JP6383419B2 - 腫瘍免疫のモジュレーション - Google Patents

Description

本発明は進行性腫瘍の治療における腫瘍免疫のモジュレーション（調節）に関する。特に、本発明は、進行性腫瘍の抗腫瘍応答を増強するためにＧＩＴＲのアゴニストと組合されたＰＤ−１のアンタゴニストを提供する。

腫瘍微小環境は、発癌イニシエーション、腫瘍進行および治療応答に寄与する癌生物学の重要な態様である。免疫系の細胞および分子は腫瘍微小環境の基本成分である。重要なことに、治療戦略は、腫瘍細胞を特異的に標的化するために免疫系を利用することが可能であり、これは、癌患者において長期持続的退縮を引き起こし再発を予防しうる腫瘍特異的免疫記憶の誘導の可能性ゆえに、特に魅力的である。

腫瘍微小環境の構造および特徴は多種多様であり、抗腫瘍免疫応答の決定において重要である。例えば、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞（ＤＣ）およびエフェクターＴ細胞を含む免疫系の或る細胞は強力な抗腫瘍応答を誘導しうる。しかし、腫瘍細胞は、しばしば、免疫抑制性微小環境を誘導し、これは、骨髄由来サプレッサー細胞および調節性Ｔ細胞のような免疫細胞の免疫抑制性集団の発生を促進する。腫瘍による免疫モジュレーションの複雑さの理解は免疫療法の開発に重要である。免疫チェックポイントを克服するための抑制性シグナリング経路のアンタゴニストおよびＤＣに基づくワクチンを含む抗腫瘍免疫応答を増強するための種々の戦略が開発中である。

ＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバーであるグルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）は後天性および適応免疫系の多数の成分において発現される（例えば、Ｈａｎａｂｕｃｈｉら（２００６）Ｂｌｏｏｄ １０７：３６１７−３６２３；ならびにＮｏｃｅｎｔｉｎｉおよびＲｉｃｃａｒｄｉ（２００５）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５．３５：１０１６−１０２２を参照されたい）。その膜発現はＴ細胞活性化後に増加し（Ｈａｎａｂｕｃｈｉ，前掲；ならびにＮｏｃｅｎｔｉｎｉおよびＲｉｃｃａｒｄｉ，前掲）、その誘発はエフェクターＴリンパ球を同時活性化し、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）活性をモジュレーションする（ＭｃＨｕｇｈら，（２００２）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２００２．１６：３１１−３２３；Ｓｈｉｍｉｚｕら（２００２）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．．３：１３５−１４２；Ｒｏｎｃｈｅｔｔｉら（２００４）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３４：６１３−６２２；およびＴｏｎｅら（２００３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １００：１５０５９−１５０６４を参照されたい）。

ＧＩＴＲはＧＩＴＲリガンド（ＧＩＴＲＬ）により活性化され、これは主にＡＰＣ上で発現され、その細胞質ドメインによりシグナルを伝達すると示唆されているが、生化学的シグナリングを明らかにするためには更なる研究が必要である（Ｎｏｃｅｎｔｉｎｉ，前掲；Ｒｏｎｃｈｅｔｔｉ，前掲；Ｓｕｖａｓら（２００５）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７９：１１９３５−１１９４２；およびＳｈｉｎら（２００２）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ １９：１８７−１９２）。

ＧＩＴＲ活性化は腫瘍およびウイルス感染に対する抵抗性を増強し、自己免疫／炎症過程に関与し、白血球の血管外遊出を調節する（Ｎｏｃｅｎｔｉｎｉ，前掲；Ｃｕｚｚｏｃｒｅａら（２００４）Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．７６：９３３−９４０；Ｓｈｅｖａｃｈら（２００６）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：６１３−６１８；Ｃｕｚｚｏｃｒｅａら（２００６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７７：６３１−６４１；およびＣｕｚｚｏｃｒｅａら（２００７）ＦＡＳＥＢ Ｊ．２１：１１７−１２９）。腫瘍マウスモデルにおいては、アゴニストＧＩＴＲ抗体ＤＴＡ−１がアンタゴニストＣＴＬＡ−４抗体と組合され、幾つかの試験群マウスにおいては進行期腫瘍の完全腫瘍退縮において相乗的結果を示した（Ｋｏら（２００５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．７：８８５−８９１）。

プログラム死受容体１（ＰＤ−１）は、主に活性化ＴおよびＢ細胞上で発現される免疫抑制受容体である。そのリガンドとの相互作用はインビトロおよびインビボの両方においてＴ細胞応答を低減することが示されている。ＰＤ−１とそのリガンドの１つであるＰＤ−Ｌ１との相互作用の遮断は腫瘍特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞免疫を増強することが示されており、したがって、免疫系による腫瘍細胞の排除に役立ちうる。

ＰＤ−１（遺伝子Ｐｄｃｄ１によりコードされる）は、ＣＤ２８およびＣＴＬＡ−４に関連した免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーである。ＰＤ−１は、そのリガンド（ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２）の嵌合に際して抗原受容体シグナリングを負に調節することが示されている。マウスＰＤ−１の構造およびヒトＰＤ−Ｌ１とのマウスＰＤ−１の共結晶構造が解明されている（Ｚｈａｎｇ，Ｘ．ら（２００４）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２０：３３７−３４７；Ｌｉｎら（２００８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０５：３０１１−６）。ＰＤ−１および類似ファミリーメンバーは、リガンド結合をもたらすＩｇ可変型（Ｖ型）ドメインと、シグナリング分子の結合をもたらす細胞質尾部とを含有するＩ型膜貫通糖タンパク質である。ＰＤ−１の細胞質尾部は、チロシンに基づく２つのシグナリングモチーフ、すなわち、ＩＴＩＭ（免疫受容体チロシンに基づく抑制モチーフ）およびＩＴＳＭ（免疫受容体チロシンに基づくスイッチモチーフ）を含有する。

ヒトにおいては、ＰＤ−１（腫瘍浸潤性リンパ球上）および／またはＰＤ−Ｌ１（腫瘍細胞上）の発現が、免疫組織化学により評価された幾つかの原発腫瘍生検において見出されている。そのような組織には、肺、肝臓、卵巣、子宮頸部、皮膚、結腸、神経膠腫、膀胱、乳房、腎臓、食道、胃、口腔扁平上皮、尿路上皮細胞および膵臓の癌ならびに頭頸部の腫瘍が含まれる（Ｂｒｏｗｎ，Ｊ．Ａ．ら（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：１２５７−１２６６；Ｄｏｎｇ Ｈ．ら（２００２）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．８：７９３−８００；Ｗｉｎｔｔｅｒｌｅら（２００３）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６３：７４６２−７４６７；Ｓｔｒｏｍｅ，Ｓ．Ｅ．ら（２００３）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６３：６５０１−６５０５；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｒ．Ｈ．ら（２００６）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６６：３３８１−５；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら（２００７）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１３：１７５７−６１；Ｎｏｍｉ，Ｔ．ら（２００７）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１３：２１５１−７）。より驚くべきことに、腫瘍細胞上のＰＤ−リガンド発現は複数の腫瘍型にわたる癌患者の不良予後と相関している（ＯｋａｚａｋｉおよびＨｏｎｊｏ（２００７）Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９：８１３−８２４において概説されている）。

現在までに、ＰＤ−１とそのリガンド（ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２）との相互作用はインビトロおよびインビボにおけるリンパ球増殖の抑制を招くことを多数の研究が示している。ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用の遮断は腫瘍特異的Ｔ細胞免疫の増強を招く可能性があり、したがって、免疫系による腫瘍細胞の排除に役立ちうるであろう。この点を検討するために、幾つかの研究が行われた。侵襲性膵臓癌のマウスモデルにおいて（Ｎｏｍｉ，Ｔ．ら（２００７）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１３：２１５１−２１５７）、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１遮断の治療効力が示された。ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に対する抗体の投与は腫瘍増殖を有意に抑制した。抗体遮断は、ＩＦＮガンマ、グランザイムＢおよびパーフォリンを含む抗腫瘍エフェクターのアップレギュレーションをもたらす、腫瘍内への腫瘍反応性ＣＤ８＋ Ｔ細胞浸潤を有効に促進した。また、該著者は、ＰＤ−１遮断が化学療法と有効に組合されて相乗効果をもたらしうることを示した。もう１つの研究においては、マウスにおける扁平上皮癌のモデルを使用して、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１の抗体遮断が腫瘍増殖を有意に抑制した（Ｔｓｕｓｈｉｍａ，Ｆ．ら（２００６）Ｏｒａｌ Ｏｎｃｏｌ．４２：２６８−２７４）。

腫瘍免疫をモジュレーションする物質の使用により免疫障害および増殖性障害、例えば腫瘍および癌を治療するための改良された方法および組成物が必要とされている。本発明は、進行期腫瘍を治療するためにＧＩＴＲのアゴニストと組合されたＰＤ−１のアンタゴニストを提供することにより、この要求を満足させるものである。

発明の概括
本発明は、ＰＤ−１アンタゴニストおよびＧＩＴＲアゴニストを患者に投与することを含む、患者における腫瘍の治療方法であって、ＰＤ−１アンタゴニストおよびＧＩＴＲアゴニストを同時または連続的に投与する方法を提供することにより、当技術分野におけるこれらの要求以上のものを満足させるものである。ある実施形態においては、ＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントであり、ＧＩＴＲアゴニストは、ＧＩＴＲに結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントである。ＧＩＴＲアゴニストおよびＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１アンタゴニストは該ヒトタンパク質に結合する。抗体またはその結合性フラグメントはヒト化体であるかまたは完全ヒト体である。

更に詳細な実施形態においては、ＰＤ−１アンタゴニストは、ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＫ−３４７５およびＭＰＤＬ３２８０Ａからなる群から選択され、ＧＩＴＲアゴニストは、配列番号１〜６６のＣＤＲの少なくとも１つを有する抗体、ＴＲＸ５１８およびＴＲＸ３８５からなる群から選択される。ＧＩＴＲアゴニストは、配列番号１〜１１の重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２〜２２の重鎖ＣＤＲ２および配列番号２３〜３３の重鎖ＣＤＲ３ならびに／または配列番号３４〜４４の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号４５〜５５の軽鎖ＣＤＲ２および配列番号５６〜６６の軽鎖ＣＤＲ３を有する抗体でありうる。更に詳細な実施形態においては、ＧＩＴＲアゴニストは、配列番号６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５および８７の可変重鎖ならびに／または配列番号６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６および８８の可変軽鎖を有する抗体である。

本発明はまた、ＰＤ−１アンタゴニストおよびＧＩＴＲアゴニストを少なくとも１回で同時に投与することを想定している。ある実施形態においては、ＰＤ−１アンタゴニストおよびＧＩＴＲアゴニストを少なくとも２回で同時に投与する。ある実施形態においては、腫瘍は進行期腫瘍であり、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、胃腸癌、膵臓癌、神経膠芽細胞腫、神経膠腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、例えば肝癌および肝細胞癌、膀胱癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、唾液腺癌、腎臓癌、例えば腎細胞癌およびウィルムス腫瘍、基底細胞癌、黒色腫、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、精巣癌ならびに食道癌からなる群から選択されうる。

本発明は、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に結合しＰＤ−１活性に拮抗する第１アームと、ＧＩＴＲに結合しＧＩＴＲ活性を刺激する第２アームとを含む二重特異性抗体を患者に投与することによる腫瘍の治療方法を提供する。ある実施形態においては、第１アームは、ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＫ−３４７５およびＭＰＤＬ３２８０Ａからの抗原結合性フラグメントからなる群から選択され、第２アームは、配列番号１〜６６のＣＤＲの少なくとも１つを有する抗体、ＴＲＸ５１８およびＴＲＸ３８５からの抗原結合性フラグメントからなる群から選択される。更にもう１つの実施形態においては、第２アームは、配列番号１〜１１の重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２〜２２の重鎖ＣＤＲ２および配列番号２３〜３３の重鎖ＣＤＲ３ならびに／または配列番号３４〜４４の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号４５〜５５の軽鎖ＣＤＲ２および配列番号５６〜６６の軽鎖ＣＤＲ３を有する。ある実施形態においては、第２アームは配列番号６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５および８７の可変重鎖ならびに／または配列番号６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６および８８の可変軽鎖を有する。

本発明は、進行期腫瘍である腫瘍の治療方法を提供する。ある実施形態においては、進行期腫瘍は、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、胃腸癌、膵臓癌、神経膠芽細胞腫、神経膠腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、例えば肝癌および肝細胞癌、膀胱癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、唾液腺癌、腎臓癌、例えば腎細胞癌およびウィルムス腫瘍、基底細胞癌、黒色腫、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、精巣癌ならびに食道癌からなる群から選択されうる。

本発明は、ＰＤ−１アンタゴニストとＧＩＴＲアゴニストとを含む医薬組成物を提供する。また、進行期腫瘍を治療するための、ＧＩＴＲアゴニストと組合されたＰＤ−１アンタゴニストの使用を提供する。

詳細な説明
添付の特許請求の範囲を含む本明細書において用いる単数形の単語は、文脈に明らかに矛盾しない限り、それらの対応複数形対象物を含む。後記の表１５は、本出願において用いられる配列表の一覧を示す。本明細書中で引用されている全ての参照文献を、各個の刊行物、データベースエントリー（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ配列またはＧｅｎｅＩＤエントリー）、特許出願または特許が参照により本明細書に組み入れられると具体的かつ個別に示されている場合と同様に、参照により本明細書に組み入れることとする。本明細書における参照文献の引用は、前記のいずれかが関連先行技術であると自認するものとは意図されず、また、それは、これらの刊行物または文書の内容または日付に関するいずれの自認にも相当しない。

