TW201702270A - 癌症組合療法 - Google Patents

Abstract

本發明提供以可結合群落刺激因子1受體(colony stimulating factor 1 receptor；CSF1R)之抗體與一或多種免疫刺激劑之組合來治療癌症的方法。

Description

癌症組合療法 相關申請案的交叉參考

本申請案主張2015年4月13日申請之美國臨時申請案第62/146,766號；及2015年7月10日申請之美國臨時申請案第62/190,945號的優先權，該等申請案各以全文引用的方式併入本文中用於任何目的。

使用結合群落刺激因子1受體(CSF1R)之抗體與一或多種免疫刺激劑之組合來治療癌症的方法。

群落刺激因子1受體(在本文中稱為CSF1R；在此項技術中亦稱為FMS、FIM2、C-FMS、M-CSF受體及CD115)為具有N末端胞外域(ECD)及C末端胞內域且具有酪胺酸激酶活性的單次跨膜受體。CSF1配位體或介白素34配位體(在本文中稱為IL-34；Lin等人，Science 320：807-11(2008))結合至CSF1R引起受體二聚、CSF1R蛋白質酪胺酸激酶活性上調、CSF1R酪胺酸殘基磷酸化及下游信號傳導事件。CSF1或IL-34活化CSF1R引起單核細胞及巨噬細胞以及其他單核細胞系(諸如蝕骨細胞、樹突狀細胞及微神經膠質細胞)輸送、存活、增殖及分化。

已發現許多腫瘤細胞或腫瘤基質細胞會產生CSF1，其藉由CSF1R活化單核細胞/巨噬細胞。已顯示腫瘤中之CSF1含量與腫瘤中 之腫瘤相關巨噬細胞(TAM)的含量相關。已發現較高含量之TAM與大部分癌症中的較差患者預後相關。另外，已發現CSF1促進腫瘤生長及進展至轉移，例如小鼠中之人類乳癌異種移植物。參見例如Paulus等人，Cancer Res.66：4349-56(2006)。另外，CSF1R在骨轉移中起溶骨性骨毀壞的作用。參見例如Ohno等人，Mol.Cancer Ther.5：2634-43(2006)。TAM部分地促進腫瘤生長，其係藉由釋放免疫抑制細胞激素及表現T細胞抑制表面蛋白質來抑制抗腫瘤T細胞效應功能。因此，結合至CSF1R的抗體可適用於治療癌症之方法中。

一些腫瘤細胞可藉由抑制免疫反應(例如藉由改變免疫調節基因之表現)來至少部分地逃避免疫系統偵測。舉例而言，免疫刺激分子與免疫抑制分子在體內的相對濃度可調節適應性免疫反應。抑制分子相對高的表現量及/或某些刺激分子的表現減少可產生下調適應性免疫反應的檢查點或開關。藉由上調適應性免疫反應或刺激先天性免疫反應來抵消此作用的藥劑為潛在癌症療法。

在癌症中調節免疫反應之藥劑(諸如免疫刺激劑)的組合療法可增加反應的深度及持久性且亦可拓寬針對對單獨單一藥劑無反應之患者的功效。

在一些實施例中，提供治療個體之癌症的方法，包含向個體投與抗CSF1R抗體及至少一種免疫刺激劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含免疫刺激分子(包括共刺激分子)之促效劑，而在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含免疫抑制分子(包括共抑制分子)之拮抗劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含免疫細胞(諸如T細胞)上所發現之免疫刺激分子(包括共刺激分子)之促效劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含免疫細胞(諸如T細胞)上所發現之免疫抑制分子(包括共抑制分子)的拮抗劑。在一些實施例中，至 少一種免疫刺激劑包含涉及先天性免疫之細胞(諸如NK細胞)上所發現之免疫刺激分子(包括共刺激分子)的促效劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含涉及先天性免疫之細胞(諸如NK細胞)上所發現之免疫抑制分子(包括共抑制分子)的拮抗劑。在一些實施例中，該組合使所治療個體中的抗原特異性T細胞反應增強且/或增強個體之先天性免疫反應。在一些實施例中，相較於單獨投與抗CSF1R抗體或免疫刺激劑，該組合使得動物癌症模型(諸如異種移植模型)中的抗腫瘤反應改善。在一些實施例中，相較於單獨投與抗CSF1R抗體或免疫刺激劑，該組合可動物癌症模型(諸如異種移植模型)中產生協同反應。

在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含T細胞活化抑制劑之拮抗劑，而在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含T細胞活化刺激劑之促效劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含CTLA4、LAG-3、半乳糖凝集素1、半乳糖凝集素9、CEACAM-1、BTLA、CD25、CD69、TIGIT、CD113、GPR56、VISTA、B7-H3、B7-H4、2B4、CD48、GARP、PD1H、LAIR1、TIM1、TIM3、TIM4、ILT4、IL-6、IL-10、TGFβ、VEGF、KIR、LAG-3、腺苷A2A受體、PI3Kδ或IDO之拮抗劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含B7-1、B7-2、CD28、4-1BB(CD137)、4-1BBL、ICOS、ICOS-L、OX40、OX40L、GITR、GITRL、CD27、CD40、CD40L、DR3、CD28H、IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21、IFNα、STING之促效劑，或Toll樣受體促效劑，諸如TLR2/4促效劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含結合至膜結合蛋白質B7家族成員(諸如B7-1、B7-2、B7-H2(ICOS-L)、B7-H3、B7-H4、B7-H5(VISTA)及B7-H6)的藥劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含結合至TNF受體家族成員的藥劑或結合至TNF受體家族成員(諸如CD40、CD40L、OX40、OX40L、GITR、GITRL、CD70、CD27L、CD30、CD30L、4-1BBL、CD137 (4-1BB)、TRAIL/Apo2-L、TRAILR1/DR4、TRAILR2/DR5、TRAILR3、TRAILR4、OPG、RANK、RANKL、TWEAKR/Fn14、TWEAK、BAFFR、EDAR、XEDAR、EDA1、EDA2、TACI、APRIL、BCMA、LTβR、LIGHT、DeR3、HVEM、VEGL/TL1A、TRAMP/DR3、TNFR1、TNFβ、TNFR2、TNFα、1β2、FAS、FASL、RELT、DR6、TROY或NGFβ)的共刺激或共抑制分子。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含拮抗或抑制細胞激素的藥劑，該細胞激素抑制T細胞活化，諸如IL-6、IL-10、TGFβ、VEGF。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含趨化因子拮抗劑，諸如CXCR2、CXCR4、CCR2或CCR4。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含刺激T細胞活化之細胞激素(諸如IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21及IFNα)的促效劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含抗體。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑可包含疫苗，諸如間皮素靶向疫苗或減毒的李斯特菌(listeria)癌症疫苗，諸如CRS-207。上述拮抗劑、促效劑及結合劑中之任何一或多者可與本文所述之抗CSF1R抗體中之任何一或多者組合。

在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含CD40促效劑，視情況與上列至少一種其他免疫刺激劑組合。在一些實施例中，CD40促效劑為抗體。在一些實施例中，CD40促效劑為抗CD40抗體。在一些實施例中，抗CD40抗體包含選自CP-870,893；達西珠單抗(dacetuzumab)；SEA-CD40；ADC-1013；RO7009789；及Chi Lob 7/4之抗體中的CDR。在一些實施例中，抗CD40抗體包含選自CP-870,893；達西珠單抗；SEA-CD40；ADC-1013；RO7009789；及Chi Lob 7/4之抗體的重鏈及輕鏈可變區。在一些實施例中，抗CD40抗體為選自CP-870,893；達西珠單抗；SEA-CD40；ADC-1013；RO7009789；及Chi Lob 7/4之抗體。在一些實施例中，CD40促效劑為 重組CD40L。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含CD40促效劑及至少一種選自上述彼等物中之任一者的其他免疫刺激劑。舉例而言，上述免疫刺激劑中之任何一或多者可與本文所述之抗CSF1R抗體中之任何一或多者組合以及與CD40促效劑(諸如CD40促效劑抗體)或重組CD40L(諸如上述抗CD40抗體中的任一者)組合。

在一些實施例中，同時或依序投與抗CSF1R抗體及至少一種免疫刺激劑。在一些實施例中，同時投與抗CSF1R抗體及至少一種免疫刺激劑。在一些實施例中，投與抗CSF1R抗體之前，投與一或多次劑量的至少一種免疫刺激劑。在一些實施例中，投與抗CSF1R抗體之前，個體接受至少一種免疫刺激劑的全過程療法。在一些實施例中，抗CSF1R抗體在第二次治療過程中聯合至少一種免疫刺激劑投與。在一些實施例中，投與抗CSF1R抗體之前，個體接受至少一次、至少兩次、至少三次或至少四次劑量的至少一種免疫刺激劑。在一些實施例中，至少一次劑量的至少一種免疫刺激劑與抗CSF1R抑制劑同時投與。在一些實施例中，投與至少一種免疫刺激劑之前，投與一或多次劑量的抗CSF1R抗體。在一些實施例中，投與至少一種免疫刺激劑之前，個體接受至少兩次、至少三次或至少四次劑量的抗CSF1R抗體。在一些實施例中，至少一次劑量的抗CSF1R抗體與至少一種免疫刺激劑同時投與。

在一些實施例中，癌症係選自非小細胞肺癌、黑色素瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、卵巢癌、胰臟癌、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱癌、子宮內膜癌、霍奇金氏淋巴瘤、肺癌、神經膠質瘤、多形性膠質母細胞瘤、結腸癌、乳癌、骨癌、皮膚癌、子宮癌、胃癌(gastric cancer)、胃癌(stomach cancer)、淋巴瘤、淋巴細胞性白血病、多發性骨髓瘤、前列腺癌、間皮瘤及腎癌。在一些實施例中，在選自手術、化學療法、放射療法或其組合之療法之後，癌症復發或進展。

在一些實施例中，提供包含抗CSF1R抗體及至少一種免疫刺激劑的組合物。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含T細胞活化抑制劑之拮抗劑，而在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含T細胞活化刺激劑之促效劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含CTLA4、LAG-3、半乳糖凝集素1、半乳糖凝集素9、CEACAM-1、BTLA、CD25、CD69、TIGIT、CD113、GPR56、VISTA、B7-H3、B7-H4、2B4、CD48、GARP、PD1H、LAIR1、TIM1、TIM3、TIM4、ILT4、IL-6、IL-10、TGFβ、VEGF、KIR、LAG-3、腺苷A2A受體、PI3Kδ或IDO之拮抗劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含B7-1、B7-2、CD28、4-1BB(CD137)、4-1BBL、ICOS、ICOS-L、OX40、OX40L、GITR、GITRL、CD27、CD40、CD40L、DR3、CD28H、IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21、IFNα、STING之促效劑，或Toll樣受體促效劑，諸如TLR2/4促效劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含結合至膜結合蛋白質B7家族成員(諸如B7-1、B7-2、B7-H2(ICOS-L)、B7-H3、B7-H4、B7-H5(VISTA)及B7-H6)的藥劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含結合至TNF受體家族成員的藥劑或結合至TNF受體家族成員(諸如CD40、CD40L、OX40、OX40L、GITR、GITRL、CD70、CD27L、CD30、CD30L、4-1BBL、CD137(4-1BB)、TRAIL/Apo2-L、TRAILR1/DR4、TRAILR2/DR5、TRAILR3、TRAILR4、OPG、RANK、RANKL、TWEAKR/Fn14、TWEAK、BAFFR、EDAR、XEDAR、EDA1、EDA2、TACI、APRIL、BCMA、LTβR、LIGHT、DeR3、HVEM、VEGL/TL1A、TRAMP/DR3、TNFR1、TNFβ、TNFR2、TNFα、1β2、FAS、FASL、RELT、DR6、TROY或NGFβ)的共刺激或共抑制分子。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含拮抗或抑制細胞激素的藥劑，該細胞激素抑制T細胞活化，諸如IL-6、IL-10、TGFβ、VEGF。 在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含刺激T細胞活化之細胞激素(諸如IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21及IFNα)的促效劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含趨化因子拮抗劑，諸如CXCR2、CXCR4、CCR2或CCR4。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含抗體。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑可包含疫苗，諸如間皮素靶向疫苗或減毒的李斯特菌癌症疫苗，諸如CRS-207。

在一些實施例中，組合物包含上述拮抗劑、促效劑及結合劑中之任何一或多者與本文所述之抗CSF1R抗體中之任何一或多者的組合。組合物可包括存在於各別容器或隔室中的各種治療劑，或者可包括混合在一起之兩種或超過兩種治療劑。

在一些實施例中，組合物包含抗CSF1R抗體及CD40促效劑，視情況與上列至少一種其他免疫刺激劑。在一些實施例中，CD40促效劑為抗CD40抗體。在一些實施例中，抗CD40抗體包含選自CP-870,893；達西珠單抗；SEA-CD40；ADC-1013；RO7009789；及Chi Lob 7/4之抗體中的CDR。在一些實施例中，抗CD40抗體包含選自CP-870,893；達西珠單抗；SEA-CD40；ADC-1013；RO7009789；及Chi Lob 7/4之抗體的重鏈及輕鏈可變區。在一些實施例中，抗CD40抗體為選自CP-870,893；達西珠單抗；SEA-CD40；ADC-1013；RO7009789；及Chi Lob 7/4之抗體。在一些實施例中，CD40促效劑為重組CD40L。在一些實施例中，組合物包含上述免疫刺激劑中之任何一或多者與本文所述之抗CSF1R抗體中之任何一或多者的組合以及與CD40促效劑(諸如CD40促效劑抗體)或重組CD40L(諸如上述抗CD40抗體中的任一者)的組合。組合物可包括存在於各別容器或隔室中的各種治療劑，或者可包括混合在一起之兩種或超過兩種治療劑。

在本文所述之組合物或方法中之任一者中，抗CSF1R抗體之抗體 重鏈及/或抗體輕鏈可具有下文所述之結構。

在本文所述之組合物或方法中之任一者中，抗CSF1R抗體重鏈可包含與選自SEQ ID NO：9、11、13及39至45之序列至少90%、至少95%、至少97%、至少99%或100%一致的序列。在本文所述之任一種方法中，抗CSF1R抗體輕鏈可包含與選自SEQ ID NO：10、12、14及46至52之序列至少90%、至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列。在本文所述之組合物或方法中之任一者中，抗CSF1R抗體重鏈可包含與選自SEQ ID NO：9、11、13及39至45之序列至少90%、至少95%、至少97%、至少99%或100%一致的序列，且抗CSF1R抗體輕鏈可包含與選自SEQ ID NO：10、12、14及46至52之序列至少90%、至少95%、至少97%、至少99%或100%一致的序列。

在本文所述之組合物或方法中之任一者中，抗CSF1R抗體HC CDR1、HC CDR2及HC CDR3可包含選自以下之序列組：(a)SEQ ID NO：15、16及17；(b)SEQ ID NO：21、22及23；以及(c)SEQ ID NO：27、28及29。在本文所述之組合物或方法中之任一者中，抗CSF1R抗體LC CDR1、LC CDR2及LC CDR3可包含選自以下之序列組：(a)SEQ ID NO：18、19及20；(b)SEQ ID NO：24、25及26；以及(c)SEQ ID NO：30、31及32。

在本文所述之組合物或方法中之任一者中，抗-CSF1R抗體重鏈可包含HC CDR1、HC CDR2及HC CDR3，其中HC CDR1、HC CDR2及HC CDR3包含選自以下之序列組：(a)SEQ ID NO：15、16及17；(b)SEQ ID NO：21、22及23；以及(c)SEQ ID NO：27、28及29；且輕鏈可包含LC CDR1、LC CDR2及LC CDR3，其中LC CDR1、LC CDR2及LC CDR3包含選自以下之序列組：(a)SEQ ID NO：18、19及20：(b)SEQ ID NO：24、25及26；以及(c)SEQ ID NO：30、31及32。

在本文所述之組合物或方法之任一者中，抗CSF1R抗體可包含： (a)包含與SEQ ID NO：9至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的重鏈及包含與SEQ ID NO：10至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的輕鏈；(b)包含與SEQ ID NO：11至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的重鏈及包含與SEQ ID NO：12至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的輕鏈；(c)包含與SEQ ID NO：13至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的重鏈及包含與SEQ ID NO：14至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的輕鏈；(d)包含與SEQ ID NO：39至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的重鏈及包含與SEQ ID NO：46至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的輕鏈；(e)包含與SEQ ID NO：40至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的重鏈及包含與SEQ ID NO：46至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的輕鏈；(f)包含與SEQ ID NO：41至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的重鏈及包含與SEQ ID NO：46至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的輕鏈；(g)包含與SEQ ID NO：39至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的重鏈及包含與SEQ ID NO：47至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的輕鏈；(h)包含與SEQ ID NO：40至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的重鏈及包含與SEQ ID NO：47至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的輕鏈；(i)包含與SEQ ID NO：41至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的重鏈及包含與SEQ ID NO：47至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的輕鏈；及(j)包含與SEQ ID NO：42至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的重鏈及包含與SEQ ID NO：48至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的輕鏈；(k)包含與SEQ ID NO：42至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的重鏈及包含與SEQ ID NO：49至少95%、至少97%、至少 99%或100%一致之序列的輕鏈；(1)包含與SEQ ID NO：42至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的重鏈及包含與SEQ ID NO：50至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的輕鏈；(m)包含與SEQ ID NO：43至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的重鏈及包含與SEQ ID NO：48至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的輕鏈；(n)包含與SEQ ID NO：43至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的重鏈及包含與SEQ ID NO：49至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的輕鏈；(o)包含與SEQ ID NO：43至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的重鏈及包含與SEQ ID NO：50至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的輕鏈；(p)包含與SEQ ID NO：44至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的重鏈及包含與SEQ ID NO：51至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的輕鏈；(q)包含與SEQ ID NO：44至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的重鏈及包含與SEQ ID NO：52至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的輕鏈；(r)包含與SEQ ID NO：45至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的重鏈及包含與SEQ ID NO：51至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的輕鏈；或(s)包含與SEQ ID NO：45至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的重鏈及包含與SEQ ID NO：52至少95%、至少97%、至少99%或100%一致之序列的輕鏈。

