[0644]

[0645] Natrijum hidrid (20 mg; 0,5 mmol) je dodat u 1,2-etandiol (0,5 ml; 9 mmol), pa je smeša mešana na sobnoj temperaturi 10 min. U isto vreme, u smešu je dodavan 1-{1-[5-hloro-3-(6-fluoropiridin-3-il)-2-metoksi-4-metilfenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (10 mg; 0,023 mmol) i zatim je reakciona smeša mešana na 110°C preko noći. Sirovi proizvod je dalje prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C 18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod (1,8 mg; 17%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C23H26ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 469,2; utvrđeno: 469,1.

Primer 189.5-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-(2,2-difluoroetoksi)-6-metilfenil)-N,N-dimetilpikolinamid bis(2,2,2-trifluoroacetat)

[0646]

Korak 1.5-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-hidroksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpikolinamid

[0647] U smešu 5-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (Primer 167, korak 5, (prvi pik) 60 mg; 0,13 mmol) u metilen hloridu (1,2 ml) na -78°C je dodat 1,0 M rastvor boron tribromida u CH2Cl2(250 µl; 0,25 mmol), pa je smeša zagrejana do sobne temperature. U isto vreme je dodavana i konc. HCI (0,1 ml) i smeša je mešana 4 h. Reakcija je zatim zaustavljena dodavanjem zasićenog rastvora NaHCO3. Smeša je dalje ekstrahovana metilen hloridom. Spojeni ekstrakti su isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni i koncentrovani da bi se dobio željeni sirovi proizvod (40 mg; 68%) koji je iskorišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS analiza, izračunato za C23H25ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 466,2; utvrđeno: 466,2.

Korak 2.5-[3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-(2,2-dif)-6-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0648] U smešu 5-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-hidroksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (15,0 mg; 0,0322 mmol), 2,2-difluoroetanola (7,9 mg; 0,096 mmol; firme Alfa Aesar, kataloški br. B22201) i trifenilfosfina (17 mg; 0,064 mmol) u tetrahidrofuranu (0,5 ml) na 0°C je dodat diizopropil azodikarboksilat (13 µl; 0,064 mmol), pa je smeša mešana na sobnoj temperaturi tokom 24 h. Sirovi proizvod je zatim prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% trifluorosirćetne kiseline, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod u vidu bis-TFA soli (1,6 mg; 6,6%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C25H27ClF2N7O2(M+H)<+>: m/z = 530,2; utvrđeno: 530,2

Primer 190.5-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-(ciklopropilmetoksi)-6-metilfenil)-N,N-dimetilpikolinamid bis(2,2,2-trifluoroacetat)

[0649]

[0650] U smešu 5-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-hidroksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (15 mg; 0,032 mmol; hiralni intermedijer iz Primera 189, korak 1), ciklopropil karbinola (7,0 mg; 0,096 mmol) i trifenilfosfina (17 mg; 0,064 mmol) u tetrahidrofuranu (0,5 ml) na 0°C je dodat diizopropil azodikarboksilat (13 µl; 0,064 mmol) i zatim je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi tokom 24 h. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% trifluorosirćetne kiseline, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod u vidu bis-TFA soli (2,4 mg; 10%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C27H31ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 520,2; utvrđeno: 520,3.

Primer 191.5-(3-{1-14-Amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0651]

Korak 1.1-[1-(3-Bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0652] Smeša 3-bromo-1-hloro-5-(1-hloroetil)-4-metoksi-2-metilbenzena (0,60 g; 2,0 mmol; iz Primera 167, korak 3), 3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (590 mg; 2,2 mmol; firme AnaSpec), cezijum karbonata (0,98 g; 3,0 mmol) i kalijum jodida (30 mg; 0,2 mmol) u N,N-dimetilformamidu (8 ml) je mešana na 140°C tokom 1 h. Smeša je zatim ohlađena, pa je u potpunosti uklonjen rastvarač. Ostatak je mešan sa CH2Cl2(30 ml) na sobnoj temperaturi tokom 20 min, a nakon toga smeša je profiltrirana. Filtrat je koncentrovan, a proizvod (0,65g, 63%) je prečišćen hromatografijom, eluiranjem sa CH2Cl2/ EtOAc (maks. EtOAc 60%). LCMS analiza, izračunato za C15H15BrClIN5O (M+H)<+>: m/z = 521,9; utvrđeno: 521,9.

Korak 2.1-[1-(3-Bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-vinil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0653] Dihloro(bis{di-terc-butil [4-(dimetilamino)fenil]fosforanil})paladijum (12 mg; 0,017 mmol) je dodat u smešu vinil boronske kiseline MIDA (110 mg; 0,6 mmol; firme Aldrich, kataloški br. 704415), 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (0,30 g; 0,57 mmol) i natrijum karbonat a(0,14 g; 1,1 mmol) u 1,4-dioksanu (1 ml) i vodi (0,1 ml), pa je smeša degasirana tri puta sa N2. Reakciona smeša je zatim mešana na 95°C tokom 4 h. Smeša je dalje razblažena metilen hloridom, isprana zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana. Proizvod je prečišćen hromatografijom, eluiranjem sa CH2Cl2/EtOAc (maks. EtOAc 60%). LCMS analiza, izračunato za C17H18BrClN5O (M+H)<+>: m/z = 422,0; utvrđeno: 422,2.

Korak 3.1-{4-Amino-1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il}etan-1, 2-diol

[0654] U rastvor 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-vinil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (100 mg; 0,236 mmol) u t-butil alkoholu (2 ml) su dodati N-metilmorfolin N-oksid (30,5 mg; 0,260 mmol) i voda (0,74 ml). U rastvor je zatim dodat vodeni rastvor osmijum tetraoksida (0,075 ml; 4%), pa je nakon 3 h, dodat i drugi ekvivalent N-metilmorfolin N-oksida. Reakciona smeša je potom mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Rastvor je dalje razblažen vodom, ekstrahovan etil acetatom, osušen upotrebom MgSO4i koncentrovan da bi se dobio proizvod koje direktno iskorišćen u narednom koraku. LCMS analiza, izračunato za C17H20BrClN5O3(M+H)<+>: m/z = 456,0; utvrđeno: 456,0

Korak 4.4-Amino-1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-karbaldehid

[0655] U rastvor 1-{4-amino-1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il}etan-1,2-diola (0,10 g; 0,22 mmol) u tetrahidrofuranu (1,6 ml)/vodi (1,0 ml) na 0°C su dodati sirćetna kiselina (0,0032 ml; 0,057 mmol) i natrijum perjodat (0,140 g; 0,657 mmol). Nakon mešanja od 2 h, reakciona smeša je razblažena vodom i ekstrahovana etil acetatom. Organski slojevi su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom MgSO4i koncentrovani, a da bi se dobio željeni sirovi proizvod koji je direktno iskorišćen u narednom koraku. LCMS analiza, izračunato za C16H16BrClN5O2(M+H)<+>: m/z = 424,0; utvrđeno: 423,9

Korak 5.5-{3-[1-(4-Amino-3-formil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0656] Smeša 4-amino-1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-karbaldehida (20 mg; 0,047mmol), {6-[(dimetilamino)karbonil]piridin-3-il}boronske kiseline (23 mg; 0,12 mmol), natrijum karbonata (10 mg; 0,094 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1), (7,7 mg; 0,0094 mmol) u acetonitrilu (0,3 ml)/etanolu (0,1 ml)/vodi (0,1 ml) je degasirana sa N2, pa je mešana na 95°C tokom 3 h. Smeša je zatim razblažena metilen hloridom, isprana zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana. Proizvod je prečišćen hromatografijom, eluiranjem sa CH2Cl2/MeOH (maks. MeOH 6%). LCMS analiza, izračunato za C24H25ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 494,2; utvrđeno: 494,1

Korak 6.5-(3-{1-[4-Amino-3-(difluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)- N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0657] Rastvoru 5-{3-[1-(4-amino-3-formil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (0,015 g; 0,030 mmol) u metilen hloridu (0,5 ml), ohlađenom na 0°C, u kapima je dodat dietilaminosumpor trifluorid (0,020 ml; 0,15 mmol). Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod (1,7 mg; 11%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C24H25ClF2N7O2(M+H)<+>: m/z = 516,2; utvrđeno: 516,2.

Primer 192. 1-[1-(5-Hloro-3-ciklopropil-2-metoksi-4-metilfenil)etil[-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0658]

[0659] U posudu za mikrotalasni rekator su odmereni 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (15 mg; 0,037 mmol; iz Primera 167, korak 4, pik 1), kalijum ciklopropiltrifluoroborat (8 mg; 0,06 mmol; firme Frontier Scientific, kataloški br. C10298), kalijum fosfat (23 mg; 0,11 mmol) i tetrakis(trifenilfosfin)paladijum (4,2 mg; 0,0036 mmol), a zatim je dodata i smeša toluena (0,3 ml) i vode (0,1 ml). Sud je zaptiven i tri puta degasiran sa N2. Reakciona smeša je dalje grejana na 110°C tokom 20 h. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod (1,1 mg; 8%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C19H23ClN5O (M+H)<+>: m/z = 372,2; utvrđeno: 372,2.

Primer 194. {3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}acetonitril

[0660]

[0661] Smeša 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (30 mg; 0,073 mmol) (iz Primera 167, korak 4, pik 1), 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)izoksazola (0,018 g; 0,095 mmol; firme Combi-Blocks, kataloški br. PN-8875), kalijum fluorida (13 mg; 0,22 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]-dihloropaladijuma (II), kompleks dihlorometanom (1:1), (12 mg; 0,015 mmol) u dimetilsulfoksidu (0,8 ml)/vodi (0,3 ml) je degasirana sa N2, pa je mešana na 130°C tokom 16 sati. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod (2,4 mg; 9%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C18H20ClN6O (M+H)<+>: m/z = 371,1; utvrđeno: 371,1

Primer 195.5-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpikolinamid bis(2,2,2-trifluoroacetat)

[0662]

Korak 1.1-(3-Bromo-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etanon

[0663] U balon sa okruglim dnom je odmeren 1-(3-bromo-5-hloro-2-hidroksi-4-metilfenil)etanon (6,0 g; 23 mmol) u anhidrovanom DMF (22,8 ml). Zatim je dodat kalijum karbonat (6,3 g; 46 mmol), pa je dodat i jodoetan (2,73 ml; 34,2 mmol) i dobijena suspenzija je mešana na 60°C tokom 2 h. Smeša je zatim presuta u 100 ml vode, pa je i ekstrahovana upotrebom 200 ml etil etra. Organski slojevi su izdvojeni, spojeni i isprani vodom i zasićenim rastvorom NaCI, pa su osušeni upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani dok nije dobijeno 6,0 g tamnog ulja. LCMS analiza, izračunato za C11H13BrClO2(M+H)<+>: m/z = 293,0; utvrđeno: 293,0

Korak 2.1-(3-Bromo-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etanol

[0664] Natrijum tetrahidroborat (0,31 g; 8,1 mmol) je na 0°C dodat u smešu 1-(3-bromo-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etanona (1,5 g; 5,4 mmol) u metanolu (25 ml), pa je dobijena reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Zatim je uklonjen rastvarač, a dobijeni ostatak je razblažen etil acetatom, ispran zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli i dalje osušen upotrebom Na2SO4, profiltriran i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen silika gel hromatografijom, eluiranjem sa 0 do 30% EtOAc u heksanima (0,30 g; 90%).

Korak 3.3-Bromo-1-hloro-5-(1-hloroetil)-4-etoksi-2-metilbenzen

[0665] Smeša cijanurin-hlorida (1,7 g; 9,2 mmol) i N,N-dimetilformamida (710 µl; 9,2 mmol) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta, pa je dodat rastvor 1-(3-bromo-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etanola (1,72 g; 6,15 mmol) u metilen hlorid (34 ml) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je zatim razblažena metilen hloridom, isprana zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen silika gel hromatografijom, eluiranjem sa 0 do 10% EtOAc u heksanima (1,01 g; 60%).

Korak 4.1-(1-(3-Bromo-1-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etil)-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0666] Smeša 3-bromo-1-hloro-5-(1-hloroetil)-4-etoksi-2-metilbenzena (150 mg; 0,50 mmol), 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (110 mg; 0,76 mmol), kalijum-jodida (9 mg; 0,05 mmol) i cezijum karbonata (330 mg; 1,0 mmol) u N,N-dimetilformamidu (4 ml) je mešana na 140°C tokom 1 h. Smeša je zatim razblažena metilen hloridom, isprana zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen silika gel hromatografijom, eluiranjem sa 0 do 70% EtOAc u CH2Cl2(103 mg; 50%). LCMS analiza, izračunato za C17H20BrClN5O (M+H)<+>: m/z = 423,1; utvrđeno: 423,0. Racemski proizvodi su dalje naneti na Phenomenex Lux-Cellulose 1 kolonu (21,1 x 250 mm, veličina čestica 5 mikrona) i eluirani upotrebom 4% etanola u heksanima sa brzinom protoka od 18 ml/min i nanetom količinom od ~ 13 mg po injeciranju, a da bi se razvojila dva enantiomera. Pik 1, retenciono vreme: 8,64 min; Pik 2, retenciono vreme: 10,64 min.

Korak 5.5-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpikolinamid bis(2,2,2-trifluoroacetat)

[0667] Smeša 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (25 mg; 0,061 mmol) (prvi pik iz prethodnog koraka hiralnog razdvajanja), N,N-dimetil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-karboksamida (25 mg; 0,09 mmol), natrijum karbonata (13 mg; 0,12 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)-ferocen]dihloropaladijuma(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1), (9,9 mg; 0,012 mmol) u acetonitrilu (0,8 ml)/vodi (0,3 ml) je degasirana sa N2, a zatim mešana na 95°C tokom 2 časa. Nakon hlađenja do sobne temperature, smeša je profiltirana i filtrat je prečiščena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% trifluorosirćetne kiseline, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod u vidu bis-TFA soli (2,3 mg; 5%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C25H29ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 494,2; utvrđeno: 494,2.

Primer 200.4-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpikolinamid bis(2,2,2-trifluoroacetat)

[0668]

Korak 1.4-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-karbonitril

[0669] Smeša 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (pik 1 iz Primera 167, korak 4, 322 mg; 0,76 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-karbonitrila (210 mg; 0,91 mmol; firme Combi-Blocks, kataloški br. PN-0143), natrijum karbonata (130 mg; 1,2 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]-dihloropaladijuma(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1), (99 mg; 0,12 mmol) u acetonitrilu (5 ml)/vodi (2 ml) je degasirana sa N2, pa je reakciona smeša mešana na 95°C tokom 2 h. Smeša je zatim razblažena metilen hloridom, isprana zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana. Proizvod (0,28 g; 85%) je prečišćen hromatografski, eluiranjem sa CH2Cl2/MeOH (maks. MeOH 6%). LCMS analiza, izračunato za C22H21ClN7O (M+H)<+>: m/z = 434,1; utvrđeno: 434,1

Korak 2. Dihidrohlorid 4-(3-(1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)pikolinske kiseline

[0670] U smešu 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-karbonitrila (0,250 g; 0,576 mmol) u etanolu (4,0 ml) je dodat 1,0 M rastvor natrijum hidroksida (2,9 ml; 2,9 mmol), pa je dobijena smeša grejana na 95°C tokom 6 h. U isto vrijeme, dadavana je i konc. HCl da bi se pH smeše podesio na ~3. Zatim je uklonjen rastvarač, a ostatak je iskorišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS analiza, izračunato za C22H22ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 453,1; utvrđeno: 453,2.

Korak 3.4-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpikolinamid bis(2,2,2-trifluoroacetat)

[0671] U rastvor 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-karboksilne kiseline (250 mg; 0,552 mmol) i benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata (370 mg; 0,83 mmol) u N,N-dimetilformamidu (4 ml) na 0°C je dodat 2,0 M rastvor dimetilamina u THF (2,0 ml; 4,0 mmol), nakon čega je dodat i trietilamin (0,23 ml; 1,6 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana 1 h. Sirova smeša je dalje prečišćena upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% trifluorosirćetne kiseline, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod u vidu bis-TFA soli. Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C24H27ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 480,2; utvrđeno: 480,2.<1>H NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 8,67 (br s, 1H), 8,36 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,41 (m, 2 H), 6,32 (q, 2 H), 3,20 (s, 3 H), 3,00 (s, 3H), 2,94 (s, 3H), 2,62 (s, 3H), 2,03 (s, 3H), 1,80 (d, 3 H) ppm.

Primer 203.2-(4-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)-1H-pirazol-1-il)acetamid

[0672]

Korak 1. terc-Butil [4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il]acetat

[0673] U rastvor 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (0,39 g; 2,0 mmol) u N,N-dimetilformamidu (6,0 ml) na 0°C je dodat 1,0 M rastvor kalijum terc-butoksida u THF (2,4 ml; 2,4 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi 5 min. Nakon hlađenja do 0°C, u smešu je dodat t-butil bromoacetat (0,5 ml; 3 mmol), pa je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Smeša je dalje razblažena etil acetatom, isprana zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana. Proizvod (0,5 g; 81%) je prečišćen hromatografijom, eluiranjem sa smešom heksana i EtOAc (maks. EtOAc 30%). LCMS analiza, izračunato za C15H26BN2O4(M+H)<+>: m/z = 309,2; utvrđeno: 309,1

Korak 2. terc-Butil(4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-1H-pirazol-1-il)acetat

[0674] Smeša 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (70 mg; 0,16 mmol) (prvi pik iz Primera 195, korak 4), terc-butil [4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il] acetata (65 mg; 0,21 mmol), natrijum karbonata (30 mg; 0,28 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijuma(II), kompleks sa dihlorometanom (1 : 1), (23 mg; 0,028 mmol) u acetonitrilu (3 ml)/vodi (0,7 ml) je degasirana sa N2, pa mešana na 95°C tokom 2 h. Smeša je zatim razblažena metilen hloridom, isprana zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana. Proizvod (65 mg; 78%) je prečišćen eluiranjem sa CH2Cl2/MeOH (maks. MeOH 5%). LCMS analiza, izračunato za C26H33ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 526,2; utvrđeno: 526,3.

Korak 3. Bistrifluoroacetat (4-{3-[1-(4-amino-3-metil/-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-1H-pirazol-1-il)sirćetne kiseline

[0675] U rastvor terc-butil (4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-1H-pirazol-1-il)acetata (0,065 g; 0,12 mmol) u metilen hloridu (0,5 ml) je dodata trifluorosirćetna kiselina (0,5 ml). Reakciona smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi 4 sata, pa je uklonjen rastvarač,a da bi se dobio sirovi proizvod koji je iskorišćen u sledećem koraku. LCMS analiza, izračunato za C22H25ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 470,2; utvrđeno: 470,1

Korak 4.2-(4-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-1H-pirazol-1-il)acetamid

[0676] U rastvor bistrifluoroacetata (4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-1H-pirazol-1-il)sirćetne kiseline (10 mg; 0,021 mmol) i benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata (10 mg; 0,03 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,7 ml) na sobnoj temperaturi je dodat amonijum karbonat (20 mg; 0,21 mmol), a zatim je dodat i trietilamin (8,8 µL; 0,064 mmol). Reakciona smeša je potom mešana 1 h. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod (2,5 mg; 25%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C22H26ClN8O2(M+H)<+>: m/z = 469,2; utvrđeno: 469,2.

Primer 208.6-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilnikotinamid bis(trifluoroacetat)

[0677]

Korak 1.1-{1-[5-Hloro-2-etoksi-4-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0678] U posudi za mikrotalasni reaktor su na sobnoj temperaturi pomešani 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (0,050 g; 0,12 mmol; pik 1 iz Primera 195, korak 4) sa kalijum acetatom (0,035 g; 0,35 mmol) i 4,4,5,5,4’,4’,5',5'-oktametil-[2,2’]bi[[1,3,2]dioksaborolanilom] (0,060 g; 0,24 mmol) u dimetil sulfoksidu (0,44 ml). Smeša je zatim degasirana azotom, pa je dodat [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]-dihloropaladijum (II), kompleks sa dihlorometanom (1:1), (0,01 g; 0,01 mmol) i reakciona smeša je grejana u uljanom kupatilu na 105°C preko noći. Nakon što je smeša ostavljena da se ohladi, u njoj je razmućen etil acetat, pa je smeša dalje isprana vodom i koncentrovanim rastvorom soli, osušena upotrebom magnezijum sulfata i koncentrovana. Proizvod (15 mg; 20%) je prečišćen eluiranjem sa CH2Cl2/MeOH (maks. MeOH 10%). LCMS analiza, izračunato za C23H32BClN5O3(M+H)<+>: m/z = 472,2; utvrđeno: 472,3.

Korak 2.6-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilnikotinamid bis(trifluoroacetat)

[0679] Smeša 1-{1-[5-hloro-2-etoksi-4-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (15 mg; 0,032 mmol), 6-hloro-N,N-dimetilnikotinamida (12 mg; 0,064 mmol), natrijum karbonata (9,0 mg; 0,085 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]-dihloropaladijuma(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1), (6,9 mg; 0,0085 mmol) u acetonitrilu (0,9 ml)/vodi (0,2 ml) je degasirana sa N2, pa je mešana na 95°C preko noći. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,05% trifluorosirćetne kiseline, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod u vidu TFA soli (2 mg; 9%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C25H29ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 494,2; utvrđeno: 494,2.

Primer 209.5-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-4-metoksi-2-metil-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzonitril

[0680]

[0681] Prethodno pripremljen katalizator (0,05 ml; iz Primera 40) je dodat u smešu 1-{1-[5-hloro-2-metoksi-4-metil-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)fenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (7,7 mg; 0,019 mmol), cinka (0,54 mg; 0,0082 mmol) i cink cijanida (2,2 mg; 0,019 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (0,3 ml). Smeša je zatim degasirana tri puta sa azotom, pa je grejana na 120°C tokom 1,5 h. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod (2,1 mg; 27%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C21H23N8O (M+H)<+>: m/z = 403,2; utvrđeno: 403,2.

Primer 211.3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilbenzonitril

[0682]

[0683] U posudi za mikrotalasni reaktor, u rastvor 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (14 mg; 0,033 mmol; pik 1 iz Primera 195, korak 4) u N,N-dimetilformamidu (0,5 ml) su sukcesivno dodati N,N,N’,N'-tetrametiletilendiamin (10 µl; 0,07 mmol), cink cijanid (3 mg; 0,03 mmol), tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (0,9 mg; 0,001 mmol) i (9,9-dimetil-9H-ksanten-4,5-diil)bis(difenilfosfin) (2 mg; 0,003 mmol). Posuda je zatim zaptivena i tri puta degasirana i napunjena N2, pa grejana na 160°C 400 sekundi u mikrotalasnom reaktoru. Smeša je zatim ohlađena i profiltrirana, a sirovi filtrat je prečišćen primenom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio željeni proizvod (2,4 mg; 20%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C18H20ClN6O (M+H)<+>: m/z = 371,1; utvrđeno: 371,2.

[0684] Eksperimentalne procedure za jedinjenja iz Primera 69, 70, 75, 78, 97, 98, 100, 103, 106, 107, 109, 111, 112, 114, 116, 119, 120, 122-124, 132, 135, 142-148, 151, 153-155, 157, 160, 162, 168-173, 175-178, 180, 185-187, 193, 196-199, 201, 202, 204-207 i 210 su sumirane u Tabelama 1 i 2.

Tabela 1

Tabela 2

Analitički podaci

[0685]<1>H NMR podaci (spektrometri tipa Varian Inova 500, Mercury 400 ili Varian (ili Mercury) 300), kao i podaci LCMS masenog spektra (MS) za jedinjenja iz Primera 69, 70, 75, 78, 97, 98, 100, 102-138, 142-148, 151, 153-155, 157, 160, 162, 168-173, 175-178, 180, 185-187, 193, 196-199, 201, 202, 204-207 i 210 navedeni su Tabeli 3 koja sledi.

Tabela 3

Primer 212.4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-etoksibenzonitril

[0686]

Korak 1.1-(5-Hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-jodofenil)etanon

[0687] Traženo jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure koja je opisana u Primeru 13, korak 3, a da bi se dobio racemski intermedijer, i to upotrebom jodoetana umesto jodometana kao polaznog materijala, pri čemu je prinos iznosio 90%.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7,68 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 3,94 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 2,61 (s, 3H), 1,48 (t, J = 7,0 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C10H10ClFIO2(M+H)<+>: m/z = 342,9, 344,9; utvrđeno: 342,9, 344,8.

Korak 2.4-Acetil-6-hloro-3-etoksi-2-jodobenzonitril

[0688] Rastvor 1-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-jodofenil)etanona (7,3 g; 21 mmol) u N,N-dimetilformamidu (80 ml) je tretiran kalijum cijanidom (2,1 g; 32 mmol), pa je mešan na 40°C tokom 5 h. Reakciona smeša je zatim razblažena etil acetatom i presuta u smešu zasićenog rastvora natrijum bikarbonata i vode (1:1). Organski sloj je izdvojen, ispran zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, osušen upotrebom magnezijum sulfata, profiltriran i koncentrovan, a da bi se dobilo neprečišćeno ulje braon boje. Sirov materijal je dalje prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom etil acetata u heksanima (0% - 30%) i tako je dobijen željeni proizvod (6,1 g; 81%) u vidu žute čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,57 (s, 1H), 3,93 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 2,61 (s, 3H), 1,47 (t, J = 7,0 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C11H10ClINO2(M+H)<+>: m/z = 349,9; utvrđeno: 349,9.

Korak 3. terc-Butil 3-(3-acetil-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil)azetidin-1-karboksilat

[0689] Cink (4,60 g; 70,3 mmol) i celit, osušen u pećnici, (870 mg) su odmereni u laboratorijski sud, pa je sud grejan pod visokim vakuumom plamenikom tokom 5 min. Sud je zatim ispunjen azotom, dodat je N,N-dimetilacetamid (57 ml), a dalje i 1,2-dibromoetan (430 µl; 5,0 mmol), nakon čega je smeša grejana na 70°C tokom 10 min i potom ohlađena do sobne temperature. Reakciona smeša je zatim tretirana hlorotrimetilsilanom (630 µl; 5,0 mmol) u kapima, pa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. U kapima je dalje dodat i rastvor terc-butil 3-jodoazetidin-1-karboksilata (18 g; 62 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (28 ml) (temperatura rastvora je održavana ispod 40°C u vodenom kupatilu), nakon čega je smeša grejana na 40°C tokom 2 h. U čist, osušen flask napunjen azotom je potom direkto dodat cink-jodni reagens (prebačen kanilom) koji je prethodno bio profiltrian kroz plastični filter (da bi se izbeglo izlaganje vazduhu, filter je odgovarajuće zaptiven). Reakciona smeša je zatim tretirana tris(dibenzilidenaceton)dipaladijumom(0) (720 mg; 0,79 mmol) i tri-(2-furil)fosfinom (370 mg; 1,6 mmol), pa je degarisana azotom nekoliko minuta. Reakciona smeša je dalje brzo tretirana rastvorom 4-acetil-6-hloro-3-etoksi-2-jodobenzonitrila (14 g; 41 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (130 ml) (degarisanom azotom) i grejana na 70°C tokom 2 h, pa je presuta u zasićen rastvor amonijum hlorida i ekstrahovana etil acetatom (3 x 300 ml). Organski ekstrakti su spojeni, isprani vodom (4 x 500 ml) i koncentrovanim rastvorom soli (1 x 500 ml), pa osušeni upotrebom magnezijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani do sirovog tamnog ulja. Sirov materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom etil acetata u heksanima (5% - 45%), a da bi se dobio željeni proizvod (14 g; 88%).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7,46 (s, 1H), 4,42- 4,20 (m, 5H), 3,80 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 2,59 (s, 3H), 1,44 (s, 9H), 1,37 (t, J = 7,0 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C15H16ClN2O4([M-(t-Bu)+H] H)<+>: m/z = 323,1; utvrđeno: 323,0.

