TWI795561B - 芒果果實萃取物及由其所得生物活性物質用於護膚及保健的用途 - Google Patents

Abstract

本發明提供一種芒果果實萃取物用於製備皮膚抗紫外線與美白及抗醣化組合物之用途。本發明亦提供一種由該芒果果實萃取物所獲得的生物活性物質所包含之水解單寧化合物，及該生物活性物質用於製備抗醣化組合物之用途。

Description

芒果果實萃取物及由其所得生物活性物質用於護膚及保健的用途

本發明係關於一種芒果果實萃取物及由其獲得包含水解單寧化合物之生物活性物質之用途，特別係關於一種芒果果實萃取物用於製備皮膚抗紫外線與美白及抗醣化組合物之用途，以及該生物活性物質用於製備抗醣化組合物之用途。

皮膚為人體對抗陽光中的紫外線輻射提供第一線保護。皮膚包含表皮(包括最外側的角質層)、真皮、及皮下組織。表皮是皮膚的最外層並且不斷更新。表皮與真皮間存在持續分裂的細胞(如纖維母細胞、角質細胞、黑色素細胞)，該些細胞的活動對紫外線非常敏感。真皮含有膠原蛋白與彈性蛋白，其賦予肌膚彈性和支撐力量。當暴露於高量的紫外線(主要是紫外線A)，膠原纖維與彈性蛋白會受損，因而造成皮膚彈性降低、皺紋形成、及出現皮膚老化的外觀。為了延緩皮膚老化，減少紫外線照射對皮膚的損害極為重要。

白皙及透亮的膚色亦是年輕有活力的象徵。為了展現個人活力，現代人透過諸如化妝及皮膚保養等方式維持皮膚亮白。膚色主要取決於黑色素細胞生成黑色素的量。先天遺傳、內分泌失調、生活作息、日光曝曬、及藥物使用等原因都可能促使黑色素細胞生成黑色素，進而導致膚色黯沉或局部斑點。因此，開發主動抑制黑色素生成的方法是維持皮膚亮白的關鍵。

皮膚老化的另一原因是醣化反應(glycation)，其為還原糖的醛(酮)基與含胺基物質(例如蛋白質、核酸等)的胺基之間的一種非酵素性反應。當人體長期處於高血糖狀態，體內蛋白質容易與葡萄糖發生醣化反應，最終形成醣化終產物(advanced glycation end products,AGEs)。除了身體自行合成外，醣化終產 物也會經由飲食攝取進入體內。經過過度烹調或加工的食物中通常含有較高量的醣化終產物，例如燒烤食物、油炸物、麵包等。形成醣化終產物的蛋白質會失去正常的分子結構與生理功能，同時，醣化終產物也會增加細胞氧化壓力與誘導促發炎細胞因子之分泌，因此可能引發造成身體老化的多種代謝疾病，例如粥狀動脈硬化、神經退化疾病、白內障、腎臟衰竭等。就皮膚老化而言，醣化反應會影響膠原蛋白聚集形成纖維，而且醣化的膠原蛋白纖維變得僵硬而易脆，使皮膚易於形成皺紋。因此，抑制醣化反應發生亦是減緩皮膚老化的一項對策。

目前市售護膚產品中的防曬、美白、或抗醣化成分多為化學合成，該些成分若使用不當，可能有害皮膚健康。因此，開發兼具皮膚美白、抗紫外線、及抗醣化的天然成分以製備新型態的護膚產品實有其必要。

本發明之一目的在提供一種芒果果實萃取物用於製備皮膚抗紫外線與美白及抗醣化組合物之用途，其中該芒果果實萃取物係以一溶劑萃取一芒果果實而獲得，其中該芒果果實係指於幼果期或快速生長期，且果皮未轉黃的芒果果實。

