DE2166090C3

DE2166090C3 - Verfahren zur Herstellung von d-Threo-2-propionamido- 1-p-nitrophenyl-l,3-propandiol und d-Threo-2-isobutyramido-l-p-nitrophenyl-l,3propandiol. Ausscheidung aus: 2120153

Info

Publication number: DE2166090C3
Application number: DE19712166090
Authority: DE
Inventors: Takashi Deguchi; Haruo Honda; Fumio Shizuoka Kato; Tokio Machida; Kunikatsu Shirabata; Takeo Suzuki; Fusao Tomita
Original assignee: Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd
Current assignee: KH Neochem Co Ltd
Priority date: 1970-04-28
Filing date: 1971-04-24
Publication date: 1974-08-15
Also published as: DE2166090A1; FR2090768A5; DE2166090B2; DE2166091C3; DE2166092B2; DE2166091B2; DE2166091A1; DE2120153A1; DE2166092C3; DE2166092A1

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung 25 (Gemisch von C₁₂ - C₁₅)
von d-Threo^-propionamido-l-p-nitrophenyl-l.S-pro-

pandiol (hier als Substanz A bezeichnet) und d-Threo- Die Züchtung wurde bei 30⁰C in 65 Stunden unter

2-isobutyramido-l-p-nitrophenyl-l,3-propandiol (hier Rühren (650 r. p. m.) und Belüften (11/1/Min.) mit als Substanz B bezeichnet) durch Fermentation. Die sterilisierter Luft ausgeführt. Das pH des Mediums genannten Substanzen sind Derivate des d-Threo-2- 30 wurde automatisch mit Ammoniakwasser auf 6,5 bis amino-l-p-nitrophenyl-l,3-propandiols (Chloramphe- 6,8 eingestellt. Es wurden dem Medium dreimal je nicol), bei dem die 2-Aminogruppe durch Propionamid 100 ml η-Paraffin nach je 12 Stunden zugefügt. Das bzw. Isobutyramid substituiert ist. Über ein Verfahren n-Paraffin-Substrat war nach vollendeter Fermentation zur Herstellung dieser Substanzen direkt durch Firmen- fast verbraucht.

tation unter Verwendung eines Bakteriums ist bisher 35 Die erhaltene Fermentbrühe (2 1) wurde durch Entin der Technik noch nirgends berichtet worden. fernung der Mikrobenzellen auf ein pH von 4,0 einge-Das erfindungsgemäße Verfahren ist dadurch ge- stellt. Nach Zusatz derselben Menge Äthylacetat wurde kennzeichnet, daß man nachfolgende Mikroorganis- die Fermentbrühe 24 Stunden geschüttelt, um die Analomen in einem Kulturmedium, welches assimilierbare gen des Chloramphenicols in die Äthylacetatschiciht zu Kohlenstoff quellen enthält, unter aeroben Bedingungen 40 extrahieren. Die so extrahierte Flüssigkeit (2,3 1) wurde züchtet und anschließend das Reaktionsgemisch in üb- mit wasserfreien Na₂SO₄ entwässert und bei ."I5°C licher Weise aufarbeitet: unter reduziertem Druck eingedampft. Der erhaltene

Rückstand wurde weiter mit Äthylacetat (100 ml)

Corynebacterium hydrocarboclastus ATCC15 592, extrahiert. Nach dem Zentrifugieren wurde die Lösungs-Nocardia gloverula ATCC 13 130, 45 mittel-Schicht durch eine Silica-Gel-Kolonne (Durch-

Arthrobacter parafineus ATCC 15 590, messer: 4 cm, Höhe: 20 cm) geschickt, welche dann

Corynebacterium equi ATCC 10 146. gründlich mit Chloroform gewaschen wurde. Danach

wurde durch die Kolonne eine Mischlösung aus ChIo-

Bei der Durchführung der Züchtung werden Koh- roform und Methanol (95: 5) geschickt,
lenwasserstoffe oder Kohlenhydrate als Haupt-C-Quel- 50 Im Laufe der Eluierung wurde die Substanz B in die len verwendet. Es ist dabei vorzuziehen, verschiedene Fraktion aus 200 bis 500 ml und die Substanz A in die Kohlenwasserstoff-Fraktionen zu verwenden, welche Fraktion aus 600 bis 1000 ml eluiert, von denen jede η-Paraffine enthalten, insbesondere C₁₀-C₂₂-, Vorzugs- getrennt gesammelt und konzentriert wurde. Jede konweise C₁₂-Ci₈-n-Paraffine. Sie werden ergänzt durch zentrierte Fraktion wurde in Äthanol gelöst, und die organische N-Quellen, wie Maiswasser, Hefeextrakt, 55 Substanzen A und B wurden dann durch Abdestillieren durch anorganische Metallsalze des Eisens, Mangans, des Lösungsmittels getrennt kristallisiert. Auf diese Magnesiums, Kaliums, Natriums. Das Medium wird Weise wurden die Substanzen A (4 g) und B (24 g) isosterilisiert und mit dem Mikroorganismus beimpft. Die liiert.

