MXPA00001614A - Composiciones detergentes que constan de una mananasa y percarbon - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a composiciones detergentes que constan de una mananasa y percarbonato para rendimiento superior de limpieza, incluyendo remoción de manchas y mantenimiento de blancu

Description

COMPOSICIONES DETERGENTES QUE CONSTAN DE UNA MANANASA Y PERCARBONATO CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a composiciones detergentes que constan de una mananasa y percarbonato.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El perborato es bien conocido en la técnica como un aditivo de lavandería o lavado de trastes que provee oxígeno disponible a través de un mecanismo de liberación de peróxido de hidrógeno. El perborato es utilizado ampliamente en el detergente de lavandería o lavado de trastes debido a su alto rendimiento y a su bajo costo. Sin embargo ha sido reconocido en la técnica que el producto lateral formado durante la liberación de peróxido de hidrógeno desde el perborato, es decir los derivados de meta borato, forman complejo con polímeros de azúcar como almidón y conducen a limpieza negativa (EP-A-736 085). Ha sido descubierto de manera sorpresiva que los polímeros de mañosa como la goma de guar también se entrecruzan con perborato volviendo a las manchas de alimentos o cosméticos aún más difíciles de remover mediante detergentes que contienen perborato. Ha sido descubierto adicionalmente de manera sorpresiva que el entrecruzamiento del borato con la goma de guar reduce la actividad de la enzima sobre tales substratos de complejo de goma/borato. De hecho, las manchas/suciedades de alimentos y cosméticos representan la mayoría de las manchas/suciedades relevantes al consumidor y con frecuencia consisten de agentes engrosadores/estabilizadores. De hecho, las gomas y emulsificadores hidrocoloides son aditivos de alimentos que se utilizan comúnmente. El término "goma" denota un grupo de polisacáridos ¡ndustrialmente útiles (polímero de cadena larga) o sus derivados que se hidratan en agua caliente o fría para formar soluciones viscosas, dispersiones o geles. Las gomas se clasifican como naturales y modificadas. Las gomas naturales incluyen extractos de alga, exudados de plantas, gomas de semilla o raíz, y gomas obtenidas de fermentación microbiana. Las gomas modificadas (sintéticas) incluyen derivados de almidón y celulosa y ciertas gomas sintéticas como pectina de bajo metoxil, alginato de propilenglicol, y goma de guar de carboximetilo e hidropropilo (Gums en Encyclopedia Chemical Technology 4th Ed. Vol. 12, pp842-862, J. Baird, Kelco división of Merck). Consultar también Carbohydrate Chemistry for Food Scientists (Eagan Press-1997) por R.L. Whistler y J.N. BeMiller, Cap. 4, pp63-89 y Direct Food Aditives in Fruit Processing por P. Laslo, Bioprinciples and Applications, Vol. 1 , Cap. II, pp313-325 (1996) Technomie Publishing. Algunas de estas gomas como la goma de guar (E412), algarrobo (E410), son utilizadas ampliamente solas o en combinaciones en muchas aplicaciones de alimentos (Gomas en ECT 4th Ed., Vof.12 , pp842-862, J. Baird, Kelco división of Merck). La goma de guar utilizada en esas manchas de alimentos y cosméticos se obtiene a partir del endosperma de la semilla de la planta leguminosa Cyamopsis tetragonoloba. La goma de guar (también llamada guaran) extraída de la semita dicotiledónea está compuesta de una unidad de estructura de base de 1-4,b-D-mannopiranosil y se utiliza como un agente engrasador en aderezos y productos congelados y cosméticos (H.D. Belitz, Food Chemistry, pp243, versión en inglés de la segunda edición, Springer-verlag, 1987, ISBN 0-387-15043-9 (US)) y (Carbohydrate Chemistry for Food Scientists por R.L. Whistler, Eagan Press-1997, ISBN 0-913250-92-9) y (Industrial Gum, segunda edición, R.L. Whistler pp 308, Academic Press, 1973, ISBN, 0-12-74-6252-x). La goma de algarrobo (también llamada goma de frijol de cárabo o pan de San Juan) también se utiliza en la industria de alimentos y se extrae de una siempreviva cultivada en el área del Mediterráneo. La goma de algarrobo probablemente difiere de la estructura de la goma de guar en el número más pequeño de cadenas laterales de D-galactosilo y tiene la misma estructura de base 1-4, b-D-mannopiranosilo. En semillas de leguminosas, la galactomanana es el carbohidrato de almacenamiento principal, constando de hasta el 20% del peso total seco en algunos casos. La galactomanana tiene una a-galactosa encadenada a 0-6 residuos de mannosa y también puede estar acetilada a varios grados sobre O-2 y O-3 de los residuos de mannosa.

De manera adicional, la acción del percarbonato sobre manchas blanqueables es ampliamente conocida en la técnica. El ingrediente activo liberado del percarbonato, es decir H2O2, es idéntico al ingrediente activo liberado desde el perborato, pero sin la liberación de material de borato. Ha sido ahora descubierto de manera sorpresiva que el uso combinado de percarbonato y mananasa, especialmente a niveles específicos, provee una remoción sinergética de manchas difíciles como manchas de alimentos y cosméticos que constan de mañanas, en particular a bajas temperaturas. Ha sido descubierto adicionalmente que el sistema ternario que consiste de percarbonato/mananasa/proteasa a niveles específicos provee un resultado aún mejor sobre dichas manchas. Las mananasas han sido identificadas en varios organismos Bacillus. Por ejemplo Talbot et al, Appl. Environ. Microbiol., vol. 56, No. 11 , pp. 3505-3510. (1990) describe una ß-mananasa derivada de Bacillus stearotermophilus en forma de dímero que tiene un PM de 162 kDa y un pH óptimo de 5.5-7.5. Mendoza et al, World J. Microbio. Boitech., vol. 10, no. 5, pp. 551-555 (1994) describe una ß-mananasa derivada de Bacillus subtilisis que tiene un PM de 38 kDa y una actividad óptima a pH de 5.0/55°C y un pl de 5.3-5.4. J63056289 describe la producción de una ß-mananasa termoestable, alcalina, que hidroliza enlaces ß--1 ,4-D-mannopiranosido de por ejemplo mannanas y produce manno:oligo:sacáridos. J63036774 se refiere a un microorganismo Bacillus FERM P-8856 que produce ß-mananasa y ß-manosidasa, a un pH alcalino. Una mananasa purificada a partir de Bacillus .^ ¿j ¿É-?á -% amyloliquefaciens y su método de preparación útil en el blanqueo de pulpa y papel, se describe en WO97/11164. WO91/18974 describe una hemicelulasa como glucanasa, xilanasa, o mananasa, activa a pH y temperatura extremos y la producción de la misma. WO94/25576 describe una enzima que exhibe un a actividad mananasa derivada de Aspergillus aculeatus CBS 101.43, que podría ser utilizada para varios propósitos para los cuales se desea la degradación o la modificación de material de pared de célula de planta o de alga. Wo93/24622 describe una mananasa aislada de Trichoderma reesie para blanquear pulpas lignocelulósicas. Sin embargo, la combinación sinergística de una mananasa y percarbonato, para un rendimiento superior de limpieza en una composición detergente, es decir, remoción superior de manchas, especialmente en manchas de alimentos y cosméticos que contienen mañanas, limpieza de manchas y mantenimiento de blancura, nunca ha sido reconocida previamente. Adicionalmente la combinación sinergística de una mananasa y percarbonato y proteasa, para un rendimiento superior de limpieza en una composición detergente, es decir, remoción superior de manchas, especialmente en manchas de alimentos y cosméticos que contienen mañanas, limpieza de manchas y mantenimiento de blancura, nunca ha sido reconocida previamente.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a composiciones detergentes que constan de una mananasa y percarbonato. Estas composiciones proveen rendimiento superior de limpieza, es decir, remoción superior de manchas, especialmente sobre manchas de alimentos y cosméticos que contienen mañanas, limpieza de manchas y mantenimiento de blancura.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Un elemento esencial de la composición detergente de la presente invención es una enzima mananasa. El uso de mananasa provee beneficios significantes de remoción de manchas sobre manchas como manchas de alimentos y cosméticos que contienen gomas hidrocoloides como goma de guar. Hemos descubierto de manera sorpresiva que la combinación d perborato y mananasa provee beneficios de rendimiento de limpieza limitados. Se cree que este rendimiento limitado es debido a la presencia de meta borato que puede entrelazarse con la goma hidrocoloide contenida en las manchas. En contraste, ha sido descubierto que el uso de percarbonato, es decir, el material que provee oxígeno disponible sin formar derivados de meta borato, provee en combinación con la mananasa de la presente invención, una limpieza sinergística sobresaliente.

Por lo tanto, la presente invención se refiere al uso de la enzima mananasa en combinación con percarbonato. Esta combinación provee beneficios sinergísticos sobresalientes de blanqueamiento y/o remoción de manchas sobre manchas de alimentos o cosméticos que contienen gomas hidrocoloides sensibles a mananasa como goma de guar o goma de frijol loco. Sin desear estar limitado por la teoría, se cree que el agente blanqueador de percarbonato no forma complejo con las gomas presentes en las manchas y por lo tanto facilita el acceso de la enzima y/o el agente blanqueador a dichas manchas. Más aún, se cree que este efecto sinergístico se debe a a) el uso de percarbonato que blanquea el cromóforo de la goma que contiene las manchas sin entrelazamiento y b) la acción de la mananasa sobre el polímero hidrocoloide para formar residuos pequeños más solubles y probando que provee alta remoción de los residuos hidrocoloides conocidos por tener una alta afinidad por la superficie de algodón de las prendas. Adicionalmente, se cree que la sinergia es debida a la ausencia de iones de borato que son conocidos por actuar como agentes de entrelazamiento con goma de guar hidratada (ver Industrial Gum, second edition, R.L.Whistler pp 317, Academic Press, 1973, ISBN, 0-12-74-6252-x).

La enzima mananasa Un elemento esencial de las composiciones detergentes de la presente invención es una enzima mananasa.

Abarcadas en la presente invención están las siguientes tres enzimas que degradan mañanas: EC 3.21.25 : ß-mannosidasa, EC 3.2.1.78 : Endo-1 ,4-ß-mannosidasa, referida en la misma como "mananasa" y EC 3.2.100 : 1 ,4-ß-mannobiosidasa, (nomenclatura de Clasificación de Enzima IUPAC, 1992 ISBN 0-12-227165-3 Academic Press). Más preferiblemente, las composiciones detergentes de la presente invención constan de una ß-1 ,4-Mannosidasa ( EC 3.2.1.78) referida como Mananasa. El término "mananasa" o "galactomananasa" denota una enzima mananasa definida de acuerdo con la técnica como siendo llamada oficialmente mannan endo-1 ,4-beta-manosidasa y teniendo los nombres alternos beta-mananasa y endo-1 ,4-mananasa y catalizando la reacción: hidrólisis aleatoria de encadenamientos 1 ,4-beta-D-mannosídicos en mannanas, galactomannanas glucomannanas y galactoglucomannanas. En particular, las mananasas (EC 3.2.1.78) constituyen un grupo de polisacarasas las cuales degradan mannanas y denotan enzimas que son capaces de cortar cadenas de poliosa que contienen unidades mannosa, es decir son capaces de cortar enlaces glicosídicos en mannanas, glucomannanas, galactomannanas y galactoglucomannanas. Las mannanas son polisacáridos que tienen una estructura de base compuesta de mannosa ß-1 ,4- encadenada; las glucomannanas son polisacáridos que tienen una estructura de base de mañosa y glucosa ß-1 ,4- encadenada que se alternan más o menos regularmente; Las galactomannanas y galactoglucomannanas son mañanas y gludomananas con ramas laterales a-1 ,6 galactosa encadenadas. Estos compuestos pueden ser acetilados. La degradación de galactomannanas y galactoglucomannanas se facilita por la remoción total o parcial de las ramas laterales de galactosa. Además de la degradación de las mañanas, glucomannanas, galactomannanas y galactoglucomannanas acetiladas se facilita por una desacetilación total o parcial. Los grupos acetilo pueden ser removidos mediante acetilestearasas álcali o mannana. Los oligomeros que son liberados de las mananasa o mediante una combinación de mananasa y ocgalactosidasa y/o mannan acetil estearasas pueden ser degradados adicionalmente para liberar maltosa libre mediante ß-mannosidasa y/o ß-glucosidasa. Las mannanasas han sido identificadas en varios organismos Bacillus. Por ejemplo, Talbot et al., Appl. Environ. Microbiol., Vol. 56, No. 11 , pp 3505-3510 (1990) describe una beta-mananasa derivada de Bacillus stearothermophilus en forma de dímero que tiene un peso molecular de 162 kDa y un pH óptimo de 5.5-7.5. Mendoza et al, World J. Microbiol. Boitech., vol. 10, no. 5, pp. 551-555 (1994) describe una ß-mannanasa derivada de Bacillus subtilisis que tiene un peso molecular de 38 kDa, una actividad óptima a pH de 5.0 y 55°C y un pl de 4.8. JP0304706 describe una beta-mannanasa derivada de Bacillus sp., que tiene un peso molecular de 373 kDa medido mediante filtración de gel, un pH óptimo de 8-10 y un pl de 5.3-5.4. JP-63056289 describe la producción de una beta-mananasa termoestable, alcalina, que hidroliza enlaces beta-1 ,4-D-mannopiranosido de por ejemplo mannanas y produce manno-oligosacáridos. JP-63036774 se refiere a un microorganismo Bacillus FERM P-8856 que produce beta-mananasa y beta-manosidasa a un pH alcalino. JP-08051975 describe beta-mananasas alcalinas a partir de Bacillus sp. Alcalofílico AM-001. Una mananasa purificada a partir de Bacillus amyloliquefaciens útil en el blanqueo de pulpa y papel y su método de preparación, se describe en WO 97/11164. WO 91/18974 describe una hemicelulasa como glucanasa, xilanasa, o mananasa, activa a pH y temperatura extremos. WO 94/25576 describe una enzima derivada de Aspergillus aculeatus CBS 101.43, que exhibe un a actividad mananasa que podría ser útil para la degradación o la modificación de material de pared de célula de planta o de alga. WO 93/24622 describe una mananasa aislada de Trichoderma reesie útil para blanquear pulpas lignocelulósicas. Una hemicelulasa capaz de degradar hemicelulosa que contiene mañana se describe en W091/18974 y una mananasa purificada a partir de Bacillus amyloliquefaciens se describe en W097/11164. En particular, esta enzima mananasa será una mananasa alcalina como se define enseguida, más preferiblemente, una mananasa que se origina de una fuente bacterial. Especialmente, la composición detergente para lavandería de la presente invención constará de una mananasa alcalina seleccionada de la mananasa de la cepa Bacillus agaradherens y/o Bacillus subtilisis cepa 168, gen yght. ít El término "enzima mananasa alcalina" significa que abarca una enzima que tiene una actividad enzimática de al menos 10%, preferiblemente al menos 25%, más preferiblemente al menos 40% de su actividad máxima a un pH dado en la escala de 7 a 12, preferiblemente de 7.5 a 10.5. Más preferiblemente, la composición detergente de la presente invención constará de mananasa alcalina a partir de Bacillus agaradherens. Dicha mananasa es: i) un polipéptido producido mediante Bacillus agaradherens, NCIMB 40482, o ii) un polipéptido que consta de una secuencia de aminoácido como se muestra en las posiciones 32-343 de SEQ ID NO:2 o iii) un análogo del polipéptido definido en i) o ii) el cual es al menos 70% homólogo con dicho polipéptido, o es derivado de dicho polipéptido mediante sustitución, eliminación o adición de uno o varios aminoácidos, o es inmunológicamente reactivo con el anticuerpo policlonal cultivado contra dicho polipéptido en forma purificada. La presente invención también abarca un polipéptido aislado que tiene actividad mananasa seleccionado del grupo consistente de (a) moléculas de polinucleótido que codifican un polipéptido que tiene actividad mananasa y que consta de una secuencia de nucleótidos como se muestra en SEQ ID NO: 1 del nucleótido 97 al nucleótido 1029; (b) especies homologas de (a); (c) moléculas de polinucleótido que codifican un polipéptido que tiene actividad mananasa que es al menos 70% idéntico a la secuencia de aminoácido de SEQ ID NO:2 desde el residuo de aminoácido 32 al residuo de aminoácido 343; (d) moléculas complementarias a (a), (b) o (c ); y (e) secuencias de nucleótidos degeneradas de (a), (b), (c ) o (d). El plásmido pSJ1678 que comprende la molécula de polinucleótido (la secuencia de ADN) que codifica una mananasa de la presente invención ha sido transformada en una cepa de la Escherichia coli que fue depositada por los inventores de acuerdo con el Tratado de Budapest sobre el Reconocimiento Internacional del Depósito de Microorganismos para Propósitos de Procedimientos de Patente en el Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Mascheroder Weg 1 b, D-38124 Braunschweig, República Federal de Alemania, el 18 de mayo de 1998 bajo el número de deposición DSM 12180. Una segunda enzima más preferida es la mananasa a partir de la cepa 168 de Bacillus subtilisis, cuya mananasa: i) está codificada por la parte codificadora de la secuencia de ADN mostrada en SEQ ID NO. 5 o un análogo de dicha secuencia y/o ii) un polipéptido que consta de una secuencia de aminoácido como se muestra en las posiciones 32-343 de SEQ ID NO:6 o iii) un análogo del polipéptido definido en i) o ii) el cual es al menos 70% homólogo con dicho polipéptido, o es derivado de dicho polipéptido mediante sustitución, eliminación o adición de uno o varios aminoácidos, o es inmunológicamente reactivo con el anticuerpo policlonal cultivado contra dicho polipéptido en forma purificada. La presente invención también abarca un polipéptido aislado que tiene actividad mananasa seleccionado del grupo consistente de (a) moléculas de polinucleótido que codifican un polipéptido que tiene actividad mananasa y que consta de una secuencia de nucleótidos como se muestra en SEQ ID NO: 5 (b) especies homologas de (a); (c) moléculas de polinucleótido que codifican un polipéptido que tiene actividad mananasa que es al menos 70% idéntico a la secuencia de aminoácido de SEQ ID NO:6 (d) moléculas complementarias a (a), (b) o (c ); y (e) secuencias de nucleótidos degeneradas de (a), (b), (c ) o (d).

Definiciones Antes de discutir esta invención en detalle adicional, se definirán primero los siguientes términos: El término "ortólogo" (o "especies homologas") denota un polipéptido o proteína obtenida a partir de una especie que tiene homología a un polipéptido o proteína análogos a partir de una especie diferente. El término "paralogo" denota un polipéptido o proteína obtenida a partir de una especie dada que tiene homología a una proteína o polipéptido distinta de esa misma especie. El término "vector de expresión" denota una molécula de ADN, lineal o circular, que consta de un segmento que codifica un polipéptido de interés encadenado de manera operable a segmentos adicionales que proveen su transcripción. Tales segmentos adicionales pueden incluir secuencias promotora y terminadora, y pueden incluir de manera opcional uno o más orígenes de duplicación, uno o más marcadores seleccionables, un mejorador, una señal de poliadenilación, y similares. Los vectores de expresión se derivan en general a partir de ADN plásmido o viral, y pueden contener elementos de ambos. El vector de expresión de la invención puede ser cualquier vector de expresión que es sometido de manera conveniente a procedimientos de ADN recombinante, y la selección del vector dependerá con frecuencia de la célula hospedero en la cual el vector debe ser introducido. De esta manera, el vector puede ser un vector de replicación de manera autónoma, es decir, un vector que existe como una entidad cromosomal extra, la replicación de la cual es independiente de la replicación cromosomal, por ejemplo un plásmido. De manera alternativa, el vector puede ser uno que, cuando es introducido en una célula hospedero, es integrado en el genoma de la célula hospedero y es replicado junto con el cromosoma(s) en el cual ha sido integrado. El término "expresado recombinante" o "expresado de manera recombinante" utilizados en la presente en relación con la expresión de un polipéptido o proteína es definido de acuerdo con la definición estándar en la técnica. La expresión de manera recombinante de una proteína se realiza en general utilizando un vector de expresión como se describe anteriormente. El término "aislado", cuando es aplicado a una molécula de polinucleótido, denota que el polinucleótido ha sido removido de su medio ambiente genético natural y está por lo tanto libre de otras secuencias de codificación indeseadas o extrañas, y está en forma adecuada para utilizarse dentro de sistemas de producción de proteínas diseñadas genéticamente. Dichas moléculas aisladas son aquéllas que están separadas de su medio ambiente natural e incluyen clones de ADNc y genómicos. Las moléculas de ADN aisladas de la presente invención están libres de otros genes con los cuales están normalmente asociadas, pero pueden incluir regiones no traducidas de 5' y 3' que ocurren de manera natural como promotores y terminadores. La identificación de las regiones asociadas será evidente para alguien de habilidad normal en la técnica (ver, por ejemplo, Dynan and Tijan, Nature 316:774-78, 1985).

El término "polinucleótido aislado" puede ser llamado de manera alternativa "polinucleótido clonado". Cuando se aplica a una proteína/polipéptido, el término "aislado" significa que la proteína se encuentra en una condición diferente a la de su medio ambiente nativo. En una forma preferida, la proteína aislada está sustancialmente libre de otras proteínas, particularmente otras proteínas homologas (es decir, "impurezas homologas" (ver enseguida)). Se prefiere proveer una proteína que está más de 40% en forma pura, más preferiblemente más de 60% en forma pura. Aún más preferiblemente se prefiere proveer la proteína en una forma muy purificada, es decir, más grande de 80% pura, más preferiblemente más de 95% pura, y aún más preferiblemente 99% pura, según se determina por SDS-PAGE. El término "proteína/polipéptido aislado" puede ser llamado de manera alternativa "proteína/polipéptido purificado". El término "impurezas homologas" significa cualquier impureza (por ejemplo, otro polipéptido diferente al polipéptido de la invención) que se origina a partir de la célula homologa de la que fue obtenido originalmente el polipéptido de la invención. El término "obtenido de" como se utiliza en la presente en conexión con una fuente microbiana específica, significa que el polinucleótido y/o polipéptido producido por la fuente específica, o por una célula en la cual un gen de esa fuente ha sido insertado. El término "encadenado de manera operable", cuando se refiere a segmentos de ADN, denota que los segmentos están dispuestos de manera que funcionen en concordancia para sus propósitos diseñados, por ejemplo la traducción inicia en el promotor y procede a través del segmento codificador al terminador. El término "polinucleótido" denota un polímero de cadena doble o sencilla de bases deoxiribonucleótido o ribonucleótido leídas del extremo 5'al extremo 3'. Los polinucleótidos incluyen ARN y ADN, y pueden ser aislados a partir de fuentes naturales, sintetizados in vitro, o prepardos a partir de una combinación de moléculas sintéticas y naturales. El término "complementos de moléculas de polinucleótido" denota moléculas de polinucleótido que tienen una secuencia de base complementaria y orientación en reversa en comparación con a una secuencia de referencia. Por ejemplo, la secuencia 5' ATGCACGGG 3'es complementaria a 5'CCCGTGCAT 3'. El término "secuencia de nucleótido degenerada" denota una secuencia de nucleótidos que incluye uno o más codones degenerados (en comparación con una molécula de polinucleótido de referencia que codifica un polipéptido). Los codones degenerados contienen tripletes diferentes de nucleótidos, pero codifican el mismo residuo de aminoácido (es decir tripletes GAU y GAC codifican cada uno Asp.) El término "promotor" denota una porción de un gen que contiene secuencias de ADN que proveen el enlace de ARN polimerasa y el inicio de la transcripción. Las secuencias promotoras se encuentran comúnmente, pero no siempre, en las regiones 5'no codificadoras de los genes.

El término "secuencia de señal secretora" denota una secuencia de ADN qu codifica un polipéptido (un "péptido secretor") que, como un componente de un polipéptido más grande, dirige al polipéptido más grande a través de la trayectoria secretora de una célula en la cual está sintetizado. El 5 péptido más grande se corta comúnmente para remover el péptido secretor durante el tránsito a través de la trayectoria secretora.

Cómo utilizar la secuencia de la invención para obtener otras secuencias relacionadas 10 La información de secuencia descrita en la presente que se refiere a una secuencia de polinucleótido que codifica una mananasa de la invención puede ser utilizada como una herramienta para identificar otras mananasas homologas. Por ejemplo, la reacción de cadena de polimerasa (PCR) puede ser utilizada para amplificar secuencias que codifican otras 15 mananasas homologas a partir de una variedad de fuentes microbiana, en particular de diferentes especies Bacillus.

Análisis para prueba de actividad Un polipéptido de la invención que tiene actividad mananasa 20 puede ser probado para actividad mananasa de acuerdo con procedimientos estándar conocidos en la técnica, como aplicando una solución a ser probada a agujeros de 4 mm de diámetro perforados en placas de ágar que contienen galactomannana AZCL al 0.2% (cárabo), es decir substrato para el análisis de 49 endo-1 ,4-beta-D-mananasa disponible como CatNo.1- AZGMA de la compañía Megazyme por US$ 110.00 por 3 gramos (dirección de Internet de Megazyme: http://www.meqazyme.com/Purchase/index.htmn.

Polinucleótidos Un polinucleótido aislado de la invención hibridizará a regiones de tamaño similar de SEQ ID No. 1 , o una secuencia complementaria a la misma, bajo al menos condiciones rigurosas medias. En particular los polinucleótidos de la invención hibridizarán a una sonda de ADN de doble cadena que consta de ya sea la secuencia completa mostrada en las posiciones 97-1029 de SEQ ID No. 1 o cualquier sonda que consta de la subsecuencia de SEQ ID No. 1 que tiene una longitud de al menos 100 pares de bases bajo condiciones rigurosas medias, pero preferiblemente condiciones a condiciones muy rigurosas como se describe en detalle enseguida. Las condiciones experimentales adecuadas para determinar la hibridación a rigurosidad media o alta entre una sonda de nucleótido y una secuencia de ADN o ARN homologa involucran el pre remojo del filtro que contiene los fragmentos de ADN o ARN a hibridizar en 5 x SSC (Cloruro de sodio/citrato de sodio, Sambrook et al. 1989) durante 10 minutos, y la prehibridización del filtro en una solución de 5 x SSC, 5 x solución de Denhardt (Sambrook et al. 1989), 0.5% SDS y 100 µg/ml de ADN de esperma de salmón desnaturalizado tratado mediante sonido (Sambrook et al. 1989), seguido por hibridización en la misma solución que contiene una concentración de 10 ng/ml de una sonda iniciada aleatoriamente (Feinberg, A.P. y Vogelstein, B. (1983) Anal. Biochem. 132:6-13), marcada 32P-dCTP (actividad específica más alta que 1 x 109 cpm/µg) durante 12 horas a aprox. 45°C. El filtro se lava después dos veces durante 30 minutos en 2 x SSC, 0.5% SDS al menos 60 °C (rigurosidad media), aún más preferiblemente al menos 65°C (rigurosidad media/alta), aún más preferiblemente al menos 70°C (alta rigurosidad), y aún más preferiblemente al menos 75°C ( muy alta rigurosidad). Las moléculas a las cuales la sonda de oligonucleótido se hibridiza bajo esas condiciones se detectan utilizando una película de rayos X. Como se anotó anteriormente, los polinucleótidos aislados de la presente invención incluyen ADN y ARN. Los métodos para aislar ADN y ARN son bien conocidos en la técnica. ADN y ARN que codifican genes de interés pueden ser clonados en bancos de genes o genotecas de ADN por medio de métodos bien conocidos en la técnica. Los polinucleótidos que codifican polipéptidos qu tienen actividad mananasa de la invención son después identificados y aislados mediante, por ejemplo, hibridización o PCR. La presente invención provee de manera adicional contrapartes de polipéptido y polinucleótido a partir de varias cepas bacterianas (ortólogos o paralogos). Son de particular interés los polipéptido de mananasa a partir de cepas alcalofílicas Gram positivo, incluyendo especies Bacillus.

