[go: up one dir, main page]

TR201901402T4 - Oksintomodulin ve bir immünoglobulin fragmanı içeren bir konjugat ve onun kullanımı. - Google Patents

Oksintomodulin ve bir immünoglobulin fragmanı içeren bir konjugat ve onun kullanımı. Download PDF

Info

Publication number
TR201901402T4
TR201901402T4 TR2019/01402T TR201901402T TR201901402T4 TR 201901402 T4 TR201901402 T4 TR 201901402T4 TR 2019/01402 T TR2019/01402 T TR 2019/01402T TR 201901402 T TR201901402 T TR 201901402T TR 201901402 T4 TR201901402 T4 TR 201901402T4
Authority
TR
Turkey
Prior art keywords
oxyntomodulin
sequence code
immunoglobulin
sequence
derivative
Prior art date
Application number
TR2019/01402T
Other languages
English (en)
Inventor
Youb Jung Sung
Jin Kim Dae
Hee Park Sung
Eun Woo Young
Young Choi In
Chang Kwon Se
Original Assignee
Hanmi Science Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=47357296&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=TR201901402(T4) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Hanmi Science Co Ltd filed Critical Hanmi Science Co Ltd
Publication of TR201901402T4 publication Critical patent/TR201901402T4/tr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/26—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/605—Glucagons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Bu buluş, oksintomodulin, bir immünoglobulin Fc bölgesi ve peptid olmayan polimer içeren bir konjugat ve o konjugatı içeren, obezitenin önlenmesi veya tedavisine yönelik bir farmasötik bileşim ile ilgili olup, bahsi geçen konjugat, oksintomodulini peptid olmayan polimer aracılığıyla immünoglobulin Fc bölgesine kovalent bağlamak suretiyle elde edilebilir. Buluşa konu olan oksintomodulin ile immünoglobulin Fc'nin bulunduğu konjugat, nativ oksintomodulinden farklı olarak gıda alımını azaltır, gastrik boşalmayı baskılar ve yan etkilere neden olmadan lipolizi kolaylaştırır ve ayrıca, nativ oksintomoduline kıyasla çok iyi reseptör-aktive edici etkiler ve uzun süreli bir süreklilik gösterir. Dolayısıyla obezite tedavisinde güvenli ve etkili bir tedavi seçeneği olarak geniş bir kullanım alanına sahip olabilir.

