TWI733307B

TWI733307B - Fxr(nr1h4)調節化合物

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Publication number: TWI733307B
Application number: TW109101217A
Authority: TW
Inventors: 彼得 A 布洛葛恩; 凱文Ｓ可利; 莫林梅佛瑞克; 伊莉莎白Ｍ霍斯特曼; 約書亞Ａ凱佩蘭; 傑弗瑞 E 克洛普夫; 威廉Ｊ瓦特金恩斯
Original assignee: 美商基利科學股份有限公司
Priority date: 2019-01-15
Filing date: 2020-01-14
Publication date: 2021-07-11
Also published as: AU2023200994A1; JP7265635B2; PE20211907A1; BR112021011762A2; KR20210114457A; ZA202104705B; AU2020209564A1; CO2021009240A2; AR117814A1; EA202191566A1; CA3124702A1; CN113302190B; CN113302190A; UA130079C2; US20250026744A1; DOP2021000148A; PT3911647T; SG11202107434PA; CR20210385A; DK3911647T3

Abstract

本發明大體上係關於結合至FXR並充當FXR促效劑的化合物。本發明進一步係關於該等化合物用於製備藥劑之用途及用於合成該等化合物之製程，該藥劑係用於透過該核受體與該等化合物之結合來治療疾病及/或病狀。

Description

FXR(NR1H4)調節化合物

本發明係關於與法尼醇(Farnesoid) X受體(FXR)結合且充當法尼醇X受體之促效劑或調節劑的化合物。本發明進一步係關於該等化合物用於藉由該等化合物來治療及/或預防疾病及/或病狀之用途。

當指人類受體時，通常亦稱為NR1H4 (核受體亞族1，族群H，成員4)之法尼醇X受體(FXR)為核激素受體。FXR已與多種生物功能相關聯。FXR主要在肝臟中及整個胃腸道中表現，但亦發現於腎臟、腎上腺及卵巢中。FXR與控制胞內基因表現相關聯，且可涉及旁分泌及內分泌信號傳導。在腸道及肝臟中，FXR充當膽酸穩定及肝脂肪生成之調節因子。FXR亦與庫弗(Kupffer)細胞及肝臟之肝臟竇狀隙內皮細胞相關聯，其中咸信該FXR具有與炎症、纖維變性及門靜脈高血壓相關之功能。

多種FXR促效劑為已知的，且正在結合包括肝臟疾病之多種生理學病狀予以研究。FXR促效劑可在脂肪變性、小葉炎症、肝細胞膨脹及纖維變性中具有益處。

FXR促效作用可在體內之不同區域中產生不同效果。在遠端小腸及全身性地在諸如肝臟之器官中，FXR之活化直接導致激素FGF19的表現及分泌。FGF19藉由下調膽酸合成來調節膽酸，其可例如在諸如肝臟疾病之病狀中有益。FXR促效劑亦與不利影響相關聯，諸如瘙癢性皮炎。此類不利影響及其所體驗之程度可視FXR促效作用之部位而定。舉例而言，已提出瘙癢性皮炎與非腸FXR促效作用相關聯。

仍需要FXR促效劑具有所要濃度、選擇率及降低之不利影響。

本發明提供與NR1H4受體(FXR)結合且充當FXR之促效劑或調節劑之化合物。本發明進一步係關於該等化合物用於經由該核受體由該等化合物結合來治療及/或預防疾病及/或病狀之用途。

本發明提供一種式(I)化合物：

，或其醫藥學上可接受之鹽。

一些實施例提供醫藥組合物，其包含式(I)化合物及醫藥學上可接受之賦形劑。

一些實施例提供式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽的固體形式。

本文中亦提供治療患有FXR介導之病狀之患者的方法，該等方法包含向有需要之患者投與式(I)化合物。

相關申請案之交叉參考

本專利申請案主張2019年1月15日申請之標題為「FXR (NR1H4) MODULATING COMPOUNDS」之美國臨時專利申請案第62/792,714號的優先權益，該美國臨時專利申請案之全部內容併入本文中。序列表

以文本格式代替紙張複本提供與本申請案相關聯之序列表，且特此以引用之方式併入至本說明書中。含有序列表之文本檔案之名稱為「1274_SequenceListing」。2018年12月17日創建之文本檔案為約1千位元組且以電子方式經由EFS-Web提交。

本發明係關於FXR促效劑。本發明亦關於與FXR促效劑相關之組合物及方法以及此類化合物用於經由FXR由該等化合物結合來治療及/或預防疾病及病狀之用途。本發明亦關於治療及/或防止肝臟疾病之組合物及方法，包括FXR促效劑以及一或多種額外治療劑。

FXR促效劑在肝臟及整個胃腸道中表現，其中該等FXR促效劑之作用或不作用可在肝臟之一或多種疾病(諸如NASH、PSC及/或肝纖維變性)中發揮作用。然而，FXR促效劑亦在身體之其他區域中經識別，在該情況下，其功能可變化。FGF19為廻腸之上皮細胞中之FXR的主要目標基因。廻腸FXR藉由膽酸之生理學活化導致FGF19的分泌。在肝臟中，FXR促效作用及FGF19信號傳導具有重疊及相異功能。舉例而言，兩種途徑均遏制膽酸合成。肝細胞中之FXR促效作用間接下調藉由FGF19減少之許多種相同酶。

FXR促效劑可適用於治療及防止多種病狀，包括肝臟疾病。肝臟疾病可包括例如藉由感染、損傷、正常物質在血液中之異常堆積或其他原因引起的對肝臟之急性或慢性損害。雖然許多FXR促效劑及相關類似物為已知的，但此類FXR促效劑可能受包括不良療效、代謝問題及/或不良事件的缺點影響。

本文中揭示FXR促效劑以及相關組合物及方法。本文中所揭示之FXR促效劑可出人意料地維持良好治療效果，同時最小化不利影響及不良代謝問題。

在一些實施例中，本文中描述之FXR促效劑可具有所要細胞效力。舉例而言，在一些實施例中，相對於具有較低細胞效力之化合物，高細胞效力可在所投與藥物之較低劑量下提供較高FXR促效作用。

在一些實施例中，本發明提供可在胃腸道中以降低之系統性FXR促效作用展現高水平之FXR促效作用的FXR促效劑。本文中所揭示之FXR促效劑在經口投與時可導致增加之FGF19分泌，而在靜脈內投與時導致最少FGF19增加。例如藉由降低及/或限制諸如瘙癢性皮炎之某些不良反應的可能性，或藉由降低與系統性藥物之潛在藥物間相互作用的風險，降低之系統性FXR促效作用可為有利的。

在一些實施例中，本文中所描述之FXR促效劑具有良好目標選擇率。舉例而言，本文中所描述之FXR促效劑促效FXR，且不顯著改變TGR5及/或與FXR相關之其他核激素受體的活性。在一些實施例中，相較於肝FXR，本文中所描述之FXR促效劑較佳地促效腸FXR。

有利地，本文中所揭示的經口投與之FXR促效劑可產生血漿FGF19含量之劑量依賴型增加及血清C4含量的減少，從而指示減少之膽酸合成。定義及一般參數

如本說明書中所使用，以下術語及片語一般意欲具有如下文所闡述之含義，使用其之上下文另外指示的方面除外。

本文中對「約」一值或參數之參考包括(且描述)針對彼值或參數本身之實施例。在某些實施例中，術語「約」包括指示量± 10%。在其他實施例中，術語「約」包括指示量± 5%。在某些其他實施例中，術語「約」包括指示量± 1%。另外，術語「約X」包括對「X」之描述。另外，除非上下文另外明確規定，否則單數形式「一」及「該」包括複數個參考物。因此，例如對「化合物」之參考包括複數種此類化合物，且對「檢定」之參考包括對熟習此項技術者已知的一或多種檢定及其等效物之參考。

本文中經說明性描述之揭示內容可在無本文中未特定揭示之任何一或多個元件、一或多個限制的情況下予以適當實踐。因此，舉例而言，應廣泛且非限制性地理解術語「包含」、「包括」、「含有」等。另外，本文中所採用之術語及表述已用作描述而非限制之術語，且在使用此類術語及表述時，不存在排除所展示及所描述的特徵或其部分之任何等效物的意圖，但應認識到，所主張之本發明之範疇內的各種修改為可能的。

在一些實施例中，本發明之化合物可呈「前藥」之形式。在醫藥領域中將術語「前藥」定義為藥物之生物學上非活性衍生物，其在向人體投與之後，根據一些化學或酶路徑而轉化為生物學上活性的母體藥物。前藥之實例包括酯化羧酸。

在人類肝臟中，UDP-葡萄糖醛酸基轉移酶作用於具有胺基、胺甲醯基、硫基(巰基)或羥基之某些化合物上以經由糖苷鍵共軛尿苷二磷酸-α-D-葡糖醛酸，或在II期代謝之過程中使具有羧基或羥基的化合物酯化。本發明之化合物可經葡萄糖醛酸苷化，亦即與葡糖醛酸共軛以形成葡萄糖苷酸，尤其(β-D)葡萄糖苷酸。

膽液之形成中的一個步驟為個別膽酸與胺基酸共軛，尤其與甘胺酸或牛磺酸共軛。本發明之化合物可在可取代位置處與甘胺酸或牛磺酸共軛。

本發明之化合物可呈醫藥學上可接受之鹽的形式。術語「醫藥學上可接受之鹽」係指由醫藥學上可接受之無毒鹼或無毒酸製備的鹽，該等無毒鹼或無毒酸包括無機鹼或無機酸及有機鹼或有機酸。本發明之化合物可呈醫藥學上可接受之鹽的形式。術語「醫藥學上可接受之鹽」係指由醫藥學上可接受之無毒鹼或無毒酸製備的鹽，該等無毒鹼或無毒酸包括無機鹼或無機酸及有機鹼或有機酸。倘若本發明之化合物含有一或多種酸基或鹼基，則本發明亦包含其對應醫藥學上或毒理學上可接受之鹽，特定言之，其醫藥學上可利用之鹽。因此，含有酸基之本發明之化合物可存在於此等基團上，且可根據本發明例如用作鹼金屬鹽、鹼土金屬鹽或銨鹽。此類鹽之更精確實例包括鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽，或具有諸如例如乙胺、乙醇胺、三乙醇胺、胺基酸之氨或有機胺或熟習此項技術者所已知的其他鹼之鹽。含有一或多個鹼基(亦即可經質子化之基團)之本發明的化合物可存在，且可根據本發明以其與無機酸或有機酸之加成鹽的形式予以使用。合適的酸之實例包括氯化氫、溴化氫、磷酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、對甲苯磺酸、萘二磺酸、草酸、乙酸、酒石酸、乳酸、柳酸、苯甲酸、甲酸、丙酸、特戊酸、二乙基乙酸、丙二酸、丁二酸、庚二酸、反丁烯二酸、順丁烯二酸、蘋果酸、胺基硫酸、苯基丙酸、葡萄糖酸、抗壞血酸、異菸酸、檸檬酸、己二酸及熟習此項技術者已知的其他酸。

若本發明之化合物在分子中同時含有酸基及鹼基，則本發明除所提及鹽形式以外亦包括內鹽或甜菜鹼(兩性離子)。各別鹽可藉由熟習此項技術者已知的習用方法而獲得，如例如藉由使此等鹽在溶劑或分散劑中與有機酸或鹼或無機酸或鹼接觸，或藉由與其他鹽進行陰離子交換或陽離子交換。

在一些實施例中，式(I)化合物之醫藥學上可接受之鹽包括兩性離子。舉例而言，式(I)化合物可如下形成兩性離子：

本發明亦包括本發明之化合物之所有鹽，該等鹽由於低生理相容性而並不直接適用於藥品，但可用作例如化學反應或製備醫藥學上可接受之鹽的中間物。適用於與基礎化合物反應以形成醫藥學上可接受之鹽(分別為酸加成或鹼加成鹽)的酸及鹼為熟習此項技術者所已知。類似地，由基礎化合物(根據本發明)製備醫藥學上可接受之鹽的方法為熟習此項技術者所已知，且揭示於例如Berge等人Journal of Pharmaceutical Science, 1977年1月第66卷, 第1期及其他來源中。

此外，本文中所揭示之化合物可經歷互變異構。在化合物或其前藥之互變異構(例如酮烯醇互變異構)可發生時，如例如酮基及烯醇形式之個別形式以及其呈任何比率的混合物各自在本發明之範疇內。相同情況適用於立體異構體，如例如對映異構體、順式/反式異構體、非對映異構體、構象異構體及其類似者。

術語「保護基」係指化合物中可遮掩或改變官能基之特性或整個化合物之特性的部分。用於保護/去保護之化學保護基及策略為此項技術中熟知的。參見例如Protective Groups in Organic Chemistry, Theodora W. Greene, John Wiley & Sons, Inc., New York, 1991。保護基通常用以遮掩某些官能基之反應性，以輔助所要化學反應之功效，例如從而以有序及計劃方式形成及破壞化學鍵。術語「去保護」係指移除保護基。

「脫離基」包括在化學反應期間可自共價鍵脫離一對電子至反應碳原子之分子片段。

熟習此項技術者將瞭解，當可替代取代基之清單包括由於其價數需求或其他原因而不能用以取代特定基團的成員時，該清單意欲用熟習此項技術者之知識來理解以僅包括適用於取代特定基團之該清單的彼等成員。

此外，本發明之化合物可以溶劑合物之形式存在，諸如包括為水溶劑合物或醫藥學上可接受之溶劑合物(諸如醇，特定言之，乙醇)之彼等。「溶劑合物」係藉由溶劑與化合物之相互相用而形成。

在某些實施例中，提供本文中所描述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或混合物的光學異構體、外消旋體或其他混合物。視需要，可藉由此項技術中熟知的方法，例如藉由液相層析來分離異構體。在彼等情形中，單一對映異構體或非對映異構體(亦即光學活性形式)可藉由不對稱合成或藉由解析來獲得。解析可例如藉由習知方法實現，諸如在存在解析劑之情況下的結晶，或使用例如對掌性高壓液相層析(HPLC)管柱之層析。

「立體異構體」係指由藉由相同鍵鍵結之相同原子構成但具有不可互換之不同三維結構的化合物。本發明涵蓋各種立體異構體及其混合物且包括「對映異構體」，該等對映異構體係指分子互為不可重疊鏡像之兩種立體異構體。「非對映異構體」為具有至少兩個不對稱原子但不互為鏡像之立體異構體。

在一些實施例中，本文中所揭示之化合物及其醫藥學上可接受之鹽可包括不對稱中心，且可因此產生對映異構體、非對映異構體及就絕對立體化學而言可針對胺基酸經定義為以下各者之其他立體異構形式：(R )-或(S )-或(D)-或(L)-。一些實施例包括所有此類可能的異構體，以及其外消旋及光學純形式。光學活性(+)及(-)、(R )-及(S )-或(D)-及(L)-異構體可使用對掌性合成子或對掌性反應劑來製備，或使用習知技術(例如層析及分步結晶)來解析。用於製備/分離個別對映異構體之習知技術包括自合適的光學純前驅體進行的對掌性合成或使用例如對掌性高壓液相層析(HPLC)對外消旋體(或鹽或衍生物之外消旋體)進行的解析。當本文中所描述之化合物含有烯系雙鍵或其他幾何不對稱中心時，且除非另外說明，否則意欲化合物包括E 及Z 幾何異構體兩者。

