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KR20010041584A - 인티그린 길항제로 사용되는 메타-질소치환고리형 벤조산화합물 및 이의 유도체 - Google Patents

인티그린 길항제로 사용되는 메타-질소치환고리형 벤조산화합물 및 이의 유도체 Download PDF

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KR20010041584A
KR20010041584A KR1020007009774A KR20007009774A KR20010041584A KR 20010041584 A KR20010041584 A KR 20010041584A KR 1020007009774 A KR1020007009774 A KR 1020007009774A KR 20007009774 A KR20007009774 A KR 20007009774A KR 20010041584 A KR20010041584 A KR 20010041584A
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treated
added
compound
formula
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Ceased
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KR1020007009774A
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English (en)
Inventor
로저스토마스이.
루민스키피터쥐.
Original Assignee
쥐.디. 씨얼리 앤드 컴퍼니
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
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Abstract

본 발명은 αvβ3인티그린 길항제(integrine antagonist)로 사용되는 하기 화학식의 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염 및 이성체에 관한 것이다.

Description

인티그린 길항제로 사용되는 메타-질소치환고리형 벤조산 화합물 및 이의 유도체{META-AZACYCLIC AMINO BENZOIC ACID COMPOUNDS AND DERIVATIVES THEREOF BEING INTEGRIN ANTAGONISTS}
인티그린은 세포 부착을 매개함으로써, 여러가지의 생물학적 상호작용동안에 발생하는 세포 부착 상호 작용의 매개체가 되는 세포 표면의 당단백질 그룹이다. 인티그린은 공유결합되지 않은 α 및 β폴리펩티드 부단위체로 이루어지는 헤테로다이머(heterodimer) 이다. 오늘날 11 개의 상이한 α부단위체 및 6 개의 상이한 β부단위체가 확인되었다. 상기 여러가지 α부단위체는 상기 여러가지 β부단위체와 결합함으로써 인티그린을 형성할 수 있다.
αvβ3(비트로넥틴 수용체로도 알려져있음)으로 확인되는 인티그린은 종양 전이, 충실성 종양 성장(이상 증식), 골다공증, 파제트병, 악성 체액성 칼슘 과다혈증, 맥관형성(종양 맥관형성 포함), 망막통증 (반점 변성 포함), 관절염 (류머티스성 관절염 포함), 치주 질환, 건선, 및 민무늬 근육세포 이동(예, 레스테노시스(restenosis))을 포함한 여러가지의 상태 또는 질병에 중요한 역할을 차지하는 것으로 확인되었다. 그 밖에, 이러한 인티그린은 항바이러스제, 항진균제 및 항균제로 사용될 수 있는 것으로 확인되었다. 따라서, αvβ3를 선택적으로 억제하거나 또는 길항시킬 수 있는 화합물이 상기 상태의 치료에 유익할 수 있다.
αvβ3인티그린 및 기타 αv함유 인티그린은 다수의 Arg-Gly-Asp (RGD) 함유 기질 고분자에 결합하는 것으로 확인되었다. 상기 RGD 서열을 함유하는 화합물은 세포외 기질 리간드를 의태함으로써 세포 표면 수용체에 결합한다. 그러나, 일반적으로 RGD 펩티드는 RGD 의존 인티그린에 대하여 비선택적인 것으로도 알려져있다. 예를 들어, αvβ3에 결합하는 대부분의 RGD 펩티드는 αvβ5, αvβ1, 및 αIIbβ3에도 결합된다. 혈소판 αIIbβ3(피브리노겐 수용체로도 알려져있음)의 길항 작용은 사람의 경우에 있어서 혈소판 응집을 억제하는 것으로 알려져있다. 인티그린 αvβ3와 관련된 상기 상태 또는 질병을 치료할 때 출혈 부작용을 없애기 위하여, αIIbβ3에 대립하는 αvβ3의 선택적인 길항제인 화합물을 개발하는 것이 바람직할 것이다.
종양 침입은 하기와 같은 세 단계 과정에 따라 발생한다: 1) 세포외 기질에의 종양 세포 부착; 2) 상기 기질의 단백질 가수분해적 용해; 및 3) 상기 용해된 장벽을 통한 세포의 이동. 이러한 과정은 반복적으로 일어날 수 있고 최초 종양으로부터 떨어진 부위에서 전이를 일으킬 수 있다.
다음 문헌[Seftor 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 89(1992) 1557-1561]에는 αvβ3인티그린이 흑색종 세포 침입에 있어서 생물학적 작용을 가진다는 것이 보고되었다. 다음문헌[Montgomery 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol.91 (1994)8856-60]에서는, 사람의 흑색종 세포상에서 발현된 인티그린 αvβ3이 생존 신호를 촉진하여, 세포의 세포자멸사를 방지한다는 것이 입증되었다. αvβ3인티그린 세포 부착 수용체를 이용하여 종양 세포 전이 경로를 매개시켜서 종양 전이를 억제하는 것이 유익할 수 있다.
다음문헌[Brooks 등, Cell, Vol. 79(1994) 1157-1164]에서는, αvβ3의 길항제를 전신 투여하면 여러가지의 조직학적으로 명백한 사람 종양이 극적으로 회귀되므로, αvβ3의 길항제는 이상증식의 치료(충실성 종양 성장의 억제)에 사용될 수 있다는 것이 확인되었다.
부착 수용체 인티그린 αvβ3는 병아리 및 남성의 맥관형성 혈관의 지표(marker)인 것으로 확인되었으므로 이러한 수용체는 맥관형성 및 신생 혈관화에 중요한 역할을 차지한다. 맥관 형성은 민무늬근 및 내피 세포의 침입, 이동 및 증식의 특징을 갖는다. αvβ3의 길항제는 신생 맥관 구조에서 세포의 세포자멸사를 선택적으로 촉진하여 상기 과정을 억제한다. 또한, 새로운 혈관의 성장 또는 맥관 형성은 당뇨병성 망막통증, 반점 변성 및 류머티스성 관절염과 같은 병리학적 상태의 원인이 된다 (Adonis 등, Amer. J. Ophthal., Vol. 118, (1994) 445-450; 및 Peacock 등, J.Exp. Med., Vol.175, (1992), 1135-1138). 따라서, αvβ3길항제는 신생맥관화와 관련된 상기의 상태를 치료하기 위한 유용한 치료제일 수 있다 (Brooks 등, Science, Vol. 264, (1994), 569-571).
세포 표면 수용체 αvβ3는 뼈에의 부착의 원인이 되는 뼈파괴세포(osteoclast)에 대한 주요한 인티그린이라는 것이 보고되었다. 뼈파괴 세포는 뼈 재흡수를 일으키고, 이러한 뼈 재흡수 활성이 뼈 형성 활성을 초과하는 경우에는 골다공증(뼈 손실)을 초래하여, 골절, 무기력화 및 사망율을 증가시키는 것이다. αvβ3의 길항제는 생체외(Sato 등, J. Cell. Biol., Vol. 111(1990) 1713-1723) 및 생체내(Fisher 등, Endocrinology, Vol. 132 (1993) 1411-1413) 모두에서 뼈파괴 세포활성의 억제제일 수 있는 것으로 확인되었다. αvβ3의 길항 작용은 뼈 재흡수를 감소시킴으로써 뼈 형성과 뼈재흡수 활성사이의 정상적 균형을 회복시킨다. 따라서, 뼈 재흡수의 효과적인 억제제가 됨으로써 골다공증의 치료 또는 예방에 사용될 수 있는 뼈파괴 세포 αvβ3의 길항제를 제공하는 것이 바람직할 수 있다.
또한, αvβ3인티그린은 민무늬근 세포 이동에서의 역할로 인하여, 맥관화 과정후 레스테노시스의 주요한 원인이 되는 이상 증식의 억제 또는 예방을 위한 치료 목표가 된다 (Choi 등, J.Vasc. Surg. Vol. 19(1)(1994)125-34). 레스테노시스를 예방 또는 억제하기 위한 약물을 이용하여 신생혈관내막 이상증식(neointimal hyperplasia)을 억제 또는 억제하는 것이 바람직할 수 있다.
다음문헌[Current Biology, Vol. 3(9)(1993)596-599]에는, 아데노바이러스는 숙주 세포로 들어가기 위하여 αvβ3를 이용한다는 것이 보고되었다. 상기 인티그린은 바이러스 입자가 세포이물을 흡수하는데 필요하며, 또한 상기 바이러스성 게놈이 숙주 세포질로 침투하는데 필요한 것으로 판단된다. 따라서, αvβ3를 억제하는 화합물은 항바이러스제로 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명은 αvβ3인티그린 길항제(integrine antagonist)로 사용되는 약물(화합물)로서, αvβ3인티그린 억제 또는 길항시킴으로써 αvβ3매개 증상을 치료하는 약학적 조성물 및 방법에서 사용되는 약물(화합물)에 관한 것이다.
본 발명은 하기 화학식의 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염에 관한 것이다:
상기 식에서, X 및 Y는 같거나 상이한 것으로서 할로 그룹이다.
상기의 화합물은 여러가지의 이성질 형태로 존재할 수 있으며 이러한 이성질 형태는 모두 본 발명의 범위에 포함된다. 또한 토오토머 형태외에도 상기 이성질체 및 토오토머의 약학적으로 허용되는 염도 본 발명의 범위에 포함된다.
더욱 구체적으로, 본 발명은 하기 화학식 (1) 내지 (16)의 화합물 및 이들의 약학적으로 허용되는 염에 관한 것이다:
상기 식에서, R은 H 또는 알킬이다.
본 발명의 또다른 목적은 상기의 화합물을 포함하는 약학적 조성물을 제공하는 것이다. 이러한 화합물 및 조성물은 인티그린을 선택적으로 억제 또는 길항시키는데 유용하므로, 본 발명의 또 다른 구현예는 αvβ3인티그린을 선택적으로 억제 또는 길항시키는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 이러한 치료를 필요로하는 포유동물에서 골다공증, 악성 체액성 칼슘과다혈증, 충실성 종양 성장(이상 증식), 악성 체액성 칼슘 과다혈증, 파제트병, 종양 전이, 맥관형성(종양 맥관형성 포함), 망막통증 (당뇨병성 망막통증 및 반점 변성 포함), 관절염 (류머티스성 관절염 포함), 치주 질환, 건선, 및 민무늬 근육세포 이동 및 레스테노시스(restenosis)와 같은, 인티그린과 관련된 병리학적 상태를 치료 또는 억제하는 것을 포함한다. 그 밖에, 본 발명은 상기의 약물은 항바이러스제 및 항균제로 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명은 상기 화학식(1) 내지 (16)으로 나타낸 화합물에 관한 것이다.
본 발명의 바람직한 화합물은 하기 화학식 (17) 내지 (32)의 화합물이다:
또한, 본 발명은 상기의 화합물을 치료적으로 유효한 양으로 함유하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 αvβ3인티그린을 선택적으로 억제 또는 길항시키는 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 치료적으로 유효한 양의 상기의 화합물을 약학적으로 허용되는 담체와 함께 투여함으로써, 뼈 재흡수, 골다공증, 악성 체액성 칼슘과다혈증, 충실성 종양 성장(이상 증식), 악성 체액성 칼슘 과다혈증, 파제트병, 종양 전이, 맥관형성(종양 맥관형성 포함), 망막통증 (당뇨병성 망막통증 및 반점 변성 포함), 관절염 (류머티스성 관절염 포함), 치주 질환, 건선, 및 민무늬 근육세포 이동 및 레스테노시스(restenosis)를 억제하는 방법에 관한 것이다.
하기에서는 본원에서 사용되는 여러가지 용어를 정의한다.
본원에서 사용되는 용어 "알킬" 또는 "저급 알킬"은 약 1 내지 약 10의 탄소수, 바람직하게는 1 내지 약 6의 탄소수를 갖는 직쇄 또는 측쇄 탄화수소기를 의미하는 것이다. 이러한 알킬기의 예로는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, t-부틸, 펜틸, 네오펜틸, 헥실, 이소헥실 등이 있다.
본원에서 사용되는 용어 "할로" 또는 "할로겐"은 브로모, 클로로 또는 아이오도를 나타내는 것이다.
본원에서 사용되는 용어 "할로알킬"은 하나 이상의 탄소 원자가 같거나 또는 상이한 할로기로 치환되는 상기의 알킬기를 의미하는 것이다. 상기 할로알킬기의 예로는 트리플루오로메틸, 디클로로에틸, 플루오로프로필 등이 있다.
본원에서 사용되는 용어 "조성물"은 하나 이상의 성분을 혼합 또는 결합함으로써 얻어지는 생성물을 의미하는 것이다.
본원에서 사용되는 "약학적으로 허용되는 염"은 화학적 약물을 운반하는데 사용되는 것으로 액체 또는 고체 충진제, 희석제, 부형제, 용매 또는 캡슐화제와 같은 약학적으로 허용되는 물질, 조성물 또는 부형제를 의미하는 것이다.
본원에서 사용되는 용어 "치료적으로 유효한 양"은 연구원 또는 임상의학자가 찾고 있는 조직, 계통 또는 동물의 생물학적 또는 의학적 반응을 유도할 수 있는 약물의 양을 의미하는 것이다.
하기에서는 본원에서 상호교환적으로 사용되는 약어 또는 이에 해당하는 의미를 설명한다.
1H-NMR = 양성자 핵자기 공명
AcOH = 아세트산
Ar = 아르곤
CH3CN = 아세토니트릴
CHN 분석 = 탄소/수소/질소 원소 분석
CHNCl 분석 = 탄소/수소/질소/ 염소 원소 분석
CHNS 분석 = 탄소/수소/질소/황 원소 분석
DI 수 = 탈이온수
DMA = N,N-디메틸아세트아미드
DMAP = 4-(N,N-디메틸아미노)피리딘
DMF = N,N-디메틸포름아미드
DECl = 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이미드 히드로클로라이드
EtOAc = 에틸 아세테이트
EtOH = 에탄올
FAB MS = 신속 원자 충격 분광법
g = 그램
HOBT = 1-히드록시벤조트리아졸 히드레이트
HPLC = 고성능 액체 크로마토그래피
IBCF = 이소부틸클로로포름에이트
KSCN = 티오시안산나트륨
L = 리터
LiOH = 수산화리튬
MEM = 메톡시에톡시메틸
MEMCl = 메톡시에톡시메틸 클로라이드
MeOH = 메탄올
mg = 밀리그램
MgSO4= 황산마그네슘
ml = 밀리리터
mL = 밀리리터
MS = 질량 분석법
MTBE = 메틸 3차-부틸 에테르
N2= 질소
NaHCO3= 중탄산나트륨
NaOH = 수산화나트륨
Na2SO4= 황산나트륨
NMM = N-메틸모르폴린
NMP = N-메틸피롤리돈
NMR = 핵자기 공명
P2O5= 오산화인
PTSA = 파라-톨루엔술폰산
RPHPLC = 반전상 고성능 액체 크로마토그래피
RT = 실온
TFA = 트리플루오로아세트산
THF = 테트라히드로푸란
TMS = 트리메틸실릴
△ = 반응 혼합물의 가열
상기의 화합물은 여러가지의 이성질 형태로 존재하며 이러한 이성질 형태는 모두 본 발명의 범위에 포함된다. 또한, 토오토머 형태뿐 아니라 상기 이성질체 및 토오토머의 약학적으로 허용되는 염도 본 발명의 범위에 포함된다.
본원에서 나타낸 구조 및 화학식에 있어서, 고리의 결합을 교차하여 그려진 결합은 상기 고리상의 어떤 이용가능한 원자에 대한 것일 수 있다.
용어 "약학적으로 허용되는 염"은 상기의 화합물을, 사람이 소비하기에 적당한 것으로 일반적으로 간주되는 음이온을 가지는 산과 접촉시킴으로써 제조되는 염을 의미하는 것이다. 이러한 약학적으로 허용되는 염의 예로는 염산염, 브롬산염, 요오드산염, 황산염, 인산염, 아세트산염, 프로피온산염, 유산염, 말레산염, 숙신산염, 타르타르산염 등이 있다. 이러한 약학적으로 허용되는 염은 모두 통상의 방법에 따라 제조될 수 있다 (참조문헌, Berge 등, J. Pharm.Sci., 66(1), 1-19 (1977), for additional examples of pharmaceutically acceptable salts).
αvβ3인티그린의 선택적인 억제를 위하여, 본 발명의 화합물은 약학적으로 허용되는 통상적인 담체, 보조제 및 부형제를 함유하는 용량 단위 제제 형태로 경구, 비경구, 흡입 스프레이 또는 국소적으로 투여될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 비경구 투여의 예로는 피하, 정맥내, 근육내, 흉골내, 주입법 또는 복막내 투여가 있다.
본 발명의 화합물은 적합한 약학적 조성물의 형태로 어떤 경로를 통해, 그리고 예정된 치료에 효과적인 용량(dose)으로 투여된다. 상기 의학적 상태의 진행을 예방하거나 또는 상기 의학적 상태를 치료하는데 필요한 화합물의 치료적으로 유효한 용량은 당업자기 의료 분야에 잘 알려져있는 예비임상학적 방법 또는 임상학적 방법을 이용하여 쉽게 결정할 있다.
