[go: up one dir, main page]

UA125024C2 - Кон’югати антитіло-лікарський засіб на основі ерибуліну та способи їх застосування - Google Patents

Кон’югати антитіло-лікарський засіб на основі ерибуліну та способи їх застосування Download PDF

Info

Publication number
UA125024C2
UA125024C2 UAA201809739A UAA201809739A UA125024C2 UA 125024 C2 UA125024 C2 UA 125024C2 UA A201809739 A UAA201809739 A UA A201809739A UA A201809739 A UAA201809739 A UA A201809739A UA 125024 C2 UA125024 C2 UA 125024C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
antibody
fragment
linker
cancer
drug conjugate
Prior art date
Application number
UAA201809739A
Other languages
English (en)
Inventor
Ерл Ф. Елбон
Эрл Ф. ЭЛБОН
Ксін Ченг
Ксин Ченг
Даніель В. Кустар
Даниель В. Кустар
Кеіджі Фурууті
Кеиджи Фуруути
Джінг Лі
Джинг ЛИ
Утпал МАДЖУМДЕР
Тосімітсу Уєнака
Тосимитсу Уенака
Original Assignee
ЕйСей РендД МЕНЕДЖМЕНТ КО., ЛТД.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ЕйСей РендД МЕНЕДЖМЕНТ КО., ЛТД. filed Critical ЕйСей РендД МЕНЕДЖМЕНТ КО., ЛТД.
Publication of UA125024C2 publication Critical patent/UA125024C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/357—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having two or more oxygen atoms in the same ring, e.g. crown ethers, guanadrel
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68033—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a maytansine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Розкриті лінкерні токсини та кон'югати антитіло-лікарський засіб, що зв'язуються з онкологічними антигенними цілями (мішенями) людини, такими як рецептор фолієвої кислоти альфа та/або забезпечують активність антитубулінового лікарського засобу. Лінкерні токсини та кон'югати антитіло-лікарський засіб містять ерибуліновий лікарський фрагмент та можуть бути інтерналізовані в клітини, що експресують цільовий антиген. Далі цей опис відноситься до способів та композицій для застосування в лікуванні раку шляхом введення кон'югатів антитіло-лікарський засіб, що представлені в цьому документі. - 72 - 1 - 1 -

