[go: up one dir, main page]

NO20131043L - Isolerte antistoffer som spesifikt binder til humant IL-6, sammensetninger, fremgangsmåter og deres anvendelser - Google Patents

Isolerte antistoffer som spesifikt binder til humant IL-6, sammensetninger, fremgangsmåter og deres anvendelser

Info

Publication number
NO20131043L
NO20131043L NO20131043A NO20131043A NO20131043L NO 20131043 L NO20131043 L NO 20131043L NO 20131043 A NO20131043 A NO 20131043A NO 20131043 A NO20131043 A NO 20131043A NO 20131043 L NO20131043 L NO 20131043L
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
antibody
agent
human
cell
antibodies
Prior art date
Application number
NO20131043A
Other languages
English (en)
Inventor
Jill Giles-Komar
David Peritt
Mohit Trikha
David Knight
Original Assignee
Centocor Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=34699762&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=NO20131043(L) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Publication of NO20131043L publication Critical patent/NO20131043L/no
Application filed by Centocor Inc filed Critical Centocor Inc

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • C07K16/248—IL-6
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
    • A01K67/0271—Chimeric vertebrates, e.g. comprising exogenous cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/08—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for nausea, cinetosis or vertigo; Antiemetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/10—Laxatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/04—Drugs for disorders of the respiratory system for throat disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/14—Antitussive agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/16—Central respiratory analeptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/12—Keratolytics, e.g. wart or anti-corn preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A61P25/32—Alcohol-abuse
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/08—Antibacterial agents for leprosy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/08—Plasma substitutes; Perfusion solutions; Dialytics or haemodialytics; Drugs for electrolytic or acid-base disorders, e.g. hypovolemic shock
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
    • C07K16/4208—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig
    • C07K16/4241—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig against anti-human or anti-animal Ig
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00—Animals characterised by purpose
    • A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
    • A01K2267/0331—Animal model for proliferative diseases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)

Abstract

Foreliggende oppfinnelse angår minst ett nytt, kimært, humanisert eller CDR-podet anti-IL-6- antistoff avledet fra det murine CLB-8-antistoff, inkludert isolerte nukleinsyrer som koder minst ett slikt anti-IL-6-antistoff; vektorer, verstceller, transgene dyr eller planter, og fremgangsmåter for fremstilling og anvendelse derav, inkludert terapeutiske sammensetninger, fremgangsmåter og anordninger.