Korak 4. terc-Butil 3-[3-hloro-2-cijano-6-etoksi-5-(1-hidroksietil)fenil]azetidin-1-karboksilat

[0690] Rastvor (3aS)-1-metil-3,3-difeniltetrahidro-3H-pirolo[1,2-c][1,3,2]oksazaborola (9,7 g; 35 mmol) u tetrahidrofuranu (100 ml) je tretiran kompleksom 1,0 M borana i THF u tetrahidrofuranu (42 ml; 42 mmol), pa je rastvor mešan na 20°C tokom 15 min. Reakciona smeša je zatim ohlađena do -30°C i polako je tretirana rastvorom terc-butil 3-(3-acetil-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil)azetidin-1-karboksilata (13 g; 35 mmol) u tetrahidrofuranu (110 ml). Posuda koja je sadržavala ketone kao početni materijal je isprana dodatnim tetrahidrofuranom (20 ml) koji je dalje dodat u reakcionu smešu. Reakciona smeša je zagrejana do 0°C tokom perioda od 30 min, pa je mešana na 0°C tokom 15 min. Reakcija je zatim zaustavljena dodavanjem vode na 0°C, nakon čega je rastvor presut u zasićeni rastvor natrijum bikarbonata i dalje ekstrahovan etil acetatom. Vodeni sloj je izdvojen i ekstrahovan etil acetatom, dok su organski slojevi spojeni, isprani vodom i koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom magnezijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani do neprečišćenog tamnog ulja. Sirov materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom etil acetata u heksanima (0% - 70%), a da bi se dobio željeni proizvod (10,4 g; 78%) u vidu žute penaste supstance koja je predstavljala smešu enantiomera u odnosu 98:2 (retenciona vremena = 7,73 min i 9,41 min; kolona ChiralPak AD-H, 4,6 x 150 mm, veličina čestica 5 mikrona, eluiranje 5% etanolom u heksanima, brzina protoka 1 ml/min).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7,56 (s, 1H), 5,15 - 5,07 (m, 1H), 4,41 - 4,17 (m, 5H), 3,74 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 2,12 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 1,49 - 1,37 (m, 15H). LCMS analiza, izračunato za C15H18ClN2O4([M-(t-Bu)+H] H)<+>: m/z = 325,1; utvrđeno: 325,1.

Korak 5. terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil}azetidin-1-karboksilat

[0691] Rastvor terc-butil 3-[3-hloro-2-cijano-6-etoksi-5-(1-hidroksietil)fenil]azetidin-1-karboksilata (98:2 smeša enantiomera iz koraka 4) (10 g; 27 mmol) u metilen hloridu (260 ml) na 0°C je tretiran trietilaminom (11 ml; 82 mmol), pa je dodat anhidrid metansulfonske kiseline (7,1 g; 41 mmol) i rastovor je mešan na 0°C tokom 15 min. Reakciona smeša je zatim razblažena dihlorometanom, isprana vodom i koncentrovanim rastvorom soli, osušena upotrebom magnezijum sulfata, profiltrirana i koncentrovana, a da bi se dobio sirov mezilat koji je potom iskorišćen bez daljeg prečišćavanja. Rastvor neprečišćenog mezilatnog intermedijera u N,N-dimetilformamidu (140 ml) je tretiran cezijum karbonatom (13 g; 41 mmol) i 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-aminom (4,7 g; 31 mmol), pa je grejan na 60°C tokom 1 h. Reakciona smeša je potom razblažena vodom i ekstrahovana etil acetatom (3 x 250 ml). Organski slojevi su spojeni, isprani vodom i koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom magnezijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani do sirovog ulja. Sirov materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (od 100% dihlorometana do 70% acetonitrila koji je sadržavao 3% metanola/30% dihlorometana), a da bi se dobio željeni proizvod (8,7 g; 62% za 2 koraka) u vidu žute penaste supstance koja je predstavljala smešu enantiomera u odnosu 95:5 (retenciono vreme = 4,29 min i 6,00 min; Phenomenex Lux Cellulose C-1 kolona, 4,6 x 150 mm, veličina čestica 5 mikrona, eluiranje 15% etanolom u heksanima, brzina protoka 1 ml/min). Navedeni materijal je dalje razdvojen hiralnim HPLC postupkom (Phenomenex Lux Cellulose C-1 kolona, 21,2 x 250 mm, veličina čestica 5 mikrona, eluiranje 15% etanolom u heksanima, brzina protoka 10 ml/min), a da bi se dobilo 7,0 g traženog materijala pika 1 (retenciono vreme 8,20 min).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,24 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 6,32 (q, J = 7,1 Hz, 1H), 5,48 (br s, 2H), 4,40-4,18 (m, 5H), 4,05 - 3,93 (m, 1H), 3,81 - 3,65 (m, 1H), 2,64 (s, 3H), 1,81 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,48 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 1,43 (s, 9H). LCMS analiza, izračunato za C25H31ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 512,2; utvrđeno: 512,3.

Korak 6.4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-etoksibenzonitril

[0692] Rastvor terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil}azetidin-1-karboksilata (enantiomer pika 1 iz koraka 5) (2,2 g; 4,2 mmol) u metilen hloridu (11 ml) je tretiran trifluorosirćetnom kiselinom (11 ml) u kapima, pa je mešan na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Reakciona smeša je zatim koncentrovana do ulja, pa je ulje dalje rekoncentrovano iz etanola (2x) i tako je dobijen ostatak. Navedeni materijal je zatim rastvoren u minimalnoj količini metanola i u kapima dodat u zasićen rastvor natrijum bikarbonata (100 ml) ohlađen na ledu, nakon čega je rastvor nekoliko puta ekstrahovan smešom dihlorometana i izopropanola u odnosu 2:1, a da bi se dobio željeni proizvod (1,8 g; kvantitativno) koji je potom iskorišćen bez daljeg prečišćavanja. Mala količina proizvoda je prečišćena preparativnim LCMS postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 60 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod. Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,11 (s, 1H), 7,47 (s, 1H), 6,23 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 4,37 - 4,26 (m, 1H), 3,91 - 3,61 (m, 6H), 2,54 (s, 3H), 1,71 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,32 (t, J = 7,0 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C20H23ClN7O (M+H)<+>: m/z = 412,2; utvrđeno: 412,1.

Primer 213.4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-(1-metilazetidin-3-il)benzonitril

[0693]

[0694] Rastvor 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-etoksibenzonitrila (hiralni intermedijer iz Primera 212, korak 6) (0,30 g; 0,73 mmol) u metanolu (7,3 ml) je tretiran formaldehidom (37%, u vodi) (0,54 ml; 7,3 mmol), pa je mešan na sobnoj temperaturi tokom 5 min. Reakciona smeša je zatim tretirana natrijum cijanoborohidridom (0,092 g; 1,5 mmol) i mešanje smeše je nastavljeno na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Smeša je dalje razblažena metanolom i prečišćena preparativnim LCMS postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 60 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod (0,16 g; 50%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,11 (s, 1H), 7,48 (s, 1H), 6,27 - 6,18 (m, 1H), 4,10 - 3,98 (m, 1H), 3,96- 3,86 (m, 2H), 3,83 - 3,74 (m, 1H), 3,72- 3,64 (m, 1H), 3,10 - 2,98 (m, 2H), 2,54 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 1,71 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,32 (t, J = 6,7 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C21H25ClN7O (M+H)<+>: m/z = 426,2; utvrđeno: 426,2.

Primer 219.4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-[1-(2-hidroksietil)azetidin-3-il]benzonitril

[0695]

[0696] Rastvor 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-etoksibenzonitrila (300 mg; 0,74 mmol; hiralni intermedijer iz Primera 212) u tetrahidrofuranu (14 ml) je tretiran trietilaminom (260 µl; 1,8 mmol), pa je u kapima dodat 2-bromoetanol (63 µl; 0,89 mmol) i rastvor je mešan na 60°C tokom 6 h. Reakciona smeša je zatim tretirana dodatnim 2-bromoetanolom (26 µl; 0,37 mmol) i mešana na 60°C dodatnih 6 h. Nakon mešanja, smeša je presuta u zasićen rastvor natrijum bikarbonata, pa je ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je koncentrovan i prečišćen preparativnim LCMS postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 60 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod (0,15 g; 44%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,19 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 6,36- 6,25 (m, 1H), 4,48 (br s, 1H), 4,19 - 4,07 (m, 1H), 4,04- 3,94 (m, 2H), 3,91 - 3,82 (m, 1H), 3,81 - 3,72 (m, 1H), 3,20 - 3,08 (m, 2H), 2,62 (s, 2H), 2,57 (s, 3H), 1,79 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,40 (t, J = 6,6 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C22H27ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 456,2; utvrđeno: 456,1.

Primer 220.4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-{1-[(2S)-2-hidroksipropil]azetidin-3-il}benzonitril

[0697]

[0698] Rastvor 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-etoksibenzonitrila (50 mg; 0,12 mmol; hiralni intermedijer iz Primera 212) u etanolu (1,7 ml) je tretiran (S)-(-)-metiloksiranom (21 µl; 0,30 mmol), pa je grejan u mikrotalasnom reaktoru na 125°C tokom 15 min. Reakciona smeša je zatim razblažena metanolom i prečišćena preparativnim LCMS postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 60 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod (27 mg; 47%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni dijastereomer.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,11 (s, 1H), 7,48 (s, 1H), 6,23 (q, J = 6,9 Hz, 1H), 4,35 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 4,13 - 3,99 (m, 1H), 3,97 - 3,88 (m, 2H), 3,85 - 3,63 (m, 2H), 3,61 - 3,51 (m, 1H), 3,15 - 2,99 (m, 2H), 2,55 (s, 3H), 2,28 (d, J = 5,9 Hz, 2H), 1,71 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 1,32 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,00 (d, J = 6,2 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C23H29ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 470,2; utvrđeno: 470,2.

Primer 236. terc-Butil 2-(3-{3-[1-(4-amino-3-meti-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil}azetidin-1-il)-2-metilpropanoat

[0699]

[0700] Rastvor 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-etoksibenzonitrila (0,38 g; 0,92 mmol; hiralni intermedijer iz Primera 212) u N,N-dimetilformamidu (4.6 ml) je tretiran kalijum karbonatom (0,51 g; 3,7 mmol), pa je dodat i terc-butil 2-bromo-2-metilpropanoat (0,86 ml; 4,6 mmol) i rastvor je grejan na 60°C tokom 3 h. Reakciona smeša je zatim presuta u vodu i ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je izdvojen, osušen upotrebom magnezijum sulfata, profiltriran i koncentrovan do sirovog ulja. Sirov materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom metanola u dihlorometanu (0% - 10%), a da bi se dobio traženi proizvod (0,43 g; 83%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,10 (s, 1H), 7,44 (s, 1H), 6,22 (q, J = 6,8 Hz, 1H), 4,12- 3,97 (m, 1H), 3,88 - 3,70 (m, 4H), 3,62- 3,48 (m, 2H), 2,54 (s, 3H), 1,70 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 1,33 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,17 (s, 9H), 1,05 (s, 6H). LCMS analiza, izračunato za C28H37ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 554,3; utvrđeno: 554,3.

Primer 237.4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil[-6-hloro-3-etoksi-2-[1-(2-hidroksi-1,1’-dimetiletil)azetidin-3-il]benzonitril

[0701]

Korak 1. bis(Trifluoroacetat) 2-(3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)eti/]-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil}azetidin-1-il)-2-metilpropanske kiseline

[0702] terc-Butil 2-(3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil}azetidin-1-il)-2-metilpropanoat (0,36 g; 0,65 mmol; hiralni intermedijer iz Primera 236) je rastvoren u prethodno napravljenoj smeši trifluorosirćetne kiseline (3,2 ml) i vode (0,065 ml), pa je smeša mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h i dalje na 50°C tokom 30 min. Reakciona smeša je zatim koncentrovana, pa rekoncentrovana iz acetonitrila (2x), a da bi se dobio traženi proizvod u vidu gumastog materijala. Ovakav gumasti materijal je zatim tretiran malom količinom metil-terc-butiletra uz mešanje sve dok se nije obrazovala čvrsta supstanca. Potom je metil-terc-butiletar dekantovan, a ostatak je koncentrovan da bi se dobio traženi proizvod (0,51 g; 109%) koji je potom iskorišćen bez daljeg prečišćavanja. LCMS analiza, izračunato za C24H29ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 498,2; utvrđeno: 498,3.

Korak 2.4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-[1-(2-hidroksi-1,1’-dimetiletil)azetidin-3-il]benzonitril

[0703] Rastvor bis(trifluoroacetata) 2-(3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil}azetidin-1-il)-2-metilpropanske kiseline (0,10 g; 0,16 mmol) u tetrahidrofuranu (0,9 ml) ohlađenom do -25°C, je tretiran 4-metilmorfolinom (0,072 ml; 0,65 mmol) i izobutil hloroformatom (0,085 ml; 0,65 mmol), pa mešan na -15°C tokom 15 min. Reakciona smeša je zatim profiltrirana kroz jednokratni filter u nov balon sa okruglim dnom. Ovakav rastvor je olađen do -20°C i u kapima je dodat rastvor natrijum tetrahidroborata (0,031 g; 0,82 mmol) u minimalnoj količini vode. Reakciona smeša je zatim mešana na -15°C tokom 30 min, pa je presuta u vodu i ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je izdvojen, koncentrovan, razblažen metanolom i prečišćen preparativnim LCMS postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod (3,5 mg; 4%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,11 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 7,35 (br s, 2H), 6,23 (q, J = 6,7 Hz, 1H), 4,44- 4,35 (m, 1H), 4,04- 3,88 (m, 1H), 3,86- 3,73 (m, 1H), 3,72- 3,57 (m, 3H), 3,12 (d, J = 4,7 Hz, 2H), 2,54 (s, 3H), 1,71 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,31 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 0,80 (s, 6H). LCMS analiza, izračunato za C24H31ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 484,2; utvrđeno: 484,2.

Primer 239.2-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil}azetidin-1-il)-2-metilpropanamid

[0704]

[0705] Rastvor bis(trifluoroacetata) 2-(3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil}azetidin-1-il)-2-metilpropanske kiseline (0,05 g; 0,069 mmol; hiralni intermedijer iz Primera 237, korak 1) i 2,0 M amonijaka u etanolu (0,17 ml; 0,34 mmol) u N,N-dimetilformamidu (1 ml) je tretiran trietilaminom (0,048 ml; 0,35 mmol) i benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonium heksafluorofosfatom (0,046 g; 0,10 mmol), pa je smeša mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakcija je zatim zaustavljena dodavanjem nekoliko kapi vode. Smeša je dalje razblažena metanolom i prečišćena preparativnim LCMS postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 60 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod (25 mg; 73%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,11 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 7,23 (s, 1H), 6,98 (s, 1H), 6,23 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 4,09 - 3,96 (m, 1H), 3,84- 3,61 (m, 4H), 3,39 - 3,34 (m, 1H), 3,32- 3,28 (m, 1H), 2,54 (s, 3H), 1,71 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 1,31 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,02 (s, 6H). LCMS analiza, izračunato za C24H30ClN8O2(M+H)<+>: m/z = 497,2; utvrđeno: 497,3.

Primer 247.4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-[1-(2-hidroksi-2-metilpropanoil)azetidin-3-il]benzonitril

[0706]

[0707] Rastvor 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-etoksibenzonitrila (0,04 g; 0,097 mmol; hiralni intermedijer iz Primera 212) i 2-hidroksi-2-metilpropanske kiseline (0,012 g; 0,12 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,54 ml) je tretiran trietilaminom (0,034 ml; 0,24 mmol), pa je dodat O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (0,048 g; 0,13 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Reakciona smeša je zatim razblažena metanolom i acetonitrilom, pa je prečišćena preparativnim LCMS postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom metanola i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksid, brzina protoka 60 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod (7 mg; 14%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,11 (s, 1H), 7,54 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,25 (q, J = 7,2 Hz, 1H), 5,08 (s, 1H), 4,88 - 4,77 (m, 1H), 4,73 - 4,60 (m, 1H), 4,50 - 4,35 (m, 1H), 4,29 - 4,09 (m, 2H), 3,85 - 3,73 (m, 2H), 2,55 (s, 3H), 1,73 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 1,37 (t, J = 6,3 Hz, 3H), 1,26 (s, 3H), 1,22 (s, 3H). LCMS analiza, izračunato za C24H29ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 498,2; utvrđeno: 498,2.

Primer 261.4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-metoksibenzonitril

Korak 1.4-Acetil-6-hloro-2-jodo-3-metoksibenzonitril

[0709] Rastvor 1-(5-hloro-4-fluoro-3-jodo-2-metoksifenil)etanona (intermedijer iz Primera 13, korak 3) (18 g; 54 mmol) u N,N-dimetilformamidu (200 ml) je tretiran kalijum cijanidom (5,2 g; 81 mmol), pa je mešan na 40°C tokom 6 h. Reakciona smeša je zatim razblažena etil acetatom i presuta u smešu zasićenog rastvora natrijum bikarbonata i vode (1:1). Organski sloj je izdvojen, ispran zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, osušen upotrebom magnezijum sulfata, profiltriran i koncentrovan, a da bi se dobilo sirovo ulje braon boje. Sirov materijal je zatim prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom etil acetata u heksanima (0% - 30%). Tako je dobijen traženi proizvod (11 g; 61%) u vidu žute čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7,60 (s, 1H), 3,81 (s, 3H), 2,62 (s, 3H). LCMS analiza, izračunato za C10H8ClINO2(M+H)<+>: m/z = 335,9; utvrđeno: 335,9.

Korak 2. terc-Butil 3-(3-acetil-5-hloro-6-cijano-2-metoksifenil)azetidin-1-karboksilat

[0710] Cink (5,0 g; 77 mmol) i celit, osušen u sušnici, (520 mg) su odmereni u laboratorijski balon, pa e balon grejan pod visokim vakuumom plamenikom tokom 5 min. Balon je zatim napunjen azotom, pa je dodat N,N-dimetilacetamid (53 ml), a dalje i 1,2-dibromoetan (400 µl; 4,6 mmol). Smeša je potom grejana na 70°C tokom 15 min i potom je ohlađena do sobne temperature. Reakciona smeša je zatim u kapima tretirana hlorotrimetilsilanom (580 µl; 4,6 mmol), pa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Nakon mešanja, reakciona smeša je u kapima tretirana rastvorom terc-butil 3-jodoazetidin-1-karboksilata (16 g; 58 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (26 ml) (temperatura smeše je održavana na ispod 40°C u vodenom kupatilu) i grejana na 40°C tokom 2 h. Dalje je dodat cink-jodni reagens (kanilom) i smeša je direkno profiltrirana kroz plasični filter (filter je odgovarajuće zaptiven da bi se izbeglo izlaganje atmosferi) novi, suvi balon koji je zatim napunjen azotom. Smeša je potom tretirana tris(dibenzilidenaceton)dipaladijumom(0) (670 mg; 0,73 mmol) i tri-(2-furil)fosfinom (340 mg; 1,5 mmol) i degarisana azotom nekoliko minuta. Nakon toga, reakciona smeša je brzo tretirana rastvorom 4-acetil-6-hloro-2-jodo-3-metoksibenzonitrila (13 g; 39 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (120 ml) (degasiranom azotom) i grejana na 70°C tokom 2 h. Reakciona smeša je potom presuta u zasićen rastvor amonijum hlorida, pa je ekstrahovana etil acetatom (3 x 300 ml). Organski ekstrakti su spojeni, isprani vodom (4 x 500 ml) i koncentrovanim rastvorom soli (1 x 500 ml), osušeni upotrebom magnezijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani do sirovog tamnog ulja. Sirov materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom etil acetata u heksanima (5% - 40%) da bi se dobio traženi proizvod (12 g; 85%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,79 (s, 1H), 4,39 - 4,29 (m, 1H), 4,28 - 4,11 (m, 4H), 3,68 (s, 3H), 2,58 (s, 3H), 1,38 (s, 9H).

Korak 3. terc-Butil 3-[3-hloro-2-cijano-5-(1-hidroksieti/)-6-metoksifenil]azetidin-1-karboksilat

[0711] Rastvor (3aS)-1-metil-3,3-difeniltetrahidro-3H-pirolo[1,2-c][1,3,2]oksazaborola (4,3 g; 16 mmol) u tetrahidrofuranu (46 ml) je tretiran 1,0 M rastvorom kompleksa borana i THF u tetrahidrofuranu (19 ml; 19 mmol), pa je mešan na 20°C tokom 15 min. Reakciona smeša je zatim ohlađena do -30°C i polako istretirana rastvorom terc-butil 3-(3-acetil-5-hloro-6-cijano-2-metoksifenil)azetidin-1-karboksilata (5,7 g; 16 mmol) u tetrahidrofuranu (49 ml). Laboratorijski balon koji je sadržavao ketone je ispran dodatnom količinom tetrahidrofurana (9 ml) koja je po ispiranju dodata u reakcionu smešu. Temperatura rekacione smeše je po završetku dodavanja iznosila -20°C. Reakciona smeša je stoga zagrejana do -5°C tokom perioda od 30 min. Reakcija je zatim zaustavljena dodavanjem vode na 0°C, pa je smeša presuta u zasićen rastvor natrijum bikarbonata i dalje ekstrahovana etil acetatom. Vodeni sloj je izdvojen i ekstrahovan etil acetatom. Organski slojevi su spojeni, isprani vodom i koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom magnezijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani do sirovog tamnog ulja. Sirov materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom etil acetata u heksanima (0% - 100%), a da bi se dobio traženi proizvod (5,5 g; 97%) u vidu bež penaste supstance koja je predstavljala smešu enantiomera u odnosu 97:3 (retenciona vremena = 12,19 min i 13,18 min; Phenomenex Lux Cellulose C-2 kolona, 4,6 x 150 mm, veličina čestica 5 mikrona, eluiranje 8% etanolom u heksanima, brzina protoka 1 ml/min).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,62 (s, 1H), 5,48 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 5,00-4,90 (m, 1H), 4,43 -4,31 (m, 1H), 4,30 - 4,10 (m, 4H), 3,66 (s, 3H), 1,38 (s, 9H), 1,29 (d, J = 6,4 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C14H16ClN2O4([M-(t-Bu)+H] H)<+>: m/z = 311,1; utvrđeno: 311,1.

Korak 4. terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-metoksifenil}azetidin-1-karboksilat

[0712] Rastvor terc-butil 3-[3-hloro-2-cijano-5-(1-hidroksietil)-6-metoksifenil]azetidin-1-karboksilata (8,6 g; 23 mmol) (smeša enantiomera iz koraka 3 sa odnosom 97:3) u metilen hloridu (220 ml), na 0°C je tretiran trietilaminom (8,2 ml; 59 mmol), pa je dodat anhidrid metansulfonske kiseline (6,1 g; 35 mmol) i smeša je mešana na 0°C tokom 15 min. Reakciona smeša je zatim razblažena dihlorometanom, isprana vodom i koncentrovanim rastvorom soli, osušena upotrebom magnezijum sulfata, profiltrirana i koncentrovana, a da bi se obezbedio sirovi mezilat koji je potom iskorišćen bez daljeg prečišćavanja. Rastvor sirovog mezilatnog intermedijera u N,N-dimetilformamidu (82 ml) je ohlađen do 0°C, tretiran natrijum hidridom (1,2 g; 30 mmol) (60%, u mineralnom ulju), pa mešan na 0°C tokom 30 min. Reakciona smeša je dalje u kapima tretirana rastvorom terc-butil 3-(3-hloro-2-cijano-6-metoksi-5-{1-[(metilsulfonil)oksi]etil}fenil)azetidin-1-karboksilata (11 g; 24 mmol) u N,N-dimetilformamidu (170 ml) tokom perioda od 10 min, pa je mešan na 0°C tokom 30 min i potom grejana na 50°C tokom 1 h. Nakon toga, reakciona smeša je razblažena vodom i zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, pa je ekstrahovana etil acetatom (3 x 200mL). Organski ekstrakti su spojeni, isprani vodom (4 x 150 ml) i koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom magnezijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani do sirovog ulja. Sirov materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (od 2% metanol/98% dihlorometan do 7% metanol/93% dihlorometan [dihlorometan je sadržavao 0,5% trietilamina]) da bi se dobio traženi proizvod (9,1 g; 77% za 2 koraka) u vidu smeše enantiomera sa odnosom 9:1. Navedeni materijal je dalje razdvojen upotrebom hiralnog HPLC postupka (retenciona vremena = 5,81 min i 8,94 min; Chiracel AD-H kolona, 20 x 250 mm, veličina čestica 5 mikrona, eluiranje 10% etanolom u heksanima, brzina protoka 18 ml/min, količina nanetog materija 10 mg po injeciranju) da bi se dobilo 6,9 g željenog materijala pika 1.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,11 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 6,25 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 4,45 - 4,33 (m, 1H), 4,27 - 4,13 (m, 4H), 3,70 (s, 3H), 2,55 (s, 3H), 1,73 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,37 (s, 9H). LCMS analiza, izračunato za C20H21ClN7O3([M-(t-Bu)+H] H)<+>: m/z = 442,1; utvrđeno: 442,1.

Korak 5.4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)eti/]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-metoksibenzonitril

[0713] Rastvor terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-metoksifenil}azetidin-1-karboksilata (1,7 g; 3,3 mmol) u metilen hloridu (30 ml) je tretiran trifluorosirćetnom kiselinom (20 ml), pa je smeša mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Reakciona smeša je zatim koncentrovana da bi se dobio ostatak koji je dalje razblažen metanolom (50 ml) i zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (50 ml). Navedeni vodeni rastvor je dalje razblažen koncentrovanim rastvorom soli (50mL) i ekstrahovan smešom dihlorometana i izopropanola u odnosu 5:1 (5 x 100 ml). Organski ekstrakti su spojeni, osušeni upotrebom natrijum sulfata i koncentrovani da bi se dobio traženi proizvod (1,4 g; 97%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,11 (s, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,34 (br s, 2H), 6,24 (q, J = 6,9 Hz, 1H), 4,40 - 4,26 (m, 1H), 3,90 - 3,68 (m, 4H), 3,63 (s, 3H), 2,55 (s, 3H), 1,72 (d, J = 7,1 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C19H21ClN7O (M<+>H)<+>: m/z = 398,1; utvrđeno: 398,1.

Primer 262.4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-metoksi-2-(1-metilazetidin-3-il)benzonitril

[0714]

[0715] Rastvor 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-metoksibenzonitrila (hiralni intermedijer iz Primera 261) (50 mg; 0,13 mmol) u metanolu (3 ml) je tretiran natrijum cijanoborohidridom (20 mg; 0,31 mmol), pa je dodat formaldehid (37% u vodi)(37 µl; 0,50 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Reakcija je zatim zaustavljena dodavanjem sirćetne kiseline (170 µl; 2,9 mmol), pa je smeša razblažena metanolom i prečišćena preparativnim LCMS postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 60 ml/min), a da bi se dobio traženi proizvod (30 mg; 58%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,11 (s, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,37 (br s, 2H), 6,23 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 4,10 - 3,96 (m, 1H), 3,95 - 3,85 (m, 2H), 3,63 (s, 3H), 3,05 - 2,94 (m, 2H), 2,55 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), 1,72 (d, J = 7,1 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C20H23ClN7O (M+H)<+>: m/z = 412,2; utvrđeno: 412,1.

Primer 268.4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-2-[1-(2-hidroksietil)azetidin-3-il]-3-metoksibenzonitril

[0716]

[0717] Rastvor 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-metoksibenzonitrila (hiralni intermedijer iz Primera 261) (400 mg; 1,0 mmol) u tetrahidrofuranu (14 ml) je tretiran trietilaminom (350 µl; 2,5 mmol) i 2-bromoetanolom (85 µl; 1,2 mmol), pa je mešan na 60°C preko noći. Reakciona smeša je zatim koncentrovana, razblažena metanolom i prečišćena preparativnim LCMS postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 60 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod (0,14 g; 31%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,11 (s, 1H), 7,46 (s, 1H), 6,24 (q, J = 6,9 Hz, 1H), 4,41 (t, J = 5,4 Hz, 1H), 4,12- 4,03 (m, 1H), 3,97 - 3,88 (m, 2H), 3,64 (s, 3H), 3,38 - 3,34 (m, 2H), 3,09 - 3,01 (m, 2H), 2,55 (s, 3H), 2,41 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 1,72 (d, J = 7,0 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C21H25ClN7O2(M<+>H)<+>: m/z = 442,2; utvrđeno: 442,2.

[0718] Jedinjenja iz Primera 268 i 269 su sintetisana polažeći od istog hiralnog intermedijera koji je naveden u Primeru 261. Shodno kristalnoj strukturi jedinjenja iz Primera 269, utvrđeno je da je stereohemija atoma ugljenika na poziciji 1 u etan-1,1’-diil grupi u S obliku. Obzirom da je jedinjenja iz Primera 268 sintetisano polazeći od isto intermedijera koji je opisan u Primeru 269, prosečno iskusan stručnjak može očekivati da atom ugljenika poziciji 1 u etan-1,1’-diil grupi jedinjenja iz Primera 268 takođe bude u S obliku. Prema tome, prepostavlja se da jedinjenje iz Primera 268 označava (S)-4-(1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-6-hloro-2-(1-(2-hidroksietil)azetidin-3-il)-3-metoksibenzonitril.

