DE2130113A1

DE2130113A1 - Aminoglykosidantibiotika und Verfahren zu ihrer Herstellung

Info

Publication number: DE2130113A1
Application number: DE19712130113
Authority: DE
Inventors: Waitz Jay Allan; Mae Counelis; Cooper David J; Jay Weinstein
Original assignee: Scherico Ltd
Current assignee: MSD International Holdings GmbH
Priority date: 1970-06-22
Filing date: 1971-06-18
Publication date: 1972-01-13
Also published as: FR2104762A1; AT322742B; US3915955A; CY913A; GB1355260A; DK499474A; IL37105A0; US4110439A; AT321458B; MY7700325A; KE2748A; ZA714013B; DE2130113B2; US4049796A; NL7108580A; DK129044B; JPS551798B1; US4389398A; BE768796A; FR2104762B1

Description

Patentanwälte

Dr.-Ing. von Kreisier Dr.-Ing. Schönwald

Dr.-Ing.Th. .W;,.er Dr. Fues Dipl.-Chem.Aieic von Kreisier DipI.-Chem.Corola Keller Dr.-Ing. Klöpsch Dipl.-Ing. Selling

Köln, Deichmannhaus

JÜNi-30-1971

989-FT'J-l

IK-re

SCHERICO LT Do Töpferstrasse 5
Luzern (Schweiz)

Aminoglykosidantibiotika und Verfahren zu ihrer Herstellung

-1-

109883/1820

1-10-1971 ' 989-FTG-2 IK "β

Diese Erfindung bezieht sich auf neue Aminoglykosidantibiotika, genannt Gentamicin B, Gentamicin B₁ und Gentamicin X, auf deren pharmazeutisch annehmbare Derivate und auf Verfahren zu ihrer Herstellung. Diese Antibiotika weisen eine Wirkung gegen Bakterien und Protozoen sowie anthelminthische Aktivität auf. Diese Erfindung bezieht sich auch" auf pharmazeutische " Zubereitungen, die wenigstens eines der genannten Antibiotika und/oder ein weiteres Aminoglykosidantibiotikum, genannt Gentamicin A, enthalten, auf Verfahren zur Herstellung solcher Zubereitungen und auf Verfahren zum Gebrauch der Antibiotika. Gentamicin A zeigt eine Aktivität gegen Protozoen und wirkt anthelminthisch.

Die Antibiotika können durch den für die Herstellung von Gentamycin bekannten Permentationsprozess erhalten

.werden. Die Herstellung, Isolierung und Reinigung von Gentamyoin wird in der US-Patentschrift Nr. 3*091,572 beschrieben. Gentamycin, nun als Gentamicin bekannt, ist in dem Patent als Hauptkomponente beschrieben und wird darin als C-Komponente oder Gentamicin C bezeiohnet. In der Patentschrift werden auch die neben

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f09883/1820

JUNl-IO- 1971

939"FTG-?

IK-re

Gentamicin C hergestellten Antibiotika BA-J (Fraktion A) und BA-J (Fraktion B) erwähnt, die gemischt einen niedrigen Grad von antibakterieller Aktivität zeigen und von Gentamicin C getrennt worden sind.

Durch die Verwendung von speziellen chromatographischen Systemen, die später hier beschrieben werden, wurde festgestellt, dass die Substanzen, die in der US-Patentschrift Nr. 3,091,572 als Antibiotikum BA-J (Fraktion A) und BA-j5 (Fraktion B) bezeichnet wurden, kein einheitliches Material darstellen, sondern zusammen aus einer Mischung von wenigstens k Komponenten bestehen. Ein verbessertes Verfahren für die Auftrennung dieser Mischung der neben Gentamicin C hergestellten Antibiotika in ihre Komponenten (im folgenden werden sie Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B₁ und Gentamicin X genannt) führte zu der Entdeckung, dass Jedes der Glieder dieser Gruppe überraschende und unerwartete Anwendungsmöglichkeiten bietet.

Gentamicin A wurde schon früher in reiner Form isoliert, chemisch und biologisch untersucht, und es konnte eine

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989-FTG-4 IK-re

zimlich schwache antibiotische Aktiviät festgestellt werden. Nun konnte die recht überraschende Anwendungsmöglichkeit desselben entdeckt werden, die in seiner anthelminthischen Aktivität und seiner Wirkung gegen Protozoen begründet ist. Gentamicin B, Gentamicin B, und Gentamicin X sind zuvor nie voneinander getrennt worden. Es konnte festgestellt v/erden, dass diese ^ Substanzen gewisse wertvolle Eigenschaften als Antibiotika, Anthelminthika und als Mittel gegen Protozoen aufweisen. Ausserdem haben Gentamicin B und Gentamicin B₁ bedeutende antibakterielle Wirkungen. Die Antibiotika Gentamicin A, Gentamicin B, lentamicin B, und Gentamicin X zeigen merklich reduzierte Nebeneffekte. Daher ist es vorteilhaft, Gentamicin B und Gentamicin B₁ für länger dauernde Behandlungen von bakteriellen Infektionen einzusetzen. In der Be-

I handlung von Helminthiasis, die durch bakterielle

Infektionen oder das Auftreten von Protozoen erschwert ist, kann die Anwendung der Antibiotika Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B₁ und Gentamicin X von unmessbarem Wert sein.

Die Antibiotika Gentamicin B, Gentamicin B₁, Genta-

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J UJUl-J-U-JLy I J.

989-FTG-5 IK~re

micin X,und Gentamicin A sind einander strukturell ähnlich, wie durch Formel (II) gezeigt wird, öle die ungefähre molekulare Anordnung ohne Berücksichtigung von räumlichen Ueberlegungen darstellt.

O ^NH2

ho r

(ID

NHCH, _H0

R^jCHR.- ... " ■ ■ 5

¹ ° °- HH,

HO R₁

Gentamicin A R₁ = NHg R=H R = OH R^. = H

Gentamicin B R₁ = OH Rg = H R, = NHg R^ = CH,

Gentamicin B₁ R₁ = OH Rg = CH, R, = NHg Rj, = CH,

Gentamicin X R_n = NH₀ R_n = H R-, = OH . Ri₁ = CH,

Die Verbindungen dieser Erfindung bilden leicht Hydrate und Solvate, die sehr schwer zu breohen sind. Daher basieren die physikalischen Konstanten von Gentamicin A, Gentamicin B und Gentamicin B, auf den verhältnismässig stabilen Hydraten oder Solvaten. Ferner muss berücksichtigt werden, dass,

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JUNI-10-1971

989-FTG-6

IK-re

obwohl Gentamicin B und Gentamicin B, kristalline Solvate mit Aethanol bilden, diese keine reproduzierbaren Schmelzpunkte zeigen, sondern erweichen und gelegentlich viskose Flüssigkeiten über einen ziemlich breiten Temperaturbereich bilden. Gentamicin X wurde bisher noch nicht in kristalliner Form erhalten. Es wird in Form einer weissen amorphen festen Substanz isoliert, die ebenfalls keinen bestimmten Schmelzpunkt aufweist.

Die folgende Tabelle I enthält die physikalischen Eigen= schäften der hierin beschriebenen Antibiotika: (Alle Werte für Sauerstoff wurden als Differenz ermittelt.)

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TABELLE I

3UNI-10-1971 989-FTG-7 IK-re

physikalische Konstanten

Warbindung Eleaentaranalyss

barachnatar

Wart*

Analyaenwert

Sulfat Analyaarwrart

26 0

Gentamicin A berechnet Pur

V₃₆VlO ¹^

C H N

43.63

7.93 11,31 37,13

C H N Q

43,60

7,06 11,66 37,16

♦96

(C

Gentamicin B berechnet für

C H N 0

47,70

8,41

10,60

33,29

C = 47,78 H = B,38 N = AO,59 0 > 33,25

♦ 155"

(C = 0,3/H₂O)

C H N S

30,35 6,59 7,49 8,48

♦ 116 ψί

(C = 0,3/H₂O) t

■ Gentamicin B

berechnet für

■ ^C20^H40^N4°10-W^H

C a 47,22 H 3 8,34 N χ 10,41 * 34,03

C H N 0

48,58

8,56

10,32

32,44

♦ (C - 0,

31,26 6,83 7,34 8,72

♦ 117" £» 0,3/H„n>

ISi ···

Gentamicin X

^C19^H38^N4°10

C H N 0

43,54 7,22 9,90

39,34

* 154" ( C * 0, C H N S

31,96 6,57 8,64 8,70

♦

JÜNI-IC-1971

989-PTG-8

IK-re ■

Gentamicin A^ Gentamicin B, Gentamicin B. und Gentamicin X haben charakteristische Infrarotabsorptionsspektren in Mineralöl (Nujol), wie in Figur 1 (Gentamicin A), Figur J) (Gentamicin B), Figur 5, (Gentamicin B,) und Figur 7 (Gentamicin X) dargestellt ist. Diese Spektren wurden mit den entsprechenden Solvaten der Antibiotika hergestellt.

Diese Antibiotika haben auch.charakteristische magnetische Kernresonanzspektren (NMR-Spektren), die in Figur 2 (Gentamicin A), Figur 4 (Gentamicin B), Figur 6 (Gentamicin B,) und Figur 8 (Gentamicin X) gezeigt werden. Alle NMR-Spektren wurden mit den freien Antibiotikumbasen hergestellt. Die Proben von Gentamicin A und Gentamicin X lagen Jedoch in der hydratisierten Form vor und die von Gentamicin B und Gentamicin B, in der Form von Aethanolsolvaten. Diese Spektren wurden mit einem Varian A-60-A Spektrometer (Varian Associates, PaIo Alto, California) mit ungefähr 0,4 ml einer Lösung, deren Konzentration ungefähr 20 mg/ml des Antibiotikums im Deuteriumoxid (DgO) betrug, hergestellt. Die Spektren sind in Teilen per Million

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(PPM) bezogen auf das Natriuffsalz τοη J-(Tr methyl8ilo)-propansulfor;säure als Internee Standard aufgeteiohnet «forden*

In der folgenden Tabelle II werden die charakteristischen Absorptionsbanden der Figuren 1, 3, 5 uoä 7 aufgeftfiirt.

BAD ORIGINAL

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⁹ ' · M m^m

t«.

