KR101001815B1

KR101001815B1 - 신경뇌혈관 장애를 치료하기 위한 조성물

Info

Publication number: KR101001815B1
Application number: KR1020047009174A
Authority: KR
Inventors: 마드허 레이; 라웬드라 팔; 사티아완 싱; 난두 말 칸나
Original assignee: 카운실 오브 사이언티픽 엔드 인더스트리얼 리서치
Priority date: 2001-12-14
Filing date: 2002-12-14
Publication date: 2010-12-15
Anticipated expiration: 2022-12-14
Also published as: CN100528149C; WO2003051380A2; EP1453528A2; MXPA04005680A; CN1615144A; AU2009212969A1; ZA200404648B; AU2002348802A1; US20100093870A1; BR0214962A; DE60233069D1; LT5284B; LT2004060A; EP1453528B1; WO2003051380A3; LV13250B; EA007067B1; CA2473874A1; JP4695839B2; NO332066B1

Abstract

본 발명은, 화학식 1의 아르-터메론 및 화학식 2의 터메론으로 구성되는 분획 A, 커큐멘 및 징지베린으로 구성되는 분획 B, 게르마크론, 커큐메론, 제도아론, 세도아론디올, 이소즈데도아로니디올, 커큐메논 및 컬론으로 구성되는 분획 C, 및/또는 약제학적으로 허용되는 첨가제를 포함하고, 생강과의 커큐머 종의 근경 및 잎의 지질 가용성 추출물로부터 얻어지며, 신경뇌혈관 장애의 치료에 유용한 조성물; 및치료학적 유효량의 지질 가용성 추출물을 투여함으로써, 상기 조성물을 사용하여 사람을 포함하는 동물에게서 발병되는 신경뇌혈관 장애를 치료하는 방법에 관한 것이다.

Description

신경뇌혈관 장애를 치료하기 위한 조성물 {A COMPOSITION FOR TREATING NEUROCEREBROVASCULAR DISORDERS}

본 발명은 생강과의 종, 특히 커큐머(Curcuma) 종의 근경 및 잎으로부터, 커큐머 오일로 불리우는 지질 가용성 추출물을 높은 수율로 제조하는 방법, 및 신경뇌혈관 장애를 치료하기 위한 이러한 오일, 이의 성분 및 이러한 성분의 신규한 유도체의 용도에 관한 것이다.

뇌혈관 경색, 발작, 허혈성 발작 등과 같은 신경뇌혈관 장애는 혈액을 뇌에 운반하는 동맥의 질환으로부터 초래되는 혈액 공급의 차단이 원인이 된다.

세가지 일반적인 발작 유형 중에서, 뇌출혈은 혈괴가 혈관벽 내에서 형성되는 경우에, 뇌혈관의 방해로 뇌혈전이 생기면서, 혈관의 파열에 의해 뇌에(뇌내출혈), 또는 혈관을 덮고 있는 막 아래에서 출혈이 생겨 일어난다.

상기 혈괴는 혈액의 이상 농밀화, 동맥의 경화증, 죽상경화증, 염증 또는 정맥의 염증으로 인한 혈관벽의 손상이 원인일 수 있다.

혈액 공급이 완전히 멈추거나 정상 수준보다 1/4 미만으로 감소되는 경우, 뇌 연화(뇌경색)는 영구적인 뇌 손상을 초래한다.

뇌색전증은 목에 있는 어느 한 동맥의 내벽 상에 형성된 혈괴가 뇌까지 이동 하여 주요 동맥 분지(branch)를 차단하는 경우와 같이 인체의 순환기의 또 다른 부분으로부터 이동하는 혈괴 또는 이물에 의해 뇌동맥이 차단되는 것이다.

일과성 허혈 발작(TIA)은 혈액 공급의 일시적 차단에 의해 야기된 증상의 단기 에피소드이다. 가역적 허혈성 신경학적 결손(RIND)은 미약한 소뇌경색이다. 다발성 뇌경색은 영구적 착란 및 기억 상실을 유도할 수 있다. 허혈성 발작은 의학적 응급상황이다. TIA 또는 발작이 일어난 후, 처치는 외과적 또는 내과적일 수 있다. 외과 처치에는 일부 경우에 혈액이 뇌로 유입되는 것을 차단하는 것을 제거하는 것이 필요할 수 있다.

약물치료는 혈관벽내 죽상경화성 플라그 상에 혈괴 형성을 방지할 수 있다. 뇌종창은 일반적으로 뇌경색 또는 뇌출혈을 동반한다. 만족할만한 치료는 아직 없다.

말초 혈관 및 뇌 질환에 최근 사용되는 약물에는, 맥각 알칼로이드, 아스피린, 항응고제 등이 포함된다. 후자는 차후 뇌혈관 사고를 예방하기 위해 발작 후에 사용되나, 이의 사용은 발작이 출혈에 의한 것이라면 금기된다.

발작을 치료하는데 매우 효과적인 항혈소판제인 티클로피딘(TICLOPIDINE)의 사용은 부작용으로 인해 장기간 사용이 제한된다. 관상 동맥내 혈괴를 치료하는 데 사용되는 조직 플라스미노겐 활성제(tissu plasminogen activator, t-PA)는 발작의 특징인 급성 허혈성 뇌 손상을 유발하는 뇌의 혈괴를 블로우 오픈(blow open)시킬 수 있는 체내 생성된 천연 혈괴 용해 물질이다. t-PA가 혈관 막힘을 일으키는 혈괴를 용해시킬 수는 있지만, 영구적인 뇌손상을 방지하고자 하는 경우에 다루어져야 하는 허혈성 발작 동안에 일어나는 다른 합병증이 있다. 혈류가 제한되는 경우와, 혈류가 재개되는 경우에 더욱더 일어날 수 있는 자유 라디칼 손상을 감소시키기 위해 t-PA가 투여되는 경우에, 혈류중에 일산화질소(NO) 및 수퍼옥사이드(superoxide) 스캐빈저를 갖는 것은 매우 중요하다.

일산화질소 및 수퍼옥사이드는 중요한 생체분자 손상을 일으키며, 이들의 생성 증가는 뇌-, 심혈관, 염증성, 신경 기능장애 및 암 등과 같은 사람의 질병에 연루되어 있다[참조: Onoda M., Inano H., Nitric Oxide: Biology and Chemistry, 4(5), 505-515(2000)].

대부분의 발작은 세포치사(경색)의 중심 영역에서 정점을 이루고, 혈류는 급격히 감소되어 세포가 일반적으로 재생될 수 없다. 뇌세포는 칼슘 활성화된 프로테아제(세포 단백질을 분해하는 효소), 리파아제(세포 막을 분해하는 효소) 및 허혈성 캐스케이드의 결과로서 형성된 유리 라디칼의 작용 결과로서 치사된다. 신경보호제 없이, 신경 세포는 수분내에 비가역적으로 손상될 수 있다. 뇌로 흐르는 혈류의 어떠한 차단도 엄청난 자유 라디칼 손상을 일으켜, 이는 발작에 일반적인 뇌 세포에 대한 상당한 재관류 손상을 유발한다. 혈류가 차단되고, 이어서 복구(재관류)되는 경우, 조직은 철을 방출시키며, 이러한 철은 종종 영구적으로 뇌 세포를 손상시키는 자유 라디칼의 형성을 위한 촉매로서 작용한다. 그러므로, 혈류 차단에 의한 손상으로부터 뇌 세포를 보호하는 것은 매우 중요하다. 허혈성 발작이 일어나면, 멜라토닌과 같은 항산화제, 비타민 및 징코 빌로바(Ginkgo biloba)와 같은 약초를 다량 사용하는 것이 어느 정도 효과가 있는 것으로 제안되어 왔다. 경구 투여로의 1500mg의 마그네슘은 혈전성 발작에 있어서 통상적인 문제가 되는 동맥 경련을 경감시키는 안정한 영양소이다.

고대 인도의 의학 시스템인 아유르베다(Ayurveda)는 질병의 예방, 진단 및 치료에 관한 것이다. 병(Illness)의 바른 해석인 "질병"은 전신의 기능부전으로서 고찰되며, 편재하는 체액의 순환 및 변환에 기여한다.

아유르베다 약물의 대부분은 다양한 기관을 포함하는 신체의 많은 기능부전에 작용하는 것으로, 명성이 높은 생성물이며, 문제를 예방하거나 정상 상태로 복귀시키는 것을 목표로 하고, 환자를 완전히 회복시키고자 한다. 오랜 기간에 걸쳐 발전되고 실험되었기 때문에, 상기 약물은 이들의 특성을 결정하고, 이들 물질의 화학적, 생물학적 또는 치료학적 효과의 원인이 되는 특정 기본 요소들의 특별한 조합의 결과물이다. 올바르게 제조된다면 치료제로서 사용될 수 없는 물질은 없다.

아유르베다는 생강과, 특히 커큐머 롱가 린네(Curcuma longa L.)[이명(syn.): 커큐머 도메스티카 발레톤(Curcuma domestica Valeton)]에 속하는 여러 종의 근경 및 잎이 많은 이로운 효과가 있음을 기술하고 있는데, 상기 근경 및 잎은 터메릭(Turmeric) 또는 할디(Haldi)로서 널리 공지되어 있다. 이들 효과 중에는, 터메릭 페이스트가 상처 및 염증을 치료하는 가정용 상비약으로서 사용될 수 있게 하는 항균, 항진균 상처 치유 및 항염증 작용이 있다.

최근, 커큐민 및 그 밖의 커큐미노이드와 같은 성분은 상기 활성을 제외하고, 담즙분비제, 콜라고직(cholagogic), 항산화제, 항암제, 류코트리엔 생합성의 억제, 5-리폭시게나아제, 시클로-옥시게나아제, 지질 과산화, 수퍼옥사이드 및 일산화질소(NO) 스케빈저 효과를 나타내는 것으로 확인되었다.

인도 의학 시스템인 아유르베다에서 명성이 높은 약초인 터메릭은 커큐머 롱가 린네(Curcuma longa L.)(이명: 커큐머 도메스티카 발레톤(Curcuma domestica Valeton))의 근경이며, 이것은 인도에서 풍부하게 자라난다. 이것은 천연 의약으로서 뿐만 아니라 음식물의 양념 및 착색제로서 오랫동안 사용되어 왔다. 이것의 분말 또는 추출물은 상처 및 염증을 치료하는데 권장된다.