包括本文中所描述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、異構體或混合物的本文中所提供之組合物可包括外消旋混合物或含有對映異構體過量之一種對映異構體或單一非對映異構體或非對映異構體混合物的混合物。此等化合物之所有此類異構形式明確地包括於本文中，如同具體且分別地列舉每一種異構形式一樣。

本文中所給定之任何式或結構亦意欲表示化合物的未經標記之形式以及經同位素標記之形式。經同位素標記之化合物具有由本文中給定之式所描繪的結構，其例外之處在於一或多個原子由具有所選原子質量或質量數之原子置換。可併入至本發明之化合物中之同位素的實例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟及氯之同位素，諸如但不限於² H (氘，D)、³ H (氚)、¹¹ C、¹³ C、¹⁴ C、¹⁵ N、¹⁸ F、³¹ P、³² P、³⁵ S、³⁶ Cl及¹²⁵ I。本發明之各種經同位素標記之化合物，例如併入諸如³ H、¹³ C及¹⁴ C之放射性同位素的彼等化合物。此類經同位素標記之化合物可適用於代謝研究、反應動力學研究、偵測或成像技術(諸如正電子發射斷層攝影法(PET)或單光子發射電腦斷層攝影法(SPECT)，包括藥物或受質組織分佈檢定)或對患者之放射性治療。本發明的經同位素標記之化合物及其前藥可一般藉由進行下文所描述之流程中或實例及製備中所揭示的程序，藉由用易於獲得的經同位素標記之反應劑取代未經同位素標記之反應劑來製備。

本發明亦包括本文中所揭示之化合物的「氘化類似物」，其中連接至碳原子之1至n個氫經氘置換，其中n為分子中之氫的數目。此類化合物可呈現增加之代謝抗性，且因此適用於在向哺乳動物(例如人類)投與時增加任何式I化合物之半衰期。參見例如Foster, 「Deuterium Isotope Effects in Studies of Drug Metabolism」, Trends Pharmacol. Sci. 5(12):524-527 (1984)。此類化合物藉助於此項技術中熟知的手段來合成，例如藉由採用一或多個氫已由氘置換之起始物質。

本發明的經氘標記或取代之治療性化合物可具有與分佈、代謝及排泄(ADME)相關之有益DMPK (藥物代謝及藥物動力學)特性。用較重同位素(諸如氘)取代可得到由較大代謝穩定性產生之某些治療性優點，例如增加之活體內半衰期、降低之劑量需求及/或治療指數的提高。經¹⁸ F標記之化合物可適用於PET或SPECT研究。

可藉由同位素增濃因子來界定此較重同位素(尤其氘)之濃度。在本發明之化合物中，未具體指定為特定同位素之任何原子意欲表示該原子的任何穩定同位素。除非另外陳述，否則當位置經具體指定為「H」或「氫」時，應理解為該位置在其天然豐度同位素組成中具有氫。因此，在本發明之化合物中，具體指定為氘(D)之任何原子意欲表示氘。

此外，本發明提供醫藥組合物，其包含本發明之化合物，或其前藥化合物，或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物與醫藥學上可接受之載劑一起作為活性成分。

「醫藥組合物」意謂一或多種活性成分及構成載劑之一或多種惰性成分，以及由任何兩種或多於兩種成分組合、複合或聚集，或由成分中之一或多者解離，或由成分中之一或多者的其他類型的反應或相互作用直接或間接產生之任何產物。因此，本發明之醫藥組合物可涵蓋藉由將本發明之至少一種化合物與醫藥學上可接受之載劑摻合而製得的任何組合物。

如本文中所使用，「醫藥學上可接受之載劑」包括賦形劑，或諸如溶劑、稀釋劑、分散介質、塗層、抗菌劑及抗真菌劑之試劑、等滲劑及吸收延緩劑及其類似者，該等載劑對所揭示化合物或其使用為無害的。此類載劑及試劑用以製備醫藥學上活性物質之組合物的用途在此項技術中為熟知的(參見例如 Remington's Pharmaceutical Sciences, Mace Publishing Co., Philadelphia, PA第17版(1985)；及Modern Pharmaceutics, Marcel Dekker, Inc. 第3版(G.S. Banker & C.T. Rhodes, 編)。

術語「治療有效量」與「有效量」可互換使用，且係指當以一或多次劑量向需要此治療之患者(例如人類)投與時，足以實現如下文所定義的治療之化合物的量。治療有效量將視患者、所治療之疾病、患者之體重及/或年齡、疾病的嚴重程度或由合格處方者或護理者決定之投與方式而變化。

術語「治療(treatment/treating)」意謂出於以下目的而投與式(I)之化合物或醫藥學上可接受之鹽：(i)延遲疾病發作，亦即使得疾病之臨床症狀不發展或延緩其發展；(ii)抑制疾病，亦即遏制臨床症狀之發展；及/或(iii)緩解疾病，亦即使得臨床症狀或其嚴重程度消退。縮寫及字首語清單

縮寫	含義
(±)-BINAP	(±)-2,2'-雙(二苯基膦基)-1,1'-聯萘
2-MeTHF	2-甲基四氫呋喃
ACN或MeCN	乙腈
aq.	水溶液
Bn	苄基
BOC或Boc	第三丁氧基羰基
BSA	牛血清白蛋白
BSS	平衡鹽溶液
calcd	計算值
DAST	三氟化(二乙胺基)硫
DCM	二氯甲烷
DIBAL-H	氫化二異丁基鋁
DMF	N,N -二甲基甲醯胺
DMSO	二甲亞碸
EA	乙酸乙酯
EDTA	乙二胺四乙酸
ESI	電噴霧電離
Et	乙基
Et₂ O	乙醚
EtOAc	乙酸乙酯
FBS	胎牛血清
h或hr(s)	小時
HATU	3-氧化六氟磷酸1-[雙(二甲胺基)亞甲基]-1H -1,2,3-三唑并[4,5-b ]吡啶
HPLC	高效液相層析
IPA	異丙醇
IPTG	異丙基β-D-1-硫代哌喃半乳糖苷
LCMS或LC/MS	液相層析質譜
Me	甲基
MEM	最低必需培養基
MeOH	甲醇
MSA min	甲磺酸分鐘
MS	質譜
m/z	質荷比
NADPH	二氫菸醯胺-腺嘌呤二核苷酸磷酸酯
NMP	N -甲基吡咯啶酮
NMR	核磁共振光譜
n -BuLi	正丁基鋰
PE	石油醚
rpm	轉/分鐘
RT或rt	室溫
sat.	飽和
TBAF	氟化四丁銨
TBDMS	第三丁基二甲基矽烷基
TBS	第三丁基二甲基矽烷基
TEMPO	2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基
TFA	三氟乙酸
THF	四氫呋喃
TMS	三甲基矽烷基
UPLC	超高效液相層析

如本文中所使用，「FXR促效劑」係指能夠結合且活化可稱為膽酸受體(BAR)或NR1H4 (核受體亞族1，族群H，成員4)受體之法尼醇X受體(FXR)的任何試劑。FXR促效劑可充當FXR之促效劑或部分促效劑。該試劑可為化合物或生物分子(例如蛋白質或抗體)。FXR促效劑之活性可藉由若干種不同方法來量測，例如在試管內檢定中使用螢光共振能量轉移(FRET)無細胞檢定，如Pellicciari等人Journal of Medicinal Chemistry, 2002第15卷, 第45:3569-72號中所描述。

如本文中所提及，「ASK1抑制劑」可為能夠不活化凋亡信號調節激酶1 (ASK1)蛋白質之任何試劑。該試劑可為化合物或生物分子(例如蛋白質或抗體)。ASK1蛋白質活性可藉由若干種不同方法來量測。舉例而言，ASK1蛋白質之活性可基於ASK1蛋白質磷酸化受質蛋白質的能力來確定。用於識別ASK1抑制劑之方法為已知的(參見例如U.S. 2007/0276050及U.S. 2011/0009410，其兩者均以全文引用之方式併入本文中)。例示性ASK1受質蛋白質包括MAPKK3、MAPKK4、MAPKK6、MAPKK7或其片段。ASK1蛋白質活性亦可藉由ASK1蛋白質之磷酸化水平來量測，例如對應於人類全長ASK1蛋白質之蘇胺酸838 (T838)或小鼠全長ASK1蛋白質的蘇胺酸845 (T845)的蘇胺酸殘餘物在ASK1蛋白質中之磷酸化水平。舉例而言，在ASK1蛋白質包含全長人類ASK1蛋白質序列之情況下，ASK1抑制劑可減弱全長人類ASK1蛋白質序列中之T838的磷酸化。針對人類ASK1 T838或小鼠ASK1 T845之部位特異性抗體可用以偵測磷酸化水平。

如本文中所使用，「ACC抑制劑」係指能夠結合且抑制乙醯基-CoA羧化酶(ACC)之任何試劑。ACC抑制劑可充當ACC之抑制劑或部分抑制劑。該試劑可為化合物或生物分子(例如蛋白質或抗體)。ACC抑制劑之活性可藉由此項技術中已知的方法來量測，諸如在美國專利第8,969,557號中及/或在美國專利申請公開案第20160108061號中所描述及引用之彼等方法。

如本文中所使用，「甲狀腺激素受體β促效劑」或「THR β促效劑」係指能夠結合且活化可稱為NR1A2 (核受體亞族1，族群A，成員2)受體之甲狀腺激素受體β的任何試劑。THR β促效劑可充當THR β之促效劑或部分促效劑。該試劑可為化合物或生物分子(例如蛋白質或抗體)。THR β促效劑之活性可藉由已知方法來量測。化合物

本文中提供一種化合物，其具有下式(I)：

或其醫藥學上可接受之鹽。

在一些實施例中，醫藥學上可接受之鹽為甲磺酸鹽。舉例而言，提供下式之化合物：

固體形式

在一些實施例中，本發明提供式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽的固體形式。諸如結晶形態之固體形式可提供可在醫藥組合物中適用作活性成分之生物可用性及穩定性的優點。

醫藥原料藥或活性成分之晶體結構的變化可影響醫藥藥品或活性成分之溶解速率(其可影響生物可用性等)、可製造性(例如易於處置、一致地製備已知強度之劑量的能力)及穩定性(例如熱穩定性、貯藏壽命等)。此類變化可影響呈不同劑量或遞送形式(諸如溶液或包括錠劑及膠囊之固體口服劑型)之醫藥組合物的製備或調配。與諸如非結晶或非晶形式之其他形式相比，結晶形態可提供所要或合適的吸濕性、粒徑控制、溶解速率、可溶性、純度、物理及化學穩定性、可製造性、產率及/或製程控制。

在一些實施例中，提供式(I)化合物之穩定固體形式。舉例而言，式(I)之甲磺酸鹽可經產生為穩定結晶形態，其在多種製造條件下並不轉化為其他多晶形式及/或形成為相同多晶形式。

因此，式I化合物之結晶形態可提供諸如改良以下各者之優點：化合物之製造製程、化合物之藥品形式的穩定性或儲存性、化合物之原料藥的穩定性或儲存性及/或化合物作為活性劑之生物可用性及/或穩定性。

在一些實施例中，固體形式為式(I)甲磺酸鹽形式I。

式(I)甲磺酸鹽形式I可藉由X射線粉末繞射圖來表徵，其中該固體形式呈現實質上如圖4中所示之X射線粉末繞射(XRPD)圖案。式(I)甲磺酸鹽形式I可呈現實質上如圖5中所示之差示掃描熱量測定(DSC)熱分析圖。式(I)甲磺酸鹽形式I可呈現實質上如圖6中所示之熱解重量分析(TGA)熱分析圖。

在式(I)甲磺酸鹽形式I之一些實施例中，以下(a)至(c)中之至少一者、至少兩者或全部適用：(a)式(I)甲磺酸鹽形式I具有實質上如圖4中所示之XRPD圖案；(b)式(I)甲磺酸鹽形式I具有實質上如圖5中所示之DSC熱分析圖；(c)式(I)甲磺酸鹽形式I具有實質上如圖6中所示之TGA熱分析圖。

在一些實施例中，式(I)甲磺酸鹽形式I具有以下特性中之至少一者、至少兩者或至少三者： (a) 實質上如圖4中所示之XRPD圖案 (b) 實質上如圖5中所示之DSC熱分析圖 (c) 實質上如圖6中所示之TGA熱分析圖。

在一些實施例中，式(I)甲磺酸鹽形式I具有展現度數2θ反射中的至少兩個、至少三個、至少四個、至少五個、至少六個、至少七個、至少八個或至少九個之XRPD圖案，其中最大強度如實質上如圖4中所示之XRPD圖案。

在某些實施例中，式(I)甲磺酸鹽形式I具有包含在9.6度、19.3度及22.6度處之度數2θ反射(±0.2度2θ)的XRPD圖案。在一些實施例中，式(I)甲磺酸鹽形式I具有包含在9.6度、19.3度及22.6度處之度數2θ反射(±0.2度2θ)及在3.2度、6.4度及12.8度處之度數2θ反射(±0.2度2θ)中之一者、兩者或三者的XRPD圖案。在一些實施例中，式(I)甲磺酸鹽形式I具有包含在9.6度、19.3度及22.6度處之度數2θ反射(±0.2度2θ)及在22.1度、25.8度及29.1度處之度數2θ反射(±0.2度2θ)中之一者、兩者或三者的XRPD圖案。在一些實施例中，式(I)甲磺酸鹽形式I具有包含在9.6度、19.3度、22.6度、3.2度、6.4度、12.8度、22.1度、25.8度及29.1度處之度數2θ反射(±0.2度2θ)的XRPD圖案。

在一些實施例中，式(I)甲磺酸鹽形式I具有包含在約221℃處開始之吸熱峰的差示掃描熱量測定熱分析圖。醫藥組合物及投與模式

此外，本發明提供醫藥組合物，其包含本發明之至少一種化合物，或其前藥化合物，或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物與醫藥學上可接受之載劑一起作為活性成分。

本發明之醫藥組合物可另外包含如前藥化合物或其他核受體調節劑之一或多種其他化合物作為活性成分。

儘管在任何給定情況下之大多數合適的途徑將視所治療病狀之性質及嚴重程度以及活性成分之性質而定，但組合物適合於經口、經直腸、局部、非經腸(包括皮下、肌肉內及靜脈內)、眼(經眼)、經肺(經鼻或頰內吸入)或經鼻投與。該等組合物可方便地以單位劑型呈現且藉由藥劑學技術中熟知的任何方法來製備。