Ｉ．定義
「グルココルチコイド誘導性ＴＮＦ受容体」（本明細書においては「ＧＩＴＲ」と略される）は、本明細書中で用いるＴＮＦ受容体スーパーファミリー１８（ＴＮＦＲＳＦ１８）、ＴＥＡＳＲおよび３１２Ｃ２としても公知であり、腫瘍壊死因子／神経成長因子受容体ファミリーのメンバーを意味する。ＧＩＴＲは、細胞外ドメイン内の３つのシステイン偽反復配列により特徴づけられる２４１アミノ酸のＩ型膜貫通タンパク質であり、Ｔ細胞受容体誘導性アポトーシスを特異的に防御する。尤も、それは、他のアポトーシスシグナル、例えばＦａｓ惹起、デキサメタゾン処理またはＵＶ照射から細胞を防御しない（Ｎｏｃｅｎｔｉｎｉ，Ｇ．ら（１９９７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４：６２１６−６２２）。３つのスプライス変異体が存在するヒトＧＩＴＲ（ｈＧＩＴＲ）の核酸およびアミノ酸配列が公知であり、例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ｇｉ：４０３５４１９８、ｇｉ：２３２３８１９０、ｇｉ：２３２３８１９３およびｇｉ：２３２３８１９６において見出されうる。

「ＧＩＴＲアゴニスト」は、ＧＩＴＲシグナリングの活性化を介して免疫反応を刺激する任意の化合物または生物学的分子を意味する。アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体の配列はＷＯ ２０１１／０２８６８３およびＷＯ ２００６／１０５０２１ならびにＴＲＸ−３８５およびＴＲＸ−５１８において示されている。また、ＧＩＴＲ結合相手である可溶性ＧＩＴＲ−Ｌタンパク質も想定される。

「ＰＤ−１アンタゴニスト」は、免疫細胞（Ｔ細胞、Ｂ細胞またはＮＫＴ細胞）上で発現されるＰＤ−１への癌細胞上で発現されるＰＤ−Ｌ１の結合を遮断する、そして好ましくは、免疫細胞により発現されるＰＤ−１への癌細胞上で発現されるＰＤ−Ｌ２の結合をも遮断する任意の化合物または生物学的分子を意味する。ＰＤ−１およびそのリガンドの別名または同義語には以下のものが含まれる：プログラム死受容体１；ＰＤ−１に関するＰＤＣＤ１、ＰＤ１、ＣＤ２７９およびＳＬＥＢ２；ＰＤ−Ｌ１に関するＰＤＣＤ１Ｌ１、ＰＤＬ１、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７−４、ＣＤ２７４およびＢ７−Ｈ；ならびにＰＤ−Ｌ２に関するプログラム死受容体リガンド１、ＰＤＣＤ１Ｌ２、ＰＤＬ２、Ｂ７−ＤＣ、ＢｔｄｃおよびＣＤ２７３。ヒト個体が治療される本発明の治療方法、医薬および使用のいずれにおいても、ＰＤ−１アンタゴニストはヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ１の結合を遮断し、そして好ましくは、ヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２の両方の結合を遮断する。ヒトＰＤ−１アミノ酸配列は、それぞれ、ＮＣＢＩローカス（Ｌｏｃｕｓ）番号：ＮＰ ０５４８６２およびＮＰ ０７９５１５において見出されうる。

本発明の治療方法、医薬および使用のいずれかにおいて有用なＰＤ−１アンタゴニストには、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する、そして好ましくはヒトＰＤ−１またはヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）またはその抗原結合性フラグメントが含まれる。該ｍＡｂはヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体であることが可能であり、ヒト定常領域を含みうる。幾つかの実施形態においては、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４定常領域からなる群から選択され、好ましい実施形態においては、ヒト定常領域はＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常領域である。幾つかの実施形態においては、抗原結合性フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）_２、ｓｃＦｖおよびＦｖフラグメントからなる群から選択される。

ＰＤ−１に結合し、本発明の治療方法、医薬および使用において有用であるｍＡｂの例はＵＳ７５２１０５１、ＵＳ８００８４４９およびＵＳ８３５４５０９に記載されている。本発明の治療方法、医薬および使用におけるＰＤ−１アンタゴニストとして有用である具体的な抗ヒトＰＤ−１ ｍＡｂには、ＷＨＯ Ｄｒｕｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．２７，Ｎｏ．２，ｐｐ．１６１−１６２（２０１３）に記載されている構造を有し図６に示されている重鎖および軽鎖アミノ酸配列を含むするヒト化ＩｇＧ４ ｍＡｂであるＭＫ−３４７５、ＷＨＯ Ｄｒｕｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．２７，Ｎｏ．１，ｐｐ．６８−６９（２０１３）に記載されている構造を有し図７に示されている重鎖および軽鎖アミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ４ ｍＡｂであるニボルマブ（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）（ＢＭＳ−９３６５５８）；ピジリズマブ（ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）（ｈＢＡＴまたはｈＢＡＴ−１としても公知であるＣＴ−０１１）；ならびにＷＯ２００８／１５６７１２に記載されているヒト化抗体ｈ４０９Ａ１１、ｈ４０９Ａ１６およびｈ４０９Ａ１７が含まれる。

ヒトＰＤ−Ｌ１に結合し、本発明の治療方法、医薬および使用において有用であるｍＡｂの例はＷＯ２０１３／０１９９０６、ＷＯ２０１０／０７７６３４ Ａ１およびＵＳ８３８３７９６に記載されている。本発明の治療方法、医薬および使用においてＰＤ−１アンタゴニストとして有用である具体的な抗ヒトＰＤ−Ｌ１ ｍＡｂには、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＥＤＩ４７３６、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、ならびにＷＯ２０１３／０１９９０６のそれぞれ配列番号２４および配列番号２１重鎖および軽鎖可変領域を含む抗体が含まれる。

本明細書中で用いる「投与」なる語は、ＧＩＴＲアゴニストと少なくとも１つの癌治療剤、例えばＰＤ−１アンタゴニストとを含む組成物の、癌患者への物理的導入を意味する。導入のあらゆる方法が本発明において想定され、該方法は、いずれの特定の導入手段にも依存しない。導入手段は当業者によく知られており、それらの例は本明細書に記載されている。

本明細書中で用いる「共投与」なる語は、ＧＩＴＲアゴニストと少なくとも１つの追加的な癌治療剤、例えばＰＤ−１アンタゴニストとの組合せが同一患者に投与される過程を意味する。ＧＩＴＲアゴニストおよびＰＤ−１アンタゴニストは同時または連続的に投与されうる。投与が連続的に行われる場合、ＧＩＴＲアゴニストおよび／またはＰＤ−１アンタゴニストは、与えられた追加的な癌治療剤または治療の前または後に投与されうる。ＧＩＴＲアゴニストおよびＰＤ−１アンタゴニスト治療は、同じビヒクルを使用して投与される必要はない。ＧＩＴＲアゴニストおよびＰＤ−１アンタゴニストは１回以上投与可能であり、該組合せの各成分の投与回数は同じ又は異なりうる。また、ＧＩＴＲアゴニストおよびＰＤ−１アンタゴニストは同一部位において投与される必要はない。

本明細書中で用いる「治療的有効量」または「治療的に有効な組合せ」なる語は、個体の全身免疫応答をモジュレーションする、例えば刺激するのに十分である、追加的な治療剤または治療（例えば、ＰＤ−１アンタゴニスト）の量または用量と一緒になったＧＩＴＲアゴニストの量または用量を意味する。与えられた治療的に有効な組合せにおける各分子の量は個体および腫瘍型によって異なることがあり、該組合せに含まれる１以上の追加的な治療剤または治療に左右されるであろう。「治療的有効量」は、「治療結果の改善」がもたらされるように、当業者により通常用いられている手法を用いて決定される。

本明細書中で用いる、癌に関する「治療結果の改善」および「治療効力の増強」なる語は、癌細胞または固形腫瘍の成長の減速または退縮、あるいは癌細胞の総数または総腫瘍量の減少を意味する。したがって、「治療結果の改善」または「治療効力の増強」は、例えば腫瘍サイズの減少、腫瘍進行までの時間の増加、無進行生存期間の増加、総生存時間の増加、余命の増加または生活の質の改善を含むいずれかの臨床的に許容される基準に基づく患者の状態における改善が認められることを意味する。特に、「改善」または「増強」は、治療結果または効力のいずれかの臨床的に許容される指標の１％、５％、１０％、２５％、５０％、７５％、１００％の又は１００％を超える改善または増強を意味する。

本明細書中で用いる「抗体」なる語は、所望の生物活性を示す任意の形態の抗体を意味する。したがって、それは最も広い意味で用いられ、特に、所望の生物活性を示すモノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体などを含む。

本明細書中で用いる「ＧＩＴＲ、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１結合性フラグメント」、「それらの結合性フラグメント」または「それらの抗原結合性フラグメント」なる語は、本明細書中で「ＧＩＴＲ誘導活性」と称されるＧＩＴＲシグナリングを誘導する抗体の生物活性を尚も保有する、抗体のフラグメントまたは誘導体を含む。あるいは、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１結合性フラグメントは、ＰＤ−１活性（例えば、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２への結合）を抑制する抗体のフラグメントまたは誘導体を含む。「抗体フラグメント」またはＧＩＴＲ、ＰＤ−１もしくはＰＤ−Ｌ１結合性フラグメントなる語は、完全長抗体の一部分、一般に、その抗原結合性または可変領域を意味する。抗体フラグメントの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２およびＦｖフラグメント；ジアボディ；直鎖状抗体；一本鎖抗体分子、例えばｓｃ−Ｆｖ；ならびに抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が含まれる。典型的には、結合性フラグメントまたは誘導体はそのＧＩＴＲアゴニスト活性の少なくとも１０％を保有する。所望の生物学的効果を発揮するのに十分なアフィニティを有するいずれの結合性フラグメントも有用であるが、好ましくは、結合性フラグメントまたは誘導体はそのＧＩＴＲアゴニスト活性またはＰＤ−１アンタゴニスト活性の少なくとも２５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％または１００％（またはそれ以上）を保有する。ＧＩＴＲ、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１結合性フラグメントは、その生物活性を実質的に改変しない保存アミノ酸置換を有する変異体を含みうることも意図される。

本明細書中で用いる「モノクローナル抗体」なる語は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を意味する。すなわち、該集団を構成する個々の抗体は、少量で存在しうる可能な天然に生じる突然変異以外は同一である。モノクローナル抗体は単一の抗原エピトープに対して高度に特異的である。これとは対照的に、通常の（ポリクローナル）抗体調製物は、典型的には、種々のエピトープに対する（または特異的な）多数の抗体を含む。「モノクローナル」なる修飾語は、実質的に均一な抗体集団から得られたという、抗体の特性を示し、いずれかの特定の方法による該抗体の産生を要すると解釈されるべきではない。例えば、本発明に従い使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５に最初に記載されたハイブリドーマ法により製造されることが可能であり、あるいは組換えＤＮＡ法により製造されることが可能である（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）。「モノクローナル抗体」は、例えばＣｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８およびＭａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７に記載されている技術を用いるファージ抗体ライブラリーからも単離されうる。

本明細書におけるモノクローナル抗体には、所望の生物活性を示す限り、重鎖および／または軽鎖の一部分が、特定の種に由来する又は特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応配列と同一または相同である一方で、該鎖の残部が、別の種に由来する又は別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応配列と同一または相同である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）、ならびにそのような抗体のフラグメントが含まれる（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６８５１−６８５５）。

「ドメイン抗体」は、重鎖の可変領域または軽鎖の可変領域のみを含有する免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントである。幾つかの場合には、２以上のＶ_Ｈ領域がペプチドリンカーと共有結合して２価ドメイン抗体を形成している。２価ドメイン抗体の、２つのＶ_Ｈ領域は、同じ又は異なる抗原を標的としうる。

「２価抗体」は２つの抗原結合部位を含む。幾つかの場合には、それらの２つの結合部位は同じ抗原特異性を有する。しかし、２価抗体は二重特異性でありうる（後記を参照されたい）。

本明細書中で用いる「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体なる語は、抗体のＶ_ＨおよびＶ_Ｌドメインを含む抗体フラグメントを意味し、ここで、これらのドメインは単一ポリペプチド鎖内に存在する。一般に、Ｆｖポリペプチドは更に、該ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成するのを可能にする、Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌドメイン間のポリペプチドリンカーを含む。ｓｃＦｖの概説としては、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（１９９４）ＴＨＥ ＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＹ ＯＦ ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ，ｖｏｌ．１１３，ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５を参照されたい。

本明細書におけるモノクローナル抗体には、ラクダ化単一ドメイン抗体も含まれる。「ドメイン抗体フラグメント」は、重鎖の可変領域または軽鎖の可変領域のみを含有する免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントである。幾つかの場合には、２以上のＶ_Ｈ領域がペプチドリンカーと共有結合して多価ドメイン抗体フラグメントを形成している。２価ドメイン抗体の、２つのＶ_Ｈ領域は、同じ又は異なる抗原を標的としうる。例えば、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓら（２００１）Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．２６：２３０；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎら（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３１：２５；ＷＯ ９４／０４６７８；ＷＯ ９４／２５５９１；米国特許第６，００５，０７９号）を参照されたい。１つの実施形態においては、本発明は、単一ドメイン抗体が形成されるような修飾を伴う２つのＶ_Ｈドメインを含む単一ドメイン抗体を提供する。

本明細書中で用いる「ジアボディ」なる語は、２つの抗原結合部位を有する小型抗体フラグメントを意味し、該フラグメントは、同一ポリペプチド鎖内で軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）に連結された重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を含む（Ｖ_Ｈ−Ｖ_ＬまたはＶ_Ｌ−Ｖ_Ｈ）。同一鎖上の２つのドメイン間のペア形成を可能にするには短すぎるリンカーを用いることにより、それらのドメインは別の鎖の相補的ドメインとのペア形成を強要され、２つの抗原結合部位を形成する。ジアボディは、例えばＥＰ ４０４，０９７、ＷＯ ９３／１１１６１およびＨｏｌｌｉｇｅｒら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８に更に詳しく記載されている。操作された抗体変異体の概説としては、全般的には、ＨｏｌｌｉｇｅｒおよびＨｕｄｓｏｎ（２００５）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２３：１１２６−１１３６を参照されたい。