Λ*

Tabelle II

Char«toteri«tiaohe Infrarotabsorptionsbanden Sulfat von Gentamicin A

3,8 u u

U U

(3, β br)

(Nujol)

(eohw, br)

(M)

(M)

6,85 u

7,25 υ

8,50-10,75 U 12,95 u 13,88 u

(Nujol) (Nujol) (b S, β br) (i BOhw, br) (βohw,br)

Beseiohnungent M »mittel; S= stark; β = sehr; eöhvr«schwaoh; br =* breit; su = Schulter

gulf.at von Oentamicin B

2,95 -	>#25 ti	(M-S, br)	7,26	U	(Nujol)
3,40	U	(Nujol)	7,75	U	(•ohw)
3,51	U	(Nujol)	8,75-9#	75 μ	*(3, br)**
4,85	U	(θohw, br)	10,28	U	(löhw - M)
6,16	μ	(M)	12,95	U	(β ButMt br)
M5	μ	(M)	13,90	μ	(sohw, tor)
*6,B3*	μ	(Nujol)			*

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_BA0

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JUNI-10-1971 ; f '8^5 1

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Sulfat von Gentamicin Β_Ί

2,95	- 3,25 u.	(M-S, br)	7,25	—j. U	(Nujol)
3, Ή	U	(Nujol)	7,75	U	(schw)
3,50	U	(Nujol)	8,75-9	,75	u (S, s br)
4,85	U	(schw, br)	10,27	U	(schw-M)
6,l6	υ	(M)	10,75	U	(schw)
6,55	U	(M)	15,05	U	(s-schw, br)
6,83	U	(Nujol)	15,90	U	(sohw, br)
		Sulfat von	Gentamicin	X

3,0 - 5,3 υ

5,57- 5,51 u

5,65- 4,55 u

4,82 μ

.5,94 u

6,17 μ

6,54 U

6,85 μ

(S, br)

(Nujol)

(M,br)

(schw, br)

(sohw, su)

(M)

(Nujol)

7,25 u (Nujol) 7,75 μ (schw-M) 8,7-10,0 μ (s-S, br) 10,50 u (br, su)

(schw, br) (s-sohw, br) (Nujol)

11,50 μ

15,05 μ

15,90 u

15,08 μ

(s-söhw)

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ORIGINAL INSPECTED

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-$2 IK-re "' ■

Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B, und
Gentamicin X enthalten Aminpgruppenoder substituierte Aminogruppen, die fähig sind, Säureadditionssalze mit organischen oder anorganischen Säuren zu bilden. Wenn solche Salze von mehrbasischen Säuren abgeleitet sind, können diese freie Säuregruppen und/oder Säuregruppen, die mit anderen Basen neutralisiert sind, wie beispielsweise mit Alkalibasen, enthalten. (Der Ausdruck nichts

w toxische Salze, der in dieser Beschreibung verwendet

wird, bezeichnet Salze, die keinen nachteiligen Nebeneffekt verursachen,wenn sie in üblicher Dosis angewendet werden.) Im allgemeinen können Salze mit anorganischen Säuren gebildet werden, indem man verdünnte Säure (1,0N) zu einer wässerigen Lösung des freien Antibiotikums gibt, . den pH-Wert der Lösung auf ungefähr 4,5 einstellt und die so erhaltene Lösung gefriertrocknet. Dementsprechend können Säureadditionssalze mit Salzsäure, Schwefelsäure,

' Phosphorsäure usw. gebildet werden, sowie die entsprechenden Alkalisalze von zwei -und drei basischen Säuren. Im allgemeinen sind die Salze von anorganischen Säuren wasserlöslich» aber im wesentlichen unlöslich in organischen Lösungsmitteln. Jedoch können solche Salze,wie beispiels weise Hydrochloride,eine sehr beschränkte Löslichkeit In polaren organischen Lösungsmitteln, wie beispielsweise in niedrigen Alkoholen ,haben. Sals· von organischen Sturen,

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BAD ORIGINAL

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•JUNI -10-1971 989-PTG-I j5 IK-re

wie beispielsweise von Karbonsäuren, eingesch Loss-en zweibasische Säuren, wie beispielsweise Bernsteinsäure, Weinsäure, Maleinsäure, Fumarsäure, Glutarsäure usw., werden im allgemeinen hergestellt, indem man eine wässerige Lösung des Antibiotikums mit der stöchiome-■^ischen Menge der Säure umsetzt und die so erhaltene Lösung entweder gefriertrooknet oder das Produkt ausfällt. Das Ausfällen kann erreicht werden, indem man ein mischbares organisches Lösungsmittel, wie beispielsweise Aceton, Dioxan, Tatrahydrofuran, Methanol oder ähnliches zusetzt. Auch Solvate von Säureadditionssalzen der Antibiotika können hergestellt werden.

Eine Möglichkeit, die Aminoglykosidantiblotika Gentamicin B und/oder Gentamicin B, und/oder Gentamicin X, die die ungefähre molekulare Formel (i)

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JUNT--10-1971

989-FTG-14

IK-re

haben, genannt Gentamicin B, wenn R. Hydroxy, ft Wasserstoff und R^Amino ist, genannt Gentamicin B , wenn R, Hydroxy, Rp Methyl und R, Amino ist, und genannt Gentamicin X, wenn R₁ Amino, Rp Wasserstoff und R, Hydroxy ist, in freier Form oder in der Form von pharmazeutisch annehmbaren Derivaten zu erhalten, umfasst das Abtrennen wenigstens eines der genannten Antibiotika in freier Form oder in Form von pharmazeutisch annehmbaren Derivaten von einer Mischung, die wenigstens eines der genannten Antibiotika enthält, und falls gewünscht, das Ueberfuhren einer so erhaltenen freien Verbindung in ihr Derivat oder eines so erhaltenen Derivates in die freie Form oder eines Derivates in ein anderes Derivat. Die Abtrennung wird nach bekannten Verfahren durchgeführt. Es ist vorteilhaft, die Trennung mit Hilfe von chromatographischen Methoden, wie beispielsweise Säulenchromatographie, durchzuführen. Vorzugsweise wird Silikagel als Adsorbeis verwendet.

Die genannte Mischung enthält z.B. Gentamicin B und/oder Gentamicin B, und/oder Gentamicin X in Mischung mit wenigstens einem weiteren Antibiotikum, wie beispiels-* weise Gentamicin A und/oder Gentamicin C.

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. 989-pro-15

IK-re

Eine Mischung, die Gentamicin B, Gentamicin B,, Gentamicin X, Gentamicin A und Gentamicin C enthält, kann beispielsweise durch das Bebrüten von Mikromonospora purpurea und Mikromonospora echinospora erhalten werden, wie es in der US-Patentschrift Nr. 3,091*572 beschrieben wird. Die so erhaltene Mischung wird vorzugsweise einer Trennung unter Verwendung von Säulenchromatographie unterworfen, wobei man die untere Phase eines Lb'sungsmittelsystems, das aus Methanol, Chloroform und Ammoniumhydroxid besteht, als Eluierungsmittel verwendet. Vor dem Chromatographieren mischt man gleiche Teile der genannten ,Lösungsmittel, lässt absetzen und trennt die Schichten. Gentamicin C, das auch als Garamycin (Handelsmarke der Schering Corporation, Bloomfield, New Jersey)bezeichnet wird,das bekanntlich aus 3 Komponenten, nämlich C., C_1& und C besteht, wird zuerst eluiert, worauf Gentamicin B,, Gentamicin X, Gentamicin B und zuletzt Gentamicin A folgen.

Das Trennungsverfahren der Mischung wird im folgenden genauer beschrieben:

Am Ende derBärüoung werden die Antibiotika aus der Fermentationsbrühe extrahiert, wobei man den ganzen Antibiotikakomplex

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aus der Fermentationsbrühe auf einem Kationaustauschharz adsorbiert* vorzugsweise auf einem des Amberlittyps, wie beispielsweise IRC-50. Das Harz wird vorzugsweise im Ammoniumzyklus verwendet, und das rohe Antibiotikumgemisch wird mit verdünntem Ammoniumhydroxid eluiert. Das Eluat wird entfärbt, indem man es durch eine Säule leitet,die Aktivkohle oder vorzugsweise ein Anionenaustauschharz, insbesondere ein Harz des oben erwähnten Atnberlit IRA Typs, enthält. Für das Entfärben des Eluat es des IRC-50 Harzes wird vorzugsweise IRA-4O1S Harz im Hydroxylzyklus verwendet. Nach dem Entfärben wird das Eluat im Vakuum auf eine Lösung, die ungefähr JO bis βθ# Festkörper enthält, konzentriert, und für die Weiterbehandlung bereitgehalten. Zu diesem Zeitpunkt enthält die Lösung alle Antibiotika wie sie durch die Fermentation erzeugt worden sind im wesentlichen in dem Verhältnis, das dabei anfällt. Gentamicin C-Komponenten stellen ungefähr 60 bis 80# der Mischung dar und die neben Gentamicin C erzeugten Antibiotika den Rest. Daher ist es vorteilhaft, wenigstens einen Teil des Gentamicin C abzuscheiden, um die neben Gentamicin C erzeugten Antibiotika zu erhalten. Es gibt eine beachtliche Zahl von Harzen, die dafür* geeignet sind. Beispiele für solche Harze

~^l6~ BAD

JONI-10-1971 989-BTG-17 IK-re

sind Anionenaustauschharze, wie beispielsweise Amberlit IRA-4OO, Amberlit IRA-401, Dowexl-X2 und Dowex 2-X4 (Amberlit ist eine Handelsmarke der Firma Rohm and Haas Company, Philadelphia, Pennsylvania; Dowex ist eine Handelsmarke der Firma Dow Chemical Company, Midland Michigan). Im allgemeinen sind poröse stark basische Harze des quaternären Amintyps zweckmässig. Die Anmelder bevorzugen Dowex 1-X2 im Hydroxylzyklus. Die Komponenten von Gentamicin C werden davon unter Verwendung von deionisiertem Wasser, das einen ungefähren Widerstand von 50.000 bis ungefähr 15O.OOO Ohm aufweist, selektiv desbrbiert. Die Säule kann vorzugsweise in Serie geschaltet se'in und durch eine LeitfähigkeitsbrUcke mit einem automatischen Fraktionensammler verbunden sein, so dass ein scharfer Anstieg der Leitfähigkeit im ausfliessenden Lösungsmittel den Fraktionensammler auslöst. Aehnlich wird ein Abfallen der Leitfähigkeit (Ansteigen des Widerstandes) gefolgt von einem scharfen Anstieg der Leitfähigkeit das Sammeln einer neuen Fraktion veranlassen. Die Sorgfalt, mit der diese Säule betrieben wird, regelt zu einem wesentlichen Grad die Menge von Gentamicin C, die in der Mischung der neben Gentamicin C erzeugten Antibiotika zurückbleibt, und beieinflusst zu einem gewissen Grad die Wirksamkeit der folgenden Säule, die zum Auftrennen der übrigen Antibiotika verwendet wird.