在實際使用中，本發明之化合物可作為緊密摻合物中之活性成分根據習知醫藥化合技術而與醫藥載劑組合。載劑可視投與(例如經口或非經腸(包含靜脈內))所需之製劑形式而採取多種形式。在製備用於口服劑型之組合物時，在諸如例如懸浮液、酏劑及溶液之經口液體製劑；或諸如澱粉、糖、微晶纖維素、稀釋劑、成粒劑、潤滑劑、黏合劑、崩解劑及其類似者之載劑的情況下，在諸如例如粉劑、硬質及軟質膠囊以及錠劑之經口固體製劑的情況下(其中相較於液體製劑，固體口服製劑為較佳的)，可採用常用醫藥介質中之任一者，諸如例如水、二醇、油、醇、調味劑、防腐劑、著色劑及其類似者。

因為錠劑及膠囊易於投與，所以其表示最有利之口服單位劑型，在此情況下採用固體醫藥載劑。若需要，錠劑可藉由標準水性或非水性技術來包覆。此類組合物及製劑應含有至少0.1%之活性化合物。當然，此等組合物中之活性化合物的百分比可變化，且可宜在單位重量之約2%至約60%之間。此類治療有用之組合物中之活性化合物的量使得將獲得有效劑量。活性化合物亦可以例如液滴或噴霧形式經鼻內投與。

錠劑、丸劑、膠囊及其類似者亦可含有黏合劑，諸如黃蓍膠、阿拉伯膠、玉米澱粉或明膠；賦形劑，諸如磷酸二鈣；崩解劑，諸如玉米澱粉、馬鈴薯澱粉、褐藻酸；潤滑劑，諸如硬脂酸鎂；及甜味劑，諸如蔗糖、乳糖或糖精。當單位劑型為膠囊時，除以上類型之材料以外，該單位劑型可含有液體載劑，諸如脂肪油。

各種其他材料可以包衣形式存在或用以修改劑量單位之物理形式。舉例而言，錠劑可經包覆有蟲膠、糖或兩者。除活性成分之外，糖漿或酏劑可含有作為甜味劑之蔗糖、作為防腐劑之甲基及對羥基苯甲酸丙酯、染料及調味劑(諸如櫻桃香料或橙香料)。

在一些實施例中，本發明之化合物亦可用作具有各種反陽離子之鹽以得到可口服的調配物。

本發明之化合物亦可非經腸投與。此等活性化合物之溶液或懸浮液可在與諸如羥基-丙基纖維素之界面活性劑適當混合之水中製備。亦可在甘油、液體聚乙二醇及其於油中之混合物中製備分散液。在普通的儲存及使用條件下，此等製劑含有防腐劑以防止微生物生長。

適合於可注射用途之醫藥形式包括無菌水溶液或分散液及用於臨時製備無菌可注射溶液或分散液的無菌散劑。在所有情況下，形式必須為無菌的，且必須在易於注射性存在之程度上為流體。其在製造及儲存條件下必須穩定，且必須保藏以防諸如細菌及真菌之微生物的污染作用。載劑可為含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇及液體聚乙二醇)、其合適的混合物及植物油之溶劑或分散介質。

可採用用於為尤其人類之哺乳動物提供有效劑量的本發明之化合物之任何合適的投與途徑。舉例而言，可採用經口、經直腸、局部、非經腸、眼部、經肺、經鼻及其類似途徑。劑型包括錠劑、糖衣錠、分散液、懸浮液、溶液、膠囊、乳膏、軟膏、氣溶膠及其類似者。在一些實施例中，本發明之化合物經口投與。套組

本文中亦提供套組，其包括本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、互變異構體、立體異構體、立體異構體混合物、前藥或氘化類似物及合適的包裝。在一個實施例中，套組進一步包括使用說明書。在一個態樣中，套組包括本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、互變異構體、立體異構體、立體異構體混合物、前藥或氘化類似物，以及該等化合物在治療適應症(包括本文中所描述的疾病或病狀)中之用途的標籤及/或說明書。

本文中亦提供製品，其包括合適的容器中之本文中所描述的化合物或其醫藥學上可接受之鹽、互變異構體、立體異構體、立體異構體混合物、前藥或氘化類似物。容器可為小瓶、廣口瓶、安瓿、預裝載注射器及靜脈袋。治療方法及用途

「治療(treatment/treating)」為用於獲得包括臨床結果之有益或所要結果的方法。有益或所要臨床結果可包括以下各者中之一或多者：(a)抑制該疾病或病狀(例如減少由該疾病或病狀導致之一或多種症狀及/或減輕該疾病或病狀的程度)；(b)減緩或遏制與該疾病或病狀相關聯之一或多種臨床症狀的發展(例如使該疾病或病狀穩定，防止或延遲該疾病或病狀之惡化或進展，及/或防止或延遲該疾病或病狀之擴散(例如轉移))；及/或(c)緩解該疾病，亦即使臨床症狀消退(例如改善疾病病況，提供該疾病或病狀之部分或總體緩解，增強另一藥物治療之效果，延遲該疾病之進展，提高生活品質及/或延長存活期)。

「防止(prevention或preventing)」意謂使疾病或病狀之臨床症狀不發展的對疾病或病狀之任何治療。在一些實施例中，可向具有該疾病或病狀之風險或具有該疾病或病狀之家族病史的受試者(包括人類)投與化合物。

「受試者」係指已成為或將成為治療、觀察或實驗之對象的動物，諸如哺乳動物(包括人類)。本文中所描述之方法可適用於人類療法及/或獸醫學應用。在一些實施例中，受試者為哺乳動物。在一個實施例中，受試者為人類。

本文中所描述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、互變異構體、立體異構體、立體異構體混合物、前藥或氘化類似物的術語「治療有效量」或「有效量」意謂當向受試者投與時足以實現治療以提供諸如改善症狀或減緩疾病進展之治療效益的量。舉例而言，治療有效量可為足以回應於FXR促效作用而減少疾病或病狀之症狀的量。治療有效量可視待治療之受試者及疾病或病狀、受試者之體重及年齡、該疾病或病狀的嚴重程度及投與方式而變化，其可容易地由吾人或一般技術者判定。

本發明進一步係關於本文中所揭示之化合物用於經由該核受體由該等化合物結合來治療及/或預防疾病及/或病狀之用途。此外，本發明係關於該等化合物用於製備藥劑之用途，該藥劑用於經由該核受體由該等化合物結合來治療及/或預防疾病及/或病狀。

在一些實施例中，本發明係關於根據式(I)之化合物在製備藥劑中的用途，該藥劑用於預防及/或治療慢性肝內或一些形式之肝外膽汁鬱積性病狀；肝纖維變性；急性肝內膽汁鬱積性病狀；起因於不當膽液組成之阻塞性或慢性發炎性病症；具有減少之飲食脂肪及脂溶性飲食維生素吸收的胃腸道病狀；發炎性腸病；脂質及脂蛋白病症；II型糖尿病以及I型及II型糖尿病之臨床併發症；歸因於強制脂質及(特定言之)三甘油酯積聚及促纖維變性途徑的後續活化而因器官之慢性脂肪及纖維變性退化所導致的病狀及疾病；肥胖及代謝症候群(血脂異常、糖尿病及異常高身體質量指數之組合病狀)；急性心肌梗塞；急性中風；以慢性阻塞性動脈粥樣硬化呈現之結果所出現的血栓；因胞內細菌或寄生原生動物之持久性感染；非惡性過度增殖性病症；惡性過度增殖性病症；特定言之，結腸腺癌及肝細胞癌；肝脂肪變性及相關症候群；以慢性肝臟疾病或外科肝臟切除之結果呈現的肝臟衰竭或肝功能障礙；B型肝炎感染；C型肝炎感染；及/或與酒精誘發之肝硬化或與病毒媒介形式之肝炎相關聯的膽汁鬱積及纖維變性作用。

如本文中所提及之藥劑可藉由習知製程來製備，包括根據本發明之化合物與醫藥學上可接受之載劑的組合。

FXR可調節膽酸在肝臟中之合成輸出及其在腸道中之回收(藉由調節膽酸結合蛋白)。FXR涉及對與病源學相關之許多種生理學過程的調節，且用於治療以下各者之疾病：膽固醇膽結石；代謝障礙，諸如II型糖尿病、血脂異常或肥胖；慢性發炎疾病，諸如發炎性腸病；或慢性肝內形式之膽汁淤積。

FXR調節肝臟中及胃腸道中之反應基因的複雜模式。基因產物對各種生理學過程具有影響。舉例而言，FXR抑制經由編碼SHP (對LRH-1顯性抑制的另一核受體)之mRNA之上調對Cyp7A1的誘導。因為FXR結合原發性膽酸(此途徑之最終產物)，所以此可被視為對基因表現水平之回饋抑制的實例。

FXR配位體誘導膽液流動，且朝向更親水性組成來改變膽酸組成。藉由研發作為工具化合物之第一合成FXR配位體GW4064及半合成人工膽酸配位體6-α-乙基-CDCA，可分析藉由強效促效劑對FXR之過度刺激的效果。展示出兩種配位體在膽管結紮動物中均誘導膽汁流動。此外，除利膽藥作用以外，亦可展現保肝作用。此等保肝作用包括由組織抑制劑對基質金屬蛋白酶TIMP-1及2之抑制造成的抗纖維變性作用、肝星形細胞中之膠原蛋白沈積解析基質金屬蛋白酶2的誘導及α膠原蛋白mRNA及轉型生長因子β (TGF-β) mRNA (其兩者皆為促纖維變性因子)之後續減少。

此外，展現在膽管結紮動物模型中以及在雌性激素誘發之膽汁淤積之動物模型中的抗膽汁鬱積性活性。基因研究展現，在遺傳形式之膽汁淤積(進展性家族性肝內膽汁淤積= PFIC，I至IV型)中，FXR自身之任一核定位由於FIC1基因(在I型PFIC中，亦稱作貝勒氏病(Byler´s Disease))之突變而降低(F. Chen等人, Gastroenterology 2004, 126, 756; L. Alvarez等人, Hum. Mol. Genet. 2004, 13, 2451)，或編碼MDR-3磷脂輸出泵之FXR目標基因的含量降低(在III型PFIC中)。存在愈來愈多的FXR結合化合物可在諸如原發性膽汁性肝硬化(PBC)或原發性硬化性膽管炎(PSC)之慢性膽汁鬱積性病狀之治療方案中展現實質性臨床效用的證據。

FXR促效劑可適用於防止膽固醇膽結石形成，或防止在外科移除或衝擊波震波碎石之後再形成膽結石。舉例而言，使用合成FXR工具化合物GW4064，可展現，FXR之活化使得膽固醇飽和指數(CSI)提高，且直接使得C57L膽結石敏感小鼠中之膽結石形成去除，而FXR基因剔除小鼠中之藥物治療展示對膽結石形成無影響。因此，在本發明之一個實施例中，根據式(I)之化合物及包含該化合物的醫藥組合物用於預防及/或治療起因於不當膽液組成(諸如膽石症，亦稱為膽固醇膽結石)之阻塞性或慢性發炎性病症。

FXR促效劑可適用於保護腸道不受贅生性轉型及瘜肉生長及其在消化道中向腺癌之轉變的影響。FXR之缺失導致肝細胞癌(HCC) (最顯著的肝癌形式)之形成的較高增加。功能性FXR防止形成結腸腺癌及肝細胞癌，而FXR活化在肝切除之後誘導肝臟再生。

與FXR活化相關聯的經組合之保肝、抗贅生性及肝臟再生作用可在治療上予以採用以供在治療嚴重肝臟疾病時使用FXR促效劑。在一個實施例中，根據本發明之化合物及包含該等化合物之醫藥組合物用於治療諸如HCC的肝臟疾病、刺激肝臟再生及減輕與大肝切除相關聯之副作用、獨立於病源學之肝硬化及在肝臟移植或大肝手術之過程中防止或治療肝臟局部缺血。

此外，FXR可為血清三酸甘油酯之關鍵調節因子。FXR藉由合成促效劑之活化可主要以減少之VLDL形式導致血清三酸甘油酯的顯著減少，而且導致減少之總血清膽固醇。血清三酸甘油酯之降低並非獨立作用。用合成FXR促效劑GW4064治療db/db或ob/ob小鼠導致血清三酸甘油酯、總膽固醇、游離脂肪酸及酮體(諸如3-OH丁酸酯)之顯著及組合式減少。此外，FXR活化與肝細胞中之細胞內胰島素信號傳導路徑相結合，使得肝臟葡糖新生之葡萄糖輸出減少，但伴隨著肝糖原的增加。胰島素敏感度以及葡萄糖耐受性受FXR治療積極影響。最近亦在過度餵食高脂質飲食之小鼠中觀測到對體重降低之作用。此體重減輕作用可能係由FXR對FGF-19之誘導造成，該FGF-19為已知導致體重減輕及運動表現型之纖維母細胞生長因子。已展現FXR促效劑對體重降低之作用。

因此，可在不同治療方式中採用FXR促效劑：歸因於其胰島素敏感化、糖原性及脂質降低作用，FXR結合化合物被視為用於治療II型糖尿病之良好候選者。

在一個實施例中，根據本發明之化合物及包含該等化合物之醫藥組合物用於預防及/或治療II型糖尿病，該II型糖尿病可藉由肝臟中的系統性胰島素敏感度及胞內胰島素信號傳導之FXR介導的上調、外周葡萄糖吸收及代謝增加、肝臟中之肝糖儲存增加、葡萄糖自肝源性葡糖新生向血清中之輸出減小而克服。

在另一實施例中，該等化合物及醫藥組合物用於預防及/或治療慢性肝內(諸如PBC、PSC)進展性家族性膽汁淤積(PFIC)、酒精誘發之肝硬化及相關膽汁鬱積以及一些形式之肝外膽汁鬱積性病狀或肝纖維變性。

本發明亦關於一種式(I)化合物或包含該化合物之醫藥組合物，其用於預防及/或治療對飲食脂肪及脂溶性飲食維生素之吸收降低的胃腸道病狀，該等胃腸道病狀可藉由增加膽酸及磷脂之腸道含量而克服。

在另一實施例中，該化合物或醫藥組合物用於防止及/或治療選自由以下各者組成之群的疾病：脂質及脂蛋白病症，諸如高膽固醇血症、高三酸甘油酯血症及動脈粥樣硬化，其作為可藉由FXR對降低總血漿膽固醇、降低血清三酸甘油酯、增加肝臟膽固醇向膽酸之轉化及增加肝臟中之VLDL及其他脂蛋白的清除率及代謝性轉化率之有益影響而予以改善的臨床表現病狀。

在另一實施例中，該化合物及醫藥組合物用於預防及/或治療疾病，其中可採用FXR靶向藥物之組合脂質降低、抗膽汁鬱積及抗纖維變性作用，以用於治療肝脂肪變性及相關症候群(諸如非酒精性脂肪變性肝炎(NASH))，或用於治療與酒精誘發的肝硬化或病毒媒介形式之肝炎相關聯的膽汁鬱積及纖維變性作用。