Las especies homologas de un polipéptido con actividad mananasa de la invención pueden ser clonadas utilizando información y composiciones provistas por la presente invención en combinación con técnicas de clonación convencionales. Por ejemplo, una secuencia de ADN de la presente invención puede ser clonada utilizando ADN cromosómico obtenido a partir de una célula tipo que expresa la proteína. Las fuentes adecuadas de ADN pueden ser identificadas mediante sondeo Northern blot con sondas diseñadas a partir de las secuencias descritas en la presente. De esta manera está preparada una genoteca a partir de ADN cromosómico de una línea de célula positiva. Una secuencia de ADN de la invención que codifica un polipéptido que tiene actividad mananasa puede después ser aislada mediante una variedad de métodos como mediante sondeo con sondas diseñadas a partir de las secuencias descritas en la presente especificación y reivindicaciones o con uno o más equipos de de sondas degeneradas basadas en las secuencias descritas. Una secuencia de ADN de la invención también puede clonada utilizando la reacción de cadena de polimerasa, o PCR (Mullís, patente de E.U.A. No. 4,683,202), utilizando iniciadores diseñados a partir de las secuencias descritas en la presente. Dentro de un método adicional, la genoteca de ADN puede ser utilizada para transformar o transfectar células hospedero, y la exprsión del ADN de inter's puede ser detectada con un anticuerpo (monoclonal o policlonal) cultivado contra la mananasa clonada a partir de B. Agaradherens, NCIMB 40482, expresada y purificada como se describe en Materials and methods and Example 1 , o mediante una prueba de actividad relacionada con un polipéptido que tiene actividad mananasa. La parte que codifica la mananasa de la secuencia clonada en el plásmido pSJ1678 presente en Escherichia coli DSM 12180 y/o un análogo de la secuencia de ADN de la invención pueden ser clonados a partir de una cepa de la especie bacteriana Bacillus agaradherens, preferiblemente la cepa NCIMB 40482, que produce la enzima con una actividad degradadora de mannana, u otra u organismo relacionado según se describe en la presente. Alternativamente, la secuencia análoga puede ser construida en base a la secuencia de ADN obtenible del plásmido presente en Escherichia coli DSM 12180 (la cual se cree que es idéntica a la SEQ ID NO.1 que se anexa), por ejemplo puede ser una sub-secuencia de la misma, y/o mediante introducción de sustituciones de nucleótido que no dan surgimiento a otra secuencia de aminoácido de la mananasa codificada mediante la secuencia de ADN, pero la cual corresponda con el uso del codón del organismo hospedero diseñado para la producción de la enzima, o mediante la introducción de sustituciones de nucleótidos que pueden dar surgimiento a una secuencia de aminoácido diferente (es decir, una variante de la enzima degradadora de mannana de la invención).

Polipéptidos Las secuencias de aminoácidos Nos. 32-343 de SEQ ID NO: 2 es una secuencia de mananasa madura. La presente invención también provee polipéptidos de mananasa que son sustancialmente homólogos al polipéptido de SEQ ID NO: 2 y especies homologas (paralogos y ortólogos) de los mismos. El término "sustancialmente homólogo" se utiliza en la presente para denotar polipéptidos que tienen 70%, preferiblemente al menos 80%, más preferiblemente al menos 85%, aún más preferiblemente al menos 90% de identidad de secuencia a la secuencia mostrada en los aminoácidos 32-343 de SEQ ID NO:2 o sus ortólogos o paralogos. Dichos polipéptidos serán más preferiblemente al menos 95% idénticos, y más preferiblemente 98% o más, a la secuencia mostrada en los aminoácidos 32-343 de SEQ ID NO:2 o sus ortólogos o paralogos. El porcentaje de identidad de secuencia se determina mediante métodos convencionales, por medio de programas de computadora conocidos en la técnica como GAP provisto en el paquete de programa GCG (Manual de Programa para el Wisconsin package, versión 8, Agosto 1994, Genetics Computer Group, 575 Science Drive, Madison, Wisconsin, USA 53711 ) según se describe en Needleman, S.B. y Wunsch, C.D., (1970), Journal of Molecular Biology, 48, 443-453, el cual se incorpora a la presente por referencia en su totalidad. GAP se utiliza con los siguientes lineamientos para comparación de secuencia de polipéptido: penalidad de creación de GAP de 3.0 y penalidad de extensión de GAP de 0.1.

La identidad de secuencias de moléculas de polinucleótido se determina mediante métodos similares utilizando GAP con los siguientes lineamientos para comparación de secuencia de ADN: penalidad de creación de GAP de 5.0 y penalidad de extensión de GAP de 0.3. La preparación de la enzima de la invención se deriva preferiblemente a partir de un microorganismo, preferiblemente a partir de una bacteria, una arquea o un hongo, especialmente a partir de una bacteria como una bacteria que pertenece a Bacillus, preferiblemente a una cepa de Bacillus alcalofílica que se puede seleccionar del grupo consistente de las especies Bacillus agaradherens y las especies Bacillus más relacionadas en las cuales todas las especies son preferiblemente 95%, aún más preferiblemente al menos 98%, homologas a Bacillus agaradherens basado en las secuencias 16S ADNr alineadas. Las proteínas y polipéptidos sustancialmente homólogos se caracterizan por tener una o más sustituciones, eliminaciones o adiciones de aminoácidos. Estos cambios son preferiblemente de una naturaleza menor, es decir sustituciones conservadoras de aminoácidos (ver cuadro 2) y otras sustituciones que no afectan de manera significativa el doblez o actividad de la proteína o polipéptido; las eliminaciones pequeñas, típicamente de uno a 30 aminoácidos; las extensiones pequeñas amino- o carboxiloterminales, como u residuo de metionina amino-terminal, un pequeño encadenador péptido de hasta 20-25 residuos, o una extensión pequeña que facilita la purificación (una marca de afinidad), como un tracto poli-histidina, Proteína A (Nillson et al, EMBO J 4:1075, 1985; Nillson et al., Methods Enzvmol. 198:3. 1991. Ver en 55 general Ford et al., Protein Expressíon and Purification 2: 95-107, 1991 , los cuales se incorporan a la presente por referencia. Los ADNs que codifican marcas de afinidad están disponibles de proveedores comerciales (por ejemplo, Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ; New England Biolabs, Beverly, MA). Sin embargo, aún aunque los cambios descritos anteriormente son preferiblemente de una naturaleza menor, dichos cambios también pueden ser de una naturaleza más grande como fusión de polipéptidos más grandes de hasta 300 aminoácidos o más como extensiones amino- o carboxiloterminales a un polipéptido mananasa de la invención.

CUADRO 1 Sustituciones conservadoras de aminoácidos Básica : arginina, lisina, histidina. Acidica : ácido glutámico, ácido aspártico. Polar : glutamina, aspargina. Hidrófoba : leucina, isoleucina, valina. Aromática : fenilalanina, triptofano, tirosina. Pequeña : glicina, alanína, serina, treonina, metionina. Además de los 20 aminoácidos estándar, aminoácidos no estándar (como 4-hidroxiprolina, 6-N-metil lisina, ácido 2-aminoisobutírico, isovalina y a-metilserina) pueden ser substituidos por residuos de aminoácidos de un polipéptido de acuerdo con la invención. Un número limitado de aminoácidos no conservadores, aminoácidos que no son codificados por el código genético, y aminoácidos no naturales pueden ser sustituidos por residuos de aminoácidos. "Aminoácidos no naturales" han sido modificados después de la síntesis de la proteína, y/o tienen estructura química en su cadena(s) lateral(es) diferente a la de los aminoácidos estándar. Los aminoácidos no naturales pueden ser sintetizados químicamente, o preferiblemente, están disponibles comercialmente, e incluyen ácido pipecólico, ácido thiazolidina carboxííico, dehidroprolina, 3- y 4-metilprolina, y 3,3-dimetilprolina. Los aminoácidos esenciales en los polipéptidos de mananasa de la presente invención se pueden identificar de acuerdo con procedimientos conocidos en la técnica, como mutagénesis dirigida al sitio o mutagénesis mediante barrido de alanina (Cunnigham y Wells, Science 244: 1081-1085, 1989). En la última técnica, las mutaciones de una sola alanina son introducidas en todos los residuos en la molécula, y las moléculas mutantes resultantes son evaluadas por actividad biológica (es decir actividad mananasa) para identificar residuos de aminoácidos que son críticos a la actividad de la molécula. Ver también Hilton et al., J. Biol. Chem. 271 : 4699- 4708, 1996. El sitio activo de la enzima u otra interacción biológica también se puede determinar mediante análisis físico de estructura, como se determina mediante técnicas como resonancia magnética nuclear, cristalografía, defracción de electrón o marcación de fotoafinidad, en conjunto con la mutación de los aminoácidos del sitio de contacto putativo. Ver, por ejemplo, de Vos et al., Science 255:306312, 1992; Smith et al., J. Mol. Biol. 224:899- 904, 1992; Wlodaver et al., FEBS Lett. 309:59-64, 1992. Las identidades de aminoácidos esenciales se pueden inferir también a partir de análisis de homologías con polipéptidos que están relacionados a un polipéptido de acuerdo con la invención. Pueden ser hechas y evaluadas múltiples sustituciones de aminoácidos utilizando métodos conocidos de mutagénesis, recombinación y/o entremezclado seguido por un procedimiento de barrido relevante, como aquellos descritos por Reidhaar-Olson y Sauer (Science 241 :53-57, 1988), Bowie y Sauer (Proc. Nati. Acad. Sci. USA 86:2152-2156, 1989), W095/17413, o W095/22625. Brevemente, esos autores describen métodos para seleccionar simultáneamente de manera aleatoria dos o más posiciones en un polipéptido, o la recombinación/entremezclado de mutaciones diferentes (W095/17413, W095/22625), seguido de la selección para funcional de un polipéptido, y después secuenciar los polipéptidos mutagenizados para determinar el espectro de sustituciones permisibles en cada posición. Otros métodos que pueden ser utilizados incluyen exhibición de fago (por ejemplo, Lowman et al, Biochem. 30:10832-10837, 1991 ; Ladner et al, patente de E.U.A. No. 5,223,409; Huse, WIPO Publication WO 92/06204) y mutagénesis dirigida a la región (Derbyshire et al, Gene 46:145, 1986; Ner et al, DNA 7:127, 1988).

Los métodos de mutagénests/entremezclado como se describen anteriormente pueden combinarse con métodos de barrido de alto rendimiento, automatizados, para detectar la actividad de polipéptidos mutagenizados en células hospedero. Las moléculas de ADN mutagenizadas que codifican polipéptidos activos pueden ser recuperadas de las células hospedero y ser secuenciadas rápidamente utilizando equipo moderno. Estos métodos permiten la rápida determinación de la importancia de residuos de aminoácidos individuales en un polipéptido de interés, y pueden ser aplicados a polipéptidos de estructura desconocida. Utilizando los métodos descritos anteriormente, alguien de habilidad normal en la técnica puede identificar y/o preparar una variedad de polipéptidos que son sustancialmente homólogos a los residuos 32 a 343 de SEQ ID NO:2 y retienen la actividad mananasa de la proteína de tipo silvestre.

Producción de proteína Las proteínas y polipéptido de la presente invención, incluyendo proteínas de longitud completa, fragmentos de las mismas y proteínas de fusión, se pueden producir en células hospedero diseñadas genéticamente de acuerdo con técnicas convencionales. Las células hospedero adecuadas son aquellos tipos de células que pueden ser transformadas o transfectadas con ADN exógeno y desarrolado en cultivo, e incluyen bacterias, células fúngicas, y células eucarióticas más desarrolladas. Las células bacterianas, particularmente células cultivadas de organismos Gram positivo, son preferidas. Las células Gram positivo a partir del gen de Bacillus son especialmente preferidas, tales como las del grupo consistente de Bacillus subtilis, Bacillus lentus, Bacillus brevis, Bacillus stearothermophilus, Bacillus alkalophilus, Bacillus amiloliquefaciens, Bacillus coagulans, Bacillus circulans, Bacillus lautus, Bacillus thuringiensis, Bacillus licheniformis y Bacillus agaradherens, en particular Bacillus agaradherens. Las técnicas para manipular moléculas clonadas de ADN y para introducir ADN exógeno dentro de una variedad de células hospedero son descritas por Sambrook et al, Molecular Cloninq: A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring harbor, NY, 1989; Ausubel et al. (eds.), Current Protocols in Molecular Bioloqy, John Willey & Sons, Inc., NY, 1987; y "Bacillus subtilis and Other Gram-Positive Bacteria", Sonensheim et al, 1993, American Society for Microbiology, Washington D.C., las cuales se incorporan a la presente por referencia. En general, la secuencia de ADN que codifica una mananasa de la presente invención está encadenada de manera operable a otros elementos genéricos requeridos para su expresión, incluyendo generalmente un promotor de transcripción y un terminador dentro de un vector de expresión. El vector también contendrá comúnmente uno o más marcadores seleccionables y uno o más orígenes de replicación, aunque aquellos expertos en la técnica reconocerán que dentro de ciertos sistemas los marcadores seleccionables pueden estar provistos sobre vectores separados, y la replicación del ADN exógeno puede ser provista mediante la integración dentro del genoma de la célula hospedero. La selección de promotores, terminadores, marcadores seleccionables, vectores y otros elementos es un asunto de diseño de rutina dentro del nivel de habilidad normal en la técnica. Muchos de tales elementos se describen en la literatura y están disponibles a través de proveedores comerciales. Para dirigir un polipéptido dentro de una trayectoria de secreción de una célula hospedero, se provee una secuencia de señal de secreción (también conocida como secuencia líder, secuencia prepro o pre secuencia) en el vector de expresión. La secuencia de señal de secreción puede ser la del polipéptido, o puede ser derivada a partir de otra proteína secretada o sintetizada de novo. Numerosas secuencias de señal de secreción adecuadas son conocidas en la técnica y se hace referencia a "Bacillus subtilis and other Gram-Positive Bacteria", Sonensheim et al., 1993, American Society for Microbiology, Washington D.C.; y Cutting, S.M. 8eds.) "Molecular Biological Methods for bacillus", John Wiley and Sons, 1990, para descripción adicional de secuencias de señal de secreción adecuadas especialmente para secreción en una célula hospedero Bacillus. La secuencia de señal de secreción está unida a la secuencia de ADN en el marco de lectura correcto. Las secuencias de señal de secreción están colocadas comúnmente al extremo 5'a la secuencia de ADN que codifica el polipéptido de interés, aunque ciertas secuencias de señales pueden estar colocadas en cualquier otro lugar en la secuencia de ADN de interés (ver, por ejemplo, Welch et al., patente de E.U.A. No. 5,037,743; Holland et al, patente de E.U.A. No. 5,143,830). Las células hospedero transformadas o transfectadas son cultivadas de acuerdo con procedimientos convencionales en un medio de cultivo que contiene nutrientes y otros componentes requeridos para el crecimiento de las células hospedero elegidas. Una variedad de medios adecuados, incluyendo medios definidos y medios complejos, son conocidos en la técnica e incluyen generalmente una fuente de carbono, una fuente de nitrógeno, aminoácidos, vitaminas y minerales esenciales. El medio también puede contener tales componentes como factores de crecimiento o suero, según se requiera. El medio de cultivo se seleccionará en general para células que contienen el ADN exógeno añadido mediante, por ejemplo, selección de fármaco o deficiencia en un nutriente esencial el cual es complementado por el marcador seleccionable llevado sobre el vector de expresión o co-transfectado dentro de la célula hospedero.

Aislamiento de proteína Cuando el polipéptido recombinante expresado es secretado el polipéptido puede ser purificado a partir del medio de cultivo. Preferiblemente las células hospedero de expresión son removidas del medio antes de la purificación del polipéptido (por ejemplo mediante centrifugación). Cuando el polipéptido recombinante expresado no es secretado de la célula hospedero, la célula hospedero es preferiblemente rota y el polipéptido es liberado en un "extracto" acuoso el cual es la primera etapa de dichas técnicas de purificación. Preferiblemente, las células hospedero de expresión son reunidas del medio antes del rompimiento de la célula (por ejemplo mediante centrifugación). El rompimiento de la célula puede ser realizado mediante técnicas convencionales como digestión de lisozima o forzando las células a través de alta presión. Ver (Robert K. Scobes, Protein Purification, Second edition, Springer-Verlag) para información adicional de tales técnicas de rompimiento. Si es que los polipéptidos recombinantes expresados (o polipéptidos quiméricos) son secretados o no, pueden ser purificados utilizando métodos y medios de formación de fracción y/o purificación convencionales. La precipitación de sulfato de amonio y la extracción de ácido o caotropo puede ser utilizada para la formación de fracciones de muestras. Los pasos de purificación ilustrativos pueden incluir hidroxiapatita, exclusión de tamaño, FPLC y cromatografía líquida de alto rendimiento de fase en reversa. Los medios de intercambio de anión adecuados incluyen dextranos derivados, agarosa, celulosa, poliacrilamida, sílices de especialidades, y similares. Son preferidos los derivados de PEÍ, DEAE, QAE y Q, con Sefarosa DEAE de flujo rápido (Pharmacia, Piscataway, NJ) siendo particularmente preferida. Los medios cromatográficos ilustrativos incluyen aquellos medios derivados con grupos fenilo, butilo u octilo, como Phenyl-Sepharose FF (Pharmacia), Toyopearl butil 650 (Toso Haas, Montgomeryville, PA), Octyl-Sepharose (Pharmacia) y similares; o resinas poliacrílicas, como Amberchrom CG 71 (Toso Haas) y similares. Los soportes sólidos adecuados incluyen esferas de vidrio, resinas de base de sílice, resinas celulósicas, esferas de agarosa, esferas de agarosa entrelazadas, esferas de poliestireno, resinas de poliacrilamida entrelazadas y similares que son insolubles bajo las condiciones bajo las cuales van a ser utilizadas. Estos soportes pueden ser modificados con grupos reactivos que permiten la adhesión de proteínas mediante grupos amino, grupos carboxilo, grupos sufhidrilo, grupos hidroxilo y/o porciones carbohidrato. Ejemplos de químicas de acoplamiento incluyen activación de bromuro de cyanogeno, activación de N-hidroxisuccinimida, activación de epóxido, activación de sulfhidrilo, activación de hidrazida, y derivados carboxilo y amino para químicas de acoplamiento de carbodiimida. Estos y otros medios sólidos son bien conocidos y ampliamente utilizados en la técnica, y están disponibles de proveedores comerciales. La selección de un método en particular es un asunto de diseño de rutina y se determina en parte por las propiedades del soporte elegido. Ver, por ejemplo, Affinity Chromatoqraphy : Principies & Methods, Pharmacia LKB Biotechnology, Uppsala, Sweden, 1988. Los polipéptidos de la invención o fragmentos de los mismos pueden ser preparados también a través de síntesis química. Los polipéptidos de la invención pueden ser monómeros o multímeros; glicosilados o no glicosilados; pegilatados o no pegilatados; y pueden o pueden no incluir un residuo de aminoácido de metionina inicial. Basado en la información de secuencia descrita en la presente, puede ser clonada una secuencia de ADN de longitud total que codifica una mananasa de la invención y que consta de la secuencia de ADN mostrada en SEQ ID NO: 1 , al menos la secuencia de ADN desde la posición 97 a la posición 1029. La clonación es realizada por procedimientos estándar conocidos en la técnica como: B preparar una genoteca genómica a partir de cepa Bacillus, especialmente la cepa ß. Agaradherens, NCIMB 40482; • colocar sobre placas dicha genoteca sobre placas de substratos adecuados; • identificar un clon que conste de una secuencia de polinucleótido de la invención mediante técnicas de hibridización estándar utilizando una sonda basada en SEQ ID NO: 1 ; o mediante • identificar un clon a partir de la mencionada genoteca genómica de Bacillus Agaradherens, NCIMB 40482 mediante una estrategia de PCR inversa utilizando iniciadores basados en la información de secuencia de SEQ ID NO: 1. Se hace referencia a ("PCR A practical approach" Information Press Ltd., Oxford England) para detalles adicionales en relación con PCR inversa.

Basado en la información de secuencia descrita en la presente (SEQ ID NO: 1 , SEQ ID NO: 2) es trabajo de rutina para una persona experta en la técnica aislar secuencias de polinucleótido homologas que codifican mananasa homologa de la invención mediante una estrategia similar utilizando genotecas genómicas a partir de organismos microbianos relacionados, en particular a partir de genotecas genómicas de otras cepas del gen Bacillus como especies alcalofílícas de Bacillus. Alternativamente, el ADN que codifica la enzima que degrada mañana o galactomanana de la invención puede, de acuerdo con procedimientos bien conocidos, ser clonado de manera conveniente a partir de una fuente adecuada, como cualquiera de los organismos mencionados anteriormente, mediante el uso de sondas de oligonucleótido sintéticas preparadas en base a la secuencia del ADN obtenible del plásmido presente en Escherichia coli DSM 12180. De acuerdo con esto, la molécula de polinucleótido de la invención puede ser aislada a partir de Escherichia coli DSM 12180, en la cual el plásmido obtenido mediante clonación como se describió anteriormente es depositado. Además, la presente invención se refiere a un cultivo biológico aislado sustancialmente puro de la cepa de Escherichia coli DSM 12180. En el contexto presente, el término "preparación de enzima" está diseñado para significar ya sea un producto de fermentación enzimática convencional, posiblemente aislado y purificado, a partir de una sola especie de un microorganismo, dicha preparación constando normalmente de un 3<f número de actividades enzimáticas diferentes; o una mezcla de enzimas monocomponentes, preferiblemente enzimas derivadas de especies bacterianas o fúngicas utilizando técnicas recombinantes convencionales, cuyas enzimas han sido fermentadas y posiblemente aisladas y purificadas por separado y las cuales se pueden originar de especies diferentes, preferiblemente especies bacterianas o fúngicas; o el producto de fermentación de un microorganismo que actúa como célula hospedero para expresión de una mananasa recombinante, pero cuyo microorganismo produce simultáneamente otras enzimas, por ejemplo enzimas, proteasas o celulasas que degradan pectina, siendo productos de fermentación que ocurren de manera natural del microorganismo, es decir el complejo de enzima producido de manera convencional por el microorganismo correspondiente que ocurre de manera natural. Un método para producir la preparación de enzima de la invención, el método constando de cultivar un microorganismo, por ejemplo una cepa tipo silvestre, capaz de producir la mananasa bajo condiciones que permiten la producción de la enzima, y recuperar la enzima del cultivo. El cultivo puede ser llevado a cabo utilizando técnicas de fermentación convencionales, por ejemplo cultivando en recipientes de agitación o termentadores con agitación para asegurar una aereación suficiente sobre un medio de cultivo induciendo la producción de la enzima mananasa. El medio de cultivo puede contener una fuente N- convencional como peptona, extracto de levadura o ácidos casamino, una cantidad reducida de una fuente C- convencional como dextrosa o sucrosa, y un inductor como goma de guar o goma de algarrobo. La recuperación puede ser llevada a cabo utilizando técnicas convencionales, por ejemplo la separación de bio masa y sobreflotante mediante filtración o centrifugación, recuperación del sobreflotante o rompimiento de las células si la enzima de interés es intracelular, seguido quizá por purificación adicional como se describe en EP 0 406 314 o mediante cristalización como se describe en WO 97/15660.

Reactividad cruzada inmunolóqica Los anticuerpos policlonales a ser utilizados para determinar la reactividad cruzada inmunológica pueden ser preparados mediante el uso de una enzima mananasa purificada. Más específicamente, puede obtenerse antisuero contra la mananasa de la invención inmunizando conejos (u otros roedores) de acuerdo con el procedimiento descrito por N. Axelsen et al, en: A Manual of Quantitative Immunoelectrphorsis, Blackwell Scientific Publications, 1973, Capítulo 23, o A. Johnstone y R. Thorpe, Immunochemistry in Practice, Blackwell Scientific Publications, 1982 (más específicamente, p. 27-31 ). Las inmunoglobulinas purificadas pueden ser obtenidas de un antisuero, por ejemplo precipitación de sal ((NH4)2 S0 ), seguido por diálisis y cromatografía de intercambio de ion, por ejemplo, sobre DEAE-Sephadex. La caracterización inmunoquímica de proteínas puede ser hecha ya sea mediante análisis Outcherlony de doble difusión (O.Outcherlony en: Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir, Ed.), Blackwell Scientific Publications, 1967, pp. 655- 706), mediante inmunoelectrofóresis cruzada (N. Axelsen et al., supra. Capítulos 3 y 4), o mediante inmunoelectrofóresis de cohete (N. Axelsen et al., capítulo 2). Ejemplos de bacterias útiles que producen la enzima o la preparación de la enzima de la invención son bacteria Gram positiva, preferiblemente a partir de la subdivisión Bacillus/Lactobacillus, preferiblemente una cepa del gen Bacillus, más preferiblemente una cepa de Bacillus agaradherens, especialmente la cepa Bacillus agaradherens, NCIMB 40482. La presente invención incluye una mananasa aislada que tiene las propiedades descritas anteriormente y la cual está libre de impurezas homologas, y se produce utilizando técnicas recombinantes convencionales.

Determinación de actividad catalitíca (ManU) de mananasa Análisis calorimétrico: Substrato: 0.2% AZCL-Galactomannana (Megazyme, Australia) a partir de cárabo en 0.1 M de regulador de pH de glicina, pH 10.0. El análisis es llevado a cabo en un tubo de 1.5 ml Eppendorf Micro sobre un termomezclador con agitación y control de temperatura de 40°C. Incubación de 0.750 ml de substrato con 0.05 ml de enzima durante 20 min. Alto mediante centrifugación durante 4 minutos a 15000 rpm. El color del sobreflotante se mide a 600 nm en una probeta de 1 cm. Una ManU (unidades mananasa) da 0.24 abs. en 1 cm.

Obtención del bacillus a afadherens mananasa NCIMB 40482 Cepas El Bacillus agaradherens, NCIMB 40482 consta de la enzima mananasa que codifica la secuencia de ADN. Cepa E. Coli: cepas de E. Coli SJ2 (Diderichsen, B., Wedsted, U., Hedegaard, L., Jensen, B. R., Sjoholm, C. (1990). Clonación de aldB, que codifica alfa-acetolactato decarboxilasa, una exoenzima de Bacillus brevis. J. Bacteriol., 172, 4315-4321 ), fueron transformadas para y transformadas mediante electroforación utilizando un electroforador Gene Pulser™ de BIO-RAD como se describe por el proveedor. B. subtilis PL2306. Esta cepa es el B. Subtilis DN 1885 con genes apr y npr rotos (Diderichsen, B., Wedsted, U., Hedegaard, L., Jensen, B. R., Sjoholm, C. (1990). Clonación de aldB, que codifica alfa-acetolactato decarboxilasa, una exoenzima de Bacillus brevis. J. Bacteriol., 172, 4315-4321 ), rota en la unidad de transcripción del gen de celulasa Bacillus subtilis conocido, resultando en células de celulasa negativas. El rompimiento fue realizado esencialmente como se describe en (Eds. A.L. Sonenshein, J.A. Hoch y Richard Losick (1993) Bacillus subtilis and other Gram-Positive Bacteria, American Society for microbiology, p. 618). Las células competentes fueron preparadas y transformadas como se describe por Yasbin, R.E., Wilson, G.A. y Young, F.E. (1975) Transformation and transfection in lysogenic strains of Bacillus subtilis: evidence for selective induction of prophage ¡n competent cells. J. Bacteriol, 121 :296-304.

Plásmidos pSJ1678 (como se describe en detalle en WO 94/19454 la cual se incorpora a la presente por referencia en su totalidad). pMOL944: este plásmido es un derivado de pUB110 que contiene esencialmente los elementos que hacen al plásmido propagable en Bacillus subtilis, gen de resistencia a canamicina y que tiene un fuerte promotor y señal de péptido clonada del gen amyL de ß. Licheniformis ATCC 14580. El péptido de señal contiene un sitio Sacl I que lo hace conveniente para clonar el ADN que codifica la parte madura de una proteína en fusión con el péptido de señal. Esto resulta en la expresión de una Pre-proteína que s dirigida hacia el exterior de la célula. El plásmido fue construido mediante técnicas de diseño genético convencionales las cuales se describen brevemente en lo siguiente.