Description

ІЇ0001| Ця заявка заявляє перевагу пріоритету попередньої патентної заявки США Мо 62/302,562, що була подана 2-го березня 2016 року, повний зміст якої включено в цей документ за допомогою посилання.
І0002| Винахід відноситься до кон'югатів антитіло-лікарський засіб (АОС), які зв'язують онкологічні антигенні цілі (мішені) людини, такі як рецептор фолієвої кислоти альфа та/або забезпечують активність антитубулінового лікарського засобу. Цей винахід додатково стосується способів та композицій, що є корисними для лікування та діагностики злоякісних новоутворень, які експресують рецептор фолієвої кислоти альфа та/або піддаються лікуванню шляхом руйнування тубуліну. 0003) Рак є однією з провідних причин захворюваності та смертності у всьому світі, 3, приблизно, 14 мільйонів нових випадків захворювання та 8,2 мільйона смертей пов'язаних з раком у 2012 році. Найбільш поширеною причиною смерті від раку є рак: легенів (1,59 мільйона смертей); печінки (745 000 смертей); шлунку (723 000 смертей); колоректальний рак (694 000 смертей); грудей (521 000 смертей); та стравоходу (400 000 смертей). Очікується, що протягом наступних двох десятиліть число нових випадків захворюваності на рак зросте на близько 70 95, до близько 22 мільйонів нових випадків захворюваності на рак в рік (Могпій Сапсег Керогі 2014 рію).
І0004| Мікротрубочки є динамічними ниткоподібними цитоскелетними білками, які беруть участь у різних клітинних функціях, включаючи внутрішньоклітинну міграцію та транспорт, клітинну сигналізацію та підтримання форми клітин. Мікротрубочки також відіграють важливу роль у розподілі мітотичних клітин, утворюючи мітотичне веретено, необхідне для сегрегації хромосом на дві дочірні клітини. Біологічні функції мікротрубочок у всіх клітинах в значній мірі регулюються їх динамікою полімеризації, яка відбувається шляхом зворотного нековалентного додавання димерів а та ВД тубуліну на обох кінцях мікротрубочок. Така динамічна поведінка та як наслідок контроль над довжиною мікротрубочок мають життєво важливе значення для правильного функціонування мітотичного веретена. Навіть незначна зміна динаміки мікротрубочок може запускати контрольну точку збірки веретена поділу, блокувати прогресію клітинного циклу при мітозі та згодом привести до загибелі клітин (Мийіаг та співавт. (2014 рік)
Мої. Сапсег Тег. 13:275-84). Через швидкий поділ клітин ракові клітини зазвичай більш чутливі
Зо до сполук, які зв'язуються з тубуліном та порушують його нормальну функцію в порівнянні з нормальними клітинами. З цієї причини інгібітори тубуліну та інші агенти, націлені на мікротрубочки, стали багатообіцяючим класом лікарських засобів для лікування раку (ЮОиштопіеї апа догдап (2010 рік) Маї. Кем. Огид Оізсом. 9:790-803).
І0005) Рецептор фолієвої кислоти альфа (ЕКА) є глікофосфатидилінозитол (ГФІ)-зв'язаним мембранним білком, який зв'язує фолат. У той час як роль ЕРА в біології нормальної та ракової тканини ще не повністю зрозуміла, він надекспресується у великій кількості злоякісних новоутворень яєчників епітеліального походження (О'ЗПпаппеззу та співавт. (2013 рік) пі. 5.
Скупесої. Раїпої. 32(3):258-68), а також у певному відсотку недрібноклітинних карцином легенів (Спгівторп та співавт. (2014 рік) Сіїп. Гипд Сапсег 15(5):320-30). ЕКА також має обмежену експресію у нормальних тканинах. Ці властивості роблять ЕКА привабливою мішенню для імунотерапії раку.
І0006| Протоонкоген рецептора людського епідермального фактора росту 2 типу (НЕКЗ2) кодує трансмембранний рецептор тирозинкінази, який належить до родини рецепторів людського епідермального фактора росту (ЕСЕК) (Кіпд та співавт. (1985 рік) Ззсієпсе 229:974-6).
Надекспресія НЕК2 забезпечує конститутивну активацію сигнальних шляхів фактора росту, таких як шлях РІЗК-АКТ-ТТОК, і, таким чином, слугує онкогенним фактором у декількох видах раку, включаючи приблизно 20 95 інвазивних карцином молочної залози. (Зіатоп та співавт. (1989 рік) Зсіепсе 244:707-12; Са)гіа апа Спапаагіарагу (2011 рік) Ехрегпі Кем. Апіісапсег Тег. 11:263-75). Враховуючи, що ампліфікація НЕК2 опосередковує трансформований фенотип,
НЕКЗ є ще однією перспективною мішенню для лікування раку.
ІЇ0007| Цей винахід, зокрема, забезпечує нові сполуки з біологічною активністю проти пухлинних клітин. Сполуки можуть пригнічувати ріст пухлини у ссавців та можуть бути корисні для лікування пацієнтів, що страждають від раку. (0008) Цей винахід більш конкретно відноситься до речовин кон'югат антитіло-лікарський засіб, які здатні зв'язувати, поглинати та вбивати пухлинні клітини (наприклад, пухлинні клітини, що експресують ЕКА). Описані кон'югати антитіло-лікарський засіб, що містять лінкер, який прикріплює лікарський фрагмент до фрагменту антитіла. Кон'югати антитіло-лікарський засіб (АС) можуть бути представлені Формулою І:
АР-(--О) р (І) бо у якій Ар є антитілом, що інтерналізується або його антигензв'язуючим фрагментом, що інтерналізується, який націлений на пухлинну клітину; р є ерібуліном;
Ї є лінкером, що розщеплюється, який ковалентно приєднує АБ до 0; а також р є цілим числом від 1 до 20.
І0009| У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер стабільний поза клітиною, так що АОС залишається інтактним, в разі якщо він присутній у позаклітинних умовах, але здатний розщеплюватися при інтерналізації в клітині, наприклад, раковій клітині. У деяких варіантах реалізації винаходу фрагмент лікарського засобу ерібуліну відщеплюється від фрагмента антитіла, в разі якщо АОС входить в клітину, що експресує антиген, специфічний до фрагменту антитіла АОС, та розщеплення вивільняє немодифіковану форму ерібуліну. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить фрагмент, що розщеплюється, який розташований так, що частина лінкера або фрагмента антитіла не залишається зв'язаною з ерібуліновим фрагментом лікарського засобу при розщепленні. 0010) У деяких варіантах реалізації винаходу фрагмент, що розщеплюється в лінкері є пептидним фрагментом, що розщеплюється. У деяких варіантах реалізації винаходу АОС, який містить пептидний фрагмент, що розщеплюється, демонструє нижчі рівні агрегації, покращене співвідношення антитіло:лікарський засіб, збільшення цільового знищення ракових клітин, зменшення нецільового знищення не ракових клітин та/або вищий вміст лікарського засобу (р) по відношенню до АЮС, що містить альтернативний фрагмент, що розщеплюється. У деяких варіантах реалізації винаходу додавання фрагмента, що розщеплюється збільшує цитотоксичность та/або активність у порівнянні з лінкером, що не розщеплюється. У деяких варіантах реалізації винаходу підвищена активність та/або цитотоксичність присутня в раку, що експресує помірні рівні антигену, який є мішенню фрагмента антитіла АОС (наприклад, помірна експресія КА). У деяких варіантах реалізації винаходу пептидний фрагмент, що розщеплюється, розщеплюється ферментом, а лінкер є лінкером, що розщеплюється ферментом. У деяких варіантах реалізації винаходу фермент є катепсином, а лінкер є лінкером, що розщеплюється катепсином. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер, що розщеплюється ферментом (наприклад, лінкер, що розщеплюється катепсином) проявляє одну або більше поліпшених властивостей, згаданих вище, в порівнянні з альтернативним
Зо механізмом розщеплення.
ЇОО0О11) У деяких варіантах реалізації винаходу пептидний фрагмент, що розщеплюється, в лінкері містить амінокислотну одиницю. У деяких варіантах реалізації винаходу амінокислотна одиниця містить валін-цитрулін (МаІ-СІ). У деяких варіантах реалізації винаходу АОС, який включає Ма!-Сїї, демонструє підвищену стабільність, зменшення нецільового знищення клітин, збільшення цільового знищення клітин, зниження рівнів агрегації та/або більш високий вміст лікарського засобу в порівнянні з АОС, який містить альтернативну амінокислотну одиницю або альтернативний фрагмент, що розщеплюється. 0012) У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить, щонайменше, одну спейсерну одиницю, яка з'єднує фрагмент антитіла з фрагментом, що відщеплюється. У деяких варіантах реалізації винаходу спейсерная одиниця в лінкері може містити щонайменше один фрагмент поліетиленгліколю (ПЕГ). ПЕГ-фрагмент може, наприклад, містити -"ПЕГ)т-, де т є цілим числом від 1 до 10. У деяких варіантах реалізації винаходу спейсерна одиниця в лінкері містить (ПЕГ)2. У деяких варіантах реалізації винаходу АОС, який містить коротшу спейсерну одиницю (наприклад, (ПЕГ)2), демонструє нижчі рівні агрегації та/"або вищий вміст лікарського засобу в порівнянні з АОС, який містить довшу спейсерну одиницю (наприклад, (ПЕГ)8), незважаючи на коротшу довжину лінкера. 0013) У деяких варіантах реалізації винаходу спейсерна одиниця в лінкері приєднується до фрагменту антитіла АОС через малеіїмідний фрагмент (МаїЇ). У деяких варіантах реалізації винаходу АОС, який містить лінкер, приєднаний до фрагменту антитіла через Маї, демонструє вищий вміст лікарського засобу в порівнянні з АЮС, що містить лінкер, приєднаний до фрагменту антитіла через альтернативний фрагмент. У деяких варіантах реалізації винаходу
Маї в лінкері реагує із залишком цистеїну на фрагменті антитіла. У деяких варіантах реалізації винаходу Ма! в лінкері з'єднаний з фрагментом антитіла через залишок цистеїну. У деяких варіантах реалізації винаходу МаІ-спейсерна одиниця містить ПЕГ-фрагмент. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить Ма!І--«ПЕГ)т, наприклад, МаІ--ПЕГ)2. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить МаІ--ПЕГ)2. У деяких варіантах реалізації винаходу
Ма!І-спейсерна одиниця прикріплює фрагмент антитіла до фрагменту, що відщеплюється, в лінкері. У деяких варіантах реалізації винаходу фрагмент, що розщеплюється в лінкері є пептидним фрагментом, що розщеплюється, наприклад, амінокислотною одиницею. У деяких бо варіантах реалізації винаходу лінкер містить МаІ--«ПЕГ)2-Ма1І-Сії.
І0014)| У деяких варіантах реалізації винаходу фрагмент, що розщеплюється, в лінкері безпосередньо з'єднується з ерібуліновим фрагментом лікарського засобу АОС, та фрагмент, що розщеплюється або безпосередньо зв'язаний з фрагментом антитіла, або зв'язаний через спейсерну одиницю. У деяких варіантах реалізації винаходу спейсерна одиниця також прикріплює фрагмент, що розщеплюється, в лінкері до ерібулінового фрагменту лікарського засобу. У деяких варіантах реалізації винаходу спейсерна одиниця, яка прикріплює фрагмент, що розщеплюється, в лінкері до ерібулінового фрагменту лікарського засобу, є таким, що саморозщеплюється. У деяких варіантах реалізації винаходу спейсер, що саморозщеплюється здатний вивільняти модифікований ерібулін у цільовій клітині. У деяких варіантах реалізації винаходу одиниця, що саморозщеплюється містить п-амінобензиловий спирт. У деяких варіантах реалізації винаходу спейсерная одиниця, що саморозщеплюється містить п- амінобензилоксикарбоніл (рАВ). рАВ у лінкері, в деяких варіантах реалізації винаходу, прикріплює фрагмент, що розщеплюється до ерібулінового фрагменту лікарського засобу. У деяких варіантах реалізації винаходу фрагмент, що розщеплюється є пептидним фрагментом, що розщеплюється, наприклад, амінокислотною одиницею. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить МаІ-СП-рАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить Маї!-
Сі-рАВ та спейсерну одиницю ПЕГ, що з'єднує лінкер з фрагментом антитіла через Маї. 0015) У деяких варіантах реалізації винаходу р є цілим числом від 1 до 6, від 2 до 5 або, переважно, від З до 4. У деяких варіантах реалізації винаходу р дорівнює 4. У деяких варіантах реалізації винаходу надається пул АОС, а середній р у пулі дорівнює близько 4 (наприклад, 3,5- 4,5, наприклад, близько 3,8). У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить МаІ--«ПЕГ)2-
МаІ-Сп-рАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить МаІ--ПЕГ)2-МаІ-СП-рАВ, а р дорівнює 4. У деяких варіантах реалізації винаходу надається пул АОС, при цьому кожен АОС містить лінкер МаІ--ПЕГ)2-МаІ-Сйп-рАВ, а середній р в пулі дорівнює близько 4 (наприклад, 3,5- 4,5, наприклад, близько 3,8).
ЇО0О16| У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується (фрагмент АБ або АБ) АОС є антитілом до рецептора фолієвої кислоти альфа (ЕКА) або фрагментом антитіла, що інтерналізується, і може зв'язувати пухлинні клітини, які експресують ЕКА (тобто, АОС націлюється на клітини, що
Зо експресують ЕКА). У деяких варіантах реалізації винаходу АОС, що містить фрагмент АБ до
ЕКА та пептидний фрагмент, що розщеплюється, демонструє нижчі рівні агрегації, покращене співвідношення антитіло:лікарський засіб, збільшення цільового знищення ракових клітин, зменшення нецільового знищення не ракових клітин, вищий вміст лікарського засобу (р), підвищену цитотоксичність та/або активність по відношенню до лінкера, що не розщеплюється, або альтернативного механізму розщеплення. У деяких варіантах реалізації винаходу підвищена активність та/або цитотоксичність присутня в раку, що експресує помірні рівні антигену, який є мішенню фрагмента антитіла АОС (наприклад, помірна експресія ЕКА). У деяких варіантах реалізації винаходу пептидний фрагмент, що розщеплюється, розщеплюється ферментом, а лінкер є лінкером, що розщеплюється ферментом. У деяких варіантах реалізації винаходу фермент є катепсином, а лінкер є лінкером, що розщеплюється катепсином. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер, що розщеплюється ферментом (наприклад, лінкер, що розщеплюється катепсином) проявляє одну або більше поліпшених властивостей, згаданих вище, в порівнянні з альтернативним механізмом розщеплення. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер є МаІ--«ПЕГ)т-МаІ-Сії-рАВ.
ЇО017| У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, зв'язується з рецептором фолієвої кислоти альфа (ЕКА) і націлюється на пухлинні клітини, що експресують ЕКА. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, містить три ділянки, що визначають комплементарність (СОК) важкого ланцюга та три СОК легкого ланцюга, при цьому СОК важкого ланцюга містять СОКТ важкого ланцюга, що складається з БЕО ІЮ МО: 2, СОК2 важкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІЮО МО:
З та СОКЗ важкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІО МО: 4; та три СОК легкого ланцюга містять СОКІ легкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 7, СОК2 легкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 8 та СОКЗ легкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 9, як визначено системою нумерації Кабата; або при цьому СОК важкого ланцюга містять СОК1 важкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 13, СОК2 важкого ланцюга, що складається з
ЗЕО ІЮ МО: 14 та СОКЗ важкого ланцюга, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 15; та СОК легкого ланцюга містять СОКІ легкого ланцюга, що складається з 5ЕО І МО: 16, СОК2 легкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 17 та СОКЗ легкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІЮ бо МО: 18, як визначено системою нумерації ІМОТ. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, містить каркасні послідовності людини. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, містить варіабельний домен важкого ланцюга з ЗЕО ІЮО МО: 23 та варіабельний домен легкого ланцюга з 5ЕО ІЮ МО: 24. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, містить константний домен важкого ланцюга Ідс1 людини та константний домен легкого ланцюга каппа Ід. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, конкурує за зв'язування та/або зв'язує той самий епітоп, що й антитіло, що містить варіабельний домен важкого ланцюга з ЗЕО ІЮ МО: 23 та варіабельний домен легкого ланцюга з ЗЕО ІО МО: 24. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, зв'язується з епітопом, що містить аланін-гістидин-лізин- аспарагінову кислоту (АНКО) (5ЕО ІО МО: 365) (0'Зпаппеззу та співавт., (2011 рік) Опсоїагдеї 2:и1227-43). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, зв'язується з епітопом, що містить
МТЗОЕАНКОМУ5БМІ (5ЕО ІО МО: 366).
ЇО0О18| У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, є антитілом, що інтерналізується, до ЕКА або антигензв'язуючим фрагментом, що інтерналізується. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, містить три СОК важкого ланцюга та три СОК легкого ланцюга, при цьому СОК важкого ланцюга містять СОМКІ важкого ланцюга, що складається з 5ЕБО І МО: 2, СОК2 важкого ланцюга, що складається з БЕО ІЮО МО: З та СОКЗ важкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІЮ
МО: 4; та три СОК легкого ланцюга містять СОКІ легкого ланцюга, що складається з ЗЕО ІЮ
МО: 7, СОК2 легкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 8 та СОКЗ легкого ланцюга, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 9, як визначено системою нумерації Кабата; або при цьому СОМ важкого ланцюга містять СОКІ важкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 13, СОК2 важкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 14 та СОКЗ важкого ланцюга, що складається з
ЗЕО ІЮО МО: 15; та СОК легкого ланцюга містять СОКІ1 легкого ланцюга, що складається з БЕО
Ко) ІО МО: 16, СОК2 легкого ланцюга, що складається з БЕО ІЮ МО: 17 та СОКЗ легкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 18, як визначено системою нумерації ІМОТ; лінкер містить Маї!- (ПЕГ)2-МаІ-СІ-рАВ; та р є 4. У деяких варіантах реалізації винаходу надається пул таких АОС Б р дорівнює близько 4 (наприклад, близько 3,8). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, містить варіабельний домен важкого ланцюга з ЗЕО ІЮ МО: 23 та варіабельний домен легкого ланцюга з ЗЕО ІЮО МО: 24. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, містить константний домен важкого ланцюга
ІДО1 людини та константний домен легкого ланцюга каппа Ід. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, конкурує за зв'язування та/або зв'язує той самий епітоп, що й антитіло, що містить варіабельний домен важкого ланцюга з ЗЕО ІЮО МО: 23 та варіабельний домен легкого ланцюга з 5ЕО ІЮ МО: 24. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, зв'язується з епітопом, що містить зЕО ІЮ МО: 365. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, зв'язується з епітопом, що містить 5ХЕО ІЮ МО: 366.
ЇО019| У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, зв'язується з рецептором людського епідермального фактора росту 2 типу (Пег2) та націлюється на клітини пухлини, що експресують пег2. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, містить три ділянки, що визначають комплементарність (СОК) важкого ланцюга та три СОК легкого ланцюга, при цьому СОК важкого ланцюга містять СОКІ важкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 71, СОК2 важкого ланцюга, що складається з БЕО ІЮ МО: 72 та СОКЗ важкого ланцюга, що складається з
ЗЕО ІЮО МО: 73; та три СОК легкого ланцюга містять СОКІ легкого ланцюга, що складається з
ЗЕО ІЮ МО: 74, СОМК2 легкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 75 та СОКЗ легкого ланцюга, що складається з БЕО ІЮ МО: 76, як визначено системою нумерації Кабата; або при цьому СОК важкого ланцюга містять СОКІ важкого ланцюга, що складається з БЕО ІЮО МО: 191,
СОК2О важкого ланцюга, що складається з 5ЕБЕО ІЮ МО: 192 та СОКЗ важкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 193; та СОК легкого ланцюга містять СОКІ легкого ланцюга, що 60 складається з 5БЕО ІЮ МО: 194, СОК2 легкого ланцюга, що складається з БЕО ІЮ МО: 195 та
СОКЗ легкого ланцюга, що складається з БЕО ІЮ МО: 196, як визначено системою нумерації
ІМОТ. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, містить каркасні послідовності людини. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, містить варіабельний домен важкого ланцюга з ЗЕО ІЮ МО: 27 та варіабельний домен легкого ланцюга з ЗЕО ІО МО: 28. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, містить константний домен важкого ланцюга
ІДО1 людини та константний домен легкого ланцюга каппа Ід. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або зв'язування антигену, що інтерналізується, конкурує за зв'язування та/або зв'язує той самий епітоп, що й антитіло, що містить варіабельний домен важкого ланцюга з 5ЕО ІО МО: 27 та варіабельний домен легкого ланцюга з ЗЕО ІЮО МО: 28.
ІЇ0020| У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, є антитілом, що інтерналізується, до пег2 або антигензв'язуючим фрагментом, що інтерналізується. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, містить три СОК важкого ланцюга та три СОК легкого ланцюга, при цьому СОК важкого ланцюга містять СОКІ важкого ланцюга, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 71, СОК2 важкого ланцюга, що складається з БЕО ІЮ МО: 72 та СОКЗ важкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІЮ
МО: 73; та три СОК легкого ланцюга містять СОКІ1 легкого ланцюга, що складається з БЕО ІЮ
МО: 74, СОК2 легкого ланцюга, що складається з БЕО ІЮО МО: 75 та СОКЗ легкого ланцюга, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 76, як визначено системою нумерації Кабата; або при цьому СОМ важкого ланцюга містять СОКІ важкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 191, СОК2 важкого ланцюга, що складається з БЕО ІЮО МО: 192 та СОКЗ важкого ланцюга, що складається з ЗЕО ІЮО МО: 193; та СОК легкого ланцюга містять СОКІ легкого ланцюга, що складається з
ЗЕО ІЮ МО: 194, СОК2 легкого ланцюга, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 195 та СОМКЗ легкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 196, як визначено системою нумерації ІМОТ; лінкер містить МаІ--ПЕГ)2-МаІ-Сп-рАВ; та р є 4. У деяких варіантах реалізації винаходу надається пул таких АОС Б р дорівнює близько 4 (наприклад, близько 3,8). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується,
Зо містить варіабельний домен важкого ланцюга з ЗЕО ІЮО МО: 27 та варіабельний домен легкого ланцюга з 5ЕО ІО МО: 28. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, містить константний домен важкого ланцюга Д01 людини та константний домен легкого ланцюга каппа Ід. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або зв'язування антигену, що інтерналізується, конкурує за зв'язування та/або зв'язує той самий епітоп, що й антитіло, що містить варіабельний домен важкого ланцюга з ЗЕО ІЮО МО: 27 та варіабельний домен легкого ланцюга з 5БЕО ІЮО МО: 28.
ЇО021| У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, зв'язується з мезотеліном (М5ІМ) та націлюється на пухлинні клітини, що експресують М5І-М. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, містить три ділянки, що визначають комплементарність (СОК) важкого ланцюга та три СОК легкого ланцюга, при цьому СОК важкого ланцюга містять СОКІ важкого ланцюга, що складається з
ЗЕО ІЮ МО: 65, СОК2 важкого ланцюга, що складається з ЗЕО І МО: 66 та СОКЗ важкого ланцюга, що складається з БЕО ІО МО: 67; та три СОК легкого ланцюга містять СОК1 легкого ланцюга, що складається з БЕО ІЮ МО: 68, СОК2 легкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІЮ
МО: 69 та СОКЗ легкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 70, як визначено системою нумерації Кабата; або при цьому СОК важкого ланцюга містять СОМ! важкого ланцюга, що складається з БЕО ІЮ МО: 185, СОК2 важкого ланцюга, що складається з БЕО ІЮО МО: 186 та
БО СОКЗ важкого ланцюга, що складається з БЕО ІЮО МО: 187; та СОК легкого ланцюга містять
СОМКІ легкого ланцюга, що складається з 5ЕБЕО ІЮ МО: 188, СОК2 легкого ланцюга, що складається з БЕО ІЮО МО: 189 та СОКЗ легкого ланцюга, що складається з БЕО ІЮ МО: 190, як визначено системою нумерації ІМОТ. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, містить варіабельний домен важкого ланцюга з 5ЕО ІЮ МО: 25 та варіабельний домен легкого ланцюга з ЗЕО ІЮ МО: 26. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, містить константний домен важкого ланцюга Ідс1 людини та константний домен легкого ланцюга каппа Ід. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або зв'язування антигену, що інтерналізується, конкурує за зв'язування бо та/або зв'язує той самий епітоп, що й антитіло, що містить варіабельний домен важкого ланцюга з ЗЕО ІЮ МО: 25 та варіабельний домен легкого ланцюга з ЗЕО ІЮ МО: 26.
Ї0022| У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, є антитілом, що інтерналізується, до М5І М або антигензв'язуючим фрагментом, що інтерналізується. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, містить три СОК важкого ланцюга та три СОК легкого ланцюга, при цьому СОК важкого ланцюга містять СОКІ важкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 65, СОМК2 важкого ланцюга, що складається з БЕО ІЮ МО: 66 та СОКЗ важкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІЮ
МО: 67; та три СОК легкого ланцюга містять СОКІ1 легкого ланцюга, що складається з БЕО ІЮ
МО: 68, СОК2 легкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 69 та СОКЗ легкого ланцюга, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 70, як визначено системою нумерації Кабата; або при цьому СОМ важкого ланцюга містять СОКІ важкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 185, СОК2 важкого ланцюга, що складається з БЕО ІЮ МО: 186 та СОКЗ важкого ланцюга, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 187; та СОК легкого ланцюга містять СОКІ легкого ланцюга, що складається з
ЗЕО ІЮ МО: 188, СОК2 легкого ланцюга, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 189 та СОМКЗ легкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІО МО: 190, як визначено системою нумерації ІМОТ; лінкер містить МаІ--ПЕГ)2-МаІ-Сп-рАВ; та р є 4. У деяких варіантах реалізації винаходу надається пул таких АОС Б р дорівнює близько 4 (наприклад, близько 3,8). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, містить варіабельний домен важкого ланцюга з ЗЕО ІЮО МО: 25 та варіабельний домен легкого ланцюга з 5ЕО ІЮО МО: 26. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, містить константний домен важкого ланцюга Д01 людини та константний домен легкого ланцюга каппа Ід. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується або зв'язування антигену, що інтерналізується, конкурує за зв'язування та/або зв'язує той самий епітоп, що й антитіло, що містить варіабельний домен важкого ланцюга з ЗЕО ІЮО МО: 25 та варіабельний домен легкого ланцюга з БЕО ІЮО МО: 26. 0023) Також у цьому документі представлені композиції, що містять множинні копії будь- якого з описаних АЮС, при цьому середній вміст лікарського засобу (середнє р) АОС в
Ко) композиції складає від близько З до 4 або від близько 3,5 до близько 4,5, або близько 4. У деяких варіантах реалізації винаходу середнє р знаходиться між близько 3,2 та 3,8. У деяких варіантах реалізації винаходу середнє р знаходиться між близько 3,6 та 4.4. 0024) Також у цьому документі представлені композиції, що містять -І-О, при цьому О є ерібуліном; а ЇЇ є лінкером, що розщеплюється, ковалентно прикріпленим до ОО. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер, що розщеплюється, ковалентно приєднується до аміну С- 35 на ерібуліні. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер, що розщеплюється, містить Маї-
Сі. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер, що розщеплюється містить спейсерну одиницю ПЕГ. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер, що розщеплюється містить Маї- (ПЕГ)2-МаІ-СП-рАВ. 0025) Далі у цьому документі представлені фармацевтичні композиції, що містять АОС та фармацевтично прийнятний розчинник, носій та/або допоміжну речовину. (0026) Інший аспект цього винаходу включає терапевтичне та діагностичне застосування описаних сполук та композицій АОС, наприклад, при лікуванні раку. Інший аспект включає способи лікування раку, що експресує антиген, який є мішенню фрагмента антитіла АОС, такою як ЕКА. У різних варіантах реалізації винаходу пропонуються способи знищення або пригнічення проліферації пухлинних клітин або ракових клітин шляхом введення терапевтично ефективної кількості та/або застосування курсу лікування будь-якого з описаних АОС. Інший аспект включає способи виявлення пухлинних клітин або ракових клітин, що експресують ЕКА із застосуванням описаних АОС, та способи скринінгу пацієнтів, які страждають на рак, що будуть реагувати на лікування описаними АЮС. У деяких варіантах реалізації винаходу рак є раком шлунку, серозним раком яєчників, світлоклітинним раком яєчника, недрібноклітинним раком легень, колоректальним раком, тричі негативним раком молочної залози, раком ендометрія, серозною карциномою ендометрія, карциноїдом легень або остеосаркомою. Способи отримання описаних АОС також розкриті.
КОРОТКИЙ ОПИС ГРАФІЧНИХ МАТЕРІАЛІВ
І0027| На Фіг. 1 зображена одна з методик, застосовуваних для отримання АОС МОКАБ-003, як описано в деяких варіантах реалізації винаходу. У цьому підході неспарені цистеїни утворюються шляхом часткового відновлення з обмеженими молярними еквівалентами відновлюючого агента ТСЕР, що не містить тіол. Цей підхід переважно зменшує міжланцюгові бо дисульфідні зв'язки, що зв'язують легкий ланцюг та важкий ланцюг (по одній парі на спарювання
Н-Ї) та два важкі ланцюги в шарнірній ділянці (дві пари на спарювання Н-Н у випадку ІдОс1 людини), залишаючи внутрішньоланцюгові дисульфідні зв'язки інтактними.
І0028| На Фіг. 2 зображений спосіб синтезу малеїмід-«ПЕГ)2-МаІ-Сп-рАВ-ерібуліну (та|!- (ПЕГ)2-МУСР-ерібуліну), як описано в деяких варіантах реалізації винаходу.
І0029| На Фіг. З зображений аналіз умов відновлення для МОКАБ-003 із застосуванням ДСН-
ПААГ-електрофорезу. Доріжки вказані праворуч від фігури. Доріжка М відповідає стандарту білка; доріжка 1 відповідає необробленому МОКАБ-003; доріжка 2 відповідає 5,3 мг/мл, що відновлений у 70,6 мкМ ТСЕР; доріжка З відповідає МОКАБ-003 5,3 мг/мл, що відновлений у 141,2 мкМ ТСЕР; доріжка 4 відповідає МОНАБ-003 1,5 мг/мл, що відновлений у 20 мкМ ТСЕР; та доріжка 5 відповідає МОКАБ-003 1,5 мг/мл, що відновлений у 40 мкМ ТСЕР. Ідентичності кожної смуги вказані на нижньому правому гелі. "Н" позначає важкий ланцюг. "І" позначає легкий ланцюг.
І0ОЗ0| На Фіг. 4 зображений аналіз умов відновлення для МОКАБ-003 з застосуванням ДСН-
ПААГ-електрофорезу. Доріжка 1 відповідає стандарту білка; доріжка 2 відповідає необробленому МОКАБ-003; доріжка З відповідає МОКАБ-003, обробленому в співвідношенні
МОВАБ-003:ТСЕР 1:1; доріжка 4 відповідає МОКАБ-003, обробленому в співвідношенні МОКАбБ- 003:ТСЕР 1:2; доріжка 5 відповідає МОКАБ-003, обробленому в співвідношенні МОКАбБ- 003:ТСЕР 1:3; та доріжка 6 відповідає МОКАБ-003, обробленому в співвідношенні МОКАБ- 00З:ТСЕР 14.
І0ОЗ11 На Фіг. 5 зображено аналіз у невідновлювальному ДСН-ПААГ електрофорезі обраних
Арс МопАБ-003, включаючи М-ММАЕ (доріжка 2), М-ОМ'І (доріжка 3), М-0026 (доріжка 4), М- 0260 (доріжка 5), М-0267 (доріжка 6), М-0272 (доріжка 7), М-0285 (доріжка 8), М-0292 (доріжка 9),
М-027-0381 (доріжка 10) та М-0284 (доріжка 11). 00321 На Фіг. бА зображені результати незалежного дослідження аналізу цитотоксичності
МОРАБ-003-малеїмідо-ПЕГ2-МаІ-СП-рАВ-ерібуліну (М3-УСР-ерібуліну або "МОКАРБ-202"). На Фіг. 6В зображені результати незалежного дослідження аналізу цитотоксичності МОКАБ-003- малеїімідо-(СН2г)5-МаІ-Сп-рАВ-ЕН-001150828 (М3-ЕН-61318). На Фіг. 6С зображені результати незалежного дослідження аналізу цитотоксичності МОКАБ-003-ПЕГ-рАВ-дуостатіну З (М3-027- 0285). Інформація, зображена в легендах відповідної фігури, забезпечує тестовані клітинну
Зо лінію:агент (клітинна лінія/культивовані клітинні лінії, щільність посіву 11/21 клітинної лінії). 0033) На Фіг. 7А та 7В зображено розподіл співвідношення лікарського засобу-до-антитіла (РАВ - апа-ю-апіїбоду) для АОС МОКАБ-003-УСР-ерібулін (Фіг. 7А) та МОКАБ-003-0285 (фіг. 7В) по відношенню до некон'югованого МОКАБ-003, як описано в деяких варіантах реалізації винаходу. Числа над кожним піком вказують на БАК окремих видів.
І0034| На Фіг. 8 зображені результати аналізу цитотоксичності - конкуренція МОКАБ-003-
МСОСР-ерібуліну з некон'югованим МОКАБ-003 (2 мкМ) в клітинах ІСКОМІ1 або 5.)5А-1. 0035) На Фіг. 9 зображена кінетика маси тіла для кожної групи мишей СО-1 (середнє по групі та СПС), які отримували одну внутрішньовенну дозу носія (ФСБ) або МОКАБ-202 у кількості 10, 20, 40 або 80 мг/кг.
І0О36| На Фіг. 10 зображена кінетика маси тіла для кожної групи мишей СО-1 (середнє по групі та СПС), які отримували внутрішньовенно ФСБ або ерібулін у кількості 0,4, 0,8, 1,6 або 3,2 мг/кг відповідно до режиму дозування діахз (дози вводилися один раз кожні чотири дні, всього
З дози).
І0037| На Фіг. 11 зображена кінетика росту пухлини для кожної групи мишей СВ17-5ДП1І0, імплантованих клітинами НДРЛ людини МСІ-Н2110 (середнє по групі та СПС), та отримували одну внутрішньовенну дозу ФСБ, МОКАБ-003-МС Р.-ерібулін (МОКАРБ-202) при 1, 2,5 або 5 мг/кг, або МОКАБ-003-0285 при 5 мг/кг.
І0038| На Фіг. 12 зображені об'єми пухлин окремих мишей СВ17-5СІО, імплантованих клітинами НДРЛ людини МСІ-Н2110, а також середнє по групам та СПС на 17-й день. Групи отримували одну дозу ФСБ внутрішньовенно, МОКАБ-003-УСР-ерібуліну (МОКАБ-202) при 1, 2,5 або 5 мг/кг або МОКАБ-003-0285 при 5 мг/кг.
ІЇ0039| На Фіг. 13 зображена кінетика маси тіла для кожної групи мишей СВ17-5Х;ШІ0О, імплантованих МСІ-Н2110 (середнє по групі та СПС), що отримували одну внутрішньовенну дозу ФСБ, МОКАБ-003-МСР-ерібулін (МОКАБ-202) при 1, 2,5 або 5 мг/кг, або МОКАБ-003-0285 при 5 мг/кг. 00401 На Фіг. 14 зображена кінетика росту пухлини для кожної групи мишей СВ17-5ХШІ0, імплантованих МСІ-Н2110 (середнє по групі та СПС), які отримували внутрішньовенно носій (ФСБ) або ерібулін при 0,5, 0,2, 0,8 або 1,6 мг/кг, відповідно до режиму дозування д4ах3. 0041) На Фіг. 15 зображені об'єми пухлин окремих мишей СВ17-5СІОЮ, імплантованих МСІ- бо Н2г110, а також середнє по групам та СПС на 24-й день. Групи отримували внутрішньовенно носій (ФСБ) або ерібулін при 0,5, 0,2, 0,8 або 1,6 мг/кг відповідно до режиму дозування д4ахз. 00421 На Фіг. 16 зображена кінетика зміни маси тіла для кожної групи мишей СВ17-5СШ11І0, імплантованих МСІ-Н2110 (середнє по групі та СПС), які отримували внутрішньовенно носій (ФСБ) або ерібулін при 0,5, 0,2, 0,8 або 1,6 мг/кг, відповідно до режиму дозування діах3. 00431 На Фіг. 17 зображена активність МОКАБ-003-МСР-ерібуліну (МОКАРБ-202) на клітинах
ІСВОМІ, ОМСАНЗ, МСІ-Н2110, А431-АЗ та 5У5А-1, як виміряно аналізом цитотоксичності з кристалічним фіолетовим.
І0044| На Фіг. 18 зображена кінетика росту пухлини для кожної групи мишей СВ17-5ХШ1І0, імплантованих МСІ-Н2110 (середнє по групі та СПС), що отримували одну внутрішньовенну дозу ФСБ або МОКАБ-003-УСР-ерібулін (МОКАБ-202) при 1, 2,5 або 5 мг/кг. 0045) На Фіг. 19А та 198 зображена кінетика росту пухлини (Фіг. 19А) та кінетика зміни маси тіла (Фіг. 198) для кожної групи РОх НДРЛ (ГХЕА-737) мишей-пухлиноносіїв (середнє по групі та
СП), які отримували одну внутрішньовенну дозу носія (ФСБ), МОКАБ-003 у кількості 5 мг/кг або
МОРАБ-003-УСР-ерібулін (МОКАРБ-202) у кількості 5 мг/кг. 0046) На Фіг. 20А та 208 зображені окремі співвідношення об'ємів пухлин (Фіг. 20А) та кінетика зміни маси тіла (Фіг. 208) для кожної групи мишей-пухлиноносіїв раку ендометрія РОхХ (Епдо-12961) (середнє по групі та СПС), які отримували одну внутрішньовенну дозу ФСБ, ерібуліну у кількості 0,1 або 3,2 мг/кг або МОКАБ-003-УСР-ерібулін (МОКАБ-202) у кількості 5 мг/кг. На Фіг. 20С та 200 зображена кінетика росту пухлини (Фіг. 20С) та кінетика зміни маси тіла (Фіг. 200) для кожної групи мишей-пухлиноносіїв раку ендометрія РОх (Епдо-10590) (середнє по групі та СПС), які отримували одну внутрішньовенну дозу ФСБ, ерібуліну у кількості 0,1 або 3,2 мг/кг або МОКАр-003-УСР-ерібулін (МОКАБ-202) у кількості 5 мг/кг.
І0047| На Фіг. 21А зображено імуногістохімічне (ІГХ) фарбування пухлинної тканини мишей- пухлиноносіїв РОх ТНРМЗ (00-ВНАЕ-0631) з антитілом до людського до. Пухлинні тканини з мишей, що отримували одну внутрішньовенну дозу носія (праворуч) або МОКАБр-003-МОС Р- ерібулін (МОКАБ-202) у кількості 5 мг/кг (ліворуч), збирали та фарбували через 5 днів після лікування. На Фіг. 218 зображено ІГХ фарбування пухлинної тканини мишей-пухлиноносіїв РОХ
ТНРМЗ (00-ВАЕ-0631) з антитілом с-гладеньком'язового актину (ГМА)-ЕРІТС. Пухлинні тканини у мишей, що отримували лікування збирали за 2 дні до лікування (ліворуч), тоді як пухлинні
Зо тканини у мишей, що отримували одну внутрішньовенну дозу МОКАБ-003-УСР-ерібуліну (МОВАБ-202) у кількості 5 мг/кг, збирали через 5 днів після лікування (праворуч). На Фіг. 21С зображена кінетика росту пухлини для кожної групи мишей-пухлиноносіїв РОх ТНРМЗ (00-ВАЕ- 0631) (середнє по групі та СПС), що отримували одну внутрішньовенну дозу носія (ФСБ) або
МОРАБ-003-УСР-ерібуліну (МОКАРБ-202) у кількості 5 мг/кг. 00481) На Фіг. 22 зображено диференціювання людських мезенхімальних стовбурових клітин кісткового мозку (МСК-КМ) в культурі з клітинами МКМ-74 після введення носія (ФСБ або етанолу), ерібуліну, МОМКАБ-003 або МОКАБ-003-МСР-ерібуліну (МОКАБ-202), як виміряно методом проточної цитометрії. Зщто-1-/С60105.4, СО344/С0031- та МОб2- є маркерами М5С, адипоцитів та перицитів, відповідно.
І0049| На Фіг. 23 зображений аналіз часової динаміки пухлинних тканин із мишей СВ17-
СІЮ, імплантованих МСІ-Н2110, що отримували одну внутрішньовенну дозу носія (ФСБ) або
МОРАБ-003-МСР-ерібуліну (МОКАБ-202) у кількості 5 мг/кг, пофарбованих із застосуванням антитіла а-гладеньком'язового актину (ГМА)-РІТС. Пухлинні тканини збирали та фарбували в день 0 та в дні 3, 5, 7 та 9 після лікування. Ось М: 95 - (Іпідраховані пофарбовані клітини/підраховано загальну кількість клітині) " 100. Ось Х: день (підраховано загальну кількість клітин).
ДОКЛАДНИЙ ОПИС ІЛЮСТРАТИВНИХ ВАРІАНТІВ РЕАЛІЗАЦІЇ ВИНАХОДУ
Ї0О50| Описані композиції та способи можуть бути легше зрозумілі з посиланням на наступний докладний опис, взятий у зв'язку з доданими фігурами, що складають частину цього опису. Слід розуміти, що описані композиції та способи не обмежені конкретними композиціями та способами, описаними та/або показаними у цьому документі, і що термінологія, що застосовується в цьому документі, призначена для опису конкретних варіантів реалізації винаходу тільки в якості прикладу та не призначена для обмеження заявлених композицій та способів. 0051 У цьому тексті описи відносяться до композицій та способів застосування зазначених композицій. У тих випадках, коли цей опис описує або претендує на ознаку або варіант реалізації винаходу, пов'язані з композицією, така ознака або варіант реалізації винаходу в рівній мірі застосовуються до способів застосування зазначеної композиції. Аналогічним чином, якщо цей опис описує або заявляє ознаку, або варіант реалізації винаходу, пов'язані зі бо способом застосування композиції, така ознака або варіант реалізації винаходу в рівній мірі застосовуються до композиції. 0052) У разі якщо виражений діапазон значень, він включає варіанти реалізації винаходу, що застосовують будь-яке конкретне значення в межах діапазону. Додатково, посилання на значення, вказані в діапазонах, включає кожне значення в цьому діапазоні. Всі діапазони включають їх кінцеві точки та є комбінованими. У разі якщо значення виражені у вигляді наближень за допомогою попереднього терміну "близько", то слід розуміти, що конкретне значення утворює інший варіант реалізації винаходу. Посилання на конкретне числове значення включає, щонайменше, це конкретне значення, якщо з контексту явно не випливає інше. Застосування "або" означає "та/або", якщо конкретний контекст його застосування не вказує інше. Всі джерела в цьому описі включені за допомогою посилання для будь-яких цілей.
Якщо посилання та специфікація вступають в конфлікт, специфікація буде переважати. 0053) Слід брати до уваги, що деякі особливості описаних композицій та способів, які для ясності, описані в цьому документі в контексті окремих варіантів реалізації винаходу, також можуть бути представлені в комбінації в одному варіанті реалізації винаходу. І навпаки, різні ознаки описаних композицій та способів, що для стислості описані в контексті одного варіанта реалізації винаходу, також можуть бути представлені окремо або в будь-якій підкомбінації.
Визначення (0054) Різні терміни, що відносяться до аспектів цього опису, застосовуються в описі та формулі винаходу. Такі терміни повинні мати своє звичайне значення в цій галузі техніки, якщо не вказано інше. Інші конкретно визначені терміни повинні тлумачитися відповідно до визначень, що представлені у цьому документі.
Ї0055| Як застосовуються в цьому документі форми однини включають в себе форми множини, якщо з контексту явно не випливає інше.
Ї0О56| Терміни "близько" або "приблизно" в контексті числових значень та діапазонів відносяться до значень або діапазонів, що наближені або близькі до вказаних значень або діапазонів, таким чином, що варіант реалізації винаходу може бути виконаний таким чином, як передбачалося, наприклад, що має потрібну кількість нуклеїнових кислот або поліпептидів в реакційній суміші, як це очевидно фахівцеві в цій галузі техніки з наведених в цьому документі принципів. Це пов'язано, принаймні частково, з різними властивостями варіацій композицій нуклеїнових кислот, віку, рас, статі, анатомії та фізіології та неточностями біологічних систем.
Таким чином, ці терміни охоплюють значення, що виходять за рамки систематичних помилок.
І0057| В цьому документі терміни "кон'югат антитіло-лікарський засіб", "кон'югат антитіла", "кон'югат", "імунокон'югат" та "АОС" застосовуються як взаємозамінні та відносяться до сполуки або її похідного, що зв'язане з антитілом (наприклад, антитілом до ЕКА) та визначається загальною формулою: Ат-(І-2)р (Формула І), де АБ - фрагмент антитіла (тобто, антитіло або антигензв'язуючий фрагмент), Ї - лінкерний фрагмент, О - фрагмент лікарського засобу та р - кількість фрагментів лікарського засобу на фрагмент антитіла. (0058) Термін "антитіло" застосовується в найширшому сенсі, щоб посилатися на молекулу імуноглобуліну, яка розпізнає та специфічно зв'язується з мішенню, такою як білок, поліпептид, вуглевод, полінуклеотид, ліпід або комбінації вищевикладеного через, щонайменше, один сайт розпізнавання антигену у варіабельній ділянці молекули імуноглобуліну. Важкий ланцюг антитіла складається з варіабельного домену важкого ланцюга (МН) та константної ділянки важкого ланцюга (СН). Легка ланцюг складається з варіабельного домену легкого ланцюга (МІ) та константної ділянки легкого ланцюга (СІ). Для цілей цієї заявки варіабельні домени зрілого важкого ланцюга та легкого ланцюга містять три ділянкиділянки, що визначають комплементарність (СОКІ, СОК2 та СОКЗ) в чотирьох каркасних ділянках (ЕК1, ЕК2, ЕКЗ та
ЕК4), що розташовані від М-кінця до С-кінця: ЕК!, СОКІ, ЕК2, СОК2, ЕКЗ, СОКЗ та ЕКа4. "Антитіло" може бути природного походження або штучним, таким як моноклональні антитіла, що продукуються за допомогою традиційної гібридомної технології. Термін "антитіло" включає повнорозмірні моноклональні антитіла та повнорозмірні поліклональні антитіла, а також фрагменти антитіл, такі як Раб, Раб", Е(аб)2, Ем та одноланцюгові антитіла. Антитіло може бути будь-яким з п'яти основних класів імуноглобулінів: ДА, ДО, ЧЕ, дос та ІМ або їх підкласів (наприклад, ізотипи ІДС1, Ідс2, ІдсСЗ, 954). Термін додатково охоплює людські антитіла, химерні антитіла, гуманізовані антитіла та будь-яку модифіковану молекулу імуноглобуліну, що містить сайт розпізнавання антигену, за умови, що він проявляє бажану біологічну активність.
І0059| Термін "моноклональне антитіло" в цьому документі відноситься до антитіла, отриманого з популяції в значній мірі однорідних антитіл, тобто окремі антитіла в складі популяції є ідентичними, за винятком мутацій, що відбуваються з природних причин, що можуть бути присутніми в невеликих кількостях. Моноклональні антитіла є високоспецифічними, бо оскільки вони спрямовані проти одного антигенного епітопу. На противагу цьому, звичайні
(поліклональні) препарати антитіл зазвичай включають безліч антитіл, направлених проти (або специфічних до) різних епітопів. Визначення "моноклональне" вказує на те, що антитіло отримано з практично однорідної популяції антитіл; його не слід інтерпретувати як вимогу продукції антитіла за допомогою будь-якого конкретного способу. Наприклад, моноклональні антитіла, що повинні застосовуватися відповідно до цього винаходу, можуть бути отримані за допомогою гібридомного способу, вперше описаного КопПіег та співавт. (1975 рік) Маїиге 256:495 або можуть бути отримані за допомогою способів рекомбінантної ДНК (див., наприклад, патент
США Мо 4,816,567). Моноклональні антитіла також можуть бути виділені з бібліотек фагових антитіл, із застосуванням методів, описаних в Сіаскзоп та співавт. (1991 рік) Маїшге 352:624-8, та Магкз5 та співавт. (1991 рію) 9. Мої. Вісі. 222:581-97, наприклад.
ІЇ0060| Моноклональні антитіла, що описані в цьому документі конкретно включають "химерні" антитіла, в яких ділянка важкого та/або легкого ланцюга є ідентичною або гомологічною відповідним послідовностям антитіл, що отримані від конкретного виду або відносяться до конкретного класу або підкласу антитіл, тоді як залишок ланцюга(ів) є ідентичним або гомологічним відповідним послідовностям антитіл, що отримані від іншого виду або відносяться до іншого класу або підкласу антитіл, а також фрагменти таких антитіл за умови, що вони специфічно зв'язують цільовий антиген та/або проявляють бажану біологічну активність.
І0061| В цьому контексті термін "людське антитіло" означає антитіло, що продукується людиною або антитіло, яке має амінокислотну послідовність антитіла, що продукується людиною.
І0062| В цьому контексті термін "химерне антитіло" відноситься до антитіл, у яких амінокислотна послідовність молекули імуноглобуліну отримана з двох або більше видів. У деяких випадках варіабельні ділянки як важких, так і легких ланцюгів відповідають варіабельним ділянкам антитіл, що отримані від одного виду з бажаної специфічністю, афінністю та активністю, тоді як константні ділянки є гомологічними антитілам, отриманим з іншого виду (наприклад, людини) для мінімізації імунної відповіді у останнього виду. 0063) В цьому контексті термін "гуманізоване антитіло" відноситься до форм антитіл, що містять послідовності з нелюдських (наприклад, мишачих) антитіл, а також людських антитіл.
Зо Такі антитіла є химерними антитілами, що містять мінімальну послідовність, отриману з імуноглобуліну, нелюдського походження. Загалом, гуманізоване антитіло буде містити практично всі з щонайменше одного, а зазвичай двох варіабельних доменів, у яких всі або практично всі гіперваріабельні петлі відповідають таким ділянкам імуноглобуліну нелюдського походження, а всі або практично всі шарнірні (ЕК) ділянки відповідають таким ділянкам послідовності імуноглобуліну людини. Гуманізоване антитіло також не обов'язково буде містити щонайменше частину константної ділянки імуноглобуліну (с), що зазвичай походить з імуноглобуліну людини. Гуманізоване антитіло може бути додатково модифіковане шляхом заміщення залишків або в каркасній ділянці Ем, та/"або в заміщених залишках нелюдського походження, для уточнення та оптимізації специфічності, афінності та/або активності антитіл.
І0064| В цьому документі термін "антигензв'язуючий фрагмент" або "антигензв'язуюча частина" антитіла, відноситься до одного або більше фрагментів антитіла, що зберігають здатність специфічно зв'язуватися з антигеном (наприклад, ЕКА). Антигензв'язуючі фрагменти переважно також зберігають здатність до інтерналізації в клітину, що експресує антиген. У деяких варіантах реалізації винаходу антигензв'язуючі фрагменти також зберігають активність імунного ефектора. Було показано, що фрагменти повнорозмірного антитіла можуть виконувати антигензв'язуючу функцію повнорозмірного антитіла. Приклади зв'язуючих фрагментів, що охоплюються терміном "антигензв'язуючий фрагмент" або "антигензв'язуюча частина" антитіла, включають (ї) фрагмент Раб, моновалентний фрагмент, що складається з доменів МІ, МН, Сі. та
СНІ; (ії) фрагмент К(ар)2, двовалентний фрагмент, що містить два фрагмента Раб, з'єднаних дисульфідним містком у шарнірній ділянці; (ії) фрагмент Ба, що складається з доменів УН та
СНІ; (ім) фрагмент Ем, що складається з доменів Мі. та МН одного плеча антитіла; (м) фрагмент аАБ, який містить один варіабельний домен, наприклад домен МН (див., наприклад, Умага та співавт. (1989 рік) Майиге 341:544-6; та УмМіпіег та співавт., ММО 90/05144); та (мі) виділену ділянку, що визначає комплементарність (СОК). Крім того, хоча два домени фрагмента Ем, МІ. та МН, кодуються окремими генами, вони можуть з'єднуватися, із застосуванням рекомбінантних способів, синтетичним лінкером, який дозволяє їм продукуватися у вигляді одного білкового ланцюга, у якому ділянки МІ. та МН спарюються з утворенням одновалентних молекул (відомі як одноланцюгові Ем (5сЕм)). Див., наприклад, Віа та співавт. (1988 рік) 5сіепсе 242:423-6; та
Низоп та співавт. (1988 рік) Ргос. Май. Асад. зсі. ОБА 85:5879-83. Такі одноланцюгові антитіла бо також охоплюються терміном "антигензв'язуючий фрагмент" або "антигензв'язуюча частина"
антитіла та відомі в цій галузі техніки як типовий тип зв'язуючого фрагмента, що може інтерналізуватися в клітини при зв'язуванні. Див., наприклад, 2Пи та співавт. (2010 рік) 9:2131- 41; Не та співавт. (2010 рік) У. Мисі. Мей. 51:427-32; та Рішпа і співавт. (2015 рік) МАБ5 7:390- 402. У деяких варіантах реалізації винаходу молекули 5сЕм можуть бути включені в злитий білок. Також охоплюються інші форми одноланцюгових антитіл, такі як діатіла. Діатіла є двовалентними, біспецифічними антитілами, у яких домени УН та Мі. експресуються в одному поліпептидному ланцюзі, але із застосуванням лінкера, який є занадто коротким, щоб забезпечити спарювання між двома доменами в одному і тому ж ланцюгу, тим самим змушуючи домени спарюватися з комплементарними доменами іншого ланцюга та створюючи два сайти зв'язування антигену (див., наприклад, Ноїїдег та співавт. (1993 рік) Ргос. Май. Асайд. сі. ОБА 90:6444-8; та РоЦак та співавт. (1994 рік) Бігисішге 2:1121-3). Антигензв'язуючі фрагменти отримують із застосуванням звичайних методів, відомих фахівцям в цій галузі техніки, а зв'язуючі фрагменти піддають скринінгу на корисність (наприклад, афінність зв'язування, інтерналізацію) таким же чином, що й інтактні антитіла. Антигензв'язуючі фрагменти можуть бути отримані розщепленням інтактного білка, наприклад, протеазою або хімічним розщепленням. 0065) В цьому контексті термін "той що інтерналізується" по відношенню до антитіла або антигензв'язуючого фрагмента, відноситься до антитіла або антигензв'язуючого фрагмента, що здатне проходити через ліпідну бішарову мембрану клітини у внутрішній компартмент (тобто "Інтерналізований") при зв'язуванні з клітиною, переважно в деградуючий компартмент в клітині.
Наприклад, антитіло, що інтерналізується, до ЕКА є антитілом, яке може бути прийнято в клітину після зв'язування з ЕКА на клітинній мембрані. 0066) В цьому контексті термін "рецептор фолієвої кислоти альфа" або "ЕКА" відноситься до будь-якої нативної форми людського ЕКА. Цей термін охоплює повнорозмірний ЕКА (наприклад, МСВІ Кеїегепсе Зедиепсе: МР 000793; 5ЕО ІЮ МО: 19), а також будь-яку форму людського ЕКА, яка є результатом процесингу в клітині. Цей термін також включає варіанти
ЕКА природного походження, включаючи, але не обмежуючись ними, сплайсингові варіанти, алельні варіанти та ізоформи. ЕКА може бути виділений з людини або може бути отриманий рекомбінантно або за допомогою синтетичних способів.
Зо І0067| Термін "антитіло до ЕКА" або "антитіло, що специфічно зв'язує ЕКА" відноситься до будь-якої форми антитіла або його фрагмента, що специфічно зв'язує ЕКА та охоплює моноклональні антитіла (включаючи повнорозмірні моноклональні антитіла), поліклональні антитіла та біологічно функціональні фрагменти антитіл, за умови, що вони специфічно зв'язують ЕКА. Переважно антитіло до ЕКА, що застосовується в описаних в цьому документі
АРрС, є антитілом, що інтерналізується або фрагментом, що інтерналізується, антитіла. МОКАБ- 003 є типовим антитілом, що інтерналізується, до ЕКА людини. В цьому контексті термін "специфічний", "специфічно зв'язується" та "зв'язується специфічно" відноситься до селективного зв'язування антитіла з епітопом цільового антигену. Антитіла можуть бути протестовані на специфічність зв'язування шляхом порівняння зв'язування з відповідним антигеном зі зв'язуванням з нерелевантних антигеном або антигенної сумішшю при заданому наборі умов. Якщо антитіло зв'язується з відповідним антигеном з щонайменше в 2, 5, 7 та, переважно, 10 раз більшою афінністю, ніж з нерелевантним антигеном або антигенною сумішшю, то це вважається специфічним зв'язуванням. В одному варіанті реалізації винаходу специфічне антитіло є антитілом, що зв'язує тільки антиген ЕКА, але не зв'язується (або проявляє мінімальне зв'язування) з іншими антигенами. 0068) В цьому контексті термін "рецептор людського епідермального фактора росту 2 типу", "пег2" або "пег2/пеи" відноситься до будь-якої нативної форми йпег2 людини. Цей термін охоплює повнорозмірний Пег2 (наприклад, МСВІ КетТегепсе Зедиепсе: МР. 004439. 2; 5ЕО ІЮ МО: 21), а також будь-яку форму людського Пегг, яка є результатом процесингу в клітині. Цей термін також включає варіанти пег2 природного походження, включаючи, але не обмежуючись ними, сплайсингові варіанти, алельні варіанти та ізоформи. Нег2 може бути виділений з людини або може бути отриманий рекомбінантно або за допомогою синтетичних способів. 0069) Термін "антитіло до Ппег2" або "антитіло, що специфічно зв'язує пег2" відноситься до будь-якої форми антитіла або його фрагмента, що специфічно зв'язує пег2 та охоплює моноклональні антитіла (включаючи повнорозмірні моноклональні антитіла), поліклональні антитіла та біологічно функціональні фрагменти антитіл, за умови, що вони специфічно зв'язують Ппег2. У патенті США Мо 5,821,337 (що включений в цей документ у якості посилання) представлені типові послідовності зв'язування Пег2, включаючи типові послідовності антитіла до пег2. Переважно антитіло до пег2, що застосовується в описаних в цьому документі АОС, є бо антитілом, що інтерналізується або фрагментом, що інтерналізується, антитіла. Трастузумаб є типовим антитілом, що інтерналізується, до пег2 людини.
І0070| Термін "епітоп" відноситься до частини антигену, яка може бути розпізнана та специфічно зв'язана антитілом. Коли антиген є поліпептидом, епітопи можуть бути утворені з суміжних амінокислот або несуміжних амінокислот, зіставлених третинною укладкою поліпептиду. Епітоп, зв'язаний антитілом, може бути ідентифікований із застосуванням будь- якого методу картування епітопів, відомого в цій галузі техніки, включаючи рентгенівську кристалографію для ідентифікації епітопів шляхом прямої візуалізації комплексу антиген- антитіло, а також контролю зв'язування антитіла з фрагментами або мутованими варіантами антигену або контролю доступності для розчинника різних частин антитіла та антигену. Типові стратегії, що застосовуються для картування епітопів антитіл, включають, але не обмежуються ними, олігопептидне сканування на основі матриці, обмежений протеоліз, сайт-спрямований мутагенез, мутагенезне картування з високою пропускною здатністю, водень-дейтерієвий обмін та мас-спектрометрію (див., наприклад, Сегепопі та співавт. (2007 рік) 21:145-56, та Надег-Вгайп апа Тотег (2005 рік) Ехрегі Кеу. Ргоїеотісв 2:745-56).
І00711| Конкурентне зв'язування та зв'язування епітопів також можуть бути застосовані для визначення антитіл, що мають ідентичні епітопи або епітопи, що перекриваються. Конкурентне зв'язування може бути оцінене з застосуванням епітоп-перехресного конкурентного аналізу, такого як аналіз, описаний в "Апііродіе5, А І арогаїгу Мапиа!;"" Соіа Зргіпд Нагброг І арогайгу,
Напом апа Гапе (Те видання 1988 рік, 2ге видання 2014 рік). У деяких варіантах реалізації винаходу конкурентне зв'язування ідентифікують, коли тестоване антитіло або зв'язуючий білок зменшує зв'язування еталонного антитіла або зв'язуючого білка з цільовим антигеном, таким як
ЕКА або пег2 (наприклад, зв'язуючий білок, що містить СОК та/або варіабельні домени, вибрані з тих, що вказані в Таблицях 2, 4 та 6), щонайменше, на 50 95 в епітоп-перехресному конкурентному аналізі (наприклад, на 50 95, 60 95, 70 95, 80 95, 90 95, 95 95, 99 90, 99,5 95 або більше або будь-який відсоток між ними) та/або навпаки. У деяких варіантах реалізації винаходу конкурентне зв'язування може бути пов'язане з загальними або схожими (наприклад, такими, що частково перекриваються) епітопами або через стеричні труднощі, у випадку якщо антитіла або зв'язуючі білки зв'язуються в сусідніх епітопах. Див., наприклад, Т7апо5, Меїпод5» іп
МоїІесшіаг Віоіоду (Могтіх5, ред. (1998 рік) том 66, стор. 55-66). У деяких варіантах реалізації
Зо винаходу конкурентне зв'язування може бути застосовано для сортування груп зв'язуючих білків, які мають подібні епітопи, наприклад, ті, що конкурують за зв'язування, можуть бути "згруповані" у вигляді групи зв'язуючих білків, що мають епітопи, що перекриваються або прилеглі епітопи, тоді як ті, що не конкурують поміщають в окрему групу зв'язуючих білків, які не мають епітопів, що перекриваються або прилеглих епітопів.
І0072| Термін "Коп" або" Ка" відноситься до константи швидкості для асоціації антитіла з антигеном з утворенням комплексу антитіло/"антиген. Швидкість може бути встановлена із застосуванням стандартних аналізів, таких як аналіз Віасоге або ІФА.
І0073| Термін "Ккой" або" Ка" відноситься до константи швидкості дисоціації антитіла з комплексу антитіло/"антиген. Швидкість може бути встановлена із застосуванням стандартних аналізів, таких як аналіз Віасоге або ІФА.
І0074| Термін "КО" відноситься до рівноважної константи дисоціації конкретної взаємодії антитіло-антиген. КО обчислюється по Ка/а. Швидкість може бути встановлена (із застосуванням стандартних аналізів, таких як аналіз Віасоге або ІФА.
І0075| Термін "р" або "співвідношення антитіло:лікарський засіб" або "співвідношення лікарського засобу-до-антитіла" або "ВАК" відноситься до числа фрагментів лікарського засобу на фрагмент антитіла, тобто, вмісту лікарського засобу або кількості фрагментів І -О на антитіло або антигензв'язуючий фрагмент (АБ) у АОС Формули І. У композиціях, що містять кілька копій
АОС Формули І, "р" відноситься до середнього числа фрагментів Ї-О на антитіло або антигензв'язуючий фрагмент, також званий середнім вмістом лікарського засобу. 0076) "Лінкер" або "лінкерний фрагмент" є будь-яким хімічним фрагментом, який здатний ковалентно з'єднуватися зі сполукою, зазвичай фрагментом лікарського засобу, таким як хіміотерапевтичний агент, з іншим фрагментом, таким як фрагмент антитіла. Лінкери можуть бути схильні до або практично стійкими до викликаного кислотою розщеплення, розщеплення, що викликане пептидазою, індукованого світлом розщеплення, розщеплення, викликаного естеразою та/(або розщеплення дисульфідного зв'язку в умовах, коли сполука або антитіло залишаються активними.
І0077| В цьому контексті термін "агент" застосовується для позначення хімічної сполуки, суміші хімічних сполук, біологічної макромолекули або екстракту, отриманого з біологічних матеріалів. Термін "терапевтичний агент", "лікарський засіб" або "фрагмент лікарського засобу" 60 відноситься до агенту, який здатний модулювати біологічний процес та/або володіє біологічною активністю.
І0078| В цьому контексті термін "хіміотерапевтичний агент" або "протираковий агент" застосовується для позначення всіх хімічних сполук, які ефективні при лікуванні раку незалежно від механізму дії. Інгібування метастаз або ангіогенезу часто є властивістю хіміотерапевтичного агента. Необмежуючі приклади хіміотерапевтичних агентів включають алкілуючі агенти, наприклад, азотисті іприти, етиленімінові сполуки та алкілсульфонати; антиметаболіти, наприклад фолієву кислоту, пуринові або піримідинові антагоністи; антимітотичні агенти, наприклад антитубулінові агенти, такі як ерібулін або мезилат ерібуліну (Наіамеп"М) або їх похідні, алкалоїди барвінку та аурістатини; цитотоксичні антибіотики; сполуки, які ушкоджують або заважають експресії або реплікації ДНК, наприклад, білки, що зв'язуються з малою борозною ДНК; та антагоністи рецепторів фактора росту. Крім того, хіміотерапевтичні агенти включають антитіла, біологічні молекули та малі молекули. Хіміотерапевтичний агент може бути цитотоксичним або цитостатичним агентом. Термін "цитостатичний агент" відноситься до агенту, який інгібує або пригнічує ріст клітин та/або розмноження клітин.
І0079| Термін "цитотоксичний агент" відноситься до речовини, яка викликає загибель клітин, головним чином, шляхом втручання в експресійну активність клітини та/або її функціонування.
Приклади цитотоксичних агентів включають в себе, але не обмежуються ними, антимітотичні агенти, такі як ерібулін, аурістатин (наприклад, монометил аурістатин Е (ММАЕ), монометил аурістатин Е (ММАБЕ)), майтанзиноїди (наприклад, майтансін), доластатини, дуостатини, криптофіцини, алкалоїди барвінку (наприклад, вінкристин, вінбластин), таксани, таксоли та колхіцини; антрацикліни (наприклад, даунорубіцин, доксорубіцин, дигідроксиантрациндіон); цитотоксичні антибіотики (наприклад, мітоміцини, актиноміцини, дуокарміцини (наприклад, СС- 1065), ауроміцини, дуоміцини, каліхеаміцини, ендоміцини, феноміцини); алкілуючі агенти (наприклад, цисплатин); інтеркалюючі агенти (наприклад, бромід етидію); інгібітори топоїзомерази (наприклад, етопозид, тенопозид); радіоїзотопи, такі як АЇ211, І131, 1125, М90,
Ке186, Ке188, 5іт153, Ві212 або 213, РЗ32, та радіоактивні ізотопи лютецію (наприклад, І и177); а також токсини бактеріального, грибкового, рослинного або тваринного походження (наприклад, рицин (наприклад, А-ланцюг рицину), дифтерійний токсин, екзотоксин А
Рзейдотопазх (наприклад, РЕ40), ендотоксин, мітогеллін, комбрестатин, рестриктоцин, гелонін,
Зо альфа-сарцин, абрін (наприклад, А-ланцюг абріну), модецин (наприклад, А-ланцюг модецину), куріцин, кротин, інгібітор Зараопаїгїіа ойісіпаїї5, глюкокортикоїд). 0080) В цьому контексті термін "ерібулін" відноситься до синтетичного аналогу галіхондрину
В, макроциклічної сполуки, яка спочатку була виділена з морської губки Наїїспопагіа оКадаїв5.
Термін "фрагмент лікарського засобу ерібуліну" відноситься до компоненту АЮС, який має структуру ерібуліну, та приєднаний до лінкера АОС через його амін С-35. Ерібулін є інгібітором динаміки мікротрубочок, який, як вважається, зв'язує тубулін та індукує зупинку клітинного циклу в фазі 52/М шляхом інгібування збірки мітотичного веретена. Термін "мезілат ерібуліну" відноситься до мезілатної солі ерібуліну, яка продається під торговою назвою НаїЇамеп "М, (00811 Термін "гомолог" відноситься до молекули, яка проявляє гомологію з іншою молекулою, маючи, наприклад, послідовності хімічних залишків, які Є однаковими або схожими у відповідних положеннях.
І0082| В цьому контексті термін "інгібувати" або "інгібування" означає зменшення на кількість, що може бути виміряна, і може включати, але не потребує повного запобігання або інгібування.
І0083| Термін "негативний на наявність мішені" або "негативний на наявність цільового антигену" відноситься до відсутності експресії цільового антигену клітиною або тканиною.
Термін "позитивний на наявність мішені" або "позитивний на наявність цільового антигену" відноситься до присутності експресії цільового антигену. Наприклад, клітина або клітинна лінія, що не експресує цільовий антиген, можуть бути описані як негативні на наявність мішені, тоді як клітина або клітинна лінія, що експресує цільовий антиген, можуть бути описані як позитивні на наявність мішені. (0084) Термін "неспецифічний цитоліз" або "ефект" свідка"" відноситься до вбивства клітин, негативних на наявність мішені в присутності клітин, позитивних на наявність мішені, при цьому вбивство клітин, негативних на наявність мішені не спостерігається при відсутності клітин, позитивних на наявність мішені. Клітинний контакт або, щонайменше, близькість між клітинами, позитивними на наявність мішені і негативними на наявність мішені уможливлює неспецифічний цитоліз. Цей тип знищення відрізняється від "нецільового знищення", яке відноситься до невибіркового вбивства клітин, негативних на наявність мішені. "Нецільове знищення" може спостерігатися під час відсутності клітин, позитивних на наявність мішені. бо (0085) Термін "рак" відноситься до фізіологічного стану у ссавців, у яких популяція клітин характеризується нерегульованим ростом клітин. Приклади раку включають, але не обмежуються ними, карциному, лімфому, бластому, саркому та лейкемію. Більш конкретні приклади таких злоякісних новоутворень включають плоскоклітинний рак, дрібноклітинний рак легені, недрібноклітинний рак легені, аденокарциному легені, плоскоклітинну карциному легені, рак органів черевної порожнини, гепатоцелюлярний рак, рак шлунково-кишкового тракту, рак підшлункової залози, гліобластому, рак шийки матки, рак яєчників, рак печінки, рак сечового міхура, гепатому, рак молочної залози (наприклад, тричі негативний рак молочної залози), остеосаркому, меланому, рак товстої кишки, колоректальний рак, рак ендометрію (наприклад, серозний) або рак матки, карциному слинних залоз, рак нирки, рак печінки, рак передміхурової залози, рак вульви, рак щитовидної залози, карциному печінки та різні типи раку голови та шиї.
Тричі негативний рак молочної залози відноситься до раку молочної залози, який є негативним на експресію генів рецептора естрогену (ЕК), рецептора прогестерону (РЕ) або Негг/пеи. (0086) Терміни "пухлина" та "новоутворення" відносяться до будь-якої маси тканини, що є результатом надмірного росту або проліферації клітин, доброякісних або злоякісних, включаючи передракові ураження. (0087) Терміни "ракова клітина" та "пухлинна клітина" відносяться до окремих клітин або загальній популяції клітин, отриманих з пухлини, включаючи як непухлиногенні клітини, так і ракові стовбурові клітини. Застосовуваний в цьому документі термін "пухлинна клітина" буде модифікуватися терміном "непухлиногенний", коли він відноситься виключно до тих пухлинних клітин, у яких немає можливості оновлюватися та диференціюватися, щоб відрізняти ці пухлинні клітини від ракових стовбурових клітин. (0088) Терміни "суб'єкт" та "пацієнт" застосовуються в цьому документі як взаємозамінні для позначення будь-якої тварини, такої як будь-який ссавець, включаючи, але не обмежуючись ними, людей, приматів, відмінних від людини, гризунів тощо. У деяких варіантах реалізації винаходу ссавець є мишею. У деяких варіантах реалізації винаходу ссавець є людиною.
ІЇ0089| Термін "спільне введення" або введення "в поєднанні з" одним або більше терапевтичними агентами включає одночасне та послідовне введення у будь-якому порядку.
І0090| "Фармацевтична композиція" відноситься до препарату, який знаходиться в такій формі, що дозволяє вводити, а потім забезпечує передбачувану біологічну активність активного інгредієнта(ів) та/або досягати терапевтичного ефекту, і яка не містить додаткових компонентів, що є неприйнятно токсичними для суб'єкта, якому вводили препарат. Фармацевтична композиція може бути стерильною.
І0091| "Фармацевтичний наповнювач" включає матеріал, такий як ад'ювант, носій, рн- регулюючі та буферні агенти, агенти для регулювання тонічності, агенти, що змочують, консервант тощо.
І0092| "Фармацевтично прийнятні" засоби схвалюються або затверджуються регулюючим органом федерального уряду або уряду штату, або внесені в Фармакопею США або іншу загальновизнану фармакопею для застосування на тваринах та, більш конкретно, на людях. (0093) "Ефективна кількість" АОС, як описано в цьому документі, є кількістю, достатньою для виконання конкретно заявленої мети, наприклад, для отримання терапевтичного ефекту після введення, такого як зменшення швидкості росту пухлини або об'єму пухлини, зменшення симптому раку або деяких інших ознак ефективності лікування. Ефективна кількість може бути визначена в звичайному порядку щодо заявленої мети. Термін "терапевтично ефективна кількість" відноситься до кількості АОС, що є ефективною для лікування захворювання або розладу у суб'єкта. У випадку раку терапевтично ефективна кількість АОС може зменшувати кількість ракових клітин, зменшувати розмір пухлини, інгібувати (наприклад, уповільнювати або зупиняти) метастази пухлин, інгібувати (наприклад, уповільнювати або зупиняти) ріст пухлини та/або полегшувати один або більше симптомів. "Профілактично ефективна кількість" відноситься до кількості, що є ефективною в дозуваннях та протягом періодів часу, необхідних для досягнення бажаного профілактичного результату. Як правило, оскільки профілактична доза застосовується у суб'єктів до або на більш ранній стадії захворювання, профілактично ефективна кількість буде меншою терапевтично ефективної кількості.
Ї0094| Застосовуваний в цьому документі термін "лікувати" або "терапевтичний" та граматично пов'язані терміни відноситься до будь-якого поліпшення будь-яких наслідків захворювання, таких як пролонговане виживання, менша захворюваність та/"або зменшення побічних ефектів, що є побічними продуктами альтернативного терапевтичного впливу. Як легко зрозуміти в цій галузі техніки, повне викорінення хвороби є кращим, але не обов'язковим для лікування. В цьому контексті "лікування" або "лікувати" відноситься до введення описаного АОС суб'єкту, наприклад, пацієнту. Лікування може полягати в терапії, лікуванні, полегшенні, 60 зменшенні, зміні, заліковуванні, усуненні, послабленні, поліпшенні або впливі на розлад,
симптоми розладу або схильність до розладу, наприклад, раку.
І0095| У деяких варіантах реалізації винаходу застосовується мічений АОС. Відповідні "мітки" включають радіонукліди, ферменти, субстрати, кофактори, інгібітори, флуоресцентні фрагменти, хемілюмінесцентні фрагменти, магнітні частинки тощо. 0096) Під "білком", як застосовується в цьому документі, мається на увазі щонайменше дві ковалентно приєднані амінокислоти. Цей термін охоплює поліпептиди, олігопептиди та пептиди.
У деяких варіантах реалізації винаходу дві або більше ковалентно приєднані амінокислоти приєднані за допомогою пептидного зв'язку. Білок може складатися з амінокислот природного походження та пептидних зв'язків, наприклад, у випадку якщо білок отримують рекомбінантно із застосуванням експресійних систем та клітин-хазяїнів. В альтернативному варіанті, білок може включати синтетичні амінокислоти (наприклад, гомофенілаланін, цитрулін, орнітин та норлейцін) або пептидоміметичні структури, тобто "пептидні або білкові аналоги", такі як пептоїди. Пептоїди є типовим класом пептидоміметиків, бічні ланцюги яких приєднані до атома азоту пептидного остова, а не до с-атомам вуглецю (так як вони знаходяться в амінокислотах) і мають різні водневі зв'язки та конформаційні характеристики в порівнянні з пептидами (див., наприклад, Зітоп та співавт. (1992 рік) Ргос. Май. Асай. Зсі. ОБА 89:9367). Як такі, пептоїди можуть бути стійкими до протеолізу або іншим фізіологічним умовам або умовам зберігання та ефективні при проникненні через клітинні мембрани. Такі синтетичні амінокислоти можуть бути включені, зокрема, у випадку якщо антитіло синтезовано іп мійго загальноприйнятими способами, добре відомими в цій галузі техніки. Крім того, можна застосовувати будь-яку комбінацію пептидоміметичних, синтетичних та таких, що зустрічаються в природі залишків/структур. Термін "амінокислота" також включає амінокислотні залишки, такі як пролін та гідроксипролін. Амінокислотна "група К" або "бічний ланцюг" може бути або в (І)-, або в (5)- конфігурації. У конкретному варіанті реалізації винаходу амінокислоти знаходяться в (І)- або (5)-конфігурації.
І0097| "Рекомбінантний білок" є білком, отриманим із застосуванням рекомбінантних методів із застосуванням будь-яких методів та способів, відомих в цій галузі техніки, тобто за допомогою експресії рекомбінантної нуклеїнової кислоти. Способи та методи отримання рекомбінантних білків добре відомі в цій галузі техніки.
Зо 0098) "Виділений" білок не супроводжується, щонайменше, деяким продуктом, з яким він зазвичай пов'язаний в його природному стані, наприклад, що становить щонайменше близько 5 до або щонайменше близько 50 95 від загальної ваги білка в цьому зразку. Зрозуміло, що виділений білок може становити від 5 до 99,9 95 маси загального вмісту білка в залежності від обставин. Наприклад, білок може бути отриманий у значно вищій концентрації за рахунок застосування індуцибельного промотора або промотора підвищеної експресії, так що білок отримують в підвищених концентраціях. Визначення включає продукування антитіла в різних організмах та/або клітинах-хазяїнах, відомих в цій галузі техніки.
Ї0099| Для амінокислотних послідовностей ідентичність послідовності та/або схожість можуть бути визначені із застосуванням стандартних методів, відомих в цій галузі техніки, включаючи, але без обмежень, алгоритм ідентифікації локальної послідовності по Зтій апа
Умаїегтап (1981 рік) Адм. Аррі. Май. 2:482, алгоритм вирівнювання ідентичності послідовності по Меедієтап апа УуУшп5сй (1970 рію) 9. Мої. Вісі. 48:443, спосіб пошуку подібності по Реагзоп апа
Пртап (1988 рік) Ргос. Маї. Асад. 5сі. ОБА 85:2444, комп'ютерні реалізації цих алгоритмів (САР,
ВЕ5ТРЇІТ, РАЗТА та ТЕАЗТА у Ууі5зсоп5віп Сепеїййс5 5оїймаге РасКаде, Сепеїїс5 Сотршег Стоир, 575 Зсієпсе Огіме, Медісон, штат Вісконсін), програму послідовності Вебі ЕЇї, описану Оемегеих та співавт. (1984 рік) Мисі. Асіа Ке5. 12:387-95, переважно застосовуючи стандартні параметри або безпосередньо перевіркою. Переважно, процентна ідентичність обчислюється за допомогою ЕРазіОВ на основі наступних параметрів: штраф невідповідності 1; штраф за пропуск в послідовності 1; розмір штрафу за пропуск в послідовності 0,33; та штраф з'єднання 30 ( "Сйцтепі Меїйод5 іп бедиепсе Сотрагізоп ап Апаїузіз,, МасготоЇєсцше бедиєпсіпуд апа зупіпеві5, ЗеІесіва Меїпоа5 апа Арріїсайоп5, стор. 127-149 (1988 рік), АІап К. І і55, Іпс). 00100) Прикладом корисного алгоритму є РІГСЕОР. РІГЕОР створює множинне вирівнювання послідовностей з групи подібних послідовностей із застосуванням прогресивних попарних вирівнювань. Він також може відображати схему, що показує відношення кластеризації, що застосовуються для створення вирівнювання. РІЇЕОР застосовує спрощення способу прогресивного вирівнювання по Репд 4 ЮооїїшШе (1987 рік) У. Мої. ЕмоїЇ. 35:351-60; спосіб аналогічний описаному Ніддіп5 апа Зпагр (1989 рік) САВІО5 5:151-3. Корисні параметри РІГЕОР включають штраф за відкриття розриву за замовчуванням 3,00, штраф за продовження розриву за замовчуванням 0,10 та оцінювані кінцеві розриви. бо І00101| Іншим прикладом корисного алгоритму є алгоритм ВГА5Т, описаний в: Айї5спи! та співавт. (1990 рік) У. Мої. Віої. 215:403-10; АНбспи! та співавт. (1997 рік) Мисієїс Асій5 Кев. 25:3389-402; і Кагіп та співавт. (1993 рік) Ргос. Май. Асад. сі. ОБА 90:5873-87. Особливо корисною програмою ВІ А5ЗТ є програма УМО-ВІ А5Т-2, отримана від Ай5сВці та співавт. (1996 рію) Меїйод5 іп Еплутоїоду 266:460-80. М/О-ВІАБТ-2 застосовує декілька таких засобів, більшість з яких мають значення за замовчуванням. Регульовані параметри задаються з наступними значеннями: довжина перекривання - І, частка перекриття - 0,125, порогова довжина слова (Т) - І. Параметри Н5Р 5 та НБ5БР 52 є динамічними значеннями та визначаються самою програмою в залежності від складу конкретної послідовності і складу конкретної бази даних, з якої здійснюється пошук послідовності, що становить інтерес; однак значення можуть бути скориговані для підвищення точності.
І00102)| Додатковим корисним алгоритмом є дарреа ВІ А5Т, як повідомляється в АїЇбсВиЇ! та співавт. (1993 рік) Мисі. Асій5 Ке5. 25:3389-402. Саррей ВГАБТ застосовує очки заміщення
ВГОБОМ-62; пороговий параметр Т встановлено на 9; метод подвійного удару застосовується для запуску розширень ипдарред, ціна довжини розриву К дорівнює 10 « К; Хи встановлений на 16, а Хо встановлений на 40 для етапу пошуку в базі даних та на 67 для етапу виведення алгоритмів. Вирівнювання даррей запускаються за допомогою оцінки, що відповідає близько 22 бітам. 00103) Як правило, гомологія амінокислот, схожість або ідентичність між білками, що описані в цьому документі, та їх варіантами, включаючи варіанти ЕКА, варіанти Пег2, варіанти послідовностей тубуліну та варіанти варіабельних доменів антитіла (включаючи окремі варіанти
СО), складають щонайменше 80 95 по відношенню до послідовностей, що представлені в цьому документі, та як правило з переважно зростаючими гомологіями або ідентичностями щонайменше 85 95, 90 95, 91 95, 92 95, 93 95, 94 95, 95 95, 96 95, 97 95, 98 95, 99 95 та майже 100 905 або 100 95.
І00104| Аналогічним чином, "відсоток (95) ідентичності амінокислотної послідовності" по відношенню до послідовності нуклеїнової кислоти антитіл та інших білків, визначених в цьому документі, визначають, як процентний вміст нуклеотидних залишків у послідовності-кандидаті, які ідентичні залишкам нуклеотидів в кодуючій послідовності антигензв'язуючого білка. У конкретному способі використовується модуль ВІАЗТМ УМО-ВІАБТ-2 з параметрами за
Зо замовчуванням, з довжиною перекривання та часткою перекривання, встановленим на 1 та 0,125, відповідно. 00105) Хоча сайт або ділянка для введення варіації амінокислотної послідовності відомі наперед, мутація сама по собі не обов'язково повинна бути відома наперед. Наприклад, з метою оптимізації продуктивності мутації на даному сайті, випадковий мутагенез може бути проведений в цільовому кодоні або ділянці, а експресовані варіанти СОК антигензв'язуючого білка, скриновані на оптимальне поєднання бажаної активності. Методи отримання мутацій, що заміщують, на заздалегідь визначених ділянках ДНК, що мають відому послідовність, є добре відомими, наприклад, мутагенез із застосуванням праймера МІЗ та мутагенез із застосуванням
ПЛР.
Кон'югати антитіло-лікарський засіб
Ї00106| Сполуки по цьому винаходу включають сполуки з протираковою активністью.
Зокрема, сполуки включають в себе фрагмент антитіла (включаючи його антигензв'язуючий фрагмент), кон'юЮюгований (тобто ковалентно зв'язаний лінкером) з фрагментом лікарського засобу, при цьому фрагмент лікарського засобу, у випадку якщо він не кон'югований з фрагментом антитіла, має цитотоксичний або цитостатичний ефект. У різних варіантах реалізації винаходу фрагмент лікарського засобу проявляє знижену цитотоксичность або її відсутність у випадку якщо зв'язаний у кон'югаті, але відновлює цитотоксичность після розщеплення з лінкера та фрагмента антитіла. У різних варіантах реалізації винаходу фрагмент лікарського засобу демонструє зменшення або відсутність неспецифічного цитолізу у випадку якщо зв'язаний в кон'югаті (наприклад, із застосуванням лінкера, що не розщеплюється), але проявляє підвищений неспецифічний цитоліз після відщеплення від кон'югату (наприклад, кон'югату, що має фрагмент Ма!І-Сії, що розщеплюється).
І00107| Розробка та виробництво АОС для застосування в якості терапевтичного агента для людини, наприклад, в якості онкологічного агента, може вимагати більше, ніж ідентифікація антитіла, здатного зв'язуватися з бажаною мішенню або мішенями та прикріплятися до лікарського засобу, що застосовується самостійно для лікування раку. Зв'язування антитіла з лікарським засобом може мати значний та непередбачений вплив на активність одного або обох антитіл та лікарського засобу, впливи, які будуть варіюватися в залежності від типу лінкера та/або обраного лікарського засобу. Тому в деяких варіантах реалізації винаходу компоненти 60 АОС вибирають так, щоб (ї) зберігати одне або більше терапевтичних властивостей, які проявляються антитілом та фрагментами лікарського засобу при виділенні, (її) підтримувати специфічні зв'язуючі властивості фрагмента антитіла; (ії) оптимізувати вміст лікарського засобу та співвідношення лікарського засобу-до-антитілу; (ім) дозволити доставку, наприклад, внутрішньоклітинну доставку фрагмента лікарського засобу за допомогою стабільного приєднання до фрагменту антитіла; (у) зберігати стабільність АОС у вигляді інтактного кон'югату до транспортування або доставки до цільового сайту; (мі) мінімізувати агрегацію АОС до або після введення; (мі) дозволити терапевтичний ефект, наприклад цитотоксичний ефект, фрагмента лікарського засобу після розщеплення в клітинному середовищі; (мії) демонструвати ефективність протиракової терапії іп мімо порівнянну або таку, що перевищує ефективність антитіла та фрагментів лікарського засобу при виділенні; (їх) звести до мінімуму нецільове знищення за допомогою фрагмента лікарського засобу; та/або (х) демонструвати бажані фармакокінетичні та фармакодинамічні властивості, здатність формулюватися "та токсикологічні/мунологічні профілі. Скринінг кожної з цих властивостей може знадобитися для ідентифікації поліпшеного АОС з метою терапевтичного застосування (АБ та співавт. (2015 рік)
Мої. Сапсег Тне 14:1605-13).
І00108) У різних варіантах реалізації винаходу описані в цьому документі АОС демонструють несподівано сприятливі властивості в деяких або кожній з перерахованих вище категорій.
Наприклад, в деяких варіантах реалізації винаходу конструкції АОС, що містять приєднання Маї до антитіла, спейсерну одиницю ПЕГ (переважно коротку спейсерную одиницю ПЕГ) та/або пептидний лінкер, що розщеплюється (наприклад, лінкер Ма!І-СЮ) демонструють дивно сприятливий вміст лікарського засобу, агрегацію та/або профілі стабільності, та/або зберігають функцію зв'язування антитіл, активність лікарського засобу, та/"або поліпшений неспецифічний цитоліз, в той же час зменшуючи нецільове знищення, в порівнянні з АОС, що застосовують інші лінкерні структури, що розщеплюються або не розщеплюються. 00109) У деяких варіантах реалізації АОС, що містить лінкер МаІ-ПЧЕГ)2-МаІ-СП-рАВ, що з'єднує ерібулін з антитілом (наприклад, антитілом до ЕКА, таким як МОКАБ-003), проявляє особливо сприятливі властивості по перерахованим категоріям порівняно з іншими лінкерами, що розщеплюються або не розщеплюються, що з'єднують ерібулін з фрагментом антитіла. У деяких варіантах реалізації винаходу АОС, що містить лінкер МаІ--«ПЕГ)2-МаІ-СТ-рАВ, що з'єднує
Зо ерібулін з антитілом (наприклад, антитілом до ЕКА, таким як МОКАБ-003), проявляє особливо сприятливі властивості неспецифічного цитолізу в порівнянні з АОС, що не розщеплюються. У деяких варіантах реалізації винаходу АОС, що містить лінкер МаІ--ПЕГ)2-МаІ-СТ-рАВ, що з'єднує ерібулін з антитілом (наприклад, антитілом до ЕКА, таким як МОКАБ-003), проявляє особливо сприятливі властивості неспецифічного цитолізу в порівнянні з АОС, який застосовує альтернативні лінкерні структури, що розщеплюються. 00110) У деяких варіантах реалізації винаходу АОС, що містить лінкер МаІ--ПЕГ)2-МаІ-СИ- рАВ, що з'єднує ерібулін з МОКАБ-003, має вище та більш бажане співвідношення лікарський засіб:антитіло (тобто, співвідношення близько 3-4) по відношенню до АОС, наприклад, що містить лінкер, приєднаний до антитіла через альтернативний фрагмент (наприклад, сукцинімідний фрагмент). У деяких варіантах реалізації винаходу АОС, що містить лінкер Маї!- (ПЕГ)2-МаІ-СЛ-рАВ, що з'єднує ерібулін з МОКАБ-003, має вище та більш бажане співвідношення лікарський засіб:антитіло та/або нижчі рівні агрегації по відношенню до АОС, наприклад, що містить довшу спейсерную одиницю (наприклад, (ПЕГ)8). У деяких варіантах реалізації винаходу АЮС, що містить лінкер. МаІ--«ПЕГ)2-МаІ-СпТ-рАВ, що з'єднує ерібулін з
МОВАБ-003, демонструє вище та більш бажане співвідношення лікарський засіб:антитіло, нижчі рівні агрегації, підвищене цільове знищення та/або зменшене нецільове знищення в порівнянні з АОС, наприклад, що містить альтернативний фрагмент, що розщеплюється (тобто непептидний фрагмент, що розщеплюється, такий як дисульфід або сульфонамід, що розщеплюється). У деяких варіантах реалізації винаходу АОС, що містить лінкер МаІ--ПЕГ)2-
МмаІ-Сп-рАВ, що з'єднує ерібулін з МОКАБ-003, демонструє підвищену стабільність, збільшене цільове знищення, зменшене нецільове знищення, нижчі рівні агрегації та/"або вище та більш бажане співвідношення лікарський засіб:"антитіло по відношенню до АОС, наприклад, що містить альтернативну амінокислотну одиницю (наприклад, Аіа-Аіа-Азп) або альтернативний фрагмент, що розщеплюється (наприклад, дисульфід або сульфонамід, що розщеплюється). 00111) У деяких варіантах реалізації винаходу АОС, що містить лінкер МаІ--ПЕГ)2-МаІ-СИ- рАВ, що з'єднує ерібулін з МОКАБ-003, може спостерігатися з АОС, що містять лінкерний токсин
Ма!І-«ПЕГ)2-МаІ-СТ-рАВ-ерібулін, кон'югований з антитілом до Нег2, таким як трастузумаб, або антитілом до мезотеліну.
ІЇ00112| Сполуки АЮС за цим винаходом можуть вибірково доставляти ефективну дозу 60 цитотоксичного або цитостатичного агента в ракові клітини або в пухлинну тканину. Було виявлено, що описані АОС мають сильну цитотоксичну та/або цитостатичну активність проти клітин, що експресують відповідний цільовий антиген (наприклад, ЕКА або ПпПег2). У деяких варіантах реалізації винаходу цитотоксична та/або цитостатична активність АОС залежить від рівня експресії цільового антигену в клітині. У деяких варіантах реалізації винаходу, описані
АрС особливо ефективні при вбивстві ракових клітин, що експресують цільовий антиген на високому рівні, в порівнянні з раковими клітинами, що експресують один і той же антиген на низькому рівні. У деяких варіантах реалізації винаходу, описані АОС особливо ефективні при вбивстві ракових клітин, що експресують цільовий антиген на помірному рівні, в порівнянні з раковими клітинами, що експресують той самий антиген на низькому рівні. Типові раки з високим рівнем експресії ЕКА включають, але без обмежень, рак яєчників (наприклад, серозний рак яєчників, світлоклітинний рак яєчників), карциноїд легень, тричі негативний рак молочної залози, рак ендометрія та недрібноклітинний рак легені (наприклад, аденокарциному). Типові раки з помірним рівнем експресії ЕКА включають, але без обмежень, рак шлунку та колоректальний рак. Типові раки з низьким рівнем експресії ЕКА включають, але без обмежень, меланому та лімфому. Типові раки з високим рівнем експресії пег2 включають, але без обмежень, рак молочної залози, рак шлунку, рак стравоходу, рак яєчників та рак ендометрія.
Типові раки з помірним рівнем експресії пег2 включають, але без обмежень, рак легенів та рак сечового міхура. 00113) У деяких варіантах реалізації винаходу розщеплення АЮС вивільняє ерібулін з фрагмента антитіла та лінкера. У деяких варіантах реалізації винаходу розщеплення та вивільнення ерібуліну покращує цитотоксичність АОС. У деяких варіантах реалізації винаходу
АБС, що містить лінкер, що розщеплюється, особливо ефективний при вбивстві ракових клітин, включаючи неспецифічний цитоліз, у порівнянні з таким самим лікуванням з АОС, що містить лінкер, що не розщеплюється. У деяких варіантах реалізації винаходу АОС, що містить лінкер, що розщеплюється (наприклад, лінкер Ма!І-СІ), демонструє підвищене цільове знищення клітин та/або зменшене нецільове знищення клітин в порівнянні з АЮС, що містить лінкер, що не розщеплюється, (наприклад, лінкер, що не розщеплюється (ПЕГ)2 або (ПЕГ4), при цьому зокрема клітини та/або рак, які отримували АОС, не експресують на високих рівнях цільовий антиген.
Зо 00114) У деяких варіантах реалізації винаходу, описані АОС також демонструють активність неспецифічного цитолізу, але низьку нецільову цитотоксичність. Не обмежуючись теорією, активність неспецифічного цитолізу АЮС може бути особливо корисною, в разі якщо його проникнення в солідну пухлину обмежене та/або експресія цільового антигену серед пухлинних клітин є гетерогенною. У деяких варіантах реалізації винаходу АЮС, що містить лінкер, що розщеплюється, особливо ефективний при неспецифічному цитолізі та/лабо демонструє поліпшену активність неспецифічного цитолізу, в порівнянні з таким самим лікуванням з АОС, що містить лінкер, що не розщеплюється.
ІЇ00115| В цьому винаході представлені сполуки АЮС, що містять антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент (АБ), який націлений на пухлинну клітину, фрагмент лікарського засобу (0) та лінкерний фрагмент (І), який ковалентно приєднує АБ до Ю. В деяких аспектах антитіло або антигензв'язуючий фрагмент можуть зв'язуватися з пухлиноасоційованим антигеном (наприклад, ЕКА або Пег2) з високою специфічністю та високою афінністю. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло або антигензв'язуючий фрагмент інтерналізуються в цільову клітину при зв'язуванні, наприклад, в деградуючий компартмент в клітині. Кращими АОС є, таким чином, ті, що інтерналізуються при зв'язуванні з цільовою клітиною, піддаються деградації та вивільняють фрагмент лікарського засобу для знищення ракових клітин. Фрагмент лікарського засобу може бути вивільнено з антитіла та/або лінкерного фрагмента АОС шляхом ферментативної дії, гідролізу, окислення або будь-якого іншого механізму. 00116) Типовий АОС відповідає Формулі І:
АРр-(І -О)р (І) де АБ - фрагмент антитіла (тобто, антитіло або антигензв'язуючий фрагмент), Ї. - лінкерний фрагмент, ОО - фрагмент лікарського засобу та р - кількість фрагментів лікарського засобу на фрагмент антитіла.
Антитіла
ІЇ00117| Фрагмент антитіла (АБ) Формули І включає в свій об'єм будь-яке антитіло або антигензв'язуючий фрагмент, що специфічно зв'язується з цільовим антигеном в раковій клітині.
Антитіло або антигензв'язуючий фрагмент може зв'язуватися з цільовим антигеном з константою дисоціації (КО) х 1 мМ, х 100 нМ або х 10 нМ або будь-яким значенням між ними, як виміряно, наприклад, за допомогою аналізу ВіАсогефт). В окремих варіантах реалізації винаходу 60 КО становить від 1 пМ до 500 пМ. У деяких варіантах реалізації винаходу КО становить від 500
ПМ до 1 мкМ, від 1 мкМ до 100 нМ або від 100 мМ до 10 нм. 00118) У деяких варіантах реалізації винаходу фрагмент антитіла є чотирьохланцюговим антитілом (також зване імуноглобуліном), що містить два важкі ланцюги та два легкі ланцюги. У деяких варіантах реалізації винаходу фрагмент антитіла є дволанцюговим антитілом (один легкий ланцюг та один важкий ланцюг) або антигензв'язуючим фрагментом імуноглобуліну.
Ї00119| У деяких варіантах реалізації винаходу фрагмент антитіла є антитілом, що інтерналізується, або його антигензв'язуючим фрагментом, що інтерналізується. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується, зв'язується з цільовим раковим антигеном, що експресується на поверхні клітини, та проникає в клітину при зв'язуванні. У деяких варіантах реалізації винаходу фрагмент лікарського засобу АЮС вивільняється з фрагмента антитіла АОС після того, як АОС проникає в клітину, та присутній у клітині, що експресує цільової раковий антиген (тобто після того, як АОС був інтерналізований).
І00120| Амінокислоти та послідовності нуклегснових кислот типових антитіл за цим винаходом наведені в Таблицях 1-9.
Таблиця 1
Антитіла кислоти альфа
Скорочення: хі - химерне; 2и -гуманізоване
Таблиця 2
Амінокислотні послідовності варіабельних ділянок мАт
ЗЕО
МАТ ланцюг ІО Амінокислотна послідовність да МО 1 МОРАБВБ-003 | Важкий 23 ЕМО МЕЗО С ОМУМОРОНВБІ ВІ 5СЗАБаЕТЕЗИамаї 5МУМ ланцюг ВОАРОКаї! ЕУУМАМІЗЗс БУГ иМАрБУКОИВЕАІЗНОМ
АКМТ РЕГОМО5І АРЕОТаУМЕСАВНОИаПО РАМ ГАУСА
ОатТРУТУЗ5 2 МОРАБ-003 | Легкий 24 РІОГТОБРБІБІ БАБМОаОВМТІТО5УББЗБОІЗЗММІ НУМО ланцюг ОКРОЕКАРКРУЛМОаТОМІ АБИМРОВЕЗОВОБОТОМТЕТ
ІЗБГОРЕБІАТУУСООМ 557 РУИМУТЕСОСТКМЕїК
З МОРАБВБ-009 | Важкий 25 ОМОЇГ ООБОРЕЇ ЕКРОАБЗУКІЗСКАБОМЗЕТОаМ ГММУУМ ланцюг КОЗНаквЕММа тРУМИАЗЗУМОКЕВОКАТІ ТОК
ЗЗТАУМОІ І ЗІ ТЗЕОБАУУЕСАВасУравнагримсо стТРУТУ55 4 МОРАБ-009 | Легкий 26 ПІЕСТОЗРАІМ5АБРОЕКУТМТОЗАБЗОЗУЗУМНУМОО ланцюг кзат5РКАУЛУЮТОКІ АБСУРОанЕЗОИБИаБОаМЗУБІ ТІ
ЗЗМЕАЕОВАТУУСООМЗКНРІТРаза ТКМЕїК 5 | трастузумаб | Важкий 27 ЕМО МЕЗОССОЇ МОРОИБІ ВІ БСААБОЕМІКОТМІНМ У ланцюг ВОАРОаКаїі ЕУУМАВІУРТМаМТАМАрЗУКОаВЕТІЗАОТ
ЗКМТАМІ ОММ5І ВАЕОТАУУ УЗН, арагМАМОУ
11111111 р мсослпМмту 77777717 трастузумаб | Легкий 28 РІОМТО5РББІ БАБМООВМТІТСВАБОСММТАМАМ У ланцюг ОСООКРОКАРКІ ПУБАЗРІ ЗСИМРЗАЕЗОЗАБОТОБТ
І ТІ ОРЕОРГАТУУСООНУТТРРТРОСТКМЕЇїК 7 | 33011-хі Важкий 29 ОБМЕЕЗИСИАІ МТРИЕИтТРІ ТТСТУБаИттві 5БОАІБММ ланцюг ВОАРОКИГЕМІСПпЧОСаТмтиМАБУАКИАЕТІЗКТО
ТТМОЇ КІТ2РТТЕОТАТУЕСАВСПОНСССМЗОМ УМ сесморімаРИТІ МТУ55 33011-хі Легкий Зо ЕМГМТОТРУЬБУМЗААМОаОТМТІКСОАБОВІВОЗМІ ЗМУ ланцюг МООКРИООРРКІ СІМ АТ АБИМРЗАЕЗИаЗНАЗОаТЕ
Р ТІБОГЕСОРААТУУСОТМУСаТ5ВЗМУагАБОС
СТЕМУУК
33011-2и Важкий 31 ЕМОЇ МЕЗССИЇ МОРОЗІ ВІ БЗСААБИЇБІ 5ЗОАІЗ ланцюг МУВОАРСОКИЕМІСПМОСамМтУМАБУАКОИАЕТІ
АНМЗКМТІ М 'ОММ5І ВАЕОТАМУУСАНИИЮНИаС
МзоУУУуУаемМорімуаості му | 33011-2и Легкий За РІОМТО5РББІ БАВБМООВМТІТСОАБОБІЗЗМІ ЗМУ ланцюг ОСООКРОКАРКІ ПІМІ А5ТІ АБСМРЗНЕЗОВОВОТОЕТ
Г/ПІЗЗОСЕВІАТУУСОТММОатЗЗ5МУагАгасаТтк
МЕІК
11 | т11т1810-хі Важкий ЗЗ ОБМЕЕЗИОИВІ МТРИЕИтТРІ ТТСТУБИагвІі МММАМ5 ланцюг МУНОАРСОКИї ЕУМаБІЗ ТИС АЄЕМАМУАКИвЕтіІ
ЗзАТЗТТМО КМТ ТТЕОТАТУєССОа!МОааТвме
УУгЕрІмсвОстІ МТУ55 12 | 11т1810-хі Легкий 34 АРЕГТОТРОЬБМЕААМОССТПТІКСОАБОВІВЗМІ ЗМУ ланцюг МООКРИООРРКІ ПІУЗАБТІ АБСМЗЗНЕКОВИаВаИ
ТЕМІ ТІБОЇ ЕСАСААТУРСОЗУУВІИСТВТРИаСО
ТЕМУУК
13 | 111810-2и Важкий 35 ЕМОЇ МЕЗОСОСЇ МОРОСБІ ВІ БСААБОГБІ ММУА ланцюг МБУМУАОАРОКИаГЕМИБІЗТОИІ АЕМАМУ/АКО
АЕТІБНОМЗКМТІ МІОМІ ВАЕОТАМУМСАВМ савазмЕМУврімсостімМтУ55 14 | 111810-2и Легкий 36 РІОМТО5РББІ БАБМООВМТІТСОАБОБІЗЗМІ 5 ланцюг МУООКРОКАРКІ ПУЗАБТІ АБСИМРЗНЕБОЗОЗ
СТОР ТІ ОСЕСААТУМСОВУМОСТОТРОаС аТКМЕК | 201С15-хі Важкий 37 ОБУКЕЗОСИВІ МТРОЕтТРІ ТТСТУБИрі 554АМ ланцюг СУ ЕРОАРОКИЇГЕМІСТІМОСАУУМАБУАКИ А
ЕТІЗАТЗТТМОЇ КАРБТАЕОТАТУРСАНУУМСИ
БУМ аРСТІ МТМ. 16 | 201С15-хі Легкий 38 ОМУМТОТРАБАБЕРУСТМТІКСОАБЕБІМВМ ланцюг ГАММООКРООРРКІІМОТЗТІ АБИаАРЗАЕКО
ЗамаТЕРТІ ТІЗЕМОСЕВААТУУСОСаИамУМАОЗ
УаІАРОССИТЕУМУК 17 | 201С15-2и Важкий 39 ОМОЇ МЕЗО МОРОСІБІ ВІ БСЗАБЗОЇОЇ ЗУ ланцюг АМОМ/МВОАРОКОИГЕМІСТІМІСВУУМАБУАК
САЕТІЗАОМЗКМТІ МІОМІ ВАЕОТАМУМСА вУуиМсавзмОомаостІі мМтУ55 18 | 201С015-2и Легкий 40 РІОМТО5РБТІ БАЗМООВМТІТСОАБЕБІМ ВАМ ланцюг ГАММООКРОКАРКІ ГІМОТ5ТІ АБОаМРЗАЕБ а5аБатТЕРТІТІЗБІ ОСОрААТУУСОССИММУ дозУаТІАгасаткмМеЕїКк 19 | 346С6-хі Важкий 1 ОБМЕЕЗИСНАІ МКРОЕБІ ТІ ТСТАБОББ5І 55 ланцюг ХАМІМУАОАРОБСИГеЕУмМІСаТтІЗТИСТУМАБ
М АКИавЕТІЗКТТ МОЇ КІТ5РТТЕОТАТУЄ
САВСИМААББЗАХУМІ РУМРОЇ МСОСТІ МТМ
55 | 346С6-хі Легкий 42 ААМІ ТОТРАЕРИБААДУМСИТМТІЗСОБОВМУУ ланцюг ММММІ АУМРООКРИасОРРКІ ПІМІ АЗТІ АБОМ
РЗАЕЗОаБИаБОТОГТІТІЗаИМОСррААТУУС
11111111 ІООсСоОООАОТРАРОссТЕММУКЇДЛДЛ/:/:///./: 21 | 346С06-2и Важкий 43 ЕМОЇ МЕЗОСОЇ МОРОСБІ ВІ 5САД5 ланцюг СЕБ5БІ 55 АМІМУНОАРИОКИаИЇ ЕЛ тІБТаСІТУМАБУАКОВЕТІЗАОМОКМ
ТІГМ'ОММ5І ВАЕОТАМУУСАНОССУАА
ЗБАХУМІ РУМЕОІ МУ СОСТІ МТУ55 22 | 346С6-2и Легкий 44 РІОМТО5РБУБІ БАБМООЮВМТІТСО55 ланцюг ОБМУММММІ АММООКРОКУРКІ М
ІГА5ТІ АБИМРОВЕЗаЗОа5атонТІ ТІ
ЗГОСЕВААТУМСІЇ СИ,аСООАОТЕАвс сОатТкМЕїКк
Таблиця З
Послідовності нуклеїнової кислоти, що кодують варіабельні ділянки мАт
То Гея 5007 пеелдоюнет ниття 1 МОНАБ- Важкий 45 авАдапТоСААстТаатасасАяаСаатТасцА 003 ланцюг сеатататасСсАдАсстаассаатосста сасстатостастоСсасатотастто
АССТТсАДаСсаастТАтТасаттатсттась атТаАпАСАаССАССТасААААсаТтстт авдатапаТтаСААТОАтТтАатТАаТтаат
СатАсСТТАТАССТАСТАТаСАСАСАИТ аТаААаспаТАСпАТТТаСААТАТСОаСИаА
САСААдСасССААДаААСАСАТТИаттостТа
САААтТасАСсАассСстаАдаАСССадАсАс
АсСсСО,СасааТсСтТАТТТТатаСАДОАСАТОа савАсаАдтоссасстааТСсаТсттТАТТа савасСсАд,аасАсооСсааТСАссаТтсто
СТСА
2 МОНАБ- Легкий 46 САСАТССАССТадоСсСА,аАасСССАдас бо ланцюг дасстадла,асассдасатаайсТаАСАСА
СТОАССАТСАССТатАатаТтсСАаТсСтТСАА
СТАТААИТТССААСААСТТаСАСТИаСТА
ССАпСАСААдаССАасСТААаасСТоСАДА асССАТаСАТСТАСОаССАСАТССААССТ ссестсотапвТатТасСсСАДаСАСАТТСАС савстдасааЙтТаСааТАССаАСТАСА
ССТТСАССАТСсАЛИаСсАасСсСсТоСАассСАс
АПССАСАТСИССАССТАСТАСТаССААДС датапАатТАаТТАСССатАСАТОТАСА сатСааСсСАДапаАССАдаатТасАА
АТСААДАА
З МОНАБ- Важкий 47 СсАасТАСААСТаСсАаа,аСсАаатотасвиасо 009 ланцюг тада,асСстааАдсадАаасстаасСсастТ САС
ТОААСАТАТССТаСААСцОаСТТСТОасТтТ
АСТСАТТСАСТаССТАСАССАТОААСТ саватТаддасСсАпАдаССАтТасАдАадас стадИатТапйАТТОаАСТТАТТАСТОСТТ
АСААТИааТаСТТсСтТАасСТАСААССАСА даттсдапааСААСасСсСАСАТТААСТ ,СТАСАСААСТСАТССАаСАСАСаССТА
САТОСАССТОСТСАаТтТтсСтТОаАСАТСТО
ААСАСТСТаСАаТСТАТТТСТатасАА ававсасаттАСсаАаСсасвАдааасТтт тТаАСТАСТОаСОАТтоСсОСасАСССС ваТсСАССатсТоСтТСА
А МОРВАБ- Легкий 48 САСАТСОДОаСТСАСТСАСТСТОСАС 009 ланцюг СААТСАТатСстТасСАТСТОСАСасааА
СААСаТСАССАТаАССТаСАСсТасс
АССТСААСТаТААСТТАСАТОСАСТО
СТАССАаСАаААаТСАпасАсстос
СССААДААСАТОСАТТТАТОАСАСАТС
САААСТООССТІСсТОпАсСТоССА,ИтТо еасттодатааСАатТасТСсТасСАдАС
ТСТТАСТСТСТСАСААТСАССАССаИта вАпасСтТОААСАТОАТОаСААСТТАТТАСТ восСсАасАаТааАСТААаСАСССТСТСА са,аттвОАтТоСаппАССААастТасАдАА
ТСААА
33011-хі Важкий 49 СсАстосатасаааваатсвааватоас ланцюг стасвтоАсасстТапаАСАССССТаАСА
СТСсАССТасАсСаТатстостТаапААТСТОСС
ТСАаТАаСОАТаСААТАЛДОСТОСИаТоСаИ
СсСАасастосАда,аапААда,а,ваастоаААТАС
АТСОСААТСАТТААТОСТОСТОСаСТААСАС
АТАСТАСОСОАДОаСТОПСИаСОАААСассяА
ТТСАССАТСТОСААААССТОСАССАСОСТ
СОАТСТОААААТСАССАаТССаАСААССа
АВОАСАСаСССАССТАТТТСТатассАаА
СаСАТТСААСАТОИСТОСТОСТААТАСТИаА
ТТАТТАТТАТТАСЇСИСАТОСАССТСОТОСОС
СССАВаСАСССТОаСТСАСТОаТСТСТТСА 33011-хі Легкий 50 СААСТаттаАТаАСССАСАСТОСАТОСТО ланцюг сататотасСсдастатаапАСАСАСАаТСА
ССАТСААСТаССАааССАаТСАСАССАТТ
П;ЇТАаТатстТатсстаатТАТСАССАСАА
АссдачвасАаССТоССААДасСТосСТОАТСТ
АТСТОаСАТССАСТСОТОССАТСТОСОСТО
СсСсАТСОСООСТТСАССаССАСТАСАТСТОС
САСАСАСТТСАСТСТСАССАТСАДаСОАССТ савдататаАСаАТастасСсСАСТТАСТАСТО
ТСАААССААТТАТОСТАСТАСТАСТАСТААТ
ТАТОСТІ ОСТІ ГОСсаСсапАсСаСАССОА ватаатТсСатсСААА 7 33011-2и Важкий 51 вААСТССААСТОИатТасададаса,вавсацАс ланцюг сАстастасласссвасавАТоССсТосСа ,СсТатсАТаТаСтТаСАТСОССОСААТТТОСС тотостоСсаАдсасвАтТАаСсТасатсАаА сАСассоССапААдАл,вавастаслХатАСА тоаатТАТСАТСААСООсССасСасАААСАСс тТАСТАСЯССТОСТОСаССААд,авассаТстт
САССАТСТСИаСОССАТААТТССААСААСА
СТСТаТАСТТОСАААТОААСТОССТОдОС ,собаАспАСАссассататАСТАСТасСа са,асасааСАТССАаСАСастТааТОасСАдА
САаСОаАСТАСТАСТАСТАТОСОАТаСАТС татаасаСсСсАаОаОААСстоттатаАссатТ сТСатсА 33011-2и Легкий 52 САСАТТСАСАТаАСССАаТтоСССАдаТстТт ланцюг састатосасстосатасасадоСсаса тТОаАССАТСАССЯТОаИССсСАасСа,аСсатоссАато
ААТТАЯССАЛССОСТастотоСтТастАССАА
СсСАСАДАдаСсСсавасААдДасСАСССАдаста
СстТаАТСТАСТТаССсСТоСАСТСОТОСССТ сававоХатТасстсАсс,аттстоСасцАТС вапАТСТОСТАСТОАТТТСАСССТСАСС
АТСТоОАОССТТСАСТаСОАСсАСАТС
ССТАСТТАСТАТТОТСАААССААСТАСО
СААССТОСАВСТОСААСТАССОСТТТОаС сттовсставСОбаАССААаИаИтТсСОАААТ
СААДА
111810-хі Важкий 53 састосатовАсаАатосвоааатсо ланцюг сстаатсАсаСсСстТаваАСАССССТОА
САСТСАССТОаСАСАСТОТСТОСАТТСТ
СССТСААТААСТАТИаСААТОЛОСТОСО тосасСсАваСсТоСАсСОвпААааваста
СААТаСАТССОАТССАТТАСТАСТОСТ сатстоОСАТТСтТАСОЯСадАСТаСОаС
АААДАпаССОаАТТСАССАТСТОСАСААС
СстТоаАССАСОСТОаСАТСТОААААТОАС
САСТСТОАСААССОАаИаАСАСОаССА
ССТАТТТСТатООСАСААДАТОСТОИТО
СТАСТТАТАТТТТСТАТТАТТТТОАСТТО таввОсССААдааСАССсСстоатсАСТат
СТСТТСА
| 111810-хі Легкий 54 ССАТТСОСААТТаАСССАСАСТОСАТОС ланцюг тосатасдассАХастатасаАвасСАс
ААТСАССАТСААЛСТОССАОСИаССАИТСА
САССАТТАИТАСТТАСТТАТСОСТОСТАТ
САССАСААДАССАСОваСАаССтТоССАА
ВсТоСтТОАТСТАТТСТОСАТОСАСТОТО аСсАТСТаСОССаТСТСАТСОСОСТТСААА сасдатабАТСТайОСАСАаАСТАСАСТ
СсТоАССАТСАССОАССТОСАОСТОТаСо
САТаСТаССАСТТАСТТСТОТСААДАССТ
АТТАТОАТАТТЕСТАСТАСТАСТТТСОС саслдассАосадасТааТсатсСААА 11 | 111810-2у Важкий 55 вААСТОИСАОССТОСТОаААТСТОССОС ланцюг саспАстастаслоосставСОвАТСТО таАСАСТОТСТТОаТОССОЯССТОСВИасСтТ
ТСТОССТОААСААСТАСОССАТОТОСТ састасаАСсАСОаСооСтТайсСАААСО сСстТавААТаСАТССОСТОСАТСАССА сАасасаасстааССтТТСТАСОаССААТ тавасССААдаваССООТТСАССАТСАС
ССООпОАСААСТоСААСААСАСССтТаИ т
АССТОСАЙАТаААСТОССТОСОЯСОСС вАааАСАССОССОаТОаТАСТАСТОТОС
САСААдАСОССсОаАааСтТОоСтТАСАТСТ тТотТАСТАСТТССАССТОТОСОООаССАС васСАСССТОССТОАСАСТОаТСАТСТ 12 | 111810-2у Легкий 56 САТАТТСАСАТОАСССАСТоССССТОоС ланцюг дасстатосасттстатовасСОАСАС
АТОАССАТСАССТОИТСАОСССТОоСС
АСТОСАТСТОСТОСТАССТОТОСТОСТ
АТсАВСАаАлАХаСсосСсваСААааСоСссс
ААССТаСтТаАТтСтТАСТСТаССТОСАСА ставостосоаоатасСсСсСтотТАВСАТТО тосвастотаОСстТотТОаСАССОАСТТТ
АСССТОАССАТСАОССТОССТоСАСТОаС авАапАтТасСассАССТАСТАСТОССАСЄ
ТОСТАСТАСВСАСАТСЯССАССТОСАСС тоааСсабАваСАССААСИтасАААТ
СААДА ланцюг сасстастоАдсасСстОаОпАСАСоС
СстТаАСАСТСАССТаСАСАСТСТОСТО
СААТССАССТСАСТАССТАТОСААТ свастасттоСаССАСастосСАсО сАдапааСсТасААТАСАТСИСААС
САТТААТАТТОаТОСТСасСОИТАТАТТ дсесахаставОСААААсаССаАТ
ТСАССАТСТОСАСААССТОСАССАС севтавАТСТОАААлсССсасссАатста
АсАдаСсСОАаОАСАСааССАССТАТТ тетТатТаССАСАТАТТАТААТОСТОСТ
АСТТАТОАСАТСТОСОСОСССАСИСА
СССтТаСТСАССОТСТСТТТА 14 | 201С15-хі Легкий 58 сАТаТттТатТаАТОАСССАСАСТОСАСЄ ланцюг сстосасатстОААсстатасаАа
ССАСАСТСАССАТСААЛСТОССАСИС
САатТаАвАССАТТТАТСЯСОТАТТО соСстТООТАТСАССАВААДАССАааС
САВССТОССААаСТОСТОАТСТАТ
САТАСАТССАСТСТОССАТСТОСО
СССССАТСОСОСТТСАААСасАатТ
СОАТАТаСОАСАСАСТТСАСТСТО
АССАТСАССССЯСОСТаСАСТатаАА вАТаСТасССАСТТАСТАСТОТСААС соСОсСТТАТТАТаСТОАТАСТТАТОС тТАТТОСТІТСОСОССОаСАСаСАССаА сстаатТастСААА | 201С015-2и Важкий 59 СсАасастасАдастааТасААТСТасс ланцюг совласаАстастаса,аосстааСос стототОАсАСсТатостаттосас
СсТоСООААТСВАССТаИтТОсСтТОоСтТА сеСстТАТОСОСТОССтТОаСОаАСАСО стостааСАлдасасСсТаСАСТАСА товОаСАССАТСААСАТОССОСОаСА сАаТатТАСТАСОССТоСтТаваСсСА дае САССАТСТОСАСАС
АСААСТОСААСААСАСССТИатАССТ
СсСАВАТаААСТОССТОСОСО,ССаА вОАСсАССОЯоСсОтТатАСТАСТОаСОаС сСаСтТАСТАСААСЯИСООаСТОСТА
СсОАТАТСТавСОСОсСССАСОСаСАСАСТ сетаАссататостост 16 | 201С015-2и Легкий САТАТССАСАТОАСССАССТОоСССо ланцюг тосАССсСТОТСоТОССТОТОТООСОС
САСАСАИТОАССАТСАССТИатсАС соСстТоСОАСТоСАТСТАССОССТО ставоСстастАТСАССАСААСаССТ вОСААдваСССССААлаСсТастаАТо
ТАСВАСАССАИСАСАСТОСОСТОС сесатасСсСстТСстТАСАТТСОТОСОСИС тотааСстотТаОСАССОАСТТТАСС
СстТаАССАТСТОСАСССТоСАСТОаС вАСОСАСасССсасССАССТАСТАТТОТ
СсАдссасааСтТАСТАСОСССОАСТО
СстТАСССААТСОСТТ ТСсССССОасАС
ССАССАДОаСтТаслАААТСААДА 17 | 346С6-хі Важкий 61 салатоватосАасаАастоСаасбоа ланцюг стоассСстастТАААдаССтТОаАСаАА
ТОССТОАСАСТСАССТОаСАСАСС
СстотТОабАТТСТОССТСАССТАСТ
ТАТаСААТОАТСОТОСОСТОСЯСС д;еастоСАассосАааваСтас
ААТаСАТСССААССАТТАСТА стастастТАТСАСАТАСТАСО севаастасасСОпАААсасССссАТ
ТСАССАТСТОСААДААССТОСАС
СсАСсСОватавАТСТОААААТСАСС
АВТОоСОАСААССаАааАСАСОИ
СССАССТАТТТСТОТаССАСАС савобАТАТОСТаСтТАСтТАСТаС
ТТАТТАТСТОССИатАСТАСТТТа дяста,атасваССАлааСАСос тТастосАСССТСТОСтТСА 18 | 34606-хі Легкий 62 сслассаТасСстаАСССАСАСА ланцюг ССАТСАССССЯТОТСотТОаСАсСтТОа таввпАСаСАСАСТСАССАТСАС тассАатТоСАатТСАсСАстТаТттт
АТААТААТААСААСТТАИаССТОаС
ТТТСАССАСААДАСССССОИССАСС
СТОССААОСТТСТОАТСТАТСТО
ССАТССАСТСОТССАТСТОСОС
ТОССАТСАССЯСТТСсАаСОаСАС тасАТСТОСОАСАСАСТТСАСТО
ТСАССАТСАСССЯОССОСтТОаСАСТО тТаАССАТИаСТаССАСТТАТТАСТ стотлаатасттатоАТаАТОСАТ
ВСтТОаАТАСТТТТОСТІ ТоОСОССОоО десадсталасТасТааТСААДА 19 | 34606-2и Важкий 63 сАдатасааСстастасААТСТО ланцюг сссесааАСТаСТаСАсСссСтТО соООАТСТоТаАСАСТОТСТТО теассесостоссасттотосста
ТОСТОСТАСОСТАТОАТСТОСО тасОбАСсАвассоСтаасСААСО воСстТОбААтТавАТоООаСАССАТ
СстТотТАССОСОССОСААТТАССТАС тАсСасстоставаССААДОСЯИС
СОСТТСАССАТСТОСАСАСАСА
АСТОСААСААСАСССТИатАССТ
СсСАВАТаААСТОССТОСОСЯС
САваАСсАССаССОаТатТАСТА татастАаАалсаСсвастАсас сССАаСсТоСОасСТТАСТАССТО
СССТАСТАСТТСОСАССТОТОСО соСсАаапаСАСССтТоаТаАСАС
ТатсСАТСТ | 34606-2и Легкий 64 САТАТТСАСАТСОАСССАССТОСС ланцюг сстосласстатосасттотат совоСОбАСААаТОаАССАТСАС статсадатостоСссСАстоСатТа
ТАТААСААСААСААССТааостО
СТАТСАССАСААДАСССОааСААО стТаССсСААаСстТастОаАТСТАССТ ваСсСстТоСАСАСТОСССТСОТООС стасоСтТСстТАСАТТСТОССССИСТ ставстотТаОсСАСССАСТТТАС
ССТОАССАТСАССТОССТОСАСТ сСсоаХапАТаССасССАССТАСТАТ тасстасасосеСстТаСпАССАСО
АсассОАТАССТТТОСТТТТСС содапСАССААСОИТасАААТСААА
Таблиця 4
Амінокислотні послідовності СОР. мАт по Кабату мАт | ланцюгюоє | 5ЕОІЮ МО | Амінокислотнапослідовність:/ | МОВАБ-003 |ї1ссов2 1777778 | стемА5 С: 6 | моОвВАБ-003 |їссов3 177779 | ООМ55УРУМУТЇГ/:/У:/ЗГ/://:С- С 8 | МОВАБ-009 | носова 0 66 0 | ПТРУМОАББУМОКЕНОЇдГ-/::ГЗ 9 | мМоОвВАБ-009 | носСовВз 067 | ббУрановрудГ/7/7/:/: З: ло | мМмовВАвБ-009 | їссОоВІ 01768 0 | БА55БУБУМН.ЇСЛС/С/:Г лі | мМмовВАБ-009 |їссов2 1777769 | оТ5КАЄС7/7/:Г77 22 | з3011-хі | ссоВ! 177780 | ОАБОБІЗБМІ8ЄЇГ -/:Г 28 | 33011-2и. | ЦїссоВ! 17786 | ОАБОБІЗБМІ8ЄЇГ -/:Г
Зі | л1ві'о-хі | несові 1777789 | мММАМ5 С/Г
За | 111віо-хі | носова 090 | БІБЄТОСІАРМАММАКАЇГЛГ/:Г о З8 | 111віб-2и | носова | 96 | БІЗТОСІАРМАММАКО.ЇГЛГ/:Г97 | 111ві'о-2и | їссоВві 177798 | ОАБОБІББМІЇГ/-/:/::::7777:У а | 11ві'о-ги, | їссов2г 1777799 | БАБА: С: СС:ГО бо | 346сб-хі | їссОВ8З 017118 | І1СОСОО0АОТЕАЇГ/7/://:/С/:(Зз (66 | 346б6-2и. | їсСОв8З3 | 124 | 1ООСОО0АОТАЇГ7/://:/С:С(
Таблиця 5
Послідовності нуклеїнової кислоти, що кодують СОК мАт по Кабату
СГ ТТБ 000 послдовнетнклвноя ни 0оЗ СОВІ1 (00 сова2 АСАСТатТадАсаасаТ (00 СсОовЗ (00 СОВІ1 (00 сСОов2
Біда ЧИ ііі ііі (00 СсОовЗ 009 СОВІ1
Б да ЧИ В о ііі 009 сова2 вААсттоАасИасо тля бе ле ет 009 СсОовЗ 009 СОВІ1 009 сСОов2 009 СсовЗ
СОВІ1 сСОов2 тапасСсаААдсас
СсОовЗ АТТАСОСасСсАТасАССстТо
СОВІ1 сСОов2
СсОовЗ таст
33011-2и ТОССОАСОСОАТТАСС
Сов | 33011-20 |. НС 144 | АТСАТСААСООСОйСОСАААСАССТАСТАСОСС сова тостТапОасСсСААсасОС 21 | 33011-20 | НС 145 | ВаСАТССАССАСИаСтТааТООАААСАасСОАСТАС сов ТАСТАСТАТОСЙСАТОаСАТСТОа 33011-2и САЧИСаТтссСсСАЙТтСААТТАаЙСАОСОаТаТстотос
Сов 33011-2и т аассСтТосСАСТСТааСстТоО сова 24 | 33011-20 | ІС 148 | САДАССААСТАСИСААССТоСАОСТСоСААСТАСО
Сов астттасс | 111810- ААСТАТаСААТОЛОИС хі Сов 26 | 111810- не ТОСАТТАСТАСТОСТОСТСТСаСАТТСТАСОСОА хі сова АСТОСИСААААСОС 111810- ААТОСТОаТОатТАСТТАТАТТТТСТАТТАТТТТОАСТТа хі Сов 111810- САПОССАСТСАСАДОСАТТАСТАСТТАСТТАТОС хі Сов 29 | 111810- ТСТаСАТССАСТСТОССАТСТ хі сова 111810- СААДАСОСТАТТАТОАТАТТОСТАСТАСТАСТ хі Сов 31 1 111810- ААСТАСаССАТОТОС 7 сові 32 | 111810- | НС 156 | ТССАТСАЙСАСАВОСаСССТОаССТТСТАСОССАА 2и сова ттапОасСсСАХОссОС 111810- ААСОаЙСООАпОСТоОСТАСАТСТТСТАСТАСТТСОАССТО 7 Сов 111810- САПИССТОССАСТОСАТСТОСТОСТАССТОИтТОоС 7 сові | 111810- ТСТаССТоСАСАСТОСССТОоС 7 сСОов2 111810- САПТССТАСТАСОАСАТСОССАССТОоСАСС 7 Сов 201с15- АССТАТОСААТОСЯС хі Сов 38 | 201С15- | НС 162 | АССАТТААТАТТИСТаСТСасСаТтАТАТТАСЯСОадОаСтТО хі сова СОИСААДДАСОС 201С15- ТАТТАТААТОСТОСТАСТТАТОАСАТС хі Сов 201С15- САПИССАСТаАпАССАТТТАТСОСОТАТТООСС хі Сов 41 | 201С15- САТАСАТССАСТСТОССАТСТ хі сова 201С15- СААДСаСОаСТТАТТАТаСТаАТАСТТАТаСТАТТОаСТ хі Сов 43 | 201С15- ТОСТАСОСТАТОСОС 7 сові 44 | 201Сс15- | НС 168 | АССАТСААСАТСОСЙСИаЙСАСАаТтОаТАСТАСОССТОСТа 2и сов2 ОаССААДОсСааС 201С15- ТАСТАСААСОЙСИССТОоСТАСОАТАТС 7 Сов 201С15- СсАсСаССсТоСалатосАТСТАССЯСОТастООсс 7 сові 47 | 201С15- САСАССАЙСАСАСТОСССТОС 7 сСОов2 201С15- САПЙСИСОССТАСТАСОССОАСТОСТАСОСААТСаИСТ и сов |СГО
СОВІ1 сСОов2 аваасСпААдсаас
СсОовЗ АСТАСТТТОаАСТТа
СОВІ1 сСОов2
СсОовЗ
СОВІ1 сова авааСсСАдасас
СсОовЗ АСТАСТТССОАССТтТа
СОВІ1 сСОов2
Баня ЕІ ПБП
СсОовЗ
Таблиця 6
Амінокислотні послідовності СОЄ мАт ІМСОТ мАт | ланцюгюєс | 5ЕОІЮ МО | Амінокислотнапослідовність: 6 | МОвВАБ-003 | їссОв8З3 | 18 | О0ОМ55УРУМУТЇГ/:/Г/:::Г 8 | МОВАБ-009 | нССоВа | 186 | ТРУМОАЄЇГ//:///:/: /:/:/2гЖ/:; 9 | МОВАБ-009 | нССОоВЗ | 187 | АВбоУроВаРроу 77/:/:ГС:ЗГи бо | 346сб-хі | 1ссСоВ3 0238 | ООСОО0АОТЕАЇГ/:/:/С:(з (66 | 346б6-2и | їссов3 | 244 | 1 ООСОО0АОТЕАЇГ/-/://:С:СГО
Таблиця 7
Послідовності нуклеїнової кислоти, що кодують СОК мАт ІМОТ ланцюг ЗЕО . . . .
МАТ ІО Послідовність нуклеїнової кислоти
Ке1Є МО (00 СОВІ1 (00 сСОов2 (00 СсОовЗ (00 СОВІ1 (00 сСОов2 ко)
ореж де рт юнює 003 СсОовЗ 009 СОВІ1 ср дет юю 009 сСОов2 тр бю (5 | ввсоооовоп осот 009 СсОовЗ 009 СОВІ1 009 сСОов2 009 СсОовЗ
СОВІ1 сСОов2
СсОовЗ АТТАТТАТТАСИЧСаСАТОаСАССТо
СОВІ1 сСОов2
СсОовЗ 7и СОВІ1 7и сСОов2 7 СсОовЗ СТАСТАСТАТОаСИАТтТасСАТСТИ 7и СОВІ1 7и сСОов2 7и СОВЗ (06; хі СОВІ1 хі сСОов2 хі СсОовЗ стта хі СОВІ1 хі сСОов2 хі СсОовЗ 7и СОВІ1 7и сСОов2 7 СсОовЗ АССТОа 7и СОВІ1 ра сов! 111810- САСТОСТАСТАСОАСАТСООСАССТССАСС 71 Сов 201С15- СОААТСОАССТСАСТАаСТАТОаСА хі Сов 201С15- АТТААТАТТИСТОСТСОаСОТА хі сова 201С15- СССАСАТАТТАТААТОСТОСТАСТТАТОАСАТС хі сов 201С15- САСАССАТТТАТСОСОТА хі Сов 201С15- САТАСАТСС хі сова 201С15- СААДСОСОаСТТАТТАТаСТОаАТАСТТАТОСТАТТаСТтТ хі сов 201С15- ПаААТСИАССТатостТосСтТАСасСтТ 7 сові 201С15- АТСААСАТСОССОССАСАОТО 7М сСОов2 201С15- аПСССастАСТАСААСООСИаСТОоСТАСОАТАТС 71 Сов 201С15- ПАаТоСАТСТАССОСИаТа 7М сові 201С15- САСАССАСС 7М сСОов2 201С15- САСИССОССТАСТАСИаССОАСТОСТАСОСААТСОСТ 71 Сов 346С6-хі СОАТТСТОССТСАСТАСТТАТаСА
Сов 346с6-хі АТТАСТАСТаСТОаСТАТСАСА сова 51 | 346С6-хі | НС 315 | ОССАСАССОССАТАТаСТОаСТАСТАСТОСТТАТТАТСТ сов СССатАСТАСТТТОАСТТОа 346С6-хі САСАСТаТТТАТААТААТААСААС
Сов 346С6-хі СстТаасСАТОСС сова 346С6-хі СстТАСИатоаттатаАТОАТаАТаСТОАТАСТТТТасСтТ сов 346С6- васттотосстатостТостТАСаст 7М сові 346С6- АТСТСТАССОЙСОСААТТАСС 7М сСОов2 57 | 346С6- не 321 | астТАааАдвасвастАСасСсСасСсСАа|стосСастТтТАСТАС 7и сов СТаССсСтТАСТАСТТСОАССТОа 346С6- САСТОСатТатАТААСААСААСААС 7М сові 346С6- стаасстос 7М сСОов2
Щ 346С6- ставав асСтТаСОАСОАСаАСасСсСаАТАССТТТОаСТ 71 Сов
Таблиця 8
Амінокислотні послідовності повнорозмірних ланцюгів мАт Ід
То ГОЮ 000олееююметєнююю 1 | МОВАБ- Важкий 1 ЕМО МЕЗО УМОРОНВБІ ВІ БСЗАБагтТЕЗИМаИ 5 003 ланцюг МУВОАРИаКагЕМУМАМІЗЗаБУТУУАрЗУКОаВЕАІВ
ВОМАКМТІ ЕГОМО5І АВРЕОТаУМЕСАВНОИаСОРАМ/БА
УМ аОатТРУТУЗБАЗТКОаРБЗМЕРІ АРОЗКОТЗОССТАА
СС МКОМЕРЕРУТУБУУМЗИАІ Та МНТЕРАМІ О55І
У5І 5БУМТУРББЗІ атОТМІСМУМНКРУОМТКМОККМЕР
КЗСОКТНТСРРОРАРЕЇ ЇЇ СсаРБЗМУРБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТ
РЕМТСУУМОУМЗ5НЕОРЕУКЕМУУУрамМЕМНМАКТКРА
ЕЕОУМЗТУВУМУБМІ ТМ НОМ МСКЕУКСКУЗМКАЇ.
РАРІЕКТІЗКАКИОРАВЕРОМУУТІ РРЗОВОБЇ ТКМОМ5І.
ТСГУКагЕМРБОІАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІО5О
СЕР У5КІ ТМОКЗАУМОСОСММЕЗСЗУМНЕАСНМНУТ
ОКБІ БІ 5Рвгак 2 | МОВАБ- Легкий РІОГТОБРБІБІ БАБМОаОВМТІТО5УББЗБОІЗЗММІ НУМО 003 ланцюг ОКРОКАРКРУЛМОаТОМІ АБИМРОВЕЗОВОБОТОМТ
ЕТІЗБІ ОРЕБІАТУУСОСМ55УРУМУТРаОСТКМЕЇ
КАТМААРБЗМРІЕРРЗОБОЇІ КЗаИТАБМУМСІ І ММЕМР
ВЕАКМОМ/КМОМАЇ О512М5ОЕЗМТЕООЗКОБЗТУБІ.
ЗОЗТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55РУТКОЕМ ваЕС
З | МОВАБ- Важкий з2г5 ОМОГ ООБОРЕЇ ЕКРОАЗУКІЗСКАЗОУЗЕТаМУ ТММ 009 ланцюг МУКОЗНОакКВІ ЕУЛО ІТРУИМИАЗОЗУМОКЕВИКАТІ Т
МОоК55ЗТАУМО І 5І ТЗЕОЗАУУЕСАВнассУранаво уУжмаватРУТУ5З5АЗТКаРОЗМЕРІ АРОЗКЗТЗИасТтТААЇ.
СС МКОМЕРЕРУТУБУУМЗИАІ Та МНТЕРАМІ О55І
У5І 5БУМТУРББЗІ атОТМІСМУМНКРУОМТКМОККМЕР
КЗСОКТНТСРРОРАРЕЇ ЇЇ саРБЗМУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗА
ТРЕМТСУМУМОУЗНЕОРЕУМКЕМУУУраМЕМНМАКТКР
ВЕЕОУМЗТУВУМУБМІ ТМ НОМ МСОКЕУКСКУЗМКА
ГРАРІЕКТІЗКАКИОРАВЕРОМУУТІ РРОВОЕЇ ТКМОУБ
ГТС УКкагМРЗОІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ 05 разгЕг кі тМокЗАМООСММЕ5СЗУМНЕАСНМ
НУТОКБІ І РОК
4 | МОВАБ- Легкий 326 ПІЕСТОЗРАІМ5АБРОЕКУТМТОЗАБЗОЗУЗУМНУУМО 009 ланцюг ОокБатЗРКАУЛУЮТОКІ АБСУРОВЕЗОаБОБВОМОУ
ЗІ ТІЗ5МЕАЕОВАТУУСООМ5КНРІТРаБОаТКМЕ
ІКАТМААРБМЕРІЕРРРБОБОЇ КатАБУМСПІ ММЕМР
ВЕАКМОМ/КМОМАЇ О512М5ОЕЗМТЕООБКОЗТУ5
І 5511 ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55РУТКВЕ
МАСЕС
| трастузумаб | Важкий 327 ЕМО МЕЗОССОЇ МОРСОБІ ВІ БСААБОЕЄМІКОТМІН ланцюг МУВОАРИаКагЕМУМАВІРТМаУтАУАрзуУКИаВЕ
ТІЗАОТ5КМТАМІ ОММБЗІ ВАЕОТАУУУСЗАМУСсСЯЮ
СЕМАМОУМУСОСТІ МТУ55АЗТКОаРОЗМУЕРІ АРК
ЗзІЗаСТААГасі МКЩОМЕРЕРУТУБМ МСА ТВСМУН
ТЕРАМІ О55О(51 51 55 УРБЗББІ ЕТО МІСМУМНК
РЗМТКМОККМЕРРКЗСОКТНТСОРРОРАРЕЇЇ ааРОМЕ
ГЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕУТСУУМОУМЗНЕО РЕМКЕММ/ У
МрамЕУНМАКТКРАЕЕОУМОЗТУВМУМУМІ ТМ НОМУ
ГМаКЕМКСКМУ5МКАЇ РАРІЕКТІЗКАКИОРАВЕРОМУ
ТГРРОВОЕТКМОМБІ ТОЇ УКОЕМРЗОІАМЕМ ЕМ
СОРЕММУКТТРРМУ ОЗравзЕгІ ЗК рквУМмО
11110111 фООМУЄ5С5УМНЕАІНМНУТОКБІБІЗРОК.ЇЛЛ/:/./С/С:- трастузумаб | Легкий 328 РІОМТО5РББІ БАБМАО ВМТ СВАБОВУМТАМАМ/ У ланцюг ОСООКРОКАРКІ ПУЗАБЗРЇ У5СаУРЗАЕЗОЗАБЗаИтТтоОг
ТІТІЗБ ОРЕОРАТУМСООНУТТРРТРИОСТКМВІК
АТМААРБМУРІРРРБЗОЕБЕОЇ К5атАБУМСГІ ММЕМРА
ЕАКМОМ/КМОМАГОБаМЗОЕЗМТЕООБКОЗТ
У5І 55ТІ ТІ БКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55Р
МТКЗЕМАСЕС
7 | 33011-хі Важкий 329 | ОБМЕЕЗОСВІ МТРОТтТРІ ТІ ТСТУБИЇІБІ ЗА ланцюг ІЗМУМАОАРОКаЇ ЕМІСИПМИСИаМТиМАБУАКИ
ВЕТІЗКТЗТТМОІ КІТ9ЄРТТЕОТАТУЕСАВНИСІЮ насамрУуУчамо! МУаРИТІ МТУ55АЗТК
СРОМЕРІ АРЗЗКЗТЗОИС
ТААГ СІ МКОМЕРЕРУТУБУУМЗИАІ Т5амМУНнтТЕ
РАМ О55Д0І 51 55 УРБЗББІ ИТОТМІСМУМ
НКРОМТКМОККУМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕТ С
СРОЗМУЕ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУМУМОУЗНЕО
РЕУКЕМУУУрамЕМНМАКТКРАЕЕОУМОТУ ВУ
УМ ТМ НОРМІ МЕКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІ
ЗКАКОИОРВЕРОМУТІ РРЗВОЄЇ ТКМОМУБІ ТС М
КагУРБОІАМЕМЕЗМИСОРЕММУКТТРРМІ ОСА
ЗЕРГУЗКІТМОКБАМОССММЕЗСЗММНЕАСНМН
ТОК І ЗРак 33011-хі Легкий 330 ЕМІЕМТОТРУІБУБААМОаОТМТІКСОАБОБІЗЗМІ. ланцюг ЗМ
МООКРОаОРРКІ МІ АЗТІ АБМРОВЕЗОЗНЗИ
ТЕРТІ ТІБОГ ЕСОРААТУУСОТМУаТ55ЗМУСЕА
ЕасатЕУУУКАТМААРБЗУРІЕРРБЗОЕОЇІ К5ИатАБ
МУСІ СММЕМРАЕАКМОУУКМОМА! О5аМЗОЕЗМТ
ЕООБКОБЗТУБІ 55ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТН
ОСІ 55РУТКЗЕМВСЕС 33011-2и Важкий 331 ЕМОЇ МЕЗОССОЇ МОРОИБІ ВІ БСААБИЇІБІ 55ОАЇІВ ланцюг МУВОАРСОКаИГЕМІСИМССИаМТУМАБУАКаИВеЕТІЗА
НМЯ5КМТІ М ОММ5І ВАЕОТАУУМСАВСІОНСИаМо
УУУУамМОІМУСОСТІ МТУ55АВЗТКОаРОЗМУЕРІ АРЗБЗКО твастААасі МКЩОМЕРЕРУТУБМ МСА ТЗаМУНТтТЕР
АМІГОББИЇ М5І 55УМ МР ЯТОГМІСМУМНКРЗМТ
КМОККУМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕГ І. СОаРБЗМУНБІ ЕРРК
РК
ОТ МІЗАТРЕУТСУММОУМЗНЕОРЕУКЕМУ МУрИаМЕМ
НМАКТКРАЕЕЄЕОУМЗТУВУУМІ ТМ НООУЛІ МОКЕМК
СКМ5МКАЇ РАРІЕКТІЗКАКСООРАЕРОММУТІ РРУОНОЕ
ІТКМОУБІ ТОЇ УКагУРЗВІАМЕМЕЗМСОРЕММУКТ
ТРРМ'ОБОО5БЕРІ У5КІ ТМОКЗЕРУМОСИаМУЕ5С5УМ
НЕАСНМНУТОКБІ ЗІ ЗРОК
| 33011-2и Легкий 332 РІОМТО5РББІ БАБМаО ВМТ СОАБОБІЗОМІ 5МУМО ланцюг ОКРОКАРКІ ПІМІ АЗТІ АБСОМРОНЕЗОЗОЗИТОЕТІ.
ТІББГОСЕВІАТУХСОТМУСТ55ЗМУСЕАБаваТткмМ
ЕІКАТМААРБЗМУРІРРРБОЕОЇ КатАЗММСП ММЕМР
ВЕАКМОМ/КМОМАЇ О512М5ОЕЗМТЕООЗКОБЗТУБІ.
ЗОТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55РУТКОЕМА
СЕС
11 | 111810-хі Важкий 333 | ОБМЕЕЗОСВІ МТРатРІ ТІ ТОТУБаИавбІ МММАМОМУМ ланцюг ВОАРИаКаї ЕУЛавзізТааі АЕМАМУАКСОИВЕТІЗАТОТ
ТМОІ КМТ ТТЕОТАТУєЄСЯВ МОСС ЗМІРУ Бр,
СТІ МТУ55АЗТКОаРБЗБМУЕРІ АРОЗКЗТЗИСТАА асСІ УК
ОМЕРЕРМУТУБММЗСИАЇ ТЗаМНТЕРАМІ 055051 51 55
МТМРБЗБЗІ атОТМміСМУМНнНКРУОМТКМОККМЕРКЗСОКТ
НТСРРОРАРЕЇЇ ааРБЗУРІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТС
МУМОУЗНЕОРЕУМКЕМУ УМВС М ЕМНМАКТКРАЕЕОУ
МЗТУАМУЗМІ ТМ НОМ МЕОКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІ
ЕКТІЗКАКЕОРАВЕРОМУТІ РРІАОСЕТКМОМБІ ТОЇ.
УКагуУРБОІАМЕМЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ ОБОСЗ
ЕРЕМБ5КІТМОКАУМООСММЕЗСЗММНЕАЇІ НМНУТО
КБІ 5І ЗРОК 12 | 111810-хі Легкий 334 | АРЕГТОТРОЗМЕААМОСТІТІКСОАБОВІЗВУ ланцюг Г ЗМУМООКРООРРКІ ІМЗАЗТІ АБОМЗЗАЕК аБОБаТЕМТІТІ5ОЇ ЕСАРААТУРСОБУМОІ аТ5ТгаватЕММУМКАТМААРЗМЕІЕРРЗОЕ
ОЇ КИ ТАБММСИ ММЕМРАЕАКМОМУКМОМ
АГ ОоБаМЗОЄЗМТЕОрКОБТУБІ ЗІ ТІ 5
КАОМЕКНКУММАСЕМТНОСІ 55РУТКЗЕМНИ
ЕС
13 | 111810-2и Важкий 335 ЕМОЇ МЕЗОСОЇ МОРОЗІ ВІ БСААБОЕБІ М ланцюг ММАМБУУМНОА РОКИ ЕУМИвІЗТИасі АЕМАМ
МАКавЕТІЗАОМЗКМТІ М'ОММБІВАЕОТАМУ
УСАвМаасавмеЕмУврімсоастІі МТГУБЗАЗТК
СРБЗМЕРГАРБЗКЗТЗИСТААГ аСІ МКОМЕРЕРМ
ТУБММБИАЇ ТЗОМНТЕРАМІ ОБОЇ БІ ЗМУ ТМ
РЗЗБЗІ СТОТМІСМУМНКРЗМТКМОККМЕРКВСОК
ТНТСОРРСОРАРЕГІ ССОРБЗМРІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТР
ЕМТСУМУММОМЗНЕОРЕМКЕМУ УМОСМЕМНМАКТ
КРАЕЕЄОУМЗТУАМММІ ТМ НОТІ МаКЕМКСО
КУЗМКАГРАРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОММТІ РРБ
АОЕСТКМОМБІ ТС МК ЕМРБОІАМЕЖМЕЗМОЮ
РЕММУКТТРРМІ ОБОСЗЕРІ ЗК ТМОКНУМО
ОСММЕЗСЗММНЕАЇ!І НМНУТОКБІ 5І РОК 14 | 111810-2и Легкий 336 РІОМТО5РББІ БАБМООВМТІТСОАБОБІЗЗМІ 5 ланцюг МУООКРОКАРКІ ПУЗАБТІ АБСМРЗАЕБОЗО
ЗатоР Тіз ОСЕРААТУМСОЗУМОІСТТЕаИ
СОаТКУБІКАТМААРБЗМУРІЕРРРЗОБОЇ КИ ТАБУМ
СПЛЯІМЕМРАЕАКМОМ/КМОМАГОБОМЗОЄЗМТЕО рЗКОБТУБІ 55ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНОС
І 55РУТКЗЕМНСЕС | 201С15-хі Важкий 337 | ОБМКЕЗОСАІ МТРИЕИтТРІ ТТОТУЗаИі земАМИМ ланцюг ЕВОАРОК,аї ЕМІСТІМОСАМУМАБУАКСИВЕТІЗАТЬ
ТТМОЇ КАРБІ ТАЕОТАТУРЄСАНУУМСОССЗУВІМСаРСИТ
ГМТУ5І АБТКОРБМУЕРІ АРІБКЗТЗИСТААГаТсі МКО
МЕРЕРМТУБУМЗОАГТЗИИМНТЕРАМІ ОЗЗОЇ БІ 55
ММТМРБЗББІ а ТОГМІСМММНКРЗУЬМТКМОККМЕРКЗСОСО
КТНТОРРСОРАРЕГ ЯОРБМУГРІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМ
ТСУММОМЗНЕОРЕУКЕМУ УМ РИМЕМНМАКТКРАЕЕ
ОМ УАУУБМІ ТМ НОБУ/Л. МаКЕУКСКУЗМКА Р
АРІЕКТІЗКАКИОРРЕРОММТІ РРОВОЕСТКМОМ5І.
ТС МКОЕМРБОІАМЕМЕЗМИОРЕММУКТТРРМІ О5 разЕгМЗКІТУрОК5АМООСМУЕЗСЗУМНЕАІНМН
УТОКБІ 5І РОК 16 | 201С15-хі Легкий 338 ОМУМТОТРАБАБЕРМаСсТМУТІКСОАБЕБІУВМІ АМУ ланцюг МООКРИОРРКІ ПМОТ5ТІ АБадРЗВНЕКОВОМИт
ЕР ТІЗЕМОСЕРААТУУСОСОМУАрБМИадвас
СТЕМУМУКАТМААРБЗМУРІРРРЗОБОЇ КБИатАБУМО
ГММЕМРАЕАКМОМКМОМАГОБИМЗОЕЗМТЕОЮ
ЗКОБТУБІ З5ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ.
ЗОЗРМТКЗЕМНСОЕС
17 | 201С015-2)и Важкий 339 | ОМОЇ МЕЗО СОЇ МОРОСІБІ ВІ БСБАБОЇОЇ ЗЗМУА ланцюг МОаммупоОАяРИакКаггЕМатІМааАУУМАБУМАКОаВ
ЕТІБАЮОМЗКМТІ МІОМІ ВАЕОТАУУУСАВУУМ савмрмуаостіУТу5БАЗТКаРЗМЕРІАРЗЗК5 тБасСтТАА асі МКОМЕРЕРУТУБУМЗСИАІ ТОМН
ТЕРАМІ ОББСИЇ БІ 55УМ ТУРІЯ ТОТМІСМУМН
КРОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕГІ СаРБ
МЕГЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕМТОСМУМОМЗНЕОРЕМКЕ
ММ УМрамМЕМНМАКТКРАЕЄОУМЗТУАУМЗМІСТМІ.
НОРМ МЕКЕМКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООР
ВЕРОММТІ РРОВОЄЇТКМОМБІ ТС МКаквгмРБОЇ
АМЕМЕБЗМООРЕММУКТТРРМІ ОБООЗЕРІ УК Т
МОКБАМООССММЕЗСЗММНЕАЇ НМНУТОКБІ БІ.
ЗРак 18 | 201С015-2)и Легкий 340 РІОМТО5РБТІ БАБМООВМТІТСОАБЕБІМ ВМ АМУ ланцюг УООКРОКАРКІІМОТЗТІ АБООМРЗН!;ЕЗОЗИБИ
ТЕР ТІББГОСОрААТУУСОСамМАрБМСИідБа
СОаТКУБІКАТМААРБЗМУРІЕРРРЗОБОЇ КИ ТАБУМ
СПЛЯІМЕМРАЕАКМОМ/КМОМАГОБОМЗОЄЗМТЕ
ОрБКОБТУБІ 55ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТН
ОСІ 55РУТКЗЕМАСЕС 19 | 346С6-хі Важкий ЗА ОБМЕЕЗИСНАІ МКРОЕБІ ТІ ТСТАБОЕ5І 55МАМІ ланцюг МУНОАРИБИЇ ЕУМІСТІЗТОаСТ УМАБУАКаНВЕТІ
ЗКТЗТТМОГКІТЗРТТЕОТАТУРСАНССУААБЗАУ
М РУМЕОГ М/СОСТІ МТМЗБАБТКОРБМУЕРІ АРБ
ЗКЗІЗастААГасі МКОУЕРЕРУТУБММЗОАТ
ЗаУНТтТЕРАМІ ОЗЗОЇ 5 5ЗММТУРЗБІ ИТОТУ
ІСМУМНКРОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОРАР
ЕП асаРЗМЕГЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТОМУМОМУ5
НЕОРЕМКЕМУ УМО МЕМНМАКТКРАЕЄОММЗТ
УВАМУЗМІ ТМ НОМ МСКЕМКСКМУЗМКАЇ РАР
ІЕКТІЗКАКООРАЕРОМУТІ РРОВОЕСТКМО М
ЗІ ТС МКОЕМРБОІАМЕМ ЕМО ОРЕММУКТТРР м'озравзгЕн Ук тоКквАМмОСамМмуУЕОСВБМ
МНЕАЇІНМНУТОКБІ БІ РОК
| 346С6-хі Легкий 342 | ААМІ ТОТРОРУИБААМИаСТМТІЗСОББЗОБММММ ланцюг ММ ГАМ РООКРЕОРРКССІМІ АТ АБОМРЗА
Езазаватовті тІБОМОСОррААТУУСІ СОЯ
СОООРАОТРАРаСОТЕУМУКАТМААРЗУРІЄЕ
РРЗОБОЇ КБаТАБУМСТІ ММЕМРАБЕАКМОМ
КМОМАГОБаМЗОЕЗМТЕОрЗКОЗТУБІ ЗТ
ГТ.ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНОІ 5ЗРУТК5
ЕМАСЕС
21 | 34606-2и Важкий 343 ЕМОЇ МЕЗОаСОЇ МОРОЗІ ВІ БСААБОЕ5І 55 ланцюг ХАМІМУАОАРОКИИГСЕУМІСТІЗ ТЕСТ УМАБУА кКавеЕтіЗАОМЗКМТІ М ОММБІ ААЕОТАМУУС
АВИСУАДАББЗАММІ РУУРОГМИОСТІ МТА
ЗІКОаРБЗМЕРІ АРБЗКЗТЗИСТААГ асі МКОМЕ
РЕРМТУБМУМЗСОАІ Т5ИМНТЕРАМІ ОБЗОЇ 5
І 55ММТМРЗББІ ТО МІСМУМНКРЗОМТКМОКК
МЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕЇЇ СаРЗМЕГЕРРК
РКОТІ МІЗАВТРЕМТСУММОМЗНЕОРЕМКЕМ
М УМрРаИамМЕМНМАКТКРАЕЄОУМЗТУАМУБМ
ГУМОРОМ МЕОКЕУКСКУЗМКАСРАРІЕКТ
ІЗКАКаИОРАЕРОММТІ РРОНОБЇ ТКМОМ5
ГТС УКагУРБОІАМЕМ ЕМО ОРЕММУК
ТТРРМ ОБразеЕРІ УЗКІ ТМОКЗАУМООС
МУМЕЗСЗМУММНЕАЇ НМНУТОКБІ 5І ЗРОК 22 | 34606-2и Легкий 344 РІОМТО5РББІ БАБМОЮВМТІТСОЗОБМ ланцюг УММММІ АМУМООКРОКМРКІ ПІМІ АЗТІ АБ ауМРЗАЕЗОаЗОБОТОВБТІ ТЗ ОСЕПАА тубі васрордотТРАгєсасткМвІКАТ
МААРБЗУРІЕРРРЗОБОЇ КИТАБУМСТІ ММ
ЕУРАВЕАКМОМКМОМАГОБаМЗОЕЗМТЕ
ОрБКОБТУБІ ЗОЗТІ ТІ ЗКАОМЕКНКММА
СЕМТНОІ 5БРУТКЗЕМАСЕС
Таблиця 9
Послідовності нуклеїнової кислоти, що кодують повнорозмірні ланцюга мАт Ід"
Тон Генео| 0 Послання 1 МОРАБ-003 | Важкий 345 сАасТоСААСстТастасааа,аСсастасаА ланцюг сататтатасСсАдсстаассватоостас ссстатостастосасАтотаасттсСАС сттсдассастатасататсттаватТа
АвАСАСасСсАССТаслАлААдАасаТтсттадат састтасСААтТаАТтТтАатТАстТаатаатАат
ТАТАССТАСТАТОСАСАСАСТОТаААИаСсО
ТАСАТТТаСААТАТСИСОВАСАСААСассА
АПБААСАСАТТаТтОоСтТасАААТасАСАас
СстадвАсССаААаАСсАССсаасатстТАТТТ татТаСААдаАСАтТасасвАСадлтосСасст сатсасттТАТасавСсСААдсааАСоссСа вТсАССЯтТСсТоСсТоАасстоСАССАДасас
СсосСсАТССсЧСатТСоТОоСсСсСсСстТаасСАСССТОСТ сССААСАСаСАССТОТОСОЕСІИЙСАСАИаСИасо сставастасстастСААааАСТАСТТОС
СббаддсссаталсаастатсатацААСТо дассассстаАсСАдаСсавасатасСАСАСС теоссавастТатсСтТАСАИатТоСтТоСАСаАСТ
СстТАСТОССТСАаСсАасатаатоасСсатас сстоСсАаасАдасттасасСАСССАСАССТАС
АТСТаСААСИаИТадАТСАСААаСсССАасСААС
АССААССЯтТаспАСААпАААаТТаАаСССАДА тТеТТатаАСААААСТСАСАСАТаСССАСС стаСсССАаСАССтТалдАСстТоСстТасаваааА сСатсАатст ССС СсСССССААДАДАСО
СААДССАСАСССТСАТОАТСТОСССИалос сСстаАдаатСсАСАТОССЯТООСТОС,СТасАС стадасСсСсАСаАддадссстадаатТСААс т сААСТООСТАССЯТтТассасасоатацАс стТаСАТААТасСсСААаАСААдассасстс сдасАаСАсСТАСААСАасСАСсаТатАссат стеаатодасатосСтТоАссатостасАс
САСсСаАСсТаасСстаААдтТасСсАдасхдатА
СААДСТтТаСАДастсТоСААСАААаТссст
СССАасСссСсССАТСИАСААААССАТСТО
СААДАДИССАдДАаааасАаасссоаАаААс
САСАССИТатТАСАСССТасСсССССАТОСС саадтадастТаАССААаААССАааТто дасстодостасстааТСААДАСаТстт
СстТАТСССАССаАсСАТСЯСССЯТОСАаИт смаададасСсААтТасаСАаасССсацАаААС
ААСТАСААДЧАССАСасстоссатаст саАстоСаАСсаастосСтТсСтТТстТтТАТ
АТТСАААССТоАССОЯТасАСАдадас дастааСсАдсСсАасаасвААсатстсто
АтастобатТОАтТаСАТалаастотасА
СААССАСТАСАСОЯЯСАСААадаИсстото сстатстоссаасАдАТаА 2 МОНАБ-003 | Легкий 346 САСАТОСАИаСтТаАССсСАадассСсСАДОа ланцюг саассталаСсассаас,атааатахд
САСаДаИтаАССАТСАССТОТАСТИаТто
АаСТСААСТАТААСТТСОСААСААСТТ вСАСТОСТАССАССАСААДасССАаИТт
ААааСТОСАААаССАТасАТСТАСО
ССАСАТССААССТОССТІСТОСТаИТтОа
ССААДаСАСАТТСАССООСТАССаатТАС
СсеатТАССОАСТАСАССТТСАССАТСАСЄ
СсАасСстоСАаССАСАасАСАТСИССА
ССТАСТАСТаССААСАСТасьлАсатАСТТ
АСССОТАСАТОТАСАССЯТТСОаИаССААО
СОАССАдасТаспАААТСАААССААСТОа таасСстТаСАССАТСТОТСТТСАТСТТОСС
СССАТСТОАТОАаСАСТТаАААТСТОС
ААСТОССТСТОТТатТатаСсСтТаТсСтТаААТ
ААСТТСТАТСССАСАСАСОаССАААСТАС датТабААдасТавАТААСИаСССтТоСААТ сеаатТААСТоССАааАсаАатаТСАСАС даСсАпОАСАаСААдааАСАаСАССТАСА соСстоАаСАаСАСССтТаАСаСстТаАасСА
ААаСАСАСТАССОАСАААСАСАААСТСТА сеасСстТасСОААатСАСССАТСАССОССТ вАССТоИСССОТСАСААДАСАИСТТСААС дасаадОАатТаттТАА
З | МОНАБ-009 | Важкий 347 СсАБОаТАСААСТОаСАсаСсАатотавасст ланцюг сАаастасАасАласстааСасСттСАата
ААВАТАТСОСТОСААЛСОССТТСТОСТТАСТ
САТТСАСТССТАСАССАТОААСТОСИТ
СААДССАСАааССАтТасАААаАасСсСтТТад стТабАТТОСАСТТАТТАСТОСТТАСААТО сТастстТАаСТАСААССАСААСТТСАС вООСААваССАСАТТААСТОТАСАСАА
СТСАТССАССАСАСССТАСАТОСАССТ
ССТСАаИтСстТаАСАТСТОААСАСТСТОаС
АатТстТАТТСсТатТаСААлссаааааттТА соАсаавАасааоетттаАдсСтТАСТасОИ вбАТССССОСАССССОаТСАССЯаТтСТоС
ТСАВССТОСАССААСОаСССАТСССЯТО тесосстааСАСССТОСТОСААДСАСС достотавасаСАсАдсосасоставоа стасстаайТСААСаАСТАСТТССССИА досастадссататостТасААСТСАСОИ сесоСстТаАсСсАссвасатасСАСАССТТ сосвеСстТаТСсСтТАСАСТОСТоАасСАСТО тТАСТОССТоАССсАССССТОСТОАССсТаС сСстоСАааСАаСсттавасСАСССАСАССТА