在本文所述之組合物或方法之任一者中，抗CSF1R抗體可包含：(a)包含以下的重鏈：具有序列SEQ ID NO：15之重鏈(HC)CDR1、具有序列SEQ ID NO：16之HC CDR2及具有序列SEQ ID NO：17之HC CDR3，以及包含以下的輕鏈：具有序列SEQ ID NO：18之輕鏈(LC)CDR1、具有序列SEQ ID NO：19之LC CDR2及具有序列SEQ ID NO：20之LC CDR3；(b)包含以下的重鏈：具有序列SEQ ID NO：21之重鏈 (HC)CDR1、具有序列SEQ ID NO：22之HC CDR2及具有序列SEQ ID NO：23之HC CDR3，以及包含以下的輕鏈：具有序列SEQ ID NO：24之輕鏈(LC)CDR1、具有序列SEQ ID NO：25之LC CDR2及具有序列SEQ ID NO：26之LC CDR3；或(c)包含以下的重鏈：具有序列SEQ ID NO：27之重鏈(HC)CDR1、具有序列SEQ ID NO：28之HC CDR2及具有序列SEQ ID NO：29之HC CDR3，以及包含以下的輕鏈：具有序列SEQ ID NO：30之輕鏈(LC)CDR1、具有序列SEQ ID NO：31之LC CDR2及具有序列SEQ ID NO：32之LC CDR3。

在本文所述之組合物或方法之任一者中，抗CSF1R抗體可包含：(a)包含序列SEQ ID NO：53之重鏈及包含序列SEQ ID NO：60之輕鏈；(b)包含序列SEQ ID NO：53之重鏈及包含序列SEQ ID NO：61之輕鏈；或(c)包含序列SEQ ID NO：58之重鏈及包含序列SEQ ID NO：65之輕鏈。在一些實施例中，抗體包含重鏈及輕鏈，其中抗體包含：(a)由序列SEQ ID NO：53組成之重鏈及由序列SEQ ID NO：60組成之輕鏈；(b)由序列SEQ ID NO：53組成之重鏈及由序列SEQ ID NO：61組成之輕鏈；或(c)由序列SEQ ID NO：58組成之重鏈及由序列SEQ ID NO：65組成之輕鏈。

在本文所述之組合物或方法之任一者中，抗CSF1R抗體可為人類化抗體。在本文所述之組合物或方法之任一者中，抗CSF1R抗體可選自Fab、Fv、scFv、Fab'及(Fab')₂。在本文所述之組合物或方法之任一者中，抗CSF1R抗體可為嵌合抗體。在本文所述之組合物或方法之任一者中，抗CSF1R抗體可選自IgA、IgG及IgD。在本文所述之組合物或方法之任一者中，抗CSF1R抗體可為IgG。在本文所述之任何方法中，抗體可為IgG1或IgG2。

在本文所述之組合物或方法之任一者中，抗CSF1R抗體可結合至人類CSF1R及/或結合至獼猴CSF1R。在本文所述之組合物或方法之任 一者中，抗CSF1R抗體可阻斷配位體與CSF1R之結合。在本文所述之組合物或方法之任一者中，抗CSF1R抗體可阻斷CSF1及/或IL-34與CSF1R之結合。在本文所述之組合物或方法之任一者中，抗CSF1R抗體可阻斷CSF1與IL-34與CSF1R之結合。在本文所述之組合物或方法之任一者中，抗CSF1R抗體可抑制配位體誘導之CSF1R磷酸化。在本文所述之組合物或方法之任一者中，抗CSF1R抗體可抑制CSF1-及/或IL-34誘導CSF1R磷酸化。在本文所述之組合物或方法之任一者中，抗CSF1R抗體可以小於1nM之親和力(K_D)結合至人類CSF1R。在本文所述之組合物或方法之任一者中，抗CSF1R抗體在CSF1或IL-34存在下可抑制單核細胞增殖及/或存活反應。

圖1A-圖1C顯示人類化抗體huAb1至huAb16中每一者之人類化重鏈可變區的比對，如實例1中所述。加框殘基為人類受體序列中變回相應小鼠殘基之胺基酸。

圖2A-圖2C顯示人類化抗體huAb1至huAb16中每一者之人類化輕鏈可變區的比對，如實例1中所述。加框胺基酸為人類受體序列中變回相應小鼠殘基之殘基。

圖3顯示抗CSF1R抗體與抗CD40抗體之組合，其在MC38腫瘤小鼠模型中展現的腫瘤生長抑制作用大於任一種單獨療法。

圖4A-圖4B顯示個別小鼠在第11天(圖4A)及第13天(圖4B)的腫瘤體積。抗CSF1R抗體與抗CD40抗體之組合在兩個時間點的效能顯著好於任一種單獨療法。

圖5顯示研究中所用之小鼠的體重。

腫瘤相關巨噬細胞(TAM)牽涉於許多癌症的發病機制，且與不良預後相關。TAM可經由多種機制抑制抗腫瘤反應。TAM表現抗炎性 細胞激素，諸如TGFβ及IL-10，該等抗炎性細胞激素的作用為抑制瘤內樹突狀細胞刺激細胞毒性T細胞反應之能力(Ruffell等人，2014,Cancer Cell)。TAM亦表現使免疫抑制性調節T細胞募集至腫瘤中的趨化因子(Curiel等人，2004,Nature Med.；Mizukami等人，2008,Int.J.Cancer)，此外，TAM表現T細胞抑制劑受體PD-1及CTLA-4之配位體，其用於直接抑制T細胞活化及功能。抑制CSF1R可減少小鼠模型及人類腫瘤中之免疫抑制TAM。參見例如Ries等人，2014,Cancer Cell,25：846-859；Pyontech等人，2013,Nature Med.,19：1264-1272；及Zhu等人，2014,Cancer Res.,74：5057-5069。與藉由減少免疫抑制而起作用的CSF1R阻斷相比，免疫刺激劑係藉由刺激免疫反應來起作用。

本文中所用之章節標題僅出於組織目的而不應被視為限制所述主題。

定義

除非另外定義，否則結合本發明使用之科學與技術術語將具有一般技術者通常理解之含義。此外，除非上下文另外需要，否則單數術語應包括複數且複數術語應包括單數。

結合重組DNA、寡核苷酸合成、組織培養及轉型(例如電穿孔、脂質體轉染)、酶促反應及純化技術使用的例示性技術在此項技術中已知。許多此類技術及程序尤其描述於例如Sambrook等人，Molecular Cloning：A Laboratory Manual(第2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.(1989))中。另外，此項技術中亦已知用於化學合成、化學分析、醫藥製備、調配及傳遞以及患者治療的例示性技術。

在本申請案中，除非另有陳述，否則「或」之使用意謂「及/或」。在多個附屬項的上下文中，「或」之使用僅以替代方式重新提及 超過一個前述獨立項或附屬項。此外，除非另外具體規定，否則諸如「元件」或「組件」之術語涵蓋包含一個單元之元件與組件以及包含超過一個子單元之元件與組件。

除非另外規定，否則如根據本發明使用之以下術語應理解為具有以下含義：術語「核酸分子」及「聚核苷酸」可互換使用，且係指核苷酸之聚合物。此類核苷酸聚合物可含有天然及/或非天然核苷酸且包括(但不限於)DNA、RNA及PNA。「核酸序列」係指構成核酸分子或聚核苷酸之線性核苷酸序列。

術語「多肽」與「蛋白質」可互換使用且係指胺基酸殘基聚合物，且不限於最小長度。此類胺基酸殘基聚合物可含有天然或非天然胺基酸殘基且包括(但不限於)肽、寡肽、胺基酸殘基之二聚物、三聚物及多聚物。全長蛋白質與其片段皆涵蓋於定義中。術語亦包括多肽之表現後修飾，例如糖基化、唾液酸化、乙醯化、磷酸化及其類似修飾。此外，出於本發明之目的，「多肽」係指原生序列包括修飾(諸如缺失、添加及取代(通常具有保守性))之蛋白質，只要該蛋白質保持所要活性。此等修飾可為有意的，如經由定點突變誘發；或可為偶然的，諸如經由產生蛋白質之宿主的突變或因PCR擴增所致的錯誤。

術語「CSF1R」在本文中係指全長CSF1R，其包括N末端ECD、跨膜域及胞內酪胺酸激酶域，具有或不具有N末端前導序列。在一些實施例中，CSF1R為具有胺基酸序列SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2之人類CSF1R。

如本文所用，術語「免疫刺激劑」係指藉由充當免疫刺激分子(包括共刺激分子)之促效劑或充當免疫抑制分子(包括共抑制分子)之拮抗劑來刺激免疫系統的分子。免疫刺激劑可為生物製劑，諸如抗體或抗體片段、其他蛋白質或疫苗，或可為小分子藥物。「免疫刺激分 子」包括作用為增強、刺激、誘導或以其他方式「開啟」免疫反應的受體或配位體。如本文所定義的免疫刺激分子包括共刺激分子。「免疫抑制分子」包括作用為減少、抑制、抑止或以其他方式「關閉」免疫反應的受體或配位體。如本文所定義的免疫抑制分子包括共抑制分子。此類免疫刺激及免疫抑制分子可為例如免疫細胞(諸如T細胞)上所發現或涉及先天免疫之細胞(諸如NK細胞)上所發現的受體或配位體。

術語「B細胞表面抗原CD40」及「CD40」本文中係指全長CD40，其包括N末端ECD、跨膜域及胞內域，具有或不具有N末端前導序列。在一些實施例中，CD40為具有胺基酸序列SEQ ID NO：96(前驅物，具有信號序列)或SEQ ID NO：97(成熟，無信號序列)的人類CD40。

術語「CD40促效劑」係指與CD40相互作用且增強CD40活性的部分。非限制性例示性CD40活性包括經由CD40進行信號傳導、增強抗原呈遞活性、誘導促炎性細胞激素及誘導殺腫瘤活性。在一些實施例中，CD40促效劑為抗CD40抗體。

術語「抗CD40抗體」係指特異性結合至CD40的抗體。除非另有特定說明，否則如本文所用，術語「抗CD40抗體」係指抗CD40促效劑抗體。

提及抗CSF1R抗體時，術語「阻斷配位體(諸如CSF1及/或IL-34)的結合及其文法變化形式」用於指抑制CSF1R與CSF1R配位體(諸如CSF1及/或IL-34)之間相互作用的能力。此類抑制可經由任何機制發生，包括直接干擾配位體結合(例如由於CSF1R上之重疊結合位點)，及/或改變配位體親和力之抗體所誘導的CSF1R構形變化等。稱為「功能性」之抗體及抗體片段特徵為具有此類特性。

如本文所用，術語「抗體」係指包含重鏈之至少互補決定區 (CDR)1、CDR2及CDR3及輕鏈之至少CDR1、CDR2及CDR3的分子，其中該分子能夠結合至抗原。術語抗體包括(但不限於)能夠結合抗原的片段，諸如Fv、單鏈Fv(scFv)、Fab、Fab'及(Fab')₂。術語抗體亦包括(但不限於)嵌合抗體、人類化抗體及各種物種之抗體，諸如小鼠、人類、食蟹獼猴等。

在一些實施例中，抗體包含重鏈可變區及輕鏈可變區。在一些實施例中，抗體包含至少一個包含重鏈可變區及重鏈恆定區至少一部分之重鏈，及至少一個包含輕鏈可變區及輕鏈恆定區至少一部分之輕鏈。在一些實施例中，抗體包含兩個重鏈，其中各重鏈包含重鏈可變區及重鏈恆定區的至少一部分，及兩個輕鏈，其中各輕鏈包含輕鏈可變區及輕鏈恆定區的至少一部分。如本文所使用，單鏈Fv(scFv)或包含例如單一多肽鏈(包含全部六個CDR(三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR))的任何其他抗體視為具有重鏈及輕鏈。在一些此類實施例中，重鏈為包含三個重鏈CDR之抗體區域且輕鏈為包含三個輕鏈CDR之抗體區域。

如本文所用，術語「重鏈可變區」係指包含重鏈CDR1、構架(FR)2、CDR2、FR3及CDR3之區域。在一些實施例中，重鏈可變區亦包含FR1的至少一部分及/或FR4的至少一部分。在一些實施例中，重鏈CDR1對應於Kabat殘基26至35；重鏈CDR2對應於Kabat殘基50至65；且重鏈CDR3對應於Kabat殘基95至102。參見例如Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest(1987及1991,NIH,Bethesda,Md.)；及圖1。在一些實施例中，重鏈CDR1對應於Kabat殘基31至35；重鏈CDR2對應於Kabat殘基50至65；且重鏈CDR3對應於Kabat殘基95至102。參看上文。

如本文所用，術語「重鏈恆定區」係指包含至少三個重鏈恆定域C_H1、C_H2及C_H3的區域。非限制性例示性重鏈恆定區包括γ、δ及 α。非限制性例示性重鏈恆定區亦包括ε及μ。各重鏈恆定區對應於抗體同型。舉例而言，包含γ恆定區之抗體為IgG抗體，包含δ恆定區之抗體為IgD抗體且包含α恆定區之抗體為IgA抗體。另外，包含μ恆定區之抗體為IgM抗體且包含ε恆定區之抗體為IgE抗體。特定同型可進一步細分為子類。舉例而言，IgG抗體包括(但不限於)IgG1(包含γ₁恆定區)、IgG2(包含γ₂恆定區)、IgG3(包含γ₃恆定區)及IgG4(包含γ₄恆定區)抗體；IgA抗體包括(但不限於)IgA1(包含α₁恆定區)及IgA2(包含α₂恆定區)抗體；且IgM抗體包括(但不限於)IgM1及IgM2。

在一些實施例中，重鏈恆定區包含一或多個賦予抗體所要特徵之突變(或取代)、添加或缺失。非限制性例示性突變為IgG4鉸鏈區中之S241P突變(恆定域CH1與CH2之間)，其使IgG4基元CPSCP變成CPPCP，此類似於IgG1中之相應基元。在一些實施例中，彼突變產生更穩定之IgG4抗體。參見例如Angal等人，Mol.Immunol.30：105-108(1993)；Bloom等人，Prot.Sci.6：407-415(1997)；Schuurman等人，Mol.Immunol.38：1-8(2001)。

如本文所用，術語「重鏈」係指至少包含重鏈可變區、具有或不具有前導序列的多肽。在一些實施例中，重鏈包含重鏈恆定區的至少一部分。如本文所用，術語「全長重鏈」係指包含重鏈可變區及重鏈恆定區、具有或不具有前導序列之多肽。

如本文所用，術語「輕鏈可變區」係指包含輕鏈CDR1、構架(FR)2、CDR2、FR3及CDR3之區域。在一些實施例中，輕鏈可變區亦包含FRI及/或FR4。在一些實施例中，輕鏈CDR1對應於Kabat殘基24至34；輕鏈CDR2對應於Kabat殘基50至56；且輕鏈CDR3對應於Kabat殘基89至97。參見例如Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest(1987及1991,NIH,Bethesda,Md.)；及圖1。

如本文所用，術語「輕鏈恆定區」係指包含輕鏈恆定域C_L之區 域。非限制性例示性輕鏈恆定區包括λ及κ。

如本文所用，術語「輕鏈」係指至少包含輕鏈可變區、具有或不具有前導序列的多肽。在一些實施例中，輕鏈包含輕鏈恆定區的至少一部分。如本文所用，術語「全長輕鏈」係指包含輕鏈可變區及輕鏈恆定區、具有或不具有前導序列之多肽。

如本文所用，「嵌合抗體」係指包含至少一個來自第一物種(諸如小鼠、大鼠、食蟹獼猴等)之可變區及至少一個來自第二物種(諸如人類、食蟹獼猴等)之恆定區的抗體。在一些實施例中，嵌合抗體包含至少一個小鼠可變區及至少一個人類恆定區。在一些實施例中，嵌合抗體包含至少一個食蟹獼猴可變區及至少一個人類恆定區。在一些實施例中，嵌合抗體包含至少一個大鼠可變區及至少一個小鼠恆定區。在一些實施例中，嵌合抗體之全部可變區來自第一物種且嵌合抗體之全部恆定區來自第二物種。

如本文所用，「人類化抗體」係指非人類可變區之構架區中的至少一個胺基酸置換為來自人類可變區之相應胺基酸的抗體。在一些實施例中，人類化抗體包含至少一個人類恆定區或其片段。在一些實施例中，人類化抗體為Fab、scFv、(Fab')₂等。

如本文所用，「CDR移植抗體」係指第一(非人類)物種之互補決定區(CDR)已移植至第二(人類)物種之構架區(FR)上的人類化抗體。

如本文所用，「人類抗體」係指在人體中產生的抗體；非人類動物中產生的包含人類免疫球蛋白基因之抗體，諸如XenoMouse®；及使用活體外方法(諸如噬菌體呈現)選擇之抗體，其中抗體文庫係基於人類免疫球蛋白序列。

術語「前導序列」係指位於多肽N末端之胺基酸殘基序列，其促進哺乳動物細胞分泌多肽。當自哺乳動物細胞輸出多肽時，前導序列可裂解形成成熟蛋白質。前導序列可為天然或合成的，且其可與其所 連接之蛋白質異源或同源。例示性前導序列包括(但不限於)抗體前導序列，諸如胺基酸序列SEQ ID NO：3及4，其分別對應於人類輕鏈及重鏈前導序列。非限制性例示性前導序列亦包括來自異源蛋白質之前導序列。在一些實施例中，抗體不具有前導序列。在一些實施例中，抗體包含至少一個前導序列，其可選自原生抗體前導序列及異源前導序列。

術語「載體」用於描述這樣一種聚核苷酸，其可經工程改造成含有一或多個可在宿主細胞中繁殖的經選殖之聚核苷酸。載體可包括以下元件中之一或多者：複製起點、一或多個調節所關注多肽之表現之調節序列(諸如啟動子及/或強化子)，及/或一或多個可選標記基因(諸如抗生素抗性基因及可用於比色分析法中的基因，例如β-半乳糖苷酶)。術語「表現載體」係指用於在宿主細胞中表現所關注多肽之載體。

「宿主細胞」係指可為或已成為載體或經分離聚核苷酸之接受體的細胞。宿主細胞可為原核細胞或真核細胞。例示性真核細胞包括哺乳動物細胞，諸如靈長類動物或非靈長類動物細胞；真菌細胞，諸如酵母；植物細胞；以及昆蟲細胞。非限制性例示性哺乳動物細胞包括(但不限於)NSO細胞、PER.C6®細胞(Crucell)以及293及CHO細胞，及其衍生物，分別諸如293-6E及DG44細胞。

