JP2003199558A

JP2003199558A - 植物疾病およびコーンルートワームを制御するためのＢａｃｉｌｌｕｓの新規な株

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Publication number: JP2003199558A
Application number: JP2003025287A
Authority: JP
Inventors: Sherry Darlene Heins; ダーレーンヘインズシェリー; Denise Carol Manker; キャロルマンカーデニス; Desmond Rito Jimenez; リトジメネズデスモンド; Randy Jay Mccoy; ジャイマッコイランディー; Jimmy Ensio Orjala; エンショオージャラジミー; Pamela G Marrone; ジィー．マローネパメラ
Original assignee: AgraQuest Inc
Current assignee: AgraQuest Inc
Priority date: 1997-05-09
Filing date: 2003-01-31
Publication date: 2003-07-15
Also published as: PL336716A1; JP3471815B2; MX214455B; MX244069B; PT981540E; KR100616372B1; KR20010012392A; JP2001507237A; DK0981540T3; CA2289916C; NO995462L; PL198772B1; AU732724B2; CZ9903757A3; CA2289916A1; NO995462D0; TW592639B; WO1998050422A1; DE69835206D1; EP0981540B1

Abstract

(57)【要約】【課題】殺虫活性、抗真菌活性、および抗細菌活性を示
す、新規な抗生物質を産生するおよび代謝物質を産生す
るBacillus subtilis株、この培養物の上清（溶媒抽出
可能な、小分子量（10,000ダルトン未満）の、コーンル
ートワームに活性な代謝物質を含む）を含む、有効な殺
虫剤、抗真菌剤、および抗細菌剤、ならびに真菌および
細菌感染、ならびにコーンルートワームの感染から植物
を防御または処理する方法をを提供すること。【解決手段】Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ株Ａ
Ｑ７１３、ＮＲＲＬアクセス番号Ｂ−２１６６１および
該株の全ての同定された特徴を有するそれらの変異体
の、生物学的に純粋な培養物。

Description

【発明の詳細な説明】【０００１】【発明の属する技術分野】本発明は、生物農薬の分野に
ある。より詳細には、本発明は、Ｂａｃｉｌｌｕｓｓ
ｕｂｔｉｌｉｓの新規な株、ＡＱ７１３が、広範な範囲
の真菌および細菌植物疾病を阻害し得、ならびにまたコ
ーンルートワーム（ｃｏｒｎｒｏｏｔｗｏｒｍ）に対
する活性を有するという知見に関する。本発明はまた、
本発明の新規なBacillus株、ならびにこの株によって生
成される抗生物質および代謝物質を、単独で、または他
の化学的なおよび生物学的な農薬と組合わせて含有す
る、抗真菌性の、抗殺菌性の、および殺虫性の組成物に
関する。【０００２】【従来の技術】本出願は、1997年５月９日に出願された
出願番号第０８／８５３，７５３の一部継続出願であ
る。【０００３】何年もの間、種々の微生物が、植物疾病を
制御するのに有用であるような生物学的活性を示すこと
が知られている。農学的および園芸学的に重要な種々の
植物疾病を制御するための生物学的農薬を同定および開
発する分野において、進歩がなされたが、使用される大
部分の農薬はなお、合成化合物である。これらの化学的
な抗真菌剤の多くは、EPAによって発ガン物質として分
類され、野生生物および他の非標的種に毒性である。さ
らに、病原体は、化学的な農薬に耐性になり得る（例え
ば、Ｓｃｈｗｉｎｎら、２４４頁、ＡＤＶＡＮＣＥＳ
ＩＮＰＬＡＮＴＰＡＴＨＯＬＯＧＹ：ＰＨＹＴＯＰ
ＨＴＨＯＲＡＩＮＦＥＳＴＡＮＳ、ＴＨＥＣＡＵＳ
ＥＯＦＬＡＴＥＢＬＩＧＨＴＯＦＰＯＴＡＴ
Ｏ（ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、ＳａｎＤｉｅｇ
ｏ１９９１）。【０００４】毎年、２億５千万〜３億ドルの化学的な農
薬が、コーンルートワーム感染を制御するために使用さ
れる。これらの化学的な農薬の多くは、ヒト、野生生
物、および他の非標的種に毒性である。また、いくつか
は、地下水において見出された。新規な化学的な殺虫剤
は、開発するために１億ドルかかる。【０００５】生物学的な制御は、合成の化学的な抗真菌
剤の魅力的な代替を提供する。生物農薬（生存する生物
体およびこれらの生物体によって生成される天然に生成
された化合物）は、より安全であり得、より生分解性で
あり得、および開発するのにあまり高価ではなくあり得
る。【０００６】スクリーニングプログラムは、抗真菌活性
を示すあるＢａｃｉｌｌｕｓｓｐｐ．（Ｂａｃｉｌｌ
ｕｓｓｓｐ．は、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂ．ｃｅｒ
ｅｕｓ、Ｂ．ｍｙｃｏｉｄｅｓ、Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉ
ｅｎｓｉｓを含む）を同定した。（例えば、Ｓｔａｂｂ
ら（１９９０）ＡｐｐｌｉｅｄＥｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｏｌ．６０：４４０４−４４１２）。これら
の株は、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｍｅｄｉｃａｇｉ
ｎｉｓ、Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ、Ｐ．ａｐｈａｎｉ
ｄｅｒｍａｔｕｍ，、またはＳｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ
ｍｉｎｏｒ（Ｓｔａｂｂら、前出を参照のこと）によっ
て引き起こされる土壌伝播性の立ち枯れ病に対して有効
である、２つの抗生物質ｚｗｉｔｔｅｒｍｉｃｉｎ−Ａ
および／またはｋａｎｏｓａｍｉｎｅ（Ｍｉｌｎｅｒら
（１９９６）Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏ
ｂ．６２：３０６１−３０６６）を生成することが示さ
れた。ｚｗｉｔｔｅｒｍｉｃｉｎ−Ａは、水溶性で、酸
安定性の直鎖アミノポリオール分子である（Ｈｅら（１
９９４）Ｔｅｔｒａ．Ｌｅｔｔ．３５（１６）２４９９
−２５０２を参照のこと）。【０００７】Ｈａｎｄｅｌｓｍａｎらに対する米国特許
第５，０４９，３７９号は、ｚｗｉｔｔｅｒｍｉｃｉｎ
−Ａが、アルファルファおよびダイズにおいてどのよう
に立ち枯れ病を生成するのかを記載する。種子が、Ｂ．
ｃｅｒｅｕｓＡＴＣＣ５３５２２でコートされる場
合、根腐れ真菌の病原性活性が阻害される。ダイズ種子
または種子の周囲の土壌に対する、あるＢ．ｃｅｒｅｕ
ｓ株の胞子ベースの処方物の同様の適用は、圃場部位で
ダイズの収量を改善することが示された。（Ｏｓｂｕｒ
ｎｅら（１９９５）Ａｍ．Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌ．Ｓ
ｏｃ．７９（６）：５５１−５５６を参照のこと）。生
物農薬を適用する方法は、当該分野において周知であ
り、ならびに、例えば、有効な薬剤の湿潤性粉末、乾燥
流動物、マイクロカプセル化、適切な培養物からの抗生
物質画分の液体または固体処方物が挙げられる（例え
ば、Ｒｏｓｓａｌｌに対する米国特許第５，０６１，４
９５号またはＨａｎｄｅｌｓｍａｎに対する米国特許第
５，０４９，３７９号を参照のこと）。【０００８】Ｓｍｉｔｈら（１９９３）ＰｌａｎｔＤ
ｉｓｅａｓｅ７７（２）１３９−１４２は、ｃｏｔｔｏ
ｎｙｃｕｃｕｍｂｅｒｌｅａｋを引き起こす土壌伝
播性真菌の、Ｐｙｔｈｉｕｍａｐｈａｎｉｄｅｒｍａ
ｔｕｍの活性が、ｚｗｉｔｔｅｒｍｉｃｉｎを生成する
Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ株ＵＷ８５を使用して抑制され得るこ
とを報告する。Ｌｅｉｆｅｒｔら（１９９５）Ｊ．Ａｐ
ｐｌ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．７８：９７−１０８は、２
つのＢａｃｉｌｌｕｓ細菌、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓＣ
Ｌ２７およびＢ．ｐｕｍｉｌｉｓＣＬ４５による抗Ｂ
ｏｔｒｙｔｉｓおよび抗Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ抗体の生
成を報告する。全ブロスおよび無細胞濾液は、インビト
ロ試験においてＢｏｔｒｙｔｉｓおよびＡｌｔｅｒｎａ
ｒｉａに対して活性であり、およびインビボでの、Ａｓ
ｔｉｌｂｅに対する小さな植物の試験において、Ｂｏｔ
ｒｙｔｉｓに対して活性であった。Ｌｅｉｆｅｒｔら
（１９９７）米国特許第５，５９７，５６５号は、収穫
後の疾病を引き起こす真菌を阻害するのに特に有効であ
るＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂ．ｐｕｍｉｌｉｓ、および
Ｂ．ｐｏｌｙｍｙｘａを開示する。彼らはまた、無細胞
培養濾液において生成される抗生物質の存在、および異
なるｐＨ値でのそれらの活性を開示したが、これらの化
合物を同定していない。【０００９】Ｒｏｓｓａｌｌ（１９９４）米国特許第
５，３４４，６４７号は、広範な抗真菌活性を有するＢ
ａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ株を開示する。Ｓｈ
ｏｌｂｅｒｇら（１９９５）Ｃａｎ．Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂ
ｉｏｌ．４１：２４７−２５２、Ｓｗｉｎｂｕｒｎｅら
（１９７５）Ｔｒａｎｓ．Ｂｒｉｔ．Ｍｙｃｏｌ．Ｓｏ
ｃ．６５：２１１−２１７、ＳｉｎｇｈおよびＤｅｖｅ
ｒａｌｌ（１９８４）ＴｒａｎｓＢｒ．Ｍｙｃｏｌ．
Ｓｏｃ．：４８７−４９０、ならびにＦｅｒｒｅｉｒａ
（１９９１）Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ８１：２
８３−２８７。Ｂａｋｅｒら（１９８３）Ｐｈｙｔｏｐ
ａｔｈｏｌｏｇｙ７３：１１４８−１１５２は、真菌