在本發明之一實施例中，該溶劑與該芒果果實之重量比範圍為20：1至1：1，且該萃取係在55℃至100℃進行。

在本發明之一實施例中，該溶劑為水，且該芒果果實萃取物之濃度為至少0.25mg/mL。

在本發明之一實施例中，該芒果果實萃取物抑制黑色素形成、預防及修復紫外線A所致皮膚纖維母細胞的損傷、及抑制膠原蛋白醣化。

本發明之另一目的在提供一種包含如式(I)所示的化合物之生物活性物質：

本發明之又一目的在提供一種包含如式(I)或式(II)所示之化合物之生物活性物質用於製備抗醣化組合物之用途。

在本發明之一實施例中，該式(I)及式(II)化合物係分離自前述芒果果實萃取物。

在本發明之一實施例中，該式(I)或式(II)化合物抑制膠原蛋白醣化。

本發明揭露芒果果實萃取物不僅對皮膚細胞有紫外線防護與美白效果，而且能抑制蛋白質醣化作用，避免蛋白質因醣化反應而喪失正常結構與功能。此外，本發明亦揭露一種具有顯著抗醣化活性，包含式(I)及式(II)化合物之生物活性物質。鑒於紫外線輻射、黑色素過度沉澱、及醣化反應皆會導致皮膚老化外觀，尤其醣化反應更是身體老化的原因之一，而本發明揭露之芒果果實萃取物及該生物活性物質基於其特性可用於製備皮膚抗紫外線與美白及抗醣化之組合物，因此，本發明提供了延緩皮膚乃至個體的老化的新對策。前述皮膚抗紫外線與美白及抗醣化之組合物可為粉末、顆粒、溶液、膠體或膏體， 且可製成醫藥品、食品、飲品、或營養補充劑，藉由口服、皮膚塗抹或其他方式給予一個體。

以下將配合圖式進一步說明本發明的實施方式，下述所列舉的實施例係用以闡明本發明之特點及應用，而非用以限定本發明之範圍，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可做些許更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。

圖1顯示黑色素瘤細胞B16F10以麴酸(kojic acid)或本發明一實施例之芒果果實萃取物處理後的黑色素相對含量。

圖2顯示皮膚纖維母細胞以本發明一實施例之芒果果實萃取物預處理再經紫外線A照射後的細胞存活率。

圖3顯示皮膚纖維母細胞先經紫外線A照射再以本發明一實施例之芒果果實萃取物處理後的細胞存活率。

圖4顯示本發明一實施例之芒果果實萃取物對膠原蛋白醣化終產物生成的作用效果。

圖5顯示化合物1之質譜圖。

圖6A顯示化合物1之氫核磁共振(¹H-NMR)光譜。

圖6B顯示化合物1之碳核磁共振(¹³C-NMR)光譜。

圖6C顯示化合物1之氫-氫關聯性(correlation spectroscopy，COSY)光譜。

圖6D顯示化合物1之碳-氫異核單量子相關(heteronuclear single quantum correlation，HSQC)光譜。

圖6E顯示化合物1之碳-氫異核多鍵相關(heteronuclear multiple bond correlation，HMBC)光譜。

圖7顯示式(I)及式(II)化合物對膠原蛋白醣化終產物生成的作用效果。

定義

除非另有說明，本文中所使用之「一」、「該」及類似用語應理解為包含單數及複數形式。

本文中所使用數值為近似值，所有實驗數據皆表示在20%的範圍內，較佳為在10%的範圍內，最佳為在5%的範圍內。

本文所述的醫藥組合物可利用熟習此技藝者所詳知的技術而製備成一適合於非經腸道地(parenterally)或口服地(orally)投藥的劑型(dosage form)，其包括但不限於：注射品(injection)[例如，無菌的水性溶液(sterile aqueous solution)或分散液(dispersion)]、粉末(sterile powder)、錠劑(tablet)、片劑(troche)、口含錠(lozenge)、丸劑(pill)、膠囊(capsule)、分散性粉末(dispersible powder)、細顆粒(granule)、溶液、懸浮液(suspension)、乳劑(emulsion)、糖漿(syrup)、酏劑(elixir)、濃漿(slurry)以及類似之物。

本文所述的醫藥組合物可由非經腸道途徑(parenteral routes)來投藥，其包括但不限於：腹膜內注射(intraperitoneal injection)、皮下注射(subcutaneous injection)、肌肉內注射(intramuscular injection)、及靜脈內注射(intravenous injection)。