주요 성분이 커큐민은 항염증제로서 개발되었다[참조: Srimal R.C., Khanna N.M.,Dhawan B.N., Ind. J. Pharmacol., 3, 10 (1971)]. 커큐민, 여러 커큐미노이드 및 커큐머 종의 몇몇 다른 성분들의 다른 치료학적 특성으로는 항균성, 항진균성[참조: Schraufstatter F., Brent H., Nature, 164, 456(1949), Arch. Dematol.. u. Syphilis, 188, 250 (1949); Lutomski. J., KedziaB., Debska W, Planta Med., 26, 9(1974) ; Rao B.G.N., Joseph P., Reichst,Aromen Koerperflegem, 21, 405-406(1971); Swada T., Yamahara J., Shimazu S., Ohta T., Shoyakagaku Zasshi, 2, 11-16(191), Prasad C. R., Sirsi M., J. Sci. Ind. Res., C. 15, 239-41(1957); Schraufstatter E., Deutsh. S. Z. Naturforsch. 4, 276 (1949) ; Chopra R. N., Gupta J. C., Chopra G. S.,Ind. J. Med. Res., 29, 769-72 (1941)], 항산화제[참조: Ramaswamy T. S., Banerjee B. N., Ann. Biochem. Exp. Med., 8, 55 (1948); Chipault J. R., Mizuno G. R., Lundberg W. O., Food Res., 10, 209, (1956)]; 지질 과산화의 억제[참조: Sharma S.C., Mukhtar H.., Sharma S. K., Krishnamurty C. R., Biochem. Biopharmacol., 21, 1210-14 (1972); Zu S., Tang. X. Lin Y., Zhougcuoyev., 22, 264-265(1991); Sharma 0. P., Biochem. Biopharmacol. 25, 1811(1976)]; 활성 산소종 스캐빈저 및 체내 커큐민에 의한 증가된 자유 라디칼 형성의 예방[참조: Tennesen H.H., Inter. J. Pharmacol., 50, 67-69(1989), Kunchandy E.., Rao M.N. A., Inter. J. Pharmacol., 58, 237 (1990)]; 포유 동물의 선(gland)에서 리포폴리사카라이드에 의한 iNOS 유도에 대한 억제 활성 및 커큐민에 의한 NO 라디칼에 대한 스캐빈저 활성[참조: Onoda M., Inano H., Nitric Oxide : Biology and Chemistry, 4 505-515 (2000)], 항염증성[참조: Arora R.B., Basu N., Kapoor V., Jain A., Proc. Second Indo Soviet Symposium on Natural Products, New Delhi, 1970, p. 170., Ind. J. Med. Res., 59, 10 (1971); Mukhopadhya A., Basu N., Ghatak N., Singh K. P., Gujral P.D., Proc. Int. Union of Physiol. Sci., 11,241(1974); Ghatak N.N., Basu. N., Ind. J. Exp. Biol., 10,235 (1972), Chandra D., Gupta S.S., Ind. J. Med. Res., 60, 138-142 (1972)]; 항암성[참조: Soudamini K.K., Kuttan R., J. Ethnopharmacol. 27,227 (1989) ; Kuttan R. Bhanumatty P., Nirmala K., George M.C., Cancer Lett., 29, 197(1985)]; 사람 백혈병 세포에서의 아폽토시스를 일으키는 항산화제 및 항종양제 프로모터[참조: Rao M.L., Huang T.S., Lin J.K., Biochem. Biophysic. Acta, 1817, 98-100 (1996)], 차이니즈 햄스터 난소 세포 배양시 세포 성장, 및 림프구 및 달튼의 림포마셀(Dalton's lymphomaCells)에 대한 세포독성의 억제[참조: Cancer Lett. (Ireland), 29, 197 (1985) via Chem. Abstr. 104, 61654^d (1986)], 7,12-디메틸 벤즈(a) 안트라센에 의해 유도된 마우스 피부암 형성에서 종양 보호 활성[참조: Kyoto-Furiton Doigaku Zasshi, 96, 725 (1987)-via Chem. Abstr., 107, 211555^a (1987)], HIV 프로테아제의 억제[참조: Suz Luz, Craik C.S., Oritz T., Montanello P. R., Proc. 205, ACS National Meeting, Denver, colarado, 28 March-2 april, Amer. Chem. Soc. Med. Chem. Div.(1993), Take Y., Inoyya H., Nakamura S., Alauddin H.S., Kuba A., J. Antibiot., 42, 107-118 (1989)], 리폭시게나아제, 시클로옥시게나아제의 억제[참조: Tennesen. H.H., Int. J Pharmacol., 50.,67 (1989)], ADP-에피네프린 및 콜라겐 유도된 혈소판 응집의 억제[참조: Srivastava R., Puri V., Srimal R. C., Dhawn B. N.; Arznei Forsch., 36,715-717(1986)]; 혈전증 유발에 대한 보호[참조: Srivastava R., Dixit M., Srimal R.C., Dhawan B.N., Thromb. Res., 40, 413-17 (1985)]; 고지방혈증 랫트에서 총 콜레스테롤/인지질 및 증가된 HDL-콜레스테롤의 비의 감소, 및 총 콜레스테롤 비의 감소[참조: Ind. J. Physiol. Pharmacol., 32, 299 (1988)]; 항응고 활성[참조: Chem. Pharm. Bu11., 33, 1499(1985)]; 혈소판 응집, 대사 장애 및 고지방혈증의 억제[참조: Lin Y., U.S. Patent, 4842849; Chem. Abstr.,111, 160200(1984); Khanna N. M., Sarin J.P.S., Singh S., Pal R., Seth R.K., Nitya Nand S., Indian Patent 162441 (1984)]를 포함하는데, 이들은 심혈관 장애 예컨대, 허혈성 심장 발작, 심근 경색 등을 예방하는데 유용하다. 인도-중국 지역에서, 커큐머 추출물은 이들의 항응고 작용으로 인해 분만시 투여된다. 커큐머 근경 에션셜 오일로부터 분리된 에틸 p-메톡시 신나메이트는 항진균 활성을 나타내며[참조: Herba Hung., 28, 95 (1989), via Chem. Abstr. 111, 191496j(1989)], 커큐머 근경 에센셜 오일로부터 분리된 푸라노거메논 및 (4S,5S)(+)게르마크론 4,5-에폭시드 또한 항염증 효과 및 스트레스성 궤양의 예방 효과를 나타낸다[참조: Yakugaku Zasshi, 106, 1137 (1986), Chem. Abstr., 106, 95935c (1987); Zhongyao Tungbto, 10, 134 (1983), Chem. Abstr. 103, 115886d (1985)]. 생강과 징지버 오피시날 로쉬(Zingiber officinale Rosch)로부터의 기타 유용한 약초는 심장 발작 또는 뇌졸중에 대한 예방 효과를 나타낸다[참조: Srivastava K.C., Prostaglandins Leukotrienes and Medicines, 13, 227-235(1964)].

발명의 목적

본 발명의 주요 목적은 생강과에 속하는 커큐머 종의 근경 및 잎으로부터의 지질 가용성 추출물을 사용하여 신경뇌혈관 장애를 치료하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 생강과에 속하는 커큐머 종의 근경 및 잎으로부터 높은 수율로 지질 가용성 추출물을 제조하는 방법을 개발하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 커큐머 오일로부터 개개의 성분을 분리하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 커큐머 오일의 상기 성분의 유사체를 개발하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 유사체로 신경뇌혈관 장애를 검사하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 신경뇌혈관 장애를 치료하기 위해 커큐머 종의 활성 성분을 확인하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 커큐머 종의 활성 성분을 사용하여 허혈증을 치료하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 커큐머 종의 활성 성분을 사용하여 발작을 치료하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 커큐머 종의 활성 성분을 사용하여 출혈을 치료하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 커큐머 종의 활성 성분을 사용하여 혈전증을 치료하는 것이다.

발명의 개요

본 발명은 커큐머 오일로 불리는 지질 가용성 추출물을 높은 수율로 제조하는 방법에 관한 것이다. 이러한 오일의 공급원은 생강과 종의 근경 및 잎이다. 상기 오일을 제조하는데 사용된 이러한 과의 특정 종은 커큐머 종이다. 상기 오일은 신경뇌혈관 장애를 치료하는데 사용된다. 상기 오일의 성분의 신규한 유사체가 개발되었고, 이들 또한 신경뇌혈관 장애의 치료에 사용될 수 있음이 발견되었다.

따라서, 본 발명은 생강과, 특히 커큐머 종의 근경 및 잎으로부터 커큐머 오일로부터 불리는 지질 가용성 추출물 및 이의 성분을 높은 수율로 수득하는 개선된 방법에 관한 것이다.

신경뇌혈관 장애 치료에 유용한 상기 조성물은, 생강과 커큐머 종의 근경 및 잎의 지질 가용성 추출물로부터 수득되며, 이 조성물은 화학식 1의 아르-터메론(ar-turmerone) 및 화학식 2의 터메론으로 구성되는 분획 A, 및/또는 커큐멘(curcumene) 및 징지베린(zingiberine)으로 구성되는 분획 B, 및/또는 게르마크론(germacrone), 커큐메론(curcumerone), 제도아론(zedoarone), 세도아론디올(sedoarondiol), 이소즈데도아로니디올(isozdedoaronidiol), 커큐메논(curcumenone) 및 컬론(curlone)으로 구성되는 분획 C, 및/또는 약제학적으로 허용되는 첨가물을 포함한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 커큐머 종은 커큐머 도메스티카 발레톤이다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 분획 A, 분획 B 및 분획 C의 비는 1-3: 1-3: 1-3이다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 첨가제는 멜라토닌, 항산화제, 칼슘 채널 길항제, 조직 플라스미노겐 활성화제(t-PA) 및 세포막 안정화제를 포함하는 군으로부터 선택된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물은 일산화질소 합성효소(NOS)의 과생성을 억제하고, 뉴런에서의 칼슘 과부하를 방지하며, 유리 라디칼 제거작용을 갖는다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물이 적용되는 뇌혈관 장애는 허혈증, 발작, 발작후 손상, 출혈, 재관류 손상, 혈전증, 혈관수축, 일산화질소-유도된 유리 라디칼 산화 손상, 경색, 염증 및 알츠하이머 병으로 구성되는 군으로부터 선 택된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 조성물의 분획 A가 가장 효과적이다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 장애는 정제, 캡슐, 좌약, 비드 및 에어로졸을 포함하는 군으로부터 선택된 다양한 전달 시스템 형태의 조성물을 사용하여 치료된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 커큐머 종 생강과의 근경 및 잎으로부터 지질 가용성 추출물, 및 화학식 1의 아르-터메론 및 화학식 2의 터메론으로 구성되는 분획 A, 커큐민 및 징지베린으로 구성되는 분획 B, 및 게르마크론, 커큐메론, 제도아론, 세도아론디올, 이소즈데도아로니디올, 커큐메논 및 컬론으로 구성되는 분획 C를 포함하는 상기 추출물의 후속 분획을 높은 수율로 수득하기 위한 개선된 방법으로서,