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iiC-re ' .:.

Die neben Gentamicin C erzeugten Antiblotlke werden von der Dowex 1-X2 Säule eluiert, nachdem di? Gentamicin C-Komponenten entfernt worden sind. Das wässerige Eluat wird im Vakuum auf ein geeignetes Yolumen eingeengt und gefrieigetrocknet. In dieser Stuf e ist es vorteilhaft, die Antibiotikamischung in heissem Methanol zu lösen und abzukühlen, wobei die Lösung gleichzeitig der Luft ausgesetzt wird. Gentamicin A adsorbiert Kohlendioxid aus der Luft, wobei es ein schwer lösliches Karbonat bildet, das aus der Methanollösung auskristallisiert,-. durch Filtrieren davon abgetrennt und anschliessendla Vakuum getrocknet wird. Man konzentriert das FiItrat zu einem Rückstand und löst diesen in ungefähr 3 Volumsteilen der unteren Phase einer Lösungsmittelmischung, bestehend aus Methanol: Chloroform: Ammoniumhydroxid im Volumsverhältnis 1:1:1, auf. Die so erhaltene Lösung bringt man auf eine entsprechend dimensionierte Säule aus vorzugsweise Sillkagel auf und eiulert die Säule mit dem oben genannten Lösungsmittelgemisch, wobei man die Durchflussmenge kontrolliert. Gentamicin B und Gentamicin B₁ können in kristalliner For» erhalten werden, indem man die Rückstände der entsprechenden

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. 9S9-FTG-I9 IK-re

Fraktionen in Aethanol löst, die Lösung im Vakuum zu einem Rückstand einengt, diesen wieder in Aethanol auflöst, die Lösung wieder zu einer kristallinen Suspesion einengt. Dieses Vorgehen ergibt im wesentlichen reines Gentamicin B und Gentamicin B, in Form von Aethanolsolvaten, die ungefähr ein Mol Aethanol pro Mol Antibiotikum enthalten. Gentamicin X wird im allgemeinen als amorphes Produkt erhalten und verhält sich in dieser Beziehung wie die

Gentamicin C-Komponenten.
Eine andere Möglichkeit besteht darin, die gesamte

Antibiotikummischung der IRA-4O1S Säule, die auch die Gentamicin C-Komponenten enthält, der Silikagelchromatographie zu unterwerfen. Aber die so erzielte Trennung ist nicht so scharf wie die Trennung, bei der der Hauptteil des Gentamicin C und des Gentamicin A abgetrennt werden, bevor die Silikagelchromatographie durchgeführt wird. Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B₁ und Gentamicin X können nach dem Entfernen der Gentamicin C-Komponenten gefriergetrocknet und als Mischung verwendet werden, um antibakterielle und/oder anthelminthische Wirkung und/oder 10 Wirkung gegen Protozoen zu erreichen.

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Gf-sp ··

IK-re ' ^?·

Beispiel 1

A. Isolierung von Gentamicin C und den neben Gentamicin C erzeugten Antibiotika von der Fermentationsbrühe Man stellt den pH-Wert der Fermentationsbrühe, die entsprechend dem Verfahren der US-Patentschrift 3,091,572 erhalten worden ist, mit Hilfe von 6n Schwefelsäure auf 2,0 ein. Man rührt die Mischung während etwa 30 Minuten, filtriert durch ein entsprechend dimensioniertes FiIter ₉ das vorher mit einer etwa 2,5 cm dicken Schicht einer Filterhilfe beschichtet worden ist. Man stellt den pH-Wert des Filtrates mit 6N Ammoniumhydroxid auf ungefähr 7 ein und fügt Oxalsäure zu* bis ein pH-Wert von 4 erreicht ist. Diese Menge von Oxalsäure ist meist ausreichend, um die Kalziumionen in der Fermentationsbrühe als unlösliches Kalsiuffloxalat auszufällen. Man stellt den pH-Wert mit 6n Ansmoniurahydroxid auf ungefähr 7 ein und rührt die Mischung während ungefähr 1 bis k Stunden bei einer Temperatur von 20 bis 35°C. Man filtriert die Mischung unter Verwendung eines entsprechend dimensionierten und beschichteten Filters und bewahrt das Filtrat. Man adsorbiert die Antibiotikamischung an IRC-50 (Ammoniurasyklus), indem man ungefähr 10 g Harz pro Liter des ursprünglichen Brühenvolumens einsetzt. Man wäscht das Harz

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JTJNI -10 -3 971 9By-FTG-21

mit deionisiertem Wasser farbfrei und eluiert dl« Antibiotika mit 2N Ammoniumhydroxyd und konzen · -' srt das Eluat im Vakuum zu einer Lösung, die ungefähr 50$ Pestkörper enthält.

B. Abtrennung der Gentamicin C-Komponenten von Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B und Gentamicin X Man bringt 1,3 m Dowex 1-X2 Harz (Hydroxylzyklus) in eine Chromatographiesäule ein, die 91 om Durchmesser und wenigstens 244 cm Höhe aufweist und durch eine LeitfähigkeitsbrUcke mit einem Praktionensammler verbunden ist. Man pumpt deionisiertes Wasser durch das Harz bett, bis das ausfliessende Wasser einen Widerstand von wenigstens 65»000 0hm hat. Man bringt eine wässerige Lösung von ungefähr 120 1, die ungefähr 60 kg Pestkörper (des Schrittes A) enthält, auf die Säule auf und adsorbiert die Antibiotkamischung, wobei man die Antibiotkamischung in einer Geschwindigkeit von ungefähr 2 Liter pro Minute durch die Säule leitet. Man entwickelt die Säule mit deionisiertem Wasser- bei einer Geschwindigkeit von ungefähr 2 Liter pro Minute und sammelt die Fraktionen entsprechend der Leitfähigkeit der Eluate. Im-allgemeinen werden 7 Fraktionen gesammelt, die zwischen ungefähr 14 und 750 Liter aufweisen. Die ersten 5 Fraktionen umfassen ungefähr 500 1 und enthalten die Hauptmenge der Gentamicin C-

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JUNI-10-19T1

989-FTG^-22

IK-re

Komponenten. Die verbleibenden 2 Fraktionen betragen ungefähr I5OO bis ΙβΟΟ 1 und enthalten die Hauptmenge von Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B, und. Gentamicin X. Die zuletzt genannten zwei Fraktionen werden vereinigt, im Vakuum auf ein kleines Volumen eingeengt und entweder gefriergetrocknet oder durch Versprühen getrocknet.

) In den Fällen, in denen die Mischung der neben Gentamicin C erzeugten Antibiotika verwendet wird, genügt entweder das gefriergetrocknete oder das durch Versprühen getrocknete Material.

C. Isolierung von Gentamicin A

Man löst 19,8 kg des Fermentationsproduktes, von dem der Hauptteil des Gentamicin C (Schritt B) entfernt worden ist, in 45 1 heissem Methanol. Man klärt die Lösung durch P Filtrieren, kühlt sie auf Raumtemperatur, wobei man sie der Luft aussetzt, und impft mit Gentamicin A. Gentamicin A kristallisiert in Form von farblosem Karbonat, das man abfiltriert, etwas mit Methanol wäscht und bei 8O C im Vakuum trocknet, wobei man 1119gdes Produktes dieses Beispieles erhält. Die Mutterlauge und die Waschlösungen

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BAD ORIGINAL

989-FTG-23 IK-re

vereinigt man, engt sie im Vakuum auf einen Rückstand ein und chromatographiert wie in Schritt D beschrieben wird.

D. Chromatographische Trennung von Gentamicin B, Gentamicin B₁ und Gentamicin X

Man füllt zwei in Serie miteinander verbundene Chromatographie~ säulen von einer Grosse von 152 cm χ 10 cm mit Silikagel (z.B. Baker Silikagel für Chromatographie), das vorher durch Kontakt mit der unteren Phase elnerMischung von Chloroform, Methanol und konzentriertem Ammoniumhydroxyd in einem Verhältnis von 1:1:1 vorbereitet worden ist. Man stellt eine Lösung von 750 g des Rückstandes von Stufe C in einem möglichst kleinen Volumen her, etwa in 2 Litern der unteren Phase des oben genannten Lösungsmittelgemisches. Man bringt die Antibiotikalösung auf die erste Säule auf und- eluiert die Säule mit einer Geschwindigkeit von etwa 3 bis etwa 4,5 1 pro Stunde, wobei man die Fraktionen von Je ungefähr 2 Litern sammelt. Man überwacht die ausfliessende Flüssigkeit durch Dünnschichtchromatographie auf Silikagelplatten, wobei man dasselbe Lösungsmittelsystem verwendet, das auf der Säule verwendet wird. Man vereinigt die Fraktionen, die gleiche Antibiotika enthalten, und dampft sie zu einem Rückstand ein. Wenn die Menge von Gentamicin B, das eluiert wird,

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■ 989 -

^IK-^re

abnimmt oder verschwindet, eluiert man die Säule mit einer Mischung* die aus gleichen Volumsteilen Methanol und konzentriertem Ammoniumhydroxyd besteht, um die Säule vollständig zu eluieren. Die Fraktionen, die Gentamicin B und Gentamicin B, enthalten, löst man in Aethanol auf und konzentriert die Lösung zu einem Rückstand. Die Wiederholung des vorherigen Schrittes führt zu einer kristallinen Suspension von Aethanolsolvat von Gentamicin B und Gentamicin B,. Wenn man die vorher besen -.ebene chromatographische Trennung durchführt,, erhält man Produkte in einer Menge und in einer Reihenfolge wie folgt:

Gentamicin C )

Gentamicin B- ) Gentamicin B,

Gentamicin B_n )

¹ )

Gentamicin X )

Gentamicin X

Gentamicin X )

Gentamicin B )

Gentamicin B

Gentamicin 3 )

Gentamicin A )

198,6 g

42,0 g

67.8 g 12,3 g

74.9 g 85,8 g

165,0 g

[α]

26^C

= 157

ο .