本文所述的醫藥組合物可包含一廣泛使用於藥物製造技術之醫藥上可接受的載劑(pharmaceutically acceptable carrier)。該醫藥上可接受的載劑可包含一或多種選自於由下列所構成之群組中的試劑：溶劑(solvent)、乳化劑(emulsifier)、懸浮劑(suspending agent)、分解劑(decomposer)、黏結劑(binding agent)、賦形劑(excipient)、安定劑(stabilizing agent)、螯合劑(chelating agent)、稀釋劑(diluent)、膠凝劑(gelling agent)、防腐劑(preservative)、潤滑劑(lubricant)、吸收延遲劑(absorption delaying agent)、脂質體(liposome)以及類似之物。該些試劑的選用與數量落在熟習此項技術者的專業素養與例行技術範疇內。

前述醫藥上可接受的載劑包含有一選自於由下列所構成之群組中的溶劑：水、生理鹽水(normal saline)、磷酸鹽緩衝鹽溶液(phosphate buffered saline，PBS)、含糖溶液、含醇水溶液(aqueous solution containing alcohol)、及它們的組合。

材料與方法 材料

自Thermo Fisher Scientific購買DMEM培養基(Gibco Dulbecco's modified Eagle’s medium)、含有Earle’s平衡鹽溶液之Eagle’s最低基本培養基 (Gibco Eagle’s minimum essential medium，簡稱MEM培養基)、胎牛血清(Gibco fetal bovine serum，FBS)、青黴素/鏈黴素(Gibco penicillin/streptomycin)、磷酸緩衝鹽溶液(Gibco PBS)、丙酮酸鈉、碳酸氫鈉、及非必需胺基酸。自AMERSCO購買用於細胞存活分析之3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide，MTT)。自Echo chemical購買二甲基亞碸(dimethyl sulfoxide，DMSO)。

溶劑係購自台灣默克公司，包括正己烷(n-hexane)、乙酸乙酯(ethyl acetate)、丙酮(acetone)、甲醇(methanol)、乙醇(ethanol)、乙腈(acetonitrile)、氯仿-d ₁ (氘化程度99.5%)、甲醇-d ₆ (氘化程度99.5%)、重水(deuterium oxide，氘化程度>99.8%)、及二甲基亞碸-d ₆ (dimethyl sulfoxide-d ₆ ，氘化程度>99.9%)。

化學分析儀器

化合物分離係利用管柱層析法(column chromatography)及薄層層析法(thin layer chromatography，TLC)。中壓液相層析(medium pressure liquid chromatography，MPLC)系統係為CombiFlash ^® Rf+(Teledyne ISCO)；管柱係選用自Sephadex LH-20(Amersham Biosciences)、Diaion HP-20(Mitsubishi Chemical)、Merck Kieselgel 60(40-63μm，Art.9385)、及Merck LiChroprep® RP-18(40-63μm，Art.0250)。高效液相層析(high performance liquid chromatography，HPLC)系統裝配Hitachi L-2310系列幫浦、Hitachi L-2420 UV-VIS偵測器(偵測波長為200nm至380nm)、及D-2000 Elite資料處理軟體；管柱係選用自分析級Discovery® HS C₁₈(250×4.6mm，5μm；SUPELCO)與Mightysil RP-18 GP 250(250×4.6mm，5μm；Kanto Chemical)，以及半製備級Discovery® HS C₁₈(250×10.0mm，5μm；SUPELCO)與製備級Discovery® HS C₁₈(250×21.0mm，5μm；SUPELCO)。層析系統配備紫外燈UVP UVGL-25(波長為254nm及365nm)。薄層層析片係塗覆矽膠60 F₂₅₄(0.25mm；Merck)或RP-18 F_254S(0.25mm；Merck)之鋁片。

化合物的化學結構係以質譜法(mass spectrometry，MS)及核磁共振光譜法(nuclear magnetic resonance spectrometry，NMR)確定。具體而言，使用二維離子阱串聯傅立葉轉換質譜(Bruker amaZon SL system)及電噴灑離子化串聯質譜(ESI-MS/MS；Thermo Scientific Orbitrap Elite system)；並使用400MHz Varian 400 FT-NMR取得一維與二維NMR光譜，以四甲基矽烷(tetramethylsilane，TMS)作為內部標準品(δ=0)。