Description

OPPFINNELSENS BAKGRUNN
Foreliggende oppfinnelsen vedrører antistoffer, inkludert spesifiserte deler eller varianter, som er spesifikke for minst ett interleukin-6 (IL-6 også kjent som interferon P2)-protein eller -fragment derav, samt nukleinsyrer som koder slike anti-IL-6-antistoffer, komplementære nukleinsyrer, vektorer, vertsceller og fremgangsmåter for fremstilling og anvendelse derav, inkludert terapeutiske formuleringer, administrasjon og anordninger.
BESLEKTET TEKNIKK
Interleukin-6 (IL-6) er et pro-inflammatorisk cytokin som produseres av mange forskjellige celletyper. In vivo-stimulerte monocytter, fibroblaster og endotelceller representerer hovedkildene for IL-6. Andre celler, slik som makrofager, T- og B-lymfocytter, granulocytter, keratinocytter, mastceller, osteoblaster, kondrocytter, glialceller og glattmuskelceller produserer også IL-6 etter stimulering (Kishimoto, T., Blood 74:1-10 (1989) og Kurihara, N., et al, J. Immunology 144:4226-4230 (1990)). Flere tumorceller produserer også IL-6 (Smith, P. C, et al., Cytokine and Growth Factor Reviews 12:33-40 (2001)) og nylig ble det angitt at IL-6 var en prognostisk faktor for prostatakreftprogresjon (Nakashima, J., et al, Clinical Cancer Research 6:2702-2706
(2000)). IL-6 produksjon kan reguleres av IL-6 selv, og avhengig av celletype kan IL-6 stimulere eller inhibere sin egen syntese.
IL-6 kan bindes til IL-6 reseptoren som uttrykkes på mitogenaktiverte B-celler, T-celler, perifere monocytter, og visse tumorer (Ishimi, Y., et al., Immunology 145:3297-3303
(1990)). IL-6 reseptoren har minst to forskjellige former og består av en a-kjede betegnet gp80 som er ansvarlig for IL-6 binding og en p-kjede betegnet gpl30 som er nødvendig for signaltransduksjon (Adebanjo, O., et al., J. Cell Biology 142:1347-1356
(1998) og Poli, V., et al, EMBO 13:1189-1196 (1994)). Cytokinfamilien som inkluderer IL-6, LIF, Oncostatin M, IL-11, CNTF og CT-1 har alle gpl30 subenheten i sine reseptorer. I tillegg kan alle medlemmer av IL-6 cytokinfamilien indusere hepatisk ekspresjon av akuttfaseproteiner (Bellido, T., et al,
J. Clin. Investigation 97:431-437 (1996)).
Det er minst to biologiske IL-6-hovedfunksjoner: mediasjon av akuttfaseproteiner og virkning som en differensierings- og aktiveringsfaktor (Awisti, G et al, Baillieres Clinical Hematology 8:815-829 (1995) og Poli, V., et al, EMBO 13:1189-1196 (1994)). Akuttfaseproteiner er kjente for å regulere immunresponser, formidle inflammasjon og spille en rolle i vevsdannelse. Som en differensierings- og aktiveringsfaktor induserer IL-6 B-celler til å differensiere og sekretere antistoff, det induserer T-celler til å differensiere til cytotoksiske T-celler, aktiverer cellesignaleringsfaktorer, og fremmer hematopoiese (Ishimi, Y., et al, Immunology 145:3297-3303 (1990)). IL-6 er sterkt involvert i mange kritiske kroppsfunksjoner og prosesser. Som et resultat av dette kan fysiologiske prosesser inkludert benmetabolisme, neoplastisk transformasjon og immun- og inflammatoriske responser forsterkes, undertrykkes eller hindres ved manipulering av den biologiske aktivitet til IL-6 in vivo ved hjelp av et antistoff signaltransduksjon (Adebanjo, O., et al, J. Cell Biology 142:1347-1356 (1998)).
Senere studier har vist at en Mab til IL-6 kan inhibere in v/vo-vekst av prostatatumorer (Smith, P. C. og Keller, E. T., The Prostate in press og Okamoto, M. et al., Cancer Research 57:141-146 (1997) og nyere karsinom (Weissglas, M. et al., The Journal of Urology 153:554-557 (1995)). I tillegg til en direkte effekt på tumorvekst kan blokkering av IL-6 produksjon også kjemosensitivere og forsterke cytotoksisk virkningsgrad (Smith, P. C, et al., Cytokine and Growth Factor Reviews 12:33-40
(2001)). Kollektivt lærer litteratur oss at blokkering av IL-6-aktivitet kan inhibere bennedbryting, tumorvekst og kreftkakeksi.
Passiv immunterapi som anvender ikke-humane, polyklonale (for eksempel anti-sera) eller monoklonale antistoffer (Mabs) og fragmenter derav (for eksempel proteolytiske nedbrytingsprodukter derav) er potensielle terapeutiske midler som utvikles som behandlinger for forskjellige sykdommer. Antistoffer bestående av ikke-humane deler er imidlertid kjent for å utløse en immunrespons ved administrasjon til mennesker. Denne immunresponsen gjør gjentatt antistoffadministrasjon ofte uegnet for terapi og kan resultere i en immunkompleks mediert clearance av antistoffene fra sirkulasjon, og reduserer således den terapeutiske nytte for pasientene. Eksempler på tilstander som kan tilskrives gjentatt administrering av antistoffer bestående av ikke-humane deler er serumsykdom og anafylakse.
I et forsøk på å unngå disse og andre problemer har en rekke fremgangsmåter inkludert kimerisering og "humanisering" blitt studert for å redusere immunogenisiteten til antistoff ene/fragmentene derav. Disse fremgangsmåtene har produsert antistoffer som har redusert immunogenisitet. Disse antistoffene er vesentlig av human opprinnelse med bare de komplementære bestemmende områder (CDR) og en viss skjelettstrukturrest som innvirker på CDR-komformasjon som er av ikke-human opprinnelse. Nye humane eller humaniserte monoklonale antistoffer er derfor spesielt nyttige alene eller i kombinasjon med eksisterende molekyler for immunterapeutiske anvendelser.
Det er følgelig et behov for å tilveiebringe høyaffinitets-, nøytraliserende kimære eller humane antistoffer til IL-6 eller fragmenter derav som overvinner ett eller flere av disse problemene, samt forbedringer i forhold til kjente antistoffer eller fragmenter derav for anvendelse i forebyggelse, behandling, bedring eller diagnostisering av tilstander relatert til nevnte IL-6.
Murine monoklonale antistoffer til IL-6 produsert fra en hybridomcellelinje er kjent, for eksempel i U.S. patent nr. 5 618 700. U.S. patent nr. 5 856 135 beskriver omdannete, humane antistoffer til humant IL-6, avledet fra et musemonoklonalt antistoff SK2 der de komplementærbestemmende regioner (CDR) fra den variable regionen i nevnte museantistoff SK2 er transplantert inn i den variable region i et humant antistoff og sammenføyd med den konstante region i et humant antistoff.
Nøytraliserende monoklonale antistoffer til IL-6 kan inndeles i to grupper basert på gjenkjennelse av to distinkte epitoper på IL-6-molekylet betegnet Sete-I og Sete-II. Sete-I er en konformasjonsepitop betegnet gpl30, bestående av både aminoterminale og karboksyterminale deler i IL-6-molekylet. Sete-II, betegnet SIL6R, inkluderer de aminosyrer som er kritiske for aktivitet (Brakenhoff et al., J. Immunol. (1990)
(145:561).
Et murint IL-6-monoklonalt antistoff er referert til som CLB-8 med høy affinitet, og som bindes til Sete-I gpl30 epitopen, er kjent (Brakenhoff et al., supra). Som angitt ovenfor er imidlertid det murine antistoff meget immunogent i mennesker, og dets terapeutiske verdi er derfor begrenset. Det er således stadig et behov for antistoffer til IL-6 som utviser høy affinitet, og en gunstig farmasøytisk profil.
OPPSUMMERING AV OPPFINNELSEN
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer isolerte kimære, humaniserte og/eller CDR-podete anti-IL-6-antistoffer som har minst ett antigenbindingsområde avledet fra CLB-8 anti-IL-6-høyaffinitetsantistoffet, samt anti-IL-6-antistoffsammensetninger, kodende eller komplementære nukleinsyrer, vektorer, vertsceller, sammensetninger, formuleringer, anordninger, transgene dyr, transgene planter relatert dertil, og fremgangsmåter for fremstilling og anvendelse derav, som beskrevet og muliggjort heri, i kombinasjon med det som er kjent innen teknikken. Antistoff ifølge oppfinnelsen nøytraliserer spesielt humant IL-6 med høy affinitet.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer minst ett isolert kimært, humanisert eller CDR-podet anti-IL-6 CLB-8-antistoff ("cCLB-8 antistoff) som beskrevet heri. cCLB-8-antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse inkluderer et hvilket som helst protein- eller peptidmolekyl innbefattende minst én komplementærbestemmende region (CDR) i en tung- eller lettkjede eller en ligandbindende del derav, avledet fra det murine CLB-8 monoklonale antistoff, i kombinasjon med en konstant tungkjede- eller lettkjederegion, en skjelettstrukturregion, eller en hvilken som helst del derav, som kan inkorporeres i et antistoff ifølge oppfinnelsen. I en utførelsesform er oppfinnelsen rettet mot et kimært anti-IL-6-antistoff, innbefattende to lettkjeder og to tungkjeder, og hvor hver av kjedene innbefatter i det minste en del av en human, konstant region og i det minste en del av en variabel region (v), avledet fra det murine cCLB-8 monoklonale antistoff som har spesifisitet til humant IL-6, idet nevnte antistoff bindes med høy affinitet til en inhiberende og/eller nøytraliserende epitop i humant IL-6, slik som antistoffet cCLB-8. Oppfinnelsen inkluderer også fragmenter eller et derivat av et slikt antistoff, slik som en eller flere deler av antistoffkjeden, slik som de konstante, sammenføyende, uensartete eller variable tungkjederegionene, eller de konstante, sammenføyende eller variable lettkjederegionene.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer ifølge et aspekt isolerte nukleinsyremolekyler innbefattende komplementært eller hybridiserende til et polynukleotid som koder nevnte spesifikke anti-IL-6-antistoffer, innbefattende minst én spesifisert sekvens, doméne, del eller variant derav. Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer videre rekombinante vektorer innbefattende nevnte anti-IL-6-antistoffnukleinsyremolekyler, vertsceller inneholdende slike nukleinsyrer og/eller rekombinante vektorer, samt fremgangsmåter for fremstilling og/eller anvendelse av slike antistoffnukleinsyrer, vektorer og/eller vertsceller.
Minst ett antistoff ifølge oppfinnelsen binder minst én spesifisert epitop som er spesifikk til minst ett IL-6-protein, subenhet, fragment, del eller en hvilken som helst kombinasjon derav. Nevnte minst ene epitop kan innbefatte minst én antistoffbindingsregion som innbefatter minst én del av nevnte protein, hvilken epitop fortrinnsvis innbefatter minst 1-5 aminosyrer i minst én del derav, slik som, men ikke begrenset til, minst ett funksjonelt, ekstracellulært, oppløselig hydrofilt, eksternt eller cytoplasmisk doméne i nevnte protein, eller en hvilken som helst del derav.
Det idet minste ene antistoff kan innbefatte minst én spesifisert del av minst én komplementærbestemmende region (CDR) (for eksempel CDR1, CDR2 eller CDR3 i den variable tung- eller lettkjederegionen) avledet fra det murine cCLB-8 monoklonale antistoff, og/eller minst én konstant eller variabel skjelettstrukturregion eller en hvilken som helst del derav. Nevnte minst ene antistoffaminosyresekvens kan ytterligere eventuelt innbefatte minst én spesifisert substitusjon, innskudd eller delesjon, som beskrevet heri eller som kjent innen teknikken.
Foretrukne antistoffer ifølge oppfinnelsen inkluderer de kimære, humaniserte og/eller CDR-podete antistoffene som konkurrerende vil inhibere in v/vo-binding til humant IL-6 i anti-IL-6 murint CLB-8, kimært anti-IL-6 CLB-8, eller et antistoff som har vesentlig de samme bindingsegenskapene, samt fragmenter og regioner deri.
Foretrukne antistoffer ifølge oppfinnelsen er de som binder epitoper gjenkjent av CLB-8 og cCLB-8, som er inkludert i Sete-I gpl30-epitopen. Foretrukne fremgangsmåter for bestemmelse av monoklonal antistoffspesifisitet og affinitet ved konkurrerende inhibering, finnes i Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., (1988), og det vises til denne referansen med hensyn til detaljer.
Foreliggende tilveiebringer videre minst ett IL-6 anti-idiotypeantistoff til minst ett cCLB-8 anti-IL-6-antistoff ifølge oppfinnelsen. Anti-idiotypeantistoffet inkluderer et hvilket som helst protein- eller peptidinneholdende molekyl som innbefatter minst en del av et immunglobulinmolekyl, slik som, men ikke begrenset til minst én komplementærbestemmende region (CDR) i en tung- eller lettkjede eller en ligandbindende del derav, en variabel tungkjede- eller lettkjederegion, en konstant tungkjede- eller lettkjederegion, en skjelettstrukturregion eller en hvilken som helst del derav, som kan inkorporeres i et anti-idiotypeantistoff til antistoffet ifølge oppfinnelsen. Et anti-idiotypeantistoff ifølge oppfinnelsen kan inkludere eller være avledet fra et hvilket som helst pattedyr, slik som, men ikke begrenset til et menneske, en mus, en kanin, en gnager, en primat og liknende.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer, ifølge et aspekt, isolerte nukleinsyremolekyler innbefattende komplementært eller hybridiserende til et polynukleotid som koder minst ett IL-6-anti-idiotype antistoff, innbefattende minst én spesifisert sekvens, doméne, del eller variant derav. Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer videre rekombinante vektorer innbefattende nevnte IL-6 anti-idiotypeantistoff som koder nukleinsyremolekyler, vertsceller inneholdende slike nukleinsyrer og/eller rekombinante vektorer, samt fremgangsmåter for fremstilling og/eller anvendelse av slike anti-idiotype antistoffnukleinsyrer, vektorer og/eller vertsceller.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer også minst én fremgangsmåte for ekspresjon av minst ett ovennevnt anti-IL-6-antistoff, eller IL-6-anti-idiotypeantistoff i en vertscelle, innbefattende dyrking av en vertscelle som beskrevet heri under betingelser hvor minst ett anti-IL-6-antistoff uttrykkes i påvisbare og/eller utvinnbare mengder.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer også minst én sammensetning omfattende (a) et isolert anti-IL-6 cCLB-8-antistoff som koder nukleinsyre og/eller antistoff som beskrevet heri; og (b) egnet bærer eller fortynningsmiddel. Bæreren eller fortynningsmiddelet kan evt. være farmasøytisk akseptabelt, ifølge kjente bærere eller fortynningsmidler. Sammensetningen kan evt. videre innbefatte minst én ytterligere forbindelse, protein eller sammensetning.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer videre minst én anti-IL-6 cCLB-8-antistoffremgangsmåte eller sammensetning, for administrasjon av en terapeutisk effektiv mengde for modulering eller behandling minst én IL-6 relatert tilstand i en celle, vev, organ, dyr eller pasient og/eller før, etter eller i løpet av en relatert tilstand, som kjent innen teknikken og/eller som beskrevet heri.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer også minst én sammensetning, anordning og/eller fremgangsmåte for avlevering av en terapeutisk eller profylaktisk effektiv mengde av minst ett anti-IL-6 cCLB-8 antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer videre minst én anti-IL-6 cCLB-8 antistoffremgangsmåte eller sammensetning, for diagnostisering av minst én IL-6 relatert tilstand i en celle, vev, organ, dyr eller pasient og/eller før, etter eller i løpet av en relatert tilstand, som kjent innen teknikken og/eller som beskrevet heri.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer også minst én sammensetning, anordning og/eller fremgangsmåte for avlevering for diagnostisering av minst ett anti-IL-6 antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse.
Ifølge et aspekt tilveiebringer foreliggende oppfinnelse minst ett isolert anti-IL-6 cCLB-8-pattedyrantistoff, innbefattende minst én variabel region innbefattende SEKV. ID nr.
7 eller 8.
Ifølge et annet aspekt tilveiebringer foreliggende oppfinnelse minst ett isolert anti-IL-6 cCLB-8-pattedyrantistoff, innbefattende enten (i) alle
tungkjedekomplementærbestemmende regioner (CDR) aminosyresekvensene i SEKV. ID nr. 1, 2 og 3; eller (ii) alle lettkjede CDR aminosyresekvensene i SEKV. UD nr. 4, 5 og 6.
Ifølge et annet aspekt tilveiebringer foreliggende oppfinnelse minst ett isolert anti-IL-6 cCLB-8-pattedyrantistoff, innbefattende minst én tungkjede- eller lettkjede-CDR som har aminosyresekvensen til minst én SEKV. ID nr. 1,2, 3,4, 5 eller 6.
Ifølge et annet aspekt tilveiebringer foreliggende oppfinnelse minst ett isolert anti-IL-6 cCLB-8-pattedyrantistoff, innbefattende minst én human CDR, der antistoffet spesifikt binder minst én epitop innbefattende minst 1-3 aminosyrer i nevnte humane IL-6.
Det i det minste ene antistoff kan evt. ytterligere binde IL-6 med en affinitet (Kj) på minst IO"<9>M, fortrinnsvis minst IO"<10>M, og/eller vesentlig nøytralisere i det minste én aktivitet til minst ett IL-6-protein. I en foretrukket utførelsesform binder antistoffet IL-6 med en affinitet (Kd) på minst 1 x IO"<11>M, idet fortrinnsvis 5 x IO"11nøytraliserer human IL-6. Antistoffet binder fortrinnsvis ikke andre medlemmer i IL-6-superfamilien og blokkerer transsignalering av gpl30.
Det tilveiebringes også en isolert nukleinsyre som koder minst ett isolert
anti-IL-6 cCLB-8-pattedyrantistoff; en isolert nukleinsyrevektor innbefattende den isolerte nukleinsyre, og/eller en prokaryotisk eller eukaryotisk vertscelle, innbefattende den isolerte nukleinsyren. Vertscellen kan evt. være minst én valgt fra COS-1, COS-7, HEK293, BHK21, CHO, BSC-1, Hep G2, 653, SP2/0,293, HeLa, myelom eller lymfomceller, eller et hvilket som helst derivat, immortalisert eller transformert celle derav. Det tilveiebringes også en fremgangsmåte for fremstilling av minst ett anti-IL-6 cCLB-8-antistoff, innbefattende translatering av den antistoffkodende nukleinsyre under betingelser in vitro, in vivo eller in situ, slik at IL-6 antistoffet uttrykkes i påvisbare eller utvinnbare mengder.
Det tilveiebringes også en sammensetning innbefattende minst ett isolert kimært anti-IL-6 cCLB-8-antistoff og minst én farmasøytisk akseptabel bærer eller fortynningsmiddel. Sammensetningen kan evt. ytterligere innbefatte en effektiv mengde av i det minste én forbindelse eller protein valgt fra minst en påvisbar markør eller rapportør, en TNF-antagonist, et antireumatikum, et muskelavslappende middel, et narkotikum, et ikke-steroid anti-inflammatorisk legemiddel (NSAID), et analgetikum, et anestetikum, et sedativ, et lokalanestetikum, en neuromuskulær blokker, et antimikrobielt middel, et antipsoriatisk middel, et korticosteroid, et anabolsk steroid, et erytropoietin, en immunisering, et immunglobulin, et immunundertrykkende legemiddel, et veksthormon, et hormonerstatningslegemiddel, et radiofarmasøytikum, et antidepressiva, et antipsykotisk middel, et stimulerende middel, en astmamedisinering, en beta-agonist, et inhalert steroid, et epinefrin eller analog derav, et cytotoksisk eller annet antikreftmiddel, en anti-metabolitt slik som metotrexat, et antiproliferativt middel, et cytokin eller en cytokinantagonist.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer videre et anti-idiotype antistoff eller fragment som spesifikt binder minst ett isolert anti-IL-6 cCLB-8 antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse.
Det tilveiebringes også en fremgangsmåte for diagnostisering eller behandling av en IL-6 relatert tilstand i en celle, et vev, organ eller dyr, innbefattende å bringe i kontakt eller administrasjon av en sammensetning innbefattende en effektiv mengde av minst ett isolert anti-IL-6 CLB-8 antistoff ifølge oppfinnelsen, med eller til cellen, vevet, organet eller dyret. Fremgangsmåten kan evt. ytterligere omfatte anvendelse av en effektiv mengde på 0,001-50 mg/kg av cellene, vevet, organet eller dyret. Fremgangsmåten kan evt. ytterligere omfatte anvendelse av nevnte kontaktanbringelse eller administrasjon av minst én måte valgt fra parenteral, subkutan, intramuskulær, intravenøs, intraartikulær, intrabronkial, intraabdominal, intrakapsulær, intrakartilaginøs, intrakavitær, intracelial, intracelebelær, intracerebroventrikulær, intracolisk, intracervikal, intragastrisk, intrahepatisk, intramyokardial, intraosteal, intrapelvisk, intraperikardial, intraperitoneal, intrapleural, intraprostatisk, intrapulmonal, intrarektal, intrarenal, intraretinal, intraspinal, intrasynovial, intratoraksisk, intrauterin, intravesikal, bolus, vaginal, rektal, buccal, sublingual, intranasal eller transdermal. Fremgangsmåten kan ytterligere omfatte administrasjon før, samtidig eller etter antistoffkontaktanbringelsen eller - adminstrasjonen, av minst én sammensetning omfattende en effektiv mengde av minst én forbindelse eller protein valgt fra minst én påvisbar markør eller rapportør, en TNF-antagonist, et antireumatikum, et muskelavslappende middel, et narkotikum, et ikke-steroid anti-inflammatorisk legemiddel (NTHE), et analgetikum, et anestetikum, et sedativ, et lokalanestetikum, en neuromuskulær blokker, et antimikrobielt middel, et antipsoriatisk middel, et korticosteroid, et anabolsk steroid, et erytropoietin, en immunisering, et immunglobulin, et immunundertrykkende legemiddel, et veksthormon, et hormonerstatningslegemiddel, et radiofarmasøytikum, et antidepressiva, et antipsykotikum, et stimulerende middel, en astmamedisinering, en beta-agonist, et inhalert steroid, et epineprin eller analog derav, et cytotoksisk eller annet antikreftmiddel, en antimetabolitt slik som metotrexat, et antiproliferativt middel, et cytokin eller en cytokinantagonist.
Det tilveiebringes også en medisinsk anordning innbefattende minst ett isolert anti-IL-6 pattedyrantistoff ifølge oppfinnelsen, der nevnte anordning er egnet for kontaktanbringelse eller administrasjon av nevnte minst ene anti-IL-6-antistoff og minst én måte valgt fra parenteral, subkutan, intramuskulær, intravenøs, intraartikulær, intrabronkial, intraabdominal, intrakapsulær, intrakartilaginøs, intrakavitær, intracelial, intracelebelær, intracerebroventrikulær, intracolisk, intracervikal, intragastrisk, intrahepatisk, intramyokardial, intraosteal, intrapelvisk, intraperikardial, intraperitoneal, intrapleural, intraprostatisk, intrapulmonal, intrarektal, intrarenal, intraretinal, intraspinal, intrasynovial, intratoraksisk, intrauterin, intravesikal, bolus, vaginal, rektal, buccal, sublingual, intranasal eller transdermal.
Det tilveiebringes også en produsert artikkel for human farmasøytisk eller diagnostisk anvendelse, omfattende emballasjemateriale og en beholder omfattende en oppløsning eller en lyofilisert form av minst ett isolert anti-IL-6 pattedyrantistoff ifølge oppfinnelsen. Produksjonsartikkelen kan evt. omfatte beholderen som en komponent i en parenteral, subkutan, intramuskulær, intravenøs, intraartikulær, intrabronkial, intraabdominal, intrakapsulær, intrakartilaginøs, intrakavitær, intracelial, intracelebelær, intracerebroventrikulær, intracolisk, intracervikal, intragastrisk, intrahepatisk, intramyokardial, intraosteal, intrapelvisk, intraperikardial, intraperitoneal, intrapleural, intraprostatisk, intrapulmonal, intrarektal, intrarenal, intraretinal, intraspinal, intrasynovial, intratoraksisk, intrauterin, intravesikal, bolus, vaginal, rektal, buccal, sublingual, intranasal eller transdermal avleveringsanordning eller system.
Det tilveiebringes også en fremgangsmåte for fremstilling av minst ett isolert anti-IL-6-antistoff ifølge oppfinnelsen, omfattende tilveiebringelse av en vertscelle eller transgent dyr eller transgen plante eller plantecelle som kan uttrykke antistoffet i utvinnbare mengder. Videre tilveiebringes ifølge oppfinnelsen minst ett anti-IL-6-antistoff fremstilt ved den ovenfor angitte fremgangsmåte.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer videre en hvilken som helst oppfinnelse som beskrevet heri.
BESKRIVELSE AV FIGURENE
Figur 1: Grafisk fremstilling viser binding av cCLB-8 til humant, rekombinant IL-6. Figur 2: Grafisk fremstilling viser inhibering av IL-6 mediert IgM mu-sekresjon fra SKW6.4 celler ved cCLB8. Figur 3: Grafisk fremstilling viser inhibering av IL-6 mediert MCP-1 produksjon vedCCLB8. Figur 4: Bilde av en western blot som viser cCLB-inhibering av IL-6 signalering i THP-1 humanmonocytt leukemiceller. Figur 5: Grafisk fremstilling viser inhibering med cCLB-8 av IL-6 indusert serum amyloid-A produksjon fra HepG2-celler. Figur 6: Grafisk fremstilling viser evnen til cCLB-8 til å nøytralisere rhIL-6-indusert celleproliferasjon. Figur 7: Grafisk fremstilling viser den relative reduksjon av vekttap i vertslegemet hos humantumorbærende mus behandlet med både anti-human- og anti-muse-IL-6-antistoff. Figur 8 A-G: Grafisk fremstilling viser seruminhiberingsstudieprofiler av 7 anti-idiotype antistoffer. Figur 9: Grafisk fremstilling viser inhibering av cCLB-8-binding til humant IL-6 med anti-id Mab. Figur 10: Grafisk fremstilling viser anti-id binding til cCLB-8 forhåndsbundet til humant IL-6.
DETALJERT BESKRIVELSE AV OPPFINNELSEN
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer isolerte, rekombinante og/eller syntetiske anti-IL-6 kimære, humaniserte eller CDR-podete antistoffer som har minst én antigenbindingsregion avledet fra CLB-8-antistoffet og IL-6 anti-idiotype antistoffene dertil, samt sammensetninger og kodende nukleinsyremolekyler omfattende minst ett polynukleotid som koder minst ett slikt anti-IL-6 antistoff eller anti-idiotype antistoff. Foreliggende oppfinnelse inkluderer videre, men er ikke begrenset til fremgangsmåter for fremstilling og anvendelse av slike nukleinsyrer og antistoffer og anti-idiotype antistoffer, inkludert diagnostiske og terapeutiske sammensetninger, fremgangsmåter og anordninger.
Som anvendt heri inkluderer et "anti-interleukin-6 CLB-8-antistoff, "anti-IL-6 CLB-8-antistoff', "anti-IL-6 CLB-8-antistoffdel", eller anti-IL-6 CLB-8-antistoffragment" og/eller "anti-IL-6 CLB-8-antistoffvariant" og liknende, et hvilket som helst protein-eller peptidholdig molekyl som i det minste innbefatter en del av et immunglobulinmolekyl inneholdende minst én komplementærbestemmende region (CDR) i en tungkjede eller lettkjede, eller en ligandbindingsdel derav avledet fira det murine CLB-8-monklonale antistoff i kombinasjon med en variabel tungkjede- eller lettkjederegion, en konstant tungkjede- eller lettkjederegion, en skjelettstrukturregion, eller en hvilken som helst del derav som kan inkorporeres i et antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse. Slikt antistoff påvirker evt. videre en spesifikk ligand, slik som, men ikke begrenset til, der slikt antistoff modulerer, reduserer, øker, antagoniserer, agoniserer, demper, lindrer, blokkerer, inhiberer, motvirker og/eller interfererer med minst én IL-6-aktivitet eller binding, eller med IL-6-reseptoraktivitet eller binding, in vitro, in situ og/eller in vitro. Som et ikke-begrensende eksempel kan et egnet anti-IL-6-antistoff, spesifisert del eller en variant ifølge oppfinnelsen, bindes med høy affinitet til en inhiberende og/eller nøytraliserende epitop av human IL-6. Et egnet anti-IL-6 antistoff, spesifisert del eller variant, kan også evt. påvirke minst én IL-6-aktivitet eller funksjon, slik som, men ikke begrenset til RNA, DNA eller proteinsyntese, IL-6-frigivning, IL-6-reseptorsigalering, membran-IL-6-spaltning, IL-6-aktivitet, ny-produksjon og/eller syntese.
Betegnelsen "antistoff skal videre innbefatte antistoffer, nedbrytingsfragmenter, spesifiserte deler og varianter derav, inkludert antistoffmimetika eller innbefattende deler av antistoffer som etterlikner strukturen og/eller funksjonen til et antistoff eller spesifisert fragment eller del derav, inkludert enkeltkjede-antistoffer og fragmenter derav; hver inneholdende minst én CDR avledet fra det monoklonale CLB-8-antistoff. Funksjonelle fragmenter inkluderer antigenbindingsfragmenter som bindes til et pattedyr-IL-6. Antistoffragmenter, for eksempel, som kan bindes til IL-6 eller deler derav, inkluderer, men er ikke begrenset til Fab (for eksempel ved papain-nedbrytning), Fab' (for eksempel ved pepsin-nedbrytning og delvis reduksjon) og F(ab')2(for eksempel ved pepsin-nedbrytning), facb (for eksempel ved plasmin-nedbrytning), pFc'
(for eksempel ved pepsin- eller plasmin-nedbrytning), Fd (for eksempel ved pepsin-nedbrytning, delvis reduksjon og re-aggregering), Fv eller scFv (for eksempel ved molekylære biologiteknikker) fragmenter, er omfattet av oppfinnelsen (se for eksempel Colligan, Imunnology, supra).
Slike fragmenter kan produseres ved enzymatisk spaltning, syntetisk eller rekombinante teknikker, som kjent innen teknikken og/eller som beskrevet heri. Antistoffer kan også produseres i en rekke forskjellig avkortete former ved anvendelse av antistoffgener der ett eller flere stoppkodoner er introdusert oppstrøms for det naturlige stoppsetet. Et kombinasjonsgen som for eksempel koder en F(ab')2tungkjededel, kan konstrueres til å inkludere DNA-sekvenser som koder CHi-doménet og/eller hengselregionen til den tunge kjeden. Antistoffenes forskjellige deler kan sammenføyes kjemisk ved hjelp av konvensjonelle teknikker, eller kan fremstilles som et tilgrensende protein ved anvendelse av genetiske konstruksjonsteknikker.
Ifølge oppfinnelsen tilveiebringes kimære eller humaniserte antistoffer der CDR er avledet fra det murine CLB-8 antistoff som kan binde humant IL-6, og i det minste en del av, eller resten av antistoffet er avledet fira ett eller flere humane antistoff. Antistoffets humane del kan således inkludere skjelettstrukturen, Cl, Ch domener (for eksempel ChI, Ch2, Ch3), hengsel, (Vl, Vh) regioner, som er vesentlig ikke-immunogene i mennesker. Som anvendt heri inkluderer "kimære" antistoffer eller "humaniserte" antistoffer eller "CDR-podete" en hvilken som helst kombinasjon av de ovenfor beskrevne murine CDR med ett eller flere proteiner eller peptider avledet fra et humant antistoff. Antistoffets regioner avledet fra humane antistoffer behøver ikke ha 100 % identitet med humane antistoffer. I en foretrukket utførelsesform er så mange av de humane aminosyreresidier som mulig beholdt for at immunogenisiteten skal være ubetydelig, men de humane rester kan modifiseres etter behov for å understøtte antigenbindingssetet dannet av CDR, og samtidig maksimere humaniseringen av antistoffet. Slike endringer eller variasjoner vil fortrinnsvis bibeholde eller redusere immunogenisiteten i mennesker eller andre arter i forhold til ikke-modifiserte antistoffer. Det skal påpekes at et humanisert antistoff kan produseres av et ikke-humant dyr eller prokaryot eller eukaryot celle som er i stand til å uttrykke funksjonelle, rearrangerte humane immunglobulin (for eksempel tungkjede og/eller lettkjede) gener. Videre når antistoffet er et enkeltkjedeantistoff, kan det innbefatte et linkerpeptid som ikke finnes i native, humane antistoffer. Et Fv, for eksempel, kan innbefatte et linkerpeptid, slik som to til ca. åtte glysin- eller andre aminosyreresidier, som forbinder den variable regionen i tungkjeden og den variable regionen i lettkjeden. Slike linkerpeptider anses å være av human opprinnelse.
Det kan også anvendes bispesifikke, heterospesifikke, heterokonjugater eller liknende antistoffer som er monoklonale, humaniserte antistoffer som har bindingsspesifisitet for minst to forskjellige antigener. I foreliggende tilfelle er en av bindingsspesifisitetene for minst ett IL-6-protein, det andre er for et hvilket som helst annet antigen. Fremgangsmåter for fremstilling av bispesifikke antistoffer er kjent innen teknikken. Tradisjonelt er den rekombinante produksjonen av bispesifikke antistoffer basert på ko-ekspresjon av to tungkjede-lettkjedepar, hvor de to tungkjedene har forskjellig spesifisitet (Milstein og Cuello, Nature 305:537 (1983)). Fordi det vilkårlige utvalget av tunge og lette immunglobulinkjeder produserer disse hybridomer (kvadromer) en potensiell blanding av 10 forskjellige antistoffmolekyler, av hvilke kun ett har den korrekte bispesifikke struktur. Rensing av det korrekte molekyl, som vanligvis foretas ved affinitetskromatografiske trinn, er temmelig tungvint og produktutbyttet er lavt. Liknende prosedyrer er beskrevet i for eksempel WO 93/08829, U.S. patent nr. 6 210 668, 6 193 967, 6 132 992, 6 106 833,6 060 285, 6 037 453, 6 010 902, 5 989 530, 5 959 084, 5 959 083, 5 932 448, 5 833 985, 5 821 333, 5 807 706, 5 643 759, 5 601 819, 5 582 996, 5 496 549, 4 676 980, WO91/00360, WO 92/00373, EP 03089, Traunecker et al., EMBO J. 10:3655 (1991), Suresh et al, Methods in Enzymology 121:210 (1986), og det vises til disse referansene med henblikk på detaljer.
Anti-IL-6 CLB-8-antistoffer nyttige i fremgangsmåter og sammensetninger ifølge foreliggende oppfinnelse er kjennetegnet ved høyaffinitetsbinding til IL-6, og har eventuelt og fortrinnsvis lav toksisitet. Et antistoff, spesifisert fragment eller en variant ifølge oppfinnelsen, der de individuelle komponentene, slik som den variable region, konstante region og skjelettstrukturen, individuelt og/eller kollektivt, evt. og fortrinnsvis, er i besittelse av lav immunogenisitet, er spesielt nyttig i foreliggende oppfinnelse. Antistoffene som kan benyttes i oppfinnelsen er evt. kjennetegnet ved deres evne til å behandle pasienter i lengre perioder med målbar lindring av symptomer og lav og/eller akseptabel toksisitet. Lav eller akseptabel immunogenisitet og/eller høy affinitet, samt andre egnete egenskaper, kan bidra til de terapeutiske resultater som oppnås. "Lav immunogenisitet" er definert heri som frembringelse av signifikante HAHA-, HACA- eller HAMA-responser på mindre enn ca. 75 %, eller fortrinnsvis mindre enn ca. 50 % hos de behandlete pasientene og/eller frembringelse av lave titere i den behandlete pasient (mindre enn ca. 300, fortrinnsvis mindre enn 100 målt med en dobbelt antigenenzymanalyse) (Eliott et al., Lancet 344:1125-1127 (1994), og det vises til denne referanse med henblikk på detaljer.
Anvendelse
De isolerte nukleinsyrene ifølge foreliggende oppfinnelse kan anvendes for produksjon av minst ett anti-IL-6-antistoff eller spesifisert variant derav, som kan anvendes til å måle en effekt i en celle, vev, organ eller dyr (inkludert pattedyr og mennesker), for å diagnostisere, overvåke, modulere, behandle, lindre, hjelpe forebyggelsen av hendelsen, eller redusere symptomene på, minst én IL-6 tilstand, valgt fira, men ikke begrenset til minst én av en immunforstyrrelse eller sykdom, en kardiovaskulær forstyrrelse eller sykdom, en infeksiøs, malign og/eller neurologisk forstyrrelse eller sykdom, en allergisk forstyrrelse eller sykdom; en hudforstyrrelse eller sykdom; en hematologisk forstyrrelse eller sykdom, og/eller en pulmonal forstyrrelse eller sykdom, eller annen kjent eller spesifisert IL-6 relatert tilstand.
En slik fremgangsmåte kan innbefatte administrasjon av en effektiv mengde av en sammensetning eller en farmasøytisk sammensetning, innbefattende minst ett anti-IL-6 antistoff til en celle, et vev, et organ, et dyr eller en pasient som har behov for slik modulering, behandling, lindring, forebyggelse eller reduksjon av symptomer, effekter eller mekanismer. Den effektive mengden kan innbefatte en mengde på ca. 0,001 til 500 mg/kg pr. enkelte (bolus), multiple eller kontinuerlig administrasjon eller for å oppnå en serumkonsentrasjon på 0,01-5000 ug/ml serumkonsentrasjon pr. enkelte, multiple eller kontinuerlig administrasjon, eller hvilket som helst effektivt område eller verdi deri, som foretatt og bestemt ved bruk av kjente metoder, som beskrevet heri eller kjent i relevante teknikker.
Sitasjorter
Alle publikasjoner eller patenter som angitt heri skal ses som fullstendig innbefattet heri ved henvisning, idet de viser teknikkens stand ved tidspunktet for foreliggende oppfinnelse og/eller for å tilveiebringe beskrivelse og muliggjøring av foreliggende oppfinnelse. Publikasjoner refererer til hvilke som helst vitenskapelige eller patentpublikasjoner, eller hvilken som helst annen publikasjon tilgjengelig i et hvilket som helst medieformat, inkludert alle registrerte elektroniske eller trykte formater. Følgende referanser er innbefattet heri med henvisning: Ausubel et al., red., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., NY, NY (1987-2001); Sambrook et al, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2. utgave, Cold Spring Harbor, NY (1989); Harlow and Lane, antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, NY (1989); Colligan et al., red., Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, Inc., NY (1994-2001); Colligan et al, Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY, (1997-2001).
Antistoffer ifølge foreliggende oppfinnelse
Ifølge foreliggende oppfinnelse er det kimære anti-IL-6 CLB-8 antistoff et antistoff hvori den variable regionen eller CDR er avledet fra det murine CLB-8 antistoff som er i stand til å bindes til og inhibere funksjonen til human IL-6, og skjelettstrukturen og konstante regioner i antistoffet er avledet fra ett eller flere humane antistoff. Den variable region eller CDR avledet fra det murine CLB-8 antistoff har fortrinnsvis fira ca. 90 til ca. 100 prosent identitet med den variable regionen eller CDR i det murine CLB-8 antistoffet, selv om hvilke som helst og alle modifikasjoner, inkludert substitusjoner, innskudd og delesjoner er aktuelle så lenge som det kimære antistoff opprettholder evne til å binde til og inhibere vevsfaktor. Regionene i de kimære, humaniserte eller CDR-podete antistoffene som er avledet fira humane antistoffer, behøver ikke ha hundre prosent identitet med de humane antistoffene. I en foretrukket utførelsesform blir så mange som mulig av de humane aminosyrerestene bibeholdt slik at immunogenisitet er ubetydelig, men de humane restene, spesielt rester i skjelettstrukturregionen er substituert etter behov og som lært i det nedenstående i overensstemmelse med foreliggende oppfinnelse. Slike modifikasjoner som beskrevet heri er nødvendig for å understøtte antigenbindingssetet dannet av CDR, samtidig som humaniseringen av antistoffet maksimeres.
Det CLB-8 murine, monoklonale antistoffet mot humant IL-6 hvorfra den variable region eller CDR kan avledes, er kjent innen teknikken (Brakenhoff et al., supra), som det vises til med henblikk på detaljer, eller kan produseres ved anvendelse av velkjente fremgangsmåter for monoklonal antistoffproduksjon (se for eksempel Harlow et al., red., 1988, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, Cold Spring Harbor, New York). Renset, humant IL-6 som antistoffer kan frembringes mot, er likeledes velkjent.
Den vanlige fagmann kan bestemme sekvensene i den variable regionen og/eller CDR under henvisning til publisert vitenskapelig litteratur eller sekvensdatabanker eller ved kloning og sekvensering av de tunge og lette kjedene i det murine antistoff, ved hjelp av konvensjonell metodikk. Ifølge foreliggende oppfinnelse tilveiebringes cDNA og aminosyresekvensene i den tunge kjeden (SEKV. ID nr. 3 og 4, henholdsvis) i murint CLB-8 tungkjede tilveiebrakt ved figur 1. cDNA og utledet aminosyresekvens i den murine CLB-8 lettkjeden er vist i figur 2.
Hver av de variable tung- og lettkjederegionene inneholder tre CDR som kombineres til dannelse av antigenbindingssete. De tre CDR er omgitt av fire FR-regioner som hovedsakelig fungerer til understøttelse av CDR. Sekvensene i CDR inne i sekvensene i de variable regionene til de tunge og lette kjedene kan identifiseres ved datastøttet tilpasning ifølge Kabat et al., (1987) i Sequences of Proteins of Immunological Interest, fjerde utgave, U. S. Department of Health and Human Services, U.S. Government Printing Office, Washington, D. C, eller ved molekylær modellering av de variable regioner, for eksempel anvendelse av ENCAD programmet som beskrevet av Levitt
(1983) J. Mol. Biol. 168:595.
I en foretrukket utførelsesform er CDR avledet fra murint, monoklonalt antistoff CLB-8.
De foretrukne tungkjede-CDR har følgende sekvenser:
De foretrukne lettkjede-CDR har følgende sekvenser:
Sekvensene i CDR i det murine CLB-8 antistoffet kan modifiseres ved anvendelse av innskudd, substitusjoner og delesjoner i den grad at det CDR-podete antistoffet bibeholder sin evne til å bindes til og inhibere human vevfaktor. Den vanlige fagmannen kan konstatere opprettholdelsen av denne aktivitet ved utførelse av de funksjonelle analysene beskrevet nedenfor. CDR kan for eksempel ha fra ca. 50 % til 100 % homologi til CDR med SEKV. ID nr. 1-6.1 en foretrukket utførelsesform har CDR fra ca. 80 % til ca. 100 % homologi til CDR med SEKV. ID nr. 1-6.1 en mer foretrukket utførelsesform har CDR fra ca. 90 % til ca. 100 % homologi til CDR med SEKV. ID nr. 1-6.1 en mest foretrukket utførelsesform har CDR fra ca. 100 % til CDR med SEKV. ID nr. 1-6.
Alternativt kan hele den variable tungkjederegionen og den variable lettkjederegion i det murine CLB-8 antistoffet, som angitt i eksempel 2 (SEKV. ID nr. 7 og 8) være kombinert med de humane, konstante og skjelettstrukturregionene til dannelse av det kimære cCLB-8-antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse.
Humane gener som koder de konstante (C) regioner i de kimære antistoff, fragmenter og regioner ifølge oppfinnelsen, kan avledes fra et humant, føtalt leverbibliotek, ved anvendelse av kjente fremgangsmåter. Human C-regiongener kan avledes fra en hvilken som helst human celle, inkludert de som uttrykker og produserer humant immunglobulin. Den humane Cn-region kan avledes fra en hvilken som helst av de kjente klasser eller isotyper av humane H-kjeder, inkludert y, u, a, 5,6og undertyper derav, slik som Gl, G2, G3 og G4. Siden H-kjede-isotypen er ansvarlig for de forskjellige effektorfunksjonene til et antistoff, vil valget av CH-region være styrt av de ønskete effektorfunksjonene, slik som komplementfiksering, eller aktivitet i antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet (ADCC). Cn-regionen er fortrinnsvis avledet fra yl (IgGl).
Den humane Ci-regionen kan avledes enten fra human L-kjede isotype, k eller X, fortrinnsvis k.
Gener som koder humane immunglobulin C-regioner oppnås fra humane celler ved standard kloningsteknikker (Sambrook et al., ( Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2. utg., Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N. Y., (1989), og Ausubel et al., red., Current Protocols in Molecular Biology (1987-1993)). Human C-regiongener er lett tilgjengelige fra kjente kloner inneholdende gener som representerer de to klassene av L-kjeder, de fem klassene av H-kjeder og underklasser derav. Kimære antistoffragmenter, slik som F(ab<1>)2og Fab, kan fremstilles ved konstruksjon av et kimært H-kjedegen som er passende avkortet. Et kimært gen som koder en H-kjededel i et F(ab<1>)2-fragment vil for eksempel inkludere DNA-sekvenser som koder CHl-doménet og hengselregionen i H-kjeden, fulgt av et translasjonsstoppkodon for å oppnå det avkortete molekyl.
De murine, humane eller murine og kimære antistoffer, fragmentene og regionene ifølge oppfinnelsen, fremstilles generelt ved kloning av DNA-segmenter som koder H- og L-kjedeantigenbindingsregionene i et TNF-spesifikt antistoff, og sammenføying av disse DNA-segmentene til DNA-segmenter som koder CH- og CL-regioner respektivt, til dannelse av murine, humane eller kimære immunglobulinkodende gener.
I en foretrukket utførelsesform skapes således et sammenføyd, kimært gen som omfatter et første DNA-segment som koder i det minste antigenbindingsregionen av ikke-human opprinnelse, slik som en funksjonelt omorganisert V-region med tilknyttet (J) segment, bundet til et annet DNA-segment som koder i det minste en del av en human C-region.
De variable regioners sekvenser i det murine CLB-8-antistoff kan modifiseres ved hjelp av innskudd, substitusjoner og delesjoner i en slik grad at det kimære antistoff bibeholder evne til å bindes til og inhibere humant IL-6. Den vanlige fagmann kan konstatere opprettholdelse av denne aktivitet ved utførelse av de nedenfor beskrevne funksjonelle analyser. De variable regionene kan for eksempel ha fira ca. 50 % til ca. 100 % homologi til de variable regioner i SEKV. ID nr. 7-8.1 en foretrukket utførelsesform har de variable regionene fira ca. 80 % til ca. 100 % homologi til de variable regioner i SEKV. ID nr. 7-8.1 en mer foretrukket utførelsesform har de variable regionene fra ca. 90 % til ca. 100 % homologi til de variable regioner i SEKV. ID nr. 7-8.1 en mest foretrukket utførelsesform har de variable regionene fra ca. 100 % homologi til CDR i SEKV. ID nr. 1-6.
For hensiktsmessighetens skyld er nummereringsskjemaet til Kabat et al. valgt heri. Rester er betegnet med små symboler eller understreket etter behov for å tilpasse de foreliggende sekvenser til den nevnte standard Kabat nummererte sekvens.
Ifølge foreliggende oppfinnelse kan rester bibeholdes i FR-regionen som er idiosynkratisk til stam-antistoffet, for eksempel CLB-8. Rester som er vist å være kritiske i humanisering av andre antistoffer, kan også bibeholdes. De foregående retningslinjer er fulgt i den grad det er nødvendig for å understøtte antigenbindingssetet dannet av CDR under samtidig maksimering av antistoffets humanisering.
Aminosyresekvensen til en representativ variabel tungkjederegion fra murint, monoklonalt antistoff CLB-8 og et humant antistoff, er vist i eksempel 2 nedenfor. Aminosyresekvensen til en representativ kimær, variabel lettkjederegion avledet fra murint, monoklonalt antistoff CLB-8 og et humant antistoff, er også vist i eksempel 2.
Et kimært antistoff inneholdende variable regioner fra det murine CLB-8-antistoff er ifølge foreliggende oppfinnelse vist å være like effektivt som murint, monoklonalt antistoff CLB-8 i binding til IL-6.
I det minste ett anti-IL-6-antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse kan evt. produseres av en cellelinje, en blandet cellelinje, en immortalisert celle eller klonal populasjon av immortaliserte celler, som er velkjent innen teknikken. Se for eksempel Ausubel et al., red., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc.,
NY, NY (1987-2001); Sambrook, et al, Molecular Cloning: A Laboratory Manual,
2. utg., Cold Spring Harbor, NY (1989); Harlow and Lane, antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, NY (1989); Colligan, et al., red., Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, Inc., NY (1994-2001); Colligan et al, Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY, (1997-2001), og det vises til disse referanser med henblikk på detaljer.
I en tilnærming produseres et hybridom ved fusjonering av en egnet immortalisert cellelinje (for eksempel en myelomcellelinje slik som ,men ikke begrenset til Sp2/0, Sp2/0-AG14, NSO, NS1, NS2, AE-1, L.5, >243, P3X63Ag8.653, Sp2 SA3, Sp2 MAI, Sp2 SS1, Sp2 SA5, U937, MLA 144, ACT IV, MOLT4, DA-1, JURKAT, WEHI, K-562, COS, RATI, NIH 3T3, HL-60, MLA 144, NAMAIWA, NEURO 2A, eller liknende eller heteromylomer, fusjonsprodukter derav, eller en hvilken som helst celle eller fusjonscelle avledet derav, eller en hvilken som helst annen egnet cellelinje som er kjent innen teknikken. Se for eksempel www.atcc.org, www.lifetech.com., og liknende, med antistoffproduserende celler, slik som, men ikke begrenset til isolert eller klonet milt, perifert blod, lymfe, tonsill eller andre immun- eller B-celleholdige celler, eller hvilke som helst andre celler uttrykkende tung- eller lettkjede konstante eller variable eller skjelettstrukturelle eller CDR-sekvenser, enten som endogen eller heterolog nukleinsyre, som rekombinant eller endogent, viralt, bakterielt, algalt, prokaryotisk, amfibisk, insekt, reptil, fisk, pattedyr, gnager, hest, ovin, geit, sau, primat, eukaryotisk, genomisk DNA, cDNA, rDNA, mitokondrisk DNA eller RNA, kloroplast DNA eller RNA, hnRNA, mRNA, tRNA, enkel-, dobbel- eller trippel-trådet, hybridisert og liknende, eller en hvilken som helst kombinasjon derav. Se for eksempel Ausubel, supra, og Colligan, Immunology, supra, kap. 2, idet det vises til disse referansene med henblikk på detaljer.
En hvilken som helst annen egnet vertscelle kan også benyttes for å uttrykke heterolog eller endogen nukleinsyre som koder et antistoff, spesifisert fragment eller variant derav ifølge foreliggende oppfinnelse. De fusjonerte celler (hybridomene) eller rekombinante celler kan isoleres ved anvendelse av selektive dyrkingsbetingelser eller andre egnete, kjente fremgangsmåter, og klonet ved begrensende fortynning eller cellesortering, eller ved andre kjente fremgangsmåter. Celler som produserer antistoffer med den ønskete spesifisitet kan velges ved anvendelse av en egnet analyse (for eksempel ELISA).
Fremgangsmåter for konstruksjon eller humanisering av ikke-humane eller humane antistoffer kan anvendes og er velkjent innen teknikken. Generelt har et humanisert eller konstruert antistoff én eller flere aminosyreresidier fra en kilde som er ikke-human, for eksempel, men ikke begrenset til mus, rotte, kanin, ikke-human primat eller annet pattedyr. Disse humane aminosyreresidier er ofte referert til som "import"rester, som typisk tas fra et "import"variabelt, konstant eller annet doméne ved kjent human sekvens.
Kjente humane Ig-sekvenser er beskrevet, for eksempel
www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi; www.atcc.org/phage/hdb.html; www.sciquest.com/; www.abcam.com/;
www.antibodyresource.com/onlinecomp.html;
www. public.iastate.edu/~pedro/research_tools.html;
www.mgen.uni-heidelberg.de/SD/IT/IT.html;
www.whfreeman.com/immunology/CH05/kuby05.htm;
www. library .thinkquest. org/12429/Immune/Antibody .html;
www.hhmi. org/grants/lectures/1996/vlab/;
www.path.cam.ac.uk/- mrc7/mikeimages.html;
www .antibodyresource.com;
mcb.harvard.edu/BioLinks/Immunology.html; www.immunologylink. com/; pathbox. wustl.edu/~hcenter/index.html; www.biotech.ufl.edu/~hcl/;
www.pebio.com/pa/340913/340913.html;
www.nal.usda.gov/awic/pubs/antibody/;
www.rn.ehime-u.ac.jp/~yasuhito/Elisa.html; www .biodesign.com/table.asp;
www .icnet.uk/axp/facs/davies/links.html;
www.biotech.ufl.edu/- fccl/protocol.html;
www.isac-net.org/sites_geo.html; aximtl.imt.uni-marburg.de/~rek/AEPStart.html; baserv.uci.kun.nl/~jraats/links 1 .html;
www.recab.uni-hd.de/immuno.bme.nwu.edu/;
www.rnrc-cpexam.ac.uk/imt-doc/public/INTRO.htrnl;
www.ibt.unam.mx/vir/V_mice.html; imgt.cnusc.fr:8104/;
www.biochem.ucl.ac.uk/~martin/abs/index.html; antibody.bath.ac.uk/;
abgen.cvm.tamu.edu/lab/wwwabgen;html;
www.unizh.ch/~honegger/AHOseminar/SlideO 1 .html; www.cryst.bbk.ac.uk/~ubcg07s/; www.nimr.mrc.ac.uk/CC/ccaewg/ccaewg.htm;
www.path.cam.ac.uk/~mrc7/humanisation/TAHHP.html;
www. ibt.unam.mx/vir/ structure/stat_aim.html;
www.biosci.missouri.edu/smithgp/index.html;
www .cryst. bioc.cam.ac. uk/~fmolina/Web-pages/Pept/spottech.html; www.jerini.de/fr_products.htm; www.patents.ibm.com/ibm.html.Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Dept. Health (1983), og det vises til disse referanser med henblikk på detaljer.
Slike importerte sekvenser kan benyttes til reduksjon av immunogenisitet eller redusere, forsterke eller modifisere binding, affinitet, on-rate, off-rate, aviditet, spesifisitet, halveringstid eller en hvilken som helst annen egnet egenskap, som kjent innen teknikken. Generelt blir en del av eller alle de ikke-humane eller humane CDR-sekvensene opprettholdt mens de ikke-humane sekvensene til de variable og konstante regionene erstattes med humane eller andre aminosyrer. Antistoffer kan også evt. humaniseres med bibehold av høy affinitet for antigenet og andre gunstige biologiske egenskaper. For å oppnå dette mål, kan humaniserte antistoffer evt. fremstilles ved en analyseprosess av de parentale sekvensene og forskjellige konseptuelle humaniserte produkter ved anvendelse av tredimensjonale modeller av de parentale og humaniserte sekvensene. Tredimensjonale immunglobulinmodeller er vanlig tilgjengelige og er kjent av fagfolk innen teknikken. Det finnes tilgjengelige dataprogrammer som illustrerer og viser sannsynlige tredimensjonale konformasjonsstrukturer for valgte immunglobulinkandidatsekvenser. Inspeksjon av disse avbildningene gir anledning til analyse av den sannsynlige rolle til restene når det gjelder funksjonen til immunglobulinkandidatsekvensen, dvs. analyse av rester som ikke innvirker på kandidatimmunglobulinets evne til å binde dets antigen. På denne måte kan FR-rester velges og kombineres fra konsensus- og importsekvensene slik at den ønskete antistoffegenskap, slik som forøket affinitet for målantigenet (-antigenene) er oppnådd. Generelt er CDR-restene direkte og mest betydelig involvert i innvirkningen på antigenbinding. Humanisering eller konstruksjon av antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse kan utføres ved anvendelse av en hvilken som helst kjent fremgangsmåte, slik som, men ikke begrenset til de som er beskrevet i Winter (Jones et al., Nature 321:522 (1986); Riechmann et al, Nature 332:323 (1988); Verhoeyen et al, Science 239:1534 (1988)), Sims et al, J. Immunol. 151:2296 (1993); Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901 (1987), Carter et al, Proe. Nati. Acad. Sei. U.S.A. 89:4285 (1992); Presta et al, J. Immunol. 151:2623 (1993), U.S. patent nr. 5 723 323, 5 976 862, 5 824 514, 5 817 483,5 814 476, 5 763 192, 5 766 886,5 714 352, 6 204 023, 6 180 370, 5 693 762, 5 530 101, 5 585 089, 5 225 539, 4 816 567, PCTV: US98/16280, US96/18978, US91/09630, US91/05939, US94/01234, GB89/01334, GB91/01134, GB92/01755; WO90/14443, WO90/14424, WO90/14430, EP229246, og det vises til disse referanser med henblikk på detaljer.
Antistoffer ifølge foreliggende oppfinnelse kan også fremstilles ved anvendelse av idet minste ett anti-IL-6-antistoff som koder nukleinsyre for tilveiebringelse av transgene dyr eller pattedyr, slik som geiter, kuer, hester, sauer og liknende, som produserer slike antistoffer i sin melk. Slike dyr kan tilveiebringes ved anvendelse av kjente fremgangsmåter. Se for eksempel, men ikke begrenset til U.S. patent nr. 5 827 690; 5 849 992; 4 873 316; 5 849 992; 5 994 616, 5 565 362; 5 304 489, og liknende, idet det vises til disse patentene med henblikk på detaljer.