本明細書中で用いる「ヒト化抗体」なる語は、非ヒト（例えば、マウス）抗体およびヒト抗体からの配列を含有する抗体の形態を意味する。そのような抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有する。一般に、該ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、超可変ループの全て又は実質的に全ては非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域の全て又は実質的に全てはヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）（典型的にはヒト免疫グロブリンのもの）の少なくとも一部分を含んでいてもよい。接頭辞「ｈｕｍ」、「ｈｕ」または「ｈ」は、ヒト化抗体を親げっ歯類抗体から区別するために、必要に応じて、抗体クローンの名称に付加される。アフィニティーを増加させるため、またはヒト化抗体の安定性を増強するため、または他の理由により、あるアミノ酸置換が含まれうるが、げっ歯類抗体のヒト化形態は、一般に、該親げっ歯類抗体の同一ＣＤＲ配列を含む。

「完全ヒト抗体」なる語は、ヒト免疫グロブリンタンパク質配列のみを含む抗体を意味する。完全ヒト抗体は、マウスにおいて、またはマウス細胞において、またはマウス細胞由来のハイブリドーマにおいて産生された場合には、マウス炭水化物鎖を含有しうる。同様に、「マウス抗体」または「ラット抗体」は、それぞれ、マウスまたはラット免疫グロブリン配列のみを含む抗体を意味する。完全ヒト抗体は、ヒトにおいて、またはヒト免疫グロブリン生殖系列配列を有するトランスジェニック動物において、またはファージディスプレイもしくは他の分子生物学的方法により産生されうる。抗体を製造するために用いられうる典型的な技術は米国特許第６，１５０，５８４号、第６，４５８，５９２号、第６，４２０，１４０号に記載されている。ライブラリーの使用のような他の技術は当技術分野で公知である。

本発明の抗体には、エフェクター機能の改変をもたらすために修飾された（または遮蔽された）Ｆｃ領域を有する抗体も含まれる。例えば、米国特許第５，６２４，８２１号、ＷＯ ２００３／０８６３１０、ＷＯ ２００５／１２０５７１、ＷＯ ２００６／００５７７０２、Ｐｒｅｓｔａ（２００６）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．５８：６４０−６５６を参照されたい。そのような修飾は、診断および療法における可能な有益な効果を伴って免疫系の種々の反応を増強または抑制するために用いられうる。Ｆｃ領域の改変には、アミノ酸変化（置換、欠失および挿入）、グリコシル化または脱グリコシル化および複数のＦｃの付加が含まれる。該Ｆｃに対する改変は治療用抗体における抗体の半減期をも変化させうる。より長い半減期はより低頻度の投与につながり、それに伴い、簡便さの向上および物質の使用量の減少をもたらすであろう。Ｐｒｅｓｔａ（２００５）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１（７３４−３５）を参照されたい。

本発明の抗体には、完全エフェクター機能をもたらす無傷Ｆｃ領域を有する抗体、例えば、イソタイプＩｇＧ１の抗体も含まれ、これは標的細胞において補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）または抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する。

本発明の抗体には、細胞傷害性（細胞毒性）積荷（ｐａｙｌｏａｄ）、例えば細胞傷害性物質または放射性核種にコンジュゲート化（結合）された抗体も含まれる。そのような抗体コンジュゲートは、ある抗原を表面上で発現する細胞を選択的に標的化し殺すために抗ＧＩＴＲ、抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１治療と共に使用されうる。典型的な細胞傷害性物質には、リシン、ビンカアルカロイド、メトトレキセート、シュードモナス（Ｐｓｕｅｄｏｍｏｎａｓ）外毒素、サポニン、ジフテリア毒素、シスプラチン、ドキソルブシン、アブリン毒素、ゲロニンおよび洋種ヤマゴボウ抗ウイルス性タンパク質が含まれる。本発明の抗体と共に免疫療法において使用される典型的な放射性核種には、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^９０Ｙ、^６７Ｃｕ、^２１１Ａｔ、^１７７Ｌｕ、^１４３Ｐｒおよび^２１３Ｂｉが含まれる。例えば、米国特許出願公開第２００６／００１４２２５号を参照されたい。

二重特異性抗体も本方法および組成物において有用である。本明細書中で用いる「二重特異性抗体」なる語は、少なくとも２つの異なる抗原エピトープに対する結合特異性を有する抗体、典型的にはモノクローナル抗体を意味する。１つの実施形態においては、該エピトープは同一抗原からのものである。もう１つの実施形態においては、該エピトープは２つの異なる抗原からのものである。二重特異性抗体の製造方法は当技術分野で公知である。例えば、二重特異性抗体は、２つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖ペアの共発現を用いて組換え製造されうる。例えば、Ｍｉｌｓｔｅｉｎら（１９８３）Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７−３９を参照されたい。あるいは、二重特異性抗体は、化学的連結を用いて製造されうる。例えば、Ｂｒｅｎｎａｎら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１を参照されたい。二重特異性抗体には、二重特異性抗体フラグメントが含まれる。例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６４４４−４８、Ｇｒｕｂｅｒら（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８を参照されたい。

「多重特異性」なる語は、２以上の標的抗原に対する特異性を有する結合性分子を含む。そのような分子は、異なる標的分子または同一標的上の異なる抗原部位と各結合部位が特異的に結合する（例えば、免疫反応する）２以上の結合部位を有する。１つの実施形態においては、本発明の多重特異性結合性分子は、少なくとも２つの標的、例えば２以上の標的分子または同一標的分子上の２以上のエピトープに対する結合特異性を有する二重特異性分子（例えば、抗体、小型抗体、ドメイン欠失抗体または融合タンパク質）である。

本明細書中で用いる「超可変領域」なる語は、抗原結合をもたらす、抗体のアミノ酸残基を意味する。超可変領域は、「相補性決定領域」、すなわち「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基、例えば、軽鎖可変ドメイン内の残基２４−３４（ＣＤＲＬ１）、５０−５６（ＣＤＲＬ２）および８９−９７（ＣＤＲＬ３）ならびに重鎖可変ドメイン内の残基３１−３５（ＣＤＲＨ１）、５０−６５（ＣＤＲＨ２）および９５−１０２（ＣＤＲＨ３）（Ｋａｂａｔら，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．）、ならびに／または「超可変ループ」からの残基、例えば、軽鎖可変ドメイン内の残基２６−３２（Ｌ１）、５０−５２（Ｌ２）および９１−９６（Ｌ３）ならびに重鎖可変ドメイン内の２６−３２（Ｈ１）、５３−５５（Ｈ２）および９６−１０１（Ｈ３）（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７）を含む。本明細書中で用いる「フレームワーク」または「ＦＲ」残基なる語は、本明細書中でＣＤＲ残基として定められた超可変領域残基以外の可変ドメイン残基を意味する。前記の残基番号づけはＫａｂａｔ番号づけ体系によるものである。

「結合性化合物」は、標的に結合しうる分子、小分子、巨大分子、ポリペプチド、抗体またはそのフラグメントもしくは類似体あるいは可溶性受容体を意味する。「結合性化合物」は、標的に結合しうる、分子の複合体、例えば非共有結合性複合体、イオン化分子、および共有結合または非共有結合により修飾された分子、例えばリン酸化、アシル化、架橋、環化または限定的な切断により修飾された分子をも意味する。抗体に関して用いる場合の「結合性化合物」なる語は抗体およびその抗原結合性フラグメントの両方を意味する。「結合」は結合性組成物と標的との会合を意味し、ここで、該結合性組成物が溶液中に溶解または懸濁されうる場合、該会合は該結合性組成物の正常なブラウン運動における低下をもたらす。「結合性組成物」は、安定剤、賦形剤、塩、バッファー、溶媒または添加剤と組合された、標的に結合しうる分子、例えば結合性化合物を意味する。

本明細書中で用いる「保存修飾変異体」または「保存置換」は、当業者に公知のアミノ酸の置換を意味し、生じる抗体の生物活性を改変することなく該抗体の必須領域においてさえもしばしば施されうる。そのような典型的な置換は、好ましくは、以下のとおりに表１に記載されているものに従い施される。

一般に、ポリペプチドの非必須領域における単一のアミノ酸の置換は生物活性を実質的に改変し得ない、と当業者に認識されている。例えば、Ｗａｔｓｏｎら，（１９８７）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅ，Ｔｈｅ Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，ｐ．２２４（４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ）を参照されたい。

本明細書および特許請求の範囲の全体にわたって用いる「からなる」なる語またはその変形、例えば「から実質的になる」もしくは「から実質的になり」は、任意の列挙されている要素または要素群の包含、および特定されている投与計画、方法または組成物の基本的または新規特性を実質的に変化させない、列挙されている要素と類似した又は異なる性質の他の要素の随意的包含を示す。非限定的な例としては、列挙されているアミノ酸配列から実質的になる結合性化合物は、該結合性化合物の特性に実質的に影響を及ぼさない、１以上のアミノ酸残基の置換を含む、１以上のアミノ酸をも含みうる。

「免疫状態」または「免疫障害」は、例えば病的炎症、炎症障害および自己免疫障害または疾患を含む。「免疫状態」は、感染、持続的感染および増殖性状態、例えば癌、腫瘍および血管新生をも意味し、免疫系による根絶に対する抵抗性を示す感染、腫瘍および癌をも含む。「癌状態」は、例えば、癌、癌細胞、腫瘍、血管新生および前癌状態、例えば過形成を含む。

「増殖活性」は、例えば正常な細胞分裂ならびに癌、腫瘍、異形成、細胞トランスフォーメーション、転移および血管新生を促進する、それらに必要である、またはそれらに特異的に関連した活性を含む。

「癌」、「腫瘍」、「癌性」および「悪性」なる語は、無制御な細胞増殖により典型的に特徴づけられる哺乳動物における生理学的状態を意味し又は示す。癌の例には、癌腫、例えば腺癌、リンパ腫、芽細胞腫、メラノーマ、肉腫および白血病が含まれるが、これらに限定されるものではない。そのような癌のより詳細な例には以下のものが含まれる：扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、胃腸癌、膵臓癌、神経膠芽細胞腫、神経膠腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、例えば肝癌および肝細胞癌、膀胱癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、唾液腺癌、腎臓癌、例えば腎細胞癌およびウィルムス腫瘍、基底細胞癌、黒色腫、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、精巣癌および食道癌、ならびに種々のタイプの頭頸部癌。

癌細胞が成長し増殖するにつれて、それらは癌組織の塊、すなわち腫瘍を形成し、それは正常隣接組織に浸潤し、該組織を破壊する。悪性腫瘍は癌である。悪性腫瘍は、通常、除去されうるが、それは再び成長しうる。悪性腫瘍からの細胞は近傍組織および器官に浸潤し、それらを損傷しうる。また、癌細胞は悪性腫瘍から離れ、血流またはリンパ系に進入し、このようにして、癌細胞は原発腫瘍（すなわち、元の癌）から広がって、他の器官において新たな腫瘍を形成する。体内の癌の広がりは転移と称される（Ｗｈａｔ Ｙｏｕ Ｎｅｅｄ ｔｏ Ｋｎｏｗ Ａｂｏｕｔ Ｃａｎｃｅｒ−ａｎ Ｏｖｅｒｖｉｅｗ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．００−１５６６；２０００年９月２６日付け発行，２００２年９月１６日付け改訂（２００２））。

本明細書中で用いる「固形（充実性）腫瘍」なる語は、嚢胞または液体領域を通常は含有しない、組織の異常成長または塊を意味する。固形腫瘍は良性（非癌性）または悪性（癌性）でありうる。種々のタイプの固形腫瘍が、それらを形成する細胞のタイプにちなんで命名されている。固形腫瘍の例としては、肉腫、癌腫およびリンパ腫が挙げられる。白血病（血液の癌）は、一般に、固形腫瘍を形成しない（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｅｒｍｓ）。

「腫瘍量」は「腫瘍負荷」とも称され、全身に分布する腫瘍物質の総量を意味する。腫瘍負荷はリンパ節および骨髄を含む身体全体にわたる癌細胞の総数または腫瘍の全サイズを意味する。腫瘍負荷は当技術分野で公知の種々の方法により決定可能であり、例えば、被験者からの摘除に際して例えばカリパスを使用して、あるいはイメージング技術、例えば超音波、骨スキャン、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）または磁気共鳴撮像（ＭＲＩ）スキャンを用いて全身において、腫瘍の寸法を測定することにより決定されうる。

「腫瘍サイズ」なる語は、腫瘍の長さおよび幅として測定されうる腫瘍の全サイズを意味する。腫瘍サイズは技術分野で公知の種々の方法により決定可能であり、例えば、被験者からの摘除に際して例えばカリパスを使用して、あるいはイメージング技術、例えば骨スキャン、超音波、ＣＴまたはＭＲＩスキャンを用いて全身において、腫瘍の寸法を測定することにより決定されうる。

本明細書中で用いる「原発癌」なる語は元の腫瘍または最初の腫瘍を意味する。癌は身体のいずれかの器官または組織において生じうる。それは通常、それが由来する身体部分または細胞のタイプにちなんで命名される（Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ Ｃａｎｃｅｒ：Ｑｕｅｓｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ａｎｓｗｅｒｓ，Ｃａｎｃｅｒ Ｆａｃｔｓ ６．２０，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，２００４年９月１日付けの総説（２００４））。

本明細書中で用いる「ｉｎ ｓｉｔｕ（原位置）癌腫」なる語は、それが成長し始めた組織内に尚も含有されており未だ浸潤性になっておらず身体の他の部分に広がっていない癌細胞を意味する。

本明細書中で用いる「癌腫」なる語は、身体の表面を覆いホルモンを産生し腺を形成する細胞である上皮細胞の癌を意味する。癌腫の例としては、皮膚、肺、結腸、胃、乳房、前立腺および甲状腺の癌が挙げられる。

本明細書中で用いる「単離された核酸分子」なる語は、該抗体核酸の天然源において通常付随している少なくとも１つの混入核酸分子から分離されており特定されている核酸分子を意味する。単離された核酸分子は、それが天然で見出される形態または状況以外のものである。したがって、単離された核酸分子は、天然細胞内に存在する核酸分子とは区別される。しかし、単離された核酸分子には、該抗体を通常発現する細胞内に含有される核酸分子が含まれ、例えば、該核酸分子は、天然細胞の場合とは異なる染色体位置に存在する。