Züchtung wird unter aeroben Bedingungen bei 20 bis Die so isolierten Kristalle wurden jeweils durch

45 C durchgeführt. Während der Züchtung wird das 60 Wiederholung des Umkristallisierens aus ÄthylendipH auf 4 bis 10, vorzugsweise 6 bis 8, eingestellt, z. B. chlorid gereinigt.

durch Zusatz einer Harnstofflösung, von Qmmoniak- Die isolierten Kristalle der Substanzen A und B hat-

wasser, von Ammoniak oder einer Ammoniumcarbo- ten niedrigere antibiotische Aktivitäten als die des natlösung. Die Züchtung ist nach 2 bis 7 Tagen zu Ende Chloramphenicols, jedoch hatten sie bezüglich des geführt. Die Vollendung der Züchtung kann durch die 6₅ antibiotischen Spektrums dieselben Tendenzen. Beide Werte der erhaltenen Chloramphenicol-Analogen so- Substanzen A und B hatten ein UV-Absorptions-Maxiwohl festgestellt als auch bestimmt werden durch die mum von 273 ΐημ, welches dasselbe war wie das des »paper disc method«, um so ein Maximum zu erreichen. Chloramphenicols.

Beispiel 2

Nocardia gloverula ATCC 13 130 wurde in einem ähnlichen, im Beispiel 1 beschriebenen Kulturmedium gezüchtet, jedoch mit dem Unterschied, daß n-Paraffin durch Glukose ersetzt war. Nach 75 Stunden wurden 0,9 g/l Substanz A und 0,3 g/l Substanz B produziert.

Beispiel 3

Arthrobacter praaffineus ATCC 15 590 wurde in ähnlicher Weise wie im Beispiel 1 beschrieben, jedoch mit dem Unterschied gezüchtet, daß vom η-Paraffin die C_u-C_is-Fraktion (400 ml) zugesetzt wurde. Nach 98stündigem Züchten wurden 1,2 g/l vcix Substanz A und 1,7 g/l von Substanz B erhalten.

Beispiel 4

Corynebacterium equi ATCC10146 wurde in 24 Stunden in einem Kulturmedium gezüchtet, das 2% Glukose, 1% Polypepton, 1% Fleischextrakt und 0,3 % Kochsalz enthielt. Mit dem erhaltenen Saatgut wurde ein Medium beimpft, das die nachfolgende Zusammensetzung in einem 5-1-Zuchtkolben bei einem Verhältnis von 10 Volumprozent hatte. Ajoschließend züchtete man 72 Stunden lang bei 30⁰C weiter (aerob).

Saccharose 8 %

K-HPO₄ G,l%

MnSO₄ · 4H₂O 0,01%

(NH₄)₂HPO₄ 0,3%

Na₂HPO₄ 0,1%

MgSO₄ -7H₂O 0,1%

ZnSO₄ · 4H₂O 0,001%

Hefeexirakt 1,0%

Der pH-Wert des Mediums war während der Züchtung mit Ammoniakwasser automatisch auf 6,5 bis 6,8 eingestellt.

ao Nach der Aufarbeitung in üblicher Weise wurden 2,5 g/l Substanz A und 0,8/1 Subsatnz B isoliert.

Claims

Die nachfolgenden Beispiele erläutern die Erfindung: Patentanspruch: Beispiel 1

Verfahren zur Herstellung von d-Threo-2-pro- Es wurde unter Schütteln in 24 Stunden Coryne-

pionamido-l-p-nitrophenyl-l,3-propandiol und 5 bacterium hydrocarboclastus ATCC 15 592 in einem d-Threo-2-isobutyramido-l-p-nitrophenyl-l,3-pro- Medium gezüchtet, das eine Zusammensetzung von pandiol durch Fermentation, dadurch ge- 1% Fleischextrakt, 1% Pepton, 0,5% NaCl und 2% kennzeichnet, daß man einen der folgenden Sorbit, sowie ein pH von 7,2 (vor der Sterilisation) Mikroorganismen hatte. Mit der erhaltenen Saatkultur wurden 3 1 eines

ίο Kulturmediums beimpft, welches die nachfolgende Zu-

ATCC 15 592, sammensetzung in einem 5-1-Glasfermenter bei einem

ATCC 13 130, Verhältnis von 10 Volumprozent hatte:

ATCC 15 590,

ATCC 10146 KH₂PO₄ 0,2%

15 MgSO₄-7H₂O 0,1%

in einem Kulturmedium, welches assimilierbare FeSO₄-7H₂O 0,02%

Kohlenstoffquellen enthält, unter aeroben Bedin- (NH₄)₂SO₄ 0,5%

gungen züchtet und anschließend das Reaktionsge- Maiswasser OJ %

misch in üblicher Weise aufarbeitet. η-Paraffin 10%(V/V)

20 Na₂HPO₄ 0,2%

MnSO₄ · 4H₂O 0,002%

ZnSO₄ · 7H₂O 0,001 %

CuCI₂ · 2H₂O 0,0003%

Hefeextrakt 0,5%