Antistoffer ifølge foreliggende oppfinnelse kan videre fremstilles ved anvendelse av minst ett anti-IL-6-antistoff som koder nukleinsyre for tilveiebringelse av transgene planter og dyrkete planteceller (for eksempel, men ikke begrenset til tobakk og mais) som produserer slike antistoffer, spesifiserte deler eller varianter i plantedelene eller i celler dyrket derfra. Som et ikke-begrensende eksempel er transgene tobakkblader som uttrykker rekombinante proteiner med hell benyttet for tilveiebringelse av store mengder rekombinante proteiner, for eksempel ved bruk av en induserbar promoter. Se for eksempel Cramer et al., Curr. Top. Microbol. Immunol. 240:95-118 (1999) og referanser angitt deri. Videre er transgen mais benyttet for å uttrykke pattedyrproteiner ved kommersielle produksjonsnivåer, med biologiske aktiviteter ekvivalent med de produsert i andre rekombinante systemer eller renset fra naturlige kilder. Se for eksempel Hood et al, Adv. Exp. Med. Biol. 464:127-147 (1999) og referanser angitt deri. Antistoffer er også produsert i store mengder fra transgene plantefrø som innbefatter antistoffragmenter, slik som enkeltkjede-antistoffer (scFv'er), inkludert tobakksfrø og potetrotknoller. Se for eksempel Conrad et al., Plant Mol. Biol. 38:101-109 (1998) og referanser angitt deri. Antistoffer ifølge foreliggende oppfinnelse kan således også produseres ved anvendelse av transgene planter ifølge kjente fremgangsmåter. Se også for eksempel Fischer et al., Biotechnol. Appl. Biochem. 30:99-108 (Okt. 1999), Ma et al, Trends Biotechnol. 13:522-7 (1995); Ma et al, Plant Physiol. 109:341-6 (1995); Whitelam et al., Biochem. Soc. Trans. 22:940-944 (1994); og referanser angitt deri. Se også generelt for planteekspresjon av antistoffer, men ikke begrenset dertil. Det vises til hver av de ovenfor angitte referanser med henblikk på detaljer.
Antistoffene ifølge oppfinnelsen kan binde human IL-6 med et bredt område av affiniteter (KD). I en foretrukket utførelsesform kan minst én human mAb ifølge oppfinnelsen evt. binde humant IL-6 med høy affinitet. En human mAb kan for eksempel binde human IL-6 med en Kdlik eller mindre enn ca. IO'<7>M, slik som, men ikke begrenset til 0,1-9,9 (for et hvilket som helst område eller verdi deri) X IO"7, IO"8 IO"<9>,10"<10>,10"<11>,IO"12, IO"<13>eller et hvilket som helst område eller verdi der.
Affiniteten eller aviditeten til et antistoff for et antigen kan bestemmes eksperimentelt ved anvendelse av en hvilken som helst egnet fremgangsmåte. (Se for eksempel Berzofsky et al., "Antibody-Antigen Interactions", In Fundamental Immunology, Paul, W. E., red., Raven Press: New York, NY (1984); Kuby, Janis Immunology, W. H. Freeman and Company: New York, NY (1992); og fremgangsmåter beskrevet heri). Den målte affiniteten for en spesiell antistoff-antigen interaksjon kan variere dersom den måles under forskjellige betingelser (for eksempel saltkonsentrasjon, pH). Målinger av affinitet og andre antigenbindingsparametere (for eksempel Kd , Ka, Kj) foretas således fortrinnsvis med standard oppløsninger av antistoff og antigen, og en standardisert buffer, slik som den heri beskrevne buffer.
N ukleinsyremolekyler
Ved anvendelse av den angitte informasjon heri, slik som nukleotidsekvensene som koder minst 70-100 % av de tilstøtende aminosyrene i minst én av SEKV. ID nr. 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 og 8, spesifiserte fragmenter, varianter eller konsensussekvenser derav, eller en innsatt vektor innbefattende minst én av disse sekvensene, kan et nukleinsyremolekyl ifølge foreliggende oppfinnelse som koder minst ett anti-IL-6-antistoff oppnås ved anvendelse av fremgangsmåter beskrevet heri, eller som kjent innen teknikken.
Nukleinsyremolekyler ifølge foreliggende oppfinnelse kan være i form av RNA, slik som mRNA, hnRNA, tRNA eller en hvilken som helst annen form, eller i form av DNA, inkludert, men ikke begrenset til cDNA og genomisk DNA oppnådd ved kloning eller fremstilt syntetisk, eller en hvilken som helst kombinasjon derav. Nevnte DNA kan være trippeltrådet, dobbelttrådet eller enkelttrådet, eller en hvilken som helst kombinasjon derav. En hvilken som helst del av minst én tråd av nevnte DNA eller RNA kan være den kodende tråden, også kjent som sens-tråden eller den kan være den ikke-kodende tråden, også referert til som anti-senstråden.
Isolerte nukleinsyremolekyler ifølge foreliggende oppfinnelse kan inkludere nukleinsyremolekyler innbefattende en åpen leseramme (ORF), evt. med ett eller flere introner, for eksempel, men ikke begrenset til minst én spesifisert del av minst én CDR, som CDR1, CDR2 og/eller CDR3 i minst én tungkjede (for eksempel SEKV. ID nr. 1-3, eller lettkjede (for eksempel SEKV. ID nr. 4-6); nukleinsyremolekyler innbefattende den kodende sekvensen for ett anti-IL-6-antistoff eller variabel region (for eksempel SEKV. ID nr. 7,8) og nukleinsyremolekyler som innbefatter en nukleotidsekvens som er vesentlig forskjellig fra de beskrevet ovenfor, men som pga. den genetiske kodens degenerasjon fremdeles koder minst ett anti-IL-6-antistoff, som beskrevet heri og/eller som kjent innen teknikken. Den genetiske koden er naturligvis velkjent innen teknikken. Det ville således være ren rutine for en fagmann innen teknikken å utvikle slike degenererte nukleinsyrevarianter som koder for spesifikke anti-IL-6-antistoffer ifølge oppfinnelsen. Se for eksempel Ausubel et al., supra, og slike nukleinsyrevarianter er inkludert ifølge foreliggende oppfinnelse. Ikke-begrensende eksempler på isolerte nukleinsyremolekyler ifølge foreliggende oppfinnelse inkluderer SEKV. ID nr. 1-8; tilsvarende til ikke-begrensende eksempler på en nukleinsyre som koder henholdsvis HC CDR1, HC CDR2, HC CDR3, LC CDR1, LC CDR2, LC CDR3, HC variabel region og LC variabel region.
Som angitt heri kan nukleinsyremolekyler ifølge foreliggende oppfinnelse som innbefatter en nukleinsyre som koder et anti-IL-6-antistoff inkludere, men er ikke
begrenset til de som koder aminosyresekvensen i et antistoffragment alene; den kodende sekvensen for hele antistoffet eller en del derav; den kodende sekvensen for et antistoff, fragment eller del, samt ytterligere sekvenser, slik som den kodende sekvensen til minst én signalleder eller fusjonspeptid, med eller uten ovennevnte ytterligere kodende sekvenser, slik som minst ett intron, sammen med ytterligere ikke-kodende sekvenser, inkludert, men ikke begrenset til ikke-kodende 5'- og 3'-sekvenser, slik som de transkriberte, ikke-translaterte sekvenser som spiller en rolle i transkripsjon, mRNA-prosessering, inkludert spleising- og polyadenyleringssignaler (for eksempel - ribosombinding og mRNA-stabilitet); en ytterligere kodende sekvens som koder for ytterligere aminosyre, slik som de som gir ytterligere funksjonaliteter. Den sekvens som koder et antistoff kan således fusjoneres med en markørsekvens, slik som en sekvens som koder et peptid som letter rensing av det fusjonerte antistoff innbefattende et antistoffragment eller -del.
Polynukleotider som selektivt hybridiserer til et polynukleotid som beskrevet heri Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer isolerte nukleinsyrer som hybridiserer under selektive hybridiseringsbetingelser til et polynukleotid som beskrevet heri. Polynukleotidene ifølge denne utførelsen kan således anvendes for isolering, påvisning og/eller kvantifisering av nukleinsyrer innbefattende slike polynukleotider. Polynukleotider ifølge foreliggende oppfinnelse kan for eksempel anvendes til å identifisere, isolere eller til å amplifisere partial- eller fullengdekloner i et deponert bibliotek. I noen utførelsesformer er polynukleotidene genomiske eller isolerte cDNA-sekvenser, eller på annen måte komplementære til et cDNA fra et humant- eller pattedyrbibliotek.
cDNA-biblioteket innbefatter fortrinnsvis minst 80 % fullengdesekvenser, fortrinnsvis minst 85 % eller 90 % fullengdesekvenser, og mer foretrukket minst 95 % fullengdesekvenser. cDNA-bibliotekene kan normaliseres for å øke representasjonen av sjeldne sekvenser. Hybridiseringsbetingelser av lav eller moderat stringens blir typisk, men ikke utelukkende benyttet med sekvenser som har en redusert sekvensidentitet i forhold til komplementære sekvenser. Betingelser av moderat og høy stringens kan evt. anvendes for sekvenser med større identitet. Lavstringensbetingelser tillater selektiv hybridisering av sekvenser som har ca. 70 % sekvensidentitet og kan anvendes for å identifisere ortologe eller paraloge sekvenser.
Eventuelt vil polynukleotider ifølge oppfinnelsen kode i det minste en del av et antistoff kodet ved hjelp av de heri beskrevne polynukleotidene. Foreliggende polynukleotider innbefatter nukleinsyresekvenser som kan anvendes for selektiv hybridisering til et polynukleotid som koder et antistoff ifølge oppfinnelsen. Se for eksempel Ausubel, supra; Colligan, supra, idet det vises til disse referansene med henblikk på detaljer.
Konstruksjon av nukleinsyrer
De isolerte nukleinsyrene ifølge foreliggende oppfinnelse kan fremstilles ved anvendelse av (a) rekombinante fremgangsmåter, (b) syntetiske teknikker, (c) rensingsteknikker, eller kombinasjoner derav, som velkjent innen teknikken.
Nukleinsyrene kan hensiktsmessig innbefatte sekvenser i tillegg til et polynukleotid ifølge oppfinnelsen. Et multikloningssete innbefattende ett eller flere endonukleaserestriksjonsseter kan for eksempel innsettes i nukleinsyren for å hjelpe isolering av polynukleotidet. Translaterbare sekvenser kan også innsettes for å hjelpe isolering av foreliggende translaterte polynukleotid. En heksahistidinmarkørsekvens for eksempel, tilveiebringer en hensiktsmessig fremgangsmåte for å rense foreliggende proteiner. Nukleinsyren ifølge foreliggende oppfinnelse - unntatt den kodende sekvens - er eventuelt en vektor, adapter eller linker for kloning og/eller ekspresjon av et polynukleotid ifølge foreliggende oppfinnelse.
Ytterligere sekvenser kan tilføyes slike klonings- og/eller ekspresjonssekvenser for optimalisering av deres funksjon ved kloning og/eller ekspresjon, for å hjelpe isolering av polynukleotidet, eller for å forbedre introduksjonen av polynukleotidet i en celle. Bruk av kloningsvektorer, ekspresjonsvektorer, adaptere og linkere er velkjent innen teknikken. (Se for eksempel Ausubel, supra; eller Sambrook, supra).
Rekombinante fremgangsmåter for konstruksjon av nukleinsyrer
De isolerte nukleinsyresammensetningene ifølge oppfinnelsen, slik som RNA, cDNA, genomisk DNA eller en hvilken som helst kombinasjon derav, kan oppnås fra biologiske kilder ved anvendelse av en rekke kloningsmetodikker, kjent for fagfolk innen teknikken. I noen utførelsesformer blir oligonukleotidprober som selektivt hybridiserer under stringente betingelser til polynukleotidene ifølge foreliggende oppfinnelse, benyttet for identifisering av den ønskete sekvens i et cDNA- eller genomisk DNA-bibliotek. Isolering av RNA og konsentrasjon av cDNA og genomiske biblioteker, er velkjent for fagfolk innen teknikken. (Se for eksempel Ausubel, supra; eller Sambrook, supra).
Nukleinsyrescreenings og -isoleringsfremgangsmåter
Et cDNA eller genomisk bibliotek kan screenes ved anvendelse av en probe basert på sekvensen til et polynukleotid ifølge oppfinnelsen, slik som de beskrevet heri. Prober kan anvendes for å hybridisere med genomiske DNA- eller cDNA-sekvenser for å isolere homologe gener i de samme eller forskjellige organismer. Fagfolk innen teknikken vil forstå at forskjellige grader av hybridiseringsstringens kan anvendes i analysen; og enten kan hybridiseirngsmediet eller vaskemediet være stringent. Etter hvert som hybridiseringsbetingelsene blir mer stringente, må det være en større grad av komplementaritet mellom proben og målet for at dupleksdannelse skal inntreffe. Graden av stringens kan reguleres ved hjelp av én eller flere av temperatur, ionestyrke, pH og tilstedeværelse av et delvis denaturerende oppløsningsmiddel, slik som formamid. Hybridiseringsstringensen blir for eksempel hensiktsmessig variert ved å endre reaktantoppløsningens polaritet ved for eksempel manipulering av formamidkonsentrasjonen innenfor området av 0 % til 50 %. Graden av komplementaritet (sekvensidentitet) som skal til for påvisbar binding vil variere i overensstemmelse med hybridiseringsmediets og/eller vaskemediets stringens. Graden av komplementaritet vil optimalt være 100 % eller 70-100 %, eller et hvilket som helst område eller verdi deri. Det skal imidlertid forstås at mindre sekvensvariasjoner i probene og primerne kan kompenseres ved å redusere hybridiserings- og/eller vaskemediets stringens.
Fremgangsmåter for amplifisering av RNA eller DNA er velkjente innen teknikken og kan anvendes ifølge foreliggende oppfinnelse uten unødig eksperimentering, basert på den lære og veiledning som er angitt heri.
Kjente fremgangsmåter for DNA- eller RNA-amplifisering inkluderer, men er ikke begrenset til polymerasekjedereaksjon (PCR) og relaterte amplifiseringsprosesser (se for eksempel U.S. patent nr. 4 683 195,4 683 202, 4 800 159, 4 965 188, til Mullis et al;
4 795 699 og 4 921 794 til Tabor et al; 5 142 033 til Innis; 5 122 464 til Wilson et al; 5 091 310 til Innis; 5 066 584 til Gyllensten et al; 4 889 818 til Gelfand et al; 4 994 370 til Silver et al; 4 766 067 til Biswas; 4 656 134 til Ringold) og RNA-mediert amplifisering som benytter antisens-RNA til målsekvensen som et templat for dobbelttrådet DNA-syntese (U.S. patent nr. 5 130 238 til Malek et al, med varemerket NASBA), idet det vises til disse patentene med henblikk på detaljer. (Se for eksempel Ausubel, supra; eller Sambrook, supra.)
Polymerasekjedereaksjon (PCR) teknologi kan for eksempel benyttes for å amplifisere sekvensene i polynukleotidene ifølge oppfinnelsen og relaterte gener direkte fra genomiske DNA- eller cDNA-bibliotek. PCR og andre irt vitro amplifikasjonsfremgangsmåter kan også være nyttige, for eksempel for å klone nukleinsyresekvenser som koder for proteiner som skal uttrykkes, for å fremstille nukleinsyrer til bruk som prober for påvisning av nærvær av den ønskete mRNA i prøver for nukleinsyresekvensering eller for andre formål. Eksempler på teknikker som er tilstrekkelige til å lede fagfolk gjennom in v/7ro-amplifikasjonsmetoder finnes i Berger, supra, Sambrook, supra, og Ausubel, supra, så vel som Mullis et al., U.S. patent nr. 4 683 202 (1987); og Innis et al, PCR Protocols, A Guide to Methods and Applications, red., Academic Press Inc., San Diego, CA (1990). Kommersielt tilgjengelige sett for genomisk PCR-amplifisering er kjent innen teknikken. Se for eksempel Advantage-GC Genomic PCR Kit (Clontech). Videre kan for eksempel T4-gen32-protein (Boehringer Mannheim) anvendes for å forbedre utbyttet av lange PCR-produkter.
Syntesefremgangsmåter for konstruksjon av nukleinsyrer
De isolerte nukleinsyrene ifølge foreliggende oppfinnelse kan også fremstilles ved direkte kjemisk syntese ved hjelp av kjente fremgangsmåter (se for eksempel Ausubel et al., supra). Kjemisk syntese produserer generelt et enkeltrådet oligonukleotid, som kan omdannes til dobbeltrådet DNA ved hybridisering med en komplementær sekvens eller ved polymerisasjon ved en DNA-polymerase ved anvendelse av den enkle tråden som et templat. En fagmann i teknikken vil forstå at mens kjemisk syntese av DNA kan være begrenset til sekvenser på ca. 100 eller flere baser, kan lengre sekvenser oppnås ved ligering av kortere sekvenser.
Rekombinante ekspresjonskassetter
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer videre rekombinante ekspresjonskassetter innbefattende en nukleinsyre ifølge foreliggende oppfinnelse. En nukleinsyresekvens ifølge oppfinnelsen, for eksempel en cDNA- eller en genomisk sekvens som koder et antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse, kan benyttes for å konstruere en rekombinant ekspresjonskassett som kan introduseres i minst én ønsket vertscelle. En rekombinant ekspresjonskassett vil typisk innbefatte et polynukleotid ifølge oppfinnelsen som er operabelt forbundet til regulatoriske transkripsjonsinitieringssekvenser som vil styre transkripsjonen av polynukleotidet i den tilsiktete vertscelle. Både heterologe og ikke-heterologe (dvs. endogene) promotorer, kan anvendes for styring av ekspresjon av nukleinsyrene ifølge oppfinnelsen.
I noen utførelsesformer kan isolerte nukleinsyrer som tjener som promotor, forsterker eller andre elementer, introduseres i den passende posisjonen (oppstrøms, nedstrøms eller i intron) i en ikke-heterolog form av et polynukleotid ifølge foreliggende oppfinnelse for således å opp- eller nedregulere ekspresjon av et polynukleotid ifølge foreliggende oppfinnelse. Endogene promotorer for eksempel, kan endres in vivo eller in vitro ved mutasjon, delesjon og/eller substitusjon.
Vektorer og vertsceller
Foreliggende oppfinnelse angår også vektorer som inkluderer isolerte nukleinsyremolekyler ifølge foreliggende oppfinnelse, vertsceller som behandles genetisk med de rekombinante vektorene, og produksjon av et anti-IL-6-antistoff ved hjelp av rekombinante teknikker, som velkjente innen teknikken. Se for eksempel Sambrook et al., supra; Ausubel et al., supra, idet det vises til disse referansene med henblikk på detaljer.
Polynukleotidene kan evt. sammenføyes med en vektor inneholdende en valgbar markør for propagering i en vert. Generelt blir en plasmidvektor introdusert i en utfelling, slik som en kalsiumfosfatutfelling eller i et kompleks med et ladet lipid. Dersom vektoren er et virus, kan den emballeres in vitro ved anvendelse av en passende emballeringscellelinje og deretter transduseres inn i vertsceller.
DNA-innskuddet bør være operativt bundet til en passende promoter. Ekspresjonskonstruktene vil ytterligere inneholde seter for transkripsjonsinitiering, terminering, og et ribosombindingssete for translasjon i den transkriberte region. Den kodende del av de modne transkriptene uttrykt ved anvendelse av konstruktene, vil fortrinnsvis inkludere en translasjonsinitiering ved begynnelsen og et termineringskodon (for eksempel UAA, UGA eller UAG) passende posisjonert ved enden av det mRNA som skal translateres, med UAA og UAG som foretrukket for pattedyr- eller eukaryotisk celleekspresjon.
Ekspresjonsvektorer vil fortrinnsvis, men eventuelt, inkludere minst en valgbar markør. Slike markører inkluderer, men er ikke begrenset til metotrexat (MTX), dihydrofolatreduktase (DHFR), U.S. patent nr. 4 399 216; 4 634 665; 4 656 134; 4 956 288; 5 149 636; 5 179 017, ampicillin, neomycin (G418), mykofenolsyre eller glutamin syntetase (GS, U.S. patent nr. 5 122 464; 5 770 359; 5 827 739) resistens for eukaryot cellekultur, og tetrasyklin- eller ampicillinresistensgener for dyrking i E. coli og andre bakterier eller prokaryoter (det vises til ovennevnte patenter med henblikk på detaljer). Passende kulturmedier og -betingelser for de ovenfor beskrevne vertscellene er kjent inne teknikken. Egnete vektorer vil lett forstås av fagmannen på området. Introduksjon av et vektorkonstrukt i en vertscelle kan bevirkes ved kalsiumfosfattransfeksjon, DEAE-dekstranmediert transfeksjon, kationisk lipidmediert transfeksjon, elektroporering, transduksjon, infeksjon eller andre kjente fremgangsmåter. Slike fremgangsmåter er beskrevet innen teknikken, slik som Sambrook, supra, kap. 1-4 og 16-18; Ausubel, supra, kap. 1, 9,13, 15 og 16.
Minst ett antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse kan uttrykkes i en modifisert form, slik som et fusjonsprotein, og kan inkludere ikke bare sekresjonssignaler, men også ytterligere heterologe funksjonelle regioner. En region av ytterligere aminosyrer, spesielt ladete aminosyrer, kan for eksempel tilføyes til N-terminalen i et antistoff for å forbedre stabilitet og persistens i vertscellen, under rensing eller under etterfølgende håndtering og lagring. Peptiddeler kan også tilføyes til et antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse for å lette rensing. Slike regioner kan fjernes før endelig fremstilling av et antistoff eller i det minste ett fragment derav. Slike fremgangsmåter er beskrevet i mange standard laboratoriehåndbøker, slik som Sambrook, supra, kap. 17.29-17.42 og 18.1-18.74; Ausubel, supra, kap. 16, 17 og 18.
Fagfolk innen teknikken har kunnskap om tallrike ekspresjonssystemer som er tilgjengelig for ekspresjon av en nukleinsyre som koder et protein ifølge oppfinnelsen.
Nukleinsyrer ifølge foreliggende oppfinnelse kan alternativt uttrykkes i en vertscelle ved igangsetting (ved manipulering) i en vertscelle som inneholder endogent DNA som koder et antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse. Slike fremgangsmåter er velkjente innen teknikken, for eksempel som beskrevet i U.S. patent nr. 5 580 734, 5 641 670, 5 733 746 og 5 733 761, og det vises til disse patenter med henblikk på detaljer.
Illustrerende cellekulturer nyttige for produksjon av antistoffer, spesifiserte deler eller varianter derav, er pattedyrceller. Pattedyrcellesystemer vil ofte være i form av monolag av celler, skjønt pattedyrcellesuspensjoner eller bioreaktorer også kan benyttes. En rekke egnete vertscellelinjer som kan uttrykke intakte glykosylerte proteiner er utviklet i teknikken, og inkluderer COS-1 (for eksempel ATCC CRL-1650), COS-7 (for eksempel ATCC CRL-1651), HEK293, BHK21 (for eksempel ATCC CRL-10), CHO (for eksempel ATCC CRL-1610) og BSC-1 (for eksempel ATCC CRL-26-cellelinjer, COS-7-celler, CHO-celler, hepG2-celler, P3X63Ag8.653, SP2/0-Agl4,293-celler, HeLa-celler og liknende, som er lett tilgjengelig fra, for eksempel American Type Culture Collection, Manassas, Virginia (www.atcc.org). Foretrukne vertsceller inkluderer celler av lymfoid opprinnelse, slik som myelom- og lymfomceller. Spesielt foretrukne vertsceller er P3X63Ag8.653-celler (ATCC aksesjonsnummer CRL-1580) og SP2/0-Agl4-celler (ATCC aksesjonsnummer CRL-1851). I en spesielt foretrukket utførelsesform er den rekombinante celle en P3X63Ag8.653-celle eller en SP2/0-Agl4-celle.
Ekspresjonsvektorer for disse cellene kan inkludere en eller flere av følgende ekspresjonskontrollsekvenser, slik som, men ikke begrenset til en replikasjonsopprinnelse; en promotor (for eksempel sen- eller tidlig SV40-promotorer, CMV-promotoren (U.S. patent nr. 5 168 062; 5 385 839), en HSV tk promotor, en pgk (fosfoglyseratkinase) promotor, en EF-1 a-promotor (U.S. patent nr. 5 266 491), minst én human immunglobulinpromotor; en forsterker, og/eller prosesseringsinformasjons-seter, slik som ribosombindingsseter, RNA-spleiseseter, polyadenyleringsseter (for eksempel et SV40 stor T Ag poly-A-addisjonssete), og transkripsjonsterminator sekvenser. Se for eksempel Ausubel et al, supra; Sambrook et al, supra. Andre celler nyttige for fremstilling av nukleinsyrer eller proteiner ifølge foreliggende oppfinnelse er kjent og/eller tilgjengelige for eksempel fra American Type Culture Collection Catalogue of Cell Lines and Hybridomas (www.atcc.org) eller andre kjente eller kommersielle kilder.
Når eukaryote vertsceller anvendes blir polyadenylerings- eller
transkripsjonsterminatorsekvenser typisk inkorporert i vektoren. Et eksempel på en terminatorsekvens er polyadenyleirngssekvensen fra bovinveksthormongenet. Sekvenser for nøyaktig spleising av transkriptet kan også inkluderes. Et eksempel på en spleisingssekvens er VPl-intronet fra SV40 (Sprague et al, J. Virol. 45:773-781
(1983)). Videre kan gensekvenser for regulering av replikasjon i vertscellen inkorporeres i vektoren, som kjent innen teknikken.
Rensing av et antistoff
Et anti-IL-6-antistoff kan utvinnes og renses fra rekombinante cellekulturer ved anvendelse av velkjente fremgangsmåter inkludert, men ikke begrenset til protein-A rensing, ammoniumsulfat- eller etanolutfelling, syreekstraksjon, anion- eller kationvekslingskromatografi, fosfocellulose kromatografi, hydrofob interaksjonskromatografi, affinitetskromatografi, hydroksylapatitkromatografi og lectinkromatografi. Høyytelsesvæskekromatografi ("HPLC") kan også anvendes for rensing. Se for eksempel Colligan, Current Protocols in Immunology, eller Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY, (1997-2001), for eksempel kapitlene 1, 4,6, 8,9 og 10, og det vises til denne litteraturen med henblikk på detaljer.
Antistoffer ifølge foreliggende oppfinnelse inkluderer naturlig rensete produkter, produkter av kjemiske synteseprosedyrer, og produkter fremstilt ved rekombinante teknikker fra en eukaryotisk vert, inkludert for eksempel gjær, høyere plante, insekt- og pattedyrceller. Avhengig av verten benyttet i en rekombinant produksjonsprosedyre, kan antistoffet ifølge oppfinnelsen være glykosylert, eller kan være ikke-glykosylert, idet glykosylert foretrekkes. Slike fremgangsmåter er beskrevet i mange standard laboratoriehåndbøker, slik som Sambrook, supra, seksjonene 17.37-17.42; Ausubel, supra, kap. 10,12,13,16, 18 og 20, Colligan, Protein Science, supra, kap. 12-14, og det vises til denne litteraturen med henblikk på detaljer.
Anti- IL- 6 antistoffer
De isolerte antistoffene ifølge foreliggende oppfinnelse innbefatter antistoff- aminosyresekvenser som beskrevet heri kodet ved hjelp av et egnet polynukleotid eller et hvilket som helst isolert eller fremstilt antistoff. Det humane antistoff eller antigenbindingsfragmentet binder fortrinnsvis humant IL-6 og nøytraliserer derved delvis eller vesentlig i det minste én biologisk aktivitet til proteinet. Et antistoff eller en spesifisert del eller variant derav, som delvis eller fortrinnsvis vesentlig nøytraliserer minst én biologisk aktivitet til minst ett IL-6-protein eller fragment, kan binde proteinet eller fragmentet og derved inhibere aktiviteter mediert gjennom bindingen av IL-6 til IL-6-reseptoren eller gjennom andre IL-6-avhengige eller medierte mekanismer. Som benyttet heri refererer betegnelsen "nøytraliserende antistoff til et antistoff som kan inhibere en IL-6-avhengig aktivitet med ca. 20-120 %, fortrinnsvis minst ca. 10, 20, 30, 40, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100 % eller mer avhengig av analysen. Et anti-IL-6-antistoffs kapasitet til å inhibere en IL-6-avhengig aktivitet bestemmes fortrinnsvis ved anvendelse av minst én egnet IL-6-protein- eller reseptoranalyse, som beskrevet heri og/eller som kjent innen teknikken. Den humane,
konstante region i det kimære antistoff ifølge oppfinnelsen, kan være av en hvilken som helst klasse (IgG, IgA, IgM, IgE, IgD osv.) eller isotype og kan innbefatte en k- eller X-kjede. I en utførelsesform innbefatter den humane, konstante regionen en IgG tungkjede eller definert fragment, for eksempel minst én av isotypene IgGl, IgG2, IgG3 eller IgG4.1 en annen utførelsesform innbefatter det anti-humane IL-6 humane antistoff en IgGl-tungkjede og en IgG-K-lettkjede.
Minst ett antistoff ifølge oppfinnelsen binder minst én spesifisert epitop som er spesifikk for minst ett IL-6-protein, underenhet, fragment, del eller hvilken som helst kombinasjon derav. Nevnte minst ene epitop kan innbefatte minst én antistoffbindingsregion innbefattende minst én del av proteinet, hvilken epitop fortrinnsvis består av minst én ekstracellulær oppløselig hydrofil, ekstern eller cytoplasmisk del av proteinet. Nevnte i det minste ene spesifiserte epitop kan innbefatte en hvilken som helst kombinasjon av minst én aminosyresekvens i minst 1-3 aminosyrer til hele den spesifiserte del av tilstøtende aminosyrer i SEKV. ID nr. 9.
Det humane antistoff eller antigenbindingsfragment ifølge foreliggende oppfinnelse vil generelt innbefatte en antigenbindingsregion som innbefatter minst én human komplementærbestemmende region (CDR1, CDR2, CDR3) eller variant av minst én variabel tungkjederegion og minst én human, komplementærbestemmende region (CDR4, CDR5 og CDR6) eller variant av minst én variabel lettkjederegion. Som et ikke-begrensende eksempel kan antistoffet eller antigenbindingsdelen eller variant innbefatte minst én av nevnte tungkjede-CDR3, som har aminosyresekvensen til SEKV. ID nr. 3, og/eller en lettkjede-CDR3, som har aminosyresekvensen til SEKV. ID nr. 6.1 en spesiell utførelsesform kan antistoffet eller antigenbindingsfragmentet ha en antigenbindingsregion som innbefatter minst en del av minst én tungkjede-CDR (dvs. CDR1, CDR2 og/eller CDR3) som har aminosyresekvensen til de tilsvarende CDR 1,2 og/eller 3 (for eksempel SEKV. ID nr. 1,2 og/eller 3). I en annen spesiell utførelsesform kan antistoffet eller antigenbindingsdelen eller variant ha en antigenbindingsregion som innbefatter minst en del av minst én lettkjede-CDR (dvs. CDR4, CDR5 og/eller CDR6) som har aminosyresekvensen til de tilsvarende CDR 4, 5 og/eller 6 (for eksempel SEKV. ID nr. 4, 5 og/eller 6). I en foretrukket utførelsesform har de tre tungkjede-CDR og de tre lettkjede-CDR til antistoffet eller antigenbindingsfragmentet en aminosyresekvens til den tilsvarende CDR til minst én av mAb cCLB8, kimær anti-IL-6 Mab, som beskrevet heri. Slike antistoffer kan fremstilles ved kjemisk sammenføying av de forskjellige delene (for eksempel CDR, skjelettstruktur) i antistoffet ved anvendelse av konvensjonelle teknikker, ved fremstilling og ekspresjon av et (dvs. ett eller flere) nukleinsyremolekyler som koder antistoffet ved anvendelse av konvensjonelle teknikker for rekombinant DNA-teknologi eller ved anvendelse av en hvilken som helst annen egnet fremgangsmåte.
Anti-IL-6-antistoffet kan innbefatte minst én av en variabel tung- eller lettkjederegion som har en definert aminosyresekvens. I en foretrukket utførelsesform for eksempel, innbefatter anti-IL-6-antistoffet minst én av minst én variabel tungkjederegion, evt. med aminosyresekvensen til SEKV. ID nr. 7 og/eller minst én variabel lettkjederegion, som evt. har aminosyresekvensen til SEKV. ID nr. 8. Antistoffer som binder til humant IL-6 og som innbefatter en definert variabel tung- eller lettkjederegion, kan fremstilles ved anvendelse av egnete fremgangsmåter, slik som phag-display (Katsube, Y., et al, IntJ Mol. Med, 1 (5):863-868 (1998)) eller fremgangsmåter som benytter transgene dyr, som kjent innen teknikken og/eller som beskrevet heri. Antistoffet, spesifisert del eller variant kan for eksempel uttrykkes ved anvendelse av den kodende nukleinsyre eller del derav i en egnet vertscelle.
Oppfinnelsen angår også antistoffer, antigenbindingsfragmenter, immunglobulinkjeder og CDR'er, innbefattende aminosyrer i en sekvens som er vesentlig den samme som en aminosyresekvens beskrevet heri. Slike antistoffer eller antigenbindingsfragmenter og antistoffer innbefatter slike kjeder eller CDR'er, kan fortrinnsvis binde IL-6 med høy affinitet (for eksempel KDmindre enn eller lik ca. IO"<9>M). Aminosyresekvenser som er vesentlig de samme som sekvensene beskrevet heri, inkluderer sekvenser innbefattende konservative aminosyresubstitusjoner, samt aminosyredelesjoner og/eller -innskudd. En konservativ aminosyresubstitusjon refererer til erstatning av en første aminosyre med en annen aminosyre som har kjemiske og/eller fysikalske egenskaper (for eksempel ladning, struktur, polaritet, hydrofobisitet/hydrofilisitet) som er lik de til den første aminosyren. Konservative substitusjoner inkluderer erstatning av en aminosyre med en annen innenfor følgende grupper: lysin (K), arginin (R) og histidin (H); aspartat (D) og glutamat (E); asparagin (N), glutamin (Q), serin (S), treonin (T), tyrosin (Y), K, R, H, D og E; alanin (A), valin (V), leusin (L), isoleusin (I), prolin (P), fenylalanin (F), tryptofan (W), metionin (M), cystein (C) og glysin (G); F, W og Y; C, S og T.
Aminosyrekoder
Aminosyrene som utgjør anti-IL-6-antistoffer ifølge foreliggende oppfinnelse er ofte forkortet. Aminosyrebetegnelsene kan indikeres ved å betegne aminosyren med dens enkeltbokstavkode, dens kode av tre bokstaver, navn, eller tre-nukleotidkodon(er), slik det forstås innen teknikken (se Alberts, B., et al., Molecular Biology of The Cell,
3. utg., Garland Publishing, Inc., New York, 1994):
Et anti-IL-6-antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse kan inkludere én eller flere aminosyresubstitusjoner, -delesjoner eller -addisjoner, enten fra naturlige mutasjoner eller human manipulering, som spesifisert heri.
Antall aminosyresubstitusjoner en fagmann ville gjøre avhenger naturligvis av mange faktorer, inkludert de som er beskrevet ovenfor. Generelt vil antall aminosyresubstitusjoner, innskudd og delesjoner for et hvilket som helst gitt anti-IL-6-antistoff, fragment eller variant ikke være mer enn 40, 30,20, 19,18,17,16,15,14,13, 12,11, 10, 9, 8, 7, 6, 5,4, 3,2, 1, slik som 1-30 eller et hvilket som helst område eller verdi deri, som spesifisert heri.
Aminosyrer i et anti-IL-6-antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse som er vesentlig for funksjon, kan identifiseres ved fremgangsmåter kjent innen teknikken, slik som seterettet mutagenese eller alaninscanningmutagenese (for eksempel Ausubel, supra, kap. 8, 15; Cunningham og Wells, Science 244:1081-1085 (1989)). Sistnevnte prosedyre introduserer alanin-enkeltmutasjoner ved hver rest i molekylet. De resterende mutantmolekylene testes deretter for biologisk aktivitet slik som, men ikke begrenset til minst én IL-6-nøytraliserende aktivitet. Seter kritiske for antistoffbinding kan også identifiseres ved strukturell analyse, slik som krystallisering, kjernemagnetisk resonans eller fotoaffinitetsmerking (Smith et al, J. Mol. Biol. 224:899-904 (1992) og de Vas et al., Science 255:306-312 (1992)).
Anti-IL-6 antistoffer ifølge foreliggende oppfinnelse kan inkludere, men er ikke begrenset til minst én del, sekvens eller kombinasjon valgt fra 5 til alle de tilstøtende aminosyrene i minst én av SEKV. ID nr. 1, 2, 3, 4, 5, 6.
Et anti-IL-6 antistoff kan videre evt. innbefatte et polypeptid av minst én av 70-100 % av de tilstøtende aminosyrene i minst én av SEKV. ID nr. 7, 8.
I en utførelsesform har aminosyresekvensen til en immunglobulinkjede, eller del derav (for eksempel variabel region, CDR) ca. 70-100 % identitet (for eksempel 70,71, 72, 73,74, 75, 76, 77,78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89,90, 91, 92, 93,94, 95, 96, 97, 98, 99, 100 eller et hvilket som helst område eller verdi deri) til aminosyresekvensen i den tilsvarende kjeden til minst én av SEKV. ID nr. 7, 8. Aminosyresekvensen til en variabel lettkjederegion kan for eksempel sammenliknes med sekvensen til SEKV. ID nr. 8, eller aminosyresekvensen til en tungkjede-CDR3, kan sammenliknes med SEKV. ID nr. 7. 70-100 % aminosyreidentitet (dvs. 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100 eller et hvilket som helst område eller verdi deri) bestemmes fortrinnsvis ved anvendelse av en egnet dataalgoritme, som kjent inne teknikken.
Eksempler på variable tungkjede- og lettkjederegionsekvenser finnes i SEKV. ID nr. 7, 8. Antistoffene ifølge foreliggende oppfinnelse eller spesifiserte varianter derav, kan innbefatte et hvilket som helst antall tilstøtende aminosyreresidier fra et antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse, hvor antallet er valgt fra gruppen av hele tall, bestående av fra 10-100 % av antallet tilstøtende rester i et anti-IL-6-antistoff. Denne undersekvensen av tilstøtende aminosyrer er evt. minst ca. 10, 20, 30,40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250 eller flere aminosyrer i lengde, eller et hvilket som helst område eller verdi deri. Videre, antallet av slike undersekvenser kan være et helt tall valgt fra gruppen bestående av fra 1 til 20, slik som minst 2,3,4 eller 5.
Som fagfolk vil forstå inkluderer foreliggende oppfinnelse minst ett biologisk aktivt antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse. Biologisk aktive antistoff har en spesifikk aktivitet som er minst 20 %, 30 % eller 40 % og fortrinnsvis minst 50 %, 60 % eller 70 % og mest foretrukket minst 80 %, 90 % eller 95 % - 1000 % av det native (ikke-syntetiske), endogene eller relaterte og kjente antistoff. Fremgangsmåter for analyserende og kvantifiserende målemetoder for enzymatisk aktivitet og substratspesifisitet er velkjent for fagfolk innen teknikken.
Ifølge et annet aspekt angår oppfinnelsen humane antistoffer og antigenbindingsfragment, som beskrevet heri som er modifisert ved den kovalente tilføyelse av en organisk gruppe. Slik modifikasjon kan frembringe et antistoff eller antigenbindingsfragment med forbedrete farmakokinetiske egenskaper (for eksempel forøket in vivo serum halveringstid). Den organiske gruppen kan være en lineær eller forgrenet, hydrofil, polymergruppe, fettsyregruppe, eller fettsyreestergruppe. I spesielle utførelsesformer kan den hydrofile polymere gruppen ha en molekylvekt på ca. 800 til ca. 120 000 dalton og kan være en polyalkan glykol (for eksempel polyetylenglykol (PEG), polypropylen (PPG)), karbohydratpolymer, aminosyrepolymer eller polyvinylpyrrolidon og fettsyren eller fettsyreestergruppen kan innbefatte fra ca. 8 til ca.
40 karbonatomer.
De modifiserte antistoffene og antigenbindingsfragmentene ifølge oppfinnelsen kan innbefatte en eller flere organiske grupper kovalent bundet, direkte eller indirekte, til antistoffet. Hver organisk gruppe som er bundet til et antistoff eller antigenbindingsfragment ifølge oppfinnelsen, kan uavhengig være en hydrofil polymergruppe, en fettsyregruppe eller en fettsyreestergruppe. Som benyttet heri innbefatter betegnelsen "fettsyre" monokarboksylsyrer og dikarboksylsyrer. En "hydrofil polymer gruppe", slik betegnelsen er benyttet heri, refererer til en organisk polymer som er mer oppløselig i vann enn i oktan. Polylysin for eksempel, er mer oppløselig i vann enn i oktan. Et antistoff modifisert ved kovalent tilknytning av polylysin omfattes således av oppfinnelsen. Hydrofile polymerer egnet for modifisering av antistoffer ifølge oppfinnelsen kan være lineære eller forgrenete og inkluderer for eksempel polyalkanglykoler (for eksempel PEG, monometoksypolyetylenglykol (mPEG), PPG og liknende), karbohydrater (for eksempel dekstran, cellulose, oligosakkarider, polysakkarider og liknende), polymerer av hydrofile aminosyrer (for eksempel polylysin, polyarginin, polyaspartat og liknende), polyalkanoksider (for eksempel polyetylenoksid, polypropylenoksid og liknende) og polyvinylpyrrolidon. Den hydrofile polymer som modifiserer antistoffet ifølge oppfinnelsen har fortrinnsvis en molekylvekt på ca. 800 til ca. 150 000 dalton som en separat molekylær enhet. Det kan for eksempel anvendes PEG5000og PEG20000, hvor indekstallet er polymerens gjennomsnittlige molekylvekt i dalton. Den hydrofile polymere gruppen kan være substituert med en til ca. seks alkyl-, fettsyre- eller fettsyreestergrupper. Hydrofile polymerer som er substituert med en fettsyre- eller fettsyreestergruppe, kan fremstilles ved anvendelse av egnete fremgangsmåter. For eksempel kan en polymer som innbefatter en aminogruppe, kobles til et karboksylat av fettsyren eller fettsyre esteren, og et aktivert karboksylat (for eksempel aktivert med N,N-karbonyldiimidazol) på en fettsyre- eller fettsyreestergruppe, kan tilkobles en hydroksylgruppe på en polymer.
Fettsyrer og fettsyreestere egnet for modifisering av antistoffer ifølge oppfinnelsen kan være mettet og inneholde en eller flere umettede enheter. Fettsyrer egnet for modifisering av antistoffer ifølge oppfinnelsen inkluderer for eksempel n-dodecanoat (C12, laurat), n-tetradecanoat (C14, myristat), n-oktadecanoat (Cig, stearat), n-eikosanoat (C20, arachidat), n-dokosanoat (C22, behenat), n-triacontanoat (C30), n-tetracontanoat (C40), cw-A^oktadecanoat (Cig, oleat), alle cis- A5,8,ll,14-eikosatetraenoat (C20, arachidonat), oktandisyre, tetradekandisyre, oktadecanedisyre, dokosanedisyre og liknende. Egnete fettsyreestere inkluderer monoestere av dikarboksylsyrer som innbefatter en lineær eller forgrenet lavere alkylgruppe. Den lavere alkylgruppen kan innbefatte fra 1 til omkring 12 karbonatomer, fortrinnsvis fra 1 til omkring 6 karbonatomer.
De modifiserte, humane antistoffene og antigenbindingsfragmentene kan fremstilles ved anvendelse av egnete fremgangsmåter, slik som ved omsetting med ett eller flere modifiseringsmidler. Et "modifiseringsmiddel" slik betegnelsen er benyttet heri, refererer til en egnet organisk gruppe (for eksempel hydrofil polymer, en fettsyre, en fettsyreester) som innbefatter en aktiveringsgruppe. En "aktiveringsgruppe" er en kjemisk del eller en funksjonell gruppe som under passende betingelser kan reagere med en annen kjemisk gruppe og derved danne en kovalent binding mellom modifiseringsmiddelet og den andre kjemiske gruppen. Amin-reaktive aktiveringsgrupper, for eksempel, inkluderer elektrofile grupper som tosylat, mesylat, halogen (klor, brom, fluor, jod), N-hydroksysuksinimidylestere (NHS), og liknende. Aktiveringsgrupper som kan reagere med tioler inkluderer for eksempel maleimid, jodacetyl, acrylolyl, pyridyldisulfider, 5-tiol-2-nitrobenzosyretiol (TNB-tioi), og liknende. En aldehydfunksjonell gruppe kan kobles til amin- eller hydrazidholdige molekyler, og en azidgruppe kan reagere med en treverdig fosforgruppe for å danne fosforamidat- eller fosforimidbindinger. Egnete fremgangsmåter for innføring av aktiverende grupper i molekyler er kjent innen teknikken (se for eksempel Hermanson, G. T., Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, CA (1996)). En aktiveringsgruppe kan være bundet direkte til den organiske gruppen (for eksempel hydrofil polymer, fettsyre, fettsyreester), eller gjennom en linkerdel, for eksempel en toverdig C\-Cngruppe hvor ett eller flere karbonatomer kan være erstattet med et heteroatom som oksygen, nitrogen eller svovel. Egnete linkerdeler inkluderer for eksempel tetraetylenglykol, -(CH2)3-, -NH-(CH2)6-NH-, -(CH2)2-NH- og -CH2-0-CH2-CH2-0-CH2-CH2-0-CH-NH-. Modifiseringsmidler som innbefatter en linkerdel kan fremstilles ved omsetting av mono-Boc-alkyldiamin (for eksempel mono-Boc-etylendiamin, mono-Boc-diaminheksan) med en fettsyre i nærvær av l-etyl-3-(3-dimetylaminopropyl)karbodiimid (EDC) for dannelse av en amidbinding mellom det frie aminet og fettsyrekarboksylatet. Boc-beskyttelsesgruppen kan fjernes fira produktet ved behandling med trifluoreddiksyre (TFA) for eksponering av et primært amin som kan tilkobles et annet karboksylat som beskrevet, eller kan omsettes med maleinsyreanhydrid og det resulterende produkt kan ringsluttes for fremstilling av et aktivert maleimid-derivat av fettsyren. (Se for eksempel Thompson et al., WO 92/16221, og det vises til denne referansen med henblikk på detaljer).
De modifiserte antistoffene ifølge oppfinnelsen kan fremstilles ved omsetting av et humant antistoff eller antigenbindingsfragment med et modifiseringsmiddel. Organiske deler, for eksempel, kan bindes til antistoffet på en ikke-setespesifikk måte ved anvendelse av et aminreaktivt modifiserende middel, for eksempel en NHS-ester av PEG. Modifiserte humane antistoff eller antigenbindingsfragment kan også fremstilles ved redusering av disulfidbindinger, for eksempel intra-kjede disulfidbindinger) i et antistoff eller antigenbindingsfragment. Det reduserte antistoff eller antigenbindingsfragment kan deretter omsettes med et tiolreaktivt modifiseringsmiddel for fremstilling av det modifiserte antistoff ifølge oppfinnelsen. Modifiserte, humane antistoff og antigenbindingsfragmenter innbefattende en organisk del bundet til spesifikke seter i et antistoff ifølge oppfinnelsen, kan fremstilles ved anvendelse av egnete fremgangsmåter, slik som revers proteolyse (Fisch et al, Bioconjugate Chem., 5:411-417 (1994); Kumaran et al, Protein Sei. 6(10):2233-2241 (1997); Itoh et al, Bioorg. Chem., 24(l):59-68 (1996); Cappelas et al, Biotechnol Bioeng., 56(4):456-463
(1997)), og fremgangsmåtene beskrevet i Hermanson, G. T., Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, CA (1996).
ANTI-IDIOTYPEANTISTOFFER TIL ANTI-IL-6 ANTISTOFFSAMMENSETNING
I tillegg til monoklonale eller kimære anti-IL-6-antistoffer er foreliggende oppfinnelse også rettet mot anti-idiotypisk (anti-id) antistoff som er spesifikt for slike antistoff ifølge oppfinnelsen. Et anti-Id-antistoff er et antistoff som gjenkjenner unike determinanter som generelt er forbundet med antigenbindingsregionen i et annet antistoff. Nevnte anti-id kan fremstilles ved immunisering av et dyr av den samme art og genetiske type (for eksempel musestamme) som kilde for Id-antistoffet med antistoffet eller en CDR-holdig region derav. Det immuniserte dyret vil gjenkjenne og respondere på de idiotypiske determinantene i det immuniserende antistoffet og produsere et anti-Id-antistoff. Anti-Id-antistoffet kan også benyttes som et "immunogen" for å indusere en immunrespons i nok et annet dyr, under frembringelse av et såkalt anti-anti-Id-antistoff.
ANTI-IL-6-ANTISTOFFSAMMENSETNINGER
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer også minst én anti-IL-6 antistoffsammensetning innbefattende minst 1, minst 2, minst 3, minst 4, minst 5, minst 6 eller flere anti-IL-6-antistoff derav, som beskrevet heri og/eller som kjent innen teknikken som er tilveiebrakt i en ikke-naturlig forekommende sammensetning, blanding eller form. Slike sammensetninger innbefatter ikke-naturlig forekommende sammensetninger, innbefattende minst én eller to fullengder, C- og/eller N-terminalt deleterte varianter, domener, fragmenter eller spesifiserte varianter av anti-IL-6-antistoffaminosyresekvensen valgt fra gruppen bestående av 70-100 % av de tilstøtende aminosyrene i SEKV. ID nr. 1,2, 3,4, 5, 6, 7, 8 eller spesifiserte fragmenter, doméner eller varianter derav. Foretrukne anti-IL-6-antistoffsammensetninger inkluderer minst ett eller to fullengdefragmenter, doméner eller varianter som i det minste én CDR eller LBR-inneholdende deler av anti-IL-6 antistoffsekvensen til 70-100 % av SEKV. ID nr. 1, 2, 3, 4, 5, 6 eller spesifiserte fragmenter, doméner eller varianter derav. Ytterlig foretrukne sammensetninger innbefatter 40-99 % av minst én av 70-100 % av SEKV. ID nr. 1,2,3,4,5, 6 eller spesifiserte fragmenter, doméner eller varianter derav. Slike sammensetningsprosentandeler er beregnet på vekt, volum, konsentrasjon, molaritet eller molalitet som væske eller tørre oppløsninger, blandinger, suspensjoner, emulsjoner eller kolloider, som kjent innen teknikken eller beskrevet heri.
Anti-IL-6 antistoffsammensetninger ifølge foreliggende oppfinnelse kan videre innbefatte minst én av hvilken som helst egnet og effektiv mengde av en sammensetning eller farmasøytisk sammensetning, innbefattende minst ett anti-IL-6-antistoff til en celle, et vev, et organ, et dyr eller en pasient med behov for slik modulasjon, behandling eller terapi, evt. ytterligere innbefattende minst én valgt fira minst én TNF-antagonist (for eksempel, men ikke begrenset til et TNF-antistoff eller et fragment, en oppløselig TNF-reseptor eller et fragment, fusjonsproteiner derav eller en småmolekyl-TNF-antagonist), et antireumatikum (for eksempel metotrexat, auranofin, aurotioglukose, azatioprin, etanercept, gull natriumtiomalat, hydroksyklorkinsulfat, leflunomid, sulfasalzin), et muskelavslappende middel, et narkotikum, et ikke-steroid anti-inflammatorisk legemiddel (NSAID), et analgetikum, et anestetikum, et sedativ, et lokalanestetikum, en neuromuskulær blokker, et antimikrobielt middel (for eksempel aminoglukosid, et antisoppmiddel, et antiparasittmiddel, et antiviralt middel, en karbapenem, cefalosporin, en fluorkinolon, et makrolid, et penicillin, et sulfonamid, et tetrasyklin, en annet antimikrobielt middel), et antipsoriatisk middel, et kortikosteroid, et anabolisk steroid, et diabetesrelatert middel, et mineral, et næringsmiddel, et tyroid middel, et vitamin, et kalsiumrelatert hormon, et antidiarétisk middel, et hostestillende middel, et antiemetisk middel, et antiulcus middel, et laksativ, et antikoaguleringsmiddel, en erytropoietin (for eksempel epoetin a), et filgrastim (for eksempel G-CSF, Neupogen), et sargramostim (GM-CSF, Leukin), et immuniseringsmiddel, et immunglobulin, et immunundertrykkende middel (for eksempel basiliximab, syklosporin, daklizumab), et veksthormon, et hormonerstatningslegemiddel, en østrogenreseptormodulator, et mydriatisk middel, et sykloplegisk middel, et alkyleringsmiddel, en antimetabolitt, en mitotisk inhibitor, et radiofarmasøytikum, et antidepressiva, et antimanisk middel, et antipsykotisk middel, et anxiolytisk middel, et hypnotisk middel, et sympatomimetisk middel, et stimuleringsmiddel, donepezil, takrin, en astmamedisin, en beta-agonist, et inhalert steroid, en leukotrien inhibitor, et metylxantin, et kromolyn, et epinefrin eller analog, dornase-a (pulmozym), et cytokin eller en cytokin antagonist. Ikke-begrensende eksempler på slike cytokiner inkluderer, men er ikke begrenset til en hvilken som helst av IL-1 til IL-23. Egnete doseringer er velkjent innen teknikken. Se for eksempel Wells et al., red., Pharmacotherapy Handbook, 2. utg., Appleton and Lange, Stamford, CT (2000); PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, Deluxe Edition, Tarascon Publishing, Loma Linda, CA (2000), idet det vises til disse referansene med henblikk på detaljer.
Slike anti-cancere eller anti-infeksjonsmidler kan også inkludere toksinmolekyler som assosieres, bindes, koformuleres eller koadministreres med minst ett antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse. Toksinet kan evt. virke slik at det selektivt dreper den patologiske celle eller vevet. Den patologiske celle kan være en cancer- eller annen celle. Slike toksiner kan være, men er ikke begrenset til renset eller rekombinant toksin eller toksinfragment innbefattende minst ett funksjonelt cytotoksisk doméne av toksin, valgt fra minst én av ricin, difteritoksin, et gift-toksin eller et bakterielt toksin. Betegnelsen toksin inkluderer også både endotoksiner og eksotoksiner produsert av hvilke som helst naturlig forekommende mutante eller rekombinante bakterier eller virus som kan forårsake en hvilken som helst patologisk tilstand i mennesker og andre pattedyr, inkludert toksinsjokk, som kan resultere i død. Slike toksiner kan inkludere, men er ikke begrenset til enterotoksigenisk E. coli varmelabilt enterotoksin (LT), varmestabilt enterotoksin (ST), Shigella cytotoksin, Aeromonas enterotoksiner, toksisk sjokk syndromtoksin-1 (TSST-1), Stajylokokk- enterotoksw. A (SEA), B (SEB), eller C (SEC), Streptokokkenterotoksiner og liknende. Slike bakterier inkluderer, men er ikke begrenset til stammer av en art av enterotoksigen E. coli (ETEC), enterohemoragisk E. coli (for eksempel stammer av serotype 0157:H7), Stafylokokkus arter (for eksempel Staphylococcus aureus, Staphylococcus pyogenes), Shigella arter (for eksempel Shigella dysenteriae, Shigella flexneri, Shigella boydii og Shigella sonnei), Salmonella arter (for eksempel Salmonella typhi, Salmonella cholera- suis, Salmonella enteritidis), Clostridium arter (for eksempel Clostridium per/ ringens, Clostridium diflcile, Clostridium botulinum), Camphlobacter arter (for eksempel Camphlobacter jejuni, Camphlobacterfetus), Heliobacter arter (for eksempel Heliobacter pylori), Aeromonas arter (for eksempel Aeromonas sobria, Aeromonas hydrophila, Aeromonas caviae), Pleisomonas shigelloides, Yersina enterocolitica, Vibrios arter (for eksempel Vibrios cholerae, Vibrios parahemolyticus), Klebsiella arter, Pseudomonas aeruginosa og Streptococci. Se for eksempel Stein, red., INTERNAL MEDICINE, 3. utg., red.,
s. 1-13, Little, Brown and Co., Boston, (1990); Evans et al, red., Bacterial Infections of Humans: Epidemiology and Control, 2. utg. red., s. 239-254, Plenum Medical Book Co., New York (1991); Mandell et al, Principles and Practice of Infectious Diseases, 3. utg., red., Churchill Livingstone, New York (1990); Berkow et al, red., The Merck Manual, 16. utg., Merck and Co., Rahway, N. J., 1992; Wood et al, FEMS Microbiology Immunology, 76:121-134 (1991); Marrack et al, Science, 248:705-711
(1990), og det vises til disse referanser med henblikk på detaljer.
Anti-IL-6 antistofforbindelser, sammensetninger eller kombinasjoner ifølge foreliggende oppfinnelse kan ytterligere innbefatte minst ett av et hvilket som helst egnet hjelpemiddel, slik som, men ikke begrenset til fortynningsmiddel, bindemiddel, stabilisator, buffer, salter, lipofile oppløsningsmidler, preservativ, adjuvans eller liknende. Farmasøytisk akseptable hjelpemidler er foretrukket. Ikke-begrensende midler på, og fremgangsmåter for fremstilling av slike sterile oppløsninger er velkjent innen teknikken, slik som, men ikke begrenset til Gennaro, red., Remington' s Pharmaceutical Sciences, 18. utg., Mack Publishing Co. (Easton, PA) 1990. Det kan rutinemessig velges farmasøytisk akseptable bærere egnet for administrasjonsmåten, oppløseligheten og/eller stabiliteten av anti-IL-6 antistoffet, fragment eller variant sammensetning, som velkjent innen teknikken eller beskrevet heri.
Farmasøytiske eksipienser og additiver nyttige i foreliggende sammensetning, inkluderer, men er ikke begrenset til proteiner, peptider, aminosyrer, lipider og karbohydrater (for eksempel sukkere, inkludert monosakkarider, di-, tri-, tetra-, og oligosakkarider; derivatiserte sukkere slik som alditoler, aldonsyrer, forestrete sukkere og liknende; og polysakkarider eller sukkerpolymerer), som kan være til stede alene eller i kombinasjon, innbefattende alene eller i kombinasjon 1-99,99 vekt- eller volumprosent. Eksempler på proteineksipienser inkluderer serumalbumin slik som humant serumalbumin (HSA), rekombinant, humant albumin (rHA), gelatin, kasein og liknende. Representative aminosyrer/antistoffkomponenter, som også kan fungere i et buffermiddel, inkluderer alanin, glysin, arginin, betain, histidin, glutaminsyre, asparaginsyre, cystein, lysin, leusin, isoleusin, valin, metionin, fenylalanin, aspartam og liknende. En foretrukket aminosyre er glysin.
Karbohydrateksipienser egnet for anvendelse i oppfinnelsen inkluderer for eksempel monosakkarider slik som fruktose, maltose, galaktose, glukose, D-mannose, sorbose og liknende; disakkarider slik som laktose, sukrose, trehalose, cellobiose og liknende; polysakkarider, slik som raffinose, melezitose, maltodekstriner, dekstraner, stivelser og liknende; og alditoler, slik som mannitol, xylitol, maltitol, laktitol, xylitol, sorbitol (glusitol), myoinositol, og liknende. Foretrukne karbohydrateksipienser for anvendelse i foreliggende oppfinnelse er mannitol, trehalose og raffinose.
En anti-IL-6-antistoffsammensetning kan også inkludere en buffer eller et pH-justeringsmiddel; typisk er bufferen et salt fremstilt fra en organisk syre eller base. Representative buffere inkluderer organiske syresalter slik som salter av sitronsyre, askorbinsyre, glukonsyre, karbonsyre, vinsyre, ravsyre, eddiksyre eller ftalsyre; Tris, trometaminhydroklorid eller fosfatbuffere. Foretrukne buffere for anvendelse i foreliggende sammensetninger er organiske syresalter, slik som sitrat.