結合降血脂作用，展示功能性FXR之損失導致ApoE基因剔除小鼠中之動脈粥樣硬化增加。因此，FXR促效劑可具有作為抗動脈粥樣硬化及心臟保護藥物之臨床效用。血管平滑肌細胞中之內皮素-1之下調亦可促成此有益治療效果。

本發明亦關於一種根據式(I)之化合物或包含該化合物之醫藥組合物，其用於以慢性阻塞性動脈粥樣硬化呈現的結果所出現之心血管病症(諸如急性心肌梗塞、急性中風或血栓)的預防及創傷後治療。

除控制腸道及結腸瘜肉形成以外，FXR似乎在乳癌組織及細胞系中但不在健康乳腺組織中表現，且似乎與ER陽性乳癌細胞中之雌激素受體相互作用。因此，FXR可為用於治療增殖性疾病(尤其表現FXR之回應形式的小分子的轉移癌症形式)之潛在目標。

在另一實施例中，該等化合物及醫藥組合物用於預防及/或治療惡性過度增殖性病症，諸如不同形式之癌症，特定言之，與FXR配位體之干擾將具有有益影響的某些形式之乳癌、肝癌或結腸癌。

FXR可涉及控制腸道中之抗菌防禦。FXR促效劑可在發炎性腸病(IBD)之治療中具有有益影響。舉例而言，在腸道之上部(廻腸)部分受影響之IBD形式(例如廻腸克羅恩氏病(Crohn´s disease))中，FXR促效劑可經由細菌生長之FXR介導的控制具有有利效果。在IBD中，腸道免疫系統中之應變性免疫反應之去敏在某種程度上受損。細菌過度生長隨後可為形成慢性發炎反應之原因觸發子。因此，藉由FXR媒介機制抑制細菌生長可為防止急性發炎事件之關鍵機制。

因此，本發明亦關於一種根據式(I)之化合物或包含該化合物之醫藥組合物，其用於防止及/或治療與發炎性腸病相關的疾病，諸如克羅恩氏病或潰瘍性結腸炎。咸信FXR介導之腸障壁功能恢復及非共生細菌負荷降低有助於減少細菌抗原暴露於腸道免疫系統，且可因此減少發炎反應。

本發明進一步係關於一種化合物或醫藥組合物，其用於預防及/或治療肥胖症及諸如代謝症候群(血脂異常、糖尿病及異常高身體質量指數之組合病狀)之相關病症，該等病症可由FXR介導之血清三酸甘油酯、血糖降低及胰島素敏感度增加及FXR介導之體重減輕而克服。

在另一實施例中，本發明之化合物或醫藥組合物適用於防止及/或治療I型及II型糖尿病之臨床併發症。此類併發症之實例包括糖尿病腎病變、糖尿病性視網膜病變、糖尿病性神經病或周邊動脈阻塞疾病(PAOD)。本發明亦涵蓋糖尿病之其他臨床併發症。

此外，亦可藉由投與本發明之化合物或醫藥組合物來防止及/或治療由於強制脂質及(特定言之)三酸甘油酯積聚及促纖維變性路徑之後續活化所致的器官之慢性脂肪及纖維變性造成的病狀及疾病。此類病狀及疾病涵蓋肝臟中之NASH及慢性膽汁鬱積病狀、腎臟中之腎絲球硬化症及糖尿病腎病變、眼睛中的黃斑變性及糖尿病性視網膜病變以及神經退化性疾病，諸如大腦中之阿茲海默氏症(Alzheimer´s Disease)或周邊神經系統中之糖尿病性神經病。

在另一實施例中，本發明之化合物或醫藥組合物適用於防止及/或治療先天性肝纖維變性。劑量

所採用活性成分之有效劑量可視所採用之特定化合物、投與模式、所治療的病狀及所治療之病狀的嚴重程度而變化。熟習此項技術者可易於確定此劑量。

當用指示本發明之化合物治療或防止FXR介導之病狀時，當以每公斤動物體重約0.1毫克至約300毫克之每日劑量投與本發明的化合物時，獲得一般令人滿意之結果。在一些實施例中，本發明之化合物以單個每日劑量或以一天兩次至六次之分次劑量或以緩釋形式給予。對於大部分大型哺乳動物，總每日劑量為約1毫克至約1000毫克，或約1毫克至約50毫克。就70 kg成人而言，總每日劑量將一般為約7毫克至約350毫克。可調整此劑量方案以提供最佳治療反應。在一些實施例中，總每日劑量為約1毫克至約900毫克、約10毫克至約800毫克、約20毫克至約700毫克、約30毫克至約600毫克、約40毫克至約550毫克、約50毫克至約400毫克、約50毫克至約300毫克或約50毫克至約200毫克。

本申請案之化合物或其組合物可使用上文所描述之任何合適的模式每天投與一次、兩次、三次或四次。另外，用化合物投與或治療可持續多天；舉例而言，對於一個治療循環，治療通常將持續至少7天、14天或28天。治療循環在癌症化學療法中為熟知的，且與循環之間的約1至28天，通常約7天或約14天之休息期頻繁交替。在其他實施例中，治療循環亦可為連續的。

在具體實施例中，本文中所提供之方法包含向受試者投與約1 mg至800 mg本文中所描述之化合物的初始每日劑量，以及以增量增加劑量直至達成臨床療效為止。可使用約5 mg、10 mg、25 mg、50 mg或100 mg之增量來增加劑量。劑量可每天、每隔一天、每週兩次或每週一次地增加。組合

在一些實施例中，本文中所揭示之化合物與一或多種額外治療劑組合投與來治療或防止本文中所揭示之疾病或病狀。在一些實施例中，一或多種額外治療劑為ACE抑制劑、乙醯CoA羧化酶抑制劑、腺苷A3受體促效劑、脂聯素受體促效劑、AKT蛋白激酶抑制劑、AMP-活化蛋白激酶(AMPK)、澱粉素受體促效劑、血管緊張素II AT-1受體拮抗劑、自分泌運動因子(Autotaxin)抑制劑、生物活性脂質、降鈣素促效劑、凋亡蛋白酶抑制劑、凋亡蛋白酶-3刺激劑、組織蛋白酶抑制劑、窖蛋白1抑制劑、CCR2趨化激素拮抗劑、CCR3趨化激素拮抗劑、CCR5趨化激素拮抗劑、氯通道刺激劑、CNR1抑制劑、細胞週期素D1抑制劑、細胞色素P450 7A1抑制劑、DGAT1/2抑制劑、二肽基肽酶IV抑制劑、內皮唾酸蛋白調節劑、伊紅趨素(Eotaxin)配位體抑制劑、細胞外基質蛋白調節劑、法尼醇X受體促效劑、脂肪酸合成酶抑制劑、FGF1受體促效劑、纖維母細胞生長因子(FGF-15、FGF-19、FGF-21)配位體、半乳糖凝集素-3抑制劑、升糖素受體促效劑、類升糖素肽1促效劑、G蛋白偶合膽酸受體1促效劑、刺蝟(Hedgehog，Hh)調節劑、丙型肝炎病毒NS3蛋白酶抑制劑、肝細胞核因子4 α調節劑(HNF4A)、肝細胞生長因子調節劑、HMG CoA還原酶抑制劑、IL-10促效劑、IL-17拮抗劑、廻腸膽酸鈉共轉運蛋白抑制劑、胰島素敏化劑、整合素調節劑、白介素-1受體相關之激酶4 (IRAK4)抑制劑、Jak2酪胺酸激酶抑制劑、己酮糖激酶抑制劑、克囉索(Klotho) β刺激劑、5-脂肪加氧酶抑制劑、脂蛋白脂肪酶抑制劑、肝臟X受體、LPL基因刺激劑、溶血磷脂酸-1受體拮抗劑、離胺醯氧化酶同系物2抑制劑、基質金屬蛋白酶(MMP)抑制劑、MEKK-5蛋白激酶抑制劑、膜銅胺氧化酶(VAP-1)抑制劑、甲硫胺酸胺基肽酶-2抑制劑、甲基CpG結合蛋白質2調節劑、微RNA-21 (miR-21)抑制劑、粒線體去偶合劑、髓鞘鹼性蛋白刺激劑、NACHT LRR PYD域蛋白質3 (NLRP3)抑制劑、NAD-依賴性去乙醯酶長壽蛋白(sirtuin)刺激劑、NADPH氧化酶抑制劑(NOX)、菸鹼酸受體1促效劑、P2Y13嘌呤受體刺激劑、PDE 3抑制劑、PDE 4抑制劑、PDE 5抑制劑、PDGF受體β調節劑、磷脂酶C抑制劑、PPAR α促效劑、PPAR δ促效劑、PPAR γ促效劑、PPAR γ調節劑、蛋白酶活化受體-2拮抗劑、蛋白激酶調節劑、ρ相關蛋白激酶抑制劑、葡萄糖鈉轉運蛋白-2抑制劑、SREBP轉錄因子抑制劑、STAT-1抑制劑、硬脂醯基CoA去飽和酶-1抑制劑、細胞介素信號傳導-1刺激劑之抑制劑、細胞介素信號傳導-3刺激劑之抑制劑、轉型生長因子β (TGF-β)、轉型生長因子β活化激酶1 (TAK1)、甲狀腺激素受體β促效劑、TLR-4拮抗劑、麩醯胺酸轉胺酶抑制劑、酪胺酸激酶受體調節劑、GPCR調節劑、核激素受體調節劑、WNT調節劑或YAP/TAZ調節劑。

一或多種額外治療劑之非限制性實例包括： ACE抑制劑，諸如依那普利(enalapril)；乙醯CoA羧化酶(ACC)抑制劑，諸如DRM-01、吉卡賓(gemcabene)、PF-05175157及QLT-091382；腺苷受體促效劑，諸如CF-102、CF-101、CF-502及CGS21680；脂聯素受體促效劑，諸如ADP-355；澱粉素/降鈣素受體促效劑，諸如KBP-042； AMP活化蛋白激酶刺激劑，諸如O-304；血管緊張素II AT-1受體拮抗劑，諸如依貝沙坦(irbesartan)；自分泌運動因子抑制劑，諸如PAT-505、PAT-048、GLPG-1690、X-165、PF-8380及AM-063；生物活性脂質，諸如DS-102； 1型大麻素受體(CNR1)抑制劑，諸如那馬珠單抗(namacizumab)及GWP-42004；凋亡蛋白酶抑制劑，諸如恩利卡生(emricasan)；泛組織蛋白酶B抑制劑，諸如VBY-376；泛組織蛋白酶抑制劑，諸如VBY-825； CCR2/CCR5趨化激素拮抗劑，諸如森尼韋若(cenicriviroc)； CCR2趨化激素拮抗劑，諸如丙帕鍺(propagermanium)； CCR3趨化激素拮抗劑，諸如柏替木單抗(bertilimumab)；氯離子通道刺激劑，諸如科普斯酮(cobiprostone)；二酸甘油脂醯基轉移酶2 (DGAT2)抑制劑，諸如IONIS-DGAT2Rx；二肽基肽酶IV抑制劑，諸如利格列汀(linagliptin)；伊紅趨素配位體抑制劑，諸如柏替木單抗；細胞外基質蛋白調節劑，諸如CNX-024；脂肪酸合成酶抑制劑，諸如TVB-2640；纖維母細胞生長因子19 (rhFGF19)/細胞色素P450 (CYP) 7A1抑制劑，諸如NGM-282；纖維母細胞生長因子21 (FGF-21)配位體，諸如BMS-986171、BMS-986036；纖維母細胞生長因子21 (FGF-21)/類升糖素肽1 (GLP-1)促效劑，諸如YH-25723；半乳糖凝集素-3抑制劑，諸如GR-MD-02；類升糖素肽1 (GLP1R)促效劑，諸如AC-3174、利拉魯肽(liraglutide)、司美魯肽(semaglutide)； G蛋白偶合膽酸受體1 (TGR5)促效劑，諸如RDX-009、INT-777；熱衝擊蛋白質47 (HSP47)抑制劑，諸如ND-L02-s0201； HMG CoA還原酶抑制劑，諸如阿托伐他汀(atorvastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、匹伐他汀(pitavastatin)、普伐他汀(pravastatin)、羅素他汀(rosuvastatin)及辛伐他汀(simvastatin)； IL-10促效劑，諸如聚乙二醇-伊洛白介素(peg-ilodecakin)；廻腸膽酸鈉共轉運蛋白抑制劑，諸如A-4250、volixibat乙醇鉀水合物(SHP-262)及GSK2330672；胰島素敏化劑，諸如KBP-042、MSDC-0602K、Px-102、RG-125 (AZD4076)及VVP-100X；己酮糖激酶抑制劑，諸如PF-06835919； β克囉索(KLB)-FGF1c促效劑，諸如NGM-313； 5-脂肪加氧酶抑制劑，諸如泰魯斯特(tipelukast) (MN-001)；脂蛋白脂肪酶抑制劑，諸如CAT-2003； LPL基因刺激劑，諸如阿利潑金(alipogene tiparvovec)；肝臟X受體(LXR)調節劑，諸如PX-L603、PX-L493、BMS-852927、T-0901317、GW-3965及SR-9238；溶血磷脂酸-1受體拮抗劑，諸如BMT-053011、UD-009、AR-479、ITMN-10534、BMS-986020及KI-16198；離胺醯氧化酶同系物2抑制劑，諸如辛圖珠單抗(simtuzumab)；胺脲敏感性胺氧化酶/血管黏附蛋白-1 (SSAO/VAP-1)抑制劑，諸如PXS-4728A；甲硫胺酸胺基肽酶-2抑制劑，諸如ZGN-839；甲基CpG結合蛋白質2調節劑，諸如巰乙胺；粒線體去偶合劑，諸如2,4-二硝基苯酚；髓鞘鹼性蛋白刺激劑，諸如奧利索西(olesoxime)； NADPH氧化酶1/4抑制劑，諸如GKT-831；菸鹼酸受體1促效劑，諸如ARI-3037MO；硝唑尼特(Nitazoxinide)； NACHT LRR PYD域蛋白質3 (NLRP3)抑制劑，諸如KDDF-201406-03及NBC-6；核受體調節劑，諸如DUR-928； P2Y13嘌呤受體刺激劑，諸如CER-209； PDE 3/4抑制劑，諸如泰魯斯特(MN-001)； PDE 5抑制劑，諸如西地那非(sildenafil)； PDGF受體β調節劑，諸如BOT-191、BOT-509； PPAR促效劑，諸如艾拉菲諾(elafibranor) (GFT-505)、MBX-8025、氘化吡格列酮R-對映異構體、吡格列酮、DRX-065、沙格列讓(saroglitazar)及IVA-337；蛋白酶活化受體-2拮抗劑，諸如PZ-235；蛋白激酶調節劑，諸如CNX-014； ρ相關蛋白激酶(ROCK)抑制劑，諸如KD-025；葡萄糖鈉轉運體-2 (SGLT2)抑制劑，諸如伊格列淨(ipragliflozin)、瑞格列淨(remogliflozin)依碳酸鹽、艾托格列淨(ertugliflozin)、達格列淨(dapagliflozin)及索格列淨(sotagliflozin)； SREBP轉錄因子抑制劑，諸如CAT-2003及MDV-4463；十八醯基CoA去飽和酶-1抑制劑，諸如阿雷美羅(aramchol)；甲狀腺激素受體(THR) β促效劑，諸如MGL-3196、MGL-3745、VK-2809； TLR-4拮抗劑，諸如JKB-121；酪胺酸激酶受體調節劑，諸如CNX-025； GPCR調節劑，諸如CNX-023；及核激素受體調節劑，諸如Px-102。