Primer 269.4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-2-{1-[(2S)-2-hidroksipropil]azetidin-3-il}-3-metoksibenzonitril

[0719]

[0720] Rastvor 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-metoksibenzonitrila (hiralni intermedijer iz Primera 261) (2,5 g; 6,3 mmol) u etanolu (130 ml) je tretiran (S)-(-)-metiloksiranom (1,1 ml; 16 mmol) i grejan u mikrotalasnom reaktoru na 120°C tokom 25 min. Reakciona smeša je zatim koncentrovana i tako je dobijen ostatak koji je dalje prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom metanola u dihlorometanu (0% - 10%; metanol koji je sadržavao 0,5% trietilamin), kao i preparativnim LCMS postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 60 ml/min). Tako je dobijen traženi proizvod (0,76 g; 26%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni dijastereomer.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,11 (s, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,34 (br s, 2H), 6,23 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 4,35 (br s, 1H), 4,14-3,99 (m, 1H), 3,98 - 3,87 (m, 2H), 3,64 (s, 3H), 3,60 - 3,52 (m, 1H), 3,13 - 2,99 (m, 2H), 2,55 (s, 3H), 2,28 (d, J = 5,9 Hz, 2H), 1,75 - 1,69 (m, 3H), 1,00 (d, J = 6,2 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C22H27ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 456,2; utvrđeno: 456,2.

Određivanje kristalne strukure jedinjenja iz Primera 269

[0721] C22,H26,N7,O2,CL1 H2O

[0722] PODACI KRISTALNE ANALIZE: C22 H28 Cl F0 N703, u ACN/vodi, bez boje, upotreba igle, ∼0,500 x 0,070 x 0,050 mm, monoklino, C2, a = 25,941(7) Å, b = 4,9767(13) Å, c = 17,787(5) Å, beta = 101,967(4)°, Vol = 2246,3(10) Å<3>, Z = 4, T = -100.°C, molekulska težina = 473,96, gustina = 1,401g/cm<3>, µ(Mo) = 0,21 mm<-1>

[0723] PRIKUPLJANJE PODATAKA: Bruker SMART APEX-II CCD sistem, MoK-alfa zračenje, standardan fokus tube, anodni prah = 50 kV x 42 mA, rastojanje kristala od ploče = 5,0 cm, 512 x 512 piksela po okviru čitanja, centar otkucaja = (256,13, 253,14), ukupan broj okvira čitanja = 704, oscilacije = 0,50°, ekspozicija po okviru čitanja = 120,1 sek okvira čitanja, SAINT integracija, hkl min/max = (-27, 34, -6, 6, -23, 11), unošenje podataka u shelx = 7578, unikatni podaci = 5186, dva-teta opseg = 3,20 do 56,74°, završenost do dva-teta 56,74 = 99,70%, R(int-xl) = 0,0331, primenjena SADABS korekcija.

[0724] REZULTATI ANALIZE I PODEŠAVANJA: Strukture dobijene upotrebom XS(Shelxtl) su preciznije analizirane upotrebom shelxtl kompjuterskog paketa, podešavanjem na detaljnu analizu najmanjih kvadrata F<2>, te uvođenjem faktora rasipanja iz Interne tabele C upotrebom 4.2.6.8 i 6.1.1.4. tabela, pri čemu je broj podataka iznosio 5186, broj ograničavajućih faktora 2, a broj parametara 313, sa odnosom podaci/parametri = 16,57, stepenom podudaranja F<2>= 1,02, R indikatorima[I>4sigma(I)] R1 = 0,0524, wR2 = 0,1033, R indikatorima(celokupni podaci) R1 = 0,0826, wR2 = 0,1162, maks. razlika vrednosti pika i proreza = 0,294 u -0,221 e/Å<3>, podešenim unapređenim parametrom = 0,05(8), Svi atomi vodenika osim atoma H u NH2i vodi su ekstrapolisani kao idealni upotrebom Ridingovog modela.

[0725] REZULTATI: Asimetrične strukture koje su sadržavale jedan molekul i jedan moleku vode, a kao što je prikazano na Slici 1, sa termalnim elipsoidama su povučene na nivoima verovatnoće od 50%. Potvrđene su pretpostavljene strukture. Apsolutna konfigracija je određena na osnovu poznatih S konfiguracija C21. Konfiguracije na C7 su definisane kao S. Parametar preklapanja sa idealnom strukturom takođe je potvrdio tačnu konfiguraciju. Shodno kristalnoj strukturi, pretpostavilo se da jedinjenje iz Primera 269 označava 4-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-6-hloro-2-(1-((S)-2-hidroksipropil)azetidin-3-il)-3-metoksibenzonitril. Kristalna sturktura je prikazana na Slici 1.

Tabela A1. Atomske koordinate (x 10^4) i parametri ekvivalentnog izotopskog izmeštaja (A^2 x 10^3.

U(eq) je definisan kao trećina traga ortogonalizovanog Uij tenzora.

Tabela A2. Dužina veza [A] i uglovi[stepeni]

Tabela A3. Parametri anizotopnog izmeštaja (A^2 x 10^3). Eksponent anizotopnog faktora je u obliku:

-2 pi^2[h^2 a*^2 U11 ... 2 h x a* b* U12]

Tabela A4. Koordinate vodonika (x 10^4) i parametri izotonog izmeštaja (A^2 x 10^3)

Tabela A5. Uglovi torzije [stepeni]

Primeri 272 i 273. Dijastereoizomeri 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-2-[1-(2-hidroksi-1-metiletil)azetidin-3-il]-3-metoksibenzonitrila

[0726]

[0727] Rastvor 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-metoksibenzonitrila (40 mg; 0,10 mmol) u metanolu (2 ml) je tretiran natrijum cijanoborohidridom (16 mg; 0,25 mmol), nakon čega je dodat i acetol (28 µl; 0,40 mmol), pa je smeša mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakcija je zatim zaustavljena dodavanjem sirćetne kiseline (100 µl; 1,8 mmol). Smeša je dalje razblažena metanolom i prečišćena preparativnim LCMS postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 60 ml/min) da bi se dobili traženi proizvodi u vidu smeše dijastereoizomera. Navedena smeša dijastereoizomera je zatim razdvojena hiralnim HPLC postupkom (retenciona vremena = 3,70 min i 6,58 min; Phenomenex Lux Cellulose C-4 kolona, 21,2 x 250 mm, veličina čestica 5 mikrona, eluiranje 20% etanolom u heksanima, brzina protoka 18 ml/min, količina nanošenja 5 mg po injeciranju) da bi se dobilo željeni izomer pika 1 (Jedinjenje 272) (19 mg; 41%) i izomer pika 2 (Jedinjenje 273) (23 mg; 50%) Pik 1:<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,11 (s, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,34 (br s, 2H), 6,24 (q, J = 6,9 Hz, 1H), 4,43 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 4,07 - 3,82 (m, 3H), 3,64 (s, 3H), 3,31 - 3,24 (m, 1H), 3,17 - 3,06 (m, 2H), 3,06- 2,97 (m, 1H), 2,55 (s, 3H), 2,21 - 2,11 (m, 1H), 1,72 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 0,81 (d, J = 6,3 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C22H27ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 456,2; utvrđeno: 456,2. Pik 2:<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,11 (s, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,35 (br s, 2H), 6,24 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 4,43 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 4,06- 3,91 (m, 2H), 3,89 - 3,79 (m, 1H), 3,64 (s, 3H), 3,30 - 3,24 (m, 1H), 3,15 - 3,00 (m, 3H), 2,55 (s, 3H), 2,21 - 2,10 (m, 1H), 1,72 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 0,82 (d, J = 6,2 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C22H27ClN7O2(M<+>H)<+>: m/z = 456,2; utvrđeno: 456,2.

Primer 281.2-(1-Acetilazetidin-3-il)-4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-metoksibenzonitril

[0728]

[0729] Rastvor 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-metoksibenzonitrila (hiralni intermedijer iz Primera 261) (60 mg; 0,15 mmol) u tetrahidrofuranu (2 ml) je na 0°C tretiran trietilaminom (53 µl; 0,38 mmol), pa je dodat acetil hlorid (13 µl; 0,18 mmol) i smeša je mešana na 20°C preko noći. Reakciona smeša je zatim razblažena metanolom i prečišćena preparativnim LCMS postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 60 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod (39 mg; 59%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,11 (s, 1H), 7,52 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,36 (br s, 2H), 6,26 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 4,57 - 4,36 (m, 3H), 4,30 - 4,21 (m, 1H), 4,18 - 4,08 (m, 1H), 3,71 (d, J = 3,1 Hz, 3H), 2,55 (s, 3H), 1,78 - 1,71 (m, 6H). LCMS analiza, izračunato za C21H23ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 440,2; utvrđeno: 440,1.

Primer 285.4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-metoksi-2-[1-(metilsulfonil)azetidin-3-il]benzonitril

[0730]

[0731] Rastvor 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-metoksibenzonitrila (hiralni intermedijer iz Primera 261) (40 mg; 0,10 mmol) u dihlorometanu (1 ml) je tretiran trietilaminom (35 µl; 0,25 mmol), ohlađenom na 0°C, pa je smeša tretirana i metansulfonil hloridom (9,3 µl; 0,12 mmol) i mešana na 0°C tokom 1 h. Reakciona smeša je zatim razblažena metanolom i prečišćena preparativnim LCMS postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 60 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod (20 mg; 42%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,12 (s, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,35 (br s, 2H), 6,25 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 4,54-4,40 (m, 1H), 4,27-4,12 (m, 4H), 3,68 (s, 3H), 3,01 (s, 3H), 2,55 (s, 3H), 1,74 (d, J = 7,1 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C20H23ClN7O3S (M+H)<+>: m/z = 476,1; utvrđeno: 476,1.

Primer 289. Metil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-metoksifenil}azetidin-1-karboksilat

[0732]

[0733] Rastvor 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-metoksibenzonitrila (hiralni intermedijer iz Primera 261) (20 mg; 0,05 mmol) u dihlorometanu (1 ml) je tretiran trietilaminom (20 µl; 0,14 mmol), pa je dodat metil hloroformat (4,7 µl; 0,06 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je zatim razblažena metanolom i prečišćena preparativnim LCMS postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 60 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod (12 mg; 52%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,11 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 7,34 (br s, 2H), 6,25 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 4,53-4,38 (m, 1H), 4,36- 4,17 (m, 4H), 3,71 (s, 3H), 3,55 (s, 3H), 2,55 (s, 3H), 1,73 (d, J = 7,1 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C21H23ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 456,2; utvrđeno: 456,1.

Primer 292.3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-metoksifenil}-N-(terc-butil)azetidin-1-karboksamid

[0734]

[0735] Rastvor 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-metoksibenzonitrila (hiralni intermedijer iz Primera 261) (20 mg; 0,05 mmol) u N,N-dimetilformamidu (1 ml) je tretiran trietilaminom (20 µl; 0,14 mmol), pa je dodat 2-izocijanato-2-metil-propan (7,2 µl; 0,063 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je zatim razblažena metanolom i prečišćena preparativnim LCMS postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 60 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod (16 mg; 64%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C24H30ClN8O2(M+H)<+>: m/z = 497,2; utvrđeno: 497,2.

Primer 293.3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-metoksifenil}azetidin-1-karboksamid

[0737] Rastvor 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-metoksifenil}-N-(terc-butil)azetidin-1-karboksamida (hiralni intermedijer iz Primera 292) (16 mg; 0,032 mmol) u trifluorosirćetnoj kiselini (2 ml) je grejan u mikrotalasnom reaktoru na 120°C tokom 10 min. Reakciona smeša je zatim razblažena metanolom i prečišćena preparativnim LCMS postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 60 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod (7 mg; 50%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,12 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,35 (br s, 2H), 6,28 (q, J = 6,9 Hz, 1H), 5,70 (br s, 1H), 4,62- 4,49 (m, 1H), 4,34- 4,20 (m, 1H), 3,83 (s, 3H), 3,78 - 3,49 (m, 2H), 2,55 (s, 3H), 1,73 (d, J = 7,0 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C20H22ClN8O2(M+H)<+>: m/z = 441,2; utvrđeno: 441,1.

Primer 296.3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-metoksifenil}-N,N-dimetilazetidin-1-karboksamid

[0738]

[0739] Rastvor 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-metoksibenzonitrila (hiralni intermedijer iz Primera 261) (40 mg; 0,10 mmol) u N,N-dimetilformamidu (2 ml) je tretiran trietilaminom (40 µl; 0,29 mmol), pa je dodat p-nitrofenil hloroformat (23 µl; 0,13 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je zatim razblažena metanolom i prečišćena preparativnim LCMS postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 60 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod koji je odmah zatim i iskorišćen. Rastvor p-nitrofenil karbamatnog intermedijera u tetrahidrofuranu (1 ml) je tretiran trietilaminom (15 µl; 0,11 mmol), pa je dodat 1,0 M rastvor dimetilamina u tetrahidrofuranu (150 µl; 0,15 mmol) i smeša je grejana u zaptivenoj tubi na 60°C tokom 2 h. Reakciona smeša je zatim koncentrovana, razblažena metanolom i prečišćena preparativnim LCMS postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 60 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod (13 mg; 28%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,11 (s, 1H), 7,49 (s, 1H), 7,36 (br s, 2H), 6,25 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 4,44- 4,23 (m, 3H), 4,22- 4,10 (m, 2H), 3,69 (s, 3H), 2,76 (s, 6H), 2,55 (s, 3H), 1,73 (d, J = 7,1 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C22H26ClN8O2(M+H)<+>: m/z = 469,2; utvrđeno: 469,1.

Primer 298. 1-{1-[4,5-Dihloro-3-(1-etilazetidin-3-il)-2-metoksifenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0740]

Korak 1.1-(4,5-Dihloro-2-hidroksifenil)etanon

[0741] Rastvor 3,4-dihlorofenola [AK Scientific] (30 g; 18 mmol) u acetil hloridu (19 ml; 270 mmol) je mešan na 60°C tokom 2 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena do 20°C, tretirana aluminijum trihloridom (37 g; 280 mmol) u porcijama i grejana na 180°C tokom 30 min. Smeša je dalje ohlađena do 20°C i rastvor je ostavljen da očvrsne u blokove čvrste supstance koji se nisu mogli lako razbiti. Ovakav materijal je zatim ohlađen do 0°C, pa je rekacija polako zaustvljena, postepenim dodavanjem 1 M HCl, u porcijama. Blokovi čvrste supstance su zatim polako razvojeni sa dovoljnom količinom HCl, pa je ovakva heterogena smeša mešana na 20°C preko noći da bi se obezbedila uniformnost rastvora. Čvrsta supstanca je zatim izdvojena filtriranjem, isprana velikim količinama vode i osušena pod vakuumom da bi se dobio traženi proizvod (38 g; kvantitativno) u vidu žuto-braon čvrste supstance.

Korak 2.1-(4,5-Dihloro-2-hidroksi-3-jodofenil)etanon

[0742] Rastvor 1-(4,5-dihloro-2-hidroksifenil)etanona (12 g; 59 mmol) u sirćetnoj kiselini (70 ml) je tretiran N-jodosukcinimidom (16 g; 71 mmol), pa je mešan na 90°C tokom 18 h. Reakciona smeša je zatim tretirana dodatnim N-jodosukcinimidom (8 g; 36 mmol) i mešana na 90°C tokom 4 h. Po koncentrovanju, reakciona smeša je razblažena etil acetatom, pa je rekacija zaustavljena dodavanjem zasićenog natrijum bikarbonata dok se nije zaustavilo izdvajanje mehurića. Organski sloj je izdvojen, a vodeni sloj je ponovo ekstrahovan etil acetatom. Organski slojevi su spojeni, osušeni i koncentrovani da bi se dobila braon čvrsta supstanca. Ovakav materijal je rekristalisan iz metanola da bi se dobilo traženi proizvod (9,0 g; 46%) u vidu žuto-braon čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 13,36 (s, 1H), 7,85 (s, 1H), 2,65 (s, 3H). LCMS analiza, izračunato za C8H6Cl2IO2(M+H)<+>: m/z = 330,9, 332,9; utvrđeno: 330,8, 332,9.

Korak 3.1-(4,5-Dihloro-3-jodo-2-metoksifenil)etanon

[0743] Rastvor 1-(4,5-dihloro-2-hidroksi-3-jodofenil)etanona (16 g; 47 mmol) i kalijum karbonata (17 g; 120 mmol) u N,N-dimetilformamidu (40 ml) je tretiran metil jodidom (6,4 ml; 100 mmol), pa je mešan na 60°C tokom 1 h. Reakciona smeša je zatim razblažena vodom i ekstrahovana etil acetatom (2x). Organski slojevi su spojeni, osušeni upotrebom magnezijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani da bi se dobila sirova čvrsta supstanca. Sirov materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom etil acetata u heksanima (5% - 30%), a da bi se obezbedio traženi proizvod (14 g; 84%) u vidu narandžaste čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7,69 (s, 1H), 3,79 (s, 3H), 2,60 (s, 3H). LCMS analiza, izračunato za C9H8Cl2IO2(M+H)<+>: m/z = 344,9, 346,9; utvrđeno: 344,8, 346,9.

Korak 4. terc-Butil 3-(3-acetil-5,6-dihloro-2-metoksifenil)azetidin-1-karboksilat

[0744] Cink (4,5 g; 69 mmol) je resuspendovan sa 1,2-dibromoetanom (420 µl; 4,9 mmol) u N,N-dimetilformamidu (54 ml), pa je smeša grejana na 70°C tokom 10 min i potom ohlađena do sobne temperature. Zatim je u smešu u kapima dodat hlorotrimetilsilan (620 µl; 4,9 mmol) i mešanje je nastavljeno tokom 1 h. Rastvor terc-butil 3-jodoazetidin-1-karboksilata (17 g; 61 mmol) u N,N-dimetilformamidu (30 ml) je dodat nakon toga, pa je smeša grejana na 40°C tokom 1 h pre dodavanja smeše 1-(4,5-dihloro-3-jodo-2-metoksifenil)etanona (14 g; 41 mmol), tris(dibenzilidenaceton)dipaladijuma(0) (710 mg; 0,77 mmol) i tri-(2-furil)fosfina (360 mg; 1,6 mmol) u N,N-dimetilformamidu (120 ml). Reakciona smeša je zatim mešana preko noći na sobnoj temperaturi, pa je preraspodeljena između etil acetata i zasićenog rastvora amonijum hlorida. Organski sloj je ispran vodom, osušen upotrebom magnezijum sulfata, profiltriran i koncentrovan do sirovog ostatka koji je dalje prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom etil acetata u heksanima (0% - 25%). Tako je dobijen traženi proizvod (12 g; 77%). LCMS analiza, izračunato za C17H21Cl2NO4Na (M+Na)<+>: m/z = 396,1; utvrđeno: 396,0.

Korak 5. terc-Butil 3-[2,3-dihloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksifenil]azetidin-1-karboksilat

[0745] Rastvor terc-butil 3-(3-acetil-5,6-dihloro-2-metoksifenil)azetidin-1-karboksilata (9,6 g; 26 mmol) u metanolu (240 ml) na 0°C je tretiran natrijum tetrahidroboratom (1,9 g; 51 mmol) u porcijama koje su dodavane u toku 5 min, pa je smeša mešana na 0°C tokom 30 min. Reakcija je zatim zaustavljena dodavanjem sirćetne kiseline (7,3 ml; 130 mmol) na 0°C, nakon čega je smeša tretirana zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (∼50 ml). Reakciona smeša je dalje koncentrovana da bi se uklonila većina metanola (to ∼60 ml) i potom je presuta u zasićen rastvor natrijum bikarbonata (150 ml), pa je ekstrahovana etil acetatom (2 x 200 ml). Organski ekstrakti su spojeni, isprani vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa su osušeni upotrebom natrijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani da bi se dobio traženi proizvod (9,6 g; kvantitativno) koji je potom iskorišćen bez daljeg prečišćavanja. LCMS analiza, izračunato za C13H16Cl2NO4([M-(t-Bu)+H] H)<+>: m/z = 320,0; utvrđeno: 320,0.

Korak 6. terc-Butil 3-[2,3-dihloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksifenil]azetidin-1-karboksilat

[0746] N,N-Dimetilformamid (0,92 ml; 12 mmol) je dodat u čvrst cijanurin-hlorid (2,2 g; 12 mmol) na sobnoj temperaturi (DMF je apsorbovala čvrsta supstanca). Smeša je zatim ostavljena da stoji tokom 10 min, pa je tretirana metilen hloridom (60 ml) i mešana nekoliko minuta da bi se razbila čvrsta supstanca. Reakciona smeša je dalje tretirana rastvorom terc-butil 3-[2,3-dihloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksifenil]azetidin-1-karboksilata (3,0 g; 8,0 mmol) u metilen hloridu (30 ml) i mešana na 35-40°C tokom 2 h. Potom je reakciona smeša tretirana dodatnim N,N-dimetilformamidom (1 ml), pa mešana na 35-40°C tokom 4 h. Reakcija je zahtevala dodatni tretman N,N-dimetilformamidom (1 ml) uz mešanje, na 35-40°C preko noći da bi se završila u potpunosti. Reakciona smeša je zatim razblažena vodom i dihlorometanpm. Organska faza je izdvojena, isprana zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom magnezijum sulfata, profiltrirana i koncentrovana do sirovog ostatak. Sirov materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom etil acetata u heksanima (5% - 40%) da bi se dobio traženi proizvod (2,8 g; 90%). LCMS analiza, izračunato za C13H15Cl3NO3([M-(t-Bu)+H] H)<+>: m/z = 338,0, 340,0; utvrđeno: 337,9, 339,9.

Korak 7. terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[4,3-c]piridin-1-il)etil]-5,6-dihloro-2-metoksifenil}azetidin-1-karboksilat

[0747] Rastvor terc-butil 3-[2,3-dihloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksifenil]azetidin-1-karboksilata (1,0 g; 2,5 mmol) i 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (0,43 g; 2,9 mmol) u N,N-dimetilformamidu (23 ml) je tretiran cezijum karbonatom (1,2 g; 3,8 mmol) i kalijum jodidom (42 mg; 0,25 mmol), pa je smeša grejana na 100°C tokom 10 h. Reakciona smeša je zatim razblažena etil acetatom (75 ml) i vodom (75 ml). Dalje je izdvojen vodeni sloj koji je potom reekstrahovan etil acetatom (2 x 50 ml). Organski slojevi su spojeni, isprani vodom, zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata i koncentrovanim rastvorom soli, pa su osušeni upotrebom magnezijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani do sirovog ostatka. Sirov materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom metanola u dihlorometanu (0% - 10%) da bi se dobio traženi proizvod (0,97 g; 75%). LCMS analiza, izračunato za C23H29Cl2N6O3(M+H)<+>: m/z = 507,2, 509,2; utvrđeno: 507,0; 509,0.

Korak 8.1-[1-(3-Azetidin-3-il-4,5-dihloro-2-metoksifenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0748] Rastvor terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[4,3-c]piridin-1-il)etil]-5,6-dihloro-2-metoksifenil}azetidin-1-karboksilata (0,97 g; 1,9 mmol) u metilen hloridu (20 ml) je tretiran trifluorosirćetnom kiselinom (10 ml), pa je smeša mešana na 20°C tokom 30 min. Reakciona smeša je zatim koncentrovana, a ostatak je razblažen metanolom (∼20 ml) i tretiran zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (do pH ∼8). Reakciona smeša je dalje koncentrovana da bi se uklonio metanol. Dobijeno ulje je resuspendovano u vodenom sloju koji je potom bio ekstrahovan smešom dihlorometana i izopropanola u odnosu 5:1, nakon čega je smeša osušena upotrebom magnezijum sulfata, profiltrirana i koncentrovan da bi se dobio traženi proizvod (0,77 g; 99%) koji je iskorišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS analiza, izračunato za C18H21Cl2N6O (M+H)<+>: m/z = 407,1, 409,1; utvrđeno: 407,0,409,0.

Korak 9.1-{1-[4,5-Dihloro-3-(1-etilazetidin-3-il)-2-metoksifenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3, 4-d]pirimidin-4-amin

[0749] Rastvor 1-[1-(3-azetidin-3-il-4,5-dihloro-2-metoksifenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (40 mg; 0,098 mmol) u metanolu (2,6 ml) je tretiran natrijum cijanoborohidridom (15 mg; 0,25 mmol), pa je dodat acetaldehid (22 µl; 0,39 mmol) i smeša je mešana na 20°C tokom 20 min. Reakcija je zatim zaustavljena dodavanjem sirćetne kiseline (130 µl; 2,3 mmol), a smeša je dalje razblažena metanolom i prečišćena preparativnim LCMS postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 60 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod u vidu smeše enantiomera. Ovakva racemske smeše je razdvojena hiralnim HPLC postupkom (retenciona vremena = 18,6 min i 22,0 min; Phenomenex Lux Cellulose C-4 kolona, 21,2 x 250 mm, veličina čestica 5 mikrona, eluiranje 5% etanolom u heksanima, brzina protoka 18 ml/min, količina nanošenja 2,5 mg po injeciranju) da bi se dobio željeni izomer iz pika 1 (11 mg; 26%).<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,11 (s, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,33 (br s, 2H), 6,21 (q, J = 6,9 Hz, 1H), 3,98 - 3,77 (m, 3H), 3,57 (s, 3H), 2,92- 2,83 (m, 1H), 2,79 - 2,72 (m, 1H), 2,55 (s, 3H), 2,35 - 2,22 (m, 2H), 1,70 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 0,86 (t, J = 7,1 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C20H25Cl2N6O (M+H)<+>: m/z = 435,1; utvrđeno: 435,0.

Primer 307.4-[1-(4-Amino-5-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-(1-izopropilazetidin-3-il)benzonitril

[0750]

Korak 1. terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-5-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil}azetidin-1-karboksilat

[0751] Traženo jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure koja je opisana u Primeru 212, korak 5 (hiralni intermedijer), upotrebom 5-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-amina [ACES Pharma] umesto 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina kao polaznog materijala, pri čemu je prinos iznosio 18%.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8,13 (s, 1H), 6,93 (br s, 1H), 6,79 (s, 1H), 6,17 (q, J = 7,1 Hz, 1H), 5,24 (s, 2H), 4,40 - 4,27 (m, 4H), 4,27 - 4,18 (m, 1H), 4,03 - 3,92 (m, 1H), 3,80 - 3,70 (m, 1H), 2,43 (s, 3H), 1,74 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,43 (s, 9H), 1,40 (t, J = 7,0 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C26H32ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 511,2; utvrđeno: 511,2.

Korak 2.4-[1-(4-Amino-5-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-etoksibenzonitril

[0752] Traženo jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure koja je opisana u Primeru 212, korak 6, upotrebom terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-5-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil}azetidin-1-karboksilata umesto terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil}azetidin-1-karboksilata kao polaznog materijala, pri čemu je prinos iznosio 99%. LCMS analiza, izračunato za C21H24ClN6O (M+H)<+>: m/z = 411,2; utvrđeno: 411,1.

Korak 3.4-[1-(4-Amino-5-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-(1-izopropilazetidin-3-il)benzonitril

[0753] Traženo jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure koja je opisana u Primeru 213, upotrebom 4-[1-(4-amino-5-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-etoksibenzonitrila umesto 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-etoksibenzonitrila, kao i acetona umesto formaldehida kao počenih materijala, pri čemu je prinos iznosio 65%. Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer.<1>H NMR (300 MHz, DMSO) δ 7,95 (s, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,16- 7,13 (m, 1H), 6,58 (s, 2H), 6,11 (q, J = 7,1 Hz, 1H), 4,04- 3,67 (m, 5H), 3,04- 2,92 (m, 2H), 2,36 (s, 3H), 2,27 - 2,12 (m, 1H), 1,69 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,30 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 0,85 (dd, J = 6,1; 1,8 Hz, 6H). LCMS analiza, izračunato za C24H30ClN6O (M+H)<+>: m/z = 453,2; utvrđeno: 453,3.