Videre, anti-IL-6-antistoffsammensetninger ifølge oppfinnelsen kan inkludere polymere eksipienser/additiver, slik som polyvinylpyrrolidoner, fikoller (et polymert sukker), dekstrater (for eksempel syklodekstriner slik som 2-hydroksypropyl-P-syklodekstrin), polyetylenglykoler, smaksstoffer, antimikrobielle midler, søtningsstoffer, antioksidanter, antistatiske midler, overflateaktive midler, for eksempel polysorbater slik som "TWEEN 20" og "TWEEN 80"), lipider (for eksempel fosfolipider, fettsyrer), steroider (for eksempel kolesterol), og chelateringsmidler (for eksempel EDTA).
Disse og ytterligere kjente farmasøytiske eksipienser og/eller additiver egnet for anvendelse i anti-IL-6-antistoff-, del- eller variantsammensetninger ifølge oppfinnelsen, er kjent innen teknikken, for eksempel som angitt i "Remington: The Science & Practice of Pharmacy", 19. utg., Williams & Williams, (1995), og i "Physician's Desk Reference", 52. utg., red., Medical Economics, Montvale, NJ (1998), og det vises til denne litteraturen med henblikk på detaljer. Foretrukket bærer- eller eksipiensmaterialer er karbohydrater (for eksempel sakkarider og alditoler) og buffere (for eksempel sitrat) eller polymere midler.
Formuleringer
Som angitt ovenfor tilveiebringer oppfinnelsen stabile formuleringer, som fortrinnsvis er en fosfatbuffer med saltoppløsning eller et valgt salt, samt preserverte oppløsninger og formuleringer inneholdende et preservativ samt preserverte flerbruksformuleringer egnet for farmasøytisk eller veterinær anvendelse, innbefattende minst ett anti-IL-6-antistoff i en farmasøytisk akseptabel formulering. Preserverte formuleringer inneholder minst ett kjent preservativ eller evt. valgt fra gruppen bestående av minst én fenol, m- kresol, p-kresol, o-kresol, klorkresol, benzylalkohol, fenylkvikksølvnitritt, fenoksyetanol, formaldehyd, klorbutanol, magnesiumklorid (for eksempel heksahydrat), alkylparaben (metyl, etyl, propyl, butyl og liknende), benzalkoniumklorid, benzetoniumklorid, natriumdehydroacetat og timerosal, eller blandinger derav i et vandig fortynningsmiddel. En hvilken som helst egnet konsentrasjon eller blanding kan anvendes som kjent innen teknikken, slik som 0,001-5 %, eller et hvilket som helst område eller verdi deri, slik som, men ikke begrenset til 0,001, 0,003, 0,005, 0,009, 0,01, 0,02, 0,03, 0,05, 0,09, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2,1,3, 1,4,1,5,1,6,1,7, 1,8, 1,9,2,0,2,1,2,2,2,3,2,4,2,5, 2,6,2,7,2,8,2,9, 3,0, 3,1,3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9, 4,0,4,3, 4,5,4,6, 4,7, 4,8, 4,9, eller ethvert område eller enhver verdi deri. Ikke-begrensende eksempler inkluderer, intet preservativ, 0,1-2 % m-kresol (for eksempel 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,9, 1.0 %), 0,1-3 % benzylalkohol (for eksempel 0,5,0,9,1,1,1,5,1,9,2,0,2,5%).
0,001-0,5 % timerosal (for eksempel 0,005, 0,01), 0,001-2,0 %) fenol (for eksempel 0,05, 0,25, 0,28, 0,5, 0,9, 1,0 %), 0,0005-1,0 % alkylparaben(er) (for eksempel 0,00075, 0,0009, 0,001, 0,002, 0,005, 0,0075, 0,009, 0,01, 0,02, 0,05, 0,075, 0,09, 0,1, 0,2, 0,3, 0. 5, 0,75, 0,9,1,0 %), og liknende.
Som angitt ovenfor tilveiebringer oppfinnelsen en fremstilt artikkel innbefattende emballeringsmateriale og minst én medisinflaske eller ampulle omfattende en oppløsning av minst ett anti-IL-6-antistoff med de foreskrevne buffere og/eller preservativer, evt. i et vannfortynningsmiddel, der nevnte emballeringsmateriale omfatter en merkelapp som angir at slik oppløsning kan oppbevares over en periode på 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9, 12, 18, 20,24, 30, 36,40, 48, 54, 60, 66, 72 timer eller mer. Oppfinnelsen omfatter ytterligere en fremstilt artikkel som omfatter emballeringsmateriale, en første medisinflaske eller ampulle omfattende lyofilisert minst ett anti-IL-6-antistoff, og en annen medisinflaske eller ampulle innbefattende et vandig fortynningsmiddel av foreskrevet buffer eller preservativ, hvor nevnte emballeringsmateriale omfatter en merkelapp som gir pasientinstruksjon om rekonstituering av nevnte idet minste ene anti-IL-6-antistoff i det vandige fortynningsmiddel til dannelse av en oppløsning som kan oppbevares over en periode på 24 timer eller mer.
Nevnte minst ene anti-IL-6-antistoff som benyttes ifølge foreliggende oppfinnelse kan fremstilles ved hjelp av rekombinante fremgangsmåter, inkludert fira pattedyrcelle- eller transgene preparater, eller kan renses fra andre biologiske kilder, som beskrevet heri, eller som kjent innen teknikken.
Området av minst ett anti-IL-6-antistoff i produktet ifølge foreliggende oppfinnelse inkluderer mengder som ved rekonstituering gir, hvis det foreligger i et fuktig/tørt system, konsentrasjoner fra ca. 1,0 ug/ml til ca. 1000 mg/ml, skjønt lavere og høyere konsentrasjoner kan anvendes og er avhengig av den tilsiktete avleveringsvehikkelen, for eksempel vil oppløsningsformuleringer atskille seg fra transdermalt plaster, pulmonale, transmukosale eller osmotiske eller mikropumpefremgangsmåter.
Det vandige fortynningsmiddelet omfatter evt. fortrinnsvis ytterligere et farmasøytisk akseptabelt preservativ. Foretrukne preservativer inkluderer de valgt fra gruppen bestående av fenol, m-kresol, p-kresol, o-kresol, klorkresol, benzylalkohol, alkylparaben (metyl, etyl, propyl, butyl og liknende), benzalkoniumklorid, benzetoniumklorid, natriumdehydroacetat og timerosal, eller blandinger derav. Konsentrasjonen av preservativ som benyttes i formuleringen, er en konsentrasjon tilstrekkelig til å gi en antimikrobiell effekt. Slike konsentrasjoner er avhengige av de valgte preservativer og kan lett bestemmes av fagfolk innen teknikken.
Andre eksipienser, for eksempel isotonisitetsmidler, buffere, antioksidanter, preservativforsterkere kan evt. og fortrinnsvis tilsettes til fortynningsmiddelet. Et isotonisitetsmiddel, slik som glyserin er vanlig benyttet ved kjente konsentrasjoner. En fysiologisk tolerert buffer blir fortrinnsvis tilsatt for tilveiebringelse av forbedret pH-regulering. Formuleringene kan dekke et vidt område av pH-verdier, slik som fra ca. pH 4 til ca. pH 10, og fortrinnsvis området fra ca. pH 5 til ca. pH 9, og mest foretrukket område på ca. 6,0 til ca. 8,0. Formuleringene ifølge foreliggende oppfinnelse har fortrinnsvis pH mellom ca. 6,8 og ca. 7,8. Foretrukne buffere inkluderer fosfatbuffere, mest foretrukket natriumfosfat, spesielt fosfatbufret saltoppløsning (PBS).
Andre tilsettinger, slik som farmasøytisk akseptable oppløsende midler, slik som Tween 20 (polyoksyetylen (20) sorbitanmonolaurat), Tween 40 (polyoksyetylen (20) sorbitanmonopalmitat, Tween 80 (polyoksyetylen (20) sorbitanmonooleat), Pluronic F68 ((polyoksyetylen polyoksypropylen-blokk-kopolymerer), og PEG (polyetylenglykol) eller ikke-ioniske overflateaktive midler, slik som polysorbat 20 eller 80 eller poloksamer 184 eller 188, "Pluronic" polyoler, andre blokk-kopolymerer, og gelateringsmidler slik som EDTA og EGTA kan evt. tilsettes til formuleringene eller sammensetningene for å redusere aggregering. Disse additivene er spesielt nyttige dersom en pumpe eller plastbeholder anvendes for administrering av formuleringen. Tilstedeværelse av farmasøytisk akseptabelt overflateaktivt middel demper proteinets tilbøyelighet til å aggregere.
Formuleringen ifølge foreliggende oppfinnelse kan fremstilles ved en fremgangsmåte som innbefatter blanding av minst ett anti-IL-6-antistoff og et preservativ valgt fra gruppen bestående av fenol, m-kresol, p-kresol, o-kresol, klorkresol, benzylalkohol, alkylparaben (metyl, etyl, propyl, butyl og liknende), benzalkoniumklorid, benzetoniumklorid, natriumdehydroacetat og timerosal, eller blandinger derav i et vandig fortynningsmiddel. Blanding av minst ett anti-IL-6-antistoff og preservativ i et vandig fortynningsmiddel utføres ved anvendelse av konvensjonelle oppløsnings- og blandeprosedyrer. For å fremstille en egnet formulering i for eksempel en utmålt mengde av minst ett anti-IL-6-antistoff i bufret oppløsning kombinert med det ønskete preservativ i en bufret oppløsning i mengder tilstrekkelige til å tilveiebringe proteinet og preservativet ved de ønskete konsentrasjoner. Variasjoner i denne prosessen vil forstås av en fagmann innen teknikken. For eksempel er den rekkefølge komponentene tilsettes i, enten ytterligere additiver anvendes eller ikke, temperatur og pH-verdi som formuleringen fremstilles ved, alle faktorer som kan optimaliseres for den benyttete konsentrasjonen og administrasjonsmåten.
De definerte formuleringene kan gis til pasienter som klare oppløsninger eller som dobbeltampuller omfattende en ampulle med minst ett lyofilisert anti-IL-6-antistoff som er rekonstituert med en annen ampulle inneholdende vann, et preservativ og/eller eksipienser, fortrinnsvis en fosfatbuffer og/eller saltoppløsning, og et valgt salt i et vandig fortynningsmiddel. Enten en enkelt oppløsningsampulle eller dobbeltampulle som nødvendiggjør rekonstituering, kan anvendes flere ganger og kan være tilstrekkelig for en enkelt eller flere sykler med pasientbehandling og kan således sørge for en mer hensiktsmessig behandlingskur en den som for tiden er tilgjengelig.
Foreliggende definerte fremstilte gjenstander er nyttige for administrasjon over en periode på umiddelbart til 24 timer eller mer. Foreliggende fremstilte artikler gir således betydelige fordeler for pasienten. Formuleringer ifølge oppfinnelsen kan evt. lagres på sikker måte ved temperaturer fira ca. 2 til 40 °C og bibeholde biologisk aktivitet av proteinet i lengre tidsperioder, idet en emballasje merking angir at oppløsningen kan oppbevares og/eller anvendes over en periode på 6, 12,18, 24, 36, 48, 72 eller 96 timer eller mer. Dersom preservert fortynningsmiddel anvendes, kan en slik merking inkludere bruk på opptil 1-12 måneder, 6 måneder, 18 måneder og/eller to år. Oppløsningene av nevnte minst ene anti-IL-6-antistoff ifølge oppfinnelsen kan fremstilles ved en fremgangsmåte omfattende blanding av minst ett antistoff i et vandig fortynningsmiddel. Blanding utføres ved anvendelse av konvensjonelle oppløsnings- og blandingsprosedyrer. For fremstilling av et egnet fortynningsmiddel, blir for eksempel en utmålt mengde av minst ett antistoff i vann eller buffer kombinert i mengder tilstrekkelige til å tilveiebringe proteinet og evt. et preservativ eller en buffer ved de ønskete konsentrasjoner. Variasjoner av denne fremgangsmåte vil forstås av fagfolk innen teknikken. For eksempel er rekkefølgen som komponentene tilsettes i, enten ytterligere additiver benyttes eller ikke, og temperatur og pH-verdi som formuleringen fremstilles ved, faktorer som kan optimaliseres for den anvendte konsentrasjon og administrasjonsmåte.
Foreliggende produkter kan gis til pasienter som klare oppløsninger eller som dobbeltampuller innbefattende en ampulle med minst ett lyofilisert anti-IL-6-antistoff som rekonstitueres med en annen ampulle inneholdende det vandige oppløsningsmiddelet. Enten en enkelt oppløsningsampulle eller dobbelt ampulle som nødvendiggjør rekonstituering kan anvendes på nytt flere ganger og kan være tilstrekkelig for en enkelt eller flere sykler med pasientbehandling og således sørge for en mer hensiktsmessig behandlingskur enn de som for tiden er tilgjengelige.
Foreliggende produkter kan gis indirekte til pasienter ved at de tilveiebringes til apotek, klinikk eller annen slik institusjon og fasilitet, som klare oppløsninger eller dobbeltampuller, innbefattende en ampulle med minst ett lyofilisert anti-IL-6-antistoff som rekonstitueres med en annen ampulle inneholdende det vandige fortynningsmiddel. Den klare oppløsningen i dette tilfellet kan være opptil en liter eller enda større, slik at det tilveiebringes et stort reservoar hvorfra mindre porsjoner av nevnte minst ene antistoffoppløsning kan hentes en eller flere ganger for overføring til mindre ampuller og leveres av apotek eller klinikk til deres kunder og/eller pasienter.
Anerkjente anordninger som innbefatter disse enkeltampullesystemene inkluderer de penn-injiseringsanordningene for avlevering av en oppløsning, slik som BD Pens, "BD Autojector", "Humaject", "NovoPen", "B-D Pen", "AutoPen" og "OptiPen", "GenotropinPen", "Genotronorm Pen", "Humatro Pen", "Reco Pen", "Roferon Pen", "Biojector", "iject", "J-tip Needle-Free Injector", "Intraject", "Medi-Ject", for eksempel som utviklet av Becton Dickensen (Franklin Lakes, NJ, www.bectondickenson.com), Disetronic (Burgdorf, Switzerland, www.disentronic.com; Bioject, Portland, Oregon (www.boiject.com); National Medical Products, Weston Medical (Peterborough, UK, www.weston-medical.com), Medi-Ject Corp (Minneapolis, MN, www.mediject.com). Anerkjente anordninger innbefattende et dobbeltampullesystem inkluderer de penn-injiseringssystemene for rekonstituering av et lyofilisert legemiddel i en patron for avlevering av den rekonstituerte oppløsningen, slik som "HumatroPen".
Foreliggende produkter inkluderer emballasjematerialet. Emballasjematerialet gir i tillegg til den informasjon som er nødvendig ifølge regulerende organer, de betingelser som produktet kan benyttes under. Emballasjematerialet ifølge oppfinnelsen gir instruksjoner til pasienten om å rekonstituere nevnte minst ene anti-IL-6-antistoff i det vandige fortynningsmiddelet for dannelse av en oppløsning og for anvendelse av oppløsningen over en periode på 2-24 timer eller mer for toampulle, fuktig/tørt, -produktet. For det enkelte ampulle oppløsningsproduktet angir merkelappen at en slik oppløsning kan benyttes over en periode på 2-24 timer eller mer. Foreliggende produkter er nyttige for human, farmasøytisk produktanvendelse.
Formuleringen ifølge oppfinnelsen kan fremstilles ved en fremgangsmåte innbefattende blanding av minst ett anti-IL-6-antistoff og en valgt buffer, fortrinnsvis en fosfatbuffer inneholdende saltoppløsning eller et valgt salt. Blanding av nevnte minst ene antistoff og buffer i et vandig fortynningsmiddel, utføres ved anvendelse av konvensjonelle oppløsnings- og blandingsprosedyrer. For fremstilling av en egnet formulering blir for eksempel en utmålt mengde av minst ett antistoff i vann eller buffer kombinert med det ønskete buffermiddel i vann i mengder tilstrekkelige til å tilveiebringe proteinet og bufferen ved de ønskete konsentrasjoner. Variasjoner i denne prosessen vil forstås av en fagmann innen teknikken. For eksempel er den rekkefølge komponentene tilsettes i, enten ytterligere additiver anvendes eller ikke, temperatur og pH-verdi som formuleringen fremstilles ved, alle faktorer som kan optimaliseres for den benyttete konsentrasjonen og administrasjonsmåten.
De foreliggende stabile eller preserverte formuleringene kan gis til pasienter som klare oppløsninger eller dobbeltampuller, innbefattende en ampulle med minst ett lyofilisert anti-IL-6-antistoff som rekonstitueres med en annen ampulle inneholdende et preservativ eller buffer og eksipienser i et vandig fortynningsmiddel. Enten en enkeloppløsningsampulle eller dobbeltampulle som nødvendiggjør rekonstituering kan anvendes på nytt flere ganger og kan være tilstrekkelig for en enkelt eller flere sykler med pasientbehandling og således sørge for en mer hensiktsmessig behandlingskur enn den som for tiden er tilgjengelig.
I det minste ett anti-IL-6-antistoff i stabile eller preserverte formuleringer eller oppløsningene som beskrevet heri, kan administreres til en pasient ifølge foreliggende oppfinnelse via en rekke forskjellige avleveringsfremgangsmåter, inkludert SC eller IM injeksjon; transdermal, pulmonal, transbukal, implantat, osmotisk pumpe, patron, mikropumpe eller annen fremgangsmåte som erkjent for fagfolk innen teknikken.
Terapeutiske anvendelser
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer også en fremgangsmåte for modulering eller behandling av minst en IL-6-relatert sykdom i en celle, et vev, organ, dyr eller pasient, som kjent innen teknikken eller som beskrevet heri, ved anvendelse av minst ett dobbelt integrinantistoff ifølge oppfinnelsen.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer også en fremgangsmåte for modulering eller behandling av minst én IL-6-relatert sykdom i en celle, et vev, organ, dyr eller pasient inkludert, men ikke begrenset til minst en av fedme, en immunrelatert sykdom, en kardiovaskulær sykdom, en infeksiøs sykdom, en malign sykdom eller en neurologisk sykdom.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer også en fremgangsmåte for modulering eller behandling av en immunrelatert sykdom i en celle, et vev, organ, dyr eller pasient inkludert, men ikke begrenset til minst en av reumatoid artritt, juvenil reumatoid artritt, systemisk begynnende juvenil reumatoid artritt, psoriatisk artritt, ankyloserende spondilitt, gastrisk ulcus, sero-negative artropatier, osteoartritt inflammatorisk tarmsykdom, ulserativ kolitt, systemisk lupus erytematose, antifosfolipid syndrom, iridosyklitt, uveitt, optisk neuritt, idiopatisk pulmonal fibrose, systemisk vaskulitt/Wegeners granulomatose, sarkoidose, orchitt/vasektomireverserings-prosedyrer, allergiske/atopiske sykdommer, astma, allergisk rhinitt, eksem, allergisk kontaktdermatitt, allergisk konjunktivitt, hypersensitivitetspneumonitt, transplanter, organtransplantatawisning, graft-versus-host-sykdom, systemisk inflammatorisk responssyndrom, sepsis syndrom, grampositiv sepsis, gramnegativ sepsis, kulturnegativ sepsis, fungal sepsis, neutropenisk feber, urosepsis, meningokokkemi, traumer/blødning, brannsår, ioniserende strålingseksponering, akutt pankreatitt, adult respiratorisk distressyndrom, reumatoid artritt, alkoholindusert hepatitt, kronisk inflammatoriske patologi er, sarkoidose, Crohn's patologi, sigdcelleanemi, diabetes, nefrose, atopiske sykdommer, hypersensitivitetsreaksjoner, allergisk rinitt, høyfeber, perennial rinitt, konjunktivitt, endometriose, astma, urticaria, systemisk anafylakse, dermatitt, pernisiøs anemi, hemolytisk sykdom, trombocytopeni, transplantatawisning av et hvilket som helst organ eller vev, nyretransplantatavvisning, hjertetransplantat-avvisning, levertransplantatawisning, pankreastransplantatawisning, lungetransplantatawisning, benmargtransplantat (BMT) avvisning, hudallograft avvisning, brusktransplantatawisning, bentransplantatawisning, tynntarmtransplantatawisning, føtalt tymusimplantatawisning, paratyroid transplantatawisning, xenograft avvisning av et hvilket som helst organ eller vev, allograft avvisning, anti-reseptor hypersensitivitetsreaksjoner, Graves sykdom, Raynoud's sykdom, type B insulinresistent diabetes, astma, myastenia gravis, antistoffmediert cytotoksisitet, type III hypersensitivitetsreaksjoner, systemisk lupus erytomatose, POEMS syndrom (polyneuropati, organomegali, endokrinopati, monoklonalt gammopati og hudendrings-syndrom), polyneuropati, organomegali, endokrinopati, monoklonal gammopati, hudendrings-syndrom, antifosfolipid syndrom, pemfigus, skleroderma, blandet bindevevs sykdom, idiopatisk Addison's sykdom, diabetes mellitus, kronisk aktiv hepatitt, primær billiær cirrhose, vitiligo, vaskulitt, post-MI kardiotomi syndrom, type IV hypersensitivitet, kontaktdermatitt, hypersensitivitetspneumonitt, allograft avvisning, granulomer pga. intracellulære organismer, legemiddelsensitivitet, metabolisk/idiopatisk sykdom, Wilson's sykdom, hemakromatose, alpha-1-antitrypsinmangel, diabetisk retinopati, Hashimoto's tyroiditt, osteoporose, hypotalamisk hypofyse-adrenalakseevaluering, primær billiær cirrhose, tyroiditt, encefalomyelitt, kakeksi, cystisk fibrose, neonatal kronisk lungesykdom, kronisk obstruktiv pulmonal sykdom (COPD), familiær hematofagocytisk lymfohistiocytose, dermatologiske tilstander, psoriasis, alopeci, nefrotisk syndrom, nefritt, glomerulær nefritt, akutt nyresvikt, hemodialyse, uremi, toksisitet, preeklampsi, okt3-terapi, anti-cd3-terapi, cytokinterapi, kjemoterapi, strålingsterapi, (for eksempel inkludert, men ikke begrenset til asteni, anemi, kakeksi og liknende), kronisk salicylat intoksikasjon, søvnapné, fedme, hjertesvikt, sinusitt, inflammatorisk tarmsykdom og liknende. Se for eksempel Merck Manual, 12.-17. utg., Merck & Company, Rahway, NJ (1972, 1977, 1982,1987, 1992, 1999), Pharmacotherapy Handbook, Wells et al, red., andre utgave, Appleton og Lange, Stamford, Conn. (1998,2000), og det vises til disse referanser med henblikk på detaljer.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer også en fremgangsmåte for modulering eller behandling av minst én infeksiøs sykdom i en celle, vev, organ, dyr eller pasient inkludert, men ikke begrenset til minst én av: akutt eller kronisk bakteriell infeksjon, akutte eller kroniske parasittiske eller infeksiøse prosesser, inkludert bakterielle, virale og fungale infeksjoner, HIV-infeksjon/HIV-neuropati, meningitt, hepatitt (A, B eller C eller liknende), septisk artritt, peritonitt, pneumoni, epiglotitt, e.coli 0157:h7, hemolytisk uremisk syndrom/trombolytisk trombocytopenisk purpura, malaria, dengue hemoragist feber, leishmaniasis, leprosi, toksisk sjokk syndrom, streptokokk myositt, gassgangren, mycobacterium tuberculosis, mycobacterium avium intracellulare, pneumocystisk carnii pneumoni, pelvisk inflammatorisk sykdom, orchitt/epidydimitt, legionella, lyme-sykdom, influenza a, epstein-barr virus, vital-assosiert hemafagocytisk syndrom, vital encefalitt/aseptisk meningitt og liknende.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer også en fremgangsmåte for modulering eller behandling av minst én malign sykdom i en celle, vev, organ, dyr eller pasient inkludert, men ikke begrenset til minst én av: leukemi, akutt leukemi, akutt lymfoblastisk leukemi (ALL), B-celle, T-celle eller FAB ALL, akutt myeloid leukemi (AML), kronisk myelocytisk leukemi (CML), kronisk lymfocytisk leukemi (CLL), hårcelle leukemi, myelodyplastisk syndrom (MDS), et lymfom, Hodgkin's sykdom, et ondartet lymfom, ikke-hodgkin's lymfom, Burkitfs lymfom, multippel myeloma, Kaposi's sarkoma, kolorektal karsinom, pankreatisk karsinom, nasofaryngialt karsinom, malign histiocytosi, paraneoplastisk syndrom/hyperkalsemi av ondartet type, faste tumorer, adenokarsinomer, sarkomer, malignt melanom, hemangiom, metastatisk sykdom, kreftrelatert benresorpsjon, kreftrelatert bensmerte og liknende. Slik fremgangsmåte kan evt. anvendes i kombinasjon med, ved administrasjon før, samtidig eller etter administrasjon av slikt IL-6-antistoff, strålingsterapi, et anti-angiogenisk middel, et kjemoterapeutisk middel, en farnesyltransferaseinhibitor eller liknende.
Spesielt tilveiebringer foreliggende oppfinnelse en fremgangsmåte for modulering eller behandling av autoimmunsykdommer, slik som reumatoid artritt, systemisk lupus erytematosus, og autoimmuninsulinavhengig diabetes; behandling av bakterielle infeksjoner; behandling av septisk sjokk pga. bakterielle infeksjoner; behandling av virale infeksjoner; behandling av krefttyper slik som multippel myelom; undertrykkelse av kreftmetastase; bedring av kreftkakeksi; og behandling av inflammatoriske sykdommer slik som mesangial proliferativ glomerulonefritt, ved administrasjon av antistoffet ifølge oppfinnelsen. En slik fremgangsmåte kan evt. innbefatte administrasjon av en effektiv mengde av minst én sammensetning eller farmasøytisk sammensetning innbefattende minst ett anti-IL-6 antistoff til en celle, vev, organ, dyr eller pasient som har behov for slik modulasjon, behandling eller terapi. Indikasjoner for behandling med anti-IL-6 terapi er beskrevet i følgende referanser, som det vises til med henblikk på detaljer: Van Snick, "Interleukin-6: An Overview", Ann. Rev. Immunol., 8:253-278 (1990); Campbell et al., "Essential Role for Interferon-gamma. And Interleukin-6 in Autoimmune Insulin-Dependent Diabetes in NOD/Wehi Mice", J. Clin. Invest., 87:739-742 (1991); Heinrich et al., "Interleukin-6 Monoclonal Antibody Therapy for a Patient with Plasma Cell Leukemia", Blood, 78(5):1198-1204 (1991); Starnes et al., "Anti-IL-6 Monoclonal Antibodies Protect Against Lethal Escherichia coli Infection and Lethal Tumor Necrosis Factor-alpha. Challenge in Mice", J.
Immunol, 145(12):4185-4191 (1990); Strassman et al, "Evidence for the Involvement of Interleukin 6 in Experimental Cancer Cachexia", J. Clin. Invest, 89:1681-1684
(1992).
En hvilken som helst fremgangsmåte ifølge foreliggende oppfinnelse kan innbefatte administrasjon av en effektiv mengde av en sammensetning eller farmasøytisk preparat omfattende minst ett anti-IL-6-antistoff til en celle, vev, organ, dyr eller pasient som har behov for slik modulasjon, behandling eller terapi. En slik fremgangsmåte kan evt. ytterligere innbefatte koadministrasjon eller kombinasjonsterapi for behandling av slike immunsykdommer eller maligne sykdommer, der administrasjonen av nevnte minst ene anti-IL-6-antistoff, spesifisert del eller variant derav ytterligere innbefatter administrasjon før, samtidig med og/eller etter, minst en valgt fra minst én TNF-antagonist (for eksempel, men ikke begrenset til et TNF-antistoff eller fragment, en oppløselig TNF-reseptor eller fragment, fusjonsproteiner derav eller en småmolekyl-TNF-antagonist), et IL-18-antistoff eller fragment, småmolekyl-IL-18 antagonist eller IL-18 reseptorbindingsprotein, et IL-1 antistoff (inkludert både IL-la og IL-p") eller fragment, en oppløselig IL-1 reseptorantagonist, antireumatikum (for eksempel metotrexat, auranofin, aurotioglukose, azatioprin, etanercept, gull natriumtiomalat, hydroksyklorokinsulfat, leflunomid, sulfasalazin, strålingsterapi, et anti-angiogenisk middel, et kjemoterapeutisk middel, Thalidomid), et muskelavslappende middel, et narkotikum, et ikke-steroid anti-inflammatorisk legemiddel (NSAID), et analgetikum, et anestetikum, et sedativ, et lokalanestetikum, en neuromuskulær blokker, et antimikrobielt middel (for eksempel aminoglykosid, et antifungalt middel, et antiparasittisk middel, et antiviralt middel, en karbapenem, cefalosporin, en fluorkinolon, et makrolid, en penicillin, et sulfonamid, en tetrasyklin, et annet antimikrobielt middel), et antipsoriatisk middel, et kortikosteroid, et anabolsk steroid, et diabetesrelatert middel, et mineral, et næringsmiddel, et tyroid middel, et vitamin, et kalsiumrelatert hormon, et erytropoietin (for eksempel epoetin alfa), et filgrastim (for eksempel G-CSF, Neupogen), et sargramostim (GM-CSF, Leukin), et immuniseringsmiddel, et immunglobulin, et immunundertrykkende middel (for eksempel basiliximab, syklosporin, daklizumab), et veksthormon, et hormonerstatningslegemiddel, en østrogenreseptormodulator, et mydriatisk middel, et sykloplegisk middel, et alkyleringsmiddel, en antimetabolitt, en mitotisk inhibitor, et radiofarmasøytikum, et antidepressiva, et antimanisk middel, et antipsykotisk middel, et anksiolytisk middel, et hypnotisk middel, et sympatomimetisk middel, et stimulerende middel, donepezil, takrin, en astmamedisinering, en beta-agonist, et inhalert steroid, en leukotrien inhibitor, en metylxantin, en kromolyn, et epinefrin eller analog, dornase alfa
(Pulmozym), et cytokin eller en cytokinantagonist. Egnete doseringer er velkjente innen teknikken. Se for eksempel Wells et al., red., Pharmacotherapy Handbook, 2. utg., Appleton og Lange, Stamford, CT (2000); PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, Deluxe Edition, Tarascon Publishing, Loma Linda, CA (2000), og det vises til disse referanser med henblikk på detaljer.
TNF-antagonister egnet for sammensetninger, kombinasjonsterapi, koadministrasjon, anordninger og/eller fremgangsmåter ifølge foreliggende oppfinnelse (ytterligere omfattende minst ett antistoff, spesifisert del eller variant derav ifølge oppfinnelsen), inkluderer, men er ikke begrenset til anti-TNF antistoffer, antigenbindingsfragmenter derav, og reseptormolekyler som bindes spesifikt til TNF; forbindelser som forebygger og/eller inhiberer TNF-syntese, TNF frigjøring eller dens virkning på målceller, slik som thalidomid, tenidap, fosfodiesteraseinhibitorer (for eksempel pentoksifyllin og rolipram), A2b-adenosinreseptoragonister og A2b-adenosinreseptorforsterkere; forbindelser som forebygger og/eller inhiberer TNF-reseptorsignalering, slik som mitogenaktivert protein (MAP) kinaseinhibitorer; forbindelser som blokkerer og/eller inhiberer membran-TNF-spalting, slik som metalloproteinaseinhibitorer; forbindelser som blokkerer og/eller inhiberer TNF-aktivitet, slik som angiotensinkonverterende enzym (ACE) inhibitorer (for eksempel captopril); og forbindelser som blokkerer og/eller inhiberer TNF-produksjon og/eller syntese, slik som MAP-kinaseinhibitorer.
Som anvendt heri vil et "tumornekrosefaktorantistoff', "TNF-antistoff, "TNF-a antistoff', eller fragment og liknende minske, blokkere, inhibere, abrogere eller interferere med TNF-a-aktivitet in vitro, in situ, og/eller fortrinnsvis in vivo. Et egnet TNF humanantistoff ifølge oppfinnelsen kan for eksempel binde TNF-a og inkluderer anti-TNF-antistoffer, antigenbindingsfragmenter derav og spesifiserte mutanter eller doméner derav som bindes spesifikt til TNF-a. Et egnet TNF-antistoff eller fragment kan også minske, blokkere, abrogere, interferere, hindre og/eller inhibere TNF-RNA, -DNA eller protein syntese, TNF-frigivning, TNF-reseptorsignalering, membran-TNF-spalting, TNF-aktivitet, TNF-produksjon og/eller -syntese.
Kimært antistoff cA2 består av den variable antigenbindingsregion av det høyaffinitetsnøytraliserende museantihumane-TNF-a IgGl-antistoffet, betegnet A2, og de konstante regioner i et humant IgGl, K-immunglobulin. Den humane IgGl-Fc-region forbedrer allogenisk antistoff-effektorfunksjon, øker den sirkulerende serumhalveringstiden og minsker antistoffets immunogenisitet. Aviditeten og epitopspesifisiteten til det kimære antistoff cA2 er avledet fra den variable region til det murine antistoff A2. En foretrukket kilde for nukleinsyrer som koder den variable region til det murine antistoff A2, er i en spesiell utførelsesform A2-hybridomcellelinj en.
Kimært A2 (cA2) nøytraliserer den cytotoksiske effekten av både naturlig og rekombinant, humant TNFa på en doseavhengig måte. Fra bindingsanalyser av kimært antistoff cA2 og rekombinant, humant TNFa, ble affinitetskonstanten til kimært antistoff cA2 beregnet å være 1,04 x 1010 M"1. Foretrukne fremgangsmåter for bestemmelse av monoklonal antistoffspesifisitet og affinitet ved konkurrerende inhibering, finnes i Harlow et al, antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1988;
Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1988; Colligan et al, red., Current Protocols in Immunology, Greene Publishing Assoc. and Wiley Interscience, New York, (1992-2000); Kozbor et al, Immunol Today, 4:72-79 (1983); Ausubel et al, red., Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience, New York (1987-2000); og Muller, Meth. Enzymol, 92:589-601 (1983), og det vises til denne litteratur med henblikk på detaljer.
I en spesiell utførelsesform blir murint, monoklonalt antistoff A2 produsert av en cellelinje betegnet c 134A. Kimært antistoff cA2 produseres av en cellelinje betegnet cl 68 A.
Ytterligere eksempler på monoklonale anti-TNF-antistoff som benyttes ifølge foreliggende oppfinnelse er beskrevet i teknikken. Se for eksempel U.S. patent nr. 5 231 024; Moller, A. et al, Cytokine 2(3): 162-169 (1990); U.S. søknad nr. 07/943 852 (innlevert 11. september 1992); Rathjen et al, Internasjonal publikasjon nr.
WO 91/02078 (publisert 21. februar 1991); Rubin et al, EPO patent publikasjon
nr. 218 868 (publisert 22. april 1987); Yone et al, EPO patent publikasjon nr. 288 088 (26. oktober 1988); Um% etal, Biochem. Biophys. Res. Comm. 137:847-854 (1986); Meager et al, Hybridoma 6:305-311 (1987); Fendly et al, Hybridoma 6:359-369
(1987); Bringman et al, Hybridoma 6:489-507 (1987); og Hirai et al, J. Immunol Meth. 96:57-62 (1987), og det vises til disse referanser med henblikk på detaljer.
TNF-reseptormolekyler
Foretrukne TNF-reseptormolekyler som er nyttige ifølge foreliggende oppfinnelse er de som binder TNFa med høy affinitet (se for eksempel Feidmann et al, Internasjonal publikasjon nr. WO 92/07076 (publisert 30. april 1992); Schall et al, Cell 61:361-370
(1990); og Loetscher et al, Cell 61:351-359 (1990), og det vises til disse referanser med henblikk på detaljer) og er evt. i besittelse av lav immunogenisitet. Spesielt er 55 kDa (p55 TNF-R) og 75 kDa (p75 TNF-R) TNF-celleoverflatereseptorene nyttige ifølge foreliggende oppfinnelse. Avkortete former av disse reseptorene, innbefattende de ekstracellulære doméner (BCD) av reseptorene eller funksjonelle deler derav (se for eksempel Corcoran et al, Eur. J. Biochem. 223:831-840 (1994)), er også nyttige ifølge foreliggende oppfinnelse. Avkortete former av TNF-reseptorene, innbefattende ECD, er påvist i urin og serum som 30 kDA og 40 kDa TNFa inhiberende bindingsproteiner (Engelmann, H. et al, J. Biol Chem. 265:1531-1536 (1990)). Multimere TNF-reseptormolekyler og TNF-immunoreseptorfusjonsmolekyler, og derivater, fragmenter og deler derav, er ytterligere eksempler på TNF-reseptormolekyler nyttige i foreliggende fremgangsmåter og sammensetninger. TNF-reseptormolekylene som kan anvendes i oppfinnelsen, er kjennetegnet ved deres evne til å behandle pasienter i lengre perioder med god til utmerket lindring av symptomer og lav toksisitet. Lav immunogenisitet og/eller høy affinitet, samt andre udefinerte egenskaper, kan bidra til de oppnådde, terapeutiske resultater.
Nyttige multimere TNF-reseptormolekyler ifølge foreliggende oppfinnelse, innbefatter hele eller en funksjonell del av nevnte ECD i to eller flere TNF-reseptorer bundet via én eller flere polypeptidlinkere eller andre ikke-peptidlinkere, slik som polyetylenglykol (PEG). De multimere molekylene kan videre innbefatte et signalpeptid av et sekretert protein for å styre ekspresjon av det multimere molekyl. Disse multimere molekylene og fremgangsmåter for deres fremstilling, er beskrevet i U.S. søknad nr. 08/437 533 (innlevert 9. mai 1995), og det vises til denne referansen med henblikk på detaljer.
TNF-immunoreseptorfusjonsmolekyler som er nyttige i foreliggende fremgangsmåte og sammensetninger, innbefatter minst én del av ett eller flere immunglobulinmolekyler og hele eller en funksjonell del av én eller flere TNF-reseptorer. Disse immunoreseptorfusjonsmolekylene kan være sammensatt som monomerer eller hetero-eller homomultimerer. Immunoreseptorfusjonsmolekylene kan også være enverdige eller treverdige. Et eksempel på et slikt TNF-immunoreseptorfusjonsmolekyl er TNF-reseptor/IgG-fusjonsprotein. TNF-immunoreseptorfusjonsmolekylene og fremgangsmåter for deres fremstilling er beskrevet i teknikken (Lesslauer et al, Eur. J. Immunol 21:2883-2886 (1991); Ashkenazi et al, Proe. Nati Acad. Sei. USA 88:10535-10539 (1991); Peppel et al, J. Exp. Med. 174:1483-1489 (1991); Kolls et al, Proe. Nati Acad. Sei. USA 91:215-219 (1994); Butlere/ al, Cytokine 6(6):616-623 (1994); Baker et al, Eur. J. Immunol 24:2040-2048 (1994); Beutler et al, U.S. patent nr. 5 447 851; og U.S. patent søknad nr. 08/442 133 (innlevert 16. mai 1995), og det vises til disse referanser med henblikk på detaljer). Fremgangsmåter for fremstilling av immunoreseptorfusjonsmolekyler finnes også i Capon et al, U.S. patent nr. 5 116 964; Capon et al, U.S. patent nr. 5 225 538; og Capon et al, Nature 337:525-531 (1989), og det vises til disse referanser med henblikk på detaljer.
En funksjonell ekvivalent, derivat, fragment eller region av TNF-reseptormolekyl refererer til den delen av TNF-reseptormolekylet eller den delen av TNF-reseptormolekylsekvensen som koder TNF-reseptormolekyl, dvs. at tilstrekkelig størrelse og sekvenser til funksjonelt og liknende TNF-reseptormolekyler som kan benyttes ifølge foreliggende oppfinnelse (for eksempel binder TNF med høy affinitet og er i besittelse av lav immunogenisitet). En funksjonell ekvivalent til TNF-reseptormolekylet inkluderer også modifiserte TNF-reseptormolekyler som funksjonelt likner TNF-reseptormolekyler som kan benyttes i foreliggende oppfinnelse (for eksempel binder TNF med affinitet og er i besittelse av lav immunogenisitet). For eksempel kan en funksjonell ekvivalent av TNF-reseptormolekyl inneholde et "SILENT" kodon eller én eller flere aminosyresubstitusjoner, delesjoner eller addisjoner (for eksempel ved å bruke en sur aminosyre i stedet for en annen sur aminosyre; eller ved å anvende ett kodon som koder den samme eller forskjellige hydrofobe aminosyre i stedet for et annet kodon som koder en hydrofob aminosyre). Se Ausubel et al, Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Assoc. and Wiley-Interscience, New York (1987-2000).
Cytokiner inkluderer et hvilket som helst kjent cytokin. Se for eksempel CopewithCytokines.com. Cytokinantagonister inkluderer, men er ikke begrenset til et hvilket som helst antistoff, fragment eller mimetisk materiale, en hvilken som helst oppløselig reseptor, fragment eller mimetisk materiale, en hvilken som helst småmolekylantagonist, eller en hvilken som helst kombinasjon derav.
Terapeutiske behandlinger
En hvilken som helst fremgangsmåte ifølge oppfinnelsen kan innbefatte en fremgangsmåte for behandling av en IL-6-mediert forstyrrelse, innebefattende administrasjon av en effektiv mengde av en sammensetning eller farmasøytisk preparat innbefattende minst ett anti-IL-6-antistoff til en celle, vev, organ, dyr eller pasient med behov for slik modulasjon, behandling eller terapi. En slik fremgangsmåte kan evt. ytterligere innbefatte koadministrasjon eller kombinasjonsterapi for behandling av slike immunsykdommer, hvor administrasjon av nevnte minst ene anti-IL-6-antistoff, spesifisert del eller variant derav, ytterligere innbefatter administrasjon, før, samtidig med, og/eller etter minst én valgt fra minst én TNF-antagonist (for eksempel, men ikke begrenset til et TNF-antistoff eller fragment, en oppløselig TNF-reseptor eller fragment, fusjonsproteiner derav eller en småmolekyl-TNF-antagonist), et antireumatikum (for eksempel metotrexat, auranofin, aurotioglukose, azatioprin, etanercept, gull natriumtiomalat, hydroksyklorkinsulfat, leflunomid, sulfasalzin), et muskelavslappende middel, et narkotikum, et ikke-steroid anti-inflammatorisk legemiddel (NSAID), et analgetikum, et anestetikum, et sedativ, et lokalanestetikum, en neuromuskulær blokker, et antimikrobielt middel (for eksempel aminoglukosid, et antisoppmiddel, et antiparasittmiddel, et antiviralt middel, en karbapenem, cefalosporin, en fluorkinolon, et makrolid, et penicillin, et sulfonamid, et tetrasyklin, et annet antimikrobielt middel), et antipsoriatisk middel, et kortikosteroid, et anabolisk steroid, et diabetesrelatert middel, et mineral, et næringsmiddel, et tyroid middel, et vitamin, et kalsiumrelatert hormon, et antidiarétisk middel, et hostestillende middel, et antiemetisk middel, et antiulcus middel, et laksativ, et antikoaguleringsmiddel, en erytropoietin (for eksempel epoetin a), et filgrastim (for eksempel G-CSF, Neupogen), et sargramostim (GM-CSF, Leukin), et immuniseringsmiddel, et immunglobulin, et immunundertrykkende middel (for eksempel basiliximab, syklosporin, daklizumab), et veksthormon, et hormonerstatningslegemiddel, en østrogenreseptormodulator, et mydriatisk middel, et sykloplegisk middel, et alkyleringsmiddel, en antimetabolitt, en mitotisk inhibitor, et radiofarmasøytikum, et antidepressiva, et antimanisk middel, et antipsykotisk middel, et anksiolytisk middel, et hypnotisk middel, et sympatomimetisk middel, et stimuleringsmiddel, donepezil, takrin, en astmamedisin, en beta-agonist, et inhalert steroid, en leukotrien inhibitor, et metylxantin, et kromolyn, et epinefrin eller analog, dornase-a (pulmozym), et cytokin eller en cytokin antagonist.
Behandling av patologiske tilstander bevirkes typisk ved administrasjon av en effektiv mengde av en dosering av minst én anti-IL-6-antistoffsammensetning som totalt i gjennomsnitt utgjør et område fra minst ca. 0,01 til 500 mg av minst ett anti-IL-6-antistoff pr. kg pasient pr. dose, fortrinnsvis fra minst ca. 0,1 til 100 mg antistoff/kg pasient pr. enkelt- eller multippel administrasjon, avhengig av den spesifikke aktivitet sammensetningen inneholder. Den effektive serumkonsentrasjonen kan alternativt innbefatte 0,1-5000 ug/ml serumkonsentrasjon pr. enkelt- eller multippeladministrasjon. Egnete doseringer er kjent for medisinske fagfolk og vil naturligvis avhenge av den spesielle sykdomstilstanden, sammensetningens spesifikke aktivitet som administreres, og den spesielle pasienten som gjennomgår behandling. I noen tilfeller kan det for oppnåelse av den ønskete terapeutiske mengde være nødvendig å sørge for gjentatte individuelle administrasjoner av en spesiell overvåket eller utmålt dose, der de individuelle administrasjoner gjentas til den ønskete daglige dose eller effekt er oppnådd.
Foretrukne doser kan evt. inkludere 0,1,0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7,0,8, 0,9,1, 2,3, 4,5, 6, 7, 8, 9, 10,11, 12, 13, 14,15, 16, 17, 18,19, 20, 21, 22,23, 24, 25, 26,27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39,40, 41, 42, 43,44, 45, 46, 47,48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78,79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90,91, 92, 93, 94,95, 96, 97, 98,99 og/eller 100-500 mg/kg/administrasjon, eller et hvilket som helst område, verdi eller fraksjon derav, eller for oppnåelse av en serumkonsentrasjon på 0,1, 0,5, 0,9, 1,0, 1,1, I, 2, 1,5,1,9, 2,0, 2,5, 2,9, 3,0, 3,5, 3,9, 4,0,4,5, 4,9, 5,0, 5,5, 5,9, 6,0, 6,5, 6,9, 7,0, 7,5, 7,9, 8,0, 8,5, 8,9, 9,0, 9,5, 9,9,10,10,5,10,9,11,11,5,11,9,20,12,5,12,9,13,0,13,5, 13,9, 14,0, 14,5, 4,9, 5,0, 5,5, 5,9, 6,0, 6,5, 6,9, 7,0, 7,5, 7,9, 8,0, 8,5, 8,9, 9,0, 9,5, 9,9, 10,10,5, 10,9, 11,11,5, 11,9, 12,12,5, 12,9, 13,0,13,5, 13,9, 14,14,5, 15, 15,5,15,9, 16,16,5, 16,9, 17,17,5, 17,9, 18,18,5, 18,9, 19,19,5, 19,9, 20,20,5, 20,9, 21,22, 23, 24,25, 26,27,28,29, 30, 35,40,45, 50, 55, 60,65, 70, 75, 80, 85, 90, 96,100,200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1500, 2000,2500, 3000, 3500, 4000,4500 og/eller 5000 ug/ml serumkonsentrasjon pr. enkelt- eller multippel administrasjon, eller et hvilket som helst område, verdi eller fraksjon derav.
Den administrerte doseringen kan alternativt variere avhengig av kjente faktorer, slik som det spesielle middelets farmakodynamiske egenskaper og dets administrasjonsmåte og -vei; mottakerens alder, helse og vekt; symptomenes natur og grad, type av samtidig behandling, behandlingsfrekvens og den ønskete effekt. Vanligvis kan en dosering av aktiv bestanddel være 0,1 til 100 mg/kg kroppsvekt. Vanligvis er 0,1 til 50, og fortrinnsvis 0,1 til 10 mg/kg pr. administrasjon eller i vedvarende frigivningsform effektivt for oppnåelse av ønskete resultater.
Som et ikke-begrensende eksempel kan behandling av mennesker eller dyr gis som en engangs- eller periodisk dosering av minst ett antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse i en mengde på 0,1 til 100 mg/kg, slik som 0,5, 0,9,1,0,1,1,1,5,2, 3,4, 5, 6, 7, 8, 9,10, II, 12, 13,14,15,16, 17,18,19,20, 21,22,23,24, 25,26,27,28, 29, 30,40,45, 50, 60, 70, 80, 90 eller 100 mg/kg pr. dag, på minst én av dag 1,2, 3,4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12,13, 14, 15, 16,17, 18, 19, 20,21, 22, 23, 24,25, 26, 27, 28,29, 30, 31, 32, 33, 34, 35,36, 37, 38,39 eller 40, eller alternativt eller i tillegg, minst en av uke 1,2, 3,4, 5, 6, 7, 8, 9, 10,11,12,13, 14,15,16,17, 18,19,20,21, 22,23,24,25, 26,27,28,29, 30, 31,32, 33, 34, 35,36, 37, 38, 39,40,41,42,43,44,45,46,47,48,49, 50, 51 eller 52, eller alternativt eller i tillegg, minst én av 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12,13, 14, 15, 16,17, 18,19 eller 20 år, eller en hvilken som helst kombinasjon derav, ved anvendelse av enkelt-, infusjons- eller gjentatte doser.
Doseringsformer (preparat) egnet for intern administrasjon inneholder generelt fra ca. 0,1 mg til ca. 500 mg aktiv bestanddel pr. enhet eller beholder. I disse farmasøytiske preparater vil den aktive bestanddel vanligvis være til stede i en mengde på ca. 0,5-99,9999 vektprosent basert på preparatets totalvekt.
For parenteral administrasjon kan antistoffet formuleres som en oppløsning, suspensjon, emulsjon eller lyofilisert pulver i forbindelse, eller tilveiebrakt separat med en farmasøytisk akseptabel, parenteral vehikkel. Eksempler på slike vehikler er vann, saltoppløsning, Ringers oppløsning, dextroseoppløsning, og 1-10 % humant serumalbumin. Liposomer og ikke-vandige vehikler, slik som fikserte oljer, kan også anvendes. Vehikkelen eller det lyofiliserte pulveret kan inneholde tilsettinger som opprettholder isotonisitet (for eksempel natriumklorid, mannitol) og kjemisk stabilitet (for eksempel buffere og preservativer). Formuleringen steriliseres ved hjelp av kjente eller egnete teknikker.
Egnete farmasøytiske bærere er beskrevet i den siste utgave av Remington's Pharmaceutical Sciences, A. Osol, en standard referansetekst på dette området.
Alternativ administrasjon
Mange kjente og utviklete måter kan benyttes ifølge foreliggende oppfinnelse for administrasjon av farmasøytisk effektive mengde av minst ett anti-IL-6-antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse. Mens pulmonal administrasjon er benyttet i den nedenstående beskrivelsen, kan andre administrasjonsmåter anvendes ifølge foreliggende oppfinnelse med egnete resultater. IL-6-antistoffet ifølge foreliggende oppfinnelse kan avleveres i en bærer, som en oppløsning, emulsjon, kolloid eller suspensjon, eller som et tørt pulver ved anvendelse av en hvilken som helst av en rekke forskjellige anordninger og fremgangsmåter egnet for administrasjon ved inhalasjon eller andre måter som beskrevet heri, eller som er kjent innen teknikken.
Parenterale formuleringer og administrasjon
Formuleringer for parenteral administrasjon kan som felles eksipienser inneholde sterilt vann eller saltoppløsning, polyalkylenglykoler slik som polyetylenglykol, oljer av vegetabilsk opprinnelse, hydrogenerte naftalener og liknende. Vandige eller oljeholdige suspensjoner for injeksjon kan fremstilles ved anvendelse av et passende emulgeringsmiddel eller fuktemiddel og et suspenderingsmiddel, ifølge kjente metoder. Midler for injeksjon kan være ikke-toksiske, ikke-oralt administrerbart fortynningsmiddel, slik som vandige oppløsning eller en steril injiserbar oppløsning eller suspensjon i et oppløsningsmiddel. Som anvendelig vehikkel eller oppløsningsmiddel er vann, Ringers oppløsning, isotonisk saltoppløsning osv., aktuelle; som et vanlig oppløsningsmiddel eller suspenderende oppløsningsmiddel, kan steril ikke-flyktig olje anvendes. For disse formål kan en hvilken som helst type ikke-flyktig olje og fettsyre benyttes, inkludert naturlige eller syntetiske eller halvsyntetiske fettoljer eller fettsyrer; naturlige eller syntetiske eller halvsyntetiske mono- eller di- eller triglyserider. Parental administrasjon er kjent inne teknikken og inkluderer, men er ikke begrenset til konvensjonelle injeksjonsmetoder, trykkgassinjeksjonsanordninguten nål, som beskrevet i U.S. patent nr. 5 851 198, og en laserperforatoranordning som beskrevet i U.S. patent nr. 5 839 446, og det vises til disse patentene med henblikk på detaljer.
Alternativ avlevering
Oppfinnelsen angår videre administrasjon av minst ett anti-IL-6-antistoff ved parenteral, subkutan, intramuskulær, intravenøs, intrartikulær, intrabronkial, intraabdominal, intrakapsulær, intrakartilaginøs, intrakavitet, intracelial, intracelebellær, intracerebroventrikulær, intrakolisk, intracervical, intragastrisk, intrahepatisk, intramyokardial, intraosteal, intrapelvisk, intraperikardial, intraperitoneal, intrapleural, intraprostatisk, intrapulmonal, intrarektal, intrarenal, intraretinal, intraspinal, intrasynovial, intratorakisk, intrauterin, intravesikal, bolus, vaginal, rektal, bukal, sublingual, intranasal eller transdermal metode. I det minste én anti-IL-6-antistoffsammensetning kan fremstilles for bruk for parenteral (subkutan, intramuskulær eller intravenøs) eller en hvilken som helst annen administrasjon spesielt i form av flytende oppløsninger eller suspensjoner; for bruk i vaginal eller rektal administrasjon, spesielt i halvfaste former, slik som, men ikke begrenset til kremer og suppositorier; for bukal eller sublingual administrasjon slik som, men ikke begrenset til i form av tabletter eller kapsler; eller intranasalt slik som, men ikke begrenset til i form av pulvere, nasale dråper eller aerosoler eller visse midler; eller transdermalt slik som, men ikke begrenset til et gel-, salve-, lotion-, suspensjon- eller plasteravleveringssystem med kjemiske forsterkere slik som dimetylsulfoksid for enten å modifisere hudstrukturen eller for å øke legemiddelkonsentrasjonen i det transdermale plasteret (Junginger et al., In "Drug Permeation Enhancement"; Hsieh, D. S., red., s. 59-90 (Marcel Dekker, Inc., New York 1994, og det vises til denne litteraturen med henblikk på detaljer), eller med oksidasjonsmidler som muliggjør påføringen av formuleringer inneholdende proteiner og peptider på huden (WO 98/53847), eller på setting av elektriske felt for å skape transiente transportveier, slik som elektroforese eller for å øke mobiliteten til ladete legemidler gjennom huden, slik som iontoforese, eller tilføring av ultralyd slik som sonoforese (U.S. patent nr. 4 309 989 og 4 767 402) (idet det vises til ovennevnte publikasjoner og patenter med henblikk på detaljer).
Pulmonal/nasal administrasjon
For pulmonal administrasjon avleveres fortrinnsvis minst én anti-IL-6-antistoffsammensetning i en partikkelstørrelse effektiv til å nå lungens nedre luftveier eller bihulene. Ifølge oppfinnelsen kan minst ett anti-IL-6-antistoff avleveres ved en hvilken som helst av en rekke forskjellige inhalerings- eller nasalanordninger kjent innen teknikken for administrasjon av et terapeutisk middel ved inhalering. Disse anordninger som er i stand til å avsette forstøvete formuleringer i bihulen eller i alveolene hos en pasient inkluderer doseutmålingsinhalatorer, forstøvere, tørrpulvergeneratorer, spray anordninger og liknende. Andre anordninger egnet for dirigering av den pulmonale eller nasale administrasjon av antistoffer er også kjent innen teknikken. Alle slike anordninger kan benytte formuleringer egnet for administrasjon for avlevering av antistoff i en aerosol. Slike aerosoler kan innbefatte enten oppløsninger (både vandige og ikke-vandige) eller faste partikler. Doseutmålingsinhalatorer slik som "Ventolin" doseutmålingsinhalator anvender typisk en drivgass og nødvendiggjør aktivering under innånding (se for eksempel WO 94/16970, WO 98/35888). Tørrpulveirnhalatorer slik som "Turbuhaler" (Astra), "Rotahaler" (Glaxo), "Diskus" (Glaxo), "Spiros" inhalator (Dura), anordninger som markedsføres av Inhale Therapeutics, og "Spinhaler" pulverinhalator (Fisons), anvender pustaktivering av et blandet pulver (US 4 668 218 Astra, EP 237 507 Astra,
WO 97/25086 Glaxo, WO 94/08552 Dura, US 5 458 135 Inhale, WO 94/06498 Fisons, idet det vises til disse referansene med henblikk på detaljer). Forstøvere slik som "AERx" Aradigm, "Ultravent" nebulisator (Mallinckrodt), og "Acorn II" nebulisator (Marquest Medical Products) (US 5 404 871 Aradigm, WO 97/22376), idet det vises til disse referansene med henblikk på detaljer, gir aerosoler fra oppløsninger, mens doseutmålingsinhalatorer, tørrpulverinhalatorer osv. utvikler småpartikkelaerosoler. Disse spesifikke eksempler på kommersielt tilgjengelige inhaleringsanordninger er ment å være representative for spesifikke anordninger egnet for utførelse av oppfinnelsen, og er ikke ment som begrensende for oppfinnelsen. En sammensetning innbefattende minst ett anti-IL-6-antistoff avleveres fortrinnsvis ved bruk av en tørrpulverinhalator eller sprayanordning. Det er et flertall ønskete trekk ved en inhaleringsanordning for administrasjon av minst ett antistoff ifølge oppfinnelsen. For eksempel er avlevering ved anvendelse av inhaleringsanordningen på fordelaktig måte pålitelig, reproduserbar og nøyaktig. Inhaleringsanordningen kan evt. avleveres små tørre partikler, for eksempel mindre enn ca. 10 um, fortrinnsvis ca. 1-5 um for god respirasjon.
Administrasjon av IL-6 antistoffsammensetninger som en spray
En spray som inkluderer IL-6-antistoffsammensetningsprotein kan produseres ved å presse en suspensjon eller oppløsning av minst ett anti-IL-6-antistoff gjennom en dyse under trykk. Dysestørrelsen og konfigurasjonen, det påførte trykk og væsketilførselsraten kan velges slik at den ønskete ytelse og partikkelstørrelse oppnås. En elektrospray kan frembringes for eksempel ved anvendelse av et elektrisk felt i forbindelse med en kapillær- eller dysetilførsel. Partikler av minst ett anti-IL-6-antistoffsammensetningsprotein avlevert ved anvendelse av en sprayanordning, har fordelaktig en partikkelstørrelse på mindre enn ca. 10 um, fortrinnsvis i området på 1 Hm til ca. 5 um, og mest foretrukket ca. 2 nm til ca. 3 um.