a. 커큐머 종의 근경 및 잎을 미세한 입자 형태로 분말화시키는 단계;

b. 연속 교반 또는 음파 처리 하의 실온에서 약 24시간 동안 극성 유기 용매를 사용하여 분말을 추출하는 단계;

c. 단계 b를 2 내지 5회 반복하는 단계;

d. 감압하 및 약 45℃ 미만의 온도에서 증류로 용매를 제거하여 잔류 농축물을 수득하는 단계;

e. 비극성 용매를 사용하여 잔류 농축물을 분쇄시키는 단계;

f. 감압하 및 45℃ 미만의 온도에서 증류에 의해 용매를 제거하는 단계;

g. 지질 가용성 추출물을 수득하는 단계;

h. 컬럼 크로마토그래피에 의해 추출물을 분별시키는 단계;

i. 분획 A, 분획 B 및 분획 C를 수득하는 단계; 및

j. 추가로 HPLC 또는 GLC를 사용하여 각각의 분획 A, B 및 C을 분별시켜 성분을 수득하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 추출물은 실리카 겔 칼럼에서 분별된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 극성 용매는 알코올 및 아세톤을 포함하는 군으로부터 선택된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 비극성 용매는 경질 석유(light petroleum) 및 톨루엔을 포함하는 군으로부터 선택된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 추출물은 n-헥산, 95:5의 n-헥산:에틸 아세테이트 혼합물, 및 에틸 아세테이트를 연속적으로 사용하여 분별된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 분획 A는 상기 추출물의 약 75%를 구성한다.

또 다른 구체예에서, 아르-터메론은 분획 A의 95%를 구성한다.

또 다른 구체예에서, 압력은 7 내지 11mmHg의 범위이다.

또 다른 구체예에서, 추출물의 농도는 약 6%이다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명은 치료학적 유효량의 지질 가용성 추출물을 투여함으로써, 사람을 포함하는 동물에게서 발병되는 신경뇌혈관 장애를 치료하는 방법에 관한 것이다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명은 일산화질소 합성효소(NOS)의 과생성을 억제하고, 뉴런 내의 칼슘 과부하를 방지하며, 유리 라디칼을 제거작용을 갖 는 방법에 관한 것이다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 뇌혈관 장애는 허혈증, 발작, 발작후 손상, 출혈, 재관류 손상, 혈전증, 혈관수축, 일산화질소-유도된 유리 라디칼 산화 손상, 경색, 감염, 및 알츠하이머 병으로 구성되는 군으로부터 선택된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 조성물 중의 분획 A가 가장 효과적이다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 장애는 정제, 캡슐, 좌약, 비드 및 에어로졸을 포함하는 군으로부터 선택된 다양한 전달 시스템 형태의 상기 조성물을 사용하여 치료된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식 3 및 4의 2개의 신규한 화합물에 관한 것이다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명은 제 1항의 조성물을 사용하여 사람을 포함하는 동물에게서 발병되는 허혈증을 치료하는 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 치료학적 유효량을 대상물에게 투여하는 단계를 포함한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 방법은 중증 뇌 허혈증을 치료하는데 도움이 된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 유효량은 분할 투여 계획으로 10 내지 1000 mg/day이다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물은 복강내 투여 및 경구 투여를 포함하는 다양한 경로를 통해 투여될 수 있다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 방법은 미토콘드리아내의 칼슘 이온의 과부하를 방지한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 분획 A가 가장 효과적이다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명은 제 1항의 조성물을 사용하여 사람을 포함하는 동물에게서 발병되는 발작을 치료하는 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 치료학적 유효량을 대상물에게 투여하는 단계를 포함한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명은 혈전성 발작, 색전성 발작 및 국소성 발작을 포함하는 군으로부터 선택된 발작을 치료하는 방법에 관한 것이다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물은 복강내 투여 및 경구 투여를 포함하는 다양한 경로를 통하여 투여된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 분획 A가 가장 효과적이다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명은 제 1항의 조성물을 사용하여 사람을 포함하는 동물에게서 발병되는 출혈을 치료하는 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 치료학적 유효량을 대상물에게 투여하는 단계를 포함한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 유효량은 분할 투여 계획으로 10 내지 500 mg/day이다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 분획 A가 가장 효과적이다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명은 제 1 항의 조성물을 사용하여 사람을 포함하는 동물에게서 발병되는 혈전증을 치료하는 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 치료학적 유효량을 대상물에게 투여하는 단계를 포함한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 혈전증은 뇌 혈전증, 심장 혈전증, 심정맥 혈전증을 포함하는 군으로부터 선택된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 방법은 혈전을 1/4로 감소시킨다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 분획 A가 가장 효과적이다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명은 제 1항의 조성물을 사용하여 사람을 포함하는 동물에게서 발병되는 고혈압을 치료하는 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 치료학적 유효량을 대상물에게 투여하는 단계를 포함한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 방법은 혈압을 약 40%까지 저하시킨다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 방법은 정상혈압으로 유지시킨다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 분획 A가 가장 효과적이다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명은 제 1항의 조성물을 사용하여 사람을 포함하는 동물에게서 발병되는 혈관수축을 치료하는 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 치료학적 유효량을 대상물에게 투여하는 단계를 포함한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 분획 A가 가장 효과적이다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명은 제 1항의 조성물을 사용하여 사람을 포함하는 동물에게서 발병되는 일산화질소-유도된 유리 라디칼 산화 손상을 치료하는 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 치료학적 유효량을 대상물에게 투여하는 단계를 포함한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 방법은 수퍼옥사이드 디스뮤타아제(SOD) 및 카탈라아제를 포함하는 산소 제거작용을 갖는 효소의 수준을 증가시킨다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 방법은 티오바르비투르산 반응성 물질(TBARS)의 수준을 감소시킨다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 분획 A가 가장 효과적이다.

본 발명은, 제 1항의 조성물을 사용하여 사람을 포함하는 동물에게서 발병되는 부종을 치료하기 위한 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 대상물에게 치료학적 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 방법은 뇌 부종 및 폐 부종을 포함하는 군으로부터 선택된 다양한 종류의 부종을 치료하는 것을 포함한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 유효량은 분할 투여 계획으로 10 내지 1000 ㎎/day의 범위이다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 분획 A가 가장 효과적이다.

본 발명의 구체예에서, 건조된 근경 및 잎을 미세 입자로 분말화한다.

본 발명의 다른 구체예에서, 상기 분말을 실온에서 유기 용매로 삼투(percolate)시킨다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 삼투시키는 동안 내용물을 계속하여 교반시킨다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 감압하 45℃ 미만의 온도에서 증류에 의해 상기 유기 용매를 제거한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 언급된 삼투 단계를 적어도 4 내지 8회 반복한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 커큐머 오일을 오렌지색을 띠는 황색의 향기나는 액체로서 5 내지 8% 수율로 수집한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 오일을 크로마토그래피와 고압 하의 증류와 같은 기술을 사용하여 이의 성분으로 분리한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 커큐머 종은 커큐머 롱가 린네(이명: 커큐머 도메스티카 발레톤), 및 커큐머 아로마티카 살리스브(Curcuma aromatica Salisb)를 포함하는 군으로부터 선택된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 유기 용매는 경질 석유(light petroleum) 및 톨루엔을 포함하는 군으로부터 선택된 비극성 유기 용매이다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 유기 용매는 에탄올 및 프로판올을 포함하는 군으로부터 선택된 극성 유기 용매이다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 비극성 유기 용매는 극성 유기 용매에 비하여 더 높은 수율을 제공한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 극성 유기 용매 추출물로부터의 잔류 농축물이 비극성 유기 용매로 추출된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 커큐머 오일은 아르-디 터메론(화학식 1), α및 β의 터메론(화학식 2), 징지베린, 커큐멘, 게르마크론, 커큐메논 및 컬론을 포함하는 이의 개별 성분으로 분리된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 크로마토그래피의 종류는 칼럼 크로마토그래 피, 바람직하게는 고성능 액체 크로마토그래피 및 기체-액체 크로마토그래피를 포함하는 군으로부터 선택된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 크로마토그래피의 흡착제는 알루미나 및 실리카 겔을 포함하는 군으로부터 선택된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 성분의 용리는 n-헥산, 에틸 아세테이트, 및 다양한 비율의 n-헥산과 에틸 아세테이트의 혼합물을 포함하는 군으로부터 선택된 유기 용매를 이용한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 크로마토그래피에 의해 분리된 커큐머 오일의 개별 성분의 분자량은 터메론(α-, β-) - 분자량 218, 아르-디-터메론 - 분자량 216, 징지베린 - 분자량 204, 및 커큐멘 - 분자량 202이다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 크로마토그래피에 의해 분리된 커큐머 오일의 개별 성분의 체류시간은 터메론(α-, β-) - 체류시간 9'-04'', 아르-디-터메론 - 체류시간 8'-08'', 징지베린 - 체류시간 5'-04'', 및 커큐멘 - 체류시간 4'-24''이다.

하기 화학식 3의 신규한 화합물, 화합물의 유사체는 아르-디 터메론, 터메론 및 게르마크론을 포함하고, 여기서 R은 알킬과 같은 치환기를 갖는, 알킬, 알케닐, 시클로알칸, 페닐, 시클로알켄, 또는 시클로알카디엔 기; 또는 페닐, 시클로알켄, 시클로알카디엔 고리의 알콕시 할로; 또는 피리딜 질소 헤테로시클릭 아민 및 치환된 아민과 같은 헤테로아릴이고, R1은 알킬 또는 아릴알킬기이다.

화학식 4의 신규한 화합물, 화합물의 유사체는 프로커큐메놀, 제도아론디올(zedoarondiol) 및 커큐메논을 포함한다.