Sintetisana jedinjenja

[0754] Eksperimentalne procedure sinteze jedinjenja iz Primera 214-218, 221-235, 238, 240-246, 248-260, 263-267, 270, 271, 274-280, 282-284, 286-288, 290, 291, 294, 295, 297, 299-306, 308 i 309 su sumirane u Tabelama 4 i 5.

4 al Tabe

Tabela 5

Analitički podaci

[0755]<1>H NMR podaci (Varian Inova 500 spektrometar, Mercury 400 spektrometar ili Varian (ili Mercury) 300 spektrometar), kao i LCMS maseni spektralni podaci (MS) za jedinjenja iz Primera 214-218, 221-235, 238, 240-246, 248-260, 263-267, 270, 271, 274-280, 282-284, 286-288, 290, 291, 294, 295, 297, 299, 300-306, 308 i 309 su navedni u Tabeli 6 koja sledi.

Tabela 6

Primer 313.5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-metoksifenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0756]

Korak 1: 5-Bromo-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0757] 5-Bromopiridin-2-karboksilna kiselina (20 g; 100 mmol; Frontier Scientific, kataloški br. B1704) je mešana u metilen hloridu (30 ml) i ohlađena do 0°C. Zatim je u rastvor polako dodat 2,0 M rastvor oksalil hlorida u metilen hloridu (100 ml), a dalje i N,N-dimetilformamid (0,8 ml), pa je smeša mešana tokom 30 minuta na 0°C i potom na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je zatim uparena, ponovo rastvorena u metilen hloridu (130 ml), pa su u smešu polako dodati dimetilamin hidrohlorid (9,8 g; 120 mmol) i trietilamin (56,1 ml; 400 mmol) u metilen hloridu (130 ml) ohlađeni do 0°C i nastavljeno je mešanje smeše na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Navedena smeša je dalje razblažena metilen hloridom (200 ml) i isprana zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom natrijum sulfata, profiltrirana i uparena. Dobijeni proizvod je prečišćen FCC postupkom na silika gelu, upotrebom gradijenta etil acetata u heksanima (0-60%). Tako je dobijen 5-bromo-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid (22,0 g; 100%). LCMS analiza, izračunato za C8H10BrN2O (M+H)<+>: m/z = 229,0, 231,0; utvrđeno: 228,9, 230,9.

Korak 2: {6-[(Dimetilamino)karbonil]piridin-3-il}boronska kiselina

[0758] Smeša 5-bromo-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (23 g; 98 mmol), 4,4,5,5,4',4',5',5'-oktametil-[2,2']bi[[1,3,2] dioksaborolanila] (27 g; 110 mmol), [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijuma(II), kompleks sa dihlorometanom (Aldrich, kataloški br. 379670) (1:1), (4,8 g; 5,9 mmol), 1,1’-bis(difenilfosfino)ferocena (Aldrich, kataloški br. 177261) (3,3 g; 5,9 mmol) i kalijum acetata (30 g; 300 mmol) u 1,4-dioksanu (600 ml) je degarisana azotom i grejana na 120°C tokom 16 sati. Smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i razblažena etil acetatom (600 ml) i vodom (600 ml). Vodeni sloj je koncentrovan in vacuo da bi se dobio čvrst ostatak. Čvrsta supstanca je rastvorena u acetonitrilu, pa profiltrirana da bi se uklonile rezidualne nerastvorne soli. Acetonitril je uklonjen in vacuo da bi se dobila {6-[(dimetilamino)karbonil]piridin-3-il}boronska kiselina (12 g; 60%). LCMS analiza, izračunato za C8H12BN2O3(M+H)<+>: m/z = 195,1; utvrđeno: 195,1.

Korak 3.4-Acetil-2-bromo-6-hloro-3-metoksibenzonitril

[0759] 1-(3-Bromo-5-hloro-4-fluoro-2-hidroksifenil)etanon (2,0 g; 7,5 mmol; Primer 43, korak 1) je pomešan sa kalijum cijanidom (0,58 g; 9,0 mmol) u N,N-dimetilformamidu (16 ml, pa je smeša grejana na 85°C u uljanom kupatilu. Nakon grejanja od 18 sati, smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature i dodati su jodometan (0,90 ml; 11 mmol) i kalijum karbonat (2,1 g; 15 mmol). Reakciona smeša je zatim zagrejana do 65°C i LC/MS postupkom je praćeno odvijanje rakcije. Nakon grejanja od 3 sati, reakcija je bila završena, pa je smeša ostavljena da se ohladi do sobne temperature i zatim je rastvorena u etil acetatu i isprana vodom, koncentrovanim rastvorom soli, pa osušena upotrebom magnezijum sulfata. Dobijeni rastvor je potom koncentrovan da bi se dobio sirovi proizvod u vidu tamnog ulja. Proizvod je prečišćen FCC postupkom na silika gelu, eluiranjem sa gradijent smešom heksana i etil acetata. Tako je dobijen 4-acetil-2-bromo-6-hloro-3-metoksibenzonitril (1,65 g; 75%) u vidu čvrstog ostatka. LCMS analiza, izračunato za C10H8BrClNO2(M+H)<+>: m/z = 287,9, 289,9; utvrđeno: 288,1, 290,0.

Korak 4: 5-(3-Acetil-5-hloro-6-cijano-2-metoksifenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0760] Natrijum karbonat (3,0 g; 20 mmol) u vodi (20 ml) je dodat u smešu 4-acetil-2-bromo-6-hloro-3-metoksibenzonitrila (2,5 g; 8,7 mmol) i {6-[(dimetilamino)karbonil]piridin-3-il}boronske kiseline (1,9 g; 10. mmol; Primer 301, korak 2) u acetonitrilu (100 ml). Reakciona smeša je zatim degasirana sa N2, pa je dodat [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1), (400 mg; 0,4 mmol) i smeša je ponovo degasirana sa N2. Reakciona smeša je dalje grejana na 100°C tokom 4 sata. Kada je LC/MS postupkom utvrđeno da se reakcija završila, smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature, pa je preraspodeljena između vode i EtOAc. Organski slojevi su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, pa osušeni upotrebom MgSO4, profiltrirani i koncentrovani da bi se dobio sirovi proizvod. Proizvod je prečišćen FCC postupkom na silika gelu, eluiranjem sa gradijent smešom heksana i etil acetata, a da bi se dobio 5-(3-acetil-5-hloro-6-cijano-2-metoksifenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid u vidu žutog ulja (2,2 g; 71 %). LCMS analiza, izračunato za C18H17ClN3O3(M+H)<+>: m/z = 358,1; utvrđeno: 358,1.

Korak 5: 5-[3-Hloro-2-cijano-5-(1-hidroksietil)-6-metoksifenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0761] Natrijum tetrahidroborat (320 mg; 8,4 mmol) je dodat u smešu 5-(3-acetil-5-hloro-6-cijano-2-metoksifenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (2 g; 6 mmol) u metanolu (100 ml) koja je bila ohlađena do 0°C. Reakciona smeša je zatim mešana na 0°C tokom 1 sata, pa je reakcija zaustavljena dodavanjem vode. Nakon toga, smeša je preraspodeljena između vode i EtOAc, a organski slojevi su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom MgSO4, profiltrirani i koncentrovani da bi se dobio sirov 5-[3-hloro-2-cijano-5-(1-hidroksietil)-6-metoksifenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid u vidu bistrog ulja (2,0 g; 100%). LCMS analiza, izračunato za C18H19ClN3O3(M+H)<+>: m/z = 360,1; utvrđeno: 360,1.

Korak 6: 5-[3-Hloro-5-(1-hloroetil)-2-cijano-6-metoksifenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0762] Tionil hlorid (800 µl; 10 mmol) je na sobnoj temperaturi u kapima dodat u rastvor 5-[3-hloro-2-cijano-5-(1-hidroksietil)-6-metoksifenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (2 g; 6 mmol), metilen hlorida (100 ml) i N,N-dimetilformamida (100 µl). Reakciona smeša je zatim mešana tokom 5 sati. Kada je LC/MS postupkom utvrđeno da se reakcija završila, smeša je preraspodeljena između vode i EtOAc. Organski slojevi su spojeni, isprani zasićenim rastvorom NaHCO3i koncentrovanim rastvorom soli, pa su osušeni upotrebom Na2SO4, profiltrirani i koncentrovani. Tako je dobijen sirov 5-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-2-cijano6-metoksifenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid u vidu ulja (1,8 g; 80%). LCMS analiza, izračunato za C18H18Cl2N3O2(M+N)<+>: m/z = 378,1; utvrđeno: 378,1.

Korak 7: 5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-metoksifenil}-N,N-dimetilpiridin-1-karboksamid

[0763] Cezijum karbonat (3000 mg; 10 mmol) je dodat u smešu 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (1100 mg; 7,1 mmol) i 5-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-2-cijano-6-metoksifenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (1,8 g; 4,8 mmol) u N,N-dimetilformamidu (50 ml), pa je reakciona smeša mešana na 80°C tokom 3 sata i dalje ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Reakciona smeša je zatim razblažena sa EtOAc, isprana vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana da bi se dobio sirovi proizvod. Navedeni proizvod je dalje prečišćen FCC postupkom na silika gelu, eluiranjem sa gradijenom smeše heksana i 10% EtOH u EtOAc (0-100%) da bi se dobilo jedinjenja iz naslova u vidu bledo žutog ulja (2,0 g; 80%). LCMS analiza, izračunato za C24H24ClN8O2(M+H)<+>: m/z = 491,1; utvrđeno: 491,2.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,74 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 8,15 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 8,13 (s, 1H), 7,77 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,74 (s, 1H), 6,43 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 3,32 (s, 3H), 3,16 (s, 3H), 3,07 (s, 3H), 2,64 (s, 3H), 1,89 (d, J = 7,1 Hz, 3H).

[0764] Enantiomeri su razdvojeni hiralnim HPLC postupkom na koloni, upotrebom Phenomenex Lux-Cellulose 1 kolone (21,1 x 250 mm, veličina čestica 5 mikrona) i eluiranjem sa 15% etanolom u heksanima (brzina protoka 18 ml/min, naneta količina ∼ 5 mg po injeciranju) da bi se dobilo sledeće: retenciono vreme prvog pika: 2,09 min, 5-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-metoksifenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid; retenciono vreme drugog pika: 3,92 min, 5-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-metoksifenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid.

Primer 314.5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-cijano-2-etoksi-5-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0765]

Korak 1: 4-Acetil-5-hidroksi-2-metilbenzonitril

[0766] Smeša 1-(4-bromo-2-hidroksi-5-metilfenil)etanona (8,5 g; 37 mmol; Alfa Aesar, kataloški br. H29125) sa cink cijanidom (8,7 g; 74 mmol) u N,N-dimetilformamidu (75 ml) je degarisana azotom, pa su dodati tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (Aldrich, kataloški br. 328774) (1,0 g; 1,1 mmol) i (9,9-dimetil-9H-ksanten-4,5-diil)bis(difenilfosfin) (Aldrich, kataloški br. 526460) (1,5 g; 2,6 mmol). Reakciona smeša je zatim ponovo degasirana azotom, pa je grejana na 120°C i odvijanje rekacije praćeno LC/MS postupkom. Nakon grejanja od 18 sati, rekacija je bila završena, pa je reakciona smeša ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Smeša je zatim rastvorena u etil acetatu i isprana vodom (2X) i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom magnezijum sulfata i koncentrovana da bi se dobio sirovi proizvod u vidu ulja boje tamnog ćilibara. Proizvod je zatim prečišćen FCC postupkom na silika gelu, eluiranjem sa gradijent smešom heksana i etil acetata, a da bi se dobio 4-acetil-5-hidroksi-2-metilbenzonitril u vidu čvrste supstance (6,3 g; 98%). LCMS analiza, izračunato za C10H10NO2(M+H)<+>: m/z = 176,1; utvrđeno: 176,2.

Korak 2: 4-Acetil-3-hidroksi-2-jodo-6-metilbenzonitril

[0767] U sirćetnoj kiselini (80 ml) je rastvoren 4-acetil-5-hidroksi-2-metilbenzonitril (6,7 g; 38 mmol), pa je dodat N-jodosukcinimid (10. g; 46 mmol). Reakciona smeša je zatim grejana na 80°C u uljanom kupatilu, a odvijanje reakcije je praćeno LC/MS postupkom. Nakon grejanja od 4 sata, reakcija je bila završena u potpunosti. Reakciona smeša je zatim ostavljena da se ohladi, pa je koncentrovana in vacuo i tako je dobijeno tamno ulje. Ulje je dalje razmućeno u etil acetatu i isprano vodom, natrijum bikarbonatom (3x, dok rastvor nije postao blago bazan) i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušeno upotrebom magnezijum sulfata i koncentrovano da bi se dobio sirovi proizvod u vidu tamnog ulja. Proizvod je prečišćen FCC postupkom na silika gelu, eluiranjem sa gradijent smešom heksana i etil acetata, a da bi se dobio 4-acetil-3-hidroksi-2-jodo-6-metilbenzonitril u vidu bledo žute čvrste supstance (7,2 g; 62 %). LCMS analiza, izračunato za C10H9NO2(M+H)<+>: m/z = 301,9; utvrđeno: 301,9.

Korak 3: 4-Acetil-2-jodo-3-etoksi-6-metilbenzonitril

[0768] 4-Acetil-3-hidroksi-2-jodo-6-metilbenzonitril (5,0 g; 17 mmol) je rastvoren u N,N-dimetilformamidu (50,0 ml), pa su dodati kalijum karbonat (4,6 g; 33 mmol) i etil jodid (2,1 ml; 33 mmol). Reakciona smeša je zatim grejana na 60°C, a odvijanje reakcije je praćeno LC/MS postupkom. Nakon grejanja od 2 sata, reakcija je bila završena u potpunosti. Reakciona smeša je zatim ostavljena da se ohladi, pa je razblažena etil acetatom (300 ml) i profiltrirana da bi se uklonila preostala čvrsta supstanca. Organski sloj je ispran vodom (3x) i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušen upotrebom magnezijum sulfata i koncentrovan da bi se dobio sirovi proizvod u vidu tamne čvrste supstance. Proizvod je zatim prečišćen FCC postupkom na silika gelu, eluiranjem sa gradijent smešom heksana i etil acetata da bi se dobio 4-acetil-3-etoksi-2-jodo-6-metilbenzonitril u vidu bledo žute kristalne, čvrste supstance (5,0 g; 96%). LCMS analiza, izračunato za C12H13INO2(M+H)<+>: m/z = 329,9; utvrđeno: 330,0.

Korak 4: 5-(3-Acetil-6-cijano-2-etoksi-5-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0769] Natrijum karbonat (3 g; 30 mmol) u vodi (20 ml) je dodat u smešu 4-acetil-3-etoksi-2-jodo-6-metilbenzonitrila (3 g; 9.mmol) i {6-[(dimetilamino)karbonil]piridin-3-il}boronske kiseline (1700 mg; 8,8 mmol; Primer 313, korak 2) u acetonitrilu (100 ml). Smeša je zatim degarisana azotom, pa je dodat [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1), (400 mg; 0,4 mmol). Reakciona smeša je zatim ponovo degasirana azotom, pa je grejana na 100°C tokom 4 sata. Smeša je dalje ostavljena da se ohladi do sobne temperature, pa je razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Organski slojevi su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom MgSO4, profiltrirani i koncentrovani da bi se dobio sirovi proizvod. Proizvod je prečišćen FCC postupkom na silika gelu, eluiranjem sa gradijent smešom heksana i EtOAc (0-100%). Tako je dobijen 5-(3-acetil-6-cijano-2-etoksi-5-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamidni proizvod u vidu žute čvrste supstance (2,3 g; 75 %). LCMS analiza, izračunato za C20H22N3O3(M+H)<+>: m/z = 352,1; utvrđeno: 352,2.

Korak 5: 5-[1-Cijano-6-etoksi-5-(1-hidroksietil)-3-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0770] Natrijum tetrahidroborat (370 mg; 9,8 mmol) je dodat u smešu 5-(3-acetil-6-cijano-2-etoksi-5-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (2,3 g; 6,5 mmol) u metanolu (100 ml) na 0°C. Reakciona smeša je zatim mešana na 0°C tokom 1 sata, pa je reakciona smeša preraspodeljena između vode i EtOAc. Organski slojevi su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom MgSO4, profiltrirani i koncentrovani, a da bi se dobio sirovi proizvod 5-[2-cijano-6-etoksi-5-(1-hidroksietil)-3-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid u vidu bistrog ulja (2,3 g; 99%). LCMS analiza, izračunato za C20H24N3O3(M+H)<+>: m/z = 354,1; utvrđeno: 354,2.

Korak 6: 5-[3-(1-Hloroetil)-6-cijano-2-etoksi-5-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0771] Tionil hlorid (900 µl; 10 mmol) je u kapima dodat u rastvor 5-[2-cijano-6-etoksi-5-(1-hidroksietil)-3-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (2,3 g; 6,5 mmol) u metilen hloridu (100 ml) i N,N-dimetilformamidu (100 µl), na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je zatim mešana tokom 3 sata, pa je razblažena metilen hloridom (100 ml) i isprana vodom i zasićenim rastvorom NaHCO3. Organski slojevi su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, pa su osušeni upotrebom MgSO4, profiltrirani i koncentrovani da bi se dobio sirov 5-[3-(1-hloroetil)-6-cijano-2-etoksi-5-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid (2,2 g; 91%). LCMS analiza, izračunato za C20H23ClN3O2(M+H)<+>: m/z = 372,1; utvrđeno: 372,2.

Korak 7: 5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-cijano-2-etoksi-5-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0772] Cezijum karbonat (4000 mg; 10 mmol) je dodat u smešu 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (1300 mg; 8,5 mmol) i 5-[3-(1-hloroetil)-6-cijano-2-etoksi-5-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (2,1 g; 5,6 mmol) u N,N-dimetilformamidu (100 ml). Reakciona smeša je zatim mešana na 80°C tokom 3 sata, a odvijanje reakcije je praćeno LC/MS postupkom. Reakciona smeša je dalje razblažena sa EtOAc, isprana vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana, a da bi se dobio sirovi proizvod. Proizvod je prečišćen FCC postupkom na silika gelu, eluiranjem sa gradijent smešom heksana i 10% EtOH u EtOAc (0-100%) i tako je dobijeno jedinjenje iz naslova (2,1 g; 77%). LCMS analiza, izračunato za C26H29N8O2(M+H)<+>: m/z = 485,2; utvrđeno: 485,2.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,70 - 8,63 (m, 1H), 8,10 (s, 1H), 8,06 (dd, J = 8,0; 2,2 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,51 (s, 1H), 6,34 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 3,59 - 3,47 (m, 1H), 3,33 (m, 1H), 3,03 (s, 3H), 2,96 (s, 3H), 2,57 (s, 3H), 2,45 (s, 3H), 1,79 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 0,90 (t, J = 7,0 Hz, 3H). Enantiomeri su razdvojeni hiralnim HPLC postupkom na koloni, upotrebom AD kolone (20 x 25 cm) i eluiranjem sa 30% etanolom u heksanima (brzina protoka 13 ml/min, naneta količina ∼ 5 mg po injeciranju) da bi se dobili sledeći podaci: retenciono vreme prvog pika: 1,63 minuta, 5-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-y1)etil]-6-cijano-2-etoksi-5-metilfenil}N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid; retenciono vreme drugog pika: 4,13 minuta, 5-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-cijano-2-etoksi-5-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid.

Primer 315. 4-[-1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-{1-[(2S)-2-hidroksipropil]azetidin-3-il}-3-metoksi-6-metilbenzonitril

[0773]

Korak 1: 4-Acetil-5-hidroksi-2-metilbenzonitril

[0774] 1-(4-Bromo-2-hidroksi-5-metilfenil)etanon (8,5 g; 37 mmol; Alfa Aesar, kataloški br. H29125) je pomešan sa cink cijanidom (8,7 g; 74 mmol) u N,N-dimetilformamidu (75 ml), pa je smeša degarisana azotom i dodati su tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (1,0 g; 1,1 mmol) i (9,9-dimetil-9H-ksanten-4,5-diil)bis(difenilfosfin) (1,5 g; 2,6 mmol). Reakciona smeša je zatim ponovo degasirana azotom i grejana na 120°C, a odvijanje reakcije je praćeno LC/MS postupkom. Nakon grejanja od 18 h, reakcija je bila završena u potpunosti, pa je reakciona smeša ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Smeša je zatim razmućena u etil acetatu, isprana vodom (2x) i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom magnezijum sulfata i koncentrovana da bi se dobio sirovi proizvod u vidu ulja tamne bolje ćilibara. Proizvod je prečišćen FCC postupkom na silika gelu, eluiranjem sa gradijent smešom heksana i etil acetata, a da bi se dobio 4-acetil-5-hidroksi-2-metilbenzonitril u vidu čvrste supstance (6,3 g; 98%). LCMS analiza, izračunato za C10H10NO2(M+H)<+>: m/z = 176,1; utvrđeno: 176,2.

Korak 2: 4-Acetil-3-hidroksi-2-jodo-6-metilbenzonitril

[0775] 4-Acetil-5-hidroksi-2-metilbenzonitril (6,7 g; 38 mmol) je rastvoren u sirćetnoj kiselini (80 ml), pa je dodat N-jodosukcinimid (10. g; 46 mmol). Reakciona smeša je zatim grejana na 80°C u uljanom kupatilu, a odvijanje reakcije je praćeno LC/MS postupkom. Nakon grejanja od 4 sata, reakcija je bila završena u potpunosti. Reakciona smeša je zatim ostavljena da se ohladi, pa je koncentrovana in vacuo i tako je dobijeno tamno ulje. Ulje je zatim razmućeno u etil acetatu i isprano vodom, natrijum bikarbonatom (3x, dok rastvor nije postao blago bazan) i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušeno upotrebom magnezijum sulfata i koncentrovano, a da bi se dobio sirovi proizvod u vidu tamnog ulja. Proizvod je dalje prečišćen FCC postupkom na silika gelu, eluiranjem sa gradijent smešom heksana i etil acetata, a da bi se dobio 4-acetil-3-hidroksi-2-jodo-6-metilbenzonitril u vidu bledo žute čvrste supstance (7,2 g; 62 %). LCMS analiza, izračunato za C10H9INO2(M+H)<+>: m/z = 301,9; utvrđeno: 301,9.

Korak 3: 4-Acetil-2-jodo-3-metoksi-6-metilbenzonitril

[0776] 4-Acetil-3-hidroksi-2-jodo-6-metilbenzonitril (5,0 g; 17 mmol) je rastvoren u N,N-dimetilformamidu (50 ml), pa su dodati kalijum karbonat (4,6 g; 33 mmol) i metil jodid (2,1 ml; 33 mmol). Reakciona smeša je zatim grejana na 60°C, a odvijanje reakcije je praćeno LC/MS postupkom. Nakon grejanja od 2 sata, reakcija je bila završena u potpunosti. Reakciona smeša je zatim ostavljena da se ohladi, pa je razblažena etil acetat (300 ml) i profiltrirana da bi se uklonila preostala čvrsta supstanca. Organski sloj je ispran vodom (3x) i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušen upotrebom magnezijum sulfata i koncentrovan da bi se dobio sirovi proizvod u vidu tamne čvrste supstance. Proizvod je prečišćen FCC postupkom na silika gelu, eluiranjem sa gradijent smešom heksana i etil acetata. Tako je dobijen 4-acetil-3-metoksi-2-jodo-6-metilbenzonitril u vidu bledo žute kristalne supstance (5,0 g; 96%). LCMS analiza, izračunato za C11H11INO2(M+H)<+>: m/z = 315,9; utvrđeno: 316,0.

Korak 4: terc-butil 3-(3-acetil-6-cijano-2-metoksi-5-metilfenil)azetidin-1-karboksilat

[0777] Cink (1,70 g; 26,0 mmol) i celit (osušen u sušnici, 500 mg) su odmereni i usitnjavani u laboratorijskom balonu sve dok čvrsta supstanca nije delovala homogeno, pa je balon grejan pod visokim vakuumom plamenikom tokom 5 minuta i potom je napunjen azotom. Čvrsta supstaca je resuspendovana u N,N-dimetilacetamidu (4,2 ml), pa je dodat 1,2-dibromoetan (0,13 ml; 1,5 mmol). Reakciona smeša je zatim grejana na 70°C tokom 30 minuta i potom je ohlađena do sobne temperature. Dalje je u kapima dodat hlorotrimetilsilan (0,16 ml; 1,3 mmol) i nastavljeno je mešanje smeše tokom 2 sata na sobnoj temperaturi. Nakon toga, polako je dodat rastvor terc-butil 3-jodoazetidin-1-karboksilata (2,70 g; 9,52 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (4,35 ml), pa je dobijena smeša grejana na 50°C tokom 2 sata. Cink-jodni reagens je ostavljen da se ohladi do sobne temperature i zatim je profiltriran upotrebom šprica i PTFE filtera (adaptiranog sa iglom) direktno u suspenziju tris(dibenzilidenaceton)dipaladijuma(0) (0,111 g; 0,121 mmol), tri-(2-furil)fosfina (0,056 g; 0,24 mmol) i 4-acetil-2-jodo-3-metoksi-6-metilbenzonitrila (2,0 g; 6,3 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (19,6 ml) prethodno degasiranom produvavanjem sa N2. Reakciona smeša je dalje ponovo degarisana azotom, pa je zagrejana do 70°C. Nakon grejanja od 30 minuta, shodno LC/MS analizi, reakcija je bila završena u potpunosti. Reakciona smeša je ostavljena da se ohladi, pa je razmućena u etil acetatu i isprana vodom i koncentrovanim rastvorom soli, osušena upotrebom magnezijum sulfata i koncentrovana da bi se dobio sirovi proizvod u vidu ulja. Proizvod je prečišćen FCC postupkom na silika gelu, eluiranjem sa gradijent smešom heksana i etil acetata, a da bi se dobio terc-butil 3-(3-acetil-6-cijano-2-metoksi-5-metilfenil)azetidin-1-karboksilat u vidu bistrog ulja. (1,8 g; 82%). LCMS analiza, izračunato za C15H17N2O4(M+H)<+>: m/z = 289,1; utvrđeno: 289,1.

Korak 5: terc-Butil 3-[2-cijano-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-3-metilfenil]azetidin-1-karboksilat

[0778] terc-Butil 3-(3-acetil-6-cijano-2-metoksi-5-metilfenil)azetidin-1-karboksilat (2,2 g; 6,4 mmol) je rastvoren u metanolu (20 ml), pa je rastvor ohlađen u ledenom kupatillu. U rastvor je zatim u porcijama dodat natrijum tetrahidroborat (0,26 g; 7,0 mmol) i odvijanje reakcije je praćeno LC/MS postupkom.

Nako mešanja od 1 h, reakcija je bila završena u potpunosti, pa je smeša razblažena etil acetatom i vode. Organski slojevi su spojeni, isprani vodom, zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata i koncentrovanim rastvorom soli, pa su osušeni upotrebom magnezijum sulfata i koncentrovani da bi se dobio sirov tercbutil 3-[2-cijano-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-3-metilfenil]azetidin-1-karboksilat u vidu žute penste supstance (2,1 g; 99%). LCMS analiza, izračunato za C15H19N2O4(M+H)<+>: m/z = 291,1; utvrđeno: 291,1.

Korak 6: terc-Butil 3-[3-(1-hloroetil)-6-cijano-2-metoksi-5-metilfenil]azetidin-1-karboksilat

[0779] terc-Butil 3-[2-cijano-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-3-metilfenil]azetidin-1-karboksilat (2,1 g; 6,4 mmol) je razmućen u metilen hloridu (50,0 ml) i N,N-dimetilformamidu (0,59 ml), ohlađenima u ledenom kupatilu, pa je polako dodat tionil hlorid (0,56 ml; 7,7 mmol). Nakon mešanja od 2 sata, shodno LC/MS analizi, reakcija je bila završena u potpunosti, pa je smeša preraspodeljena između etil acetatu i vode. Organski slojevi su spojeni, isprani vodom, zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata i koncentrovanim rastvorom soli, pa su osušeni upotrebom magnezijum sulfata i koncentrovani da bi se dobio sirov tercbutil 3-[3-(1-hloroetil)-6-cijano-2-metoksi-5-metilfenil]azetidin-1-karboksilat u vidu ulja (2,2 g; 100%). LCMS analiza, izračunato za C15H18ClN2O3(M+H)<+>: m/z = 309,1; utvrđeno: 309,1.