「制御配列」なる表現は、特定の宿主生物における、機能的に連結されたコード配列の発現に関与するＤＮＡ配列を意味する。原核生物に適した制御配列には、例えば、プロモーター、場合によってはオペレーター配列、およびリボソーム結合部位が含まれる。真核細胞はプロモーター、ポリアデニル化シグナルおよびエンハンサーを用いることが公知である。

核酸が「機能的に連結」されていると言えるのは、それが別の核酸配列に対して機能的な関係で配置されている場合である。例えば、プレ配列または分泌リーダーのＤＮＡがポリペプチドのＤＮＡに機能的に連結されていると言えるのは、それが、該ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合であり、プロモーターまたはエンハンサーがコード配列に機能的に連結されていると言えるのは、それが該配列の転写に影響を及ぼす場合であり、あるいはリボソーム結合部位がコード配列に機能的に連結されていると言えるのは、翻訳を促進するようにそれが位置している場合である。一般に、「機能的に連結（されている）」は、連結されているそれらのＤＮＡ配列が連続的であり、分泌リーダー配列の場合には、連続的であり、かつ、リーディングフレームが一致していることを意味する。しかし、エンハンサーは連続的でなくてもよい。連結は簡便な制限部位における連結により達成される。そのような部位が存在しない場合には、通常の慣例に従って合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが使用される。

本明細書中で用いる「細胞」、「細胞系」および「細胞培養」なる表現は互換的に用いられ、全てのそのような語は後代を含む。したがって、「形質転換体」および「形質転換細胞」なる語は、導入の数には無関係に、初代対象細胞、およびそれに由来する培養を含む。また、意図的な又は故意でない突然変異のため、全ての後代はＤＮＡ含量において厳密には同一でないこともあると理解される。元の形質転換細胞においてスクリーニングされたものと同じ機能または生物活性を有する突然変異体後代も含まれる。異なる名称が意図される場合、それは文脈から明らかであろう。

本明細書中で用いる「ポリメラーゼ連鎖反応」または「ＰＣＲ」は、例えば米国特許第４，６８３，１９５号に記載されているとおり、核酸、ＲＮＡおよび／またはＤＮＡの少量の特異的断片を増幅する方法または技術を意味する。一般に、オリゴヌクレオチドプライマーが設計されうるように、関心領域の末端またはその向こうからの配列情報が入手可能である必要があり、これらのプライマーは、増幅すべき鋳型の逆鎖と配列において同一または類似であろう。それらの２つのプライマーの５’末端ヌクレオチドは、増幅される物質の末端と一致しうる。ＰＣＲは、特異的ＲＮＡ配列、全ゲノムＤＮＡからの特異的ＤＮＡ配列、および全細胞ＲＮＡから転写されたｃＤＮＡ、バクテリオファージまたはプラスミド配列などを増幅するために用いられうる。全般的には、Ｍｕｌｌｉｓら，（１９８７）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５１：２６３；Ｅｒｌｉｃｈ編，（１９８９）ＰＣＲ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ（Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．）を参照されたい。本明細書中で用いるＰＣＲは、プライマーとしての既知核酸と核酸の特異的断片を増幅し又は生成させるための核酸ポリメラーゼとの使用を含む、核酸試験サンプルを増幅するための核酸ポリメラーゼ反応法の一例（しかし唯一の例ではない）とみなされる。

本明細書中で用いる「生殖系列配列」は、げっ歯類（例えば、マウス）およびヒト生殖系列配列を含む、未再構成免疫グロブリンＤＮＡ配列の配列を意味する。いずれかの適当な未再構成免疫グロブリンＤＮＡ源が用いられうる。ヒト生殖系列配列は、例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ａｎｄ Ｍｕｓｃｕｌｏｓｋｅｌｅｔａｌ ａｎｄ Ｓｋｉｎ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈのウェブサイト上でＪＯＩＮＳＯＬＶＥＲ（登録商標）生殖系列データベースから得られうる。マウス生殖系列配列は、例えば、Ｇｉｕｄｉｃｅｌｌｉら，（２００５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３３：Ｄ２５６−Ｄ２６１に記載されているとおりに得られうる。

例えばＧＩＴＲ活性の増強の度合を調べるために、与えられた例えばタンパク質、遺伝子、細胞または生物を含むサンプルまたはアッセイを潜在的活性化または抑制性物質で処理し、不活性対照分子で処理された対照サンプルと比較する。対照サンプルには１００％の相対活性値を割り当てる。対照に対する活性値が約９０％以下、典型的には８５％以下、より典型的には８０％以下、最も典型的には７５％以下、一般には７０％以下、より一般には６５％以下、最も一般には６０％以下、典型的には５５％以下、通常は５０％以下、より通常は４５％以下、最も通常は４０％以下、好ましくは３５％以下、より好ましくは３０％以下、より一層好ましくは２５％以下、最も好ましくは２０％未満である場合、抑制が達成される。対照に対する活性値が約１１０％、一般には少なくとも１２０％、より一般には少なくとも１４０％、より一般には少なくとも１６０％、頻繁には少なくとも１８０％、より頻繁には少なくとも２倍、最も頻繁には少なくとも２．５倍、通常は少なくとも５倍、より通常は少なくとも１０倍、好ましくは少なくとも２０倍、より好ましくは少なくとも４０％、最も好ましくは４０倍を超える場合、活性化が達成される。

活性化または抑制におけるエンドポイントは以下のとおりにモニターされうる。例えば細胞、生理的流体、組織、器官および動物またはヒト対象の処理に対する活性化、抑制および応答はエンドポイントによりモニターされうる。該エンドポイントは、例えば炎症、発癌能または細胞脱顆粒もしくは分泌（例えば、サイトカイン、毒性酸素またはプロテアーゼの放出）の指標の、予め決められた量または比率を含みうる。該エンドポイントは、例えば、イオン流量または輸送、細胞遊走、細胞接着、細胞増殖、転移の可能性、細胞分化および表現型変化（例えば、炎症、アポトーシス、トランスフォーメーション、細胞周期または転移に関連する遺伝子の発現における変化）の、予め決められた量を含みうる（例えば、Ｋｎｉｇｈｔ（２０００）Ａｎｎ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｓｃｉ．３０：１４５−１５８；ＨｏｏｄおよびＣｈｅｒｅｓｈ（２００２）Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ ２：９１−１００；Ｔｉｍｍｅら，（２００３）Ｃｕｒｒ．Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ ４：２５１−２６１；ＲｏｂｂｉｎｓおよびＩｔｚｋｏｗｉｔｚ（２００２）Ｍｅｄ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ Ａｍ．８６：１４６７−１４９５；ＧｒａｄｙおよびＭａｒｋｏｗｉｔｚ（２００２）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．３：１０１−１２８；Ｂａｕｅｒら（２００１）Ｇｌｉａ ３６：２３５−２４３；ＳｔａｎｉｍｉｒｏｖｉｃおよびＳａｔｏｈ（２０００）Ｂｒａｉｎ Ｐａｔｈｏｌ．１０：１１３−１２６を参照されたい）。

抑制のエンドポイントは、一般に、対照の７５％以下、好ましくは、対照の５０％以下、より好ましくは、対照の２５％以下、最も好ましくは、対照の１０％以下である。一般に、活性化のエンドポイントは、対照の少なくとも１５０％、好ましくは、対照の少なくとも２倍、より好ましくは、対照の少なくとも４倍、最も好ましくは、対照の少なくとも１０倍である。

「小分子」は、１０ｋＤａ未満、典型的には２ｋＤａ未満、好ましくは１ｋＤａ未満の分子量を有する分子と定義される。小分子には、無機分子、有機分子、無機成分を含有する有機分子、放射性原子を含む分子、合成分子、ペプチド模倣体および抗体模倣体が含まれるが、これらに限定されるものではない。治療用物質としては、小分子は、大分子より細胞に透過性であり、分解に対する、より低い感受性を有し、免疫応答を惹起する、より低い傾向を有しうる。抗体およびサイトカインのペプチド模倣体のような小分子ならびに小分子毒素が記載されている。例えば、Ｃａｓｓｅｔら（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３０７：１９８−２０５；Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７４：２７７−３０２；Ｌｉ（２０００）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１８：１２５１−１２５６；Ａｐｏｓｔｏｌｏｐｏｕｌｏｓら（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．９：４１１−４２０；Ｍｏｎｆａｒｄｉｎｉら（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓ．８：２１８５−２１９９；Ｄｏｍｉｎｇｕｅｓら（１９９９）Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．６：６５２−６５６；ＳａｔｏおよびＳｏｎｅ（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３７１：６０３−６０８；米国特許第６，３２６，４８２号を参照されたい。

リガンド／受容体、抗体／抗原、または他の結合ペアに関する「特異的」または「選択的」な結合は、タンパク質および他の生物学的物質の不均一集団内の該タンパク質の存在を決定する結合反応を示す。したがって、示されている条件下、特定されているリガンドは特定の受容体には結合し、サンプル中に存在する他のタンパク質には有意量では結合しない。本明細書中で用いる抗体が、与えられた配列（この場合はＧＩＴＲ）を含むポリペプチドに特異的に結合すると言えるのは、それが、ＧＩＴＲの配列を含むポリペプチドには結合するが、ＧＩＴＲの配列を欠くタンパク質には結合しない場合である。例えば、ＧＩＴＲを含むポリペプチドに特異的に結合する抗体はＧＩＴＲのＦＬＡＧ（登録商標）タグ付き形態には結合しうるが、他のＦＬＡＧ（登録商標）タグ付きタンパク質には結合しないであろう。

「エピトープ」または「抗原決定基」なる語は、結合性分子が特異的に結合する、抗原上の部位を意味する。エピトープは、連続的アミノ酸、またはタンパク質の三次元フォールディングにより並置した不連続的アミノ酸の両方から形成されうる。連続的アミノ酸から形成されるエピトープは、典型的には、変性溶媒にさらされても維持されるが、三次元フォールディングにより形成されるエピトープは、典型的には、変性溶媒で処理されると失われる。エピトープは、典型的には、特有の空間的コンホメーションにおいて、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５個のアミノ酸を含む。エピトープの空間的コンホメーションを決定するための方法には、例えば、Ｘ線結晶学および二次元核磁気共鳴が含まれる。

同じエピトープを認識する結合性分子は、１つの抗体が標的抗原への別の抗体の結合を遮断しうることを示す単純なイムノアッセイ、すなわち、競合結合アッセイにおいて特定されうる。競合結合は、被検結合性分子が共通の抗原（例えば、ＧＩＴＲ）への参照結合性分子の特異的結合を抑制するアッセイにおいて決定される。多数のタイプの競合結合アッセイが公知であり、例えば以下のものが挙げられる：固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）；固相直接または間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉら（１９８３）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９：２４２を参照されたい）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄら（１９８６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４を参照されたい）；固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照されたい）；１〜１２５個の標識を使用する固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌら（１９８８）ＭｏＩ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５（１）：７を参照されたい）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇら（１９９０）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６）；および直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒら（１９９０）Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７）。

典型的には、そのようなアッセイは、固体表面に結合した精製抗原またはこれらのいずれかを含有する細胞、非標識試験結合性分子および標識参照結合性分子の使用を含む。競合抑制は、試験結合性分子の存在下、細胞または固体表面に結合した標識の量を決定することにより測定される。

通常、試験結合性分子は過剰に存在する。通常、競合結合性分子が過剰に存在する場合、それは共通抗原への参照結合性分子の特異的結合を少なくとも５０〜５５％、５５〜６０％、６０〜６５％、６５〜７０％、７０〜７５％以上抑制する。

想定される方法の抗体、または抗体の抗原結合部位から誘導された結合性組成物は、無関係な抗原に対するアフィニティより少なくとも２倍大きな、好ましくは少なくとも１０倍大きな、より好ましくは少なくとも２０倍大きな、最も好ましくは少なくとも１００倍大きなアフィニティで、その抗原に結合する。好ましい実施形態においては、該抗体は、例えばスキャッチャード分析により測定された場合、約１０^９ リットル／モルより大きなアフィニティを有する。Ｍｕｎｓｅｎら（１９８０）Ａｎａｌｙｔ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０７：２２０−２３９。

ＩＩ．総論
本発明は、ＧＩＴＲアゴニストとＰＤ−１アンタゴニスト（抗ＧＩＴＲおよび抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む）との組合せを使用する進行期の腫瘍の治療方法を提供する。

ＩＩＩ．医薬組成物
医薬組成物または無菌組成物を製造するためには、ＧＩＴＲ、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１抗体を医薬上許容される担体または賦形剤と混合する。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ＳｃｉｅｎｃｅｓおよびＵ．Ｓ． Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９８４）を参照されたい。

治療用および診断用物質の製剤は、例えば凍結乾燥粉末、スラリー、水性溶液または懸濁液の形態で、生理的に許容される担体、賦形剤または安定剤と混合することにより製造されうる。例えば、Ｈａｒｄｍａｎら（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，ＷｉｌｌｉａｍｓおよびＷｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ａｖｉｓら（編）（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；ＷｅｉｎｅｒおよびＫｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照されたい。

単独で又は免疫抑制剤と組合せて投与される該抗体組成物の毒性および治療効力は、例えばＬＤ_５０（集団の５０％に致死的である用量）およびＥＤ_５０（集団の５０％において治療的に有効である用量）を決定するための、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手法により決定されうる。毒性効果と治療効果との用量比は治療係数であり、それはＥＤ_５０に対するＬＤ_５０の比として表されうる。高い治療係数を示す抗体が好ましい。これらの細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータは、ヒトにおける使用のための投与量の範囲の決定において使用されうる。そのような化合物の投与量は、好ましくは、毒性をほとんど又は全く伴わないＥＤ_５０を含む循環濃度の範囲内である。該投与量は、使用される剤形および投与経路に応じて、この範囲内で変動しうる。