CHR₁-CHR₁= 페닐, 치환된 페닐 또는

= a b △, H,

R₂ = H, 또는 cd △,

R₃ = 저급 알킬 C_1-3

신경뇌혈관 장애의 치료에 유용한 약제 조성물은 생강과 식물의 종, 특히 커큐머 종의 근경 및 잎으로부터 얻은, 커큐머 오일이라 불리는 지질 가용성 추출물 을 유효량으로 포함하거나, 이의 개별적인 성분을 단독으로, 또는 멜라토닌 및 조직 플라스미노겐 활성화제(t-PA)를 포함하는 관련 화합물과 함께 포함하며, 임의로 약제학적으로 허용되는 첨가제를 포함할 수도 있다.

본 발명의 또 다른 구체예는 일산화질소(NO)의 과생성, 염증으로 인한 손상, 칼슘 유입 증가, 및 중요한 생체분자에 대한 유리 라디칼 산화 손상에 관한 질환 증상을 치료, 감소, 조절, 예방하는데 사용된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 첨가제는 단백질, 탄수화물, 당, 탤크, 마그네슘 스테아레이트, 셀룰로오스, 탄산 칼슘, 전분-젤라틴 페이스트를 포함하는 영양분, 및/또는 약제학적으로 허용되는 담체, 부형제, 희석제 또는 용매의 군으로부터 선택된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물은 경구, 흡입, 또는 이식에 의해 투여된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 경구 투여용 조성물의 물리적 상태는 캡슐, 정제, 시럽, 농축물, 분말, 과립, 에어로졸 또는 비드의 형태이다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물은 5 내지 5000 ㎎/day의 용량 수준으로 투여된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물은 동물 또는 사람을 치료하는데 사용된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물은 고혈압을 치료하는데 사용된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물은 뇌 경색 및 심근 경색을 동반하는 뇌 부종 및 폐 부종을 치료하는데 사용된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물은 재관류 손상을 치료하는데 사용된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물은 발작 및 일과성 허혈 발작을 포함하는 뇌혈관 질환을 치료하는데 사용된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물은 혈전성, 색전성, 국소성 및 재발성을 포함하는 모든 종류의 발작을 치료하는데 사용된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물은 거미막밑 출혈 및 뇌 출혈을 치료하는데 사용된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물은 신경계 기능부전을 치료하는데 사용된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물은 뇌, 심장 및 심정맥을 포함하는 혈전성 경색을 치료하는데 사용된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물은 암을 치료하는데 사용된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물은 알츠하이머 병을 치료하는데 사용된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물은 후천성 면역결핍증을 치료하는데 사용된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물은 편두통을 치료하는데 사용된 다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물은 재발증상의 경우에 재투여된다.

대상물에게 발병된 신경뇌혈관 장애 증상을 치료하는 방법은, 임의적으로 사용되는 약제학적으로 허용되는 첨가제와 함께, 식물 생강과, 특히, 커큐머(curcuma) 종의 근경 및 잎으로부터의 유효량의 커큐머 오일이라 불리는 지질 가용성 추출물을 그 자체로서 또는 이의 개별 성분으로 단독으로, 또는 멜라토닌 및 조직 플라스미노겐 활성화제(t-PA)을 포함하는 관련 화합물과 함께 대상물에 투여하는 것을 포함한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 첨가제는 단백질, 탄수화물, 당, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 셀룰로오스, 탄산 칼슘, 전분-젤라틴 페이스트, 및/또는 약제학적으로 허용되는 담체, 부형제, 희석제 또는 용매를 포함하는 영양분의 군으로부터 선택된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물은 경구투여, 흡입 또는 이식에 의해 투여될 수 있다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 경구투여용 조성물의 물리적인 상태는 캡슐, 정제, 시럽, 농축물, 분말, 과립, 에어로졸 또는 비드의 형태이다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물은 5 내지 5000mg/day 범위의 용 량 수준으로 투여된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물은 뇌 경색 및 심근 경색이 수반되는 뇌 부종 및 폐 부종을 치료하는데 사용된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물은 발작후 손상을 치료하는데 사용된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물은 발작, 및 일과성 허혈 발작을 포함하는 뇌혈관 질환을 치료하는데 사용된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물은 혈전성, 색전성, 국소성 및 재발성 발작을 포함하는 모든 종류의 발작을 치료하는데 사용된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물은 뇌 혈전증, 심장 혈전증 및 심정맥 혈전증을 포함하는 혈전증을 치료하는데 사용된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물은 편두통을 치료하는데 사용된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 조성물은 재발성 증상의 경우에 투여된다.

본 발명의 일 구체예에서, 본 발명은 생강과에 속하는 커큐머 종의 근경 및 잎의 추출물로부터 치료학적으로 유효한 약물을 얻거나/제조한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명은, 보다 상세하게는 일반적으로 터메릭 또는 할디로서 알려진 커큐머 롱가 린네(이명: 커큐머 도메스티카 발레톤)의 지질 가용성 추출물/분획을 제공한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명은 일산화질소(NO)의 과생성 및 자유 라디칼 산화 손상과 연관되는 사람의 질환을 치료 및 예방하기 위한, 약제학적으로 허용되는 제형/전달 시스템, 예컨대, 정제, 캡슐, 좌제, 비드 또는 에어로졸 등을 제공한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 질환은 일과성 허혈 발작과 같은 신경뇌혈관 장애(허혈, 출혈, 및 국소성 재발 등), 혈전증(뇌, 심장 및 심정맥), 경색, 발작(혈전성, 색전성 및 국소성 등), 알츠하이머 병, 염증질환, 신경성 기능부전, 상처, 발암 또는 종양 전이 등이다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 이하 커큐머 오일이라 불리는 커큐머 종의 근경(과: 생강과), 특히, 커큐머 롱가 린네(이명: 커큐머 도메스티카 발레톤)의 지질 가용성 추출물/분획은 그 자체 또는 이의 다양한 성분 단독으로, 또는 이들 성분들의 혼합물이 수퍼옥사이드 및 일산화질소(NO) 제거효과(scavenging)를 나타내거나, 이들은 다양한 퇴행성 질환을 억제하도록 치료학적으로 효과적이게 하는 다른 성분, 보다 구체적으로는, 뇌 경색 및 심근 경색이 수반되는 뇌 부종 및 폐 부종/팽창을 치료하는 항소염 활성을 지니는 일산화질소(NO) 및 수퍼옥사이드 스캐빈저인 약물과의 혼합물로서 수퍼옥시드 및 일산화질소 스캐빈징 특성을 나타낸다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 이들의 생물학적 특성의 관점, 및 이에 후속하여 아유르베다의 정신적 및 육체적 관점을 고려하면, 커큐머 오일이라 불리며 커큐머 롱가 린네(이명: 커큐머 도메스티카 발레톤)의 근경 및 잎으로부터 얻어진 지질 가용성 추출물/물질이, 그 자체 또는 이의 주요 활성 성분들, 즉, 아르-디-터메론(화학식 1), 터메론(α-, β-, 화학식 2)으로서 단독으로, 또는 서로의 혼합물로, 및 다른 미량의 성분과의 혼합물로서 현저하게 유용한 것으로 밝혀졌으며, 강력한 일산화질소(NO) 및 자유 라디칼/수퍼옥사이드 제거효과를 갖는 것으로 확인되었다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 지질 가용성 추출물은 미토콘트리아성 손상을 보호하여 후속하는 손상을 보호할 수 있는 효능적인 자유 라디칼 제거효과/항산화 활성을 나타내거나/지니고 있으며, 이들은 또한 일산화질소 합성효소(NOS)의 과생성을 억제하고, 염증으로 인한 손상을 방지하며, 칼슘 유입을 감소시켜 뉴 런에서의 칼슘 과부하가 일어나지 않게 한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 또 다른 중요한 이점은, 재관류 손상의 주요 원인인 상기 세 가지 파라메타중 어떠한 것이 저해된다면, 상기 세가지 파라메타는 이들 약물에 의해서 치료되며, 윌리스 환(Circle of Willis)으로부터의 측부순환이 혈류를 도와서 약물이 손상 부위에 도달하게 할 수 있게 한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 중증 뇌 허혈이 발생된 경우에, 커큐머 오일을 그 자체 또는 이의 개별 성분들, 예컨대, 단독의 아르-디-터메론 또는 터메론 등으로 투여하거나, 각각의 성분들의 혼합물을 화학식 3 또는 화학식 4 유형의 다른 관련된 화합물 및/또는 다른 치료학적으로 유리한 성분, 예컨대, 멜라토닌, 다른 항산화제, 칼슘 통로 길항제, 조직 플라스미노겐 활성화제(t-PA) 및 세포막 안정화제와 함께 또는 이들 없이 투여하면, 뇌 및 심장 손상에 대해서 효과적으로 보호할 수 있다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 발작은 고혈압 환자의 사망에 주된 원인중 하나이기 때문에, 본 발명은 또한 커큐머 오일 그 자체 또는 이의 개별 성분들을 단독으로, 또는 항산화 및 신경 보호 활성을 지닌 효과적인 항고혈압약으로서 이들의 혼합물의 중요성을 강조하고자 한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 생강과의 커큐머 종, 특히, 커큐머 롱가 린네(이명: 커큐머 도메스티카 발레톤)의 근경 및 잎의 지질 가용성 추출물로서, 이하 커큐머 오일이라 불리는 주요 성분이 아르-디-터메론(화학식 1), 터메론(α-, β-, 화학식 2)[참조: Tap Chi Hoa Hoc: 25, 18(1987); Chem. Abstr., 108, 137682^s(1988)]이고 다른 미량의 성분이 징지베린(zingiberine), 커큐멘, 컬론, 커큘론, 커제논, α-,β-커큐메놀리드, 커큐메논, 커디온, 게르마크론, 리날로올, 캄포르, 보르네올 및 징지베롤 등[참조: Essenze Deriv. Agrum, 54, 117(1984); Chem Abstr., 103, 128791^w(1985)]인 엷은 황색 내지 오렌지빛이 도는 황색의 향기좋은 오일성 액체인 지질 가용성 추출물은 일산화질소(NO)의 과생성을 억제하며, 뇌혈관장벽을 침투하여, 신경뇌혈관 기능부전, 모든 유형의 발작, 혈전증(뇌, 심장, 심정맥), 경색, 염증성 및 신경성 장애, 특정 유형의 암, 상처, 알츠하이머 병 및 다른 일산화질소 신경독성, 고압산소 노출 등에서의 일산화질소(NO) 및 수퍼옥사이드/자유 라디칼 유도된 신경 손상을 방지함으로써 효과적인 치료학적 보호를 제공할 수 있다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 높은 수율의 지질 가용성 물질은 이하 커큐머 오일이라 불리는 커큐머 종(과: 생강과), 특히, 커큐머 롱가 린네(이명: 커큐머 도메스티카 발레톤)의 근경 및 잎으로부터 얻어지며, 이의 다양한 성분의 분리에 의해서 얻어진다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 보다 상세하게는, 본 발명은 커큐머 오일 그 자체 또는 이의 개별 성분을 단독으로, 또는 이들과 이들을 신경뇌혈관 장애 및 이와 관련되거나 관련되지 않은 기능부전, 예컨대, 허혈성 발작, 모든 형태의 발작, 혈전증, 경색, 편두통, 알츠하이머 병, 염증성 및 신경성 기능부전, 발암, 종양전이 상처, 및 심지어 HIV/AIDS를 치료 및 예방하기 위한 약물로 사용될 수 있게 하는 다른 성분과의 혼합물에 의해, 일산화질소(NO) 및 수퍼옥사이드 제거효과 및 뇌혈류 역학에서의 어떠한 변화의 방지에 관한 것이다.

