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WO2017115773A1 - Ｆｃ領域含有ポリペプチドの精製を効率化するための方法 - Google Patents

Ｆｃ領域含有ポリペプチドの精製を効率化するための方法 Download PDF

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WO2017115773A1
WO2017115773A1 PCT/JP2016/088820 JP2016088820W WO2017115773A1 WO 2017115773 A1 WO2017115773 A1 WO 2017115773A1 JP 2016088820 W JP2016088820 W JP 2016088820W WO 2017115773 A1 WO2017115773 A1 WO 2017115773A1
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WO
WIPO (PCT)
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region
resin
polypeptide
polypeptide chain
protein
Prior art date
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Ceased
Application number
PCT/JP2016/088820
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English (en)
French (fr)
Inventor
田中　信幸
瑠美子 百瀬
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
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Priority to KR1020187020141A priority patent/KR102784832B1/ko
Priority to US16/061,454 priority patent/US11649262B2/en
Priority to MX2018007781A priority patent/MX2018007781A/es
Priority to SG11201803989WA priority patent/SG11201803989WA/en
Priority to BR112018009312A priority patent/BR112018009312A8/pt
Priority to AU2016381992A priority patent/AU2016381992B2/en
Priority to CA3004288A priority patent/CA3004288C/en
Application filed by Chugai Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Priority to JP2017559189A priority patent/JP7219005B2/ja
Priority to HK18110553.8A priority patent/HK1251237B/xx
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    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/528—CH4 domain

Definitions

  • the present invention relates to a method for increasing the dynamic binding capacity of an Fc region-containing polypeptide to a protein A resin in protein A column chromatography, a purification method using the method, and the like.
  • protein A resin has been improved, and more antibodies can be bound to protein A resin. Accordingly, the efficiency of antibody purification has been improved.
  • GE Healthcare's rProtein A sepharoseGEFast Flow which is a representative first generation protein A resin, has a typical antibody binding capacity of 15-20 / g / L resin, whereas its second generation protein
  • the binding capacity of about 30 g / L resin is generally recognized in Mab Select SuRe, which is an A-resin and is currently the world's most used.
  • the latter can cope with a linear flow velocity about 1.5-2 times higher than the former, and protein A purification of antibody molecules can be performed more efficiently.
  • Bispecific antibodies have two types of heavy chains due to their ability to recognize two different types of antigens. Therefore, the culture supernatant containing a bispecific antibody includes not only a bispecific antibody containing two types of H chains but also an antibody having only one type of H chain. In order to separate these from bispecific antibodies, Fc region mutants having altered binding power to protein A resin are used (Patent Documents 1 and 2). There was concern that protein A purification of bispecific antibodies would become inefficient due to the effects of such molecular modifications.
  • An object of the present invention is to provide a method for more efficiently purifying an Fc region-containing polypeptide, particularly a bispecific antibody, using a protein A resin column.
  • the present inventors have determined that the Fc region has a binding force to the protein A resin of the first polypeptide chain of the Fc region and the second polypeptide chain of the Fc region. It was found that by using different Fc regions, the dynamic binding capacity of the antibody increases and the purification efficiency of the antibody increases, and the present invention has been completed.
  • the present invention provides the following.
  • [1] A method for increasing the dynamic binding capacity of an Fc region-containing polypeptide to a protein A resin in protein A column chromatography.
  • [2] preparing a first polypeptide chain and a second polypeptide chain having different binding forces to the resin as the first polypeptide chain and the second polypeptide of the Fc region, [1].
  • [3] A first polypeptide chain that binds to the resin is prepared as a first polypeptide chain of the Fc region, and the second polypeptide chain of the Fc region does not bind to the resin or
  • the Fc region of the Fc region-containing polypeptide is bound to the resin, while the first polypeptide chain of the Fc region binds to the resin, or the second polypeptide chain of the Fc region does not bind to the resin, or The method according to any one of [1] to [3], comprising a step of modifying the Fc region so that the binding (to the resin is weaker than that of the first polypeptide chain).
  • the first polypeptide chain of the Fc region contains CH3 of IgG1, IgG2 or IgG4, and the second polypeptide chain of the Fc region contains CH3 of IgG3, any one of [1] to [4] The method of crab.
  • the EU numbering 435th amino acid of the first polypeptide chain of the Fc region is His, and the EU numbering 435th amino acid of the second polypeptide chain is Arg, [1] to [5] The method according to any one. [7] The method according to any one of [1] to [6], wherein the increase in the binding capacity is 5 g / L resin or more. [8] The method according to any one of [1] to [7], wherein the increased dynamic binding capacity is 45 g / L resin or more. [9] The method according to any one of [1] to [8], wherein the Fc region-containing polypeptide is an antibody. [10] The method according to [9], wherein the antibody is a bispecific antibody.
  • [11] A method for purifying an Fc region-containing polypeptide using the method according to [1] to [10].
  • An Fc region-containing polypeptide purified by the method according to [11].
  • a method for producing an Fc region-containing polypeptide using protein A resin comprising the following steps: (A) preparing a first polypeptide chain and a second polypeptide chain of the Fc region having different binding forces to the resin, (B) In protein A column chromatography, the dynamic binding capacity of the Fc region-containing polypeptide in step (a) to protein A resin is substantially the same as the binding force to the resin in protein A column chromatography.
  • a first polypeptide chain that binds to the resin is prepared as the first polypeptide chain of the Fc region, and the second polypeptide chain of the Fc region is added to the resin as the second polypeptide chain.
  • the method according to [15], which is a step of preparing a second polypeptide chain that does not bind or has a weak bond (to the resin as compared to the first polypeptide chain) [17]
  • the step (a) However, the Fc region of the Fc region-containing polypeptide to be purified binds to the resin, while the first polypeptide chain of the Fc region binds to the resin, and the second polypeptide chain of the Fc region binds to the resin.
  • the sample according to the step (c) is capable of binding to both a polypeptide containing the first polypeptide chain of the Fc region and a polypeptide containing the second polypeptide chain of the Fc region.
  • the purification method according to [11], wherein the Fc region-containing polypeptide is an antibody.
  • the purification method according to [19], wherein the antibody is a bispecific antibody.
  • the present invention provides a method for more efficiently purifying Fc region-containing polypeptides, particularly bispecific antibodies, using protein A resin.
  • the Fc region-containing polypeptide used in the present invention only needs to contain the Fc region of an antibody, and includes a polypeptide in which the Fc region and another polypeptide are fused, such as an antibody.
  • the polypeptide in the present invention usually refers to peptides and proteins having a length of about 10 amino acids or more.
  • it is usually a biological polypeptide, but is not particularly limited, and may be, for example, a polypeptide comprising an artificially designed sequence.
  • any of natural polypeptide, synthetic polypeptide, recombinant polypeptide, etc. may be sufficient.
  • Fc region usually refers to a region in an antibody molecule comprising two polypeptide chains comprising a hinge region or a part thereof, a CH2 domain, and a CH3 domain, but is not particularly limited to this, and the hinge region Or some of them may not be included.
  • the Fc region of the human IgG class is Kabat EU numbering, which means, for example, from the 226th cysteine to the C terminus, or from the 230th proline to the C terminus, but is not limited thereto.
  • the human CH2 domain means the 231st to 340th in the Kabat EU numbering
  • the human CH3 domain means the 341th to 447th in the Kabat EU numbering, but is not limited thereto.
  • the Fc region can be suitably obtained by re-elution of the fraction adsorbed to the protein A resin after partial digestion of IgG1, IgG2, IgG3, Fc region-containing monoclonal antibodies, etc. with a protease such as pepsin. .
  • protease such as pepsin.
  • Such proteolytic enzymes are not particularly limited as long as full-length antibodies can be digested so that Fab and F (ab ') 2 can be produced in a limited manner by appropriately setting the reaction conditions of the enzyme such as pH.
  • pepsin, papain, etc. can be illustrated.
  • the Fc region include human IgG type Fc.
  • any of IgG1, IgG2, IgG3, and IgG4 isotypes may be used.
  • the Fc region of the present invention includes the first polypeptide chain and the second polypeptide chain.
  • One embodiment of the present invention is a method for increasing the dynamic binding capacity of an Fc region-containing polypeptide to a protein A resin in protein A column chromatography.
  • the first polypeptide chain and the second polypeptide chain contained in the Fc region preferably have different binding forces to the protein A resin, for example, bind to the protein A resin as the first polypeptide chain.
  • a polypeptide chain that binds weakly or does not bind to protein A resin as compared to the first polypeptide chain can be used as the second polypeptide chain.
  • a polypeptide chain containing CH3 of IgG1, IgG2, or IgG4 can be used as such a first polypeptide chain, and a polypeptide chain containing CH3 of IgG3 can be used as a second polypeptide chain .
  • IgG1, IG2, IgG3, and IgG4 may be natural types or may contain mutations within a range that can achieve the object of the present invention.
  • a polypeptide chain in which EU numbering 435 is His (H) can be used as the first polypeptide chain, and EU numbering 435 is Arg (R) as the second polypeptide chain.
  • a polypeptide chain can be used.
  • EU polypeptide chain in which EU numbering 435 is His (H) and position 436 is Tyr (Y) can be used as such a first polypeptide chain
  • EU polypeptide can be used as a second polypeptide chain
  • a polypeptide chain in which numbering 435 is Arg (R) and 436 is Phe (F) can be used. It should be noted that positions other than EU numbering 435 or 436 may be the same as or different from natural IgG.
  • the increase in the dynamic binding capacity of the Fc region-containing polypeptide to the resin in protein A column chromatography is obtained by changing the Fc region of the Fc region-containing polypeptide that binds to the resin to the first of the Fc regions.
  • the polypeptide chain of the Fc region and the second polypeptide chain of the Fc region can also be achieved by modifying the polypeptide chain of the Fc region and the second polypeptide chain of the Fc region so that the binding force to the resin is different from each other so that they become Fc regions.
  • the increase in the dynamic binding capacity of the Fc region-containing polypeptide to the resin in protein A column chromatography is the same as the Fc region of the Fc region-containing polypeptide that binds to the resin.
  • the first polypeptide chain of the region binds to the resin, but the second polypeptide chain of the Fc region does not bind to the resin or has a weaker bond than the first polypeptide chain,
  • modifications include, for example, specific amino acid residues at specific positions as exemplified above so that the first and second polypeptide chains of the Fc region include CH3 regions as exemplified above.
  • the modification to make is, but not limited to.
  • the region other than the Fc region in the Fc region-containing polypeptide used in the present invention may be homozygous or heterozygous.
  • a homozygote is a homozygote having one or more single or the same antigen-binding activity (that is, when the Fc region-containing polypeptide is an antigen-binding molecule, one or more single or the same antigen An antigen-binding molecule having binding activity, such as an IgG type antibody having two identical antigen-binding sites).
  • the heterozygous is preferably a heterozygote having different antigen-binding activity (that is, the Fc region-containing polypeptide is a bispecific antigen-binding molecule such as a bispecific antibody).
  • the H chain is heterozygous but the L chain may be common, and the common L chain is preferably on both H chains.
  • the bispecific antibody is composed of two common L chains identical to two hetero heavy chains.
  • the binding capacity includes a static binding capacity (Static Binding Capacity, SBC) and a dynamic binding capacity (Dynamic Binding Capacity, DBC).
  • SBC Static Binding Capacity
  • DBC Dynamic Binding Capacity
  • the static binding capacity represents the upper limit amount of the resin that can adsorb the polypeptide
  • the dynamic binding capacity represents the extent to which the polypeptide can be recovered in a state where a solution containing the polypeptide is flowing through the column.
  • the dynamic coupling capacity can be determined by the following method, for example. First, a column packed with resin is loaded into a chromatographic apparatus, and a sample solution containing a polypeptide is passed through the column at a predetermined linear flow rate. Thereafter, the absorbance of the eluate is measured, and the mass of the added polypeptide at the time when the breakthrough (BT) at a predetermined ratio (for example, 5%) of the absorbance of the added sample solution is measured is determined. Can be determined.
  • -LC device AKTA AVANT25 manufactured by GE Healthcare ⁇ Software: Unicorn version6.1 manufactured by GE Healthcare ⁇ Protein A resin: GE Healthcare Mab Select SuRe (Cat No.17-5438-05 ) Or Hitrap Mab Select SuRe (Cat No. 11-0034-93) ⁇ Use buffer solution; Equilibration / pre-washing ... 20 mmol / L Na-phosphate, pH 7.5 Elution ... 50 mmol / L Acetic acid Regeneration ... 0.1 mol / L NaOH
  • the increase in the dynamic binding capacity of the Fc region-containing polypeptide to the protein A resin in protein A column chromatography is at least 5 g / L resin based on 5% BT. Preferably, they are 10 g / L resin or more, 15 g / L resin or more, 20 g / L resin or more, 25 g / L resin or more. In a specific embodiment of the present invention, the increase in the dynamic binding capacity of the Fc region-containing polypeptide to the protein A resin in protein A column chromatography is at a contact time of 3.4 minutes based on 5% BT. , At least 5 g / L resin, preferably 10 g / L resin or more, 15 g / L resin or more, 20 g / L resin or more, 25 g / L resin or more.
  • the dynamic binding capacity of the Fc region-containing polypeptide to the protein A resin in protein A column chromatography is at least 5% BT. It is 45 g / L resin or more, preferably 50 g / L resin or more, 55 g / L resin or more, 60 g / L resin or more. In a specific embodiment of the present invention, according to the method of the present invention, the dynamic binding capacity of the Fc region-containing polypeptide to the protein A resin in protein A column chromatography is at least 5% BT.
  • a contact time of 3.4 minutes it is 50 g / L resin or more, preferably 51 g / L resin or more, 52 g / L resin or more, 53 g / L resin or more, 54 g / L resin or more, 55 g / L More than L resin.
  • the Fc region-containing polypeptide may be one in which the Fc region is bound to another protein, bioactive peptide, or the like.
  • proteins and physiologically active peptides include, but are not limited to, receptors, adhesion molecules, ligands (cytokines, chemokines, etc.) and enzymes.
  • it may be a blood coagulation factor, and examples thereof include FIX, FIXa, and FX.
  • the Fc region-containing polypeptide may be an immunoadhesin.
  • the Fc region-containing polypeptide may be an antibody.
  • the antibody in the present invention is not particularly limited as long as it binds to a desired antigen, and may be a polyclonal antibody or a monoclonal antibody, and a monoclonal antibody is preferable in that a homogeneous antibody can be stably produced.
  • the monoclonal antibodies used in the present invention include not only monoclonal antibodies derived from animals such as humans, mice, rats, hamsters, rabbits, sheep, camels, monkeys, but also chimeric antibodies, humanized antibodies (reshaped humans). Artificially modified recombinant antibodies such as antibodies) and bispecific antibodies are also included.
  • antibody properties may be modified to modify antibody molecule physical properties (specifically, isoelectric point (pI) modification, Fc receptor affinity modification, etc.) for the purpose of improving blood retention and pharmacokinetics.
  • antibody molecule physical properties specifically, isoelectric point (pI) modification, Fc receptor affinity modification, etc.
  • pI isoelectric point
  • Fc receptor affinity modification etc.
  • genetically engineered antibodies in which the constant region and the like are artificially modified.
  • the immunoglobulin class of the antibody used in the present invention is not particularly limited, and may be any class such as IgG1, IgA, IgD, IgE, IgM such as IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, etc. preferable.
  • the antibodies used in the present invention include not only whole antibodies, but also antibody fragments such as Fv, Fab, F (ab) 2, etc., and monovalent or linked antibody variable regions with a linker such as a peptide linker. Also included are low-molecular-weight antibodies such as single-chain Fvs (dibodies such as scFv, sc (Fv) 2 and scFv dimers).