投与様式は特には重要でない。適当な投与経路には、例えば経口、直腸、経粘膜または腸投与；非経口運搬、例えば筋肉内、皮下、脊髄内注射、および鞘内、直接心室内、静脈内、腹腔内、鼻腔内または眼内注射が含まれうる。本発明の方法を実施するための又は該医薬組成物中で使用される抗体の投与は、種々の通常方法、例えば経口摂取、吸入、局所適用または皮膚、皮下、腹腔内、非経口、動脈内または静脈内注射により行われうる。

あるいは、例えば、関節炎関節、または免疫病理学により特徴づけられる病原体誘発性病変内への直接的な該抗体の注射により、全身的方法ではなく局所的方法により、しばしば、デポー剤または徐放製剤で、該抗体を投与することが可能である。さらに、標的化ドラッグデリバリーシステムにおいて該抗体を投与することが可能であり、例えば、関節炎関節または免疫病理学により特徴づけられる病原体誘発性病変を標的化する、例えば組織特異的抗体で被覆されたリポソームにおいて、該抗体を投与することが可能である。該リポソームは罹患組織を標的化し、該罹患組織により選択的に取り込まれるであろう。

治療用物質に関する投与計画の選択は、該物質の血清または組織代謝回転速度、症状の程度、該物質の免疫原性、および生物学的マトリックスにおける標的細胞の接近可能性を含む幾つかの要因に左右される。好ましくは、投与計画は、許容可能なレベルの副作用と調和して患者に運搬される治療用物質の量を最大にする。したがって、運搬される生物学的物質（生物学的製剤）の量は、部分的には、個々の物質および治療される状態の重症度に左右される。抗体、サイトカインおよび小分子の適当な用量を選択する際の指針が入手可能である。例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ（１９９６）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ；Ｋｒｅｓｉｎａ（編）（１９９１）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｃｈ（編）（１９９３）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｅｒｔら（２００３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１−６０８；Ｍｉｌｇｒｏｍら（１９９９）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６−１９７３；Ｓｌａｍｏｎら（２００１）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３−７９２；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚら（２０００）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３−６１９；Ｇｈｏｓｈら（２００３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４−３２；Ｌｉｐｓｋｙら（２０００）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４−１６０２を参照されたい。

適当な用量の決定は、例えば、治療に影響を及ぼすことが当技術分野で知られている若しくは疑われている又は治療に影響を及ぼすと予想されるパラメータまたは因子を用いて、臨床家によりなされる。一般に、用量は、最適用量より幾分少ない量から開始し、ついで、負の副作用と比較して所望または最適効果が得られるまで、少しずつ増量する。重要な診断尺度には、例えば炎症の症状の尺度、または産生される炎症性サイトカインのレベルが含まれる。好ましくは、使用される生物学的物質（生物学的製剤）は、治療のために標的化される動物と同じ種から実質的に誘導され（例えば、ヒト対象の治療のためのヒト化抗体）、それにより該薬剤に対する免疫応答を最小化する。

抗体および抗体フラグメントは、連続的注入により、または例えば、１日、週１〜７回、１週間、２週間、毎月、隔月などの間隔での投与により投与されうる。投与は、静脈内、皮下、局所、経口、鼻腔内、直腸内、筋肉内、大脳内、髄腔内投与または吸入により行われうる。好ましい投与プロトコールは、有意な望ましくない副作用をもたらさない最大用量または投与頻度を含むものである。毎週の全用量は、一般に、少なくとも０．０５μｇ／ｋｇ、０．２μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ体重以上である。例えば、Ｙａｎｇら（２００３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４９：４２７−４３４；Ｈｅｒｏｌｄら（２００２）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４６：１６９２−１６９８；Ｌｉｕら（１９９９）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｐｓｙｃｈ．６７：４５１−４５６；Ｐｏｒｔｉｅｌｊｉら（２０００３）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２：１３３−１４４を参照されたい。小分子治療用物質、例えばペプチド模倣体、天然物または有機化合物の所望用量は、モル／ｋｇで、抗体またはポリペプチドの場合とほぼ同じである。

第２の治療用因子、例えばサイトカイン、抗体、ステロイド、化学療法物質、抗生物質、抗ウイルス物質または放射線との共投与または治療のための方法は当技術分野でよく知られている。例えば、Ｈａｒｄｍａｎら（編）（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１０ｔｈ ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；ＰｏｏｌｅおよびＰｅｔｅｒｓｏｎ（編）（２００１）Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ｆｏｒ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ．，ＰＡ；ＣｈａｂｎｅｒおよびＬｏｎｇｏ（編）（２００１）Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ．，ＰＡ．を参照されたい。特に、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１抗体の投与は同時または連続的に行われうる。特定の実施形態においては、まず、抗ＧＩＴＲ抗体を投与し、ついで抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１抗体の定期的（例えば、１週間後または毎週）投与を行う。あるいは、抗ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１抗体での治療の後、類似スケジュールで抗ＧＩＴＲ抗体での治療を行うことが可能である。更に詳細な実施形態においては、抗ＧＩＴＲ抗体を、少なくとも１回の治療または複数用量（例えば、毎週の投与）において、抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１と共に共投与する。

ＧＩＴＲ、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１抗体は、以下のものを含む化学療法剤と組合されうる：アルキル化剤、例えばチオテパ（ｔｈｉｏｔｅｐａ）およびＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）シクロスホスファミド（ｃｙｃｌｏｓｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）；アルキルスルホナート、例えばブスルファン（ｂｕｓｕｌｆａｎ）、イムプロスルファン（ｉｍｐｒｏｓｕｌｆａｎ）およびピポスルファン（ｐｉｐｏｓｕｌｆａｎ）；アジリジン、例えばベンゾドーパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン（ｃａｒｂｏｑｕｏｎｅ）、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）およびウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）；エチレンイミンおよびメチルアメルアミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）、例えばアルトレタミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスルアミド（ｔｒｉｅｔｈｉｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈａｏｒａｍｉｄｅ）およびトリメチロロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｍｅ）；アセトゲニン（ａｃｅｔｏｇｅｎｉｎ）（特にブルラタシン（ｂｕｌｌａｔａｃｉｎ）およびブルラタシノン（ｂｕｌｌａｔａｃｉｎｏｎｅ））；カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）（合成類似体トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）を含む）；ブリオスタチン（ｂｒｙｏｓｔａｔｉｎ）；カリスタチン（ｃａｌｌｙｓｔａｔｉｎ）；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン（ａｄｏｚｅｌｅｓｉｎ）、カルゼレシン（ｃａｒｚｅｌｅｓｉｎ）およびビゼレシン（ｂｉｚｅｌｅｓｉｎ）合成類似体を含む）；クリプトフィシン（ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ）（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ）；ドュオカルマイシン（ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎ）（合成類似体ＫＷ−２１８９およびＣＢ １−ＴＭ１を含む）；エリューテロビン（ｅｌｅｕｔｈｅｒｏｂｉｎ）；パンクラチスタチン（ｐａｎｃｒａｔｉｓｔａｔｉｎ）；サルコジクチイン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンジスタチン（ｓｐｏｎｇｉｓｔａｔｉｎ）；窒素マスタード、例えばクロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、クロルナファジン（ｃｈｌｏｒｎａｐｈａｚｉｎｅ）、クロロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン（ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ）、イフォスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、メクロルエタミン（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）、メクロルエタミンオキシド塩酸塩、メルファラン（ｍｅｌｐｈａｌａｎ）、ノベムビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン（ｐｒｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、トロフォスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ウラシルマスタード（ｕｒａｃｉｌ ｍｕｓｔａｒｄ）；ニトロソウレア、例えばカルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）、クロロゾトシン（ｃｈｌｏｒｏｚｏｔｏｃｉｎ）、フォテムスチン（ｆｏｔｅｍｕｓｔｉｎｅ）、ロムスチン（ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ）、ニムスチン（ｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）およびラニムスチン（ｒａｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）；抗生物質、例えばエンジイン抗生物質［例えば、カリケアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）、特にカリケアマイシン・ガンマ１Ｉおよびカリケアマイシン・オメガＩ１（例えば、Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３−１８６（１９９４）を参照されたい）；ダイネマイシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）、例えばダイネマイシンＡ；ビスホスホナート、例えばクロドロナート（ｃｌｏｄｒｏｎａｔｅ）；エスペラマイシン（ｅｓｐｅｒａｍｉｃｉｎ）；ならびにネオカルジノスタチン（ｎｅｏｃａｒｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）発色団および関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団］、アクラシノマイシン（ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｓｉｎ）、アクチノマイシン（ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン（ａｚａｓｅｒｉｎｅ）、ブレオマイシン（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ）、カクチノマイシン（ｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カミノマイシン（ｃａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、クロモマイシン（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎ）、ダクチノマイシン（ｄａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン（ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ）、エソルビシン（ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ）、マルセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン（ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ）、例えばマイトマイシンＣ、ミコフェノール酸（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌｉｃ ａｃｉｄ）、ノガラマイシン（ｎｏｇａｌａｍｙｃｉｎ）、オリボマイシン（ｏｌｉｖｏｍｙｃｉｎ）、ペプロマイシン（ｐｅｐｌｏｍｙｃｉｎ）、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン（ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ）、クエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン（ｓｔｒｅｐｔｏｎｉｇｒｉｎ）、ストレプトゾシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｃｉｎ）、ツベルシジン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）、ウベニメックス（ｕｂｅｎｉｍｅｘ）、ジノスタチン（ｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、ゾルビシン（ｚｏｒｕｂｉｃｉｎ）；代謝拮抗物質、例えばメトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）および５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸類似体、例えばデノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、メトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、プテロプテリン（ｐｔｅｒｏｐｔｅｒｉｎ）、トリメトレキセート（ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ）；プリン類似体、例えばフルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、６−メルカプトプリン、チアミプリン（ｔｈｉａｍｉｐｒｉｎｅ）、チオグアニン（ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ）；ピリミジン類似体、例えばアンシタビン（ａｎｃｉｔａｂｉｎｅ）、アザシチジン（ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）、６−アザウリジン、カルモフール（ｃａｒｍｏｆｕｒ）、シタラビン（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）、ジデオキシウリジン（ｄｉｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ）、ドキシフルリジン（ｄｏｘｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ）、エノシタビン（ｅｎｏｃｉｔａｂｉｎｅ）、フロクスリジン（ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）；アンドロゲン、例えばカルステロン（ｃａｌｕｓｔｅｒｏｎｅ）、ドロモスタノロン（ｄｒｏｍｏｓｔａｎｏｌｏｎｅ）プロピオナート、エピチオスタノール（ｅｐｉｔｉｏｓｔａｎｏｌ）、メピチオスタン（ｍｅｐｉｔｉｏｓｔａｎｅ）、テストラクトン（ｔｅｓｔｏｌａｃｔｏｎｅ）；抗アドレナール、例えばアミノグルテチミド（ａｍｉｎｏｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）、ミトタン（ｍｉｔｏｔａｎｅ）、トリロスタン（ｔｒｉｌｏｓｔａｎｅ）；葉酸補充物、例えばフロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）；アセグラトン（ａｃｅｇｌａｔｏｎｅ）；アルドホスファミド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）グリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル（ｅｎｉｌｕｒａｃｉｌ）；アムサクリン（ａｍｓａｃｒｉｎｅ）；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）；エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルシン（ｄｅｍｅｃｏｌｃｉｎｅ）；ジアジクオン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；エルフォルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ）；エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）；エトグルシド（ｅｔｏｇｌｕｃｉｄ）；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン（ｌｅｎｔｉｎａｎ）；ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｍｉｎｅ）；メイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）、例えばメイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）およびアンサミトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎ）；ミトグアゾン（ｍｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ）；ミトザントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン（ｐｅｎｔｏｓｔａｔｉｎ）；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン（ｐｉｒａｒｕｂｉｃｉｎ）；ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン（ｐｒｏｃａｒｂａｚｉｎｅ）；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇ．）；ラゾキサン（ｒａｚｏｘａｎｅ）；リゾキシン（ｒｈｉｚｏｘｉｎ）；シゾフラン（ｓｉｚｏｆｕｒａｎ）；スピロゲルマニウム（ｓｐｉｒｏｇｅｒｍａｎｉｕｍ）；テヌアゾン酸（ｔｅｎｕａｚｏｎｉｃ ａｃｉｄ）；トリアジクオン（ｔｒｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｅｎｅ）（特にＴ−２毒素、ベルラクリン（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ）Ａ、ロリジン（ｒｏｒｉｄｉｎ）Ａおよびアングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ））；ウレタン；ビンデシン（ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ）；ダカルバジン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）；マンノムスチン（ｍａｎｎｏｍｕｓｔｉｎｅ）；ミトブロニトール（ｍｉｔｏｂｒｏｎｉｔｏｌ）；ミトラクトール（ｍｉｔｏｌａｃｔｏｌ）；ピポブロマン（ｐｉｐｏｂｒｏｍａｎ）；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（ａｒａｂｉｎｏｓｉｄｅ）（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）；チオテパ（ｔｈｉｏｔｅｐａ）；タキソイド、例えばＴＡＸＯＬ（登録商標）パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標） パクリタキセルのクレモフォア非含有アルブミン操作ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，Ｉ１１．）、およびＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）ドキセタキセル（ｄｏｘｅｔａｘｅｌ）（Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）；クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）；ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）；６−チオグアニン；メルカプトプリン（ｍｅｒｃａｐｔｏｐｕｒｉｎｅ）；メトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）；白金類似体、例えばシスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）およびカルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）；ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）；白金；エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）（ＶＰ−１６）；イフォスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）；ミトザントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）；ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標）ビノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）；ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）；テニポシド（ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）；エダトレキセート（ｅｄａｔｒｅｘａｔｅ）；ダウノマイシン（ｄａｕｎｏｍｙｃｉｎ）；アミノプテリン（ａｍｉｎｏｐｔｅｒｉｎ）；ＸＥＬＯＤＡ（登録商標）カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）；イバンドロネート（ｉｂａｎｄｒｏｎａｔｅ）；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ｄｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えばレチノイン酸；ならびに前記のいずれかのものの医薬上許容される塩、酸または誘導体。