如本文所用，術語「經分離」係指已與自然界中通常存在的至少一些組分分離的分子。舉例而言，當多肽與產生多肽之細胞的至少一些組分分離時，該多肽稱為「經分離」。若多肽在表現後由細胞分泌，則使含有多肽之清液層與產生其之細胞在實體上分離視為「分離」多肽。類似地，當聚核苷酸不為較大聚核苷酸(諸如基因組DNA或粒線體DNA，在DNA聚核苷酸的情況下)(其通常發現於自然界中)之一部分或與產生其之細胞中的至少一些組分分離(例如在RNA聚核 苷酸的情況下)時，稱聚核苷酸為「經分離」。因此，宿主細胞內之載體中所含的DNA聚核苷酸可稱為「經分離」，只要自然界中該聚核苷酸不存在於該載體中。

術語「升高之含量」意謂個體之特定組織中的蛋白質含量高於對照組(諸如未罹患癌症或本文所述之其他病狀的個體)中之相同組織。升高之含量可為任何機制之結果，諸如蛋白質之表現增加、穩定性提高、降解減少、分泌增加、清除率降低等。

術語「降低」意謂使個體之特定組織中的蛋白質含量降低至少10%。在一些實施例中，藥劑(諸如結合CSF1R的抗體)使個體之特定組織中的蛋白質含量降低至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%或至少90%。在一些實施例中，蛋白質含量相對於與藥劑(諸如結合CSF1R的抗體)接觸之前的蛋白質含量減少。

當在針對治療劑之抗性之情形下使用時，術語「抗性」意謂相對於個體過去對標準劑量之治療劑的反應或相對於患有類似病症之類似個體對標準劑量之治療劑的預期反應，對標準劑量之治療劑的反應降低或缺乏反應。因此，在一些實施例中，儘管個體先前並未經治療劑給藥，但個體可對治療劑具有抗藥性，或個體在一或多種前述場合對藥劑產生反應後可對治療劑產生抗藥性。

術語「個體」及「患者」在本文中可互換地用於指人類。在一些實施例中，亦提供治療其他哺乳動物(包括(但不限於)嚙齒動物、猿類、貓科動物、犬科動物、馬科動物、牛科動物、豬科動物、綿羊、山羊、實驗室哺乳動物、農用哺乳動物、運動型哺乳動物及哺乳寵物)之方法。

如本文所用，術語「樣品」係指獲自或來源於含有細胞及/或其 他分子實體之個體的組合物，該細胞及/或其他分子實體例如基於物理、生物化學、化學及/或生理特徵表徵、定量及/或鑑別。例示性樣品為組織樣品。

術語「組織樣品」係指獲自個體組織的類似細胞的統稱。組織樣品來源可為來自新鮮、冷凍及/或防腐器官或組織樣品或生物檢體或抽出物的固體組織；血液或任何血液組分；體液，諸如大腦脊髓液、羊膜液、腹膜液、滑液或間質液；個體妊娠或發育的任何時間的細胞。在一些實施例中，組織樣品為滑膜生物檢體組織樣品及/或滑液樣品。在一些實施例中，組織樣品為滑液樣品。組織樣品亦可為初級或經培養細胞或細胞株。視情況而言，組織樣品獲自疾病組織/器官。組織樣品可含有自然界中不與組織天然互混之化合物，諸如防腐劑、抗凝劑、緩衝劑、固定劑、營養物、抗生素或其類似物。如本文所用，「對照樣品」或「對照組織」係指獲自已知來源之樣品、細胞或組織，或咸信未罹患個體所治療之疾病之樣品、細胞或組織。

出於本文之目的，組織樣品「切片」意謂組織樣品之一部分或塊，諸如自固體組織樣品切下的組織或細胞之薄片。

本文所用之術語「癌症」係指展現增殖及生長程度異常高的細胞群。癌症可為良性(亦稱為良性腫瘤)、惡化前或惡性。癌細胞可為實體癌細胞或白血病癌細胞。本文所用之術語「癌症生長」係指包含癌症之細胞增殖或生長，此導致癌症尺寸或程度相應提高。

癌症之實例包括(但不限於)癌瘤、淋巴瘤、母細胞瘤、肉瘤及白血病。更特定而言，此類癌症之非限制性實例包括鱗狀細胞癌、小細胞肺癌、垂體癌、食道癌、星形細胞瘤、軟組織肉瘤、非小細胞肺癌(包括鱗狀細胞非小細胞肺癌)、肺腺癌、肺鱗狀癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌、胰臟癌、神經膠母細胞瘤、宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜或子宮癌、唾液 腺癌、腎癌、腎細胞癌、肝癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、腦癌、子宮內膜癌、睪丸癌、膽管癌、膽囊癌、胃癌、黑素瘤及多種類型之頭頸癌(包括頭頸部之鱗狀細胞癌)。

術語「復發性癌症」係指癌症在先前治療方案之後恢復，隨後存在癌症偵測不到的一段時間。

術語「漸進性癌症」為自治療方案開始，尺寸增加或腫瘤擴散之癌症。在某些實施例中，漸進性癌症為自治療方案開始，尺寸增加或腫瘤擴散至少10%、至少20%、至少30%、至少40%或至少50%的癌症。

「化學治療劑」為適用於治療癌症之化合物。化學治療劑之實例包括(但不限於)烷基化劑，諸如噻替派(thiotepa)及Cytoxan^®環磷醯胺；烷基磺酸鹽，諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶，諸如苯唑多巴(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、米特多巴(meturedopa)及尤利多巴(uredopa)；伸乙亞胺及甲基三聚氰胺，包括六甲蜜胺(altretamine)、三伸乙基蜜胺(triethylenemelamine)、三伸乙基磷醯胺(trietylenephosphoramide)、三伸乙基硫代磷醯胺(triethiylenethiophosphoramide)及三甲密胺(trimethylolomelamine)；乙醯精寧(acetogenins)(特定而言，布拉他辛(bullatacin)及布拉他辛酮(bullatacinone))；喜樹鹼(包括合成類似物拓朴替康(topotecan))；苔蘚蟲素(bryostatin)；海洋抑素(callystatin)；CC-1065(包括其合成類似物阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)及比折來新(bizelesin))；念珠藻環肽(cryptophycins)(特定言之，念珠藻環肽1及念珠藻環肽8)；海兔毒素(dolastatin)；多卡米辛(duocarmycin)(包括合成類似物KW-2189及CB1-TM1)；艾榴素(eleutherobin)；水鬼蕉鹼(pancratistatin)；沙考地汀(sarcodictyin)；海綿抑素(spongistatin)；氮芥(nitrogen mustards)，諸如苯丁酸氮芥 (chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷醯胺(cholophosphamide)、雌氮芥(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、二氯甲二乙胺、氧化二氯甲二乙胺鹽酸鹽、美法侖(melphalan)、新氮芥(novembichin)、芬司特瑞(phenesterine)、潑尼氮芥(prednimustine)、曲洛磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亞硝基脲(nitrosureas)，諸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)及雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素，諸如烯二炔抗生素(例如卡奇黴素(calicheamicin)，尤其是卡奇黴素γ1I及卡奇黴素ωl1(參見例如Agnew,Chem Intl.Ed.Engl.,33：183-186(1994))；達內黴素(dynemicin)，包括達內黴素A；雙膦酸鹽，諸如氯屈膦酸鹽(clodronate)；埃斯培拉黴素(esperamicin)；以及新抑癌蛋白發色團及相關色蛋白烯二炔抗生素發色團)、阿克拉黴素(阿克拉黴素)、放線菌素(actinomycin)、安麯黴素(authramycin)、偶氮絲胺酸(azaserine)、博來黴素(bleomycins)、放線菌素C、卡拉比辛(carabicin)、洋紅黴素(carminomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)、色黴素(chromomycinis)、放線菌素d、道諾黴素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-側氧基-L-正白胺酸、Adriamycin^®小紅莓(doxorubicin)(包括嗎啉基-小紅莓、氰基嗎啉基-小紅莓、2-吡咯啉基-小紅莓及去氧小紅莓)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、艾達黴素(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素(mitomycins)(諸如絲裂黴素C)、黴酚酸(mycophenolic acid)、諾加黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycins)、培洛黴素(peplomycin)、潑非黴素(potfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、奎那黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑黴素(streptonigrin)、鏈脲菌素(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司 他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代謝物，諸如甲胺喋呤及5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物，諸如迪諾特寧(denopterin)、甲胺喋呤(methotrexate)、蝶羅呤(pteropterin)、曲美沙特(trimetrexate)；嘌呤類似物，諸如氟達拉賓(fludarabine)、6-巰基嘌呤、硫米嘌呤、硫鳥嘌呤；嘧啶類似物，諸如安西他濱(ancitabine)、阿紮胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、雙去氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄激素，諸如卡魯睪酮(calusterone)、屈他雄酮丙酸酯(dromostanolone propionate)、環硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睪內酯(testolactone)；抗腎上腺藥物，諸如胺魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補充劑，諸如亞葉酸(frolinic acid)；乙醯葡醛酯(aceglatone)；醛磷醯胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；胺基乙醯丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；貝斯布西(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；艾達曲克(edatraxate)；得弗伐胺(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；艾弗鳥胺酸(elfornithine)；依利醋銨(elliptinium acetate)；埃坡黴素(epothilone)；依託格魯(etoglucid)；硝酸鎵；羥脲(hydroxyurea)；蘑菇多醣(lentinan)；羅尼達寧(lonidainine)；類美登素(maytansinoids)，諸如美登素(maytansine)及胺沙托辛(ansamitocins)；丙脒腺(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫比達摩(mopidanmol)；硝拉維林(nitraerine)；噴司他汀(pentostatin)；凡那明(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙基醯肼；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK^®多醣複合物(JHS Natural Products,Eugene,OR)；雷佐生(razoxane)；根瘤菌素(rhizoxin)；西佐喃(sizofiran)；螺旋鍺 (spirogermanium)；細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2"-三氯三乙胺；單端孢黴烯(trichothecenes)(特定而言，T-2毒素、弗納庫林A(verracurin A)、桿孢菌素A(roridin A)及胺癸叮(anguidine))；烏拉坦(urethan)；長春地辛(vindesine)；達卡巴嗪(dacarbazine)；甘露氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；甲托辛(gacytosine)；阿拉伯糖苷(「Ara-C」)、環磷醯胺；噻替派；類紫杉醇，例如Taxol^®太平洋紫杉醇(Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)、太平洋紫杉醇之不含十六醇聚氧乙烯醚且經白蛋白工程改造之奈米粒子調配物Abraxane^®(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,Illinois)，及Taxotere^®多西他賽(doxetaxel)(Rhône-Poulenc Rorer,Antony,France)；苯丁酸氮芥(chloranbucil)；Gemzar^®吉西他濱(gemcitabine)；6-硫鳥嘌呤；巰基嘌呤；甲胺喋呤；鉑類似物，諸如順鉑(cisplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)及卡鉑(carboplatin)；長春鹼(vinblastine)；鉑；依託泊苷(etoposide)(VP-16)；異環磷醯胺；米托蒽醌(mitoxantrone)；長春新鹼(vincristine)；Navelbine^®長春瑞賓(vinorelbine)；諾凡特龍(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依達曲沙(edatrexate)；道諾黴素(daunomycin)；胺基喋呤；希羅達(xeloda)；伊班膦酸鹽；伊立替康(irinotecan)(Camptosar,CPT-11)(包括伊立替康與5-FU及甲醯四氫葉酸之治療方案)；拓撲異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(DMFO)；類視黃素，諸如視黃酸；卡培他濱(capecitabine)；康柏斯達汀(combretastatin)；甲醯四氫葉酸(LV)；奧沙利鉑，包括奧沙利鉑治療方案(FOLFOX)；PKC-α、Raf、H-Ras之抑制劑、EGFR抑制劑(例如埃羅替尼(erlotinib)(Tarceva^®))及減少細胞增殖之VEGF-A抑制劑，以及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物。

其他非限制性例示性化學治療劑包括調節或抑制對癌症之激素作用的抗激素劑，諸如抗雌激素及選擇性雌激素受體調節劑(SERM)，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)(包括Nolvadex®他莫昔芬)、雷諾昔酚(raloxifene)、曲洛昔芬(droloxifene)、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、雷洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奧那司酮(onapristone)及Fareston®托瑞米芬(toremifene)；抑制酶芳香酶之芳香酶抑制劑，其調節腎上腺腺體中之雌激素產生，諸如4(5)-咪唑、胺格魯米特(aminoglutethimide)、Megase®乙酸甲地孕酮(megestrol acetate)、Aromasin®依西美坦(exemestane)、福美斯坦(formestanie)、法屈唑(fadrozole)、Rivisor®伏羅唑(vorozole)、Femara®來曲唑(letrozole)及Arimidex®阿那曲唑(anastrozole)；及抗雄激素，諸如氟他胺(flutamide)、尼魯胺(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、亮丙立德(leuprolide)及戈舍瑞林(goserelin)；以及曲沙他濱(troxacitabine)(1,3-二氧雜環戊烷核苷胞嘧啶類似物)；反義寡核苷酸，特定言之，抑制異常細胞增殖中所牽涉之信號傳導路徑中的基因表現者，諸如PKC-α、Raf及H-Ras；核糖核酸酶，諸如VEGF表現抑制劑(例如Angiozyme®核糖核酸酶)及HER2表現抑制劑；疫苗，諸如基因療法疫苗，例如Allovectin®疫苗、Leuvectin®疫苗及Vaxid®疫苗；Proleukin® rIL-2；Lurtotecan® 1型拓撲異構酶抑制劑；Abarelix® rmRH；及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物。

「抗血管生成劑」或「血管生成抑制劑」係指直接或間接抑制血管生成、血小管生成或非所要之血管通透性的小分子量物質、聚核苷酸(包括例如抑制RNA(RNAi或siRNA))、多肽、經分離蛋白質、重組蛋白質、抗體或其結合物或融合蛋白。應理解，抗血管生成劑包括結合及阻斷血管生成因子或其受體之血管生成活性的彼等藥劑。舉例而言，抗血管生成劑為血管生成劑之抗體或其他拮抗劑，例如VEGF- A之抗體(例如貝伐單抗(bevacizumab)(Avastin^®))或VEGF-A受體之抗體(例如KDR受體或Flt-1受體)、抗PDGFR抑制劑，諸如Gleevec^®(甲磺酸伊馬替尼(Imatinib Mesylate))、阻斷VEGF受體信號傳導之小分子(例如PTK787/ZK2284、SU6668、Sutent^®/SU11248(蘋果酸舒尼替尼(sunitinib malate))、AMG706或例如國際專利申請案WO 2004/113304中所述的彼等物。抗血管生成劑亦包括原生血管生成抑制劑，例如血管生長抑素、內皮生長抑素等。參見例如Klagsbrun及D'Amore(1991)Annu.Rev.Physiol.53：217-39；Streit及Detmar(2003)Oncogene 22：3172-3179(例如表3列舉惡性黑色素瘤之抗血管生成療法)；Ferrara及Alitalo(1999)Nature Medicine 5(12)：1359-1364；Tonini等人(2003)Oncogene 22：6549-6556(例如表2列舉已知抗血管生成因子)；及Sato(2003)Int.J.Clin.Oncol.8：200-206(例如表1列舉臨床試驗中所用的抗血管生成劑)。

如本文所用，「生長抑制劑」係指活體外或活體內抑制細胞(諸如表現VEGF之細胞)生長之化合物或組合物。因此，生長抑制劑可為顯著降低S期細胞(諸如表現VEGF之細胞)百分比之藥劑。生長抑制劑之實例包括(但不限於)阻斷細胞週期進程(除S期以外之處)之藥劑，諸如誘發G1停滯及M期停滯之藥劑。經典M期阻斷劑包括長春花(長春新鹼及長春鹼)、紫杉烷及II型拓撲異構酶抑制劑，諸如小紅莓、表柔比星、道諾黴素、依託泊苷及博萊黴素。阻滯G1之彼等藥劑亦深入到S期阻滯，例如DNA烷基化劑，諸如他莫西芬、潑尼松(prednisone)、達卡巴嗪、甲基二(氯乙基)胺、順鉑、甲胺喋呤、5-氟尿嘧啶及阿糖胞苷。其他資訊可見於Mendelsohn及Israel編，The Molecular Basis of Cancer，第1章，標題為"Cell cycle regulation,oncogenes,and antineoplastic drugs" Murakami等人(W.B.Saunders,Philadelphia,1995)，例如第13頁。紫杉烷(太平洋紫杉醇及多西他賽)為來源於紫杉 樹之抗癌藥物。來源於歐洲紫杉的多西他賽(Taxotere®,Rhone-Poulenc Rorer)為太平洋紫杉醇(Taxol®,Bristol-Myers Squibb)之半合成類似物。太平洋紫杉醇及多西他賽促進微管蛋白二聚物組裝成微管且藉由防止解聚合而穩定微管，從而抑制細胞中之有絲分裂。

術語「抗贅生組合物」係指適用於治療癌症的包含至少一種活性治療劑之組合物。治療劑之實例包括(但不限於)例如化學治療劑、生長抑制劑、細胞毒性劑、用於輻射療法之藥劑、抗血管生成劑、癌症免疫治療劑、細胞凋亡劑、抗微管蛋白劑及治療癌症的其他藥劑，諸如抗HER-2抗體、抗CD20抗體、表皮生長因子受體(EGFR)拮抗劑(例如酪胺酸激酶抑制劑)、HER1/EGFR抑制劑(例如埃羅替尼(Tarceva^®)、血小板源生長因子抑制劑(例如Gleevec^®(甲磺酸伊馬替尼))、COX-2抑制劑(例如塞內昔布(celecoxib))、干擾素、CTLA4抑制劑(例如抗CTLA抗體伊匹單抗(ipilimumab)(YERVOY®))TIM3抑制劑(例如抗TIM3抗體)、細胞激素、結合至以下標靶中之一或多者的拮抗劑(例如中和抗體)：ErbB2、ErbB3、ErbB4、PDGFR-β、BlyS、APRIL、BCMA、CTLA4、TIM3或VEGF受體、TRAIL/Apo2，及其他生物活性及有機化學劑等。本發明亦包括其組合。

當藥劑中和、阻斷、抑制、消除、降低及/或干擾因子活性時，表示該藥劑可「拮抗」因子活性，包括當因子為配位體時，該藥劑可結合至一或多種受體。

如本文所用，「治療」係指治療性處理與預防性或防治性措施，其中目標為預防或減緩(減輕)靶向病理性病狀或病症。在某些實施例中，術語「治療」涵蓋針對哺乳動物(包括人類)疾病之治療劑的任何投與或施用，且包括抑制或減緩疾病或疾病進展；部分或完全緩解疾病，例如藉由引起消退，或恢復或修補損失、遺失或有缺陷的功能；刺激低效過程；或促使疾病穩定期時之嚴重程度降低。術語「治療」 亦包括降低任何表現型特徵之嚴重程度及/或降低彼特徵之發生率、程度或可能性。需要治療者包括已患該病症者以及傾向於患該病症者；或預防該病症者。