Construcción de pMOL944: El plásmido pUB110 (McKenzie, T. Et al., 1986, Plasmid 15:93-103) fue digerido con la única enzima de restricción Ncil. Un fragmento PCR amplificado del promotor amyL codificado sobre el plásmido pDN1981 (P.L.

Jorgensen et al., 1990, Gene, 96, p. 37-41 ) fue digerido con Ncil e insertado en el pUB110 digerido por Ncil para dar el plásmido pSJ2624.

Los dos iniciadores PCR utilizados tienen las siguientes secuencias: #LWN5494 5'- GTCGCCGGGGCGGCCGCTATCAATTGGTAACTGTATCTCAGC -3 ' #LWN5495 5'- GTCGCCCGGGAGCTCTGATCAGGTACCAAGCTTGTCGACCTGCAGAATG AGGCAGCAAGAAGAT -3' El iniciador #LWN5494 inserta un sitio Notl en el plásmido. El plásmido pSJ2624 fue entonces digerido con Sacl y Notl y un nuevo fragmento PCR amplificado sobre un promotor amyL codificado sobre el pDN1981 fue digerido con Sacl y Notl y este fragmento de ADN fue insertado en el pSJ2624 digerido por Sacl-Notl para dar el plásmido pSJ2670. Esta clonación reemplaza la primera clonación de promotor amyL con el mismo promotor pero en la dirección opuesta. Los dos iniciadores utilizados para amplificación de PCR tienen las siguientes secuencias: #LWN5938 5'- GTCGGCGGCCGCTGATCACGTACCAAGCTTGTCGACCTGCA GAATGAGGCAGCAAGAAGAT 3' #LWN5939 5'- GTCGGAGCTCTATCAATTGGTAACTGTATCTCAGC -3' El plásmido pSJ2670 fue digerido con las enzimas de restricción Pstl y Bcll y un fragmento PCR amplificado de una secuencia de ADN clonado que codifica la amilasa alcalina SP722 (descrita en la Solicitud de patente Internacional publicada como W095/26397 la cual esta incorporada a la presente por referencia en su totalidad) fue digerida con Pstl y Bcll e insertada para dar el plásmido pMOL944. Los dos iniciadores utilizados para amplificación de PCR tienen la siguiente secuencia: #LWN7864 5'- AACAGCTGATCACGACTGATCTTTTAGCTTGGCAC -3' #LWN7901 5' AACTGCAGCCGCGGCACATCATAATGGGACAAATGGG -3' El iniciador #LWN7901 inserta un sitio Sacll en el plásmido.

Clonación del gen de mananasa a partir de Bacillus agaradherens Preparación del ADN qenómico: La cepa Bacillus agaradherens, NCIMB 40482 fue propagada en medio líquido como se describe en WO94/01532. Después de 16 horas de incubación a 30°C y 300 rpm, las células fueron cosechadas, y el ADN genómico aislado mediante el método descrito por Pitcjer et al., (Pitcher, D.G., Saunders, N.A., Owen, R.J. (1989). Rapid extraction of bacterial ghenomic DNA with guanidium thiocynate. Lett. Appl. Microbiol., 8, 151-156).

Construcción de qenoteca qenómica: ADN genómico fue digerido parcialmente con enzima de restricción Sau3A, y fraccionado mediante electrofóresis sobre un gel de agarosa al 0.7%. Fueron aislados fragmentos de tamaño entre 2 y 7 kb mediante electrofóresis en papel de DEAE-celulosa (Dretzen, G., Bellard, M., Sassone-Corsi, P., Chambón, P. (1981 ) A Relieable method for the recovery of DNA fragments from agarose and acrylamide gels Anal. Biochem., 112, 295-298). Fragmentos asilados de ADN fueron ligados al plásmido de ADN pSJ1678 digerido por BamHI, y la mezcla de ligación fue utilizada para transformar E. Coli SJ2.

Identificación de clones positivos: Una genoteca de ADN, construida como se describe anteriormente, fue evaluada sobre placas de agar LB que contienen AZCL-galactomanana al 0.2% (Megazyme) y 9 µg/ml de cloramfenicol e incubada durante la noche a 37°C. Aparecieron clones que expresan actividad mananasa con halos de difusión azul. El ADN plásmido a partir de uno de esos clones fue aislado mediante preparaciones giratorias de plásmido de Qiagen sobre 1 ml de caldo de cultivo durante la noche (células incubadas a 37°C en TY con 9 µg/ml de cloramfenicol y agitación a 250 rpm). Este clon, (MB525) fue caracterizado adicionalmente mediante secuenciamiento de ADN del fragmento de ADN Sau3A clonado. El secuenciamiento de ADN fue llevado a cabo mediante avance de iniciador, utilizando el equipo de formación de secuencia de ciclo Taq deoxi-terminal (Perkin -Elmer, USA), terminadores marcados de manera fluorescente y oligonucleótidos adecuados como iniciadores. El análisis de los datos de secuencia fue realizado de acuerdo con Devereux et al (1984) Nucleic Acid Res. 12, 387-395. La secuencia que codifica a la mananasa se muestra en SEQ ID No:2.

Subclonación y expresión de mananasa en B. Subtilis: La secuencia de ADN que codifica mananasa de la invención fue amplificada mediante PCR utilizando el equipo de iniciador PCR que consiste de estos dos oligonucleótidos: Mananasa. Superior. Sacll 5' -CAT TCT GCA GCC GCG GCA GCA AGT ACA GGC TTT TAT GTT GAT GG- 3' Mananasa. Inferior. Notl 5' -GAC GAC GTA CAA GCG GCC GCG CTA TTT CCC TAA CAT GAT GAT ATT TTC G -3' Los sitios de restricción Sacll y Notll están subrayados. ADN cromosomal aislado a partir de B. agaradherens NCIMB 40482 como se describe anteriormente fue utilizado como patrón en una reacción PCR utilizando Amplitaq ADN polimerasa (Perkin Elmer) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. La reacción PCR fue colocada en regulador de pH de PCR (10 nM Tris-HCl, pH 8.3, 50 mM KCl, 1.5 mM MgCI2) 0.01 % (p/v) gelatina) conteniendo 200 µM de cada dNTP, 2.5 unidades de AmpliTaq polimerasa (Perkin-Elmer, Getes, USA) y 100 pmoles de cada iniciador. La reacción PCR fue realizada utilizando un ciclador térmico de ADN (Landgraf, Germany). Una incubación a 94°C durante 1 minuto seguida por treinta ciclos de PCR realizados utilizando un perfil de ciclo de desnaturalización a 94°C durante 30 sec, fijando a 60°C durante 1 min, y extensión a 72°C durante 2 min. Cinco µl alícuas del producto de amplificación fueron analizadas mediante electrofóresis en geles de agarosa al 0.7% (NuSieve, FMC). La aparición de un fragmento de ADN de 1.4 kb de tamaño indicó una amplificación adecuada del segmento de gen. Subclonación del fragmento PCR. Cuarenta y cinco-µl alícuas de los productos PCR generados como se describe anteriormente fueron purificadas utilizando equipo de purificación QIAquick PCR (Qiagen, USA) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. El ADN purificado fue eluído en 50 µl de 10mM Tris-HCl, pH 8.5. 5 µg de pMOL944 y veinticinco-µl del fragmento PCR purificado fueron digeridos con Sacll y Notl, electroforesados en geles de agarosa al 0.8% de baja temperatura de gelificación (SeaPlaque GTG, FMC), los fragmentos relevantes fueron extirpados de los geles y purificados utilizando equipo de extracción QIAquick Gel (Qiagen, USA) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. El fragmento PCR de ADN aislado fue después ligado a pMOL944 digerido y purificado por Sacll-Notl. La ligación fue realizada durante la noche a 16, C atizando 0.5 µg de cada fragmento de ADN, 1 U de ADN T4 ligasa y regulador de pH T4 ligasa (Boehringer Mannheim, Germany). La mezcla de ligación fue utilizada para transformar B. Subtilis PL2306 competente. Las células transformadas fueron depositadas sobre placas LBPG-10 µg/ml de canamicina. Después de 18 horas de incubación a 37°C fueron vistas colonias sobre las placas. Varios clones fueron analizados aislando ADN plásmido de caldo de cultivo de durante la noche. Uno de dichos clones positivos fue reveteado varias veces sobre placas de agar como se utilizaron anteriormente, este clon fue llamado MB594. El clon MB594 fue cultivado durante la noche en TY-10 µg/ml de canamicina a 37°C, y al día siguiente 1 ml de células fueron utilizados para aislar plásmido a partir de las células utilizando el equipo Qiaprep Spin Plasmid Miniprep # 27106 de acuerdo con las recomendaciones del fabricante para preparaciones de plásmido B. Subtilis. Este ADN fue secuenciado de ADN y reveló la secuencia de ADN que corresponde a la parte madura de la mananasa, es decir las posiciones 94-1404 de la SEQ ID NO:3 que se anexa. La proteína madura derivada se muestra en la SEQ ID NO:4. Aparecerá que el extremo 3' de la mananasa codificada por la secuencia de SEQ ID NO:1 fue cambiada a la mostrada en SEQ ID NO:3 debido al diseño del iniciador inferior utilizado en el PCR. La secuencia de aminoácido resultante se muestra en SEQ ID NO:4 y es evidente que el término C de la SEQ ID NO:2 (SHHVREIGVQFSAADNSSG rKLYffNVTLR) está cambiado al término C de SEQ ID NO:4 (IIMLGK).

Medios: TY (como se describe en Ausubel, F.M. et al., (eds.) "Current protocols in Molecular Biology". John Wiley and Sons, 1995). Agar LB (como se describe en Ausubel, F.M. et al., (eds.) "Current protocols in Molecular Biology". John Wiley and Sons, 1995). LBPG es agar LB (ver arriba) complementado con glucosa al 0.5% y 0.05 M fosfato de potasio, pH 7.0. El medio BPX se describe en EP 0 506 780 (WO 91/09129).

Expresión, purificación y caracterización de mananasa a partir de Bacillus aqaradherens. El clon MB 594 obtenido como se describe anteriormente bajo Materiales y Métodos fue cultivado en medio de 25 x 200 ml BPX con 10 µg/ml de canamicina en dos frascos de agitación encajonados de 500 ml durante 5 días a 37°C a 300 rpm. 6500 ml de fluido de cultivo del frasco de agitación del clon MB594 (lote No. 9813) fueron reunidos y ajustados de pH a 5.5. 146 ml de agente catiónico (C521 ) y 292 ml de agente aniónico (A130) fueron añadidos durante la agitación para floculación. El material floculado fue separado mediante centrifugación utilizando una centrífuga Sorval RC 3B a 9000 rpm durante 20 min a 6°C. El sobreflbtante fue aclarado utilizando filtros de vidrio Whatman GF/D y C y finalmente concentrado sobre un filtron con un corte de 10 kDa. 750 ml de este concentrado fueron ajustados a pH de 7.5 utilizando una columna de 900 ml de Q-sefarosa equilibrada con 50 mmoles de Tris pH 7.5. El enlace de actividad mananasa fue eluido utilizando un gradiente de cloruro de sodio. La enzima pura dio una sola banda en SDS-PAGE con un peso molecular de 38 kDa. La secuencia de aminoácido de la enzima mananasa, es decir la secuencia de ADN traducida, se muestra en SEQ ID NO:2. Determinación de constantes cinéticas: Substrato: goma de algarroba (cárabo) y análisis de azúcar reductora (PHBAH). Goma de algarroba de Sigma. (G-0753). Determinación cinética utilizando diferentes concentraciones de goma de algarroba e incubación durante 20 min a 40°C a pH 10 dio: Kcat: 467 per sec. Km: 0.08 gram per I PM: 38 kDa pl (punto isoeléctrico): 4.2 La temperatura óptima de la mananasa se descubrió que fue de 60°C. El perfil de actividad pH mostró máxima actividad entre pH de 8 y 10.

La calorimetría de evaluación diferencial DSC da 77°C como punto de fusión a pH 7.5 en regulador de pH Tris indicando que esta enzima es muy termoestable. La compatibilidad detergente utilizando AZCL-Galactomanana al 0.2% de carobo como substrato e incubación como se describe anteriormente a 40°C muestra compatibilidad excelente con detergentes líquidos convencionales y buena compatibilidad con detergentes en polvo convencionales.

Obtención de la mananasa 168 bacillus subtilis La ß-mananasa Bacillus subtilis fue caracterizada y purificada como sigue: El genoma Bacillus subtilis fue buscado para homología con una secuencia de gen Bacillus sp ß-mananasa conocida (Mendoza et al., Biochemica et Biophvsica Acta, 1243:552-554, 1995). La región de codificación de ydhT, cuyo producto fue desconocido, mostró una similaridad de 58% al Bacillus ß-mananasa conocido. Los siguientes oligonucleótidos fueron diseñados para amplificar las secuencias que codifican para la porción madura de la ß-mananasa putativa: 5' -GCT CAA TTG GCG CAT ACT GTG TCG CCT GTG- 3' y 5' -GAC GGA TCC CGG ATT CAC TCA ACG ATT GGC G- 3'. El ADN genómico total a partir de la cepa Bacillus subtilis 1 A95 fue utilizado como un patrón para amplificar la región ydhT madura utilizando los iniciadores mencionados anteriormente. El PCR es realizado utilizando el equipo GENE-AMP PCR con AMPLITAQ DNA Polymerase (Perkin Elmer, Applid Biosystems, Foster City, CA). Un período de fusión inicial a 95°C durante 5 min fue seguido por 25 ciclos del siguiente programa: fusión a 95°C durante 1 min, fijación a 55°C durante 2 min, y extensión a 72°C durante 2 min. Después del último ciclo, la reacción se mantuvo a 72°C durante 10 min para completar la extensión. Los productos PCR fueron purificados utilizando equipo de purificación QIAquick PCR (Qíagen, Chatswort, CA). La región madura ydhT amplificada a partir de la cepa Bacillus subtilis 1 A95 fue insertada en el vector de expresión pPG1524 (descrito previamente) como sigue. El fragmento 1028 bp amplificado fue digerido con Mfe I y BamH I. El vector de expresión pPG1527 fue digerido con EcoR I y BamH I. Los productos de restricción fueron purificados utilizando equipo de purificación QIAquick PCR (Qiagen, Chatswort, CA). Los dos fragmentos fueron ligados utilizando T4 ADN ligasa (13 hr, 16°C) y utilizados para transformar cepa E. Coli DH5-a competente. Las colonias resistentes a la ampicilina fueron cultivadas para preparaciones de ADN. El ADN fue entonces caracterizado mediante análisis de restricción. El plásmido pPG3200 contiene la región madura del gen ydhT. El plásmido pPG3200 fue después utilizado para transformar cepa Bacillus subtilis PG 632 (Saunders et al., 1992). Fueron recogidos siete clones Bacillus subtilis resistentes a canamicina y un clon PG 632 de control y cultivados en 20 ml de medio 20/20/5 (20 g/l triptona, 20 g/l de extracto de levadura, 5 g/l NaCI) suplementado con 1 ml de maltrína a 25%, 120 µl 10 mM MnCI2, y 20 µl de 50 mg/ml de canamicina. Los clones fueron cultivados durante la noche en frascos de agitación encajonados de 250 ml a 14,000 rpm durante 15 minutos. Un µl de cada sobreflotante fue diluido en 99 µl de 50mM acetato de sodio (pH 6.0). Un µl de esta dilusión fue analizado utilizando las endo-1 ,4-ß-mananasa Beta-manazima Tabs (Megazyme, Irlanda) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. La absorbencia fue leída a 590 nm sobre un espectrofotómetro Bckman DU640. El clon 7 mostró la adsorbencia más alta de 1.67. El control PG632 no mostró adsorbencia a 590 nm. El sobreflotante fue analizado mediante SDS-PAGE sobre un gel de Tris-Glicina al 10-20% (Novex, San Diego, Ca) para confirmar el tamaño de proteína esperado de 38 kDa. Las muestras fueron preparadas como sigue. Una muestra de 500 µl de so b ref I otantes de clon 7 ydhT y PG632 fueron precipitados con 55.5 µl de ácido tricloroacético al 100% (Sigma), lavadas con 100 µl tricloroacético al 5%, resuspendidas en 50 µl de regulador de pH de muestra SDS tris-glicina (Novex) y hervida durante cinco minutos. Un µl de cada muestra fue electroforesado sobre el gel a 30 mA durante 90 minutos. Fue observada una gran banda de proteína que corre a 38 kDa para el clon 7 ydhT. Una fermentación 10 I de clon 7 ydhT Bacillus subtilis fue realizada en un termentador B. Braun Biostat O Las condiciones de fermentación fueron como sigue. Las células fueron cultivadas durante 18 hrs. en un medio rico similar a 20/20/5 a 37°C. Al final de la corrida de fermentación, las células fueron removidas y el sobreflotante concentrado a 1 litro utilizando un sistema de filtración de flujo tangencial. El rendimiento final de ß-mananasa en el sobreflotante concentrado se determinó que fue de 3 g/l. La purificación de la ß-mananasa a partir del sobreflotante de fermentación fue realizada como sigue: 500 ml de sobreflotante fueron centrifugados a 10,000 rpm durante 10 min a 4°C. El sobreflotante centrifugado fue entonces dializado durante la noche a 4°C en dos cambios de 4 L de 10 mM fosfato de potasio (pH 7.2) a través de membrana cortada Spectrapor de 12,000-14,000 PM (Spectrum). El sobreflotante dializado fue centrifugado a 10,000 rpm durante 10 min a 4°C. Una columna de intercambio de ion de flujo rápido de 200 ml de Q sefarosa (Pharmacia) fue equilibrada con 1 litro de 10 mM fosfato de potasio (p 7.2) a 20°C y 300 ml de sobreflotante fueron cargados sobre la columna. Fueron reunidas dos fracciones de flujo de 210 ml (muestra A) y 175 ml (muestra B). Las dos fracciones fueron analizadas como anteriormente, excepto que las muestras fueron diluidas con 199 µl de 50 mM acetato de sodio (pH 6.0), y mostraron Adsorbencia de .38 y .52 respectivamente. Dos µl de cada muestra fueron añadidos a 8 µl de regulador de pH de muestra de SDS Tris-glicina (Novex, CA) y hervidos durante 5 min. Las muestras resultantes fueron electroforesadas sobre un gel de Tris-glicina al 10-20% (Novex, CA) a 30 mA durante 90 minutos. Una banda principal correspondiente a 38 kDA estuvo presente en cada muestra y constó de más de 95% de la proteína total. Un análisis de proteína BCA (Pierce) fue realizado sobre ambas muestras de acuerdo con las instrucciones del fabricante, utilizando albúmina de suero bovino como estándar. Las muestras A y B contuvieron 1.3 mg/ml y 1.6 mg/ml de ß-mananasa respectivamente. La identidad de la proteína fue confirmada mediante espectrometría de masa de aspersión de ion y análisis de secuencia de aminoácido amino terminal. Las muestras de ß-mananasa purificada fueron utilizadas para caracterizar la actividad de las enzimas como sigue. Todos los análisis utilizaron endo-1 ,4-ß-mananasa Beta-manazima Tabs (Megazyme, Irlanda) como se describe anteriormente. La actividad a una escala de pH de 3.0- 9.0 fue realizada en 50 mM regulador de pH de fosfato-citrato, para determinación de actividad a pH 9.5, 50 mM CAPSO (Sigma), y para escala de pH 10.0-11.0 fue utilizado 50 mM regulador de pH CAPS. El pH óptimo para el Bacillus subtilis ß-mananasa se descubrió que fue pH 6.0-6.5. Los perfiles de actividad de temperatura fueron realizados en 50 mM regulador de pH fosfato citrato (pH 6.5). La enzima mostró actividad óptima a 40-45°C. El Bacillus subtilis ß-mananasa retuvo actividad significante a menos de 15°C y más grande que 80°C. La actividad específica contra ß-1 ,4-Galactomanana fue determinada que fue de 160,000 µmol/min»mg ß-mananasa utilizando endo-1 ,4-ß-mananasa Beta-manazima Tabs (Megazyme, Irlanda) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Las secuencias de nucleótido y aminoácido de la Bacillus subtilis ß-mananasa se muestran en SEQ ID NO: 5 y 6. La mananasa está incorporada en las composiciones de la invención preferiblemente a un nivel de 0.0001 % a 2%, más preferiblemente de?.0005% a 0.1 %, más preferido de 0.001 % a 0.02% de enzima pura en peso de la composición. La enzima de la invención, además del núcleo de enzima que comprende el dominio catalítico, también comprende un dominio de enlace de celulosa (CBD), el dominio de enlace de celulosa y el núcleo de enzima estando encadenados operablemente. El dominio de enlace de celulosa (CBD) puede existir como una parte integral de la enzima codificada, o un CBD de otro origen puede ser introducido en la enzima creando de esta manera un híbrido de enzima. En este contexto, el término "dominio de enlace de celulosa" está diseñado para ser entendido como se define por Peter Tomme et al. "Cellulose-Binding Domains: Classification and Properties" en "Enzymatic Degradation of Insoluble Carbohydrates", John N. Saddler y Michael H. Penner (Eds.), ACS Symposium Series, No. 618, 1996. Esta definición clasifica más de 120 dominios de enlace de celulosa en 10 familias (l-X), y demuestra que los CBDs se encuentran en varias enzimas como celulasas, xylanasas, mananasas, arabinofuranosidasas, esterasas y chitinasas de acetilo. Los CBDs también han sido descubiertos en algas, por ejemplo, el alga roja Porphyra purpurea como una proteína no hidrolítica que enlaza polisacárido, ver Tomme et al., op. Cit. Sin embargo, la mayoría de los CBDs son de celulasas y xilanasas, los CBDs se encuentran en los términos N y C de proteínas o son internos. Los híbridos de enzima son conocidos en la técnica, ver, por ejemplo, WO 90/00609 y WO 95/16782, y pueden ser preparados transformando en una célula hospedero un constructo de ADN que comprende al menos un fragmento de ADN que codifica el dominio de enlace de celulosa ligado, con o sin un encadenador, a una secuencia de ADN que codifica la enzima mananasa y cultivando la célula hospedero para expresar el gen fusionado. Los híbridos de enzima pueden ser descritos mediante la siguiente fórmula: CBD - MR - X En la cual CBD es la región N-terminal o C-terminal de una secuencia de aminoácido correspondiente a al menos el dominio de enlace de celulosa; MR es la región media (el encadenador), y puede ser un enlace, o un grupo de cadena corta preferiblemente de 2 a 100 átomos de carbono, más preferiblemente de 2 a 40 átomos de carbono; o es preferiblemente de 2 a 100 aminoácidos, más preferiblemente de 2 a 40 aminoácidos; y X es una región N-terminal o C-terminal de la enzima de la invención. Las enzimas mencionadas anteriormente pueden ser de cualquier origen adecuado, como origen vegetal, animal, bacterial, fúngico, y de levadura. El origen puede ser además mesofílico o extremofílico (psicrofílico, psicotrópico, termofílico, barofílico, alcalofílico, acidofílico, halofílico, etc.). Pueden ser utilizadas formas purificadas o no purificadas de esas enzimas. Actualmente, es práctica común modificar enzimas tipo silvestre mediante técnicas de diseño genético/proteínas con el fin de optimizar su eficiencia de rendimiento en las composiciones limpiadoras de la invención. Por ejemplo, las variantes pueden ser diseñadas de tal manera que la compatibilidad de la enzima a ingrediente que se encuentran comúnmente de tales composiciones es incrementada. De manera alternativa, la variante puede ser diseñada de tal manera que el pH óptimo, la estabilidad de blanqueador o quelatador, la actividad catalítica y similares, de la variante de enzima estén hechas a la medida para adecuarse a la aplicación de limpieza particular. En particular, la atención debe enfocarse sobre aminoácidos sensibles a la oxidación en el caso de estabilidad de blanqueador y sobre cargas de superficie para la compatibilidad con el agente tensioactivo. El punto isoeléctrico de tales enzima puede ser modificado mediante la sustitución de algunos aminoácidos cargados, por ejemplo un incremento en el punto isoeléctrico puede ayudar a mejorar la compatibilidad con agentes tensioactivos aniónicos. La estabilidad de las enzimas puede ser mejorada adicionalmente mediante la creación de por ejemplo puentes de sal adicionales y refuerzo de sitios de enlace de metal para incrementar la estabilidad del quelatador.

El compuesto de percarbonato Las composiciones detergentes de la presente contienen típicamente de 0.1 % a 50%, preferiblemente de 0.5% a 35%, en peso, más preferiblemente de 1 % a 25% en peso de un blanqueador de percarbonato de metal alcalino en forma de partículas que tienen un tamaño promedio de 250 a 900 mieras, preferiblemente de 500 a 700 mieras. Los aditivos de lavandería contienen típicamente de 20% a 80% de dichas partículas de percarbonato.

Las composiciones detergentes preferidas de acuerdo con la presente invención constan de un nivel de mananasa (enzima pura en peso de composición total) de 0.0001 % a 2% y un nivel de percarbonato de 0.1 % a 50% en peso de la composición total, preferiblemente un nivel de mananasa de 0.0005% a 0.5%, y un nivel de percarbonato de 0.5% a 35%, más preferiblemente un nivel de mananasa de 0.001 % a 0.1% y un nivel de percarbonato de 1 % a 25%. El blanqueador de percarbonato de metal alcalino está normalmente en forma de sal de sodio. El percarbonato de sodio es un compuesto de adición que tiene una fórmula que corresponde a 2Na2C03 3H2?2- Para mejorar la estabilidad de almacenamiento el blanqueador de percarbonato puede estar revestido con, por ejemplo una sal mezclada adicionalmente de un sulfato y carbonato de metal alcalino. Dichos revestimientos junto con los procedimientos de revestimiento han sido descritos previamente en GB-1 ,466,799, cedida a Interox el 9 de marzo de 1977. La relación en peso del material de revestimiento de sal mezclada a percarbonato yace en la escala de 1 :2000 a 1 :4, más preferiblemente de 1 :99 a 1 :9, y más preferiblemente de 1 :49 a 1 :19. Preferiblemente, la sal mezclada es de sulfato de sodio y carbonato de sodio la cual tiene la fórmula general Na2S04.n.Na2C03 en la cual n es de 0.1 a 3, preferiblemente n es de 0.3 a 1.0 y más preferiblemente n es de 0.2 a 0.5. El percarbonato adecuado para el objeto de la presente invención es el percarbonato de sodio descrito en WO97/35591 estando caracterizado por un tamaño de partiente promedio intrínseco de 500 a 100 mu m, no más de 20% por debajo de 350 mu m y una absorción de humedad de no más de 30g por 1000g de muestra a humedad relativa de 80% y 32°C durante 24h o caracterizada por un tamaño de partícula promedio de 500 a 1200 mu m y una emisión de calor madurada 7 días a 40°C de por debajo de 3 mu W/g en 16h. También es adecuado el percarbonato de sodio fabricado a partir de peróxido de hidrógeno y carbamato de sodio en medio acuoso sin el uso de agente de des salación de cloruro como se describe en WO97/35806. Otros materiales de revestimiento adecuados son silicato de sodio, de relación Si02:Na20 de 1.6:1 a 2.8:1 , y silicato de magnesio. El blanqueador de percarbonato revestido de carbonato/sulfato disponible comercialmente puede incluir un bajo nivel de un secuestrante de metal pesado como EDTA, 1-hidroxietilideno, ácido 1 ,1 -difosfónico (HEDP) o un aminofosfonato, que es incorporado durante el procedimiento de fabricación. Los secuestrantes de metal pesado preferidos para incorporación como se describe aquí anteriormente incluyen los fosfonatos y amino alquilen poli(alquilenfosfonatos) orgánicos como los etano 1 -hidroxi difosfonatos de metal alcalino, los nitrilo trimetilenfosfonatos, los etilendiamina tetrametilefosfonatos y los dietilentriamina pentametilenefosfonatos. --y^-^SXi XsÉLi Componentes detergentes Las composiciones detergentes de la invención deben contener al menos un componente detergente adicional. La naturaleza precisa de estos componentes adicionales y los niveles de incorporación de los mismos dependerá de la forma física de la composición y de la naturaleza de la operación de limpieza para la cual se usará. Las composiciones detergentes de acuerdo con la invención pueden ser formas líquidas, de pasta, geles, barras, tabletas, aspersión, polvo o granuladas. Las composiciones granuladas también pueden estar en forma "compacta"; las composiciones líquidas pueden estar también en una forma "concentrada". En una modalidad preferida, la presente invención se refiere a una composición para lavandería y/o cuidado de telas que comprende una mananasa y percarbonato. En una segunda modalidad, la presente invención se refiere a composiciones para lavado de vajillas. Las composiciones de la invención pueden por ejemplo, formularse como composiciones para el lavado de vajillas a mano y en máquina, incluyendo composiciones aditivas detergentes para lavandería y composiciones adecuadas para usarse en el remojo y/o pretratamiento de telas sucias, composiciones suavizantes de telas añadidas durante el enjuague. Cuando se formulan como composiciones adecuadas para usarse en un método de lavado de ropa manual, las composiciones de la SüT** invención contienen preferiblemente un agente tensioactivo y preferiblemente otros compuestos detergentes seleccionados de compuestos poliméricos orgánicos, agentes mejoradores de espumas, iones de metal del grupo II, solventes, hidrotropos y enzimas adicionales. Cuando se formulan como composiciones adecuadas para usarse en un método de lavado de ropa a máquina, las composiciones de la invención contienen preferiblemente un agente tensioactivo y un compuesto mejorador de detegencia y adicionalmente uno o mas componentes detergentes seleccionados preferiblemente de compuestos poliméricos orgánicos, agentes de blanqueo, enzimas adicionales, supresores de espuma, dispersantes, dispersantes de jabón de cal, agentes de suspensión y antirredeposición de suciedades e inhibidores de corrosión. Las composiciones para lavandería también pueden contener agentes suavizantes, como componentes detergentes adicionales. Dichas composiciones que contienen mananasa y percarbonato pueden proveer limpieza de telas, remoción de manchas, mantenimiento de blancura, apariencia de color, inhibición de transferencia de color y sanización cuando se formulan como composiciones detergentes para lavandería. Las composiciones de la invención también se pueden usar como productos aditivos detergentes. Dichos productos aditivos están diseñados para complementar o fomentar el rendimiento de las composiciones detergentes convencionales y pueden ser añadidos en cualquier etapa del procedimiento de limpieza.