また、例えば以下のような、腫瘍に対するホルモン作用を調節または抑制するよう作用する抗ホルモン剤も含まれる：抗エストロゲンおよび選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）、例えばタモキシフェン（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン（ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ）、ドロロキシフェン（ｄｒｏｌｏｘｉｆｅｎｅ）、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン（ｔｒｉｏｘｉｆｅｎｅ）、ケオキシフェン（ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ）、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン（ｏｎａｐｒｉｓｔｏｎｅ）およびＦＡＲＥＳＴＯＮ．トレミフェン（ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ）；副腎におけるエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼインヒビター、例えば４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド（ａｍｉｎｏｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）酢酸メゲストロール（ｍｅｇｅｓｔｒｏｌ）、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）エキセメスタン（ｅｘｅｍｅｓｔａｎｅ）、フォルメスタニー（ｆｏｒｍｅｓｔａｎｉｅ）、ファドロゾール（ｆａｄｒｏｚｏｌｅ）、ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標）ボロゾール（ｖｏｒｏｚｏｌｅ）、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）レトロゾール（ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ）およびＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）アナストロゾール（ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）；ならびに抗アンドロゲン、例えばフルタミド（ｆｌｕｔａｍｉｄｅ）、ニルタミド（ｎｉｌｕｔａｍｉｄｅ）、ビカルタミド（ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅ）、ロイプロリド（ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅ）およびゴセレリン（ｇｏｓｅｒｅｌｉｎ）；ならびにトロキサシタビン（ｔｒｏｘａｃｉｔａｂｉｎｅ）（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、例えばＰＫＣ−アルファ、ＲａｌｆおよびＨ−Ｒａｓのような異常細胞増殖に関与するシグナリング経路における遺伝子の発現を抑制するもの；リボザイム、例えばＶＥＧＦ発現インヒビター（例えば、ＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（登録商標）リボザイム）およびＨＥＲ２発現インヒビター；ワクチン、例えば遺伝子治療ワクチン、例えばＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチンおよびＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）ｒＩＬ−２；ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標）トポイソメラーゼ１インヒビター；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）ｒｍＲＨ；ならびに前記のいずれかのものの医薬上許容される塩、酸または誘導体。

少なくとも約１７５ｍｍ^３の寸法を有する進行期腫瘍を治療するために、組合せ療法を用いる。本発明のもう１つの実施形態においては、少なくとも約２００ｍｍ^３、３００ｍｍ^３、４００ｍｍ^３、５００ｍｍ^３、７５０ｍｍ^３、１０００ｍｍ^３までの寸法を有する進行期腫瘍を治療するために、組合せ療法を用いる。本発明の組合せ療法は、触診により又は当技術分野でよく知られているイメージング技術、例えばＭＲＩ、超音波もしくはＣＡＴスキャンにより見出されるのに十分な程度に大きな腫瘍を治療するために用いられる。

２つの化合物の「相乗効果」は、それらの２つの物質の組合せの効果がそれらの個々の効果の総和より大きく、対照および単一薬物とは統計的に異なるものである。もう１つの実施形態においては、本発明の組合せ療法は相加効果を有する。２つの化合物の「相加効果」は、それらの２つの物質の組合せの効果がそれらの個々の効果の総和であり、対照および／または単一薬物とは統計的に異なるものである。

本方法は抑制を約１０％超（すなわち、約１０％を超える）、約２０％超、約３０％超、約３５％超、約４２％超、約４３％超、約４４％超、約４５％超、約４６％超、約４７％超、約４８％超、約４９％超、約５０％超、約５１％超、約５２％超、約５３％超、約５４％超、約５５％超、約５６％超、約５７％超、約５８％超、約５９％超、約６０％超、約６５％超、約７０％超、約７５％超、約８０％超、約８５％超、約９０％超、約９５％超、または約１００％超の腫瘍サイズの抑制をもたらす。１つの実施形態においては、ＰＤ−１アンタゴニスト分子と組合されたＧＩＴＲ結合性分子の投与は進行腫瘍の完全退縮をもたらしうる。

抗ウイルス療法剤とのＧＩＴＲアゴニスト／ＰＤ−１アンタゴニストの組合せの共投与も想定される。抗ウイルス剤には、ウイルスを破壊する任意の薬物が含まれる。抗ウイルス剤には、ウイルスの複製を抑制するように機能するインターフェロン、プロテアーゼインヒビター、および逆転写酵素インヒビター、またはＨＩＶに対する高活性抗レトロウイルス療法（ＨＡＡＲＴ）の組合せに含まれる物質が含まれうる。

典型的な獣医学用、実験用または研究用対象には、サル、イヌ、ネコ、ラット、マウス、ウサギ、モルモット、ウマおよびヒトが含まれる。

ＩＶ．用途
該ＧＩＴＲ、ＰＤ−１もしくはＰＤ−Ｌ１抗体または抗原結合性フラグメントは、癌を治療するため（すなわち、腫瘍細胞の増殖または生存を抑制するため）に使用されうる。本発明の抗体を使用して増殖が抑制されうる好ましい癌には、免疫療法に対して典型的に応答性である癌が含まれ、そしてまた、免疫療法にこれまでに関連づけられていない癌も含まれる。治療に好ましい癌の非限定的な例には、黒色腫（メラノーマ）（例えば、転移性悪性黒色腫）、腎臓癌（例えば、明細胞癌）、前立腺癌（例えば、ホルモン不応性前立腺癌）、膵臓腺癌、乳癌、結腸癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、食道癌、頭頸部の扁平上皮癌、肝臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、甲状腺癌、神経膠芽腫、神経膠腫、白血病、リンパ腫および他の新生物悪性疾患が含まれる。更に、本発明は、本発明の抗体を使用して増殖が抑制されうる難治性または再発性悪性疾患を含む。

該ＧＩＴＲアゴニスト／ＰＤ−１アンタゴニスト抗体または抗原結合性フラグメントは単独で又は以下のものと組合せて使用されうる：他の抗新生物（腫瘍）剤または免疫原性剤（例えば、弱毒化癌細胞、腫瘍抗原（組換えタンパク質、ペプチドおよび炭水化物分子を含む）、腫瘍由来抗原または核酸でパルスされた樹状細胞のような抗原提示細胞、免疫刺激性サイトカイン（例えば、ＩＬ−２、ＩＦＮａ２、ＧＭ−ＣＳＦ）、および免疫刺激性サイトカイン、例えばＧＭ−ＣＳＦ（これに限定されるものではない）をコードする遺伝子でトランスフェクトされた細胞）；標準的な癌治療（例えば、化学療法、放射線療法または手術）；または他の抗体（ＶＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＶＥＧＦ受容体、他の増殖因子受容体、ＣＤ２０、ＣＤ４０、ＣＴＬＡ−４、ＯＸ−４０、４−ＩＢＢおよびＩＣＯＳに対する抗体を含むが、これらに限定されるものではない）。

感染症
ＧＩＴＲアゴニスト／ＰＤ−１アンタゴニストの組合せは感染および感染症の予防または治療にも使用されうる。ＧＩＴＲアゴニスト／ＰＤ−１アンタゴニストの組合せは、病原体、毒素および自己抗原に対する免疫応答を刺激するために、単独で、またはワクチンと組合せて使用されうる。該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ヒトに感染性であるウイルス（限定的ではないが例えば、ヒト免疫不全ウイルス、クラスＡ、ＢおよびＣ肝炎ウイルス、エプスタインバーウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、ヒトパピローマウイルス、ヘルペスウイルス）に対する免疫応答を刺激するために使用されうる。該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、細菌または真菌寄生体および他の病原体による感染に対する免疫応答を刺激するために使用されうる。

ワクチン接種アジュバント
ＧＩＴＲアゴニスト／ＰＤ−１アンタゴニスト抗体または抗体フラグメントの組合せは、他の組換えタンパク質および／またはペプチド（例えば、腫瘍抗原または癌細胞）と共に、これらのタンパク質に対する免疫応答を増強するために（すなわち、ワクチン接種プロトコールにおいて）使用されうる。

例えば、ＧＩＴＲアゴニスト／ＰＤ−１アンタゴニスト抗体およびその抗体フラグメントは、ＧＩＴＲアゴニスト／ＰＤ−１アンタゴニストの組合せと関心のある抗原（例えば、ワクチン）との共投与により抗原特異的免疫応答を刺激するために使用されうる。したがって、もう１つの態様においては、本発明は、（ｉ）抗原、および（ｉｉ）ＧＩＴＲアゴニスト／ＰＤ−１アンタゴニストの組合せを対象に投与して、対象における抗原に対する免疫応答を増強することを含む、対象における抗原に対する免疫応答を増強する方法を提供する。該抗原は、例えば腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原または病原体からの抗原でありうる。

Ｔ細胞のエクスビボ活性化
本発明の抗体および抗原フラグメントは、腫瘍に対する抗原特異的Ｔ細胞を増加させるために、抗原特異的Ｔ細胞のエクスビボ活性化および増殖ならびにレシピエント内へのこれらの細胞の養子移植のためにも使用されうる。これらの方法は、感染因子、例えばＣＭＶに対するＴ細胞応答を活性化させるためにも使用されうる。ＧＩＴＲアゴニスト／ＰＤ−１アンタゴニストの組合せの存在下のエクスビボ活性化は養子移植Ｔ細胞の頻度および活性を増加させると予想されうる。

図１Ａ〜１Ｋは、ＭＣ３８細胞系が移植されたマウス（ｎ＝１０／群）の抗腫瘍応答に対する、単独で又は抗ＰＤ−１抗体と組合せて投与された抗ＧＩＴＲ抗体の効果を示す。腫瘍が２４０〜３６０ｍｍ^３に達したときに治療を開始した。 図２Ａ〜２Ｆは、抗ＧＩＴＲ抗体の単一用量投与およびその１週間後の抗ＰＤ−１抗体の単一用量投与（図２Ｂ）またはその逆の順序（図２Ｃ）の抗腫瘍効力を示す。これをいずれかの抗体単独の場合と比較した（図２Ｅ〜２Ｆ；ｎ＝１０／群）。 図３Ａ〜３Ｄは、ＣＴ２６腫瘍モデル（ｎ＝１０／群）における抗ＧＩＴＲおよび抗ＰＤ−１抗体の両方の抗体の共投与（図３Ａ）と比較された場合の、抗ＧＩＴＲまたは抗ＰＤ−１抗体のみの単独療法（図３Ｃ〜３Ｄ）の抗腫瘍効力を示す。 図４Ａ〜４Ｄは、ＭＢ４９細胞系が移植されたマウス（ｎ＝１０／群）の抗腫瘍応答に対する、単独で投与された抗ＧＩＴＲおよびＰＤ−１抗体または両方の抗体の共投与の効果を示す。腫瘍が８５〜１２２ｍｍ^３に達したときに治療を開始した。 図５Ａ〜５Ｂは混合リンパ球反応（ＭＬＲ）におけるＴｒｅｇ（図５Ａ）およびＴｒｅｇ：ＣＤ８細胞比（図５Ｂ）に対する抗ＧＩＴＲ（ＭＫ−４１６６）および抗ＰＤ−１（ＭＫ−３４７５）の組合せの用量依存効果を示す。 図６は、ＭＫ−４１６６およびＭＫ−３４７５の組合せとのインキュベーションがＭＬＲにおけるＴｒｅｇの抑制活性の低下をもたらすことを示す。

実施例
実施例１
全般的方法
分子生物学における標準的な方法は、Ｍａｎｉａｔｉｓら（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，３^ｒｄｅｄ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ｗｕ（１９９３）Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ，Ｖｏｌ．２１７，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ．に記載されている。標準的な方法は、Ａｕｓｂｅｌら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ＶｏＩｓ．１−４，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹにも記載されており、これは、細菌細胞におけるクローニングおよびＤＮＡ突然変異誘発（Ｖｏｌ．１）、哺乳類細胞および酵母におけるクローニング（Ｖｏｌ．２）、複合糖質およびタンパク質発現（Ｖｏｌ．３）、ならびにバイオインフォマティクス（Ｖｏｌ．４）を記載している。

免疫沈降、クロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離および結晶化を含むタンパク質精製のための方法が記載されている。Ｃｏｌｉｇａｎら（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ。化学分析、化学修飾、翻訳後修飾、融合タンパク質の製造、タンパク質のグリコシル化が記載されている。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ａｕｓｕｂｅｌら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．３，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ，ｐｐ．１６．０．５−１６．２２．１７；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃｏ．（２００１）Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｏｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ；ｐｐ．４５−８９；Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ（２００１）ＢｉｏＤｉｒｅｃｔｏｒｙ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．，ｐｐ．３８４−３９１を参照されたい。ポリクローナルおよびモノクローナル抗体の製造、精製およびフラグメント化が記載されている。Ｃｏｌｉｇａｎら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９９９）Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，前掲。リガンド／受容体相互作用を特徴づけるための標準的な技術が利用可能である。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．４，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい。

モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体およびヒト化抗体は製造可能である（例えば、ＳｈｅｐｅｒｄおよびＤｅａｎ（編）（２０００）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎおよびＤｕｂｅｌ（編）（２００１）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ｐｐ．１３９−２４３；Ｃａｒｐｅｎｔｅｒら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：６２０５；Ｈｅら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：１０２９；Ｔａｎｇら（１９９９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：２７３７１−２７３７８；Ｂａｃａら（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７−８８３；ＦｏｏｔｅおよびＷｉｎｔｅｒ（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７−４９９；米国特許第６，３２９，５１１号を参照されたい）。

ヒト化に代わる手段は、ファージ上で提示されるヒト抗体ライブラリー、またはトランスジェニックマウスにおけるヒト抗体ライブラリーを使用することである（Ｖａｕｇｈａｎら（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：３０９−３１４；Ｂａｒｂａｓ（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １：８３７−８３９；Ｍｅｎｄｅｚら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６−１５６；ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＣｈａｍｅｓ（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ２１：３７１−３７７；Ｂａｒｂａｓら（２００１）Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｋａｙら（１９９６）Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；ｄｅ Ｂｒｕｉｎら（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：３９７−３９９）。