術語「有效量」或「治療有效量」係指有效治療個體之疾病或病症的藥物之量。在某些實施例中，有效量係指以必需的劑量及時間段有效達成所要治療或預防結果的量。本發明之抗CSF1R抗體及/或免疫刺激劑的治療有效量可根據諸如以下因素改變：個體之疾病狀態、年齡、性別及體重，及該或該等抗體誘發個體出現所要反應的能力。治療有效量涵蓋抗體之治療有益作用超過任何毒性或有害作用的量。在一些實施例中，表述「有效量」係指抗體有效治療癌症之量。

「預防有效量」係指以必要的劑量及時間段有效達成所要預防結果之量。通常但並非必需，因為在疾病之前或在疾病早期，在個體中使用預防劑量，所以預防有效量將低於治療有效量。

與一或多種其他治療劑「組合」投與包括同時(並行)及以任何順序連續(依序)投與。

「醫藥學上可接受之載劑」係指此項技術中習知的無毒固體、半固體或液體填補劑、稀釋劑、囊封材料、調配助劑或載劑，其聯合治療劑使用，一起構成「醫藥組合物」投與個體。醫藥學上可接受之載劑在所用劑量及濃度下對接受者無毒且與調配物之其他成分相容。醫藥學上可接受之載劑適於所用之調配物。舉例而言，若治療劑經口投與，則載劑可為凝膠膠囊。若治療劑皮下投與，則理想的是，載劑對皮膚無刺激性且不引起注射部位反應。

抗CSF1R抗體

抗CSF1R抗體包括(但不限於)人類化抗體、嵌合抗體、小鼠抗體、人類抗體及本文所述之包含重鏈及/或輕鏈CDR的抗體。

例示性人類化抗體

在一些實施例中，提供結合CSF1R之人類化抗體。人類化抗體適用作治療分子，因為人類化抗體減輕或消除對非人類抗體之人類免疫反應(諸如人類抗小鼠抗體(HAMA)反應)，導致對抗體治療產生免疫反應，且降低治療之有效性。

非限制性例示性人類化抗體包括本文所述的huAb1至huAb16。非限制性例示性人類化抗體亦包括包含選自huAb1至huAb16之抗體的重鏈可變區及/或選自huAb1至huAb16之抗體的輕鏈可變區的抗體。非限制性例示性人類化抗體包括包含選自SEQ ID NO：39至45之重鏈可變區及/或選自SEQ ID NO：46至52之輕鏈可變區的抗體。例示性人類化抗體亦包括(但不限於)包含選自0301、0302及0311之抗體之重鏈CDR1、CDR2及CDR3及/或輕鏈CDR1、CDR2及CDR3的人類化抗體。

在一些實施例中，人類化抗CSF1R抗體包含選自0301、0302及0311之抗體的重鏈CDR1、CDR2及CDR3及/或輕鏈CDR1、CDR2及CDR3。非限制性例示性人類化抗CSF1R抗體包括包含選自SEQ ID NO：15、16及17；SEQ ID NO：21、22及23；及SEQ ID NO：27、28及29之重鏈CDR1、CDR2及CDR3組的抗體。非限制性例示性人類化抗CSF1R抗體亦包括包含選自SEQ ID NO：18、19及20；SEQ ID NO：24、25及26；及SEQ ID NO：30、31及32之輕鏈CDR1、CDR2及CDR3組的抗體。

非限制性例示性人類化抗CSF1R抗體包括包含表1中之重鏈CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3組的抗體(所示SEQ ID NO；參看表8中的序列)。表1的每一列顯示例示性抗體之重鏈CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3。

表1：重鏈及輕鏈CDR

其他例示性人類化抗體

在一些實施例中，人類化抗CSF1R抗體包含可變區序列與選自SEQ ID NO：9、11、13及39至45的序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的重鏈，且其中該抗體結合CSF1R。在一些實施例中，人類化抗-CSF1R抗體包含可變區序列與選自SEQ ID NO：10、12、14及46至52的序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的輕鏈，且其中該抗體結合CSF1R。在一些實施例中，人類化抗CSF1R抗體包含重鏈，該重鏈包含與選自SEQ ID NO：9、11、13及39至45之序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的可變區序列；以及輕鏈，該輕鏈包含與選自SEQ ID NO：10、12、14及46至52之序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的可變區序列；其中該抗體結合CSF1R。

如本文所用，可使用例如電腦程式確定多肽是否例如與胺基酸序列至少95%一致。確定特定序列是否與參考序列例如95%一致時，在參考胺基酸序列的全長上計算一致性百分比。

在一些實施例中，人類化抗CSF1R抗體包含本文所述之至少一個CDR。亦即，在一些實施例中，人類化抗CSF1R抗體包含選自以下之至少一個CDR：本文所述之重鏈CDR1、本文所述之重鏈CDR2、本文 所述之重鏈CDR3、本文所述之輕鏈CDR1、本文所述之輕鏈CDR2及本文所述之輕鏈CDR3。另外，在一些實施例中，人類化抗CSF1R抗體包含基於本文所述之CDR的至少一個突變CDR，其中突變CDR相對於本文所述之CDR包含1、2、3或4個胺基酸取代。在一些實施例中，胺基酸取代中的一或多個為保守胺基酸取代。熟習此項技術者可選擇一或多種適於特定CDR序列之保守胺基酸取代，其中適合的保守胺基酸取代預測不會顯著改變包含突變CDR之抗體的結合特性。

例示性人類化抗CSF1R抗體亦包括與本文所述之抗體競爭結合至CSF1R的抗體。因此，在一些實施例中，提供與選自Fab 0301、0302及0311之抗體；以及彼等Fab之二價(亦即具有兩個重鏈及兩個輕鏈)抗體型式競爭結合至CSF1R的人類化抗CSF1R抗體。

例示性人類化抗體恆定區

在一些實施例中，本文所述之人類化抗體包含一或多個人類恆定區。在一些實施例中，人類重鏈恆定區具有選自IgA、IgG及IgD之同型。在一些實施例中，人類輕鏈恆定區具有選自κ及λ之同型。在一些實施例中，本文所述之人類化抗體包含人類IgG恆定區。在一些實施例中，本文所述之人類化抗體包含人類IgG4重鏈恆定區。在一些此類實施例中，本文所述之人類化抗體包含人類IgG4恆定區中的S241P突變。在一些實施例中，本文所述之人類化抗體包含人類IgG4恆定區及人類κ輕鏈。

重鏈恆定區之選擇可決定抗體是否將具有活體內效應功能。在一些實施例中，此類效應功能包括抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)及/或補體依賴性細胞毒性(CDC)，且從而可殺死抗體所結合之細胞。在一些治療方法(包括治療一些癌症之方法)中，例如當抗體結合至支持腫瘤維持或生長的細胞時，可能需要殺死細胞。可支持腫瘤維持或生長的例示性細胞包括(但不限於)腫瘤細胞本身、幫助血管 向腫瘤募集之細胞及提供支持或促進腫瘤生長或腫瘤存活的配位體、生長因子或反受體之細胞。在一些實施例中，當需要效應功能時，選擇包含人類IgG1重鏈或人類IgG3重鏈之抗CSF1R抗體。

抗體可藉由任何方法人類化。非限制性例示性人類化方法包括例如以下文獻中所述的方法：美國專利第5,530,101號、第5,585,089號、第5,693,761號、第5,693,762號、第6,180,370號；Jones等人，Nature 321：522-525(1986)；Riechmann等人，Nature 332：323-27(1988)；Verhoeyen等人，Science 239：1534-36(1988)；及美國公開案US 2009/0136500。

如上文所述，人類化抗體為非人類可變區之構架區中的至少一個胺基酸已置換為來自人類構架區相應位置之胺基酸的抗體。在一些實施例中，非人類可變區之構架區中的至少兩個、至少三個、至少四個、至少五個、至少六個、至少七個、至少八個、至少九個、至少10個、至少11個、至少12個、至少15個或至少20個胺基酸置換為來自一或多個人類構架區中的一或多個相應位置之胺基酸。

在一些實施例中，用於取代之一些相應人類胺基酸來自不同人類免疫球蛋白基因的構架區。亦即，在一些此類實施例中，一或多個非人類胺基酸可置換為來自第一人類抗體之人類構架區或由第一人類免疫球蛋白基因編碼的相應胺基酸，一或多個非人類胺基酸可置換為來自第二人類抗體之人類構架區或由第二人類免疫球蛋白基因編碼的相應胺基酸，一或多個非人類胺基酸可置換為來自第三人類抗體之人類構架區或由第三人類免疫球蛋白基因編碼的相應胺基酸等。另外，在一些實施例中，單個構架區(例如FR2)中用於取代的全部相應人類胺基酸無需來自相同人類構架。然而，在一些實施例中，用於取代之全部相應人類胺基酸均來自相同人類抗體或由相同人類免疫球蛋白基因編碼。

在一些實施例中，藉由用相應人類構架區置換一或多個全部構架區將抗體人類化。在一些實施例中，選擇與所置換之非人類構架區具有最高同源度之人類構架區。在一些實施例中，此類人類化抗體為CDR移植抗體。

在一些實施例中，在CDR移植之後，一或多個構架胺基酸變回小鼠構架區中的相應胺基酸。在一些實施例中，進行此類「回復突變」以保留似乎促成一或多個CDR之結構及/或可能涉及抗原接觸及/或似乎涉及抗體之整體結構完整性的一或多個小鼠構架胺基酸。在一些實施例中，在CDR移植之後，對抗體之構架區作出十個或低於十個、九個或低於九個、八個或低於八個、七個或低於七個、六個或低於六個、五個或低於五個、四個或低於四個、三個或低於三個、兩個或低.於兩個、一個或零個回復突變。

在一些實施例中，人類化抗體亦包含人類重鏈恆定區及/或人類輕鏈恆定區。

例示性嵌合抗體

在一些實施例中，抗CSF1R抗體為嵌合抗體。在一些實施例中，抗CSF1R抗體包含至少一個非人類可變區及至少一個人類恆定區。在一些此類實施例中，抗CSF1R抗體之全部可變區為非人類可變區，且抗CSF1R抗體之全部恆定區為人類恆定區。在一些實施例中，嵌合抗體之一或多個可變區為小鼠可變區。嵌合抗體之人類恆定區無需與其置換之非人類恆定區(若存在)為相同同型。嵌合抗體論述於例如美國專利第4,816,567號；及Morrison等人.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81：6851-55(1984)中。

非限制性例示性嵌合抗體包括包含選自0301、0302及0311之抗體之重鏈及/或輕鏈可變區的嵌合抗體。其他非限制性例示性嵌合抗體包括包含選自0301、0302及0311之抗體之重鏈CDR1、CDR2及CDR3 及/或輕鏈CDR1、CDR2及CDR3的嵌合抗體。

非限制性例示性嵌合抗CSF1R抗體包括包含以下重鏈及輕鏈可變區對的抗體：SEQ ID NO：9及10；SEQ ID NO：11及12；以及SEQ ID NO：13及14。

非限制性例示性抗CSF1R抗體包括包含上文在表1中所示之一組重鏈CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3的抗體。

其他例示性嵌合抗體

在一些實施例中，嵌合抗CSF1R抗體包含重鏈，該重鏈包含與選自SEQ ID NO：9、11、13及39至45之序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的可變區序列，其中該抗體結合CSF1R。在一些實施例中，嵌合抗CSF1R抗體包含輕鏈，該輕鏈包含與選自SEQ ID NO：10、12、14及46至52之序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之可變區序列，其中該抗體結合CSF1R。在一些實施例中，人類化抗CSF1R抗體包含重鏈，該重鏈包含與選自SEQ ID NO：9、11、13及39至45之序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的可變區序列；以及輕鏈，該輕鏈包含與選自SEQ ID NO：10、12、14及46至52之序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的可變區序列；其中該抗體結合CSF1R。

在一些實施例中，嵌合抗CSF1R抗體包含本文所述之至少一個CDR。亦即，在一些實施例中，嵌合抗CSF1R抗體包含選自以下之至少一個CDR：本文所述之重鏈CDR1、本文所述之重鏈CDR2、本文所述之重鏈CDR3、本文所述之輕鏈CDR1、本文所述之輕鏈CDR2及本 文所述之輕鏈CDR3。另外，在一些實施例中，嵌合抗CSF1R抗體包含基於本文所述之CDR的至少一個突變CDR，其中突變CDR相對於本文所述之CDR包含1、2、3或4個胺基酸取代。在一些實施例中，胺基酸取代中的一或多個為保守胺基酸取代。熟習此項技術者可選擇一或多種適於特定CDR序列之保守胺基酸取代，其中適合的保守胺基酸取代預測不會顯著改變包含突變CDR之抗體的結合特性。

例示性嵌合抗CSF1R抗體亦包括與本文所述之抗體競爭結合至CSF1R的嵌合抗體。因此，在一些實施例中，提供與選自Fab 0301、0302及0311；以及彼等Fab之二價(亦即具有兩個重鏈及兩個輕鏈)抗體型式結合至CSF1R的嵌合抗CSF1R抗體。

例示性嵌合抗體恆定區

在一些實施例中，本文所述之嵌合抗體包含一或多個人類恆定區。在一些實施例中，人類重鏈恆定區具有選自IgA、IgG及IgD之同型。在一些實施例中，人類輕鏈恆定區具有選自κ及λ之同型。在一些實施例中，本文所述之嵌合抗體包含人類IgG恆定區。在一些實施例中，本文所述之嵌合抗體包含人類IgG4重鏈恆定區。在一些此類實施例中，本文所述之嵌合抗體包含人類IgG4恆定區中的S241P突變。在一些實施例中，本文所述之嵌合抗體包含人類IgG4恆定區及人類κ輕鏈。

如上文所指出，是否需要效應功能可視抗體預定之特定治療方法而定。因此，在一些實施例中，當需要效應功能時，選擇包含人類IgG1重鏈恆定區或人類IgG3重鏈恆定區的嵌合抗CSF1R抗體。在一些實施例中，當不需要效應功能時，選擇包含人類IgG4或IgG2重鏈恆定區之嵌合抗CSF1R抗體。

例示性人類抗體

人類抗體可藉由任何適合方法製備。非限制性例示性方法包括 在包含人類免疫球蛋白基因座之轉殖基因小鼠中產生人類抗體。參見例如Jakobovits等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：2551-55(1993)；Jakobovits等人，Nature 362：255-8(1993)；Lonberg等人，Nature 368：856-9(1994)；及美國專利第5,545,807號、第6,713,610號、第6,673,986號、第6,162,963號、第5,545,807號、第6,300,129號、第6,255,458號、第5,877,397號、第5,874,299號；及第5,545,806號。

非限制性例示性方法亦包括使用噬菌體呈現庫製備人類抗體。參見例如Hoogenboom等人，J.Mol.Biol.227：381-8(1992)；Marks等人，J.Mol.Biol.222：581-97(1991)；及PCT公開案第WO 99/10494號。

在一些實施例中，人類抗CSF1R抗體結合至具有序列SEQ ID NO：1的多肽。例示性人類抗CSF1R抗體亦包括與本文所述之抗體競爭結合至CSF1R的抗體。因此，在一些實施例中，提供與選自Fab 0301、0302及0311及彼等Fab之二價(亦即具有兩個重鏈及兩個輕鏈)抗體型式之抗體競爭結合至CSF1R的人類抗CSF1R抗體。

在一些實施例中，人類抗CSF1R抗體包含一或多個人類恆定區。在一些實施例中，人類重鏈恆定區具有選自IgA、IgG及IgD之同型。在一些實施例中，人類輕鏈恆定區具有選自κ及λ之同型。在一些實施例中，本文所述之人類抗體包含人類IgG恆定區。在一些實施例中，本文所述之人類抗體包含人類IgG4重鏈恆定區。在一些此類實施例中，本文所述之人類抗體包含人類IgG4恆定區中的S241P突變。在一些實施例中，本文所述之人類抗體包含人類IgG4恆定區及人類κ輕鏈。

在一些實施例中，當需要效應功能時，選擇包含人類IgG1重鏈恆定區或人類IgG3重鏈恆定區的人類抗CSF1R抗體。在一些實施例中，當不需要效應功能時，選擇包含人類IgG4或IgG2重鏈恆定區之人 類抗CSF1R抗體。

其他例示性抗CSF1R抗體

例示性抗CSF1R抗體亦包括(但不限於)包含例如本文所述之一或多種CDR序列的小鼠、人類化、人類、嵌合及工程改造抗體。在一些實施例中，抗CSF1R抗體包含本文所述之重鏈可變區。在一些實施例中，抗CSF1R抗體包含本文所述之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗CSF1R抗體包含本文所述之重鏈可變區及本文所述之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗CSF1R抗體包含本文所述之重鏈CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，抗CSF1R抗體包含本文所述之輕鏈CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，抗CSF1R抗體包含本文所述之重鏈CDR1、CDR2及CDR3及本文所述之輕鏈CDR1、CDR2及CDR3。

在一些實施例中，抗CSF1R抗體包含選自Fab 0301、0302及0311之抗體的重鏈可變區。非限制性例示性抗CSF1R抗體亦包括包含選自人類化抗體huAb1至huAb16之抗體之重鏈可變區的抗體。非限制性例示性抗CSF1R抗體包括包含重鏈可變區的抗體，該重鏈可變區包含選自SEQ ID NO：9、11、13及39至45之序列。

在一些實施例中，抗CSF1R抗體包含選自Fab 0301、0302及0311之抗體的輕鏈可變區。非限制性例示性抗CSF1R抗體亦包括包含選自人類化抗體huAb1至huAb16之抗體之輕鏈可變區的抗體。非限制性例示性抗CSF1R抗體包括包含輕鏈可變區的抗體，該輕鏈可變區包含選自SEQ ID NO：10、12、14及46至52之序列。

在一些實施例中，抗CSF1R抗體包含選自Fab 0301、0302及0311之抗體的重鏈可變區及輕鏈可變區。非限制性例示性抗CSF1R抗體亦包括包含選自人類化抗體huAb1至huAb16之抗體之重鏈可變區及輕鏈可變區的抗體，非限制性例示性抗CSF1R抗體包括包含以下重鏈及輕鏈可變區對之抗體：SEQ ID NO：9及10；SEQ ID NO：11及12；以及 SEQ ID NO：13及14；SEQ ID NO：39及40；SEQ ID NO：41及42；SEQ ID NO：43及44；SEQ ID NO：45及46；SEQ ID NO：47及48；SEQ ID NO：49及50；以及SEQ ID NO：51及52。非限制性例示性抗CSF1R抗體亦包括包含以下重鏈及輕鏈對之抗體：SEQ ID NO：33及34；SEQ ID NO：35及36；以及SEQ ID NO：37及38。

