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MX2013014779A - Un conjugado que comprende oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina, y uso del mismo. - Google Patents

Un conjugado que comprende oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina, y uso del mismo.

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MX2013014779A
MX2013014779A MX2013014779A MX2013014779A MX2013014779A MX 2013014779 A MX2013014779 A MX 2013014779A MX 2013014779 A MX2013014779 A MX 2013014779A MX 2013014779 A MX2013014779 A MX 2013014779A MX 2013014779 A MX2013014779 A MX 2013014779A
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MX
Mexico
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immunoglobulin
seq
oxyntomodulin
region
deleted
Prior art date
Application number
MX2013014779A
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MX353402B (es
Inventor
Dae Jin Kim
Se Chang Kwon
Sung Youb Jung
In Young Choi
Young Eun Woo
Sung Hee Park
Original Assignee
Hanmi Science Co Ltd
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Publication date
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First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=47357296&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=MX2013014779(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Hanmi Science Co Ltd filed Critical Hanmi Science Co Ltd
Publication of MX2013014779A publication Critical patent/MX2013014779A/es
Publication of MX353402B publication Critical patent/MX353402B/es

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Abstract

La presente invención se refiere a un conjugado que comprende oxintomodulina, una región Fc de inmunoglobulina y un polímero no peptidilico, pudiéndose obtener el conjugado mediante la unión covalente de la oxintomodulina con la región Fc de inmunoglobulina a través del polímero no peptidilico, y a una composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento de la obesidad que comprende los conjugados. El conjugado que comprende oxintomodulina y la Fc de inmunoglobulina de la presente invención reduce la ingesta de alimentos, suprime el vaciado gástrico y facilita la lipólisis sin provocar efectos secundarios, a diferencia de la oxintomodulina nativa, y también muestra excelentes efectos de activación de los receptores y sostenibilidad a largo plazo, en comparación con la oxintomodulina. Así pues, se puede usar ampliamente en el tratamiento de la obesidad con seguridad y eficacia.

Description

UN CONJUGADO QUE COMPRENDE OXINTOMODULINA Y UN FRAGMENTO DE IN UNOGLOBULINA, Y USO DEL MISMO CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a un conjugado que comprende oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina, y al uso del mismo. Más particularmente, la presente invención se refiere a un conjugado que comprende oxintomodulina, una región Fe de inmunoglobulina y un polímero no peptidílico, pudiéndose obtener el conjugado mediante la unión covalente de la oxintomodulina con la región Fe de inmunoglobulina a través del polímero no peptidílico, y a una composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento de la obesidad que comprende el conjugado.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Recientemente, el crecimiento económico y los cambios en el estilo de vida están dando lugar a cambios en los hábitos alimenticios. Las principales causas de las crecientes tasas de sobrepeso y obesidad en las personas contemporáneas son el consumo de alimentos ricos en calorías tales como la comida rápida y la falta de ejercicio. La Organización Mundial de la Salud (OMS) estima que más de mil millones de personas en todo el mundo tienen sobrepeso, y al menos 300 millones de ellas son clínicamente obesas. En concreto, cada año, mueren 250.000 personas en Europa y más de 2,5 millones de personas en todo el mundo a consecuencia del sobrepeso (Organización Mundial de la Salud, Estrategia Mundial sobre Régimen Alimentario, Actividad Física y Salud, 2004).
El hecho de tener sobrepeso o ser obeso aumenta la presión arterial y los niveles de colesterol, provocando la aparición o el agravamiento de varias enfermedades tales como la enfermedad cardiovascular, la diabetes y la artritis, y también son las principales causas del aumento de las tasas de incidencia de la arterosclerosis, hipertensión, hiperlipidemia o enfermedad cardiovascular en niños y adolescentes, así como en adultos.
La obesidad es una afección grave que provoca varias enfermedades en todo el mundo. Se piensa que se resuelve con el esfuerzo a nivel individual, y también se cree que los pacientes obesos carecen de autocontrol. Sin embargo, es difícil tratar la obesidad, porque la obesidad es un trastorno complejo que implica la regulación del apetito y el metabolismo energético. Para el tratamiento de la obesidad, se deben tratar las acciones anómalas asociadas con la regulación del apetito y el metabolismo energético junto con el esfuerzo de los pacientes obesos. Se han hecho muchos intentos por desarrollar fármacos capaces de tratar las acciones anómalas. Como resultado de estos esfuerzos, se han creado fármacos tales como Rimonabant (Sanofi-Aventis), Sibutramina (Abbott), Contrave (Takeda) y Orlistat (Roche), pero tienen las desventajas de provocar graves efectos adversos o efectos contra la obesidad muy débiles. Por ejemplo, se informó de que Rimonabant (Sanofi-Aventis) muestra un efecto secundario de trastorno nervioso central, la Sibutramina (Abbott) y Contrave (Takeda) muestran efectos secundarios cardiovasculares y Orlistat (Roche) solamente muestra un pérdida de peso de 4 kg tras tomarlo durante 1 año. Desafortunadamente, no hay agentes terapéuticos para la obesidad que se puedan prescribir de forma segura para los pacientes obesos.
Se han realizado muchos estudios para desarrollar agentes terapéuticos contra la obesidad que no tengan los problemas que presentan los fármacos contra la obesidad convencionales. Recientemente, han sido objeto de mucha atención los derivados de glucagón. El glucagón es producido por el páncreas cuando el nivel de glucosa en sangre cae como consecuencia de otros medicamentos o enfermedades, deficiencias hormonales o enzimáticas. El glucagón estimula la degradación del glucógeno en el hígado, y facilita la liberación de glucosa para elevar los niveles de glucosa en sangre hasta un intervalo normal. Además del efecto de aumentar el nivel de glucosa en sangre, el glucagón inhibe el apetito y activa la lipasa sensible a hormonas (LSH) de los adipocitos para facilitar la lipólisis, mostrando de ese modo efectos contra la obesidad. Uno de los derivados de glucagón, el péptido 1 similar al glucagón (GLP-1) se encuentra en fase de desarrollo como agente terapéutico para la hiperglucemia en pacientes con diabetes, y funciona para estimular la síntesis y secreción de insulina, para inhibir la secreción de glucagón, para retardar el vaciado gástrico, para aumentar la utilización de la glucosa y para inhibir la ingesta de alimentos. La exendina-4 se aisla del veneno de lagarto que comparte aproximadamente el 50 % de homología de aminoácidos con el GLP-1 , y también se ha informado que activa el receptor de GLP-1 , mejorando de este modo la hiperglucemia en pacientes con diabetes. Sin embargo, se ha publicado que los medicamentos contra la obesidad que incluyen GLP-1 presentan efectos secundarios tales como vómitos y náuseas.
Así pues, como alternativa al GLP-1 , se ha prestado mucha atención en la oxintomodulina, un péptido derivado de un precursor de glucagón, pre-glucagón que se une a los receptores de dos péptidos, el GLP-1 y el glucagón. La oxintomodulina representa una potente terapia contra la obesidad, pues inhibe la ingesta de alimentos como el GLP- , potencia la saciedad y tiene una actividad lipolítica como el glucagón.
En base a la doble función del péptido oxintomodulina, se ha estudiado activamente como fármaco para el tratamiento de la obesidad. Por ejemplo, la patente coreana N° 925017 desvela una composición farmacéutica que incluye oxintomodulina como principio activo para el tratamiento del sobrepeso en seres humanos, que se administra por vía oral, parenteral, mucosa, rectal, subcutánea o transdérmica. Sin embargo, se ha informado de que este fármaco contra la obesidad que incluye oxintomodulina tiene una corta semivida in vivo y una eficacia terapéutica débil, incluso administrándose a una dosis elevada tres veces al día. Por lo tanto, se han hecho muchos esfuerzos por mejorar la semivida in vivo o el efecto terapéutico de la oxintomodulina en la obesidad mediante su modificación.
Por ejemplo, se prepara una oxintomodulina agonista dual (Merck) sustituyendo la L-serina con D-serina en la posición 2 de la oxintomodulina para aumentar la resistencia a la dipeptidil peptidasa-IV (DPP-IV) y uniendo un resto de colesterol en el terminal C para aumentar, al mismo tiempo, la semivida en sangre. ZP2929 (Zelanda) se prepara sustituyendo la L-serina con D-serina en la posición 2 para mejorar la resistencia a la DPP-IV, sustituyendo la arginina con alanina en la posición 17 para mejorar la resistencia a la proteasa, sustituyendo la metionina con lisina en la posición 27 para mejorar la estabilidad oxidativa y sustituyendo la glutamina con ácido aspártico y alanina en las posiciones 20 y 24, y la asparagina con serina en la posición 28 para mejorar la estabilidad de la desamidación. Sin embargo, pese a que la semivida de la oxintomodulina agonista dual (Merck) se ha mejorado hasta mostrar una semivida de 8-12 minutos más larga que la de la oxintomodulina nativa, sigue teniendo una semivida in vivo muy corta, de 1 ,7 horas, y su dosis de administración también es tan alta como de varios mg/kg. Desafortunadamente, la oxintomodulina o sus derivados tienen las desventajas de una administración diaria de dosis alta debido a la corta semivida y una baja eficacia.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Problemas técnicos Por consiguiente, los presentes inventores han hecho muchos esfuerzos por desarrollar un procedimiento para aumentar la semivida de la oxintomodulina en sangre, manteniendo a la vez su actividad in vivo. Como resultado de ello, han encontrado que un conjugado preparado mediante la unión de un vehículo con la oxintomodulina usando un polímero no peptidílico muestra una mejor semivida en sangre, a la vez que mantiene la actividad in vivo para así presentar excelentes efectos contra la obesidad, completando de este modo la presente invención.
Solución técnica Un objeto de la presente invención es proporcionar un conjugado que comprende oxintomodulina, una región Fe de inmunoglobulina y polímero no peptidílico, pudiéndose obtener el conjugado mediante la unión covalente de la oxintomodulina con la región Fe de inmunoglobulina a través del polímero no peptidílico.
Otro objeto de la presente invención es proporcionar una composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento de la obesidad que comprenda los conjugados.
Otro objeto más de la presente invención es proporcionar un procedimiento para prevenir o tratar la obesidad, que comprende la etapa de administrar el conjugado o la composición a un sujeto.
Otro objeto más de la presente invención es proporcionar el uso del conjugado o la composición en la preparación de fármacos para la prevención o el tratamiento de la obesidad.
Efectos ventajosos El conjugado que comprende oxintomodulina y Fe de inmunoglobulina de la presente invención reduce la ingesta de alimentos, suprime el vaciado gástrico y facilita la lipólisis sin provocar efectos secundarios, a diferencia de la oxintomodulina nativa, y también muestra excelentes efectos de activación de los receptores y sostenibilidad a largo plazo, en comparación con la oxintomodulina. Por lo tanto, se puede usar ampliamente en el tratamiento de la obesidad con seguridad y eficacia. A diferencia de la oxintomodulina nativa, el nuevo péptido de la presente invención reduce la ingesta de alimentos, suprime el vaciado gástrico y facilita la lipólisis sin provocar efectos secundarios, y también muestra excelentes efectos de activación de los receptores. Por lo tanto, se puede usar ampliamente en el tratamiento de la obesidad con seguridad y eficacia.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La FIG. 1 muestra un gráfico que muestra los cambios en la ingesta de alimentos de acuerdo con la dosis de administración de oxintomodulina o derivado de oxintomodulina.
La FIG. 2a muestra un gráfico que muestra el resultado de la purificación de oxintomodulina mono-PEGilada a través de una columna de purificación SOURCE S.
La FIG. 2b muestra un gráfico que muestra el resultado del mapeo de péptidos de la oxintomodulina mono-PEGilada purificada.
La FIG. 2c muestra un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen oxintomodulina y Fe de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SOURCE 15Q.
La FIG. 3a muestra un gráfico que muestra el resultado de la purificación de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEC ID N° 29) a través de una columna de purificación SOURCE S.
La FIG. 3b muestra un gráfico que muestra el resultado dé la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 29) y Fe de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SOURCE 15Q.
La FIG. 4a muestra un gráfico que muestra el resultado de la purificación de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEC ID N° 30) a través de una columna de purificación SOURCE S.
La FIG. 4b muestra un gráfico que muestra el resultado del mapeo de péptidos del derivado de oxintomodulina mono-PEGilada purificada (SEC ID N° 30).
La FIG. 4c muestra un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 30) y Fe de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SOURCE 15Q.
La FIG. 5a muestra un gráfico que muestra el resultado de la purificación de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEC ID N° 31) a través de una columna de purificación SOURCE S.
La FIG. 5b muestra un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 31) y Fe de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SOURCE 5Q.
La FIG. 6a muestra un gráfico que muestra el resultado de la purificación de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEC ID N° 2) a través de una columna de purificación SOURCE S.
La FIG. 6b muestra un gráfico que muestra el resultado del mapeo de péptidos de derivado de oxintomodulina mono-PEGilada purificada (SEC ID N° 2).
La FIG. 6c muestra un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 2) y Fe de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SOURCE 15Q.
La FIG. 6d muestra un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 2) y Fe de inmunoglobulina a través de una columna de purificación Source ISO.
La FIG. 7a muestra un gráfico que muestra el resultado de la purificación de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEC ID N° 3) a través de una columna de purificación SOURCE S.
La FIG. 7b muestra un gráfico que muestra el resultado del mapeo de péptidos de derivado de oxintomodulina mono-PEGilada purificada (SEC ID N° 3).
La FIG. 7c muestra un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 3) y Fe de inmunoglobulina a través de una columna de purificación Butyl FF.
La FIG. 7d muestra un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 3) y Fe de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SOURCE 15Q.
La FIG. 8a muestra un gráfico que muestra el resultado de la purificación de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEC ID N 0 23) a través de una columna de purificación SOURCE S.
La FIG. 8b muestra un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N 0 23) y Fe de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SOURCE 15Q.
La FIG. 8c muestra un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N 0 23) y Fe de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SOURCE ISO.
La FIG. 9a muestra un gráfico que muestra el resultado de la purificación de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEC ID N 0 24) a través de una columna de purificación SOURCE S.
La FIG. 9b muestra un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N 0 24) y Fe de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SOURCE 15Q.
La FIG. 9c muestra un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N 0 24) y Fe de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SOURCE ISO.
La FIG. 10a muestra un gráfico que muestra el resultado de la purificación de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEC ID N 0 25) a través de una columna de purificación SOURCE S.
La FIG. 10b muestra un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N 0 25) y Fe de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SOURCE 15Q.
La FIG. 10c muestra un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N 0 25) y Fe de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SOURCE ISO.
La FIG. 11a muestra un gráfico que muestra el resultado de la purificación de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEC ID N 0 28) a través de una columna de purificación SOURCE S.
La FIG. 11b muestra un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N 0 28) y Fe de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SOURCE 15Q.
La FIG. 11c muestra un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N 0 28) y Fe de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SOURCE ISO.
La FIG. 12 muestra un gráfico que muestra los cambios en el peso corporal de los ratones de acuerdo con el tipo y la dosis de administración de conjugados de derivado de oxintomodulina-Fc de inmunoglobulina.
La FIG. 13 muestra un gráfico que muestra los cambios en el peso corporal de ratones de acuerdo con el tipo y la dosis de administración de conjugados de derivado de oxintomodulina-Fc de inmunoglobulina.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN En un aspecto para lograr los objetos anteriores, la presente invención proporciona un conjugado que comprende oxintomodulina, una región Fe de inmunoglobulina y polímero no peptidílico, pudiéndose obtener el conjugado mediante la unión covalente de la oxintomodulina con la región Fe de inmunoglobulina a través del polímero no peptidílico.
Como se usa en el presente documento, el término "conjugado" significa un conjugado que comprende oxintomodulina y otros factores. Los otros factores pueden ser cualquier sustancia que pueda inducir un aumento de la estabilidad en la sangre, suspender la emisión a través del riñon u otros efectos útiles. En la presente invención, los factores pueden ser región Fe de inmunoglobulina. Preferentemente, el conjugado puede estar compuesto de una oxintomodulina y una región Fe de inmunoglobulina, que estén unidas por un polímero no peptidílico. El polímero no peptídico puede unir una oxintomodulina y una región Fe de inmunoglobulina a través de enlaces covalentes. Dos extremos terminales de polímero no peptidílico se pueden unir a un grupo amino o un grupo tiol de la región Fe de inmunoglobulina y derivados oxintomodulina, respectivamente.