  • a hybridoma producing a monoclonal antibody can be basically produced using a known technique as follows. That is, a desired antigen or a cell expressing the desired antigen is used as a sensitizing antigen and immunized according to a normal immunization method, and the resulting immune cell is fused with a known parent cell by a normal cell fusion method. And can be prepared by screening monoclonal antibody-producing cells (hybridomas) by a normal screening method.
  • the hybridoma can be produced, for example, according to the method of Milstein et al. (Kohler. G. and Milstein, C., Methods Enzymol.
  • the amino acid residue can be modified by modifying one or a plurality of bases in a DNA encoding a polypeptide and expressing the DNA in a host cell as described later.
  • a person skilled in the art can easily determine the number, position, and type of bases to be modified according to the type of amino acid residue after modification.
  • alteration means any one of substitution, deletion, addition, insertion, or a combination thereof.
  • the antibody used in the present invention may further contain additional modifications in addition to the above-described amino acid sequence modifications. Additional alterations can be selected from, for example, any of amino acid substitutions, deletions, and modifications, or combinations thereof. Specifically, any polypeptide containing the following modifications in its amino acid sequence is included in the present invention.
  • human lymphocytes are sensitized with a desired antigen or cells expressing the desired antigen in vitro, and the sensitized lymphocytes are fused with human myeloma cells to obtain a desired human antibody having binding activity to the antigen.
  • a desired human antibody can be obtained by immunizing a transgenic animal having all repertoires of human antibody genes with an antigen.
  • a technique for obtaining a human antibody by panning using a human antibody library is also known.
  • a human antibody can be obtained by expressing a variable region of a human antibody as a single chain antibody (scFv) on the surface of the phage by the phage display method and selecting a phage that binds to the antigen.
  • scFv single chain antibody
  • Such human antibodies are also included in the antibodies used in the present invention.
  • an antibody gene is once isolated and introduced into a suitable host to produce an antibody, a combination of a suitable host and an expression vector can be used.
  • eukaryotic cells are used as hosts, animal cells, plant cells, and fungal cells can be used. Examples of animal cells include mammalian cells such as CHO, COS, myeloma, BHK (baby hamster kidney), HeLa, and Vero. Etc. can be used.
  • An antibody can be obtained by introducing a desired antibody gene into these cells by transformation and culturing the transformed cells in vitro.
  • the antigen of the antibody used in the present invention is not particularly limited, and any antigen may be used.
  • an antigen for example, a ligand (cytokine, chemokine, etc.), a receptor, a cancer antigen, an MHC antigen, a differentiation antigen, an immunoglobulin and an immune complex partially containing an immunoglobulin are preferably exemplified.
  • a ligand cytokine, chemokine, etc.
  • a receptor a cancer antigen
  • an MHC antigen an MHC antigen
  • a differentiation antigen an immunoglobulin and an immune complex partially containing an immunoglobulin
  • an immunoglobulin and an immune complex partially containing an immunoglobulin are preferably exemplified.
  • it may be a blood coagulation factor, and examples thereof include FIX, FIXa, and FX.
  • the expression product is recovered when the polypeptide is secreted into the medium. If the polypeptide is produced intracellularly, the cell is first lysed and then the polypeptide is recovered.
  • ammonium sulfate or ethanol precipitation acid extraction, anion or cation exchange chromatography, phosphocellulose chromatography, hydrophobic interaction chromatography, affinity chromatography, hydroxylapatite chromatography
  • Known methods including graphy and lectin chromatography can be used.
  • protein A affinity chromatography is preferred.
  • a purification method using a column, a separation method using a column, and chromatography may be used synonymously.
  • Examples of the column using protein A resin include, but are not limited to, POROS A (manufactured by Applied Biosystems), rProtein A Sepharose F. F. (manufactured by GE), ProSep vA (manufactured by Millipore) and the like.
  • a resin (resin) obtained by binding a ligand whose amino acid sequence or the like is modified from intact protein A can be used for protein A affinity chromatography. Even when such a modified protein A resin is used, the amino acid modification of the present invention causes a difference in the binding strength, and the target polypeptide multimer can be separated and purified.
  • Examples of the resin to which the modified protein A is bound include mabSelect SuRE (manufactured by GE Healthcare) Hitrap MabSelect Sure (manufactured by GE Healthcare), but are not limited thereto.
  • a column filled with protein A resin, a column using protein A resin, a protein A resin column, and a protein A column are synonymous.
  • a purification method using a protein A resin and a purification method using a protein A column may be used synonymously.
  • One embodiment of the present invention is a method for purifying an Fc region-containing polypeptide using a method for increasing the dynamic binding capacity of an Fc region-containing polypeptide to a protein A resin in protein A column chromatography. More specifically, one embodiment is a method for purifying an antibody, and another embodiment is a method for purifying a bispecific antibody.
  • Another embodiment of the present invention is an Fc region-containing polypeptide purified by the purification method. More specifically, one embodiment is an antibody purified by the purification method, and another embodiment is a bispecific antibody purified by the purification method.
  • another embodiment of the present invention is a protein A resin to which an Fc region-containing polypeptide is bound, which is 45 g / L resin or more with respect to 5% BT, and a column containing the resin.
  • the dynamic binding capacity of the Fc region-containing polypeptide to the resin and the column containing the same is preferably 50 g / L or more, 55 g / L or more, 60 g / L or more, preferably 5% BT. 65 g / L or more.
  • a specific embodiment of the present invention has a dynamic binding capacity of 50 g of the Fc region-containing polypeptide for protein A resin in protein A column chromatography at a contact time of 3.4 minutes when viewed on the basis of 5% BT.
  • the dynamic binding capacity of the Fc region-containing polypeptide to the resin and the column containing the same is preferably 51 g / L resin or more and 52 g / L resin at a contact time of 3.4 minutes, based on 5% BT. More than 53 g / L resin, more than 54 g / L resin, more than 55 g / L resin.
  • One embodiment of the present invention is an Fc region-containing polypeptide having an increased dynamic binding capacity for protein A resin in protein A column chromatography. More specifically, in one embodiment, the Fc region-containing polypeptide is an antibody, and in another embodiment, the Fc region-containing polypeptide is a bispecific antibody. In one embodiment of the present invention, the increase in the dynamic binding capacity of the Fc region-containing polypeptide to the protein A resin in protein A column chromatography is at least 5 g / L resin based on 5% BT. Preferably, they are 10 g / L resin or more, 15 g / L resin or more, 20 g / L resin or more, 25 g / L resin or more.
  • the increase in the dynamic binding capacity of the Fc region-containing polypeptide to the protein A resin in protein A column chromatography is at a contact time of 3.4 minutes based on 5% BT. , At least 5 g / L resin, preferably 10 g / L resin or more, 15 g / L resin or more, 20 g / L resin or more, 25 g / L resin or more.
  • the Fc region-containing polypeptide having an increased dynamic binding capacity to the protein A resin has the first polypeptide chain and the second polypeptide chain contained in the Fc region bound to the protein A resin.
  • the second polypeptide chain is a protein that is less protein than the first polypeptide chain.
  • Polypeptide chains that bind weakly or not to the A-resin can be used.
  • a polypeptide chain containing CH3 of IgG1, IgG2, or IgG4 can be used as such a first polypeptide chain, and a polypeptide chain containing CH3 of IgG3 can be used as a second polypeptide chain .
  • IgG1, IG2, IgG3, and IgG4 may be natural types or may contain mutations within a range that can achieve the object of the present invention.
  • a polypeptide chain in which EU numbering 435 is His (H) can be used as the first polypeptide chain, and EU numbering 435 is Arg (R) as the second polypeptide chain.
  • a polypeptide chain can be used.
  • a polypeptide chain in which EU numbering 435 is His (H) and position 436 is Tyr (Y) can be used as such a first polypeptide chain, and EU polypeptide can be used as a second polypeptide chain.
  • a polypeptide chain in which numbering 435 is Arg (R) and 436 is Phe (F) can be used. It should be noted that positions other than EU numbering 435 or 436 may be the same as or different from natural IgG.
  • One embodiment of the present invention is a method for producing an Fc region-containing polypeptide using a protein A resin, comprising the following steps: (A) a step of preparing a first polypeptide chain and a second polypeptide chain of the Fc region having different binding forces to the resin; (B) The dynamic binding capacity of the Fc region-containing polypeptide in step (a) to protein A resin in protein A column chromatography is the same as the binding force to the resin in protein A column chromatography.
  • a first polypeptide chain that binds to the resin is prepared as the first polypeptide chain of the Fc region, and the second polypeptide chain of the Fc region does not bind to the resin.
  • it may be a step of preparing a second polypeptide chain having a weak bond (to the resin as compared to the first polypeptide chain).
  • the Fc region of the Fc region-containing polypeptide to be purified is bound to the first polypeptide chain of the Fc region, and the second polypeptide chain of the Fc region is bound to the resin.
  • the modification is not particularly limited as long as it is a modification for obtaining an Fc region having the above-mentioned characteristics.
  • the first polypeptide chain is a polypeptide chain containing CH3 of IgG1, IgG2, or IgG4.
  • Such modifications include, for example, that EU numbering 435 of the first polypeptide chain is His (H) and EU numbering 435 of the second polypeptide chain is Arg (R). Modifications can be mentioned.
  • EU numbering 435 of the first polypeptide chain is His (H)
  • Tyr (Y) is 436
  • EU numbering 435 of the second polypeptide chain is Arg (R )
  • a modification that causes position 436 to be Phe (F) may be the same as or different from natural IgG.
  • the two polypeptide chains may be any polypeptide chain as long as the binding force to the resin is substantially the same, and the degree of homology between the two polypeptide chains is high. May be low.
  • an Fc region-containing polypeptide comprising two polypeptide chains that have substantially the same binding force to the resin is an Fc region-containing polypeptide comprising two of the first polypeptide chains, or two An Fc region-containing polypeptide comprising the second polypeptide chain of the book.
  • two polypeptide chains having substantially the same binding force to protein A resin are, for example, a polypeptide in which each of the two polypeptide chains contains any of CH1, IgG1, IgG2 or IgG4.
  • Peptide chain two polypeptide chains are both polypeptide chains containing IgG3 CH3, EU numbering at position 435 of both polypeptide chains is His (H), or both are Arg (R) Both polypeptide chain and two polypeptide chains are EU numbering 435 position His (H), position 436 is Tyr (Y) polypeptide chain and both polypeptide chains position EU numbering 435 Is a polypeptide chain in which Arg (R) and position 436 are Phe (F). “Substantially the same” does not necessarily have to be exactly the same as long as the object of the present invention is achieved, and includes the “same” case.
  • “compare” in the step (b) means that the dynamic binding capacity of the Fc region-containing polypeptide of the step (a) to the protein A resin in protein A column chromatography is In protein A column chromatography, confirm that the Fc region-containing polypeptide containing two polypeptide chains that have substantially the same binding force to the resin is higher than the dynamic binding capacity to the protein A resin. It may be a process. In addition, by comparing or confirming the dynamic binding capacity, it is possible to know the maximum amount of antibody that can be added to the protein A resin column during antibody production, and efficient antibody production becomes possible.
  • the sample described in the step (c) includes both the H chain of the polypeptide containing the first polypeptide chain of the Fc region and the H chain of the polypeptide containing the second polypeptide chain of the Fc region.
  • a common L chain polypeptide capable of conferring binding ability to may be included, or two different L chain polypeptides may be included.
  • the Fc region-containing polypeptide in the method for purifying the Fc region-containing polypeptide, is an antibody, and in another embodiment, the Fc region-containing polypeptide is a bispecific antibody. It is.
  • the steps (a) to (d) are not necessarily in this order, and each step may be included a plurality of times.
  • One embodiment of the present invention is a method for purifying an Fc region-containing polypeptide using a protein A resin, comprising the steps (a) to (d).
  • Example 1 Preparation of antibody gene expression vector and expression of each antibody
  • anti-FIXa / FX bispecific antibody H1 chain / H2 chain / L chain having FVIII function alternative activity described in WO2012 / 067176 : SEQ ID NO: 1/2/3)
  • BiAb anti-FIXa / FX bispecific antibody having FVIII function alternative activity described in WO2012 / 067176 : SEQ ID NO: 1/2/3)
  • the BiAb is composed of three types of four chains, each of two types of H1 and H2 chains and one type of two common L chains.
  • the antibody was obtained by the method described in WO2012 / 067176.
  • the bispecific antibody was expressed by integrating the antibody gene into an animal cell expression vector and transfecting it into CHO cells.
  • Q homo consisting of the two L chains and two H1 chains and J homo consisting of the two L chains and two H2 chains were obtained by the above method.
  • This antibody is of the IgG4 type, and His at the 435th EU numbering in the Fc region of the H1 chain is substituted with Arg. This substitution reduces or loses the binding force of the Fc region to protein A resin.
  • Example 2 Evaluation Method of Dynamic Binding Capacity (DBC) In general, for DBC verification, the breakthrough curve shows how continuously loaded protein leaks from the column by UV monitoring using a purification device connected with a UV detector. (Hereinafter referred to as BTC). As an example, FIG. 1 shows a BTC chromatogram when BiAb is used. This time, DBC was evaluated by comparing the load of 5% breakthrough point (BT point) for each antibody molecule and its mixture. The following devices were used for DBC calculation.
  • BTC Dynamic Binding Capacity
  • Example 3 DBC of each antibody molecule alone
  • MSS Hitrap MabSelect Sure (hereinafter referred to as MSS) (GE Healthcare)
  • MSS Hitrap MabSelect Sure
  • Load material IgG concentration of actual load CM using each antibody purification standard, Simulating pH and conductivity. IgG concentration approx. 2 g / L, pH 7.5, Conductivity 1.2 S / m J homo approx. 80%, Q homo approx. 85%, BiAb approx. 95% purity
  • Contact time 3.4min (43.75 cm / h) The results are shown in Table 1.
  • Example 4 (Verification of pH and contact time of BiAb against DBC) Next, the BiAb alone was used to confirm the DBC when the pH of the loading solution and the contact time with the resin were changed, and the effects of both parameters were verified. The conditions are shown below. ⁇ Column: MabSelect Sure (GE Healthcare), 1.0 x 20 cm ⁇ Load material: Diluted BiAb purified sample and imitating CM (BiAb 95%) 2g / L, pH6.5-8.0 (verification), Conductivity 1.2 S / m ⁇ Contact time: 3-8 min (verification) The results are shown in Table 2.
  • Example 5 (DBC in BiAb and Homo mixture)
  • HCCF culture supernatant
  • both homo are regarded as BiAb competitors. Therefore, in view of actual production, it is meaningful to verify the DBA of BiAb in a situation where both homo are present to some extent in the HCCF. In order to verify this, the test was conducted under the following conditions.
  • HPLC apparatus Alliance 2695/2487 made by Waters ⁇ Software: Empower3 made by Waters ⁇ CIEC column: Thermo Scientific ProPac WCX-10, Product No.054993 Column temperature: 30 degC ⁇ Injection amount: 30 ⁇ g / shot ⁇ Use buffer solution; Mobile phase A ... 9.6 mmol / L Tris, 6.0 mmol / L piperazine, 11.0 mmol / L imidazole, pH 6.0 Mobile phase B ...
  • J homo has two sequences that bind strongly to the MSS ligand, so it binds to the MSS resin at two locations. In other words, the MSS ligand existing within the range occupied by J homo is not usable.
  • BiAb since BiAb has only one sequence that strongly binds to MSS, it has a higher degree of spatial freedom than J homo, and it is considered that high DBC could be realized by utilizing more MSS ligands.
  • the low DBC of Q homo is thought to be due to the low binding force of the molecule as a whole. Q homo and J homo are thought to competitively inhibit the binding of BiAb to MSS.