Korak 7: terc-Butil 3-{3-[-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-cijano-2-metoksi-5-metilfenil}azetidin-1-karboksilat

[0780] terc-Butil 3-[3-(1-hloroetil)-6-cijano-2-metoksi-5-metilfenil]azetidin-1-karboksilat (2,3 g; 6,3 mmol) je rastvoren u N,N-dimetilformamidu (68 ml) sa cezijum karbonatom (4,1 g; 13 mmol) i 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-aminom (1,4 g; 9,4 mmol), pa je smeša grejana u uljanom kupatilu na 80°C. Reakciona smeša je zatim mešana tokom 18 sati, pa je ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Reakciona smeša je dalje razmućena u etil acetatu, profiltrirana, isprana vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom magnezijum sulfata i koncentrovana da bi se dobio sirovi proizvod. Proizvod je prečišćen FCC postupkom na silika gelu, eluiranjem sa gradijent smešom heksana i 10% etanol etil acetata, a da bi se dobilo terc-butil 3-{3-[-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-cijano-2-metoksi-5-metilfenil}azetidin-1-karboksilat u vidu a polučvrste supstance (1,5 g; 50%). LCMS analiza, izračunato za C25H32N7O3(M+H)<+>: m/z = 478,2; utvrđeno: 478,2. Enantiomeri su dalje razdvojeni hiralnim HPLC postupkom na koloni, upotrebom Phenomenex Lux-Cellulose kolone (21,1 x 250 mm, veličina čestica 5 mikrona) i eluiranjem sa 15% etanolom u heksanima (brzina protoka 18 ml/min, naneta količina ∼ 5 mg po injeciranju). Tako je dobijeno sledeće: retenciono vreme prvog pika: 2,1 minut, terc-butil 3-{3-[-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-cijano-2-metoksi-5-metilfenil}azetidin-1-karboksilat; retenciono vreme drugog pika: 3,9 minuta, terc-butil 3-{3-[-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-cijano-2-metoksi-5-metilfenil}azetidin-1-karboksilat.

Korak 8: 4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-3-metoksi-6-metilbenzonitril bis(trifluoroacetat)

[0781] terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-cijano-2-metoksi-5-metilfenil}azetidin-1-karboksilat (0,35 g; 0,73 mmol) (korak 7, pik 1) je rastvoren u metilen hloridu (3,0 ml) i trifluorosirćetnoj kiselini (1,0 ml), na sobnoj temperaturi. Nakon mešanja od 1 sata, shodno LC/MS analizi, reakcija je bila završena u potpunosti. Reakciona smeša je zatim je koncentrovana in vacuo da bi se dobio 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-3-metoksi-6-metilbenzonitril (bis(trifluoroacetat) u vidu viskoznog ulja boje tamnog ćilibara (0,50 g; 100%). LCMS analiza, izračunato za C20H24N7O (M+H)<+>: m/z = 378,2; utvrđeno: 378,2.

Korak 9: 4-[-1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)eti/]-2-{1-[(2S)-2-hidroksipropil]azetidin-3-il}-3-metoksi-6-metilbenzonitril

[0782] 4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-3-metoksi-6-metilbenzonitril bis(trifluoroacetat) (0,074 g; 0,10 mmol) je rastvoren u etanolu (3,0 ml) i DIPEA (0,071 ml; 0,41 mmol), pa je dodat (S)-(-)-metiloksiran (0,0071 g; 0,12 mmol). Reakciona smeša je zatim grejana u zaptivenoj tubi na 90°C, a odvijanje reakcije je praćeno LC/MS postupkom. Nakon grejanja od 6 sati, reakciona smeša je prečišćena preparativnim HPLC postupkom bez podešavanja na C-18 koloni, eluiranjem sa gradijent smešom vode i acetonitrila koja je bila puferisana na pH 10, a da bi se dobilo jedinjenje iz naslova u vidu amorfne bele čvrste supstance (0,018 g; 40%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C23H30N7O2(M+H)<+>: m/z = 436,2; utvrđeno: 436,3.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,09 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 6,22 (q, J = 7,1 Hz, 1H), 4,34 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 4,09 - 3,83 (m, 3H), 3,60 (s, 3H), 3,58 - 3,51 (m, 1H), 3,12-2,95 (m, 2H), 2,55 (s, 3H), 2,33 (s, 3H), 2,27 (d, J = 5,9 Hz, 2H), 1,71 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,00 (d, J = 6,2 Hz, 3 H).

Primer 316. 4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-[6-(1-hidroksi-1-metiletil)piridin-3-il]benzonitril

[0783]

Korak 1.5-Bromo-N-metoksi-N-metilpiridin-2-karboksamid

[0784] U smešu N,N,N',N'-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uronijum heksafluorofosfata (1400 mg; 3,7 mmol), N,N-diizopropiletilamina (1000 µl; 7 mmol) i 5-bromopiridin-2-karboksilne kiseline (500 mg; 2 mmol; Frontier Scientific, kataloški br. B1704) u N,N-dimetilformamidu (10 ml) je dodat N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorid (500 mg; 5 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi preko noći, pa je LC/MS postupkom praćeno dok se reakcija nije završila u potpunosti. Reakciona smeša je zatim je preraspodeljena između vode i EtOAc. Organski slojevi su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom MgSO4, profiltrirani i koncentrovani, a da bi se dobio sirovi proizvod. Proizvod je zatim prečišćen FCC postupkom na silika gelu, eluiranjem sa gradijent smešom heksana i EtOAc (0-30%) i tako je dobijen 5-bromo-N-metoksi-N-metilpiridin-2-karboksamid u vidu bistrog ulja (0,50 g; 60%). LCMS analiza, izračunato za C8H10BrN2O2(M+H)<+>: m/z = 244,9, 246,9; utvrđeno: 244,9, 246,9.

Korak 2.1-(5-Bromopiridin-2-il)etanon

[0785] Metilmagnezijum hlorid 3,0 M u THF (0,5 ml) je u kapima dodat u smešu 5-bromo-N-metoksi-N-metilpiridin-2-karboksamida (200 mg; 0,8 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) na 0°C. Nakon mešanja od 1 sata na sobnoj temperaturi, reakcija je zaustavljena dodavanjem 1 N NH4Cl, pa je smeša ekstrahovana sa EtOAc. Organski slojevi su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom MgSO4i koncentrovani da bi se dobio sirovi proizvod 1-(5-bromopiridin-2-il)etanon (0,15 g; 90%). LCMS analiza, izračunato za C7H7BrNO (M+H)<+>: m/z = 199,9, 201,9; utvrđeno: 199,9, 201,9.

Korak 3.2-(5-Bromopiridin-2-il)propan-2-ol

[0786] Metilmagnezijum hlorid 3,0 M u THF (0,3 ml) je u kapima dodat u smešu 1-(5-bromopiridin-2-il)etanona (100 mg; 0,5 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) na 0°C. Nakon mešanja od 1 sata na sobnoj temperaturi, reakcija je zaustavljena dodavanjem 1 N NH4Cl, pa je smeša ekstrahovana sa EtOAc. Organski slojevi su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, pa su osušeni upotrebom MgSO4i koncentrovani da bi se dobio sirov 2-(5-bromopiridin-2-il)propan-2-ol (0,1 g; 100%). LCMS analiza, izračunato za C8H11BrNO (M+H)<+>: m/z = 215,9, 217,9; utvrđeno: 215,8, 217,8.

Korak 4. [6-(1-Hidroksi-1-metiletil)piridin-3-il] boronska kiselina

[0787] Smeša 2-(5-bromopiridin-2-il)propan-2-ola (70 mg; 0,3 mmol), 4,4,5,5,4',4',5',5'-oktametil-[2,2']bi[[1,3,2] dioksaborolanila] (90. mg; 0,36 mmol), [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijuma(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1), (10 mg; 0,01 mmol) i kalijum acetata (100 mg; 1 mmol) u 1,4-dioksanu (5 ml) je grejana na 120°C preko noći. Reakciona smeša je zatim praćena LC/MS postupkom dok nije u potpunosti bila završena, pa je koncentrovana in vacuo da bi se dobila sirova [6-(1-hidroksi-1-metiletil)piridin-3-il]boronska kiselina. LCMS analiza, izračunato za C8H13BNO3(M+H)<+>: m/z = 182,1; utvrđeno: 182,1.

Korak 5.4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-[6-(1-hidroksi-1-metiletil)piridin-3-il]benzonitril bis(2,2,2-trifluoroacetat)

[0788] Natrijum karbonat (10 mg; 0,09 mmol) u vodi (0,5 ml) je dodat u smešu 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-bromo-6-hloro-3-etoksibenzonitrila (20 mg; 0,04 mmol; racemski intermedijer iz Primera 43, korak 5) i [6-(1-hidroksi-1-metiletil)piridin-3-il]boronske kiseline (12 mg; 0,069 mmol; Primer 306, korak 4) u acetonitrilu (1 ml). Reakciona smeša je zatim degasirana sa N2, pa je dodat [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1), (2 mg; 0,002 mmol). Reakciona smeša je ponovo degasirana sa N2i grejana na 100°C tokom 1 sata. Reakciona smeša je zatim ostavljena da se ohladi do sobne temperature, pa je prečišćena preparativnim HPLC postupkom bez podešavanja na C-18 koloni, eluiranjem sa gradijent smešom vode i acetonitrila koja je bila puferisana sa TFA, a da bi se dobilo jedinjenje iz naslova u vidu amorfne bele čvrste supstance. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C25H27ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 492,1; utvrđeno: 492,1.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,60 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,96 (dd, J = 8,2, 2,3 Hz, 1H), 7,80 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,73 (s, 1H), 6,36 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 3,52- 3,40 (m, 1H), 3,40 - 3,30 (m, 1H), 2,59 (s, 3H), 1,80 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 1,48 (d, J = 2,3 Hz, 6H), 0,88 (t, J = 7,0 Hz, 3H).

Primer 317.4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-3-metoksi-6-metil-2-[5-(metilsulfonil)piridin-3-il]benzonitril

[0789]

[0790] Upotrebom procedura analognih procedurama opisanim u Primeru 314, ali upotrebom metil jodida umesto etil jodida u koraku 3, pripremljen je 4-acetil-2-jodo-3-metoksi-6-metilbenzonitril, dok je upotrebom 3-(metilsulfonil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridina umesto {6-[(dimetilamino)karbonil]piridin-3-il}boronske kiseline (racemski intermedijer iz koraka 4), pripremljeno jedinjenje iz naslova 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-3-metoksi-6-metil-2-[5-(metilsulfonil)piridin-3-il]benzonitril. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C23H24N7O3S (M+H)<+>: m/z = 478,1; utvrđeno: 478,2.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 9,24 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 9,03 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,59 (t, J = 2,1 Hz, 1H), 8,31 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 6,56 (q, J = 7,1 Hz, 1H), 3,38 (s, 3H), 3,31 (s, 3H), 2,72 (s, 3H), 2,59 (s, 3H), 1,98 (d, J = 7,1 Hz, 3H).

Primer 318. 4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-pirolidin-1-ilbenzonitril

[0791]

Korak 1.4-Acetil-6-hloro-3-etoksi-2-jodobenzonitril

[0792] 4-Acetil-6-hloro-3-etoksi-2-jodobenzonitril je pripremljen praćenjem postupaka analognih postupcima koji su opisani u Primeru 43, korci 1 i 2, ali upotrebom N-jodosukcinimida. LCMS analiza, izračunato za C11H10ClINO2(M+H)<+>: m/z = 349,9; utvrđeno: 350,0

Korak 2.4-Acetil-6-hloro-3-etoksi-2-pirolidin-1ilbenzonitril

[0793] 4-Acetil-6-hloro-3-etoksi-2-jodobenzonitril (0,20 g; 0,57 mmol) je pomešan sa pirolidinom (0,052 ml; 0,63 mmol) u N,N-dimetilformamidu (2,0 ml) i sa cezijum karbonatom (0,19 g; 0,57 mmol), pa je smeša grejana na 120°C u zaptivenoj tubi. Nakon grejanja od 18 sati, reakciona smeša je ostavljena da se ohladi, pa je razmućena u etil acetatu, isprana vodom i koncentrovanim rastvorom soli, osušena upotrebom magnezijum sulfata i koncentrovana da bi se dobio sirovi proizvod u vidu tamnog ulja. Proizvod je prečišćen FCC postupka na silika gelu, eluiranjem sa gradijent smešom heksana i etil acetata i tako je dobijen 4-acetil-6-hloro-3-etoksi-2-pirolidin-1-ilbenzonitril u vidu ulja (0,045 g; 27%). LCMS analiza, izračunato za C15H18ClN2O2(M+H)<+>: m/z = 293,1; utvrđeno: 293,1.

Korak 3.6-Hloro-3-etoksi-4-(1-hidroksietil)-2-pirolidin-1-ilbenzonitril

[0794] 4-Acetil-6-hloro-3-etoksi-2-pirolidin-1-ilbenzonitril (0,045 g; 0,15 mmol) je rastvoren u metanolu (3 ml), pa je rastvor ohlađen u ledenom kupatilu. Zatim je u rastvor dodat natrijum tetrahidroborat (0,0058 g; 0,15 mmol) i odvijanje reakcije je praćeno LC/MS postupkom. Nakon mešanja od 1 h, reakciona smeša je razmućena u etil acetatu, pa je isprana vodom, natrijum bikarbonatom i koncentrovanim rastvorom soli i osušena upotrebom magnezijum sulfata da bi se dobio sirov 6-hloro-3-etoksi-4-(1-hidroksietil)-2-pirolidin-1-ilbenzonitril u vidu bistrog ulja (0,045 g; 100%). LCMS analiza, izračunato za C15H20ClN2O2(M+H)<+>: m/z = 295,1; utvrđeno: 295,1.

Korak 4.6-Hloro-4-(1-hloroetil)-3-etoksil-pirolidin-1-ilbenzonitril

[0795] U metilen hloridu (3,0 ml) i N,N-dimetilformamidu (0,002 ml; 0,03 mmol) je razmućen 6-hloro-3-etoksi-4-(1-hidroksietil)-2-pirolidin-1-ilbenzonitril (0,045 g; 0,15 mmol), pa je rastvor ohlađen u ledenom kupatilu. Zatim je dodat tionil hlorid (0,017 ml; 0,23 mmol) i odvijanje reakcije je praćeno LC/MS postupkom. Nakon mešanja od 2 sata, reakcija je bila završena u potpunosti. Reakciona smeša je zatim razmućena u etil acetatu, isprana natrijum bikarbonatom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom magnezijum sulfata i koncentrovana da bi se dobio sirov 6-hloro-4-(1-hloroetil)-3-etoksi-2-pirolidin-1-ilbenzonitril u vidu žutog ulja (0,048 g; 100%). LCMS analiza, izračunato za C15H19Cl2N2O (M+H)<+>: m/z = 313,1; utvrđeno: 313,1.

Korak 5.4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-pirolidin-1-ilbenzonitril

[0796] 6-Hloro-4-(1-hloroetil)-3-etoksi-2-pirolidin-1-ilbenzonitril (0,048 g; 0,15 mmol; racemska smeša) je pomešan sa 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-aminom (0,034 g; 0,23 mmol) i cezijum karbonatom (0,10 g; 0,31 mmol) u N,N-dimetilformamidu (3,0 ml), pa je smeša grejana u uljanom kupatilu na 85°C. Nakon grejanja od 18 sata, reakcija je bila završena u potpunosti. Sirova smeša je zatim prečišćena preparativnim HPLC postupkom bez podešavanja na C-18 koloni, eluiranjem sa gradijent smešom vode i acetonitrila koja je bila puferisana na pH 10, a da bi se dobilo jedinjenje iz naslova u vidu amorfne bele čvrste supstance (0,012 g; 18%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C21H25ClN7O (M+H)<+>: m/z = 426,1; utvrđeno: 426,1.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,11 (s, 1H), 6,91 (s, 1H), 6,25 (q, J = 7,1 Hz, 1H), 3,71 (dp, J = 15,7; 8,1; 7,2 Hz, 4H), 3,49 - 3,35 (m, 2H), 2,55 (s, 3H), 2,00 -1,76 (m, 4H), 1,70 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,34 (t, J = 7,0 Hz, 3H).

Primer 319. 4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-(3-metoksiazetidin-1-il)benzonitril

[0797]

Korak 1.4-Acetil-6-hloro-3-etoksi-2-(3-metoksiazetidin-1-il)benzonitril

[0798] U smešu 4-acetil-6-hloro-3-etoksi-2-jodobenzonitrila (50 mg; 0,1 mmol; Primer 318, korak 1), 3-metoksiazetidin hidrohlorida (21 mg; 0,17 mmol; Chem-Impex, kataloški br. 20140) i cezijum karbonata (70. mg; 0,21 mmol) u 1,4-dioksanu (4 ml) su dodati (9,9-dimetil-9H-ksanten-4,5-diil)bis(difenilfosfin) (40 mg; 0,07 mmol) i tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum (0) (60 mg; 0,07 mmol). Reakciona smeša je zatim degasirana sa N2, pa je grejana na 80°C tokom 2 sata i odvijanje reakcije je praćeno LC/MS postupkom. Po završetku reakcije, smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature, pa je zatim razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Organski slojevi su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom MgSO4, profiltrirani i koncentrovani, a da bi se dobio sirovi proizvod. Proizvod je potom prečišćen FCC postupkom na silika gelu, eluiranjem sa gradijent smešom heksana i EtOAc (0-70%). Tako je dobijen 4-acetil-6-hloro-3-etoksi-2-(3-metoksiazetidin-1-il)benzonitril u vidu bistrog ulja (0,030 g; 70%). LCMS analiza, izračunato za C15H18ClN2O3(M+H)<+>: m/z = 309,1; utvrđeno: 309,1.

Korak 2.6-Hloro-3-etoksi-4-(1-hidroksietil)-2-(3-metoksiazetidin-1-il)benzonitril

[0799] 4-Acetil-6-hloro-3-etoksi-2-(3-metoksiazetidin-1-il)benzonitril (30 mg; 0,1 mmol) je rastvoren u metanolu (5 ml), pa je rastvor ohlađen do 0°C i dodat je natrijum tetrahidroborat (5,5 mg; 0,14 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana tokom 1 h na 0°C, pa je preraspodeljena između EtOAc i vode. Organski slojevi su spojeni, isprani vodom, zasićenim rastvorom NaHCO3i koncentrovanim rastvorom soli, pa su osušeni upotrebom Na2SO4, profiltrirani i koncentrovani da bi se dobio sirov 6-hloro-3-etoksi-4-(1-hidroksietil)-2-(3-metoksiazetidin-1-il)benzonitril (0,030 g; 100%). LCMS analiza, izračunato za C15H20ClN2O3(M+H)<+>: m/z = 311,1; utvrđeno: 311,1.

Korak 3.6-Hloro-4-(1-hloroetil)-3-etoksi-2-(3-metoksiazetidin-1-il)benzonitril

[0800] U metilen hloridu (5 ml) i N,N-dimetilformamidu (100 µl; 1 mmol) je rastvoren 6-hloro-3-etoksi-4-(1-hidroksietil)-2-(3-metoksiazetidin-1-il)benzonitril (30 mg; 0,1 mmol) (racemska smeša). Zatim je na sobnoj temperaturi u kapima doda tionil hlorid (18 µl; 0,24 mmol) i reakciona smeša je mešana tokom 2 sata. Reakciona smeša je zatim je razblažena sa EtOAc, isprana vodom, zasićenim rastvorom NaHCO3i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana da bi se dobio sirov 6-hloro-4-(1-hloroetil)-3-etoksi-2-(3-metoksiazetidin-1-il)benzonitril (0,030 g; 100%). LCMS analiza, izračunato za C15H19Cl2N2O3(M+H)<+>: m/z = 329,1; utvrđeno: 329,1.

Korak 4.4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-(3-metoksidzetidin-1-il)benzonitril

[0801] Cezijum karbonat (50 mg; 0,2 mmol) je dodat u smešu 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (16 mg; 0,10 mmol) i 6-hloro-4-(1-hloroetil)-3-etoksi-2-(3-metoksiazetidin-1-il)benzonitrila (30 mg; 0,09 mmol) u N,N-dimetilformamidu (3 ml; 40 mmol), pa je reakciona smeša mešana na 80°C preko noći. Smeša je zatim razblažena sa EtOAc, isprana vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana da bi se dobio sirov proizvod. Proizvod je dalje prečišćen preprativnim HPLC postupkom na C-18 koloni, eluiranjem sa gradijent smešom vode i acetonitrila koja je bila puferisana na pH 10, i tako je dobijeno jedinjenje iz naslova u vidu amorfne bele čvrste supstance (0,007 g; 20%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C21H25ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 442,1; utvrđeno: 442,1.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,11 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 6,18 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 4,58-4,44 (m, 2H), 4,18 (m, 1H), 4,13 - 4,01 (m, 2H), 3,81 - 3,62 (m, 2H), 3,23 (s, 3H), 2,55 (s, 3H), 1,69 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,35 (t, J = 7,0 Hz, 3H).

Primer 320. 4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-3-etoksi-2-(1-izopropilazetidin-3-il)-6-metilbenzonitril

[0802]

Korak 1: 4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-3-etoksi-6-metilbenzonitril bis(trifluoroacetat)

[0803] Upotrebom postupaka analognih postupcima opisanim u Primeru 315, ali upotrebom etil jodida u koraku 3 umesto metil jodida, pripremljen je intermedijer 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-3-etoksi-6-metilbenzonitril bis(trifluoroacetat). LCMS analiza, izračunato za C21H26N7O (M+H)<+>: m/z = 392,2; utvrđeno: 392,2.

Korak 2.4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1il)etil]-3-etoksi-2-(1-izopropilazetidin-3-il)-6-metilbenzonitril

[0804] U smešu 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-3-etoksi-6-metilbenzonitrila (70 mg; 0,2 mmol) u metanolu (50 ml) su dodati aceton (0,1 ml; 2 mmol) i natrijum cijanoborohidrid (17 mg; 0,27 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata, pa je reakcija praćena LC/MS postupkom dok se nije u potpunosti završila. Reakcija je dalje zaustavljena dodavenjem vode, pa je smeša ekstrahovana sa EtOAc. Organski slojevi su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom MgSO4, profiltrirani i koncentrovani da bi se dobio sirovi proizvod. Proizvod je prečišćen preprativnim HPLC postupkom na C-18 koloni, eluiranjem sa gradijent smešom vode i acetonitrila koja je bila puferisana pH 10, a da bi se dobilo jedinjenje iz naslova u vidu amorfne bele čvrste supstance (0,030 g; 40%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS analiza, izračunato za C24H32N7O (M+H)<+>: m/z = 434,2; utvrđeno: 434,3.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 8,17 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 6,37 (q, J = 7,1 Hz, 1H), 4,17 - 3,98 (m, 4H), 3,90 - 3,71 (m, 3H), 2,65 (s, 3H), 2,46 (s, 4H), 1,84 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,42 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 1,03 (dd, J = 6,2, 1,4 Hz, 6H).

Primer 321. 4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-3-etoksi-2-[1-(2-hidroksi-2-metilpropil)azetidin-3-il]-6-metilbenzonitril

[0805]

[0806] 4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-3-etoksi-6-metilbenzonitril (0,055 g; 0,14 mmol; hiralni intermedijer iz Primera 320, korak 1) je pomešan sa tetrahidrofuranom (22 ml), DIPEA (0,049 ml; 0,28 mmol) i 2,2-dimetil-oksiranom (0,018 ml; 0,21 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je zatim grejana na 95°C preko noći, pa je ostavljena da se ohladi do sobne temperature i dalje je prečišćena preparativnim HPLC postupkom bez podešavanja, na C-18 koloni, eluiranjem sa gradijent smešom vode i acetonitrila koja je bila puferisana do pH 10, a da bi se dobilo jedinjenje iz naslova u vidu amorfne bele čvrste supstance (0,035 g; 50%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C25H34N7O2(M+H)<+>: m/z = 464,3; utvrđeno: 464,3.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,09 (s, 1H), 7,23 (s, 1H), 6,21 (q, J = 6,8 Hz, 1H), 4,00 (m, 4H), 3,81 - 3,54 (m, 2H), 3,15 (m, 2H), 2,53 (s, 3H), 2,33 (s, 3H), 2,27 (bs, 2H), 1,70 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,30 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,04 (s, 6H).

Primer 322. 4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-3-etoksi-2-[1-(2-hidroksi-2-metilpropanoil)azetidin-3-il]-6-metilbenzonitril

[0807]

[0808] 4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-3-etoksi-6-metilbenzonitril (0,075 g; 0,10 mmol; hiralni intermedijer iz Primera 320, korak 1) je rastvoren u N,N-dimetilformamidu (3,0 ml) i DIPEA (0,089 ml; 0,51 mmol), pa su dodati 2-hidroksi-2-metil-propanska kiselina (0,013 g; 0,12 mmol) i N,N,N',N'-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uronijum heksafluorofosfat (0,058 g; 0,15 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 sati, a rekcija je praćena LC/MS postupkom dok se nije u potpunosti završila. Proizvod je prečišćen preparativnim HPLC postupkom bez podešavanja, na C-18 koloni, eluiranjem sa gradijent smešom vode i acetonitrila koja je bila puferisana do pH 10 da bi se dobilo jedinjenje iz naslova u vidu amorfne bele čvrste supstance (0,025 g; 51%). Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer. LCMS analiza, izračunato za C25H32N7O3(M+H)<+>: m/z = 478,2; utvrđeno: 478,2.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,10 (s, 1H), 7,29 (s, 1H), 6,24 (q, J = 6,8 Hz, 1H), 5,07 (s, 1H), 4,90 - 4,75 (m, 1H), 4,73 - 4,58 (m, 1H), 4,39 (p, J = 8,5 Hz, 1H), 4,30 - 4,05 (m, 2H), 3,75 (d, J = 7,1 Hz, 2H), 2,54 (s, 3H), 2,38 (s, 3H), 1,72 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,35 (t, J = 6,1 Hz, 3H), 1,26 (s, 3H), 1,23 (s, 3H).

Sintetisana jedinjenja

[0809] Eksperimentalne procedure za jedinjenja iz Primera 326-344 su sumirane u Tabelama 7 i 8.

Tabela 7

Tabela 8

Analitički podaci

[0810]<1>H NMR podaci (Varian Inova 500 spektrometar, Mercury 400 spektrometar ili Varian (ili Mercury) 300 spektrometar), kao i LCMS podaci masenog spektra (MS) za jedinjenja iz Primera 326-344 obezbeđeni su u Tabeli 9.

Tabela 9

Primeri 310 i 311. Dijastereoizomeri 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}pirolidin-2-ona

[0811]

Korak 1.1-(5-Hloro-2-etoksi-3-jodo-4-metilfenil)etanol

[0812] Traženo jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure koja je opisana u Primeru 212, korak 4 (racemska smeša), upotrebom 1-(5-hloro-2-etoksi-3-jodo-4-metilfenil)etanona umesto terc-butil 3-(3-acetil-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil)azetidin-1-karboksilata kao polaznog materijala, pri čemu je prinos iznosio 94%, a dobijena smeša je predstavljala smešu enantiomera u odnosu 96:4 (retenciona vremena = 3,56 min i 4,28 min; Chiral Technologies ChiralPak AD-H kolona, 20 x 250 mm, veličina čestica 5 mikrona, eluiranje 5% etanolom u heksanima, brzina protoka 1 ml/min). LCMS analiza, izračunato za C11H13ClIO (M-(OH))<+>: m/z = 323,0; utvrđeno: 322,9.

Korak 2.1-[1-(5-Hloro-2-etoksi-3-jodo-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0813] Traženo jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure koja je opisana u Primeru 212, korak 5, upotrebom 1-(5-hloro-2-etoksi-3-jodo-4-metilfenil)etanola (96:4 smeša iz koraka 1) umesto terc-butil 3-[3-hloro-2-cijano-6-etoksi-5-(1-hidroksietil)fenil]azetidin-1-karboksilata kao polaznog materijala, pri čemu je prinos iznosio 32%, a dobijeno je jedinjenja u vidu pojedinačnog enantiomera (traženi pik 1, retenciono vreme = 3,39 min; ChiralPak IA kolona, 20 x 250 mm, veličina čestica 5 mikrona, eluiranje sa 3% etanolom u heksanima, brzina protoka 18 ml/min). LCMS analiza, izračunato za C17H20ClIN5O (M+H)<+>: m/z = 472,0; utvrđeno: 472,0.