抗原の精製は抗体の製造に必要ではない。関心のある抗原を含有する細胞で動物を免疫化することが可能である。ついで該免疫化動物から脾細胞を単離し、該脾細胞を骨髄腫細胞系と融合させてハイブリドーマを得ることが可能である（例えば、Ｍｅｙａａｒｄら（１９９７）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ７：２８３−２９０；Ｗｒｉｇｈｔら（２０００）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １３：２３３−２４２；Ｐｒｅｓｔｏｎら，前掲；Ｋａｉｔｈａｍａｎａら（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３：５１５７−５１６４を参照されたい）。

抗体は例えば小薬物分子、酵素、リポソーム、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）にコンジュゲート化されうる。抗体は治療、診断、キットまたは他の目的に有用であり、例えば色素、放射性同位体、酵素または金属、例えばコロイド金に結合した抗体を包含する（例えば、Ｌｅ Ｄｏｕｓｓａｌら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：１６９−１７５；Ｇｉｂｅｌｌｉｎｉら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：３８９１−３８９８；ＨｓｉｎｇおよびＢｉｓｈｏｐ（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：２８０４−２８１１；Ｅｖｅｒｔｓら（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８：８８３−８８９を参照されたい）。

蛍光標識細胞分取検出系（ＦＡＣＳ（登録商標））を含むフローサイトメトリーのための方法が利用可能である。例えば、Ｏｗｅｎｓら（１９９４）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｇｉｖａｎ（２００１）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，２^ｎｄ ｅｄ．；Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｓｈａｐｉｒｏ（２００３）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪを参照されたい。例えば診断試薬としての使用のための、核酸プライマーおよびプローブを含む核酸、ポリペプチドおよび抗体を修飾するのに適した蛍光試薬が利用可能である。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ。

免疫系の標準的な組織学的方法が記載されている。例えば、Ｍｕｌｌｅｒ−Ｈａｒｍｅｌｉｎｋ（編）（１９８６）Ｈｕｍａｎ Ｔｈｙｍｕｓ：Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｈｉａｔｔら（２０００）Ｃｏｌｏｒ Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ，ＰＡ；Ｌｏｕｉｓら（２００２）Ｂａｓｉｃ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ：Ｔｅｘｔ ａｎｄ Ａｔｌａｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照されたい。

例えば抗原フラグメント、リーダー配列、タンパク質フォールディング、機能的ドメイン、グリコシル化部位および配列アライメントを決定するためのソフトウェアパッケージおよびデータベースが利用可能である。例えば、ＧｅｎＢａｎｋ，Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩ（登録商標）Ｓｕｉｔｅ（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｉｎｃ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）；ＧＣＧ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）；ＤｅＣｙｐｈｅｒ（登録商標）（ＴｉｍｅＬｏｇｉｃ Ｃｏｒｐ．，Ｃｒｙｓｔａｌ Ｂａｙ，Ｎｅｖａｄａ）；Ｍｅｎｎｅら（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ １６：７４１−７４２；Ｍｅｎｎｅら（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｎｏｔｅ １６：７４１−７４２；Ｗｒｅｎら（２００２）Ｃｏｍｐｕｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｐｒｏｇｒａｍｓ Ｂｉｏｍｅｄ．６８：１７７−１８１；ｖｏｎ Ｈｅｉｊｎｅ（１９８３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３３：１７−２１；ｖｏｎ Ｈｅｉｊｎｅ（１９８６）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１４：４６８３−４６９０を参照されたい。

実施例２
インビトロ処理方法
約８〜１０週齢の雌Ｃ５７Ｂｌ／６ＪまたはＢＡＬＢ／ｃ／ＡｎＮマウスを、それぞれ、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭａｉｎｅまたはＳａｃｒａｍｅｎｔｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）またはＴａｃｏｎｉｃ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｏｘｎａｒｄ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）から入手した。通常の動物飼料および水を自由に与えた。動物を使用する全てのプロトコールはＭｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．，Ｉｎｃ．およびＭｅｒｃｋ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｓ（ＭＲＬ）Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ Ａｎｉｍａｌ Ｕｓｅ ａｎｄ Ｃａｒｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅにより承認された。

処理前に、マウスを計量し、個々のマウスからの腫瘍を測定した。バイアスを避けるために、体重または腫瘍体積の任意の異常値を除去し、残りのマウスを、同等の平均腫瘍サイズを有する種々の処理群に無作為化した。

試験材料およびアイソタイプ対照をＭＲＬ Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ部門から凍結（−８０℃）ストックとして得た。製剤化バッファーは、タンパク質を安定化させ沈殿を防ぐために、各抗体に特異的なものであった。それらの詳細は後記に記載されている。

製剤／希釈剤をＭＲＬ Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ部門から４℃の貯蔵体として得た。２０ｍＭ 酢酸Ｎａ、７％ スクロース（ｐＨ５．５）のアイソタイプ対照ｍＩｇＧ２ａおよび抗ＰＤ−１製剤／希釈剤、７５ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ホスファート、３％ スクロース（ｐＨ７．３）のｍＩｇＧ１製剤／希釈剤、ならびに２０ｍＭ 酢酸Ｎａ、７％ スクロース、０．０２％ Ｔｗｅｅｎ８０ 低過酸化物（ｐＨ５．５）のｍＤＴＡ−１（抗ｍＧＩＴＲ）製剤／希釈剤を、タンパク質を安定化させ沈殿を防ぐためのものであった。

実施例３
腫瘍細胞系の調製および移植
ＭＣ３８またはＣＴ２６結腸癌細胞を、１０％ 熱不活性化ウシ胎児血清で補足されたＲＰＭＩ培地内で培養した。１×１ ＭＢ４９膀胱癌細胞を、１０％ ウシ胎児血清および１％ ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）で補足されたダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）内で培養した。１×１０^６細胞のＭＣ３８、３×１０^５細胞のＣＴ２６または０．５×１０^６細胞のＭＢ４９細胞を１００μＬ容量のリン酸緩衝食塩水中で各マウスの左腹部または右脇腹に皮下注射した。典型的には、まず、マウスを、移植に用いられる領域において電気バリカンで剃毛した。

実施例４
腫瘍測定および体重
第１投与の前日およびその後は週２回、腫瘍を測定した。電気バリカンを使用して腫瘍の長さおよび幅を測定し、式：体積（ｍｍ^３）＝０．５×長さ×幅^２（式中、長さは長いほうの寸法である）を用いて、腫瘍体積を決定した。

マウスを定期的に計量して全身健康状態を監視し、そしてまた、必要な場合には実際のｍｇ／ｋｇ用量運搬／マウスを評価した。

実施例５
投与溶液の調製、投与および分析
凍結ストックを融解し、湿った氷に移した。凍結融解の反復を避けるために、ストックの各バイアルを１回融解し、１回の使用に十分な体積のアリコートを調製した。ポリプロピレン低付着チューブをこの目的に使用した。該アリコートをドライアイス中で瞬間凍結し、８０℃で保存した。各投与前に、１個のアリコートを融解し、適当な希釈剤中で名目濃度に希釈し、直ちに投与した。投与溶液のアリコートをドライアイス中で瞬間凍結し、分析まで−８０℃で保存した。電気化学発光検出とパターン化アレイとの組合せである多アレイ技術に基づくＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ（登録商標），Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）プラットフォームを使用して投与溶液を評価した。

ＭＣ３８およびＣＴ２６腫瘍がそれぞれ約３００ｍｍ^３および２２０ｍｍ^３の平均サイズに達したら（典型的には移植の約２週間後）、試験物質の投与を開始した。ＭＢ４９腫瘍が約１０５ｍｍ^３の平均サイズに達したら（移植の１週間後）、試験物質の投与を開始した。５ｍｇ／ｋｇの投与濃度における投与頻度の変動（１回の投与から週６回の投与までの範囲）を試験した。その詳細は後記に記載されている。

実施例６
ＤＴＡ−１抗体のマウス化
ラット抗マウスＤＴＡ−１ ＧＩＴＲ抗体（Ｓ．Ｓａｋａｇｕｃｈｉ，Ｋｙｏｔｏ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｙｏｔｏ，Ｊａｐａｎ）を以下のとおりにマウス化した。ラット抗体ＤＴＡ−１の配列を可変重（ＶＨ）および可変軽（ＶＬ）ドメインに関して決定した。ラットＤＴＡ−１ ＶＨ配列をＩｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ＩＭＧＴ Ｄａｔａｂａｓｅ（ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ）（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．ら（１９９９）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２７：２０９−２１２）からのマウスＶＨ生殖系列配列と比較した。ＤＴＡ−１ ＶＨ配列をマウスＶＨ生殖系列配列とアライメントさせ、従来のヒト化系と同様に評価した（例えば、ＷＯ ２００５／０４７３２６を参照されたい）。ラットＤＴＡ−１ ＶＨはマウス生殖系列ＩＧＶＨ５−４、ＩＧＶＨ５−６およびＩＧＶＨ５−９に最も類似していた。ＣＤＲ残基をＤＴＡ−１ ＶＨからマウス生殖系列ＩＧＶＨ５−４に移し、２つのＩＧＶＨ５−４フレームワーク残基をそれらの適合ＩＧＶＨ５−６へと改変し、マウスＪ領域ＩＧＨＪ−４（ＩＭＧＴ）をマウスＩｇＧ１およびマウスＩｇＧ２ａ Ｆｃ領域への連結のために使用した。

ラットＤＴＡ−１ ＶＬ（ラムダ）配列をＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＨ０２１２９．１からのマウスＶＬ（ラムダ）配列とアライメントさせた。ＣＤＲ残基をラットＤＴＡ−１ ＶＬ（ラムダ）からマウスＡＡＨ０２１２９フレームワーク配列へ移した。マウス化ＤＴＡ１上の７個のフレームワーク残基を、ラットおよびマウス化ＶＬドメインのコンピュータグラフィックモデルに基づいて改変した。マウス化ＤＴＡ−１ ＶＬ（ラムダ）ドメインをマウス定常軽ドメインに融合させた。

全３個の構築物（１個のＶＨおよび２個のＶＬ（ラムダ））に関して、コドン最適化遺伝子を合成し、発現ベクター内に挿入した。抗体をＨＥＫ２９３細胞内の一過性発現により発現させ、プロテインＡクロマトグラフィーを用いて精製した。

実施例７
抗ＧＩＴＲ／抗ＰＤ−１処理の結果
進行したＭＣ３８腫瘍を担持するＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスをマウス化抗ｍＧＩＴＲ（Ｍｅｒｃｋ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｓ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）（皮下（ＳＣ））およびマウス化抗ｍＰＤ−１（Ｍｅｒｃｋ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｓ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）（腹腔内（ＩＰ））のそれぞれ５ｍｇ／ｋｇの用量での１回または２回の毎週の注射で処理（治療）した。腫瘍サイズが２４０〜３６０ｍｍ^３に達したら、処理を開始した。腫瘍を週２回測定した。腫瘍の完全退縮（ＣＲ）を抗腫瘍効力に関する指標として用いた。２回の毎週の組合せ投与の後に組合せ投与は１００％のＣＲの頑強な相乗効果をもたらした。該レジメンを各抗体（Ａｂ．）の１回の投与（１用量）に制限すると、ＣＲは７０％に低下した。これは、抗ｍＧＩＴＲの投与およびその１週間後に開始する抗ｍＰＤ−１の４回の毎週の投与の組合せで達成されたものに類似している。抗ｍＧＩＴＲおよび抗ｍＰＤ−１投与の間の２週間の間隔はそれほど有効ではなかった。抗ｍＧＩＴＲでの６回までの毎週の処理または抗ｍＰＤ−１ Ａｂの２〜４回の毎週の処理の単独療法では僅か２０〜３０％のＣＲが認められたに過ぎなかった（図１Ａ〜１Ｋを参照されたい）。

進行したＭＣ３８腫瘍を担持するＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスをそれぞれ５ｍｇ／ｋｇの用量の抗ｍＧＩＴＲ（ＳＣ）および抗ｍＰＤ−１（ＩＰ）で処理した。腫瘍サイズが２００〜３５０ｍｍ^３に達したら、処理を開始した。腫瘍を週２回測定した。腫瘍の完全退縮（ＣＲ）を抗腫瘍効果の指標として用いた。２回の毎週の組合せ投与の後に組合せ投与は１００％のＣＲの頑強な相乗効果をもたらした。これは前記の結果に匹敵するものである。しかし、該抗体を１週間の間隔で別々に投与した場合には６０％のＣＲの低下が観察された。抗ｍＧＩＴＲまたは抗ｍＰＤ−１のいずれかの２回の毎週の単独療法は腫瘍増殖を抑制したが、ＣＲをもたらさなかった（図２Ａ〜２Ｆを参照されたい）。

進行したＣＴ２６腫瘍を担持するＢＡＬＢ／ｃＡｎＮマウスをそれぞれ５ｍｇ／ｋｇの用量の抗ｍＧＩＴＲ（ＳＣ）および抗ｍＰＤ−１（ＩＰ）で処理した。腫瘍サイズが２２０ｍｍ^３（１８０〜２６０ｍｍ^３）に達したら、処理を開始した。腫瘍を週２回測定した。腫瘍の完全退縮（ＣＲ）を抗腫瘍効果の指標として用いた。１回の組合せ投与は７０％のＣＲの頑強な相乗効果をもたらした。単独療法として投与されたいずれかの抗体での抗腫瘍効力は０〜１０％のＣＲであった（図３Ａ〜３Ｄを参照されたい）。

ＭＢ４９腫瘍を担持するＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスをそれぞれ５ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇの抗ｍＧＩＴＲ（ＳＣ）および抗ｍＰＤ−１（ＩＰ）の１回の投与（１用量）で処理した。腫瘍サイズが１０５ｍｍ^３（８５〜１２２ｍｍ^３）に達したら、処理を開始した。腫瘍を週２回測定した。腫瘍の完全退縮（ＣＲ）を抗腫瘍効果の指標として用いた。抗ＧＩＴＲおよび抗ＰＤ−１の組合せ処理は４０％のＣＲの増強した効力をもたらした。単剤処理群においてはＣＲは全く観察されなかった（図４Ａ〜４Ｄを参照されたい）。