[α]

26^C

- 153.8°

[α]

26^C

-24-

BAD ORIGINAL

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. JWI-lü-1971
9δ9-?τσ-25
IK-re

Die Fraktionen, die Mischungen der Antibiotka enthalten, können neuerlich chromatographiert werden, um die Ausbeute der einzelnen Fraktionen zu erhöhen.

Beispiel 2 Herstellung des Sulfates von Gentamicin A

Man löst 5,0 g Gentamicin A in 25 ml Wasser und stellt

den pH-Wert der Lösung mit IN Schwefelsäure auf 4,5 ein» Man behandelt die Lösung mit ungefähr 50 mg Aktivkohle während

ungefähr 15 Minuten und filtriert. Man giesst unter

heftigem Bewegen das Filtrat in ungefähr 300 ml Methanol,

setzt die Bewegung während etwa 10 bis 20 Minuten fort

und filtriert. Man wäscht den Rückstand mit Methanol und

trocknet bei ungefähr 60 C im Vakuum , um das Produkt dieses Beispiels zu erhalten.

In ähnlicher Weise kann man das Sulfat von Gentamicin B, Gentamicin B, und Gentamicin X herstellen. Um das Sulfat einer Mischung von Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B, und Gentamicin X herzustellen, behandelt man das
gefriergetrocknete oder durch Versprühen getrocknete
Produkt des Beispiels 1 Stufe B wie in diesem Beispiel
beschrieben wird.

-25-

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:" JUNI-10-1971

-" ; ■ ' 9i89-FTG-26 ΙΚ-Γθ

Beispiel 3

Herstellung des Hydrochlorides von Gentamicin B ₁ . Man löst 5,0 g Gentamicin B₁ in 1000 ml Wasser. Man bereitet eine Säule vor, die 500geines schwach basischen lonenaustauschharzes im Chloridzyklus, vorzugsweise IR-45 (Handelsmarke von Rohm und Haas, Philadelphia, Pennsylvania), enthält. Mari leitet die Antibiotikalösung durch die Säule, gefolgt von 500 ml Wasser. Man konzentriert die ausfliessende Flüssigkeit im Vakuum auf ungefähr 100 ml und gefriertrocknet das Produkt, wobei man das Produkt dieses Beispiels erhält.

In analoger Weise kann man die Hydrochloride von Gentamicin A, Gentamicin B und Gentamicin X herstellen.

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auch auf das Bekämpfen von bakteriellen Infektionen, das darin besteht, beispielsweise einem Tier, das eine solche Infektion hat, eine therapeutisch wirksame Menge von wenigstens einem der Antibiotka, Gentamicin B, Gentamicin B-, Gentamicin X und Gentamicin A, deren nicht giftigen pharmazeutisch annehmbaren Derivaten, wie beispielsweise Säureadditionssalzen, Solvaten und Hydraten alter · dieser Verbindungen, zu verabreichen.

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Diese Erfindung bezieht sich auch auf die Behandlung von bakteriellen Infektionen, die darin besteht, beispielsweise einem Tier, das eine solche Infektion hat, eine therapeutisch wirksame Menge einer Mischung zu verabreichen, die als aktive Hauptkomponente eine oder mehrere Substanzen_/Gentamicin B, Gentamicin B,, Gentamicin X und deren nicht giftige pharmazeutisch annehmbare Derivate, wie beispielsweise Säureadditionssalze, Solvate und Hydrate aller dieser Verbindungen, enthält.

Die Erfindung bezieht sich auch auf die Bekämpfung von Infektionen, die durch Protozoen verursacht sind, und/oder von Wurmerkrankungen. Dabei werden therapeutisch wirksame Mengen von wenigstens einem der genannten Antibiotika Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B, und Gentamicin X, deren nicht giftigen pharmazeutisch annehmbaren Derivaten, wie beispielsweise Säureadditionssalzen, Solvaten und Hydraten all dieser Verbindunger an beispielsweise Tiere verabreicht.

Die Erfindung bezieht sich auch auf das Behandeln von Infektionen, die durch Protozoen verursacht sind, und/oder von Wurmerkrankungen, die das Verabreichen einer therapeutisch

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JUNI»!0-1971

9Ö9-PTG-28

IK-re

wirksamen Menge einer Mischung, die als Hauptaktivsubstanz eine oder mehrere der Substanzen Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B₁ und Gentamicin X oder der nicht giftigen pharmazeutisch annehmbaren Derivaten, wie beispielsweise Säureadditionssalze, Solvate und Hydrate all dieser Verbindungen, an· beispielsweise Tiere, die solche Erkrankungen haben, umfasst.

Gentamicin Ä und Gentamicin X und zu einem geringeren Ausmass Gentamicin B und Gentamicin B₁ sind wirksam gegen Protozoen, wie Entamoeba histolytica^, Historaonas meteagridiSi) Trichomonas foetus und Trichomonas vsginalis* Histomonas meleagridis ist ein Parasit^, der Enterohepatitis bei Truthähnen verursacht, ("blackhead disease"). Diese Krankheit verursacht ernste ökonomische Probleme bei der Truthähne züchtenden Industrie. Trichomonas vaginalis ist der Krankheitserreger^ der sehr häufig mit Infektionen der menschlichen Vagina verbunden ist und der meist sehr schwer auszuroden ist.

Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B₁ und Gentamicin X sind auch wirksam als anthelminthische Agentien gegen MadenwUrmer, wie beispielsweise Syphazia obveata.

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JÜNI-IO-1971

989-FTG-29 IK-re

Es ist überraschend, dass die Substanzen Gentamicin A, aentamicin B, Gentamicin B₁ und Gentamicin X va^tvolle Wirkungen gegen Protozoen aufweisen. Es ist berichtet worden, dass Gentamicin C, das den vorhergenannten Antibiotika strukturell ähnlich ist, nur schwache Aktivität gegen T. vaginalis bei verhältnismässig hohen Dosen zeigt. Es ist ferner von Albach et al in American Journal of Tropical Medicine und Hygiene, 15, 885 (1965) berichtet worden, dass Gentamicin C verhältnismässig unwirksam gegen E. histolytica ist. Alle diese Gentamicin-Antibiotika sind Glieder einer chemischen Klasse von Verbindungen, die manchmal als Aminoglykoside bezeichnet wird. Diese Klasse umschliesst bekannte Antibiotika wie Neomycin, Kanamycin, Streptomycin und Paromomycin. Nur von Paromomycin ist bekannt, dass es eine Aktivität gegen Protozoen von namhaftem Ausmass aufweist. Ferner sind mit Ausnahme von Paromomycin, Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B₁ und Gentamicin X die einzigen Aminoglykoside, von denen jetzt bekannt ist, dass sie anthelminthische Aktivität bei zweckmässiger Dosis aufweisen.

In Hinblick auf diese Eigenschaften können Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B₁ und Gentamicin X in vitro in

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JUJJI-10-1971

989-F^¹G-IO

IK-re

in Waschlösungen für sanitäre Zwecke verwendet werden, wie beispielsweise für das Reinigen von Laborgträten, die mit Protozoen der oben genannten Art infiziert sind. Das bezieht sich speziell auf die oberen Teile von Labortischen, auf Tierkäfige und Stallungen, die man von Parasiten der Arten von Protozoen und Bakterien, die gegen die genannten Antibiotika empfindlich sind, reinigen will. Infolge ihrer in vivo Aktivität können die Verbindungen dieser Erfindung in Mischung mit Trinkwasser oder Tierfutter für die Behandlung von Untersuchungs -und Haustieren verwendet werden, wenn die genannten Tiere intestinale Infektionen durch Bakterien, Protozoen oder Würmer oder Kombinationen der vorher genannten Organismen haben, wobei die infizierenden Organismen empfindlich gegen die Verbindungen dieser Erfindung sind.

Diese Verbindungen sind besonders zweckmässig bei intestinalen Erkrankungen, da sie nicht nennenswert vom Gastrointestinaltrakt absorbiert werden. So kann eine beachtliche Konzentration des therapeutischen Mittels eingenommen werden, ohne toxische Erscheinungen im Patienten zu verursachen und gleichzeitig kann das Mittel in Mengen vorliegen, die ausreichen, den infizierenden Organismus zu zerstören oder wenigstens wesentlich einzudämmen. Um allge-

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"IK-re'

meine bakterielle Infektionen des Systems zu bekämpfen, erfolgt die Verabreichung des Antibiotikums anders als oral, vorzugsweise mittels Injektionen.

Ai.ribiotische Aktiviät -in vitro

In der folgenden Tabelle III ist die minimale Inhibitionskonzentration (MIC) von Gentamicin B, Gentamicin B-. und Gentamicin X in Vergleich mit der MIG des bekannten Antibiotikums Kanamycin gegen eine Vielzahl von grampositiv·-..1 und gramnegativen Mikroorganismen zusammengestellt. Die Antibiotika wurden in der Form der freien Base eingesetzt. Die Untersuchungen wurden in einem Medium bestehend aus Hefe-Rindfleischbrühe mit einem pH-Wert von 7,4 ausgeführt.