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Abstract

Fc領域含有ポリペプチドのFc領域を、Fc領域の第一のポリペプチド鎖はプロテインAレジンに結合するが、Fc領域の第二のポリペプチド鎖は前記レジンに結合しないか若しくは結合が弱いFc領域とすることによって、前記レジン体積当たりの前記Fc領域含有ポリペプチドの結合量が増加し、前記Fc領域含有ポリペプチドのより効率的な精製が可能となることを見出した。

Description

Ｆｃ領域含有ポリペプチドの精製を効率化するための方法
　本発明はプロテインAカラムクロマトグラフィーにおける、Fc領域含有ポリペプチドのプロテインAレジンに対する動的結合容量を増加させる方法及びその方法を用いた精製方法等に関する。
　抗体医薬品の製造において、プロテインAカラム、イオン交換カラムなどを用いた精製工程は、抗体の製造効率（収率）を大きく左右することから、その効率化が望まれている。効率化を図るための手段として、（１）樹脂単位体積当たりの結合容量を上げる、（２）高流速処理により、精製に要する時間を短縮する、の2通りの方法がある。
　近年、プロテインAレジンの改良が進み、プロテインAレジンにはより多くの抗体が結合できるようになり、それに伴い抗体精製の効率化が図られてきた。例えば、代表的な第一世代プロテインAレジンであるGEヘルスケア社製rProtein A sepharose Fast Flowでは、通常抗体の結合容量は15-20 g/L resinであるのに対し、同社製第二世代プロテインAレジンであり、現在世界的にもっとも使用されているMab Select SuReでは、一般的に約30 g/L resinの結合容量が認められている。加えて、前者に対して後者は1.5-2倍程度高い線流速に対応可能であり、より効率的な抗体分子のプロテインA精製が可能となっている。
　二重特異性抗体は異なる二種類の抗原を認識する性質上、二種類のH鎖を有している。そのため、二重特異性抗体を含む培養上清には、二種類のH鎖を含む二重特異性抗体のみならず、一種類のH鎖のみを有する抗体も含まれている。これらと二重特異性抗体を分離するべく、プロテインAレジンへの結合力を変化させたFc領域変異体が用いられている（特許文献１、特許文献２）。このような分子改変の影響により、二重特異性抗体のプロテインA精製が非効率になることが懸念された。
　以上のような状況下、プロテインAレジンカラムを用いた二重特異性抗体精製をより効率的に行うための新たな方策が望まれていた。
US20100331527 US20130018174
　本発明の目的は、Fc領域含有ポリペプチド、特に二重特異性抗体をプロテインAレジンカラムを用いてより効率的に精製するための方法を提供することである。
　上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、本発明者らは、Fc領域を、該Fc領域の第一のポリペプチド鎖と該Fc領域の第二のポリペプチド鎖のプロテインAレジンへの結合力が互いに異なる、Fc領域とすることで、抗体の動的結合容量が高まり、抗体の精製効率が増加することを見出し、本発明を完成した。
　すなわち、本発明は以下のものを提供する。
〔１〕プロテインAカラムクロマトグラフィーにおける、Fc領域含有ポリペプチドのプロテインAレジンに対する動的結合容量を増加させる方法。
〔２〕前記Fc領域の第一のポリペプチド鎖及び第二のポリペプチドとして前記レジンへの結合力が互いに異なる第一のポリペプチド鎖及び第二のポリペプチド鎖を用意する工程を含む、〔１〕に記載の方法。
〔３〕前記Fc領域の第一のポリペプチド鎖として前記レジンに結合する第一のポリペプチド鎖を用意し、前記Fc領域の第二のポリペプチド鎖として前記レジンに結合しないか若しくは（前記第一のポリペプチド鎖に比べ前記レジンへの）結合が弱い第二のポリペプチド鎖を用意する工程を含む、〔１〕または〔２〕に記載の方法。
〔４〕前記Fc領域含有ポリペプチドのFc領域を、該Fc領域の第一のポリペプチド鎖は前記レジンに結合するが、該Fc領域の第二のポリペプチド鎖は前記レジンに結合しないか若しくは（前記第一のポリペプチド鎖に比べ前記レジンへの）結合が弱い、Fc領域となるよう改変する工程を含む、〔１〕～〔３〕のいずれかに記載の方法。
〔５〕前記Fc領域の第一のポリペプチド鎖はIgG1、IgG2又はIgG4のCH3を含み、前記Fc領域の第二のポリペプチド鎖はIgG3のCH3を含む、〔１〕～〔４〕のいずれかに記載の方法。
〔６〕前記Fc領域の第一のポリペプチド鎖のEUナンバリング435番目のアミノ酸はHisであり、第二のポリペプチド鎖のEUナンバリング435番目アミノ酸はArgである、〔１〕～〔５〕のいずれかに記載の方法。
〔７〕前記結合容量の増加が５ g/Lレジン以上である、〔１〕～〔６〕のいずれかに記載の方法。
〔８〕前記増加後の動的結合容量が４５ g/Lレジン以上である、〔１〕～〔７〕のいずれかに記載の方法。
〔９〕前記Fc領域含有ポリペプチドが抗体である、〔１〕～〔８〕のいずれかに記載の方法。
〔１０〕前記抗体が二重特異性抗体である、〔９〕に記載の方法。
〔１１〕〔１〕～〔１０〕に記載の方法を用いたFc領域含有ポリペプチドの精製方法。
〔１２〕〔１１〕に記載の方法で精製されたFc領域含有ポリペプチド。
〔１３〕プロテインAカラムクロマトグラフィーにおけるFc領域含有ポリペプチドのプロテインAレジンに対する動的結合容量が４５ g/Lレジン以上である、Fc領域含有ポリペプチドが結合したプロテインAレジン。
〔１４〕プロテインAカラムクロマトグラフィーにおける、プロテインAレジンに対する動的結合容量が増加したFc領域含有ポリペプチド。
〔１５〕以下の工程を含む、プロテインAレジンを用いてFc領域含有ポリペプチドを製造する方法：
　（a）該レジンへの結合力が互いに異なるFc領域の第一のポリペプチド鎖と第二のポリペプチド鎖とを用意する工程、
　（b）プロテインAカラムクロマトグラフィーにおける、工程（a）の該Fc領域含有ポリペプチドのプロテインAレジンに対する動的結合容量を、プロテインAカラムクロマトグラフィーにおける、該レジンへの結合力が実質的に同じである２本のポリペプチド鎖を含む Fc領域含有ポリペプチドのプロテインAレジンに対する動的結合容量と比較する工程、
　（c）Fc領域の第一のポリペプチド鎖を含有するポリペプチドおよびFc領域の第二のポリペプチド鎖を含有するポリペプチドを含む試料を該レジンに接触させる工程；ならびに
　（d）該レジンに結合した、Fc領域の第一のポリペプチド鎖を含有するポリペプチドおよびFc領域の第二のポリペプチド鎖を含有するポリペプチドのヘテロ体を含有するFc領域含有ポリペプチドを回収する工程。
〔１６〕前記工程（a）が、前記Fc領域の第一のポリペプチド鎖として前記レジンに結合する第一のポリペプチド鎖を用意し、前記Fc領域の第二のポリペプチド鎖として前記レジンに結合しないか若しくは（前記第一のポリペプチド鎖に比べ前記レジンへの）結合が弱い第二のポリペプチド鎖を用意する工程である、〔１５〕に記載の方法
〔１７〕前記工程（a）が、精製対象である前記Fc領域含有ポリペプチドのFc領域を、該Fc領域の第一のポリペプチド鎖は前記レジンに結合するが、該Fc領域の第二のポリペプチド鎖は前記レジンに結合しないか若しくは（前記第一のポリペプチド鎖に比べ前記レジンへの）結合が弱い、Fc領域となるよう改変する工程である、〔１５〕または〔１６〕に記載の方法。
〔１８〕前記工程（c）に記載の試料が、前記Fc領域の第一のポリペプチド鎖を含有するポリペプチドおよび前記Fc領域の第二のポリペプチド鎖を含有するポリペプチドの両方に結合能を与え得る共通のL鎖ポリペプチドを含む、〔１５〕～〔１７〕のいずれかに記載の方法。
〔１９〕前記Fc領域含有ポリペプチドが抗体である、〔１１〕に記載の精製方法。
〔２０〕前記抗体が二重特異性抗体である、〔１９〕に記載の精製方法。
〔２１〕〔１９〕に記載の方法で精製された抗体。
〔２２〕〔２０〕に記載の方法で精製された二重特異性抗体。
〔２３〕〔１３〕に記載のレジンを含むカラム。
　本発明により、Fc領域含有ポリペプチド、特に二重特異性抗体をプロテインAレジンを用いてより効率的に精製するための方法が提供された。
BiAb溶液をプロテインAレジンカラムに継続負荷した際にカラムから漏出したタンパク質を検出したブレークスルーカーブクロマトグラムを示す図である。
　以下、本発明を詳細に説明する。
　本発明で使用されるFc領域含有ポリペプチドは抗体のFc領域を含んでいればよく、Fc領域と他のポリペプチドが融合したポリペプチド、例えば抗体などが含まれる。
　本発明におけるポリペプチドとは、通常、１０アミノ酸程度以上の長さを有するペプチド、およびタンパク質を指す。また、通常、生物由来のポリペプチドであるが、特に限定されず、例えば、人工的に設計された配列からなるポリペプチドであってもよい。また、天然ポリペプチド、あるいは合成ポリペプチド、組換えポリペプチド等のいずれであってもよい。
　「Fc領域」は、通常、抗体分子中の、ヒンジ部若しくはその一部、CH2ドメイン、CH3ドメインからなるポリペプチド鎖を二本含む領域のことをいうが、特にこれに限定されず、ヒンジ部若しくはその一部が含まれない場合もある。ヒトIgGクラスのFc領域は、KabatのEU ナンバリングで、例えば226番目のシステインからC末端、あるいは230番目のプロリンからC末端までを意味するが、これに限定されない。またヒトCH2ドメインはKabatのEU ナンバリングで231番目から340番目を意味し、ヒトCH3ドメインはKabatのEU ナンバリングで341番目から447番目を意味するが、これに限定されない。
　Fc領域は、IgG1、IgG2、IgG3、Fc領域含有モノクローナル抗体等をペプシン等の蛋白質分解酵素にて部分消化した後に、プロテインAレジンに吸着された画分を再溶出することによって好適に取得され得る。かかる蛋白質分解酵素としてはpH等の酵素の反応条件を適切に設定することにより制限的にFabやF(ab')2を生じるように全長抗体を消化し得るものであれば特段の限定はされず、例えば、ペプシンやパパイン等が例示できる。
　Fc領域としてはヒトIgGタイプのFcを挙げることができ、例えばIgG1、IgG2、IgG3、IgG4のアイソタイプのいずれであってもよい。
　本発明のFc領域は、第一の前記ポリペプチド鎖及び第二の前記ポリペプチド鎖を含む。
　本発明の一つの実施形態は、プロテインAカラムクロマトグラフィーにおける、Fc領域含有ポリペプチドのプロテインAレジンに対する動的結合容量を増加させる方法である。Fc領域に含まれる第一のポリペプチド鎖と第二のポリペプチド鎖はプロテインAレジンへの結合力が互いに異なっていることが好ましく、例えば、第一のポリペプチド鎖としてプロテインAレジンに結合するポリペプチド鎖を用いる場合、第二のポリペプチド鎖としては第一のポリペプチド鎖に比べ、プロテインAレジンに弱く結合するか、若しくは結合しないポリペプチド鎖を用いることが出来る。そのような第一のポリペプチド鎖としてはIgG1、IgG2又はIgG4のCH3を含むポリペプチド鎖を用いることができ、第二のポリペプチド鎖としてはIgG3のCH3を含むポリペプチド鎖を用いることができる。この際、IgG1、IG2、IgG3及びIgG4は天然型でもよく、本発明の目的を達成できる範囲で変異を含んでいてもよい。また、そのような第一のポリペプチド鎖としてはEUナンバリング435位がHis（H）であるポリペプチド鎖を用いることができ、第二のポリペプチド鎖としてはEUナンバリング435位がArg（R）であるポリペプチド鎖を用いることができる。また、そのような第一のポリペプチド鎖としてはEUナンバリング435位がHis（H）、436位がTyr(Y)であるポリペプチド鎖を用いることができ、第二のポリペプチド鎖としてはEUナンバリング435位がArg（R）、436位がPhe(F)であるポリペプチド鎖を用いることができる。尚、EUナンバリング435位又は436位以外のポジションは天然型IgGと同じであってもよく、また天然型IgGとは異なっていてもよい。
　本実施形態において、プロテインAカラムクロマトグラフィーにおける、Fc領域含有ポリペプチドの前記レジンに対する動的結合容量の増加は、前記レジンに結合するFc領域含有ポリペプチドのFc領域を、該Fc領域の第一のポリペプチド鎖と該Fc領域の第二のポリペプチド鎖の前記レジンへの結合力が互いに異なる、Fc領域となるように改変することによっても達成することができる。
　本発明の別の実施形態において、プロテインAカラムクロマトグラフィーにおける、Fc領域含有ポリペプチドの前記レジンに対する動的結合容量の増加は、前記レジンに結合するFc領域含有ポリペプチドのFc領域を、該Fc領域の第一のポリペプチド鎖は前記レジンに結合するが、該Fc領域の第二のポリペプチド鎖は前記レジンに結合しないか若しくは前記第一のポリペプチド鎖に比べ結合が弱い、Fc領域となるように改変することによっても達成することができる。
　当該改変としては、Fc領域の第一および第二のポリペプチド鎖が上に例示したようなCH3領域を含むように、例えば上に例示したような特定の位置における特定のアミノ酸残基を含むようにする改変が挙げられるが、それらに限定されない。
　一方、本発明で使用されるFc領域含有ポリペプチドにおけるFc領域以外の領域は、ホモ体であってもよいし、ヘテロ体であってもよい。
　ホモ体としては、一又は二以上の単一又は同じ抗原結合活性を有するホモ体である（すなわち、当該Fc領域含有ポリペプチドが抗原結合分子である場合、一又は二以上の単一又は同じ抗原結合活性を有する抗原結合分子、例えば同一の二つの抗原結合部位を有するIgG型抗体である）。
　ヘテロ体としては、好ましくは、異なる抗原結合活性を有するヘテロ体である（すなわち、当該Fc領域含有ポリペプチドが二重特異性抗原結合分子、例えば二重特異性抗体である）。本発明で使用されるFc領域含有ポリペプチドが二重特異性抗体である場合、H鎖はヘテロ体であるがL鎖は共通であってもよく、当該共通L鎖は好ましくは両H鎖に結合能を与え得る共通L鎖である。尚、二重特異性抗体はIgG型の場合、ヘテロなH鎖二本と同一の共通L鎖二本から構成される。
　結合容量には、静的結合容量（Ｓｔａｔｉｃ　Ｂｉｎｄｉｎｇ　Ｃａｐａｃｉｔｙ、ＳＢＣ）と動的結合容量（Ｄｙｎａｍｉｃ　Ｂｉｎｄｉｎｇ　Ｃａｐａｃｉｔｙ、ＤＢＣ）がある。静的結合容量は、レジンがポリペプチドを吸着できる上限の量を表し、動的結合容量は、カラムにポリペプチドを含む溶液を流している状態で、ポリペプチドを回収できる程度を表す。動的結合容量が大きいレジンでは、高線流速においてもポリペプチドを効率よく吸着でき、短時間でポリペプチドを精製することができる。
　動的結合容量（ＤＢＣ）は、例えば以下の方法で決定することができる。まずレジンを充填したカラムをクロマト装置に装填して、カラムにポリペプチドを含むサンプル溶液を所定の線流速で通液する。その後、溶出液の吸光度を測定し、添加したサンプル溶液の吸光度の所定の割合（例えば５％）のブレークスルー（BT）が測定された時点の添加ポリペプチドの質量を特定することで、ＤＢＣを決定することができる。
　DBCの計算には、例えば以下の装置等を用いることができる。
 ・LC装置；GEヘルスケア社製AKTA AVANT25
 ・ソフトウェア；GEヘルスケア社製Unicorn version6.1
 ・Protein A樹脂；GEヘルスケア社製Mab Select SuRe (Cat No.17-5438-05
　　　　　　　　　)またはHitrap Mab Select SuRe (Cat No. 11-0034-93)
 ・使用緩衝液；
　　　　平衡化/前洗浄...20 mmol/L Na-phosphate, pH 7.5
　　　　溶出...50 mmol/L Acetic acid
　　　　再生...0.1 mol/L NaOH
　DBCの計算方法は以下の通りに行うことができる。
　上記使用機器、ソフトウェア、及び樹脂を用いて、以下の手順でクロマトグラフィー操作によりDBCを算出する。以下に５%BTを指標とする場合の計算方法を示す。
　(1) 負荷画分（IgG濃度P g/Lとする）をいったんカラムを通さずにLC装置に流し、100％漏出（＝100％BT）時のOD280 nmの値を確認した。この値をaとする。
　(2) aに0.05を掛けた値を、5％BT時のOD280 nm定義する。この値をb5%とする。
　(3) 負荷画分を平衡化された一定量の樹脂(r Lとする)に流し続け、OD280 nmの値がb5%となった時の負荷画分の容量をクロマトグラムから読み取る。この値をc5% Lとする。
　(4) 計算式(P x c5%)/rで得られる値を、5%BT時の動的結合容量、DBC5%として算出する。
　　　DBC5% = (P x c5%)/r (単位；g/L resin)
DBC10%を求める際は、同じ要領でc10％を求め、算出することができる。
　本発明の一つの実施形態において、プロテインAカラムクロマトグラフィーにおける、Fc領域含有ポリペプチドのプロテインAレジンに対する動的結合容量の増加分は、5％BTを基準に見ると、少なくとも5 g/Lレジンであり、好ましくは10 g/Lレジン以上、15 g/Lレジン以上、20 g/Lレジン以上、25 g/Lレジン以上である。
　本発明の特定の実施形態において、プロテインAカラムクロマトグラフィーにおける、Fc領域含有ポリペプチドのプロテインAレジンに対する動的結合容量の増加分は、5％BTを基準にみると接触時間３．４分において、少なくとも5 g/Lレジンであり、好ましくは10 g/Lレジン以上、15 g/Lレジン以上、20 g/Lレジン以上、25 g/Lレジン以上である。
　本発明の一つの実施形態において、本発明の方法によれば、プロテインAカラムクロマトグラフィーにおける、Fc領域含有ポリペプチドのプロテインAレジンに対する動的結合容量は少なくとも、5%BTを基準に見ると、45 g/Lレジン以上であり、好ましくは50 g/Lレジン以上、55 g/Lレジン以上、60 g/Lレジン以上である。
　本発明の特定の実施形態において、本発明の方法によれば、プロテインAカラムクロマトグラフィーにおける、Fc領域含有ポリペプチドのプロテインAレジンに対する動的結合容量は少なくとも、5%BTを基準に見ると、接触時間３．４分において、50 g/Lレジン以上であり、好ましくは51 g/Lレジン以上、52 g/Lレジン以上、53 g/Lレジン以上、54 g/Lレジン以上、55 g/Lレジン以上である。
　本発明の一つの実施形態において、Fc領域含有ポリペプチドは、Fc領域と、他のタンパク質、生理活性ペプチドなどとが結合したものであってよい。他のタンパク質、生理活性ペプチドとしては、例えば受容体、接着分子、リガンド（サイトカイン、ケモカインなど）、酵素が挙げられるが、これらに限定されるものではない。例えば、血液凝固因子であってもよく、例えばFIX、FIXa、FXなどが挙げられる。
　本発明の一つの実施形態において、Fc領域含有ポリペプチドはイムノアドヘシンであってもよい。
　本発明の別の一つの実施形態において、Fc領域含有ポリペプチドは、抗体であってもよい。本発明における抗体は、所望の抗原と結合する限り特に制限はなく、ポリクローナル抗体であってもモノクローナル抗体であってもよく、均質な抗体を安定に生産できる点でモノクローナル抗体が好ましい。