細胞培養

以下實施例所用細胞包括購自美國典型培養物保存中心(American Type Culture Collection，ATCC)之小鼠黑色素瘤細胞株B16F10(ATCC CRL-6475)及人類皮膚纖維母細胞CCD-966SK(ATCC CRL-1881)。B16F10細胞在37℃、5%二氧化碳的條件下培養於添加10% FBS及1%青黴素/鏈黴素的DMEM培養基，以下稱DMEM細胞培養基。CCD-966SK細胞在37℃、5%二氧化碳的條件下培養於添加10% FBS、1mM丙酮酸鈉、1.5g/L碳酸氫鈉、0.1mM非必需胺基酸、及1%青黴素/鏈黴素之MEM培養基，以下稱MEM細胞培養基。

黑色素生成試驗

黑色素瘤細胞株B16F10的黑色素含量測定方法簡述如下。自經過指定處理的細胞培養物中收集細胞。該細胞以PBS溶液清洗並以胰蛋白酶(trypsin)溶液處理3分鐘，所得懸浮細胞以離心方式(400 xg，5分鐘)收集，經PBS溶液清洗二次，而後再懸浮於200μL PBS溶液。該細胞懸浮液以液態氮冷凍10分鐘，再置於室溫約30分鐘至完全解凍後，以離心方式(12,000g，3分鐘)移除上清液。餘下細胞沉澱與120μL氫氧化鈉混合均勻，再於60℃加熱1小時以獲得細胞裂解液。將100μL該細胞裂解液移入一96孔盤，並使用ELISA讀盤機(enzyme-linked immunosorbent assay reader；BioTek)測量該細胞裂解液在450nm的吸光值(OD 450)。黑色素相對含量係依下列公式計算：黑色素相對含量(%)=(各組OD450值/空白對照組OD450值)×100%。

MTT分析

細胞存活率係以MTT分析測定。簡言之，將MTT溶液(4mg/ml MTT溶於PBS溶液)依15μL/孔添加至96孔盤中的細胞，於室溫反應4小時。移除反應液後，將DMSO依50μL/孔添加至細胞並震盪反應10分鐘以溶解所生成的甲

(formazan)結晶。最終，使用ELISA讀盤機(BioTek)測量該細胞混合物在570nm的吸光值(OD 570)。細胞存活率係依下列公式計算：細胞存活率=(各組的OD 570值/空白對照組的OD 570值)×100%。

統計分析

數據表示為平均值±標準差(SD)。使用Excel軟體進行統計分析，數據間在統計上的顯著差異以學生t檢驗(student's t-test)判定。

實施例1 芒果果實萃取物之製備

本文所述的芒果(Mangifera indica)係指產地為台灣之芒果品種，但不以此為限。一般而言，芒果果實的生長發育分為四個階段，依次為(1)幼果期：芒果花謝後，果實開始緩慢生長且呈綠色；(2)快速生長期：果實快速肥大，果肉中澱粉逐漸累積；(3)成熟期：果實的內果皮硬化後即進入成熟期，此時果實外型變化不大但果實重量仍持續增加，一些物理性、化學性的變化仍在進行，例如果實硬度下降、糖度增加、果皮轉黃，使果實接近完熟可食階段；(4)老化期：果實完熟後即開始老化。本文所述的芒果果實係指於幼果期或快速生長期且果皮未轉黃的芒果果實。

為獲得一芒果果實萃取物，將長度約為3至7公分的未成熟芒果果實以均質機磨碎。其後，以水、醇類、或醇水混合物為溶劑對芒果果實均質物進行萃取，且該溶劑可添加0.1%至5%有機酸(如醋酸及檸檬酸)與氫氯酸之混合酸，其中，該溶劑與該芒果果實均質物之重量比為20：1至1：1。萃取溫度為介於55℃至100℃，較佳為55℃至85℃。以下實施例2-5所述芒果果實萃取物皆為以含0.1至0.5%醋酸、檸檬酸與氫氯酸之水溶液萃取，萃取時間為0.5至3小時。

經上述萃取步驟所得芒果果果實萃取物冷卻至室溫後，可進一步以3000至5000rpm之轉速在室溫離心5至10分鐘而獲得一上清液，且該上清液可使用400目(mesh)之濾網過濾，以移除殘餘固體物。該過濾後的芒果果實萃取物可進一步在45℃至70℃進行減壓濃縮而獲得一濃縮產物。為獲得固態的芒果果實萃取物，可將前述濃縮的芒果果實萃取物以例如冷凍乾燥、噴霧乾燥等乾燥方式去除溶劑，因此獲得粉末狀芒果果實萃取物。

實施例2 芒果果實萃取物抑制黑色素形成

為檢驗芒果果實萃取物對黑色素生成的影響，利用黑色素生成試驗測定黑色素瘤細胞株B16F10以實施例1所述芒果果實萃取物處理後，其黑色素含量變化。簡言之，將B16F10細胞依1.5×10⁵細胞/孔接種於6孔培養盤，各孔含有3mL DMEM細胞培養基。在37℃培養細胞24小時後，移除該細胞培養基，並將含有0.25mg/mL芒果果實萃取物(實驗組)或0.25mg/mL麴酸(正控制組)之3mL DMEM細胞培養基添加至各孔細胞。另設置一空白對照組，係僅以3mL DMEM 細胞培養基處理細胞。在37℃下培養48小時後，收集前述三組細胞以測定黑色素含量(三重複試驗)。

圖1顯示前述三組黑色素瘤細胞的黑色素相對含量。依據該圖，相比空白對照組，施予芒果果實萃取物使黑色相對含量明顯降低約18%，且此黑色素形成抑制效果與相同濃度麴酸(習知的美白生物活性物質)的抑制效果相當。此結果說明芒果果實萃取物具有不亞於習知美白生物活性物質的黑色素形成抑制功效。

實施例3 芒果果實萃取物預防及減少紫外線A照射所致皮膚纖維母細胞死亡

為檢驗芒果果實萃取物保護皮膚對抗紫外線照射的作用，利用細胞存活分析(MTT分析)評估人類皮膚纖維母細胞CCD-966SK預先以實施例1所述芒果果實萃取物處理再照射紫外線A(UVA防護試驗)，或先經紫外線A照射再予以實施例1所述芒果果實萃取物處理(UVA損傷修復試驗)的細胞存活率。

3.1 UVA防護試驗

將CCD-966SK細胞依5×10³個細胞/孔接種於96孔培養盤，各孔含有200μL MEM細胞培養基。在37℃培養細胞24小時後，移除該細胞培養基，將不含或含有0.5mg/mL芒果果實萃取物之200μL MEM細胞培養基添加至各孔細胞，再於37℃培養細胞24小時後，以下列方式處理前述細胞：(a)未經芒果果實萃取物預處理的細胞在無紫外線照射下培養1小時(空白對照組)；(b)未經芒果果實萃取物預處理的細胞置於紫外線照射箱(Vilber)中以15J/cm²紫外線A照射1小時(UVA組)，該輻射劑量會造成半數細胞死亡；或(c)經芒果果實萃取物預處理的細胞以15J/cm²紫外線A照射1小時(芒果果實萃取物+UVA組)。其後，對各組細胞進行MTT分析以計算細胞存活率。

圖2顯示皮膚纖維母細胞在不同處理後的細胞存活率。依據圖2，相比空白對照組，UVA組的細胞存活率約為61.8%，顯示紫外線A照射會造成皮膚纖維母細胞大量死亡。相比UVA組，芒果果實萃取物之預處理使UV照射下細胞的存活率回升至約84.1%。此結果說明芒果果實萃取物之施用可預防紫外線所致皮膚細胞的損傷或死亡。

3.2 UVA損傷修復試驗

將CCD-966SK細胞依5×10³個細胞/孔接種於96孔培養盤，各孔含有200μL MEM細胞培養基。在37℃培養細胞24小時後，以下列方式處理各孔細胞及更換細胞培養基：(a)在無紫外線照射下培養1小時後施以不含芒果果實萃取物之200μL MEM細胞培養基(空白對照組)；(b)以15J/cm²紫外線A照射1小時後施以不含芒果果實萃取物之200μL MEM細胞培養基(UVA組)；或(c)以15J/cm²紫外線A照射1小時後施以含有0.5mg/mL芒果果實萃取物之200μL MEM細胞培養基(UVA+芒果果實萃取物組)。各組細胞於37℃培養24小時，並進行MTT分析以計算細胞存活率。

圖3顯示皮膚纖維母細胞在不同處理後的細胞存活率。依據圖3，相比空白對照組，UVA組的細胞存活率約為42.9%，但細胞經UV照射後以芒果果實萃取物處理可使其存活率回升至約78.4%。此結果說明芒果果實萃取物之施用可減少或修復紫外線所致皮膚細胞的損傷。

實施例4 芒果果實萃取物抑制膠原蛋白醣化

為測試芒果果實萃取物的抗醣化活性，以抗醣化分析測定不同濃度之實施例1所述芒果果實萃取物對豬膠原蛋白醣化反應的抑制作用。簡言之，先使用200mM磷酸鹽緩衝溶液(pH 7.4)配製60mg/mL膠原蛋白溶液(含0.06%疊氮化鈉)及1.5M果糖溶液。為進行膠原蛋白醣化反應，將0.2mL膠原蛋白溶液與0.2mL果糖溶液之混合液與0.2mL的140、70、14、1.4、或0.14mg/mL芒果果實萃取物樣品(以去離子水稀釋)或去離子水(空白對照組)均勻混合，於50℃反應24小時，再添加胺基胍(aminoguanidine，AG，購自Sigma)以中止醣化反應。使用分光螢光計(FLx 800，BioTek)測量前述反應液(0.1mL)在0小時與24小時的螢光強度(激發波長360nm，偵測波長460nm)，並依下列公式計算膠原蛋白醣化終產物(AGEs)生成率：AGEs生成率=[(樣品螢光強度_24小時-樣品螢光強度_0小時)/(空白對照組螢光強度_24小時-空白對照組螢光強度_0小時)]×100%。

圖4顯示芒果果實萃取物對膠原蛋白醣化終產物生成的作用效果。依據該圖，相比空白對照組，140、70、14、1.4、及0.14mg/mL芒果果實萃取物之處理分別顯著降低醣化終產物生成量至約3.6%、9.6%、39.7%、59.2%、 及62.9%，顯示芒果果實萃取物可抑制體內蛋白質的醣化反應，進而延緩個體老化。

實施例5 式(I)及式(II)化合物之製備及鑑定

為獲取芒果果實萃取物中的抗醣化活性成分，首先，依實施例1所述方法製備1L芒果果實萃取物，藉由乙酸乙酯與水等比例液相分配的方式萃取該萃取物三次。將所得乙酸乙酯層萃取液合併，再經減壓濃縮乾燥可得到乙酸乙酯層萃取物約4.7g。

依據生物活性導引分離方法(bioassay guided fractionation)，使用Diaion HP-20管柱及水與甲醇漸減極性梯度混合之沖提液，對乙酸乙酯層萃取物(約4.7g)進行管柱層析，分離得到3個劃分層(分別標記為F1至F3)。其後，使用Sephadex LH-20管柱及甲醇沖提液，對F2或F3劃分層進行管柱層析，所得流出液再經薄層層析片分離，可分別得到3個劃分層(分別標記為F2-1至F2-3及F3-1至F3-3)。F3-2劃分層進一步以水與甲醇依體積比1：1之混合液作為移動相進行高效液相層析，可分離得化合物1約13.0mg。此外，F2-1劃分層進一步以水與甲醇依體積比2：1之混合液作為移動相進行高效液相層析，可分離得化合物2約23.0mg。

化合物1及化合物2的化學結構係以質譜法及核磁共振光譜法(NMR)確定。化合物1是一種淡褐色油狀物，由圖5所示之質譜圖觀察到一偽分子離子峰m/z 907[M-H]^-，故推測化合物1的分子量為908Da。依據圖6A所示之氫核磁共振光譜，化合物1具有一個醣基及五個芳香環構成的主體結構。依據圖6B所示之碳核磁共振光譜，化合物1具有共41個碳吸收訊號，分別為5個羰基吸收訊號、5個苯環吸收訊號、及1組醣基吸收訊號。此外，依據圖2C至2E所示之二維核磁共振光譜(COSY、HSQC、HMBC)，可推知化合物1中單一醣基及五個芳香環的連接方式及取代基位置，因此確認化合物1是一種水解單寧，其具有如式(I)所示之結構。化合物2以其質譜及核磁共振光譜經文獻比對確認是一種水解單寧，其具有如式(II)所示之結構。

實施例6 式(I)及式(II)化合物的抗醣化活性

為測試式(I)及式(II)化合物的抗醣化活性，利用如實施例4所述抗醣化分析測定該些化合物對豬膠原蛋白醣化反應的抑制作用。簡言之，將0.2mL膠原蛋白溶液與0.2mL果糖溶液之混合物與0.2mL的100μg/mL式(I)或式(II)化合物水溶液樣品或去離子水(空白對照組)均勻混合，於50℃反應24小時，並測量前述反應液(0.1mL)在0小時與24小時的螢光強度以計算膠原蛋白醣化終產物生成率。

圖7顯示式(I)及式(II)化合物對膠原蛋白醣化終產物生成的作用效果。依據該圖，相比空白對照組，式(I)及式(II)化合物之處理分別顯著減少醣化終產物生成量至約60.2%及73.7%，顯示該二種化合物具有顯著的抗醣化活性。

綜上所述，本發明揭露芒果果實萃取物不僅對皮膚細胞有紫外線防護與美白效果，而且能抑制蛋白質醣化作用，避免蛋白質因醣化反應而喪失正常結構與功能。此外，本發明亦揭露一種具有顯著抗醣化活性的式(I)及式(II)化合物。鑒於紫外線輻射、黑色素過度沉澱、及醣化反應皆會導致皮膚老化外觀，尤其醣化反應更是身體老化的原因之一，而本發明揭露之芒果果實萃取物及生物活性物質基於其特性可用於製備皮膚抗紫外線與美白及抗醣化之組合物，因此，本發明提供了延緩皮膚乃至個體的老化的新對策。前述抗紫外線與美白及抗醣化之組合物可為粉末、顆粒、溶液、膠體或膏體，且可製成醫藥品、食品、飲品、或營養補充劑，藉由口服、皮膚塗抹或其他方式給予一個體。

Claims (3)

1. 一種芒果果實萃取物用於製備一皮膚抗紫外線與美白及抑制膠原蛋白醣化組合物之用途，其中該芒果果實萃取物係以一溶劑萃取一芒果(Mangifera indica)之果實而獲得，其中該芒果(Mangifera indica)之果實係指於幼果期或快速成長期的芒果(Mangifera indica)果實，其中該皮膚抗紫外線包含預防及修復紫外線A所致皮膚纖維母細胞的損傷，其中該溶劑與該芒果之果實的重量比為20：1至1：1，該溶劑為含0.1至0.5%醋酸、檸檬酸與氫氯酸之水溶液，該芒果果實萃取物的萃取溫度介於55℃至85℃，該芒果果實萃取物的萃取時間為0.5至3小時。
2. 一種芒果果實萃取物用於製備一皮膚抗紫外線與美白及抑制膠原蛋白醣化組合物之用途，其中該芒果果實萃取物係以一溶劑萃取一芒果(Mangifera indica)之果實而獲得，其中該芒果(Mangifera indica)之果實係指於幼果期或快速成長期的芒果(Mangifera indica)果實，其中該溶劑與該芒果之果實的重量比為20：1至1：1，該溶劑為含0.1至0.5%醋酸、檸檬酸與氫氯酸之水溶液，該芒果果實萃取物的萃取溫度介於55℃至85℃，該芒果果實萃取物的萃取時間為0.5至3小時，該芒果果實萃取物包含如式(I)所示的化合物，

   

   或

   
3. 如請求項1或2所述之用途，其中該芒果(Mangifera indica)之果實萃取物之濃度為至少0.25mg/mL。

Images