植物病原体の生物制御剤として、Ｂａｃｉｌｌｕｓｓ
ｐｐ．およびＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓの使
用をを開示する。Ｂａｋｅｒら（１９８３）Ｐｈｙｔｏ
ｐａｔｈｏｌｏｇｙ７３：１１４８−１１５２はま
た、植物病原体に対する使用のための抗真菌Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓを報告する。Ｐｕｓｅｙら
（１９８８）ＰｌａｎｔＤｉｓ．７２：６２２−６
２６、ＰｕｓｅｙおよびＲｏｂｉｎｓ（米国特許第５，
０４７，２３９号）、ならびにＭｃＫｅｅｎら（１９８
６）Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ７６：１３６−１
３９は、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓを使用する、収穫後の果
実腐敗の制御を開示する。ＭｃＫｅｅｎら、前出は、低
分子量のｉｔｕｒｉｎ環式ポリぺプチドに類似する抗生
物質が、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓのこの真菌活性に寄与す
ることを示した。【００１０】Ｌｉｕら（１９９５）米国特許第５，４０
３，５８３号は、Ｂａｃｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕ
ｍ、ＡＴＣＣ５５０００および真菌植物病原体のＰｈ
ｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉを制御するための方
法を開示する。ＩｓｌａｍおよびＮａｎｄｉ（１９８
５）ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓ
ｅｓａｎｄＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ９２（３）：２
４１−２４６は、イネ褐色斑点の原因因子のＤｒｅｃｈ
ｓｌｅｒａｏｒｙｚａｅに対する拮抗作用を有するＢ
ａｃｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍを開示する。同
じ著者の、ＩｓｌａｍおよびＮａｎｄｉ（１９８５）Ｊ
ｏｕｒｎａｌｏｆＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅｓ
ａｎｄＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ９２（３）：２３３−
２４０はまた、Ｄｒｅｃｈｓｌｅｒａｏｒｙｚａｅ、
Ａｌｔｅｒｎａｒｉａａｌｔｅｒｎａｔａ、およびＦ
ｕｓａｒｉｕｍｒｏｓｅｕｍに対するＢ．ｍｅｇａｔ
ｅｒｉｕｍのインビトロ拮抗作用を開示する。彼らは、
培養濾液における３つの成分を考察する。最も活性な抗
生物質は、２５５ｎｍでのＵＶピークおよび２６０ｎｍ
での肩（ｓｈｏｕｌｄｅｒ）を有し、水およびメタノー
ルに高度に可溶性であり、これはポリオキシン様リポペ
プチドになることを証明した。Ｃｏｏｋ（（１９８７）
ＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓＢｅｌｔｗｉｄｅＣｏｔｔ
ｏｎＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎ−Ｍｅｃｈａｎｉｚａｔｉ
ｏｎＲｅｓｅａｒｃｈＣｏｎｆｅｒｅｎｃｅ、Ｃｏ
ｔｔｏｎＣｏｕｎｃｉｌ，Ｍｅｍｐｈｉｓ、４３〜４
５頁）は、綿の根腐れ病の原因のＰｈｙｍａｔｏｔｒｉ
ｃｈｕｍｏｍｎｉｖｏｒｕｍによって殺傷される綿植
物の数を減少するための、Ｂａｃｉｌｌｕｓｍｅｇａ
ｔｅｒｉｕｍの懸濁液の使用を開示する。【００１１】Ｂ．ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍの抗生物質産生
は、Ｂｅｒｄｙ（ＣＲＣＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＡ
ｎｔｉｂｉｏｔｈｉｃＣｏｍｐｏｕｎｄｓ、第Ｉから
ＸＩＶ巻（ＣＲＣＰｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．Ｂｏｃａ．Ｒ
ａｔｏｎ、ＦＬ１９８０−８７）によって報告されて
おり、彼は、哺乳動物低毒性のペプチド抗生物質（例え
ば、ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎ−ＰＤＭ−Ｏ、ｂａｃｉｍ
ｅｔｈｒｉｎ、ｍｅｇａｃｉｎ、ペンタペプチド、、ホ
モペプチド類）の生成を報告する。【００１２】Ｂａｃｉｌｌｉは、抗真菌および抗細菌二
次代謝物質を生成することが知られる（Ｋｏｒｚｙｂｓ
ｋｉら（１９７８））。ウィスコンシンおよびコーネル
大学の研修者らは、Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐ．によって
生成される、新規な抗真菌化合物のｚｗｉｔｔｅｒｍｉ
ｃｉｎＡを同定した（Ｈｅら（１９９４）Ｔｅｔｒ
ａ．Ｌｅｔｔ．３５（１６）：２４９９−２５０２）。
同じ株によって生成される第２の抗真菌代謝物質は、公
知のアミノ糖、Ｋａｎｏｓａｍｉｎｅとして、最近同定
された（Ｍｉｌｎｅｒら（１９９６）Ａｐｐｌ．Ｅｎｖ
ｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂ．６２：３０６１−３０６
５）。【００１３】以前に記載されるＢａｃｉｌｌｕｓ代謝物
質の別の群は、ｉｔｕｒｉｎクラスの環式リポペプチド
であり、このいくつかは、強力な抗真菌剤である。これ
らの薬剤は、７つのαアミノ酸および脂肪族側鎖を伴う
１つのβ−アミノ酸を有する環式オクタペプチドからな
る。アミノ酸配列の順序および成分が異なるｉｔｕｒｉ
ｎ類のいくつかの群が存在する。これらは、以下の表１
において示される。一般に、一そろいの関連の分子は、
脂肪酸アミノ酸残基の長さおよび枝別れにおける差異を
伴って、生成される。Ｓａｃｃａｒｏｍｙｃｅｓｃｅ
ｒｅｖｅｓｉａｅに対して試験される場合、ｍｙｃｏｓ
ｕｂｔｉｌｉｎが最も活性な薬剤（ＬＣ５０＝１０μｇ
／ｍＬ）であり、ｉｔｕｒｉｎ−Ａおよびｂａｃｉｌｌ
ｏｍｙｃｉｎＬが続く（両方は、ＬＣ５０＝３０μｇ
／ｍＬを有する）ことが見出された（Ｂｅｅｓｏｎら
（１９７９）Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ３２
（８）：８２８−８３３）。これらの環式リポペプチド
の作用の態様は、生体イオンの放出を許容する膜貫通チ
ャンネルを作製する真菌膜との相互作用に起因すること
が報告されている（Ｌａｔｏｕｄら（１９８６）Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ８５６：５２６
−５３５）。Ｉｔｕｒｉｎ−Ｃは、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉ
ｕｍｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍを含む真菌に対して不活
性である（Ｐｅｙｐｏｕｘら（１９７８）Ｔｅｔｒａｈ
ｅｄｒｏｎ３４：１１４７−１１５２）。【００１４】【表１】ＵＳＤＡでの研究グループは、アミノ酸鎖長が異なる多
くのアナログを作製して、ｉｔｕｒｉｎ類の構造／活性
関係を調査した。研究者らは、ｉｔｕｒｉｎ類の活性
が、脂肪酸側鎖の長さおよび末端の枝別れ（ｉｓｏ＞通
常＞ａｎｔｅｉｓｏの順に）とともに増加したことを報
告した（Ｂｌａｎｄら（１９９５）Ｐｒｏｃ．Ｐｌａｎ
ｔＧｒｏｗｔｈＲｅｇｕｌａｔｉｏｎＳｏｃ．Ａ
ｍ．第２２号：１０５−１０７）。彼らはまた、Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓの多くのｉｔｕｒｉｎ生成株を用いる彼らの
研究に基づいて、「天然の産物から得られたｉｔｕｒｉ
ｎの量は、商業的に実行可能であるのに不十分である」
と述べる。【００１５】Ｂ．ｃｅｒｅｕｓから単離された環式リポ
ペプチドの別の群は、ｐｌｉｐａｓｔａｔｉｎｓであ
る。これらの化合物は、アシル化デカペプチドのファミ
リーであり、その構造は図１において示される（Ｎｉｓ
ｈｉｋｉｏｒｉら（１９８６）Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉ
ｃｓ３９（６）７５５−７６１）。これらの化合物
は、元来、ブタ膵臓ホスホリパーゼＡ_２のインヒビター
として単離された（Ｕｍｅｚａｗａら（１９８６）Ｊ．
Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ３９（６）：７３７−７４
４）が、後に、いくつかの植物病原性真菌（Ｂｏｔｒｙ
ｔｉｓ、Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ、およびＡｌｔｅｒｎ
ａｒｉａを含む）を阻害することが見出された（Ｙａｍ
ａｄａら（１９９０）ＮｉｐｐｏｎＮｏｙａｋｕＧ
ａｋｋａｉｓｈｉ１５（１）：９５−９６）。Ｙａｍ
ａｄａらはまた、両方ともに同じＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ
株によって生成される、ｉｔｕｒｉｎＡとＰｌｉｐａｓ
ｔａｔｉｎ類との間で観察される相乗効果を報告した。【００１６】研究は、液体（ＰｈａｅおよびＳｈｏｄａ
（１９９１）Ｊ．Ｆｅｒｍｅｎｔ．Ｂｉｏｅｎｇ．７
１：１１８−１２１）；Ｏｈｎｏら（１９９３）Ｊ．Ｆ
ｅｒｍｅｎｔ．ｂｉｏｅｎｇ．７５：４６３−４６５）
および固体状態の発酵物（Ｏｈｎｏら（１９９２）Ｂｉ
ｏｔｅｃｈ．Ｌｅｔｔ．１４（９）：８１７−８２２；
Ｏｈｎｏら（１９９５）Ｊ．Ｆｅｒｍｅｎｔ．Ｂｉｏｅ
ｎｇ．５：５１７−５１９）の両方におけるｉｔｕｒｉ
ｎの生成を増加するための発酵の改善に対して行われ
た。同じＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ株によって生成される、
それ自身では不活性である、密接に関連するＳｕｒｆａ
ｃｔｉｎ類と、ｉｔｕｒｉｎ類との間での相乗効果の報
告がある（Ｈｉｒａｏｋａら（１９９２）Ｊ．Ｇｅｎ．
Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３８：６３５−６４
０）。ｉｔｕｒｉｎＡおよびｓｕｒｆａｃｔｉｎの合
成を同時調節する遺伝子のヌクレオチド配列が公開され
ている（Ｈｕａｎｇら（１９９３）Ｊ．Ｆｅｒｍｅｎ
ｔ．Ｂｉｏｅｎｇ．７６（６）：４５５−４５０）。ｉ