在某些特定實施例中，一或多種額外治療劑選自A-4250、AC-3174、乙醯水楊酸、AK-20、AKN-083、阿利潑金、阿雷美羅、ARI-3037MO、ASP-8232、阿托伐他汀、柏替木單抗、無水甜菜鹼、BAR-704、BI-1467335、BMS-986036、BMS-986171、BMT-053011、BOT-191、BTT-1023、BWD-100、BWL-200、CAT-2003、森尼韋若、CER-209、CF-102、CGS21680、CNX-014、CNX-023、CNX-024、CNX-025、、科普斯酮、考來維侖(colesevelam)、達格列淨、16-脫氫-孕烯醇酮、氘化吡格列酮R-對映異構體、2,4-二硝基苯酚、DRX-065、DS-102、DUR-928、EDP-305、艾拉菲諾 (GFT-505)、恩利卡生(emricasan)、依那普利、EP-024297、艾托格列淨、依格列汀、EYP-001、F-351、非沙明(fexaramine)、GKT-831、GNF-5120、GR-MD-02、氫氯噻嗪、二十碳五烯酸乙酯、IMM-124-E、INT-767、IONIS-DGAT2Rx、INV-33、伊格列淨、厄貝沙坦(Irbesarta)、丙帕鍺、IVA-337、JKB-121、KB-GE-001、KBP-042、KD-025、M790、M780、M450、二甲雙胍、西地那非、LC-280126、利格列汀、利拉魯肽、LJN-452、LMB-763、MBX-8025、MDV-4463、巰乙胺、MET-409、MGL-3196、MGL-3745、MSDC-0602K、馬珠單抗、NC-101、ND-L02-s0201、NFX-21、NGM-282、NGM-313、NGM-386、NGM-395、NTX-023-1、降熊去氧膽酸(norursodeoxycholic acid)、O-304、奧貝膽酸(obeticholic acid)、25HC3S、奧利索西、PAT-505、PAT-048、聚乙二醇-伊洛白介素、吡格列酮、吡非尼酮(pirfenidone)、PRI-724、PX20606、Px-102、PX-L603、PX-L493、PXS-4728A、PZ-235、RDX-009、RDX-023、瑞格列淨依碳酸鹽、再利用三環素(tricaprilin)、RG-125 (AZD4076)、沙格列讓、司美魯肽、辛圖珠單抗、SIPI-7623、索利黴素(solithromycin)、索格列淨、士他汀(statins) (阿托伐他汀、氟伐他汀、匹伐他汀、普伐他汀、羅素他汀、辛伐他汀)、TCM-606F、TERN-101、TEV-45478、泰魯斯特(MN-001)、TLY-012、曲匹氟索(tropifexor)、TRX-318、TVB-2640、UD-009、熊去氧膽酸(ursodeoxycholic acid)、VBY-376、VBY-825、VK-2809、維莫德吉(vismodegib)、volixibat乙醇鉀水合物(SHP-626)、VVP-100X、WAV-301、WNT-974及ZGN-839。

在一些實施例中，方法及組合物包括治療有效量之凋亡信號調節激酶1 (ASK1)抑制劑及治療有效量之法尼醇X受體(FXR)促效劑，其中FXR促效劑為式(I)化合物：

或其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體、立體異構體混合物或互變異構體。

在本文中所揭示之方法及醫藥組合物的某些實施例中，ASK1抑制劑為式(II)化合物：

諸如式(II)化合物之ASK1抑制劑可使用熟習此項技術者已知的方法來合成及表徵，諸如描述於U.S. 2007/0276050、U.S. 2011/0009410及U.S. 2013/0197037中之彼等方法。

在一些實施例中，方法及組合物包括治療有效量之乙醯CoA羧化酶(ACC)抑制劑及治療有效量之法尼醇X受體(FXR)促效劑，其中FXR促效劑為式(I)化合物：

在本文中所揭示之方法及醫藥組合物的某些實施例中，ACC抑制劑為式(III)化合物：

或其醫藥學上可接受之鹽。

諸如式(III)化合物之ACC抑制劑可使用熟習此項技術者已知的方法來合成及表徵，諸如描述於PCT國際申請公開案第WO 2013/071169號中之彼等方法。

在一些實施例中，方法及組合物包括治療有效量之甲狀腺激素受體(THR) β促效劑以及治療有效量之法尼醇X受體(FXR)促效劑，其中FXR促效劑為式(I)化合物：

在本文中所揭示之方法及醫藥組合物的某些實施例中，THR β促效劑為式(IV)化合物：

諸如式(IV)化合物之THR β促效劑可使用熟習此項技術者已知的方法來合成及表徵。實例

包括以下實例以展現本發明之特定實施例。熟習此項技術者應瞭解，以下實例中所揭示之技術表示在實踐本發明時運行良好的技術，且因此可被視為構成其實踐之特定模式。然而，鑒於本發明，熟習此項技術者應瞭解，此等實例為例示性且非窮盡性的。可在不脫離本發明之精神及範疇的情況下，在所揭示之特定實施例中作出許多變化，且仍獲得相似或類似結果。

本文中所揭示之化合物可根據以下方案及實例之程序使用適當材料來製備，且藉由以下特定實例來進一步例示。此外，藉由利用本文中所描述之程序，結合此項技術中之一般技能，可易於製備本文中所主張的本發明之額外化合物。實例進一步說明製備本發明之化合物的細節。熟習此項技術者將容易理解，以下製備程序之條件及製程的已知變化可用以製備此等化合物。為合成作為本發明中所描述之實施例的化合物，待合成化合物之結構的檢測將提供各取代基之一致性。在一些情況下，最終產物之一致性可藉由檢測之製程使必要起始材料之一致性明顯，給出本文中之實例。化合物可以其醫藥學上可接受之鹽(諸如上文所描述之彼等)的形式分離。通常，本文中所描述之化合物在室溫及室壓下為穩定且可分離的。

下文展示製備本文中所揭示之化合物的說明。除非另有指示，否則變數具有與上文所描述相同的含義。下文所呈現之實例意欲說明本發明之具體實施例。如下文所描述之合成中所採用之合適的起始材料、架構基塊及反應劑可商購自例如Sigma-Aldrich或Acros Organics，或可常規地藉由文獻中(例如「March's Advanced Organic Chemistry:Reactions, Mechanisms, and Structure」, 第5版; John Wiley & Sons或T. Eicher, S. Hauptmann 「The Chemistry of Heterocycles; Structures, Reactions, Synthesis and Application」, 第2版, Wiley-VCH 2003; Fieser等人「Fiesers´ Reagents for Organic Synthesis」 John Wiley & Sons 2000中)所描述之程序來製備。方法 X 射線粉末繞射 ( XRPD )

在環境條件下在以下實驗設定下在PANanalytical XPERT-PRO繞射儀上收集XRPD圖案：45 KV，40 mA，Kα1=1.5406 Å，掃描範圍2至40°2θ，步長大小0.0084或0.0167°2θ，量測時間：5 min。差示掃描熱量測定 (DSC)

在配備有50位自動取樣器之TA Instruments Q2000系統上收集DSC熱分析圖。能量及溫度之校準使用經鑑定銦來進行。通常，在銷孔鋁盤中將1 mg至5 mg之各樣品以10℃/min自約25℃加熱至約300℃。在整個量測中對樣品維持50 mL/min之乾燥氮氣吹掃。熔融吸熱之起點經報導為熔點。熱解重量分析 (TGA)

在配備有25位自動取樣器之TA Instruments Q5000系統上收集TGA熱分析圖。將約1 mg至5 mg之各樣品裝載至預配衡鋁盤上且以10℃/min自約25℃加熱至約350℃。在整個量測中對樣品維持25 mL/min之氮氣吹掃。通用合成方案

可根據以下通用合成方案來合成式(Ia)化合物，其中Y為N。

在以上通用合成方案中，A為伸吡啶基或伸苯基，其各自視情況經獨立地選自以下各者之一個或兩個基團取代：鹵素、C_1-4 -烷氧基、鹵基-C_1-4 -烷氧基、C_1-4 -烷基及鹵基-C_1-4 -烷基；Q為伸苯基或伸吡啶基，其各自視情況經獨立地選自以下各者之一個或兩個取代基取代：鹵素、甲基、C_1-4 -烷氧基、鹵基-C_1-4 -烷氧基、-CH₂ F、-CHF₂ 及-CF₃ ；X為脫離基，Y為諸如可用於形成有機金屬物種(諸如格林納反應劑(Grignard reagent))之鹵素的基團，Z為經R¹ 取代之異噁唑或經C_1-4 -烷基或C_3-6 -環烷基取代之吡唑，R² 及R³ 獨立地選自氫、鹵素、甲氧基、-CF₃ 、-CHF₂ 、-CH₂ F、-OCH₂ F、-OCHF₂ 、-OCF₃ 及甲基；R⁴ 為-CO₂ R⁵ 或-C(O)NR⁵ R⁶ ；R⁵ 為氫、C_1-6 -烷基或鹵基-C_1-6 -烷基；且R⁶ 為氫或C_1-6 -烷基，其中該C_1-6 -烷基視情況經獨立地選自以下各者之1至6個取代基取代：鹵素、-SO₃ H及-CO₂ H。PG為保護基，且剩餘變數如本文中所提供。式(C)化合物可藉由在鹼之存在下使式(A)化合物與式(B)化合物反應來製備式(D)化合物由式(C)化合物經由形成有機金屬物種(諸如格林納試劑)隨後與經適當保護之3-酮氮雜環丁烷縮合而形成。式(E)化合物由式(D)化合物在適當去保護條件下形成。式(E)化合物可在鹼之存在下與式(F)化合物組合以得到式(Ia)化合物。

可替代地，式(D)化合物可藉由在鹼之存在下使式(A)化合物與式(G)化合物反應而形成。

結構(A)及結構(B)之適當化合物可根據以下實例中所描述之方法或藉由此項技術中已知的方法來製備。舉例而言，X可為鹵素(例如氟、溴、氯及/或碘)，且PG可為第三丁基羰基保護基(BOC)。實例 1 ： 製備式 (I) 步驟 1 ：製備 2,6- 二氯 -4- 氟苯甲醛肟

將2,6-二氯-4-氟苯甲醛(20 g，100 mmol)、羥胺鹽酸鹽(14 g，210 mmol)及碳酸鈉(27 g，260 mmol)於乙醇/水(5:1，170 mL)中之懸浮液音波處理約10分鐘，且隨後在室溫下置於攪拌隔夜。

用水及乙酸乙酯稀釋混合物。用乙酸乙酯萃取水相兩次。用飽和氯化鈉水溶液洗滌經合併之有機層，經無水硫酸鎂乾燥，過濾且在減壓下濃縮以得到所要中間物。LCMS-ESI+ (m/z )：C₇ H₅ Cl₂ FNO之[M+H]+計算值：207.97；實驗值：207.99。步驟 2 ： 製備氯化 2,6- 二氯 -4- 氟基 -N - 羥基苯甲基亞胺基 (hydroxybenzimidoyl)

用單份之N -氯丁二醯亞胺(1.5 g，11 mmol)處理2,6-二氯-4-氟苯甲醛肟(21 g，99 mmol)於N,N -二甲基甲醯胺(200 mL)中之溶液。將氯化氫蒸汽(大約40 mL，自濃鹽酸瓶之頂空獲取)鼓泡至混合物中。在添加另一份N -氯丁二醯亞胺(1.5 g，90 mmol)之後，再引入兩體積之氯化氫氣體(40 mL × 2)。以小份添加額外N -氯丁二醯亞胺(12 g，11 mmol)。在放熱至25℃之觀測下，在室溫水浴中冷卻混合物。使溫度降至約23℃，且逐份添加N -氯丁二醯亞胺之剩餘部分。在添加結束時，LC/MS分析揭露肟起始材料之存留，因此添加最終份之N -氯丁二醯亞胺(1.2 g，9.0 mmol)。在室溫下使混合物攪拌隔夜，且不經處理地將其向前載送至後續合成步驟。LCMS-ESI+ (m/z )：C₇ H₄ Cl₃ FNO之[M+H]+計算值：241.93；實驗值：242.20。步驟 3 ：製備 5- 環丙基 -3-(2,6- 二氯 -4- 氟苯基 ) 異噁唑 -4 甲酸乙酯

在室溫下經由具有三乙胺(55 mL，400 mmol)之注射器處理環丙基-3-側氧基丙酸乙酯(19 g，120 mmol)於2-甲基四氫呋喃中之溶液。在攪拌30分鐘之後，經由注射器逐滴添加含有氯化2,6-二氯-4-氟基-N -羥基苯甲基亞胺基之反應混合物(24 g，99 mmol)。在添加結束時，在約60℃下加熱混合物隔夜。在減壓下濃縮反應混合物。用10%鹽酸溶液及乙酸乙酯稀釋殘餘物。用乙酸乙酯萃取水相三次。經合併之有機萃取物用飽和氯化鈉水溶液洗滌一次，經無水硫酸鎂乾燥，且在減壓下濃縮。藉由急驟層析(矽膠)純化殘餘物以得到所要中間物。LCMS-ESI+ (m/z)：C₁₅ H₁₃ Cl₂ FNO₃ 之[M+H]+計算值：344.02；實驗值：344.03。步驟 4 ：製備 (5- 環丙基 -3-(2,6- 二氯 -4- 氟苯基 ) 異噁唑 -4- 基 ) 甲醇

將5-環丙基-3-(2,6-二氯-4-氟苯基)異噁唑-4-甲酸乙酯(15 g，44 mmol)之溶液溶解於2-甲基四氫呋喃(220 mL)中，且以磁攪拌在約-12℃至-10℃濕潤冰/丙酮浴中冷卻。逐滴添加氫化鋰鋁溶液(2.0 M，於四氫呋喃中，53 mmol)。在浴中攪拌30分鐘之後，依次用水(2.0 mL，極謹慎地逐滴)、15%水性氫氧化鈉溶液(2.0 mL)及水(6.0 mL)將在冰水浴中冷卻之混合物淬滅。在添加無水硫酸鎂之前，在室溫下使懸浮液攪拌15分鐘，隨後將其再攪拌一小時。過濾漿料；用乙酸乙酯洗滌濾餅，且在減壓下濃縮濾液至乾燥。藉由急驟層析(矽膠)純化殘餘物以得到所要中間物。LCMS-ESI+ (m/z )：C₁₃ H₁₁ Cl₂ FNO₂ 之[M+H]+計算值：302.01；實驗值：302.51。步驟 5 ：製備 4-( 氯甲基 )-5- 環丙基 -3-(2,6- 二氯 -4- 氟苯基 ) 異噁唑