Description

TARIFNAME OKSINTOMODULIN VE BIR IMMUNOGLOBULIN FRAGMANI ICEREN BIR KONJUGAT VE ONUN KULLANIMI Teknik Alan Bu bulus, oksintoinodulin ve bir iminünoglobulin fragmani içeren bir konjugat ve onun kullanimi ile ilgilidir. Daha somut ifade etmek gerekirse, bu bulus, oksintomodulin, bir immünoglobulin Fe bölgesi ve bir peptid olmayan polimer içeren bir konjugat ve o konjugati içeren obezitenin 'Önlenmesi veya tedavisine yönelik bir farmas'otik bilesim ile ilgili olup, burada konjugat, oksintomodulinin peptid olmayan polimer araciligiyla immünoglobulin Fc bölgesine kovalent baglanmasi yoluyla elde edilebilir. Bulus Hakkinda On Bilgiler Günümüzde insanlarin yasam tarzindaki degisimler ve ekononiik büyüme yeme aliskanliklarinin degismesine neden olmaktadir. Içinde bulunduguinuz çagda yasayan insanlar arasinda asiri kiloluluk ve obezite oranlarinin artista olmasinin temel sebepleri, ayaküstü yenen hizli yemeklerin örnek gösterilebilecegi yüksek kalorili gida tüketimi ve egzersiz yapilmamasidir. Düiiya Saglik Örgütü'nün (WHO) rakamlarina göre, dünya genelinde 1 milyardan fazla insanin asiri kilolu oldugu ve bunlardan en az 300 milyonunun klinik ölçeklere göre obez oldugu tahmin edilmektedir. Ozellikle Avrupa'da her yil 250.000 kisi ve dünya genelinde her yil 2,5 milyondan fazla kisi asiri kilolu olmanin getirdigi sorunlardan Ötürü 'Ölmektedir (Dünya Saglik Örgütü, Global Strategy on Diet, Physical Activity and Health, 2004). Asiri kilolu ve obez olmak kan basincini ve kolesterol seviyelerini artirarak, kardiyovasküler hastalik, diyabet ve artrit gibi çesitli hastaliklarin ortaya çikmasina veya siddetlenmesine neden olur ve ayrica, yetiskinlerin yani sira çocuklar veya ergenlerdeki arterioskleroz, hipertansiyon, hiperlipideini veya kardiyovasküler hastalik ensidans oranlarindaki artisin ana sebepleri de asiri kiloluluk ve obezitedir. Obezite, düiiya genelinde çesitli hastaliklara sebep olan siddetli ve ciddi bir durumdur. Bireysel çabalarla üstesinden gelinebilecegi düsünülmekte olup, ayrica obez hastalarin irade gücüne sahip olmadigina inanilmaktadir. Fakat isin asli obezite, istah regülasyonundan enerji inetabolizinasina kadar çesitli farkli faktörlerin rol oynadigi karmasik bir problem oldugu için tedavisi güç bir bozuklugu teskil eder. Obezite tedavisi için, obez hastalarin bireysel çabalarinin yani sira, istah regülasyonu ve enerji metabolizmasi ile baglantili anormal eylemlerin kontrol altina aliiimasi gerekir. Bugüne dek, bu anormal eylemleri tedavi edebilecek ilaçlar gelistirmek için birçok girisimde bulunulmustur. Bu girisimlerin sonucu olarak, Rimonabant (Sanofi-Aventis), Sibutramin (Abbott), Contrave (Takeda) ve Orlistat (Roche) gelistirilmistir, ancak bu ilaçlar ciddi advers etkilere veya çok zayif anti-obezite etkilerine sahip olmalarindan ileri gelen dezavantajlarla iliskilidirler. Ornek vermek gerekirse, Rimonabant (Sanofi-Aventis) ürününün merkezi sinir sisteminde bozukluga neden olan bir yan etkiye sahip oldugu, Sibutramine (Abott) ve Contrave (Takeda) ürünlerinin kardiyovasküler yan etkilere sahip olduklari ve Orlistat (Roche) ürününün 1 yil boyunca kullanimda yalnizca 4 kg ölçüsünde agirlik kaybi saglayabildigi rapor edilmistir. Ne yazik ki, obez hastalar için güvenle reçete edilebilecek obezite karsiti herhangi bir terapötik ajan yoktur. Konvansiyonel anti-obezite ilaçlarinin tasidiklari problemleri tasimayan obezite karsiti terap'otik ajanlar gelistirmek maksadiyla birçok çalisma yapilmistir. Bu alanda son dönemde glukagon türevlerine ilgi gösterilmektedir. Glukagon, baska ilaçlardan veya hastaliklardan, hormon veya enzim eksikliklerinden dolayi kandaki glukoz seviyesi düstügünde pankreas tarafindan üretilir. Glukagon, karacigerde glikojen yikimini stimüle eder ve glukoz salimini kolaylastirarak kan glukoz seviyelerinin normal bir araliga yükselmesini saglar. Glukagon, kan glukoz seviyesini artirici etkisinin yani sira, istahi baskilamak ve adipositlerin hormon-sensitif lipazini (HSL) aktive edip lipolizi kolaylastirmak suretiyle anti-obezite etkileri gösterir. Glukagon türevlerinden biri olan glukagon benzeri peptid-l (GLP-l), diyabetli hastalarda hiperglisemiye yönelik bir terap'otik ajan olarak gelistirme asamasindadir ve yerine getirdigi islevler, insülin sentezi ve sekresyonunu stimüle etinek, glukagon sekresyonunu inhibe etmek, gastrik bosalmayi yavaslatmak, glukoz kullanimini artirmak ve gida alimini inhibe etmektir. GLP-l ile yaklasik %50 oraninda ainino asit homolojisine sahip olan kertenkele zehrinden izole edilen Eksendin-4'ün de GLP-l reseptörünü aktive ettigi ve böylelikle diyabetli hastalarda hipergliseiniyi iyilestirdigi rapor edilmektedir. Fakat GLP-l içeren anti-obezite ilaçlarinin kusma ve bulanti gibi yan etkiler sergiledikleri rapor edilmektedir. Bundan dolayi, GLP-l'in bir alternatifi olarak, iki peptidin de reseptörlerine baglanan, yani GLP-l ve glukagonun reseptörlerinin her ikisine de baglanan bir ön-glukagonu teskil eden bir glukagon prekürsöründen elde edilen bir peptid olan oksintoinodulin epey ilgi odagi olmustur. Oksintomodulin, güçlü bir anti-obezite tedavisini temsil eder, çünkü GLP-l'e benzer sekilde gida alimini inhibe eder, tokluk hissini destekler ve artirir ve glukagona benzer sekilde bir lipolitik aktiviteye sahiptir. Oksintomodulin peptidinin sahip oldugu iki yönlü fonksiyon temelinde, bu madde obezite tedavisine yönelik bir ilaç olarak fiilen çalisilmistir. Ornek vermek gerekirse, 925017 sayili Kore patentinde, asiri kilolu insanlarin tedavisine yönelik bir etkin bilesen olarak oksintomodulini içeren ve oral, parenteral, mukozal, rektal, subkütan veya transderinal yolla uygulanan bir farmasötik bilesim açiklanmaktadir. Ancak oksintomodulini içeren bu anti-obezite ilacinin günde üç defa yüksek bir dozda uygulansa dahi kisa bir in Vivo yari ömür ve zayif bir terap'otik etkinlik ortaya koydugu rapor edilmistir. Buna bagli olarak, oksintomodulinde çesitli modifikasyonlar denenerek söz konusu maddenin in vivo yari 'Ömrünü uzatmaya veya obezite üzerindeki terapötik etkisini gelistirmeye yönelik birçok girisimde bulunulmustur. Örnegin, dipeptidil peptidaz-IV'e (DPP-IV) direnci artirmak ainaciyla oksintomodulinin 2 numarali pozisyonundaki L-serini D-serin ile ikame etmek ve ayni zamanda kan yari ömrünü artirmak maksadiyla C-terminale bir kolesterol moietesi tutturmak suretiyle bir iki yönlü agonist oksintoiriodulin (Merck) hazirlanmistir. Diger yandan, DPP- IV'ye direnci artirmak amaciyla 2 numarali pozisyondaki L-serini D- serin ile ikame etmek, proteaza direnci artirmak amaciyla 17 numarali pozisyondaki arjinini alanin ile ikame etmek, oksidatif stabiliteyi artirmak amaciyla 27 nuinarali pozisyondaki inetionini lizin ile ikame etmek ve deamidasyon stabilitesini artirmak amaciyla 20 ve 24 numarali pozisyonlardaki glutamini aspartik asit ve alanin ile ve 28 numarali pozisyondaki asparajini serin ile ikame etmek suretiyle ZP2929 (Zealand) hazirlanmistir. Fakat iki yönlü agonist oksintoinodulinin (Merck) yari ömrü nativ oksintoinoduline kiyasla 8- 12 dakika kadar uzatilmis olsa da, ürün hâlâ 1,7 saat gibi çok kisa bir in Vivo yari ömre sahiptir ve ayrica uygulandigi doz hâlâ birkaç mg/kg gibi yüksek bir düzeydedir. Peptid ilaçlarinin yari ömrünü uzatmak için, PEG-konjugatlari veya PEG-immünoglobulin Fc konjugatlari gibi baska yöntemler de önerilmistir (WO 2010/ 107256 A2). Bunlariii yani sira, WO 2007/ 100535 A2 sayili patent yayininda diyabet ve obezite tedavisine yönelik ek oksintoinodulin türevleri açiklanmaktadir. Fakat ne yazik ki, oksintomodulin veya onun türevleri, kisa yari ömür ve düsük etkinlik sorunlarindan dolayi yüksek dozda günlük uygulama yapilmasini gerekli kilan dezavantajlara sahiptirler. Bulusun Açiklamasi Teknik Problem Bu kapsamda bulus sahipleri, oksintomodulinin in vivo ortamdaki aktivitesini bozmadan kan yari ömrünü artirmak için bir yöntem gelistirmek amaciyla ellerinden geleni yapmislardir. Sonuç olarak, peptid olmayan bir polimer araciligiyla bir tasiyiciyi oksintomoduline baglamak suretiyle hazirlanan bir konjugatin daha uzun bir yari 'Ömür sergilemekte olup bunun yani sira in Vivo ortam aktivitesinde kayba neden olinadigini ve dolayisiyla mükemmel anti-obezite etkileri ortaya koydugunu tespit etmis ve böylece bu bulusu ortaya çikarmislardir. Probleme Getirilen Çözüm Bu bulusun hedeflerinden biri, SEKANS KOD NO.: 24, 25 veya 26 amino asit sekansini içeren bir oksintomodulin türevi, bir immünoglobulin FC bölgesi ve bir peptid olmayan polimer içeren bir konjugat ortaya koymak olup, burada peptid olmayan polimer oksintomodulin türevi ile immünoglobulin Fe bölgesini kovalent baglar. Bu bulusun bir diger hedefi, obeziteyi önlemeye veya tedavi etmeye yönelik olan ve bahsi geçen konjugatlari içeren bir farmasötik bilesim ortaya koymaktir. Bu bulusun yine bir diger hedefi, obeziteyi `Önlemek veya tedavi etmek amaçli kullanim için söz konusu konjugat veya söz konusu farmasötik bilesimi ortaya koymaktir. Bu bulusun ek hedefleri, bagimli istemlerde açiklanacaklardir. Bulusun Faydali Etkileri Bulusa konu olan immünoglobulin Fc ve oksintomodulin içeren konjugat, nativ oksiiitomodulinin tersine gida alimini azaltir, gastrik bosalmayi baskilar ve yan etkilere sebep olmadan lipolizi kolaylastirir ve ayrica, oksiiitomoduline kiyasla çok iyi düzeyde reseptör-aktive edici etkiler ve uzun süreli bir süreklilik sergiler. Dolayisiyla obezite tedavisinde güvenli ve etkili bir tedavi seçenegi olarak genis bir kullanim alanina sahip olabilir. Nativ oksintomodulinin aksine bu bulusa konu olan yeni peptid, gida alimini azaltir, gastrik bosalmayi baskilar ve yan etkilere sebep olinadan lipolizi kolaylastirir ve ayrica, çok iyi reseptör-aktive edici etkiler sergiler. Dolayisiyla obezite tedavisinde güvenli ve etkili bir tedavi seçenegi olarak genis bir kullanim alanina sahip olabilir. Bu bulusa konu olan oksintomodulin türevlerini içeren konjugatlar, SEKANS KOD NO.: 24, 25 ve 26 sekanslari ile ilgili olanlardir. Burada sunulan diger oksintomodulin türevleri veya varyantlar yalnizca referans amaçli gösterilmektedirler. Sekillere Dair Kisa Açiklamalar SEKIL l, oksintoinodulin veya oksintomodulin türevinin uygulama dozuna göre gida aliminda meydana gelen degisimlerin gösterildigi bir grafiktir. SEKIL 2a, bir SOURCE saflastirma kolonu araciligiyla gerçeklestirilen mono-PEGile oksintoinodulin saflastirinasinin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL 2b, saflastirilmis mono-PEGile oksintomoduline yönelik yapilan peptid haritalamanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL 20, bir SOURCE 15Q saflastirma kolonu araciligiyla oksintomodulin ve immünoglobulin Fc içeren konjugatlara yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL 3a, bir SOURCE S saflastirma kolonu araciligiyla bir mono- PEGile oksintomodulin türevine (SEKANS KOD NO.: 29) yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL 3b, bir SOURCE 15Q saflastirina kolonu araciligiyla oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 29) ve iminünoglobulin Fc içeren konjugatlara yönelik gerçeklestirilen saflastirinanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL 4a, bir SOURCE S saflastirina kolonu araciligiyla bir mono- PEGile oksintoinodulin türevine (SEKANS KOD NO.: 30) yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL 4b, saHastirilmis inono-PEGile oksintomodulin türevine (SEKANS KOD NO.: 30) yönelik yapilan peptid haritalamanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL 40, bir SOURCE 15Q saflastirma kolonu araciligiyla oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 30) ve iinmünoglobulin FC içeren konjugatlara yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL Sa, bir SOURCE S saflastirnia kolonu araciligiyla bir mono- PEGile oksintoinodulin türevine (SEKANS KOD NO.: 31) yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL Sb, bir SOURCE 15Q saflastirma kolonu araciligiyla oksintoinodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 31) ve iinmünoglobulin F0 içeren konjugatlara yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL 6a, bir SOURCE S saflastirma kolonu araciligiyla bir mono- PEGile oksintomodulin türevine (SEKANS KOD NO.: 2) yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL 6b, saflastirilmis niono-PEGile oksiiitomoduliii türevine (SEKANS KOD NO.: 2) yönelik yapilan peptid haritalamanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL 60, bir SOURCE 15Q saflastirina kolonu araciligiyla oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 2) ve iminünoglobulin Fc içeren konjugatlara yönelik gerçeklestirilen saflastirnianin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL 6d, bir Source ISO saflastirma kolonu araciligiyla oksintoinodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 2) ve immünoglobulin Fc içeren konjugatlara yönelik gerçeklestirilen saflastirnianin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL 7a, bir SOURCE S saflastirina kolonu araciligiyla bir mono- PEGile oksintomodulin türevine (SEKANS KOD NO.: 3) yönelik gerçeklestirilen saflastirinanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL 7b, saflastirilmis niono-PEGile oksintomodulin türevine (SEKANS KOD NO.: 3) yönelik yapilan peptid haritalamanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL 7c, bir Butyl FF saflastirnia kolonu araciligiyla oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 3) ve iniinünoglobulin Fc içereii konjugatlara yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL 7d, bir Source l5Q saflastirnia kolonu araciligiyla oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 3) ve iminünoglobulin F0 içeren konjugatlara yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL 8a, bir SOURCE S saflastirnia kolonu araciligiyla bir mono- PEGile oksintomodulin türevine (SEKANS KOD NO.: 23) yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL 8b, bir Source 15Q saflastirma kolonu araciligiyla oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 23) ve immünoglobulin Fc içeren konjugatlara yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL 8c, bir SOURCE ISO saflastirma kolonu araciligiyla oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 23) ve immünoglobulin Fc içeren konjugatlara yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL 921, bir SOURCE S saflastirnia kolonu araciligiyla bir mono- PEGile oksintoinodulin türevine (SEKANS KOD NO.: 24) yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL 9b, bir Source 15Q saflastirma kolonu araciligiyla Oksintoinodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 24) ve immünoglobulin Fc içeren konjugatlara yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL 90, bir SOURCE lSO saflastirma kolonu araciligiyla oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 24) ve iinmünoglobulin Fc içeren konjugatlara yönelik gerçeklestirilen saflastirinanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL lOa, bir SOURCE S saflastirma kolonu araciligiyla bir mono- PEGile oksintomodulin türevine (SEKANS KOD NO.: 25) yönelik gerçeklestirilen saflastirnianin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL 1%, bir Source 15Q saflastirma kolonu araciligiyla oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 25) ve iinmünoglobulin FC içeren konjugatlara yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL lOC, bir SOURCE ISO saflastirma kolonu araciligiyla oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 25) ve immünoglobulin Fc içeren konjugatlara yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL lla, bir SOURCE S saflastirma kolonu araciligiyla bir mono- PEGile oksintomodulin türevine (SEKANS KOD NO.: 28) yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL llb, bir Source 15Q saflastirma kolonu araciligiyla oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 28) ve immünoglobulin Fc içeren konjugatlara yönelik gerçeklestirilen saflastirinanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL 110, bir SOURCE ISO saflastirma kolonu araciligiyla oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 28) ve immünoglobulin Fc içeren konjugatlara yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. SEKIL 12, oksintomodulin türevi-iinmünoglobulin Fc kon jugatlarinin tipine ve uygulama dozuna göre farelerin Vücut agirliklarinda meydana gelen degisimlerin gösterildigi bir grafiktir. SEKIL 13, oksintomodulin türevi-immünoglobulin Fc konjugatlarinin tipine ve uygulama dozuna göre farelerin vücut agirliklarinda meydana gelen degisimlerin gösterildigi bir grafiktir. Bulusu Gerçeklestirmek Için En Iyi Yol Yukarida bahsi geçen hedeflere ulasmaya dönük bir bulus özelligine göre bu bulus, oksintomodulin, bir immünoglobulin FC bölgesi ve peptid olmayan polimer içeren bir konjugat ortaya koymakta olup, burada konjugat, oksintomodulinin peptid olmayan polimer araciligiyla immünoglobulin Fc bölgesine kovalent baglanmasi yoluyla elde edilebilir. Burada kullanildigi aiilamiyla "konjugat" terimi, oksintomodulin ve baska faktörler içeren bir konjugat anlainina gelir. Bahsi geçeii diger faktörler arasinda, kanda stabilite artisi indükleyebilecek olan, böbrek aracili emisyonu askiya alabilecek olan veya baska faydali etkilere sahip olan her türlü madde bulunabilir. Bu bulusta, bahsi geçen faktörler inimi'inoglobulin FC bölgesini teskil edebilir. Tercih edilen duruma göre, konjugat, birbirlerine peptid olmayan bir polimer araciligiyla bagli olan bir oksintomodulin ile bir immünoglobulin FC bölgesinden olusabilir. Burada bahsi geçen peptid olmayan polimer, bir oksintomodulin ile bir immünoglobulin FC bölgesini kovalent baglar araciligiyla birbirlerine baglayabilir. Peptid olmayan polimerin iki terminal ucu, sirasiyla immünoglobulin FC bölgesi ile oksintomodulin türevlerinin bir amin grubu veya tiol grubuna baglanabilirler. Bu bulusa konu olan konjugat, natiV oksintoinoduliiie kiyasla daha uzun bir in VIVO etkinlik süresine sahiptir ve bu uzun süre etkili konjugatta, natiV oksintomoduliniii amino asit sekansiiida modifikasyon, ikame, ekleme veya silme yapilarak hazirlanan oksintodomodulin, polietilen glikol (PEG) gibi bir biyobozunur poliinere kon juge olan oksintomodulin, albümin veya immünoglobulin gibi uzun süre etkili bir proteine konjuge olan oksintomodulin, vücuttaki albümine baglanma kabiliyetine sahip olan bir yag asidine konjuge olan oksintomodulin veya biyobozunur nanopartik'ûllerde kapsüllenmis olan oksintomodulin bulunabilecek olup, olasi uzun süre etkili konjugat çesitleri bunlarla sinirli degildir. "Oksintomodulin" teriini, ön-glukagonu teskil eden bir glukagon prekürsör'unden elde edilen bir peptid anlamina gelir ve natiV oksintoinodulini, onuii prekürsörlerini, türevlerini, fragmanlarini ve varyantlarini içine alan bir anlam tasir. Örnegin, SEKANS KOD NO.: 1 (HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIA) amino asit sekansina sahip olabilir. "Oksintomodulin varyanti" terimi, nativ oksiiitoinodulinin ainino asit sekanslarindan farkli bir veya daha fazla sayida amino asit sekansina sahip olan bir peptide atif yapar ve GLP-l ve glukagon reseptörlerini aktive etme fonksiyonunu koruyan bir peptid anlamina gelir ve bu peptid, nativ oksiiitomodulinin ainino asit sekansinin bir kisminda ikame, ekleme, silme veya modifikasyon ya da bunlarin bir çesit kombinasyonu yapilarak hazirlanabilir. "Oksintomodulin türevi" terimi, nativ oksintomoduliiie kiyasla hem GLP-l reseptörünü hem de glukagon reseptörünü yüksek bir düzeyde aktive etmek maksadiyla oksintoinodulinin amino asitleri silinerek veya ikame edilerek ya da oksintomoduline amino asit eklenerek hazirlanan peptidler, peptid türevleri veya peptid mimetiklerini içine alan bir anlam tasir. "Oksintomodulin fragmani" terimi, nativ oksintomodulinin dogada kendiliginden olusmayan ainino asitler (Örnegin D-tipi amino asit) eklenebilecek olan N-terminal veya C-terminal kisminda yer alan bir veya daha fazla sayida ainino asit silinerek veya 0 kisma bir veya daha fazla sayida amino asit eklenerek elde edilen ve hem GLP-l reseptöri'inü hem de glukagon reseptörünü aktive etmeye dönük bir fonksiyona sahip olan bir fragman anlamina gelir. Oksintomodulinin varyantlari, türevleri ve fragmanlari için sunulan hazirlama yöntemlerinin her biri tek basina ya da diger yöntemler ile birlikte kullanilabilir. Örnegin, nativ peptidin amino asitlerinden farkli bir veya daha fazla sayida amino aside sahip olup N-terminal amino asit artiginda deaininasyon söz konusu olan ve hem GLP-l reseptörûnü