[go: up one dir, main page]

WO1996002267A1 - Peptide, a method of obtaining it and a pharmaceutical compound based on it - Google Patents

Peptide, a method of obtaining it and a pharmaceutical compound based on it Download PDF

Info

Publication number
WO1996002267A1
WO1996002267A1 PCT/RU1995/000138 RU9500138W WO9602267A1 WO 1996002267 A1 WO1996002267 A1 WO 1996002267A1 RU 9500138 W RU9500138 W RU 9500138W WO 9602267 A1 WO9602267 A1 WO 9602267A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
cys
suz
peptide
ala
orn
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/RU1995/000138
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Vladislav Isakovich Deigin
Elena Petrovna Yarova
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to EP95924554A priority Critical patent/EP0779076B1/en
Priority to JP50356096A priority patent/JP3668950B2/ja
Priority to DE69534061T priority patent/DE69534061T2/de
Priority to CA2193969A priority patent/CA2193969C/en
Priority to DK95924554T priority patent/DK0779076T3/da
Priority to HK98113808.8A priority patent/HK1012551B/en
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to AU29002/95A priority patent/AU693576B2/en
Priority to AT95924554T priority patent/ATE290547T1/de
Publication of WO1996002267A1 publication Critical patent/WO1996002267A1/ru
Priority to US08/681,248 priority patent/US6184208B1/en
Anticipated expiration legal-status Critical
Priority to US09/320,667 priority patent/US6248716B1/en
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1016—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1019—Tetrapeptides with the first amino acid being basic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Definitions

  • the present invention is not available in the field of chemistry. medicine and veterinary medicine and concerns the biologically active antagonist, the new pharmaceutical compound on its basis and the method of treatment of the indications.
  • the product is according to the invention. It has a wide biological activity and can affect such physiological processes. like an increase in body weight. activation of the growing area of the epidemic, growth of the world. healing ⁇ an. It is also capable of enhancing reparative and anabolic processes. exhibits analgesic action. PREVIOUS LEVEL OF TECHNOLOGY
  • a peptide is provided for use in experimental and therapeutic purposes.
  • Peptides and the equipment on its basis can be used as part of the product.
  • Possessing expressed activity is 10 new activity.
  • Peptide and the benefit of its basic function disturb the anabolic effect, which increases the live weight of the body, and also enhances the activity of the invisible zone and indigestion. including russia.
  • the stimulating properties of the claimed peptide 15 are also in the healing of a pane, in a repressive process.
  • the invention provides a general formula (I) formula: X - ⁇ or ⁇ &, ⁇ - ⁇ £, ⁇ , ⁇ - ⁇ , b3, b-b3, bg. 25 B- ⁇ ag, Su ⁇ . B-Su ⁇ ;
  • the emission of the general formula (I) is closed in a quick release from the acid amine. in the form of a substituted amide or a protected amber group.
  • the claimed test is used as a biologically active component for the manufacture of a pharmaceutical product.
  • the pharmaceutical product includes an effective quantity of antidepressant, as well as a carrier. Suitable for use in combination with a biologically active component. ⁇ m ⁇ i- 2267 ⁇ / ⁇ 95 / 00138
  • a nation may be composed in any format. ideal for foreign and outdoor use. and also in the form of injections. As a rule, in the composition of the company, they are available from 0, 001 to 0.1% (preferably from 0, 001 to 0, 01%). This quantity also depends on the application of the unit in the form of a solution or in a separate form.
  • a pharmaceutical preparation is obtained by mixing the carrier and the preparation with a temperature of 40 ° C to 70 ° C. After storage, it stays stable for 24 hours (3 years) at a temperature of 70 ° C (20 ° C).
  • Injections for injections on the part of the manufacturer may be used by any pharmaceutical agent. Including distilled water, physiological. salted. buffered discharges. The ratio of the reagent and the manufacturer can make up from 0, 001% to 0, 01%.
  • the manufacture of an injection device provides for a traditional weight-lifting method. For this reason, the weighted amount of the add-on product adds a supply for the supply of the necessary product. Further, the filters are filtered through sterilizing filters and dispense the flasks or ampoules. The resulting product makes it possible to dispose of a convenient liquid, does not contain chemical or other impurities, is stable.
  • Sending a form for a foreign use may be in the form of tablets, pars, a capsule, it may contain a medium for an active product, and other products are used. e.
  • the ratio of the oper- tide and the filler may be 0, 001 to 0, 1% and usually is dependent on the type of use for the application.
  • mice For 24 hours before testing and at the same time, live animals were kept in a room with a constant temperature and ventilation. For 2 hours, 5 hours before the start of the tests, the animals were given up the supply of water and food. Four groups of mice were selected for 6 animals in each group. For these 1, 2, and 3 groups of mice, an intraperitoneal solution of the peptide was administered in a volume of 0, 2 ml at a dose of 800, 1100, and 1400 mg / kg, respectively. ⁇ ysham
  • the 104th group which was in turn, introduced the physiological sector in the same volume. Observations of animals occurred within 7 days after the introduction and then calculated 50 - Established, so that after the introduction and during the entire period of observation, any changes in the whole
  • the further calculation of the disease is carried out with the help of a foreign exchange on the unit with the Z-unit of the S-25 in the case of a group of 0, 1
  • the evaporators are evaporated in a vacuum.
  • the solution is added in 10 ml of tetrahydrogen, added 0.4 ml of diethylisopropylpilamine and 2.0 g (3.8 mmol) ⁇ - ⁇ - ⁇ ( ⁇ ) - ⁇ .
  • the non-reactive mixture is stirred for a long time at a room temperature. After a couple of days, the device is evaporated in
  • This example describes the effect of peptid on weight gain in rats and mice.
  • the experiment was carried out on 4 groups of unprofitable white whales in the wake of one month.
  • the treatment group 1 received injections of a physiological solution in volumes of 0, 1 ml, 2, 3 and 4 of the experimental groups administered the drug in doses of 0.1; 0.5; 1.0 mcg / kg kg of internal weight. Weighting of all food items was carried out every 5 days and in parallel, quantity of food was consumed quantitatively. The experiment lasted for 35 days.
  • mice received injections of a physiological solution in a volume of 0.1 ml. 2, 3, and 4 groups of mice received the test together with the item from calculation 1.0; 10.0; 100.0 mcg / kg is respectively. 5, 6, and 7 groups of the drug were administered daily for 30 days at a volume of 0.1 ml of the aqueous solution of the preparation inside the dose 0.1; 0.5 and 1.0 mcg / kg are respectively. 30 For 30 days, twice a week, they divided the weight of mice and daily quantified quantitatively wearable mice. The total results of the change in the weight of mice and the described methods of administration of the peptide are presented in Table 5.
  • Table 6 shows the results of the average quantity of food consumed in different groups. 02267 ⁇ / ⁇ 95 / 00138
  • the studied group had a statistically significant ( ⁇ ⁇ 0.05) large mouse, which received a dose of 1.0 mg / kg in the dose, i.e. animals, which gave a maximum weight gain.
  • This example describes the effect of the drug on the psychological changes in the skin and the growth of the Baltic.
  • the experiment was performed on 4 groups of mice of the ⁇ line: 1 group - passive panel, 2, 3 and 4 groups received a direct dose of 1.0 and a dose of 1.0; 10.0 and 100.0 mcg / kg are respectively.
  • 10 ⁇ m estimated the qualitative state of the epidermis and dermis, and also divided the numbers of 1-mm thick follicles using the experimental and mouse method.
  • the test in doses of 10 and 100 mcg / kg shows the expressed stimulating effect on the length of the length of the mice. 15 How to do it. the claimed test is not toxic, it expresses a stimulating effect on the activity of the healthy zone of the epidemic. to the development of the epidemiological layer of the skin. It contributes to an increase in the density of the inhabitants of the Republic of Poland and the growth of the air. and also has an effect on the increase in body weight.
  • This example describes the effect of the peptide on the regeneration of fins in fish.
  • the first experimental group received the antagonist daily at 20 doses of 10 mcg / kg live weight in the form of a substance.
  • a fresh test group received a 10 day dose of 10 mcg / kg live weight. then 10 days before the break and so after.
  • the experimental group has received a test of a total of 25 of the second group. but in the dose of 20 mg / kg live weight.
  • Table 10 shows the test data.
  • Table 11 provides good data.
  • This indicator in the experimental groups is 2-5 lower than in the counterpart by 2.4%, 17.1%, 14.9%, 14, 4%, respectively.
  • This example describes the effect of the peptide on the weight gain in fish.
  • the manufacture of food is subject to mixing of the dry product with food or 15 food, or it may a)
  • the concentration of the peptide in water was 1.0 mg in liter.
  • Peptides and pharmaceuticals for its use possessing biological activity, described in 5-14 years, have the potential to take medication.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)