在室溫下將亞硫醯二氯(6.6 mL，90 mmol)添加至(5-環丙基-3-(2,6-二氯-4-氟苯基)異噁唑-4-基)甲醇(9.1 g，30 mmol)於二氯甲烷(150 mL)中之混合物。隨後在約45℃下將混合物加熱45分鐘。將混合物在減壓下濃縮。將殘餘物溶解於乙醚中且再濃縮。將此操作再重複兩次以得到所要中間物，該所要中間物不進一步純化即向前載送。LCMS-ESI+ (m/z )：C₁₃ H₁₀ Cl₃ FNO之[M+H]+計算值：319.97；實驗值：320.50。步驟 6 ：製備 4-((4- 溴 -3- 氯苯氧基 ) 甲基 )-5- 環丙基 -3-(2,6- 二氯 -4- 氟苯基 ) 異噁唑

用4-溴-3-氯苯酚(2.7 g，13 mmol)、碘化鈉(3.3 g，22 mmol)及無水碳酸鉀(3.6 g，26 mmol)處理粗物質4-(氯甲基)-5-環丙基-3-(2,6-二氯-4-氟苯基)異噁唑(4.2 g，13 mmol)於N,N -二甲基甲醯胺(50 mL)中之溶液。在約60℃下將混合物加熱25分鐘。在冷卻之後，過濾混合物，且在減壓下濃縮濾液。藉由急驟層析(矽膠)純化殘餘物以得到所要中間物。LCMS-ESI+ (m/z )：C₁₉ H₁₃ BrCl₃ FNO₂ 之[M+H]+計算值：489.91；實驗值：490.10。步驟 7 ：製備 3-(2- 氯 -4-((5- 環丙基 -3-(2,6- 二氯 -4- 氟苯基 ) 異噁唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 苯基 )-3- 羥基氮雜環丁烷 -1- 甲酸 第三丁 酯

在氬氣氛圍下，經由注射器用氯化異丙基鎂/氯化鋰溶液(1.3 M，12 mL，15 mmol)處理4-((4-溴-3-氯苯氧基)甲基)-5-環丙基-3-(2,6-二氯-4-氟苯基)異噁唑(5.1 g，10 mmol)於四氫呋喃(27 mL)中之溶液。在引入額外體積之氯化異丙基鎂/氯化鋰溶液(1.3 M，4.0 mL，5.2 mmol)之前，將所得混合物攪拌一小時。在通過攪拌45分鐘之後，添加另一份之氯化異丙基鎂/氯化鋰溶液(1.3 M，1.0 mL，1.3 mmol)。在攪拌一小時之後，將3-側氧基氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯(3.8 g，22 mmol)一次性添加至格林納混合物，在濕潤冰/丙酮浴中將其冷卻。在攪拌30分鐘之後，添加額外份之3-側氧基氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯(0.80 g，4.7 mmol)。用10%檸檬酸水溶液(50 mL)將混合物淬滅。用乙酸乙酯萃取水相三次。經合併之有機物各自用水及飽和氯化鈉水溶液洗滌一次，經無水硫酸鎂乾燥，過濾且在減壓下濃縮。藉由急驟層析(矽膠)純化殘餘物以得到所要中間物。LCMS-ESI+ (m/z )：C₂₇ H₂₇ Cl₃ FN₂ O₅ 之[M+H]+計算值：584.86；實驗值：483.19。步驟 8 ：製備 3-(2- 氯 -4-((5- 環丙基 -3-(2,6- 二氯 -4- 氟苯基 ) 異噁唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 苯基 ) 氮雜環丁 -3- 醇甲苯磺酸鹽

將單水合對甲苯磺酸(3.5 g，18 mmol)添加至3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯-4-氟苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯(5.3 g，9.1 mmol)與異丙醇(21 mL)之混合物。混合物在約50℃下加熱隔夜，且隨後在磁攪拌下在濕潤冰/丙酮浴中冷卻。在約50℃下將所得懸浮液幾近加熱回至均勻性。在混合物冷卻之後，添加己烷，且所得懸浮液進行音波處理且隨後溫熱至約50℃。固體藉由抽濾收集，用己烷洗滌，且在約75℃真空烘箱中乾燥以得到所要中間物之甲苯磺酸鹽。LCMS-ESI+ (m/z )：C₂₂ H₁₉ Cl₃ FN₂ O₃ 之[M+H]+計算值：483.04；實驗值：483.19。步驟 9 ：製備 6-(3-(2- 氯 -4-((5- 環丙基 -3-(2,6- 二氯 -4- 氟苯基 ) 異噁唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 苯基 )-3- 羥基氮雜環丁 -1- 基 ) 菸鹼酸 甲酯

在80℃下將3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯-4-氟苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)氮雜環丁-3-醇甲苯磺酸鹽(0.47 g，0.71 mmol)、6-氯菸鹼酸甲酯(0.15 g，0.90 mmol)及碳酸鉀(0.49 g，3.6 mmol)於N,N -二甲基甲醯胺(4 mL)中之混合物加熱隔夜。將混合物分配於乙酸乙酯與水之間。用乙酸乙酯萃取水相三次。經合併之萃取物依次用水及飽和氯化鈉水溶液洗滌，經無水硫酸鎂乾燥，過濾且在減壓下濃縮。藉由急驟層析(矽膠)純化殘餘物以得到所要中間物。LCMS-ESI+ (m/z )：C₂₉ H₂₄ Cl₃ FN₃ O₅ 之[M+H]+計算值：618.07；實驗值：618.41。步驟 10 ：製備 6-(3-(2- 氯 -4-((5- 環丙基 -3-(2,6- 二氯 -4- 氟苯基 ) 異噁唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 苯基 )-3- 羥基氮雜環丁 -1- 基 ) 菸鹼酸

將6-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯-4-氟苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基氮雜環丁-1-基)異菸鹼酸甲酯(0.32 g，0.51 mmol)及單水合氫氧化鋰(43 mg，1.0 mmol)於四氫呋喃/水(1:1，10 mL)中之混合物在室溫下攪拌隔夜。

在減壓下濃縮混合物以移除大部分揮發物。將所得水性混合物進一步用水稀釋，且用乙酸隨後用10%鹽酸水溶液處理。所得沈澱物藉由抽濾收集，用水洗滌，且在約50℃真空烘箱中乾燥以得到呈游離酸形式之所要材料。LCMS-ESI+ (m/z )：C₂₈ H₂₂ Cl₃ FN₃ O₅ 之[M+H]+計算值：604.05；實驗值：604.41。步驟 11 ：製備 6-(3-(2- 氯 -4-((5- 環丙基 -3-(2,6- 二氯 -4- 氟苯基 ) 異噁唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 苯基 )-3- 羥基氮雜環丁 -1- 基 ) 菸鹼酸 ，參鹽

將6-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯-4-氟苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基氮雜環丁-1-基)菸鹼酸(0.29 g，0.48 mmol)以懸浮液形式溶解於MeOH/水(95:5，2 mL)中，用緩血酸胺(58 mg，0.48 mmol)處理，在55℃下加熱，且濃縮以得到呈緩血酸胺鹽形式之所要酸。1H NMR (400 MHz, 甲醇-d 4) δ 8.65 (dd, J = 2.2, 0.8 Hz, 1H), 8.05 (dd, J = 8.7, 2.2 Hz, 1H), 7.38 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 6.78 (dd, J = 8.6, 2.6 Hz, 1H), 6.42 (dd, J = 8.8, 0.8 Hz, 1H), 4.92 (s, 2H), 4.57 (dd, J = 9.3, 1.1 Hz, 2H), 4.29 (dd, J = 9.2, 1.1 Hz, 2H), 3.63 (s, 7H), 2.32 (tt, J = 8.0, 5.5 Hz, 1H), 1.25 - 1.11 (m, 4H)。實例 2 ： 合成比較實例 1 6-(3-(2- 氯 -4-((5- 環丙基 -3-(2,6- 二氯 -4- 氟苯基 ) 異噁唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 苯基 )-3- 羥基氮雜環丁 -1- 基 )-5- 氟 菸鹼酸

合成中間物 A ：

在約-78℃下在N₂ 下向(4-溴-3-氯苯氧基)(第三丁基)二甲基矽烷(60 g，187 mmol)於THF (500 mL)中之溶液逐滴添加正丁基鋰(n -BuLi) (2.5 M，75 mL)。將反應物在約-78℃下攪拌1小時。隨後在-78℃下將3-側氧基氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯(27 g，155 mmol)於THF (500 mL)中之溶液逐滴添加至混合物。隨後將反應物在約20℃下攪拌3小時。將反應混合物倒入H₂ O (1 L)中，且用EtOAc (2 L)萃取三次。經合併之有機層用水(1 L)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由用10:1石油醚:EtOAc溶離之矽膠層析來純化粗產物以得到3-(4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-氯苯基)氮雜環丁-3-醇( 中間物 A) 。步驟 1 ： 3-(2- 氯 -4- 羥苯基 )-3- 羥基氮雜環丁烷 -1- 甲酸 第三丁 酯

在約-10℃下向3-(4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-氯苯基)-3-羥基氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯(中間物 A ，1.27 g，3.07 mmol)於THF (50.0 mL)中之溶液逐滴添加含1 M TBAF之THF (3.68 mL，3.68 mmol)。反應物攪拌2小時且濃縮以得到3-(2-氯-4-羥苯基)-3-羥基氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯，其不經進一步純化即使用。步驟 2 ： 4-( 氯甲基 )-5- 環丙基 -3-(2,6- 二氯 -4- 氟苯基 ) 異噁唑

將(5-環丙基-3-(2,6-二氯-4-氟苯基)異噁唑-4-基)甲醇(45 mg，2.80 mmol)於DCM (28.0 mL)中之溶液冷卻至約0℃。添加亞硫醯二氯(1.02 mL，14.0 mmol)，且在約45℃下將溶液加熱1小時。將反應物濃縮至乾燥，且不經純化即用於下一步驟中。步驟 3 ： 3-(2- 氯 -4-((5- 環丙基 -3-(2,6- 二氯 -4- 氟苯基 ) 異噁唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 苯基 )-3- 羥基氮雜環丁烷 -1- 甲酸 第三丁 酯

將3-(2-氯-4-羥苯基)-3-羥基氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯(922 mg，3.07 mmol)於DMF (28.0 mL)中之溶液添加至粗物質4-(氯甲基)-5-環丙基-3-(2,6-二氯-4-氟苯基)異噁唑，隨後添加碳酸鉀(773 mg，5.60 mmol)。在約60℃下將混合物加熱8小時。反應物經濃縮，用水稀釋且用EtOAc萃取(3×)。經合併之有機層用水、鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。藉由矽膠層析(DCM/Et₂ O/MeOH)純化粗產物以得到3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯-4-氟苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯。LCMS-ESI⁺ (m/z )：[(M+H)-BOC]⁺ 計算值483.04；實驗值483.04。步驟 4 ： 3-(2- 氯 -4-((5- 環丙基 -3-(2,6- 二氯 -4- 氟苯基 ) 異噁唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 苯基 ) 氮雜環丁 -3- 醇

向3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯-4-氟苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯(1.52 g，2.60 mmol)於DCM (130 mL)中之溶液添加含4 N HCl之1,4-二噁烷(26.0 mL，104 mmol)。溶液在室溫下攪拌2.5小時，且濃縮至乾燥以得到呈鹽酸鹽形式之3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯-4-氟苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)氮雜環丁-3-醇，其不經進一步純化即使用。LCMS-ESI⁺ (m/z )：[M+H]⁺ 計算值483.04；實驗值483.03。步驟 5 ： 6-(3-(2- 氯 -4-((5- 環丙基 -3-(2,6- 二氯 -4- 氟苯基 ) 異噁唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 苯基 )-3- 羥基氮雜環丁 -1- 基 )-5- 氟 菸鹼酸 甲酯

將甲基6-氯-5-氟吡啶(235 mg，1.24 mmol)、呈鹽酸鹽形式之3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯-4-氟苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)氮雜環丁-3-醇(495 mg，0.952 mmol)及含碳酸鉀(1.05 g，7.61 mmol)之DMF (30.0 mL)的混合物在約60℃下加熱1小時。反應物經濃縮，用水稀釋且用EtOAc萃取(3×)。經合併之有機層用鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。藉由矽膠層析(DCM/Et₂ O/MeOH)來純化粗混合物以得到6-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯-4-氟苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基氮雜環丁-1-基)-5-氟菸鹼酸甲酯。LCMS-ESI⁺ (m/z )：[M+H]⁺ 計算值636.07；實驗值635.96。步驟 6 ： 6-(3-(2- 氯 -4-((5- 環丙基 -3-(2,6- 二氯 -4- 氟苯基 ) 異噁唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 苯基 )-3- 羥基氮雜環丁 -1- 基 )-5- 氟 菸鹼酸 ( 比較實例 1)

向6-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯-4-氟苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基氮雜環丁-1-基)-5-氟菸鹼酸甲酯(364 mg，0.571 mmol)於THF/水(1:1，20.0 mL)中之溶液添加單水合氫氧化鋰(41.3 mg，0.984 mmol)。溶液攪拌18小時，濃縮以移除THF且用水(10.0 mL)稀釋。使用1N HCl將pH調整至3。固體經過濾，用水洗滌，溶解於ACN/水中，且凍乾以得到6-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯-4-氟苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基氮雜環丁-1-基)-5-氟菸鹼酸(比較實例 1 )。LCMS-ESI⁺ (m/z )：[M+H]⁺ 計算值622.05；實驗值622.12。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ) δ 12.84 (bs, 1H), 8.44 (t, J = 1.7 Hz, 1H), 7.79 - 7.63 (m, 3H), 7.39 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.77 (dd, J = 8.6, 2.6 Hz, 1H), 6.28 (s, 1H), 4.93 (s, 2H), 4.70 (d, J = 9.8 Hz, 2H), 4.34 (d, J = 9.5 Hz, 2H), 2.50-2.43 (m, 1H), 1.22 - 1.08 (m, 4H)。實例 3 ： FRET 活性檢定