ｔｕｒｉｎを生成する株に対する圃場研究は、Ｒｈｉｚ
ｏｃｔｏｎｉａの制御についての土壌処理に集中し（Ａ
ｓａｋａおよびＳｈｏｄａ（１９９６）Ａｐｐｌ．Ｅｎ
ｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６２：４０８１−４
０８５）、ならびにｉｔｕｒｉｎ類の葉の圃場適用は報
告されていない。【００１７】Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓによって生成される
別の環式リポペプチド化合物は、ｓｕｒｆａｃｔｉｎで
あり、これは、非常に優れた界面活性剤活性を保有する
（Ｋａｎｉｎｕｍａら（１９６９）Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．３３：９７３−９７６）。ｓｕｒｆａｃ
ｔｉｎは、ラクトン環によってＬＬＤＬＬＤＬ配列を有
するヘプタペプチド部分に連結されるＣ１４またはＣ１
５のβ−ヒドロキシ脂肪酸を含む（Ａｒｉｍａら（１９
６８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏ
ｍｍｕｍ．３１：４８８−４９４）。Ｓａｎｄｒｉｎら
（（１９９０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．１２：３７０−３７５）は、ｓｕｒｆａｃ
ｔｉｎおよびｉｔｕｒｉｎＡの両方、ｂａｃｉｌｌｏ
ｍｙｃｉｎＦおよびＬ、ならびにｍｙｃｏｓｕｂｔｉ
ｌｉｎを産生するＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ株を見出した。【００１８】本発明者らによって発見され、以前は、Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍの株であると考
えられ、そして現在、Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌ
ｉｓの株として同定された、新規な微生物ＡＱ７１３
は、Ａｉｔｕｒｉｎ類、ｐｌｉｐａｓｔａｔｉｎ類、
およびｓｕｒｆａｃｔｉｎ類を生成する。微生物による
リポペプチドのこの組合せの生成は、以前には報告され
ていなかった。さらに、本発明者らは、ＡＱ７１３はま
た、「ａｇｒａｓｔａｔｉｎ類」として称される化合物
の新規に記載される群を生成することを見出した。全て
の３つの上記の公知の化合物と、新規なａｇｒａｓｔａ
ｔｉｎ類との組合わせはまた、新規である。【００１９】１つの一般に使用される生物農薬は、グラ
ム陽性細菌Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓ
ｉｓである。農薬のＢ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ株
は、昆虫および線虫のある目および種に特異的に毒性で
ある結晶タンパク質を、胞子形成の間に生成することが
知られる（米国特許第４，９９９，１９２号および同第
５，２０８，０１７号）。Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓ
ｉｓによって生成されるプロテイナーゼ性のエンドトキ
シンはまた、コーンルートワームおよび他の甲虫に対す
る殺虫剤として作用する（例えば、米国特許第５，１８
７，０９１号；Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｔ．Ｊ．ら（１９９
３）Ｊ．ＥｃｏｎｏｍｉｃＥｎｔｏｍｏｌｏｇｙ８
６：３３０−３３３）。Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉ
ｓエンドトキシンは、精製された結晶、洗浄された細胞
ペレット、および発現されたタンパク質として有効であ
ることが示された。Ｗａｒｒｅｎら（ＷＯ９６／１００
８３）は、ＢａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓおよびＢ．
ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓの栄養段階の間に生成され
る、非エンドトキシンタンパク質を開示する。Ｖｉｐ１
およびＶｉｐ２と呼ばれる、これらの栄養タンパク質
は、コーンルートワーム（ｎｏｒｔｈｅｒｎおよびｗｅ
ｓｔｅｒｎ）に対して強力な活性を有する（Ｅｓｔｒｕ
ｃｈら（１９９７）ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｙ１５：１３７−１４１およびＭｕｌｌｉｎｓ
ら（１９９７）、ＡｐｐｌＥｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒ
ｏｂｉｏｌ．６３（印刷中）。【００２０】β−エキソトキシンと呼ばれる１つのＢ．
ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ熱安定性代謝物質はまた、
農薬特性を有することが示された。Ｂｕｒｇｊｅｒｏｎ
およびＢｉａｃｈｅ（１９７９）、Ｅｎｔｏｍｏｐｈａ
ｇａ１１：２７９−２８４は、Ｃｏｌｏｒａｄｏｐ
ｏｔａｔｏｂｅｅｔｌｅ（Ｌｅｐｉｎｏｔａｒｓａｄ
ｅｃｅｍｌｉｎｅａｔａ）に対して活性である、βエキ
ソトキシンを報告する。さらに、公知のＢ．ｔｈｕｒｉ
ｎｇｉｅｎｓｉｓβ−エキソトキシンは、非特異的な農
薬活性を示し、線虫だけでなく、ハエ、アワヨトウの幼
虫、ダニ、およびコーンルートワームもまた殺傷する。
Ｓｉｇｍａエキソトキシンは、β−エキソトキシンに類
似の構造を有し、およびＣｏｌｏｒａｄｏｐｏｔａｔ
ｏｂｅｅｔｌｅに対して活性である（Ａｒｇａｕｅｒ
ら（１９９１）Ｊ．Ｅｎｔｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．２６：２
０６−２１３）。α−エキソトキシンは、Ｍｕｓｃａｄ
ｏｍｅｓｔｉｃａの幼虫に対して毒性である（Ｃｌｕｔ
ｈｙ（１９８０）ＦＥＭＳＭｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅ
ｔｔ．８：１−７）。γ−エキソトキシンは、種々のタ
ンパク質分解性酵素、キチナーゼ、およびプロテアーゼ
である。γエクソトキシンの毒性効果は、β−エキソト
キシンまたはδ−エンドトキシンとの組合わせにおいて
発現されるのみである。Ｆｏｒｓｂｅｒｇら（１９７
６）「Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉ
ｓ：環境の質におけるその効果」、Ｎａｔｉｏｎａｌ
ＲｅｓｅａｒｃｈＣｏｕｎｃｉｌｏｆＣａｎａｄ
ａ。Ｓｔｏｎａｒｄら（１９９４）ＡＣＳＳｙｍｐｏ
ｓｉｕｍＳｅｒｉｅｓ５５１：２５は、Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓｃｅｒｅｕｓ株の上清中の、コーンルートワー
ムに対する水溶性の二次代謝物質を報告する。【００２１】抗真菌活性およびコーンルートワーム活性
の両方を有するＢａｃｉｌｌｕｓの記録された株は存在
しない。Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓによって
生成される公知でない代謝物質が存在し、これは、約１
０，０００未満の分子量であり、および非極性溶媒にお
いて抽出可能である。【００２２】【発明が解決しようとする課題】Ｂａｃｉｌｌｕｓｍ
ｅｇａｔｅｒｉｕｍとして以前に同定された、Ｂａｃｉ
ｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓの新規な抗生物質を生成す
るおよび代謝物質を生成する株が提供され、この株は、
広範な抗真菌および抗殺菌活性を示し、ならびにまたコ
ーンルートワーム活性を示す。また提供されるものは、
コーンルートワームに対する活性を有する新規なＢ．ｓ
ｕｂｔｉｌｉｓからの新規な代謝物質である。また提供
されるものは、真菌および細菌感染から植物を処理また
は防御する方法であり、抗生物質を生成するＢａｃｉｌ
ｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓの有効量を適用する工程を包
含する。抗生物質を生成するＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂ
ｔｉｌｉｓは、全ブロス培養物における懸濁液として、
またはＢａｃｉｌｌｕｓの抗生物質を生成する株の全ブ
ロス培養物から得られる抗生物質を含有する上清とし
て、提供され得る。また提供されるものは、コーンルー
トワームの侵襲から植物の根を処理または防御する方法
であり、新規な代謝物質を生成するＢａｃｉｌｌｕｓ
ｓｕｂｔｉｌｉｓの有効量を適用する工程を包含する。
新規な代謝物質質を生成するＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂ
ｔｉｌｉｓは、全ブロス培養物における懸濁液として、
または代謝物質を含有する上清もしくは微生物の全ブロ
ス培養物から得られる精製された代謝物質として、提供
され得る。また提供されるものは、新規な株ＡＱ７１３
によって生成される新規な化合物のａｇｒａｓｔａｔｉ
ｎ類、ならびにｉｎｔｕｒｉｎＡ、ｐｌｉｐａｓｔａ
ｔｉｎ、ｓｕｒｆａｃｔｉｎ、およびａｇｒａｓｔａｔ
ｉｎを含む化合物の新規な組合わせである。【００２３】【課題を解決するための手段】項目１．Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓｓｕｂｔｉｌｉｓ株ＡＱ７１３、ＮＲＲＬアクセス
番号Ｂ２１６６１およびその変異体の、単離された、純
粋な培養物。【００２４】項目２．項目１に記載のＢａｃｉｌｌｕｓ
ｓｕｂｔｉｌｉｓによって生成される代謝物質であっ
て、コーンルートワームに対して活性を示し、溶媒抽出
可能であり、および１０，０００ダルトン未満の分子量
を有する、代謝物質。【００２５】項目３．項目１に記載のＢａｃｉｌｌｕｓ
ｓｕｂｔｉｌｉｓ株ＡＱ７１３の培養物から得られる
上清であって、抗真菌および抗細菌活性、ならびにコー
ンルートワームに対する活性を示す、上清。【００２６】項目４．項目１に記載のＢａｃｉｌｌｕｓ
ｓｕｂｔｉｌｉｓ株ＡＱ７１３の全ブロス培養物、お
よび化学的な抗真菌剤を含有する、組成物。【００２７】項目５．項目１に記載のＢａｃｉｌｌｕｓ
ｓｕｂｔｉｌｉｓ株ＡＱ７１３の全ブロス培養物、お
よび生物学的または化学的な農薬を含有する、組成物。【００２８】項目６．化学的な抗真菌剤をさらに含有す
る、項目５に記載の組成物。【００２９】項目７．項目２に記載の代謝物質、および