Si es necesario, la densidad de las composiciones detergentes para lavandería de la presente varía de 400 a 1200 g/litro, preferiblemente 500 a 950 g/litro de composición, medidas a 20°C. La forma "compacta" de las composiciones de la presente se refleja mejor mediante densidad y, en términos de composición, por la cantidad de sal llenadora inorgánica; las sales llenadoras inorgánicas son ingredientes convencionales de las composiciones detergentes en polvo; en las composiciones detergentes convencionales, las sales llenadoras están presentes en cantidades sustanciales, típicamente de 17-35% en peso de la composición total. En las composiciones compactas, las sal llenadora está presente en cantidades que no exceden 15% de la composición total, preferiblemente que no excedan 10%, muy preferiblemente sin exceder 5% en peso de la composición. Las sales llenadoras inorgánicas tales como las que se requieren en las presentes composiciones se seleccionan a partir de sales alcalinas y de metal alcalino terreo de sulfatos y cloruros. Una sal llenadora preferida es el sulfato de sodio. Las composiciones detergentes líquidas de acuerdo con la presente invención también pueden estar en "forma concentrada", en cuyo caso, las composiciones detergentes líquidas de acuerdo con la presente invención contendrán una cantidad menor de agua, en comparación con los detergentes líquidos convencionales. Típicamente, el contenido de agua del detergente líquido concentrado es preferiblemente de menos del 40%, muy preferiblemente menos del 30% y más preferiblemente menos del 20% en peso de la composición detergente. Los compuestos detergentes adecuados para utilizarse en la presente se seleccionan del grupo consistente de los compuestos descritos enseguida.

Sistema de agente tensioactivo Las composiciones detergentes de acuerdo con la presente invención constan en general de un sistema de agente tensioactivo en el que el agente tensioactivo se puede seleccionar a partir de agentes tensioactivos no iónicos y/o aniónicos y/o catiónicos y/o anfolíticos y/o zwiteriónicos y/o semipolares. El agente tensioactivo está presente típicamente a un nivel de 0.1 % a 60% en peso. Los niveles de incorporación que más se prefieren son de 1 % a 35% en peso, más preferiblemente de 1 % a 30% en peso de las composiciones detergentes de acuerdo con la invención. El agente tensioactivo se formula preferiblemente para ser compatible con los componentes de enzima presentes en la composición. En las composiciones líquidas o en gel, el agente tensioactivo se formula más preferiblemente de forma tal que promueva, o por lo menos no degrade, la estabilidad de cualquier enzima en esas composiciones. Los sistemas de agente tensioactivo a ser usados de acuerdo con la presente invención comprenden como un agente tensioactivo de uno o más de los agentes tehsioactivos no tónicos y/o aniónicos descritos en la presente. Los condensados de óxido de polietileno, polipropileno y polibutileno de alquilfenoles son adecuados para usarse como el agente tensioactivo no iónico de los sistemas de agente tensioactivo de la presente invención, prefiriéndose más los condensados de óxido de polietileno. Estos compuestos incluyen los productos de condensación de alquilfenoles que tienen un grupo alquilo que contiene aproximadamente de 6 a aproximadamente 14 átomos de carbono, preferiblemente de aproximadamente 8 a aproximadamente 14 átomos de carbono, ya sea en una configuración de cadena recta o de cadena ramificada con el óxido de alquileno. En una modalidad preferida, el óxido de etileno está presente en una cantidad ¡gual a de 2 a aproximadamente 25 moles, más preferiblemente de aproximadamente 3 a aproximadamente 15 moles, de óxido de etileno por mole de alquilfenol. Los agentes tensioactivos no iónicos de este tipo disponibles comercialmente incluyen IgepalTM CO-630, comercializado por GAF Corporation; y Tritón™ X-45, X-114, X-100 y X-102, todos vendidos por Rohm & Haas Company. Estos agentes tensioactivos son conocidos comúnmente como alcoxilados de alquilfenol ( por ejemplo etoxilados de alquilfenol). Los productos de condensación de los alcoholes alifáticos primarios y secundarios con aproximadamente 1 a 25 moles de óxido de etileno son adecuados para usarse como el agente tensioactivo no iónico del sistema de agente tensioactivo no iónico de la presente invención. La cadena alquilo del alcohol alifático pude ser o recta o ramificada, primaria o secundaria, y contiene generalmente de aproximadamente 8 a aproximadamente 22 átomos de carbono. Se prefieren los productos de condensación de alcoholes que tienen un grupo alquilo que contiene de aproximadamente 8 a aproximadamente 20 átomos de carbono, más preferiblemente de aproximadamente 10 a aproximadamente 18 átomos de carbono, con desde aproximadamente 2 a aproximadamente 10 moles de óxido de etileno por mol de alcohol. Aproximadamente 2 a aproximadamente 7 moles de óxido de etileno, y más preferiblemente de 2 a 5 moles de óxido de etileno por mole de alcohol están presentes en dichos productos de condensación. Ejemplos de agentes tensioactivos no ¡ónicos de este tipo disponibles comercialmente ¡ncluyen Tergitol™ 15-S-9 (el producto de condensación de alcohol lineal de C^-C^ con 9 moles de óxido de etileno), Tergitol™ 24-L-6 NMW (el producto de condensación de alcohol primario de C12-C14 con 6 moles de óxido de etileno con una distribución de peso molecular angosta), ambos comercializados por Union Carbide Corporation; Neodol™ 45.9 (e| producto de condensación de alcohol lineal de C14-C15 con 9 moles de óxido de etileno), Neodol™ 23-3 (el producto de condensación de alcohol lineal de C12-C13 con 3.0 moles de óxido de etileno), Neodol™ 45.7 (el producto de condensación de alcohol lineal de C14-C15 con 7 moles de óxido de etileno), Neodol™ 45-5 (el producto de condensación de alcohol lineal de C14-C15 con 5 moles de óxido de etileno) comercializados por Shell Chemical Company, Kyro™ EOB (el producto de condensación de alcohol de C13-C15 con 9 moles de óxido de etileno), comercializado por The Procter & Gamble Company, y Genapol LA 030 o 050 (el producto de condensación de alcohol de C12-C14 con 3 ó 5 moles de óxido de etileno) comercializado por Hoechst. La escala preferida de HLB en estos productos es de 8-11 y más preferida de 8-10. También útiles como el agente tensioactivo no iónico de los sistemas de agente tensioactivo de la presente invención son los alquilpolisacáridos descritos en la patente de E.U.A. No. 4,565,647, Llenado, del 21 de enero de 1986, que tienen un grupo hidrófobo que contiene de 6 a aproximadamente 30 átomos de carbono, preferiblemente alrededor de 10 a aproximadamente 16 átomos de carbono, y un polisacárido, por ejemplo, un poliglucósido, un grupo hidrófilo que contiene de aproximadamente 1.3 a aproximadamente 10, preferiblemente de aproximadamente 1.3 a aproximadamente 3, más preferiblemente de aproximadamente 1.3 a aproximadamente 2.7 unidades de sacárido. Cualquier sácarido reductor que contenga 5 ó 6 átomos de carbono puede ser usado, por ejemplo, glucosa, las porciones de galactosa y de galactosilo pueden ser substituidas por las porciones glucosilo (opcionalmente el grupo hidrófobo está fijado en las posiciones 2-, 3-, 4-, etc., dando de esta manera una glucosa o galactosa en oposición a un glucósido o galactósido). Los enlaces entre sacáridos pueden ser, por ejemplo, entre la posición uñó de tas urtidades sacárido adicionales y las posiciones 2-, 3-, 4- y/o 6- de las unidades sacárido precedentes. Los alquilpoliglucósidos preferidos tienen la fórmula R20(CnH2nO)t(glucosilo) x 2 en donde R se selecciona del grupo que consiste de alquilo, alquilfenilo, hidroxialquilo, hidroxialquilfenilo y mezclas de los mismos, en los cuales los grupos alquilo contienen de aproximadamente 10 a aproximadamente 18, preferiblemente de aproximadamente 12 a aproximadamente 14 átomos de carbono; n es 2 ó 3, preferiblemente 2; t es de 0 a aproximadamente 10, preferiblemente 0; y x es de aproximadamente 1.3 a aproximadamente 10, preferiblemente aproximadamente 1.3 a aproximadamente 3, más preferiblemente de aproximadamente 1.3 a aproximadamente 2.7. El glucosilo se deriva preferiblemente de glucosa. Para preparar estos compuestos, se forma el alcohol o alcohol alquilpolietoxilado primero, y después se hace reaccionar con glucosa o una fuente de glucosa para formar el glucósido (fijación en la posición 1 ). Las unidades glucosilo adicionales pueden ser después fijadas entre su posición 1 y las unidades glucosilo precedentes en la posición 2-, 3-, 4- y/o 6-, preferiblemente y en forma predominante en la posición 2. Los productos de condensación de óxido de etileno con una base hidrófoba formados mediante la condensación de óxido de propileno con propilenglicol también son adecuados para usarse como el sistema de agente tensioactivo no iónico adicional de la presente invención. La porción hidrófoba de estos compuestos tendrá preferiblemente un peso molecular de desde aproximadamente 1500 a aproximadamente 1800, y exhibirá insolubilidad en agua. La adición de porciones de polioxetileno a esta porción hidrófoba tiende a aumentar la solubilidad en agua de la molécula como un todo, y el carácter líquido del producto es retenido hasta el punto en el que el contenido de polioxetileno es de aproximadamente 50% del peso total del producto de condensación, lo cual corresponde a la condensación con hasta aproximadamente 40 moles de óxido de etileno. Ejemplos de compuestos de este tipo incluyen ciertos agentes tensioactivos disponibles comercialmente como Plurafac™ LF 404 y Pluron¡c™> comercializados por BASF. También adecuados para usarse como el agente tensioactivo no iónico del sistema de agente tensioactivo no iónico de la presente invención son los productos de condensación de óxido de etileno con el producto que resulta de la reacción de óxido de propileno y etilendiamina. La porción hidrófoba de estos productos consiste del producto de reacción de etilendiamina y óxido de propileno en exceso, y tiene generalmente un peso molecular de 2500 a aproximadamente 3000. Esta porción hidrófoba es condensada con óxido de etileno hasta el grado que el producto de condensación contenga de aproximadamente 40% a aproximadamente 80% en peso de polioxietileno y tenga un peso molecular de 5,000 a aproximadamente 11 ,000. Ejemplos de este tipo de agente tensioactivo no ¡ónico ¡ncluyen ciertos de los compuestos comercialmente disponibles Tetronic™j comercializados por BASF.

Preferidos para usarse como el agente tensioactivo no iónico de los sistemas de agente tensioactivo de la presente invención son los condensados de óxido de polietileno de alquilfenoles, los productos de condensación de alcoholes alifáticos primarios y secundarios con de aproximadamente 1 a aproximadamente 25 moles de óxido de etileno, alquil polisacáridos y mezclas de los mismos. Los que más se prefieren son los etoxilados de alquilfenol de Cs-C-|4 que tienen de 3 a 15 grupos etoxi y los etoxilados de alcohol de Cs-C^s (preferiblemente de C-|rj promedio) que tienen de 2 a 10 grupos etoxi, y mezclas de los mismos, Los agentes tensioactivos no iónicos altamente preferidos son los agentes tensioactivos de amida de ácido graso polihidroxílica de la fórmula R2_C_N— Z II O R en donde R^ es H, o R1 es hidrocarbilo de C-1-C4, 2-hidroxietilo, 2-hidroxi propilo o una mezcla de los mismos, R^ es hidrocarbilo de C5-31 y z es polihidroxihidrocarbilo que tiene una cadena hidrocarbilo lineal con por lo menos 3 hidroxilos directamente conectados a la cadena, o un derivado alcoxilado de los mismos. Preferiblemente, R1 es metilo, R^ es una cadena alquilo de C-11-C15 o alquilo o alquenilo de C-iß-C-iß recta tal como coco alquilo o mezclas de los mismos, y z se deriva de un azúcar reductor como glucosa, fructosa, maltosa y lactosa, en una reacción de aminación reductiva. i-r- Los agentes tensioactivoß aniónícos adecuados a ser utilizados son los agentes tensioactivos de éstersulfonato de alquilo que incluyen esteres lineales de ácidos carboxílicos de C8-C20 (es decir, ácidos grasos) que son sulfonados con SO3 gaseoso de acuerdo con "The Journal of the American Oil Chemists Society", 52 (1975), pp. 323-329. Los materiales de partida adecuados podrían incluir substancias grasas naturales como las derivadas de sebo, aceite de palma, etc. El agente tensioactivo de alquilestersulfonato preferido, especialmente para aplicaciones de lavandería, comprende agentes tensioactivos de alquilestersulfonato de la fórmula estructural: en donde R3 es un hidrocarbilo de C8-C20. preferiblemente un alquilo o combinación del mismo, R4 es un hidrocarbilo de C1-C5, preferiblemente un alquilo o una combinación del mismo, y M es un catión que forma una sal soluble en agua con el éstersulfonato de alquilo. Los cationes formadores de sal adecuados ¡ncluyen metales tales como sodio, potasio y litio, y cationes de amonio sustituido o no sustituido tales como monoetanolamina, dietanolamina y trietanolamina. Preferiblemente, R^ es alquilo de C-|Q-Ci6 y R^ es metilo, etilo o isopropilo. Se prefiere especialmente los éstersulfonatos de metilo en los que R es alquilo de C-jn-C-iß- Otros agentes tensioactívoß aniónicos adecuados incluyen los agentes tensioactivos de alquil sulfato que son sales o ácidos solubles en agua de la fórmula ROSO3M, en la que R es preferiblemente un hidrocarbilo de C-|o-C24, preferiblemente un alquilo o hidroxialquilo que tiene un componente alquilo de C10-C2O' m^s preferiblemente un alquilo o hidroxialquilo de C-12- 18. y M es H o un catión, por ejemplo, un catión de metal alcalino (por ejemplo, sodio, potasio, litio), o amonio o amonio substituido (por ejemplo, cationes de metil-, dimetil-, y trimetilamonio y cationes de amonio cuaternario tales como cationes de tetrametilamonio y de dimetilpiperidinio y cationes de amonio cuaternario derivados de alquilaminas tales como etilamina, dietilamina, trietilamina y mezclas de los mismos, y similares). Típicamente, las cadenas alquilo de C-|2_C<|6 se prefieren para temperaturas de lavado inferiores (por ejemplo, abajo de aproximadamente 50°C) y las cadenas alquilo de C-|g_-|8 se prefieren para temperaturas de lavado más altas (por ejemplo, arriba de aproximadamente 50°C). Otros agentes tensioactivos anionicos útiles para los propósitos detersivos también pueden incluirse en las composiciones detergentes de la presente invención. Estos pueden incluir sales (incluyendo, por ejemplo, sales de sodio, potasio, amonio y de amonio substituido tales como sales de mono-, di- y trietanolamina) de jabón, alcanosulfonatos primarios o secundarios de C8-C22 olefinsulfonatos de C8-C24, ácidos policarboxílicos sulfonados preparados mediante la sulfonación del producto pirolizado de citratos de metal de tierra alcalina, por ejemplo, como los descritos en la especificación de la patente británica No. 1 ,082,179, étersulfatos alquilpoliglicólicos de Cs- C24 (que contienen hasta 10 moles de óxido de etileno); sulfonatos alquil glicerólicos, sulfonatos acilglicerólicos grasos, sulfonatos oleilglicerólicos 5 grasos, éter sulfatos de óxido de etileno de alquilfenol, parafin sulfonatos, alquil fosfatos, isetionatos, tales como los acil isetionatos, N-acil tauratos, alquil succinamatos y sulfosuccinatos, monoésteres de sulfosuccinatos (especialmente monoésteres de C-|2-C-|8 saturados e insaturados) y diésteres de sulfosuccinatos (especialmente diésteres de Cß-C-^ saturados e 10 ¡nsaturados), acil sarcosinatos, sulfatos de alquilpolisácaridos tales como los sulfatos de alquilpoliglucósido (los compuestos no sulfatados no ¡ónicos siendo descritos posteriormente), alquilsulfatos primarios ramificados y alquil polietoxicarboxilatos tales como aquellos de la fórmula RO(CH2CH20)?- CH2COO-M+ en la cual R es un alquilo de C8-C22- k es un entero de 1 a 10 y 15 M es un catión formador de sal soluble. Los ácidos de resina y los ácidos de resina hidrogenados también son adecuados, tales como colofonia, colofonia hidrogenada y ácidos de colofonia, así como ácidos de colofonia hidrogenados presentes en o derivados de aceite de sebo. Ejemplos adicionales se describen en "Surface Active Agents 20 and Detergents" (Vol. I y II por Schwartz, Perry y Berch). Una variedad de dichos agentes tensioactivos se describen generalmente también en la patente de E.U.A. No. 3,929,678, del 30 de Diciembre de 1975 a Laughlin, et í¡-¡A"M "-aJ&iaMwfc.- al, en Columna 23, línea 58 a Columna 29, línea 23 (incorporada en la presente a manera de referencia). Cuando están incluidos en éstas, las composiciones detergentes para lavandería de la presente invención comprenden típicamente de 1% a aproximadamente 40%, preferiblemente de 3% a aproximadamente 20% en peso de dichos agentes tensioactivos aniónicos. Los agentes tensioactivos aniónicos altamente preferidos incluyen los agentes tensioactivos de alquilsulfato alcoxilado que son sales solubles en agua o ácidos de la fórmula RO(A)mS03M en la que R es un grupo alquilo o hidroxialquilo de C-10-C24 insustituido que tiene un componente alquilo de C<|n-C24> preferiblemente un alquilo o hidroxialquilo de C-12-C20. muy preferiblemente alquilo o hidroxialquilo de C-|2-C-|8> A es una unidad etoxi o propoxi, m es mayor que cero, típicamente entre aproximadamente 0.5 y aproximadamente 6, muy preferiblemente entre aproximadamente 0.5 y aproximadamente 3, y M es H o un catión que puede ser, por ejemplo, un catión de metal (por ejemplo, sodio, potasio, litio, calcio, magnesio, etc.) o un catión de amonio o de amonio substituido. Los alquilsulfatos etoxilados así como los alquilsulfatos propoxilados también se contemplan en la presente. Ejemplos específicos de cationes de amonio substituido incluyen cationes de metil-, dimetil-, y trimetil amonio y cationes de amonio cuaternario tales como cationes de tetrametilamonio y dimetilpiperidinio y aquellos derivados de aquilaminas tales como etilamina, dietilamina, trietilamina, mezclas de los mismos y similares. Agentes tensioactivos ejemplares son alquil stiftío polietoxilado de C12-C18 C °) (Ci2-Ci8E(1.0)M), alquil sulfato polietoxilado de C12-C18 (2.25) (C12- Ci8E(2.25)M), alquil sulfato polietoxilado de C12-C18 (3.0) (C12- C-|8E(3.0)M), y alquil sulfato polietoxilado de C-12-C18 (4.0) C-|2-C-| 8E(4.0)M), en los que M se selecciona convenientemente a partir de sodio y potasio. Las composiciones detergentes de la presente invención pueden contener también agentes tensioactivos catiónicos, anfolíticos, zwiteriónicos y semipolares, así como los agentes tensioactivos no ¡ónicos y/o aniónicos que no sean los que ya se describieron en la presente. Los agentes tensioactivos detersivos catiónicos adecuados para usarse en las composiciones detergentes de la presente invención son aquellos que tienen un grupo hidrocarbilo de cadena larga. Ejemplos de dichos agentes tensioactivos catiónicos incluyen los agentes tensioactivos de amonio tales como halogenuros de alquiltrimetil amonio y aquellos agentes tensioactivos que tienen la fórmula: [R2(OR3)y][R4(OR3)y]2R5N+X- en donde R2 es un grupo alquilo o alquilbencilo que tiene de aproximadamente 8 a aproximadamente 18 átomos de carbono en la cadena alquilo, cada R3 se selecciona del grupo que consiste de -CH2CH2-, -CH2CH(CH3)-, -CH2CH(CH2?H)-, -CH2CH2CH2-, y mezclas de los mismos; cada R4 se selecciona a partir del grupo que consiste de alquilo de C-1-C4, hidroxialquilo de C1-C4, estructuras de anillo de bencilo formadas uniendo los dos grupos R4, -CH2CHOH-, -CHOHCOR6CHOHCH2OH, en los que R6 es cualquier hexosa o polímero de hexosa que tenga un peso molecular menor de aproximadamente 1000, e hidrógeno cuando y no sea 0; R5 es la misma que R4 O es una cadena alquilo en la que el número total de átomos de carbono de R2 más R^ no es mayor de aproximadamente 18; cada y es de 0 a aproximadamente 10 y la suma de los valores y va de 0 a aproximadamente 15; y X es cualquier anión compatible. El agente tensioactivo de amonio cuaternario adecuado para la presente invención tiene la fórmula (I): Fórmula I en donde R1 es un alquilo de cadena corta (C6-C10) o alquilamidoalquilo de la fórmula (II): Fórmula II y es 2-4, preferiblemente 3, en donde R2 es H o un alquilo de C1-C3, en donde x es 0-4, preferiblemente 0-2, muy preferiblemente 0, en donde R3, R4 y R5 son cada uno el mismo o diferentes, y pueden ser ya sea un alquilo de cadena corta (C1-C3) o alquilo alcoxilado de la fórmula (lll), en donde X" es un contfa ion, preferiblemente un halogenuro, v.gr., cloruro o metiisulfato.

Fórmula III R6 es C?-C4 y z es 1 ó 2. Los agentes tensioactivos de amonio cuaternario solubles son aquellos como los definidos en la la fórmula I en donde R-| es Cs, C-|o o mezclas de los mismos, x=o, R3, R4 = CH3 y R5 = CH2CH2OH. Agentes tensioactivos catiónicos altamente preferidos son los compuestos de amonio cuaternario solubles en agua útiles en la presente composición, que tienen la fórmula: R<| R2R3R4N+X- (i) en donde R-| es alquilo de CQ-C^Q, cada uno de R2, R3 y R4 es independientemente alquilo de C-|-C4, hidroxialquilo de C-1-C4, bencilo y - (C2H4o)x^, en donde x tiene un valor de 2 a 5 y x es un anión. No más de uno de R2, R3 o R4 debe ser bencilo. La longitud preferida de la cadena alquilo para R-| es C-12-C15, particularmente cuando el grupo alquilo sea una mezcla de longitudes de cadena derivadas de grasa de semilla de palma o de coco o sea derivada «¿- ,1 . sintéticamente por la acumulación olefína o fa síntesis de alcoholes OXO. Los grupos preferidos para R , R3 y R4 son grupos metilo e hidroxietilo, y el anión X se puede seleccionar a partir de iones de halogenuro, metosulfato, acetato y fosfato. Ejemplos de compuestos de amonio cuaternario de la fórmula (i) para usarse en la presente son: cloruro o bromuro de trimetil amonio de coco; cloruro o bromuro de metil dihidroxietil amonio de coco; cloruro de decil trietil amonio; cloruro o bromuro de decil dimetil hidroxietil amonio; cloruro o bromuro de dimetil hidroxietil amonio de C-12-C15; cloruro o bromuro de dimetil hidroxietil amonio de coco; metil sulfato de miristil trimetil amonio; cloruro o bromuro de lauril dimetil bencil amonio cloruro o bromuro de lauril dimetíl (etenoxi)4 amonio; esteres de colina (compuestos de la fórmula i en la que Ri es alquilo de CH2-CH2-O-C-C-12-I4 y 2R3R4 son metilo). II o di-alquil ímidazolinas [compuestos de la fórmula (i)]. Otros agentes tensioactivos catiónicos útiles en la presente se describen también en la patente de E.U. No. 4,228, 044, Cambre, expedida el 14 de octubre de 1980, y en la solicitud de patente europea EP 000,224.