実施例８
調節性Ｔ細胞およびＣＤ８細胞比に対する抗ＰＤ−１および抗ＧＩＴＲの組合せの効果
Ａ．方法
１．混合リンパ球反応培養
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、フィコール・プラーク・プラス（Ｆｉｃｏｌｌ Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓ）密度勾配遠心分離を１２００×ｇで２０分間用いてバフィーコートから単離した。末梢血単核細胞を培地：血漿境界から集め、ダルベッコリン酸緩衝食塩水（ＤＰＢＳ）で２回洗浄した。塩化アンモニウムカリウムＲＢＣ溶解溶液（ＲＢＣ溶解溶液）を使用して残留赤血球（ＲＢＣ）を溶解した。

以下の方法を用いて、ＣＤ１４＋単球から樹状細胞（ＤＣ）を産生させた。まず、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐヒト単球富化カクテルおよびフィコール・プラーク・プラス（Ｆｉｃｏｌｌ Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓ）密度勾配遠心分離を１２００×ｇで２０分間用いて、バフィーコートから単球を単離した。単球を培地：血漿境界から取り出し、ＤＰＢＳで２回洗浄した。ＲＢＣ溶解溶液を使用して残留ＲＢＣを溶解した。１０％ ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１，０００Ｕ／ｍＬ 顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）および４００Ｕ／ｍＬ インターロイキン（ＩＬ）−４で補足されたダルベッコ変法イーグル培地内で富化単球を２×１０^６／ｍＬの細胞密度で培養した。第６日に、０．５μｇ／ｍＬ リポ多糖を該培養に加え、該細胞を更に２日間培養した。

混合リンパ球反応培養を２４ウェルプレート内で調製した。末梢血単核細胞（２×１０^６／ｍＬ）を、１００Ｕ／ｍＬ ＩＬ−２、５ｎｇ／ｍＬ ＩＬ−１５、抗ｈＧＩＴＲ抗体（ＭＫ４１６６）、抗ｈＰＤ−１抗体（ＭＫ−３４７５）、ＭＫ−３４７５およびＭＫ４１６６の組合せまたはアイソタイプ対照ｍＡｂ（抗ＲＳＶ）の存在下、γ照射（３０Ｇｙ）同種異系ＤＣ（０．２×１０^６／ｍＬ）と共に培養した。フローサイトメトリーを用いてＭＬＲ培養内の調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の数を第７日に評価した。

２．混合リンパ球反応培養におけるＴｒｅｇのフローサイトメトリー検出
Ｔｒｅｇ（ＣＤ３＋ ＣＤ４＋ ＣＤ２５＋ ＦｏｘＰ３＋）およびＣＤ８＋ Ｔ細胞の検出のために、ＭＬＲ培養からの１〜２×１０^６細胞を５０μＬのＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ染色バッファー中で抗ＣＤ３、抗ＣＤ４、抗ＣＤ２５および抗ＣＤ８と共にインキュベートした。固定可能生存可能色素（Ｆｉｘａｂｌｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｄｙｅ）ｅＦｌｕｏｒ ５０６を使用して死細胞を排除した。抗ＣＤ３、抗ＣＤ４、抗ＣＤ３、抗ＣＤ４、抗ＣＤ８および抗ＣＤ２５ ｍＡｂでの表面染色の後、ＦｏｘＰ３固定／透過性亢進キットを製造業者の説明（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）に従い使用して、細胞内ＦｏｘＰ３染色を行った。サンプルの獲得をＬＳＲ ＩＩフローサイトメーターで行い、Ｆｌｏｗソフトウェアバージョン１０．０．６（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ，Ｉｎｃ．）を使用してデータを分析した。ＣＤ３＋ ＣＤ４＋細胞上のゲート化およびそれに続くＣＤ２５＋ ＦｏｘＰ３＋細胞上のゲート化により、Ｔｒｅｇを特定した。

３．調節性Ｔ細胞抑制アッセイ
ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞富化キットおよびフィコール・プラーク・プラス（Ｆｉｃｏｌｌ Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓ）密度勾配遠心分離を１２００×ｇで２０分間用いて、バフィーコートからＣＤ４＋ Ｔ細胞を単離した。ＣＤ４＋ Ｔ細胞を培地：血漿境界から集め、ＤＰＢＳで２回洗浄した。ＲＢＣ溶解溶液を使用して残留ＲＢＣを溶解した。ヒトＣＤ２５−結合マイクロビーズＩＩキットを製造業者の説明（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）に従い使用して、ＣＤ４＋ ＣＤ２５＋ ＴｒｅｇおよびＣＤ４＋ ＣＤ２５−エフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆｓ）を分離した。ＣＤ４＋ ＣＤ２５＋ ＣＤ１２７− Ｔｒｅｇの純度は約４０％〜７０％であった。ヒトＤＣを前記のとおりに産生させた。

Ｔ細胞抑制アッセイのために、合計１×１０^５個のＴ細胞（ＴｒｅｇおよびＴｅｆｆｓ）および２×１０^４個のγ照射（３０Ｇｙ）ＤＣ（ウェル当たり）を、ＭＫ−４１６６、ＭＫ−３４７５、ＭＫ−３４７５およびＭＫ−４１６６の組合せ、またはアイソタイプ対照ｍＡｂ（抗ＲＳＶ）の存在下、９６ウェル丸底プレート内で７日間培養した。ＣＤ４＋ ＣＤ２５− ＴｅｆｆｓおよびＣＤ４＋ ＣＤ２５＋ Ｔｒｅｇを４：１の比で混合した。第６日に、トリチウム標識チミジンを該培養に２０分間加えた。トリチウム標識チミジンの存在下のインキュベーションの後、該細胞を集め、水を使用して細胞溶解し、βカウンター（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，２４５０マイクロプレートカウンター）を使用して分析した。Ｔ細胞増殖のレベルは、取り込まれたトリチウム標識チミジンのレベルにより反映された。全てのアッセイは三重重複実験として行った。

Ｂ．結果
抗マウスＧＩＴＲ作動性ｍＡｂ ＤＴＡ−１がＴｒｅｇの安定性および腫瘍内蓄積を変化させうることはＤＴＡ−１の作用メカニズムに必須である（Ｃｏｈｅｎら（２０１０）ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ５（ｅ１０４３６）：１−１２；およびＳｃｈａｅｒら（２０１３）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．１：３２０−３３１を参照されたい）。ＭＫ−４１６６の単体またはＭＫ−３４７５との組合せがヒトＴｒｅｇの誘導およびそれらの抑制活性に影響を及ぼす能力を、ヒトインビトロアッセイを用いて調べた。

ＭＬＲにおけるＴｒｅｇの誘導は詳細に記載されている（例えば、Ｌｅｖｉｔｓｋｙら（２０１３）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ９６：６８９−６９６を参照されたい）。したがって、血液中で天然に生じるヒトＴｒｅｇの数を増加させるために、そしてヒトＴｒｅｇおよびＣＤ８：Ｔｒｅｇ比に対するＭＫ−４１６６の単体またはＭＫ−３４７５との組合せの効果を評価するために、ＭＬＲを使用した。ＭＬＲ培養への１０μｇ／ｍＬ ＭＫ−４１６６の添加は７日後にＣＤ４＋ ＣＤ２５＋ ＦｏｘＰ３＋ Ｔｒｅｇの数の減少をもたらした（図５Ａ）。ＭＫ−３４７５は単独ではＴｒｅｇの数に影響を及ぼさなかった。しかし、ＭＫ−３４７５とＭＫ−４１６６との組合せはＴｒｅｇの数およびＣＤ８：Ｔｒｅｇ比に最も顕著な影響を及ぼした（図５Ｂ）。

ヒトＴｒｅｇの抑制活性に対するＭＫ−４１６６の効果を評価するために、Ｔｒｅｇ抑制アッセイを確立した。このアッセイにおいては、Ｔ細胞増殖のレベルは、取り込まれたトリチウム標識チミジンのレベルにより反映される。ＭＫ−４１６６をＭＫ−３４７５と組合せた場合、Ｔ細胞増殖の用量依存的増加が観察された（図６）。これらの結果は、ＭＫ−４１６６およびＭＫ３４７５の存在下のインキュベーションがＭＬＲ誘導性Ｔｒｅｇの数を減少させ、ＣＤ８：Ｔｒｅｇ比を増加させ、インビトロにおけるヒトＴｒｅｇの抑制機能を低下させる証拠を示している。

表２は配列表における配列の簡潔な説明を示す。

Claims (20)

1. 患者における腫瘍の治療のための、（ｉ）ＰＤ−１アンタゴニストおよび（ｉｉ）ＧＩＴＲアゴニストを含む医薬組成物であって、
   該ＰＤ−１アンタゴニストが、ＭＫ−３４７５であり、
   該ＧＩＴＲアゴニストが、
   配列番号８２に示すアミノ酸配列（アミノ酸３１がＱであり、アミノ酸５７がＱである）を含む、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域と、
   配列番号８１に示すアミノ酸配列を含む、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖免疫グロブリン可変領域と
   を含む抗体または抗体結合性フラグメントであり、
   該ＰＤ−１アンタゴニストおよび該ＧＩＴＲアゴニストが同時または連続的に投与される、医薬組成物であって、
   ここで、該組成物は、インビトロにおける混合リンパ球反応（ＭＬＲ）培養アッセイ及びＴ細胞抑制アッセイでの測定において、ＭＬＲ誘導性Ｔｒｅｇの数を減少させ、ＣＤ８：Ｔｒｅｇ比を増加させ、インビトロにおけるヒトＴｒｅｇの抑制機能を低下させる特性を有する、医薬組成物。
2. 該抗体またはフラグメントがヒト化されている抗体である、請求項１記載の医薬組成物。
3. 該ＰＤ−１アンタゴニストおよび該ＧＩＴＲアゴニストが少なくとも１回で同時に投与される、請求項１記載の医薬組成物。
4. 該ＰＤ−１アンタゴニストおよび該ＧＩＴＲアゴニストが少なくとも２回で同時に投与される、請求項１記載の医薬組成物。
5. 該腫瘍が進行期腫瘍である、請求項１記載の医薬組成物。
6. 該進行期腫瘍が、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、胃腸癌、膵臓癌、神経膠芽細胞腫、神経膠腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、肝癌、肝細胞癌、膀胱癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、骨髄腫、多発性骨髄腫、唾液腺癌、腎臓癌、腎細胞癌、ウィルムス腫瘍、基底細胞癌、黒色腫、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、精巣癌および食道癌からなる群から選択される、請求項５記載の医薬組成物。
7. 患者における腫瘍の治療のための、ＰＤ−１アンタゴニストとＧＩＴＲアゴニストとを含む組み合わせ薬剤であって、
   ａ）該ＰＤ−１アンタゴニストが、ＭＫ−３４７５であり、
   ｂ）該ＧＩＴＲアゴニストが、
   配列番号８２に示すアミノ酸配列（アミノ酸３１がＱであり、アミノ酸５７がＱである）を含む、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域と、
   配列番号８１に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む、重鎖免疫グロブリン可変領域と
   を含む、抗体である、
   組み合わせ薬剤であって、
   ここで、該組み合わせ薬剤は、インビトロにおける混合リンパ球反応（ＭＬＲ）培養アッセイ及びＴ細胞抑制アッセイでの測定において、ＭＬＲ誘導性Ｔｒｅｇの数を減少させ、ＣＤ８：Ｔｒｅｇ比を増加させ、インビトロにおけるヒトＴｒｅｇの抑制機能を低下させる特性を有する、組み合わせ薬剤。
8. 進行期腫瘍を治療するための医薬の製造のための、ＰＤ−１アンタゴニストおよびＧＩＴＲアゴニストの使用であって、
   ａ）該ＰＤ−１アンタゴニストが、ＭＫ−３４７５であり、
   ｂ）該ＧＩＴＲアゴニストが、
   配列番号８２に示すアミノ酸配列（アミノ酸３１がＱであり、アミノ酸５７がＱである）を含む、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域と、
   配列番号８１に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む、重鎖免疫グロブリン可変領域と
   を含む、抗体である、使用であって、
   ここで、該医薬は、インビトロにおける混合リンパ球反応（ＭＬＲ）培養アッセイ及びＴ細胞抑制アッセイでの測定において、ＭＬＲ誘導性Ｔｒｅｇの数を減少させ、ＣＤ８：Ｔｒｅｇ比を増加させ、インビトロにおけるヒトＴｒｅｇの抑制機能を低下させる特性を有する、使用。
9. 該ＧＩＴＲアゴニストが、該患者に毎週少なくとも０．０５μｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項１に記載の医薬組成物。
10. 該ＧＩＴＲアゴニストが、該患者に毎週０．２μｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項１に記載の医薬組成物。
11. 該ＧＩＴＲアゴニストが、該患者に毎週０．５μｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項１に記載の医薬組成物。
12. 該ＧＩＴＲアゴニストが、該患者に毎週１μｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項１に記載の医薬組成物。
13. 該ＧＩＴＲアゴニストが、該患者に毎週１０μｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項１に記載の医薬組成物。
14. 該ＧＩＴＲアゴニストが、該患者に毎週１００μｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項１に記載の医薬組成物。
15. 該ＧＩＴＲアゴニストが、該患者に毎週０．２ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項１に記載の医薬組成物。
16. 該ＧＩＴＲアゴニストが、該患者に毎週１．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項１に記載の医薬組成物。
17. 該ＧＩＴＲアゴニストが、該患者に毎週２．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項１に記載の医薬組成物。
18. 該ＧＩＴＲアゴニストが、該患者に毎週１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項１に記載の医薬組成物。
19. 該ＧＩＴＲアゴニストが、該患者に毎週２５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項１に記載の医薬組成物。
20. 該ＧＩＴＲアゴニストが、該患者に毎週５０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項１に記載の医薬組成物。

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