따라서, 본 발명은 αvβ3세포 표면 수용체를 선택적으로 억제 또는 길항시킴으로써 매개 상태를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기의 화합물류에서 선택된 치료적으로 유효한 양의 화합물을 투여하는 것을 포함한다. 상기 한 종이상의 화합물은 한 종이상의 약학적으로 허용되는 비독성 담체 및/또는 희석제 및/또는 보조제 (본원에서는 "담체"로 집합적으로 나타냄) 및 필요한 경우 다른 활성 성분과 함께 투여된다. 더욱 구체적으로, 본 발명은 αvβ3세포 표면 수용체를 억제하는 방법을 제공한다. 더욱 바람직하게, 본 발명은 뼈 재흡수, 골다공증, 악성 체액성 칼슘과다혈증, 충실성 종양 성장(이상 증식), 악성 체액성 칼슘 과다혈증, 파제트병, 종양 전이, 맥관형성(종양 맥관형성 포함), 망막통증 (당뇨병성 망막통증 및 반점 변성 포함), 관절염 (류머티스성 관절염 포함), 치주 질환, 건선, 및 민무늬 근육세포 이동 및 레스테노시스(restenosis)를 억제하는 방법을 제공한다.
당업자에게 잘 알려져있는 표준 실험실 방법 및 과정에 기초하여, 그리고 알려져있는 유용한 화합물과 비교하여, 상기의 화합물은 상기의 병리학적 상태를 가지는 환자의 치료에 사용될 수 있다. 당업자는 본 발명의 가장 적절한 화합물을 선택할 수 있으며 또한 이러한 선택은 표준 평가분석 및 동물 실험을 통해 얻은 결과들의 평가를 포함한 여러가지의 인자에 의존하게 된다는 것을 알 수 있다.
상기의 병리학적 상태들중 하나의 상태를 가지는 환자의 치료에는, 상기 상태를 억제하는데 있어서 또는 환자의 생명을 상기의 치료가 없을 때 예상되는 것보다 연장시키는데 있어서 치료적으로 유효하게 되는 양의 상기 화합물을 상기 환자에게 투여하는 것이 포함된다. 본원에서 사용되는 용어 상태의 "억제"는 상기 상태를 지연, 중단, 저지 또는 정지시키는 것을 의미하는 것으로서, 반드시 상기 상태의 전체적인 제거를 나타내는 것은 아니다. 또한, 환자의 생명을 연장시키는 것은 상기 상태가 바람직할 정도로 억제되는 것을 의미하는 것이다.
상술한 바와 같이, 본 발명의 화합물은 여러가지의 생물학적, 예방 또는 치료 분야에 사용될 수 있다. 이러한 화합물은 αvβ3인티그린이 역할을 차지하는 어떤 질병 상태의 예방 또는 치료에 유용한 것으로 판단된다.
상기 화합물의 용량(dosage) 또는 상기 화합물을 함유하는 조성물의 용량은 환자의 유형, 연령, 체중, 성별 및 의학적 상태, 상태의 심각성, 투여 경로, 및 이용되는 화합물의 활성을 포함한 여러가지의 인자에 의존하게 된다. 따라서, 상기 용량은 폭넓게 변화할 수 있다. 하루에 체중 1kg당 약 0.01 mg 내지 약 1000mg의 용량이 상기 상태의 치료에 유용하며, 더욱 바람직한 용량은 하루에 체중 1kg당 약 0.01mg 내지 약 100 mg이다.
주사에 의해 투여되는 상기 활성 성분은 예를들어 염수, 덱스트로스 또는 물이 적당한 담체로 사용되는 조성물로서 제형화된다. 적당한 하루 용량으로서, 상기의 인자에 의존하여 하루에 체중 1kg 당 약 0.01 내지 10 mg을 여러 차례 주사하는 것이다.
이러한 치료를 필요로하는 환자에게 투여하기 위하여, 치료적으로 유효한 양의 상기 화합물은 일반적으로, 상기의 투여 경로에 적절하게 되는 한 종이상의 보조제와 결합된다. 상기 화합물은 락토오스, 수크로스, 전분 분말, 알칸산의 셀룰로오스 에스테르, 셀룰로오스 알킬 에스테르, 탤크, 스테아르산, 스테아르산마그네슘, 인산 및 황산의 나트륨 및 칼슘 염, 젤라틴, 아카시아, 알긴산나트륨, 폴리비닐피롤리돈, 및/또는 폴리비닐알콜과 혼합될 수 있고, 적절한 투여를 위해 정제화 또는 캡슐화될 수 있다. 또는 그렇지 않으면, 상기 화합물은 물, 폴리에틸렌글리콜, 프로필렌 글리콜, 에탄올, 옥수수유, 면실유, 땅콩유, 참기름, 벤질 알콜, 염화나트륨 및/또는 여러가지의 완충액에 용해될 수 있다. 다른 보조제 및 치료 방법이 제약 분야에 잘 알려져있다.
본 발명에서 유용한 약학적 조성물은 살균과 같은 통상적인 약학적 조작으로 처리될 수 있고 및/또는 방부제, 살균제, 습윤제, 에멀션화제, 완충제 등과 같은 통상적인 약학적 보조제를 함유할 수 있다.
본 발명에서 유용한 화합물을 제조하기 위한 일반적인 합성 순서를 하기의 반응식 (1) 내지 (3)에서 나타낸다. 또한, 본 발명의 여러가지 실시예를 하기에서 설명한다. 하기의 반응식 및 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위를 제한하지 않는다. 당업자는 하기 반응식 및 실시예에서 설명된 조건 및 방법을 변경하여 본 발명의 화합물을 합성할 수 있다.
달리 나타내지 않는한, 이용되는 모든 출발 물질 및 장치는 상업적으로 입수가능한 것이다.
상기 반응식 (1)은 글리-β-아미노산 에스테르에 결합될 수 있는 본 발명의 테트라히드로피리미디노벤조산 부분을 제조하는데 유용한 방법을 예시하는 것이다. 간략히 말해서, 반응식(1)에 있어서, 3,5-디히드록시벤조산을 다음문헌[Austr. J. Chem., 34(6), 1319-24(1981)]에 설명된 방법을 이용하여 3-아미노-5-히드록시-벤조산으로 전환한다. 상기 생성물을 일반적으로 처리한 후, 뜨겁고 묽은 염산에서 티오시안산알루미늄과 반응시켜 3-티오우레아-5-히드록시벤조산을 생성한다. 이러한 티오우레아 중간체를 환류하에 에탄올에서 요오드화메틸과 반응시켜 S-메틸 유도체로 전환한다. 1,3-디아미노-2-히드록시프로판을 뜨거운 DMA에서 상기 중간체와 반응시키다. 냉각하면 침전물이 형성되고 상기 양쪽이온성 생성물을 여과에 의해 분리한다. 또는 그렇지않으면, 휘발성 물질을 제거하고 응축함으로써 상기 최초의 반응 혼합물로부터 생성물을 분리할 수 있다. 상기 얻어지는 생성물을 물에 용해하고 약 5-7의 pH로 조절하여 양쪽성 이온 생성물을 침전하고 여과에 의해 분리한다. HCl 염을 전술한 바와 같이 얻거나, 또는 묽은 염산에 간단히 용해한 후 고체 상태로 응축하고 건조함으로써 얻을 수 있다.
상기 반응식 (2)는 글리-β-아미노산 에스테르에 결합될 수 있는 본 발명의 테트라히드로피리미디노벤조산 부분의 제조에 유용한 방법을 예시하는 것이다. 간략히 말해서, 상기 반응식 (2)에 있어서, 1,3-디아미노-2-히드록시프로판을 에탄올-물과 같은 적절한 용매에서 이황화탄소와 반응시키고, 환류 및 냉각하고, 염산을 부가하고, 다시 환류 및 냉각한후, 5-히드록시테트라히드로피리미딘-2-티온을 여과에 의해 얻은 다음 건조한다. 이러한 티오우레아 중간체를 에탄올에서 환류하에 티온 및 요오드화메틸과 반응하여 S-메틸 유도체로 전환한다. 감압하에 휘발성물질을 제거하여 원하는 2-메틸티오에테르-5-히드록시피리미딘 히드로아이오도를 쉽게 분리한다. 다음에, 염화메틸렌 및 DMA (약 10:1) 및 트리에틸아민에 용해된 2-메틸티오에테르-5-히드록시피리미딘 히드로아이오도를 얼음 중탕 온도까지 냉각하고 디-3차-부틸 디카본에이트(BOC 무수물)를 부가한다. 통상적으로 처리하여 BOC-2-메틸티오에테르-5-히드록시피리미딘을 오일로서 얻는다.
3,5-디히드록시벤조산을 다음문헌[Austr. J. Chem., 34(6), 1319-24(1981)]에 설명된 방법을 이용하여 3-아미노-5-히드록시-벤조산으로 전환한다.
BOC-2-메틸티오에테르-5-히드록시피리미딘과 3-아미노-5-히드록시벤조산을 뜨거운 DMA에서 반응시켜서 3-히드록시-5-[(5-히드록시-1,4,5,6-테트라히드로-2-피리미디닐)아미노]벤조산을 최종의 원하는 생성물로서 얻는다. 예를들어 묽은 염산을 이용하여 얼림 건조를 실시하여 HCl 염을 얻는다.
상기 반응식 (3)은 테트라히드로피리미디노벤조산 부분에 결합될 수 있는 본 발명의 에틸 N-글리-아미노-3-(3,5-디할로-2-히드록시)페닐 프로피온에이트 부분을 제조하기 위한 방법을 예시한다. 간략히 말해서, 5-브로모살리실알데히드를 아세트산에서 슬러리화하고 염소를 부가하여 3-클로로-5-브로모-2-히드록시벤즈알데히드를 얻는 것과 같은 직접 할로겐화를 이용하여 3,5-할로 치환 살리실알데히드를 제조할 수 있다. 일부의 생성물을 침전시키고 여과하여 회수할 수 있다. 나머지는 여액을 물로 희석하고 침전물을 분리함으로써 회수할 수 있다. 상기 고체들을 합치고 건조시켜서 3-클로로-5-브로모-2-히드록시벤즈알데히드를 얻는다. 5-클로로살리실알데히드를 DMF에서 N-아이오도숙신이미드와 반응시키고 상기 혼합물을 통상의 조작 조건에 따라 처리하여 3-아이오도-5-클로로살리실알데히드를 제조할 수 있다. 5-브로모살리실알데히드를 아세토니트릴에서 요오드화칼륨 및 클로르아민과 반응시켜서 3-아이오도-5-브로모살리실알데히드를 제조할 수 있다. 헥산으로 처리하여 원하는 3-아이오도-5-클로로살리실알데히드를 얻는다.
변형된 퍼킨 반응(Vogel's Textbook of Practical Organic Chemistry, 5판, 1989, p.1040)을 이용하여 살리실알데히드로부터 코우마린을 제조할 수 있다. 상기 할로-치환 코우마린을 3-아미노히드로코우마린(참조, J.G. Rico, Tett. Let., 1994, 35, 6599-6620)으로 전환하며, 이러한 3-아미노히드로코우마린은 산성 알콜에서 쉽게 개환되어 3-아미노-3-(3,5-할로-2-히드록시)페닐 프로판산 에스테르가 얻어진다.
3-아미노-3-(3,5-할로-2-히드록시)페닐 프로판산 에스테르를 N-글리-3-아미노-3-(3,5-할로-2-히드록시)페닐 프로판산 에스테르로 전환하고 이를 Boc-N-글리-N-히드록시숙신이미드와 반응시켜서 Boc-N-글리-3-아미노-3-(3,5-할로-2-히드록시)페닐 프로판산 에스테르로 전환하고 이를 에탄올에서 HCl을 이용하여 BOC-보호기를 제거하여 N-글리-아미노-3-(3,5-할로-2-히드록시)페닐 프로판산 에스테르의 HX 염(여기서, X는 할로기임)으로 전환한다.
본 발명의 화합물을 제조하는데 사용되는 상기 아미노 산 화합물은 하기에 설명된 방법에 따라 그리고 본원과 동일자로 미합중국에 출원된 공계류중인 USSN Attorney Docket 3076에서 설명된 방법에 따라 제조할 수 있다. 상기 공계류중인 특허출원의 개시내용은 본원에 참조로 인용된다.
상기 반응식 (4)는 본 발명의 여러가지 화합물을 제조하는데 유용한 방법을 예시한다. 3-히드록시-5-[(1,4,5,6-테트라히드로-5-히드록시-2-피리미디닐)아미노]벤조산을 공지의 방법을 이용하여 활성화하여 커플링시킨다. 다음에, DMA와 같은 적당한 용매에 용해한 후 NMM을 부가한다. 상기 반응 혼합물을 얼음 중탕 온도까지 냉각한 후 IBCF를 부가한다. 상기 혼합된 무수물 중간체에 상기 글리-β-아미노산 에스테르 및 NMM을 부가한다. 반응의 종료후, 상기 생성물을 PREP HPLC로 정제하고 얻어지는 에스테르를 적당한 용매(디옥산/물 또는 아세토니트릴/물)에서 LiOH와 같은 염기로 처리하여 산으로 가수분해한다. 또는 그렇지않으면, TFA와 같은 적당한 산을 사용할 수도 있다. PREP HPLC로 생성물을 분리하거나, 또는 pH 5-7에서 상기 양쪽이온을 분리하고 표준 과정에 따라 상기 원하는 염으로 전환한다.
실시예 A: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
단계 1: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
기계적 교반기 및 냉각기를 구비한 2 리터 둥근바닥 플라스크에, 3,5-디클로로살리실알데히드(200g, 1.05mol, 1당량), 아세트산 무수물(356g, 3.49mol) 및 트리에틸아민(95.0g, 0.94 mol, 0.90 당량)을 부가하였다. 상기 반응 용액을 환류하에 밤새 가열하였다. 상기 암갈색 반응 혼합물을 50 ℃까지 냉각하고, 교반하면서 물 (1L)을 부가하였다. 1 시간후, 상기 혼합물을 여과하고, 그 여액을 에탄올(1 L)과 합쳤다. 이 혼합물을 45 ℃까지 1 시간동안 가열하고, 실온으로 냉각하고, 여과하고, 고체(분획A)를 에탄올(1.5 L)로 씻었다. 상기 결합된 에탄올 용액을 회전 증발로 응축하여 오일(분획 B)을 얻었다. 상기 분획 A로부터의 고체를 메틸렌 클로라이드(1.5 L)에 용해하고, 얻어지는 용액을 실리카 겔 패드(1300 ml 체적)에 통과시켰다. 얻어지는 암갈색 용액을 응축하여 오일을 얻고 이를 헥산(1.3 L)을 이용하여 분쇄하여 고체를 얻고, 이를 여과로 분리하고, 헥산으로 씻어서 실제적으로 순수한 6,8-디클로로코우마린(163g)을 얻었다. 유사한 방식으로 상기 분획 B의 오일을 처리하여 31g의 생성물을 추가로 얻었다. 즉, 상기 오일을 염화메틸렌(0.5 L)에 용해하고, 실리카 패드(0.5 L)에 통과시킨 다음 헥산으로 분쇄하였다. 전체적으로 194g 또는 86% 수율의 갈색 고체를 얻었다.
단계 2: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
기계적 교반기를 구비한 2L 용량의 3구 둥근 바닥 플라스크에, 상기 단계 1에서 제조한 6,8-디클로로코우마린(160g, 0.74mol) 및 건조 THF(375ml, Aldrich Sure Seal)을 부가하였다. 상기 얻어지는 혼합물을 -40℃(드라이 아이스/아세톤 중탕)로 냉각하고, 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드(0.80 mol, 800 ml, THF에서 1M)를 부가하면서 온도를 -40 ℃ 이하로 유지했다. 부가를 종료한 후, 상기 얼음 중탕을 제거하였다. 에탄올(1.25 L)에 용해된 HCl(0.5 L, 디옥산에서 4M)의 용액을 부가하여 상기 반응물을 냉각했다. 온도를 0 ℃ 이하로 밤새 유지했다. 상기 반응 혼합물을 그의 최초 체적의 약 1/2로 응축하고, 에탄올(3 L)과 물(2 L)의 사이에 분배했다. 유기층을 수성 HCl(3 x 1L 0.5 N HCl)로 씻었다. 10% 수성 NaOH를 부가하여, 합쳐진 수성층들의 pH를 약 7로 조절하고, 염화메틸렌(3 x 2 L)으로 추출했다. 상기 합쳐진 유기층들을 건조(MgSO4)하고, 여과하고, 디옥산(210ml)에 용해된 4M HCl을 부가하면서 교반했다. 침전의 완료후, 상기 고체를 여과로 제거했다. 상기 여액을 작은 체적으로 응축하고, 메틸 t-부틸 에테르를 부가했다. 얻어진 고체를 상기 처음에 형성한 고체와 합치고, 상기 합쳐진 생성물을 메틸 t-부틸 에테르로 씻고, 여과로 분리하고, 진공하에 일주일간 건조하여 원하는 생성물(172g, 74% 수율)을 얻었다.
MS 및 NMR 결과는 상기 원하는 구조와 일치했다.
단계 3: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
자기 교반봉을 구비한 불꽃 건조된 0.5 L의 둥근 바닥 플라스크에 N-t-Boc-글리신 N-히드록시숙신이미드 에스테르(Sigma, 15.0g, 0.055 mol), 건조 DMF (Aldrich Sure Seal, 200 ml), 및 상기 단계 2에서 얻은 생성물(21.67g, 0.055 mol)를 불활성 분위기(아르곤)하에서 부가했다. 상기 반응 혼합물을 약 0℃(염-얼음 중탕)까지 냉각하고, N-메틸모르폴린(5.58g, 0.056 mole) 및 촉매량의 DMAP를 부가한 다음, 밤새 반응시켰다. 상기 반응 혼합물을 슬러시(slush) 상태로 응축하고, 에틸 아세테이트(0.4 L)와 수성 염기(2 x 0.2L, 수성 포화 NaHCO3)사이로 분배하였다. 유기층을 수성 시트르산(2 x 0.2L, 10% w/v), 수성 중탄산나트륨 (2 x 0.2L) 및 염수로 순서적으로 씻은 다음, 건조(황산나트륨)하였다. 55 ℃에서 진공하에 휘발성 물질을 제거하여 오일(22.5G, 92% 수율)을 얻고, 정치하여 응고시켰다.
MS 및 NMR 결과는 상기의 원하는 구조와 일치하였다.
단계 4: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
상기 단계 3에서 제조한 생성물을 하기의 과정에 따라 보호기 제거하여 아민 히드로클로라이드 염을 얻었다. 상기 단계 3에서 얻은 생성물(14.0g, 0.032mole)을 불꽃 건조된 둥근 바닥 플라스크(0.1 L)에 장입하고, 건조 디옥산(40 ml)을 부가하였다. 여기에, 0℃에서 디옥산(2 당량, 6.32ml)에 용해된 4.0N HCl을 부가한 다음, 기체 방출이 멈출때 까지 반응시켰다. 반응후, 휘발성 물질을 진공하에 제거하고, 그 잔류물을 디에틸 에테르(50 ml)를 이용하여 분쇄하였다. 여과하여 고체를 회수하고, 에테르로 씻은 다음, 건조시켜서 원하는 생성물(12.5g)을 얻었다.
MS 및 NMR 분석 결과는 상기 원하는 구조와 일치하였다.
실시예 B: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
단계 1: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
아세트산 무수물(280.5 ml, 3.0 mol)에 용해된 3-브로모-5-클로로살리실알데히드(175.0 g, 743.2 mmol)의 현탁액에, 트리에틸아민 (103.6 ml, 743.2mmol)을 부가하였다. 상기 반응 용액을 4.5 시간동안 환류 가열하였다. 상기 용액을 냉각하고, 진공 응축하였다. 얻어지는 갈색 잔류물에 무수 에탄올(730ml)을 부가하였다. 상기 혼합물을 0 ℃에서 14 시간동안 유지하였다. 여과하여 갈색 고체를 회수하고 차가운 에탄올로 씻었다. 상기 고체를 진공 건조하여 원하는 생성물(123.0g, 64% 수율)을 얻었다.1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 2: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
-76℃에서, THF(400ml)에 용해된 코우마린(40.0g, 154.1 mmol)의 현탁액에, 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드(154.1ml, THF에서 1M 용액)를 교반하면서 10분에 걸쳐서 적가하였다. 다음에, 상기 반응 혼합물을 5분간 교반하고, -20℃까지 가온하고, 15분간 교반하였다. 이 용액에, THF(28ml)에 용해된 아세트산(9.25g, 154.1 mmol)을 5 분에 걸쳐서 부가하였다. 얻어지는 혼합물을 실온으로 가온하고, 휘발성 물질을 진공하에서 제거하였다. 잔류물을 에테르(850ml)에 용해하고, 포화중탄산 나트륨 수용액(2 x 100 ml), 염수(2 x 40ml)로 씻고 건조(황산나트륨)하였다. 얻어지는 에테르 용액을 약 160 ml로 응축하고, 0℃로 냉각하였다. 이러한 현탁액에, 디옥산(56.3 ml, 225 mol)에 용해된 4 M HCl을 부가하고, 그 혼합물을 0℃에서 30분간 교반하였다. 얻어지는 현탁액을 여과하고 그 여과 케이크를 에테르로 씻었다. 얻어지는 고체를 진공 건조하여 원하는 생성물을 HCl 염, 디옥산 용매화합물(45.0g)로 얻었다.1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치하였다.
단계 3: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
무수 에탄올(533ml)에 용해된 락톤(142.2g, 354.5mmol)의 현탁액에, 디옥산(157.8ml, 631.1mmol)에 용해된 4M HCl을 10 분에 걸쳐서 부가하였다. 얻어지는 반응 혼합물을 실온에서 2.5 시간동안 교반하였다. 휘발성 물질을 진공하에 제거하였다. 그 잔류물을 에틸 아세테이트(450ml)에 용해하고, 얻어지는 용액을 0 ℃에서 15 시간동안 교반하였다. 얻어지는 황갈색 침전물을 여과로 회수하고, 차가운 에틸 아세테이트로 씻었다. 얻어지는 고체를 진공 건조하여 원하는 생성물을 염화수소산염 형태로 얻었다(100.4 g, 79% 수율).1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 4: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
자기 교반봉을 구비한 불꽃 건조된 둥근 바닥 플라스크(0.1 L)에 N-t-Boc-글리신 N-히드록시숙신이미드 에스테르(Sigma, 2.72g, 0.010 mole), 건조 THF(Aldrich Sure Seal, 50 ml) 및 상기 단계 3에서 얻은 생성물(3.10g, 오산화인을 이용하여 밤새 진공 건조됨)을 부가하였다. 얻어지는 반응 혼합물을 약 0 ℃(염-얼음 중탕)까지 냉각하고, 트리에틸아민(1.01g, 0.010 mole)을 부가하였다. 다음에, 밤새 반응시켰다. 얻어지는 반응 혼합물을 1/2로 응축하고, 상기 실시예 A의 단계 3에서와 동일한 방식으로 처리하였다. 55 ℃에서 진공하에 휘발성물질을 유기층으로부터 제거하여, 오일(4g, 83% 수율)을 얻고 이를 정치시켜서 응고시켰다.
MS 및 NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 5: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
상기 단계 4에서 얻은 생성물을 하기의 과정에 따라 보호기 제거하여 아민 염화수소산염을 얻었다. 상기 단계 4에서 얻은 생성물(4.0g, 0.084mole)을 교반봉을 구비한 불꽃 건조된 둥근 바닥 플라스크(0.1 L)에 장입하고, 건조 디옥산(20 ml)을 부가하였다. 여기에, 디옥산(20ml)에 용해된 4.0 N HCl을 부가한 다음, 기체 방출이 멈출때 까지 반응시켰다(약 1시간). 반응후, 휘발성 물질을 진공하에 제거하고, 그 잔류물을 디에틸 에테르(50 ml)를 이용하여 분쇄하였다. 여과하여 고체를 회수하고, 에테르로 씻은 다음, 건조시켜서 원하는 생성물(2.7g, 78% 수율)을 얻었다.
MS 및 NMR 분석 결과는 상기 원하는 구조와 일치하였다.
실시예 C: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
단계 1: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
아세트산 무수물(164.8 ml, 1.8 mol)에 용해된 3,5-디브로모살리실알데히드(100g, 357 mmol)의 현탁액에, 트리에틸아민(45ml, 375mmol)을 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 아르곤 분위기하에 밤새 환류 가열하였다. 얻어지는 용액을 실온으로 냉각하여 고체 물질을 형성했다. 얻어지는 암갈색 반응 혼합물을 뜨거운 헥산(3 x 300 ml)으로 씻고, 중탄산나트륨 포화용액으로 씻었다. 얻어지는 고체를 에틸 아세테이트(2L)에 용해하고, 물로 씻었다. 유기층을 건조(황산나트륨)하고 응축하고, 여과하여 갈색 고체를 얻었다. 상기 고체를 진공 건조하여 실제적으로 순수한 6,8-디브로모코우마린 (94.2g, 87% 수율)을 얻었다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기 원하는 구조와 일치했다.
단계 2: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
-78℃에서, THF(100ml)에 용해된 6,8-디브로모코우마린(20.0g, 0.066 mol)(상기 단계 1에서 제조함)의 현탁액에, 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드(66ml, THF에서 1M 용액)를 교반하면서 10분에 걸쳐서 적가하였다. 다음에, 상기 반응 혼합물을 5분간 교반하고, 0 ℃까지 가온하고 15분간 교반하였다. 이 용액에, 아세트산(3.95g)을 1 분에 걸쳐서 부가하였다. 얻어지는 혼합물을 실온으로 가온하고 휘발성 물질을 진공하에서 제거하였다. 잔류물을 헥산(500ml)에 용해하고, 포화중탄산 나트륨 수용액(2 x 100 ml)으로 씻고, 건조(황산나트륨)하였다. 얻어지는 유기 용액을 응축하여 오일을 얻은 다음 바로, 디에틸 에테르(400 ml)에 용해하고 디옥산(30ml)에 용해된 4M HCl 을 부가하면서 0 ℃에서 30분간 교반하였다. 과량의 HCl을 진공 제거하고, 남아있는 현탁액을 여과하고, 그 여과 케이크를 에테르로 씻었다. 얻어지는 고체를 진공 건조하여 원하는 생성물을 HCl 염, 디옥산 용매화합물(45.0g)의 형태로 얻었다. MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치하였다.
단계 3: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
상기 단계 2에서 제조한 락톤(15g)을 무수 에탄올(400ml)에 용해하고 무수 HCl 가스를 1분간 통과시켰다. 얻어지는 반응 혼합물을 실온에서 2.5 시간동안 교반하였다. RPHPLC는 완전한 반응을 나타냈다. 휘발성 물질을 진공하에 제거하여 어두운 잔류물을 얻었다. 그 잔류물을 디에틸 에테르 (500ml)에 용해하고 얻어지는 용액을 밤새 교반하였다. 얻어지는 황갈색 침전물을 여과로 회수하고, 디에틸 에테르로 씻었다. 얻어지는 고체를 진공 건조하여 원하는 생성물을 염화수소산염 형태로 얻었다(15.2 g). MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 4: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
자기 교반봉을 구비한 불꽃 건조된 둥근 바닥 플라스크(0.2 L)에 N-t-Boc-글리신 N-히드록시숙신이미드 에스테르(Sigma, 8.1g, 0.030 mole), 건조 THF(Aldrich Sure Seal, 50 ml) 및 상기 단계 3에서 얻은 생성물(12g, 0.03mole, 오산화인을 이용하여 밤새 진공 건조됨)을 아르곤 분위기하에서 부가하였다. 얻어지는 반응 혼합물을 약 0 ℃(염-얼음 중탕)까지 냉각하고, N-메틸 모르폴린(3.03 g, 0.030 mole) 및 촉매량의 DMAP를 부가하였다. 다음에, 실온으로 가온하여 밤새 반응시켰다. 얻어지는 반응 혼합물을 1/2로 응축하고 상기 실시예 A의 단계 3에서와 동일한 방식으로 처리하였다. 휘발성물질을 55 ℃에서 진공하에 유기층으로부터 제거하여, 오일(15.7g, 93% 수율)을 얻고 이를 정치시켜서 응고시켰다.
MS 및 NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 5: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
상기 단계 4에서 얻은 생성물을 하기의 과정에 따라 보호기 제거하여 아민 염화수소산염을 얻었다. 상기 단계 4에서 얻은 생성물(13.0g, 0.084mole)을 교반봉을 구비한 불꽃 건조된 둥근 바닥 플라스크(0.1 L)에 장입하고, 건조 디옥산(40 ml)을 부가하였다. 여기에, 디옥산(30ml)에 용해된 4.0 N HCl을 부가한 다음, 기체 방출이 멈출때 까지 반응시켰다(약 1시간). 반응후, 휘발성 물질을 진공하에 제거하고 그 잔류물을 디에틸 에테르(50 ml)를 이용하여 분쇄하였다. 여과하여 고체를 회수하고 에테르로 씻은 다음, 건조시켜서 고체(10.6g, 93% 수율)을 얻었다.
MS 및 NMR 분석 결과는 상기 원하는 구조와 일치하였다.
실시예 D: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
단계 1: 하기 화학식을 갖는 3-클로로-5-브로모살리실알데히드의 제조
기계적 교반기 및 기체 공급관을 구비한 5L 둥근바닥 플라스크에, 5-브로모살리실알데히드(495g, 2.46mol) 및 아세트산을 실온에서 부가하여 슬러리를 형성하였다. 이 혼합물에, 염소 가스를 적당한 속도로 부가하여 약간 과량의 염소(183 g, 1.05 mol)를 용해하였다. 이러한 부가를 중지한 후, 밤새 반응시켰다. 형성되는 고체를 여과로 회수하고, 그 여액을 물(2.5L)에 희석하였다. 얻어지는 혼합물을 20분간 강하게 교반하고, 그 생성물을 여과로 회수하고 물로 씻었다. 합쳐진 고체를 진공 건조하여 원하는 3-클로로-5-브로모살리실알데히드(475g, 82% 수율)를 얻었다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 2: 하기 화학식을 갖는 6-브로모-8-클로로코우마린의 제조
기계적 교반기 및 냉각기를 구비한 5L 둥근바닥 플라스크에, 3-클로로-5-브로모살리실알데히드(554.1g, 2.35 mol, 1 당량), 아세트산 무수물(1203g, 11.8 mol., 5 당량) 및 트리에틸아민(237.4g, 2.35 mol, 1당량)을 장입하였다. 상기 반응 용액을 환류(131-141℃)로 밤새 가열하였다. 얻어지는 암갈색 반응 혼합물을 50 ℃까지 냉각하고, 얼음(2L)을 부가하여 얼음 중탕 냉각하면서 교반하였다. 1 시간후, 얻어지는 혼합물을 여과하고, 그 여액을 에탄올(1L)과 합쳤다. 이러한 혼합물에, 에탄올(300ml)을 부가하고 그 반응 혼합물을 1 시간동안 교반하였다. 형성되는 침전물을 여과로 회수하고 물:에탄올(3 x 1.3L)로 씻고, 진공 건조한 다음, 유동층 건조기에서 건조하였다. 총 수율은 563g 또는 92% 였다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 3: 하기 화학식을 갖는 3-아미노-3-(2-히드록시-3-클로로-5-브로모)페닐 프로판산 에틸 에스테르의 제조
기계적 교반기를 구비한 5L 3구 둥근바닥 플라스크에, 6-브로모-8-클로로코우마린(300g, 1.16 mole)(상기 단계 2에서 제조함) 및 건조 THF(900ml, Aldrich Sure Seal)를 부가하였다. 얻어지는 혼합물을 -45 ℃이하로 냉각(드라이 아이스/아세톤 중탕)하고, 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드(0.80 mol, 800 ml, THF에서 0.1M 및 헥산에서 0.6M, 1.2 당량)를 부가하면서 온도를 -45℃ 이하로 0.5 시간동안 유지하였다. 또다른 5L 플라스크에서, 에탄올(2.5L) 및 HCl (디옥산에 용해된 4N HCl, 1 L)를 -15℃에서 합쳤다. 얻어지는 코우마린 반응물을, 냉각된 HCl/에탄올 용액을 부가하여 냉각하였다. 0.5 시간후, 얻어지는 반응 혼합물의 온도는 -8.3℃였다. 상기 반응 혼합물을 0℃로 밤새 유지하고, 약 2.5 L로 응축하고, 에탄올(3 L)과 물의 사이로 분배했다. 얻어지는 유기층을 수성 HCl(4 x 1.2L, O.5 N HCl)로 씻었다. 합쳐진 수성층들의 pH를, 10% 수성 NaOH를 부가하여 약 8로 조절하고 염화메틸렌(1 x 7 L 및 3 x 2 L)을 이용하여 추출했다. 합쳐진 유기층들을 황산나트륨(900g)을 이용하여 건조시키고, 여과하고, 디옥산(400 ml)에 용해된 4M HCl을 부가하면서 교반하였다. 침전이 형성된 후 여과하여 고체를 분리하였다. 얻어지는 혼합물을 2.5 L로 응축하고 헥산(2.5L)을 부가하고, 여과하여 침전물을 분리했다. 얻어지는 여과 케이크를 염화메틸렌/헥산(1:2)으로 씻고, 흡인 건조하고, 40℃ 에서 진공 오븐 건조하여 원하는 생성물(251g, 60% 수율)을 얻었다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 5: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
실시예 B의 단계 4에서 이성질체의 제조에 대하여 제시한 것와 실제적으로 동일한 과정 및 상대적 양을 이용하여 상기의 화합물을 제조하였다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 6: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
실시예 B의 단계 5에서 이성질체의 제조에 대하여 제시한 것와 실제적으로 동일한 과정 및 상대적 양을 이용하여 상기의 화합물을 제조하였다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
실시예 E: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
단계 1: 하기 화학식을 갖는 3-아이오도-5-클로로살리실알데히드의 제조
N-아이오도숙신이미드(144.0g, 0.641 mole)를 디메틸포름아미드(400ml)에 용해된 5-클로로살리실알데히드(100g, 0.638mole)의 용액에 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 2일간 교반하였다. 추가의 N-아이오도숙신이미드(20.0g)를 부가하고 2일간 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(1L)로 희석하고, 염산(300 ml, 0.1N), 물(300ml), 티오황산나트륨(5%, 300 ml), 염수(300 ml)로 씻고, 황산나트륨을 이용하여 건조하고, 건조상태까지 응축하여 원하는 알데히드(162g, 90% 수율)를 담황색 고체로 얻었다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 2: 하기 화학식을 갖는 3-클로로-8-아이오도코우마린의 제조
3-아이오도-5-클로로살리실알데히드(100g, 0.354 mole), 아세트산 무수물(300ml) 및 트리에틸아민(54ml)의 혼합물을 18 시간동안 환류가열하였다. 냉각하여, 원하는 코우마린을 암갈색 결정 물질로서 침전시켰다. 상기 침전물을 여과하고 헥산/에틸 아세테이트(4:1, 200ml)으로 씻은 다음, 공기 건조하였다. 수율:60g (55%).
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 3: 하기 화학식을 갖는 (R,S)-4-아미노-3,4-디히드로-6-클로로-8-아이오도코우마린 히드로클로라이드의 제조
리튬 헥사메틸디실아잔(21.62ml, 1M, 21.62 mol)을 -78 ℃에서 테트라히드로푸란(100 ml)에 용해된 6-클로로-8-아이오도코우마린(6.63g, 21.62mmol)의 용액에 부가하였다. 이 온도에서 상기 반응 혼합물을 30분간 교반하고, 0℃에서 1시간 교반하였다. 아세트산(1.3g, 21.62mmol)을 상기 반응 혼합물에 부가하였다. 얻어지는 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(300ml) 및 탄산나트륨 포화용액(200ml)에 부가하였다. 유기층을 분리하고 염수(200ml)로 씻고, 황산나트륨위에서 건조시키고, 응축하여 잔류물을 얻었다. 상기 잔류물을 0℃ 에서 무수 에테르(200ml)에 부가한 후 디옥산/HCl (4N, 30ml)에 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 교반하고, 여과하고, 진공 건조시켜서 원하는 생성물(4.6g, 59% 수율)을 분말로 얻었다. (RPHPLC: Rf 6.8분; 그레디언트 15분간 10% 아세토니트릴-90% 아세토니트릴에서 다음 6분간 100% 아세토니트릴; 물 및 아세토니트릴은 0.1% TFA를 함유함; Vydac C18 단백질 펩티드 칼럼, 2ml/분 유속, 254nm에서 측정).
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 4: 하기 화학식을 갖는 (R,S)-에틸 3-아미노-3-(5-클로로-2-히드록시-3-아이오도)페닐 프로피온에이트 히드로클로라이드의 제조
염화수소 가스를 에탄올(250ml)에 용해된 4-아미노-3,4-디히드로-6-클로로-8-아이오도코우마린 (22.0g, 61.09 mmol)의 용액내로 버블링시키면서, 상기 반응 혼합물을 포화될 때 까지 0-10℃로 유지했다. 6 시간 환류한 후, 대부분의 용매가 증류 제거되었다. 얻어지는 차가운 잔류물을 무수 에테르에 부가하고, 3시간동안 교반하였다. 상기 최초의 검 상태는 결정성 물질로 변화되었다. 상기 결정성 생성물을 여과하고 건조시켜서 원하는 생성물(20g, 81% 수율)을 백색 결절 분말로 얻었다. (Rf 7.52 분, 상기 단계 3과 동일한 조건).
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 5: 하기 화학식을 갖는 (R,S)-에틸 3-(N-BOC-글리)-아미노-3-(5-클로로-2-히드록시-3-아이오도)페닐 프로피온에이트의 제조
BOC-글리(2.16g, 12.31 mmol), HOBT(1.67g, 12.31 mmol), EDCl(2.36g, 12.31 mmol) 및 DMF(50 ml)를 0 ℃에서 1 시간 교반하였다. 상기 반응 혼합물에, 에틸 3-아미노-3-(5-클로로-2-히드록시-3-아이오도)프로피온에이트 히드로클로라이드(5.0g, 12.31mmol)을 부가한 다음, 트리에틸아민(3.5ml)을 부가했다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 18 시간 교반하였다. DMF를 진공하에서 제거하고, 그 잔류물을 에틸 아세테이트(300ml)와 중탄산나트륨(200ml)의 사이에 분배했다. 얻어지는 유기층을 염산(1N, 100 mL), 염수(200ml)로 씻고, 황산나트륨으로 건조시킨 다음, 응축하여 원하는 생성물(6g, 93% 수율)을 고체 상태로 얻었다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 6: 하기 화학식을 갖는 (R,S)-에틸 3-(N-글리)-아미노-3-(5-클로로-2-히드록시-3-아이오도)페닐 프로피온에이트 히드로클로라이드의 제조
디옥산/HCl (4N, 20ml)를 에틸 3-(N-BOC-글리)-아미노-3-(5-클로로-2-히드록시-3-아이오도)프로피온에이트(6.0g, 11.39mmol)에 0 ℃에서 부가하고, 실온에서 3시간 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 응축하고, 톨루엔(100 ml)을 부가한 후 한 번 더 응축하였다. 얻어지는 잔류물을 에테르에 현탁하고 여과한 다음, 건조하여 원하는 생성물을 결정 분말(5.0g, 95% 수율) 형태로 얻었다.
(RPHPLC: Rf 8.3 분, 상기 단계 3과 동일한 조건).
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
실시예 F: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
단계 1: 3-아이오도-5-브로모살리실알데히드의 제조
자기 교반기를 구비한 500 ml 둥근바닥 플라스크에서, 아세토니트릴(150ml) 및 물(50 ml)에 용해된 5-브로모살리실알데히드(20.0g, 0.1mole) 및 요오드화칼륨(17g, 0.1mole)에 클로르아민 T(23g, 0.1mole)을 부가하였다. 상기 혼합물을 1 시간동안 반응시켰다. 상기 반응 혼합물을 염산(10%, 200ml)과 에틸 아세테이트의 사이에 분배했다. 유기층을 황산나트륨을 이용하여 건조하고, 여과 및 진공 응축하였다. 상기 잔류물에, 헥산을 부가하고 얻어지는 혼합물을 50℃까지 15분간 가열하였다. 용해되지 않은 물질을 여과로 제거하였다. 여액을 진공 응축하여 황색의 3-아이오도-5-브로모살리실알데히드(26g)를 얻었다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 2: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
실시예 E의 단계 2에서의 3-아이오도-5-클로로살리실알데히드대신에 동일한 양의 3-아이오도-5-브로모-살리실알데히드가 사용되었다는 것을 제외하곤, 실시예 E의 단계 2-6의 과정과 동일한 과정을 이용하여 상기의 화합물을 제조하였다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
실시예 H: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
단계 1
기계적 교반기, 클라이젠 어뎁터, 부가 깔대기, 환류 냉각기 및 열전쌍을 구비한 2L 3구 둥근바닥 플라스크에 에탄올(375ml) 및 탈이온수(375ml)를 부가하였다. 1,3-디아미노-2-히드록시프로판(125.04g, 1.39mol)(Aldrich)를 상기 반응 플라스크에 부가하고 교반하여 용해시켰다. 이황화탄소(84ml, 1.39 mol)을 25-33 ℃에서 35분간 부가 깔대기를 통해 적가하여 유백색 혼합물을 얻었다. 얼음 중탕을 이용하여 상기 온도를 유지했다. 상기 반응 혼합물을 73.4 ℃로 2시간동안 환류시켜서 황색 용액을 얻었다. 상기 반응 혼합물을 얼음 중탕을 이용하여 25℃로 냉각한 다음, 진한 HCl(84ml)을 적가하면서 온도를 25-26℃로 유지했다. 상기 반응 혼합물을 78.4℃에서 21 시간동안 환류시켰다. 얻어지는 반응 용액을 2℃로 냉각하고 진공 여과하여 생성물을 회수했다. 얻어지는 회색 고체를 얼음 중탕 냉각된 에탄올:물(1:1)(50ml) 로 3회 씻고, 40℃에서 진공 건조하여 5-히드록시테트라히드로피리미딘-2-티온(63.75g, 34.7% 수율)을 백색 고체 형태로 얻었다.
MS 및 NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 2
상기 단계 1에서 제조한 5-히드록시테트라히드로피리미딘-2-티온(95g, 0.72mol), 무수 에탄올(570ml) 및 오오드화메틸(45ml, 0.72mol)을, 기계적 교반기 및 열전쌍을 구비한 2L 둥근 바닥 플라스크에 부가했다. 상기 반응 혼합물을 78 ℃로 5시간동안 환류시킨 다음, 실온으로 냉각하였다. 상기 반응 혼합물을 진공 응축하여 백색 고체(194.72g)를 얻었다. 상기 백색 고체를 에틸 에테르(500ml)를 이용하여 3회 분쇄하고, 진공 건조하여 2-메틸티오에테르-5-히드록시피리미딘 히드로아이오드(188.22g, 95.4% 수율)를 백색 고체 형태로 얻었다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 3
환류 냉각기, 기계적 교반기 및 정적 질소 분위기를 가지는 2L 3구 둥근바닥 플라스크에, 2-메틸 티오에테르-5-히드록시피리미딘 히드로아이오도(150.81g, 0.55 mol), 염화메틸렌(530ml), 디메틸아세트아미드(53ml) 및 트리에틸아민(76.7ml, 0.55 ml)을 부가하였다. 상기 혼합물을 얼음 중탕을 이용하여 냉각하고 디-3차-부틸 디카본에이트(120.12g, 0.55 mol)를 4℃에서 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 42.5℃로 18시간동안 가열하여 담황색 용액을 얻었다. 상기 용액을 2L 분리 깔대기에 옮기고, 탈이온수(200 ml)로 3회 세척하고, 황산나트륨을 이용하여 건조하고, 여과 및 진공 응축하여 Boc-2-메틸티오에테르-5-히드록시피리미딘(134.6g, 99.35% 수율)을 담황색 점착성 오일 형태로 얻었다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 4
Boc-2-메틸티오에테르-5-히드록시피리미딘(50.3g, 0.204mol), 아미노-5-히드록시벤조산(Aust. J. Chem. (1981)34(6), 1319-24)(25.0g, 0.1625 mole) 및 50 ml 무수 DMA를 2일간 100℃로 가열하면서 교반하였다. 슬러리 침전물을 얻었다. 상기 반응물을 실온으로 냉각하고 상기 침전물을 여과하고, CH3CN으로 씻은 다음, 에틸 에테르로 씻고 건조시켰다. 얻어지는 고체를 물에서 슬러리화하고, 진한 HCl을 이용하여 산성화하여 용액을 얻었다. 상기 용액을 얼림 건조하여 원하는 생성물(14.4g)을 백색 고체 형태로 얻었다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
실시예 I: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
단계 1: 하기 화학식을 갖는 레포르맷스키 화합물의 제조
냉각기, 온도 탐침 및 기계적 교반기를 구비한 4L 플라스크에, Zn 금속(180.0g, 2.76mol, -30-100 매시) 및 THF(1.25 L)를 부가하였다. 교반하면서, 1,2-디브로모메탄(4.74ml, 0.05 mol)을 주입기를 통해 부가하였다. 또는 그렇지않으면, THS Cl(0.1 당량)을 실온에서 1 시간동안 부가할 수 있다. 불활성 가스를 이용하여 퍼어지(3회 N2/진공 사이클)한 후, THF에 용해된 상기 아연의 현탁액을 65℃에서 환류 가열하고, 이 온도에서 1 시간동안 유지했다. 상기 혼합물을 50℃까지 냉각하고 3차-부틸 브로모아세테이트(488g, 369 ml, 2.5 mol)를 50 ml 주입기 및 주입 펌프(4.1ml/분으로 주입량 설정)를 통해 1.5 시간에 걸쳐서 장입하였다. 상기 부가동안 50℃+/-5℃의 온도를 유지하였다. 상기 부가를 완료한 후, 상기 반응 혼합물을 50℃에서 1 시간동안 교반하였다. 다음에, 상기 혼합물을 25℃까지 냉각하여 침전시켰다. 상기 THF 모액을 굵은 유리 필터 막대 및 부분 진공 트랜스퍼(20 mmHg)를 이용하여 2L 둥근 바닥 플라스크내로 경사분리하였다. 따라서, 상기 THF의 약 65%를 상기 혼합물로부터 제거하였다. 1-메틸-2-피롤리디논(NMP, 800ml)을 부가하고, 5분간 교반했다. 상기 혼합물은 여과되어 어떤 남아있는 아연이 제거될 수 있다. 분석 결과, 1.57M 및 94% 수율을 가지는 원하는 레포르맷스키의 적정값이 확인되었다. 또는 그렇지않으면, 상기 고체 물질은 여과에 의해 최초의 반응 혼합물로부터 분리될 수 있다. 얻어지는 여과 케이크를 THF로 씻어서 백색 고체를 얻은 다음, 질소 분위기하에 건조시켜서 원하는 생성물을 모노 THF 용매화물의 형태로 얻는다. 상기 용매화물은 20℃(건조)에서 장시간동안 보관될 수 잇다. 대표적인 수율은 85-90% 이다.
단계 2
2A. 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
DMF(40ml)에 용해된 3,5-디클로로살리실알데히드(11.46g, 60 mole)의 용액에, 탄산칼륨(분말, 진공하에 100℃에서 오븐 건조, 8.82g, 60mmole)를 실온에서 부가하여 담황색 슬러리를 얻었다. 다음에, MEMCl(순수, 7.64g, 61mmole)를 부가하면서 중탕 온도를 20 ℃로 유지했다. 다음에, 상기 혼합물을 22℃에서 6시간동안 교반하고 MEMCl(0.3g, 2.3 mmole)을 부가했다. 상기 혼합물을 0.5 시간동안 더 교반하고 차가운 물(200 ml)에 부가하여 상기 생성물을 침전시켰다. 얻어지는 슬러리를 압력 필터상에서 여과하고 그 여액을 물로 씻고 N2/진공하에서 건조시켜서 원하는 생성물(14.94g, 89% 수율)을 백색 고체 형태로 얻었다.
1H NMR(CDCl3TMS) 3.37(s, 3H), 3.54 - 3.56(m, 2H), 3.91 - 3.93(m, 2H), 5.30(s, 2H), 7.63(d, 1H) 7.73(d 1H), 10.30(s 1H);13C NMR(CDCl3, TMS) d(ppm): 59.03, 70.11, 99.57, 126.60, 129.57, 130.81, 132.07, 135.36, 154.66, 188.30. DSC:48.24℃(흡열 90.51J/g);
미량분석: C11H12Cl2O4
계산값: C: 47.33%; H: 4.33%; Cl: 25.40%;
실측값: C: 47.15%; H: 4.26%; Cl: 25.16%.
2B. 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
상기 단계 2A에서 얻은 생성물(35.0g, 0.125 mol)을, 기계적 교반기 및 부가 깔대기를 구비한 1L 3구 둥근바닥 플라스크에 장입한 후 THF(200ml)를 부가했다. 상기 용액을 22℃에서 교반한 다음, (S)-페닐글리시놀(17.20g, 0.125mol)을 한꺼번에 부가하였다. 22℃에서 30분간 유지한 후, 황산나트륨922g)을 부가했다. 상기 혼합물을 22℃에서 1 시간동안 교반하고, 굵은 유리 필터에서 여과하였다. 여액을 감압하에 응축하였다. 더 이상의 정제는 수행하지 않았으며, 얻어지는 조제 이민(crude imine)을 하기의 단계 2C에서의 커플링 반응에 직접 사용했다.
2C. 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
기계적 교반기 및 부가 깔대기를 구비한 1L 3구 둥근바닥 플라스크에, 상기 단계 1에서 제조한 고체 물질(91.3g, 0.275 mol) 및 NMP(200ml)를 질소 분위기하에 부가했다. 다음에, 상기 용액을 -10℃까지 냉각하고, 350 rpm으로 교반하였다. NMP에 용해된 상기 단계 2B에서 제조한 이민의 용액을 질소 분위기하에서 제조한 다음, 상기 반응 혼합물에 20분에 걸쳐서 부가하면서 온도를 -5℃(자켓 온도 -10℃)로 유지했다. 그후, 상기 혼합물을 -8 ℃에서 1.5 시간동안 더 교반하고, -5℃에서 1 시간동안 교반하였다. -10 ℃까지 냉각한 후, 진한 HCl/포화 NH4Cl 용액 (8.1ml/200ml)의 혼합물을 10분에 걸쳐서 부가하였다. MTBE(200 ml)를 부가하고 얻어지는 혼합물을 23℃에서 15분간 200rpm으로 교반하였다. 교반을 멈추고 층들을 분리하였다. 수성층을 MTBE(100ml)를 이용하여 추출했다. 두 개의 유기 층을 합치고 NH4Cl 포화 용액 (100ml), 물(100 ml) 및 염수(100 ml)로 연속적으로 씻었다. 얻어지는 용액을 황산나트륨(30g)을 이용하여 건조하고, 응축하여 오랜지색 오일(66.3g)을 얻었다. 상기 오일은 양성자 및 탄소 nmr로 확인하였을 때 원하는 생성물을 하나의 부분 입체 이성질체 형태로 함유하며 정치시에 응고하는 것이다. 분석용 시료를 헵탄으로부터 결정화하여 정제하여 회색의 고체를 얻었다. 양성자 및 탄소 NMR 및 IR 스펙트럼은 상기의 원하는 구조와 일치했다. [α]D 25=+8.7°(c=1.057, MeOH).
미량분석: C25H33Cl2NO6
계산값: C: 58.77%; H: 6.47%; N: 2.72%; Cl: 13.78%;
실측값: C: 58.22%; H: 6.54%; N: 2.70%; Cl: 13.66%.
단계 3: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
3A. 에탄올 (250ml)에 용해된 상기 단계 2에서 제조한 조제 에스테르(17.40g, 0.033 mole(이론값))의 용액을 1L 3구 자켓 반응기에 장입했다. 상기 용액을 0℃까지 냉각하고, Pb(OAc)4(14.63g, 0.033 mole)를 한꺼번에 부가하였다. 2 시간후, NaOH의 15% 용액(30 ml)을 부가하고 감압하에 에탄올을 제거하였다. 또다른 15% NaOH(100ml)를 부가한 다음, 얻어지는 혼합물을 MTBE(2 x 100 ml)로 추출하고, 물( 2 x 100 ml) 및 염수(50 ml)로 씻고, 황산나트륨을 이용하여 건조시키고, 셀라이트상에서 여과하고 감압하에 응축하여 오랜지색 오일(12.46g)을 얻었다. 상기 오일을 박층 크로마토그래피(TLC)로 균질화하고 더 이상의 여과없이 사용했다.
3B. 상기 단계 3A에서 얻은 오일을 에탄올(30 ml)로 희석하고 파라톨루엔 술폰산(1.3 당량, 0.043 몰, 8.18 g)을 부가했다. 상기 용액을 8 시간동안 환류 가열하고, 실온까지 냉각하고, 감압하에 응축하였다. 잔류물을 THF(20 ml)로 처리하고 환류 가열하여 용액을 형성했다. 상기 용액을 실온까지 냉각하고, 결정화하였다. 헵탄(30 ml )및 THF(10ml)를 부가하여 유체 슬러리를 형성하고, 이를 여과하였다. 여과 케이크를 THF/헵탄(40ml, 1/1)으로 씻고 질소 분위기하에 압력 필터에서 2 시간동안 진공 건조하여 백색 고체(7.40g)를 얻었다. 양성자 및 탄소 NMR 및 IR 스펙트럼은 실제적으로 에난시오머 형태로 존재하는 상기 원하는 생성물과 일치했다.
미량분석: C18H21Cl2NO6S, 0.25 C4H8O
계산값: C: 48.73%; H: 4.95%; N: 2.99%; Cl: 15.14%;
실측값: C: 48.91%; H: 4.95%; N: 2.90%; Cl: 14.95%;
단계 4: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
자기 교반봉 및 질소기포 발생기를 구비한 500 ml 둥근바닥 플라스크에, 상기 단계 3에서 제조한 생성물의 유리 염기(21.7g, 0.065 mole), N-t-Boc-글리신 N-히드록시숙신이미드 에스테르(17.7g, 0.065 mole) 및 DMF(200 ml)를 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 질소분위기 및 실온에서 3.25 시간동안 교반하여 담황색 용액을 형성했다. 상기 반응 혼합물을 얼음 냉각된 에틸 아세테이트(1.2 L)에 부가했다. 상기 유기 용액을 1M HCl(250 ml)로 씻은 다음 염수(500 ml)로 씻고, 황산나트륨을 이용하여 건조시키고, 감압하에 건조상태로 응축하여 오일을 얻고 이를 50 ℃에서 건조시켜서 무색 오일 형태의 생성물(28.12g, 99%)을 얻었다. 에틸 아세테이트/헥산으로부터 시이드 결정을 얻었다. 상기 생성물(28g)을 에틸 아세테이트(35ml) 및 헥산(125ml)에 용해하였다. 상기 용액에 상기 시이드 결정을 부가하여 침전물을 형성했다. 상기 고체를 여과하고 55℃에서 진공하에 밤새 건조하여 무색 고체(27.0g, 95% 수율)를 얻었다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 5: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
상기 단계 4에서 제조한 Boc-보호기 글리신 아미드(27.0g, 0.062 mole)를 P2O5및 NaOH 펠릿을 이용하여 밤새 건조하였다. 얻어지는 고체를 디옥산(40ml)에 용해하고, 그 용액을 0 ℃로 냉각하였다. 동일한 체적의 4N HCl/디옥산(0.062mole)을 부가하고, 2 시간동안 반응시켰다. 이때 RPHPLC로 측정한 전환율은 80% 였다. 상기 반응 혼합물을 4 시간동안 실온에서 유지하였다. 상기 반응 혼합물을 40℃에서 응축하여 발포체를 형성하고, 이를 에테르(200ml)를 이용하여 분쇄하였다. 형성되는 백색 고체를 P2O5상에서 건조하여 원하는 글리신-베타-아미노산 에스테르 화합물을 HCl 염(20.4g, 88.5% 수율)의 형태로 얻었다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
실시예 J: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
단계 1: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
실시예 I의 단계 2A에 따라 제조한 MEM 보호기 3-브로모-5-클로로살리실알데히드(129.42g, 0.4 mol)를 준비했다. 3,5-디클로로살리실알데히드대신에 동일량의 3-브로모-5-클로로살리실알데히드를 이용하고, 이를 기계적 교반기를 구비한 2L 둥근바닥 플라스크에 채운다음, THF(640ml) 및 (S)-페닐글리시놀(54.86g, 0.4mol)을 부가하였다. 22℃에서 30분간 유지한 후, 황산나트륨(80g)을 부가했다. 상기 혼합물을 22℃에서 2 시간동안 교반하고, 굵은 유리 필터에서 여과하였다. 여액을 감압하에 응축하여 원하는 이민을 함유하는 담황색 오일(180.0g)을 얻었다. 더 이상의 정제는 수행하지 않았으며, 얻어지는 조제 생성물을 하기의 단계 2에서의 커플링 반응에 직접 사용했다.
미량분석: C19H21BrClNO4
계산값: C: 51.54%; H: 4.78%; N: 3.16%; Br: 18.04%; Cl: 8.00%
실측값: C: 50.22%; H: 4.94%; N: 2.93%; Br: 17.15%; Cl: 7.56%
단계 2: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
기계적 교반기를 구비한 5L 3구 둥근바닥 플라스크에서, 상기 실시예 I의 단계 1에서 제조한 물질(332.0g, 0.8 mol)을 NMP(660ml)에 질소 분위기하에서 용해하였다. 다음에, 상기 용액을 -10℃까지 냉각하였다. NMP(320ml)에 용해된 상기 단계 1에서 제조한 이민의 용액을 질소 분위기하에서 제조한 다음, 상기 반응 혼합물에 30분에 걸쳐서 부가하면서 온도를 -5℃로 유지했다. 그후, 상기 혼합물을 -8 ℃에서 1 시간동안 더 교반하고, -5℃에서 2 시간동안 교반하였다. -10 ℃까지 냉각한 후, 진한 HCl/포화 NH4Cl 용액 (30ml/720ml)의 혼합물을 10분에 걸쳐서 부가하였다. MTBE(760 ml)를 부가하고 얻어지는 혼합물을 23℃에서 30분간 교반하였다. 교반을 멈추고 층들을 분리하였다. 수성층을 MTBE(320ml)를 이용하여 추출했다. 유기 층들을 합치고 NH4Cl 포화 용액 (320ml), 탈이온수(320 ml) 및 염수(320 ml)로 연속적으로 씻었다. 얻어지는 용액을 황산나트륨(60g)을 이용하여 건조하고 응축하여 황색 오일(221.0g)을 얻었다. 상기 오일은 양성자 NMR로 확인하였을 때 원하는 생성물을 하나의 부분 입체 이성질체 형태로 함유한다.
DSC: 211.80℃(흡열. 72.56 J/g), 228.34℃(98.23 J/g);
미량분석: C25H33BrClNO6
계산값: C: 53.72%; H: 5.95%; N: 2.50%; Br: 14.29%; Cl: 6.33%
실측값: C: 52.11%; H: 6.09%; N: 2.34%; Br: 12.84%; Cl: 6.33%
단계 3: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
기계적 교반기를 구비한 3L 3구 둥근바닥 플라스크에, 에탄올(1500L)에 용해된 상기 단계 2에서 제조한 조제 에스테르(111g)의 용액을 질소 분위기하에 장입하였다. 상기 반응 혼합물을 0℃ 까지 냉각하고, 사아세트산납(88.67g, 0.2mol)을 한꺼번에 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 0 ℃에서 3 시간동안 교반한 다음, 상기 반응 혼합물에 5 ℃이하의 온도에서 15% NaOH 수용액(150ml)을 부가하였다. 로타벱(rotavap)상에서 감압하에 메탄올을 제거하였다. 또다른 150ml의 15% NaOH 수용액을 부가한 다음, 상기 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 300 ml)를 이용하여 추출하고, 탈이온수(2 x 100 ml) 및 염수(2 x 100 ml)로 씻고, 무수 황산마그네슘(30g)위에서 건조하였다. 다음에, 셀라이트상에서 여과하고 감압하에 응축하여 원하는 생성물(103g)을 적색 오일 형태로 얻었다.
단계 4: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
실시예 I의 단계 3의 생성물을 이용하고 실시예 I의 단계 4 및 5에서 이용된 과정을 이용하여 상기의 화합물을 제조하였다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
실시예 K
실시예 J의 화합물의 제조를 위한 변형예
단계 1: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
실시예 B의 단계 3에서 제조한 생성물(50.0g, 139.2mmol)및 NaHCO3(33.5g, 398.3mmol)에, CH2Cl2(500 ml) 및 물(335ml)을 부가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 10 분간 교반하였다. CH2Cl2(380 ml)에 용해된 벤질 클로로포름에이트(38.0g, 222.8mmol)의 용액을 20분에 걸쳐서 부가하면서 빠르게 교반하였다. 50분후, 상기 반응 혼합물을 별도의 깔대기에 따르고, 유기층을 회수했다. 수성층을 CH2Cl2(170 ml)로 씻었다. 합쳐진 유기층들을 황산마그네슘위에서 건조하고 진공 응축하였다. 얻어지는 검질 고체를 헥산을 이용하여 분쇄하고 여과로 회수하였다. 얻어지는 황갈색 고체를 진공 건조하여 원하는 라세미 생성물(61.2g, 96% 수율)을 얻었다. 이 물질을 카랄 칼럼(chiral column)을 이용하여 반전상 크로마토그래피 정제하여 각각의 순수한 에난시오머를 얻었다. 상기에서 이용되는 칼럼은 90 : 10 헵탄 : 에탄올 이동상을 이용하며 10 미크론 입자 크기를 갖는 Whelk-O(R,R)이었다. 유사한 칼럼 및 용매 조건을 이용하는 분석 HPLC를 이용하여 측정한 광학 순도는 98% 이상이었다.
1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 2: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
CH2Cl2(450 ml)에 용해된 상기 단계 1에서 제조한 화합물 용액(48.5g, 106.2 mmol)에, CH2Cl2(100 ml)에 용해된 트리메틸실릴 아이오도(25.5g, 127.4mmol)를 캐눌라(canula)를 통해 부가하였다. 얻어지는 오랜지색 용액을 실온에서 1 시간동안 교반하였다. 메탄올(20.6 ml, 509.7 mmol)을 적가하고 그 용액을 15분간 교반하였다. 얻어지는 반응 용액을 진공 응축하여 오랜지색 오일을 얻었다. 그 잔류물을 메틸 t-부틸 에테르(500 ml)에 용해하고 1N HCl(318 ml) 및 물(1 x 200 ml, 1 x 100 ml)을 이용하여 추출하였다. 얻어지는 수성 추출물을 MTBE(100 ml)로 다시 씻었다. 얻어지는 수용액에 고체상 NaHCO3(40.1g, 478mmol)를 조금씩 부가하였다. 얻어지는 염기성화 수성 혼합물을 MTBE(1 X 1L, 2 x 200 ml)를 이용하여 추출하였다. 합쳐진 유기 용액을 염수로 씻고 진공 응축하여 원하는 생성물(23.3g, 68% 수율)을 얻었다.1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 3: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
DMF(200ml)에 용해된 상기 단계 2에서 제조한 생성물 용액(23.3g, 72.1 mmol)에, N-T-Boc-글리신N-히드록시숙신이미드 에스테르(17.9g, 65.9 mmol)를 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 20 시간동안 교반하였다. 상기 혼합물을 에틸 아세테이트(1.2L)에 따르고, 1M HCl(2 x 250 ml), NaHCO3포화 수용액(2 x 250ml) 및 염수(2 x 250 ml)로 씻었다. 상기 용액을 황산마그네슘위에서 건조하고 응축하여 원하는 생성물(32.0g, 100% 수율)을 얻었다.
원소분석: C18H24BrClN2O6
계산값: C: 46.06; H: 5.04; N: 5.84;
실측값: C: 45.17; H: 5.14; N: 6.12;
1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 4: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
무수에탄올(205ml)에 용해된 상기 단계 3에서 제조한 생성물(31.9 g, 66.5 mmol)의 용액에, 에탄올 HCl 용액(3M 용액, 332.4mmol)을 부가하였다. 상기 반응 용액을 58℃에서 30분간 교반하였다. 상기 용액을 냉각하고 진공 응축하였다. 얻어지는 잔류물을 에틸 아세테이트(250ml)에 용해하고 0 ℃에서 2 시간동안 교반하였다. 여과하여 백색 침전물을 회수하고, 차가운 에틸 아세테이트로 씻었다. 얻어지는 고체를 진공 건조하여 원하는 생성물(23.5g, 85% 수율)을 얻었다.
원소분석: C13H16BrClN2O4+ 1.0HCl
계산값: C: 37.53; H: 4.12; N: 6.73;
실측값: C: 37.29; H: 4.06; N: 6.68;
실시예 L: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
단계 1: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
DMF(175ml)에 용해된 3-클로로-5-브로모살리실알데히드(35.0g, 0.15 mole)의 용액에, 탄산칼륨(분말, 진공하에 100℃에서 오븐 건조, 22.1g, 0.16 mole)를 실온에서 부가하여 담황색 슬러리를 얻었다. 다음에, MEMCl(순수, 25.0g, 0.2 mole)를 부가하면서 중탕 온도를 20 ℃로 유지했다. 다음에, 상기 혼합물을 22℃에서 6시간동안 교반하고 탈이온수(1200 ml)에 부가하여 생성물을 침전시켰다. 얻어지는 슬러리를 압력 필터상에서 여과하고, 그 여과 케이크를 탈이온수(2 x 400ml)로 씻고 N2/진공하에서 건조시켜서 원하는 생성물(46.0g, 95% 수율)을 회색 고체 형태로 얻었다.
1H NMR(CDCl3TMS) 3.35(s, 3H), 3.54 - 3.56(m, 2H), 3.91 - 3.93(m, 2H), 5.30(s, 2H), 7.77(d, 1H) 7.85(d 1H), 10.30(s 1H);13C NMR(CDCl3, TMS) d(ppm): 59.05, 70.11, 71.49, 99.50, 117.93, 129.78, 132.37, 138.14, 155.12, 188.22. DSC:48.24℃(흡열 90.51J/g);
미량분석: C11H12BrClO4
계산값: C: 40.82%; H: 3.74%; Cl: 10.95%; Br: 24.69%
실측값: C: 40.64%; H: 3.48%; Cl: 10.99%; Br: 24.67%
단계 2: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
기계적 교반기를 구비한 500 ml의 3구 둥근바닥 플라스크에, 상기 단계 1에서 제조한 생성물(32.35g, 0.1mol)을 장입한 다음, THF(160 ml) 및 (S)-페닐글리시놀(13.71g, 0.1mol)을 부가하였다. 22℃에서 30분간 유지한 후, 황산마그네슘(20g)을 부가하였다. 상기 혼합물을 22℃에서 1 시간동안 교반하고 굵은 유리 필터상에서 여과하였다. 얻어지는 여액을 감압하에 응축하여 원하는 이민을 함유하는 담황색 오일(48.0g)을 얻었다. 더 이상의 정제는 수행하지 않았으며 상기 조제 생성물을 다음의 반응 단계에서 바로 사용했다.
미량분석: C19H21BrClNO4
계산값: C: 51.54%; H: 4.78%; N: 3.16% Br: 18.04%; Cl: 8.00%
실측값: C: 51.52%; H: 5.02%; N: 2.82% Br: 16.31%; Cl: 7.61%
단계 3: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
기계적 교반기를 구비한 500ml 3구 둥근바닥 플라스크에서, 상기 실시예 I의 단계 1에서 제조한 물질(332.0g, 0.8 mol)을 NMP(660ml)에 질소 분위기하에서 용해하였다. 다음에, 상기 용액을 -10℃까지 냉각하였다. NMP(320ml)에 용해된 상기 단계 2에서 제조한 이민의 용액을 질소 분위기하에서 제조한 다음, 상기 반응 혼합물에 30분에 걸쳐서 부가하면서 온도를 -5℃로 유지했다. 그후, 상기 혼합물을 -8 ℃에서 1 시간동안 더 교반하고, -5℃에서 2 시간동안 교반하였다. -10 ℃까지 냉각한 후, 진한 HCl/포화 NH4Cl 용액 (30ml/720ml)의 혼합물을 10분에 걸쳐서 부가하였다. MTBE(760 ml)를 부가하고 얻어지는 혼합물을 23℃에서 1시간 교반하였다. 교반을 멈추고 층들을 분리하였다. 수성층을 MTBE(320ml)를 이용하여 추출했다. 유기 층들을 합치고 NH4Cl 포화 용액 (320ml), 탈이온수(320 ml) 및 염수(320 ml)로 연속적으로 씻었다. 얻어지는 용액을 황산마그네슘(60g)을 이용하여 건조하고 응축하여 황색 오일(228 g)을 얻었다. 상기 오일은 양성자 NMR로 확인하였을 때 원하는 생성물을 하나의 부분 입체 이성질체 형태로 함유한다.
DSC: 227.54℃(흡열. 61.63 J/g);
미량분석: C25H33BrClNO6
계산값: C: 53.72%; H: 5.95%; N: 2.50% Br: 14.29%; Cl: 6.33%
실측값: C: 53.80%; H: 6.45%; N: 2.23% Br: 12.85%; Cl: 6.12%
단계 4: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
기계적 교반기를 구비한 3L 3구 둥근바닥 플라스크에, 에탄올(1500L)에 용해된 상기 단계 2에서 제조한 조제 에스테르(111g)의 용액을 질소 분위기하에 장입하였다. 상기 반응 혼합물을 0℃ 까지 냉각하고, 사아세트산납(88.67g, 0.2mol)을 한꺼번에 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 0 ℃에서 3 시간동안 교반한 다음, 상기 반응 혼합물에 5 ℃이하의 온도에서 15% NaOH 수용액(150ml)을 부가하였다. 로타벱(rotavap)상에서 감압하에 에탄올을 제거하였다. 또다른 600ml의 15% NaOH 수용액을 부가한 다음, 상기 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(2 x 300 ml), MTBE (2 x 200 ml) 및 에틸 아세테이트 (2 x 200 ml)를 이용하여 추출하였다. 유기층들을 합치고, 탈이온수(2 x 100 ml) 및 염수(2 x 100 ml)로 씻고, 무수 황산마그네슘(30g)위에서 건조하였다. 다음에, 상기 용액을 셀라이트상에서 여과하고 감압하에 응축하여 원하는 생성물(96g)을 오랜지색 오일 형태로 얻었다. 상기 오일은 더 이상의 정제없이 다음 단계에 직접 사용하였다.
DSC: 233.60℃(흡열 67.85 J/g);
미량분석: C24H29BrClNO5
계산값: C: 54.71%; H: 5.54%; N: 2.65% Br: 15.16%; Cl: 6.72%
실측값: C: 52.12%; H: 5.04%; N: 2.47% Br: 14.77%; Cl: 6.48%
단계 5: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
상기 단계 4에서 얻은 조제 생성물(약 94g)을 무수 에탄올(180ml)에 용해하고 파라 톨루엔술폰산 모노히드레이트(50.0g, 0.26 mol)을 부가하였다. 다음에, 상기 반응 혼합물을 8 시간동안 환류 가열한 후 감압하에 용매를 제거하였다. 잔류하는 고체를 THF(100ml)에 용해한 후, 상기 THF를 감압하에 스트리핑 제거하였다. 상기 잔류물을 에틸 아세테이트(500ml)에 용해하고 약 5℃까지 냉각하였다. 다음에, 상기 고체를 여과하고 헵탄(2 x 50 ml)으로 씻어서 백색 고체를 얻었다. 다음에, 상기 고체를 공기 건조하여 백색 고체 형태의 원하는 생성물(38g)을 단일 이성질체 형태로 얻었다.
1H NMR(DMSO, TMS)(ppm)1.12(t, 3H), 2.29(s, 3H), 3.0(m, 2H), 4.05(q, 2H), 4.88(t, 1H), 7.11(d, 2H), 7.48(d, 2H), 7.55(d, 1H), 7.68(1H, d), 8.35(br.s, 3H);13C NMR(DMSO, TMS)(ppm): 13.82, 20.75, 37.13, 45.59, 60.59, 110.63, 122.47, 125.44, 127.87, 128.06, 129.51, 131.95 137.77, 145.33, 150.14 168.98: DSC:69.86℃(흡열 406.5J/g) 165.7℃(흡열 62.27J/g), 211.24℃(발열 20.56J/g)
[α]D 25=+4.2°(c=0.960, MeOH); 1R (MIR) (cm-1) 2922, 1726, 1621, 1591, 1494, 1471, 1413, 1376, 1324, 1286, 1237, 1207;.
미량분석: C18H21ClNO6S
계산값: C: 43.69%; H: 4.27%; N: 2.83%; Br: 16.15%, Cl: 7.16%; S: 6.48%
실측값: C: 43.40%; H: 4.24%; N: 2.73%; Br: 16.40%, Cl: 7.20%; S: 6.54%
단계 6: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
상기 실시예 I의 단계 4에서 유리 염기 대신에 상기 단계 5에서 제조한 동일량의 중간체를 사용하였다는 것을 제외하곤, 실시예 I의 단계 4 및 5에서 설명된 과정에 따라 상기의 화합물을 제조하였다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
실시예 M: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
단계 1: 3-아이오도-5-클로로살리실알데히드의 제조
디메틸포름아미드(400ml)에 용해된 5-클로로살리실알데히드(100g, 0.638 mole)의 용액에 N-아이오도숙신이미드(144.0g, 0.641mole)를 부가했다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 2일간 교반했다. 추가의 N-아이오도숙신이미드(20.0g)을 부가하고 2일간 더 교반했다. 얻어지는 반응 혼합물을 에틸 아세테이드(1L)로 희석하고, 염산(300 ml, 0.1N), 물(300ml), 티오황산나트륨(5%, 300ml), 염수(300ml)로 씻고, 황산마그네슘을 이용하여 건조한 후, 건조상태 까지 응축하여 원하는 알데히드를 담황색 고체(162g, 90% 수율) 형태로 얻었다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 2: 2-O-(MEM)-3-아이오도-5-클로로살리실알데히드의 제조
20 ℃에서, DMF(200 ml)에 용해된 3-아이오도-5-클로로살리실알데히드(84.74g, 0.30 mole)의 용액에, 탄산칼륨(41.4g, 0.30 mole)을 부가하여 황색 슬러리를 얻었다. MEM-Cl(38.2g, 0.305 mole)을 부가하면서 상기 반응 온도를 유지했다. 2 시간 후, 추가의 MEM-Cl(1.5g)을 부가했다. 1 시간동안 교반한 후, 얻어지는 반응 혼합물을 얼음-물 혼합물에 따르고 교반하였다. 형성되는 침전물을 여과하고, 진공 건조하여 원하는 보호된 알데히드를 얻었다. 수율: 95g (85%)
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 3: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
실온에서, THF(200ml)에 용해된 2-O-(MEM)-3-아이오도-5-클로로살리실알데히드(41.5g, 0.112 mole)의 용액에 (S)-페닐 글리시놀(15.37g, 0.112 mole)을 부가하였다. 1 시간 교반한 후, 황산마그네슘(16g)을 부가하고 12 시간동안 교반하였다. 얻어지는 반응 혼합물을 여과하고 그 여액을 응축 및 2 시간동안 진공 건조하여 원하는 중간체 이민을 얻었다. 2구 둥근바닥 플라스크에, 상기 실시예 I의 단계 1에서 얻은 레포르매스키 시약(81.8g, 0.2464mole) 및 N-메틸피롤리돈(100 ml)을 장입하고 -10 ℃에서 교반하였다. 이 온도에서 상기 혼합물을 2 시간동안 유지한 후 -5 ℃에서 1 시간동안 유지하였다. 상기 혼합물을 -10℃까지 냉각한 후, 포화 염화암모늄에 용해된 진한 HCl의 용액(16ml/200ml)을 부가하였다. 에틸 에테르(500ml)를 부가하고 실온에서 2 시간동안 교반하였다. 상기 에테르 층을 분리하고, 수성층을 에테르(300 ml)를 이용하여 추출하였다. 합쳐진 에테르 층들을 포화 염화암모늄(200ml), 물(200ml), 염수(200ml)로 씻고 황산마그네슘을 이용하여 건조하고 응축하여 오일(61.0g, 90% 수율)을 얻었다.1H NMR 분석 결과 상기 원하는 구조는 실제적으로 하나의 부분입체 이성질체라는 것이 확인되었으며, MS 분석 결과는 상기 원하는 구조와 일치하였다.
단계 4: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
상기 단계 3에서 제조한 조제 에스테르(48.85g, 80.61mmol)의 용액을 에탄올 (500ml)에 용해하고, 0℃까지 냉각하였다. 사아세트산납(35.71g, 80.61mmol)을 부가하였다. 3 시간 후, 상기 혼합물에 15% NaOH (73ml) 용액을 부가하였다. 대부분의 에탄올을 감압하에서 제거하였다. 얻어지는 잔류물에, 15% NaOH 용액(200ml)을 부가하고 에테르(400ml)를 이용하여 추출하였다. 상기 에테르 층을 물(100ml),염수(100ml)로 씻고 건조 및 응축하여 오랜지색 오일을 얻었다. 상기 오일을 에탄올(100ml)에 용해하고 파라-톨루엔술폰산(19.9g)을 부가하였다. 얻어지는 용액을 8 시간동안 환류로 가열하고 감압하에 응축하였다. 얻어지는 잔류물을 THF(60ml)로 희석하고, 환류로 가열한 다음, 냉각하였다. 형성되는 침전물을 여과하고, 헥산/THF(300 ml, 1:1)으로 씻고, 건조하여 원하는 생성물을 얻었다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 5: S-에틸 3-(N-BOC-글리)-아미노-3-(S)-(5-클로로-2-히드록시-3-아이오도)페닐 프로피온에이트의 제조
BOC-글리-OSu(9.4g, 34.41mmol)에, DMF(200ml)에 용해된 에틸 3-(S)-아미노-3-(5-클로로-2-히드록시-3-아이오도)프로피온에이트 PTSA 염(17.0g, 31.38mmol)을 부가하고 트리에틸아민(4.8ml)을 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 18 시간동안 교반하였다. DMF를 진공하에 제거하고, 그 잔류물을 에틸 아세테이트(600ml)와 묽은 염산(100 ml)의 사이에 분배했다. 유기층을 중탄산나트륨(200 ml), 염수(200 ml)로 씻고, 황산마그네슘을 이용하여 건조하고 응축하여 원하는 생성물을 고체(14.2g, 86% 수율) 상태로 얻었다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 6: S-에틸 3-(N-글리)아미노-3-(5-클로로-2-히드록시-3-아이오도)페닐 프로피온에이트 히드로클로라이드의 제조
0℃에서, 디옥산/HCl (4N, 70ml)를 에틸 3-(S)-(N-BOC-글리)-아미노-3-(5-클로로-2-히드록시-3-아이오도)페닐 프로피온에이트(37.20g, 70.62 mmol)에 부가하고, 실온에서 3 시간동안 교반하였다. 얻어지는 반응 혼합물을 응축하고, 톨루엔(100 ml)를 부가한 후 다시 응축하였다. 얻어지는 잔류물을 에테르에 현탁하고, 여과 및 건조하여 원하는 생성물을 결정 분말 (32g, 98% 수율) 형태로 얻었다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
실시예 N: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
단계 1: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
3,5-디클로로살리실알데히드 대신에 동일한 양의 2-히드록시-3,5-디브로모벤즈알데히드를 사용하였다는 것을 제외하곤, 실시예 I의 단계 2A의 과정을 이용하여 상기의 화합물을 제조하였다. 수율 88%; 담황색 고체; m.p.46-47℃; Rf=0.6(에틸 아세테이트/헥산 1:1 v/v);1H NMR(CDCl3)d 3.37(s, 3H), 3.56(m, 2H), 3.92(m, 2H), 5.29(s, 2H), 7.91(d, 1H, J=2.4Hz), 7.94(d, 1H, J=2.4Hz), 10.27(s, 1H); FAB-MS m/z 367(M+)
HR-MS: C11H12Br2O4
계산값: 367.9083
실측값: 367.9077
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 2: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
상기 단계 1의 화합물을 실시예 I의 단계 2B에서 동일한 양으로 이용하였다는 것을 제외하곤 실시예 I의 단계 2B 및 2C의 과정에 따라 상기의 화합물을 제조하였다. 수율 90%; 황색 고체; m.p. 57-59℃; Rf=0.46(에틸 아세테이트/헥산 1:1 v/v);1H NMR(CDCl3) d 1.45(s, 9H); 2.1(br, 1H, 교환가능), 2.51(d, 1H, J1=9.9Hz, J2=15.3Hz), 2.66(d, 1H, J1=4.2Hz, J2=15.3Hz), 3.02(br, 1H, 교환가능), 3.39(s, 3H), 3.58-3.63(m, 4H), 3.81(m, 1H), 3.93(m, 2H), 4.63(dd, 1H, J=4.2Hz), 5.15(s, 2H), 7.17-7.25(m, 6H), 7.49(d, 1H); FAB-MS m/z 602(M+H)
HR-MS: C25H34NBr2O6
계산값: 602.0753
실측값: 602.0749
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 3: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
상기 단계 2의 화합물을 실시예 I의 단계 3A에서 동일한 양으로 이용하였다는 것을 제외하곤 실시예 I의 단계 3의 과정에 따라 상기의 화합물 (p-톨루엔술폰산염)을 제조하였다. 수율 62%; 백색 고체;1H NMR(DMSO-d6) d 1.09(t,3H, J=7.2Hz), 2.27(s, 3H), 2.97(dd, 2H, J1=3.0 Hz, J2=7.2 Hz), 4.02(q, 2H, J=7.2Hz), 4.87(t, 1H, J=7.2Hz), 7.08(d, 2H, J=4.8 Hz), 7.45(m, 3H), 7.57(d, 1H, J=2.4Hz), 8.2(br, 3H); FAB-MS m/z 365(M+H)
HR-MS: C11H14NBr2O3
계산값: 365.9340
실측값: 365.9311
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 4: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
상기 단계 3의 화합물을 이용하여 실시예 I의 단계 4의 과정에 따라 상기의 화합물을 제조하였다. 얻어지는 BOC 보호기 중간체를 실시예 I의 단계 5의 과정을 이용하여 원하는 화합물로 전환했다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
실시예 P: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
실시예 I의 단계 2A에서 제조한 3,5-디클로로살리실일데히드대신에, 실시예 F의 단계 1에서 제조한 동일량의 3-아이오도-5-브로모살리실알데히드를 이용하여, 실시예 I의 과정에 따라 상기의 화합물을 제조하였다.
실시예 1
(±)3-브로모-5-클로로-2-히드록시-β-[[2-[[[3-히드록시-5-[(1,4,5,6-테트라히드로-5-히드록시피리미딘-2-일)아미노]페닐]카르보닐]아미노]아세틸]아미노]벤젠프로판산, 트리플루오로아세테이트 염
하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
얼음 중탕 온도에서, 실시예 H의 생성물(0.4g, 0.0014mole)에, 실시예 B의 생성물(0.58g, 0.0014 mole), 트리에틸아민(0.142g, 0.0014 mole), DMAP(17mg), 및 무수 DMA(4ml)에, EDCl(0.268g, 0.0014 mole)을 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 얻어지는 에스테르 중간체를 반전상 정제 HPLC로 분리하였다. 이러한 에스테르를 물(10ml) 및 CH3CN (5ml)에 용해하여 LiOH (580mg, 0.0138mole)를 부가하였다. 실온에서 1 시간동안 교반한 후, pH를 TFA를 이용하여 2로 저하시키고, 반전상 정제 HPLC로 정제하고 얼림건조하여 원하는 생성물을 백색 고체(230 mg)의 형태로 얻었다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
실시예 2: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
실시예 B에서 얻은 생성물 대신에, 실시예 A에서 얻은 동일량의 생성물을 이용하여, 실시예 1의 방법에 따라 상기의 화합물을 제조하였다. 얼림 건조후에 백색 고체 상태로 얻은 수율은 320mg이었다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
실시예 3: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
실시예 B에서 얻은 생성물 대신에, 실시예 F에서 얻은 동일량의 생성물을 이용하여, 실시예 1의 방법에 따라 상기의 화합물을 제조하였다. 얼림건조후에 백색 고체 상태로 얻은 수율은 180mg 이었다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
실시예 4: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
실시예 B에서 얻은 생성물 대신에, 실시예 D에서 얻은 동일량의 생성물을 이용하여, 실시예 1의 방법에 따라 상기의 화합물을 제조하였다. 얼림건조후에 백색 고체 상태로 얻은 수율은 180mg 이었다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
실시예 5: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
실시예 B에서 얻은 생성물 대신에, 실시예 E에서 얻은 동일량의 생성물을 이용하여, 실시예 1의 방법에 따라 상기의 화합물을 제조하였다. 얼림건조후에 백색 고체 상태로 얻은 수율은 250mg 이었다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
실시예 6: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
실시예 B에서 얻은 생성물 대신에, 실시예 C에서 얻은 동일량의 생성물을 이용하여, 실시예 1의 방법에 따라 상기의 화합물을 제조하였다. 얼림건조후에 백색 고체 상태로 얻은 수율은 220mg 이었다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
실시예 7: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
불꽃 건조 플라스크에서 질소 분위기 및 얼음 중탕 온도로, 무수 DMA(50 ml)에 용해된 실시예 H의 생성물(7.8g, 0.027 mole)에, 이소부틸클로로포름에이트(3.7g, 0.027 mole)을 서서히 부가한 다음, N-메틸모르폴린(2.73g, 0.027 mole)을 부가하였다. 상기 용액을 얼음 중탕 온도로 15분간 교반하였다. 상기 반응 혼합물에, 실시예 L의 생성물(10.0g, 0.024 mole)을 얼음 중탕 온도에서 부가한 후 N-메틸모르폴린(2.73g, 0.027 mole)을 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 얻어지는 에스테르 중간체를 반전상 정제 HPLC로 분리하였다. 이러한 에스테르를 물(60ml) 및 CH3CN (30ml)에 용해하여 LiOH (10g, 0.238 mole)를 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 1 시간동안 교반한 후, pH를 TFA를 이용하여 2로 저하시키고, 반전상 정제 HPLC로 정제하고 얼림건조하여 원하는 생성물을 백색 고체(9.7g)의 형태로 얻었다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
실시예 8
(S)3,5-디클로로-2-히드록시-β-[[2-[[[3-히드록시-5-[(1,4,5,6-테트라히드로-5-히드록시피리미딘-2-일)아미노]페닐]카르보닐]아미노]아세틸]아미노]벤젠프로판산, 모노히드로클로라이드 모노히드레이트
하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
단계 A
무수 DME(200ml)에 용해된 실시예 H의 생성물(9.92g, 0.0345mole)에, N-메틸모르폴린(4.0ml, 0.0362mole)을 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 -5℃(염-얼음 중탕)까지 냉각하였다. 이소부틸크로로포름에이트, IBCF (4.48 ml, 4.713g, 0.0345mole)를 1분에 걸쳐서 부가하고 그 반응 혼합물을 얼음 중탕 온도에서 12분간 교반하였다. 다음에, 상기 반응 혼합물에 실시예 I의 생성물(11.15g, 0.030mole)을 얼음 중탕 온도에서 부가한 후 N-메틸모르폴린(4.0ml, 0.0362mole)을 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온으로 가온한 후 50 ℃에서 진공 응축하여, 어두운 잔류물을 얻었다. 상기 잔류물을 아세토니트릴:물(약 50 ml)에 용해하였다. 소량의 TFA를 부가하여 pH를 산성으로 조절했다. 상기 잔류물을 10 x 500cm C-18(50 미크론 입자크기) 칼럼에 위치시켜서 상기 원하는 생성물의 에스테르를 분리했다. (용매 프로그램: 100% 물+ 0.05% TFA 내지 30:70 물+0.05% TFA: 아세토니트릴+0.05% TFA; 1시간; 100ml/분; 상기 용매 프로그램은 용매 전진점이 용리한 후에 개시되었음). RPHPLC 정제하고 얼림 건조한 후 백색 고체(10.5g, 50%)를 얻었다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 B
상기 단계 A에서 얻은 생성물(약 11g)을 디옥산:물에 용해하고, 2.5N NaOH를 부가하여 상기 용액의 pH를 약 11.5로 조절했다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 교반했다. 주기적으로, 염기를 부가하여 상기 pH를 11이상으로 다시 조절했다. 2-3 시간후, 상기 에스테르의 산으로의 전환은 완결된 것으로 판단하였다. 상기 반응 혼합물의 pH를 약 6으로 조절하고 상기 용액으로부터 점착성 오일을 침전시켰다. 상기 오일을 경사분리로 제거하고 뜨거운 물(200ml)로 씻었다. 얻어지는 수성 혼합물을 냉각하고 여과하여 상기 화합물(2.6g, HCl 용액으로부터 얼림건조후)을 고체 상태로 얻었다. 어두운 점착성 오일인 상기 잔류물을 뜨거운 물로 처리하고 냉각하여 황갈색 분말(4.12g, HCl 용액으로부터 얼림 건조후)을 얻었다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
실시예 9
(S)3-브로모-5-클로로-2-히드록시-β-[[2-[[[3-히드록시-5-[(1,4,5,6-테트라히드로-5-히드록시피리미딘-2-일)아미노]페닐]카르보닐]아미노]아세틸]아미노]벤젠프로판산, 트리플루오로아세테이트 염
단계 1: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
N,N-디메텔아세트아미드(10ml)에 용해된 실시예 J의 생성물(1.0g, 2.4 mmol), 상기 실시예 H의 생성물(0.75g, 2.6 mmol), 및 4-디메틸아미노피리딘(40mg)에, 트리에틸아민(0.24g, 2.4 mmol)을 부가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 15분간 교반하고 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이미드 히드로클로라이드(0.60g, 3.1 mmol)을 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 얻어지는 혼합물을 진공 응축하고 반전상 HPLC 정제(출발 그레디언트 90:10 물/TFA:MeCN, 체류 시간 22분)하여 원하는 생성물(1.6g, 52% 수율)을 얻었다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 2
1:4 MeCN:물 용액(7 ml)에 용해된 상기 단계 1에서 제조한 에스테르(800mg, 1.2 mmol)의 용액에, 수산화리튬(148 mg, 6.2 mmol)을 부가했다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 2 시간동안 교반했다. TFA(0.71 ml, 9.2 mmol)를 부가하고 얻어지는 혼합물을 반전상 HPLC 정제(출발 그레데언트 95:5 물/TFA:MeCN, 체류 시간 24분)하여 원하는 생성물(860mg, 83% 수율)을 얻었다.
원소분석: C22H23BrClN5O7+ 1.7 TFA
계산값: C 39.18; H 3.20; N 8.99
실측값: C 39.11; H 3.17; N 9.07
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 3
히드로클로라이드 염의 제조
실시예 2의 생성물을 적당한 용매(아세토니트릴:물)에 용해하고, 상기 용액을 Bio-Rad AG2-8X (염화물 형태, 200-400 매시, 5 당량 이상) 이온 교환 칼럼에 서서히 통과시켰다. 얼림 건조하여 원하는 생성물을 HCl 염 형태로 얻었다.
실시예 10: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
실시예 8의 단계 A에서, 실시예 I의 생성물대신에 실시예 N의 생성물을 이용하여 실시예 8의 과정에 따라 상기의 화합물을 제조하였다. 정제 RPHPLC로 생성물을 분리하고 얼림 건조하여 원하는 생성물을 TFA 염 형태로 얻었다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
실시예 11: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
실시예 8의 단계 A에서, 실시예 I의 생성물대신에 실시예 M의 생성물을 이용하여 실시예 8의 과정에 따라 상기의 화합물을 제조하였다. 정제 RPHPLC로 생성물을 분리하고 얼림 건조하여 원하는 생성물을 TFA 염 형태로 얻었다.
MS 및1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
실시예 12: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
실시예 8의 단계 A에서, 실시예 I의 생성물대신에 실시예 P의 생성물을 이용하여 실시예 8의 과정에 따라 상기의 화합물을 제조하였다. 정제 RPHPLC로 생성물을 분리하고 얼림 건조하여 원하는 생성물을 TFA 염 형태로 얻었다.
실시예 13: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
단계 1: 하기 화학식을 갖는 2-O-(MEM)-3,5-디아이오도살리실알데히드의 제조
20 ℃에서, DMF(150ml)에서 용해된 3,5-디아이오도살리실알데히드(50.0g, 0.134 mole)의 용액에, 탄산칼륨(18.5g, 0.134mole)을 부가하여 황색 슬러리를 얻었다. 상기 반응 온도를 유지하면서 MEM-Cl(15.8ml, 0.134mole)를 부가했다. 2 시간후, 추가의 MEM-Cl(1.5g)을 부가했다. 1 시간동안 더 교반한 후, 상기 반응 혼합물을 얼음물에 따르고 교반하였다. 형성되는 침전물을 여과하고, 진공 건조하여 상기의 원하는 보호된 알데히드(61g, 99% 수율)를 얻었다.
1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 2: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
실온에서, THF(150ml)에 용해된 2-O-(MEM)-3,5-디아이오도살리실알데히드(41.5g, 0.112 mole)의 용액에 (S)-페닐 글리시놀(17.9 g, 0.13 mole)을 부가하였다. 1 시간 교반한 후, 황산마그네슘(20.7g)을 부가하고 12 시간동안 교반하였다. 얻어지는 반응 혼합물을 여과하고 그 여액을 응축 및 2 시간동안 진공 건조하였다. 2구 둥근바닥 플라스크에, 레포르매스키 시약(96g, 0.289mole) 및 N-메틸피롤리돈(250 ml)을 장입하고 -10 ℃에서 교반하였다. N-메틸피롤리돈(100ml)에 용해된 상기 이민의 용액을 서서히 부가하면서 온도를 -10 ℃로 유지하였다. 이 온도에서 상기 혼합물을 2 시간동안 유지한 후 -5 ℃에서 1 시간동안 유지하였다. 상기 혼합물을 -10℃까지 냉각한 후, 포화 염화암모늄에 용해된 진한 HCl의 용액(16ml/200ml)을 부가하였다. 에틸 에테르(500ml)를 부가하고 실온에서 2 시간동안 교반하였다. 상기 에테르 층을 분리하고, 수성층을 에테르(300 ml)를 이용하여 추출하였다. 합쳐진 에테르 층들을 포화 염화암모늄(200ml), 물(200ml), 염수(200ml)로 씻고 황산마그네슘을 이용하여 건조하고 응축하여 오일(90.0g, 99% 수율)을 얻었다. NMR 분석 결과 상기 원하는 구조는 실제적으로 하나의 부분입체 이성질체라는 것이 확인되었다.
단계 3: 하기 화학식을 갖는 화합물의 제조
상기 단계 2에서 제조한 조제 에스테르(14.0g, 20.1mmol)의 용액을 에탄올 (100ml)에 용해하고, 0℃까지 냉각하였다. 사아세트산납(9.20g, 20.75mmol)을 한꺼번에 부가하였다. 3 시간 후, 상기 혼합물에 15% NaOH (73ml) 용액을 부가하였다. 대부분의 에탄올을 감압하에서 제거하였다. 얻어지는 잔류물에, 15% NaOH 용액(200ml)을 부가하고 에테르(400ml)를 이용하여 추출하였다. 상기 에테르 층을 물(100ml),염수(100ml)로 씻고 건조 및 응축하여 오랜지색 오일을 얻었다. 상기 오일을 에탄올(100ml)에 용해하고 파라-톨루엔술폰산(6.08g)을 부가하였다. 얻어지는 용액을 8 시간동안 환류로 가열하고 감압하에 응축하였다. 얻어지는 잔류물을 THF(60ml)로 희석하고, 환류로 가열한 다음, 냉각하였다. 보관시에 침전은 형성되지 않았다. 상기 반응 혼합물을 응축 및 HPLC로 정제하여 상기 아미노산을 이의 PTSA 염 형태로 얻었다. 얻어지는 고체를 에탄올에 용해하고 HCl 가스로 포화시켰다. 상기 반응 혼합물을 6 시간동안 환류 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 응축하여 상기 원하는 아미노산의 PTSA 염(12.47g)을 얻었다.
단계 4: 에틸 3-(N-BOC-글리)-아미노-3-(S)-(3,5-디아이오도-2-히드록시페닐)프로피온에이트의 제조
BOC-글리-OSu(7.48g, 27.04mmol)에, DMF(200ml)에 용해된 에틸 3-(S)-아미노-3-(3,5-디아이오도-2-히드록시페닐)프로피온에이트 PTSA 염(12.47g, 27.04mmol)을 부가하고 트리에틸아민(3.8ml)을 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 18 시간동안 교반하였다. DMF를 진공하에 제거하고, 그 잔류물을 에틸 아세테이트(600ml)와 묽은 염산(100 ml)의 사이에 분배했다. 유기층을 중탄산나트륨(200 ml), 염수(200 ml)로 씻고, 황산마그네슘을 이용하여 건조하고 응축하여 원하는 생성물을 고체(17.0g, 96% 수율) 상태로 얻었다.
1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 5 : 하기 화학식을 갖는 에틸 3-(N-글리)-아미노-3-(3,5-디아이오도-2-히드록시페닐)-프로피온에이트 히드로클로라이드의 제조
0 ℃에서, 디옥산/HCl (4N, 40ml)에, 에틸 3-(N-BOC-글리)-아미노-3-(S)-(3,5-디아이오도-2-히드록시페닐)프로피온에이트(17.0g, 25.97 mmol)를 부가하고, 얻어지는 반응 혼합물을 실온에서 3 시간동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 응축하고, 톨루엔(100ml)을 부가한 후 다시 응축하였다. 얻어지는 잔류물을 건조하여 원하는 생성물을 결정 분말(8.0g, 56% 수율)의 형태로 얻었다.
1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
단계 6
디메틸아세트아미드(25ml)에서 m-(5-히드록시피리미디노)히푸르산(3.74g, 12.98 mmol)을 가열하여 용해하였다. 다음에, 0℃까지 가열하고 이소부틸클로로포름에이트(1.68ml)를 한번에 부가한 후 N-메틸모르폴린(1.45ml)을 부가하였다. 10 분후, 에틸 3-(N-글리)-아미노-3-(3,5-디아이오도-2-히드록시페닐)-프로피온에이트 히드로클로라이드(6.0g, 10.82 mmol)를 한번에 부가한 후 N-메틸모르폴린(1.45ml)을 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 18 시간동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 응축하고, 그 잔류물을 테트라히드로푸란/물(1:1, 20 ml)에 용해하고, 크로마토그래피(반전상, 60분, 0.1% TFA를 함유하는 95:5 물: 아세토니트릴 내지 30: 70 물: 아세토니트릴) 하였다. 합쳐진 분획들을 응축하였다. 얻어지는 잔류물을 아세토니트릴:물에 용해하고 수산화리튬을 부가하여 염기성으로 만들었다. 얻어지는 용액을 2 시간동안 교반하였다. 얻어지는 반응 혼합물을 응축하고 상술한 바와같이 HPLC로 정제하여 상기 원하는 산을 TFA 염 형태로 얻었다. 상기 TFA 염을 이온 교환 칼럼에 통과시킨 후 얼림 건조하여 상응하는 히드로클로라이드 염으로 전환했다.1H NMR 분석 결과는 상기의 원하는 구조와 일치했다.
실시예 14-18
당업자가 명백히 알 수 있는 바와같이 적당한 출발 물질 및 시약을 이용하여 본원에 설명된 방법에 따라 상기 화학식(7), (8), (11), (13) 및 (14)의 화합물을 제조할 수 있다.
본 발명의 화합물의 활성을 다음과 같은 평가 분석에 의해 시험하였다. 그러한 평가 분석에 따른 시험의 결과는 표 1에서 나타낸다.
비트로넥틴 부착 평가 분석(VITRONECTIN ADHESION ASSAY)
재료(MATERIALS)
사람의 비트로넥틴 수용체(αvβ3)를, 다음문헌[Pytela 등의 Methods in Enzymology, 144:475-489 (1987)]에서 설명한 바와 같이, 사람의 태반으로 부터 정제하였다. 사람의 비트로넥틴을 다음문헌[Yatohgo 등의 Cell Structure and Function, 13:281-292 (1988)]에서 설명한 바와 같은 신선한 냉동 혈장으로 부터 정제하였다. 비오틴화된 사람의 비트로넥틴을 다음문헌[Charo 등의 J. Biol. Chem., 266(3):1415-1421 (1991)]에서 설명한 바와 같이, 정제된 비트로넥틴에, Pierce Chemical Company (Rockford, IL)로 부터 입수한 NHS-비오틴(biotin)을 결합시킴으로써 마련하였다. 평가 분석 완충액, OPD 기질 정제, 및 RIA 등급 BSA 는 미 합중국 메릴랜드 주 세인트루이스 시의 Sigma 로부터 입수하였다. 항-비오틴(anti-biotin) 항체(antibody)는 미 합중국 캘리포니아 주 라 졸라 시의 Calbiochem 으로부터 입수하였다. 린브로(Linbro) 미량적정판은 미 합중국 버지니아 주 맥클린 시의 Flow Labs 로부터 입수하였다. ADP 시약(reagent)은 미 합중국 메릴랜드 주 세인트루이스 시의 Sigma 로부터 입수하였다.
방법(METHODS)
고상 수용체 평가 분석(Solid Phase Receptor Assays)
본 평가 분석은, 전술한 바와 같은 [Niiya 등의 Blood, 70:475-483 (1987)]의 보고와 기본적으로 동일하다. 정제된 사람의 비트로넥틴 수용체(αvβ3)를, 1.0 mM Ca++, Mg++, 및 pH7.4 (TBS+++) 를 함유하는 크리스 완충 염수(tris-buffered saline) 내에서 스톡 용액(stock solution)으로부터 1.0 g/mL 까지 희석하였다. 희석된 수용체는, 100 L/웰(well) (100 ng 수용체/웰) 의 속도로 린브로 미량 적정판으로 즉시 전달되었다. 미량 적정판은 밀봉된 후 4℃ 에서 밤새 배양되어, 수용체가 웰에 결합될 수 있도록 한다. 이후의 모든 단계는 실온에서 진행되었다. 평가 분석판들은 비워진 후에, TBS+++(TBS+++/BSA) 내의 1% RIA 등급 BSA의 200 L 을 첨가하여 노출된 플라스틱 면들을 차단하도록 하였다. 두 시간 동안의 배양을 행한 후에, 평가 분석판을 96 웰 판 세척기(well plate washer)를 이용하여 세척하였다. 테스트 화합물 및 대조용 화합물(controls)의 대수 직렬(logarithmic serial) 희석을, 2 mM 의 스톡 농도에서 시작하여, 희석제로서 TBS+++/BSA 내의 2 nM 비오틴화된 비트로넥틴을 사용하여, 수행하였다. 테스트(또는 대조용) 리간드(ligand)와 표지된(labeled) 리간드와의 이러한 예비 혼합, 그리고 후속되는 평가 분석판으로의 50 L 분획의 전달을 CETUS 프로핏 로봇(Propette robot)에 의해 실행하였는 데, 표지된 리간드의 최종 농도는 1 nM 이었으며, 테스트 화합물의 최고 농도는 1.0 ×10-4M 이었다. 경쟁(competition)이 두 시간 동안 일어났으며, 그 후에는 모든 웰들(wells)을, 전술한 바와 마찬가지로, 판 세척기(plate washer)에 의해 세척하였다. 친화력 정제된 호스라디쉬 퍼옥시다제 표지된 염소 항-비오틴 항체 (affinity purified horseradish peroxidase labeled goat anti-biotin antibody)를 TBS+++/BSA 내에서 1:3000 으로 희석하였으며, 125 L가 각각의 웰에 첨가되었다. 30 분 후에, 상기 판들을 세척한 후, pH 5.0 의 100 mM/L 구연산염 완충액 내에서 OPD/H20 로서 배양하였다. 상기 판은 450 nm 의 파장에서 미량 적정판 판독기에 의해 판독되었는 데, 최대-결합 대조용 웰들(maximum-binding control wells)이 약 1.0 의 앱서라운드 바터먼스(absoround bottomance)에 도달하였을 때, 최종 A450이 분석을 위해 기록되었다. 이 데이타는 엑셀 스프레드시트 프로그램(EXCEL spreadsheet program)에 사용될 수 있도록 기록된 매크로(macro)를 사용하여 분석되었다. 평균, 표준 편차, 및 %CV 는 이중 농도들(duplicate concentrations)을 위해 결정되었다. 평균 A450값들을, 네개의 최대-결합 비교치(아무런 경쟁 요소의 첨가 없이; B-MAX)의 평균으로 표준화하였다. 상기 표준화된 값들을, [Rodbard 등의 Int. Atomic Energy Agency, Vienna, pp469 (1977)]의 4 변수 곡선 적용 알고리즘(four parameter curve fit algorithm)에 적용하고, 준-로그 스케일(semi-log scale)로 작도하였으며, 그리고 비오틴화된 비트로넥틴 (IC50) 의 최대 결합의 50% 의 억제에 해당하는 계산된 농도와 해당하는 R2가 시험된 최고의 농도에서 50 % 이상의 억제를 나타내는 화합물들에 대해 기록하였다. 또는, IC50은 테스트된 최고 농도 이상인 것으로 보고되었다. 강력한 αvβ3길항제(3 내지 10 nM 범위내의 IC50)인, β-[[2-[[5-[(아미노이미노메틸)-아미노]-1-옥소펜틸]아미노]-1-옥소펜틸]아미노]-3-피리딘프로판 산[USSN 08/375,388, Example 1 참조]이 각각의 판에 양의 대조용 인자로서 포함되었다.
정제된 IIb/IIIa 수용체 평가 분석(PURIFIED IIb/IIIa RECEPTOR ASSAY)
재료(MATERIALS)
사람의 피브리노겐 수용체(αIIbβ3)를 통상적인 혈소판으로 부터 정제하였다 (Pytela, R., Pierschbacher, M.D., Argraves, S., Suzuki, S., 및 Rouslahti, E. 의 "Arginine-Glycine-Aspartic acid adhesion receptors" Methods in Enzymology, 144(1987):475-489 참조). 사람의 비트로넥틴을, Yatohgo, T., Izumi, M., Kashiwagi, H., 및 Hayashi, M. 의 Cell Structure and Function, 13(1988):281-292 에 서술된 바와 같은 신선한 냉동 혈장으로 부터 정제하였다. 비오틴화된 사람의 비트로넥틴을, (Charo, I.F., Nannizzi, L., Phillips, D.R., Hsu, M.A., Scaround bottomorough, R.M. 의 J. Biol. Chem., 266(3)(1991):1415-1421) 에서 설명한 바와 같은 정제된 비트로넥틴에, Pierce Chemical Company (Rockford, IL)로 부터 입수되는 NHS-비오틴을 결합시킴으로써 마련하였다. 평가 분석 완충액, OPD 기질 정제, 및 RIA 등급 BSA 는 미 합중국 메릴랜드 주 세인트루이스 시의 Sigma 로부터 입수하였다. 항-비오틴(anti-biotin) 항체(antibody)는 미 합중국 캘리포니아 주 라 졸라 시의 Calbiochem 으로부터 입수하였다. 린브로(Linbro) 미량적정판은 미 합중국 버지니아 주 맥클린 시의 Flow Labs 로부터 입수하였다. ADP 시약(reagent)은 미 합중국 메릴랜드 주 세인트루이스 시의 Sigma 로부터 입수하였다.
방법(METHODS)
고상 수용체 평가 분석(Solid Phase Receptor Assays)
본 평가 분석은, Niiya, K., Hodson, E., Bader, R., Byers-Ward, V. Koziol, J.A., Plow, E.F. 및 Ruggeri, Z.M. 에 의한 Blood 70(1987):475-483 의 "Increased surface expression of the membrane glycoprotein IIb/IIIa complex induced by platelet activation: Relationships to the binding of fibrinogen and platelet aggregation" 에서의 보고와 기본적으로 동일하다. 정제된 사람의 피브리노겐 수용체(αIIbβ3)를, 1.0 mM Ca++, Mg++, 및 pH7.4 (TBS+++) 를 함유하는 크리스 완충 염수(tris-buffered saline) 내에서 스톡 용액(stock solution)으로부터 1.0 μg/mL 까지 희석하였다. 희석된 수용체를, 100 μL/웰(well) (100 ng 수용체/웰) 의 속도로 린브로 미량 적정판으로 즉시 전달하였다. 미량 적정판을 밀봉된 후 4℃ 에서 밤새 배양되어, 수용체가 웰에 결합될 수 있도록 한다. 이후의 모든 단계는 실온에서 진행되었다. 평가 분석판들은 비워진 후에, TBS+++(TBS+++/BSA) 내의 1% RIA 등급 BSA의 200 μL 을 첨가하여 노출된 플라스틱 면들을 차단하도록 하였다. 두 시간 동안의 배양을 행한 후에, 평가 분석판은 96 웰 판 세척기(well plate washer)를 이용하여 세척하였다. 테스트 화합물 및 대조용 화합물(controls)의 대수 직렬(logarithmic serial) 희석은, 2 mM 의 스톡 농도에서 시작하여, 희석제로서 TBS+++/BSA 내의 2 nM 비오틴화된 비트로넥틴을 사용하여, 수행하였다. 테스트(또는 대조용) 리간드와 표지된 리간드와의 이러한 예비 혼합, 그리고 후속되는 평가 분석판으로의 50 μL 분획의 전달은 CETUS 프로핏 로봇(Propette robot)에 의해 실행되었는 데, 표지된 리간드의 최종 농도는 1 nM 이었으며, 테스트 화합물의 최고 농도는 1.0 ×10-4M 이었다. 경쟁이 두 시간 동안 일어났으며, 그 후에는 모든 웰들이, 전술한 바와 마찬가지로, 판 세척기에 의해 세척한다. 친화력 정제된 호스라디쉬 퍼옥시다제 표지된 염소 항-비오틴 항체는 TBS+++/BSA 내에서 1:3000 으로 희석하였으며, 125 μL 이 각각의 웰에 첨가하였다. 30 분 후에, 상기 판들을 세척한 후, pH 5.0 의 100 mM/L 구연산염 완충액 내에서 ODD/H202와함께 배양하였다. 상기 판을 450 nm 의 파장에서 미량 적정판 판독기에 의해 판독하였는 데, 최대-결합 대조용 웰들이 약 1.0 의 앱서라운드 바터먼스(absoround bottomance)에 도달하였을 때, 최종 A450이 분석을 위해 기록하였다. 이 데이타는 상표명 엑셀인 스프레드시트 프로그램(EXCELTMspreadsheet program)에 사용될 수 있도록 기록된 매크로를 사용하여 분석하였다. 평균, 표준 편차, 및 %CV 는 이중 농도들을 위해 결정되었다. 평균 A450값들은, 네개의 최대-결합 비교치(아무런 경쟁 요소의 첨가 없이; B-MAX)의 평균으로 표준화하였다. 상기 표준화된 값들은, [Rodbard 등의 Int. Atomic Energy Agency, Vienna, pp469 (1977)]의 4 변수 곡선 적용 알고리즘(four parameter curve fit algorithm)에 적용하고, 준-로그 스케일(semi-log scale)로 작도되었으며, 그리고 비오틴화된 비트로넥틴 (IC50) 의 최대 결합의 50% 의 억제에 해당하는 계산된 농도와 해당하는 R2가 시험된 최고의 농도에서 50 % 이상의 억제를 나타내는 화합물들에 대해 기록하였다. 또는, IC50은 테스트된 최고 농도 이상인 것으로 보고되었다. 강력한 αvβ3길항제(3 내지 10 nM 범위내의 IC50)인, β-[[2-[[5-[(아미노이미노메틸)-아미노]-1-옥소펜틸]아미노]-1-옥소펜틸]아미노]-3-피리딘프로판 산[USSN 08/375,388, Example 1 참조]이 각각의 판에 양의 대조용 인자로서 포함되었다.
사람의 혈소판 고농도 평가 분석(HUMAN PLATELET RICH PLASMA ASSAYS)
건강한 아스피린 자유 공여자들을 자원자들의 풀(pool)로 부터 선택한다. 혈소판 고농도 혈장의 채취 및 그에 따른 ADP 유도 혈소판 응집 평가 분석을, Zucker, M.B. 의 Methods in Enzymology 169(1989):117-133 의 "Platelet Aggregation Measured by the Photometric Methods" 에 기술된 바와 같이 실행한다. 나비(butterfly)를 사용하는 표준 정맥 천공(venipuncture) 기법은, 5 mL 의 3,8 % 구연산 삼나트륨(trisodium citrate)을 함유하는 60 mL 주사기 내로 45 mL 의 전체 혈액(whole blood)을 인출하는 것을 가능하게 하였다. 주사기 내에서의 철저한 혼합을 거친 후에, 항-응고(anti-coagulated) 전체 혈액을 50 mL 원추형 폴리에틸렌 관으로 이송하였다. 상기 혈액을, 200 mg 에서 12 분 동안 실온에서, 침전 비-혈소판 세포들(sediment non-platelet cells)로 원심 분리하였다. 혈소판 고 농도 혈장을 폴리에틸렌 관을 통해 제거하여, 이용될 때 까지 실온에서 보관하였다. 혈소판 저 농도 혈장을 나머지 혈액에 대한 2000 xg 에서의 15 분 동안의 제 2 차 원심 분리로 부터 얻었다. 혈소판 수(platelet counts)는 대략 마이크로리터(microliter) 당 300,000 내지 500,000 개 이다. 혈소판 고 농도 혈장(0.45mL)을 실리콘화된 큐벳(siliconized cuvettes) 내로 분획한 후, 1 분 동안 37℃에서 1100 rpm 으로 교반하고, 그 다음에 50 uL 의 예비-희석된 테스트 화합물을 첨가하였다. 1 분 동안의 혼합을 거친 후에, 50 uL 의 200 uM ADP 를 첨가함으로써 응집을 개시했다. 응집은, 미합중국 뉴욕 주 버팔로 시의 Payton Scientific 의 페이턴 듀얼 채널 응집 측정기(Payton dual channel aggregometer) 내에서 3 분간 기록하였다. 일련의 테스트 화합물 희석에 대한 최대 반응의 퍼센트 억제(염류 제어)를, 용량 반응 곡선(dose response curve)을 결정하는 데 이용하였다. 모든 화합물들은 이중으로 테스트되었으며, 반-최대 억제의 농도(IC50)는, 테스트된 최고의 농도에서 50 % 또는 그 이상의 억제를 나타내는 화합물에 대하여, 상기 용량 반응 곡선으로 부터, 선도상에서 계산하였다. 또는, 상기 IC50는, 테스트된 최고 농도 보다 더 큰 것으로 보고된다.
실시예 αvβ3IC50(nM) IIb/IIIaIC50(nM)
1 0.88 310
2 1.04 430
3 23.7 2440
4 2.02 575
5 2.13 744
6 6.46 919
7 1.01 262
8 0.40 131
9. 0.37 388
9. HCL 0.82 226.2
10 2.26 641
11
12 9.59 1060

Claims (36)

  1. 하기 화학식의 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염:
    상기 식에서, X 및 Y는 서로 같거나 상이한 것으로서 할로기이고, R은 H 또는 저급 알킬이다.
  2. 제 1 항에 있어서, 하기의 화학식을 가지는 화합물들로부터 성택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
  3. 제 1 항에 있어서, 하기의 화학식을 가지는 화합물들로부터 성택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
  4. 제 1 항에 따른 치료적으로 유효한 양의 화합물 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학적 조성물.
  5. 제 2 항에 따른 치료적으로 유효한 양의 화합물 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학적 조성물.
  6. 제 3 항에 따른 치료적으로 유효한 양의 화합물 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학적 조성물.
  7. αvβ3인티그린(integrin) 매개 상태의 치료를 필요로하는 포유동물의 상기 매개 상태를 치료하는 방법으로서, 제 1 항에 따른 화합물을 αvβ3유효 억제량으로 투여하는 것을 포함하는 방법.
  8. αvβ3인티그린(integrin) 매개 상태의 치료를 필요로하는 포유동물의 상기 매개 상태를 치료하는 방법으로서, 제 2 항에 따른 화합물을 αvβ3유효 억제량으로 투여하는 것을 포함하는 방법.
  9. αvβ3인티그린(integrin) 매개 상태의 치료를 필요로하는 포유동물의 상기 매개 상태를 치료하는 방법으로서, 제 3 항에 따른 화합물을 αvβ3유효 억제량으로 투여하는 것을 포함하는 방법.
  10. 제 7 항에 있어서, 상기 치료되는 상태가 종양 전이인 방법.
  11. 제 8 항에 있어서, 상기 치료되는 상태가 종양 전이인 방법.
  12. 제 9 항에 있어서, 상기 치료되는 상태가 종양 전이인 방법.
  13. 제 7 항에 있어서, 상기 치료되는 상태가 충실성 종양 성장인 방법.
  14. 제 8 항에 있어서, 상기 치료되는 상태가 충실성 종양 성장인 방법.
  15. 제 9 항에 있어서, 상기 치료되는 상태가 충실성 종양 성장인 방법.
  16. 제 7 항에 있어서, 상기 치료되는 상태가 맥관형성인 방법.
  17. 제 8 항에 있어서, 상기 치료되는 상태가 맥관형성인 방법.
  18. 제 9 항에 있어서, 상기 치료되는 상태가 맥관형성인 방법.
  19. 제 7 항에 있어서, 상기 치료되는 상태가 골다공증인 방법.
  20. 제 8 항에 있어서, 상기 치료되는 상태가 골다공증인 방법.
  21. 제 9 항에 있어서, 상기 치료되는 상태가 골다공증인 방법.
  22. 제 7 항에 있어서, 상기 치료되는 상태가 악성의 체액성 칼슘과다혈증인 방법.
  23. 제 8 항에 있어서, 상기 치료되는 상태가 악성의 체액성 칼슘과다혈증인 방법.
  24. 제 9 항에 있어서, 상기 치료되는 상태가 악성의 체액성 칼슘과다혈증인 방법.
  25. 제 7 항에 있어서, 상기 치료되는 상태가 민무늬 근육 세포 이동인 방법.
  26. 제 8 항에 있어서, 상기 치료되는 상태가 민무늬 근육 세포 이동인 방법.
  27. 제 9 항에 있어서, 상기 치료되는 상태가 민무늬 근육 세포 이동인 방법.
  28. 제 7 항에 있어서, 레스테노시스(restenosis)의 억제에 사용되는 방법.
  29. 제 8 항에 있어서, 레스테노시스의 억제에 서용되는 방법.
  30. 제 9 항에 있어서, 레스테노시스의 억제에 서용되는 방법.
  31. 제 7 항에 있어서, 상기 치료되는 상태가 류머티스성 관절염인 방법.
  32. 제 8 항에 있어서, 상기 치료되는 상태가 류머티스성 관절염인 방법.
  33. 제 9 항에 있어서, 상기 치료되는 상태가 류머티스성 관절염인 방법.
  34. 제 7 항에 있어서, 상기 치료되는 상태가 반점 변성(macular degeneration)인 방법.
  35. 제 8 항에 있어서, 상기 치료되는 상태가 반점 변성인 방법.
  36. 제 9 항에 있어서, 상기 치료되는 상태가 반점 변성인 방법.
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