hem de glukagon reseptörünü aktive etmeye dönük bir fonksiyona sahip olan bir peptid bu bulusun kapsaminda sayilir. Burada bahsi geçen amino asitler, IUPAC-IUB'nin nomenklat'ür kuralina göre asagida gösterildigi gibi kisaltilmaktadirlar: Alanin A Arjinin R Asparajin N Aspartik asit D Sistein C Glutaniik asit E Glutainin Q Glisin G Histidin H Izolösin I Lösin L Lizin K Metionin M Fenilalanin F Proliii P Serin S Treonin T Triptofan W Tirozin Y Valin V Glukagon ve GLP-l reseptörlerini ayni anda aktive etmek maksadiyla oksintomodulinin ainino asit sekansinda (HSQGTFTSDYSKYLDSR RAQDFVQWLMNTKRNRNNIA, SEKANS KOD NO.: 1) ikameler, eklemeler, silmeler veya translasyon sonrasi modifikasyonlar yapilarak hazirlanan oksintomodulin peptidleri gösterilmektedir. Ainino asit ikainesi veya eklemesinde, insan proteinlerinde yaygin olarak bulunan 20 amino asitten herhangi biri ve ayrica atipik veya dogada kendiliginden olusmayan amino asitler kullanilabilir. Atipik amino asitlerin ticari yollarla edinilebilecegi kaynaklar arasinda, Sigma-Aldrich, ChemPep Inc. ve Genzyme Pharmaceuticals sayilabilir. Bu amino asitleri ve atipik peptid sekanslarini içeren peptidler, sentezlenebilir Ve örnegin American Peptide Company veya Bachem (ABD) ya da Anygen (Kore) gibi ticari tedarikçilerden satin alinabilirler. Örnegin, oksintomodulin türevi, asagida gösterilen Formül 1'in amino asitlerini içerebilir: R1-Xl-X2-GTFTSD-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-XlO- X11-X12-Xl3-X14-X15-Xl6-Xl7-X18-X19-X20-X21- X22-X23-X24-R2 (Formül 1) burada R1, histidin, desamino-histidil, dimetil-histidil (N- dimetil-histidil), beta-hidroksiimidazopropionil, 4- imidazoasetil, beta-karboksi imidazopropionil veya tirozindir; X1, Aib (aminosiobütirik asit), d-alanin, glisin, Sar (N- metilglisin), serin veya d-serindir; X2, glutamik asit veya glutamindir; X3, lösin veya tirozindir; X4, serin veya alanindir; X5, lizin veya arjinindir; X6, glutamin veya tirozindir; X7, lösin veya metionindir; X8, aspartik asit veya glutarnik asittir; X9, glutamik asit, serin veya alfa-metil-glutamik asittir ya da silinir; XIO, glutamin, glutamik asit, lizin, arjinin veya serindir ya da silinir; Xl 1, alanin, arjinin veya valindir ya da silinir; XlZ, alanin, arjinin, serin veya valindir ya da silinir; Xl3, lizin, glutamin, arjinin veya alfa-inetil-glutik asittir ya da silinir; Xl4, aspartik asit, glutamik veya lösindir ya da silinir; X15, fenilalanindir ya da silinir; Xl6, izolösin veya valindir ya da silinir; Xl7, alanin, sistein, glutamik asit, lizin, glutamin veya alfa- metil-glutainik asittir ya da silinir; X18, triptofandir ya da silinir; Xl9, alanin, izolösin, lösin, serin veya valindir ya da silinir; X20, alanin, lizin, metionin, glutamin veya arjinindir ya da silinir; X21, asparajindir ya da silinir; X22, alanin, glisin veya treonindir ya da silinir; X23, sistein veya lizindir ya da silinir; X24, alanin, glisin veya serinin kombinasyoiiundan olusan 2 ilâ adet amino asidin bulundugu bir peptiddir ya da silinir; ve R2, KRNRNNIA (SEKANS KOD NO.: 35), GPSSGAPPPS (SEKANS KOD NO.: 36), GPSSGAPPPSK (SEKANS KOD NO.: 37), HSQGTFTSDYSKYLD (SEKANS KOD NO.: 38), HSQGTFTSDYSRYLDK (SEKANS KOD NO.: 39) veya HGEGTFTSDLSKQMEEEAVK'dir (SEKANS KOD NO.: 40) ya da silinir (Formül l'in amino asit sekansi SEKANS KOD NO.: 1 sekansi ile Özdes ise disarida birakilir). Yabani tip Oksintomodulinin glukagon reseptörü ve GLP-l reseptörüne yönelik aktivitesini kuvvetlendirmek amaciyla, peptidde, SEKANS KOD NO.: 1 ile temsil edilen ainino asit sekansiiii 1 numarali pozisyonundaki histidinin alfa karbonunun silinmesine dayali 4-imidazoasetil, N-terminal amino grubunun silinmesine dayali desamino-histidil, N-terminal amino grubunun iki metil grubu ile modifiye edilmesine dayali dimetil-histidil (N-dimetil-histidil), N- terminal ainino grubunun yerine bir hidroksil grubu ikame edilmesine dayali beta-hidroksi imidazopropionil veya N-terminal amino grubunun yerine bir karboksil grubu ikame edilmesine dayali beta- karboksi imidazopropionil ikamesi yapilabilir. Bunun yani sira, GLP- l reseptör'ûne baglanan bölge, hidrofobik ve iyonik baglari kuvvetlendiren amino asitlerle veya onlarin kombinasyonlariyla ikame edilebilir. Oksintomodolin sekansinin bir kismi, GLP-l reseptör'u üzerindeki aktiviteyi kuvvetlendirmek maksadiyla GLP-l veya Eksendin-4'i'1n amino asit sekansi ile ikame edilebilir. Dahasi, oksintomodulin sekansinin bir kismi, alfa helisi stabilize edici özellige sahip bir sekans ile ikame edilebilir. Formül 1 ainino asit sekansinin 10, 14, 16, 20, 24 ve 28 numarali pozisyonlarinda bulunan amino asitler, alfa helisi stabilize ettikleri bilinen ve Tyr(4-Me), Phe, Phe(4-Me), Phe(4-Cl), Phe(4-CN), Phe(4-N02), Phe(4-NH2), Phg, Pal, Nal, Ala(2-tienil) ve Ala(benzotienil)'den olusan amino asit türevleri veya amino asitler ile ikame edilebilirler ve sokulabilecek alfa helis- stabilize edici ainino asit veya amino asit türevlerinin çesidi ve sayisi bakimindan belirlenmis herhangi bir sinirlama yoktur. Ayrica, 10 ile 14, 12 ile 16, 16 ile 20, 20 ile 24 ve 24 ile 28 nuinarali pozisyonlarda bulunan amino asitler de halkalar olusmasini saglamak maksadiyla sirasiyla glutamik asit veya lizin ile ikame edilebilirler ve bu pozisyoiilara sokulabilecek halkalarin sayisi bakimindan belirleiiniis herhangi bir sinirlama yoktur. Asagidaki Formüller l ilâ 6 arasindan seçilen bir ainino asit sekansina sahip olan peptidler gösterilmektedir. Oksintoinodulinin ainino asit sekansinin eksendinin veya GLP-l'in amino asit sekansi ile ikame edilmis oldugu asagidaki Formül 2 amino asit sekansini içeren bir oksintomodulin türevi de gösterilmektedir. R1 -A-R3 (Formül 2) Oksintomodulinin amino asit sekansiniii bir kismi ile eksendin veya GLP-l'in amiiio asit sekansinin bir kismi uygun bir ainino asit baglayici araciligiyla birbirlerine baglanarak hazirlanan asagidaki Formül 3 ainino asit sekansini içeren bir peptid de ortaya konmaktadir. R1 -B-C-R4 (Formül 3) Bir diger oksintomodulin türevi, oksintomodulinin amino asit sekansinin bir kisminin GLP-l reseptörüne baglanma afinitesini artirma kabiliyetine sahip bir ainino asitle ikame edilmis oldugu, örnegin GLP-l reseptörüne hidrofobik etkilesimle baglanan 26 numarali pozisyondaki Leu artiginin hidrofobik artik Ile veya Val ile ikame edilmis oldugu asagidaki Formül 4 amino asit sekansini içermektedir. Rl -SQGTFTSDYSKYLD-D l -D2-D3-D4-D5 -LFVQW- D6-D7-N-D8-R3 (Formül 4) Nativ oksintomodulinin GLP-l reseptörü ve glukagon reseptörü üzerinde ortaya koydugu aktiviteleri kuvvetlendirmek maksadiyla amino asit sekansinin bir kisminin silinmis veya baska bir amino asitle ikame edilmis oldugu ya da amino asit sekansina baska bir amino asit eklenmis oldugu asagidaki Formül 5'i içeren bir oksintomodulin türevi de ortaya konmaktadir. Rl -El -QGTFTSDYSKYLD-EZ-E3-RA-E4-E5-FV-E6- WLMNT-E7-R5 (Formül 5) Asagidaki Formüller 2 ilâ 5'te, R1, Formül 1 için verilen taniinda açiklandigi gibidir; A, SQGTFTSDYSKYLDSRRAQD-FVQWLMNT (SEKANS KOD NO.: 41), SQGTFTSDYSKYLDEEAVRLFIEWLMNT (SEKANS KOD NO.: 42), SQGTFTSDYSKYLDERRAQDFVAWLKNT (SEKANS KOD NO.: 43), GQGTFTSDYSRYLEEEAVRLFIEWLKNG (SEKANS KOD NO.: 44), GQGTFTSDYS- RQMEEEAVRLFIEWLKNG (SEKANS KOD NO.: 45), GEGTFTSDL-SRQMEEEAVRLFIEWAA (SEKANS KOD NO.: 46) ve SQGTFTSDYSRQMEEEAVRL-FIEWLMNG'den (SEKANS KOD NO.: 47) olusan grup içerisinden seçilir; B, SQGTFTSDYSKYLDSRRAQD-FVQWLMNT (SEKANS KOD NO.: 41), SQGTFTSDYSKYLDEEAVRLFIEWLMNT (SEKANS KOD NO.: 42), SQGTFTSDYSKYLDERRAQDFVAWLKNT (SEKANS KOD NO.: 43), GQGTFTSDYSRYLEEEAVRLFIEWLKNG (SEKANS KOD NO.: 44), GQGTFTSDYS- RQMEEEAVRLFIEWLKNG (SEKANS KOD NO.: 45), GEGTFTSDL-SRQMEEEAVRLFIEWAA (SEKANS KOD NO.: 46), SQGTFTSDYSRQMEEEAVRL-FIEWLMNG (SEKANS KOD NO.: 47), GEGTFTSDLSRQMEEEAVRLFIEW (SEKANS KOD NO.: 48) ve SQGTFTSDYSRYLD'den (SEKANS KOD NO.: 49) olusan grup içerisinden seçilir; C, alanin, glisin ve serinin kombinasyonlarmdan olusan 2 ilâ 10 adet amino asit bulunan bir peptiddir; Dl , serin, glutamik asit veya arjinindir; D2, arjinin, glutamik asit veya serindir; D3, arjinin, alanin veya valindir; D4, arjinin, valin veya serindir; D5, glutamin, arjinin veya lizindir; D6, izolösin, valin veya serindir; D7, metionin, arjinin veya glutamindir; D8, treonin, glisin veya alanindir; El, serin, Aib, Sar, d-alanin veya d-serindir; E2, serin veya glutamik asittir; E3, arjinin veya lizindir; E4, glutamin veya lizindir; ES, aspartik asit veya glutamik asittir; E6, glutamin, sistein veya lizindir; E7, sistein veya lizindir ya da silinir; R3, KRNRNNIA (SEKANS KOD NO.: 35), GPSSGAPPPS (SEKANS KOD NO.: 36) veya GPSSGAPPPSK'dir (SEKANS KOD NO.: 37); R4, HSQGTFTSDYSKYLD (SEKANS KOD NO.: 38), HSQGTFTSDYSKYLDK (SEKANS KOD NO.: 39) veya HGEGTFTSDLSKQMEEEAVK'dir (SEKANS KOD NO.: 40); ve R5, KRNRNNIA (SEKANS KOD NO.: 35), GPSSGAPPPS (SEKANS KOD NO.: 36) veya GPSSGAPPPSK'dir (SEKANS KOD NO.: 37) ya da silinir (Formül 2 ilâ 5'in amino asit sekanslari SEKANS KOD NO.: 1 sekansi ile özdes ise disarida birakilir). Açiklanan bir diger oksintomodulin türevi, asagidaki Formül 6'ya sahiptir. R1 -X l-X2-GTFTSD-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10- Xll-XlZ-Xl3-Xl4-X15-Xl6-Xl7-X18-Xl9-X20-X21- X22-X23-X24-R2 (Formül 6) burada Rl , histidin, desamino-histidil, 4-imidazoasetil veya tirozindir; Xl, Aib (aminosiobütirik asit), glisin veya serindir; X2, glutamik asit veya glutamindir; X3, lösin veya tirozindir; X4, serin veya alanindir; X5, lizin veya arjinindir; X6, glutamin veya tirozindir; X7, lösin veya metionindir; X8, aspartik asit veya glutamik asittir; X9, glutamik asit veya alfa-metil-glutamik asittir ya da silinir; X10, glutamin, glutamik asit, liZin veya arjinindir ya da silinir; X1 l, alanin veya arjinindir ya da silinir; X12, alanin veya valindir ya da silinir; X13, lizin, glutamin, arjinin veya alfa-metil-glutamik asittir ya da silinir; Xl4, aspartik asit, glutamik asit veya lösindir ya da silinir; X15, fenilalanindir ya da silinir; X16, izolösin veya valindir ya da silinir; X17, alanin, sistein, glutamik asit, glutamin veya alfa-metil- glutamik asittir ya da silinir; X 1 8, triptofandir ya da silinir; Xl 9, alanin, izolösin, lösin veya valindir ya da silinir; X20, alanin, lizin, metionin veya arjinindir ya da silinir; X21, asparajindir ya da silinir; X22, treonindir ya da silinir; X23, sistein veya lizindir ya da silinir; X24, glisinden olusan 2 ilâ 10 adet amino asidin bulundugu bir peptiddir ya da silinir; ve R2, KRNRNNIA (SEKANS KOD NO.: 35), GPSSGAPPPS (SEKANS KOD NO.: 36), GPSSGAPPPSK (SEKANS KOD NO.: 37), HSQGTFTSDYSKYLD (SEKANS KOD NO.: 38), HSQGTFTSDYSRYLDK (SEKANS KOD NO.: 39) veya HGEGTFTSDLSKQMEEEAVK'dir (SEKANS KOD NO.: 40) ya da silinir (Formül 6'nin amino asit sekansi SEKANS KOD NO.: 1 sekansi ile özdes ise disarida birakilir). Burada açiklanan oksintoinodulin türevi de SEKANS KOD NO.: 2 ilâ 34'teki peptidlerden biridir. Ornek 2-l'deki Tablo 1'de daha detayli gösterilmektedir. Bu son bahsi geçen oksintoinodulin türevlerinden SEKANS KOD NO.: 24, 25 ve 26 sekanslarina sahip olanlar bu bulusun bir parçasini teskil ederler. Oksintomodulin, GLP-l ve glukagon adi verileii iki peptidin aktivitelerine sahiptir. GLP-l, kan glukozunu düsürür, gida alimini azaltir ve gastrik bosalmayi baskilar ve glukagon, kan glukozunu artirir, lipolizi kolaylastirir ve enerji metabolizmalarini artirarak vücut agirligini düsürür. Bu iki peptidin farkli biyolojik etkileri, glukagonun GLP-l'den daha baskin bir etki göstermesi halinde kan glukoz seviyelerinde artis veya GLP-l'in glukagondan daha baskin bir etki göstermesi halinde bulanti ve kusma benzeri istenmeyen etkilere neden olabilir. Örnek vermek gerekirse, asagida anlatilan Ornek 10 kapsaminda üretilmis olan konjugat, Ornek 12'de üretilen konjugata kiyasla GLP-l reseptörüne yönelik daha yüksek bir afinite göstermistir, fakat Ornek 18 kapsaminda yapilan in vivo deneyle gösterildigi gibi ilk bahsi geçen konjugatin etkinligi digerinin etkinliginden daha düsüktür. Bunun sebebi, konjugatlarin GLP-l reseptörüne istinaden ortaya koyduklari düsük etkinlige karsin Ornek 12'de görüldügü gibi glukagon reseptörüne istinaden artmis bir etkinlige sahip olmalari olabilir. Dolayisiyla, bu bulusa uygun Oksintomodulin türevleri ve onlarin konjugatlari, ilgili aktiviteler bakimindan kosulsuz artislar göstereii türevler ile sinirli degildirler. Örnegin, glukagonun aktivitesini baskiladiklari bilinen oksintomodulinin 1 ve 11 numarali pozisyonlarindaki amino asitler, glukagon ile GLP-l arasindaki aktivite oranini kontrol altinda tutmak ainaciyla modifiye edilebilirler. Bir tasiyiciyi kovalent bag araciligiyla veya mikrosfer olusturulmasi yoluyla oksintomoduline baglamak suretiyle meydana getirilen bu bulusa uygun konjugatlar, kanda stabilite artisi iiidükleyebilirler, böbrek aracili emisyonu askiya alabilirler ve reseptörlere yönelik afiniteyi degistirebilirler. Oksintomodulin içeren bir konjugat olusturmak için kullanilacak olan tasiyici, albümin, transferrin, antikorlar, antikor fragmanlari, elastin, heparin, polisakkarit, örnegin kitin, fibronektin ve en faydali seçenek olarak immünoglobulin FC bölgesinden olusan grup içerisinden seçilebilecek olup, bu sayilan seçeneklerin hepsi, oksintomoduline baglanma yoluyla olusturulan kon jugatm kandaki yari ömrünü artirabilecek niteliktedir. Burada kullanildigi anlamiyla "immünoglobulin F c bölgesi" terimi, bir immünoglobulinin agir ve hafif zincirlerinin degisken bölgeleri, agir zincir sabit bölgesi l (CHl) ve hafif zincir sabit bölgesi l (CLl) hariç agir zincir sabit bölgesi 2 (CH2) ve agir zincir sabit bölgesi 3'ü (CH3) içeren bir proteine atif yapar. Agir zincir sabit bölgesinde bir meritese bölgesi de içerebilir. Bulusa konu olan immünoglobulin Fc bölgesi, bunlarin yani sira, nativ proteinin fizyolojik fonksiyonuna büyük ölçüde benzeyen veya ondan daha iyi olan bir fizyolojik fonksiyona sahip oldugu sürece, agir ve hafif zincirlerin degisken bölgeleri hariç agir zincir sabit bölgesi 1 (CHl) ve/Veya hafif zincir sabit bölgesi 1'i (CLl) içeren Fc bölgesinin bir kisinini veya tamamini da ihtiva edebilir. Ayrica, immünoglobulin Fc bölgesi, CH2 ve/veya CH3'ün amino asit sekansinin nispeten uzun bir kismini kapsayan bir silmenin söz konusu oldugu bir fraginan olabilir. Baska bir deyisle, bu bulusa konu olan immünoglobulin Fc bölgesi, 1) bir CHl domaini, bir CH2 domaini, bir CH3 domaini ve bir CI-l4 domaini, 2) bir CH] domaini ve bir CH2 domaini, 3) bir CHl domaini ve bir CH3 domaini, 4) bir CH2 domaini ve bir CH3 domaini, 5) bir veya daha fazla sayida domain ile bir immünoglobulin mentese bölgesinin (veya mentese bölgesinin bir kisminin) bir kombinasyonunu ve 6) agir zincir sabit bölgeleri ile hafif zincir sabit bölgesi arasindan her domainiii bir dimerini içerebilir. Bulusa konu olan immünoglobulin Fc bölgesi, bir nativ amino asit sekansi ve onun bir sekans türevini (mutant) içerir. Bir amino asit sekansi türevi, bir veya daha fazla sayida amino asit artigi ile ilgili bir silme, bir sokma, bir konservatif olan veya olmayan ikame ya da bunlarin bir çesit kombinasyonundan ötürü nativ amino asit sekansindan farkli olan bir sekanstir. Örnegin, bir IgG Fc'de baglanim açisindan önem arz ettikleri biliiien 214 ilâ 238, 297 ilâ 299, 318 ilâ 322 veya 327 ilâ 331 numarali pozisyonlardaki amino asit artiklari uygun bir modifikasyon hedefi olarak ele alinabilirler. Bir disülfûr bagi Olusturma kabiliyeti tasiyan bir bölgenin silindigi veya bir nativ Fc formunun N-terminal ucundaki belirli amino asit artiklarinin ortadan kaldirildigi veya oraya bir metionin artiginin eklendigi seçenek de dahil çesitli baska türevler de olasidir. Bunlarin yani sira, efektör fonksiyonlari ortadan kaldirinak için, bir kompleman-baglanma yerinde, örnegin bir Clq-baglanma yeri ve bir ADCC (antikor-bagimli hücre-aracili sitotoksisite) yerinde bir siline de yapilabilir. Immünoglobulin FC bölgesinin bu gibi sekans türevlerini hazirlamak için kullanilabilecek teknikler WO 97/34631 ve WO 96/32478 sayili patent yayinlarinda açiklanmaktadir. Proteinler ve peptidlerde yapilabilecek olup 0 proteinler veya peptidlerin aktivitesinde genelde degisiklige neden olmayan ainino asit degisiklikleri sektörde bilinmektedir (H. Neurath, R. L. Hill, The Proteins, Academic Press, New York, 1979). En yaygin basvurulan degisiklikler, her iki yöndeki degisiklikleri de içine alan bir anlamda Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Thy/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asu, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu ve ASp/Gly'dir. Ek olarak, istenirse Fc bölgesinde fosforilasyon, sülfasyon, akrilasyon, glikozilasyon, metilasyon, famesilasyon, asetilasyon, amidasyon veya benzeri bir yolla modifikasyon yapilabilir. Yukarida bahsi geçen Fc türevleri, bulusa konu olan Fc bölgesinin biyolojik aktivitesi ile özdes bir biyolojik aktiviteye sahip olan ya da örnegin isi, pH veya benzeri bir faktöre karsi gelismis yapisal stabiliteye sahip olan türevlerdir. Öte yandan, bu FC bölgeleri, insanlardan ve inekler, keçiler, domuzlar, fareler, tavsanlar, hamsterler, siçanlar ve gine domuzlarinin dahil oldugu baska hayvanlardan izole edilen nativ formlardan elde edilebilirler ya da transforme hayvan hücreleri veya mikroorganizmalardan elde edilen rekombinanlari veya onlarin türevlerini teskil edebilirler. Bu bulus kapsaminda, insan veya hayvan organizmalarindan tam iinmünoglobulinlerin izole edilmesi ve izole tam immünoglobuline bir proteolitik enzim uygulanmasi yoluyla bir nativ immünoglobulinden elde edilebilirler. Papain, nativ iminünoglobulini parçalayarak Fab ve Pc bölgelerine ayirir ve pepsin uygulamasi sonucunda, pF'c ve F(ab)2 fragmanlari elde edilir. Bu fragmanlar, örnegin Fc veya pF'c'yi izole etmek ainaciyla boyut dislama kromatografisine tâbi tutulabilirler. Tercih edilen, bir insan- kaynakli Fc bölgesinin bir mikroorganizmadan elde edilen bir rekombinan immüiioglobulin FC bölgesi olmasidir. Bunlarin yani sira, bu bulusa konu olan imniünoglobulin Fc bölgesi, nativ seker zincirlerine, bir nativ forma kiyasla daha fazla sayida seker zincirine veya bir nativ forma kiyasla daha az sayida seker zincirine sahip olan bir formda ya da bir deglikozile formda bulunabilir. Iininünoglobulin Fc seker zincirlerinin sayisini artirmak, azaltmak veya bu zincirleri çikarmak için, sektörde yaygin olarak kullanilan uygun yöntemlere, örnegin bir kimyasal yönteme, bir enziinatik yönteme veya bir mikroorganizma kullanilan bir genetik mühendislik yöntemine basvurulabilir. Bir Fc bölgesindeki seker zincirlerinin çikarilmasi, birinci kompleman koinponenti Cl'in Clq kismina yönelik baglanma afinitesinde keskin bir düsüse ve antikor-bagimli hücre-aracili sitotoksisite veya kompleman-bagimli sitotoksisitede bir azalma veya kayba yol açar ve dolayisiyla in vivo ortamda gereksiz immün cevaplarin indükte olmamasini saglar. Bu bakimdan, bir deglikozile veya aglikozile formda bulunan bir immünoglobulin Fc bölgesi, bir ilaç tasiyicisi olarak bu bulusun hedefi için daha uygun olabilir. Burada kullanildigi anlamiyla "deglikozilasyon" terimi, bir PC bölgesindeki seker moietelerinin enzimatik yolla çikarilmasina atif yapar ve "aglikozilasyon" terimi, bir PC bölgesinin tercihen E. coli olmak 'üzere bir prokaryot yardimiyla bir glikozile olmayan formda üretilmesi anlamina gelir. Immünoglobulin Fc bölgesi, ayiii zamanda, insanlardan ya da inekler, keçiler, domuzlar, fareler, tavsanlar, hamsterler, siçanlar ve gine domuzlari dahil baska hayvanlardan elde edilebilir ve tercihen insanlardan elde edilir. Ek olarak, immünoglobulin Fc bölgesi, lgG, lgA, IgD, IgE ve IgM'den elde edileii ya da bunlarin bir çesit kombinasyonu veya hibridi ile yapilan bir Fc bölgesi olabilir. Tercih edilen, insan kaninda en bol bulunan proteinler arasinda sayilan lgG veya lgM'den elde edilmesidir ve en çok tercih edilen, ligand-baglanma proteinlerinin yari ömürlerini artirdigi bilinen lgG'den elde edilmesidir. Öte yandan, burada kullanildigi baglamda "kombinasyon" terimi, ayni kaynaktan olan tek-Zincirli immünoglobulin FC bölgeleri kodlayan polipeptidlerin bir dimer veya multimer olusturmak maksadiyla farkli bir kaynaktan olan bir tek-Zincirli polipeptide baglanmasi anlamina gelir. Baska bir deyisle, lgG Fc, IgA Fc, IgM Fc, IgD Pc ve IgE Fc fragmanlarindan olusan grup içerisinden seçilen iki veya daha fazla sayida fragmanlar bir dimer veya multimer olusturulabilir. "Peptid olmayan polimer" terimi, birbirlerine bir peptid bag hariç herhangi bir kovaleiit bag ile