Formuleringer av minst ett anti-IL-6-antistoffsammensemingsprotein egnet for anvendelse med en sprayanordning, inkluderer typisk antistoffsammensetningsprotein i en vandig oppløsning ved en konsentrasjon på ca. 0,1 mg til ca. 100 mg av minst ett anti-IL-6-antistoffsammensetningsprotein pr. ml oppløsning eller mg/g, eller et hvilket som helst område eller verdi deri, for eksempel, men ikke begrenset til 0,1, 0,2,0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12,13, 14, 15, 16,17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25,26, 27, 28, 29, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90 eller 100 mg/ml eller mg/g. Formuleringen kan inkludere midler som en eksipiens, en buffer, en buffer, et isotonisk middel, et preservativ, et overflateaktivt middel og fortrinnsvis sink. Formuleringen kan også inkludere en eksipiens eller et middel for stabilisering av antistoffsammensetningsproteinet slik som en buffer, et reduksjonsmiddel, et bulkprotein eller et karbohydrat. Bulkproteiner som er nyttige for formulering av antistoffsammensetningsproteiner inkluderer albumin, protamin eller liknende. Typiske karbohydrater som er nyttige ved formuleringen av antistoffsammensetningsproteiner inkluderer sukrose, mannitol, laktose, trehalose, glukose eller liknende. Antistoffsammensetningsproteinformuleringen kan også innbefatte et overflateaktivt middel som kan redusere eller hindre overflateindusert aggregering av antistoffsammensetningsproteinet forårsaket ved forstøvning av oppløsningen ved dannelse av en aerosol. Forskjellige konvensjonelle overflateaktive midler kan benyttes, slik som polyoksyetylenfettsyreestere og alkoholer og polyoksyetylensorbitolfettsyre-estere. Mengder vil generelt variere mellom 0,001 og 14 vektprosent av formuleringen. Spesielt foretrukne overflateaktive midler for foreliggende oppfinnelses formål er polyoksyetylensorbitanmonooleat, polysorbat 80, polysorbat 20 eller liknende. Ytterligere midler som er kjent innen teknikken for formulering av et protein slik som IL-6-antistoffer eller spesifiserte deler eller varianter, kan også inkluderes i formuleringen.
Administrasjon av IL-6-antistoffsammensetninger ved bruk av en nebulisator Antistoffsammensetningsprotein kan administreres ved anvendelse av en nebulisator, slik som en jet-nebulisator eller en ultralydnebulisator. I en jet-nebulisator blir det typisk benyttet en trykkluftskilde for å skape en luftstråle av høy hastighet gjennom en åpning. Idet gassen ekspanderer utenfor dysen, skapes et lavtrykksområde som trekker en oppløsning av antistoffsammensetningsprotein gjennom et kapillarrør forbundet med et væskereservoar. Væskestrømmen fra kapillærrøret skjæres til ustabile filamenter og små dråper når den kommer ut av røret og danner derved aerosolen. Et område av konfigurasjoner, strømningsrater og ledeflatetyper kan anvendes for oppnåelse av de ønskete ytelsesegenskaper fra en gitt jet-nebulisator. I en ultralydnebulisator anvendes høyfrekvent, elektrisk energi til å skape mekanisk vibrasjonsenergi, typisk ved anvendelse av en piezoelektrisk transduser. Denne energien overføres til formuleringen av antistoffsammensetningsproteinet enten direkte eller gjennom et koblingsfluid, slik at det dannes en aerosol som inkluderer antistoffsammensetningsproteinet. Partikler av antistoffsammensetningsprotein avlevert ved anvendelse av en nebulisator har fordelaktig en partikkelstørrelse på mindre enn ca. 10 um, fortrinnsvis i området på ca.
1 nm til ca. 5 um, og mest foretrukket ca. 2 nm til ca. 3 pm.
Formuleringer av minst ett anti-IL-6-antistoff egnet for anvendelse med en nebulisator, enten jet eller ultralyd, inkluderer typisk en konsentrasjon på ca. 0,1 mg til ca. 100 mg av minst ett anti-IL-6-antistoffprotein pr. ml oppløsning. Formuleringen kan inkludere midler slik som en eksipiens, en buffer, et isotonisitetsmiddel, et preservativ, et overflateaktivt middel, og fortrinnsvis sink. Formuleringen kan også inkludere en eksipiens eller middel for stabilisering av nevnte minste ene anti-IL-6-antistoffsammensetningsprotein, slik som en buffer, et reduksjonsmiddel, et bulkprotein eller et karbohydrat. Bulkproteiner nyttige ved formulering av minst ett anti-IL-6-antistoffsammensetningsprotein inkluderer albumin, protamin eller liknende. Typiske karbohydrater nyttige ved formulering av minst ett anti-IL-6-antistoff inkluderer sukrose, mannitol, laktose, trehalose, glukose eller liknende. Nevnte minst ene anti-IL-6-antistofformulering kan også inkludere et overflateaktivt middel som kan redusere eller hindre overflateindusert aggregering av nevnte minst ene anti-IL-6-antistoff forårsaket av forstøvning av oppløsningen under dannelse av en aerosol. Forskjellige konvensjonelle overflateaktive midler kan anvendes, slik som polyoksyetylenfettsyreestere og alkoholer og polyoksyetylensorbitanfettsyreestere. Mengder vil generelt variere mellom 0,001 og 4 vektprosent av formuleringen. Spesielt foretrukne overflateaktive midler for foreliggende oppfinnelses formål er polyoksyetylensorbitanmonooleat, polysorbat 80, polysorbat 20 eller liknende. Ytterligere midler kjent innen teknikken for formulering av et protein slik som et antistoffprotein kan også inkluderes i formuleringen.
Administrasjon av IL-6 antistoffsammensetninger ved bruk av en utmålingsdoseinhalator
En utmålingsdoseinhalator (MDI), et drivmiddel, minst ett anti-IL-6-antistoff og hvilke som helst eksipienser eller andre tilsettinger inneholdes i en boks som en blanding innbefattende kondensert, komprimert gass. Aktivisering av utmålingsventilen frigjør blandingen som en aerosol, fortrinnsvis inneholdende partikler i størrelsesområdet på mindre enn ca. 10 um, fortrinnsvis ca. 1 um til ca. 5 um, mest foretrukket ca. 2 nm til ca. 3 nm. Den ønskete aerosolpartikkelstørrelse kan oppnås ved anvendelse av en formulering av antistoffsammensetningsprotein fremstilt ved forskjellige fremgangsmåter som er kjent for fagfolk inne teknikken, inkludert strålemaling, sprøytetørking, kritisk punkt kondensasjon eller liknende. Foretrukne utmålingsdoseinhalatorer inkluderer de som er produsert av 3M eller Glaxo og anvender et hydrofluorkarbondrivmiddel.
Formulering av minst ett anti-IL-6-antistoff for anvendelse med en utmålingsdoseinhalatoranordning vil generelt inkludere et findelt pulver inneholdende minst ett anti-IL-6-antistoff som en suspensjon i et ikke-vandig medium, for eksempel suspendert i et drivmiddel ved hjelp av et overflateaktivt middel. Drivmiddelet kan være et hvilket som helst konvensjonelt materiale benyttet for dette formål, slik som klorfluorkarbon, hydroklorfluorkarbon, hydrofiuorkarbon eller et hydrokarbon inkludert trifluormetan, diklordifluormetan, diklortetrafluoretanol og 1,1,1,2-tetrafluoretan, HFA-134a (hydrofluoralkan-134a), HFA-227 (hydrofluoralkan-227) eller liknende. Drivmiddelet er fortrinnsvis et hydrofiuorkarbon. Det overflateaktive middel kan velges for å stabilisere nevnte i det minste ene anti-IL-6-antistoff som en suspensjon i drivmiddelet for å beskytte det aktive middel mot kjemisk nedbryting og liknende. Egnete overflateaktive midler inkluderer sorbitantrioleat, soyalecitin, oleinsyre eller liknende. I noen tilfeller foretrekkes oppløsningsaerosoler ved anvendelse av oppløsningsmidler slik som etanol. Ytterligere midler kjent innen teknikken for formulering av et protein, slik som et protein kan også inkluderes i formuleringen.
En fagperson innen teknikken vil lett forstå at fremgangsmåtene ifølge foreliggende oppfinnelse kan gjennomføres ved pulmonal administrasjon av minst én anti-IL-6-antistoffsammensetning via anordninger som ikke er beskrevet heri.
Orale formuleringer og administrasjon
Formuleringer for oral administrasjon baseres på koadministrasjon av adjuvanser (for eksempel resorcinoler og ikke-ioniske overflateaktive midler, slik som polyoksyetylenoleyleter og n-heksadecylpolyetyleneter) for på kunstig vis øke tarmveggenes permeabilitet, samt koadministrasjonen av enzymatiske inhibitorer (for eksempel pankreatiske trypsininhibitorer, diisopropylfluorfosfat (DFF) og trasylol) for å inhibere enzymatisk nedbryting. Den aktive bestanddels forbindelse i doseringsformen av faststofftypen for oral administrasjon kan blandes med minst en tilsetting, inkludert sukrose, laktose, cellulose, mannitol, trehalose, raffinose, maltitol, dekstran, stivelser, agar, arginater, kitiner, kitosaner, pektiner, tragantgummi, gummi arabikum, gelatin, kollagen, kasein, albumin, syntetisk eller halvsyntetisk polymer og glyserid. Disse doseringsformene kan også inneholde andre typer av tilsettinger, for eksempel inaktivt fortynningsmiddel, smøremiddel slik som magnesiumstearat, paraben, preserveirngsmiddel slik som sorbinsyre, askorbinsyre, a-tokoferol, antioksidasjonsmidler slik som cystein, desintegrator, bindemiddel, fortykningsmiddel, buffermiddel, søtningsmiddel, smaksmiddel, parfymemiddel, osv.
Tabletter og piller kan videre prosesseres til enterisk belagte preparater. De flytende preparatene for oral administrasjon inkluderer emulsjon, sirup, eliksir, suspensjon og oppløsningspreparater som er akseptable for medisinsk anvendelse. Disse preparatene kan inneholde inaktive fortynningsmidler som vanligvis benyttes på nevnte områder, for eksempel vann. Liposomer er også beskrevet som legemiddelavleveringssystemer for insulin og heparin (U.S. patent nr. 4 239 754). Mer nylig er mikrosfærer av kunstige polymerer av blandete aminosyrer (proteinoider) benyttet for avlevering av farmasøytika (U.S. patent nr. 4 925 673). Videre anvendes bærerforbindelser som beskrevet i U.S. patent nr. 5 879 681 og 5 871 753 for oral avlevering av biologisk aktive midler som er kjent innen teknikken.
Mukosaformuleringer og administrasjon
For absorpsjon gjennom mukosaoverflater inkluderer sammensetninger og fremgangsmåter for administrasjon av minst ett anti-IL-6-antistoff en emulsjon innbefattende et flertall submikrometerpartikler, et mukoadhesivt makromolekyl, et bioaktivt peptid, og en vandig kontinuerlig fase som fremmer absorpsjon gjennom mukosaoverflater ved oppnåelse av mukoadhesjon av emulsjonspartiklene (U.S. patent nr. 5 514 670). Mukøse overflater egnet for påføring av emulsjonene ifølge oppfinnelsen, kan inkludere korneale, konjunktivale, bukale, sublinguale, nasale, vaginale, pulmonale, mage-, intestinale- og rektale administrasjonsveier. Formuleringer for vaginal eller rektal administrasjon, for eksempel suppositorier, kan inneholde eksipienser, for eksempel polyalkylenglykoler, vaselin, kakaosmør og liknende. Formuleringer for intranasal administrasjon kan være faste og som eksipienser inneholde for eksempel laktose eller kan være vandige eller oljeholdige oppløsninger av nesedråper. For bukal administrasjon inkluderer eksipienser sukkere, kalsiumstearat, magnesiumstearat, pregelatinert stivelse og liknende (U.S. patent nr. 5 849 695).
Transdermale formuleringer og administrasjon
For transdermal administrasjon er minst ett anti-IL-6-antistoff innkapslet i en avleveringsanordning, slik som et liposom eller polymere nanopartikler, mikropartikkel, mikrokapsel eller mikrosfærer (kollektivt referert til som mikropartikler med mindre annet er angitt). Et antall egnete anordninger kjent, inkludert mikropartikler fremstilt fira syntetiske polymerer, slik som polyhydroksysyrer, slik som polymelkesyre, polyglykolsyre og kopolymerer derav, polyortoestere, polyanhydrider og polyfosfazener, og naturlige polymerer som kollagen, polyaminosyrer, albumin og andre proteiner, alginat og andre polysakkarider, og kombinasjoner derav (U.S. patent nr. 5 814 599).
Forlenget administrasjon og formuleringer
Det kan enkelte ganger være ønskelig å avlevere forbindelsene ifølge oppfinnelsen til individet over lengre tidsperioder, for eksempel i perioder på en uke til ett år fra en enkelt administrasjon. Forskjellige langsomt frigivende, depot- eller implantatdoseringsformer kan anvendes. En doseringsform kan for eksempel inneholde et farmasøytisk akseptabelt ikke-toksisk salt av forbindelsene som har en lav oppløsningsgrad i kroppsvæsker, for eksempel (a) et syreaddisjonssalt med en flerbasisk syre, slik som fosforsyre, svovelsyre, sitronsyre, vinsyre, garvesyre, pamoinsyre, alginsyre, polyglutaminsyre, naftalen mono- eller -disulfonsyrer, polygalakturonsyre og liknende; (b) et salt med et flerverdig metallkation slik som sink, kalsium, vismut, barium, magnesium, aluminium, kobber, kobolt, nikkel, kadmium og liknende, med et organisk kation dannet fra for eksempel N,N'-dibenzyletylendiamin eller etylendiamin; eller (c) kombinasjoner av (a) og (b), for eksempel et sinktannatsalt. Videre kan forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse eller fortrinnsvis et relativt uoppløselig salt av slike som nettopp beskrevet, formuleres i en gel, for eksempel en aluminiummonostearatgel med for eksempel sesamolje, egnet for injeksjon. Særlig foretrukne salter er sinksalter, sinktannatsalter, pamoatsalter og liknende. En annen type av en depotformulering med langsom frigivningsvirkning for injeksjon vil inneholde forbindelsen eller saltet dispergert for innkapsling i en langsom nedbrytende, ikke-toksisk, ikke-antigenpolymer, slik som en polymelkesyre/glykolsyrepolymer, for eksempel som beskrevet i U.S. patent nr. 3 773 919. Forbindelsene eller fortrinnsvis relativt uoppløselige salter av slike som de som er beskrevet ovenfor, kan også formuleres i kolesterolsilastik-matrikspellets, spesielt for anvendelse i dyr. Langsomt frigivende, depot- eller implantatformuleringer, for eksempel gass- eller væskeliposomer er dessuten kjent i litteraturen (U.S. patent nr. 5 770 222 og "Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems", J. R. Robinson, red., Marcel Dekker, Inc.,N. Y., 1978).
Kloning og ekspresjon av IL-6-antistoff i pattedyrceller
En typisk pattedyrekspresjonsvektor inneholder minst ett promoterelement som medierer initiering av transkripsjon av mRNA, antistoffkodingssekvensen, og signaler som skal til for terminering av transkripsjon og polyadenyleringen av transkriptet. Ytterligere elementer inkluderer forsterkere, Kozak-sekvenser og intervenerende sekvenser flankert av donor- og akseptorseter for RNA-spleising. Høyeffektiv transkripsjon kan oppnås med tidlig- og sen-promotorene fra SV40, de lange terminalgjentakelsene (LTRS) fra retrovirus, for eksempel RSV, HTL VI, HIVI og tidligpromoter til cytomegalovirus (CMV). Cellulære elementer kan imidlertid også anvendes (for eksempel den humane aktinpromoteren). Egnete ekspresjonsvektorer for anvendelse ved utførelse av foreliggende oppfinnelse inkluderer for eksempel vektorer som pIRESlneo, pRetroOff, pRetro-On, PLXSN, eller pLNCX (Clontech Labs, Palo Alto, CA), pcDNA3.1 (+/-), pcDNA/Zeo (+/-) eller pcDNA3.1/Hygro (+/-) (Invitrogen), PSVL og PMSG (Pharmacia, Uppsala, Sweden), pRSVcat (ATCC 37152), pSV2dhfr (ATCC 37146) og pBC12MI (ATCC 67109). Pattedyrvertsceller som kan benyttes inkluderer humane Hela 293, H9 og Jurkatceller, mus NIH3T3 og C127-celler, Cos 1, Cos 7 og CV 1, vaktel QC1-3 celler, mus-L-celler og kinesiske hamsterovarie (CHO) celler.
Genet kan alternativt uttrykkes i stabile cellelinjer som inneholder gen integrert i et kromosom. Kotransfeksjon med en valgbar markør, slik som dhfr, gpt, neomycin eller hygromycin gir anledning til identifikasjon og isolering av de transfekterte celler.
Det transfekterte gen kan også amplifiseres for å uttrykke store mengder av det kodete antistoffet. DHFR (dihydrofolatreduktase) markøren er nyttig for å utvikle cellelinjer som bærer flere hundre eller endog flere tusen kopier av genet av interesse. En annen nyttig valgbar markør er enzymet glutaminsyntase (GS) (Murphy, et al., Biochem. J. 227:277-279 (1991); Bebbington et al, Bio/Technology 10:169-175 (1992)). Ved anvendelse av disse markører dyrkes pattedyrceller i selektivt medium og cellene med den høyeste resistens velges. Disse cellelinjene inneholder det amplifiserte gen(er) integrert i et kromosom. Kinesisk hamsterovarie (CHO) og NSO-celler benyttes ofte for produksjon av antistoffer.
Ekspresjonsvektorene pCl og pC4 inneholder den sterke promoteren (LTR) til Rous sarkomvirus (Cullen et al., Molec. Cell. Biol. 5:438-447 (1985)) pluss et fragment av CMV-forsterkeren (Boshart et al., Cell 41:521-530 (1985)). Et flertall kloningsseter, for eksempel med restriksjonsenzymspaltingssetene BamBI, Xbal og Asp718, letter kloningen av genet av interesse. Vektorene inneholder i tillegg 3'-intronett, polyadenylerings- og termineringssignalet til rotte-preproinsulingenet.
Kloning og ekspresjon i CHO-celler
Vektoren pC4 anvendes for ekspresjon av IL-6-antistoff. Plasmid pC4 er et derivat av plasmidet pSV2-dhfr (ATCC aksesjonsnr. 37146). Plasmidet inneholder muse DHFR genet under styring av SV40 tidligpromoteren. Kinesisk hamsterovarie- eller andre celler som mangler dihydrofolataktivitet som transfekteres med disse plasmider, kan velges ved dyrking av cellene i et selektivt medium (for eksempel alfa minus MEM, Life Technologies, Gaithersburg, MD) supplert med det kjemoterapeutiske midlet metotrexat. Amplifisering av DHFR-genene i celler resistente mot metotrexat (MTX), er vel dokumentert (se for eksempel F. W. Alt et al, J. Biol. Chem. 253:1357-1370
(1978); J. L. Hamlin og C. Ma, Biochem. et Biophys. Acta 1097:107-143 (1990); og M. J. Page og M. A. Sydenham, Biotechnology 9:64-68 (1991)). Celler dyrket i økende konsentrasjoner av MTX utvikler resistens mot legemiddelet ved overproduksjon av målenzymet, DHFR, som et resultat av amplifisering av DHFR-genet. Dersom et annet gen er bundet til DHFR-genet, blir det vanligvis koamplifisert og overuttrykt. Det er kjent innen teknikken at denne metoden kan benyttes for å uttrykke cellelinjer som bærer mer enn 1000 kopier av det amplifiserte gen(ene). Deretter, når metotrexatet er fjernet, oppnås cellelinjer inneholdende det amplifiserte gen integrert i ett eller flere kromosomer i vertscellen.
Plasmid pC4 inneholder for ekspresjon av genet av interesse den sterke promoteren til den lange terminalgjentakelsen (LTR) til Rous sarkomvirus (Cullen et al., Molec. Cell. Biol. 5:438-447 (1985)), pluss et fragment isolert fra forsterkeren til det umiddelbare, tidliggenet hos human cytomegalovirus (CMV) (Boshart et al., Cell 41:521-530
(1985)). Nedstrøms for promoteren er BamHl, Xbal og Asp718 restriksjonsenzymspaltingsseter, som gir anledning til integrasjon av genene. Bak disse kloningssetene inneholder plasmidet 3'-intronet og polyadenyleringssetet i rotte-preproinsulingenet. Andre høyeffektive promotere kan også anvendes for ekspresjon, for eksempel den humane b-aktinpromoteren, SV40 tidlig- eller senpromotere eller de lange terminale gjentakelsene fra andre retrovirus, for eksempel HIV og HTLVI. Clontech's Tet-Off og Tet-On genekspresjonssystemer og liknende systemer kan anvendes for å uttrykke IL-6 på en regulert måte i pattedyrceller (M. Gossen og H. Bujard, Proe. Nati. Acad. Sei. USA 89:5547-5551 (1991)). For polyadenylering av mRNA kan andre signaler, for eksempel fra det humane veksthormonet eller globingener også benyttes. Stabile cellelinjer som bærer et gen av interesse integrert i kromosomene kan også velges ved kotransfeksjon med en valgbar markør, slik som gpt, G418 eller hygromycin. Det er fordelaktig å benytte mer enn én valgbar markør i begynnelsen, for eksempel G418 pluss metotrexat.
Plasmid pC4 oppløses med restriksjonsenzymer og blir deretter defosforylert ved anvendelse av intestinal fosfatase fra kalv ved prosedyrer kjent innen teknikken. Vektoren isoleres deretter fra en 1 % agarosegél.
DNA-sekvensen som koder det komplette IL-6-antistoffet anvendes, for eksempel slik det fremgår i SEKV. ID nr. 7 og 8, tilsvarende HC og LC i variable regioner i et IL-6-antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse, ifølge kjente fremgangsmåtetrinn. Isolert nukleinsyre som koder en egnet human, konstant region (dvs. HC og LC regioner) anvendes også i dette konstrukt.
Den isolerte, variable og konstante region som koder DNA og den defosforylerte vektor, blir deretter ligert med T4 DNA ligase. E. coli HB 101 eller XL-1 blå celler transformeres deretter og det identifiseres bakterier inneholdende fragmentet innsatt i plasmid pC4 ved anvendelse av for eksempel restriksjonsenzymanalyse.
Kinesisk hamsterovarie (CHO) celler som mangler et aktivt DHFR-gen anvendes for transfeksjon. 5 ng av ekspresjonsplasmidet pC4 kotransfekteres med 0,5 ng av plasmid pSV2-neo ved anvendelse av lipofektin. Plasmid pSV2neo inneholder en dominant, selekterbar markør noegenet fra Tn5 som koder et enzym som gir resistens til en gruppe av antibiotika, inkludert G418. Cellene kimsettes i alfa minus MEM supplert med 1 fig/ml G418. Etter to dager blir cellene trypsinert og kimsatt i hybridomkloningsplater (Greiner, Tyskland) i alfa minus MEM supplert med 10, 25 eller 50 ng/ml metotrexat pluss 1 fig/ml G418. Etter ca. 10-14 dager blir enkeltkloner trypsinert og deretter kimsatt i 6-brønners petriskåler eller 10 ml kolber, ved anvendelse av forskjellige konsentrasjoner av metotrexat (50 nM, 100 nM, 200 nM, 400 nM,
800 nM). Kloner som vokser ved de høyeste konsentrasjoner av metotrexat blir så overført til nye 6-brønners plater inneholdende enda høyere konsentrasjoner av metotrexat (1 nM, 2 nM, 5 nM, 10 nM, 20 nM). Den samme prosedyren gjentas inntil det er oppnådd kloner som vokser ved en konsentrasjon på 100-200 mM. Ekspresjon av det ønskete genproduktet analyseres, for eksempel ved anvendelse av SDS-PAGE og western blot eller ved reversfase HPLC-analyse.
Forkortelser
BSA bovint serumalbumin
EIA enzym immunanalyse
FBS føtalt bovinserum
H2O2hydrogenperoksid
HRP pepperrot peroksidase
lg immunglobulin
IL-6 interleukin-6
IP intraperitoneal
IV intravenøs
Mab monoklonalt antistoff
OD optisk tetthet
OPD o-fenylendiamindihydrokorid
PEG polyetylenglykol
PSA penicillin, streptomycin, amfotericin
RT romtemperatur
SQ subkutan
v/v volum pr. volum
w/v vekt pr. volum
EKSEMPEL 1. Utvikling av murint CLB8-Mab
Immunisering
Hybridomet som gir opphav til det murine CLB-IL6-8 antistoff ble avledet fra en fusjon utført i et laboratorium til Dr. Lucien Aarden, Central Laboratory of the Netherlands Red Cross Transfusion Service (CLB) som rapportert (Brackenhoff et al., J. Immunol.
(1990) 145:561-568).
Åtte uker gamle Balb/c hunnmus oppnådd fra CLB's spesifiserte patogenfrie foredlingsforråd ble immunisert intramuskulært (IM) med 10 fig renset, rekombinant interleukin-6 (rIL-6) (CLB) emulgert i Freunds fullstendige adjuvans. Tre etterfølgende IM-injeksjoner med 10 ng hver av rIL-6 i Freunds ufullstendige adjuvans ble utført ved intervaller på 4-8 uker.
Cellefusjon
Fire dager etter den siste IM-forsterkete injeksjonen, ble en mus avlivet; milten ble fjernet og findelt. En enkelt cellesuspensjon ble oppnådd i Earle's balanserte saltoppløsning ved omgivelsestemperatur. Cellene ble vasket og telt. En fusjon ble utført ved et 1:3 forhold av levedyktige miltceller til murine myelomceller (SP2/0-Agl4) i nærvær av 42 % (w/v) polyetylenglykol i Iscove's modifiserte Dulbeccos medium (IMDM). Ikke-Ig-utskillende fusjonspartner SP2/0 ble etablert fra en cellebank holdt ved CLB. Etter fusjon ble cellene resuspendert i MDM, supplert med 5 % føtalt bovinserum, 50 uM penicillin/streptomycin, 5 x 10"<5>M 2-merkaptoetanol (2-ME) og HAT (6 x IO"<4>M hypoxantin, 6,5 x IO"<7>M aminopterin, 6,4 x 10"<5>M tymidin.). Proliferasjonen av disse hybridomene umiddelbart etter fusjon er avhengig av IL-6, derfor ble 100 U/ml renset murint IL-6 (Van Smick, Brussel) tilsatt til seleksjonsmediet. De fusjonerte cellene ble deretter fordelt i 96-brønners plater ved 1 x 10<5>celler/100 mikroL brønn.
Primær karakterisering av murine anti- IL- 6- hybridomer
Anti-IL-6 utskillende hybrider ble valgt ved anvendelse av enzymbundet immunosorberende analyse (ELISA) og radioimmunanalyse (RIA) (Brackenhoff et al.,
(1990) 145:561-568). En fastfase ELISA ble anvendt for screening av monoklonale antistoffer spesifikke for humant IL-6. Renset rIL-6 (0,5 ug/ml) ble belagt overnatten
ved romtemperatur i fosfatbufret saltoppløsning (PBS) på flatbunnete plater (Dynatech), 100 ul/brønn. Platene ble vasket med PBS, 0,02 % (v/v) Tween 20 (PBS/Tween) og ble inkubert med 1:2 fortynninger av kultursupernatanter i PBS/Tween supplert med 0,2 %
gelatin (PTG) i 2 timer ved omgivelsestemperatur. Etter vasking ble platene inkubert med pepperrotperoksidasekonjugert monoklonal rotte-antimus kappa lettkjede 226 (Einstein University, NY) i PTG (2 ug/ml) i en time. Platene ble vasket og den bundne peroksidasen ble påvist med 100 ul/brønn av 3,5,3,5-tetrametylbenzidin/0,003 % hydrogenperoksid i 0,1-M natriumacetat, pH 5,5. Fargereaksjonen ble stoppet med 2M H2SO4og platene ble avlest ved 450 nM på en Titertek, Multiscan-leser. Brønnene som ga positiv optisk tetthet (OD) ble valgt.
En fastfase RIA ble også anvendt for screening av anti-IL-6 hybridomer. Geit antimurine Ig-antistoffer ble tilkoblet cyanogenbromidaktivert sefarose CL-4B (Pharmacia). Sefarosen ble vasket og resuspendert ved 10 mg/ml i PBS, 0,1 % Tween 20, 0,1 % natriumazid. Hybridomsupernatanter ble tilsatt til sefarosekuler i nærvær av ca. 20000 tellinger/minutt av<125>iod-rIL-6 (CLB) i 6 timer under konstant blanding. Kulene ble omfattende vasket i PBS/Tween og tellet i en gammateller. Brønnene som ga de høyest spesifikke aktiviteter ble valgt.
Hybridomer som var positive i begge analysesystemene ble etablert og subklonet 2 ganger ved begrensende fortynninger i IMDM supplert med 2 x 10"<5>M 2-ME og 5 % FBS (fullstendig IMDM). Den IL-6 uavhengige subklonen CLB-IL6-8 ble valgt og opprettholdt i fullstendig IMDM. Lagerkulturer testet negativt for mykoplasma ved anvendelse av en indirekte Hoescht farge etter fire dager i kultur på Vero76-målceller. Iso-typebestemmelse av supernatant via Innogenetics Line ImmunoAssay (INNO-LIA) mus monoklonalt antistoff isotype-sett ga en enkelt murin isotype IgGikappa. Denne isotypebestemmelse ble bekreftet ved anvendelse av en oppfangings-EIA.
Den murine hybridom og cellelinje ble således produsert, CLBIL-6/8 ble betegnet CLB8. Den ble kimerisert og ytterligerekarakterisertsom beskrevet nedenfor.
EKSEMPEL 2. Kimerisering og sekvensering
Kloning og ekspresjon av de cCLB8 variable regiongener
Genomisk DNA ble isolert fra den murine hybridom Cl43A som utskiller et murint, monoklonalt antistoff spesifikt for humant IL-6.
For lettkjeden ble DNA nedbrutt med restriksjonsendonuklease HindlW og utsatt for elektroforese gjennom en 0,8 % agarosegel. Den delen av gelen inneholdende DNA-fragmenter av en lengde på ca. 3,4 Kb ble utskåret og nevnte DNA ble eluert. Fragmentene ble ligert inn i vektor8charon27, og pakket i bakteriofagpartikler. For tungkjeden ble DNA nedbrutt med restriksjonsendonuklease EcoKL og utsatt for elektroforese gjennom en 0,8 % agarosegel. Den delen av gelen inneholdende DNA-fragmenter av en lengde på ca. 3,6 Kb ble utskåret, og nevnte DNA ble eluert. Fragmentene ble ligert inn i vektor8gtl0, og pakket i bakteriofagpartikler.
Både tung- og lettkjedebakteriofagbibliotek ble utstrøket på E. coli og dyrket over natten. Plakkene ble overført til nitrocellulosefiltre, og undersøkt med<32>P-merkete DNA-fragmenter tilsvarende murint JK(lettkjede) eller murint Jhsekvenser. Positive plakk ble identifisert og plakkrenset. Phag-DNA ble isolert, og HindUl (lettkjede) eller EcoRl (tungkjede) -innskudd ble isolert og klonet inn i
immunglobulinekspresjonsvektorer.
Tung- og lettkjedeekspresjonsplasmider ble anvendt for kotransfeksjon av SP2/0-celler, og mykofenolsyrevalg ble utført. Individuelle kloner som produserte primært antistoff ble identifisert og subklonet for å sikre monoklonalitet og for å utvikle høyere produsenter.
Antistoff renset fra individuelle cellelinjer, ble testet for nøytraliseringsevne i en IL-6-avhengig B9-celleproliferasjonsanalyse. Antistoffet er referert til som kimært CLB8 eller cCLB8 gjennom hele denne foreliggende beskrivelsen.
EKSEMPEL 3. Måling av binding av cCLB8 til humant IL-6 ved fastfase-EIA
En fastfase-EIA ble anvendt for å bestemme bindingsegenskaper for cCLB8 Mab til humant IL-6.1 korthet ble plater belagt med rekombinant, humant IL-6 (RDI) ve 1Hg/ml i PBS over natten ved 4 °C. Etter vasking i 0,15 M saltoppløsning inneholdende 0,02 % (v/v) Tween 20, ble brønnene blokkert med 1 % (w/v) BSA i PBS, 200 ul/brønn i en time ved romtemperatur. Renset antistoff ble inkubert i togangers seriefortynninger fra en startkonsentrasjon på 5 ug/ml i en time ve 37 °C. Platen ble vasket og deretter undersøkt med 50 ul/brønn HRP-merket geit anti-humant IgG (Tago) fortynnet 1:20000 i 1 % BSA-PBS i en time ved romtemperatur. Platen ble pånytt vasket og 100 ul/brønn av sitrat-fosfatsubstratoppløsningen (0,1 M sitronsyre og 0,2 M natriumfosfat, 0,01 % H2O2 og 1 mg/ml OPD) ble tilsatt i 15 minutter ved romtemperatur. Stoppoppløsning (4 N svovelsyre) ble deretter tilsatt ved 25fil/brønn og absorpsjonen ved 490 nm kvantifisert ved anvendelse av et automatisert platefotometer. Figur 1 viser cCLB8 binding til IL-6 målt som OD 490 nm, og viser at cCLB8 binder til rekombinant, humant IL-6 på en konsentrasjonsavhengig måte.
EKSEMPEL 4. In vitro nøytraliseringsanalyser
Blokkering av IL- 6 med cCLB8 inhiberer sekresjon av IgMog MCP- 1
Det kimære, monoklonale antistoffet cCLB8 ble bestemt i to enkle bioanalyseformater for bestemmelse av dets nøytraliserende bioaktivitet på IL6-indusert sekresjon av humant IgM og kjemokinet MCP-1. To humane cellelinjer ble anvendt i disse studier. SKW6.4-cellelinjen ble opprinnelig avledet fra et EBV-transformert Burkitts B-cellelymfom og sekreter oppløselige i IgM i respons til IL6. U937-cellelinjen er monoblastisk, utsatt for monocyttdifferensiering og ble opprinnelig isolert fra en pasient med diffus histiocytisk lymfom. U937-celler utskiller MCP-1 i respons på IL6. cCLB8-inhibering av disse spesielle bioaktivitetene ble evaluert siden de lett kunne overvåkes ved anvendelse av et EIA-format. Før analyse ble cellene underernært på serum over natten, og deretter dyrket dagen etter alene med IL6 eller med IL6 preinkubert med forskjellige konsentrasjoner av antistoff eller et negativt kontrollantistoff. Ved slutten av en 72-timers inkubering ble supernatanter oppsamlet og benyttet i IgM-spesifikke og MCP-1 spesifikke EIA. Resultatene som er angitt i figur 2 og 3 viser at cCLB8 i signifikant grad inhiberer IL6-mediert sekresjon av IgM og MCP-1 in vitro.
I forsøket representert ved figur 2, ble EIA-plater belagt med geite-antihumant IgM Fc5u fragmentspesifikt i 10 mM karbonatbuffer, pH 9,6 over natten ved 4 °C. Plater ble vasket med 0,15 M saltoppløsning med 0,02 % v/v Tween 20 og blokkert med PBS/1 % w/v BSA i en time. Cellekultursupernatant ble tilsatt ved 2 gangers seriefortynninger. Etter inkubasjon og etter vasking med 0,02 % Tween, 0,15 M saltoppløsning, ble platen undersøkt med HRP-merket geite-antihumant IgMu-kjedespesifikt. OPD-substrat ble deretter tilsatt og etter fargeutvikling ble OD avlest ved 490 nm. Dataene indikerer at cCLB8, men ikke den isotypetilpasset negative kontroll cK931, inhiberer IgM mu-sekresjon.
I forsøket representert ved figur 3, ble EIA-plater belagt med geite-antihumant MCP-1 i 10 mM karbonatbuffer, pH 9,6 over natten ved 4 °C. Plater ble vasket med 0,15 M saltoppløsning med 0,02 % v/v Tween 20 og blokkert med PBD/1 % w/v BSA i en time. Cellekultursupematant ble tilsatt ved 2 gangers seriefortynninger. Etter en totimers inkubasjon og etter vaskinger med 0,02 % Tween, 0,15 M saltoppløsning, ble platen undersøkt med biotinylert antihumant MCP-1 ifølge produsentens anvisninger. Plater ble vasket på nytt og HRP-merket streptavidin ble tilsatt i en time. Fargeutvikling ble foretatt med TMB-substrat. OD avlest ved 450. Dataene indikerer at cCLB8, men ikke cK931, inhiberer IL-6 mediert MCP-1 produksjon.
Nøytralisering av IL6- mediert fosforylering av STAT3
IL6-reseptoren består av en 80 Kdbindingsunderenhet, IL6Ra og signaltransduksjonsunderenheten, gpl30. IL6 binder til IL6Ra subenheten og initierer assosieringen av IL6Ra og gpl30, som resulterer i en høyaffinitetsreseptor og signaltransduksjon. IL6Ra eksisterer også i en oppløselig form. IL6 kan binde til oppløselig IL6R (sIL6R) og komplekset kan påvirke celler som uttrykker gpl30. Det er vist at IL6 aktiverer STAT3. En human, akutt monocyttisk leukemicellelinje, THP-1, ble anvendt for å vise inhibering avSTAT3-fosforylering med cCLB8-celler. Celler ble stimulert med (IL6 + sIL6R) +/- cCLB8 eller irrelevante antistoff (K931) som en negativ kontroll. Cellelysater ble immunutfelt med anti-STAT3, prøver oppløst på 7,5 % SDS-PAGE og overført til Hybond-P membran, fulgt av western blotting ved anvendelse av anti-fosfotyrosin-HRP. ECLplus ble anvendt for påvisning.
Dataene som er angitt i figur 4 viser at cCLB8 kan inhibere fosforylering av STAT3 når den a) får anledning til å bindes til rhIL6 før tilsetting av sIL6R, b) får anledning til å bindes til sIL6R før tilsetting av rhIL6, eller c) når rhIL6 får anledning til å bindes til sIL6R før tilsetting av cCLB8 og celler. THP-1- celler ble inkubert i medium uten serum i 16 timer, skrapet fra kolber og resuspendert i 0,5 ml mediefelter 2-6, IL6 inkubert +/- antistoff i 15 minutter, deretter ble IL6R tilsatt og inkubert i 15 minutter. Celler ble tilsatt og ytterligere inkubert i 15 minutter. Felt 7, IL6, ble inkubert med sIL6R i 15 minutter, deretter ble CLB-IL6 tilsatt og inkubert i 15 minutter. Celler ble tilsatt og inkubert i ytterligere 15 minutter. Prøver ble immunutfelt med anti-STAT3 (1 ug/ml), resuspendert i Laemmli prøvebuffer og resolvert på 7,5 % SDS-PAGE og overført til Hybond-P. Membran ble inkubert med anti-fosfotyrosin-HRP.
cCLB8 inhiberer serumamyloid- A produksjon
IL-ip er en potent induser av serumamyloid-A (SAA) produksjon fra HepG2 humane hepatomceller i nærvær av humant IL-6 (Smith og McDonald, Clin. Exp. Immunol. 90:293-9 (1992)). cCLB8 Mab ble derfor analysert med henblikk på evne til å inhibere IL-ip/IL-6 indusert SAA-produksjon fra disse cellene. I korthet ble HepG2-celler kimsatt ved 2,25 x 10<5>/brønn i 24 timer. IL-6 (100 ng/ml, RDI) og IL-6sR (200 ng/ml, S & D) ble preinkubert i 30 minutter, og blandet med IL-lp" (1 ng/ml, R & D). Nevnte cCLB8 Mab og en negativ isotypekontroll Mab (cSF25) ble seriefortynnet og deretter preinkubert med ovennevnte blanding i ytterligere 30 minutter.
For de eksperimentelle resultatene som er vist i figur 5, ble seriefortynninger av cCLB8 eller cSF25 (en isotypetilpasset irrelevant Mab) preinkubert med IL-6sR og IL-ip og deretter dyrket med HepG2-celler i 24 timer. Cellesupernatant ble deretter analysert for serumamyloid-A produksjonsnivåer ved anvendelse av ELISA. (Human SAA ELISA-sett, Biosource, utført ifølge produsentens instruksjoner). Feilstolper indikerer SEM til duplikatprøver. Dataene i figur 5 indikerer at cCLB8 var i stand til å inhibere IL-lp7IL-6 indusert SAA-produksjon fra HepG2-celler på en doseavhengig måte.
Inhibering av IL- 6 indusert celleproliferosjon med cCLB8 Mab
Den murine B-myelomcellelinje 7TD1, induseres til å proliferere i nærvær av IL-6. For å vise evnen til cCLB8 Mab med henblikk på å nøytralisere aktiviteten til IL-6, ble cellene inkubert ved 37 °C i 72 timer i IMDM inneholdende 10 % FBS og 0,5 ng/ml rekombinant, humant IL-6 (R & D Systems), og med seriefortynninger av cCLB8 Mab eller negativ kontroll Mab 17-IA. Celleproliferasjon ble målt ved en luminescens ATP-analyse (ATPLite, Packard Bioscience) som korrelerer direkte med celleantall.
Dataene vist i figur 6 viser at IL-6 på dramatisk måte stimulerer proliferasjon av 7TD1-celler og cCLB8 inhiberte denne celleproliferasjonen på en konsentrasjonsavhengig måte med en EC50på 7,2 ng/ml. Feilstolper indikerer SEM til duplikatprøver.<*>representerer proliferasjon av celler i fravær av rIL-6.
EKSEMPEL 5. Epitop kartlegging
Epitopene til flere nøytraliserende anti-IL-6 Mabs inkludert CLB8 har vært kjennetegnet ved anvendelse av antistoffbinding til humane IL-6 mutante proteiner som beskrevet i (Brakenhoff, J. et al., (1990) J. Immunology 145:561-568). Amino- og karboksylterminale delesjonsmutanter ble fremstilt og panelet av antistoffer til IL-6 ble analysert ved antistoffkonkurranseforsøk. På basis av konkurransestudiene ble de nøytraliserende Mab inndelt i to grupper (I og II). Ved denne fremgangsmåten blir rester som er inkludert i epitopen til en gitt Mab avtegnet ved sin mangel på å gjenkjenne det antigeniske proteinets tilsvarende setespesifikke enkelt-aminosyresubstitusjonsvarianter. CLB-IL-6/8 ble kartlagt til sete I på det humane IL-6 molekylet som består av aminosyrene Gln29-Leu34 i umiddelbar nærhet av molekylets karboksylterminus. Ytterligere studier (Kalai, M. et al., Eur. J. Biochem. 249:690-700
(1997)), viste at CLB.IL-6/8 gjenkjente aminosyreresidier som er avgjørende for binding av IL-6 til IL-6R (gp80). Disse studier viste også at dets epitop dekker endene til både AB-løkkeregionene og D-helixregionene til IL-6 molekylet.
EKSEMPEL 6. In vivo -karakterisering
Behandling med anti- humant IL- 6 ( cCLB8) og anti- muse IL- 6 mus Mab forsinker kreftkakeksi
Humane melanomceller (A375S2) ble inokkulert i nakne hunnmus og Mab-terapi startet den samme dag. Antistoffer ble injisert intraperitonealt ved en dose på 10 mg/kg (2 ganger ukentlig) og C57 (anti-CMV) ble anvendt som en kontroll-mAb. Kombinasjon av cCLB8 (anti-humant IL-6) og MP520F3 (Mab til mus IL-6, R & D Systems) ble anvendt for å skape en kombinert blokade som i betydelig grad inhiberte vekttap av human melanom tumorbærende dyr, sammenliknet med kontrollantistoff C57-behandlete dyr (figur 7). Antistoffterapi hadde ingen effekt på tumorvekst eller endelig tumorvekt. Disse funn viser at IL6 deltar i tumorindusert dyrevekttap, og blokade av IL-6 kan forsinke kreftkakeksi i denne modellen.
Figur 7. Kombinert blokade av human og muse-IL-6 (anti-IL6 mAbs cCLB8 og MP520F3) resulterer i betydelig inhibering av dyrevekttap. Korrigert dyrevekttap på Y-aksen er (dyrevekt-tumorvekt ved slutten av studiet) minus dyrevekt ved studiestart. Hver stolpe er datagjennomsnittet fra minst 14 dyr/gruppe og feilstolper indikerer standard avvik. En to-halet T-testanalyse indikerte at ant-IL-6-gruppen i betydelig grad inhiberte kroppsvekttap med p=0,007.
EKSEMPEL 7. Affinitets målinger
BIAcore 2000, Sensor Chip CM-5 (gulloverflate på brikke dekket med en karboksymetylert dekstranmatriks), HBS (10 mM HEPES med 0,15 M NaCl, 3,4 mM EDTA, og 0,05 % overflateaktivt middel P20 ved pH 7,4), aminkoblingsreagenser (N-hydroksysuksinimid (NHS), N-etyl-N'-(3-metylaminopropyl)-karbodiimid (EDC) og 1 M etanolamin HC1) ble oppnådd fra BIAcore og fremstilt ifølge produsentens instruksjoner. Anti-humant Fc (Jackson AffiniPure Goat antihuman IgG, Fen, Cat# 109-005-098, Lot#48646) ble innkjøpt fra Jackson ImmunoResearch.
Kimært CLB8 (Lot# PD1F03) IgG monoklonalt antistoff i 5 ml 0,15 M natriumklorid, 0,01 M natriumfosfat, pH 7,2, ble fremstilt av Centocor. Rekombinant humant IL-6 (Lot# Al 197111) ble innkjøpt fra R & D Systems.
Et antihumant Fc (1,8 mg/ml) ble fortynnet til en konsentrasjon på 50 ng/ml i NaOAc-buffer (10 mM, pH 4,8) og tilkobles den karboksymetylerte dekstranmatriks til en CM-5-sensorbrikke ved anvendelse av produsentens aminkoblingskjemi, som beskrevet i BIAcore Systems håndbok. Ved anvendelse av overflatepreparerings-"wizard", som er beregnet på 10000 RU, ble karboksylgruppene på sensoroverfiaten først aktivert med NHS/EDC etterfulgt av tilsetting av det antihumane Fc. De gjenværende aktiverte grupper ble blokkert ved injeksjon av 1 M etanolamin. Hver av strømningscellene ble tilkoblet individuelt. Ved anvendelse av disse betingelsene ble de fire strømningscelleoverflatene, inneholdende 7554-9571 resonansenheter (RU) av antihumant Fc, fremstilt. I preliminære forsøk ble det bestemt at tre injeksjoner (15 ul ved 30fil/min) av 100 mM H3PO4/0,05 % CHAPS på effektiv måte ville fjerne det bundne immunglobulin og bevare bindingskapasiteten til det immobiliserte antihumane Fc.
To forsøk ble utført på BIAcore 2000 ved 25 °C og en strømningsrate på 30 ul/minutt. cCLB8 ble oppløst i HBS ved 5 ng/ml. Analytten IL-6, ble oppløst i HBS ved 0,25, 0,125, 0,062,0,031 og 0,015 ng/ml. En bestemt mengde antistoff overstrømmet dets respektive strømningscelle etterfulgt av injeksjoner av 30 ni av hver IL-6 konsentrasjon ved 30 nl/minutt (assosiasjonsfase) og en uavbrutt 800 sekunders bufferstrøm (dissosiasjonsfase). Brikkens overflate ble regenerert ved tre sekvensielle injeksjoner, hver på 15 ni med 100 mM H3PO4/0,05 % CHAPS. Injeksjonene av HBS tjener som en referanse (kontrollsensogram) for subtraksjonen av bulkbrytingsindekser for analyse. Ved anvendelse av 1:1 modellen i BIA-analyse 3,0 ble det foretatt en lokal tilpasning for både dissosiasjon (kd, [s-1] og assosiasjon (ka, [M-ls-1]) og dissosiasjonskonstanten (KD, [M]) beregnet (kd/ka).
Analyse ble foretatt ved anvendelse av BIAevaluation versjon 3,0. Kinetiske konstanter ble avledet fra sensogramdata ved tilpasning av de eksperimentelle kurvene til hastighetslikningene avledet fra modeller av interaksjonsmekanismen. Ved anvendelse av en global analyse ved anvendelse av 1:1 bindingsmodell med lokal RUmax tilpasning, ble ka, kd og KDbestemt (tabell 1).
EKSEMPEL 8. Anti-idiotypeantistoffer
Utvikling av effektive analysesystemer (immunohistokjemi og serumpåvisning) for cCLB8 krever anvendelse av anti-idiotypiske antistoffer. Balb/c-mus immuniseres derfor med cCLB8 for å danne anti-idiotypiske antistoffer til cCLB8 som kan anvendes som farmakokinetiske prober i serumpåvisning og i immunohistokjemiske analyser.
Immunisering
Fem Balb/c-mus (Charles River Laboratories), med alder på 6-7 uker ble immunisert over en 12 ukers periode med cCLB8 (Centoco5, PD1F03), gitt ved 50 ng IP og 25 ng SC. Hver mus mottok IP- og SC-injeksjoner. Injeksjonene foregikk ved 2-ukers intervaller gjennom hele immuniseirngskuren. Injeksjonsmaterialet administrert IP ble emulgert med et likt volum av Freunds adjuvans (Sigma). Den første IP-injeksjonen benyttet Freunds fullstendige adjuvans i et totalvolum på 200 ul. Etterfølgende IP-injeksjoner inneholdt Freunds ufullstendige adjuvans. Injeksjonsmaterialet administrert SC ble fortynnet i PBS og fordelt mellom to injeksjonsseter ved 100 nl/sete. Musene ble blodtappet på dag 0,21,47 og 77. Innsamling av blod ble foretatt på bedøvete mus ved retroorbital punktur, og serum ble innsamlet for titerbestemmelse ved anvendelse av cCLB8 fastfase-EIA. Tre uker etter immuniseringsprotokollens slutt, mottok mus nr. 1 en siste IV-forsterkerinjeksjon på 100 ng cCLB8 fortynnet i 125 ni PBS (2).
Påvisning av muse-IgG anti-cCLB8-antistoffer i Museserum
Fastfase EIA ble anvendt for å undersøke museserum for antistoffer som var spesifikke for cCLB8.1 korthet ble plater (Costar, 9018) belagt med cCLB8 ved 10 ng/ml i PBS over natten. Etter vasking i 0,15 M saltoppløsning inneholdende 0,02 % (w/v) Tween 20, ble brønnene blokkert med 1 % (w/v) BSA i PBS i en time ved romtemperatur. Plater ble frosset ved -20 °C for fremtidig bruk. Museserumfortynninger ved 50 nl/brønn ble inkubert på cCLB8-belagte plater i 30 minutter ved romtemperatur. Plater ble vasket og deretter undersøkt ved romtemperatur i 30 minutter med 50 nl/brønn HRP-merket geite antimuse IgG Fc (Sigma) fortynnet 1:20000 i PBS/1 % BSA. Plater ble igjen vasket, deretter inkubert i 15 minutter ved romtemperatur med 50 ul/brønn sitrat-fosfatsubstratoppløsning (0,1 M sitronsyre og 0,2 M natriumfosfat,
0,01 % H202, og 1 mg/ml OPD). Substratutvikling ble stoppet ved tilsetting av 4 N svovelsyre ved 50 nl/brønn og de optiske tettheter (OD) ble bestemt ved 490 nm via et automatisert platespektrofotometer (3).
CeUefusjon
Tre dager etter mottakelse av siste IV-injeksjonen, ble mus nr. 1 eutanisert ved C02-kvelning, milten ble fjernet aseptisk, og neddykket i 10 ml kald PB S/PS A (PBS inneholdende PSA som er 100 U/ml penicillin, 100fig/ml streptomycin og 0,25fig/ml aminoopterin B). Miltcellene ble isolert ved passasje gjennom en steril celleinnsamler samtidig som skylling med RPMI-medium (RPMI, 20 % FBS, 1 mM natriumpyruvat, 4 mM L-glutamin, 1 % MEM ikke-essensielle aminosyrer). Cellene ble så vasket en gang og telt på en Coulter-teller.
Fusjonen ble utført ved et 5:1 forhold av levedyktige miltceller til murine myelomceller (Centocor's Cell Biology Services, P3x63Ag8.653). Milt- og myelomcelleblanding ble plassert i et 50 ml reagensrør og pelletisert. Pelleten ble langsomt suspendert ved 2 ml 50 % (w/v) PEG-oppløsning (5 g PEG molekylvekt 3000, 5 ml sterilt dH20 pH 8,0, 500 fil DMSO (Sigma)) ved 37 °C. Cellefusjonen fikk foregå i 2 minutter ved romtemperatur, og ble stoppet ved langsom tilsetting av 15 ml RPMI (ingen tilsettinger) ved 37 °C. Fusjonerte celler ble sentrifugert i 10 minutter ved 1000 rpm/minutt, trukket opp i en 25 ml pipette og drevet ut i en 225 cm<3>kolbe (Costar, 431082) inneholdende 100 ml fusjonsmedium (RPMI, 20 % FBS, 1 mM natriumpyruvat, 4 mM L-glutamin, 1 % MEM ikke-essensielle aminosyrer, 25 ng/ml gentamicin, 100 mM hypoxantin, 0,4 nM aminopterin og 16 nM tymidin). Cellene fikk stå over natten ved 37 °C, ytterligere 100 ml ved 37 °C fusjonsmedium ble tilsatt til kolben, og kolben ble virvlet for å resuspendere cellene. Cellene ble så kimsatt ved 200 nl/brønn i ni 96-brønners flatbunnete vevskulturplater (Costar, 3595). Fusjonsplater ble plassert i en fuktig 37 °C inkubator ved 5 % C02i 7-10 dager. Fusjonsmediet ble endret etter 7 dager (4).
Påvisning av muse-IgG anti-cCLB8 antistoffer i hybridomsupernatant Hybridomer fra fusjon av cCLB8 immuniserte muselymfocytter med murine myelomceller (Centocor's Cell Biology Services, P3x63Ag8.653) ble evaluert ved EIA for deres evne til å utskille antivariable regionantistoffer. I korthet ble plater belagt med cCLB8 ved 10 ng/ml i PBS over natten ved 4 °C. Platene ble vasket og blokkert som beskrevet ovenfor, deretter avkjølt inntil bruk. Ufortynnete hybridomsupernatanter fira 12-dagers fusjonskultur, ble inkubert på cCLB8-plater i 30 minutter ved romtemperatur. Alle 1824 brønner fra fusjonsplater ble testet. Plater ble vasket og deretter undersøkt med HRP-merket geit anti-mus IgG Fc fortynnet ved 1:20000 i PBS/1 % BSA. Plater ble igjen vasket og så inkubert med sitrat-fosfatsubstratoppløsning som beskrevet tidligere. Celler i positive brønner ble overført til 24-brønners plater og supernatanter testet på andre mus/human kimære antistoffer, slik som C207A (anti-faktor VII), C128A (anti-CD4), C116J (anti-Platelet GPIIb/IIIA), C168J (anti-TNFa), og C300A/C301A (to forskjellige antiprostatatumorantigener). Celler i negative brønner ble klonet til >80 % homogenisitet og gitt C-koder. Det ble fremstilt forskningscellebanker av 12 ampuller hver, og testing for mykoplasma og sterilitet ble foretatt for Mabs C433A-C437A (5).
Isotyping
Isotypebestemmelse av antistoffene ble gjennomført ved anvendelse av Mouse Monoclonal Antibody Isotyping Kit (Life Technologies) i dyppstrimmelformat. En blanding av fortynningsbuffer, hybridomsupernatant, og rotte anti-mus konjugat ble inkubert over natten ved romtemperatur med rysting av reagensrør inneholdende strimler forhåndsbelagte med forskjellige murine oppfangingsantistoffisotyper. Strimler ble fjernet fra reagensrør og forsiktig skyllet i dH20, og isotyper ble bestemt (6).
Seruminhiberingsanalyse
Bestemmelse av de inhiberende effekter av konkurrerende, sirkulerende immunglobuliner i NHS på 7 anti-id antistoffenes evne til å bindes cCLB8, ble gjennomført ved anvendelse av fastfase-EIA. De syv rensete anti-idiotypiske antistoffene ble inkubert ved togangers seriefortynninger ved å starte med 50 ng/ml sluttkonsentrasjon i nærvær av 0 %, 0,5 %, 5 % og 50 % (v/v) normalt humanserumforråd i 30 minutter ved 37 °C. Blandingene ble overført til cCLB8-belagte plater, inkubert i 30 minutter ved 37 °C og så vasket. Plater ble undersøkt i 30 minutter ved 37 °C med geit antimus-IgG Fc<*>HRP ved 1:20000 i PBS/1 % BSA og vasket. OPD-substratutvikling fikk foregå i mørke i 15 minutter ved romtemperatur. 4 N svovelsyre ble tilsatt til platene for å stoppe substratutvikling. Plater ble undersøkt for bindingsinhibering ved OD-måling ved 490 nm (7).
Inhibering av cCLB8-binding til HuIL-6 ved anti-id Mabs
Analyse av de syv anti-id antistoffenes dyktighet med henblikk på inhibering av binding av cCLB8 til HuIL-6 ble gjennomført ved HuIL-6 fastfase-EIA. Plater ble belagt med HuIL-6 ved 1 ng/ml i PBS ved 4 °C over natten, og blokkert med PBS/1 % BSA i en time ved romtemperatur. cCLB8 ved 2 ng/ml sluttkonsentrasjon ble preinkubert i 30 minutter ved 37 °C med togangers seriefortynninger av de syv anti-id antistoffene ved å starte med 50 ng/ml. Preinkubasjonsblandingene ble så tilsatt til HuIL-6-plater, inkubert i 30 minutter ved 37 °C og vasket. Plater ble undersøkt med geit antihumant IgG Fc<*>HRP (nøyaktig) ved 1:25000 i 30 minutter ved 37 °C og så vasket. OPD-substratutvikling fikk foregå i mørke i 15 minutter ved romtemperatur. Substratutvikling ble stoppet ved tilsetting av 4 N svovelsyre. Plater ble undersøkt ved OD-måling ved 490 nm (8).
Anti-id monoklonale antistoffers binding til cCLB8 pre-bundet til HuIL-6
Syv anti-id antistoffers evne til å binde cCLB8 allerede bundet til HuIL-6 ble bestemt. Plater ble belagt med HuIL-6 ved 1 ng/ ml i PBS ved 4 °C over natten, og blokkert. cCLB8 ved 10 ng/ml i PBS ble inkubert på HuIL-6-platene i 30 minutter ved 37 °C. Platene ble vasket, tregangers seriefortynninger ved start med 10 ng/ml av anti-id Mabs ble tilsatt og inkubert i 30 minutter ved 37 °C og vasket. Plater ble så undersøkt i 30 minutter ved 37 °C med HRP-merket geit antimus IgG Fc ved 1:20000 i PBS/1 % BSA. Platene ble vasket pånytt og så utviklet med OPD-substrat i 30 minutter ved romtemperatur. Optiske tettheter (OD) ble målt ved 490 nm (9).
Utvikling av mus cCLB8 anti-idiotypiske monoklonale antistoffer
Én fusjon som anvendte en cCLB8-immunisert milt fra Balb/c-mus resulterte i identifikasjon av syv anti-id antistoffer spesifikke for cCLB8 via EIA. Det ble vist at de syv anti-id antistoffene ikke binder andre mus/humane kimære antistoffer slik som C207A, C128A, C168J, Cl 16J, C300A og C301A. Seks av de syv antistoffene var av isotype IgGlKog ett antistoff var IgG2bK. Tabell 1 oppsummerer resultatene av fusjonen. Det skal påpekes at et maksimum serumtiter på 1:800 ble oppnådd i musen etter 47 dager, og forble konstant gjennom hele immuniseringens varighet.
Tabell 1. Egenskaper til mus-cCLB8 anti-idiotypiske monoklonale antistoffer
Seruminhiberingsanalyse
Effekten av normalt, humant serumforråd på de syv anti-id antistoffers evne til å binde cCLB8 ble bestemt. Ingen av nevnte anti-id Mabs ble hindret i å binde cCLB8 av 0 % og 0,5 % NHS. Tre Mabs (C433A, C435A og C437A) oppviste partiell bindingsinhibering av 5 % NHS. Alle unntatt C434A og C436A ble i betydelig grad påvirket av NHS-konsentrasjon på 50 %. Figur 8 A-G viser seruminhiberingsbindingsprofilene av de syv anti-id antistoffene. Figur 8A-G. Dobbelte fortynninger av anti-id Mabs med start ved 50 ng/ml ble inkubert i nærvær av 0 %,
0,5 %, 5 % og 50 % NHS i 30 minutter ved 37 °C. Blandingene ble overført til cCLB8-belagte plater, inkubert i 30 minutter ved 37 °C og så vasket. Plater ble undersøkt i 30 minutter ved 37 °C med geit antimus-IgG Fc<*>HRP. (A) C433A, (B) C434A, (C) C435A, (D) C436A, (E) C437A, (F) C438A og (G) C439A.
Inhibering av cCLB8-binding til HuIL-6 med anti-id Mabs
De syv anti-id antistoffenes evne til å inhibere cCLB-binding til HuIL-6 ble bestemt. Tidligere EIA-studier har vist at cCLB8 binder meget svakt til HuIL-6-belagte plater (10). To Mabs (C435A og C437A) ved konsentrasjonsoverskudd på fra 6 til 25 ganger, viste praktisk talt fullstendig inhibering av cCLB8-binding til HuIL-6. C434A uttrykte en inhiberende effekt for cCLB8 bare ved 25 gangers overskudd. De to beste antistoffene ved inhiberingsbinding av cCLB8 til HuIL-6, var C436A og C439A. Disse to antistoffene var i stand til fullstendig inhibering av cCLB8-binding over et konsentrasjonsoverskuddsområde på fra 3 til 25 ganger. C433A og C438A viste ingen inhiberende aktivitet. Denne analysen bekreftet resultatene oppnådd i en preliminær studie (11).
Figur 9. cCLB8 ved 2 ng/ml inkubert med dobbelte fortynninger av anti-id Mabs med start ved 50 ng/ml i 30 minutter ved 37 °C. Blandingene ble overført til HuIL-6-belagte plater og inkubert i 30 minutter ved 37 °C. Plater ble vasket og deretter undersøkt med geit antihumant IgG Fc<*>HRP.
Anti-id binding til cCLB8 forhåndsbundet til HuIL-6
De syv anti-id antistoffenes evne til å binde cCLB8, som var forhåndsbundet til HuIL-6 ble undersøkt. Som i preliminære studier var C436A og C438A de ensete antistoffene som var i stand til å binde cCLB8 som var forhåndsbundet til HuIL-6 (11). Figur 3 illustrerer bindingsevnene til de syv anti-id antistoffene for cCLB8 som er forhåndsbundet til HuIL-6.
Figur 10. cCLB8 ved 10 ng/ml inkubert på HuIL-6-plater i 30 minutter ved 37 °C. Plater ble vasket og deretter inkubert med tredobbelte oppløsninger av anti-id Mabs med start ved 10 ng/ml i 30 minutter ved 37 °C. Plater ble vasket og så undersøkt med geit antimus IgG Fc<*>HRP.
Konklusjon
Syv monoklonale anti-idiotypiske antistoffer ble produsert fira fusjon av murine myelomceller og miltceller fra en Balb/c-mus immunisert med kimært antihumant IL-6-antistoff (cCLB8). Fem av de anti-id antistoffene (C434A, C435A, C436A, C437A og C439A) var i stand til å blokkere cCLB8-binding til HuIL-6. To antistoffer (C434A og C438A) hadde evne til å binde cCLB8 som var forhåndsbundet til HuIL-6, og to antistoffer (C434A og C436A) var praktisk talt upåvirket fra binding av cCLB8 ved enhver konsentrasjon av NHS som ble testet. De brede bindingsprofilene til disse cCLB8-anti-idiotypiske antistoffene, gjør noen av dem til potensielle kandidater for anvendelse som farmakokinetiske prober i serumpåvisning og immunohistokjemiske analyser.
RESYMÉ
IL-6 er pga. sin pleiotrope aktivitet, implisert i patologien til en rekke forskjellige sykdommer. En høyaffinitetsnøytralisering av kimært eller humant antistoff til IL-6 ville derfor være ønskelig for anvendelse i IL-6-relaterte sykdommer, slik som kreft, kakeksi, SLE, osteoporose og CHF. cCLB8 eller hvilke som helst derivater av dette Mab, inkludert kimære eller humaniserte, eller fragmenter, kan benyttes med henblikk på lindring av bensmerte, inhibering av tumorvekst slik som prostatakreft og multippel myeloma og andre sykdommer, der IL-6 har vært implisert. Dette antistoffet kan benyttes, enten som et enkelt middel eller i kombinasjon med andre terapeutiske midler. I tillegg kan dette Mab anvendes som et kjemosensitiveringsmiddel hvorved det kan øke cytotoksiske midlers terapeutiske effektivitet.
Det vil klart fremgå at oppfinnelsen kan utføres på annen måte enn slik som spesielt beskrevet i beskrivelsen og eksemplene heri.
Tallrike modifikasjoner og variasjoner av foreliggende oppfinnelse er mulig i lys av den heri angitte lære, og er derfor innenfor omfanget av de medfølgende krav.