在一些實施例中，抗CSF1R抗體包含選自Fab 0301、0302及0311之重鏈CDR1、CDR2及CDR3。非限制性例示性抗CSF1R抗體包括包含選自SEQ ID NO：15、16及17；SEQ ID NO：21、22及23；及SEQ ID NO：27、28及29之重鏈CDR1、CDR2及CDR3組的抗體。

在一些實施例中，抗CSF1R抗體包含選自Fab 0301、0302及0311之抗體的輕鏈CDR1、CDR2及CDR3。非限制性例示性抗CSF1R抗體亦包括包含選自SEQ ID NO：18、19及20；SEQ ID NO：24、25及26；及SEQ ID NO：30、31及32之輕鏈CDR1、CDR2及CDR3組的抗體。

在一些實施例中，抗CSF1R抗體包含選自Fab 0301、0302及0311之抗體的重鏈CDR1、CDR2及CDR3及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3。

非限制性例示性抗CSF1R抗體包括包含上文在表1中所示之重鏈CDR1、CDR2及CDR3及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3組的抗體。

其他例示性抗體

在一些實施例中，抗CSF1R抗體包含重鏈，該重鏈包含與選自SEQ ID NO：9、11、13及39至45之序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的可變區序列，其中該抗體結合CSF1R。在一些實施例中，抗CSF1R抗體包含輕鏈，該輕鏈包含與選自SEQ ID NO：10、12、14及46至52之序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之可變區序列，其中該抗體結合CSF1R。在一些實施例中， 抗CSF1R抗體包含重鏈，該重鏈包含與選自SEQ ID NO：9、11、13及39至45之序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的可變區序列；以及輕鏈，該輕鏈包含與選自SEQ ID NO：10、12、14及46至52之序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的可變區序列；其中該抗體結合CSF1R。

在一些實施例中，抗CSF1R抗體包含本文所述之至少一個CDR。亦即，在一些實施例中，抗CSF1R抗體包含選自以下之至少一個CDR：本文所述之重鏈CDR1、本文所述之重鏈CDR2、本文所述之重鏈CDR3、本文所述之輕鏈CDR1、本文所述之輕鏈CDR2及本文所述之輕鏈CDR3。另外，在一些實施例中，抗CSF1R抗體包含基於本文所述之CDR的至少一個突變CDR，其中突變CDR相對於本文所述之CDR包含1、2、3或4個胺基酸取代。在一些實施例中，胺基酸取代中的一或多個為保守胺基酸取代。熟習此項技術者可選擇一或多種適於特定CDR序列之保守胺基酸取代，其中適合的保守胺基酸取代預測不會顯著改變包含突變CDR之抗體的結合特性。

例示性抗CSF1R抗體亦包括與本文所述之抗體競爭結合至CSF1R的抗體。因此，在一些實施例中，提供與選自Fab 0301、0302及0311及彼等Fab之二價(亦即具有兩個重鏈及兩個輕鏈)抗體型式之抗體競爭結合至CSF1R的抗CSF1R抗體。

例示性抗體恆定區

在一些實施例中，本文所述之抗體包含一或多個人類恆定區。在一些實施例中，人類重鏈恆定區具有選自IgA、IgG及IgD之同型。在一些實施例中，人類輕鏈恆定區具有選自κ及λ之同型。在一些實施例中，本文所述之抗體包含人類IgG恆定區。在一些實施例中，本文 所述之抗體包含人類IgG4重鏈恆定區。在一些此類實施例中，本文所述之抗體包含人類IgG4恆定區中的S241P突變。在一些實施例中，本文所述之抗體包含人類IgG4恆定區及人類κ輕鏈。

如上文所指出，是否需要效應功能可視抗體預定之特定治療方法而定。因此，在一些實施例中，當需要效應功能時，選擇包含人類IgG1重鏈恆定區或人類IgG3重鏈恆定區的抗CSF1R抗體。在一些實施例中，當不需要效應功能時，選擇包含人類IgG4或IgG2重鏈恆定區之抗CSF1R抗體。

例示性抗CSF1R重鏈可變區

在一些實施例中，提供抗CSF1R抗體重鏈可變區。在一些實施例中，抗CSF1R抗體重鏈可變區為小鼠可變區、人類可變區或人類化可變區。

抗CSF1R抗體重鏈可變區包含重鏈CDR1、FR2、CDR2、FR3及CDR3。在一些實施例中，抗CSF1R抗體重鏈可變區進一步包含重鏈FR1及/或FR4。非限制性例示性重鏈可變區包括(但不限於)具有選自SEQ ID NO：9、11、13及39至45之胺基酸序列的重鏈可變區。

在一些實施例中，抗CSF1R抗體重鏈可變區包括含有選自SEQ ID NO：15、21及27之序列的CDR1。

在一些實施例中，抗CSF1R抗體重鏈可變區包括含有選自SEQ ID NO：16、22及28之序列的CDR2。

在一些實施例中，抗CSF1R抗體重鏈可變區包括含有選自SEQ ID NO：17、23及29之序列的CDR3。

非限制性例示性重鏈可變區包括(但不限於)包含選自SEQ ID NO：15、16及17；SEQ ID NO：21、22及23；以及SEQ ID NO：27、28及29之CDR1、CDR2及CDR3組的重鏈可變區。

在一些實施例中，抗CSF1R抗體重鏈包含與選自SEQ ID NO：9、 11、13及39至45之序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的可變區序列，其中重鏈與輕鏈一起能夠形成結合CSF1R之抗體。

在一些實施例中，抗CSF1R抗體重鏈包含本文所述之至少一個CDR。亦即，在一些實施例中，抗CSF1R抗體重鏈包含選自以下之至少一個CDR：本文所述之重鏈CDR1、本文所述之重鏈CDR2及本文所述之重鏈CDR3。另外，在一些實施例中，抗CSF1R抗體重鏈包含基於本文所述之CDR的至少一個突變CDR，其中突變CDR相對於本文所述之CDR包含1、2、3或4個胺基酸取代。在一些實施例中，胺基酸取代中的一或多個為保守胺基酸取代。熟習此項技術者可選擇一或多種適於特定CDR序列之保守胺基酸取代，其中適合的保守胺基酸取代預測不會顯著改變包含突變CDR之重鏈的結合特性。

在一些實施例中，重鏈包含重鏈恆定區。在一些實施例中，重鏈包含人類重鏈恆定區。在一些實施例中，人類重鏈恆定區具有選自IgA、IgG及IgD之同型。在一些實施例中，人類重鏈恆定區為IgG恆定區。在一些實施例中，重鏈包含人類IgG4重鏈恆定區。在一些此類實施例中，人類IgG4重鏈恆定區包含S241P突變。

在一些實施例中，當需要效應功能時，重鏈包含人類IgG1或IgG3重鏈恆定區。在一些實施例中，當效應功能不太需要時，重鏈包含人類IgG4或IgG2重鏈恆定區。

例示性抗CSF1R輕鏈可變區

在一些實施例中，提供抗CSF1R抗體輕鏈可變區。在一些實施例中，抗CSF1R抗體輕鏈可變區為小鼠可變區、人類可變區或人類化可變區。

抗CSF1R抗體輕鏈可變區包含輕鏈CDR1、FR2、CDR2、FR3及CDR3。在一些實施例中，抗CSF1R抗體輕鏈可變區進一步包含輕鏈 FR1及/或FR4。非限制性例示性輕鏈可變區包括具有選自SEQ ID NO：10、12、14及46至52之胺基酸序列的輕鏈可變區。

在一些實施例中，抗CSF1R抗體輕鏈可變區包括含有選自SEQ ID NO：18、24及30之序列的CDR1。

在一些實施例中，抗CSF1R抗體輕鏈可變區包括含有選自SEQ ID NO：19、25及31之序列的CDR2。

在一些實施例中，抗CSF1R抗體輕鏈可變區包含選自SEQ ID NO：20、26及32之序列的CDR3。

非限制性例示性輕鏈可變區包括(但不限於)包含選自SEQ ID NO：18、19及20；SEQ ID NO：24、25及26；以及SEQ ID NO：30、31及32之CDR1、CDR2及CDR3組的輕鏈可變區。

在一些實施例中，抗CSF1R抗體輕鏈包含與選自SEQ ID NO：10、12、14及46至52之序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的可變區序列，其中輕鏈與重鏈一起能夠形成結合CSF1R之抗體。

在一些實施例中，抗CSF1R抗體輕鏈包含本文所述之至少一個CDR。亦即，在一些實施例中，抗CSF1R抗體輕鏈包含選自以下之至少一個CDR：本文所述之輕鏈CDR1、本文所述之輕鏈CDR2及本文所述之輕鏈CDR3。另外，在一些實施例中，抗CSF1R抗體輕鏈包含基於本文所述之CDR的至少一個突變CDR，其中突變CDR相對於本文所述之CDR包含1、2、3或4個胺基酸取代。在一些實施例中，胺基酸取代中的一或多個為保守胺基酸取代。熟習此項技術者可選擇一或多種適於特定CDR序列之保守胺基酸取代，其中適合的保守胺基酸取代預測不會顯著改變包含突變CDR之輕鏈的結合特性。

在一些實施例中，輕鏈包含人類輕鏈恆定區。在一些實施例 中，人類輕鏈恆定區選自人類κ及人類λ輕鏈恆定區。

其他的例示性CSF1R結合分子

在一些實施例中，提供結合CSF1R之其他分子。此類分子包括(但不限於)非典型骨架，諸如抗運載蛋白(anti-calins)、纖連蛋白、錨蛋白重複等。參見例如Hosse等人，Prot.Sci.15：14(2006)；Fiedler,M.及Skerra,A.,「Non-Antibody Scaffolds,」第467-499頁，於Handbook of Therapeutic Antibodies,Dubel,S.編，Wiley-VCH,Weinheim,Germany,2007。

抗CSF1R抗體之例示性特性

在一些實施例中，具有上述結構的抗體以小於1nM之結合親和力(K_D)結合至CSF1R，阻斷CSF1及/或IL-34與CSF1R之結合且抑制CSF1及/或IL-34誘導CSF1R磷酸化。

在一些實施例中，抗CSF1R抗體結合至CSF1R之胞外域(CSF1R-ECD)。在一些實施例中，抗CSF1R抗體具有小於1nM、小於0.5nM、小於0.1nM或小於0.05nM的針對CSF1R之結合親和力(K_D)。在一些實施例中，抗CSF1R抗體具有0.01nM與1nM之間、0.01與0.5nM之間、0.01與0.1nM之間、0.01與0.05nM之間或0.02與0.05nM之間的K_D。

在一些實施例中，抗CSF1R抗體阻斷配位體與CSF1R之結合。在一些實施例中，抗CSF1R抗體阻斷CSF1與CSF1R結合。在一些實施例中，抗CSF1R抗體阻斷IL-34與CSF1R之結合。在一些實施例中，抗CSF1R抗體阻斷CSF1及IL-34與CSF1R之結合。在一些實施例中，阻斷配位體結合之抗體結合至CSF1R之胞外域。在一些實施例中，當抗體使配位體相對於CSF1R之可偵測結合之量降低至少50%(使用例如美國專利第8,206,715 B2號實例7中所述的分析，該文獻以引用的方式併入本文中用於任何目的)時，該抗體阻斷配位體與CSF1R之結合。在 一些實施例中，抗體使配位體相對於CSF1R之可偵測結合的量降低至少60%、至少70%、至少80%或至少90%。在一些此類實施例中，據稱抗體將配位體結合阻斷至少50%、至少60%、至少70%等。

在一些實施例中，抗CSF1R抗體抑制配位體誘導之CSF1R磷酸化。在一些實施例中，抗CSF1R抗體抑制CSF1誘導CSF1R磷酸化。在一些實施例中，抗CSF1R抗體抑制IL-34誘導CSF1R磷酸化。在一些實施例中，抗CSF1R抗體抑制CSF1誘導及IL-34誘導之CSF1R磷酸化。在一些實施例中，當抗體使可偵測之配位體誘導之CSF1R磷酸化之量降低至少50%(使用例如美國專利第8,206,715 B2號實例6所述之分析，該專利以引用的方式併人本文中用於任何目的)時，抗體視為「抑制配位體誘導之CSF1R磷酸化」。在一些實施例中，抗體使可偵測之配位體誘導之CSF1R磷酸化的量降低至少60%、至少70%、至少80%或至少90%。在一些此類實施例中，據稱抗體將配位體誘導之CSF1R磷酸化抑制至少至少50%、至少60%、至少70%等。

在一些實施例中，抗體抑制CSF1及/或IL-34存在下的單核細胞增殖及/或存活反應。在一些實施例中，當抗體使CSF1及/或IL-34存在下的單核細胞增殖及/或存活反應的量降低至少50%(使用例如美國專利第8,206,715 B2號實例10所述之分析，該專利以引用的方式併入本文中用於任何目的)時，抗體視為「抑制單核細胞增殖及/或存活反應」。在一些實施例中，抗體使CSF1及/或IL-34存在下的單核細胞增殖及/或存活反應的量降低至少60%、至少70%、至少80%或至少90%。在一些此類實施例中，據稱抗體至少將單核細胞增殖及/或存活反應抑制至少50%、至少60%、至少70%等。

例示性免疫刺激劑

免疫刺激劑可包括例如小分子藥物、抗體或其片段，或其他生物製劑或小分子。生物免疫刺激劑之實例包括(但不限於)抗體、抗體 片段、受體或配位體多肽片段(例如阻斷受體-配位體結合)、疫苗及細胞激素。在一個態樣中，抗體為單株抗體。在某些態樣中，單株抗體為人類化或人類抗體。

在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含免疫刺激分子(包括共刺激分子)之促效劑，而在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含免疫抑制分子(包括共抑制分子)之拮抗劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含免疫細胞(諸如T細胞)上所發現之免疫刺激分子(包括共刺激分子)之促效劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含免疫細胞(諸如T細胞)上所發現之免疫抑制分子(包括共抑制分子)的拮抗劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含涉及先天性免疫之細胞(諸如NK細胞)上所發現之免疫刺激分子(包括共刺激分子)的促效劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含涉及先天性免疫之細胞(諸如NK細胞)上所發現之免疫抑制分子(包括共抑制分子)的拮抗劑。在一些實施例中，該組合使所治療個體中的抗原特異性T細胞反應增強且/或增強個體之先天性免疫反應。在一些實施例中，相較於單獨投與抗CSF1R抗體或免疫刺激劑，該組合使得動物癌症模型(諸如異種移植模型)中的抗腫瘤反應改善。在一些實施例中，相較於單獨投與抗CSF1R抗體或免疫刺激劑，該組合可動物癌症模型(諸如異種移植模型)中產生協同反應。

在某些實施例中，免疫刺激劑靶向作為免疫球蛋白超家族(IgSF)成員的刺激或抑制分子。舉例而言，免疫刺激劑可為靶向(或特異性地結合至)膜結合配位體B7家族(包括B7-1、B7-2、B7-H2(ICOS-L)、B7-H3、B7-H4、B7-H5(VISTA)及B7-H6)成員的藥劑，或特異性地結合至B7家族成員的共刺激或共抑制受體。免疫刺激劑可為靶向膜結合配位體之TNF家族成員的藥劑，或特異性地結合至TNF家族成員的共刺激或共抑制受體。免疫刺激劑可靶向的例示性TNF及TNFR家族 成員包括CD40及CD40L、OX-40、OX-40L、GITR、GITRL、CD70、CD27L、CD30、CD30L、4-1BBL、CD137(4-1BB)、TRAIL/Apo2-L、TRAILR1/DR4、TRAILR2/DR5、TRAILR3、TRAILR4、OPG、RANK、RANKL、TWEAKR/Fn14、TWEAK、BAFFR、EDAR、XEDAR、TACI、APRIL、BCMA、LTβR、LIGHT、DcR3、HVEM、VEGI/TL1A、TRAMP/DR3、EDAR、EDA1、XEDAR、EDA2、TNFR1、淋巴毒素α/TNFβ、TNFR2、TNFα、LTβR、淋巴毒素α 1β2、FAS、FASL、RELT、DR6、TROY及NGFR。免疫刺激劑可為靶向IgSF成員(諸如B7家族成員、B7受體家族成員、TNF家族成員或TNFR家族成員，諸如上述彼等物)的藥劑，例如抗體。

在一些實施例中，免疫刺激劑可包含(i)抑制T細胞活化之蛋白質(例如免疫檢查點抑制劑)的拮抗劑，諸如CTLA-4、LAG-3、TIM3、半乳糖凝集素9、CEACAM-1、BTLA、CD69、半乳糖凝集素-1、TIGIT、CD113、GPR56、VISTA、B7-H3、B7-H4、2B4、CD48、GARP、PD1H、LAIR1、TIM-1、TIM-4及ILT4且/或可包含(ii)刺激T細胞活化之蛋白質的促效劑，諸如B7-1、B7-2、CD28、4-1BB(CD137)、4-1BBL、ICOS、ICOS-L、OX40、OX40L、GITR、GITRL、CD70、CD27、CD40、CD40L、DR3及CD28H。

在一些實施例中，免疫刺激劑可包含抑制細胞激素或為細胞激素拮抗劑的藥劑，該等細胞激素抑制T細胞活化(例如IL-6、IL-10、TGF-ß、VEGF及其他免疫抑制性細胞激素)，且在一些實施例中，免疫刺激劑可包含作為細胞激素促效劑的藥劑，該等細胞激素刺激T細胞活化(諸如IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21及IFNα(例如細胞激素本身))。在一些實施例中，免疫刺激劑可包含趨化因子拮抗劑，諸如CXCR2(例如MK-7123)、CXCR4(例如AMD3100)、CCR2或CCR4(莫 格利珠單抗(mogamulizumab))。

在一些實施例中，免疫刺激劑可包括NK細胞上之抑制性受體的拮抗劑或NK細胞上之活化受體的促效劑。舉例而言，抗CSF1R抗體可與KIR拮抗劑組合，視情況連同至少一種其他免疫刺激劑(諸如CD40促效劑)一起。

免疫刺激劑亦可包括抑制TGF-β信號傳導的藥劑、增強腫瘤抗原呈現的藥劑(例如樹突狀細胞疫苗、分泌GM-CSF的細胞疫苗、CpG寡核苷酸及咪喹莫特(imiquimod))，或增強腫瘤細胞免疫原性的療法(例如蒽環黴素)。

免疫刺激劑亦可包括某些疫苗，諸如靶向間皮素的疫苗或減毒的李斯特菌癌症疫苗，諸如CRS-207。

免疫刺激劑亦可包含耗乏或阻斷Treg細胞的藥劑，諸如特異性結合至CD25的藥劑。

免疫刺激劑亦可包含抑制新陳代謝酶(諸如吲哚胺雙加氧酶(indoleamine dioxigenase；IDO)、雙加氧酶、精胺酸酶或氧化氮合成酶)的藥劑。

免疫刺激劑亦可包含抑制腺苷形成或抑制腺苷A2A受體的藥劑。

免疫刺激劑亦可包含逆轉/防止T細胞惰能或衰竭的藥劑及在腫瘤位點觸發先天性免疫活化及/或發炎的藥劑。

抗CSF1R抗體可與超過一種免疫刺激劑組合，諸如CD40促效劑與至少一種其他免疫刺激劑。抗CSF1R抗體，視情況連同CD40促效劑一起，可與靶向免疫路徑之多個元素的組合途徑組合，諸如以下中之一或多者：至少一種增強腫瘤抗原呈現的藥劑(例如樹突狀細胞疫苗、分泌GM-CSF的細胞疫苗、CpG寡核苷酸、咪喹莫特)；至少一種抑制負向免疫調節的藥劑，例如藉由抑制CTLA-4路徑及/或耗乏或阻斷Treg或其他免疫抑制細胞；刺激正向免疫調節的療法，例如使用刺 激CD-137、OX-40及/或GITR路徑及/或刺激T細胞效應功能的促效劑；至少一種全身性地提高抗腫瘤T細胞出現率的藥劑；耗乏或抑制Tregs(諸如腫瘤中之Tregs)的療法，例如使用CD25拮抗劑(例如達利珠單抗(daclizumab))或藉由離體抗CD25珠粒耗乏；至少一種影響腫瘤中之抑制性骨髓細胞之功能的藥劑；增強腫瘤細胞免疫原性的療法(例如蒽環黴素)；授受性T細胞或NK細胞轉移，包括經基因修飾之細胞，例如藉由嵌合抗原受體修飾之細胞(CAR-T療法)；至少一種抑制新陳代謝酶(諸如吲哚胺雙加氧酶(IDO)、雙加氧酶、精胺酸酶或氧化氮合成酶)的藥劑；至少一種逆轉/防止T細胞惰能或衰竭的藥劑；在腫瘤位點觸發先天性免疫活化及/或發炎的療法；投與免疫刺激性細胞激素或阻斷免疫抑制性細胞激素。

舉例而言，抗CSF1R抗體，視情況與CD40促效劑一起，可聯合以下使用：一或多種連接正向共刺激受體的促效劑；一或多種經由抑制性受體減弱信號傳導的拮抗劑(阻斷劑)，諸如克服腫瘤微環境內之不同免疫抑止路徑的拮抗劑；一或多種全身性地增加抗腫瘤免疫細胞(諸如T細胞)出現率、耗乏或抑制Trcgs(例如藉由抑制CD25)的藥劑；一或多種抑制代謝酶(諸如IDO)的藥劑；一或多種逆轉/防止T細胞惰能或衰竭的藥劑；及一或多種在腫瘤位點觸發先天性免疫活化及/或發炎的藥劑。

在一個實施例中，至少一種免疫刺激劑包含CTLA-4拮抗劑，諸如拮抗性CTLA-4抗體。適合的CTLA-4抗體包括例如YERVOY(伊匹單抗(ipilimumab))或曲美單抗(tremelimumab)。

在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含LAG-3拮抗劑，諸如拮抗性LAG-3抗體。適合的LAG3抗體包括例如BMS-986016(WO10/19570、WO14/08218)或IMP-731或IMP-321(WO08/132601、WO09/44273)。

在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含CD137(4-1BB)促效劑，諸如促效性CD137抗體。適合的CD137抗體包括例如優瑞路單抗(urelumab)及PF-05082566(WO12/32433)。

在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含GITR促效劑，諸如促效性GITR抗體。適合的GITR抗體包括例如TRX-518(WO06/105021、WO09/009116)、MK-4166(WO11/028683)或WO2015/031667中所揭示的GITR抗體。

在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含OX40促效劑，諸如促效性OX40抗體。適合的OX40抗體包括例如MEDI-6383、MEDI-6469或MOXR0916(RG7888：WO06/029879)。

在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含CD27促效劑，諸如促效性CD27抗體。適合的CD27抗體包括例如瓦里木單抗(varlilumab)(CDX-1127)。

在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含靶向B7H3的MGA271(WO11/109400)。

在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含KIR拮抗劑，諸如利瑞路單抗。

在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含IDO拮抗劑。IDO拮抗劑包括例如INCB-024360(WO2006/122150、WO07/75598、WO08/36653、WO08/36642)、因多莫得(indoximod)、NLG-919(WO09/73620、WO09/1156652、WO11/56652、WO12/142237)或F001287。

在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含Toll樣受體促效劑，例如TLR2/4促效劑(例如卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin)；TLR7促效劑(例如希托洛(Hiltonol)或咪喹莫特(Imiquimod))；TLR7/8促效劑(例如雷西莫特(Resiquimod))；或TLR9促效劑(例如CpG7909)。

在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含TGF-β抑制劑，例如GC1008、LY2157299、TEW7197或IMC-TR1。

CD40促效劑及例示性CD40促效劑分子

在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含CD40促效劑，視情況與如本文所述的至少一種其他免疫刺激劑一起。細胞表面分子CD40為腫瘤壞死因子受體超家族成員且由抗原呈遞細胞(諸如樹突狀細胞、B細胞、巨噬細胞及單核細胞)且亦在其他細胞類型(包括免疫、造血、血管及上皮細胞)上以及各種腫瘤細胞上表現。在抗原呈遞細胞中，CD40信號傳導引起T細胞共刺激分子及誘導免疫反應所必需之其他關鍵免疫介體發生活化及上調。CD40促效劑為潛在癌症療法，其經由抗腫瘤免疫活化與針對腫瘤細胞之直接細胞毒性作用引起腫瘤消退。CD40靶向療法已經歷針對晚期癌症患者之1期臨床評估，且初步結果已顯示功效而無較大毒性。

就CD40而言，例如動物模型已顯示樹突狀細胞上之CD40連接，引起介導腫瘤殺死之細胞毒性T淋巴細胞活化(Marzo等人，2000,J.Immunol.；Todryk等人，2001,J.Immunol.Methods.)。巨噬細胞上之CD40的活化引起殺腫瘤活性(Beatty等人，2011,Science)，且由CD40刺激之抗原呈遞細胞產生的細胞激素引起天然殺手細胞活化，此對於腫瘤根除而言具有重要作用。鑒於抗腫瘤免疫反應之複雜性質，因此有效癌症療法可能需要將多種免疫治療劑組合。與此一致，在胰臟腫瘤模型中，CSF1R之小分子抑制作用顯示與抗PD1免疫檢查點阻斷作用協同發生。發生Zhu等人，2014,Cancer Res.,74：5057-5069。因此，具有表現CSF1R之TAM的腫瘤可能對抗CSF1R抗體與CD40促效劑之組合療法敏感。

本發明之組合物及方法之例示性CD40促效劑包括例如增強CD40活性的抗CD40抗體。此類抗體可為人類化抗體、嵌合抗體、小鼠抗 體、人類抗體及包含本文所述抗CD40抗體之重鏈及/或輕鏈CDR的抗體。

各種促效劑抗CD40抗體在此項技術中已知。非限制性例示性促效劑抗CD40抗體包括(但不限於)CP-870,893(Pfizer及VLST；EP 1 476 185 B1及US專利第7,338,660號中的抗體21.4.1；亦參見clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02225002)；達西珠單抗(Seattle Genetics；本文中之SEQ ID NO：98及99；亦參見美國專利第6,946,129號及美國專利第8,303,955號)；RO7009789(Roche；參見例如clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02304393)；ADC-1013(Alligator Bioscience；美國公開案第2014/0348836號；亦參見clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02379741)；SEA-CD40(Seattle Genetics；包含SEQ ID NO：98及99之抗體的去海藻糖基化形式；亦參見clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02376699)；及Chi Lob 7/4(Univ.Southampton；美國公開案第2009/0074711號；亦參見clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT01561911)。參見例如Vonderheide等人，2013,Clin Cancer Res 19：1035。

例示性CD40促效劑亦包括重組CD40L。

例示性抗體結合物

在一些實施例中，抗體結合至標記及/或細胞毒性劑。如本文所用，標記為促進偵測抗體及/或促進偵測抗體所結合之分子的部分。非限制性例示性標記包括(但不限於)放射性同位素、螢光基團、酶基團、化學發光基團、生物素、抗原決定基標記、金屬結合標記等。熟習此項技術者可根據預定應用來選擇適合標記。

如本文所用，細胞毒性劑為降低一或多種細胞之增殖能力的部分。當細胞變得不太能夠增殖(例如由於細胞經歷細胞凋亡或以其他方式死亡)時，細胞增殖能力減弱，細胞不能完成細胞週期且/或不能 分裂、細胞分化等。非限制性例示性細胞毒性劑包括(但不限於)放射性同位素、毒素及化學治療劑。熟習此項技術者可根據預定應用來選擇適合細胞毒性。

在一些實施例中，標記及/或細胞毒性劑係使用化學方法活體外與抗體結合。非限制性例示性化學結合方法在此項技術中已知且包括可購自以下之服務、方法及/或試劑：例如Thermo Scientific Life Science Research Produces(先前為Pierce；Rockford,IL)、普洛美(Prozyme)(Hayward,CA)、SACRI抗體服務(SACRI Antibody Services)(Calgary,Canada)、AbD Serotec(Raleigh,NC)等。在一些實施例中，當標記及/或細胞毒性劑為多肽時，標記及/或細胞毒性劑可與至少一個抗體鏈一起由同一表現載體表現，以產生包含標記及/或細胞毒性劑與抗體鏈融合的多肽。熟習此項技術者可根據預期應用選擇將標籤及/或細胞毒性劑結合至抗體的適合方法。

例示性前導序列

為了大量表現及分泌一些分泌型蛋白質，可能需要來自異源蛋白質之前導序列。在一些實施例中，前導序列選自分別為輕鏈及重鏈前導序列的SEQ ID NO：3及4。在一些實施例中，採用異源前導序列的有利之處在於，由於在分泌過程中，前導序列在ER中移除，因此所得成熟多肽可保持不變。可能需要添加異源前導序列來表現及分泌一些蛋白質。

某些例示性前導序列描述於例如新加坡國立大學生物化學系(Department of Biochemistry,National University of Singapore)所維護的線上前導序列資料庫(online Leader sequence Database)中。參見Choo等人，BMC Bioinformatics,6：249(2005)；及PCT公開案第WO 2006/081430號。

編碼抗體之核酸分子

提供包含聚核苷酸之核酸分子，其編碼抗體之一或多個鏈。在一些實施例中，核酸分子包含編碼抗體之重鏈或輕鏈的聚核苷酸。在一些實施例中，核酸分子包含編碼抗體重鏈之聚核苷酸及編碼抗體輕鏈之聚核苷酸。在一些實施例中，第一核酸分子包含編碼重鏈之第一聚核苷酸且第二核酸分子包含編碼輕鏈之第二聚核苷酸。

在一些此類實施例中，重鏈及輕鏈由一個核酸分子表現，或以兩個各別多肽形式由兩個各別核酸分子表現。在一些實施例中，諸如當抗體為scFv時，單一聚核苷酸編碼包含重鏈及輕鏈連接在一起的單一多肽。

在一些實施例中，編碼抗體之重鏈或輕鏈的聚核苷酸包含編碼前導序列之核苷酸序列，該序列在轉譯時位於重鏈或輕鏈之N末端。如上文所述，前導序列可為原生重鏈或輕鏈前導序列，或可為另一異源前導序列。

核酸分子可使用此項技術中習知的重組DNA技術建構。在一些實施例中，核酸分子為適於在所選宿主細胞中表現的表現載體。

抗體表現及產生 載體

提供包含編碼抗體重鏈及/或輕鏈之聚核苷酸的載體。亦提供包含編碼抗體重鏈及/或輕鏈之聚核苷酸的載體。此類載體包括(但不限於)DNA載體、噬菌體載體、病毒載體、逆轉錄病毒載體等。在一些實施例中，載體包含編碼重鏈之第一聚核苷酸序列及編碼輕鏈之第二聚核苷酸序列。在一些實施例中，重鏈及輕鏈以兩種各別多肽形式由載體表現。在一些實施例中，重鏈及輕鏈作為單一多肽之一部分表現，諸如抗體為scFv時。

在一些實施例中，第一載體包含編碼重鏈之聚核苷酸且第二載體包含編碼輕鏈之聚核苷酸。在一些實施例中，第一載體及第二載體 以類似量(諸如類似莫耳量或類似質量)轉染至宿主細胞中。在一些實施例中，第一載體與第二載體以5：1與1：5之間的莫耳比或質量比轉染至宿主細胞中。在一些實施例中，編碼重鏈之載體與編碼輕鏈之載體使用1：1與1：5之間的質量比。在一些實施例中，編碼重鏈之載體與編碼輕鏈之載體使用1：2質量比。

在一些實施例中，選擇最佳化的載體以便CHO或CHO源細胞或NSO細胞表現多肽。例示性此類載體描述於例如Running Deer等人，Biotechnol.Prog.20：880-889(2004)中。

在一些實施例中，選擇載體用於在包括人類之動物中活體內表現抗體重鏈及/或抗體輕鏈。在一些此類實施例中，多肽在以組織特異性方式起作用的啟動子控制下表現。舉例而言，肝臟特異性啟動子描述於例如PCT公開案第WO 2006/076288號中。

宿主細胞

在各種實施例中，抗體重鏈及/或輕鏈可表現於原核細胞中，諸如細菌細胞；或表現於真核細胞中，諸如真菌細胞(諸如酵母)、植物細胞、昆蟲細胞及哺乳動物細胞。此類表現可例如根據此項技術中已知的程序進行。可用於表現多肽之例示性真核細胞包括(但不限於)COS細胞，包括COS 7細胞；293細胞，包括293-6E細胞；CHO細胞，包括CHO-S及DG44細胞；PER.C6®細胞(Crucell)；及NSO細胞。在一些實施例中，抗體重鏈及/或輕鏈可表現於酵母中。參見例如美國公開案第US 2006/0270045 A1號。在一些實施例中，特定真核宿主細胞係根據其對抗體重鏈及/或輕鏈產生所要轉譯後修飾的能力加以選擇。舉例而言，在一些實施例中，CHO細胞產生多肽，該等多肽的唾液酸化程度高於293細胞中所產生之相同多肽。

向所要宿主細胞中引入一或多種核酸可藉由任何方法完成，包括(但不限於)磷酸鈣轉染、DEAE-聚葡萄糖介導之轉染、陽離子脂質 介導之轉染、電穿孔、轉導、感染等。非限制性例示性方法描述於例如Sambrook等人，Molecular Cloning,A Laboratory Manual，第3版Cold Spring Harbor Laboratory Press(2001)。核酸可根據任何適合方法短暫或穩定轉染於所要宿主細胞中。

在一些實施例中，可根據任何適合方法，在已使用一或多種編碼多肽之核酸分子工程改造或轉染的動物中活體內產生一或多種多肽。

抗體純化

抗體可藉由任何適合方法純化。此類方法包括(但不限於)使用親和基質或疏水性相互作用層析。適合親和配位體包括結合抗體恆定區之抗原及配位體。舉例而言，蛋白質A、蛋白質G、蛋白質A/G，或抗體親和管柱可用於結合恆定區及純化抗體。疏水性相互作用層析法(例如丁基或苯基管柱)亦可適於純化一些多肽。此項技術中已知許多純化多肽之方法。

無細胞產生抗體

在一些實施例中，抗體在無細胞系統中產生。非限制性例示性無細胞系統描述於例如Sitaraman等人，Methods Mol.Biol.498：229-44(2009)；Spirin,Trends Biotechnol.22：538-45(2004)；Endo等人，Biotechnol.Adv.21：695-713(2003)。

治療性組合物及方法 癌症治療方法

在一些實施例中，提供癌症治療方法，包含投與有效量的抗CSF1R抗體及有效量的至少一種免疫刺激劑。在一些實施例中，同時投與抗CSF1R抗體及至少一種免疫刺激劑。舉例而言，治療劑可一起輸注或在大致相同的時間注射。在一些實施例中，依序投與抗CSF1R抗體及至少一種免疫刺激劑。舉例而言，在一些實施例中，在至少一 種免疫刺激劑之前或之後依序投與抗CSF1R抗體，使得兩種治療劑相隔30分鐘、60分鐘、90分鐘、120分鐘、3小時、6小時、12小時、24小時、36小時、48小時、3天、5天、7天或兩週投與。

在一些實施例中，投與至少一種免疫刺激劑之前，投與至少一次、至少兩次、至少三次劑量、至少五次劑量或至少十次劑量的抗CSF1R抗體。在一些實施例中，投與抗CSF1R抗體之前，投與至少一次劑量、至少兩次劑量、至少三次劑量、至少五次劑量或至少十次劑量的至少一種免疫刺激劑。在一些實施例中，在CSFR1抑制劑之第一劑量之前的至少一天、兩天、三天、五天或十天，或一週、兩週、三週、五週、十二週或二十四週投與免疫刺激劑之最後劑量。在一些其他實施例中，在至少一種免疫刺激劑之第一劑量之前的至少一天、兩天、三天、五天或十天，或一週、兩週、三週、五週、十二週或二十四週投與CSFR1抑制劑之最後劑量。在一些實施例中，個體已接受或正接受至少一種免疫刺激劑療法，且將抗CSF1R抗體添加至治療方案中。