　本発明で使用されるモノクローナル抗体としては、ヒト、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ヒツジ、ラクダ、サル等の動物由来のモノクローナル抗体だけでなく、キメラ抗体、ヒト化抗体（再構成（reshaped）ヒト抗体ともいう）、二重特異性抗体（bispecific抗体）など人為的に改変した遺伝子組み換え型抗体も含まれる。さらに、血中滞留性や体内動態の改善を目的とした抗体分子の物性の改変（具体的には、等電点（pI）改変、Fc受容体の親和性改変等）を行うために抗体の定常領域等を人為的に改変した遺伝子組み換え型抗体も含まれる。
　また、本発明で使用される抗体の免疫グロブリンクラスは特に限定されるものではなく、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4などのIgG、IgA、IgD、IgE、IgMなどいずれのクラスでもよいが、IgGが好ましい。
　さらに本発明で使用される抗体には、wholeの抗体だけでなく、Fv、Fab、F(ab)2などの抗体断片や、抗体の可変領域をペプチドリンカー等のリンカーで結合させた1価または2価以上の一本鎖Fv（scFv、sc(Fv)2やscFvダイマーなどのDiabody等）などの低分子化抗体なども含まれる
　上述した本発明で使用される抗体は、当業者に周知の方法により作製することができる。
　モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマは、基本的には公知技術を使用し、以下のようにして作製できる。すなわち、所望の抗原や所望の抗原を発現する細胞を感作抗原として使用して、これを通常の免疫方法にしたがって免疫し、得られる免疫細胞を通常の細胞融合法によって公知の親細胞と融合させ、通常のスクリーニング法により、モノクローナルな抗体産生細胞（ハイブリドーマ）をスクリーニングすることによって作製できる。ハイブリドーマの作製は、たとえば、ミルステインらの方法（Kohler. G. and Milstein, C., Methods Enzymol. (1981) 73: 3-46 ）等に準じて行うことができる。
　アミノ酸残基の改変は、後述のようにポリペプチドをコードするDNAにおいて1又は複数の塩基を改変し、当該DNAを宿主細胞で発現させることによって行うことが出来る。当業者であれば、改変後のアミノ酸残基の種類に応じて、改変すべき塩基の数や位置、種類を容易に決定することが出来る。
　本発明において改変とは、置換、欠損、付加、挿入のいずれか、又はそれらの組み合わせを意味する。
　また本発明で使用される抗体は、上述のアミノ酸配列の改変に加え、更に付加的な改変を含むことができる。付加的な改変は、たとえば、アミノ酸の置換、欠損、及び修飾のいずれか、あるいはそれらの組み合わせから選択することができる。具体的には、そのアミノ酸配列に次のような改変を含むポリペプチドは、いずれも本発明に含まれる。
・二重特異性抗体の2種類のH鎖のヘテロ会合率を高めるためのアミノ酸の改変
・第１の抗原結合活性を有するポリペプチドと第2の抗原結合活性を有する又は抗原結合活性を有しないポリペプチド間のジスルフィド結合を安定化させるためのアミノ酸改変
・抗体の血漿中滞留性を改善するためのアミノ酸改変
・酸性条件下における安定性向上のための改変
・ヘテロジェニティー低減のための改変
・脱アミド化反応抑制のための改変
・2種類のポリペプチド間に等電点の差異を導入するための改変
・Fcγレセプターへの結合性を変化させるための改変
　ヒト抗体の取得方法も知られている。例えば、ヒトリンパ球をin vitroで所望の抗原または所望の抗原を発現する細胞で感作し、感作リンパ球をヒトミエローマ細胞と融合させ、抗原への結合活性を有する所望のヒト抗体を得ることもできる。また、ヒト抗体遺伝子の全てのレパートリーを有するトランスジェニック動物を抗原で免疫することで所望のヒト抗体を取得することができる。さらに、ヒト抗体ライブラリーを用いて、パンニングによりヒト抗体を取得する技術も知られている。例えば、ヒト抗体の可変領域を一本鎖抗体（scFv）としてファージディスプレイ法によりファージの表面に発現させ、抗原に結合するファージを選択することにより、ヒト抗体を取得することができる。本発明で使用される抗体には、このようなヒト抗体も含まれる。
　抗体遺伝子を一旦単離し、適当な宿主に導入して抗体を作製する場合には、適当な宿主と発現ベクターの組み合わせを使用することができる。真核細胞を宿主として使用する場合、動物細胞、植物細胞、真菌細胞を用いることができ、動物細胞としては、哺乳類細胞、例えば、CHO, COS，ミエローマ、BHK （baby hamster kidney），HeLa，Veroなどを用いることができる。これらの細胞に、目的とする抗体遺伝子を形質転換により導入し、形質転換された細胞をin vitroで培養することにより抗体が得られる。
　本発明で使用される抗体の抗原としては特に限定されず、どのような抗原でもよい。抗原の例としては、例えば、リガンド（サイトカイン、ケモカインなど）、受容体、癌抗原、MHC抗原、分化抗原、免疫グロブリンおよび免疫グロブリンを一部に含む免疫複合体が好適に挙げられる。例えば、血液凝固因子であってもよく、例えばFIX、FIXa、FXなどが挙げられる。
　発現産物の回収は、ポリペプチドが培地に分泌される場合は、培地を回収する。ポリペプチドが細胞内に産生される場合は、その細胞をまず溶解し、その後にポリペプチドを回収する。
　組換え細胞培養物からポリペプチドを回収し精製するには、硫酸アンモニウム又はエタノール沈殿、酸抽出、アニオン又はカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー及びレクチンクロマトグラフィーを含めた公知の方法を用いることができる。本発明においてはプロテインAアフィニティクロマトグラフィーが好ましい。尚、本明細書において、カラムを用いた精製方法、カラムを用いた分離方法及びクロマトグラフィーは同義に用いられる場合がある。
プロテインAレジンを用いたカラムとしては、POROS A(Applied Biosystems製), rProtein A Sepharose F. F. (GE製)、ProSep vA(Millipore製)等が挙げられるがこれらに限定されない。また、プロテインAアフィニティクロマトグラフィーには、インタクトなプロテイン Aからアミノ酸配列等を改変したリガンドを結合させたレジン（樹脂）を用いることもできる。このような改変プロテイン A樹脂を用いた場合も、本発明のアミノ酸改変により、その結合力に差が生じ、目的のポリペプチド多量体を分離・精製することが可能である。改変プロテイン Aを結合させたレジンとしては、例えば、mabSelect SuRE(GE Healthcare製) Hitrap MabSelect Sure（GE Healthcare製）が挙げられるがこれに限定されない。尚、本明細書において、プロテインAレジンが充填されたカラム、プロテインAレジンを用いたカラム、プロテインAレジンカラム及びプロテインAカラムは同義である。また、プロテインAレジンを用いた精製方法、プロテインAカラムを用いた精製方法も同義に用いられる場合がある。
　本発明における一つの実施形態は、プロテインAカラムクロマトグラフィーにおける、Fc領域含有ポリペプチドのプロテインAレジンに対する動的結合容量を増加させる方法を用いたFc領域含有ポリペプチドの精製方法である。より具体的には一つの実施形態は抗体の精製方法であり、また別の一つの実施形態は二重特異性抗体の精製方法である。
　本発明における別の一つの実施形態は、前記精製方法で精製されたFc領域含有ポリペプチドである。より具体的には一つの実施形態は前記精製方法で精製された抗体であり、また別の一つの実施形態は前記精製方法で精製された二重特異性抗体である。
　さらに、本発明における別の一つの実施形態は、5%BTを基準に見ると、45ｇ/Lレジン以上である、Fc領域含有ポリペプチドが結合したプロテインAレジン及び当該レジンを含むカラムである。Fc領域含有ポリペプチドの当該レジンおよびそれを含むカラムに対する動的結合容量は、5%BTを基準に見ると、好ましくは、50 g/L以上、55 g/L以上、60 g/L以上、65 g/L以上である。
　また、本発明の特定の実施形態は、5%BTを基準に見ると接触時間３．４分において、プロテインAカラムクロマトグラフィーにおけるFc領域含有ポリペプチドのプロテインAレジンに対する動的結合容量が50 g/Lレジン以上である、Fc領域含有ポリペプチドが結合したプロテインAレジン及び当該レジンを含むカラムである。Fc領域含有ポリペプチドの当該レジンおよびそれを含むカラムに対する動的結合容量は5%BTを基準に見ると、接触時間３．４分において、好ましくは51 g/Lレジン以上、52 g/Lレジン以上、53 g/Lレジン以上、54 g/Lレジン以上、55 g/Lレジン以上である。
　本発明における一つの実施形態は、プロテインAカラムクロマトグラフィーにおける、プロテインAレジンに対する動的結合容量が増加したFc領域含有ポリペプチドである。
より具体的には一つの実施形態においてFc領域含有ポリペプチドは抗体であり、また別の一つの実施形態においてFc領域含有ポリペプチドは二重特異性抗体である。
　本発明における一つの実施形態において、プロテインAカラムクロマトグラフィーにおける、Fc領域含有ポリペプチドのプロテインAレジンに対する動的結合容量の増加分は、5%BTを基準に見ると、少なくとも5 g/Lレジンであり、好ましくは10 g/Lレジン以上、15 g/Lレジン以上、20 g/Lレジン以上、25 g/Lレジン以上である。
　本発明の特定の実施形態において、プロテインAカラムクロマトグラフィーにおける、Fc領域含有ポリペプチドのプロテインAレジンに対する動的結合容量の増加分は、5％BTを基準にみると接触時間３．４分において、少なくとも5 g/Lレジンであり、好ましくは10 g/Lレジン以上、15 g/Lレジン以上、20 g/Lレジン以上、25 g/Lレジン以上である。
　プロテインAカラムクロマトグラフィーにおける、プロテインAレジンに対する動的結合容量が増加したFc領域含有ポリペプチドは、当該Fc領域に含まれる第一のポリペプチド鎖と第二のポリペプチド鎖はプロテインAレジンへの結合力が異なっていることが好ましく、例えば、第一のポリペプチド鎖としてプロテインAレジンに結合するポリペプチド鎖を用いる場合、第二のポリペプチド鎖としては第一のポリペプチド鎖に比べ、プロテインAレジンに弱く結合するか、若しくは結合しないポリペプチド鎖を用いることが出来る。そのような第一のポリペプチド鎖としてはIgG1、IgG2又はIgG4のCH3を含むポリペプチド鎖を用いることができ、第二のポリペプチド鎖としてはIgG3のCH3を含むポリペプチド鎖を用いることができる。この際、IgG1、IG2、IgG3及びIgG4は天然型でもよく、本発明の目的を達成できる範囲で変異を含んでいてもよい。また、そのような第一のポリペプチド鎖としてはEUナンバリング435位がHis（H）であるポリペプチド鎖を用いることができ、第二のポリペプチド鎖としてはEUナンバリング435位がArg（R）であるポリペプチド鎖を用いることができる。また、そのような第一のポリペプチド鎖としてはEUナンバリング435位がHis（H）、436位がTyr(Y)であるポリペプチド鎖を用いることができ、第二のポリペプチド鎖としてはEUナンバリング435位がArg（R）、436位がPhe(F)であるポリペプチド鎖を用いることができる。尚、EUナンバリング435位又は436位以外のポジションは天然型IgGと同じであってもよく、また天然型IgGとは異なっていてもよい。
　本発明における一つの実施形態は、以下の工程を含む、プロテインAレジンを用いてFc領域含有ポリペプチドを製造する方法である：
　（a）該レジンへの結合力が互いに異なるFc領域の第一のポリペプチド鎖と第二のポリペプチド鎖とを用意する工程；
　（b）プロテインAカラムクロマトグラフィーにおける、工程（a）のFc領域含有ポリペプチドのプロテインAレジンに対する動的結合容量を、プロテインAカラムクロマトグラフィーにおける、該レジンへの結合力が実質的に同じである２本のポリペプチド鎖を含む Fc領域含有ポリペプチドのプロテインAレジンに対する動的結合容量と比較する工程、
　（c）Fc領域の第一のポリペプチド鎖を含有するポリペプチドおよびFc領域の第二のポリペプチド鎖を含有するポリペプチドを含む試料を該レジンに接触させる工程；ならびに
　（d）該レジンに結合した、Fc領域の第一のポリペプチド鎖を含有するポリペプチドおよびFc領域の第二のポリペプチド鎖を含有するポリペプチドのヘテロ体を含有するFc領域含有ポリペプチドを回収する工程。
　上記工程（a）は、前記Fc領域の第一のポリペプチド鎖として前記レジンに結合する第一のポリペプチド鎖を用意し、前記Fc領域の第二のポリペプチド鎖として前記レジンに結合しないか若しくは（前記第一のポリペプチド鎖に比べ前記レジンへの）結合が弱い第二のポリペプチド鎖を用意する工程であってよい。また上記工程（a）は精製対象である前記Fc領域含有ポリペプチドのFc領域を、該Fc領域の第一のポリペプチド鎖は前記レジンに結合するが、該Fc領域の第二のポリペプチド鎖は前記レジンに結合しないか若しくは（前記第一のポリペプチド鎖に比べ前記レジンへの）結合が弱い、Fc領域となるよう改変する工程であってもよい。当該改変は、上記のような特徴を有するFc領域を得るための改変であれば特に限定されないが、例えば、第一のポリペプチド鎖がIgG1、IgG2又はIgG4のCH3を含むポリペプチド鎖になるようにする改変、および、第二のポリペプチド鎖がIgG3のCH3を含むポリペプチド鎖になるようにする改変が挙げられる。そのような改変としては、例えば、第一のポリペプチド鎖のEUナンバリング435位がHis（H）であり、かつ第二のポリペプチド鎖のEUナンバリング435位がArg（R）であるようにする改変が挙げられる。また、別の改変として、第一のポリペプチド鎖のEUナンバリング435位がHis（H）、436位がTyr(Y)であり、かつ第二のポリペプチド鎖のEUナンバリング435位がArg（R）、436位がPhe(F)であるようにする改変が挙げられる。尚、EUナンバリング435位又は436位以外のポジションは天然型IgGと同じであってもよく、また天然型IgGとは異なっていてもよい。
　前記工程（b）において、２本のポリペプチド鎖は該レジンへの結合力が実質的に同じであればいかなるポリペプチド鎖でもよく、２本のポリペプチド鎖同士の相同性の程度は高くても低くてもよい。例えば「該レジンへの結合力が実質的に同じである２本のポリペプチド鎖を含むFc領域含有ポリペプチド」は２本の前記第一のポリペプチド鎖を含む Fc領域含有ポリペプチド、又は二本の前記第二のポリペプチド鎖を含む Fc領域含有ポリペプチドである。また、プロテインAレジンへの結合力が互いに実質的に同じである２本のポリペプチド鎖とは、例えば、２本のポリペプチド鎖がいずれもIgG1、IgG2又はIgG4のCH3のいずれかを含むポリペプチド鎖、２本のポリペプチド鎖がいずれもIgG3のCH3を含むポリペプチド鎖、２本のポリペプチド鎖のEUナンバリング435位がいずれもHis（H）である、またはいずれもArg（R）であるポリペプチド鎖、２本のポリペプチド鎖のいずれもEUナンバリング435位がHis（H）、436位がTyr(Y)であるポリペプチド鎖、２本のポリペプチド鎖のいずれもEUナンバリング435位がArg（R）、436位がPhe(F)であるポリペプチド鎖を挙げることができる。
　「実質的に同じ」とは、本発明の目的を達成する範囲内であれば、必ずしも全く同一である必要はなく、また「同じ」場合を含む意である。
　本発明の一つの実施形態において、前記工程（b）において「比較する」とは、プロテインAカラムクロマトグラフィーにおける、工程（a）のFc領域含有ポリペプチドのプロテインAレジンに対する動的結合容量が、プロテインAカラムクロマトグラフィーにおける、該レジンへの結合力が実質的に同じである二本のポリペプチド鎖を含む Fc領域含有ポリペプチドのプロテインAレジンに対する動的結合容量よりも「高いことを確認する」工程であってもよい。
　尚、動的結合容量を比較又は確認することで、抗体製造時にプロテインAレジンカラムに添加することができる最大抗体量を知ることができ、効率的な抗体製造が可能となる。
　前記工程（c）に記載の試料は、前記Fc領域の第一のポリペプチド鎖を含有するポリペプチドのH鎖および前記Fc領域の第二のポリペプチド鎖を含有するポリペプチドのH鎖の両方に結合能を与え得る共通のL鎖ポリペプチドを含んでもよいし、二つの異なるL鎖ポリペプチドを含んでもよい。
　本発明の一つの実施形態において、前記Fc領域含有ポリペプチドを精製する方法において、Fc領域含有ポリペプチドは抗体であり、また別の一つの実施形態においてFc領域含有ポリペプチドは二重特異性抗体である。
　尚、前記工程（a）～（d）は必ずしもこの順番である必要はなく、また各工程が複数回含まれていてもよい。
　本発明の一つの実施形態は、前記（a）～（d）の工程を含む、プロテインAレジンを用いてFc領域含有ポリペプチドを精製する方法である。
　本明細書において明示的に引用される全ての特許および参考文献の内容は全て本明細書に参照として取り込まれる。
　以下、実施例を用いて本発明をさらに具体的に説明する。ただし、本発明の技術的範囲はこれらの実施例に限定されるものではない。
実施例１　抗体遺伝子発現ベクターの作製と各抗体の発現
　本実施例では、WO2012/067176に記載されたFVIII機能代替活性を有する抗FIXa/FX二重特異性抗体（H1鎖/H2鎖/L鎖：配列番号１/２/３）を用いた(以下、「BiAb」といい、いわゆるヘテロ体である)。なお、当該BiAbは３種類の４本の鎖からなり、二種類のH1鎖及びH2鎖をそれぞれ一本、一種類の共通L鎖二本からなる。当該抗体はWO2012/067176に記載された方法で取得した。抗体遺伝子を、動物細胞発現ベクターに組み込み、それをCHO細胞へトランスフェクションすることで、二重特異性抗体を発現させた。また、前記L鎖二本とH1鎖二本からなるQ homo、前記L鎖二本とH2鎖二本からなるJ homoを上記の方法で取得した。
　本抗体はIgG4型であり、H1鎖のFc領域におけるEUナンバリング435番目のHisはArgに置換されている。尚、この置換はFc領域のプロテインAレジンへの結合力を減弱若しくは失わせる。
実施例２　動的結合容量（DBC）の評価方法
　一般にDBCの検証には、UV検出器を連結した精製装置を用いたUVモニタリングにより、継続負荷されたタンパク質がカラムから漏出する様子をブレークスルーカーブ（以下BTC）としてクロマトグラムに描くことにより行われる。一例として図１にBiAbを用いたときのBTCクロマトグラムを示した。
　今回は、それぞれの抗体分子及びその混合液に対して、5%ブレークスルーポイント（BT point）の負荷量を比較することでDBCを評価した。