Claims (26)

1. Isolert antistoff eller antistoff fragment som spesifikt binder til human IL-6, karakterisert ved at det omfatter de tung kjede og lett kjede komplementaritets bestemmende regionene (CDR) bestående av aminosyresekvensene til SEQ UD NO: 1-6 og en konstant region avledet fra en eller flere humane antistoffer.
2. Anti-IL-6 antistoff eller antistoff fragment i følge krav 1, karakterisert ved at nevnte antistoff eller spesifisert del eller variant i det vesentlige nøytraliserer minst en aktivitet av minst en IL-6.
3. Anti-IL-6 antistoff eller antistoff fragment i følge krav 2, karakterisert ved at nevnte aktivitet er minst én valgt fra gruppen bestående av inhibering av IgM mu sekresjon fra SKW6.4 celler, inhibering av IL-6 formidlet MCP-1 produksjon, inhibering av IL-6 signalering i THP-1 humane monocyttiske leukemiceller, inhibering av IL-6 induserte serum amyloid A produksjon fra HepG2 celler og inhibering av rhIL-6 indusert celle proliferering.
4. Anti-IL-6 antistoff sammensetning eller antistoff fragment sammensetning, karakterisert ved at det omfatter det isolerte IL-6 antistoffet eller antistoff fragmentet i følge krav 1 og en bærer eller fortynningsmiddel.
5. Sammensetning i følge krav 4, karakterisert ved at den ytterligere omfatter minst én forbindelse eller protein valgt fra minst en av en TNF antagonist, et antireumatisk middel, et muskel avslappende middel, et narkotikum, et ikke-stereoid anti-inflammatorisk medikament (SNAID), et smertestillende middel,, et anestetikum, et sedativ, et lokalanestetikum, en neuromuskulær blokker, et antimikrobielt middel, et antipsoriatisk middel, et kortikosteroid, et anabolisk steroid, et diabetesrelatert middel, et mineral, et næringsmiddel, et tyroid middel, et vitamin, et kalsiumrelatert hormon, et antidiarémiddel, et hostestillende middel, et antiemetisk middel, et antiulcus middel, et laksativ, et antikoaguleringsmiddel, en erytropoietin, et filgrastim, et sargramostim, et immuniseringsmiddel, et immunglobulin, et immunundertrykkende middel, et veksthormon, et hormonerstatningsmiddel, en østrogenreseptormodulator, et mydriatisk middel, et sykloplegisk middel, et alkyleringsmiddel, en antimetabolitt, en mitotisk inhibitor, et radiofarmasøytikum, et antidepressivt middel, et antimanisk middel, et antipsykotisk middel, et anksiolytisk middel, et hypnotisk middel, et sympatomimetisk middel, et stimuleringsmiddel, donepezil, takrin, en astmamedisin, en beta-agonist, et inhalert steroid, en leukotrien inhibitor, et metylxantin, et kromolyn, et epinefrin eller analog, dornase-a, et cytokin, en cytokin antagonist.
6. Formulering, karakterisert ved at den omfatter minst et anti-IL-6 antistoff eller antistoff fragment i følge krav 1, og minst en valgt fra sterilt vann, sterilt bufret vann eller minst et konserveirngsmiddel valgt fra gruppen bestående av fenol, m-kresol, p-kresol, o-kresol, klorkresol, benzylalkohol, fenylkvikksølvnitritt, fenoksyetanol, formaldehyd, klorbutanol, magnesiumklorid, alkylparaben, benzalkoniumklorid, benzetoniumklorid, natriumdehydroacetat og timerosal, eller blandinger derav i et vandig fortynningsmiddel.
7. Formulering i følge krav 6, karakterisert ved at konsentrasjonen av anti-IL-6 antistoff eller antistoff fragment er omtrent 0,1 mg/ml til omtrent 100 mg/ml.
8. Formulering i følge krav 6, karakterisert ved at den ytterligere omfatter et isotonisistetsmiddel.
9. Formulering i følge krav 6, karakterisert ved at den ytterligere omfatter en fysiologisk akseptabel buffer.
10. Formulering, karakterisert ved at den omfatter minst et anti-IL-6 antistoff eller antistoff fragment i følge krav 1 i lyofilisert form i en første beholder og en valgfri andre beholder som omfatter sterilt vann, sterilt bufret vann eller minst ett konserveringsmiddel valgt fra gruppen bestående av fenol, m-kresol, p-kresol, o-kresol, klorkresol, benzylalkohol, fenylkvikksølvnitritt, fenoksyetanol, formaldehyd, klorbutanol, magnesiumklorid, alkylparaben, benzalkoniumklorid, benzetoniumklorid, natriumdehydroacetat og timerosal, eller blandinger derav i et vandig fortynningsmiddel.
11. Formulering i følge krav 10, karakterisert ved at konsentrasjonen av anti-IL-6 antistoff eller antistoff fragment rekondisjoneres til en konsentrasjon på omtrent 0,1 mg/ml til omtrent 500 mg/ml.
12. Formulering i følge krav 10, karakterisert ved at den ytterligere omfatter et isotonisitets middel.
13. Formulering i følge krav 10, karakterisert ved at den ytterligere omfatter fysiologisk akseptabel buffer.
14. Isolerte nukleinsyremolekyler som koder for et antistoff eller antigen bindende fragment derav som spesifikt binder og inhiberer aktiviteten til humant IL-6, karakterisert ved at nevnte antistoff eller antigenbindende fragment omfatter: et humant antistoff tung kjede konstant region og en tung kjede variabel region som omfatter CDR1, CDR2 og CDR3, som henholdsvis består av aminosyresekvensene SEQ ID NO:l, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, og en human antistoff lett kjede konstant region og en lett kjede variabel region som omfatter CDR1, CDR2 og CDR3 som henholdsvis består av aminosyresekvensene SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6.
15. Fremgangsmåte for å produsere et anti-IL-6 antistoff eller antistoffbindende fragment derav, karakterisert ved at den omfatter å translatere nukleinsyremolekylene i følge krav 14 under betingelser in vitro, in vivo, in situ, slik at anti-IL-6 antistoffet eller antisoff fragmentet uttrykkes i detekterbare eller gjenvinningsbare mengder.
16. Sammensetning, karakterisert ved at den omfatter nukleinsyremolekyler i følge krav 14 og en bærer eller fortynningsmiddel.
17. Fremgangsmåte for å produsere et anti-IL-6 antistoff eller antigenbindende fragment, karakterisert ved at den omfatter å transformere en vertscelle som er i stand til å uttrykke nevnte antistoff eller antigenbindende fragment derav i gjenvinningsbare mengder med nukleinsyremolekylene i følge krav 14 og uttrykke nevnte antistoff eller antigenbindende fragment derav fra nevnte vertscelle.
18. Fremgangsmåte i følge krav 17, karakterisert ved at nevnte vertscelle er en mammalsk celle, en plantecelle eller en gjærcelle.
19. Vektor, karakterisert ved at den omfatter nukleinsyremolekylet i følge krav 14.
20. Vektor ifølge krav 19, karakterisert ved at vektoren omfatter minst én promoter valgt fra gruppen bestående av en sen- eller tidlig-SV490-promoter, en CMV-promoter, en HSV tk-promoter, en pgk (fosfoglyseratkinase)-promoter, en human immunglobulinpromoter eller en F-l alfa-promoter.
21. Vektor ifølge krav 19, karakterisert ved at vektoren omfatter minst ett gen eller del derav, valgt fra gruppen beatående av metotrexat (MTX), grønnfluorescerende prototein (GFP), dihydrofolatreduktase (DHFR), neomycin (G418), eller glutaminsyntetase (GS).
22. Isolert vertscelle, karakterisert ved at den omfatter et isolert nukleinsyremolekyl som omfatter en nukleotidsekvens som koder for en tung kjede antistoff variabel region og et nukleinsyremolekyl som omfatter en nukleotidsekvens som koder for en lett kjede variabel region, hvori nevnte tung kjede variabel region omfatter CDR1, CDR2 og CDR3 aminosyresekvenser bestående henholdsvis av SEQ ID NO: 1-3 og nevnte lett kjede variable region omfatter CDR1, CDR2 og CDR3 aminosyresekvenser bestående av henholdsvis SEQ ID NO: 4-6.
23. Vertscelle i følge krav 22, karakterisert ved at nevnte vertscelle er minst én valgt fra COS-1, COS-7, HEK293, BHK21, CHO, BSC-1, Hep G2, 653, SP2/0, 293, HeLa, myelom- eller lymfomceller eller et hvilket som helst derivat, immortalisert eller tranformert celle derav.
24. Fremgangsmåte for å produsere et anti-IL-6 antistoff eller antistoff fragment som spesifikt binder til human IL-6 som omfatter tung kjede og lett kjede CDR som består av aminosyresekvensene til SEQ ID NO: 1-6, karakterisert ved at nevnte fremgangsmåte omfatter å uttrykke nevnte antistoff eller antistoff fragment i gjenvinnbare mengder fra en vertscelle i følge krav 25.
25. Fremgangsmåte i følge krav 24, karakterisert ved at nevnte vertscelle er en mammalsk celle, en plantecelle eller en gjærcelle.
26. Anvendelse av en farmasøytisk effektiv mengde av et isolert antistoff eller antistoff fragment som spesifikt binder til human IL-6, som omfatter de tung kjede og lett kjede komplementaritetsbestemmende regionene (CDR) som består av aminosyresekvensene til SEQ ID NO: 1-6 og en konstant region avledet fra en eller flere humane antistoffer for å inhibere tumor vekst i en celle, vev, organ eller dyr eller inhibere cancer kakeksi hos et dyr.
NO20131043A 2001-11-14 2013-07-25 Isolerte antistoffer som spesifikt binder til humant IL-6, sammensetninger, fremgangsmåter og deres anvendelser NO20131043L (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US33274301P 2001-11-14 2001-11-14
PCT/US2002/036213 WO2004039826A1 (en) 2001-11-14 2002-10-26 Anti-il-6 antibodies, compositions, methods and uses