САТСТаСААССТОААТСАСААСИСССАасСА
АСАССААдСИаТаСАСААаААдАаттаАаСос
АААТСТТИатаАСААААСТСАСАСАТИСССА ссатТаСсССАаСАССТОАдАСТОСТОСОИСОИ
АССатсАаТсСТТоСТСТТоСССССААААСС
СААССАСАСССТСАТИАТСТОССООАСОС стаАваТСАСАТОСОЯТОСТОСТОСАСата
АВССАССААСАСССТаАСИТСААСТТСААС театасатеасАассасотааАсОаТасСАТААТ вССААСАСААдАл,асоа,асСс,асаАхасАаСАСтТА
СААСАССАССОЯТАСССТОТОСТоА,СаТтостТ
СсАССОСТОоСТаСАССАССАСТОВСТОААТОС
СААСОСАСТАСААИатаСААааИТСТоСААСААА всССтТоССАВСССССАТССАСААААССАТСТ
ССАААдаССААдАсСааСАаССССпАСААССАС
АдастТаТАСАСССТаСССССАТОССОСОСАТО
АдаСТОАССААаААССАваТтсАаССстаАСсСТ
ВоСстТОСТСАААвасСТТСтТАТСССАССОСАСА тсессстасАдатасОАвАаСААтТасасСАс
СсСапАшААСААСТАСААСАССАСаССстТоС сестаставАСТоСОАсаастостстТтостТ
СТАСАВСААДОаСтТоАСсСсатаспАСААаАсаСАС ставСсАааСАаасавААСаТсСТсТСАТОаСТо
СсетТаАТаСАТОАХСОСТОТаСАСААССАСТА
СсАСОСАСААСЬСССТОТОССТОТоТоССОоОа
САДАТОА
4 | МОНАБ-009 | Легкий 348 САСАТССАССТСАСТСАСТСТОСАССААТС ланцюг АТатТотТаСАТСТОСАСОВОАСААасатТСАС
СсАТОАССТаСАСТассАасСТСААаТатАА
СТТАСАТОСАСТСТАССАССАСААСТСА
СОаСАССТОССССААААСАТОСАТТ ТАТА
САСАТССАААСТОССТІСТаСАСТоССАС стсасттсадстаасАастасеТстТасАААС
ТСТТАСТСОТСТСАСААТСАССАССОТОСАС
СсСтТаААСАТОАТаСААСТТАТТАСТОССАСЄ
САдатапАСТААаСАСССтТоТСАСаттооо
АтТоСаООпАССААдааТаспсАААТСАААСОАА статаасСстТаСАССАТСТатсСТТсСАТСТТОС
СсОССАТСТОАТаАДОаСАатТТаАААТСТасАА стасстотаттататТасСсСтТасСтТОААТААСТТ
СТАТСССАСАСАСасССАААатТАСАаТтаасаАА сатапАТААСаСССтТоСААТССОаТААСТО
СсСАасаАаАсТатСАСАсАаСАааАСАаСА
АВОАСАВСАССТАСАИССТоАаСАаСАСС
СстТаАСОСТОАаСАААаСАСАСТАСИАСААА
САСАААСТотТАСсасстассААаТСАСССАТС дласессталастоаСССатСАСАААСАОаСТ
ТСсААСАССЮОССОСАСАСТаИтТАА | 33011-хі Важкий 349 слатосатасхасаатосооосатсасСстТ ланцюг сетТсАсСасСстааОАСАССССТОАСАСТСА
ССТаСАСССТОТСТОСААТСТОССТСАСТА всОАТОСААТААССТОСОСТоСаССАСасСто
САааапААдаасвасСТоОААТАСАТССОССААТСАТ
ТААТаСтТасСтТасСтТААСАСАТАСТАССЯССДОС тавасСОАААдаасССОпАТТСАССАТСТОСАДАА
ССТоОАССАССССТасвАТСТОААААТСАССАС
ТОСОАСААССаАдапАСАСаасССАССТАТТТО татаССАСАСОСАТТСААСАТОСТОатТастА
АТАСТОАТТАТТАТТАТТАСОЯСАТасСАССТОТ савасеаСССАсасСсАссСстааТсСАСТОТСТСТТо
АВСАТССАССААДССОССССАТССОТСоТТоСОС стааСАСССТОСТОСААСАаСАССТОТасО сеСсАсАаассесоставсестасстаатТсСАА вОАСТАСТТССССОААССсоетТоАсаатато стТабААСТоАСОСсаСсСсСстаАССсАсосваСсат
ССАСАССТІОССООИСТатоСтТАСАСТОСТСА вОАСТСТАСТОССТоАССАСССОТааТаАССО тасоСстТоСАаСАаСсттаваСАСССАСАССТА
САТСТаСААССТОААТСАСААДаСССАаСААС
АССАДОССТОСАСААСАААСТТаАаСССАААТ
СстТатаАСААДААСТСАСАСАТаСССАССИТО
СсССАаСАССТОААСТОСТОСОСОСОАССИТо
АСТСТТОСТСТТоСССССААААСССААСИАС
АСССТСАТаАТСТОССООАСоССТаАСИТо
АсАТОСОаТОСТОСТОСАССТОАОИССА
СОААБАСССтТОдОасСтТСААСТТСААСТОа стасставАассасатавАаатТасСАТА
АТОССААСАСАдАаассасававАасаАс
САСТАСААСАССАСОЯТАССОТаТасТто дМдасатостТсАсСсатоСстасСАССАааА стТаасСстТОААТОССААССОСАСТАСААС тТаСААСатСстТоСААСАААасСсСсСтТоССА
ССССССАТССАСААААССАТСТОСААА вСсСААдАдаааСАаСссСсСаАСААССАСА сОатТатТАСАСССТаСССССАТОССОЯСО
АтТаАаСТаАССААаААССАаИаТтСАасс таАсстасстастТСАААаасСТТсСтТАТОС
СсАаСсаАСАТСОЯСССОСТОСАСТасОАсАС
СААТОСОИССАаССОапАсСААСААСТАСАА вАССАССОССТОССОСТОСтТаОАСТОСОА сеасСстосСтТсСТсСТТАТАТТСАААССТО
АдосатавАСААаАдаСАсатаасСАсСА савопААсатстТТсТСАТаСтТоСатОАТ
ССАТОАДООСТСТаСАСААССАСТАСАС вСАСААСАсаСсСсТотТоССстТаТатстоссоа
САДАТОА
33011-хі Легкий 350 СААСТИаттаАТИАСССАСАСТОСАТОС ланцюг тосстатотасадастатавОАСАСАСА
СТСАССАТСААСТТОССАСИаССАсСТСАС
АасСАТТАСТАСТОТОТТатТоСстТастАТО
АВСАСАААССАсСааСАаССсТоССАдас
ТОСТОАТСТАТСТССАТССАСТСОТОСС дятставастоССАТсаССсваттсАаСос
СсАатАаАтТотТаваАСАаАСТТСАСТСТО
АССАТСАССОСАССТОСАСТаТаАСаАТ ссСтТасСссСАСТТАСТАСТОТСАААССААТТ
АТОаСТАСТАСТАСТАСТААТТАТОСТТТТ ссттосаСсавбАасасАсСссАаатасто
СТСААДАССААСТОТОаСТаСАССАТСТО
ТСТТСАТСТТОССассАТСТОАТОАаСА
СТТОАААТСТасААСтТасстотаттата тасстасСтОААТААСТТСТАТСССАСАС
АваССААДАСТАСсАастТасААлааТацпАТА
АсС,СССТОСААТоОаСТААСТОССАСО даАХдататСАСАаАаСАавАСАаСААас
АСАБСАССТАСАСССТСАССАССАСОС таАСаСтТОАаСАААаСАСАСТАСОАСА
ААСАСАААСТСтТАСОаСсСстасапААаТСАС
СсСАТСАСССОСССТОАЛССсТоаоССОаТСАС
АААдСАдаСТТСААСАассаасАаАаТа Та 7 | 33011-2и Важкий 351 СААСТССААСТОСТОСААЛАССсЯавася; ланцюг дасАСсТОСТОСАССсСОооеСаСАТОСС тосвеастТатсАТОТаСтТасСАТСООСАА тоесстотоСстТоСаАСОСССАТТАОСТО саТСАСАСАСассссСавАААаааасСтТ сОАаТАСАТоаатАТСАТСААССЯСССОЯ
СООААДАСАССТАСТАССЯССТОСТОСО
СсСААдсСаассасСТТСАССАТСТСССООЯ
САТААТТССААСААСАСТСТОаТАСТТО
САААТаААСТОССТОАСсаасСаАасаА
СсАССООССОСтТОаТАСТАСТОСОСООСОСО вСАТСоСАаСАСсОаТастТапАААСАСаС
САСТАСТАСТАСТАТОСОСАТОаСАТСТО тессасСАсавААСстТотта7тТОАССат стоатсАаСАТССАССААДССОСОС
АтсссетоттосоостасСАСССТО
СтТоСААДСАЗОаСсАССТОТОаИОсСаасСАС длассаасостасвастасСсСстТаатсСАА
СОАСТАСТТССССаАдАССсаатаАс сатататапААСтТоАа,ваСасСсстТ вАСсСсАЛаСсаасСсаТтасСАСАССТТоСо вастатсСстТАСАаТССТСАСаАСТо тТАСТоССтТСАдаСсАССЯТааТтаАСс стассстоСсАадаСАдаставасСАСс
САСАССТАСАТСТаСААСИатТаААТС
АСААДаСССАаСААСАССАДОСаИтас
АСААДСААДАСТТаласссАААТСТТОа
ТОАСАДААСТСАСАСАТаСССАСССИ тасСсСсСАасСАССТаААСТОСТОСО,ИаС вАСсСатСсАатст стос
ААДААСССААДИаСАСАСССТСАТОаАТО тосбсаапАССССТаАСпатСАСАТОС стастааТавАСатадаССАСОАА
САСССТаАпаТСсААаИТТСААСТаат дсатапвдс,авасатапАаатасСАТА
АТаССААСАСААдАДИ,аССаИасСсаааАИа с
А,ВСАСТАСААСАааСАСсатАсСсатат сватсдасСсаТсСсТАССатссСстТасСАС
СсАавАСстТааЙСсТААтТааСАдацАатТ
АСААДИТаСААпатСстТоСААСААдАас
СсСТоССАаСССССАТСОАСААДААСС
АТСТОСААДАДаССААДАаСОССИСАаСОССо
САСААССАСАСИаТатАСАСоСсТасс
СССАТСССООаСПАТтТаАдОаСТаАССАда
ААСсССсАСИОСТоАасстаАсСсТасстТоа
ТСАААСаИТстТСстТАТСССАаСО,АСАТС сссатасдатаавпАапАаСААтТацОас
АПВЙССОВПАСААСААСТАСААЧАССАСаИ сстоссастаставАСТоСаАСаасСтТо
СТТОТТСТТАТАТТСАААОаСТСАССаТта
САСАдадаСАадчатаасСсАасСАсацаА
АСаТтТсСТтСсТСАТаСТоСатаАТаСАТ пАпастТстТаСАСААССАСТАСАСасСА пвАдаСАХассттосТатстосоцвась
АААТОА
33011-2и Легкий 352 САСАТТСАСАТОАСССАаЙТССССАА ланцюг астсастатосасстосатавосСа
АСсССасСаТатаАССАТСАСОЯТасСссСАааИ
СсаТтСсССАСТСААТТАС,аСАс,СсаИатОас
ТСТоСТааТАССААСАСПСАдАаССОося
СООААдДаСАСССАдастТастаАТСТ
АСТТааССТоСАСТСОТОСССТоОоса вАаТассТСАсааТтсТСасвАТС вапАТСТааТтТАСТОаАТТТСАСССТо
АССАТСТСОСАЛИ,аССТТсАа,атТасСсадОас
АСАТСОСТАСТТАСТАТТОТСАААСС
ААСТАСИСААССТоСАасСТоСААСТ дсассст"тта,асстссватаСацаА
ССААСаТСаддАТСАААСОААСТОИТ васСстТаСАССАТСТаТтСТТтСсАТСТТО
СсСасССАТСТОАТаАДаСАСаТТаАААТ стапйАдАстТассттатататасст
ОСТОААТААСТТСТАТСССАСАСсАа
СССААДАаИТАСАС,СТапААдаатТасАТА
АСаСССТоСААТСОСИаТААСТоССо дапАпАатТатСАСАаАаСАсСсАСА ді
ССААдаСАСАССАССТАСАИССТСА вСсАаСАСССТаАСаСстТаАасСАААС
САСАСТАСОАСАААСАСАААСТСТА сеаСсСстТасСОААаИтСАСССАТСАСОС
СсСстТОАаСсТоаСССОТСАСАДАСАС
СстТТсСААСАсСсасАадаТаттад 111810-хі Важкий 353 сяаатосатасасоАХстосававоа ланцюг тсасстастосАСсаСсСстааОАСАС
СССТОАСАСТСАССТОаСАСАСТОСТ
СстТаапАТТСТОССТСААТААСТАТО
СсААТОлССТОСОСТоСаССАсСаТст
СсСАсавпААлсасаСставААТасАТ
СсООАТССАТТАСТАСТОСТОСТСТ
СОСАТТСТАСОССААСТаСОаСАА
ААдааСССпАТТСАССАТСТОСАСА
АсСстТовАССАСОСОСТацвавАТСТОАА
ААТОАССАИТСТаАСААССОАСО
АСсСАСОССССАССТАТТТСТОТОСС
АВАААТОСТОаТастАСТТАТАТ
ТТТСТАТТАТТТТОАСТТОТасО вССААСаСАСоСстоатсАСТатТ
СТСТТСАВСАТССАССААЛСССОС
СсСАТССОСТСоТТоСсоССстТООсСАС
ССТоОСТоСААСАаСАССТоТОС савеаСАСсАХаСсосеоостТавасСта сСстТаСТСААасСАСТАСТТОСОС вААСССОСТОАСОСССТаИтоСтТасА
АстТоАааасассСстТАСсСАаСас сетТасСАСАССТІОСССОСОСТОаТтОоС
ТАСАСТОСТоАСаАСТСТАСТОС
СстсАаСсАаасатастаАссатас (9:0); тоСсАаасАдаставпОСАСССАСА
ССТАСАТСТОСААСОТаААТСАСА
АВСССАВСААСАССААДСаТтасаАс
ААПААДАСТТОАДаСССАААТСТТО
ТаАСААДААСТСАСАСАТИСССАС сеатТасссСАаСАССТОААСТОСТ свссовАСсСсаТСАатТоТТосто
ТТОСССССААААСССААССАСАС
ССТСАТОАТСТоССОасСАССССТ вАССТСАСАТОССОТОСТОСТО вАССТОАОаССАСОСААСАСССТ
САССТСААСТТСААСтТОастТАС стасвассесстасАсатасСА
ТААТаССААСАСААДАСССаИасСс совдасдОаСАСТАСААСАаСАС стТАсСсСсТатасТосАсСа7тост
СсАССОТОСТаСАССАСаАСТОаС
СстТаААтТаССААдссАСТАСААаИт
ССААВИТСТоСААСАААаСССТ
СССАВСССССАТСВАСААААСС
АТСТОСАААДаССААдАаааСАас
СССОАБААССАСАаатаТАСАС сСстТаСсССССАТСССОЯОСАТОАО
СтТаАССААСААССАСааТтСАасстТ вАССТОССТОСТСАААСаТсттотТ
АТоССАССОАСАТССЬСССТОаСАС таваАвАаСААтТавсасАассо
САСААСААСТАСААСАССАСС сстосса;теаСстТасАСТоССаАС
СОеСТОСТТСТТСТТАТАТТСАА
АаСсТсАССаТаСАСААДСаАСС дастааСсАХдаСАааасааААСаТ
СТСТСсАТОСТОСОТаАТОСА таАдваСстТотТасСАСААССАСТА
САСОСАСААЛСАСССТСТОоССТ стТоТоССпОСАААТаА | 111810-хі Легкий 354 ССАТТСПААТТОАСССАСАСТ ланцюг СсСАТСОСТОСОТОСАСасСАаст стасаАдООаСАСААТСАССАТС
АддатасСсАдасаССАаТСАсАас
АТТАСТАСТТАСТТАТОСТаИастА
ТСАССАААДАССАСТЯЯСАСССТ
СССААаСТоСТОАТСТАТТСТОС
АТССАСТСТОССАТСТОСОСТСТ
СсАТСЯСОСТТСАААаСаСсАс,стТасцА тотТавОАСАСАСТАСАСТСТСАСС
АтТсАдаСсаАСсСТаСАСТатасССаА тТастасССАСТТАСТТСТИаТСААДАС
СТАТТАТОАТАТТасТтАСТАСТАСТ тпсевесавАадсасАсСссАсаТаатТ
СОТСААДАСОСААСТатТааСсТасАСС
АТСТааТСсТТСсАТСТТСССОССАТСТ
САТОАССАСТТОАААТСТИасСААСТО сстотаттататТасСсСтТасСтТОААТАА
СТТСТАТСССАВАСАСОаССАААСтТА
СсАдатапАдасТапАТААСаССсстТо
СААТСОССОТААСТОССАСИаАладата
ТСАСАСАаССАапАСАаСААаСАСА
ССАССТАСАЕССТоАОСАССАСОСС таАСаСстТОАаСААдАдаСАСАСТАСО
АСАААСАСАААИТСТАСасстТасо
ААатСАСССАТСАССЯССТОАССТО
ССССОТСАСАААСАССТ ТСААСАС ссдадататтаА 11 | 111810-2и Важкий 355 вААСТОСАССТОСИСТаСААТСТОСС ланцюг сеаесссАстастасаХаоставаСавА тототТОАсАСТОТСоТОСТаСсСОеСстТ соаастстоССтТОААСААСТАСОС
СсАТОТОСТОСИаТаСОАСАСОаСССС тааСААдАдваСсСстТапААтТасАТтова
СТоСАТСАССАСАССОССОСОоСТОаС
СТТСТАСИССААТТаСОЯССААСИО сСОаТТСсАССАТСАСССОИСАСАА
СТОСААВААСАСССТаИтТАССТОСАСЄ
АтТаААСсСТОССТОСОСОССОоАсОаАС
АдосассатаТАСТАСТатТассСАСАА
АдоссвасрсавАвасСтТоСтТАСАТСТТСТА
СстТАСТТоОСАССТОТОСОеССАСОС
САСССТоСТОАСАИТОаТСАТСТОаСА
ТОСАССААДСОССССАТСОССОСТСТТОС соСстТОаСАСССТОСТОСААСАССАС стотасооОСАСАССОСОВоССтОоса стасстаайТСААааАСТАСТТОССОС вААССССОСТОАСОСОСТатоатТасСААС тсАсаСаСсоСстаАССсАасвоСата
САСАССТТОССООСтТОаТОСТАСАСТ
ССТСАаОАСТСТАСТОССТСАаС дласатастодосатасСссСтосСА вСАаСсТапаСАСССАСАССТА
САТСТОСААСОТОААТСАСАЛОС
ССАпССААСАССАдааЙТаапАСАА
СААДАСТТОЛОаСССАААТСТТаТтОа
АСААДААСТСАСАСАТаСССАССО тТаСССАаСАССТОААСТОСТОаСС савАсСатсАатсТсстстос
ССССААДАСССААдапАСАСССтТо
АтТаАТСТОССООЧААССССсТаАсИтТо
АСсАТОСОЯТОСТОИСТапАСатаАа
ССАСПАдАпАСССТаАааТСААаТтТ
ТсААСстТаатаса,атасАасаасСата
САСатасАТААТаССААСАСАдАОа ссасапОпАпапАаСАаСТАСААСАС
СсАСОСтТАсСсСОЯтТатаатСА,СсаТтсст
СсАССОИТОСТаСАССАСаАСТааТстТ
СААТа,ЧСАДапСАаТАСААСТасСАА
СатСстТоСААСААдАДасСссСстоССАсас
ССССАТСОАСААААССАТСТОСАА
А,ВССААдАдвааСАаССССаАцСААс
САСАЧИаТаТтАСАСССТассСсСсСсСАТ осо аАТаАдаСТаАССААСААС
СсАаЧватТсАдассталсста7асстаато
АААСОаСТТСТАТСССА,СОАСАТС ассатасдатапйдпАпАдасСААТИаС псСАаССОапАСпСААСААСТАСАДИА ссАсасстоссатасСставАСТОоС
САСООСТОСТТСТТСТТАТАТТСАА
А,СТСАССаТапйАСАДадаСАсаИТт васАдаСсАапапААСаТтсТ СТАТИ
СстТоСОаТаАТаСАТОАЗСастСтТасАСс
ААССАСТАСАСаСАПААИаАдасСстотТ ост СсТоССааасАААТИаА 12 | 111810-2и Легкий 356 САТАТТСАСАТОАСССАаТтосССсстТ ланцюг ссласстатсастстатавасаА
САВАСТОАССАТСАССТаТСАа,асСс
ТоССАаТССАТСТОСТОСТАССТИаТо стТаатАТСАаСАаАдАаСССаасСААа аСССССАДаСТаСТаАТСТАСТОСТОаС
СстТоСАСАСТОСССТОСООССсОСТасСос
ТСстТАвАТТСТОСЯССТСТааСТоТОа
ССАССОАСТТТАСССТОАССАТСАС стосстоСАдатТасСсадапАТаССасСо
АССТАСТАСТаССАаТТСоСТАСТАСИА
САТСС,САССТОСАССТТСОИаСаавА
СаСАССААДОСТОСАДАТСАДАСИадА ста7атаасСстТаСАССАТСТаТСТТСАТС т еССасССАТСТаАТтаАдаСАаТттТаА
ААТСОТасаААСТОССТСОТОТТООТОаТтаС
СТастадАТААСТТСТАТСССАСАСА
СаССАДАСТАСсАатТаайАдАваТасАТ
ААСаСССТоСААТСОаСатААСТОССО давАпАдатТатСсАСАпАаСАаспсАСАс
САДИСАСАаСАССТАСАИаССТСАСаС
А,ВСАСССТаАСасСстаАаСАААаСАСА
СТАСОСАСААДАСАСАААаИтТсСтТАСасст аСсСаААаТСАСССАТСАОСвасСсСсТаАа
СсТСасСССОаТСАСААДАпСАасСТТСААС дасааАдадататтад ланцюг тсасстастосАСсаСсСстааОАСАС
СССТОАСАСТСАССТОаСАСАСТОСТ стапвААТССАССТСАСТАОСтТАТО
СсААТОСОСТОСТТоСаССАсОасСтТо
САапапААдаапаСтТасААТАСАТСС
СААССАТТААТАТТОСТОСТОСОССИТ
АТАТТАСЯСОАДССтТаСОаСАААдАСО
ССОАТТСАССАТСТОСАСААССТОС
АССсАССССТапАТСТОАААаСаСССА сТоТаАСАаССсАааАСАСаасССАС
СТАТТТСТатассСАСАТАТТАТААТИаС теаатТАаТТАТОАСАТСТОСОЯССССАС вСсАсоСстТааТсАССИТСТСТТТАССАТ
ССАССААДССаСССАТССССТоТТоСоС стаасСАСССТОСТоСААСАССАССТ ставасОСАсСАасСссаосстасастТ воСстТООТСААОСАСТАСТТССССОА досастадсосатТатоатОаОААСТСА сасаооСстТаАСсСАааСссаСсатТасСАС
АосттосСвастТаТоСтТАСАСТОСТ
СсАаСАСТСТАСТОССТоАЛаСАССИаТ севтоАдссатассСстоСАаСАссСТтТ вОааСАСССАСАССТАСАТСТОСАА
СсаТаААТСАСААаСССАСаСААСАСС
АдаатаспАСААаАААаИтТаАаСССА
ААТСТТИаТтТОАСААДААСТСАСАСАТОС
СсСАССсСОСТтассСсАаСАССТОААСТОС тесасавАСсСатсАатсТостТесТт
ССССССААДААСССААДаСАСАСССТо
АТОАТСТоССОСАССССТаАСОаТСА
САТОССТОСТОСТОСАССТОАДОССА
СОААВАСССтТОАСОСТСААСТТСААСТ севтасстаслссесатавАаатТасСА
ТААТаССААСАСААДАДСССОСОааАС
САССАСТАСААСАаСАСсатАссатат свтодаСсатоСсТСАсСсаИтостТасСАСС дМдасАСсТааСТОААТааСААацвАатТА
СААаТасСААааТСсТоСААСАААасс
СсТоССАаСССССАТССАСАДААССАТ
СТОСАААДаССАААсСааСАаСсССаА
СААССАСАСИаИтТатАСАСССтТасСоссс
СсАТСССОСООАТаАОаСТОАССААСАА
СсСАсСатсАасстаАсстасстоасто
АААСаСТТСсСТАТСССАССОСАСАТСС ссатасАадстосОАСАССААтТавОас даСсСОабпАшААСААСТАСААСАССАС сестоссстасСставАСТоСОАСав
СТОСТТСТТСТТАТАТТСАААастоСА
СсСатТаОАСААСАааСАсатааСАас дасапААСаТсСТсТСАТОСТОоСИаТ
САТОСАТОАЛДООСТСТаСАСААССАС
ТАСАСОЯСАСААСАСССТоТоССтТат
СстоСоСООСАААТОА 14 | 201С15-хі Легкий 358 САТИаТТаТОАТОАСССАСАСТОСАСЄ ланцюг сстоСаСаТСстТОААсСстТатаааАс
ССАСАСТСАССАТСААИСТаССАСО
ССАСТОаАаАаСАТТТАТСИССТАТТ сеаСсСстТООТАТСАССАСААДАССАСО всСАаССТоССААдасСтТоСтТОАТ
СТАТОАТАСАТССАСТСОТОССА тотасоеССССАТСОССаатТтсСА
АдаасАдатТавАТАТаСОАСАСА
СТТСАСТСТСАССАТСАССОСС стаСсА9атТатаААаАтТастТассСА
СТТАСТАСТОТСААаСОССОаИТТАТ
ТАТОСТОАТАСТТАТаСТАТТОС тптосвасовАасавАССОСАсата стТаОТСАААСОСААСстТатааста
САССАТСТОТСТТСАТСТТОССО
ССАТСТОАТОАССАСТТОАААТС теавААСТОССТСОТОТТОатТаТаСо тТастоААТААСТТСТАТСССАСАС
АвОаССАААСТАСсАастТасАлсИ та
САТААДСЯСССТОСААТСИССТАА
СстоССАваАаАсТатСАСАСАаС даБАСАаСАдаСАСАаСАССТАС дасСсТСАаСАаСАСССтТаАСаст
САССАААДаСАСАСТАСОСАСАААС
АСАААДОИТСстТАСаСсСтасаААатТо
АСсССАТСАССОСССТОАаСаСсТоаСС
СОТСАСААДАСАССТ ТСААСАССИС вАСАСТОИТТад | 201С015-2у Важкий 359 СсластасХастастТасААТСТО ланцюг ссавадасАстеасТаСАассСта ссаастототТОАвАСТатТосСтО теоСасстоСООААТССАССТО тоСстТоСстТАСОССТАТОСОСТОСИЯ таспАСсАвастоСстаасСААСО воСстТООАСТАСАТСВИаСАССА
ТСААСАТСЯССОСОСАССАСТИт
АстТАСОЯССТОСТОСИаССААСО воСаСТТСАССАТСТОСАСАС
АСААСТОСААСААСАСССТатА
ССТоСАСАТОААСТОССТОаСО сасбоАООАСАССаССатТатА
СстТАСТаСОСССОаатТАСТАСААС сеасаасСстТоСтТАССАТАТСТОСОСЯ соСАаааОСАСАСТОСТОаАССаИтТт сТоСстТСстТаСАТССАССААЛСОСОС
СсСАТССОСТСоТТоСсоССстТООсСАС
ССТоОСТоСААСАаСАССТоТОС савеаСАСсАХаСсосеоостТавасСта
ССстТастТСААаСАСТАСТТОСОСО
ААсссеастаАассататсатасААС тсАсаСсаСсоСстаАССАсосааСаТ вСАСАССТТОССОаСИСТатосСтТАСА
СТоСТСАВОАСТСТАСТОССТСАС саасатастаАССатТаССсСтТоСА ссдаСсттаваСАСССАСАССТАС
АТСТаСААСИаТОаААТСАСААСИССС
АССААСАССААДСИаТЕСАСААСАДА
СТТОАаСССАААТСТТИТтОАСАААА
СТСАСАСАТОСССАСССТОаСССАС
СсАССТОААСТОСТОСОСОСОСАССИТ
САИТСТТОСТСТТОСССССААААСС
СААССАСАСССТСАТИАТСТОССС вбАССССТОАаСИаТтСАСАТОССТОС теставАСсатаАаССАСОААСАС
СсСТОАССТСААаТТСААСТОат дсатасассесстасАастос
АТААТАССААДСАСАААассаса аваАдапАаСАСаТАСААСАаСАСаИт доесататавТсСАаСаТатссСтТСАСС аТоСстТасСАССАаСАСТааЙСтТадА тТаасСсААДССАСТАСААатасАдаатТ
СТоСААСААдАаСССтоССАаСССс
САТССАСААДААССАТСТОСАдДАОаС
СААДДССССАаССССаАаААССА
СсАасСТатТАСАСССТасСсСсСсСсСАТС сСааОпАТаАДаСТаАССААСААСС даатсдасстаАССсТа|асстТаатсСА
ААСССТТСТАТСССАИаСОАСАТСО ссатасвдатавйаАпАдаСААТаСа
СсАасСсСсапАпААСААСТАСААСАС сАса,асстоссатастааАСТОоСа
АССаСтТОСТТСТТСТТАТАТТСААДА асСсТсАССатайАСААдаАдаСАсаИтТ васАаСсАааапААСаТтсТТстТсСАТ аСстСатаАТаСАТОАЗСИасСтТоСтТа
САСААССАСТАСАСасСАаАдада
ЄстсТосСсТатстсСсСОаасСААдААТ аА 16 | 201С15-2и Легкий 360 САТАТССАЧВАТаАСССАаТоСс ланцюг СсстТоСАсСосСсТатста,|асстостат ваасСОпАСсАпАатТаАССАТСАС
СсТатсАвасстоСаАаТтсСсСАТ стдсес,асатастаасстТаатА
ТСсАССАПАдасстТаасСАдаас
ССССААаСтТастТаАТСТАСОА
САССАаСАСАСТОСССТОоСОаа са,атассстТстТАаАТТСТОоСОаС тстааЙстотТаасСАССаАатТТТАС
ССТОАССАТСТоСАаССтТоСАСТ аДСаАСсаАсассСасСссСАССТАСТА тпатслдадасСсаасСстТАСТАСИаСС
САСТОСТАСОСААТСОЯСТТТСа аДапАпаСАССАДааТасАААТ
САААСОААСТаИтаасСстТасСАССАТ
СТатсТтТСсАТСТТСССасСсСАТСТ
САТаАДаСАаЙТтТаАААТСТааАА стасстотаттататасстаст
СААТААСТТСТАТСССАСАада
СССАААСТАСАаТапААСцаТта
САТААСаСССТоСААТСОВСаИатА
АСТОССАпСпАпАСТаТСАСАСА асСАппАСАаСААаспАСАасСАСС
ТАСАЯССТСАаСАасСАСССТаА
СсасСстТаАОСАААаСАСАСТАСИА
САААСАСАААДИатТстТАСсаТасстас
СААСТСАСССАТСАСИвасСсСтТаА аСсТасСссСатСАСААДАаАаТстТтТ
СААСАССЗИаСАаАа,ТаТатталд 17 | 346С6-хі Важкий 361 слатсаатаслаавХатсаас ланцюг аватсасстТааТАААасСсСстТаАс
СААТСССТаАСАСТСАССТасСА
СсАасстстТааАТТСТОССТСАС
ТАСТТАТОаСААТаАТСТОСИаТо сасслдаастсда,аа,ваадаса аДСсТапААТаСАТСИСААСС
АТтТАатТАСТОаТаатАТСА
САТАСТАСОСОАОСТОСОС
САДАСОСССАТТСАССАТС
ТОСАДААССТОСАССАСОС
ТОСАТСТОААААТСАССАС
ТОСОАСААСССАССАСАС
СОССАССТАТТТСТОТОС
САСАСОССОСАТАТОСТОС
ТАСТАСТОСТТАТТАТСТОС
СОТАСТАСТТТОАСТТОТО
СООССААСССАСССТОСТ
САССОТСТОСТСАССАТС
САССААССОСССАТССОСТ
СсТТоСССсСтТоСсАСОСТОС
ТОСААСАССАССТСТОСОС
ССсАСАССООСССТОСОСТО
ССТОСТСААССАСТАСТТОС
ССОААССОСсТОАСОСТОТО
СТОСААСТСАСОСОССОСТтО
АССАССООСОТОСАСАССТТ
СССоОстТОтТосСтТАСАСТОСТ
САССАСТСТАСТОССТСАСС дасстастоеАссстесосто
САССАССТТОСОСАСССАСА
ССТАСАТСТОСААССТОААТС
АСАДОСССАССААСАССААС
СТОСАСААСАААСТТОАОСС
САДАТСТТОТОАСААААСТСА
САСАТОСССАСССТОСССАС
САССТОААСТОСТОСОСОСА ссатсАстсттостоттосос
ССАДААСССАДССАСАСОСТ
САТОАТСТОССССАССССТО
АСОТСАСАТОСОТОСТОСТО
САССТОАСССАСОААСАССС
ТОАСОТСААСТТСААСТОСТА сотосАсоосотосАССТОС
АТААТОССААСАСАААСССОС
СОСАСОАССАСТАСААСАСС
АССТАСССТСТОСТСАОССТС
СТСАСССТОСТОСАССАССАС
ТООСТОААТОССААССАСТАС
ААСТОСААСОТСТССААСАДА
ССССТОССАССССССАТССАС
АДДАССАТСТССАААОССАДАС
СОСАССССССАСААССАСАСО
ТОТАСАСССТОСССССАТСССО
СОАТОАССТОСАССААСААССАС
СТСАСССТОАССТОССТОСТтсА
ААСОСТТСТАТСССАСССАСАТС
СССОТОСАСТОССАСАССААТО
СОСАСССОСАСААСААСТАСАА
САССАСОССТОСССТОСТОСАС
ТОССАСССОСТОСТТСТТСТТАТА
ТТСАААССТСАСССТОСАСААС
АССАССТООСАОСАССОСААС
СТСТТСТСАТОСТОСОТСАТОС
АТСАСОСТСТОСАСААССАСТА
САСОСАСААСАСССТСТООСТ
СТСТОССОСОАААТОА
(18 | з46С6-хі | Легкий | 362 | бСАСССоТОСтТОАСССАЄ ДСС:
ланцюг АСАССАТСАССТССТатоТта
САасстатаасАаасСАСАСТ
САССАТСАСТТОССАИаТоС
А,ТСАВАСТатТТТАТААТАА
ТААСААСТТАОСССТОСТТТО
АВСАПАдАдАсссавасАасс
ТОССАДИСТТСТаАТСТАТОС таасАТССАСТСТаССАТСТ соааТоССАТСАСОСТТСАа ссвасАдатТасАТСТаСаАСАСА
СТТСАСТСТСАССАТСАССОС сатасАстТатаАСаАтТастас
САСТТАТТАСТОТСТАССТОСТ татОАТОАТОАТаСТОАТАСТТ тпасттсвсасааАдаааАСТО
АвдатааТОаТСАДАСОААСТаИ таастаСАССАТСТОатТСТТСАТ
СсТТоССассАТСТОАТаАОСА
СТТаАААТСТаСААСТОаССТо таттатТасстасСтТОаААТАА
СТТСТАТСССАСАСАСаССАА
АатАСАДИТаСАдАдаатТааАТАА
СсасСССстТоСААТСОЯСатТААСТО
СсСсАааваАпАаТатСАСАСАОСА вОАСАСаСААасСАСАасСАССТА
САСССТСАаСАаЙсСАСССТОаАС аСстТОАаСААДАдаСАСАСТАСОСА
САААСАСААдАатстТАСаТасста
СОААИТСАСССАТСАОСЯОССТ вАССсТасСССаТСАСАААСАС
СТТСсААСсдасавАсАсТаТТаА 19 | 34606-2и Важкий 363 сААдатасластаатацААТСТ ланцюг сесса,аса,асАстаатасаласс таасасАТСТСТОАСАСТОТО татоессаеасстоса,сттото
СсСтТатосСтТосСТАСОСТАТОАТ ставатаСсаАдСсАвассосто аСААХСсСаСсСТааААТасАТС вОаСАССАТСТСТАССОЯОССОа
ААТТАССТАСТАСОЯССТОСТО ваССААдСааССасТТСАССА
ТСТОСАСАСАСААСТОСААСА
АСАСССТатАССТОСАСАТОА дстосстассавассаАасАСА ссоеоса,ататАСТАТТаТтаСтТАС
АдсвасавастАсассоассСАасто
СсастТАСТАССТаССсССсСТАСТАС тсоаАсстатассСассАа,всвас
АССсСстТоатаАСАСТатсАТСТа
САТССАССААЛСаСаСССАТССОС тоттооооСсТаасСАСССТОоСТо
СсААСАЗаСАССТСТОСОСасСАС дасса,асостасастасстаат
СААДСОаАСТАСТТССССОААССО стадса,аатТатСатацпААСТСАС ссассстТадссАаассвсасатас
АСАССТТСССОСасСстТатосСтТАСА аТоСТСАСОАСТОТАСТОССТО дасласатастаАассатос сСстТоСсАаСсАа,астта,асвасСАС
ССАСАССТАСАТСТОаСААС
СТОААТСАСААаСССАСаСА
АСАССААДОИТаСАСААСАА
АаТТОАаСССАААТСТТИтО
АСАААДАСТСАСАСАТИСОССА
СсоатТаСССАССАССТОААСТ сстассосааАСсСсаТсАатст
ТОСТСТТССССССААААСОС
ААдапАСАСССТСАТОАТСТО сСапАССсССстТаАСОаТСАСАТ ссстастоастовАСатТаАс
ССАССААСАСССтТалаатсСА
АСТТСААСстТастАСатасАс сасставАаатТасСАТААТОС
СААЧАСААДАДОССТСОСОИИАС СИ
АССАСТАСААСАаСАСИТАСС статааТСАаСатТссСтТСАСс сТоСстТаСАССАВСАСТОССТО
ААТОССААСОСАаТАСААСИТас
ААПИТСТОСААСАААДОаСССТО
ССАВСССССАТССАСААААСС
АТСТОСАААДОССААдАаааСАс
ССССОАСААССАСАССИТОИТАС
АооСстТаСССССАТОССООСАТ вАССТаАССААСААССАсИТо даСсСсТОАССтТаССтТастСААА паст СсТАТСССАССОСАСАТС сссатасадатТоваАСАССАА тесасАдаССасСАСААСААСТ
АСААСАССАСЯССТоССИ,ТтО ставАСТОССАСОааСтТоСтТтТ
СТТСТТАТАТТСААДАДастоСАС сетасАСААдсдаСАсатас
СсАдаСсАасасавпААсатстсто
АдтастосатТаАтТаСАТаАДОС
СТСТаСАСААССАСТАСАСО
САБААСАСССТОТоССТтато тосоааСАААТОА | 346С06-2и Легкий 364 САТАТТСАЧАТИАСССАСТО ланцюг соссстосАасоста7атосаст тотатавОСОпАСАСАСТаА
ССАТСАССТОТСАСТОСТОоС
СсАаТтоСатаТАТААСААСАА
СААсСсТааССстТастАТСАСЄ
САСАААСССааСААСИаИтас
ССААДИСТаСтТОАТСТАССТО
СССТоСАСАСТОСССТОСТО ссатасСсСсСтТСтТАСАТТСТОС сестотаоСстотТОасСАСССОЯ
АСТТТАСССТОАССАТСАСС тосбстоСсАастТаСОАСОАТОа
ССОаССАССТАСТАТТОССТ свосссестаСОАСОАСаА
СеССОАТАССТТТаСТТТТО ссавАааСАССААСИаТас
АААТСААДАСОСААСТатаас
ТаСАССАТСТОТСТТСАТС тосбСасСссСАТСТОАТаАО
САСТТОАААТСТОаСААС тесстотаттетатесст асСтТаААТААСТТСТАТОС сАаддадааССААдАатТАС датапАлда,асТасАТААС
ВоССТоСААТССаатТАА
СстТоССАааАсАатТатсА
СсАдсдасдапАСАасСАдса
САСАВСАССТАСАаССТ
САаСсАаСАСССстТадсас таАаСАдДдаСАСпСАСТАС пАСАДАСАСАДАаТСтТА сасстасСсаддатсАСс
САТСАССХОСОССТОАС,СТО
ВоССаТСАСААдОадаст тТСААСсАаасададата ад х Представлені послідовності нуклеїнових кислот не включають лідерні послідовності. 00121) У різних варіантах реалізації винаходу, описаний в цьому документі АОС може містити будь-який набір варіабельних доменів важкого та легкого ланцюгів, перерахованих в наведених вище таблицях (наприклад, варіабельні домени важкого та легкого ланцюга МОКАбБ- 003 або варіабельні домени важкого та легкого ланцюга трастузумаба) або набір з шести послідовностей СОК з набору важких та легких ланцюгів. У деяких варіантах реалізації винаходу АОС додатково містить константні домени важкого та легкого ланцюга людини або їх фрагменти. Наприклад, АОС може містити константний домен важкого ланцюга (ДО людини (такий як ЇДС1) та константний домен легкого ланцюга каппа або лямбда людини. У різних варіантах реалізації винаходу фрагмент антитіла описаних АОС містить константний домен важкого ланцюга підтипу 1 імуноглобуліну з (901) людини з константним доменом легкого ланцюга Ід каппа людини.
І00122| У різних варіантах реалізації винаходу цільовий раковий антиген для АОС є рецептором фолієвої кислоти альфа ("ЕКА"). 00123) У різних варіантах реалізації винаходу антитіло до ЕКА або його антигензв'язуючий фрагмент містить три СОК важкого ланцюга та три СОК легкого ланцюга наступним чином:
СОКІ важкого ланцюга (НСОКІ), що складається з 5ЕО ІЮ МО: 2, СОК2 важкого ланцюга (НСОК2), що складається з БЕО ІЮ МО: 3, СОКЗ важкого ланцюга (НСОКЗ), що складається з
ЗЕО ІЮ МО: 4; СОКІ1 легкого ланцюга (СО), що складається з 5ЕО ІО МО: 7, СОМК2 легкого ланцюга (СОК2), що складається з 5ЕО І МО: 8 та СОКЗ легкого ланцюга (СОКЗ), що складається з 5ЕО ІЮ МО: 9, як визначено системою нумерації Кабат (Кабаї, Зедиепсе5 ої
Ргоївіп5 ої Іттипоїодісаї Іпієгеві (Майіопаї! Іпбзійшев5 ої Неанй, Бетесда, штат Меріленд (1987 рік та 1991 рік))). 00124) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло до ЕКА або його антигензв'язуючий фрагмент містить три СОК важкого ланцюга та три СОК легкого ланцюга наступним чином:
СОКІ важкого ланцюга, що складається з 5ЕБЕО ІЮО МО: 13, СОК2 важкого ланцюга, що складається з БЕО ІЮ МО: 14, СОКЗ важкого ланцюга, що складається з БЕО ІЮО МО: 15; СОК!1
Ко) легкого ланцюга, що складається з ЗЕО ІЮО МО: 16, СОК2 легкого ланцюга, що складається з
ЗЕБЕО ІЮО МО: 17 та СОМКЗ легкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 18, як визначено системою нумерації ІМОТ (Іпіегпайопа! ІтМипосепетісв Іпіоппацоп Зузіет (ІМОСТФ)). 00125) У різних варіантах реалізації винаходу антитіло до ЕКА або його антигензв'язуючий фрагмент включає варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність з ЗЕО ІО МО: 23, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність з БЕО ІЮ МО: 24. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло до ЕКА або його антигензв'язуючий фрагмент містить амінокислотну послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга з 5ЕО ІЮО МО: 23 та амінокислотну послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга з 5ЕО ІЮ МО: 24 або послідовності, які щонайменше на 95 95 ідентичні вищезазначеним послідовностям. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло до ЕКА або його антигензв'язуючий фрагмент має амінокислотну послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга, яка щонайменше на 96 95, щонайменше на 97 95, щонайменше на 98 95 або щонайменше на 99 95 ідентична 5ЕО ІЮ МО: 23 та амінокислотну послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга, яка щонайменше на 96 95, щонайменше на 97 95, щонайменше на 98 до або щонайменше на 99 95 ідентична ЗЕО ІЮ МО: 24. 00126) У різних варіантах реалізації винаходу антитіло до ЕКА містить константний домен важкого ланцюга ІДО1 людини з константним доменом легкого ланцюга Ід каппа людини. 00127) У різних варіантах реалізації винаходу антитіло до ЕКА містить амінокислотну послідовність важкого ланцюга з ЗЕО ІЮ МО: 1 або послідовність, яка щонайменше на 95 95 ідентична послідовності БЕО ІЮО МО: 1, та амінокислотну послідовність легкого ланцюга ЗЕО 10
МО: 6 або послідовність, яка щонайменше на 95 95 ідентична послідовності зЗЕО ІЮ МО: 6. У конкретних варіантах реалізації винаходу антитіло містить амінокислотну послідовність важкого ланцюга з 5ЕО ІЮ МО: 1 та амінокислотну послідовність легкого ланцюга з ЗЕО ІЮ МО: 6 або послідовності, які щонайменше на 95 95 ідентичні вищезазначеним послідовностям. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло до ЕКА має амінокислотну послідовність важкого ланцюга, яка щонайменше на 96 95, щонайменше на 97 95, щонайменше на 98 95 або щонайменше на 99 95 ідентична послідовності ЗЕО ІЮО МО: 1 та/або амінокислотну послідовність легкого ланцюга, яка щонайменше на 96 95, щонайменше на 97 95, щонайменше на 98 95 або щонайменше на 99 95 ідентична послідовності 56 ІО МО: 6. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло до ЕКА містить важкий ланцюг, що кодується нуклеотидною послідовністю
ЗЕО ІЮ МО: 11 (з нуклеотидами, що кодують лідерну послідовність) або 5ЕО ІЮ МО: 345 (без нуклеотидів, що кодують лідерну послідовність); та легкий ланцюг, що кодується нуклеотидною послідовністю ЗЕО ІЮ МО: 12 (з нуклеотидами, що кодують лідерну послідовність) або ЗЕО ІЮ
МО: 346 (без нуклеотидів, що кодують лідерну послідовність). У деяких варіантах реалізації винаходу амінокислотна послідовність важкого ланцюга не має С-кінцевого лізину. У різних варіантах реалізації винаходу антитіло до ЕКА має амінокислотну послідовність антитіла, що продукується клітинною лінією, яка депонована на умовах відповідно до Будапештського договору з Американською колекцією типових культур (АТСС, 10801 Опімегейу Віма., Манассас, штат Вірджинія 20110-2209) 24 квітня 2006 року під Ме доступу РТА-7552 або такі послідовності, позбавлені С-кінцевого лізину важкого ланцюга. У різних варіантах реалізації винаходу антитіло до ЕКА є МОКАБ-003 (назва ОЗАМ: фарлетузумаб) (Ебеї та співавт. (2007 рік) Сапсег Іттипну 7:6) або його антигензв'язуючим фрагментом. 00128) У різних інших варіантах реалізації винаходу цільовий раковий антиген для АОС є рецептором людського епідермального фактора росту 2 типу ("Ппегг2"). 00129) У різних варіантах реалізації винаходу антитіло до пег2 або його антигензв'язуючий
Зо фрагмент містить три СОК важкого ланцюга та три СОК легкого ланцюга наступним чином:
СОКІ важкого ланцюга (НСОКТ), що складається з 5ЕО ІЮО МО: 71, СОК2 важкого ланцюга (НСОК2), що складається з БЕО ІЮ МО: 72, СОКЗ важкого ланцюга (НСОКЗ), що складається з
ЗЕО ІЮ МО: 73; СОКІ1 легкого ланцюга (СОКТ), що складається з БЕО ІО МО: 74, СОМК2 легкого ланцюга (-СОК2), що складається з 5ЕО ІЮ МО: 75 та СОКЗ легкого ланцюга (ГСОКЗ), що складається з ЗЕО ІЮ МО: 76, як визначено системою нумерації Кабат. 00130) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло до Пег2 або його антигензв'язуючий фрагмент містить три СОК важкого ланцюга та три СОК легкого ланцюга наступним чином:
СОКІ важкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІО МО: 191, СОК2 важкого ланцюга, що складається з БЕО І МО: 192, СОКЗ важкого ланцюга, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 193;
СОМКІ легкого ланцюга, що складається з 5ЕБЕО ІЮ МО: 194, СОК2 легкого ланцюга, що складається з БЕО ІЮО МО: 195 та СОКЗ легкого ланцюга, що складається з БЕО ІЮ МО: 196, як визначено системою нумерації ІМОТ. 00131) У різних варіантах реалізації винаходу антитіло до пег2 або його антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність з ЗЕО ІО МО: 27, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність з БЕО ІЮ МО: 28. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло до Ппег2 або його антигензв'язуючий фрагмент містить амінокислотну послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга з 5ЕО ІЮО МО: 27 та амінокислотну послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга з 5ЕО ІЮ МО: 28 або послідовності, які щонайменше на 95 95 ідентичні вищезазначеним послідовностям. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло до пег2 або його антигензв'язуючий фрагмент має амінокислотну послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга, яка щонайменше на 96 95, щонайменше на 97 95, щонайменше на 98 95 або щонайменше на 99 95 ідентична 5ЕБО ІО МО: 27 та/або амінокислотну послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга, яка щонайменше на 96 9565, щонайменше на 97 95, щонайменше на 98 95 або щонайменше на 99 95 ідентична 5ЕО ІЮО МО: 28.
І00132) У різних варіантах реалізації винаходу антитіло до пег2 містить константний домен важкого ланцюга ІдДО1 людини та константний домен легкого ланцюга Ід каппа людини. 00133) У різних варіантах реалізації винаходу антитіло до йпег2 містить амінокислотну послідовність важкого ланцюга з 5БЕО ІЮО МО: 327 або послідовність, яка щонайменше на 95 95 60 ідентична послідовності зЕО ІЮ МО: 327, та амінокислотну послідовність легкого ланцюга з БЗЕО
ІО МО: 328 або послідовність, яка щонайменше на 95 95 ідентична послідовності зЕО ІЮ МО: 328. У конкретних варіантах реалізації винаходу антитіло містить амінокислотну послідовність важкого ланцюга з 5ЕО ІЮ МО: 327 та амінокислотну послідовність легкого ланцюга з БЕ ІЮ
МО: 328 або послідовності, які щонайменше на 95 95 ідентичні вищезазначеним послідовностям.
У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло до пег2 має амінокислотну послідовність важкого ланцюга, яка щонайменше на 96 95, щонайменше на 97 95, щонайменше на 98 95 або щонайменше на 99 95 ідентична послідовності «ЕО ІЮО МО: 327 та амінокислотну послідовність легкого ланцюга, яка щонайменше на 96 95, щонайменше на 97 95, щонайменше на 98 95 або щонайменше на 99 905 ідентична послідовності 5ЕО ІЮ МО: 328. У різних варіантах реалізації винаходу антитіло до пег2 є трастузумабом або його антигензв'язуючим фрагментом. 00134) У різних варіантах реалізації винаходу антитіло до ЕКА або його антигензв'язуючий фрагмент містить три СОК важкого ланцюга та три СОК легкого ланцюга МОКАБ-003 або при цьому СОК включають не більше одного, двох, трьох, чотирьох, п'яти або шести амінокислотних додатків, делецій або заміщень в НСОКІ (5ЕО ІЮО МО: 2 відповідно до Кабата або 5ЕО ІЮ МО: 13 відповідно до ІМСТ), НСОК2 (ЗЕО ІЮ МО: З відповідно до Кабата або 5ЕО ІЮ
МО: 14 відповідно до ІМСТ), НСОКЗ (ЗЕО ІО МО: 4 відповідно до Кабата, або 5ЕО ІЮ МО: 15 відповідно до ІМСТ); СОМ (ЗЕО ІЮ МО: 7 відповідно до Кабата або 5ЕО ІО МО: 16 відповідно до ІМОТ), ГСОМК2 (5ЕО ІО МО: 8 відповідно до Кабата або 5ЕО ІЮ МО: 17 відповідно до ІМОТ) та
ГСОМЗ (5ЕО ІЮО МО: 9 відповідно до Кабата, або 5ЕО ІО МО: 18 відповідно до ІМСТ).
ІЇО0135| У різних інших варіантах реалізації винаходу антитіло до Пег2 або його антигензв'язуючий фрагмент містить три СОК важкого ланцюга та три СОК легкого ланцюга трастузумаба або при цьому СОК включають не більше одного, двох, трьох, чотирьох, п'яти або шести амінокислотних додатків, делецій або заміщень в НСОКІ1 (ЗЕО ІЮ МО: 71 відповідно до
Кабата або 5ЕО ІО МО: 191 відповідно до ІМТ), НСОК2 (ЗЕО ІО МО: 72 відповідно до Кабата або ЗЕО ІЮ МО: 192 відповідно до ІМОТ), НСОМЗ (ЗЕБЕО ІЮ МО: 73 відповідно до Кабата, або
ЗЕО ІЮ МО: 193 відповідно до ІМСТ); І СОКІ1 (5ЕО ІЮ МО: 74 відповідно до Кабата або 5ЕО ІО
МО: 194 відповідно до ІМОТ), ЇСОМК2 (ЗЕО ІО МО: 75 відповідно до Кабата або 5ЕО І МО: 195 відповідно до ІМОТ) та /СОМЗ (ЗЕО ІЮ МО: 76 відповідно до Кабата, або 5ЕО ІЮО МО: 196 відповідно до ІМОТ).
Зо 00136) У різних варіантах реалізації винаходу амінокислотні заміни є замінами одного залишку. Вставки зазвичай матимуть порядок від близько 1 до близько 20 амінокислотних залишків, хоча значно більші вставки можуть бути допустимі, доки зберігається біологічна функція (наприклад, зв'язування з ЕКА або Пе!г2). Делеції зазвичай варіюються від близько 1 до близько 20 амінокислотних залишків, хоча в деяких випадках делеції можуть мати значно більший розмір. Заміни, делеції, вставки або будь-яка їх комбінація можуть застосовуватися для отримання остаточного похідного або варіанту. Як правило, ці зміни проводяться на декількох амінокислотах, щоб звести до мінімуму зміну молекули, особливо |імуногенність та специфічність антигензв'язуючого білка. Проте, великі зміни можуть допускатися за певних обставин. Консервативні заміни зазвичай виконуються у відповідності з наступною таблицею, зображеною як Таблиця 10.
Таблиця 10
Вихідний залишок Типові заміни
Аа зег
Аг9 Гуз
Авп Сип, Ні5
Азр Сім
Сувз зег
Сип Авп
Сп Ар сьуу Рго
Ніб Азп, СіІп
Пе І ем, Ма!
Ї еи Пе, Маї
Гуз Ага, Сп, Си
Меї Ї ем, Пе
Рпе Меї, Г еи, Туг зег Ти 60 Тие зег
Тр Туг
Ту Тер, Рпе
Ма! Пе, Ї еи
І00137| Істотні зміни функції або імунологічної ідентичності виробляються шляхом відбору замін, що є менш консервативними, ніж ті, які показані в Таблиці 10. Наприклад, можуть бути виконані заміни, що суттєвіше впливають на: структуру поліпептидного остову в ділянці зміни, наприклад, альфа-спіральну або бета-складчасту структуру; заряд або гідрофобність молекули на цільовому сайті; або об'ємну частину бічного ланцюга. Очікується, що заміни, які загалом будуть давати найбільші зміни у властивостях поліпептиду, є такими, в яких (а) гідрофільний залишок, наприклад, серил або треонін, заміщений (або заміщується) гідрофобним залишком, наприклад, лейцилом, ізолейцилом, фенілаланіном, валілом або аланілом; (Б) цистеїн або пролін заміщений (або заміщується) будь-яким іншим залишком; (с) залишок, який має електропозитивний бічний ланцюг, наприклад лізил, аргініл або гістидил, заміщений (або заміщується) електронегативним залишком, наприклад, глутамілом або аспартілом; або (а) залишок, що має об'ємний бічний ланцюг, наприклад фенілаланін, заміщений (або заміщується) одним залишком, що не має бічного ланцюга, наприклад гліцином.
І00138| У різних варіантах реалізації винаходу, де варіанти послідовностей антитіла застосовуються в АОС, варіанти зазвичай проявляютьтаку ж якісну біологічну активність та викликатимуть таку ж імунну відповідь, хоча варіанти можуть також бути обрані для модифікації характеристик антигензв'язуючих білків за потреби. В альтернативному варіанті, варіант може бути сконструйований таким чином, що біологічна активність антигензв'язуючого білка змінюється. Наприклад, сайти глікозилювання можуть бути змінені або видалені, як обговорювалося в цьому документі. (001391) Різні антитіла можуть застосовуватися із застосовуваним у цьому документі АОС для націлювання на ракові клітини. Як показано нижче, лінкер-токсини в АОС, що описані в цьому документі, є несподівано ефективними з різними антитілами, що націлюються на антиген, проти пухлини. В цій галузі техніки відомі відповідні антигени, що експресуються на пухлинних клітинах, але не на здорових клітинах, або експресуються на пухлинних клітинах на більш високому рівні, ніж на здорових клітинах, а також антитіла, спрямовані проти них. Ці антитіла
Зо можна застосовувати з лінкерами та токсином (наприклад, ерібуліном), що описаний в цьому документі. У деяких варіантах реалізації винаходу фрагмент антитіла націлений на ЕКА. У деяких варіантах реалізації винаходу фрагмент антитіла, націленого на ЕКА, є МОКАБ-003. У деяких варіантах реалізації винаходу, в той час як описані лінкери та токсин (ерібулін) є несподівано ефективними з декількома різними антитілами, націленими на пухлину, фрагменти антитіл, націлені на ЕКА, такі як МОМКАБ-003, забезпечують особливо покращене співвідношення лікарський засіб:антитіло, націлювання на пухлину, неспецифічний цитоліз, ефективність лікування, а також зменшене нецільове знищення. Підвищена ефективність лікування може бути виміряна іп міго або іп мімо, та може включати зниження швидкості росту пухлини та/або зменшення об'єму пухлини. 00140) У деяких варіантах реалізації винаходу застосовують антитіла до інших мішеней антигену та забезпечують, щонайменше, деякі з сприятливих функціональних властивостей
АОС, що містить фрагмент антитіла, націленого на ЕКА, такий як МОКАБ-003 (наприклад, покращене співвідношення лікарський засіб:антитіло, поліпшена ефективність лікування, зниження нецільового знищення тощо). У деяких варіантах реалізації винаходу деякі або всі з цих сприятливих функціональних властивостей спостерігаються, в разі якщо описані лінкери та токсин (ерібулін) кон'юговані з фрагментом антитіла, націленого на Пег2, таким як трастузумаб.
У деяких варіантах реалізації винаходу фрагмент антитіла націлений на Ппег2. У деяких варіантах реалізації винаходу фрагмент антитіла, націленого на Ппег2, є трастузумабом. У деяких варіантах реалізації винаходу деякі або всі з цих сприятливих функціональних властивостей спостерігаються, в разі якщо описані лінкери та токсин (ерібулін) кон'юговані з фрагментом антитіла, націленого на М5І М, таким як МОКАБ-009. У деяких варіантах реалізації винаходу фрагмент антитіла націлений на М5ІМ. У деяких варіантах реалізації винаходу фрагмент антитіла, націленого на М5І-М, є МОКАБ-009.
Лінкери 00141) У різних варіантах реалізації винаходу лінксер в АЮС є позаклітинно стабільним достатнім чином, щоб бути терапевтично ефективним. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер стабільний поза клітиною, так що АЮС залишається інтактним, у випадку якщо він присутній в позаклітинних умовах (наприклад, перед транспортуванням або доставкою в клітину). Термін "Інтактний", що застосовується в контексті АОС, означає, що фрагмент антитіла бо залишається приєднаним до фрагменту лікарського засобу. В цьому контексті термін
"стабільний" в контексті лінкера або АС, що містить лінкер, означає, що не більше ніж 20 95, не більше ніж близько 15 95, не більше ніж близько 10 95, не більше ніж близько 5 95, не більше ніж близько З 95 або не більше ніж близько 1 95 лінкерів (або будь-який відсоток між ними) у зразку
АС розщеплюються (або у випадку спільного АОС, в іншому разі не інтактного), у випадку якщо АОС знаходиться в позаклітинних умовах.
ЇО0142| Чи є стабільним лінкер позаклітинно, можна визначити, наприклад, шляхом включення АОС в плазму крові протягом заданого періоду часу (наприклад, 2, 4, 6, 8, 16 або 24 годин), а потім кількісного визначення кількості вільного фрагмента лікарського засобу присутнього в плазмі крові. Стабільність може надати час для АОС з метою локалізації цільових пухлинних клітин та запобігти передчасному вивільненню лікарського засобу, що може знизити терапевтичний індекс А0С, через пошкодження як нормальних, так і пухлинних тканин. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер стабільний поза цільовою клітиною та вивільняє частину лікарського засобу з АОС один раз всередині клітини, таким чином, що фрагмент лікарського засобу може зв'язуватися зі своєю ціллю (наприклад, з мікротрубочками). Таким чином, ефективний лінкер буде: (ї) підтримувати специфічні зв'язуючі властивості фрагмента антитіла; (і) дозволяти доставку, наприклад, внутрішньоклітинну доставку фрагмента лікарського засобу за допомогою стабільного приєднання до фрагменту антитіла; (ії) залишатися стабільним та інтактним до того часу, доки АОС не буде транспортований або доставлений до його цільового сайту; та (м) дозволяти терапевтичний ефект, наприклад цитотоксичний ефект, фрагмента лікарського засобу після розщеплення.
І00143| Лінкери можуть впливати на фізико-хімічні властивості АОС. Оскільки чимало цитотоксичних агентів є гідрофобними за своєю природою, зв'язування їх з антитілом з додатковим гідрофобним фрагментом може привести до агрегації. Агрегати АОС нерозчинні та часто обмежують досяжний вміст лікарського засобу на антитілі, що може негативно впливати на ефективність АОС. Протеїнові агрегати біологічних препаратів, загалом, також були пов'язані з підвищеною імуногенністю. Як показано нижче, лінкери, описані в цьому документі, призводять до АОС з низьким рівнем агрегації та бажаним рівнем вмісту лікарського засобу. (00144) Лінкер може бути "таким, що розщеплюється" або "таким, що не розщеплюється" (Юйсгу апа Біштр, Віосопійдаїє Спет. (2010 рік) 21:5-13). Лінкери, що розщеплюються
Зо призначені для вивільнення лікарського засобу при впливі певних факторів навколишнього середовища, наприклад, при інтерналізації в цільову клітку, тоді як лінкери, що не розщеплюються зазвичай покладаються на деградацію самого фрагмента антитіла. 00145) У деяких варіантах реалізації винаходу лінкером є лінкер, що не розщеплюється. У деяких варіантах реалізації винаходу фрагмент лікарського засобу АОС вивільняється шляхом деградації фрагмента антитіла. Лінкери, що не розщеплюються, як правило, залишаються ковалентно зв'язаними з, щонайменше, однієї амінокислотою антитіла та лікарським засобом при інтерналізації та деградації в цільовій клітині. Лінкери, що не розщеплюються, зазвичай включають тіоефірний зв'язок, який отримують шляхом кон'югації тіольної групи на лікарському засобі або антитілі з малеімідною або галоацетамідною групою на антитілі або лікарському засобі, відповідно (Ссоідтаснег та співавт., п Сапсег Огид Рріхсомегу апа Оемеіюортепі: Апііроду-
Огид Сопіндаїез апа Іттипоїохіп5 (І РАйїр5 вид., Зргіпдег, 2013 рік)). Типовий лінкер, що не розщеплюється містить тіоефір, циклогексил, М-сукцинімідил-4-(М-малеімідометил) циклогексан-ї карбоксилат (З5МСС), М-гідроксисукцинімід (МН5) або один або більше фрагментів поліетиленгліколю (ПЕГ), наприклад, 1, 2, 3, 4, 5 або 6 ПЕГ. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер, що не розщеплюється містить (ПЕГ)2. В інших варіантах реалізації винаходу лінкер, що не розщеплюється містить (ПЕГ)4.
І00146| У деяких варіантах реалізації винаходу лінкером є лінкер, що розщеплюється.
Лінкер, що розщеплюється відноситься до будь-якого лінкера, який містить фрагмент, що розщеплюється. В цьому контексті термін "фрагмент, що розщеплюється" відноситься до будь- якого хімічного зв'язку, який може бути розщеплений. Відповідні хімічні зв'язки, що розщеплюються добре відомі в цій галузі техніки та включають, але без обмежень, кислотолабільні зв'язки, протеазо/пептидазолабільні зв'язки, фотолабільні зв'язки, дисульфідні зв'язки та естеразолабільні зв'язки. Лінкери, що містять фрагмент, що розщеплюється, можуть дозволити вивільнення фрагмента лікарського засобу з АОС через розщеплення на певній ділянці в лінкері. У різних варіантах реалізації винаходу розщеплення антитіла від зв'язаного токсину активує або збільшує активність токсину. У деяких варіантах реалізації винаходу АОС, що містить лінкер, що розщеплюється (наприклад, лінкер МаІ-Сі), демонструє підвищене цільове знищення клітин та/або зменшене нецільове знищення клітин в порівнянні з АОС, що містить лінкер, що не розщеплюється, (наприклад, лінкер, що не розщеплюється, (ПЕГ)2 або бо (ПЕГ)4). У деяких варіантах реалізації винаходу АОС, що містить лінкер, що розщеплюється,
демонструє поліпшену ефективність лікування по відношенню до АОС, що містить лінкер, що не розщеплюється, у випадку якщо клітини та/або рак, які отримували лікування у вигляді АОС, не експресують цільовий антиген на високих рівнях (наприклад, ЕКА або Пегг2). У деяких варіантах реалізації винаходу розщеплення антитіла від пов'язаного токсину потрібно для досягнення поліпшеної ефективності лікування АОС, як виміряно іп міїго та/або іп мімо.
ЇО0147| У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер розщеплюється за внутрішньоклітинних умов, так що розщеплення лінкера в достатній мірі вивільняє фрагмент лікарського засобу від фрагмента антитіла у внутрішньоклітинному середовищі для активації лікарського засобу та/або робить лікарський засіб терапевтично ефективним. У деяких варіантах реалізації винаходу фрагмент лікарського засобу не розщеплюється від фрагмента антитіла до того часу, доки АОС не потрапить в клітину, що експресує антиген, специфічний для фрагмента антитіла АЮС, а фрагмент лікарського засобу відщеплюється від фрагмента антитіла після входу в клітину. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить фрагмент, що розщеплюється, який розташований так, що частина лінкера або фрагмента антитіла не залишається зв'язаною з фрагментом лікарського засобу при розщепленні. Приклади лінкерів, що розщеплюються включають кислотолабільні лінкери, лінкери, чутливі до протеази/пептидази, фотолабільні лінкери, диметил-, дисульфід- або сульфонамідвмісні лінкери.
І00148| У деяких варіантах реалізації винаходу лінкером є лінкер, чутливий до рН та чутливий до гідролізу за певних значень рн. Як правило, лінкер, чутливий до рН розщеплюється в кислих умовах. Ця стратегія розщеплення зазвичай використовує нижчі значення рН в ендосомальних (рН - 5-6) та лізосомальних (рН - 4,8) внутрішньоклітинних компартментах у порівнянні з цитозолем (рН -- 7,4) для запуску гідролізу кислотолабільної групи в лінкері, такому як гідразон (даїп та співавт. (2015 рік) Рпапт Кез 32:3526-40). У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер є кислотолабільним лінкером та/або лінкером, що гідролізується. Наприклад, може бути застосований кислотолабільний лінкер, який гідролізується в лізосомі, та містить кислотолабільну групу (наприклад, гідразон, семікарбазон, тіосемікарбазон, цис-аконітовий амід, ортоефір, ацеталь, кеталь тощо). Див., наприклад, патенти США Мо 5,122,368; 5,824,805; 5,622,929; ВБиром/спік апа УмаїЇКег (1999 рік) Рпапт. Тпегарешісв 83:67-123; МеміШе та співавт.
Зо (1989 рію) Віої. Спет. 264:14653-61. Такі лінкери відносно стабільні за нейтральних умов рН, наприклад, в крові, але нестабільні при рН нижче 5,5 або 5,0, приблизному значенні рн лізосоми. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер, що гідролізується є тіоефірним лінкером (таким як, наприклад, тіоефір, приєднаний до терапевтичного агенту через ацилгідразоновий зв'язок). Див., наприклад, патент США Мо 5,622,929. 00149) У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер розщеплюється у відновлювальних умовах. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер розщеплюється в присутності відновлюючого агента, такого як глутатіон або дитіотреїтол. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер є дисульфідним лінкером, що розщеплюється, або сульфонамідним лінкером, що розщеплюється.
Ї00150| У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер є дисульфідним лінкером, що розщеплюється. У цій галузі техніки відомі різні дисульфідні лінкери, включаючи, наприклад, ті, що можуть бути отримані із застосуванням ЗАТА (М-сукцинімідил-5-ацетилтіоацетату), ЗРОР (М-сукцинімідил-3-(2-пірідилдитіо)пропіонату), ЗРОВ (М-сукцинімідил-3-(2-пірідилдитіо)бутирату) та 5МРТ (М-сукцинімідилоксикарбоніл-альфа-метил-альфа-(2-пірідил-дитіо)толуолу), 5РОВ та
ЗМРТ. Див., наприклад, ТПпогре та співавт. (1987 рік) Сапсег Ке5. 47:5924-31; УМамгтггупсгак та співавт., Іп Іттипосопішдасез: Апібоду Сопідаїез іп Кадіоітадегу апа Тпегару ої Сапсег (СМ
Модеї вид., Охіога |). Ргез5, 1987 рік). Див. також патент США Мо 4,880,935. Дисульфідні лінкери зазвичай застосовують з метою використання поширених внутрішньоклітинних тіолів, які можуть сприяти розщепленню їх дисульфідних зв'язків. Внутрішньоклітинні концентрації найбільш поширеного внутрішньоклітинного тіолу, відновленого глутатіону, зазвичай знаходяться в діапазоні 1-10 НМ, що близько у 1000 разів вище, ніж у найбільш поширеного низькомолекулярного тіолу в крові (тобто, цистеїну) близько 5 мкМ (сСоЇІдтаснег та співавт., Їп
Сапсег Огид Оізсомегу апа ОемеІортенпі: Апіїбоду-Огид Сопіцдатез апа Іттипоїохіпв (СІ. РиПірв вид, Зргіпдег, 2013 рік)). Внутрішньоклітинні ферменти сімейства білків дисульфід-ізомерази можуть також сприяти внутрішньоклітинному розщепленню дисульфідного лінкера. Як застосовується в цьому документі, дисульфідний лінкер, що розщеплюється, відноситься до будь-якого лінкера, який містить дисульфідний фрагмент, що розщеплюється. Термін "дисульфідний фрагмент, що розщеплюється" відноситься до дисульфідного зв'язку, який може бути розщеплений та/або відновлений, наприклад, тіолом або ферментом. У деяких варіантах бо реалізації винаходу дисульфідний фрагмент, що розщеплюється, є дисульфідил-диметилом.
00151) У деяких варіантах реалізації винаходу лінксером є сульфонамідний лінкер, що розщеплюється. Як застосовується в цьому документі, сульфонамідний лінкер, що розщеплюється, відноситься до будь-якого лінкера, який містить сульфонамідний фрагмент, що розщеплюється. Термін "сульфонамідний фрагмент, що розщеплюється" відноситься до сульфонамідної групи, тобто, до сульфонільної групі, приєднаної до аміногрупи, при цьому сіро- азотний зв'язок може бути розщеплений. 00152) У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер може бути лінкером дендритного типу для ковалентного приєднання більш ніж одного фрагмента лікарського засобу до фрагменту антитіла через багатофункціональний фрагмент лінкера, що розгалужується. Див., наприклад, зип та співавт. (2002 рік) Віоогд. Мед. Спет. Гей. 12:2213-5; 5ип та співавт. (2003 рік) Віоого.
Мей. Сет. 11:1761-8. Дендритні лінксери можуть збільшувати молярне співвідношення лікарського засобу по відношенню до антитіла, тобто, вміст лікарського засобу, що пов'язано з ефективністю АОС. Таким чином, якщо фрагмент антитіла несе тільки одну реакційноздатну цистеїнову тіольну групу, наприклад, через дендритний лінкер можна приєднати безліч фрагментів лікарського засобу. У деяких варіантах реалізації винаходу лінксерний фрагмент або фрагмент лінкер-лікарський засіб можуть бути приєднані до антитіла за допомогою хімії відновлених дисульфідних містків або обмеженою технології обмеженої утилізації лізину. Див., наприклад, Міжнародні публікації Мо МО 2013173391 та УМО 2013173393.
Ї00153| У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер розщеплюється агентом, що розщеплюється, наприклад, ферментом, який присутній у внутрішньоклітинному середовищі (наприклад, в лізосомах або ендосомі, або кавеолі). Лінкером може бути, наприклад, пептидний лінкер, який розщеплюється внутрішньоклітинною пептидазою або ферментом протеази, включаючи, але без обмежень, лізосомальну або ендосомальную протеазу. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкером є пептидний лінкер, що розщеплюється. Як застосовується в цьому документі, пептидний лінкер, що розщеплюється, відноситься до будь-якого лінкера, який містить пептидний фрагмент, що розщеплюється. Термін "пептидний фрагмент, що розщеплюється" стосується будь-якого хімічного зв'язку, що зв'язує амінокислоти (натуральні або синтетичні похідні амінокислот), які можуть бути розщеплені агентом, що присутній у внутрішньоклітинному середовищі. Наприклад, лінкер може містити послідовність аланін-
Зо аланін-аспарагін (АІа-АІа-А5п) або валін-цитрулін (мМаІ-СіЮ), яка розщеплюється пептидазою, такою як катепсин, наприклад, катепсин В.
І00154| У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер є лінкером, що розщеплюється ферментом і пептидний фрагмент, що розщеплюється, в лінкері розщеплюється ферментом. У деяких варіантах реалізації винаходу пептидний фрагмент, що розщеплюється, розщеплюється лізосомальним ферментом, наприклад, катепсином. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер є лінкером, що розщеплюється катепсином. У деяких варіантах реалізації винаходу пептидний фрагмент, що розщеплюється, в лінкері розщеплюється лізосомальним цистеїновим катепсином, таким як катепсин В, С, Е, Н, К, Ї, 0, 5, М, Х або М. У деяких варіантах реалізації винаходу пептидний фрагмент, що розщеплюється, розщеплюється катепсином В. Типовим дипептидом, який може бути розщеплений катепсином В, є валін-цитрулін (Ма!І-СіЮ) (биромеспік та співавт., 2002 рік) Віосопіддае Спет. 13:855-69). У деяких варіантах реалізації АОС, що містить пептидний фрагмент, що розщеплюється, демонструє нижчі рівні агрегації та/або вищий вміст лікарського засобу (р) у порівнянні з АОС, що містить альтернативний фрагмент, що розщеплюється (наприклад, дисульфідний фрагмент, що розщеплюється, або сульфонамідний фрагмент, що розщеплюється).
Ї00155| У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер або пептидний фрагмент, що розщеплюється, в лінкері містить амінокислотну одиницю. У деяких варіантах реалізації винаходу амінокислотна одиниця дозволяє розщеплювати лінкер за допомогою протеази, тим самим полегшуючи вивільнення фрагмента лікарського засобу з АОС за впливу однієї або більше внутрішньоклітинних протеаз, таких як один або більше лізосомальних ферментів (Юогопіпа та співавт. (2003 рік) Маї. Віоїтесппої. 21:778-84; ЮБиром/спік апа Му/аКег (1999 рік)
Ріпапт. Тнегарешіісв 83:67-123). Типові амінокислотні одиниці включають, але без обмежень, дипептиди, трипептиди, тетрапептиди та пентапептиди. Типові дипептиди включають, але без обмежень, валін-цитрулін (Ма!І-Сі), аланін-аспарагін (Аїа-Азп), аланін-фенілаланін (АїІа-Рнеє), фенілаланін-лізин (Рпе-ГГ ув), аланін-лізин ( Аїа-ГГуз), аланін-валін (АІа-мМаї), валін-аланін (Маї!-
Аа), валін-лізин (Ма!-Гув), лізин-лізин (Гув-І уз), фенілаланін-цитрулін (Рпе-Сі), лейцин-цитрулін (Геи-СІ), ізолейцин-цитрулін (Пе-Сі), триптофан-цитрулін (Тгтр-СІ) та фенілаланін-аланін (Рпе-
Аа). Типові трипептиди включають, але без обмежень, аланін-аланін-аспарагін (АІа-Аіа-Авп), гліцин-валін-цитрулін (сіІу-Ма!-Сі), гліцин-гліцин-гліцин (с1у-Стіу-сіІу), фенілаланін фенілаланін- бо лізин (Рпе-РПе-ГГуз) та гліцин-фенілаланін-лізин (С1у-РНе-Гув). Інші типові амінокислотні одиниці включають, але без обмежень, СІу-РНе-І еи-Спу, Аїа-І ей-АЇІа-І еи, Рипе-МО-тозил-Агд та Рпе-МО-
Нітро-Аго, як описано, наприклад, в патенті США Мо 6,214,345. У деяких варіантах реалізації винаходу амінокислотна одиниця в лінкері містить МаІ-СИЙ. У деяких варіантах реалізації винаходу амінокислотна одиниця в лінкері містить АЇа-Аіа-А5п. У деяких варіантах реалізації винаходу АЮС, який включає Ма!І-Сіїї, демонструє зменшення нецільового знищення клітин, збільшення цільового знищення клітин, зниження рівнів агрегації та/або вищий вміст лікарського засобу (р) в порівнянні з АЮС, який містить альтернативну амінокислотну одиницю або альтернативний фрагмент, що розщеплюється. Амінокислотна одиниця може містити амінокислотні залишки, що зустрічаються в природі та/або другорядні амінокислоти, та/або аналоги амінокислот, що не зустрічаються в природі, такі як цитрулін. Амінокислотні одиниці можуть бути сконструйовані та оптимізовані для ферментативного розщеплення конкретним ферментом, наприклад, пухлиноасоційованою протеазою, лізосомальною протеазою, такою як катепсин В, С, 0 або 5, або плазміновою протеазою. 00156) У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер в будь-якому з описаних в цьому документі АОС може містити щонайменше одну спейсерну одиницю, яка з'єднує фрагмент антитіла з фрагментом лікарського засобу. У деяких варіантах реалізації винаходу спейсерна одиниця з'єднує сайт розщеплення (наприклад, пептидний фрагмент, що розщеплюється) в лінкері з фрагментом антитіла. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер та/або спейсерна одиниця в лінкері є по суті гідрофільними. Гідрофільний лінкер може застосовуватися для зменшення ступеня, в якому лікарський засіб може викачуватися зі стійких ракових клітин через множинну стійкість до лікарських засобів (МОК) або функціонально аналогічних транспортерів.
У деяких аспектах лінкер включає один або більше фрагментів поліетиленгліколю (ПЕГ), наприклад, 1, 2, 3, 4, 5 або 6 фрагментів ПЕГ. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер являє собою коротший лінкер ПЕГ та забезпечує поліпшену стабільність і зменшену агрегацію в порівнянні з довшими лінкерами ПЕГ.
І00157| У деяких варіантах реалізації винаходу спейсерна одиниця в лінкері містить один або більше фрагментів ПЕГ. У деяких варіантах реалізації винаходу спейсерна одиниця містить - (ПЕГ)т- та т є цілим числом від 1 до 10. У деяких варіантах реалізації винаходу т знаходиться в діапазоні від 1 до 10; від 2 до 8; від 2 до 6; від 2 до 5; від 2 до 4; або від 2 до 3. У
Зо деяких варіантах реалізації винаходу т дорівнює 8. У деяких варіантах реалізації винаходу т дорівнює 4. У деяких варіантах реалізації винаходу т дорівнює 3. У деяких варіантах реалізації винаходу т дорівнює 2. У деяких варіантах реалізації винаходу спейсерна одиниця містить (ПЕГ)2, (ПЕГ)4, (ПЕГ)8, (ПЕГ)У, (ПЕГ)З-триазол- (ПЕГ)3, (ПЕГ)4-триазол- (ПЕГ)3, або дибензилциклооктен-триазол- (ПЕГ)3. У деяких переважних варіантах реалізації винаходу спейсерна одиниця містить (ПЕГ)2. У деяких варіантах реалізації винаходу АОС, який містить коротшу спейсерну одиницю (наприклад, (ПЕГ)2), демонструє нижчі рівні агрегації та/"або вищий вміст лікарського засобу (р) в порівнянні з АЮС, який містить довшу спейсерну одиницю (наприклад, (ПЕГ)8).
ІЇ00158| У деяких варіантах реалізації винаходу спейсерна одиниця в лінкері містить алкільний фрагмент. У деяких варіантах реалізації винаходу спейсерна одиниця містить - (СНг)п-, та п є цілим числом від 1 до 10 (тобто, п може бути 1,2, 3,4, 5,6, 7, 8, 9 або 10). У деяких варіантах реалізації винаходу п дорівнює 5. У деяких варіантах реалізації винаходу АОС, який містить коротшу спейсерну одиницю (наприклад, (СН2)5), демонструє нижчі рівні агрегації та/або вищий вміст лікарського засобу (р) в порівнянні з АОС, який містить довшу спейсерну одиницю (наприклад, (ПЕГ)8).
І00159| Спейсерна одиниця може бути застосована, наприклад, для зв'язування фрагмента антитіла з фрагментом лікарського засобу, прямо або або опосередковано. У деяких варіантах реалізації винаходу спейсерна одиниця безпосередньо зв'язує фрагмент антитіла з фрагментом лікарського засобу. У деяких варіантах реалізації винаходу фрагмент антитіла та фрагмент лікарського засобу приєднуються через спейсерну одиницю, що містить один або більше фрагментів ПЕГ (наприклад, (ПЕГ)2 або (ПЕГ)4). У деяких варіантах реалізації винаходу спейсерна одиниця опосередковано зв'язує фрагмент антитіла з фрагментом лікарського засобу. У деяких варіантах реалізації винаходу спейсерна одиниця зв'язує фрагмент антитіла з фрагментом лікарського засобу опосередковано через фрагмент, що розщеплюється (наприклад, пептид, що розщеплюється, дисульфід, що розщеплюється, або сульфонамід, що розщеплюється) та/або приєднаний фрагмент для приєднання спейсерної одиниці до фрагменту антитіла, наприклад, малеїмідного фрагменту.
І00160| Спейсерна одиниця в різних варіантах реалізації винаходу прикріплюється до фрагменту антитіла (тобто до антитіла або антигензв'язуючого фрагменту) через малеімідний бо фрагмент (МаїЇї). У деяких варіантах реалізації винаходу АОС, що містить лінкер, приєднаний до фрагменту антитіла через малеімідний фрагмент, демонструє вищий вміст лікарського засобу (р) у порівнянні з АОС, що містить лінкер, приєднаний до фрагменту антитіла через альтернативний приєднаний фрагмент, такий як сукцинімідний фрагмент.
ІЇ00161| Спейсерна одиниця, що прикріплюється до антитіла або антигензв'язуючого фрагменту через Маї, згадується в цьому документі як "МаІ-спейсерна одиниця". В цьому контексті термін "малеімідний фрагмент" означає сполуку, що містить малеїмідну групу, та яка реагує з сульфгідрильною групою, наприклад, сульфгідрильною групою залишку цистеїну на фрагменті антитіла. Інші функціональні групи, що реагують з сульфгідрильними групами (тіолами), включають йодацетамід, бромацетамід, вінілпіридин, дисульфід, піридилдисульфід, ізоціанати та ізотіоцианат, але не обмежуються ними. У деяких варіантах реалізації винаходу
Ма!-спейсерна одиниця реагує із залишком цистеїну на антитілі або антигензв'язуючому фрагменті. У деяких варіантах реалізації винаходу МаІ-спейсерна одиниця з'єднується з антитілом або антигензв'язуючим фрагментом через залишок цистеїну. У деяких варіантах реалізації винаходу МаІ-спейсерна одиниця містить ПЕГ-фрагмент. У деяких варіантах реалізації винаходу Ма!І-спейсерна одиниця містить алкільний фрагмент. (00162) В окремих випадках реалізації винаходу лінкер містить МаІ-спейсерна одиниця та пептидний фрагмент, що розщеплюється. У деяких варіантах реалізації винаходу пептидний фрагмент, що розщеплюється, містить амінокислотну одиницю. У деяких варіантах реалізації винаходу амінокислотна одиниця містить МаІ-Сї. У деяких варіантах реалізації винаходу амінокислотна одиниця містить АІа-АіІа-А5п. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить Ма!І-спейсерна одиниця та Ма!-Сії. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить
Ма!--ПЕГ)2 та Мма!-Сії. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить МаІ--ПЕГ)т та Ма!-
Сії де т складає від 2 до 8 або від 2 до 5, або 2, 3, 4 або 5. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить МаІ--ПЕГ)8 та МаІ-Сї. В окремих випадках реалізації винаходу лінкер містить МаІ-«СН2)5 та Ма!І-Сйї. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить Маї!- спейсерна одиниця та АїІа-Аіа-Азп. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить Ма!- (ПЕГ)2 та АІа-АІа-Авп. 00163) У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить МаІ-спейсерна одиниця та дисульфідний фрагмент, що розщеплюється. У деяких варіантах реалізації винаходу
Зо дисульфідний фрагмент, що розщеплюється, є дисульфідил-диметилом. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить МаІ-спейсерна одиниця та дисульфідил-диметил. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить Ма!І--ПЕГ)4-триазол--ПЕГ)З3 та дисульфідил- диметил. 00164) У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить МаІ-спейсерна одиниця та сульфонамідний фрагмент, що розщеплюється. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить МаІ--ПЕГ)4-триазол-(ПЕГ)З та сульфонамід.
І00165| У різних варіантах реалізації винаходу спейсерна одиниця прикріплюється до антитілу або антигензв'язуючому фрагменту через сукцинімідний фрагмент (О5и1и). Спейсерна одиниця, що прикріплюється до антитіла або антигензв'язуючого фрагменту через О5иИ, згадується в цьому документі як "ОБи-спейсерна одиниця". В цьому контексті термін "сукцинімідний фрагмент" означає сполуку, що містить сукцинімідну сполуку, яка реагує з аміногрупою, наприклад, аміногрупою лізинового залишку на фрагменті антитіла. Типовий сукцинімідний фрагмент є М-гідроксисукцинімід (МН5З). У деяких варіантах реалізації винаходу
О5Би-спейсерна одиниця реагує із залишком лізину на антитілі або антигензв'язуючому фрагменті. У деяких варіантах реалізації винаходу ОБи-спейсерна одиниця з'єднується з антитілом або антигензв'язуючим фрагментом через залишок лізину. У деяких варіантах реалізації винаходу ОБЗи-спейсерна одиниця містить ПЕГ-фрагмент. У деяких варіантах реалізації винаходу ОЗи-спейсерна одиниця містить алкільний фрагмент. (00166) В окремих варіантах реалізації винаходу лінкер містить О5и-спейсерна одиниця та пептидний фрагмент, що розщеплюється. У деяких варіантах реалізації винаходу пептидний фрагмент, що розщеплюється, містить амінокислотну одиницю. У деяких варіантах реалізації винаходу амінокислотна одиниця містить МаІ-Сї. У деяких варіантах реалізації винаходу амінокислотна одиниця містить АІа-АіІа-А5п. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить ОБи-спейсерна одиниця та МаІ-Сй. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить ОБи -(ПЕГ)2 та Ма!-Сії. В інших варіантах реалізації винаходу лінкер містить О5и-(ПЕГ)9 та МаІ-Сйї. В інших варіантах реалізації винаходу лінкер містить О5и-(СН2г)5 та Ма!І-Сії. В окремих варіантах реалізації винаходу лінкер містить О5и-(ПЕГ)З-триазол-«ПЕГ)З та Ма!І-Сїї. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить ОЗи-спейсерна одиниця та АїІа-Аіа-Авп. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить О5и-(ПЕГ)2 та АІа-Аіа-Авп. бо І00167| У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить ОЗи-спейсерна одиниця та дисульфідний фрагмент, що розщеплюється. У деяких варіантах реалізації винаходу дисульфідний фрагмент, що розщеплюється, є дисульфідил-диметилом. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить О5и-спейсерна одиниця та дисульфідил-диметил. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить О5и-(ПЕГ)З-триазол--«ПЕГ)З3 та дисульфідил- диметил. В інших варіантах реалізації винаходу лінкер містить ОЗи-дибензилциклооктен- триазол-(ПЕГ)З та дисульфідил-диметил. 00168) У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить ОЗи-спейсерна одиниця та сульфонамідний фрагмент, що розщеплюється. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить О5!и-(ПЕГ)З-триазол--«ПЕГ)З3 та сульфонамід. В інших варіантах реалізації винаходу лінкер містить Ози-дибензилциклооктен-триазол-(ПЕГ)З та сульфонамід. 00169) У деяких варіантах реалізації винаходу МаІ-спейсерна одиниця або ОЗи-спейсерна одиниця приєднують фрагмент антитіла (тобто антитіло або антигензв'язуючий фрагмент) до фрагменту, що розщеплюється, в лінкері. У деяких варіантах реалізації винаходу МаІ-спейсерна одиниця або ОЗи-спейсерна одиниця приєднують антитіло або антигензв'язуючий фрагмент до пептидного фрагменту, що розщеплюється. У деяких варіантах реалізації винаходу пептидний фрагмент, що розщеплюється, містить амінокислотну одиницю. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить МаІ-спейсерна одиниця-амінокислотна одиниця або ОБЗи-спейсерна одиниця-амінокислотна одиниця. У деяких варіантах реалізації винаходу Маї!-спейсерна одиниця або ОБи-спейсерна одиниця містить ПЕГ-фрагмент. У деяких варіантах реалізації винаходу МаІ-спейсерна одиниця або Оби-спейсерна одиниця містить алкільний фрагмент. У деяких варіантах реалізації винаходу амінокислотна одиниця містить Ма!1!-Сії. В інших варіантах реалізації винаходу амінокислотна одиниця містить Аїа-АІа-Авп. 00170) У деяких варіантах реалізації лінкер містить структуру: МаІ-спейсерна одиниця-Маї-
Сі У деяких варіантах реалізації лінкер містить структуру: Ма!І--«ПЕГ)2-МаІ-Сй. У деяких варіантах реалізації лінкер містить структуру: МаІ--«ПЕГ)2-МаІ-Сп-рАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить Ма!І--«ПЕГ)8-МаІ-Сйї. В певних випадках реалізації винаходу лінкер містить МаІ--СН2г)5-МаІ-Сй. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить Маї- спейсерна одиниця-Аіа-АІа-Азп. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить Маї!- (ПЕГ)2-АІіа-Аіа-Авп.
Зо 00171) У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить О5и-спейсерна одиниця-Маї!-
Сії. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить О5и-(ПЕГ)2-Ма!-Сії. В інших варіантах реалізації винаходу лінкер містить О5и-(ПЕГ)9-Ма!І-Сї. В інших варіантах реалізації винаходу лінкер містить ОЗи-(СН2)5-Ма!І-Сїї. В інших варіантах реалізації винаходу лінкер містить О5и- (ПЕГ)З-триазол-«(ПЕГ)3-МаІ-Сй. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить О5и- спейсерна одиниця-АІа-Аіа-А5зп. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить О5и- (ПЕГ)2-АІіа-Аіа-Авп. 00172) У різних варіантах реалізації винаходу МаІ-спейсерна одиниця або ОЗи-спейсерна одиниця приєднують антитіло або антигензв'язуючий фрагмент до дисульфідного фрагменту, що розщеплюється. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить МаіІ-спейсерна одиниця-дисульфід або ОЗи-спейсерна одиниця-дисульфід. У деяких варіантах реалізації винаходу дисульфід є дисульфідил-диметилом. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить МаІ-спейсерна одиниця-дисульфідил-диметил. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить МаІ--ПЕГ)4-триазол-«ПЕГ)З-дисульфідил-диметил. В інших варіантах реалізації винаходу лінкер містить ОБи-спейсерна одиниця-дисульфідил-диметил. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить О5и-(ПЕГ)З-триазол-«ПЕГ)З-дисульфідил-диметил. В інших варіантах реалізації винаходу лінкер містить О5бБи-дибензилциклооктен-триазол-(ПЕГ)3- дисульфідил-диметил. 00173) У певних варіантах реалізації винаходу МаІ-спейсерна одиниця або ОЗи-спейсерна одиниця приєднують антитіло або антигензв'язуючий фрагмент до сульфонамідного фрагменту, що розщеплюється. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить Ма!-спейсерна одиниця-сульфонамід або ОЗи-спейсерна одиниця-сульфонамід. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить МаІ-«"ПЕГ)4-триазол-«(ПЕГ)З-сульфонамід. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить О5и!и-(ПЕГ)З-триазол-«ПЕГ)3-сульфонамід. В інших варіантах реалізації винаходу лінкер містить Ози-дибензилциклооктен-триазол-«(ПЕГ)3-сульфонамід. 00174) У різних варіантах реалізації винаходу фрагмент, що розщеплюється, в лінкері з'єднується безпосередньо з фрагментом лікарського засобу. В інших варіантах реалізації винаходу інша спейсерна одиниця застосовується для прикріплення фрагмента, що розщеплюється, в лінкері до фрагмента лікарського засобу. У різних варіантах реалізації винаходу фрагмент лікарського засобу є ерібуліном. У різних варіантах реалізації винаходу бо ерібулін приєднаний до фрагмента, що розщеплюються, в лінкері за допомогою спейсерної бо одиниці. У деяких варіантах реалізації винаходу ерібулін приєднаний до фрагмента, що розщеплюються, в лінкері за допомогою спейсерної одиниці, що саморозщеплюється. У деяких варіантах реалізації винаходу ерібулін приєднаний до фрагмента, що розщеплюються, в лінкері за допомогою спейсерної одиниці, що саморозщеплюється, фрагмент, що розщеплюється, містить МаІ-Сії, а додаткова спейсерна одиниця, яка містить ПЕГ, з'єднує фрагмент, що розщеплюється, з фрагментом антитіла. В окремих варіантах реалізації винаходу ерібулін з'єднується з антитілом до ЕКА через МаІ-спейсерна одиниця в лінкері, з'єднаному з фрагментом, що розщеплюється, Маі-СИйЙ та спейсерною одиницею рАВ, що саморозщеплюється. У певних інших варіантах реалізації винаходу ерібулін з'єднується з антитілом до Ппег2 через МаІ-спейсерная одиниця в лінкері, з'єднаному з фрагментом, що розщеплюється, Ма!1!-Сії та спейсерною одиницею рАВ, що саморозщеплюється. 00175) Спейсерна одиниця може бути "такою, що саморозщеплюється" або "такою, що не саморозщеплюється". "Така, що не саморозщеплюється" спейсерна одиниця, є спейсерною одиницею, що повністю або частково залишається зв'язаною з фрагментом лікарського засобу при розщепленні лінкера. Приклади спейсерних одиниць, що не саморозщеплюється, включають гліцинову спейсерну одиницю та гліцин-гліцинову спейсерну одиницю, але не обмежуються ними. Спейсерні одиниці, що не саморозщеплюються, можуть з часом деградувати, але не можуть легко в повній мірі вивільняти зв'язаний нативний лікарський засіб в клітинних умовах. "Така, що саморозщеплюється" спейсерна одиниця забезпечує вивільнення фрагмента нативного лікарського засобу у внутрішньоклітинних умовах. "Нативний лікарський засіб" є лікарським засобом, у якому після розщеплення/деградації спейсерної одиниці не залишається частини спейсерної одиниці або іншої хімічної модифікації. 00176) Хімія саморозщеплення відома в цій галузі техніки та може бути легко вибрана для описаних АЮС. У різних варіантах реалізації винаходу спейсерна одиниця, що прикріплює фрагмент, що розщеплюється, в лінкері до фрагменту лікарського засобу (наприклад, ерібуліну), є такою, що саморозщеплюється та піддається саморозщепленню одночасно з або незадовго до/після розщеплення фрагмента, що розщеплюється, за внутрішньоклітинних умов.
І00177| У деяких варіантах реалізації винаходу спейсерна одиниця, що саморозщеплюється, в лінкері містить п-амінобензильну групу. У деяких варіантах реалізації винаходу, п-
Зо амінобензиловий спирт (рАВОН) приєднаний до амінокислотної одиниці або іншого фрагменту, що розщеплюється, в лінкері за допомогою амідного зв'язку, та між рАВОН їі фрагментом лікарського засобу утворюється карбамат, метилкарбамат або карбонат (Натапп та співавт. (2005 рік) Ехреп Оріп. Тег. Раїепі5 15:1087-103). У деяких варіантах реалізації винаходу спейсерна одиниця, що саморозщеплюється, є або містить п-амінобензилоксикарбоніл (рАВ).
Не прив'язуючись до теорії, вважається, що рАВ, що саморозщеплюється, включає спонтанну реакцію 1,6-елімінації (даїп та співавт. (2015 рік) Рпапт Кез 32:3526-40). 00178) У різних варіантах реалізації винаходу структура п-амінобензилоксикарбонілу (рАВ), що застосовується в описаних АОС, показана нижче: їв М ная ши ен, фр-аміно-йензлюве тан 001791 У різних варіантах реалізації винаходу спейсерна одиниця, що саморозщеплюється, прикріплює фрагмент, що розщеплюється, в лінкері до аміну С-35 на ерібуліні. У деяких варіантах реалізації винаходу спейсерна одиниця, що саморозщеплюється, є рАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу рАВ прикріплює фрагмент, що розщеплюється, в лінкері до аміну
С-35 на ерібуліні. У деяких варіантах реалізації винаходу рАВ піддається саморозщепленню при розщепленні фрагмента, що розщеплюється, та ерібулін вивільняється з АОС в його нативній, активній формі. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло до ЕКА (наприклад, МОКАбБ- 003) з'єднується з аміном С-35 ерібуліну за допомогою лінкера, що містить МаІ--«ПЕГ)2-МаІ-Сі- рАВ. В інших варіантах реалізації винаходу антитіло до Ппег2 (наприклад, трастузумаб) з'єднується з аміном С-35 ерібуліну за допомогою лінкера, що містить МаІ--ПЕГ)2-МаІ-Сйи-рАВ.
ІЇ00180| У деяких варіантах реалізації винаходу рАВ піддається саморозщепленню при розщепленні пептидного фрагмента, що розщеплюється, в лінкері. У деяких варіантах реалізації винаходу пептидний фрагмент, що розщеплюється, містить амінокислотну одиницю. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить амінокислотна одиниця-рАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу амінокислотна одиниця є МаІ-Сї. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить МаІ-СИЕ-рАВ (МСР). В окремих варіантах реалізації винаходу амінокислотна одиниця є АПа-АІа-Авп. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить АІа-АІа-А5п-рАВ.
ІЇ00181| У деяких варіантах реалізації винаходу рАВ піддається саморозщепленню при розщепленні дисульфідного фрагмента, що розщеплюється, в лінкері. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить дисульфід-рАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить дисульфідил-диметил-рАВ.
І00182| У деяких варіантах реалізації винаходу рАВ піддається саморозщепленню при розщепленні сульфонамідного фрагмента, що розщеплюється, в лінкері. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить сульфонамід-рАВ. (00183) В різноманітних аспектах фрагмент антитіла АОС кон'югує з фрагментом лікарського засобу за допомогою лінкера, при цьому лінкер містить МаІ-спейсерна одиниця, амінокислотну одиницю, що розщеплюється, та рАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу спейсерна одиниця містить ПЕГ-фрагмент. У деяких варіантах реалізації винаходу спейсерна одиниця містить алкільний фрагмент. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить МаІ--ПЕГ)2- амінокислотна одиниця-рАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить МаІ--ПЕГ)2-
Ма!-Сп-рАВ. В інших варіантах реалізації винаходу лінкер містить МаІ--«ПЕГ)2-АІа-АіІа-Азп-рАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить МаІ--ПЕГ)в8-амінокислотна одиниця-рАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить МаІ--ПЕГ)8-МаІ-Сп-рАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить МаІ--«СН2)5-амінокислотна одиниця-рАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить МаІ-(СН2г)5-МаІ-СП-рАВ.
І00184| У різних варіантах реалізації винаходу фрагмент антитіла АОС кон'югує з фрагментом лікарського засобу за допомогою лінкера, при цьому лінкер містить МаІ-спейсерна одиниця-дисульфід-рРАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу спейсерна одиниця містить
ПЕГ-фрагмент. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить МаІ-«"ПЕГ)4-триазол- (ПЕГ)З-дисульфід-рРАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить МаІ--ПЕГ)4- триазол-(ПЕГ)З-дисульфідил-диметил-рАВ.
І00185| У деяких варіантах реалізації винаходу фрагмент антитіла АОС кон'югує з
Зо фрагментом лікарського засобу за допомогою лінкера, при цьому лінкер містить МаІ-спейсерна одиниця-сульфонамід-рАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу спейсерна одиниця містить
ПЕГ-фрагмент. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить МаІ-«"ПЕГ)4-триазол- (ПЕГ)З3-сульфонамід-рАВ. 00186) У деяких аспектах фрагмент антитіла АОС кон'югує з фрагментом лікарського засобу за допомогою лінкера, при цьому лінкер містить ОБи-спейсерна одиниця-амінокислотна одиниця-рРАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу спейсерна одиниця містить ПЕГ- фрагмент. У деяких варіантах реалізації винаходу спейсерна одиниця містить алкільний фрагмент. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить О5и-(ПЕГ)2-амінокислотна одиниця-рАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить О5!и-(ПЕГ)2-МаІ-Сйп-рАВ. В інших варіантах реалізації винаходу лінкер містить О5и-(ПЕГ)2-АІа-АіІа-Азп-рАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить О5и-(ПЕГ)9-амінокислотна одиниця-рАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить О5!и-(ПЕГ)9-МаІ-Сп-рАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить ОЗи-(СН2г)5-амінокислотна одиниця-рАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить О5Зи-(СН2г)5-Маі-СП-рАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить О5и-(ПЕГ)З-триазол-«ПЕГ)З-амінокислотна одиниця-рАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить О5и-(ПЕГ)З-триазол-«ПЕГ)3-МаІ-Сп-рАВ.
І00187| У деяких варіантах реалізації винаходу фрагмент антитіла АОС кон'югує з фрагментом лікарського засобу за допомогою лінкера, при цьому лінкер містить ОБи-спейсерна одиниця-дисульфід-рРАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу спейсерна одиниця містить
ПЕГ-фрагмент. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить О5Би-(ПЕГ)З-триазол- (ПЕГ)З-дисульфід-рРАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить О5и-(ПЕГ)З3- триазол-«-«ПЕГ)З-дисульфідил-диметил-рАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить ОЗи-дибензилциклооктен-триазол-(ПЕГ)З-дисульфід-рАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить ОЗи-дибензилциклооктен-триазол-«ПЕГ)З-дисульфідил-диметил-рАВ.
Ї00188| У деяких варіантах реалізації винаходу фрагмент антитіла АОС кон'югує з фрагментом лікарського засобу за допомогою лінкера, при цьому лінкер містить ОБи-спейсерна одиниця-сульфонамід-рАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу спейсерна одиниця містить
ПЕГ-фрагмент. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить ОБЗи-(ПЕГ)З-триазол- (ПЕГ)З-сульфонамід-рАВ. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить О5и- бо дибензилциклооктен-триазол-«ПЕГ)3-сульфонамід-рАВ.
І00189| У різних варіантах реалізації винаходу лінкер призначений для полегшення неспецифічного цитолізу (знищення сусідніх клітину шляхом розщеплення після клітинної інтерналізації та дифузії фрагмента лінкер-лікарський засіб та/(або фрагмента лікарського засобу окремо до сусідніх клітин. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер сприяє клітинній інтерналізації. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер призначений для зведення до мінімуму розщеплення в позаклітинному середовищі та, таким чином, для зниження токсичності по відношенню до нецільової тканини (наприклад, не ракової тканини), при збереженні зв'язування АЮС з цільовою клітиною та неспецифічним цитолізом ракової тканини, що не експресує антиген, націлений на фрагмент антитіла АОС, але оточує цільову ракову тканину, що експресує цей антиген. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер, що містить малеіїмідний фрагмент (Маї), фрагмент поліетиленгліколю (ПЕГ), валін-цитрулін (МаІ-СИ або "ме") та рАВ, забезпечує ці функціональні ознаки. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер, що містить Ма!І- (ПЕГ)2-МаІ-Сп-рАВ особливо ефективний для забезпечення цих функціональних ознак, наприклад, при з'єднанні фрагмента антитіла до ЕКА, такого як МОКАБ-003, та фрагмента лікарського засобу, такого як ерібулін. У деяких варіантах реалізації винаходу, щонайменше, деякі з цих функціональних ознак також можуть спостерігатися без фрагмента антитіла до ЕКА та/або без МОКАБ-003. Наприклад, в деяких варіантах реалізації винаходу лінкер, що містить Ма(ПпЕГ)2-МаІ-СпЕ-рАВ ефективний для забезпечення всіх або деяких з цих функціональних ознак, наприклад, при з'єднанні фрагмента антитіла до Пег2, такого як трастузумаб, та фрагмента лікарського засобу, такого як ерібулін.
Ї00190| У деяких варіантах реалізації винаходу фрагмент антитіла кон'югований з фрагментом лікарського засобу за допомогою лінкера, що містить малеімідний фрагмент (Маї), фрагмент поліетиленгліколю (ПЕГ), валін цитрулін (МаІ-СИ або "мс") та рАВ. У цих варіантах реалізації винаходу малеіїмідний фрагмент ковалентно приєднує фрагмент лінкера-лікарського засобу до фрагменту антитіла, а рАВ діє як спейсерна одиниця, що саморозщеплюється. Такий лінкер може згадуватися як лінкер "т-ус-рАВ", лінкер "МаІ-МСР", лінкер "МаІ--ПЕГ)2-МСР", або лінкер "МаІ--ПЕГ)2-МаІ-Сп-рАВ". У деяких варіантах реалізації винаходу фрагмент лікарського засобу є ерібуліном. Структура МаІ--«ПЕГ)2-МаІ-СпП-рАВ-ерібулін приведена в Таблиці 46. рАВ лінкера МаІ--ПЕГ)2-МаІ-СП-рАВ приєднаний до аміну С-35 на ерібуліні.
Зо І00191| Було виявлено, що АОС, що містять МаІ--ПЕГ)2-МаІ-СП-рАВ-ерібулін, демонструють конкретну комбінацію бажаних властивостей, особливо у випадку якщо спарені з антитілом до
ЕКА, таким як МОКАБ-003, або його антигензв'язуючим фрагментом. Ці властивості включають, але не обмежуються ними, ефективні рівні вмісту лікарського засобу (р - 4), низькі рівні агрегації, стабільність в умовах зберігання або при циркуляції в організмі (наприклад, стабільність в сироватці крові), збереження афінності до клітин, що експресують мішень у порівнянні з некон'югованим антитілом, сильну цитотоксичність проти клітин, що експресують мішень, низькі рівні нецільового знищення клітин, високі рівні неспецифічного цитолізу та/або ефективну протиракову активність іп мімо, все в порівнянні з АОС із застосуванням інших лінкер- токсинів та/або антитіл. У той час як численні варіанти лінкера та комбінації спейсерів і сайтів розщеплення були відомі в цій галузі техніки та можуть забезпечити певні переваги в одній або більше з цих функціональних категорій, конкретна комбінація МаІ--«ПЕГ)2-МаІ-СП-рАВ, що з'єднує ерібулін з фрагментом антитіла, таким як антитіло до ЕКА (наприклад, МОКАБ-003), може забезпечувати хороші або чудові властивості по всьому спектру бажаних функціональних властивостей для терапевтичного АЮС. У деяких варіантах реалізації винаходу хороші або чудові функціональні властивості, що забезпечуються конкретною комбінацією лінкера Маї!Ї- (ПЕГ)2-МаІ-СПТ-рАВ, що з'єднує ерібулін з фрагментом антитіла, можуть спостерігатися з цим лінкер-токсином, кон'югованим з, наприклад, антитілом до Пег2, таким як трастузумаб. 00192) У деяких варіантах реалізації винаходу АОС містить МаІ--ПЕГ)2-МаІ-Сп-рАВ-ерібулін та фрагмент антитіла, що містить антитіло, що інтерналізується, або його антигензв'язуючий фрагмент, який зберігає здатність до націлювання та інтерналізації в пухлинній клітині. У деяких варіантах реалізації винаходу АЮС містить МаІ--|ПЕГ)2-МаІ-Спі-рАВ-ерібулін та антитіло, що інтерналізується, або його антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, який націлений на пухлинні клітини, що експресують ЕКА. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується, або його антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, який націлений на пухлинну клітину, що експресує ЕКА, містить три ділянки, що визначають комплементарність важкого ланцюга (НСОК), що містять амінокислотні послідовності з «ЕО ІЮ МО: 2 (НСОКІ), 5ЕО
ІО МО: З (НСОК2) та 5ЕО ІЮО МО: 4 (НСОКЗ); три ділянки, що визначають комплементарність легкого ланцюга (-СОК), що містять амінокислотні послідовності з «ЕО ІЮ МО: 7 (СОМ), ЗЕО
ІО МО: 8 (І СО2) та 5ЕО ІОЮ МО: 9 (І СОКЗ), як визначено системою нумерації Кабата; або три бо ділянки, що визначають комплементарність важкого ланцюга (НСОК), що містять амінокислотні послідовності з 560 ІЮ МО: 13 (НСОКТ), 5ЕО ІЮ МО: 14 (НСОК2) та 5ЕО ІЮ МО: 15 (НСОКУ); та три ділянки, що визначають комплементарність легкого ланцюга (СОМ), що містять амінокислотні послідовності з ФЕО ІЮ МО: 16 (СОМ), 5ЕО І МО: 17 (І СОК2) та ЗЕО І МО: 18 (СОКЗ), як визначено системою нумерації ІМТ. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується, або його антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, який націлений на пухлинні клітини, що експресують ЕКА, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність з 5ЕО ІЮ МО: 23, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність з БЕО ІЮО МО: 24. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується, або його антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, який націлений на пухлинні клітини, що експресують ЕКА, містить константний домен важкого ланцюга ІдДо1 людини та константний домен легкого ланцюга каппа Ід. 00193) У деяких варіантах реалізації винаходу АОС має Формулу І:
АР-(--О) р (І) в якій: () АБ є антитілом, що інтерналізується, до рецептора фолієвої кислоти альфа (ЕКА) або його антигензв'язуючим фрагментом, що інтерналізується, що містить три ділянки, що визначають комплементарність важкого ланцюга (НОСОК), що містять амінокислотні послідовності з «ЕО ІЮ МО: 2 (НСОКІ), 5ЕО ІО МО: З (НСОК2) та 5ЕО ІЮ МО: 4 (НСОКЗ); три ділянки, що визначають комплементарність легкого ланцюга (СОК), що містять амінокислотні послідовності з зХЕО І МО: 7 (І СОК1), 5ЕО ІЮ МО: 8 (І СОК2) та 5ЕО І МО: 9 (І СОКУ), як визначено системою нумерації Кабата; або три ділянки, що визначають комплементарність важкого ланцюга (НСОК), що містять амінокислотні послідовності з «ЕО ІЮ МО: 13 (НСОК'І),
ЗБО ІЮ МО: 14 (НСОК2) та 5ЕБО ІО МО: 15 (НСОКЗ); та три ділянки, що визначають комплементарність легкого ланцюга (СОК), що містять амінокислотні послідовності з БЕО ІЮ
МО: 16 (СОВА), 5ЕО І МО: 17 (СОК2) та 5ЕО ІЮ МО: 18 (СОМ), як визначено системою нумерації ІМОТ; (і) О є ерібуліном; (ії) І є лінкером, що розщеплюється, що містить МаІ-«ПЕГ)2-МаІ-Сі-рАВ; та (ім) р є цілим числом від 1 до 20.
Зо 00194) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується, або його антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність з 5ЕО ІЮ МО: 23, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність з БЕО ІЮО МО: 24. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується є МОКАБ-003. У деяких варіантах реалізації винаходу р дорівнює від 1 до 8 або від 1 до 6. У деяких варіантах реалізації винаходу р дорівнює від 2 до 8 або від 2 до 5. У деяких варіантах реалізації винаходу р дорівнює від З до 4.
У деяких варіантах реалізації винаходу р дорівнює 4. 00195) В інших варіантах реалізації винаходу АОС містить МаІ--ПЕГ)2-МаІ-Сп-рАВ-ерібулін та антитіло, що інтерналізується, або його антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, який націлений на пухлинні клітини, що експресують Ппег2. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується, або його антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, який націлений на пухлинну клітину, що експресує Пег2, містить три ділянки, що визначають комплементарність важкого ланцюга (НСОК), що містять амінокислотні послідовності з «ЕС ІЮ МО: 71 (НСОКІ1), 5ЕО ІЮ МО: 72 (НСОК2) та 5ЕО ІЮ МО: 73 (НСОКУ); три ділянки, що визначають комплементарність легкого ланцюга (СОМ), що містять амінокислотні послідовності з 5ЕО ІЮ МО: 74 (СОМ), 5ЕО І МО: 75 (І СОК2) та ЗЕО І МО: 76 (І СОМКЗ3), як визначено системою нумерації Кабата; або три ділянки, що визначають комплементарність важкого ланцюга (НСОК), що містять амінокислотні послідовності з БЕО ІЮ
МО: 191 (НСОКТ), 5ЕО ІО МО: 192 (НСОК2) та 5ЕО ІЮ МО: 193 (НСОКЗ); та три ділянки, що визначають комплементарність легкого ланцюга (ІСОК), що містять амінокислотні послідовності з ФЕО ІЮ МО: 194 (СОМ), 5ЕО ІЮ МО: 195 (І. СОМК2) та 5ЕО ІО МО: 196 (І СОКУ), як визначено системою нумерації ІМОСТ. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується, або його антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, який націлений на пухлинні клітини, що експресують Ппег2, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність з ЗЕО ІЮ МО: 27, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність з ЗБО ІЮ МО: 28. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується, або його антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, який націлений на пухлинні клітини, що експресують Пег2, містить константний домен важкого ланцюга ІдДо1 людини та константний домен легкого ланцюга каппа Ід. бо 00196) У деяких варіантах реалізації винаходу АОС має Формулу І:
АР-(--О) р (І) в якій: () АБ є антитілом, що інтерналізується, до рецептора людського епідермального фактора росту 2 типу (пег2) або його антигензв'язуючим фрагментом, що інтерналізується, що містить три ділянки, що визначають комплементарність важкого ланцюга (НСОК), що містять амінокислотні послідовності з «БО ІЮ МО: 71 (НСОМІ1), 5ЕО ІЮ МО: 72 (НСОК2) та 5ЕО ІО МО: 73 (НСОКЗ); три ділянки, що визначають комплементарність легкого ланцюга (СОК), що містять амінокислотні послідовності з БЕО ІЮ МО: 74 (І СОК1), 5ЕО ІЮ МО: 75 (І. СОМК2) та ЗЕО
ІО МО: 76 (СОМ), як визначено системою нумерації Кабата; або три ділянки, що визначають комплементарність важкого ланцюга (НСОК), що містять амінокислотні послідовності з БЕО ІЮ
МО: 191 (НСОКТ), 5ЕО ІО МО: 192 (НСОК2) та 5ЕО ІЮ МО: 193 (НСОКЗ); та три ділянки, що визначають комплементарність легкого ланцюга (ІЇСОК), що містять амінокислотні послідовності з «ЗЕО ІЮ МО: 194 (СОМ), 5ЕО ІЮ МО: 195 (| СОК2) та ЗЕО ІЮ МО: 196 (І СОН), як визначено системою нумерації ІМОТ; (ії) О є ерібуліном; (ії) І є лінкером, що розщеплюється, що містить МаІ-«ПЕГ)2-МаІ-Сі-рАВ; та (ім) р є цілим числом від 1 до 20.
І00197| У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується, або його антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність з 5ЕО ІЮ МО: 27, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність з «ЕО ІО МО: 28. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується є трастузумабом. У деяких варіантах реалізації винаходу р дорівнює від 1 до 8 або від 1 до 6. У деяких варіантах реалізації винаходу р дорівнює від 2 до 8 або від 2 до 5. У деяких варіантах реалізації винаходу р дорівнює від З до 4. У деяких варіантах реалізації винаходу р дорівнює 4. 00198) В інших варіантах реалізації винаходу АОС містить МаІ--ПЕГ)2-МаІ-Сп-рАВ-ерібулін та антитіло, що інтерналізується, або його антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, який націлений на пухлинні клітини, що експресують мезотелін (М5І М). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується, або його антигензв'язуючий фрагмент, що
Зо інтерналізується, який націлений на пухлинну клітину, що експресує М5І-М, містить три ділянки, що визначають комплементарність важкого ланцюга (НСОК), що містять амінокислотні послідовності з «ЕС ІЮ МО: 65 (НСОКІ1), 5ЕО ІЮ МО: 66 (НСОК2) та 5ЕО ІЮ МО: 67 (НСОКУ); три ділянки, що визначають комплементарність легкого ланцюга (ЇСОК), що містять амінокислотні послідовності з ФЕО ІЮ МО: 68 (СОСОК), 5ЕО І МО: 69 (І СОК2) та ЗЕО І МО: 70 (І СОКЗ3) як визначено системою нумерації Кабата; або три ділянки, що визначають комплементарність важкого ланцюга (НСОК), що містять амінокислотні послідовності з БЗЕО ІЮ
МО: 185 (НСОКТ), 5ЕО ІО МО: 186 (НСОК2) та 5ЕО ІЮ МО: 187 (НСОКЗ); та три ділянки, що визначають комплементарність легкого ланцюга (ІЇСОК), що містять амінокислотні послідовності з ФЕО ІЮ МО: 188 (І СОК1), 5ЕО І МО: 189 (.СОМК2) та 5ЕО ІЮ МО: 190 (І СОКЗ), як визначено системою нумерації ІМОСТ. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується, або його антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, який націлений на пухлинні клітини, що експресують М5ІМ, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність з ЗЕО ІЮ МО: 25, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність з ЗБО ІЮ МО: 26. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується, або його антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, який націлений на пухлинні клітини, що експресують М5іІМ, містить константний домен важкого ланцюга Ідс1 людини та константний домен легкого ланцюга каппа
Ід. 00199) У деяких варіантах реалізації винаходу АОС має Формулу І:
АРр-(І -О)р (І) в якій: () АБ є антитілом, що інтерналізується, до мезотеліну або його антигензв'язуючим фрагментом, що інтерналізується, що містить три ділянки, що визначають комплементарність важкого ланцюга (НСОК), що містять амінокислотні послідовності з «ЕО ІЮ МО: 65 (НСОК'І),
ЗБО І МО: 66 (НСОМК2) та 5ЕБО ІО МО: 67 (НСОКЗ); три ділянки, що визначають комплементарність легкого ланцюга (СОК), що містять амінокислотні послідовності з БЕО ІЮ
МО: 68 (СОР), 5ЕО ІЮ МО: 69 (СОК2) та 5ЕО ІЮ МО: 70 (СОМ), як визначено системою нумерації Кабата; або три ділянки, що визначають комплементарність важкого ланцюга (НСОК), що містять амінокислотні послідовності з зХЕО ІЮ МО: 185 (НСОКІ1), 5ЕО ІЮ МО: 186 (НСОК2З) та бо ЗЕО ІВ МО: 187 (НСОКЗ); та три ділянки, що визначають комплементарність легкого ланцюга
(СО), що містять амінокислотні послідовності з БЕО ІЮ МО: 188 (І СОК1), 5ЕБЕО ІЮ МО: 189 (СО2) та 5ЕО ІО МО: 190 (І СОКЗ), як визначено системою нумерації ІМОТ; (і) О є ерібуліном; (ії) І є лінкером, що розщеплюється, що містить МаІ-«ПЕГ)2-МаІ-Сі-рАВ; та (ім) р є цілим числом від 1 до 20.
І002О0| У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується, або його антигензв'язуючий фрагмент, що інтерналізується, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність з 5ЕО ІЮ МО: 25, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність з ЕО ІО МО: 26. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що інтерналізується є МОКАБ-003, МОНАБ-009 або трастузумабом. У деяких варіантах реалізації винаходу р дорівнює від 1 до 8 або від 1 до 6. У деяких варіантах реалізації винаходу р дорівнює від 2 до 8 або від 2 до 5. У деяких варіантах реалізації винаходу р дорівнює від З до 4. У деяких варіантах реалізації винаходу р дорівнює 4.
Фрагменти лікарських засобів
І00201| Фрагмент лікарського засобу (ЮД) АОС, що описаний в цьому документі, може бути будь-яким хіміотерапевтичних агентом. Корисні класи хіміотерапевтичних агентів включають, наприклад, антитубулінові агенти. В окремих варіантах реалізації винаходу фрагмент лікарського засобу є протитубуліновим агентом. Приклади антитубулінових агентів включають криптофіцін та ерібулін. Кращим фрагментом лікарського засобу для застосування в описаних
АБС є ерібулін. (002021 У різних варіантах реалізації винаходу фрагмент лікарського засобу є ерібуліном. У цих варіантах реалізації винаходу лінкер АОС приєднаний через амін С-35 на ерібуліні. 00203) У різних варіантах реалізації винаходу природна форма ерібуліну застосовується для з'єднання з лінкером та фрагментом антитіла, показана нижче: ;
ОН в Б й
МАМ сс ук и Я Шоодикя « Ше ши х Гах й - я і ня З в Си зх па Є Ще Ка
Ерібулін у-е і
І00204| У деяких варіантах реалізації винаходу проміжну сполуку, яка є попередником лінкера, піддають взаємодії з фрагментом лікарського засобу у відповідних умовах. В окремих варіантах реалізації винаходу реактивні групи застосовують на лікарському засобі та/або в проміжній сполуці або лінкері. Продукт реакції між лікарським засобом та проміжною сполукою
Ко) або дериватизованим лікарським засобом потім піддають взаємодії з антитілом або антигензв'язуючим фрагментом у відповідних умовах. В альтернативному варіанті, лінкер або проміжна сполука можуть спочатку взаємодіяти з антитілом або дериватизованим антитілом, а потім реагувати з лікарським засобом або дериватизованим лікарським засобом. 00205) Існує безліч різних реакцій для ковалентного приєднання лікарських засобів та/або лінкерів до фрагменту антитіла. Це часто досягається реакцією одного або більше амінокислотних залишків молекули антитіла, включаючи аміногрупи лізину, вільні карбоксильні групи глутамінової кислоти та аспарагінової кислоти, сульфгідрильні групи цистеїну та різні фрагменти ароматичних амінокислот. Наприклад, неспецифічне ковалентне приєднання може бути здійснено із застосуванням карбодиімідної реакції для зв'язування карбокси (або аміно) групи на сполуці з аміно або (карбокси) групою на фрагменті антитіла. Крім того, біфункціональні агенти, такі як диальдегіди або імідоефіри, також можуть бути застосовані для зв'язування аміногрупи на сполуці з аміногрупою на фрагменті антитіла. Також для прикріплення лікарського засобу до зв'язуючих агентів доступна реакція основи Шиффа. Цей спосіб включає окислення перйодату лікарського засобу, що містить гліколеві або гідроксильні групи, утворюючи таким чином альдегід, який потім піддають взаємодії зі зв'язуючим агентом.
Приєднання відбувається шляхом утворення основи Шиффа з аміногрупами зв'язуючого агента.
Ізотіоціанати також можуть бути застосовані в якості агентів, що сполучають, для ковалентного прикріплення лікарських засобів до зв'язуючих агентів. Інші методи відомі фахівцеві в цій галузі техніки та знаходяться в рамках цього опису.
Вміст лікарського засобу (00206) Вміст лікарського засобу представлено р, а також згадується в цьому документі як співвідношення лікарського засобу до антитіла (ВАК). Вміст лікарського засобу може становити від 1 до 20 фрагментів лікарського засобу на фрагмент антитіла. У деяких варіантах реалізації винаходу р є цілим числом від 1 до 20. У деяких варіантах реалізації винаходу р є цілим числом від 1 до 10, від 1 до 9, від 1 до 8, від 1 до 7, від 1 до 6, від 1 до 5, від 1 до 4, від 1 до З або від 1 до 2. У деяких варіантах реалізації винаходу р є цілим числом від 2 до 10, від 2 до 9, від 2 до 8, від2 до 7, від2 до 6, від 2 до 5, від 2 до 4 або від 2 до 3. У деяких варіантах реалізації винаходу р є цілим числом від З до 4. В інших варіантах реалізації винаходу р дорівнює 1, 2, 3, 4, 5 або 6, бажано З або 4.
І00207| Вміст лікарського засобу може бути обмежений кількістю сайтів приєднання на фрагменті антитіла. У деяких варіантах реалізації винаходу фрагмент лінкера (І) АОС прикріплюється до фрагменту антитіла через хімічно активну групу на одному або більше амінокислотних залишках на фрагменті антитіла. Наприклад, лінкер може бути приєднаний до фрагменту антитіла через вільну аміно, іміно, гідроксильну, тіольну або карбоксильну групу (наприклад, до М- або С-кінця, до епсилон-аміногрупи одного або більше залишків лізину, до вільної карбоксильної групи одного або більше залишків глутамінової кислоти або аспарагінової кислоти або до сульфгідрильної групи одного або більше залишків цистеїну). Сайт, до якого приєднаний лінкер, може бути залишком природного походження в амінокислотній послідовності фрагмента антитіла або може бути введений у фрагмент антитіла, наприклад, за допомогою рекомбінантної технології ДНК (наприклад, шляхом введення залишку цистеїну в амінокислотну послідовність) або біохімії білка (наприклад, шляхом відновлення, регулюванням рН або гідролізом).
І00208| У деяких варіантах реалізації кількість молекул лікарської речовини, які можна кон'югувати з фрагментом антитіла, обмежена кількістю вільних залишків цистеїну. Наприклад, якщо група, що приєднується, є тіольною групою цистеїну, антитіло може містити тільки одну або декілька тіольних груп цистеїну, або може містити тільки одну або декілька достатньо реакційноздатних тіольних груп, до яких можна приєднати лінкер. Як правило, антитіла не містять багатьох вільних та реакційноздатних тіольних груп цистеїну, що можуть бути зв'язані з
Зо фрагментом лікарського засобу. Дійсно, більшість тіольних залишків в антитілах існують у вигляді дисульфідних містків. Надмірне приєднання лінкер-токсину до антитіла може дестабілізувати антитіло шляхом зменшення залишків цистеїну, доступних для утворення дисульфідних містків. Отже, оптимальне співвідношення лікарський засіб:антитіло має збільшувати активність АОС (шляхом збільшення кількості приєднаних фрагментів лікарського засобу на антитіло) без дестабілізації фрагмента антитіла. У деяких варіантах реалізації винаходу оптимальне співвідношення може становити близько 3-4. 00209) У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер, приєднаний до фрагменту антитіла через фрагмент Маї, дає відношення близько 3-4. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер, приєднаний до фрагменту антитіла через альтернативний фрагмент (наприклад, фрагмент ОЗи), може забезпечувати менш оптимальне співвідношення (наприклад, нижче співвідношення, таке як близько 0-3). У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер, що містить коротку спейсерну одиницю (наприклад, коротку спейсерну одиницю ПЕГ, таку як (ПЕГ)2 або (ПЕГУЯ, або коротку алкільну спейсерну одиницю, таку як (СН2)5) забезпечує співвідношення близько 3-4. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер, який містить довшу спейсерну одиницю (наприклад, (ПЕГ)8), може забезпечити менш оптимальне співвідношення (наприклад, нижче співвідношення, наприклад, близько 0-3). У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер, що містить пептидний фрагмент, що розщеплюється, забезпечує співвідношення близько 3-4. У деяких варіантах реалізації винаходу лінкер, що містить альтернативний фрагмент, що розщеплюється (наприклад, дисульфід, що розщеплюється або сульфонамід, що розщеплюється), може забезпечити менш оптимальне співвідношення (наприклад, менше співвідношення, наприклад, близько 0-3). У деяких варіантах реалізації винаходу АЮС, що містить МаІ--«ПЕГ)2-МаІ-СП-рАВ-ерібулін, приєднаний до антитіла, такого як антитіло до ЕКА (наприклад, МОКАБ-003) має співвідношення близько 3-4. У деяких варіантах реалізації винаходу співвідношення близько 3-4 спостерігається з АОС, що містить МаІ--ПЕГ)2-МаІ-Сп-рАВ- ерібулін, приєднаний до іншого антитіла, такого як антитіло до пег2 (наприклад, трастузумаб). У деяких варіантах реалізації винаходу оптимальне співвідношення, яке спостерігається з АОС, що містить лінкер-токсин МаІ--ПЕГ)2-МаІ-Сйи-рАВ-ерібулін, є антитіло-незалежним.
І00210| У деяких варіантах реалізації винаходу фрагмент антитіла піддають дії відновлювальних умов до кон'югації з метою отримання одного або більше вільних залишків 60 цистеїну. Антитіло, в деяких варіантах реалізації винаходу, можна відновити за допомогою відновлюючого агента, наприклад, дитіотрейтолу (ДТТ) або трис(2-карбоксиетил)уфосфіну (ТСЕР) за частково або повністю відновлювальних умов з метою отримання реакційноздатних тіольних груп цистеїну. Неспарені цистеїни можуть бути отримані шляхом часткового відновлення з обмеженими молярними еквівалентами ТСЕР, що переважно зменшує міжланцюгові дисульфідні зв'язки, які зв'язують легкий ланцюг та важкий ланцюг (по одній парі на спарювання Н-їІ) та два важкі ланцюги в шарнірній ділянці (дві пари на спарювання Н-Н у випадку ІдсС1 людини), залишаючи внутрішньоланцюгові дисульфідні зв'язки інтактними (Хегапо та співавт. (2013 рік) Меїпоа5 Мої. Віої., 1045:145-71). У варіантах реалізації винаходу дисульфідні зв'язки всередині антитіл відновлюються електрохімічно, наприклад, з використанням робочого електрода, який створює змінну відновну та окисну напругу. Цей підхід може забезпечити зв'язування відновлення дисульфідного зв'язку в режимі реального часу з аналітичним пристроєм (наприклад, електрохімічним детекторним пристроєм, ЯМР- спектрометром або мас-спектрометром) або пристроєм хімічного поділу (наприклад, рідинним хроматографом (наприклад, ВЕРХ) або електрофорезом (див., наприклад, публікацію США Мо 20140069822)). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло піддають дії денатуруючих умов з метою виявлення реакційноздатних нуклеофільних груп на амінокислотних залишках, наприклад, лізині або цистеїні. 00211) Вміст лікарського засобу АЮС може контролюватися по-різному, наприклад, за допомогою: (ї) обмеження молярного надлишку проміжної речовини лікарський засіб-лінкер або лінкерного реагенту по відношенню до антитіла; (і) обмеження часу або температури реакції кон'югації; (ії) часткових або обмежуючих відновлювальних умов для модифікації тіолу цистеїну; та/або (ім) конструювання за допомогою рекомбінантних методів амінокислотної послідовності антитіла, так що кількість та стан залишків цистеїну модифіковано для контролю кількості та/або положення приєднань лінкер-лікарський засіб.
І00212| У деяких варіантах реалізації винаходу вільні залишки цистеїну вводять в амінокислотну послідовність фрагмента антитіла. Наприклад, можуть бути отримані антитіла, сконструйовані за допомогою цистеїну, при цьому одна або більше амінокислот вихідного антитіла заміщені амінокислотою цистеїну. Будь-яка форма антитіла може бути сконструйована таким чином, тобто мутована. Наприклад, фрагмент Бар вихідного антитіла може бути
Зо сконструйований для утворення сконструйованого за допомогою цистеїну Раб, званого "ТпіоРабр". Аналогічно, вихідне моноклональне антитіло може бути сконструйовано з утворенням "ТпіомМаб". Мутація в одному сайті дає один штучно введений цистеїновий залишок в Тпіогаб, тоді як мутація в одному сайті дає два штучно введених цистеїнових залишки в ТпіоМар через димерну природу антитіла дО. ДНК, що кодує варіант амінокислотної послідовності вихідного поліпептиду, може бути отримана різними способами, відомими в цій галузі техніки (див., наприклад, способи, описані в МО 2006/034488). Ці способи включають, але без обмежень, приготування за допомогою сайт-спрямованого (або опосередкованого олигонуклеотидами) мутагенезу, ПЛР-мутагенезу та касетного мутагенезу раніше приготованої ДНК, що кодує поліпептид. Варіанти рекомбінантних антитіл також можуть бути сконструйовані також за допомогою маніпуляції з рестрикційним фрагментом або за допомогою ПЛР з синтетичними олігонуклеотидами, що перекриваються. АОС формули І містять, але без обмежень, антитіла, які мають 1, 2, 3, або 4 штучно введених амінокислотних залишків цистеїну (Гуоп та співавт. (2012 рік) Меїйоа» іп Еплутої. 502:123-38). У деяких варіантах реалізації винаходу один або більше вільних залишків цистеїну вже присутні в фрагменті антитіла без застосування інженерії, і в цьому випадку існуючі вільні залишки цистеїну можна застосовувати для кон'югації фрагмента антитіла з фрагментом лікарського засобу. 00213) У деяких варіантах реалізації винаходу високий вміст лікарського засобу (наприклад, ро» 5), може привести до агрегації, нерозчинності, токсичності або втрати здатності деяких кон'югатів антитіло-лікарський засіб проникати в клітину. Вищий вміст лікарського засобу також може мати негативний вплив на фармакокінетику (наприклад, кліренс) певних АОС. У деяких варіантах реалізації винаходу нижчий вміст лікарського засобу (наприклад, р « 3) може знизити активність деяких АОС проти клітин, що експресують мішень та/або випадкових клітин. У деяких варіантах реалізації винаходу вміст лікарського засобу для АОС за цим винаходом варіюється від 1 до близько 8; від близько 2 до близько 6; від близько 2 до близько 5; від близько 3 до близько 5; або від близько З до близько 4. 00214) Коли більш ніж одна нуклеофільна група реагує з проміжною сполукою лікарського засобу-лінксера або реагентом фрагмента лінкера з подальшим реагентом фрагмента лікарського засобу, в реакційній суміші, що містить множинні копії фрагмента антитіла та фрагмента лінкера, потім отриманий продукт може бути сумішшю сполук АОС з розподілом 60 одного або більш фрагментів лікарського засобу, прикріплених до кожної копії фрагмента антитіла в суміші. У деяких варіантах реалізації винаходу вміст лікарського засобу в суміші АОС, що утворюються в результаті реакції кон'югації, варіює від 1 до 20 фрагментів лікарського засобу, прикріплених на фрагмент антитіла. Середня кількість фрагментів лікарського засобу на фрагмент антитіла (тобто середній вміст лікарського засобу або середнє значення р) може бути обчислена будь-яким загальноприйнятим способом, відомим в цій галузі техніки, наприклад, за допомогою мас-спектрометрії (наприклад, обернено-фазової РХ-МС) та/або високоефективної рідинної хроматографії (наприклад, НІС-ВЕРХ). У деяких варіантах реалізації винаходу середню кількість фрагментів лікарського засобу на фрагмент антитіла визначають за допомогою хроматографії з гідрофобною взаємодією-високоефективною рідинною хроматографією (НІС-
ВЕРХ). У деяких варіантах реалізації винаходу середнє число фрагментів лікарського засобу на фрагмент антитіла визначають обернено-фазовою рідинною хроматографією-мас- спектрометрією (РХ-МС). У деяких варіантах реалізації винаходу середня кількість фрагментів лікарського засобу на фрагмент антитіла становить від близько З до близько 4; від близько 3,1 до близько 3,9; від близько 3,2 до близько 3,8; від близько 3,2 до близько 3,7; від близько 3,2 до близько 3,6; від близько 3,3 до близько 3,8; або від близько 3,3 до близько 3,7. У деяких варіантах реалізації винаходу середня кількість фрагментів лікарського засобу на фрагмент антитіла становить від близько 3,2 до близько 3,8. У деяких варіантах реалізації винаходу середня кількість фрагментів лікарського засобу на фрагмент антитіла становить близько 3,8. У деяких варіантах реалізації винаходу середня кількість фрагментів лікарського засобу на фрагмент антитіла становить від З до 4; від 3,1 до 3,9; від 3,2 до 3,8; від 3,2 до 3,7; від 3,2 до 3,6; від 3,3 до 3,8; або від 3,3 до 3,7. У деяких варіантах реалізації винаходу середня кількість фрагментів лікарського засобу на фрагмент антитіла становить від 3,2 до 3,8. У деяких варіантах реалізації винаходу середня кількість фрагментів лікарського засобу на фрагмент антитіла становить 3,8. 00215) У деяких варіантах реалізації винаходу середня кількість фрагментів лікарського засобу на фрагмент антитіла становить від близько 3,5 до близько 4,5; від близько 3,6 до близько 4,4; від близько 3,7 до близько 4,3; від близько 3,7 до близько 4,2; або від близько 3,8 до близько 4,2. У деяких варіантах реалізації винаходу середня кількість фрагментів лікарського засобу на фрагмент антитіла становить від близько 3,6 до близько 4,4. У деяких варіантах
Зо реалізації винаходу середня кількість фрагментів лікарського засобу на фрагмент антитіла становить близько 4,0. У деяких варіантах реалізації винаходу середня кількість фрагментів лікарського засобу на фрагмент антитіла становить від 3,5 до 4,5; від 3,6 до 4,4; від 3,7 до 4,3; від 3,7 до 4,2; або від 3,8 до 4,2. У деяких варіантах реалізації винаходу середня кількість фрагментів лікарського засобу на фрагмент антитіла становить від 3,6 до 4,4. У деяких варіантах реалізації винаходу середня кількість фрагментів лікарського засобу на фрагмент антитіла становить 4,0. 00216) У різних варіантах реалізації винаходу термін "близько", що застосовується по відношенню до середньої кількості фрагментів лікарського засобу на фрагмент антитіла, становить х/- 10 Об.
І00217| Окремі сполуки АОС або "види" можуть бути ідентифіковані в суміші за допомогою мас-спектроскопії та розділені за допомогою НВЕРХ або ВЕРХ, наприклад, хроматографії з гідрофобною взаємодією (НІС-ВЕРХ). У деяких варіантах реалізації винаходу з кон'югаційної суміші можна виділити однорідний або майже однорідний АОС з однаковим значенням вмісту, наприклад, за допомогою електрофорезу або хроматографії. 00218) У деяких варіантах реалізації винаходу вміст лікарського засобу та/або середній вміст лікарського засобу близько 4 забезпечує корисні властивості. У деяких варіантах реалізації винаходу вміст лікарського засобу та/або середній вміст лікарського засобу менш ніж близько 4 може призводити до неприйнятно високого рівня некон'югованих видів антитіл, що можуть конкурувати з АОС за зв'язування з цільовим антигеном та/або забезпечувати зниження ефективності лікування. У деяких варіантах реалізації винаходу вміст лікарського засобу та/або середній вміст лікарського засобу більш ніж близько 4 може призводити до неприйнятно високого рівня неоднорідності продукту та/або агрегації АОС. Вміст лікарського засобу та/або середній вміст лікарського засобу більш ніж близько 4 може також впливати на стабільність
АС через втрату одного або більше хімічних зв'язків, необхідних для стабілізації фрагмента антитіла. 00219) У деяких варіантах реалізації винаходу АОС має Формулу І:
АР-(--О) р (І) в якій: () Ар є антитілом, що інтерналізується, до рецептора фолієвої кислоти альфа або його бо антигензв'язуючим фрагментом, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність з 5ЕО ІЮ МО: 23, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність з ФЕО ІЮ МО: 24; (і) О є ерібуліном; (ії) І є лінкером, що розщеплюється, що містить МаІ-«ПЕГ)2-МаІ-Сі-рАВ; та (їм) р є цілим числом від З до 4. (00220) В інших варіантах реалізації винаходу АОС має Формулу І:
АР---О) р (І) де: () АБ є антитілом, що інтерналізується, до рецептора людського епідермального фактора росту 2 типу або його антигензв'язуючим фрагментом, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність з 5ЕО ІЮ МО: 27, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність з хЕО ІЮ МО: 28; (і) О є ерібуліном; (ії) І є лінкером, що розщеплюється, що містить МаІ-«ПЕГ)2-МаІ-Сі-рАВ; та (ім) р є цілим числом від З до 4. 00221) У деяких варіантах реалізації винаходу р дорівнює 4. (00222) Цей винахід включає способи отримання описаних АОС. Якщо коротко, АОС містять антитіло або антигензв'язуючий фрагмент в якості фрагмента антитіла, фрагмента лікарського засобу та лінкера, який з'єднує фрагмент лікарського засобу та фрагмент антитіла. У деяких варіантах реалізації винаходу АОС можна отримати із застосуванням лінкера, що містить реакційноздатні функціональні групи для ковалентного приєднання до фрагменту лікарського засобу та фрагменту антитіла. Наприклад, в деяких варіантах реалізації винаходу цистеїновий тіол фрагмента антитіла може утворювати зв'язок з реакційноздатною функціональною групою лінкера або проміжної сполуки лікарський засіб-лінкер (наприклад, малеіїмідний фрагмент) з утворенням АОС. Отримання АОС може бути виконано будь-яким способом, відомим фахівцеві в цій галузі техніки.
І00223| У деяких варіантах реалізації винаходу АОС отримують шляхом контактування фрагмента антитіла з лінкером та фрагментом лікарського засобу послідовним чином, таким чином що фрагмент антитіла спочатку ковалентно зв'язується з лінкером, а потім попередньо
Зо сформована проміжна сполука антитіло-лінкер реагує з фрагментом лікарського засобу.
Проміжна сполука антитіло-лінкер може піддаватися етапу очищення або не може піддаватися етапу очищення перед контактуванням з фрагментом лікарського засобу. В інших варіантах реалізації винаходу АОС отримують шляхом контактування фрагмента антитіла зі сполукою лінкер-лікарський засіб, попередньо сформованою шляхом взаємодії лінкера з фрагментом лікарського засобу. Попередньо сформована сполука лінкер-лікарський засіб може або не може піддаватися етапу очищення перед контактуванням з фрагментом антитіла. В інших варіантах реалізації винаходу фрагмент антитіла контактує з лінкером та фрагментом лікарського засобу в одній реакційній суміші, дозволяючи одночасне утворення ковалентних зв'язків між фрагментом антитіла та лінкером і між лінкером та фрагментом лікарського засобу. Цей спосіб отримання АОС може включати реакцію, в якій фрагмент антитіла контактує з фрагментом антитіла перед додаванням лінкера до реакційної суміші та навпаки. У деяких варіантах реалізації винаходу АЮС отримують шляхом взаємодії фрагмента антитіла з лінкером, приєднаним до фрагменту лікарського засобу, такого як МаІ-«ПЕГ)2-МаІ-СП-рАВ-ерібулін, в умовах, що допускають кон'югування. (00224) АСС, отримані відповідно до способів, описаних вище, можуть піддаватися етапу очищення. Етап очищення може включати будь-які біохімічні способи, відомі в цій галузі техніки для очищення білків, або будь-яку комбінацію їх способів. Вони включають, але без обмеження, тангенціальну потокову фільтрацію (ТПФ), афінну хроматографію, іонообмінну хроматографію, будь-яку хроматографію на основі заряду або ізоелектричної точки, хроматографію зі змішаним режимом, наприклад, СНТ (керамічний гідроксиапатит), хроматографію з гідрофобною взаємодією, ексклюзійну хроматографію, діаліз, фільтрацію, селективне осадження або будь- яку їх комбінацію.
Терапевтичні застосування та композиції
І00225| В цьому документі описані способи застосування описаних АОС для лікування суб'єкта, що має розлад, наприклад, онкологічний розлад. АОС можна вводити окремо або в поєднанні з другим терапевтичним агентом та можуть вводитися в будь-якій фармацевтично прийнятній композиції, дозуванні та режимі дозування. Ефективність лікування АОС може бути оцінена як за токсичністю, так і за показниками ефективності та відповідним чином скоригована.
Вимірювання ефективності включають, але не обмежуються ними, іп мійго або іп мімо бо цитостатичний та/або цитотоксичний ефект, що спостерігається, зменшений об'єм пухлини,
інгібування росту пухлини та/або пролонговане виживання.
І00226| Відомі способи визначення того, чи робить АС цитостатичний та/або цитотоксичний ефект на клітину. Наприклад, цитотоксичну або цитостатичну активність АОС можна виміряти шляхом: обробки клітин ссавців, що експресують цільовий білок АОС в клітинному культуральному середовищі; культивування клітин протягом періоду від близько 6 годин до близько 5 днів; та вимірювання життєздатності клітин. Дослідження іп міго на клітинах також можуть бути застосовані для вимірювання життєздатності (проліферації), цитотоксичності та індукції апоптозу (активації каспаз) АОС.
І00227| Для визначення того, чи має кон'югат антитіло-лікарський засіб цитостатичний ефект, може бути застосований аналіз включення тимідину. Наприклад, ракові клітини, що експресують цільовий антиген з щільністю 5000 клітин/лунка 96-лункового планшета, можуть бути культивовані протягом 72-годинного періоду та піддаються впливу 0,5 мкКі ЗН-тимідину протягом останніх 8 годин 72-годинного періоду. Включення ЗН-тимідину в клітини культури вимірюється за присутності та відсутності АОС.
ІЇ00228| Для визначення цитотоксичності можуть бути виміряні некроз або апоптоз (запрограмована загибель клітин). Некроз звичайно супроводжується підвищеною проникністю плазматичної мембрани; клітинним набряком та розривом плазматичної мембрани. Апоптоз зазвичай характеризується пузирінням мембрани, конденсацією цитоплазми та активацією ендогенних ендонуклеаз. Визначення будь-якого з цих ефектів на ракові клітини вказує на те, що АОС корисний при лікуванні раку. (00229) Життєздатність клітин може бути виміряна, наприклад, шляхом визначення в клітині поглинання барвника, такого як нейтральний червоний, трипановий синій, кристалічний фіолетовий або А АМАК "М синій (див., наприклад, Раде та співавт. (1993 рік) Іпій. У. ОпсоЇоду 3:473-6). В такому аналізі клітини інкубують в середовищах, що містять барвник, клітини промивають, а барвник, що залишився, що відображає клітинне поглинання барвника, вимірюють спектрофотометрично. У деяких варіантах реалізації винаходу іп міго активність отриманих АЮС оцінюють, застосовуючи аналіз з кристалічним фіолетовим. Кристалічний фіолетовий є триарилметановим барвником, який накопичується в ядрі життєздатних клітин. У цьому аналізі клітини піддаються впливу АЮС або контрольних агентів протягом певного
Зо періоду часу, після чого клітини фарбують кристалічним фіолетовим, ретельно промивають водою, потім солюбілізують 1 95 505 та зчитують спектрофотометрично. Білокзв'язуючий барвник сульфородамін В (ЗКВ) також може бути застосований для вимірювання цитотоксичності (5Кепап та співавт., 1990 рік) У. Май). Сапсег Іпві. 82:1107-12). 00230) Апоптоз можна кількісно визначити, наприклад, шляхом вимірювання фрагментації
ДНК. Доступні комерційні фотометричні способи кількісного визначення фрагментації ДНК іп міго. Приклади таких аналізів, включаючи ТОМЕЇГ. (який виявляє включення мічених нуклеотидів у фрагментованій ДНК) та аналізи на основі ІФА, описані в Віоспетіса (1999 рік) Мо 2, стор. 34- 37 (Боспе Моїесшіаг Віоспетісаї!5). (00231) Апоптоз можна також визначити шляхом вимірювання морфологічних змін в клітині.
Наприклад, як і під час некрозу, втрата цілісності плазматичної мембрани може бути визначена шляхом вимірювання поглинання певних барвників (наприклад, флуоресцентного барвника, такого як, наприклад, акридиновий помаранчевий або бромід етидія). Спосіб вимірювання числа апоптотичних клітин був описаний ЮБиКе апа Сопеп, Сигтепі Ргоїосої!5 іп Іттипоіоду (Соїїдап та співавт., вид. (1992 рік) стор. 3. 17. 1-3. 17. 16). Клітини також можуть бути помічені барвником
ДНК (наприклад, акридиновим помаранчевим, бромідом етидія або йодидом пропідія) та клітинами, що спостерігаються на наявність конденсації та скупчення хроматину уздовж внутрішньої ядерної мембрани. Інші морфологічні зміни, які можна виміряти для визначення апоптозу, включають, наприклад, цитоплазматичну конденсацію, підвищене пузиріння мембрани та зменшення розміру клітин.
І00232| Описані АОС також можуть бути оцінені на активність неспецифічного цитолізу.
Активність неспецифічного цитолізу може бути визначена, наприклад, аналізом із застосуванням двох клітинних ліній, однією, що містить цільовий антиген та однієї, що не містить цільовий антиген. Щоб розрізняти клітинні лінії їх переважно мітять. Наприклад, клітини