　DBCの計算には以下の装置等を用いた。
 ・LC装置；GEヘルスケア社製AKTA AVANT25
 ・ソフトウェア；GEヘルスケア社製Unicorn version6.1
 ・Protein A樹脂；GEヘルスケア社製Mab Select SuRe (Cat No.17-5438-05
　　　　　　　　　)またはHitrap Mab Select SuRe (Cat No.11-0034-93)
　・使用緩衝液；
　　　　平衡化/前洗浄...20 mmol/L Na-phosphate, pH 7.5
　　　　溶出...50 mmol/L Acetic acid
　　　　再生...0.1 mol/L NaOH

　DBCの計算方法は以下の通りに行った。
　上記使用機器、ソフトウェア、及び樹脂を用いて、以下の手順でクロマトグラフィー操作によりDBCを算出した。
　(1) 負荷画分（IgG濃度P g/Lとする）をいったんカラムを通さずにLC装置に流し、100％漏出（＝100％BT）時のOD280 nmの値を確認した。この値をaとした。
　(2) aに0.05を掛けた値を、5％BT時のOD280 nm定義した。この値をb5%とした。
　(3) 負荷画分を平衡化された一定量の樹脂(r Lとする)に流し続け、OD280 nmの値がb5%となった時の負荷画分の容量をクロマトグラムから読み取った。この値をc5% Lとした。
　(4) 計算式(P x c5%)/rで得られる値を、5%BT時の動的結合容量、DBC5%として算出した。
　　　DBC5% = (P x c5%)/r (単位；g/L resin)
DBC10%を求める際は、同じ要領でc10％を求め、算出した。
実施例３　各抗体分子単独のDBC
　Q homo, J homo及びBiAbそれぞれ単独のDBCを以下の条件で検証した。
　・Column：Hitrap MabSelect Sure（以下、MSSという）(GEヘルスケア)、
　　　　　　0.7 x 2.5 cm
　・Load material：各抗体精製標準品を用いて、実際の負荷CMのIgG濃度、
　　　　　　　　　 pH、導電率を模したもの。
　　　　　　　　　 IgG濃度約2 g/L、pH7.5、Conductivity 1.2 S/m
　　　　　　　　　 J homo 約80％、Q homo約85％、BiAb約95％純度のもの
　　　　　　　　　 を使用
　・Contact time：3.4min(43.75 cm/h)

　その結果を表１に示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
 　この結果は、BiAbのDBCが、両homoに対して有意に高いことを示すものであった。
実施例４（BiAbのDBCに対するpH、接触時間の検証）
　次に、BiAb単独で、負荷溶液のpH、及び樹脂に対する接触時間を変化させた時のDBCを確認し、両者のパラメータの影響を検証した。
条件を以下に示した。
　・Column：MabSelect Sure（GEヘルスケア）、1.0 x 20 cm
　・Load material：BiAb精製標品を希釈調製しCMを模したもの（BiAb 95%）
　　 　　　　　　　2g/L、pH6.5-8.0（検証）、Conductivity 1.2 S/m
　・Contact time：3-8 min（検証）

　その結果を表2に示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
実施例５（BiAbとHomo混合液におけるDBC）
　実際のプロテインA樹脂に負荷する培養上清（以下HCCF）は、BiAbと両homoが混在している。即ち、目的物質であるBiAbを回収するという視点では、両homoはBiAbの競合物質と捉えられる。したがって、実製造を見据えた場合、両homoがHCCF中にある程度存在する状況でのBiAbのDBCを検証することは有意義である。このことを検証するため、以下の条件で試験を行った。
　・Column：Hitrap MabSelect Sure（MSS）（GEヘルスケア）、0.7 x 2.5cm
　・Load Material：BiAb/Homo精製標品を混合し、CMを模したもの
　　　　　　　　　 2 g/L、pH 7.5、Cond 1.2 S/m
　　　　　　　　　 Control BiAb(95%)　J homo：BiAb：Q homo= 5：95：0
　　　　　　　　　 Mimic A　 J homo：BiAb：Q homo= 10：83：7
　　　　　　　　　 Mimic B　 J homo：BiAb：Q homo= 10：68：22
　・Contact time：3.4 min(43.75 cm/h)
　・BTCのLoadを分画し、Analytical CIECで各BT PointsのBiAb/Homo比を確認

　Analytical CIECの条件は以下の通りに行った。
　・HPLC装置；Waters社製Alliance 2695/2487
　・ソフトウェア；Waters社製Empower3
　・CIECカラム；Thermo scientific社製ProPac WCX-10、Product No.054993
　・カラム温度；30 degC
　・注入量；30 μg/shot
　・使用緩衝液；
　　　　移動相A...9.6 mmol/L Tris, 6.0 mmol/L piperazine, 11.0 mmol/L
　　　　　　　　　imidazole, pH 6.0
　　　　移動相B...9.6 mmol/L Tris, 6.0 mmol/L piperazine, 11.0 mmol/L
　　　　　　　　　imidazole, 150 mmol/L NaCl, pH 10.1

　・グラジエント条件；
　　　　時間(min)　　　流速(mL/min)　　　　％A　　　　　％B
　　　　　0.0           1.0                100           0
　　　　　1.0           1.0                100           0
　　　　　20.0          1.0                  0         100
　　　　　35.0          1.0                  0         100

　その結果を表３に示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
　以上の結果から、以下のことが分かった。
・DBC；J homo ≒ Q homo < BiAb
・MSSへの親和力；Q homo < BiAb < J homo
・BiAb DBCにおけるパラメータの影響；
　pH...6.5-8.0の範囲において、低いほどDBCは高い傾向があるものの、インパクトは小さい。
　接触時間...3-8分の範囲において、長いほどDBCは高くなる傾向があるものの、3分ですらQ homo及びJ homoのDBCを下回ることはない。
　MSSへの親和力に関しては、本発明の構成を反映した結果であり、そのことは実施例5におけるリークの順序にも表れている。
　一方、DBCについては、MSS樹脂への親和力の違いとリガンドの有効利用性が働いて、このような結果になったと推察している。即ち、J homoはMSSリガンドに強く結合する配列を2か所持っているため、2か所でMSS樹脂に結合している。つまり、J homoが空間的に占める範囲内に存在するMSSリガンドは、利用できなくなる。一方、BiAbはMSSに強く結合する配列を一か所しか持たないため、空間的な自由度がJ homoより高く、より多くのMSSリガンドを有効活用して、高いDBCを実現できたと考えられる。Q homoのDBCが低いのは、単に分子全体としての結合力が低いためと考えられる。また、Q homo及びJ homoはBiAbのMSSへの結合を競合阻害していると考えられる。

Claims (17)

  1. 　プロテインAカラムクロマトグラフィーにおける、Fc領域含有ポリペプチドのプロテインAレジンに対する動的結合容量を増加させる方法。
  2. 　前記Fc領域の第一のポリペプチド鎖及び第二のポリペプチドとして前記レジンへの結合力が互いに異なる第一のポリペプチド鎖及び第二のポリペプチド鎖を用意する工程を含む、請求項１に記載の方法。
  3. 　前記Fc領域の第一のポリペプチド鎖として前記レジンに結合する第一のポリペプチド鎖を用意し、前記Fc領域の第二のポリペプチド鎖として前記レジンに結合しないか若しくは前記第一のポリペプチド鎖に比べ前記レジンへの結合が弱い第二のポリペプチド鎖を用意する工程を含む、請求項１または２に記載の方法。
  4. 　前記Fc領域含有ポリペプチドのFc領域を、該Fc領域の第一のポリペプチド鎖は前記レジンに結合するが、該Fc領域の第二のポリペプチド鎖は前記レジンに結合しないか若しくは前記第一のポリペプチド鎖に比べ前記レジンへの結合が弱い、Fc領域となるよう改変する工程を含む、請求項１～３のいずれかに記載の方法。
  5. 　前記Fc領域の第一のポリペプチド鎖はIgG1、IgG2又はIgG4のCH3を含み、前記Fc領域の第二のポリペプチド鎖はIgG3のCH3を含む、請求項１～４のいずれかに記載の方法。
  6. 　前記Fc領域の第一のポリペプチド鎖のEUナンバリング435番目のアミノ酸はHisであり、第二のポリペプチド鎖のEUナンバリング435番目アミノ酸はArgである、請求項１～５のいずれかに記載の方法。
  7. 　前記結合容量の増加が５ g/Lレジン以上である、請求項１～６のいずれかに記載の方法。
  8. 　前記増加後の動的結合容量が４５ g/Lレジン以上である、請求項１～７のいずれかに記載の方法。
  9. 　前記Fc領域含有ポリペプチドが抗体である、請求項１～８のいずれかに記載の方法。
  10. 　前記抗体が二重特異性抗体である、請求項９に記載の方法。
  11. 　請求項１～１０に記載の方法を用いたFc領域含有ポリペプチドの精製方法。
  12. 　請求項１１に記載の方法で精製されたFc領域含有ポリペプチド。
  13. 　プロテインAカラムクロマトグラフィーにおけるFc領域含有ポリペプチドのプロテインAレジンに対する動的結合容量が４５ g/Lレジン以上である、Fc領域含有ポリペプチドが結合したプロテインAレジン。
  14. プロテインAカラムクロマトグラフィーにおける、プロテインAレジンに対する動的結合容量が増加したFc領域含有ポリペプチド。
  15. 　以下の工程を含む、プロテインAレジンを用いてFc領域含有ポリペプチドを製造する方法：
    　（a）該レジンへの結合力が互いに異なるFc領域の第一のポリペプチド鎖と第二のポリペプチド鎖とを用意する工程、
    　（b）プロテインAカラムクロマトグラフィーにおける、工程（a）の該Fc領域含有ポリペプチドのプロテインAレジンに対する動的結合容量を、プロテインAカラムクロマトグラフィーにおける、該レジンへの結合力が実質的に同じである２本のポリペプチド鎖を含む Fc領域含有ポリペプチドのプロテインAレジンに対する動的結合容量と比較する工程、
    　（c）Fc領域の第一のポリペプチド鎖を含有するポリペプチドおよびFc領域の第二のポリペプチド鎖を含有するポリペプチドを含む試料を該レジンに接触させる工程；ならびに
    　（d）該レジンに結合した、Fc領域の第一のポリペプチド鎖を含有するポリペプチドおよびFc領域の第二のポリペプチド鎖を含有するポリペプチドのヘテロ体を含有するFc領域含有ポリペプチドを回収する工程。
  16. 　前記工程（a）が、前記Fc領域の第一のポリペプチド鎖として前記レジンに結合する第一のポリペプチド鎖を用意し、前記Fc領域の第二のポリペプチド鎖として前記レジンに結合しないか若しくは前記第一のポリペプチド鎖に比べ前記レジンへの結合が弱い第二のポリペプチド鎖を用意する工程である、請求項１５に記載の方法
  17. 　前記工程（a）が、精製対象である前記Fc領域含有ポリペプチドのFc領域を、該Fc領域の第一のポリペプチド鎖は前記レジンに結合するが、該Fc領域の第二のポリペプチド鎖は前記レジンに結合しないか若しくは前記第一のポリペプチド鎖に比べ前記レジンへの結合が弱い、Fc領域となるよう改変する工程である、請求項１５または１６に記載の方法。
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CA3004288A CA3004288C (en) 2015-12-28 2016-12-27 METHOD FOR PROMOTING THE CLEARANCE EFFICIENCY OF A POLYPEPTIDE CONTAINING THE FC REGION
JP2017559189A JP7219005B2 (ja) 2015-12-28 2016-12-27 Ｆｃ領域含有ポリペプチドの精製を効率化するための方法
EP16881748.4A EP3398965A4 (en) 2015-12-28 2016-12-27 METHOD FOR PROMOTING THE EFFICIENCY OF CLEANING POLYPEPTIDE WITH FC REGION
KR1020187020141A KR102784832B1 (ko) 2015-12-28 2016-12-27 Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 정제를 효율화하기 위한 방법
HK18110553.8A HK1251237B (en) 2015-12-28 2016-12-27 Method for promoting efficiency of purification of fc region-containing polypeptide
CN201680069093.0A CN108368166B (zh) 2015-12-28 2016-12-27 提高含fc区多肽纯化效率的方法
IL259247A IL259247B2 (en) 2015-12-28 2018-05-09 Method for promoting efficiency of purification of fc region-containing polypeptide

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Cited By (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10253091B2 (en) 2009-03-19 2019-04-09 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody constant region variant
US10435458B2 (en) 2010-03-04 2019-10-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody constant region variants with reduced Fcgammar binding
US10450381B2 (en) 2010-11-17 2019-10-22 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods of treatment that include the administration of bispecific antibodies
US10934344B2 (en) 2006-03-31 2021-03-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods of modifying antibodies for purification of bispecific antibodies
US11046784B2 (en) 2006-03-31 2021-06-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for controlling blood pharmacokinetics of antibodies
US11066483B2 (en) 2010-11-30 2021-07-20 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Cytotoxicity-inducing therapeutic agent
US11124576B2 (en) 2013-09-27 2021-09-21 Chungai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for producing polypeptide heteromultimer
US11142587B2 (en) 2015-04-01 2021-10-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for producing polypeptide hetero-oligomer
US11168344B2 (en) 2005-03-31 2021-11-09 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for producing polypeptides by regulating polypeptide association
US11248053B2 (en) 2007-09-26 2022-02-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of modifying isoelectric point of antibody via amino acid substitution in CDR
US11332533B2 (en) 2007-09-26 2022-05-17 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Modified antibody constant region
US11649262B2 (en) 2015-12-28 2023-05-16 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for promoting efficiency of purification of Fc region-containing polypeptide
US12421322B2 (en) 2017-11-01 2025-09-23 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody variant and isoform with lowered biological activity
US12460014B2 (en) 2016-04-28 2025-11-04 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody-containing preparation

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN119462804A (zh) 2019-05-08 2025-02-18 渤健马萨诸塞州股份有限公司 寡核苷酸的汇聚液相合成

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008523140A (ja) * 2004-12-14 2008-07-03 ジーイー・ヘルスケア・バイオサイエンス・アクチボラグ 免疫グロブリンの精製方法
WO2011078332A1 (ja) * 2009-12-25 2011-06-30 中外製薬株式会社 ポリペプチド多量体を精製するためのポリペプチドの改変方法
WO2011125674A1 (ja) * 2010-03-31 2011-10-13 Jsr株式会社 アフィニティークロマトグラフィー用充填剤
JP2012531439A (ja) * 2009-06-26 2012-12-10 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 天然の免疫グロブリン形式を有する容易に単離される二重特異性抗体
JP2015510764A (ja) * 2012-03-13 2015-04-13 ノビミューン エスアー 天然の免疫グロブリン形式を有する容易に単離される二重特異性抗体
WO2015063339A1 (en) * 2013-11-04 2015-05-07 Glenmark Pharmaceuticals S.A. Production of t cell retargeting hetero-dimeric immunoglobulins
JP2016069329A (ja) * 2014-09-30 2016-05-09 Jsr株式会社 標的物の精製方法、及び、ミックスモード用担体