Publications (1)

Publication Number Publication Date
NO20131043L true NO20131043L (no) 2004-08-05

Family

ID=34699762

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20042418A NO334574B1 (no) 2001-11-14 2004-06-10 Anti-IL-6-antistoff, sammensetninger og deres anvendelser
NO20131043A NO20131043L (no) 2001-11-14 2013-07-25 Isolerte antistoffer som spesifikt binder til humant IL-6, sammensetninger, fremgangsmåter og deres anvendelser
NO2014025C NO2014025I1 (no) 2001-11-14 2014-09-24 Antistoffet siltuximab er definert ved dets sekvens av dets tunge og lette kjede variable regioner, henholdsvis SEQ ID NO:7 og SEQ ID NO:8 slik det fremgår av spesielt krav 1 i patent nr. 334574

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20042418A NO334574B1 (no) 2001-11-14 2004-06-10 Anti-IL-6-antistoff, sammensetninger og deres anvendelser

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO2014025C NO2014025I1 (no) 2001-11-14 2014-09-24 Antistoffet siltuximab er definert ved dets sekvens av dets tunge og lette kjede variable regioner, henholdsvis SEQ ID NO:7 og SEQ ID NO:8 slik det fremgår av spesielt krav 1 i patent nr. 334574

Country Status (25)

Country Link
US (7) US7291721B2 (no)
EP (2) EP1562968B1 (no)
JP (1) JP2007528691A (no)
KR (1) KR20100120246A (no)
CN (1) CN100374457C (no)
AR (1) AR037384A1 (no)
AU (1) AU2002346369B2 (no)
BE (1) BE2014C052I2 (no)
BR (1) BRPI0214168B8 (no)
CA (1) CA2467719C (no)
CY (3) CY1114738T1 (no)
DK (2) DK1562968T3 (no)
ES (2) ES2436206T3 (no)
FR (1) FR14C0064I2 (no)
IL (1) IL161968A0 (no)
LU (1) LU92543I2 (no)
MX (1) MXPA04004671A (no)
MY (1) MY142290A (no)
NL (1) NL300687I2 (no)
NO (3) NO334574B1 (no)
NZ (1) NZ533223A (no)
PT (2) PT1562968E (no)
RU (1) RU2318829C2 (no)
TW (1) TWI329019B (no)
WO (1) WO2004039826A1 (no)