ІСКОМІ (ЕКАФ), помічені Мисіїднпі м (згеєп (М.О) та НІ-60 (ЕВА-), помічені Мисіїднпі7м Кеа (Мк), можуть бути спільно культивовані, оброблені АЮС до ЕКА з подальшим контролем цитотоксичності. Знищення клітин, що не містять цільовий антиген при їх змішуванні з клітинами, що містять цільовий антиген свідчить про неспецифічний цитоліз, тоді як знищення клітин, що не містять цільовий антиген під час відсутності клітин, що містять цільовий антиген свідчить про нецільове знищення. бо 00233) У деяких аспектах цей опис включає спосіб знищення, інгібування або модулювання росту, або порушення метаболізму ракової клітини або тканини шляхом руйнування тубуліну.
Цей спосіб може застосовуватися з будь-яким суб'єктом, де порушення тубуліну забезпечує терапевтичну перевагу. Суб'єкти, що можуть отримувати користь від руйнування тубуліну, включають, але без обмеження, ті, що мають або можуть мати рак шлунка, рак яєчників (наприклад, серозний рак яєчників), рак легені (наприклад, недрібноклітинний рак легенів), рак грудей (наприклад , тричі негативний рак молочної залози), рак ендометрія (наприклад, серозну карциному ендометрія), остеосаркому, саркому Капоші, рак статевих клітин яєчка, лейкемію, лімфому (наприклад, хвороба Ходжкіна, неходжкінська лімфома), мієлому, рак голови та шиї, рак стравоходу, рак підшлункової залози, рак передміхурової залози, рак мозку (наприклад, гліобластому), рак щитовидної залози, колоректальний рак та/або рак шкіри (наприклад, меланому) або будь-які метастази (ЮОштопіеї апа догаап, 2010) Маї. Кем. ЮОгид Оібсом. 9:790- 803). У різних варіантах реалізації винаходу описані АОС можна вводити в будь-якій клітині або тканині, що експресує ЕКА, такий як ракова клітина або тканина, що експресує ЕКА. Типовий варіант реалізації винаходу включає спосіб інгібування передачі сигналів, опосередкованих
ЕРКА, або спосіб знищення клітини. Цей спосіб можна застосовувати на будь-якій клітині або тканині, що експресують ЕКА, таких як ракова клітина або метастатичне ураження.
Необмежуючі приклади раків, що експресують ЕКА, включають рак шлунка, серозний рак яєчників, світлоклітинний рак яєчника, недрібноклітинний рак легені, колоректальний рак, тричі негативний рак молочної залози, рак ендометрія, серозну карциному ендометрія, карциноїд легенів та остеосаркому. Необмежуючі приклади клітин, що експресують ЕКА, включають клітини карциноми яєчника ІСКОМІ та ОМСАКЗ людини, клітини недрібноклітинної карциноми легенів МСІ-Н2110 людини та клітини, що містять рекомбінантну нуклеїнову кислоту, що кодує
ЕКА або її частину. (00234 У різних інших варіантах реалізації винаходу описані АОС можна вводити в будь-якій клітині або тканині, що експресує Пег2, такий як ракова клітина або тканина, що експресує пег2.
Типовий варіант реалізації винаходу включає спосіб інгібування передачі сигналів, опосередкованих Пег2, або спосіб знищення клітини. Цей спосіб можна застосовувати на будь- якій клітині або тканині, що експресують Ппег2, таких як ракова клітина або метастатичне ураження. Необмежуючі приклади раків, що експресують Ппег2, пухлин включають рак молочної
Зо залози, рак шлунка, рак сечового міхура, карциному уротеліальних клітин, рак стравоходу, рак легенів, рак шийки матки, рак ендометрія та рак яєчників (Еподіїзп та співавт. (2013 рік) Мої.
Оіадп. Тнег. 17:85-99). Необмежуючі приклади клітин, що експресують пег2, включають клітини шлункової карциноми МС1І-М87-Ійс людини, клітини проточною карциноми молочної залози 2К75 та ВТ-474 людини і клітини, що містять рекомбінантну нуклеїнову кислоту, що кодує Пег2 або її частину. (00235) У різних інших варіантах реалізації винаходу описані АОС можна вводити у будь-яку клітину або тканину, що експресує мезотелін (М5ІМ), таку як ракова клітина або тканина, що експресує М5І М. Типовий варіант реалізації винаходу включає спосіб інгібування передачі сигналів, опосередкованих М5ІМ, або спосіб знищення клітини. Цей спосіб можна застосовувати на будь-якій клітині або тканині, що експресують М5І М, таких як ракова клітина або метастатичне ураження. Необмежуючі приклади раків, що експресують М5І М, включають мезотеліому, рак підшлункової залози (наприклад, аденокарциному підшлункової залози), рак яєчників та рак легенів (наприклад, аденокарциному легенів) (У/апд та співавт. (2012 рік) РІ о5
ОМЕ 7:е33214). Необмежуючі приклади клітин, що експресують М5ІМ включають клітини карциноми яєчника ОМСАКЗ людини, ендометріоїдні клітини НЕС-251 людини, пласкі клітини мезотеліоми легенів Н226 людини та клітини, що містять рекомбінантну нуклеїнову кислоту, що кодує М5І-М або її частину. (00236) Типові способи включають етапи контактування клітини з АОС, як описано в цьому документі, в ефективній кількості, тобто кількості, достатній для знищення клітини. Спосіб може бути застосований на клітинах в культурі, наприклад, іп мійго, іп мімо, ех мімо, або іп 5йи.
Наприклад, клітини, що експресують ЕКА, пег2 та/або М5ІМ (наприклад, клітини, зібрані шляхом біопсії пухлинного або метастатичного ураження, клітини з верифікованої лінії ракових клітин; або рекомбінантні клітини), можуть бути культивовані іп мійго в культуральному середовищі, а етап контактування може бути здійснений шляхом додавання АОС до культурального середовища. Зазначений спосіб призведе до знищення клітин, що експресують
ЕКА, Ппег2 та/"або М5І М, включаючи, зокрема, пухлинні клітини, які експресують ЕКА, Пег2 та/або М5ІМ. В альтернативному варіанті, щоб мати ефект іп мімо АОС можна вводити суб'єкту будь-яким відповідним способом введення (наприклад, внутрішньовенним, підшкірним або прямим контактом з пухлинною тканиною). бо І00237| Ефект іп мімо описаної терапевтичної композиції АОС може бути оцінений на відповідній тваринній моделі. Наприклад, можуть бути застосовані моделі ксеногенного раку, при цьому експланти раку або ксенотрансплантатні тканини, що перещеплюються, вводяться в тварини з ослабленим імунітетом, такі як безтимусні миші або миші ЗСІО (Кієїп та співавт., 1997 рію) Маїшге Медй., 3:402-8). Ефективність може бути передбачена з застосуванням аналізів, які вимірюють інгібування утворення пухлин, регресії пухлин або метастазів і тому подібного. (00238) Також можуть бути застосовані аналізи іп мімо, що оцінюють просування апоптозу. В одному варіанті реалізації винаходу ксенотрансплантати від мишей-пухлиноносіїв, що отримували терапевтичну композицію, можна досліджувати на наявність апоптичних осередків та порівняти з контрольними мишами, які не отримували лікування, що переносять ксенотрансплантати. Ступінь, в якій апоптотичні осередки виявляються в пухлинах мишей, що отримували лікування, вказує на терапевтичну ефективність композиції.
І00239| Далі в цьому документі описані способи лікування раку. АОС, описані в цьому документі, можуть бути введені ссавцю, що відрізняється від людини, або людині в терапевтичних цілях. Терапевтичні способи включають введення ссавцю, що має пухлину, біологічно ефективної кількості АОС, що містить обраний хіміотерапевтичний агент (наприклад, ерібулін), зв'язаний з антитілом, що націлює, яке зв'язується з антигеном, що експресується, який доступний для зв'язування або локалізований на поверхні ракової клітини. Типовий варіант реалізації винаходу є способом доставки хіміотерапевтичного агента в клітину, що експресує
ЕКА, що включає кон'югування хіміотерапевтичного агента з антитілом, яке імуноспецифічно зв'язується з епітопом ЕКА та піддання клітини впливу АЮС. Типові пухлинні клітини, що експресують ЕКА, для яких вказані АОС за цим винаходом, включають клітини раку шлунка, серозного раку яєчників, недрібноклітинного раку легенів, колоректального раку, раку молочної залози (наприклад, тричі негативного раку молочної залози), карциноїда легенів, остеосаркоми, раку ендометрія та карциноми ендометрія з серозною гістологією. (00240) Інший типовий варіант реалізації винаходу є способом доставки хіміотерапевтичного агента в клітину, що експресує пег2, що включає кон'югування хіміотерапевтичного агента з антитілом, яке імуноспецифічно зв'язується з епітопом пег2 та піддання клітини впливу АОС.
Типові пухлинні клітини, що експресують пег2, для яких вказані АОС за цим винаходом, включають клітини раку молочної залози, раку шлунка, раку сечового міхура, карциноми
Зо уротеліальних клітин, раку стравоходу, раку легенів, раку шийки матки, раку ендометрія та раку яєчників.
І00241| Інший типовий варіант реалізації винаходу є способом доставки хіміотерапевтичного агента в клітину, що експресує М5І М, що включає кон'югування хіміотерапевтичного агента з антитілом, яке імуноспецифічно зв'язується з епітопом М5ІМ та піддання клітини впливу АОС.
Типові пухлинні клітини, що експресують М5І М, для яких вказані АОС за цим винаходом, включають клітини з мезотеліоми, раку підшлункової залози (наприклад, аденокарциноми підшлункової залози), раку яєчників та раку легенів (наприклад, аденокарциноми легені). (00242) Іншим типовим варіантом реалізації винаходу є спосіб лікування пацієнта, що має рак або схильного до ризику виникнення раку, що експресує цільовий антиген для фрагмента антитіла АЮС, такий як ЕКА, пег2 або М5ІМ, що містить введення пацієнту терапевтично ефективної кількості АОС за цим винаходом. У деяких варіантах реалізації винаходу пацієнт не реагує або слабо реагує на лікування антитілом до ЕКА при введенні в монотерапії та/або на лікування фрагментом лікарського засобу (наприклад, ерібуліном) при введенні в монотерапії. В інших варіантах реалізації винаходу пацієнт не реагує або слабо реагує на лікування антитілом до пег2 при введенні в монотерапії талабо на лікування фрагментом лікарського засобу (наприклад, ерібуліном) при введенні в монотерапії. В інших варіантах реалізації винаходу пацієнт не реагує або слабо реагує на лікування антитілом до М5І-М при введенні в монотерапії та/або на лікування фрагментом лікарського засобу (наприклад, ерібуліном) при введенні в монотерапії. В інших варіантах реалізації винаходу пацієнт має непереносимість до лікування фрагментом лікарського засобу (наприклад, ерібуліном) при введенні в монотерапії. Наприклад, пацієнт може мати необхідність в дозах ерібуліну для лікування раку, що призводять до системної токсичності, яку долають шляхом цілеспрямованої доставки в рак, що експресує цільовий антиген для фрагмента антитіла АОС, такий як ЕКА, пег2 або М5ІМ, тим самим зменшуючи нецільове знищення. (00243) Іншим типовим варіантом реалізації винаходу є спосіб зменшення або інгібування росту пухлини, що експресує цільовий антиген (наприклад, пухлини, що експресує ЕКА, пухлини, що експресує Ппег2 або пухлини, що експресує М5ІМ), що включає введення терапевтично ефективної кількості АОС. У деяких варіантах реалізації винаходу лікування є достатнім для зменшення або інгібування росту пухлини пацієнта, зменшення кількості чи 60 розміру метастатичних уражень, зниження пухлинної маси, зниження маси первинної пухлини,
зниження інвазивності, подовження часу виживання та/або підтримки або поліпшення якості життя. У деяких варіантах реалізації винаходу пухлина стійка або резистентна до лікування за допомогою антитіла до ЕКА при введенні в монотерапії талабо до лікування фрагментом лікарського засобу (наприклад, ерібуліном) при введенні в монотерапії. В інших варіантах реалізації винаходу пухлина стійка або резистентна до лікування за допомогою антитіла до пег2 при введенні в монотерапії та/"або до лікування фрагментом лікарського засобу (наприклад, ерібуліном) при введенні в монотерапії. У деяких варіантах реалізації винаходу пухлина стійка або резистентна до лікування за допомогою антитіла до МОЇМ при введенні в монотерапії та/або до лікування фрагментом лікарського засобу (наприклад, ерібуліном) при введенні в монотерапії. (00244) Більш того, антитіла за цим винаходом можуть бути введені ссавцю, відмінному від людини, який експресує антиген, з яким АОС здатний зв'язуватися для ветеринарних цілей або як тваринна модель людського захворювання. Що стосується останнього, такі тваринні моделі можуть бути корисні для оцінки терапевтичної ефективності описаних АОС (наприклад, тестування дозувань та часової динаміки введення). (00245) Далі в цьому документі описано терапевтичне застосування описаних АОС. Типовим варіантом реалізації винаходу є застосування АОС для лікування раку, що експресує цільовий антиген (наприклад, раку, що експресує ЕКА, раку, що експресує Пег2 або раку, що експресує
М5ІМ). Також описані АОС для застосування в лікуванні раку, що експресує цільовий антиген (наприклад, раку, що експресує ЕКА, раку, що експресує пег2 або раку, що експресує М5ІМ).
Способи ідентифікації суб'єктів, що мають раки, які експресують ЕКА, Пег2 та/або М5ІМ, відомі в цій галузі техніки та можуть бути застосовані для ідентифікації відповідних пацієнтів з метою лікування описаним АОС. (00246) Другим варіантом реалізації винаходу є застосування АОС в способі виготовлення медичного препарату для лікування раку, що експресує цільовий антиген (наприклад, раку, що експресує ЕКА, раку, що експресує пег2 або раку, що експресує М5І-М).
І00247| Терапевтичні композиції, що застосовуються у практиці вищенаведених способів, можуть бути виготовлені у вигляді фармацевтичних композицій, що містять фармацевтично прийнятний носій, що підходить для бажаного способу доставки. Типовий варіант реалізації
Зо винаходу є фармацевтичною композицією, яка містить АОС за цим винаходом та фармацевтично прийнятним носієм. Відповідні носії включають будь-який матеріал, який в поєднанні з терапевтичної композицією зберігає протипухлинну функцію терапевтичної композиції та, як правило, не вступає в реакції з імунною системою пацієнта. Фармацевтично прийнятні носії включають будь-які та всі розчинники, дисперсійні середовища, покриття, антибактеріальні та протигрибкові агенти, ізотонічні агенти та такі агенти, що уповільнюють всмоктування і тому подібні, які фізіологічно сумісні. Приклади фармацевтично прийнятних носіїв включають одне або більше з води, фізіологічного розчину, фосфатного буферного розчину, глюкози, гліцерину, етанолу, мезилатної солі і тому подібного, а також їх комбінацій. У багатьох випадках буде кращим включати в композицію ізотонічні агенти, наприклад, цукри, поліспирти, такі як маніт, сорбіт або натрію хлорид. Фармацевтично прийнятні носії можуть додатково містити незначні кількості допоміжних речовин, таких як зволожувальні агенти або агенти, що перетворюють на емульсію або буфери, які збільшують термін зберігання або ефективність АОС. (00248) Терапевтичні склади можуть бути солюбілізовані та введені будь-яким способом, здатним доставляти терапевтичну композицію в розташування пухлини. Потенційно ефективні шляхи введення включають, але без обмежень, внутрішньовенне, парентеральне, внутрішньочеревне, внутрішньом'язове, внутрішньопухлинне, внутрішньошкірне, внутрішньоорганне, ортотопічне тощо. Терапевтичні білкові препарати можна ліофілізувати та зберігати у вигляді стерильних порошків, переважно під вакуумом, а потім ресуспендувати в бактеріостатичній воді (що містить, наприклад, консервант бензилового спирту) або в стерильній воді перед ін'єкцією. Терапевтичні склади можуть містити АВС або його фармацевтично прийнятну сіль, наприклад мезилатну сіль. (00249) Описані в цьому документі АОС можуть вводитися в дозі від 0,2 мг/кг до близько 10 мг/кг пацієнту, який цього потребує. У деяких варіантах реалізації винаходу АЮС вводиться пацієнтові щодня, раз в два місяці або в будь-який проміжок часу між ними. Дозування та протоколи введення для лікування злоякісних новоутворень із застосуванням вищевказаних способів будуть варіюватися в залежності від способу та цільового раку і будуть в цілому залежати від ряду інших факторів, визнаних в цій галузі техніки. 002501 Відомі різні системи доставки та можуть застосовуватися для введення одного або 60 більше АЮС за цим винаходом. Способи введення АЮС включають, але без обмеження,
парентеральне введення (наприклад, внутрішньошкірне внутрішньом'язове, внутрішньоочеревинне, внутрішньовенне та підшкірне), епідуральне введення, внутрішньопухлинне введення та мукозальне введення (наприклад, інтраназальний та оральний шляхи). Крім того, введення пульмональним способом може бути здійснено, наприклад, із застосуванням інгалятора або розпилювача та складу з аерозольним агентом.
Див., наприклад, композиції та способи для пульмонального введення, описані в патентах США
Мо 6,019,968, 5,985,320, 5,985,309, 5,934,272, 5,874,064, 5,855,913, 5,290,540 та 4,880,078; та публікаціях РСТ Мо УМО 92/119244, УМО 97/32572, УМО 97/44013, УМО 98/31346 та УМО 99/66903.
АОС може бути введений будь-яким зручним шляхом, наприклад, шляхом інфузії або болюсної ін'єкції або шляхом абсорбції через епітеліальні або шкірно-слизові тканини, що вистилають (наприклад, слизову оболонку порожнини рота, прямої кишки та слизової оболонки кишківника тощо). Введення може бути, як системним, так і місцевим. 00251) Описані в цьому документі терапевтичні композиції можуть бути стерильними та стабільними в умовах виробництва і зберігання. У деяких варіантах реалізації винаходу один або більше АС, або фармацевтичних композицій постачаються у вигляді сухого стерилізованого ліофілізованого порошку або безводного концентрату в герметично закритому контейнері та можуть бути ресуспендовані (наприклад, водою або фізіологічним розчином) до відповідної концентрації для введення суб'єкту. Переважно один або більше профілактичних, або терапевтичних агентів або фармацевтичних композицій поставляються у вигляді сухого стерильного ліофілізованого порошку в герметично закритому контейнері при одиничній дозі щонайменше 5 мг, щонайменше 10 мг, щонайменше 15 мг, щонайменше 25 мг, щонайменше 35 мг, щонайменше 45 мг, щонайменше 50 мг, щонайменше 75 мг або щонайменше 100 мг, або будь-яка кількість між даними значеннями. У деяких варіантах реалізації винаходу ліофілізований АОС або фармацевтичні композиції зберігають при температурі від 2 "С до 87 в оригінальному упакуванні. У деяких варіантах реалізації винаходу один або більше АОС або фармацевтичних композицій, описаних в цьому документі, поставляються в рідкій формі в герметично закритому контейнері, наприклад, в контейнері, що вказує кількість та концентрацію агента. У деяких варіантах реалізації винаходу рідка форма композиції, що вводиться, поставляється в герметично закритому контейнері щонайменше 0,25 мг/мл, щонайменше 0,5 мг/мл, щонайменше 1 мг/мл, щонайменше 2,5 мг/мл, щонайменше 5 мг/мл, щонайменше 8 мг/мл, щонайменше 10 мг/мл, щонайменше 15 мг/мл, щонайменше 25 мг/мл, щонайменше 50 мг/мл, щонайменше 75 мг/мл або щонайменше 100 мг/мл АОС. Рідка форма може зберігатися при температурі від 2 "С до 8 "С в оригінальному упакуванні.
І00252| У деяких варіантах реалізації винаходу, описані АОС можуть бути включені в фармацевтичну композицію, що підходить для парентерального введення. Розчин для ін'єкцій може складатися з рідкої або ліофілізованої лікарської форми в скляному прозорому флаконі або флаконі з темного (помаранчевого) скла, ампулі або попередньо заповненому шприці або іншому відомому пристрої доставки або зберігання. (00253) Композиції, описані в цьому документі, можуть бути в різних формах. До них відносяться, наприклад, рідкі, напівтверді та тверді лікарські форми, такі як рідкі розчини (наприклад, ін'єкційні та інфузійні розчини), дисперсії або суспензії, таблетки, пігулки, порошки, ліпосоми та супозиторії. Бажана форма залежить від передбачуваного способу введення та терапевтичного застосування. (00254) У різних варіантах реалізації винаходу лікування включає одиничний болюс або повторне введення препарату АОС через прийнятний шлях введення. (00255) Пацієнти можуть бути оцінені на рівні цільового антигену в цьому зразку (наприклад, на рівні клітин, що експресують цільовий антиген), щоб допомогти у визначенні найбільш ефективного режиму дозування і тому подібного. Типовий варіант реалізації винаходу є способом визначення, чи буде пацієнт реагувати на лікування АОС за цим винаходом, включаючи надання біологічного зразка від пацієнта та контактування біологічного зразка з
АОС. Типові біологічні зразки включають тканину або біологічну рідину, таку як запальний ексудат, кров, сироватку, кишкову рідину, пробу фекалій або біопсію пухлини (наприклад, біопсію пухлини, отриману від пацієнта, що має або схильний до ризику захворювання на рак, що експресує цільовий антиген, наприклад, рак, що експресує ЕКА, рак, що експресує Ппег2 або рак, що експресує М5І М). У деяких варіантах реалізації винаходу зразок (наприклад, тканина та/або біологічна рідина) може бути отриманий від суб'єкта, і відповідний імунологічний метод може бути застосований для виявлення та/або вимірювання експресії білка цільового антигену (наприклад, ЕКА, пег2 або М5ІМ). Такі оцінки також застосовуються з метою моніторингу під час терапії та корисні для оцінки терапевтичного успіху в поєднанні з оцінкою інших параметрів. бо І00256| У деяких варіантах реалізації винаходу ефективність АОС може бути оцінена шляхом контактування зразка пухлини із суб'єкта з АОС та оцінки швидкості росту або об'єму пухлини. У деяких варіантах реалізації винаходу, в разі якщо визначено, що АОС є ефективним, його можна вводити суб'єкту.
І00257| Вищевказані терапевтичні підходи можуть бути об'єднані з будь-яким з безлічі різноманітних додаткових хірургічних, хіміотерапевтичних або променевих курсами лікування. (00258) Також в цьому документі описано застосування одного або більше описаних АОС при виготовленні лікарського препарату для лікування раку, наприклад, відповідно до способів, описаних вище. У деяких варіантах реалізації винаходу, описані в цьому документі АОС застосовуються для лікування раку, наприклад, відповідно до способів, описаних вище. 00259) У різних варіантах реалізації винаходу набори для застосування в лабораторних та терапевтичних цілях, описані в цьому документі, входять в об'єм цього винаходу. Такі набори можуть містити носій, упакування або контейнер, які розділені на частини щоб вміщати один або більше контейнерів, таких як флакони, трубки тощо, причому кожен з контейнерів містить один з окремих елементів, які повинні застосовуватися в описаному в цьому документі способі, поряд з етикеткою або вкладишем, що містить інструкції для застосування, такі як застосування, описане в цьому документі. Набори можуть містити контейнер, що містить фрагмент лікарського засобу. Цей опис також забезпечує один або більше АОС, або їх фармацевтичних композицій, упакованих в герметично закритий контейнер, такий як ампула або фільтр-пакет, із зазначенням кількості агенту.
І00260| Набори можуть містити контейнер, описаний вище, та один або більше інших контейнерів, пов'язаних з ним, які містять матеріали, бажані з комерційної та користувальницької точок зору, включаючи буфери, розчинники, фільтри, голки, шприци; носії, упаковки, контейнери, флакони та/або етикетки з написом, та/або інструкції для застосування, а також листки-вкладиші до інструкцій із застосування.
І00261| Етикетка може бути присутня на контейнері або в ньому для вказівки, що композиція застосовується для конкретної терапії або нетерапевтичного застосування, такого як прогностичне, профілактичне, діагностичне чи лабораторне застосування. Етикетка може також вказувати напрямки для застосування іп мімо або іп міо, такі як ті, що описані в цьому документі. Вказівки та/або інша інформація також можуть бути вказані на вкладиші(шах) або
Зо етикетці(ках), які включені в набір або знаходитися на наборі. Етикетка може бути включена в контейнер або пов'язана з контейнером. Етикетка може перебувати на контейнері, коли літери, цифри та інші символи, що утворюють етикетку, пресуються або витравлюються на самому контейнері. Етикетка може бути пов'язана з контейнером, в разі якщо вона присутня в ємності або носії, яка також утримує контейнер, наприклад, у вигляді листа-вкладиша. Етикетка може вказувати на те, що композиція застосовується для діагностики або лікування стану, такого як рак, описаний в цьому документі.
І00262| Фахівцям в цій галузі техніки буде очевидно, що інші відповідні модифікації та пристосування, описаних в цьому документі способів винаходу очевидні, та можуть бути зроблені із застосуванням відповідних еквівалентів, не відступаючи від об'єму винаходу або описаних в цьому документі варіантів реалізації винаходу. Спираючись на докладний опис винаходу, він буде більш зрозумілим з посиланням на наступні приклади, які включені виключно в цілях ілюстрації та не призначені для обмеження.
ПРИКЛАД 1 1. Матеріали та способи
І00263| МОВАБ-003, що застосовується для приготування АОС, був із партії ЖХААОЗ312. 1.1 Цитотоксини (00264) Структури цитотоксинів, що кон'югуються, наведені в Таблиці 11.
Таблиця 11
Цитотоксини, що кон'югуються
Назва . Роз- сполуки Лінкер Цитотоксин щеплю- Структура ваність
ПЕГЗ-В2- малеїімідо- дисульфі- ПЕГЗ- 5 й дил- Бензил- Криптофі- тк і УВУ диметил- дисульфі- | цин й 7. ї» сон їси криптофі- дил- цИн диметил
Я Хе а п12- вот ро криптофі-. | 2 криптофі- в зво вней е брова кох
ИН цИНн ку роя
Ц но - н он 3 криптофі- порою оДя Шосе криптофі-... ІЗ й є зрада рибецев
Ин В Ще ше он
МОРр- малеїімідо- . 5 0 «ук софосовей а криптофі- | ПЕГО-Уа!- | криптофі- є тре йо . ин ля цин Сі-рАВ он
Ч
Ко ін малеімідо- Дол ху ф (ЕВ ПЕГО-Ма!- | ерібулін є Щ вх, о г як 01159569) | СТРАВ наго Ба мео. Ме о -З-пйо
ЕВ- моло А єв. малеїмідо- | 001150828 а де дер (СНг)5-Ма!- | (азиридин- є Ме ме Ден ом о 0011613918 СІ-рРАВ майтансін- о. то Д он, Тл
РЗ) Х но ІФ
Ме Ме
Мео. Ме о --йо
ЕВ- коло А Уло
ЕВ малеїмідо- | 001150828 а де ч А т "Ме 001161319 ПЕГ2-Маї!- (азиридин- Є ме Дон мн с о
СіЇ-рАВ майтансін- о. 5 Ко ДЕ об нн» ро; осо Й
РЗ) мем ме" о
ЩІ ге
ЕВ- малеїмідо- | майтансін шк он 001159200 (СНг)5 рм1 ДЕ мем го; малеїмідо- | мономети- і "сне Я, пад нон
М-ММАЕ (СНг)5-Ма!- | лауріста- є Кослрулко 54 шен
Сі-рАВ тин Е надо дея МНе-ПЕГО вурістатин вовни Ще сколи КИ ! й в"
М-оМІ «Мос майтансін рОшивсчИ ь рм1 о
З лк мо
Хімія відновлених дисульфідних містків м во ух
М-0285 ПЕГ-РАВ | дуостатінЗ | є питаю ст дя ех Мк й роди
М-0115 Авп-Аїа дуостатін-5 | є ше ка; сил зв'язування сил зв'язування
М 158 ПЕГ-РАВ Хімія відновленого дисульфідного 0 зв'язування
ПЕГ- дуостатін Хімія відновленого дисульфідного мМ-0384 - . , тіоефір 14 зв'язування
М-0302 ПЕГ-А5п дуостатін Хімія відновленого дисульфідного 14 зв'язування мМ-292 ПЕГ-Авп Хімія відновленого дисульфідного
11700001 рення 01010101
М-0026 ПЕГ дуостатін є Хімія відновленого дисульфідного 14 зв'язування
Й ПЕГ- й Хімія відновленого дисульфідного
М-0267 тіоефір дуоміцин 7 нема зв'язування
М.0272 дуоміцин 7 Хімія відновленого дисульфідного зв'язування
Й й й Хімія відновленого дисульфідного мМ-0260 ПЕГ-рАВ дуоміцин 7 Є зв'язування
М.0276 дуоміцин 7 Хімія відновленого дисульфідного зв'язування мМ-015-0913 иКЛОТеК 0 дуостатін3 | нема Обмежене використання лізину
М-030-0132 | ПЕГ-рАВ Обмежене використання лізину
М-0161 я ж нема Обмежене використання лізину
М-0157 ПЕГ-рАВ я ж Обмежене використання лізину мМ-027-0381 дутати нема Обмежене використання лізину мМ-0025 дутати нема | Обмежене використання лізину мМ-0301 ПЕГ-Авп пр титн нема Обмежене використання лізину мМ-030-0011 ПЕГ-рАВ дутати Обмежене використання лізину
М-030-0291 | ПЕГ-Авп дутати Обмежене використання лізину
М-0114 ПЕГ-рАВ Хімія відновлених дисульфідних містків
Скорочення: АПа, аланін; Азтп, аспарагін; Сії, цитрулін; МН5, М-гідроксисукцинімід; рАВ, п- амінобензилоксикарбоніл; ПЕГ, поліетиленгліколь; 5МСОС, сукцинімідил-4-(М-малеіїмідометил) циклогексан-1-карбоксилат; Маї, валін; МСР, МаІ-Сії-рАВ. 1.2 Кон'югація антитіла-лікарського засобу 1.2.1 Часткове відновлення за допомогою ТСЕР
І00265| Умови часткового відновлення для МОКАБ-003 були встановлені шляхом зміни концентрації відновлюючого агенту трис (2-карбоксиетил) фосфіну (ТСЕР), що не містить тіол, зміни концентрації антитіл та часу відновлення. Для МОНАБ-003 замінювали буфер на фосфатно-сольовий буфер Дульбекко (ОРВ5), що містить 1 мМ етилендіамінтетраоцтової кислоти (ЕДТК), потім концентрували до 10 мг/мл, застосовуючи центрифужну концентрацію із центрифужними фільтрами з межею відсікання 10 кДа за молекулярною масою затриманих компонентів (МУУСО - тоїесшаг меїдні сші-ой). Антитіла розводили до відповідної концентрації і додавали ТСЕР у зазначеній кінцевій концентрації та легко перемішували протягом 1 години при кімнатній температурі ТСЕР видаляли шляхом знесолення, застосовуючи 5- або 10- мілілітрові колонки для знесолення ера", що обертаються, із ОРВ5/1 мМ ЕДТК в якості буферу (Тпепто Ріхпег, 40 кКДа МУУСО) відповідно до протоколу виробника. Зразки аналізували на вміст вільних тіолів за допомогою набору флуорометричного кількісного визначення тіолу (Арсат) відповідно до протоколу виробника. Аналіз ДСН-ПААГ-електрофорезу в невідновлювальних умовах проводили для визначення ступеня та місця розриву дисульфідного зв'язку, як описано у розділі 1. 3. 3. У деяких випадках знесолені мАт доводили до 1-2 мг/мл шляхом розведення у ОРВ5 та піддавали біотинілюванню для визначення здатності кон'югувати і співвідношення лікарського засобу-до-антитіла (САК). 10 мМ малеїімідо-ПЕГ2-біотину (Тпегто
Еізпег) у диметилсульфоксиді (ДМСО) додавали до антитіла (мАт) при молярному співвідношенні 10:11 та інкубували при кімнатній температурі протягом 4 годин при легкому перемішуванні. Після кон'югації сполуку, що не прореагувала, видаляли шляхом знесолення із застосуванням колонок для знесолення 7ера""М, що обертаються (Тпепто Рі5пег). Потім зразки аналізували за допомогою РХ-МС для визначення ОАК, як описано у розділі 1. 3. 4. 1.2.2 Кон'югація цитотоксинів (00266) Частково відновлене антитіло доводили до 2,5 мг/мл у 0,5Х ОРВ5, 0,5 мМ ЕДТК та ретельно перемішували. Потім, якщо їх застосовували, додавали органічні співрозчинники та ретельно перемішували. У якості співрозчинників використовували пропіленгліколь (кінцева концентрація 20 95 та 50 95), диметилсульфоксид (ДМСО) (10 95), М,М-диметилформамід (20 905),
М,М-диметилацетамід (20 95) та М,М-диметилпропіонамід (20 95). Малеімід-модифікований цитотоксин (6 мМ вихідний розчин у ДМСО) додавали до антитіл при молярному співвідношенні 1:6 (мАт:сполука) та ретельно перемішували. Кон'югація продовжувалася при кімнатній температурі протягом 3,5 годин при легкому перемішуванні. 50 95 пропіленгліколь при 50 95 був обраний у якості кінцевого органічного модифікатора та застосовувався в усіх наступних реакціях кон'югації. 1.2.3 Очистка
І00267| Кон'юговане антитіло очищали за допомогою колонки(ок) для знесолення 26/10
НіТгарб (СЕ Неашсаге) з хроматографією, виконаною на рідинній експрес-хроматографії білків (РЕХБ) (СЕ Неакпйсаге) для видалення малеїімідо-цитотоксину, що не прореагував, та пропіленгліколю. АОС МОКАБ-003, включно з МОКАБ-003-таІ-УСР-ерібуліном (МОКАБ-202), були приготовлені в ОРВ5З (буфер для складів застосовували в якості рухомого буфера під час
РЕХБ-хроматографії). 1.3 Біофізична характеристика 1.3.1 Аналіз БХК (00268) Готовий реагент (200 мкл) біцинхонінової кислоти (БХК) додавали до 25 мкл серійно розведених АОС або до 2 мг/мл стандарту бичачого гамма-глобіну (Тпегто Різпег) та зразки ретельно перемішували. Зразки інкубували при 37 "С протягом 20 хв. Планшети зчитували при 595 нм на планшет-рідері 5ресігаМах? М5 (МоїІесшіаг Оемісев5). Дані аналізували за допомогою зЗойПМахо Рго (версія 3. 2) з моделлю 4-параметричної підгонки. 1.3.2 Аналіз ексклюзійної ВЕРХ
І00269| Агрегацію антитіл аналізували за допомогою ексклюзійної високоефективної рідинної хроматографії (ексклюзійної ВЕРХ) із застосуванням Адііепі 1100. мАт розводили до 1 мг/мл у ОРВ5. Антитіло (20 мкл) вводили в захисну передколонку Т5Кдекюш зирегзуум (4,6 мм х 3,5 см, розмір пор 4 мкм, То5оП Віозсіепсе), а потім в колонку ТеКдек зирегЗуу3000 (4,6 мм х см, розмір пор 4 мкм), елюювали з колонки 0,1 М фосфатом натрію, що містить 0,15 М Масі 30 та 0,05 95 Мам3, при рН 7,4 при швидкості потоку 0,3 мл/хв. протягом 20 хв. Всі дані були проаналізовані із застосуванням програмного забезпечення Адіїєепі СПпетбіайоп. Відсоток агрегації розраховувався як (РАагрегату/РАзагальний)"100, де РА - інтегрована площа піку. 1.3.3 Аналіз ДСН-ПААГ-електрофорезу 002701) Зразки білка (0,1-10 мкг) були доведені до 1Х буфером для зразків, що містить додецилсульфат літію (ДСЛ). Для невідновлених зразків інкубацію проводили при кімнатній температурі протягом 10 хв перед електрофорезом. Для відновлених зразків додавали дитіотреїтол (ДТТ) до кінцевої концентрації 20 мМ та зразки нагрівали до 95 "С протягом 10 хв. і поміщали на лід перед електрофорезом. Зразки завантажували в 10-, 12- або 15-лункові гелі
Біс-Трис для ДСН-ПААГ-електрофорезу (Тпегто Різпег) із ЯХ МОПС або 1Х МЕС у якості електродного буфера. -Електрофорез проводили при 185 В (постійна напруга) протягом 1 години. Гелі фарбували фарбуючим розчином ІпзіапіВісе (Ехредеоп) та знебарвлювали у воді.
Документацію виконували в системі документування гелів ОКгаі ит із застосуванням помаранчевих фільтрів із довжиною хвилі 600 нм. 1.3.4 Аналіз НВЕРХ/ЕРІ-МС співвідношення лікарського засобу-до-антитіла (АК) 00271) АОС були деглікозильовані, застосовуючи РМСази Е (Мем Епдіапа ВіоЇ арх). Буфер 7 (10 мкл) та РЮСаза Е (2 мкл) додавали до мАт (90 мкл, 1 мг/мл у ОРВ5). Реакцію інкубували в мікрохвильовій печі (СЕМ) Різсомег протягом двох циклів (1) мікрохвильова потужність 10 Вт, 37 "С, 10 хв., далі йде 5-хвилинна пауза; (2) мікрохвильова потужність 2 Вт, 37 "С, 10 хв.
Частину зразка відновлювали за допомогою додавання ДТТ до кінцевої концентрації 20 мМ із подальшою інкубацією при 60 С протягом З хв. Потім зразки аналізували, застосовуючи надвисокоефективну рідинну хроматографію (НВЕРХ) ММаїег5 Асдийу та квадрупольну час- пролітну (0-Тої - дчадгироїе (те ої ПдНпО мас-спектрометрію Ргетіег. Зразки (0,5-2 мкг кожного) вводили у мікроколонку для знесолення Маз5Ргер "м при 65 "С, елюювали з колонки з 5- хвилинним врівноваженням у 95 95 рухомої фази А, 10-хвилинним градієнтом (5-90 95 В) та 10- хвилинним повторним врівноваженням у 95 9о рухомої фази А при 0,05 мл/хв. Рухома фаза А становила 0,1 95 мурашиної кислоти у воді. Рухома фаза В становила 0,1 95 мурашиної кислоти в ацетонітрилі. Мас-спектрометр О-Тої працював у М-режимі визначення позитивних іонів з детектуванням у діапазоні 500-4000 м/3. Параметри джерела були наступними: капілярна напруга, 2,25 кВ (інтактне антитіло)-2,50 кВ (відновлене антитіло); напруга пробовідбірного бо конусу, 65,0 В (інтактне антитіло) або 50,0 В (відновлене антитіло); температура джерела,
100 "С; температура десольватації, 250 "С; потік газу десольватації, 550 л/год. Пік білка деконволюціонували із застосуванням функції Маз5і упхФ МахЕПп!і 1. Відносні інтенсивності мас кожного некон'югованого, одноразово-кон'югованого та багаторазово-кон'югованого важкого та легкого ланцюга об'єднували для розрахунку загального ОАК за формулою: 2ІЙШсся - 2(Ісзг) -- З(сяз) В... пс Хісзагь 2ЦІнояя - 2(Інсзг) я- З(Інсяз) в... П(Інсяп))/Х Інсзагі де Іс з 1 являє собою масову інтенсивність легкого ланцюга, кон'югованого з одним цитотоксин, Іїс «2 являє собою масову інтенсивність легкого ланцюга, кон'югованого з двома цитотоксинами, і так далі. Інс являють собою інтенсивності відповідних кон'югованих важких ланцюгів і ХІісзаг та ХІнсзаг являють собою об'єднані інтенсивності всіх некон'югованих і кон'югованих легких ланцюгів та важких ланцюгів відповідно. 1.3.5 НІС-ВЕРХ аналіз ОАЄ
І00272| На додаток до аналізу ОАК за допомогою аналізу НВЕРХ/електророзпилюючої іонізації (ЕРІ)-МС, ОАК МОКАБ-003-мср-ерібуліну та ВАК МОКАБ-003-0285 також аналізували із застосуванням ВЕРХ із гідрофобною взаємодією (НІС-ВЕРХ). Зразки вводили у Т5Кдеке ЕїШтег-5
РММ, 7,5 мм ІЮ х 7,5 см, розмір пор 10 мкм, та елюювали з колонки із 3З-хвилинним врівноваженням у 100 906 рухомої фази А, 15-хвилинним градієнтом (0-100 95 В), 5-хвилинною витримкою у 100 95 В, 1-хвилинною заміною на 100 95 А та 5-хвилинним повторним врівноваженням у 100 96 рухомої фази А при 0,7 мл/хв. Рухома фаза А становила 25 ММ фосфату натрію, 1,5 М сульфату амонію, рН 7,0. Рухома фаза В становила 25 мМ фосфату натрію, 25 Фо ізопропанолу, рН 7,0. Детекцію проводили при 280 нм (контроль 320 нм). ОАК визначали за формулою:
ІАОС. її ж 2(АС.2г) - З(АОСз) ко. п(АОС ХАОС заг) где АС. является площадью под кривой для пика мАт, соответствующего АОС, коньюгированному с одним цитотоксином, АОС. является площадью под кривой для пика мАт, соответствующего АОС, коньюгированному с двумя цитотоксинами, и так далее. ХАОС заг являє собою об'єднану площу під кривою для всіх піків. 1.4 Аналіз цитотоксичності 1.4.1 Аналіз фарбування кристалічним фіолетовим 00273) Клітини ІСКОМІ (ЕК) та 52У5А-1 (ЕКпед) субкультивували та висівали при 10000
Зо клітин/лунку в готове живильне середовище в 96б-лункових планшетах для культивування тканин, інкубували при 37 "С, 5 96 СО» протягом ночі (16 годин). Як правило, реагенти для випробування серійно розводили 1:4 в планшетах для розведення з 2-мілілітровими глибокими лунками, починаючи з 1 мкМ (всього 10 розведень). 100 мкл розбавлених зразків додавали до клітинних планшетів (при початковій концентрації зразків для випробування 500 нМ). Планшети інкубували при 37 "С, 5 95 СО» протягом додаткових 48 годин. Середовище видаляли, планшети промивали один раз 200 мкл ОРВ5, фарбували 50 мкл 0,2 95 розчину кристалічного фіолетового при кімнатній температурі протягом 15 хв. та потім ретельно промивали водою з-під крану.
Планшети сушили на повітрі, а кристалічний фіолетовий розчиняли з 200 мкл 1 95 розчину ДСН.
Планшети зчитували при 570 нм. Дані аналізували із застосуванням СгарпРавй Ргізт 6. Аналізи проводили, застосовуючи щільності посіву 1000 клітин на лунку, а вплив сполуки становив в цілому 5 днів. Коли був потрібен коротший вплив, через 4 години видаляли середовище, що містить цитотоксичні агенти, та замінювали свіжим живильним середовищем перед 5-денною інкубацією. Для ОМСАКЗ, Саом3 та МСІ-Н2110, клітини висівали при 3000 клітин/лунку та інкубували протягом 5 днів з АОС. Для конкурентних експериментів АЮС, що титрувались, попередньо інкубували з 2 мкМ (кінцева) некон'югованого МОКАБ-003 перед інкубацією з клітинами. 1.4.2 Аналіз неспецифічного цитолізу 00274) За день до початку дослідження клітини ІСКОМ1 МисіднтМ Огееп (МІ с) висівали при 5000 клітин/лунку в 96-лункові круглодонні планшети з подальшим центрифугуванням при 1000 об./хв. протягом З хв. при кімнатній температурі для забезпечення утворення клітинного осаду. Планшет поміщали в резервуар в Іпсисуїе 7о00тФ (Е5зепВіо 5сіепсе) та інкубували при 37 "С/5 95 СО» протягом ночі. Програма була налаштована кожні дві години збирати зображення росту клітин та визначати загальну кількість клітин із пофарбованими в зелений колір ядрами та пофарбованими в червоний колір ядрами, а також фазу і конфлюентність клітин. У день експерименту АОС МОКАБ-003 або чистий лікарський засіб розбавляли в повному середовищі
ЕРМІ та серійно розводили, починаючи з 400 нМ. 50 мкл розчину цитотоксину додавали до клітин МІ О-ІЗКОМІ та інкубували протягом 30 хв. Протягом інкубаційного періоду клітини НІ -60 (ЕКпед) МисіднітМ Кеа (МІК) розводили свіжим середовищем до 2х105, 1х105 чи 5х104 клітин/імл. В лунки з МІ.С-ІЗКОМ1 додавали 50 мкл суспензії клітин МІ Б-НІ 60 або окремо бо середовища з подальшим центрифугуванням при 1000 об/хв протягом З хв. при кімнатній температурі для забезпечення повторного утворення клітинного осаду. Планшет поміщали назад в резервуар в Іпсисуї 200т (Е55епВіо 5сіепсе) та інкубували при 37 "С/5 95 СО» впродовж 5 днів. Відносний ріст клітин МІО-ІЗКОМ1 визначали, застосовуючи підрахунок зелених клітин, шляхом порівняння із зразками без АОС або зразками, до яких додали окремо чистий лікарський засіб. Відносний ріст клітин НІ 60 визначали аналогічним чином, за винятком того, що визначали кількість червоних клітин. Визначення значень ІК5О для МІ С-ІОЗКОМ1 та
МІ В-НІ -60 визначалось за допомогою Ргізт (сгарпРад). 1.4.3 Аналіз стабільності сироватки
І(00275| 20 мкл АОС МОКАБ-003 ретельно змішували з 80 мкл ОРВ5, нормальною об'єднаною сироваткою людини (Віогесіатацйоп, партія ВЕН5Б52911) або нормальною об'єднаною сироваткою миші (Віогесіатацоп, партія МЗЕ152591) та інкубували при 37 "С протягом 0, 4, 24 і 48 годин. Після інкубації зразки заморожували та зберігали при -20 "С до оцінювання в аналізах цитотоксичності та зв'язування. Для аналізу цитотоксичності зразки оцінювали на клітинах ІСКОМІ1 та 5)5А-1, як описано в розділі 1. 4. 1. Для оцінки зв'язування зразки оцінювали, застосовуючи аналіз М5О ЕСі на основі розчину. Зразки інкубували з біотинильованим рецептором фолієвої кислоти альфа та сульфо-міткою до МОКАБ-003 перед уловлюванням на стрептавідин у планшеті та детектували зі застосуванням електрохемілюмінесценції за допомогою пристрою М5О зЗесіог Ітадег 2400. 2. Результати 2.1 Приготування АОС МОКАБ-003 (00276) Щоб вибрати кращу комбінацію лінкера та цитотоксину для кон'югації із МОКАБ-003,
АОС були підготовлені за допомогою трьох методик. У відповідності зі стратегією кон'югації, зображеною на Фіг. 1, неспарені цистеїни утворюються шляхом часткового відновлення з обмеженими молярними еквівалентами відновлюючого агента ТСЕР, що не містить тіол. Ця стратегія переважно зменшує міжланцюгові дисульфідні зв'язки, які зв'язують легкий ланцюг та важкий ланцюг (по одній парі на спарювання Н-їЇ) та два важкі ланцюги в шарнірній ділянці (дві пари на спарювання Н-Н у випадку ІдДО1 людини), залишаючи внутрішньоланцюгові дисульфідні зв'язку інтактними.
І00277| Друга стратегія кон'югації для отримання АОС МОКАБ-003 використовувала хімію відновлених дисульфідних містків. Хімія відновлених дисульфідних містків перебудовує містки вільних тіолів цистеїнових залишків, що звільняються в процесі часткового відновлення, імітуючи роль дисульфідного зв'язку і тим самим зберігаючи стабільність та функцію АОС.
І00278| У третій стратегії кон'югації для отримання АЮС МОКАБ-003 застосовували обмежене використання лізину. Обмежене використання лізину призводить до кон'югації дуже обмеженої кількості вирахуваних 70-- грідрофільних лізинів, доступних на типовій молекулі людського дб, та потенційно може давати суміші продуктів АОС з нижчою гомогенністю в порівнянні зі стратегіями, що включають модифікацію цистеїну. 2.1.1 Приготування МСР-ерібуліну для АОС МОКАБ-00ОЗ 002791 Ерібулін (1) (10 мг, 14 мкмоль) (Фіг. 2) розчиняли в М,М-диметилформаміді (ДМФА) (Імл) та добре перемішували. Додавали М,М-диізопропілетиламін (основа Хуніга або іРГг2гМЕЮ (3,6 мкл, 21 мкмоль) та Фмок-МаІ-Сі-пара-амінобензил-пара-нітрофенол (Фмок-МСР-РМР) (2) (16 мг, 21 мкмоль, Сопсогіїз Віозузіет5, са Ж МС1003). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 4-16 годин, відстежували за допомогою набору для нінгідринової реакції (Апазрес, саї Ж 25241) до тих пір, доки реакція не була завершена. Потім в реакційну суміш додавали диетиламін (ЕС2МН) (0,014 мл, 0, 14 мкмоль), перемішували протягом 2 годин при 18-25 "С для видалення захисної групи Фмок. Реакцію відстежували за допомогою набору для нінгідринової реакції. Після закінчення, розчинник випарювали під вакуумом, щоб отримати неочищений МСР-ерібулін (3) (16 мг), очищали із застосуванням колонки 2ОВАХ 5В-
С18 (розмір пор 5 мкм, 9,4 х 150 мм) в системі ВЕРХ Умаїег5 АїйШапсе е2695 у рухомій фазі НгО-
СНЗіСМ, що містить 0,1 95 мурашиної кислоти, через градієнт В 15-70 95. МСР-ерібулін (3) (16 мг) розчиняли в ДМФА (1 мл). Додавали основу Хуніга (7,2 мкл, 41мкмоль) та малеімід-ПЕГ2-МН5 (4) (9,7 мг, 27 мкмоль). Реакційну суміш перемішували при 18-25 "С протягом З годин. Реакційну суміш очищали за допомогою ВЕРХ (НгО-СНІСМ), що містить 0,1 95 мурашиної кислоти) через градієнт В 15-70 95. Розчинник видаляли шляхом ліофілізації, щоб отримати таІ--«ПЕГ)2-МаІ-Сй- п-амінобензилоксикарбоніл (рАВ)-ерібулін (таІ--«ПЕГ)2-УСР-ерібулін) (5). 2.1.2 Оптимізація умов відновлення (00280 АОС МОВАБ-003 отримували шляхом утворення неспарених цистеїнів внаслідок часткового відновлення з обмеженими молярними еквівалентами відновлюючого агента трис(2- карбоксиетил)фосфіну (ТСЕР). Першопочаткове дослідження було виконано на МОКАБ-003, в бо якому варіювалися концентрація антитіла, концентрація ТСЕР та час інкубації з метою створення в середньому 4 сайтів, що кон'югуються, на молекулу антитіла. Кількість сайтів вільних тіолів визначали за допомогою аналізу флуорометричного кількісного визначення тіолу.
Результати цього аналізу наведені в таблиці 12. Ступінь руйнування зв'язків Н-Н та Н-Ї. після 10 хв., 30 хв., 60 хв. або 120 хв. інкубації також аналізували за допомогою ДСН-ПААГ- електрофорезу (Фіг. 3). Для цього аналізу невідновлені і відновлені зразки завантажували на гель для ДСН-ПААГ-електрофорезу, та електрофорез проводили при 185 В протягом 1 години.
На Фіг. З доріжка М відповідає стандартному білку. Доріжка 1 відповідає необробленому, невідновленому МОКАБ-003. Доріжка 2 відповідає МОКАБ-003 (5,3 мг/мл), відновленому в 70,6
МКМ ТСЕР. Доріжка З відповідає МОКАБ-003 (5,3 мг/мл), відновленому в 141,2 мкМ ТСЕР.
Доріжка 4 відповідає МОКАБ-003 (1,5 мг/мл), відновленому в 20 мкМ ТСЕР. Доріжка 5 відповідає
МОВАБ-003 (1,5 мг/мл), відновленому в 40 мкМ ТСЕР. Ідентичності кожної смуги вказані на нижньому правому гелі. "Н" позначає важкий ланцюг, тоді як "І" позначає легкий ланцюг.
Таблиця 12
Оптимізація умов відновлення МОКАБ-003 11 ю017юж0 100010 концентрація |концентрація | Вільнії Відновлені |Вільнії Відновлені |Вільні!ї Відновлені |Вільні| Відновлені
МОКАБ-003 ТСЕР тіоли | дисульфідні | тіоли | дисульфідні | тіоли | дисульфідні | тіоли | дисульфідні
МКМ (мг/мл) МКМ МКМ | зв'язки на мАт | мкМ | зв'язки на мАт | мкМ | зв'язки на мАт | мкМ |зв'язки на мАт звавя | м? |39 48 |вте| 58 зва2| 54 |ая. 58 опе | о |за| о 147) 07 52, ов |ме| о
І00281| Аналіз ДСН-ПААГ-електрофорезу та вмісту тіолу показав, що 60-хвилинна інкубація 5,3 мг/мл мАт при 4-кратному молярному співвідношенні ТСЕР до мАт забезпечувала задовільний вихідний стан, оскільки, як видається, було присутнє обмежене відновлення внутрішньомолекулярних дисульфідів (що визначено за вмістом вільного тіолу) та залишалося дуже мало невідновлених мАт (невідновлене мАт буде діяти як конкурентний інгібітор у дослідженнях іп міго та іп мімо при застосуванні приготованих АОС). Подальші дослідження проводилися з МОКАБ-003 при початкових концентраціях 5,0 мг/мл для підтвердження цього оптимізованого молярного співвідношення ТСЕР до мАт із застосуванням аналізу ДСН-ПААГ- електрофорезу (Фіг. 4). На Фіг. 4 доріжка 1 відповідає стандартному білку. Доріжка 2 відповідає необробленому, невідновленому МОКАБ-003. Доріжка З відповідає МОКАБ-003, обробленому в співвідношенні 1:11 МОКАБ-003:ТСЕР. Доріжка 4 відповідає МОКАБ-003, обробленому в співвідношенні 1:2 МОКАБ-003:ТСЕР. Доріжка 5 відповідає МОКАБ-003, обробленому в співвідношенні 1:3 МОКАБ-003:ТСЕР. Доріжка б відповідає МОКАБ-003, обробленому в співвідношенні 14 МОКАБ-003:ТСЕР. Також услід за відновленням та видаленням ТСЕР проводили кон'югацію із застосуванням малеімідо-ПЕГ2-біотину для того, щоб стимулювати
Зо кон'югацію цитотоксину для приготування АОС. Аналіз ОАК проводили, застосовуючи РХ-МС.
Результати цих досліджень наведені в таблиці 13.
Таблиця 13
Оптимізація умов відновлення МОКАБ-003 - рівні кон'югації з малеімідо-ПЕГ2-біотином
ТСЕР МОРАБ-00З3
І С, рівень біотину легкого ланцюга; НС, рівень біотину важкого ланцюга; САКЕ, біотин на мАт
ІБАВ - 2(І С) -- 2(НО). 00282) Після кон'югації біотину аналіз вільних тіолів показав, що в МОКАБ-003-біотині немає вільних тіолів. Це вказувало на те, що після відновлення дисульфідних зв'язків кон'югація зазвичай відбувалася як при утворенні тіолів, так і в результаті того, що будь-які некон'юговані, відновлені дисульфіди піддавалися повторному окисленню для перетворення дисульфідних зв'язків. Кінцевими умовами, обраними для відновлення для генерації АОС, були концентрація антитіла 5,0 мг/мл, концентрація ТСЕР 110 мкМ та час інкубації 60 хв. Це призводить до мАт з рАК 4 після кон'югації. 2.1. З Оптимізація кон'югації АОС
І00283| В якості першого цитотоксину, що застосовується для приготування АОС, застосовували криптофіцин, який являє собою гідрофобну сполуку, експерименти з оптимізації початкової кон'югації проводили за допомогою "сурогатного" антитіла до мезотеліну людини, що має два неспарені цистеїни, доступні для кон'югації (по одному на легкий ланцюг) в певних положеннях. Це значно полегшує аналіз ефективності кон'югації за допомогою мас- спектрометрії, оскільки потрібно аналізувати тільки легкий ланцюг. Потім проводили титрування пропіленгліколю під час кон'югації малеїімідо-І І З-криптофіцина з сурогатним антитілом із подальшим аналізом ефективності кон'югації легкого ланцюга за допомогою РХ-МС (таблиця 14).
Таблиця 14
Оптимізація концентрації пропіленгліколю в реакції кон'югації
Пропіленгліколь Кон'югований І С АБ (Ус) (Ус) ек
Маси І С: некон'югований, 23536 Да; кон'югований, 24367 Да. (00284) 50 95 пропіленгліколь призводив до повного заповнення доступних сайтів та був обраний в якості кінцевої концентрації для застосування. Після кон'югації не спостерігалося втрати зв'язування мАт (дані не наведені), що вказує на те, що пропіленгліколь не чинив шкідливого впливу на антитіло. Таким чином, обрані кінцеві умови реакції кон'югації становили
Зо 2,5 мг/мл кінцевої концентрації мАт, 6:1 молярне співвідношення малеїімідо-лінкер- цитотоксин:мАт у 0,5Х ОРВЗ (кінцева концентрація після додавання пропіленгліколю), 0,5 мМ
ЕДТК, 50 95 пропіленгліколь, рН 7,2, протягом 3,5-4 годин при кімнатній температурі. У цих реакціях перед додаванням малеїімідо-лінкер-цитотоксину додають пропіленгліколь. 2.1. 4 Приготування АОС та біофізична характеристика
І00285| Встановлені умови відновлення та кон'югації, описані в розділі 2. 1. 2, були застосовані для приготування перших 10 АОС МОКАбБ-003, перерахованих у таблиці 15. Решта
АОС, за винятком М-ММАЕ та М-ОМ'І, були приготовлені за допомогою або відновлених дисульфідних містків, або обмеженого використання лізину. М-ММАЄЕ та М-ОМІ1 були виготовлені компанією Сопсогії5 Віозуз(етв, Іпс. та отримані в кон'югованій формі.
І00286| Хімія відновлених дисульфідних містків будує містки за вільними тіолами, що утворюються в процесі часткового відновлення, даючи один цитотоксин на відновлений дисульфід. Відповідно до теорії, антитіло з САК - 4 буде мати перебудовані дисульфідні містки в Н-Ї та шарнірі, надаючи АОС підвищену стабільність та однорідність у порівнянні з традиційними підходами кон'югації. Обмежене використання лізину призводить до кон'югації дуже обмеженої кількості вирахуваних 70. грідрофільних лізинів, доступних на типовій молекулі людського |дс. Кон'югати МОКАБ-003, приготовлені із застосуванням цього способу,
призводили до 2,0 ВАК, що вказувало на те, що на пару Н-Ї був використаний один лізин. (00287) Усі АОС очищали шляхом хроматографії зі знесоленням НіРгер 26/10 та готували у
ОРВЗ. Аналіз ВАК проводили на всіх приготовлених АОС за допомогою РХ-МС та рівні агрегації визначали за допомогою ексклюзійної ВЕРХ. Результати цих аналізів ОАК таагрегації перераховані в таблиці 15 поруч із відповідним АОС.
Таблиця 15
Біофізичний аналіз АОС МОКАБ-003 77111111 Назвасполуюю///////////// | АВ | Агрегацябб) криптофіцин сухе х ге В ОН Я УНН КО З ЗО 8 | ЕВН-О0Т1Т59200.77777777771711111111111111111111128 11111111 9 |М-ММАЕ (77777717 11117140 11111112 1о| МНе-ПЕГАЯАЧЕГ//7777777111111111111111150 11111111 (00288) Значення БАК для всіх АОС перебували в попередньо визначеному діапазоні (ОАЄ між З і 4). Рівні агрегатів для АОС на основі криптофіцину були значно вищими бажаного (» 10
Фо), тоді як малеїмідо-лінкер-цитотоксини на основі ерібуліну (МСР-ерібулін) та на основі майтансіна (ЕК-001161318, ЕН-001161319 та М-ММАЕ) демонстрували прийнятні рівні агрегатів. Дослідження інших органічних співрозчинників проводили на реакціях кон'югації
МОРВАБ-003 із застосуванням МСР-криптофіцину. Випробованими співрозчинниками були ДМСО (10 95), М,М-диметилформамід (20 95), М,М-диметилацетамід (20 95) та М,М-диметилпропіонамід (20 95). Рівні агрегатів після кон'югації із застосуванням цих співрозчинників були рівними або перевищували рівні для 50 95 пропіленгліколю. (00289) Аналіз невідновлювального ДСН-ПААГ-електрофорезу був виконаний на підмножині
АОС (Фіг. 5). Оскільки ОАК для всіх цих АОС було визначено як 4, вважалося, що ці АОС повинні мігрувати як інтактний Ідс - 160 кДа, так як дисульфідні містки повинні бути перебудованими в обох Н-Ї та обох шарнірах. Ця підмножина АОС включає в себе М-ММАЕ (доріжка 2), М-ОМІ (доріжка 3), М-0026 (доріжка 4), М-0260 (доріжка 5), М-0267 (доріжка 6), М- 0272 ( доріжка 7), М-0285 (доріжка 8), М-292 (доріжка 9), М-027-0381 (доріжка 10) та М-0384 (доріжка 11) (Фіг. 5). На Фіг. 5 доріжка 1 відповідає стандартному білку.
І00290| З цього аналізу ясно, що, для АОС, створених способом хімії відновлених дисульфідних містків (доріжки 4-9, 11), на додаток до інтактного АОС, існують значні моновалентні види Н-!. (80 кДа). Це вказує на те, що, на додаток до утворення міжланцюгових містків у шарнірі, існує значне утворення внутрішньоланцюгових дисульфідних містків у шарнірі.
Аналіз ексклюзійної ВЕРХ показує, що АОС мігрують як один інтактний дос, що вказує на те, що для цих АОС із утвореними внутрішньоланцюговими Н-Н містками важкі ланцюги асоційовані нековалентно в кінцевому АОС. 2. 2 Аналіз іп міго активності АОС МОНКАБ-00З 2. 2. 1 Цитотоксичність на клітинах ІСКОМІ1 та 5)5А-1 (00291) Активністьприготовлених АОС іп міго оцінювали за допомогою аналізу фарбування кристалічним фіолетовим, як детально описано в розділі 1. 4. 1.
І00292| Першопочатковий скринінг усіх АОС МОКАБ-003 виконували на клітинах ІСКОМ1 (ЕКпі(н-я)) та 5УБА-1 (ЕНпед(-)). Клітини ІСКОМІ мають походження епітеліальної карциноми яєчників людини та експресують на високому рівні рецептор фолієвої кислоти альфа (ЕК), цільового антигену МОМКАБ-003. Клітини 59У5А-1 являють собою лінію пухлинних клітин остеосаркоми людини, у яких відсутній рецептор фолієвої кислоти альфа. Скринінг вибраних
АОС також виконувався на клітинах СаоУу3З (карцинома яєчника людини, ЕКітед(нь)), МСІ-
Н2г110 (недрібноклітинна карцинома легенів людини, ЕКтед(їнк)) талли ОМСАКЗ (карцинома яєчника людини, ЕКітед(ї)). Результати цього скринінгу наведені в таблиці 16.
Таблиця 16
Скринінг цитотоксичності (ІКоо) АОС МОВАБ-003 на різних лініях пухлинних клітин
ПЕТ іонні ПЕ 2А НСС ПОЛОН ПОЛЯ НЯ криптофіцин ШМе-криптофіцин. 77777777 | 0023 | 47 | 0953 | Щщ | щ о З-криптофіцин. 77777777 | 0086 | 127 | 019 | щ-(хБ | 0бова о МСР-криптофіцин.////////777777777 | 1003 | 100 | 002 | щ(МГ
ОО ЕН-001161318....777777777777777/ | 1026 | 5100 | з | -:
ОО ЕН-001161319..Й.Й7Й7777ю7юЮюЮюЮюЮюЮюЮюЮюЮюЮюЮюЮюЮ/ЮЛ| 049 | 5100 | 113 | :: ОЇ Су
ОО ЕН-001159200...7777777ю7юЙюЙюЙюЙЮЩРГБ. | 65 | 5100, | 92
ОМАММАЕЇ 77777771 1102 | 255 | | Її
МН ПЕГ2-АМЕ 77777777 | 102 | х5000Ї...ЙЙЙЙ. | .....ЙЮЦЇ |:
Мом 77777171 11155 | 7132 | 7 / |Ї7777777111171Ї1 71 ом-о285..Й.ЙЮЙЙ.ЙМБ.:( Й КфРеНЄрурРКЕеЮ | 03 | 5100 | | 74 | 88 мб 77777711 1054 | 5100! 7 Ї7777777717117Ї171 мл 77111111 5500 | х500Ї..Й.Й.Й. |... 1:22. мл: 77711111 5500 | х500Ї..Й.Й.Й. |... 1:22.
ОомМлБВ 77777771 5500 | »55000Ї..ЙЙЙ.|....ЙЮЙЮЦЇ:.:С2С2 у ом-оз384 77777711 225 | 245 | | Її омчоз3о2 77777771 11930 | »55000Ї..ЙЙЙ. |... 1.2.
Мая. 77111111 Ї117117 | 5500! Ї777711111171Ї11
НИ ТР и НИЄ ЛЕТ: ЛОНО ПООНО Т ЛО ПОЛОН НОЯ КО ом-б2в7 77777771 100029 | 0028 | ....-Ц- |. 71771 . нути ГЕ: ЕЕ по ПО ПО ом-б2гво 77777771 0983 | 0096 | Й... Ї.Й.Й...ЙИ 1171 ом-о2г767777771111111111111111111111 1043 | 30 | 7 ї17777117ї11 омчої5-0913...77777771717171717171711111111111 | 5500 | х500|..Й.ЙЙ.|.:ЙЄЙЮЦЄЇ:.:С2 у омчоз3о-о13211111111111111111111111 | 5500 | 173 | Г7777/Ї1 7. омчївї 77777711 5500 | х500|..Й.Й. |... |:
оМм-0157,..7777777171717171717171717111111111111 | 5500 | х5000Ї..Й.Й.ЙЇ|Ї...ЙЮЙЮЦЇ 1:22 ом-б27-0381...77777717171111111111111111|1 1145 | 28 | 71777711 ом-бба5 77777711 5500 | х500Ї..ЙЙЙ.|..ЙЮЙЮЦЇ 1.2 омеозої 77777111 5500 | х500Ї..Й.Й.ЙЙ.|...ЙЮЙЮЦЇ 1:22 у омчозо-оо11 77777111 1606 | 55000... |... |: ом-о30-0291,...77777777777717171717111111111 | 5500 | 7105 | (ЇЇ її ом-б255 ...ююЮюЮюЮюЮюЮюЮюЮю/м«КН/4н6уиї117171717171711 | 1012 | 046 | | 77777771 ом-бї14 77711111 1144 | 5 |! 7 ї17111111171ї11
Всі значення представлені ІКоов НМ і являють собою середні значення виконаних повторних експериментів. (00293) АОС УСР-ерібулін був ефективним (54 пМ) на клітинах ІСКОМІ1 та спричиняв низьке знищення клітин 5ОУЗА-1. Для цих клітинних ліній АОС МСР-ерібулін демонстрував вищу активність та специфічність у порівнянні з АОС з еквівалентними значеннями ВАК, такими як М-
ММАЕ та М-ОМ1. АОС УСРР -ерібулін також демонстрував високу цитотоксичність на додаткових лініях пухлинних клітин, що експресують ЕК, що походять з яєчника (Саоу3 та ОМСАКЗ) та недрібноклітинної карциноми легенів (МС-Н2110). (00294 АОС УСРР -ерібуліну, ГІ 2-криптофіцину, ГІ З-криптофіцину, МСР-криптофіцину, ЕК- 001161318, ЕН-001161319 та ЕК-001159200 показали специфічну цитотоксичність (» 2-09 специфічності) на клітинах СаоОМм3З (ЕКтеа(ї--)). Велика кількість цих АОС проявили субнаномолярну активність. Кон'югати криптофіцину також демонстрували високі рівні активності (23 пМ - 86 пМ) на клітинах ІСКОМ'1, але, за винятком МСР-криптофіцину, також демонстрували помітну цитотоксичність на клітинах 5УБА-1. Кон'югати майтансіну, що розщеплюються, ЕК-001161318 та ЕК-001161319 проявляли проміжну активність на клітинах
ІСКОМТІ (0,26 нМ і 0,49 нМ) та незначне нецільове знищення клітин 5УЗА-1. 00295) Усі кон'югати, отримані шляхом обмеженого використання лізину, не демонстрували жодної специфічності та надалі не оцінювалися. Всі кон'югати, що розщеплюються, приготовлені за допомогою технології відновлених дисульфідних містків дуостазу-З (М-0285), дуостатіну-5 (М-0115) та дуостатіну-14 (М-292 та М-0026), демонстрували специфічну цитотоксичність на клітинній лінії ІСЕКОМ1, незначну цитотоксичність на клітинній лінії 5)5А-1.
Кон'югати дуостатіну-3 та дуостатіну-5, похідні аурістатину, мали трохи вищу активність, ніж кон'югати дуостатіну-14, який є похідним майтансіну. Ефективності та специфічності були зіставними з контрольним кон'юЮгатом М-ММАЕ, який застосовує лінкер МаІ-СП-рАВ (МСР), приєднаний до монометилу Е. Всі кон'югати, що не розщеплюються, приготовані за допомогою хімії відновлених дисульфідів, не мали достатньої активності або специфічності, та надалі не аналізувалися. 2. 2. 2. Цитотоксичність на клітинній лінії раку яєчника людини Саом3, щл експресує
Зо рецептор фолієвої кислоти (00296) Активність обраних АОС МОКАБ-003 також визначали на лініях пухлинних клітин яєчника людини ОМСАКЗ та СаоОМ3, а також на клітинній лінії НДРЛ людини МСІ-Н2110 (таблиця 16). На клітинній лінії яєчника людини Саом3 кон'югати криптофіцину демонстрували помітно вищу активність, ніж кон'югат МСР-ерібулін, на відміну від тих, що спостерігались на клітинах ІСКОМІ. Це може бути пов'язано з нижчим рівнем експресії рецептора фолієвої кислоти альфа в клітинах СасуЗ у порівнянні з ІСКОМІ1 або з вищою активністю криптофіцину в цих клітинах у порівнянні з ерібуліном. Кон'югати на основі майтансіну ЕК-001161318, ЕВ- 001161319 та ЕК-001159200, усі показували ефективності подібні або нижчі, ніж МСР-ерібулін. 2. З Неспецифічний цитоліз МСР-ерібуліну, ЕВ-001161318 та М-0285
І00297| Щоб оцінити активність неспецифічного цитолізу, аналіз був налаштований із застосуванням двох мічених клітинних ліній. У цьому аналізі клітини ІЗКОМ1 (ЕКПі), мічені
Мисіїднім «згееп, та НІ -60 (ЕКпеод), мічені Мисіднім Кеа, сумісно культивували в різних співвідношеннях кількості клітин та обробляли титрами АОС МОКАБ-003 УМСР-ерібуліном, ЕБ- 001161318 або М-0285. МСР-ерібулін являє собою АОС, приготований на основі ерібуліну, який містить лінксер малеімідо-ПЕГ2-МаІ-СТ-рАВ, що розщеплюється, тоді як ЕК-001161318 являє собою АОС, приготований на основі майтансіна, який містить лінкер малеїімідо-(СН2г)5-МаІ-Сї- рАВ, що розщеплюється, та М-0285 являє собою АОС, приготований на основі дуостатіна, який містить лінкер ПЕГ-рРАВ, що розщеплюється. Цитотоксичність відстежували за допомогою системи візуалізації клітин Іпсисуїе 200171). Результати цього аналізу неспецифічної цитотоксичності наведені в таблиці 17 та на Фіг. бА-0.
Таблиця 17
Активність неспецифічного цитолізу
МСОСР-ерібуліну на со-культурі ЕК-позитивних та ЕК-негативних клітинних ліній (со-культура з ІСВОМ-1 (ерібулін) 002981) Коли клітини НІ--60 (ЕКпед) культивували при співвідношенні 2:1 до клітин ІСКОМ1 (ЕВПЇ), обробка МОКАБОО3-УСР-ерібуліном призводила до 2-І0д збільшення знищення клітин
НІ--60 у порівнянні з клітинами НІ -60 окремо (таблиця 17 та Фіг. бА). Ці дані свідчать про те, що клітини, негативні на наявність цільового рецептора фолієвої кислоти альфа (ЕК), ефективніше знищуються МОКАБОО3-УСР-ерібуліном при спільному культивуванні з клітинами, позитивними на наявність цільового ЕК, згадуються в цьому документі як неспецифічний цитоліз.
Неспецифічний цитоліз відрізняється від нецільового знищення, яке визначається як самостійне знищення клітин, негативних на наявність цілі, за відсутності та незалежно від сумісного культивування з клітинами, позитивними на наявність цілі Збільшення неспецифічного цитолізу, що спостерігалось, також було майже ідентичним збільшенню, що спостерігається після обробки клітин НІ-6бО0 вільним ерібуліном, що вказує на потенційний механізм неспецифічного ефекту. Не бажаючи бути пов'язаними відповідністю до будь-якої теорії, автори вважають, що МОКАБОО3-УСР-ерібулін може бути розщеплений в або поблизу ЕК-позитивних клітин ІСКОМ'І, які також піддаються апоптозу та вивільняють вільний ерібулін в культуру.
Вивільнений цитотоксин може знищити ЕК-негативні клітини НІ -60.
І00299| Навпаки, для МОКАБО03-ЕН-001161318 спостерігався лише незначний зсув (Фіг. 68) та не спостерігалося жодного зсуву для МОКАБОО3-0285 (Фіг. 6С). Коли співвідношення Ні - 60ОЛ1ООМ1 було знижено з 2:11 до 1:22, для МОКАБОО3-ЕН-001161318 спостерігалося помітне знищення клітин НІ -60 у порівнянні з клітинами НІ -60 окремо, в той час якдля МОКАБО03-0285 неспецифічний ефект все ще залишався низьким, хоча і таким, що детектується. Ці дані свідчать, що на предмет неспецифічного цитолізу оцінені АОС МОКАБ-003 можуть ранжуватися як МСР-ерібулін » ЕК-001161318 » М-0285. 2. 4 Аналіз стабільності сироватки
І0О300| З огляду на тривалий період напівжиття АМС у кровотоці іп мімо та потенціал токсичності, якщо цитотоксини вивільняються в кровотік, АОС повинні демонструвати стабільність у сироватці. АОС МОКАБ-003 МСР-ерібулін, ЕК-001161319 та М-0285 попередньо інкубували в сироватці людини або миші при 37 "С протягом 48 годин, а потім оцінювали в аналізі цитотоксичності на клітинах ІСКОМІ та 59У5А-1. ЕН-001161319 являє собою АОС, створений на основі майтансіна, що містить той самий лінкер, який розщеплюється, що і МСР- ерібулін, малеімідо-ПЕГ2-МаІ-Сйп-рАВ. Контролі ФОБ та сироватка були включені для корекції будь-яких ефектів сироватки на виконання аналізу. Результати цього дослідження наведені в таблиці 18.
Таблиця 18. Стабільність обраних АОС МОВАБ-003 у сироватці
МОРАБООЗ- МОРАБООЗ-
Час ФоБ ватка | ФОБ ватка | ФСБ ватка люди- й люди- й люди- й миші миші миші ни ни ни дроби зво ве ви) ме) по зом ою ю год.- 0,021 | 0013 1 0,02 0,28 0,15 0,2 0,074 | 0,089 нв
ФСБ
(0) годе 0,022 | 0,014 | 0,01 0,15 0,15 0,2 0,063 | 0,078 | 0,049 (бвомі | биро- ватка (0) год.- »10 »10 » 10 » 10 »10 »10 »10 »10 »10
ФСБ
(0) год.- »10 »10 » 10 » 10 »10 »10 »10 »10 »10 вувА-І | Сиро- ватка
Заштриховані ящики вказують на значне зниження активності порівняно зразка Т-0.
У той час, як МСР-ерібулін та М-0285 були стабільними протягом щонайменше 48 годин в обох сироватках, ЕК-001161319 демонстрував значне зниження активності через 48 годин. Це може бути пов'язано з азиридин-карбаматним зв'язком із майтансіном, який раніше не був описаний у літературі Форма сполуки, що вивільняється, може не володіти високою ефективністю, оскільки не спостерігалося збільшення цитотоксичності на клітинах 5УЗА-1. 2. 5 Дослідженняйїп міго з МОКАБО03-УСР-ерібуліном 2. 5. 1 НІС-ВЕРХ аналіз БАК та гетерогенності продукту
І00301| МОВАБООЗ3-УСР-ерібулін та МОКАБОО3-0285 аналізували за допомогою НІС-ВЕРХ з метою оцінки БАК альтернативним способом і вивчення гетерогенності продукту, а також вмісту некон'югованого антитіла (конкурента). Показано, що МОКАБОО3-УСР-ерібулін має види ОАК 0, 2, 4 та 6, що передбачено способом, який застосовується для відновлення та кон'югації (Фіг.
ТА). Спостерігалася дуже невелика кількість видів з ОАК - 0. Загальний САК, що базується на розрахунках АОС, склав 3,80, що відповідає значенням, визначеним РХ-МС. На НІС-ВЕРХ
МОРАБООЗ3-0285 мігрував як єдиний пік, що вказує на один вид БАК (Фіг. 7В). Це було визначено як АК 4. 0. 2. 5. 2 Специфічність з конкурентного аналізу
Ї00302| Антигенна специфічність цитотоксичності МОКАБ-003-МСР-ерібуліну була продемонстрована для кон'югату МСР-ерібулін за допомогою формату конкурентного аналізу (Фіг. 8). В цьому експерименті титри МОКАБр-003-МСР-ерібуліну (початкова концентрація 100
НМ) сумісно інкубували з 2 мкМ некон'югованого МОКАБ-003. Некон'югований. МОКАБ-00З забезпечував 2-І09д зсув активності на клітинах ІСКОМІ1, аналогічний результатам, отриманим із
ІМОМ853, АОС до людського рецептора фолієвої кислоти альфа-майтансіну від Іттиподеп, що знаходиться в цей момент на ІІ-й фазі клінічних випробувань, на клітинах КВ (Мооге і співавт., 2015 Американське товариство клінічної онкології (АЗСО - Атегісап 5осівїу ої Сіїпіса! Опсоіоду)
щорічний збірник, Реферат 5518). 2. 5. З Цитотоксичність на клітинах НДРЛ МСІ-Н2110 (00303) Цитотоксичність на клітинній лінії НДРЛ людини МСІ-Н2110, як для МОКАрО03-МОР- ерібуліну, так і для МОКАБОО3-0285, визначали за допомогою аналізу фарбування кристалічним фіолетовим. Результати цього аналізу наведені в таблиці 16. МОКАБОО3-УСР-ерібулін мав ІК5О 0,73 нМ, тоді як МОКАБО0О3-0285 мав ІК5БО 14 нМ. 2. 6 Іп мімо дослідження 2. 6. 1 Максимальна переносима доза (МПД) МОКАБ-003-УСР-ерібуліну (МОКАБ-202) на лінії мишей СО-1 (00304| Мишам СО-1, які раніше не отримували лікування, вводили внутрішньовенно 200 мкл МОКАБ-202 відповідно до схеми з таблиці 19. Вагу тіла вимірювали в день дозування до введення дози, через 24 години після дози та три рази на тиждень в подальший час. Тварин спостерігали щодо клінічного гарного самопочуття протягом усієї тривалості дослідження. Через два тижні після дозування вимірювали та реєстрували кінцеву масу тіла. В кінці дослідження миші, що піддавалися евтаназії (а також якщо якась миша була піддана евтаназії або знайдена мертвою під час дослідження), були оброблені для розтину. Органи були обстежені на ознаки пошкодження тканин.
Таблиця 19
План дослідження
Група й Мишей Лікування Доза (мг/кг) Схема Спосіб введення
Носій" г одиночний
МОНРАБ-202 олюс в
І00305) У порівнянні з контрольною групою, що одержувала ФСБ, ні в одній з груп лікування не спостерігалося значимої втрати маси тіла, або ж будь-яких результатів клінічних досліджень, які свідчать про токсичність під час лікування. Маса тіла окремих мишей наведена в таблиці 20, а середнє по групі та СПС наведені в таблиці 21. Кінетика зміни маси тіла для кожної групи (середнє значення по групі та СПС) зображені на фіг. 9. МОКАБ-202 при дозах до 80 мг/кг через внутрішньовенне введення болюсу не викликав токсичності. Отже, МПД вище 80 мг/кг.
Таблиця 20 дев н і Кантуроть СК : ВЖК З мк і ЖК Ж мела. і ВОК Дике і ЗЖОІ Кит і
З ТЕ Ж ау ет нн и ши ен нн м нн в нн вин зо ше ше ши ши ши ши ши ши ше ши шк ши ши ши ши
Таблиця 21 іерецній! аж їв і еередне цк Тож кед) пк Їх переднє середнє, ДК НОСІЙ і : У ПН ЕЕ ДИ ПН У м ! : не ЗІ М НН НА З ПИ З с З НЕ ЗЕ мо мо 1 і З рома роко Роз Рома Її ол їз ре з ПИ: ЗИ МОХ З ЗІ ЗНИНЕ ПИ жа м ! 5 оо З ПИ З М ДЕ ЩА У ЩІ ПИ ТИ ВИЗ ДН М М НИ МК воя і В нн І І В УЗН З У | НЕ І М З І: ХДУ І МЕ Ж СЕ і ї Іл І І: З Шо І А УНН І: ВУ Р 2. 6. 2 Максимальна переносима доза ерібуліну в мишей СО-1
І00306| Мишам СО-1, які раніше не отримували лікування, вводили внутрішньовенно 200 мкл ерібуліну відповідно до схеми з таблиці 22. Вагу тіла вимірювали три рази на тиждень, включаючи вимір перед введенням дози у кожен день дозування та через 24 години після кожної дози. Тварин спостерігали щодо клінічного гарного самопочуття протягом усієї тривалості дослідження (два тижні після останньої дози). Вимірювали та реєстрували кінцеву масу тіла. В кінці дослідження миші, що піддавалися евтаназії (а також якщо якась миша була піддана евтаназії або знайдена мертвою під час дослідження), були оброблені для розтину.
Органи були обстежені на ознаки пошкодження тканин.
Таблиця 22
План дослідження . . Спосіб
Група й Мишей Лікування Доза (мг/кг) Схема введення
Фо
Ерібулін
Щ
І00307| У тварин, яким вводили ерібулін в дозах до 1,6 мг/кг, із застосуванням режиму дозування д4ахз3 (один раз кожні чотири дні, всього З дози), не спостерігали жодної значущої втрати ваги тіла або результатів клінічних досліджень, які свідчать про токсичність. Введення 3,2 мг/кг за тією ж схемою викликало у всіх трьох мишей пілоерекцію після другої дози.
Спостерігалася серйозна втрата ваги (втрата 23 95 у однієї миші, Ж552, після другої дози, 17 90 та 8 95 у інших, Ж551 та 2552, після третьої дози) у порівнянні з контролем ФСБ. Макроскопічних змін в органах мишей при розтині не спостерігалося. Маса тіла окремих мишей наведена в таблиці 23, а середнє по групі та СПС наведені в таблиці 24. Кінетика зміни маси тіла для кожної групи (середнє по групі та СПС) зображені на Фіг. 10.
І00308| Ерібулін при дозах до 1,6 мг/кг із застосуванням режиму дозування д4ах3 не викликав токсичності, тоді як 3,2 мг/кг викликали серйозну втрату ваги. Таким чином, МПД ерібуліну в цьому дослідженні становить 1,6 мг/кг, д4ахз.
Таблиця 23 у чи ши ши и не т ки НН А
Таблиця 24 знане 00000000 тб 000000 вве 0 чбунляния 000 юн ман : Кередне гі, 1» іередяе т, а і з : як | к середнє! ІЗ : середнє ісереднє ЩЕ»
Н а НИХ І НЕ ЗМ є ЗИ ПИ, В МИ с ЗМ дк що з ща 18 За ІС : і НЕ: І ШЕ? З ПЕ З М У З Є ДЕ я їв 13 ої З мА г ІЩЕ ЗЕ поем ин мовних ПОМвнн пиммив вно Мимо в Зно інни поммовівннх Комі Мов пня нн завинив тивно змиви зинннви і ІЗ ОД Ин ШЕ В С ЗНН ще: щі з В ОМ З 000 ЕСЕ
Кит . Н ет Р і Н 1 ї і 5 ії ж | 8 1 3 | М | 5 1 з її з 1 з шов | з ою емо ннвв зіоо пані подолана попоновивнви митивиа Я Н : 7 В 1 ї шишки шиши ни ниешие наши шана шисше а рові ва тів юні ввіз ом шишки нини ин ан: ши ше
Шрі юю вїзв мо мм ся рові мі | юю мі о ввів вової вм
Кожен стовпець відображає окрему тварину "9003: піддавали евтаназії при втраті ваги » 20 90 2. 6. З Оцінка мінімальної ефективної дози МОКАрО03-УС Р-ерібуліну (МОВАБ-202) на моделі НДРЛ людини МСІ-Н2110 у мишей СВ17-5С10
І00309| НДРЛ людини, клітини МСІ-Н2110, пасаж 47, імплантували підшкірно 30 мишам
СВ17 5СІО (самка, у віці від 5 до б тижнів, вагою 20 грам). Через 14 днів після імплантації мишей розподіляли випадковим чином на п'ять груп. Середній об'єм пухлини в кожній групі у день лікування (день 0) варіював від 154 до 175 мм" (таблиця 27). Мишей, включених у дослідження, лікували МОКАБОО3-УСР-ерібуліном (МОКАБ-202) (партіяж МВ2900-87Е 10/07/15) при 1, 2,5 або 5 мг/кг, МОКАБ-003-0285 (партіях 042-150-002) в якості контролю при 5 мг/кг, або
ФСБ, відповідно до плану дослідження (таблиця 25). Кожна група була виключена з дослідження, коли об'єм пухлини у будь-якої тварини в групі становив » 2000 мм3. Остання група була перервана на 61-й день.
Таблиця 25
План дослідження
Група й Мишей Лікування Доза Схема Спосіб (мг/кг) введення 15111111 811005 | мовльоозусетеріул | 25
З 5 МОРАБ-003-УСР-ерібулін 2,5 болюс в/в
МОНАБ-003-УСР-ерібулін «Чотири миші в цій групі. Одна миша була виключена з цієї групи через помилки введення препарату, яка була підтверджена відсутністю сполуки в сироватці тварини на основі даних електрохемілюмінесцентного імуноаналізу (ЕХЛА). 00310) Об'єми пухлин окремих мишей наведені в таблиці 26, а середнє по групі та СПС наведені в таблиці 27. Кінетика росту пухлини для кожної групи (середнє по групі та стандартна помилка середнього, СПС) наведені на Фіг. 11, а об'єми пухлин у окремих мишей, а також середнє по групі та СПС наведені на Фіг. 12. Грунтуючись на об'ємах пухлин на 17-й день (коли спостерігався перший об'єм пухлини х2000 мм3 ), МОКАБ-202 викликав інгібування росту пухлини (ТО - штог дгоуйй іппірйіоп) на 47 95 при 1 мг/кг (р - 0,002 у порівнянні з фізіологічним розчином), 96 956 ТО при 2,5 мг/кг (р « 0,0001 у порівнянні з фізіологічним розчином). Однак, пухлини, які регресують, відновлюються через один-два тижні після закінчення лікування. У мишей, оброблених 5 мг/кг МОКАБ-202, пухлина не виявлена. Ці миші залишалися без пухлини понад 60 днів після лікування одноразовою дозою. МОКАБ-003-0285 викликав 89,7 95 ТОЇ при 5 мг/кг (р « 0,0001 у порівнянні з фізіологічним розчином).
ІЇ00311| Маса тіла окремих мишей наведена в таблиці 28, а середнє по групі та СПС наведені в таблиці 29. Кінетика зміни маси тіла для кожної групи (середнє по групі та СПС) зображені на Фіг. 13.
І00312) У порівнянні з контролем, ні в одній з груп лікування не спостерігалося значимої втрати маси тіла.
Ї00313| МОНАБ-202 виявив значимий ефект на ріст пухлини МСІ-Н2110. Регресія пухлини була досягнута шляхом болюсного лікування при 2,5 мг/кг з 94 95 ТО (у порівнянні з ФСБ).
Відповідно, мінімальна ефективна доза МОКАБ-202, випробувана на цій моделі, становить 2,5 мг/кг. Повне знищення пухлини було досягнуто одноразовою дозою 5 мг/кг. Ріст пухлини не спостерігався понад 60 днів.
Таблиця 26
Об'єми пухлин охклювнраннннннй | 00050.) МОВАЬІЮМЮю | МЮВЯЬОВІІ нн; | МОйАювІвнИк 1 банк 2 ЗБ 195 13 300 ВО ЛЮ ЗК 333 МІВООЗО) ЖИ Бе: 2 1 ЗЕ ДНО зх Б зо б) ж я
З ЗБ 413 2791 БВ? ЗХ ВО У 04 ЗОБІ ЗІБ ЗЯЄ 97 в ВО що 335 БВ: БА ЯЗ 259) 355 392 364 5 ДО КА СО ЕІ 7 ЩО ЖИ 41 397 235 247 129 ! 10 ВЗА Я 24 659 б Ю4 Зю й Ле Мо З З 5 о о о: 0 39 55 ЗЮ 183 86 ! й в В с Во Вся В В а ВН ПН НН НН В о о КН ни а с У СЕС ск В ВЗ В НАСЕ НА А НК А НК В ПЕ НЕ, з Ми ши Шк ово ес о БО МАН с МИ А ДН НН ВК он он НА за НЕ Б моз ови бояю а ої 0 БІ ЗУМІВ З ' 28 ШЕ. Б БФ БА ОЯ в о вояк б: 5 Нм доя ЗІ З, ни ЕНН ЕЕ ЗЕЕЕтникн ! Е) ПИШЕ НН. НИМ НН яв їм ОЗ ЗМ б я оо і! І ! сво нини сн НН нн ни и и М аз НИ: но а а ПО НЕ (ТД: ВІН: НИ З о я МИ МАУ
ШЕ ШІ: В НИ ПИ НИ ПОХОВАНО МИНЕ СЕ НИ М НИ НЕ в во
Кожен стовпець відображає окрему тварину.
Таблиця 27 ав наве 0 аоютьуюо 00 мжелєною | евованю одкіпістрандомізаці (СРРЕДНЕ САС ОЇ мо СЕРЕДНЄ КО о СЕРЕДНІ СОЇ о» СЕРЕДНЄ КО ом СЕРЕДНЄ (ПС я в Н 12 я, 5 в о а п: я й ЛЕ. 4 й 108 . ПАЮ 5 мо пом они смоавви, ОВ пон ви пив вв ру о пріі в и о ви ВІВ іпі ій івіь током зі зоніців ппір вн, пай Проців зднввва шк з І 36 ВМ. 5 ЛО ММ 5 ЛЕ ЛІЖОК Ла АКБ 5
ШЕ 5 ДЗБТ5 ВАННУ 5.9 ОБАЗМІ 58 ТОБІ 050025 ТЯМ: 4 НО ЗВ 5
Ше 51 ЖЕ аж 5 ря ЗМО 50005 ЗОБІ 50000 МЖК Я 0120 ЗВО 5 нене похо ру ув мив Мона оту, ниви зно ун нем ЗМУ оку ин спон Змоннх им
Ше Н БА ЖК 5 05 МИ 5 ОБ ОЯБМБО 5 1 ЛЯ Я 06 мя 5 :
Рв якіх 3250! 5 Ме МЕ 5 Би аюює 5 0 0 ІК ЗАЯВІ, 5
Рак 1 мжя люті 5 05 9583 5 ЗО пев 5 10006014 165 п ляже 5253 НЯ ж Сх НН и ВЕ ВИ ува ЛЕ 5. ними по оо виви вони ОН вн пи змов ин по и вн ги: пи пор внвих зими Зі змен жо ім ІК 5 дове блю 5 я нове 50060064 в ж оон пором ром в вовни моло порвав провини порою зомовмю во зопмммо вн: пммомрвввни пивом полою зором: пого мвивюввннни моммн зро зоною п і і АН ТЕ СЕС НИ З МЕ В ТЗ ЕЙ
А І і | | | ОМ СОННИК ИН ИН (Вам 5 кими і | | | СТА У 05 00000085 НЮХ МІЖ ж | і | | | Ва) ЕЛЯМІ 5 11 я 86 НОВ 5 ! пом нн пор пон миром Мн зок пон Зо уроков они мн пиву ному Коти ння мине п я | | | | | ик ДИ НЕ ВЕ В ЕЕ реву
ПОМ НИНІ ПИМННК МАН НИК МАННЯ АН НА Ук МСА КИНЕ НИВКИ МАННА МАК МАННЯ ши | ! | | | м зе 5 б її во | і ! | | | ви слеви 5 ва 4. ' і ру КК КТК Кф ни и о п, М ПО В п п ВО Я М
І Я ЕВ і і Н ; Н | Н : і НИК з ме є і :
Я : КЗ Я і і | Н Й : і : пе ЗИ ЗИ: У ! ї
Я Я КУ | | і | ! | ! : : НИ: ЗІ НЕ ЗИ НЄ ЯН Я : шини | ! | | ! | : : ШИ ' і рої ях | і | : : Я : НЕ ШЕ ЗМЕН ШЕ ! : ш | ' | | | ' : : ДВ НИ ТИ НИ '
Таблиця 28 дні хісля раідомізації вакр кам вкхь-охмсю 100 ВОИМНКРВИБеМГх 0 здо ям до ТЯ 93 6 9 МАЛ ТЯ ВА: ЯЯ ЗА БАЛКИ ЛЯ ВО Я ЯЯ
З 68 898 3 33 вл ЮО Мо біда І ШБОяЗ Я; ОБУ ВЯ 1599 Я її ІВ1ПБЗ 15 б ВУ АЛИвА ол 93 ЗАЗ Ж РМЗІ Я КО ва що ва 15 83 1631196 208 173 ВО 1БЯ 37
Н пики о п зах и а а о р ОВ Ва и пив и Ин пи ПА ПА В ЗК ЗО: Ви ВАДИ ЗНИК і 7 РЕ: Я Ка КЯ заяв ІВ ВОЯЛТЯ? Б5 ла ва во мо Бл КО Ивя 18
М 187 18 152 85 МАЛЖЯ 18 204 209.19 МОЯ 97 АВЯ ЮЯ Є 06 еА 6? 0 005 ко не МУ Ж 12 ЛОЖІ оз А З Ал ОБЯ о о Я О 9302015 еко ва а я їж ЛО А
М ІВЖ Я ВЛ ЙО М/5ИХЯ ЛУ З МО ОО ЖВОЯБ 19 193 17000175 393 17 192 ІйО А А
МОДНЕ Іа Ва МЛ А І КМ КТ еЗ АВ еА МІ МО Я 09 Ю М У 98 129 ЗВ 185 5 13 БОР БУ оо вліво ов я я вЯ; ОА 7412021197, 38 9 я 195
МО одне ВВ ВООЗ ВВ БО ЛАБ ОАМТ5 МО М ІЯ5 М ма МУ ж Ш 1 І сш... Вя ав вана о 0 ВЗТЯМИ Хана ва на 134
Н ние ниви зола полин или пив повинно зловив заввива зовинви ЗЛИВИ ВИ ВИ сОМНмх ПІФИНМХ ванни ІОВ ІОВ ПОВИ ЗОВ ВИ поро ридав ПАМ ЗИ 28 ШЕ ГО БК ВВ ЗІБ 0 18523176 1 А А З Я 135 з ДЕ І НМ СНО КИ З МЕ У ВН 3 В ШЕ 21.03... ва вав ня о о ВЕ ! ЗА ши ще пи мм ДАЧІ А А Кс У МН «а НН НИ ше ПИ ни ни ШЕ о НС М 45 ВН НЕ ше ШИ ШЕ пе оз оаіня 01
СР ОРГ. НИ ИН п В НЯ ДИ ! гх ши ШИ М ши УКУС О ВИШ ре пн НН НЯ НИ ИН БЕ. З ЖИ ННЯ З МИ М
ОБ шк НН ШИ ДСН ЧИ ВН в | ві ШИ ШК. | ШИ ШИ вав ана
Таблиця 29 : днілісля | КЕ МОВав-202 Тмг/ве МОМар-202 2.5 мкг | МОКай- 5 мгике МОйаВ-ЮЗ-дуростатин 5мг/яу (РИ се ак ої ж ОРЕДНЕО їх ОФРЕДНЕ КО воОСЕРЕДНЄ й РЕНІ ОК : 8 о аБЕ аі52ю 5 0 0 008 5 0013 НЕО 5 Ол пЕаМ 90 БЕЖ 5 ром в о ввввнь подавав ка пиввалнввнй перева ав пиво вввані плов зимові заплав пол овнннй ро о а оплат зорово ПАМ пива : 5 "ам ам 5 ще МОЮ: 5000 Ме 5001 ОЖІМ сбМею 4000 й БЖ 5 нн рення почин уко пеня миня лок нини пило зв пн нини зр о пив рови урок: ПИ ї ! Тов ВВЕНИ ко 4 БММЕИ 5 00 МБО ООЯНЮЮ 5 058305 оби 5 рою ЕІ 5
Енн они рун а у ння стру во кими реле пу чар нин нни ноо зони нини сно ни У щим виш і Най сови МИ ЕН СНИ ес ко НН вія НН о в ! сан виш ше Не На Не с мовно Зір онвн Ацом ща пам НбУ вн мом нини іду ЗИМОВІ зн нов Зовні о міння ММОНВ УФ пив
В т шо В ВН А В З НА с З ВВС о ин ни пев зон нина поповви Зов оо пив зона горе по пов Зав нина ОВО повно и
ЕД ПА НА ав НААН оо НН ок АННИ ВА НААН НИ НИ ой КАК. : во | ше ше: ШИ НС: НН Й
Е Б й В і : : ние о А А М І
Фр в кр вк фару : КЕ : : Ї : Е а ов) 5 0 отмеж обн3 я 935 о3юю 5 ї за ! | : І : : о аді ібхмях 5 0 а ба 8015 МОМ БО: ї ЕЕ | : | ! : ЕС ЗЕ СИ | | :
В 5 | : | : Е сома маже 5 а бабі Я | | : им олово поповнив пово попав попав панни І т т у Н т : ЕЕ | : | : Е ОВ мом 5 0 не ода: 5 | | | : : ЕД | : | : : | | ва пом Я. | | : ово ові зовн пово обов во зорі попів ново пбовнввн з зо пого мин посівом собів : ОД | і | ! : | ! Б озюмі | | | : : ЕЕ | : | : : | | До | | :
Ем о пн зі зим мон зд пон зон зорова зим пов ооо во знов, зоря мин нвих зопннннвнни : пі | : | : Е | | ! ще МИ 41 | | : ї КУ Н Ї : і : Н : ! Сг ОЖНЯ: 4 Н ї Н : 53 : | і і і : : Н СІ М | ї : ком оо пово пом ово мово ооо пово вв моло поро пово зо м пивом Мом опо вя помввввни запо : СЕ | : І ! Е ! | соло оБжюв: 4 | | | : 2. 6. 4 Оцінка мінімальної ефективної дози ерібуліну на моделі НДРЛ людини МСІ-Н2110 у мишей СВ17-5С10 (00314) НДРЛ людини, клітини Н2110, пасаж 46, імплантували підшкірно 30-ти мишам СВ17
ЗСІО (самка, у віці від 5 до 6 тижнів, вагою 20 грам). Через 11 днів після імплантації мишей розподіляли випадковим чином на п'ять груп. П'ять тварин з об'ємами пухлин, які найбільше відхилялися від середнього, були виключені. Середній об'єм пухлини в кожній групі в день лікування (день 0) варіював від 87,6 до 89,4 мм3 (таблиця 32). Мишей, включених у дослідження, лікували ерібуліном (партіяж М1201193) при 0,05, 0,2, 0,8 або 1,6 мг/кг, або ФСБ, відповідно до плану дослідження (таблиця 30). Кожна група була виключена з дослідження, відповідно, коли всередині групи вперше спостерігали об'єм пухлини х2000 мм3. Дослідження було припинено на 38-й день (30 днів після останньої дози).
Таблиця 30
План дослідження
Група й Мишей Лікування Доза (мг/кг) Схема Спосіб введення
Фо : до. 0,2
З Ерібулін длахз в/в 8 00315) Об'єми пухлин окремих мишей наведені в таблиці 31, а середнє по групі та СПС наведені в таблиці 32. Кінетика росту пухлини для кожної групи (середнє по групі та СПС) зображена на Фіг. 14, а об'єми пухлин у окремих мишей, а також середнє по групі та СПС на 24- й день (коли у мишей, оброблених ФСБ, спостерігали об'єм пухлини » 2000 мм? ), зображені на
Фіг. 15. Ерібулін викликав 50,5 95 ТО (без спостереження регресії пухлини) при 0,05 мг/кг (ри -
0,0026 у порівнянні з фізіологічним розчином); « 99 95 ТОЇ при 0,2, 0,8 або 1,6 мг/кг (р значення становило « 0,0001 для всіх З груп у порівнянні з фізіологічним розчином). Мінімальна ефективна доза, яка викликала регресію пухлини, становить 0,2 мг/кг. Однак більшість пухлин, які регресують, у цих мишей (3/5 в групі 0,2 мг/кг, 4/5 в групі 0,8 мг/кг та 2/5 в групі 1,6 мг/кг) знову виросли або залишалися такими, що піддаються виміру, протягом усього дослідження (30 днів після останньої дози).
ІЇ00316| Маса тіла окремих мишей наведена в таблиці 33, а середнє по групі та СПС наведені в таблиці 34. Кінетика зміни маси тіла для кожної групи (середнє по групі та СПС) зображені на Фіг. 16.
І00317| У порівнянні з контрольною групою, що одержувала фізіологічний розчин, ні в одній з груп лікування не спостерігалося значимої втрати маси тіла. Результати клінічних досліджень, які свідчать про токсичність під час лікування, не спостерігалися. 00318) Ерібулін виявив значимий ефект на ріст пухлини Н2110 при введенні в/в д4ахзЗ при 0,2 мг/кг. Регресія пухлини була досягнута. Регресія пухлини не була досягнута, коли вводили нижчу дозу (при 0,05 мг/кг). Відповідно, мінімальна ефективна доза, випробувана в цьому дослідженні, становить 0,2 мг/кг.
Таблиця 31 кювет твтжтттжтжлуювттютжттржжлтжтжлтютжлттжтжлтльтжлтлжтття тюлю ллжтжлжлжтувтлжлжлжлжтюттжлтюлжлтжтжлтжтжлтюжтжлтлжтжлжлжттжлжлттужттжтжлтлтеютяюжтжлттжлтжлжттжтж клтюлжлтжтжтлжтжлюжтжжлжтжлжлжтлжлжллюлжлжттжлятжтжля жлжлжлжтжлжеютлтжжт дніліспя 13 доз востй Ї зрібулім 0.05 меїке ерібулін 0.2 вр/кг ерібулін Ям 0000 ерібулін Тбмі/к:
З в Ще о Бл ою і моб обію я віям б а вювинія ! 5 виз; ІВ ЕМ 15 ЯМ І МІ 6 щі І М 5 м М
ШЕ: іа мо я б З ІЙ жо МІ Мо іі є ож м ю З М юю 5 о....-5.....280 555 2, 62 489320 ХЮ З 36 ДЕ 5 9 Ж Бо Во 5 мі о в мо ' І; тю асо ово нов я пе ЗМ Ба і 0 в ого З я о 0оіжіо во ао
Ів ВО изМ юю міне я Ми ль й З юю 6 о юіш о1 оо 902 со Бон вм ло МЕ ев юю о 5 9 м пом ю о вв оо, ! ж | і ЩЕ І 1вБім о нім віх мо омі5 я б оо коми мини мими ниви сором пимнми поро зони зриник т ут не Ми зх пий мокрі нори ; й ї рі ШЕ : б. 710: 51936 МО 0116560 зі ИН 1 в жо вм ее ю вжи ом ао ' З Ї і ШЕ : БМ ІВ А Я В А я Іо пн нн пи нини нини пон Мннни пани пи их плини ЗАнни пики ій пори зим НОной Вин Ми М ООН по шле нич М пи ши шк шишки ке теле лена
Таблиця 32 ерібулін 0.05 мг/кг ерібулінО.В мг/кг | врібулін їб мкг вмикляіїдази СЕРЕДНЄ: СИС ОЇ оно ССБЕДНЕЇ КО ож ОСЕРЕДНЕ СК 0 ІСЕРЕДНЕ КО 0 СДН ФС ж в Вол ним ли: ж я НН жи НИЖ НК З НН : 3 ТІ ВН: 5 1132 1 9: МА 1 465 6 5 бю нини п ни нс сп а в в а В В нас пн с ВС ДОН а мі ба 5 мя: Ми 5 я м 5 міх А ІВ т 1 АЮ 5 1393 а: 5 ок Я 5 мА В 506 365 і оно: кино пивних кино ин зивниввнии гине зано Н ши ин нин иа лимони ши я Ве 5 ЗУ 1 ЯМ 500366 347 5 164 1 3075 1316 515 жо тещі юІ: 5 ізюм 500505 ЗМ ю : ? ес ШЕ Є пр и У МЕ р а мк я: и иа С я Ви о п ЮК З М
Н оо ви нин поони зни имени вони пив пит зання нон пит ливу лови мин ' Ех. сюда: яю: 5 ва: 555 5 мМ я тА 15545: 5 6 ом 5 во ЗМ 5 ВА 1 6500575 ши Е : ! | 98184 5 ші 2В 515 3 5 й ! ! Е ! ! ' о юдІБИ 5 Бе З 5033395
Н Ен мно пон поро поро поро, Зоо пови зони онов звемо ви мови вових порвав, момевнн
Кі ! ! : : Е Е НЯ я 5: 36:59 5. 554 35 5 ' З ! ! : ! ! : ще у: ВИШ З МИ УНН У ШНМ Є У М М М, У З ВИС ХВ пн и В В а В В С ВВ ВИ С Дол ви Вс ' х Е ! Е ! Е Е ват 5 раю 5635
Н Ноомі по по поро зом пови оо а оон зийінв нон зно вн пн нн знов інв имени виш
Кожен стовпець відображає окрему тварину.
Таблиця 33 і дюкдя ідо! 00000000нодй 0050000оерібунін ОО5МОЖ 10000 ерібулін бом 1000 ерібуін б микр о 10000 рун Зб і а 5 ВІК 4:51 01 БЕ: 153 ХО ВІ 8 йОІ БО ЗАЯВІ ВО ЩО А: ВІ ВО
Гн сн о З ОЛОВО ІМЯ Я В м ЕІ НЕ ВЕ ВО БО Бе я во в ово мав ЯМ со --3------ .Ж5 8 85: 9 5 ВІТ жі Бі ве ві б 5 З Бе ОВО НА ОВ Ви, нн ОО «ЗЛ ОВ З Я БО ВІЗ ОО 5 ве ВМО Во НЯ Во оо ВЕЖ, з ВЕ Мб Я ММА Я Бо ЕВ) б Во НІ ще Не ВІ МІ Мо В
Я 5 ТВА А: ЖЕ Маю 89: РО ЖЕО що Ма жо: БУ 5 Баш НУ ще ма Ві іще ма: БА В по 60000186 963 І ВЗ А б Р Я ОВО Ве а ее о МОБ о, г ко аа: 5 3: Ко я: 5 аб МУ 53: 359 7: ще Я ОО 8 Ко Ба: 88305: 653 одн М нен ВА ЛІВА ЛІВО ЖІ 5 Ома що 3 НЯ 005 о) ве я м вер воі во о ве по 1ВЯ БЕ БІВ МВВ ВА ВО А ЯР МЕ МО ВО еЖ М Ио5 МІБІВВ зни дворі - 22 2 508 ОНЯ Ме МУ ВР ОВЯ 3 5 51 ЯМ МЕ 6,
Я КІ ЕВРО ХІІ У В: ВІ Жх о ЮЗ юоі Ваія а ! Ко ДН ВЕ ЕН В ПН ЗУ ВАВ З КЕ 02400525 В ІМЯ В НЯ Ме ЮУ 3 о МАВ; 28; ! КІ | тв же ві пе Я мо щі ля на Я В о Я 4 3,
Таблиця 34 : щь і ерібулів 035 мг/кг ерібуліт 0.7 мік ерібувін 0.8 мг/кг ерібулін МбМмк ОО
Солеоютятяном СДН КОВО ОРД, ко свиеднє ЯК М. НЕ «Вр КМ нн ВВ я оби 5, Вели НЕ МИ В Мои СНИ кишки иа щя вв ем ЛВ ом 5 85 019 5 Я ОБ 5
Ронні ВЗ. 05. 138 066 5 |що од 5) 3 02215) 89 0615 нний нн у В вала 89 о50 586 025) ОБ 5. нн В а 5 188 069588 о 5) 5 039 5 4 о 5. со.35..Щ 1861076 5 385 965 5 | 8 0595) 3 030 5 о об 5, с - 5 295 013 5192 ом 591 055 5 185 032 587 ом 5) 26 ші 75 о 55 ою|5 3925 09 5
МЕ ЗИ М НОЯ ВО НО КО НИ ВЕН НЕ Лв БЛАНКИ
ЗИ МИ ВИ М ВА НА В КЕ о МСА КАВА А Аа ЛАН 3 : жі ові 5 тво 54 оп,
КІ | | ' 5 о 5 8 047501 0605.
ПРИКЛАД 2 1. Матеріали та способи
Ї00319| МОВАБООЗ3-УСР-ерібулін (МОКАБ-202) синтезували шляхом кон'югації МОКАБ-00З3 (гуманізованого антитіла до рецептора фолієвої кислоти альфа людини) зі сполукою МАС-ПЕГ2-
МаІ-СпП-РАВ-ерібулін (ЕК-001159569), описаною в розділі 1. 1 Прикладу 3. Спосіб кон'югації описаний в розділі 1. 4. 1 Прикладу 4. 111 Пухлинні моделі (003201 Лінії пухлинних клітин людини, що застосовуються в додатковій оцінці МОКАБ-202 іп міго,, включають ІЗКОМ'І (карциному яєчника людини, ЕКпі(--)), ОМСАКЗ (карциному яєчника людини, ЕКтеа(ж)), МСІ-Н2110 (недрібноклітинну карциному легенів людини, ЕКтеа(жнтю)),
Ад431-АЗ (вихідну клітинну лінію А431, стабільно трансфіковану мезотеліном людини, ЕКіо(/-)),
ЗУБА-1 (остеосаркому людини, ЕКпед(-)) та НІ -60 (лейкоз людини, ЕКпед/(-)). Всі ці клітинні лінії були отримані безпосередньо з Американської колекції типових культур (АТСС). Для досліджень іп мімо ксенотрансплантатні моделі пухлини у мишей, отримані з пацієнтів з недрібноклітинним раком легенів, тричі негативним раком молочної залози та раком ендометрію, були створені та підтримувалися в Опсоїезі ЗтрЬН (Фрайбург, Німеччина),
Опсодезідп (Діжон, Франція) та ЕРО Ветпіп-Висп зтрьнН (Берлін, Німеччина), відповідно. 1.2 Аналізи цитотоксичності іп міго 1.2.1 Аналіз фарбування кристалічним фіолетовим
ІЇ00321| Клітини ІСКОМ1 (РКПЇ (жк), А431-АЗ3 (ЕВІо(-/-)) та 5УБА-1 (ЕВпед(-)) субкультивували та висівали при 10000 клітин/лунку в готове живильне середовище в 96- лункових планшетах для культивування тканин, інкубували при 37 "С, 5 95 СО» протягом ночі (16 годин). Як правило, реагенти для випробування серійно розводили 1:4 в планшетах для розведення з 2-мілілітровими глибокими лунками, починаючи з 1 мкМ (всього 10 розведень).
Зо 100 мкл розбавлених зразків додавали до клітинних планшетів (при початковій концентрації зразків для випробування 100 нМ). Планшети інкубували при 37 "С, 5 956 СО» протягом додаткових 48 годин. Середовище видаляли, планшети промивали один раз 200 мкл ОРВ5, фарбували 50 мкл 0,2 95 розчину кристалічного фіолетового при кімнатній температурі протягом 15 хв. та потім ретельно промивали водою з-під крану. Планшети сушили на повітрі, а кристалічний фіолетовий розчиняли з 200 мкл 1 95 розчину ДСН. Планшети зчитували при 570 нм. Дані аналізували із застосуванням СгарпРаай Ргізт 6. Для ОМСАКЗ (ЕКтед(нь)) та МСІ-
Н2г110 (ЕКтед(жня)), клітини висівали при 3000 клітин/лунку та інкубували протягом 5 днів з
МОРВАБ-202. 1.3 Дослідження іп мімо 1.3.1 Ксенотрансплантатна модель МСІ-Н2110
І00322| Підготовка тварин: Мишей СВ17 СІЮ (самка, у віці 6 тижнів) розміщували по 5 мишей на вентильовану клітку. Стерилізовані харчові гранули та пляшка з водою були доступні тваринам ай Іїр. Тварин адаптували протягом 5-7 днів до імплантації пухлини. 00323) Культура клітин: Людські клітини МСІ-Н2110 розморожували із замороженої вихідної культури (МВ2813-65) та культивували в середовищі КРМІ-1640, доповненому 10 95 фетальною бичачою сироваткою (ФБС), в 5 95 СО» при 37 "С. Після двох пасажів при досягненні приблизно 70 956 конфлюентності, клітини збирали за допомогою розчину для дисоціації клітин, двічі промивали середовищем без сироватки та підраховували. (00324) Імплантація пухлини: Клітинну суспензію у середовищі без сироватки змішували 1:1 (об./06.) із крижаним матрігелем до кінцевої концентрації 1,0 х 108 клітин/мл. Кожній миші вводили підшкірно 100 мкл суміші при 1,0 х 107 клітин/мишу. Для всіх ін'єкцій застосовували голку 270. Мишей спостерігали щодо клінічного гарного самопочуття та пухлини вимірювали цифровим штангенциркулем три рази на тиждень, починаючи на 3-їй день після імплантації.
Об'єм пухлини (мму) був розрахований за формулою: Ш (мм) х Д (мм) х Г (мм) х п/6. Коли пухлини досягали - 100 мм3 (в середньому від » 70 до - 130 мм"), тварин розподіляли випадковим чином по 4-5 на групу. 5 тварин з об'ємами пухлин, які найбільше відхилялися від середнього, були виключені.
І00325| План дослідження: Включеним у дослідження піддослідним мишам вводили внутрішньовенно 200 мкл носія або МОКАБ-202 при 1,0, 2,5 та 5 мг/кг відповідно до плану дослідження (таблиця 35) у день випадкового розподілу. Вагу тіла вимірювали до введення дози та два рази на тиждень під час дослідження. В кінці дослідження вимірювали та реєстрували кінцеву масу тіла. Тварин піддавали евтаназії коли окремий об'єм пухлини перевищував 2000 мм3. Критерії дострокового припинення дослідження до досягнення максимально допустимого об'єму пухлини: (1) виразка пухлини більше 50 95 пухлини (об./об.); (2) параліч; (3) » 20 95 втрати маси тіла; та (4) 50 95 тварин в групі піддалися виключенню. Будь- яку мишу, яка піддавалася евтаназії або була знайдена мертвою під час дослідження, обробляли відповідно до описаної вище процедури виключення.
Таблиця 35
План дослідження терен лине | й | еее | снення
Група й Мишей Лікування Схема Спосіб введення (мг/кг) ей 01. о 5 одиночний болюс в/в 1.3.2 Ксенотрансплантатні моделі, отримані з пацієнтів (РОХх - райепі-дегімед хеподгай) 1.3.2.1 РОХ модель недрібноклітинного раку легені (НДРЛ): ГХЕА-737 (Опсоїеві)
І00326| Імплантація пухлини: Фрагменти пухлини НДРЛ були отримані з пухлинних ксенотрансплантатів ГХЕА-737, серійно перещеплюваних голим мишам. Після видалення з
Зо донорних мишей пухлини розрізали на фрагменти (довжина краю 3-4 мм) та поміщали в фосфатно-сольовий буфер (ФСБ), що містить 10 95 пеніциліну/стрептоміцину. Тварин- реципієнтів анестезували шляхом інгаляції ізофлурану та підшкірно імплантували отриману односторонню або двосторонню пухлину в бік. Пухлинні ксенотрансплантати були імплантовані однією або двома пухлинами на мишу з частотою приживання « 65 95. У разі двостороннього взяття одна з цих пухлин була експлантована до випадкового розподілу. Тварин та пухлинні імплантати щодня спостерігали, доки ріст солідної пухлини не був виявлений у достатньої кількості тварин. Під час випадкового розподілу був визначений об'єм пухлин, що ростуть.
Тварини, які відповідають критеріям випадкового розподілу (тобто мають пухлини 50-250 мм3, бажано 80-200 мм), були розподілені на експериментальні групи, що складаються з 5-6 тварин на групу, спрямовані на зіставні медіанні та середні об'єми пухлини групи приблизно 100-120 мм3. Тварини, яких не використовували для експериментів, піддавали евтаназії. День випадкового розподілу був позначений як О-вий день експерименту.
І00327| План дослідження: Включеним у дослідження піддослідним мишам вводили внутрішньовенно носій, МОКАБ-003 при 5 мг/кг або МОКАБ-202 при 5 мг/кг, відповідно до плану дослідження (таблиця 36) у день випадкового розподілу. Вагу тіла вимірювали в кожен день дозування до введення дози та два рази на тиждень під час дослідження. В кінці дослідження вимірювали та реєстрували кінцеву масу тіла. Тварин піддавали евтаназії, коли окремий об'єм пухлини перевищував 2000 мм3.
Таблиця 36
План дослідження
Група й Мишей Лікування Доза Схема Спосіб введення
РУ У (мг/кг) д 11171116 |ней | о ав МОНАБ-00З3 одиночний болюс в/в 1.3.2.2. РОхХ модель тричі негативного раку молочної залози (ТНРМ3): 00-ВНЕ-0631 (Опсодезідп) 00328) Імплантація пухлини: Дев'яти самкам мишей ЗУМІЗ5 пиде вводили підшкірно в правий бік фрагменти пухлини ТНРМ3З, отримані з пацієнтів. Мишей-пухлиноносіїв піддавали евтаназії, коли об'єм пухлини досягав 500-1000 мм3у, а пухлини вирізали хірургічним шляхом.
Фрагменти пухлин (30-50 мг) ортотопічно імплантували в ділянку жирової тканини молочної залози у 34 самок мишей 5УМІЗ5 пиде з 24 до 72 години після опромінення всього тіла гамма- джерелом (2 Гр, 60Со, ВіомМЕР, Франція). Коли пухлини досягли середнього об'єму 200-300 мму, 24 з 34 тварин були розподілені випадковим чином на дві групи (п-12 тварин) відповідно до їх індивідуального об'єму пухлини, застосовуючи програмне забезпечення Мімо Мападег? (Віозуєтетев5, Кутернон, Франція). Було проведено статистичний тест (аналіз дисперсії) для оцінки однорідності між групами. День випадкового розподілу був позначений як 0-вий день експерименту.
І00329| План дослідження: На 1-й день відбирали (через один день після випадкового розподілу і за два дні до лікування) З миші з кожної із двох груп, які не отримували лікування.
Піддослідним мишам, що залишилися, на 3-й день вводили внутрішньовенно носій або МОКАбБ- 202 при 5 мг/кг, відповідно до плану дослідження (Таблиця 37). На 8-й день (через п'ять днів після лікування) були відібрані З миші з кожної із двох груп, що оброблялися. Відразу ж після закінчення пухлинну тканину збирали та фіксували в 4 95 забуференому нейтральному формаліні від 24 до 48 годин, а потім заключали в парафін (Нізіозест, Мегск, Дармштадт,
Німеччина). Заключений у парафін зразок зберігали при кімнатній температурі для подальшого імуногістохімічного аналізу.
Таблиця 37
План дослідження
Група й Мишей Лікування Доза Схема Спосіб введення
РУ У (мг/кг) д 8 рноїй 10000000 одиночнийболююо вів 2 00330) Імуногістохімічний аналіз (ІГХ): Було проведено ІГХ фарбування фіксованих у формаліні заключених у парафін пухлинних тканин для оцінки як розташування МОКАБ-202, так і експресії асоційованих з раком фібробластів. Перед фарбуванням слайди депарафінізували та
Зо антиген вилучали в Габ Мізіоп'м РТ Моаше (Тпегто Зсіепійіс) у цитратному буфері (рН 6,0), попередньо нагрітому до 85 "С, застосовуючи наступну програму: нагріти до 97 "С; інкубувати при 97 "С протягом 30 хв.; та охолодити до 60 "С. Потім слайди переносили в бідистильовану воду при кімнатній температурі на 5 хв. Фарбування проводили в Гар Мізіоп'"Мм Ащовзіаїпег 360 (Тпегто Зсіепійіс). Коротко, слайди двічі промивали в 1Х Трис-буферизованому фізіологічному розчині/Твін-2го (ТВ5Т - Тііз-бинетейд заїїпе/Гжмеєп-20) протягом 6 хв/промивка. Потім тканинні зрізи інкубували в блокуючому буфері (300 мкл) (10 95 козячої сироватки (даск5оп
Іттипогезєагтсп! Іарогаїоту пс. Саї Мо. 005-000-121), розведеної у 3 95 бичачому сироватковому альбуміні (БСА) - фосфатно-сольовому буфері (ФСБ)) протягом 1 години, інкубували з кон'югованим антитілом (200 мкл) (таблиця 38) протягом 1 години та промивали п'ять разів у їХ ТВ5Т протягом 6 хв/промивка. Слайди дофарбовували БАРІ у середовищах заливки та накриті покривним склом слайди залишали затвердіти на 30 хв. Слайди оброблялися на сканері Рапогатіс МІС! (ЗОНІЗТЕСН), а ІГХ зображення аналізували за допомогою програмного забезпечення Наїйо (Іпаїса І арх). Антитіла, що застосовуються в цьому аналізі, націлені на са-гладком'язовий актин (ГМА), який є специфічним маркером для асоційованих з раком фібробластів, та людський ІдсС, який може виявляти присутність МОКАбБ- 202.
Таблиця 38
ІЇГХ антитіла
Вихід- - . ' - Номер за . м чий
Антитіло Кон'югований | Постачальник Партія ний каталогом роз- розчин чин а-гладком'язо- | 20 50 вий актин | РІТС Зідта Е3777 124М4775У мг/мл мкг/мл (ГМА)-РІТС
ІДО1 миші, к 02 ізотипічний АР4А88 Віоієдепа 400129 В128493 мг/мл 11000 контроль до ДО людини 1.3.2.3 РОХ моделі раку ендометрію: Епдо-12961 та Епдо-10590 (ЕРО Ветіїп) (00331) Імплантація пухлини: Фрагменти пухлини раку ендометрію отримували з пухлинних ксенотрансплантатів, що серійно перещеплюються, Епдо-12961 та Епдо-10590, та зберігали як вихідну культуру в рідкому азоті. Фрагменти пухлини імплантували підшкірно в лівий бік 40 самок мишей ММК пи/пи та спостерігали об'єм пухлини. Мишей з об'ємом пухлини 100-160 мм розподіляли випадковим чином в одну з чотирьох груп (групи А-О, Таблиця 39). Супутникові миші для випадкового розподілу були включені в п'яту групу (група Е, Таблиця 39). Кожна група складалася з 8 тварин. День випадкового розподілу був позначений як О0-вий день експерименту.
І00332| План дослідження: Включеним у дослідження піддослідним мишам вводили внутрішньовенно ФСБ, ерібулін при 3,2 мг/кг або 0,1 мг/кг, або МОКАБВБ-202 при 5 мг/кг, відповідно до плану дослідження (Таблиця 39) у день випадкового розподілу. Ріст пухлини оцінювали шляхом вимірювання двох перпендикулярних діаметрів два рази на тиждень, та розраховували об'єм пухлини (ТМ - їштог моЇїште), відносний об'єм пухлини (ЕТМ - геЇайме шШтог моЇште) і значення лікування/контроль (Т/С - Ігеагед/сопігої). Вагу тіла також оцінювали два рази на тиждень в якості параметра на токсичність, з розрахунком маси тіла на групу та змінами маси тіла (ВУУС - роду ууеідпї спапде) у порівнянні з початком лікування. Тварин умертвляли, коли окремий об'єм пухлини перевищував 1 см3, або в кінці дослідження.
Коо)
Таблиця 39
План дослідження
Група й Мишей Лікування Доза Схема Спосіб введення (мг/кг)
Фо - - одиночний болюс в/в 1.4 Механізм дії 1.4.1 Тривимірна (30) система сумісної культури в 2Ргєдісіїа 003331) Всі експерименти з ЗО со-культурою, що містить мезенхімальні стовбурові клітини (МОСК), проводилися в 2Ргедісіа із застосуванням органоспецифічних ЗО-систем позаклітинного матриксу, таких як геотасп М, Мезенхімальні стовбурові клітини кісткового мозку (МСК КМ) в ге(отасп"мМм сумісно культивували з клітинною лінією раку шлунку Мис Кей Гід МКМ-74 у чотирьох повторностях в 48-лунковому форматі протягом 12 днів. Раніше було показано, що клітини МКМ-74 експресують достатню кількість рецептору фолієвої кислоти альфа (ЕК) у відповідь на обробку МОКАБ-202, щоб індукувати клітинний апоптоз. Перед культивуванням,
МСК КМ оцінювали на експресію цільового антигену та на маркери диференціації МСК (Таблиця 40) за допомогою проточної цитометрії.
Таблиця 40
Маркери диференціації МСК
Мезенхімальні стовбурові клітини й й (МСЮ) зЗіго-1/60105
Преадипоцити бор34/6031-
Асоційовані з раком фібробласти Й , . . (САЕ - сапсег авзосіаїес Пбгобіавів) Альфа-гладком'язовий актин (а«ГМА), віментин
Адвентиціальні клітини/перицити маг, СОр18х, 20146
І00334| Культури гбіотасп"М обробляли або МОКАБ-202, некон'югованим антитілом
МОРАБ-003, ерібуліном, або контролем, як наведено в Таблиці 41. Контроль включав необроблені та оброблені носієм (ФСБ та ДМСО) культури. Диференціацію МСК спостерігали за допомогою світлової мікроскопії. Як тільки спостерігалася видима диференціація, зразки збирали для фарбування та аналізу шляхом проточної цитометрії.
Таблиця 41
Обробки со-культур
Робочаці) концентрація)
МОВАр-202
МОВАР-003 (некон'юговане антитіло)
Ерібулін 1,7 нМ та 0,2 НМ
ФоБ С дМмсо
Необроблений контроль пннпІ"ньиНВнннншшшні 1.4.2 Аналіз часової динаміки впливу МОКАБ-202 на асоційовані з раком фібробласти
І00335| Мишей-пухлиноносіїв, із підшкірним ксенотрансплантатом Н2110, отримували, як описано в розділі 1. 3. 1. Зразки пухлин збирали в дні 0, 3, 5, 7 та 9 після введення носія або
МОРВАрБ-202 при 5 мг/кг. Зібрані зразки пухлин обробляли на слайдах, а експресію асоційованих з раком фібробластів аналізували шляхом ІГХ, як описано в розділі 1. 3. 2. 2. 2. Результати 2.1 Аналізи цитотоксичності іп міго 2.1.1 Цитотоксичність МОКАБ-202
ІЇ00336| Активність МОМКАБ-202 іп мійго оцінювали за допомогою аналізу фарбування кристалічним фіолетовим, як описано в розділі 1. 2. 1. Скринінг виконували на клітинах ІСКОМ1 (ЕВ (4---)), ОМСАВЗ (ЕАтед(ч-)), МСІ-Н2110 (ЕВтед(--)), А431-АЗ (ЕВіІо(-/-)) та 5)5А-1 (ЕВпед(-)). Результати цього скринінгу наведені на Фіг. 17 та в Таблиці 42.
Таблиця 42
Скринінг цитотоксичності (ЕКхо) МОВАБ-202 на різних лініях пухлинних клітин
ЕКбво (НМ)
ІСВОМ | ОМСАВЗ МСІ-Н2г110 А431-АЗ ЗУБА-1
ЕВчз--- ЕВ. ЕВ. ЕВ/- ЕВ-
Ї00337| МОНАБ-202 виявляв цитотоксичність до ліній пухлинних клітин, залежну від експресії рецептора фолієвої кислоти альфа, та низькі рівні нецільового знищення. МОКАБ-202 продемонстрував найвищий рівень активності (0,01 нМ) на клітинах ІСКОМІ1 з невеликою цитотоксичністю (» 100 нМ) на клітинах 5У5А-1, що не містять рецептор фолієвої кислоти альфа. Проміжна активність спостерігалася на клітинах ОМСАКЗ та МСІ-Н2110 (0,16 нМ та 0,74
НМ). 2.2 Дослідження іп мімо 2.2.1 Ефективність МОКАБ-202 на ксенотрансплантатній моделі МС1-Н2110
І(00338| Мишам-пухлиноносіям, із підшкірним Н2110, внутрішньовенно вводили носій або
МОВАрБ-202 при 1, 2,5 та 5 мг/кг. Значима регресія пухлини спостерігалася після одноразової дози МОКАБ-202 при 5 мг/кг (Фі. 18 та Таблиця 43). Показано, що, застосовуючи цю ксенотрансплантатну модель із високим рівнем експресії рецептора фолієвої кислоти альфа та введеннями одноразової дози, терапевтичний діапазон для МОКАБ-202 становить 1 мг/кг для
Зо затримки росту пухлини (зі стабільним захворюванням) та 2 2,5 мг/кг для регресії пухлини. У цьому дослідженні МОКАБ-202 у дозі 2,5 мг/кг призводив до часткової відповіді, а МОКАБ-202 у дозі 5 мг/кг призводив до повної відповіді.
Таблиця 43
Протипухлинна активність МОКАБ-202 на ксенотрансплантатній моделі МС1-Н2110 11111111 Об'єм пухлини, мм (інгібування росту пухлини, 95) 11111111 деньї7//// | 777 день:
Носій (п - 5) 1583,4 ж 146,1 (100)
МОНА 202, 1 мг/кг, одноразова 840,0 х 76,8 (5371) н/з доза (п-5)
МОНА 202, 2,5 мг/кг, одноразова 60,8 х 271 (3,8) 1173,2 5 373,2 доза (п-5)
МОВАБ-202, 5 мг/кг, одноразова доза (п-4) 0,0 (0,0) о (0,0) 2.2.2 Ефективність МОКАБ-202 на РОХх моделі НДРЛ"ХЕА-737
І00339| Мишам-пухлиноносіям, із підшкірним РОх НДРЛ, внутрішньовенно вводили носій,
МОРАБ-003 при 5 мг/кг або МОКАБ-202 при 5 мг/кг. Одноразова доза МОКАБ-202 (5 мг/кг) призводила до значимої регресії пухлини на цій моделі, на відміну від одноразової дози некон'югованого антитіла МОКАБ-003 (5 мг/кг), що не демонструвала значиму протипухлинну активність (Фіг. 19А). П'ять з усіх шести мишей, які отримували МОКАБ-202, вважалися такими, що не мають пухлин на 32-й день дослідження (Таблиця 44), та чотири залишалися без пухлин до 74-го дня (припинення дослідження). Додатково, в групі лікування не спостерігалося значимої втрати маси тіла в порівнянні з контрольною групою, яка одержувала носій, що вказувало на відсутність токсичності під час лікування (Фіг. 198).
Таблиця 44
Протипухлинна активність МОКАБ-202 на РОХхХ моделі НДРЛ
Об'єм пухлини, мм" (інгібування росту пухлини, 95)
Носій (п-6) 1004,5 (100 1561,3 (100
МОРАБ-003, 5 мг/кг, одноразова 860,7 (85,7) 1572,1 (100,7) н/З доза (п-6)
МОРВАБ-202, 418.3 5 мг/кг, одноразова 22,9 (2,3) 4,7 (0,3) (4/6 без пухлини) доза (п-6) 2.2.3 Відносна ефективність МОКАБ-202 та ерібуліну на РОх моделях раку ендометрію:
Епдо-12961 та Епао-10590
І00340| Ксенотрансплантати Епдо-12961 та Епдо-10590 експресують на високих рівнях рецептор фолієвої кислоти альфа. Мишам-пухлиноносіям, із підшкірним РОх раком ендометрію, вводили внутрішньовенно ФСБ, ерібулін при 3,2 мг/кг або 0,1 мг/кг, або МОКАБ-202 при 5 мг/кг.
Максимальна переносима доза (МПД) ерібуліну на цій моделі становить 3,2 мг/кг, тоді як 0,1 мг/кг є еквівалентним дозі ерібуліну, наданій МОКАБ-202, що вводиться при 5 мг/кг. Протягом початку дослідження значима протипухлинна активність спостерігалася після лікування МОКАбБ- 202 (5 мг/кг) та дозою МПД ерібуліну (3,2 мг/кг) на обох тваринних моделях, у той час як жодної значимої протипухлинної активності не спостерігалося після лікування ерібуліном при 0,1 мг/кг (Фіг. 20А та 20С). Однак, пухлини, що регресують, у мишей, які отримували ерібулін при 3,2 мг/кг, почали знову рости під час дослідження, тоді як у мишей, що отримували МОКАБ-202, не спостерігалося значимого повторного росту пухлини. У цьому дослідженні МОКАБ-202 виявився значно ефективнішим, ніж ерібулін. Лікування ерібуліном також тимчасово впливало на масу тіла протягом першого тижня після лікування (Фіг. 20В та 200). Навпаки, у тварин, які
Зо отримували МОКАБ-202, не спостерігалося втрати маси тіла. 2.3 Механізм дії МОКАБ-202 2.3.1 ІГХ та ефективність МОКАБ-202 на РОХ моделі ТНРМ3З: 0О0-ВАЕ-0631
І00341| Мишам-пухлиноносіям, із підшкірним РОх ТНРМ3, вводили внутрішньовенно носій або МОМКАБ-202 при 5 мг/кг. У мишей в кожній групі збирали пухлинну тканину до початку лікування (День 1) та після лікування (День 8). Аналізи ІГХ зібраних пухлинних тканин показали, що, після введення на 3-й день одноразової дози (5 мг/кг), МОКАБ-202 розташовується в пухлинних клітинах, які експресують рецептор фолієвої кислоти альфа, через п'ять днів після лікування (День 8). Розташування в клітинах оцінювали із застосуванням антитіла до до людини (Фіг. 21А). Було також показано, що лікування МОКАБ-202 призводить до зменшення структури асоційованих з раком фібробластів, що показано шляхом ІГХ фарбування з антитілом до а-гладком'язового актину (ГМА)-РІТС (Фіг 218). З точки зору ефективності, лікування
МОРВАБ-202 призводило до максимальної регресії пухлини через 11 днів після лікування, яка вимірюється за відносним об'ємом пухлини (КТ) 0,62 (Фіг. 213). 2.3.2 Вплив МОКАБ-202, МОВАБ-003 та ерібуліну на систему ЗО со-культури (00342) Мезенхімальні стовбурові клітини кісткового мозку (МСК КМ) в гетотасі "м (2Ргеаїсіа) спільно культивували з лінією клітин раку шлунку МКМ-74 протягом 12 днів. Перед культивуванням, МСК КМ оцінювали на експресію рецептора фолієвої кислоти альфа та на маркери диференціації МОСК за допомогою проточної цитометрії. Культури геЮтаснп "м обробляли або МОКАБ-202, некон'югованим антитілом МОКАБ-003, ерібуліном, або контролем.
Як тільки за допомогою світлової мікроскопії спостерігалася видима диференціація МОСК, зразки збирали для фарбування та аналізу шляхом проточної цитометрії. Результати цих аналізів зображені на Фіг. 22. (00343) Загальна тривалість обробки 7 днів із доповненням обробки протягом цього періоду була достатньою для того, щоб провести вимірюваний ефект на диференціацію МОСК КМ людини в культурі з клітинами МКМ-74. Порівняно до контролю носія, обробка МОКАБ-202 (10
НМ) призводила до збільшення в популяціях МОСК і адипоцитів та зменшення в популяціях перицитів (Таблиця 45). Ці дані вказують, що МОКАБ-202 може мати значний вплив на мікрооточення пухлини.
Таблиця 45
Вплив МОКАБ-202, МОВАБ-003 та ерібуліну на систему ЗО со-культури нин по НН 2.3.3 Аналіз часової динаміки впливу МОКАБ-202 на асоційовані з раком фібробласти (00344) Зразки пухлин збирали у мишей-пухлиноносіїв, із підшкірним ксенотрансплантатом
Н2110, у дні 0, 3, 5, 7 та 9 після введення носія або МОКАБ-202 при 5 мг/кг. Зібрані зразки
Зо пухлин обробляли на слайдах, а експресію асоційованих з раком фібробластів (САБК) аналізували шляхом ІГХ. Структура мережі САЕ, як оцінювали та кількісно визначали шляхом фарбування з антитілом до а-гладком'язового актину (ГМА)-РІТС, була видна на 3-й день та 5-й день після введення одноразової дози МОКАБ-202 при 5 мг/кг (Фіг. 23). Однак, до 7-го дня велика частина цієї структури значно зменшилася.
ПРИКЛАД З
1. Матеріали та способи 00345) Сполуки ерібуліну, що кон'югуються та мають структури, наведені в Таблиці 46, синтезували у відповідності з наступними процедурами та застосовували в приготуванні АОС (Приклад 4). (00346) Усі розчинники, що застосовуються в реакціях синтезу, були в безводному вигляді (ЕМО Мійіроге). Всі розчинники, що застосовуються для клінічного обстеження або очищення, були ступеня чистоти для високоефективної рідинної хроматографії (ВЕРХ) (ЕМО МійПроге). Всі хімічні речовини були комерційно доступними, якщо не вказано інше. Колоночну хроматографію проводили із застосуванням Віоїаде? 5Р4. Видалення розчинника проводили із застосуванням або роторного випарювача (Виспі І арогіеспік АС), або відцентрового випарювача (Сепемас, 5Р
5сіепійіс). Підготовчу рідинну хроматографію-мас-спектрометрію (РХ-МС) проводили |із застосуванням У/ас(ег5 АшоРигіїсайноп Зузіет та колонки ХТеїгта М5 С18 (5 мкм, 19 мм х 100 мм) в умовах кислої рухомої фази. Спектри ядерного магнітного резонансу (ЯМР) були отримані із застосуванням дейтерованого хлороформу (СОСІЗ), якщо не вказано інше, та зареєстровані за 400 або 500 МГц із застосуванням інструменту Магіап (Адіїєепі ТесппоІодіе5). Мас-спектри отримували із застосуванням надвисокоефективної РХ-МС МуУасеге Асдийу. Вживаний в цьому документі термін "інертний" відноситься до заміщення повітря в реакторі (наприклад, реакційному резервуарі, колбі, скляному реакторі) інертним газом, який по суті не містить вологи, таким як азот або аргон. Мультиплетності вказані з застосуванням наступних скорочень: с-синглет, д-дублет, т-триплет, кв-квартет, пентет-квінтет, секстет-секстет, м-мультиплет, дд-дублет-дублетів, ддд-дублет-дублетів-дублетів, дт-дублет-триплетів, ш. с-широкий синглет.
Таблиця 46
Сполуки ерібуліну, що кон'югуються намоо
НМ і) / но Н я па ши М он 7 о о А й о о МАК оо о
В оон т в) 95 ми тп, у, О,,, , о
МАГ -ПЕГ2-МаІ-СП-РАВ-ерібулін
ЕН-001159569 нам. йо
НМ
Ге) (в) но Н а
Мо хоттот оту М нон і в) о А.М о о МАК ооо
В м н (в! пи та, у, О,, і, о
МН5О-ПЕГ2-МаІ-СП-РАВ-ерібулін
ЕН-001236940 пато о
НМ
(о) (в) / н Нн о, (є; о А се) О.М ди о. о ра в Ге) Е НУ о 9) 25;
Ух "в; Ж,
Щ
МНЗ-(СНгег)5-МаІ-СП-РАВ-ерібулін
ЕВ-001236941
Моне ай
Нию о о) / н Нн о зей и , ц
Х хх Н М х о о
ІФ) (Ф) в) м 7, і о ри в ге) : ну ів) (в) ми п, у, О,,, і, (в)
Ма!-(СНег)5-МаІ-СП-РАВ-ерібулін
ЕВ-001235638 но ї о о (в; т о дос "ов. Ка е) не й хо о о о о о фр ол ово БИ НН
Н 5: о
Те обчн
МАЇ -ПЕГ8-МаІ-СП-РАВ-ерібулін
ЕН-001242287 нов : Ге) ото т о хо. хх В о рі о но о од о о о но су в нн пн пн пн й в Н (о) о ї йо он
МН5О-ПЕГО-МаІ-СП-РАВ-ерібулін
ЕВ-001242288 но т о ото у Щі о о "ов. род о о но Мо о д-
М. о Мем (є) (о) ом
Моя о олова КИ н н о Е н
З ок
МН5О-ПЕГЗ-триазол-ПЕГЗ-МаІ-СП-РАВ-ерібулін
ЕН-001243700
МН» (о) (9) (е) (е)
Ці Н / в) соки ЛАД оно: і Но: Но о М.Х. мк Н в) ва біо 00 о (в) І нн
С бо
Ки тп з Оп,
І, (Ф)
Ма!І-ПЕГ2-АІа-Аіа-Азп-РАВ-ерібулін
ЕН-001231679
Мне о но о / (в) о о вве он о йо ДА Д й о й й о АЖ то о й (в) 0: о: Ге) : ни
Те же;
Мови
Ма!-ПЕГ2-(Аіа-АІа-Азп-РАВ)2-ерібулін
ЕН-001231690
МН»
Ге) |в) (о) Ге) / кіло ЛАД он о
Нн І н н ів; о - о СХ о АК н о м 0-00 о (0) І н ми п, з Он, о
МН5О-ПЕГ2-АІа-Аіа-Азп-РАВ-ерібулін
ЕН-001231691 б
Н Он : в) М е Н ж «Ж От Ге! о о о Е н" о о о
Й ЩО Е о, -5З . «о щі вола (в; ни
ОМ
Азид-ПЕГЗ-дисульфід-РАВ-ерібулін
ЕВ-001237508 б но он З ша р Ге! Ге! щі о ке)
Ге) Е нн -З о «Ко то о о й о куту тр
М Н о м б /
Ма!І-ПЕГ4-триазол-ПЕГЗ-дисульфід-РАВ-ерібулін
ЕВ-001237504 в но 7 Н
Н КО Ге!
МИ о НО З о і (о)
Її, ю з щ зо о вона о тою М и ие ит в о о
МН5О-ПЕГЗ-триазол-ПЕГЗ-дисульфід-РАВ-ерібулін
ЕВ-001244129 о
Н он й
О.М Ух ж Жу о Ге) Ге; Н '. К; (Ф)
Ге) Е нн
Те ГГ п ОО т пе)
М - 07 масо
ОМ М
Азид-ПЕГЗ-сульфонамід-РАВ-ерібулін
ЕВ-001138856 б
Н он Я о. М К ж Ж 0-7» Ге) Ге) що д с Ке) ів) Н нн
Ме. Ух ті, у, о, - Й о з К "
М -
А-8
Ще о
МД о о о;
М ит иа ум:
Ма!І-ПЕГ4-триазол-ПЕГЗ-сульфонамід-РАВ-ерібулін
ЕВ-001237505 б но у, Н
Н Є Ге) оте о пи ів; НУ (о) о і (о) у, узи
Ї, о у (о вах ще Мм-М (в) (о) Ге) М- вада их нити туго а о о
МН5О-ПЕГЗ-триазол-ПЕГЗ-сульфонамід-РАВ-ерібулін
ЕВ-001244623 о Й
МУ ти то М К щі «І Ф) -тф 0-7 Ге) о. о о) (Ф) І нн
У пи, 7 о, і, ю
Ма!-ПЕГ2-ерібулін т) з он:
М о о М.М Н
Х ета иа тр ХУ 0-7, ГФ) ГФ) о о (о) Я н" о оо м з, т. Ох, і ю
Ма!-ПЕГА-ерібулін б но он 7;
М М е витер А 0-7 Ге) Ге! о (в А НУ м й 7 О,,,,, іо
Азидо-ПЕГ2-ерібулін в ка а а о, М КУ що ів) в) М . -т о са в) о. о (Ф) І н о оо щ- ше ТИ іо
Азидо-ПЕГА-ерібулін (в) но нон 7 Н асан о с о Омто
Н ЕН Е н
Ї й Ся ою о, нм Ї " з . о. на бо т
Азидо-ПЕГ4-МаІ-СП-РАВ-ерібулін 1. 1 Приготування МАГ -ПЕГ2-МаІ-СИ-РАВ-ерібуліну (ЕН-001159569)
о. МН; ї 7 Мету Ух МА о со Кон х нн х М "З в ї 9579 А но (е п нащо Ол і и лк учи, Моря їх М ра й и в/з С) Щі в К й ! й 0.0. і дн Ко ре ся ж в го й 1. Основа Хуніга, ДМФА ФмокуСР-РМР 9 емо, ще 2. ЕБМН " ЕВ-0В6526 ос МН» тн ! бо в, ен и о на КК н но г 5 оо убототовотуо я, А. Н З щ о.и- Мо зо я о Мо
Основа Хуніга; ДМФА ЕК-1228950 Й в
МОР-ерібулін КО й
Й
Ох МН ге -0 - / тя й о би н ни о я н го то 5 оо 9 о р н о Її ек о Мини То Е ле нКл
Й 7 М МІЙ в чо 5
ЕВ-1159569 9 Са - 1.
І00347| Ерібулін (ЕК-000086526) (61,5 мг, 0,074 ммоль) розчиняли в М,М-диметилформаміді (ДМФА) (6,0 мл) та потім змішували з основою Хуніга (0,027 мл, 0,156 ммоль) та Фмок-МаІ-Сії-
РАВ-РМР (86 мг, 0,112 ммоль). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 18 годин, до тих пір, доки зв'язування не було завершено, що було визначено за допомогою аналізу високоефективної рідинної хроматографії (ВЕРХ). До суміші додавали диетиламін (0,078 мл, 0,745 ммоль) та суміш перемішували протягом додаткових 2 годин до завершення реакції. Розчинник видаляли випарюванням та залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії для одержання МаІ-СИ-РАВ-ерібуліну (ЕН-001228950) у вигляді білої твердої речовини (60 мг, вихід 71 95). І-НЯМР (400 МГц, СОзОб) 5 м. д. 7,56 (д, у - 8,4 Гц, 2Н), 7,32 (д, У - 8,4 Гц, 2Н), 5,14 (с, 1Н), 5,06 (д, У - 12,4 Гц, 1Н), 5,03 (с, 1Н), 5,01 (а, У - 12,4 Гц, 1Н), 4,87 (с, 1Н), 4,83 (с, 1Н), 4,71 (т, -4,4 Гц, 1Н), 4,62(т,9У -4,4 Гц, 1Н), 4,57 (дд, У - 4,8, 8,68 Гц, 1Н), 4,47 (д, У - 10,68 Гц, 1Н), 4,32-4,27 (м, 2Н), 4,18 (дд, у) - 4,8, 6,4 Гц, 1Н), 4,13-4,07 (м, 2Н), 3,98 (т, у - 10,4 Гу, 1Н), 3,88-3,82 (м, ЗН), 3,76-3,70 (м, 4Н), 3,60 (д, У -6,0 Гц, 1Н), 3,38 (с, ЗН), 15. 3,26-3,10 (м, ЗН), 2,93 (дд, у - 2,0, 11,2 Гу, 1Н), 2,91-2,84 (м, 1Н), 2,75-2,64 (м, 2Н), 2,44-2,29 (м,
БН), 2,21-1,97 (м, 8Н), 1,93-1,83 (м, ЗН), 1,79-1,72 (м, 5Н), 1,68-1,29 (м, 8Н), 1,11 (д, У - 6,68 Гц,
ЗН), 1,07-1,01 (м, 1Н), 1,06 (д, У - 7,2 Гц, ЗН), 1,02 (д, У - 7,2 Гц, ЗН). РХ-МС (МН) -1135,7. 003481) МаІ-СП-РАВ-ерібулін (ЕК-001228950) (16 мг, 14 мкмоль) розчиняли в ДМФА (1 мл). М,
М-диїзопропілетиламін (7,2 мкл, 41 мкмоль) та МаІ-ПЕГ2-МНЗ (9,7 мг, 27 мкмоль) додавали до цього розчину при кімнатній температурі та реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 1 години. По завершенню реакції неочищену суміш очищали за допомогою обернено-фазової ВЕРХ із застосуванням рухомої фази ацетонітрил-вода, що містить 0,1 95 мурашиної кислоти. Зібрані фракції концентрували у вакуумі при кімнатній температурі на охолоджувальній водяній бані для отримання МаІ-ПЕГ2-МаІ-СП-РАВ-ерібуліну (ЕВ-001159569) (7,1 мг, 5,2 мкмоль, вихід 38 95). І" НЯМР (400 МГц, СОзОб) 5 м. д. 7,59 (д, У - 8,4
Гц, 2Н), 7,31 (д, У - 8,4 Гц, 2Н), 6,81 (с, 2Н), 5,13 (с, 1Н), 5,06 (д, у - 12,4 Гц, 1Н), 5,02 (с, 1Н), 5,01 (д, У - 12,4 Гу, 1Н), 4,87 (с, 1Н), 4,82 (с, 1Н), 4,71 (т, -4,0 Гц, 1Н), 4,61 (т,7У - 4,4 Гц, 1н),
4,50 (дд, У - 5,2,9,2 Гц, 1Н), 4,47 (д, У - 10,8 Гц, 1Н), 4,32-4,27 (м, 2Н), 4,19 (дд, У - 6,8, 11,6 Гц, 1Н), 4,13-4,07 (м, 2Н), 3,98 (т, У - 10,4 Гц, 1Н), 3,88-3,82 (м, ЗН), 3,76-3,64 (м, 6Н), 3,62-3,51 (м, 6Н), 3,38 (с, ЗН), 3,22-3,08 (м, 4Н), 2,93 (дд, у) - 2,4, 9,6 Гц, 1Н), 2,92-2,84 (м, 1Н), 2,76-2,63 (м, 2Н), 2,52 (т, У - 6,0 Гц, 2Н), 2,44-2,29 (м, 5Н), 2,21-1,97 (м, 8Н), 1,93-1,83 (м, ЗН), 1,80-1,66 (м, 5Н), 1,66-1,28 (м, 1ОН), 1,11 (д, У - 6,4 Гц, ЗН), 1,07-1,01 (м, 1Н), 0,99 (д, у - 6,8 Гц, ЗН), 0,97 (д, у - 6,4 Гц, ЗН). РХ-МС (МН) -1374,9. 1.2 Приготування МНЗ-ПЕГ2-МаІ-Сп-РАВ-ерібуліну (ЕК-001236940)
Би 2
МН що би ср й ва ОК но Ї в 0 о. хо умо кити ит ро, шен ше вка юр: о о дит ран ЕБМ, ДМФА
ЕВ-1228950 ою
МУСР-ерібулін Й о... МН»
КЕ: о / а т о н 9 Г н 5 ие болить три ве ши рено М о о ря н З якою Мн й) х ж в/о пе А А А о й т в чо у 9 Соми г /
ЕВ-1236940 и г 003491) Маі-СП-РАВ-ерібулін (ЕК-001228950) (45 мг, 0,04 ммоль) та біс(2,5-діоксопіролідин-1- іл) 3,3'-(етан-1 2-диілбіс(окси))дипропаноат (79 мг, 0,198 ммоль) змішували в ДМФА (1,5 мл) та потім додавали ЕїзМ (44,2 мкл, 0,317 ммоль). Суміш перемішували протягом 18 годин до завершення реакції, що було визначено за допомогою аналізу ВЕРХ. Розчинник випарювали та залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії для одержання МН5О-ПЕГ2-МаІ-СП-РАВ- ерібуліну (ЕК-001236940) у вигляді білої твердої речовини (38 мг, вихід 68 95). "НЯМР (400 МГц,
СОзОр) б м. д. 7,58 (д, У - 8,4 Гц, 2Н), 7,33 (д, у) - 8,4 Гц, 2Н), 5,14 (с, 1Н), 5,05 (д, У - 12,4 Гц, 1Н), 5,03 (с, 1Н), 5,01 (д, У - 12,4 Гц, 1Н), 4,87 (с, 1Н), 4,83 (с, 1Н), 4,71 (т, У - 4,4 Гц, 1Н), 4,62 (т,
У -4,4 Гу, 1Н), 4,51 (дд, У - 4,8, 8,68 Гц, 1Н), 4,50-4,47 (м, 1Н), 4,32-4,27 (м, 2Н), 4,21 (дд, У - 4,8, 6,4 Гц, 1Н), 4,14-4,08 (м, 2Н), 3,99 (т, У - 10,4 Гц, 1Н), 3,88-3,82 (м, ЗН), 3,78-3,70 (м, 4Н), 3,62 (с, 2Н), 3,62-3,58 (м, 1Н), 3,50-3,46 (м, 2Н), 3,39 (с, 4Н), 3,36 (с, ЗН), 3,22-3,08 (м, ЗН), 2,93 (дд, у - 202,0, 11,2 Гц, 1Н), 2,91-2,87 (м, 1Н), 2,84 (с, 2Н), 2,80 (с, 2Н), 2,75-2,64 (м, 2Н), 2,59-2,52 (м, 2Н), 2,44-2,29 (м, 5Н), 2,21-1,97 (м, ТОН), 1,93-1,83 (м, ЗН), 1,79-1,72 (м, 5Н), 1,68-1,29 (м, 8Н), 1,11 (д,
У - 6,68 Гц, ЗН), 1,08-0,98 (м, 1Н), 1,00 (д, У - 7,2 Гц, ЗН), 0,98 (д, У - 7,2 Гц, ЗН). РХ-МС (МАН) -1421,0. 1. З Приготування МНЗ-(СНг)5-МаІ-СП-РАВ-ерібуліну (ЕК-001236941)
Оу Мне 7 іо) й но кит он р 7 -
ЩО би и
Нам чи н Я. Г у, о мо 5; ДЦК, МН, ТГФ на її. ста ра ГФ) ша оду «М х о І ий ух не!
ЩІ у 95 (9 НК, дб кн КУМ доти чу
ЕК-1228950 і. о. в о
МСР-ерібулін 5 й ЕВ-001236140 ї
МЕ,
ДМФА о МН ле о но г н ви ин нн і зи -ч н но г М, о оо о 4 но Ав, Й У о о. о Кия Же
ЕК-1236941 М. ви у
Й
00350) Пімелінову кислоту (1,6 г, 9,99 ммоль) розчиняли в тетрагідрофурані (ТГФ) (100 мл) та потім додавали 1-гідроксипіролідин-2,5-діон (2,299 г, 19,98 ммоль) з наступним додаванням
ДЦК (4,12 г, 19,98 ммоль). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 18 годин, доки аналіз ВЕРХ не показав завершення реакції. Тверду речовину видаляли за допомогою фільтрування через целітову прокладку та промивали ТГФ (3 х 2 мл). Об'єднаний фільтрат концентрували та очищали за допомогою флеш-хроматографії для одержання біс(2,5- діоксопіролідин-1-іл) гептанедіоату (ЕК-001236140) у вигляді білої твердої речовини (2,5 г, вихід 71 Ув). "НЯМР (400 МГіу) б м. д. 2,83 (с, 8Н), 2,64 (т, У - 7,6 Гц, 4Н), 1,80 (дт, у - 7,6 Гц, 4Н), 1,59- 1,51 (м, 2Н). РХ-МС (М'Н)-355,2. 00351) МНУЬ-(СНг)5-МаІ-Сп-РАВ-ерібулін (ЕК-001236941) був отриманий (8,5 мг, вихід 47 95) з МСР-ерібуліну (ЕК-001228950) та біс(2,5-діоксопіролідин-1-іл) гептанедіоату (ЕК-001236140) із застосуванням тієї ж процедури, що описана вище для приготування МНЗ-ПЕГ2-МаІ-СП-РАВ- ерібуліну (ЕК-001236940). "НЯМР (400 МГц, СОзОБ) 5 м. д. 7,56 (д, У - 8,4 Гц, 2Н), 7,30 (д, у - 8,4 Гц, 2Н), 5,13 (с, 1Н), 5,04 (д, у) - 12,0 Гц, 1Н), 5,01 (с, 1Н), 5,00 (д, у - 12,4 Гц, 1Н), 4,86 (с, 1Н), 4,82 (с, 1Н), 4,70 (т,9У -4,4 Гц, 1Н), 4,60 (т, У - 4,4 Гц, 1Н), 4,50 (дд, у) - 4,8, 8,68 Гц, 1Н), 4,46 (д, У - 10,8 Гу, 1Н), 4,36-4,25 (м, 2Н), 4,17 (дд, у - 4,8, 6,4 Гу, 1Н), 4,13-4,06 (м, 2Н), 3,97 (т, 9 - 10,4 Гц, 1Н), 3,87-3,80 (м, ЗН), 3,74-3,68 (м, 2Н), 3,37 (с, ЗН), 3,20-3,06 (м, 4Н), 2,94 (дд, у) - 2,0, 11,2 Гц, 1Н), 2,90-2,82 (м, 1Н), 2,82 (с, 4Н), 2,74-2,65 (м, 2Н), 2,61 (т, У - 8,0 Гц, 2Н), 2,46-2,26 (м, 7Н), 2,24-1,81 (м, 1ЗН), 1,78-1,28 (м, 19Н), 1,10 (д, У - 6,68 Гц, ЗН), 1,06-0,96 (м, 1Н), 0,97 (д, у) - 7,2 Гц, ЗН), 0,95 (д, У - 7,2 Гц, ЗН). РХ-МС (МН) -1375 1. 1. 4 Приготування Ма!І-(СНг)5-МаІ-СП-РАВ-ерібуліну (ЕК-001235638)
о шт, МО» о не А с їх о но Ї зу со о / у Моиию «М щ. і І; ї о. М на н 0 н но 0 9,9 З нами о: "МН 9, бо ре
Керя Ж " МомавсіРАВ-РМР о М
Мо нннжлжлжлЛлдлд,дїдлдлинонноа м ой основа Хуніга; ДМФА
ЕК-086526
Ох МН
Мн о но г в и ун
Йорк А й М. 5 но -х о о о
С том: МВ пи Кор ку о А Йо ан а х рах сані ан хо и 9) й: ак 4 9 о у о Км рон
Ми
ЕБК-1235638 у й
І00352| Ерібулін (ЕК-000086526) (10 мг, 0,012 ммоль) розчиняли в ДМФА (1 мл) та змішували з МОС-МаІ-СП-РАВ-РМР (9,02 мг, 0,012 ммоль) та основою Хуніга (4,44 мкл, 0,025 ммоль). Потім суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 12 годин, доки аналіз
ВЕРХ не показав завершення реакції. Реакційну суміш концентрували та очищали за допомогою флеш-хроматографії для одержання Ма!І-«СНг)5-МаІ-СП-РАВ-ерібуліну (ЕК- 001235638) у вигляді білої твердої речовини (11,3 мг, вихід 63 95). "НЯМР (400 МГц, СОзОб) 5 м. д. 7,57 (д, У - 8,4 Гц, 2Н), 7,31 (д, у - 8,4 Гц, 2Н), 6,79 (с, 2Н), 5,13 (с, 1Н), 5,05 (д, у - 12,4 Гц, 1Н), 5,02 (с, 1Н), 5,00 (д, У - 12,4 Гц, 1Н), 4,87 (с, 1Н), 4,83 (с, 1Н), 4,71 (т, у - 4,4 Гц, 1Н), 4,61 (т, 109 - 4,4 Гц, 1Н), 4,56-4,46 (м, ЗН), 4,35-4,27 (м, 2Н), 4,20-4,07 (м, 4Н), 3,98 (т, У - 10,8 Гц, 1Н), 3,87-3,83 (м, ЗН), 3,73-3,70 (м, 2Н), 3,48 (т, у - 7,6 Гц, 2Н), 3,38 (с, ЗН), 3,20-3,08 (м, 4Н), 2,93 (дд, У - 1,6, 9,6 Гц, 1Н), 2,89-2,85 (м, 1Н), 2,69 (дт, У - 11,2, 16,8 Гц, 2Н), 2,44-2,33 (м, 5Н), 2,27- 1,683 (м, 1ЗН), 1,78-1,68 (м, 5Н), 1,66-1,27 (м, 14Н), 1,11 (д, У - 7,2 Гц, ЗН), 1,07-0,98 (м, 1Н), 0,98 (д, У - 7,2 Гц, ЗН), 0,96 (д, У - 7,2 Гц, ЗН). РХ-МС (МаН)-1328,9. 1. 5 Приготування МаІ-ПЕГ8-МаІ-СП-РАВ-ерібуліну (ЕК-001242287)