化学的な抗真菌剤を含有する、組成物。【００３０】項目８．項目２に記載の代謝物質、および
生物学的または化学的な農薬を含有する、組成物。【００３１】項目９．化学的な抗真菌剤をさらに含有す
る、項目８に記載の組成物。【００３２】項目１０．項目３に記載の上清、および化
学的な真菌剤を含有する、組成物。【００３３】項目１１．項目３に記載の上清、および生
物学的または化学的な農薬を含有する、組成物。【００３４】項目１２．化学的な農薬をさらに含有す
る、項目１１に記載の組成物。【００３５】項目１３．真菌および細菌感染、ならびに
コーンルートワームの感染から、植物および果実を防御
または処理するための方法であって、項目１に記載のＢ
ａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ株の有効量を適用す
る工程を包含する、方法。【００３６】項目１４．真菌および細菌感染、ならびに
コーンルートワームの感染から、植物および果実を防御
または処理するための方法であって、項目２に記載の代
謝物質の有効量を適用する工程を包含する、方法。【００３７】項目１５．真菌および細菌感染、ならびに
コーンルートワームの感染から、植物および果実を防御
または処理するための方法であって、項目３に記載の上
清の有効量を適用する工程を包含する、方法。【００３８】項目１６．真菌および細菌感染、ならびに
コーンルートワームの感染から、植物および果実を防御
または処理するための方法であって、項目４、５、６、
７、８、９、１０、１１、または１２に記載の組成物の
有効量を適用する工程を包含する、方法。【００３９】項目１７．項目１３、１４、または１５に
記載の方法であって、前記感染が、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈ
ｏｒａｉｎｆｅｓｔａｎｓ、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ
ｓｏｌａｎｉ、Ｐｈｙｔｈｉｕｍｕｌｔｉｍｕｍ、
Ｂｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａ、Ａｌｔｅｒｎａｒ
ｉａｓｏｌａｎｉ、Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍｃ
ｏｃｏｄｅｓ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａｂｒａｓｓｉｃ
ｉｃｏｌａ、Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍｃｕｃｕｍｅ
ｒｉｎｕｍ、Ｍｏｎｉｌｉｎｉａｆｒｕｃｔｉｃｏｌ
ａ、Ｖｅｎｔｒｕｒｉａｐｙｒｉｎａ、Ａｃｉｄｏｖ
ｏｒａｘａｖｅｎａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓ
ｙｒｉｎｇａｅ、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓｃａｍｐｅ
ｓｔｒｉｓ、Ｅｒｗｉｎｉａｃａｒｏｔｏｖｏｒａ、
Ｃｌａｖｉｂａｃｔｅｒｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｅ、
Ｐｌａｓｍｏｐａｒａｖｉｔｉｃｏｌａ、Ｓｐｈａｅ
ｒｏｔｈｅｃａｆｕｌｉｇｉｎｅａ、Ｕｎｃｉｎｕｌ
ａｎｅｃａｔｏｒ、およびＰｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ
ｐａｒａｓｉｔｉｃａからなる群より選択される少なく
とも１つの微生物によって引き起こされる、方法。【００４０】項目１８．項目１６に記載の方法であっ
て、前記感染が、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｉｎｆｅ
ｓｔａｎｓ、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉ、
Ｐｈｙｔｈｉｕｍｕｌｔｉｍｕｍ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ
ｃｉｎｅｒｅａ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａｓｏｌａｎ
ｉ、Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍｃｏｃｏｄｅｓ、
Ａｌｔｅｒｎａｒｉａｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ、Ｃ
ｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ、Ｍｏ
ｎｉｌｉｎｉａｆｒｕｃｔｉｃｏｌａ、Ｖｅｎｔｒｕ
ｒｉａｐｙｒｉｎａ、Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘａｖｅ
ｎａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｙｒｉｎｇａｅ、
Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ、Ｅｒ
ｗｉｎｉａｃａｒｏｔｏｖｏｒａ、Ｃｌａｖｉｂａｃ
ｔｅｒｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｅ、Ｐｌａｓｍｏｐａｒ
ａｖｉｔｉｃｏｌａ、Ｓｐｈａｅｒｏｔｈｅｃａｆ
ｕｌｉｇｉｎｅａ、Ｕｎｃｉｎｕｌａｎｅｃａｔｏ
ｒ、およびＰｅｒｏｎｏｓｐｏｒａｐａｒａｓｉｔｉ
ｃａからなる群より選択される少なくとも１つの微生物
によって引き起こされる、方法。【００４１】項目１９．項目１３に記載の方法であっ
て、前記Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ株ＡＱ７
１３が、全ブロス培養物として適用される、方法。【００４２】項目２０．項目１３に記載の方法であっ
て、前記Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ株ＡＱ７
１３が、上清として適用される、方法。【００４３】項目２１．項目１９に記載の方法であっ
て、前記Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ株ＡＱ７
１３が、湿潤性粉末、顆粒、流動物、またはマイクロカ
プセル化物として適用される、方法。【００４４】項目２２．項目２０に記載の方法であっ
て、前記Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ株ＡＱ７
１３が、湿潤性粉末、顆粒、流動物、またはマイクロカ
プセル化物として適用される、方法。【００４５】項目２３．項目１３、１４、または１５に
記載の方法であって、植物の根または該根の周囲の土壌
が処理される、方法。【００４６】項目２４．項目１６に記載の方法であっ
て、植物の根または該根の周囲の土壌が処理される、方
法。【００４７】項目２５．以下の式：【００４８】【化１】を含有する化合物であって、ここでＲ_１は、Ｃ８〜Ｃ２
０の分枝鎖または直鎖の脂肪族側鎖であり；Ｘは、Ｖａ
ｌであり、Ｒ_２は、酢酸またはエステル誘導体であり、
およびＧｌｘは、ＧｌｎまたはＧｌｕである、化合物。【００４９】項目２６．以下の式：【００５０】【化２】を含有する、化合物。【００５１】項目２７．以下の式：【００５２】【化３】を含有する、化合物。【００５３】項目２８．Ａ型ｉｔｕｒｉｎ、ｐｌｉｐａ
ｓｔａｔｉｎ、ｓｕｒｆａｃｔａｎｔおよびａｇｒａｓ
ｔａｔｉｎを含有する、組成物。【００５４】項目２９．真菌および細菌およびコーンル
ートワーム感染から、植物および果実を防御または処理
するための方法であって、項目２５、２６、２７、また
は２８に記載の組成物の有効量を適用する工程を包含す
る、方法。【００５５】項目３０．項目２９に記載の方法であっ
て、前記感染が、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｉｎｆｅ
ｓｔａｎｓ、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉ、
Ｐｈｙｔｈｉｕｍｕｌｔｉｍｕｍ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ
ｃｉｎｅｒｅａ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａｓｏｌａｎ
ｉ、Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍｃｏｃｏｄｅｓ、
Ａｌｔｅｒｎａｒｉａｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ、Ｃ
ｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ、Ｍｏ
ｎｉｌｉｎｉａｆｒｕｃｔｉｃｏｌａ、Ｖｅｎｔｒｕ
ｒｉａｐｙｒｉｎａ、Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘａｖｅ
ｎａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｙｒｉｎｇａｅ、
Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ、Ｅｒ
ｗｉｎｉａｃａｒｏｔｏｖｏｒａ、Ｃｌａｖｉｂａｃ
ｔｅｒｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｅ、Ｐｌａｓｍｏｐａｒ
ａｖｉｔｉｃｏｌａ、Ｓｐｈａｅｒｏｔｈｅｃａｆ
ｕｌｉｇｉｎｅａ、Ｕｎｃｉｎｕｌａｎｅｃａｔｏ
ｒ、およびＰｅｒｏｎｏｓｐｏｒａｐａｒａｓｉｔｉ
ｃａからなる群より選択される、少なくとも１つの微生
物によって引き起こされる、方法。【００５６】項目３１．植物を、コーンルートワーム感
染から防御または処理するための方法であって、項目２
５、２６、２７、または２８に記載の組成物の有効量
を、植物の根または該根の周囲の土壌に適用する工程を
包含する、方法。【００５７】【発明の実施の形態】本発明は、Ｂａｃｉｌｌｕｓｍ
ｅｇａｔｅｒｉｕｍとして以前に同定された、Ｂａｃｉ
ｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓの新規な株、ＡＱ７１３、
または広範な抗真菌および抗細菌活性を有するその変異
体、ならびに抗真菌および抗コーンルートワーム活性の
新規な組合せを提供する。この新規な株は、ＡＱ７１３
と称され、そして承認番号Ｂ２１６６１のもと、特許手
続き上の微生物の寄託の国際的承認に関するブタペスト
条約に基づく規則のもとに、１９９７年３月７日に、Ｎ