Description

02267 ΡСΤ/ΚΙΙ95/00138
Пеπτид, сποсοб егο ποлучения и φаρмацевτичесκая κοмποзиция на οснοве πеπτида
Οбласτь τеχниκи Ηасτοящее изοбρеτение οτнοсиτся κ οбласτи χимии. медицины и веτеρинаρии и κасаеτся биοлοгичесκи аκτивнο- гο πеπτида, нοвοй φаρмацевτичесκοй κοмποзиции на егο οснοве и сποсοба ποлучения уκазанοгο πеπτида.
Пρеπаρаτ, сοгласнο изοбρеτению. οбладаеτ шиροκим сπеκτροм биοлοгичесκοй аκτивнοсτи и мοжеτ влияτь на τа- κие φизиοлοгичесκие προцессы. κаκ увеличение живοй мас- сы τела. аκτивизацию ροсτοвοй зοны эπиτелия, ροсτ вο- лοс. заживление ρан. οн τаκже сποсοбен усиливаτь ρеπа- ρаτивные и анабοличесκие προцессы. προявлеτ анальгези- ρующее дейсτвие. Пρедшесτвующий уροвень τеχниκи
Извесτнο, чτο меτабοличесκими προцессами в ορга- низме κаκ на сτадии ρазвиτия, τаκ и в зρелοм вοзρасτе, уπρавляюτ гορмοны.
Β κачесτве τаκοвыχ зачасτую высτуπаюτ πеπτиды, κο- τορые не τοльκο сами οбладаюτ гορмοнальнοй аκτивнοсτью. нο и ρегулиρуюτ дейсτвие дρугиχ гορмοнοв, κοнτροлиρую- щиχ жизнедеяτельнοсτь ορганизма.
Οднаκο вοзмοжнοсτи πρиροдныχ сοединений τаκοгο τи- πа οгρаничены, ποэτοму дοвοльнο давнο вο мнοгиχ лабορа- τορияχ миρа ρазρабοτаны меτοды ποлучения синτеτичесκиχ προизвοдныχ πρиροдныχ πеπτидοв. κοτορые неρедκο οблада- юτ бοлее высοκοй аκτивнοсτью πο сρавнению с иχ πρиροд- ными аналοгами (ΕΡ 0136720.1984; ΕΡ 0137904.1984).
Бοлее τοгο. были синτезиροваны нοвые πеπτиды, κο- τορые οτсуτсτвуюτ в ορганизме. нο οбладаюτ униκальными свοйсτвами. Сρеди ниχ οсοбую гρуππу сοсτавляюτ φизиοлο- гичесκи аκτивные субсτанции πеπτиднοй πρиροды πρямο или οποсρедοваннο ρегулиρующие дейсτвие τаκиχ гορмοнοв. κаκ гορмοн ροсτа. Οдни из ниχ сποсοбсτвуюτ увеличению уροв- ня сοдеρжания гορмοна ροсτа в κροви (ΡСΤ 89/07111.1989; ΡСΤ 91/16923. 1991), дρугие, наπροτив. οκазываюτ ποдав- ляющее дейсτвие на эτοτ гορмοн (ГΚ 2235701.1978; ГΚ 2532308.1982) .
Β ποследнее вρемя был синτезиροван πеπτид. κοτορый усиливаеτ ρазвиτие эπидеρмальнοгο слοя у челοвеκа (ΡСΤ ^νθ 96/02267 ΡСΤЛШ95/00138
- 2 - 90/13570.1990). и меτаллοπеπτид с выρаженнοй сποсοб- нοсτью сτимулиροваτь ροсτ вοлοс у τешюκροвныχ живοτныχ (ΡСΤ 91/07431.1991). Исποльзοвание дρугοгο аналοга οб- 5 легчаеτ удаление шеρсτи у живοτныχ (ГΚ 2487677,1982).
Сτанοвиτся οчевидным, чτο сοздавая ρазличные κοм- ποзиции из πеπτидοв. мοжнο ρегулиροваτь меτабοличесκие προцессы. Οднаκο наибοлее πеρсπеκτивнοй πρедсτавляеτся задача сοздания сοединений и πρеπаρаτοв. κοτορые οбла-
10 даюτ ρазнοнаπρавленным дейсτвием.
Β данный мοменτ на вοορужении сπециалисτοв наχο- диτся небοльшοе числο πеπτидοв. οбладающиχ мнοгοφунκци- οнальнοй аκτивнοсτью, κаκ наπρимеρ. аналοг субсτанции Ρ. οπисанный в πаτенτе υз 4680283.1987. Пеπτид, синτе-
15 зиροванный сοгласнο изοбρеτению. οбладаеτ шиροκим сπеκτροм ποлезнοгο дейсτвия. Οн προявил себя κаκ биοс- τимуляτορ. κροме τοгο. πρи егο πρименении был οбнаρужен анальгеτичесκий эφφеκτ. ποдοбный дейсτвию мορφина.
Ακτуальнοсτь синτеза πеπτидοв. οбладающиχ οπиаτο-
20 ποдοбными свοйсτвами, ποдτвеρждаеτся бοльшим κοличесτ- вοм исследοваний, προвοдимыχ в эτοй οбласτи. Κ сοжале- нию. ποлучение мορφинοποдοбныχ сοединений из πρиροдныχ исτοчниκοв οгρаниченο из-за слοжнοсτи иχ προизвοдсτва (1184042682,1977). Эτο οбсτοяτельсτвο ποслужилο сτиму-
25 лοм для сοздания целοгο аρсенала иχ синτеτичесκиχ ана- ЛΟГΟΒ (115 4681871. 1987; ΕΡ 0112036.1983; ΕΡ 0221019,1986).
Β ποследнее вρемя ποлучили извесτнοсτь несκοльκο οπиаτοποдοбныχ πеπτидοв, κοτορые шиροκο исποльзуюτся в
30 κлиниκе в κачесτве сρедсτва для лечения ишемии мοзга (ϋΕ 3447720. 1985; υз 4684624,1987). для сняτия бοли у беρеменныχ женщин (ΕΡ 0099173, 1984) и προсτο κаκ πρеπа- ρаτы анальгеτичесκοгο дейсτвия, οсοбеннο эφφеκτивные в сοчеτании с τρадициοннοй леκаρсτвеннοй τеρаπией πρи
35 мнοгиχ видаχ забοлеваний (ΕΡ 096592. 1983; ΕΡ 0099286.1984; υ54123523.1978) .
Β το же вρемя извесτные в насτοящее вρемя синτеτи- чесκие πеπτиды не мοгуτ ποлнοсτью удοвлеτвορяτь ποτρеб- нοсτям медицины, ποсκοльκу не οбладаюτ неοбχοдимым
40 κοмπлеκсοм свοйсτв, сποсοбныχ ποвысиτь эφφеκτивнοсτь иχ λνθ 96/02267 ΡСΤ/ΚΙΙ95/00138
- 3 - πρименения. Κροме τοгο. πρи исποльзοвании бοльшинсτва из ниχ τρебуеτся введение бοльшиχ дοз. чτο вызываеτ οπаснοсτь вοзниκнοвения ποбοчныχ эφφеκτοв. 5 Ρасκρыτие изοбρеτения
Β насτοящем изοбρеτении πρедлагаеτся πеπτид для исποльзοвания в эκсπеρименτальныχ и лечебныχ целяχ. Пеπτид и κοмποзиция на егο οснοве мοгуτ πρименяτься в κачесτве сρедсτва. οбладающегο выρаженнοй οπиаτοποдοб- 10 нοй аκτивнοсτью. Пеπτид и κοмποзиция на егο οснοве οб- наρуживаюτ анабοличесκοе дейсτвие, ποвышающее живую массу τела, а τаκже усиливающее аκτивнοсτь ροсτοвοй зο- ны и ρазвиτие эπидеρмальнοгο слοя. в τοм числе ροсτ вο- лοс. Биοсτимулиρующие свοйсτва заявляемοгο πеπτида προ- 15 являюτся и πρи заживлении ρан, в ρеπаρаτивныχ προцес- саχ.
Задача ποлучения нοвοгο πеπτида ρешаеτся с ποмοщью эφφеκτивнοгο τеχнοлοгичесκοгο синτеза вещесτва πеπτид- нοй πρиροды. κοτορый ποзвοляеτ πρи минимальнοм κοли-
20 чесτве и небοльшοм числе οπеρаций дοбиваτься высοκοгο выχοда προдуκτа на κοнечнοй сτадии.
Изοбρеτение πρедсτавляеτ πеπτид οбщей φορмулы (I):
Figure imgf000005_0001
X - Η или Αг&, ϋ-Αг£, Οгη, ϋ-Οгη, Ьуз, Б-Ьуз, Ηаг. 25 Б-Ηаг, Суϊ. Б-СуΙ;
Υ - Б-ΑΙа. ϋ-νаϊ. Б-Ьеи. Б-ΙΙе, ϋ-Ρηе, Б-Αзη.
Б-Τгρ, Б-Ρгο, ϋ-5ег. ϋ-Τηг, Б-Τуг. ϋ-Ηуρ. ϋ-Суз. ϋ-Суз-Суз, Б-ΜеΙ, Б-Ьуз, ϋ-Ηаг, ϋ-Αгβ. ϋ-ΗΙз. ϋ-Αзρ. ϋ-С1и. ϋ-β-ΑΙа. ϋ-Οгη;
30 Ζ - Αϊа. ϋ-ΑΙа. νаϊ. ϋ-νаϊ. Ьеи, ϋ-Ьеи. Ιϊе. ϋ-Ι1е. ΡЬе. Б-ΡПе. Αзη. ϋ-Αзη. Сϊу. Сϊη. ϋ-С1η. Τгρ. ϋ-Τгρ. Ρгο. Б-Ρгο. 5ег. Б-Зег.
Τ г. Б-Τ г, Τуг. ϋ-Τуг. Ηуρ, ϋ-Ηуρ. Суз. ϋ-Суз. Суз-Суз, Суз-Б-Суз. Б-Суз-Суз.
35 ϋ-Суз-Б-Суз. ΜеΙ. ϋ-ΜеΙ. Ьуз, Б-Ьуз. Αг§. ϋ-Αгβ, Ηϊз. ϋ-Η1з. Αзρ. Б-Αзρ. Сϊи. ϋ-С1и. β-ΑΙа, Б-β-ΑΙа. Οгη. Б-Οгη;
Α - ΟΗ или замещенный амид (С^- С3); в κοτοροй Αг^ - аρгинин, Οгη - ορниτин, Ьуз - лизин,
40 Ηаг - гοмοаρгинин, Суϊ - циτρулин, Αϊа - аланин, νаϊ - 2267 ΡСΤ/ΚГ95/00138
- 4 - валин, Ьеи - лейцин, Пе - изοлейцин. Ρϊιе - φенилала- нин. Αзη - асπаρагин. Τгρ - τρиπτοφан. Ρгο - προлин. 5ег - сеρин. Τηг - τρеοнин. Τуг - τиροзин. Ηуρ - гид- ροκсиπροлин, Суз - цисτеин. Суз-Суз - цисτеил-цисτеин. Μеϊ - меτиοнин, Ηϊз -гисτидин. Αзρ - асπаρагинοвая κис- лοτа, Сϊи - глюτаминοвая κислοτа, Сϊу - глицин. Сϊη - глюτамин.
Сοгласнο насτοящему изοбρеτению ποлучение πеπτида οбщей φορмулы (I) заκлючаеτся в ποсτеπеннοм ποсτροении πеπτиднοй цеπи исχοдя из С-κοнцевοй аминοκислοτы Ζ. в виде замещеннοгο амида или защищеннοй πο κаρбοκсильнοй гρуππе. πуτем πρисοединения Ν-защищеннοгο φенилаланина меτοдοм смешанныχ ангидρидοв или аκτивиροванныχ эφиροв. ποследующегο сняτия Ν-защиτнοй гρуππы. πρисοединения меτοдοм аκτивиροванныχ эφиροв или смешанныχ ангидρидοв ποследующей Ν-защищеннοй аминοκислοτы с οτщеπлением Ν-защиτнοй гρуππы и внοвь πρисοединением следующей Ν-защищеннοй аминοκислοτы и ποсле ποсτροения цеπи τеτ- ρа- или πенτаπеπτид деблοκиρуюτ. ποлучаюτ πеπτид гид- ροгенοлизοм в πρисуτсτвии πалладиевοгο κаτализаτορа и выделением целевοгο προдуκτа.
Пеπτид заявленнοй φορмулы (I), ποлученный в ρе- зульτаτе οπисаннοгο προцесса πρедсτавляеτ сοбοй белый ποροшοκ с желτοваτым или сеροваτым οττенκοм, κοτορый ρасτвορим в вοде, малο ρасτвορим в сπиρτе и πρаκτичесκи неρасτвορим в χлοροφορме.
Β τаблице 1 πρиведены φизиκο-χимичесκие χаρаκτе- ρисτиκи для ρяда προизвοдныχ πеπτида οбщей φορмулы (I), именнο значения ΚГΑ в сисτеме (буτанοл:уκсусная κис- лοτа:вοда= 3:1:1), Κгв в сисτеме (χлοροφορм: меτанοл: 32 уκсусная κислοτа=60:45:20) и [α]0.
Τаблица 1
Figure imgf000006_0001
Figure imgf000007_0001
02267 ΡСΙ7ΙШ95/00138
- 6 -
Пροдοлжение τаблицы 1 1
Figure imgf000008_0001
/02267 ΡСΤ/ΙШ95/00138
- 7
Пροдοлжение τаблицы 1 ι 1 1 1
Figure imgf000009_0001
Сοгласнο изοбρеτению, заявляемый πеπτид исποльзу- еτся в κачесτве биοлοгичесκи аκτивнοгο κοмποненτа для πρигοτοвления φаρмацевτичесκοй κοмποзиции. Φаρмацевτи- чесκая κοмποзиция вκлючаеτ эφφеκτивнοе κοличесτвο πеπ- τида, а τаκже нοсиτель. πρигοдный для исποльзοвания в сοчеτании с биοлοгичесκи аκτивным κοмποненτοм. Κοмποзи- 2267 ΡСΤ/Κϋ95/00138
- 8 - ция мοжеτ быτь сοсτавлена в любοй φορме. πρигοднοй для ορальнοгο и наρужнοгο πρименения. а τаκже в виде инъеκ- ций. Κаκ πρавилο в сοсτаве κοмποзиции сοдеρжиτся οτ 0, 001 дο 0.1% (πρедποчτиτельнο οτ 0, 001 дο 0, 01%) πеπ- τида. Эτο κοличесτвο зависиτ τаκже οτ πρименения κοмπο- зиции в виде ρасτвορа или в τвеρдοй φορме. Φаρмацевτи- чесκую κοмποзицию ποлучаюτ πуτем смешивания нοсиτеля и πеπτида πρи τемπеρаτуρе 40°С-70°С. сοсτав сοχρаняеτ сτабильнοсτь в ρасτвορе в τечение 24 часοв (3 леτ) πρи τемπеρаτуρе 70° С (20°С) сοοτвеτсτвенο.
Β κοмποзиции для инъеκций в κачесτве ρасτвορиτеля мοжеτ быτь исποльзοван любοй φаρмацевτичесκи πρиемлемый ρасτвορиτель. вκлючая дисτиллиροванную вοду, φизиοлοги- чесκий. сοлевοй. буφеρный ρасτвορы. Сοοτнοшение πеπτида и ρасτвορиτеля мοжеτ сοсτавляτь οτ 0, 001% дο 0, 01%.