El conjugado de la presente invención implica tener una mejor duración in vivo de la eficacia, en comparación con la oxintomodulina nativa, pudiendo incluir el conjugado de acción prolongada oxintomodulina preparada por modificación, sustitución, adición o supresión de secuencias de aminoácidos de la oxintomodulina nativa, oxintomodulina conjugada con un polímero biodegradable tal como polietilenglicol (PEG), oxintomodulina conjugada con una proteína de acción prolongada tal como albúmina o inmunoglobulina, oxintomodulina conjugada con ácido graso que tiene la capacidad de unirse a la albúmina en el cuerpo, o oxintomodulina encapsulada en nanopartículas biodegradables, pero el tipo del conjugado de acción prolongada no se limita a los mismos.
Como se usa en el presente documento, el término "oxintomodulina" significa un péptido derivado de un precursor de glucagón, pre-glucagón, e incluye una oxintomodulina nativa, precursores, derivados, fragmentos de los mismos y variantes de los mismos. Preferentemente, puede tener la secuencia de aminoácidos de SEC ID N° 1 (HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIA).
La expresión "variante de oxintomodulina" es un péptido que tiene una o más secuencias de aminoácidos diferentes de las de la oxintomodulina nativa, y significa un péptido que conserva la función de activación de los receptores de GLP-1 y glucagón, y se puede preparar mediante una cualquiera de entre sustitución, adición, supresión y modificación, o mediante una combinación de las mismas, en una parte de las secuencias de aminoácidos de la oxintomodulina nativa.
La expresión "derivado de oxintomodulina" incluye péptidos, derivados de péptidos o miméticos de péptidos que se preparan mediante la adición, supresión o sustitución de aminoácidos de oxintomodulina para activar tanto el receptor de GLP-1 como el receptor de glucagón en un nivel alto, en comparación a la oxintomodulina nativa.
La expresión "fragmento de oxintomodulina" significa un fragmento que tiene uno o más aminoácidos añadidos o suprimidos en el extremo N-terminal o C-terminal de la oxintomodulina nativa, en el que se pueden añadir aminoácidos de origen no natural (por ejemplo, aminoácido de tipo D), y que tiene una función de activación tanto del receptor de GLP-1 como del receptor de glucagón.
Cada uno de los procedimientos de preparación para las vanantes, los derivados y los fragmentos de oxintomodulina se pueden usar individualmente o en combinación. Por ejemplo, la presente invención incluye un péptido que tiene uno o más aminoácidos diferentes de los del péptido nativo y desaminación del resto de aminoácido N-terminal, y tiene una función de activación tanto del receptor de GLP-1 como del receptor de glucagón.
Los aminoácidos mencionados en el presente documento se abrevian de acuerdo con la regla de nomenclatura de la IUPAC-IUB como se indica a continuación: Alanina A; Arginina R Asparagina N; Ácido aspártico D Cisteína C; Ácido glutámico E Glutamina Q; Glicina G Histidina H; Isoleucina I Leucina L; Lisina K Metionina M; Fenilalanina F Prolina P; Serina S Treonina T; Triptófano W Tirosina Y; Valina V.
En la presente invención, el derivado de oxintomodulina engloba cualquier péptido que se prepara mediante sustituciones, adiciones, supresiones o modificaciones posteriores a la traducción (por ejemplo, metilación, acilación, ubiquitinación, unión coyalente intramolecular) en la secuencia de aminoácidos de la oxintomodulina (HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIA, SEC ID N° 1) para activar los receptores de glucagón y GLP-1 al mismo tiempo. Tras la sustitución o adición de aminoácidos, se puede usar cualquiera de los 20 aminoácidos que se encuentran comúnmente en las proteínas humanas, así como aminoácidos atípicos o no naturales. Las fuentes disponibles en el mercado de aminoácidos atípicos incluyen Sigma-Aldrich, Inc. ChemPep y Genzyme farmacéuticos. Los péptidos que incluyen estos aminoácidos y secuencias de péptidos atípicos se pueden sintetizar y adquirir de proveedores comerciales, por ejemplo, American Peptide Company o Bachem (EE.UU.) o AnyGen (Corea).
En una forma de realización específica, el derivado de oxintomodulina de la presente invención es un nuevo péptido que incluye los aminoácidos de la siguiente Fórmula 1.
R -X1 -X2-GTFTSD-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11 -X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22-X23-X24-R2 (Fórmula 1) en la que R1 es histidina, desamino-histidilo, dimetil-histidilo (/V-dimetil-histidilo), beta-hidroxiimidazopropionilo, 4-imidazoacetilo, beta-carboxi-imidazopropionilo o tirosina; XI es Aib (ácido aminosiobutírico), d-alanina, glicina, Sar (A/-metilglicina), serina o d-serina; X2 es ácido glutámico o glutamina; X3 es leucina o tirosina; X4 es serina o alanina; X5 es lisina o arginina; X6 es glutamina o tirosina; X7 es leucina o metionina; X8 es ácido aspártico o ácido glutámico; X9 es ácido glutámico, serina, ácido alfa-metil-glutámico o está eliminado; X10 es glutamina, ácido glutámico, lisina, arginina, serina o está eliminado; XI I es alanina, arginina, valina o está eliminado; X12 es alanina, arginina, serina, valina o está eliminado; X13 es lisina, glutamina, arginina, ácido alfa-metil-glutámico o está eliminado; X14 es el ácido aspártico, ácido glutámico, leucina o está eliminado; X15 es fenilalanina o está eliminado; X16 es isoleucina, valina o está eliminado; X 7 es alanina, cisteína, ácido glutámico, lisina, glutamina, ácido alfa-metil-glutámico o está eliminado; X18 es triptófano o está eliminado; X19 es alanina, isoleucina, leucina, serina, valina o está eliminado; X20 es alanina, lisina, metionina, glutamina, arginina o está eliminado; X2 es asparagina o está eliminado; X22 es alanina, glicina, treonina o está eliminado; X23 es cisteína, lisina o está eliminado; X24 es un péptido que tiene de 2 a 10 aminoácidos que consisten en combinaciones de alanina, glicina y serina, o está eliminado; y R2 es KRNRNNIA (SEC ID N° 35), GPSSGAPPPS (SEC ID N° 36), GPSSGAPPPSK (SEC ID N° 37), HSQGTFTSDYSKYLD (SEC ID N° 38), HSQGTFTSDYSRYLDK (SEC ID N° 39), HGEGTFTSDLSKQMEEEAVK (SEC 40) o está eliminado (excluido si la secuencia de aminoácidos de Fórmula 1 es idéntica a la de SEC ID N° 1).
Para mejorar la actividad de la oxintomodulina de tipo natural hacia el receptor de glucagón y el receptor de GLP-1 , el péptido de la presente invención se puede sustituir con 4-imidazoacetilo donde se elimina el carbono alfa de histidina de la posición 1 de la secuencia de aminoácidos representada por SEC ID N° 1, desamino-histidilo donde se elimina el grupo amino N-terminal, dimetil-histidilo (N-dimetil-histidilo) donde se modifica el grupo amino N-terminal con dos grupos metilo, beta- hidroxi-imidazopropionilo donde se sustituye el grupo amino N-terminal con un grupo hidroxilo, o beta-carboxi-imidazopropionilo donde se sustituye el grupo amino N-terminal con un grupo carboxilo. Además, la región de unión al receptor de GLP-1 se puede sustituir con aminoácidos que mejoren los enlaces hidrófobos e iónicos, o combinaciones de los mismos. Se puede sustituir una parte de la secuencia de oxintomodulina con la secuencia de aminoácidos de GLP-1 o exendina-4 para mejorar la actividad sobre el receptor de GLP-1.
Además, se puede sustituir una parte de la secuencia de oxintomodulina con una secuencia de estabilización de la hélice alfa. Preferentemente, los aminoácidos de las posiciones 1?, 14, 16, 20, 24 y 28 de la secuencia de aminoácidos de Fórmula 1 se pueden sustituir con aminoácidos o derivados de aminoácidos que consisten en Tyr(4-Me), Phe, Phe(4-Me), Phé(4-CI), Phe(4-CN), Phe(4-N02), Phe(4-NH2), Phg, Pal, Nal, Ala(2-tienilo) y Ala(benzotienilo), que son conocidos por estabilizar la hélice alfa, no habiendo limitaciones en el tipo ni el número de aminoácidos o derivados de aminoácidos de estabilización de la hélice alfa insertados. Preferentemente, los aminoácidos de las posiciones 10 y 14, 12 y 16,' 16 y 20, 20 y 24, y 24 y 28 también se pueden sustituir con ácido glutámico o lisina, respectivamente, para formar anillos, y no hay limitación en el número de anillos insertados. Lo más preferentemente, el péptido puede ser un péptido que tenga una secuencia de aminoácidos seleccionada de las siguientes Fórmulas 1 a 6.
En una realización específica, el derivado de oxintomodulina de la presente invención es un nuevo péptido que incluye la secuencia de aminoácidos de la siguiente Fórmula 2, en la que la secuencia de aminoácidos de la oxintomodulina se sustituye con la de la exendina o GLP-1.
R1-A-R3 (Fórmula 2) En otra forma de realización específica, el derivado de oxintomodulina de la presente invención es un nuevo péptido que incluye la secuencia de aminoácidos de la siguiente Fórmula 3, que se prepara mediante la unión de una parte de la secuencia de aminoácidos de oxintomodulina y una parte de la secuencia de aminoácidos de exendina o GLP-1 a través de un engarce de aminoácidos apropiado.
R1-BC-R4 (Fórmula 3) En otra realización específica más, el derivado de oxintomodulina de la presente invención es un nuevo péptido que incluye la secuencia de aminoácidos de la siguiente Fórmula 4, en la que una parte de la secuencia de aminoácidos de la oxintomodulina se sustituye con un aminoácido capaz de aumentar la afinidad de unión al receptor de GLP-1 , por ejemplo, se sustituye Leu de la posición 26, que se une con el receptor de GLP-1 mediante interacción hidrófoba, con el resto hidrófobo lie o Val.
R1-SQGTFTSDYSKYLD-D1-D2-D3-D4-D5-LFVQW-D6-D7-N-D8-R3 (Fórmula 4) En otra realización específica más, el derivado de oxintomodulina de la presente invención es un nuevo péptido que incluye la siguiente Fórmula 5, en la que una parte de la secuencia de aminoácidos se suprime, añade o sustituye con otro aminoácido con el fin de mejorar las actividades de la oxintomodulina nativa hacia el receptor de GLP-1 y el receptor de glucagón.
R1 -E -QGTFTSDYSKYLD-E2-E3-RA-E4-E5-FV-E6-WLMNT-E7-R5 (Fórmula 5) En las Fórmulas 2 a 5, R1 es el mismo que en la descripción de la Fórmula 1 ; A está seleccionada del grupo que consiste en SQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNT (SEC ID N° 41), SQGTFTSDYSKYLDEEAVRLFIEWLMNT (SEC ID N° 42), SQGTFTSDYSKYLDERRAQDFVAWLKNT (SEC ID N° 43), GQGTFTSDYSRYLEEEAVRLFIEWLKNG (SEC ID N° 44), GQGTFTSDYSRQMEEEAVRLFIEWLKNG (SEC ID N° 45), GEGTFTSDLSRQMEEEAVRLFIEWAA (SEC ID N 0 46) y SQGTFTSDYSRQMEEEAVRLFIEWLMNG (SÉC ID N 047); B está seleccionada del grupo que consiste en SQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNT (SEC ID N° 41), SQGTFTSDYSKYLDEEAVRLFIEWLMNT (SEC ID N° 42), SQGTFTSDYSKYLDERRAQDFVAWLKNT (SEC ID N° 43), GQGTFTSDYSRYLEEEAVRLFIEWLKNG (SEC ID N° 44), GQGTFTSDYSRQMEEEAVRLFIEWLKNG (SEC ID N° 45), GEGTFTSDLSRQMEEEAVRLFIEWAA (SEC ID N 46), SQGTFTSDYSRQMEEEAVRLFIEWLMNG (SEC ID N 0 47), GEGTFTSDLSRQMEEEAVRLFIEW (SEC ID N 048) y SQGTFTSDYSRYLD (SEC ID N 049); C es un péptido que tiene de 2 a 10 aminoácidos que consisten en combinaciones de alanina, glicina y serina; D1 es serina, ácido glutámico o arginina; D2 es arginina, ácido glutámico o serina; D3 es arginina, alanina o valina; D4 es arginina, valina o serina; D5 es glutamina, arginina o lisina; D6 es isoleucina, valina o serina; D7 es metionina, arginina o glutamina; D8 es treonina, glicina o alanina; E1 es serina, Aib, Sár, d-alanina o d-serina; E2 es serina o ácido glutámico; E3 es arginina o lisina; E4 es glutamina o lisina; E5 es ácido aspártico o ácido glutámico; E6 es glutamina, cisteína o lisina; E7 es cisteína, lisina o está eliminado; R3 es KRNRNNIA (SEC ID N° 35), GPSSGAPPPS (SEC ID N° 36) o GPSSGAPPPSK (SEC ID N° 37); R4 es HSQGTFTSDYSKYLD (SEC ID N° 38), HSQGTFTSDYSRYLDK (SEC ID N° 39) o HGEGTFTSDLSKQMEEEAVK (SEC ID N° 40); y R5 es KRNRNNIA (SEC ID N° 35), GPSSGAPPPS (SEC ID N° 36), GPSSGAPPPSK (SEC ID N° 37) o está eliminado (excluido si las secuencias de aminoácidos de las Fórmulas 2 a 5 son idénticas a la de SEC ID N° 1).
Preferentemente, el derivado de oxintomodulina de la presente invención puede ser un péptido nuevo de la siguiente Fórmula 6.
R1 -X1 -X2-GTFTSD-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11 -?12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22-X23-X24-R2 (Fórmula 6) en la que R1 es histidina, desamino-histidilo, 4-¡midazoacetilo o tirosina; X1 es Aib (ácido aminosiobutírico), glicina o serina; X2 es ácido glutámico o glutamina; X3 es leucina o tirosina; X4 es serina o alanina; X5 es lisina o arginina; X6 es glutamina o tirosina; X7 es leucina o metionina; X8 es ácido aspártico o ácido glutámico; X9 es ácido glutámico, ácido alfa-metil-glutámico o está eliminado; X 0 es glutamina, ácido glutámico, lisina, arginina o está eliminado; X11 es alanina, arginina o está eliminado; X12 es alanina, valina o está eliminado; X 3 es lisina, glutamina, arginina, ácido alfa-metil-glutámico o está eliminado; X14 es ácido aspártico, ácido glutámico, leucina o está eliminado; X15 es fenilalanina o está eliminado; X16 es isoleucina, valina o está eliminado; X17 es alanina, cisteína, ácido glutámico, glutamina, ácido alfa-metil-glutámico o está eliminado; X 8 es triptófano o está eliminado; X19 es alanina, isoleucina, leucina, valina o está eliminado; X20 es alanina, lisina,. metionina, arginina o está eliminado; X21 es asparagina o está eliminado; X22 es treonina o está eliminado; X23 es cisteína, lisina o está eliminado; X24 es un péptido que tiene de 2 a 10 aminoácidos que consiste en glicina o está eliminado, y R2 es KRNRNNIA (SEC ID N° 35), GPSSGAPPPS (SEC ID N° 36), GPSSGAPPPSK (SEC ID N° 37), HSQGTFTSDYSKYLD (SEC ID N° 38), HSQGTFTSDYSRYLDK (SEC ID N° 39), HGEGTFTSDLSKQMEEEAVK (SEC ID N° 40) o está eliminado (excluido si la secuencia de aminoácidos de Fórmula 6 es idéntica a la de la SEC ID N° 1) Más preferentemente, el derivado de oxintomodulina de la presente invención se puede seleccionar del grupo que consiste en los péptidos de SEC ID N° 2-34. Mucho más preferentemente, el derivado de oxintomodulina de la presente invención puede ser un derivado de oxintomodulina descrito en la Tabla 1 del Ejemplo 2-1.