ＲＲＬに寄託された。本発明はまた、このような細菌株
またはこのような細菌株から得られる抗生物質を含有す
る上清もしくは純粋な抗生物質を使用して、植物におけ
る真菌および細菌疾病を防止および処理する方法を包含
する。本発明はまた、ＡＱ７１３の細菌懸濁液、または
ＡＱ７１３の培養物の代謝物質を含有する上清もしくは
株ＡＱ７１３から精製された代謝物質で、コーンルート
ワーム幼虫を制御するために、植物の根および土壌を処
理する方法を含む。本発明はまた、１０，０００ダルト
ン未満の分子量を伴う、コーンルートワームに対する活
性を有する溶媒抽出可能な代謝物質を含む。本発明はさ
らに、新規な微生物によって生成される新規な化合物
の、ａｇｒａｓｔａｔｉｎ類を含む。また含まれるもの
は、Ａ型ｉｔｕｒｉｎ、ｐｌｉｐａｓｔａｔｉｎ、ｓｕ
ｒｆａｃｔｉｎ、およびａｇｒａｓｔａｔｉｎを含有す
る新規な組合せである。【００５８】（定義）本明細書中で使用されるように、
「生物学的制御」は、第２の生物体の使用による病原体
または昆虫の制御として規定される。生物学的制御の公
知の機構は、根の表面上の空間について、真菌を外部競
合する（out-competing）ことによって、根腐れを制御
する腸内細菌を含む。細菌トキシン（例えば、抗生物
質）は、病原体を制御するために使用されてきた。トキ
シンは単離され得、そして植物に直接的に適用され得る
か、または細菌種は、トキシンをインサイチュで生成す
るように投与され得る。【００５９】用語「真菌」は、クロロフィルを欠く、広
範に多様な有核胞子を保有する生物を含む。真菌の例と
しては、酵母、カビ、ウドンコ病菌、サビ菌、およびキ
ノコが挙げられる。【００６０】用語「細菌」としては、明瞭な核を有しな
い任意の原核生物が挙げられる。【００６１】「抗真菌性」は、真菌の死亡率を増加す
る、または増殖速度を阻害する、物質の能力を意味す
る。【００６２】「抗生物質」は、微生物を殺傷または阻害
し得る、任意の物質を含む。抗生物質は、微生物によっ
てまたは合成プロセスまたは半合成プロセスによって生
成され得る。それゆえ、この用語は、真菌を阻害または
殺傷する物質、例えば、zwittermicin-Aまたはkanosami
neを含む。【００６３】「抗真菌剤」は、真菌を殺傷し得る、また
は真菌の増殖を阻害し得る任意の物質を含む。【００６４】用語「培養する」は、種々の種類の培地上
でのまたは培地中での、生物体の増殖をいう。「全ブロ
ス培養物」は、細胞および培地の両方を含む液体培養物
をいう。「上清」は、ブロス中で増殖された細胞が、遠
心分離、濾過、沈降、または他の当該分野において公知
の手段によって除去される場合に残存する液体ブロスを
いう。【００６５】「有効量」は、有益なまたは所望の結果を
達成するのに十分な量である。有効量は、１回以上の投
与において投与され得る。処理および防御の用語におい
て、「有効量」は、真菌または細菌病の状態の進行を、
軽減、安定化、逆転、緩慢、または遅延するのに十分な
量である。【００６６】本明細書中で使用されるように、「昆虫」
は、「昆虫（Insecta）」網における全ての生物体を含
む。「成虫前の（pre-adult）」昆虫は、成虫段階の前
の生物体の任意の形態（例えば、卵、幼虫、および若虫
を含む）をいう。「殺虫性」は、昆虫の死亡率を増加す
る、または増殖速度を阻害する、物質の能力をいう。
「殺線虫性」は、線虫の死亡率を増加する、または増殖
速度を阻害する、物質の能力をいう。「農薬性」は、昆
虫、線虫、およびダニの、死亡率を増加する、または増
殖速度を阻害する、物質の能力をいう。【００６７】「ポジティブコントロール」は、農薬活性
を有することが知られる化合物を意味する。「ポジティ
ブコントロール」としては、市販の化学的な農薬が挙げ
られるが、これに制限されない。用語「ネガティブコン
トロール」は、農薬活性を有することが知られていない
化合物を意味する。ネガティブコントロールの例として
は、水または酢酸エチルが挙げられる。【００６８】用語「溶媒」は、溶液中に別の物質を保持
する任意の液体を含む。「溶媒抽出可能な」は、溶媒中
に溶解し、次いで、溶媒から単離され得る任意の化合物
をいう。溶媒の例としては、酢酸エチルのような有機溶
媒が挙げられるが、これらに制限されない。【００６９】用語「代謝物質」は、農薬活性を有する微
生物の発酵の、任意の化合物、物質、または副生成物を
いう。上述のように規定される抗生物質は、微生物に対
して特異的に活性な代謝物質である。【００７０】用語「agrastatin類」は、以下の構造を有
する新規な化合物の群をいう：【００７１】【化４】ここで、R₁は、C8〜C20の分枝鎖または直鎖の脂肪族側
鎖であり；Ｘは、AlaまたはValのいずれかであり、R
₂は、酢酸またはエステル誘導体であり；およびGlxは、
GlnまたはGluである。これらの化合物は、抗細菌および
抗真菌活性、ならびに抗コーンルートワーム活性を有す
る。【００７２】本発明者らは、Bacillus megateriumとし
て以前に同定された、Bacillussubtilisの新規な、代謝
物質および抗生物質を生成する株を記載し、この株は、
広範な抗真菌および抗殺菌活性を示し、ならびにまたコ
ーンルートワーム幼虫を殺傷するか、または発育阻止す
る。別の局面において、本発明は、真菌および細菌感染
から、植物を処理または防御する方法を提供し、本発明
におけるBacillussubtilis AQ713の全ブロス培養物から
得られる上清の有効量を適用する工程を包含する。上清
は、当該分野において周知の方法（遠心分離、濾過、沈
降などを含む）によって得られ得る。【００７３】別の局面において、本発明は、真菌および
細菌感染から、植物を処理または防御する方法を含み、
新規な株のBacillus subtilisの全ブロスの有効量を適
用する工程を包含する。【００７４】さらなる局面において、本発明は、真菌お
よび細菌疾病から、植物を処理または防御する方法を含
み、Bacillus subtilisの新規な株によって生成される
抗生物質の有効量を適用する工程を包含する。【００７５】別の局面において、本発明は、コーンルー
トワーム侵襲から、植物の根を処理または防御する方法
を提供し、本発明におけるBacillus subtilis AQ713の
全ブロス培養物から得られる上清の有効量を適用する工
程を包含する。上清は、当該分野において周知の方法
（遠心分離、濾過、沈降などを含む）によって得られ得
る。【００７６】別の局面において、本発明は、コーンルー
トワーム侵襲から、植物の根を処理または防御する方法
を包含し、Bacillus subtilisの新規な株の全ブロスの
有効量を適用する工程を包含する。【００７７】さらなる局面において、本発明は、コーン
ルートワーム感染から、植物の根を処理または防御する
方法を包含し、Bacillus subtilisの新規な株によって
生成される代謝物質の有効量を適用する工程を包含す
る。【００７８】本発明における組成物の良好な分散および
接着を達成するために、全ブロス培養物、上清、および
／または代謝物質／抗生物質を、分散および接着を補助
する成分とともに処方することが有利であり得る。適切
な処方物は、当業者に公知である。【００７９】本発明における組成物は、湿潤性粉末、顆
粒などとして処方され得るか、または適切な媒体などに
マクロカプセル化され得る。他の処方物の例としては、
可溶性粉末、湿潤性顆粒、乾燥流動物（flowables）、
水性流動物、湿潤性の分散性の顆粒、乳化可能な濃縮
物、および水性懸濁物が挙げられるが、これらに制限さ
れない。他の適切な処方物は、当業者に公知である。【００８０】本発明のなおさらなる局面において、「ag
rastatin類」と称される化合物の新規な群が提供され
る。これらの化合物は、抗コーンルートワーム活性に加
えて、抗細菌および抗真菌活性を示す。【００８１】本発明のなおさらなる局面において、A型i
turin、plipastatin、surfactin、およびagrastatinを
含有する新規な組合せが提供される。【００８２】本発明の別の局面において、真菌および細
菌疾病から、植物を処理または防御する方法が提供さ
れ、A型iturin、plipastatin、surfactin、およびagras
tatinを含有する化合物の新規な組合せの有効量が、適
用される工程を包含する。【００８３】本明細書中に引用される全ての特許および
刊行物は、その全体が本明細書中に参考として援用され
る。以下の例は、本発明を説明するために提供される。
これらの例は、制限するとして解釈されない。【００８４】【実施例】（実施例１：AQ713株の特徴づけ）単離物
を、Bochner（1989）Nature339:157-158において記載さ
れるように、Biolongのマイクロプレートパネル（Biolo
ng，Inc.、Hayward、CA）の利用に基づいて同定した。B
iolongマイクロプレートを、グラム陽性細菌およびグラ
ム陰性細菌について利用可能な95個の異なる炭素基質プ
レートを有する、予め充填および乾燥したパネルから構
成される。単離物を、28℃で液体培地中で増殖し、そし
て24時間後、洗浄した細胞懸濁液（0.85%生理食塩水）
を、GPMicroplate（Biolong，Inc.）の各パネルウェル
に接種した。28℃で、24時間後、炭素利用反応をを評価
した。次いで、基質利用プロフィールを、BiologGram-P
ositive Data Base（リリース3.50）と比較し、そして
最も類似する種に対して単離した。Biologの結果は、Ba
cillus Megateriumに対して0.883の類似性指標を与え
た。【００８５】AQ713のより広範囲の特徴付けを、アメリ
カンタイプカルチャーコレクション、Rockville,Md.に
よって行った。提出された単離物：未知；AQ713株同定された単離物：利用可能な生理学的および生化学的
データを使用して、この株は、Bacillus subtilisに最
も類似する。細胞形態学：運動性の細胞が、単一で見出され、１つの
内性胞子が、中心または端近くの領域において形成され
た。細胞は、グラム陽性に均一に染色された。コロニー形態学：コロニーは、凸面高、粗い、鈍い表
面、およびでこぼこの縁を伴って、不透明および不規則
であった。【００８６】AQ713株の特徴づけデータ：【００８７】【表１４Ａ】注解：利用可能な生理学的および生物学的データを使用
して、この株は、Bacillus subtilisに最も類似する。【００８８】【表１４Ｂ】参考文献：Gordon，R.E.、W.C.HaynesおよびC.H.N.Pan
g．1973。Bacillus属。ハンドブック427号。米国農務
省、Washington，D.C. （実施例２：コーンルートワームに対するAQ713の活