bagli olan iki veya daha fazla sayida tekrar biriminin bulundugu bir biyouyumlu poliinere atif yapar. Bu bulus baglaminda peptid olmayan poliiner, peptid olinayaii baglayici ile ayiii anlamda kullanilmaktadir. Bu bulusa istinaden bahsi geçen peptid olmayan polimer, bir biyobozunur polimer, bir lipid polimer, kitin, hiyalüronik asit ve bunlarin bir kombiiiasyonundan olusan grup içerisinden seçilebilir ve tercih edilen, biyobozunur polimerin polietilen glikol, polipropilen glikol, etileii glikol-propilen glikol kopolimeri, polioksietile poliol, polivinil alkol, polisakkarit, dekstran, poliviiiil etil eter, polilaktik asit (PLA) veya polilaktik-glikolik asit (PLGA) olmasidir ve en çok tercih edilen, polietileii glikol (PEG) olmasidir. Ayrica, sektörde bilinen türevleri ve sektörde bilinen bir yöntem ile kolayca hazirlanabilecek olan türevleri de bu bulusun kapsami içinde sayilabilirler. Bir konvansiyonel çerçeve-içinde füzyon yönteini ile elde edilen füzyon proteininde kullanilan peptid baglayici, in vivo ortamda bir proteolitik enziinin etkisi ile kolayca yarilmasindan ve bundan dolayi bir tasiyici ile etkin ilacin serum yari ömrünün yeteri kadar artirilmasinin mümkün olmamasindaii ileri gelen soruiilara sahiptir. Bununla birlikte bu bulusta, tasiyiciiiiii serum yari ömrüne benzeyen peptid serum yari ömrünü korumak maksadiyla, proteolitik enzime karsi direnç sahibi olan polimer kullanilabilir. Dolayisiyla, yukarida bahsi geçen fonksiyona sahip olan bir polimer oldugu, yani in vivo proteolitik enziine dirençli bir polimer oldugu sürece, herhangi bir sinirlama olmadan herhangi bir peptid olmayan polimer kullanilabilir. Peptid Olmayan polimer, l ilâ 100 kDa araliginda ve tercihen 1 ilâ 20 kDa araliginda bir molekül agirligina sahiptir. Bu bulusa konu olan ve immünoglobulin Fc bölgesine baglanarak kullanilan peptid olmayan polimer, bir polimer olabilecegi gibi farkli tipte polimerlerin bir kombinasyonu da olabilir. Bu bulusta kullanilan peptid olmayan polimer, immünoglobulin FC bölgesine ve protein ilacina baglanma kabiliyetine sahip olan bir reaktif grup barindirir. Peptid olmayan polimer, her iki ucunda da bir reaktif grup ihtiva etmekte olup, bu reaktif grup tercihen bir reaktif aldehit, bir propionaldehit, bir bütiraldehit, bir inaleimid ve bir süksinimid türevinden olusan grup içerisinden seçilir. Bahsi geçen süksinimid türevi, süksinimidil propionat, hidroksi süksinimidil, süksinimidil karboksimetil veya süksinimidil karbonat olabilir. Ozellikle de, peptid olmayan polimerin her iki ucunda da bir reaktif aldehit varsa, her iki uca da spesifik olmayan reaksiyonlarin asgari düzeyde oldugu bir immünoglobulin ve bir fizyolojik açidan aktif polipeptid baglamak etkili olacaktir. Bir aldehit bagi ile indirgen alkilasyon yapilarak elde edilen bir nihai ürün, bir amid bagi ile baglanma saglanan bir üründen çok daha stabildir. Aldehit reaktif grubu, düsük bir pH seviyesinde bir N-terminal uca seçici olarak baglanir ve pH 9,0 gibi yüksek bir pH seviyesinde bir lizin artigina baglanarak bir kovalent bag olusturur. Peptid olmayan polimerin iki ucundaki reaktif gruplar ayni veya farkli olabilirler. Örnek vermek gerekirse, peptid olinayan polimer, bir ucunda bir maleimid grubuna ve diger ucunda bir aldehit grubu, bir propionaldehit grubu veya bir bütiraldehit grubuna sahip olabilir. Peptid olmayan polimer olarak her iki ucunda da bir reaktif hidroksi grubu bulunan bir polietilen glikol kullanildiginda, hidroksi grubu, bilinen kimyasal reaksiyonlarla çesitli reaktif gruplara karsi aktive edilebilir ya da bulusa uyguii uzun süre etkili kon jugati hazirlamak için ticari piyasadan edinilebilecek olan bir modifiye reaktif grup barindiran bir polietilen glikol kullanilabilir. Bulusa konu olan konjugat, iki reaktif terminal gruba sahip olan peptid olmayan polimerin iki ucunun sirasiyla immünoglobulin Fc bölgesi ve oksintomodulin türevlerinin bir amin grubu veya bir tiol grubuna bagli olduklari bir kon jugat olabilir. Peptid olinayan poliinerin her iki ucunda da, tercihen bir reaktif aldehit grubu, bir propionaldehit grubu, bir bütiraldehit grubu, bir maleimid grubu ve bir süksinimid türevinden olusan grup içerisinden seçilen bir reaktif grubu bulunur. Bahsi geçen süksinimid türevi, süksinimidil propionat, hidroksi süksinimidil, süksinimidil karboksimetil veya süksinimidil karbonat olabilir. Peptid olinayan poliinerin iki reaktif terminal grubu birbirleri ile ayni ya da birbirlerinden farkli olabilirler. Örnegin, peptid olinayan polimer, bir ucunda bir maleiniid grubuna ve diger ucunda bir aldehit grubu, bir propionaldehit grubu veya bir bütiraldehit grubuna sahip olabilir. Örnegin, peptid olinayan polimerin bir terminal grubunda bir reaktif aldehit grubu ve diger terminal grubunda bir maleimid grubu varsa, her iki uca da spesifik olmayan reaksiyonlarin asgari düzeyde oldugu bir immünoglobulin ve bir fizyolojik açidan aktif polipeptid baglamak etkili olacaktir. Bu bulusa konu olan Orneklere göre, kon jugatlar, yalnizca propionaldehit grubu ya da hem maleimid grubu hem de aldehit grubu bulunan bir peptid olmayan polimeri teskil eden PEG kullanilarak bir kovalent bag araciligiyla oksintomodulin veya onun türevi ile immünoglobulin Fc bölgesinin baglanmasi yoluyla hazirlanmislardir. Bu bulusa konu olan konjugatlar, nativ oksintomoduline kiyasla GLP- l reseptörü ve glukagon reseptörüne yönelik çok iyi düzeyde aktivite gösterirler ve FC bölgesine baglama sayesinde kan yari ömrü artmistir ve bu sayede in vivo aktivite uzun bir süre boyunca korunabilir. Bulusun yine bir diger özelligine göre bu bulus, obezitenin önlenmesi veya tedavisi için olup burada bahsi geçen peptidi içeren bir farmasötik bilesim ortaya koyar. Burada kullanildigi baglamda "önleme" terimi, hastalik olusumunun sinirlanmasini veya gecikmesini saglayan eylem ve uygulamalarin bütününe atif yapar. Bu bulus baglaminda "önleme", vücut agirligi veya vücut yaginda artis gibi faktörlerden dolayi görülen obezite olusumunun bulusa konu olan konjugatlar uygulanarak sinirlanmasi veya geciktirilmesi anlamina gelir. Burada kullanildigi baglamda "tedavi" terimi, hastaligin semptomlarinin hafiflemesini, gerilemesini veya iyilesmesini saglayan eylem ve uygulamalarin bütününe atif yapar. Bu bulus baglaminda "tedavi", obezitenin semptomlarinin bu bulusa konu olan konjugatlar uygulanarak hafifletilmesi, geriletilmesi veya iyilestirilmesi ve böylelikle vücut agirligi veya vücut yaginda düsüs saglanmasi anlamina gelir. Burada kullanildigi anlamiyla "obezite" terimi, vücutta fazla miktarda yag dokusunun birikmesine atif yapar ve 25'ten yüksek olan bir vücut kitle endeksi (vücut agirligi (kg) bölü boyun (m) karesi) obezite sayilir. Obezite, genelde, alinan besin miktarinin harcanan enerji miktarini uzun bir süre boyunca asmasi halinde söz konusu olan bir enerji dengesizliginden dolayi meydana gelir. Obgezite, bütün vücudu etkileyen bir metabolik hastaliktir ve diyabet, hiperlipidemi, cinsel islev bozuklugu, artrit ve kardiyovasküler hastaliklara yönelik riski artirir ve bazi durumlarda kanser ensidansi ile iliskili oldugu rapor edilmistir. SEKANS KOD NO.: 24, 25 ve 26 oksintomodulin türevlerini imm'ûnoglobulin Fc bölgesine baglamak suretiyle hazirlanan bu bulusa uygun kon jugatlar, glukagon ve GLP-l reseptörlerine yönelik çok iyi baglanma afiniteleri göstermektedir (Tablo 3) ve in vivo proteolitik enzimlere karsi çok iyi bir direnç seviyesi ortaya koymakta olup uzun bir süre boyunca in vivo aktivite sergileyebilmekte ve dolayisiyla vücut agirliginda azalma gibi çok iyi anti-obezite etkileri göstermektedir (Sekil 12). Bu bulusa konu olan farmasötik bilesimde, bir farmasötik açidan kabul edilebilir tasiyici, yardimci madde veya seyreltici de bulunabilir. Burada kullanildigi baglamda "farmasötik açidan kabul edilebilir" terimi, atif yaptigi bilesimin zararli yan etkilere neden olunmadan terapötik etkilere ulasilmasini saglamak için yeterli oldugu anlamina gelir ve bu bilesim, hastaligin tipi, hastaniii yasi, kilosu, saglik durumu, cinsiyeti ve ilaç duyarliligi, uygulama yolu, uygulama modu., uygulama sikligi, tedavinin süresi, bulusa konu olan bilesim ile birlikte uygulanacak baska ilaç tedavileri veya bilesim uygulamasi ile çakisan diger ilaç tedavileri ve tip alaninda bilinen baska faktörlere bagli olarak kolaylikla belirlenebilir. Bulusa konu olan türevi içeren farmasötik bilesiinde, bir farmasötik açidan kabul edilebilir tasiyici da bulunabilir. Oral uygulama için, tasiyici, sadece bunlarla sinirli kalmaksizin, bir baglayici, bir kayganlastirici, bir dagitici, bir yardimci madde, bir çözünürlestirici, bir disperse edici ajan, bir stabilizatör, bir süspanse edici ajan, bir renklendirici ve bir aroma maddesi içerebilir. Enjektabl preparatlar için, tasiyici, bir tamponlama ajaiii, bir koruyucu ajan, bir analjezik, bir çözünürlestirici, bir izotonoik ajan ve bir stabilizatör içerebilir. Topikal uygulainalik preparatlar için, tasiyici, bir baz, bir yardimci madde, bir kayganlastirici ve bir koruyucu ajan içerebilir. Bu bulusa konu olan bilesim, yukarida bahsi geçen farmasötik açidan kabul edilebilir tasiyicilar ile birlikte çesitli dozaj formlarinda formüle edilebilir. Ornek vermek gerekirse, oral uygulama için, farmasötik bilesim, tablet, yuvarlak yassi hap, kapsül, eliksir, süspansiyon, surup veya wafer formunda formüle edilebilir. Enjektabl preparatlar için, farmasötik bilesim, bir tek dozaj formu veya bir çoklu doz kabi olarak bir ampul formunda formüle edilebilir. Farmasötik bilesim, çözelti, süspansiyon, tablet, hap, kapsül ve uzun süre etkili preparat formunda da formunda da formüle edilebilir. Öte yandan, farmas'otik formülasyonlar için uygun tasiyici, yardimci madde ve seyreltici örnekler arasinda, laktoz, dekstroz, sukroz, sorbitol, mannitol, ksilitol, eritritol, maltilol, nisasta, akasya kauçugu, alginat, jelatin, kalsiyum fosfat, kalsiyum silikat, selüloz, metilselüloz, mikrokristalin selüloz, pilivinilpirolidon, su, metilhidroksibenzoat, propilhidroksibenzoat, talk, magnezyum stearat ve mineral yaglari sayilabilir. Ayrica, farmas'otik formülasyonlarda, dolgu maddeleri, t0paklanma önleyici ajanlar, kayganlastiricilar, nem tutucular, aroirialar ve antiseptikler de bulunabilir. Bu bulusa konu olan farmasötik bilesim, tabletler, haplar, grani'iller, kapsüller, süspansiyonlar, dahili kullanimlik sivilar, emülsiyonlar, suruplar, steril ak'Öz çözeltiler, ak'oz olmayan çözücüler, liyofilize formülasyonlar ve supozituvarlardan olusan grup içerisinden seçilen herhangi bir formülasyona sahip olabilir. Dahasi, bilesim, hastanin Vücudu için uygun bir tek dozaj formunda formüle edilebilir ve tercihen, bir oral veya parenteral yolla, sadece bunlarla sinirli kalmaksizin ömegin cilt araciligiyla, intravenöz, intrami'isk'i'iler, intraarteriyel, intramedüller, intraventriküler, pulmoner, transdermal, subkütan, intraperitoneal, intranazal, iiitrakolonik, topikal, dilalti, vajinal veya rektal uygulama ile uygulanmak üzere, farmas'otik alaninda kullanilan standart yönteme göre peptid ilaçlar için faydali bir preparat formunda formüle edilir. Bilesim, fizyolojik salin veya organik çözücülerin 'Örnek gösterilebilecegi muhtelif farmasötik açidan kabul edilebilir tasiyicilar ile harmanlanarak kullanima yönelik olabilir. Stabiliteyi veya absorptiviteyi artirmak için, glukoz, sukroz veya dekstran gibi karbonhidratlar, askorbik asit veya glutatyon gibi aiitioksidanlar, selatlayici ajanlar, düsük molekül agirlikli proteinler veya baska stabilizatörler kullanilabilir. Bulusa konu olan farmasötik bilesimin uygulama dozu ve sikligi, tedavi edilecek hastaligin hangi hastalik oldugu, uygulama yolu, hastaniii yasi, cinsiyeti ve kilosu ve hastaligin siddeti ile birlikte, bilesiinde bulunan etkin bilesenin tipine göre belirlenir. Bulusa konu olan bilesimin toplam etkin dozu, bir hastaya bir tek doz halinde uygulanabilir ya da bölümlere ayrilmis bir tedavi protokolü uyarinca birden çok doz halinde uzun bir dönem boyunca uygulanabilir. Bulusa konu olan farmasötik bilesiindeki etkin bilesen içerigi, hastaligin siddetine bagli olarak farklilik gösterebilir. Tercih edilen duruina göre, bulusa konu olan peptidin toplam günlük dozu, hastanin vücut agirliginin 1 kg'i basina yaklasik 0,0001 ug ilâ 500 mg araliginda olabilir. Bununla birlikte, peptidin etkin dozu, farmasötik bilesiinin uygulama yolu ve tedavi sikligina ek olarak, hastanin yasi, kilosu, saglik durumu, cinsiyeti, hastaligin siddeti, hastanin diyeti ve sekresyon hizinin dahil oldugu çesitli faktörler dikkate alinarak belirlenir. Bu çerçevede, sektörde bilgi ve beceri sahibi uzmanlar, bulusa konu olan farmasötik bilesimin kullanim alani ve amaci için uygun bir etkin dozu kolayca belirleyebilirler. Bulusa konu olan farmasötik bilesim, bulusuii etkilerini gösterebilen bir bilesim oldugu sürece, herhangi bir formülasyona sahip olabilir herhangi bir uygulama yolu ve modu için olabilir. Bulusa konu olan farmasötik bilesim, çok iyi bir in Vivo etkinlik süresi ve çok iyi bir titre gösterir ve bu sayede uygulama sayisi ve sikliginin kayda deger ölçüde azaltilmasina olanak saglar. Ayrica, farmasötik bilesim, tek basina uygulanabilecegi gibi, obezite üzerinde profilaktik veya terapötik etkiler gösteren baska farmasötik formülasyonlarla birlikte veya bu tarz baska formülasyonlarin uygulamasi ile çakisan bir uygulama programi çerçevesinde uygulanabilir. Obezite üzerinde profilaktik veya terapötik etkiler gösteren farmasötik formülasyonlar özellikle belirli tür formülasyonlar ile sinirli degildirler ve bunlarda, bir GLP-l reseptör agonisti, bir leptin reseptör agonisti, bir DPP-IV inhibitörü, bir Y5 reseptör antagonisti, bir Melamin-konsantre edici hormon (MCH) reseptör antagonisti, bir Y2/3 reseptör agonisti, bir MC3/4 reseptör agonisti, bir gastrik/pankreatik lipaz inhibitörü, bir 5HT20 agonisti, bir ß3A reseptör agonisti, bir Amilin reseptör agonisti, bir Girelin antagonisti ve/Veya bir Girelin reseptör antagonisti bulunabilir. Bulusun yine bir diger özelligine göre bu bulus, obeziteyi önlemek veya tedavi etmek için olan ve konjugati veya konjugatin bulundugu farmasötik bilesimi bir denege uygulama basamagi içeren bir yöntem ortaya koyar. Burada kullanildigi baglamda "uygulama" terimi, önceden belirlenmis bir maddeden belirli bir miktarin bir hastaya belirli uygun bir yöntem ile aktarilmasi anlamina gelir. Bu bulusa konu olan bilesim, istenen dokuya ulasilmasini saglayabilecek bir uygulama yolu oldugu sürece, yaygin kullanilan uygulama yollarindan herhangi biri araciligiyla, sadece bunlarla sinirli kalmaksizin örnegin intraperitoneal, intravenöz, intrami'iski'iler, subkütan, intradermal, oral, topikal, intranazal, intrapulmoner veya intrarektal uygulama yolu ile uygulanabilir. Bununla birlikte, oral uygulama yapildiginda peptidler sindirildikleri için, oral uygulamalik bir bilesimin etkin bilesenleri midedeki degradasyona karsi koruma saglayacak uygun bir formda formüle edilmeli veya kaplanmalidirlar. Bu bulus çerçevesinde "denek" terimi, obezite bulundugundan süphelenilenlere, baska bir deyisle obezitesi bulunan veya obezite ihtimali bulunan insanlar, fareler ve besi hayvanlari dahil memelilere atif yapar. Bununla birlikte, bu bulusa konu olan peptid veya farmasötik bilesim ile tedavi edilecek olan her türlü denek sinirlama olmaksizin bu kapsamda degerlendirilir. Bulusa konu olan peptidi içeren farmasötik bilesim, obezite bulundugundan süphelenilen bir denege, denegin etkin ve etkili ölçüde tedavi olmasini saglamak üzere uygulanir. Obezite, yukarida taniinlandigi gibi olan bir hastaliktir. Bu bulusa konu olan terapötik yöntemde, farmasötik açidan etkili bir miktarda peptid içeren bilesimin uygulandigi bir basamak bulunabilir. Toplam günlük doz, bir doktor tarafindan tibbi faktörler dikkate alinarak belirlenmeli ve bir kez veya birkaç kez uygulanmalidir. Bu bulusun hedefleri açisindan, belirli herhangi bir hasta için uygulanacak spesifik terapötik açidan etkili doz seviyesi, ulasilmasi hedeflenen cevabin çesidi ve derecesi, birlikte kullanilan baska ajanlar bulunup bulunmadigina göre kesin bilesim içerigi, hastanin yasi, kilosu, saglik durumu, cinsiyeti, diyeti, uygulama zamani ve yolu, bilesiinin sekresyon hizi, tedavinin uygulanacagi süre ve dönem, bulusa konu olan bilesiinle birlikte kullanilan baska ilaçlarin veya bulus konusu bilesim uygulamasi ile çakisan baska ilaç tedavilerinin söz konusu olup olmadigi ve tip sektöründe iyi bilinen benzeri faktörler dahil tip sektöründe iyi bilinen çesitli faktörlere bagli olarak farklilik gösterebilir. Bulusun yine bir diger özelligine göre bu bulus, konjugatin veya konjugati içeren famiasötik bilesimin obezitenin önlenmesi veya tedavisine yönelik ilaçlarin hazirlanmasinda kullanimi ile de ilgilidir. Bulusu Gerçeklestirme Sekli Takip eden kisinida bulus, asagida verilen Örnekler çerçevesinde daha ayrintili bir dille açiklanacaktir. Burada SEKANS KOD NO.: 24, 25 ve 26 amino asit sekanslarini içeren oksintomodulin türevleri ve konjugatlari bu bulusa konu olan türevler ve konjugatlardir. Baska SEKANS KOD NUMARALARI ile iliskilendirilmis ainino asit sekanslarini içeren türevler ve konjugatlar konuyu aydinlatma ve ömeklendirme amaciyla sunulmaktadirlar. Örnek 1: Invitro aktive h'ûcre hatti `üretimi Ornek 1-1: GLP-l'e karsi cAMP cevabi gösteren h'i'icre hattinin 'üretimi Bir PCR ürünü elde etmek amaciyla, HindIII ve EcoRI restriksiyon yerlerinden her birini içeren asagidaki ileri ve geri primerler kullanilarak ve bir sablon olarak insan GLP-l reseptör geninin cDNA'sindaki (Origene Technologies, Inc. ABD) ORF'ye (Açik Okuma Çerçevesi) tekabül edeii bir bölge kullanilarak PCR gerçeklestirildi. Ileri primer: 5'-CCCGGCCCCCGCGGCCGCTATTCGAAAT AC-3' (SEKANS KOD NO.: 47) Geri primer.' 