	Tabelle	III	B Gentamicin B,	Gentamicin	X Kanamycin
	MIC (pg/ml)
Organismus	Gentamicin	0,08	-	3
Aerobacter
aerogenes '	0,08	3,0	0,03	0,3
Bacillus.		0,08-0,3	0,3	5
subtilis'	0,8
Escherichia coli	0,03-0,3	3,0	0,75	1
Klebsiella.
pneumoniae	3,0	0,08 0,	3-0,75	62,5
Pseudomonas
aeruginosa '	0,C>-0,08

-³¹- BAD

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Organismus Gentamicin B Gentamicin B, Gentamicin X Kanamycin

. Sarcina lutea 0,3 0,5 - 4 ' Staphylococcusλ

aureus 0*3-3,0 0,3-3,0 0,08-0,75 0,25 Streptococcus »

pyogenes "' 3,0 3,0 0,3-0,75 50

Shigella sp M324 5,0 5,0

Salmonella sp. 1 0_s8 0,3 0,75

Salmonella sp. 2 0,8 0,3

Salmonella sp.B 0,8 0,3

AntibiQtische Aktivität - in vivo-

Bie Sohutzaktivität von Gentamicin B₅ Gentamicin B₁ und

Gentamicin X wird ermittelt, indem man die betreffende Verbindung eine Stunde nach dem Verabreichen einer infizierenden Dosis des pathogenen Organismus subkutan I

verabreicht und die überlebenden Versuchstiere 48 Stunden nach der Infektion zählt. Infizierte, nichtbehandelte Kontrolltiere sterben in ungefähr l8 bis 24 Stunden. Im allgemeinen werden den Mäusen 5 bis 7 verschiedene Dosen "verabreicht. Die Mäuse wiegen 20 g und sind in Gruppen von 7 bis 10 Stück zusammengefasst. Die PD₅₀ Werte werden in der folgenden Tabelle IV zusammengefasst:

—"52—

BAD ORIGINAL

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989-FTG-35

.TK-re

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Tabelle IV 2130113

Sohutzaktjvität von Gentamicin B,B_n und X bei Susen

PD₃₀ (mg/kg) Microorganismus Gentamicin B Gentamicin B₁ Gentamicin X

Staphylococcus

aureus Gray 20,0 JO,0 4,0

Staphylococcus

aureus W 50,0 50,0

Staphylococcus

aureus Smith 5,0 2,5

Streptococcus

pyogenes C 15,0 18,0

Salmonella

paratyphi B 5,0 4,0

Pseudomonas

aeruginosa SC 2,0 2,0 7,0

Escherichia

coli SC ■ - 1,5

Akute Toxicität

Die akute Toxicität von Gentamicin B, Gentamicin B, und Gentamicin X wird an männlichen CF-l(Carworth Farms) Mäusen, die ungefähr je 20 g wiegen, ermittelt. Die Resultate dieser Untersuchung sind in der folgenden Tabelle V zusammengestellt:

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• IF-re Tabelle V ^H

Akute Toxizität von Gentamicin B, Gentamicin B und Gentamicin X

. (mg/kg)

Art der Verabreichung . Gentamicin B Gentamicin B., Gentamicin X

intravenös 228 2^0

intraperitoneal 1750 16OO JlOOO

subkutan '^1500 * J15OO oral

In vitro Aktivität gegen Trichomonas vaginalis In der folgenden Tabelle VI ist die in vitro Aktivität der Verbindungen dieserErfindung gegen Trichomonas' vaginalis zusammengefasst. Die Untersuchung wurde im wesentlichen durchgeführt, wie es von R.J. Schnitzer auf Seiten 289-351 in Experimental Chemotherapy, Volume 1, Academic Press, New York (1965) beschrieben wird.

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989-FTG-35

IK-re

Tabelle VI

Verbindung

Minimaler Gehalt

für 99$ Unterdrückung

(ug/ml) (pg/ml)

24 Stunden 48 Stunden

Minimaler Gehalt
für vollständigen Schutz (pg/ml) 24 Stunden 48 Std,

Gentamicin A	10	5-10	25	10
Gentamicin B	25	25	)²⁵°	25
Gentamicin EL	25	10-25	)250	25
Gentamicin X	-	2,5	-	10
, (D Garamycin—	250	100	^N>250	100

Vereinfachtes Tripticaseserummedium,Baltimore Biolgical Laboratories, Baltimore, Maryland.

Gegen Entamoeba hystolytica hat Gentamicin X eine minimale Inhibitionskonzentration von 4 mcg/ml (48 Stunden) und eine minimale Schutzkonzentration von 7 mcg/ml (48 Stunden)..

Anthelminthische Aktivität in vivo

Gentamicin B und Gentamicin X zeigen anthelminthische Aktivität gegen Syphacia obvelata, wenn die Untersuchungen an Gruppen von 7 männlichen Millerton Mäusen im wesentlichen nach 0.D, Standen, Seite 7OI-892, Experimental Chemotherapy, Vol/ume 1, durchgeführt werden.

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	259	Tabelle	0	36	VII	JUNI-1C-1971 989-FTG-36 IK-re 2130113	0
	100	Tag	0	% in Diät		0
	39	0	,25	% mittlere infiziert Wurmmenge	0
	8	0	,0625	0	29,5
Verbindung mg/kg/pro	310	0	,02	0	0
Gentamicin B	62	0	,008	0	27
Gentamicin B	0	0	,25	67	53
Gentamicin B	0	0	,05	0	22
Gentamicin B	0	0		83	6,8
Gentamicin X			100
Gentamicin X		100
Kontrollsubstanz		75
Kontrollsubstanz
Kontrollsubstanz

Die Daten in Tabelle VII zeigen, dass Gentamicin B eine anthelminthisehe Aktivität gegen Syphacia obvelata bei einer Mindestdosis von 39 mg/kg pro Tag bei Verabreichung an männliche Millerton Mäuse hat. Gentamicin X erreicht einen, totalen Erfolg bei 310 mg/kg pro Tag und einen teilweisen Erfolg bei 62/mg/kg pro Tag unter den gleichen Untersuchung sbed ingung en .

Vermindertes Auftreten von.Ataxia

Gentamicin B und zu einem geringeren Ausm'ass Gentamicin Bj zeigen eine Eigenschaft,die recht ungewöhnlich für Aminoglykosidantibiotika ist. Wenn man diese Verbindungen entsprechend den Untersuchungsmethoden, die von Weinstein,

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JUNT-10-197?

939-3TG-37 IK-re

Wagman und Taber in Antimikrobial Agens and Chemotherapy, 1965* Seiten 227-231, beschrieben sind, verabreicht, so benötigen diese Verbindungen eine wesentlich längere Zeit der Anwendung bei hohen Dosen um eine Störung des Streckreflexes und das Auftreten von Ataxia zu erreichen. Es scheint ein Zusammenhang zwischen hohen Dosen von aminoglykosidartigen Antibiotika, die über eine ausgedehnte Zeit verabreicht werden, und vestibulären Schädigungen zu bestehen, wobei eines der ersten Symptc ne Ataxia ist. Die Untersuchungsergebnisse in Tabelle VIII zeigen, dass Gentamicin B und Gentamicin B,-in Vergleich zu Gentamicin C (Garamycin) in Dosen verwendet werden können, dieVfesentlieh über den normalen therapeutischen Dosen liegen. Ferner können sie in solchen Dosen für eine Zeit verwendet werden, die wesentlich über der normalen Zeit liegt, die benötigt wird, um Infektionen zu beheben, ohne Ataxia zu verursachen, wobei minimale wenn überhaupt auftretende toxische* Erscheinungen fesgestellt werden.

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	Dosis (mg/kg/pro Tag)	3?	JUNI-IO-1971 .989-FTG-33 IK-re	von mittlere Tagzahl bis zum Auftreten von Attaxia
	240 60 40		2130113	21,0 69,0 108,0
	60 40 20		13,5 17,5 31,4
	240 60 40	täglicher subkutaner	21,0 81,0 >312*

Tabelle VIII	Anzahl Katzen
Chronische Toxizität bei Katzen nach	1 4 4
Verabreichung.	8 11 5
Antibiotic	1 4 4
Gentamicin B,
(B.) Garamycin ^{v ;}
Gentamicin B

* Die Untersuchung wurde am Ende vor 385 Tagen beendet, als Ataxia an 2 von den 4 Katzen nicht aufgetreten war. Die ange gebenen Zahlen stellen das abgerundete Mittel dar.

Prophylaktische Aktivität von Gentamicin A bei Truthähnen gegen Histomonas Meleagridis

Gentamicin A wurde an Gruppen von Truthähnen in einer Dosismenge von 5, 10 und I5 mg pro Truthahn und Tag in wässeriger Lösung verabreicht. Zwei Tage nach dem Verabreichen des Medikaments wurden die Truthähne oral mit 500 Heterakis gallinae ova (die Zwischenträger von Histomonas) infiziert. Eine einzige Gruppe von Truthähnen erhielt während 6 Tagen 0,035 % Genta-

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JUNl-I0-1971

939-T5TG-39 IK-re

micin A in ihr Futter. Unbehandelte infizierte Kontrolltiere wurden auch beobachtet. Die Untersuchung wurde während 12 Tagen durchgeführt, und die Vögel wurden am IjJ. Tag aircopsiert. Die Infektion zeigt sich im allgemeinen besonders an zwei Stellen, dem Blinddarm und der Leber, die bei der Autopsie überprüft wurden.

Aus den Ergebnissen des obenbeschriebenen Testes kann geschlossen werden, dass Gentamicin A eine vorbeugende Aktivität bei Truthähnen gegen Histomonas meleagridis bei einer minimalen Dosis von 10 mg pro Vogel zeigt. Unbehandelte Kontrolltiere hingegen wurden infiziert.

Die Verbindungen dieser Erfindung Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B, und Gentamicin X sind geeignet für orale, äusserliche und parenterale Verabreichung. Wenn sie oral verabreicht werden, können sie in Form von Tabletten, Kapseln, Elixieren und ähnlichem oder sogar in Mischung mit * Tierfutter verwendet werden. In dieser Dosisform sind die Verbindungen besonders in Hinblick auf ihre Wirkung als Anthelminthika und als Mittel gegen Prtozoen wirksam. Das trifft besonders zu, wenn sie für die Behandlung von intestinaler Amoebiasis oder nicht spezifische Diarrhöe

BAD

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JUNI-10-1971 989-FTG-4O

IK-re

verwendet werden. Die Verbindungen dieser Erfindung können in Dosiseinheiten als einzige aktive Ingredientien vorliegen oder sie können in Verbindung mit anderen aktiven Ingredientien vorliegen, wie beispielsweise mit Beruhigungs-' mitteln, da es bekannt ist, dass Infektionen und Infestationen oft Angstzustände hervorrufen. Wenn der Warmblüter oral behandelt wird, so ist die verabreichte Menge . etwa 10 bis etwa 100 mg, vorzugsweise 20 bis 70 mg/kg Körpergewicht und Tag, vorzugsweise geteilt in 2 bis t Dosen.