Los componentes catiónicos suavizantes de telas incluyen los activos suavizantes de telas de amonio cuaternario ¡nsolubles en agua o su precursor de amina correspondiente, siendo el más comúnmente usado el cloruro o metiisulfato de amonio de cadena alquilo di-larga. Los suavizantes catiónicos que se prefieren entre éstos incluyen los siguientes: 1 ) cloruro de disebodimetilamonio (DTDMAC); 2) cloruro de disebohidrogenadodimetílamonio; 3) metiisulfato de disebohidrogenadodimetilamonio; 4) cloruro de distearildimetilamonio; 5) cloruro de dioleildimetilamonio; 6) cloruro de dipamitilhidroxietilmetilamonio; 7) cloruro de estearilbencildimetilamonio; 8) cloruro de sebotrimetilamonio; 9) cloruro de sebohidrogenadotrimetilamonio; 10) cloruro de alquilhidroxietildimetilamonio de C-|2-14 11 ) cloruro de alquildihidroxietildimetilamonio de C-| 2-18', 12) cloruro de di(stearoilox¡etil)dimetilamonio (DSOEDMAC); 13) cloruro de di(sebo-oxi-etil)dimetilamonio; 14) metiisulfato de diseboimidazolinio; 15) metiisulfato de 1-(2-seboilamidoetil)-2-seboilimidazolinio. Los compuestos de amonio cuaternario biodegradables han sido presentados como alternativas para los cloruros y metiisulfatos de amonio de cadena alquilo di-larga usados tradicionalmente. Dichos compuestos de amonio cuaternario contienen grupos alqu(en)ilo de cadena larga interrumpidos por grupos funcionales tales como grupos carboxilo. Dichos materiales y las composiciones suavizantes de telas que los contienen se describen en numerosas publicaciones tales como EP-A-0,040,562 y EP-A-0,239,910. Los compuestos de amonio cuaternario y precursores de amina de la presente tienen la fórmula (I) o (II), a continuación: ( l ) l l ) en donde Q se selecciona de -O-C(O)-, -C(0)-0-, -0-C(0)-0-, NR4-C(0)-, C(0)-NR4-; R1 es (CH2)n-Q-T2 o T3; R2 es (CH2)m-Q-T4 o T$ o t3; R es alquilo de C-1-C4 o hidroxialquilo de C1-C4 o H; R4 es H o alquilo de C1-C4 o hidroxialquilo de C1-C4; T^ , t2, t , T4 y T^ son independientemente alquilo o alquenilo de C-n-C22; n y m son enteros de 1 a 4; y X" es un anión compatible con suavizador. Ejemplos no limitantes de aniones compatibles con suavizante incluyen cloruro o metiisulfato. La cadena T"1 , T2, T3, T4 y T5 del alquilo o alquenilo debe contener por lo menos 11 átomos de carbono, preferiblemente por lo menos 16 átomos de carbono. La cadena puede ser recta o ramificada. El sebo es una fuente conveniente y no costosa de material alquilo y alquenilo de cadena larga. Se prefieren particularmente los compuestos en los que T^ , T2, T3, T4 y T^ representan la mezcla de materiales de cadena larga típicos para sebo. Ejemplos específicos de compuestos de amonio cuaternario para usarse en las composiciones acuosas suavizantes de telas de la presente incluyen: 1 ) cloruro de N,N-di(seboil-oxi-etil)-N,N-dimetilamonio; 2) metiisulfato de N,N-di(seboil-oxi-etil)-N-metil, N-(2-hidroxietil)amonio; 3) cloruro de N,N-di(2-seboil-oxi-2-oxo-etil)-N,N-dimetilamonio; 4) cloruro de N,N-di(2-seboil-oxi-etílcarbonil-ox¡-et¡l)-N,N-dimetilamonio 5) N-(2-sebo¡l-oxi-2-etil)-N-(2-seboil-oxi-2-oxo-etil)-N,N-dimetilamonio; 6) cloruro de N,N,N-tri(seboil-oxi-etil)-N-metilamonio; 7) cloruro de N~(2-seboil-oxi-2-oxo-etil)-N-(seboil-N,N-dimetilamonio y 8) cloruro de 1 ,2-d¡seboil-oxi-3-trimetilamoniopropano y mezclas de cualesquiera de los materiales anteriores. < Cuando están incluidos en éstas, las composiciones detergentes para lavandería de la presente invención comprenden tipicamente alrededor de 0.2% a aproximadamente 25%, preferiblemente alrededor de 1 % a aproximadamente 8% en peso de dichos agentes tensioactivos catiónicos. Los agentes tensioactivos anfolíticos también son adecuados para usarse en las composiciones detergentes de la presente invención. Estos agentes tensioactivos se pueden describir ampliamente como derivados alifáticos de aminas secundarias o terciarias, o como derivados alifáticos de aminas secundarias o terciarias heterocíclicas en las cuales el radical alifático puede ser una cadena recta o ramificada. Uno de los substituyentes alifáticos contiene por lo menos aproximadamente 8 átomos de carbono, típicamente de aproximadamente 8 a aproximadamente 18 átomos de carbono, y por lo menos uno contiene un grupo aniónico solubilizable en agua, v.gr., carboxi, sulfato, sulfonato. Véase la patente de E.U.A. No. 3,929,678 a Laughlin y otros, expedida el 30 de diciembre de 1975, columna 19, renglones 18-35, para ejemplos de agentes tensioactivos anfolíticos. Cuando están incluidos en éstas, las composiciones detergentes para lavandería de la presente invención comprenden típicamente de aproximadamente 0.2% a aproximadamente 15%, preferiblemente de t£-V aproximadamente 1 % a aproximadamente 10% en peso de dichos agentes tensioactivos anfolíticos. Los agentes tensioactivos zwiteriónicos también son adecuados para usarse en las composiciones detergentes. Estos agentes tensíoactivos se pueden describir ampliamente como derivados de aminas secundarias y terciarias, derivados de aminas secundarias y terciarias heterocíclicas o derivados de amonio cuaternario, compuestos de fosfonio cuaternario o sulfonio terciario. Véase la patente de E.U. No. 3,929,678 a Laughlin y otros, expedida el 30 de diciembre de 1975, en la columna 19, renglón 38 a columna 22, renglón 48, para ejemplos de agentes tensioactivos zwiteriónicos. Cuando están incluidos en éstas, las composiciones detergentes de la presente invención comprenden típicamente de 0.2% a aproximadamente 15%, preferiblemente de aproximadamente 1 % a aproximadamente 10% en peso de dichos agentes tensioactivos zwiteriónicos. Los agentes tensioactivos no iónicos semipolares son una categoría especial de agentes tensioactívos no iónicos que incluyen óxidos de amina solubles en agua que contienen una porción alquilo de desde aproximadamente 10 a aproximadamente 18 átomos de carbono y 2 porciones seleccionadas del grupo que consiste de grupos alquilo y grupos hidroxialquilo que contienen de aproximadamente 1 a aproximadamente 3 átomos de carbono; óxidos de fosfina solubles en agua que contienen una porción alquilo de aproximadamente 10 a aproximadamente 18 átomos de carbono y dos porciones seleccionadas del grupo que consiste de grupos alquilo y grupos hidroxialquilo que contienen de aproximadamente 1 a aproximadamente 3 átomos de carbono; y sulfóxidos solubles en agua que contienen una porción alquilo de desde aproximadamente 10 a aproximadamente 18 átomos de carbono y una porción seleccionada del grupo que consiste de porciones alquilo e hidroxialquilo de desde aproximadamente 1 a aproximadamente 3 átomos de carbono. Los agentes tensioactivos no iónicos semipolares incluyen los agentes tensioactivos de óxido de amina que tienen la fórmula: o T R3(OR4)xN(R5)2 en donde R3 es un grupo alquilo, hidroxialquilo o alquilfenilo o mezclas de los mismos, que contiene de aproximadamente 8 a aproximadamente 22 átomos de carbono; R4 es un grupo alquileno o hidroxialquileno que contiene de aproximadamente 2 a aproximadamente 3 átomos de carbono, o mezclas de los mismos; x es de 0 a aproximadamente 3; y cada R5 es un grupo alquilo o hidroxialquilo que contiene de aproximadamente 1 a aproximadamente 3 átomos de carbono, o un grupo de óxido de polietileno que contiene de aproximadamente 1 a aproximadamente 3 grupos de óxido de etileno. Los grupos R5 pueden estar fijados uno al otro, v.gr., a través de un átomo de oxígeno o de nitrógeno para formar una estructura de anillo. Estos agentes tensioactivos de óxido de amina ¡ncluyen en particular óxidos de alquil dimefilamina de C-|rj-Ci8 y óxidos de alcoxietildihidroxietilamina de C8-C-|2- Cuando están incluidos en éstas, las composiciones detergentes para lavandería de la presente invención comprenden típicamente de aproximadamente de 0.2 a aproximadamente 15%, preferiblemente de aproximadamente 1 % a aproximadamente 10% en peso de dichos agentes tensioactivos no iónicos semipolares. La composición detergente de la presente invención puede comprender además preferiblemente un co-agente tensioactivo seleccionado del grupo de aminas primarias o terciarias. Las aminas primarias adecuadas para usarse en la presente incluyen aminas de acuerdo con la fórmula R-1 NH2, en la que R-| es una cadena alquilo de Cg-C^, preferiblemente Cg-C-|n. o R4X(CH2)n, X es -O-,-C(0)NH_ o -NH-, R4 es una cadena alquilo de Cg-C^, n es entre 1 a 5, preferiblemente 3. Las cadenas alquilo de R-| pueden ser rectas o ramificadas y pueden estar interrumpidas con hasta 12, preferiblemente menos de 5 porciones de óxido de etileno. Las aminas preferidas de acuerdo con la fórmula anterior son las n-alquilaminas. Aminas adecuadas para usarse en la presente pueden seleccionarse de 1-hexilamina, 1-octilamina, 1-decilamina y laurilamina. Otras aminas primarias preferidas incluyen oxipropilamina de Cs- C-jQ, octiloxipropilamina, 2-etilexil-oxipropilamina, lauril amido propilamina y amido propilamina.

Las aminas terciarias adecuadas para usarse en la presente incluyen aminas terciarias que tienen la fórmula R-1 R2R3N, en la que R-| y R2 son cadenas alquilo de C-|-C8 o Rs -(CH2 — CH— 0)XH R3 es una cadena alquilo de Cg-C-|2> preferiblemente Cg-C-|n, ° R3 es R4X(CH2)n, en donde X es -0-,-C(O)NH_ o -NH-, R4 es una C4-C12, n es entre 1 a 5, preferiblemente 2-3. R5 es H o alquilo de C1-C2 y x está entre 1 a 6. R3 y R4 pueden ser lineales o ramificados; las cadenas de alquilo de R3 pueden ser interrumpidas con hasta 12, preferiblemente menos de 5 porciones de óxido de etileno. Las aminas terciarias preferidas son R-1 R2R3N, en donde R-| es una cadena alquilo de Cg-C-|2> R2 y R3- son alquilo de C -C3 o Rs -(CH2 — CH— 0)XH en donde R-5 es H o CH-3 y x = 1-2. También se prefieren las amidoaminas de la fórmula: O II Ri— C— NH— (CH2)n— N— (R2)2 en donde R-j es alquilo de Cg-C-12; n es 2-4, preferiblemente n es 3; R2 y R3 es C-1-C4.

Las aminas muy preferidas de la presente invención incluyen 1-octilamina, 1-hexilamina, 1-decilamina, 1-dodecilamina, oxipropilamina de Cg- C?o> N coco 1-3-diaminopropano, cocoalquildimetilamina, laurildimetilamina, lauril bis(hidroxietil)amina, coco bis(hidroxietil)amina, laurilamina propoxilada con 2 moles, octilamina propoxilada de 2 moles, lauril amidopropildimetilamina, amidopropildimetilamina de Cg-C^o y amidopropildimetilamina de C10. Las aminas más preferidas para usarse en las composiciones de la presente son 1-hexilamina, 1 -octilamina, 1-decilamina, 1-dodecilamina. Especialmente deseables son la n-dodecildimetilamina y bishidroxietilcocoalquilamina y oleilamina etoxilada 7 veces, lauril amido propilamina y cocoamidopropilamina.

Enzimas detergentes convencionales Se ha encontrado sorprendentemente que las composiciones detergentes de la presente invención que comprenden además otra enzima detergente que provee rendimiento de limpieza, cuidado de telas y/o beneficio de sanitización, especialmente una lipasa, amilasa, proteasa, enzima que incremente la solubilidad en agua de manchas/suciedades que contengan ácidos grasos saturados; proveen limpieza mejorada de manchas y/o suciedades corporales cotidianas, grasosas/aceitosas y con color. Además, estas composiciones proveen limpieza y blancura mejorada de artículos realistas de tela cuando se les formula como una composición detergente para lavandería/cuidado de telas. Las proteasas adecuadas son las subtilisinas que se obtienen de cepas particulares de B. subtilis y ß. licheniformis (subtilisina BPN y BPN'). Una proteasa adecuada se obtiene de una cepa de Bacillus, que tiene una actividad máxima a lo largo de la escala de pH de 8-12, desarrollada 5 y vendida como ESPERASE® por Novo Industries A/S de Dinamarca, en adelante "Novo". La preparación de esta enzima y de enzimas análogas se describe en GB 1 ,243,784 a Novo. Otras proteasas adecuadas incluyen ALCALASE®' DURAZYM® y SAVINASE® de Novo y MAXATASE®, MAXACAL®, PROPERASE® y MAXAPEM® (proteína manipulada Maxacal) de ío Gist-Brocades. Las enzimas proteolíticas abarcan también proteasas de serina bacteriana modificadas tales como aquellas descritas en la solicitud de patente europea No. de serie 87 303761.8, presentada el 28 de abril de 1987 (en particular páginas 17,24 y 98), y la cual se llama aquí "Proteasa B", y en la solicitud de patente europea 199,404, Venegas, publicada el 29 de octubre de 15 1986, la cual se refiere a una enzima proteolítica de serina bacteriana modificada que se llama aquí "Proteasa A". La que es adecuada es la que aquí se llama "Proteasa C", que es una variante de una proteasa de serina alcalina de Bacillus en la cual la lisina reemplaza arginina en posición 27, tirosina reemplaza valina en la posición 104, serina reemplaza asparagina en 20 la posición 123 y alanina reemplaza treonina en la posición 274. La proteasa C se describe en EP 90915958:4, que corresponde a WO 91/06637, publicada el 16 de mayo de 1991. También se incluyen en la presente las variantes genéticamente modificadas, particularmente de la proteasa O ^^^^^^ Una proteasa que se prefiere llamada "Proteasa D" es una variante de carbonilhidrolasa que tiene una secuencia de aminoácidos que no se encuentra en la naturaleza, y la cual se deriva de una carbonilhidrolasa precursora sustituyendo un aminoácido diferente por una pluralidad de residuos de aminoácidos en una posición en dicha carbonilhidrolasa equivalente a la posición +76, preferiblemente también en combinación con una o más posiciones de residuos de aminoácidos equivalentes a aquellas seleccionadas del grupo que consiste de +99, +101 , +103, +104, +107, +123, +27, +105, +109, +126, +128, +135, +156, +166, +195, +197, +204, +206, +210, '216, +217, +218, +222, +260, +265, y/o +274 de acuerdo con la numeración de la subtilisina de Bacillus amyloliquefaciens, según se describe en WO95/10591 y en la solicitud de patente de O Ghosh, et al, "Bleaching Compositions Comprising Protease Enzymes", que tiene el número de serie de E.U. 08/322,677, presentada el 13 de octubre de 1994. También es adecuada una variante carbonil hidrolasa de la proteasa descrita en WO95/10591 que tiene una secuencia de aminoácidos derivada mediante el reemplazo de una pluralidad de residuos de aminoácido reemplazados en la enzima precursora que corresponden a la posición +210 en combinación con uno o más de los siguientes: +33, +62, +67, +76, +100, +101 , +103, +104, +107, +128, +129, +130, +132, +135, +156, +158, +164, +166, +167, +170, +209, +215, +217, +218 y +222, en donde la posición numerada corresponde a subti sina que ocurre naturalmente de Bacillus amyloliquefaciens a a residuos de aminoácido equivalentes en otras carbonil hidrolasas o subtilisinas, tales como subtilisina de Bacillus lentus (solicitud de patente copendiente de E.U.A. No. de serie 60/048,550, presentada el 4 de junio de 1997). También son adecuadas para la presente invención las proteasas descritas en las solicitudes de patente EP 251 446 y WO 91/06637, proteasa BLAP® descrita en WO91/02792 y sus variantes descritas en WO 95/23221. Véase también una proteasa de alto pH de Bacillus sp. NCIMB 40338 descrita en WO 93/18140 A a Novo. Los detergentes enzimáticos que comprenden proteasa, una o más de otras enzimas diferentes y un inhibidor de proteasa reversible se describen en WO 92/03529 A a Novo. Cuando se desee, está disponible una proteasa que tiene adsorción disminuida e hidrólisis incrementada como la descrita en WO 95/07791 a Procter & Gamble. Una proteasa tipo tripsina recombinante para detergentes adecuada en la presente se describe en WO 94/25583 a Novo. Otras proteasas adecuadas se describen en EP 516 200 por Unilever. Las enzimas proteolíticas se incorporan en las composiciones detergentes de la presente invención a un nivel de 0.0001 % a 2% preferiblemente de 0.001 % a 0.2%, muy preferiblemente de 0.005% a 0.1 % de enzima pura en peso de la composición. Dichas enzimas incluyen las enzimas seleccionadas de celulasas, hemicelulasas, peroxidasas, proteasas, glucoamilasas, amilasas, xilanasas, lipasas, esterasas, cutinasas, pectinasas, queratanasas, reductasas, oxidasas, fenoloxidasas, lipoxigenasas, ligninasas, pululanasas, tanasas, pentosanasas, malanasas, ß-glucanasas, arabinosidasas, hialuronidasa, condroitinasa, lacasa o mezclas de las mismas. Las celulasas útiles en la presente invención incluyen celulasas tanto bacterianas como micóticas. De preferencia, tendrán un pH óptimo de entre 5 y 12, y una actividad de más de 50 CEVU (Unidad de Viscosidad de Celulosa). Celulasas adecuadas se describen en la patente de E.U.A. No. 4,435,307, Bargesgoard et al, J61078384 y WO96/02653 las cuales describen celulasas micóticas producidas respectivamente a partir de Humicola insolens, Trichoderma, Thielavia y Sporotrichum. EP 739 982 describe celulasas aisladas de especies de Bacillus novedosas. Las celulasas adecuadas se describen también en GB-A-2.075.028; GB-A-2.095.275; DE-OS-2.247.832 y W095/26398. Ejemplos de dichas celulasas son las celulasas producidas por una cepa de Humicola insolens (Humicola grísea var. thermoidea}, particularmente la cepa DSM 1800 de Humicola. Otras celulasas adecuadas son celulasas originadas de Humicola insolens que tienen un peso molecular de aproximadamente 50Kda, un punto isoeléctrico de 5.5 y que contienen 415 aminoácidos; y una endoglucanasa de ~43kD derivada de Humicola insolens, DSM 1800, que exhibe actividad celulasa; un componente de endoglucanasa que se prefiere tiene la secuencia de aminoácidos descrita en la solicitud de patente de PCT No. WO 91/17243. Celulasas también adecuadas son las celulasas EGIII de Trichoderma longibrachiatum descritas en WO94/21801 , Genencor, publicada el 29 de septiembre de 1994. Celulasas especialmente adecuadas son las celulasas que tienen beneficios de cuidado de color. Ejemplos de dichas celulasas son las celulasas descritas en la solicitud de patente europea No. 91202879.2, presentada el 6 de noviembre de 1991 (Novo). Son especialmente útiles Carezyme y Celluzyme (Novo Nordisk A/S). Véase también WO 91/17244 y WO91/21801. Otras celulasas adecuadas para propiedades de cuidado de telas y/o limpieza se describen en WO96/34092, W096/17994 y W095/24471. Dichas celulasas se incorporan normalmente en la composición detergente a niveles de 0.0001 % a 2% de enzima activa en peso de la composición detergente. Las enzimas peroxidasa se usan en combinación con fuentes de oxígeno, v.gr., percarbonato, perborato, persulfato, peróxido de hidrógeno, etc. Se usan para el "blanqueo en solución", es decir, para evitar la transferencia de colorantes o pigmentos removidos de substratos durante las operaciones de lavado, hacia otros substratos en la solución de lavado. Las enzimas peroxidasa son conocidas en la técnica e incluyen, por ejemplo, peroxidasa de rábano, ligninasa, y halógenoperoxidasa tal como cloro- y bromo-peroxidasa. Composiciones detergentes que contienen peroxidasa se describen, por ejemplo, en la solicitud internacional de PCT WO89/099813, WO 89/09813 y en la solicitud de patente europea No. 91202882.6, presentada el 6 de noviembre de 1991 y EP No. 96870013.8, presentada el 20 de febrero de 1996. Los mejoradores están comprendidos generalmente a un nivel de 0.1% a 5% en peso de la composición total. Los mejoradores que se prefieren son fentiazina y fenoxazina, ácido 10-fenotiazinopropiónico (PPT), ácido 10-etilfenotiazino-4-carboxílíco (EPC), ácido 10-fenoxazinopropiónico (POP) y 10-metilfenoxazina (descritos en WO 94/12621 ) y siringatos sustituidos (alquilsiringatos de C3-C5 sustituidos) y fenoles. El percarbonato o perborato de sodio son fuentes de peróxido de hidrógeno que se prefieren. Dichas peroxidasas se incorporan normalmente en la composición detergente a niveles de 0.0001 % a 2% de enzima activa en peso de la composición detergente. Las enzimas lipasas adecuadas para el uso en detergentes incluyen aquellas producidas por microorganismos del grupo Pseudomonas, tales como Pseudomonas stutzerí ATCC 19.154, como las que se describen en la patente británica 1 ,372,034. Lipasas adecuadas incluyen aquellas que muestran una reacción cruzada inmunológica positiva con el anticuerpo de la lipasa, producidas por el microorganismo Pseudomonas fluorescent lAM 1057. Esta lipasa está disponible de Amano Pharmaceutical Co. Ltd., Nagoya, Japón, bajo el nombre comercial Lipasa P "Amano", en adelante referida como "Amano-P". Otras lipasas comerciales adecuadas incluyen Amano-CES, lipasas ex Chromobacter viscosum, v.gr. Chromobacter viscosum var. lipoliticum NRRLB 3673, de Toyo Jozo Co., Tagata, Japón; lipasas Chromobacter viscosum de U.S. Biochemical Corp, E.U.A. y Disoynth Co., Holanda y lipasas ex Pseudomonas gladioli. Lipasas especialmente adecuadas son las lipasas tales como M1 LipaseR y LipomaxR (Gist- Brocades) y LipolaseR y Lipolase UltraR (Novo), las cuales se ha descubierto que son muy efectivas cuando se usan en combinación con las composiciones de la presente invención. También son adecuadas las enzimas lipolíticas descritas en EP 258 068, WO 92/05249 y WO 95/22615 por Novo Nordisk y en WO 94/03578, WO 95/35381 y WO 96700292 por Unilever. También son adecuadas las cutinasas [EC 3.1.1.50] que se pueden considerar como un tipo especial de lipasa, a saber lipasas que no requieren la activación interfacial. La adición de cutinasas a composiciones detergentes se ha descrito en v.gr., WO-A-88/09367 (Genencor); WO 90/09446 (Plant Genetic System) y WO 94/14963 y WO 94/14964 (Unilever). Las lipasas y/o cutinasas se incorporan normalmente en la composición detergente a niveles de 0.0001% a 2% de enzima activa por peso de la composición detergente. Se pueden incluir amilasas (a y/o ß) para la remoción de manchas a base de carbohidratos. El documento WO94/02597, Novo Nordisk A/S publicado el 3 de febrero de 1994, describe composiciones de limpieza que incorporan amilasas mutantes. Véase también WO95/10603, Novo Nordisk A/S, publicada el 20 de abril de 1995. Otras amilasas conocidas para usarse en composiciones de limpieza incluyen amilasas tanto como ß. Las a-amilasas se conocen en la técnica e incluyen aquéllas descritas en la patente de E.U.A. No. 5,003,257; EP 252,666; WO/91/00353; FR 2,676,456; EP 285,123; EP 525,610; EP 368,341 ; y en la descripción de la patente británica No 1 ,296,839 (Novo). Otras amilasas adecuadas son las amilasas de estabilidad mejorada descritas en W094/18314, publicada el 18 de agosto de 1994 y WO96/05295, Genencor, publicada el 22 de febrero de 1996, así como las variantes de amilasa que tienen una modificación adicional en el progenitor inmediato disponibles de Novo Nordisk A/S, descritas en WO 95/10603, publicada el 25 de abril de 1995. También son adecuadas las amilasas descritas en EP 277 216, W095/26397 y W096/23873 (todas por Novo Nordisk). Ejemplos de productos de a-amilasa comerciales son Purafect Ox Am® de Genencor y Termamyl®, Ban®, Fungamyl® y Duramyl®, todas disponibles de Novo Nordisk A/S, Dinamarca. El documento W095/26397 describe otras amilasas adecuadas: a-amilasas caracterizadas porque tienen una actividad específica por lo menos 25% superior a la actividad específica de Termamyl® a una escala de temperatura de 25°C a 55°C y a un valor de pH en escala de 8 a 10, medido por la prueba de actividad de a-amilasa Phadebas®. Son adecuadas las variantes de las enzimas anteriores, descritas en W096/23873 (Novo Nordisk). Otras enzimas amilolíticas que se prefieren con propiedades mejoradas con respecto al nivel de actividad y la combinación de termoestabilidad, así como un nivel de actividad más alto se describen en W095/35382. Las enzimas amilolíticas se incorporan en las composiciones detergentes de la presente invención a un nivel de 0.0001 % a 2% preferiblemente de 0.00018% a 0.06%, muy preferiblemente de 0.00024% a 0.048% de enzima pura en peso de la composición.

Las enzimas anteriormente mencionadas pueden tener cualquier origen adecuado, tal como vegetal, animal, bacteriano, micótico y de levadura.

El origen puede ser además mesófilo o extremófilo (psicrófilo, psicrótrofo, termófilo, barófilo, alcalófilo, acidófilo, halogenófilo, etc.). Se pueden usar formas purificadas o no purificadas de estas enzimas. También se incluyen por definición los mutantes de enzimas nativas. Los mutantes pueden obtenerse, por ejemplo, mediante manipulación genética y/o de proteínas, modificaciones químicas y/o físicas de enzimas nativas. La práctica común es también la expresión de la enzima por medio de organismos hospederos en los cuales se haya clonado el gen responsable de la producción de la enzima. Dichas enzimas se incorporan normalmente en la composición detergente a niveles de 0.0001 % a 2% de enzima activa en peso de la composición detergente. Las enzimas pueden ser añadidas como ingredientes individuales separados (pellas, granulos, líquidos estabilizados, etc... que contengan una enzima) o como mezclas de dos o más enzimas (v.gr., cogranulados). Otros ingredientes detergentes adecuados que pueden añadirse son los barredores de oxidación de enzima que se describen en la solicitud de patente europea copendiente 92970018.6, presentada ei 31 de enero de 1992. Ejemplos de dichos barredores de oxidación de enzima son tetraetilenpoliaminas etoxiladas.

Una gama de materiales de enzima y medios para su incorporación en las composiciones detergentes sintéticas se describe también en WO 9307263 y WO 9307260 a Genencor International, WO 8908694 A a Novo, y E.U. 3,553,139, 5 de enero de 1971 a McCarty y otros. Enzimas se describen también en E.U.A. 4,101 ,457, Place y otros, 18 de julio de 1978 y en E.U. 4,507,219, Hughes, 26 de marzo de 1985. Los materiales de enzima útiles para formulaciones detergentes líquidas y su incorporación en dichas formulaciones se describen en E.U. 4,261 ,868, Hora y otros, 14 de abril de 1981. Las enzimas que se usarán en detergentes pueden estabilizarse mediante varias técnicas. Las técnicas de estabilización de enzimas se describen y se ejemplifican en E.U. 3,600,319, 17 de agosto de 1991 , Gedge y otros, EP 199,405 y EP 200,586, 29 de octubre 1986, Venegas. También se describen sistemas de estabilización de enzima, por ejemplo, en E.U. 3,519,570. Un Bacillus sp. AC13 útil y que da proteasas, xilanasas y celulasas se describe en WO 9401532 A a Novo.