性）Bacillusサンプルを、Bacillus培養培地中で増殖し
た。培地２は、５%ペプトン、５%デキストロース、３%
酵母抽出物、３%麦芽抽出物、1.5% proflo綿種子抽出物
（59%タンパク質、4.26% 脂肪、6.73% 灰分、3.19% 繊
維、および微量のゴシポール；バランスは水である）、
10%ダイズ粉、および0.5%MgSO₄×７H₂O。培地３は、20%
ペプトンおよび3.4% KH₂PO₄および4.3%K₂HPO₄以外は、
同じ成分を含んだ。１日齢の線条培養物を、250mLのバ
ッフル振とうフラスコを接種するために使用した。フラ
スコを、200rpmにて、29℃で、５日間、振とうした。殺
虫活性をアッセイするために、35mLの培養ブロスを、5,
200rpmで、20分間、遠心分離し、そして上清を、以下に
記載のマイクロアッセイにおいて使用した。【００８９】アッセイを、96ウェルのマイクロプレート
において行った。各ウェルは、固体寒天基質を含み、試
験生物体、およびポジティブコントロール、ネガティブ
コントロール、または新規なBacillus株から実施例１に
記載されるように得られた上清のいずれかを、含んだ。【００９０】殺虫活性をアッセイするために、寒天基質
を、Marroneら（1985）J. Econ. Entomol. 78:290-293
に従って、マイクロプレートのウェルについて調製し
た。殺線虫活性をアッセイするために、寒天平板（1.5
%）をウェルの代わりに使用した。【００９１】Avid(R)（avermectin）の１ppm溶液を、ポ
ジティブコントロールとして使用した。脱イオン水を、
ネガティブコントロールとして使用した。試験サンプル
またはコントロールの２つの反復実験を、各アッセイに
おいて使用した。培地１、２、３において増殖した40μ
Lの上清サンプルまたは全ブロスを、各サンプルウェル
に分配した。次いで、プレートを、寒天溶液が乾燥する
まで約２〜３時間、乾燥するために蒸気フード中に置い
た。【００９２】試験生物体は、成虫前のコーンルートワー
ム（Diabrotica undecimpunctata）、成虫前のGermanゴ
キブリ（Blatella germanica）、成体前のシロイチモン
ジョトウガの幼虫（Spodopteraexigua）、成虫前のハエ
（Drosophila melanogaster）、または線虫Caenorhabdi
tis elegansのN2株であった。試験生物体は、0.1%寒天
中に、各ウェル中に分配した25μLの寒天当たり約５生
物体の濃度に、希釈した。マイクロプレートを、Mylar
(R)のような気密な物質でシールし、そして各ウェル
を、ピン圧で空気を通した。プレートを、27℃で、７日
間まで、インキュベートした。【００９３】インキュベーション後、ウェルを、新生虫
の死亡率または幼虫発育の程度を記録することによって
スコアした。全て死亡したまたは発育を妨げられた幼虫
を含むサンプルウェルに、１のスコアを与え、いくらか
死亡したおよび他の重篤に発育が阻止された幼虫を含む
ウェルに、２のスコアを与え、生存するが発育阻止され
た幼虫を含むウェルを、３とスコアし、および死亡する
幼虫を含まないサンプルに、４のスコアを与えた。スコ
アは、各サンプル内の反復実験間で平均した。結果を表
２および３にまとめる。表２：昆虫害虫全ブロスに対するAQ713のスコア評価【００９４】【表２】表３：昆虫害虫上清に対するAQ713のスコア評価【００９５】【表３】これらの試験は、AQ713が、全ブロス培養物として両方
の培地において活性であり、培地２で最も良好な活性で
あったことを示す。上清は、AQ713が培地２中で増殖さ
れた場合にのみ活性であった。【００９６】（実施例３：コーンルートワームに対して
活性なAQ713代謝物質の化学特性）50mLのAQ713を、培地
２中で増殖した。各培養物に、50mL酢酸エチルを添加
し、そして混合物を、別々の漏斗中で、２分間、振とう
した。水層を除去し、そして有機層を、硫酸マグネシウ
ムを含有するボトル中に回収した。次いで、有機濾液
を、丸底フラスコに濾過し、そして溶媒を回転蒸散器
（rotovap）において除去した。【００９７】バイオアッセイのために、乾燥した有機抽
出物を、2.5mLアセトン中に再溶解した。40μLアリコー
トを回収し、そして70%アセトン/水で、800μLに希釈し
た。これは、有機抽出物の10倍の濃度である。連続希釈
を行い、新生コーンルートワームに対するサンプルを
得、７日後に新生幼虫（上述のように調製したように、
マイクロタイタープレート中のウェルあたり１）の死亡
率パーセントを記録した。結果を、表４において記録す
る。表４：コーンルートワームに対するAQ713の酢酸エチル
抽出物の活性【００９８】【表４】結果は、AQ713が、コーンルートワームを殺傷する溶媒
抽出可能な代謝物質を生成することを示す。【００９９】活性な代謝物質の分子量範囲を決定するた
めに、AQ713の50mL培養物を、培地２において増殖し
た。１mLを、微量遠心分離管に置き、そして12,000で15
分間、スピンした。上清を回収した。500μリットルの
上清を、10,000ダルトン分子量セントリコンフィルター
の上部に置いた。これらを、製造業者の指示に従って、
遠心分離した（12,000rpm、35分間）。濾液を回収し、
そして保持物を遠心分離およびフィルターの洗浄によっ
て回収した。上清、濾液、および保持物のサンプルを、
新生コーンルートワーム幼虫に対して試験した（昆虫食
餌を伴う、96ウェルプレート、Marroneら、前出、上述
のように；ウェルあたり40μLのサンプル、および各サ
ンプルについて８ウェル、１幼虫／ウェル）。試験の結
果を、表５において示す。表５：AQ713の分子量カットオフ【０１００】【表５】結果は、上清および濾液が活性であったことを示し、従
って、代謝物質の分子量は、10,000ダルトン未満であ
る。【０１０１】（実施例４：植物病原体に対して活性なAQ
713代謝物質の化学特性）AQ713の50mLを培地２において
増殖した。各培養物に、50mL酢酸エチルを添加し、そし
て混合物を、別々の漏斗中で、２分間、振とうした。水
層を除去し、そして有機層を、硫酸マグネシウムを含有
するボトル中に回収した。次いで、有機濾液を、丸底フ
ラスコに濾過し、そして溶媒を回転蒸散器において除去
した。【０１０２】バイオアッセイのために、乾燥した有機抽
出物を、2.5mLアセトン中に再溶解した。40μLアリコー
トを回収し、そして70%アセトン/水で800μLに希釈し
た。これは、有機抽出物の10倍の濃度である。Pythiumu
ltimumおよびBotrytis cinereaを用いる96ウェルプレー
トアッセイ（以下に記載する）植物病原体アッセイを、
有機抽出物の活性を決定するために行った。全ブロス
は、100%制御（１のスコア）を与えたが、10倍の有機抽
出物は、２つの植物病原体の制御を与えなかった（４の
スコア）。このことは、活性な抗生物質が、AQ713によ
って生成されるコーンルートワーム活性の代謝物質とは
異なり、酢酸エチルのような有機溶媒中に抽出可能でな
いことを示す。【０１０３】さらなる試験は、新規な化合物、アグラス
タチンＡ（agrastatin A）の単離を提供した。ブタノー
ル抽出物を、発酵ブロスから、先ずブロスを２回、等容
量の酢酸エチルで抽出し、そして層を分離することによ
って作製した。次いで、水性画分を、等容量のブタノー
ルで２回抽出した。ブタノール抽出物を合わせ、そして
溶媒を回転式エバポレーターで除去した。粉末を、得ら
れた抽出物の凍結乾燥によって得た。【０１０４】粉末を、80%アセトニトリル／水中に溶解
し、そして超音波処理した。溶液を、メタノールで活性
化し、そして80%アセトニトリル／水で平衡化したC-18
固相抽出（SPE）カートリッジにアプライした。SPEカー
トリッジを、80%ACN/水で溶出し、そしてこの溶出物を
回収し、そして溶媒を除去した。溶出物をさらに、HPLC
によって精製した。C-18 HPLCカラム（１cm×25cm）
を、アセトニトリル＋0.05%TFA／水＋0.05% TFA溶媒勾
配とともに、以下のように使用した（210nmでのUV検
出）：０〜20分間、33％ ACN；20〜30分間、40％ ACN；
30〜45分間、45〜55%ACN；および45〜63分間、55％ AC
N。【０１０５】AQ713のHPLCクロマトグラムは、イツリン
類、イツリン様化合物プリパスタチン（plipastatin）
類およびアグラスタチン類）、およびサーファクチン
（surfactin）類の存在を示す、図１を参照のこと。イ
ツリン A2、A3、A4、A7、およびA6を、NMRのデータおよ
びLC質量分析データ、および文献値との比較との組み合
わせによって同定した。サーファクチン類を、HPLCによ
っておよびLC質量分析によって、購入したサーファクチ
ン類の標準に比較することにより同定した。【０１０６】イツリン様化合物を、アミノ酸分析とLC質
量分析との組合せによって、プリパスタチン類と新規な
アグラスタチン類との混合物であるとして決定した。広
範囲のNMRのデータをまた、新規な化合物のうちの１つ
（HPLCピーク20）について回収し、アグラスタチンＡと
称した。アグラスタチンＡは、以下のアミノ酸を含むこ
とが見出された：Thr；３Glu；Pro；Ala；Val；２Tyr；
およびOrn。これは、Valの存在およびIleの欠損によっ
て、プリパスタチンＡからの差異を生じる。アグラスタ
チンＡの分子量は、1448であると決定され、これは以下
の構造に対応する：【０１０７】【化５】脂肪酸部位の直鎖の性質を、¹H NMRによって確認した。
環式ペプチドにおけるアミノ酸の部位を、TOCSYおよびR
OESYデータセットの詳細な分析によって決定した。【０１０８】アグラスタチンＢ（HPLCピーク26）の質量
分析およびアミノ酸分析は、この構造がプリパスタチン
Ｂ２に類似し、Ala残基のValへの置換を伴う。構造は以
下である：【０１０９】【化６】（実施例５：インビトロ培養（96ウェルプレート）にお
ける植物病原体に対するAQ713の活性）AQ713が、真菌、
Phytophthorainfestans、Pythium ulitimum、Botrytis
cinerea、Rhizoctonia solani、Alternaria solaniに対
して有効であるか否かを決定するために、以下の実験を
行った。96ウェルプレート（平底、400μl/ウェル、Nun
c商標）を、寒天培地（ポテトデキストロース寒天）（P
DA、Difco）で充填した。Phytophthorainfestans培養物
を、３日間、液体YPG-1培地（0.4g酵母、0.1%KH₂PO、0.