如下執行對配位體介導之輔因子肽相互作用之測定以定量與核受體FXR結合之配位體。

製備人類FXR α配位體結合域(LBD)：人類FXR α LBD作為N端GST標記融合蛋白質表現於大腸桿菌株BL21(DE3)中。編碼FXR配位體結合域之DNA經克隆至載體pDEST15 (Invitrogen)中。表現在IPTG誘導性T7啟動子之控制下。配位體結合域之胺基酸邊界為資料庫條目NM_005123 (RefSeq)之胺基酸187至472。FXR-LBD之表現及純化：經轉化之大腸桿菌株的隔夜預先培養物在LB-胺苄青黴素(Ampicillin)培養基中以1:20稀釋，且在30℃下生長至光學密度OD₆₀₀ =0.4至0.6。隨後藉由添加0.5 mM IPTG誘導基因表現。在30℃下以180 rpm將細胞培育額外6 h。藉由離心(7000 × g，7分鐘，室溫)收集細胞。將每公升之原始細胞培養物中之細胞再懸浮於10 mL裂解緩衝液(50 mM葡萄糖、50 mM Tris pH 7.9、1 mM EDTA及4 mg/mL溶菌酶)中且置於冰上30 min。隨後使細胞經歷音波處理，且經由離心(22000 × g，30 min，4℃)移除細胞碎片。每10 mL之上清液添加0.5 mL預洗滌麩胱甘肽4B瓊脂糖漿料(Qiagen)，且在4℃下使懸浮液持續緩慢旋轉1小時。藉由麩胱甘肽4B瓊脂糖珠粒離心(2000 × g，15秒，4℃)進行沉澱，且在洗滌緩衝液(25 mM Tris、50 mM KCl、4 mM MgCl₂ 及1M NaCl)中洗滌兩次。將每公升原始培養物之沉澱團粒再懸浮於3 mL溶離緩衝液 (溶離緩衝液：緊接在使用之前以粉末形式添加20 mM Tris、60 mM KCl、5 mM MgCl₂ 及80 mM麩胱甘肽)中。在4℃下使懸浮液旋轉15 min，用相較於第一次之一半體積的溶離緩衝液將珠粒再次進行沉澱化且溶離。溶離液經混合且在含有60 mM KCl、5 mM MgCl₂ 以及1 mM二硫蘇糖醇及10% (v/v)甘油之20 mM Hepes緩衝液(pH 7.5)中透析隔夜。藉由SDS-Page分析蛋白質。

方法量測推定配位體基於殘餘物676-700之SRC-1 (LCD2，676-700)來調節純化細菌表現的FXR配位體結合域(LBD)與合成生物素標記肽之間的相互作用之能力。所使用肽之序列為B-CPSSHSSLTERHKILHRLLQEGSPS-COOH(SEQ ID NO: 1)，其中N端為經生物素標記之(B)。FXR之配位體結合域(LBD)使用載體pDEST15在BL-21細胞中表現為具有GST之融合蛋白質。藉由音波處理來裂解細胞，且根據製造商說明書通過麩胱甘肽瓊脂糖(Pharmacia)純化融合蛋白質。為針對化合物對FXR-肽相互作用之影響來篩選化合物，應用Perkin Elmer LANCE技術。此方法依賴於自附著於所關注結合配偶體之供體螢光體至受體螢光體之結合依賴性能量傳遞。為易於操縱及減少來自化合物螢光之背景，LANCE技術利用通用螢光團標記，且以25 µL最終體積在384孔板中在基於Tris之緩衝液(20 mM Tris-HCl pH 7.5；60 mM KCl、5 mM MgCl₂ ；35 ng/µL BSA)中進行時間解析偵測檢定，該基於Tris之緩衝液含有20至60 ng/孔融合於GST的以重組方式表現之FXR-LBD、200至600 nM N端生物素標記肽(表示SRC1胺基酸676至700)、200 ng/孔抗生蛋白鏈菌素-xlAPC共軛物(Prozyme)及6至10 ng/孔Eu W1024-抗GST(Perkin Elmer)。樣品之DMSO含量保持在1%。在產生檢定混合及稀釋潛在FXR調節配位體之後，在暗處在室溫下在FIA板黑色384孔(Greiner)中使檢定均衡1小時。藉由Perkin Elmer VICTOR2VTM多標記計數器偵測LANCE信號。藉由繪製在665 nm與615 nm下之所發射光之間的比率而將結果視覺化。在無所添加配位體之存在下觀測到基本含量之FXR肽形成。促進複合物形成之配位體誘導時間解析螢光信號之濃度依賴性增加。將預期同等良好地結合至單體FXR及FXR-肽複合物兩者之化合物不產生信號變化，而將預期較佳地結合至單體受體之配位體誘導所觀測信號之濃度依賴性減小。

為評定化合物之促效潛力，測定實例化合物之EC₅₀ 值，且將該等值列於下表1中(FRET EC₅₀ )。如表1中所指示，實例1之化合物連同比較實例1及比較實例2 (美國專利申請公開案第2017/0355685號之實例3)一起評定，其化學結構描繪於下表中。實例 4 ：哺乳動物單雜交 (M1H) 檢定

如下執行配位體介導之Gal4啟動子驅動反式活化的測定以定量FXR之配位體結合介導之活化。

在CMV啟動子之控制下，將編碼FXR配位體結合域之cDNA部分克隆至載體pCMV-BD (Stratagene)中作為與酵母菌GAL4 DNA結合域之融合。配位體結合域之胺基酸邊界為資料庫條目NM_005123 (RefSeq)之胺基酸187至472。質體pFR-Luc (Stratagene)用作報導質體，其含有具有酵母菌GAL4結合位點之五個串聯重複的合成啟動子，驅動作為報導基因之螢火蟲(美國螢火蟲)螢光素酶基因的表現。為提高實驗準確度，質體pRL-CMV (Promega)經共轉染。pRL-CMV含有控制海腎(Renilla reniformis)螢光素酶之表現的構成性CMV啟動子。所有Gal4報導基因檢定在約37℃下在5% CO₂ 中在生長於具有L-麩醯胺酸之MEM及補充有10%胎牛血清、0.1 mM非必需胺基酸、1 mM丙酮酸鈉及每mL 100單位盤尼西林(Penicilin)/抗生蛋白鏈菌素之厄勒氏(Earle's) BSS中的HEK293細胞(自DSMZ，Braunschweig，Germany獲得)中進行。培養基及補充劑自Invitrogen獲得。對於檢定，在無酚紅及L-麩醯胺酸之情況下，且在具有補充有10%經木炭/聚葡萄糖處理之FBS (HyClone，South Logan，Utah)、0.1 mM非必需胺基酸、2 mM麩醯胺酸、1 mM丙酮酸鈉及每mL 100單位盤尼西林/抗生蛋白鏈菌素之厄勒氏BSS的情況下，以100 µL每孔MEM在96孔板中每孔接種5 × 10⁵ 個細胞，在約37℃下在5% CO₂ 中培育。第二天將細胞＞ 90%融合。移除培養基，且暫時使用20 µL每孔的基於OptiMEM-聚乙烯-亞胺之轉染反應劑(OptiMEM，Invitrogen，聚乙二亞胺，Aldrich目錄號40,827-7) (包括上文所描述之三種質體)來轉染細胞。在添加轉染混合物之後2至4小時，添加具有與用於接種細胞相同的組成之MEM。隨後添加在MEM中預稀釋之化合物原料(最終媒劑濃度不超出0.1%)。在使用雙重光螢光素酶檢定系統(Dyer等人，Anal. Biochem. 2000, 282, 158-161)在相同細胞提取物中依序量測螢火蟲及海腎螢光素酶活性之前，培育細胞額外16小時。所有實驗均進行三次。

為評定實例化合物之FXR促效效力，在M1H檢定中測定效力，且將其列於下表1中(M1H EC₅₀ )。表 1

實例	FRET EC₅₀ (nM)	M1H EC₅₀ (nM)
實例1		14.2	5.5
比較實例1		7.5	1.2
比較實例2		3.4	2

實例 5 ：評定食蟹猴中之活體內藥力學

實例1之式(I)、比較實例1及比較實例2的活體內藥力學測定如下。測試製 品及調配物 口服懸浮液劑量

在pH 2下的1%月桂基硫酸鈉(SLS)、1%乙醇及98%水之水性懸浮液中以1 mg/mL之濃度調配式(I) (實例 1 )之口服溶液劑量。在1%羥丙基甲基纖維素(HPMC)、0.5% Tween 80及98.5%水中以2.5 mg/mL之濃度調配比較實例 1 及比較實例 2 之口服懸浮液劑量。靜脈內劑量

在包括5% DMSO、15% NMP、60% PEG 300及水的具有1.1當量之NaOH之媒劑中以0.5 mg/mL之濃度調配式(I) (實例 1 )、比較實例 1 及比較實例 2 之化合物的靜脈內劑量。動物

各投與組由三至六隻雄性食蟹猴組成。在投與時，動物體重在2.4 kg與4.4 kg之間。投與

對於5 mg/kg之劑量，經由經口管飼以2 mL/kg或經由鼻胃插管以5 mL/kg向猴投與口服測試製品。對於1 mg/kg之劑量，以大約30分鐘輸注經由留置導管在隱靜脈或頭靜脈中以大約2 mL/kg投與靜脈內測試製品。樣品收集

在自各動物投與之後的指定時間點處採集靜脈血液樣品。將血液樣品收集且轉移至含有鉀(K₂ ) EDTA抗凝血劑之管中。測定血漿中之 FGF19 濃度

使用來自BioVendor (產品編號RD191107200R)之FGF19 ELISA檢定套組來測定所收集血液樣品中之FGF19濃度。測定血漿中之藥物濃度

對於在API 5000 LC/MS/MS系統上之分析，用含有內部標準物之200 µL乙腈(ACN)處理50 µL之各血漿樣品的等分試樣。以5000 RPM將以上溶液離心10分鐘，且將50 µL清液轉移至清潔96孔板，隨後添加200 µL水。將10 µL之等分試樣注入至API 5000 LC/MS/MS系統。

對於在Applied Biosystems API 5500 LC/MS/MS系統上之分析，用含有內部標準物之120 µL乙腈(ACN)處理20 µL之各血漿樣品的等分試樣。將以上溶液離心，且將100 µL清液轉移至清潔96孔板，隨後添加100 µL之水。將7 µL至10 µL之等分試樣注入至API 5500 LC/MS/MS系統。HPLC 條件

使用來自Agilent Technologies (部件編號735700-902)之Zorbax Extend C18 HPLC管柱(50 × 2.1 mm，3.5 µm) (比較實例1及比較實例2)或Waters BEH C18管柱(50 × 2.1 mm，1.7 µm) (實例1)。對於Zorbax Extend C18 HPLC管柱，移動相A含有用甲酸調節至pH 3.0的1%乙腈於10 mM甲酸銨中之水溶液，且移動相B含有用甲酸調節至pH 4.6的10% 10 mM甲酸銨於乙腈中。對於Waters BEH C18管柱，移動相A含有95%水、5%乙腈及0.1%甲酸，且移動相B含有50%甲醇、50%乙腈及0.1%甲酸。具有兩個相同Agilent 1200系列二元泵(P/N G1312A Bin泵)之Thermo Aria多工器用於溶離及分離。所使用溶離程式闡述於針對Zorbax Extend C18 HPLC之下表2中及針對Waters BEH C18管柱之表3中。表 2.

時間 ( 秒 )	步驟註解	流動速率 ( mL/min )	移動相 A (%)	移動相 B (%)
30	樣品裝載	0.50	85	15
180	斜變	0.50	50	50
90	斜變	0.50	99	1
60	溶離	0.50	99	1
120	再均衡	0.50	85	15

表 3.

時間 ( 秒 )	步驟註解	流動速率 (mL/min)	移動相 A (%)	移動相 B (%)
0	樣品裝載	0.80	45	55
60	斜變	0.80	35	65
63	斜變	0.80	5	95
78	斜變	0.80	5	95
90	步進	0.80	45	55

來自AB Sciex，Foster City，CA之API 5000三重四極質譜儀用於多個反應監測模式中以定量化合物。所使用質譜參數闡述於下表4中。表 4.

離子源	噴霧電壓(V)	氣體1 (Arb)	氣體2 (Arb)	碰撞氣體(Arb)	乾燥器溫度(℃)
Turbo離子噴霧	5500	70	50	6	550

食蟹猴中之經口與 IV 投與

法尼醇X受體在遠端小腸中以及全身性地在諸如肝臟之器官中的活化直接促使FGF19之表現及分泌。在經口投與及靜脈內投與實例 1 、比較實例 1 或比較實例 2 的劑量之後，血漿FGF19含量經評估為雄性食蟹猴中之FXR活化的藥力學標記物。在經口投與(PO)與靜脈內投與(IV)之後FGF19的含量之間的差用以比較所投與之各化合物的腸道FXR促效作用(經由PO資料之分析)與系統性FXR促效作用(經由IV資料之分析)的程度。在24小時週期內在各時間點處量測藥物及FGF19之血漿含量以產生藥代動力學及藥力學曲線。

圖1描繪在經實例1之化合物投與後食蟹猴中之FGF19血漿濃度隨時間的圖表。

圖2描繪在經比較實例1之化合物投與後食蟹猴中之FGF19血漿濃度隨時間的圖表。

圖3描繪在經比較實例2之化合物投與後食蟹猴中之FGF19血漿濃度隨時間的圖表。

藥代動力學資料概述於下表5中。表 5.