5'-GAACGGTCCGGAGGACGTCGACTCTTAA GATAG-3' (SEKANS KOD NO.: 48) Elde edilen PCR ürünü bilinen hayvan hücresi ekspresyon vektörü xOGC/dhfr'ye klonlanarak bir rekombinan vektör olan xOGC/GLPlR hazirlandi. DMEM/FIZ (%10 FBS) vasatinda kültürleiien CHO DG44 hücre hatti, Lipofektamjn (Invitrogen, ABD) kullanilarak bu rekombinan vektör XOGC/GLPIR ile transfekte edildi ve 1 ing/niL G418 ve 10 nM metotreksat içeren bir seleksiyon vasatinda kültürlendi. Bir sinirlayici seyreltme teknigi kullanilarak bu kültürden tek klon hücre hatlari seçildi ve nihayetinde bunlar arasindan, konsantrasyona bagli ölçüde GLP-l 'e karsi çok iyi bir CAMP cevabi gösteren bir hücre hatti seçildi. Ornek 1-2: Glukagona karsi cAMP cevabi gösteren hücre hattinin üretimi Bir PCR ürünü elde etmek amaciyla, EcoRI ve XhoI restriksiyon yerlerinden her birini içeren asagidaki ileri ve geri primerler kullanilarak ve bir sablon olarak insan glukagon reseptör geninin cDNA'sindaki (Origene Technologies, Inc. ABD) ORF'ye tekabül eden bir bölge kullanilarak PCR gerçeklestirildi. Ileri primer: 5'-CAGCGACACCGACCGTCCCCCCGTACTT AAGGCC-3' (SEKANS KOD NO.: 49) Geri primer: 5'-CTAACCGACTCTCGGGGAAGACTGAGCT CGCC-3' (SEKANS KOD NO.: 50) Elde edilen PCR ürünü bilinen hayvan hücresi ekspresyon vektörü xOGC/dhfr'ye klonlanarak bir rekombinan vektör olan xOGC/GCGR hazirlandi. DMEM/F 12 (%10 FBS) vasatinda kültürlenen CHO DG44 hücre hatti, Lipofektamin (Invitrogen, ABD) kullanilarak bu rekombinan vektör XOGC/GCGR ile transfekte edildi ve 1 mg/mL G418 ve 10 nM metotreksat içeren bir seleksiyon vasatinda kültürlendi. Bir sinirlayici seyreltine teknigi kullanilarak bu kültürden tek klon hücre hatlari seçildi ve nihayetinde bunlar arasindan, konsantrasyona bagli ölçüde glukagona karsi çok iyi bir CAMP cevabi gösteren bir hücre hatti seçildi. Ornek 2: Oksintomodulin türevlerinin in vitro aktivitesine dair test Ornek 2-1: Oksintomodulin türevlerinin sentezi Oksintomodulin türevlerinin in vitro aktivitelerini ölçmek için, asagida gösterilen amino asit sekanslarina sahip olan oksintomodulin türevleri sentezlendi (Tablo 1). Tablo 1 [Tablo 1] Oksintomodulin ve oksintomodulin türevleri SEKANS Amino asit sekansi KOD NO.: SEKANS HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNlA KOD NO.: 1 SEKANS CA-SQGTFTSDYSKYLDEEAVRLFIEWLMNTKRNRNNIA KOD NO.: 2 SEKANS CAISQGTFTSDYSKYLDERRAQDFVAWLKNTGPSSGAPPP KOD NO.: 3 S SEKANS CA-GQGTFTSDYSRYLEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS KOD NO.: 4 SEKANS CA-GQGTFTSDYSRQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPP KOD NO.: 5 S SEKANS CA-GEGTF'TSDLSRQMEEEAVRLFIEWAAHSQGTFTSDYS KOD NO.: 6 KYLD SEKANS CA-SQGTFTSDYSRYLDEEAVRLFIEWLMNTK KOD NO.: 7 SEKANS CA-SQGTFTSDLSRQLEEEAVRLFIEWLMNK KOD NO.: 8 SEKANS CA-GQGTFTSDYSRYLDEEAVXLFIEWLMNTKRNRNNIA KOD NO.: 9 SEKANS CA-SQGTFTSDYSRQMEEEAVRLFIEWLMNGGPSSGAPPP KOD NO.: 10 SK SEKANS CA-GEGTF'TSDLSRQMEEEAVRLFIEWAAHSQGTFTSDYS KOD NO.: 11 RYLDK SEKANS CA-SQGTFTSDYSRYLDGGGHGEGTFTSDLSKQMEEEAV KOD NO.: 12 K SEKANS CA-SQGTFTSDYSRYLDXEAVXLFIEWLMNTK KOD NO.: 13 SEKANS CA-GQGTFTSDYSRYLDEEAVXLFIXWLMNTKRNRNNIA KOD NO.: 14 SEKANS CA-GQGTFTSDYSRYLDEEAVRLFIXWLMNTKRN RNNIA KOD NO.: 15 SEKANS CA-SQGTFTSDLSRQLEGGGHSQGTFTSDLSRQLEK KOD NO.: 16 SEKANS CA-SQGTFTSDYSRYLDEEAVRLFIEWIRNTKRNRNNIA KOD NO.: 17 SEKANS CA-SQGTFTSDYSRYLDEEAVRLFIEWIRNGGPSSGAPPPS KOD NO.: 18 K SEKANS CA-SQGTFTSDYSRYLD E EAV K LFIEWIRN- KOD NO.: TKRNRN N 1A SEKANS CA-SQGTFTSDYSRYLD E EAV K LFIEWIRNGG- SEKANS CA-SQGTFTSDYSRQLEEEAVRLFIEWVRNTKRNRNNIA KOD NO.: 21 SEKANS DA-SQGTFTSDYSKYLD E KRA K EFVQWLMNTK KOD NO.: 22 SEKANS HAibQGTFTSDYSKYLDEKRAKEFVCWLMNT KOD NO.: 23 SEKANS HAibQGTFTSDYSKYLDEKRAKEFVQWLMNTC KOD NO.: 24 SEKANS HAibQGTFTSDYSKYLD g KRA E EFVQWLMNTC KOD NO.: 25 SEKANS HAibQGTFTSDYS E YLD E KRAKEFVQWLMNTC KOD NO.: 26 SEKANS HAibQGTFTSDYSKYLD E QAA E EFICWLMNT KOD NO.: 27 SEKANS HAibQGTFTSDYSKYLDEKRAKEFVQWLMNT KOD NO.: 28 SEKANS H(d)SQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIA KOD NO.: 29 SEKANS CA-SQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIA KOD NO.: 30 SEKANS CA-(d)SQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNN KOD NO.: 31 m SEKANS CA-AibQGTFTSDYSKYLDEKRAKEFVQWLMNTC KOD NO.: SEKANS HAibQGTFTSDYAKYLDEKRAKEFVQWLMNTC KOD NO.: 33 SEKANS YAibQGTFTSDYSKYLDEKRAKEFVQWLMNTC KOD NO.: 34 Tablo 1'de, alti çizili koyu renk karakterlerle gösterilen amino asitler halka olusumunu temsil etmektedirler ve X ile temsil edilen amino asitler bir nativ olmayan amino asit olan alfa-metil-glutamik asidi teskil etmektedirler. Bunlarin yani sira, CA, 4-imidazoasetili ve DA, desamino-histidili temsil etmektedir. Ornek 2-2: Oksintomodulin türevlerinin in vitro aktivitesine dair test Ornek 2-l'de sentezlenen Oksintomodulin türevlerinin anti-obezite etkinliklerini ölçmek için, Örnekler 1-1 ve 1-2'de hazirlanan hücre hatlari kullanilarak in vitro ortamda hücre aktivitesi ölçüldü. Kullanilan hücre hatlari, CHO'yu (Çin Hamsteri Yumurtalik) sirasiyla insan GLP-l reseptör geni ve glukagon reseptör genini eksprese etmesini saglamak üzere transfekte etmek suretiyle hazirlanan hücre hatlariydi. Dolayisiyla bu hatlar, GLP-l ve glukagon aktivitelerini ölçmek için uygundurlar. Her bir Oksintomodulin türevinin aktivitesi, her bir transforme hücre hatti kullanilarak ölçüldü. Somutlastirmak gerekirse, her bir hücre hatti haftada iki veya üç defa alt-kültürlendi ve 1 X 105 yogunlugunda alikotlara bölünerek 96- kuyucuklu bir plakanin her bir kuyucuguna dagitildi ve takip eden 24 saat boyunca kültürlendi. Kültürlenen hücreler, KRB tamponu ile yikandi, 1 niM IBMX içeren 40 ml KRB tamponunda süspanse edildi ve 5 dakikaligina oda sicakliginda birakildilar. Oksintomodulin (SEKANS KOD NO.: 1) ve Oksintomodulin türevleri (SEKANS KOD NO.: 2-6, 8, 10-13, 17, 18, 23-25, 27, 28 ve 32-34 ile temsil edilen türevler), 5 katlik seri seyreltine ile 1000 nM'den 0,02 nM'ye seyreltildiler ve elde edilen her seyreltiden 40 mL alinip hücrelere eklendi ve bir COz inkübatöründe 1 saat boyunca 37°C sicaklik altinda kültürleme gerçeklestirildi. Daha sonra, hücre lizisi için 20 mL hücre lizis tamponu ilave edildi ve hücre lizatlari bir CAMP esey kitine (Molecular Device, ABD) uygulanarak cAMP konsantrasyonlari Ölçüldü. Olçülen konsantrasyonlardan EC50 degerleri hesaplandi ve bu degerleri birbirleri ile karsilastirildi. Hesaplanan EC 50 degerleri, asagidaki Tablo 2'de gösterilinektedirler. Tablo 2 [Tablo 2] Oksintomodulin ve Oksintomodulin türevlerinin GLP-l reseptörü ve glukagon reseptörüne yönelik in vitro aktiviteleri bakimindan karsilastirilmasi SEKANS KOD NO.: EC50(nM) CHO/GLP- 1 R CHO/GCGR SEKANS KOD NO.:1 50-210 10-43 SEKANS KOD NO.: 2 51,8 12,8 SEKANS KOD NO.: 3 1.000 637,7 SEKANS KOD NO.: 4 5,5 1.000 SEKANS KOD NO.: 5 5,9 1.000 SEKANS KOD NO.: 6 500,1 1.000 SEKANS KOD NO.: 8 419,6 1.000 SEKANS KOD NO.: 10 1.000 1.000 SEKANS KOD NO.: 11 1.000 1.000 SEKANS KOD NO.: 12 1.000 1.000 SEKANS KOD NO.: 13 1.000 1.000 SEKANS KOD NO.: 17 97,9 1.000 SEKANS KOD NO.: 18 96,3 1000 SEKANS KOD NO.: 23 2,46 5,8 SEKANS KOD NO.: 24 1,43 6,95 SEKANS KOD NO.: 25 1,9 1,3 SEKANS KOD NO.: 27 2,8-5,5 3,1-5,6 SEKANS KOD NO.: 28 3,1 0,3 SEKANS KOD NO.: 32 14,25 17,3 SEKANS KOD NO.: 33 2,20 80,2 SEKANS KOD NO.: 34 12,5 1,0 Tablo 2'de gösterildigi gibi, SEKANS KOD NO.: 1 ile temsil edilen nativ oksintomoduline kiyasla GLP-l reseptörü ve glukagon reseptörü üzerinde çok iyi in vitro aktivitelere sahip olan ve farkli aktivite oranlari gösteren Oksintomodulin türevleri vardi. Oksintomodulinin hem GLP-l reseptörü hem de glukagon reseptörünü aktive ederek istahi baskiladigi, lipolizi kolaylastirdigi ve tokluk hissini destekleyip artirdigi, dolayisiyla anti-obezite etkileri gösterdigi bilinmektedir. Bu bulusa konu olan oksintomoduliii türevleri, hem GLP-l reseptörüne hem de glukagon reseptörüne yönelik olarak yabani tip oksintomodulinden daha yüksek in vitro aktiviteler göstermektedirler ve dolayisiyla, bilinen oksintomodulinden daha yüksek etkinliklere sahip olan obeziteye yönelik bir terapötik ajan olarak kullanilabilirler. Ornek 3: Oksintomodulin türevlerinin in vivo aktivitesine dair test Oksintomodulin türevlerinin in vivo terapötik aktivitesini ölçmek için, Oksintomodulin türevleri uygulanarak gida aliminda saglanan degisimler, kontrol olarak nativ Oksintomodulin kullanilarak ob/ob farelerde incelendi. Somutlastirmak gerekirse, terap'otik ajanlarin obeziteye ve diyabete yönelik etkinliklerini test etmek için yaygin kullanilan obez diyabetik ob/ob tipi fareler önce 16 saat boyunca aç birakildilar ve daha sonra bu farelere oksintomodulinden 1 veya 10 mg/kg ya da SEKANS KOD NO.: 2 Oksintomodulin türevindeii 0,02, 0,1, 1 veya 10 mg/kg uygulandi. Ardindan 2 saat boyunca gida aliini incelendi (SEKIL 1). SEKIL l, oksintomodulin veya oksintomodulin türeVinin uygulama dozuna göre gida aliminda meydana gelen degisimlerin gösterildigi bir grafiktir. SEKIL l'de gösterildigi gibi, 1 mg/kg oksintomodulin türevi ile yapilan uygulama, 10 mg/kg oksintomodulin ile yapilan uygulamaya kiyasla gida aliini üzerinde çok daha iyi inhibe edici etkiler gösterdi. Bu sonuçlar birlikte ele alindiginda fark edilecegi üzere, bu bulusa konu olan oksintoinodulin türevleri, daha düsük bir dozda uygulansalar dahi yabani tip oksintomodulinden çok daha yüksek düzeyde anti-obezite etkileri gösterinekte ve buna bagli olarak, daha düsük anti-obezite etkileri sergileyen ve bundan dolayi günde üç defa yüksek bir dozda uygulanmasi gereken yabani tip oksintomodulinin tasidigi sorunlara çare olmaktadirlar. Ornek 4: Oksintomodulin ve immünoglobulin Fc içeren konjugatlarin hazirlanmasi Ilk önce, oksintomodulinin ainino asit sekansinda (SEKANS KOD NO.: 1) 30 numarali pozisyonda bulunan lizin artigini 3.4 K PropionALD(2) PEG (iki propilaldehit grubu bulunan PEG, NOF, Japonya) ile PEGilasyona tâbi tutmak için, oksintomodulin ile 3.4 K PropionALD(2) PEG, 5 ing/m1 protein konsantrasyonuyla 1:12 mol oraninda 4°C sicaklikta 4,5 saat boyunca reaksiyona sokuldular. Bu reaksiyon, lOO mM Na-Borat tampoiiu (pH 9,0) ve %45 izopropanolden meydana gelen bir çözücü karisiminda gerçeklestirildi ve bu karisima bir indirgen ajan olarak 20 mM sodyum siyanoborhidrür (siyanoborhidrür (SCB, NaCNBH3), NaCNBH3) eklendi. Reaksiyon tamamlandiktan sonra, reaksiyon karisimi bir SOURCE S'ye (XK16, Amersham Biosciences) uygulanarak, mono- pegile lizin bulunan oksintomodulin saflastirildi (kolon: SOURCE S (XK16, Amersham Biosciences), akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: A %0 9 %3 1 dakika B 9 %40 222 dakika B (A: 20 mM Na-sitrat, pH 3,0 + %45 etanol, B: A + 1 M KC1)) (SEKIL 2a). SEKIL 2a, bir SOURCE saflastirma kolonu araciligiyla gerçeklestirilen mono- PEGile oksintomodulin saflastirmasinin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. El'ue olan piklerin mono-PEGilasyonu, SDS-PAGE ile incelendi ve lizin selektivitesi, Asp-N proteaz kullanilarak peptid haritalama ile incelendi (SEKIL 2b). SEKIL 2b, saflastirilmis mono- PEGile oksintomoduline yönelik yapilan peptid haritalamanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. Bir sonraki asamada, saflastirilmis mono-PEGile oksintomodulin ile imm'unoglobulin Fc, 20 mg/ml protein konsantrasyonuyla 1:10 mol oraninda 4°C sicaklikta 16 saat boyunca reaksiyona sokuldular. Bu reaksiyon, 100 mM potasyum fosfat tainponuiida (pH 6,0) gerçeklestirildi ve bir indirgen ajan olarak 20 mM SCB eklendi. Reaksiyon tamamlandiktan sonra, reaksiyon karisimi bir SOURCE lSQ saflastirma kolonuna uygulanarak, oksintomodulin ve immünoglobulin Fc'yi içeren konjugatlar saflastirildi (kolon: SOURCE 15Q (XK16, Amersham Biosciences), akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: A %0 9 %20 100 dakika B (A: 20 HM Tris-HCl, pH 7,5, B: A + 1 M NaC1)) (SEKIL 2c). SEKIL 2c, bir SOURCE 15Q saflastirma kolonu araciligiyla oksintomodulin ve immünoglobulin Fc içeren kon jugatlara yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. Ornek 5: Oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 29) ve immünoglobulin Fc içeren konjugatlarin hazirlanmasi Ilk önce, Oksintomodulin türevinin amino asit sekansinda (SEKANS KOD NO.: 29) 30 numarali pozisyonda bulunan lizin artigini 3.4 K PropionALD(2) PEG ile PEGilasyona tâbi tutmak için, oksintoinodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 29) ile 3.4 K PropionALD(2) PEG, 5 mg/ml protein konsantrasyonuyla 1:12 mol oraninda 4°C sicaklikta 4,5 saat boyunca reaksiyona sokuldular. Bu reaksiyon, 100 mM Na-Borat tamponu (pH 9,0) ve %45 izopropanolden meydana gelen bir çözücü karisiminda gerçeklestirildi ve bir indirgen ajan olarak 20 mM SCB eklendi. Reaksiyon tainamlandiktan sonra, reaksiyon karisimi bir SOURCE S'ye uygulanarak, mono-pegile lizin bulunan oksintoinodulin türevi saflastirildi (Kolon: SOURCE S, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: A %0 -) %3 1 dakika B 9 %40 222 dakika B (A: 20 HM Na-sitrat, pH 3,0 + %45 etanol, B: A + 1 M KC1)) (SEKIL 3a). SEKIL 3a, bir SOURCE S saflastirma kolonu araciligiyla bir mono-PEGile Oksintomodulin türevine (SEKANS KOD NO.: 29) yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. Bir sonraki asamada, saflastirilmis mono-PEGile Oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 29) ile immünoglobulin FC, 20 mg/ml protein konsantrasyonuyla 1:10 mol oraninda 4°C sicaklikta 16 saat boyunca reaksiyona sokuldular. Bu reaksiyon, 100 mM potasyum fosfat tamponunda (pH 6,0) gerçeklestirildi ve bir indirgen ajan olarak mM SCB eklendi. Reaksiyon tamamlandiktan sonra, reaksiyon karisimi bir SOURCE '15Q saflastirma kolonuna uygulanarak, oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 29) ve immünoglobulin Fc'yi içeren konjugatlar saflastirildi (kolon: SOURCE 15Q, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: A %0 9 %20 100 dakika B (A: 20 mM Tris- HCl, pH 7,5, B: A + 1 M NaCl)) (SEKIL 3b). SEKIL 3b, oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 29) ve iminünoglobulin Fc içeren konjugatlara yöiielik gerçeklestirilen saflastinnanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. Örnek 6: Oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 30) ve immünoglobulin Fc içeren konjugatlarin hazirlanmasi Ilk önce, oksintomodulin türevinin amino asit sekansinda (SEKANS KOD NO.: 30) 30 numarali pozisyonda bulunan lizin artigini 3.4 K PropionALD(2) PEG ile PEGilasyona tâbi tutmak için, oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 30) ile 3.4 K PropionALD(2) PEG, 3 mg/inl protein konsantrasyonuyla 1:15 mol oraninda 4°C sicaklikta 4,5 saat boyunca reaksiyona sokuldular. Bu reaksiyon, 100 mM HEPES tamponu (pH 7,5) ve %45 izopropanolden meydana gelen bir çözücü karisiminda gerçeklestirildi ve bir indirgen ajan olarak 20 ml\/[ SCB eklendi. Reaksiyon tamamlandiktan sonra, reaksiyon karisimi bir SOURCE S saflastirma kolonuna uygulanarak, niono-pegile lizin bulunan oksiiitoinodulin türevi saflastirildi (Kolon: SOURCE S, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: A %0 9 %3 1 dakika B 9 %40 222 dakika B (A: 20 mM Na-sitrat, pH 3,0 + %45 etanol, B: A + 1 M KC1)) (SEKIL 4a). SEKIL 4a, bir SOURCE s saflastirma kolonu araciligiyla bir mono-PEGile oksintomodulin türevine (SEKANS KOD NO.: 30) yönelik gerçeklestirilen saflastirinanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. Elüe olan piklerin mono- PEGilasyonu, SDS-PAGE ile incelendi ve lizin selektivitesi, Asp-N proteaz kullanilarak peptid haritalama ile incelendi (SEKIL 4b). SEKIL 4b, saflastirilmis mono-PEGile oksintomodulin türevine (SEKANS KOD NO.: 30) yönelik yapilan peptid haritalamanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. Bir sonraki asamada, saflastirilmis mono-PEGile oksintoinodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 30) ile iininünoglobulin Fc, 20 ing/ml protein konsantrasyonuyla 1:10 mol oraninda 4°C sicaklikta 16 saat boyunca reaksiyona sokuldular. Bu reaksiyon, 100 mM potasyum fosfat tainponunda (pH 6,0) gerçeklestirildi ve bir indirgen ajan olarak mM SCB eklendi. Reaksiyon tamamlandiktan sonra, reaksiyon karisiini bir SOURCE 15Q sailastirma kolonuiia uygulanarak, oksintoinodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 30) ve iininünoglobulin Fc'yi içeren konjugatlar saflastirildi (kolon: SOURCE 15Q, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: A %0 9 %20 100 dakika B (A: 20 mM Tris- HCl, pH 7,5, B: A + 1 M NaCl)) (SEKIL 4c). SEKIL 4c, oksintoinodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 30) ve iinmünoglobulin Fc içeren konjugatlara yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. Örnek 7: Oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 31) ve immünoglobulin Fc içeren konjugatlarin hazirlanmasi Ilk 'Önce, oksintoinodulin türevinin amino asit sekansinda (SEKANS KOD NO.: 31) 30 numarali pozisyonda bulunan lizin artigini 3.4 K PropionALD(2) PEG ile PEGilasyona tâbi tutinak için, oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 31) ile 3.4 K PropionALD(2) PEG, 3 mg/ml protein konsaiitrasyonuyla '1:15 mol oraninda 4°C sicaklikta 4,5 saat boyunca reaksiyona sokuldular. Bu reaksiyon, 100 mM HEPES tamponu (pH 7,5) ve %45 izopropanolden meydana gelen bir çözücü karisiminda gerçeklestirildi ve bir indirgen ajan olarak 20 mM SCB eklendi. Reaksiyon tamamlandiktan sonra, reaksiyon karisimi bir SOURCE S saflastirma kolonuna uygulanarak, mono-pegile lizin bulunan oksintomodulin türevi saflastirildi (Kolon: SOURCE S, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: A %0 9 %3 1 dakika B 9 %40 222 dakika B (A: 20 mM Na-sitrat, pH 3,0 + %45 etanol, B: A + 1 M KC1)) (SEKIL sa). SEKIL 5a, bir SOURCE s saflastirma kolonu araciligiyla bir mono-PEGile oksintomodulin türevine (SEKANS KOD NO.: 31) yönelik gerçeklestirilen safîastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. Bir sonraki asamada, saflastirilmis mono-PEGile oksintoinodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 31) ile immünoglobulin FC, 20 mg/ml protein konsantrasyonuyla 1:10 mol oraninda 4°C sicaklikta 16 saat boyunca reaksiyona sokuldular. Bu reaksiyon, 100 mM potasyum fosfat tainponunda (pH 6,0) gerçeklestirildi ve bir indirgen ajan olarak mM SCB eklendi. Reaksiyon tamamlandiktan sonra, reaksiyon karisimi bir SOURCE 15Q saflastirma koloiiuna uygulanarak, oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 31) ve immünoglobulin Fc'yi içeren konjugatlar saflastirildi (kolon: SOURCE 15Q, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: A %0 9 %20 100 dakika B (A: 20 mM Tris- HCi, pH 7,5, B: A + 1 M NaC1)) (SEKIL 513). SEKIL 5b, oksiiitonioduliii türevi (SEKANS KOD NO.: 31) ve inimünoglobulin Fc içeren konjugatlara yönelik gerçeklestirilen saHastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. Ornek 8: Oksintomodulin t'i'irevi (SEKANS KOD NO.: 2) ve imm'i'inoglobulin Fc içeren konjugatlarin hazirlanmasi Ilk önce, Oksintomodulin türevinin amino asit sekansinda (SEKANS KOD NO.: 2) 30 numarali pozisyonda bulunan lizin artigini 3.4 K PropionALD(2) PEG ile PEGilasyona tâbi tutmak için, oksintoinodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 2) ile 3.4 K PropionALD(2) PEG, 3 nig/inl protein konsantrasyonuyla 1:10 mol oraninda 4°C sicaklikta 4 saat boyunca reaksiyona sokuldular. Bu reaksiyon, 100 mM HEPES tamponu (pH 7,5) ve %45 izopropanolden meydana gelen bir çözücü karisiminda gerçeklestirildi ve bir indirgen ajan olarak 20 mM SCB eklendi. Reaksiyon tamamlandiktan sonra, reaksiyon karisimi bir SOURCE S saflastirnia kolonuna uygulanarak, mono-pegile lizin bulunan oksintoinodulin türevi saflastirildi (Kolon: SOURCE S, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: A %0 9 %3 1 dakika B 9 %40 222 dakika B (A: 20 mM Na-sitrat, pH 3,0 + %45 etanol, B: A + 1 M KC1)) (SEKIL 6a). SEKIL 6a, bir SOURCE s saflastirma kolonu araciligiyla bir mono-PEGile Oksintomodulin türevine (SEKANS KOD NO.: 2) yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. Elüe olan piklerin mono- PEGilasyonu, SDS-PAGE ile incelendi ve lizin selektivitesi, Asp-N proteaz kullanilarak peptid haritalama ile incelendi (SEKIL 6b). SEKIL 6b, saflastirilmis mono-PEGile Oksintomodulin türevine (SEKANS KOD NO.: 2) yönelik yapilan peptid haritalamanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. Bir sonraki asamada, saflastirilmis mono-PEGile oksintoinodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 2) ile immünoglobulin FC, 20 mg/ml protein konsantrasyonuyla l:8 mol oraninda 4°C sicaklikta 16 saat boyunca reaksiyona sokuldular. Bu reaksiyon, 100 mM potasyum fosfat taniponunda (pH 6,0) gerçeklestirildi ve bir indirgen ajan olarak mM SCB eklendi. Reaksiyon tamainlandiktan sonra, reaksiyon karisimi bir SOURCE 15Q saflastirma kolonuna (Kolon: SOURCE 15Q, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: A %0 9 %4 1 dakika B 9 %20 80 dakika B (A: 20 mM Tris-HCl, pH 7,5, B: A + 1 M NaC1)) (SEKIL 6c) ve bir Source ISO saflastirma kolonuna (Kolon: SOURCE ISO (XK16, Amersham Biosciences), akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: A %0 9 %100 100 dakika B, (A: 20 mM Tris-HCl, pH 7,5, B: A + 1,3 M AS)) (SEKIL 6d) uygulanarak, Oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 2) ve immünoglobulin Fc'yi içeren konjugatlar saflastirildi. SEKIL 60, bir SOURCE 15Q saflastirma kolonu araciligiyla Oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 2) ve imniünoglobulin FC içeren konjugatlara yönelik gerçeklestirilen saflastirmanm sonucunun gösterildigi bir grafiktir ve SEKIL 6d, bir Source ISO saflastirnia kolonu araciligiyla Oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 2) ve immünoglobulin FC içeren konjugatlara yönelik gerçeklestirilen saflastirinanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. Örnek 9: Oksintomodulin t'ûreVi (SEKANS KOD NO.: 3) ve imm'i'inoglobulin Fe içeren konjugatlarin hazirlanmasi Ilk 'Önce, oksintoinodulin türevinin amino asit sekansinda (SEKANS KOD NO.: 3) 27 numarali pozisyonda bulunan lizin artigini 3.4 K PropionALD(2) PEG ile PEGilasyona tâbi tutmak için, Oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 3) ile 3.4 K PropionALD(2) PEG, 3 mg/ml protein konsaiitrasyonuyla '1:10 mol oraninda 4°C sicaklikta 4 saat boyunca reaksiyona sokuldular. Bu reaksiyon, 100 mM HEPES tamponu (pH 7,5) ve %45 izopropanolden meydana gelen bir çözücü karisiminda gerçeklestirildi ve bir indirgen ajan olarak 20 mM SCB eklendi. Reaksiyon tamamlandiktan sonra, reaksiyon karisimi bir SOURCE S saflastirma kolonuna uygulanarak, mono-pegile lizin bulunan oksintomodulin türevi saflastirildi (Kolon: SOURCE S, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: A %0 9 %3 1 dakika B 9 %40 222 dakika B (A: 20 mM Na-sitrat, pH 3,0 + %45 etanol, B: A + 1 M KC1)) (SEKIL 7a). SEKIL 7a, bir SOURCE s saflastirma kolonu araciligiyla bir mono-PEGile oksintomodulin türevine (SEKANS KOD NO.: 3) yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. Elüe olan piklerin mono- PEGilasyonu, SDS-PAGE ile incelendi ve lizin selektivitesi, Asp-N proteaz kullanilarak peptid haritalama ile incelendi (SEKIL 7b). SEKIL 7b, saflastirilmis mono-PEGile oksintomodulin türevine (SEKANS KOD NO.: 3) yönelik yapilan peptid haritalamanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. Bir sonraki asamada, saflastirilinis mono-PEGile oksiiitomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 