화학식 4의 신규 화합물, 즉 프로커큐메놀, 제도아론디올 및 커큐메논을 포함하는 화합물의 유사체.

CHR₁-CHR₁ = 페닐, 치환된 페닐 또는

= ab △, H,

R₂ = H, 또는 cd △,

R₃ = 저급 알킬 C_1-3

도 1은 커큐머 오일을 사용한 후 국소 허혈증이 발병된 랫트에서의 경색 예방을 도시한다.

도 2는 분획 A를 사용한 후 전뇌에서 폐색후 경색의 완전한 예방을 도시한다.

도 3은 분획 B를 사용한 후 전뇌에서 폐색후 경색의 완전한 예방을 도시한다.

도 4는 미토콘드리아에서 칼슘 변화를 도시한다(340/380 비)

도 5는 분획 A 및 분획 B를 사용한 후 미토콘드리아 내에서의 SOD 수준의 변화를 도시한다.

도 6은 분획 A 및 분획 B를 사용한 후 미토콘드리아 내에서의 카탈라아제 수준을 도시한다.

도 7은 분획 A를 사용한 후 미토콘드리아 내에서의 말론디알데히드 수준을 도시한다.

도 8은 NE로 유도된 수축에 대한 이완율(%)의 변화를 도시한다.

도 9는 분획 A를 사용한 후 미토콘드리아 내에서의 SNP 수준의 변화를 도시한다.

본 발명의 다른 구체예에서는, 생강과에 속하는 다양한 종의 근경 및 잎의 지질 가용성 추출물/분획, 특히 커큐머 롱가 린네(이명: 커큐머 도메스티카 발레톤) 또는 커큐머 아로마티카 살리스브 또는 커큐머 제도아리아 록스브. 등의 근경/잎의 분말을, 알코올, 아세톤, 에틸 아세테이트 등과 같은 유기 용매, 바람직하게는 경질 석유 또는 톨루엔과 같은 비극성 유기 용매를 사용하여 일정하게 교반하면서 추출하고, 감압하 45℃ 미만의 온도에서 증류시켜 상기 추출물로부터 용매를 제거함으로써, 커큐머 종으로부터 커큐머 오일을 양호한 수율로 수득하는 방법이 제공된다.

본 발명의 다른 구체예에서, 에탄올과 같은 극성 유기 용매로 추출하는 경우, 용매의 제거후 잔류하는 알코올성 농축물을 경질 석유 또는 톨루엔 등과 같은 비극성 유기 용매로 완전히 추출시킨다.

본 발명의 다른 구체예에서, 이러한 추출물로부터 용매를 감압하 45℃ 미만의 온도에서 증류시켜 5 내지 6% 수율로 엷은 황색 내지 오렌지빛이 도는 황색의 향기있는 액체를 수득한다.

본 발명의 다른 구체예에서, 적합한 흡착제상에서 적합한 유기 용매에 의해 용리시키는 칼럼 크로마토그래피에 의해, 또는 HPLC 또는 GLC 또는 진공 증류에 의해 오일을 분별시켜, 모두 GC-MS 등에 의해 확인된 주성분(GC-MS로 측정하여 약 70%)인 아르-디-터메론(화학식 1), 터메론(α-,β-, 화학식 2) 뿐만 아니라 다른 소수 성분, 예를 들어 징지베린, 커큐멘, 제데오론, 게르마크론, 컬론, 커디온 등을 수득한다.

본 발명의 다른 구체예에서, 생강과에 속하는 다양한 종의 근경 및 잎의 지질 가용성 추출물/분획, 특히 커큐머 롱가 린네(이명: 커큐머 도메스티카 발레톤) 또는 커큐머 아로마티카 살리스브 등의 근경 및 잎의 지질 가용성 추출물/분획을, 이러한 근경/잎의 미세 분말을 적합한 유기 용매로 점차적으로 연속 교반하면서 완전히 추출하거나, 통상적인 실온에서 음파처리한 다음 추출물로부터 용매를 감압하 45℃ 미만의 온도에서 증류시켜 제거함으로써 높은 수율로 수득하는 하는 방법이 제공된다.

본 발명의 다른 구체예에서, 유기 용매는 비극성 유기 용매, 예를 들어 경질 석유, 톨루엔 등이다.

본 발명의 다른 구체예에서, 사용된 유기 용매는 극성 유기 용매, 예를 들어 에탄올, 프로판올 등이다.

본 발명의 다른 구체예에서, 극성 유기 용매 추출물로부터 용매를 제거한 후 잔류하는 농축물을 비극성 유기 용매, 예를 들어 경질 석유, 톨루엔 등으로 완전히 추출한다.

본 발명의 다른 구체예에서, 감압하 45℃ 미만의 온도에서 증류시켜 유기 용매를 추출물로부터 제거한다.

본 발명의 다른 구체예에서, 수동으로 또는 기계 교반기로 또는 전기 모터로 연속 교반을 수행한다.

본 발명의 다른 구체예에서, 엷은 황색 내지 오렌지빛이 도는 황색의 향기있는 오일성 액체인 상기 종의 근경 또는 잎의 지질 가용성 추출물/물질을, 크로마토그래피(칼럼, HPLC, GLC 등) 또는 고진공 하에 증류시켜, 개별 성분, 예를 들어 아르-디-터메론(화학식 1), 터메론(α-,β-, 화학식 2), 징지베린, 커큐멘, 게르마크론, 커큐메논, 컬론 등으로 분리시킨다.

본 발명의 다른 구체예에서, 커큐머 오일의 개별 성분은 적합한 흡착제, 예를 들어 알루미나, 실리카겔 등 상에서 적합한 유기 용매, 예를 들어 n-헥산, n-헥산:에틸 아세테이트의 혼합물(다양한 비율), 에틸 아세테이트 등으로 용리시키는 칼럼 크로마토그래피에 의해 수득된다.

본 발명의 다른 구체예에서, HPLC 또는 GLC에 의해 커큐머 오일의 개별 성분을 분리한다. 예를 들어, 터메론(α-,β-): 분자량 218, 유지시간 9'-04"; 아르-디-터메론: 분자량 216 유지시간 8'-08"; 징지베린: 분자량 204, 유지시간 5'-04"; 커큐멘: 분자량 202, 유지시간 4'-24"이다.

본 발명의 다른 구체예에서, 커큐머 오일의 개별 성분, 예를 들어 아르-디-터메론 (화학식 1), 터메론 (화학식 2), 징지베린, 커큐멘, 커큐메논, 게르마크론 등이 커큐머 오일의 진공 증류에 의해 수득되는데, 예를 들어, 전체 커큐머 오일의 약 70%를 차지하는, 내지 아르-디-터메론의 고농도 분획(끓는점 140-160℃/lOmmHg)을 통해 아르-디-터메론(끓는점 155-160℃/9mmHg)이 수득된다.

본 발명의 다른 구체예에서, 상기 지질 가용성 추출물의 개별 성분, 예를 들어 아르-디-터메론(도 1), 터메론(도 2), 게르마크론, 커큐메논, 징지베린, 커큐멘 등의 일산화질소(NO) 및 수퍼옥사이드 제거(항산화) 효과가 제공된다.

본 발명의 다른 구체예에서, R이 알킬과 같은 치환기를 갖는, 알킬, 알케닐, 시클로알칸, 페닐, 시클로알켄, 또는 시클로알카디엔 기; 또는 페닐, 시클로알켄, 시클로알카디엔 고리의 알콕시 할로; 또는 피리딜 질소 헤테로시클릭 아민 및 치환된 아민과 같은 헤테로아릴이고, R1이 알킬 또는 아릴알킬기인 화학식 3의 화합물, 즉 아르-디-터메론, 터메론 및 게르마크론을 포함하는 화합물의 유사체가 중요한 생체분자에 대한 일산화질소(NO), 수퍼옥사이드/자유 라디칼 산화 손상을 제거/방지하기 위한 일산화질소(NO), 수퍼옥사이드/자유 라디칼 스캐빈저로서 제공된다.

본 발명의 다른 구체예에서, 화학식 4의 화합물, 즉 프로커큐메놀, 제도아론디올 및 커큐메논 등을 포함하는 화합물의 유사체 - 견고한 골격내에 아르-디-터메론 및 터메론(α-,β-) 분자의 현저한 특징을 분자 구조내에 포함하는 커큐머 종의 지질 가용성 추출물의 다른 소수 성분들이 모든 유형의 발작, 혈전증, 경색, 신경기능부전의 치료 및 예방에 치료학적으로 이로운 약제로서 작용한다.

CHR₁-CHR₁ = 페닐, 치환된 페닐 또는

= ab △, H,

R₂ = H, 또는 cd △,

R₃ = 저급 알킬 C_1-3

본 발명의 다른 구체예에서, 커큐머 오일 그 자체 또는 이의 개별 성분이 단독으로, 또는 서로 또는 관련 화합물과 함께 나타내는 치료학적으로 이로운 효과는, 중요한 생체분자에 대한 일산화질소(NO)의 과생성 및 자유 라디칼 산화 손상과 관련된 사람의 질환, 예를 들어 모든 유형의 발작(혈전성, 색전성, 국소성, 허혈성), 혈전증(뇌, 심장, 심정맥), 경색, 신경성 기능부전 등을 경감, 조절 또는 예방한다.