Beneficios de cuidado del color y de cuidado de telas Se pueden incluir también las tecnologías que proveen un tipo de beneficio de cuidado del color. Ejemplos de estas tecnologías son metalocatalizadores para el mantenimiento del color. Dichos metalocatal ¡zadores se describen en la solicitud de patente europea copendiente No. 92870181.2. Los agentes de fijación de colorantes, dispersión de poliolefina para anti-arrugas y absorbencia de agua mejorada, perfume y polímero amiñofuncional para el tratamiento de cuidado del color y substantividad de perfume son ejemplos adicionales de tecnologías de cuidado de color/cuidado de telas y se describen en la solicitud de patente copendiente No. 96870140.9, presentada el 7 de noviembre de 1996. Los agentes suavizantes de telas también pueden incorporarse en las composiciones detergentes de acuerdo con la presente invención. Estos agentes pueden ser de tipo inorgánico u orgánico. Los agentes suavizantes inorgánicos se ejemplifican por las arcillas de esmectita descritas en GB-A-1 400 898 y en la patente de E.U.A. No. 5,019,292. Los agentes suavizantes de telas orgánicos incluyen las aminas terciarias insolubles en agua como las descritas en GB-A1 514 276 y EP-BO 011 340 y su combinación con sales de amonio monocuaternario de C12-C14 se describen en EP-B-0 026 527 y EP-B-0 026 528 y las diamidas de cadena doblemente larga como las descritas en EP-B-0 242 919. Otros ingredientes orgánicos útiles de los sistemas suavizantes de telas incluyen los materiales de óxido de polietileno de alto peso molecular como los descritos en EP-A-0 299 575 y 0 313 146. Los niveles de arcilla esmectita están normalmente en la escala de 2% a 20%, muy preferiblemente de 5% a 15% en peso, siendo añadido el material como un componente mezclado en seco o secado por aspersión al resto de la formulación. Los agentes suavizantes de tela orgánicos tales como las aminas terciarias solubles en agua o los materiales de amida de cadena doblemente larga se incorporan a niveles de 0.5% a 5% en peso, t-'í?r-* -tSA ^«2*-* * ,? *¡M*s¡>»£!ídrt- normalmente de 1 % a 3% en peso, mientras que los materiales de óxido de polietileno de alto peso molecular y los materiales catiónicos solubles en agua se añaden a niveles de desde 0.1 % a 2%, normalmente de 0.15% a 1.5% en peso. Estos materiales se añaden normalmente a la porción secada por aspersión de la composición, aunque en algunos casos puede ser más conveniente añadirlos como un material en partículas mezclado en seco, o rociarlos como un líquido derretido sobre los demás componentes sólidos de la composición.

Agente de blangueo Los ingredientes detergentes opcionales y adicionales que pueden incluirse en las composiciones detergentes de la presente invención incluyen agentes blanqueadores tales como PB1 , PB4 y percarbonato con un tamaño de partícula de 400-800 mieras. Estos componentes de agente de blanqueo pueden incluir uno o más agentes blanqueadores de oxígeno y, dependiendo del agente blanqueador elegido, uno o más activadores de blanqueo. Cuando están presentes, los compuestos blanqueadores de oxígeno estarán presentes típicamente a niveles de desde aproximadamente 1 % a aproximadamente 25%. El componente de agente de blanqueo para usarse en la presente puede ser cualquiera de los agentes de blanqueo útiles para las composiciones detergentes incluyendo blanqueadores de oxígeno, así como otros conocidos en la técnica. El agente de blanqueo adecuado para la presente invención puede ser un agente de blanqueo activado o no activado. Una categoría de agente de blanqueo de oxígeno que se puede usar abarca los agentes de blanqueo de ácido percarboxílico y las sales de los mismos. Ejemplos adecuados de esta clase de agentes incluyen monoperoxiftalato de magnesio hexahidratado, la sal de magnesio del ácido meta-cloro perbenzoico, ácido 4-non¡lamino-4-oxoperoxibutírico y ácido diperóxidodecanodioico. Dichos agentes de blanqueo se describen en la patente de E.U.A. No. 4,483,781 , solicitud de patente de E.U.A. No. 740,446, solicitud de patente europea No. 0,133,354 y patente de E.U.A. No. 4,412,934. Los agentes de blanqueo altamente preferidos incluyen también el ácido 6-nonilamino-6-oxoperoxicaproico como el descrito en la patente de E.U.A. No. 4,634,551. Otra categoría de agentes de blanqueo que se puede usar abarca los agentes de blanqueo de halógeno. Ejemplos de agentes de blanqueo de hipohalogenita, por ejemplo, incluyen ácido tricloro isocianúrico y los dicloroisocianuratos de sodio y potasio y N-cloro y N-bromo alcano sulfonamidas. Dichos materiales se añaden normalmente a 0.5-10% en peso del producto terminado, preferiblemente 1-5% en peso. Los agentes liberadores de peróxido de hidrógeno se pueden usar en combinación con activadores de blanqueo tales como tetraacetiletilendiamina (TAED), nonanoiloxibencen-sulfonato (NOBS, descrito en EU 4,412,934), 3,5-trimetilhexanoloxibencensulfonato (ISONOBS, descrito en EP 120,591 ) o pentaacetilglucosa (PAG) o éster fenolsulfonato de ácido N-nonanoil-6-aminocaproico (NACA-OBS, descrito en WO94/28106), que son pérhidrolizados para formar un perecido como la especie de blanqueo activa, llevando a un efecto de blanqueo mejorado. Activadores también adecuados son los esteres de citrato acilados tales como los descritos en la solicitud de patente europea copendiente No. 91870207.7.

Agentes de blanqueo útiles que incluyen peroxiácidos y sistemas de blanqueo que comprenden activadores de blanqueo y compuestos de blanqueo de peroxígeno para usarse en las composiciones detergentes granuladas para lavandería que contienen blanqueador de conformidad con la invención, se describen en las solicitudes co- pendientes de los autores USSN 08/136,626, PCT/US95/07823, W095/27772, W095/27773, W095/27774 y W095/27775. El peróxido de hidrógeno puede estar también presente añadiendo un sistema enzimático (es decir, una enzima y un sustrato para la misma) el cual sea capaz de generar peróxido de hidrógeno al inicio o durante el procedimiento de lavado y/o enjuague. Dichos sistemas enzimáticos se describen en la solicitud de patente EP 91202655.6, presentada el 9 de octubre de 1991. Los catalizadores que contienen metal para usarse en las composiciones de blanqueo incluyen catalizadores que contienen cobalto, tales como sales de cobalto (lll) de pentaamina acetato y catalizadores que contienen manganeso, tales como los que se describen en los documentos EPA 549 271 ; EPA 549 272; EPA 458 397; US 5,246,621 ; EPA 458 398; US 5,194,416 y US 5,114,611. Una composición de blanqueo que comprende un 5 compuesto peroxi, un catalizador de blanqueo que contiene manganeso y un agente quelatador, se describe en la solicitud de patente No. 94870206.3. Los agentes de blanqueo diferentes de los agentes de blanqueo de oxígeno son también conocidos en la técnica y se pueden usar en la presente. Un tipo de agente de blanqueo no de oxígeno de particular interés ío incluye agentes de blanqueo fotoactivados tales como las ftalocianinas sulfonadas de zinc y/o aluminio. Estos materiales pueden ser depositados sobre el sustrato durante el procedimiento de lavado. Después de irradiación con luz, en presencia de oxígeno, tal como colgando las prendas para que se sequen a la luz del día, la ftalocianina de zinc sulfonada es activada y, en 15 consecuencia, el sustrato es blanqueado. La ftalocianina de zinc preferida y un procedimiento de blanqueo fotoacfivado se describen en la patente de E.U.A. 4,033,718. Típicamente, las composiciones detergentes granuladas para lavandería que contienen blanqueador contendrán de alrededor de 0.025% a aproximadamente 1.25%, en peso, de ftalocianina de zinc 20 sulfonada. **<" Sistema meiorador de deteTgencia Las composiciones de acuerdo con la presente invención pueden comprender además un sistema mejorador de detergencia. Cualquier sistema mejorador de detergencia convencional es adecuado para usarse en la presente, incluyendo materiales de aluminosilicato, silicatos, policarboxilatos y ácidos grasos, materiales tales como tetraacetato de etilendiamina, pentametilenacetato de dietilentriamina, secuestrantes de iones metálicos tales como aminopolifosfonatos, particularmente ácido etilendiamintetra-metilenfosfónico y ácido dietilentriamin pentametilen-fosfónico. También se pueden usar en la presente los mejoradores de detergencia de fosfato. Los mejoradores de detergencia adecuados pueden ser un material inorgánico de intercambio de ¡ones, comúnmente un material de aluminosilicato hidratado inorgánico, muy particularmente una zeolita sintética hidratada tal como zeolita hidratada A, X, B, HS o MAP. Otro material mejorador de detergencia inorgánico adecuado es el silicato estratificado, v.gr., SKS-6 (Hoechst). El SKS-6 es un silicato estratificado cristalino que consiste de silicato de sodio (Na2S¡2?5). Los policarboxilatos adecuados contienen un grupo carboxi e incluyen ácido láctico, ácido glicólico y derivados de éter de los mismos, como los descritos en las patentes belgas Nos. 831 ,368, 821 ,369 y 821 ,370. Los policarboxilatos que contienen dos grupos carboxi incluyen las sales solubles en agua de ácido succínico, ácido malónico ácido (etilendioxi) diacético, ácido maleico, ácido diglicólico, ácido tartárico, ácido tartrónico y ácido fumárico, así corrió los étercarboxilatos descritos en la patente alemana 2,446,686 y 2,446,687 y en la patente de E.U. No. 3,935,257, y los sulfinil carboxilatos descritos en la patente belga No. 840,623. Los policarboxilatos que contienen tres grupos carboxi incluyen, en particular, los citratos, aconitratos y 5 citraconatos solubles en agua, así como los derivados de succinato tales como los carboximetiloxisuccinatos descritos en la patente británica No. 1 ,379,241 , los lactoxisuccinatos descritos en la solicitud holandesa 7205873, y los materiales de oxipolicarboxilato tales como tricarboxilatos de 2-oxa-1 ,1-3- propano descritos en la patente británica No. 1 ,387,447. ío Los policarboxilatos que contienen cuatro grupos carboxi ¡ncluyen los oxidisuccinatos descritos en la patente británica No. 1 ,261 ,829, 1 ,1 ,2,2-etano tetracarboxilatos, 1 ,1 ,3,3-propano tetracarboxilatos y 1 ,1 ,2,3- propano tetracarboxilatos. Los policarboxilatos que contienen substituyentes sulfo incluyen los derivados de sulfosuccinato descritos en las patentes 15 británicas Nos. 1 ,398,421 y 1 ,398,422, y en la patente de E.U. No. 3,936,448, así como los citratos pirolizados sulfonados descritos en la patente británica No. 1 ,082,179, mientras que los policarboxilatos que contienen sustituyentes de fosfona se describen en la patente británica No. 1 ,439,000. Los policarboxilatos alicíclicos y heterocíclicos incluyen 20 ciclopentan-cis,cis,cis-tetracarboxilatos, ciclopentadienida pentacarboxilatos, 2,3,4, 5-tetrah id roturan - cis, cis, cis-tetracarboxilatos, 2, 5-tetra hidrof uran - cis - dicarboxilatos, 2,2,5,5-tetrahidrofuran - tetracarboxilatos, 1 , 2,3,4, 5,6-hexan - hexacarboxilatos y derivados de carboximetilo de alcoholes polihídricos tales *03 como sorbitol, manitol y xilitol. Los policarboxílatos aromáticos ¡ncluyen ácido melítico, ácido piromelítico y los derivados de ácido ftálico descritos en la patente británica No. 1 ,425,343. De los anteriores, los policarboxilatos preferidos son los hidroxicarboxilatos que contienen hasta tres grupos carboxi por molécula, muy particularmente los citratos. Los sistemas mejoradores de detergencia preferidos para usarse en las presentes composiciones, ¡ncluyen una mezcla de un mejorador de detergencia de aluminosilicato insoluble en agua tal como zeolita A, o de un silicato estratificado (SKS-6) y un agente quelatador de carboxilato soluble en agua tal como ácido cítrico. Los sistemas mejoradores de detergencia preferidos incluyen una mezcla de un mejorador de detergencia de aluminosilicato insoluble en agua tal como zeolita A y un agente quelatador de carboxilato soluble en agua tal como ácido cítrico. Los sistemas mejoradores de detergencia que se prefiere usar en las composiciones detergentes líquidas de la presente invención son jabones y policarboxilatos. Otros mejoradores de detergencía que pueden formar parte del sistema mejorador de detergencia para usarse en las composiciones granuladas incluyen materiales inorgánicos tales como carbonatos, bicarbonatos, silicatos de metal alcalino y materiales orgánicos tales como los fosfonatos orgánicos, amino polialquilenfosfonatos y amino policarboxilatos.

Otras sales orgánicas solubles en agua adecuadas son los ácidos homo- o copoliméricos o sus sales, en los cuales el ácido policarboxílico comprende por lo menos dos radicales carboxilo separados uno del otro por no más de dos átomos de carbono. Polímeros de este tipo se describen en GB-A-1 ,596,756. Ejemplos de dichas sales son los poliacrilatos de PM 2000-5000 y sus copolímeros con anhídrido maleico, dichos copolímeros fienen un peso molecular de desde 20,000 a 70,000, especialmente aproximadamente 40,000. Las sales mejoradoras de detergencia se incluyen normalmente en cantidades de desde 10% a 80% en peso de la composición, preferiblemente de 20% a 70% y muy comúnmente de 30% a 60% en peso.

Agentes quelatadores Las composiciones detergentes de la presente también pueden contener opcionalmente uno o más agentes quelatadores de fierro y/o manganesio. Dichos agentes quelatadores se pueden seleccionar del grupo que consiste de aminocarboxilatos, aminofosfatos, agentes quelatadores aromáticos polifuncionalmente sustituidos y mezclas de los mismos, todos como se definen más adelante. Sin pretender limitarse por la teoría, se cree que el beneficio de estos materiales se debe en parte a su excepcional capacidad para remover de las soluciones de lavado los iones de fierro y manganesio mediante la formación de quelatos solubles.

*¡$ Los aminocarboxilatos útiles como agentes quelatadores opcionales incluyen etilendiaminotetracetatos, N-hidroxietiletilendiamino-triacetatos, nitrilotriacetatos, etilendiamonotetraproprionatos, trietilentetra-aminohexacetatos, dietilentriaminopentaacetatos y etanoldiglicinas, sales de metal alcalino, amonio y de amonio substituidas en la presente y mezclas en la presente. Los aminofosfatos también son útiles para uso como agenttes quelatadores en las composiciones de la invención cuando por lo menos se permiten niveles bajos de fósforo total en las composiciones detergentes e incluyen efilendiaminotetraquis (metilenfosfonatos) como DEQUEST. Preferiblemente, estos aminofosfonatos no contienen grupos alquilo o alquenilo con más de alrededor de 6 átomos de carbono. Los agentes quelatadores aromáticos polifuncionalmente substituidos también son útiles en las composiciones de la presente. Véase la patente de E.U.A. 3,812,044 expedida el 21 de mayo de 1974 a Connor y otros Los compuestos preferidos de este tipo en forma acida son dihidroxidisulfobencenos tal como 1 ,2-dihidroxi-3,5-disulfobenceno. Un quelatador biodegradable que se prefiere usar en la presente es disuccinato de etilendiamina ("EDDS"), especialmente el isómero [S,S] como el descrito en la patente de E.U.A. 4,704,233, 3 de noviembre de 1987 a Hartman y Perkins. Las composiciones de la presente también pueden contener sales hidrosolubles de ácido metilglicinodiacético (MGDA) (o forma de ácido) 1T6 como un queltador o co-mejorador de detergencia útil con, por ejemplo, mejoradores de detergencia insolubles tales como zeolitas, silicatos estratificados y similares. Si se utilizan, estos agentes quelatadores generalmente deben comprender de alrededor de 0.1 % a alrededor de 15% en peso de las composiciones detergentes de la presente. Muy preferiblemente, si se utilizan, los agentes quelatadores deben comprender de alrededor de 0.1 % a aproximadamente 3.0% en peso de dichas composiciones.

Supresor de espumas Otro ingrediente opcional es un supresor de espumas ejemplificado por silicones y mezclas de sílice-silicón. Los silicones pueden representarse generalmente por los materiales de polisiloxano alquilado mientras que las sílices se usan normalmente en formas finamente divididas ejemplificadas por aerogeles y xerogeles de sílice y sílices hidrófobas de varios tipos. Estos materiales se pueden incorporar como partículas en las cuales el supresor de espumas esté incorporado ventajosa y liberablemente en un vehículo impermeable detergente substancialmente no activo en superficies, dispersable o soluble en agua. Alternativamente, el supresor de espumas puede ser disuelto o disperso en un vehículo líquido y aplicado mediante aspersión sobre uno o más de los demás componentes. Un agente de control de espumas de silicón preferido se describe en Bartollota y otros, patente de E.U.A. No. 3 933 672. Otros supresores de espumas particularmente úfiles son los supresores de espumas de silicón autoemulsificables descritos en la solicitud de patente alemana DTOS 2 646 126, publicada el 28 de abril de 1977. Un ejemplo de dicho compuesto es DC-544, disponible comercialmente de Dow Corning, el cual es un copolímero de siloxano-glucol. Agentes de control de espumas especialmente preferidos son el sistema supresor de espumas que comprende una mezcla de aceites de silicón y 2-alquil-alcanoles. Los 2-alquil-alcanoles adecuados son 2-bitil-octanol que están disponibles comercialmente bajo el nombre comercial Isofol 12 R. Dichos sistemas de supresor de espumas se describen en la solicitud de patente europea copendiente No. 92870174.7, presentada el 10 de noviembre de 1992. Los agentes de control de espumas de silicón especialmente preferidos se describen en la solicitud de patente europea copendiente No. 92201649.8. Dichas composiciones pueden comprender una mezcla de sílice/silicón en combinación con sílice fumante no porosa tal como Aerosil®. Los supresores de espumas descritos anteriormente se emplean normalmente a niveles de desde 0.001 % a 2% en peso de la composición, preferiblemente de 0.01 % a 1 % en peso.

Otros componentes Se pueden emplear otros componentes usados en composiciones detergentes para lavandería, tales como agentes de suspensión de suciedades, agentes liberadores de suciedades, abrillantadores ópticos, abrasivos, bactericidas, inhibidores de oxidación, agentes colorantes y/o perfumes encapsulados o no encapsulados. Los materiales encapsulantes especialmente adecuados son las 5 cápsulas solubles en agua que consisten de una matriz de compuestos de polisacárido y polihidroxi tales como las descritas en GB 1 ,464,616. Otros materiales encapsulantes solubles en agua adecuados comprenden dextrinas derivadas de esteres-ácidos de almidón no gelatinizados de ácidos dicarboxílicos substituidos tales como los descritos en ío EU 3,455,838. Estas dextrinas de ácido-éster se preparan preferiblemente a partir de almidones tales como maíz ceroso, sorgo ceroso, sago, tapioca y patata. Ejemplos adecuados de dichos materiales encapsulantes incluyen N- Lok, fabricado por National Starch. El material encapsulante N-Lok consiste de un almidón de maíz modificado y glucosa. El almidón se modifica añadiendo 15 grupos substituidos monofuncionales tales como anhídrido de ácido octenil succínico. Los agentes de antirredeposición y suspensión de suciedades adecuados en la presente incluyen derivados de celulosa tales como metilcelulosa, carboximetilcelulosa e hidroxietilcelulosa, y ácidos 20 policarboxílicos homo- o copoliméricos o sus sales. Los polímeros de este tipo incluyen los poliacrilatos y los copolímeros de anhídrido maleico-ácido acrílico mencionados anteriormente como mejoradores de detergencia, así como copolímeros de anhídrido maleico con etileno, éter metilvinílico o ácido metacrílico, constituyendo el anhídrido maleico por lo menos 20% molar del copolímero. Estos materiales se usan normalmente a niveles de desde 0.5% a 10% en peso, muy preferiblemente de 0.75% a 8%, más preferiblemente de 1% a 6% en peso de la composición. 5 Los abrillantadores ópticos preferidos son de carácter aniónico, ejemplos de los cuales son 4,'-bis-(2-dietanolamino-4-anilino-s-triazin-6- ilamino)estilben-2:2'disulfonato disódico, 4,-4'-bis-(2-morfolino-4-anilino-s- triazin-6-ilamino-estilben-2:2-disulfonato disódico, 4,4'-bis-(2,4-dianilino-s- triazin-6-¡lamino)estilben-2:2'-d¡sulfonato disódico, 4',4"-bis-(2,4-dianilino-s- 10 triazin-6-ilamino)estilben-2-sulfonato monosódico, 4,4'-bis-(2-anilino-4-(N- metil-N-2hidroxietilamino)-s-tr¡azin-6-ilamino)est¡lben-2,2'-d¡sulfonato disódico, 4,4'-bis-(4-fenil-2,1 ,3-triazol-2-il)-estilben-2,2'-disulfonato disódico, 4,4'-bis(2- anilino-4-(1-metil-2-hidroxietilamino)-s-triazin-6-ilami-no)estilben- 2,2'disulfonato disódico, 2(estilbil-4"-(nafto-1 ',2':4,5)-1 ,2,3-triazol-2"-sulfonato 15 de sodio y 4,4'-bis(2-sulfostiril)bifenilo. Los abrillantadores altamente preferidos son los abrillantadores específicos de la solicitud de patente europea copendiente No. 95201943.8. Otros materiales poliméricos útiles son los polietilenglucoles, particularmente aquellos de un peso molecular de 1000-10000, muy 20 particularmente 2000 a 8000 y muy preferiblemente aproximadamente 4000. Estos se usan a niveles de desde 0.20% a 5%, muy preferiblemente de 0.25% a 2.5% en peso. Estos polímeros y las sales de policarboxilato homo- o copolimérico anteriormente mencionadas son valiosas porque mejoran el mantenimiento de la blancura, evitan fa deposición de cenizas en la tela y mejoran el rendimiento de limpieza sobre suciedades de arcilla, proteináceas y oxidables en presencia de impurezas de metal de transición. Los agentes de liberación de suciedades útiles en las composiciones de la presente invención son convencionalmente copolímeros o terpolímeros de ácido tereftálico con unidades de etilenglucol y de propilenglucol en varias disposiciones. Ejemplos de dichos polímeros se describen en las patentes de E.U.A. Nos. 4116885 y 4711730 comunmente asignadas, y en la solicitud de patente europea publicada No. 0 272 033. Un polímero particularmente preferido de acuerdo con EP-A-0 272 033 tiene la fórmula: (CH3(PEG)43)o.75(POH)0.25[T-PO)2.8(T-PEG)0.4]- T(POH)o.25((PEG)43CH3)o.75 en donde PEG es -(OCH2H4)0-, PO es (OC3HgO) y T es (pcOCg^CO). También muy útiles son los poliésteres modificados tales como polímeros aleatorios de tereftalato de dimetilo, sulfoisoftalato de dimetilo, etilenglucol y 1-2 propanodiol, los grupos extremos que consisten primariamente de sulfobenzoato y secundariamente de monoésteres de etilenglucol y/o propano-diol. El objetivo es el de obtener un polímero bloqueado en ambos extremos por grupos sulfobenzoato; "primariamente", en el presente contexto, significa que la mayoría de dichos copolímeros de la presente estarán bloqueados en sus extremos por grupos sulfobenzoato. Sin embargo, algunos copolímeros estarán menos que completamente bloqueados y por lo tanto sus grupos extremos pueden consistir de monoéster de etilenglucol y/o propano 1-2 diol, de los mismos, que consisten "secundariamente" de dichas especies. Los poliésteres seleccionados de la presente contienen aproximadamente 46% en peso de ácido dimetiltereftálico, aproximadamente 16% en peso de propano -1.2 diol, aproximadamente 10% en peso de etilenglucol, aproximadamente 13% en peso de ácido metilsulfobenzoico y aproximadamente 15% en peso de ácido sulfoisoftálico, y tienen un peso molecular de aproximadamente 3.000. Los poliésteres y su método de preparación se describen en detalle en EPA 31 1 342. Se conoce bien en la técnica que el cloro libre en el agua de la llave desactiva rápidamente las enzimas comprendidas en las composiciones detergentes. Por lo tanto, el usar un barredor de cloro tal como perborato, sulfato de amonio, sulfito de sodio o polietilenimina a un nivel por encima del 0.1 % en peso de la composición total, en las fórmulas proveerá una estabilidad mejorada a través del lavado de las enzimas amilasas. Las composiciones que comprenden un barredor de cloro se describen en la solicitud de patente europea No. 29870018.6, presentada el 31 de enero de 1992. Los policarboxilatos alcoxilados tales como aquellos preparados a partir de poliacrilatos son útiles en la presente para proveer rendimiento adicional de remoción de grasa. Dichos materiales se describen en WO 91/08281 y PCT 90/01815 en p. 4 et seq, incorporada en la presente a manera de referencia. Químicamente, estos materiales comprenden poliacrilatos que tienen una cadena lateral etoxi por cada 7-8 unidades acrilato. Las cadenas laterales tienen la fórmula (CH2CH2?)m(CH2)nCH3 en donde m es 2-3 y n es 6-12. Las cadenas laterales son enlazadas por éster a la "estructura de base" del poliacrilato para proveer una estructura de polímero tipo "peine". El peso molecular puede variar, pero está típicamente en la escala de aproximadamente 2000 a aproximadamente 50,000. Dichos policarboxilatos alcoxilados pueden comprender de aproximadamente 0.05% a aproximadamente 10% en peso de las composiciones de la presente.

Dispersantes Las composiciones detergentes de la presente invención también pueden contener dispersantes. Las sales orgánicas hidrosolubles adecuadas son los ácidops homo- o co-polimépcos de sus sales, en las cuales el ácido policarboxílico consta de al menos dos radicales carboxilo separados uno de otro por no más de dos átomos de carbono. Los polímeros de este tipo se describen en GB-A-1 ,596,756. Ejemplos de tales sales son poliacrilatos de PM 2000-5000 y sus copolímeros con anhídrido maléico, tales copolímeros tienen un peso molecular de 1 ,000 a 100,000. Especialmente, el copolímero de acrilato y metilacrilato como el 480N que tiene un peso molecular de 4000, a un nivel de 0.5-20% en peso de la composición puede ser añadido a las composiciones detergentes de la presente invención. v Las composiciones de la invención pueden contener un compuesto peptizador de jabón de cal que tiene preferiblemente un poder de dispersión de jabón de cal (LSDP), como se define de aquí en delante de no más de 8, preferiblemente no más de 7, más preferiblemente no más de 6. El compuesto peptizador de jabón de cal está presente preferiblemente a un nivel de 0% a 20% en peso. Una medida numérica de la efectividad de un peptizador de jabón de cal se da mediante el poder de dispersión de jabón de cal (LSDP), el cual se determina utilizando la prueba de dispersante de jabón de cal como se describe en un artículo por H.C. Borghetty y C.A. bergman, J. Am. Oil. Chem. Soc. volumen 27, páginas 88-90, (1950). El método de la prueba de dispersante de jabón de cal es ampliamente utilizado por practicantes en este campo de la técnica siendo referido en, por ejemplo, los siguientes artículos d resumen: W.N. Linfield, Tenside surf. Det. Volumen 27, páginas 159-163, (1990); y M.K. Nagarajan, W.F. Masier, Cosmetics and Toiletries, volumen 104, páginas 71-73, (1989). El LSDP es el % de relación en peso de agente dispersante a oleato de sodio requerido para dispersar los depósitos de jabón de cal formados por 0.025g de oleato de sodio en 30ml de agua de 333 rpm CaCo3 (Ca:Mg=3.2) de dureza equivalente. Los agentes tensioactivos que tienen buena capacidad peptizadora de jabón de cal reducirán ciertos óxidos de amina, betaínas, sulfobetaínas, etoxisulfatos de alquilo y alcoholes etoxilados.

M4 Los agentes tensioactívos ilustrativos que tienen LSDP de no más de 8 para utilizarse de acuerdo con la presente invención incluyen óxido de dimetil amina de C16-C18, etoxisulfatos de alquilo de C12-C18 con un grado promedio de etoxilación de 1-5, particularmente agentes tensioactivos de etoxisulfatos de alquilo de C12-C15 con un grado de etoxilación de cantidad 3 (LSDP=4), y los alcoholes etoxilados de C14-C15 con un grado promedio de etoxilación de ya sea 12 (LSDP=6) o 30, vendidos bajo las marcas comerciales Lutensol A012 y Lutensol A030 respectivamente, por BASF GmbH. Los peptizadores de jabón de cal poliméricos adecuados para utilizarse en la presente invención se describen en un artículo por M.K. Nagarajan, W.F. Masier, que se encuentra en Cosmetics and Toiletries, volumen 104, páginas 71-73, (1989). Los blanqueadores hidrófobos como 4-(N-octanoil-6- aminoexanoil)benzensulfonato, 4-(N-nonanoil-6- aminoexanoil)benzensulfonato, 4-(N-decanoil-6-aminoexanoil)benzensulfonato y mezclas de los mismos; y nanoiloxibenzensulfonato junto con formulaciones de blanqueador hidrófilo/hidrófobo también pueden ser utilizados como compuestos peptizadores de jabón de cal.