ос. МН» чн і й я о 9 г о, ту чу жи. ( о й с МЕ, ДМФА
Керн
ЕН-1228950 бе
МСР-ерібулін -
ОМ ге шо о ик нс в ви
Х. ри чи ана о М. в ОМ. нт но Ге! о я о ' сив вшо ни А ОС
Мн й во А не пи и МК о ак оту ї був
ІФ) ї , щі я що - ій й
ЕК-1242287 у 00353) МСР-ерібулін (ЕК-001228950) (10 мг, 8,808 мкмоль) та 2,5-діоксопіролідин-1-іл 1-(2,5- діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)-3-оксо-7,10,13,16,19,22,25,28-октаокса-4-азагентриаконтан-31- оат (6,07 мг, 8,808 мкмоль) змішували з ДМФА (1 мл) з наступним додаванням ЕїзМ (9,82 мкл, 0,07 ммоль). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 18 годин, доки аналіз ВЕРХ не показав завершення реакції. Розчинник видаляли випарюванням та залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії для одержання МаІ-ПЕГ8-МаІ-СП-РАВ-ерібуліну (ЕВ-001242287) у вигляді білої твердої речовини (3,0 мг, вихід 20 95). І НЯМР (400 МГц, СОзО0) б м. д. 7,58 (д, У - 8,4 Гц, 2Н), 7,29 (д, У - 8,4 Гц, 2Н), 6,80 (с, 2Н), 5,12 (с, 1Н), 5,04 (д, У - 12,4
Гц, 1ТН), 5,01 (с, 1Н), 4,99 (д, у - 12,4 Гц, 1Н), 4,85 (с, 1Н), 4,80 (с, 1Н), 4,69 (т, 7 - 4,4 Гц, 1Нн), 4,59 (т, У - 4,4 Гу, 1Н), 4,50-4,42 (м, 2Н), 4,32-4,24 (м, 2Н), 4,20-4,14 (м, 2Н), 4,12-4,04 (м, ЗН), 3,96 (т, у - 10,4 Гц, 1Н), 3,86-3,80 (м, ЗН), 3,76-3,57 (м, 4Н), 3,48 (т,7 - 6,0 Гц, 1Н), 3,36 (с, ЗН), 3,20-3,08 (м, ЗН), 2,91 (дд, у - 2,0, 11,2 Гу, 1Н), 2,90-2,82 (м, 1Н), 2,74-2,60 (м, 2Н), 2,44-2,29 (м,
БН), 2,21-1,97 (м, ТОН), 1,93-1,83 (м, ЗН), 1,79-1,20 (м, 19Н), 1,09 (д, У - 6,68 Гц, ЗН), 1,04-0,98 (м, 1Н), 0,99 (д, У - 7,2 Гц, ЗН), 0,97 (д, У - 7,2 Гц, ЗН). РХ-МС (МАН) -1711,6. 1. 6 Приготування МНЗ-ПЕГО-МаІ-СП-РАВ-ерібуліну (ЕК-001242288)
охуичн»;
ЯМ ог биту о, о нам. ЯМ Ж н но г С Хо. йо, пр, : і ШІ о н і ше ) реч» Пи, и» О я пах ха 95 бо о В Я нн и нд ка !
Її ви МЕ, ДМФА !
ЕВ-1228950 а
МОР -ерібулін Її
О.М. ! ! о Н У Н о н о, й і З н ев н. й б
М 4 У 'в Н А н о ще о Ми хо ще ау бо п шив ші ак й в/о --- - - - їй т рони ї /
ЕВ-1242288 Мини у ї 00354) МНУО-ПЕГО-МаІ-СП-РАВ-ерібулін (ЕК-001242288) був отриманий (13 мг, вихід 85 95) з
МОР -ерібуліну (ЕК-001228950) та БісмМН5З-ПЕГУО із застосуванням тієї ж процедури, що описана вище для приготування МН5З-ПЕГ2-МаІ-СИ-РАВ-ерібуліну (ЕК-001236940). "НЯМР (400 МГЦ, брзОор)бм. д. 7,61 (д, у) - 8,4 Гц, 2Н), 7,32 (д, У - 8,4 Гц, 2Н), 5,16 (с, 1Н), 5,06 (д, у - 12,4 Гц, 1Н), 5,01 (с, 1Н), 5,00 (д, У - 12,4 Гу, 1Н), 4,687 (с, 1Н), 4,82 (с, 1Н), 4,71(т,9У -44 Гц, 1Н), 4,61 (т,
У -4,4 ГЦ, 1Н), 4,52-4,45 (м, 2Н), 4,34-4,26 (м, 2Н), 4,20-4,19 (м, 1Н), 4,14-4,06 (м, 2Н), 3,98 (т, 9 - 10,4 Гц, 1Н), 3,88-3,80 (м, ЗН), 3,76-3,70 (м, 4Н), 3,66-3,58 (м, 37Н), 3,38 (с, ЗН), 3,24-3,10 (м, ЗН), 2,93 (дд, У - 2,0, 11,2 Гц, 1Н), 2,91-2,84 (м, 1Н), 2,84 (с, АН), 2,76-2,64 (м, 2Н), 2,58-2,50 (м, 4Н), 10.2,46-2,28 (м, 5Н), 2,22-1,96 (м, 8Н), 1,91-1,82 (м, ЗН), 1,79-1,68 (м, 5Н), 1,64-1,24 (м, 8Н), 1,11 (д,
У - 6,68 Гц, ЗН), 1,08-0,96 (м, 1Н), 0,99 (д, У - 7,2 Гц, ЗН), 0,97 (д, У - 7,2 Гц, ЗН). РХ-МС (МАН) -1729,7. 1. 7 Приготування МНЗ-ПЕГЗ-триазол-ПЕГЗ3-МаІ-СП-РАВ-ерібуліну (ЕК-001243700)
о:-МН, мно ЕК-1228950
Й УсСтерібулін о, й о З в вач КК н ке п о одио ту ЩІ ге) от ше о - б
ЕФ) Тоня од пен
Кз, : г я ! бо тот тру Ме ЕМ, ДМФА о , о: - МНЕ
А ЕВ-1243116 ; ря мито ср н а Гу о ме 5 м нн и ни и М ха ні, ов о зе уибиМя . ди й п'оит в) Ку й рани і о р сто 7 а а а о хе і Кимі-смола, пода, "Бутанол ! ох -МН» омн а ій ЕН-1243701 . М ; о ж: 3. - їн кеш чи м щ мо че 5 уко нас ов ва А в кат ко Хя си
І з а о І і; Он о ню тех ий беняит шк Мо що утон ЗДК, ДМФА г
ІФ Н
Оси Мнь
Мн о й ЕН-АА2437Ю, ря
М м хг ми ий -о. Ми ч. я, но ва о о і: а ши ба и то де ще а ож а ет ен 00355) МСР-ерібулін (ЕК-001228950) (25 мг, 0,022 ммоль) розчиняли в ДМФА (2,5 мл) та потім змішували з Е6ВМ (24,55 мкл, 0,176 ммоль) та азид-ПЕГЗ-МН5 (8,34 мг, 0,024 ммоль).
Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 18 годин, доки аналіз ВЕРХ не 5 показав завершення реакції Суміш концентрували у вакуумі та залишок очищали препаративною ВЕРХ (Месм і вода з 0,1 96 мурашиною кислотою). Фракції, що містять азид-
ПЕГЗ-МаІ-СИ-РАВ-ерібулін, екстрагували дихлорметаном (СНе2Сіг) (З х 20 мл), а СНоСі» випарювали для отримання азид-ПЕГЗ3-МаІ-СИ-РАВ-ерібуліну (ЕК-001243116) у вигляді білої твердої речовини (18,9 мг, вихід 63 95). І" НЯМР (400 МГц, СОзОб) 6 м. д. 7,58 (д, У - 8,4 Гц, 2Н), 7,30 (д, У - 8,4 Гц, 2Н), 5,14 (с, 1Н), 5,04 (д, У - 12,4 Гц, 1Н), 5,03 (с, 1Н), 5,01 (д, у - 12,4 Гц, 1Н), 4,85 (с, 1Н), 4,81 (с, 1Н), 4,70 (т, У - 4,4 Гц, 1Н), 4,61 (т, У - 4,4 Гц, 1Н), 4,52-4,48 (м, 2Н), 4,31- 4,25 (м, 2Н), 4,20-4,15 (м, 1Н), 4,13-4,07 (м, 2Н), 3,99 (м, У - 10,4 Гц, 1Н), 3,84-3,79 (м, ЗН), 3,77- 3,65 (м, 4Н), 3,64-3,56 (м, 1ЗН), 3,38 (с, ЗН), 3,20-3,05 (м, ЗН), 2,95-2,80 (м, 2Н), 2,75-2,60 (м, 2Н), 2,55-2,50 (м, 2Н), 2,43-2,25 (м, 5Н), 2,21-1,97 (м, 8Н), 1,93-1,83 (м, ЗН), 1,79-1,72 (м, 5Н), 1,68- 1,29 (м, ТОН), 1,08 (д, у - 6,8 Гц, ЗН), 1,05-0,95 (м, 1Н), 0,98 (д, У - 7,2 Гц, ЗН), 0,95 (д, у) - 7,2 Гц,
ЗН). РХ-МС (МН) -1365,1.
І0ОЗ356) Азид-ПЕГЗ-МСР-ерібулін (ЕК-001243116) (9,6 мг, 7,035 мкмоль) та 2,5-
діоксопіролідин-1-іл. 3-(2-(2-(проп-2-ін-1-ілокси)етокси)етокси)пропаноат (6,61 мг, 0,021 ммоль) змішували у воді (0,6 мл) та т-бутанолі (1,8 мл). Суміш барботували з Ме протягом 45 хв. До суміші додавали йодид міді на амберліст-21 (1,23 ммоль/г, 10 мг) та через суміш барботували
Ме протягом наступних 30 хв. Потім реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 72 годин до повного споживання вихідного матеріалу. За допомогою РХ-МС не було виявлено жодного бажаного продукту складного ефіру МН, а тільки гідролізовану карбонову кислоту. Суміш фільтрували через коротку целітову прокладку для видалення смоли сСиїЇ.
Фільтрат концентрували у вакуумі та отриманий залишок очищали препаративною тонкошаровою хроматографією (преп-ТШХ) (20 95 Меон/СНесіг) для отримання кислоти-ПЕГЗ- триазол-ПЕГЗ3-МаІ-СП-РАВ-ерібуліну (ЕК-001243701) у вигляді білої твердої речовини (3,7 мг, вихід 33 95). РХ-МС (Е5) (МН) -1581,2.
І00357| Кислота-ПЕГЗ-триазол-ПЕГЗ3-МаІ-СИП-РАВ-ерібулін (ЕК-001243701) (3,0 мг, 1,898 мкмоль) розчиняли в ДМФА (200 мкл) та додавали 1-гідроксипіролідин-2,5-діон (0,437 мг, 3,796 мкмоль) із подальшим додаванням 1-етил-3-(З-диметиламінопропіл)/укарбодиіїміду (ЕДК) (0,728 мг, 3,796 мкмоль). Після перемішування при кімнатній температурі протягом 18 годин реакція пройшла приблизно на 50 95. Додавали ЕДК (1,46 мг, 7,8 мкмоль) та суміш перемішували протягом наступних 18 годин, доки аналіз ВЕРХ не показав » 95 95 конверсії в МН5З-ПЕГЗ- триазол-ПЕГЗ3-МаІ-СИ-РАВ-ерібулін. Суміш концентрували у вакуумі та залишок очищали преп-
ТШХ (15 95 Меон/СНосСіІ2) для отримання МНЗ-ПЕГЗ-триазол-ПЕГЗ-МаІ-СП-РАВ-ерібуліну (ЕВ- 001243700) у вигляді білої твердої речовини (2,2 мг, вихід 69 95). "НЯМР (400 МГц, СОзОб) 6 м. д. 8,00 (с, 1Н), 7,59 (д, у - 8,0 Гц, 2Н), 7,31 (д, У - 8,4 Гц, 2Н), 5,13 (с, 1Н), 5,04 (д, У - 12,4 Гц, 1Н), 5,02 (с, 1Н), 5,00 (д, У - 12,4 Гу, 1Н), 4,87 (с, 1Н), 4,83 (с, 1Н), 4,71 (т,9 -4,0 Гц, 1Н), 4,63 (с, 2Н), 4,61 (т, У - 4,4 Гу, 1Н), 4,57-4,55 (м, 2Н), 4,51-4,45 (м, 1Н), 4,32-4,28 (м, 2Н), 4,21-4,17 (м, 2Н), 4,13-4,10 (м, 2Н), 3,98 (т, У - 10,68 Гц, 1Н), 3,88-3,80 (м, 5Н), 3,75-3,70 (м, 4Н), 3,68-3,55 (м, 18Н), 3,45-3,40 (м, 2Н), 3,38 (с, ЗН), 3,20-3,08 (м, 4Н), 2,93-2,80 (м, 2Н), 2,75-2,50 (м, 2Н), 2,68 (с,
АН), 2,48-2,30 (м, 7Н), 2,28-1,92 (м, 1ОН), 1,90-1,68 (м, 8Н), 1,65-1,27 (м, 8Н), 1,11 (д, 7-68 Гу,
ЗН), 1,05-0,95 (м, 1Н), 0,99 (д, У - 7,2 Гц, ЗН), 0,97 (д, у - 6,8 Гц, ЗН). РХ-МС (МН) -1678,3. 1. 8 Приготування МаІ-ПЕГ2-АІа-АІа-Азп-РАВ-ерібуліну (ЕК-001231679) та Ма!І-ПЕГ2-(АїІа-
АІа-Азп-РАВ)2-ерібуліну (ЕК-001231690)
в - тн но - 5 мо - Опт и МО ше дно щі Я х її І Г
Нам. я ох» - о о ртутото те
У ї Ж би Я, о 5 ЗІ м туя с 7 т їн ІЙ І Н и з. о о зро
У- ЕВ-086526 Фмок-Аіа-Аіа-Аєп-РАВ-РМРО ОС 1. Основа Хуніга 2. ЕБМН
МН» о 7 биту ій Х МЖК І Ат хво А В ото нин но а в НО в я ічи вв у 5 С 1-2 ї Н пе, ! у ї -
ІФ)
Ж іо А в х Моя и,
Шк я х ще ЩА ДМФА, ЕБМ
МаІ-п23Г2-МН5 не -0- 9; но г В вич с мото А АХ зу Метя но ть 5 о нн и ни шо со зу ре
Й "ваш же
ЕК-1231679 о а та м - чу ; ; у о Ше / ве - о о о, н- НК
Ї М. ра АМААХ м Я с. х но т 5 и ше аа м и о а м но мо у о Че ! о х й 2, Гоше (9) ен ЯМИ Об о і
Ді 9 ри х /? Є -- в;
ЕВ-1231690 Но ря
І00358| Ерібулін (ЕК-000086526) (10 мг, 0,014 ммоль) розчиняли в ДМФА (0,5 мл) та змішували з основою Хуніга (3,59 мкл, 0,021 ммоль). Потім додавали (9Н-флуорен-9-іл)уметил ((5)-1-(((5)-1-((5)-4-аміно-1-((4-(((4-нітрофенокси)карбоніл)окси)метил)феніл)аміно)-1,4- діоксобутан-2-іл)аміно)-1-оксопропан-2-іл)аміно)-1-оксопропан-2-ілукарбамат (15,76 мг, 0,021 ммоль) та отриманий жовтий розчин перемішували при кімнатній температурі протягом З днів, доки аналіз ВЕРХ не показав повного споживання вихідного матеріалу. До реакційної суміші додавали диетиламін (14,23 мкл, 0,137 ммоль), який потім перемішували при кімнатній температурі протягом додаткових 2 годин до тих пір, доки не було 100 95 розщеплення Фмок захисту. Реакційну суміш концентрували для видалення диетиламіну та залишок повторно розчиняли в ДМФА (1,5 мл). Еї2»8М (0,015 мл, 0,11 ммоль) додавали при кімнатній температурі з подальшим додаванням 2,5-діоксопіролідин-1-іл /3-(2-(2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1- іл)етокси)етокси)пропаноату (9,71 мг, 0,027 ммоль). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 16 годин до завершення реакції, що було визначено за допомогою аналізу РХ-МС. Суміш концентрували під глибоким вакуумом та очищали за допомогою флеш-хроматографії для одержання МаїІ-ПЕГ2-АІа-АІа-Азп-РАВ-ерібуліну (ЕК- 001231679) (9,2 мг, вихід 49 95) та МаІ-ПЕГ2-(АІа-АіІа-Азп-РАВ)2-ерібуліну (ЕК-001231690) (6,0 мг, вихід 18 95) у вигляді безбарвних олій.
00359) МаІ-ПЕГ2-АЇІа-Аіа-Азп-РАВ-ерібулін (ЕК-001231679)"НЯМР (400 МГ) 5 м. д. 9,23 (с, 1Н), 8,00 (д, у - 7,6 Гц, 1Н), 7,61 (д, у - 8,4 Гц, 2Н), 7,38 (д, У - 6,68 Гц, 1Н), 7,24 (д, 7 - 8,4 Гу, 2Н), 7,13 (д, У - 7,2 Гц, 1Н), 6,68 (с, 2Н), 6,30 (ш. с, 1Н), 6,04-6,00 (м, 1Н), 5,77 (ш. с, 1Н), 5,42 (ш. с, 1Н), 5,07 (с, 1Н), 5,06-4,98 (м, 2Н), 4,93 (с, 1Н), 4,88 (с, 1Н), 4,90-4,82 (м, 1Н), 4,80 (с, 1Н), 4,69 (т,9У -4,0 Гц, 1Н), 4,60 (т, У - 4,0 Гу, 1Н), 4,49-4,42 (м, 1Н), 4,38-4,25 (м, АН), 4,19 (т, У - 4,68 Гц, 1Н), 4,15-4,08 (м, 1Н), 4,03 (т, У - 4,68 Гц, 1Н), 3,97-3,85 (м, ЗН), 3,83-3,50 (м, 12Н), 3,41 (с, ЗН), 3,50-3,10 (м, ЗН), 3,02-2,64 (м, 6Н), 2,52-2,30 (м, 7Н), 2,30-1,65 (м, 14Н), 1,65-1,20 (м, 12Н), 1,10 (д, У - 6,8 Гц, ЗН), 1,13-1,05 (м, 1Н). РХ-МС (МаМа) -1396,6. 00360) МаІ-ПЕГ2-(АІа-Аіа-Азп-РАВ)2-ерібулін (ЕК-001231690)"НЯМР (400 МГц, СОзОБ) 6 м. д. 7,65 (д, у) - 8,4 Гц, 2Н), 7,60 (д, У - 8,4 Гц, 2Н), 7,28 (д, у - 8,68 Гц, 2Н), 7,23 (д, у - 8,4 Гц, 2Н), 6,79 (с, 2Н), 5,13 (с, 1Н), 5,02 (с, 1Н), 5,06-4,98 (м, 4Н), 4,87 (с, 1Н), 4,82 (с, 1Н), 4,85-4,72 (м, 2Н), 4,71 (т,9-:4,8 Гц, 1Н), 4,61 (т, У - 4,4 Гц, 1Н), 4,47 (д, У - 11,2 Гц, 1ТН), 4,30-4,06 (м, 9Н), 3,97 (т, У - 4,8 Гц, 1Н), 3,89-3,80 (м, ЗН), 3,75-3,48 (м, 12Н), 3,38 (с, ЗН), 3,17 (д, у - 6,8 Не, 2Н), 2,94-2,62 (м, 8Н), 2,50-2,28 (м, 7Н), 2,22-1,65 (м, 14Н), 1,58-1,30 (м, 18Н), 1,10 (д, У - 6,68 Гц, ЗН), 1,06-0,97 (м, 1Н). РХ-МС (М--Ма) -1802,8. 1. 9 Приготування МНЗ-ПЕГ2-АІа-АіІа-Азп-РАВ-ерібуліну (ЕК-001231691) бо ит но - м Ко) ул о дяки МО я, нут ; ра п й ди. я А С А пай о в; і, Ж Н о Х Н о г г Гео) си
Й ря ря г пн не их я ши хи си Я С Б нах
Ми то ії мно 7 ЕВ-О8б6526 Фмок-АІа-Аіа-Аєп-РАВ-РМР 1. Основа Хуніга 2. ЕБМН
МН; г оз і я З ж ке - ги І . Бе Со М, о кА 0 - 0 оо УМ т : : ма вий о Й І ра : ке щ ї ой '
ЕВ-1231678 і й / й я (9)
А -О. / х Й
Су их о і ІХ 7 ! І за 2 ї у їй ДМФА, БМ
Біс-ПЗГ2-МН5
Мн р-н 9 о у 78 оо ин ; о, у Я Н т Сл по
Фк и чик ша по г м о оо зу Ох 12 Н ій : Н ЩІ І |. н р ще те Нд 5 0: О обшити є й ї нак Де й о їй Ж
ЕК-1231691 й о. що а
Ї
00361) АіІа-АІа-Азп-РАВ-ерібулін (ЕК-001231678) був приготовлений (15 мг, кількісний вихід) з ерібуліну (ЕК-000086526) та Фмок-АіІа-АІа-Азп-РАВ-РМР із застосуванням тієї ж процедури, що описана вище для приготування МаІ-СП-РАВ-ерібуліну (ЕК-001228950). РХ-МС (МАН) -1135,5.
І00362| МНО-ПЕГ2-Аіа-АІа-Азп-РАВ-ерібулін (ЕК-001231691) був отриманий (12,4 мг, вихід 64 95) з АІа-АіІа-Азп-РАВ-ерібуліну (ЕК-001231678) та БісмМН5е-ПЕГ2 із застосуванням тієї ж процедури, що описана вище для приготування МНЗ-ПЕГ2-МаІ-СП-РАВ-ерібуліну (ЕК- 001236940). "НЯМР (400 МГ) 5 м. д. 9,21 (с, 1Н), 7,95 (д, У - 8,0 Гц, 1Н), 7,62 (д, У - 8,8 Гц, 2Н),
7,58-7,52 (м, 1Н), 7,28 (ш. с, 1Н), 7,24 (д, У - 8,4 Гц, 2Н), 7,10 (ш. с, 1Н), 6,29 (д, У - 12,4 Гц, 1Н), 5,83 (ш. с, 1Н), 5,38 (ш. с, 1Н), 5,07 (с, 1Н), 5,05-4,95 (м, 2Н), 4,93 (с, 1Н), 4,88 (с, 1Н), 4,90-4,83 (м, 1Н), 4,81 (с, 1Н), 4,69 (т, У - 4,4 Гц, 1Н), 4,60 (т, У - 4,4 Гу, 1Н), 4,46-4 41 (м, 1Н), 4,36-4,25 (м,
АН), 4,19 (дд, У) - 4,8, 6,0 Гц, 1Н), 4,15-4,09 (м, 1Н), 4,03 (дд, у) - 4,8, 6,0 Гц, 1Н), 3,99-3,89 (м, ЗН), 3,85-3,50 (м, 10ОН), 3,41 (с, ЗН), 3,40-3,10 (м, ЗН), 3,01-2,60 (м, 1ОН), 2,60-2,35 (м, 7Н), 2,35-1,65 (м, 14Н), 1,65-1,20 (м, 14Н), 1,10 (д, у - 6,8 Гц, ЗН), 1,15-1,03 (м, 1Н). РХ-МС (Е5) (МАН) -1442,7. 1. 10 Приготування, азид-ПЕГЗ-дисульфід-РАВ-ерібуліну (Ек-001237508) «-ОтВ5 о рт
ШИ НИ ново с ЕМ, осм й й но чи й ех водо? и небо (925) отв, ве
ЕВ-М131970 755) ЕК.1131973 зору оте оте в до з «бо ее дит дулю ст
Що себотєтиитм, СваСО», ТВА!
ЕНА1140141 (в) деОм/меонноо вена й сом мМеонна ях и (91) ЕВ-А1140549
Ох, Її. ху о кі як . | Ру 5 ев) ' ки МОХ г а о З я -я ат чу Тут на ї ИИюти в свт
Я Кн - а пи КА ля Отто аж 97 х ЕК-1140550 7 х щи Ка би пІІІІІІІІиІІІІІииИннииииннинииннини 7 ЕВ-086526
ОБО отит ! и Ге і : нії нова Хуніга й й 7 г ши Ж о тв ши м
ЕН-1237506
І00З363| 4-(«(трет-бутилдиметилсиліл)окси)метил)бензойну кислоту (1,0 г, 3,754 ммоль) розчиняли в дихлорметані (ДХМ) (25 мл), охолоджували до 0 "С. Потім додавали триетиламін (0,549 мл, 3,941 ммоль), а потім - дифенілфосфоразидат (1,085 мг, 3,941 ммоль). Реакційну суміш повільно нагрівали до кімнатної температури та перемішували протягом 14 годин.
Неочищену суміш розбавляли з етилацетатом (ЕІАс)/Нер (1:1, 100 мл) та пропускали через коротку кремнієву пробку, елюючи ЕОАс/Нер (50 95). Розчинник видаляли під вакуумом для отримання 1,10 г 4-«(трет-бутилдиметилсиліл)окси)метил)бензойної кислоти (ЕК-001131970).
ІН ЯМР (400 МГц) б м. д. 7,р9в8(д, 2Н,У-8,0 Гц), 740 (д,2Н, У -:8,0 Гц), 4,79 (с, 2 Н), 0,94 (с, 9
Н), 0,10 (с, 6 Н).
00364) 4-«(трет-бутилдиметилсиліл)окси)метил)бензойну кислоту (ЕК-001131970) (111 г, 3,775 ммоль) розчиняли в толуолі (20 мл), нагрівали при 110 "С протягом З годин. Незважаючи на те, що продукт не проявився як одна пляма, аналіз тонкошарової хроматографії (ТШХ) показав, що вихідний матеріал був витрачений. Потім реакційну суміш охолоджували до кімнатної температури та переносили у віалу, герметизували у струмі азоту та зберігали в вигляді розчину в толуолі (1 мл - 32,6 мг) при -20 "С.
І00365| До розчину трет-бутил((4-ізоціанатобензил)окси)удиметилсілану (165 мг, 0,626 ммоль) в толуолі (5 мл) додавали триетиламін (0,099 мл, 0,709 ммоль), потім спирт (90,0 мг, 0,591 ммоль) та реакційну суміш перемішували протягом б годин при 36 "С. Хід реакції перевіряли за допомогою НВЕРХ/МС. Потім додавали насичений розчин бікарбонату натрію (Мансоз) (10 мл), екстрагували ЕІАс/Нер (1:1, 60 мл), промивали сольовим розчином, сушили сульфатом натрію та концентрували. Неочищений матеріал очищали за допомогою флеш- хроматографії (ЕЮФАс/Нер 10 95 - 40 95) для отримання 215 мг 2-метил-2- (метилдисульфаніл)пропіл(4-«(трет-бутилдиметилсиліл)окси)метил)феніл)карбамату (ЕК- 001131973). "Н ЯМР (400 МГц) б м. д. 7,34 (д, 2 Н, 2-84 Гц), 7,26 (д, 2 Н, У - 7,6 Гу), 6,63 (ш. с, 1), 4,69 (с, 2 Н), 4,17 (с, 2 Н), 2,42 (с, З Н), 1,35 (с, 6 Н), 0,93 (с, 9 Н), 0,08 (с, 6 Н).
І0ОЗз66) 2-метил-2-(метилдисульфаніл)пропіл(4-((трет- бутилдиметилсиліл)окси)метил)феніл)укарбамат (ЕК-001131973) (198 мг, 0,476 ммоль) та 2-(2- (2-(2-азидоетокси)етокси)етокси)етил 4-метилбензолсульфонат (325 мг, 0,87 ммоль) розчиняли в ДМФА (6,6 мл). Потім додавали карбонат цезію (621 мг, 1,905 ммоль), а потім тетрабутиламоніййодид (45 мг, 0,122 ммоль) та реакційну суміш перемішували протягом 15 годин при 36 "С. Хід реакції перевіряли за допомогою НВЕРХ/МС. Потім додавали насичений розчин МНАСІ (30 мл), екстрагували ЕЮАсС/Нер (2:1, 150 мл), промивали сольовим розчином (10 мл), сушили сульфатом натрію та концентрували під вакуумом. Неочищений матеріал очищали за допомогою флеш-хроматографії (ЕАс/Нер 20 905 - 50 90) для отримання 248 мг 2-метил-2- (метилдисульфаніл)пропіл(2-(2-(2-(2-азидоетокси)етокси)етокси)етил)(4-((трет- бутилдиметилсиліл)окси)метил)феніл)карбамату (ЕК-001140141). "Н ЯМР (400 МГ) 6 м. д. 7,28 (д, 2Н,9У-8,4 Гу), 7,20(д, 2Н, У -8,0 Гу), 4,73 (с,2 Н), 4,06 (ш. с, 2 Н), 3,83 (дд, 2 Н, у - 6,4, 5,6
Гц), 3,68- 3,56 (м, 12 Н), 3,37 (дд, 2 Н, У. 5,6,5,2 Гц), 2,33 (с, З Н), 1,14 (ш. с, 6 Н), 0,93 (с, 9 Н),
Коо) 0,09 (с, 6 Н).
І00367| 2-метил-2-(метилдисульфаніл)пропіл(2-(2-(2-(2-азидоетокси)етокси)етокси)етил)(4- ((трет-бутилдиметилсиліл)окси)метил)феніл)укарбамат (ЕК-001140141) ( 81 мг, 0,131 ммоль) розчиняли в суміші метанолу (5 мл) та води (0,5 мл). Потім до реакційної суміші додавали оцтову кислоту (0,5 мл, 8,734 ммоль) та перемішували протягом 14 годин при 38 "С. Реакційну суміш охолоджували до кімнатної температури та розчинник видаляли під вакуумом. Залишок розбавляли ЕОАс (30 мл), промивали водою (2 х 5 мл), МансСоОз та сольовим розчином (З мл), сушили сульфатом натрію та концентрували під вакуумом. Неочищений матеріал очищали за допомогою флеш-хроматографії (ЕАс/Нер 30 95 - 90 95) для отримання 61,0 мг 2-метил-2- (метилдисульфаніл)пропіл(2-(2-(2-(2-азидоетокси)етокси)етокси)етил)(4- (гідроксиметил)феніл)карбамату (ЕК-001140549). "Н ЯМР (400 МГц) б м. д. 7,34 (д, 2 Н, У - 8,8
Гу), 7,26 (д,2Н, У -8,0 Гц), 4,69 (д,2Н, У) -4,4 Гц), 4,06 (ш. с, 2 НН), 3,84 (дд, 2Н, У -6,2,6,2 Гу), 3,66-3,56 (м, 12 Н), 3,37 (дд, 2 Н, У 25,2, 5,2 Гц), 2,33 (с, З Н), 1,74 (ш. с, 1 Н), 1,14 (ш. с, 6 Н).
І00368| 2-метил-2-(метилдисульфаніл)пропіл(2-(2-(2-(2-азидоетокси)етокси)етокси)етил)(4- (гідроксиметил)феніл)/карбамат (ЕК-001140549) (60 мг, 0,119 ммоль) розчиняли в ДХМ (2 мл) та
Ру (0,019 мл, 0,239 ммоль) охолоджували до 0"С. Потім додавали 4- нітрофенілкарбонохлоридат (38,5 мг, 0,191 ммоль) в ДХМ (2 мл) та диметиламінопіридин (ДМАП) (2,9 мг, 0,024 ммоль), та реакційну суміш перемішували протягом 30 хв. при 0 "с.
Реакційну суміш повільно нагрівали до кімнатної температури і перемішували до тих пір, доки вихідний матеріал не був спожитий (приблизно 2,5 години). Розчинник видаляли під вакуумом та залишок очищали шляхом флеш-хроматографії (ЕФАс/Нер 10 905 - 35 95) для отримання 78
МГ 2-метил-2-(метилдисульфаніл)пропіл(2-(2-(2-(2-азидоетокси)етокси)етокси)етил)(4- ((4нітрофенокси)карбоніл)окси)метил)феніл)/карбамату (ЕБ-001140550). "Н ЯМР (400 МГц) 5 м. д.8,27(дд,2Н,.)-6,8,2,4 ГІ), 7,41 (д, 2Н,У-8,8 Гц), 7,37 (дд, 2Н,9У-7,2,24 Гц), 7,33(д, 2 Н,
У-8,8 Гу), 5527 (с, 2Н), 408 (ш. с, 2 Н), 3,85 (дд, 2 Н, У - 5,8, 5,8 Гц), 3,66- 3,57 (м, 12 Н), 3,36 (дд, 2 Н,У -5,2,5,2 Гц), 2,33 (ш. с, З Н), 1,19 (ш. с, 6 Н).
І00369| 2-метил-2-(метилдисульфаніл)пропіл(2-(2-(2-(2-азидоетокси)етокси)етокси)етил)(4- (((4нітрофенокси)карбоніл)окси)метил)феніл)карбамат (ЕК- 001140550) (30 мг, 0,045 ммоль) в
ДХМ (З мл, 46,625 ммоль) в струмі азоту поміщали в 25-мілілітрову колбу та охолоджували до 0 "С. Додавали амін (40,8 мг, 0,049 ммоль) в ДХМ (2 мл) та основу Хуніга (0,024 мл, 0,135 бо ммоль), а потім ДМАП (1,4 мг, 0,011 ммоль). Потім реакційну суміш повільно нагрівали до кімнатної температури, перемішували протягом З годин, концентрували під вакуумом та очищали за допомогою флеш-хроматографії (ЕОАс/Нер 50 95 - 100 95, з подальшим
Меон/гюАс З 95 - 8 95) для отримання 45,0 мг чистого азид-ПЕГЗ-дисульфід-РАВ-ерібуліну (ЕВ-001237508). "Н ЯМР (400 МГц) б м. д. 7,32(д, 2 Н, У -8,0 НН), 7,25(д, 2Н,9 7,2 Гу), 5,28 (дд, 1 Н, у - 5,6, 5,6 Гц), 5,11-5,04 (м, З Н), 4,93 (с, 1 Н), 4,88 (с, 1 Н), 4,81 (с, 1 Н), 4,69 (дд, 1 Н, У -44,4,4 Гц), 460 (дд, 1 НН, -4,2,4,2 Гу), 4,36 (ш. с, 1 Н), 4,33(дд, 1 Н, У - 4,0, 2,0), 4,29 (ддд, 1
Н,У-9,6,4,4,44 Гу, 418 (дд, 1 Н, 2 -6,4,44 Гц), 4,14-4,04(м,3Н), 403 (дд, 1 НН, -6,4, 4,4
Гу), 3,97-3,89 (м, З Н), 3,84-3,78 (м, З Н), 3,67-3,56 (м, 14 Н), 3,42 (с, З Н), 3,40-3,35 (м, 1 Н), 3,37 (дд, 2Н,9У-5,2,5,2 ГП), 327 (д,1Н,9У-3,2 ГП), 3,20 (ддд, 1 Н, У - 12,8,6,0, 6,0 Гц), 2,91-2,83 (м, 2 Н),2,70 (дд, 1 Н, У - 16,0, 10,0 Гу), 2,52-2,40 (м, З Н), 2,35-2,13 (м, 9 Н), 2,10-2,06 (м, 1 Н), 2,01- 1,89 (м, 4 Н), 1,78-1,64 (м, 4 Н), 1,60-1,52 (м, 4 Н), 1,49-1,28 (м, 5 Н), 1,22-1,07 (м, 6 Н), 1,09 (д, З
Н,Уу-6,0 Гу). 1. 11 Приготування ма!-ПЕГА триазол-ПЕГЗ-дисульфід-РАВ ерібуліну (ЕК-001237504) в) о о фа ах о
Ї о що -й рн; ря ра н. С ї т М а а КО!) ода ІФ) Ес / я Кот тет -58-К о ре 2, уо ж рили у а Вена ЧИ 77 Клік-хімія, сто м опосередкована смолою Сиці в
В ри с т р охии о я з; о оби і ц ом - Ж об з і ви - Ви 7 у вно ОМ, г
Й тою 7 мем З ги
І о тих дат тд кити ит І ж нн -й є
ІЇ00370| Суміш азиду (9,0 мг, 7,151 мкмоль) та 3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-М- (3,6,9,12-тетраоксапентадек-14-ін-1-ілупропанаміду (6,8 мг, 0,018 ммоль) у трет-бутанолі (1,5 мл) та воді (0,5 мл) дегазували протягом 45 хв. Потім додавали йодид міді на амберліст-21 (1,23 ммоль/г, 10 мг) та дегазували протягом додаткових 30 хв. Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 18 годин та перевіряли за допомогою НВЕРХ/МС. Велика частина вихідного матеріалу була спожита та бажаний продукт виявився як основний пік. Суміш потім відокремлювали від смоли та очищали на ВЕРХ (ацетонітрил/вода з 0,05 96 мурашиною кислотою) для отримання 1,5 мг МаІ-ПЕГ4-триазол-ПЕГЗ-дисульфід-РАВ-ерібуліну (ЕК- 001237504). "Н ЯМР(400 МГц) б м. д. 7,74 (с,1Н),7,32(д, 2 Н,9У-8,4 Гц), 7,27-7,25 (м, 2 Н), 6,69 (ш. с, 2 Н), 5,43 (дд, 1 Н, У - 5,6, 5,6 Гц), 5,14-5,06 (м, З Н), 4,95 (с, 1 Н), 4,89 (с, 1 Н), 4,82 (с, 1
Н), 4,70 (дд,1 Н,/ - 44,44 Гц), 466 (с,2Н), 462 (дд, 1 Н, у -4,4,4,4 Гц), 4,52(дд, 1 Н, У) 5,2, 5,2 Гц), 4,38-4,31 (м, 2 Н), 4,30 (ддд, 1 Н, )У -10,4,4,0,4,0ГП),4,20(дд, 1 Н, У -6,4, 44 Гу), 4,16- 4,05 (м, З Н), 4,04 (дд, 1 Н, у) - 6,4, 4,4 Гц), 3,99-3,91 (м, З Н), 3,87-3,80 (м, 6 Н), 3,70-3,59 (м, 22
Н), 3,53 (дд, 2 Н, У 5,2, 5,2 Гу), 3,44 (с, З Н), 3,43-3,36 (м, З Н), 3,29 (д, 1 Н, У - 2,8 Гц), 3,18 (ддд, 1 Н, У - 12,9,6,2, 6,2 Гц), 2,92-2,84 (м, 2 Н), 2,72 (дд, 1 Н, У - 16,0, 10,0 Гу), 2,54-2,42 (м, 5
Зо Н), 2,37-1,90 (м, 19 Н), 178-1,52 (м, З Н), 1,50-1,14 (м, 16 Н), 1,10 (д, З Н, у - 6,0 Гу). РХ-МС (МАН) -1642,1. 1. 12 Приготування МНЗ-ПЕГЗ-триазол-ПЕГЗ-дисульфід-РАВ-ерібуліну (ЕК-001244129)
й он 7 как 1 но о о
Н СТ н І рота ой т в Є бито о т о днях ай Клік-хімія, -К Ї ІЙ о. (о, г і сот ї ху чин Ж бий опосередкована смолою Си во, КА 2. ДЦК У ен А ІЙ
Оу о ої но. рак и ВН не оо ри у маше о ва / Кон, Ж бом шт Є ща що / ре ци й Ї з і, МИ ЩІ
В о. ії У о г лат, й мем туди шина ї зе ож ж па з Ля шк (9)
І00371| Суміш азиду (9 мг, 7,151 мкмоль) та 2,5-диоксопіролідин-1-іл. 3-(2-(2-(проп-2-ін-1- ілокси)етокси)етокси)пропаноату (4,5 мг, 14,30 мкмоль) у трет-бутанолі (1 мл) та воді (0,5 мл) дегазували протягом 45 хв. Потім додавали йодид міді на амберліст-21 (1,23 ммоль/г, 10 мг, 1,151 мкмоль) та дегазували протягом додаткових 30 хв. Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 18 годин та перевіряли за допомогою НВЕРХ/МС. Велика частина вихідного матеріалу була спожита та бажаний продукт виявився як основний пік. Потім суміш відокремлювали від смоли фільтруванням, екстрагували з ДХМ (15 мл), промивали сольовим розчином (3 х З мл), сушили сульфатом натрію та концентрували під вакуумом.
Залишок (5 мг, 3,39 мкмоль) піддавали азеотропній перегонці з толуолом, розчиняли в ТГФ (1 мл) та охолоджували до 0 "С. Додавали ДЦК (4,2 мг, 0,02 ммоль) з наступним додаванням 1- гідроксипіролідин-2,5-діону (2,2 мг, 0,019 ммоль) та реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 18 годин. Велика частина вихідного матеріалу була спожита та бажаний продукт виявився як основний піку» що визначено НВЕРХ/МС. Потім реакційну суміш концентрували та очищали на препаративній ТШХ (ДХМ/і-пропанол, 8 95) для отримання 2,5 мг
МН5О-ПЕГЗ-триазол-ПЕГЗ-дисульфід-РАВ-ерібуліну (ЕК-001244129) у вигляді безбарвної олії. 1ТН ЯМР (400 МГц, СО2Сіг) бм. д. 7,72(с,1Н),7,ж32(д, 2Н, 9-88 ГЦ), 7,25(д, 2Н,УУ-88 Гу), 5,08-5,04 (м, З Н), 4,93 (с, 1 Н), 4,85 (с, 1 Н), 4,78 (с, 1 Н), 4,64 (дд, 1 Н, У) - 4,4,4,4 Гу), 4,58 (с, 2
Н), 4,55 (дд, 1Н,47У-44,4,4 ГГ), 448 (дд, 2 НН, -5,0,5,0 Гц), 4,32(д, 1 Н, У - 6,6 Гц), 4,27-422 (м, 2Н), 4,14 (дд, 1 Н, У - 6,6, 4,8 Гц), 4,10-4,01 (м, З Н), 4,00 (дд, 1 Н, у - 6,68, 4,4 Гу), 3,92-3,78 (м, 9 Н), 3,65-3,53 (м, 19 Н), 3,44-3,39 (м, 4 Н), 3,37 (с, 3 Н), 3,26 (д, 1 Н, У - 3,2 Гц), 3,13 (ддд, 1
Н,Уу -12,4,6,0, 6,0 Гу), 2,91-2,73 (м, 11 Н), 2,70-2,64 (м, 2 Н), 2,54-2,А41 (м, З Н), 2,38-1,80 (м, 16
Н), 1,74-1,52 (м, З Н), 1,41-1,13 (м, 10 Н), 1,07 (д, З Н, У - 6,4 Гц). РХ-МС (МН) -1572,3. 1. 13 Приготування азид-ПЕГЗ-сульфонамід-РАВ-ерібуліну (ЕК-001138856)
о ке ро ще х. еп на ення фор ототве М о й зотва 80 шк оди Ох Ма ву ле І роя - т
НМ а ру мо У вн й К»Со», ДМФА, БОС (8695) по (7596)
ЕК-1137670 но ть тво о, юю
Свв м Сов м, шк АСОН, КОЖ 7 ом меон, ньо І лобом ся о. (8495) ї
Г речо литок отв з
ЕВ-1138455 ЕК-1138452
ОМ. и Бех о Ру
Я "сі (5895) а й
Н нн і 2 обу ій ер о дит ар же В им, з чу ав
З ще ві С йо й ех Ж ЕК-086526
МО» о. ц на ниви
ЕК-1135286 "о з / он 5 че і не «І о Основа Хуніга г аг с ся ОМАР я, нн Я, (9295) . МО т Хі . | о НЯ - ше; ша - мех 8-М іч л, ноша: ч А бо охо й аль
ЕК-1138856 00372) 4-(«(трет-бутилдиметилсиліл)окси)метил)анілін (315 г, 1,327 ммоль) розчиняли в
ДХМ (10 мл), охолоджували до 0 "С. Потім додавали піридин (0,268 мл, 3,317 ммоль) з наступним додаванням 5-ціанопірідін-2-сульфонілхлориду (365 мг, 1,801 ммоль) в ДХМ (10 мл) протягом 15 хв. Реакційну суміш повільно нагрівали до кімнатної температури протягом 1 години та перемішували протягом 2 годин. Реакційну суміш розбавляли ЕОАс (50 мл), промивали сольовим розчином, сушили сульфатом натрію та концентрували під вакуумом для отримання 610 мг (103 95) М-(4-«(трет-бутилдиметилсиліл)окси)метил)феніл)-5-ціанопіридин-2- сульфонаміду (ЕК-001137670). Неочищений продукт був досить чистим, хоча і забарвленим. "Н
ЯМР (400 МГу) 5 м. д. 8,94 (дд, 1 Н, У - 1,8, 0,6 Гц), 8,10 (дд, 1 Н, У - 8,4, 2,0 Гц), 7,99 (дд, 1 Н, -8,0,08 Гу), 7 18(д, 2Н,9У-82 Гу), 7,15(ш. с, 1 Н), 7,11 (дд, 2Н, У) -6,8, 0,8 Гц), 4,64 (с, 2 Н), 0,90 (с, 9 Н), 0,05 (с, 6 Н). 00373 М-(4-(«(трет-бутилдиметилсиліл)окси)метил)феніл)-5-ціанопіридин-2-сульфонамід (ЕН-001137670) (105,0 мг, 0,26 ммоль) та 2-(2-(2-(2-азидоетокси)етокси)етокси)етил 4- метилбензолсульфонат (143 мг, 0,383 ммоль) розчиняли в ДМФА (4 мл). Потім додавали карбонат калію (К2СОз) (144 мг, 1,041 ммоль), а потім тетрабутиламоніййодид (19,2 мг, 0,052 ммоль) та реакційну суміш перемішували протягом 36 годин при 50 "С. Хід реакції перевіряли за допомогою НВЕРХ/МС. Додавали насичений розчин МНАСІ (10 мл), екстрагували ЕЮАс/Нер
(211, 30 мл), промивали сольовим розчином, сушили сульфатом натрію та концентрували.
Неочищений матеріал очищали за допомогою флеш-хроматографії (ЕЮФАс/Нер 25 905 - 80 95) для отримання 118,0 МГ М-(2-(2-(2-(2-азидоетокси)етокси)етокси)етил)-М-(4-((трет- бутилдиметилсиліл)окси)метил)феніл)-5-ціанопіридин-2-сульфонаміду (ЕК-001138452) (75 95).
ІН ЯМР (400 МГ) б м. д. 8,99 (дд, 1 Н, у) - 1,8,0,6 Гц), 8,08 (дд, 1 Н, у -8,2, 2,2 Гц), 7,86 (дд, 1
Н,уУ-8,0,08 Гу), 7,24(д, 2Н,.-10Г),7,09(д, 2 Н, У) - 8,68 Гц), 4,69 (с,2Н), 4,06 (дд, 2 Н, У) - 6,0,6,0 ГГ), 3,67 (дд, 2 Н, у) - 5,2,5,2 Гц), 3,65 -3,62(м,4 НН), 3,58 (дд, 2 Н, У -6,2, 6,2 Гу), 3,56 - 3,53 (м,4 НН), 3,38 (дд, 2 Н, У - 5,2, 5,2 Гц), 0,93 (с, 9 Н), 0,08 (с, 6 Н). 00374 М-(2-(2-(2-(2-азидоетокси)етокси)етокси)етил)-М-(4-((трет- бутилдиметилсиліл)окси)метил)феніл)-5-ціанопіридин-2-сульфонамід (ЕК-001138452) (150 мг, 0,248 ммоль) розчиняли в метанолі (6 мл). Потім додавали воду (0,60 мл) з наступною оцтовою кислотою (АСОН) (0,60 мл, 10,481 ммоль). Реакційну суміш повільно нагрівали до 38 "С та перемішували протягом 14 годин. Більшу частину розчинника видаляли під вакуумом. Залишок розбавляли ЕІЮАсС (30 мл), промивали водою (2 х 5 мл), МаНСоОз та сольовим розчином, сушили сульфатом натрію та концентрували під вакуумом. Неочищений матеріал очищали за допомогою флеш-хроматографії (Е(ФАс/Нер 35 905 - 90 95) для отримання 105,0 мг М-(2-(2-(2-(2- азидоетокси)етокси)етокси)етил)-5-ціано-М-(4-гідроксиметил)феніл)піридин-2-сульфонаміду (ЕВ-001138455) (84 95). "Н ЯМР (400 МГ) 6 м. д. 8,99 (д, 1 Н, У - 1,2 Гц), 8,09 (дд, 1 Н, У - 8,4, 2,0Гу, 7,88 (дд, 1 Н,.)-8,4,0,8 ГПУ, 7,30 (д, 2 Н,Уу-8,8 Гц), 7,15(д, 2 Н, У - 8,4 Гц), 4,67 (с, 2
Н), 4,06 (дд, 2 Н,9У-6,2,6,2 Гц), 3,66 (дд, 2 Н, У - 5,0, 5,0 Гц), 3,65 - 3,58 (м, 6 Н), 3,55 - 3,51 (м, 4Н), 3,38 (дд, 2Н,9У-5,2, 5,2 Гц.
І0ОЗ 75) М-(2-(2-(2-(2-азидоетокси)етокси)етокси)етил)-5-ціано-М-(4- гідроксиметил)феніл)піридин-2-сульфонамід (ЕК-001138455) (45 мг, 0,092 ммоль) розчиняли в
ДХМ (З мл) та охолоджували до 0 "С після додавання піридину (0,015 мл, 0,183 ммоль). Потім додавали 4-нітрофенілкарбонохлоридат (20,3 мг, 0,101 ммоль) в ДХМ (2 мл) та ДМАП (2,3 мг, 0,018 ммоль). Реакційну суміш повільно нагрівали до кімнатної температури та перемішували протягом 2 годин. НВЕРХ/МС показала, що залишилося трохи вихідного матеріалу. Потім реакційну суміш концентрували під вакуумом та очищали за допомогою флеш-хроматографії (ЕЮАс/Нер 12 95 - 40 95) для отримання 35 мг 4-((М-(2-(2-(2-(2-азидоетокси)етокси)етокси)етил)-
Зо Б-ціанопірідін)-2-сульфонамідо)бензил (4-нітрофеніл)укарбонату (ЕК-001235286) (58 95) та 20 мг вихідного матеріалу. "Н ЯМР (400 МГц) бм. д.8,99(д, 1 Н, 70,8 Гц), 8,27 (дд, 2Н,9У9-9,2,2,0
Гу), 812(дд, 1 Н,9У-7,65,2,0ГП),7,92(д,1Н,9У- 8,4 ГП), 7,3в (д, 4 Н,9У-96 ГП), 7,26 (д, 2 Н, У г 8,8 Гц), 5,45(с,2Н),4,06 (дд, 2 Н, У - 5,68, 5,8 Гц), 3,67 - 3,58 (м, 8 Н), 3,58 - 3,50 (м, 4 Н), 3,38 (дд, 2Н,7-6,1,6,1 Гу). 00376) А-(М-(2-(2-(2-(2-азидоетокси)етокси)етокси)етил)-5-ціанопірідін-2- сульфонамідо)бензил (4-нітрофеніл)карбонат (ЕК-001235286) (35,0 мг, 0,053 ммоль) поміщали в струмі азоту в 25-мілілітрову колбу та охолоджували до 0 "С. Потім додавали амін (48,5 мг, 0,059 ммоль) в ДХМ (3 мл, 46,625 ммоль) та основу Хуніга (0,037 мл, 0,214 ммоль), а потім
ДМАП (2,61 мг, 0,021 ммоль). Реакційну суміш перемішували протягом 30 хв. при 0 "С та потім перемішували протягом додаткових 6 годин при кімнатній температурі. Потім реакційну суміш концентрували під вакуумом та очищали за допомогою флеш-хроматографії (ЕФАс/Нер 50 95 - 100 95, з подальшим МеОН/ЕЮАс З 95 - 8 95) для отримання 61,0 мг чистого азид-ПЕГЗ- сульфонамід-РАВ-ерібуліну (ЕК-001138856). "Н ЯМР (400 МГц) б м. д.8,9в8(д, 1 Н, У -1,2 Гу), 8Л1О(дд, 1 Н.У - 82,1, Гц), 7,87 (ід, 1 Н.У -8,0Гц), 7,26 (д, 2Н,У-68Г), 7 13(д, 2Н, 24-84
Гу), 5,29 (дд, 1 Н, у - 5,6, 5,6 Гц), 5,08-5,00 (м, З Н), 4,92 (с, 1 Н), 4,87 (с, 1 Н), 4,80 (с, 1 Н), 4,68 (дд, 1 Н, У - 4,6, 4,6 Гц), 4,59 (дд, 1 Н, ./ - 4,6, 4,6 Гц), 4,38-4,30 (м, 2 Н), 4,28 (ддд, 1 Н, у - 10,4, 4,0,40 Гц), 417 (дд, 1 Н,7-6,2, 4,6 Гу), 4,13-4,01 (м, 4 Н), 3,97-3,88 (м, З Н), 3,82-3,78 (м, 1 Н), 3,67-3,50 (м, 15 Н), 3,41 (с, З Н), 3,40-3,33(м,1Н), 3,37 (дд, 2 Н,.77-:4,8554,8 Гц), 3,27 (д, 1 Н, У - 3,2 Гц), 3,15 (ддд, 1 Н, у) - 12,8, 6,4, 6,4 Гу), 2,90-2,82 (м, 2 Н), 2,70 (дд, 1 Н, У - 16,0, 10,0 Гу), 02,51-2,40 (м, З Н), 2,34-2,13 (м, 7 Н), 2,10-2,05 (м, 1 Н), 1,99-1,88 (м, 4 Н), 1,78-1,64 (м, 5 Н), 1,62- 1,52 (м, 2 Н), 1,50-129(м,4 Н), 1,08 (д, З Н, У - 6,8 Гц). 1. 14 Приготування МаІ-ПЕГ4-триазол-ПЕГЗ-сульфонамід-РАВ-ерібуліну (ЕК-001237505)
Он сй на св в ох 5, д Бр о ру / о що о ія д- да чо /й 7», ки, а В; ці і ри що ра дж сх Коші і - її х ІЙ о о па Кк о о
М хан Й й й й о, уд, І Клік-хімія,
ОТ ль опосередкована смолою Си ан ак а
СТ Бе огий. лає н З о й Го) оку
Ко Жов
Моск В Ї в я ша що
Ше на о і мем й о. о й Ул тют ит т итни, з М р, о)
І00377| Суміш азиду (10 мг, 8,023 мкмоль) та 3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-М- (3,6,9,12-тетраоксапентадек-14-ін-1-іл)упропанаміду (9,20 мг, 0,024 ммоль) у трет-бутанолі (2,1 мл) та воді (0,7 мл) дегазували протягом 45 хв. Потім додавали йодид міді на амберліст-21 (1,23 ммоль/г, 15 мг) та дегазували протягом додаткових 30 хв. Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 18 годин та перевіряли за допомогою НВЕРХ/МС. Велика частина вихідного матеріалу була спожита та бажаний продукт виявився як основний пік. Потім реакційну суміш відокремлюють від смоли та очищають на препаративній ТШХ (ДХМ/метанол, 7 до) для отримання 5,5 мг МаІ-ПЕГ4-триазол-ПЕГЗ-сульфонамід-РАВ-ерібуліну (ЕК-001237505).
ІН ЯМР (400 МГц, СО2Сі2) б м. д. 9,01 (с,1 НН), 8,15(дд, 1 Н, 2 -8,0,1,8 Гц), 7,87 (д, 1 Н, У -8,0
Гу), 7,75(с,1Н),7,28(д, 2Н,УУ-8,0 ГЦ), 7,14(д, 2 Н, У - 8,4 Гц), 6,68 (с, 2Н), 6,47 (ш. с, 1 Н), 5,44 (ш. с, 1 Н), 5,10-5,02 (м, З Н), 4,94 (с, 1 Н), 4,86 (с, 1 Н), 4,80 (с,1Н), 468 (дд, 1 Н,) - 4,4, 4,4 Гц), 4,59 (с,2 Н), 4,56 (дд, 1 Н,у-4,4,4,4 Гц), 4,51(дд, 2 Н, У - 5,2, 5,2, Гі), 4,34(д, 1 Н, У - 7,6, Гу), 4,30-4,23 (м, 2 Н), 4,19 -414(м,2Н), 408 (дд, 1 Н, У -4,0,4,0 Гц), 4,03 -3,98(м, 2 Н), 3,94 - 3,72 (м, 8 Н), 3,68 - 3,46 (м, 28 Н), 3,38 (с, 3 НН), 3,38 -3,33 (м, 3Н), 3,27 (д,1Н,У-3,2 Гу), 3,16 - 3,02 (м, 2 Н), 2,90 - 2,81 (м, 2 Н), 2,68 (дд, 1 Н, У - 16,2, 9,8 Гу), 2,54-2,40 (м, 7Н), 2,40-1,8 (м, 11 Н), 1,80-1,50 (м, З Н), 1,48-1,25 (м, З Н), 1,09 (д, З Н, У - 6,4 Гі). РХ-МС (МАН) -1630,0. 1. 15 Приготування МНЗ-ПЕГЗ-триазол-ПЕГЗ-сульфонамід-РАВ-ерібуліну (ЕК-001244623)
он о шк в й
КИ Воно ою тий ц п "А ій й
Ох рани Ж би лік-хімія, опосередкована смолою Си)
Ме. з Є ші дру о вик у і с І ; - дн щи І ЗАКО
То вв о но г Ї | й нн о и ОО то р о що Й р й син Жов»
З Му ни ВИМ, Га 5. о сн а ма о ок о ри о с а й у- о ьо
І00378| Суміш азиду (14 мг, 0,011 ммоль) та 2,5-диоксопіролідин-1-іл. 3-(2-(2-(проп-2-ін-1- ілокси)етокси)етокси)пропаноату (8,80 мг, 0,028 мкмоль) у трет-бутанолі (2 мл) та воді (1 мл) 5 дегазували протягом 45 хв. Потім додавали йодид міді на амберліст-21 (1,23 ммоль/г, 20 мг) та дегазували протягом додаткових 30 хв. Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 18 годин та перевіряли за допомогою НВЕРХ/МС. Велика частина вихідного матеріалу була спожита та бажаний продукт виявився як основний пік. Реакційну суміш потім відокремлювали від смоли шляхом екстракції з ДХМ (2 х 10 мл). Шар ДХМ промивали сольовим розчином (4 х 5 мл), сушили сульфатом натрію та концентрували до бажаного продукту (який застосовували на наступному етапі без додаткового очищення).
ІЇ00379| Неочищену кислоту (15,0 мг, 10,255 мкмоль) розчиняли в ТГФ (1,5 мл) та охолоджували до 0 "С. Потім додавали ДЦК (15,2 мг, 0,074 ммоль), а потім 1-гідроксипіролідин- 2,5-діон (8,3 мг, 0,072 ммоль). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 18 годин. НВЕРХ/МС показала, що велика частина вихідного матеріалу була спожита та бажаний продукт виявився як основний пік. Потім реакційну суміш концентрували та очищали на препаративній ТШХ (ДХМ/і-пропанол, 8 95) для отримання 2,5 мг МНЗ-ПЕГЗ-триазол-ПЕГЗ- сульфонамід-РАВ-ерібуліну (ЕК-001244623). "Н ЯМР (400 МГц, СО»2сСіг) б м. д. 9,00 (с, 1 Н), 8,12 (д, 1 Н,7У-84 Гу), в00(д, 1 Н,2-8,0 Гу), 7,72(с,1Н),7,26(д, 2Н,уУ-8,0 Гу), 7,12(д, 2 Н,У - 8,0 Гу), 5,37 (ш. с, 1 Н), 5,08-5,02 (м, З Н), 4,93 (с, 1 Н), 4,85 (с, 1 Н), 4,78 (с, 1 Н), 4,66-4,62 (м, 1
Н), 4,58-4,56 (м, 4 Н), 4,33 (д, 1 Н, У - 10,68 Гу), 4,29-4,21 (м, 2 Н), 4,10-3,96 (м, 4 Н), 3,93-3,76 (м, б Н), 3,74-3,44 (м, 27 Н), 3,36 (с, З Н), 3,34-3,24 (м, 2 Н), 3,15-3,06 (м, 1 Н), 2,97 (ш. с, 1 Н), 2,90- 2,78 (м, 8 Н), 2,74-2,08 (м, 13 Н), 2,05 -1,78 (м, 5 Н), 1,73-1,50 (м, 2 Н), 1,41-1,25(м, 4 Н), 1,07 (д,
З Н.У - 6,0 Гц). РХ-МС (Ме-Н) -1560,0. 1. 16 Приготування Ма!І-ПЕГ2-ерібуліну 003801 Ерібулін (5 мг, 7 ммоль) розчиняли в ДМФА (0,5 мл) та змішували з малеіїмідо-ПЕГ2-
МНЗ5 (5 мг, 14 мкмоль; Вгоадрпагт, Саї Мо. ВР-21680) та основою Хуніга (2,4 мкл, 14 мкмоль).
Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 2 годин. Потім реакційну суміш очищали за допомогою ВЕРХ (вода-градієнт ацетонітрилу 30-70 95, що містять 0,1 95
Зо мурашиної кислоти). Елюент збирали за масою та ліофілізували насухо. Кінцевий вихід склав 3,7 мг (3,8 мкмоль, 54 95). Прогнозована точна маса становила 968,5 Да. Виміряна маса становила 969,6 Да (МАНІ. 1. 17 Приготування Ма!І-ПЕГ4-ерібуліну
(00381) Ерібулін (5 мг, 7 ммоль) розчиняли в ДМФА (0,5 мл) та змішували з малеімідо-ПЕГ4-
МН5 (6,2 мг, 14 мкмоль; Вгоадрпагт, Саї Мо. ВР-20554) та основою Хуніга (2,4 мкл, 14 мкмоль).
Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 2 годин. Потім реакційну суміш очищали за допомогою ВЕРХ (вода-градієнт ацетонітрилу 30-70 95, що містять 0,1 95 мурашиної кислоти). Елюент збирали за масою та ліофілізували насухо. Кінцевий вихід склав 3,7 мг (3,5 мкмоль, 50 95). Прогнозована точна маса становила 1056,5 Да. Виміряна маса становила 1057,7 Да МАНІ. 1. 18 Приготування азидо-ПЕГ2-ерібуліну 003821 Ерібулін (5 мг, 7 ммоль) розчиняли в ДМФА (0,5 мл) та змішували з азидо-ПЕГ2-МН5О (4,2 мг, 14 мкмоль; Вгоадрпагт, Саї Мо. ВР-20524) та основою Хуніга (2,4 мкл, 14 мкмоль).
Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 2 годин. Потім реакційну суміш очищали за допомогою ВЕРХ (вода-градієнт ацетонітрилу 30-70 95, що містять 0,1 95 мурашиної кислоти). Елюент збирали за масою та ліофілізували насухо. Кінцевий вихід склав 2,2 мг (2,4 мкмоль, 34 95). Прогнозована точна маса становила 914,5 Да. Виміряна маса становила 915,7 Да (МАНІ. 1. 19 Приготування азидо-ПЕГА4-ерібуліну 003831 Ерібулін (5 мг, 7 ммоль) розчиняли в ДМФА (0,5 мл) та змішували з азидо-ПЕГ4-МН5О (5,5 мг, 14 мкмоль; Вгоадрпагт, Саї Мо. ВР-20518) та основою Хуніга (2,4 мкл, 14 мкмоль).
Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 2 годин. Потім реакційну суміш очищали за допомогою ВЕРХ (вода-градієнт ацетонітрилу 30-70 95, що містять 0,1 90 мурашиної кислоти). Елюент збирали за масою та ліофілізували насухо. Кінцевий вихід склав 3,0 мг (3,0 мкмоль, 43 95). Прогнозована точна маса становила 1002,5 Да. Виміряна маса становила 1003,7 Да МАНІ. 1. 20 Приготування азидо-ПЕГ4-МаІ-СП-РАВ-ерібуліну
І00384| Ерібулін (15 мг, 21 ммоль) розчиняли в ДМФА (1,5 мл) та добре перемішували. Потім додавали основу Хуніга (5,5 мкл, 32 мкмоль) та ФмокК-МСР-РМР (24 мг, 22 мкмоль, І емепа
Віорпагта, Саї Мо. МС1003). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ночі (16 годин). По завершенні реакції до реакційної суміші додавали диетиламін (20 мкл, 0,21 ммоль) та перемішували протягом 2 годин при кімнатній температурі для видалення захисної
Зо групи Фмок. Реакцію видалення захисних груп відстежували із застосуванням мас-спектрометра
Умаїег5 БОЮ. По завершенні реакції реакційну суміш переносили в попередньо зважену 1,5 мл мікроцентрифужну пробірку. Розчинник випарювали під вакуумом із застосуванням охолодженого концентратора Сепігмар з температурою, встановленою на 30 "С. Вихід становив 16 мг (14 мкмоль) неочищеного МН2-МаІ-Сй-рАВ-ерібуліну (точна маса 11346 Да, вихід 67 95). (00385) МН2-Ма!І-Сі-рАВ-ерібулін (16 мг, 14,1 мкмоль) розчиняли в ДМФА (1,5 мл). Потім додавали основу Хуніга (7,2 мкл, 41 мкмоль) та азидо-ПЕГ4-МНО (11 мг, 28,2 мкмоль).
Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом З годин. Потім реакційну суміш очищали за допомогою ВЕРХ (вода-градієнт ацетонітрилу 48-72 95, що містять 0,1 95 мурашиної кислоти). Елюент збирали при 1409 м/з та ліофілізували з отриманням азидо-ПЕГа4-
МаІ-СпП-РАВ-ерібуліну (точна маса 1407,7 Да). Отримували 13 мг (9,2 мкмоль) азидо-ПЕГ4-Маї!-
СП-РАВ-ерібуліну (вихід на етапі 65 95, 44 95 в цілому).
Приклад 4 1. Матеріали та способи (00386) Усі застосовані реагенти були отримані від комерційних постачальників, високого ступеня чистоти або вище, якщо не вказано інше. 111 Антитіла
І00387| МОВАБ-003 (гуманізоване антитіло до рецептора фолієвої кислоти альфа людини, 25 мг/мл) та МОКАБ-009 (химерне антитіло миші/людини до мезотеліну людини, 25 мг/мл), що застосовуються в наступних дослідженнях, були з партії ЯМВО2962-19 та партії ЖОЗО0А14, відповідно. Трастузумаб був придбаний комерційно (Сііпдеп) та був з партії 2503345.
І00388| Химерні антитіла кролика/людини та гуманізовані антитіла до мезотеліну людини, що мають неспарений цистеїн в І Ссу580 (Таблиця 1), транзієнтно експресували в клітинах 293 або як стабільно вибрані пули. Кондиціоноване середовище очищали та децистеїнували, як описано в розділі 1. 4. 1. 2.1. 1.2 Цитотоксини
І00389| Сполуки ерібуліну, що кон'югуються, синтезували, як описано в Прикладі З (таблиця 46). Вихідний розчин (10 мМ) готували в ДМСО та зберігали при -20 "С до застосування. 1.3 Лінії пухлинних клітин 00390) Лінії пухлинних клітин людини, що застосовуються в аналізах АОС МОКАБ-003, бо МОРАБ-009 та Трастузумабу, приготованих зі сполуками малеїімідо/сукцініміду. (О5ц)/азидо-
лінкер-ерібуліну (таблиця 46), включають ІСКОМІ1 (карциному яєчника людини, ЕКпПі, М5І Мпеод),
МСІ-Н2110 (недрібноклітинну карциному легені людини, ЕКітей, М5ІМтеа), А431 (ЕВРпед,
М5І Мпед), МСІ-М87-ішс (карциному шлунку людини, ЕКіо, М5іМтеа, Пег2пі), МОССЗ (аденокарциному шлунку людини, ЕКпед, М5ІМпед, Ппеггпед), 4К75 (протокову карциному молочної залози людини, ЕКпед, М5І Мпед, пег2тед) та ВТ-474 (протокову карциному молочної залози людини, ЕКпед, М5І Мпед, ПегагпПпі). Лінії пухлинних клітин людини, що застосовуються в аналізах химерних антитіл кролика/людини та гуманізованих антитіл до І Ссу5з80 мезотеліну людини, кон'югованих з МА -ПЕГ2-МаІ-СП-РАВ-ерібуліном (ЕК-001159569), представляли собою
АЗ (А431, стабільно трансфіковану мезотеліном людини, М5І- Мпї), ОМСАКЗ (карциному яєчника людини, М5ІМАї), НЕС-251 (ендометроїд людини, М5іМтеа), Н2г26 (плоскоклітинну мезотеліому легенів людини, М5І Міо) та вихідну А431 (М5І Мпед). Всі вживані клітинні лінії були отримані безпосередньо з Американської колекції типових культур (АТСС), за винятком ІСКОМІ1 (отримано з дозволу від Національного інституту раку) та АЗ (створену в МогрпоїекК з вихідної
А431). 1.4 Кон'югація антитіла-лікарського засобу 1.4.1 Кон'югація на основі цистеїну із застосуванням малеімідів 1.4.1.1 Кон'югація міжланцюгових дисульфідів 1.4.1.1.1 Часткове відновлення
І00391| Для МОКАБ-003 та МОКАБ-009 замінювали буфер на фосфатно-сольовий буфер
Дульбекко (ОРВ5) та потім концентрували до 20 мг/мл, застосовуючи центрифужну концентрацію. Додавали рівний об'єм 270 мкМ трис(2-карбоксиетил)фосфіну (ТСЕР) в 1Х ОРВ5 з 2 ММ ЕДТК та відновлення проводили шляхом обережного перемішування протягом 80 хв. при кімнатній температурі. Аналогічним чином частково відновлювали трастузумаб, за винятком того, що відновлення проводили шляхом обережного перемішування протягом 40 хв при кімнатній температурі. 1.4.1.1.2 Кон'югація
І00392| Сполуку малеїімідо-лінкер-ерібулін (в ДМСО) кон'югували з частково відновленими антитілами при молярному співвідношенні 1:6 (мАт:сполука). Сполуку додавали до 50 905 пропіленгліколю в ОРВ5З та добре перемішували. Потім додавали рівний об'єм частково
Зо відновленого антитіла та обережно перемішували (кінцева концентрація пропіленгліколю 25 95).
Кон'югація тривала від 3,5 до 4 годин при кімнатній температурі. 1.4.1.2 Кон'югація з І Ссуз80 1.4.1.2.1 Децистеїнування 00393) Застосовуючи АКТА Ехріогег (ЗЕ Неайпсаге), колонку з білюом А (СЕ Неайсаге) врівноважували 10-ма обсягами колонки (СМ - соїштп моЇїште) 20 мМ фосфату натрію, 10 мМ
ЕДТК, рН 7,2 (буфер для врівноваження). Потім завантажували кондиціоноване середовище, а потім промивали матеріал, що не зв'язався, 10-ма СМ буферу для врівноваження. Колонку промивали 16-ма СМ 20 мМ фосфату натрію, 10 мМ ЕДТК, 5 мМ цистеїну, рН 7,2, при 0,5 мл/хв. протягом 16 годин для видалення кепуючої групи. Потім колонку промивали б0о-ма СМ 20 мМ
Трис, рН 7,5, при 0,5 мл/хв протягом 60 годин. Децистеїноване антитіло елюювали із застосуванням 5-ти СМ 0,1 М гліцину, рН 2,9 та негайно нейтралізували, застосовуючи 5 95 об'єму 2 М Трис, рН 9,0. Фракції, що містять антитіла, об'єднували та діалізували в ОРВ5 із застосуванням 20К МУУСО 5ііае-А-І угег (Тнегто РівНег). 1.4.1.2.2 Кон'югація
І00394| Децистеїноване антитіло доводили до 5,0 мг/мл в ОРВ5, 1 мМ ЕДТК та 50 95 пропіленгліколь готували в ОРВ5, 1 мМ ЕДТК. МАС-ПЕГ2-МаІ-Сп-РАВ-ерібулін (ЕК-001159569) (12 мМ в ДМСО) додавали до 50 95 пропіленгліколю та ретельно перемішували. Потім додавали рівний об'єм децистеїнованого антитіла в молярному співвідношенні 1:4 (мАт:сполука) та обережно перемішували. Кон'югація тривала від 3,5 до 4 годин при кімнатній температурі. 1.4.2 Кон'югація на основі аміну із застосуванням сукцинімідів 1.4.2.1 Кон'югація 00395) Антитіло (МОКАБ-003 або МОКАБ-009, не відновлене) доводили до 10,0 мг/мл вв 0,1
М бікарбонаті натрію, рН 8,3. 50 95 пропіленгліколь готували в 0,1 М бікарбонаті натрію, рн 8,3.
Сукцинімід (О5и)-лінкер-ерібулін (в ДМСО) додавали до 50 95 пропіленгліколю та ретельно перемішували. Потім додавали рівний об'єм антитіла в молярному співвідношенні 1:4 (мАт:ісполука) та ретельно перемішували. Кон'югація тривала 1 годину при кімнатній температурі. Реакцію кон'югації зупиняли додаванням 1:20 об'єму 1 М Трису, рН 8,0, та АОС очищали, як описано в розділі 1. 4. 4. 1.4.3 Двостадійна кон'югація на основі аміну із застосуванням хімії азид-алкінового бо циклоприєднання, промотованого напругою циклу (ЗРААС)
1.4.3.1 Дериватизація дибензилциклооктину (ДБЦО) (00396) Антитіло (МОКАБ-003 або МОКАБ-009, не відновлене) доводили до 10,0 мг/мл вв 0,1
М бікарбонаті натрію, рН 8,3. 50 95 пропіленгліколь готували в 0,1 М бікарбонаті натрію, рн 8,3.
МН5О-ПЕГ4-ДБЦО (СіїскК Спетівігу Тооі5, 50 мМ в ДМСО) додавали до 50 95 пропіленгліколю та ретельно перемішували. Потім додавали рівний об'єм антитіла в молярному співвідношенні 1:4 (мАт:ісполука) та ретельно перемішували. Кон'югація тривала 1 годину при кімнатній температурі. МНЗ-ПЕГ4-ДБЦО, який не прореагував, видаляли, як описано в розділі 1. 4. 4. 1.4.3.2 Кон'югація
І00397| 5095 пропіленгліколь готували в ОРВ5. Азидо-лінкер-ерібулін додавали до 50 95 пропіленгліколю та ретельно перемішували. Потім в суміш додавали рівний об'єм ДБЦО- модифікованого МОКАБ-003 або МОКАБ-009 в молярному співвідношенні 1:4 (мАт:сполука) та ретельно перемішували. ЗРААС кон'югацію залишали на ніч при кімнатній температурі. МН5З-
ПЕГ4-ДБЦО, який не прореагував, видаляли, як описано в розділі 1. 4. 4. 1.4.4 Очистка 00398) Кон'юговане антитіло очищали за допомогою колонки(ок) для знесолення НіТгар (СЕ
Неанйсаге). Хроматографію проводили на швидкій білковій рідинній хроматографії (ШБРХ) (СЕ
Неайрсаге), застосовуючи їХ ОРВ5 у якості рухомого буферу, щоб видалити малеїмідо/ОЗц/азидо-лінкер-ерібулін та пропіленгліколь. Кінцевий вміст білка визначали за допомогою аналізу БХК, як описано в розділі 1. 3. 1 Прикладу 1. 1.5 Біофізична характеристика 1.5.1 Аналіз ексклюзійної ВЕРХ (00399) Агрегацію АОС аналізували за допомогою ексклюзійної високоефективної рідинної хроматографії (ексклюзійної ВЕРХ) із застосуванням ВЕРХ Адіїепі 1260. АОС розводили до 1 мг/мл в ОРВ5. Потім АОС (10 мкл) вводили в захисну передколонку Адмапсейа 5ЕС ЗО0А (4,6 мм х 3,5 см, розмір пор 2,7 мкм, Адіїепі!), а потім в колонку Адмапсеавіо ЗО0А (4,6 мм х 30 см, розмір пор 2,7 мкм). АОС елюювали з колонки 0,1 М фосфатом натрію, що містить 0,15 М Масі та 5 95
ІПС, рН 7,4 при швидкості потоку 0,25 мл/хв. протягом 28 хв. Всі дані були проаналізовані за допомогою програмного забезпечення Адііепі Спетеїацоп. Відсоток агрегації розраховувався як
ІРАагрегату/РАзагальний)"100, де РА - інтегрована площа піку.
Зо 1.5.2 Аналіз НІС-ВЕРХ співвідношення лікарського засобу-до-антитіла (БАК) (00400) БАК аналізували із застосуванням ВЕРХ з гідрофобною взаємодією (НІС-ВЕРХ).
Зразки вводили в колонку Т5Кдекш ВиїуІ-МР5, 4,6 мм ІО х 3,5 см, непористий розмір 2,5 мкм (Тозоп Віозсіепсе), та елюювали з З-хвилинним врівноваженням у 100 95 рухомої фази А, 15- хвилинним градієнтом (0-100 Фо В), 5-хвилинною витримкою в 100 95 В, 1-хвилинною заміною на 100 906 А та 5-хвилинним повторним врівноваженням в 100 9о рухомої фази А при 0,7 мл/хв.
Рухома фаза А становила 25 мМ фосфату натрію, 1,5 М сульфату амонію, рН 7,0. Рухома фаза
В становила 25 мМ фосфату натрію, 25 95 ізопропанолу, рН 7,0. Детекцію проводили при 280 нм (контроль 320 нм). ПАК визначали за формулою:
ІАОС. її ж 2(АС.2г) - З(АОСз) ко. п(АОС ХАОС заг) де АОС являє собою площу під кривою для піку антитіла, що відповідає АОС, кон'югованому з одним цитотоксином, АОС. являє собою площу під кривою для піку антитіла, що відповідає АОС, кон'югованому з двома цитотоксинами, і так далі. ХАОСзаг являє собою об'єднану площу під кривою для всіх піків. 1.5.3 РХ-МС аналіз ОАЄ (00401) БАК також аналізували із застосуванням способу РХ-МС з ВЕРХ Умаїег5 АїШапсе з
ЗОБ/РОА детекцією. Зразки вводили в колонку Ргоїеотіх КР-1000 (5 мкМ, 1000А, 4,6 мм х 15 см, Зерах) при 65"С та елюювали з З-хвилинним врівноваженням у 25 95 В, 27-хвилинним лінійним градієнтом 25 95 - 55 95 В, 5-хвилинною витримкою в 55 95 В, 1-хвилинною заміною на 90 956 В, 5-хвилинною витримкою у 90 95 В, 1-хвилинною заміною на 25 95 В та 5-хвилинним повторним врівноваженням у 25 95 В. Рухома фаза А являла собою 0,1 95 ТФО в воді та рухома фаза В являла собою 0,1 95 ТФО в ацетонітрилі. Елюат потім розділяли (10:1) в детектори РОА та 500. Детектор 5ОО був налаштований у режимі позитивних іонів (ЕЗ розійме), капілярна напруга 3,2 кВ, напруга конусу 40 В, екстрактор З В та радіочастотна лінза 0,2 В, температура джерела 150 "С та температура десольватації 250 "С. Дані мас були отримані при 200-2000 м/з протягом 40 хвилин, безперервному режимі, часі сканування 1 секунда. Дані аналізували та деконволюціонували в автономному режимі із застосуванням Маззіупх та МахЕпи. ВАК розраховували, застосовуючи формулу: 2ЦАШсісяї - (Асі сг) 4 З(АОсСі сзз) в... П(АОсі сп) Хі сзагіз 2ЦАОсСнеяї - 2(Аснезг) 4 З(АОсСнезз) ж... п(АОсСнозп)/хАОсСнезагі бо де АШсСіс їз 1: являє собою площу під кривою піку легкого ланцюга, кон'югованого з одним цитотоксином, АШсіс з. 2 являє собою площу під кривою піку легкого ланцюга, кон'югованого з двома цитотоксинами, і так далі. АОСно являє собою площу під кривою відповідних важких ланцюгів та ХАИОсСісзаг і ХАОСнсосзаг являють собою об'єднану площу під кривою усіх некон'югованих та кон'югованих легких ланцюгів та важких ланцюгів, відповідно. 1.5.4 Аналіз НВЕРХ/ЕРІ-МС БАК АБС І Ссуз80 (00402| АОС (1 мг/мл) відновлювали додаванням ДТТ до кінцевої концентрації 20 мМ з подальшою інкубацією при 60 "С протягом З хв. Потім зразки аналізували із застосуванням надвисокоефективної рідинної хроматографії Умаїег5 Асдийу та мас-спектрометра О-Тої Ргетівг.
Зразки (0,5-2 мкг кожного) вводили у мікроколонку для знесолення Маз5Ргер при 65 с, елюювали з колонки з 5-хвилинним врівноваженням у 95 9о рухомої фази А, 10-хвилинним градієнтом (5-90 95 В) та 10-хвилинним повторним врівноваженням у 95 956 рухомої фази А при 0,05 мл/хв. Рухома фаза А становила 0,1 95 мурашиної кислоти у воді. Рухома фаза В становила 0,1 96 мурашиної кислоти в ацетонітрилі. Мас-спектрометр О-ТОої працював у М- режимі визначення позитивних іонів з детектуванням у діапазоні 500-4000 м/з. Параметри джерела були наступними: капілярна напруга, 2,25 кВ (інтактне антитіло)-2,50 кВ (відновлене антитіло); напруга пробовідбірного конусу, 65,0 В (інтактне антитіло) або 50,0 В (відновлене антитіло); температура джерела, 105"С; температура десольватації, 250 "С; потік газу десольватації, 550 л/год. Пік білка легкого ланцюга деконволюціонували із застосуванням функції Маз5зіупх МахЕпі 1. Відносні інтенсивності мас некон'югованого та одноразово- кон'югованого легкого ланцюга застосовували для розрахунку загального ПАК за формулою: гі, Си/хІ Сзагі де Си являє собою масову інтенсивність легкого ланцюга, кон'югованого з одним цитотоксином та Хі Сзаг являє собою об'єднані інтенсивності некон'югованих та кон'югованих легких ланцюгів. 1.6 Характеристика зв'язування 1.6.1 ВІАсоге 00403) Концентрації антитіл доводили до 2 мкг/мл в буфері НВЗ-Р- (СЕ Неайнсагє).
Немодифіковані антитіла або АОС вводили через сенсор для антитіл до Їдо людини на ВіАсоге
Т100 (СЕ Неайнсагє) протягом 1 хв. при швидкості потоку 10 мкл/хв. Для реєстрації асоціації
Зо антигенів із захопленим антитілом вводили серії зростаючих концентрацій антигену протягом 300 с при швидкості потоку 30 мкл/хв. Для антитіл до мезотеліну діапазон концентрацій становив 10 нМ - 0,041 нМ. Для АС МОКАБ-003 та МОКАБ-009 діапазон концентрацій становив 100 нМ - 0,41 нМ. Дисоціацію антигену перевіряли протягом 30 хв. при тій же швидкості потоку. Поверхню сенсору відновлювали за допомогою введення З М МосСі2 протягом 35 2 х 30 с при швидкості потоку 30 мкл/хв. Сенсограми аналізували за допомогою програмного забезпечення для оцінки Віасоге Т100, застосовуючи модель зв'язування Ленгмюра 1:1. 1.6.2 ІФА - Рецептор фолієвої кислоти альфа (00404) Рекомбінантний рецептор фолієвої кислоти альфа людини розводили до 115 нг/мл в буфері для покриття (50 мМ карбонат-бікарбонатному буфері, рН 9,6) та наносили в чорні 96- 40 лункові планшети Махізогр (Тпегто, Саї Мо. 43711, 100 мкл/лунку) при 4 "С, на ніч. Розчин для покриття викидали та планшети промивали три рази, застосовуючи 1Х ФСБ з 0,05 95 буфером
Твін-20 (ФСБ-Твін). Планшети блокували в 300 мкл блокуючого буферу (1 95 БСА в ФСоБ-Твін) при кімнатній температурі протягом 2 годин на орбітальному шейкері. АОС МОКАБ-003 та
МОРАБ-003 розводили до 1000 нг/мл в блокуючому буфері, потім 2-кратно серійно розводили 45 для отримання діапазону від 1000 нг/мл до 0,98 нг/мл. Блокуючий буфер викидали та в планшети додавали 100 мкл/лунку розведеного антитіла. Планшети інкубували при кімнатній температурі протягом 2 годин на орбітальному шейкері. Розчин антитіла викидали та планшети промивали три рази, застосовуючи ФСОБ-Твін. До планшетів додавали 100 мкл/лунку розчину антитіла кози до людського дос (На )-НКР (розведення 1:10000 в блокуючому буфері) та 50 планшети інкубували при кімнатній температурі протягом 1 години на орбітальному шейкері.
Розчин вторинних антитіл викидали та планшети промивали три рази, застосовуючи ФОСБ-Твін.
До планшетів додавали 100 мкл/лунку робочого розчину флуорогенного субстрату пероксидази
ОпгцапіаВіи (Тпегто, Саї Мо. 15169) та планшети інкубували при кімнатній температурі протягом хв. Флуоресценцію зчитували при збуджені 325 нм/емісії 420 нм, застосовуючи ЗресігаМах
М5 (МоІесшаг Оемісе5). Дані аналізували із застосуванням програмного забезпечення зЗойМахРр го 5. 4. 2 із 4-параметричною підгонкою. 1.6.3 ІФА - Мезотелін 00405) Рекомбінантний мезотелін людини розводили до 1 мкг/мл в буфері для покриття (50
ММ карбонат-бікарбонатному буфері, рН 9,6) та наносили в чорні 96-лункові планшети Махізогр бо (Тпепто, Саї Мо. 43711, 100 мкл/лунку) при 4 "С, на ніч. Розчин для покриття викидали та планшети промивали три рази, застосовуючи 1Х ФСБ з 0,05 95 буфером Твін-20 (ФСоБ-Твін).
Планшети блокували в 300 мкл блокуючого буферу (1 95 БСА в ФСБ-Твін) при кімнатній температурі протягом 2 годин на орбітальному шейкері АБС МОКАБ-009 та МОКАБ-009 розводили до 1000 нг/мл в блокуючому буфері, потім 2,5-кратно серійно розводили для отримання діапазону від 1000 нг/мл до 0,105 нг/мл. Блокуючий буфер викидали та в планшети додавали 100 мкл/лунку розведеного антитіла. Планшети інкубували при кімнатній температурі протягом 2 годин на орбітальному шейкері. Розчин антитіла викидали та планшети промивали три рази, застосовуючи ФОСБ-Твін. До планшетів додавали 100 мкл/лунку розчину антитіла кози до людського Ідс (Не )-НКР (розведення 1:10000 в блокуючому буфері) та планшети інкубували при кімнатній температурі протягом 1 години на орбітальному шейкері. Розчин вторинних антитіл викидали та планшети промивали три рази, застосовуючи ФСОСБ-Твін. До планшетів додавали 100 мкл/лунку робочого розчину флуорогенного субстрату пероксидази
ОцапіавВіи (Тпегто, Саї Мо. 15169) та планшети інкубували при кімнатній температурі протягом 30 хв. Флуоресценцію зчитували при збуджені 325 нм/емісії 420 нм, застосовуючи ЗресігаМах
М5 (МоїІесшаг Оемісе5). Дані аналізували із застосуванням програмного забезпечення зЗойМахРр го 5. 4. 2 із 4-параметричною підгонкою. 1.7 Аналіз цитотоксичності 1.7.1 Аналіз фарбування кристалічним фіолетовим 00406) Клітини ІЖАОМІ (ЕВ, М5І Мпед), МСІ-Н2110 (ЕВтеєд, М5І Мтеєа) та А431 (ЕВпед,
М5І Мпед) субкультивували та висівали при 5000 клітин/лунку в готове живильне середовище в 9б-лункових планшетах для культивування тканин, інкубували при 37 "С, 5 95 СО» протягом ночі (16 годин). Реагенти для випробування серійно розводили 1:3 в планшетах для розведення з 2- мілілітровими глибокими лунками, починаючи з 200 нМ (всього 10 розведень). Розведені зразки (100 мкл) додавали до клітинних планшетів (при початковій концентрації зразків для випробування 100 нМ). Планшети інкубували при 37 "С, 5 95 СО» протягом додаткових 5 днів.
Потім середовище викидали. Планшети промивали один раз 200 мкл ОРВ5, фарбували 50 мкл 0,2 95 розчину кристалічного фіолетового при кімнатній температурі протягом 15 хв. та потім ретельно промивали водою з-під крану. Планшети сушили на повітрі, а кристалічний фіолетовий розчиняли з 200 мкл 1 96 розчину ДСН. Планшети зчитували при 570 нм. Дані
Зо аналізували із застосуванням СгарпРаай Ргізт 6. 2. Результати 2.1 Біофізична характеристика АОС МОКАБ-003, МОВАБ-009 та трастузумабу 00407! АОС МОВАБ-003 (гуманізованого антитіла до рецептора фолієвої кислоти альфа людини), МОНАБ-009 (химерного антитіла миші/людини до мезотеліну людини) та трастузумабу (гуманізованого антитіла до Нег2) були приготовлені із застосуванням сполук ерібуліну, що кон'югуються, перерахованих в таблиці 46, відповідно до одного з трьох способів кон'югації, включаючи: (1) часткове відновлення міжланцюгових дисульфідів антитіла із застосуванням відновлюючого агенту ТСЕР, що не містить тіол, з подальшою кон'югацією із застосуванням тіол-реактивних конструкцій малеїімідо-спейсер-лінкер-ерібуліну; (2) пряму кон'югацію із залишками лізину антитіла із застосуванням конструкцій сукцинімід (О51и)-спейсер-лінкер- ерібуліну; та (3) кон'югацію із залишками лізину антитіла із застосуванням двостадійного підходу, в результаті чого спочатку кон'югували О5!1и-ПЕГ4-дибензилциклооктин із залишками лізину, потім проводили ортогональну кон'югацію конструкцій азидо-спейсер-лінкер-ерібуліну із застосуванням 5РААО.
Ї00408| Після очищення рівні агрегації для всіх АЮОС МОРАБ-003, МОВАБ-009 та трастузумабу визначали за допомогою ексклюзійної ВЕРХ та співвідношення лікарського засобу-до-антитіла (ВАВ) аналізували із застосуванням обернено-фазової РХ-МС та/або НІС-
ВЕРХ. САВ для всіх АОС, створених на основі малеїіміду, аналізували із застосуванням як обернено-фазової РХ-МС, так і НІС-ВЕРХ. Між цими двома способами зазвичай спостерігалася різниця значень САК менша, ніж 0,3. Навпаки, ВАК для всіх АОС, отриманих шляхом кон'югації через залишки лізину, аналізували тільки за допомогою РХ-МС, оскільки високий ступінь гетерогенності цих АОС перешкоджає розділенню окремих видів ФАК шляхом НІС-ВЕРХ. Для
Ар мМоОвАБ-003 та МОМКАБ-009 зв'язування з цільовим антигеном також аналізували за допомогою ІФА. Результати аналізів агрегації та ОАЕ наведені в таблиці 47 поруч із відповідним
Ар.
Таблиця 47 Зв'язуван-ня з
Біофізичний аналіз ЛОС МОКАБ-003, Аналіз ОАК Аналіз ексклюзійної ВЕРХ антигеном
МОНВАБ-009 та трастузумабу дн мя) пей роз. ОАВ | ОАВ 95 В дек ІФА, ЕК дос пло н'ю- сер щеп- Мо) ВЕРХ) з Атр. й Фраг. во; НГ/ НМ гації лення мл
СДН СВ СНО СС НИ ВАННЯ НЕ УЗА НОСНЯ НС НИ НАС ЗНО
ДНИНИ СНО сснІ НИНІ НИ НІС НЕСЗН НІСН НЕ:
АВС СНАСТІ ННІ ШИНА ПЕС НСС ВИС ВИСНО
МОВА
ЬООз-
ЕВЯ15 | МО увісі- 9569. ВАБ- пег2 | са зв5БВ | 391 | 312 | 9688 22,60 015 (Партія ) 003
МВ307 3-88І.
МОВА ьоОо-
ЕВЯЯ5 | МО увісі- 9569. ВАБ- пег2 | са з63 | 393 | 323 | 96,77 43,70 0,29 (Партія ) 009
МВ307 3-88)
МОВА
ЬООз-
ЕВЯЯ5 | МО увісі- 9569(П 0 ВАБ- пег2 | рАв дво | 48 | 321 | 9679 18,20 02 артія 003
МВ314 2-62А
МОВА ьоОо-
ЕВЯ15 | МО увісі- 9569(П 0 ВАБ- пег2 | са 468 | 457 99,10 3310 0,22 артія 009
МВ314 2-620 трастуз умаб- трас маї-сй- утво | тузу пег2 | са зло | зиї | 426 | 9874 н/з н/з маб 9569
МОВА І Мо 5003 | ВА пЕгв | Мао | 231 | 235 4863 | 8137 24,50 014
ЕВІ2А - РАВ ' ' ' ' ' ' 2287. | 003
МОВА І Мо 5009 | ВА пЕгв | Мас | 443 | 200) 441,24 | 8876 58,60 0,39
ЕВІ2А - РАВ ' ' ' ' ' ' 2287. | 009
МОВА І Мо роя | ВАБ- пенти | Май) зеБ | зве | зе | 96,05 15,30 бло 5взВ | 003 й
МОВА І Мо рота | ВАБ- пекти | Ма | зве |) 4ло 45 |) 955 65,6О 0,44 5538 009 й
МОКА аїа- роо3- | МО аіа- ратоа | ВАБ- пЕго | За зво | заз | 309 | 961 18,30 02 1679... | 003 РАВ
МОКА аїа- робе- | МО аіа-
Рдтоа | ВАБ- пЕго | аг 327 | 394 | 439 | 951 41,40 0,28 1679. | 009 оАВ хг ратоа | ВАБ- пЕго | За 302 | 323 | 444 | 9556 8,92 їв90| 003 рАВ-
Таблиця 47 Зв'язуван-ня з
Біофізичний аналіз ЛОС МОКАБ-003, Аналіз ОАК Аналіз ексклюзійної ВЕРХ антигеном
МОНВАБ-009 та трастузумабу дн- | Хмія | Хімія | рад ) од 9; В дек ІФА, ЕК оС ти- ді спей- розу (РХ- (НІС- | 956 Агр. | Моно- Ф ? " нг/ Бо; тіло | Ню| сер щеп МС) | ВЕРХ) мер раг. во; НГ. НМ гації лення мл аїа- аїа- азп-
РАВ аїа- аїа-
МОВА авп- росе- МО рАВ-
ЕВІ12З3 НКАБ- ПЕГ2 аіа- 2,36 3,17 6,22 93,78 58,70 0,39 009 1690 аїа- азп- рАВ дисул
МОВА ПЕГ4- | ьфіди 5ООЗ- пд триазо | л- б52 | 1 | 1373 | 8627 29,80 0,20
ЕВ123 003 Й п- димет ' ' ' ' ' ' 7504 ПЕГЗ ил-
РАВ дисул
МОВА ПЕГ4- | ьфіди 6О09- ще триазо | л- 072 | лоз | 978 | 90,22 55,90 0,37
ЕВ123 009 Й п- димет ' ' ' ' ' ' 7504 ПЕГЗ ил-
РАВ
ШОК мот (ною оте
ЕВІТ2З КАБ- п- онамі 1,85 3,88 5,72 94,28 18,30 012 7505. | 003 пЕГЗ | Я шок юн | їнне ле
ЕВІ12З3 КАБ- п- онамі 2,33 3,91 5,44 94,56 61,00 0,41 7505. | 009 пЕГЗ | А
МОВА «що рооз- І) не
ПЕГ2- НКАБ- ПЕГ2 розще 4,15 4,49 3,97 96,03 0,05 ерібулі | 003 плюєт
Н ься
МОВА «що рооо- І) не
ПЕГ2- ВАБ- ПЕГ2 розще 4,55 4,30 1,15 97,11 1,74 8,84 ерібулі | 009 плюєт
Н ься
МОВА «що рооз- І) не
ПЕГА- ВАБ- ПЕГА4А розще 4,70 4,79 9,84 89,76 9,91 ерібулі | 003 плюєт
Н ься
МОВА «що рооо- І) не
ПЕГА- ВАБ- ПЕГА4А розще 4,48 4,57 1,03 97,13 1,84 11,60 0,08 ерібулі | 009 плюєт
Н ься
ОЗ. МО сукц. маї-сй-
ЕВІ2З ВАБ- | инімі | ПЕГ2 АВ 0,72 3,65 96,35 17,00 0,11 003 | д р 6940 вою МО сУукц. маї-сй-
ЕВІ12З3 ВАБ- | инімі | ПЕГ2 АВ 0,89 2,75 97,25 66,30 0,44 009 |д р 6940
ОЗ. МО сукц. маї-сй-
ЕВІ24 ВАБ- | инімі | ПЕГО АВ 2,85 97,15 14,40 0,10 003 |д р 2288 вою МО сукц маї-сй-
ВАБ- | инімі | ПЕГО 0,21 1,69 98,31 15,30 010
ЕН124 009 д рАВ 2288
Таблиця 47 , Й
Біофізичний аналіз ЛОС МОКАБ-003, Аналіз ОАК Аналіз ексклюзійної ВЕРХ
МОНВАБ-009 та трастузумабу дн. | ко. | спей. | роз | САА | АВ 9; В дек ІФА, ЕК оС ти- пи Й й (РХ- (НІС- | 956 Агр. | Моно- ? " Бо; тіло таці сер щеп | МС) | ВЕРХ) мер | фраг. во, нг НМ
МОВА
І) сукц но роб я | ВАБ- | инімі | Пенти | МАЙ 077 зиз | 96,87 13,00
З 003 л рАВ 6941 д
МОВА
Й І) сукц но рдтра | ВАБ- инімі | ленти | Мао | оз 304 96,96 44,60 0,30 009 л р 6941 д
МОВА ПЕГЗ-
Й І) сукц но рою | ВАБ- | инімі | триазо сАВ. КІ зе» | 96,08 Щ 6,22 0,04 зо 05 |до | пегз
МОВА ПЕГЗ-
Й І) сукц но ей и ВАБ- | инімі | Триазо сАВ. КІ 197 | 9803 Щ 46,70 0,31 3700 | 009 |д ПЕГЗ
МОВА аїа- рооз- МО | сукц аіа-
ВАБ- | инімі | ПЕГ2 0,37 3,46 96,54 11,50 0,08
ЕНІ23 003 авп- 1691 д РАВ
МОВА аїа- робе- | МО | сукц аіа-
ВАБ- | инімі | ПЕГ2 0,29 2,45 97,55 43,30 0,29
ЕНІ23 009 авп- 1691 д РАВ дисул ьо03. АБ. німі тривзо п 0,24 10,87 | 8913 14,30 оо
ЕК124 003 л- димет ' ' ' ' ' 4129 д ПЕГЗ | ил-
РАВ дисул ьо. АБ. німі три т 047 12,79. | 87,21 57,70 0,38
ЕК124 009 д л- димет ' ' ' ' ' 4129 ПЕГЗ ил-
РАВ нок мо | сни | 16 | сьо
ЕВІ24 ВАБ- | инімі п- онамі 0,55 5,21 94,79 4,54 0,03 4823 | 003 | д пЕГЗ | А
Боб. МО | суки | триазо | сульф
ЕВІ24 ВАБ- | инімі п- онамі 1,14 100 39,00 0,26 4во3 | 009 | д пЕГЗ | Я дибен дисул
МОВА зилци - рооз- І) Ммімі клоокт ьфіди
ДБЦО- ВАБ- ен- 2,19 41 95,9 24,10 0,16
ЕНІ23 003 ді триазо димет 7508 клік п- ил- пЕгз | РАВ дибен дисул
МОВА сукц зилци ьфіди рооо- І) инімі | КЛоокт | до
ДБЦО- | НБАБ- ен- 2,33 100 53,80 0,36
ЕНІ23 009 ді триазо димет 7508 клік п- ил- пЕгз | РАВ дибен
МОВА зилци рооз- І) мм клООКт сульф
ДБЦО- | ВАБ- / ен- онамі 1,82 3,49 96,51 15,00 0,10
ЕНІТ1З3 003 ді триазо | д 8856 КЛІК д-
ПЕГЗ
МОВА І) сукц | дибен | сульф рооо- ВАБ- | инімі | зилци онамі 1,59 100 44,70 0,30
ДБЦО- | 009 ді клоокт | д
Таблиця 47 Зв'язуван-ня з
Біофізичний аналіз ЛОС МОКАБ-003, Аналіз ОАК Аналіз ексклюзійної ВЕРХ антигеном
МОНКАрБ-009 та трастузумабу дня) опей | | ВАВ | АВ 96 В дек ІФА, ЕК оС ти- ; р (РХ- (НІС- | 956 Агр. | Моно- ? " Бо; тіло | ню | сер | щеп | мс) | ВЕРХ) мер | фраг. во, НГ/ НМ гації лення мл
ЕНІТ1З3 ен- 8856 триазо л-
ПЕГЗ
МОВА дибен рооз- сук зилци
ДБЦО- | МО УК | клоокт й инімі маїІ-сі-
ПЕГА ВАБ- | у ен- АВ 3,09 2,87 97,13 16,00 0,11
МОР 003 клік триазо р ерібулі л-
Н ПЕГА
МОВА дибен рооо- зилци
ПЕГА ВАБ- | у ен- АВ 2,91 022 99,78 33,70 0,22
МОР 009 клік триазо р ерібулі л-
Н ПЕГА
МОВА дибен рооз- сукц зилци |. що
ДБЦО- Пе) инімі | Клоокт | не
ПЕГ? ВАБ- / ен- розще 3,43 3,88 96,12 19,10 0,13 я: | 003 В. триазо | плюєт ерібулі клік п- ься й ПЕГ2
МОВА дибен
Й зилци з Що
ДБЦО- Пе) Ммімі клоокт | не
ПЕГО- ВАБ- / ен- розще 3,07 115 98,85 23,30 0,16 я: | 009 ДІ. триазо | плюєт ерібулі клік п- ься й ПЕГ2
МОВА дибен рооз- зилци |, що
ДБЦО- | МО мм клоокт | не
ПЕГА ВАБ- / ен- розще 2,96 3,64 96,36 13,30
МОР 003 клік триазо | плюєт ерібулі л- ься
Н ПЕГА
МОВА дибен рооо- сук зилци |, що
ДБЦО- | МО Ммімі клоокт | не
ПЕГА ВАБ- / ен- розще 2,8 112 98,88 45,20 0,30
МОР 009 клік триазо | плюєт ерібулі л- ься
Н ПЕГА
Скорочення: Агр., 9о агрегації; 95 Фраг, 96 фрагментації. 244 2.1.2 АОС МОНАБ-003, МОВАБ-009 та трастузумабу 00409) Ніяких значимих відмінностей між МОКАБ-003, МОНАБ-009 та трастузумабом не спостерігалося з точки зору як ефективності кон'югації, так і біофізичних параметрів. Усі АОС демонстрували подібні значення ВАК та рівні утворення агрегатів. 2.1.3 АСС на основі малеїміду 00410 Для АОС на основі малеіміду, як спейсери пентил та ПЕГ2, спарені з сайтом розщеплення маї1І-сй-рАВ, так і спейсер ПЕГ2, спарений з сайтом розщеплення аїа-аіа-азп-рАВ, давали значення ВАК між 3,5 та 4,0 у обернено-фазовій РХ-МС та НІС-ВЕРХ, на додаток до низьких (« 5 905) рівнів агрегатів. Однак, коли спейсер для ПЕГ8 (спареного з сайтом розщеплення маїІ-сйі-рАВ) подовжували, рівні агрегатів зростали (11-18 95), а ефективність кон'югації знижувалася, що призводило до значень ЮАК між 1,1 та 2,3. Див., наприклад, відсоток агрегації та значення ОАК для МОКАБООЗ/МОКАБО0О9-ЕН-001159569 (короткий ПЕГ- лінкер) та МОКАБООЗ/МОКАБО09-1242287 (довгий ПЕГ-лінкер) у таблиці 47.
І00411| Для АОС, приготовлених з сайтом розщеплення дисульфідил-рАВ, спостерігали низькі значення ВАК (1,0-1,6) разом із відносно високими рівнями агрегатів (10-14 95). Значно нижчі значення ЮАК спостерігалися, коли ці АОС аналізували за допомогою РХ-МС, ніж за допомогою НІС-ВЕРХ /«(див., наприклад, РХ-МС/НІС-ВЕРХ значення ОАК для
МОРАБООЗ/МОНАБО09-ЕК1237504 та МОКАБООЗ/МОКАБОО9-ЕК1237505 в таблиці 47). Цей результат передбачає, що лінкерний сайт розщеплення вказує на пов'язану з рН нестабільність, оскільки рухома фаза аналізу РХ-МС має приблизно 3,0, тоді як рухома фаза аналізу НІС-ВЕРХ є нейтральною.
І00412| Для АОС, приготовлених зі сульфонамідним сайтом розщеплення, спостерігали низькі (« 5 95) рівні агрегатів. Подібно до АОС дисульфідил-рАВ, спостерігали нижчі значення
БАК при аналізі за допомогою РХ-МС (1,8-2,3), ніж при НІС-ВЕРХ (3,9), що ще раз вказує на те, що лінкерний сайт розщеплення вказує на пов'язану з рН нестабільність.
І00413| Для лінкерів ПЕГ2 та ПЕГ4 , які не розщеплюються, спостерігали ефективну кон'югацію, що призводить до значень ВАК від 4,0 до 4,7. АОС МОКАБ-009 з цими лінкерами, що не розщеплюються, також демонстрували низькі рівні агрегації (« 2 95), в той час як спостерігалися дещо вищі рівні агрегації для відповідних АОС МОКАБ-003 (4 95 та 10 95 для
ПЕГ2 та ПЕГА, відповідно). 2.1.4 АБС на основі сукциніміду (00414) Усі АОС, приготовлені із застосуванням сукциніміду, з'єднаного зі спейсер-лінкер- ерібуліном, давали значення БАК « 1,0. Щоб підтвердити, що дана знижена ефективність кон'югації (по відношенню до малеїмідів) була наслідком самої процедури кон'югації, ці АОС були перероблені із застосуванням вищого співвідношення сполука:антитіло та повторно проаналізовані з застосуванням тих же способів аналізу БАК. Були отримані аналогічні результати, що, без прив'язки до теорії, означає, що нижчі значення ЮАК є постійною властивістю комбінації сукциніміду та ерібуліну, і що малеіїміди можуть бути ефективніше кон'юговані. Ефективність кон'югації сукциніміду підвищували за допомогою застосування двостадійного способу, відповідно до чого спочатку додавали ДБЦО до антитіла, застосовуючи
МН5ОЗ-ДБЦО із подальшим додаванням азидосполук. Цей підхід призводить до вищих значень рАК, що виміряно за допомогою аналізу обернено-фазової ВЕРХ, у порівнянні з кон'югацією безпосередньо із залишками лізину антитіла. Для АОС на основі сукциніміду, що мають лінкери сульфонамід (розщеплюється), маі-сСй-РАВ (розщеплюється) або ПЕГ2/ЛЕГА4 (що не
Зо розщеплюється), значення БАК, отримані в результаті двостадійної кон'югації, були аналогічні значенням, визначеним для АОС на основі малеіїміду, що мають сульфонамідний сайт розщеплення. Не прив'язуючись до теорії, цей результат знову вказує на те, що нижчі значення
БАК для реакцій кон'югації сукцинімід-спейсер-лінкер-ерібуліну є постійною властивістю комбінації сукциніміду та ерібуліну. 2.2 Характеристика зв'язування АОС МОКАБ-003 та МОКАБ-009
І00415| Для АЮС МОКАБ-003 щодо зв'язування цільового антигену не спостерігалося значних відмінностей між АОС із лінкером-ерібуліном, що створений на основі малеїміду та не розщеплюється, та вихідним МОКАБ-003. Для інших АОС МОКАБ-003, зі створеним на основі малеїміду лінекром-ерібуліном, зазвичай, за допомогою ІФА, спостерігали 2-3-кратну втрату зв'язування цільового антигену в порівнянні з вихідним МОКАБ-003. Однак не спостерігалося жодної кореляції між довжиною лінкеру або складом лінкеру та нижчими значеннями ЕК5БО .
Аналогічно, для АЮС МОКАБ-003, зі створеним на основі сукцініміду лінекром-ерібуліном, зазвичай спостерігали 0-3-кратну втрату зв'язування цільового антигену в порівнянні з некон'югованим МОМКАБ-003. Знову ж, жодної кореляції між довжиною лінкеру або складом лінкеру та нижчими значеннями ЕК5О не було. Для АОС МОКАБ-009 усі АОС мали менш ніж 2- кратне зниження значень ЕК5О щодо вихідного МОКАБ-009. 2.3 Аналізи цитотоксичності АОС МОКАБ-003, МОВАБ-009 та трастузумабу іп міго (00416) Активність приготовлених АОС МОМКАБ-003, МОНАБ-009 та трастузумабу іп міго оцінювали, застосовуючи аналіз цитотоксичності на клітинах на основі фарбування кристалічним фіолетовим. Клітинні лінії, вибрані для скринінгу АОС МОКАБ-003 та МОКАБ-009, являли собою ІСКОМ1, МСІ-Н2110 та А431. Клітини ІСКОМІ1 мають походження епітеліальної карциноми яєчників людини та експресують на високих рівнях рецептор фолієвої кислоти альфа, однак не мають мезотеліну (тобто, МОКАБ-00З-реактивні). Клітини МСІ-Н2110 мають походження недрібноклітинної карциноми легенів людини та експресують на помірних рівнях як рецептор фолієвої кислоти альфа, так і мезотелін (тобто, МОКАБ-003- та МОМКАБ-009- реактивні). Контрольні клітини А4-31 мають походження епідермальній карциноми людини та не експресують жодного цільового антигену. Результати цього скринінгу наведені в таблиці 48.
Арс МоОвВАБ-003, МОВАБ-009 та трастузумабу, що містять лінкер-токсин малеїмідо-ПЕГ2-ма1І-сії- рАВ-ерібулін (МСР-ерібулін), також оцінювали на додаткових лініях клітин раку шлунку та раку 60 молочної залози, включаючи МСІ-М87 ( ЕВіо, М5І Мтєа, НеггНі), ВТ-474 (ЕВпед, М5І Мпеа,
Пегг Пі), 28-75 (ЕКпед, М5І Мпед, пег2тей) та МОССЗ (ЕКпед, М5І Мпед, пег2гпед). Результати цього скринінгу наведені в таблиці 49.
Таблиця 48
Скринінг цитотоксичності (Ко) АОС МОКАБ-003 та - -
МОВАр-009 на клітинах ІСВОМ1, МСІ-Н2110 та А431 Аналіз цитотоксичності
ІаВОМІ МСІ-Н2г110 Ад31 (ЕВ", МІ Мге9) (ЕВ, МВ Мтез) (ЕВе9, МО Ме) днти- хімія хімія
АОС тіло кон'ю- | спейсер | розщеп- | ІКво(нМ) св ІКво (НМ) св ІКво (НМ) св гації лення дя ре ре оре лені ві|ні|воіюві
СОС НН СЕ НС ПЕСНЯ НОСИ НОСН НОСЧНИ НЄ НОСИ НАС мне |на ні | 171111 маб
МОВАБО о3-
ЕВ11595 | МОВ уаі-сі- 69 Ар- ПЕГ2 АВ 0,155 0,064 3,685 0,417 5100 (Партія 003 й
МВ3073- 881)
МОВАБО
09-
ЕВ11595 | МОВ уві-сі- 69 др- ПЕГ2 АВ 9,450 | 2,093 | 14945 1,747 5100 (Партія 009 р
МВ3073- 88Е
МОВАБО о3-
ЕВ11595 | МОВ уаі-сі- 69 Ар- ПЕГ2 АВ 0,020 1,550 5100 (Партія 003 р
МВ3142- б2А
МОВАБО
09-
ЕВ11595 | МОВ уаі-сі- 69 Ар- ПЕГ2 АВ 5,687 6,784 5100 (Партія 009 р
МВ3142- 620) трастузу маб- траст маЇ-сії-
ЕВІ15о5 | Узума пЕг2 РАВ 69 в Мов маЇ-сії-
ЕДіодо» | Аб- ПЕГ8 РАВ 0,115 0,035 7,065 0,417 85,960 87 003 кефінни Мов маЇ-сії-
Едіодо» | АБ- ПЕГ8 РАВ 25,765 8,478 34,455 3,033 »100 87 009 в Мов маЇ-сії-
ЕВІ2356 0 АБ- пентил РАВ 0,105 0,092 3,920 1,032 5100
ЗВ 003 "ИЙ дБ пентил | Мас) 6830 | бевг |) 3965 | ве 100
ЕВІ12356 РАВ ' ' ' ' ? 009 38 дю НАро Мов аіа-аїа-
Ар- ПЕГ2 авп- 0,080 0,028 3,800 0,566 31,630 1,202
ЕВ12316 79 003 рАВ
Таблиця 48
Скринінг цитотоксичності (Ко) АОС МОКАБ-003 та - -
МОВАБ-009 на клітинах ІСВОМ1, МСІ-Н2110 та А431 Аналіз цитотоксичності
ІаКОМ1 МСІ-Н2г110 А431 (ЕВ, МІ М"-в) (рвтез, МІ) | (ЕВ, МБІ Меев) днти- хімія хімія
АОС тіло кон'ю- | спейсер | розщеп- | ІКво(нМ) св ІКво (НМ) св ІКво (НМ) св гації лення доро мок аіа-аїа-
АБ- ПЕГ2 азп- 8,890 0,976 7,080 1,867 34,390 3,536
ЕНІТ2316 009 РАВ 79 аіа-аїа-
МОВА | мов в
ЕВ12316 оо ПЕГ2 аіа-аза- 0,125 0,021 4,745 2,114 38,555 0,403 90 азп-
РАВ аіа-аїа-
МОВА | мов в
ЕВІ12316 оба ПЕГ2 аіа-аіа- 16,980 5,176 12,310 3,422 54,960 5,360 90 азп-
РАВ про | мов пега. | піди
ЕВІ12375 оо триазол дИМети 0,265 0,092 0,845 0,177 7,005 0,290 04 л-рАВ
МОНАБО 1 мов пега. | бідне
АБ- триазол д 6,375 2,751 1,220 0,325 8,130 0,608
ЕНІТ2375 009 "ПЕГЗ димети 04 л-рАВ
МОНАБО 1 мов пЕГЯ. | сульфо
АБ- триазол уль 0,370 0,269 0,690 0,283 6,800 0,834
ЕНІТ2375 намід 05 003 -ПЕГЗ
МОНАБО 1 мов пЕГЯ- | сульфо
АБ- триазол Ууль 6,370 3,012 0,990 0,453 9,030 1,527
ЕНІТ2375 намід 009 -ПЕГЗ 05 , що не
МОКАБВБО МОВ розщеп 03-ПЕГ2- АБ- ПЕГ2 0,330 38,300 2100 вот, люєтьс ерібулін 003 я
МОВАБО | МОВ ' оя сп 09-ПЕГ2- | АБ- ПЕГ2 розщ 42,770 50,040 »100 от, люєтьс ерібулін 009 я , що не
МОКАБВБО МОВ розщеп 03-ПЕГ4- АБ- ПЕГА4А 0,277 21,630 2100 пот. люєтьс ерібулін 003 я , що не
МОКАБВБО МОВ розщеп 09-ПЕГ4- АБ- ПЕГА4А 76,320 31,600 2100 от, люєтьс ерібулін 009 я
МОКАБВБО
МОВ й 03- Й сукци маї-сії-
ЕВІ12369 Ар німід ПЕГ2 РАВ 0,325 0,106 30,545 3,132 2100 003
МОКАБВБО
09- дО осущи | пера о мамой | зе | вію | збою | 41031 90060
ЕНІТ2369 німід рАвВ " " " " " 009 40
МОКАБВБО
03 до осущи | пвге 0 мабой | звлов | Бої вдо 8075 5100
ЕК12422 німід рАвВ ' ' ' ' 003 88
МОКАБВБО
МОВ й 09- Й сукци маї-сії-
ЕВІ12422 Ар німід ПЕГО РАВ 2100 2100 2100 009 88
Таблиця 48
Скринінг цитотоксичності (Ко) АОС МОКАБ-003 та - -
МОВАБ-009 на клітинах ІСВОМ1, МСІ-Н2110 та А431 Аналіз цитотоксичності
ІаВОМ1 МСІ-Нг110 АдЗ31 (ЕВ", МІ Мг"е9) (ЕВеЗ, МБ Ме) (ЕВе9, МБ М"е9) днти- хімія хімія
АОС тіло кон'ю- | спейсер | розщеп- | ІКво(нМ) св ІКво (НМ) св ІКво (НМ) св гації лення о Мов сукци маї-сії-
ЕВІ12369 оба німід пентил РАВ 0,330 0,071 42,105 12,594 2100 дм гени Мов сукци маї-сії- ета оба німід пентил РАВ 2100 49,485 13,569 2100 о Мов сукци пеГЗ- ма!-сі-
Ар- о: триазол 1,150 »100 »100
ЗИ 003 німід «ПЕГЗ рАвВ
Ген Мов сукци пеГЗ- ма!-сі-
Ар- ня триазол »100 »100 »100 ри 009 німід «ПЕГЗ рАвВ поло мок сукци аіа-аїа-
Евіоз16 | АБ. німід ПЕГ2 авп- 12,320 31,795 4,448 »100 91 003 рАВ доро мок сукци аіа-аїа-
ЕВІоз16 | АБ. німід ПЕГ2 авп- 5100 20,000 5,954 »100 91 009 рАВ в Мов сукци | ПЕГУ- Фідил-
У СЯ німід триазол дим сти | 0870 | била | 0750 0,071 12005 | 1,534 29 0о3 -ПЕГЗ лрАВ
Ген Мов сукци пЕГЗ- пили,
ЕВІ12441 Ар- німі триазол иМети 6,595 4,052 0,840 0,057 9,230 0,014 009 А | -ПЕгЗ д 29 л-рАВ о Мов сукци пЕГЗ- сульфо
Ар- :. триазол й 0,980 0,396 1,820 0,410 37,235 15,733 ропи 003 німід «ПЕГЗ намід
МОНАБО | мод ПЕГЗ-
Еніоаає | АБ. сукци | триазол | сУльфо | одБоБ | 4702 | 2235 | 0629 36665 | 14206 23 009 А | лЕГЗ д
МОВАБО дибенз 03- мок сукци илцикл пили,
ДБЦО- Ар- німід/ ооктен- иМети 0,545 0,389 0,900 0,071 9,670 0,382
ЕВ12375 003 клік триазол іі АВ о8 -ПЕГЗ р.
МОВАБО дибенз 09- мок сукци илцикл пили,
ДБЦО- АБ- німід/ ооктен- им етИ 10,245 3,486 1,040 0,297 11,280 2217
ЕВ12375 009 клік триазол п АВ о8 -ПЕГЗ р.
МОВАБО дибенз 03- мок сукци илцикл сульфо
ДБЦО- АБ- німід/ ооктен- ним 1,775 1,421 1,655 0,007 24,990 2,022
ЕНМКІ11388 003 клік триазол щ 56 -ПЕГЗ
МОВАБО дибенз 09- мок сукци илцикл сульфо
ДБЦО- Ар- німід/ ооктен- ним 19,155 5,438 1,960 0,113 28,070 0,636
ЕНМКІ11388 009 клік триазол щ 56 -ПЕГЗ о Мов сукци чини маї-сії-
ДБЦО- Адр- німід/ | ооктен- | рАВ 0,038 4,281 »100
ПЕГА 003 клік триазол
Таблиця 48
Скринінг цитотоксичності (Ко) АОС МОКАБ-003 та - -
МОВАБ-009 на клітинах ІСВОМ1, МСІ-Н2110 та А431 Аналіз цитотоксичності
ІаВОМ1 МСІ-Нг110 АдЗ31 (ЕВ", МІ Мг"е9) (ЕВеЗ, МБ Ме) (ЕВе9, МБ М"е9) днти- хімія хімія
АОС тіло кон'ю- | спейсер | розщеп- | ІКво(нМ) св ІКво (НМ) св ІКво (НМ) св гації лення
МОР -ПЕГ4А ерібулін доро дибенз
Й мок сукци илцикл лк дрло АБ- | німід/ | ооктен- | МОСК | 12960 31,400 5100
СР 009 клік триазол р купі -ПЕГ4А ерібулін
МОВАБО дибенз 03- мок сукци илцикл ' ОЗ с
ДБЦО- АЬ- німід/ | ооктен- Р юєтьс 4,250 38,070 5100
ПЕГ2 003 клік триазол я ерібулін -ПЕГ2
МОВАБО дибенз 09- мок сукци илцикл ' ОЗ с
ДБЦО- др- німід/ | ооктен- юс 75,680 85,680 5100
ПЕГ2- 009 клік триазол я ерібулін -ПЕГ2
МОВАБО о3- дибенз що не
ДБЦО- Мой укл илцикл розщеп 182 62 ї
ПЕГА - німід ооктен- люєтьс 323 6,280 2100
УСР 003 клік триазол купі -ПЕГ4А ерібулін
МОВАБО
09- дибенз що не
ДБЦО- Мой укл илцикл розщеп 14 ї
ПЕГА - німід ооктен- люєтьс 61,490 39,330 2100
УСР 009 клік триазол тд. -ПЕГ4А ерібулін
Всі значення ІКсо представлені в нМ та являють собою середні значення повторних експериментів. СВ - стандартне відхилення.
Таблиця 49
Скринінг цитотоксичності (Ко) АОС МОКАБ-003, Аналіз питотоксичності
МОВАБ-009 та трастузумабу на клітинах МСІ-М87, ВТ-474, ц 7278-75 та МОССЗ
Мои 1 втята вла 0 Мво5 (ЕВе (ве, (вис, (Ето ' пед пед ' меми, | Метан; | пегтеу | МеШРЄ,
Неге") Нега"е9) хімія
АОС антитіло комжогації сер. ще. ІКсо (НМ) ІКво (НМ) ІКво (НМ) ІКво (НМ) лення трастузума ; ; » »
МОНАБООЗ- маі-
Партія МОВАБ-003 ПЕГО | сії-
МВ3073-881) рАВ
МОНАБООО- уаі-
ЕЩТ159569. .Ю МОВАБ-009 ПЕГ2 | сі- (Партія РАВ
МВ3073-88Е)
МОНАБЬООЗ- уаі- пн нн те би нене
МВ3142-62А рАВ
МОНАБООО- уаі- ню нн те б | вив ян
МВ3142-620 рАВ ше ен нн
ЕВІ1159569 растузу АВ
Всі значення ІКхоо представлені в нМ та являють собою середні значення повторних експериментів. СВ - стандартне відхилення. 2.3.1 2.3.2 Цитотоксичність АОС на основі малеїміду
І00417| Усі АОС МОКАБ-003 та МОКАБ-009, створені на основі малеїміду, виявляють специфічну цитотоксичність на клітинах ІЗКОМІ1 із різницею по ефективності, що спостерігається між антитілами, в 2-3 порядки. АС МОКАБ-003 ма!І-сі-рАВ-ерібуліну продемонстрували вищу активність на клітинній лінії ІСКОМІ, ніж АОС МОКАБ-003 ПЕГ2 або
ПЕГ4, що не розщеплюються, однак рівень специфічності не змінився. Аналогічні тенденції спостерігалися для АС МОКАБ-009, із АОС МОКАБ-009, що не розщеплюється, які демонструють нижчу цитотоксичність на клітинах ІСКОМІ, ніж АОС МОКАБ-009 маї!-сі-рАВ- ерібуліну. 00418 АОС МОВАБ-009 на основі малеіїміду з лінкерами на основі дисульфідилу та сульфонаміду продемонстрували вищу активність на клітинній лінії МС 1І-Н2110, ніж на клітинній лінії ІСЄКОМ1. Це може бути пов'язано з потенційною нестабільністю лінкерів у культурі, як зазначено нижче. Також спостерігалася висока цитотоксичність з відповідними АОС МОКАбБ- 003. Навпакию, АОС МОКАБ-003 та МОКАБ-009 на основі малеїміду із лінкерами, що не розщеплюються, демонстрували відносно низьку активність на клітинах МСІ-Н2110. Не прив'язуючись до теорії, цей результат вказує на те, що, при нижчій цільовій експресії, ефективне розщеплення та вивільнення корисного навантаження може збільшити цитотоксичність. (00419) АБС із лінкером маІ-сТ-рАВ, що розщеплюється ферментом, або лінкером, що не розщеплюється, продемонстрували низькі рівні нецільового знищення на контрольних клітинах
А431 (ІКБО » 100 нМ), тоді як АОС з лінкером аїіа-аі(а-азп-РАВ, що розщеплюється ферментом, проявили слабке, але таке, що виявляється, знищення цих контрольних клітин. Це вказує на те, що лінкери маІ-сі-рАВ, які розщеплюються ферментом, можуть бути стабільнішими в культурі, ніж лінкери ала-аіа-азєп-рРАВ, що розщеплюються ферментом. Окрім того, АОС МОКАБ-009 з коротшим спейсером ПЕГ2 продемонстрували вищу цитотоксичність на клітинах ІСКОМІ1, ніж відповідні АОС з довшим спейсером ПЕГ8. Аналогічна тенденція спостерігалася на клітинах
МСІ-Н2110 як для АОС МОКАБ-003, так і для АОС МОКАБ-009 з коротшою довжиною спейсера, що призводить до вищої цитотоксичності. (00420) АОС з лінкерами на основі сульфонаміду зазвичай демонстрували вищі значення
БАК та нижчі рівні агрегатів у порівнянні з відповідними АОС з лінкерами на основі дисульфідилу. Однак в обох цих категоріях АОС спостерігалося знищення контрольних клітин
А431 на наномолярному рівні, вказуючи на те, що лінкери на основі дисульфідилу та сульфонаміду були менш стабільними в культурі, ніж лінкери, що розщеплюються ферментом, у перевірених умовах аналізу.
Ї00421| Конкретний лінкер-токсин малеїімідо-ПЕГ2-маІ-сі-рАВ-ерібулін (МСР-ерібулін) додатково досліджували на предмет специфічності та активності на різних лініях клітин раку шлунку та раку молочної залози. МСР-ерібулін кон'югували з МОКАБ-003 та МОКАБ-009, на додаток до антитіла до пег2 людини трастузумабу. МОКАБ-003-УСР-ерібулін демонстрував слабке, але специфічне знищення клітин МСІ-М87, які експресують на низьких рівнях рецептор фолієвої кислоти альфа (ЕК), та незначне знищення на інших трьох ЕК-негативних клітинних лініях. МОКАБ-009-МОСР-ерібулін також демонстрував високу цитотоксичність на клітинах МСІ1-
М87, які експресують на помірних рівнях мезотелін. Трастузумаб-МСР-ерібулін був дуже сильнодіючим (3-6 пМ, ІК5О) на клітинах МСІ-М87 та ВТ-474, двох клітинних лініях, які експресують на високих рівнях Пег2, а також сильнодіючим на клітини раку молочної залози 2К-
75, які лише помірно експресують пег2. Усі АОС МОКАБ-003, МОВАБ-009 та трастузумабу МСР- ерібуліну продемонстрували низьку цитотоксичність на клітинах МОССЗ, що не експресують ЕК, мезотелін або Пегг, відповідні цільові антигени. 2.3.3 Цитотоксичність АОС на основі сукциніміду (00422) Тенденції цитотоксичності АОС на основі сукцініміду були схожі з АОС на основі малеіїміду для клітин ІЗКОМІ, з АОС зі спейсером ПЕГ8, що демонструють низьку цитотоксичність на додаток до низьких значень САК. Нижча цитотоксичність як на клітинах
ІЗКОМ1, так і на МСІ-Н2110 зазвичай спостерігалася для АЮС на основі сукциніміду з лінкерами, що розщеплюються ферментом, у порівнянні з відповідними АОС на основі малеїміду, що, швидше за все, пов'язано з їх нижчими значеннями БАК. Нецільове знищення клітин А431 спостерігалося також з лінкерами на основі дисульфідилу та сульфонаміду, аналогічними відповідним АОС на основі малеїіміду. Це вказує на підвищену нестабільність, яка швидше потенційно виникає через сайт розщеплення, ніж через хімію кон'югації. 00423) Коли виконували двостадійну кон'югацію, спостерігали вищі значення САК щодо тих, які спостерігалися при підході прямої кон'югації сукциніміду. Ці вищі значення ОАК корелювали з вищою ефективністю. Для АС МОКАБ-003 МСР-ерібуліну спостерігали високу цитотоксичність як на клітинах ІСКОМІ, так і на МСІ-Н2110. Незважаючи на те, що АОС МОВАБ- 003, які не розщеплюються, продемонстрували ефективність на клітинах ІСКОМІ (1-4 нМ), вони все ще були менш ефективними, ніж АОС МОКАБ-003 УСР-ерібуліну, приготовані за допомогою цього способу (38 пМ), хоча значення БАК були зіставними. Окрім того, АОС МОВАБ-003, що не розщеплюються, приготовані із застосуванням двостадійного способу, були трохи менш ефективними на клітинній лінії ІОКОМ'І, ніж відповідні АОС на основі малеїіміду, що може бути пов'язано з їх нижчими значеннями САБЕ. Подібно їх аналогам на основі малеїміду, АОС, що не розщеплюються, приготовані із застосуванням двостадійного способу, також втратили майже всю цитотоксичність на клітинах МСІ-2110. 2.4 Біофізична характеристика АОС антитіла до мезотеліну людини (І Ссу580)
І00424| МА -ПЕГ2-МаІ-СП-РАВ-ерібулін (ЕК-001159569) кон'югували із вісьмома різними антитілами до мезотеліну людини (таблиця 1). Афінності зв'язування вихідних антитіл визначали шляхом аналізу ВіІАсоге, як описано вище в розділі 1. 6. 1. Рівні агрегації для всіх
АОС антитіл до мезотеліну людини визначали за допомогою ексклюзійної ВЕРХ та ВАК аналізували із застосуванням НІС-ВЕРХ. Активність іп міго оцінювали, застосовуючи аналіз цитотоксичності на клітинах на основі фарбування кристалічним фіолетовим, на клітинах АЗ (А431, стабільно трансфікована мезотеліном людини (М5ЇМ), М5ІМпї), ОМСАКЗ (яєчник людини, М5І Ми), НЕС-251 (ендометроїд людини, М5іМтеа), Н226 (плоскоклітинна мезотеліома легенів людини, М5І- Міо) та вихідній А431 (М5І Мпед). Результати аналізу ВАК, агрегації та цитотоксичності наведені в таблиці 50.
Таблиця 50
Біофізична характеристика АСС антитіла до мезотеліну людини (І. Ссуз80)
Корисне Ексклюзійна | Аналіз цитотоксичності на
Афінність навантаження | де ВЕРХ основі клітин, ЕК5О, НМ щУя з вай зх змі Лікарський де агрегаз ще іду ' | й як
Біне Нртесі Дію Мі засіб-лінкер ПАХ Ук асрегату пкксновну АВ ОВНС, ШІ М зо | хі ! | НКИ НХЮ 1195 8597 | ЗУ 1067108 ! Мо. я
ДІ 510 | ЗА | БНХООЮ 118915 | 9558 1-00 10 БЕ, М 0 шво -- 865381 ВОпевВою 5 5 |до Год 1390, чо о" | 55355) ХМ) ЗОЗ МО 100 20 мо ее ЩЕ 45 І МОГОЮ 11851 15 | 9835 850 00, М ие ЩІ
ШИ: МОМ 4 | Воевоюю 110) 540 ом де 0010 00 мі мкс; | г. ЗЕ і па МОГОЮ 1560528 КУРОК по 5А Го Мі
НИ МК В НКЮ 6 848 09555 1 о ШО, МІ 05
Скорочення: хі - химерне; 71 - гуманізоване. (00425) Усі АОС антитіла до мезотеліну людини зберігали низькі рівні агрегації (« 10 95 агрегату) та демонстрували високу активніСТть на цІЛЬОВихХ кКлІТИННИХ ЛІНІЯХ. Висока активність спостерігалася на АЗ та ОМСАКЗ, тоді як клітини НЕС-251 та Н226 були відносно стійкими до цитотоксичності АОС.
Вибравівослідовнасте
БО ПА МО: гважкни ланкюг (НС МОКАБ-ООУ х БУМ Чув Ьві: шов шов ЕЕ сви нУВШАа БОКОБЕЯВМ ді ІБЕСОВУТУХ ВОБУКОВЕВІ ЕБОМАКИТЬЖ ГОМПЕБЕРЕО ТОУУЕСВВНЕ 151 ПРЕАЖЕВУКО СІВ ІЗЕВА ВТЕЕЕЗЕВЬ БРЕББЕТЕОО таААБОСІТУКА
МУ ІБЕБЕЗЕЧЕМ Маші сУВ ТЕЕВАУТОшЕ БЕБІ УУКУ вЕБВБУТОТУ
ШАХ ІПНВУМНКЕЕМ ТЕУОКЕУВЕК БСІКЕБІСЕВЕ СЕВЕЕСЦізУЕ БУЕБЕЕВКЕК
Бі ПТЕМІБКТЕЕ УТОСУЗУПУЄН ЕПРЕУКЕВКЕ УБОМЕУНМАК ЕКЕБЕЕСЕКЕ зві ТЕВИЧЕЧТЬТУ БЕФОЖЬМСКЕ УКСКУВМКАЬ ВАБІЕКТЕШК ВКСОБВЕРОХ зві ЕЖТАЕТЕВРЕЬ ТЕБСУВІТСЬ УЕСЕТЕВОТА УКЕБЕБМОСЕЕ ММЕКТЕВЕМЬ
УНІ пПерсеЕвіхЕ ЖЬТУЦЕОНОЮ ОБМУВЕСЕУМ пЕВТНКНЕТО КЕ БЯВІЕ
БО мо (СП НС МОКАЬ ОВ за Кабатоми сусьє
БО пІмО З(Спю НСМОКАЬ Обя за Кабатомі МІБВОСВУТЕУХАОлІУКЕ
БО ОО МОЯ СЕЗ НС МОКАБ ОО: за Кабатоми нспоБАКЕВХ
ЗВО ПО МЕ: З (аміохислотва послідовніють повнорозміного бічка-поперелкику важкого дакнюга МОКАВ-ОЮЕ лілерна послілови сть лідкреслена) ї Можеш їі УдІідтаУав УШЕУжЕСОСУ УМЕОЕЛЬЕБЕ СЕВЕСЕТЕ В
Бі ЖОВ сен УАМІ БЕССОЇТІЖА ПЯУКОВЕБВІя КІЖАКНТЬКі. 151 ШЕПВББРЕЛІ СУТЕСЬВНОЮ БРАЖЕВЕКВИ ЗІВУТУЕБАЕ ТОБІ їБ1 РЕБКЕТЕСОСТ БАБОСІТМКИЕХ КЕЖЕСТОВММ БСАБІЕОМНІ БЕАХІТОЕВОеЬ 281 УБББЕУТТУВ БВБІСТОТХІ СМОБНЕРЕМТІ ЕУПЕКУЕБКЯ СРКТЕТСЕРС 5ї ЕВЕЕТІМКВ КЕБЕЕРЕВТВО ТОКМЕБКТРЕМХ ТСУУУТУЕНЕ ПЕЕУКЕВМЖТУ
ПУ ПСушУПНКАКІ КРУВЕКОСУБЕТ ЖБУХЕЗЬТУЄ БОЦІ еКЕК КОКЗЕМКАТЕ
Зв АРІЖЕКТІЗКА КСОБВЕРОУТ ТОРЕЕВЛЕБТ КМОУВБТСЬУ КСЕУРОВІВУ 21 ЕКЕЗМООРЕМ МУКТТрЕЖЛЬЮ ЗПОБЕЕБІВК МТУрДКОБИО СУК ЕСЕУМИ 1 ЕВІТНЕНЕТОМХ БЕБІ РОК
ЗБОЮ МЕ: б (легкий ланивют С МОБ АВ х ПІДШТТОВЕВЕ БеаВУСИКМІ ГІСВУЖНЕІВ МЕНЮ ЕОКЕРКЕУКІУ з СТЕМІАшЕМЕ ВККЕЕНИНУХ СЕТЕТІББІ БЕБХАКУХСВ МЕЖ ЕЗКХЕ 151 ЕСОСІКУКІК СТУАВЕЕЯУКІ БРЕБОЕДЬКО СТЕЕУУСТІБМ МРЕЕРНЕВИЧО
МЕЖІ МЕСЕБЕМІВЦЮ шКІЕаТЕВІшЕ ТЕТЕЕКАПЕ КАКУСВСЕУТ
ЗВО МОЗ (СЕР ІС МОСКАЬ-(ЮЗ за Кабатомі: УБЕВІВЕМШЬК
ЗВО ШІ МО ІСП ІСЄ МОКАвВ-ЮХ: заз Кабатоміи: стаМАх звОопшІМмОо: зр МОВА ОВ; за Кабатоміи: сОМЕШЕБУМУЕ "БО МО: ТО амінокислотна послідови сть повнорозе юного бізка-поперелнику легкого ваЕНЮТа МОБАБ-ОЮЗ слічерна послішовність підкреслена) ї МИМОСІЇІЕ: УБВТАТОУНЕО ІОБТОЯРЕВІ БАеЧУСОВБУТІ ТОБУВЕВІВЕ
У ММОпИїМшКЕ ЕКАБКЕМІШО ТЕМОАБСМРЕ КЕН ЖІЕТІВВІ ЦЕ щі ЕГІАТТУЖСОЮ МЕБХЕМТЕ ПОСТ ЖУВІКВ ІУБЗБЕМЕТЕ БРЕПЕСІМЕЕ 151 ЖЕБЕЗУСЕЇ МУ ЕЖЕБЕАКООК ЖМОМАВОВЕК БОЕЕУТЕОБЕ КЕБТХБЕВТ ших ПТООКБЛУЕК ПЕУТАСЕСКК ССЕЕБЕКУТКЕ ЕББЕЄ
ЗО МЕТІ (ет НС МОВ АВБ-О0 ї ЕТОССАТОСЬ ШСОТСТАТОВТІ ССТСТІСТтТЄ СТВОСАВСВо СТАСВостсЕ ві СиВШТтТОюіНк пІСТВАЄТОМУ ТОМИ пікнік
ТХ вини п ІІ БОСТССЬТ СЕ ТІСВС СТЕСВІікнУ іі ТАКСССІТСОТ СТІСссстТоВс ВоВвсссвост соБАВВстТо КТОАСТОССЕ
Ві ТОСОЛ ЕТ ІВ г сій БЕБСІІВТВО СЕБСТВТОСВ ССВ ТЕ. 251 ВіхзосійвтТ ТтОСАВІВТСС СОБ-ВІВВОї СовБесввсвс АТЕТТОСТЕ тії свАвтТІОВСВ спостовевос Сова Восвоо сс ІСТАТЕ ТТ ОВУ ві АСВтссСвевВос сАтТОСЮІ ЯТІ СОСТЕВ тов Євою р ЕСВССЕКСТС Сто СтТОЮ ВССУ ю СВТ ОІСТЕ СОСОСрасВ ахі СИСТИСТССА Волков то осо ссСоБОКОВЕ стік шоЛії вої СаАЛйКІАСЕВО ТІССССсвВо СсшрсаАсештТ СЕС ВС тТолкосноо влі ЕВ СостовсвоС ТЕСССоесоте ТОСТАЄСВеТС сСтовсевоТо «ВІ ЕВСТСССТСВ СОвОСОКОІ соком плюси ТС СВОСОА. ві еасоІвсАТО Тосплюєтсв ВТСАСАВеСО СВОоСаВСВЕС АМТС ть
КЕ БсавяІ тя песо вАВТСТ Тстс-воваАва СТСВОВОВтТе сосаСото
ТЖЕ 0 СОБОСАССТО ВАСТОСТоСІ СССВСОСТОВ СТСТІОСТСВ ТОСССОСАВА 23 асосавтовс ВсостТоАТОВ ТСТСССсСсво сСостевстто асВтшсстоб
БІ Хіт сосвВОсвЕ СО ОоСвоСсвВ севосот ТОСТІВ Ст ТВАнУ ТУ з5і САС Востсовтавй ТУССВАСАСВ ВВС ліколитме В, зі севсвосвст тВосетсто5 товссотост свосстосто СВосассвст
100: сСостовдвтос сСавссвстАЄ ЗАстоСАвсс ТотосСаАвсАВ ВОоСССТопоВ
ЗМОВІ ссссссВтсс ВСоВАВВССАТ СТССАВАССС ААдсжосВЕс ТОТоАСВВС 132: БСаостТсТвАс воссСтсОСсЄ сатосСссшсВ ТСВОстТовоС вАСАВССЬОС 1ЕБЕ тесвесстовс сСстосстоото ЗеКлОСТІСтТ АТОССсВлосв СВТССОСтО і8пЕ сшвотсссвсв ссдвтососв шосссвсаво АВсІвсвАсла СоВосостТоС і85І согосСтосво ТосСоВсоосСтТ ССТІСтТтСтТтТ АтАТТОВаАВе стовсостОоЄ ї18а5ї БдсвдлАлоВе пТИсСЬссвя побавосптТст ХСтТОВТоСтТо СотсВтосАт 138: баошстстоСс ВоВассВств сасссвовАс ВоССТСТССС тстІСстТоюСсЄ 13пї вав тсА
ЗРО МО: інт 1 С МОКАБ-ПОЗ) ї ссвстсссво втссСвастоВ сосвовсосос вВсосвоссте досословесе ї18ї тосетовово ВотоБсосвтТо ВоСтІсСтТестТо ТСАССТОВВО ТВТАВТТОо 11 ВасАВСстТтсС востостІВось повсаваосв потевоосто САВЕсоссвто 281 САтСтВСЄ ВоВтОеСавос топсттсСтоб тстосоВвос ВоВЕТовесе зах сов тс СОВССІВСтА СІСССВЕСве ТОСВЕТАСІВ ВОШОСТВОВТ зві ствсвостто соссввсооЗ СсАвсстоса АатсАВАСоВв ВоТОТООоСтО чв1 сВОСВтТСтТстТ СТІСВтСтТІо ССПОСВтСТо втТОВОСАЄсТЕ пАВЕтТстТесА 851 ВОТИССТОТО ТТОТСТОССсТ ССТІВАТАВО ТІСТАТСОС САСОАОПССВА ва встасвстос авсзтесАтА ВсссСсстТосСА АтТСССстТвВО ТОСОВлоВвоВ
БІ СстТотоВСАСсА ПподосВасВвосС АВсСЕСвсосСА ССІВСВСССтІ СВОСВОСВоо «ві стсвссостовВ подАЗссвсоВ СІвСсвовАВ СЕСЕвВЕтсСт ВосостТоСсв сЕї ВстовВосссВт сапоссостов сотопосполт СЕсввВовсос ттсавВсвосо и свсАстсТтА А
БО ОО МеЕСІЗСТІВІ НС МОВА ПУХКУ сЕЕЕвсте
БО ОО МеСІЯ (СВО НС МОВА МСЕ тест
БО КОС ІІІ НС МОКАБіІКН БИСТЬ ванспгевшкАХ
ЗБО А КО С ІС ЕС МОКАБ-О0К ПИТ) вБІБВКИ
БО А МО: ІТС ІЕС МОКАБ-ООЮ МОСТИ сте опо Ммеа: іс Ес МОВА ОП БЯСТ ссмештвМмит
ЗВО ТО МОСІЗІЕКА людини) їі шфацеитивиіі іфБізштачш вешоківнах пшеїіпоошевва ЕпПлхвхосие щизБетохве
І ххпасесевЕпр ведевапидевУ 1УКЕпхЗпсдд енеаравскивЕІ іцшьсісесв рпідрхішну і8А бцеменаехчі пчрісктейсв студе у зшдепевноам пееелІвйнсв УадввоеиЕвЕ 185 УЕреВвочістп вічсавУкча пушЕдецІі сткхІтсдреодл рпеетахтЕісв ваетецвлрна та: анркЕті«тваі вт1кі1те «БО УМО: 20 нуклеотня ЕКА людини ї сашоосстоде бассесьсас саесваовов зсосовдода свалзсабсяс вовоседава 12хЕ зевоцсетоцву ссвуцастов дотостсввї чЕстцсвБЗв есассавоса совзсвзасаяка і-ї авшосешусс сосаспцасва сокоусасчвя садово сородвеацав спавьоссвУус гаї шциБсбвссвг всЕссацссв славассссви заоапаз ев: серасссавсов тацаттсавс зпА задаассвост стодедеса?ї сдосвссьаис зпосвавсодо дсисосавссв давсатоевоє
Зі сЕсьвсоввь чсрБспоссова сесошпшсст тодевссввас воашьодавсв дпашстацснс екі зазовисчозЗ бастцавсяр пссссроатес вжвовисаест дісазсваза спопдовацат а5Е тотоедевстьв поскратассто савлдаасавс тоедсзоввад зобБзсвавста дасотсвЯадя вії зпевасавцо оссосацьоцд васіцдсотдос сввссЗосгс всештспсовсвВ сосссасассо тва астциссоци ссевзбдеват сросастьсвос зсоссасавця босгпевасьв сведосовоцо еЕї зоастодесцоб япсвлссовцво сьсдовслас соевоисссовац зчовасолове соавадсвслод т адсовасвсов есосбБосвос савсастодоа дстодосссо сцосацссво досоттсстьо так сосвасобца ссоствавнвосї сстотодсро стовдссодвс стоасеобтвс стбстдатес ах стдопавабссстососвовЕ свасосгага достсссавст астспатиса вдос свтяня
ЗБЕ тсседодссвсо дасадосвоо стшдевтвавс саетесассос всатовувст сововаства
БІ скдовевдевде вававсасавя зе
ВО ОО МО:21 Пре? людини) і ТЕ ЕТЕеВвістхт 111511ораз веоплуєьцьй ткіхіравов брісйтікБіст сессучоллі ті віскірзпав 15т1іобіцпет попучізіввнло сиспчУуріцтії іїчтхцзпіїей лувівчзчіщлош 1 освівпивУв павроцдікеі1і щдіквчІ1твіїх дшочіїцупол Рісуцаріічи ЗІЕВЕпопів 18ї ітііббпІвЕ вопрос сакснделдвае бсовістбУс вцпсатскю ірасосьали аї вачстлденвя бчсідоеійспе всісвійовв ІсУбупиЯств зшвопоречхУуєЄ їдвесУбвосюЮ зп уУупуівзсосов стістсріквцш!ш еУубаецотоах седсенрсоах тохдісвеВві геттаУвваив
За іошєїноскЕкі їчвішЖіррвя Ебсобравпта сісеоізсї єбівеїссуї івано ус
Вл бітівіст ітцтіїплзда твізістпітші еміціквіїтє іцецівіївБ повісЕствоУ зії теассчістпра свіїіптакххут едбесодедіа спсісвтавс хопозбосут сепкіктчаво вах севстоїдаі схктеутпешВвос і1рскряесава позошсеЕдее волотвсавВу хХобрвіствис
БЕ пЕдткІцівУу прічнЕрсове сагорсрійпс жовстз1адкЕ сперавцхуаво 1іб5іівачУд
Бе іДдЕларчіолт жхчі1іниКод ХЯКЕХУЄАКЕЇ ідеш ЕЗеві роздЕнобса спкііхетаї
ТЕ хЕтиосішеше ІчстУкХВіві шфодепУнівдУу віхлікевов шквохеїіїідцеє дучлладтавв
ТЕ Уутвхлічісі сесУцпіттяі потасіієсво їгепхчахісвш біісгссшщів ХхошпвудейнЕ 41 ітвкаівзатв сітхвоанткх із ахІї дпідЕсЕУПаАВ дактрікнтива зЗевіїхІтхЕшх я Гюдяесумвуще бнвіхнсясв коУуснірака ічізекцек ірзюрішьО о уушаілстисяв я ійзесхрхїх еітшєеївІшШВв ЕСЮСЕЇУЧаЄтс дедізчсавові ЯЕсбЕЗЕв1їе осві чаВ 1221 зе уімтлпсЯ Жжсумісоволвлопвуновувував ву БлисИйТт ідпідо«веав птвзпідвавва іа -ечісстспнлІ ОО ЕОлдаес ЧУ поешлІВВ вуІвООЦіІс дол вєЮжеєван пт вив 10951 вавасЕсось стдавилійв і9тплдерій хуУузЕедесВі бхетидутар 15с85юЮшрЕи 1151 поечкриро ввтхецвівва пгоадасіекшв хобі раипач чзкшнЕВЕцаВ сепретіює і801і1 дезворслойпро ввІвсвіспі тукочцобвровх черзі птшвпремів іо
БО МО: 22 (шУклеотид Бех? людини) ії влічшнио то ССБОСТРГОБО ССБТ СТССТОССтО СОСТСТІСВСС СОСОжОовоюЕ і песявовосо ваЄтТитТОово ССС ВоСвОВОо ВтСАВОСтТа СиСтТССстеЄ сСвстсоСеВе ії ВомоВОстоес ВОСЕТеСТССЄ ССАССЕСТВС спосте ВіжеіОТОСв есАВВОТКке тАВСІСвОСЕ ВоСтессас СаАвЕстсвВОс СЕСІЮ Босак аК Соло аї СА ТЕ Во ТОСТСВвтСсоС ТСАСвАССАВ столове ТИССаАСТоСВ свесотшсц шої шТТСтТиСсвВо соувссосвесІт СТРЕС ВАСтТВтТОСО тіні ТС вевАсоВьтосА 1 пасшососстоВв ВСВВІВССВос ССС сСАСВ Осо СТСЄ весло суто ща СБС РСіьА зоотовсАся шАТСОТЕСВВА сс ТеАТССВ свв В
ЕІ СТСТОСТвАСС восвовАсСоВт ТЕТ свв: звовІСтІТОЄ воввасавсваА СсаоестосЕ ва шШІСЕвСЬстТоВв ТВоВОВсСсВВ песто оСсІСоВоЄ ССРСТТОТИС ВТО ТВВх пі ОІВ собой САБЕТСТеВи аТЕЗТОВОВ СТВ СВТ Е кві шосе ІТС СтТе СаАдлінУосА СРО овоіІв Во ТоСов толоса іх т ОТО ше сшеюошо Сама стТет шВОЕОсотос Сет онаА СТЕСВАЛОВО та ВЕТО САТОТ іі с ТОВ СОМ СТІ САССЕ ВОПАБСВОВЕА СВІ ТОВ 4Аї ТОСВЕШСССВ ВІТСССсносте Со еІВТвСВА ТЕС ЕІ ІБ тес ТОе
Зої ТАСАВСЕАТС ТІТСТАСОСА СТУС СВО ЕСЕІОСОСЕ СововВАссвА вві ааніхі вх СВслЕсеВЛІМКа ВВюЮВИВСіМи КТС сових юи МОТО. 1021 ожтегестІвтТе ІСТ СВтТ СВ САСТЕТОЯ СопвсвесІов сови ТВо СаБІООоСаву іб81 втосСвоОСАст тТІтОТОосоті СвАСаАБСВТО ТЕТОСсСАСОЄ ЖШОСЬВТТТСРТ сосотвсяАсо 1141 КЕТЕСАТООоС ВОССВвеСОВО САВСАСТеСС пошетОвово слові Сов ІІЕЕ 1801 о сасастотоОС БасАСАТОВО БСЕТВОСтТА ТАСВІСТСВО СатосссСоссве СаБоСтТОСТ 121 БАС ЕСВОС ТОТТССтаАА ПОТОСВВеТА АРОСсСтссас ваВТЕСтТІоА САБО і55І1 ЖАСТОССТОВ СОБЛІОАВОВ ІТ СвАЕО ВоСтТеоВев РОСТ СТО БО тТОолосснаАа іі сте свсто вСтіосост СЕиТосВСЄВтТ АВСБОоСоВоС ЖСЕТОСТІСЄСВ сова Тіх і1451 пост евоС вОСТСтТГтТоЄ АВС САТ ТОВ тас СвасСовБОСА.
ІіВОс1 бо восаеЕ што што ЛІСОВОЇ ТІ КІКСІОЮ ВЕСТ ії о тот ССВ БОС ОСсвАюсОсв іі свво ТОВ СоВОЕ ВЕСТЕСООо сслкевиМТо вЕ2І ЄбтСсвссВАК СОСОвСТВОСТ содою поса ВІВАТ СВоССВСТеТ і5БІ тт ТОСю АСССтоват ВТІВБОСОСве ВЕТО БСВОСТОВТЕ БОС ілі СОСтсСВоОсСвтї БТСТОССТе ТеССОвСтАТ пАСОВОССТИ СЖСЕТСтсові сесоосіш і8Ф1 СоСАССюрВІв товввсстОов СКТСТОСТВО ТОСОСВТОх БОвВСБІТОО Боаетолдо ізж1 ПоСОСАТОСС ВСССТІЄСОС СВТСАВСКОС ДОССВСТОСЕ СТСТОЄАЄСТ соАтТсвсАво 1321 остоссоСЕ посвосвова Восовоссст стоВостссв ТСВтСтТотсос сетесттасо 1381 ВТтСТОСтТоС ТОСТОЗТСттТ СссСостОостоС ТтІСсСсАтТосС ТСвтТСВаВосс всОоССАССсВо 22а3 ВАСАТССССА ВСТАСЬССВІ СоСОАСАСТО СТОСАСсВАВ СосвостТост ссвсососте 21і013 ВсВоСстТАССс свсссьтТосс СеАвссвлосо сасдтсосссв ТОСТОВВАсВ сьсссвосто гії ВссАВССТСА ВССТССТІСС ВТСТИССОСТ ТІТСССАСАЄ ТСТАСЕВССС САТСТОСАТЕ 2221 ОСтТОАТССС АСАВТСТІВв ВЕТТССВСТЕ СОСВІСЬВАС ТОТТСАСССЬ ЗАВСВСВТОЄ 2281 ОСолААСОСА ВОВААсаАВВТ СТІВСВССВА ССАТВОССТОВ ТОССТЕСТОТ ОБОСКООТА 2743 ТАТСТСТССС состтстТосс СеТСТСССтТО АСАТОСАССсС ТоСВОСТостТ СВСВСВОСтт 2403 ВтТососстЕтТс ССТосстТотІ ЗсАссвтТсто спосавАВос псссасссст ссостоссво гаї САССТОСтТсА ВСТОСТСІВІ ССВСАТІССС дАСОССАЕса ССТВССТОСА ссВтстТосот 2521 СтІССТАСаСА попасттяос СоСтоссВвс стостостов вІшфшІТОссвь ссвтстТодав 25ЩВІ БІТАСАСВСТ ТОПсССТООС ТОСсСтТоСтТо сасВтІтТоВсс ВОБСАЕВСТА ССАТОСВСВТ с2Е3ї ссссссАВес ТОСОСБТСАВ СІССАТОССО СТССАсТОсСаА ТІСТОСсССт ССОСТІСВСС 2701 САССАСАСТС ВТТСТЄсвя ТТАТОСТСТИ ВСТСТСТОСс ВОСТОАТОДС ттКТОдоСсЄ 2761 АААССТІВСС ВТЕССАТООС дДоСсссссВа ВТСОСТовОС ТОСТОСАВАВ солесворсв 2821 стСсОСоСЯвс СОСОСАТотТЕ САССЬТІСВІ СТСТВСАТОА ТСАТОСТОВЬ АТСТТССАТо 234ї ВоссвосСосСс АсСоСТтТІСТ ССТСАТОСАС АвТЄДссАсСтТ ТосссссВвоС СВСТОССТІс
З001 САСАССВОСТ КСТАССССТо ВотТоСтТосва саАссвтовоВ КОбСОЄАССТ сстссАтост заєї бассастдтТс ТоСТВОЮСоВ СоВсссстто Ттстотосво воСстессос сдосестосо 121 соСаАтОоСтТос ВБОСАСАЄсОВ СОСОВССТОВ ТСІВССАСсА СТОСОССТОС СЕАОСТОВСВ зіві о ствосостох восостстов дсАловеосс ссовостото свотоссвос стоссовьссо з2а3 сСтосстТОСс ВтТстТвттТІсВ ТОСТОВОСТтТО содатососс САСССЕВесс сстесвавесс за0і СТССССАСАС АТовСоюЮСВЕ СОСТОТАСВИ СостВСАстТо ВобАссоСАЄ ВЕТвОСОстТо ззвІ1 ОСстТотТоВсоВ СтТоБТОосстА ССОТТОССССС стовостось сососсвосс товВтАТсТо загі аВспвлссвх АТСтІТОСоОС ОСАССССССТ тТососорсве вососостТот осостостошо заві о ссвостост стосСсвстост СОСАВАЄСССС АВсВстотот соссСасосаа сВВтТеоОото з5а1 СТСАВВЄАСС ЕТТТТСССТЕ ТОССПСТОСО сТосСьсАвВОС СОСАСТАЄТТ САСАОСОСЬС
Зейі сслсовестя ШОССІСвЕОС ССАСССТОСТ сстссССтТтсв сОСОВЕССТІ СЗВСВАЮСТО
ЗЕЕЇ ЖВттТАСТОСЬІ ВОСВОЗВвоСС ВосСВоВосСсс сопсостосвс ССВОСВССТІ САВВОССАСА 3721 ОСтТАСпосСВІ ВОДВСсСВсВ СТАССТОЗСТ СтссасСстТосС СВстТетТов
З а
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕИ
«110» ЕІ5АЇ СО., ПТО.
Е5АЇ ІМС.
МОКРНОТЕК, ІМС. о 1205 КОН'ЮГАТИ АНТИТІЛО-ЛІКАРСЬКИИ ЗАСІБ НА ОСНОВІ ЕРІБУЛІНУ ТА
СПОСОБИ ЗАСТОСУВАННЯ
«130» 08061.0024-00304 «1405» РСТ/США2017/020529 «141» 2017-03-02
«150» 62/302,562 «1515 2016-03-02 «160» 368 «170» Рагепцп версія 3,5 «21051 «2115 449 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 1
СІи МаїЇ Сів Г еп МаїЇ СОЇ 5ег СТу СТУ СТУ Маї Маї Сп Рго О1у Аге 201 5 10 15
Зег І еи Аге Ге 5ег Сув 5ег Аа 5ег СТ1у Ре ТІг Рре 5ег СІу Туг 25
СОІУ Гец 5ег Тгр Маї Аге СіІп Аа Рго СОІУ Гуз СТУ еп ОЇнп Ттр Маї
Зо
Аа Меї Пе 5ег 5ег СТу СТу бег Туг Тіг Туг Туг Аа Авр 5ег Маї 60 35 ув СОТу Аге Ре Аа Це 5ег Аге Авр Авп Аа Гуз Авп ТПг І. еи Рре 65 70 75 80
І си СІп Меї Авр 5ег І еи Аге Рго ОЇ Авр Тіг СТу Маї Туг Рре Сув 40 85 90 95
Аа Аге Нів О1у Авр Авр Рго Аа Ттр Ре Аа Тут Ттр ОТу СІп СТу 100 105 110 45
Ті Рго МаїЇ Тнг Маї 5ег 5ег Аа 5ег Тіг Гув СІу Рго 5ег Маї Ре 115 120 125 50
Рго І ей Аа Рго 5ег 5ег Му 5ег Тг 5ег СТу СТу Тіг Аа Аа Гей 130 135 140
ОтТу Сув Гей МаїЇ Гуз Авр Туг Ріє Рго Сни Рго Маї Тіг Маї 5ег Ттр 145 150 155 160
Авп 5ег Оу Аа І еи Тг 5ег ОТу Маї Нів ТНг Ре Рго Аа Маї І еп 165 170 175
СіІп 5ег 5ег СТУ І еи Туг 5ег І еп 5ег 5ег Ма! Ма! ТНг Маї Рго 5ег 180 185 190
Зег зег еп СОТу Тіт СІп ТНг Туг Це Сув Авп Маї Авп Нів Гу Рго 195 200 205
Зег Авп ТП ув Ма! Авр Гуз був Маї ОЇи Рго Гуз 5ег Сув Авр Гув 210 215 220
Тег Нів Тіг Сухв Рго Рго Суз Рго Аа Рго Си Ге Геи О1у СІу Рго 225 230 235 240
Зег Ма! РІе І еи Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТП І еи Меї Це 5ег
Зо 245 250 255
Ате ТІ Рго СЇши Маї Тіт Сув Маї Маї Маї Авр Маї 5ег Нів СЇш Авр 260 265 270
Рго СЇи Маї Гуз Ре Авп Тгр Туг МУаїЇ Авр СТУ Маї СЇши Маї Нів Авп 215 280 285
Аа Гув Тіг Гуз Рго Аге ОЇ Си Сіп Туг Авп 5ег Тіт Туг Аге Маї 290 295 300
Маї бег Ма! Геи Тіг Ма! І еи Нів СіІп Авр Тгр Гей Авп СІу був СТий 305 310 315 320
Туг був Сув Муз Маї 5ег Авп Гуз Аа Г еп Рго Аа Рго Це Си Гув 5О 325 330 335
Тіг Це 5ег Гув АІа був СТу СЇп Рго Аге Си Рго СІп Маї Туг ТОг 340 345 350
І еи Рго Рго 5ег Аге Авр ОЇ І еи Тг Гув Авп Сп Маї 5ег еп ТНг 355 360 365
Сув Геи Маї Гуз СТу Ре Тут Рго 5ег Авр Пе Аа Маї СЇи Тгр ОЇ 370 375 380 бег Авп СОТу СіІп Рго Си Авп Авп Туг Гуз Тіг Тіг Рго Рго Маї І еп 385 390 395 400
Авр 5ег Авр О1Ту 5ег Ре Ре І еи Туг 5ег МГув Гей ТІг Маї Авр Гуз 405 410 415
Зег Аго Тгр СіІп СІп СТу Авп Маї Ре 5ег Сув 5ег Ма! Меї Нів СЇи 420 425 430
Аа еи Нів Авп Нів Туг Тіг СІп Гуз 5ег І еи 5ег І еи 5ег Рго СІу 435 440 445
Зо
Гув «21052 «21155 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «40052
СОІУ Тут СТУ Гей 5ег 1 5
БО «2105 3
«2115 17 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «2205» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 3
Меї Це 5ег 5ег СОТу СТу 5ег Туг ТІіг Туг Туг Аа Авр 5ег Маї Гув 1 5 10 15
Оу «2105 4 20. «2115 10 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 4
Зо Нів ОЇу Авр Авр Рго Аа Тгр Ре Аа Туг 1 5 10 «2105 5 00 «2115 468 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005» 5
Ме О1у Тгр 5ег Сув Це Це Гей Ре Геп Маї Аа ТІПг Аа Тіг СТу 1 5 10 15
Уа! Нів 5ег ОЇши Маї Сп Геп Маї СЇи 5ег СТу СІу СІу Маї Маї СІп 5О 20 25 30
Рго ОС1у Аго 5ег Гей Аге І еи 5ег Сув 5ег Аа 5ег СТУ Ре ТІг Ре 35 40 45
Зег О1у Туг СІу Геи 5ег Тгр Маї Аге Сп Аа Рго СТу Гуз О1У Гей 50 55 60
СІи Ттр Маї Аа Меї Це 5ег 5ег СТ1у СТу 5ег Туг ТІг Туг Туг АІа 65 70 75 80
Авр 5ег МаіЇ Гув СТу Аге Ріє Аа Це 5ег Агео Авр Авп Аа Гуз Авп 85 90 95
Тіт Гей Ре ГГ еп Сп Меї Авр 5ег І еи Аге Рго СЇйи Авр Тг О1у Маї 100 105 110
Туг Ріре Сув Аа Аге Нів СІу Авр Авр Рго Аа Ттр Ре Аа Тут Ттр 115 120 125
ОСІуУ ОЇп ОСТу Тіг Рго Маї Тіг Маї 5ег 5ег Аа 5егт Тг Гуз О1у Рго 130 135 140
Зо
Зег Ма! Ре Рго І еп Аа Рго 5ег 5ег Гуз 5ег Тг 5ег О1Ту СТУ Тіг 145 150 155 160
Аа Аа Гей С1Ту Сув Гей МаїЇ Гуз Авр Туг Ре Рго СІи Рго Маї Тіг 165 170 175
Уа! 5ег Ттр Авп 5ег СТу Аа І еи ТНг 5ег СТУ Маї Ні Тіг РБе Рго 180 185 190
Аа Ма! І еи СіІп 5ег 5ег СТУ Гец Туг 5ег І еп 5ег 5ег Ма! Ма! ТОг 195 200 205
Уа! Рго 5ег 5ег 5ег еп СТу Тіт СІп ТПг Туг Це Сув Авп Маї Авп 210 215 220
Нів Гув Рго 5ег Азп Тіг був Ма! Авр Гуз Гув Маї ОЇи Рго Гуз 5ег 225 230 235 240
Сув Авр Муз Тіг Нів Тіг Сув Рго Рго Сухв Рго Аа Рго Он І еп І еп 245 250 255
СОІУ О1у Рго 5ег Маї Ріє Гей Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр Тіг Гей 260 265 270
Меї Це 5ег Аге Тіг Рго СЇшм Ма! Тіг Сув Маї Маї Маї Авр Маї 5ег 215 280 285
Нів ОЇшп Авр Рго СЇи Маї Гуз Ріе Авп Тгтр Туг МУаї Авр О1Уу Маї ОЇ 290 295 300
Уа! Нів Авп Аа Гуз ТПг Гуз Рго Аге ОЇй СЇи СТп Туг Авп 5ег ТОг 305 310 315 320 Туг Аге Маї МУаї 5ег Ма! І еи Тіг Ма! І еи Нів Сіп Авр Тгр Гей Авп 325 330 335
СІу Гуз СЇш Туг Муз Сув Гув Маї 5ег Авп Гуз Аа Гей Рго Аа Рго
Зо 340 345 350
Пе СЇш Гуз Тіг Це 5ег Суб Аа Гув СТу Сп Рго Аге Си Рго СІп 355 360 365
Уа! Тут Тіт І еи Рго Рго 5ег Аге Авр Он Геи ТІіг Суб Авп Сп Маї 370 375 380
Зег Геи Тіг Сув Геп Ма! Гуз СОТу Ре Туг Рго 5ег Авр Це Аа Маї 385 390 395 400
СІ Тгр СЇш 5ег Азп СТу СІп Рго СЇшй Авп Авп Туг був Тг Тіг Рго 405 410 415
Рго МУаїЇ Гей Авр 5ег Авр СТу 5ег Ре Ре ГІ еи Туг 5ег Мув еп ТНг 5О 420 425 430
Уаї Авр Гуз бег Аге Ттр СіІп СіІп СІу Авп Маї Ре 5ег Сув 5ег Маї 435 440 445
Ме Нів СЇн Аа ГГ еп Нів Азп Нів Туг Тіг СІп Гуз бег І еи 5ег Гей 450 455 460
Зег Рго СТУ Гув 465 «21056 «2115 217 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4а00»6
Авр Це Сіп ГГ еп ТНг Сп 5ег Рго 5ег 5егт І.еи 5ег Аа 5ег Уа! СІТу 1 5 10 15
Авр Аге МаїЇ ТІг Це Тіг Сув 5ег Маї 5ег 5ег 5ег Це 5ег 5ег Авп 20 25 30
Авп І еп Нів Ттр Туг СІп Сп Був Рго СТу був Аа Рго Гуз Рго Тгр 35 40 45
Це Туг О1у Тіг 5ег Авп І еп Аа 5ег СТу Маї Рго 5ег Аге РНе 5етг 50 55 60
СОІУ бег ОЇу 5ег СО1у Тіг Авр Туг Тіт Ре ТІг Це 5ег 5ег І ей СІп 65 70 75 80
Рго СЇпи Авр Це Аа Тіт Туг Туг Сув СІп Сіл Тгр 5ег 5ег Туг Рго 85 90 95
Туг Меї Туг Тіг Рпе СТу СІп СТу Тіг Гуз МаїЇ СЇи Це Гуз Аге Трг
100 105 110
Уаї Аа Аа Рго 5ег Маї Ре Це РНе Рго Рго 5ег Авр Сни Сіп І еп 115 120 125
Гуз бег ОТу Тіт Аа 5ег Маї Маї Сув Г еп І еп Авп Авп Ре Туг Рго 130 135 140
Ате Си Аа Гуз Маї СІп Тгр Гуз Маї Авр Авп Аа Гей Сп 5ег СІТу 145 150 155 160
Авп 5ег СіІп СІи 5ег Ма! ТНг СЇш СІп Авр 5ег Гув Авр 5ег Тг Туг 165 170 175 5ег І еи 5ег 5ег ТПг Геи ТПг Геи 5ег був Аа Авр Туг СОЇш Гуз Нів 180 185 190
Гуз МУаїЇ Туг Аа Сув СІи Маї Тіг Нів Сп О1У Ге 5ег 5ег Рго Маї 195 200 205
Ті Гуз 5ег Рпе Авп Аге СТу СЇш Сув 210 215
Зо «21057 «211512 «212» ПРТ 0213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 7
Зег Ма! 5ег 5ег 5ег Це 5ег 5ег Авп Авп І еи Нів 1 5 10 «2105 8 «21157 «212» ПРТ 0213» Штучна послідовність
«221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 8
СІу Тіг 5ег Авп І еп Аа 5ег 1 5 «21059 «211511 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 9
СІп Сп Тгтр 5ег 5ег Туг Рго Туг Меї Тут ТІг 1 5 10 «210» 10 «2115 236 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 10
Мег Оу Тгр 5ег Сув Це Це Геи Ре І еи Маї Аа Тіг Аа Тіг О1у 1 5 10 15
Уа! Нів 5ег Авр Це Сп Ге Тіг Сп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 20 25 30
Зег Ма! О1у Авр Аге Маї ТІПг Це Тіг Сув 5ег Маї 5ег 5ег 5ег Це 35 40 45 бег 5ег Авп Авп І еп Нів Тгр Туг СіІп Сп Гув Рго СОІУ Гув Аа Рго
50 55 60
Гуз Рго Тгр Це Туг СТу ТПг 5ег Авп ГІ еп Аа 5ег СТу Маї Рго 5ег 65 70 75 80
Ате Ріе 5ег О1Іу 5ег Оу 5ег СТу Тг Авр Туг ТІг Ре ТІг Це 5ег 85 90 95
Зег Гей Сп Рго ОЇпи Авр Це Аа Тіг Туг Туг Сув СІп Сію Тгр 5ег 100 105 110
Зег Туг Рго Туг Меї Туг Тіг Рпе СТУ СІп Сіу Тіг Гуз МаїЇ ОЇи Це 115 120 125 ув Аге Ті Маї Аа Аа Рго 5ег Маї Ре Це Ре Рго Рго 5ег Авр 130 135 140
СІ Оп Гей Гу 5ег СТу ТіПг Аа 5ег Маї Ма! Сув І еи І еп Авп Авп 145 150 155 160
Ре Туг Рго Аге Си Аа Гуз Маї СіІп Тгр Гуз Маї Авр Ав Аа Гей 165 170 175
Зо
СіІп 5ег ОЇу Авп 5ег СіІп СІи 5ег Ма! ТНг СЇши Сп Авр 5ег Гуз Авр 180 185 190
Зег Тіг Туг 5ег Г еп 5ег 5ег ТПг Геи Тіт Гей 5ег Суб Аа Авр Туг 195 200 205
СТш Був Нів був Маї Туг Аа Сувз СОЇш Маї ТІг Нів Сіп СОІУ Ге 5ег 210 215 220
Зег Рго Ма! Тіг Гуз б5ег Рре Авп Аге Оу СЇи Сув 225 230 235 «210511 «2115 1407 «212» ДНК
«213» Штучна послідовність
«221» джерело 2235 Іпримітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид «400511 асгевагвра всіоасаї ссісцеце, ріарсаасає стасаретеї ссасіссваєт 60 й віссаасіве (ераварсев (ера рієсаассів вссерРісссї рсессівісс 120 ївсіссесаї стеесисас сисавсе вс гас цеї сПеррівар, асаресассі 180 реаааареіс Цраріреоі іосайвай аріарієоів пміарца(ас сіасіаєсса 240 расарірірва арреаврай (есай(аєсе срарасаасе ссаараасас айриссів 300 саааге раса рссігарасс сраарасасс роерістац Шоіесаарасаїррерас 360 й расссессі ррИсерсца йееооссаа росассссео ісассрісіс сісарссісс 420 ассаареесс саїсеріси сссссіреса сссіссісса арарсассісіррреосаса 480 всерССссіро рсірссіррі саареасіас Цссссеаас серірасері рісвівраас 540 ісаресессс г(рассарсео срівсасасс йсссерсіо (ссіасаріс сісарвасіс 600 єгасісссіса рсарсрівоі рассрірссс (ссарсарсі (гросассса рассіасаїс 660 й (весаасоіва аїсасаарсс сарсаасасс ааррісраса агааарцеа рсссаааєсті 720 (рірасаааа сісасаса(е сссассрірс ссарсассіо аасіссівро рерассріса 780 рісцссісі (ссссссааа асссааррас асссісаєра (сісссерас сссірарріс 840 асасесріво (сріорасрі рарссасеаа расссіраро ісаарисаа сісеіасрія 900 расеррсріве аррівса(аа (єссаараса аарссесерро ареарсаріа саасарсася 960 й єассрівіре (сарсріссі сассріссів сассаррасі росівааіро саарраріас 1020 ааріссааро (сіссаасаа арсссіссса всссссаїсе араааассає сіссааарсс 1080 ааароесарс сссрараасс асароівтас асссірсссс са(сссреораравсігасс 1140 аараассаро (сарссірас сірссівріс аааросисі аїсссарсра саїсессяів 1200 раріверава рсайівооса вссераваас аасіасаара ссасессісс сріссіврас 1260
(ссвасеесі ссцсцси абгацсааае сісассріво асаарарсар рівосарсар 1320 врераасрісі (сісаєрсіс срісаєрсаї раресісівс асаассасіа сасрсаваат 1380 арссісіссс (рісісссре рааагра 1407 «210» 12 «2115711 10212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «400» 12 асевагввра всіоасаї ссісцеце, ріарсаасаєв стасарегеї ссасіссвас 60 аєссавсіва сссаравссс аарсарссїів авсессарсе (ре рісасав, арісассас 120 ассівтарівя їсавсісаар (агаарцсс аасаасицес асівріасса всараарсса 180 вріааросіс садарсса(е васасеос асабссаасс(ррсцсіврі(вірссаарс 240 авайсарсе ріарсеріав серіассрас (асассиса сса(сарсар ссіссарсса 300 раргасагсе ссассіасіа сіоссаасав (ерартавиї асссріасає ріасасрийс 360 вреиссаарера ссаареіеса айсааасра асірівосів сасса(сірі сисаїсис 420 ссерссаїсір, аграрсариї рааа(сірра асівссісто Поівірссі всівааіаас 480 Цеабссса варароссаа аріасарісо аароісоаа асесссісса аїсреоіаас 540 ісссаррара рірісасара рсаррасарс ааррасарса ссіасарссі сарсарсасс 600 сірасрсіва рсааарсара сіасрарааа сасааарісі асессірсра арісасссаї 660 савеессіва всісесссеї сасаааравс Цсаасаврее гававісцаа ті «210» 13 «21158 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» 50005221» джерело
«223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 13
Оу Рре Тіг Ре 5ег СТу Туг СТу 1 5 «210» 14 «21158 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» 15. х221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 14
Це 5ег 5ег СІу СТу бег Тут Тиг 1 5 «2105 15 х211512 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» 005221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 15
Аа Аге Нів ОТу Авр Авр Рго Аа Тгр Ре Аа Туг 1 5 10 «210» 16 «21157 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» 221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 16
Бег 5зег Це 5ег 5ег Авп Авп
1 5 «2105» 17 «21153 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 17 СІу Тіг 5ег 1 «210» 18 20. «21511 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 18 з30 СІп СІп Тгтр 5ег 5ег Туг Рго Туг Меї Туг ТІг 1 5 10 «2105» 19 «2115 257 «212» ПРТ «213» Ното варіепв «400» 19
Меї Аа Сіп Аге Меї Тіг ТПг Сп Гей Гей Гей І ей Гей Маї Ттр Маї 1 5 10 15
Аа Уаї Уа! О1уУ ОЇпи Аа Сіп Тнг Аге Це Аа Тгр Аа Аге Тіг Сп 20 25 30
І ей І ей Авп Маї Сув Меї Аві Аа Гуз Нів Нів був ОЇш Гуз Рго СТу 35 40 45
Рго СЇпи Авр Гуз І еп Нів СЇши Сп Сув Аге Рго Ттр Аге Гув Авп Аа 50 55 60
Сув Сув 5ег ТІг Авп Тг 5ег СіІп Си Аа Нів Гуз Авр Маї 5ег Туг 65 70 75 80
Гей Туг Аге Ре Авп Тгр Азп Ні Сув СТу ОЇи Меї Аа Рго Аа Сув 85 90 95
Гуз Аге Нів Ре Це СіІп Авр ТП Сув Гей Туг ОЇи Сув 5ег Рго Авп 100 105 110
І си СІу Рго Тгр Це Сп Сіп Маї Авр Сп 5ег Тгр Аге МГув СЇи Аге 115 120 125
Уа! Гей Авп Маї Рго Геи Сув Суб ОЇи Авр Сув ОЇи Сіп Тгтр Тгр Ой 130 135 140
Авр Сув Агео ТІг 5ег Тут Тг Сув Гуз 5ег Авп Ттр Нів Муз О1у Ттр 145 150 155 160
Авп Тгр Тг 5ег СТу Ре Авп Гуз Сув Аа Маї О1у Аа Аа Сув СІп 165 170 175
Рго Ре Нів Ре Туг Рре Рго ТП Рго Тіг Ма! І еи Сув Авп Си Це 180 185 190
Тгр Ті Нів 5ег Туг Гув Маї 5ег Авп Тут 5ег Аге Оу бег С1у Аге 195 200 205
Сув Це СІп Меї Ттр Ре Авр Рго Аа Сіп Су Авп Рго Авп Сн Си 210 215 220
Уаї Аа Аге Ріе Туг Аа Аа Аа Меї 5ег О1у Аа О1у Рго Тгр Аа 225 230 235 240
Аа Тгр Рго Ре І еп І еп 5ег І еи Аа І еи Ме І си Гей Тгтр Гей Гей
245 250 255 зег «2105 20 «2115 982 «2125 ДНК «213» Ното варіепв «400» 20 сацессцее гессасівас сасарсісц і(сцсаврера сарасасєвес (їсарсевае 60 й асаасасарс (есівсісстї Істарівівя, пів рсіар гарреварес їсавасаавя 120 айесагере, ссарвасіва рсиссааї рістесаїєва асессаарса ссасаареаа 180 аарссаресс ссрареасаа еЦесагсар сарівісвас ссірсраврраа раа(оссівс 240 (рисіасса асассарсса реаарсссаї ааррасц ссіассіас(атарацсаас 300 (геаассасі рісварараї ресассірсс (есааасрес ашісаєсса ррасассірс 360 й сістасрарі ясісссссаа сцереросессс (роассарс ареісеаєса рарсівосяс 420 аааравсере (асіваасрі рссссіріос ааарарсасі рісарсаа(е рісосеаараї 480 Ірісесассі сегасассіо саарарсаас Іресасааре рсісораасір расисартя 540
Шаасаарі рсесарівре арсівссівс саассіфсс ашісіасий ссссасассс 600 асірисіві рсайсгааваї сісрасісас (ссіасааро Ісарсаасіа сарссрарят 660 й арірессесі всаїссараї ріверицсрас ссарсссаро рсаассссааврарраррія 720 всваррисі аг(осівсарс саграрісео всірросссі реосарссів рссціссівя 780 сцарссіре сссіааесі рсіріросів сісарсівас сісспцас сисіваєсас 840 сіррааасс сірсссірії сарссссаса рсісссаасташериссіосіссаєрт 900 (серессісї расарссасі йцеайааас сарасассес асас(сівсіссіраваацає 960 й нераааааа аааааааааа аа 982 «210521 0 «2115 1255
«212» ПРТ «213» Ното варіепв «4005 21
Меси Гей Аа Аа ГГ ей Сув Аге Ттр ОС1У Гей Гей Гей Аа Ге Гей 1 5 10 15
Рго Рго СІу Аа Аа 5ег Тіг СіІп МаїЇ Суб Тіг С1у Тіт Авр Меї Гуз 20 25 30
І ей Аге І еп Рго Аа 5ег Рго СЇи Тіг Нів Ге Авр Мей І ей Аге Нів 35 40 45
І си Туг СІп СТу Сув Сп Маї Маї СІп СТУ Авп І еи Си Геи Твг Туг 50 55 60
І еи Рго ТІг Авп Аа 5ег І еи 5ег Ре Гей СіІп Авр Це СІп СЇпй Маї 65 70 75 80 СОІп СТу Туг МаїЇ І еп Це Аа Нів Авп Сп Маї Аге Сіп Маї Рго І еп 85 90 95
СІп Аге Гей Аге Це Маї Аге Сіу ТІПг Сп еп Рбе Ой Авр Авп Туг
Зо 100 105 110
Аа еи Аа Ма! І ей Авр Авп ОСІу Авр Рго Гей Авп Авзп ТВг Тг Рго 115 120 125
Уа! Тіт О1у Аа 5ег Рго СІу О1Ту Геп Аге ОЇ І еи Сіл Гей Аге 5ег 130 135 140
І ви ТІг ОЇш Це Гей був СТу СТу Ма! І еп Це Сп Аге Авп Рго СіІп 145 150 155 160 Іеци Сув Туг СІп Авр ТІг Це І еи Тгр Гуз Авр Це Ре Нів Гув Авп 165 170 175
Авп Сп Гей Аа Гей Тіт Гей Це Авр Тг Авп Аге 5ег Аге Аа Сув 5О 180 185 190
Нів Рго Суз 5ег Рго Меї Сув Гуз Оу 5ег Агео Сув Тгр ОЇу СЇи 5ег 195 200 205
Зег ОЇш Авр Сув Сіп 5ег Їеи ТНг Аге Тіг МаїЇ Сув Аа О1у О1у Сув 210 215 220
Аа Атге Сув Гуз О1Ту Рго І еп Рго Тіг Авр Сув Сув Нів ОЇпи СІп Сув 225 230 235 240
АЇІа АІа СІу Сув ТІг ОТу Рго Муз Нів 5ег Авр Сув Гей Аа Сув І еп 245 250 255
Нів Ре Авп Нів 5ег СТу Це Сув ОЇи Ге Нів Сув Рго Аа ГГ еи Маї 260 265 270
Тіг Туг Авп ТІг Авр ТНг Ре Си 5ег Меї Рго Авп Рго Сп ОС1у Аге 215 280 285
Туг Ті Ріе О1у Аа 5ег Сув Ма! Тнг Аа Сухв Рго Туг Авп Туг Гей 290 295 300
Зо
Зег Тіг Авр Маї СТу 5ег Сув Тіг І еи Маї Сухв Рго Г еп Нів Авп СІп 305 310 315 320 СІи МаЇ Тг Аа СІш Авр О1Ту Тіг Сп Аге Суб СТи був Сув бБег Гув 325 330 335
Рго Сув Аа Аге МУаї Сув Туг О1у еп О1у Меї Сни Нів І ей Аге Сп 340 345 350
Уаї Аге Аа МУаї Тіг 5ег Аа Авп Це Сіп СОЇи Ре Аа С1у Сув Гув 355 360 365
Гуз Це Ріе О1Уу 5ег І еп Аа Ре Гей Рго ОЇи 5ег Рре Авр СІу Авр 370 375 380
Рго Аа 5ег Авп Тг Аа Рго І ей Сп Рго СЇи Сіп Гей Сп Маї Ре 385 390 395 400
ОЇ Тг Гей ОЇпй ОЇш Це Тіг Су Туг Ге Туг Це 5ег Аа Тгр Рго 405 410 415
Авр 5ег І еи Рго Авр ГГ еп 5ег Маї Рре Сіп Авп Гей Сп Маї Це Аге 420 425 430
СОІУ Аге Це І еп Нів Авп Оу Аа Туг 5ег Геи ТНг Гей Сп О1у Гей 435 440 445
СІу Це 5ег Ттр Ге О1у Гей Агое 5ег Гей Аге Оп Гей Оу 5ег СТу 450 455 460
І еи Аа І еп Це Нів Нів Авп Тг Нів Ге Сув Ре Маї Ні Тіг Маї 465 470 475 480 Рго Тгр Авр Сп Гей Рре Аге Авп Рго Нів Сіп Аа ГГ еп І еи Ні Тіг 485 490 495
Аа Авп Аге Рго СЇшп Авр ОЇпи Сув МаїЇ СТУ СТи О1Ту Гей Аа Сузв Нів
Ко 500 505 510
СіІп Гей Сув Аа Аге СІу Нів Сув Тгр Оу Рго Оу Рго Тіг СіІп Сув 515 520 525
Уаї Авп Сув 5ег СІп Ре І еп Аге О1у СіІп ОЇпи Сув МаїЇ ОЇш Си Сув 530 535 540
Ате МУаїЇ І еп СІп СТУ Г еп Рго Аге ОЇ Туг МаїЇ Авп Аа Аге Нів Сув 545 550 555 560
І еп Рго Сув Нів Рго ОЇш Сув СІп Рго Сіп Авп О1у 5ег Ма!Ї Тіг Сув 565 570 575
Ре О1Іу Рго Сн Аа Авр Сіп Суз Маї Аа Суз Аа Нів Туг Гув Авр 5О 580 585 590
Рго Рго Ріє Сух Маї Аа Аге Сухв Рго 5ег СОТу МаїЇ Гув Рго Авр Гей 595 600 605
Зег Тут Меї Рго Це Ттр Гуз Ре Рго Авр ОЇ СЇи СІу Аа Сув Сп 610 615 620
Рго Сухв Рго Це Авп Сув ТІ Нів 5ег Сув МаїЇ Авр Гей Авр Авр Гуз 625 630 635 640 СІу Сув Рго Аа СЇп Сп Аге Аа 5ег Рго І еи ТПг 5ег Це Це 5ег 645 650 655
Аа Уаї Уа! О1у Це Гец І еи Маї Маї Маї Гей СТу Маї Маї Рре СТу 660 665 670
Це Ге Це Гуз Аго Аге Сп СІп Гув Це Аге Гуз Туг Тіг Меї Аг 675 680 685
Ате І еп І еп СіІп СЇи Тіт ОЇ Гей Маї СІ Рго Гей Тг Рго 5ег СТу 690 695 700
Зо
Аа Меї Рго Авзп Сіп Аа Сіп Меї Аге Це Гей Гув СТи Тіг СІ Гей 705 710 715 720 Аге Гув Ма! Гуз Ма! еп О1у 5ег ОТу Аа Ре С1Ту Тіг Маї Туг Гув 725 730 735
СОІУ Це Тгр Це Рго Авр О1у ОЇшп Авп Маї Гуз Це Рго Маї Аа Це 740 745 750
Гуз Ма! І ей Аге Сп Авп Тіг 5ег Рго Гув Аа Авп Гуз Си Це Гей 755 760 765
Авр Сп Аа Туг МУаї Меї Аа С1у Маї О1у 5ег Рго Туг Маї 5ег Аге 7 715 780
І си Геи СТУ Це Сув Ге ТНг 5ег ТІПг Маї СіІп Гей Маї Тг Сп Гей 785 790 795 800
Ме Рго Туг СО1Ту Суб Гец І еп Авр Нів Маї Агео ОЇ Авп Аге Оу Аге 805 810 815
І си ОС1Ту 5ег СіІп Авр Ге Гей Авп Тгр Сув Меї СіІп Пе Аа Гуз СІТу 820 825 830
Меї 5ег Туг І ей ОЇпй Авр Маї Аге І еи Маї Нів Агео Авр І еп Аа Аа 835 840 845
Ате Авп Ма! Ге МаїЇ Гуз 5ег Рго Азп Нів Маї Гуз Це Тіт Авр Ре 850 855 860
СОІУ Гец Аа Аге І еи І еи Авр Це Авр СЇи Тіг СІи Туг Нів Аа Авр 865 870 875 880 ОІу СТу Гуз Маї Рго Пе Гуз Тгр Меї Аа ГГ еп Си 5ег Це Гей Аге 885 890 895
Ате Аге Ре Тіг Нів Сп 5ег Авр Маї Тгр 5ег Туг СТУ Ма! Тнг Маї
Ко 900 905 910
Тгр ОЇш І еи Меї Тіг Ре Оу Аа Гуз Рго Туг Авр Оу Це Рго Аа 915 920 925
Ате СІи Це Рго Авр Гей Ге СЇш Гуз О1у ОЇн Аге ГГ еи Рго Сіп Рго 930 935 940
Рго Це Сувз Тіг Це Авр Маї Туг Меї Це Меї Маї Гуз Сув Тгр Ме 945 950 955 960
Це Авр 5ег СЇш Сув Аге Рго Аге РНе Аге СІи І еи Маї 5ег ОЇи Ре 965 970 975 5Зег Аго Меї Аа Аге Авр Рго Сіп Аге Ріе Маї МаїЇ Це Сіп Авп СЇи 5О 980 985 990
Авр Ге Оу Рго Аа 5ег Рго Гей Авр 5ег ТП Рре Туг Аге 5ег І еп 995 1000 1005
Іеи СОЇш Авр Авр Авзр Мес ОЇу Авр І еи Маї Авр Аа СІ Сни Туг 1010 1015 1020
І си Маї Рго СіІп СІп СІу Рре Ре Сух Рго Авр Рго Аа Рго Оїу 1025 1030 1035
Аа СІу Оу Меї Маї Нів Нів Аге Нів Аге 5ег б5ег 5ег ТІг Аге 1040 1045 1050
Зег СОТу ОСТу ОТу Авр Гей Тіг Геп Оу Гей Ой Рго 5ег ОЇпи ОЇий 1055 1060 1065
СІ Аа Рго Аге 5ег Рго ЇГеи Аа Рго 5ег ОЇш С1Ту Аа О1у 5ег 1070 1075 1080
Авр Ма! Ре Авр СІу Авр Геп ОТу Меї О1у Аа Аа Гуз С1Уу Гей 1085 1090 1095
Зо
СІп 5ег І еи Рго ТІ Нів Авр Рго 5ег Рго Ге СіЇп Аге Туг 5ег 1100 1105 1110
СІшй Авр Рго Тг Маї Рго Гецп Рго 5ег СОЇш ТІПг Авр Оу Туг Маї 1115 1120 1125
Аа Рго Гей ТП Сув бег Рго Сіп Рго СЇи Тут Ма! Авп Сп Рго 1130 1135 1140
Авр Маї Аге Рго Сіп Рго Рго 5ег Рго Аге Си СІу Рго Гей Рго 1145 1150 1155
Аа Аа Аге Рго Аа СіІу Аа Тг Гей Ой Аге Рго Гуз Тіг Гей 1160 1165 1170
Зег Рго Оу Муз Авп СТу Ма! МаїЇ Гуз Авр Маї Рре Аа Ре Су 1175 1180 1185
Оу Аа Маї СЇш Авп Рго СЇш Туг Геп Тг Рго СІп С1Ту О1у Аа 1190 1195 1200
Аа Рго Сіп Рго Нів Рго Рго Рго Аа РБе 5ег Рго Аа Ріре Авр 1205 1210 1215
Авп еп Туг Туг Тгр Авр СІп Авр Рго Рго Сп Аге ОС1Іу Аа Рго 1220 1225 1230
Рго 5ег ТІг Рпе Гуз СО1у Тіг Рго ТНг Аа Спи Авп Рго СІни Туг 1235 1240 1245
Іеи СТУ Гей Авр Маї Рго Маї 1250 1255 «210522 «211» 3768 «212» ДНК «213» Ното варіепв з30 «4005 22 асераєвєсіве сервссцрів ссесівреее, сіссіссіся сссісЦесс ссссерарсс 60 всварсассс ааріоівсас сеесасарас аїеаарсівс врсісссівс сарісссвав 120 асссассіре, асаг(есісся ссассі тас сарерсівсс арвіврівса верааассів 180 раасісассі ассірсссас саагрссарс сіріссцсс (рсареа(са(ссаррареіо 240 сарерсіасе (осісагсес (сасаассаа ріраррсаро (сссасівса раросіосто 300 айрірсвар рсасссарсі сшеарсас аасіа(ессс (рессріссіарасааірра 360 васссесіса асацаіассас ссетоісаса вееессіссс савеаврессії всееварсів 420 сарсцсераа рссісасара вгаїсцоааа ррароерісі(рагссарся раасссссая 480 сістостасс аррасасраї Шеіераар расаєсисс асаараасаа ссарсіввсі 540 сісасасіра (арасассаа ссрсісісре вссірссасс ссірисісс раївіріаає 600
РеСіСссрсі рсіррорара рарисівав райоісара рссірсасесе сасісісівї 660 вссеріврсі рівсссесів саарорососса сірсссасів асіосіоссаврарсавівї 720 всірссросі рсасерессс саарсасісї расісссіро ссірссісса сийсаассас 780 аріресасі рірарсіоса сірсссарсс сіврісассі асаасасара сасеШрар 840 (ссагрссса аїсссрарео ссеріа(аса Псеесесса рсірірівасірссівіссс 900 й єасаастасс Шегасрва срірерасс (осасссісе (сірсссссі рсасаассаа 960 раррісасар сарарра(се аасасарсео Ірісараарі рсарсаарсс сіріосссва 1020 рі(ріосіасо рісіреосаї реарсасце сраравріса рессарцас сарієссаає 1080 асссарварі Цесіресів саараараїс Шеррарсс іресацшісі яссвраравс 1140