Korak 3. Metil (2E)-3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-I-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}akrilat

[0814] Suspenzija 1-[1-(5-hloro-2-etoksi-3-jodo-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (pik 1, pojedinačni izomer iz koraka 2) (0,61 g; 1,3 mmol) u acetonitrilu (7,4 ml) je degasirana azotom u zapečaćanoj vajli. Smeša je zatim tretirana trifenilfosfinom (0,048 g; 0,18 mmol), metil akrilatom (0,41 ml; 4,5 mmol) i paladijum acetatom (0,029 g; 0,13 mmol), nakon čega je dodat i trietilamin (0,54 ml; 3,9 mmol) i smeša je grejana na 100°C tokom 16 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena do sobne temperature, pa je profiltrirana, a čvrsta supstanca je isprana acetonitrilom, dok je filtrat je koncentrovan do ostatka. Sirov materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom etil acetata (koji je sadržavao 3% metanol) u heksanima (0% - 100%), a da bi se dobio traženi proizvod (0,40 g; 72%). LCMS analiza, izračunato za C21H25ClN5O3(M+H)<+>: m/z = 430,2; utvrđeno: 430,2.

Korak 4. Dijastereoizomeri metil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-4-nitrobutanoata

[0815] Rastvor metil (2E)-3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}akrilata (0,40 g; 0,93 mmol) u nitrometanu (6,3 ml) je tretiran 1,8-diazabiciklo[5,4,0]andek-7-enom (0,14 ml; 0,93 mmol), pa je mešan na 90°C tokom 22 h. Reakciona smeša je zatim koncentrovana, razblažena metanolom i prečišćena preparativnim LCMS postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila u vodi koja je sadržavala 0,1% trifluorosirćetnu kiselinu, brzina protoka 60 ml/min). LCMS frakcije su koncentrovane da bi se uklonio acetonitril, pa je smeša tretirana čvrstim natrijum bikarbonatom i ekstrahovana etil acetatom. Etil acetat je dalje koncentrovan da bi se dobio traženi proizvod (0,22 g; 48%) u vidu smeše dijastereoizomera. LCMS analiza, izračunato za C22H28ClN6O5(M+H)<+>: m/z = 491,2; utvrđeno: 491,2.

Korak 5. Dijastereoizomeri 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-1-etoksi-6-metilfenil}pirolidin-2-ona

[0816] Rastvor metil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-4-nitrobutanoata (0,089 g; 0,18 mmol) u metanolu (1,3 ml) je tretiran nikl hlorid heksahidratom (0,087 g; 0,36 mmol), pa je mešana tokom 5 min. Reakciona smeša je zatim ohlađena do 0°C, tretirana natrijum tetrahidroboratom (0,073 g; 1,9 mmol) koji je dodat u četiri porcije, pa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Reakciona smeša je dalje grejana na 60°C tokom 1,5 sata, pa je ohlađena do sobne temperature i zatim razblažena zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (10 ml) i dihlorometanom (25 ml) i profiltrirana kroz celit. Čep celita je potom ispran dihlorometanom, a filtrat je prebačen u novi levak. Organski sloj je izdvojen, ispran koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušen upotrebom natrijum sulfata, profiltriran i koncentrovan do ostatka. Sirov ostatak je razblažen metanolom i prečišćen preparativnim LCMS postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 60 ml/min) da bi se dobilo traženi dijastereoizomer pika 1 (16 mg; 21%) i dijastereoizomer pika 2 (19 mg; 24%). Pik 1 (Jedinjenje 310):<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,10 (s, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,34 (s, 1H), 6,21 (q, J = 7,1 Hz, 1H), 4,38 - 4,22 (m, 1H), 3,93 - 3,80 (m, 1H), 3,79 - 3,67 (m, 1H), 3,65 - 3,55 (m, 1H), 3,28 - 3,20 (m, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,29 (dd, J = 17,5, 8,3 Hz, 1H), 2,21 (s, 3H), 1,70 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 1,40 (t, J = 6,9 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C21H26ClN6O2(M+H)<+>: m/z = 429,2; utvrđeno: 429,2. Pik 2 (Jedinjenje 311):<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,11 (s, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 6,20 (q, J = 7,1 Hz, 1H), 4,38 - 4,22 (m, 1H), 3,90 - 3,68 (m, 2H), 3,65 - 3,56 (m, 1H), 3,28 - 3,17 (m, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,32 (dd, J = 17,3, 8,5 Hz, 1H), 2,21 (s, 3H), 1,69 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 1,39 (t, J = 6,9 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C21H26ClN6O2(M+H)<+>: m/z = 429,2; utvrđeno: 429,2.

Primer 323.4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-(2-okso-1,3-oksazolidin-5-il)benzonitril

[0817]

Korak 1.4-Acetil-6-hloro-3-etoksi-2-vinilbenzonitril

[0818] Smeša 4-acetil-6-hloro-3-etoksi-2-jodobenzonitrila (1,3 g; 3,6 mmol), 4,4,5,5-tetrametil-2-vinil-1,3,2-dioksaborolana (740 µl; 4,3 mmol), [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijuma(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1), (100 mg; 0,20 mmol) i kalijum karbonata (1,5 g; 11 mmol) u 1,4-dioksanu (20 ml) i vodi (10 ml) je grejana na 80°C preko noći. Smeša je zatim ohlađena do sobne temperature, pa je ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakti su zatim isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom natrijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani. Prečišćavanjem na silika gelu, upotrebom etil acetata u heksanima (0-20%) je dobijeno traženo jedinjenje, 780 mg; 87%. LCMS analiza, izračunato za C13H13ClNO2(M+H)<+>: m/z = 250,1; utvrđeno: 250,1.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,78 (s, 1H), 6,83 (m, 1H), 6,10 (m, 1H), 5,83 (m, 1H), 3,84 (m, 2 H), 2,58 (s, 3 H), 1,22 (m, 3 H).

Korak 2. terc-Butil [2-(3-acetil-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil)-2-hidroksietil]karbamat

[0819] U rastvor terc-butil [(4-hlorobenzoil)oksi]karbamata (ref. Lawrence Harris, J. Org.Chem, 2011, 76, 358-372) (0,91 g; 3,3 mmol) u acetonitrilu (10 ml) je dodat 0,2 M osmijum tetraoksid u vodi (0,5 ml), pa je rastvor mešan tokom 10 minuta. Zatim je u vidu rastvora dodat 4-acetil-6-hloro-3-etoksi-2-vinilbenzonitril (0,56 g; 2,2 mmol) u acetonitrilu (10 ml), a dalje je dodato još vode (2 ml) i reakciona smeša je mešana tokom 3 sata na sobnoj temperaturi. Reakcija je potom zaustavljena dodavanjem zasićenog 10 M dikalijum disulfita u vodi (12 ml). Mešanje smeše je nastavljeno tokom 5 minuta, pa je ponovo dodata voda i reakciona smeša je ekstrahovan etil acetatom. Ekstrakti su potom isprani zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata i koncentrovanim rastvorom soli, pa su osušeni upotrebom natrijum sulfata, profiltrirani i upareni. Prečišćavanjem na silika gelu, upotrebom etil acetata u heksanu (0-100%) je dobijeno traženo jedinjenje u vidu racemske smeše, 610 mg; 72%. LCMS analiza, izračunato za C18H24ClN2O5(M+H)<+>: m/z = 383,1; utvrđeno: 383,1.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,62 (s, 1H), 7,03 (br s, 1H), 5,68 (br s, 1H), 3,96 (m, 1H), 3,69 (m, 1H), 3,31 (m, 1H), 3,19 (m, 1H), 2,60 (s, 3 H), 1,30 (m, 12 H).

Korak 3.4-Acetil-6-hloro-3-etoksi-2-(2-okso-1,3-oksazolidin-5-il)benzonitril

[0820] terc-Butil [2-(3-acetil-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil)-2-hidroksietil]karbamat (290 mg; 0,76 mmol) (racemska smeša iz koraka 2) je tretirana 4,0 M rastvorom hidrogen hlorida u 1,4-dioksanu (6,1 ml) tokom 15 minuta, pa je smeša uparena. Ostatak je rastvoren u tetrahidrofuranu (2,3 ml) i N,N-diizopropiletilaminu (0,66 ml; 3,8 mmol). Zatim je dodat N,N-karbonildiimidazol (250 mg; 1,5 mmol) i reakciona smeša je refluksovana na 70°C preko noći, pa uparena. Prečišćavanjem na silika gelu, upotrebom etil acetata u heksanu (0-100%) je dobijeno traženo jedinjenje u vidu racemske smeše, 110 mg; 47%. LCMS analiza, izračunato za C14H14ClN2O4(M+H)<+>: m/z = 309,1; utvrđeno: 309,1.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,00 (br s, 1H), 7,93 (s, 1H), 5,99 (m, 1H), 3,89 (m, 1H), 3,81 (m, 2 H), 3,52 (m, 1H), 2,58 (s, 3 H), 1,23 (m, 3 H).

Korak 4.6-Hloro-3-etoksi-4-(1-hidroksietil)-2-(2-okso-1,3-oksazolidin-5-il)benzonitril

[0821] Natrijum tetrahidroborat (19 mg; 0,50 mmol) je dodat u smešu 4-acetil-6-hloro-3-etoksi-2-(2-okso-1,3-oksazolidin-5-il)benzonitrila (100 mg; 0,34 mmol) (racemska smeša iz koraka 3) u metanolu (1,6 ml; 38 mmol) na 0°C, pa je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta i uparena. Ostatak je razblažen etil acetatom, ispran sa 1 N HCl i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušen upotrebom natrijum sulfata, profiltriran i koncentrovan da bi se dobilo traženo jedinjenje u vidu smeše četiri dijastereomera, 58 mg; 55%. LCMS analiza, izračunato za C14H16ClN2O4(M+H)<+>: m/z = 311,1; utvrđeno: 311,1.

Korak 5.6-Hloro-4-(1-hloroetil)-3-etoksi-2-(2-okso-1,3-oksazolidin-5-il)benzonitril

[0822] U smešu 6-hloro-3-etoksi-4-(1-hidroksietil)-2-(2-okso-1,3-oksazolidin-5-il)benzonitrila (58 mg; 0,19 mmol) (smeša četiri dijastereomera iz koraka 4) i N,N-dimetilformamida (36 µl) u metilen hloridu (1 ml) je dodat tionil hlorid (40 µl; 0,56 mmol), pa je smeša mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 minuta Smeša je zatim razblažena metilen hloridom, isprana zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom natrijum sulfata, profiltrirana i koncentrovana. Tako je dobiijeno traženo jedinjenje u vidu smeše četiri dijastereomera, 55 mg; 91%. LCMS analiza, izračunato za C14H15Cl2N2O3(M+H)<+>: m/z = 329,0; utvrđeno: 329,1.

Korak 6.4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-(2-okso-1,3-oksazolidin-5-il)benzonitril

[0823] Cezijum karbonat (0,11 g; 0,34 mmol) je dodat u smešu 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (30 mg; 0,20 mmol) (smeša četiri dijastereomera iz koraka 5) u N,N-dimetilformamidu (0,91 ml), pa je smeša mešana tokom 10 minuta. U smešu je zatim dodat 6-hloro-4-(1-hloroetil)-3-etoksi-2-(2-okso-1,3-oksazolidin-5-il)benzonitril (56 mg; 0,17 mmol) u N,N-dimetilformamidu (1,0 ml) i reakciona smeša je mešana na 90°C tokom 1 sata. Prečišćavanje preparativnim LCMS postupkom (pH 10) upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) je dobijeno traženo jedinjenje u vidu pika 1 (racemska smeša dva dijastereomera) - LCMS analiza, izračunato za C20H21ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 442,1; utvrđeno: 442,1.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,17 (s, 1H), 8,00 (br s, 1H), 7,79 (s, 1H), 6,25 (m, 1H), 5,92 (m, 1H), 3,90 (m, 3 H), 3,57 (m, 1H), 2,58 (s, 3 H), 1,75 (m, 3 H), 1,40 (m, 3 H); ili pika 2 (racemska smeša dva dijastereomera) - LCMS analiza, izračunato za C20H21ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 442,1; utvrđeno: 442,1.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,12 (s, 1H), 8,00 (br s, 1H), 7,71 (s, 1H), 6,23 (m, 1H), 5,96 (m, 1H), 3,85 (m, 3 H), 3,58 (m, 1H), 2,58 (s, 3 H), 1,75 (m, 3 H), 1,40 (m, 3 H).

[0824] Hiralno prečiščavanje pika 2 (racemska smeša dva dijastereomera) na Phenomenex Lux Cellulose-1 koloni (21,2 x 250 mm, veličina čestica 5 mikrona, brzina protoka 18 ml/min), upotrebom 20% etanola u heksanima obezbedila je jedinjenje pika 3 i pika 4. Pik 3, retenciono vreme = 12,22 minuta (pojedinačni enantiomer): LCMS analiza, izračunato za C20H21ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 442,1; utvrđeno: 442,1.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,12 (s, 1H), 7,98 (br s, 1H), 7,71 (s, 1H), 6,23 (m, 1H), 5,96 (m, 1H), 3,85 (m, 3 H), 3,58 (m, 1H), 2,58 (s, 3 H), 1,75 (m, 3 H), 1,40 (m, 3 H). Pik 4, retenciono vreme = 16,25 minuta (pojedinačni enantiomer). LCMS analiza, izračunato za C20H21ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 442,1; utvrđeno: 442,1.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,12 (s, 1H), 7,98 (br s, 1H), 7,71 (s, 1H), 6,23 (m, 1H), 5,96 (m, 1H), 3,85 (m, 3 H), 3,58 (m, 1H), 2,58 (s, 3 H), 1,75 (m, 3 H), 1,40 (m, 3 H).

Primer 324.6-{3-[1-(4-Amino-3-metil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}morfolin-3-on

[0825]

Korak 1.1-(5-Hloro-2-metoksi-4-metil-3-vinilfenil)etanon

[0826] Smeša 1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanona (2,6 g; 9,5 mmol), 4,4,5,5-tetrametil-2-vinil-1,3,2-dioksaborolana (1,9 ml; 11 mmol), [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijuma(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1), (400 mg; 0,5 mmol) i kalijum karbonata (4,0 g; 29 mmol) u 1,4-dioksanu (60 ml) i vodi (30 ml) je grejana na 80°C tokom 3 sata. Smeša je zatim ohlađena do sobne temperature, pa je ekstrahovana etil acetatom. Prečišćavanje na silika gelu, upotrebom etil acetata u heksanima (0-20%) je dobijeno traženo jedinjenje, 2,0 g; 94%. LCMS analiza, izračunato za C12H14ClO2(M+H)<+>: m/z = 225,1; utvrđeno: 225,1.

Korak 2. terc-Butil [2-(3-acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-2-hidroksietil]karbamat

[0827] U rastvor terc-butil [(4-hlorobenzoil)oksi]karbamata (2,0 g; 7,2 mmol) (ref. Lawrence Harris, J. Org.Chem, 2011, 76, 358-372) u acetonitrilu (22 ml) je dodat 0,2 M osmijum tetraoksid u vodi (1 ml), pa je smeša mešana tokom 10 minuta. Zatim je dodat 1-(5-hloro-2-metoksi-4-metil-3-vinilfenil)etanon (1,1 g; 4,8 mmol) u vidu rastvora u acetonitrilu (22 ml), pa je dodato još vode (5 ml). Reakciona smeša je zatim mešana tokom 3 sata na sobnoj temperaturi, pa je reakcije zaustavljena dodavanjem zasićenog 10 M dikalijum disulfita u vodi (25 ml) i mešanje smeše je nastavljeno tokom 5 minuta. U reakcionu smešu je dalje dodata voda, nakon čega je smeša ekstrahovana etil acetatom. Organski ekstrakti su isprani zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata i koncentrovanim rastvorom soli, pa su osušeni upotrebom natrijum sulfata i upareni pod sniženim pritiskom. Prečišćavanjem na silika gelu, upotrebom etil acetata u heksanu (0-100%) je dobijeno traženo jedinjenje u vidu racemske smeše, 1,2 g; 69%. LCMS analiza, izračunato za C17H24ClNO5Na (M+Na)<+>: m/z = 380,1; utvrđeno: 380,1.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 7,48 (s, 1H), 6,80 (m, 1H), 5,50 (br s, 1H), 5,20 (br s, 1H), 3,83 (s, 3 H), 3,32 (m, 1H), 3,22 (m, 1H), 2,59 (s, 3 H), 2,55 (s, 3 H), 1,32 (s, 9 H). Hiralnim prečišćavanjem na ChiralPak AD-H koloni (20 x 250 mm (Chiral Technologies), veličina čestica 5 mikrona, brzina protoka 18 ml/min), upotrebom 8% etanola u heksanima dobijen je proizvod iz pika 1 (pojedinačni enantiomer) (retenciono vreme = 9,86 minuta) i pika 2 (pojedinačni enantiomer) (retenciono vreme = 11,47 minuta).

Korak 3. N-[2-(3-Acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-2-hidroksietil]-2-hloroacetamid

[0828] terc-Butil [2-(3-acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-2-hidroksietil]karbamat (170 mg; 0,47 mmol) (pik 1 iz koraka 2) je tretiran 4,0 M rastvorom hidrogen hlorida u 1,4-dioksanu (12 ml) tokom 15 minuta. Rastvarači su zatim upareni, pa su dodati metilen hlorid (6 ml) i trietilamin (200 µl; 1,4 mmol) i smeša je ohlađena do 0°C. Dalje je polako dodavan hloroacetil hlorid (45 µl; 0,56 mmol) i smeša je mešana tokom 10 minuta na 0°C. Ponovo su upareni rastvarači, ovaj put do suva, pa je dodata voda i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Organski ekstrakti su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom natrijum sulfata i koncentrovani da bi se dobio sirov ostatak u vidu pojedinačnog enantiomera. LCMS analiza, izračunato za C14H17Cl2NO4Na (M+Na)<+>: m/z = 356,1; utvrđeno: 356,1.

Korak 4.6-(3-Acetil-5-hloro-1-metoksi-6-metilfenil)morfolin-3-on

[0829] U rastvor N-[2-(3-acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-2-hidroksietil]-2-hloroacetamida (170 mg; 0,50 mmol (pojedinačni enantiomer iz koraka 3) u tetrahidrofuranu (4 ml), ohlađen do 0°C, je dodata smeša natrijum hidrida (60%, disperzija u mineralnom ulju; 39 mg; 1,0 mmol), pa je dobijena smeša mešana tokom 1 sata. Reakcija je zatim zaustavljena dodavanjem vode i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakti su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom natrijum sulfata i koncentrovani da bi se dobio sirov ostatak u vidu pojedinačnog enantiomera, 61 mg; 41%. LCMS analiza, izračunato za C14H17ClNO4(M+H)<+>: m/z = 298,1; utvrđeno: 298,1.

Korak 5.6-[3-Hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]morfolin-3-on

[0830] U rastvor 6-(3-acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)morfolin-3-ona (27 mg; 0,090 mmol) (pojedinačni enantiomer iz koraka 4) u metanolu (2 ml) je dodat natrijum tetrahidroborat (6,8 mg; 0,18 mmol) na 0°C, pa je rastvor mešan tokom 1 sata. Prečišćavanje preparativnim LCMS postupkom (pH 10) je dobijeno traženo jedinjenje u vidu racemske smeše dva dijastereomera, 20 mg; 76%. LCMS analiza, izračunato za C14H17ClNO3(M-OH)<+>: m/z = 282,1; utvrđeno: 282,1.

Korak 6.6-[3-Hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]morfolin-3-on

[0831] Smeša tionil hlorida (15 µl; 0,21 mmol) i N,N-dimetilformamida (10,0 µl) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta. Zatim je dodat rastvor 6-[3-hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]morfolin-3-ona (19,0 mg; 0,0634 mmol) (racemska smeša dva dijastereomera iz koraka 5) u metilen hloridu (1,0 ml) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je dalje razblažena metilen hloridom, isprana zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom natrijum sulfata, profiltrirana i koncentrovana da bi se dobilo traženo jedinjenje u vidu racemske smeše dva dijastereomera, 19 mg; 94%. LCMS analiza, izračunato za C14H17ClNO3(M-Cl)<+>: m/z = 282,1; utvrđeno: 282,1.

Korak 7.6-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}morfolin-3-on

[0832] Smeša 6-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]morfolin-3-ona (19,0 mg; 0,0597 mmol) (racemska smeša dva dijastereomera iz koraka 6), 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (11 mg; 0,072 mmol), cezijum karbonata (29 mg; 0,090 mmol) i kalijum jodida (0,99 mg; 0,006 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,19 ml) je grejana na 140°C tokom 1 sata. Smeša je zatim razblažena etrom, isprana vodom, koncentrovana i prečišćena preparativnim LCMS postupkom (pH 10) upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min), a da bi se dobilo 2,5 mg; 10% jedinjenja pika 1 (pojedinačni enantiomer, retenciono vreme 10,15 min): LCMS analiza, izračunato za C20H24ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 431,2; utvrđeno: 431,1, i 2,7 mg; ili 10% jedinjenja pika 2 (pojedinačni enantiomer, retenciono vreme 10,76 min): LCMS analiza, izračunato za C20H24ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 431,2; utvrđeno: 431,1.

Primer 325.5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-1,3-oksazolidin-2-on

[0833]

Korak 1.5-(3-Acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-1,3-oksazolidin-2-on

[0834] U rastvor terc-butil [2-(3-acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-2-hidroksietil]karbamata (140 mg; 0,40 mmol) (pik 1, pojedinačni enantiomer iz koraka 2, Primer 324) u tetrahidrofuranu (2,5 ml) su dodati N,N-diizopropiletilamin (0,35 ml; 2,0 mmol) i N,N-karbonildiimidazol (130 mg; 0,80 mmol). Reakciona smeša je zatim refluksovana na 70°C tokom 10 minuta, pa je uparena do suva. Prečišćavanjem na silika gelu, upotrebom (0-50%) etil acetata u heksanu je dobijeno traženo jedinjenje u vidu pojedinačnog enantiomera, 78 mg; 69%. LCMS analiza, izračunato za C13H15ClNO4(M+H)<+>: m/z = 284,1; utvrđeno: 284,1.

Korak 2.5-[3-Hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]-1,3-oksazolidin-2-on

[0835] U rastvor 5-(3-acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-1,3-oksazolidin-2-ona (21 mg; 0,072 mmol) (pojedinačni enantiomer iz koraka 1) u metanolu (1 ml) je dodat natrijum tetrahidroborat (5,5 mg; 0,14 mmol) na 0°C. Smeša je zatim mešana na 0°C tokom 1 sata, pa je razblažena metanolom i prečišćena preparativnim LCMS postupkom, upotrebom pH 10 pufera, a da bi se dobilo traženo jedinjenje u vidu racemske smeše dva dijastereomera, 17 mg; 83%. LCMS analiza, izračunato za C13H15ClNO3(M-OH)<+>: m/z = 268,1; utvrđeno: 268,1.

Korak 3.5-[3-Hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]-1,3-oksazolidin-2-on

[0836] Smeša cijanurin-hlorida (16 mg; 0,084 mmol) i N,N-dimetilformamida (15 µl) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta. Zatim je dodat rastvor 5-[3-hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]-1,3-oksazolidin-2-ona (16 mg; 0,056 mmol) (racemska smeša dva dijastereomera iz koraka 2) u metilen hloridu (0,3 ml) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dalje je dodat tionil hlorid (12 µl; 0,17 mmol), pa je mešanje smeše nastavljeno još 10 min. Smeša je zatim razblažena metilen hloridom, isprana zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, vodom i koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušena upotrebom natrijum sulfata, profiltrirana i koncentrovana da bi se dobilo traženo jedinjenje u vidu racemske smeše dva dijastereomera, 17 mg; 100%. LCMS analiza, izračunato za C13H16Cl2NO3(M+H)<+>: m/z = 304,0; utvrđeno: 304,1.

Korak 4.5-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-1,3-oksazolidin-2-on

[0837] Smeša 5-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]-1,3-oksazolidin-2-ona (17 mg; 0,056 mmol) (racemska smeša dva dijastereomera iz koraka 3), 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (10 mg; 0,067 mmol), cezijum karbonata (27 mg; 0,084 mmol) i kalijum jodida (0,93 mg; 0,0056 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0,18 ml) je grejana na 140°C tokom 1 sata. Smeša je zatim razblažena etrom, isprana vodom, koncentrovana i prečišćena preparativnim LCMS postupkom (pH 10) da bi se dobilo traženo jedinjenje u vidu racemske smeše dva dijastereomera, 2,2 mg; 9%; LCMS analiza, izračunato za C19H22ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 417,1; utvrđeno: 417,1.

Primeri 345-348. Dijastereoizomeri 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo(3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}pirolidin-2-ona

[0838]

Korak 1.1-(5-Hloro-2-etoksi-3-jodo-4-metilfenil)etanol

[0839]

[0840] Rastvor 1-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-jodofenil)etanona (20,0 g; 58,4 mmol; Primer 212, korak 1) i 1,2-etandiola (6,5 ml; 120 mmol) u toluenu (190 ml) je tretiran monohidratom p-toluenesulfonske kiseline (1,1 g; 5,8 mmol). Balon je zatim namešten na Dean-Stark-ov sistem ispunjen materijalom za prosejavanje i grejan na temperaturi refluksa tokom 3 h. Reakciona smeša je dalje ohlađena, pa je u nju dodat zasićen rastvor natrijum bikarbonata (250 ml) ohlađen u ledenom kupatillu i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je ispran koncentrovanim rastvorom soli, osušen upotrebom natrijum sulfata, profiltriran i koncentrovan do sirovog narandžastog ulja. Sirov materijal je dalje prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom etil acetata u heksanima (0% - 20%). Tako je dobijen traženi proizvod (22 g; 99%). LCMS analiza, izračunato za C12H14ClFIO3(M+H)<+>: m/z = 387,0; utvrđeno: 386,9.

Korak 2. Etil (2E)-3-[3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(2-metil-1,3-dioksolan-2-il)fenil]akrilat

[0841]

[0842] Smeša 2-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-jodofenil)-2-metil-1,3-dioksolana (22 g; 58 mmol) (iz koraka 1), etil (2E)-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)akrilata (16 ml; 70 mmol) i kalijum karbonata (24 g; 170 mmol) u 1,4-dioksanu (230 ml) i vodi (110 ml) je degarisana azotom tokom 10 min. Reakciona smeša je zatim tretirana [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijumom(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1), (2,4 g; 2,9 mmol), pa je smeša ponovo degarisana azotom tokom dodatnih 10 min i dalje grejana na 80°C tokom 2 h. Smeša je potom profiltrirana kroz celit, pa je čep celita ispran etil acetatom (300 ml), a filtrat je prebačen u vodu (400 ml). Dalje je izdvojen vodeni sloj koji je potom ekstrahovan dodatnim etil acetatom (300 ml). Organski ekstrakti su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom natrijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani do sirove braon čvrste supstance. Sirov materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom etil acetata u heksanima (0% - 30%), a da bi se dobio traženi proizvod (20 g; 96%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,74 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,70 (dd, J = 16,5; 0,9 Hz, 1H), 4,26 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 4,10 - 3,99 (m, 2H), 3,91 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 3,87 - 3,76 (m, 2H), 1,73 (s, 3H), 1,44 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 1,33 (t, J = 7,1 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C17H21ClFO5(M+H)<+>: m/z = 359,1; utvrđeno: 359,1.

Korak 3. Etil 3-[3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(2-metil-1,3-dioksolan-2-il)fenil]-4-nitrobutanoat

[0843]

[0844] Rastvor etil (2E)-3-[3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(2-metil-1,3-dioksolan-2-il\)fenil]akrilata (10 g; 28 mmol) (iz koraka 2) u nitrometanu (100 ml) je tretiran 1,8-diazabiciklo[5,4,0]andek-7-enom (4,6 ml; 31 mmol), pa je mešan na 60°C tokom 15 h. Reakciona smeša je zatim presuta u vodu (400 ml) i dalje je ekstrahovana etil acetatom (2 x 300 ml). Organski ekstrakti su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom natrijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani do sirovog narandžastog ulja. Sirov materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom etil acetata u heksanima (0% - 30%), a da bi se dobio traženi proizvod u vidu smeše enantiomera (10,4 g; 89%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,52 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 4,82 (ddd, J = 12,5, 7,6, 1,4 Hz, 1H), 4,68 (dd, J = 12,5, 7,2 Hz, 1H), 4,54-4,40 (m, 1H), 4,15 - 3,90 (m, 6H), 3,89 - 3,75 (m, 2H), 2,85 (ddd, J = 16,0, 8,6, 1,4 Hz, 1H), 2,73 (dd, J = 16,1, 6,2 Hz, 1H), 1,70 (s, 3H), 1,47 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 1,21 (t, J = 7,1 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C18H24ClFNO7(M+H)<+>: m/z = 420,1; utvrđeno: 420,1.