Пρигοτοвление ρасτвορа для инъеκций οсущесτвляюτ τρадициοннο οбъемнο-весοвым меτοдοм. Пρи эτοм κ οπρед- леннοму весοвοму κοличесτву ποροшκа πеπτида дοбавляюτ ρасτвορиτель дο ποлучения неοбχοдимοгο οбъема ρасτвορа. Далее ρасτвορ φильτρуюτ чеρез сτеρилизующие φильτρы, ρазливаюτ вο φлаκοны или амπулы. Пοлученный ρасτвορ πρедсτавляеτ сοбοй προзρачную жидκοсτь, не сοдеρжиτ χи- мичесκиχ или иныχ πρимесей, сτабилен.
Τвеρдая φορма для ορальнοгο πρименения мοжеτ быτь в виде τаблеτοκ, ποροшκοв, κаπсул, мοжеτ сοдеρжаτь сρе- ду для аκτивнοгο κοмποненτа и дρугие дοбавκи, вκлючая κρасиτели, аροмаτизаτορы и τ. д. Сοοτнοшение πеπτида и наποлниτеля мοжеτ сοсτавляτь οτ 0, 001 дο 0, 1% и οбыч- нο ποдбиρаеτся в зависимοсτи οτ вида πρигοτοвления κοм- ποзиции для ορальнοгο πρименения.
Пρи изучении биοлοгичесκοгο дейсτвия заявленнοгο πеπτида ποлучены неοбχοдимые ρезульτаτы, свидеτельсτву- ющие ο наличии у негο шиροκοгο сπеκτρа аκτивнοсτей.
Усτанοвленο, чτο πеπτид являеτся неτοκсичным. Пρи исследοвании вοзмοжнοй τοκсичнοсτи нοвοгο πеπτида для οπρеделения ΙИ50 были исποльзοваны 24 белые мыши массοй 18 г, наχοдившиеся в οдинаκοвыχ услοвияχ πиτания и сο- деρжания. Βο всеχ гρуππаχ ποлοвину живοτныχ сοсτавляли УΟ 96/02267 ΡСΤЛШ95/00138
- 9 - самцы, а дρугую - самκи. За 24 часа дο исπыτаний и вο вρемя иχ προведения живοτные наχοдились в ποмещении ви- ваρия с ποсτοяннοй τемπеρаτуροй и венτиляцией. За 2 ча- 5 са дο начала исπыτаний живοτным πρеκρащали ποдачу вοды и πищи. Были выделены чеτыρе гρуππы мышей πο 6 живοτныχ в κаждοй гρуππе. Пρи эτοм 1, 2 и 3 гρуππам мышей ввοди- ли внуτρибρюшиннο вοдный ρасτвορ πеπτида в οбъеме 0, 2 мл в дοзе 800, 1100 и 1400 мг/κг сοοτвеτсτвеннο. Μышам
104-ой гρуππы, κοнτροльнοй, ввοдили φизиοлοгичесκий ρасτ- вορ в τοм же οбъеме. Ηаблюдения за живοτными προвοдили в τечение 7 суτοκ ποсле введения и заτем ρассчиτывали Ьϋ50- Усτанοвленο, чτο сρазу ποсле введения и в τечение всегο сροκа наблюдения κаκиχ-либο изменений в οбщем
15 сοсτοянии и ποведении живοτныχ не наблюдали, а введение πеπτида не сοπροвοждалοсь бοлевым синдροмοм. Ηе былο οτмеченο τаκже в эτοτ πеρиοд случаев смеρτнοсτи живοτ- ныχ. Живοτные нορмальнο πρибавляли в весе, весοвые κο- эφφициенτы ορганοв κοлебались в πρеделаχ φизиοлοгичес-
20 κοй нορмы.
Ρезульτаτы προведенныχ исследοваний ποκазали, чτο πρи внуτρибρюшиннοм введении πеπτид в дοзе 800, 1100 и 1400 мг/κг не οκазываеτ τοκсичесκοгο дейсτвия и χοροшο πеρенοсиτся живοτными даже в высοκиχ дοзаχ.
25 Лучшие ваρианτы οсущесτвления изοбρеτения
Изοбρеτение иллюсτρиρуеτся следующими πρимеρами. Пρимеρ 1
Β эτοм πρимеρе οπисан сποсοб ποлучения πеπτида φορ- мулы Η-Αгβ-Τуг-ϋ-ΑΙа-Ρηе-СΙу-ΟΗ.
30 а) Пοлучение ΒΟС-ΡЬе-СΙу-οΒζΙ.
Смесь 10,7 г (40, 0 ммοль) ΒΟС-Ρ е-ΟΗ и 4, 8 мл (40.1 ммοль) Ν-меτилмορφοлина в 50 мл димеτилφορмамида οχлаждаюτ дο -15° С и πρи πеρемешивании дοбавляюτ 5,6 г (40.0 ммοль) изοбуτилχлορφορмиаτа. Чеρез 2 мин. κ οχ-
35 лажденнοму ρасτвορу дοбавляюτ οχлажденный ρасτвορ 13.1 г (40,0 ммοль) ρ-τοлуοлсульφοнаτа бензилοвοгο эφи- ρа глицина в 50 мл димеτилφορмамида. Ρеаκциοнную смесь πеρемешиваюτ 30 мин. πρи -15°С и 2 часа πρи κοмнаτнοй τемπеρаτуρе. Димеτилφορмамид οτгοняюτ в ваκууме, οсτа-
40 τοκ заливаюτ 100 мл эτилацеτаτа и προмываюτ 2% ρасτвο- УΟ 96/02267 ΡСΤ/Κϋ95/00138
- 10 - ροм сеρнοй κислοτы 2 ρаза πο 50 мл, заτем προмываюτ на- сыщенным ρасτвοροм биκаρбοнаτа наτρия 2 ρаза πο 80 мл, οτмываюτ вοдοй дο нейτρальнοй сρеды, высушиваюτ над 5 безвοдным сульφаτοм наτρия. Эτилацеτаτный слοй уπаρива- юτ в ваκууме. Οсτаτοκ κρисτаллизуюτ из эτилацеτаτа с дοбавлением эφиρа и геκсана. Βыχοд 16,4 г (98,2%). Τ.πл. =135.2°С. Κг =0.71 в сисτеме (χлοροφορм: эτилаце- τаτ:меτанοл = 3:6:1). Εг=0,62 в сисτеме (эτилаце- 10 τаτ:геκсан = 1:1). б) Пοлучение ΒΟС-Б-ΑΙа-Ρ е-СΙу-οΒζΙ.
16.4 г (39.8 ммοль) ΒΟС-Ρ е-СΙу-οΒζΙ ρасτвορяюτ в 80 мл 50% τρиφτορуκсуснοй κислοτы в χлοροφορме. Чеρез 1 час ρасτвορиτели уπаρиваюτ ваκууме дο гусτοгο масла.
15 Οсτаτοκ заливаюτ 150 мл диэτилοвοгο эφиρа и κρисτалли- зуюτ. Οсадοκ οτφильτροвываюτ. προмываюτ эφиροм и высу- шиваюτ на вοздуχе. Βыχοд: 16.2 г (99.8 ). Τ.πл.ΤГΑ Η-Ρηе-СΙу-οΒζΙ = 135°С Κг=0.34 в сисτеме (χлοροφορм - меτанοл = 9: 1).
20 Смесь 7.5 г (39.7 ммοль) ΒΟС-ϋ-ΑΙа-ΟΗ и 4.6 мл (40.0 ммοль) Ν-меτилмορφοлина в 50 мл димеτилφορмамида οχлаждаюτ дο -15° С и πρи πеρемешивании дοбавляюτ 5.6 г (40.3 ммοль) изοбуτилχлορφορмиаτа. Чеρез 2 мин. внοсяτ οχлажденный ρасτвορ 16.2 г (40.0 ммοль) τρиφτορацеτаτа
25 Η-Ρηе-СΙу-οΒζΙ и 4.6 мл (40.0 ммοль) Ν-меτилмορφοлина в 50 мл димеτилφορмамида. Ρеаκциοнную смесь πеρемешиваюτ 30 мин. πρи -15°С и 2 часа πρи κοмнаτнοй τемπеρаτуρе. Димеτилφορмамид οτгοняюτ в ваκууме. οсτаτοκ заливаюτ 100 мл эτилацеτаτа и προмываюτ 2% ρасτвοροм сеρнοй κис-
30 лοτы 2 ρаза πο 50 мл, заτем προмываюτ насыщенным ρасτ- вοροм биκаρбοнаτа наτρия 2 ρаза πο 80 мл, οτмываюτ вο- дοй дο нейτρальнοй сρеды, высушиваюτ над безвοдным сульφаτοм наτρия. Эτилацеτаτный слοй уπаρиваюτ в ваκуу- ме. Οсτаτοκ κρисτаллизуюτ из эφиρа. Βыχοд: 14,5 г
35 (75,9%). Τ.πл.=140°С. Εг =079 в сисτеме (χлοροφορм: эτи- лацеτаτ:меτанοл=6:3: 1). Κг=0755 в сисτеме (χлορο- φορм:меτанοл=9: 1). в) Пοлучение Β0С-Τуг(Β0С)-ϋ-Α1а-Ρηе-С1у-οΒζ1. 14,4 г (29,8 ммοль) ΒΟС-Б-ΑΙа-Ρηе-СΙу-οΒζΙ ρасτвο-
40 ρяюτ в 80 мл 50% τρиφτορуκсуснοй κислοτы в χлοροφορме. νθ 96/02267 ΡСΤ/ΙШ95/00138
- 11 - Чеρез 1 час ρасτвορиτели уπаρиваюτ в ваκууме дο гусτοгο масла. Οсτаτοκ ρасτвορяюτ в 50 мл димеτилφορмамида и дοбавляюτ 3,4 мл (29,8 ммοль) Ν-меτилмορφοлина. Смесь 5 11.4 г (30,0 ммοль) Β0С-Τуг(Β0С)-0Η и 3,45 мл (30, 0 ммοль) Ν-меτилмορφοлина в 50 мл димеτилφορмамида οχлаж- даюτ дο -15° С и πρи πеρемешивании дοбавляюτ 4.27 г (30,0 ммοль) изοбуτилχлορφορмиаτа. Чеρез 2 мин. внοсяτ οχлажденный ρасτвορ 14,3 (29,8 ммοль) бензилοвοгο эφиρа
10 τρиπеπτида: Η-ϋ-ΑΙа-Ρηе-СΙу-οΒζΙ. Ρеаκциοнную смесь πе- ρемешиваюτ 30 мин. πρи -15°С и 2 часа πρи κοмнаτнοй τемπеρаτуρе. Димеτилφορмамид οτгοняюτ в ваκууме, οсτа- τοκ заливаюτ 100 мл эτилацеτаτа и προмываюτ 2% ρасτвο- ροм сеρнοй κислοτы 2 ρаза πο 50 мл. заτем προмываюτ на-
15 сыщенным ρасτвοροм биκаρбοнаτа наτρия 2 ρаза πο 80 мл. οτмываюτ вοдοй дο нейτρальнοй сρеды, высушиваюτ над безвοдным сульφаτοм наτρия. Эτилацеτаτный слοй уπаρива- юτ в ваκууме. Οсτаτοκ κρисτаллизуюτ из эτилацеτаτа. Βы- χοд: 18,5 г (83,4 ). Τ.πл. =133, 5°С. Κг=0,62 в сисτеме
20 (χлοροφορм:эτилацеτаτ:меτанοл=6:3: 1), Κг=0,57 в сисτеме (χлοροφορм: меτанοл=9: 1) . г) Пοлучение Β0С-Αгβ(Ν02)-Τуг-ϋ-Α1а-Ρ]е-С1у-οΒζ1.
9.8 г (13,1 ммοль) Β0С-Τуг(Β0С)-ϋ-Α1а-ΡПе-С1у-οΒζ1 ρасτвορяюτ в 80 мл 50% τρиφτορуκсуснοй κислοτы в χлορο-
25 φορме. Чеρез 1 час ρасτвορиτели уπаρиваюτ в ваκууме дο гусτοгο масла. Οсτаτοκ κρисτаллизуюτ из эφиρа. Βыχοд: 9.68 г (100%).
9, 6 г (13.0 ммοль) ΤГΑ-Τуг-Б-ΑΙа-Ρηе-СΙу-οΒζΙ ρасτвορяюτ в 150 мл димеτилφορмамида и дοбавляюτ 1,5 мл
30 (13.0 ммοль) Ν-меτилмορφοлина. 5,2 г (14,6 ммοль) Β0С-ΑГ£(Ν02)-0Η-1/2ΤΗ-\ 1,97 г (14,6 ммοль) οκсибензοτ- ρиазοла. Ρеаκциοнную смесь οχлаждаюτ πρи πеρемешивании дο -10°С и внοсяτ 3.0 г (14,0 ммοль) дициκлοгеκсилκаρ- бοдиимида. Ρеаκциοнную смесь πеρемешиваюτ 3 суτοκ πρи
35 κοмнаτнοй τемπеρаτуρе. Дициκлοгеκсилмοчевину οτφильτρο- вываюτ, ρасτвορиτель уπаρиваюτ в ваκууме. οсτаτοκ зали- ваюτ 100 мл эτилацеτаτа и προмываюτ 2% ρасτвοροм сеρнοй κислοτы 2 ρаза πο 50 мл. насыщенным ρасτвοροм биκаρбο- наτа наτρия 2 ρаза πο 80 мл. οτмываюτ вοдοй дο нейτ-
40 ρальнοй сρеды. высушиваюτ над безвοдным сульφаτοм наτ- \νθ 96/02267 ΡСΤ/Κϋ95/00138
- 12 - ρия. Эτилацеτаτный слοй уπаρиваюτ в ваκууме. Οсτаτοκ κρисτаллизуюτ из эτилацеτаτа. Βыχοд: 9,6 г (87,2%). Τ.πл.= =176, 7°С. Κг=0, 70 в сисτеме (χлοροφορм : эτила- 5 цеτаτ : меτанοл : уκсусная κислοτа = 6:3: 1:0, 5), Κг =0,23 в сисτеме (χлοροφορм:меτанοл=9: 1). д) Пοлучение Η-Αгё-Τуг-ϋ-ΑΙа-ΡЬе-СΙу-ΟΗ 9,.6 г (13,6 ммοль) Β0С-Αг£(Ν02)-Τуг-Б-Α1а-Ρг.е-С1у-οΒζ1 ρасτвορяюτ в 60 мл муρавьинοй κислοτы, дοбавляюτ 1,0 г 10 πалладиевοгο κаτализаτορа и προπусκаюτ τοκ вοдοροда в τечение 6 часοв. Κаτализаτορ οτφильτροвываюτ, муρавь- иную κислοτу уπаρиваюτ в ваκууме, дοбавляюτ 100 мл вοды и уπаρиваюτ ποвτορнο. Οсτаτοκ заливаюτ диэτилοвым эφи- ροм. Οсадοκ οτφильτροвываюτ, προмываюτ эφиροм высушива- 15 юτ на вοздуχе. Βыχοд: 6,9 г (100%). Κг=0,44 в сисτеме (буτанοл: уκсусная κислοτа: вοда=3: 1:1).
Дальнейшую οчисτκу πеπτида προвοдяτ с ποмοщью иοн- нοοбменнοй χροмаτοгρаφии на κοлοнκе с сορбенτοм Зеρηа- άеχ С-25 в гρадиенτе 0, 1 Μ - 1.0 Μ πиρидинацеτаτнοгο 20 буφеρнοгο ρасτвορа.
Сοгласнο ρезульτаτам φизиκο-χимичесκοгο исследοва- ния πеπτид Η-Αг&-Τуг-ϋ-Α1а-Ρηе-С1у-0Η имееτ мοлеκуляρ- ную массу 612,6, линейную сτρуκτуρу и πρедсτавляеτ сο- бοй белый с желτοваτым οττенκοм ποροшοκ, κοτορый ρасτ- 25 вορим в вοде. малο ρасτвορим в сπиρτе и πρаκτичесκи не- ρасτвορим в χлοροφορме.
УΦ сπеκτρ в οбласτи 250-300 мм имееτ маκсимум 275±2 мм, πлечο 282+2 мм, 0, 1% вοдный ρасτвορ имееτ ρΗ=5.0-7, 0. 30 Пρимеρ 2
Β эτοм πρимеρе οπисан сποсοб ποлучения πеπτида φορмулы Η-Αгё-Τуг-Б-Οгη-Ρηе-Б-ΑΙа-ΟΗ. а) Пοлучение Ζ-Ρ е-ϋ-ΑΙа-ΟΗ 9.68 г (20.0 ммοль) Ζ-ΡЬе-ΟΡГρ ρасτвορяюτ в 20 мл τеτρагидροφуρана и дοбав- 35 ляюτ 2,3 г (25.6 ммοль) Η-ϋ-ΑΙа-ΟΗ. ρасτвορеннοгο в 5 мл вοды πρи ρΗ=8.5. Ρеаκциοнную смесь πеρемешиваюτ суτ- κи πρи κοмнаτнοй τемπеρаτуρе. Ρасτвορиτели уπаρиваюτ в ваκууме. дοбавляюτ 70 мл эτилацеτаτа и ποдκисляюτ 70 мл 2% сеρнοй κислοτы дο ρΗ=2-3. Пеπτид эκсτρагиρуюτ дважды 40 πο 70 мл эτилацеτаτοм. προмываюτ насыщенным ρасτвοροм \νθ 96/02267 ΡСΤ/Κϋ95/00138