Швеагвеоро асссарссіс саасасірсс ссрсіссарс сарарсарсі ссааріецйй 1200 й рарасісівео аарараєсас арецЦассга (асагсісар са(сессевра сарссівссії 1260 рассісарсе (сцссараа ссіссааріа аїссроорас раайсірса сааїросясс 1320 Часісесіра сссірсааро рсіреосаїс арсіросіре росірсесісасірарортаа 1380 сірресарія расівсосссі саїссассаї аасасссасс (сірсцсрі всасасреіє 1440 сссірерасс арсісшісея раасссесас саарсісірс (ссасасірс саассвосса 1500 й равргасрарі рісісовосра реоссівосс (вссассарс (рівсесссея ареосасівс 1560 (рееріссар ррсссассса рірісісаас (есарссарі (ссисррро ссаррарієс 1620 рівраррайї рссраріасі рсарееесіс сссаресарі аг(оісаасос саросасівї 1680 цПессрірвсс асссіраріо (сарссссар айгеосісар ірассіс(Ші(ррассртат 1740 всірассарі рівірессір (есссастіаї ааррасссіс ссИсіосрі ресссесіос 1800 й сссарсеріе (гааассіра ссісісстас агесссаїсі ррааріцсс араєрарврар 1860 весесаїрсс арссцрссс сабсаасівс асссасіссі рісіврассі рра(расаар 1920 врсірссссе ссрарсарар арссарсссі сісасрісса (сагсісівс реірейрес 1980 айсівсіво (свіррісИ рреорісріс Шееосасс (саїсаарсе асросарсая 2040 аараїссева аріасасраї рсерарасіє сіссаррааа сррарсіреі ррарссясів 2100 асассіарсе варсра(рсс саассарося сараїрсера (ссівааара расррарсія 2160 аврраарріва арріссцре а(сівосрсі Шеесасар Істасаарео саїсірває 2220 ссіра(реоо арайа(соісаа аайссаріо рсса(сааар (гЦрареса ааасасаєсс 2280 сссааарсса асадаараааї сцарасраа всагасріва (еосіреірі рерсісссса 2340 (агрісіссс рссцсірее сасірссіо асабссасере (весарсіреі расасавси 2400 й асесссіаге рсівссісу арассаїріс сереаааасс рсерасессі реросісссар 2460 вассірсіва асівріраї рсарайрсс аарресара рсіассіввра ррагрівсвя 2520 сісвтасаса роерасирес сесісреаас ріосісоіса арарісссаа сса(рісааа 2580 айасарасі (серосірос (сеосіосів расацеасе арасараріа ссаєрсаває 2640 вгеррерсааре (всссасаа рісрагросе сірварісса Цсіссрссея рсррйсасс 2700 й сассарарів а(сісіврат Цасеоіоо асіріоівоо арсіраєрас Шеротсс 2760 ааассцасе а(серассс арсссерерар а(сссірасс (рсірраааа ререрарсвр 2820 сірссссарс сссссасіо сассайраї рістасаєра (сасосісаа асейераєт 2880 айрасісір, айісісеесс аарайссеео варцерісі сіраайсіс ссевсагрясс 2940 арреассссс арсесцвї ррісаєссає ааграррасі(серосссарс саріссся 3000 й расарсассі (стассрсіс асіосірвар расрагєраса (сооорассі ррівраєрсі 3060 враргартас (еріасссса рсароесцс Псіріссар асссівсссс реросесівря 3120 ррса(ррісс ассасареса ссесарсіса Ісіассарра рісосерівр ррассіраса 3180 сіареесіво арсссісівра арарраресс сссаррісіс сасівосасс сіссваарря 3240 всіррсіссе агеташва (соісассір ррайаісорео сарссаарре рсіосааавс 3300 й сіссссасас агсассссав сссіссасар серіасаріо аррассссас аріассссір 3360 сссісірава сіра(єресіа сейрссссс сірассівса рсссссарсс (ваасаєрів 3420 аассарссар а(гИсерсс ссарсссссі Ісрссссврар арросссісі рссірсівсс 3480 срассірсів рівссасісї ррааарессс аарасісісі ссссарераа раа(сореіс 3540 рісадараст ШИрессИ (роорріосс рісрараасс ссраріаси расассссар 3600 враврарсія ссссісарсс ссасссіссі ссівссцса рсссарссц срасаассіс 3660 сацасірео ассаррассс ассарарсео рооосіссас ссарсасси сааарераса 3720 с«васеесар араасссара ятассіреі сіврасеес саріріва 3768 «2105 23 «2115 119 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 23
СІи МаїЇ Сів Г еп МаїЇ СОЇ 5ег СТу СТу СТу Маї Маї Сіп Рго О1у Ага 201 5 10 15
Зег І еи Аге Ге 5ег Сув 5ег Аа 5ег С1у Ре Тіт Ре 5ег ОТу Туг 25
СОІУ Гец 5ег Тгр Маї Аге СіІп Аа Рго О1Іу Гуз СОІУ Геп Оп Тгр Маї
Зо
Аа Меї Пе 5ег 5ег СТу СТу бег Туг Тіг Туг Туг Аа Авр 5ег Маї 60 35 ув СОТу Аге Ре Аа Це 5ег Аге Авр Авп Аа Гуз Авп Тг Геи Рре 65 70 75 80
І си СІп Меї Авр 5ег І еи Аге Рго ОЇ Авр ТП СтТу Маї Туг Рпе Сув 40 85 90 95
Аа Аге Нів О1у Авр Авр Рго Аа Тгр Ре Аа Тут Ттр СІу СІп СТу 100 105 110 45
Ті Рго МаїЇ Тнг МУаї 5ег 5ег 115 50
«2105 2А «2115 110 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 2А
Авр Це Сіп ГГ еп ТНг Сп 5ег Рго 5ег 5егт І.еи 5ег Аа 5ег Уа! СІТу 1 5 10 15
Авр Аге Маї Тіт Пе ТІг Сув 5ег Маї! 5ег 5ег 5ег Це 5ег 5ег Авп 20 Авп Гей Нів Тгр Туг СІп Сп Гуз Рго С1у Гув Аа Рго Гуз Рго Ттр
Пе Туг О1у Тіг 5ег Авп І еп Аа 5ег СТу Маї Рго 5ег Аге Ре 5ег 25 50 55 60
СОІУ бег ОЇу 5ег СО1у Тіг Авр Туг Тіт Ре ТІг Це 5ег 5ег І ей СІп 65 70 75 80
Зо
Рго СЇпи Авр Це Аа Тіт Туг Туг Сув Сп Сп Ттр 5ег 5ег Туг Рго 85 90 95 35
Туг Меї Туг Тіт Рре ОТу СІп СТу Тіг Гуз Ма! ОЇш Це Гуз 100 105 110 40 «2105 25 «2115 119 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність 45 0 «2205» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 25
СІп Маї Сп Гей Сп Сп 5ег С1Ту Рго СІи Гей СЇш Гув Рго СТу Аа 1 5 10 15 бег МаЇ Гуз Це 5ег Сув Гуз Аа 5ег ОТу Туг 5ег Ре ТІіг СІу Туг 20 25 30
Тіп Меї Авп Ттр Маї Гув Сп 5ег Нів О1у Гуз 5ег Гей ОЇи Тгр Це 35 40 45
СТУ Гец Це ТНг Рго Туг Авп ОС1Ту Аа 5ег 5ег Туг Авп Сіп Гув Ре 50 55 60
Ате СІу Гув Аа Тг Геи Тг Маї Авр Гуз 5ег б5ег 5ег ТІг Аа Туг 65 70 75 80
Меї Авр Г еп І си 5ег Геи Тг 5ег ОЇй Авр 5ег Аа Маї Туг Ре Сув 85 90 95
Аа Аге Оу О1у Туг Авр ОЇу Аге С1Іу Ре Авр Туг Тгр ОІу 5ег СТу 100 105 110
Ті Рго МаїЇ Тнг МУаї 5ег 5ег
Зо 115 «2105» 26 «2115 106 з35 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 26
Авр Це СІ І еи Тг Сп 5ег Рго Аа Це Меї 5ег Аа 5ег Рго СІТу 1 5 10 15
СІ Гув Ма! Тіг Меї Тіг Сув 5ег Аа 5ег 5ег 5зег Ма! 5ег Туг Меї 20 25 30
Нів Ттр Тут СОЇІп Сіп Суб 5ег СТу ТПг 5ег Рго Гуз Аге Тгр Це Туг 35 40 45
Авр ТІг 5ег Муз І ей Аа 5ег О1у Маї Рго Су Аге Ріе 5ег СТу 5ег 50 55 60
СІу бег ОЇу Авп 5ег Туг 5ег еп ТІг Це 5ег 5ег Ма! СЇшми Аа Си 65 70 75 80
Авр Авр Аа Тіг Туг Туг Сув СІп Сп Тгр 5ег Гуз Нів Рго Гей ТОг 85 90 95
РІе СІу 5ег О1у Тіт Гуз Маї ОЇш Пе Гув 100 105 «2105 27 «2115 120 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 27
СІи Маї Сів ГГ еп МаїЇ ОЇш 5ег СТу СТу СТУ І еи Маї Сіп Рго С1у О1у 1 5 10 15
Зег Гей Аге Ге 5ег Сув Аа Аа 5ег О1у Ре Азп Пе Гув Авр Тиг 20 25 30
Туг Це Нів Тгр Маї Аге Сп Аа Рго СІу був СТУ ІГеи ОЇи Тгр Маї 35 40 45
Аа Аге Це Туг Рго Тіг Авп СІу Туг ТПг Аге Туг Аа Авр 5ег Маї 60
Гуз СІу Аге Рпе ТНг Це 5ег Аа Авр ТІг 5ег Гуз Авп Тіг Аа Туг 5065 70 75 80
І еи СІп Меї Авп 5ег І еи Аге Аа СЇй Авр Тіг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95
Зег Аго Тгр СІу СТу Авр Су Ре Туг Аа Меї Авр Тут Тгр О1у Сп 100 105 110
СІу Тіг ГГ еи Маї Тг Маї 5ег 5ег 115 120 «2105 28 «2115 107 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005» 28
Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Уа! СТу 1 5 10 15
Авр Аге МаїЇ ТІг Це Тіг Сув Агео Аа 5ег СіІп Авр МаїЇ Азп ТП Аа 20 25 30
Уа Аа Тгр Туг Сіп Сп Гуз Рго С1у Гуз Аа Рго Гуз Гей Гей Це 35 40 45
Туг бег Аа 5ег Ре І еи Туг 5ег О1у Маї Рго 5ег Аге Ре 5ег СІу 50 55 60 5Зег Аго 5ег С1у Тіт Авр Ре ТІг Іеи ТПг Це 5ег 5ег ІГеи Сп Рго 65 70 75 80
СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув СІп СіІп Нів Туг ТНг Тг Рго Рго 85 90 95
ТІ Ррбе СІу СЇІп СТу Тіг був Маї ОТи Це Гув
100 105 «2105» 29 «2115 123 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» 105221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 29
Сп 5ег МаЇ СЇп ОЇни 5ег СТу О1у Аге Геи Маї Тг Рго С1Іу Тіг Рго 1 5 10 15
І ви ТІг Геп Тіг Сув Тіг Маї 5ег ОТу Це 5ег І еи 5ег 5ег Авр Аа 20 25 30
Це 5ег Тгр Маї Аге Сп Аа Рго СІу Гуз СТУ Гей ОЇи Туг Це СТу 35 40 45
Пе Це Авп Су Оу СІу Авзп Тг Туг Туг Аа 5ег Ттр Аа Гуз О1у 50 55 60
Зо
Ате Рре ТІг Це 5ег Гуз Тіг 5ег Тіт Тіт Маї Авр Гецп Гуз Пе ТОг 65 70 75 80 5ег Рго Тг Тіг СЇш Авр Тіг Аа Тіт Туг Ре Сув Аа Аге СТу Це 85 90 95
СІп Нів СІу ОТу СТу Авп 5ег Авр Туг Туг Туг Туг ОТу Меї Авр Гей 100 105 110
Тгр Оу Рго О1у Тіг Гей Маї Тіг Маї 5ег 5ег 115 120 «210» 30 «2115 112 «212» ПРТ 0213» Штучна послідовність
«221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 30
СІи МУаїЇ І еи Меї Тіг Сіп Тіг Рго 5ег 5ег Ма! 5ег Аа Аа МУаї СІу 1 5 10 15
Авр Тіг Маї ТПг Це Гуз Сув СІп Аа 5ег Сп 5ег Це 5ег 5ег Маї 20 25 30
І еи 5ег Тгр Туг Сіп Сп Гуз Рго О1у Сп Рго Рго Гуз Гец Гей Це 35 40 45
Туг Гей Аа 5ег ТІг І еи Аа 5ег Оу Маї Рго 5ег Аге Ре 5ег СІу 50 55 60
Зег Аго 5ег СТУ Тіт ОЇи Ре ТНг Геи Трг Це 5ег Авр Гей ОЇи Сув 65 70 75 80
Авр Авр Аа Аа Тіт Туг Туг Сув СіІп Тіг Авп Туг СІу Тіт 5ег 5ег 85 90 95
Зо
Зег Авп Туг СТу Ре Аа Рре СТу СОТу СТу Тіг СЇпи Маї Маї Ма! Гув 100 105 110 «210» 31 «2115 126 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 31
СІи Маї Сів ГГ еп МаїЇ ОЇш 5ег СТу СТу СТУ І еи Маї Сіп Рго С1у О1у 1 5 10 15
Зег І еи Аге Ге 5ег Сув Аа Аа 5ег О1у Це 5ег І еи 5ег 5ег Авр 20 25 30
Аа Це 5ег Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго СТу Гуз О1у Гей ОЇи Туг Це 35 40 45
СОІУ Це Це Авп ОТу СТу СТу Авп ТІг Туг Туг Аа 5ег Тгр Аа Гув 50 55 60
СОІУ Аге Ре Тіт Це 5ег Аге Нів Авп 5ег Гуз Авзп ТПг ГГ еп Тут І ей 65 70 75 80
СіІп Меї Авп 5ег І еи Аге Аа Сп Авр Тг Аа Маї Туг Туг Сув Аа 85 90 95
Ате СІу Це СіІп Ні СІу ОІу О1у Авп 5ег Авр Туг Туг Туг Туг СІТу 100 105 110 Мег Авр Г еп Тгр СТУ СЇп С1у ТНг Ге Ма! ТНг Маї 5ег 5ег 115 120 125 «2105» 32 «2115112 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» 005221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 32
Авр Це СІп Меї Тіт Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еп 5ег Аа 5ег Ма! СТу 1 5 10 15
Авр Аге Маї Тіг Це Тіг Сув Сп Аа 5ег Сіп 5ег Це 5ег 5ег Маї 20 25 30
І еи 5ег Тгр Туг Сіп Сп Гуз Рго С1у Гуз Аа Рго Гуз Гей Гей Це 35 40 45
ТугІ еп Аа 5ег Тіг І еп Аа 5ег О1Ту Маї Рго 5ег Аге Рре 5ег О1у 50 55 60
Зег ОТу бег СТУ Тіг Авр Ре ТІг Іеи ТІг Це 5ег 5ег Іеи СІп Сув 65 70 75 80
СІ Авр Це Аа Тг Туг Туг Суб СІп Тіг Авп Туг О1Іу Тіт 5ег 5ег 85 90 95 5Зег Авп Туг СТу Ре Аа Рре СТу СТу СТу Тіт Гув Маї ОЇш Пе Гув 100 105 110 «2105» 33 «2115118 20212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело 25 «223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 33
СіІп 5ег МаЇ Си Си б5ег СТу О1у Аге Геи Маї Тг Рго СІу Тіг Рго зо 1 5 10 15
І си ТІПг Геп ТОг Сув Тіг Маї 5ег СІу Ре 5ег І еи Авп Авп Туг Аа
Меї 5ег Тгр Маї Аге СіІп Аа Рго О1у Гуз С1у еп Оп Ттр Це СІу 35 40 45
Зег Це 5ег Тіг О1Іу СІу Гей Аа Ре Туг Аа Авп Тгр Аа Гув СТу 50 55 60 Аге РПе Тг Це 5ег Агео ТІг 5ег Тіг ТНг МаїЇ Авр І еи Гув Ме Тиг 65 70 75 80
Зег Геи Тіг Тіг СЇй Авр Тіг Аа Тіг Туг Рре Сув СТу Агео Авп ОСТу 5О 85 90 95
СтІу О1у бег Туг Це Ре Туг Туг Рре Авр Геп Ттр СТу СІп С1Ту ТНг 100 105 110
І си Маї ТІг Маї 5ег бег 115 «2105» 34 «2115 108 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 34
Аа Ріе ОЇ Ге Тг Сп Тг Рго 5ег 5ег Ма! ОЇи Аа Аа Маї О1у 1 5 10 15
СтТу Тіг Це Тіг Це Гуз Сув Сіп Аа 5ег Сіп 5ег Це 5ег 5ег Туг 20 25 30
ТГец 5ег Тгр Туг СіІп СіІп Гуз Рго СІу Сіп Рго Рго Гуз Гей Гей Це
Туг бег Аа 5ег ТІг І.еи Аа 5ег Оу Маї 5ег 5ег Аге Ре Гув СІТу 35 50 55 60
Зег ОТу 5ег СТу Тіт См Туг ТІПг Геп Тг Це 5ег Авр І ей СЇшм Сув 65 70 75 80 40
Аа Авр Аа Аа Тіг Туг Ріе Сув Сп 5ег Туг Туг Авр Це СІу Тіг 85 90 95 45
Зег Тіг Ре ОС1у ОІу О1у Тіг ОЇши Маї Маї МаїЇ Гув 100 105 «2105 35
«2115 121 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «2205» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 35
СІи Маї Сів ГГ еп Маї ОЇ 5ег СТу СТу СТУ І еи Маї Сіп Рго С1у О1у 1 5 10 15 5ег Гей Аге Гец 5ег Сув Аа Аа 5ег Оу Ре 5ег Гей Авп Авп Туг
Аа Меї 5ег Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго С1у Гуз О1у Гей ОЇи Ттр Це 20 35 40 45
СОІУ 5ег Це 5ег ТіПг СІу СОІУ Геп Аа Ріє Туг Аа Авп Тгтр Аа Гуз 50 55 60 25
СІу Аге Ре ТІг Це 5ег Агео Авр Авп 5ег Губ Авп ТІг І ей Туг Гей 65 70 75 80
Зо
СіІп Меї Авп 5ег І еи Аге Аа Сп Авр Тг Аа Маї Туг Туг Сув Аа 85 90 95
Аг Авп ОЇу СІу СТу 5ег Туг Це Ре Туг Туг Ріє Авр Гей Тгр СІу 100 105 110
СІп ОТу ТПг Ге Ма! Тнг Маї 5ег 5ег 115 120 «210» 36 «2115 108 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело 00223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 36
Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Ма! СТУ в і 5 10 15
Авр Аге Маї Тіг Це Тіг Сув Сп Аа 5ег Сіп 5ег Це 5ег 5ег Туг 20 25 30
І еи 5ег Тгр Туг Сіп Сп Гуз Рго С1у Гуз Аа Рго Гуз Гей Гей Це 35 40 45
Туг бег Аа 5ег ТІг І .еи Аа 5ег О1у Маї Рго 5ег Аге Рре 5ег ОЇу 50 55 60 бег ОЇу 5ег ОТ1у Тіг Авр Ре ТІг Іеи ТПг Це 5ег 5ег Іеи СІп Сув 65 70 75 80
СІ Авр Аа Аа ТІг Туг Туг Сув Сіп 5ег Туг Туг Авр Це СТу ТОг 85 90 95
Зег Тіт Ре С1Іу ОІу СТу Тіт Гуз Маї ОЇш Це Гув 100 105
Зо «2105 37 «2115 114 «212» ПРТ 0213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 37
СІп 5ег Ма! Гуз Сни бег СТу О1у Аге Геи Маї Тг Рго СІу Тіг Рго 1 5 10 15
І ви ТІг Геи Тг Сув Тіг Маї 5ег СТу Це Авр Г еп 5ег 5ег Туг Аа 20 25 30
Мег Оу Тгр Ріє Аге Сіп Аа Рго Су Гу О1уУ Гей СЇши Туг Це О1у 35 40 45
Ті Це Авп Це СТу ОІу Аге Маї Туг Туг Аа 5ег Тгтр Аа Гуз О1у 50 55 60
Ате Рре ТІг Це 5ег Аге ТПг 5ег ТІПг Тіг Маї Авр Ге Гуз Аа Рго 65 70 75 80
Зег Геи Тіг Аа ОЇй Авр Тіг Аа ТІг Туг Ре Сув Аа Аге Туг Туг 85 90 95
Авп ОІу О1у 5ег Туг Авр Пе Тгр СІу Рго СІу Тіг Геи Маї ТІПг Маї 100 105 110 зегІ ей «210» 38 «2115 110 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" х400» 38
Авр Уаї Уа! Меї Тіг СІп Тнг Рго Аа 5ег Аа 5ег СЇши Рго Маї СІу 1 5 10 15
СтТу Тг Ма! ТПг Це Гу Суб СІп Аа 5ег ОЇи 5ег Це Туг Аге Маї 20 25 30
І еи Аа Тгр Туг СіІп СіІп Гуз Рго О1у СіІп Рго Рго Гуз Гей Гей Це 35 40 45
Туг Авр ТП 5ег Тіг Гей Аа 5ег О1у Аа Рго 5ег Атге Ре був СТу 60 50
Зег ОТу Туг СТу Тіт СІи Ріе Тіг Геи Тіг Це 5ег СЛУ Маї СІп Сув 65 70 75 80
СІ Авр Аа Аа Тіг Туг Туг Сув СІп ОС1у О1Іу Тут Туг Аа Авр 5ег 85 90 95
Туг СТу Це Аа Ре ОСїу СІу СТу ТІг ОЇш Маї Маї Маї Гув 100 105 110 «210» 39 «2115 117 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 39 СІп МаїЇ Сів І еи МаїЇ СЇш 5ег СТу СТу СТУ І еи Маї Сіп Рго С1у О1у 1 5 10 15
Зег І еи Аге Ге 5ег Сув 5ег Аа 5ег СОТу Це Авр ГГ еи 5ег 5ег Туг
Зо 20 25 30
Аа Меї ОС1Ту Тгр МУаї Аге Сп Аа Рго СІу Гуз СТу Гецп ОЇи Туг Це 35
СІу Тіг Це Авп Це СІу О1Іу Аге Маї Туг Туг Аа 5ег Ттр Аа Гуз 60 40
СІу Аге Ре ТІг Це 5ег Агео Авр Авп 5ег Губ Авп ТІг І ей Туг Гей 65 70 75 80 45 СІп Меї Авп 5ег І ей Аге Аа СЇй Авр Тіг Аа Маї Туг Туг Сув Аа 85 90 95
Ате Туг Туг Азп СІу О1у 5ег Туг Авр Це Ттр СТУ Сп СТу ТПг Гей 5О 100 105 110
Уа Тіх Хаї 5ег 5ег «210» 40 «2115 110 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 40
Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег ТПг Ге 5ег Аа 5ег Ма! О1у 1 5 10 15
Авр Аге Маї Тіт Пе Тіпг Сув СІп Аа 5ег СІи 5ег Це Туг Аге Маї 20 25 30
І еи Аа Тгр Туг СіІп СІп Гуз Рго СІу Гув Аа Рго Гуз Г еп Геи Це 35 40 45
Туг Авр Тг 5ег ТПг І ей Аа 5ег ОІу Маї Рго 5ег Аге Ре 5ег СІу 50 55 60
Зег ОТу бег СТУ Тіг СЇш Ре ТПг І. еи Трг Це 5ег 5ег Геи Сп Сув 65 70 75 80
Авр Авр Аа Аа Тіт Туг Туг Сув СіІп О1у О1у Туг Туг Аа Авр 5ег 85 90 95
Туг О1Іу Це Аа Ре С1Іу ОІу СІу Тіт Гув Маї СЇТи Це Гув 100 105 110 «210» 41 «2115 122 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність
«221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 41
СіІп 5ег МаЇ ОЇи ОЇ 5ег СТу ОС1у Аге Гей Маї Гуз Рго Авр Си 5ег 1 5 10 15
І си ТІг Гей Тг Сув Тіг Аа 5ег О1у Ре 5ег Г еп 5ег 5ег Туг Аа 20 25 30
Ме Пе Тгр МУаї Аге СіІп Аа Рго СОІУ СЇши СІу Гей Оп Ттр Пе СІу 35 40 45
Тіг Це 5ег Тіг СІу СТу Це Тіг Туг Туг Аа 5ег Тгр АІа Гув СІТу 50 55 60
Аге РіПе Тіт Пе бег Губ Тіт 5ег ТІг ТНг Маї Авр Геп Гуз Пе Трг 65 70 75 80 5Зег Рго ТІг Тіг ОЇш Авр Тіг Аа Тіг Туг Ре Сув Аа Аге СІу СТУ 85 90 95
Зо
Туг Аа Аа 5ег 5ег Аа Туг Туг Гей Рго Туг Туг Ріє Авр Гей Тгтр 100 105 110 ОтТу СІп Су Тіг Ге Маї Тіг Маї бег 5ег 115 120 «210» 42 «2115112 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 42
Аа Аа МаїЇ І еи Тг СІп Тг Рго 5ег Рго Маї 5ег Аа Аа МаїЇ ОТу
1 5 10 15
СІу Тіг МУаї ТІг Це 5ег Сув Сіп 5ег 5ег СіІп 5ег Ма! Туг Авп Авп 20 25 30
Авп Авп Гей Аа Тгр Ре Сп СіІп Гув Рго СІу Сіп Рго Рго Гуз Гей 35 40 45
І си Це Туг Гей Аа 5ег ТНг ГГ еп Аа 5ег СТу Маї Рго 5ег Аге Ріє 50 55 60
Зег ОТу б5ег СТу 5ег СТу Тіг СіІп Ре ТІг Геп Тг Це 5ег С1у Маї 65 70 75 80
ОСІп Сув Авр Авр Аа Аа Тіг Тут Туг Суб Геп О1Ту О1Ту Суб Авр Авр 85 90 95
Авр Аа Авр Тіг Ре Аа Ре ОС1Іу О1у О1у Тіг СЇни Маї Маї Маї Гув 100 105 110 «210» 43 «2115 125 з0 005212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело 05223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 43
СІи Маї Сів ГГ еп МаїЇ ОЇш 5ег СТу СТу СТУ І еи Маї Сіп Рго С1у О1у 401 5 10 15
Зег Гей Аге Ге 5ег Сув Аа Аа 5ег О1у Ре 5ег І еи 5ег 5ег Туг 20 25 30
Аа Меї Пе Тгр Маї Аге СіІп Аа Рго О1Іу Гуз СОІУ Геп Оп Ттр Це 35 40 45
СтТу Тіг Це 5ег Тіг СТу СТу Пе ТІг Туг Туг Аа 5ег Ттр Аа Гув 50 55 60
Оу Аге Ріе ТІ Це 5ег Аге Авр Авп 5ег Гуз Авзп Тг ГГ еп Тут І ей 65 70 75 80
СіІп Меї Авп 5ег І еи Аге Аа Сп Авр Тг Аа Маї Туг Туг Сув Аа 85 90 95
Ате СІу ОТу Туг Аа Аа 5ег 5ег Аа Тут Туг І еи Рго Туг Туг Ре 100 105 110
Авр І еп Ттр С1Уу СіІп О1у Тіг Гей Маї ТОг Маї 5ег 5ег 115 120 125 «210» 44 «2115 112 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид"
Зо «400» 44
Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Уа! СТу 1 5 10 15
Авр Аге Маї Тіт Пе ТІг Сув Сп 5ег 5ег СіІп 5ег Ма! Туг Авп Авп 20 25 30
Авп Авп Гей Аа Ттр Туг СІп СІп Гув Рго СТу Гуз Маї Рго Гуз Гей 35 40 45
І си Це Туг Гей Аа 5ег ТПг І еп Аа 5ег СІТу Маї Рго 5ег Аге Ріє 60
Зег ОЇу бег СОТу 5ег СТу Тіг Авр Ріе ТНг Геи Тіг Це 5ег 5ет Геп 65 70 75 80 50
СІп Сув СОЇши Авр Аа Аа Тіг Туг Туг Суб Гей СТу ОТу Сув Авр Авр 85 90 95
Авр Аа Авзр ТІіг Ріє Аа Ре О1Іу О1Іу СІу Тіт був Маї СЇи Це Гув 100 105 110 «2105 45 «2115 357 «212» ДНК -213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 45 ваввіссаас Теріегавав, севісвавяї вИеіесаас сівессеріс ссівсессів 60 їссірсісся саїсівеси сассисарс верста (рісЦцеврі рарасареса 120 сегрраааар вісцеавія рр есаасе ацйарттаріе віерРтарца гасстастає 180 рсарасарів (гааретіар ашесайа (сесрараса асессаараа сасайоис 240 сірсаайіее асарссірав асссераарас ассвреріссацшйоівсаарасаєрря 300 васваїсссе ссівеИисес ЧЦапйеревс сааревассс серісассві сіссіса 357 «210» 46 «2115 330 «212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «400» 46 васабссарс (расссарає сссаарсарс сівавсесса все іва саравівасс 60 асассівга рірісарсіс ааріагаарі їссаасаасі Тесасієріа ссарсаваае, 120 ссарріааре сіссааарсс агтераїстас ресасаєсса ассівесис Терівесса 180 арсарайцса рсеріарсео (арсеріасс расіасассі (їсассаєсар сарссіссав 240 ссарарраса Ісессасса сіасівссаа сарієраріа рЦасссртіа саєотасася 300 Псерссаар ррассаареої реааасааа 330 «2105 47 «2115 357 10212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «400» 47 сарріасаас Тесавсаріс героссівав сісрараарс сісесесце арівааратга 60 їсстрсааря, систе ца сісайсасі рестасасса (ваасівері раарсаравс 120 сагерааара вссПрарів вгайераси абасісси асайасерівс пставрстас 180 аассараарі (сареерсаа рессасайца асіріараса арісаєссар сасарссіас 240 асерассісс ісарісівас а(сіраарас істесарісі айшісірівсааррееретті 300 їтасвасвева гр Шва стасівеера Іссрегассс серісассяї сіссіса 357
«210» 48 «2115 318 «212» ДНК 0213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «400» 48 васабссваєс їсасісаріс (ссарсааіс агвісівсаї сіссаррева ваареісасс 60 авассірса рівссарсіс ааріеаарі гасасесасі врассарса ваарісавес 120 ассіссссса ааагагераї цасосасаса їссааасіве систе варії сссарвісес 180 псаріреса ріверісіре ааасісцас (сісісасаа (сарсарсрі рравосіваа 240 рагвгаєсаа сцацасів ссарсарісе аріаарсасс сісісасеИ сераїссряв 300 ассаароіво ааассааа 318
«210» 49 «211» 369 «212» ДНК -213» Штучна послідовність
«220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид"
«400» 49 сарісеріве авраріссея вревісессіе рісасессів ррасассссі васасісасс 60 тесассвісї стевайісіс ссісартаврс вагесайагаа всірерісся ссавррсісса 120 веваавререс їсеайасаї сееаасай айеріеріе ріаасасава сасесварс 180 (гресрааар, рссрайсас сагсіссааза ассісвасса серівра(сі рааааєсасс 240 аріссрасаа ссраррасас рессассаї йсірірсса раресайцса асасреівої 300 еРіайарів ацацаца цасерсасо рассісірео рсссаросас ссіреісасі 360 рістісиса 369
«210» 50 «211» 336 «212» ДНК 0213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005» 50 вааріврцва (вгасссавас їссаїссісс рівісівсаєв сіре еравра сасарісасс 60 абсаарірсс арессаріса гарсацаві арівісцеї ссіераєса всарааасса 120 веесавссїс ссаарсіссї васасія есаїссасіс герсасіве ррісссася 180 серисарсяе рсаріарас (сорасарас йсасісіса ссаїсарсра ссіорарівї 240 расрагрсіє ссасцасіа сірісааасс аацасеота сіаріаріар (аацаєтеі 300
Шесцсе всерарерас сраврісріс рісааа 336 «210» 51 «2115 378 «212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 51 вааріссаас Теріегвааат срееераврва сісрівсарс срерсераїс ссіссеесів 60 їсасоірсів саїсее гаї Чсссеїсісс (ссвасесва Царсівеї сарасаресс 120 сссераааря, грсівваріа са(серас аїсаасееся всергааасас стастасесс 180 (Ісстрросса аррессрси сассасісе сресагаай ссаараасасісіріасце 240 саайагсраасі сссірареос срареасасс вссрітасі асівсесесе сресаїссає 300 сасерісоів рааасарсеа сіастастіас (агоооасо а(сісіресе ссарераасі 360 сирівасся (рісвіса 378 «2105 52 «211» 336 «212» ДНК 0213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «400» 52 васайсавра (всасссаріс сссаарсісе сіріссессї ссрівеесва ссесрівасс 60 абсасвірсс аресвіссса рісаацарс арсвівсісї ссієртасса асараарсся 120 вевааарсас ссаарсіесї ргаєстасце, вссіссасіс (еессісевре авівссиса 180
СеРИСІСсе ра(сереас геоасіраї йсасссіса ссагсісрар ссцсарівс 240 раргасасе сіасцасіа Црісааасс аастасеоаа ссіссарсіс саасіасряс 300
Шоессицсе рівосерерас сааррісраа аїсаза 336 «2105 53 «2115 354 «212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «400» 53 сарісеріве авраріссея вревісессіе рісасессів ррасассссі васасісасс 60 їесасавісї стерацсіс ссісайагаас гатосайіва рсіеерісся, ссаресісса 120 вевааверес гераагераї сераєссай артасівріе рісісвсай стасесеаас 180 (геесаааар яссрайцсас саїсіссара ассісрасса серівра(сі вааааєрасс 240 аврісірасаа ссраррасас рессасегаї Цсірісоса радарів ісотавцає 300 ашеайнй айшірасиї ріррерссаа росасссісе ісасірісіс йса 354 «2105 54 «2115 32А «212» ДНК -213» Штучна послідовність 0 «2205 «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 54 всацсеааї (расссаврас їссаїссісс рівеваресав, сіствераря сасааісасс 60 асааріесс арессаріса гарсацарі арцаснца: сет раса всарааасса 120 вевсарссс ссаарсіссї гак тіайсі всабссасіс терсасіве, вісісася 180 севисаааєв, есаврісевас (сесасавав (асасісіса ссаєсавсва сстевавіеї 240 вссрарсія ссасцаси сірісааарс гацйасоа(ва Пееасіар(асшісряс 300 ррарерасся ареісрісрі сааа 32А «2105 55 «2115 363 «212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» 105221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 55 ваарівсарс (вріеваас геесевсева сівоіесарс сівесеваїс (сісарасія 60
ІсИрівссе, ссіссерсИ сіссстеаас аастасесса Іріссівевї ясрасавесс 120 сеіверсааат вссіераае ра(серсісс аїсарсасав всевссівес спстасесс 180 аацеррсса аррессррї сассаєсарс срегасаасі ссаараасас ссівтассіс 240 сара(єраасі сссірсерос сраррасасс вссрітасі асісісссарааасррсрта 300 врсіссіаса ісИстасіа сисвассіо (рророссаро рсасссісрі расарівіса 360 (с 363 «2105 56 «2115 32А «212» ДНК -213» Штучна послідовність 0 «2205 «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 56 вагайсава (васссаріс ссссіссарс сівіссеси сіртееесва саравівасс 60 асассіріс аррссіссса ріссафєсісс ссвассві ссіераса всараарссс 120 весаарессс ссаарсівсї гаєстасісї яссіссасас Терссіссев свівсссїсі 180 авайсісся всісівосіс (восассврас Шасссїва ссаїсаврсіс ссеіссарівс 240 рареасрссе ссассіасіа сірссарісс асіасраса (сересассіс сассисврс 300 рраресасса арріерааай саза 32А «2105 57 х2115 342 «212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «400» 57 сарісаріва арваріссев верісессте рісасессів верасассссї расасісасс 60 їесасавісї стерайісва ссісартарс (агосаасеве всіврцссе ссаресісса 120 вевааверес (ерайасаї севаассай ааацевте, вісесеава Часесеарс 180
(гресаааар яссрайсас сагсіссара ассісвасса серісра(сі рааарсяссс 240 арісівасар ссрареасас рессассаї Цсірівсса рагацасєаа(реівтаті 300 (агбрасасі ррррсссаре сасссірріс ассрісіси га 342 «2105 58 «211» 330 30005212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело 05223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 58 вага (вгасссарас (ссарссїсс рсвісіваас сівівеваря, сасарісасс 60 асааріесс арессаріса гарсашає сесетацев, ссіеоаєса всарааасса 120 вевсавссїс ссаарсіссї васагтаї асаїссасіс герсаїсіве рессссаїся 180 севрцсааар рсарістаца (серасарає Цсасісіса ссаїсарсео сеівсавісї 240 раараєрсіє ссасцаста сірісаарос рецацагсо сірасарца (етацесі 300 йсресеррар ррассвароі роіееісааа 330
«2105» 59 «2115 351 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 59 сарвівсаєвс Теріераас геосеварвра сіввівсарс сіресерсіс Ісіварасів 60 (ссірцссе, ссіссерааї свассівісс їсстасеста (вес всрасаресі 120 сесіврсааре вссіерарта са(єсерсасс абїсаасаєся ясевсараві вастасесс 180 (Ісстрросса аррессери сассасісс арарасаасі ссаараасас ссівтассіс 240 сара(раасі сссірсерос сраррасасс вссрітасі асівсессся ріасіасаас 300 вРСевсссї асеагасіе верссавеес асасісріва ссрівіссіс 351
«210» 60 «211» 330 «212» ДНК -213» Штучна послідовність
«220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид"
«400» 60 вагаєссава (вгасссаріс ссссіссасс сівістіессії сіріееесва саравівасс 60 асассіріс аррссіссва ріссаєчас сеерівсіве ссіераса ясараарссї 120 врсаавессс ссаарсівсії раїстасрас ассавсасас Теессіссее свівсссісі 180 арайсіссе рсісівосіс їросассрар Шасссіва ссагсіссар ссіссавірс 240 васрасессе ссассіасіа Црісареос весіасіасе ссрасісстіа сррааістсії 300 псресеррвар рсассаарої ррааасааа 330 «2105 61
«211» 366 «212» ДНК -213» Штучна послідовність «2205» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" то «400561 сарісеріве авраріссев, севісессіе ятааарссїе асеайсссї расасісасс 60 ївсасаврссї стерайсіс ссісаттаві гатесааіва (стеерісся ссаресісса 120 веерфарревс (ераагеваї сераассай артасісоте ріасєсасава сіасесвавс 180 (гресрааар, рссрайсас сагсіссааза ассісвасса серівра(сі рааааєсасс 240 аріссрасаа ссраррасас россассаї йсіріссса рарерооа(а(осівстаті 300 арівсцай а(сіссста сіасшеас Цріресесс аарреасссі ррісасстіс 360 іссіса 366 «210» 62 «211» 336 «212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «400» 62 всавссрівс Івасссарас ассаєсассс вівісівсав, сів гаря, сасарісасс 60 аєсарцесс аріссаріса гарісщає аагаасааса асцарссів яШсарсав 120 ааасссеврс арссісссаа всцсіваїс гасіврсаї ссасісівес а(сірерріс 180 ссабєсасері (сарсеесав (роасісво асасарцса сісісассаєсавсерсрів 240 сарівірасе а(осівєссас Цацасівї стіароівойї рісаграєраосірагасі 300
Шесцсе всерарерас ірареірое рісааа 336 «2105» 63
«2115 375 «212» ДНК -213» Штучна послідовність «2205» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" то «4005» 63 ваарівсаєвс Теріераас геосеесева сіврівсарс сіресераїс Ісіварасів 60
ІсИрівссе, ссіссеРсИ сісссівісс (їссгасесга гва(ссівеві всрасавесс 120 се(ресааре вссіввайе ра(сеесасс асісіассея всеваацас стастасесс 180 (Ісстрросса аррессери сассасісс арарасаасі ссаараасас ссівтассіс 240 сара(єраасі сссірсерос сраррасасс вссрітасіацроівсіараресеесіас 300 вссрссарсі ссрсцасіа ссірсссіас гасисрасс (рівоеосса рресасссіс 360 рівасаріві сасі 375 «210» 64 «211» 336 «212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «400» 64 вагайсава (васссаріс ссссіссарс сівіссеси сіртееесва саравівасс 60 асассіріс аріссіссса ріссріваї аасаасааса ассіверссе, я(аєсарсав, 120 ааасссевеса аррівсссаа всіссіваїс Тассіврссі ссасасіврс сістеесеяів 180 сссістара ісіссеесіс (еосісірес ассрасща сссірассає ссарсісссіс 240 сарівсваро а(оссессас сіасіайцес сірсеосерсі рсрасвасра срссрагасс 300
Шесіще рсееареосас саавроівоаа агбсааа 336 «2105 65
«212» ПРТ -213» Штучна послідовність «2205» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 65
СІу Тут ТП Меї Авп 1 5 «2105» 66 «2115 17 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «2205» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 66
І си Це Тіт Рго Туг Авп О1у Аа 5ег 5ег Туг Авп СіІп Гув Ріе Аг 1 5 10 15 зо Оу «2105 67
З5 «2115 10 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 67 ОІу ОТу Туг Авр ОЇу Аге ОТу Ріре Авр Туг 1 5 10 «210» 68 «2115 10
«212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» 221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 68 бег Аа 5ег 5ег 5ег Маї 5ег Туг Меї Нів 1 5 10 «210» 69 «21157 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» 20221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 69 Авр ТШШг 5ег Гуз Г еп Аа 5ег 1 5 «2105 70
Зо «21159 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» 005221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 70
СІп СІп Тгр 5ег Гуз Нів Рго Ге Тг 1 5 «2105 71 «21155 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» 50005221» джерело
«223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 71
Авр Пт Тут Це Нів 1 5 «2105 72 «2115 17 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» 15. х221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 72
Аге Це Туг Рго Тіт Авп ОСТу Туг Тіг Аге Туг Аа Авр 5ег Маї Гув 1 5 10 15
ОСІу «2105 73 «211511 05212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело 05223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 73
Тгр ОЇу СОІУ Авр ОС1у Ре Туг Аа Меї Авр Туг 401 5 10 «2105 74 «211511 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело 00223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 74
Ате Аа 5ег СіІп Авр Маї Азп ТНг Аа Маї Аа
Б 11 5 10 «2105 75 «21157 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 75
Зег Аа 5ег Ріе ГГ еп Тут 5ег 201 5 «2105 76 «21159 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело 0 «223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 76
СІп Оп Нів Туг ТПг Тіг Рго Рго ТОг з35 1 5 «2105 77 «21155 х212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 77
Зег Авр Аа Це 5ег 501 5
«2105 78 «2115 16 212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 78
Пе Це Авп Су Оу СІу Авзп Тг Туг Туг Аа 5ег Ттр Аа Гуз О1у 1 5 10 15 «2105 79 «2115 18 20. х212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 79
СІу Це Сіно Нів ОІу Оїу СІу Авп 5ег Авр Туг Туг Туг Туг ОТу Меї зо 1 5 10 15
Авр еп
З5 «210» 80 «211511 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 80
СІп Аа 5ег Сіп 5ег Це 5ег 5ег Ма! Ї еп 5ег 1 5 10
«210» 81 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 81
І еи Аа 5ег Тіг Гей Аа 5ег 1 5 «2105» 82 «2115 14 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 82
СІп Тіг Авп Туг О1у Тіт 5ег 5ег 5ег Авп Туг О1у Ре Аа 1 5 10
Зо «2105» 83 «21155 «212» ПРТ 0213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 83
Зег Авр Аа Це 5ег 1 5 «210» 84 «2115 16 «212» ПРТ 0213» Штучна послідовність
«221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 84
Пе Це Авп Су Оу СІу Авзп Тг Туг Туг Аа 5ег Ттр Аа Гуз О1у 1 5 10 15 «2105» 85 «2115 18 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 85
СІу Це Сіно Нів ОІу Оїу СІу Авп 5ег Авр Туг Туг Туг Туг ОТу Меї 1 5 10 15
Авр еп
Зо «210» 86 «211511 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність
З5 «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 86
СІп Аа 5ег Сіп 5ег Це 5ег 5ег Ма! Ї еп 5ег 1 5 10 «2105 87 «21157 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність
«221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 87
І ей Аа 5ег ТПг Гей Аа 5ег 1 5 «2105» 88 «2115 14 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 88
СІп Тіг Авп Туг О1у Тіт 5ег 5ег 5ег Авп Туг О1у Ре Аа 1 5 10 «2105» 89 «21155 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність
Зо «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид"
З5 «400» 89
Авп Туг АІа Меї 5ег 1 5 «210» 90 «2115 16 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид"
«400» 90
Зег Це 5ег Тіг СІу СОІУ Гей Аа Ре Туг Аа Авп Ттр Аа Гуз СТу 1 5 10 15 «210» 91 «2115 13 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 91
Авп ОІу О1у О1у 5ег Туг Це Ріе Туг Туг Ре Авр ГГ еп 1 5 10 «2105» 92 «211511 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид"
Зо «400» 92
СІп Аа 5ег Сіп 5ег Це 5ег 5ег Туг І еп 5ег 1 5 10
З5 «2105» 93 «21157 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 93
Зег Аа 5ег ТП І еп Аа 5ег 1 5
«210» 94 «2115 10 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 94
СІп 5ег Туг Туг Авр Це СТу Тіг 5ег ТОг 1 5 10 «2105» 95 «21155 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 95
Авп Туг АІа Меї 5ег 1 5
Зо «210» 96 «2115 16 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність
З5 «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 96
Зег Це 5ег Тіг СІу СОІУ Гей Аа Ре Туг Аа Авп Ттр Аа Гуз СТу 1 5 10 15 «2105» 97 «2115 13 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність
«221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 97
Авп ОІу О1у О1у 5ег Туг Це Ріе Туг Туг Ре Авр ГГ еп 1 5 10 «2105» 98 «211511 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 98
СІп Аа 5ег Сіп 5ег Це 5ег 5ег Туг І еп 5ег 1 5 10 «2105» 99 «21157 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність
Зо «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид"
З5 «400» 99
Зег Аа 5ег ТП І еп Аа 5ег 1 5 «210» 100 «2115 10 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид"
«400» 100
СІп 5ег Туг Туг Авр Це СТу Тіг 5ег ТОг 1 5 10 «2105» 101 «21155 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 101
Зег Туг АІа Ме СТу 1 5 «210» 102 «2115 16 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид"
Зо «4005» 102
Тіг Це Авп Це Оу О1у Аге Маї Туг Туг Аа 5ег Тгтр АІа був СТу 1 5 10 15
З5 «2105» 103 «21159 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 103
Туг Туг Авп СТу ОТу бег Туг Авр Це 1 5
«210» 104 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 104
СіІп Аа 5ег Си 5ег Це Туг Аге Маї І еи Аа 1 5 10 «210» 105 «21157 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 105
Авр ТІг 5ег Тіг І еи Аа 5ег 1 5
Зо «210» 106 «211512 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність
З5 «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 106
СІп ОТу ОС1у Туг Туг Аа Авр 5ег Туг СТУ Це Аа 1 5 10 «2105» 107 «21155 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність
«221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 107
Зег Туг АІа Ме СТу 1 5 «210» 108 «2115 16 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 108
Тіг Це Авп Це Оу О1у Аге Маї Туг Туг Аа 5ег Ттр АІа був СТу 1 5 10 15 «210» 109 «21159 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність
Зо «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид"
З5 «400» 109
Туг Туг Авп СТу ОТу бег Туг Авр Це 1 5 «210» 110 «211511 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид"
«4005» 110
СіІп Аа 5ег Си 5ег Це Туг Аге Маї І еи Аа 1 5 10 «2105 111 «21157 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 111
Авр ТІг 5ег Тіг І еи Аа 5ег 1 5 «2105» 112 «211512 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид"
Зо «4005» 112
СІп ОТу ОС1у Туг Туг Аа Авр 5ег Туг СТУ Це Аа 1 5 10
З5 «2105113 «21155 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 113
Зег Туг АІа Меї Це 1 5
«210» 114 «2115 16 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 114
Тіг Це 5ег Тіг СІу СТу Це Тіг Туг Туг Аа 5ег Тгр АІа Гув СІТу 1 5 10 15 «2105» 115 «2115 17 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 115
СтІу О1Ту Туг Аа Аа 5ег 5ег Аа Туг Туг Г.еи Рго Туг Туг Ре Авр 1 5 10 15
Зо
І еп «2105 116 «2115 13 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 116
СіІп 5ег 5ег СіІп 5ег Ма! Туг Авп Авп Авп Авп Гей Аа 1 5 10 00 «2105 117
-212» ПРТ -213» Штучна послідовність в «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 117
І ей Аа 5ег ТПг Гей Аа 5ег 1 5 «2105 118 «2115 12 -212» ПРТ -213» Штучна послідовність «2205» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 118
І си СТУ ОТу Сув Авр Авр Авр Аа Авзр Пі Ре Аа 1 5 10 «2105 119 «21155 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність 0 «2205 «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 119
Зег Туг АІа Меї Це 1 5 «210» 120 «2115 16 -212» ПРТ -213» Штучна послідовність
БО 0 «2205
«221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" кабо» 120
Тіг Це 5ег Тіг СІу СТу Це Тіг Туг Туг Аа 5ег Тгр АІа Гув СІТу 1 5 10 15 «2105 121 «2115 17 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 121
СтІу О1Ту Туг Аа Аа 5ег 5ег Аа Туг Туг Г.еи Рго Туг Туг Ре Авр 1 5 10 15 ТІец «210» 122 «2115 13 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 122
СІп 5ег 5ег СІп 5ег Ма! Туг Авп Авп Авп Авп Гей Аа 1 5 10 «2105» 123
АБ 00 «21157 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» 50005221» джерело
«223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 123 ТГепц Аа 5ег ТНг Г еп Аа 5ег 1 5 «210» 124 «211512 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» 15. х221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 124 ТГецп О1Іу О1Їу Сувз Авр Авр Авр Аа Авр Тіг Ріє Аа 1 5 10 «210» 125 25. «21515 «212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» 005221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005 125 ррсарері ріс 15 «210» 126 «2115 51 40212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 126 асвайарта ріееерав, йагасстас (атесавраса рістваарея ї 51
«2105 127 «2115 30 -212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005 127 сагррерасе аїсссессів пИсесцаї 30
«210» 128 «2115 36 -212» ДНК -213» Штучна послідовність
«220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'"
«4005» 128 авівісарсі сааріагаар, йссаасаас ЦЧесас 36 «2105 129 «211521 -212» ДНК -213» Штучна послідовність 0 «2205 «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 129 ресасасса ассісосис і 21 «210» 130 «2115 33 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» 50005221» джерело
«223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 130 саасарієра ріарйцассс ятасаєттас асе 33 «2105» 131 «2115 15 10212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 131 рестасасса (ваас 15 «210» 132 «2115 51 -212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний
Зо олігонуклеотид'" «400» 132 сцацасіс сбасаасее (есИстарс тасаассара ависаревя с 51
З5 «2105» 133 «2115 30 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 133
Реве ецасе асррраррее Шірастас 30 «2105 134
«2115 30 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «2205» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 134 арірссарсі саарівіаат Цасасесас 30 «210» 135 15. «211521 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 135 васасаєсса аасіресис і 21 «210» 136 «2115 27 «212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело 05223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид" «400» 136 савсарівса яїаарсассс їстісасе 27
«2105» 137 «2115 15 -212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний 5О олігонуклеотид'"
«4005» 137 арсраєрсаа гайрс 15 «210» 138 «2115 48 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 138 асайаайае р(еріераа сасагастас рсвавсівве сеааарес 48 «2105» 139 «2115 54 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" з0 «400» 139 врсайсаас агеріеріев їайарісаї габйацац асеесагевра ссіс 54 «210» 140
З5 «2115 33 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» 405221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 140 сарессаріс арарсацав (арівісце (сс 33 «210» 141 «211521 005212» ДНК
-213» Штучна послідовність «221» джерело 223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005 141 сіресасса сісівосас 1 21 «210» 142 «2115 42 -212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 142 сааассадайї аєеетастав гавтавтааї гаїв сі 42 «210» 143 «2115 15 -212» ДНК -213» Штучна послідовність
Зо «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'"
З5 «400» 143 іссрасесра Царс 15 «2105» 144 «2115 48 -212» ДНК -213» Штучна послідовність 0 «2205» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" 5Бо «400» 144 асаєсаасе всеесевааа сасстасіас вссіссівее ссаареес 48 «210» 145 «2115 54 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» 105221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 145 весабссарс асерівріве ааасарсеас сгасасасі агоевагсева сів 54 «210» 146 «2115 33 20. х212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 146 саресвіссс арісаацав сарсрівсіс їсс 33
Зо «2105» 147 «211521 -212» ДНК 0213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 147
Нерссісса сісірессіс т 21 «210» 148 «2115 42 -212» ДНК -213» Штучна послідовність
«221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'"
«400» 148 сааассаасі асееаассіс савсіссаас їгасеесще сс 42 «2105 149 «2115 15 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 149 аасіагрсаа (рарс 15 «210» 150 25. «115 48 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 150 їссацарта сіеріерісї сесацетас всеаасівее, саааайрес 48 «2105» 151 «2115 39 40212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005 151 ааіеріврів ріарца(ає шссацаї шерасця 39
«210» 152 «2115 33 -212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 152 сарессаріс агарсайає сарцасца (сс 33
«2105» 153 «211521 -212» ДНК -213» Штучна послідовність
«220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'"
«4005» 153 (сіосаєсса сісівесас і 21 «2105 154 «2115 30 -212» ДНК -213» Штучна послідовність 0 «2205 «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 154 сааарсіац аєргагацео гастартасі 30 «2105» 155 «211515 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» 50005221» джерело
«223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 155 аасіасрсса (рісс 15 «210» 156 «2115 48 10212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 156 їссаєсарса саресевссї вессцеас яссаайеее ссаареес 48 «2105» 157 «2115 39 -212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний
Зо олігонуклеотид'" «4005 157 аасресевавр, всісстасаї сцєсвасіас йсрассів 39
З5 «2105» 158 «2115 33 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 158 сарессіссс аріссаїсіс сісстассів (сс 33 0 «2105 159
-212» ДНК -213» Штучна послідовність «2205» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 159 (сірссісса сасіроссіс с 21 «210» 160 15. «2115 30 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 160 саріссіасі асраса(сее сассіссасс 30 «2105» 161 «2115 15 «212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело 05223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 161 арсіаєрсаа іррос 15
«210» 162 «2115 48 -212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний 5О олігонуклеотид'"
«400» 162 ассацайаа Черіеріся стагацас всеарсівее саааарес 48
«2105» 163 «2115 27 -212» ДНК -213» Штучна послідовність
«220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'"
«400» 163 тайасайае яевавца (сасас 27 «2105» 164 «2115 33 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" зо «400» 164 сарессарів арарсаша (сестаця рсс 33 «210» 165 «211521 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 165 раасасса сісіресас 1 21 «210» 166 «2115 36 005212» ДНК
-213» Штучна послідовність «221» джерело 223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 166 сааресеец ацйа(есіва гарцагтві айс 36 «210» 167 «2115 15 -212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 167 їсстасрсїа (ррос 15 «210» 168 «2115 48 «212» ДНК -213» Штучна послідовність
Зо «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'"
З5 «400» 168 ассаїсааса Ісеерсеесав, арівтастас рссіссівве ссаареес 48 «2105» 169 «2115 27 -212» ДНК -213» Штучна послідовність 0 «2205» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 169 їтастасаася всевсісста сеа(аєс 27 «210» 170 «2115 33 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» 105221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 170 сарессіссе аріссаєса ссееріесія сс 33 «2105» 171 «211521 20. х212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005 171 расассарса сасісессіс с 21
Зо «2105» 172 «2115 36 -212» ДНК 0213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 172 сарввсерсі ачтасессра сіссгасева аїсесії 36 «2105» 173 «2115 15 -212» ДНК -213» Штучна послідовність
«221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'"
«4005» 173 арцагрсаа (рас 15 «2105 174 «2115 48 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 174 ассацарга стеяіе раї сасагастас рсвавсівве стааарес 48 «2105» 175 25. «2115 51 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» 005221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005 175 вееевагсас стівсіаріавр геспацаї сіссстасіасшщваси в 51 «210» 176 «2115 39 40212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 176 саріссіссс аріссріога (аасаасаас аассіввсс 39
«2105 177
-212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005 177 сіресасса сісівосас 1 21
«210» 178 «2115 36 -212» ДНК -213» Штучна послідовність
«220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'"
«400» 178 старіти ріваграра (есівагасі Шесі 36 «2105 179 «2115 15 -212» ДНК -213» Штучна послідовність 0 «2205 «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 179 їсстасрсїа (вас 15 «210» 180 45. «2115 48 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» 50005221» джерело
«223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 180 ассаєюсга ссерсевааї гасстастас вссіссівее ссааревс 48 «2105» 181 «2115 51 10212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005 181 весввсасе ссессарсіс сесЦасіас сівсссгасі асисвассї 8 51 «2105» 182 «2115 39 -212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний
Зо олігонуклеотид'" «4005» 182 саріссіссс аріссріога (аасаасаас аассіревсс 39
З5 «2105» 183 «211521 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 183 сірессісса сасісессіс 1 21 «2105 184 2А1
«2115 36 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «2205» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 184
СІРеесевсії всвасвасва сессвагасс Шесі 36 «210» 185 «21158 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 185
ОІу Туг 5ег Ре Тіг О1Ту Туг Тіг 1 5 «210» 186
Зо «21158 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» 005221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 186
Це Тіт Рго Туг Авп ОСІу Аа 5ег 1 5 «2105» 187 «211512 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» 50005221» джерело
«223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 187
Аа Агео ОСІу СІу Туг Авр ОІу Аге Оу Рре Авр Туг 1 5 10 «210» 188 «21155 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» 15. х221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 188 бег 5ег Маї 5ег Туг 1 5 «210» 189 «21153 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» 005221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 189 Авр Тг 5ег 1 «210» 190 «21159 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 190
СІп Сп Тгр 5ег Муз Нів Рго еп Тг
1 5 «2105» 191 «21158 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» 105221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 191
СІу Рпе Авп Це Гуз Авр Тіт Туг 1 5 «210» 192 «21158 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 192 з30 Це Туг Рго Тіг Авп Оу Туг Тіг 1 5 «210» 193 «2115 13 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» 405221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 193 5ег Аго Тгтр СІу СТу Авр Оу Ре Туг Аа Меї Авр Туг 1 5 10 «210» 194 «21156
«212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» 221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 194
Сп Авр МаЇ Аво Тг Аа 1 5 «210» 195 «21153 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» 20221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 195 бег Аа 5ег 1 «210» 196
Зо «21159 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» 005221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 196
СІп Сп Ні Туг ТПг Тіг Рго Рго ТОг 1 5 «2105» 197 «21158 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» 50005221» джерело
«223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 197
Оу Це 5егІ еи 5ег 5ег Авр Аа 1 5 «210» 198 «21157 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» 15. х221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 198
Це Авзп ОІу ОТу О1у Авп Тіг 1 5 «210» 199 25. «2115 20 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» 005221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 199
Аа Аге ОТу Це Сп Нів О1Іу СІу СТу Авп 5ег Авр Туг Туг Туг Туг 1 5 10 15
ОСІу Меї Авр І еп 20 «210» 200 «21156 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело 0 «223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 200
СіІп 5ег Це 5ег 5ег Маї
Б 11 5 «2105 201 «2115 3 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 201
І еи Аа 5ег 201 «210» 202 «2115 14 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело 0 «223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 202
СІп Тіг Авп Туг О1у Тіт 5ег 5ег 5ег Авп Туг О1у Ре Аа 1 5 10 «2105» 203 «2115 8 х212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 203
СІу Це 5ег Гей 5ег 5ег Авр Аа 501 5
«210» 204 212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 204
Це Авп СІу СІу СТу Авп ТНг 1 5 «2105» 205 «2115 20 20. х212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело 25 «223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 205
Аа Аге ОС1Іу Це Сіп Нів О1Іу СІу ОСІу Авп 5ег Авр Туг Туг Туг Туг зо 1 5 10 15
ОСІу Меї Авр І еп
З5 «210» 206 «21156 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 206
СіІп 5ег Це 5ег 5ег Маї 1 5
«2105 207 «2115 3 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 207
І еи Аа 5ег 1 «210» 208 «2115 14 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 208
СІп Тіг Авп Туг О1у Тіт 5ег 5ег 5ег Авп Туг О1у Ре Аа 1 5 10
Зо «210» 209 «2115 8 «212» ПРТ 0 «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 209
СІу Ре 5ег І ей Авп Авп Туг Аа 1 5 «210» 210 «21157 «212» ПРТ 0213» Штучна послідовність
«221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 210
Це 5ег ТПг ОТу СТУ І еп Аа 1 5 «2105 211 «2115 15 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 211
СОІУ Аге Авп СІу ОТу СТУ 5ег Туг Це Ре Туг Туг Ре Авр Гей 1 5 10 15 «2105» 212 «21156 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 212
СіІп 5ег Це 5ег 5ег Туг 1 5 «2105 213 «2115 3 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид"
«4005 213
Зег Аа 5ег 1 «210» 214 «2115 10 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 214
СІп 5ег Туг Туг Авр Пе ОСІу Тіг 5ег ТОг 1 5 10 «2105 215 «2115 8 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 215
СІу Ре 5ег І ей Авп Авп Туг Аа 1 5
З5 «210» 216 «21157 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 216
Це 5ег ТПг ОТу СТУ І еп Аа 1 5
«2105 217 «2115 15 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 217
Аа Аге Авп ОС1у Оу О1у 5ег Туг Це Рре Туг Туг Ре Авр Гей 1 5 10 15 «2105» 218 «21156 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 218
СіІп 5ег Це 5ег 5ег Туг 1 5
Зо «2105» 219 «2115 3 «212» ПРТ 0 «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 219
Зег Аа 5ег 1 «210» 220 «2115 10 «212» ПРТ 0213» Штучна послідовність
«221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 220
СІп 5ег Туг Туг Авр Це СТу Тіг 5ег ТОг 1 5 10 «2105 221 «2115 8 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 221
СІу Це Авр Гей 5ег 5ег Туг Аа 1 5 «2105 222 «21157 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 222
Пе Авп Це О1у ОС1у Аге Маї 1 5 «2105 223 «211511 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид"
«4005 223
Аа Аге Туг Туг Авп О1у О1у 5ег Туг Авр Це 1 5 10 «2105 22А «21156 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 224
СІи 5ег Це Туг Аге Маї 1 5 «2105 225 «2115 3 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 225
Авр ТІг 5ег 1
З5 «210» 226 «211512 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 226
СІп ОТу ОС1у Туг Туг Аа Авр 5ег Туг СТУ Це Аа 1 5 10
«2105 227 «2115 8 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 227
СІу Це Авр Гей 5ег 5ег Туг Аа 1 5 «210» 228 «21157 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 228
Пе Авп Це О1у ОС1у Аге Маї 1 5
Зо «210» 229 «211511 «212» ПРТ 0213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 229
Аа Аге Туг Туг Авп О1у О1Ту 5ег Туг Авр Це 1 5 10 «210» 230 «21156 «212» ПРТ 0213» Штучна послідовність
«221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 230
СІи 5ег Це Туг Аге Маї 1 5 «2105 231 «2115 3 -212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 231
Авр ТІг 5ег 1 «210» 232 «2115 12 -212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 232
СІп ОТу ОС1у Туг Туг Аа Авр 5ег Туг СТУ Це Аа 1 5 10 «210» 233 «2115 8 -212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид"
«4005» 233
СІу Ре 5ег І еи 5ег 5ег Туг Аа 1 5 «210» 234 «21157 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 234
Це 5ег Тг СТу СПТУ Пе Трг 1 5 «2105» 235 «2115 19 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 235
Аа Аге СІу СТУ Туг Аа Аа 5ег 5ег Аа Туг Туг Г еп Рго Туг Туг 1 5 10 15
З5
РПе Авр ГГ еп «210» 236 «2115 8 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид"
«4005» 236
СіІп 5ег Маї Туг Авп Авп Авп Авп 1 5 «2105 237 «2115 3 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 237
І еи Аа 5ег 1 «2105» 238 «211512 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид"
Зо «400» 238
І си СТУ ОТу Сув Авр Авр Авр Аа Авзр Пі Ре Аа 1 5 10
З5 «210» 239 «2115 8 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 239
СІу Ре 5ег І еи 5ег 5ег Туг Аа 1 5
«210» 240 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 240
Це 5ег Тг СТу СПТУ Пе Трг 1 5 «2105 241 «2115 19 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 241
Аа Аге СІу СТУ Туг Аа Аа 5ег 5ег Аа Туг Туг Г еп Рго Туг Туг 1 5 10 15
Зо
РПе Авр ГГ еп «2105 242 «2115 8 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 242
СіІп 5ег Маї Туг Авп Авп Авп Авп 1 5 00 «2105 243
«2115 3 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «2205» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 243
І ей Аа 5ег 1 15. «2105 244 «211512 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «2205» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 244
І си СТУ ОТу Сув Авр Авр Авр Аа Авр Тг Ре Аа 1 5 10 «2105 245 «2115 24 -212» ДНК -213» Штучна послідовність 0 «2205 «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005 245 ресисассі Ісарсеесіа (ро 2А «210» 246 «2115 24 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» 50005221» джерело
«223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 246 ацаріарія рірарца (асс 2А «2105 247 «2115 36 10212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 247 всаарасате ревасрасс сессівеис всцаї 36 «2105» 248 «211521 -212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний
Зо олігонуклеотид'" «400» 248 ісааріаіаа рИссаасаа с 21
З5 «210» 249 «21159 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 249 вресасасс 9 0 «2105» 250
«2115 33 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «2205» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 250 саасавівва ріарцассс ріасаєтас асе 33 «2105 251 15. «2115 24 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005 251 врцасіса сасіроста сасс 2А «2105 252 «2115 24 «212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело 05223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005 252 ацасісси асайгеоівс Кс 2А
«2105 253 «2115 36 -212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний 5О олігонуклеотид'"
«4005» 253 всаавреееее вйасвасев ваги вастас 36
«210» 254 «2115 15 -212» ДНК -213» Штучна послідовність
«220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'"
«4005» 254 ісааріріаа рас 15 «2105 255 «21159 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" з0 «4005 255 расасаєсс 9 «210» 256 «211527 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 256 сарвсарівса ріаарсассс їсбсасе 27 «2105 257 «2115 24 005212» ДНК
-213» Штучна послідовність «221» джерело 223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005 257 рраайсіссс (саріарсра (оса 2А «210» 258 «211521 -212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 258 апайсеріо рістіаасас а 21 «210» 259 «2115 60 -212» ДНК -213» Штучна послідовність
Зо «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'"
З5 «4005» 259 вссававреса йсаасасее гео ай аісацац абйацасее, сагерассіс 60 «2105» 260 «2115 18 -212» ДНК -213» Штучна послідовність 0 «2205» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'"
Бо х400» 260 сарарсаца ріаріріс 18 «210» 261 «21159 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» 105221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005 261 сівосасі 9 «210» 262 «2115 42 20. х212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 262 сааассадаії аєеятастав гаттавтааї сабо сі 42
Зо «210» 263 «2115 24 -212» ДНК 0213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 263 рераашссс ісіссіссва сесе 2А «210» 264 «211521 -212» ДНК -213» Штучна послідовність
«221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'"
«4005» 264 ассаасерсе рсегааасас с 21 «2105 265 «2115 60 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005 265 всесесерса їссарсасее Терієгааас авсеасіасі астасіатее вагевасів 60 «210» 266 25. «211518 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» 005221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 266 сарісааца рсарсрів 18 «2105 267 «21159 40212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005 267 цКерссісс 9
«210» 268 «2115 42 -212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 268 сааассаасі асееаассіс савсіссаас їтасевсщше сс 42
«210» 269 «2115 24 -212» ДНК -213» Штучна послідовність
«220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'"
«400» 269 ррайсіссс ісай(ааста (оса 2А «2105 270 «211521 -212» ДНК -213» Штучна послідовність 0 «2205 «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 270 аарасіе рісвісісяса 21 «2105 271 45. «2115 45 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» 50005221» джерело
«223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005 271 врсарааа(т ріврівоіар Цасацис (ацайшіе асо 45 «2105 272 «2115 18 10212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005 272 сарарсаца піарнас 18 «2105 273 «21159 -212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний
Зо олігонуклеотид'" «4005 273 (сірсаєсс 9
З5 «210» 274 «2115 30 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 274 сааарсіац агоагацев гастартасі 30 00 «2105 275
«2115 24 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «2205» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005 275
РесИсІссс геаасаасіа сесс 2А «210» 276 15. «211521 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 276 абсарсасар рсерссірос с 21 «2105 277 «2115 45 «212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело 05223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005 277 вссаврааасе всеварвсіс сіасаєсцс Гастасисе, ассів 45 «2105 278 «2115 18 -212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний 5О олігонуклеотид'"
«4005 278 саріссайсі ссісстас 18 «210» 279 «21159 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 279 (сірссісс 9 20. «2105» 280 «400» 280 000 «2105 281 «4005 281 зо 000 «210» 282
З5 «4005» 282 000 «2105» 283 «4005» 283 000 «210» 284 5Бо «400» 284
000 «2105 285 «400» 285 000 «210» 286 «400» 286 0000 «2105 287 «4005 287 000 «210» 288 «400» 288 000
Зо «210» 289 з5 «400» 289 000 «210» 290 «400» 290 000 «2105» 291 «400» 291 5о 000
«210» 292
«400» 292 000
«210» 293 «400» 293 000
«210» 294 «400» 294 000 «2105» 295 «400» 295 000
«210» 296 «400» 296 (000 «2105» 297
«400» 297 000
«210» 298 «400» 298 000
«210» 299 хА0бО» 299 000 «2105 300 «2115 30 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 300 саріссіасі асраса(сее сассіссасс 30 «2105» 301 х2115 24 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 301 рраафсрасс ісаріарсіа їрса 2А «210» 302 «211521 40212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 302 амайакце рівеісяста 21
«210» 303 «2115 33 -212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 303 рссара(ай абайгеоіое (арца(вас ас 33
«210» 304 «2115 18 -212» ДНК -213» Штучна послідовність
«220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'"
«400» 304 рагарсаші абєсеста 18 з30 «2105» 305 «21159 -212» ДНК -213» Штучна послідовність 0 «2205 «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 305 рагасаєсс 9 «210» 306 «2115 36 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» 50005221» джерело
«223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 306 сааресерой ацагрсіва гарца(врі ацесі 36 «210» 307 «2115 24 10212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 307 ррайсрасс (ріссісста сесії 2А «210» 308 «211521 -212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний
Зо олігонуклеотид'" «400» 308 ассаасаєся всеесараві о 21
З5 «210» 309 «2115 33 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 309 всссерасі асаасеесее, сісстасваї аїс 33 «210» 310
«2115 18 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «2205» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 310 рарісса(сі ассрорів 18 «2105» 311 «21159 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» 20221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 311 васассарс 9 «210» 312 «2115 36 «212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело 05223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 312 сарввсерсі ачтасессра сісстасевра аїсесії 36
«210» 313 «2115 24 -212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний 5О олігонуклеотид'"
«400» 313 ррайсіссс Ісарарна (оса 2А
«210» 314 «211521 -212» ДНК -213» Штучна послідовність
«220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'"
«400» 314 аарятасіе рісеаєсаса 21 «2105 315 «2115 57 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" зо «4005» 315 вссававеее, вагасесівс гатаріесі габйасісс стасаси (гасне 57 «210» 316 «2115 24 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 316 сарарірц агаа(аагсаа саас 2А «210» 317 «21159 005212» ДНК
-213» Штучна послідовність «221» джерело 223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 317 сіресасс 9 «210» 318 «2115 36 -212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 318 старіти ріваграра (есівагасі Шесі 36 «210» 319 «2115 24 -212» ДНК -213» Штучна послідовність
Зо «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'"
З5 «400» 319
РеСИСсІСсс (ріссісста сесії 2А «2105» 320 «211521 -212» ДНК -213» Штучна послідовність 0 «2205» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" 5Бо «400» 320 аєсісіассея всераанас с 21 «2105» 321 «2115 57 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» 105221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 321 всегараресе рсегасессес сарсіссесі гасіассівс сетасаси свассїв 57 «210» 322 «2115 24 20. х212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 322 саріссріві абєаасаасаа саас 2А
Зо «210» 323 «21159 -212» ДНК 0213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «4005» 323 сірессісс 9 «210» 324 «2115 36 -212» ДНК -213» Штучна послідовність
«221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид'" «400» 324
СІРеесевсії всвасвасва сессвагасс Шесі 36 «2105» 325 «211» 449 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005» 325
СІп МаїЇ СІп Гей Сп Оп 5ег СТу Рго СЇши Гей СЇш Гув Рго СТу Аа 1 5 10 15 бег Ма! був Пе бег Сув Гуз Аа 5ег СІу Туг бег Рпе Тіт СТу Туг 20 25 30
Тіх Меї Авп Тгр Маї Гуз ОІп 5ег Ні5 СПу Гув бег Гей Си Тгр Пе
СОІУ Ге Пе Тіт Рго Туг Авп С1у Аа 5ег бег Туг Авп СіІп Гу Ре 60 35
Аге СІу Гуз Аа ТІг Геп ТІг Маї Авр Гуз 5ег бег 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80 40
Меї Авр Г еп І си 5ег Геи Тг 5ег ОЇй Авр 5ег Аа Маї Туг Рре Сув 835 90 95 45 Аа Агео Сіу СТу Туг Авр ОСІу Аге Су Ре Авр Туг Тгр О1Іу 5ег СТу 100 105 110
Тіх Рго Маї Тіг МУаї бег 5ег Аа 5ег Тг Гуз СпТу Рго 5ег Ма! Ріє 50 115 120 125
Рго І ей Аа Рго 5ег 5ег Му 5ег Тг 5ег СТу СТу Тіг Аа Аа Гей 130 135 140
СОІУ Сув Геи МаїЇ Гуз Авр Туг Ре Рго СІи Рго Маї Тнг Маї 5ег Тгр 145 150 155 160
Авп 5ег Оу Аа І еи Тг 5ег ОТу Маї Нів ТНг Ре Рго Аа Маї І еп 165 170 175
Сі 5ег 5ег СТу Гец Туг 5ег І еп 5ег 5ег Ма! Ма! ТІг Маї Рго 5ег 180 185 190
Зег зег еп СОТу Тіт СІп ТНг Туг Це Сув Авп Маї Авп Нів Гу Рго 195 200 205
Зег Авп ТПг Гув Маї Авр Гуз був Маї ОЇи Рго МГув бег Сув Авр Гув 210 215 220
Тіп Нів Тіг Сузв Рго Рго Сув Рго Аа Рго СІ І еи Ге ОТу О1у Рго 225 230 235 240
Зо
Зег Ма! РІе І еи Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТІг І еи Меї Це 5ег 245 250 255 Аге ТП Рго СЇшп МаїЇ Тіг Сув Маї Маї МУаї Авр Маї 5ег Нів ОЇи Авр 260 265 270
Рго СЇи Маї Гуз Ре Авп Тгр Туг МУаїЇ Авр СТУ Маї СЇши Маї Нів Авп 215 280 285
Аа Гув Тіг Гуз Рго Аге ОЇ Си Сіп Туг Авп 5ег Тіт Туг Аге Маї 290 295 300
Уа! 5ег Уа! еп Тіг Ма! Гей Нів Сіп Авр Тгр Гей Авп О1у Гув СТий 305 310 315 320
Туг був Сув Муз Маї 5ег Авп Гуз Аа Г еп Рго Аа Рго Це Си Гув 325 330 335
ТІ Це 5ег Гу АІа Гуз О1у СіІп Рго Аге СІи Рго Сіп Маї Туг Тіг 340 345 350
І еи Рго Рго 5ег Аге Авр ОЇ І еи Тг Гув Авп Сп Маї 5ег еп ТНг 355 360 365
Сув Геи Маї Гуз СТу Ре Тут Рго 5ег Авр Пе Аа Маї СЇи Тгр ОЇ 370 375 380
Зег Авп СТУ Сп Рго СЇмй Авп Авп Туг Гу ТІг Тг Рго Рго Маї І еп 385 390 395 400
Авр 5ег Авр О1Ту 5ег Ре Ре І еи Туг 5ег МГув Гей ТІг Маї Авр Гуз 405 410 415 бЗег Аго Тгр СіІп СІп СІу Авп Маї Ре 5ег Сув 5ег Ма! Меї Нів СЇи 420 425 430
Аа еи Нів Авп Нів Туг Тіг СІп Гуз 5ег І еи 5ег І еи 5ег Рго СІу
Зо 435 440 445
Гув «210» 326 «2115 213 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 326
Авр Це Сн Г еп ТНг Сп 5ег Рго Аа Це Меї 5ег Аа 5ег Рго СОТу 1 5 10 15
СІ Гув Ма! Тіг Меї Тіг Сув 5ег Аа 5ег 5ег 5ег Ма! 5ег Туг Меї 20 25 30
Нів Ттр Тут СОЇІп Сіп Суб 5ег СТу ТПг 5ег Рго Гуз Аге Тгр Це Туг 35 40 45
Авр ТНг 5ег Гуз Г еп Аа 5ег О1у Маї Рго СТу Аге Ре 5ег С1у 5ег 50 55 60
СОІУ бег ОЇу Авп 5ег Туг 5ег еп Тіт Це 5ег 5ег Ма! СОЇми Аа Си 65 70 75 80
Авр Авр Аа Тіг Туг Туг Сув СІп Сп Тгр 5ег Гуз Нів Рго Гей ТОг 85 90 95
Ре СІу 5ег О1у Тіт Гу Маї ОЇи Це Гуз Аге ТІг Маї Аа Аа Рго 100 105 110
Зег Ма! Ріе Пе Ре Рго Рго 5ег Авр СЇи Сіп Ге Гув 5ег СТу ТНг 115 120 125
Аа 5ег МаїЇ МаїЇ Сув І ей І еп Авп Авп Ре Тут Рго Аге Спи Аа Гуз 130 135 140
Уа! СіІп Тгр Гуз Маї Авр Авп Аа ГІ еи Сіп 5ег О1у Авп 5ег СІп ОЇ 145 150 155 160
Зег Ма! Тіт ОЇи Сп Авр 5ег Гуз Авр 5ег ТІг Туг 5ег І ей 5ег 5ег 165 170 175
Тіп Ге Тіг Гей 5ег Гув Аа Авр Туг СОЇи Гуз Нів Гуз Маї Туг Аа 180 185 190
Сувз ОЇш Маї Тг Нів СіІп О1Уу ГГ еп 5ег 5ег Рго Маї ТІіг Гуз бег Ре 195 200 205
Авп Аге ОСІу СЇш Сув
«2105» 327 «2115451 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 327
СІ Маї СіІп Гей МаїЇ ОЇ 5ег ОЇу СІу СТУ Ге Маї Сїп Рго СТу СТу 1 5 10 15
Зег Гей Аге Ге 5ег Сув Аа Аа 5ег О1у Ре Азп Пе Гув Авр Тиг 20 25 30
Туг Це Нів Тгр Маї Аге Сп Аа Рго СІу був СТУ Гец ОЇ Тгр Маї 35 40 45
Аа Аге Це Туг Рго Тіг Авп О1у Туг Тіг Аге Туг Аа Авр 5ег Маї 50 55 60
Зо
Гуз СІу Аге Ре Тг Це 5ег Аа Авр ТІг 5ег Гуз Авп Тіг Аа Туг 65 70 75 80 Гецп СЇп Меї Авп 5ег Гей Аге Аа СЇпи Авр ТІг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95
Зег Аге Тгр СІу СТу Авр Су Ре Туг Аа Меї Авр Тут Тгр О1у Сп 100 105 110
СІу Тіг І еи Маї Тг Маї 5ег 5ег Аа 5ег Тіт Гуз Оу Рго 5ег Маї 115 120 125
Ре Рго І еи Аа Рго 5ег 5ег Му 5ег ТПг 5ег СТу СТу ТІг Аа Аа 130 135 140
І си СТУ Сув Ге Маї Гуз Авр Туг Ре Рго СіІи Рго Маї Тіг Маї 5ег 145 150 155 160
Тр Авп 5ег СО1Ту Аа Геп Тіт 5ег СОТу Маї Ні Тіт Ре Рго Аа Маї 165 170 175
І си СіІп 5ег 5ег О1у І еи Туг 5ег І еп 5ег 5ег Ма! Ма! Тнг Маї Рго 180 185 190
Зег зег 5ег Гей Сіу Тг СІп ТІг Туг Це Сув Авп Маї Авп Нів Гув 195 200 205
Рго 5ег Азп Тіг Гуз МаїЇ Авр Гуз був Маї СЇш Рго Рго Гуз 5ег Сув 210 215 220
Авр Гуз Тіг Нів Тіг Сув Рго Рго Сухв Рго Аа Рго Си І еи І еи СІу 225 230 235 240
Оу Рго 5ег Маї РІе І еи Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр Тіт І еи Меї 245 250 255
Це 5ег Аге Тіг Рго СЇш Маї Тіг Сув Маї Маї Маї Авр Маї 5ег Нів
Зо 260 265 270
СІи Авр Рго Сни Маї Гуз Ре Авп Тгр Туг МаїЇ Авр ОТу МУаїЇ ОЇш Маї 215 280 285
Нів Авп Аа Гуз Тіг Гуз Рго Аге Си СОЇшй Сп Туг Авп 5ег Тг Туг 290 295 300
Ате Уаї МУаї 5ег Ма! І еи Тіг Ма! І еи Нів Сів Авр Тгр Гей Авп О1у 305 310 315 320 ув СЇш Тут Гуз Суб був Маї 5ег Авп Гуз Аа Ге Рго Аа Рго Це 325 330 335
СТи був ТІг Це 5ег Гуз Аа Гуз СТУ Сп Рго Аге Оїи Рго Сіп Маї 5О 340 345 350
Туг Тіт Гей Рго Рго 5ег Аге Авр ОЇи Гей Тг був Авп Сп Маї 5ег 355 360 365
І си ТІг Сув Ге МаїЇ Гуз Оу Ріе Тут Рго 5ег Авр Це Аа Маї Си 370 375 380
Тгр ОЇю 5ег Авп СТУ Сіп Рго СЇй Авп Авп Туг Гув ТНг Тг Рго Рго 385 390 395 400
Ма Гей Авр 5ег Авр СІу 5ег РНе Ре Гей Туг 5ег Гу5 Геи Тіг Маї 405 410 415
Авр Гуз 5ег Аг Тгр СІп СІп СТу Авп Маї Ре 5ег Сув 5ег Ма! Меї 420 425 430
Нів ОСЇшп Аа Гей Нів Авп Нів Туг Тіт Сп Гуз 5ег І еп 5ег еп 5ег 435 440 445
Рго СТУ Гув 450
Зо «210» 328 «2115 214 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 328
Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Уа! СТу 1 5 10 15
Авр Аге Маї Тіт Пе Тіг Сув Аге Аа 5ег СіІп Авр Маї Авп Тіг Аа 20 25 30
Маї Аа Тгр Туг СіІп СіІп Гуз Рго СІу Гуз Аа Рго Гуз Гей Гей Це
35 40 45
Туг бег Аа 5ег Ре І еи Туг 5ег О1у Маї Рго 5ег Аге Ре 5ег СІу 50 55 60 5Зег Аго 5ег С1у Тіт Авр Ре ТІг Іеи ТПг Це 5ег 5ег ІГеи Сп Рго 65 70 75 80
СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув СІп СіІп Нів Туг ТНг Тг Рго Рго 85 90 95
Ті Ре О1у СіІп СІу ТПг Гув Маї СЇи Це Гув Аге ТІг Маї Аа Аа 100 105 110
Рго 5ег МаїЇ Ре Пе Ре Рго Рго 5ег Авр ОЇи Сіп Гей Гув бег О1у 115 120 125
Тіг Аа 5ег МУаї МаїЇ Сув Геп Гей Азп Авп Ре Туг Рго Аге ОСЇи Аа 130 135 140
Гуз Ма! СІп Тгр Гув Маї Авр Авп Аа Гей Сп 5ег О1у Авп 5ег СіІп 145 150 155 160
Зо
СІи 5ег МаїЇ Тіг ОЇнпи СіІп Авр 5ег Суб Авр 5ег ТІг Туг 5ег І еи 5ег 165 170 175
Зег Тіг Гей ТІг Гей 5ег МГув Аа Авр Туг СЇш Гув Нів Гуз Маї Туг 180 185 190
Аа Сув СОЇш МаїЇ Тіг Нів СІп СОІУ Гей 5ег 5ег Рго Ма! ТІПг Гуз бег 195 200 205
РНе Авп Аге Оу СЇшп Сув 210 «210» 329 «2115 453 50005212» ПРТ
-213» Штучна послідовність «221» джерело 223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 329
СіІп 5ег МаЇ Си Си б5ег СТу О1у Аге Геи Маї Тг Рго СІу Тіг Рго 1 5 10 15
І ви ТІг Геп Тіг Сув Тіг Маї 5ег ОТу Це 5ег І еи 5ег 5ег Авр Аа 20 25 30
Це 5ег Тгр Маї Аге Сп Аа Рго СІу Гуз СТУ Гей ОЇи Туг Це СТу 35 40 45
Пе Це Авп Су Оу СІу Авзп Тг Туг Туг Аа 5ег Ттр Аа Гуз О1у 50 55 60 Аге РПе ТІг Це 5ег Гу5 Тіт 5ег Тг ТОг Маї Авр Гей Гув Це ТНг 65 70 75 80
Зег Рго Тіг Тіг СЇш Авр Тіг Аа Тіг Туг Ре Сув Аа Аге СТу Це
Зо 85 90 95
СІп Нів СІу ОТу СТу Авп 5ег Авр Туг Туг Туг Туг ОТу Меї Авр Гей 100 105 110
Тгр О1у Рго О1у Тіт Ге Маї Тіг Маї 5ег 5ег Аа 5ег Тг був СТу 115 120 125
Рго 5ег Маї Ре Рго І еп Аа Рго 5ег 5ег Гув бег ТІг 5ег СОТу СТу 130 135 140
ТІ Аа Аа Гей СТУ Сув І еи Маї Суб Авр Туг Ре Рго Сіши Рго Маї 145 150 155 160
Ті Маї 5ег Тгр Авп 5ег СІТу Аа Ге ТНг 5ег О1у Маї Нів Тіт Ре 5О 165 170 175
Рго Аа Маї І еп Сіп 5ег 5ег Оу І еи Туг 5ег І еи 5ег 5ег Маї! Маї 180 185 190
Тіг Маї Рго 5ег 5ег 5ег еп СТу ТПг СІп ТНг Туг Це Сув Авп Маї 195 200 205
Авп Нів Муз Рго 5ег Авп ТІг Гуз Маї Авр Гуз Гув Маї ОЇши Рго Гуз 210 215 220 бег Субв Авр Муз Тіг Нів Тг Сухв Рго Рго Сух Рго Аа Рго Си І еп 225 230 235 240
І си СТу ОТу Рго 5ег Маї Ріє Гей Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТІг 245 250 255
І и Меї Це 5ег Аге Тіг Рго ОЇи МаїЇ Тіг Сув Маї Маї Маї Авр Маї 260 265 270
Зег Нів СОЇпи Авр Рго СОЇи Маї Пух Ре Азп Тгр Туг Маї Авр ОС1у Маї 215 280 285
Зо
СІи Маї Ні Авп Аа був Тіг Гуз Рго Аге СЇш ОЇш СІвп Туг Авп 5ег 290 295 300
ТТ Туг Аге Маї Маї 5ег Ма! Геи Тіг Ма! І еи Нів Сп Авр Тгтр Гей 305 310 315 320
Авп ОТу Гуз ОЇи Туг Гув Суб був Маї бег Авп Гуз Аа І еи Рго Аа 325 330 335
Рго Це СЇш Гуз ТНг Це 5ег Гу Аа Гуз СТУ Сп Рго Аге Си Рго 340 345 350
СІп МУаї Туг Тіг Гей Рго Рго 5ег Аге Авр СІи Гей Тг Гув Авп Сп 355 360 365
Уа! 5ег Геи Тіг Сув Гей Маї Гув СІТу Ріє Туг Рго 5ег Авр Це Аа 370 375 380
Маї ОЇш Ттр Си 5ег Авп СТУ Сіп Рго СЇш Авп Авп Туг Гув Тг ТОг 385 390 395 400
Рго Рго Маї Гей Авр 5ег Авр СІу 5ег Ріе Ре І еи Туг бег Гув Гей 405 410 415
Ті Маї Авр Гуз 5ег Аге Тгр СіІп СіІп СТу Авп Маї Ре 5ег Сув 5ег 420 425 430
Уа! Меї Нів СІ Аа І еп Нів Авп Нів Туг ТПг СІп Гув бег Гей 5ег 435 440 445
І еи 5ег Рго Су Гув 450 «2105» 330 «2115 219 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" з5 «400» 330
СІи МУаїЇ І еи Меї Тіг Сіп Тіг Рго 5ег 5ег Ма! 5ег Аа Аа Маї СІу 1 5 10 15
Авр Штг МаїЇ Тіг Це був Сув СІп Аа 5ег СіІп 5ег Це 5ег 5ег Маї 20 25 30
І еи 5ег Тгр Туг Сіп Сп Гуз Рго СТу Сіп Рго Рго Гуз Гец Ге Це 35 40 45
ТугІ еп Аа 5ег Тіг І еп Аа 5ег О1Ту Маї Рго 5ег Аге Рре 5ег О1у 60 50
Зег Аго 5ег СТУ Тіг ОЇи Ре ТНг Геи Трг Це 5ег Авр Геп ОЇи Сув 65 70 75 80
Авр Авр Аа Аа Тіт Туг Туг Сув СІп Тіг Авп Туг СІу ТІг 5ег 5ег 85 90 95 бег Авп Туг СТу Ре Аа Рре СТу СТу СТу Тіг Си Маї Маї МаїЇ Гув 100 105 110
Ате Тіг МУаї Аа Аа Рго 5ег Маї Ре Пе Ріе Рго Рго 5ег Авр Сп 115 120 125
СІп Гей Гуз 5ег СТу ТНг Аа 5ег Маї Ма! Сув Ге Гей Авп Авп Ре 130 135 140
Туг Рго Аге Сни Аа Гуз Маї СіІп Тгр Гуз Маї Авр Авп Аа ГІ ей СІп 145 150 155 160
Зег О1у Авп 5ег СіІп СІи 5ег Ма! ТНг СЇш СІп Авр 5ег Гуз Авр 5ег 165 170 175 зо ТІг Туг 5ег Гей 5ег 5ег ТІг Гей ТПг Геи 5ег Суб Аа Авр Туг Си 180 185 190
Гуз Нів Гуз Маї Туг Аа Сув СІи Маї Тіг Нів Сіп О1у І ей 5ет 5ег 195 200 205
Рго Уаї Тіт Гуз 5ег Рре Авп Аге ОС1Іу СЇши Сув 210 215 «210» 331 «2115 456 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид"
«400» 331
СІи Маї Сів ГГ еп МаїЇ ОЇш 5ег СТу СТу СТУ І еи Маї Сіп Рго С1у О1у 1 5 10 15
Зег Гей Аге Ге 5ег Сув Аа Аа 5ег О1у Це 5ег І еи 5ег 5ег Авр 20 25 30
Аа Це 5ег Тгр Маї Аге СіІп Аа Рго О1Іу Гув СІТу Гей ОЇпи Туг Це 35 40 45
СІу Це Це Авп СІу СТу СТу Авп ТІг Тут Туг Аа 5ег Тгр Аа Гув 50 55 60
СОІУ Аге Ре Тіт Це 5ег Аге Нів Авп 5ег Гуз Авзп ТПг ГГ еп Тут І ей 2065 70 75 80
СіІп Меї Авп 5ег І еи Аге Аа Сп Авр Тг Аа Маї Туг Туг Сув Аа 85 90 95
Ате СІу Це СіІп Ні СІу ОІу О1у Авп 5ег Авр Туг Туг Туг Туг СІТу 100 105 110
Зо
Меї Авр Гей Тгр С1Ту СІп СТу Тг Геи Маї Тг Маї 5ег 5ег Аа 5ег 115 120 125 ТШг Був СТу Рго 5ег Маї Ре Рго ГГ еп Аа Рго 5ег 5ег Гув б5ег ТІг 130 135 140
Зег ОТу О1у ТІг Аа Аа Ге Оу Сув Геп МаїЇ Гув Авр Туг Ре Рго 145 150 155 160
СІ Рго Маї Тіг Маї 5ег Тгр Авп 5ег О1Ту Аа Геп ТПг 5ег СТу Маї 165 170 175
Нів Тіг Ре Рго Аа Маї І еп Сп 5ег 5ег СІу Гей Туг 5ег Гей 5ег 180 185 190
Зег Ма! Ма! Тіг Маї Рго 5ег 5ег 5ег Геи СіІу Тіг СІп Тіг Туг Це 195 200 205
Сув Авп МаїЇ Авп Нів Гуз Рго 5ег Авп ТІг Гув МаїЇ Авзр Гуз Суб Маї 210 215 220
СІи Рго Муз бег Суб Авзр Гув ТНг Нів Тіг Сув Рго Рго Суз Рго Аа 10. 225 230 235 240
Рго Си Гей еп СТу О1Ту Рго 5ег Маї Ріє І еи Ре Рго Рго Гуз Рго 245 250 255
Гуз Авзр Тг ГГ еп Меї Пе 5ег Аге ТНг Рго СЇш Маї Тіг Сув Маї Маї 260 265 270
Уа Авр ХМаї 5ег Нів ОЇи Авр Рго ОЇи Маї Гуз РНе Авп Ттр Туг Маї 215 280 285
Авр О1Ту Маї СЇш Маї Нів Авп Аа Гуз Тіг Гуз Рго Аге Сп ОЇйи СІп 290 295 300
Туг Авп 5ег Тіг Туг Аге Маї МУаї 5ег Ма! еп ТНг Ма! І еи Нів Сп зо 305 310 315 320
Авр Тгр Гей Авп СІу Гуз СОЇи Туг був Сув Гуз Маї бег Авп Гуз Аа 325 330 335
І еи Рго Аа Рго Це Си Гуз ТНг Це 5ег Гуз Аа Гуз О1у Сп Рго 340 345 350
Ате СІи Рго СіІп Маї Туг ТНг І еи Рго Рго 5ег Аге Авр Си Гей ТОг 355 360 365 ув Авп Сп Маї 5ег Геи Тіг Сув Гей Маї Гуз СТу Ре Тут Рго 5ег 370 375 380
Авр Це Аа Маї Си Тгр Сн 5ег Авп О1у Сп Рго ОСЇй Авп Авп Туг
Бо 385 390 395 400
Гуз Тіт Тіг Рго Рго Маї І еп Авр 5ег Авр Оу 5ег Ре Ре ГГ еп Туг 405 410 415
Зег Гуз Гей Тіг МУаї Авр ув бег Аге Тгр СіІп СІп СТу Авп Маї Рре 420 425 430
Зег Сув 5ег Ма! Меї Нів Сни Аа Гей Нів Авп Нів Туг Тіг Сіп Гув 435 440 445 5ег І еи 5ег Гей 5ег Рго СТу Гуз 450 455 «210» 332 20. «2115 219 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» 221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 332
Зо Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еп 5ег Аа 5ег Ма! О1у 1 5 10 15
Авр Аге Маї Тіт Пе Тіг Сув Сп Аа 5ег СіІп 5ег Це 5ег 5ег Маї 20 25 30
І еи 5ег Тгр Туг СіІп СІп Гуз Рго С1у Гуз Аа Рго Гуз Гей Гей Це 35 40 45
ТугІ еп Аа 5ег Тіг І еп Аа 5ег О1Ту Маї Рго 5ег Аге Рре 5ег О1у 50 55 60
Зег ОТу 5ег СТУ Тіг Авр Ре ТІг Іеи ТІг Це 5ег 5ег Іеи СІп Сув 65 70 75 80
СОІи Авр Це Аа Тг Туг Туг Суб СІп Тіг Авп Туг О1Іу Тіт 5ег 5ег
85 90 95 5Зег Авп Туг СТу Ре Аа Рре СТу СТу СТу Тіт Гув Маї ОЇш Пе Гув 100 105 110
Ате Тіг МУаї Аа Аа Рго 5ег Маї Ре Пе Ріе Рго Рго 5ег Авр Сп 115 120 125
СІп Гей Гуз 5ег СТу ТНг Аа 5ег Маї Ма! Сув Ге Гей Авп Авп Ре 130 135 140
Туг Рго Аге Сни Аа Гуз Маї СіІп Тгр Гуз Маї Авр Авп Аа ГІ ей СІп 145 150 155 160 бег ОЇу Авп 5ег СіІп СІи 5ег Ма! ТНг СЇш СІп Авр 5ег Гуз Авр 5ег 165 170 175
Ті Туг 5ег Гец 5ег 5ег ТНг Геи Тіг Гей 5ег Суб Аа Авр Туг СЇи 180 185 190
Гуз Нів Гуз Маї Туг Аа Сув СІи Маї Тіг Нів Сіп О1у І ей 5ет 5ег 195 200 205
Зо
Рго Уаї Тіт Гуз 5ег Рре Авп Аге ОС1Іу СЇши Сув 210 215 «210» 333 «2115 448 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 333
СіІп 5ег МаЇ Си Си б5ег СТу О1у Аге Геи Маї Тг Рго СІу Тіг Рго 1 5 10 15
І си ТІг Геп Тг Сув Тіг Маї 5ег СІТу Ріе 5ег І еи Авп Авп Туг Аа 20 25 30
Меї 5ег Тгр МаїЇ Аге Сп Аа Рго СТу Гуз СТУ Ге ОЇ Ттр Це СТу 35 40 45
Зег Це 5ег Тіг СІу СОІУ Гей Аа Ре Туг Аа Авп Ттр Аа Гуз СТу 50 55 60
Ате Рре ТІг Це 5ег Аге ТІг 5ег ТІг ТП Маї Авр Геи Гу Меї ТОг 65 70 75 80
Зег Геи Тг Тіг СЇй Авр Тіг Аа Тіг Туг Рре Сув СТу Агео Авп СТу 85 90 95
СтІу О1у бег Туг Це Ре Туг Туг Рре Авр Геп Ттр СТу СІп С1Ту ТНг 100 105 110 Іеци МаїЇ Тіт Маї 5ег 5ег Аа 5ег Тіг Гув С1Ту Рго 5ег Маї Ре Рго 115 120 125
І еи Аа Рго 5ег 5ег Гув 5ег Тіг 5ег СОТу СТу Тг Аа Аа Г еп СТу
Зо 130 135 140
Сув Геи Маї Гуз Авр Тут Ре Рго Си Рго Маї ТІг Маї 5ег Тгр Авп 145 150 155 160
Зег О1у Аа Геи ТІг 5ег СТУ Маї Ні ТІг Ре Рго Аа Маї І еп Сп 165 170 175
Зег зег СТУ Ге Туг 5ег І еп 5ег 5ег Ма! Ма! Тнг Маї Рго 5етг 5ег 180 185 190 5ег Гей СТу Тіг СІп ТПг Туг Це Сув Авп Маї Авп Нів Гуз Рго 5ег 195 200 205
Авп Тіг був Ма! Азр Гуз Гуз Маї ОЇ Рго Гуз 5ег Суб Авр Гув ТІг 5О 210 215 220
Нів Тіг Сув Рго Рго Сухв Рго Аа Рго СІи І еи Ге СТу О1у Рго 5ег 225 230 235 240
Уаї Ре І еи Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр Тг І еи Меї Це 5ег Аг 245 250 255
Ті Рго СЇшпи Маї Тіг Суз Маї Маї Маї Авр Маї 5ег Нів Си Авр Рго 260 265 270
СІ Маї Гуз Ріє Авп Тгр Туг МаїЇ Авр СТУ Маї СЇши Маї Нів Авп Аа 215 280 285
Гуз Тіг Гуз Рго Аге Си Си Сі Туг Авп 5ег ТІг Туг Аге Маї Маї 290 295 300
Зег Ма! І еи Тіг Ма! І еи Нів Сп Авр Ттр Гей Авп СІТу був ОЇю Туг 305 310 315 320
Гуз Сувз був МаїЇ 5ег Авп ув Аа І еп Рго Аа Рго Це СТш Гуз ТНг 325 330 335
Зо
Це 5ег Гуз АІа був СТу Сп Рго Аге Сни Рго СіІп Маї Туг ТПг Гей 340 345 350
Рго Рго 5ег Аге Авр ОЇи І еп Тг Гув Авп Сп Маї 5ег еп Тіг Сув 355 360 365
І си МаїЇ Гуз СТу Ре Туг Рго 5ег Авр Це Аа Маї Си Ттр Си 5ег 370 375 380
Авп О1у Сп Рго СЇшй Авп Авп Туг Гув ТОг Тг Рго Рго Маї Гей Авр 385 390 395 400
Зег Авр СТу 5ег Ріе Ре І еи Туг 5ег Гу5 Гей ТП Маї Авр Гуз 5ег 405 410 415
Ате Тгр СіІп СІп СІу Авп Маї РНе 5ег Сув 5ег Ма! Меї Нів СОЇп Аа 420 425 430
Гей Нів Авп Нів Туг Тіг СІп Гуз 5ег І еп 5ег Гей 5ег Рго С1у Гу 435 440 445 «210» 334 «2115215 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 334
АІа Ррбе СІш Ге ТВг СІп ТНг Рго 5ег 5ег Ма! СОЇи Аа Аа Маї СІу 1 5 10 15
СтТу Тіг Це Тіг Це Гуз Сув Сіп Аа 5ег Сіп 5ег Це 5ег 5ег Туг 20 25 30
І еи 5ег Тгр Туг Сіп Сп Гуз Рго О1у Сп Рго Рго Гуз Гец Гей Це
Зо
Туг бег Аа 5ег ТІг І.еи Аа 5ег Оу Маї 5ег 5ег Аге Ре Гув СІТу 60 35
Зег ОТу 5ег СТу Тіг См Туг ТНг Ге Тіг Це 5ег Авр Г еп СЇпи Сув 65 70 75 80 40 Аа Авр Аа Аа Тг Туг Ре Сув Сіп 5ег Туг Туг Авр Це СТу ТОг 85 90 95
Зег Тіт Ре ОС1у СІу СТу Тіг СЇн Маї Маї МаїЇ Гуз Аге Тіг Маї Аа 45 100 105 110
Аа Рго 5ег Маї Ре Це Ре Рго Рго 5ег Авр Сп СіІп Гей Гу 5ег 115 120 125 50
СІу Тіг Аа 5ег Маї Маї Сув І еи І ей Авп Азп Ре Туг Рго Аге СІи 130 135 140
Аа Гуз Маї СіІп Тгр Гуз МаїЇ Авр Ав Аа І еи Сп 5ег О1у Авп 5ег 145 150 155 160
СІп ОЇш 5ег Ма) Тіг ОЇн Сп Авр 5ег Суб Авр 5ег ТІг Туг 5ег Гей 165 170 175
Зег зег ТІПг Геи ТНг Ге 5ег Гуз Аа Авр Туг ОЇи Гуз Нів Гуз Маї 180 185 190
Туг Аа Сув СІи Маї Тіт Нів СІп СТУ Гей 5ег 5ег Рго Ма!Ї Тіг Гу 195 200 205 5Зег Ріе Авп Аге ОС1у ОЇши Сув 210 215 «210» 335 «2115 451 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність
Зо «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 335
СІи Маї Сів ГГ еп МаїЇ ОЇш 5ег СТу СТу СТУ І еи Маї Сіп Рго С1у О1у 1 5 10 15
Зег Гей Аге Ге 5ег Сув Аа Аа 5ег Оу Ре 5ег Гей Авп Авп Туг 20 25 30
Аа Ме 5ег Тгр Маї Аге СіІп Аа Рго СІу Гуз СОІУ Геп Оп Ттр Це 35 40 45
СОІУ 5ег Це 5ег ТІПг СІу СОІУ Геп Аа Ріє Туг Аа Авп Тгтр Аа Гув 5О 50 55 60
СІу Аге Ре ТІг Це 5ег Агео Авр Авп 5ег Губ Авп ТІг І ей Туг Гей 65 70 75 80
СіІп Меї Авп 5ег І еи Аге Аа Сп Авр Тг Аа Маї Туг Туг Сув Аа 85 90 95
Ате Авп О1Ту О1Іу СІу 5ег Туг Це Ріе Тутг Туг Ріре Авр ГГ еп Тгр О1у 100 105 110 СІп СІу Тг Ге Маї ТНг Маї 5ег 5ег Аа 5ег Тіт Гув СтІу Рго 5ег 115 120 125
Уа! Ре Рго ГІ еп Аа Рго 5ег 5ег Гу 5ег Тг 5ег ОТу СТу ТІг Аа 130 135 140
Аа Те ОСІу Сув Ге Маї Гуз Авр Туг Ре Рго Си Рго Маї Тнг Маї 145 150 155 160
Зег ТІгр Авп 5ег ОЇу Аа Гей Тіг 5ег С1у Маї Ні Тіг Ре Рго Аа 165 170 175
Зо
Уа Гей Сп 5ег 5ег СТу Гец Тут 5ег І еи 5ег 5ег Ма! Ма! ТНг Маї 180 185 190 Рго 5ег 5ег 5ег Геи Сіу Тіг СіІп Тіг Туг Це Сув Авзп Маї Авп Нів 195 200 205
Гуз Рго 5ег Авп ТІіг Гу Маї Авр Гуз був МаїЇ СТи Рго Муз бег Сув 210 215 220
Авр Гуз Тіг Нів Тіг Сув Рго Рго Сухв Рго Аа Рго Си І еи І еи СІу 225 230 235 240
СІу Рго 5ег Маї Ріє Гей Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТНг Геи Ме 245 250 255
Зоо
Це 5ег Аге Тіг Рго СЇш Маї Тіг Сув Маї Маї Маї Авр Маї 5ег Нів 260 265 270
ОЇшй Авр Рго СЇпи МаїЇ Гуз Ре Авп Ттр Туг МУаї Авр О1у Маї СОЇш Маї 215 280 285
Нів Авп Аа Гуз Тіг Гуз Рго Аге Си СОЇшй Сп Туг Авп 5ег Тг Туг 290 295 300
Ате Уаї МУаї 5ег Ма! І еи Тіг Ма! І еи Нів Сів Авр Тгр Гей Авп О1у 305 310 315 320
Гуз СІ Туг Гуз Сув був Маї 5ег Азп Гуз Аа І еи Рго Аа Рго Це 325 330 335
СТи був ТІг Це 5ег Гуз Аа Гуз СТУ Сп Рго Аге Оїи Рго Сіп Маї 340 345 350 Туг Тіг Г еп Рго Рго 5ег Аге Авр Сни Ге Тіг Гув Авп Сп Маї 5ег 355 360 365
І си ТІг Сув Ге МаїЇ Гуз Оу Ріе Тут Рго 5ег Авр Це Аа Маї Си
Зо 370 375 380
Тгр ОЇю 5ег Авп СТУ Сіп Рго СЇй Авп Авп Туг Гув ТНг Тг Рго Рго 385 390 395 400
Уа! Гей Авр 5ег Авр Оу 5ег Ре Ре І еи Туг 5ег Гуз Геи Тіг Маї 405 410 415
Авр Гуз 5ег Аг Тгр СІп СІп СТу Авп Маї Ре 5ег Сув 5ег Ма! Меї 420 425 430
Ні ОЇш Аа І ей Нів Авп Нів Туг ТІПг СіІп Гув б5ег І ей 5ег Гей 5ег 435 440 445
Рго СТУ Гув 5О 450
«210» 336 «2115 215 5212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 336
Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Уа! СТу 1 5 10 15
Авр Аге Маї Тіт Пе Тіг Сув Сп Аа 5ег СіІп 5ег Це 5ег 5ег Туг 20
І еи 5ег Тгр Туг Сіп Сп Гуз Рго С1у Гуз Аа Рго Гуз Гей Гей Це 25
Туг бег Аа 5ег ТІг І .еи Аа 5ег О1у Маї Рго 5ег Аге Рре 5ег ОЇу 60 зо бег ОЇу 5ег ОТ1у Тіг Авр Ре ТІг Іеи ТПг Це 5ег 5ег Іеи СІп Сув 65 70 75 80
СІ Авр Аа Аа ТІг Туг Туг Сув Сіп 5ег Туг Туг Авр Це СТу ТОг 35 85 90 95
Зег Тіт Ре С1Іу СІу СТу Тіг Гуз Маї СІи Це Гуз Аге Тіг МУаї Аа 100 105 110 40
Аа Рго 5ег Маї Ре Це Ре Рго Рго 5ег Авр Сп СіІп Гей Гу 5ег 115 120 125 45
СІу Тіг Аа 5ег Маї МаїЇ Сув І еи Гей Авп Азп Ре Тут Рго Аге Сп 130 135 140 50 Аа був Маї СІп Ттр Гув Маї Авзр Авп Аа І ей Сп 5ег СІу Авп 5ег зЗо02
145 150 155 160
СІп Оп 5ег Ма! Тіг ОЇи Сіп Авр 5ег Мув Авр 5ег ТІг Туг 5етг І еп 165 170 175
Зег зег ТІПг Геи ТНг Ге 5ег Гуз Аа Авр Туг ОЇи Гуз Нів Гуз Маї 180 185 190
Туг Аа Сувз СІи Маї ТІг Нів Сп О1Уу Гей 5ег 5ег Рго Ма!Ї Тіг Гу 195 200 205 5Зег Ріе Авп Аге ОС1у ОЇши Сув 210 215 «2105» 337 «211» 444 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" зо «4005» 337
СІп 5ег Ма! Гуз Сни бег СТу О1у Аге Геи Маї Тг Рго СІу Тіг Рго 1 5 10 15 Гецп Тг Ге Тіг Су Тіт Маї 5ег СТУ Пе Авр Г еп 5ег 5ег Туг Аа 20 25 30
Мег Оу Тгр Ріє Аге Сіп Аа Рго Су Гу О1уУ Гей СЇши Туг Це О1у 35 40 45
Тіг Це Авп Це Оу О1у Аге Маї Туг Туг Аа 5ег Ттр АІа був СТу 50 55 60
Ате Рре ТІг Це 5ег Аге ТПг 5ег ТІПг Тіг Маї Авр Ге Гуз Аа Рго 65 70 75 80
ЗОЗ
Зег Геи Тіг Аа ОЇй Авр Тіг Аа ТІг Туг Ре Сув Аа Аге Туг Туг 85 90 95
Авп ОЇу СІу 5ег Туг Авр Це Ттр ОС1у Рго Су ТНг Ге Маї Тіг Маї 100 105 110
Зег Гей Аа 5ег Тг Гуз ОС1у Рго 5ег Маї Ре Рго І еи Аа Рго 5ег 115 120 125
Зег Муз бег ТНг 5ег ОТу СТУ ТІг Аа Аа Геи СТУ Сув Ге Маї Гув 130 135 140
Авр Туг Ре Рго СІши Рго Маї Тіг Маї 5ег Тгр Авп 5ег СІу Аа Гей 145 150 155 160
Ті 5ег СОТу Маї Ні ТІг Ре Рго Аа Маї Гей Сп 5ег 5ег СТУ І еп 165 170 175 Туг бег І еи 5ег 5ег Ма! Ма! Тіг Маї Рго 5ег 5ег 5ег Гей С1Ту ТНг 180 185 190
СІп Тіг Туг Це Сув Авп Маї Авп Нів Гуз Рго 5ег Азп ТІг Гуз Маї
Зо 195 200 205
Авр Гуз Гуз Маї СЇи Рго Муз 5ег Сув Авр Гуз Тіт Нів Тіг Сув Рго 210 215 220
Рго Сухв Рго Аа Рго Си ГІ еп Г.еи СІу ОС1Ту Рго 5ег Маї Ре Ге РІе 225 230 235 240
Рго Рго Муз Рго Гуз Авр Тг Геи Меї Це 5ег Аге ТІг Рго СЇшп Маї 245 250 255
ТП Сув МаїЇ Маї МУаї Авр Маї 5ег Нів ОЇшпи Авр Рго ОЇи Маї Гув Ре 260 265 270
Авп Тгтр Туг Маї Авр ОС1у Маї СОЇи Маї Нів Авп Аа Гуз Тіт Гув Рго 5О 215 280 285
Ате СІЇи СОЇшп СіІп Туг Авп 5ег ТІг Туг Аге Маї Маї 5ег Ма! ЇГеи ТОг 290 295 300
Уа Гей Нів Сп Авр Ттр Гей Авп С1Ту був СЇи Туг Гуз Сув був Маї 305 310 315 320
Зег Авп ув Аа І еп Рго Аа Рго Це СЇи Гув ТІіг Це 5ег Гув Аа 325 330 335
Був ОТу СІп Рго Аге Си Рго Сіп Маї Туг Тіг Гей Рго Рго 5ег Аг 340 345 350
Авр Сію Геп Тіг Суб Авп Сп Маї 5ег Геи Тіг Сув Геи Ма! Гуз О1у 355 360 365
Ре Туг Рго 5ег Авр Це Аа Маї СІши Тгр ОЇи 5ег Авп О1у Сп Рго 370 375 380
СІ Авп Авп Туг Гув Тіт Тіг Рго Рго Маї Гей Авр 5ег Авр С1Уу 5ег 385 390 395 400
Зо
Ре Ре І еи Туг 5ег МЦув Гей ТІг МУаї Авр Гуз 5ег Аге Ттр СІп СЇп 405 410 415 ОІу Авп Маї Ре 5ег Сув 5ег Ма! Меї Нів Сни Аа ГГ еп Нів Авп Нів 420 425 430
Туг Ті Сп Гуз 5ег І еи 5ег І еи 5ег Рго СІу Гув 435 440 «210» 338 «2115 217 212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело 00223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 338
Авр Уаї Уа! Меї Тіг СІп Тнг Рго Аа 5ег Аа 5ег СЇши Рго Маї СІу в і 5 10 15
СІу Тіг Маї Тіг Це Гу Сув СІп Аа 5ег ОЇи 5ег Це Туг Аге Маї 20 25 30
І еи Аа Тгр Туг СіІп СіІп Гуз Рго О1у СіІп Рго Рго Гуз Гей Гей Це 35 40 45
Туг Авр ТП 5ег Тіг Гей Аа 5ег О1у Аа Рго 5ег Атге Ре був СТу 50 55 60 бег Оу Туг СТу Тіт СІи Ріе Тіг Геи Тіг Це 5ег СТУ Маї СІп Сув 65 70 75 80
СІ Авр Аа Аа Тіг Туг Туг Сув СІп ОС1у О1Іу Тут Туг Аа Авр 5ег 85 90 95
Туг О1Іу Це Аа Ріє ОС1Іу ОС1у СІу Тіг ОСЇи Маї МУаї МаїЇ Гуз Аге Трг 100 105 110
Зо
Уаї Аа Аа Рго 5ег Маї Ре Це РНе Рго Рго 5ег Авр Сни Сіп І еп 115 120 125
Гуз бег ОТу Тіт Аа 5ег Маї Маї Сув Г еп І еп Авп Авп Ре Туг Рго 130 135 140
Аг СЇшп Аа Гуз МаїЇ СІп Ттр Гуз Маї Авр Авп Аа Геп Сп 5ег СТу 145 150 155 160
Авп 5ег СіІп СІи 5ег Ма! ТНг СЇш СІп Авр 5ег Гув Авр 5ег Тг Туг 165 170 175
Зег І еи 5ег 5ег ТПг Гей ТПг Геи 5ег був Аа Авр Туг СЇш Гуз Нів 180 185 190
Гуз МУаїЇ Туг Аа Сув СІи Маї Тіг Нів Сп О1У Ге 5ег 5ег Рго Маї 195 200 205
Ті Гуз 5ег Рпе Авп Аге СТу СЇш Сув 210 215 «210» 339 «2115 447 -212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 339
СІп Маї Сів ГГ еп МаїЇ ОЇш 5ег СТу СТу СТУ І еи Маї Сіп Рго С1у О1у 1 5 10 15
Зег Гей Аге Гей 5ег Сув 5ег АІа 5ег СІТу Пе Авр Геим 5ег 5ег Туг 20 25 30
Аа Меї ОСІу Тгтр МУаї Аге Сп Аа Рго Су був О1у Геп Си Туг Це
Оу Тіг Пе Авп Пе С1Ту СІу Аге Маї Туг Туг Аа 5ег Тгр Аа Гув 60 35
Оу Аге Ре ТІ Пе 5ег Аге Авр Авп 5ег Гув Авп ТІг Гей Туг Гей 65 70 75 90 40
СіІп Меї Авп 5ег І еи Аге Аа Сп Авр Тг Аа Маї Туг Туг Сув Аа 85 90 95 45 Аге Туг Туг Авп СІу Оїу 5ег Туг Авр Пе Тгр Су ОЇп ОІу Тг Гей 100 105 110
Уаї Ті Уаї 5ег б5ег Аа 5ег Тіт Гув СТу Рго 5ег Маї Ре Рго І еп 50 115 120 125
Аа Рго 5ег 5ег Гу 5ег ТІПг 5ег СТу О1у Тіг Аа Аа Ге СІу Сув 130 135 140
І си МаїЇ Гув Авр Тут Ре Рго Сни Рго Маї Тіг Маї 5ег Ттр Авп 5ег 145 150 155 160
СОІУ Аа Ге ТНг 5ег СТУ Маї Нів Тнг Ре Рго Аа Маї І еи Сіп 5ег 165 170 175 Бег О1уУ Гей Туг 5ег І еи 5ег 5ег Ма! Ма! Тіг Маї Рго 5ег 5ег 5ег 180 185 190
І ви СІу ТіПг СІп Тг Туг Це Сув Авп Маї Авп Нів Гуз Рго 5ег Авп 195 200 205
Ті Гуз Маї Авзр Гуз був Маї СТи Рго Гув бег Сув Авр Гуз Тіг Нів 210 215 220
Ті Сухв Рго Рго Сухв Рго Аа Рго Си І еп І еи О1у Оу Рго 5ег Маї 225 230 235 240
Зо
РІе І еи Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТІг І еи Меї Це 5ег Агео ТІг 245 250 255
Рго ОЇш МаїЇ Тіг Сув Маї Маї МУаї Авр Маї 5ег Нів СЇш Авр Рго ОЇ 260 265 270
Уа! Гуз Ре Авп Ттр Туг МаїЇ Авр О1уУ Маї ОЇши Маї Нів Авп Аа Гув 215 280 285
Ті Гуз Рго Аге Спи СІи Сіп Туг Авп 5ег ТІг Туг Аге Маї Маї 5ег 290 295 300
Уа! Ге Тіг Ма! І еи Нів Сп Авр Ттр Гей Авоп С1Ту був СОЇ Туг був 305 310 315 320 зов
Сув Муз Маї 5ег Авп Гуз Аа ГІ еп Рго Аа Рго Це СТи Гуз Тіг Це 325 330 335 бег Шув АІа був ОТу Сп Рго Аге Си Рго Сіп Маї Туг ТПг Гей Рго 340 345 350
Рго 5ег Аге Авр ОЇш еп ТПг Гув Авп Сп Маї 5ег еп Тіг Сув Гей 355 360 365
Уа! був СІу Ре Тут Рго 5ег Авр Пе Аа Маї Си Тгр СІЇи 5ег Авп 370 375 380
СІу Оп Рго СЇшй Авп Авп Туг Гуз ТІг Тіг Рго Рго Маї Гей Авр 5ег 385 390 395 400
Авр Оу 5ег Ре Ре Ге Туг 5ег МГув Ге Тг Маї Авр Гуз 5ег Аге 405 410 415
Ттр ОЇп СІп СТу Авп Маї Ріе 5ег Сув 5ег Ма! Меї Нів ОЇи Аа І еп 420 425 430
Нів Авп Нів Туг Тіг Сіп Гуз 5ет Геи 5ег І еп 5ег Рго СІу Гув
Зо 435 440 445 «210» 340 «2115 217 з35 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 340
Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег ТПг Ге 5ег Аа 5ег Ма! О1у 1 5 10 15
Авр Аге Маї Тіт Пе Тіпг Сув СІп Аа 5ег СІи 5ег Це Туг Аге Маї 20 25 30
І еи Аа Тгр Туг СіІп СІп Гуз Рго СІу Гув Аа Рго Гуз Г еп Геи Це 35 40 45
Туг Авр Тг 5ег Тіг Гей Аа 5ег О1у Маї Рго 5ег Аге Рре 5ег ОЇу 50 55 60 бег ОТу 5ег СТу ТПг СЇши Ріре ТПг І.еи Трг Це 5ег 5ег І еи СіІп Сув 65 70 75 80
Авр Авр Аа Аа Тіт Туг Туг Сув СіІп О1у О1у Туг Туг Аа Авр 5ег 85 90 95
Туг О1Іу Це Аа Ре Су ОІу СТу Тіт Гув МаїЇ СЇи Це Гув Аге Трг 100 105 110
Уаї Аа Аа Рго 5ег Маї Ре Це РНе Рго Рго 5ег Авр Сни Сіп І еп 115 120 125
Гуз бег ОТу Тіт Аа 5ег Маї Маї Сув Гени Ге Авп Авп Ре Туг Рго 130 135 140
Аге СЇшй Аа Гуз МаїЇ СІп Ттр Гуз Маї Авр Авп Аа Геп Сп 5ег СТу 145 150 155 160
Авп 5ег СіІп СІи 5ег Ма! ТНг СЇш СІп Авр 5ег Гу Авр 5ег ТНг Туг 165 170 175
Зег І еи 5ег 5ег ТПг Гей ТПг Геи 5ег був Аа Авр Туг СЇш Гуз Нів 180 185 190
Гуз МУаїЇ Туг Аа Сув СІи Маї Тіг Нів СІп О1уУ Ге 5ег 5ег Рго Маї 195 200 205
Ті Гуз 5ег Рпе Авп Аге СТу СЇш Сув 210 215 «210» 341
«2115 452 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «2205» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005» 341
СіІп 5ег МаЇ Си Сни 5ег СТу О1у Аге Г еп Маї Гуз Рго Авр Си 5ег 1 5 10 15 Геп Ті Ге ТНг Сув Тіт Аа 5ег СТу Ре 5ег І еи 5ег 5ег Туг Аа
Ме Це Тгр Маї Аге Сп Аа Рго СОІУ ОЇшпи СОІУ еп ОТи Ттр Пе СІу 20 35 40 45
Тіг Це 5ег Тіг СІу СТу Це Тіг Туг Туг Аа 5ег Тгр Аа Гуз О1у 50 55 60 25
Ате Рре ТІг Це 5ег Гуз Тіг 5ег Тіт Тіт Маї Авр Гецп Гуз Пе ТОг 65 70 75 80
Зо 5Зег Рго Тіт Тг ОЇш Авр Тіг Аа Тіг Туг Рре Сув Аа Аге СІу СІТу 85 90 95 Туг Аа Аа 5ег 5ег Аа Туг Туг Г.еи Рго Туг Туг Ріє Авр І еп Ттр 100 105 110
СОІУ ОЇп СТу ТНг ГГ еп Маї ТПг Маї 5ег 5ег Аа 5ег Тіг Гув О1у Рго 115 120 125
Зег Маї РІе Рго І еп Аа Рго 5ег 5ег Гуз 5ег ТІПг 5ег О1Ту СТУ Тіг 130 135 140
Аа Аа Геи СІу Сув Гецп МаїЇ Гуз Авр Туг Ре Рго ОїЇи Рго Маї ТНг 145 150 155 160
Уа! 5ег Ттр Авп 5ег СТу Аа І еи ТНг 5ег СТУ Маї Ні Тіг РБе Рго 165 170 175
Аа Ма Геп Сп 5ег 5ег О1у І еи Туг 5ег ІГ.еи 5ег 5ег Ма! Ма! Тіг 180 185 190
Уа! Рго 5ег 5ег 5ег еп СТу Тіт СІп ТПг Туг Це Сув Авп Маї Авп 195 200 205
Нів Гув Рго 5ег Азп Тіг був Ма! Авр Гуз Гув Маї ОЇи Рго Гуз 5ег 210 215 220
Сув Авр Гуз ТІіг Нів ТІг Сув Рго Рго Сузв Рго Аа Рго Си І еи Гей 225 230 235 240
СОІУ О1у Рго 5ег Маї Ріє Гей Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр Тіг Гей 245 250 255
Меї Це 5ег Аге Тг Рго ОЇи Маї Тіг Сув Маї Маї МУаї Авр Маї 5ег 260 265 270
Нів ОЇшп Авр Рго СЇи Маї Гуз Ріе Авп Тгтр Туг МУаї Авр О1Уу Маї ОЇ
Зо 215 280 285
Уа! Нів Авп Аа Гуз ТПг Гуз Рго Аге ОЇй СЇи СТп Туг Авп 5ег ТОг 290 295 300
Туг Аге Уаї МУаї 5ег Ма! І еи Тіг Ма! І еи Нів СІп Авр Тгр Гей Авп 305 310 315 320
СІу Гуз СЇш Туг Муз Сув Гув Маї 5ег Авп Гуз Аа Гей Рго Аа Рго 325 330 335
Це ОЇш Гуз Тіт Це 5ег був АІа Гуз СТу Сіп Рго Аге Си Рго СІп 340 345 350
Уа! Тут Тіт І еи Рго Рго 5ег Аге Авр Он Геи ТІіг Суб Авп Сп Маї 5О 355 360 365
Зег Геи Тіг Сув Геп Ма! Гуз СОТу Ре Туг Рго 5ег Авр Це Аа Маї 370 375 380
СІи Ттр СІи 5ег Азп СТу Сп Рго СЇшй Авп Авп Туг був Тг Тіг Рго 385 390 395 400
Рго МУаїЇ Гей Авр 5ег Авр СТу 5ег Ре Ре ГІ еи Туг 5ег Мув еп ТНг 405 410 415
Маї Авр ув 5ег Аге Ттр СіІп СІп СТу Авп Маї РНе 5ег Сув 5ег Маї 420 425 430
Ме Нів СЇн Аа ГГ еп Нів Азп Нів Туг Тіг СІп Гуз бег І еи 5ег Гей 435 440 445
Зег Рго СТУ Гув 450 «210» 342 «2115 219 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 342
Аа Аа Ма! І еи Тіг СіІп Тіг Рго 5ег Рго Маї 5ег Аа Аа МУаї СТу 1 5 10 15
СІу Тіг Маї ТІг Це 5ег Сув Сп 5ег 5ег СіІп 5ег Ма! Туг Авп Авп 20 25 30
Авп Авп Гей Аа Тгр Ре Сп СіІп Гув Рго СІу Сіп Рго Рго Гуз Гей 35 40 45
Гепц Це Туг Гей Аа 5ег Тіт І еп Аа 5ег С1Ту Маї Рго 5ег Аге Ріе
50 55 60
Зег ОТу б5ег СТу 5ег СТу Тіг СіІп Ре ТІг Геп Тг Це 5ег С1у Маї 65 70 75 80
СІп Сув Авр Авр Аа Аа Тг Тутг Туг Сув Гецп Оу О1у Суб Авр Авр 85 90 95
Авр Аа Авр Тіг Ре Аа Ре ОС1Іу О1у О1у Тіг СЇни Маї Маї Маї Гув 100 105 110
Ате Тіг МУаї Аа Аа Рго 5ег Маї Ре Пе Ріе Рго Рго 5ег Авр Сп 115 120 125
СІп Гей Гуз 5ег СТУ ТНг Аа 5ег Маї Ма! Сув Гей Гей Авп Авп Ре 130 135 140
Туг Рго Аге Сни Аа Гуз Маї СіІп Тгр Гуз Маї Авр Авп Аа ГІ ей СІп 145 150 155 160
Зег О1у Авп 5ег СіІп СІи 5ег Ма! ТНг СЇш СІп Авр 5ег Гуз Авр 5ег 165 170 175
Зо
Ті Туг 5ег Гец 5ег 5ег ТНг Геи Тіг Гей 5ег Суб Аа Авр Туг СЇи 180 185 190
Гуз Нів Гуз Маї Туг Аа Сув СІи Маї Тіг Нів Сіп О1у І ей 5ет 5ег 195 200 205
Рго МаЇ Тіт Гуз 5ег Рпе Авп Аге ОСТу СЇш Сув 210 215 «210» 343 «2115 455 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» 50005221» джерело
«223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 343
ОЇшп МаІ СІп Геп Маї ОЇи 5ег СТу СТу О1У Геи Маї СіІп Рго СО1у О1у 1 5 10 15
Зег Гей Аге Ге 5ег Сув Аа Аа 5ег О1Іу Ре 5ег І .еи 5ег 5ег Туг 20 25 30
Аа Меї Пе Тгр Маї Аге СіІп Аа Рго О1Іу Гуз СОІУ Геп Оп Ттр Це 35 40 45
СІу Тіг Це 5ег Тіг СТу СТУ Пе ТІг Туг Туг Аа 5ег Тгр Аа Гув 50 55 60
СІу Аге Ре ТІг Це 5ег Агео Авр Авп 5ег Губ Авп ТІг І ей Туг Гей 65 70 75 80 СІп Меї Авп 5ег І еи Аге Аа Сп Авр Тіг Аа Маї Туг Туг Сув Аа 85 90 95
Ате СІу ОТу Туг Аа Аа 5ег 5ег Аа Тут Туг І еи Рго Туг Туг Ре
Зо 100 105 110
Авр І еп Тгр С1у СЇп О1у Тіг І еи Маї Тіг Маї 5ег б5ег Аа 5ег ТОг 115 120 125
Гуз ОІу Рго 5ег Маї Ре Рго І еп Аа Рго 5ег 5ег Гув 5ег ТІг 5ег 130 135 140
СІу ОТу ТІг Аа Аа Геи СтТу Сув Гей МаїЇ Гув Авр Туг Ре Рго СЇи 145 150 155 160
Рго МаЇ Ті Маї 5ег Тгр Авп 5ег СОТу Аа Геи ТПг 5ег О1у Маї Нів 165 170 175
Ті Ре Рго Аа Маї І еп Сп 5ег 5ег О1у ІГеи Туг 5ег І ей 5ег 5ег 5О 180 185 190
Уа! Маї Тіг Маї Рго 5ег 5ег 5ег Гей СТу ТПг СІп ТІг Туг Це Сув 195 200 205
Авп Маї Авп Нів Гуз Рго 5ег Авп ТІг був МаїЇ Азр Гуз Гувз Маї ОЇйм 210 215 220
Рго Гуз 5ег Сув Авр Гуз ТІг Нів Тіг Сув Рго Рго Суз Рго Аа Рго 225 230 235 240 СІшІвеи Геп О1Іу СІу Рго 5ег Маї Ре Геи Ре Рго Рго Муз Рго Гув 245 250 255
Авр Тг І еи Ме Це 5ег Аге Тіг Рго СЇши Маї ТІг Сув Маї Маї Маї 260 265 270
Авр Уаї 5ег Нів СЇш Авр Рго СЇи Маї Гуз Ріе Авп Тгр Туг Маї Авр 215 280 285
СтТу МУаї ОЇш Маї Нів Авп Аа Гуз Тіг Гуз Рго Аге ОЇпи ОЇйи Сп Туг 290 295 300
Зо
Авп 5ег ТІг Туг Аге Маї Маї 5ег Ма! І еи ТНг Ма! І еи Нів СІп Авр 305 310 315 320 Ттр Гей Авп СІу був СЇи Туг був Сув Гув Маї бег Авп Гуз Аа Гей 325 330 335
Рго Аа Рго Це СІи Гув Тіг Це 5ег Гув АІа Гув СТу Сп Рго Аге 340 345 350
СІ Рго Сіп Маї Туг Тіг Геи Рго Рго 5ег Аге Авр ОЇи І еп ТНг Гуз 355 360 365
Авп Сп Маї 5ег Іеи ТІг Сув Ге МаїЇ Гуз О1у Ре Туг Рго 5ег Авр 370 375 380
Це Аа Маї ОЇи Ттр Си 5ег Азп СТУ Сіп Рго СЇй Авп Авп Туг Гуз 385 390 395 400
Ті ПШг Рго Рго Маї! І еи Авр 5ег Авр О1Ту 5ег Ре Ре І еи Туг 5ег 405 410 415
Гуз еп Тг МУаї Авр Гуз 5ег Аге Ттр Сіп Сіп О1у Авп Маї Рре 5ег 420 425 430
Сув б5ег Ма! Меї Нів СІ Аа ГІ еи Ні Авп Нів Туг Тіг Сп Гуз бег 435 440 445
І си 5ег ІГ.еи 5ег Рго СТу Гуз 450 455 «210» 344 «2115 219 «212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид"
Зо «400» 344
Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Уа! СТу 1 5 10 15
Авр Аге Маї Тіт Пе ТІг Сув Сп 5ег 5ег СіІп 5ег Ма! Туг Авп Авп 20 25 30
Авп Авп Гей Аа Ттр Туг СІп СІп Гув Рго СТу Гуз Маї Рго Гуз Гей 35 40 45
І си Це Туг Гей Аа 5ег ТПг І еп Аа 5ег СІТу Маї Рго 5ег Аге Ріє 60
Зег ОЇу бег СОТу 5ег СТу Тіг Авр Ріе ТНг Геи Тіг Це 5ег 5ет Геп 65 70 75 80 50
СІп Сув СОЇпи Авр Аа Аа Тіг Туг Туг Суб Гей СТу ОТу Сув Авр Авр 85 90 95
Авр Аа Авзр ТІіг Ріє Аа Ре О1Іу О1Іу СІу Тіт був Маї СЇи Це Гув 100 105 110
Аге Ті Маї Аа Аа Рго 5ег Маї Ре Це Ре Рго Рго 5ег Авр Си 115 120 125
СІп Гей Гуз 5ег СТу ТНг Аа 5ег Маї Ма! Сув Ге Гей Авп Авп Ре 130 135 140
Туг Рго Аге Сни Аа Гуз Маї СіІп Тгр Гуз Маї Авр Авп Аа ГІ ей СІп 145 150 155 160
Зег О1у Авп 5ег СіІп СІи 5ег Ма! ТНг СЇш СІп Авр 5ег Гуз Авр 5ег 165 170 175
Ті Туг 5ег Гец 5ег 5ег ТНг Геи Тіг Гей 5ег Суб Аа Авр Туг СЇи 180 185 190 з0 ув Ні Гуз Маї Туг Аа Сув СЇши Маї ТІг Нів СіІп С1Уу Г еп 5ег 5ег 195 200 205
Рго Уаї Тіт Гуз 5ег Рре Авп Аге ОС1Іу СЇши Сув 210 215 «210» 345 «211» 1350 405212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «400» 345 ваввіссаас (еріегавав, сервера вИеіесаас сівессеріс ссівсессів 60 іссірсісся сагїсівеси сассисавс весасвеві еісЦПереї рарасареса 120 сетераааає рісцвавіе ве Песаае абйартавіе ріертарца гассастає 180 всарасаріо (раареоіар ашесайа (сесрараса асессаараа сасайрис 240 сірсаайіео асарссірав асссраарас ассрееріссашивіосаарасаєття 300 расраїсссе ссіреЦсес Цайресес саарреассс серісассрі сіссісарсс 360 й іссассааро рссса(сеоі суисссссів рсасссіссі ссаарарсас сісіворврос 420 асарсеессс (реосірссі роісааррас гасцссссе аассерівас ррісісрістя 480 аасісаресе сссірассар серсрівсас ассцсссре сірісстаса ріссісарта 540 сістасіссс (сарсарсрі ррівассрів сссіссарса всПрресас ссарассіас 600 аєсірсаасе (гайгсасаа рсссарсаас ассаароіре асаараадарі(рарсссааа 660 й (Ісцріраса адасісасас а(есссасся (всссарсас сіраасіссірререрасся 720 (сарісисс (сцсссссс аааасссаар расасссіса (раїсісссе рассссірає 780 вісасасєрсе (роівоіора срірарссас раарасссіо аррісаарії саасіво(ас 840 ріррасерсе іреароівса (аа(оссаар асааарссрс рераррарса ріасаасарс 900 асріассріо (еоісарсрі ссісассріс сівсассавро асіресісаа(ресааррат 960 й єасаарірса аррісіссаа сааарсссіс ссарссссса Ісрараааас сабсіссааа 1020 рссааарррс арссссрара ассасарее гасасссірс ссссаїсссе рраїрарсію 1080 ассаараасс аррісарссі рассівссіо рісаааресі (ста(сссар свасаїстсс 1140 рівварівре арарсаагро рсарссерар аасаасіаса арассасессісссрівсію 1200 расіссрасе всіссцси сцагацса аарсісассе (грасаарар саррісосат 1260 й саррреаася (сиусісаге сіссрірае са(савросіс (есасаасса стасасесая 1320 аарарссісі сссірісісс сергаааєса 1350
«210» 346 «2115 654 -212» ДНК «213» Штучна послідовність
«221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид"
«400» 346 васабєссавс Івасссараєр, сссаарсавс сіварсесса всріверіса саварівасс 60 асассівга рірісарсіс ааріагаарі (ссаасаасі (есасівєрта ссавсараат 120 ссарріааре сіссааарсс а(ераєтас ресасаїсса ассіресис герівівсса 180 арсарайцса рсеріарсео (арсеріасс растіасассі (сассаїсар сарссіссав 240 ссарарраса (срссассга сіасірссаа сарієраріа рЦасссріа сагїріасасе 300 йпсрессаар роассаарої роааасааа сеаасівіво сірсассаїсірісцсаєс 360 псссрссаї сірагєрарса рираааісі реаасіоссі сірцрірів ссірсіраає 420 аасисіаіс ссарарарес сааартасає (рраароіре агаасесссі ссааістряї 480 аасісссаре арарівісас арарсаррас арсаарраса рсассіасавр ссісарсавс 540 асссірасес (гарсадарс авасіасрар адасасааар (стасессів сраарісасс 600 саїсарерсс Ігарсісесс срісасааар арсцсааса веегаравіе Цаа 654 «2105 347 «2115 1350 «212» ДНК -213» Штучна послідовність 0 «2205 «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 347 сарріасаас Тесаврсаріс гееессівав сіввараарс сісесесис арісаарата 60 їсстрсааря систе ца сісайсасі врстасасса граасівеяї ваарсаварс 120 сагврааара вссцраріе гайеваси абасісси асайасерівс йставстас 180 аассавраарі (сарреосаа воссасаца асіоіараса арісаєссар сасарссіас 240 асерассісс ісарісівас а(сіраарас істесарісташсірівсаареретреяї 300 єасвасеера вреріщшва стасіреосва (ссрорассс серісассрі сіссісарсс 360 іссассааро рссса(сеоі суисссссів рсасссіссі ссаарарсас сісіворврос 420 асарсроссс (роосівссі ррісаарсас (асцссссе аассерірас ррівісрів 480 аасісаресяе, сссірассар серсрівсас ассцсссре сірісстаса ріссісарта 540 сістасіссс (сарсарсрі ррівассрів сссіссарса всПрресас ссарассіас 600 й аєсірсаасе (гайгсасаа рсссарсаас ассаароіре асаараадарі(рарсссааа 660 (Ісцріраса ааасісасас а(есссасся (всссарсас сіраасіссірререрасся 720
Ісаріснцсс (сцсссссс аааасссаарт расасссіса (расісссе рассссірає 780 рісасагєрся (рів вірва срірарссас раарасссір аррісаарі саасіретас 840 рірврасерсе іреароівса (аа(рссаар асааарссеяс рерареарса ріасаасавс 900 й асріассріо (роісарсрі ссісассріс сівсассавро асіресіваа(ресааррає 960 єасаарірса аррісіссаа сааарсссіс ссарссссса Ісрараааас сабсіссааа 1020 вссааареос арссссрара ассасарріо (асасссірс ссссаїсссе рраїрарсіє 1080 ассаараасс аррісарссі рассівссіво рісаааресі (ста(сссар свасаїстсс 1140 рівварівре арарсаа(ро рсарссерар аасаасіаса арассасесс (сссрівсія 1200 й расіссрасе всіссцси ссістасарс аарсісассея (ррасаарар сароістсат 1260 саррреаася (сиусісаге сіссріра(е са(савросіс (есасаасса стасасесая 1320 аарарссісі сссірісісс срргаааітра 1350 «210» 348 «2115 642 405212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело 223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид «400» 348 васабссваєс їсасісаріс (ссаврсайас агвістесаї сіссареера вааррісасс 60 асассівса вірссавсіс аарісіаарі гасатосасії яеассарса раарісавес 120 ассіссссса азагагераї Пагоасаса іссааасієео систеваві сссаррісес 180
Цсаріроса рісорісіво ааасісцас (сісісасаа(сарсарсрі рраресіваа 240 рагваєвсаа сцацасія ссарсарісе аріаарсасс сісісасей сераїссвтре 300 ассаароіво аайгсавдасе аасівіеосі весассаїсів (сцса(су сссрссаїст 360 й рагврарсарі (всааасіре аасівссісї еЦрівірсс (есівааіаа сисіаєссс 420 ававраресса ааріасаріо ваарріераї аасесссісс ааісееріаа сісссаррат 480 арігрісасар арсаррасар саароасарс ассіасарсс (сарсарсас ссірасесів 540 арсадарсар асіасрараа асасаааріс гасессірсе аарісасссаїсаррессів 600 арсісрсссе (сасааарар сисаасаре реаграрівц аа 642 «210» 349 «211» 1362 -212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело 223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «400» 349 сарісеріве авравріссев верісессіе рісасессів ррасассссї расасісасс 60 ївсассвісії сівеаасіс ссісавтарс вагесайіаа рсісерісся ссаресісса 120 веваавререс ісеайасаї среваасай айгеріеріе ріаасасага стасесеарс 180 (гресрааар, рссрайсас сагсіссааа ассісвасса серіреасі рааааєсасс 240 й аріссрасаа ссваррасас россассаї йсірівсса раррсайса асагеоівої 300 еРіайарів ацацаца цЦасерсагсо рассісірре всссаросас ссіррісасі 360 рісісцсар саїссассаа реосссася рісцссссс (восасссіс сіссааравс 420 ассісіррре всасарсеос ссіворосівс сісрісааре асіасцссс сеаассврів 480 асерірісрі реаасісаре сесссірасс арсерсрівс асассцссс ресівісста 540 саріссісар, расістасіс ссісарсарс рісрівасся (есссіссар сарсЦерос 600 асссавассі аса(сівсаа срірайссас аарсссарса асассаареі ррасаарааа 660 вИЦрарссса айісцеса саааасісас аса(рсссас срівсссарсассіраасіс 720 сірререрас срісарісії ссісцсссс ссаааассса аррасасссі саграєсісс 780 серассссір аррісаса(е срісрісоів расрірарсс асраарасссірареісаає 840 й ипсаасіроі асрісвасре соівсароіо са(аа(рсса арасааарсс рсеррартат 900 сартасааса рсасріассе (рісоісарс ріссісасся (ссірсасса ррасівосію 960 айревосааро аріасааріо сааррісісс аасааарссс (сссарсссс саїсвавааа 1020 ассаєсісса аарссаааро рсарссссва раассасаро (ріасасссі рсссссаїсс 1080 среоаграрс (сассаараа ссаррісарс сівсассівсс (ерісаааре сисіаєссс 1140 й арсвасаїсе ссрістваріо реарарсайї рросаврссре араасаасіа саарассася 1200 ссісссріос герасіссва сеесіссис цсцагац сааарсісас сріврасаає 1260 авсаррісос арсареееаа срісисіса (осіссріра (есаграресісівсасаас 1320 сасіасасрс араарарссі сісссірісї сссрераааї ра 1362 з0 «210» 350 «211» 660 -212» ДНК «213» Штучна послідовність 0 «2205 «221» джерело 223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005» 350 ваарівцва (вгасссаврас їссафссісс рівістесав, сіті гара сасарісасс 60 асааріесс арессаріса гарсацйаврі арівісцеї ссеіеотаєса рсарааасса 120 вевсарссїс ссаарсіссї вастаєсте рсагссасіс г(ересасіве ррісссася 180 серисарсяе рсаріара(с (серасарар цсасісіса ссаїсарсра ссіврарісї 240 расрагрсіє ссасцасіа сірісааасс аацйасеоа старіаріаріаацаєтеі 300
Шесцсе рсерарерас сваррівріс рісааасеаа сісівосіос асса(сівіс 360 псабсисс сессасіра (равсарцяе ааабсіреаа сівссісір((рірівссів 420 сірайаасі (сіагбсссар арарессааа ріасарісрва аррірраєаа сесссіссаа 480 (сере ріаасі сссаррараєр (рісасарав саррасарса аррасарсас сіасарссіс 540 арсарсассс (расрсірав сааарсарас гасрарааас асаааріста сессівсраа 600 й рісасссаїс ареоссівав сісесссріс асааарарсі (саасароер аравісцва 660 «2105» 351 15. «2115 1371 -212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» 20221» джерело 223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «400» 351 вааріссаас (сріврааат сере ерарва сісріесарс сревсераїс ссіссеесів 60 їсасоірсів саїсеевааї ЧЦссеїсісс (ссвасесва ЧЦарсівеї сарасаресс 120 сссераааря, грсіеравріа са(се ета асаасеесе всевааасас сіастіасесс 180 й (Ісстрросса аррессерси сассасісе сресагаац ссаараасасісірсасце 240 сааагеаасі сссіраррес срареасасс рссрівасі асієсесесе сресаїссає 300 сасерівоіе рааасарсра сіасіасіас (а(сораре асіріррео ссарреаасі 360 сурірасся грісрісарс агїссассаар ресссаїсер ісЦсссссі ресасссісс 420 іссаарарса ссісівреоео сасарсеесс сівоосірсс (ерісаареа сітасцсссс 480 й раассрріра серірісріо веаасісарес рсоссірасса рсресрірса сассиссся 540 всірісстас аріссісаре асістасісс сісарсарсе (ерівассрі рсссіссарс 600 аврсЦереса сссарасса саїсівсаас рірааісаса арсссарсаа сассаартівє 660 расаарааар Цеарсссаа а(сцрірас аааасісаса са(осссасс рірсссарса 720 ссіваасісс (рререрасс рісарісцс сісцссссс саааасссаа реасасссіс 780 асрагсіссс ррассссіра реісасаєос рісоісоіво асрірарсса сраарасссії 840 врарреісаарі їсаасіє та срісвасеос рісравроіос а(аа(есссаа расааарсся 900 севрраррарс аріасаасав сасріассяії рісвісарсе Іссісассрі ссірсассає 960 васіресіра а(еосаареа ріасаарівс ааррісісса асааарсссі сссарссссс 1020 аєсрараааа ссаїсіссаа арссааарео сарссссрав аассасарреі ріасасссів 1080 й сссссаїссс рерагсарсі рассаараас сареісарсс (рассірссі ррісааарос 1140 нсіаіссса всрасагсес срісрарісе рарарсаасо ресарссера раасаасіас 1200 аарассасес сісссрірсі врасіссрас росіссисі (сцасайс ааарсісасс 1260 рісрасаара рсареісеса рсаресеаас рісисісаї рсіссрісає есаїравясі 1320 сірсасаасс асіасасеса раарарссіс ісссірісіс ссрерааасв а 1371 «210» 352 «211» 660 -212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело 223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «400» 352 васайсавра (расссаріс сссаарсіся сіріссрссії ссвівеесра ссесвівасс 60 абсасвірсс аресвіссса рісаайарс арсрівсісї ссіветасса асарааесся 120 вевааарсас ссаарсіесї гастасця, вссіссасіс Теессісвве арівссиса 180
СеРИСІссе раг(серерас (еоіасіраї йсасссіса ссагсісрав ссцсаріос 240 й раргасасе сіасцасіа Прісадасс аасіасераа ссіссарсіс саасіасрряс 300
Шоессцсе рівосерерас саароісраа а(сааасеаа сісівосіос ассаєсівіс 360
Цсасцес сеосаїсіва (рарсарце ааасіреаа сісссісір((рірівссів 420 сірайаасі (стаєсссар арароссааа ріасарісра ареісра(аа сесссіссаа 480 (сере ріаасі сссареараєр (рісасарав саррасарса аррасарсас сіасарссіс 540 арсарсассс (расрсірав сааарсарас гасрарааас асаааріста сессівсраа 600 рісасссаїс ареоссівав сісесссріс асааарарсі (саасароер аравісцва 660
«210» 353 «211» 1347 «212» ДНК -213» Штучна послідовність
«220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид"
«400» 353 сарісеріве авравріссев вревісессе рісасессїво ррасассссї расасісасс 60 їесасавісї стерацеїс ссісайагаас (атесайіва всіверісся ссаресісса 120 вевааверес (ераасевраї серассай атасівоте рісісесайц сіасесеаас 180 (геесаааар яссрайцсас сагсіссара ассісрасса серівра(сі вааааєрасс 240 арісірасаа ссраррасас рессассаї Цсірісоса рааа(еріво (соіавцає 300 ашевацй айшраси ріресессаа росасссісе ісасірісіс йсарсаєсс 360 ассаареесс са(серіси сссссіреса сссіссісса арарсассісісвроросаса 420 всеесссіро рсівссіреі саарсрасіас Цссссраас серірасері рісвіртаас 480 ісаресессс (рассарсео сріссасасс йсссерсів (ссіасаріс сісаррасіс 540 асісссіса рсарсрісої рассрісссс Іссарсарсі (гросассса рассіасаїс 600 (весаасріва абсасаарсс сарсаасасс ааррісраса арааарцеа рсссаааєстї 660 (рірасаааа сісасаса(е сссассрівс ссарсассів аасіссірво роретасстіса 720 рісцссісі Іссссссааза асссааррас асссісаєра (сісссерас сссірарріс 780 асасесріре (врісрасрі рарссасеаа расссіваро їсаарисаа сіреіасрія 840 васррсрірво ароіссагаа (сссаараса аарссесрео аррарсаріа саасарсасе 900 єассрівіре їсарсріссі сассріссів сассареасі ресіраа(ре саареатіас 960 ааріссааре ісіссаасаа арсссіссса рсссссаїсе араааассає сіссааарсс 1020 ааарресарс сссрараасс асаврівтас асссірсссс са(їсссверарарсівасс 1080 аараассаре їсарссірас сірссівріс аааресисі агїсссарсра саїсессеівє 1140 варірерара рсайїрооса вссерараас аасіасаара ссасессісс сріссірвас 1200 (ссвасеесі ссцсцси абгацсааав сісассріво асаарарсав рівосарсат 1260 врераасрісі (сісасрсіс сріваєрсаї раресісіос асаассасіа сасесараат 1320 арссісіссс (рісісссре рааагра 1347 «210» 354 15. «2115 648 «212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «400» 354 всайсвайЙ ї(васссаврас (ссафєссісс рівваресаєв сістверавря, сасааісасс 60 асааріесс арессаріса гарсацйаврі арцасцає сстераєса рсарааасса 120 веесавссс ссаарсіссї гаєктацсї рсабєссасіс герсасіве, врісісася 180 серисааар рсаріеоа(с (серасарає гасасісіса ссаїсарсра ссіоварівї 240 вссрагрсів ссасцаси сірісааарс гайасеаєва Пееіасіав (асцшісряс 300 ррарерассе арріврісрі сааасеаасі ріросівсас са(сісісц саїсцссося 360 ссаєсіває арсарцеаа а(сісеаасі рссісіеце (ріессірсі ваагаасис 420 гаїсссарар, арессааварі асаріреаар ріврагаася сссіссааіс реріаасісс 480 сарраграрір (сасарарса рерасарсаар расарсассіасарссісар сарсасссію 540 асрсірарса аарсарасіа сгарааасас ааарістасе ссірсвраарі сасссаєсая 600 ввссіварсі срсссрісас ааагарсис аасарееває арісцеа 648 «210» 355 «2115 1356 50005212» ДНК
«213» Штучна послідовність
«221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «400» 355 ваарівсаєвс (еріераас геесресевра сісвівсарс сісесерагс ісіварасів 60 й ІсИрівссе, ссіссерсИ сіссстеаас аастасесса (віссіреві всвасаресс 120 сеівесааат, вссіераагсе рагсерсісс абсарсасав всерссівес спстасесс 180 аайрерсса аррессериї сассаєсарс сресасаасі ссаараасас ссіртассіс 240 сара(раасі сссірсерос сраррасасс вссрівасі асіріоссарааасврсяра 300 весісстаса ісцетасіа сисрассів їррооссаро рсасссісрі расаріріса 360 й (сірсабєсса ссаарерссс аг(серісцс ссссіросас ссіссіссаа рарсассісї 420 веррерсасар сересссіврре сівссірріс ааррасіасі(ссссеваасс ррісасрріє 480 Ісріреаасі саррсесссі рассарсеос ріссасассі (сссевосірі ссіасарісс 540 (саррасісії асісссісар сарсрівоіо ассрірсссі ссарсарсЦ рросасссає 600 ассіаса(сі рсаасрісаа (сасаарссс арсаасасса аррівсрасаа рааарцрат 660 й сссаайіси рірасаааас (сасасаєрс ссассрірсс сарсассівса асісстрвре 720 врассрісар (сЦссісц ссссссаааа сссаарсаса сссіса(рає ссісссррасс 780 ссірареіса са(осрісрі реіреасрів арссасраар асссірареі саарісаас 840 (етасріво асеесрівра воіесагааї рссаарасаа арссесррра ррарсатас 900 аасарсасеї ассрівіреії сарсріссіс ассріссірс ассарсрасіо рсіраатрос 960 й аареаріаса арівсаароі сіссаасааа рсссісссар сссссаїсра ваааассаєс 1020 іссадарсса аарерсарсс ссрараасса сареістаса сссівссссс аїсссеетраї 1080 варсірасса араассареї сарссівасс (ессірріса ааресисіаїсссарсвас 1140 ассессрірве арісоварає сайіеоосар ссреарааса асіасаарас сасессіссс 1200 рівсіерасі ссвасерсіс сисисца гайсааарс (сассрівра саарарсарт 1260
(ресарсаре реаасріси сісагосісс рірса(есаср аросісіоса саассасіас 1320 асрсараара вссісісссі рісісссере ааагва 1356 «210» 356 «2115 648 «212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «400» 356 вагайсава (сасссаріс ссссіссарс сіріссеси сівтевесва саравівасс 60 асассіріс аррссіссса ріссасісс їсстасері сстеятаєса рсаваарссс 120 весаавессс ссаарсієсії вастасісї вссіссасас (еессіссев, срівссссі 180 арайцсіссе рсісівосіс Іресассрас Шасссіва ссабсарсіс ссіссарівс 240 варра(рссе ссассіасіа сірссарісс (асіасраса (сеосассіс сассцсряс 300 враврсасса аррісраааї садасеаасі рісосівсас са(сісісц са(сцссся 360 ссаєсіває арсарцеаа а(сісеаасі рссісіеце (ріессірсі ваагаасис 420 гаїсссарар, арессааварі асарісеааср ріссааася сссіссааіс рріаасісс 480 сарраграрір (сасарарса рерасарсаар расарсассі асарссісар сарсасссів 540 асерсірарса аарсарасіа сгарааасас ааарістасо ссірсвраарі сасссаєсая 600 верссірарсі сесссрісас ааагарсис аасареерає арісцеа 648 «2105 357 «2115 1335 «212» ДНК -213» Штучна послідовність
АБО «2205 «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид"
Бо «4005» 357 сарісаріва авєравіссее ревісессе рісасессїво ррасассссї расасісасс 60 тесасавдісї стерааісва ссісартарс Тагосайіее, сів Исся ссаресісса 120 вевфааререс (ерайасаї сераассай ацмацерге рісесеава ЧЦасесеарс 180 (гресаааар яссрайцсас сагсіссара ассісрасса серісоа(сі рааавсвссс 0 240 арісівасар ссрареасас россассаї Исіріесса рагацагаа(сеісотарі 300 й гаграсасії рреесссаро сасссісоіс ассрісіси (арсаєссас сааррессса 360 (серісцсс сссіррсасс сіссіссаар арсассісір рреосасарс ресссіррос 420 Ірссірріса аррасіасії ссссраасся рірасерірі сріссаасісаросесссів 480 ассарсеесе (всасассії сссеосіріс сіасаріссі саррасіста сісссісарс 540 аврсрірріва ссрірсссіс сарсарсце росасссара ссіаса(сів саастіваає 600 й сасаарссса рсаасассаа рріврасаав ааарцеарс ссаааєсце (гасаааасі 660 сасасаєесс сассрірссс арсассіраа сіссірероо рассрісаріспссісйс 720 сссссаааас ссааррасас ссісаграс (сссерассс сіраррісас агесеіррів 780 ріввасріса рссасеаара сссірарріс аарцсаасі воіастірва сррсріврар 840 рівсагайе ссаарасада рссесрреат рарсаріаса асарсасеіа ссвірівріс 900 й аврсріссіса ссріссірса ссареасіре сіраа(реса арсаріасаа ріссаареіс 960 (ссаасааар сссісссарс ссссагсвав аааассаїсі ссааарссааарресарссс 1020 срвараассас аррістасас ссірссссса (сссеорар арсірассаа раассарріс 1080 арссірассі рссіврісаа аресисаї сссарсраса (сессрівра рісррарарс 1140 айіреесарс сррараасаа стасаарасс асерссісссе (осіррасіс свасреясісс 1200 й нсисца: ацсааарсі сассрірвас аарарсароі росарсарее раасеісцс 1260 (сабесісся (рагесаїра ресісіосас аассастаса срсараарає ссісісссів 1320 Ісісссроса айва 1335 «210» 358 «2115 654 «212» ДНК
-213» Штучна послідовність
«220»
«221» джерело
223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид"
«400» 358 вагеиева (вгасссарас (ссарссїсс всрісіваас сірівреваве сасарісасс 60 асааріесс арессаріса варсашаї сестайцев ссіераса всаврааасса 120 вевсавссс ссаарсіссї вастагваї асаїссасіс (еесаїсіве рессссася 180 серцсааар рсарісоаа (греасарав Цсасісіса сса(сарсее срівсарівї 240 раараєосіє ссасцасіа сірісаарес рецацае сівгаєарцарацосі 300 псресевар ррассвароі ррісоісааа сеаасівісе сіссассаїсірісцсає 360 псссрссаї сірагєрарса рираааісі реаасіоссі сірцрірів ссірсіраає 420 аасисіаіс ссарарарес сааартасар (сраароіво аєаасесссі ссааістряї 480 аасісссаре арарівісас арарсаррас арсаарраса рсассіасар ссісарсавс 540 асссірасес (гарсадарс аврасіасвар адзасасааав (сіасессів сраарісасс 600 саїсарерсс Ігарсісесс срісасааав арсцсааса веегарарів ва 654
«210» 359
«211» 1344
«212» ДНК 0213» Штучна послідовність
«220»
«221» джерело
«223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид"
«400» 359 сарвівсаєвс (еріераас геесеварвра сісвівсарс сівесерсіс ісіврарасів 60 ссірцссе, ссіссерааї свассірісс їсстасеста (ресів всвасавесі 120 сесіврсааре вссіераста сагїсеесасс ассаасаєся ясевсаварі ртастасесс 180 їсствеесса ареессеви сассаїсісс агагасаасії ссаараасас ссіотассіс 240 сара(раасі сссірсерос сраррасасс вссрівасі асірвсессся ріасіасаас 300
Ресерсіссі асра(асіо рооссаррес асасісріса ссрісіссісівсаїссасс 360 аарроесссаї серісцссс ссіресассс (ссіссаара рсассісіро рросасарся 420 всссірерсі рссіррісаа реасіасис сссраассре (расерівіс рісраасіса 480 весесссіра ссарсеесеї рсасассис ссеесірісс гасаріссісаррасістас 540 й (сссісарса всрісрісас сріссссісс арсарсЦео рсасссарас сіасаїсівєс 600 аасрірайсс асаарсссар саасассаар, рісрасаара аарцеарсс саааєснеї 660 расаааасіс асасасєоссс ассрірссса рсассіраас Іссіррреоо ассрісаріс 720 нссісцсс ссссаааасс сааррасасс сісас(раєсі сссррассссіраррісаса 780 (есріврісо гррасрірар ссасраарас ссірарріса арисаасів ріасрівврас 840 й весрісраво (рсагаасрс саарасааар ссрсрераро арсаріасаа сарсастіає 900 сріріеріса всріссісас сріссірсас саррасісес (саа(ресаа реаттасаає 960 Ірсааррісі ссаасааарс ссісссарсс сссагсвара ааассаїсіс сааарссааа 1020 рерсарсссс рараассаса реіотасасс сірссссса( сссрерагса рсірассаає 1080 аассарріса вссірассів ссісеісааа госисіаєс ссарсвасає ссессвіртат 1140 й (герарарса агореосарсс ррараасаас (асаарасса сессісссрі рсіввасісс 1200 врасерсіссі Ісцсца(а йсааарсіс ассрірраса арарсаррів рсарсароря 1260 з5 аасрісисі са(осіссрі рагесаграр рсісівєсаса ассастасас рсавааравс 1320 сісісссірі сісссрераа а(бвра 1344 «210» 360 «2115 654 -212» ДНК «213» Штучна послідовність
АБО «2205 «221» джерело 223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" 5о х400» 360 вагаєссава ірасссаріс ссссіссасс сірістессі сіре есра сарарісасс 60 асассіріс аррссіссва ріссаєчас сервісів, ссісраса всараарссї 120 весаарессс ссаарсірсї гаїстасвас ассавсасас Теессіссее свівсссісі 180 арайсіссе рсісівосіс Іресассрар Шасссірва сса(сіссар ссіссарівс 240 расрасесся ссасстасіа йрісарерс восіасіасе ссрасісста среааістсії 300 й псресевар рсассаарої роааасава сеаасірісо сіссассаїсірісцсаєс 360 псссрссаї сірагєрарса рираааісі реаасіоссі сірцрірів ссірсіраає 420 аасисіа(с ссарарарес сааартасаєр (реааррісо аєаасесссі ссааїсвтреї 480 аасісссаре арарівісас арарсаррас арсаарраса рсассіасавр ссісарсавс 540 асссірасес (гарсадарс аврасіасрар адасасааар (стасессів сраарісасс 600 й саїсарерсс Ігарсісесс срісасааав арсцсааса веегарарів ва 654 «210» 361 «2115 1359 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» 005221» джерело 223» Іпримітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид «400» 361 саврісеріве авеаріссев серісессіе ріааарссїе асеайісссї расасісасс 60 ївсасаврссї стерайсіс ссісартаві гатесааіва (сте рісся ссаресісса 120 вреваверес герааеваї сераассац авіасіввіе, рагсасага стасерсвавс 180 й (геесрааар, рссрайсас сагсіссааа ассісвасса серіреасі рааааєсасс 240 аріссрасаа ссраррасас россассгаї цсіріосса рарресоеа(аосіоставі 300 арірсцай асіссста спіасшвеас Црірееосс аарррасссі ррісассріс 360 (сстсарсаї ссассаарео ссса(серіс Цсссссіро сасссіссіс саарарсасс 420 (Ісіререрса сарсерсссі рросівссіо рісааррасіасЦссссра ассерівсася 480
РІрІісрівра асісаресес ссірассарс росріссаса ссИсссррсіріссіасав 540 (сстсаррас (стасісссї сарсарсеіе рісассрірс ссіссарсар сЦеросасс 600 сарассгаса (сірсаасрії райссасаар сссарсааса ссааррівра саарааарії 660 рарсссаааї сцеірасаа аасісасаса (есссассрі рсссарсассіраасісстя 720 верерассрії сарісцесі сцсссссса ааасссааро асасссіса( рагсісссвтт 780 ассссіраре ісаса(есрі ррісрісрас рісарссасе аарасссіва ррісааріийс 840 аасірріасе (ерасерсрі рраррівсаї аа(ессаара сааарссясея рраврравсар 900 Тасаасарса сріассрірі ерісарсріс сісассрісс (есассареа сісосіваає 960 реисааррарі асаарірсаа роісіссаас ааарсссісс сарсссссаї срараааасс 1020 аєсіссадар ссааарееса рссссрараа ссасаррірі асасссірсс сссаїссстт 1080 раграрсіва ссаараасса ррісарссів ассірссіре (сааареси сіаїсссавс 1140 раса(сессе (рраріврва рарсайівро сарссерара асаасіасаа рассасессї 1200 сссрірсіре асіссрасео сіссцсис Цасайсаа арсісассрі ррасаарарс 1260 аврівесарс арреоаасрі сисісасос (ссріраєрс агсаросісі рсасаассасє 1320 сасасрсара арарссісіс ссірісіссс рероаааіра 1359
«210» 362 «211» 660 «212» ДНК 0213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «400» 362 всавссрівс (васссарас ассаєсассс рірістесавр, сівісеравя сасарісасс 60 асарцесс аріссаріса гарістаї аагаагааса асцарссів рсарсав 120 ааасссеврс авссїсссаа всисівас гасіврсай ссасіств ес а(сівеевіс 180 ссаєсасеві їсавсеесав Тева(сівсе асасаврцса сіссассаї савсеесвіе 240 сарірірасяе агесієссас Цацасівї спіареівойї рісаграєраосірагасі 300
Шесцсе рсерарерас ірароісоо рісааасраа сірісосірс асса(сівіс 360 Цсафсисс сессаїсіра ірарсарце аааісівсваа сірссісір((рівівссів 420 сірайаасі (стаєсссар арароссааа ріасарісра ареісра(аа сесссіссаа 480 (сере ріаасі сссареараєр (рісасарав саррасарса аррасарсас сіасарссіс 540 арсарсассс (расрсірав сааарсарас гасрарааас асааарісіа сессівсраа 600 рісасссаїс ареоссівав сісесссріс асааарарсі (саасароер аравісцва 660 «210» 363 «2115 1368 «212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «400» 363 ваарівсаєвс Теріераас геесресевра сісвівсарс сісесевагс ісіварасів 60
ІсИрівссе, ссіссеРсИ сісссівісс їсстасеса ггасівері всвасаресс 120 сесівесааре вссіераасе рагсерсасс асістасся всераайас састасесс 180 (Ісстрросса аррессери сассасісс арарасаасі ссаараасас ссіртассіс 240 сараграасі сссірсерес сраррасасс вссрісітасі ацеіосіараросеесіас 300 вссрссарсі ссясцасіа ссівссстас гасисрасс (рірсоресса рррсасссіс 360 рірасаріві сагбсівса(єс сассааррес сса(серісі ісссссірес асссіссісс 420 аарарсассі сірроеосас арсеесссів росівссіро (саареасіасЦссссваа 480 ссерівасре (сісрістаа сісаросесс сірассарсе всрірсасас сцсссевясі 540 ріссіасарі ссісареасі сіасісссіс арсарсріво (рассрірсс сіссарсарс 600 цпересассс арассгасаї сірсаасеіе айісасаарс ссарсаасас саароівсрас 660 аарадарня арсссаааїс йрірасааа асісасаса( рсссассвір сссарсассії 720 раасіссіво рооовассріс арісцссіс йссссссаа аасссаареа сасссісаєв 780 аєсісссева ссссівавоі саса(есеіо рісоісорасе (рарссасва арасссірав 840 рісаарнса асісрасяї ррасеесріо рароіоса(а агессаарас ааарссястт 900 рареарсарі асаасарсас ріассрісіо рісарсрісс ісассріссі ясассарвас 960 (ресірайіе рсааррарта сааріосаар, рісіссааса аарсссіссс арсссссаїс 1020 й рараааасса ісіссадарс сааареосар ссссвараас сасаррісіа сасссівссс 1080 сса(сссере а(сарсівас саараассат рісарссіра ссіоссівоі саааррсис 1140 абсссарсяе аса(сессрі рераріресар арсай(роес арссерараа саасіасаає 1200 ассасессіс ссрірсівра сіссрасрес (ссисисі (асайсааа рсісасстів 1260 расаарарса ррісесарса ресеаасріс йсіса(рсі ссрірсаєосаїравесісіє 1320 й сасаассасі асасрсараа рарссісісс сірісіссся реаааіра 1368 «210» 364 «2115 660 -212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» 005221» джерело 223» Іпримітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид «400» 364 вагацйсавра (васссаріс ссссіссарс сіріссеси сів есва сарарівасс 60 асассіріс аріссіссса ріссяіваї аасаасааса ассівессів ріаїсарсав 120 ааасссевеса аррівсссаа всіссіваїс тассірессії ссасасівес сістеесвіе 180 й сссістара (сіссерсіс (ресісірос ассрасща сссірассає сарсісссіс 240 саріросраре агоссессас сіасіайос сісеосеосі рсрасрасра срссрагасс 300 Шроцце рсераресас саареісеаа а(сааасеаа сірівосіос асса(сісіс 360 псабсисс сессасіра (равсарцяе ааабсіреаа сівссісір((рірівссів 420 сірайаасі (стаєсссар арароссааа ріасарісра ареісра(аа сесссіссаа 480
(сере ріаасі сссареараєр (рісасарав саррасарса аррасарсас сіасарссіс 540 арсарсассс (расрсірав сааарсарас гасрарааас асаааріста сессівсраа 600 рісасссас арооссірар сісесссріс асааарарсі їсаасареео арарірсйра 660 «210» 365 «21154 10212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 365
Аа Нів Гув Авр 201 «210» 366 «2115 13 25. к212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело 0 «223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 366
Авп ТІг 5ег СіІп Сіши Аа Нів Гуз Авр Маї 5ег Тут І еп 1 5 10 «2105» 367 «21154 40212» ПРТ -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 367
СІу Ріє Г еп Оу 1
«210» 368 212» ПРТ «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 368
Аа Гей Аа Гей 1