본 발명의 다른 구체예에서, 필요로 하는 대상물에게 유효량의 커큐머 오일 자체 또는 이의 개별 성분을 단독으로, 또는 서로 또는 관련 화합물과 함께 투여하는 것을 포함하여, 포유동물에서 발작후 손상을 치료하는 방법이 제공된다.

본 발명의 다른 구체예에서, 필요로 하는 대상물에게 치료학적 유효량의 커큐머 오일 자체 또는 이의 개별 성분을 단독으로, 또는 서로 또는 관련 화합물과 함께 투여하는 것을 포함하여, 발작 5 내지 7시간 후 거미막밑 출혈성 및 뇌 출혈성 발작 환자를 치료하는 방법이 제공된다.

본 발명의 다른 구체예에서, 필요로 하는 대상물에게 유효량의 커큐머 오일 (그 자체) 또는 이의 개별 성분을 단독으로, 또는 서로 또는 관련 화합물과 함께 투여하는 것을 포함하여, 포유동물에서 재관류 손상을 치료하는 방법이 제공된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 필요로 하는 대상물에게 유효량의 커큐머 오일 (전체로서) 또는 이의 개별 성분들을 단독으로, 또는 서로 또는 관련된 화합물과 함께 투여함으로써, 모든 유형의 발작(혈전성, 색전성, 국소성, 재발성), 일과성 허혈 발작 등과 같은 뇌혈관 질환을 치료하는 방법이 제공된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 필요로 하는 대상물에게 유효량의 커큐머 오일 (전체) 또는 이의 개별 성분들을 단독으로, 또는 서로 또는 관련된 화합물과 함께 투여함으로써, 허혈성 질환을 치료하고, 위험한 혈괴 형성을 예방하는 방법이 제공된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 필요로 하는 대상물/환자에게 유효량의 커큐머 오일 (전체) 또는 이의 개별 성분들을 단독으로, 또는 서로 또는 관련된 화합물과 함께 투여하는 것을 포함하여, 포유동물에서 고혈압을 치료하는 방법이 제공된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 필요로 하는 대상물에게 커큐머 오일 (전체) 또는 이의 개별 성분들과 같은 약제를 단독으로, 또는 항염증 활성을 갖는 일산화질소(NO) 및 수퍼옥사이드/자유 라디칼 스캐빈저로서의 서로 또는 관련된 화합물과 함께 투여함으로써, 뇌 경색 및 심근 경색을 수반하는 뇌 부종 및 폐 부종을 치료하는 방법이 제공된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 치료학적으로 이로운 효과의 상기 지질 가용성 추출물, 즉 그 자체 또는 아르-디-터메론, 터메론, 게르마크론, 징지베린, 커큐멘, 컬론 등과 같은 이의 개별 성분을 단독으로, 또는 멜라토닌, 조직 플라스미노겐 활성제(t-PA)와 같은 치료학적으로 유용한 제제와 함께 그리고 이러한 성분없이, 경구적으로, 비경구적으로 (개별적인 순수한 성분들), 또는 정제, 캡슐, 비드, 좌제, 에어로졸, 이식 등과 같은 그밖의 임의의 적합한 약제학적으로 허용되는 전달 시스템에 의해 유효량으로(발작에 대해서는 분할 투여로 10 내지 500mg/day 및 그밖의 질병에 대하여 분할 투여로 10 내지 1000mg/day) 투여함으로써, 일산화질소 (NO) 및 자유 라디칼 산화 손상과 관련된 모든 유형의 발작, 혈전증, 경색 및 신경성 기능부전과 같은 사람의 질환에 대하여 매우 효과적인 치료/치료법을 제공하고, 백혈병과 같은 특정 유형의 암, 알츠하이머 병 및 심지어는 HIV/AIDS에서도 치료학적으로 사용될 수 있다.

하기 실시예는 본 발명을 광범위하게 설명하는 것으로서, 어떠한 방식으로든 본 발명의 특성 및 범위를 제한하지 않는다.

실시예 1

본 실시예는 커큐머 오일 및 이의 성분들을 높은 수율로 수득하는 방법 및 이의 투여 제형을 제조하는 방법을 기술한다. 커큐머 롱스 린네(이명: 커큐머 도메스티카 발레톤) 또는 그밖의 커큐머 종의 근경으로부터 커큐머 오일 및 이의 성분들을 추출하는 개선된 방법이 제공된다.

통상의 추출 공정은 경질 석유, 톨루엔, 알코올 등과 같은 유기 용매를 이용하여 건조 분쇄된 커큐머 근경을 3회 또는 4회 삼투시키고, 삼투물로부터 용매를 증류시키는 것을 포함한다. 알코올성 추출물의 경우, 용매가 제거된 후, 잔류 농 축액을 경질 석유와 같은 비극성 유기 용매로 분쇄하고, 이어서 증류에 의해 용매를 제거하여 1 내지 1.5%의 수율로 커큐머 오일을 수득한다.

고온 추출(속슬렛)은 필수적인 휘발성 성분들의 손실을 초래한다. 상기 공정들을, 경질 석유, 아세톤, 알코올 등과 같은 적합한 유기 용매를 이용하여 전기 모터 또는 수동에 의해 구동되는 기계 교반기에 의해서나, 음파 처리에 의한 교반으로 연속하여 교반하면서 건조 분쇄된 커큐머 근경을 추출한 다음, 감압하 45℃ 미만의 온도에서 증류에 의해 상기 추출물로부터 용매를 제거하는 단계로 변경시킴으로써, 커큐머 오일의 수율 및 품질을 상당히 증가시킨다.

통상적인 공정에서, 미세하게 건조 분말화된 커큐머 롱스 린네 근경(1kg)을 바닥 근처에 마개가 장착된 스테인레스 강 또는 유리 삼투기/용기에서 n-헥산(3ℓ)을 이용하여 연속적으로 삼투시키고, 내용물을 전기 모터에 의해 구동되는 기계 교반기에 의해 24시간 동안 매번 연속적으로 완속 교반하였다. 오렌지빛이 도는 황색의 삼투물을 배수시키고, 이 공정을 4 내지 5회 반복하였다. 감압하 45℃ 미만의 온도에서 삼투물로부터 용매를 증류시켜, 오렌지빛이 도는 황색의 향기로운 액체(51g = 5.1% 수율)를 수득하였다.

마찬가지로, 미세하게 분말화된 커큐머 롱스 린네 근경(1kg)을 24시간 동안 매번 연속적인 교반하에 아세톤 또는 알코올(5 x 3ℓ)로 초기 추출시키고, 이어서 감압하 45℃ 미만의 온도에서 증류에 의해 삼투물로부터 용매를 제거하고, 잔류 농축물을 n-헥산 또는 톨루엔(6 x 500ml)으로 집중적으로 분쇄시키고, 감압하 45℃ 미만의 온도에서 증류에 의해 용매를 제거하여, 오렌지빛이 도는 황색의 향기로운 액체(60g = 6% 수율)를 수득하였다.

상기 오렌지빛이 도는 황색의 향기로운 액체(20.0g)를 실리카 겔 칼럼 상에서, n-헥산, n-헥산:에틸 아세테이트(다양한 비율로)의 혼합물 및 에틸 아세테이트로 연속하여 칼럼 크로마토그래피하여, 아르-디-터메론(화학식 1, 55%) 및 터메론(α-,β-화학식 2, 20%)을 주요 성분(분획-A)으로서 수득하고, 이어서 커큐멘(10%) 및 징지베린(분획-B)을 수득하고, 활성이 낮은 그밖의 미량 성분으로서 -게르마크론, 커큐메론, 제도아론, 제도아론디올, 이소즈데도아로니디올, 커큐메논, 컬론 등(분획-C)을 수득하였다.

감압하(140-160℃/9 mmHg)에 커큐머 오일(20.0g)을 증류시켜 아르-디-터메론이 풍부하게 존재하는 주요 분획 I(화학식 1, 15.0g)과 함께 그밖의 터메론(α-,β-, 화학식 2) 및 다른 미량 성분들(4.2g, 분획 II)을 수득하였다.

분획 I는 굴절률(n_D ³⁰)이 1.4990이고, 비광회전은 (L)²⁵+19.6이었다. 크로마토그래피 또는 고 진공하 증류에 의해 수득된 커큐머 오일 자체 또는 이의 개별적인 성분들을 단독으로, 또는 임상적으로 적합한 유효 제형을 제조하기 위한 그밖의 치료학적으로 이로운 화합물과 함께 및 이러한 화합물없이 사용하였다.

커큐머 오일 그 자체 또는 이의 개별 성분들을 단독으로, 또는 서로 특히 아르-디-터메론, α-,β-터메론과 함께, 적합한 비율의 전분 및 미세결정성 셀룰로오스를 이용하여 혼합기에서, 혼합물이 흐름이 자유로운 분말이 될 때까지 침연시킴으로써 고체 투여 형태를 수득할 수 있으며, 이를 치료학적으로 바람직한 세부사항에 따라 캡슐에 채우거나 정제로 전환시킬 수 있다.

통상적인 실시예에서, 커큐머 오일(10.0g)을 에탄올(100ml)에 용해시켰다. 전분(5.0g) 및 미세결정성 셀룰로오스(85.0g)를 상기 용액에 첨가하였다. 내용물을 완전히 혼합하고, 45℃ 미만의 온도에서 건조시킴으로써 용매를 제거하였다. 수득된 생성물을 40-메시 크기의 체로 통과시켜 흐름이 자유로운 과립을 수득하였다. 이후, 이 과립을 적합한 투여 요건의 정제로 압착하였는데, 예컨대 500mg으로 칭량된 각 정제는 50mg의 커큐머 오일을 함유한다.