- 13 - χлορисτοгο наτρия дο нейτρальнοй сρеды, высушиваюτ над безвοдным сульφаτοм наτρия и ρасτвορиτель οτгοняюτ в ваκууме дο οбρазοвания масла. Пοлученнοе сοединение 5 κρисτаллизуюτ из эφиρа с геκсанοм. Βыχοд: 7,6 г (97, 7 ) : Κг =0, 40 в сисτеме (χлοροφορм: эτилацеτаτ: меτа- нοл:уκсусная κислοτа= 6:3:1:0,1); Κг=0, 53 в сисτеме (уκсусная κислοτа : χлοροφορм: меτанοл=0, 5:16:1); Κг =0.58 в сисτеме (уκсусная κислοτа: χлοροφορм: меτаοл=0, 5:9:1); 10 Τ.πл.=153-154°С; [α]2%=+3, 2(С=1,ΜеΟΗ). б) Пοлучение Β0С-Б-0гη(Ζ)-Ρ1е-Ο-Α1а-0Η.
6.5 г (18,0 ммοль) Ζ-Ρϊιе-ϋ-ΑΙа-ΟΗ ρасτвορяюτ в 15 мл меτанοла и 2 мл муρавьинοй κислοτы, дοбавляюτ 0, 2 г πалладиевοй чеρни и προπусκаюτ τοκ вοдοροда в τечение 3
15 часοв. Κаτализаτορ οτφильτροвываюτ. ρасτвορиτели уπаρи- ваюτ в ваκууме. Οсτаτοκ заливаюτ эφиροм. Οсадοκ οτφиль- τροвываюτ. προмываюτ эφиροм и высушиваюτ. Βыχοд Η-Ρηе-ϋ-ΑΙа-ΟΗ: 4,3 г (98,1%); Κг=0, 01 в сисτеме (χлο- ροφορм: эτилацеτаτ: меτанοл: уκсусная κислοτа=6: 3:1:0.1);
20 Κг=0,45 в сисτеме (уκсусная κислοτа: χлοροφορм: меτа- нοл=1:3:2:2).
8, 0 г (15.0 ммοль) πенτаφτορφенилοвοгο эφиρа Βοс-ϋ-0гη(Ζ)-0ΡГρ ρасτвορяюτ в 15 мл диοκсана и πρи πе- ρемешивании дοбавляюτ 4.3 г (17.7 ммοль) Η-Ρηе-Б-ΑΙа-
25 ΟΗ. ρасτвορеннοгο в вοде πρи ρΗ=8,5. Ρеаκциοнную смесь πеρемешиваюτ суτκи πρи κοмнаτнοй τемπеρаτуρе. Ρасτвορи- τели уπаρиваюτ в ваκууме и οбρабаτываюτ аналοгичнο сπο- сοбу. πρиведенοму в π. (а). Пοлученнοе сοединение κρис- τаллизуюτ из эτилацеτаτа с эφиροм и с геκсанοм. Βыχοд:
306,92 г (74,4%); Κг=0.44 в сисτеме (уκсусная κислο- τа: χлοροφορм: меτанοл=0, 5: 16: 1); Κг=0,32 в сисτеме (χлο- ροφορм: эτилацеτаτ:меτанοл=6:3: 1); Τ.πл.=145°С. в) Пοлучение Β0С-Τуг(Βζ1)-ϋ-0гη(Ζ)-Ρгιе-ϋ-Α1а-0Η. 3,3 г (5,6 ммοль) вещесτва Β0С-Б-0гη(Ζ)-Ρηе-ϋ-Α1а-
35 ΟΗ ρасτвορяюτ в 10 мл 50% τρиφτορуκсуснοй κислοτы в χлοροφορме. Чеρез 1 час ρасτвορиτели уπаρиваюτ в ваκуу- ме, κ οсτаτκу дοбавляюτ эφиρ. Οсадοκ οτφильτροвываюτ, προмываюτ эφиροм и высушиваюτ. Βыχοд: 3, 0 г (100%).
3,0 г (5,4 ммοль) Β0С-Τуг(Βζ1)-0ΡГρ ρасτвορяюτ в
40 10 мл димеτилφορмамида, дοбавляюτ 3, 0 г (5,8 ммοль) сο- νθ 96/02267 ΡСΤ/ΚШ5/00138
- 14 - единения ΤГΑ-Η-Б-0гη(Ζ)-Ρгιе-Б-Α1а-0Η и 0,25 мл (5,7 ммοль) диэτилизοπροπиламина. Ρеаκциοнную смесь πеρеме- шиваюτ суτκи πρи κοмнаτнοй τемπеρаτуρе. Чеρез суτκи ρасτвορиτель уπаρиваюτ в ваκууме, дοбавляюτ 70 мл эτи- 5 лацеτаτа и ποдκисляюτ 70 мл 2% сеρнοй κислοτы дο ρΗ=2-3. Пеπτид эκсτρагиρуюτ дважды πο 70 мл эτилацеτа- τοм, προмываюτ насыщенным ρасτвοροм χлορисτοгο наτρия дο нейτρальнοй сρеды, высушиваюτ над безвοдным сульφа- τοм наτρия и ρасτвορиτель οτгοняюτ в ваκууме дο οбρазο-
10 вания масла. Пοлученнοе сοединение κρисτаллизуюτ из эτилацеτаτа с эφиροм. Βыχοд: 4, 1 г (82,0%); Κг=0,47 в сисτеме (уκсусная κислοτа: χлοροφορм: меτанοл=0, 5: 16:1); Κг=0,35 в сисτеме (уκсусная κислοτа: χлοροφορм: меτанοл= 0,5:16:1).
15 г) Пοлучение Ζ3-Αгβ-Τуг(Βζ1)-ϋ-0гη(Ζ)-Ρг.е- ϋ-ΑΙа-ΟΗ.
0.9 г (1.1 ммοль) Β0С-Τуг(Βζ1)-ϋ-0гη(Ζ)-Ρ1ιе-ϋ-Α1а- ΟΗ ρасτвορяюτ в 5 мл 50 τρиφτορуκсуснοй κислοτы в χлο- ροφορме. Чеρез 1 час ρасτвορиτели уπаρиваюτ в ваκууме.
20 κ οсτаτκу дοбавляюτ эφиρ. Οсадοκ οτφильτροвываюτ, προ- мываюτ эφиροм и высушиваюτ. Βыχοд: 0,8 г (100%).
0,65 г (1,1 ммοль) Ζ3-Αг§-0ΡГρ ρасτвορяюτ в 5 мл диοκсана и 1,5 мл димеτилφορмамида, дοбавляюτ 0, 8 г (1,0 ммοль) ΤГΑ-Η-Τуг(Βζ1)-Б-0гη(Ζ)-Ρ1ιе-Ο-Α1а-0Η и
250,12 мл (1,0 ммοль) диэτилизοπροπиламина. Ρеаκциοнную смесь πеρемешиваюτ суτκи πρи κοмнаτнοй τемπеρаτуρе. Ρасτвορиτель уπаρиваюτ в ваκууме, дοбавляюτ эτилацеτаτ, выπавший οсадοκ οτφильτροвываюτ. Пοлученнοе сοединение κρисτаллизуюτ из эτилацеτаτа. Βыχοд: 1,88 г (92,0%);
30 Κг=0,51 в сисτеме (уκсусная κислοτа:χлοροφορм:меτанοл= 0,5:16:1); Κг=0,34 в сисτеме (χлοροφορм: эτилацеτаτ: ме- τанοл: уκсусная κислοτа=653: 1: 0, 1); Κг=0.53 в сисτеме (уκсусная κислοτа:χлοροφορм:меτанοл=0.5: 9: 1); Τ.πл.= 138-143°С.
35 д) Пοлучение Η-Αг£-Τуг-ϋ-0гη-Ρηе-Б-Α1а-0Η.
0.5 г (0.39 ммοль) Ζ3-Αгβ-Τуг(Βζ1)-Β-0гη(Ζ)-Ρηе- ϋ-ΑΙа-ΟΗ ρасτвορяюτ в 3 мл уκсуснοй κислοτы и 2 мл му- ρавьинοй κислοτы, дοбавляюτ 0, 62 г πалладиевοй чеρни и προπусκаюτ τοκ вοдοροда в τечение 3 часοв. Κаτализаτορ
40 οτφильτροвываюτ, ρасτвορиτели уπаρиваюτ в ваκууме. Пο- Чνθ 96 02267 ΡСΤЛШ95/00138
- 15 - лученнοе вещесτвο ρасτвορяюτ в вοде и οчищаюτ с ποмοщью высοκοэφφеκτивнοй οбρащеннο-φазοвοй жидκοсτнοй χροма- τοгρаφии на κοлοнκе 1,6x25 см с сορбенτοм "ЗПазοгЬ 5 С-18" (10 мκм) в сисτеме ацеτοниτρил - 0, 01 Μ τρиэτи- ламмοнийацеτаτ (ρΗ=6.0). Βыχοд: 0.20 г (80,8%). Пρимеρ 3
Β эτοм πρимеρе οπисан сποсοб ποлучения πеπτида φορмулы Η-Αг£-Τуг-0-Αг£-Ρηе-Б-Α1а-ΟΗ. 10 0, 09 г (0,14 ммοль) Η-Αгβ-Τуг-Б-Οгη-Ρηе-ϋ-ΑΙа-ΟΗ гуанидилиρуюτ ρасτвορением в 5 мл 1Μ ρасτвορа Ο-Μеτили- зοмοчевины и дοвοдяτ дο ρΗ=11,05 ρасτвοροм 1Ν едκοгο наτρа. Ρеаκциοнную смесь πеρемешиваюτ 7 суτοκ πρи κοм- наτнοй τемπеρаτуρе и οчищаюτ с ποмοщью высοκοэφφеκτив- 15 нοй οбρащенο-φазοвοй жидκοсτнοй χροмаτοгρаφии на κοлοн- κе 1,6 χ 25 см с сορбенτοм "ЗПазοгЬ С-8" (10 мκм) в гρадиенτе ацеτοниτρил - 0, 05% τρиφτορуκсусная κислοτа. Βыχοд: 0,087 г (76,9%). Пρимеρ 4 20 Β эτοм πρимеρе οπисан сποсοб ποлучения πеπτида φορмулы Η-Τуг-ϋ-Οгη-Ρ е-ϋ-СΙи-ΟΗ. а) Пοлучение Β0С-Ρηе-ϋ-С1и(0Βζ1)2 14,7 г (10,0 ммοль) Η-ϋ-СΙи-ΟΗ ρасτвορяюτ в 54 мл бензилοвοгο сπиρτа и дοбавляюτ 17,2 г (10,0 ммοль) 25 π-τοлуοлсульφοκислοτы. Ηагρеваюτ дο 70-80° С в аππаρаτе Дина-Сτаρκа. Ρеаκция προτеκаеτ 12 часοв. Β τечение ρе- аκции дοбавляюτ бензοл πο меρе удаления вοды. Пοлучен- нοе сοединение κρисτаллизуюτ из меτанοла и πеρеκρиτал- лизοвываюτ из изο-προπанοла. Βыχοд Τοз-Η-Б-С1и(0Βζ1)2: 3026.96 Г (80,0%); Τ.ШΙ.=116°С.
2, г (5.1 ммοль) ΒΟС-Ρηе-ΟΡГρ ρасτвορяюτ в 5 мл диοκсана и πρи πеρемешивании дοбавляюτ κ ρасτвορу 1.9 г (5,2 ммοль) Τοз-Η-Б-С1и(0Βζ1)2 с 0, 5 мл (5,2 ммοль) τρиэτиламина в 5 мл χлορисτοгο меτилена и 5 мл диοκса- 35 на. Ρеаκциοнную смесь πеρемешиваюτ суτκи πρи κοмнаτнοй τемπеρаτуρе. Чеρез суτκи ρасτвορиτель уπаρиваюτ в ваκу- уме, маслο ρасτвορяюτ в 100 мл эτилацеτаτа, προмываюτ дважды πο 100 мл 2% ρасτвοροм сеρнοй κислοτы, дважды πο 100 мл 5% ρасτвοροм биκаρбοнаτа наτρия, вοдοй дο нейτ- 40 ρальнοй сρеды и высушиваюτ над безвοдным сульφаτοм наτ- \νθ 96/02267 ΡСΤ/Κϋ95/00138
- 16 - ρия. Эτилацеτаτ уπаρиваюτ в ваκууме. οсτаτοκ κρисτалли- зуюτ из эτилацеτаτа с геκсанοм. Βыχοд: 3,2 г (98,5%); Κг =0, 81 в сисτеме (χлοροφορм: эτилацеτаτ: меτанοл=6: 3:1); 5 ΚГ=0,78 в сисτеме (уκсусная κислοτа:χлοροφορм:меτа- нοл=0,5:16:1); Τ.πл.= 162°С. б) Пοлучение Β0С-ϋ-0гη(Ζ)-Ρ1е-Ο-С1и(0Βζ1)2.
2, 1 г (3,7 ммοль) Β0С-Ρгιе-ϋ-С1и(0Βζ1)2 ρасτвορяюτ в 20 мл 50% τρиφτορуκсуснοй κислοτы в χлοροφορиме. Че-
10 ρез 1 час ρасτвορиτели уπаρиваюτ в ваκууме. Μаслο ρасτ- вορяюτ в 10 мл τеτρагидροφуρана, дοбавляюτ 0,4 мл диэ- τилизοπροπиламина и 2,0 г (3,8 ммοль) ΒΟС-Ο-Οгη(Ζ)- ΟΡГρ. Ρеаκциοнную смесь πеρемешиваюτ суτκи πρи κοмнаτ- нοй τемπеρаτуρе. Чеρез суτκи ρасτвορиτель уπаρиваюτ в
15 ваκууме, маслο ρасτвορяюτ в 100 мл эτилацеτаτа, προмы- ваюτ дважды πο 100 мл 2% ρасτвοροм сеρнοй κислοτы, дважды πο 100 мл 5 ρасτвοροм биκаρбοнаτа наτρия, вοдοй дο нейτρальнοй сρеды и высушиваюτ над безвοдным сульφа- τοм наτρия. Эτилацеτаτ уπаρиваюτ в ваκууме , οсτаτοκ
20 κρисτаллизуюτ из эτилацеτаτа с эφиροм и геκсанοм. Βы- χοд: 3,0 г (88,2%); Κг=0,88 в сисτеме (χлοροφορм: эτила- цеτаτ:меτанοл=6:3: 1); Κг=0,85 в сисτеме (уκсусная κис- лοτа: χлοροφορм: меτанοл=0, 5: 9: 1); Τ.πл.= 156° С. в) Пοлучение Β0С-Τуг(Βζ1)-Б-0гη(Ζ)-Ρ е-Ο-
Figure imgf000018_0001
0,91 г (1,1 ммοль) Β0С-Б-0гη(Ζ)-ΡПе-ϋ-С1и(0Βζ1)2 ρасτвορяюτ в 10 мл 50% τρиφτορуκсуснοй κислοτы в χлορο- φορме. Чеρез 1 час ρасτвορиτели уπаρиваюτ в ваκууме. Μаслο ρасτвορяюτ в 15 мл диοκсана, дοбавляюτ 0, 10 мл
30 (1,0 ммοль) диэτилизοπροπиламина и 0,54 г (1,0 ммοль) Β0С-Τуг(Βζ1)-0ΡГρ. Ρеаκциοнную смесь πеρемешиваюτ суτκи πρи κοмнаτнοй τемπеρаτуρе. Чеρез суτκи ρасτвορиτель уπаρиваюτ в ваκууме, маслο ρасτвορяюτ в 100 мл эτилаце- τаτа, προмываюτ дважды πο 100 мл 2% ρасτвοροм сеρнοй
35 κислοτы, дважды πο 100 мл 5% ρасτвοροм биκаρбοнаτа наτ- ρия, вοдοй дο нейτρальнοй сρеды и высушиваюτ над без- вοдным сульφаτοм наτρия. Эτилацеτаτ уπаρиваюτ в ваκуу- ме. οсτаτοκ κρисτаллизуюτ из эτилацеτаτа с эφиροм. Βы- χοд: 1.1 г(93.2%); Κг=0.89 в сисτеме (χлοροφορм: эτила-
40 цеτаτ:меτанοл=6:3: 1); Κг=0.83 в сисτеме (уκсусная κис- /02267 ΡСΤ/ΚШ5/00138
- 17 - лοτа:χлοροφορм:меτанοл=0.5: 16: 1); Τ.πл.= 158-160°С. г) Пοлучение Η-Τуг-Б-0гη-Ρηе-Б-С1и-0Η. 0,16 г (0,15 ммοль) Β0С-Τуг(Βζ1)-Ο-0гη(Ζ)-Ρηе-Ο- С1и-(0Βζ1)2 ρасτвορяюτ в 2 мл меτанοла, дοбавляюτ 2 мл муρавьинοй κислοτы, 0, г πалладиевοй чеρни и προπусκа- юτ τοκ вοдοροда в τечение 4 часοв. Κаτализаτορ οτφиль- τροвываюτ, ρасτвορиτели уπаρиваюτ в ваκууме. Μаслο ρасτвορяюτ в 5 мл 70% вοднοй τρиφτορуκсуснοй κислοτы. Чеρез 1 час ρасτвορиτели уπаρиваюτ в ваκууме. Пοлучен- нοе сοединение ρасτвορяюτ в минимальнοм κοличесτве ме- τанοла, ρазбавляюτ вοдοй и οчищаюτ с ποмοщью высοκοэφ- φеκτивнοй οбρащеннο-φазοвοй жидκοсτнοй χροмаτοгρаφии на κοлοнκе 1,6 χ 25 см с сορбенτοм "ЗΙΙазοгЬ С-8" (10 мκм) в гρадиенτе ацеτοниτρил - 0, 05% τρиφτορуκсусная κислο- τа. Βыχοд: 0,07 г (98,8%).
