RU2110275C1 - Способ получения пептида, обладающего анаболической активностью, стимулирующего увеличение массы тела, развитие эпидермального слоя и роста волосяного покрова - Google Patents
Способ получения пептида, обладающего анаболической активностью, стимулирующего увеличение массы тела, развитие эпидермального слоя и роста волосяного покрова Download PDFInfo
- Publication number
- RU2110275C1 RU2110275C1 RU94033068A RU94033068A RU2110275C1 RU 2110275 C1 RU2110275 C1 RU 2110275C1 RU 94033068 A RU94033068 A RU 94033068A RU 94033068 A RU94033068 A RU 94033068A RU 2110275 C1 RU2110275 C1 RU 2110275C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- peptide
- synthesis
- development
- phe
- gly
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 title claims description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 title claims description 6
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 title claims description 5
- 230000001195 anabolic effect Effects 0.000 title claims description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title abstract description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 title abstract description 5
- 230000003779 hair growth Effects 0.000 title description 5
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 claims abstract description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 claims description 7
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 claims description 7
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 claims description 7
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 4
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 claims description 2
- -1 carbobenzoxy amino Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 2
- SJMDMGHPMLKLHQ-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 2-aminoacetate Chemical group CC(C)(C)OC(=O)CN SJMDMGHPMLKLHQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- RRONHWAVOYADJL-HNNXBMFYSA-N (2s)-3-phenyl-2-(phenylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RRONHWAVOYADJL-HNNXBMFYSA-N 0.000 claims 1
- UVTGNSWSRSCPLP-UHFFFAOYSA-N Arg-Tyr Natural products NC(CCNC(=N)N)C(=O)NC(Cc1ccc(O)cc1)C(=O)O UVTGNSWSRSCPLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 claims 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 claims 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 claims 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 7
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 abstract description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 abstract description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 abstract 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 abstract 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 abstract 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 abstract 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 11
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- HSQIYOPBCOPMSS-ZETCQYMHSA-N (2s)-5-(diaminomethylideneamino)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N HSQIYOPBCOPMSS-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 4
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 4
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 4
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 4
- 108010081819 sedatin Proteins 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical class [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 3
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 3
- 210000003780 hair follicle Anatomy 0.000 description 3
- MCRMUCXATQAAMN-HNNXBMFYSA-N (2s)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-(phenylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 MCRMUCXATQAAMN-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011785 NMRI mouse Methods 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- AQEFLFZSWDEAIP-UHFFFAOYSA-N di-tert-butyl ether Chemical compound CC(C)(C)OC(C)(C)C AQEFLFZSWDEAIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YBPUBXQZBUQACE-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;phosphoric acid Chemical compound NCC(O)=O.OP(O)(O)=O YBPUBXQZBUQACE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropyl carbonochloridate Chemical compound CC(C)COC(Cl)=O YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical compound OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BGOFOVHACSQSIE-UHFFFAOYSA-N 5-[bis[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]methylideneamino]-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NC(C(O)=O)CCCN\C(NC(=O)OC(C)(C)C)=N/C(=O)OC(C)(C)C BGOFOVHACSQSIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 235000021316 daily nutritional intake Nutrition 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 231100000683 possible toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- GAPYKZAARZMMGP-UHFFFAOYSA-N pyridin-1-ium;acetate Chemical compound CC(O)=O.C1=CC=NC=C1 GAPYKZAARZMMGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, точнее к способам получения биологически активных веществ, и может найти применение в клинике, ветеринарии, а также в экспериментальных исследованиях. Актуальность разработки способов получения новых биологически активных веществ, регулирующих анаболические процессы, ведущие к увеличению живой массы у животных и увеличению роста и качества волосяного покрова, подтверждается большим количеством исследований, проведенных в этой области. Изобретение связано со способом получения пептида, обладающего анаболической активностью, стимулирующего увеличение массы тела, развитие эпидермального слоя и роста волосяного покрова. Синтез заявляемого пептида проводили классическим методом в растворе последовательным наращиванием цепи с С-конца молекулы, используя стратегию максимального блокирования функциональных групп. Пентапептид получали, исходя из третбутилового эфира глицина с помощью метода активированных эфиров и метода смешанных ангидридов, используя карбобензокси- и трет-бутилоксикарбониламинокислоты, окончательное деблокирование проводили в кислой среде и целевой продукт очищали ионообменной хроматографией. 8 ил.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, точнее к способам получения биологически активных веществ, и может найти применение в клинике, ветеринарии, а также в экспериментальных исследованиях.
Актуальность разработки способов получения новых биологически активных веществ, регулирующих анаболические процессы, ведущие к увеличению живой массы у животных и увеличению роста и качества волосяного покрова, подтверждается большим количеством исследований, проведенных в этой области.
Как правило, решение этой проблемы сводится либо к созданию целых композиций, включающих витамины, гормоны и другие биологические активные вещества (SU N 1664325, 1988; GB N 1460020, 1976), либо к поиску оптимальных технологий по очистке природного гормона роста, влияющего на процесс роста волос и вес тела (US N 4115375, 1978; US N 4332717, 1982; US N 4371462, 1983), либо к получению путем синтеза средств, подобных гормону роста (ЕП N 0137904, 1984). При этом особую группу составляют синтезированные физиологически активные субстанции пептидной или полипептидной природы, прямо либо опосредованно влияющие на гормон роста (Fr N 2266516, 1975; Fr N 2532308, 1983; ЕП N 0143850, 1984; PCT 89/0711, 1989; PCT N 90/13570, 1990; PCN /16923, 1991; US N 5008244, 1991).
Известно, однако, что гормон роста не проявляет строгой специфичности, одновременно воздействует на многие метаболистические пути и в эффективных дозах обладает широким терапевтическим действием (US N 4816439, 1989; PCT 90/12589, 1990; PCT 90/14839, 1990 US N 5006510, 1991; PCT 91/15227, 1991).
На сегодняшний день известны два препарата пептидной природы. У одного из которых отмечена специфическая направленность на стимулирование развития эпидермального слоя кожного покрова у человека (PCT N 90/13570, 1990), у другого - металлопептида, выраженная специфичность в отношении роста волос у теплокровных животных (PCT N 91/07431, 1991).
Однако известные способы получения биологически активных пептидов являются сложными, трудоемкими, выход продукта низким, а применение известных средств в большинстве своем сопровождается нежелательными побочными действиями.
Настоящим изобретением поставлена и решена задача создания эффективного способа получения нового, не известного ранее биологически активного пептида формулы:
H-Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-A,
где A - OH или замещенный амид (C1 - C3),
обладающего специфическим, стимулирующим действием на активность ростовой зоны эпителия, развитие эпидермального слоя, рост волос, а также влияющего на увеличение живой массы.
H-Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-A,
где A - OH или замещенный амид (C1 - C3),
обладающего специфическим, стимулирующим действием на активность ростовой зоны эпителия, развитие эпидермального слоя, рост волос, а также влияющего на увеличение живой массы.
Сущность нового способа состоит из синтеза пептида в растворе путем последовательного наращивания цепи с C-конца молекулы, используя стратегию максимального блокирования функциональных групп, исходя из третбутилового эфира глицина с помощью метода активированных эфиров и метода смешанных ангидридов, используя карбобензокси- и третбутилоксикарбониламинокислоты.
Способ иллюстрируется следующим примером:
Пример 1. H-Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-OH
Получение BOC-Arg(BOC)-Tyr(OBut)-D-Ala-Phe-Gly-oBut.
Пример 1. H-Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-OH
Получение BOC-Arg(BOC)-Tyr(OBut)-D-Ala-Phe-Gly-oBut.
1. Z-Phe-Gly-oBut
46,5 г (0,1 моля) Z-Phe-OPfP растворяли в 150 мл диметилформамида и при перемешивании добавляли раствор 21,3 г третбутилового эфира фосфата глицина и 11,5 мл N-метилморфолина в водном диметилформамиде. Реакционную смесь перемешивали сутки при комнатной температуре. Диметилформамид отгоняли в вакууме, остаток заливали 200 мл этилацетата и промывали 2%-ным раствором серной кислоты 2 раза по 150 мл, затем промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия 2 раза по 150 мл, отмывали водой до нейтральной среды, высушивали над безводным сульфатом натрия. Этилацетатный слой упаривали в вакууме. Остаток кристаллизировали из эфира с гексаном. Выход: 37,3 г (90,5%). Rf = 0,68 (система: хлороформ : этилацетат : метанол = 3 : 6 : 1), Rf = 0,59 (система : этилацетат : гексан = 1 : 1).
46,5 г (0,1 моля) Z-Phe-OPfP растворяли в 150 мл диметилформамида и при перемешивании добавляли раствор 21,3 г третбутилового эфира фосфата глицина и 11,5 мл N-метилморфолина в водном диметилформамиде. Реакционную смесь перемешивали сутки при комнатной температуре. Диметилформамид отгоняли в вакууме, остаток заливали 200 мл этилацетата и промывали 2%-ным раствором серной кислоты 2 раза по 150 мл, затем промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия 2 раза по 150 мл, отмывали водой до нейтральной среды, высушивали над безводным сульфатом натрия. Этилацетатный слой упаривали в вакууме. Остаток кристаллизировали из эфира с гексаном. Выход: 37,3 г (90,5%). Rf = 0,68 (система: хлороформ : этилацетат : метанол = 3 : 6 : 1), Rf = 0,59 (система : этилацетат : гексан = 1 : 1).
2. Z-D-Ala-Phe-Gly-oBut
37,3 г (0,09 моля) Z-Phe-Gly-oBut растворяли в 200 мл этилового спирта, добавляли 4,0 г палладиевого катализатора и пропускали ток водорода в течение 4 ч. Катализатор отфильтровывали, растворители упаривали в вакууме до густого масла, до постоянного веса.
37,3 г (0,09 моля) Z-Phe-Gly-oBut растворяли в 200 мл этилового спирта, добавляли 4,0 г палладиевого катализатора и пропускали ток водорода в течение 4 ч. Катализатор отфильтровывали, растворители упаривали в вакууме до густого масла, до постоянного веса.
34,4 г (0,1 моля) Z-D-Ala-ONP растворяли в 100 мл диметилформамида и при перемешивании добавляли раствор 13,5 г (0,1 моля) гидроксибензотриазола и 25,2 г (0,09 моля) H-Phe-Gly-oBut в 70 мл диметилформамида. Реакционную смесь перемешивали сутки при 20oC. Диметилформамид отгоняли в вакууме, остаток заливали 200 мл этилацетата и промывали 2%-ным раствором серной кислоты 2 раза по 100 мл, затем промывали 2%-ным раствором аммиака 4 раза по 80 мл, отмывали водой до нейтральной среды, высушивали над безводным сульфатом натрия. Этилацетатный слой упаривали в вакууме. Остаток кристаллизовали из эфира. Выход: 39,5 г (90,8%). Rf - 0,76 (система: хлороформ:этилацетат:метанол = 6 : 3 : 1), Rf = 0,52 (система: хлороформ:метанол = 9 : 1).
3. Z-Tyr(oBut)-D-Ala-Phe-Gly-OBut
39,5 г (0,08 моля) Z-D-Ala-Phe-Gly-oBut растворяли в 200 мл этилового спирта, добавляли 4,0 г палладиевого катализатора и пропускали ток водорода в течение 4 ч. Катализатор отфильтровывали, растворители упаривали в вакууме до густого масла, до постоянного веса.
39,5 г (0,08 моля) Z-D-Ala-Phe-Gly-oBut растворяли в 200 мл этилового спирта, добавляли 4,0 г палладиевого катализатора и пропускали ток водорода в течение 4 ч. Катализатор отфильтровывали, растворители упаривали в вакууме до густого масла, до постоянного веса.
34,9 г (0,09 моля) Z-Tyr(oBut)-Oh и 10,3 мл (0,09 ммоля) N-метилморфолина в 150 мл диметилформамида охлаждали до -15oC и при перемешивании добавляли 12,6 г (0,09 моля) изобутилхлорформиата. Через 2 мин вносили охлажденный раствор 28,6 г (0,08 моля) третбутилового эфира трипептида: H-D-Ala-Phe-Gly-oBut. Реакционную смесь перемешивали при -15oC 30 мин и 2 ч при комнатной температуре. Диметилформамид отгоняли в вакууме, остаток заливали 200 мл этилацетата и экстрагировали 2%-ным раствором серной кислоты 2 раза по 80 мл, затем промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия 2 раза по 80 мл, отмывали водой до нейтральной среды, высушивали над безводным сульфатом натрия. Этилацетатный слой упаривали в вакууме. Остаток кристаллизовали из этилацетата. Выход : 51,3 г (95,4%), Rf = 0,61 (система: хлороформ: этилацетат:метанол = 6 : 3 : 1), Rf = 0,55 (система: хлороформ:метанол = 9 : 1).
4. BOC-Arg(BOC)-Tyr(oBut)-D-Ala-Phe-Gly-OBut
51,3 г (0,07 моля) Z-Tyr-(BOC)-D-Ala-Phe-Gly-OBut растворители в 200 мл этилового спирта, добавляли 4,0 г палладиевого катализатора и пропускали ток водорода в течение 4 ч. Катализатор отфильтровывали, растворяли упаривали в вакууме до густого масла, до постоянного веса.
51,3 г (0,07 моля) Z-Tyr-(BOC)-D-Ala-Phe-Gly-OBut растворители в 200 мл этилового спирта, добавляли 4,0 г палладиевого катализатора и пропускали ток водорода в течение 4 ч. Катализатор отфильтровывали, растворяли упаривали в вакууме до густого масла, до постоянного веса.
42,0 г (0,07 моль) H-Tyr(OBut)-D-Ala-Phe-Gly-OBut растворяли в 150 мл диметилформамида и добавляли 9,2 мл (0,08 моля) N-метилморфолина, 30,0 г (0,08 моля) BOC-Arg(BOC)-OH и 10,8 г оксибензотриазола. Реакционную смесь охлаждали при перемешивании до -10oC и вносили 16,5 г (0,08 моля) дициклогексилкарбодиимида. Реакционную смесь перемешивали 3 сут при комнатной температуре. Дициклогексилмочевину отфильтровывали, растворитель отгоняли в вакууме, остаток заливали 300 мл этилацетата и промывали 2%-ным раствором серной кислоты 2 раза по 150 мл, затем промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия 2 раза по 100 мл, отмывали водой до нейтральной среды, высушивали над безводным сульфатом натрия. Этилацетатный слой упаривали в вакууме. Остаток кристаллизовали из этилацетата. Выход: 62,6 г (93,5%), Rf = 0,71 (система: хлороформ: этилацетат:метанол:уксусная кислота = 6:3:1:0.5), Rf = 0,22 (система: хлороформ:метанол = 9:1).
5. Получение H-Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-OH
62,6 г (0,065 моля) BOC-Arg(BOC)-Tyr(OBut)-D-Ala-Phe-Gly-OBut растворяли в 80 мл 50%-ной трифторуксусной кислоты в хлороформе. Через 1 ч растворители упаривали в вакууме до густого масла. Остаток заливали эфиром и затирали. Осадок отфильтровывали и промывали эфиром, высушивали на воздухе. Выход: 39,8 г (100%), Rf = 0,44 (система:бутанол:уксусная кислота:вода = 3:1:1).
62,6 г (0,065 моля) BOC-Arg(BOC)-Tyr(OBut)-D-Ala-Phe-Gly-OBut растворяли в 80 мл 50%-ной трифторуксусной кислоты в хлороформе. Через 1 ч растворители упаривали в вакууме до густого масла. Остаток заливали эфиром и затирали. Осадок отфильтровывали и промывали эфиром, высушивали на воздухе. Выход: 39,8 г (100%), Rf = 0,44 (система:бутанол:уксусная кислота:вода = 3:1:1).
Очистку пептида проводили с помощью ионнообменной хроматографии на колонке с Сефадексом в градиенте 0,1 - 1,0 М пиридинацетатного буфера. Выход: 35,8 г (90,0%).
В результате изучения физико-химических свойств нового пептида были получены следующие его характеристики:
Первичная структура - H-Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-OH
Брутто-формула - C29H40N8O7
Молекулярный вес - 612,6 Da
Внешний вид - белый с желтоватым или серый порошок
Растворитель - растворим в воде, 0,1%-ный водный раствор прозрачен, малорастворим в спирте, практически нерастворим в хлороформе
УФ-спектр - характерный максимум поглощения 0,02%-ного водного раствора 275 ± 2 нм, плечо 282 ± 2 нм.
Первичная структура - H-Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-OH
Брутто-формула - C29H40N8O7
Молекулярный вес - 612,6 Da
Внешний вид - белый с желтоватым или серый порошок
Растворитель - растворим в воде, 0,1%-ный водный раствор прозрачен, малорастворим в спирте, практически нерастворим в хлороформе
УФ-спектр - характерный максимум поглощения 0,02%-ного водного раствора 275 ± 2 нм, плечо 282 ± 2 нм.
В результате изучения биологической активности нового пептида были получены данные, свидетельствующие о его влиянии на такие физиологические процессы, как: увеличение живой массы тела; активация ростовой зоны эпителия, стимулирование развития эпидермиса и волосяного покрова у различных видов животных.
Влияние пептидного препарата на прирост веса.
A. Эксперимент проводили на 4 группах беспородных белых крысят в возрасте одного месяца. Контрольная группа 1 получала инъекции физиологического раствора, 2,3 и 4 экспериментальным группам вводили препарат в дозах 0,1; 0,5; 1,0 мкг/кг веса внутрибрюшинно. Взвешивание крыс во всех группах проводили каждые 5 дней и параллельно фиксировали количество потребляемой пищи. Эксперимент длился в течение 35 дней. Результаты представлены на фиг. 1. Отмечен наибольший прирост веса в группе, получавшей 1,0 мкг/кг пептида. Данные, отражающие количество потребляемой крысами пищи, представлены на фиг. 2. Во всех экспериментальных группах отмечено отсутствие влияния пептида на количество потребляемой пищи, что свидетельствует о его анаболической активности.
B. Эксперимент проведен на 7 группах мышей линии NMRI, находящихся в свободном рационе питания с неограниченным доступом к воде и пище. При этом 1 группа получала инъекции физиологического раствора, 2, 3 и 4 группы мышей получали пептид вместе с питьем из расчета 1,0, 10,0 и 100 мкг/кг соответственно 5, 6 и 7 группам пептид вводился ежедневно внутрибрюшинно в дозах 0,1, 0,5 и 1,0 мкг/кг соответственно. В течение 30 дней дважды в неделю определяли вес мышей и ежедневно фиксировали количество потребляемого корма. Суммарные результаты по изменению веса мышей при описанных способах введения пептида представлены на фиг. 3. Наиболее эффективным является прием пептида вместе с питьем в дозе 1 мкг/кг (p/o).
На фиг. 4 представлены результаты по количеству среднесуточного потребления пищи в разных группах. Статически значимо (p < 0,05) больше корма потребляли мыши, получавшие препарат с питьем в дозе 1,0 мкг/кг перорально, т.е. животные, которые дали максимальный привес.
Учитывая, что под влиянием пептида меняются два параметра: прирост веса и потребления пищи, рассчитан прирост веса в процентах при потреблении 1 г пищи, что является показателем коммерческой выгоды применения пептида. На фиг. 5 представлены результаты. Видно, что наибольший прирост веса при потреблении 1 г пищи отмечен при приеме пептида с питьем в дозе 10,0 мкг/кг, что на 36,5% превышает прирост у контрольной группы.
Влияние пептида на морфологические изменения кожи и рост волосяного покрова.
Эксперимент проведен на 4 группах мышей линии NMRI: 1 группа - пассивный контроль, 2, 3 и 4 группы получали перорально при питье пептидный препарат в дозах 1,0, 10,0 и 100 мкг/кг соответственно. После биопсии образцы кожи, взятые в области холки размером 5х5 мм, фиксировали по методу Лилли в течение 48 ч, отмывали в спиртах нисходящей батареи и погружали в краситель Гемолаун Майера на 24 ч. Затем проводили проводку и заключение в целлодин. Изготовление гистологических препаратов осуществляли с помощью микротома фирмы Рейхард, ориентировав кусочки кожи в плоскости хода осевого волоса, срезы докрашивали по классической методике эозином.
При изучении гистологических препаратов толщиной 10 мм оценивали качественное состояние эпидермиса и дермы, а также определяли число волосяных фоликул в 1 мм по методу Афтандилова у опытных и контрольных групп мышей. Результаты представлены на фиг. 6. Из диаграмм на фигуре видно, что у мышей, получавших 100, 10,0, 1,0 мкг/кг пептида, отмечалось увеличение числа волосяных фоликулов на 14, 19 и 22% соответственно по сравнению с контрольной группой.
У указанных групп мышей оценивалась длина шерсти в области холки. С точностью до микрона у каждой мыши измерялась длина 10 волосков и рассчитывались средние значения по каждой группе. Результаты представлены на фиг. 6, 7.
Изучение токсичности препарата.
Исследования возможной токсичности нового пептида для определения ЛД-50 были проведены на 24 здоровых беспородных белых мышах массой 18 г, находившихся в одинаковых условиях питания и содержания. Во всех группах половину животных составляли самцы, а другую - самки. За 24 ч до испытаний и во время их проведения животные находились в помещении вивария с постоянной температурой и вентиляцией. За 2 ч до начала испытаний животным прекращали подачу воды и пищи.
Были выделены четыре группы мышей по 8 животных в каждой группе. При этом 1, 2 и 3 группах мышей вводили водный раствор препарата в дозе 800, 1100 и 1400 мг/кг соответственно. Мышам 4 группы, контрольной, вводили физиологический раствор в том же объеме. Наблюдения за животными проводили в течение 7 суток после введения. Установлено, что сразу после введения и в течение всего срока наблюдения каких-либо изменений в общем состоянии и поведении животных не наблюдали. Не было отмечено также в этот период случаев смертности животных.
Результаты проведенных исследований показали, что при внутрибрюшинном введении пептид в дозе 800, 1100 и 1400 мг/кг не оказывает токсического действия; при этих дозах оказалось невозможным достигнуть дозы ЛД-50.
Таким образом, новый пептид формулы: H-Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-OH не является токсичным и оказывает выраженное стимулирующее действие на активность ростовой зоны эпителия, на развитие эпидермального слоя кожи, способствует увеличению плотности волосяных фоликул и росту волос, а также оказывает влияние на увеличение живой массы тела.
Claims (1)
- Способ получения пептида, обладающего анаболической активностью, стимулирующего увеличение массы тела, развитие эпидермального слоя и роста волосяного покрова, заключающийся в том, что вводят во взаимодействие в растворе третбутиловый эфир глицина с бензилоксикарбонилфенилаланином, затем постепенно наращивают пептидную цепь методом активированных эфиров и методом смешанных ангидридов, последовательно присоединяют карбобензоксиаминокислоты с предварительным отщеплением на каждой стадии карбобензоксигруппы путем обработки реакционной смеси током водорода в присутствии палладиевого катализатора и с последующим очищением промежуточных продуктов кристаллизацией, окончательно деблокируют в кислой среде и целевой продукт формулы
H - Arg - Tyr - D - Ala - Phe - Gly - A,
где A - OH или замещенный C1 - C3-амид,
очищают ионообменной хроматографией.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU94033068A RU2110275C1 (ru) | 1994-09-09 | 1994-09-09 | Способ получения пептида, обладающего анаболической активностью, стимулирующего увеличение массы тела, развитие эпидермального слоя и роста волосяного покрова |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU94033068A RU2110275C1 (ru) | 1994-09-09 | 1994-09-09 | Способ получения пептида, обладающего анаболической активностью, стимулирующего увеличение массы тела, развитие эпидермального слоя и роста волосяного покрова |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU94033068A RU94033068A (ru) | 1996-09-10 |
| RU2110275C1 true RU2110275C1 (ru) | 1998-05-10 |
Family
ID=20160359
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU94033068A RU2110275C1 (ru) | 1994-09-09 | 1994-09-09 | Способ получения пептида, обладающего анаболической активностью, стимулирующего увеличение массы тела, развитие эпидермального слоя и роста волосяного покрова |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2110275C1 (ru) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2139085C1 (ru) * | 1998-06-23 | 1999-10-10 | Санкт-Петербургская общественная организация "Институт биорегуляции и геронтологии" | Средство, стимулирующее репаративные процессы, и способ его применения |
| RU2155064C1 (ru) * | 1999-04-16 | 2000-08-27 | ЗАО "Центр "Пептос" | Адаптоген стресс-корректор и фармацевтическая композиция на его основе |
| RU2161974C1 (ru) * | 2000-01-20 | 2001-01-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Клиника Института биорегуляции и геронтологии" | Лечебно-профилактическое средство для ухода за кожей (варианты) |
| RU2260597C2 (ru) * | 2000-06-05 | 2005-09-20 | Сумитомо Электрик Индастриз, Лтд | Олигопептиды |
| RU2295949C1 (ru) * | 2005-08-15 | 2007-03-27 | ООО "Лаборатории "Новые Горизонты Химии" | Стимулятор роста волос на основе производных пантотеновой кислоты |
| RU2323941C2 (ru) * | 2002-08-09 | 2008-05-10 | Сосьете Де Консей Де Решерш Э Д`Аппликасьон Сьентифик, С.А.С. | Рилизинг-пептиды ростового гормона |
| RU2457830C2 (ru) * | 2006-06-14 | 2012-08-10 | Др.Редди'С Лабораторис Лимитед | Композиции для местного применения |
-
1994
- 1994-09-09 RU RU94033068A patent/RU2110275C1/ru active
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2139085C1 (ru) * | 1998-06-23 | 1999-10-10 | Санкт-Петербургская общественная организация "Институт биорегуляции и геронтологии" | Средство, стимулирующее репаративные процессы, и способ его применения |
| RU2155064C1 (ru) * | 1999-04-16 | 2000-08-27 | ЗАО "Центр "Пептос" | Адаптоген стресс-корректор и фармацевтическая композиция на его основе |
| RU2161974C1 (ru) * | 2000-01-20 | 2001-01-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Клиника Института биорегуляции и геронтологии" | Лечебно-профилактическое средство для ухода за кожей (варианты) |
| RU2260597C2 (ru) * | 2000-06-05 | 2005-09-20 | Сумитомо Электрик Индастриз, Лтд | Олигопептиды |
| RU2323941C2 (ru) * | 2002-08-09 | 2008-05-10 | Сосьете Де Консей Де Решерш Э Д`Аппликасьон Сьентифик, С.А.С. | Рилизинг-пептиды ростового гормона |
| RU2295949C1 (ru) * | 2005-08-15 | 2007-03-27 | ООО "Лаборатории "Новые Горизонты Химии" | Стимулятор роста волос на основе производных пантотеновой кислоты |
| RU2457830C2 (ru) * | 2006-06-14 | 2012-08-10 | Др.Редди'С Лабораторис Лимитед | Композиции для местного применения |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU94033068A (ru) | 1996-09-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP2402369B1 (en) | Peptide fragments for inducing synthesis of extracellular matrix proteins | |
| JP3902406B2 (ja) | 老化防御効果を示すテトラペプチド、これを基にした薬理学的物質、及びその利用法 | |
| FI60553C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av ovulationsframkallande nonapeptidamidderivat | |
| SK281825B6 (sk) | Peptidy a spôsob ich prípravy | |
| JP3668950B2 (ja) | ペプチドと、その合成方法と、それをベースにした医薬品 | |
| DE3780000T2 (de) | Peptidverbindungen. | |
| RU2110275C1 (ru) | Способ получения пептида, обладающего анаболической активностью, стимулирующего увеличение массы тела, развитие эпидермального слоя и роста волосяного покрова | |
| US6184208B1 (en) | Peptide, a method for its preparation and a pharmaceutical composition containing the peptide | |
| RU2362579C1 (ru) | Фармацевтическая композиция на основе пептида, обладающего противоопухолевым действием | |
| CH637111A5 (fr) | Composes polypeptidiques a activite thymique ou antagoniste et leurs procedes de synthese. | |
| EP0288278B1 (en) | Chemical derivatives of GHL-CU | |
| US7183430B2 (en) | Compounds which can block the response to chemical substances or thermal stimuli or mediators of inflammation of nociceptors, production method thereof and compositions containing same | |
| US4794169A (en) | Pentapeptides with cell growth regulatory effects and a process for the preparation thereof | |
| RU2304444C1 (ru) | Пептид, обладающий стресспротекторным действием, фармацевтическая композиция на его основе и способ ее применения | |
| JPS63198698A (ja) | 新規ペプチド、その製法およびそれを含有する医薬組成物 | |
| US6248716B1 (en) | Peptide, a method for its preparation and a pharmaceutical composition containing the peptide | |
| RU2177802C1 (ru) | Тетрапептид, регулирующий функции предстательной железы, фармакологическое средство на его основе и способ его применения | |
| CH654841A5 (de) | Appetitzuegelnde tripeptide und verfahren zur herstellung derselben. | |
| CN121202996A (zh) | 甲状旁腺激素相关肽类似物及其制备方法和用途 | |
| EP0257084B1 (en) | Use of a dipeptide with cell growth regulating effect for the preparation of a medicament | |
| CN118304387A (zh) | 靶向Wnt/β-catenin通路的多肽类抑制剂及其制备方法和应用 | |
| CN118141890A (zh) | 一种psd-95抑制剂、其制备方法及其用途 | |
| SU1011632A1 (ru) | Декапептид, обладающий липотропной активностью | |
| CN121079099A (zh) | 一种psd-95结构域抑制剂、其制备方法及其用途 | |
| JPH0322398B2 (ru) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20120418 |