Bei äusserlieher Anwendung liegen die erfindungsgemässen Verfoindwigen in Form von Cremen, Salben, Suppositorien und dergleichen vor. Solche Dosisformen sollten etwa 1 bis etwa 10$ Antibiotikum enthalten, und sollten an der Stelle der Infektion 2 bis 4 mal täglich aufgebracht werden.

Bei der Behandlung von bakteriellen Infektionen können die Antibiotika Gentamicin B, Gentamicin B, und Gentamicin X in Mengen von ungefähr 2 mg bis ungefähr 20 mg, vorzugsweise 5 bis 15 mg pro Kilogramm Körpergewicht angewendet werden.

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Wie oben in Tabelle VIII gezeigt worden ist, koYinen Gentamicin B und Gentamicin B in Hinblick auf ihre geringe Fähigkeit Ataxia zu verursachen für die Behandlung von tief sitzenden bakteriellen Infektionen verwendet werden, insbesondere für solche, die sich als widerstandsfähig gegen andere antibakterielle Mittel erwiesen haben. Vorzugsweise wird Genta-

micin B und/oder Gentamicin B, parenteral verabreicht und zwar in Dosen von etwa 2 bis etwa 10 mg/kg Körpergewicht pro Tag, geteilt in mehrere Dosen.

Wenn von den Antibiotika Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B, und Gentamicin X gesprochen wird, so ist natürlich auch die Anwendung von deren pharmazeutisch anwendbaren Derivaten, insbesondere von ihren Saureädditionssalzen und Solvaten, sowie Hydraten all dieser Verbindungen eingeschlossen.

Wie zuvor erwähnt worden ist, können die Antibiotika in Form von Zubereitungen angewendet werden. Diese Zubereitungen können durch Mischen der aktiven Ingredientien mit einem geeigneten pharmazeutischen Träger hergestellt werden, wie beispielsweise Gellatine, Laktose, Talkum, Stearinsäure, Acaeia,.Gummi oder Zellulosematerial, Polyalkylene, Glykole, Vaselin, desintegrierende Agentien, wie beispielsweise Mais

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JUNI-VQ-1971-

98<>-FTG-42 IK-re

oder Stärke, Schmier- oder Gleitmittel, wie beispielsweise Magnesiumstearat und Kalziumkarbonat, aromatiosches Wasser, Benzylalkohol, Syrup, pharmazeutische Leim, Elixiere, Färmbemittel, Tinkturen, Extrakte, OeIe, steriles Wasser oder isotonische Salzlösung, Präservative, wie beispielsweise Methylparaben, Propylparaben, Benzoesäure und nicht toxische antimicrobielle Agentien.

Die folgenden Beispiele sollen einige Möglichkeiten von Dosisformen, in die die erfindungsgemassen Verbindungen gebracht werden können, darstellen.

Zubereitung I Parenterale Lösung

mg/ml ml/lO ml«

Gentamicin B (als Sulfat) 40 - 200 * 400 - 2000 Methylparaben 1,8 18

Propylparaben 0,2 2

mit Injektionswasser

auffüllen auf 1,0ml 10,0 ml

* berechnet für eine theoretische Reinheit von 100 %

Man bringt 70 % des für Injektionen geeigneten Wassers in ein passendes Mischgefäss ein und erhitzt auf 70°C, fügt Methylparaben und Propylparaben zu und mischt bis diese ge-

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939 -5-TG-45 IK-re

löst sind. Man kühlt die Lösung auf 25 bis J0° O,

leitet einen Stickstoffstrom durch|eln geeignetes Sterilisierfilter, wobei man geeignete aseptische Techniken verwendet. Füllt die Lösung in geeignete sterile Behälter, wobei man ebenfalls geeignete aseptische FUllmethoden verwendet.

Zubereitung II

Parenterale Lösung	mg/ml	mg/10 ml.
	40 bis 200*	400 - 2000
Gentamicin A (als Sulfat)	1,80	18,00
Methylparaben	0,20	2,00
Propylparaben	3,20	32,0
Natriumbisulfit	0,10	1,00
Dinatrium edetatdihycrat	1,25	12,50
Eisessig	2,50	25,00
Natriumaoetat	100 bis 400	1000 - 4000
Propylenglykol	1,0 ml	10,00 ml
mit Injektionswasser auffüllen auf

Basierend auf der theoretischen Reinheit von 100

Man bringt 70 % des Injektionswassers in ein geeignetes Mischgefäss ein und erhitzt auf 70° C, fügt Methylparaben und Propylparaben zu, mischt bis diese gelöst sind,kühlt die Lösung auf 25 bis 30°C, leitet einen Stickstoffstrom

* durch die Lösung, fügt Gentamicin B in Form dee Sulfates zu und mischt bis dieses gelöst ist. Man füllt die Lösung auf das gewünschte Volumen auf, leitet die Lösung durch

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JUNI-IO-1971 989 -FTG- 44 IK-re

durch die Lösung, fügt Natriumacetat und Eisessig zu und mischtI bis dieses gelöst ist, fügt Propylenglykol zu' und mischt sorgfältig. Man fügt Gentamicin A in Form des Sulfates zu, mischt bis es gelöst ist und bringt die Lösung auf das gewünschte Volumen. Danach leitet man die Lösung durch ein entsprechendes Sterilisierfilter, wobei man aseptische Methoden verwendet, füllt die Lösung in geeignete sterile Behälter, wobei ebenfalls geeignete aseptische Methoden verwendet werden.

Zubereitung III

Parenterale Lösung	mg/ml	mg/100 ml
	40 bis 200*	4000-20,000
Gentamicin B₁ (als Sulfat)	1,80	l8o
Methylparaben	0,20	20
Propylparaben	3,20	320
Natriumbisulfit	0,10	10
Dinatriumedetatdihydrat	1,25	125
Eisessig	2,50	250
Natriumacetat

auffüllen mit Injektions- ·

wasser auf 1,00 ml 100 ml

* Basierend auf der theoretischen Reinheit von 100 %

* sorgfältig. Danach beendet man das Durchleiten von Stickstoff, fügt Natriumbisulfit zu und mjasht

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Man bringt 70$ des Injektionswassers in einen geeigneten Mischbehälter ein und erhitzt auf 70° C, fügt das Methylparaben und Propylparaben zu, mischt bis diese gelöst sind, kühlt diese Lösung auf 25 C, leitet einen Stickstoffstrom durch die Lösung, fügt Dinatriumedetatdihydrat, Natriumacetat und Eisessig zu und mischt sorgfältig. Man beendet das Durchleiten des Stickstoffstromes, fügt Natriumbisulfit zu, mischt, bis es gelöst ist, fügt Gentamicin B, In Form des Sulfates zu und mischt, bis dieses gelöst ist. Man bringt die Lösung auf das gewünschte Volumen, leitet die Lösung durch ein geeignetes Sterilisierfilter, wobei man geeignete aseptische Methoden verwendet, füllt die Lösung in geeignete sterile Behälter, wobei man geeignete aseptische Füllmethoden verwendet.

Zubereitung IV Syrup für orale Verabreichung pro Liter

Gentamicin A {als Sulfat) 100 *

Granulierter Standardzucker 550

Sorbitollösung 200

auffüllen mit Wasser auf 1,0 1

•^Basierend auf der theoretischen Reinheit von 100$

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Man bringt Gentamicin A in Form des Sulfates, granulierten Zucker und Sorbitollosung in ungefähr 300 ml Wasser, das in einem geeigneten Mischbehälter vorliegt, ein. Man mischt, -...s eine Lösung vorliegt und füllt auf einen Liter auf. Man leitet die Lösung durch ein geeignetes Klärfilter.

Zubereitung V Syrup für orale Verabreichung pro Liter

Gentamicin B (als Sulfat) 100 g*

granulierter Zucker 100

Glukosesyrup 44

Sorbitollösung 400

Gycerin 50

Alkohol , 50

auffüllen mit Wasser auf 1,0 1

* Basierend auf der theoretischen Reinheit von 100$ Man fügt Gentamicin B in Form des Sulfates, granulierten Zucker, Glukosesyrup,Sorbitollösung, Glyzerin, Alkohol zu ungefähr 500 ml Wasser, das in einem geeigneten Mischbehälter vorliegt. Man rührt bis eine Lösung vorliegt, füllt mit Wasser auf einen Liter auf und leitet die Lösung durch ein geeignetes Klärfilter,

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	Topische Creme	JXJNl-lO-1971 989-FTG-47. IK-r? Ift 2130113
Zubereitung VI	Gentamicin A (als Sulfat)
Stearinsäure	g/kg
Propylenglykolmonostearat	10 - 100 *
Isopropylmyristat	60
100
80

Polyoxyäthylen(20)sorbitanmonopalmitat 60 Sorbitanlösung 20

auffüllen mit Wasser auf 1,0 kg

^Basierend auf der theoretischen Reinheit von 100$

Man bringt Stearinsäure, Propylenglykolmonostearat, Isopropylmyristat und Polyoxyäthylen(20)sorbitanmonopalmitat in ein geeignetes Rührgefäss ein, erhitzt auf 80%bis zur Schmelze und mischt.

Zubereitung VII Topische Creme g/kg

Gentamicin B (als Sulfat) 10 - 100 *

Aethoxylierter Cetyl/Stearylalkohol 20 Cetylalkohol 35

Stearylalkohol 35

Vaselin 200

Mineralöl 50

auffüllen mit Wasser auf 1,0 kg

^4? rad

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JUNI-]0-1971

969-FTG-^R IK-re

* Basierend auf der theoretischen Reinheit von ~'^f-

Man gibt Cetylalkohol, Stearylalkohol,äthoxylierten Cetyl/stearylalkohol, Vaselin und Mineralöl in ein

ο geeignetes Mischgefäss, erhitzt auf 80 C zur Schmelze,

gibt Gentamicin B in Form des Sulfates in ungefähr 95 % des Wassers, das auf 8o C in einem geeigneten Mischgefass erhitzt worden ist, mjscht, fügt die geschmolzene Wachsphase zu der wässerigen Phase und mJS3ht, während man auf ungefähr 4o° C abkühlt, fügt das auf 1. kg fehlende Wasser zu und mischt bis die Mischung erkaltet ist.