Family Cites Families (344)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5144499B1 (ja) 1970-08-29 1976-11-29
JPS5334319B2 (ja) 1971-12-28 1978-09-20
JPS5717624B2 (ja) 1974-04-17 1982-04-12
US4208479A (en) 1977-07-14 1980-06-17 Syva Company Label modified immunoassays
US4474893A (en) 1981-07-01 1984-10-02 The University of Texas System Cancer Center Recombinant monoclonal antibodies
US4444878A (en) 1981-12-21 1984-04-24 Boston Biomedical Research Institute, Inc. Bispecific antibody determinants
JPH06104071B2 (ja) 1986-08-24 1994-12-21 財団法人化学及血清療法研究所 第▲ｉｘ▼因子コンホメ−シヨン特異性モノクロ−ナル抗体
US6121424A (en) 1991-11-25 2000-09-19 Enzon, Inc. Multivalent antigen-binding proteins
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
US5004697A (en) 1987-08-17 1991-04-02 Univ. Of Ca Cationized antibodies for delivery through the blood-brain barrier
US5670373A (en) 1988-01-22 1997-09-23 Kishimoto; Tadamitsu Antibody to human interleukin-6 receptor
US5322678A (en) 1988-02-17 1994-06-21 Neorx Corporation Alteration of pharmacokinetics of proteins by charge modification
US6010902A (en) 1988-04-04 2000-01-04 Bristol-Meyers Squibb Company Antibody heteroconjugates and bispecific antibodies for use in regulation of lymphocyte activity
US5126250A (en) 1988-09-28 1992-06-30 Eli Lilly And Company Method for the reduction of heterogeneity of monoclonal antibodies
IL89491A0 (en) 1988-11-17 1989-09-10 Hybritech Inc Bifunctional chimeric antibodies
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
JPH0341033A (ja) 1989-07-07 1991-02-21 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 安定なモチリン類含有製剤
GB8916400D0 (en) 1989-07-18 1989-09-06 Dynal As Modified igg3
ATE177321T1 (de) 1989-12-11 1999-03-15 Immunomedics Inc Verfahren zum aufspüren von diagnostischen oder therapeutischen mitteln durch antikörper
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
TW212184B (ja) 1990-04-02 1993-09-01 Takeda Pharm Industry Co Ltd
JPH05184383A (ja) 1990-06-19 1993-07-27 Dainabotsuto Kk 二重特異性抗体
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
JPH05199894A (ja) 1990-08-20 1993-08-10 Takeda Chem Ind Ltd 二重特異性抗体および抗体含有薬剤
JP3370324B2 (ja) 1991-04-25 2003-01-27 中外製薬株式会社 ヒトインターロイキン−６受容体に対する再構成ヒト抗体
JPH05304992A (ja) 1991-06-20 1993-11-19 Takeda Chem Ind Ltd ハイブリッド・モノクローナル抗体および抗体含有薬剤
US5637481A (en) 1993-02-01 1997-06-10 Bristol-Myers Squibb Company Expression vectors encoding bispecific fusion proteins and methods of producing biologically active bispecific fusion proteins in a mammalian cell
US6136310A (en) 1991-07-25 2000-10-24 Idec Pharmaceuticals Corporation Recombinant anti-CD4 antibodies for human therapy
ES2165851T3 (es) 1991-11-25 2002-04-01 Enzon Inc Proteinas multivalentes que se unen a antigenos.
US5667988A (en) 1992-01-27 1997-09-16 The Scripps Research Institute Methods for producing antibody libraries using universal or randomized immunoglobulin light chains
JPH05203652A (ja) 1992-01-28 1993-08-10 Fuji Photo Film Co Ltd 抗体酵素免疫分析法
JPH05213775A (ja) 1992-02-05 1993-08-24 Otsuka Pharmaceut Co Ltd Ｂｆａ抗体
US6749853B1 (en) 1992-03-05 2004-06-15 Board Of Regents, The University Of Texas System Combined methods and compositions for coagulation and tumor treatment
GB9206422D0 (en) 1992-03-24 1992-05-06 Bolt Sarah L Antibody preparation
US6129914A (en) 1992-03-27 2000-10-10 Protein Design Labs, Inc. Bispecific antibody effective to treat B-cell lymphoma and cell line
US5744446A (en) 1992-04-07 1998-04-28 Emory University Hybrid human/animal factor VIII
ZA936260B (en) 1992-09-09 1994-03-18 Smithkline Beecham Corp Novel antibodies for conferring passive immunity against infection by a pathogen in man
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
WO1994009817A1 (en) 1992-11-04 1994-05-11 City Of Hope Novel antibody construct
ES2156149T3 (es) 1992-12-04 2001-06-16 Medical Res Council Proteinas de union multivalente y multiespecificas, su fabricacion y su uso.
EP0628078B1 (en) 1992-12-11 1999-12-08 The Dow Chemical Company Multivalent single chain antibodies
WO1995001571A1 (en) 1993-07-01 1995-01-12 Baxter Diagnostics Inc. Process for the preparation of factor x depleted plasma
UA40577C2 (uk) 1993-08-02 2001-08-15 Мерк Патент Гмбх Біспецифічна молекула, що використовується для лізису пухлинних клітин, спосіб її одержання, моноклональне антитіло (варіанти), фармацевтичний препарат, фармацевтичний набір (варіанти), спосіб видалення пухлинних клітин
IL107742A0 (en) 1993-11-24 1994-02-27 Yeda Res & Dev Chemically-modified binding proteins
US5945311A (en) 1994-06-03 1999-08-31 GSF--Forschungszentrumfur Umweltund Gesundheit Method for producing heterologous bi-specific antibodies
DE4419399C1 (de) 1994-06-03 1995-03-09 Gsf Forschungszentrum Umwelt Verfahren zur Herstellung von heterologen bispezifischen Antikörpern
US8017121B2 (en) 1994-06-30 2011-09-13 Chugai Seiyaku Kabushika Kaisha Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component
EP0771216B9 (en) 1994-07-11 2003-01-02 The Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions for the specific coagulation of tumoral vasculature
IL114909A (en) 1994-08-12 1999-10-28 Immunomedics Inc Immunoconjugates and humanized antibodies specific for b-cell lymphoma and leukemia cells
US6451523B1 (en) 1994-09-14 2002-09-17 Interneuron Pharmaceuticals, Inc. Detection of a leptin receptor variant and methods for regulating obesity
US6309636B1 (en) 1995-09-14 2001-10-30 Cancer Research Institute Of Contra Costa Recombinant peptides derived from the Mc3 anti-BA46 antibody, methods of use thereof, and methods of humanizing antibody peptides
EP0783893B1 (en) 1994-10-07 2012-04-04 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Inhibition of abnormal growth of synovial cells using il-6 antagonist as active ingredient
CZ298325B6 (cs) 1994-10-21 2007-08-29 Kishimoto@Tadamitsu Farmaceutický prípravek pro prevenci nebo lécení plasmocytosy
WO1996016673A1 (en) 1994-12-02 1996-06-06 Chiron Corporation Method of promoting an immune response with a bispecific antibody
US6485943B2 (en) 1995-01-17 2002-11-26 The University Of Chicago Method for altering antibody light chain interactions
ES2152514T3 (es) 1995-02-28 2001-02-01 Procter & Gamble Preparacion de productos de bebidas no carbonatadas que tienen una estabilidad microbiana superior.
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
WO1996034892A1 (en) 1995-05-03 1996-11-07 Bioenhancements Ltd. Bispecific antibodies in which the binding capability is reversibly inhibited by a photocleavable moiety
ES2233974T3 (es) 1995-09-11 2005-06-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Anticuerpo contra la cadena alfa del receptor de la interleucina 5 humana.
US20020193571A1 (en) 1996-01-08 2002-12-19 Paul J. Carter Wsx receptor agonist antibodies
MA24512A1 (fr) 1996-01-17 1998-12-31 Univ Vermont And State Agrienl Procede pour la preparation d'agents anticoagulants utiles dans le traitement de la thrombose
FR2745008A1 (fr) 1996-02-20 1997-08-22 Ass Pour Le Dev De La Rech En Recepteur nucleaire de glucocorticoides modifie, fragments d'adn codant pour ledit recepteur et procedes dans lesquels ils sont mis en oeuvre
US20020147326A1 (en) 1996-06-14 2002-10-10 Smithkline Beecham Corporation Hexameric fusion proteins and uses therefor
AU720232B2 (en) 1996-07-19 2000-05-25 Amgen, Inc. Analogs of cationic proteins
JPH10165184A (ja) 1996-12-16 1998-06-23 Tosoh Corp 抗体、遺伝子及びキメラ抗体の製法
US5990286A (en) 1996-12-18 1999-11-23 Techniclone, Inc. Antibodies with reduced net positive charge
US6323000B2 (en) 1996-12-20 2001-11-27 Clark A. Briggs Variant human α7 acetylcholine receptor subunit, and methods of production and uses thereof
CA2284665C (en) 1997-03-20 2010-08-17 David Fitzgerald Recombinant antibodies and immunoconjugates targeted to cd-22 bearing cells and tumors
US6183744B1 (en) 1997-03-24 2001-02-06 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
US6306393B1 (en) 1997-03-24 2001-10-23 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
US6884879B1 (en) 1997-04-07 2005-04-26 Genentech, Inc. Anti-VEGF antibodies
US20070059302A1 (en) 1997-04-07 2007-03-15 Genentech, Inc. Anti-vegf antibodies
WO1998050431A2 (en) 1997-05-02 1998-11-12 Genentech, Inc. A method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
US20020062010A1 (en) 1997-05-02 2002-05-23 Genentech, Inc. Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
US20030207346A1 (en) 1997-05-02 2003-11-06 William R. Arathoon Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
WO2001036486A2 (en) 1999-11-18 2001-05-25 Oxford Biomedica (Uk) Limited Scfv antibodies against disease associated molecules
DE19725586C2 (de) 1997-06-17 1999-06-24 Gsf Forschungszentrum Umwelt Verfahren zur Herstellung von Zellpräparaten zur Immunisierung mittels heterologer intakter bispezifischer und/oder trispezifischer Antikörper
WO1999002567A2 (en) 1997-07-08 1999-01-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Compositions and methods for producing homoconjugates of antibodies which induce growth arrest or apoptosis of tumor cells
US5980893A (en) 1997-07-17 1999-11-09 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Agonist murine monoclonal antibody as a stimulant for megakaryocytopoiesis
US6207805B1 (en) 1997-07-18 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Prostate cell surface antigen-specific antibodies
US20020187150A1 (en) 1997-08-15 2002-12-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Preventive and/or therapeutic agent for systemic lupus erythematosus comprising anti-IL-6 receptor antibody as an active ingredient
US6342220B1 (en) 1997-08-25 2002-01-29 Genentech, Inc. Agonist antibodies
AU750453B2 (en) 1997-10-03 2002-07-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Natural human antibody
PL201461B1 (pl) 1998-03-17 2009-04-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Czynnik zapobiegający lub terapeutyczny do leczenia zapalenia jelita, zawierający antagonistę IL-6 jako składnik aktywny
KR20010042435A (ko) 1998-04-03 2001-05-25 나가야마 오사무 인간조직인자(티에프)에 대한 인간형화항체 및인간형화항체의 제조방법
DE19819846B4 (de) 1998-05-05 2016-11-24 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Multivalente Antikörper-Konstrukte
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
US7081360B2 (en) 1998-07-28 2006-07-25 Cadus Technologies, Inc. Expression of G protein-coupled receptors with altered ligand binding and/or coupling properties
EP1105427A2 (en) 1998-08-17 2001-06-13 Abgenix, Inc. Generation of modified molecules with increased serum half-lives
WO2000018806A1 (de) 1998-09-25 2000-04-06 Horst Lindhofer Bispezifische und trispezifische antikörper, die spezifisch mit induzierbaren oberflächenantigenen als operationelle zielstrukturen reagieren
DE69942671D1 (de) 1998-12-01 2010-09-23 Facet Biotech Corp Humanisierte antikoerper gegen gamma-interferon
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US7183387B1 (en) 1999-01-15 2007-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
PL209786B1 (pl) 1999-01-15 2011-10-31 Genentech Inc Przeciwciało zawierające wariant regionu Fc ludzkiej IgG1, przeciwciało wiążące czynnik wzrostu śródbłonka naczyń oraz immunoadhezyna
US6897044B1 (en) 1999-01-28 2005-05-24 Biogen Idec, Inc. Production of tetravalent antibodies
US6972125B2 (en) 1999-02-12 2005-12-06 Genetics Institute, Llc Humanized immunoglobulin reactive with B7-2 and methods of treatment therewith
CO5280147A1 (es) 1999-05-18 2003-05-30 Smithkline Beecham Corp Anticuerpo humano monoclonal
SK782002A3 (en) 1999-07-21 2003-08-05 Lexigen Pharm Corp FC fusion proteins for enhancing the immunogenicity of protein and peptide antigens
AT411997B (de) 1999-09-14 2004-08-26 Baxter Ag Faktor ix/faktor ixa aktivierende antikörper und antikörper-derivate
SE9903895D0 (sv) 1999-10-28 1999-10-28 Active Biotech Ab Novel compounds
US20020028178A1 (en) 2000-07-12 2002-03-07 Nabil Hanna Treatment of B cell malignancies using combination of B cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications
EP1238080A2 (en) 1999-12-14 2002-09-11 The Burnham Institute Bcl-g polypeptides, encoding nucleic acids and methods of use
AU2001256174A1 (en) 2000-03-01 2001-09-12 Christoph Gasche Mammalian interleukin-10 (il-10) receptor variants
TWI241345B (en) 2000-03-10 2005-10-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Apoptosis inducing polypeptide
WO2001070775A2 (en) 2000-03-22 2001-09-27 Curagen Corporation Wnt-1 related polypeptides, and nucleic acids encoding the same
MXPA02009626A (es) 2000-03-31 2003-05-14 Idec Pharma Corp Uso combinado de anticuerpos anti-citocina o antagonistas y anti-cd20 para el tratamiento de linfoma de celulas b.
JP2004505609A (ja) 2000-04-03 2004-02-26 オックスフォード　グリコサイエンシズ（ユーケー）　リミテッド 核酸分子、ポリペプチド、ならびにアルツハイマー病の診断および処置を含むそれらの使用
WO2001079494A1 (fr) 2000-04-17 2001-10-25 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anticorps agonistes
AU2001266272B2 (en) 2000-05-03 2005-09-15 Medigene Ag Cationic diagnostic, imaging and therapeutic agents associated with activated vascular sites
AU2001264946A1 (en) 2000-05-24 2001-12-03 Imclone Systems Incorporated Bispecific immunoglobulin-like antigen binding proteins and method of production
WO2001097858A2 (en) 2000-06-20 2001-12-27 Idec Pharmaceuticals Corporation Cold anti-cd20 antibody/radiolabeled anti-cd22 antibody combination
KR20080039547A (ko) 2000-07-12 2008-05-07 아이덱 파마슈티칼즈 코포레이션 Ｂ 세포 고갈 항체 및 면역 조절 항체 관련 적용의 조합을이용한 ｂ 세포 악성종양의 치료
AU2001271066A1 (en) 2000-07-17 2002-01-30 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for screening ligand having biological activity
MXPA03002262A (es) 2000-09-18 2003-10-15 Idec Pharma Corp Terapia de combinacion para tratamiento de enfermedades autoinmunes usando una combinacion de anticuerpos inmunorreguladores/supresores de celulas b.
US6875432B2 (en) 2000-10-12 2005-04-05 Genentech, Inc. Reduced-viscosity concentrated protein formulations
ATE391174T1 (de) 2000-10-20 2008-04-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Modifizierter tpo-agonisten antikörper
CN1308447C (zh) 2000-10-20 2007-04-04 中外制药株式会社 低分子化的激动剂抗体
EP1327680B1 (en) 2000-10-20 2008-04-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Modified tpo agonist antibody
EP1327681A4 (en) 2000-10-20 2004-09-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Degraded agonist antibodies
WO2002036165A1 (fr) 2000-10-27 2002-05-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Agent à base d'antagoniste d'il-6, faisant baisser le niveau des mmp-3 dans le sang
US7083784B2 (en) 2000-12-12 2006-08-01 Medimmune, Inc. Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
PT1366067E (pt) 2001-03-07 2012-11-29 Merck Patent Gmbh Tecnologia de expressão para proteínas contendo uma unidade de anticorpo de isotipo híbrido
UA80091C2 (en) 2001-04-02 2007-08-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Remedies for infant chronic arthritis-relating diseases and still's disease which contain an interleukin-6 (il-6) antagonist
WO2002078612A2 (en) 2001-04-02 2002-10-10 Euro-Celtique S.A. Thrombopoietin (tpo) synthebody for stimulation of platelet production
CN1294148C (zh) 2001-04-11 2007-01-10 中国科学院遗传与发育生物学研究所 环状单链三特异抗体
CA2443903C (en) 2001-04-13 2018-03-20 Biogen, Inc. Antibodies to vla-1
CN1314803C (zh) 2001-06-22 2007-05-09 中外制药株式会社 含有抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体的细胞生长抑制剂
ATE477280T1 (de) 2001-06-28 2010-08-15 Domantis Ltd Doppelspezifischer ligand und dessen verwendung
US6833441B2 (en) 2001-08-01 2004-12-21 Abmaxis, Inc. Compositions and methods for generating chimeric heteromultimers
US20030049203A1 (en) 2001-08-31 2003-03-13 Elmaleh David R. Targeted nucleic acid constructs and uses related thereto
BR0213303A (pt) 2001-10-15 2005-06-07 Immunomedics Inc Proteìnas de ligação de alvejamento direto
DK1443961T3 (da) 2001-10-25 2009-08-24 Genentech Inc Glycoprotein-sammensætninger
US20030190705A1 (en) 2001-10-29 2003-10-09 Sunol Molecular Corporation Method of humanizing immune system molecules
DE10156482A1 (de) 2001-11-12 2003-05-28 Gundram Jung Bispezifisches Antikörper-Molekül
CA2472922A1 (en) 2002-02-11 2003-08-21 Genentech, Inc. Antibody variants with faster antigen association rates
US20040002587A1 (en) 2002-02-20 2004-01-01 Watkins Jeffry D. Fc region variants
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
WO2003074679A2 (en) 2002-03-01 2003-09-12 Xencor Antibody optimization
US8188231B2 (en) 2002-09-27 2012-05-29 Xencor, Inc. Optimized FC variants
US7736652B2 (en) 2002-03-21 2010-06-15 The Regents Of The University Of California Antibody fusion proteins: effective adjuvants of protein vaccination
ATE512989T1 (de) 2002-04-15 2011-07-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Verfahren zur herstellung von scdb-bibliotheken
AU2003222664A1 (en) 2002-04-18 2003-11-03 Genencor International, Inc. Production of functional antibodies in filamentous fungi
WO2003091424A1 (fr) 2002-04-26 2003-11-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Procede de criblage d'un anticorps agoniste
JP2004086862A (ja) 2002-05-31 2004-03-18 Celestar Lexico-Sciences Inc タンパク質相互作用情報処理装置、タンパク質相互作用情報処理方法、プログラム、および、記録媒体
WO2003107218A1 (ja) 2002-05-31 2003-12-24 セレスター・レキシコ・サイエンシズ株式会社 相互作用予測装置
WO2003104425A2 (en) 2002-06-07 2003-12-18 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Novel stable anti-cd22 antibodies
AU2003256266A1 (en) 2002-06-12 2003-12-31 Genencor International, Inc. Methods and compositions for milieu-dependent binding of a targeted agent to a target
DK1517921T3 (da) 2002-06-28 2006-10-09 Domantis Ltd Immunglobulin-enkeltvariable antigen-bindende domæner og dobbeltspecifikke konstruktioner deraf
DK2314629T4 (da) 2002-07-18 2023-02-06 Merus Nv Rekombinant produktion af blandinger af antistoffer
JP2005535341A (ja) 2002-08-15 2005-11-24 エピトミスク インコーポレーティッド ヒト化ウサギ抗体
EP1541165A4 (en) 2002-08-27 2009-06-24 Chugai Pharmaceutical Co Ltd METHOD FOR STABILIZING PROTEIN PREPARATION
US20060235208A1 (en) 2002-09-27 2006-10-19 Xencor, Inc. Fc variants with optimized properties
US8158385B2 (en) 2002-10-11 2012-04-17 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Cell death-inducing agent
US7217797B2 (en) 2002-10-15 2007-05-15 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
GB0224082D0 (en) 2002-10-16 2002-11-27 Celltech R&D Ltd Biological products
CN1729203B (zh) 2002-10-17 2014-02-19 根马布股份公司 抗cd20的人单克隆抗体
PT2263692T (pt) 2002-12-24 2018-11-28 Rinat Neuroscience Corp Anticorpos anti-ngf e métodos de utilização dos mesmos
JPWO2004060919A1 (ja) 2002-12-26 2006-05-11 中外製薬株式会社 ヘテロ受容体に対するアゴニスト抗体
EP1605058B1 (en) 2003-01-21 2009-05-13 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of screening light chain of antibody light chains
US7223393B2 (en) 2003-02-07 2007-05-29 Pdl Biopharma, Inc Amphiregulin antibodies and their use to treat cancer and psoriasis
EP1598074B1 (en) 2003-02-28 2019-01-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Stabilized protein-containing formulations
US8388955B2 (en) 2003-03-03 2013-03-05 Xencor, Inc. Fc variants
US20090010920A1 (en) 2003-03-03 2009-01-08 Xencor, Inc. Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb
JP4739954B2 (ja) 2003-03-13 2011-08-03 中外製薬株式会社 変異受容体に対するアゴニスト活性を有するリガンド
EP1609803A4 (en) 2003-03-31 2006-05-24 Chugai Pharmaceutical Co Ltd MODIFIED ANTIBODY AGAINST CD22 AND APPLICATIONS THEREOF
GB2400851B (en) 2003-04-25 2004-12-15 Bioinvent Int Ab Identifying binding of a polypeptide to a polypeptide target
JP2004321100A (ja) * 2003-04-25 2004-11-18 Rikogaku Shinkokai ＩｇＧのＦｃ領域を含むタンパク質の変異体
GB2401040A (en) 2003-04-28 2004-11-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for treating interleukin-6 related diseases
CA2527694C (en) 2003-05-30 2015-07-14 Hendricus Renerus Jacobus Mattheus Hoogenboom Fab library for the preparation of anti vegf and anti rabies virus fabs
PT2272868E (pt) 2003-06-05 2015-07-07 Genentech Inc Terapêutica de combinação para distúrbios de células b
JP4794301B2 (ja) 2003-06-11 2011-10-19 中外製薬株式会社 抗体の製造方法
EP1636264A2 (en) 2003-06-24 2006-03-22 MERCK PATENT GmbH Tumour necrosis factor receptor molecules with reduced immunogenicity