La oxintomodulina tiene las actividades de los dos péptidos, el GLP-1 y el glucagón. El GLP-1 disminuye la glucosa en sangre, reduce la ingesta de alimentos y suprime el vaciado gástrico, y el glucagón aumenta la glucosa en sangre, facilita la lipólisis y disminuye el peso corporal mediante el aumento del metabolismo energético. Los diferentes efectos biológicos de los dos péptidos pueden causar efectos no deseados como el aumento de glucosa en sangre, si el glucagón muestra un efecto más dominante que el GLP-1 , o provocar náuseas y vómitos, si el GLP-1 muestra un efecto más dominante que el glucagón. Por ejemplo, el conjugado producido en el Ejemplo 10 que se presenta más adelante mostró una mayor afinidad por el receptor de GLP-1 que el producido en el Ejemplo 12, pero la eficacia del primero fue inferior a la del segundo como se muestra en el experimento in vivo del Ejemplo 18. Esto se podría deber a la mayor eficacia de los conjugados en relación con el receptor de glucagón del Ejemplo 12 a pesar de su baja eficacia en relación con el receptor de GLP-1. Por lo tanto, los derivados de oxintomodulina y sus conjugados de la presente invención no se limitan a aquellos derivados que muestran un aumento incondicional de las actividades. Por ejemplo, se pueden modificar los aminoácidos de las posiciones 1 y 1 1 de la oxintomodulina, que son conocidas por inhibir la actividad del glucagón, para controlar la proporción entre la actividad del glucagón y el GLP-1.
Los conjugados de la presente invención pueden inducir una mayor estabilidad en la sangre, suspender la emisión a través del riñon y cambiar la afinidad hacia los receptores mediante la unión de un vehículo con la oxintomodulina a través de un enlace covalente o la formación de microesferas. El vehículo que puede formar un conjugado que contiene oxintomodulina se puede seleccionar del grupo que consiste en albúmina, transferrina, anticuerpos, fragmentos de anticuerpos, elastina, heparina, polisacáridos tales como quitina, fibronectina y, más favorablemente, región Fe de ¡nmunoglobulina, la totalidad de los cuales puede aumentar la semivida en sangre de los conjugados cuando se unen a la oxintomodulina.
La expresión "región Fe de ¡nmunoglobulina", como se usa en el presente documento, se refiere a una proteína que contiene la región constante de cadena pesada 2 (CH2) y la región constante de cadena pesada 3 (CH3) de una inmuno-globulina, excluyendo las regiones variables de cadena pesada y cadena ligera, la región constante de cadena pesada 1 (CH1) y la región constante de cadena ligera 1 (CL1) de la inmunoglobulina. Se puede incluir además una región bisagra en la región constante de cadena pesada. Además, la región Fe de inmunoglobulina de la presente invención puede contener una parte o toda la región Fe, incluyendo la región constante de cadena pesada 1 (CH1) y/o la región constante de cadena ligera 1 (CL1), a excepción de las regiones variables de las cadenas pesadas y ligeras, siempre que tenga una función fisiológica sustancialmente similar a o mejor que la proteína nativa. Es más, la región Fe de inmunoglobulina puede ser un fragmento que tenga una supresión en una parte relativamente larga de la secuencia de aminoácidos de CH2 y/o CH3. Es decir, la región Fe de inmunoglobulina de la presente invención puede comprender 1) un dominio CH1 , un dominio CH2, un dominio CH3 y un dominio CH4; 2) un dominio CH1 y un dominio CH2; 3) un dominio CH1 y un dominio CH3 ; 4) un dominio CH2 y un dominio CH3; 5) una combinación de uno o más dominios y una región bisagra de inmunoglobulina (o una parte de la región bisagra); y 6) un dímero de cada dominio de las regiones constantes de cadena pesada y la región constante de cadena ligera.
La región Fe de inmunoglobulina de la presente invención incluye una secuencia nativa de aminoácidos y un derivado de la misma secuencia (muíante). Un derivado de secuencia de aminoácidos es una secuencia que se diferencia de la secuencia de aminoácidos nativa en una supresión, una inserción, una sustitución no conservadora o conservadora, o combinaciones de las mismas de uno o más restos de aminoácidos. Por ejemplo, en un Fe de IgG, se pueden usar restos de aminoácidos conocidos por ser importantes en la unión, en las posiciones 214 a 238, 297 a 299, 318 a 322 o 327 a 331 , como diana adecuada para la modificación.
Además, son posibles otros varios derivados, incluyendo uno en el que se elimine una región capaz de formar un enlace disulfuro, o se eliminen ciertos restos de aminoácidos del extremo N-terminal de una forma Fe nativa o se añada un resto de metionina a la misma. Además, para eliminar funciones efectoras, se puede producir una supresión en un sitio de unión del complemento, tal como un sitio de unión a C1q y un sitio de ADCC (citotoxicidad mediada por células dependientes de anticuerpos). En el documento WO 97/34631 y el documento WO 96/32478, se desvelan técnicas de preparación de tales derivados de la secuencia de la región Fe de inmunoglobulina.
Los intercambios de aminoácidos en proteínas y péptidos que generalmente no alteran la actividad de las proteínas o los péptidos son conocidos en la técnica (H. Neurath, R. L. Hill, "The Proteins", Academic Press, Nueva York, 1979). Los intercambios que se producen más comúnmente son Ala/Ser, Val/lie, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Thy/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/lie, Leu/Val, Ala/Glu y Asp/Gly, en ambos sentidos. Además, si se desea, es posible modificar la región Fe mediante fosforilación, sulfatación, acrilación, glucosilación, metilación, farnesilación, acetilación, amidación, y similares.
Los derivados de Fe anteriormente mencionados son derivados que tienen una actividad biológica idéntica a la región Fe de la presente invención o mejor estabilidad estructural, por ejemplo, frente al calor, pH, o similares.
Además, estas regiones Fe se pueden obtener de formas nativas aisladas de seres humanos y otros animales, incluyendo vacas, cabras, cerdos, ratones, conejos, hámsteres, ratas y cobayas, o pueden ser recombinantes o derivados de las mismas, obtenidas a partir de células animales o microorganismos transformados. En el presente documento, se pueden obtener de una inmunoglobulina nativa mediante el aislamiento de inmunoglobulinas enteras de organismos humanos o animales, y su tratamiento con una enzima proteolítica. La papaína digiere la inmunoglobulina nativa en las regiones Fab y Fe, y el tratamiento con pepsina genera la producción de fragmentos pF'c y F(ab)2 . Estos fragmentos se pueden someter, por ejemplo, a cromatografía de exclusión por tamaño para aislar Fe o pF'c. Preferentemente, una región Fe derivada de seres humanos es una región Fe de inmunoglobulina recombinante que se obtiene de un microorganismo.
Además, la región Fe de inmunoglobulina de la presente invención pueden estar en la forma que tiene cadenas de azúcar nativas, mayores cadenas de azúcar en comparación con una forma nativa o menores cadenas de azúcar en comparación con la forma nativa, o puede estar en una forma no glucosilada. El aumento, la disminución o la eliminación de las cadenas de azúcar de Fe de inmunoglobulina se pueden lograr mediante procedimientos comunes en la técnica tales como un procedimiento químico, un procedimiento enzimático y un procedimiento de ingeniería genética usando un microorganismo. La eliminación de las cadenas de azúcar de una región Fe produce una fuerte disminución de la afinidad de unión hacia la parte de C1q del primer componente del complemento C1 y una disminución o pérdida de citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos o citotoxicidad dependiente del complemento, no induciendo de ese modo respuestas inmunes innecesarias in vivo. En este sentido, una región Fe de inmunoglobulina de una forma desglucosilada o aglucosilada puede ser más adecuada para el objeto de la presente invención como vehículo farmacológico.
Como se usa en el presente documento, el término "desglucosilación" se refiere a la eliminación de restos de azúcar enzimáticamente de una región Fe, y el término "aglucosilación" significa que una región Fe es producida en una forma no glucosilada por un procariota, preferentemente E. coli.
Entretanto, la región Fe de inmunoglobulina se puede obtener de seres humanos u otros animales, incluyendo vacas, cabras, cerdos, ratones, conejos, hámsteres, ratas y cobayas, y preferentemente de seres humanos.
Además, la región Fe de inmunoglobulina puede ser una región Fe derivada de IgG, IgA, IgD, IgE e IgM, o que está hecha mediante combinaciones de las mismas o sus híbridos. Preferentemente, se obtiene de IgG o IgM, que se encuentran entre las proteínas más abundantes de la sangre humana, y lo más preferentemente, de IgG, que es conocida por aumentar las semividas de las proteínas de unión al ligando.
Por otro lado, el término "combinación", como se usa en el presente documento, significa que los polipéptidos que codifican regiones Fe de inmunoglobulina de una sola cadena del mismo origen están unidos a un polipéptido de una sola cadena de un origen diferente para formar un dímero o un multímero. Es decir, se puede formar un dímero o un multímero a partir de dos o más fragmentos seleccionados del grupo que consiste en fragmentos Fe de IgG, Fe de IgA , Fe de IgM, Fe de IgD y Fe de IgE.
La expresión "polímero no peptidílico" se refiere a un polímero biocompatible que incluye dos o más unidades de repetición unidas entre sí por cualquier enlace covalente con exclusión de un enlace peptídico. En la presente invención, el polímero no peptidílico se puede usar indistintamente con el engarce no peptidílico.
El polímero no peptidílico útil en la presente invención se puede seleccionar del grupo que consiste en un polímero biodegradable, un polímero lipídico, quitina, ácido hialurónico y una combinación, de los mismos, y preferentemente, el polímero biodegradable puede ser polietilenglicol, polipropilenglicol, copolímero de etilenoglicol-propilenglicol, poliol polioxietilado, alcohol polivinílico, polisacáridos, dextrano, éter poliviniletílico, ácido poliláctico (PLA) o ácido poliláctico-glicólico (PLGA), y más preferentemente, es polietilenglicol (PEG). Además, en el ámbito de la presente invención, se pueden incluir derivados de los mismos conocidos en la técnica y derivados que se preparan fácilmente mediante un procedimiento conocido en la técnica.
El engarce peptídico que se usa en la proteína de fusión obtenida mediante un procedimiento de fusión en marco convencional tiene los inconvenientes de que es escindido fácilmente in vivo por una enzima proteolítica y, por lo tanto, no se puede obtener un efecto suficiente de aumento de la semivida en suero del fármaco activo por un vehículo como era de esperar. Sin embargo, en la presente invención, se puede usar el polímero que tiene resistencia a la enzima proteolítica para mantener una semivida en suero del péptido similar a la del vehículo. Por lo tanto, se puede usar cualquier polímero no peptidílico sin limitación, siempre que sea un polímero que tenga la función anteriormente mencionada, es decir, un polímero que tenga resistencia a la enzima proteolítica in vivo. El polímero no peptidílico tiene un peso molecular en el intervalo de 1 a 100 kDa y, preferentemente, de 1 a 20 kDa. El polímero no peptidílico de la presente invención, unido a la región Fe de inmunoglobulina, puede ser un polímero o una combinación de diferentes tipos de polímeros.
El polímero no peptidílico usado en la presente invención tiene un grupo reactivo capaz de unirse a la región Fe de inmunoglobulina y al fármaco proteico. El polímero no peptidílico tiene un grupo reactivo en ambos extremos que se selecciona preferentemente del grupo que consiste en un aldehido reactivo, un propionaldehído, un butiraldehído, una maleimida y un derivado de succinimida. El derivado de succinimida puede ser propionato de succinimidilo, hidroxi-succinimidilo, carboximetilo de succinimidilo o carbonato de succinimidilo. En particular, cuando el polímero no peptidílico tiene un grupo aldehido reactivo en ambos extremos del mismo, se une eficazmente por ambos extremos con un polípéptido fisiológicamente activo y una inmunoglobulina con un mínimo de reacciones inespecíficas. Un producto final generado mediante alquilación reductora por un enlace de tipo aldehido es mucho más estable que el unido por un enlace de tipo amida. El grupo reactivo aldehido se une selectivamente a un extremo N-terminal a un pH bajo, y se une a un resto de lísina para formar un enlace covalente a un pH alto, tal como pH 9,0. Los grupos reactivos de ambos extremos del polímero no peptidílico pueden ser iguales o diferentes. Por ejemplo, el polímero no peptidílico puede poseer un grupo maleimida en un extremo, y un grupo aldehido, un grupo propionaldehído o un grupo butiraldehído en el otro extremo. Cuando se usa un polietilenglicol que tiene un grupo hidroxi reactivo en ambos extremos del mismo como el polímero no peptidílico, el grupo hidroxi se puede activar en varios grupos reactivos mediante reacciones químicas conocidas, o se puede usar un polietilenglicol que tenga un grupo reactivo modificado disponible en el mercado para preparar el conjugado de acción prolongada de la presente invención.
En el conjugado de la presente invención, puede ser que ambos extremos del polímero no peptidílico que tenga dos grupos terminales reactivos estén unidos a un grupo amina o un grupo tiol de la región Fe de inmunoglobulina y derivados oxintomodulina, respectivamente.
El polímero no peptidílico tiene un grupo reactivo en ambos extremos que se selecciona preferentemente del grupo que consiste en un grupo aldehido, un grupo propionaldehído, un grupo butiraldehído, un grupo maleimida y un derivado de succinimida reactivos. El derivado de succinimida puede ser propionato de succinimidilo, hidroxi-succinimidilo, carboximetilo de succinimidilo o carbonato de succinimidilo.
Los dos grupos terminales reactivos del polímero no peptidílico pueden ser ¡guales o diferentes entre sí. Por ejemplo, el polímero no peptídico puede poseer un grupo maleimida en un extremo y un grupo aldehido, un grupo propionaldehído o un grupo butiraldehído en el otro extremo. Por ejemplo, cuando el polímero no peptidílico tiene un grupo aldehido reactivo en un grupo terminal, y un grupo maleimida en el otro grupo terminal, se une eficazmente por ambos extremos con un polipéptido fisiológicamente activo y una inmunoglobulina con un mínimo de reacciones inespecíficas. De acuerdo con los ejemplos de la presente invención, los conjugados se prepararon mediante la unión de la oxintomodulina o derivado de la misma y la región Fe de inmunoglobulina a través de un enlace covalente usando PEG, que es un polímero no peptidílico que incluye el grupo propionaldehído solo o tanto el grupo maleimida como el grupo aldehido.
Los conjugados de la presente invención muestran una excelente actividad sobre el receptor de GLP-1 y el receptor de glucagón, en comparación con la oxintomodulina nativa, y la semivida en sangre se aumenta mediante la unión con la región Fe para mantener la actividad in vivo durante un largo período de tiempo.
En otro aspecto más, la presente invención proporciona una composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento de la obesidad que comprende el péptido.
Como se usa en el , presente documento, el término "prevención" significa todas las acciones mediante las cuales se restringe o se retarda la aparición de la enfermedad. En la presente invención, "prevención" significa que la aparición de la obesidad a partir de factores tales como un aumento del peso corporal o la grasa corporal se restringe o se retarda mediante la administración de los conjugados de la presente invención.
Como se usa en el presente documento, el término "tratamiento" significa todas las acciones mediante las cuales los síntomas de la enfermedad se han aliviado o mejorado. En la presente invención, "tratamiento" significa que los síntomas de la obesidad se alivian o mejoran mediante la administración de los conjugados de la presente invención, produciendo una reducción del peso corporal o de la grasa corporal.