Zubereitung VIII Topische Salbe g/kg

Gentamicin B₁ (als Sulfat) 10 - 100 *

weisses Vaselin, Rest auf 1,0

*Basieren auf der theoretischen Reinheit von 100 %

Man schmilzt und erhitzt das Vaselin auf 50 C in einem geeigneten Mischbehälter, entfernt einen Teil des geschmolzenen Vaselins und stellt eine Aufschlämmung des Gentamicin B₁ in Form des Sulfates her. Man treibt die Aufschlämmung durch eine geeignete Kolloidmühle und mahlt bis eine einheitliche Dispersion erhalten wird, fügt die gemahlene Aufschlämmung zu dem verbliebenen geschmolzenen Vaselin und mischt bis zum Erkalten.

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IK-re

Zubereitung IX

Tabletten

Mischung von 10 mg Tab.

[mg]

Gentamicin A,B,

B₁ und X (als

Sulfate) 17,50 *

Lactose (äusserst feines Puder) 197,50

Maisstärke

Polyvinylpyrrolidon

25,00

7,50 Magnesiumstearat 2,50

25 mg Tab.	100 mg Tab.
[mg]	[mg]
43,75 *	175,00 »
171,25	126,00
25,00	35,00
7,50	10,50
2,50	3,50

2.50,00 250,00 350,00

♦Basierend auf 60% iger Aktivität plus 5 % Ueberschuss

Man stellt eine Aufschlämmung her, bestehend aus einer Mischung von Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B₁ und Gentamicin X in Fora der Sulfate, die nach Beispiel 1, Stufe B erhalten ; worden ist, Lactose und Polyvinylpyrrolidon. Man trocknet die Aufschlämmung durch Versprühen, fügt Maisstärke und Magneslumstearat zu und mischt. Man presst die Mischung in geeigneten Tablettlervorriohtungen zu Tabletten.

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	•	10 r	fO	X	A	E	2130113
	Zubereitung	ng Kap.	25 mg Kap.
Kapseln aus harter	Gelatine	[mg] 17,50 *	[mg] ^3,75 *	C
		231,	205,25	100 mg Kap.
Gentamioin A,B,B₁ (als Sulfat^ ^L	und X	I₁	1,00	[mg] 175,00 *
Lactose (ätisserst Puder)	feines	,50	124,25
Magnesiumstearat		,00	0,75

k »Basierend auf 60 % iger Aktivität plus 5 % Ueberschuss.

Man bringt die Mischung von Gentamioin A, Gentamicin B, Gentamicin B, und Gentamicin X in Form der Sulfate und Lactose in einen geeigneten Mischbehälter ein und mischt. Man leitet die gemischten Puder durch eine MUhIe, bringt die gemahlenen Puder in einen geeigneten Mischbehälter und mischt wieder. Dann mischt man das Magnesiumstearat mit einem Teil des Gemisches, leitet das vorgemischte Magnesiumstearat zu der ψ übrigen Menge und mischt. Man füllt die Mischung in leere Gelatinekapseln, indem man geeignete AbfUlleinrichtungen verwendet.

Zubereitung XI Bolus 100 mg Bolus

Mischung von

Oentmmioin A, B, B, und X (als SuIfate) 175,00 ♦ ng

Lactose ^335,00 ng

J_50-' BAD ORIGINAL

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JUWJI-Ip* 1971 -ι _f, IK-re '· .ί.

teilweise gelatinierte Maisstärke ΙΟδΟ,ΟΟ nig Magnesiumstearat 90,00 mg

Wasser 100,00 ml.

10,000,00 mg

* Basierend auf 60 % iger Aktivität plus 5$ Ueberschuss.

Man bringt die Mischung von Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B, und Gentamicin X in Form der Sulfate, Lactose und einen Teil der Maisstärke, die teilweise hydrolisiert ist, in einen geeigneten Mischbehälter und mischt. Man bereitet eine Paste aus einem Teil der Maisstärke und verwendet diese Paste, um eine feuchte Masse aus dem oben genannten Puder herzustellen, man granuliert die Masse, trocknet das Granulat, verkleinert die Teilchen zu einer bestimmten Teilchengrösse, fügt das Magnesiumstearat zu, mischt und presst das granulierte Material zu Tabletten, wobei man geeignete Tablettlereinrichtungen verwendet.

Zubereitung XII Bolus * 5 g Bolus

Mischung von

Gentamicin A,B, Β_χ und X (als Sulfate) 8250,00 mg*

Lactose, (äusserst feines Puder) 8560,00 mg Polyvinylpyrrolidon . 900,00 mg

Magnesiumstearat 90,00 mg

Maisstärke 200,00 mg

10.000,00 mg

1 8 20 ^BAD Q^RIGINAL

ΪΚ-rW ' .·,

* Basierend auf 6θ% iger Aktivität plus 5$ Uefcersohuss

Man stellt eine Aufschlämmung her, die aus einer Mischung von Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B₁ und Gentamicin X in Form der Sulfate, Lactose und Polyvinylpyrrolidon besteht, trocknet die Aufschlämmung durch Versprühen, fügt die Maisstärke und Magnesiumstearat zu, mischt. Man presst diese Masse zu Tabletten, indem man geeignete Tablettiereinrichtungen verwendet.

Zubereitung XIII

Farenterale Lösung mg/ml

Gentamicin X (als Sulfat) 40 to 200 * Methylparaben 1,8

Propylparaben 0,2

auffüllen mit Injektionswasser auf 1,0 ml ♦Basierend auf der theoretischen Reinheit von 100 %

Man bringt 70 % des Injektionswassers in einen geeigneten Mischbehälter und erhitzt auf 70° C, fügt Methylparaben und Propylparaben zu, mischt, bis diese gelöst sind, kühlt die Lösung auf 25-30°C, leitet einen Stickstoffstrom über die Lösung, fügt Gentamicin X in Form des Sulfates zu und mischt, bis dieses gelöst ist. Man füllt die Lösung

, : -51-

BAD ORIGINAL 109883/182Q

Si

IK-re '*■

auf das gewünschte Volumen auf, leitet die Lösung durch ein geeignetes Sterilisierfilter, wobei man geeignete aseptische Methoden verwendet, füllt die Lösung in geeignete sterile Behälter, wobei man geeignete aseptische Füllmethoden verwendet.

Zubereitung XIV Tierfutter g

Mischung von

"Jentamicin A,B,B₁ und X (als Sulfate) 10*

So Jabohnenmehl 400

Fischmehl 400

Weizenkeimöl 50

Sorghummolasse l4o

♦Basierend auf 100$ iger Reinheit

Man mischt alle oben genannten Ingredientlen und presst sie zu Pillen,deren Grosse von den Tieren abhängig ist, für die sie bestimmt sind. Man mischt die Pillen in solcher Menge mit dem gewöhnlichen Futter des Tieres, dass ungefähr 10 bis ungefähr 100 mg/kg Körpergewicht pro Tag durch das Tier aufgenommen werden. Diese Zubereitung kann Laboratoriumstieren, wie beispielsweise Mäusen, Ratten, Hasen, Katzen, Hunden usw. gegeben werden.

BAD ORIGINAL -52- —

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JUMI»10-1971 0

Eine andere Möglichkeit besteht darin, die Mischung der Antibiotika oder einzelne Antibitika in trockenem Zustand mit dem normalen Futter der Tiere zu mischen, so dass eine normale Tagesration eine therapeutische Dosis darstellt. Diese Methode ist besonders vorteilhaft, wenn die Antibiotika verwendet werden, um prophylaktische Wirkung, wie z.B. oben für die Truthähne beschrieben worden ist, zu erreichen.

Zubereitung XV Suppositorien * 5g- Suppsitorien

Mischung von

Gentamicin Α,Β,Β und X (als Sulfat) Wasser

Granulierte Gelatine

Glycerin

♦Basierend auf der theoretischen Reinheit von 100 %

Man löst eine Mischung von Gentamicin A, Gentamicin B, Genta-" micin B. und Gentamicin X in Form der Sulfate in Wasser und fügt das Glycerin unter Rühren zu. Zuletzt fügt man Gelatine zu und erwärmt die Mischung unter Rühren, bis sie homogen ist. Man bringt die Mischung in vorgekühlte Formen und lässt sie erstarren. Diese Zubereitung genügt, um zwanzig Suppositorien von je 5 g herzustellen.

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5	*g
10	ml f
20	g
65	g

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Claims

Patentansprüche

Aminoglykosidantibiotikum Gentamicin B, Gentamicin B. und Gentamicin X der ungefähren Molekularformel (l)

genannt Gentamicin B, wenn R, Hydroxy, R₂ Wasserstoff und R, Amino ist, genannt Gentamicin B,,wenn R, Hydroxy, R₂ Methyl und R_ Amino ist, und genannt Gentamicin X, wenn R₁ Amino, R₂ Wasserstoff und R, Hydroxy ist, in freier Form oder in der Form von pharmazeutisch annehmbaren Derivaten.

2. Gentamicin B, Gentamicin B, und Gentamicin X, die in ihrer freien Form ein Infrarotabsorptionsspektrum in Mineralöl haben, wie es im wesentlichen in den Figuren

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JUNI-10-1971 989-FTG 55 IK/ug

J5# 5 und 7 dargestellt ist,und ein magnetisches Kernresonanzspektrum haben, wie es im wesentlichen in Figuren 4, 6 und 8 dargestellt ist, und deren pharmazeutisch annehmbare Derivate.

5. Eine Verbindung nach Anspruch 1 oder 2, die in Form eines Solvates oder Hydrates vorliegt.

4. Eine Verbindung nach Anspruch 3, die in Form eines Aethanolsolvates vorliegt.

5. Eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, die in der Form eines nicht toxischen Säureadditionssalzes vorliegt, das, wenn es von einer mehrbasischen Säure abgeleitet ist, freie Säuregruppen und/oder Säuregrupppen, die durch andere Basen neutralisiert sind, enthalten kann.