實例	組	FGF19 C _最大 (pg/mL)	FGF19 AUC _最後 (pg/mL.h)	GS-AUC _最後 (nM.h)	AUC _最後與 FG19/GS 比率	PO/IV
實例1	IV	432 +/- 100	5144 +/- 2199	3150 +/- 1030	1.6	7.8
PO	6260 +/- 2194	28153 +/- 11539	2250 +/- 1640	12.5
比較實例1	IV	2350 +/- 179	22798 +/- 2387	1630 +/- 323	14	1.37
PO	3810 +/- 195	32085 +/- 4252	1670 +/- 250	19.2
比較實例2	IV	1179 +/- 226	10757 +/- 2551	3140 +/- 167	3.4	8.2
PO	3186 +/- 856	18193 +/- 7134	643 +/- 216	28

如結果中所反映，相較於FGF19在投與前的基線含量，實例1、比較實例1及比較實例2之經口投與全部導致在投與時間間隔內血漿FGF19的增加。此指示腸道FXR受體之促效作用。實例1之IV投與未導致FGF19之增加，從而指示系統性FXR促效作用之缺乏。相比之下，相較於FGF19在投與前的基線含量，比較實例1及比較實例2之IV投與增加FGF19含量，從而指示系統性FXR促效作用發生。

此等資料表明，實例1及比較實例2之廻腸暴露導致腸道上皮細胞中之FXR活化。資料進一步表明，相對於實例1，比較實例1及比較實例2經由IV投與之全身性暴露導致更大系統性非腸道FXR活化。實例 6 ： UGT1A1 抑制

針對UGT1A1之抑制來測試式(I)化合物(實例1)，且對照比較實例1進行比較。為執行檢定，在探測受質雌二醇(10 µM)之存在下，在37℃下用表現人類UGT1A1之Supersomes^TM (0.25 mg/mL)、阿拉黴素(alamethicin) (25 µg/mg)及UDPGA (5 mM)將樣品化合物培育30 min。除測試化合物以外，篩選選擇性UGT1A1抑制劑阿紮那韋(atazanavir)作為陽性對照。藉由將等分試樣猝滅至兩體積甲醇中來終止反應。在4℃下以2500 rpm將樣品離心30 min，且用含甲酸之去離子水(最終甲酸濃度0.1%)及內部標準物稀釋清液之等分試樣。使用Cyprotex通用LC-MS/MS條件來監測雌二醇3-葡萄糖苷酸形成。相較於媒劑對照的代謝物形成之減少用以計算IC50值。

資料展示，實例1之化合物展示所比較化合物之最強效的UGT1A1抑制。實例1具有0.44 µM之IC₅₀ 。實例 7 ： CYP2C8 、 CYP3A4 及 CYP2B6 抑制

式(I)化合物(實例1)針對CYP2C8、CYP3A4及CYP2B6抑制評定，且對照比較實例1進行比較。CYP2C8

在探測受質甲苯磺丁脲(120 µM)之存在下，在37℃下用人類肝臟微粒體(1 mg/mL)及NADPH (1 mM)將六種樣品化合物濃縮物(0.1 µM、0.25 µM、1 µM、2.5 µM、10 µM、25 µM，於DMSO中；最終DMSO濃度0.25%)培育60分鐘。除測試化合物以外，篩選選擇性CYP2C9抑制劑磺胺噻唑作為陽性對照。CYP3A4

在探測受質咪達唑侖(midazolam) (2.5 µM)之存在下，在37℃下用人類肝臟微粒體(0.1 mg/mL)及NADPH (1 mM)將六種樣品化合物濃縮物(0.1 µM、0.25 µM、1 µM、2.5 µM、10 µM、25 µM，於DMSO中；最終DMSO濃度0.26%)培育5 min。除測試化合物以外，篩選選擇性CYP3A4抑制劑酮康唑(ketoconazole)作為陽性對照。可替代地，在探測受質睪固酮(50 µM)之存在下，在37℃下用人類肝臟微粒體(0.5 mg/mL)及NADPH (1 mM)將六種樣品化合物濃縮物(0.1 µM、0.25 µM、1 µM、2.5 µM、10 µM、25 µM，於DMSO中；最終DMSO濃度0.275%)培育5 min。除測試化合物以外，篩選選擇性CYP3A4抑制劑酮康唑作為陽性對照。CYP2B6

在探測受質布洛芬(bupropion) (110 µM)之存在下，在37℃下用人類肝臟微粒體(0.1 mg/mL)及NADPH (1 mM)將六種測試化合物濃縮物(0.1 µM、0.25 µM、1 µM、2.5 µM、10 µM、25 µM，於DMSO中；最終DMSO濃度0.3%)培育5 min。除測試化合物以外，篩選選擇性CYP2B6抑制劑噻氯匹定(ticlopidine)作為陽性對照。

對於CYP2B6、CYP2C8及CYP3A4培育中之各者，藉由添加甲醇來終止反應。隨後將樣品離心且藉由LC-MS/MS分析。在分析之前，將含有內部標準物的含甲酸之去離子水(最終濃度0.1%)添加至最終樣品。相較於媒劑對照的代謝物形成之減少用以計算IC50。

資料展示，實例1之化合物不抑制CYP2B6，而比較實例1抑制CYP2B6。實例 8 ： 製備式 (I) 甲磺酸鹽形式 I

藉由在具有異丙醇(1 mL)之小瓶中將6-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯-4-氟苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基氮雜環丁-1-基)菸鹼酸(0.050 g，0.0827 mmol)與甲磺酸(8 uL，0.123 mmol)合併來製備式(I)甲磺酸鹽形式I，從而得到漿料。漿料加熱約30分鐘至約50℃，隨後使其緩慢冷卻至室溫且漿化約16小時。隨後過濾漿料，且所分離固體由呈現於圖4中之XRPD表徵。隨後在約50℃下在真空烘箱中乾燥固體，且該等固體由產生相同圖案之XRPD表徵。式(I)甲磺酸鹽形式I XRPD峰值包括在以下各者處之峰值：3.2°2θ、6.4°2θ、9.6°2θ、12.8°2θ、19.3°2θ、22.1°2θ、22.6°2θ、25.8°2θ、29.1°2θ。所獲得XRPD峰值列於下表1中。表 1.

編號	位置[°2θ]	相對強度[%]
1	3.2	55
2	6.4	24
3	8.0	4
4	9.6	78
5	10.6	3
6	12.8	46
7	17.3	4
8	18.2	7
9	19.3	59
10	20.1	2
11	22.1	23
12	22.6	100
13	23.7	6
14	24.3	10
15	25.8	20
16	26.5	3
17	27.3	5
18	28.1	3
19	29.1	19
20	32.5	12
21	34.4	3
22	35.5	2
23	36.9	9

執行DSC及TGA分析。式(I)甲磺酸鹽形式I之DSC熱分析圖展示在約221℃下之吸熱事件，隨後為放熱事件，如在圖5中所見。式(I)甲磺酸鹽形式I之TGA熱分析圖展示在加熱至約200℃時約0.6%之重量減輕，如在圖6中所見。

式(I)甲磺酸鹽形式I亦藉由將6-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯-4-氟苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基氮雜環丁-1-基)菸鹼酸(3.00 g，4.96 mmol)懸浮液形式溶解於MeCN/水(1.5:1 v/v，15 mL)中，且用氫氧化鈉水溶液(30 wt%，0.56 mL，5.95 mmol)處理而形成。隨後在數小時內將所得溶液裝入至含有經預加熱至約50℃的甲磺酸(1.0 mL，15.9 mmol)於MeCN (15 mL)中之攪動溶液的第二容器。所得漿料在約50℃下老化數小時，且隨後冷卻至約20℃。在真空下過濾漿料，且在高達約60℃之高溫下在真空下乾燥所得固體以得到式(I)甲磺酸鹽形式I。

式(I)甲磺酸鹽形式I亦藉由將6-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯-4-氟苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基氮雜環丁-1-基)菸鹼酸(0.5 g，0.83 mmol)以懸浮液形式溶解於丙酮/水(97:3 v/v，10 mL)中且加熱至約55℃而形成。將甲磺酸(60 μL，0.91 mmol)裝入至漿料，且在約55℃下使混合物老化數小時。漿料冷卻至約20℃且在真空下過濾。所得固體用丙酮洗滌，且在高達約60℃之高溫下在真空下乾燥以得到式(I)甲磺酸鹽形式I。 * * *

除非另外定義，否則本文中所使用之所有技術及科學術語均具有與一般熟習此項技術者通常所理解相同的含義。

因此，應理解，儘管已藉由較佳實施例及視情況存在之特徵特定地揭示本發明，但本文中所揭示的實施於本文中之本發明的修改、改進及變化可由熟習此項技術者採用，且認為此類修改、改進及變化在本發明之範疇內。此處提供之材料、方法及實例代表較佳實施例，為例示性的，且不意欲作為對本發明之範疇的限制。

已在本文中廣泛且一般性地描述本發明。屬於通用揭示內容內的較狹義物種及亞屬組中之各者亦形成本發明之部分。此包括本發明之一般性描述，其限制條件或負限制為自該類屬中移除任何主題，無論所刪除之材料是否在本文中特定敍述。

另外，在就馬庫西群組(Markush group)而言描述本發明之特徵或態樣的情況下，熟習此項技術者將認識到，亦藉此就馬庫西群組之任一單個成員或成員子組而言描述本發明。

應理解，雖然已結合以上實施例描述本發明，但前述描述及實例意欲說明而非限制本發明之範疇。本發明之範疇內的其他態樣、優點及修改對於熟習本發明相關技術者而言將顯而易見。

圖4為式(I)甲磺酸鹽形式I之X射線粉末繞射圖。

圖5為式(I)甲磺酸鹽形式I之DSC曲線。

圖6為式(I)甲磺酸鹽形式I之TGA曲線。

Claims

一種具有下式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，
如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其供用於治療法尼醇(Farnesoid)X受體(FXR)介導之病狀。
如請求項2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該FXR介導之病狀為肝臟疾病。
如請求項2至3中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該FXR介導之病狀為非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。
如請求項2至3中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該FXR介導之病狀為原發性硬化性膽管炎(PSC)。
如請求項2至3中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該FXR介導之病狀為原發性膽汁性膽管炎(PBC)。
如請求項2至3中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該 FXR介導之病狀為肝纖維變性。
如請求項2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該FXR介導之病狀為發炎性腸病(IBD)。
一種醫藥組合物，其包含具有下式(I)之化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項9之醫藥組合物，其進一步包含醫藥學上可接受之載劑。
一種如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其係用於製造用於治療法尼醇X受體(FXR)介導之病狀的藥劑。
如請求項11之用途，其中該FXR介導之病狀選自由以下各者組成之群：慢性肝內病狀；肝纖維變性；肝臟之慢性或阻塞性發炎病症；肝硬化；肝脂肪變性；急性或慢性肝臟衰竭；主要肝切除之後的肝臟缺血；化療相關脂肪變性肝炎(CASH)；原發性硬化性膽管炎(PSC)；胃腸道或肝臟之贅生性疾病；及發炎性腸病(IBD)；脂質失調或脂蛋白失調；I型糖尿病；II型糖尿病；選自由以下各者組成之群的I型糖尿病及II型糖尿病之臨床併發症：糖尿病腎病變、糖尿病神經病變、糖尿病性視網膜病變及臨床顯現長期糖尿病之其他所觀測到的影響；肥胖；選自由血脂異常、糖尿病及異常高身體質量指數之組合病狀組成之群的代謝症候群；急性心肌梗塞；急性中風；以慢性阻塞性動脈粥樣硬化呈現之結果所出現的血栓；非惡性過度增殖性病症；選自由肝細胞癌、結腸腺瘤及多發性瘜肉組成之群的惡性過度增殖性病症；結腸腺癌；乳癌；胰臟腺癌；及巴雷特氏食道症(Barrett's esophagus)。
如請求項11之用途，其中該FXR介導之病狀選自由以下各者組成之群：肝外膽汁鬱積性病狀；膽汁鬱積性或纖維變性影響，其與酒精誘發之肝硬化或與病毒媒介形式之肝炎相關聯；原發性膽汁性肝硬化(PBC)；非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)；及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。
如請求項11之用途，其中該FXR介導之病狀為發炎性腸病。
一種凋亡信號調節激酶1(ASK1)抑制劑與法尼醇X受體(FXR)促效劑之組合的用途，其係用於製造用於治療有需要之患者中肝臟疾病的藥劑，其中該FXR促效劑為式(I)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項15之用途，其中該ASK1抑制劑為式(II)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體、立體異構體混合物或互變異構體。
如請求項15至16中任一項之用途，其中FXR促效劑及該ASK1抑制劑係分別投與。
如請求項15至16中任一項之用途，其中該肝臟疾病為非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。
如請求項15至16中任一項之用途，其中該肝臟疾病為原發性硬化性膽管炎(PSC)。
如請求項15至16中任一項之用途，其中該肝臟疾病為原發性膽汁性肝硬化(PBC)。
一種醫藥組合物，其包含治療有效量之凋亡信號調節激酶1(ASK1)抑制劑及治療有效量之法尼醇X受體(FXR)促效劑，其中該FXR促效劑為式(I)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項21之醫藥組合物，其中該ASK1抑制劑為式(II)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體、立體異構體混合物或互變異構體。
如請求項21至22中任一項之醫藥組合物，其進一步包含醫藥學上可接受之載劑。
一種乙醯CoA羧化酶(ACC)抑制劑與法尼醇X受體(FXR)促效劑之組合的用途，其係用於製造用於治療有需要之患者中肝臟疾病的藥劑，其中該FXR促效劑為式(I)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項24之用途，其中該ACC抑制劑為式(III)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體、立體異構體混合物或互變異構體。
如請求項24至25中任一項之用途，其中該ACC抑制劑及該FXR促效劑係分別投與。
如請求項24至25中任一項之用途，其中該肝臟疾病為非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。
如請求項24至25中任一項之用途，其中該肝臟疾病為原發性硬化性膽管炎(PSC)。
如請求項24至25中任一項之用途，其中該肝臟疾病為原發性膽汁性肝硬化(PBC)。
一種醫藥組合物，其包含治療有效量之乙醯CoA羧化酶(ACC)抑制劑及治療有效量之法尼醇X受體(FXR)促效劑，其中該FXR促效劑為式(I)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項30之醫藥組合物，其中該ACC抑制劑為式(III)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體、立體異構體混合物或互變異構體。
如請求項30至31中任一項之醫藥組合物，其進一步包含醫藥學上可接受之載劑。
一種甲狀腺激素受體(THR)β促效劑與法尼醇X受體(FXR)促效劑之組合的用途，其係用於製造用於治療有需要之患者中肝臟疾病的藥劑，其中該FXR促效劑為式(I)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項33之用途，其中該THR β促效劑為式(IV)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體、立體異構體混合物或互變異構體。
如請求項33至34中任一項之用途，其中該THR β促效劑及該FXR促效劑係分別投與。
如請求項33至34中任一項之用途，其中該肝臟疾病為非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。
如請求項33至34中任一項之用途，其中該肝臟疾病為原發性硬化性膽管炎(PSC)。
如請求項33至34中任一項之用途，其中該肝臟疾病為原發性膽汁性肝硬化(PBC)。
一種醫藥組合物，其包含治療有效量之甲狀腺激素受體(THR)β及治療有效量之法尼醇X受體(FXR)促效劑，其中該FXR促效劑為式(I)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項39之醫藥組合物，其中該THR β促效劑為式(IV)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體、立體異構體混合物或互變異構體。
如請求項39至40中任一項之醫藥組合物，其進一步包含醫藥學上可接受之載劑。
一種式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之用途，
其係用於製造用於抑制患有肝臟疾病的患者中UGT1A1之藥劑。
一種下式之化合物的結晶形態：
如請求項43之結晶形態，其中該結晶形態為形態I，其X射線繞射圖在9.6度2θ、19.3度2θ及22.6度2θ加或減0.2度2θ處具有2θ反射。
如請求項43至44中任一項之結晶形態，其中X射線繞射圖進一步包含在3.2度2θ、6.4度2θ及12.8度2θ加或減0.2度2θ處之2θ反射。
如請求項43至44中任一項之結晶形態，其中X射線繞射圖進一步包含在22.1度2θ、25.8度2θ、29.1度2θ加或減0.2度2θ處之2θ反射。
如請求項43至44中任一項之結晶形態，其具有實質上如圖4中所示之X射線繞射圖。
如請求項43至44中任一項之結晶形態，其具有包含在約221℃處開始之吸熱的差示掃描熱量測定熱分析圖。
如請求項43至44中任一項之結晶形態，其具有實質上如圖5中所示之差示掃描熱量測定熱分析圖。
如請求項43至44中任一項之結晶形態，其具有實質上如圖6中所示之熱解重量分析。