Inhibición de la transferencia de colorantes Las composiciones detergentes de la presente invención pueden incluir también compuestos para inhibir la transferencia de colorantes de una tela a otra, de colorantes solubilizados y suspendidos encontrados durante las operaciones de lavado de telas que incluyen telas teñidas.

Agentes poliméricos inhibidores de transferencia de colorantes Las composiciones detergentes de acuerdo con la presente invención comprenden también de 0.001% a 10%, preferiblemente 0.01% a 2%, muy preferiblemente de 0.05% a 1 % en peso de agentes poliméricos inhibidores de transferencia de colorantes. Dichos agentes poliméricos inhibidores de transferencia de colorantes se incorporan normalmente a las composiciones detergentes para inhibir la transferencia de colorantes desde las telas teñidas sobre las telas lavadas con las mismas. Estos polímeros tienen la capacidad de complejar o adsorber los colorantes fugitivos deslavados de las telas teñidas antes de que los colorantes tengan la oportunidad de fijarse a otros artículos en el lavado. Los agentes poliméricos inhibidores de transferencia de colorantes especialmente adecuados son los polímeros de N-óxido de poliamina, copolímeros de N-vinilpirrolidona y N-vinilimidazol, polímeros de polivinilpirrolidona, poliviniloxazolidonas, polivinilimidazolonas y mezclas de los mismos. La adición de dichos polímeros incrementa también el rendimiento de las enzimas de acuerdo con la invención. a) Polímeros de N-óxido de poliamina Los polímeros de N-óxido de poliamina adecuados para su uso contienen unidades que tienen la siguiente fórmula estructural: en donde P es una unidad polimerizable, a la cual el grupo R-N-0 puede estar fijado o en la cual el grupo R-N-0 forme parte de la unidad polimerizable, o un combinación de ambas.

O O O II II II A es NC,CO,C,-0-,-S-,-N- ; x esOol R son grupos alifáticos, alifáticos etoxilados, aromáticos, heterocíclicos o alicíclicos o cualquier combinación de los mismo a los que el nitrógeno del grupo N-O puede estar fijado o en los que el nitrógeno del grupo N-O sea parte de estos grupos. El grupo N-O puede representarse mediante las siguientes estructuras generales: O O (R1)x-N—(R2)y = N-(R1)x (R3)z en donde R1, R2, y R3 son grupos alifáticos, aromáticos, heterocíclicos o alicíclicos o combinaciones de los mismos, X y/o y o/y z es 0 ó 1 y en donde el nitrógeno del grupo N-O puede estar fijado a, o en donde el nitrógeno del grupo N-O forme parte de estos grupos. tú El grupo N-O puede ser parte de la unidad polimerizable (P) o puede estar fijado a la estructura de base polimérica o una combinación de ambos. Los N-óxidos de poliamina adecuados en los que el grupo N-O forma parte de la unidad polimepzable comprenden los N-óxidos de poliamina en los que R se selecciona a partir de grupos alifáticos, aromáticos, alicíclicos o heterocíclicos. Una clase de dichos N-óxidos de poliamina comprende el grupo de N-óxidos de poliamina en los que el nitrógeno del grupo N-O forma parte del grupo R. Los N-óxidos de poliamina preferidos son aquellos en los que R es un grupo heterocíc co tales como piridina, pirrol, imidazol, pirrolidina, piperidina, quinolina, acridina y derivados de los mismos. Otra clase de dichos N-óxidos de poliamina comprenden el grupo de N-óxidos de poliamina en los que el nitrógeno del grupo N-O está fijado al grupo R. Otros N-óxidos de poliamina adecuados son los óxidos de poliamina a los cuales el grupo N-O esta fijado a la unidad polimerizable. Las clases preferidas de estos N-óxidos de poliamina son los N- óxidos de poliamina que tienen la fórmula general (I) en la que R es un grupo aromático, heterocíclicos o alicíclicos en donde el nitrógeno del grupo funcional N-O es parte de dicho grupo R. Ejemplos de estas clases son los óxidos de poliamina en los que R es un compuesto heterocíclico tal como pirridina, pirrol, imidazol y derivados de los mismos. 1 Í8 Otra clase preferida de N-óxidos de poliamina son los óxidos de poliamina que tienen la fórmula general (I) en la R es un grupo aromático heterocíclico o alicíclico en donde el nitrógeno del grupo funcional N-O está fijado a dichos grupos R. Ejemplos de estas clases son los óxidos de poliamina en los que los grupos R pueden ser aromáticos, tales como fenilo. Cualquier estructura de base de polímero se puede usar, siempre y cuando el polímero de óxido de amina formado sea soluble en agua y tenga propiedades inhibidoras de transferencia de colorantes. Ejemplos de estructuras de base poliméricas adecuadas son polivinilos, polialquilenos, poliésteres, poliéteres, poliamina, poliamidas, poliacrilatos y mezclas de los mismos. Los polímeros de N-óxido de amina de la presente invención tienen típicamente una relación de amina a N-óxido de amina de 10:1 a 1 :1000000. Sin embargo, la cantidad de grupos de óxido de amina presente en el polímero de óxido de poliamina puede variar mediante la copolimerización adecuada o mediante un grado adecuado de N-oxidación. Preferiblemente, la relación de amina a N-óxido de amina es de 2:3 a 1 :1000000, muy preferiblemente de 1 :4 a 1 :1000000, y más preferiblemente de 1 :7 a 1 :1000000. Los polímeros de la presente invención abarcan realmente copolímeros aleatorios o de bloque en los que un tipo de monómero es un N-óxido de amina y el otro tipo de monómero es o no un N-óxido de .. H ~ amina. La unidad de óxido de amina de los N-óxidos de poliamina tiene un Pka <10, preferiblemente Pka <7, muy preferiblemente Pka <6. Los óxidos de poliamina pueden obtenerse en casi cualquier grado de polimerización. El grado de polimerización no es critico, siempre y cuando el material tenga la solubilidad en agua y la potencia de suspensión de colorantes deseadas. Típicamente, el peso molecular promedio está dentro de la escala de 500 a 1000,000; preferiblemente de 1 ,000 a 50,000, más preferiblemente de 2,000 a 30,000 y todavía más preferiblemente de 3,000 a 20,000. b) Copolímeros de N-vinilpirrolidona y N-vinilimidazol Los polímeros de N-vinilimidazol y N-vinilpirrolidona usados en la presente invención tienen un peso molecular promedio en la escala de 5,000- i 1 ,000,000, preferiblemente de 5,000-200,000. Los polímeros altamente preferidos para usarse en las composiciones detergentes de acuerdo con la presente invención comprenden un polímero seleccionado de copolímeros de N-vinilimidazol y N-vinilpirrolidona en los que dicho polímero tiene una escala de peso molecular promedio de 5,000 a 50,000, muy preferiblemente de 8,000 a 30,000, más preferiblemente de 10,000 a 20,000. La escala de peso molecular promedio se determinó mediante escudriñamiento de luz como el descrito en Barth H.G. y Mays J.W. Chemical Analysis Vol 113, "Modern Methods of polymer characterization".

Los copolímeros de N-vinfimtdazol y N-vinilpirrolidona altamente preferidos tienen una escala de peso molecular promedio de 5,000 a 50,000; muy preferiblemente de 8,000 a 30,000; más preferiblemente de 10,000 a 20,000. Los copolímeros de N-vinilimidazol y N-vinilpirrolidona caracterizados porque tienen dicha escala de peso molecular promedio proveen excelentes propiedades inhibidoras de transferencia de colorantes y no afectan adversamente el rendimiento de limpieza de las composiciones detergentes formuladas con los mismos. El copolímero de N-vinilimidazol y N-vinilpirrolidona de la presente invención tiene una relación molar de N-vinilimidazol a N-vinilpirrolidona de 1 a 0.2, muy preferiblemente de 0.8 a 0.3 y más preferiblemente de 0.6 a 0.4. c) Polivinilpirrolidona Las composiciones detergentes de la presente invención pueden utilizar también polivinilpirrolidona ("PVP") que tenga un peso molecular promedio desde aproximadamente 2500 a aproximadamente 400,000, preferiblemente de aproximadamente 5,000 a aproximadamente 200,000, más preferiblemente de aproximadamente 5,000 a aproximadamente 50,000 y todavía más preferiblemente de aproximadamente 5,000 a aproximadamente 15,000. Las polivinilpirrolidonas adecuadas están disponibles comercialmente de ISP Corporation, Nueva York, NY y Montreal, Canadá, bajo los nombres de producto PVP K-15 (peso molecular de viscosidad de 10,000), PVP K-30 (peso molecular promedio de 40,000), PVP K-60 ( peso molecular promedio de 160,000) y PVP K-90 (peso molecular promedio de 360,000). Otras polivinilpirrolidonas adecuadas que están disponibles comercialmente de BASF Cooperation incluyen Sokalan HP 165 y Sokalan HP 12; las polivinilpirrolidonas conocidos por las personas expertas en el campo de los detergentes (ver por ejemplo, EP-A-262,897 y EP-A-256,696). d) Poliviniloxazolidona Las composiciones detergentes de la presente invención también pueden utilizar poliviniloxazolidona como un agente polimérico inhibidor de transferencia de colorantes. Dichas poliviniloxazolidonas tienen un peso molecular promedio de aproximadamente 2,500 a aproximadamente 400,000, preferiblemente de aproximadamente 5,000 a aproximadamente 200,000, muy preferiblemente de aproximadamente 5,000 a aproximadamente 50,000 y todavía más preferiblemente de aproximadamente 5,000 a aproximadamente 15,000. e) Polivinilimídazol Las composiciones detergentes de la presente invención pueden utilizar también polivinilimidazol como un agente polimérico inhibidor de transferencia de colorantes. Dichos polivinilimidazoles tienen un peso molecular promedio de 2,500 a aproximadamente 400,000, preferiblemente de aproximadamente 5,000 a aproximadamente 200,000, muy preferiblemente de aproximadamente 5,000 a aproximadamente 50,000 y más preferiblemente de aproximadamente 5,000 a aproximadamente 15,000. f) Polímeros entrelazados Los polímeros entrelazados son polímeros cuyas estructuras de base están interconectadas hasta cierto grado; estos enlaces pueden ser de naturaleza química o física, posiblemente con grupos activos en la estructura de base o sobre las ramificaciones; los polímeros entrelazados se han descrito en the Journal of Polymer Science, volumen 22, páginas 1035-1039. En una modalidad, los polímeros entrelazados están hechos en forma tal que formen una estructura rígida tridimensional que pueda atrapar colorantes en los poros formados por la estructura tridimensional. En otra modalidad, los polímeros entrelazados atrapan los colorantes mediante hinchamiento. Dichos polímeros entrelazados se describen en la solicitud de patente copendiente 94870213.9 Método de lavado Las composiciones de la invención se pueden usar esencialmente en cualquier método de lavado o de limpieza, incluyendo métodos de remojo, métodos de pretratamiento y métodos en los cuales se usen pasos de enjuague para los cuales se necesite o se pueda añadir una composición auxiliar de enjuague separada. El procedimiento descrito en la presente comprende hacer contacto entre las telas y una solución de lavado en forma usual y ejemplificada posteriormente en la presente. 133 v El procedimiento de la invención se lleva a cabo convenientemente en el transcurso del procedimiento de limpieza. El método de limpieza se lleva a cabo preferiblemente a 5°C a 95°C, especialmente entre 10°C y 60°C. El pH de la solución de tratamiento es preferiblemente de 7 a 12.

Un método preferido de lavado de vajillas a máquina comprende tratar artículos manchados con un líquido acuoso que tiene disuelto o surtido en el mismo una cantidad efectiva de la composición para lavado o enjuague de vajillas a maquina: Una cantidad efectiva convencional de la composición para lavar vajillas a máquina significa 8-60 g de producto disueltos o surtidos en un volumen de lavado de 3-10 litros. De acuerdo con un método de lavado de vajillas a mano, los trastes manchados son contactados con una cantidad efectiva de la composición para lavado de vajillas, típicamente de 0.5-20g (por 25 trastes siendo tratados). Los métodos de lavado de vajillas a mano preferidos incluyen la aplicación de una solución concentrada a las superficies de los trastes o el remojo en una gran cantidad de solución diluida de la composición detergente.

Los siguientes ejemplos están diseñados para ilustrar composiciones de la presente invención, pero no están necesariamente diseñados para limitar o definir de otra manera el alcance de la invención.

En las composiciones detergentes, los niveles de enzimas se expresan por enzima pura en peso de la composición total, y a menos que se indique lo contrario, los ingredientes detergentes se expresan en peso de las composiciones totales. Las identificaciones de los componentes abreviados tienen los siguientes significados: LAS: Alquilbencensulfonato de sodio lineal de Ci 1 _-| 3 TAS: Seboalquilsulfato de sodio CxyAS: Alquilsulfato de sodio de C?x-C-|y CxySAS: Alquilsulfato de sodio de C-|x-C<|y secundario (2,3) CxyEz: Alcohol primario de C<|X-C-|y predominantemente lineal lineal condensado con un promedio de z moles de óxido de etileno CxyEzS: Alquilsulfato de sodio de C-|x-C-| y condensado con z moles de óxido de etileno QAS: R2.N+(CH3)2(C2H4?H) con R2 = C12-C<|4 QAS 1 : R2.N+(CH3)2(C2H4OH) con Cg-Cn APA: Amidopropildimetilamina de Cg-C-|o. Jabón: Alquil carboxilato lineal de sodio derivado de una mezcla 80/20 de ácidos grasos de sebo y coco. No iónico: Alcohol graso etoxilado/propoxilado de C?3-C-? mixto con un grado promedio de etoxilación de 3.8 y un grado promedio de propoxilación de 4.5 Neodol 45-13: Alcohol primario lineal de C14-C15 etoxilado, vendido por Shell Chemical Co STS: Toluensulfonato de sodio CFAA: Alquil-N-metilglucan da" de Ci2-C14 TFAA: Alquil-N-metilglucamida de C-|g-C<|8 TPKFA: Ácidos grasos cortados enteros de C-12-C14 Silicato: Silicato de sodio amorfo (relación Si?2:Na2? = 1.6-3.2) Metasilicato: Metasilicato de sodio (relación Si?2:Na2? = 1.0) Zeolita A: Aluminosilicato de sodio hidratado de fórmula Nai2(A102Si02)i2 27H20 que tiene un tamaño de partícula primaria en la escala de 0.1 a 10 mieras (peso expresado en un base anhidra). Na-SKS-6: Silicato estratificado cristalino de la fórmula d-Na2S¡2?5 Citrato: Citrato trisódico dihidratado con una actividad de 86.4% y con una distribución de tamaño de partícula de entre 425 µm y 850 µm Cítrico: Acido cítrico anhidro Borato: Borato de sodio Carbonato: Carbonato de sodio anhidro con un tamaño de partícula de entre 200 µm y 900 µm Bicarbonato: Bicarbonato de sodio anhidro con un tamaño de partícula de entre 400 µm y 1200 µm Sulfato: Sulfato de sodio anhidro Sulfato de Mg: Sulfato de magnesio anhidro STPP: Tripolifosfato de sodio TSPP Pirofosfato de tetrasodio MA/AA: Copolímero 4:1 de acrilato/maleato, peso molecular promedio de aproximadamente 70,000-80,000 MA/AA 1: Copolímero 6:4 de acrilato/maleato, peso molecular promedio de aproximadamente 10,000 AA: Polímero de poliacrilato de sodio con un peso molecular promedio de 4,500 PA30: Acido poliacrílico de peso molecular promedio entre 4,500- 8,000. 480N: Copolímero aleatorio de 7:3 acrilato/metacrilato de peso molecular promedio de aproximadamente 3,500. Poligel/Carbopol: Poliacrilatos entrelazados de alto peso molecular. PB1 : Perborato de sodio anhidro con fórmula nominal NaB?2-H2?2 PB4: Perborato de sodio tetrahidratado de fórmula nominal NaB?2.3H2O.H2? 2 Percarbonato: Percarbonato de sodio anhidro de fórmula nominal 2Na2C?3.3H202 NaDCC: Dicloroisocianurato de sodio TAED: Tetraacetiletilendiamina NOBS: Nonanoiloxibencensulfonato en forma de la sal de sodio NACA-OBS: (6-nonamidocaproil)oxibencensulfonato DTPA: Acido dietilentriaminopentaacético HEDP: Acido 1 ,1-hidroxietandifosfónico DETPMP: Dietilentriam¡npenta(met¡lenfosfonato), comercializado por Monsanto bajo el nombre comercial Dequest 2060. EDDS: Acido etilendiamin-N,N'-disuccínico, isómero [S,S] en forma de su sal de sodio. MnTACN: 1 ,4,7-trimetil-1 ,4,7-triazaciclononano de manganeso Blanqueador Fotoactivado: Ftalocianina de zinc sulfonada encapsulada en polímero soluble en dextrina Blanqueador Fotoactivado 1 : Ftalocianina de aluminio sulfonada encapsulada en polímero soluble en dextrina PAAC: Sal de cobalto (lll) de acetato de pentaamina. Parafina: Aceite de parafina vendido bajo la marca comercial Winog 70 por Wintershall. NaBz: Benzoato de sodio. BzP: Peróxido de benzoilo. Mananasa: mananasa a partir de Bacillus agaradherens, NCIMB 40482.

Proteasa: Enzima proteolítica vendida bajo el nombre comercial Savinase, Alcalase, Durazym por Novo Nordisk A/S, Maxacal, Maxapem vendida por Gist-Brocades y proteasas descritas en las patentes W091/06637 y/o WO95/10591 y/o EP 251 446. Amilasa: Enzima amilolítica vendida bajo el nombre comercial Purafact Ox AmR, descrita en WO 94/18314, vendida por Genencor, Termamyl®, Fungamyl® y Duramyl®, todas disponibles de Novo Nordisk A/S y aquellas descritas en W095/26397. Lipasa: Enzima lipoítica vendida bajo el nombre comercial Lipolase Ultra por Novo Nordisk A/S y Lipomax por Gist- Brocades. Celulasa: Enzima celulítica vendida bajo el nombre comercial Carezyme, Celluzyme y/o Endolase por Novo Nordisk A/S CMC: Caroboximetilcelulosa de sodio PVP: Polímerod e polivinilo, con un peso molecular promedio de 60,000 PVNO: N-óxido de polivinilpiridina, con un peso molecular promedio de 50,000 PVPVI: Copolímero de vinilimidazol y vinilpirrolidona, con un peso molecular promedio de 20,000 Abrillantador 1 : 4,4'-bis(2-sulfoestiril)bifen¡lo disódico Abrillantador 2: 4,4'-b¡s(4-anilino-6-morfolino-1 ,3,5-tr¡azin-2-il)estilbeno- 2,2'-disulfonato disódico Antiespuma de Silicón: Controlador de espuma de polidimetílsiloxano con copolímero de siloxano-oxialquileno como agente de dispersión con una relación de dicho controlador a dicho agente de dispersión de 10:1 a 100:1 Supresor de espuma: 12% de silicón/sílice, 18% de alcohol estearílico, 70% de almidón en forma granulada Opacador: Mezcla de látex de monoestireno a base de agua vendida por BASF Aktiengesellschaft bajo el nombre comercial Lytron 621 SRP 1 : Poliésteres aniónicamente bloqueados en los extremos SRP 2: Polímero de bloque corto de poli(1 ,2-propilentereftalato) dietoxilado QEA: bis((C2H5?)(C2H4?n)(CH3)-N+-CgH12-N+-(CH3) bis((C2H5?)-(C2H4?n), en donde n = de 20 a 30 PEÍ Polietilenimina con un peso molecular promedio de 1800 y un grado de etoxilación promedio de 7 residuos de etilenoxi por nitrógeno SCS: Cumensulfonato de sodio HMWPEO: Oxido de polietileno de alto peso molecular PEGx: Polietilenglicol con un peso molecular de x PEO: Oxido de polietileno con un peso molecular de 5,000 TEPAE: Tetraetilenpentaamfna etoxilada BTA: Benzotriazola PH: Medido como una solución al 1 % en agua destilada a 20°C.