Claims (47)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Кон'югат антитіло-лікарський засіб Формули (1): АР-(І--О) р, (І) у якій АБ є альфа-антитілом проти рецептора фолієвої кислоти, що інтерналізується або його антигензв'язуючим фрагментом, що інтерналізується, який містить три ділянки, що визначають комплементарність важкого ланцюга (НСОК»5), що включають амінокислотні послідовності хЕО ІО МО: 2 (НСОМК'), ЗЕО ІЮ МО: З (НСОК2) і ЗЕО ІО МО: 4 (НСОКУ); і три області, що визначають комплементарність легкого ланцюга (СОК), що містять амінокислотні послідовності БЕО ІЮ МО: 7 (.СОКІ), 5ЕО ІЮ МО: 8 (І СОМ2) та 5ЕО ІЮ МО: 9 (СОКЗ), як визначено системою нумерації Кабата; або три ділянки, що визначають комплементарність важкого ланцюга (НСОК), що містять амінокислотні послідовності БЕО ІЮ МО: 13 (НСОКІ1), 5ЕО І МО: 14 (НСОКЗ2) та ЗЕБЕО ІЮ МО: 15 (НСОКЗ); і три області, що визначають комплементарність легких ланцюгів (СО), що включають амінокислотні послідовності БЕС ІЮО МО: 16 (СОМ), 5ЕО ІЮ МО: 17 (СО2) та 5ЕО ІО МО: 18 (І СОКЗ), як визначено системою нумерації ІМОТ; р є ерибуліном; Ї є лінкером, що розщеплюється, який містить групу приєднання антитіла, спейсерну одиницю та розщеплювану одиницю; а також р є цілим числом від 1 до 8.
2. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 1, який відрізняється тим, що р це З або 4.
3. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 1 або п. 2, який відрізняється тим, що антитіло або антигензв'язуючий фрагмент приєднані до групи приєднання антитіла.
4. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-3, який відрізняється тим, що (Її) група приєднання антитіла прямо чи опосередковано приєднана до спейсерної одиниці; (ії) спейсерна одиниця прямо чи опосередковано приєднана до розщеплюваної одиниці; та (її) розщеплювана одиниця прямо чи опосередковано приєднана до ерибуліну.
5. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким з пп. 1-4, який відрізняється тим, що Зо одиниця, що розщеплюється, розташована таким чином, що жодна частина лінкера або антитіло, або антигензв'язуючий фрагмент не залишається зв'язаним з ерибуліном при розщепленні.
6. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за пп. 1-5, який відрізняється тим, що розщеплювана одиниця містить розщеплюваний пептидний фрагмент.
7. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-6, який відрізняється тим, що пептидний фрагмент, що розщеплюється, або одиниця, що розщеплюється, містить амінокислотну одиницю.
8. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 7, який відрізняється тим, що амінокислотна одиниця містить валін-цитрулін (МаІ-Сію.
9. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким з пп. 1-8, який відрізняється тим, що спейсерна одиниця містить поліетиленгліколевий (ПЕГ) фрагмент.
10. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 9, який відрізняється тим, що ПЕГ-фрагмент містить -("ПЕГ)т- та т є цілим числом від 1 до 10.
11. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 10, який відрізняється тим, що т це 2.
12. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-11, який відрізняється тим, що спейсерна одиниця приєднується до антитіла або антигензв'язуючого фрагмента через групу приєднання антитіла.
13. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 12, який відрізняється тим, що група приєднання антитіла містить малеїімідну (Маї) частину ("МаІ-спейсерна одиниця").
14. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 13, який відрізняється тим, що МаіІ-спейсерна одиниця з'єднана з антитілом або антигензв'язуючим фрагментом через залишок цистеїну на антитілі або антигензв'язуючому фрагменті.
15. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 13 або 14, який відрізняється тим, що лінкер, що розщеплюється, містить МаІ-спейсерну одиницю та пептидний фрагмент, що розщеплюється.
16. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 15, який відрізняється тим, що пептидний фрагмент, що розщеплюється, містить Ма1І-Сії.
17. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 13-16, який відрізняється тим, що Ма!-спейсерна одиниця прикріплює антитіло або антигензв'язуючий фрагмент до фрагмента, що розщеплюється, в лінкері. бо
18. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 17, який відрізняється тим, що фрагмент, що розщеплюється, в лінкері містить пептидний фрагмент, що розщеплюється.
19. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 18, який відрізняється тим, що пептидний фрагмент, що розщеплюється, містить Ма1І-Сії.
20. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 17-19, який відрізняється тим, що лінкер, що розщеплюється, містить МаІ--«ПЕГ)2-Маї1-Сії.
21. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-20, який відрізняється тим, що фрагмент, що розщеплюється, в лінкері прикріплюється до ерибуліну безпосередньо або через вибіркову додаткову спейсерну одиницю.
22. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 21, який відрізняється тим, що додаткова спейсерна одиниця містить р-амінобензилоксикарбоніл (рАВ).
23. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 21 або 22, який відрізняється тим, що фрагмент, що розщеплюється, в лінкері містить пептидний фрагмент, що розщеплюється.
24. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 23, який відрізняється тим, що пептидний фрагмент, що розщеплюється, містить МаїІ-сСії.
25. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким з пп. 21-24, який відрізняється тим, що лінкер, що розщеплюється, містить МаІ-СИ-рАВ.
26. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким з пп. 1-25, який відрізняється тим, що лінкер, що розщеплюється, містить Ма!-(РЕС)2-Ма!І-СИи-рАВ.
27. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким з пп. 1-26, який відрізняється тим, що лінкер, що розщеплюється, ковалентно приєднаний до ерибуліну через амін С-35.
28. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким з пп. 1-27, який відрізняється тим, що антитіло або антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність з ЗЕО ІЮ МО: 23, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність з ЗЕО ІЮ МО: 24.
29. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-28, який відрізняється тим, що антитіло або антигензв'язуючий фрагмент містить константний домен важкого ланцюга Ідс1 людини та константний домен легкого ланцюга Ід каппа людини.
30. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 28 або 29, який відрізняється тим, що р це З або 4.
31. Кон'югат антитіло-лікарський засіб Формули (1): Коо) АРр-(І-О) р, (І) в якій Ар є антитілом, що інтерналізується, до рецептора фолієвої кислоти альфа або його антигензв'язуючим фрагментом, що інтерналізується, що містить три ділянки, що визначають комплементарність важкого ланцюга (НСОК»5), що містять амінокислотні послідовності з БЕО ІЮ МО: 2 (НСОКІ), 5ЕБО ОО МО: З (НСОК2) та 5БО ІО МО: 4 (НСОКЗ); та три ділянки, що визначають комплементарність легкого ланцюга (ІЇСОК), що містять амінокислотні послідовності з зХЕО І МО: 7 (І СОК1), 5ЕО ІЮ МО: 8 (І СОК2) та 5ЕО І МО: 9 (І СОКУ), як визначено системою нумерації Кабата; або три ділянки, що визначають комплементарність важкого ланцюга (НСОК), що містять амінокислотні послідовності з 56 ІЮ МО: 13 (НСОКТІ), ЗБО ІЮ МО: 14 (НСОК2) та 5ЕБО ІО МО: 15 (НСОКЗ); та три ділянки, що визначають комплементарність легкого ланцюга (СОК), що містять амінокислотні послідовності з «ЕО ІЮ МО: 16 (СОМ), БО ІО МО: 17 (СОМ2) та 5ЕО І МО: 18 (СОКЗ), як визначено системою нумерації ІМОТ; р є ерибуліном; І є лінкером, що розщеплюється, що містить МаІ-"ПЕГ)2-МаІ-Сп-рАВ; та р є цілим числом від 1 до 8.
32. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 31, який відрізняється тим, що антитіло або антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність з 5ЕО ІЮ МО: 23, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що БО містить амінокислотну послідовність з ФЕО ІЮ МО: 24.
33. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 31 або 32, який відрізняється тим, що антитіло або антигензв'язуючий фрагмент містить людський константний домен важкого ланцюга Ідс1 та людський константний домен легкого ланцюга каппа Ід.
34. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким з пп. 31-33, який відрізняється тим, що р це З або 4.
35. Композиція, що містить множинні копії кон'югата антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-34, яка відрізняється тим, що середнє р кон'югатів антитіло-лікарський засіб у вказаній композиції дорівнює від близько 3,2 до близько 4,4.
36. Спосіб лікування пацієнта, що має рак або має ризик виникнення раку, який містить бо введення пацієнту терапевтично ефективної кількості кон'югата антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-34 або композиції за п. 35, де рак експресує альфа-рецептор фолієвої кислоти.
37. Спосіб за п. 36, відповідно до якого рак є раком шлунка, серозним раком яєчників, світлоклітинним раком яєчника, недрібноклітинним раком легені, колоректальним раком, раком молочної залози, раком ендометрія, карциноїдом легенів, остеосаркомою, раком сечового міхура або карциномою уротеліальних клітин.
38. Спосіб зниження або інгібування росту пухлини, який включає введення терапевтично ефективної кількості кон'югата антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-34 або композиції за п. 35, де пухлина експресує альфа-рецептор фолієвої кислоти.
39. Спосіб за п. 38, відповідно до якого вказана пухлина є раком шлунка, серозним раком яєчників, світлоклітинним раком яєчника, недрібноклітинним раком легень, колоректальним раком, раком молочної залози, раком ендометрія, карциноїдом легень, остеосаркомою, раком сечового міхура або карциномою уротеліальних клітин.
40. Застосування кон'югата антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-34 або композиції за п. 35 в способі виготовлення медичного препарату для лікування раку, де рак експресує альфа- рецептор фолієвої кислоти.
41. Застосування за п. 40, де рак є раком шлунка, серозним раком яєчників, світлоклітинним раком яєчника, недрібноклітинним раком легенів, колоректальним раком, раком молочної залози, раком ендометрія, карциноїдом легенів, остеосаркомою, раком сечового міхура або карциномою уротеліальних клітин.
42. Фармацевтична композиція, що містить кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-34 або композицію за п. 35, та фармацевтично прийнятний носій.
43. Спосіб отримання кон'югата антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-34 або композиції за п. 35, що включає взаємодію антитіла або антигензв'язуючого фрагмента з лінкером, що розщеплюється, сполученим з ерибуліном в умовах, які дозволяють кон'югацію.
44. Спосіб визначення того, чи буде пацієнт реагувати на лікування кон'югатом антитіло- лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-34 або композицією за п. 35, який включає надання біологічного зразка від пацієнта та контактування біологічного зразка з кон'югатом антитіло- лікарський засіб або композицією. Ко)
45. Спосіб за п. 44, відповідно до якого біологічний зразок є біопсією пухлини, що має походження від раку шлунку, серозного раку яєчників, світлоклітинного раку яєчника, недрібноклітинного раку легенів, колоректального раку, раку молочної залози, раку ендометрія, карциноїду легенів, остеосаркоми, раку сечового міхура або карциноми уротеліальних клітин.
46. Композиція, що містить множинні копії кон'югата антитіло-лікарський засіб Формули (1): АРр-(І-О) р, (І) в якій Ар є антитілом, що інтерналізується, до рецептора фолієвої кислоти альфа або його антигензв'язуючим фрагментом, що інтерналізується, що містить три ділянки, що визначають комплементарність важкого ланцюга (НСОК»5), що містять амінокислотні послідовності з БЕО ІЮ МО: 2 (НСОКТІ), 5ЕБО ІЮО МО: З (НСОК2) та 5БО ІО МО: 4 (НСОКЗ); та три ділянки, що визначають комплементарність легкого ланцюга (СОМ), що містять амінокислотні послідовності з зХЕО І МО: 7 (І СОК1), 5ЕО ІЮ МО: 8 (І СОК2) та 5ЕО І МО: 9 (І СОКУ), як визначено системою нумерації Кабата; або три ділянки, що визначають комплементарність важкого ланцюга (НСОК), що містять амінокислотні послідовності з «ЕО ІЮ МО: 13 (НСОК'І), ЗБО ІЮ МО: 14 (НСОК2) та 5ЕБО ІО МО: 15 (НСОКЗ); та три ділянки, що визначають комплементарність легкого ланцюга (СОК), що містять амінокислотні послідовності з БЕО ІЮ МО: 16 (І СОВА), 5ЕО І МО: 17 (1 СОК2) та ЗЕО ІО МО: 18 (І СОКЗ), як визначено системою нумерації ІМОТ; р є ерибуліном; І є лінкером, що розщеплюється, що містить МаІ-"ПЕГ)2-МаІ-Сп-рАВ; та р є середнім числом фрагментів -І-О на АБ, при цьому середнє р кон'югатів антитіло-лікарський засіб в композиції складає від близько 3,6 до близько 4,4; а середнє р визначають за допомогою хроматографії з гідрофобною взаємодією - високоефективною рідинною хроматографією (НІС- ВЕРХ).
47. Композиція за п. 46, яка відрізняється тим, що антитіло або антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність з ЗЕО ІЮ МО: 23, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність з ЗЕО ІО МО: 24. (510)
(я сх ШЕ ЛЕМНЯ Ше и ЕХ вт Бажан МАК щі КеелАМ ані М п. «о | Е- У нак Ж Я Ех я ше "а ме щ Ге ік КАС ок ; Я Мей Кк Я М а «ну ; я с: КУ Ж и У тце БЕ ЩІ му ян фену дж ов -е т схо пе щк й Її Ікя дм ще че 5 і КЕ: І: Якй г у лох Цит у, - і я той г х ек О З ї но я хз маша СІЙ Ка ї Ме - й Яе я ї п 2 Ко т - сне Х Зк й: » ух й ЩЕ «Врж, о і ; Кк Як Ж Шик її І ї в ТОК У І: г і у чі | пл ТОтО і щі х дам з, зкаленаю Ці; й З те Ка воски 15 й піни щік І І жк ВЕ Ге хі ї Б засто г З пох відання у ях ща прове щі ! МАЛ І Й Фіг. З дв у й і В ї а НЯ су Коба т ца ІНАУ я х ка з я а й шк є з За бу , 3 ЩІ оди к и Кв ще ї ще. її с бий : Що НА у ів5 щи В в З чи чу з 5. А пен ПК ик НО хи Ки ее є п: Ух же ТО У М хх іш ЖІ бо Ох к ій: ве А УСвРМВ ЕВ і ; Бон зе ща Я клани Ко асан я ща , ее дек й М ех ? пов я по г ся ? ее ше С Дона й Й Я Н ско, т Те нн й те Сон Хоч В сія Ме М ї З х й «й НЯ й ек А хе Як:
ї. о Сх пу Кона б» Х й ій ие су ЗА : Боня плит «ру С сЧЕОЕВУ й й ка ХМ ЯГА ЛКСР ВЕ ЛУ К шин о Вед; дк
Фіг. 2 щ оон ; ОО ВВВи жахи о. х ї КО оо о од кос с р х СХ с НК З М Я ОКО що з і-й с о. о. о х ОО КАш ХХ Ух ЗО БОС ОХ . . . З Я З в с я СВ З . . м З ОЗ МКК ОЗ КЕ М . КМ КЕ ТА ОЗ ВХ о. ОЗ А о Бе В ОК хх І КК о. ОХ х ОО х ОК СІ п с . о. . СО о. Ту КО 5 ОХ ЗК З п М .
її. є с с о. ММК Тх З ОК ХК Ох С ОХ ОО З . си ВО ОВО М с 5 Ох о. о ще . с СВУ у що ОО с Ж З З Х З С М же о . .
ко . о і. о. с КК х ХХ с. ОК І ХХХ З я г - ОХ ОКО КК хх ОЗ В "ВЕК с щ я
Же . с 1. п зи сне о : з с о ОЗ ПЕС о ЖЕ. - то п о о. 5 о КІ о о З п Ве п і й с г в. ОЗ АК ОО КН В і й с шен. о. ОО ХО ОХ СО Я ог» 5 о КОХ В хх 5 ж МОЯ о ОКХ с с ж МУ ОКО З ХО
З -.- о -. і. о о о ШМЗ КЕН ОХ ОНА ХХ ЗО КОН МО . . . о я ТЕМАХ Зх ОО с . . . ЕКО с хх с о. . Хо о. ЖК о. МОВ х . се МВ КЕШ ТУ і .
я о.
Зк . с я ї- ОО як
А а у 5 : є за Но с КАН ВУ ім СКК он Хо г У т о З З св с о М за г о М КУ о Ох СЕ ЕІ ХО КЗ с о МООа а ой пли КО г ІАЕ Я МИ ОЕМ Пд ях ПИ оо - КК М ше о ож? Сл ЖК ГА п (У З; В КИШК МИ. се БО ах М т В ре сх К с АВ УНК - а о СХ о ЕЕ Тк СОУ ЕК к ЗЯВх ВН Зх ТІМ ІЗ те ПОВЕ с о. Зо ї С с З ПК па ПК С Я й нг ХУ х с СО о М й ОК Я З с с М Х ХХ и з; х МЕ дк У ОО М ОО ОО ЩІ МТ т ох о ЗО с о. ма о с о я ох х дах ЗХ : ля о хо, о ох Та ех З М КЕ ще о З МКК У хо п Он» ОК С ях ЕХ Х ВХ о. З КН ж с 5. КОЛ, З хх о що Се ХВ СМ Зх ДО до НЯ ск Ве Ох со ОО ПІК хе ХУ КЕ сх ХХ о Ку Ех хо У СО МУ ах ди Ко КІ пох ОВ КЕ Те що Я Ох ОХ п МОВ ЕКО Бе и З ЕК ЕЕ ОХ мое щи о с 5 Зх ех Зо и ОХ с. що их о с. ех ОК ех У о хх О ЗО З. с ВЕ ХУ ТУ А ке КЕ ОХ ЗУ Б КОХ СУ о З вно яЕ со . о. ПО Ох с що З З оо хо о 5 я ДН І В Ж З о хх Ух ЯКУ о о. о. о с с БЖ КО То ШУ Їж ох г о КАХ шо о ПЕК о ОХ С ще ОХ І ж Не ЗХ З ще о - Б Б Сех о с. ЕКО о З КО о ти". ЕК ща ТА хом ТЗ ох ОКО ЕС ах У ТІЛ ХО ХХХ 5 0. ТОК В о о ОО о - Б їх о З хх ХХ За ох ЗХ В о хх ух 5 35 Б то ПОН З ох и о. я ЕХ З СО с я ОО Х : й ЕК -о зх І с ОКХ іх ех Ех КО с. о. І де о Зх Ве ТК» ДВ ЗЕ г Си ЗК с у о НЯ З З о Се ох ЗХ о. ТК жк о. ЗУ І? Б 3 ех о ОХ ЗХ ЗЕ ОО КН х с ХХ п. ОХ с ОО що МК сх ОМ о Ох З
ОО . о о КО г ЕІ КИ ХМ с КК 5 КО с я ВХ ШХ С ХХ У ЕЕ з ОЗ о ОВ о ТО о КЕ це В З с г с кН БО З о ещ с ие ОО 5 В о о о ох ОХ М ХМК ЗОЗ ТЕ ПЕ ОК ту КК ОВ ОН Ба ЗЕ ЗХ АТУУ г м ще ох щ КО СЯ В ПАК хе ВО ОО що МК КК о ЛЕН с МИНА пе СЗЗ ока КО У КЕ ня З Є о с т КО КУ КК сачіх ще ДК Ко СО Хе с СІМ Кок чо Зо. МО хе З Ух ВК п КО п. с о 5 ЗУ ОО п о с о З М ОКО їх с Сх У КК ОХ ОО ХХ З гр ОХ 5 хх КК о САКЕ З МУ ЗК що М о. іх З ОО. с М о» іо о Зх о я МКК ОХ с с Зх ох сх ВО КЕ Ох о ОК о: о. у о З Он ЕОЬ ОКО с хо що Ох с 2 о й 5-х о. ЕКО о Ж хе ВО ДО о ОО Мах и ОХ КК ЕХ У о о З ПЕ У
С. З ще що ЗК ОК о шин ОХ З ще о. КО ще ХУ В о СЯ М с р. с о о о. г о с З З о г КО с кЕ МОВ о ХХ Ех о о с Я КВ С ОХ ХО Х МОХ г хх ОКХ 2 ех сх У МВ ах ТЕКИ Х с о. ЗК ТТУНИ ях ЗК Ме КАХ ЗУ ХЕ щх ох ЗМ хх КТК ЕХ ЗОВ НО с Ще як ЗУ У ОЗ их З КИ хх ТЗ 1 АХ МК я КО ХХ ЖЕ с о. хну КЕ З с жх 5 г п о. В ЗЕ 5 с В с КУ Ко У Се КОХ З З З а ОКХ же МЕ У КК о. ХХ МУ сх КК мох ЕХ І ЗОМ ХК КАХ ЗО з КК хх п М ПХ КК що сх А с о... с З Ох ух п. х КЕ Ко ОМ В п. СО З о Зо т 2 ; ТЕМ М ме Я щ5 СОУ ЗХ МК п У ЗК ща МЕ ЗУ КК Сай КО ТХ КК п КЕ СХ КЕя КК С У ОК п СХ со зо ке КОКО МКК ЗБ о КК с о с ПЕ Е КЕ ЗОЗ ЕК КОКО с а с З БО ях ОХ КОКСУ с й У З с У ху ВО З о с ЕКО Ох ОХ с ЗХ ЕЕ ОК с КЕ КО СО КВ ОО с щи ХХ КК їх М ХХ ХХ о. с З А У с ЗУ ЗУ КЕ пеце ЗВ ХХ КО о КЕ п СО с ХУ с У с СУ АД Е: ОКХ ОХ ЗМК ин СОНЯ о У с ХУ г МЕС С ще ОО с С зе З с БУ с ох МАЕ с ЗХ ле КЕ З КМ З ХЕ ПМ А МЕМОМ ЗХ ОХ Се х ОХ КЕ ХХ ОХ з МК МК У ЗХ ТК МАХ СЕ ях ОО ОХ З МКК дО КЕ ЯКУ КЕ ІХ КАХ Зх с СК 55 я Ох СОС о. С хе ке о. ОО КО Зх ще Ое УКХ В ох с г КО с Ох ОВ МУ КО КО КО жо ЗКУ ти КК М ох ЗК КУМ Пиши со о зр, ЕМО М ОО ж М Ох хх ХХ З З о ще МА Ме ЗБК, Се СО ОХ У СОКОМ М ох МО ще еще ЕК ХХ МО хх ХК ЗЕ ХА КОМУ ах ХО ум МОХ 5 У о. У ОВ хе КО зх ТК о У В ЕКО с ОК шо о МОХ Ох ОХ М о. В КУ о с ХВ ОК ОХ МЕ КУ ОХ МК ще о МОХ КО ЗХ щх о. МУ о ХО х ОКХ Хе ОО о. ОО о КОХ С ХХ о о ОХ Ох с о . Мне іг. 4 і хх м -х МАМ ОХ с ІН г 0. КОХ п
5. - со ОКХ КК с Е " - і : Ко г я в ее х У її ЯЗ ЕІ г - - ооо ЖЕ: о х ЗЕ ПК КЕНЕ Що с їх М ПК ІЕЕ ВО ШК 0 М г БО я В « В о ЖЖ в с о х ОКХ М о тео Я о к 7 г с ВХ А о В х с о п в п х Ж ї г ОНИ В Я х ов шо ех З що ха с нн як ше х Я ЗУ п. г У с ТОВ хе п 5 с с со сш МВ г ВН оо.. сх ТИШІ шен ТК КК и Зоя дя ТАК. У Не я УМХ. щи с З хх же 0. с. г п о п. о Со оон о о. СКК В -о г
ЩІ. п о г ще В а о В п. р ВО ях о я п г щ. І З г о них ІБ о. о. о ПК, т МЕ Соя КОН МОНЕ о їх ОК тей ОН ВХ с с ТК» НН Є и БО ТК Ме МЕ о. КЕЙ Ко с г МЕ сх ГГ ех Ух о с о С о їх о о. о. ПІ ТЦ п с с З Же с с ВО с З с п с о МОХ ЗХ КК х ях я ще пе г М ОО п сх ко. ТЕ ДО КО с о Се А Я У - с зо М МЕ МИШІ ОО ВО ТЕ бе У ах НК КН о КК КЕ Я В У с Кл о МК ях ХХ ОН з. ВОК. п ве ЕЕ. В Ж с СОУ У тА Я С. ТКЕ КК ЛК, ОО З З х: ВХ Тх ПЕК ТУ і Ох Ух ОКУ с, КЕКС с о СЯ с п. МОХ З м КЕКВ х ПИ ж з ЕП МЕНЕ ПЕК ПЕК ХЕ у ПО СХ ОО ХО СОМ М їх с З о о ОЗ с о ОХ ДМК с с с СК З с Он МОХ МОХ М Не ОО ПІЖЕ с п ЗХ МОВ КЕ с ще ОО КЕ с КК ве о. З о о ТУ ЕХ с о НК с о.
5. З о їх с п дО Н я. о. ІГ. Ше: Ох ;
Же НЕБУ ЧН КХП УА НОМУ КК, От в НА ЛУНЕХІ зай НЕННЯ ЕІ ЛЕ ТУНА НОМ ПИтяХ НА ЛУНКУ «дня НЕФКО МКУ ПОЗУ У КА МЕКИНСВО, Отут КВ, ПУНКУ)
«ЩЕ. МУДРУ АВТ кі ЗХ КЕПЬХ ТО МІНОЯ, банк НЯ ЛУНЕ т. ВИКЛИ АСВ Ж ОК ТУРА ВОМУ, Виистено ма ПУМКУХ ТЗН се ку ЖК он нн ш й 5 о али : тої ва В в СВ в і ЕД Я іо ї Й - Н й БИ Ї я УЖ хх Й СІ З ї ще Ще Я, у / дак: - що Б ї З 12 У св ЕІ їх й они КК ЕЕ Ку: ї : Кіа в Н Ей Я т ле й шо МЕ 5 ! СЯ а шен в о В ВИНІ ЕНТВАННЯ ЗзнйМі й МІЖХЬММВ-ЕВНІЗУНІХУПЬГУЮВ НЕО, 1дтих НА ЛУНЕУ -- МІЖВМУ ЕН ЕИ Я ІСС КУЛЬТУРА МІ БИ2ВОВСВА, Гоннаєвннє МА ПЕН) сах» ЗВЕКУМ ЕВ ЗВ ПОО-ВЕВЕТУВА МНОБКВНОМУ, Допис НА ПУНКТІ о КВУ ЕВ ЗВ КУЛНУКА ПВХ, Ук НА ЕН Я їч вч Й - У ін Ш. і. ! АК р Е Її і й р ох ; з ж Б Кі як жа ях я і ж Н Ку США: КОМ Ко і й м й Боня Н ї Бу | Коояж-х СУ Ж я Я ї Я о й ка г ЕЗ | у тя Н я Кі й МА ї в ще ен; кишикя г щ-т К/ НК ЗК ПН сто НН сн й у бе Р ой : ВВ сво ооо ення ! Са З 5 і М -к МАКОМ ЕН ХВ ІНН вин
Фіг. 6Е ее НЕ ВМОКИЧДЕВ ІКЖНВУКВА НО Котис НА ЛЯНКЯ;
«в. НЕО ЕХ ВІВ ОКА УА НЕЖНЕУВСТИЄ, Боткєтти МАТ НКУ КО КК АЗК ОКУНЯ НЕМУ У, Же НА ЛЕН ЗИ 3. Кк щ ов - В МИНЕ я г щ - ї й хх Ї є ш ще; рі Кя ї Її і ї КИ Ж і ї Кк Щи КІ ї Кі ї єї щ " : рр ще ге н дос У т Й Що ех З Фест щЕт петрерп у ли нин в ме на З а а БУ «ї ї : х важча ах как
Фіг. 6С ши зх А ж З х Ж ЦІ ОН 35 Е хі 4 НИ - їх В зкшщанюя 1 МОНА НОЮя- КСВ ЕРЕУЯ нй І Н їх ще «: ан х й Я 4 т ї їх У її де КУ Е «1 щу в хи «ок - я к хи « і-ї Ж й - 4 ка сдко0 МЖ пк Ша -4 Я Є їх і: - і ре у Я З дня ння с ува ххх пох ев ся шко доку они век ш-- я є НАМ УЖЕ уманкеляхл стеля я яп мне ше не нен ме и ниви нини и межи ми мин ни зо нон м тн и мой пон и нс нс сн нс воно по мис ви нка
Фіг. тА вх Ж пу КЕ Ша х З щу х пе -ї їх КЗ В НЕ Кк -ї к - -ї їх ру НЕ і: з. шйої вих І х г алу ж ких, т МВ кро МОВАХ Ще т, і ї З Н «7 г г що киш З НІ 15 -Ї ШУ Н ія ха : і і п Еш -х У ї х
- в. й в їх сени ни ний: нин нон а ДИ ЧИ пи и ТАНК т кю тк ад ях о тя дк,
Фіг. 7 а КОЖНОЮ ЕНН о ва «б ВУАН ЖБК й БД МОВЕКОН ЕККУНІК і аж рехечНЯ н че ВМ - ; т І ; т КУ : ХМ Ж хів ; д 3 я т і а КОХ КТК дока я Є е З я З й : кн Х Ще ЩІ Я ре хх Е Н ч х пох Ж Н о. х ха Ж і в у Б От х Я Н з чЕ ї і :ч КЕ ож Ех о і що (ч Н а й Е вч о
-О. З Кн хх ну нн, с; КОНЦЕНТРКЧ КОН ЬККВІ БЖ нн БОНУС ЖК Б Я, МОВА ж і бе МК Ж ка ЩЕ ня МОВ Ка - й і ти МКМ И Во ка Н не і -я ї с і - -е Щ- : і шині Н т : х ішункннннн у Ше я нн ї щ- М рі нн НИ Н Н дж єюн кл, и Кок ї КУ - Ку шк ска ан як р нн ря «КО УМО ори й Д после ую хо в-й Ко ж М ; ! й В 13 7 ЯН ПІБХВАНКЯ
Н г. Вк
Фіг. 8
-- Я ' і ' і - жк ! тую - щі Ши і Ї От У Ши Й Сен Що ї сш Ж т пе вне с Ка ко сля же х да ще Се Ж шо с - коза Ши Дос М В Бо ХКдянннн ДЕМИт я ХХ Я, і дж о ЩО 5 Тї- ке Я сей ьо пд І Гез ме ач ен тех г оду -- й Ян Н рі ЕКОН : В пен : : ії Я ВМІВ дюн що ше Пси ї ІЗ ще ; КО нн Я І сйо- ЕВІБУЛКН подежке Я і кеш --яр-- ЕРІБУТЮМ тавне І « шо пк х леді СРКУЛ Хань і ЗнАЖУВАННЯ ДО ДНЕ ДОЗУВАННЯ І | ї ШЕ | ! : ; ; що ЕЕ Н і З ї ! Є ! Й Й ї Ї Й Й ї й Н ІЙ Н Н Н Н Н : ї ! : ц 5 й в й у й з Бон ОВО оно БОБ ов ож ВВ м м КЕ І а З ! і ї ДНіЛСла лКУВАННЯ
Фіг. 10 : - тк ве : 5 Я ВОККНА меле ї ХЕ : д Е я КОЖНЕ КА вав х : 1 І кр МКК КЕ які ш : КИ 1 ТУ кл пою ; - : «АК - : Кк ВМІВ веву Ж до Е м во БМ в; Й Шо ї Х. мг я х ї І д З г-й їн й Б : ту се у Я ни В ше З НН ї Що ЕЕ Ся ше 00000 0. МЕТИ. ще Кох ДІА : мк ще кл ши Я ШИ ОДН сук ме кА ЕІ У ОК лу жо у АКОТ ям хх - у її 7 й ЕЕ -К т ї Шех дж с ум. й мож я од жо ша син ЕК и В Я ї то й « Ко лк В й у ї ій : і 5 іх МИ: ПИ З З п с ЗВТ ЗЕ ИН ННЯ Ї ДИС Ран ДМАЦЇ Е ? ДЕН ЛІВУВАНУЯ з Н і зе | а КУНА ДЕН ТУ я Е і як 3 оф Шо ово БО ї АХ У | с . | оо
ЕВ. ги сі | ОО В | огогсофоююе ВЕ - Н їх і Й пох щ 5. ов 5 У хе Н з ще -х АЖ (Є Оу г що ще це ай ща ЖЕ НО ке -Х дж ша Бо 5 ще «
Н Зйозу ду ії їх І з сту Ме щ она: нм жо - КРТ не 5 ще о . Що « 5 щі ще ніжне ЄВ Мей МЕ я мн У тра КАНАВ ЗУ 5 хе ме Явокоо ее УКХ З як Фе Н ше сих ж в ! ех ВОВК ВА В кг ФО й М і зда ЗК КЕ : пове ПОВЕ КУ : Н : . Н Н : Н Н Н Н ї Н : . ДВС РАРОДОВеЗКЦІЇ їх ДЕНЬ пара НнМа
Фіг. 13 З» ї - ї Ї мл ї 1 Її ри Ї В ре ї а ї Я ж щи ї по й КЗ ї води й зичу Ж и шк як НОЯ се. дики нео хо КОКМТ До Уккасіми х М - но Кз «Б ВЕК ик ОДН ка н-е ; КОКО ра «й. КРИВУ ант КЕ Той Ж щі й «же БЕБУЛІН ОЕМЕАНЕ мо тАКЗ КОХ ж Ж: єм ВАШИМЕ пане ще нн Щи ру ЧУ с Но я і пи Зло о С ЗВ У хх а КУ НИМ нн у в не ї Я Ї те ак 7 т Я в і у ЕЗ І тк Чака - Мн ! ! | ДННВСЛЯ ВамДснЯ АН Е ж КЗ ря са я це хх ж
Фіг. 14
З ро «ок ЕК А месоодкуххх 0 оф к Я а З Н ж ї я т х я Ме щ : Кь- Бо Зв. меня З Н -х т Н рег - шо! Со КЗ Ж Ка ЯК лок як щ де Зо ей сн нн зн нн нн ФГ фани дк ся А НК сі МВ и рах сх сії ох -ї хх АХ КІ ще й - К В й БУ я де -? сх Й М С КУ й Ку дх Ку Я ро й в щ в яу
Фіг. 15 Ку УМ : хе МОЦІ В «КЕ БУК ВО т яке КРИКИ У якутке ЗЕ ех й В : «ке. БЕІБЖМН ВАК ! о ЕНВУВН Здіжтк д ; шко ж що же х - : ДИ: Де тк о. не пкт, НУ о А СІ» ние Х-х ОМ ен КИ ШИ як. син я з не я Ж ще Кя о КК Мк а С Б з 7 Горе я шо ІМ зай т хе ек ктеКх сао хо «ТМ гу; з ї хе -- щ г ХУ їв в Ж х пес пкіскевагвии З Н ї ДЕД ВКДОМЕМИ Р ш Ж Б БУ Б
Фіг. 16 не Ж ОЇ о Н ш і сх : ч у ОО наш КО ж що ощА й дя Я тку ВВ : Н Я и ї их ОО К Я Ні зве КОСІ Б яд Я Тк щі ке ян ВОМНОНЕ і сом ї ря ще
Ж в. и яко і ска» МК Що ви й С й У тк. БІЙ Я з Я й і ші як Сай Н ра ЖЕ «ої -ї ї шо Й р х 7 Ж ді яка й а Н - ННІ ак з с ї щ я ни В який че х ої ре Боже з хх СЯ КУ й й Б ЩЕ Ежен Вт Ден Х, Фо жона я ях ж їй лі -к а й Я | ї Бе е Пп Б -8 З Ку БОКЦЕТЕЯЦІЯ ВОК Ме
Фіг. 17 МАВ НН ВЕ ЖЕ як екв і і г шо личх КО КОВАОТ яеК ! тк сх ВВ В мих ще х зар ВИХ НВ Х Вл; - І й І яр І Я х і що ве. В | її "ШИ Е. т де Й ж Я Ка ї З в ее Е
5. ЖЕК Ку ї Е | А со то З ' ги тд 1 З ІЗ ах пох ЛК | Ж жа НЕ Н І Деу хе ЗАКО ' м ГУ 3 х Н БУ КІ Кня ТІ: ОСЖАНІ ВОЧК, т ї 1: і з-д ІС ШЕ Шини Н Кая их ої Н Кот Я Гоше: ЕН Я Н аа о сне МНН Н що Гр АТО і Ме де Й ней МО « соев АК я НІ ія) ки х зо КУМ ск кю у, со А я У ів пн ни пн а ок и є ни пив ОО У ж щ щ КЗ ї сен чисток вами Й й Шо ДНЕРНИС ТВ КАЛ ВЕАНТІЇ ВЕНЬ ЛІКУВАННЯ
UAA201809739A 2016-03-02 2017-03-02 Кон’югати антитіло-лікарський засіб на основі ерибуліну та способи їх застосування UA125024C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662302562P 2016-03-02 2016-03-02
PCT/US2017/020529 WO2017151979A1 (en) 2016-03-02 2017-03-02 Eribulin-based antibody-drug conjugates and methods of use