EP1644416A4 (en) 2003-06-30 2007-08-29 Centocor Inc ANTI-TARGET AND GENETICALLY MODIFIED IMMUNOGLOBULIN-DERIVED PROTEINS, COMPOSITIONS, METHODS AND USES
US7297336B2 (en) 2003-09-12 2007-11-20 Baxter International Inc. Factor IXa specific antibodies displaying factor VIIIa like activity
JP2005101105A (ja) 2003-09-22 2005-04-14 Canon Inc 位置決め装置、露光装置、デバイス製造方法
US20060134105A1 (en) 2004-10-21 2006-06-22 Xencor, Inc. IgG immunoglobulin variants with optimized effector function
AU2003271174A1 (en) 2003-10-10 2005-04-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Double specific antibodies substituting for functional protein
EP2311945A1 (en) 2003-10-14 2011-04-20 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Bispecific antibodies substituting for functional proteins
WO2005063815A2 (en) 2003-11-12 2005-07-14 Biogen Idec Ma Inc. Fcϝ receptor-binding polypeptide variants and methods related thereto
JP2008504002A (ja) 2003-11-12 2008-02-14 バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド 新生児Ｆｃレセプター（ＦｃＲｎ）結合ポリペプチド改変体、ダイマーＦｃ結合タンパク質、およびそれらに関連する方法
EP1701979A2 (en) 2003-12-03 2006-09-20 Xencor, Inc. Optimized antibodies that target the epidermal growth factor receptor
KR101333449B1 (ko) 2003-12-10 2013-11-26 메다렉스, 엘.엘.시. Ｉｐ―１０ 항체 및 그의 용도
DK1711207T3 (da) 2003-12-10 2013-03-11 Medarex Inc Interferon-alpha-antistoffer og anvendelse heraf
WO2005056605A1 (ja) 2003-12-12 2005-06-23 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha ３量体以上の受容体を認識する改変抗体
TW200530269A (en) 2003-12-12 2005-09-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-Mpl antibodies
AR048210A1 (es) 2003-12-19 2006-04-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Un agente preventivo para la vasculitis.
US20050136051A1 (en) 2003-12-22 2005-06-23 Bernard Scallon Methods for generating multimeric molecules
RU2377254C2 (ru) 2003-12-25 2009-12-27 Кирин Фарма Кабусики Кайся Мутанты анти-cd40 антитела
AU2004309050B2 (en) 2003-12-30 2010-10-14 Merck Patent Gmbh IL-7 fusion proteins
US20050266425A1 (en) 2003-12-31 2005-12-01 Vaccinex, Inc. Methods for producing and identifying multispecific antibodies
EA012872B1 (ru) 2004-01-09 2009-12-30 Пфайзер Инк. АНТИТЕЛА ПРОТИВ MAdCAM
WO2005092925A2 (en) 2004-03-24 2005-10-06 Xencor, Inc. Immunoglobulin variants outside the fc region
AR048335A1 (es) 2004-03-24 2006-04-19 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agentes terapeuticos para trastornos del oido interno que contienen un antagonista de il- 6 como un ingrediente activo
WO2005112564A2 (en) 2004-04-15 2005-12-01 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Germline and sequence variants of humanized antibodies and methods of making and using them
TW200605906A (en) 2004-05-11 2006-02-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Remedy for thrombopenia
AU2005250499B2 (en) 2004-06-03 2011-12-08 Novimmune S.A. Anti-CD3 antibodies and methods of use thereof
KR100620554B1 (ko) 2004-06-05 2006-09-06 한국생명공학연구원 Ｔａｇ-72에 대한 인간화 항체
AR049390A1 (es) 2004-06-09 2006-07-26 Wyeth Corp Anticuerpos contra la interleuquina-13 humana y usos de los mismos
CA2572133A1 (en) 2004-06-25 2006-01-12 Medimmune, Inc. Increasing the production of recombinant antibodies in mammalian cells by site-directed mutagenesis
UA94019C2 (ru) 2004-07-09 2011-04-11 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Антитело, которое специфически связывается с глипиканом 3 (gpc3)
KR100863776B1 (ko) 2004-07-15 2008-10-16 젠코어 인코포레이티드 최적화된 Ｆｃ 변이체
JP5055603B2 (ja) 2004-08-04 2012-10-24 メントリック・バイオテック・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー 変異Ｆｃ領域
EP1789446A2 (en) 2004-09-02 2007-05-30 Genentech, Inc. Heteromultimeric molecules
US7572456B2 (en) 2004-09-13 2009-08-11 Macrogenics, Inc. Humanized antibodies against West Nile Virus and therapeutic and prophylactic uses thereof
EP1799718A1 (en) 2004-09-14 2007-06-27 National Institute for Biological Standards and Control (NIBSC) Vaccine
US20060074225A1 (en) 2004-09-14 2006-04-06 Xencor, Inc. Monomeric immunoglobulin Fc domains
US7563443B2 (en) 2004-09-17 2009-07-21 Domantis Limited Monovalent anti-CD40L antibody polypeptides and compositions thereof
TWI380996B (zh) 2004-09-17 2013-01-01 Hoffmann La Roche 抗ｏｘ４０ｌ抗體
EP1810979B1 (en) 2004-09-22 2012-06-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. STABILIZED HUMAN IgG4 ANTIBODIES
WO2006047350A2 (en) 2004-10-21 2006-05-04 Xencor, Inc. IgG IMMUNOGLOBULIN VARIANTS WITH OPTIMIZED EFFECTOR FUNCTION
EA012162B1 (ru) 2004-10-22 2009-08-28 Эмджен Инк. Способ рефолдинга рекомбинантных антител
US7462697B2 (en) 2004-11-08 2008-12-09 Epitomics, Inc. Methods for antibody engineering
US7632497B2 (en) 2004-11-10 2009-12-15 Macrogenics, Inc. Engineering Fc Antibody regions to confer effector function
US20090061485A1 (en) 2004-12-22 2009-03-05 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of Producing an Antibody Using a Cell in Which the Function of Fucose Transporter Is Inhibited
US8728828B2 (en) 2004-12-22 2014-05-20 Ge Healthcare Bio-Sciences Ab Purification of immunoglobulins
EP1833510A4 (en) 2004-12-27 2010-02-10 Progenics Pharmaceuticals Neva ORAL ADMINISTRATION ANTITOXIN ANTIBODIES AND METHODS OF MAKING AND USING THE SAME
EP2476705B1 (en) 2004-12-28 2015-10-07 Innate Pharma Monoclonal antibodies against NKG2A
US20060275282A1 (en) 2005-01-12 2006-12-07 Xencor, Inc. Antibodies and Fc fusion proteins with altered immunogenicity
EP1847602B1 (en) 2005-01-12 2014-04-23 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. STABILIZED HUMAN IgG2 ANTIBODIES
US7700099B2 (en) 2005-02-14 2010-04-20 Merck & Co., Inc. Non-immunostimulatory antibody and compositions containing the same
CA2602663A1 (en) 2005-03-31 2006-10-05 Xencor, Inc. Fc variants with optimized properties
US9493569B2 (en) 2005-03-31 2016-11-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Structural isomers of sc(Fv)2
EP3623473A1 (en) 2005-03-31 2020-03-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Process for production of polypeptide by regulation of assembly
TW200714313A (en) 2005-04-08 2007-04-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Antibodies that substitute for coagulation factor VIII
JP5222720B2 (ja) 2005-04-15 2013-06-26 ジェネンテック， インコーポレイテッド ＨＧＦβ鎖変異体
CA2606102C (en) 2005-04-26 2014-09-30 Medimmune, Inc. Modulation of antibody effector function by hinge domain engineering
JP5047947B2 (ja) 2005-05-05 2012-10-10 デューク ユニバーシティ 自己免疫疾患のための抗ｃｄ１９抗体治療
WO2006132363A1 (ja) 2005-06-10 2006-12-14 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha メグルミンを含有するタンパク質製剤の安定化剤、およびその利用
EP1900814A4 (en) 2005-06-10 2010-07-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd SCREED SC (FV) 2-MUTANTE
AU2006261920A1 (en) 2005-06-23 2007-01-04 Medimmune, Llc Antibody formulations having optimized aggregation and fragmentation profiles
JP2009500458A (ja) 2005-07-11 2009-01-08 マクロジェニクス，インコーポレーテッド ヒト化抗ｃｄ１６ａ抗体を用いる自己免疫疾患の治療方法
JP5105485B2 (ja) 2005-08-10 2012-12-26 マクロジェニクス，インコーポレーテッド 変異型Ｆｃ領域を有する抗体の同定および工学的改変およびその使用方法
JP5415071B2 (ja) 2005-08-19 2014-02-12 ワイス・エルエルシー Ｇｄｆ−８に対するアンタゴニスト抗体ならびにａｌｓおよびその他のｇｄｆ−８関連障害の処置における使用
US20070134234A1 (en) 2005-09-29 2007-06-14 Viral Logic Systems Technology Corp. Immunomodulatory compositions and uses therefor
CA2625773C (en) 2005-10-14 2015-05-12 Fukuoka University Inhibition of interleukin-6 (il-6) receptor promotes pancreatic islet transplantation
RU2450830C2 (ru) 2005-10-21 2012-05-20 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Средства для лечения кардиопатии
WO2007060411A1 (en) 2005-11-24 2007-05-31 Ucb Pharma S.A. Anti-tnf alpha antibodies which selectively inhibit tnf alpha signalling through the p55r
EP1820513A1 (en) 2006-02-15 2007-08-22 Trion Pharma Gmbh Destruction of tumor cells expressing low to medium levels of tumor associated target antigens by trifunctional bispecific antibodies
TW200745163A (en) 2006-02-17 2007-12-16 Syntonix Pharmaceuticals Inc Peptides that block the binding of IgG to FcRn
WO2007108559A1 (ja) 2006-03-23 2007-09-27 Kirin Pharma Kabushiki Kaisha ヒトトロンボポエチン受容体に対するアゴニスト抗体
PT1999154E (pt) 2006-03-24 2013-01-24 Merck Patent Gmbh Domínios proteicos heterodiméricos modificados
ES2654040T3 (es) 2006-03-31 2018-02-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Método de modificación de anticuerpos para la purificación de anticuerpos biespecíficos
CN101479381B (zh) 2006-03-31 2015-04-29 中外制药株式会社 调控抗体血液动力学的方法
EP2025346B1 (en) 2006-04-07 2016-08-10 Osaka University Muscle regeneration promoter
ES2398076T3 (es) 2006-06-02 2013-03-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anticuerpos de alta afinidad contra el receptor de IL-6 humano
JP2009539841A (ja) 2006-06-06 2009-11-19 トラークス，インコーポレイテッド 自己免疫疾患の治療における抗ｃｄ３抗体の投与
BRPI0712426B1 (pt) 2006-06-08 2021-10-26 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Usos de um anticorpo anti-nr10/il-31ra com atividade neutralizante de nr10/il-31ra, de um fragmento e/ou um fragmento quimicamente modificado do anticorpo e de um agente
US20090182127A1 (en) 2006-06-22 2009-07-16 Novo Nordisk A/S Production of Bispecific Antibodies
US20100034194A1 (en) 2006-10-11 2010-02-11 Siemens Communications Inc. Eliminating unreachable subscribers in voice-over-ip networks
US20110236374A1 (en) 2007-01-24 2011-09-29 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Genetically recombinant antibody composition capable of binding specifically to ganglioside gm2
WO2008092117A2 (en) 2007-01-25 2008-07-31 Xencor, Inc. Immunoglobulins with modifications in the fcr binding region
WO2008119353A1 (en) 2007-03-29 2008-10-09 Genmab A/S Bispecific antibodies and methods for production thereof
EP2155790A1 (en) 2007-05-31 2010-02-24 Genmab A/S Method for extending the half-life of exogenous or endogenous soluble molecules
US20100267934A1 (en) 2007-05-31 2010-10-21 Genmab A/S Stable igg4 antibodies
ES2540854T3 (es) 2007-06-29 2015-07-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Usos de antagonistas MDL-1
EP2031064A1 (de) 2007-08-29 2009-03-04 Boehringer Ingelheim Pharma GmbH & Co. KG Verfahren zur Steigerung von Proteintitern
CA2698809C (en) 2007-09-14 2023-10-17 Amgen Inc. Homogeneous antibody populations
EP3127921A1 (en) 2007-09-26 2017-02-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of modifying isoelectric point of antibody via amino acid substition in cdr
WO2009041734A1 (ja) 2007-09-26 2009-04-02 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. ヒトトロンボポエチン受容体に対するアゴニスト抗体
BRPI0817250A2 (pt) 2007-09-26 2014-06-17 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticorpo anti-receptor da il-6.
WO2009041613A1 (ja) 2007-09-26 2009-04-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 抗体定常領域改変体
WO2009041062A1 (ja) 2007-09-28 2009-04-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 血漿中動態が改善されたグリピカン３抗体
JO3076B1 (ar) 2007-10-17 2017-03-15 Janssen Alzheimer Immunotherap نظم العلاج المناعي المعتمد على حالة apoe
WO2009053368A1 (en) 2007-10-22 2009-04-30 Merck Serono S.A. Single ifn-beta fused to a mutated igg fc fragment
BRPI0821110B8 (pt) 2007-12-05 2021-05-25 Chugai Pharmaceutical Co Ltd anticorpo de neutralização de anti-nr10/il31ra, composição farmacêutica compreendendo o referido anticorpo e uso do mesmo
NZ585959A (en) 2007-12-18 2012-09-28 Bioalliance Cv Antibodies recognizing a carbohydrate containing epitope on cd-43 and cea expressed on cancer cells and methods using same
US8242247B2 (en) 2007-12-21 2012-08-14 Hoffmann-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
PE20091174A1 (es) 2007-12-27 2009-08-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Formulacion liquida con contenido de alta concentracion de anticuerpo
ES2563027T3 (es) 2008-01-07 2016-03-10 Amgen Inc. Método para fabricación de moléculas heterodímeras Fc de anticuerpos utilizando efectos de conducción electrostática
KR20160070165A (ko) 2008-02-08 2016-06-17 메디뮨 엘엘씨 Ｆｃ 리간드 친화성이 감소된 항-ＩＦＮＡＲ１ 항체
EP2604280A3 (en) 2008-03-27 2013-10-16 ZymoGenetics, Inc. Compositions and methods for inhibiting PDGFRBETA and VEGF-A
HUE067049T2 (hu) 2008-04-11 2024-09-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Két vagy több antigén-molekulát ismétlõdõen megkötni képes antigénkötõ molekula
AU2009241589B2 (en) 2008-04-29 2013-10-10 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
WO2009139822A1 (en) 2008-05-01 2009-11-19 Amgen Inc. Anti-hepcidin antibodies and methods of use
TWI440469B (zh) 2008-09-26 2014-06-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Improved antibody molecules
BRPI0919382A2 (pt) 2008-09-26 2016-01-05 Roche Glycart Ag anticorpos bi-específicos anti-egfr/anti-igf-1r
CN104974251A (zh) * 2008-10-20 2015-10-14 Abbvie公司 在抗体纯化过程中的病毒灭活
WO2010064090A1 (en) 2008-12-02 2010-06-10 Pierre Fabre Medicament Process for the modulation of the antagonistic activity of a monoclonal antibody
AR074438A1 (es) 2008-12-02 2011-01-19 Pf Medicament Proceso para la modulacion de la actividad antagonista de un anticuerpo monoclonal
DE202008016028U1 (de) 2008-12-04 2010-04-15 Melitta Haushaltsprodukte Gmbh & Co. Kg Behälter zur Aufbewahrung von Gegenständen
US20120149875A1 (en) * 2009-01-12 2012-06-14 Ge Healthcare Bio-Sciences Ab Affinity chromatography matrix
AU2010206681A1 (en) 2009-01-23 2011-09-01 Biogen Idec Ma Inc. Stabilized Fc polypeptides with reduced effector function and methods of use
PE20121094A1 (es) 2009-03-05 2012-09-13 Abbvie Inc Proteinas de union a il-17
JP2010210772A (ja) 2009-03-13 2010-09-24 Dainippon Screen Mfg Co Ltd 液晶表示装置の製造方法
US9228017B2 (en) 2009-03-19 2016-01-05 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody constant region variant
EP3674317B1 (en) 2009-03-19 2024-12-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody constant region variant
EP2233500A1 (en) 2009-03-20 2010-09-29 LFB Biotechnologies Optimized Fc variants
CN102471380B (zh) 2009-04-01 2015-01-14 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗FcRH5抗体和免疫偶联物及使用方法
CA2757931C (en) 2009-04-07 2019-03-26 Roche Glycart Ag Trivalent, bispecific antibodies
WO2010129304A2 (en) 2009-04-27 2010-11-11 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Method for making heteromultimeric molecules
WO2011037158A1 (ja) 2009-09-24 2011-03-31 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
US10053513B2 (en) 2009-11-30 2018-08-21 Janssen Biotech, Inc. Antibody Fc mutants with ablated effector functions
PL2519543T3 (pl) 2009-12-29 2016-12-30 Białka wiążące heterodimery i ich zastosowania
US9023997B2 (en) 2010-01-20 2015-05-05 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-ILT5 antibodies and ILT5-binding antibody fragments
CA2787755A1 (en) 2010-01-20 2011-07-28 Tolerx, Inc. Immunoregulation by anti-ilt5 antibodies and ilt5-binding antibody fragments
AR080428A1 (es) 2010-01-20 2012-04-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Formulaciones liquidas estabilizadas contentivas de anticuerpos
KR101913440B1 (ko) 2010-03-02 2018-10-30 교와 핫꼬 기린 가부시키가이샤 개변 항체 조성물
JP5889181B2 (ja) 2010-03-04 2016-03-22 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
KR20150002894A (ko) 2010-03-11 2015-01-07 리나트 뉴로사이언스 코프. ｐＨ 의존성 항원 결합을 갖는 항체
PT2560993T (pt) 2010-04-20 2024-09-16 Genmab As Proteínas contendo anticorpo heterodimérico fc e métodos para a produção das mesmas
WO2011133886A2 (en) 2010-04-23 2011-10-27 Genentech, Inc. Production of heteromultimeric proteins
JP6022444B2 (ja) 2010-05-14 2016-11-09 ライナット ニューロサイエンス コーポレイション ヘテロ二量体タンパク質ならびにそれを生産および精製するための方法
AU2011257121A1 (en) 2010-05-27 2013-01-10 Genmab A/S Monoclonal antibodies against HER2
JP5953303B2 (ja) 2010-07-29 2016-07-20 ゼンコア インコーポレイテッド 改変された等電点を有する抗体
JP2013537416A (ja) 2010-08-13 2013-10-03 メディミューン リミテッド 変異型Ｆｃ領域を含むモノマーポリペプチド及び使用方法
RS59589B1 (sr) 2010-11-05 2019-12-31 Zymeworks Inc Dizajniranje stabilnog heterodimernog antitela sa mutacijama u fc domenu
KR102099580B1 (ko) 2010-11-17 2020-04-10 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 혈액응고 제viii 인자의 기능을 대체하는 기능을 갖는 다중특이성 항원 결합 분자
LT2647707T (lt) 2010-11-30 2018-11-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Citotoksiškumą indukuojantis terapinis agentas
EP2698431B1 (en) 2011-03-30 2020-09-09 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Retention of antigen-binding molecules in blood plasma and method for modifying immunogenicity
WO2012145238A2 (en) 2011-04-20 2012-10-26 Tolerx, Inc. Methods for reducing an adverse immune response to a foreign antigen in a human subject with anti-cd4 antibodies or cd4-binding fragments thereof or cd4-binding molecules
PL2771364T3 (pl) 2011-10-27 2020-01-31 Genmab A/S Wytwarzanie heterodimerycznych białek
KR102168733B1 (ko) 2011-10-31 2020-10-23 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 중쇄와 경쇄의 회합이 제어된 항원 결합 분자
WO2013063702A1 (en) 2011-11-04 2013-05-10 Zymeworks Inc. Stable heterodimeric antibody design with mutations in the fc domain
GB201203051D0 (en) 2012-02-22 2012-04-04 Ucb Pharma Sa Biological products
MY166045A (en) 2012-03-08 2018-05-22 Hoffmann La Roche Abeta antibody formulation
JP6280031B2 (ja) 2012-03-29 2018-02-14 中外製薬株式会社 抗ｌａｍｐ５抗体およびその利用
KR102171431B1 (ko) 2012-04-20 2020-10-30 메뤼스 엔.페. Ig-유사 분자의 제조방법 및 제조수단
US20140154270A1 (en) * 2012-05-21 2014-06-05 Chen Wang Purification of non-human antibodies using kosmotropic salt enhanced protein a affinity chromatography
NZ704771A (en) 2012-08-13 2018-02-23 Regeneron Pharma Anti-pcsk9 antibodies with ph-dependent binding characteristics
US20150297820A1 (en) * 2012-09-10 2015-10-22 Kaneka Corporation Adsorbent
JP6273205B2 (ja) 2012-10-05 2018-01-31 協和発酵キリン株式会社 ヘテロダイマータンパク質組成物
EP2914634B1 (en) 2012-11-02 2017-12-06 Zymeworks Inc. Crystal structures of heterodimeric fc domains
MX368665B (es) 2013-03-15 2019-10-10 Abbvie Biotherapeutics Inc Variantes de fc.
CA2925256C (en) 2013-09-27 2023-08-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for producing polypeptide heteromultimer
TW201625299A (zh) 2014-06-20 2016-07-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd 用於因第ｖｉｉｉ凝血因子及／或活化的第ｖｉｉｉ凝血因子的活性降低或欠缺而發病及／或進展的疾病之預防及／或治療之醫藥組成物
AR101262A1 (es) * 2014-07-26 2016-12-07 Regeneron Pharma Plataforma de purificación para anticuerpos biespecíficos
MA40764A (fr) 2014-09-26 2017-08-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agent thérapeutique induisant une cytotoxicité
CN114773470A (zh) 2015-02-05 2022-07-22 中外制药株式会社 包含离子浓度依赖性的抗原结合结构域的抗体，fc区变体，il-8-结合抗体及其应用
US11142587B2 (en) 2015-04-01 2021-10-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for producing polypeptide hetero-oligomer
JP6962819B2 (ja) 2015-04-10 2021-11-05 アディマブ， エルエルシー 親ホモ二量体抗体種からのヘテロ二量体多重特異性抗体の精製方法
WO2016166014A1 (en) 2015-04-17 2016-10-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with coagulation factors and multispecific antibodies
JP2018123055A (ja) 2015-04-24 2018-08-09 公立大学法人奈良県立医科大学 血液凝固第ｖｉｉｉ因子（ｆｖｉｉｉ）の機能を代替する多重特異性抗原結合分子を含有する、血液凝固第ｘｉ因子（ｆｘｉ）異常症の予防および／または治療に用いられる医薬組成物
KR102784832B1 (ko) 2015-12-28 2025-03-21 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 정제를 효율화하기 위한 방법
TWI797073B (zh) 2016-01-25 2023-04-01 德商安美基研究（慕尼黑）公司 包含雙特異性抗體建構物之醫藥組合物
WO2017188356A1 (ja) 2016-04-28 2017-11-02 中外製薬株式会社 抗体含有製剤
KR102687774B1 (ko) 2017-03-31 2024-07-24 고리츠다이가쿠호징 나라켕리츠 이카다이가쿠 혈액 응고 제viii 인자의 기능을 대체하는 다중 특이성 항원 결합 분자를 함유하는, 혈액 응고 제ix 인자 이상증의 예방 및/또는 치료에 이용되는 의약 조성물
JP2020518584A (ja) 2017-05-02 2020-06-25 中外製薬株式会社 細胞傷害誘導治療剤
US10246642B2 (en) 2017-08-25 2019-04-02 Saudi Arabian Oil Company Process to produce blown asphalt
SG11201810270SA (en) 2017-09-29 2019-04-29 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Multispecific antigen-binding molecules having blood coagulation factor viii (fviii) cofactor function-substituting activity and pharmaceutical formulations containing such a molecule as an active ing
MX2020003472A (es) 2017-11-01 2020-08-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Variante e isoforma de anticuerpos con actividad biologica reducida.
KR20220080044A (ko) 2018-05-16 2022-06-14 얀센 바이오테크 인코포레이티드 암 요법에 사용하기 위한 bcma/cd3 및 gprdc5d/cd3 이중특이성 항체
US20240183826A9 (en) 2020-04-02 2024-06-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Analysis method for impurity molecules in composition containing multi-specific antigen-binding molecules