在一些實施例中，提供選擇患者接受抗CSF1R抗體與至少一種免疫刺激劑(諸如CD40促效劑)組合療法的方法，包含測定患者中之TAMs及/或CD8+ T細胞含量。在一些實施例中，若患者之TAM含量較高，則選擇患者進行組合療法。在一些實施例中，若患者之TAM及CD8+ T細胞含量較高，則選擇患者進行組合療法。若TAM或CD8+ T細胞含量比未患癌症之個體中的含量高至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少75%或至少100%，則TAM或CD8+ T細胞含量視為「較高」。在一些實施例中，若TAM或CD8+ T細胞含量比患有癌症之個體中發現的中值含量高，則TAM或CD8+ T細胞含量視為「較高」。在一些實施例中，若患者之TAM含量較高且CD8+ T細胞含量較低，則選擇患者用於抗CSF1R抗體與至少一種免疫刺激劑 (諸如CD40促效劑)之組合療法。若CD8+ T細胞含量為患有癌症之個體中所發現的中值含量或比其低，則CD8+ T細胞含量視為「較低」。在一些實施例中，若CD8+ T細胞含量比未患癌症之個體中的含量低至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少75%或至少100%，則CD8+ T細胞含量視為「較低」。在一些實施例中，測定患者之TAM上的CSF1R表現。在一些實施例中，若患者之TAM表現CSF1R，則選擇患者進行組合療法。在一些實施例中，若患者之TAM表現CSF1R的量升高，則選擇患者進行組合療法。在一些實施例中，若CSF1R含量為發現於癌症個體中之TAMS上所表現之CSF1R的中值含量或比其高，則患者之TAM視為表現CSF1R的量「升高」。在一些實施例中，若患者之CSF1R表現顯示與CD8+ T細胞之含量高度相關，則選擇患者進行組合療法。若表現相關度為癌症個體中所發現之中值含量或比其高，則表現相關度視為「高」。

TAMs、CSF1R表現、CD8+ T細胞及/或調節T細胞的含量可藉由此項技術中的方法量測。非例示性方法包括免疫組織化學(IHC)、螢光活化細胞分選(FACS)、蛋白質陣列及基因表現分析，諸如RNA定序、基因陣列及定量PCR。在一些實施例中，一或多種選自CSF1R、CD68、CD163、CD8及FoxP3的標記可藉由IHC、FACS或基因表現分析、針對腫瘤切片或來自腫瘤切片之不連續細胞來偵測。

在一些實施例中，癌症選自鱗狀細胞癌、小細胞肺癌、垂體癌、食道癌、星形細胞瘤、軟組織肉瘤、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺鱗狀細胞癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌、胰臟癌、神經膠母細胞瘤、宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜或子宮癌、唾液腺癌、腎臟癌、腎癌、肝癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、腦癌、子宮內膜癌、睪丸癌、膽管癌、膽囊癌、胃癌、黑素瘤及多種類型之頭頸癌。在一些實施例中， 肺癌為非小細胞肺癌或肺鱗狀細胞癌。在一些實施例中，白血病為急性骨髓白血病或慢性淋巴細胞性白血病。在一些實施例中，乳癌為乳房侵襲性癌。在一些實施例中，卵巢癌為漿液性囊腺癌。在一些實施例中，腎臟癌為腎臟腎透明細胞癌。在一些實施例中，結腸癌為結腸腺癌。在一些實施例中，膀胱癌為膀胱尿道上皮癌。在一些實施例中，癌症選自膀胱癌、宮頸癌(諸如鱗狀細胞宮頸癌)、頭部及頸部鱗狀細胞癌、直腸腺癌、非小細胞肺癌、子宮內膜癌、前列腺癌、結腸癌、卵巢癌(諸如漿液性上皮細胞卵巢癌)及黑素瘤。

在一些實施例中，抗CSF1R抗體阻斷CSF1及/或IL-34與CSF1R之結合且/或抑制CSF1及/或IL-34誘導CSF1R磷酸化。在一些實施例中，抗CSF1R抗體阻斷CSF1及IL-34與CSF1R之結合且/或抑制CSF1及/或IL-34誘導CSF1R磷酸化。在一些實施例中，抗CSF1R抗體包含本文所述之選自huAb1至huAb16之抗體的CDR或可變區。在一些實施例中，抗CSF1R抗體包含huAb1之CDR或可變區。

在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含T細胞活化抑制劑之拮抗劑，而在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含T細胞活化刺激劑之促效劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含CTLA4、LAG-3、半乳糖凝集素1、半乳糖凝集素9、CEACAM-1、BTLA、CD25、CD69、TIGIT、CD113、GPR56、VISTA、B7-H3、B7-H4、2B4、CD48、GARP、PD1H、LAIR1、TIM1、TIM3、TIM4、ILT4、IL-6、IL-10、TGFβ、VEGF、KIR、LAG-3、腺苷A2A受體、PI3Kδ或IDO之拮抗劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含B7-1、B7-2、CD28、4-1BB(CD137)、4-1BBL、ICOS、ICOS-L、OX40、OX40L、GITR、GITRL、CD27、CD40、CD40L、DR3、CD28H、IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21、IFNα、STING之促效劑，或Toll樣受體促效劑，諸如TLR2/4促效劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺 激劑包含結合至膜結合蛋白質B7家族成員(諸如B7-1、B7-2、B7-H2(ICOS-L)、B7-H3、B7-H4、B7-H5(VISTA)及B7-H6)的藥劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含結合至TNF受體家族成員的藥劑或結合至TNF受體家族成員(諸如CD40、CD40L、OX40、OX40L、GITR、GITRL、CD70、CD27L、CD30、CD30L、4-1BBL、CD137(4-1BB)、TRAIL/Apo2-L、TRAILR1/DR4、TRAILR2/DR5、TRAILR3、TRAILR4、OPG、RANK、RANKL、TWEAKR/Fn14、TWEAK、BAFFR、EDAR、XEDAR、EDA1、EDA2、TACI、APRIL、BCMA、LTβR、LIGHT、DeR3、HVEM、VEGL/TL1A、TRAMP/DR3、TNFR1、TNFβ、TNFR2、TNFα、1β2、FAS、FASL、RELT、DR6、TROY或NGFβ)的共刺激或共抑制分子。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含拮抗或抑制細胞激素的藥劑，該細胞激素抑制T細胞活化，諸如IL-6、IL-10、TGFβ、VEGF。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含刺激T細胞活化之細胞激素(諸如IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21及IFNα)的促效劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含趨化因子拮抗劑，諸如CXCR2、CXCR4、CCR2或CCR4。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含抗體。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑可包含疫苗，諸如間皮素靶向疫苗或減毒的李斯特菌癌症疫苗，諸如CRS-207。

在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含CD40促效劑，例如抗CD40抗體。非限制性例示性促效劑抗CD40抗體包括CP-870,893(Pfizer及VLST)；達西珠單抗(Seattle Genetics)；RO7009789(Roche)；ACD-1013(Alligator Bioscience)；SEA-CD40(Seattle Genetics)；及Chi Lob 7/4(Univ.Southampton)。在一些實施例中，CD40促效劑為重組CD40L。

投藥途徑及載劑

在多個實施例中，抗體可藉由多種途徑活體內投與，包括(但不限於)經口、動脈內、非經腸、鼻內、靜脈內、肌肉內、心內、室內、氣管內、經頰、直腸、腹膜內、皮內、局部、經皮及鞘內，或植入或吸入。本發明組合物可調配成呈固體、半固體、液體或氣態形式的製劑；包括(但不限於)錠劑、膠囊、散劑、顆粒、軟膏、溶液、栓劑、灌腸劑、注射劑、吸入劑及氣溶膠。編碼抗體的核酸分子可塗佈於金微粒上且藉由顆粒轟擊裝置或「基因槍」皮內遞送，如文獻(參見例如Tang等人，Nature 356：152-154(1992))中所述。可根據預定應用選擇適當調配物及投藥途徑。

在各種實施例中，包含抗體的組合物係使用廣泛多種的醫藥學上可接受之載劑、以調配物形式提供(參見例如Gennaro,Remington：The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons：Drugfacts Plus，第20版(2003)；Ansel等人，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，第7版，Lippencott Williams and Wilkins(2004)；Kibbe等人，Handbook of Pharmaceutical Excipients,第3版，Pharmaceutical Press(2000))。可使用醫藥學上可接受之多種載劑，包括媒劑、佐劑及稀釋劑。此外，亦可使用醫藥學上可接受之多種輔助物質，諸如pH調節劑及緩衝劑、張力調節劑、穩定劑、濕潤劑及其類似物。非限制性例示性載劑包括生理食鹽水、緩衝生理食鹽水、右旋糖、水、丙三醇、乙醇及其組合。

在各種實施例中，包含抗體之組合物可藉由將其在水性或非水性溶劑(諸如植物油或其他油、合成脂族酸甘油酯、較高碳數脂族酸之酯，或丙二醇)中溶解、懸浮或乳化來調配以用於注射(包括皮下投與)；且必要時，使用習知添加劑，諸如增溶劑、等張劑、懸浮劑、乳化劑、穩定劑及防腐劑。在各種實施例中，組合物可針對吸入來調配，例如使用可接受之加壓推進劑，諸如二氯二氟甲烷、丙烷、氮氣 及其類似物。在各種實施例中，組合物亦可調配成持續釋放型微膠囊，諸如使用可生物降解或不可生物降解聚合物。非限制性例示性可生物降解調配物包括聚乳酸-乙醇酸聚合物。非限制性例示性不可生物降解調配物包括聚甘油脂肪酸酯。製備此類調配物之某些方法描述於例如EP 1 125 584 A1中。

本發明亦提供包含一或多個容器之醫藥封裝及套組，其各自含有一或多個劑量之抗體或抗體組合。在一些實施例中，提供單位劑型，其中單位劑型含有預定量之包含抗體或抗體組合且具有或不具有一或多種其他藥劑的組合物。在一些實施例中，此類單位劑型係於注射用之單次使用預裝藥注射器中供應。在各種實施例中，單位劑型中所含之組合物可包含生理食鹽水、蔗糖或其類似物；緩衝液，諸如磷酸鹽或其類似物；及/或在穩定及有效pH範圍內調配。或者，在一些實施例中，組合物可以凍乾粉末形式提供，該凍乾粉末可在添加適當液體(例如無菌水)時復原。在一些實施例中，組合物包含一或多種抑制蛋白質聚集之物質，包括(但不限於)蔗糖及精胺酸。在一些實施例中，本發明之組合物包含肝素及/或蛋白聚醣。

醫藥組合物以有效治療或預防特定適應症之量投與。治療有效量通常取決於所治療個體之體重、其生理或健康狀況、所治療病狀之延伸情況或所治療個體之年齡。一般而言，可以每次給藥每公斤體重約10μg至約100mg範圍內的量投與抗體。在一些實施例中，可以每次給藥每公斤體重約50μg至約5mg範圍內之量投與抗體。在一些實施例中，可以每次給藥每公斤體重約100μg至約10mg範圍內之量投與抗體。在一些實施例中，可以每次給藥每公斤體重約100μg至約20mg範圍內之量投與抗體。在一些實施例中，可以每次給藥每公斤體重約0.5mg至約20mg範圍內之量投與抗體。

需要時，可向個體投與抗體組合物。熟習此項技術者(諸如主治 醫師)可基於以下考慮因素確定投藥頻率：所治療病狀、所治療個體之年齡、所治療病狀之嚴重程度、所治療個體之一般健康狀態及其類似因素。在一些實施例中，向個體投與有效劑量之抗體一或多次。在各種實施例中，一月一次、小於一月一次(諸如每兩個月一次或每三個月一次)向個體投與有效劑量之抗體。在其他實施例中，超過每月一次(諸如每三週一次、每兩週一次或每週一次)投與有效劑量之抗體。在一些實施例中，每1、2、3、4或5週一次投與有效劑量之抗體。在一些實施例中，每週兩次或三次投與有效劑量之抗體。有效劑量之抗體投與個體至少一次。在一些實施例中，有效劑量之抗體可投與多次，包括歷時至少一個月、至少六個月或至少一年。

其他組合療法

上述治療組合可單獨投與或聯合其他治療方式投與。其可在其他治療方式(例如手術、化學療法、放射療法或投與生物製劑，諸如另一治療性抗體)之前、實質上同時或之後提供。在一些實施例中，癌症在選自手術、化學療法及放射療法或其組合之療法之後復發或進展。

治療癌症時，組合可聯合一或多種其他抗癌劑(諸如化學治療劑、生長抑制劑、抗癌疫苗(諸如基因療法疫苗)、抗血管生成劑及/或抗贅生性組合物)投與。可與本發明之抗體組合使用的化學治療劑、生長抑制劑、抗癌疫苗、抗血管生成劑及抗贅生性組合物之非限制性實例提供於本文之「定義」下。

在一些實施例中，消炎藥(諸如類固醇或非類固醇消炎藥(NSAID))可聯合該組合投與。

實例

下文所述之實例僅意欲說明本發明，且不應視為以任何方式限制本發明。該等實例並非意欲表示下述實驗為所進行之所有實驗或唯 一實驗。已努力確保關於所用數量(例如量、溫度等)的準確度，但應說明存在一些實驗性誤差及偏差。除非另外指示，否則份數為重量份，分子量為重量平均分子量，溫度為攝氏度，且壓力為大氣壓或近大氣壓。

實例1：人類化抗CSF1R抗體

先前開發了多種人類化抗CSF1R抗體。參見例如PCT公開案第WO 2011/140249號。

圖1(重鏈)及圖2(輕鏈)中顯示與親本嵌合抗體可變區之序列及人類受體可變構架區之序列比對的人類化重鏈可變區及人類化輕鏈可變區中之每一者的序列。人類化可變區序列相對於人類受體可變構架區序列的變化加有方框。各可變區之各CDR顯示於加方框區中，且在加方框序列上方標記為「CDR」。

下表8顯示抗體huAb1至huAb16之人類化重鏈及人類化輕鏈的完全序列。彼等抗體中之每一者的人類化重鏈及人類化輕鏈之名稱及SEQ ID NO顯示於表3中。

如上文所述，測試16種人類化抗體與人類、食蟹獼猴及小鼠 CSF1R ECD之結合。參見例如PCT公開案第WO 2011/140249號。發現抗體結合至人類與食蟹獼猴CSF1R ECD，但不結合至小鼠CSF1R ECD。亦發現人類化抗體阻斷CSF1與IL-34與人類及食蟹獼猴CSF1R之結合且抑制CSF1誘導及IL-34誘導CHO細胞中所表現之人類CSF1R磷酸化。參見例如PCT公開案第WO 2011/140249號。

預先測定結合至人類CSF1R ECD之k_a、k_d及K_D且顯示於表4中。參見例如PCT公開案第WO 2011/140249號。

實例2：利用組合療法增強抗腫瘤活性

按每個籠中5隻動物來圈養6-8週齡之雌性C57BL/6小鼠，讓其隨意接取食物及水。小鼠在到達飼養室之後適應至少3天。對小鼠稱重且在腫瘤細胞株接種之前對其側腹刮毛。

鼠類結腸腺癌細胞株MC38在37℃及5% CO₂下在RPMI+10% FBS+2mM L-麩醯胺酸+抗生素/抗黴菌素中培養。將細胞以5百萬個細胞/毫升之濃度懸浮於50%/v DPBS及50%/v基質膠(Matrigel)中。使用27G1/2針，將100μl細胞溶液(50萬個細胞)植入每隻小鼠之右側腹上。藉由使用18G針及注射器且藉由輕微渦旋防止細胞沈降至管 底。使用異氟烷將小鼠麻醉以減少緊張且允許更精確的腫瘤細胞植入。使用電子測徑規量測每個腫瘤之長度(L)及寬度(W)且使用V=(L×W²)/2計算腫瘤體積(V)。一旦平均腫瘤體積達到約105mm³，則將小鼠分組且給藥，如下文所論述。

分組及給藥

將小鼠分成以下各組且根據下述給藥時程，向嵌合大鼠投與抗小鼠CSF1R抗體(小鼠IgG1；稱為「cmFPA008」)及/或抗CD40抗體FGK45(Bio X Cell；參見Rolink等人，1996,Immunity 5：319-330)。

˙對照組：鼠類IgG，30mg/kg，i.p.lx/wk，第0天開始。大鼠IgG 100μg，i.p.，第0天。

˙huAb1：抗CSF1R抗體，30mg/kg，i.p.lx/wk，第0天開始。大鼠IgG 100μg，i.p.，第0天。

˙抗CD40(高)：抗CD40抗體，100μg i.p.，第0天。鼠類IgG，30mg/kg，i.p.lx/wk，第0天開始。

˙組合(高)：抗CSF1R抗體，30mg/kg，i.p.lx/wk，第0天開始，抗CD40，100μg i.p.，第0天。

˙抗CD40(低)：抗CD40抗體，30μg i.p.，第0天。鼠類IgG，30mg/kg，i.p.lx/wk，第0天開始。

˙組合(低)：抗CSF1R抗體，30mg/kg，i.p.lx/wk，第0天開始，抗CD40，30μg i.p.，第0天。

給藥時程及分組情況顯示於表5中：

若觀測到以下徵象中之任一者，則在研究結束之前將動物無痛處死。

˙體重減輕等於或大於初始體重的15%。

˙觀測到腫瘤潰爛。

˙小鼠呈現瀕死狀態。

˙個別腫瘤體積等於或大於初始體重的10%

收集血漿用於藥物動力學(PK)分析。研究最後一天，經由心內放血來收集全血，且分離出血漿用於PK分析(生物分析組)。自每一組收集至少五(5)個腫瘤用於以下分析。藉由膠原蛋白酶處理來產生腫瘤單細胞分離株，且利用FACS檢查免疫細胞在腫瘤中之浸潤情況。亦在液氮中快速冷凍腫瘤切片且在-80℃儲存以用於蛋白質及mRNA提取。將腫瘤切片包埋在最佳切片溫度化合物(Optimum Cutting Temperature compound；OCT)中且在-80℃儲存。腫瘤切片亦在10%緩衝福馬林中置放隔夜，且接著於次日轉移至70%乙醇中。

此實驗之結果顯示於圖3及圖4中。如圖3中所示，抗CSF1R抗體與抗CD40抗體(高)之組合引起早期腫瘤消退，隨後引起腫瘤停滯。抗CSF1R抗體與抗CD40抗體(低)之組合亦展現比任一種單獨療法更大的功效。圖4顯示(A)第11天及(B)第13天之個別腫瘤體積。表6顯示在第11天及第13天使用單向ANOVA所得的腫瘤體積統計資料。抗CSF1R抗體與抗CD40抗體(高)之組合顯示比任一種單獨療法顯著更佳的功效。

圖5顯示研究中所有動物之體重(每週量測至少兩次)。任何群組中均未觀測到相對於對照組的顯著不同體重。

序列表

表10提供本文所述之某些序列。除非另外指示，否則顯示不具有前導序列之全部多肽及抗體。

<110> 美商戊瑞治療有限公司 艾瑪 麥斯特樂 湯瑪士 布雷曼 大衛 貝洛芬 凱文 貝克 布萊恩 汪

<120> 癌症組合療法

<130> 01134-0044-00PCT

<150> US 62/146,766

<151> 2015-04-13

<150> US 62/190,945

<151> 2015-07-10

<160> 99

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 953

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(953)