실시예 2

국소 뇌 허혈증:

CDRI 애니멀 하우스로부터의 체중이 270 내지 375g인 수컷 스프라그 돌리(Sprague Dawley) 랫트를 본 연구를 위해 이용하였다. 랫트를 12시간의 광/암 주기에 수용하고, 물을 임의로 공급하였다. 동물들을 하룻밤동안 단식시키고, 30mg/kg의 펜토바르비톤 나트륨으로 마취하였다. 직장 온도를 모니터하였다. 혈관내 미세섬유를 이용한 일시적인 허혈/관류를 수행하여, 중간 뇌동맥을 한측으로 2시간 동안 폐색시킨 다음[참조: Longa Z.E., Weinstein P.R., Carlson S., Cummins R.; Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats: Stroke, 20, 84-91 (1989)], 추가 36시간 동안 관류시켰다. 동물들을 n=5마리 랫트인 하기 그룹으로 무작위로 나누었다 (1) 대조군: 모의로 조작됨, (2) 허혈/재흐름 - 비처리, (3) 허혈/재흐름 -처리된 그룹: (i) 커큐머 오일(중량/ml, 0.86g), 683.65mg/kg, i.p. 및 P.O.로 제공됨, (ii) 분획-A(중량/ml, 0.88g), 569.56mg/kg, i.p. 및 P.O.로 제공됨, (iii) 분획-B(중량/ml, 0.91g), 938.86mg/kg, i.p. 및 P.O.로 제공됨. 동물들을 치사시키고, 뇌를 제거한 즉시 냉동하였다. 각 뇌로부터 두께가 2mm인 8개의 대조 절편을 절단하고, 37℃에서 30분 동안 2,3,5-트리페닐테트라졸륨 클로라이드로 염색한 후 포르말린으로 고정하였다. 각 뇌의 조각을 촬영하였다. 각 조각에서의 경색 영역을 이중 맹검법으로 평가하였다. n=3인 랫트 그룹(1, 2 & 3)으로부터 뇌를 분리하고, 미토콘드리아 Ca²⁺ 평가를 위해 프로세싱하였다.

시험 프로토콜:

전뇌 미토콘드리아의 단리:

약간 변형된 라이(Lai) 및 클라크(Clark)의 방법에 따라 랫트의 전뇌로부터 미토콘드리아를 단리시켰다[참조: Lai J.C.K., Clark J.P., Preparation of synaptic and non-synaptic mitochondria from mammalian brain: Method Enzymol., 55, 51-60(1979)]. 머리 제거 후 랫트의 전뇌를 즉시 분리하고, 빙냉 단리 매질 또는 인산염 완충 식염수에 침지시켰다. 뇌를 잘게 썰고 헹구어서 미량의 혈액을 모두 제거하였다. 적합한 매질에서 모터로 작동되는 테플론 균질화기를 이용하여 조직을 균질화하고(10% w/v), 즉시 1800g에서 10분 동안 원심분리하였다. 상청액을 따라내고, 펠릿을 재균질화한 다음, 1800g에서 10분 동안 원심분리하였다. 제 1 및 제 2 회전으로부터의 상청액을 합치고, 17,000g에서 20분 동안 원심분리하였다. 생성된 펠릿을 특정 매질에 재현탁시키고, 17,000g에서 5분 동안 원심분리하였다.

미토콘드리아 내용물의 측정:

약간 변형된 자이단 이.(Zaidan E.) 및 심스 엔.알.(Sims N.R.)의 방법에 따라 전뇌로부터 단리된 미토콘드리아의 칼슘 함량을 측정하였다[참조: The calcium content of mitochondria from brain subregions following short term forebrain ischaemia and recirculation in the rat; J. Neurochem., 63, 1812-1819(1994)]. 간단하게, 숙시네이트 매질 중에 미토콘드리아(0.3mg, 단백질)를 Fura-2AM (0-5μM)과 함께 로딩시키고, 계속 셰이킹시키면서 37℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 이후, 미토콘드리아를 숙시네이트 매질로 2회 세척하고, 동일한 매질에 재현탁시켰다.

시마즈(Shimadzu) RF 5000 분광형광계를 사용하여, 510nm에서의 방사로 340 및 380nm의 파장을 여기시키는 Fura-2 형광도 비를 측정하였다. 미토콘드리아 칼슘([Ca²⁺]_m)은 340/380 형광도 비의 추적자로서 표시된다[참조: Macleod K.T. and Harding S.E.; Effect of phorbolester in contraction, intracelluar pH and intracellular Ca²⁺ in isolated mammalian ventricular myocytes. J. Physiol. (London), 444, 481-498(1991)].

결과: 전처리된 그룹의 국소 허혈성 랫트로부터의 경색은 도 1 및 2에서 확인할 수 있듯이 완전히 억제되었다. 시험 화합물/성분이 중간 뇌동맥의 폐색 후 제공된 그룹에서, 7개의 뇌 절편 중의 6개가 완전한 억제(도 3)를 나타내는 반면, 1개에서는 약 20%의 영역이 경색된 것으로 나타났다. 모의, 허혈 및 시험 화합물로 처리된 그룹 (i)의 동물로부터의 전뇌에서 단리된 미토콘드리아는 표준에 가까운 세포내 칼슘 수준을 나타내었다(도 4).

실시예 3

콜라게나아제-유도된 뇌 내출혈:

CDRI-애니멀 하우스로부터의 성체 수컷 랫트(250 내지 350g)를 하기 시험에 이용하였다. 랫트를 펜토바르비톤 나트륨(30mg/kg, i.p.)으로 마취하고, 입체 공간적 구조(랫트용, Narashige, Japan)에 놓았다. 로센베르그(Rosenberg) 등의 방법을 수행하였다[참조: Rosenberg G.A. Mun-Bryce S., Mary B.S. and Kornfeld M., Collagenase-Induced intracerebral hemorrhage in rats: Stroke, 21, 801-807(1990)]. 머리 가죽을 절개하고, 23-게이지 바늘을 꼬리핵 및 조가비핵에 이식하였다(A5.8, L3.0, H1의 좌표로)(A stereotaxic atlas of the rat brain, eds. R. M. Elliot, Gardener Lindzey and Kenneth, MacCorquodale. Meredith Publishing Company, 1967). 랫트(n=10)에 콜라게나아제 (2㎕의 식염수 중의 0.01 IU)를 주입하고, 모의(sham)에 대하여 2㎕의 표준 식염수를 주입하였다. 주입 후, 바늘을 제거하고, 상처를 봉합하였다. 동물들이 마취에서 회복되게 하고, 따뜻한 곳에 두고, 사료와 물을 공급하였다. 18시간 후, 야마모토(Yamamoto) 등에 따라 비정상적인 자세 및 반마비에 대한 점수를 매김으로써 신경학적 결함을 평가하였다[참조: Yamamoto A. Tamura, Kirino T., Shimizu M and Sano K. Behavioral changes after focal cerebral ischaemia by left middle cerebral artery occlusion in rats. Brain Research, 452, 323-328(1998)]. 이후, 랫트를 30mg/kg i.p.의 펜토바르비톤 나트륨으로 재마취시키고, 뇌를 분리하였다. 랫트를 세 그룹으로 무작위로 나누었다. 그룹 1에는 식염수를 제공하였다. 콜라게나아제(2㎕ 식염수 중의 0.01IU)로 처리된 그룹 2 및 3에는 경구로 콜라게나아제 처리 5시간 및 7시간 후, 분획 A(683.65mg/kg)를 제공하였다.

산화방지제 평가

미토콘드리아를 실시예 2에 기술된 바와 같이 단리하였다. 산화방지제 평가를 위해, 미토콘드리아를 헹구고, 인산염 완충액에 현탁시켰다. 그 밖의 평가를 위해, 미토콘드리아를 수크로오스 250mM, KH₂PO₄ 6mM 및 숙시네이트 6mM를 함유하는 매질(pH 7.2)에 재현탁시켰다. 단리 과정은 4℃에서 수행하였다.

산화방지제:

산소 제거효과를 갖는 효소인 수퍼옥사이드 디스뮤타아제(SOD), 카탈라아제 (CAT) 및 티오바르비투르산 반응성 물질을, 실험용 동물의 전뇌로부터 단리한 미토콘드리아에서 평가하였다.

SOD: SOD 활성을 NADH, PMS, NBT의 억제 및 560nm에서의 흡광도에 의해 측정하였다. 효소 활성은 U/분/mg 단백질로 표현된다[참조: Nishikini M., Rao N.A., Yagi K., The occurrence of superoxide anion in the reaction of reduced PMS and molecular oxygen. Biochem Biophysi. Res. Commun. 46, 849-854 (1972)].

CAT: CAT 활성을 애비(Aebi)의 문헌에 따라 240nm에서 H₂O₂의 UV 흡광도 변화를 측정함으로써 검정하였다[참조: Aebi H., In Methods of Enzymatic Analysis (Third edition) ed. H.U. Bergmeyer Academic Press, New York and London, Vol.2, pp 673-684. (1974)].

티오바르비투르산 반응성 물질 (TBARS):

미토콘드리아 TBARS 수준을 532nm에서 오카와(Okhawa) 등의 방법에 의해 말론디알데히드의 지수로서 측정하고, 이로부터 지질 과산화도를 측정하였다[참조: Okhawa H., Ohishi N., Yagi K., Assay of lipid peroxides in animal tissues by thiobarbituric acid reaction: Anal. Biochem., 95, 351 (1979)]. 기능 결함을 베데르손(Bederson)의 문헌에 따라 평가하고[참조: Bederson J.B., Pitts, L.H. Tsiji M., Nishimura M.C. Davis R.L., Barkowisk H., Rat MCAO: Evaluation of model and development of a neurologic examination, Stroke, 17, 472 (1986)], 수분 함량을 평가하였다. 둘 모두의 파라미터는 처리되지 않은 군과 비교하여 현저하게 감소된 것으로 확인되었다.

단백질 검정

미토콘드리아 단백질을, 우혈청 알부민(BSA)를 표준물질로 사용하여 로우리(Lowry) 등의 방법에 의해 측정하였다[참조: Lowry O.H., Rosbrough N.J., Farr. A.L., Randall K.J.; Protein measurement with folin phenol reagent: J. Biol. Chem., 193, 265 (1951)].

결과: 시험 화합물(분획 A)은 콜라게나아제 처리한 지 5시간 후에 부종을 현저하게 감소시켰다. 처리한 지 5시간 및 7시간째의 신경학적 결함은 처리되지 않은 군의 경우에 4 등급으로 기록되었고, 처리군의 경우에 0 내지 2 등급으로 기록되었다. 처리되지 않은 군의 경우에 치사율은 5마리 중 3마리였고, 처리군의 경우에 치사율은 5마리 중 1마리였다.