3) ile immünoglobulin Fc, 20 mg/ml protein konsantrasyonuyla 1:8 mol oraninda 4°C sicaklikta 16 saat boyunca reaksiyona sokuldular. Bu reaksiyon, 100 mM potasyum fosfat tampoiiunda (pH 6,0) gerçeklestirildi ve bir indirgen ajan olarak HM SCB eklendi. Reaksiyon tamamlandiktan sonra, reaksiyon karisimi bir Butyl FF saflastirma koloiiuna (Kolon: Butyl FF (XK16, Amersham Biosciences), akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: B %0 9 %100 5 dakika A (A: 20 inM Tris-HCI, pH 7,5, B: A + 1,5 M NaCl)) (SEKIL 70) ve bir SOURCE 15Q saflastirma kolonuna (Kolon: SOURCE 15Q, akis hizi: 2,0 inl/dakika, gradyan: A %0 9 %4 1 dakika B 9 %20 80 dakika B (A: 20 mM Tris-HCl, pH 7,5, B: A + 1 M NaCl)) (SEKIL 7d) uygulanarak, oksintoinodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 3) ve immünoglobulin Fc'yi içeren konjugatlar saflastirildi. SEKIL 70, bir Butyl FF saflastirma kolonu araciligiyla oksintoinodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 3) ve immünoglobulin Fc içeren konjugatlara yönelik gerçeklestirilen satlastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir ve SEKIL 7d, bir SOURCE 15Q saflastirma kolonu araciligiyla oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 3) ve immünoglobulin Fc içeren konjugatlara yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. Ornek 10: Oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 23) ve immünoglobulin Fc içeren konjugatlarin hazirlanmasi Ilk önce, oksintomodulin türevinin amino asit sekansinda (SEKANS KOD NO.: 23) 24 numarali pozisyonda bulunan sistein artigini MAL- lOK-ALD PEG (NOF., Japonya) ile PEGilasyona tâbi tutmak için, oksintoniodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 23) ile MAL-10K-ALD PEG, 3 ing/ml protein konsantrasyonuyla 123 mol oraninda oda sicakliginda 3 saat boyunca reaksiyona sokuldular. Bu reaksiyon, 50 mM Tris tainponu (pH 8,0) ve %45 izopropanolde gerçeklestirildi ve bu karisima 1 M guanidin eklendi. Reaksiyon tamamlandiktan sonra, reaksiyon karisimi bir SOURCE S saflastirma kolonuna uygulanarak, mono-pegile sistein bulunan oksintomodulin türevi saflastirildi (kolon: SOURCE S, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: A %0 9 %100 50 dakika B (A: 20 mM Na-sitrat, pH 3,0 + %45 etanol, B: A + 1 M KC1)) (SEKIL 8a). SEKIL 8a, bir SOURCE S saflastirma kolonu araciligiyla bir mono-PEGile oksintomoduliii türevine (SEKANS KOD NO.: 23) yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. Bir sonraki asamada, saflastirilmis mono-PEGile oksintoinodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 23) ile immünoglobulin FC, 20 mg/ml protein konsantrasyonuyla 1:5 mol oraninda 4°C sicaklikta 16 saat boyunca reaksiyoiia sokuldular. Bu reaksiyon, 100 mM potasyuin fosfat tamponunda (pH 6,0) gerçeklestirildi ve bir indirgen ajan olarak mM SCB eklendi. Reaksiyon tamamlandiktan sonra, reaksiyon karisimi bir SOURCE 15Q saflastirma kolonuna (kolon: SOURCE 15Q, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: A %0 9 %4 1 dakika B 9 %20 80 dakika B (A: 20 mM Tris-HCl, pH 7,5, B: A + 1 M NaCl)) (SEKIL 8b) ve bir Source ISO saflastirma kolonuna (kolon: SOURCE ISO, akis hizi: 2,0 nil/dakika, gradyan: B %0 9 %100 100 dakika A, (A: 20 mM Tris-HCl, pH 7,5, B: A + 1,1 M AS)) (SEKIL 8c) uygulanarak, oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 23) ve immünoglobulin Fc'yi içeren konjugatlar saflastirildi. SEKIL 8b, bir SOURCE 15Q saflastirma kolonu araciligiyla oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 23) ve immünoglobulin FC içeren kon jugatlara yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir ve SEKIL 8c, bir Source ISO saflastirma kolonu araciligiyla oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 23) ve immünoglobulin FC içeren konjugatlara yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. Ornek 11: Oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 24) ve immünoglobulin Fc içeren konjugatlarin hazirlanmasi Ilk önce, oksintomodulin türevinin amino asit sekansinda (SEKANS KOD NO.: 24) 30 nuinarah pozisyonda bulunan sistein artigini MAL- lOK-ALD PEG ile PEGilasyona tâbi tutmak için, oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 24) ile MAL-IOK-ALD PEG, 3 mg/ml protein konsantrasyonuyla 1:3 mol oraninda oda sicakliginda 3 saat boyunca reaksiyona sokuldular. Bu reaksiyon, 50 inM Tris tamponu (pH 8,0) ve %45 izopropanolde gerçeklestirildi ve bu karisima 1 M guanidin eklendi. Reaksiyon tamamlandiktan sonra, reaksiyon karisimi bir SOURCE S saflastirma kolonuna uygulanarak, mono- pegile sisteiii bulunan oksintomodulin türevi saflastirildi (kolon: SOURCE S, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: A %0 9 %100 50 dakika B (A: 20 mM Na-sitrat, pH 3,0 + %45 etanol, B: A + 1 M KC1)) (SEKIL 9a). SEKIL 9a, bir SOURCE s saflastirma kolonu araciligiyla bir mono-PEGile oksintomodulin türevine (SEKANS KOD NO.: 24) yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. Bir sonraki asamada, saflastirilmis mono-PEGile oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 24) ile immünoglobulin FC, 20 ing/m1 protein konsantrasyonuyla l:5 mol oraninda 4°C sicaklikta 16 saat boyunca reaksiyona sokuldular. Bu reaksiyon, 100 mM potasyum fosfat tamponunda (pH 6,0) gerçeklestirildi ve bir indirgen ajan olarak mM SCB eklendi. Reaksiyon tamamlandiktan sonra, reaksiyon karisimi bir SOURCE 15Q saflastirma kolonuna (kolon: SOURCE 15Q, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: A %0 9 %4 1 dakika B 9 %20 80 dakika B (A: 20 1nM Tris-HCI, pH 7,5, B: A + 1 M NaC1)) (SEKIL 9b) ve bir Source ISO saflastirina kolonuna (kolon: SOURCE ISO, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: B %0 9 %100 100 dakika A, (A: 20 mM Tris-HCl, pH 7,5, B: A + 1,1 M AS)) (SEKIL 90) uygulanarak, oksintoinodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 24) ve immünoglobulin Fc'yi içeren konjugatlar saflastirildi. SEKIL 9b, bir SOURCE 15Q saflastirma kolonu araciligiyla oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 24) ve iminünoglobulin Fc içeren konjugatlara yönelik gerçeklestirilen saflastirinanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir ve SEKIL 90, bir Source ISO saflastirma kolonu araciligiyla oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 24) ve iinmünoglobulin FC içeren konjugatlara yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. Ornek 12: Oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 25) ve immünoglobulin Fe içeren konjugatlarm hazirlanmasi Ilk önce, oksintomodulin türeviniii amino asit sekansinda (SEKANS KOD NO.: 25) 30 iiuinarali pozisyonda bulunan sistein artigini MAL- 10K-ALD PEG ile PEGilasyona tâbi tutmak için, oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 25) ile MAL-IOK-ALD PEG, 3 mg/ml protein konsantrasyonuyla l:3 mol oraninda oda sicakliginda 3 saat boyunca reaksiyona sokuldular. Bu reaksiyon, 50 1nM Tris tamponu (pH 8,0) ve %45 izopropanolde gerçeklestirildi ve bu karisima 1 M guanidin eklendi. Reaksiyon tainamlandiktan sonra, reaksiyon karisiini bir SOURCE S saflastirma kolonuna uygulanarak, mono- pegile sistein bulunan oksintomodulin türevi saflastirildi (kolon: SOURCE S, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: A %0 9 %100 50 dakika B (A: 20 mM Na-sitrat, pH 3,0 + %45 etanol, B: A + 1 M KCl)) (SEKIL 10a). SEKIL 10a, bir SOURCE S saflastirma kolonu araciligiyla bir mono-PEGile oksintomodulin türevine (SEKANS KOD NO.: 25) yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. Bir sonraki asamada, saflastirilmis mono-PEGile oksintoinodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 25) ile immünoglobulin Fc, 20 mg/ml protein konsantrasyonuyla l:5 mol oraninda 4°C sicaklikta 16 saat boyunca reaksiyona sokuldular. Bu reaksiyon, 100 mM potasyum fosfat tamponunda (pH 6,0) gerçeklestirildi ve bir indirgen ajan olarak mM SCB eklendi. Reaksiyon tamamlandiktan sonra, reaksiyon karisimi bir SOURCE 15Q saflastirma kolonuna (kolon: SOURCE 15Q, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: A %0 9 %4 1 dakika B 9 %20 80 dakika B (A: 20 mM Tris-HCl, pH 7,5, B: A + 1 M NaC1)) (SEKIL 10b) ve bir Source ISO saflastirma kolonuna (kolon: SOURCE ISO, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: B %0 9 %100 100 dakika A, (A: 20 mM Tris-HCl, pH 7,5, B: A + 1,] M AS)) (SEKIL 100) uygulanarak, oksiiitomodulin türevi (S EKANS KOD NO.: 25) ve immünoglobulin Fc'yi içeren konjugatlar saflastirildi. SEKIL 1%, bir SOURCE 15Q saflastirma kolonu araciligiyla oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 25) ve inimünoglobulin Fc içeren konjugatlara yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir ve SEKIL 10c, bir Source ISO saflastirma kolonu araciligiyla oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 25) ve immünoglobulin FC içeren konjugatlara yönelik gerçeklestirilen satlastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. Ornek 13: Oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 28) ve immünoglobulin Fc içeren konjugatlarin hazirlanmasi Ilk önce, oksintomodulin türevinin amino asit sekansinda (SEKANS KOD NO.: 28) 20 numarali pozisyonda bulunan lizin artigini 3.4 K PropionALD(2) PEG ile PEGilasyona tâbi tutmak için, oksintoinodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 28) ile MAL-lOK-ALD PEG, 3 mg/inl protein konsantrasyonuyla 1:5 mol oraninda 4°C sicaklikta 3 saat boyunca reaksiyona sokuldular. Bu reaksiyon, 50 mM Na-Borat tamponunda (pH 9,0) gerçeklestirildi ve bu karisima 2 M guanidin eklendi. Reaksiyon tamamlandiktan sonra, reaksiyon karisimi bir SOURCE S saflastirma kolonuna uygulanarak, mono- pegile 1izin bulunan oksintomodulin türevi saflastirildi (kolon: SOURCE S, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: A %0 9 %3 1 dakika B 9 %40 222 dakika B (A: 20 mM Na-sitrat, pH 3,0 + %45 etanol, B: A + 1 M KC1)) (SEKIL lla). SEKIL 11a, bir SOURCE s saflastirma kolonu araciligiyla bir mono-PEGile oksintomodulin türevine (SEKANS KOD NO.: 28) yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. Bir sonraki asamada, saflastirilmis mono-PEGile oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 28) ile immünoglobulin FC, 20 mg/ml protein konsantrasyonuyla 1:10 mol oraninda 4°C sicaklikta 16 saat boyunca reaksiyona sokuldular. Bu reaksiyon, 100 mM potasyum fosfat tamponunda (pH 6,0) gerçeklestirildi ve bir indirgen ajan olarak mM SCB eklendi. Reaksiyon tamamlandiktan sonra, reaksiyon karisimi bir SOURCE 15Q saflastirma kolonuna (kolon: SOURCE 15Q, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: A %0 9 %4 1 dakika B 9 %20 80 dakika B (A: 20 mM Tris-HCl, pH 7,5, B: A + 1 M NaCl)) (SEKIL llb) ve bir Source ISO saflastirma kolonuna (kolon: SOURCE ISO, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: B %0 9 %100 100 dakika A, (A: 20 mM Tris-HCl, pH 7,5, B: A + 1,1 M AS)) (SEKIL llc) uygulanarak, oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 28) ve imniünoglobulin Fc'yi içeren konjugatlar saflastirildi. SEKIL llb, bir SOURCE 15Q saflastirma koloiiu araciligiyla oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 28) ve iminünoglobulin Fc içeren konjugatlara yönelik gerçeklestirilen saflastirinanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir ve SEKIL 1 le, bir Source ISO saflastirma kolonu araciligiyla oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 28) ve iinmünoglobulin FC içeren konjugatlara yönelik gerçeklestirilen saflastirmanin sonucunun gösterildigi bir grafiktir. Ornek 14: Oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 32) ve immünoglobulin Fe içeren konjugatlarin hazirlanmasi Ilk önce, oksintomodulin türeviniii amino asit sekansinda (SEKANS KOD NO.: 32) 30 iiuinarali pozisyonda bulunan sisteiii artigini MAL- 10K-ALD PEG ile PEGilasyona tâbi tutmak için, oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 32) ile MAL-IOK-ALD PEG, 1 mg/ml protein konsantrasyonuyla l:3 mol oraninda oda sicakliginda 3 saat boyunca reaksiyona sokuldular. Bu reaksiyon, 50 mM Tris tamponunda (pH 8,0) gerçeklestirildi ve bu karisima 2 M guaiiidin eklendi. Reaksiyon tamamlandiktan sonra, reaksiyon karisimi bir SOURCE S saflastirnia kolonuna uygulanarak, mono-pegile sistein bulunan oksintomodulin türevi saflastirildi (kolon: SOURCE S, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: A %0 9 %100 50 dakika B (A: 20 mM Na-sitrat, pH 3,0 + %45 etanol, B: A + 1 M KCl)). Bir sonraki asamada, saHastirilmis mono-PEGile Oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 32) ile immünoglobulin FC, 20 mg/ml protein konsantrasyonuyla 1:8 mol oraninda 4°C sicaklikta 16 saat boyunca reaksiyona sokuldular. Bu reaksiyon, 100 mM potasyum fosfat tainponunda (pH 6,0) gerçeklestirildi ve bir indirgen ajan olarak mM SCB eklendi. Reaksiyon tamamlandiktan sonra, reaksiyon karisimi bir SOURCE 15Q saflastirma kolonuna (kolon: SOURCE 15Q, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: A %0 9 %4 1 dakika B 9 %20 80 dakika B (A: 20 mM Tris-HCl, pH 7,5, B: A + 1 M NaCl)) ve bir Source ISO saflastirma kolonuna (kolon: SOURCE ISO, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: B %0 9 %100 100 dakika A, (A: 20 mM Tris-HCl, pH 7,5, B: A + 1,1 M AS)) uygulanarak, oksintoinodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 32) ve immünoglobulin Fc'yi içeren konjugatlar sailastirildi. Ornek 15: Oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 33) ve immünoglobulin Fc içeren konjugatlarm hazirlanmasi Ilk önce, Oksintomodulin türevinin amino asit sekansinda (SEKANS KOD NO.: 33) 30 nuinarali pozisyonda bulunan sistein artigini MAL- 10K-ALD PEG ile PEGilasyona tâbi tutmak için, Oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 33) ile MAL-lOK-ALD PEG, l mg/ml protein konsantrasyonuyla 1:1 mol oraninda oda sicakliginda 3 saat boyunca reaksiyona sokuldular. Bu reaksiyon, 50 mM Tris tainponunda (pH 8,0) gerçeklestirildi ve bu karisima 2 M guanidin eklendi. Reaksiyon tamamlandiktan sonra, reaksiyon karisimi bir SOURCE S saflastirma kolonuiia uygulanarak, mono-pegile sistein bulunan oksintomodulin türevi saflastirildi (kolon: SOURCE S, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: A %0 9 %100 50 dakika B (A: 20 mM Na-sitrat, pH 3,0 + %45 etanol, B: A + 1 M KC1)). Bir sonraki asamada, saflastirilmis mono-PEGile oksintoinodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 33) ile iminî'inoglobulin Fc, 20 mg/ml protein konsantrasyonuyla l:5 mol oraninda 4°C sicaklikta 16 saat boyunca reaksiyona sokuldular. Bu reaksiyon, 100 mM potasyum fosfat tamponunda (pH 6,0) gerçeklestirildi ve bir indirgen ajan olarak mM SCB eklendi. Reaksiyon tamamlandiktan sonra, reaksiyon karisimi bir SOURCE 15Q saflastirma kolonuna (kolon: SOURCE 15Q, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: A %0 9 %4 1 dakika B 9 %20 80 dakika B (A: 20 mM Tris-HCl, pH 7,5, B: A + 1 M NaCl)) ve bir Source ISO saflastirma kolonuna (kolon: SOURCE ISO, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: B %0 9 %100 100 dakika A, (A: 20 mM Tris-HCl, pH 7,5, B: A + 1,1 M AS)) uygulanarak, oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 33) ve immünoglobulin Fc'yi içeren konjugatlar saflastirildi. Ornek 16: Oksintomodulin t'ûrevi (SEKANS KOD NO.: 34) ve imm'i'inoglobulin Fc içeren konjugatlarin hazirlanmasi Ilk 'Önce, oksintoinodulin türevinin amino asit sekansinda (SEKANS KOD NO.: 34) 30 numarali pozisyonda bulunan sistein artigini MAL- 10K-ALD PEG ile PEGilasyona tâbi tutmak için, oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 34) ile MAL-lOK-ALD PEG, 3 mg/ml protein konsantrasyonuyla lzl mol oraninda oda sicakliginda 3 saat boyunca reaksiyona sokuldular. Bu reaksiyon, 50 mM Tris tamponunda (pH 8,0) gerçeklestirildi ve bu karisima 1 M guanidin eklendi. Reaksiyon tamamlandiktan sonra, reaksiyon karisimi bir SOURCE S saflastirma kolonuna uygulanarak, mono-pegile sistein bulunan oksintomodulin türevi saflastirildi (kolon: SOURCE S, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: A %0 9 %100 50 dakika B (A: 20 mM Na-sitrat, pH 3,0 + %45 etanol, B: A + 1 M KCl)). Bir sonraki asamada, saflastirilmis mono-PEGile oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 34) ile immünoglobulin Fc, 20 mg/ml protein konsantrasyonuyla l:5 mol oraninda 4°C sicaklikta 16 saat boyunca reaksiyona sokuldular. Bu reaksiyon, 100 mM potasyum fosfat tamponunda (pH 6,0) gerçeklestirildi ve bir indirgen ajan olarak mM SCB eklendi. Reaksiyon tamamlandiktan sonra, reaksiyon karisimi bir SOURCE 15Q saflastirma kolonuna (kolon: SOURCE 15Q, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: A %0 9 %4 1 dakika B 9 %20 80 dakika B (A: 20 mM Tris-HCl, pH 7,5, B: A + 1 M NaC1)) ve bir Source ISO saflastirma kolonuna (kolon: SOURCE ISO, akis hizi: 2,0 ml/dakika, gradyan: B %0 9 %100 100 dakika A, (A: 20 mM Tris-HCl, pH 7,5, B: A + 1,] M AS)) uygulanarak, oksintoinodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 34) ve immünoglobulin Fc'yi içeren konjugatlar saflastirildi. Ornek 17: Oksintomodulin türevi-immünoglobulin Fc konjugatlarinin in vitro aktivitesi Oksintomodulin veya oksintomodulin türevi ve immünoglobulin Fe buluiimakta olup yukaridaki Orneklerde anlatildigi gibi hazirlanmis olan konjugatlarin anti-obezite etkinliklerini ölçmek maksadiyla, Ornek 2-2'de anlatilan prosedürle deneyler gerçeklestirildi. Somutlastirmak gerekirse, Örnekler l-l ve 1-2'de hazirlanan transformantlarin her biri haftada iki veya üç defa alt-kültürlendi ve 1 X 105 yogunlugunda alikotlara bölünerek 96-kuyucuklu bir plakanin her bir kuyucuguna dagitildi ve takip eden 24 saat boyunca kültürlendi. Kültürlenen transformantlarin her biri, KRB tamponu ile yikandi ve 1 mM IBMX içeren 40 ml KRB tamponunda süspanse edildi ve 5 dakikaligina oda sicakliginda bekletildi. GLP-l, glukagon ve oksintomodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 23, 24, 25, 32, 33 veya 34)-immünoglobulin Fc konjugatlari, 5 katlik seri seyreltme ile 1000 nM'den 0,02 nM'ye seyreltildiler ve elde edilen her seyreltiden 40 mL alinip hücrelere eklendi ve bir COZ inkübatöründe 1 saat boyunca 37°C sicaklik altinda kültürleme gerçeklestirildi. Daha sonra, hücre lizisi için 20 mL hücre lizis tamponu ilave edildi ve hücre lizatlari bir CAMP esey kitine (Molecular Device, ABD) uygulanarak bir Victor (Perkin Elmer, ABD) ile cAMP konsantrasyonlari ölçüldü. Olçülen konsantrasyonlardan EC50 degerleri hesaplandi ve bu degerleri birbirleri ile karsilastirildi (Tablo 3). Tablo 3 [Tablo 3] Oksintomodulin türevi-immünoglobulin FC kon jugatlarinin in vitro aktivitesi SEKANS KOD NO.: EC50 (nM) CHO/GLP- CHO/GCGR lR GLP-l 1,7 ± 0,82 1.000 Glukagon 1.000 1,7 ±1,69 SEKANS KOD NO.: 5,4 15,8 23 - Fc konjugatlari SEKANS KOD NO.: 8,4 76,8 24 - FC konjugatlari SEKANS KOD NO.: 5,5 9,4 - FC konjugatlari SEKANS KOD NO.: 68,7 11,9 32 - Fc konjugatlari SEKANS KOD NO.: 1 1,7 85,9 33 - FC konjugatlari SEKANS KOD NO.: 168,0 8,0 34 - FC konjugatlari Tablo 3'te gösterildigi gibi, oksintomoduli türevi-immi'inoglobulin Fc konjugatlarinin in vitro ortamda GLP-l ve glukagon reseptörlerine karsi aktivite gösterdikleri tespit edildi. Ornek 18: Oksintomodulin türevi-immünoglobulin Fc konjugatlarinin in vivo aktivitesi Oksintoinodulin türevi-innnünoglobulin Fc konjugatlarinin in vivo ortamda vücut agirligini azaltici yönde çok iyi etkiler gösterip göstermedikleri incelendi. Somutlastirmak gerekirse, 6 haftalik normal C57BL/6 farelerine 24 hafta boyunca 60 kcal yüksek yagli bir diyet verilerek farelerin vücut agirliklarinin ortalamada yaklasik 50 g artmasi saglandi ve 3 hafta boyunca her hafta 0,03 veya 0,06 mg/kg dozuiida subkütan yolla oksintoinodulin türevi (SEKANS KOD NO.: 23, 24 veya 25)- imm'ûnoglobulin Fc konjugatlari uygulandi. Daha sonra, farelerin vücut agirliklarinda meydana gelen degisimler ölçüldü (SEKIL 12 ve SEKIL 13). SEKILER 12 ve SEKIL 13, oksintomodulin türevi- imm'ûnoglobulin FC konjugatlarinin tipine ve uygulama dozuna göre farelerin vücut agirliklarinda meydana gelen degisimlerin gösterildigi grafiklerdir. SEKIL 12 ve SEKIL 13'te gösterildigi gibi, her ne kadar kullanilan oksintomodulin türevi-immünoglobulin Fc konjugatlarinin tiplerine göre bazi farklar söz konusu olsa da genel olarak oksintomodulin türevi-immünoglobulin Fc konjugatlarinin uygulama dozu arttikça, Vücut agirliginda dogru orantili bir azalma kaydedildi ve dolayisiyla, oksintoinodulin türevi-immünoglobulin Fc koiijugatlariiiin Vücut agirliginda doza bagli sagladiklari belirlenmis oldu. TR TR TR TR TR TR TR TR TR