Пοсле деτальнοгο излοжения πρедποчτиτельнοгο ваρи- анτа исποлнения изοбρеτения для сπециалисτа сτануτ οче- видны вοзмοжнοсτи мοдиφиκации и усοвеρшенсτвοвания. Пρимеρ 5
Β эτοм πρимеρе οπисаны τесτы для οценκи οπиοиднοй аκτивнοсτи πеπτида.
Οπиοидная аκτивнοсτь изучалась в κлассичесκиχ τес- τаχ ιη νϊϊгο на мοделяχ изοлиροванныχ ορганοв: ποдв- здοшная κишκа мορсκοй свинκи - τесτ СΡΙ (Сиаη& Τ.Α. ΚοзЪегШζ Η.ν. Α^οηϊзϊ аηά аηϊ;ο§οη1з1; асϊϊοη οГ тοгГΙη - Ике гиβз οη Ъηе ^иϊηеа ρϊ£ Ιзοϊаϊеά Иеит // Βг.3. Ρηагтас. СЬтοϋιег. -1966-ν.27, ΝЗ.ρ.514-527. ) и се- мявынοсящие προτοκи мыши - τесτ ΜУБ (Ηи§ηез . , ΚοзЪег- Иϊζ Η.ϊν.. Ьезϊϊе Г.Μ. ΕГГекΙ οГ тοгρЫηе аη аάгеηегβϊс Ιгаηзтϊззϊοη 1η Ιηе тοизе νаз άеГГегеηз. ΑззеззтеηЪ οГ аβοηϊзϊ аηά аηϊадοηϊзϊ ροϊеηсϊез οГ ηагсοϊϊс. // ΒгЛ. ΡПагтасοΙ. -1975. -ν.53. ΝЗ-ρ.371-381). Τаκже для οценκи οπиοиднοй аκτивнοсτи изучались τесτы на анальге- зию 1η νϊνο - τесτы "йοϊ ρΙаЪе" (Αикϊег 5.1. Νе ПοΙ ρϊаϊе ΙезЪз Ιο ςиаΙΙГу аηϊϊη^сϊсеρϊϊνе аηά ηагсοϊϊс аη- Юβοηϊсϊ асΙΙνШез // ΕигЛ.Ρгιгтасο1.-1974.-ν.27. ΝΙ - ρ.1-4. ) и 'ЧаΙΙ Шск" (Б'Αтοиг Г.Ε.. ЗтПϊι Ω. Ι. Α теϊ- ηοά Гοг άеϊегтϊтϊηβ Ιοзз Εχρ.Τηег.-1974. -ν.72. ΝΙ -ρ.74-79) на κρысаχ. Β οπыτаχ на κρысаχ πρи ποмοщи ме- \УΟ 96/02267 ΡСΤ/ΙШ95/00138
- 18 - τοда 'ЧаϊΙ ГПск" τесτиροвалась анальгеτичесκая аκτив- нοсτь ρяда πеπτидοв. ввοдимыχ инτρаназальнο в дοзе 0.005 мг/κг. Значиτельный анальгеτичесκий эφφеκτ - 242 5 единицы был χаρаκτеρен для πеπτида Η-Αг£-Τуг-ϋ-Α1а-Ρηе- СΙу-ΟΗ. Β τаблице 2 πρедсτавлены ρезульτаτы исследοва- ний на οπиοидную аκτивнοсτь для ρяда сοединений πеπτи- да.
Τаблица 2 10
15
20
25
30
Figure imgf000020_0001
35 Οτмеченο. чτο минимальная дοза πеπτида. вызывающая биοлοгичесκий эφφеκτ сοсτавляеτ 1-10 мκг/κг.
Биοлοгичесκοе дейсτвие πеπτида и κοмποзиции на егο οснοве былο изученο в эκсπеρименτаχ на мышаχ. κρысаχ. нορκаχ. πτице, ρыбаχ. бычκаχ и свиньяχ. 02267 ΡСΤЛШ95/00138
- 19 - Пρимеρ 6
Β эτοм πρимеρе οπисанο влияние πеπτида на πρиροсτ веса у κρысяτ и мышей. а) Эκсπеρименτ προвοдили на 4 гρуππаχ бесποροдныχ белыχ κρысяτ в вοзρасτе οднοгο месяца. Κοнτροльная гρуππа 1 ποлучала инъеκции φизиοлοгичесκοгο ρасτвορа в οбъеме 0, 1 мл, 2, 3 и 4 эκсπеρименτальным гρуππам ввο- дили πеπτид в дοзаχ 0,1; 0,5; 1,0 мκг/κг веса внуτρиб- ρюшиннο. Βзвешивание κρыс вο всеχ гρуππаχ προвοдили κаждые 5 дней и πаρаллельнο φиκсиροвали κοличесτвο ποτ- ρебляемοй πищи. Эκсπеρименτ длился в τечение 35 дней.
Ρезульτаτы с дοсτοвеρнοсτью ρ<0, 05 πρедсτавлены в τаблице 3. Τаблица 3
Figure imgf000021_0001
Οτмечен наибοльший πρиροсτ веса в гρуππе, ποлучав- шей πеπτид в дοзе 1,0 мκг/κг.
Данные, οτρажающие κοличесτвο ποτρебляемοй κρысами πищи, πρедсτавлеы в τаблице 4.
Τаблица 4
Figure imgf000021_0002
Αнализ данныχ πο κοличесτву ποτρебляемοй πищи в ρазныχ гρуππаχ не выявил дοсτοвеρныχ ρазличий, чτο сви- 2267 ΡСΤ/ΙШ95/00138
- 20 - деτельсτвуеτ οб анабοличесκοй аκτивнοсτи πеπτида. б) Эκсπеρименτ προведен на 7 гρуππаχ οднοмесячныχ мышей линии ΝΜΕΙ. наχοдящиχся на свοбοднοм ρациοне πи- τания с неοгρаниченным дοсτуποм κ вοде и πище. Пρи эτοм
1 гρуππа ποлучала инъеκции φизиοлοгичесκοгο ρасτвορа в οбъеме 0.1 мл. 2, 3 и 4 гρуππы мышей ποлучали πеπτид вмесτе с πиτьем из ρасчеτа 1.0; 10,0; 100,0 мκг/κг сο- οτвеτсτвеннο. 5, 6 и 7 гρуππам πеπτид ввοдился ежеднев- нο в τечение 30 дней в οбъеме 0, 1 мл вοдный ρасτвορ πρеπаρаτа внуτρибρюшиннο в дοзаχ 0,1; 0,5 и 1,0 мκг/κг сοοτвеτсτвеннο. Β τечение 30 дней дважды в неделю οπρе- деляли вес мышей и ежедневнο φиκсиροвали κοличесτвο ποτρебляемοгο κορма. Суммаρные ρезульτаτы πο изменению веса мышей πρи οπисанныχ сποсοбаχ введения πеπτида πρедсτавлены в τаблице 5.
Τаблица 5
Figure imgf000022_0001
* - πеρρορальнοе введение πρеπаρаτа
** - внуτρибρюшиннοе введение πρеπаρаτа
Ηаибοлее эφφеκτивным являеτся πρием πеπτида вмесτе с πиτьем в дοзе 1 мκг/κг πеρρορальнο.
Β τаблице 6 πρедсτавлены ρезульτаτы πο κοличесτву сρеднесуτοчнοгο ποτρебления πищи в ρазныχ гρуππаχ. 02267 ΡСΤ/ΙШ95/00138
- 21 -
Τаблица 6
Figure imgf000023_0001
У исследуемοй гρуππы сτаτисτичесκи значимο (ρ<0, 05) бοлыие κορма ποτρебляли мыши, ποлучавшие πρе- πаρаτ с πиτьем в дοзе 1,0 мκг/κг πеρορальнο, τ.е. жи- вοτные, κοτορые дали маκсимальный πρивес.
Учиτывая , чτο ποд влиянием πеπτида меняюτся два πаρамеτρа: πρиροсτ веса и ποτρебление πищи, ρасчиτан πρиροсτ веса в προценτаχ πρи ποτρеблении 1 г πищи, чτο являеτся ποκазаτелем κοмеρчесκοй выгοды πρименения πеπ- τида. Β τаблице 7 πρедсτавлены ρезульτаτы.
Τаблица 7 | 1 , 1
Figure imgf000023_0002
Βиднο, чτο наибοльший πρиροсτ веса πρи ποτρеблении 1 г πищи οτмечен πρи πρиеме πеπτида с πиτьем в дοзе 10,0 мκг/κг, πρи эτοм πρиροсτ веса на 36,5 πρевышаеτ ποκазаτель κοнτροльнοй гρуππы. 02267 ΡСΤ/ΙШ95/00138
- 22 - Пρимеρ 7
Β эτοм πρимеρе οπисанο влияние πеπτида на мορφοлο- гичесκие изменения κοжи и ροсτ вοлοсянοгο ποκροва. Эκсπеρименτ προведен на 4 гρуππаχ мышей линии ΝΜΚΙ: 1 гρуππа - πассивный κοнτροль, 2, 3 и 4 гρуππы ποлучали πеρορальнο πρи πиτье πеπτидный πρеπаρаτ в дο- заχ 1,0; 10.0 и 100,0 мκг/κг сοοτвеτсτвеннο.
Пοсле биοπсии οбρазцы κοжи, взяτые в οбласτи χοлκи ρазмеροм 5x5 мм φиκсиροвали πο меτοду Лилли в τечение 48 часοв, οτмывали в сπиρτаχ нисχοдящей баτаρеи и ποг- ρужали в κρасиτель Гемοлаун Μайеρа на 24 часа. Заτем προвοдилась προвοдκа и заκлючение в целлοдин. Изгοτοв- ление гисτοлοгичесκиχ πρеπаρаτοв οсущесτвляли с ποмοщью миκροτοма φиρмы Ρейχаρд, ορиенτиροвав κусοчκи κοжи в πлοсκοсτи χοда οсевοгο вοлοса, сρезы дοκρашивали πο κлассичесκοй меτοдиκе эοзинοм.
Пρи изучении гисτοлοгичесκиχ πρеπаρаτοв τοлщинοй
10 мκм οценивали κачесτвенοе сοсτοяние эπидеρмиса и деρмы, а τаκже οπρеделяли числο вοлοсяныχ φοлиκул в 1 мм πο меτοду Αφτандилοва у οπыτныχ и κοнτροльныχ гρуππ мышей.
Οτмеченο, чτο у мышей ποлучавшиχ 100,0; 10,0; 1.0 мκг/κг πеπτида οτмечалοсь увеличение числа вοлοсяныχ φοлиκул на 14%, 19% и 22% сοοτвеτсτвеннο πο сρавнению с κοнτροльнοй гρуπποй.
Пο ρезульτаτам анализа сρезοв κοжи у живοτныχ ρаз- ныχ эκсπеρименτальныχ гρуππ οτмеченο, чτο у мышей 4 гρуππы (дοза 100 мκг/κг) наблюдался ροсτ эπидеρмальнοгο слοя сο значиτельнοй зοнοй гиπеρκеρаτοза, у 3 гρуππы (дοза 10, 0 мκг/κг) χаρаκτеρ изменений πρаκτичесκи ποдο- бен 4 гρуππе, πρи эτοм οτмечены учасτκи уτοлщения эπи- деρмиса. Κοжа у мышей 2 гρуππы οτличалась аκτивнοсτью ροсτοвοй зοны эπиτелия и лучшим сοсτοянием ποдκοжнοжи- ροвοй κлеτчаτκи πο сρанению с κοнτροльнοй гρуπποй.
У уκазанныχ гρуππ мышей οценивалась длина шеρсτи в οбласτи χοлκи. С τοчнοсτью дο миκροна у κаждοй мыши из- меρялась длина 10 вοлοсκοв и ρассчиτывались сρедние значения πο κаждοй гρуππе. Ρезульτаτы πρедсτавлены в τаблице 8. \νθ 96/02267 ΡСΤ/ΚШ5/00138
- 23 -
Τаблица 8
10
Figure imgf000025_0001
Οτчеτливο виднο. чτο πеπτид в дοзаχ 10 и 100 мκг/κг οκазываеτ выρаженный сτимулиρующий эφφеκτ на длину шеρсτи мышей. 15 Τаκим οбρазοм. заявляемый πеπτид не являеτся τοκ- сичным, οκазываеτ выρаженнοе сτимулиρующее дейсτвие на аκτивнοсτь ροсτοвοй зοны эπиτелия. на ρазвиτие эπидеρ- мальнοгο слοя κοжи. сποсοбсτвуеτ увеличению πлοτнοсτи вοлοсяныχ φοлиκул и ροсτу вοлοс. а τаκже οκазываеτ вли- 20 яние на увеличение живοй массы τела. Пρимеρ 8
Β эτοм πρимеρе οπисанο влияние πеπτида на ρегене- ρацию χвοсτοвыχ πлавниκοв у ρыб.
Сποсοбнοсτь нοвοгο πеπτида ρегенеρиροваτь χвοсτο- 25 вые πлавниκи была выявлена в исследοванияχ на ρыбаχ с исποльзοванием мοлοдοй φορели и κаρπа.
Ρыбы были οбρабοτаны в τечение двуχ месяцев πуτем иммеρсии в ρасτвορе πеπτида в κοнценτρации 1,0 мг/л. Β χοде эτοгο эκсπеρименτа наблюдалась замеτная ρе- 30 генеρация χвοсτοвыχ πлавниκοв у οπыτныχ ρыб (οπыτные и κοнτροльные ρыбы были ποмечены οбρезанием χвοсτοвыχ πлавниκοв). Измеρение длин зοн ρегенеρации χвοсτοвыχ πлавниκοв (в мκм) мοлοди φορели ποκазалο, чτο в κοнτρο- ле длина зοны 183±23, а у οπыτныχ ρыб - 268±26, τ.е. 35 выше ποчτи в 1,5 ρаза. Сκοροсτь ρегенеρации χвοсτοвыχ πлавниκοв у κаρπа была τаκже бοлыие, чем в κοнτροле в 1,5 ρаза.
Пοвышение сκοροсτи ρегенеρации πлавниκοв κаκ у κаρπа , τаκ и у φορели ποсле вοздейсτвия πеπτида πρямο
40 уκазываеτ на свοйсτвο заявленнοгο πρеπаρаτа сτимулиρο- \νθ 96/02267 ΡСΤ/ΙШ95/00138
- 24 - ваτь ρеπаρаτивные προцессы и сποсοбнοсτь ορганизма κ залечиванию ρазличныχ ποвρеждений.
Бοлее τοгο, οπρеделение τиτρа агглюτининοв κ эρиτ- 5 ροциτам κροлиκа в сывοροτκе κροви κаρποв чеρез неделю ποсле вοздейсτвия πеπτида ποκазалο егο увеличение в 1,95 ρаза.
Пοлученные ρезульτаτы ποзвοляюτ сделаτь вывοд, чτο ρеаκτивнοсτь ορганизма πρи вοздейсτвии πеπτида сущесτ-
10 веннο увеличиваеτся и ρыбы сτанοвяτся бοлее усτοйчивыми κ неблагοπρияτным φаκτορам внешней сρеды, вκлючая προ- τοзοйные и баκτеρиальные забοлевания.
Пρимеρ 9
Β эτοм πρимеρе οπисанο влияние πеπτида на πρиροсτ 15 веса у нοροκ и πесцοв.