SOD: SOD 수치는 5시간 동안에 거의 정상인 반면, 시험 화합물(분획 A)의 경우, 콜라게나아제 처리한 지 7시간 후에 SOD 수준이 증가하였다(도 5).

카탈라아제: 이 효소는 뇌에 미소한 양으로 존재하는 것으로 보고되었다(도 6).

TBARS: 콜라게나아제 처리한 지 5시간째에, 이의 수치는 콜라게나아제 처리된 동물의 수치에 근접한 반면, 7시간째에 수치는 정상 군과 비교하여 현저히 감소하였는데, 이는 시험 화합물 - 분획 A의 산화방지 특성을 나타낸다(도 7). 미토콘드리아를 실시예 2에 기술된 바와 같이 단리하였다.

실시예 4

C.D.R.I. 애니멀 하우스로부터의 수컷의 성체 랫트(250 내지 350gm.)를 30mg/kg의 펜토바르비톤 나트륨으로 마취시켰다. 랫트의 경정맥을 노출시켰다. 65% 메탄올 중의 10% 포르말린 5방울을 정맥에 적하하였다. 6시간 정치시켜서 혈전이 형성되도록 하고, 이후 이의 존재 또는 부재에 따라 등급화하였다[참조: Blake O. R., Ashwin J.G., Jaques L.B.,; An assay for the antithrombotic activity of anticoagulants: J. Clin. Pathol., 12, 118 (1959)]. 처리군에는 분획 A (아르-디-터메론 및 터메론)을 300gm. 랫트 당 200㎕로 투여하고(i.p.), 처리되지 않은 군(대조군)에는 등량의 식식염수를 투여하였다(i.p.).

결과: 처리되지 않은 군에서 혈전은 2.8mg이었고, 처리군에서 0.75mg이었으며, 이는 처리군과 비교하여 처리되지 않은 군에서의 373.33%의 증가를 나타내는 것이다.

실시예 5

랫트를 골드블랫트(Goldblatt) 등에 따라 고혈압이 되게 하였다 [참조: Goldblatt H., Lynch J., Hanezal R.F., Serville W.W.; Studies on experimental hypertension,; The production of persistent elevation of systolic blood pressure by means of renal ischaemia J Exp Med; 59:347-379 (1934)]. 8주 후, 고혈압 랫트는 200mm/Hg의 평균 최초 혈압을 나타냈다. 커큐머 오일 683.65mg/kg을 복강내 투여한 후, 혈압은 15분내에 115mm/Hg로 강하하였고, 이러한 수준에서 60분 넘게 유지되었다.

표 1

랫트	투여용량 (i.p.) (683.65mg/kg)	혈압 강하 (%)	지속시간 (분)	실험 회수
고혈압		38.76 ±7.19	> 60분	n = 3
정상혈압		강하 없음		n = 2

결과: 상기 화합물은 고혈압 랫트에서는 혈압을 현저히 강하시켰지만, 정상혈압 랫트에서는 그렇지 않았다. 이는 혈관확장제에 공통적인 β-아드레날린성 수용체 길항으로 인한 서맥 또는 반사성 빈박없이 혈압을 낮추었다[참조: Nichols A.J., Gallai M. Ruffolo R.P Jr. Studies on the mechanism of arterial vasodilation produced by the noval antihypertensive agent. Carvediolol. Fundam. Clin. Pharmacol., 5:25-38 (1991)].

실시예 6

복부 대동맥을 볼프강(Wolfgang) 등의 문헌에 따라 마운팅(mounting)하였다 [참조: Wolfgang Auch-Schwelk, Zvonimir S.Katusic and Paul M. Vanhoutte : contractions to oxygen derived free radicals are augmented in aorta of the spontaneously hypertensive rats., Hypertension, 13, 859-864 (1989)]. 대동맥 고리를 노르에피네프린 10^-8 내지 10^-5M로 수축시켰다. 수축된 혈관을 단계적으로 첨가되는 아세틸콜린 또는 커큐머 오일에 의해 이완시켰다. 아세틸콜린은 10^-7 내지 10^-5M의 농도로 첨가하였다. 커큐머 오일의 경우, 수득된 최종 수축은 8ml 조에서 0.861mg 이었다(도 8). 단백질 키나아제 C 활성제인 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트 (PMA) (10^-7M)는 온전하고 노출된 대동맥 띠 시료에서 수축을 유도시켰다. 커큐머 오일 0.881mg으로 전처리하면 PMA 유도 수축을 완전히 억제하였다. 이는 단백질 키나아제 C를 억제한다 [참조: Kaczmarck L. K.; The role of Protein Kinase C in regulation of ion channels and neurotransmitter release: Trends in Neurosciences, 10, 30-34 (1987); Jin-Moo Lee, Grabb M.C., Zipfel G.J., Choi D. W., J. Clin. Invest., 106, (6), 723-731 (2000)].

결과: 커큐머 오일 및 아세틸콜린은 노르에피네프린 유도 수축을 완전하게 이완시켰으며, 이는 현저한 혈관이완 효과를 나타낸다.

실시예 7

일산화질소는 중추 신경계에서 글루타메이트 수용체의 활성화에 이어 일어나는 cGMP 수준의 증가를 매개하는 세포내 메신저에서 최초로 특징화되었다[참조: Garthwaite J. Charles S.L. and Chess-Williams R. Endothelium derived relaxing factor release on activation of NMDA receptors suggest a role as intracellular messenger in the brain. Nature 336, 385-388 (1988)]. NO 및 수퍼옥사이드 라디칼의 동시 생성은 독성 반응 생성물인 퍼옥시니트라이트 음이온의 생성을 촉진시킨다[참조: Beckman JS, Beckman TW, Chen J. Marshal PA and Freeman BA. Apparent hydroxyl radical production by peroxynitrile: implication for endothelial injury for nitric oxide and superoxide. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 1620 (1990)]. 세포 근처 또는 세포 내부에 존재하는 경우, 퍼옥시니트라이트는 다수의 생체 성분, 즉, DNA(가닥 절단에 의해), 지질(지질 과산화반응에 의해), 아코니타아제 및 산화방지제 이용률을 손상시키거나 고갈시킬 수 있다[참조: Cuzzocrea S, Riley. DP, Caputi AP 및 Salvemini D. Antioxidant therapy: a new pharmacological approach ion shock, inflammation and ischemia/reperfusion injury. Pharmacol. Rev. 53: 135-159, (2001)]. 시험 성분의 일산화질소 제거 효과를 시험하기 위해, NO 공여체인 나트륨 니트로프루시드를 사용하여 시험관내 시험을 수행하였다.

시험 화합물/성분에 의한 일산화질소(NO) 제거효과

나트륨 니트로프루시드(SNP)는 일산화질소(NO)를 생성시킨다[참조: Sreejayan and Rao M.N.A.: Nitric oxide scavenging by curcuminoids, J. Pharm. Pharmacol., 49, 105-107 (1997)]. 분획 -A 86.14mg을 다양한 농도의 SNP (5 내지 40mM)에서 인산염 완충 식식염수에서 혼합하고, 1:1 비의 그리스(Griess) 시약을 시험 화합물(분획-A)과 혼합하였다. SNP, 시험 화합물(분획-A) 및 그리스 시약으로 형성된 상기 발색단 완충액의 흡광도를 546nm에서 판독하고, 이를 동일한 방식으로 그리스 시약으로 처리된 칼륨 니트라이트의 표준 용액의 흡광도와 비교하였다[참조: Green L.C., Wagner D.A., Glogowski J, Skipper P.L., Wishnok J,S., Tannenbaum S.R., Analysis of nitrate, nitrite and ¹⁵N in biological fluids; Anal. Biochem. 126, 131 (1982). Marcocci L., Maguire J.J, Droy-Lefaix M.T., Packer L.: The nitric oxide scavenging property of Ginkgo biloba extract EGb 761, Biochmem. Biophys. Res. Commun. 201, 748 (1994)].

결과: SNP는 일산화질소를 발생시켰고, 시험 화합물 (분획 A)은 이렇게 생성된 일산화질소를 제거하였다. 결과는 시험 화합물 (분획 A)이 국소 허혈에서 일산화질소의 스캐빈저임을 나타낸다 (도 9).

Claims

생강과(Zingiberaceae) 커큐머(curcuma) 종의 근경 및 잎의 지질 가용성 추출물로부터 얻어지며, 신경뇌혈관 장애의 치료에 유용한 조성물로서,

하기 화학식 1의 아르-디-터메론(ar-d-turmerone) 및 하기 화학식 2의 α 및 β 터메론으로 구성되는 분획 A; 커큐멘(curcumene) 및 징지베린(zingiberine)으로 구성되며 선택적으로 포함되는 분획 B; 게르마크론(germacrone), 커큐메론(curcumerone), 제도아론(zedoarone), 세도아론디올(sedoarondiol), 이소즈데도아로니디올(isozdedoarondiol), 커큐메논(curcumenone) 및 컬론(curlone)으로 구성되는 분획 C를 포함하는 조성물:

상기 식에서,

α 터메론인 경우에는 R = CH₃이고, β 터메론인 경우에는 R = CH₂이다.
제 1항에 있어서, 상기 커큐머 종이 커큐머 도메스티카 발레톤(Curcuma domestica Valeton)임을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 분획 A, 분획 B 및 분획 C의 비가 1-3: 1-3: 1-3의 범위임을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 첨가제가 멜라토닌, 항산화제, 칼슘 채널 길항제, 조직 플라스미노겐 활성화제(t-PA) 및 세포막 안정화제를 포함하는 군으로부터 선택됨을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 조성물이 일산화질소 합성효소(NOS)의 과생성을 억제하고, 뉴런에서의 칼슘 과부하를 방지하며, 유리 라디칼의 제거작용(scavenging)을 함을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 신경뇌혈관 장애가 허혈증, 발작, 발작후 손상, 출혈, 재관류 손상, 혈전증, 혈관수축, 일산화질소 유도된 유리 라디칼 산화 손상, 경색, 염증 및 알츠하이머 병을 포함하는 군으로부터 선택됨을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 조성물의 분획 A가 가장 효과적임을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 조성물이 정제, 캡슐, 좌약, 비드 및 에어로졸로 이루어진 군에서 선택된 제형의 형태로 제조되는 조성물.
제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 약제학적으로 허용되는 첨가제를 추가적으로 포함하는 조성물.
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