Families Citing this family (170)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060078533A1 (en) * 2004-10-12 2006-04-13 Omoigui Osemwota S Method of prevention and treatment of aging and age-related disorders including atherosclerosis, peripheral vascular disease, coronary artery disease, osteoporosis, arthritis, type 2 diabetes, dementia, alzheimer's disease and cancer
GB2401040A (en) 2003-04-28 2004-11-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for treating interleukin-6 related diseases
US8617550B2 (en) 2003-12-19 2013-12-31 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Treatment of vasculitis with IL-6 antagonist
AR048210A1 (es) * 2003-12-19 2006-04-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Un agente preventivo para la vasculitis.
DE602005020743D1 (de) * 2004-02-11 2010-06-02 Warner Lambert Co Verfahren zur behandlung von osteoarthritis mit anti-il-6 antikörpern
JP4989456B2 (ja) * 2004-02-26 2012-08-01 ベイラー リサーチ インスティテュート 関節炎の全身処置のための組成物および方法
DK1794586T3 (da) 2004-09-22 2013-05-13 Cancer Advances Inc Monoklonale antistoffer til progastrin
US20090041783A1 (en) 2005-04-28 2009-02-12 Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. Anti-platelet membrane glycoprotein vi monoclonal antibody
JP5224707B2 (ja) * 2005-04-28 2013-07-03 持田製薬株式会社 抗血小板膜糖蛋白質ｖｉモノクローナル抗体
JO3058B1 (ar) 2005-04-29 2017-03-15 Applied Molecular Evolution Inc الاجسام المضادة لمضادات -اي ال-6,تركيباتها طرقها واستعمالاتها
RU2425054C2 (ru) * 2005-06-01 2011-07-27 Микромет Аг Антитела против il2
AR061400A1 (es) * 2005-10-14 2008-08-27 Chugai Kabushiki Kaisha Agentes para suprimir el dano a los islotes transplantados despues del transplante de islotes
JP5191235B2 (ja) 2005-10-21 2013-05-08 中外製薬株式会社 心疾患治療剤
AR057582A1 (es) * 2005-11-15 2007-12-05 Nat Hospital Organization Agentes para suprimir la induccion de linfocitos t citotoxicos
KR20080084818A (ko) * 2005-11-25 2008-09-19 각고호우징 게이오기주크 전립선암 치료제
KR101413451B1 (ko) 2005-12-09 2014-07-10 유씨비 파마, 에스.에이. 사람 ｉｌ­6에 특이성을 지니는 항체 분자
AR057227A1 (es) * 2005-12-09 2007-11-21 Centocor Inc Metodo para usar antagonistas de il6 con inhibidores del proteasoma
JP2009521909A (ja) * 2005-12-30 2009-06-11 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング ＩＬ−６とＩＬ−６Ｒαの複合体のｇｐ１３０への結合を阻害する抗ＩＬ−６抗体
WO2007100937A2 (en) * 2006-01-19 2007-09-07 The Regents Of The University Of Michigan System and method for spectroscopic photoacoustic tomography
AU2007208678B2 (en) 2006-01-27 2013-01-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Therapeutic agents for diseases involving choroidal neovascularization
DK3056568T3 (da) 2006-03-31 2021-11-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Fremgangsmåder til kontrollering af antistoffers blodfarmakokinetik
CA2648644C (en) 2006-04-07 2016-01-05 Osaka University Muscle regeneration promoter
NZ572807A (en) * 2006-05-19 2011-10-28 Alder Biopharmaceuticals Inc Culture method for obtaining a clonal population of antigen-specific b cells
AU2007282023B2 (en) * 2006-08-03 2012-09-13 Vaccinex, Inc. Anti-IL-6 monoclonal antibodies and uses thereof
WO2008042611A2 (en) * 2006-09-29 2008-04-10 Centocor, Inc. Method of using il6 antagonists with mitoxantrone for prostate cancer
US8414897B1 (en) * 2006-10-02 2013-04-09 The Uab Research Foundation Pathway for Th-17 cell development and methods utilizing same
AU2012200284B2 (en) * 2006-10-06 2014-03-06 Amgen Inc. Stable Antibody Formulations
JP5631591B2 (ja) * 2006-10-06 2014-11-26 アムジエン・インコーポレーテツド 安定な抗体製剤
MX2009003982A (es) * 2006-10-20 2009-04-27 Amgen Inc Formulaciones de polipeptido estables.
WO2008067438A2 (en) * 2006-11-29 2008-06-05 The Regents Of University Of Michigan System and method for photoacoustic guided diffuse optical imaging
TW200831528A (en) 2006-11-30 2008-08-01 Astrazeneca Ab Compounds
WO2008076454A1 (en) 2006-12-19 2008-06-26 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Immunogenic compositions comprising progastrin and uses thereof
US8136651B2 (en) * 2007-12-14 2012-03-20 The Procter & Gamble Company Method and apparatus for orienting articles
JP2010095445A (ja) * 2006-12-27 2010-04-30 Tokyo Medical & Dental Univ Ｉｌ−６アンタゴニストを有効成分とする炎症性筋疾患治療剤
BRPI0806812B8 (pt) * 2007-01-23 2021-09-14 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agente para suprimir reação de rejeição crônica e uso de um inibidor de il-6
WO2008135419A2 (en) * 2007-05-04 2008-11-13 Charité Universitätsmedizin Berlin Anti-il-6-agents for improving primary functioning of allogenic grafts
US8404235B2 (en) 2007-05-21 2013-03-26 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP
TW201531484A (zh) 2007-05-21 2015-08-16 Alder Biopharmaceuticals Inc 抗ＴＮＦ-α之抗體及其用途
KR101615715B1 (ko) 2007-05-21 2016-04-27 앨더바이오 홀딩스 엘엘씨 Ｉｌ-６에 대한 항체 및 이의 용도
JP5859202B2 (ja) * 2007-05-21 2016-02-10 アルダーバイオ・ホールディングズ・エルエルシー 新規のウサギ抗体ヒト化方法及びヒト化ウサギ抗体
US8062864B2 (en) * 2007-05-21 2011-11-22 Alderbio Holdings Llc Nucleic acids encoding antibodies to IL-6, and recombinant production of anti-IL-6 antibodies
US20090238825A1 (en) * 2007-05-21 2009-09-24 Kovacevich Brian R Novel rabbit antibody humanization methods and humanized rabbit antibodies
US8252286B2 (en) 2007-05-21 2012-08-28 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat thrombosis
US9701747B2 (en) 2007-05-21 2017-07-11 Alderbio Holdings Llc Method of improving patient survivability and quality of life by anti-IL-6 antibody administration
US7906117B2 (en) * 2007-05-21 2011-03-15 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat cachexia, weakness, fatigue, and/or fever
US8178101B2 (en) 2007-05-21 2012-05-15 Alderbio Holdings Inc. Use of anti-IL-6 antibodies having specific binding properties to treat cachexia
EP2185718B1 (en) 2007-08-03 2017-10-04 MUSC Foundation For Research Development Human monoclonal antibodies and methods for producing the same
GB0717337D0 (en) 2007-09-06 2007-10-17 Ucb Pharma Sa Method of treatment
EP3689912A1 (en) 2007-09-26 2020-08-05 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of modifying isoelectric point of antibody via amino acid substitution in cdr
CN101815532B (zh) * 2007-10-02 2012-08-15 中外制药株式会社 以白细胞介素6受体抑制剂为有效成分的移植物抗宿主病治疗剂
US20100203009A1 (en) * 2007-10-02 2010-08-12 The Uab Research Foundation Pathway for Th-17 Cell Development and Methods Utilizing Same
NZ585064A (en) * 2007-11-05 2012-08-31 Medimmune Llc Methods of treating scleroderma
PE20091174A1 (es) * 2007-12-27 2009-08-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Formulacion liquida con contenido de alta concentracion de anticuerpo
KR102057826B1 (ko) * 2008-04-11 2019-12-20 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 복수 분자의 항원에 반복 결합하는 항원 결합 분자
AU2009241589B2 (en) 2008-04-29 2013-10-10 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
CA2724279C (en) 2008-05-13 2017-03-07 Novimmune S.A. Anti-il-6/il-6r antibodies and methods of use thereof
US9109026B2 (en) 2008-06-03 2015-08-18 Abbvie, Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
EP3002299A1 (en) 2008-06-03 2016-04-06 AbbVie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
CN104906581A (zh) * 2008-06-05 2015-09-16 国立研究开发法人国立癌症研究中心 神经浸润抑制剂
US8188235B2 (en) 2008-06-18 2012-05-29 Pfizer Inc. Antibodies to IL-6 and their uses
WO2010003101A2 (en) * 2008-07-02 2010-01-07 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Il6 immunotherapeutics
TW201012475A (en) 2008-07-08 2010-04-01 Abbott Lab Prostaglandin E2 dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
TWI440469B (zh) 2008-09-26 2014-06-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Improved antibody molecules
WO2010048192A2 (en) * 2008-10-20 2010-04-29 Abbott Laboratories Viral inactivation during purification of antibodies
MX2011004198A (es) * 2008-10-20 2011-05-24 Abbott Lab Anticerpos que unen a il-12 y metodos para purificar los mismos.
JP5789192B2 (ja) * 2008-11-13 2015-10-07 フェムタ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッドＦｅｍｔａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ． ヒト化抗ｉｌ−６抗体
US8992920B2 (en) 2008-11-25 2015-03-31 Alderbio Holdings Llc Anti-IL-6 antibodies for the treatment of arthritis
US9212223B2 (en) 2008-11-25 2015-12-15 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat thrombosis
US8420089B2 (en) 2008-11-25 2013-04-16 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP
AU2016250477B2 (en) * 2008-11-25 2018-07-05 Vitaeris Inc. Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP
US8337847B2 (en) 2008-11-25 2012-12-25 Alderbio Holdings Llc Methods of treating anemia using anti-IL-6 antibodies
US9452227B2 (en) 2008-11-25 2016-09-27 Alderbio Holdings Llc Methods of treating or diagnosing conditions associated with elevated IL-6 using anti-IL-6 antibodies or fragments
EP2376126B1 (en) 2008-11-25 2017-12-20 AlderBio Holdings LLC Antagonists of il-6 to prevent or treat thrombosis
US8323649B2 (en) 2008-11-25 2012-12-04 Alderbio Holdings Llc Antibodies to IL-6 and use thereof
RU2650594C1 (ru) * 2009-01-29 2018-04-17 Медиммун, Ллк Человеческие анти-il-6 антитела с пролонгированным периодом выведения in vivo и их применение при лечении онкологических, аутоиммунных заболеваний и воспалительных заболеваний
WO2010106812A1 (en) * 2009-03-19 2010-09-23 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Pharmaceutical formulation containing improved antibody molecules
JP5647222B2 (ja) * 2009-04-10 2014-12-24 アブリンクス エン．ヴェー． Ｉｌ−６ｒ関連疾患及び障害の治療のためのｉｌ−６ｒに指向性を有する改善されたアミノ酸配列及びこれを含むポリペプチド
AU2010289527C1 (en) * 2009-09-01 2014-10-30 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US20110059080A1 (en) * 2009-09-08 2011-03-10 Mark Cornfeld Use of an anti-il6 antibody to decrease hepcidin in cancer patients
BR112012008833A2 (pt) 2009-10-15 2015-09-08 Abbott Lab imunoglobulinas de dominio variavel duplo e usos das mesmas
UY32979A (es) 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
AU2010319531A1 (en) * 2009-11-10 2012-05-24 Amgen Inc. Anti-c-MPL antibodies
WO2011066374A2 (en) 2009-11-24 2011-06-03 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Antagonists of il-6 to prevent or treat cachexia, weakness, fatigue, and/or fever
US9775921B2 (en) 2009-11-24 2017-10-03 Alderbio Holdings Llc Subcutaneously administrable composition containing anti-IL-6 antibody
EP2516467A2 (en) 2009-12-23 2012-10-31 Emergent Product Development Seattle, LLC Compositions comprising tnf-alpha and il-6 antagonists and methods of use thereof
JO3417B1 (ar) 2010-01-08 2019-10-20 Regeneron Pharma الصيغ المستقرة التي تحتوي على الأجسام المضادة لمضاد مستقبل( interleukin-6 (il-6r
DE102010007562A1 (de) * 2010-02-10 2011-08-11 sterna biologicals GmbH & Co KG, 35043 Dermatologische, pharmazeutische Zusammensetzung geeignet für Oligonukleotide
AU2011219715B2 (en) 2010-02-26 2014-12-11 Novo Nordisk A/S Stable antibody containing compositions
US20120323158A1 (en) * 2010-03-10 2012-12-20 Paul Tebbey Extracorporeal immunoadsorption treatment
JP6294075B2 (ja) * 2010-05-28 2018-03-14 ノヴォ ノルディスク アー／エス 抗体及び防腐剤を含む安定した多用量組成物
JP6051049B2 (ja) 2010-05-28 2016-12-21 中外製薬株式会社 抗腫瘍ｔ細胞応答増強剤
US20130224109A1 (en) * 2010-07-20 2013-08-29 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Compositions and methods featuring il-6 and il-21 antagonists
NZ607480A (en) 2010-08-03 2014-10-31 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
CN103299191B (zh) * 2010-08-13 2016-06-15 莫尔豪斯医学院 中风的生物标记
PH12013500337A1 (en) 2010-08-26 2017-08-23 Abbvie Inc Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
DK2643018T3 (da) 2010-11-23 2021-01-18 Vitaeris Inc Anti-il-6-antistoffer til behandling af oral mucositis
TWI761912B (zh) 2010-11-30 2022-04-21 日商中外製藥股份有限公司 具有鈣依存性的抗原結合能力之抗體
US8696616B2 (en) 2010-12-29 2014-04-15 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Obesity therapy and heart rate variability
CN102161998B (zh) * 2011-01-14 2013-01-09 中国人民解放军军事医学科学院附属医院 基于b7-1-pe40kdel外毒素融合基因的dna疫苗及其用途
US20120189621A1 (en) 2011-01-21 2012-07-26 Yann Dean Combination Therapies and Methods Using Anti-CD3 Modulating Agents and Anti-IL-6 Antagonists
SG192945A1 (en) 2011-02-25 2013-09-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Fcgriib-specific fc antibody
TW201945034A (zh) * 2011-09-30 2019-12-01 日商中外製藥股份有限公司 包含依離子濃度之條件對抗原之結合活性會改變之抗原結合分域、及於pH中性之條件下對FcRn有結合活性之FcRn結合分域、且誘導對標的抗原的免疫反應之抗原結合分子
TW201817744A (zh) 2011-09-30 2018-05-16 日商中外製藥股份有限公司 具有促進抗原清除之ＦｃＲｎ結合域的治療性抗原結合分子
JP6322411B2 (ja) 2011-09-30 2018-05-09 中外製薬株式会社 複数の生理活性を有する抗原の消失を促進する抗原結合分子
TWI589299B (zh) 2011-10-11 2017-07-01 再生元醫藥公司 用於治療類風濕性關節炎之組成物及其使用方法
JP6124800B2 (ja) 2011-11-30 2017-05-10 中外製薬株式会社 免疫複合体を形成する細胞内への運搬体（キャリア）を含む医薬
CA2861610A1 (en) 2011-12-30 2013-07-04 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against il-13 and/or il-17
EP2813568B1 (en) 2012-02-09 2025-04-23 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Modified fc region of antibody
WO2013175276A1 (en) * 2012-05-23 2013-11-28 Argen-X B.V Il-6 binding molecules
US9234035B2 (en) 2012-10-22 2016-01-12 Fountain Biopharma Inc. Antibodies to interleukin-6
TW201811825A (zh) 2012-11-01 2018-04-01 美商艾伯維有限公司 抗-ｖｅｇｆ／ｄｌｌ４雙重可變區域免疫球蛋白及其用途
US9168000B2 (en) 2013-03-13 2015-10-27 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Meal detection devices and methods
CA2904448A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Tariq Ghayur Dual specific binding proteins directed against il-1.beta. and/or il-17
EP3653207A1 (en) 2014-02-10 2020-05-20 Respivant Sciences GmbH Mast cell stabilizers treatment for systemic disorders
ES2792682T3 (es) 2014-02-10 2020-11-11 Respivant Sciences Gmbh Métodos para el tratamiento de enfermedades pulmonares con estabilizadores de mastocitos
RU2550262C1 (ru) * 2014-02-28 2015-05-10 Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов" Федерального медико-биологического агентства Моноклональное антитело против интерлейкина-6 человека и гибридома, продуцирующая данное моноклональное антитело
CN105037548B (zh) * 2014-04-21 2018-08-03 上海市免疫学研究所 抗人白介素-6受体β链单克隆抗体、其制备方法和用途
US9840553B2 (en) 2014-06-28 2017-12-12 Kodiak Sciences Inc. Dual PDGF/VEGF antagonists
US10093733B2 (en) 2014-12-11 2018-10-09 Abbvie Inc. LRP-8 binding dual variable domain immunoglobulin proteins
EP4600372A3 (en) 2014-12-19 2025-11-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-myostatin antibodies, polypeptides containing variant fc regions, and methods of use
BR112017011235A2 (pt) 2014-12-19 2018-02-06 Chugai Pharmaceutical Co Ltd anticorpos anti-c5 e métodos de uso
CN114773469B (zh) 2015-02-05 2025-12-19 中外制药株式会社 包含离子浓度依赖性的抗原结合结构域的抗体，fc区变体，il-8-结合抗体及其应用
TWI805046B (zh) 2015-02-27 2023-06-11 日商中外製藥股份有限公司 Il-6受體抗體用於製備醫藥組成物的用途
WO2016195088A1 (ja) 2015-06-04 2016-12-08 国立研究開発法人 国立精神・神経医療研究センター Ｉｌ－６阻害剤を有効成分とする精神疾患治療剤
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
NZ739392A (en) 2015-07-31 2019-10-25 Medimmune Ltd Methods for treating hepcidin-mediated disorders
US10238625B2 (en) 2015-08-07 2019-03-26 Respivant Sciences Gmbh Methods for the treatment of mast cell related disorders with mast cell stabilizers
WO2017027402A1 (en) 2015-08-07 2017-02-16 Patara Pharma, LLC Methods for the treatment of systemic disorders treatable with mast cell stabilizers, including mast cell related disorders
WO2017110981A1 (en) 2015-12-25 2017-06-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-myostatin antibodies and methods of use
NZ783685A (en) 2015-12-30 2025-09-26 Kodiak Sciences Inc Antibodies and conjugates thereof
EP3440108A4 (en) * 2016-04-07 2020-01-08 Janssen Biotech, Inc. DEPRESSION TREATMENT USING ACTIVE SUBSTANCES THAT BLOCK IL-6 BINDING TO THE IL-6 RECEPTOR
SG11201809786TA (en) * 2016-05-05 2018-12-28 Univ Pennsylvania Dna monoclonal antibodies targeting il-6 and cd126
KR102102734B1 (ko) 2016-08-05 2020-04-22 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 Il-8 관련 질환의 치료용 또는 예방용 조성물
CN110139646A (zh) 2016-08-31 2019-08-16 瑞思皮万特科学有限责任公司 用于治疗由特发性肺纤维化引起的慢性咳嗽的色甘酸组合物
AU2017339366A1 (en) 2016-10-07 2019-04-11 Respivant Sciences Gmbh Cromolyn compositions for treatment of pulmonary fibrosis
EP3574010A4 (en) 2017-01-30 2020-12-16 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha ANTI-SCLEROSTINE ANTIBODIES AND METHODS OF USE
KR20250029283A (ko) * 2017-02-01 2025-03-04 노보 노르디스크 에이/에스 이뇨제 내성의 치료
US11851486B2 (en) 2017-05-02 2023-12-26 National Center Of Neurology And Psychiatry Method for predicting and evaluating therapeutic effect in diseases related to IL-6 and neutrophils
US12150978B2 (en) 2017-06-15 2024-11-26 Cancer Advances Inc. Compositions and methods for preventing tumors and cancer
EP3624841A4 (en) 2017-06-15 2021-01-27 Cancer Advances, Inc., COMPOSITIONS AND METHODS FOR INDUCING HUMORAL AND CELLULAR IMMUNITIES AGAINST TUMORS AND CANCER
JP7295838B2 (ja) 2017-07-13 2023-06-21 シティ・オブ・ホープ ホスホロチオエートコンジュゲートペプチド及びその使用方法
EP3697425A1 (en) 2017-10-18 2020-08-26 Chemotherapeutisches Forschungsinstitut Georg-Speyer-Haus Methods and compounds for improved immune cell therapy
EP3698808B1 (en) 2017-10-20 2025-01-01 Hyogo College Of Medicine Anti-il-6 receptor antibody-containing medicinal composition for preventing post-surgical adhesion
CN109867723B (zh) * 2017-12-05 2022-06-17 南京金斯瑞生物科技有限公司 抗人il6单克隆抗体及其制备方法和用途
SG11202006157VA (en) 2018-01-05 2020-07-29 Corvidia Therapeutics Inc Methods for treating il-6 mediated inflammation without immunosuppression
SG11202008242XA (en) 2018-03-02 2020-09-29 Kodiak Sciences Inc Il-6 antibodies and fusion constructs and conjugates thereof
US12103972B2 (en) * 2018-04-06 2024-10-01 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. KIR3DL3 as an HHLA2 receptor, anti-HHLA2 antibodies, and uses thereof
CN109517064B (zh) * 2018-10-10 2020-05-08 北京汇智和源生物技术有限公司 白介素-6的人源化单克隆抗体、其编码基因及应用
US11279698B2 (en) 2018-11-20 2022-03-22 Cornell University Macrocyclic complexes of alpha-emitting radionuclides and their use in targeted radiotherapy of cancer
MX2021009242A (es) 2019-01-31 2021-10-26 Sanofi Biotechnology Anticuerpo anti-receptor de il-6 para tratar la artritis juvenil idiopatica.
WO2020178193A1 (en) 2019-03-01 2020-09-10 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method of treatment of sarcoidosis
AU2020261431A1 (en) 2019-04-24 2021-12-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of diagnosis and treatment of rheumatoid arthritis
MA55809B1 (fr) 2019-05-01 2025-12-31 Novo Nordisk A/S Formulations d'anticorps anti-il-6
TW202110892A (zh) 2019-06-04 2021-03-16 法商賽諾菲生物技術公司 治療具有類風濕性關節炎的個體中疼痛之組成物及方法
CN114375205A (zh) 2019-06-20 2022-04-19 武田药品工业株式会社 用基于病毒的基因疗法进行治疗的方法
JP7481077B2 (ja) * 2019-08-05 2024-05-10 インターナショナル・ビジネス・マシーンズ・コーポレーション 抗菌活性の向上を達成するためのコンビネーション・セラピー
AU2020364071A1 (en) 2019-10-10 2022-05-26 Kodiak Sciences Inc. Methods of treating an eye disorder
WO2022157493A1 (en) 2021-01-21 2022-07-28 Eusa Pharma (Uk) Limited Method for treating il-6 associated histiocytic and lymphoproliferative disorders
WO2022162354A1 (en) 2021-01-28 2022-08-04 Eusa Pharma (Uk) Limited Methods for treating rare disorders with anti-il-6 therapy
WO2022162352A1 (en) 2021-01-28 2022-08-04 Eusa Pharma (Uk) Limited Methods for treating rare disorders with anti-il-6 therapy
WO2022162351A1 (en) 2021-01-28 2022-08-04 Eusa Pharma (Uk) Limited Methods for treating rare disorders with anti-il-6 therapy
WO2022162358A1 (en) 2021-01-28 2022-08-04 Eusa Pharma (Uk) Limited Methods for treating rare disorders with anti-il-6 therapy
WO2022162357A1 (en) 2021-01-28 2022-08-04 Eusa Pharma (Uk) Limited Methods for treating igg4-related disease with anti-il-6 therapy
CN113057142B (zh) * 2021-03-30 2022-12-09 四川大学华西医院 一种视网膜内和/或视网膜下纤维化动物模型的构建方法
CN114373522B (zh) * 2022-01-13 2024-09-27 腾讯科技（深圳）有限公司 分子生成模型的训练方法、装置、设备及存储介质
CN114478672B (zh) * 2022-01-27 2024-06-14 浙江仙居君业药业有限公司 一种he3286的合成方法
CN117247451B (zh) * 2023-11-17 2024-02-09 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种针对人白介素6蛋白的单域抗体及其应用
WO2025217380A1 (en) 2024-04-10 2025-10-16 Recordati Rare Diseases Inc. Use of il-6 inhibitors for preventing or inhibiting immune-related adverse events in a subject
WO2025226628A1 (en) 2024-04-22 2025-10-30 Recordati Rare Diseases Inc. Use of il-6 inhibitors for preventing or inhibiting lung transplantation rejection in a subject
WO2025224095A1 (en) 2024-04-22 2025-10-30 Recordati Netherlands Bv Use of inhibitors of il-6 or il-6r for treating graft versus host disease in a subject

Family Cites Families (122)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US4309989A (en) 1976-02-09 1982-01-12 The Curators Of The University Of Missouri Topical application of medication by ultrasound with coupling agent
FR2374910A1 (fr) 1976-10-23 1978-07-21 Choay Sa Preparation a base d'heparine, comprenant des liposomes, procede pour l'obtenir et medicaments contenant de telles preparations
FR2413974A1 (fr) 1978-01-06 1979-08-03 David Bernard Sechoir pour feuilles imprimees par serigraphie
US5326859A (en) 1979-10-30 1994-07-05 Juridical Foundation, Japanese Foundation For Cancer Research DNA and recombinant plasmid
US5554513A (en) 1979-11-21 1996-09-10 Yeda Research & Development Co. Ltd. Production of recombinant human interferon-beta2
IL58765A (en) 1979-11-21 1986-09-30 Yeda Res & Dev Process for the production of essentially pure messenger rna of human fibroblast interferon and process for the production of interferon beta
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US5179017A (en) 1980-02-25 1993-01-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4634665A (en) 1980-02-25 1987-01-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4656134A (en) 1982-01-11 1987-04-07 Board Of Trustees Of Leland Stanford Jr. University Gene amplification in eukaryotic cells
US5149636A (en) 1982-03-15 1992-09-22 Trustees Of Columbia University In The City Of New York Method for introducing cloned, amplifiable genes into eucaryotic cells and for producing proteinaceous products
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5807715A (en) * 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US5168062A (en) 1985-01-30 1992-12-01 University Of Iowa Research Foundation Transfer vectors and microorganisms containing human cytomegalovirus immediate-early promoter-regulatory DNA sequence
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US4965188A (en) 1986-08-22 1990-10-23 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences using a thermostable enzyme
US6492107B1 (en) 1986-11-20 2002-12-10 Stuart Kauffman Process for obtaining DNA, RNA, peptides, polypeptides, or protein, by recombinant DNA technique
EP0229046B1 (fr) 1985-03-30 1994-05-04 BALLIVET, Marc Procede d'obtention d'adn, arn, peptides, polypeptides ou proteines, par une technique de recombinaison d'adn
SE448277B (sv) 1985-04-12 1987-02-09 Draco Ab Indikeringsanordning vid en doseringsanordning for lekemedel
US4766067A (en) 1985-05-31 1988-08-23 President And Fellows Of Harvard College Gene amplification
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US5618920A (en) 1985-11-01 1997-04-08 Xoma Corporation Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
DE3600905A1 (de) 1986-01-15 1987-07-16 Ant Nachrichtentech Verfahren zum dekodieren von binaersignalen sowie viterbi-dekoder und anwendungen
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US4800159A (en) 1986-02-07 1989-01-24 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences
SE453566B (sv) 1986-03-07 1988-02-15 Draco Ab Anordning vid pulverinhalatorer
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US4767402A (en) 1986-07-08 1988-08-30 Massachusetts Institute Of Technology Ultrasound enhancement of transdermal drug delivery
WO1988001213A1 (en) 1986-08-18 1988-02-25 Clinical Technologies Associates, Inc. Delivery systems for pharmacological agents
US4889818A (en) 1986-08-22 1989-12-26 Cetus Corporation Purified thermostable enzyme
US4921794A (en) 1987-01-14 1990-05-01 President And Fellows Of Harvard College T7 DNA polymerase
US4795699A (en) 1987-01-14 1989-01-03 President And Fellows Of Harvard College T7 DNA polymerase
EP0832981A1 (en) 1987-02-17 1998-04-01 Pharming B.V. DNA sequences to target proteins to the mammary gland for efficient secretion
US4873316A (en) 1987-06-23 1989-10-10 Biogen, Inc. Isolation of exogenous recombinant proteins from the milk of transgenic mammals
IL88375A (en) 1988-11-14 1995-07-31 Yeda Res & Dev Monoclonal antibodies that specifically bind interferon-bia 2 natural and recombinant and a natural and recombinant interferon-beta 2 purification method and method
US6010902A (en) 1988-04-04 2000-01-04 Bristol-Meyers Squibb Company Antibody heteroconjugates and bispecific antibodies for use in regulation of lymphocyte activity
US4956288A (en) 1988-04-22 1990-09-11 Biogen, Inc. Method for producing cells containing stably integrated foreign DNA at a high copy number, the cells produced by this method, and the use of these cells to produce the polypeptides coded for by the foreign DNA
US5130238A (en) 1988-06-24 1992-07-14 Cangene Corporation Enhanced nucleic acid amplification process
US5601819A (en) 1988-08-11 1997-02-11 The General Hospital Corporation Bispecific antibodies for selective immune regulation and for selective immune cell binding
US5091310A (en) 1988-09-23 1992-02-25 Cetus Corporation Structure-independent dna amplification by the polymerase chain reaction
US5066584A (en) 1988-09-23 1991-11-19 Cetus Corporation Methods for generating single stranded dna by the polymerase chain reaction
US5142033A (en) 1988-09-23 1992-08-25 Hoffmann-La Roche Inc. Structure-independent DNA amplification by the polymerase chain reaction
US6682896B1 (en) 1988-10-14 2004-01-27 Schering Aktiengesellschaft Peptides representing epitopic sites on r-IFN-β, antibodies thereto and uses thereof
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US4994370A (en) 1989-01-03 1991-02-19 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services DNA amplification technique
US5266491A (en) 1989-03-14 1993-11-30 Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. DNA fragment and expression plasmid containing the DNA fragment
DE3909708A1 (de) 1989-03-23 1990-09-27 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur herstellung bispezifischer antikoerper
CA2016841C (en) 1989-05-16 1999-09-21 William D. Huse A method for producing polymers having a preselected activity
EP0478627A4 (en) 1989-05-16 1992-08-19 William D. Huse Co-expression of heteromeric receptors
CA2016842A1 (en) 1989-05-16 1990-11-16 Richard A. Lerner Method for tapping the immunological repertoire
DK0479909T3 (da) 1989-06-29 1997-04-07 Medarex Inc Bispecifikke reagenser til AIDS-behandling
AU7160391A (en) 1989-12-15 1991-07-18 Lucien A Aarden Cytokine antibody for the treatment of sepsis
US5580575A (en) 1989-12-22 1996-12-03 Imarx Pharmaceutical Corp. Therapeutic drug delivery systems
US6075181A (en) * 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5942220A (en) 1990-03-16 1999-08-24 Chiron Corporation Inhibitor of cytokine activity and applications thereof
US5358673A (en) * 1990-02-15 1994-10-25 3D Systems, Inc. Applicator device and method for dispensing a liquid medium in a laser modeling machine
TW212184B (no) 1990-04-02 1993-09-01 Takeda Pharm Industry Co Ltd
JPH06500011A (ja) 1990-06-29 1994-01-06 ラージ　スケール　バイオロジー　コーポレイション 形質転換された微生物によるメラニンの製造
US5580734A (en) 1990-07-13 1996-12-03 Transkaryotic Therapies, Inc. Method of producing a physical map contigous DNA sequences
WO1992008802A1 (en) 1990-10-29 1992-05-29 Cetus Oncology Corporation Bispecific antibodies, method of production, and uses thereof
US5582996A (en) 1990-12-04 1996-12-10 The Wistar Institute Of Anatomy & Biology Bifunctional antibodies and method of preparing same
US5404871A (en) 1991-03-05 1995-04-11 Aradigm Delivery of aerosol medications for inspiration
DK0575545T3 (da) 1991-03-15 2003-09-15 Amgen Inc Pegylering af polypeptider
DE4118120A1 (de) 1991-06-03 1992-12-10 Behringwerke Ag Tetravalente bispezifische rezeptoren, ihre herstellung und verwendung
US5637481A (en) 1993-02-01 1997-06-10 Bristol-Myers Squibb Company Expression vectors encoding bispecific fusion proteins and methods of producing biologically active bispecific fusion proteins in a mammalian cell
CA2112674C (en) 1991-07-02 2005-10-04 John S. Patton Method and device for delivering aerosolized medicaments
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
US5641670A (en) 1991-11-05 1997-06-24 Transkaryotic Therapies, Inc. Protein production and protein delivery
US5968502A (en) 1991-11-05 1999-10-19 Transkaryotic Therapies, Inc. Protein production and protein delivery
US5932448A (en) 1991-11-29 1999-08-03 Protein Design Labs., Inc. Bispecific antibody heterodimers
CA2103887C (en) 1991-12-13 2005-08-30 Gary M. Studnicka Methods and materials for preparation of modified antibody variable domains and therapeutic uses thereof
DE4207475A1 (de) 1992-03-10 1993-09-16 Goldwell Ag Mittel zum blondieren von menschlichen haaren und verfahren zu dessen herstellung
EP0583020B1 (en) * 1992-05-20 1998-08-12 Eastman Kodak Company Photographic material with improved granularity
WO1994006498A1 (en) 1992-09-23 1994-03-31 Fisons Plc Inhalation device
AU5322494A (en) 1992-10-02 1994-04-26 Trustees Of Dartmouth College Bispecific reagents for redirected targeting of low density lipoprotein
RO113214B1 (ro) 1992-10-19 1998-05-29 Dura Pharma Inc Inhalator de pulbere uscata
EP0672144A1 (en) 1992-10-20 1995-09-20 Chiron Corporation Interleukin-6 receptor antagonists
US5643252A (en) 1992-10-28 1997-07-01 Venisect, Inc. Laser perforator
US5849695A (en) 1993-01-13 1998-12-15 The Regents Of The University Of California Parathyroid hormone analogues useful for treatment of osteoporosis and disorders of calcium meatabolism in mammals
EP0680451B1 (en) 1993-01-19 1998-11-04 Glaxo Group Limited Aerosol dispenser and method of manufacture
ATE453709T1 (de) 1993-02-12 2010-01-15 Univ Leland Stanford Junior Regulierte transkription von zielgerichteten genen und andere biologische ereignisse
JP3525221B2 (ja) 1993-02-17 2004-05-10 味の素株式会社 免疫抑制剤
US5888511A (en) * 1993-02-26 1999-03-30 Advanced Biotherapy Concepts, Inc. Treatment of autoimmune diseases, including AIDS
EP0754225A4 (en) 1993-04-26 2001-01-31 Genpharm Int HETEROLOGIC ANTIBODY-PRODUCING TRANSGENIC NON-HUMAN ANIMALS
TW458985B (en) 1993-05-31 2001-10-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Reconstructed human antibody against human interleukin-6
US5891998A (en) 1993-06-23 1999-04-06 Istituto Di Ricerche Di Biologica Molecolare P. Angeletti S.P.A. Interleukin-6 receptor agonists
US5888510A (en) 1993-07-21 1999-03-30 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component
FR2707882B1 (fr) 1993-07-23 1997-08-01 Immunotech Sa Nouveaux kits thérapeutiques anti-médiateurs protéiques, procédé de préparation et compositions pharmaceutiques les renfermant.
US5514670A (en) 1993-08-13 1996-05-07 Pharmos Corporation Submicron emulsions for delivery of peptides
DE4337197C1 (de) 1993-10-30 1994-08-25 Biotest Pharma Gmbh Verfahren zur selektiven Herstellung von Hybridomazellinien, die monoklonale Antikörper mit hoher Zytotoxizität gegen humanes CD16-Antigen produzieren, sowie Herstellung bispezifischer monoklonaler Antikörper unter Verwendung derartiger monoklonaler Antikörper und des CD30-HRS-3-Antikörpers zur Therapie menschlicher Tumore
US5814599A (en) 1995-08-04 1998-09-29 Massachusetts Insitiute Of Technology Transdermal delivery of encapsulated drugs
US5827690A (en) 1993-12-20 1998-10-27 Genzyme Transgenics Corporatiion Transgenic production of antibodies in milk
CA2183268C (en) 1994-03-07 2001-05-15 Edward D. Ball Bispecific molecules having clinical utilities
US5641657A (en) 1994-05-19 1997-06-24 Human Genome Sciences, Inc. DNA encoding an interleukin-6 splice variant
US8017121B2 (en) * 1994-06-30 2011-09-13 Chugai Seiyaku Kabushika Kaisha Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component
EP0791359A4 (en) * 1994-10-21 2002-09-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd MEDICINE AGAINST IL-6 PRODUCTION IN DISEASES
IT1274782B (it) 1994-12-14 1997-07-24 Angeletti P Ist Richerche Bio Metodo per selezionare superagonisti, antagonisti e superantagonisti di ormoni del cui complesso recettoriale fa parte gp 130
DE69525971T3 (de) * 1994-12-29 2013-01-10 Chugai Seiyaku K.K. Verwendung eines pm-1 antikörpers oder eines mh 166 antikörpers zur verstärkung des anti-tumor-effektes von cisplatin oder carboplatin
JP4540132B2 (ja) 1995-02-13 2010-09-08 中外製薬株式会社 Ｉｌ−６レセプター抗体を含んでなる筋蛋白分解抑制剤
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US6037453A (en) 1995-03-15 2000-03-14 Genentech, Inc. Immunoglobulin variants
IT1276555B1 (it) 1995-04-28 1997-11-03 Angeletti P Ist Richerche Bio Antagonisti di interluchina-6 umana del tutto incapaci di formare un legame con gp 130, e loro uso per la preparazione di composizioni
US5730723A (en) 1995-10-10 1998-03-24 Visionary Medical Products Corporation, Inc. Gas pressured needle-less injection device and method
GB9526100D0 (en) 1995-12-20 1996-02-21 Intersurgical Ltd Nebulizer
EP0938907B1 (en) 1996-01-03 2001-12-05 Glaxo Group Limited Inhalation device
US5714352A (en) 1996-03-20 1998-02-03 Xenotech Incorporated Directed switch-mediated DNA recombination
US5854398A (en) 1996-07-25 1998-12-29 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (KSHV) interleukin 6 (IL-6) and uses thereof
DK0826695T3 (da) 1996-09-03 2002-04-15 Gsf Forschungszentrum Umwelt Tilintetgørelse af kontaminerende tumorceller i stamcelletransplantater med bispecifikke antistoffer
US5879681A (en) 1997-02-07 1999-03-09 Emisphere Technolgies Inc. Compounds and compositions for delivering active agents
US5921447A (en) 1997-02-13 1999-07-13 Glaxo Wellcome Inc. Flow-through metered aerosol dispensing apparatus and method of use thereof
JPH10302563A (ja) * 1997-04-22 1998-11-13 Yazaki Corp グロメット
IL120943A (en) 1997-05-29 2004-03-28 Univ Ben Gurion A system for administering drugs through the skin
US6011288A (en) * 1997-12-22 2000-01-04 Taiwan Semiconductor Manufacturing Company, Ltd. Flash memory cell with vertical channels, and source/drain bus lines
US7098309B2 (en) * 1998-12-23 2006-08-29 Merck & Co., Inc. Recombinant hepatitis B surface antigen
US20020010320A1 (en) * 1999-04-05 2002-01-24 James W. Fett Chemeric and humanized antibodies to angiogenin
AU2001236807A1 (en) 2000-02-10 2001-08-20 Abbott Laboratories Antibodies that bind human interleukin-18 and methods of making and using
JP5470817B2 (ja) 2008-03-10 2014-04-16 日産自動車株式会社 電池用電極およびこれを用いた電池、並びにその製造方法
TWI503850B (zh) 2013-03-22 2015-10-11 Polytronics Technology Corp 過電流保護元件
TWI510996B (zh) 2013-10-03 2015-12-01 Acer Inc 控制觸控面板的方法以及使用該方法的可攜式電腦
US9816280B1 (en) 2016-11-02 2017-11-14 Matthew Reitnauer Portable floor

Also Published As

Publication number Publication date
BRPI0214168B8 (pt) 2021-05-25
US7955597B2 (en) 2011-06-07
JP2007528691A (ja) 2007-10-18
CA2467719A1 (en) 2003-05-13
NO20042418L (no) 2004-08-05
ES2624547T3 (es) 2017-07-14
EP2308888A1 (en) 2011-04-13
IL161968A0 (en) 2005-11-20
US7612182B2 (en) 2009-11-03
TW200301134A (en) 2003-07-01
US20120096569A1 (en) 2012-04-19
US20070292420A1 (en) 2007-12-20
RU2318829C2 (ru) 2008-03-10
LU92543I2 (fr) 2014-11-05
AU2002346369A1 (en) 2004-05-25
BRPI0214168B1 (pt) 2020-11-10
CY1118955T1 (el) 2018-01-10
CY2014038I2 (el) 2015-12-09
DK2308888T3 (en) 2017-06-06
TWI329019B (en) 2010-08-21
CN1694894A (zh) 2005-11-09
US20110218329A1 (en) 2011-09-08
AR037384A1 (es) 2004-11-03
CA2467719C (en) 2015-03-17
MXPA04004671A (es) 2005-08-25
CY1114738T1 (el) 2015-12-09
US20140141013A1 (en) 2014-05-22
RU2004114882A (ru) 2005-04-20
BE2014C052I2 (no) 2022-02-01
HK1079213A1 (en) 2006-03-31
CY2014038I1 (el) 2015-12-09
NO2014025I2 (no) 2014-09-24
MY142290A (en) 2010-11-15
NO2014025I1 (no) 2014-09-24
PT1562968E (pt) 2013-10-23
US20080312172A1 (en) 2008-12-18
KR20100120246A (ko) 2010-11-12
FR14C0064I2 (fr) 2022-07-08
HK1083509A1 (zh) 2006-07-07
EP1562968A4 (en) 2006-08-23
NO334574B1 (no) 2014-04-14
WO2004039826A1 (en) 2004-05-13
NL300687I2 (no) 2016-10-11
US20090291084A1 (en) 2009-11-26
AU2002346369B2 (en) 2009-08-27
EP2308888B1 (en) 2017-03-01
CN100374457C (zh) 2008-03-12
ES2436206T3 (es) 2013-12-27
US20060188502A1 (en) 2006-08-24
PT2308888T (pt) 2017-05-03
EP1562968A1 (en) 2005-08-17
FR14C0064I1 (no) 2014-10-17
EP1562968B1 (en) 2013-08-21
BR0214168A (pt) 2004-09-14
NZ533223A (en) 2007-04-27
US7291721B2 (en) 2007-11-06
US7833786B2 (en) 2010-11-16
DK1562968T3 (da) 2013-10-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2318829C2 (ru) Антитела против il-6, композиции, способы и применение
RU2532826C2 (ru) Гуманизированные антитела против il-6
JP4934207B2 (ja) 抗ｉｌ−６抗体、組成物、方法および使用
JP5956507B2 (ja) 抗ｉｌ−６抗体、組成物、方法および使用
JP5583095B2 (ja) 抗ｉｌ−６抗体、組成物、方法および使用
KR101073471B1 (ko) 항 ｉｌ-6 항체, 조성물, 방법 및 용도
HK1158656A (en) Anti-il-6 antibodies, compositions, methods and uses
HK1158656B (en) Anti-il-6 antibodies, compositions, methods and uses
HK1079213B (en) Anti-il-6 antibodies, compositions, methods and uses

Legal Events

Date Code Title Description
FC2A Withdrawal, rejection or dismissal of laid open patent application