5% MgSO₄×７H₂O、1.5%グルコース）で増殖した。他の
真菌について、胞子をペトリディッシュの表面から掻き
とり、そして脱イオン水の0.1〜0.2mLアリコートおよび
病原体の胞子懸濁液（濃度約２×10⁶胞子/mL）を寒天上
に広げた。【０１１０】AQ713を、実施例２において記載するよう
に、培地２および３中で、72時間増殖した。上清を得る
ために、全ブロス培養物を、5,200rpmで20分間、遠心分
離した。真菌植物病原体を、96ウェルプレート上にピペ
ットで加えた（８ウェル／病原体）。真菌増殖の存在ま
たは不在を、８ウェルそれぞれについて記録した。約40
μLのAQ713上清または20μLの全ブロスを、各ウェルに
添加した。「１」のスコアは、真菌増殖の完全な阻害を
意味する。「４」のスコアは、真菌増殖の阻害がなかっ
たことを示す。結果を、表６において示す。表６：真菌増殖のインビトロ阻害（96ウェルプレート）【０１１１】【表６】結果は、AQ713が、インビトロでの広範な殺真菌スペク
トルを有すること、および全ブロスおよび上清の両方
が、非常に活性であることを示す。培地３における上清
は、Rhizoctoniasolaniに対して活性であったが、培地
２における上清は活性でなかった。【０１１２】（実施例６：インビトロ培養における植物
病原体に対するAQ713の活性（領域アッセイ））寒天分
散（領域）アッセイにおけるAQ713の活性を決定するた
めに、植物病原体の胞子を、10cmペトリディッシュ中の
ポテトデキストロース寒天の表面上に広げた。7.0mmウ
ェルを、寒天から取り出し、そして培地２中で増殖した
AQ713の上清の100μLサンプルをウェル中においた。上
清を、4200rpmで40分間遠心分離することによって調製
した。次いで、上清を、4200rpmで、さらに40分間、再
度スピンした。典型的な結果は、ウェルの周囲の病原体
の増殖のないおよび／または減少された増殖の領域から
なった。領域のミリメートル（mm）の大きさを測定し、
そして記録した。結果を、表７において示す。表７：真菌植物病原体増殖のインビトロ阻害（領域試
験）【０１１３】【表７】（実施例７：細菌植物病原体に対するAQ713の活性）標
準的な寒天分散アッセイを、実施例６のように設定し
た。各細菌病原体のローンをペトリプレートの表面にわ
たって広げた。培地２中で増殖したAQ713全ブロスの100
μLを、各ウェルにおいた。領域の大きさを、mmで測定
した。表８：細菌植物病原体のインビトロ阻害（領域試験）【０１１４】【表８】 AQ713は、インビトロで試験した細菌植物病原体の全て
の種に対して活性であった。【０１１５】（実施例８：植物試験における植物病原体
に対するAQ713の活性）AQ713の活性を、マメおよびゼラ
ニウムの葉において、灰色カビ菌、Botrytiscinerea、
トマト苗木におけるAlternaria solani、およびレタス
のベト病、Bremia lactucae、に対して試験した。【０１１６】A.solaniについて、６パックにおいて植え
た２〜３葉期のトマト種子を、AQ713全ブロス（培地
２）で、ランオフに噴霧した。噴霧後、苗木を、乾燥さ
せた（約1.5時間）。次いで、苗木を、5.0×10⁴胞子/mL
で噴霧した。苗木を、プラスチックの円蓋で覆い、そし
て28℃で、Percivalインキュベーター中に放置した。病
原体の胞子を含有するかまたは含有しない、AQ713を含
有しない水を、ネガティブコントロールおよびポジティ
ブ病原体コントロールとして使用した。４日後、試験を
読み取った。水A.solaniコントロールにおいて、葉面一
面に均一の病変が存在し、子葉は剥離され、そして重篤
に感染された（５の評価＝完全な感染、制御なし）。AQ
713処理した植物は、本葉において分散する数個の軽度
の病変を有した。子葉は付着されたが、いくつかの小さ
な病変を伴った（１の評価）。ネガティブコントロール
は感染されなかった。【０１１７】二次試験を、円蓋下に置き、上述のように
保存した、水で充填されたメーゾンジャー中に配置され
た分離したトマト苗木（圃場レベルで茎を折った）を使
用してセットアップした。植物を、上述のように噴霧
し、そしてA.solaniの症状を、その後４日間に記録し
た。ネガティブコントロールにおいて症状はなかった。
ポジティブコントロールにおいて、苗木一面に均一の病
変が存在した。AQ713処置を、１と評価した（病変がほ
とんどないかまたは病変なし）。２日後、ポジティブコ
ントロールにおける植物は破壊されたが、AQ713処理し
た苗木は、実質的に無傷であり、ネガティブコントロー
ル（水を噴霧した植物）と同じように見えた。【０１１８】Botrytis cinereaに対する試験について、
マメ植物の第１の本葉を、13×100培養チューブの口
を、各葉上に押し付けることによって傷つけた。各葉
は、葉あたり２つの傷を受けた。葉を、AQ713全ブロス
（培地２）または水単独もしくは病原体単独で、噴霧し
た。乾燥した時に、これらを再度、B.cinerea胞子（0.8
×10⁶胞子/mL）で噴霧した。葉を、プラスチックの円蓋
で覆った平面に置き、そしてPercivalインキュベーター
中で18〜20℃で保存した。５日後、ポジティブコントロ
ール（病原体単独）は、約25mmの直径の面積において腐
敗した。ネガティブコントロール（水単独）は、腐敗を
有しなかった。AQ713は、葉が傷つけられた８つの円の
うちの７つにおいて感染を示さなかった。感染された１
つは、円のまわりの２つの位置で、軽度の感染を有し
た。【０１１９】Bremia試験について、レタス種子を、約８
cm高および幅の小さな透明なプラスチックの植物飼育容
器において、ピート、パーライト、およびバーミキュラ
イトを含有する、滅菌した鉢植え混合土の層に植えた。
レタスが発芽した後（１週間）、レタス苗木を、AQ713
ブロスまたは上清サンプルで噴霧した。植物を乾燥さ
せ、次いで、感染されたレタス苗木からのベト病胞子懸
濁液を、苗木上に噴霧した。プラスチック覆いを、植物
上に置き、そしてPercivalインキュベーターにおいて18
〜20℃で、インキュベートした。１週間後、試験を評価
した。AQ713は、レタス苗木において、Bremiaから、ベ
ト病を防止しなかった。【０１２０】（実施例９：植物疾病に対するAQ713の効
力（温室試験））（ブドウベト病）AQ713を、400リットル発酵器におい
て、48時間、ダイズベースの培地中で増殖した。ブドウ
植物（品種Chardonnay）を、手持ち噴霧器を用いて、滅
菌水で0.5×および0.25×濃度に希釈された400リットル
発酵物からの全ブロスで、ランオフに噴霧した。葉が乾
燥した場合、植物に、二回の噴霧をした。乾燥後、植物
を、ブドウベト病を引き起こす病原体、Plasmoparaviti
colaで接種した。３つの植物を、各用量について試験し
た。各植物を、０〜100％制御の規模に基づいて、疾病
制御のパーセントを見積ることによって、評価した。10
0％制御は、植物が可視的な病変を有さない。化学殺真
菌剤の、メタラキシル（metalaxyl）を、比較のために
使用した。結果は、以下のようであった： AQ713 0.5×全ブロス 97.7%制御 AQ713 0.25×全ブロス 100%制御メタラキシル 30ppm 100%制御メタラキシル 10ppm 98.3%制御メタラキシル１ppm 80%制御結果は、AQ713が、化学殺真菌剤と同様に、ブドウベト
病の制御を達成したことを実証する。【０１２１】（実施例１０：カボチャウドンコ病に対す
るAQ713の効力）AQ713を、400リットル発酵器におい
て、48時間、ダイズベースの培地中で増殖した。カボチ
ャ植物（CrookneckおよびAcorn）を、手持ち噴霧器を用
いて、400リットル発酵物からの全ブロスおよび滅菌水
で0.5×濃度に希釈されたサンプルで、ランオフに噴霧
した。乾燥後、植物を、カボチャウドンコ病菌、Spheae
rothecafuligineaで接種した。２つの植物を、各用量に
ついて処置した。全ブロスの噴霧乾燥した粉末をまた試
験した。400リットル発酵ブロスを、噴霧乾燥して、水
を除去した。10%および2.5%噴霧乾燥した粉末溶液を、