<223> hCSF1R(全長，無前導序列)

<400> 1

<210> 2

<211> 972

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(972)

<223> hCSF1R(全長，+前導序列)

<400> 2

<210> 3

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：輕鏈前導序列

<400> 3

<210> 4

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：重鏈前導序列

<400> 4

<210> 5

<211> 487

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：hCSF1R ECD.506

<400> 5

<210> 6

<211> 719

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：hCSF1R ECD.506-Fc

<400> 6

<210> 7

<211> 506

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：cynoCSF1R ECD(有前導序列)

<400> 7

<210> 8

<211> 740

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：cynoCSF1R ECD-Fc(有前導序列)

<400> 8

<210> 9

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：Fab 0301重鏈可變區

<400> 9

<210> 10

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：Fab 0301輕鏈可變區

<400> 10

<210> 11

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：Fab 0302重鏈可變區

<400> 11

<210> 12

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：Fab 0302輕鏈可變區

<400> 12

<210> 13

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：Fab 0311重鏈可變區

<400> 13

<210> 14

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：Fab 0311輕鏈可變區

<400> 14

<210> 15

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：0301重鏈CDR1

<400> 15

<210> 16

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：0301重鏈CDR2

<400> 16

<210> 17

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：0301重鏈CDR3

<400> 17

<210> 18

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：0301輕鏈CDR1

<400> 18

<210> 19

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：0301輕鏈CDR2

<400> 19

<210> 20

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：0301輕鏈CDR3

<400> 20

<210> 21

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：0302重鏈CDR1

<400> 21

<210> 22

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：0302重鏈CDR2

<400> 22

<210> 23

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：0302重鏈CDR3

<400> 23

<210> 24

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：0302輕鏈CDR1

<400> 24

<210> 25

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：0302輕鏈CDR2

<400> 25

<210> 26

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：0302輕鏈CDR3

<400> 26

<210> 27

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：0311重鏈CDR1

<400> 27

<210> 28

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：0311重鏈CDR2

<400> 28

<210> 29

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：0311重鏈CDR3

<400> 29

<210> 30

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：0311輕鏈CDR1

<400> 30

<210> 31

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：0311輕鏈CDR2

<400> 31

<210> 32

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：0311輕鏈CDR3

<400> 32

<210> 33

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：cAb0301重鏈

<400> 33

<210> 34

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：cAb 0301輕鏈

<400> 34

<210> 35

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：cAb 0302重鏈

<400> 35

<210> 36

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：cAb 0302輕鏈

<400> 36

<210> 37

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：cAb 0311重鏈

<400> 37

<210> 38

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：cAb 0311輕鏈

<400> 38

<210> 39

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：h0301-H0重鏈可變區

<400> 39

<210> 40

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：h0301-H1重鏈可變區

<400> 40

<210> 41

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：h0301-H2重鏈可變區

<400> 41

<210> 42

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：h0302-H1重鏈可變區

<400> 42

<210> 43

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：h0302-H2重鏈可變區

<400> 43

<210> 44

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：h0311-H1重鏈可變區

<400> 44

<210> 45

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：h0311-H2重鏈可變區

<400> 45

<210> 46

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：h0301-L0輕鏈可變區

<400> 46

<210> 47

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：h0301-L1輕鏈可變區

<400> 47

<210> 48

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：H0302-L0輕鏈可變區

<400> 48

<210> 49

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：H0302-L1輕鏈可變區

<400> 49

<210> 50

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：H0302-L2輕鏈可變區

<400> 50

<210> 51

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：H0311-L0輕鏈可變區

<400> 51

<210> 52

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：H0311-L1輕鏈可變區

<400> 52

<210> 53

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：h0301-H0重鏈

<400> 53

<210> 54

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：h0301-H1重鏈

<400> 54

<210> 55

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：h0301-H2重鏈

<400> 55

<210> 56

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：H0302-H1重鏈

<400> 56

<210> 57

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：H0302-H2重鏈

<400> 57

<210> 58

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：H0311-H1重鏈

<400> 58

<210> 59

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：H0311-H2重鏈

<400> 59

<210> 60

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：h0301-L0輕鏈

<400> 60

<210> 61

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：h0301-L1輕鏈

<400> 61

<210> 62

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：H0302-L0輕鏈

<400> 62

<210> 63

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：H0302-L1輕鏈

<400> 63

<210> 64

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：H0302-L2輕鏈

<400> 64

<210> 65

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：H0311-L0輕鏈

<400> 65

<210> 66

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：H0311-L1輕鏈

<400> 66

<210> 67

<211> 158

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(158)

<223> 人類CSF1

<400> 67

<210> 68

<211> 222

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(222)

<223> 人類IL-34

<400> 68

<210> 69

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：人類受體A FR1

<400> 69

<210> 70

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：人類受體A FR2

<400> 70

<210> 71

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：人類受體A FR3

<400> 71

<210> 72

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：人類受體A FR4

<400> 72

<210> 73

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：人類受體B FR1

<400> 73

<210> 74

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：人類受體B FR2

<400> 74

<210> 75

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：人類受體B FR3

<400> 75

<210> 76

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：人類受體B FR4

<400> 76

<210> 77

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：人類受體C FR1

<400> 77

<210> 78

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：人類受體C FR2

<400> 78

<210> 79

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：人類受體C FR3

<400> 79

<210> 80

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：人類受體C FR4

<400> 80

<210> 81

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：人類受體D FR1

<400> 81

<210> 82

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：人類受體D FR2

<400> 82

<210> 83

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：人類受體D FR3

<400> 83

<210> 84

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：人類受體D FR4

<400> 84

<210> 85

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：人類受體E FR1

<400> 85

<210> 86

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：人類受體E FR2

<400> 86

<210> 87

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成；人類受體E FR3

<400> 87

<210> 88

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：人類受體E FR4

<400> 88

<210> 89

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：人類受體F FR1

<400> 89

<210> 90

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：人類受體F FR2

<400> 90

<210> 91

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：人類受體F FR3

<400> 91

<210> 92

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：人類受體F FR4

<400> 92

<210> 93

<211> 719

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：mCSF1R ECD-Fc

<400> 93

<210> 94

<211> 327

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：人類IgG4 S241P

<400> 94

<210> 95

<211> 107

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(107)

<223> 人類Ig？

<400> 95

<210> 96

<211> 277

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(277)

<223> 人類CD40前驅體(有信號序列)

<400> 96

<210> 97

<211> 257

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(257)

<223> 人類CD40(成熟，無信號序列)

<400> 97

<210> 98

<211> 444

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：達西珠單抗重鏈

<400> 98

<210> 99

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成：達西珠單抗輕鏈

<400> 99

Claims (31)

1. 一種治療個體中癌症之方法，其包含向該個體投與抗CSF1R抗體及至少一種免疫刺激劑，該至少一種免疫刺激劑選自屬於以下類別中之一或多者的藥劑：a.免疫刺激分子之促效劑，該免疫刺激分子包括共刺激分子，諸如T細胞或NK細胞上所發現的免疫刺激分子；b.免疫抑制分子之拮抗劑，該免疫抑制分子包括共抑制分子，諸如T細胞或NK細胞上所發現的免疫刺激分子；c.以下之拮抗劑：LAG-3、半乳糖凝集素1、半乳糖凝集素9、CEACAM-1、BTLA、CD25、CD69、TIGIT、CD113、GPR56、VISTA、B7-H3、B7-H4、2B4、CD48、GARP、PD1H、LAIR1、TIM1、TIM3、TIM4、ILT4、IL-6、IL-10、TGFβ、VEGF、KIR、LAG-3、腺苷A2A受體、PI3Kδ或IDO；d.以下之促效劑：B7-1、B7-2、CD28、4-1BB(CD137)、4-1BBL、ICOS、ICOS-L、OX40、OX40L、GITR、GITRL、CD27、CD40、CD40L、DR3、CD28H、IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21、IFNα、STING，或Toll樣受體促效劑，諸如TLR2/4促效劑；e.結合至膜結合蛋白質B7家族成員的藥劑，該B7家族成員諸如B7-1、B7-2、B7-H2(ICOS-L)、B7-H3、B7-H4、B7-H5(VISTA)及B7-H6；f.結合至TNF受體家族成員的藥劑或結合至TNF受體家族成員的共刺激或共抑制分子，該TNF受體家族成員諸如CD40、CD40L、OX40、OX40L、GITR、GITRL、CD70、CD27L、CD30、CD30L、4-1BBL、CD137(4-1BB)、TRAIL/Apo2-L、 TRAILR1/DR4、TRAILR2/DR5、TRAILR3、TRAILR4、OPG、RANK、RANKL、TWEAKR/Fn14、TWEAK、BAFFR、EDAR、XEDAR、EDA1、EDA2、TACI、APRIL、BCMA、LTβR、LIGHT、DeR3、HVEM、VEGL/TL1A、TRAMP/DR3、TNFR1、TNFβ、TNFR2、TNFα、1β2、FAS、FASL、RELT、DR6、TROY或NGFβ；g.拮抗或抑制細胞激素的藥劑，該細胞激素抑制T細胞活化，該細胞激素諸如IL-6、IL-10、TGFβ、VEGF；h.刺激T細胞活化之細胞激素之促效劑，該細胞激素諸如IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21及IFNα；及i.趨化因子之拮抗劑，該趨化因子諸如CXCR2、CXCR4、CCR2或CCR4。
2. 如請求項1之方法，其中該至少一種免疫刺激劑包含CD40促效劑，諸如抗CD40抗體，且視情況包含至少一種其他的如請求項1(a)-(h)之免疫刺激劑。
3. 如請求項2之方法，其中該CD40促效劑包含抗CD40抗體，該抗CD40抗體包含選自下列抗體之CDR：CP-870,893；達西珠單抗(dacetuzumab)；SEA-CD40；ADC-1013；RO7009789；及Chi Lob 7/4。
4. 如請求項3之方法，其中該抗CD40抗體包含選自下列抗體之重鏈及輕鏈可變區：CP-870,893；達西珠單抗；SEA-CD40；ADC-1013；RO7009789；及Chi Lob 7/4。
5. 如請求項4之方法，其中該抗CD40抗體選為選自下列之抗體：CP-870,893；達西珠單抗；SEA-CD40；ADC-1013；RO7009789；及Chi Lob 7/4。
6. 如請求項2之方法，其中該CD40促效劑包含重組CD40L。
7. 如前述請求項中任一項之方法，其中該抗CSF1R抗體與該至少一種免疫刺激劑係同時或依序投與。
8. 如前述請求項中任一項之方法，其中該抗CSF1R抗體與該至少一種免疫刺激劑係同時投與。
9. 如請求項7之方法，其中至少一種免疫刺激劑的一或多次劑量係在投與抗CSF1R抗體之前投與。
10. 如請求項7之方法，其中該抗CSF1R抗體的一或多次劑量係在投與免疫刺激劑之前投與。
11. 如前述請求項中任一項之方法，其中該癌症係選自非小細胞肺癌、黑色素瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、卵巢癌、胰臟癌、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱癌、子宮內膜癌、霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)、肺癌、神經膠質瘤、多形性膠質母細胞瘤、結腸癌、乳癌、骨癌、皮膚癌、子宮癌、胃癌(gastric cancer)、胃癌(stomach cancer)、淋巴瘤、淋巴細胞性白血病、多發性骨髓瘤、前列腺癌、間皮瘤及腎癌。
12. 如前述請求項中任一項之方法，其中該癌症在選自手術、化學療法、放射療法或其組合之療法之後復發或進展的。
13. 如前述請求項中任一項之方法，其中該抗CSF1R抗體阻斷CSF1及/或IL-34與CSF1R之結合。
14. 如前述請求項中任一項之方法，其中該抗CSF1R抗體在活體外抑制配位體誘導之CSF1R磷酸化。
15. 如前述請求項中任一項之方法，其中該抗體選自：a)包括含有序列SEQ ID NO：39之重鏈及含有序列SEQ ID NO：46之輕鏈的抗體；b)包含重鏈及輕鏈之抗體，該重鏈包含具有序列SEQ ID NO：15之重鏈(HC)CDR1、具有序列SEQ ID NO：16之HC CDR2及具 有序列SEQ ID NO：17之HC CDR3，該輕鏈包含具有序列SEQ ID NO：18之輕鏈(LC)CDR1、具有序列SEQ ID NO：19之LC CDR2及具有序列SEQ ID NO：20之LC CDR3；及c)包括含有序列SEQ ID NO：53之重鏈及含有序列SEQ ID NO：60之輕鏈的抗體。
16. 如請求項15之方法，其中該抗體為人類化抗體。
17. 如請求項15或16之方法，其中該抗體係選自Fab、Fv、scFv、Fab'及(Fab')₂。
18. 一種包含抗CSF1R抗體及至少一種免疫刺激劑的組合物，該至少一種免疫刺激劑選自屬於以下類別中之一或多者的藥劑：a.免疫刺激分子之促效劑，該免疫刺激分子包括共刺激分子，諸如T細胞或NK細胞上所發現的免疫刺激分子；b.免疫抑制分子之拮抗劑，該免疫抑制分子包括共抑制分子，諸如T細胞或NK細胞上所發現的免疫刺激分子；c.以下之拮抗劑：LAG-3、半乳糖凝集素1、半乳糖凝集素9、CEACAM-1、BTLA、CD25、CD69、TIGIT、CD113、GPR56、VISTA、B7-H3、B7-H4、2B4、CD48、GARP、PD1H、LAIR1、TIM1、TIM3、TIM4、ILT4、IL-6、IL-10、TGFβ、VEGF、KIR、LAG-3、腺苷A2A受體、PI3Kδ或IDO；d.以下之促效劑：B7-1、B7-2、CD28、4-1BB(CD137)、4-1BBL、ICOS、ICOS-L、OX40、OX40L、GITR、GITRL、CD27、CD40、CD40L、DR3、CD28H、IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21、IFNα、STING，或Toll樣受體促效劑，諸如TLR2/4促效劑；e.結合至膜結合蛋白質B7家族成員的藥劑，該B7家族成員諸如B7-1、B7-2、B7-H2(ICOS-L)、B7-H3、B7-H4、B7-H5 (VISTA)及B7-H6；f.結合至TNF受體家族成員的藥劑或結合至TNF受體家族成員的共刺激或共抑制分子，該TNF受體家族成員諸如CD40、CD40L、OX40、OX40L、GITR、GITRL、CD70、CD27L、CD30、CD30L、4-1BBL、CD137(4-1BB)、TRAIL/Apo2-L、TRAILR1/DR4、TRAILR2/DR5、TRAILR3、TRAILR4、OPG、RANK、RANKL、TWEAKR/Fn14、TWEAK、BAFFR、EDAR、XEDAR、EDA1、EDA2、TACI、APRIL、BCMA、LTβR、LIGHT、DeR3、HVEM、VEGL/TL1A、TRAMP/DR3、TNFR1、TNFβ、TNFR2、TNFα、1β2、FAS、FASL、RELT、DR6、TROY或NGFβ；g.拮抗或抑制細胞激素的藥劑，該細胞激素抑制T細胞活化，該細胞激素諸如IL-6、IL-10、TGFβ、VEGF；h.刺激T細胞活化之細胞激素之促效劑，該細胞激素諸如IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21及IFNα；及i.趨化因子之拮抗劑，該趨化因子諸如CXCR2、CXCR4、CCR2或CCR4。
19. 如請求項18之組合物，其中該至少一種免疫刺激劑包含CD40促效劑，諸如抗CD40抗體，且視情況進一步包含至少一種其他的如請求項18(a)-(h)之免疫刺激劑。
20. 如請求項19之組合物，其中該CD40促效劑包含抗CD40抗體，該抗CD40抗體包含選自下列抗體之CDR：CP-870,893；達西珠單抗(dacetuzumab)；SEA-CD40；ADC-1013；RO7009789；及Chi Lob 7/4。
21. 如請求項20之組合物，其中該CD40促效劑包含抗CD40抗體，該抗CD40抗體包含選自下列抗體之重鏈及輕鏈可變區：CP- 870,893；達西珠單抗；SEA-CD40；ADC-1013；RO7009789；及Chi Lob 7/4。
22. 如請求項21之組合物，其中該抗CD40抗體為選自下列之抗體：CP-870,893；達西珠單抗；SEA-CD40；ADC-1013；RO7009789；及Chi Lob 7/4。
23. 如請求項19之組合物，其中該CD40促效劑包含重組CD40L。
24. 如請求項18至23中任一項之組合物，其中該抗CSF1R抗體係選自：a)包括含有序列SEQ ID NO：39之重鏈及含有序列SEQ ID NO：46之輕鏈的抗體；b)包含重鏈及輕鏈之抗體，該重鏈包含具有序列SEQ ID NO：15之重鏈(HC)CDR1、具有序列SEQ ID NO：16之HC CDR2及具有序列SEQ ID NO：17之HC CDR3，該輕鏈包含具有序列SEQ ID NO：18之輕鏈(LC)CDR1、具有序列SEQ ID NO：19之LC CDR2及具有序列SEQ ID NO：20之LC CDR3；及c)包括含有序列SEQ ID NO：53之重鏈及含有序列SEQ ID NO：60之輕鏈的抗體。
25. 如請求項24之組合物，其中該抗CSF1R抗體為人類化抗體。
26. 如請求項24或25之組合物，其中該抗CSF1R抗體係選自Fab、Fv、scFv、Fab'及(Fab')₂。
27. 如請求項18至26中任一項之組合物，其中該抗CSF1R抗體及該至少一種免疫刺激劑各自分別存在於獨立的隔室或容器中。
28. 如請求項18至26中任一項之組合物，其中該抗CSF1R抗體與該至少一種免疫刺激劑係混合或調配在一起。
29. 如請求項18至28中任一項之組合物，其用於治療癌症。
30. 一種如請求項18至28中任一項之組合物的用途，其係用於製備 供治療癌症用的藥劑。
31. 如請求項29或30之組合物或用途，其中該癌症係選自非小細胞肺癌、黑色素瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、卵巢癌、胰臟癌、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱癌、子宮內膜癌、霍奇金氏淋巴瘤、肺癌、神經膠質瘤、多形性膠質母細胞瘤、結腸癌、乳癌、骨癌、皮膚癌、子宮癌、胃癌(gastric cancer)、胃癌(stomach cancer)、淋巴瘤、淋巴細胞性白血病、多發性骨髓瘤、前列腺癌、間皮瘤及腎癌。