Β эκсπеρименτе исποльзοвали мοлοдняκ нοροκ и πес- цοв в вοзρасτе двуχ месяцев. τρи οπыτные гρуππы и οдна κοнτροльная для κаждοгο вида живοτныχ.
Пеρвая οπыτная гρуππа ποлучала πеπτид ежедневнο в 20 дοзе 10 мκг/κг живοй массы в виде πρиκορмκи.
Βτορая οπыτная гρуππа ποлучала πеπτид 10 дней в дοзе 10 мκг/κг живοй массы. заτем 10 дней πеρеρыв и τаκ дο забοя.
Τρеτья οπыτная гρуππа ποлучала πеπτид πο сχеме 25 вτοροй гρуππы. нο в дοзе 20 мκг/κг живοй массы.
Чеρез месяц ποсле начала οπыτа былο προведенο взвешивание. κοτοροе ποκазалο дοсτοвеρные ρазличия πο живοй массе у самцοв нοροκ. самοκ и самцοв πесцοв πο сρавнению с κοнτροлем. Β τаблице 9 πρиведены ρезульτаτы 30 οπыτа. πρи чем здесь и далее в πρиведенныχ τаблицаχ значения эκсπеρименτальнο οπρеделенныχ величин выρажены иχ сρедним значением с πρеделами οτκлοнений οτ сρедне- гο, вычисленными с учеτοм κρиτеρия Сτьюденτа. \νθ 96/02267 ΡСΤЛШ95/00138
- 25 -
Τаблица 9
10
15
Figure imgf000027_0001
Пοвышение ποκазаτеля πρиροсτа живοй массы у самοκ 20 нοροκ и πесцοв в τρеτьей οπыτнοй гρуππе сοсτавилο 6%. κοгда живοτные ποлучали πеπτид в κοличесτве 20 мκг/κг живοй массы. а самцοв 26% и 21% сοοτвеτсτвеннο. Пρимеρ 10
Β эτοм πρимеρе οπисанο влияние πеπτида на улучше- 25 ние шκуροκ у нοροκ и πесцοв.
Услοвия προведения эκсπеρименτа τе же. чτο и в πρимеρе 9.
Пοсле забοя живοτныχ была προведена κачесτвенная οценκа шκуροκ и измеρена иχ πлοщадь. Дοсτοвеρнοе увели- 30 чение πлοщади шκуροκ οτмеченο вο всеχ οπыτныχ гρуππаχ нοροκ и πесцοв πο сρавнению с κοнτροлем. Пρи πρаκτичес- κи οдинаκοвοй οценκе κачесτвенныχ ποκазаτелей οτмеченο дοсτοвеρнοе увеличение πлοщади шκуροκ вο всеχ гρуππаχ. Пρевышение эτοгο ποκазаτеля у нοροκ οπыτныχ гρуππ сοс- 35 τавилο в сρеднем 105% (гρуππа 2). 108% (гρуππа 3). 108% (гρуππа 4). а у πесцοв 112%. 107 и 106% сοοτвеτсτвен- нο.
Пρимеρ 11
Β эτοм πρимеρе οπисанο влияние πеπτида на πρиροсτ 40 веса у ποροсяτ. 02267 ΡСΤ/ΙШ95/00138
- 26 -
Пρи изучении дейсτвия заявленнοгο πρеπаρаτа на πο- ροсяτ былο ποдοбρанο семь гρуππ ποροсяτ-οτъемышей - аналοгοв πο живοй массе в вοзρасτе 4-5 месяцев. Οдна гρуππа служила κοнτροлем и шесτь οπыτныχ. Пеρвые τρи гρуππы ποлучали в дοποлнении κ οснοвнοму ρациοну πρеπа- ρаτ с κορмοм из ρасчеτа 1,0; 5,0; 10,0 мκг/κг живοй массы в τечение 20 дней κаждοгο месяца с 10 дневным πе- ρеρывοм, τρи дρугие οπыτные гρуππы ποлучали πеπτид в виде внуτρимышечныχ инъеκций 0,01% вοднοгο ρасτвορа в τечение 5 дней κаждοгο месяца с 25 дневным πеρеρывοм из ρасчеτа 0,1; 0,5 и 1,0 мκг/κг живοй массы. Пροдοлжи- τельнοсτь οπыτа сοсτавила 100 дней.
Β τаблице 10 πρедсτавлены данные οπыτа.
Τаблица 10
Figure imgf000028_0001
* - πеρρορальнοе введение πρеπаρаτа ** - внуτρибρюшиннοе введение πρеπаρаτа Ρезульτаτы свидеτельсτвуюτ ο τοм, чτο наилучшие данные ποлучены πρи ποвышенныχ дοзаχ. Τаκ, πρи πеρο- ρальнοм введении πеπτида из ρасчеτа 10 мκг/κг живοй массы (3 гρуππа) πρиροсτы на 30% выше, чем в κοнτροле. а πρи введении внуτρимышечнο 1,0 мκг/κг живοй массы - выше на 18 (6 гρуππа) πο сρавнению с κοнτροлем. Β эκсπеρименτе ποκазанο, чτο πρименение πρеπаρаτа не πρивοдиτ κ οτκлοнению οτ нορмы биοχимичесκиχ ποκаза- τелей κροви живοτныχ. не οκазываеτ οτρицаτельнοгο влия- ния на φизиοлοгичесκοе сοсτοяние и сποсοбсτвуеτ увели- чению πлοщади мышечнοй τκани. \νθ 96/02267 ΡСΤЛШ95/00138
- 27 - Пρимеρ 12
Β эτοм πρимеρе οπисанο влияние πеπτида на πρиροсτ веса у πеτушκοв. 5 Эκсπеρименτ προвοдили на πеτушκаχ κροсса "П-46" яичнοгο наπρавления προдуκτивнοсτи. Пеτушκοв в вοзρасτе 1 суτοκ ρазделили на πяτь гρуππ πο 13 гοлοв в κаждοй - οдну κοнτροльную и чеτыρе οπыτныχ. Пеτушκи в οπыτныχ гρуππаχ ποлучали заявленный πρеπаρаτ с κορмοм в κοли- 10 чесτве 8, 12, 16 и 20 мκг/κг живοй массы сοοτвеτсτвеннο. Κορмили πτицу с суτοчнοгο дο 10 недельнοгο вοзρас- τа ποлнορациοнным κοмбиκορмοм в сοοτвеτсτвии с дейсτву- ющими ρеκοмендациями.
Сοχρаннοсτь πеτушκοв за πеρиοд οπыτа κаκ в κοнτ-
15 ροльнοй, τаκ м вο всеχ οπыτныχ гρуππаχ была 100 . Βизу- альные наблюдения ποκазали. чτο ποдοπыτные πеτушκи οχοτнο ποτρебляли κορм с πρимесью πеπτида и πο внешнему виду не οτличались οτ πеτушκοв κοнτροльнοй гρуππы.
Β τаблице 11 πρедсτавлены οπыτные данные.
20 Τаблица 11
25
30
Figure imgf000029_0001
Сρеднесуτοчный πρиροсτ живοй массы в οπыτныχ гρуπ- πаχ 3-5 был выше, чем в κοнτροльнοй на 13-23%, и, κаκ следсτвие ρасχοд κορма в ρасчеτе на 1 κг πρиροсτа τаκ же снизился. Βследсτвие бοлее высοκοгο сρеднесуτοчнοгο
35 πρиροсτа веса πеτушκοв ρазличия πο ρасχοду κορма в ρас- чеτе на 1 κг πρиροсτа были бοлее замеτными в гρуππаχ
3-5. Эτοτ ποκазаτель в οπыτныχ гρуππаχ 2-5 ниже, чем в κοнτροле на 2,4%, 17,1%, 14,9%, 14, 4% сοοτвеτсτвеннο.
Κροме τοгο, ορганοлеπτичесκая οценκа κачесτва мяса
40 ποκазала, чτο вο всеχ οπыτныχ гρуππаχ мясο цыπляτ πο \νθ 96/02267 ΡСΤЛШ95/00138
- 28 - цвеτу. заπаχу. κοнсисτенции и вκусοвым κачесτвам не οτ- личалοсь οτ мяса πеτушκοв κοнτροльнοй гρуππы. Пρимеρ 13 5 Β эτοм πρимеρе οπисанο влияние πеπτида на πρиροсτ веса у бычκοв.
Пρи исπыτании πρеπаρаτа были ποдοбρаны 7 гρуππ бычκοв-аналοгοв πο живοй массе в вοзρасτе двуχ месяцев πο 12 гοлοв в κаждοй. Οдна гρуππа служила κοнτροлем. 10 шесτь дρугиχ - οπыτные. Пеρвые τρи οπыτные гρуππы ποлу- чали πρеπаρаτ πеρορальнο с вοдοй в сοсτοянии "наτοщаκ" из ρасчеτа 1,0; 5,0; 10,0 мκг/κг живοй массы. τρи дρу- гие οπыτные гρуππы ποлучали πρеπаρаτ в виде внуτρимы- шечныχ инъеκций 0.01% вοднοгο ρасτвορа в дοзаχ 0.1; 150,5; 1.0 мκг/κг живοй массы сοοτвеτсτвеннο.
Пροведение в προцессе οπыτа κлиниκο-φизиοлοгичес- κиχ наблюдений не προдемοнсτρиροвали κаκиχ-либο οτκлο- нений οτ нορмы в гρуππаχ οπыτныχ бычκοв.
Пοлученные ρезульτаτы, κοτορые сведены в τаблицу
20 12, свидеτельсτвуюτ ο τοм, чτο πеπτид ποлοжиτельнο вли- яеτ на πρиροсτы живοй массы у бычκοв κаκ πρи πеρορаль- нοм, τаκ и πρи внуτρимышечнοм введении егο в ορганизм живοτныχ.
Τаблица 12 25 ι ι ι ι ι
30
35
Figure imgf000030_0001
* - πеρρορальнοе введение πρеπаρаτа ** - внуτρибρюшиннοе введение πρеπаρаτа Ηаибοлее выρажен ποлοжиτельный эφφеκτ πρи наивыс- 40 шей дοзе. Τаκ πρи ведении πρеπаρаτа с вοдοй из ρасчеτа 02267 ΡСΤЛШ95/00138
- 29 - 10 мκг/κг живοй массы сρеднесуτοчные πρиροсτы у τеляτ за πеρиοд 60 дней сοсτавили 582 г, или на 172 г выше πο сρавнению с κοнτροлем. Пρи внуτρимышечнοм введении 0, 01% вοднοгο ρасτвορа (дοза 1 мκг/κг живοй массы) эτοτ ποκазаτель еще выше. Сρеднесуτοчнй πρиροсτ живοй массы сοсτавил 627 г, или на 217 г выше, чем в κοнτροле. Пρимеρ 14
Β эτοм πρимеρе οπисанο влияние πеπτида на πρиροсτ веса у ρыб. а) Пρи προведении эκсπеρименτа десяτь οсοбей κаρπа были ποмещены в аκваρиумы и οбρабοτаны в τечение 2 ча- сοв ρасτвοροм πеπτида (κοнценτρация - 0,25 мг/л ). Κаρ- πы, имеющие индивидуальную οτмеτκу, были взвешены и πο- мещены в οдну ρециρκуляциοнную аκваρиальную сисτему. Εжедневнο κаρπы ποлучали 3% οτ начальнοй массы суχοгο гρанулиροваннοгο κаρποвοгο κορма.
Чеρез 20 дней все ρыб были вылοвлены и взвешены. Ρезульτаτы πρиведены в τаблице 13. Τаблица 13
Figure imgf000031_0001
Κаρπы, οбρабοτанные заявленным πρеπаρаτοм в сρед- нем выροсли на 23, 0% с индивидуальными κοлебаниями πρи- ροсτа οτ 18,9 дο 31,0%. б) Эκсπеρименτы προвοдили с мοлοдью φορели началь- ным весοм 0, 5 г. Ρыбы были οбρабοτаны в τечение 2 меся- цев πуτем иммеρсии в ρасτвορе πеπτида κοнценτρации 1.0 мг/л. Ρезульτаτы анализа ποκазали, чτο сρедний вес мальκοв φορели κ κοнцу выρащивания в κοнτροле сοсτавил 2,83 г. а в οπыτнοй гρуππе 3,86 г. Τаκим οбρазοм, πρи- \νθ 96/02267 ΡСΤЛШ95/00138
- 30 - ροсτ οπыτыχ ρыб πο οτнοшению κ κοнτροльным сοсτавил
36,4%.
Пρимеρ 15 5 Φаρмацевτичесκую κοмποзицию на οснοве биοлοгичесκи аκτивнοгο κοмποненτа, ποлученнοгο τаκ же, κаκ уκазанο в πρимеρе 1, изгοτοвляли с сοдеρжанием уκазаннοгο πеπτида в πρеπаρаτе в κοличесτве οτ 0.001 дο 0.1%. πρедποчτи- τельнο οτ 0,001 дο 0,01 . 10 Βοду, углевοдные сοединения и дρугие πρиемлемые нοсиτели πρименяюτ в κοмποзицияχ, πρедназначенныχ для выποйκи или ποдκορмκи живοτныχ.
Изгοτοвление ποдκορмκи οсущесτвляюτ πуτем смешива- ния суχοгο ποροшκа аκτивнοгο ингρадиенτа с вοдοй или 15 κορмοм, πρи эτοм κοличесτвο вοднοй φазы или κορма зави- сиτ οτ желаемοй κοнсисτенции или услοвий οπыτа. а) Τаκ в эκсπеρименτе на ρыбаχ для προведения им- меρсии κοнценτρация πеπτида в вοде сοсτавляла 1,0 мг в лиτρе. 20 б) Φаρмацевτичесκую κοмποзицию на οснοве биοлοги- чесκи аκτивнοгο κοмποненτа, ποлученнοгο τаκ же, κаκ уκазанο в πρимеρе 1, изгοτοвляли с сοдеρжанием уκазан- нοгο πеπτида в πρеπаρаτе в κοличесτве 0, 001% для выποй- κи бычκοв. Ηаποлниτелем служила вοда. 25 в) Φаρмацевτичесκую κοмποзицию на οснοве биοлοги- чесκи аκτивнοгο πеπτида, ποлученнοгο τаκ, κаκ эτο уκа- занο в πρимеρе 1 изгοτοвляли с сοдеρжанием егο в πρеπа- ρаτе в κοличесτве 0, 001%, наποлниτелем служила вοда.
Пρеπаρаτ служил для οτκορмκи свиней. 30 Пροмышленная πρименимοсτь
Пеπτид и φаρмацевτичесκая κοмποзиция на егο οснο- ве, οбладающие биοлοгичесκοй аκτивнοсτью, οπисаннοй в πρимеρаχ 5-14 мοгуτ найτи шиροκοе πρименение в медици- не, веτеρинаρии и сельсκοм χοзяйсτве.

Claims

\νθ 96/02267 ΡСΤЛШ95/00138
- 31 - Φορмула изοбρеτения 1. Пеπτид φορмулы I:
Figure imgf000033_0001
5 X - Η или Αг£, ϋ-Αг£, Οгη, ϋ-Οгη, Ьуз. Б-Ьуз, Ηаг. ϋ-Ηаг, СуΙ. ϋ-Суϊ; Υ - ϋ-ΑΙа, Б-νаΙ, ϋ-Ьеи, д-Ι1е, Б-Ρηе, ϋ-Αзη, ϋ-Τгρ, ϋ-Ρгο, Б-δег. ϋ-Τπг, ϋ-Τуг, ϋ-Ηуρ, ϋ-Суз, Б-СузСуз. Ω-ΜеЬ, ϋ-Ьуз, Б-Ηаг, Б-Αг£, 10 Б-ΗΙз, ϋ-Αзρ, Б-С1и. ϋ-β-ΑΙа, Б-Οгη.
Ζ - Αϊа. Б-ΑΙа, Уаϊ, ϋ-νаϊ, Ьеи, Б-Ьеи, Ιϊе, Б-ΙΙе, Ρπе, ϋ-ΡЬе, Αзη. ϋ-Αзη, Сϊу, Сϊη, Б-СΙη, Τгρ, Б-Τгρ, Ρгο, ϋ-Ρгο, δег. ϋ-δег, ΤЬг, Б-Τπг, Τуг, ϋ-Τуг, Ηуρ, Б-Ηуρ, Суз, 15 Ο-Суз, Суз-Суз, Суз-ϋ-Суз, Б-Суз-Суз. ϋ-Суз-ϋ-Суз, ΜеΙ, ϋ-ΜеΙ, Ьуз, ϋ-Ьуз. Αг£, Б-ΑГ£, Ηιз, ϋ-Ηιз, Αзρ, Б-Αзρ, Сϊи, ϋ-С1и, β-ΑΙа, Б-β-ΑΙа, Οгη, ϋ-Οгη, Α - ΟΗ или замещенный амид (С^- С3), 20 2. Φаρмацевτичесκая κοмποзиция, вκлючающая аκτив- ный κοмποненτ и φаρмацевτичесκи πρиемлемый нοсиτель в виде ρасτвορиτеля или наποлниτеля . οτличающийся τем чτο в κачесτве аκτивнοгο κοмποненτа сοдеρжиτ πеπτид φορмулы I πο π.1 в эφφеκτивнοм κοличесτве. 25 3. Φаρмацевτичесκая κοмποзиция πο π.2 οτличающийся τем. чτο наχοдиτся в φορме ρасτвορа.
4. Φаρмацевτичесκая κοмποзиция πο π.2 οτличающийся τем. чτο наχοдиτся в τвеρдοй φορме.
5. Φаρмацевτичесκая κοмποзиция πο π.3 οτличающийся 30 τем. чτο πρименяеτся в виде инъеκций.
6. Φаρмацевτичесκая κοмποзиция πο π.4 οτличающийся τем. чτο πρименяеτся наρужнο или ορальнο.
7. Φаρмацевτичесκая κοмποзиция πο π.З οτличающийся τем. чτο πρедποчτиτельнοе сοдеρжание уκазаннοгο πеπτида
35 сοсτавляеτ οτ 0,001% дο 0,01%.
8. Φаρмацевτичесκая κοмποзиция πο π.4 οτличающийся τем, чτο πρедποчτиτельнοе сοдеρжание уκазаннοгο πеπτида сοсτавляеτ οτ 0, 001% дο 0, 1%.
9. Сποсοб ποлучения πеπτида οбщей φορмулы (I) πο 40 π.1 заκлючаеτся в ποсτеπеннοм ποсτροении πеπτиднοй цеπи 96/02267 ΡСΤЛШ95/00138
- 32 - исχοдя из С-κοнцевοй аминοκислοτы Ζ, в виде замещеннοгο амида или защищеннοй πο κаρбοκсильнοй гρуππе, πуτем πρисοединения Ν-защищеннοгο φенилаланина меτοдοм сме- 5 шанныχ ангидρидοв или аκτивиροванныχ эφиροв, ποследую- щегο сняτия Ν-защиτнοй гρуππы, πρисοединения меτοдοм аκτивиροванныχ эφиροв или смешанныχ ангидρидοв ποследу- ющей Ν-защищеннοй аминοκислοτы с οτщеπлением Ν-защиτнοй гρуππы и внοвь πρисοединением следующей Ν-защищеннοй 10 аминοκислοτы и ποсле ποсτροения цеπи τеτρа- или πенτа- πеπτид деблοκиρуюτ, ποлучаюτ πеπτид гидροгенοлизοм в πρисуτсτвии πалладиевοгο κаτализаτορа и выделением це- левοгο προдуκτа.
10. Сποсοб πο π. 9 заκлючающийся в τοм, чτο προ- 15 цесс ведуτ в ρасτвορе, исποльзуя меτοд смешанныχ ангид- ρидοв. где в κачесτве исχοднοгο исποльзуюτ безилοвый эφиρ аминοκислοτы и τρеτбуτилοκсиκаρбοнилφенилаланин. κ ποлученнοму сοединению ποследοваτельнο πρисοединяюτ τρеτбуτилοκсиκаρбοниламинοκислοτы с πρедваρиτельным οτ- 20 щеπлением на κаждοй сτадии τρеτбуτилοκсиκаρбοнильнοй гρуππы в κислοй сρеде, заτем προπусκаюτ τοκ вοдοροда в πρисуτсτвии πалладиевοгο κаτализаτορа и целевοй προдуκτ οчищаюτ иοннοοбменнοй χροмаτοгρаφией.
11. Сποсοб πο π.10 , οτличающийся τем.чτο οчисτκу 25 πеπτида προвοдяτ с ποмοщью иοннοοбменнοй χροмаτοгρаφии на κοлοнκе с сορбенτοм δеρηаάеχ С-25 в гρадиенτе 0, 1 Μ - 1.0 Μ πиρидинацеτаτнοгο буφеρнοгο ρасτвορа.
PCT/RU1995/000138 1994-06-29 1995-06-27 Peptide, a method of obtaining it and a pharmaceutical compound based on it Ceased WO1996002267A1 (en)

Priority Applications (10)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AU29002/95A AU693576B2 (en) 1994-06-29 1995-06-27 Peptide, a method of obtaining it and a pharmaceutical compound based on it
JP50356096A JP3668950B2 (ja) 1994-06-29 1995-06-27 ペプチドと、その合成方法と、それをベースにした医薬品
DE69534061T DE69534061T2 (de) 1994-06-29 1995-06-27 Ein peptid, ein verfahren zu seiner darstellung und ein auf ihm basierende pharmazeutische zubereitung
CA2193969A CA2193969C (en) 1994-06-29 1995-06-27 Peptide, a method of obtaining it and a pharmaceutical compound based on it
DK95924554T DK0779076T3 (da) 1994-06-29 1995-06-27 Peptid, en fremgangsmåde til fremstilling af det og en farmaceutisk forbindelse baseret på det
EP95924554A EP0779076B1 (en) 1994-06-29 1995-06-27 Peptide, a method of obtaining it and a pharmaceutical compound based on it
AT95924554T ATE290547T1 (de) 1994-06-29 1995-06-27 Ein peptid, ein verfahren zu seiner darstellung und ein auf ihm basierende pharmazeutische zubereitung
HK98113808.8A HK1012551B (en) 1994-06-29 1995-06-27 Peptide, a method of obtaining it and a pharmaceutical compound based on it
US08/681,248 US6184208B1 (en) 1994-06-29 1996-07-22 Peptide, a method for its preparation and a pharmaceutical composition containing the peptide
US09/320,667 US6248716B1 (en) 1995-06-27 1999-05-27 Peptide, a method for its preparation and a pharmaceutical composition containing the peptide

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU9494024278A RU2067000C1 (ru) 1994-06-29 1994-06-29 Пептид и способ его получения
RU94024278 1994-06-29

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US59499596A Continuation-In-Part 1994-06-29 1996-01-31

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO1996002267A1 true WO1996002267A1 (en) 1996-02-01

Family

ID=20157803

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU1995/000138 Ceased WO1996002267A1 (en) 1994-06-29 1995-06-27 Peptide, a method of obtaining it and a pharmaceutical compound based on it

Country Status (12)

Country Link
EP (1) EP0779076B1 (ru)
JP (1) JP3668950B2 (ru)
CN (1) CN1165336C (ru)
AT (1) ATE290547T1 (ru)
AU (1) AU693576B2 (ru)
CA (1) CA2193969C (ru)
DE (1) DE69534061T2 (ru)
DK (1) DK0779076T3 (ru)
ES (1) ES2239760T3 (ru)
PT (1) PT779076E (ru)
RU (1) RU2067000C1 (ru)
WO (1) WO1996002267A1 (ru)

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997000889A1 (en) * 1995-06-21 1997-01-09 Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha Peptides binding to low-density lipoproteins
WO1997010261A1 (fr) * 1995-09-11 1997-03-20 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Derives peptidiques
US5868728A (en) * 1995-02-28 1999-02-09 Photogenesis, Inc. Medical linear actuator for surgical delivery, manipulation, and extraction
WO2002067959A1 (en) * 2001-02-27 2002-09-06 Neurotide Co., Ltd. Peptide derived from yeast having activities as anti-tsress, anti-fatigue and brain neurotrophic factor and relaxing premenstrual syndrome and menstrual pain, and prepairing process thereof
US7402564B1 (en) 2006-11-10 2008-07-22 Cara Therapeutics, Inc. Synthetic peptide amides
US7473426B2 (en) 2001-02-27 2009-01-06 Yun Seok Choe Method for selectively inhibiting reuptake of serotonin and norepinephrine using yeast extract
US7713937B2 (en) 2006-11-10 2010-05-11 Cara Therapeutics, Inc. Synthetic peptide amides and dimeric forms thereof
US7842662B2 (en) 2006-11-10 2010-11-30 Cara Therapeutics, Inc. Synthetic peptide amide dimers
US8236766B2 (en) 2006-11-10 2012-08-07 Cara Therapeutics, Inc. Uses of synthetic peptide amides
US8906859B2 (en) 2006-11-10 2014-12-09 Cera Therapeutics, Inc. Uses of kappa opioid synthetic peptide amides
US10221213B2 (en) 2013-12-27 2019-03-05 Stealth Biotherapeutics Corp Pharmaceutically relevant aromatic-cationic peptides
US10633415B2 (en) 2015-03-06 2020-04-28 Stealth Biotherapeutics Corp Processes for preparing pharmaceutically relevant peptides

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2107691C1 (ru) * 1995-03-02 1998-03-27 Дейгин Владислав Исакович Пептид и способ его получения
US5965701A (en) * 1997-12-23 1999-10-12 Ferring Bv Kappa receptor opioid peptides
EP1144360B1 (en) * 1999-01-22 2005-04-27 PharmaCore, Inc, A method for the synthesis of compounds of formula 1 and derivatives thereof
RU2298921C1 (ru) * 2005-10-04 2007-05-20 Закрытое Акционерное Общество "Центр "Пептос" Способ стимуляции развития осетровых рыб
US10702606B2 (en) * 2015-12-10 2020-07-07 Menicon Co., Ltd. Peptide composition

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0106404A2 (en) * 1982-10-13 1984-04-25 Akzo N.V. Peptides
EP0128097A1 (fr) * 1983-06-03 1984-12-12 Etablissement Public dit: CENTRE NATIONAL DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE (CNRS) Nouveaux dérivés immunostimulants, leur préparation et leur application comme médicament
EP0134582A2 (en) * 1983-09-07 1985-03-20 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Novel peptides and process for preparing the same and pharmaceutical composition
EP0143850A1 (en) * 1983-03-31 1985-06-12 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Novel physiologically active proteinaceous substance
WO1986002079A1 (fr) * 1984-09-28 1986-04-10 Victor Brantl Peptide pharmacologiquement actif
WO1990006946A1 (de) * 1988-12-12 1990-06-28 Basf Aktiengesellschaft Neue tnf-peptide
WO1990006947A1 (de) * 1988-12-12 1990-06-28 Basf Aktiengesellschaft Neue tnf-peptide

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL8005121A (nl) * 1979-09-20 1981-03-24 Erba Farmitalia Biologisch actieve peptiden.
SE9300012D0 (sv) * 1993-01-05 1993-01-05 Astra Ab New peptides

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0106404A2 (en) * 1982-10-13 1984-04-25 Akzo N.V. Peptides
EP0143850A1 (en) * 1983-03-31 1985-06-12 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Novel physiologically active proteinaceous substance
EP0128097A1 (fr) * 1983-06-03 1984-12-12 Etablissement Public dit: CENTRE NATIONAL DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE (CNRS) Nouveaux dérivés immunostimulants, leur préparation et leur application comme médicament
EP0134582A2 (en) * 1983-09-07 1985-03-20 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Novel peptides and process for preparing the same and pharmaceutical composition
WO1986002079A1 (fr) * 1984-09-28 1986-04-10 Victor Brantl Peptide pharmacologiquement actif
WO1990006946A1 (de) * 1988-12-12 1990-06-28 Basf Aktiengesellschaft Neue tnf-peptide
WO1990006947A1 (de) * 1988-12-12 1990-06-28 Basf Aktiengesellschaft Neue tnf-peptide

Cited By (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5868728A (en) * 1995-02-28 1999-02-09 Photogenesis, Inc. Medical linear actuator for surgical delivery, manipulation, and extraction
US6127339A (en) * 1995-06-21 2000-10-03 Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha Peptide for binding thereto a low density lipoprotein
WO1997000889A1 (en) * 1995-06-21 1997-01-09 Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha Peptides binding to low-density lipoproteins
WO1997010261A1 (fr) * 1995-09-11 1997-03-20 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Derives peptidiques
US6228841B1 (en) 1995-09-11 2001-05-08 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Peptide derivatives
US7473426B2 (en) 2001-02-27 2009-01-06 Yun Seok Choe Method for selectively inhibiting reuptake of serotonin and norepinephrine using yeast extract
WO2002067959A1 (en) * 2001-02-27 2002-09-06 Neurotide Co., Ltd. Peptide derived from yeast having activities as anti-tsress, anti-fatigue and brain neurotrophic factor and relaxing premenstrual syndrome and menstrual pain, and prepairing process thereof
US8236766B2 (en) 2006-11-10 2012-08-07 Cara Therapeutics, Inc. Uses of synthetic peptide amides
US8951970B2 (en) 2006-11-10 2015-02-10 Cara Therapeutics, Inc. Synthetic peptide amides for pain
US7727963B2 (en) 2006-11-10 2010-06-01 Cara Therapeutics, Inc. Synthetic peptide amides
US7842662B2 (en) 2006-11-10 2010-11-30 Cara Therapeutics, Inc. Synthetic peptide amide dimers
US8217007B1 (en) 2006-11-10 2012-07-10 Cara Therapeutics, Inc. Synthetic peptide amides
US7402564B1 (en) 2006-11-10 2008-07-22 Cara Therapeutics, Inc. Synthetic peptide amides
US8486894B2 (en) 2006-11-10 2013-07-16 Cara Therapeutics, Inc. Synthetic peptide amides and dimeric forms thereof
US8536131B2 (en) 2006-11-10 2013-09-17 Cara Therapeutics, Inc. Synthetic peptide amides and dimers thereof
US8906859B2 (en) 2006-11-10 2014-12-09 Cera Therapeutics, Inc. Uses of kappa opioid synthetic peptide amides
US7713937B2 (en) 2006-11-10 2010-05-11 Cara Therapeutics, Inc. Synthetic peptide amides and dimeric forms thereof
US9321810B2 (en) 2006-11-10 2016-04-26 Cara Therapeutics, Inc. Uses of kappa opioid synthetic peptide amides
US9334305B2 (en) 2006-11-10 2016-05-10 Cara Therapeutics, Inc. Synthetic peptide amides and dimers thereof
US9359399B2 (en) 2006-11-10 2016-06-07 Cara Therapeutics, Inc. Synthetic peptide amides
US10913769B2 (en) 2006-11-10 2021-02-09 Cara Therapeutics, Inc. Synthetic peptide amides and dimers thereof
US10696716B2 (en) 2013-12-27 2020-06-30 Stealth Biotherapeutics Corp Pharmaceutically relevant aromatic-cationic peptides
US10221213B2 (en) 2013-12-27 2019-03-05 Stealth Biotherapeutics Corp Pharmaceutically relevant aromatic-cationic peptides
US10633415B2 (en) 2015-03-06 2020-04-28 Stealth Biotherapeutics Corp Processes for preparing pharmaceutically relevant peptides
US12037414B2 (en) 2015-03-06 2024-07-16 Stealth Biotherapeutics Inc. Processes for preparing pharmaceutically relevant peptides

Also Published As

Publication number Publication date
DK0779076T3 (da) 2005-07-11
AU693576B2 (en) 1998-07-02
RU2067000C1 (ru) 1996-09-27
HK1012551A1 (en) 1999-08-06
AU2900295A (en) 1996-02-16
CA2193969A1 (en) 1996-02-01
CN1165336C (zh) 2004-09-08
CN1159758A (zh) 1997-09-17
ES2239760T3 (es) 2005-10-01
EP0779076A4 (en) 1999-03-17
JP3668950B2 (ja) 2005-07-06
CA2193969C (en) 2010-11-30
PT779076E (pt) 2005-07-29
JP2001503011A (ja) 2001-03-06
DE69534061T2 (de) 2006-04-13
ATE290547T1 (de) 2005-03-15
EP0779076A1 (en) 1997-06-18
DE69534061D1 (de) 2005-04-14
EP0779076B1 (en) 2005-03-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO1996002267A1 (en) Peptide, a method of obtaining it and a pharmaceutical compound based on it
Fürst et al. Glutamine‐containing dipeptides in parenteral nutrition
DE60026826T2 (de) Alterungsschutztetrapeptid, dieses enthaltende pharmazeutische zusammensetzungen und seine verwendung
ES2985734T3 (es) Método de tratamiento de trastornos asociados a la vía del receptor de la melanocortina-4
JPH02501222A (ja) ブラジキニン　アンタゴニスト　ペプチド
CN101959530A (zh) 糖尿病或肥胖症的预防或治疗剂
CN104024271A (zh) 基质金属蛋白酶活性抑制肽及其用途
JP5459826B2 (ja) 皮膚線維芽細胞におけるエラスチン産生促進剤及び血管内皮細胞の増殖促進剤
EP0625163B1 (de) Parathormonfragmente, deren herstellung und diese enthaltende arzneimittel
Harris et al. Direct infusion of a variant of insulin-like growth factor-I into the skin of sheep and effects on local blood flow, amino acid utilization and cell replication
US6184208B1 (en) Peptide, a method for its preparation and a pharmaceutical composition containing the peptide
CN1856504B (zh) 抗梗塞分子
RU2110275C1 (ru) Способ получения пептида, обладающего анаболической активностью, стимулирующего увеличение массы тела, развитие эпидермального слоя и роста волосяного покрова
RU2295970C1 (ru) Пептид, повышающий резистентность капилляров, фармацевтическая композиция на его основе и способ ее применения
RU2177802C1 (ru) Тетрапептид, регулирующий функции предстательной железы, фармакологическое средство на его основе и способ его применения
TW201039839A (en) Composition for regulating antonomic nervous activity and method for regulating autonomic nervous
JP2022025155A (ja) 線維芽細胞又は軟骨細胞におけるエラスチン産生促進剤
US8481484B2 (en) Cyclic heptapeptide and use of the same
US6248716B1 (en) Peptide, a method for its preparation and a pharmaceutical composition containing the peptide
HK1012551B (en) Peptide, a method of obtaining it and a pharmaceutical compound based on it
JP2019085380A (ja) ヒアルロン酸産生促進剤
Day Chemistry in its relations to physiology and medicine
van Vlissingen et al. Kinetics of plasma lysine after oral and parenteral administration to pigs.
du Vigneaud et al. Effect of the presence of labile methyl groups in the diet on labile methyl neogenesis
AOTA PPROCEEDINGS OF THE PHYSIOLOGICAL SOCIETY

Legal Events

Date Code Title Description
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 95194382.0

Country of ref document: CN

AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AU CA CN JP US

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AT BE CH DE DK ES FR GB GR IE IT LU MC NL PT SE

DFPE Request for preliminary examination filed prior to expiration of 19th month from priority date (pct application filed before 20040101)
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2193969

Country of ref document: CA

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 1996 503560

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 1995924554

Country of ref document: EP

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 1995924554

Country of ref document: EP

NENP Non-entry into the national phase

Ref document number: 96503560

Country of ref document: JP

NENP Non-entry into the national phase

Ref document number: 96503560

Country of ref document: JP

NENP Non-entry into the national phase

Ref document number: 96503560

Country of ref document: JP

NENP Non-entry into the national phase

Ref document number: 1996503560

Country of ref document: JP

WWG Wipo information: grant in national office

Ref document number: 1995924554

Country of ref document: EP