Como se usa en el presente documento, el término "obesidad" implica la acumulación de una cantidad en exceso de tejido adiposo en el cuerpo, y se considera indicador de obesidad un índice de masa corporal (peso corporal (kg) dividido entre la altura al cuadrado (m)) superior a 25. La obesidad está generalmente causada por un desequilibrio energético, cuando la cantidad de la ingesta dietética supera la cantidad de energía gastada durante un largo período de tiempo. La obesidad es una enfermedad metabólica que afecta a todo el cuerpo, y aumenta el riesgo de padecer diabetes, hiperlipidemia, disfunción sexual, artritis y enfermedades cardiovasculares, y en algunos casos, se asocia con la incidencia del cáncer.
Los conjugados de la presente invención, que se preparan uniendo oxintomodulina o un derivado de la misma con la región Fe de inmunoglobulína, muestran una excelente afinidad de unión hacia los receptores de glucagón y GLP-1 (Tabla 3) y una excelente resistencia a las enzimas proteolíticas in vivo con el fin de presentar la actividad in vivo durante un largo período de tiempo, mostrando así excelentes efectos contra la obesidad, tales como reducciones del peso corporal (Fig. 12).
La composición farmacéutica de la presente invención puede incluir además un vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable. Como se usa en el presente documento, la expresión "farmacéuticamente aceptable" significa que la composición es suficiente para lograr los efectos terapéuticos sin provocar efectos secundarios perjudiciales, y se puede determinar fácilmente en función del tipo de las enfermedades, la edad del paciente, el peso corporal, el estado de salud, el género y la sensibilidad al fármaco, la vía de administración, el modo de administración, la frecuencia de administración, la duración del tratamiento, los fármacos usados en combinación o coincidentes con la composición de la presente invención, y otros factores conocidos en medicina.
La composición farmacéutica que incluye el derivado de la presente invención puede incluir además un vehículo farmacéuticamente aceptable. Para la administración oral, el vehículo puede incluir, pero sin limitación, un aglutinante, un lubricante, un desintegrante, un excipiente, un solubilizante, un agente dispersante, un estabilizador, un agente de suspensión, un colorante y un saborizante. Para las preparaciones inyectables, el vehículo puede incluir un agente tampón, un agente conservante, un analgésico, un solubilizante, un agente isotónico y un estabilizador.
Para las preparaciones de administración tópica, el vehículo puede incluir una base, un excipiente, un lubricante y un agente conservante.
La composición de la presente invención se puede formular en una variedad de formas de dosificación en combinación con los vehículos farmacéuticamente aceptables mencionados antenormente. Por ejemplo, para la administración oral, la composición farmacéutica se puede formular en comprimidos, trociscos, cápsulas, elixires, suspensiones, jarabes u obleas. Para preparaciones inyectables, la composición farmacéutica se puede formular en una ampolla como una forma de dosificación única o un envase multidosis. La composición farmacéutica también se puede formular en soluciones, suspensiones, comprimidos, pildoras, cápsulas y preparaciones de acción prolongada.
Por otro lado, los ejemplos del vehículo, excipiente y diluyente adecuados para las formulaciones farmacéuticas incluyen lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, xilitol, eritritol, maltitol, almidón, goma de acacia, alginato, gelatina, fosfato de calcio, silicato de calcio, celulosa, metilcelulosa, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, agua, hidroxibenzoato metílico, hidroxibenzoato propílico, talco, estearato de magnesio y aceites minerales. Además, las formulaciones farmacéuticas pueden incluir cargas, agentes anticoagulantes, lubricantes, humectantes, saborizantes y antisépticos.
Además, la composición farmacéutica de la presente invención puede tener cualquier formulación seleccionada del grupo que consiste en comprimidos, pildoras, polvos, gránulos, cápsulas, suspensiones, líquidos para uso interno, emulsiones, jarabes, soluciones acuosas estériles, disolventes no acuosos, formulaciones liofilizadas y supositorios.
Además, la composición se puede formular en una sola forma de dosificación adecuada para el cuerpo del paciente, y preferentemente se formula en una preparación útil para fármacos peptídicos de acuerdo con el procedimiento típico del campo farmacéutico de manera que se administra por una vía oral o parenteral tal como mediante administración cutánea, intravenosa, intramuscular, intraarterial, intramedular, intraventricular, pulmonar, transdérmica, subcutánea, intraperitoneal, intranasal, intracolónica, tópica, sublingual, vaginal o rectal, pero sin limitarse a las mismas.
La composición se puede usar mediante la mezcla con una variedad de vehículos farmacéuticamente aceptables tales como solución salina fisiológica o disolventes orgánicos. Con el fin de aumentar la estabilidad o la capacidad de absorción, se pueden usar carbohidratos tales como glucosa, sacarosa o dextrano, antioxidantes tales como ácido ascórbico o glutatión, agentes quelantes, proteínas de bajo peso molecular u otros estabilizadores.
La dosis y frecuencia de administración de la composición farmacéutica de la presente invención se determinan por el tipo de principio activo, junto con varios factores tales como la enfermedad que se va a tratar, la vía de administración, la edad, el sexo y el peso corporal del paciente, así como la gravedad de la enfermedad.
La dosis total eficaz de la composición de la presente invención se puede administrar a un paciente en una sola dosis, o se puede administrar durante un largo período de tiempo en dosis múltiples de acuerdo con un protocolo de tratamiento fraccionado. En la composición farmacéutica de la presente invención, el contenido de principio activo puede variar dependiendo de la gravedad de la enfermedad. Preferentemente, la dosis diaria total del péptido de la presente invención puede ser de aproximadamente 0,0001 µ9 a 500 mg por 1 kg de peso corporal de un paciente. Sin embargo, la dosis eficaz del péptido se determina considerando varios factores, incluyendo la edad, el peso corporal, el estado salud, el sexo, la gravedad de la enfermedad, la dieta y la tasa de secreción del paciente, además de la vía de administración y la frecuencia del tratamiento de la composición farmacéutica. En vista de lo expuesto, los expertos en la materia pueden determinar fácilmente una dosis eficaz adecuada para el uso particular de la composición farmacéutica de la presente invención. La composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención no se limita particularmente a la formulación, ni a la vía y el modo de administración, siempre que muestre los efectos de la presente invención.
La composición farmacéutica de la presente invención muestra una excelente duración in vivo de la eficacia y del título, reduciéndose de este modo notablemente el número y la frecuencia de administración de la misma.
Por otra parte, la composición farmacéutica se puede administrar sola o en combinación o coincidente con otras formulaciones farmacéuticas que muestran efectos profilácticos o terapéuticos sobre la obesidad. Las formulaciones farmacéuticas que muestran efectos profilácticos o terapéuticos sobre la obesidad no se limitan a ninguna en particular, y pueden incluir un agonista del receptor de GLP-1 , un agonista del receptor de leptina, un inhibidor de la DPP-IV, un antagonista del receptor Y5, un antagonista del receptor de la hormona concentradora de melanina (MCH), un agonista del receptor Y2/3, un agonista del receptor MC3/4, un inhibidor de la lipasa gástrica/pancreática, un agonista de 5HT2c, un agonista del receptor ß3?, un agonista del receptor de amilina, un antagonista de grelina y/o un antagonista del receptor de grelina.
En otro aspecto más, la presente invención proporciona un procedimiento para prevenir o tratar la obesidad que comprende la etapa de administrar a un sujeto el conjugado o la composición farmacéutica que incluye el mismo.
Como se usa en el presente documento, el término "administración" significa la introducción de una cantidad de una sustancia predeterminada en un paciente mediante un determinado procedimiento adecuado. La composición de la presente invención se puede administrar a través de cualquiera de las vías comunes, siempre que sea capaz de llegar a un tejido deseado, por ejemplo, pero sin limitación, administración intraperitoneal, intravenosa, intramuscular, subcutánea, intradérmica, oral, tópica, intranasal, intrapulmonar o intrarrectal. Sin embargo, ya que los péptidos se digieren tras la administración oral, los principios activos de una composición para la administración oral deberían estar recubiertos o formularse para su protección contra la degradación en el estómago.
En la presente invención, el término "sujeto" se refiere a aquellos sospechosos de tener obesidad, lo que significa los mamíferos, incluyendo seres humanos, ratones y ganado, que tienen obesidad o que tienen la posibilidad de tener obesidad. Sin embargo, se incluye, sin limitación, cualquier sujeto que se vaya a tratar con el péptido o la composición farmacéutica de la presente invención. La composición farmacéutica que incluye el péptido de la presente invención se administra a un sujeto sospechoso de tener obesidad, tratando de este modo eficazmente al sujeto.
La obesidad es como se ha descrito anteriormente.
El procedimiento terapéutico de la presente invención puede incluir la etapa de administrar la composición que incluye el péptido en una cantidad farmacéuticamente eficaz. La dosis diaria total se debería determinar a través del juicio médico apropiado de un médico, y administrarse una o varias veces. Con respecto a los objetos de la presente invención, el nivel de dosis terapéuticamente eficaz específica para cualquier paciente en particular puede variar dependiendo de varios factores bien conocidos en la técnica médica, incluyendo el tipo y grado de la respuesta por alcanzar, las composiciones concretas conforme a si se usan otros agentes con las mismas o no, la edad, el peso corporal, el estado de salud, el sexo y la dieta del paciente, el tiempo y la vía de administración, la tasa de secreción de la composición, el período de tiempo de tratamiento, otros fármacos usados en combinación o coincidentes con la composición de la presente invención, y factores similares bien conocidos en las técnicas médicas.
En otro aspecto más, la presente invención proporciona un uso del conjugado o de la composición farmacéutica que incluye el mismo en la preparación de fármacos para la prevención o el tratamiento de la obesidad.
Modo de la invención De aquí en adelante, se describirá la presente invención más detalladamente con referencia a los siguientes ejemplos. Sin embargo, dichos ejemplos solamente son a efectos ilustrativos, y la invención no pretende limitarse a los mismos.
Ejemplo 1. Producción de la línea celular activa in vitro Ejemplo 1-1 : Producción de línea celular que muestra la respuesta de cAMP a GLP-1 Se realizó una PCR usando una región correspondiente al ORF (marco de lectura abierto) en ADNc (OriGene Technologies, Inc. EE.UU.) de gen de receptor de GLP-1 humano como molde, y los siguientes cebadores directo e inverso que incluían cada uno de los sitios de restricción Hindlll y EcoRI para obtener un producto de PCR.
Cebador directo: 5'-CCCGGCCCCCGCGGCCGCTATTCGAAATAC-3' (SEC ID N° 47).
Cebador inverso: 5'-GAACGGTCCGGAGGACGTCGACTCTTAAGATAG-3' (SEC ID N° 48).
Se clonó el producto de PCR en el vector de expresión de células animales conocido xOGC/dhfr para preparar un vector xOGC/GLP1 R recombinante.
Se transfectó línea celular CHO DG44 cultivada en medio DMEM/F12 (SBF al 10 %) con el vector recombinante x0GC/GLP1 R usando Lipofectamine (Invitrogen, EE.UU.), y se cultivó en un medio de selección que contenía 1 mg/ml de G418 y metotraxato 10 nM. Se seleccionaron líneas celulares de clones individuales de la misma mediante una técnica de dilución límite, y finalmente, se seleccionó de la misma una línea celular que mostraba una excelente respuesta de cAMP hacia GLP-1 de una manera dependiente de la concentración.
Ejemplo 1-2: Producción de línea celular que muestra respuesta de cAMP hacia el glucagón Se realizó una PCR usando una región correspondiente al ORF en ADNc (OriGene Technologies, Inc. EE.UU.) de gen de receptor de glucacón humano como molde, y los siguientes cebadores directo e inverso que incluían cada uno de los sitios de restricción EcoRI y Xhol para obtener un producto de PCR.
Cebador directo: 5'-CAGCGACACCGACCGTCCCCCCGTACTTAAGGCC-3' (SEC ID N° 49).
Cebador inverso: 5'-CTAACCGACTCTCGGGGAAGACTGAGCTCGCC-3' (SEC ID N° 50).
Se clonó el producto de PCR en el vector de expresión de células animales conocido xOGC/dhfr para preparar un vector xOGC/GCGR recombinante.
Se transfectó línea celular CHO DG44 cultivada en medio DMEM/F12 (SBF al 10 %) con el vector recombinante xOGC/GCGR usando Lipofectamine, y se cultivó en un medio de selección que contenía 1 mg/ml de G418 y metotraxato 10 nM. Se seleccionaron líneas celulares de clones individuales de la misma mediante una técnica de dilución límite, y finalmente, se seleccionó de la misma una línea celular que mostraba una excelente respuesta de cAMP hacia el glucacón de una manera dependiente de la concentración.
Ejemplo 2. Ensayo sobre la actividad in vitro de derivados de oxintomodulina Ejemplo 2-1 : Síntesis de derivados de oxintomodulina Para medir las actividades in vitro de los derivados de oxintomodulina, se sintetizaron derivados de oxintomodulina que tenían las siguientes secuencias de aminoácidos (Tabla 1 ).
[Tabla 1] Oxintomodulina y derivados de oxintomodulina En la Tabla 1 , los aminoácidos en negrita y subrayados representan la formación de anillos, y los aminoácidos representados por X significan un aminoácido no nativo, ácido alfa-metil-glutámico. Además, CA representa 4-imidazoacetilo y DA representa desamino-histidilo.
Ejemplo 2-2: Ensayo sobre la actividad in vitro de los derivados de oxintomodulina Para medir las eficacias contra la obesidad de los derivados de oxintomodulina sintetizados en el Ejemplo 2-1 , se midió la actividad de las células in vitro usando las líneas celulares preparadas en los Ejemplos 1-1 y 1-2.
Las líneas celulares fueron las preparadas mediante la transfección de CHO (ovario de hámster chino) para expresar el gen del receptor de GLP-1 humano y el gen del receptor de glucagón humano, respectivamente. Por lo tanto, eran adecuadas para medir las actividades de GLP-1 y del glucagón. Así pues, se midió la actividad de cada derivado de oxintomodulina usando cada línea celular transformada.
En concreto, se subcultivó cada línea celular dos o tres veces a la semana, y se dividió en alícuotas en cada pocilio de una placa de 96 pocilios a una densidad de 1 x 105, tras lo que se realizó un cultivo durante 24 horas.
Se lavaron las células cultivadas con tampón KRB, se suspendieron en 40 mi de tampón KRB que contenía IBMX 1 mM y se dejaron a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se diluyeron oxintomodulina (SEC ID N° 1) y derivados de oxintomodulina (representados por SEC ID N° 2-6, 8, 0-13, 17, 18, 23-25, 27, 28 y 32-34) de 1.000 nM a 0,02 nM mediante una dilución en serie de 5 veces, y se añadieron cada 40 mi de la misma a las células y se cultivaron a 37 °C durante 1 hora en una incubadora de C02. A continuación, se añadieron 20 mi de tampón de lisis celular para la lisis celular, y se aplicaron los lisados celulares a un kit de ensayo de cAMP (Molecular Device, EE.UU.) para medir las concentraciones de cAMP. Se calcularon los valores de CE50 de las mismas, y se compararon entre sí. En la siguiente Tabla 2, se muestran los valores de CE50.
[Tabla 2] Comparación de las actividades in vitro para el receptor de GLP-1 y el receptor de glucagón entre la oxintomodulina y los derivados de oxintomodulina.
Como se muestra en la Tabla 2, hubo derivados de oxintomodulina que mostraron excelentes actividades in vitro y diferentes proporciones de actividades sobre el receptor de GLP-1 y el receptor de glucagón, en comparación con la oxintomodulina nativa de la SEC ID N °. 1.
Se sabe que la oxintomodulina activa tanto el receptor de GLP-1 como el receptor de glucagón para suprimir el apetito, facilitar la lipólisis y promover la saciedad, mostrando de ese modo efectos contra la obesidad. Los derivados de oxintomodulina de acuerdo con la presente invención muestran mayores actividades in vitro tanto sobre el receptor de GLP-1 como sobre el receptor de glucagón que la oxintomodulina de tipo natural, y por lo tanto, se pueden usar como un agente terapéutico para la obesidad con eficacias superiores a las de la oxintomodulina conocida.
Ejemplo 3. Ensayo sobre la actividad in vivo de los derivados oxintomodulina Para medir la actividad terapéutica in vivo de los derivados de oxintomodulina, se examinaron los cambios en la ingesta de alimentos mediante la administración de derivados de oxintomodulina a ratones ob/ob usando oxintomodulina nativa como control.
En concreto, se mantuvieron en ayunas durante 16 horas ratones ob/ob obesos y diabéticos, comúnmente usados para analizar las eficacias de agentes terapéuticos para la obesidad y la diabetes, y se administraron 1 o 10 mg/kg de oxintomodulina, o 0,02; 0,1 ; 1 o 10 mg/kg del derivado de oxintomodulina de SEC ID N° 2. A continuación, se examinó la ingesta de alimentos durante 2 horas (Figura 1). La FIG. 1 es un gráfico que muestra los cambios en la ingesta de alimentos de acuerdo con la dosis de administración de oxintomodulina o derivado de oxintomodulina. Como se muestra en la FIG. 1 , la administración de 1 mg/kg de derivado de oxintomodulina mostró mejores efectos inhibidores sobre la ingesta de alimentos que la administración de 10 mg/kg de oxintomodulina.
Tomados en conjunto, los derivados de oxintomodulina de la presente invención tienen efectos contra la obesidad mucho más altos que los de la oxintomodulina de tipo natural, a pesar de administrarse a una dosis más baja, lo que indica una mejora en cuanto a los problemas sobre la necesidad de administrar una dosis más alta tres veces al día de oxintomodulina de tipo natural por mostrar efectos contra la obesidad inferiores.
Ejemplo 4: Preparación de conjugados que incluyen oxintomodulina y Fe de inmunoglobulina En primer lugar, para la PEGilación del resto de lisina en la posición 30 de la secuencia de aminoácidos de la oxintomodulina (SEC ID N° 1) con PEG PropionALD(2) 3,4 K (PEG con dos grupos propilaldehído, NOF, Japón), se hicieron reaccionar la oxintomodulina y el PEG PropionALD(2) 3,4 K a una relación molar de 1 :12 con la concentración de proteína de 5 mg/ml a 4 °C durante 4,5 horas. En ese momento, se llevó a cabo la reacción en una mezcla de disolventes de tampón de borato de Na 100 mM (pH 9,0) e isopropanol al 45 %, y se añadió cianoborohidruro de sodio 20 mM (cianoborohidruro (SCB, NaCNBH3), NaCNBH3) a la misma como agente de reducción. Una vez completada la reacción, se aplicó la mezcla de reacción a una SOURCE S (XK16, Amersham Biosciences) para purificar la oxintomodulina que tenía lisina mono-pegilada (columna: SOURCE S (XK16, Amersham Biosciences), caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0? 3 % 1 min B? 40 % 222 min B (A: citrato de Na 20 mM, pH 3,0 + etanol al 45 %, B: A + KCI 1 M)) (Fig. 2a). La FIG. 2a es un gráfico que muestra el resultado de la purificación de la oxintomodulina mono-PEGilada a través de una columna de purificación SOURCE S. Se examinó la mono-PEGilación de los picos eluidos mediante SDS-PAGE, y se examinó la selectividad de la lisina mediante mapeo de péptidos usando Asp-N proteasa (FIG. 2b). La FIG. 2b es un gráfico que muestra el resultado del mapeo de péptidos de la oxintomodulina mono-PEGilada purificada.
A continuación, se hicieron reaccionar la oxintomodulina mono-PEGilada y Fe de inmunoglobulina en una relación molar de 1 :10 con la concentración de proteína de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En ese momento, se llevó a cabo la reacción en tampón de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se añadió SCB 20 mM a la misma como agente reductor. Una vez completada la reacción, se aplicó la mezcla de reacción a una columna de purificación SOURCE 15Q para purificar los conjugados que incluían oxintomodulina y Fe de inmunoglobulina (columna: SOURCE 15Q (XK16, Amersham Biosciences), caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0? 20 % 100 min B (A: Tris-HCI 20 mM, pH 7,5; B: A + NaCI 1 M)) (FIG. 2c). La FIG. 2c es un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen oxintomodulina y Fe de inmunoglobulina.
Ejemplo 5: Preparación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N 0 29) y Fe de inmunoglobulina En primer lugar, para la PEGilación de resto de lisina en la posición 30 de la secuencia de aminoácidos de derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 29) con PEG PropionALD(2) 3,4 K, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 29) y el PEG PropionALD(2) 3,4 K en una relación molar de 1 :12 con la concentración de proteína de 5 mg/ml a 4 °C durante 4,5 horas. En ese momento, se llevó a cabo la reacción en una mezcla de disolventes de tampón de borato de Na 100 mM (pH 9,0) e isopropanol al 45 %, y se añadió SCB 20 mM a la misma como agente reductor. Una vez completada la reacción, se aplicó la mezcla de reacción a una SOURCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tenía lisiha mono-pegilada (columna: SOURCE S, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0? 3 % 1 min B -» 40 % 222 min B (A: citrato de Na 20 mM, pH 3,0 + etanol al 45 %, B: A + KCI 1 M)) (Fig. 3a). La FIG. 3a es un gráfico que muestra el resultado de la purificación de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEC ID N° 29) a través de una columna de purificación SOURCE S.
A continuación, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina mono- PEGilada (SEC ID N° 29) y Fe de inmunoglobulina en una relación molar de 1 :10 con la concentración de proteína de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En ese momento, se llevó a cabo la reacción en tampón de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se añadió SCB 20 mM a la misma como agente reductor. Una vez completada la reacción, se aplicó la mezcla de reacción a una columna de purificación SOURCE 15Q para purificar los conjugados que incluían derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 29) y Fe de inmunoglobulina (columna: SOURCE 15Q, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0? 20 % 100 min B (A: Tris-HCI 20 mM, pH 7,5; B: A + NaCI 1 M)) (FIG. 3b). La FIG. 3b es un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 29) y Fe de inmunoglobulina.
Ejemplo 6: Preparación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N 0 30) y Fe de inmunoglobulina En primer lugar, para la PEGilación de resto de lisina en la posición 30 de la secuencia de aminoácidos de derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 30) con PEG PropionALD(2) 3,4 K, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 30) y el PEG PropionALD(2) 3,4 K en una relación molar de 1 :15 con la concentración de proteina de 3 mg/ml a 4 °C durante 4,5 horas. En ese momento, se llevó a cabo la reacción en una mezcla de disolventes de tampón de HEPES 100 mM (pH 7,5) e isopropanol al 45 %, y se añadió SCB 20 mM a la misma como agente reductor. Una vez completada la reacción, se aplicó la mezcla de reacción a una columna de purificación SOURCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tenía lisina mono-pegilada (columna: SOURCE S, caudal: 2,0 ml/mín, gradiente: A 0 ? 3 % 1 min B - 40 % 222 min B (A: citrato de Na 20 mM, pH 3,0 + etanol al 45 %, B: A + KCI 1 M)) (Fig. 4a). La FIG. 3a es un gráfico que muestra el resultado de la purificación de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEC ID N° 30) a través de una columna de purificación SOURCE S. Se examinó la mono-PEGilación de los picos eluidos medíante SDS-PAGE, y se examinó la selectividad de la lisina mediante mapeo de péptidos usando Asp-N proteasa (FIG. 4b). La FIG. 4b es un gráfico que muestra el resultado del mapeo de péptidos del derivado de oxintomodulina mono-PEGilada purificada (SEC ID N° 30).
A continuación, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEC ID N° 30) y Fe de inmunoglobulina en una relación molar de 1 :10 con la concentración de proteína de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En ese momento, se llevó a cabo la reacción en tampón de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se añadió SCB 20 mM a la misma como agente reductor. Una vez completada la reacción, se aplicó la mezcla de reacción a una columna de purificación SOURCE 15Q para purificar los conjugados que incluían derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 30) y Fe de inmunoglobulina (columna: SOURCE 15Q, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A O? 20 % 100 min B (A: Tris-HCI 20 mM, pH 7,5; B: A + NaCI 1 M)) (FIG. 4c). La FIG. 4c es un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 30) y Fe de inmunoglobulina.
Ejemplo 7: Preparación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N 0 31) y Fe de inmunoglobulina En primer lugar, para la PEGilación de resto de lisina en la posición 30 de la secuencia de aminoácidos de derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 31) con PEG PropionALD(2) 3,4 K, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 31) y el PEG PropionALD(2) 3,4 K en una relación molar de 1 :15 con la concentración de proteína de 3 mg/ml a 4 °C durante 4,5 horas. En ese momento, se llevó a cabo la reacción en una mezcla de disolventes de tampón de HEPES 100 mM (pH 7,5) e isopropanol al 45 %, y se añadió SCB 20 mM a la misma como agente reductor. Una vez completada la reacción, se aplicó la mezcla de reacción a una columna de purificación SOURCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tenía lisina mono-pegilada (columna: SOURCE S, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ? 3 % 1 min B? 40 % 222 min B (A: citrato de Na 20 mM, pH 3,0 + etanol al 45 %, B: A + KCI 1 M)) (Fig. 5a). La FIG. 5a es un gráfico que muestra el resultado de la purificación de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEC ID N° 31) a través de una columna de purificación SOURCE S.
A continuación, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEC ID N° 31) y Fe de inmunoglobulina en una relación molar de 1 :10 con la concentración de proteína de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En ese momento, se llevó a cabo la reacción en tampón de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se añadió SCB 20 mM a la misma como agente reductor. Una vez completada la reacción, se aplicó la mezcla de reacción a una columna de purificación SOURCE 15Q para purificar los conjugados que incluían derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 31) y Fe de inmunoglobulina (columna: SOURCE 15Q, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0? 20 % 100 min B (A: Tris-HCI 20 mM, pH 7,5; B: A + NaCI 1 M)) (FIG. 5b). La FIG. 5b es un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 31) y Fe de ¡nmunoglobulina.
Ejemplo 8: Preparación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N 0 2) y Fe de ¡nmunoglobulina En primer lugar, para la PEGilación de resto de lisina en la posición 30 de la secuencia de aminoácidos de derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 2) con PEG PropionALD(2) 3,4 K, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 2) y el PEG PropionALD(2) 3,4 K en una relación molar de 1 :10 con la concentración de proteína de 3 mg/ml a 4 °C durante 4 horas. En ese momento, se llevó a cabo la reacción en una mezcla de disolventes de tampón de HEPES 100 mM (pH 7,5) e isopropanol al 45 %, y se añadió SCB 20 mM a la misma como agente reductor. Una vez completada la reacción, se aplicó la mezcla de reacción a una columna de purificación SOURCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tenía lisina mono-pegilada (columna: SOURCE S, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ? 3 % 1 min B? 40 % 222 min B (A: citrato de Na 20 mM, pH 3,0 + etanol al 45 %, B: A + KCI 1 M)) (Fig. 6a). La FIG. 6a es un gráfico que muestra el resultado de la purificación de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEC ID N° 2) a través de una columna de purificación SOURCE S. Se examinó la mono-PEGilación de los picos eluidos mediante SDS-PAGE, y se examinó la selectividad de la lisina mediante mapeo de péptidos usando Asp-N proteasa (FIG. 6b). La FIG. 6b es un gráfico que muestra el resultado del mapeo de péptidos del derivado de oxintomodulina mono-PEGilada purificada (SEC ID N° 2).
A continuación, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina mono- PEGilada (SEC ID N° 2) y Fe de ¡nmunoglobulina en una relación molar de 1 :8 con la concentración de proteína de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En ese momento, se llevó a cabo la reacción en tampón de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se añadió SCB 20 mM a la misma como agente reductor. Una vez completada la reacción, se aplicó la mezcla de reacción a una columna de purificación SOURCE 15Q (columna: SOURCE 15Q, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0? 4 % 1 min B ? 20 % 80 min B (A: Tris-HCI 20 mM, pH 7,5; B: A + NaCI 1 M)) (FIG. 6c) y una columna de purificación SOURCE ISO (Columna: SOURCE ISO (XK16, Amersham Biosciences), caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0? 100 % 100 min B (A: Tris-HCI 20 mM, pH 7,5; B: A + AS 1 ,3 M)) (FIG. 6d) para purificar los conjugados que incluían derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 2) y Fe de inmunoglobulina. La FIG. 6c es un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 2) y Fe de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SOURCE ISO, y la FIG. 6d es un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 2) y Fe de inmunoglobulina a través de una columna de purificación de SOURCE ISO.
Ejemplo 9: Preparación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 3) y Fe de inmunoglobulina En primer lugar, para la PEGilación de resto de lisina en la posición 27 de la secuencia de aminoácidos de derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 3) con PEG PropionALD(2) 3,4 K, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 3) y el PEG PropionALD(2) 3,4 K en una relación molar de 1:10 con la concentración de protema de 3 mg/ml a 4 °C durante 4 horas. En ese momento, se llevó a cabo la reacción en una mezcla de disolventes de tampón de HEPES 100 mM (pH 7,5) e isopropanol al 45 %, y se añadió SCB 20 mM a la misma como agente reductor. Una vez completada la reacción, se aplicó la mezcla de reacción a una columna de purificación SOURCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tenía lisina mono-pegilada (columna: SOURCE S, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ? 3 % 1 min B? 40 % 222 min B (A: citrato de Na 20 mM, pH 3,0 + etanol al 45 %, B: A + KCI 1 M)) (Fig. 7a). La FIG. 7a es un gráfico que muestra el resultado de la purificación de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEC ID N° 3) a través de una columna de purificación SOURCE S. Se examinó la mono-PEGilación de los picos eluidos mediante SDS-PAGE, y se examinó la selectividad de la lisina mediante mapeo de péptidos usando Asp-N proteasa (FIG. 7b). La FIG. 7b es un gráfico que muestra el resultado del mapeo de péptidos del derivado de oxintomodulina mono-PEGilada purificada (SEC ID N° 3).
A continuación, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEC ID N° 3) y Fe de inmunoglobulina en una relación molar de 1 :8 con la concentración de proteína de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En ese momento, se llevó a cabo la reacción en tampón de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se añadió SCB 20 mM a la misma como agente reductor. Una vez completada la reacción, se aplicó la mezcla de reacción a una columna de purificación Butyl FF (columna: Butyl FF (XK16, Amersham Biosciences), caudal: 2,0 ml/min, gradiente: B 0? 100 % 5 min A (A: Tris-HCI 20 mM, pH 7,5; B: A + NaCI 1 ,5 M)) (FIG. 7c) y una columna de purificación SOURCE 15Q (Columna: SOURCE 15Q, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0? 4 % 1 min B? 20 % 80 min B (A: Tris-HCI 20 mM, pH 7,5; B: A + NaCI 1 M)) (FIG. 7d) para purificar los conjugados que incluían derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 3) y Fe de inmunoglobulina. La FIG. 7c es un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 3) y Fe de inmunoglobulina a través de una columna de purificación Butyl FF, y la FIG. 7d es un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 3) y Fe de inmunoglobulina a través de una columna de purificación de SOURCE 15Q.
Ejemplo 10: Preparación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N ° 23) y Fe de inmunoglobulina En primer lugar, para la PEGilación de resto de cisteína en la posición 24 de la secuencia de aminoácidos de derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 23) con PEG MAL-10K-ALD (NOF., Japón), se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 23) y el PEG MAL-10K-ALD en una relación molar de 1 :3 con la concentración de proteína de 3 mg/ml a temperatura ambiente durante 3 horas. En ese momento, se llevó a cabo la reacción en tampón de Tris 50 mM (pH 8,0) e isopropanol al 45 %, y se añadió guanidina 1 M a la misma. Una vez completada la reacción, se aplicó la mezcla de reacción a una columna de purificación SOURCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tenía cisteína mono-pegilada (columna: SOURCE S, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0? 100 % 50 min B (A: citrato de Na 20 mM, pH 3,0 + etanol al 45 %, B: A + KCI 1 M)) (Fig. 8a). La FIG. 8a es un gráfico que muestra el resultado de la purificación de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEC ID N° 23) a través de una columna de purificación SOURCE S.
A continuación, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEC ID N° 23) y Fe de inmunoglobulina en una relación molar de 1 :5 con la concentración de proteína de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En ese momento, se llevó a cabo la reacción en tampón de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se añadió SCB 20 mM a la misma como agente reductor. Una vez completada la reacción, se aplicó la mezcla de reacción a una columna de purificación SOURCE 15Q (columna: SOURCE 5Q, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0? 4 % 1 min B? 20 % 80 min B (A: Tris-HCI 20 mM, pH 7,5; B: A + NaCI 1 M)) (FIG. 8b) y una columna de purificación SOURCE ISO (Columna: SOURCE ISO, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: B 0? 100 % 100 min A (A: Tris-HCI 20 mM, pH 7,5; B: A + AS 1 ,1 M)) (FIG. 8c) para purificar los conjugados que incluían derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 23) y Fe de inmunoglobulina. La FIG. 8b es un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 23) y Fe de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SOURCE 15Q, y la FIG. 8c es un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 23) y Fe de inmunoglobulina a través de una columna de purificación de SOURCE ISO.
Ejemplo 11: Preparación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 24) y Fe de inmunoglobulina En primer lugar, para la PEGilación de resto de cisteína en la posición 30 de la secuencia de aminoácidos de derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 24) con PEG MAL-10K-ALD, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 24) y el PEG MAL-10K-ALD en una relación molar de 1 :3 con la concentración de proteína de 3 mg/ml a temperatura ambiente durante 3 horas. En ese momento, se llevó a cabo la reacción en tampón de Tris 50 mM (pH 8,0) e isopropanol al 45 %, y se añadió guanidina 1 M a la misma. Una vez completada la reacción, se aplicó la mezcla de reacción a una columna de purificación SOURCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tenía cisteína mono-pegilada (columna: SOURCE S, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0? 100 % 50 min B (A: citrato de Na 20 mM, pH 3,0 + etanol al 45 %, B: A + KCI 1 M)) (Fig. 9a). La FIG. 9a es un gráfico que muestra el resultado de la purificación de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEC ID N° 24) a través de una columna de purificación SOURCE S.
A continuación, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEC ID N° 24) y Fe de inmunoglobulina en una relación molar de 1 :5 con la concentración de proteína de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En ese momento, se llevó a cabo la reacción en tampón de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se añadió SCB 20 mM a la misma como agente reductor. Una vez completada la reacción, se aplicó la mezcla de reacción a una columna de purificación SOURCE 15Q (columna: SOURCE 15Q, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0? 4 % 1 min B? 20 % 80 min B (A: Tris-HCI 20 mM, pH 7,5; B: A + NaCI 1 M)) (FIG. 9b) y una columna de purificación SOURCE ISO (Columna: SOURCE ISO, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: B 0? 100 % 100 min A (A: Tris-HCI 20 mM, pH 7,5; B: A + AS 1 ,1 M)) (FIG. 9c) para purificar los conjugados que incluían derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 24) y Fe de inmunoglobulina. La FIG. 9b es un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 24) y Fe de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SOURCE 15Q, y la FIG. 9c es un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 24) y Fe de inmunoglobulina a través de una columna de purificación de SOURCE ISO.
Ejemplo 12: Preparación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 25) y Fe de inmunoglobulina En primer lugar, para la PEGilación de resto de cisteína en la posición 30 de la secuencia de aminoácidos de derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 25) con PEG MAL-10K-ALD, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 25) y el PEG MAL-10K-ALD en una relación molar de 1 :3 con la concentración de proteína de 3 mg/ml a temperatura ambiente durante 3 horas. En ese momento, se llevó a cabo la reacción en tampón de Tris 50 mM (pH 8,0), y se añadió guanidina 1 M a la misma. Una vez completada la reacción, se aplicó la mezcla de reacción a una columna de purificación SOURCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tenía cisteína mono-pegilada (columna: SOURCE S, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0? 100 % 50 min B (A: citrato de Na 20 mM, pH 3,0 + etanol al 45 %, B: A + KCI 1 M)) (Fig. 10a). La FIG. 10a es un gráfico que muestra el resultado de la purificación de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEC ID N° 25) a través de una columna de purificación SOURCE S.
A continuación, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEC ID N° 25) y Fe de inmunoglobulina en una relación molar de 1 :5 con la concentración de proteína de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En ese momento, se llevó a cabo la reacción en tampón de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se añadió SCB 20 mM a la misma como agente reductor. Una vez completada la reacción, se aplicó la mezcla de reacción a una columna de purificación SOURCE 15Q (columna: SOURCE 15Q, caudal: 2,0 ml/mín, gradiente: A 0? 4 % 1 min B? 20 % 80 min B (A: Tris-HCI 20 mM, pH 7,5; B: A + NaCI 1 M)) (FIG. 10b) y una columna de purificación SOURCE ISO (Columna: SOURCE ISO, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: B 0? 100 % 100 min A (A: Tris-HCI 20 mM, pH 7,5; B: A + AS 1 ,1 M)) (FIG. 10c) para purificar los conjugados que incluían derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 25) y Fe de inmunoglobulina. La FIG. 10b es un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 25) y Fe de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SOURCE 15Q, y la FIG. 10c es un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 25) y Fe de inmunoglobulina a través de una columna de purificación de SOURCE ISO.
Ejemplo 13: Preparación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 28) y Fe de inmunoglobulina En primer lugar, para la PEGilación de resto de lisina en la posición 20 de la secuencia de aminoácidos de derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 28) con PEG PropionALD(2) 3,4 K, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 28) y PEG MAL-10K-ALD en una relación molar de 1 :5 con la concentración de proteína de 3 mg/ml a 4 °C durante 3 horas. En ese momento, se llevó a cabo la reacción en tampón de borato de Na 50 mM (pH 9,0), y se añadió guanidina 2 M a la misma. Una vez completada la reacción, se aplicó la mezcla de reacción a una columna de purificación SOURCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tenía lisina mono-pegilada (columna: SOURCE S, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ? 3 % 1 min B? 40 % 222 min B (A: citrato de Na 20 mM, pH 3,0 + etanol al 45 %, B: A + KCI 1 M)) (Fig. 1 a). La FIG. 11a es un gráfico que muestra el resultado de la purificación de un .derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEC ID N° 28) a través de una columna de purificación SOURCE S.
A continuación, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina mono- PEGilada (SEC ID N° 28) y Fe de inmunoglobulina en una relación molar de 1 :10 con la concentración de proteína de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En ese momento, se llevó a cabo la reacción en tampón de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se añadió SCB 20 mM a la misma como agente reductor. Una vez completada la reacción, se aplicó la mezcla de reacción a una columna de purificación SOURCE 15Q (columna: SOURCE 15Q, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0? 4 % 1 min B -> 20 % 80 mi B (A: Tris-HCI 20 mM, pH 7,5; B: A + NaCI 1 M)) (FIG. 11b) y una columna de purificación SOURCE ISO (Columna: SOURCE ISO, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: B 0? 100 % 100 min A (A: Tris-HCI 20 mM, pH 7,5; B: A + AS 1 ,1 M)) (FIG. 11c) para purificar los conjugados que incluían derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 28) y Fe de inmunoglobulina. La FIG. 11b es un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 28) y Fe de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SOURCE 15Q, y la FIG. 11c es un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 28) y Fe de inmunoglobulina a través de una columna de purificación de SOURCE ISO.
Ejemplo 14: Preparación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 32) y Fe de inmunoglobulina En primer lugar, para la PEGilación de resto de cisteína en la posición 30 de la secuencia de aminoácidos de derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 32) con PEG MAL-10K-ALD, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 32) y el PEG MAL-10K-ALD en una relación molar de 1 :3 con la concentración de proteína de 1 mg/ml a temperatura ambiente durante 3 horas. En ese momento, se llevó a cabo la reacción en tampón de Tris 50 mM (pH 8,0), y se añadió guanidina 2 M a la misma. Una vez completada la reacción, se aplicó la mezcla de reacción a una columna de purificación SOURCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tenía cisteína mono-pegilada (columna: SOURCE S, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0? 100 % 50 min B (A: citrato de Na 20 mM, pH 3,0 + etanol al 45 %, B: A + KCI 1 M)).
A continuación, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina mono- PEGilada (SEC ID N° 32) y Fe de inmunoglobulina en una relación molar de 1 :8 con la concentración de proteína de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En ese momento, se llevó a cabo la reacción en tampón de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se añadió SCB 20 mM a la misma como agente reductor. Una vez completada la reacción, se aplicó la mezcla de reacción a una columna de purificación SOURCE 15Q (columna: SOURCE 15Q, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0? 4 % 1 min B? 20 % 80 min B (A: Tris-HCI 20 mM, pH 7,5; B: A + NaCI 1 M)) y una columna de purificación SOURCE ISO (Columna: SOURCE ISO, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: B 0? 100 % 100 min A (A: Tris-HCI 20 mM, pH 7,5; B: A + AS 1 ,1 M)) para purificar los conjugados que incluían derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 32) y Fe de inmunoglobulina.
Ejemplo 15: Preparación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N 0 33) y Fe de inmunoglobulina En primer lugar, para la PEGilación de resto de cisterna en la posición 30 de la secuencia de aminoácidos de derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 33) con PEG MAL-10K-ALD, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 33) y el PEG MAL-10K-ALD en una relación molar de 1 :1 con la concentración de proteína de 1 mg/ml a temperatura ambiente durante 3 horas. En ese momento, se llevó a cabo la reacción en tampón de Tris 50 mM (pH 8,0), y se añadió guanidina 2 M a la misma. Una vez completada la reacción, se aplicó la mezcla de reacción a una columna de purificación SOURCE S para purificar él derivado de oxintomodulina que tenía cisteína monó-pegilada (columna: SOURCE S, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0? 100 % 50 min B (A: citrato de Na 20 mM, pH 3,0 + etanol al 45 %, B: A + KCI 1 M)).
A continuación, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEC ID N° 33) y Fe de inmunoglobulina en una relación molar de 1 :5 con la concentración de proteína de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En ese momento, se llevó a cabo la reacción en tampón de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se añadió SCB 20 mM a la misma como agente reductor. Una vez completada la reacción, se aplicó la mezcla de reacción a una columna de purificación SOURCE 15Q (columna: SOURCE 15Q, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0? 4 % 1 min B? 20 % 80 min B (A: Tris-HCI 20 mM, pH 7,5; B: A + NaCI 1 M)) y una columna de purificación SOURCE ISO (Columna: SOURCE ISO, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: B 0? 100 % 100 min A (A: Tris-HCI 20 mM, pH 7,5; B: A + AS 1 ,1 M)) para purificar los conjugados que incluían derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 33) y Fe de inmunoglobulina.
Ejemplo 16: Preparación de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEC ID N 0 34) y Fe de inmunoglobulina En primer lugar, para la PEGilación de resto de cisteína en la posición 30 de la secuencia de aminoácidos de derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 34) con- PEG MAL-10K-ALD, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 34) y el PEG MAL-10K-ALD en una relación molar de 1 :1 con la concentración de proteína de 3 mg/ml a temperatura ambiente durante 3 horas. En ese momento, se llevó a cabo la reacción en tampón de Tris 50 mM (pH 8,0), y se añadió guanidina 1 M a la misma. Una vez completada la reacción, se aplicó la mezcla de reacción a una columna de purificación SOURCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tenía cisteína mono-pegilada (columna: SOURCE S, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0? 100 % 50 min B (A: citrato de Na 20 mM, pH 3,0 + etanol al 45 %, B: A + KCI 1 M)).
A continuación, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEC ID N° 34) y Fe de inmunoglobulina en una relación molar de 1 :5 con la concentración de proteína de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En ese momento, se llevó a cabo la reacción en tampón de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se añadió SCB 20 mM a la misma como agente reductor. Una vez completada la reacción, se aplicó la mezcla de reacción a una columna de purificación SOURCE 15Q (columna: SOURCE 15Q, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0? 4 % 1 min B? 20 % 80 min B (A: Tris-HCI 20 mM, pH 7,5; B: A + NaCI 1 M)) y una columna de purificación SOURCE ISO (Columna: SOURCE ISO, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: B 0? 100 % 100 min A (A: Tris-HCI 20 mM, pH 7,5; B: A + AS 1 ,1 M)) para purificar los conjugados que incluían derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 34) y Fe de inmunoglobulina.
Ejemplo 17: Actividad in vitro de conjugados de derivado de oxintomodulina-Fc de inmunoglobulina Para medir las eficacias contra la obesidad de los conjugados que incluyen la oxintomodulina o derivado de oxintomodulina y el Fe de inmunoglobulina que se prepararon en los ejemplos anteriores, se realizaron experimentos de la misma manera que en el Ejemplo 2-2.
En concreto, se subcultivó cada uno de los transformantes preparados en los Ejemplos 1-1 y 1-2 dos o tres veces a la semana, y se dividió en alícuotas en cada pocilio de una placa de 96 pocilios a una densidad de 1 x 105, tras lo que se realizó un cultivo durante 24 horas. Se lavó cada uno de los transformantes cultivados con tampón KRB, se suspendieron en 40 mi de tampón KRB que contenía IBMX 1 mM y se dejaron a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se diluyeron GLP-1 , glucagón y conjugados de derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 23, 24, 25, 32, 33 o 34)-Fc de inmunoglobulina de 1.000 nM a 0,02 nM mediante una dilución en serie de 5 veces, y se añadieron cada 40 mi de la misma a cada transformante y se cultivaron a 37 °C durante 1 hora en una incubadora de C02. A continuación, se añadieron 20 mi de tampón de lisis celular para la lisis celular, y se aplicaron los lisados celulares a un kit de ensayo de cAMP (Molecular Device, EE.UU.) para medir las concentraciones de cAMP usando un Víctor (Perkin Elmer, EE.UU.). Se calcularon los valores de CE50 de las mismas, y se compararon entre sí (Tabla 3).
[Tabla 3] Actividad in vitro de conjugados de derivado de oxintomodulina-Fc de inmunoglobulina Como se muestra en la Tabla 3, se descubrió que los conjugados de derivado de oxintomodulina-Fc de inmunoglobulina muestran la actividad in vitro hacia GLP-1 y los receptores de glucagón.
Ejemplo 18: Actividad in vivo de conjugados de derivado de oxintomodulina-immunoglobulina Se examinó si los conjugados de derivado de oxintomodulina-Fc de inmunoglobulina muestran excelentes efectos de reducción del peso corporal in vivo.
En concreto, se alimentaron con una dieta rica en grasas de 60 kcal durante 24 semanas ratones C57BL/6 normales de 6 semanas de vida para aumentar su peso corporal en aproximadamente 50 g de media, y se administraron por vía subcutánea los conjugados de derivado de oxintomodulina (SEC ID N° 23, 24 o 25)-Fc de inmunoglobulina a una dosis de 0,03 o 0,06 mg/kg/semana durante 3 semanas. Tras ello, se midieron los cambios en el peso corporal de los ratones (FIG. 12 y. FIG. 13). La FIG. 12 y la FIG. 13 son gráficos que muestran los cambios en el peso corporal de los ratones en función del tipo y la dosis de administración de los conjugados de derivado de oxintomodulina-Fc de inmunoglobulina. Como se muestra en la FIG. 12 y la FIG. 13, a medida que se aumentaba la dosis de administración de los conjugados de derivado de oxintomodulina-Fc de inmunoglobulina, se redujo el peso corporal de manera directamente proporcional, a pesar de haber diferencias entre los tipos de conjugados de derivado de oxintomodulina-Fc de inmunoglobulina, lo que sugiere que los conjugados de derivado de oxintomodulina-Fc de inmunoglobulina reducen el peso corporal de una manera dependiente de la dosis.

Claims (27)

REIVINDICACIONES
1. Un conjugado, caracterizado porque comprende oxintomodulina, una región Fe de inmunoglobulina y un polímero no peptidílico, pudiéndose obtener el conjugado mediante la unión covalente de la oxintomodulina con la región Fe de inmunoglobulina a través del polímero no peptidílico.
2. El conjugado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la oxintomodulina tiene la secuencia de aminoácidos de SEC ID N° 1.
3. El conjugado de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque la oxintomodulina es un derivado de oxintomodulina preparado mediante la adición, eliminación o sustitución de aminoácidos de la oxintomodulina nativa.
4. El conjugado de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el derivado de oxintomodulina comprende la secuencia de aminoácidos de la siguiente Fórmula 1 : R1 -X1 -X2-GTFTSD-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11 -X12-X 3-X14-X15-X16- X17-X18-X19-X20-X21-X22-X23-X24-R2 (Fórmula 1) en la que R1 es histidina, desamino-histidilo, dimetil-histidilo (/V-dimetil-histidilo), beta-hidroxiimidazopropionilo, 4-imidazoacetilo, beta-carboxi-imidazopropionilo o tirosina; X1 es Aib (ácido aminosiobutírico), d-alanina, glicina, Sar (/V-metilglicina), serina o d-serina; X2 es ácido glutámico o glutamina; X3 es leucina o tirosina; X4 es serina o alanina; X5 es lisina o arginina; X6 es glutamina o tirosina; X7 es leucina o metionina; X8 es ácido aspártico o ácido glutámico; X9 es ácido glutámico, serina, ácido alfa-metil-glutámico o está eliminado; X10 es glutamina, ácido glutámico, lisina, arginina, serina o está eliminado; X11 es alanina, arginina, valina o está eliminado; X12 es alanina, arginina, serina, valina o está eliminado; X13 es lisina, glutamina, arginina, ácido alfa-metil-glutámico o está eliminado; X14 es ácido aspártico, ácido glutámico, leucina o está eliminado; X15 es fenilalanina o está eliminado; X16 es isoleucina, valina o está eliminado; X17 es alanina, cisteína, ácido glutámico, lisina, glutamina, ácido alfa-metil-glutámico o está eliminado; X18 es el triptófano o está eliminado; X19 es alanina, isoleucina, leucina, serina, valina o está eliminado; X20 es alanina, lisina, metionina, glutamina, arginina o está eliminado; X21 es asparagina o está eliminado; X22 es alanina, glicina, treonina o está eliminado; X23 es cisteína, lisina o está eliminado; X24 es un péptido que tiene de 2 a 10 aminoácidos que consisten en combinaciones de alanina, glicina y serina, o está eliminado; y R2 es KRNRNNIA (SEC ID N° 35), GPSSGAPPPS (SEC ID N° 36), GPSSGAPPPSK (SEC ID N° 37), HSQGTFTSDYSKYLD (SEC ID N° 38), HSQGTFTSDYSRYLDK (SEC ID N° 39), HGEGTFTSDLSKQMEEEAVK (SEC 40) o está eliminado (excluido si la secuencia de aminoácidos de Fórmula 1 es idéntica a la de la SEC ID N° 1).
5. El conjugado de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el derivado de oxintomodulina es capaz de activar el receptor de GLP-1 y el receptor de glucagón.
6. El conjugado de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el conjugado tiene efectos contra la obesidad.
7. El conjugado de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque uno o más aminoácidos de las posiciones 10, 14, 16, 20, 24 y 28 de la secuencia de aminoácidos de Fórmula 1 están sustituidos con aminoácidos o derivados de aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en Tyr(4-Me), Phe, Phe(4-Me), Phe(4-CI), Phe(4-CN), Phe(4-N02), Phe(4-NH2), Phg, Pal, Nal, Ala(2-tienilo) y Ala(benzotienilo).
8. El conjugado de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque uno o más pares de aminoácidos de las posiciones 10 y 14, 12 y 16, 16 y 20, 20 y 24, y 24 y 28 de la secuencia de aminoácidos de Fórmula 1 están sustituidos con ácido glutámico o lisina para formar anillos.
9. El conjugado de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque uno o más pares de aminoácidos de las posiciones 10 y 14, 12 y 16, 16 y 20, 20 y 24, y 24 y 28 de la secuencia de aminoácidos de Fórmula 1 forma anillos.
10. El conjugado de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el derivado de oxintomodulina está seleccionado del grupo que consiste en los péptidos de SEC ID N° 2 a 34.
11. El conjugado de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque el polímero no peptidílico está seleccionado del grupo que consiste en polietilenglicol, polipropilenglicol, copolímeros de etilenoglicol y propilenglicol, polioles polioxietilados, alcohol polivinílico, polisacáridos, dextrano, éter poliviniletílico, ácido poliláctico (PLA), ácido poliláctico-glicólico (PLGA), polímeros lipidíeos, quitinas, ácido hialurónico, polisacárido y combinaciones de los mismos.
12. El conjugado de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque un grupo amina y un grupo tiol de la región Fe de inmunoglobulina y oxintomodulina están unidos por ambos extremos del polímero no peptidílico, respectivamente.
13. El conjugado de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque el polímero no peptidílico tiene grupos reactivos capaces de unirse con la región Fe de inmunoglobulina y el fármaco proteico por ambos extremos.
14. El conjugado de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el grupo reactivo está seleccionado del grupo que consiste en un grupo aldehido, un grupo propionaldehído, un grupo butiraldehído, un grupo maleimida y un derivado de succinimida.
15. El conjugado de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque los grupos reactivos de ambos extremos son iguales o diferentes entre sí.
16. El conjugado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la región Fe de inmunoglobulina es una región Fe no glucosilada.
17. El conjugado de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque la región Fe de inmunoglobulina está seleccionada del grupo que consiste en un dominio CH1 , un dominio CH2, un dominio CH3 y un dominio CH4; un dominio CH1 y un dominio CH2; un dominio CH1 y un dominio CH3; un dominio CH2 y un dominio CH3; una combinación de uno o más dominios y una región bisagra de inmunoglobulina (o una parte de la región bisagra); y un dímero de cada dominio de las regiones constantes de cadena pesada y la región constante de cadena ligera.
18. El conjugado de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque la región Fe de inmunoglobulina es un derivado en el que es eliminada una región capaz de formar un enlace disulfuro, son eliminados ciertos restos de aminoácidos del extremo N-terminal de una forma Fe nativa, es añadido un resto de metionina en el extremo N-terminal de una forma Fe nativa, es eliminado un sitio de unión al complemento o es eliminado un sitio de citotoxicidad mediada por células dependientes de anticuerpos (ADCC).
19. El conjugado de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque la región Fe de inmunoglobulina es una región Fe derivada de una inmunoglobulina seleccionada del grupo que consiste en IgG, IgA, IgD, IgE y IgM.
20. El conjugado de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque la región Fe de inmunoglobulina es una región Fe de lgG4.
21. El conjugado de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque la región Fe de inmunoglobulina es una región Fe no glucosilada derivada de lgG4 humana.
22. Una composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento de la obesidad, caracterizada porque comprende el conjugado como el que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21.
23. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 22, caracterizada porque comprende además un vehículo farmacéuticamente aceptable.
24. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 22, caracterizada porque la composición es administrada sola o en combinación con otras formulaciones farmacéuticas que muestran efectos profilácticos o terapéuticos sobre la obesidad.
25. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 24, caracterizada porque la formulación farmacéutica está seleccionada del grupo que consiste en un agonista del receptor de GLP-1 , un agonista del receptor de leptina, un inhibidor de la DPP-IV, un antagonista del receptor Y5, un antagonista del receptor de la hormona concentradora de melanina (MCH), un agonista del receptor Y2/3, un agonista del receptor MC3/4, un inhibidor de la lipasa gástrica/pancreática, un agonista de 5HT2c, un agonista del receptor ß3?, un agonista del receptor de amilina, un antagonista de grelina y un antagonista del receptor de grelina.
26. Un procedimiento para la prevención o el tratamiento de la obesidad, caracterizad porque comprende la etapa de administrar el conjugado como el que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21 o la composición como la que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 22 a 25 a un sujeto.
27. El uso del conjugado como el que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21 o de la composición como la que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 22 a 25 en la preparación de fármacos para la prevención o el tratamiento de la obesidad.
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Families Citing this family (66)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9249407B2 (en) 2006-02-03 2016-02-02 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US8048849B2 (en) 2006-02-03 2011-11-01 Modigene, Inc. Long-acting polypeptides and methods of producing same
US10221228B2 (en) 2006-02-03 2019-03-05 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US20140113860A1 (en) 2006-02-03 2014-04-24 Prolor Biotech Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US20150038413A1 (en) 2006-02-03 2015-02-05 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US9663778B2 (en) 2009-07-09 2017-05-30 OPKO Biologies Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US12203113B2 (en) 2009-07-09 2025-01-21 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US10166295B2 (en) 2011-06-02 2019-01-01 Opko Biologics Ltd. Pegylated OXM variants
DK3878859T5 (da) 2011-06-10 2024-06-10 Hanmi Science Co Ltd Hidtil ukendte oxyntomodulinderivater og farmaceutisk præparat til behandling af fedme omfattende disse
SI2721062T1 (sl) 2011-06-17 2019-03-29 Hanmi Science Co., Ltd. Konjugat, obsegajoč oksintomodulinski in imunoglobinski fragment, in uporaba le-tega
KR20130049671A (ko) 2011-11-04 2013-05-14 한미사이언스 주식회사 생리활성 폴리펩타이드 결합체 제조 방법
AR090281A1 (es) 2012-03-08 2014-10-29 Hanmi Science Co Ltd Proceso mejorado para la preparacion de un complejo polipeptidico fisiologicamente activo
SG10201702228QA (en) 2012-06-04 2017-04-27 Opko Biolog Ltd Pegylated oxm variants
KR101968344B1 (ko) * 2012-07-25 2019-04-12 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 고지혈증 치료용 조성물
WO2014049610A2 (en) 2012-09-26 2014-04-03 Cadila Healthcare Limited Peptides as gip, glp-1 and glucagon receptors triple-agonist
UA116217C2 (uk) 2012-10-09 2018-02-26 Санофі Пептидна сполука як подвійний агоніст рецепторів glp1-1 та глюкагону
KR101993393B1 (ko) * 2012-11-06 2019-10-01 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 당뇨병 또는 비만성 당뇨병 치료용 조성물
MY168536A (en) 2012-11-06 2018-11-12 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Liquid formulation of protein conjugate comprising an oxyntomodulin derivative covalently linked to a non-peptidyl polymer to an immunoglobulin fc region
MX2015008114A (es) 2012-12-21 2015-11-06 Sanofi Sa Derivados de exendina-4.
AR096890A1 (es) * 2013-07-12 2016-02-03 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Conjugando fc de inmunoglobulina, que mantiene la afinidad de unión del fragmento fc de la inmunoglobulina a fcrn
AR096891A1 (es) * 2013-07-12 2016-02-03 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Conjugado de monómero polipéptido biológicamente activo y conjugado de fragmento fc de inmunoglobulina, que muestra aclaramiento mediado por receptor reducido, y el método para la preparación del mismo
US20150158926A1 (en) 2013-10-21 2015-06-11 Opko Biologics, Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
WO2015086729A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Sanofi Dual glp-1/gip receptor agonists
EP3080152A1 (en) 2013-12-13 2016-10-19 Sanofi Non-acylated exendin-4 peptide analogues
TW201609797A (zh) 2013-12-13 2016-03-16 賽諾菲公司 雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑
EP3080150B1 (en) 2013-12-13 2018-08-01 Sanofi Exendin-4 peptide analogues as dual glp-1/gip receptor agonists
CR20160376A (es) 2014-01-20 2016-10-07 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Insulina de acción prolongada y uso de la misma
MX387560B (es) * 2014-03-31 2025-03-18 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd Procedimiento para mejorar la solubilidad de proteínas y péptidos usando un enlace del fragmento fc de inmunoglobulina.
TW201625669A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自艾塞那肽－４（Ｅｘｅｎｄｉｎ－４）之肽類雙重ＧＬＰ－１／升糖素受體促效劑
TW201625670A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自ｅｘｅｎｄｉｎ－４之雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑
TW201625668A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 作為胜肽性雙重ｇｌｐ－１／昇糖素受體激動劑之艾塞那肽－４衍生物
AR100639A1 (es) 2014-05-29 2016-10-19 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Composición para tratar diabetes que comprende conjugados de análogos de insulina de acción prolongada y conjugados de péptidos insulinotrópicos de acción prolongada
TWI684458B (zh) * 2014-05-30 2020-02-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 包含胰島素及ｇｌｐ-１/昇糖素雙重促效劑之治療糖尿病之組成物
KR20150140177A (ko) 2014-06-05 2015-12-15 한미약품 주식회사 단백질 및 펩타이드의 면역원성을 감소시키는 방법
US9932381B2 (en) 2014-06-18 2018-04-03 Sanofi Exendin-4 derivatives as selective glucagon receptor agonists
TWI802396B (zh) 2014-09-16 2023-05-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 長效glp-1/高血糖素受體雙促效劑治療非酒精性脂肝疾病之用途
PH12017501089B1 (en) 2014-12-10 2022-06-22 Opko Biologics Ltd Methods of producing long acting ctp-modified growth hormone polypeptides
KR102291020B1 (ko) 2014-12-30 2021-08-20 한미약품 주식회사 안정성이 증가된 글루카곤 유도체
KR102418477B1 (ko) 2014-12-30 2022-07-08 한미약품 주식회사 글루카곤 유도체
AR105319A1 (es) 2015-06-05 2017-09-27 Sanofi Sa Profármacos que comprenden un conjugado agonista dual de glp-1 / glucagón conector ácido hialurónico
KR102172937B1 (ko) 2015-06-19 2020-11-03 옵코 바이오로직스 리미티드 장기-작용성 응고 인자 및 그의 제조 방법
DK3322437T5 (da) * 2015-06-30 2024-10-07 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd Glukagonderivat og en sammensætning omfattende et langtidsvirkende konjugat af samme
TW201706291A (zh) 2015-07-10 2017-02-16 賽諾菲公司 作為選擇性肽雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑之新毒蜥外泌肽（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）衍生物
UY36870A (es) 2015-08-28 2017-03-31 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Análogos de insulina novedosos
EP4534107A3 (en) * 2015-09-24 2025-12-10 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Protein complex by use of a specific site of an immunoglobulin fragment for linkage
PE20250556A1 (es) 2015-12-31 2025-02-24 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd Agonista triple de receptores de glucagon/glp-1/gip
CA3029518A1 (en) * 2016-06-29 2018-01-04 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Glucagon derivative, conjugate thereof, composition comprising same, and therapeutic use thereof
SG10202100189WA (en) 2016-07-11 2021-02-25 Opko Biologics Ltd Long-acting coagulation factor vii and methods of producing same
KR102698929B1 (ko) 2016-09-23 2024-08-27 한미약품 주식회사 인슐린 수용체와의 결합력이 감소된, 인슐린 아날로그 및 이의 용도
JOP20190095A1 (ar) 2016-10-27 2019-04-28 Janssen Pharmaceutica Nv مركبات ببتيد تيروسين-تيروسين الحلقية كمعدلات لمستقبلات الببتيد العصبي y
AR110299A1 (es) 2016-12-02 2019-03-13 Sanofi Sa Conjugados que comprenden un agonista dual de glp-1 / glucagón, un conector y ácido hialurónico
CN108299553B (zh) * 2017-01-13 2021-07-16 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 胃泌酸调节素修饰物
US20200230250A1 (en) 2017-02-03 2020-07-23 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Long-acting conjugate of a physiologically active material and use thereof
AR111341A1 (es) 2017-03-23 2019-07-03 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Un conjugado del análogo de insulina con afinidad reducida para el receptor de insulina y uso del mismo
WO2019035672A1 (ko) 2017-08-16 2019-02-21 동아에스티 주식회사 아실화 옥신토모듈린 펩타이드 유사체
PL3670529T3 (pl) * 2017-08-16 2024-06-10 Dong-A St Co., Ltd. Acylowany analog peptydowy oksyntomoduliny
WO2019171352A2 (en) * 2018-03-08 2019-09-12 Janssen Pharmaceutica Nv Methods of treating severe non-diabetic obesity
TW202015735A (zh) 2018-05-30 2020-05-01 法商賽諾菲公司 包含ｇｌｐ－１／升糖素／ｇｉｐ三重受體促效劑、連接子及透明質酸之接合物
KR20200135618A (ko) * 2019-05-23 2020-12-03 ㈜ 디앤디파마텍 폴리펩티드를 포함하는 비알코올성 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물
US12338270B2 (en) * 2018-07-19 2025-06-24 D&D Pharmatech Inc. Pharmaceutical composition comprising polypeptide
CN110964116A (zh) * 2018-09-26 2020-04-07 北京辅仁瑞辉生物医药研究院有限公司 GLP1-Fc融合蛋白及其缀合物
US12441776B2 (en) 2018-11-30 2025-10-14 Eirgen Pharma Ltd. Oxyntomodulin peptide analog formulations
WO2020128967A2 (en) * 2018-12-19 2020-06-25 Janssen Pharmaceutica Nv Methods of treating severe non-diabetic obesity
CN111944055B (zh) * 2019-05-16 2022-08-02 浙江道尔生物科技有限公司 一种治疗代谢疾病的融合蛋白
IL298428A (en) * 2020-05-22 2023-01-01 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Liquid formulation
WO2024155591A1 (en) * 2023-01-17 2024-07-25 Eli Lilly And Company Novel linkers for sustained delivery of therapeutics

Family Cites Families (81)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
JP4046354B2 (ja) 1996-03-18 2008-02-13 ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム 増大した半減期を有する免疫グロブリン様ドメイン
JP3895109B2 (ja) 1998-03-06 2007-03-22 中外製薬株式会社 蛋白非添加製剤
US6660843B1 (en) * 1998-10-23 2003-12-09 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
US6677136B2 (en) 2000-05-03 2004-01-13 Amgen Inc. Glucagon antagonists
GB0121709D0 (en) * 2001-09-07 2001-10-31 Imp College Innovations Ltd Food inhibition agent
US7217845B2 (en) * 2002-11-25 2007-05-15 Sun Bio, Inc. Bifunctional polyethylene glycol derivatives
GB0300571D0 (en) 2003-01-10 2003-02-12 Imp College Innovations Ltd Modification of feeding behaviour
EP1594530A4 (en) 2003-01-22 2006-10-11 Human Genome Sciences Inc HYBRID PROTEINS OF ALBUMIN
US7772188B2 (en) * 2003-01-28 2010-08-10 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders
WO2005035761A1 (en) 2003-10-16 2005-04-21 Compugen Ltd. Splice variants of preproglucagon, glucagon-like peptide-1 and oxyntomodulin
RU2352583C2 (ru) * 2003-11-13 2009-04-20 Ханми Фарм. Инд. Ко., Лтд. ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ Fc-ОБЛАСТЬ ИММУНОГЛОБУЛИНА В КАЧЕСТВЕ НОСИТЕЛЯ
US8263084B2 (en) 2003-11-13 2012-09-11 Hanmi Science Co., Ltd Pharmaceutical composition for treating obesity-related disease comprising insulinotropic peptide conjugate
KR101135244B1 (ko) 2007-11-29 2012-04-24 한미사이언스 주식회사 인슐린 분비 펩타이드 결합체를 포함하는 비만 관련질환 치료용 조성물
US20090238838A1 (en) 2003-11-13 2009-09-24 Hanmi Pharm. Ind. Co. Ltd. Insulinotropic peptide conjugate using an immunoglobulin fc
CN101128487B (zh) 2004-12-02 2012-10-10 杜门蒂斯有限公司 靶向血清白蛋白和glp-1或pyy的双特异性结构域抗体
BRPI0606992A2 (pt) 2005-02-11 2009-07-28 Amylin Pharmaceuticals Inc análogo e polipeptìdeos hìbridos de gip com propriedades selecionáveis
NZ578298A (en) * 2005-03-31 2010-07-30 Amylin Pharmaceuticals Inc Amylin and amylin agonists for treating psychiatric an anxiety disorder
KR100754667B1 (ko) 2005-04-08 2007-09-03 한미약품 주식회사 비펩타이드성 중합체로 개질된 면역글로불린 Ｆｃ 단편 및이를 포함하는 약제학적 조성물
GB0511986D0 (en) 2005-06-13 2005-07-20 Imp College Innovations Ltd Novel compounds and their effects on feeding behaviour
JP2008543816A (ja) 2005-06-13 2008-12-04 インペリアル イノベーションズ リミテッド 新規化合物および該化合物が摂食行動に及ぼす効果
EP2330124B1 (en) 2005-08-11 2015-02-25 Amylin Pharmaceuticals, LLC Hybrid polypeptides with selectable properties
WO2007030375A2 (en) 2005-09-08 2007-03-15 Children's Hospital Medical Center Lysosomal acid lipase therapy for nafld and related diseases
EP2471811B1 (en) 2006-02-22 2015-09-16 Merck Sharp & Dohme Corp. Oxyntomodulin derivatives
EP2046367A4 (en) 2006-06-07 2009-11-11 Human Genome Sciences Inc ALBUM INFUSION PROTEINS
KR100880509B1 (ko) 2006-10-16 2009-01-28 한미약품 주식회사 재조합 단백질의 대량 생산을 위한 신규한 벡터, 발현세포주 및 이를 이용한 재조합 단백질의 생산 방법
TWI428346B (zh) 2006-12-13 2014-03-01 Imp Innovations Ltd 新穎化合物及其等對進食行為影響
GB0624868D0 (en) 2006-12-13 2007-01-24 Imp Innovations Ltd Novel compounds and their effects on feeding behaviour
US20090098130A1 (en) 2007-01-05 2009-04-16 Bradshaw Curt W Glucagon-like protein-1 receptor (glp-1r) agonist compounds
JP2008169195A (ja) 2007-01-05 2008-07-24 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd キャリア物質を用いたインスリン分泌ペプチド薬物結合体
MX2009008241A (es) 2007-02-15 2009-10-08 Univ Indiana Res & Tech Corp Co-agonistas de receptor de glucagon/glp-1.
EP2175834B8 (en) 2007-07-10 2012-08-22 Eli Lilly And Company Glp-1-fc fusion protein formulation
WO2009015763A1 (en) 2007-07-27 2009-02-05 Bayer Cropscience Ag Ternary active compound combinations
RU2010113979A (ru) 2007-09-11 2011-10-20 Мондобайотек Лабораториз Аг (Li) Применение bubuc и необязательно eaa-marti (26-35) в качестве терапевтического средства для лечения инфекций hcmv
ES2558155T3 (es) 2007-10-30 2016-02-02 Indiana University Research And Technology Corporation Compuestos que muestran actividad antagonista de glucacón y agonista de GLP-1
CN101983066B (zh) 2008-01-30 2016-06-29 印第安那大学科技研究公司 基于酯的胰岛素前药
PA8830501A1 (es) 2008-06-17 2010-07-27 Univ Indiana Res & Tech Corp Co-agonistas del receptor de glucagon/glp-1
KR20110039230A (ko) 2008-06-17 2011-04-15 인디애나 유니버시티 리서치 앤드 테크놀로지 코퍼레이션 생리학적 ｐＨ 완충액에서 강화된 용해도 및 안정성을 나타내는 글루카곤 유사체
WO2010013012A2 (en) 2008-08-01 2010-02-04 Lund University Bioscience Ab Novel polypeptides and uses thereof
US20110171312A1 (en) 2008-09-19 2011-07-14 Nektar Therapeutics Modified therapeutic peptides, methods of their preparation and use
WO2010033240A2 (en) 2008-09-19 2010-03-25 Nektar Therapeutics Carbohydrate-based drug delivery polymers and conjugates thereof
US8642541B2 (en) 2008-12-15 2014-02-04 Zealand Pharma A/S Glucagon analogues
SG172291A1 (en) * 2008-12-19 2011-07-28 Univ Indiana Res & Tech Corp Amide based glucagon superfamily peptide prodrugs
CN108530543B (zh) 2009-02-03 2023-06-23 阿穆尼克斯制药公司 延伸重组多肽和包含该延伸重组多肽的组合物
WO2010096052A1 (en) * 2009-02-19 2010-08-26 Merck Sharp & Dohme Corp. Oxyntomodulin analogs
WO2010107256A2 (en) * 2009-03-20 2010-09-23 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Method for preparing a site-specific physiologically active polypeptide conjugate
CA2755336C (en) 2009-03-20 2015-07-14 Amgen Inc. Carrier immunoglobulins and uses thereof
PE20120914A1 (es) 2009-06-16 2012-08-22 Univ Indiana Res & Tech Corp Compuestos glucagon activo de receptor de gip
DK2454282T3 (en) 2009-07-13 2015-05-04 Zealand Pharma As acetylated glucagonanaloger
US20120294855A1 (en) 2009-11-03 2012-11-22 Eli Lilly & Company Glp-1 receptor agonist compounds for obstructive sleep apnea
US20120269830A1 (en) 2009-12-07 2012-10-25 Lawrence Horowitz Conjugates with improved pharmacokinetic properties
US8703701B2 (en) 2009-12-18 2014-04-22 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon/GLP-1 receptor co-agonists
AR079344A1 (es) 2009-12-22 2012-01-18 Lilly Co Eli Analogo peptidico de oxintomodulina, composicion farmaceutica que lo comprende y uso para preparar un medicamento util para tratar diabetes no insulinodependiente y/u obesidad
JO2976B1 (en) 2009-12-22 2016-03-15 ايلي ليلي اند كومباني Axentomodulin polypeptide
CN102918055B (zh) 2010-03-26 2017-03-29 诺沃—诺迪斯克有限公司 新的胰高血糖素类似物
EP2568993A4 (en) 2010-05-13 2014-02-19 Univ Indiana Res & Tech Corp GLUCAGON SUPERFAMILY PEPTIDES WITH G-PROTEIN-COUPLED RECEPTOR ACTIVITY
WO2011163012A2 (en) 2010-06-24 2011-12-29 Indiana University Research And Technology Corporation Amide based glucagon superfamily peptide prodrugs
KR101337797B1 (ko) 2010-07-14 2013-12-06 한미사이언스 주식회사 지속형 인간 성장 호르몬 결합체 액상 제제
KR101382593B1 (ko) * 2010-07-21 2014-04-10 한미사이언스 주식회사 신규한 지속형 글루카곤 결합체 및 이를 포함하는 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물
JP5282146B2 (ja) 2010-09-06 2013-09-04 パナソニック株式会社 表示装置及びその制御方法
CN101974077A (zh) 2010-09-15 2011-02-16 南京瑞年天平医药科技有限公司 一种新颖的多肽化合物
KR101767570B1 (ko) 2010-10-26 2017-08-14 한미사이언스 주식회사 항 비만 펩타이드의 지속형 결합체
KR101303388B1 (ko) 2010-10-26 2013-09-03 한미사이언스 주식회사 지속형 인터페론 알파 결합체의 액상 제제
CN102010473A (zh) * 2010-11-10 2011-04-13 曹鹏 重组胃泌酸调节素融合蛋白及其制备和应用
CN103402536A (zh) 2010-12-22 2013-11-20 马克迪亚生物科技公司 用gip和glp-1受体活性的基于胰高血糖素的肽来治疗代谢异常和肥胖的方法
EP2492749A1 (en) 2011-02-28 2012-08-29 Rohm and Haas Electronic Materials LLC Photoresist compositions and methods of forming photolithographic patterns
KR101161526B1 (ko) 2011-05-16 2012-07-02 숭실대학교산학협력단 연료전지용 촉매전극을 위한 코어/쉘 구조의 나노 지지체 및 그 제조방법
DK3878859T5 (da) * 2011-06-10 2024-06-10 Hanmi Science Co Ltd Hidtil ukendte oxyntomodulinderivater og farmaceutisk præparat til behandling af fedme omfattende disse
SI2721062T1 (sl) 2011-06-17 2019-03-29 Hanmi Science Co., Ltd. Konjugat, obsegajoč oksintomodulinski in imunoglobinski fragment, in uporaba le-tega
JP6184404B2 (ja) 2011-06-22 2017-08-23 インディアナ ユニヴァーシティ リサーチ アンド テクノロジー コーポレイション グルカゴン／ｇｌｐ−１レセプターコアゴニスト
KR101665009B1 (ko) 2012-03-09 2016-10-11 한미사이언스 주식회사 비알콜성 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
BR112014025951A2 (pt) 2012-04-19 2017-07-11 Opko Biologics Ltd variantes de oxintomodulina de longa ação e métodos de produção do mesmo
ES2602486T3 (es) 2012-06-21 2017-02-21 Indiana University Research And Technology Corporation Análogos de glucagón que muestran actividad de receptor de GIP
KR101968344B1 (ko) 2012-07-25 2019-04-12 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 고지혈증 치료용 조성물
KR101373563B1 (ko) 2012-07-25 2014-03-12 전북대학교산학협력단 Ｔｏｆ-ｍｒａ를 이용한 혈류특성 및 ｍｒ-신호강도구배(전단율) 유도방법
WO2014049610A2 (en) 2012-09-26 2014-04-03 Cadila Healthcare Limited Peptides as gip, glp-1 and glucagon receptors triple-agonist
MY168536A (en) 2012-11-06 2018-11-12 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Liquid formulation of protein conjugate comprising an oxyntomodulin derivative covalently linked to a non-peptidyl polymer to an immunoglobulin fc region
KR101993393B1 (ko) 2012-11-06 2019-10-01 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 당뇨병 또는 비만성 당뇨병 치료용 조성물
JP6137046B2 (ja) 2014-05-09 2017-05-31 信越化学工業株式会社 単量体、高分子化合物、レジスト材料及びパターン形成方法
TWI802396B (zh) 2014-09-16 2023-05-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 長效glp-1/高血糖素受體雙促效劑治療非酒精性脂肝疾病之用途
WO2019171352A2 (en) 2018-03-08 2019-09-12 Janssen Pharmaceutica Nv Methods of treating severe non-diabetic obesity

Also Published As

Publication number Publication date
EP2721062A4 (en) 2014-11-12
CN103732616A (zh) 2014-04-16
AU2018282298B2 (en) 2020-06-18
PE20141178A1 (es) 2014-09-12
US10363320B2 (en) 2019-07-30
NZ742400A (en) 2021-05-28
PL2721062T3 (pl) 2019-05-31
TW201305195A (zh) 2013-02-01
US20140212440A1 (en) 2014-07-31
MX353402B (es) 2018-01-11
IL272345B (en) 2021-01-31
JP2017071609A (ja) 2017-04-13
KR101591411B1 (ko) 2016-02-05
AU2018282298A1 (en) 2019-01-17
WO2012173422A9 (en) 2013-03-14
PH12018501119B1 (en) 2022-08-03
CL2013003619A1 (es) 2014-05-30
BR112013032375B1 (pt) 2022-09-20
PE20230404A1 (es) 2023-03-07
PH12013502517A1 (en) 2014-01-20
RU2607365C2 (ru) 2017-01-10
KR20120139579A (ko) 2012-12-27
AU2017202672A1 (en) 2017-05-11
SMT201900078T1 (it) 2019-02-28
RU2016147505A (ru) 2018-10-24
TWI519541B (zh) 2016-02-01
US20170340753A1 (en) 2017-11-30
CA3080189A1 (en) 2012-12-20
IL229759A0 (en) 2014-01-30
IL272345A (en) 2020-03-31
DK2721062T3 (en) 2019-02-25
CN109306015A (zh) 2019-02-05
CA2838504A1 (en) 2012-12-20
AU2012270366C1 (en) 2017-07-13
NZ618811A (en) 2016-05-27
PH12018501119A1 (en) 2019-02-04
PE20181268A1 (es) 2018-08-03
IL257928B (en) 2020-02-27
EP2721062A1 (en) 2014-04-23
RS58606B1 (sr) 2019-05-31
KR101577734B1 (ko) 2015-12-29
IL257928A (en) 2018-06-28
EP3502129A1 (en) 2019-06-26
HRP20190265T1 (hr) 2019-04-05
UA114709C2 (uk) 2017-07-25
AU2012270366A1 (en) 2014-01-16
US11872283B2 (en) 2024-01-16
WO2012173422A1 (en) 2012-12-20
TWI601744B (zh) 2017-10-11
SG195275A1 (en) 2013-12-30
IL245556B (en) 2018-03-29
EP3502129B1 (en) 2021-04-07
KR20140133493A (ko) 2014-11-19
EP2721062B1 (en) 2018-11-14
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