EJEMPLO 1 Se prepararon las siguientes composiciones detergentes para lavandería de alta densidad, de acuerdo con la presente invención: I II III IV V VI LAS 8.0 8.0 8.0 2.0 6.0 6.0 TAS - 0.5 - 0.5 1.0 0.1 C46(S)AS 2.0 2.5 - - - - C25AS - - - 7.0 4.5 5.5 C68AS 2.0 5.0 7.0 - - - C25E5 - - 3.4 10.0 4.6 4.6 C25E7 3.4 3.4 1.0 - - - C25E3S - - - 2.0 5.0 4.5 QAS - 0.8 - - - - QAS 1 - - - 0.8 0.5 1.0 Zeohta A 18.1 18.0 14.1 18.1 20.0 18.1 Cítrico - - - 2.5 - 2.5 Carbonato 13.0 13 0 27.0 10.0 10.0 13.0 Na-SKS-6 - - - 10.0 - 10.0 Silicato 1.4 1.4 3.0 0.3 0.5 0.3 Citrato - 1.0 - 3.0 - - Sulfato 26.1 26.1 26.1 6.0 - - Sulfato de Mg 0.3 - - 0.2 - 0.2 MA/AA 0.3 0.3 0.3 4.0 1.0 1.0 CMC 0.2 0.2 0.2 0.2 0.4 0.4 Mananasa 0.001 0.002 0.005 0.001 0.002 0.003 Percarbonato 9.0 9.0 5.0 5.0 18.0 18.0 TAED 1.5 0.4 1.5 - 3.9 4.2 NACA-OBS - 2.0 1.0 - - - DETPMP 0.25 0.25 0.25 0.25 - - SRP 1 - - - 0.2 0.2 EDDS - 0.25 0.4 - 0.5 0.5 CFAA - 1.0 - 2.0 - - HEDP 0.3 0.3 0.3 0.3 0.4 0.4 QEA - - - 0.2 - 0.5 Proteasa 0.009 0.009 0.01 0.04 0.05 0.03 Amilasa 0.002 0.002 0.002 0.006 0.008 0.008 Celulasa 0.0007 - - 0.0007 0.0007 0.0007 Lipasa 0.006 - - 0.01 0.01 0.01 Blanqueador 15 15 15 - 20 20 fotoactivado (ppm) PVNO/PVPVI - - - 0.1 - - Abrillantador 1 0.09 0.09 0.09 - 0.09 0.09 Permufe 0.3 0.3 0.3 0.4 0.4 0.4 Antiespumas de silicón 0.5 0.5 0.5 - 0.3 0.3 Perfume 0.3 0.3 0.3 0.4 0.4 0.4 Densidad en g/1 850 850 850 850 850 850 Ingredientes diversos y Hasta 100% componentes menores EJEMPLO 2 Se prepararon las siguientes composiciones detergentes granuladas para lavandería de utilidad particular bajo condiciones de lavado en lavadora europea, de conformidad con la presente invención: I II III IV V VI LAS 5.5 7.5 5.0 5.0 6.0 7.0 TAS 1.25 1.9 - 0.8 0.4 0.3 C24AS/C25AS - 2.2 5.0 5.0 5.0 2.2 C25E3S - 0.8 1.0 1.5 3.0 1.0 C45E7 3.25 - - - - 3.0 TFAA - - 2.0 - - - C25E5 - 5.5 - - - - QAS' 0.8 - - - - - QAS 1 - 0.7 1.0 0.5 1.0 0.7 STPP 19.7 - - - - - Zeohta A - 19.5 20.0 14.5 20.0 17.0 NaSKS-6/ácido cítrico - 10.6 - 10.6 - - (79:21) Na-SKS-6 - - 9.0 - 10.0 10.0 Carbonato 6.1 21.4 9.0 10.0 10.0 18.0 Bicarbonato - 2.0 7.0 5.0 - 2.0 Silicato 6.8 - - 0.3 0.5 - Citrato - - 4.0 4.0 - - Sulfato 39.8 - - 5.0 - 12.0 Sulfato de Mg - - 0.1 0.2 0.2 - MA/AA 0.5 1.6 3.0 4.0 1.0 1.0 CMC 0.2 0.4 1.0 1.0 0.4 0.4 Mananasa 0.001 0.002 0.002 0.001 0.002 0.002 Percarbonato 5.0 12.7 5.0 5.0 18.0 15.0 TAED 0.5 3.1 - - 5.0 - NACA-OBS 1.0 3.5 - - - 2.5 DETPMP 0.25 0.2 0.3 0.4 - 0.2 HEDP - 0.3 - 0.3 0.3 0.3 QEA - - 1.0 1.0 1.0 - Proteasa 0.009 0.03 0.03 0.05 0.05 0.02 Lipasa 0.003 0.003 0.006 0.006 0.006 0.004 Celulasa 0.0006 0.0006 0.0005 0.0005 0.0007 0.007 Amilasa 0.002 0.002 0.006 0.006 0.01 0.003 PVNO/PVPVI - - 0.2 0.2 - - PVP 0.9 1.3 - - - 0.9 SRP 1 - - 0.2 0.2 0.2 - Blanqueador 15 27 - - 20 20 fotoactivado (ppm) Blanqueador 15 - - - - -fotoactivado (2) (ppm) Abrillantador 1 0.08 0.2 - - 0.09 0.15 Abrillantador 2 - 0.04 - - - - Perfume 0.3 0.5 0.4 0.3 0.4 0.3 Antiespumas de 0.5 2.4 0.3 0.5 0.3 2.0 sihcón Densidad en g/1 750 750 750 750 750 750 Ingredientes diversos Hasta 100% y componentes menores EJEMPLO 3 Se prepararon las siguientes composiciones detergentes de utilidad particular bajo condiciones de lavado en lavadora europea, de conformidad con la presente invención: I II III IV Polvo soplado LAS 6.0 5.0 11.0 6.0 TAS 2.0 - - 2.0 Zeohta A 24.0 - - 20.0 STPP - 27.0 24.0 - Sulfato 4.0 6.0 13.0 - MA/AA 1.0 4.0 6.0 2.0 Silicato 1.0 7.0 3.0 3.0 CMC 1.0 1.0 0.5 0.6 Abrillantador 1 0.2 0.2 0.2 0.2 Antiespumas de sihcón 1.0 1.0 1.0 0.3 DETPMP 0.4 0.4 0.2 0.4 Rociables Abrillantador 0.02 _ _ 0.02 C45E7 - - - 5.0 C45E2 2.5 2.5 2.0 - C45E3 2.6 2.5 2.0 - Perfume 0.5 0.3 0.5 0.2 Antiespumas de sihcón 0.3 0.3 0.3 - Aditivos secos QEA _ _ _ 1.0 EDDS 0.3 - - - Sulfato 2.0 3.0 5.0 10.0 Carbonato 6.0 13.0 15.0 14.0 Cítrico 2.5 - - 2.0 QAS 1 0.5 - - 0.5 Na-SKS-6 10.0 - - - Percarbonato 18.5 18.0 10.0 21.5 Mananasa 0.001 0.002 0.02 0.02 TAED 2.0 2.0 - 2.0 NACA-OBS 3.0 2.0 4.0 - Proteasa 0.03 0.03 0.03 0.03 Lipasa 0.008 0.008 0.008 0.004 Amilasa 0.003 0.003 0.003 0.006 Abrillantador 1 0.05 - - 0.05 Ingredientes diversos y Hasta 100% componentes menores EJEMPLO 4 Se prepararon las siguientes composiciones detergentes granuladas de conformidad con la presente invención: I II III IV V VI Polvo soplado LAS 23.0 8.0 7.0 9.0 7.0 7.0 TAS - - - - 1.0 - C45AS 6.0 6.0 5.0 8.0 - - C45AES - 1.0 1.0 1.0 - - C45E35 - - - - 2.0 4.0 Zeolita A 10.0 18.0 14.0 12.0 10.0 10.0 MA/AA - 0.5 - - - 2.0 MA/AA 1 7.0 - - - - - AA - 3.0 3.0 2.0 3.0 3.0 Sulfato 5.0 6.3 14.3 11.0 15.0 19.3 Silicato 10.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 Carbonato 15.0 20.0 10.0 20.7 8.0 6.0 PEG 4000 0.4 1.5 1.5 1.0 1.0 1.0 DTPA - 0.9 0.5 - - 0.5 Abrillantador 2 0.3 0.2 0.3 - 0.1 0.3 Rociables C45E7 - 2.0 - - 2.0 2.0 C25E9 3.0 - - - - - C23E9 - - 1.5 2.0 - 2.0 Perfume 0.3 0.3 0.3 2.0 0.3 0.3 Aglomerados C45AS - 5.0 5.0 2.0 - 5.0 LAS - 2.0 2.0 - - 2.0 Zeohta A - 7.5 7.5 8.0 - 7.5 Carbonato - 4.0 4.0 5.0 - 4.0 PEG 4000 - 0.5 0.5 - - 0.5 Ingredientes - 2.0 2.0 2.0 - 2.0 diversos (agua, etc.) Aditivos secos QAS - - - - 1.0 - Cítrico - - - - 2.0 - Mananasa 0.001 0.02 0.001 0.02 0.001 0.01 Percarbonato 4.0 1.0 3.0 2.0 14.0 11.0 Carbonato - 5.3 1.8 - 4.0 4.0 NOBS 4.0 - 6.0 - - 0.6 Metil celulosa 0.2 - - - - - Na-SKS-6 8.0 - - - - - STS - - 2.0 - 1.0 - Acido - 1.0 - - - 2.0 cumensulfónico Proteasa 0.02 0.02 0.02 0.01 0.02 0.02 Lipasa 0.004 - 0.004 - 0.004 0.008 Amilasa 0.003 - 0.002 - 0.003 - Celulasa 0.0005 0.0005 0.0005 0.0007 0.0005 0.0005 PVPVI - - - - 0.5 0.1 PVP - - - - 0.5 - PV O - - 0.5 0.3 - - QEA - - - - 1.0 - SRP 1 0.2 0.5 0.3 - 0.2 - Antiespuma de 0.2 0.4 0.2 0.4 0.1 - sihcón Sulfato de Mg - - 0.2 - 0.2 - 10 Ingredientes Hasta 100% diversos y componentes menores -» "* Se prepararon la siguientes composiciones detergentes de acuerdo con la presente invención: II III IV Granulo base Zeolita A 30.0 22.0 24.0 10.0 Sulfato 10.0 5.0 10.0 7.0 MA/AA 3.0 - - - AA - 1.6 2.0 - MA/AA 1 - 12.0 - 6.0 LAS 14.0 10.0 9.0 20.0 C45AS 8.0 7.0 9.0 7.0 C45AES - 1.0 1.0 - Silicato - 1.0 0.5 10.0 Jabón - 2.0 - - Abrillantador 1 0.2 0.2 0.2 0.2 Carbonato 6.0 9.0 10.0 10.0 PEG 4000 - 1.0 1.5 - DTPA - 0.4 - - Rociables C25E9 - - - 5.0 C45E7 1.0 1.0 - - C23E9 - 1.0 2.5 - Perfume 0.2 0.3 0.3 - Aditivos secos Carbonato 5.0 10.0 18.0 8.0 PVPVI/PVNO 0.5 - 0.3 - Mananasa 0.001 0.001 0.02 0.02 Proteasa 0.03 0.03 0.03 0.02 Lipasa 0.008 - - 0.008 Amilasa 0.002 - - 0.002 Celulasa 0.0002 0.0005 0.0005 0.0002 NOBS - 4.0 - 4.5 Percarbonato 1.0 5.0 1.5 6.0 Sulfato 4.0 5.0 - 5.0 SRP1 - 0.4 - - Supresor de - 0.5 0.5 - espuma Ingredientes Hasta 100% diversos y componentes menores EJEMPLO 6 Se prepararon las siguientes composiciones detergentes granuladas de acuerdo con la presente invención: I II III Polvo soplado Zeolita A 20.0 - 15.0 STPP - 20.0 - Sulfato - - 5.0 Carbonato - - 5.0 TAS - - 1.0 LAS 6.0 6.0 6.0 C68AS 2.0 2.0 - Silicato 3.0 8.0 - MA/AA 4.0 2.0 2.0 CMC 0.6 0.6 0.2 Abrillantador 1 0.2 0.2 0.1 DETPMP 0.4 0.4 0.1 STS - - 1.0 Rociables C45E7 5.0 5.0 4.0 Antiespuma de silicón 0.3 0.3 0.1 Perfume 0.2 0.2 0.3 Aditivos secos QEA - - 1.0 Carbonato 14.0 9.0 10.0 Percarbonato 20.0 15.0 13.0 TAED 2.0 2.0 2.0 QAS - - 1.0 Blanqueador 15 ppm 15 ppm 15 ppm fotoactivado Na-SKS-6 - - 3.0 Mananasa 0.001 0.02 0.0015 Proteasa 0.03 0.03 0.007 Lipasa 0.004 0.004 0.004 Amilasa 0.006 0.006 0.003 Celulasa 0.0002 0.0002 0.0005 Sulfato 10.0 20.0 5.0 Densidad (g/litro) 700 700 700 Ingredientes diversos Hasta 100% y componentes menores EJEMPLO 7 Se prepararon las siguientes composiciones detergentes de acuerdo con la presente invención: I II III Polvo soplado Zeolita A 15.0 15.0 15.0 Sulfato - 5.0 - LAS 3.0 3.0 3.0 QAS - 1.5 1.5 DETPMP 0.4 0.2 0.4 EDDS - 0.4 0.2 CMC 0.4 0.4 0.4 MA/AA 4.0 2.0 2.0 Aglomerados LAS 5.0 5.0 5.0 TAS 2.0 2.0 1.0 Silicato 3.0 3.0 4.0 Zeolita A 8.0 8.0 8.0 Carbonato 9.0 7.0 7.0 Rociables Perfume 0.3 0.3 0.3 C45E7 2.0 2.0 2.0 C25E3 2.0 - - Aditivos secos Citrato 5.0 - 2.0 Bicarbonato - 3.0 - Carbonato 8.0 15.0 10.0 TAED 6.0 2.0 5.0 Percarbonato 14.0 7.0 10.0 PEO - - 0.2 Arcilla bentonita - - 10.0 Mananasa 0.001 0.02 0.01 Proteasa 0.03 0.03 0.03 Lipasa 0.008 0.008 0.008 Celulasa 0.001 0.001 0.001 Amilasa 0.01 0.01 0.01 Antiespuma de silicón 5.0 5.0 5.0 Sulfato - 3.0 - Densidad (g/htro) 850 850 850 Ingredientes diversos Hasta 100% y componentes menores EJEMPLO 8 Se prepararon las siguientes composiciones detergentes de acuerdo con la presente invención: I II III IV LAS 18.0 14.0 24.0 20.0 QAS 0.7 1.0 - 0.7 TFAA - 1.0 - - C23E56.5 - - 1.0 - C45E7 - 1.0 - - C45E3S 1.0 2.5 1.0 - STPP 32.0 18.0 28.0 20.0 Silicato 9.0 5.0 9.0 8.0 Carbonato 11.0 7.5 10.0 5.0 Bicarbonato - 7.5 - - Percarbonato 3.0 2.0 2.0 2.0 NOBS 2.0 1.0 - - DETPMP - 1.0 - - DTPA 0.5 - 0.2 0.3 SRP 1 0.3 0.2 - 0.1 MA/AA 1.0 1.5 2.0 0.5 CMC 0.8 0.4 0.4 0.2 PEÍ - - 0.4 - Sulfato 20.0 10.0 20.0 30.0 Sulfato de Mg 0.2 - 0.4 0.9 Mananasa 0.001 0.001 0.02 0.03 Proteasa 0.03 0.03 0.02 0.02 Amilasa 0.008 0.007 - 0.004 Lipasa 0.004 - 0.002 - Celulasa 0.0003 - - 0.0001 Blanqueador fotoactivado 30 ppm 20 ppm - 10 ppm Perfume 0.3 0.3 0.1 0.2 Abrillantador 1/2 0.05 0.02 0.08 0.1 Ingredientes diversos y componentes menores hasta 100% EJEMPLO 9 Las siguientes composiciones detergentes granulares para telas que proveen capacidad de "suavizado durante el lavado" fueron preparadas de acuerdo con la invención I C45AS - ' 10.0 LAS 7.6 - C68AS 1.3 - C45E7 4.0 - C25E3 - 5.0 Cloruro de Cocoalquil-dimetil hidroxi1.4 1.0 etil amonio Citrato 5.0 3.0 Na-SKS-6 - 11.0 Zeolita A 15.0 15.0 MA/AA 4.0 4.0 DETPMP 0.4 0.4 Percarbonato 15.0 15.0 TAED 5.0 5.0 Arcilla Smectita 10.0 10.0 HMWPEO - 0.1 Mananasa 0.001 0.02 Proteasa 0.02 0.01 Lipasa 0.02 0.01 Amylasa 0.03 0.005 Celulasa 0.001 - Silicato 3.0 5.0 Carbonato 10.0 10.0 Supresor de espuma 1.0 4.0 CMC 0.2 0.1 Vanos y menores Hasta 100% EJEMPLO 10 5 Las siguientes composiciones aditivas detergentes fueron preparadas de acuerdo con la presente invención: I II LAS - 5 0 STPP 30.0 Zeo ta A - 35.0 Percarbonato 20 0 15 0 TAED 10.0 8.0 Mananasa 0.001 0.02 Proteasa - 0.3 15 Amilasa - 0.06 Menores, agua y vanos Hasta 100% EJEMPLO 11 20 Las siguie_ntes composiciones detergentes compactas para lavado de vajillas de alta densidad (0.96 Kg/l) fueron preparadas de acuerdo con la presente invención: 1 II lll IV V VI Vil VIII STPP - - 54.3 51.4 51.4 - - 50.9 Citrato 35.0 17.0 - - - 46.1 40.2 - Carbonato - 17.5 14.0 14.0 14.0 - 8.0 32.1 Bicarbonato - - - - - 25.4 - - Silicato 32.0 14.8 14.8 10.0 10.0 1.0 25.0 3.1 Metasilicato - 2.5 - 9.0 9.0 - - - Percarbonato 10.5 9.7 7.8 7.8 7.8 6.7 11.8 4.8 No iónico 1.5 2.0 1.5 1.7 1.5 2.6 1.9 5.3 TAED 5.2 2.4 - - - 2.2 - 1.4 HEDP - 1.0 - - - - - - DETPMP - 0.6 - - - - - - MnTACN - - - - - - 0.008 - PAAC - - 0.008 0.01 0.007 - - - BzP - - - - 1.4 - - - Parafina 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.6 - - Mananasa 0.001 0.02 0.015 0.02 0.001 0.001 0.02 0.02 Proteasa 0.072 0.072 0.029 0.053 0.046 0.026 0.059 0.06 Amilasa 0.012 0.012 0.006 0.012 0.013 0.009 0.017 0.03 Lipasa - 0.001 - 0.005 - - - - BTA 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 - 0.3 0.3 MA/AA - - - - - - 4.2 - 480N 3.3 6.0 - - - - - 0.9 Perfume 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.1 0.1 Sulfato 7.0 20.0 5.0 2.2 0.8 12.0 4.6 - PH 10.8 11.0 10.8 11.3 11.3 9.6 10.8 10.9 Varios y agua Hasta 100% EJEMPLO 12 Las siguientes composiciones detergentes granulares para lavado de vajillas de densidad volumétrica de 1.02 Kg/L fueron preparadas de acuerdo con la presente invención: 1 11 lll IV V STPP 30.0 30.0 33.0 34.2 31.1 Carbonato 30.5 30.5 31.0 30.0 39.4 Silicato 7.4 7.4 7.5 7.2 3.4 Metasilicato - - 4.5 5.1 - Percarbonato 4.4 4.2 4.5 4.5 4.0 NADCC - - - - - No iónico 1.2 1.0 0.7 0.8 0.7 TAED 1.0 - - - 0.8 PAAC - 0.004 0.004 0.004 - BzP - - - 1.4 - Parafina 0.25 0.25 0.25 0.25 - Mananasa 0.01 0.001 0.02 0.001 0.001 Proteasa 0.036 0.015 0.03 0.028 0.03 Amilasa 0.003 0.003 0.01 0.006 0.01 Lipasa 0.005 - 0.001 - - BTA 0.15 0.15 0.15 0.15 - Perfume 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 Sulfato 23.4 25.0 22.0 18.5 19.3 PH 10.8 10.8 11.3 11.3 11.5 Varios y agua Hasta 100% EJEMPLO 13 Las siguientes composiciones detergentes en tableta fueron preparadas de acuerdo con la presente invención mediante compresión de una composición detergente granular para lavado de vajillas a una presión de 13KN/cm2 utilizando una prensa giratoria estándar de 12 cabezas.

LISTADO DE S OBNCIAS (1) INFORMACIÓN GENERAL: SOLICITANTE: NOMBRE: The Procter & Gamble Company CALLE: One Procter & Gamble Plaza CIUDAD: Cincinnati, OHIO PAÍS- USA CÓDIGO POSTAL: 45202 TITULO DE LA INVENCIÓN: Composiciones Detergentes que constan de una mañanase y percarbonate NUMERO DE SECUENCIAS: 6 FORMA LEÍBLE EN COMPUTADORA: TIPO DE MEDIO: Diskette COMPUTADORA: IBM PC compatible SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS SOFTWARE: Patentln Reléase # 1.0 Versión 1.25 (EPO) SEQ ID NO:1 jy ^?jy Mit?ay?^..-A CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: LONGITUD: 1407 pares de bases TIPO: ácido nucleico CADENA: sencilla TOPOLOGÍA: lineal TIPO DE MOLÉCULA: ADN genomico FUENTE ORIGINAL CARACTERÍSTICAS: NOMBRE/CLAVE: CDS UBICACIÓN: 1-1482 DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO: 1 ATGAAAAAAAAGTTATCACAGATTTATCATTTAATTATTTGCACACTTATAA TAAGTGTGGGAATAATGGGGATTACAACGTCCCCATCAGCAGCAAGTACA GGCTTTTATGTTGATGGCAATACGTTATATGACGCAAATGGGCAGCCATT TGTCATGAGAGGTATTAACCATGGACATGCTTGGTATAAAGACACCGCTT CAACAGCTATTCCTGCCATTGCAGAGCAAGGCGCCAACACGATTCGTATT GTTTTATCAGATGGCGGTCAATGGGAAAAAGACGACATTGACACCATTCG TGAAGTCATTGAGCTTGCGGAGCAAAATAAAATGGTGGCTGTCGTTGAAG TTCATGATGCCACGGGTCGCGATTCGCGCAGTGATTTAAATCGAGCCGTT GATTATTGGATAGAAATGAAAGATGC'é TTATCGGTAAAGAAGATACGGT TATTATTAACATTGCAAACGAGTGGTATGGGAGTTGGGATGGCTCAGCTT GGGCCGATGGCTATATTGATGTCATTCCGAAGCTTCGCGATGCCGGCTTA ACACACACCTTAATGGTTGATGCAGCAGGATGGGGGCAATATCCGCAATC TATTCATGATTACGGACAAGATGTGTTTAATGCAGATCCGTTAAAAAATAC GATGTTCTCCATCCATATGTATGAGTATGCTGGTGGTGATGCTAACACTG TTAGATCAAATATTGATAGAGTCATAGATCAAGACCTTGCTCTCGTAATAG GTGAATTCGGTCATAGACATACTGATGGTGATGTTGATGAAGATACAATC CTTAGTTATTCTGAAGAAACTGGCACAGGGTGGCTCGCTTGGTCTTGGAA AGGCAACAGTACCGAATGGGACTATTTAGACCTTTCAGAAGACTGGGCTG GTCAACATTTAACTGATTGGGGGAATAGAATTGTCCACGGGGCCGATGG CTTACAGGAAACCTCCAAACCATCCACCGTATTTACAGATGATAACGGTG GTCACCCTGAACCGCCAACTGCTACTACCTTGTATGACTTTGAAGGAAGC ACACAAGGGTGGCATGGAAGCAACGTGACCGGTGGCCCTTGGTCCGTAA CAGAATGGGGTGCTTCAGGTAACTACTCTTTAAAAGCCGATGTAAATTTAA CCTCAAATTCTTCACATGAACTGTATAGTGAACAAAGTCGTAATCTACACG GATACTCTCAGCTCAACGCAACCGTTCGCCATGCCAATTGGGGAAATCCC GGTAATGGCATGAATGCAAGACTTTACGTGAAAACGGGCTCTGATTATAC ATGGCATAGCGGTCCTTTTACACGTATCAATAGCTCCAACTCAGGAACAA CGTTATCTTTTGATTTAAACAACATCGAAAATAGTCATCATGTTAGGGAAA TAGGCGTGCAATTTTCAGCGGCAGATAATAGCAGTGGTCAAACTGCTCTA TACGTTGATAACGTTACTTTAAGATAG 1*8 SEQ ID NO:2 CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: LONGITUD: 493 amino ácidos TIPO: amino ácido TOPOLOGÍA: lineal TIPO DE MOLÉCULA: proteina DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO: 2 MKKKLSQIYHLIICTLIISVGIMGITTSPSAASTGFYVDGNTLYDANGQPFVMRG INHGHAWYKDTASTAIPAIAEQGANTIRIVLSDGGQWEKDDIDTIREVIELAEQ NKMVAVVEVHDATGRDSRSDLNRAVDYWIEMKDALIGKEDTVIINIANEWYG SWDGSAWADGYIDVIPKLRDAGLTHTLMVDAAGWGQYPQSIHDYGQDVFN ADPLKNTMFSIHMYEYAGGDANTVRSNIDRVIDQDLALVIGEFGHRHTDGDV DEDTILSYSEETGTGWLAWSWKGNSTEWDYLDLSEDWAGQHLTDWGNRIV HGADGLQETSKPSTVFTDDNGGHPEPPTATTLYDFEGSTQGWHGSNVTGG PWSVTEWGASGNYSLKADVNLTSNSSHELYSEQSRNLHGYSQLNATVRHA NWGNPGNGMNARLYVKTGSDYTWHSGPFTRINSSNSGTTLSFDLNNIENSH HVREIGVQFSAADNSSGQTALYVDNVTLR SEQ ID NO:3 CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: LONGITUD: 1407 pares de base TIPO: ácido nucleico CADENA: sencilla TOPOLOGÍA: lineal TIPO DE MOLÉCULA: ADN genomico DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO: 3 i o ATGAAAAAAAAGTTATCACAGATTTATCATTTAATTATTTGCACACTTATAA TAAGTGTGGGAATAATGGGGATTACAACGTCCCCATCAGCAGCAAGTACA GGCTTTTATGTTGATGGCAATACGTTATATGACGCAAATGGGCAGCCATT TGTCATGAGAGGTATTAACCATGGACATGCTTGGTATAAAGACACCGCTT CAACAGCTATTCCTGCCATTGCAGAGCAAGGCGCCAACACGATTCGTATT 15 GTTTTATCAGATGGCGGTCAATGGGAAAAAGACGACATTGACACCATTCG TGAAGTCATTGAGCTTGCGGAGCAAAATAAAATGGTGGCTGTCGTTGAAG TTCATGATGCCACGGGTCGCGATTCGCGCAGTGATTTAAATCGAGCCGTT GATTATTGGATAGAAATGAAAGATGCGCTTATCGGTAAAGAAGATACGGT TATTATTAACATTGCAAACGAGTGGTATGGGAGTTGGGATGGCTCAGCTT 20 GGGCCGATGGCTATATTGATGTCATTCCGAAGCTTCGCGATGCCGGCTTA ACACACACCTTAATGGTTGATGCAGCAGGATGGGGGCAATATCCGCAATC TATTCATGATTACGGACAAGATGTGTTTAATGCAGATCCGTTAAAAAATAC GATGTTCTCCATCCATATGTATGAGTATGCTGGTGGTGATGCTAACACTG TTAGATCAAATATTGATAGAGTCATAGATCAAGACCTTGCTCTCGTAATAG GTGAATTCGGTCATAGACATACTGATGGTGATGTTGATGAAGATACAATC CTTAGTTATTCTGAAGAAACTGGCACAGGGTGGCTCGCTTGGTCTTGGAA AGGCAACAGTACCGAATGGGACTATTTAGACCTTTCAGAAGACTGGGCTG GTCAACATTTAACTGATTGGGGGAATAGAATTGTCCACGGGGCCGATGG CTTACAGGAAACCTCCAAACCATCCACCGTATTTACAGATGATAACGGTG GTCACCCTGAACCGCCAACTGCTACTACCTTGTATGACTTTGAAGGAAGC ACACAAGGGTGGCATGGAAGCAACGTGACCGGTGGCCCTTGGTCCGTAA CAGAATGGGGTGCTTCAGGTAACTACTCTTTAAAAGCCGATGTAAATTTAA CCTCAAATTCTTCACATGAACTGTATAGTGAACAAAGTCGTAATCTACACG GATACTCTCAGCTCAACGCAACCGTTCGCCATGCCAATTGGGGAAATCCC GGTAATGGCATGAATGCAAGACTTTACGTGAAAACGGGCTCTGATTATAC ATGGCATAGCGGTCCTTTTACACGTATCAATAGCTCCAACTCAGGAACAA CGTTATCTTTTGATTTAAACAACATCGAAAATATCATCATGTTAGGGAAATA SEQ ID NO:4 CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: LONGITUD: 468 amino ácidos TIPO: amino ácido TOPOLOGÍA: lineal TIPO DE MOLÉCULA: proteína DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO: 4 MKKKLSQIYHLIICTLIISVGIMGITTSPSAASTGFYVDGNTLYDANGQPFVMRG INHGHAWYKDTASTAIPAIAEQGANTIRIVLSDGGQWEKDDIDTIREVIELAEQ NKMVAVVEVHDATGRDSRSDLNRAVDYWIEMKDALIGKEDTVIINIANEWYG SWDGSAWADGYIDVIPKLRDAGLTHTLMVDAAGWGQYPQSIHDYGQDVFN ADPLKNTMFSIHMYEYAGGDANTVRSNIDRVIDQDLALVIGEFGHRHTDGDV DEDTILSYSEETGTGWLAWSWKGNSTEWDYLDLSEDWAGQHLTDWGNRIV HGADGLQETSKPSTVFTDDNGGHPEPPTATTLYDFEGSTQGWHGSNVTGG PWSVTEWGASGNYSLKADVNLTSNSSHELYSEQSRNLHGYSQLNATVRHA NWGNPGNGMNARLYVKTGSDYTWHSGPFTRINSSNSGTTLSFDLNNIENIIM LGK SEQ ID NO:5 CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: LONGITUD: 1029 pares de base TIPO: ácido nucleico CADENA: sencilla TOPOLOGÍA: lineal TIPO DE MOLÉCULA: ADN genomico DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID Noli 5' AAT TGG CGC ATA CTG TGT CGC CTG TGA ATC CTA ATG CCC AGC AGA CAA CAA AAA CAG TGA TGA ACT GGC TTG CGC ACC TGC CGA ACC GAA CGG AAA ACA GAG TCC CCG GAG CGT TCG GAG GTT ACA GCC ATG ACA CAT TTT CTA TGG CTG AGG CTG ATA GAA TCC GAA GCG CCA CCG GGC AAT CGC CTG CTA TTT ATG GCT GCG ATT ATG CCA GAG GAT GGC TTG AAA CAG CAA ATA TTG AAG ATT CAA TAG ATG TAA GCT GCA ACG GCG ATT TAA TGT CGT ATT GGA AAA ATG GCG GAA TTC CGC AAA TCA GTT TGC ACC TGG CGA ACC CTG CTT TTC AGT CAG GGC ATT TTA AAA CAC CGA TTA CAA ATG ATC AGT ATA AAA ACA TAT TAG ATT CAG CAA CAG CGG AAG GGA AGC GGC TAA ATG CCA TGC TCA GCA AAA TTG CTG ACG GAC TTC AAG AGT TGG AGA ACC AAG GTG TGC CTG TTC TGT TCA GGC CGC TGC ATG AAA TGA ACG GCG AAT GGT TTT GGT GGG GAC TCA CAT CAT ATA ACC AAA AGG ATA ATG AAA GAA TCT CTC TAT ATA AAC AGC TCT ACA AGA AAA TCT ATC ATT ATA TGA CCG ACA CAA GAG GAC TTG ATC ATT TGA TTT GGG TTT ACT CTC CCG ACG CCA ACC GAG ATT TTA AAA CTG ATT TTT ACC CGG GCG CGT CTT ACG TGG ATA TTG TCG GAT TAG ATG CGT ATT TTC AAG ATG CCT ACT CGA TCA ATG GAT ACG ATC AGC TAA CAG CGC TTA ATA AAC CAT TTG CTT TTA CAG AAG TCG GCC CGC AAA CAG CAA ACG GCA GCT TCG ATT ACA GCC TGT TCA TCA ATG CAA TAA AAC AAA AAT ATC CTA AAA CCA TTT ACT TTC TGG CAT GGA ATG ATG i>. >-,<• . ***.** i **-í« AAT GGA GCG CAG CAG TAA ACA AGG GTG CTT CAG CTT TAT ATC ATG ACA GCT GGA CAC TCA ACA AGG GAG AAA TAT GGA ATG GTG ATT CTT TAA CGC CAA TCG TTG AGT GAA TCC GGG ATC 3' SEQ ID NO:6 CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: LONGITUD: 363 amino ácidos TIPO: amino ácido TOPOLOGÍA: lineal TIPO DE MOLÉCULA: proteina DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO: 6 ydhT 1 LFKKHTISLLIIFLLASAVLAKPIEAHTVSPVNPNAQQTTKTVMNWLAHL 50 ydhT 51 PNRTENRVLSGAFGGYSHDTFSMAEADRIRSATGQSPAIYGCDYARGWLE 100 ydhT 101 TANIEDSIDVSCNGDLMSYWKNGGIPQISLHLANPAFQSGHFKTPITNDQ 150 ydhT 151 YKNILDSATAEGKRLNAMLSKIADGLQELENQGVPVLFRPLHEMNGEWFW 200 ydhT 201 WGLTSYNQKDNERISLYKQLYKKIYHYMTDTRGLDHLIWVYSPDANRDFK 250 ydhT 251 TDFYPGASYVDIVGLDAYFQDAYSINGYDQLTALNKPFAFTEVGPQTANG 300 ydhT 301 SFDYSLFINAIKQKYPKTIYFLAWNDEWSAAVNKGASALYHDSWTLNKGE 350 ydhT 351 IWNGDSLTPIVE*. 363

Claims (8)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Una composición detergente que consta de una enzima mananasa y percarbonato.

2.- Una composición detergente de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada porque dicha mananasa está presente a un nivel de 0.0001 % a 2%, preferiblemente de 0.0005% a 0.5%, más preferiblemente de 0.001 % a 0.02% de enzima pura en peso de la composición total.

3.- Una composición detergente de conformidad con las reivindicaciones 1-2, caracterizada porque dicho percarbonato está presente a un nivel de 0.1% a 50%, preferiblemente de 0.5% a 35%, más preferiblemente de 1 % a 25% en peso de la composición total.

4.- Una composición detergente de conformidad con las reivindicaciones 1 a 3, caracterizada porque dicho percarbonato tiene un tamaño de partícula promedio de 250 a 900 mieras.

5.- Una composición detergente de conformidad con las reivindicaciones 1 a 4 que consta adicionalmente de una proteasa.

6.- Una composición detergente de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque la proteasa es una proteasa de la clasificación IUPAC EC 3.4.-.-, preferiblemente una proteasa endo-serina de la clasificación IUPAC EC 3.4.21.-, más preferiblemente una proteasa subtilisina de la clasificación IUPAC EC 3.4.21.62.

7.- El uso de una composición de conformidad con las reivindicaciones 1 a 6 para remoción de manchas y/o mantenimiento de blancura.

8.- El uso de conformidad con la reivindicación 7 para remoción de manchas de alimentos y cosméticos que contienen mananasa.