Claims (1)

1.
TR2019/01402T 2011-06-17 2012-06-15 Oksintomodulin ve bir immünoglobulin fragmanı içeren bir konjugat ve onun kullanımı. TR201901402T4 (tr)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20110058852 2011-06-17

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TR201901402T4 true TR201901402T4 (tr) 2019-02-21

Family

ID=47357296

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TR2019/01402T TR201901402T4 (tr) 2011-06-17 2012-06-15 Oksintomodulin ve bir immünoglobulin fragmanı içeren bir konjugat ve onun kullanımı.

Country Status (33)

Country Link
US (3) US9731031B2 (tr)
EP (2) EP3502129B1 (tr)
JP (2) JP6038905B2 (tr)
KR (2) KR101577734B1 (tr)
CN (2) CN109306015B (tr)
AR (2) AR086969A1 (tr)
AU (3) AU2012270366C1 (tr)
BR (1) BR112013032375B1 (tr)
CA (2) CA2838504C (tr)
CL (1) CL2013003619A1 (tr)
CY (1) CY1121255T1 (tr)
DK (2) DK3502129T3 (tr)
ES (2) ES2710356T3 (tr)
HR (1) HRP20190265T1 (tr)
HU (1) HUE042585T2 (tr)
IL (4) IL229759A (tr)
LT (1) LT2721062T (tr)
MX (2) MX381780B (tr)
MY (1) MY164680A (tr)
PE (3) PE20181268A1 (tr)
PH (2) PH12018501119B1 (tr)
PL (1) PL2721062T3 (tr)
PT (1) PT2721062T (tr)
RS (1) RS58606B1 (tr)
RU (2) RU2733544C2 (tr)
SG (2) SG10201605006XA (tr)
SI (1) SI2721062T1 (tr)
SM (1) SMT201900078T1 (tr)
TR (1) TR201901402T4 (tr)
TW (2) TWI601744B (tr)
UA (2) UA125895C2 (tr)
WO (1) WO2012173422A1 (tr)
ZA (1) ZA201309013B (tr)

Families Citing this family (66)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9249407B2 (en) 2006-02-03 2016-02-02 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US20150038413A1 (en) 2006-02-03 2015-02-05 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US10221228B2 (en) 2006-02-03 2019-03-05 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US8048849B2 (en) 2006-02-03 2011-11-01 Modigene, Inc. Long-acting polypeptides and methods of producing same
US20140113860A1 (en) 2006-02-03 2014-04-24 Prolor Biotech Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US12203113B2 (en) 2009-07-09 2025-01-21 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US9663778B2 (en) 2009-07-09 2017-05-30 OPKO Biologies Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US10166295B2 (en) 2011-06-02 2019-01-01 Opko Biologics Ltd. Pegylated OXM variants
WO2013183052A1 (en) 2012-06-04 2013-12-12 Prolor Biotech Inc. Pegylated oxm variants
CA2838503C (en) 2011-06-10 2020-02-18 Hanmi Science Co., Ltd. Novel oxyntomodulin derivatives and pharmaceutical composition for treating obesity comprising the same
ES2710356T3 (es) 2011-06-17 2019-04-24 Hanmi Science Co Ltd Conjugado que comprende oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina, y uso del mismo
KR20130049671A (ko) 2011-11-04 2013-05-14 한미사이언스 주식회사 생리활성 폴리펩타이드 결합체 제조 방법
AR090281A1 (es) 2012-03-08 2014-10-29 Hanmi Science Co Ltd Proceso mejorado para la preparacion de un complejo polipeptidico fisiologicamente activo
KR101968344B1 (ko) * 2012-07-25 2019-04-12 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 고지혈증 치료용 조성물
WO2014049610A2 (en) 2012-09-26 2014-04-03 Cadila Healthcare Limited Peptides as gip, glp-1 and glucagon receptors triple-agonist
UA116217C2 (uk) 2012-10-09 2018-02-26 Санофі Пептидна сполука як подвійний агоніст рецепторів glp1-1 та глюкагону
MY197849A (en) * 2012-11-06 2023-07-20 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Liquid formulation of protein conjugate comprising the oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment
KR101993393B1 (ko) 2012-11-06 2019-10-01 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 당뇨병 또는 비만성 당뇨병 치료용 조성물
SG11201503526UA (en) 2012-12-21 2015-06-29 Sanofi Sa Dual glp1/gip or trigonal glp1/gip/glucagon agonists
AR096890A1 (es) * 2013-07-12 2016-02-03 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Conjugando fc de inmunoglobulina, que mantiene la afinidad de unión del fragmento fc de la inmunoglobulina a fcrn
AR096891A1 (es) 2013-07-12 2016-02-03 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Conjugado de monómero polipéptido biológicamente activo y conjugado de fragmento fc de inmunoglobulina, que muestra aclaramiento mediado por receptor reducido, y el método para la preparación del mismo
US20150158926A1 (en) 2013-10-21 2015-06-11 Opko Biologics, Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
WO2015086730A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Sanofi Non-acylated exendin-4 peptide analogues
WO2015086733A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Sanofi Dual glp-1/glucagon receptor agonists
WO2015086729A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Sanofi Dual glp-1/gip receptor agonists
EP3080150B1 (en) 2013-12-13 2018-08-01 Sanofi Exendin-4 peptide analogues as dual glp-1/gip receptor agonists
MA43289B1 (fr) 2014-01-20 2019-12-31 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Insuline à action prolongée et utilisation associée
EA201691795A1 (ru) * 2014-03-31 2017-03-31 Ханми Фарм. Ко., Лтд. Способ улучшения растворимости белка и пептида за счет использования связывания с фрагментом fc иммуноглобулина
TW201625670A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自ｅｘｅｎｄｉｎ－４之雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑
TW201625668A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 作為胜肽性雙重ｇｌｐ－１／昇糖素受體激動劑之艾塞那肽－４衍生物
TW201625669A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自艾塞那肽－４（Ｅｘｅｎｄｉｎ－４）之肽類雙重ＧＬＰ－１／升糖素受體促效劑
AR100639A1 (es) 2014-05-29 2016-10-19 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Composición para tratar diabetes que comprende conjugados de análogos de insulina de acción prolongada y conjugados de péptidos insulinotrópicos de acción prolongada
TWI684458B (zh) * 2014-05-30 2020-02-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 包含胰島素及ｇｌｐ-１/昇糖素雙重促效劑之治療糖尿病之組成物
KR20150140177A (ko) 2014-06-05 2015-12-15 한미약품 주식회사 단백질 및 펩타이드의 면역원성을 감소시키는 방법
US9932381B2 (en) 2014-06-18 2018-04-03 Sanofi Exendin-4 derivatives as selective glucagon receptor agonists
TWI802396B (zh) 2014-09-16 2023-05-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 長效glp-1/高血糖素受體雙促效劑治療非酒精性脂肝疾病之用途
PH12021552108A1 (en) 2014-12-10 2022-05-11 Opko Biologics Ltd Methods of producing long acting ctp-modified growth hormone polypeptides
KR102418477B1 (ko) * 2014-12-30 2022-07-08 한미약품 주식회사 글루카곤 유도체
AR103322A1 (es) * 2014-12-30 2017-05-03 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Derivados de glucagón con estabilidad mejorada
AR105319A1 (es) 2015-06-05 2017-09-27 Sanofi Sa Profármacos que comprenden un conjugado agonista dual de glp-1 / glucagón conector ácido hialurónico
CN113289009B (zh) 2015-06-19 2025-05-02 Opko生物科学有限公司 长效凝固因子及其产生方法
PT3322437T (pt) 2015-06-30 2024-03-20 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd Derivado de glucagon e composição que compreende um conjugado de ação prolongada do mesmo
TW201706291A (zh) 2015-07-10 2017-02-16 賽諾菲公司 作為選擇性肽雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑之新毒蜥外泌肽（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）衍生物
UY36870A (es) 2015-08-28 2017-03-31 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Análogos de insulina novedosos
JP7222710B2 (ja) * 2015-09-24 2023-02-15 ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド 免疫グロブリン断片の特定位置を連結部位として用いたタンパク質結合体
EA038544B1 (ru) 2015-12-31 2021-09-13 Ханми Фарм. Ко., Лтд. Тройной агонист рецепторов глюкагона/glp-1/gip
UA126662C2 (uk) 2016-06-29 2023-01-11 Ханмі Фарм. Ко., Лтд. Похідна глюкагону, її кон'югат, композиція, яка її містить, та її терапевтичне застосування
SG10202100189WA (en) 2016-07-11 2021-02-25 Opko Biologics Ltd Long-acting coagulation factor vii and methods of producing same
BR112019005637A2 (pt) 2016-09-23 2019-07-30 Hanmi Pharm Ind Co Ltd análogos da insulina com afinidade reduzida para o receptor de insulina e seu uso
JOP20190095A1 (ar) 2016-10-27 2019-04-28 Janssen Pharmaceutica Nv مركبات ببتيد تيروسين-تيروسين الحلقية كمعدلات لمستقبلات الببتيد العصبي y
AR110299A1 (es) 2016-12-02 2019-03-13 Sanofi Sa Conjugados que comprenden un agonista dual de glp-1 / glucagón, un conector y ácido hialurónico
CN108299553B (zh) * 2017-01-13 2021-07-16 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 胃泌酸调节素修饰物
JP2020506932A (ja) 2017-02-03 2020-03-05 ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド 持続性が増加した生理活性物質の結合体及びその用途
TWI798209B (zh) 2017-03-23 2023-04-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 對胰島素受體有降低親和性之胰島素類似物之接合物及其用途
WO2019035672A1 (ko) 2017-08-16 2019-02-21 동아에스티 주식회사 아실화 옥신토모듈린 펩타이드 유사체
AU2018318672B2 (en) 2017-08-16 2021-04-15 Dong-A St Co., Ltd. Acylated oxyntomodulin peptide analog
WO2019171352A2 (en) * 2018-03-08 2019-09-12 Janssen Pharmaceutica Nv Methods of treating severe non-diabetic obesity
TW202015735A (zh) 2018-05-30 2020-05-01 法商賽諾菲公司 包含ｇｌｐ－１／升糖素／ｇｉｐ三重受體促效劑、連接子及透明質酸之接合物
KR20200135618A (ko) * 2019-05-23 2020-12-03 ㈜ 디앤디파마텍 폴리펩티드를 포함하는 비알코올성 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물
EP3823659A4 (en) * 2018-07-19 2022-06-22 D&D Pharmatech Inc. PHARMACEUTICAL COMPOSITION WITH A POLYPEPTIDE
CN110964116A (zh) * 2018-09-26 2020-04-07 北京辅仁瑞辉生物医药研究院有限公司 GLP1-Fc融合蛋白及其缀合物
US12441776B2 (en) 2018-11-30 2025-10-14 Eirgen Pharma Ltd. Oxyntomodulin peptide analog formulations
WO2020128967A2 (en) * 2018-12-19 2020-06-25 Janssen Pharmaceutica Nv Methods of treating severe non-diabetic obesity
CN114853908B (zh) * 2019-05-16 2024-06-07 浙江道尔生物科技有限公司 一种治疗代谢疾病的融合蛋白
AU2021276071A1 (en) * 2020-05-22 2023-02-02 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Liquid formulation
CR20250275A (es) * 2023-01-17 2025-08-18 Lilly Co Eli Enlazadores novedosos para el suministro sostenido de terapéuticos