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008523140A (ja) * 2004-12-14 2008-07-03 ジーイー・ヘルスケア・バイオサイエンス・アクチボラグ 免疫グロブリンの精製方法
JP2012531439A (ja) * 2009-06-26 2012-12-10 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 天然の免疫グロブリン形式を有する容易に単離される二重特異性抗体
WO2011078332A1 (ja) * 2009-12-25 2011-06-30 中外製薬株式会社 ポリペプチド多量体を精製するためのポリペプチドの改変方法
WO2011125674A1 (ja) * 2010-03-31 2011-10-13 Jsr株式会社 アフィニティークロマトグラフィー用充填剤
JP2015510764A (ja) * 2012-03-13 2015-04-13 ノビミューン エスアー 天然の免疫グロブリン形式を有する容易に単離される二重特異性抗体
WO2015063339A1 (en) * 2013-11-04 2015-05-07 Glenmark Pharmaceuticals S.A. Production of t cell retargeting hetero-dimeric immunoglobulins
JP2016069329A (ja) * 2014-09-30 2016-05-09 Jsr株式会社 標的物の精製方法、及び、ミックスモード用担体

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Dynamic binding capacity study on MabSelect SuReTM LX for capturing high-titer monoclonal antibodies", GE HEALTHCARE LIFE SCIENCES APPLICATION NOTE 28-9875-25-AA, 2011, XP055395739, Retrieved from the Internet <URL:http://www.processdevelopmentforum.com/images/articles/28-9875-25_AA_AN_DBC_study_on_MabSelect_SuRe_LX_final.pdf> [retrieved on 20170217] *
See also references of EP3398965A4 *
TAKAYOSHI ABE ET AL.: "Novel Protein A Resin: Synthetic Polymer Matrix Design Impact on Antibody Binding Capacity", JSR TECHNICAL REVIEW, vol. 119, 2012, pages 1 - 5, XP055558083, Retrieved from the Internet <URL:http//www.jsr.co.jp/pdf/rd/tec119-1.pdf> [retrieved on 20170217] *

Cited By (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11168344B2 (en) 2005-03-31 2021-11-09 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for producing polypeptides by regulating polypeptide association
US10934344B2 (en) 2006-03-31 2021-03-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods of modifying antibodies for purification of bispecific antibodies
US11046784B2 (en) 2006-03-31 2021-06-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for controlling blood pharmacokinetics of antibodies
US12473375B2 (en) 2006-03-31 2025-11-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for controlling blood pharmacokinetics of antibodies
US12116414B2 (en) 2007-09-26 2024-10-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of modifying isoelectric point of antibody via amino acid substitution in CDR
US12122840B2 (en) 2007-09-26 2024-10-22 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of modifying isoelectric point of antibody via amino acid substitution in CDR
US11248053B2 (en) 2007-09-26 2022-02-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of modifying isoelectric point of antibody via amino acid substitution in CDR
US11332533B2 (en) 2007-09-26 2022-05-17 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Modified antibody constant region
US10253091B2 (en) 2009-03-19 2019-04-09 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody constant region variant
US10435458B2 (en) 2010-03-04 2019-10-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody constant region variants with reduced Fcgammar binding
US10450381B2 (en) 2010-11-17 2019-10-22 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods of treatment that include the administration of bispecific antibodies
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