6. Eine Verbindung nach Anspruch 5* die Säurereste von werlgstens einer der folgenden Säuren enthält: Salzsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Bernsteinsäure, Weinsäure, Malleinsäure, Fumarsäure und Glutarsäure.

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989-PTG-56

IK/ug

7. Säureadditionssalz nach Anspruch 5 oder 6, das Säuregruppen enthält, die mit Alkalibasen neutralisiert sind.

8. Verfahren für die Gewinnung von Aminoglykosldantibiotika der ungefähren Molekularformel (I)

HO / \

— WU

(D,

HO

genannt Gentamicin B, wenn R, Hydroxy, Rp Wasserstoff und R, Amino ist, genannt Gentamicin B₁, wenn R₁ Hydroxy, R₂ Methyl und R, Amino ist, und genannt Gentamicin X, wenn R, Amino, Rg Wasserstoff und R, Hydroxy ist, in freier Form oder in der Form von pharmazeutisch annehmbaren Derivaten, dadurch gekennzeichnet, dass es das Abscheiden von wenigstens einem der genannten Antibiotika in freier Form oder in der Form von pharmazeutisch annehmbaren Derivaten aus einer Mischung, die wenigstens eines der genannten Antibiotika enthält, und gewUnschtenfalls das UeberfUhren einer so erhaltenen freien Verbindung in ihr Derivat oder eines

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IK)Ug

so erhaltenen Derivates in die freie Form oder eines Derivates in ein anderes Derivat umfasst.

9. Verfahren nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, dass die Abtrennung .nach bekannten Verfahren erfolgt.

10. Verfahren nach Anspruch 8 oder 9, dadurch gekennzeichnet, dass die Abtrennung mittels Chromatograph!seher

* Methoden erfolgt.

11. Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass Säulenchromatographie verwendet wird.

12. Verfahren nach Anspruch 10 oder 11, dadurch gekennzeichnet, dass Siliks gel als Adsorbens verwendet wird.

13. Verfahren nach einem der Ansprüche 8 bis 12,
dadurch gekennzeichnet, dass die Mischung Gentamicin B und/oder Gentamicin B, und/oder Gentamicin X zusammen mit wenigstens einem weiteren Antibiotikum enthält.

14. Verfahren nach Anspruch IjJ, dadurch gekennzeichnet, dass das weitere Antibiotikum Gentamicin A und/oder Gentamicin C ist.

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989-PTG-58

ΙΚ/ug

15. Verfahren nach einem der Ansprüche 8 bis 14, dadurch gekennzeichnet, dass die Mischung Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B,, Gentamicin X und Gentamicin C enthält.

16. Verfahren nach einem der Ansprüche 8 bis 12, dadurch gekennzeichnet, dass die Mischung Gentamicin B, Gentamicin B und Gentamicin X enthält.

17. Verfahren nach einem der Ansprüche 10 bis 16, dadurch gekennzeichnet, dass als Lösungsmittel für die chromatographische Abtrennung die unter Phase eines Lösungsmittelsystems verwendet wird, das aus Methanol, Chloroform und Ammoniumhydroxyd im Volumsverhältnis 1:1:1 besteht.

18. Verfahren nach einem der Ansprüche 8 bis 17, dadurch gekennzeichnet, dass die Verbindungen Gentamicin B und/oder Gentamicin B, und/oder Gentamicin X in der Form ihrer Säureadditionssalze oder in Form von Solvaten oder Hydraten der freien Antibiotika oder deren .Säureadditionssalzen isoliert werden.

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ίο-

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IK/ug

Aminoglykosidantibiotika Gentamicin B, Gentamicin B₁

und Gentamicin X, denen die allgemeine Molekularformel (I) zukommt *

NH,

genannt Gentamicin B, wenn R. Hydroxy, R„ Wasserstoff und R., Amino ist, genannt Gentamicin B,, wenn R₁ Hydroxy, Rp Methyl und R, Amino ist, und genannt Gentamicin X, wenn R Amino, R₃ Wasserstoff und R Hydroxy ist, in freier Form

oder in Form ihrer pharmazeutisch annehmbaren Derivate, wenn sie nach einem Verfahren nach einem der Ansprüche 8 bis 18 erhalten worden sind.

-59-

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989-PTG-6O IK/ug

20. Eine pharmazeutische Zubereitung, die wenigstens eines der Aminoglykosidantibiotika Gentamicin B, Gentamicin B, und Gentamicin X, denen die allgemeine Molekularformel (I)

CH.

HO

NHCH₃ OH

R₂GHR,

HO

NH,

(D

zukommt, genannt Gentamicin B, wenn R, Hydroxy, R₃ Wasserstoff und R, Amino ist, genannt Gentamicin B₁ , wenn R₁ Hydroxy, R₂ Methyl und R, Amino ist, und genannt Gentamicin X, wenn R₁ Amino, Rp Wasserstoff und R, Hydroxy ist, in freier Form oder in Form ihrer pharmazeutisch annehmbaren Derivate als aktives Ingrediens enthält.

21. Eine pharmazeutische Zubereitung mit Wirkung gegen Protozoen und anthelminthische Aktivität, die wenigstens Gentamicin A in freier Form und/oder in der Form von pharmazeutisch annehmbaren Derivaten als aktives Ingrediens enthält.

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22. Eine Zubereitung nach Anspruch' 20 oder 21, die das aktive Ingrediens in Mischung mit einem geeigneten pharmazeutischen Träger enthält»

23. Zubereitung nach einem der Ansprüche 20 bis 22 in der Form von Dosiseinheiten..

2k. Geformte Zubereitung nach einem der Ansprüche 20 bis 23* wie beispielsweise eine Tablette, Kapsel oder ein Suppositorium.

25. Verfahren zur Herstellung von pharmazeutischen Zubereitungen, dadurch gekennzeichnet, dass wenigstens eines der Aminoglykosidantibiotika Gentamicin B * Gentamicin B₁ und Gentamicin X, denen die ungefähre Molekularformel (I)

(D

HO R₁

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ϊΚ/ug

zukommt, genannt Gentamicin B, wenn R₁ Hydroxy, R_ Wasserstoff und R, Amino ist, genannt Gentamicin B,, wenn R₁ Hydroxy, R₂ Methyl und R, Amino ist, und genannt Gentamicin X, wenn R, Amino, R„ Wasserstoff und R, Hydroxy ist, in freier Form und/oder in der Form ihrer pharmazeutisch annehmbaren Derivate als aktives Ingrediens in eine Form gebracht wird, die für die therapeutische Verabreichung geeignet ist.

26. Verfahren zur Herstellung einer pharmazeutischen Zubereitung mit Wirkung gegen Protozoen und anthelminthischer Aktivität, dadurch gekennzeichnet, dass wenigstens Gentamicin A in freier Form und/oder in Form seiner pharmazeutisch annehmbaren Derivate als aktives Ingrediens in eine Form gebracht wird, die für therapeutische Verabreichung geeignet ist.

27. Verfahren nach Anspruch 25 oder 26, dadurch gekennzeichnet, dass das aktive Ingrediens mit einem geeigneten pharmazeutischen Träger gemischt wird.

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28. Ein Verfahren zum Behandeln von durch Protozoen verursachten Infektionen, die das Verabreichen von wenigstens einem der Antibiotika Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B₁ und Gentamicin X, ihrer pharmazeutisch annehmbaren Derivate oder Mischungen von wenigstens zwei der genannten Verbindungen in therapeutisch wirksamer Menge an infizierte Tiere umfasst.

29. Ein Verfahren zum Hervorrufen von anthelminthischer Reaktion bei Tieren,die von Helminthiasis befallen sind, das das Verabreichen von wenigstens einem der Antibiotika Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B, and Gentamicin X, ihrer pharmazeutisch annehmbaren Derivate oder Mischungen von wenigstens zwei der genannten Verbindungen in therapeutisch wirksamer Menge an infizierte Tiere umfasst.

30. Ein Verfahren nach Anspruch 28 oder 29* bei dem die therapeutisch wirksame Menge etwa 10 mg bis etwa 100 mg/kg Körpergewicht pro Tag beträgt.

31. Ein Verfahren zum Behandeln von bakteriellen Infektionen, das das Verabreichen von wenigstens einem

der Antibiotika Gentamicin B, Gentamicin B₁ und Gentamicin X,

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(#6

deren pharmazeutisch annehmbaren Derivaten öden von Mischungen wenigstens zwei der genannten Verbindungen in therapeutisch wirksamer Menge an infizierte Tiere umfasst.

32. Ein Verfahren nach Anspruch 31, bei dem die therapeutisch wirksame Menge etwa 2 mg bis etwa 20 mg/kg Körpergewicht pro Tag beträgtο

33· Ein Verfahren nach Anspruch 32, bei dem die therapeutisch wirksame Menge von Gentamicin B und Gentamicin B, für parenterale Anwendung etwa 2 mg bis etwa 10 mg/kg Körpergewicht und pro Tag beträgt.

34. Ein Verfahren nach einem der Ansprüche 28 bis 33* dadurch gekennzeichnet, dass die darin verwendeten pharmazeutisch annehmbaren Derivate, Säureadditionssalze oder Solvate oder Hydrate der freien Antibiotika sowie deren Säureadditionssalzen sind.

35. Aminoglykoaidanitbiotika Gentamicin B, Gentamicin B₁, Gentamicin X, denen die ungefähre Molekülarformel (I)

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NHCH OH

(D

HO R_n

zukommt, genannt Gentamicin -B, wenn R, Hydroxy, R₂ Wasserstoff und R, Amino ist, genannt Gentamicin B₁, wenn R_n Hydroxy, Rg Methyl und R-. Amino ist, und genannt Gentarafcin X, wenn R₁ Amino, R₂ Wasserstoff und R, Hydroxy ist, in freier Form oder in der Form ihrer pharmazeutisch annehmbaren Derivate, Verfahren zu deren Gewinnung, pharmazeutische Zubereitungen, die wenigstens eines der Antibiotika Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B, und Gentamicin X enthalten, und Verfahren zu deren Herstellung, Verfahren zum Behandeln von Infektionen, die durch Protozoen oder Bakterien verursacht sind,und für das Erreichen anthelminthischer Reaktion bei der Behandlung von Tieren, wie im wesentlichen hierin beschrieben worden ist.

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