Family Cites Families (81)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
CA2249195A1 (en) 1996-03-18 1997-09-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobin-like domains with increased half lives
JP3895109B2 (ja) 1998-03-06 2007-03-22 中外製薬株式会社 蛋白非添加製剤
US6660843B1 (en) * 1998-10-23 2003-12-09 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
US6677136B2 (en) 2000-05-03 2004-01-13 Amgen Inc. Glucagon antagonists
GB0121709D0 (en) * 2001-09-07 2001-10-31 Imp College Innovations Ltd Food inhibition agent
US7737260B2 (en) * 2003-11-13 2010-06-15 Hanmi Pharm. Co., Ltd Protein complex using an immunoglobulin fragment and method for the preparation thereof
US7217845B2 (en) * 2002-11-25 2007-05-15 Sun Bio, Inc. Bifunctional polyethylene glycol derivatives
GB0300571D0 (en) 2003-01-10 2003-02-12 Imp College Innovations Ltd Modification of feeding behaviour
EP1594530A4 (en) 2003-01-22 2006-10-11 Human Genome Sciences Inc HYBRID PROTEINS OF ALBUMIN
US7772188B2 (en) * 2003-01-28 2010-08-10 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders
WO2005035761A1 (en) 2003-10-16 2005-04-21 Compugen Ltd. Splice variants of preproglucagon, glucagon-like peptide-1 and oxyntomodulin
US8263084B2 (en) 2003-11-13 2012-09-11 Hanmi Science Co., Ltd Pharmaceutical composition for treating obesity-related disease comprising insulinotropic peptide conjugate
KR101135244B1 (ko) * 2007-11-29 2012-04-24 한미사이언스 주식회사 인슐린 분비 펩타이드 결합체를 포함하는 비만 관련질환 치료용 조성물
US20090238838A1 (en) 2003-11-13 2009-09-24 Hanmi Pharm. Ind. Co. Ltd. Insulinotropic peptide conjugate using an immunoglobulin fc
RU2428431C2 (ru) 2004-12-02 2011-09-10 Домантис Лимитед Слитые конструкции лекарственного средства и конъюгаты
CA2597649A1 (en) 2005-02-11 2006-08-17 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Gip analog and hybrid polypeptides with selectable properties
DK1888094T3 (da) * 2005-03-31 2009-11-09 Amylin Pharmaceuticals Inc Amylin og amylinagonister til behandling af psykiatriske sygdomme og forstyrrelser
KR100754667B1 (ko) 2005-04-08 2007-09-03 한미약품 주식회사 비펩타이드성 중합체로 개질된 면역글로불린 Ｆｃ 단편 및이를 포함하는 약제학적 조성물
GB0511986D0 (en) * 2005-06-13 2005-07-20 Imp College Innovations Ltd Novel compounds and their effects on feeding behaviour
JP2008543816A (ja) 2005-06-13 2008-12-04 インペリアル イノベーションズ リミテッド 新規化合物および該化合物が摂食行動に及ぼす効果
AU2006279680B2 (en) 2005-08-11 2012-12-06 Amylin Pharmaceuticals, Llc Hybrid polypeptides with selectable properties
US20090297496A1 (en) 2005-09-08 2009-12-03 Childrens Hospital Medical Center Lysosomal Acid Lipase Therapy for NAFLD and Related Diseases
EP2471810A1 (en) * 2006-02-22 2012-07-04 Merck Sharp & Dohme Corporation Oxyntomodulin derivatives
WO2007146038A2 (en) 2006-06-07 2007-12-21 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
KR100880509B1 (ko) 2006-10-16 2009-01-28 한미약품 주식회사 재조합 단백질의 대량 생산을 위한 신규한 벡터, 발현세포주 및 이를 이용한 재조합 단백질의 생산 방법
TWI428346B (zh) 2006-12-13 2014-03-01 Imp Innovations Ltd 新穎化合物及其等對進食行為影響
GB0624868D0 (en) * 2006-12-13 2007-01-24 Imp Innovations Ltd Novel compounds and their effects on feeding behaviour
JP2008169195A (ja) 2007-01-05 2008-07-24 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd キャリア物質を用いたインスリン分泌ペプチド薬物結合体
US20090098130A1 (en) 2007-01-05 2009-04-16 Bradshaw Curt W Glucagon-like protein-1 receptor (glp-1r) agonist compounds
AU2008216265B2 (en) * 2007-02-15 2014-04-03 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon/GLP-1 receptor co-agonists
US20100196405A1 (en) 2007-07-10 2010-08-05 Kingman Ng GLP-1 Fc FUSION PROTEIN FORMULATION
CN103416421B (zh) 2007-07-27 2016-07-27 拜尔农作物科学股份公司 三元活性化合物结合物
AU2008306141A1 (en) 2007-09-11 2009-04-09 Mondobiotech Laboratories Ag Thyrotropin releasing hormone for therapeutic applications
EP2214691B1 (en) 2007-10-30 2015-09-30 Indiana University Research and Technology Corporation Compounds exhibiting glucagon antagonist and glp-1 agonist activity
AU2009210570B2 (en) 2008-01-30 2014-11-20 Indiana University Research And Technology Corporation Ester-based insulin prodrugs
MX337038B (es) 2008-06-17 2016-02-10 Univ Indiana Res & Tech Corp Co-antagonistas de receptor de glucagon/glp-1.
CN104447980A (zh) 2008-06-17 2015-03-25 印第安纳大学研究及科技有限公司 在生理pH缓冲液中具有增强的溶解性和稳定性的胰高血糖素类似物
WO2010013012A2 (en) 2008-08-01 2010-02-04 Lund University Bioscience Ab Novel polypeptides and uses thereof
US8680263B2 (en) 2008-09-19 2014-03-25 Nektar Therapeutics Carbohydrate-based drug delivery polymers and conjugates thereof
US20110171312A1 (en) 2008-09-19 2011-07-14 Nektar Therapeutics Modified therapeutic peptides, methods of their preparation and use
MX2011006320A (es) 2008-12-15 2011-09-22 Zealand Pharma As Analogos de glucagon.
SG172291A1 (en) 2008-12-19 2011-07-28 Univ Indiana Res & Tech Corp Amide based glucagon superfamily peptide prodrugs
EA020843B1 (ru) 2009-02-03 2015-02-27 Амуникс Оперейтинг Инк. Удлиненные рекомбинантные полипептиды и содержащие их композиции
WO2010096052A1 (en) * 2009-02-19 2010-08-26 Merck Sharp & Dohme Corp. Oxyntomodulin analogs
PL2408800T3 (pl) 2009-03-20 2016-11-30 Sposób wytwarzania koniugatu miejscowo-specyficznego, fizjologicznie aktywnego polipeptydu
WO2010108154A2 (en) 2009-03-20 2010-09-23 Amgen Inc. Selective and potent peptide inhibitors of kv1.3
MX2011013625A (es) 2009-06-16 2012-01-20 Univ Indiana Res & Tech Corp Compuestos glucagon activo de receptor de gip.
AP3329A (en) 2009-07-13 2015-06-30 Zealand Pharma As Acylated glucagon analogues
WO2011056713A2 (en) 2009-11-03 2011-05-12 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Glp-1 receptor agonist compounds for obstructive sleep apnea
WO2011071957A1 (en) 2009-12-07 2011-06-16 Sea Lane Biotechnologies, Llc Conjugates comprising an antibody surrogate scaffold with improved pharmacokinetic properties
WO2011075393A2 (en) 2009-12-18 2011-06-23 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon/glp-1 receptor co-agonists
AR079344A1 (es) 2009-12-22 2012-01-18 Lilly Co Eli Analogo peptidico de oxintomodulina, composicion farmaceutica que lo comprende y uso para preparar un medicamento util para tratar diabetes no insulinodependiente y/u obesidad
AR079345A1 (es) 2009-12-22 2012-01-18 Lilly Co Eli Analogo peptidico de oxintomodulina
RU2559320C2 (ru) 2010-03-26 2015-08-10 Ново Нордиск А/С Новые аналоги глюкагона
RU2012153753A (ru) 2010-05-13 2014-06-20 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн Пептиды глюкагонового суперсемейства, обладающие активностью в отношении сопряженных с g-белком рецепторов
CA2796894A1 (en) 2010-06-24 2011-12-29 Indiana University Research And Technology Corporation Amide based glucagon superfamily peptide prodrugs
KR101337797B1 (ko) 2010-07-14 2013-12-06 한미사이언스 주식회사 지속형 인간 성장 호르몬 결합체 액상 제제
KR101382593B1 (ko) 2010-07-21 2014-04-10 한미사이언스 주식회사 신규한 지속형 글루카곤 결합체 및 이를 포함하는 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물
CN102576513B (zh) 2010-09-06 2014-11-12 松下电器产业株式会社 显示装置及其控制方法
CN101974077A (zh) 2010-09-15 2011-02-16 南京瑞年天平医药科技有限公司 一种新颖的多肽化合物
KR101303388B1 (ko) 2010-10-26 2013-09-03 한미사이언스 주식회사 지속형 인터페론 알파 결합체의 액상 제제
KR101767570B1 (ko) 2010-10-26 2017-08-14 한미사이언스 주식회사 항 비만 펩타이드의 지속형 결합체
CN102010473A (zh) 2010-11-10 2011-04-13 曹鹏 重组胃泌酸调节素融合蛋白及其制备和应用
RU2013133803A (ru) 2010-12-22 2015-01-27 Маркадиа Байотек, Инк. Способы лечения метаболических нарушений и ожирения при помощи пептидов на основе глюкагона, активных по отношению к рецепторам гип и гпп
EP2492749A1 (en) 2011-02-28 2012-08-29 Rohm and Haas Electronic Materials LLC Photoresist compositions and methods of forming photolithographic patterns
KR101161526B1 (ko) 2011-05-16 2012-07-02 숭실대학교산학협력단 연료전지용 촉매전극을 위한 코어/쉘 구조의 나노 지지체 및 그 제조방법
CA2838503C (en) 2011-06-10 2020-02-18 Hanmi Science Co., Ltd. Novel oxyntomodulin derivatives and pharmaceutical composition for treating obesity comprising the same
ES2710356T3 (es) 2011-06-17 2019-04-24 Hanmi Science Co Ltd Conjugado que comprende oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina, y uso del mismo
MX2013015168A (es) 2011-06-22 2014-03-31 Univ Indiana Res & Tech Corp Co-agonista del receptor de glucagon/glp-1.
KR101665009B1 (ko) 2012-03-09 2016-10-11 한미사이언스 주식회사 비알콜성 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
AU2013250711A1 (en) 2012-04-19 2014-11-27 Opko Biologics Ltd. Long-acting oxyntomodulin variants and methods of producing same
CN104583232B (zh) 2012-06-21 2018-04-13 印第安纳大学研究及科技有限公司 展现gip受体活性的胰高血糖素类似物
KR101373563B1 (ko) 2012-07-25 2014-03-12 전북대학교산학협력단 Ｔｏｆ-ｍｒａ를 이용한 혈류특성 및 ｍｒ-신호강도구배(전단율) 유도방법
KR101968344B1 (ko) 2012-07-25 2019-04-12 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 고지혈증 치료용 조성물
WO2014049610A2 (en) 2012-09-26 2014-04-03 Cadila Healthcare Limited Peptides as gip, glp-1 and glucagon receptors triple-agonist
KR101993393B1 (ko) 2012-11-06 2019-10-01 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 당뇨병 또는 비만성 당뇨병 치료용 조성물
MY197849A (en) 2012-11-06 2023-07-20 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Liquid formulation of protein conjugate comprising the oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment
JP6137046B2 (ja) 2014-05-09 2017-05-31 信越化学工業株式会社 単量体、高分子化合物、レジスト材料及びパターン形成方法
TWI802396B (zh) 2014-09-16 2023-05-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 長效glp-1/高血糖素受體雙促效劑治療非酒精性脂肝疾病之用途
WO2019171352A2 (en) 2018-03-08 2019-09-12 Janssen Pharmaceutica Nv Methods of treating severe non-diabetic obesity

Also Published As

Publication number Publication date
IL257928B (en) 2020-02-27
JP6038905B2 (ja) 2016-12-07
RU2013153198A (ru) 2015-07-27
TW201305195A (zh) 2013-02-01
DK3502129T3 (da) 2021-07-12
CN103732616B (zh) 2018-08-17
PH12013502517A1 (en) 2014-01-20
RU2733544C2 (ru) 2020-10-05
CN103732616A (zh) 2014-04-16
SG10201605006XA (en) 2016-08-30
CN109306015A (zh) 2019-02-05
AU2017202672A1 (en) 2017-05-11
ES2710356T3 (es) 2019-04-24
IL229759A0 (en) 2014-01-30
TWI601744B (zh) 2017-10-11
AU2012270366B2 (en) 2017-02-02
EP2721062B1 (en) 2018-11-14
JP2014518209A (ja) 2014-07-28
CL2013003619A1 (es) 2014-05-30
PE20141178A1 (es) 2014-09-12
IL257928A (en) 2018-06-28
LT2721062T (lt) 2019-02-11
AU2018282298A1 (en) 2019-01-17
MX2013014779A (es) 2014-06-23
SI2721062T1 (sl) 2019-03-29
PE20181268A1 (es) 2018-08-03
SMT201900078T1 (it) 2019-02-28
WO2012173422A9 (en) 2013-03-14
US9731031B2 (en) 2017-08-15
KR101577734B1 (ko) 2015-12-29
PH12018501119B1 (en) 2022-08-03
US20190321485A1 (en) 2019-10-24
CA3080189A1 (en) 2012-12-20
RU2016147505A3 (tr) 2020-04-08
TW201506037A (zh) 2015-02-16
CA2838504C (en) 2020-07-21
RU2016147505A (ru) 2018-10-24
UA114709C2 (uk) 2017-07-25
IL229759A (en) 2017-08-31
US10363320B2 (en) 2019-07-30
EP2721062A4 (en) 2014-11-12
ES2882520T3 (es) 2021-12-02
MY164680A (en) 2018-01-30
US20140212440A1 (en) 2014-07-31
US20170340753A1 (en) 2017-11-30
AU2012270366A1 (en) 2014-01-16
CN109306015B (zh) 2022-04-26
AU2012270366C1 (en) 2017-07-13
JP6345216B2 (ja) 2018-06-20
WO2012173422A1 (en) 2012-12-20
PH12018501119A1 (en) 2019-02-04
EP3502129A1 (en) 2019-06-26
US11872283B2 (en) 2024-01-16
KR20120139579A (ko) 2012-12-27
NZ742400A (en) 2021-05-28
IL272345B (en) 2021-01-31
TWI519541B (zh) 2016-02-01
AR086969A1 (es) 2014-02-05
AU2017202672B2 (en) 2019-01-17
PT2721062T (pt) 2019-02-12
KR20140133493A (ko) 2014-11-19
RU2607365C2 (ru) 2017-01-10
UA125895C2 (uk) 2022-07-06
BR112013032375A2 (pt) 2016-11-22
NZ718999A (en) 2017-07-28
CY1121255T1 (el) 2020-05-29
CA2838504A1 (en) 2012-12-20
NZ733478A (en) 2020-06-26
ZA201309013B (en) 2014-11-26
PE20230404A1 (es) 2023-03-07
EP3502129B1 (en) 2021-04-07
EP2721062A1 (en) 2014-04-23
RS58606B1 (sr) 2019-05-31
IL245556B (en) 2018-03-29
IL272345A (en) 2020-03-31
AU2018282298B2 (en) 2020-06-18
CA3080189C (en) 2023-01-17
PL2721062T3 (pl) 2019-05-31
MX353402B (es) 2018-01-11
BR112013032375B1 (pt) 2022-09-20
MX381780B (es) 2025-03-13
KR101591411B1 (ko) 2016-02-05
AR125914A2 (es) 2023-08-23
NZ618811A (en) 2016-05-27
SG195275A1 (en) 2013-12-30
IL245556A0 (en) 2016-06-30
HRP20190265T1 (hr) 2019-04-05
JP2017071609A (ja) 2017-04-13
DK2721062T3 (en) 2019-02-25
HUE042585T2 (hu) 2019-07-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11872283B2 (en) Conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof
HK40009561A (en) A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof
HK40009561B (en) A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof
HK40003883A (en) A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof
HK40003883B (en) A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof
NZ718999B2 (en) A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof
NZ742400B2 (en) A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof
HK1193828B (zh) 包括泌酸调节肽和免疫球蛋白片段的结合物以及其应用
HK1193828A (en) A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof