DE3034843A1

DE3034843A1 - Verfahren zur herstellung von 10-deazaminopterin und dessen 10-alkylderivate

Info

Publication number: DE3034843A1
Application number: DE19803034843
Authority: DE
Inventors: Joseph Irving Sunnyvale Calif. De Graw; Francis Michael New York City N.Y. Sirotnak
Original assignee: SRI International Inc; Memorial Sloan Kettering Cancer Center; Stanford Research Institute
Current assignee: SRI International Inc; Memorial Sloan Kettering Cancer Center
Priority date: 1979-09-17
Filing date: 1980-09-16
Publication date: 1981-06-11
Also published as: US4393064A; JPS5651482A; US4369319A; FR2477152A1; FR2464956A1; DE3034843C2; JPH0340029B2; CA1139752A; FR2477152B1; FR2464956B1; GB2058770B; ZA805474B; BE885255A; AU6243980A; GB2058770A; US4433147A; JPH034553B2; JPH0334979A; AU540326B2

Description

Patentanwälte
Dipl. Ing. HanB-Jüryen LLüllgr Dr. rer. nat Thomas Berendt Dr.-Ing. Huns Leyh

Luclle-Gtaho-StratJe 38 0 β MBnchan 80

SRl Internütional 333 Ravenswood Avenue Menlo Park, CA 94025 V.St.A

Sloan Kettering Institute for Cancer Research .. _.

1275 York Avenue

New York, N.Y. 10021 V.St.A.

VERFAHREN ZUR HERSTELLUNG VON 1Ü-DEAZAMINOPTERIN UND DESSEN 1Q-ALKYLDERIVATE

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COPY

BESCHREIBUNG

Leukämie ist eins akute oder chronische Krankheit unbekannter Ursache des Menschen und anderer warmblütiger Tiere. Sie ist gekennzeichnet durch einen anormalen Anstieg der Anzahl von unreifen Leukocyten im Körpergewebe und im Blutkreislauf. Die Krankheit beeinträchtigt offensichtlich die blutbildenden Crgane und wird nach der Art von Leukocyten klassifiziert, die anormal reproduziert werden. Die Krankheit ist eine einer Anzahl von Formen von der neoplastischen Krankheit und die Entwicklung von Arzneimitteln zur Besserung oder Heilung der Krankheit hat die Aufmerksamkeit von Forschungsorganisationen über viele Jahre hindurch beschäftigt, ohne daß bis jüngst ein merklicher Erfolg erzielt wurde. Heute können viele Formen der Leukämie wirksam mit Arzneimitteln behandelt werden. Im Fall der Kombination einer Chemotherapie der akuten Lymphocytenleukämie bei Kindern wird ein großer Prozentsatz C50 - 60 %) fünf Jahre überlebender Patienten erzielt und die Krankheit wird nunmehr als heilbar eingeordnet.

In der DE-DS 27 09 506.3 ist zur Behandlung der Leukämie sowie anderer Krankheiten, einschließlich Ascitestumoren bei warmblütigen niederen Tieren das 1O-Deazaminopterin beschrieben, was eine entfernt, analoge Substanz zumPfethotrexate ist, welches gegenwärtig das ArzneimittelcOPlifeML zur klinischen Behandlung von Leukämie ist, wobei erwartet wird, daß diese Verbindung eine ähnliche Wirkung beim Menschen aufweist.

Die Erfindung schafft nunmehr 1O-Alkylderivate von 1O-Deazaminopterin, die ebenfalls zur Behandlung von Leukämie und anderer Krankheiten einschließlich Ascitestumoren bei warmblütigen niederen Tieren und erwartungsgemäß beim Menschen wirkt.

Die 10-Alkyl-10-deazaminopterinverbindungen gssmäß der Erfindung haben die Formel:

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NH₅,

,CH₂C ^

CH₂

COOH

CH₂

OOH

Bei der Verbindung 1Q-Deazaminopterin sind R. und R^ beide Wasserstoff. Bei den Alkylderivaten können entweder R. und R~ oder beide Alkylgruppen mit 1 bis etwa 8, vorzugsweise 1 oder 2 Kohlenstoffatomen sein. Wenn nur eine der Gruppen R,. und R~ eine Alkylgruppe ist, ist die andere ein Wasserstoffatom.

Beispiele für R- und R sind Methyl, Äthyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, Isobutyl, ssk-Butyl, tert-Butyl, Amyl, Iso-amyl, sek-Amyl, tert-Amyl, Hexyl, Iso-hexyl, Heptyl, Iso-heptyl, Octyl, Iso-octyl, 2-Äthylhexyl und tert-Octyl.

Die 1O-Alkyl-1O-Deazaminopterinverbindungen werden als neue Verbindungen angesehen.

Die Beziehungen zwischen N-Deazaminopterin' und dem N-1-O-M.ethylderivat von Aminopterin, Methotrexat, a?gibt sich aus folgender Formel:

COOH CONHCH

CH₂

0OH

Die Verbindung 4-Amino-4-dBoxy-10-deazapterinsäure, eine wichtige Zwischenverbindung bei der Synthese von 1O-Deazaminopterin, wurde zuerst von DeGraw, Brown, Kisliuk und Gaumont, gemäß Journal of Medicinal Chemistry,14, Seite 8BB C1971) beschrieben. Weiterhin

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ORIGINAL INSPECTED

^: ' JÖ'3-4843

haben DeGraw, Tsakotellis, Kisliuk und Gaumont im Journal of Heterocyclic Chemistry 8, Seite 105 [1971] berichtet über die wirksame Aktivität von 1O-Deazapterinsäure als Wachstumsinhibitor, ebenso wie das Tetrahydroderivat^gegen Streptococcus faecium, einem Organismus, der von Folsäure abhängt. Die Aktivität wurde durch Reduktion zur Tetrahydroverbindung shark erhöht. Dementsprechend wurde angenommen, daß die 2,4-Diamino-pteridine geprüft werden sollten, da man von ihnen annahm, daß sie besser in die Zelle eindringen. Unter den hergestellten 2,4-Diaminopteridinen befand sich auch 4-Amino-4-deoxy-10-deazapterinsäure, die Verbindung in Schema I, Reihe d, Seite 867 des erstgenannten Artikels.

Im Journal of Medicinal Chemistry 17, Seite 552 [1974) haben DeGraw, Kisliuk, Gaumont, Baugh und Nair über die Synthese und Antifolsäure-Aktivität von 1O-Deazaminopterin berichtet. Die antimicrobielle und Antitumor-Wirksamkeit cer kräftigen Inhibitoren für Dihydrofolsäure-Reduktase, Aminopterin und dessen N-1O-Methylderivat, Methotrexate, sind an sich bekannt und es wurden viele analoge Verbindungen hergestellt, um die potentielle Wirksamkeit, das Eindringvermögen in die Zelle und die Toxizitätseigenschaften dieser Verbindungen weiter zu verbessern. Als Teil eines fortschreitenden Programms zur Erforschung der Beziehungen zwischen Struktur und Wirksamkeit bei Folsäureanalogen interessierten sich die Verfasser De Graw et al für die Wirkungen des Ersatzes des Stickstoffatoms in der Seitenkette von Aminopterin und berichteten über die Synthese und die biologische Wirksamkeit von 1O-Deazaminopterin in dieser Arbeit. In Fortführung dieser Arbeiten mit 1O-Deazaminopterin und dessen 1O-Alkylderivate wurde nun gefunden, daß diese eine antileukämische Wirksamkeit besitzen und zur Behandlung verschiedener Ascitestumorsysteme brauchbar sind, was Gegenstand der Erfindung ist.

Das Verfahren zur Behandlung von Leukämie und Ascitestumoren gemäß der Erfindung umfaßt die Verabreichung einer therapeutischen nicht-toxischen Menge einer 1O-Alkyl-1O-cUazaminopterinverbindung gemäß obiger Definition als solcher oder in Form

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eines pharmakologisch unbedenklichen Salzes an ein warmblütiges Tier mit einem anormal hohen Anteil von Leukocyten oder anderen Anzeichen für die Krankheit. Diese Salze werden mit ein oder mehreren freien NH₂~Gruppen der 1O-Alkyl-1O-deazaminopterinverbindung gebildet.

Das Verfahren gemäß der Erfindung zur Herstellung der 10-Deazaminopterinverbindungen, einschließlich dieser Verbindung selbst und der 1O-Alkylderivate umfaßt eine Synthese mit folgenden Stufen, ausgehend von Flethoxymethyl-acetylen CMethyl-propargylether] :

CH₃OCH₂C s CH -g£-^tBu> CH₃OCH = C= CH₂

Stufe 1

CH₃OCH=C=CH₂ -i~r> CH₃OCH=CHCH₂Cl

Stufe 2

H-C-(OVcOOH

CH₃OCh=CHCH₂CI

Stufe 3

Stufe 4

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. ORiCfNAL INSPECTED

NH₃

Stufe 6

NH

CH₂C-^O)-CONHcIh ^NaQH

cI

0OEt

NH₂

H₂N

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R₁ COOH

.CH₂C-^O)-CONHCH . R₂ CH,

CH₂

■ COOH . COPY

- ir- Kh / ■'■_':'

Die Gruppen R und R-, sind Wasserstoff oder Alkylgruppen mit- eins bis etwa acht Kohlenstoffatomen, wie oben in Formel I.

Stufe 1 besteht im wesentlichen aus einer Umlagerung des Methylpropargyl-äthers zum entsprechenden 1-MethDxy-allen. Die Umlagerung schreitet unter wasserfreien Bedingungen in Gegenwart \on Alkali, wie z.B. einem Alkalimetalloxid Dder anorganischen' Alkali oder Alkalimetall unter Zusatz von Alkohol fort. Ein niedriger Alkohol, wie ··. Methylalkohol, Äthylalkohol, Propylalkohol und. Butylalkohol und die entsprechenden iso-, sekundär- ind tertiär-Isomeren können in Form des Alkoxids tenutzt werden. Atrium und Kalium sind die bevorzugten Alkalimetalle. Die Reaktion schreitet bei erhöhter Temperatur fort und die Anwendung von Rückflußkühlung ist ein zweckmäßiges Verfahren zur Regelung der Temperatur. Sauerstoff sollte aus dem Reaktionsgemisch ausgeschlossen werden, um eine Reaktion mit den ungesättigten Gruppen zu vermeiden. Eine inerte Atmosphäre, wie Stickstoff, kann verwendet werden.

In Stufe 2 wird Chlorwasserstoff an die alienische Doppelbindung von 1-Methoxyalien addiert. Es kann jedes ÄLkoxyallen verwendet werden, wie 1-Ethoxyallen. Die Reaktion schreitet unter wasserfreien Bedingungen bei niedrigen Temperaturen fort. Die Zugabe wird bei niedriger temperatur durchgeführt, unterhalb etwa -25 C und zweckmäßig unter -70 C, wobei die Verbindung

-C

CH₃S-CHCH=CH₂

erhalten wird. Danach wird die Temperatur auf uC ansteigengelassen, um eine Umlagerung zu

CH₃OCH = CHCH₂Cl

zu verursachen.Diese Reaktion erfordert auch den Ausschluß von Sauerstoff und kann daher in einer inerten Atmosphäre, wie Stickstoff, durchgeführt werden. Eine Lösung von wasserfreiem Chlorwasserstoff in einem inerten Lösungsmittel, wie Diethyläther, wird langsam zur Lösung des 1-Methoxyallens im gleichen Lösungsmittel zugegeben. Das Reaktionsgemisch kann direkt mit in Stufe 3 verwendet werden.

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;atiregruppe

In Stufe 3 wird das C1O-Kohlenstoffatom der Benzoesäriregruppe von 1D-Deazaminopterin durch das 3-Chlor-1-methoxy-propen aus Stufe 2 alkyliert. Das Alkylierüngsverfahren benötigt die Reaktion einer p-Alkylbenzoesäure mit einem Lithium-alkylamid als katalysator., um ein aktives Anion als Reagenz zu bilden. Die p-Alkylgrup· pe hat die Struktur

^R1

CH-

^R2

entsprechend der Gruppe C10 am 10-DA mit einem freien Wasserstoffatom. Dieses Verfahren [das auch eine Ionisierung das Carboxylgruppenprotons verursacht) benötigt niedrigere Temperaturen, bei welchen sie langsam fortschreitet, z.B. bis zu 3D Stunden Dauer. Die Reaktion wird vorzugsweise unter wasserfreien Bedingungen unter Stickstoff in Gegenwart eines inerten polaren Lösungsmittels, wie Tetrahydrofuran, durchgeführt. Die Gegenwart von Hexamethylphosphorsäuretriamid CHi⁷IPA) als Ko-Lösungsmittel beschleunigt den Ionisierungsprozess. Z.B. wird in dem Fall, wenn R. und R~ beides Alkylgruppen sind, HMPA-Ko-Lösungsmittel und eine Reaktionstemperatur um 15 bis 25 C benötigt, um eine vollständige Ionisation innerhalb 15 bis 30 Stunden zu erzielen. Nach der Bildung des aktiven Anions kann das 3-Chlor-i-methoxy-propen langsam zu dem Reaktionsgemisch mit dem Anionenreagenz zugegeben werden, wiederum bei Raumtemperatur oder darunter. Da das reaktive Anion stark gefärbt ist und das Reaktionsprodukt farblos ist, kann die Reaktion durch die Farbänderung verfolgt werden und ist vollständig, wenn das Reaktionsgemisch farblos ist. Die Lösungsmittel können danach abgezogen werden und das Reaktionsprodukt aufgearbeitet werden.

In Stufe 4 der Synthese wird eine Brom-Acetaldehyd-Gruppe durch ·■ Bromierung und Hydrolyse des Methoxypropylen-Substituenten des Reaktionsprodukts von Stufe 3 gebildet. Diese Reaktion verläuft bei einem pH-Wert im Bereich von etwa 7 bis etwa 9. Da die wässrige Reaktionslösung aus Stufe 3 alkalisch ist, wird sie mit gasförmigen Kohlendioxid carbonatisiert, um den pH-Wert innerhalb

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des Bereichs von etwa 8 bis etwa 9 zu reduzieren. Die Reaktion kann bei einer Temperatur im Bereich von etwa 0 bis etwa 50^DC 'durchgeführt werden, wird aber vorzugsweise" bei 0 bis 5 C djrchgeführt.

Die Reaktion schreitet unter Addition von Brom an der Äthylengruppe fort und das Brornrnethoxid wird zu einer Aldehydgruppe hydrolytisch umgewandelt, unter Abspaltung von Ffir. Die Gegenwart eines inerten Lösungsmittel, wie Dichlor-methan,erleichtert die Abspaltung des Broms und die Beobachtung cer Änderung der Bromfärbung. Sie ist vollständig, wenn die Aufnahme von Brom den theoretischen Wert für die Addition von einem /tomBrom an das Reaktionsprodukt von Stufe 3 erreicht. Von Zeit zu Zeit kann die Zugabe eines Puffers, wie die von festem Natriumbicarbonat, erforderlich sein, um den pH-Wert oberhalb 7 zu halten. Das Reaktionsgemisch wird dann durch Zugabe von wässriger Salzsäure auf einen pH-Wert von 2 angesäuert. Das Reaktionsgemisch wird durch Extraktion in ein organisches Lösungsmittel und Entfernung des Lösungsmittels aufgearbeitet, wobei d as rohe Bromacetaldehydsäure-Reaktionsprodukt erhalten wird, dessen Formel im Reaktionsschema oben angegeben ist.

In Stufe 5 wird dieses Reaktionsprodukt mit 2,4,5,6-rTetraaminopyri- Kixäa in wässriger Essigsäure umgesetzt und die 5, 6-Aminogruppen dieser Verbindung mit der Aldehydgruppe ind dem Bromatom des Raktionsprodukts von Stufe 4 zyklisiert, wobei sich der Dihydropteridinring bildet. Der Pteridinring wird dann in Stufe 6 zu 4-Amino-4-desoxy-1 O-Deazapterinsäure durch Reaktion mit. Kaliumj odid/Ood CKl 3 dehydriert.

Das als Ausgangsmaterial.'in Stufe 5 verwendete 2,4, 5, BTTetraaminopyrirnidinsulfat wird zuerst mit Bariumchlorid und Wasser zur Entfernung der Sulfatgruppe umgesetzt, wobei Bariumsulfat als Niederschlag ausfällt. Dieser kann abfiltriert werden und das Filtrat kann zur Reaktion in Stufe 5 verwendet werden.

Die Zyklisierungsreaktion in Stufe 5 schreitet bei einem saueren pH-Wert von vorzugsweise im Bereich von 3 bis 5 fort, weshalb ein

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saures Lösungsmittel, wie wässrige Essigsäure, verwendet werden kann. Wässrige Essigsäure ergibt einen saueren pH-Wert und der Effekt von Essigsäure als organisches Ko-Lösungsmittel trägt zur Solubilisierung der Bromaldehyde bei. Die Reaktion schreitet bei mäßig erhöhten Temperaturen im Bereich von 35 bis 75 C fort und ergibt die Bildung des Dihydropteridins.

Dieses Reaktionsprodukt in Stufe 6 wird mit KJ ~ dehydriert, das durch Lösen von Jod in einer wässrigen Lösung von Kaliumiodid erhalten wird. Das KJ- kann langsam zum Dihydrpteridin zugegeben werden und die Reaktion kann anschließend durch Entfärbung der KJ^-Lösung verfolgt werden. Wenn die Entfärbung abklingt ist die Reaktion vollständig. Andere geeignete Oxidationsmittel, wie Wasserstoffperoxid oder Kaliumpermanganat, könne η verwendet werden .

Das Reaktionsprodukt ist im Reaktionsgemisch unlöslich und fällt aus. Beim Aufarbeiten kann das Material abfiltriert, gewaschen und getrocknet werden. Gegebenenfalls tenn der Niederschlag in verdünnter Amoniumhydroxidlösung aufgenommen werden und erneut mit verdünnter Säure gefällt werden, wie nit Essigsäure.

Die erhaltene 4-Amino-4-desoxy-1O-deazapterinsäure wird dann in zwei Stufen zur 10-deazaminopterinverbindung in den Stufen 7 und 8 überführt. Zunächst wird das Produkt mit Isobutylchlorameisensäureester und anschließend mit Diethyl-L-glutamat umgesetzt, wobei die Pteroinsäuregruppe in das entsprechende Glutamid als Diethylester überführt wird und die veresternden Äthylgruppen werden dann durch Reaktionen mit verdünnter wässriger Alkalilösung, wie wässrigem Natriumhydroxid, abhydrolisiert, wobei die glutamidfreie Disäuregruppe der 1O-Deazaminopterinverbindung gebildet wird.

Die Reaktion in Stufe 7 benötigt einen Säureakzeptor, um den freigesetzten Chlorwasserstoff aufzunehmen. Die Reaktion in Stufe 7 kann mit anderen Alkyl-Chlorameisensäureestern, wie dem Methyl-Äthylester etc. durchgeführt werden. Säureakzeptoren sind vorzugsweise organische Basen, wie tertiäre Amine oder substituierte Pyridine, z.B. Triethylamin, Tributylamin, N-Methylmorpholin, Collidin und Lutidin. Das Diethylglutamat kann als freie Base

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oder als Hydrochloridsalz in Gegenwart eines weiteren Äquivalents des Säureakzeptors zugegeben werden.

Die Reaktion verläuft bei Raumtemperatur oder darunter vorzugsweise bei 0 bis -5 C und es kann ein inertes Lösungsmittel verwendet werden. Der Isobutylchlorameisensäureester kann langsam zum Reaktionsgemisch zugegeben werden und nach vollständiger Reaktion können das Diethyl-L-glutamat, das organische Amin und weiteres Lösungsmittel zugegeben werden und die Reaktion kann bei gleicher Temperatur bis zum vollständigen Ablauf fortgesetzt werden.

Das Reaktionsgemisch wird aufgearbeitet durch Entfernen des Lösungsmittels durch Verdampfen, vorzugsweise im Vacuum, und Rühren des Rückstands mit einer mild-alkalischen wässrigen Lösung, wie wässrigem Natriumbicarbonat. Der Diester ist unlöslich und kann Filtrieren isoliert werden, während nicht umgesetzte Pterinsäure in alkalischer Lösung sich löst.

Die Hydrolyse der veresternden Äthylgruppen wird mit wässrigem Alkali bei Raumtemperatur, oder darüber durchgeführt. Der Diester kann in einem geeigneten Lösungsmittel gelöst werden, wie 2-Flethaxyethanol und kann in Gegenwart von wässrigem Alkali gehalten werden, bis die' Hydrolyse vollständig ist. Die saure 1O-Deazaminopterinverbindung ist in wässrigem Alkali löslich und kann dann durch Zugabe von Säure, wie Eisessig, ausgefällt werden. Der Niederschlag kann iaoliert, gewaschen und getrocknet werden.

Die folgenden Beispiele erläutern die Anwendung der Synthese auf die Herstellung von 10-Deazaminopterinverbindungen.

Beispiel 1

1-Flethoxy-allen [2):

Ein Gemisch von 100 cm Flethylpropargylether (getrocknet über einem 4A~Sieb] und 3 g Kalium-t-butoxid wurde unter Rückflußbedingungen vier Stunden unter einem sehr geringen Stickstoffstrom gerührt» Das Infrarotspektrum zeigte, daß die Umlagerung praktisch vollständig war. Die Flüssigkeit wurde durch eine Kurzwegvorrichtung in einem mit Trockeneis gekühlte Vorlage destilliert, wobei

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yiethoxy-allenj (R-Sp
wurden.

72 g 1-Methoxy-allenj (R-Spektrum 1950 und 850 cm" ₍ erhalten

3-Chlor--i-methoxypropeni C3):

Ein Strom von trockenem HCl wurde in 700 cm wasserfre iem Äther, der in einem Eisbad gekühlt wurde, eingeleitet. Nach Zugabe von 45 g HCl wurden weitere 267 an frischer Äther zu-

gegeben. Gleiche Teile aus 541 cm [25,2 g, 0,69 Mol HCl) wurden dann unter Stickstoff tropfenweise zu einer Lösung von 48,2 g CO, 69 Mol) 1-Methoxy-allen in 240 cm³ Äther bei -78°C zugegeben. Die Zugabe erforderte 2,5 Stunden uid die Innentemperatur wurde unter -7O⁰C gehalten. Nach 30 Minuten wurde die Lösung in einem Kühlschrank bsi 0 bis 5⁰C 24 Stunden aufbewahrt und in der nächsten Stufe unmittelbar verwendet.

4-Amino-4-deso>f:y-1 Dtieazapterinsäure C7) :

Es wurde eine Lösung von 192,8 cm" C1,38 Mol) frisch destilliertes Diisopropylamin in 1928 cm trockenen THF auf 0 bis 5⁰C gekühlt

3
und eine Lösung von 862 cm M,38 Mol) 1,6 m-Butyllithium in Hexan wurde tropfenweise zugegeben, wobei die Temperatur um 0 bis 5 C gehalten wurde..Das Gemisch wurde weitere 30 Minuten gerührt, wonach eine Lösung von 93,5 g CO, 69 MjI Krockene Methyl-

3 benzoesäure (R. und R„ = H) in 385 cm trockenem THF tropfenweise bei 0 bis 5⁰C zugegeben wurde. Das rote Gemisch wurde bei dieser Temperatur 3,5 Stunden gerührt und anschließend 24 Stunden in einem kalten Raum auf 0 bis 5⁰C gehalten. Die Ätherlösung von 3-Chlor-1-methoxypropen wurde dann tropfenweise über 1,5 Stunden bei 0 bis 5 C zugegeben. Die rote Farbe verschwand vollständig am Ende des Zugabezeitraums. Nach zwei Stunden wurden die Lösungsmittel im Vacuum abgezogen und der Rückstand zwischen 1 Liter Wasser und 1 Liter Äther verteilt. Der wässrige Teil, der Produkt (4) enthielt, wurde gekühlt, mit gasförmigen CO₉ behandelt bis der

pH-Wert 8 bis 9 betrug und dann 240 cm CH₃Cl₂ zugefügt. Dann wurde bei 0 bis 5 C tropfenweise unter Rühren ein Mol Brom in CH₃Cl₂ zugefügt, bis die rote Färbung bestehen blieb (87 % Bromaufnahme wurde beobachtet). GelegenÜlich wurde festes Natrium

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bicarbonat zugegeben, um den pH-Wert aif 7 bis 8 zu halten. Das Gemisch wurde auf einen pH-Wert etwa 2mit 6n HCl ange-

säuert (etwa 50 cm ). Die Schicht mit CH₉Cl₉ wurde entfernt

und das wässrige Gemisch mit weiteren 200 cm CH₉Cl₉ strahiert. Die kombinierten organischen Extrakte wjrden über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vacuum eingedampft, wobei 180,2 g eines arrange halbfesten Rückstands der rohen Bromaldehydsäure (5) zurückblieb.

Ein Gemisch aus 156,2 g (0,66 Mol) 2,4,5,6-Tetraaminopyrimidinsulfat (Aldrich), 160,3 g (0,65 Mol) BaCl₂"2H₂0 und 3 Liter Wasser wurde bei Raumtemperatur 1,5 Stunden gerührt. Das Gemisch wurde auf 7O⁰C erwärmt, heiß filtriert und das Filtrat auf Raumtemperatur gekühlt. Das Filtrat wurde auf pH-Wert 3 bis 4 mit 10%iger Natronlauge eingestellt, auf 45°C erwärmt,

3 10 Minuten mit dem Bromaldehyd in 1075 cm Eisessig behandelt. Das Gemisch wurde bei 45 bis 5O⁰C 1,5 Std. gerührt, dekantiert um unlösliche Gummen zu entfernen und auf Raumtemperatur gekühlt« Die Lösung, die das Dihydropteridin. (6) anthielt, wurde tropfenweise mit wässriger KJ--Lösung (aus 81,9 g Jod und

3
156,2 g KKaliumjodid sowie 1075 cm Wasser] behandelt, wobei sich die Lösung nach Zugabe von 700 ml nicht mehr entfärbte. Die Lösung wurde 24 Stunden stehen gelassen und der gelbe Niederschlag gesammelt, mit Wasser und Äthanol gewaschen und getrocknet, wobei 36 g Produkt erhalten wurden. Das Material

3 3

wurde mit 1800 cm Wasser, das 20 cm konzentriertes Ammoniumhydroxid enthielt, 2 Stunden gerührt und filtriert. Das Filtrat wurde mit Essigsäure angesäuert, wobei das Produkt (7] ausfiel das gesammelt, mit Wasser gewaschen und getrocknet wurde wobei 25,5 g erhalten wurden. A.max im UV-Spektrum (pH 13) 230 nm (22 100)

253 (25 400), 370 (6400). Die Ausbeute betrug 12 %, aber Ausbeuten bis zu 25 % wurden in ähnlichen Ansätzen erzielt.

1Q-Deazaminopterin (9):

Ein Gemisch aus 18,1 g (0,058 Mol) Pterinsäure (7), 15,8 cm³ Triethylamin (0,116 Mol) und 900 cm³ trockenes DMF wurde auf 80 C unter Rühren erwärmt, bis eine fast vollständige Lösung erhalten wurde. Die Lösung wurde auf 0 bis 5⁰C im Eisbad ge-

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kühlt und tropfenweise mit 1 5 cm³ Isobutylchlorameisensäureester (0,116 Mol) behandelt. Nach 1,5 Stunden bei 0 bis 5°C wurde das Gemisch mit einem Gemisch aus 28,0 g (0,116 Mol) Diethyl-L-glutamat-hydrochlorid, 15,8 cm³ Triethylamin (0,116 Mol) und 100 cm³ trockenem DMF behandelt. Das Gemisch wurde zwei Stunden im Eisbad und 24 Stunden bei Raumtemperatur gerührt.

Das Dimethylformamid wurde unter vermindertem Druck (etwa 1 mm) verdampft und der Rückstand mit 400 cm³ 5?oiger Natriumbicarbonatlösung und 400 cm³ Äther eine Stunde gerührt. Das Gemisch wurde filtriert und der Filterkuchen mit Wasser und Äther gewaschen und getrocknet, wobei 26 g des Diesters (8) zurückblieben. Das Ansäuern der Bicarbonatlösung ergab nur 2,8 g rückgewonnene Pterinsäure (7).

Der Diester (26 g) wurde in 200 cm' 2-Methoxyäthanol gelöst und mit 100 cm³ In-NaOH behandelt. Die Lösung wurde bei Raumtemperatur 4,5 Stunden aufgehoben und dann mit 1 Liter Wasser verdünnt. Die Lösung wurde mit Eisessig angesäuert, bis ein Niederschlag vollständig ausfiel. Der Niederschlag wurde abfiltriert. Der Filterkuchen wurde in Wasser unter Rührung suspendiert, filtriert und getrocknet, wobei 15,5 g rohes 10-Deazaminopterin zurückblieben. Eine Verteilungschromatographie zeigte an, daß 91 So 10-Deazaminopterin (9) und 9 % nicht umgesetzte Pterinsäure vorhanden war. Die Ausbeute betrug 61 %. ^m a χ in UV-Spektrum (pH 13) 254 η m (33 170), 375 (7460).

Die endliche Reinigung von 10-DA wurde durch Flüssigkeits-Chromatotjraphie an einem Absorptionsmittel mit umgekehrter Phase durch Elution mit Wasser oder Bifferlosung beim pH-Wert 6 bis 8 bewerkstelligt,

Die Pterinsäure und das 10-Deazaminopterin waren identisch mit bekannten Verbindungen, die durch andere Verfahren vorher hergestellt waren, gemäß der Verteilungschromatographie und UV-Spektrum.

Beispiel 2

1-Mcthoxy-allen

Ein Gemisch von 100 cm³ Methylpropargyläther (getrocknet über 4A-Siebe) und 3 g Kalium-t-butoxid wurde unter Rückflußbedingungen 4 Stunden unter sehr schwachem Stickstoffstrom gerührt.

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Das Infrarotspektrum zeigte, daß die Umlagerung praktisch vollständig war. Danach wurde die Flüssigkeit durch eine Kurzwegvorrichtung in eine mit Trockeneis gekühlte Vorlage destilliert, wobei 72 g 1-Methoxy-allen;TR-Spektrum 1950 und 850 cm, erhalten wurden.

3-Chlor ,--1 -fflethoxypropen

Ein Strom von trockenem Chlorwasserstoff wurde in 700 cm³ wasserfreiem Äther in einem Eisbad geleitet. Nach 45 g HCl-Zugabe wurden weitere 267 cm³ frischer Äther zugefügt. Ein aliquoter Teil von 541 cm³ (25,2 g, 0,69, Mol HCl) wurden dann tropfenweise unter Stickstoff zu einer Lösung von 48,2 g (0,69 Mol) 1-Methoxy-allen in 240 cm³ Äther bei-78°C zugegeben. Die Zugabe erforderte 2,5 Stunden und die Innentemperatur wurde unter -70 C gehalten. Nach 30 Minuten wurde die Lösung in einem Kühlschrank bei 0 bis 5 C 24 Stunden aufgehoben und direkt in der nächsten Stufe verwendet.

4-Amino-4-desoxy-10-methyl~1Q-deazapter insäure

Eine Lösung von 192,8 cm³ (1,38 Mol) frisch destilliertes Diisopropylamin in 1928 cm³ trockenem THF wurde auf 0 bis 5 C gekühlt und eine Lösung von 862 cm³ (1,38 Mol) 1,6 m Butyllithium in Hexan wurde tropfenweise zugefügt, wobei die Temperatur um 0 bis 5 C gehalten wurde. Das Gemisch wurde weitere 30 Minuten gerührt und danach eine Lösung von 103,5 g (0,69 Mol) trockener p-Äthylbenzoesäure (R₁ =H, R„ =CH_T) in 385 cm³ trockenen THF tropfenweise bei 0 bis 5⁰C zugefügt. Das rote Gemisch wurde bei dieser Temperatur 3,5 Stunden gerührt und dann bei 0 bis 5⁰C in einem kalten Raum 21 Stunden aufbewahrt. Die Ätherlösung von 3-Chlor-1-methoxypropen wurde dann tropfenweise über 1,5 Stunden bei 0 bis 5 C zugefügt, wobei die rote Färbung vollständig am Ende der Zugabe verschwand. Nach 2 Stunden wurden die Lösungsmittel im Vacuum entfernt und der Rückstand zwischen 1 Liter Wasser und 1 Liter Äther verteilt. Die wässrige Teillösung wurde gekühlt, mit gasförmigen CO,, behandelt, bis der pH-Wert 8 bis 9 betrug und 240 cm³ CH Cl zugefügt. Tropenweise wurde bei 0 bis 5⁰C unter Rühren 1 Mol Brom in CH₂Cl₂ bis die rote Färbung blieb (85 !'0 Aufnahme von Brom beobachtet) zugefügt. Festes Natriumbicarbonat wurde gelegentlich zugegeben, um den pH-Wert bei 7 bis 8 zu halten. Das Gemisch wurde auf den pH-Wert etwa

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2 mit 6n Hol ( etwa 50 cni^J) angesäuert. Die CH-Cl -Schicht wurde abgezogen und der wässrige Teil mit weiteren 200 cm³ ChLCl₂ extrahiert. Die kombinierten organischen Extrakte wurden über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vacuum eingedampft, wobei ein orange halbfester Rückstand der rohen Bromaldehydsäure zurückblieb.

Es wurde ein Gemisch aus 156,2 g (0,66 Hol) 2,4,5,6-Tetraaminopyrimidinsulfat (Aldrich), 160,3 g (0,65 Mol) BaCl '2H₂O und

3 Liter Wasser 1,5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Gemisch wurde auf 70 C erwärmt, heiß filtriert und das Filtrat auf Raumtemperatur gekühlt. Das Filtrat wurde auf den pH-Wert 3 bis 4 mit 10 ?oiger Natronlauge eingestellt, auf 45⁰C erwärmt und über 10 Minuten mit dem Bromaldehyd in 1075 cm³ Eisessig behandelt. Das Gemisch wurde 1,5 Stunden bei 50 C gerührt, dekantiert zur Entfernung von unlöslichem Gummi und auf Raumtemperatur gekühlt. Die Lösung, die das Dihydropteridin enthielt, wurde tropfenweise mit wässrigem KJ, behandelt ( aus 81,9g Jod, 156,2g Kaliumjodid und 1075 cm³ Wasser), bis die Lösung entfärbt wurde. Die Lösung 24 Stunden stehengelassen und der gelbe Niederschlag gesammelt und mit Wasser und Äthanol gewaschen. Das Material wurde mit 1800 cm³ Wasser, das 20 cm³ konzentriertes Ammoniumhydroxid enthielt, 2 Stunden gerührt und filtriert. Das Filtrat wurde mit Essigsäure angesäuert, um das Produkt auszufällen, das gesammelt, mit Wasser gewaschen und getrocknet wurde, wobei 32 % Ausbeute erhalten wurden,mit folgender Analyse:

Formel Analyse 0,1 n-HCl 0,1 N-NaOH (MW) Berechnung Gefunden Λ max nm (E) λ max. nm (E)

C, ,H„,N,0„ C 54,69 C 54,39 242(27 995) 255(24 294)

Io Io 6 L

'3/2 H₂O H 5,45 H 5,05

(351,370) N 23,92 N 23,95 338(9 303) 369(6 741)

IO-Methyl-10-deazaminopterin

Ein Gemisch von 20,4 g (0,058 Hol) Pterinsäure, 15,8 cm³ Triethylamin (0,116 Mol) und 900 cm³ trockenes DMF wurde auf 80 C unter Rühren erwärmt, bis eine fast vollständige Lösung erzielt wurde. Die Lösung wurde auf 0 bis 5 C im Eisbad gekühlt und tropfenweise mit 15 cm³ Isobutylchlorameisensäureester (0,116 Mol) behandelt. Nach 1,5 Stunden bei 0 bis 5⁰C wurde das

. ./16

130024/0677

303Α9Ά3

Gemisch mit einem Gemisch aus 28,0 g (0,116 Mol) Diethyl-L-glutarnathydrochlorid, 15,8 cm³ Triethylamin (0,116 Mol) und 100 cm³ trockenes DMF behandelt. Das Gemisch wurde zwei Stunden im Eisbad und 24 Stunden bei Raumtemperatur gerührt.

Dimethylformamid wurde unter vermindertem Druck (etwa 1 mm) abgedampft und der Rückstand mit 400 cm³ 5 ?oiger Natriumbicarbonatlösung und 400 cm³ Äther eine Stunde gerührt. Das Gemisch wurde filtriert und der Filterkuchen mit Wasser und Äther gewaschen und getrocknet, wobei der Diester zurückblieb.

Der Diester wurde in 200 cm³ 2-Methoxyäthanol gelöst und mit 100 cm³ 1n Natronlauge behandelt. Die Lösung wurde bei Raumtemperatur 4,5 Stunden gehalten und dann mit 1 Ltr. Wasser verdünnt. Die Lösung wurde mit Eisessig angesäuert bis zur vollständigen Niederschlagbildung. Der Niederschlag wurde abfiltriert. Der Kuchen wurde erneut in Wasser unter Rühren suspendiert, filtriert und getrocknet. Hierbei wurden 10-Methyl-10-deazaminopterin mit 90 % 10-Methyl-10-deazaminopterin und 10 %w]jreagierter Pterinsäure gemäß Verteilungschromatographie erhalten. Die Ausbeute betrug 38 %.

Nach Reinigung durch präparative Verteilungschromatographie zeigte das Produkt folgende Analyse:

Formel Analyse 0,1n-HCl 0,1 H-NaOH

(MW) Berechnung Gefunden λ max. nm (E) Kmax. nrn (E)

C₂₁H₂₃N₇O₅ C 52,01 C 52,07 242 (29 612) 255 (30 465) •7/4 H₂O H 5,51 H 5,12

(484,989) N 20,22 N 19,88 338 (10 318) 371 (7 433)

Beispiel III

1-Methoxy-allen

Ein Gemisch aus 100 cm³ Methyl-propargyläther ^1 ) getrocknet über 4A-Sieb)und 3 g Kalium-t-Liutoxid wurde 4 Stunden unter einem sehr geringen Stickstoffstrom und Rückflußbedingungen gerührt. Das Infrarotspektrum zeigte eine praktisch vollständige Umlagerung. Die Flüssigkeit wurde durch eine Kurzwegvorrichtung in eine mit Trockeneis gekühlte Vorlage desülüer.t. ΛφψΑ 72g 1-Methoxy-allen; IR-

../17

Spektrum 1950 und 850 cm" erhalten wurden.

3-Chlor-i-methoxypropen

Ein Strom von trockenem Chlorwasserstoff wurde in 700 cm³ wasserfreiem Äther, der in einem Eisbad gekühlt wurde, eingeleitet. Nach Zugabe von 45 g HCl wurden weitere 267 cm³ frischer Äther zugegeben. Ein aliquoter Teil von 541 cm³ (25,2 g, 0,69 Mol HCl) wurde dann tropfenweise unter Stickstoff zu einer Lösung von 48,2 g (0,69 Mol) 1-Methoxyallen in 240 cm³ Äther bei -78 C zugegeben. Die Zugabe erforderte 2,5 Stunden und die Innentemperatur wurde unter -70 C gehalten. Nach 30 Minuten wurde die Lösung in einem Kühlschrank bei 0 bis 5 C 25 Stunden gehalten und direkt in der nächsten Stufe verwendet.

4-Amino-4-desoxy-10-äthyl-10-deazapterinsäure

Eine Lösung von 192,8 cm³ (1,38 Mol) frisch destilliertes Diisopropylamin in 1928 cm³ trockenem THF wurde auf 0 bis 5 C gekühlt und eine Lösung von 862 cm³ (1,38 Mol) 1,6m Butyllithium in Hexan wurde tropfenweise zugegeben, wobei die Temperatur um 0 bis 5 C gehalten wurde. Das Gemisch wurde weitere 30 Minuten gerührt und es wurde eine Lösung von 113 g (0,69 Mol) trockener p-Propylbenzoesäure (R. =H, R„ =C₉H,) in 385 cm³ trockenem THF tropfenweise bei 0 bis 5 C zugefügt. Das rote Gemisch wurde bei dieser Temperatur 3,5 Stunden gerührt und dann bei 0 bis 5 C in einem kalten Raum 25 Stunden belassen. Die Ätherlösung von 3-Chlor-1-ffiethoxypropen wurde dann tropfenweise über 1,5 Stunden bei 0 bis 5 C zugefügt. Das Verschwinden der roten Farbe erfolgte vollständig am Ende der Zugabe. Nach 2 Stunden wurden die Lösungsmittel im Vacuum entfernt und der Rückstand zwischen 1 Liter und 1 Liter Äther verteilt. Der wässrige Teil wurde abgekühlt, mit gasförmigen C0_ behandelt, bis der pH-Wert 8 bis 9 betrug und sodann 240 cm³ CH Cl zugefügt. Danach wurden tropfenweise unter Rühren bei 0 bis 5 C 1m Brom in CH₂Cl₂ zugefügt, bis die rote Farbe blieb (35 % Bromaufnahme beobachtet). Festes Natriurnbicarbonat wurde in Abständen zugefügt, um den pH-Wert auf 7 bis 8 zu halten. Das Gemisch wurde auf einen pH-Wert von etwa 2 mit 6n Salzsäure (etwa 50 cm³) angesäuert. Die Schicht von CH₂Cl₂ wurde abgezogen und die wässrige Lösung mit weiteren 200 cm³ CH₉Cl₇ extrahiert. Die kombinierten organischen Extrakte wurden über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vacuum eingedampft, wobei ein orange

../18 τ

sirupartiger Rückstand der rohen Bromaldehydsäure zurückblieb.

Es wurde ein Gemisch von 156,2 g (0,66 Mol) 2,4,5,6-Tetraaminopyrimidinsulfat (Aldrich), 160,3 g (0,65 Mol) BaCl₂*2H₂O. und 3 Liter Wasser bei Raumtemperatur 1,5 Stunden gerührt. Das Gemis-ch ■wurde auf 70⁰C gewärmt, heiß filtriert und das Filtrat auf Raumtemperatur gekühlt. Das Filtrat wurde auf den pH-Wert 3 bis 4 mit 10 ?iiger Natronlauge eingestellt, auf 45°C gewärmt und 10 Minuten mit dem Bromaldehyd in 1075 cm³ Eisessig behandelt. Das Gemisch wurde 1,5 Stunden bei 50 C gerührt, zur Entfernung von unlöslichem Gummi dekantiert und auf Raumtemperatur gekühlt. Die Lösung, die das Dihydropteridin enthielt,, wurde tropfenweise mit wässrigem KJ-, behandelt (aus 81,9 g Jod, 156,2 g Kaliumiodid und 1075 cm³ Wasser) bis das KJ-, entfärbte. Die Lösung wurde 24 Stunden stehengelassen und der gelbe Niederschlag wurda gesammelt, mit V/asser und Äthanol gewaschen und getrocknet. Das Material wurde in 1800 crn³ Wasser gerührt, welches 20 cm³ konzentriertes Ammoniumhydroxid enthielt, was 2 Stunden dauerte, und filtriert. Das Filtrat wurde mit Essigsäure angesäuert und das. ausgefällte Produkt gesammelt, mit Wasser gewaschen und getrocknet, wobei in 32 % Ausbeute die Substanz erhalten wurde, die nach Kristallisation aus Methanol folgende Analysenwerte zeigt:

Formel (MW)	Analyse Berechnet Gefunden	,83	0,1 n-HCl λ max. nm(E)	0,1 A.max.	n-NaOH nm (E)
^C17^H18^N6°2	C 59,51 C 59	,39 ,62	242(22 622)	255 (	26 281)
•2/5 CH₃OH (351,178)	H 5,62 M 5 N 23,93 N 23		338(6 568)	370	(6 398)
IO-Methyl-1	O-deazaminopterin

Ein Gemisch von 19,6 g (0,058 Mol) Pterinsäure, 15,8 cm³ Triethylamin (0,116 Mol) und 900 cm³ trockenem DMF wurde auf 8O⁰C unter Rühren erwärmt bis zur fast vollständigen Lösung. Die Lösung wurde auf 0 bis 5⁰C in einem Eisbad gekühlt und tropfenweise mit 15 cm³ Isobutylchlorameisensäureester (0,116 Mol) behandelt. Nach 1,5 Stunden bei 0 bis 5 C wurde das Gemisch mit einem Gemisch aus 28,0 g (0,116 Mol) Diethyl-L-glutamat-hydrochlorid, 15,8 cm³ Triethylamin (0,116 Mol) und 100 cm³ trockenen DMF behandelt. Das Gemisch wurde 2 Stunden im Eisbad und 24 Stunden bei Raumtemperatur gerührt.

130024/0677

../19

Dimethylformamid wurde unter vermindertem Druck (etwa 1 mm) verdampft und der Rückstand mit 400 cm³ 5?oiger Natriumbicarbonatlösung und 400 cm³ Äther eine Stunde gerührt. Das Gemisch wurde filtriert und der Filterkuchen mit Wasser und Äther gewaschen und getrocknet, wobei der Diester zurückblieb.

Der Diester wurde in 200 cm³ 2-Methoxyethanol gewaschen und mit 100 cm³ 1n Natronlauge behandelt. Die Lösung wurde bei Raumtemperatur 4,5 Stunden aufbewahrt und=,mit 1 Liter Wasser gewaschen. Die Lösung wurde mit Eisessig angesäuert¹ bis der Niederschlag vollständig war. Der Niederschlag wurde abfiltriert. Der Filterkuchen wurde erneut in Wasser unter Rühren suspendiert, filtriert und getrocknet, wobei rohes 1O-Äthyl-10-deazaminopterin; mit 90% 1O-Äthyl-10-deazaminopterin und 10!i unreagierter Pterinsäure gemäß Verteilungschromatographie erhalten wurde. Die Ausbeute betrug 30 %.

Nach Reinigung durch praperative Verteilungschromatographie zeigte das Produkt folgende Analyse:

Formel (HW)	°5	IV	Analyse Berechnet Gefunden	52,	ι	95 C 53,	43	0,1 'Xmax.	134)	Amax	n-NaOH . nm(E)
C₂₂H₂₅N₇		C	5,	41 H 5,	43	242I		255	(30 731 )
•7/4 H₂O	⁾	H	19,	63 N 19,	23		102
(494,515	N				338(		370	(7,582)
Beispiel
	1 -liethoxy-aller
n-HCl , nm(E)
[29

Ein Gemisch von 100 cm³ Methyl-propargyläther (1, getrocknet über 4A-5ieb) und 3 g Kalium-t-butoxid wurde unter Rückflußbedingungen 4 Stunden unter sehr geringem Stickstoffstrom gerührt. Das Infrarotsp-ektrum zeigte eine im wesentlichen vollständige Umlagerung. Die Flüssigkeit wurde durch eine Kurzwegvorrichtung in eine mit Trockeneis gekühlte Vorlage destilliert, wobei 72 g 1-Methoxy-allen; IR-Spektrum 1950 und 850 cm _f erhalten wurde.

3-Chlor-1-methoxypropen

Ein Strom von trockenem Chlorwasserstoff wurde in 700 cm³ wasserfreiem Äther in ein Eisbad eingeleitet. Nach Zugabe von 45 g HCl wurden

130024/0G77 __/20

/ COPY

weitere 267 cm³ frischer Äther zugesetzt. Ein aliquoter Teil von 541 cm³ (25,2 g, 0,69 Hol UCl) wurde tropfenweise unter Stickstoff zu einer Lösung von 40,2 g (0,69 Hol) 1-Methoxy-allen in 240 cm³ -~

Äther bei-78 C zugesetzt. Die Zugabe erforderte 2,5 Stunden und die Innentemperatur wurde unter -7O⁰C gehalten. Nach 30 Minuten wurde die Lösung im Kühlschrank bei 0 bis 5⁰C 24 Stunden aufbewahrt und direkt in der nächsten Stufe verwendet.

4-Amino-4-desoxy-10)1Q-dimethyl-10-deazapterinsSure

Eine Lösung von 192,8 ml (1,38 Mol) frisch destilliertes Diisopropylamin in 1928 cm³ trockenem THF wurde auf 0 bis 5⁰C gekühlt und eine Lösung von 862 cm³ (1,38 Hol) 1,6m Butyllithium in Hexan wurde tropfenweise zugegeben, wobei die Temperatur um 0 bis 5 Cgehalten wurde. Das Gemisch wurde weitere 30 Minuten gerührt und es wurde eine Lösung von 113 g (0,69 Mol) trockenerp-Isopropylbenzoesäure (R. und R„ = CH,) in 300 ml trockenem HIIPA tropfenweise bei 0 bis 5°C zugefügt. Das rote Gemisch wurde bei dieser Temperatur eine Stunde gerührt und dann bei Raumtemperatur 15 Stunden gehalten. Die Ätherlösung von 3-Chlor-1-Methoxypropen wurde dann tropfenweise über 1,5 Stunden bei 0 bis 5 C zugegeben. Am Ende der Zugabe verschwand die rote Färbung. Nach 2 Stunden wurden die Lösungsmittel im Vacuum entfernt und der Rückstand zwischen 1 Liter Wasser und 1 Liter Äther verteilt. Der wässrige Teil wurde gekühlt, mit gasförmigen C0„ behandelt, bis der pH-Wert 8 bis 9 betrug und 240 cm³ CH„C1„ zugegeben. Dann wurde bei 0 bis 5 C tropfenweise unter Rühren 1 Mol Brom in CI-LC1„ zugegeben, bis die rote Farbe bestehen blieb. (8250 beobachtete Bromaufnahme). Festes Natriumbicarbonat wurde gelegentlich zugegeben, um den pH-Wert auf 7 bis 8 zu halten. Das Gemisch wurde auf einem pH-Wert von etwa 2 mit 6n Salzsäure (etwa 50 ml) angesäuert. Die CH₂Cl -Schicht wurde entfernt und der wässrige Teil mit weiteren 200 cm³ CH„C1„^extrahiert. Die kombinierten organischen Extrakte wurden über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vacuum verdampft, wobei ein organge sirupartiger Rückstand der rohen Bromaldehyd säure zurückblieb.

Es wurde ein Gemisch aus 156,2 g (0,66 Mol) 2,4,5,6-Tetraaminopyrimidinsulfat (Aldrich), 160,3 g (0,65If-IoI) BaCl₂*2H 0 und 3 Liter Wasser 1,5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Gemisch wurde auf 70 C erwärmt, heiß filtriert und das Filtrat auf Raumtemperatur gekühlt. Das Filtratwurde auf den pH-Wert 3 bis 4 mit 10biger Natronlauge eingestellt, auf 45⁰C erv^ärmi: und 10 Minuten mit dem Bromaldehyd in

../21

cgpT

1Ü75 cm³ Eisessig behandelt. Das Gemisch wurde 1,5 Stunden bei 50 C gerührt, zur Entfernung von unlöslichem Gummi dekantiert und auf Raumtemperatur gekühlt. Die Lösung, welche das Dihydropteridin enthielt wurde tropfenweise mit wässrigem KJ., bis zur Entfärbung des KJ, (hergestellt aus 81,9 g Jod, 156,2 g KJ und 1075 cm³ Wasser) behandelt. Die Lösung wurde 24 Stunden stehengelassen und der gelbe Niederschlag gesammelt, mit Wasser und Äthanol gewaschen und getrocknet. Das Material wurde mit 1800 ml Wasser, das 20 cm³ konzentrierte Ammoniumhydroxidlösung enthielt , 2 Stunden gerührt und filtriert. Das Filtrat wurde mit Essigsäure angesäuert und das Produkt ausgefällt, gesammelt, mit Wasser gewaschen und getrocknet, wobei eine Ausbeute von 13 % mit folgender Analyse erhalten wurde:

Formel Analyse o,1 n-IICl 0,1 n-Na0H (HW) Berechnet Gefunden λ max. nm (E) λ max. nm (E)

255(26 432) (352,736) N 23,82 N 23,40 337(9 109) 370(6 441)

C	57	,80	C	57	,70	242(27	082)
H	5	,60	H	5	,27
N	23	,82	N	23	,40	337(9	109)

10,10-Dimethyl-10-deazaminopterin

Ein Gemisch von 19,6 g (0,058 Mol) Pterinsäure, 15,8 ml Triethylamin (0,116 Mol) und 900 cm³ trockener DMF wurde auf 8O⁰C unter Rühren erwärmt bis zur fast vollständigen Lösung. Die Lösung wurde auf 0 bis 5⁰C im Eisbad gekühlt und tropfenweise mit 15 cm³ Isobutylchlorameisensäureester (0,116 Mol) behandelt. Nach 1,5 Stunden bei 0 bis 5⁰C wurde das Gemisch mit einem Gemisch aus 28,0 g (0,116 Hol) Diethyl-L-glutamat-hydrochlorid, 15,8 cm³ Triethylamin (0,116 Mol) und 100 cm³ trockenem DMF behandelt. Das Gemisch wurde 2 Stunden im Eisbad und 24 Stunden bei Raumtemperatur gerührt.

Dimethylformamid wurde unter vermindertem Druck ( etwa 1 mm ) verdampft und der Rückstand mit 400 cm³ 5 %iger Natriumbicarbonatlösung und 400 cm³ Äther eine Stunde gerührt. Das Gemisch wurde filtriert Lnd der Kuchen mit Wasser und Äther gewaschen und getrocknet, wobei der Diester erhalten wurde.

Der Diester wurde in 200 cm³ 2-Methoxyäthanol gelöst und mit 100 cm³ 1n Natronlauge behandelt. Die Lösung wurde bei Raumtemperatur 4,5

130 024/^

Stunden aufbewahrt und dann mit 1 Liter Wasser verdünnt. Dic Lösung wurde mit Eisessiy angesäuert, bis der Niederschlag vollständig war. Der Niederschlag wurde abfiltriert, der Filterkuchen erneut in V/asser unter Rühren suspendiert, filtriert und getrocknet, wobei rohes 10,1O-Dimethyl-10-deazaminopterin enthaltend 9Q?0 10,10-Dimethyl-10-deazaminopterin und 10 % unreagierte Pterinsäure gemäß Verteilungschromatographie erhalten wurde. Die Ausbeute betrug 26 %.

Nach dem Reinigen durch präperative Verteilungschromatographie zeigte das Produkt folgende Analys.enwerte:

Formel (MW)	Analys Berechnet	51	,56	e Gefunden	51	,26	λ max	n-HCl . nm(E)	0,1 λ max	n-NaOH .- nm(E)
C₂₂H₂₅N₇O₅	C	5	,90	C	5	,52	242	(28 647)	255	(29 583)
•5/2 H₂O	H	19	,13	H	18	,61
(512,531)	N	N	338	(10 115)	370	(7 112)

Die 1O-Alkyl-10-deazaminopterinverbindung kann als solche oder in Verbindung mit einem pharmakologisch unbedenklichen Verdünnungsmittel oder Träger verabreicht werden. Dementsprechend .schafft die Erfindung auch ein Arzneimittel in Dosierungseinheiten von. 0,1 bis etwa 500 mg 1O-Alkyl-1O-deazaminopterinverbindung je Dosierungseinheit , zusammen mit einem pharmakalogisch unbedenklichen nicht toxischen inerten Träger oder Verdünnungsmittel.

Die 10-Alkyl-1 OtJeazaminopterinverbindung kann als solche oder in Form eines Additionssalzes mit einer Säure verwendet werden. Diese Salze werden mit ein oder mehreren freien Amminogruppen des 10-Alkyl-10-deazaminopterinmoleküls gebildet.

Die Additionssalze mit Säuren sind vorzugsweise die pharmakologisch unbedenklichen nicht toxischen Additionssalze mit geeigneten Säuren, wie mit anorganischen Säuren, z.B. Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Salpetersäure, Schwefelsäure und Phosphorsäure sowie mit organischen Säuren, wie organische Carbonsäuren, z.B. Glykolsäure, Maleinsäure, Hydroxymaleinsäure, Äpfelsäure, Weinsäure, Zitronensäure, Salicylsäure, o-Acetyloxybenzoesäure, Nikotinsäure und Isonikotinsäure sowie organische Sulfonsäuren, z.B. ilethansulfonsäure, Ä'thansulf onsäure, 2-llydroxyäthansul fonsäure, Toluol-p-sulf onsäure und Naphthalin-

130024/0677 „./23

2-sulfonsäure.

Ein Additionssalz mit einer Säure kann in die freie Verbindung nach bekannten Verfahren überführt werden, z.B. durch Behandeln mit einer Base, wie einem Metallhydroxid oder -alkoxid, z.B. einem Alkalimetall- oder Erdalkalimetallhydroxid, z.B. Lithiumhydroxid, Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid oder Calciumhydroxid, mit einem Metallcarbonat, wie einem Alkalimetall- oder Erdalkalimetallcarbonat oder -hydrogencarbonat, z.B. Natrium-, Kaliumoder Calciumcarbonat oder -hydrogencarbonat oder mit Ammoniak oder mit einem Hydroxylionenaustauscherharz, oder mit irgendeinem anderen geeigneten Reagens·

Ein Additionssalz mit einer Säure kann auch in ein anderes Additionssalz mit einer Säure nach bekannten Verfahren überführt werden, z.B. kann ein Salz mit einer anorganischen Säure mit einem Metallsalz, z.B. Natrium-, Barium-, oder Silbersalz einer Säure in einem geeigneten Lösungsmittel behandelt werden, in welchem ein resultierendes anorganisches Salz unlöslich ist und somit aus dem Reaktionsmedium entfernt werden kann. Ein Additionssalz mit einer Säure kann auch in ein anderes Additionssalz durch BehandsOn mit einem Anionenaustauscherpräparat überführt werden.

Die 10-Alkyl-10-deazarninopterinverbindung oder deren Salzkann dem Tier auf jedem verfügbaren Weg verabreicht werden, einschließlich oral und parenteral (intravenös, intraperitoneal, subcutan und intramuskulär). Die verabreichte:_;Menge reicht aus, um die Leukämie oder Ascitestumor zu bessern und hängt von dem Typ der Leukämie, der Art des Tieres und dem Gewicht des Tieres ab. Zur Gehandlung des Menschen sollte beispielsweise eine Dosis 10-Alkyl-1O-deazaminopterinverbindung im Bereich von etwa 0,1 mg/kg bis etwa 500 mg/kg je Tag ausreichen. Dosierungen im höheren Bereich in der Nähe von 500 mg/kg werden gewöhnlich in Verbindung mit Leucovoran (dl-5-Formyl-tetrahydrofolat)zur Verminderung der Toxizität verabreicht. Bei der Behandlung von niederen Versuchstieren ist ein ähnlicher Dosisbereich therapeutisch. Die Dosis-Obergrenze wird durch toxische Nebenwirkungen überlagert und kann durch Versuche bei dem zu behandelnden Tier einschließlich dem Menschen bestimmt werden.

Um die Verabreichung zu erleichtern, können die 1Q-Alkyl-1G-deazaminapterinverbindung oder deren Salz in Form einer Zubereitung, vorzugsweise in Form einer Einheitsdosis zur Verfügung gestellt werden. Während die Verbindung als solche verabreicht werden kann, wird sie normalerweise in Verbindung mit einem pharmakologisch unbedenklichen Träger verabreicht,' welcherdie Verbindung verdünnt und die Handhabung erleichtert. Unter "pharmakologisch unbedenklich" wird verstanden, daß der Träger (und die- erhaltene Zubereitung) steril und nicht toxisch sind.

Der Träger oder das Verdünnungsmittel können fest, halbfest oder flüssig sein und können als Trägersubstanz, Excipient oder Medium für die 10-Deazaminopterinverbindung dienen. Beispiele für Verdünnungsmittel und Träger sind Lactose, Dextrose, Saccarose, Sorbitol, Mannitol, Stärken^ Gummiarabikum, Calciumphosphat, Mineralöl, Kakaobutter, Theobromöl, Alginate, Traganth, Gelatin^ Sirup, Methylcellulose, PoIyoxyethylensorbitanmonolaurat, Methyl- und Propyl-hydroxybenzoat, Talk oder Magnesiumstearat.

Zur zweckmäßigen Handhabung können die 1Q-Alkyl-10-deazaminopterinverbindung und der Träger oder das Verbindungsmittel in einer Kapsel, einem Dragee, Gelatine, Papier oder einem an- · deren Behälter eingeschlossen oder eingekapselt sein, insbesondere, wenn sie zur Verwendung in Dosierungseinheiten vorgesehen sind. Die Dosierungseinheiten können z.B. die Form von Tabletten, Kapseln, Suppositorien oder Dragees einnehmen.

Die folgenden Beispiele erläutern verschiedene Formen von Dosierungseinheiten, in welchen die 10—Alkyl—1O-deazaminopterinverbindung oder deren Salze zubereitet werden können.

Beispiel 5

Tablettenzubereitung

mg/Tablette

IO-Alkyl-10-deazaminopterinverbindung 15

Lactose 86

Maisstärke (trocken) 45,5

Gelatine 130024/0677 ²>⁵

!•iagnesiumstearat 1,0

ORIGINAL INSPECTED

3034343

Die 1O-Alkyl-1O-deazaminoptecinverbindung wird pulverisiert und durch ein Sieb gegeben und gut mit der Lactose und 30 mg Maisstärke gemischt, die beide durch ein Sieb passiert worden waren.

Die gemischten Pulver werden mit einer warmen Gelatinelösung zu einer Masse verarbeitet, die durch Rühren der Gelatine in V/asser, erhitzen bis zu 10 Gew.-^ Lösung hergestellt »ird. Die Masse wird granuliert, in dem sie durch ein Sieb gegeben wird, und die feuchten Körner werden bei 40 C getrocknet.

Die getrockneten Körner werden erneut granuliert, indem sie durch ein Sieb gegeben werden, und der Rest der Stärke und von Magnesiumstearat werden zugegeben und es wird gründlich gemischt.

Die Körner herden gepresst, um Tabletten von je 150 mg zu bilden.

Beispiel 6

Tablettenzubereitung

mg/Tablette

1O-Alkyl-10-deazaminopterinverbindung 100

Lactose 39

Maisstärke (trocken) 80 Gelatine 4,0

Magnesiumstearat 2,0

Die llerstellungsmethode ist identisch mit der von Beispiel 5 mit der Ausnahme, daß 60 mg Stärke verwendet werden bei der Granulierung und 20 mg während des Tablettierens.

Beispiel 7

Kapaelansatz

mg/Kapsel

1O-Alkyl-10-deazaminopterinverbindung Lactose

130024/0677 "^/26

Die 1O-Alkyl-1O-deazaminopterinverbindung und Lactose werden durch ein Sieb gegeben und die Pulver werden gut gemischt, bevor sie in harte Gelatinekapseln geeigneter Größe eingefüllt werden, so daß jede Kapsel 400 mg des gemischten Pulvecs enthält.

Beispiel 3

Suppositorien

mg/Suppositorium

IO-Alkyl-10-deazaminopterinverbindung 50

Theobromöl 950

Die IO-Alkyl-10-deazaminopterinverbindung wird pulverisiert und durch ein Sieb gegeben und mit geschmolzenem Theobromöl verrieben bei 45 C, um eine glatte Suspension zu bilden.

Das Gemisch wird gut gerührt und in Formen gegossen von je 1 g Kapazität um Suppositorien herzustellen.

Seispiel 9

Cachets

mg/Cachet

1O-Alkyl-1O-deazaminopterinverbindung 100

Lactose 400

Die 1O-Alkyl-1O-deazaminopterinverbindung wird durch ein kleines Sieb gegeben und mit vorher gesiebter Lactose gemischt und in Cachets geeigneter Größe gefüllt, so daß jede 500 mg enthält.

Beispiel 10

Intramuskuläres Injektionspräparat

(sterile Suspension in Wasser) m_g_

1 O-Alkyl-1 O-deazaminopterinverbindung 10 Natriumeitrat 5,7

Natriumcarboxymethylcellulose (niederviskos) 2,0 Methyl-p .--hydroxybenzoat 1 ,5

Propyl-p .-hydroxybenzoat^ 30024/0677 _0j2

../27

Wasser für Injektionszwecke auf 1,0 ml

Beispiel 11

Intraperitoneale, intravenöse oder subcutane Injektion (sterile Lösung im wässrigen System)

m_g_

1O-Alkyl-10-deazaminopterinverbindung, HCl-SaIz 15

Natriumeitrat 5,7

Natriumcarboxymethylcellulose (niederviskos) 2,0

Methyl-p- -hydroxybenzoat 1,5

Propyl-p --hydroxybenzoat 0,2

Wasser Für Injektionszwecke auf 1,0 ml

Das folgende Beispiel erläutert die Verabreichung von 1O-Alkyl-10-deazaminopterin durch Verwendung eines standardisierten Tests:

Beispiele 12 und 13

Es wird 0,2 cm³ einer 0,1n-Natriumhydroxidlösung zu 5 mg 10-ilethyl-10-deazaminopterin gegeben. Destilliertes Wasser wurde sodann zugegeben, der pH-Wert auf 7,ο eingestellt und die Lösung mit destilliertem Wasser auf 10 cm³ verdünnt. Die Lösung wurde gemäß Beispiel 8 verabreicht.

Eine Lösung wurde in ähnlicher Weise aus IO-Ä'thyl-1 0-deazaminopterin hergestellt. Die Lösung wurde in Beispiel 9 verabreicht.

Die beiden Ansätze der erhaltenen Lösungen und deren Verdünnungen wurden in gleichen Teilen von 0,1 cm³ intraperitoneal injiziert in weibliche Mäuse BD (2) F^ mit Leukämie vom Stamm L1210 (A. R. Schtnid, Madison, V/is.). Injektionen wurden einmal täglich, dreimal wöchentlich (Montag, Mittwoch, Freitag) verabreicht, beginnend 1 Tag nach der Tumortransplantation (10⁶ Zellen/
für L(JGSo Lz t.

. ./28

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(10 Zellen/Maus). Die Therapie wurde bis zum Tod der Tiere

Zu Vergleichszwecken und als Kontrolle wurde eine Parallelreihe von Versuchen gleichzeitig unter Verwendung gleichartiger weiblicher Mäuse BD (2) Ei mit Leukämie ^vom Stamm LI210 unter den
genau gleichen Testbedingungen, wobei anstelle von 1O-Methyl-1O-deazaminopterin oder 1O-Ethyl-1O-deazaminopterin Methotrexat verabreicht wurde.

Das Testverfahren und die Aufrechterhaltung und Transplantation der Leukämie L1210 entspricht dem Verfahren von Hutchinson,
D.J., Robinson, D.C, Martin, D., Ittensohn, O.L. und Dillenberg, Journal Cancer Res. 22, Seite 57-72 (1962). Die antileukämische Aktivität von 1O-Methyl-1O-deazaminopterin und 1O-Ethyl-1O-deazaminopterin wurde gegen Methotrexat als Ausdruck des Anstiegs
der mittleren Lebensspanne bei verschiedenen Dosierungen widergegeben, bis zur maximalen Toleranzdosis, verglichen mit unbehandelten Tieren. Die Toxizität der verschiedenen Dosierungen
wurde durch den Gewichtsverlust und gegebenenfalls Tod bestimmt ohne Anzeichen des Tumors.

Repräsentative Ergebnisse gegen Leukämie L1210 sind die folgenden :

L1210 Leukämie:

Inoculum : 10 Zellen
Wirt : BD (2) F. Mäuseweibchen
Träger : Gepuffertes Isosalin
Verabreichung : Alle 2 Tage χ 5

10-Methyl- 10-Ethyl-

Häuse Methotrexate 10-deazaminopterin 10-deazaminopterin (Versuch Dosis AST ILS AST ILS AST ILS χ Nr. ) (mg/kg) Tage % Tage % Tage %

5x2 - 6,7-0,7 - 6,7* 0,7 - 6,7* 0,7

5x2 6 13,8*1,2 +105

5x2 9 15,8*1,7 +135

5x2 12 16,9*1,5 +149 18,1*1,9 +170 18,3* 1,7 +172

5x2 18 17,3*1,8 +153 22,2*1,6 +230 21,8* 1,4 +220

5x2 24 15,3*2,1 +127

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.,/29

Es ergibt sich aus den Ergebnissen, daß die Lebensspanne der Versuchsmäuse sehr erheblich durch Verabreichung von 10-Methyl-1O-deazaminopterin und 1O-Ethyl-1O-deazaminopterin verlängert wird. Erhöhte Dosierungen führen zu höheren Lebensspannen, wobei die maximale Lebensdauer mit der maximalen Dosis bei etwa 22 mg/kg erhalten wird, bei welcher Dosis eine leichte Toxizität beobachtet wird, wie sich durch einen Abfall der Gewichtsänderung anzeigt. Die Ergebnisse zeigen, daß 1O-Methyl-1O-deazaminopterin und 1O-Ethyl-1O-deazaminopterin dem Methotrexat bei ähnlicher Dosierung überlegen sind und da Methotrexat als wirksam anerkannt wird, ist davon auszugehen, daß 10-Methyl- und 10-Ethyl-1O-deazaminopterin wenigstens so wirksam sind wie Methotrexat unter gleichen Bedingungen, wahrscheinlich aber etwas kräftiger, mit Bezug auf die Dosis. Die potente antileukämische Wirksamkeit von 1O-Methyl-1O-deazaminopterin und 1O-Ethyl-10-deazaminopterin ergibt sich aus diesen Versuchsergebnissen.

In einer ähnlichen Verfahrensweise, wie bei 1O-deazaminopterin, können die 1O-Alkyl-1O-deazaminopterinverbindungen zur Behandlung verschiedener Arten Ascitesturnoren verwendet werden.

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Claims

Dr.Be/he

3034343

PATENTANSPRÜCHE

.) Verfahren zur Herstellung von 1Q-Deazaminopterin und dessen 10-Alky.lderivate, dadurch gekennzeichnet, daß man
1) 3-Chlor-teaethQxy-propen mit dem Reaktionsprodukt von Alkyllithium mit einer p-Alkylbenzoesäure, in der die Alkylgruppe die Formel

^R1

HC-

R₂

entsprechend .der 10-Kohlenstoffgruppe des gewünschten 1O-Deazaminopterin aufweist, wobei in der Formel R₁ und R„ jeweils ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff und Alkylgruppen mit 1 bis 8 Kohlenstoffatomen, in Gegenwart eines Säureakzeptors bei einer Temperatur unter 0 C, bei welchem die Reaktion in Gegenwart eines inerten Lösungsmittels unter wasserfreien Bedingungen noch fortschreitet, umsetzt und

2) die erhaltene Verbindung, bei welcher die p-Alkylgruppe der Säure durch eine Methoxypropylengruppe ersetzt ist, an der Methoxypropylengruppe in eine Brom-Aeetaldehydgruppe durch Umsetzen mit Brom überführt, während der pH-Wert im Bereich von etwa 7 bis etwa 8 gehalten wird, gegebenenfalls unter Zusatz eines Puffers, um den pH-Wert unter 8 zu halten und

3) das erhaltene Reaktionsprodukt mit 2, 4, 5, 6-Tetraaminopyrimidin bei einem saueren pH-Wert im Bereich von etwa 3 bis etwa 5 und erhöhter Temperatur im Bereich von etwa 35 bis etwa 75⁰C umsetzt, die 5, 6-Arninogruppen mit der Aldehydgruppe und dem Bromatom des Reaktionsprodukte cyclisiert und

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^ΛΒΙΛ""Ί INSPECTED

4) die erhaltene Verbindung mit einem Dihydro-pteridinring, in welchem die 5,6-Stickstoffatome enthalten sind, durch Umsetzen mit Kaliumjodid/Jod der Formel K3_ dehydriert und

5) die erhaltene 4-Amino-4-desoxy-1O-deazapterinsäure mit Isobutylchlorameisensäureester in Gegenwart eines Säureakzeptors bei einer Temperatur im Bereich von 0 bis -5°C umsetzt, zum Reaktionsgemisch Diethyl-L-glutamathydrochlorid zusetzt und die Reaktion bei einer Temperatur im Bereich von 0 bis -5 C weiterführt, bis die Fterinsäuregruppe ϊι den entsprechenden Glutamid-diethyleater umgewandelt ist und danach

6) -die veresternden Äthylgruppen durch Umsetzen des Esters mit verdünnter wässriger Alkalilösung unter Bildung der freien Disäure der Glutamidgruppe und Bildung der vollständigen 10-Deazaminopteriηverbindung abhydrolisiert.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,

daß man Methyl-propargylether in das entsprechende 1-Methoxyallen unter wasserfreien Bedingungen in Gegenwart von Alkali bei erhöhter Temperatur in einer inerten Atmosphäre umlagert und anschließend an die Doppelbindungen das 1-Methoxy-allens Chlorwasserstoff unter wasserfreien Bedingungen bei e-iner Temperatur unter etwa -25⁰C in einer inerten Atmosphäre in Lösung in einem inerten Lösungsmittel addiert ind das erhaltene 3-Chlor-"knethoxy-prapen enthaltende Reaktionsgemisch unmittelbar in Stufe.. (1) einsetzt.

3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß man als Alkali ein Alkalimetallalkoxid verwendet.

St»

4. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,

daß man als Säureakzeptor in Stufe- [1) ein tertiärss Amin verwendet.

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&UL INSPECTED

5ί Verfahren naoh Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man die Reaktion der p-Alkyl-benzoesäure mit dem Alkyllithium bei einer Temperatur von D - 5⁰C durchführt und das 3-ChIor-1-mebhoxy-propen in Lösung in einem inerten Lösungsmittel langsam in das Reaktionsgemisch der Reagenzien eingibt und die Reaktion fortführt bis das Reaktionsgemisch farblos ist.

B. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man das in Stufe (23 erhaltene Brom-Acetaldehyd-Reaktionsprodukt wäscht und in wässriger Lösung mit gasförmigen Kohlendioxid carbonatisiert, um den pH-Wert auf-einen Bereich von etwa B bis etwa 9 zu bringen.

7. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man in Stufe (2) festes Natriumbicarbonat verwendet, um den pH-Wert unter 8 zu halten und das Reaktionsgemisch dann durch Zugabe- von gasförmigem Chlorwasserstoff auf einen pH-Wert von etwa 2 ansäuert.

ß. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man Stufe [3) in einer organischen Säure als Lösungsmittel durchführt bei einer Temperatur im Bereich von 35 bis 75⁰C.

9. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man in Stufe (5) als Säureakzeptor Triethylamin verwendet und daß die 4-Amino-4-desoxy-1Q~deazapterinsüuru in einem inerten Lösungsmittel vorliegt, daß man den Isobutyl-Chlorameisensäureester langsam zu dem Reaktionsgemisch zugibt und nach vollständiger Reaktion das Diethyl-L-glutamate-hydrochlorid, das organische Amin und weiteres Lösungsmittel zugibt und die Reaktion bei der gleichen Temperatur bis zum vollständigen Ablauf weiterführt, das freigesetzte Dimethylformamid abzieht und den Rückstand mit alkalischer wässeriger Pufferlösung mischt, in welcher der Diester •unlöslich ist.

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1o. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als p-Alkylbenzüesäure eine .solche der folgenden Formel einsetzt: Jj

H-C-

R₃

daß das Reaktionsppodukt von Stufe [13 die Formel

aufweist und das Reaktionsprodukt von Stufe [2) die Formel Q ?·ι

I I Br R₅₈

besitzt und das Reaktionsprodukt van Stufe (3] die

Formel

NH₂

?^l

N₂

I H CH₂C-(O)-COOH

besitzt u-nd das Reaktionsprodukt der Stufe (4] die

Formel JJH₂ T¹

.CH₂C-Zo)-COOH

besitzt und das Reaktionsprodukt von Stufe (5) die

Formel R₁

COOEt CH₂C -Y oVcONHCH

^Ra CH₂

CH,

Et=C₂H₅

COOEt

aufweist und das erhaltene 10-deazaminopterin die Formel

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' ORIGINAL INSPECTED

CH₂C-XO)-CONHCH

besitzt, in welcher R^ und R„ Wasserstoff oder Alkylgruppen

OOH

off

mit 1 bis etwa 8 Kohlenstoffatomen bedeutet. 11. IG-Alkyl-10-deazaminopterinverbindungen der Formel

- in welcher R. und R„ ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff und Alkylgruppen mit 1 bis etwa B Kohlenstoffatomen und wenigstens eine der Gruppen R^. und R_ eine Alkylgruppe ist.

12. IQ-Alkyl-10-deazaminopterinverbindungen nach Anspruch 11, in denen eine der Gr-uppen R. und R„ eine Alkylgruppe tnd die andere Wasserstoff bedeuten.

13. IO-Alkyl-10-deazaminopterinverbindungen nach Anspruch 12, wobei die Alkylgruppe eine Äthylgruppe ist.

14. lO-Alkyl-ID-dsazaminopterinverbindungen nach Anspruch 12, wobei die Alkylgruppe eine Methylgruppe ist.

15. 10-Alkyl-1Q~deazarninopterinverbindungen nach Anspruch 11, wobei beide Gruppen R. und R-, Alkylgruppen sind.

16. lo-Alkyl-IQ-deazaminopterinverbindungen nach Anspruch 15, worin die Alkylgruppe eine Methylgruppe ist.

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17. Arzneimittel zur Behandlung van Leukämie und Ascites-Tumoren, dadurch gekennzeichnet,

daß es eine therapeutische und untoxischePenge einer 10-Alkyl-10-deazaminopterihverbindung nach einem der Ansprüche 11 bis 16 enthält.

18. Arzneimittel nach Anspruch 17, dadurch gekennzeichnet,

daß die 10-Alkyl-ID-deazarninopterinverbindung als pharmaculo^isch unbedenkliches Salz vorliegt.

19. Arzneimittel nach Anspruch 18, dadurch gekennzeichnet,

daß die IO-Alkyl-1O-deazaminopterinverbindung i η einer täglichen-Dosierungsform von etwa 0,1 bis etwa SDO mg/Tag vorliegt.

20. Arzneimittel nach Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, daß die 1D-Alkyl-1ü-deazaminopterinverbindung zusammen nit einem inerten Verdünnungsmittel oder einer Trägersubstanz für die orale oder par-enterale Verabreichung vorliegt.

21. Arzneimittel nach Anspruch 17 bis 20, dadurch gekennzeichnet, daß es in Form .von Tabletten, Kapseln, Suppositorien, Dragees, einer sterilen wässrigen Lösung oder Dispersion vorliegt.

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