Korak 4. Enantiomeri 4-[3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(2-metil-1,3-dioksolan-2-il)fenil]pirolidin-2-ona

[0845]

[0846] Suspenzija etil 3-[3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(2-metil-1,3-dioksolan-2-il)fenil]-4-nitrobutanoata (1,0 g; 2,4 mmol) (iz koraka 3) u etanolu (16 ml) je zagrejana da bi se rastvorila čvrsta supstanca. Rastvor je zatim ponovo ohlađen do sobne temperature, pa je smeša degarisana azotom i tretirana amorfnim katalizatorom Raney-ovog nikla tipa 2800 u vodi (1,5 ml). Reakciona smeša je dalje ponovo degasirana azotom, pa je hidrogenizovana u balonu, vodonikom tokom 3 h. Reakciona smeša je zatim profiltrirana kroz celit i koncentrovana da bi se dobio intermedijerni amino estar (0,93 g; 100%). Intermedijerni amino estar je rastvoren u toluenu (12 ml) koji je dalje grejan na 110°C tokom 12 h. Nakon hlađenja, došlo je do taloženja čvrste supstance. Navedena susupenzija je zatim ohlađena do 0°C, pa je mešana tokom 30 min, profiltrirana, isprana hladnim toluenom i osušena da bi se dobio traženi proizvod u vidu smeše enantiomera (0,61 g; 75%). LCMS analiza, izračunato za C16H20ClFNO4(M+H)<+>: m/z = 344,1; utvrđeno: 344,1. Enantiomeri su razdvojeni hiralnim HPLC postupkom da bi se dobili pojedinačni enantiomeri u vidu pika 1 i pika 2 (retenciona vremena = 5,39 min i 7,01 min, tim redom; Phenomenex Lux Cellulose C-1, 21,2 x 250 mm, veličina čestica 5 mikrona, eluiranje sa 20% etanolom u heksanima, brzina protoka 18 ml/min).

Korak 5. Enantiomeri 4-(3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-ona

[0848] Razdvojeni enantiomeri iz koraka 4 su pojedinačno obrađeni do konačnih jedinjenja. Rastvor 4-[3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(2-metil-1,3-dioksolan-2-il)fenil]pirolidin-2-ona (1,7 g; 5,0 mmol) (iz koraka 4) u metanolu (17 ml) je tretiran u kapima 6,0 M hidrogen hloridom u vodi (11 ml; 69 mmol), pa je mešan 20°C tokom 30 min. Zatim je reakciona smeša u kapima dodata u ledeni zasićen rastvor natrijum bikarbonata (75 ml), nakon čega je ekstrahovana etil acetatom (2 x 100 ml). Organski ekstrakti su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom natrijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani da bi se dobili traženi proizvodi [iz pika 1 (1,5 g; 99%); iz pika 2 (1,5 g; 99%)] koji su dalje iskorišćeni bez dodatnog prečišćavanja. Pik 1:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,84 (s, 1H), 7,70 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 4,16-3,99 (m, 1H), 3,83 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 3,65 - 3,54 (m, 1H), 3,30 - 3,23 (m, 1H), 2,55 (s, 3H), 2,33 (dd, J = 16,8; 8,4 Hz, 1H), 1,30 (t, J = 7,0 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C14H16ClFNO3(M+H)<+>: m/z = 300,1; utvrđeno: 300,0. Pik 2:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,84 (s, 1H), 7,70 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 4,13 - 4,00 (m, 1H), 3,87 - 3,77 (m, 2H), 3,65 - 3,55 (m, 1H), 3,31 - 3,23 (m, 1H), 2,55 (s, 3H), 2,32 (ddd, J = 16,9; 8,4; 1,6 Hz, 1H), 1,30 (t, J = 7,0 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C14H16ClFNO3(M+H)<+>: m/z = 300,1; utvrđeno: 300,1.

Korak 6. Dijastereoizomeri 4-[3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(1-hidroksietil)fenil]pirolidin-2-ona

[0849]

[0850] Enantiomeri iz koraka 5 su pojedinačno procesuirani do finalnih proizvoda. Rastvor 4-(3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-ona (0,402 g; 1,34 mmol) (iz koraka 5) u anhidrovanom metanolu (6,7 ml) je, na 0°C, u atmosferi azota tretiran natrijum tetrahidroboratom (0,10 g; 2,7 mmol), pa je smeša mešana na 0°C tokom 30 min. Reakcija je zatim zaustavljena dodavanjem vode na 0°C i smeša je presuta u smešu vode (50 ml) i etil acetata (100 ml) uz mešanje. Smeša je dalje zagrejana do sobne temperature, pa je izdvojen vodeni sloji koji je ekstrahovan dodatnim etil acetatom (50 ml). Organski ekstrakti su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom natrijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani da bi se dobila bela penasta supstanca. Sirov material je prečišćen fleš hromatografijom, upotrebom acetonitrila (koji je sadržavao 7% metanola) u dihlorometanu (0% - 100%), a da bi se dobili traženi proizvodi u vidu smeša dijastereoizomera [iz pika 1 (0,40 g; 99%); iz pika 2 (0,40 g; 99%)]. Pik 1: LCMS analiza, izračunato za C14H18ClFNO3(M+H)<+>: m/z = 302,1; utvrđeno: 302,0. Pik 2: LCMS analiza, izračunato za C14H18ClFNO3(M+H)<+>: m/z = 302,1; utvrđeno: 302,1.

Korak 7. Dijastereoizomeri 4-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-etoksi-2-fluorofenil]pirolidin-2-ona

[0851]

[0852] Dijastereoizomeri iz koraka 6 su pojedinačno procesuirani do finalnih proizvoda. Rastvor 4-[3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(1-hidroksietil)fenil]pirolidin-2-ona (0,41 g; 1,4 mmol) (iz koraka 6) u metilen hloridu (12 ml) je tretiran N,N-dimetilformamidom (0,011 ml; 0,14 mmol), pa je u kapima dodat i tionil hlorid (0,21 ml; 2,9 mmol) i smeša je mešana na 20°C tokom 30 min. Reakciona smeša je zatim u kapima dodata u ledeni zasićeni rastvor natrijum bikarbonata, pa je ekstrahovana dihlorometanom. Organski sloj je izdvojen i ispran koncentrovanim rastvorom soli, pa je osušen upotrebom natrijum sulfata, profiltriran i koncentrovan da bi se dobili traženi proizvodi [iz pika 1 (0,38 g; 87%); iz pika 2 (0,39 g; 89%)] uporedo sa 17-18% stirenom koji se obarazovao usled eliminacije hlorida. Navedene smeše su dalje upotrebljene bez dodatnog prečišćavanja. Pik 1: LCMS analiza, izračunato za C14H17Cl2FNO2(M+H)<+>: m/z = 320,1; utvrđeno: 320,0. Pik 2: LCMS analiza, izračunato za C14H17Cl2FNO2(M+H)<+>: m/z = 320,1; utvrđeno: 320,0.

Korak 8. Dijastereoizomeri 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}pirolidin-2-ona

[0853]

[0854] Dijastereoizomeri iz koraka 7 su pojedinačno procesuirani do finalnih proizvoda. Smeša 4-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-etoksi-2-fluorofenil]pirolidin-2-ona (0,36 g; 1,1 mmol) (iz koraka 7), 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (0,19 g; 1,3 mmol), cezijum karbonata (0,54 g; 1,7 mmol) i kalijum jodida (18 mg; 0,11 mmol) u N,N-dimetilformamidu (7,4 ml) je grejana na 100°C tokom 4,5 sata. Reakciona smeša je zatim presuta u vodu (30 ml), pa je ekstrahovana etil acetatom (3 x 50 ml) da bi se dobila smeša dijastereoizomera ((S)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-ona; (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-ona; (S)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-ona; i (R)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-meti1-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-ona). Dijastereoizomeri su zatim prečišćeni preparativnim LCMS postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 60 ml/min) da bi se dobili traženi proizvodi [iz pika 1 su izolovani pik A (Jedinjenje 345) (0,13 g; 54%) i pik B (Jedinjenje 346) (0,11 g; 46%); iz pika 2 su izolovani pik A (Jedinjenje 347) (0,15 g; 63%) i pik B (Jedinjenje 348) (0,14 g; 55%)]. Jedinjenje 346:<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,12 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,52 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,30 (br s, 1H), 6,23 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 4,05 - 3,90 (m, 1H), 3,88 - 3,78 (m, 2H), 3,63 - 3,53 (m, 1H), 3,29 - 3,20 (m, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,38 - 2,21 (m, 1H), 1,70 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,39 (t, J = 6,9 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C20H23ClFN6O2(M+H)<+>: m/z = 433,2; utvrđeno: 433,1. Jedinjenje 347:<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,12 (s, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,53 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,26 (br s, 2H), 6,24 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 4,04-3,94 (m, 1H), 3,93 - 3,85 (m, 1H), 3,84- 3,77 (m, 1H), 3,61 - 3,53 (m, 1H), 3,27 - 3,22 (m, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,30 (dd, J = 18,1, 8,6 Hz, 1H), 1,71 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,40 (t, J = 6,9 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C20H23ClFN6O2(M+H)<+>: m/z = 433,2; utvrđeno: 433,1.

Primeri 349-352. Dijastereoizomeri 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-(5-oksopirolidin-3-il)benzonitrila

[0855]

Korak 1. Enantiomeri 4-acetil-6-hloro-3-etoksi-2-(5-oksopirolidin-3-il)benzonitrila

[0856]

[0857] Racemska smeša 4-(3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-ona (0,20 g; 0,67 mmol) (iz Primera 345, korak 5) i natrijum cijanida (0,057 g; 1,2 mmol) u dimetil sulfoksidu (1,5 ml) je mešana na 80°C tokom 3 h. Reakciona smeša je zatim presuta u vodu (35 ml), pa je ekstrahovana etil acetatom (2 x 50 ml). Organski ekstrakti su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom natrijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani da bi se dobio sirov ostatak. Sirov materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom etra (koji je sadržavao 10% metanol) u heksanima (0% - 100%), a da bi se dobio traženi proizvod (0,15 g; 71%) u vidu smeše enantiomera. LCMS analiza, izračunato za C15H16ClN2O3(M+H)<+>: m/z = 307,1; utvrđeno: 307,0. Smeša enantiomera je razdvojena hiralnim HPLC postupkom da bi se dobili individualni enantiomeri u vidu pika 1 i pika 2 (retenciona vremena = 5,00 min i 10,4 min; Phenomenex Lux Cellulose C-2, 21,2 x 250 mm, veličina čestica 5 mikrona, eluiranje sa 60% etanolom u heksanima, brzina protoka 18 ml/min).

Korak 2. Dijastereoizomeri 6-hloro-3-etoksi-4-(1-hidroksietil)-2-(5-oksopirolidin-3-il)benzonitrila

[0858]

[0859] Enantiomeri iz koraka 1 su pojedinačno procesuirani do finalnih proizvoda. Rastvor 4-acetil-6-hloro-3-etoksi-2-(5-oksopirolidin-3-il)benzonitrila (iz pika 1: 0,83 g; 2,7 mmol; iz pika 2: 0,86 g; 2,8 mmol) u anhidrovanom metanolu (14 ml) su, na 0°C u atmosferi azota, tretirani natrijum tetrahidroboratom (0,20 g; 5,4 mmol), pa su mešani na 0°C tokom 30 min. Reakcija je zatim zaustavljena dodavanjem vode na 0°C i smeša je presuta u smešu vode (50 ml) i etil acetata (100 ml) uz mešanje. Smeša je dalje zagrejana do sobne temperature, pa je izdvojen vodeni sloj koji je potom ekstrahovan dodatnim etil acetatom (50 ml). Organski ekstrakti su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom natrijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani da bi se dobili traženi proizvodi u vidu smeša dijastereoizomera [pik 1 (0,83 g; 99%); pik 2 (0,87 g; 99%)]. Pik 1: LCMS analiza, izračunato za C15H18ClN2O3(M+H)<+>: m/z = 309,1; utvrđeno: 309,1. Pik 2: LCMS analiza, izračunato za C15H18ClN2O3(M+H)<+>: m/z = 309,1; utvrđeno: 309,1.

Korak 3. Dijastereoizomeri 6-hloro-4-(1-hloroetil)-3-etoksi-2-(5-oksopirolidin-3-il)benzonitrila

[0860]

[0861] Dijastereoizomeri iz koraka 2 su pojedinačno procesuirani do finalnih proizvoda. Rastvor 6-hloro-3-etoksi-4-(1-hidroksietil)-2-(5-oksopirolidin-3-il)benzonitrila (pik 1: 0,83 g; 2,7 mmol; pik 2: 0,87 g; 2,8 mmol) u metilen hloridu (23 ml) je tretiran N,N-dimetilformamidom (0,021 ml; 0,27 mmol), pa je u kapima dodat i tionil hlorid (0,490 ml; 6,72 mmol) i smeša je mešana na 20°C tokom 2 h. Reakciona smeša je zatim u kapima dodata u ledeni zasićeni rastvor natrijum bikarbonata, pa je ekstrahovana dihlorometanom. Organski sloj je izdvojen i ispran koncentrovanim rastvorom soli, osušen upotrebom natrijum sulfata, profiltriran i koncentrovan da bi se dobili traženi proizvodi u vidu smeša dijastereoizomera [pik 1 (0,85 g; 97%); pik 2 (0,90 g; 98%)]. Navedene smeše su dalje upotrebljene bez dodatnog prečišćavanja. Pik 1: LCMS analiza, izračunato za C15H17Cl2N2O2(M+H)<+>: m/z = 327,1; utvrđeno: 327,1. Pik 2: LCMS analiza, izračunato za C15H17Cl2N2O2(M+H)<+>: m/z = 327,1; utvrđeno: 327,1.

Korak 4. Dijastereoizomeri 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-(5-oksopirolidin-3-il)benzonitrila

[0862]

[0863] Dijastereoizomeri iz koraka 3 su pojedinačno procesuirani do finalnih proizvoda. Smeša 6-hloro-4-(1-hloroetil)-3-etoksi-2-(5-oksopirolidin-3-il)benzonitrila (iz pika 1: 0,85 g; 2,6 mmol; iz pika 2: 0,89 g; 2,7 mmol), 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (0,46 g; 3,1 mmol), cezijum karbonata (1,3 g; 3,9 mmol) i kalijum jodida (43 mg; 0,26 mmol) u N,N-dimetilformamidu (17 ml; 220 mmol) je grejana na 90°C tokom 3 h. Reakciona smeša je zatim presuta u smešu vode (100 ml) i etil acetata (100 ml), pa je profiltrirana kroz celit da bi se uklonile crna čvrsta supstanca. Dalje je izdvojen vodeni sloj koji je potom ekstrahovan etil acetatom (2 x 100 ml). Organski ekstrakti su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom natrijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani da bi se dobila bela penasta supstanca. Sirov material je prečišćen fleš hromatografijom na koloni, upotrebom metanola u dihlorometanu (0% - 20%), a da bi se dobili traženi proizvodi u vidu smeša dijastereoizomera [pik 1 (0,49 g; 43%); pik 2 (0,53 g; 44%)]. Analitička hiralna HPLC analiza dijastereoizomera pika 1 ukazala je da su u smeši prisutna četiri umesto dva pika usled epimerizacije. Analiza dijastereoizomera pika 2 takođe je ukazala na prisustvo četiri pika. Oba seta smeša su spojena i prečišćena hiralnim HPLC postupkom da bi se dobila četiri pojedinačna izomera (retenciona vremena = 6,41 min, 8,13 min, 9,93 min, 14,4 min; Phenomenex Lux Cellulose C-2, 21,2 x 250 mm, veličina čestica 5 mikrona, eluiranje 60% etanolom u heksanima, brzina protoka 18 ml/min). Jedinjenja pika 1 (Jedinjenje 351), pika 2 (Jedinjenje 349), pika 3 (Jedinjenje 352) i pika 4 (Jedinjenje 350) su zatim ispitana u testovima navedenim u Primerima A3 i B2. Jedinjenje 349:<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,12 (s, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,30 (br s, 2H), 6,26 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 4,32- 4,20 (m, 1H), 4,00 - 3,91 (m, 1H), 3,90 - 3,81 (m, 1H), 3,65 - 3,59 (m, 1H), 3,49 -3,42 (m, 1H), 2,55 (s, 3H), 1,74 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 1,43 (t, J = 6,9 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C21H23ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 440,2; utvrđeno: 440,2. Jedinjenje 352:<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,12 (s, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,30 (br s, 2H), 6,26 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 4,32- 4,19 (m, 1H), 3,97 - 3,82 (m, 2H), 3,67 - 3,59 (m, 1H), 3,49 - 3,40 (m, 1H), 2,59 - 2,52 (m, 3H), 1,73 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 1,42 (t, J = 6,9 Hz, 3H). LCMS analiza, izračunato za C21H23ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 440,2; utvrđeno: 440,2.

Primeri 353 i 354. Dijastereomeri 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}-1,3-oksazolidin-2-ona

[0864]

Korak 1:1-(5-Hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-vinilfenil)etanon

[0865]

[0866] Smeša 1-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-jodofenil)etanona (13,3 g; 38,8 mmol) (iz Primera 139, korak 1), 4,4,5,5-tetrametil-2-vinil-1,3,2-dioksaborolana (7,9 ml; 46 mmol), [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijuma(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1), (1,0 g; 1,0 mmol) i kalijum karbonata (16 g; 120 mmol) u 1,4-dioksanu (200 ml) i vodi (100 ml) je grejana na 80°C tokom 2 sata. Smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i dalje je ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakti su isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom natrijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani. Prečišćavanjem na silika gelu, upotrebom etil acetata u heksanima (0-30%) je dobijeno traženo jedinjenje, 7,0 g; 74%. LCMS analiza, izračunato za C12H13ClFO2(M+H)<+>: m/z = 243,0; utvrđeno: 243,1.

Korak 2: 1-[5-Hloro-3-(1,2-dihidroksietil)-2-etoksi-4-fluorofenil]etanon

[0867]

[0868] AD-smeša-alfa (5,8 g; 7,3 mmol) (Aldrich, kataloški br.392758) je mešana u terc-butil alkoholu (21 ml) sa vodom (21 ml) tokom 15 minuta. Zatim je dodat 1-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-vinilfenil)etanon (1,0 g; 4,1 mmol) (iz koraka 1) i suspenzija je mešana tokom 16 sati. Dalje je dodat natrijum sulfit (6,2 g; 49 mmol), pa je suspenzija mešana još 15 minuta. Reakciona smeša je dalje ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakti su potom isprani koncentrovanim rastvorom soli i osušeni upotrebom natrijum sulfata, pa su profiltrirani i upareni. Prečišćavanjem na silika gelu, upotrebom etil acetata u heksanima (0-80%), je dobijeno traženo jedinjenje u vidu racemske smeše, 900 mg; 80%. Hiralnim prečišćavanjem na Phenomenex Lux Cellulose C-2 koloni (21,2 x 250 mm (Chiral Technologies), veličina čestica 5 mikrona, brzina protoka 18 ml/min), upotrebom 20% etanola u heksanima dobijeno je jedinjenja iz pika 1 (pojedinačni enantiomer) (retenciono vreme = 7,88 minuta) i pika 2 (pojedinačni enantiomer) (retenciono vreme = 11 minuta); prioritetni enantiomer je enantiomer pika 2. LCMS analiza, izračunato za C12H13ClFO3(M-OH)<+>: m/z = 259,1; utvrđeno: 259,1.

Korak 3: 1-[3-(2-{[terc-Butil(dimetil)silil]oksi}-1-hidroksietil)-5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil]etanon

[0869]

[0870] 1-[5-Hloro-3-(1,2-dihidroksietil)-2-etoksi-4-fluorofenil]etanon (700 mg; 2 mmol) (iz koraka 2, pik 2) je mešan u 1,2-dihloroetanu (6 ml) sa N,N-diizopropiletilaminom (4,0 ml; 23 mmol), pa je dodat 1,0 M rastvor terc-butildimetilsilil hlorida u 1,2-dihloroetanu (7,6 ml). Smeša je zatim grejana na 80°C tokom 3 sata, pa je ohlađena do sobne temperature. Uparavanjem i prečišćavanjem na silika gelu, upotrebom etil acetata u heksanima (0-50%), je dobijeno traženo jedinjenje - 800 mg; 80%. LCMS analiza, izračunato za C18H28ClFO4SiNa (M+Na)<+>: m/z = 413,1; utvrđeno: 413,1.

Korak 4: 1-(3-Acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)-2-{[terc-butil(dimetil)silil]oksi}etil metansulfonat

[0871]

[0872] 1-[3-(2-{[terc-Butil(dimetil)silil]oksi}-1-hidroksietil)-5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil]etanon (700 mg; 2,0 mmol) (iz koraka 3) je mešan u 1,2-dihloroetanu (15 ml) sa trietilaminom (2,0 ml; 14 mmol) i anhidridom metansulfonske kiseline (670 mg; 3,8 mmol) na sobnoj temperaturi tokom 1,5 sata. Smeša je zatim presuta u koncentrovani rastvor soli, pa je ekstrahovana dihlorometanom. Ekstrakti su osušeni upotrebom natrijum sulfata, profiltrirani i upareni, a da bi se dobilo traženo jedinjenje 830 mg; 100%. LCMS analiza, izračunato za C18H27ClFO3Si (M-OMs)<+>: m/z = 373,1; utvrđeno: 373,1.

Korak 5: 1-[3-(1-Azido-2-{[terc-butil(dimetil)silil]oksi}etil)-5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil]etanon

[0873]

[0874] 1-(3-Acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)-2-{[terc-butil(dimetil)silil]oksi}etil metansulfonat (0,83 g; 1,77 mmol) (iz koraka 4) je mešan u dimetil sulfoksidu (10 ml), pa je dodat natrijum azid (0,12 g; 1,8 mmol). Smeša je zatim grejana na 50°C tokom 1 sata, pa je ohlađena do sobne temperature. Smeša je dalje presuta u koncentrovan rastvor soli i potom je ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakti su osušeni upotrebom upotrebom natrijum sulfata, profiltrirani i upareni da bi se dobilo traženo jedinjenje 736 mg; 100%. LCMS analiza, izračunato za C18H21ClFN3O3SiNa (M+Na)<+>: m/z = 438,1; utvrđeno: 438,1.

Korak 6: 1-[3-(1-Amino-2-{[terc-butil(dimetil)silil]oksi}etil)-5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil]etanon

[0875]

[0876] 1-[3-(1-Azido-2-{[terc-butil(dimetil)silil]oksi}etil)-5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil]etanon (750 mg; 1,8 mmol) (iz koraka 5) je mešan u tetrahidrofuranu (10 ml) sa vodom (0,33 ml), pa je dodat trifenilfosfin. Smeša je zatim grejana na 60°C tokom 2 sata i potom ohlađena do sobne temperature. Dalje je u smešu dodat koncentrovan rastvor soli, pa je smeša ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakti su osušeni upotrebom natrijum sulfata, profiltrirani i upareni da bi se dobilo traženo jedinjenje 700 mg; 100 %. LCMS analiza, izračunato za C18H30ClFNO3Si (M+H)<+>: m/z = 390,2; utvrđeno: 390,2.

Korak 7: terc-Butil (1-(3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)-2-{[tercbutil(dimetil)silil]oksi}etil)karbamat

[0877]

[0878] 1-[3-(1-Amino-2-{[terc-butil(dimetil)silil]oksi}etil)-5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil]etanon (700 mg; 2,0 mmol) (iz koraka 6) je mešan u tetrahidrofuranu (30 ml) sa di-terc-butildikarbonatom (780 mg; 3,6 mmol), pa je dodat N,N-diizopropiletilamin (0,94 ml; 5,4 mmol). Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta, pa je dalje dodat koncentrovan rastvor soli i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakti su osušeni upotrebom natrijum sulfata, profiltrirani i upareni. Prečišćavanjem na silika gelu, upotrebom etil acetata u heksanima (0-30%) je dobijeno 550 mg; 60 % traženog jedinjenja. LCMS analiza, izračunato za C23H37ClFNO5SiNa (M+Na)<+>: m/z = 512,2; utvrđeno: 512,2.

Korak 8: terc-Butil [1-(3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)-2-hidroksietil]karbamat

[0879]

[0880] terc-Butil (1-(3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)-2-{[terc-butil(dimetil)silil]oksi}etil)karbamat (500 mg; 1,0 mmol) (iz koraka 7) je mešan u tetrahidrofuranu (10 ml), pa je dodat 1,0 M rastvor tetra-nbutilamonijum fluorida u tetrahidrofuranu (1,5 ml). Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta, pa je uparena. Prečišćavanjem na silika gelu, upotrebom etil acetata u heksanima (0-50%), je dobijeno 238 mg; 60 % traženog jedinjenja. LCMS analiza, izračunato za C17H23ClFNO5Na (M+Na)<+>: m/z = 398,1; utvrđeno: 398,1.

Korak 9: 4-(3-Acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)-1,3-oksazolidin-2-on

[0881]

[0882] terc-Butil [1-(3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)-2-hidroksietil]karbamat (234 mg; 0,62 mmol) (iz koraka 8) je rastvoren u 1,2-dihloroetanu (12 ml), pa je dodat rastvor 2,0 M fozgena u toluenu (0,93 ml). Smeša je zatim grejana na 80°C tokom 1,5 sata. Uparavanjem i prečišćavanjem na silika gelu, upotrebom etil acetata u heksanima (0-85%), je dobijeno traženo jedinjenje, 175 mg; 93%. LCMS analiza, izračunato za C13H14ClFNO4(M+H)<+>: m/z = 302,1; utvrđeno: 302,1.

Korak 10: 4-[3-Hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(1-hidroksietil)fenil]-1,3-oksazolidin-2-on

[0883]

[0884] 4-(3-Acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)-1,3-oksazolidin-2-on (175 mg; 0,58 mmol) je mešan u metanolu (10 ml) na 0°C, pa je dodat natrijum tetrahidroborat (33 mg; 0,87 mmol). Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata, pa je uparena. Dalje je dodat voda i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakti su isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom natrijum sulfata, profiltrirani i upareni da bi se dobila smeša dijastereomera u približnom odnosu 1:1, 175 mg; 99%. LCMS analiza, izračunato za C13H15ClFNO4Na (M+Na)<+>: m/z = 326,1; utvrđeno: 326,1.

Korak 11: 4-(3-Hloro-5-(hloroetil)-6-etoksi-2-fluorofenil]-1,3-oksazolidin-2-on

[0885]

[0886] 4-[3-Hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(1-hidroksietil)fenil]-1,3-oksazolidin-2-on (150 mg; 0,49 mmol) (iz koraka 10) je mešan u dihlorometanu (4 ml) sa N,N-dimetilformamidom (96 µl), pa je dodat tionil hlorid (110 µl; 1,5 mmol) i smeša je uparena. Zatim je dodata voda i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakti su isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom natrijum sulfata, profiltrirani i upareni da bi se dobilo traženo jedinjenje, 159 mg; 100%.

Korak 12: 4-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}-1,3-oksazolidin-2-on

[0887]

[0888] 4-[3-Hloro-5-(hloroetil)-6-etoksi-2-fluorofenil]-1,3-oksazolidin-2-on (160 mg; 0,50 mmol) (iz koraka 11) je mešan u N,N-dimetilformamidu (21 ml) sa cezijum karbonatom (324 mg; 0,99 mmol), pa je dodat 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (89 mg; 0,60 mmol). Smeša je zatim grejana na 80°C tokom 1,5 sata, pa je ohlađena do sobne temperature. Smeša je dalje razblažena vodom i ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakti su isprani koncentrovanim rastvorom soli, osušeni upotrebom natrijum sulfata, profiltrirani i upareni. Prečišćavanje preparativnim LCMS postupkom (pH 10), upotrebom RP-HPLC postupka (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min), je dovelo do razdvajanja dva dijastereomera (pik 1 [Jedinjenje 353] retenciono vreme = 4,9 min. i pik 2 [Jedinjenje 354] retenciono vreme = 5,6 min.); čime je obezbeđeno Jedinjenje 354 u vidu traženog pojedinačnog enantiomera, 28 mg; 13%. Pik 2: LCMS analiza, izračunato za C19H21ClFN6O3(M+H)<+>: m/z = 435,1; utvrđeno: 435,1.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 8,15 (s, 1H), 7,62 (m, 1H), 6,31 (m, 1H), 5,39 (m, 1H), 4,79 (m, 1H), 4,40 (m, 1H), 3,95 (m, 1H), 3,80 (m, 1H), 2,60 (s, 3 H), 1,80 (m, 3 H), 1,40 (m, 3 H).

Primeri 355-358. Dijastereomeri 5-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}-1,3-oksazolidin-2-ona

[0889]

Korak 1: terc-Butil [2-(3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)-2-hidroksietil]karbamat

[0890]

[0891] U rastvor terc-butil [(4-hlorobenzoil)oksi]karbamata (Lawrence Harris, J. Org.Chem, 2011, 76, 358-372) (19 g; 70 mmol) u acetonitrilu (210 ml) je dodat 0,2 M osmijum tetraoksid u vodi (10 ml), pa je smeša mešana tokom 10 minuta. Zatim je dodat 1-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-vinilfenil)etanon (11,2 g; 46 mmol) (iz Primera 353, korak 1) u vidu rastvora u acetonitrilu (210 ml), pa je dodato još vode (50 ml) i reakciona smeša je mešana tokom 3 sata na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim zaustavljena dodavanjem zasićenog 10 M dikalijum disulfita u vodi (240 ml) i smeša je mešana još 5 minuta. Dalje je dodata voda i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakti su isprani zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, koncentrovanim rastvorom soli i osušeni upotrebom natrijum sulfata, pa su profiltrirani i upareni. Prečišćavanjem na silika gelu, upotrebom etil acetata u heksanima (0-100%) je dobijeno traženo jedinjenje u vidu racemske smeše, 16,6 g; 95%. LCMS analiza, izračunato za C17H23ClFNO5Na (M+Na)<+>: m/z = 398,1; utvrđeno: 398,0.

Korak 2: 5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}-1,3-oksazolidin-2-on

[0892]

[0893] Traženi pojedinačni enantiomer (pik 3) je pripremljen upotrebom iste procedure koja je navedena u Primeru 353 (koraci 8-12), s time što je intermedijer iz koraka 1 u ovom primeru predstavljao racemat i stoga je konačno razdvajanje četiri dijastereomera sprovedeno u koraku 12. Hiralnim prečišćavanjem na Phenomenex Lux Cellulose C-4 koloni ( 21 x 250 mm (Chiral Technologies), veličina čestica 5 mikrona, brzina protoka 18 ml/min) upotrebom 30% etanola u heksanima, obezbeđeno je jedinjenja iz pika 1: Jedinjenje 355 (pojedinačni enantiomer) (retenciono vreme = 12,7 minuta), pika 2: Jedinjenje 356 (pojedinačni enantiomer) (retenciono vreme = 14,2 minuta), pika 3: Jedinjenje 357 (pojedinačni enantiomer) (retenciono vreme = 20,3 minuta) i pika 4: Jedinjenje 358 (pojedinačni enantiomer) (retenciono vreme = 28,9 minuta); najaktivniji enantiomer predstavlja jedinjenja iz pika 3. LCMS analiza, izračunato za C19H21ClFN6O3(M+H)<+>: m/z = 435,1; utvrđeno: 435,1.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8,15 (s, 1H), 7,81 (s, 1H), 7,71 (d, 1H), 7,26 (bs, 1H), 6,23 (m, 1H), 5,84 (t, 1H), 3,92 (m, 1H), 3,83 (m, 1H), 2,52 (s, 3 H), 1,75 (d, 3 H), 1,40 (m, 3 H).

Primer 359.5-(3-{1-[4-Amino-5-okso-6-(1H-pirazol-4-il)pirido[2,3-d]pirimidin-8(5H)-il]etil}-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0894]

Korak 1.4-Amino-6-jodopirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-on

[0895] U suspenziju 4-aminopirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-ona (firme VWR, 0,48 g; 3,0 mmol) u DMF-u (8 ml) je dodat N-jodosukcinimid (0,80 g; 3,6 mmol). Dobiijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći, pa je reakciona smeša profiltrirana i isprana etil acetatom da bi se dobio traženi proizvod u vidu žute čvrste supstance (0,81 g; 95%). LCMS analiza, izračunato za C7H6IN4O (M+H)<+>: m/z = 289,0; utvrđeno: 289,0.

Korak 2.5-{3-[1-(4-Amino-6-jodo-5-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(5H)-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0896]

[0897] U smešu 4-amino-6-jodopirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-ona (255 mg; 0,885 mmol), cezijum karbonata (0,43 g; 1,3 mmol) i kalijum jodida (14,7 mg; 0,0885 mmol) u DMF-u (9,4 ml) je dodat 5-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid (325 mg; 0,885 mmol) (iz Primera 25, korak 1), pa je smeša mešana na 140°C tokom 1 sata. Smeša je zatim razblažena metanolom i prečišćena RP-HPLC postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobilo traženo jedinjenje (221 mg; 40%). LCMS analiza, izračunato za C25H25ClIN6O3(M+H)<+>: m/z = 619,1; utvrđeno: 619,0.

Korak 3.5-(3-{1-[4-Amino-5-okso-6-(1H-pirazol-4-il)pirido[2,3-d]pirimidin-8(5H)-il]etil}-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0898]

[0899] Smeša 5-{3-[1-(4-amino-6-jodo-5-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(5H)-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (10,3 mg; 0,0166 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (3,5 mg; 0,018 mmol), natrijum karbonata (3,5 mg; 0,033 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]-dihloropaladijuma(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1), (1,6 mg; 0,0020 mmol) u acetonitrilu (0,1 ml)/vodi (0,03 ml) je degasirana sa N2i mešana na 90°C tokom 2 sata. Smeša je zatim razblažena metanolom i prečišćena RP-HPLC postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijent smešom acetonitrila i vode koja je sadržavala 0,1% amonijum hidroksida, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod (2,7 mg; 30%). LCMS analiza, izračunato za C28H28ClN8O3(M+H)<+>: m/z = 559,2; utvrđeno: 559,2.

Primer 360.5-{3-[1-(4-Amino-6-metil-5-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(5H)-il)etil)-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[900]

[0901] U posudu za mikrotalasni reaktor su odmereni 5-{3-[1-(4-amino-6-jodo-5-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(5H)-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid (24,0 mg; 0,0388 mmol), kalijum trifluoro(metil)borat (9,4 mg; 0,078 mmol), paladijum acetat (2,1 mg; 0,0094 mmol), dicikloheksil(2',6'-diizopropoksibifenil-2-il)fosfin (8,7 mg; 0,019 mmol) i cezijum karbonat (38 mg; 0,12 mmol) u toluenu (0,5 ml) i vodi (0,06 ml). Reakciona posuda je zatim oslobođena vazduha pod visokim vakuumom, pa je napunjena sa N2. Reakciona smeša je grejana na 100°C preko noći. Smeša je zatim razblažena metanolom, profiltrirana i prečišćena RP-HPLC postupkom (XBridge C18 kolona, eluiranje gradijentom acetonitril/vode koji je sadržavao 0,05% trifluorosirćetne kiseline, brzina protoka 30 ml/min) da bi se dobio traženi proizvod u vidu bis-TFA soli (3,0 mg; 15%). LCMS analiza, izračunato za C26H28ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 507,2; utvrđeno: 507,0.

Primeri 361-363. Dijastereomeri 4-(1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-6-hloro-2-(1-(2-hidroksipropil)azetidin-3-il)-3-metoksibenzonitrila

[0902] Shodno stereohemiji jedinjenja iz Primera 269, pretpostavilo se da stereohemija svakog dijasteromera podrazumeva 4-((R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-6-hloro-2-(1-((S)-2-hidroksipropil)azetidin-3-il)-3-metoksibenzonitril (Primer 361), 4-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-6-hloro-2-(1-((R)-2-hidroksipropil)azetidin-3-il)-3-metoksibenzonitril (Primer 362) i 4-((R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-6-hloro-2-(1-((R)-2-hidroksipropil)azetidin-3-il)-3-metoksibenzonitril (Primer 363) (strukture su prikazane ispod)

Sinteza jedinjenja iz Primera 361:

[0903] U (R)-4-(1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-2-(azetidin-3-il)-6-hloro-3-metoksibenzonitril (6,00 g; 14,3 mmol) je dodat metanol (72 ml). U dobijenu suspenzija je zatim na sobnoj temperaturi dodat (S)-(-)-metiloksiran (2,01 ml; 28,6 mmol), pa je smeša mešana na sobnoj temperaturi 19 sati. Nakon toga je dodato još (S)-(-)-metiloksirana (0,50 ml; 7,2 mmol) i mešanje je nastavljeno još jedan sat. U reakcionu smešu je dalje dodata voda (280 ml), pa je nastavljeno mešanje zamućenog rastvora. Smeša je zatim ekstrahovana metilen hloridom (300 ml x 4). Organski slojevi su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli (50 ml), pa su koncentrovani. Sirov proizvod je prečišćen hromatografijom na silika koloni, elucijom sa MeOH (koji je sadržavao oko 0,5% amonijum hidroksida) u metilen hloridu. Dalje su prikupljene frakcije koje su sadržavale proizvod, pa su one uparene do suva. Ovakav ostatak je potom prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova. Uzorak jedinjenja iz naslova je analiziran NMR spektroskopijom i masenom spektrometrijom i tako su dobijeni sledeći podaci:<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,11 (s, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,30 (br s, 2H), 6,24 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 4,32 (br s, 1H), 4,07 (m, 1H), 3,94 (m, 2H), 3,65 (s, 3H), 3,59 (m, 1H), 3,08 (m, 2H), 2,56 (s, 3H), 2,38 - 2,19 (m, 2H), 1,73 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,00 (d, J = 6,2 Hz, 3H) ppm. LCMS analiza, izračunato za C22H27ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 456,2; utvrđeno: 456,2.

Sinteza jedinjenja iz Primera 362:

[0904] U (S)-4-(1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-2-(azetidin-3-il)-6-hloro-3-metoksibenzonitril (293,0 mg; 0,73 mmol) je dodat metanol (3,7 ml). U dobijenu suspenzija je zatim na sobnoj temperaturi dodat (R)-(+)-metiloksiran 103 µl; 1,46 mmol), pa je smeša mešana na sobnoj temperaturi 19 sati. Nakon toga je dodato još (R)-(+)-metiloksirana (51,3 µl; 0,73 mmol) i mešanje je nastavljeno još 2,5 sata. U reakcionu smešu je dalje dodata voda (14 ml), pa je nastavljeno mešanje zamućenog rastvora. Smeša je zatim ekstrahovana metilen hloridom (4 x 16 ml). Organski slojevi su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli (50 ml), pa su koncentrovani. Sirov proizvod je prečišćen hromatografijom na silika koloni, elucijom sa MeOH (koji je sadržavao oko 0,5% amonijum hidroksida) u metilen hloridu. Dalje su prikupljene frakcije koje su sadržavale proizvod, pa su one uparene do suva. Ovakav ostatak je prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova. Uzorak jedinjenja iz naslova je analiziran NMR spektroskopijom i masenom spektrometrijom i tako su dobijeni sledeći podaci:<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,11 (s, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,30 (br s, 2H), 6,24 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 4,37 (br s, 1H), 4,09 (m, 2H), 3,93 (m, 2H), 3,65 (s, 3H), 3,59 (m, 1H), 3,12 (m, 2H), 2,56 (s, 3H), 2,39 2,26 (m, 2H), 1,73 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,00 (d, J = 6,2 Hz, 3H) ppm. LCMS analiza, izračunato za C22H27ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 456,2; utvrđeno: 456,2.

Sinteza jedinjenja iz Primera 363:.

[0905] U (R)-4-(1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-2-(azetidin-3-il)-6-hloro-3-metoksibenzonitril (6,0 g; 14,3 mmol) je dodat metanol (72 ml). U dobijenu suspenzija je zatim na sobnoj temperaturi dodat (R)-(+)-metiloksiranom (2,01 ml; 28,6 mmol), pa je smeša mešana na sobnoj temperaturi 18 sati. Nakon toga je dodata voda (280 ml) i nastavljeno je mešanje zamućenog rastvora. Smeša je dalje ekstrahovana metilen hloridom (300 ml x 4). Organski slojevi su spojeni, isprani koncentrovanim rastvorom soli (50 ml), pa su koncentrovani. Sirov proizvod je prečišćen hromatografijom na silika koloni, elucijom sa MeOH (koji je sadržavao oko 0,5% amonijum hidroksida) u metilen hloridu. Dalje su prikupljene frakcije koje su sadržavale proizvod, pa su one uparene do suva. Ovakav ostatak je potom prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova. Uzorak jedinjenja iz naslova je analiziran NMR spektroskopijom i masenom spektrometrijom i tako su dobijeni sledeći podaci:<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,11 (s, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,29 (br s, 2H), 6,24 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 4,31 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 4,11 - 4,00 (m, 1H), 3,98 - 3,90 (m, 1H), 3,65 (s, 3H), 3,61 - 3,53 (m, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,56 (s, 3H), 2,28 (d, J = 5,9 Hz, 2H), 1,73 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,00 (d, J = 6,2 Hz, 3H) ppm.

[0906] Razvijena su tri HPLC postupka za razdvajanje stereoizomera jedinjenja iz Primera 269. Postupak A je razvijen zarad razdvajanja dijastereomera iz Primera 361 od onih iz Primera 269. Retenciona vremena za Primer 361 i Primer 269 su iznosila 15,7 min i 11,5 min, tim redom. Hromatografski uslovi su navedeni u Tabeli B1.

Tabela B1

Postupak B je razvijen zarad razdvajanja dijastereomera iz Primera 362 od onih iz Primera 269. Retenciona vremena za Primer 362 i Primer 269 su iznosila 26,4 min i 21,7, tim redom. Hromatografski uslovi su navedeni u Tabeli B2.

Tabela B2

Postupak C je razvijen zarad razdvajanja tri steroizomera iz Primera 361, Primera 362 i Primera 363 od onih iz Primera 269. Stereoizomeri Primera 361, Primera 362 i Primera 363 su eluirani sa retencionim vremenima od 12,9, a u vidu širokih traka, dok su stereoizomeri Primera 269 eluirani sa retencionim vremenom od 14,3 min. Zarad utvrđivanja nivoa enantiomera, enantiomeri Primera 363 se mogu odrediti kombinacijom podataka dobijenih postupcima A, B, i C. Hromatografski uslovi su navedeni u Tabeli B3.

Tabela B3

Primer A1: PI3K enzimski eseji

[0907] Komercijalni paket za PI3-kinazni luminescentni esej koji je sadržavao lipidni kinazni supstrat, D-mio-fosfatidilinozitol 4,5-bisfosfat (PtdIns(4,5)P2)D(+)-sn-1,2-di-O-oktanoilgliceril, 3-O-fosfo vezan (PIP2) biotiniziran I(1,3,4,5)P4 i PI(3,4,5)P3 detekcioni protein je nabavljen od firme Echelon Biosciences (Salt Lake City, UT). AlphaScreen™ GST detekcioni komercijalni paket koji je sadržavao donorske i akceptorske smole je nabavljen od firme PerkinElmer Life Sciences (Waltham, MA). Enzim PI3Kδ (p110δ/p85α) je nabavljen od firme Millipore (Bedford, MA). ATP, MgCl2, DTT, EDTA, HEPES i CHAPS su nabavljeni od firme Sigma-Aldrich (St. Louis, MO).

AlphaScreen™ esej aktivnosti PI3Kδ

[0908] Kinazna reakcija je rađena u REMP mikrotitarskim pločama sa 384 bunarića firme Thermo Fisher Scientific, u finalnoj zapremini od 40 µl. Najpre su inhibitori serijski razblaženi u DMSO-u, pa su dodati u bunariće ploče pre dodavanja ostalih reakcionih komponenti. Finalne koncentracije u DMSO-u su u eseju iznosile 2%. PI3K eseji su rađeni na sobnoj temperaturi u 50 mM HEPES-u, pH 7,4, 5mM MgCl2, 50 mM NaCl, 5mM DTT-u i 0,04%CHAPS-u. Reakcije su započinjane dodavanjem ATP-a, tako da je konačna reakciona smeša koja je inkubirana tokom 20 minuta sadržavala 20 µM PIP2, 20 µM ATP i 1,2nM PI3Kδ. Po 10 µl reakcione smeša je zatim prebacivano u 5 µl 50nM biotiniziranog I(1,3,4,5)P4 u stop puferu: 50 mM HEPES pH 7,4, 150 mM NaCl, 10 mM EDTA, 5 mM DTT, 0,1% Tween-20, nakon čega je dodavano po 10 µl AlphaScreen™ donorskih i akceptorskih smola koje su takođe bile resuspendovane u stop puferu koji je sadržavao 25nM PI(3,4,5)P3 detekcioni protein. Finalne koncentracije donorskih i akceptorskih smola su bile 20 mg/ml. Po zaptivanju ploča, ploče su inkubirane na tamnom mestu, na sobnoj temperaturi, tokom 2 sata. Aktivnost proizvoda je određivana na Fusion-alpha čitaču za mikroploče (Perkin-Elmer). Vrednosti IC50su određivane u procentima, na osnovu krive zavisnosti aktivnosti kontrole u odnosu na inhibitorne koncentracije prikazane u vidu log vrednosti, a upotrebom GraphPad Prism 3,0 kompjuterskog programa.

Primer A2: PI3K enzimski esej

[0909] Materijali: Lipidni kinazni supstrat, fosfoinozitol-4,5-bisfosfat (PIP2), je nabavljen od firme Echelon Biosciences (Salt Lake City, UT). PI3K izoforme α, β, δ i γ su nabavljene od firme Millipore (Bedford, MA). ATP, MgCl2, DTT, EDTA, MOPS i CHAPS su nabavljeni od firme Sigma-Aldrich (St. Louis, MO).

[0910] Kinazne reakcije su rađene u providnim mikrotitar pločama sa 96 bunarića firme Thermo Fisher Scientific, u konačnoj zapremini od 24 µl. Inhibitori su najpre serijski razblaženi u DMSO-u, pa su dodati u bunariće ploče pre dodavanja ostalih reakcionih komponenti. Finalne koncentracije u DMSO-u su u eseju iznosile 0,5%. PI3K eseji su rađeni na sobnoj temperaturi u 20 mM MOPS-u, pH 6,7, 10 mM MgCl2, 5 mM DTT-u i 0,03% CHAPS-u. Zatim je pripremana reakciona smeša koja je sadržavala 50 µM PIP2, kinaze i različite koncentracije inhibitora. Reakcije su započinjane dodavanjem ATP-a koji je sadržavao 2,2 µCi [γ-<33>P] ATP-a tako da je finalna koncentracija iznosila 1000 µM. Finalna koncentracija PI3K izoformi α, β, δ i γ u eseju je iznosila 1,3, 9,4, 2,9 i 10,8 nM, tim redom. Reakcione smeše su inkubirane tokom 180 minuta, pa je reakcija završavana dodavenjem 100 µl 1 M kalijum fosfata pH 8,0, kao i 30 mM EDTA stop pufera. Alikvoti reakcionih smeša od po 100 µl su zatim prebacivani u mikrotitar ploče sa 96 mesta sa filterom (Millipore, MultiScreen IP, 0,45 µm PVDF filter) (navedene ploče su bile prethodno navlažene sa po 200 µl 100% etanola, distilovane vode i 1 M rastvora kalijum fosfata pH 8,0, tim redom). Tečnost iz ploča je dalje izvučena vakuumom, upotrebom Mllipore Manifold aparature, pa su bunarići isprani sa 18 × 200 µl pufera za ispiranje koji je sadržavao 1 M kalijum fosfat pH 8,0 i 1 mM ATP. Nakon sušenja aspiriranjem i blotovanjem, ploča je osušena i na vazduhu u inkubatoru na 37°C preko noći. Dalje je na ploču namešten Packard TopCount adapter (Millipore) i u svaki bunarić je dodato po 120 µl Microscint 20 scintilacionog koktela (Perkin Elmer). Po zaptivanju ploča, radioaktivnost proizvoda je određivana upotrebom Topcount (Perkin-Elmer) scintilacionog brojača. Vrednosti IC50su određivane u procentima, na osnovu krive zavisnosti aktivnosti kontrole u odnosu na inhibitorne koncentracije prikazane u vidu log vrednosti, a upotrebom GraphPad Prism 3,0 kompjuterskog programa.

Primer A3: PI3Kδ scintilacioni esej proksimititeta

Materijali

[0911] [γ-<33>P] ATP (10mCi/mL) je nabavljen od firme Perkin-Elmer (Waltham, MA). Lipidni kinazni supstrat, D-mio-fosfatidilinozitol 4,5-bisfosfat (PtdIns(4,5)P2)D(+)-sn-1,2-di-O-oktanoilgliceril i 3-O-fosfo vezan (PIP2), CAS 204858-53-7, su nabavljeni od firme Echelon Biosciences (Salt Lake City, UT). PI3Kδ (p110δ/p85α) je nabavljen od firme Millipore (Bedford, MA). ATP, MgCl2, DTT, EDTA, MOPS i CHAPS su nabaljeni od firme Sigma-Aldrich (St. Louis, MO). YSi SPA scintilaciona smola sa aglutininom iz zrna pšenice (WGA) je nabavljena od firme GE healthcare life sciences (Piscataway, NJ).

[0912] Kinazne reakcije su rađene u polistirenskim belim mikrotitar pločama sa 384 bunarića firme Thermo Fisher Scientific, u konačnoj zapremini od 24 µl. Inhibitori su najpre serijski razblaženi u DMSO-u, pa su dodati u bunariće ploče pre dodavanja ostalih reakcionih komponenti. Finalne koncentracije u DMSO-u su u eseju iznosile 0,5%. PI3K eseji su rađeni na sobnoj temperaturi u 20 mM MOPS-u, pH 6,7, 10 mM MgCl2, 5 mM DTT-u i 0,03% CHAPS-u. Reakcije su započinjane dodavanjem ATP-a, tako da je konačna reakciona smeša sadržavala 20 µM PIP2, 20 µM ATP, 0,2 µCi [γ-<33>P] ATP, 4 nM PI3Kδ. Reakcije su se odvijale tokom inkubacije od 210 min, a završavane su dodavanjem 40 µl SPA smole resuspenovane u stop puferu sledećeg sastava: 150mM kalijum fosfat pH 8,0, 20% glicerol, 25 mM EDTA, 400 µM ATP. Finalna koncentracija SPA smole je iznosila 1,0mg/mL. Po zaptivanju ploča, ploče su šejkovane tokom noći na sobnoj temperaturi, pa su centrifugirane na 1800 rpm tokom 10 minuta. Radioaktivnost proizvoda je određivana upotrebom Topcount (Perkin-Elmer) scintilacionog brojača. Vrednosti IC50su određivane u procentima, na osnovu krive zavisnosti aktivnosti kontrole u odnosu na inhibitorne koncentracije prikazane u vidu log vrednosti, a upotrebom GraphPad Prism 3,0 kompjuterskog programa. IC50vrednosti jedinjenja iz Primera, određene esejem A3, su navedene u Tabeli 10. IC50vrednosti jedinjenja iz Primera 361 i 363, određene esejem A2, su prikazane u Tabeli 10a.

Tabela 10

Tabela 10a

Primer B1: Esej proliferacije B ćelija

[0913] Da bi se obezbedile B ćelije, humani PBMC je izolovan iz periferne krvi normalnih, lekovima netretiranih donora, standardnim centrifugiranjem na Ficoll-Hypague gradijentu (GE Healthcare, Piscataway, NJ) i inkubiranjem sa anti-CD19 mikrosmolama (Miltenyi Biotech, Auburn, CA). B ćelije su zatim prečišćene pozitivnim imunosortiranjem upotrebom autoMacs (Miltenyi Biotech) uređaja, a prema uputstvu proizvođača.

[0914] Prečišćene B ćelije (2×10<5>/bunaru/200 µl) su zasejane u miklotitar ploče sa 96 mesta sa ultra smanjenim afinitetom vezivanja (Corning, Corning, NY) u RPMI1640 medijumu koji je sadržavao 10% FBS i koziji anti-humani F(ab')2 IgM antitela (10 µg/ml) (Invitrogen, Carlsbad, CA), a u prisustvu različitih jedinjenja koja su testirana koja su inkubirana sa ćelijama tokom tri dana. U kulturu B ćelija je nakon inkubacije dodat [<3>H]-timidin (1 µCi/bunaru) (PerkinElmer, Boston, MA) u PBS-u i ćelije su inkubirane u ovakvom rastvoru 12 sati pre razdvajanja ugrađenog radioaktiviteta od neugrađenog, filtracijom kroz tzv GF/B filtere (Packard Bioscience, Meriden, CT) vodom. Vrednost radioaktiviteta u tečnosti je određena upotrebom TopCount (Packard Bioscience) scintilacionog brojača.

Primer B2: Pfeiffer-ov esej ćelijske proliferacije

[0915] Pfeiffer-ova ćelijska linija (difuzni krupnoćelijski B limfom) je nabavljena od firme ATCC (Manassas, VA), a ćelije su gajene u medijumu za kulturu koji je preporučen od strane proizvođača (RPMI sa 10% FBS). Da bi se odredila anti-proliferativna aktivnost jedinjenja predmetnog pronalaska, Pfeiffer-ove ćelije su zasejane u medijum za kulturu (2x10<3>ćelija/bunaru/po 200 µl), u miklotitar ploče sa 96 mesta sa ultra smanjenim afinitetom vezivanja (Corning, Corning, NY), a u prisustvu ili odsustvu različitih osega koncentracija jedinjenja koja su testirana. Nakon 3-4 dana, u kulturu je dodat [<3>H]-timidin (1 µCi/bunaru) (PerkinElmer, Boston, MA) u PBS-u i ćelije su inkubirane u ovakvom rastvoru 12 sata pre razdvajanja ugrađenog radioaktiviteta od neugrađenog, filtracijom sa vodom kroz tzv GF/B filtere (Packard Bioscience, Meriden, CT). Vrednost radioaktiviteta u tečnosti je određena upotrebom TopCount (Packard Bioscience) scintilacionog brojača. IC50 vrednosti odabranih jedinjenja predmetnog pronalaska su prikazane u Tabeli 11.

Tabela 11

Primer C: Esej Akt fosforilacije

[0916] Ramos-ove ćelije (B limfociti Burkitt-ovog limfoma) su nabavljeni od firme ATCC (Manassas, VA)m pa su gajene u RPMI1640 sa 10% FBS. Ćelije (3×10<7>ćelija/tubi/3 ml u RPMI) su inkubirane sa različitm količinama jedinjenja koja su testirana tokom 2 sata, na 37°C, nakon čega su ćelije stimulisane kozijim anti-humanim F(ab')2 IgM-a (5 µg/mL) (Invitrogen) tokom 17 minuta u vodenom kupatilu (37°C). Stimulisane ćelije su iscentrifugirane na 4°C, a celokupan ćelijski ekstrakt je zatim pripremljen upotrebom 300 µl pufera za liziranje (Cell Signaling Technology, Danvers, MA). Dobijeni lizati su dalje sonikovani, pa su izdvojeni supernatanti. Nivo fosforilacije Akt kinaze u supernatantu je analiziran upotrebom PathScan fosfo-Akt (Ser473) komercijalnog paketa za sendvič ELISA postupak (Cell Signaling Technology), a u skladu sa uputstvima proizvođača.

Claims

Patentni zahtevi

1. Jedinjenje koje je izabrano između:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

2. Jedinjenje prema zahtevu 1, koje je (5R)-{3-[1-(R)-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}-1,3-oksazolidin-2-on.

3. Jedinjenje prema zahtevu 1, koje je (5R)-{3-[1-(S)-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}-1,3-oksazolidin-2-on.

4. Jedinjenje prema zahtevu 1, koje je (5S)-{3-[1-(R)-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}-1,3-oksazolidin-2-on.

5. Jedinjenje prema zahtevu 1, koje je (5S)-{3-[1-(S)-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}-1,3-oksazolidin-2-on.

6. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 5, ili njegova farmaceutski prihvatljvia so i bar jedan farmaceutski prihvatljiv nosač.