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA125024C2 true UA125024C2 (uk) 2021-12-29

Family

ID=58347964

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201809739A UA125024C2 (uk) 2016-03-02 2017-03-02 Кон’югати антитіло-лікарський засіб на основі ерибуліну та способи їх застосування

Country Status (35)

Country Link
US (4) US10548986B2 (uk)
EP (2) EP3423105B1 (uk)
JP (6) JP6599019B2 (uk)
KR (4) KR102702620B1 (uk)
CN (4) CN114191428B (uk)
AR (3) AR107787A1 (uk)
AU (2) AU2017225982B2 (uk)
BR (1) BR112018067379A2 (uk)
CA (1) CA3013791A1 (uk)
CL (3) CL2018002456A1 (uk)
CO (1) CO2018008667A2 (uk)
CY (1) CY1124628T1 (uk)
DK (1) DK3423105T3 (uk)
ES (1) ES2880402T3 (uk)
HR (1) HRP20211125T1 (uk)
HU (1) HUE054726T2 (uk)
IL (3) IL261428B2 (uk)
JO (3) JOP20170053B1 (uk)
LT (1) LT3423105T (uk)
MA (1) MA45280B1 (uk)
MD (1) MD3423105T2 (uk)
MX (4) MX2018010562A (uk)
MY (2) MY199595A (uk)
PE (3) PE20181953A1 (uk)
PH (1) PH12018501847A1 (uk)
PL (1) PL3423105T3 (uk)
PT (1) PT3423105T (uk)
RS (1) RS62108B1 (uk)
RU (1) RU2754369C2 (uk)
SG (2) SG10202007520WA (uk)
SI (1) SI3423105T1 (uk)
SM (1) SMT202100416T1 (uk)
TW (3) TWI772288B (uk)
UA (1) UA125024C2 (uk)
WO (1) WO2017151979A1 (uk)

Families Citing this family (75)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006116592A2 (en) * 2005-04-22 2006-11-02 Morphotek, Inc. Antibodies with immune effector activity and that internalize in folate receptor alpha-positive cells
EP3315606B1 (en) * 2015-06-24 2025-11-26 JCR Pharmaceuticals Co., Ltd. Anti-human transferrin receptor antibody permeating blood-brain barrier
CN107849150B (zh) 2015-06-24 2021-12-14 Jcr制药股份有限公司 含有bdnf的融合蛋白
EP3561058B1 (en) 2016-12-26 2025-07-23 JCR Pharmaceuticals Co., Ltd. Fusion protein including bdnf
JP6956741B2 (ja) 2016-12-26 2021-11-02 Ｊｃｒファーマ株式会社 血液脳関門を通過する新規な抗ヒトトランスフェリン受容体抗体
CN110831946B (zh) 2017-04-05 2022-06-21 哈佛大学的校长及成员们 大环化合物及其用途
US11498892B2 (en) 2017-07-06 2022-11-15 President And Fellows Of Harvard College Fe/Cu-mediated ketone synthesis
WO2019010363A1 (en) 2017-07-06 2019-01-10 President And Fellows Of Harvard College HALICHONDRINES SYNTHESIS
AU2018364114B2 (en) * 2017-11-08 2024-09-26 Yafei Shanghai Biolog Medicine Science & Technology Co., Ltd. Conjugates of biomolecule and use thereof
CN111566113B (zh) 2017-11-15 2024-01-09 哈佛大学的校长及成员们 大环化合物及其用途
IL316090A (en) * 2018-06-01 2024-12-01 Eisai R&D Man Co Ltd Antibody-drug conjugates of splicing modulators and methods of use
EP3801523B1 (en) 2018-06-01 2024-09-11 Eisai R&D Management Co., Ltd. Splicing modulators
KR20210042120A (ko) * 2018-08-06 2021-04-16 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 항체-약물 콘주게이트와 튜불린 저해제의 조합
TWI853863B (zh) 2018-12-13 2024-09-01 日商衛材R&D企管股份有限公司 荷伯希二烯(herboxidiene)剪接調節抗體-藥物結合物及其使用方法
US11779649B2 (en) * 2018-12-21 2023-10-10 Novartis Ag Antibodies to PMEL17 and conjugates thereof
CN110568121A (zh) * 2019-07-11 2019-12-13 山东省药学科学院 一种艾日布林及含艾日布林的制剂中有关物质的检测方法
PE20230467A1 (es) 2019-11-07 2023-03-14 Eisai Randd Man Co Ltd Conjugados de anticuerpo y farmaco de eribulina anti-mesotelina y metodos de uso
MX2022007798A (es) 2019-12-23 2022-07-19 Eisai R&D Man Co Ltd Metodo de produccion de conjugado de anticuerpo-farmaco a base de eribulina.
EP4094779A4 (en) * 2020-01-22 2023-11-22 Shanghai Senhui Medicine Co., Ltd. ACTIVE CONJUGATE OF ERIBULIN DERIVATIVE, METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF AND ITS USE IN MEDICINE
CN113274507B (zh) * 2020-02-20 2025-02-28 亚飞（上海）生物医药科技有限公司 靶向递送和激活的免疫刺激性偶联复合物的制备和用途
CN113509557A (zh) * 2020-04-09 2021-10-19 嘉兴优博生物技术有限公司 靶向蛋白酶降解平台(ted)
AU2021284401A1 (en) 2020-06-05 2023-01-05 Eisai R&D Management Co., Ltd. Anti-BCMA antibody-drug conjugates and methods of use
WO2022031150A1 (ko) * 2020-08-07 2022-02-10 주식회사 피노바이오 데옥시사이티딘계 항암제 및 실릴 에테르 함유 링커를 포함하는 접합체 및 이의 용도
EP4210751A4 (en) * 2020-09-11 2025-05-21 Alexion Pharmaceuticals, Inc. ANTI-CERULOPLASMIN ANTIBODIES AND THEIR USES
BR112023005593A2 (pt) * 2020-09-28 2023-05-09 Navrogen Inc Composição e uso de anticorpos anti-mesotelina alternativamente formatados para tratamento de câncer
CA3195850A1 (en) * 2020-10-18 2022-04-21 May Kung Sutherland Anti-msln binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
CN114560940B (zh) * 2020-11-27 2023-07-14 缔码生物科技(武汉)有限公司 一种抗SIRPα兔重组单克隆抗体及其制备方法和应用
JP2023552559A (ja) * 2020-12-04 2023-12-18 ダイン セラピューティクス，インコーポレーテッド 抗体－オリゴヌクレオチド複合体およびそれらの使用
US20240050583A1 (en) * 2020-12-08 2024-02-15 Harbour Biomed (Shanghai) Co., Ltd Protein-drug conjugate and site-specific conjugating method
KR20230137295A (ko) * 2021-01-28 2023-10-04 난징 챔피언 바이오테크놀로지 컴퍼니 리미티드 접합체 및 이의 용도
CA3215049A1 (en) * 2021-04-10 2022-10-13 Baiteng ZHAO Folr1 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
US20240269315A1 (en) * 2021-06-02 2024-08-15 Bio-Thera Solutions, Ltd. Drug conjugate and use thereof
EP4374879A1 (en) * 2021-07-22 2024-05-29 Shanghai Senhui Medicine Co., Ltd. Drug conjugate of eribulin derivative
EP4385522A1 (en) * 2021-08-13 2024-06-19 Kunshan Xinyunda Biotech Co., Ltd. Microtubule inhibitor-based antibody-drug conjugate
WO2023024949A1 (zh) * 2021-08-24 2023-03-02 昆山新蕴达生物科技有限公司 一种由可断裂连接子偶联的抗体偶联药物
WO2023041007A1 (zh) * 2021-09-16 2023-03-23 正大天晴药业集团股份有限公司 抗her2抗体药物偶联物及其组合物和用途
WO2023055376A1 (en) * 2021-09-30 2023-04-06 Virtuoso Binco, Inc. Multispecific antibodies for targeting cd47 and icam1 and methods of use thereof
WO2023061466A1 (zh) * 2021-10-14 2023-04-20 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种艾日布林衍生物的制备方法
KR20240095442A (ko) 2021-11-03 2024-06-25 항저우 디에이씨 바이오테크 씨오, 엘티디 항체의 특이적 접합
US20250049938A1 (en) * 2021-12-01 2025-02-13 Shanghai Institute Of Biological Products Co., Ltd. Antibody-drug conjugate and use thereof
JP2024545138A (ja) * 2021-12-09 2024-12-05 クンシャン シンユンター バイオテック カンパニー，リミティド 親和性が改善された抗体薬物複合体、その調製法、及びその応用
WO2023124963A1 (zh) * 2021-12-27 2023-07-06 昆山新蕴达生物科技有限公司 一种可逆反应减少的抗体-药物偶联物，其制备方法及应用
CN118591394A (zh) * 2022-01-28 2024-09-03 启德医药科技（苏州）有限公司 抗体药物偶联物、药物组合物及用途
WO2023143320A1 (zh) * 2022-01-28 2023-08-03 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 用于制备抗体药物偶联物的连接子、化合物及用途
WO2023155808A1 (zh) * 2022-02-16 2023-08-24 苏州宜联生物医药有限公司 抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物、其中间体、制备方法、药物组合物和用途
PE20251386A1 (es) * 2022-03-11 2025-05-22 Mablink Bioscience Conjugados anticuerpo-farmaco y sus usos
US20250249114A1 (en) * 2022-04-12 2025-08-07 Bio-Thera Solutions, Ltd. Method for treating her2-positive solid tumor
KR20250004695A (ko) * 2022-04-12 2025-01-08 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤 에리불린-기반의 항체-약물 컨쥬게이트 및 이용 방법
EP4601702A1 (en) * 2022-10-14 2025-08-20 Genequantum Healthcare (Suzhou) Co., Ltd. Linker-payload compound, conjugates and applications thereof
CN117917248A (zh) * 2022-10-20 2024-04-23 英诺湖医药(杭州)有限公司 酶裂解连接子及包含其的配体-艾瑞布林偶联物
WO2024107780A2 (en) * 2022-11-14 2024-05-23 Cornell University Anionically functionalized polypeptides, and methods of making same and uses thereof
EP4653016A1 (en) 2023-01-17 2025-11-26 SystImmune, Inc. Conjugate of eribulin drug
CN120417925A (zh) 2023-01-19 2025-08-01 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种含艾日布林衍生物药物偶联物的药物组合物
EP4665396A1 (en) * 2023-02-13 2025-12-24 Bliss Biopharmaceutical (Hangzhou) Co., Ltd. Antibody-drug conjugate for cancer treatment
TW202448519A (zh) * 2023-05-12 2024-12-16 大陸商蘇州宜聯生物醫藥有限公司 多彈頭抗體偶聯藥物及其製備方法和用途
CN120957757A (zh) * 2023-05-12 2025-11-14 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 大环类药物偶联物及其制备方法和用途
CN120957758A (zh) * 2023-05-12 2025-11-14 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 大环化合物及其制备方法和用途
JP2024165695A (ja) 2023-05-18 2024-11-28 セイコーエプソン株式会社 印刷方法、印刷ヘッドユニットおよびロボットシステム
CN121311508A (zh) 2023-06-09 2026-01-09 徕特康(苏州)生物制药有限公司 抗her2互补性双特异抗体-药物偶联物及其制备方法和用途
US12319747B2 (en) 2023-07-03 2025-06-03 Medicovestor, Inc. Methods of using anti-SP17 immunotherapeutics
WO2025027529A1 (en) 2023-07-31 2025-02-06 Advesya Anti-il-1rap antibody drug conjugates and methods of use thereof
WO2025078841A2 (en) 2023-10-11 2025-04-17 Antikor Biopharma Limited Antibodies, conjugates, and uses thereof
TW202518024A (zh) 2023-10-13 2025-05-01 日商衛材R&D企管股份有限公司 抗體－藥物軛合物代謝物
TW202530697A (zh) 2023-10-13 2025-08-01 日商衛材R&D企管股份有限公司 用於基於艾日布林之抗體－藥物結合物之生物標記及使用方法
US12364777B2 (en) 2023-10-20 2025-07-22 Medicovestor, Inc. Homodimeric antibodies for use in treating cancers and methods of use
WO2025106586A1 (en) * 2023-11-13 2025-05-22 Luxvitae Therapeutics Inc. Macrocyclic ketone compounds and applications thereof
WO2025128837A1 (en) * 2023-12-13 2025-06-19 Systimmune, Inc. Anti-claudin18.2 antibody-camptothecin drug conjugate and pharmaceutical use thereof
WO2025126157A1 (en) 2023-12-15 2025-06-19 Advesya Anti-il-1rap binding domains and antibody-drug conjugates thereof
US12116410B1 (en) 2023-12-26 2024-10-15 Medicovestor, Inc. Methods of manufacturing dimeric antibodies
WO2025162492A1 (zh) * 2024-01-29 2025-08-07 甘李药业股份有限公司 一种连接子、配体-药物偶联物及其医药用途
US12258396B1 (en) 2024-02-02 2025-03-25 Medicovestor, Inc. Methods of using immunotherapeutics that bind folate receptor alpha
US12378314B1 (en) 2024-02-02 2025-08-05 Medicovestor, Inc. Proteins that bind folate receptor alpha including fully-human antibodies
US12240900B1 (en) 2024-02-02 2025-03-04 Medicovestor, Inc. Nucleic acids, vectors, and cells that encode antibodies and other proteins that bind folate receptor alpha
WO2025199464A1 (en) 2024-03-22 2025-09-25 Eisai R&D Management Co., Ltd. Anti-trop2 antibody-drug conjugates and methods of use
WO2025228172A1 (zh) * 2024-04-28 2025-11-06 上海拓济医药有限责任公司 艾日布林衍生物及其抗体药物偶联物和医药用途

Family Cites Families (227)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4880935A (en) 1986-07-11 1989-11-14 Icrf (Patents) Limited Heterobifunctional linking agents derived from N-succinimido-dithio-alpha methyl-methylene-benzoates
US4880078A (en) 1987-06-29 1989-11-14 Honda Giken Kogyo Kabushiki Kaisha Exhaust muffler
FI102355B1 (fi) 1988-02-11 1998-11-30 Bristol Myers Squibb Co Menetelmä yhdistävän välikappaleen omaavien antrasykliini-immunokonjugaattien valmistamiseksi
ES2052027T5 (es) 1988-11-11 2005-04-16 Medical Research Council Clonacion de secuencias de dominio variable de inmunoglobulina.
ES2181673T3 (es) 1991-05-01 2003-03-01 Jackson H M Found Military Med Procedimiento de tratamiento de las enfermedades respiratorias infecciosas.
DE69233254T2 (de) 1991-06-14 2004-09-16 Genentech, Inc., South San Francisco Humanisierter Heregulin Antikörper
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
US5934272A (en) 1993-01-29 1999-08-10 Aradigm Corporation Device and method of creating aerosolized mist of respiratory drug
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
US6019968A (en) 1995-04-14 2000-02-01 Inhale Therapeutic Systems, Inc. Dispersible antibody compositions and methods for their preparation and use
ES2195036T3 (es) 1995-12-22 2003-12-01 Bristol Myers Squibb Co Conectores de hidrazona ramificados.
PT885002E (pt) 1996-03-04 2011-07-14 Massachusetts Inst Technology Materiais e métodos para aumento da internalização celular
US5985309A (en) 1996-05-24 1999-11-16 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of particles for inhalation
US5874064A (en) 1996-05-24 1999-02-23 Massachusetts Institute Of Technology Aerodynamically light particles for pulmonary drug delivery
US5855913A (en) 1997-01-16 1999-01-05 Massachusetts Instite Of Technology Particles incorporating surfactants for pulmonary drug delivery
PT954282E (pt) 1997-01-16 2005-06-30 Massachusetts Inst Technology Preparacao de particulas para inalacao
EP1089712B1 (en) 1998-06-24 2003-05-02 Advanced Inhalation Research, Inc. Large porous particles emitted from an inhaler
US6019963A (en) 1998-11-20 2000-02-01 D.S.C. Products, Inc. Deodorizing composition containing tea tree and eucalyptus oils
US7109019B2 (en) 1999-01-06 2006-09-19 The Regents Of The University Of California Gene cluster for production of the enediyne antitumor antibiotic C-1027
IL158532A0 (en) 2001-05-02 2004-05-12 Purdue Research Foundation Treatment and diagnosis of macrophage mediated disease
US7179617B2 (en) 2001-10-10 2007-02-20 Neose Technologies, Inc. Factor IX: remolding and glycoconjugation of Factor IX
US7157277B2 (en) 2001-11-28 2007-01-02 Neose Technologies, Inc. Factor VIII remodeling and glycoconjugation of Factor VIII
US7173003B2 (en) 2001-10-10 2007-02-06 Neose Technologies, Inc. Granulocyte colony stimulating factor: remodeling and glycoconjugation of G-CSF
US8008252B2 (en) 2001-10-10 2011-08-30 Novo Nordisk A/S Factor VII: remodeling and glycoconjugation of Factor VII
US7439043B2 (en) 2001-10-10 2008-10-21 Neose Technologies, Inc. Galactosyl nucleotide sugars
US7399613B2 (en) 2001-10-10 2008-07-15 Neose Technologies, Inc. Sialic acid nucleotide sugars
US7226903B2 (en) 2001-10-10 2007-06-05 Neose Technologies, Inc. Interferon beta: remodeling and glycoconjugation of interferon beta
US7265085B2 (en) 2001-10-10 2007-09-04 Neose Technologies, Inc. Glycoconjugation methods and proteins/peptides produced by the methods
US7696163B2 (en) 2001-10-10 2010-04-13 Novo Nordisk A/S Erythropoietin: remodeling and glycoconjugation of erythropoietin
US7125843B2 (en) 2001-10-19 2006-10-24 Neose Technologies, Inc. Glycoconjugates including more than one peptide
US7265084B2 (en) 2001-10-10 2007-09-04 Neose Technologies, Inc. Glycopegylation methods and proteins/peptides produced by the methods
US7297511B2 (en) 2001-10-10 2007-11-20 Neose Technologies, Inc. Interferon alpha: remodeling and glycoconjugation of interferon alpha
US7214660B2 (en) 2001-10-10 2007-05-08 Neose Technologies, Inc. Erythropoietin: remodeling and glycoconjugation of erythropoietin
US7795210B2 (en) 2001-10-10 2010-09-14 Novo Nordisk A/S Protein remodeling methods and proteins/peptides produced by the methods
AU2003224644A1 (en) 2002-02-27 2003-09-09 The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Healtan Conjugates of ligand, linker and cytotoxic agent and related compositions and methods of use
PT2357006E (pt) * 2002-07-31 2016-01-22 Seattle Genetics Inc Conjugados de fármacos e sua utilização para tratamento do cancro, de uma doença autoimune ou de uma doença infeciosa
JP2004119755A (ja) 2002-09-27 2004-04-15 Alps Electric Co Ltd 磁気検出素子及びその製造方法
US20040071540A1 (en) 2002-10-15 2004-04-15 Lucas Philip J. Disposable/recyclable pallet system and method
US20080025989A1 (en) 2003-02-20 2008-01-31 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd70 antibody-drug conjugates and their use for the treatment of cancer and immune disorders
MXPA05010773A (es) 2003-04-09 2005-12-12 Neose Technologies Inc Metodos de glicopegilacion y proteinas/peptidos producidos por los metodos.
WO2005027842A2 (en) 2003-09-18 2005-03-31 Combinatorx, Incorporated Combinations of drugs for the treatment of neoplasms
US6997024B2 (en) 2003-10-01 2006-02-14 Truth Hardware Corporation Pull door lock
US20050148535A1 (en) 2003-10-30 2005-07-07 Lacasse Eric IAP nucleobase oligomers and oligomeric complexes and uses thereof
US8012944B2 (en) 2003-10-30 2011-09-06 Pharmascience Inc. Method for treating cancer using IAP antisense oligomer and chemotherapeutic agent
CA2556027C (en) 2004-02-12 2015-11-24 Morphotek, Inc. Monoclonal antibodies that specifically block biological activity of a tumor antigen
US7117807B2 (en) 2004-02-17 2006-10-10 University Of Florida Research Foundation, Inc. Dynamically modifiable polymer coatings and devices
WO2006073419A2 (en) 2004-04-01 2006-07-13 Gang Zheng Lipoprotein nanoplatforms
EP1773389A4 (en) 2004-05-07 2008-09-10 Massachusetts Inst Technology METHOD AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF CANCER RELATING TO THE RECOGNITION OF THE BACH1 PHOSPHORYLE BRCA1 BRCT DOMAIN
US7982060B2 (en) 2004-06-03 2011-07-19 Eisai R&D Management Co., Ltd. Intermediates for the preparation of analogs of Halichondrin B
BRPI0516284A (pt) 2004-09-23 2008-09-02 Genentech Inc anticorpo construìdo com cisteìna, método de selecionar anticorpos, compostos conjugados de droga-anticorpo, composição farmacêutica, método para matar ou inibir a proliferação de células de tumor, métodos de inibir a proliferação celular e o crescimento de células de tumor, artigo manufaturado e método para produzir um composto
JO3000B1 (ar) * 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
EP1831697A4 (en) 2004-12-09 2011-01-26 Eisai R&D Man Co Ltd SEARCH FOR TUBULINISOTYPES IN CANCER THERAPY USING HALICHONDRIN B ANALOG
JP2008522624A (ja) 2004-12-09 2008-07-03 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 ヘミアスタリン（ｈｅｍｉａｓｔｅｒｌｉｎ）アナログを使用する癌治療におけるチューブリンのアイソタイプのスクリーニング
WO2007008848A2 (en) 2005-07-07 2007-01-18 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine carboxy modifications at the c-terminus
EP2722051B1 (en) 2005-07-07 2018-11-07 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine side-chain modifications at the C-terminus
GB0515025D0 (en) 2005-07-21 2005-08-31 Novartis Ag Organic compounds
CA2617660C (en) 2005-08-19 2014-03-25 Endocyte, Inc. Multi-drug ligand conjugates
ES2382879T3 (es) 2005-09-14 2012-06-14 Ucb Pharma, S.A. Conjugado de anticuerpo - polímero de peine.
US8293726B2 (en) 2005-12-02 2012-10-23 Vianova Labs, Inc. Treatment of cancer and other diseases
EP2021502A4 (en) 2006-05-09 2010-08-25 Mas Metabolic Analytical Servi GENES AND ATYPICAL MARKERS IN TYPE 2 DIABETES AND OBESITY
US20140037539A1 (en) 2012-07-27 2014-02-06 Rutgers, The State University Of New Jersey Antibody cocktails for breast cancer radioimmunotherapy
US20150030534A1 (en) 2013-07-26 2015-01-29 Rutgers, The State University Of New Jersey Antibody cocktails for breast cancer radioimmunotherapy
US8398956B2 (en) 2007-01-11 2013-03-19 Immunomedics, Inc. In vivo copper-free click chemistry for delivery of therapeutic and/or diagnostic agents
US20100104626A1 (en) 2007-02-16 2010-04-29 Endocyte, Inc. Methods and compositions for treating and diagnosing kidney disease
WO2008112873A2 (en) 2007-03-14 2008-09-18 Endocyte, Inc. Binding ligand linked drug delivery conjugates of tubulysins
EP1977765A1 (en) 2007-04-03 2008-10-08 Diatos Peptide prodrugs
US8093410B2 (en) 2007-10-03 2012-01-10 Eisai R&D Management Co., Ltd. Intermediates and methods for the synthesis of halichondrin B analogs
MY188455A (en) * 2007-10-19 2021-12-09 Genentech Inc Cysteine engineered anti-tenb2 antibodies and antibody drug conjugates
JP5065228B2 (ja) 2007-10-30 2012-10-31 富士通株式会社 携帯端末装置
PL2265283T3 (pl) 2008-03-18 2015-03-31 Seattle Genetics Inc Koniugaty aurystatyny lek łącznik
EP2279267A4 (en) 2008-03-27 2012-01-18 Vascular Biosciences Inc METHOD FOR IDENTIFYING NEW THERAPY CANDIDATES ON GENE EXPRESSION ANALYSIS IN DISEASES RELATED TO VACCINES
AU2009241589B2 (en) 2008-04-29 2013-10-10 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US20100260668A1 (en) 2008-04-29 2010-10-14 Abbott Laboratories Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof
AU2009243009B2 (en) * 2008-04-30 2014-09-11 Immunogen, Inc Potent conjugates and hydrophilic linkers
EP3002299A1 (en) 2008-06-03 2016-04-06 AbbVie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US9109026B2 (en) 2008-06-03 2015-08-18 Abbvie, Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
TW201012475A (en) 2008-07-08 2010-04-01 Abbott Lab Prostaglandin E2 dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
EA018420B1 (ru) 2008-09-12 2013-07-30 Сантен Фармасьютикал Ко., Лтд. Агонист глюкокортикоидного рецептора, содержащий новые производные 1,2,3,4-тетрагидрохиноксалина с фенильной группой, имеющей структуру эфира сульфоновой кислоты, введенной в нее в качестве заместителя
NZ593314A (en) 2008-12-04 2013-03-28 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
RU2011140335A (ru) 2009-03-05 2013-04-10 Эбботт Лэборетриз Связывающие il-17 белки
US20140339088A1 (en) 2009-03-09 2014-11-20 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Dielectrophoresis methods for determining a property of a plurality of cancer cells
MX2011011669A (es) 2009-05-01 2011-11-18 Abbott Lab Inmunoglobulinas de dominio variable dual y usos de las misma.
US8686520B2 (en) * 2009-05-29 2014-04-01 International Business Machines Corporation Spin-torque magnetoresistive structures
UY32808A (es) 2009-07-29 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas como dominio variable dual y usos de las mismas
WO2011022264A1 (en) * 2009-08-15 2011-02-24 Genentech, Inc. Anti-angiogenesis therapy for the treatment of previously treated breast cancer
AU2010289527C1 (en) 2009-09-01 2014-10-30 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
GB0917044D0 (en) 2009-09-29 2009-11-18 Cytoguide As Agents, uses and methods
BR112012008833A2 (pt) 2009-10-15 2015-09-08 Abbott Lab imunoglobulinas de dominio variavel duplo e usos das mesmas
UY32979A (es) 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
ES2633317T3 (es) 2009-11-06 2017-09-20 Plexxikon, Inc. Compuestos y métodos para la modulación de quinasas, e indicaciones para ello
RU2579511C2 (ru) 2010-01-26 2016-04-10 Эйсай Ар Энд Ди Менеджмент Ко., Лтд. Производные фуро[3,2-в]пирана, применимые в синтезе аналогов
US8710035B2 (en) 2010-03-24 2014-04-29 The University Of Chicago Methods and compositions related to glucocorticoid receptor antagonists and breast cancer
CN103037690B (zh) 2010-03-24 2016-04-27 俄亥俄州立大学 用于葡萄糖转运抑制的组合物和方法
KR101539684B1 (ko) 2010-05-14 2015-07-27 애브비 인코포레이티드 Ｉｌ－１ 결합 단백질
NZ604718A (en) 2010-06-15 2015-01-30 Genmab As Human antibody drug conjugates against tissue factor
UY33492A (es) 2010-07-09 2012-01-31 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
NZ607480A (en) 2010-08-03 2014-10-31 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
PH12013500337A1 (en) 2010-08-26 2017-08-23 Abbvie Inc Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US9089570B2 (en) 2010-09-03 2015-07-28 Tactical Therapeutics Inc Compositions for treating cancers having acquired resitance to prior chemotherapeutic and targeted drugs using carboxyamidotriazole orotate
US9192677B2 (en) 2010-09-07 2015-11-24 Johannes Kepler Universität Linz Biodegradable, water soluble and pH responsive poly(organo)phosphazenes
WO2012065019A2 (en) 2010-11-12 2012-05-18 Exelixis, Inc. Pyridopyrimidinone inhibitors of p13k alpha
WO2012065057A2 (en) 2010-11-12 2012-05-18 Exelixis, Inc. Phosphatidylinositol 3-kinase inhibitors and methods of their use
WO2012075361A2 (en) 2010-12-02 2012-06-07 Immunomedics, Inc. In vivo copper-free click chemistry for delivery of therapeutic and/or diagnostic agents
EP2655417A2 (en) 2010-12-21 2013-10-30 AbbVie Inc. Il-1 -alpha and -beta bispecific dual variable domain immunoglobulins and their use
UY33826A (es) 2010-12-22 2012-07-31 Abbott Lab Proteínas de unión con dominios trivariables y sus usos
UY33827A (es) 2010-12-22 2012-07-31 Abbott Lab Proteínas de unión a media-inmunoglobulina y sus usos
WO2012106559A1 (en) 2011-02-02 2012-08-09 Translational Genomics Research Institute Biomarkers and methods of use thereof
EP2675474B1 (en) 2011-02-15 2019-01-16 Vaxiion Therapeutics, LLC Therapeutic compositions and methods for antibody and fc-containing targeting molecule-based targeted delivery of bioactive molecules by bacterial minicells
WO2012116277A1 (en) 2011-02-25 2012-08-30 Arena Pharmaceuticals, Inc. Cannabinoid receptor modulators
JP2014508165A (ja) * 2011-03-02 2014-04-03 モルフォテック、インク． 乳癌の治療のためのエリブリンおよびファーレツズマブの共投与
WO2012118978A1 (en) 2011-03-03 2012-09-07 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Methods for treating oncovirus positive cancers
EP2966061B1 (en) 2011-03-04 2017-05-03 Life Technologies Corporation Compounds and methods for conjugation of biomolecules
CA2830240A1 (en) 2011-03-15 2012-09-20 The University Of North Carolina At Chapell Hill Methods of treating breast cancer with anthracycline therapy
ES2731653T3 (es) 2011-03-18 2019-11-18 Eisai R&D Man Co Ltd Métodos y usos para predecir la respuesta a la eribulina
EP2508525A1 (en) 2011-04-05 2012-10-10 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Substituted 2,3-dihydroimidazo[1,2-c]quinazoline salts
US9132131B2 (en) 2011-04-21 2015-09-15 Saint Louis University Use of adenosine A3 receptor agonists for treatment of neuropathic pain
MX371526B (es) 2011-05-27 2020-01-31 Ambrx Inc Composiciones que contienen, metodos que incluyen, y usos de derivados de dolastatina enlazados a aminoacidos no naturales.
KR102356286B1 (ko) 2011-05-27 2022-02-08 암브룩스, 인코포레이티드 비-천연 아미노산 연결된 돌라스타틴 유도체를 함유하는 조성물, 이를 수반하는 방법, 및 용도
WO2012170640A1 (en) 2011-06-07 2012-12-13 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods and compositions for trail-drug combination therapy
US8815226B2 (en) 2011-06-10 2014-08-26 Mersana Therapeutics, Inc. Protein-polymer-drug conjugates
JP5926374B2 (ja) 2011-06-10 2016-05-25 メルサナ セラピューティクス，インコーポレイティド タンパク質−高分子−薬剤コンジュゲート
DK2739649T3 (en) 2011-08-05 2018-01-08 Bioasis Technologies Inc P97 FRAGMENTS WITH TRANSFER ACTIVITY
EP2785687B1 (en) 2011-11-30 2019-02-20 Sandoz AG Process for preparation of (3r)-2,4-di-leaving group-3-methylbut-1-ene
EP2791123B1 (en) 2011-12-16 2018-07-18 Sandoz AG Process for preparation of 3-((2s,5s)-4-methylene-5-(3-oxopropyl)tetrahydrofuran-2-yl) propanol derivatives and intermediates useful thereof
WO2013093809A1 (en) 2011-12-23 2013-06-27 Pfizer Inc. Engineered antibody constant regions for site-specific conjugation and methods and uses therefor
US9764038B2 (en) 2011-12-23 2017-09-19 Innate Pharma Enzymatic conjugation of antibodies
WO2013097042A1 (en) 2011-12-29 2013-07-04 Alphora Research Inc. 2-((2s,3s,4r,5r)-5-((s)-3-amino-2-hydroxyprop-1-yl)-4-methoxy-3-(phenylsulfonylmethyl)tetrahydrofuran-2-yl)acetaldehyde derivatives and process for their preparation
AR092790A1 (es) 2012-02-01 2015-05-06 Euro Celtique Sa Derivados bencimidazolicos del acido hidroxamico
WO2013130093A1 (en) * 2012-03-02 2013-09-06 Genentech, Inc. Biomarkers for treatment with anti-tubulin chemotherapeutic compounds
AU2013201584A1 (en) 2012-03-12 2013-09-26 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating pancreatic cancer using combination therapies comprising an anti-ErbB3 antibody
US9358235B2 (en) 2012-03-19 2016-06-07 Plexxikon Inc. Kinase modulation, and indications therefor
JP6639228B2 (ja) 2012-03-29 2020-02-05 アルター・バイオサイエンス・コーポレーション 新生物を治療するための方法
IN2014MN02106A (uk) 2012-03-30 2015-09-11 Alphora Res Inc
WO2013152034A1 (en) 2012-04-02 2013-10-10 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Dosage and administration of monospecific and bispecific anti-igf-1r and anti-erbb3 antibodies
US9981046B2 (en) 2012-05-15 2018-05-29 Concortis Biosystems, Corp., a wholly owned Subsidiary of Sorrento Therapeutics, Inc. Drug-conjugates, conjugation methods, and uses thereof
WO2013172955A1 (en) 2012-05-15 2013-11-21 Diatech Oncology Tumor cell isolation/purification process and methods for use thereof
WO2013185117A1 (en) 2012-06-07 2013-12-12 Ambrx, Inc. Prostate-specific membrane antigen antibody drug conjugates
KR101915942B1 (ko) 2012-06-08 2018-11-06 에프. 호프만-라 로슈 아게 암의 치료를 위한 포스포이노시타이드 3 키나제 억제제 화합물 및 화학치료제의 돌연변이체 선택성 및 조합물
EP2861262B1 (en) 2012-06-19 2018-11-28 Ambrx, Inc. Anti-cd70 antibody drug conjugates
EP2866795A4 (en) 2012-06-29 2016-01-27 Univ New York State Res Found POLYENOLZIN BINDER FOR THE ACTIVE PROMOTION OF THE INACTIVATION OF CANCER STRAIN CELLS AND FOR THE POTENTIATING OF CYTOTOXIC ANTITUMOROUS SUBSTANCES
EP2867370A4 (en) 2012-06-29 2016-06-29 Nanostring Technologies Inc METHOD FOR THE TREATMENT OF BREAST CANCER WITH GEMCITABIN THERAPY
ES2939836T3 (es) 2012-07-12 2023-04-27 Hangzhou Dac Biotech Co Ltd Conjugados de moléculas de unión celular con agentes citotóxicos
US20140069822A1 (en) 2012-09-10 2014-03-13 Antec Leyden B.V. Electrochemical reduction of disulfide bonds in proteinaceous substances and electrochemical cell for carrying out such reduction
WO2014047199A1 (en) 2012-09-19 2014-03-27 The Research Foundation For The State University Of New York Novel prodrugs for selective anticancer therapy
EP2903616B8 (en) 2012-10-04 2018-02-07 AB Science Use of masitinib in combination with gemcitabine for treating a subgroup of patients suffering from pancreatic cancer
WO2014058317A1 (en) 2012-10-10 2014-04-17 Stichting Het Nederlands Kanker Instituut-Antoni van Leeuwenhoek Ziekenhuis Methods and means for predicting resistance to anti-cancer treatment
WO2014063443A1 (zh) 2012-10-22 2014-05-01 Zhang Yuliang 自冷式热力做功方法
HUE038285T2 (hu) 2012-10-23 2018-10-29 Synaffix Bv Módosított antitest, antitest-konjugátum és eljárás ezek elõállítására
EP2917195B9 (en) 2012-11-05 2018-05-30 Pfizer Inc Spliceostatin analogs
CN105849086B (zh) 2012-11-24 2018-07-31 杭州多禧生物科技有限公司 亲水性链接体及其在药物分子和细胞结合分子共轭反应上的应用
AU2013356241A1 (en) 2012-12-03 2015-07-09 Calithera Biosciences, Inc. Treatment of cancer with heterocyclic inhibitors of glutaminase
US9243058B2 (en) 2012-12-07 2016-01-26 Amgen, Inc. BCMA antigen binding proteins
TW201425336A (zh) * 2012-12-07 2014-07-01 Amgen Inc Ｂｃｍａ抗原結合蛋白質
EP2928503B1 (en) 2012-12-10 2019-02-20 Mersana Therapeutics, Inc. Conjugates of auristatin compounds
AU2013359506B2 (en) 2012-12-10 2018-05-24 Mersana Therapeutics, Inc. Protein-polymer-drug conjugates
EP2931316B1 (en) 2012-12-12 2019-02-20 Mersana Therapeutics, Inc. Hydroxyl-polymer-drug-protein conjugates
EP2934596A1 (en) 2012-12-21 2015-10-28 Glykos Finland Oy Linker-payload molecule conjugates
US20150182634A1 (en) 2012-12-28 2015-07-02 Cody P. Coyne Molecular Design and Chemical Synthesis of Pharmaceutical-Ligands and Pharmaceutical-Pharmaceutical Analogs with Multiple Mechanisms of Action
CA2898329A1 (en) 2013-01-19 2014-07-24 New York University Oligooxopiperazines for p53 reactivation
US9605026B2 (en) 2013-01-19 2017-03-28 New York University Hydrogen-bond surrogate peptides and peptidomimetics for p53 reactivation
WO2014121235A2 (en) 2013-02-01 2014-08-07 Zoneone Pharma, Inc. Transformation of drug cyclodextrin complex compositions into compositions of mixtures of lipid vesicle encapsulated drug and cyclodextrin drug complexes
FI3922241T3 (fi) 2013-02-01 2023-11-28 Celator Pharmaceuticals Inc Niukasti liukoisten lääkkeiden etälataus liposomeihin
US9849193B2 (en) 2013-02-08 2017-12-26 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Nanoparticles for drug delivery
JP6382231B2 (ja) 2013-02-22 2018-08-29 ユニバーシティ オブ ヒューストンＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｏｆ Ｈｏｕｓｔｏｎ 神経保護剤としてのホスファプラチン
PL2968294T3 (pl) 2013-03-13 2019-10-31 Oncoceutics Inc 7-Benzylo-10-(2-metylobenzylo)-2,6,7,8,9,10-heksahydroimidazo[1,2-a]pirydo[4,3-d]pirymidyn-5(3H)-on do zastosowania w leczeniu nowotworu
WO2014140174A1 (en) * 2013-03-13 2014-09-18 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
US9376437B2 (en) 2013-03-13 2016-06-28 Oncoceutics, Inc 7-benzyl-4-(2-methylbenzyl)-2,4,6,7,8,9-hexahydroimidazo[1,2-a]pyrido[3,4-e]pyrimidin-5(1H)-one, salts thereof and methods of using the same in combination therapy
WO2015073072A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Oncoceutics, Inc. 7-benzyl-4-(2-methylbenzyl)-2,4,6,7,8,9-hexahydroimidazo[1,2-a]pyrido[3,4-e]pyrimidin-5(1h)-one
AU2014240467B2 (en) 2013-03-14 2018-11-29 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Regulation of cancer using natural compounds and/or diet
US20140271923A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Christopher Brian Reid Compositions & formulations for preventing and treating chronic diseases that cluster in patients such as cardiovascular disease, diabetes, obesity, polycystic ovary syndrome, hyperlipidemia and hypertension, as well as for preventing and treating other diseases and conditions
US20160022829A1 (en) 2013-03-14 2016-01-28 Mersana Therapeutics, Inc. Tubulysin compounds and conjugates thereof
CN105358174B (zh) 2013-03-15 2019-03-15 酵活有限公司 具细胞毒性和抗有丝分裂的化合物以及其使用方法
US9295731B2 (en) 2013-04-01 2016-03-29 Mark Quang Nguyen Cleavable drug conjugates, compositions thereof and methods of use
WO2014168721A2 (en) 2013-04-12 2014-10-16 Tufts Medical Center Methods and systems for designing and/or characterizing soluble lipidated ligand agents
WO2014176284A1 (en) 2013-04-22 2014-10-30 Avelas Biosciences, Inc. Selective drug delivery compositions and methods of use
GB2513405A (en) 2013-04-26 2014-10-29 Adc Biotechnology Ltd Method of synthesising ADCs using affinity resins
WO2014177771A1 (en) 2013-05-02 2014-11-06 Glykos Finland Oy Conjugates of a glycoprotein or a glycan with a toxic payload
WO2014183211A1 (en) 2013-05-15 2014-11-20 Alphora Research Inc. 3-((2s,5s)-4-methylene-5-(3-oxopropyl)tetrahydrofuran-2-yl)propanol derivatives, their preparation and intermediates useful thereof
GB201309807D0 (en) 2013-05-31 2013-07-17 Pharma Mar Sau Antibody drug conjugates
WO2014197871A2 (en) 2013-06-06 2014-12-11 Igenica Biotherapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates, compositions and methods of use
US11229711B2 (en) 2013-06-06 2022-01-25 Magenta Therapeutics, Inc. Linkers for antibody-drug conjugates and related compounds, compositions, and methods of use
WO2014202773A1 (en) 2013-06-20 2014-12-24 Innate Pharma Enzymatic conjugation of polypeptides
CA2914189C (en) 2013-06-21 2023-03-14 Innate Pharma Enzymatic conjugation of polypeptides
EP3013974A1 (en) 2013-06-26 2016-05-04 AFG Technologies S.à.r.l Screening, diagnosis, prognostication and treatment of ovarian cancer
CA2916537C (en) 2013-07-03 2021-07-27 Alphora Research Inc. Synthetic process for preparation of macrocyclic c1-keto analogs of halichondrin b and intermediates useful therein including intermediates containing -so2-(p-tolyl) groups
WO2015017729A1 (en) 2013-07-31 2015-02-05 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Dielectrophoresis methods for determining a property of a plurality of cancer cells
US20160166637A1 (en) 2013-08-02 2016-06-16 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Methods of treating a cancer through targeted disruption of alpha connexin 43-zonula occludens-1 (zo-1) interaction
AU2014312190A1 (en) 2013-08-28 2016-02-18 Bioasis Technologies Inc. CNS-targeted conjugates of antibodies
CA2922529A1 (en) 2013-08-28 2015-03-05 Stemcentrx, Inc. Novel sez6 modulators and methods of use
WO2015031698A1 (en) 2013-08-28 2015-03-05 Stem Centrx, Inc. Site-specific antibody conjugation methods and compositions
CA2923166A1 (en) 2013-09-09 2015-03-12 British Columbia Cancer Agency Branch Methods and kits for predicting outcome and methods and kits for treating breast cancer with radiation therapy
WO2015038426A1 (en) 2013-09-13 2015-03-19 Asana Biosciences, Llc Self-immolative linkers containing mandelic acid derivatives, drug-ligand conjugates for targeted therapies and uses thereof
US20150093331A1 (en) 2013-10-01 2015-04-02 OncoLock Co., Ltd. Biomarkers for breast cancer
US9878049B2 (en) 2013-10-09 2018-01-30 The University Of Akron High drug loading system to co-deliver anticancer drugs and nucleic acids for cancer therapy
JP6420331B2 (ja) 2013-10-11 2018-11-07 メルサナ セラピューティクス，インコーポレイティド タンパク質−高分子−薬剤コンジュゲート
AU2014331667B2 (en) 2013-10-11 2019-08-22 Biomed Valley Discoveries, Inc. TEM8 antibodies and their use
IL245009B (en) 2013-10-11 2022-08-01 Asana Biosciences Llc Protein-polymer-drug conjugates
EP3060654B1 (en) 2013-10-21 2023-03-15 Hemoshear, LLC In vitro model for a tumor microenvironment
ES2787603T3 (es) 2013-11-04 2020-10-16 Eisai R&D Man Co Ltd Reacciones de macrociclación y productos intermedios útiles en la síntesis de análogos de halicondrina B
KR20160070188A (ko) 2013-11-07 2016-06-17 데시페라 파마슈티칼스, 엘엘씨. 암치료에 유용한 tie2 키나아제의 억제 방법
US9457019B2 (en) 2013-11-07 2016-10-04 Deciphera Pharmaceuticals, Llc Methods for inhibiting tie-2 kinase useful in the treatment of cancer
BR112016011072B1 (pt) 2013-11-15 2022-06-21 Oncoceutics, Inc. Composto 7-benzil-4-(2-metilbenzil)-2,4,6,7,8,9- hexahidroimidazo[1,2-a]pirido[3,4-e]pirimidin-5(1h) -ona e composição farmacêutica contendo o referido composto
AU2014354643B2 (en) 2013-11-27 2020-03-05 Redwood Bioscience, Inc. Hydrazinyl-pyrrolo compounds and methods for producing a conjugate
BR112016012237B1 (pt) 2013-12-06 2023-02-07 Eisai R&D Management Co., Ltd Métodos úteis na síntese de análogos de halicondrina b
US20170020817A1 (en) 2013-12-19 2017-01-26 Luminus Biosciences, Inc. Solid nanoparticle formulation of microtuble inhibitors with reduced ostwald repening for oral administration
WO2015106164A1 (en) 2014-01-10 2015-07-16 Rgenix, Inc. Lxr agonists and uses thereof
EP3092027A4 (en) 2014-01-10 2017-09-06 Atossa Genetics Inc. Transpapillary methods and compositions for diagnosing and treating breast conditions
JP2017503803A (ja) 2014-01-10 2017-02-02 シャンハイ バーディー バイオテック インコーポレイテッド Ｅｇｆｒ発現腫瘍を処置するための化合物及び組成物
CN104784699B (zh) 2014-01-20 2019-05-03 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 叶酸受体结合配体-药物偶联物
TWI655211B (zh) * 2014-02-03 2019-04-01 國立研究開發法人國立癌症研究中心 Anti-tissue factor monoclonal antibody
CA3151947A1 (en) 2014-02-03 2015-08-06 Eidgenoessische Technische Hochschule Zuerich Low molecular weight drug conjugates for binding to carbonic anhydrase ix
EP2913064A1 (en) 2014-02-26 2015-09-02 celares GmbH Branched drug-linker conjugates for the coupling to biological targeting molecules
TW201617326A (zh) 2014-03-06 2016-05-16 Ａｌｐｈｏｒａ研發股份有限公司 （ｓ）－１－（（２ｒ，３ｒ，４ｓ，５ｓ）－５－烯丙－３－甲氧－４－（對甲苯磺醯甲基）四氫呋喃－２－基）－３－氨基丙－２－醇之結晶衍生物
WO2015136017A1 (en) 2014-03-13 2015-09-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods and compositions for modulating estrogen receptor mutants
US9260478B2 (en) * 2014-04-04 2016-02-16 Shanghui Hu Potent and efficient cytotoxic peptides and antibody-drug conjugates thereof and their synthesis
JP2017515800A (ja) 2014-04-08 2017-06-15 ザ・メソジスト・ホスピタル ｉＮＯＳ阻害組成物および乳がん治療薬としてのその使用
CN106456796A (zh) 2014-04-14 2017-02-22 恩多塞特公司 用于治疗耐药性癌症及用于联合治疗的药物递送缀合物
WO2015161247A1 (en) * 2014-04-17 2015-10-22 Igenica Biotherapeutics, Inc. Humanized anti-c16orf54 antibodies and methods of use thereof
WO2015162293A1 (en) * 2014-04-25 2015-10-29 Pierre Fabre Medicament Antibody-drug-conjugate and its use for the treatment of cancer
KR101628872B1 (ko) * 2014-05-28 2016-06-09 주식회사 레고켐 바이오사이언스 자가-희생 기를 포함하는 화합물
US9808528B2 (en) * 2014-06-18 2017-11-07 Mersana Therapeutics, Inc. Protein-polymer-drug conjugates and methods of using same
TWI695011B (zh) * 2014-06-18 2020-06-01 美商梅爾莎納醫療公司 抗ｈｅｒ２表位之單株抗體及其使用之方法
WO2016008112A1 (en) * 2014-07-16 2016-01-21 Medshine Discovery Inc. Linkers and application towards adc thereof
EP3069734A1 (en) * 2015-03-17 2016-09-21 Exiris S.r.l. Cryptophycin-based antibody-drug conjugates with novel self-immolative linkers
US10975112B2 (en) * 2015-06-16 2021-04-13 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Linkers for conjugation of cell-binding molecules
CN116726190A (zh) 2015-06-20 2023-09-12 杭州多禧生物科技有限公司 澳瑞他汀类似物及其与细胞结合分子的共轭偶联物

Also Published As

Publication number Publication date
EP3824909A1 (en) 2021-05-26
KR20220101204A (ko) 2022-07-19
CN108883198B (zh) 2022-08-09
MA45280A (fr) 2019-01-09
US20230398228A1 (en) 2023-12-14
CN108883198A (zh) 2018-11-23
IL261428A (en) 2018-10-31
MX2023003806A (es) 2023-04-12
MX2023003808A (es) 2023-04-12
PH12018501847A1 (en) 2019-05-15
PL3423105T3 (pl) 2021-10-25
SG11201806515RA (en) 2018-09-27
KR20220101203A (ko) 2022-07-19
TWI772288B (zh) 2022-08-01
KR20180115330A (ko) 2018-10-22
JP2020128413A (ja) 2020-08-27
JP6599019B2 (ja) 2019-10-30
NZ744808A (en) 2024-04-26
KR102445255B1 (ko) 2022-09-22
JP2024174991A (ja) 2024-12-17
EP3423105A1 (en) 2019-01-09
JP6870051B2 (ja) 2021-05-12
LT3423105T (lt) 2021-09-10
RS62108B1 (sr) 2021-08-31
AU2023285804A1 (en) 2024-01-18
JP2021185176A (ja) 2021-12-09
MD3423105T2 (ro) 2021-10-31
JP7556086B2 (ja) 2024-09-25
MX2018010562A (es) 2019-02-20
MY199595A (en) 2023-11-08
CN114272389B (zh) 2023-04-18
IL261428B2 (en) 2025-10-01
IL320940A (en) 2025-07-01
CA3013791A1 (en) 2017-09-08
BR112018067379A2 (pt) 2019-01-15
SMT202100416T1 (it) 2021-09-14
RU2018134331A3 (uk) 2020-08-14
CL2018002456A1 (es) 2018-12-21
US10548986B2 (en) 2020-02-04
JP2020019787A (ja) 2020-02-06
TWI825834B (zh) 2023-12-11
KR102456433B1 (ko) 2022-10-19
JP2023082096A (ja) 2023-06-13
CL2021000048A1 (es) 2021-05-28
RU2754369C2 (ru) 2021-09-01
MX2023003809A (es) 2023-04-12
HUE054726T2 (hu) 2021-09-28
AR121301A2 (es) 2022-05-04
ES2880402T3 (es) 2021-11-24
KR102702620B1 (ko) 2024-09-05
AU2017225982A1 (en) 2018-08-16
CN114191428A (zh) 2022-03-18
TW201800110A (zh) 2018-01-01
NZ785232A (en) 2025-05-30
IL292946B2 (en) 2024-11-01
DK3423105T3 (da) 2021-07-26
JOP20210074A1 (ar) 2023-01-30
RU2021125492A (ru) 2022-04-05
TW202408592A (zh) 2024-03-01
TWI871094B (zh) 2025-01-21
JP2019516664A (ja) 2019-06-20
JOP20210073A1 (ar) 2023-01-30
IL261428B1 (en) 2025-06-01
CN114191428B (zh) 2024-09-24
WO2017151979A1 (en) 2017-09-08
US20170252458A1 (en) 2017-09-07
PE20231049A1 (es) 2023-07-11
SG10202007520WA (en) 2020-09-29
IL292946A (en) 2022-07-01
IL292946B1 (en) 2024-07-01
AR121302A2 (es) 2022-05-04
CN114191563A (zh) 2022-03-18
CO2018008667A2 (es) 2018-08-31
US10322192B2 (en) 2019-06-18
MA45280B1 (fr) 2021-08-31
AR107787A1 (es) 2018-06-06
RU2018134331A (ru) 2020-04-02
HRP20211125T1 (hr) 2021-10-15
TW202241524A (zh) 2022-11-01
US20200297860A1 (en) 2020-09-24
KR20240007722A (ko) 2024-01-16
MY189113A (en) 2022-01-26
AU2017225982B2 (en) 2023-10-05
PE20231050A1 (es) 2023-07-11
PE20181953A1 (es) 2018-12-17
CN114272389A (zh) 2022-04-05
PT3423105T (pt) 2021-07-19
AU2023285804B2 (en) 2025-12-18
SI3423105T1 (sl) 2021-12-31
US20180193478A1 (en) 2018-07-12
JOP20170053B1 (ar) 2021-08-17
EP3423105B1 (en) 2021-05-05
JP7254861B2 (ja) 2023-04-10
CL2021000049A1 (es) 2021-05-28
CY1124628T1 (el) 2022-07-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA125024C2 (uk) Кон’югати антитіло-лікарський засіб на основі ерибуліну та способи їх застосування
CN112218663B (zh) 剪接调节抗体-药物缀合物及其使用方法
JP2021006527A (ja) 抗ｂ７−ｈ３抗体及び抗体薬物コンジュゲート
JP7791843B2 (ja) 抗ｂｃｍａ抗体－薬物コンジュゲート及び使用方法
UA120247C2 (uk) Антитіло до ceacam5 і його застосування
EP4480499A1 (en) Conjugate of antibody-eribulin or derivative thereof, intermediate thereof, preparation method therefor, pharmaceutical composition thereof and use thereof
BR112021010936A2 (pt) Conjugados anticorpo-fármaco de herboxidieno e métodos de uso
WO2025083071A2 (en) Antibody-drug conjugates
HK40053532A (en) Eribulin-based antibody-drug conjugates and methods of use
WO2025083069A1 (en) Her2-binding molecules
WO2026019375A1 (en) B7h3-binding molecules