上述のように、ランオフに植物において噴霧した。ウド
ンコ病の発病を、０から５のスコアに評価した。５評価
は、100%疾病であり、一方０評価は、疾病なしである。
結果を、以下の表９において示す。表９【０１２２】【表９】 AQ713全ブロスおよび噴霧乾燥した粉末は、カボチャウ
ドンコ病のほぼ完全な制御を提供した。【０１２３】（実施例11：温室における疫病、灰色カビ
病、ブドウウドンコ病、穀類ウドンコ病、葉鞘枯れ病、
およびイネ葉枯れ病に対するAQ713の効力）AQ173を、72
時間、250mL振とうフラスコにおいて、ダイズベースの
培地中で増殖した。疾病、原因となる病原体、および宿
主を、以下の表10において列挙する。この全ブロス培養
物を、以下の表11に示されるように、植物に対して試験
した。表１０【０１２４】【表１０】各ブロスを、手持ち噴霧器を使用して、試験植物に対し
て、１×濃度で、ランオフに噴霧し、乾燥させ、次い
で、二回目の噴霧を行った。３つの植物を、各疾患およ
び処理について試験した。乾燥後、植物を、病原体で接
種した。各植物を、０〜100%制御の規模に基づいて、疾
患制御のパーセントを見積ることによって評価した。10
0％コントロールとは、可視的病変部を有さない植物を
いう。化学的な殺真菌剤を、比較のために使用した。疾
病の指標は、未処置コントロールに対する疾病の重篤度
である。表１１【０１２５】【表１１】AQ713は、試験した全ての病原体に対して、化学殺真菌
剤に等しい活性を示した。【０１２６】（実施例12：アブラナ属植物ベト病に対す
るAQ173の効力）Bacillus株AQ713を、10リットルの発酵
器において、ダイズベースの培地中で、48時間、増殖し
た。１×強度での全ブロス培養物を、圧縮空気によって
供給される画家のエアブラシを使用して、３つの１週齢
のカリフラワーおよび完全子葉期での芽キャベツ植物上
に、噴霧した。15〜25個の苗木／ポットの３反復実験物
を、処置当たり噴霧した。Quadris^TM（Zenecaからのア
ゾキシストロビン（azoxystrobin）殺真菌剤）をまた、
250ppmおよび125ppmの比率で、植物（処置あたり３個
体）に対して噴霧した。AQ713およびQuadris噴霧が乾燥
した後に、１〜５×10⁴胞子/mLで、ベト病菌、Peronosp
oraparasiticaの胞子懸濁液を、アブラナ属植物上に噴
霧した。植物を、15〜17℃に、24時間、感染のために保
持し、次いで、苗木を、20〜24℃で、６日間、インキュ
ベートした。ポットを、15〜17℃に、一晩戻して、試験
が評価されるまで病原体を胞子形成させた。各植物を、
０〜100%制御の規模に基づいて、疾病制御のパーセント
を見積ることによって、評価した。100%コントロール
は、胞子形成病変を伴わない植物である。反復実験のポ
ットで平均される結果を、以下の表12において示す。表12 【０１２７】【表１２】 AQ713は、３週間持続して、効果的にベト病を制御し
た。【０１２８】（実施例13：AQ713および市販の殺真菌剤
の相乗効果）AQ713を、10リットルの発酵器において、
ダイズベースの培地中で、72時間、増殖した。細菌培養
物を、滅菌水で、0.5×および0.25×濃度に希釈した。
１×、0.5×、および0.25×濃度で、培養物を、圧縮空
気によって供給される画家のエアブラシを使用して、３
つの１週齢のトウガラシ植物上に、噴霧した。３個体の
植物を、処置当たり噴霧した。Quadris^TM（Zenecaから
のアゾキシストロビン殺真菌剤）をまた、500ppm、250p
pmおよび150ppmの濃度で、植物（処置あたり３個体）に
対して噴霧した。さらに、１：１の比率におけるQuadri
s＋AQ713の全ブロス培養物の組合せを、トウガラシ植物
上に噴霧した（処置あたり３個体）。Quadrisを伴うお
よび伴わない処理を、以下の表13において概説する。１
×10⁶胞子/mLでの、Botrytiscinerea、灰色カビ菌の胞
子懸濁液を、AQ713およびQuadris噴霧が乾燥した後に、
トウガラシ植物上に噴霧した。植物を、20〜22℃で、３
日間、試験が評価されるまで保持した。灰色カビ病の発
病を、０〜５のスコアに対して評価した。５評価は、10
0%疾病を示し、一方０評価は、疾患なしを示す。結果
を、以下の表13において示す。表１３【０１２９】【表１３】結果は明らかに、QuadrisとAQ713との組合わせが、Quad
risまたはAQ713単独のいずれかよりも有意に良好に、灰
色カビ病を制御することを示す。【０１３０】本発明は、殺虫活性、抗真菌活性、および
抗細菌活性を示す、新規な抗生物質を産生するおよび代
謝物質を産生するBacillus subtilis株に関する。この
新規な株の上清は、有効な殺虫剤、抗真菌剤、および抗
細菌剤を含む。本発明において含まれるものはまた、こ
の上清において生成される溶媒抽出可能な、小分子量
（10,000ダルトン未満）の、コーンルートワームに活性
な代謝物質である。本発明において含まれるものはま
た、真菌および細菌感染、ならびにコーンルートワーム
の感染から植物を防御または処理する方法であり、この
方法は、抗生物質／代謝物質を生成する新規なBacillus
subtilis株、新規なBacillus subtilis株によって生成
される抗生物質／代謝物質、またはその組み合わせの有
効量を、植物に適用する工程を包含し、必要に応じて、
別の抗生物質を生成する細菌株および／または化学的な
農薬をさらに含有する。本発明はまた、新規なBacillus
subtilis株の培養物から得られる全ブロス培養物もしく
は上清を、単独でまたは化学農薬および／もしくは他の
生物制御剤と組合わせて使用する、真菌および細菌感染
を防止または処理するための方法を包含する。本発明は
また、agrastatin類と称される新規な抗真菌および抗細
菌化合物を包含し、ならびにＡ型iturin、plipastati
n、surfactin、およびagrastatinを含有する新規な組合
わせを包含する。植物を真菌および細菌感染およびコー
ンルートワーム(cornrootwarm)感染から処理または防御
する方法であって、新規なagrastatin類、ならびにＡ型
iturin、plipastatin、surfactin、およびagrastatinを
含有する新規な組合わせを投与する工程を包含する方法
が、提供される。【０１３１】【発明の効果】本発明により、殺虫活性、抗真菌活性、
および抗細菌活性を示す、新規な抗生物質を産生するお
よび代謝物質を産生するBacillus subtilis株が提供さ
れ、有効な殺虫剤、抗真菌剤、および抗細菌剤もまた提
供される。

【図面の簡単な説明】【図１】図１は、plipastatin抗生物質の構造を示す。【図２】図２は、AQ713代謝物質のHPLCクロマトグラム
を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者デニスキャロルマンカーアメリカ合衆国カリフォルニア 95616, デイビス，プラドレーン 3037 (72)発明者デスモンドリトジメネズアメリカ合衆国カリフォルニア 95695, ウッドランド，ペンダーガストストリート９ (72)発明者ランディージャイマッコイアメリカ合衆国カリフォルニア 95616, デイビス，ブレトンアベニュー 3212 (72)発明者ジミーエンショオージャラアメリカ合衆国カリフォルニア 95616, デイビス，ロラードドライブ 2905 (72)発明者パメラジィー．マローネアメリカ合衆国カリフォルニア 95616, デイビス，ビクトリア 3333 Ｆターム(参考） 4B065 AA19X AC14 BA16 BA24 CA24 CA34 CA48 4H045 AA10 BA15 CA11 DA83 EA06 FA72 FA73 GA01

Claims

【特許請求の範囲】【請求項１】Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ株
ＡＱ７１３、ＮＲＲＬアクセス番号Ｂ−２１６６１およ
び該株の全ての同定された特徴を有するそれらの変異体
の、生物学的に純粋な培養物。