SK16502001A3

SK16502001A3 - Spôsob prípravy zlúčenín hemisyntézou

Info

Publication number: SK16502001A3
Application number: SK1650-2001A
Authority: SK
Inventors: Carmen Cuevas; Marta Perez; Andr�S Francesch; Carolina Fern�Ndez; Jos� Luis Chicharro; Pilar Gallego; Maria Zarzuelo; La Calle Fernando De; Ignacio Manzanares
Original assignee: Pharma Mar, S. A.
Priority date: 1999-05-14
Filing date: 2000-05-15
Publication date: 2002-06-04
Also published as: BRPI0110801B8; WO2001087894A1; NO20015547L; PL353002A1; BRPI0110801B1; JP2002544280A; PL226890B1; SK287835B6; CZ20023751A3; US20040002602A1; KR100834601B1; BR0010559A; CZ20023746A3; DK1185536T3; BG65896B1; CN1229382C; CY1108095T1; CN1441805A; WO2000069862A2; BR0110443A

Description

Vynález sa týka syntetických metód, so zvláštnym dôrazom na polosyntetické metódy.

Doterajší stav techniky

Európsky patent 309 477 sa týka ekteinascidínov 729, 743, 745, 759A, 759B a 770. Bolo zistené, že zlúčeniny ekteinascidínov majú antibakteriálne a iné užitočné vlastnosti. Protinádorové vlastnosti ekteinascidínu 743 sa teraz overujú v klinických štúdiách.

Ekteinascidín 743 má komplexnú tris(tetrahydroizochinolírifenol)ovú štruktúru podľa všeobecného vzorca I

V súčasnej dobe sa táto zlúčenina pripravuje izoláciou z extraktov Ecteinascidin turbinata. Pretože výťažok je malý, hľadajú sa iné spôsoby prípravy ekteinascidínov.

-2Syntetický proces prípravy zlúčenín ekteinascidínov je opísaný v US Patent 5 721 362. Patentovaná metóda je dlhá a komplikovaná, pozostávajúca z 38 príkladov, opisujúcich každý krok syntézy až po prípravu ekteinascidínu 743.

Patentový nárok číslo 25 z US nárokov 5 721 362 je zameraný na fenolový medziprodukt podľa všeobecného vzorca I, ktorý sa tak isto nazýva medziproduktom číslo 11. Táto zlúčenina má nasledovnú bis(tetrahydroizo-chinolínfenol)ovú štruktúru II:

OCHj

CH₃

CH

OTBDPS kde MOM je metoxymetylová substitučná skupina a TBSPS je 3,5-tbutyldifenylsilylová substitučná skupina.

Z medziproduktu 11 je možné syntetizovať inú zaujímavú protinádorovú látku, ftalascidín. Viď. Proc. Natl. Sci. USA, 96, 3496-3501, 1999. Ftalascidín je bis(tetrahydroizochinolín)ový derivát podľa všeobecného vzorca III:

ch och₃ <

N (III)

-3V ekteinascidíne 743 má 1,4 mostík štruktúru podľa všeobecného vzorca IV;

Ďalšie známe ekteinascidíny zahrňujú zlúčeniny s inými systémami premostenia cyklických kruhov, ako je to napríklad v ekteinascidíne 722 a 736, kde mostík má štruktúru podľa všeobecného vzorca V;

o

HN, (V)

-4 Ďalším príkladom je ekteinascidín 583 a 597, kde mostík má štruktúru podl'a všeobecného vzorca VI:

o

(VI) ^H 'NHj

Iným príkladom je ekteinascidín 594 a 596, kde mostík má štruktúru podľa všeobecného vzorca VII:

'( (VII)

Kompletná štruktúra týchto a príbuzných zlúčenín je uvedená v J. Am. Chem. Soc., 1996. 118, 9 017-9 023. Odkaz na článok sa nachádza v zozname citovanej literatúry.

Ďalšie známe zlúčeniny neobsahujú systém premostených cyklických kruhov. Tieto zahrňujú bis(tetrahydroizochínolínchinon)y - protinádorové a antimikrobiálne látky safracíny a saframycíny, a prírodné morské produkty renieramycíny a

-5xestomycíny, izolované z kultúr mikróbov alebo húb. Všetky majú spoločnú dimerickú tetrahydroizochinolínovú uhlíkovú kostru. Podľa charakteru oxidácie aromatických kruhov je možné tieto zlúčeniny rozdeliť do štyroch typov I až IV.

Typ I, alebo dimerické izochinolinochinóny, predstavujú systém podľa všeobecného vzorca VIII. Najčastejšie sa vyskytujú v tejto skupine zlúčenín - viď. tab. I:

Tab. I

Štruktúra saframycínových antibiotík typu I

(VIII)

Substitučná skupina

Zlúčenina	R¹⁴³	R^14b	R²¹	R²⁵³	R^25b	r^25c
Saframicín A	H	H	CN	0	0	ch₃
Saframicín B	H	H	H	0	0	ch₃

Saframicín C	H	och₃	CN	0	0	ch₃
Saframicín G	H	OH	CN	0	0	ch₃
Saframicín H	H	H	CN	OH	CH₂COCH₃	ch₃
Saframicín S	H	H	OH	0	0	ch₃
Saframicín Y₃	H	H	CN	0	0	ch₃
saframicín Ydi	H	H	CN	nh₂	H	C₂H₅
saframicín Ad!	H	H	CN	0	0	c₂h₅
saframicín Yd₂	H	H	CN	nh₂	H	H
saframicín Y_2b	H	Q^b	CN	nh₂	H	ch₃
saframicín Y_2b._d	H	Q^b	CN	nh₂	H	c₂h₅
saframicín AH₂	H	H	CN	H^a	OH^a	ch₃
saframicín AH₂Ac	H	H	CN	H	OAc	ch₃
saframicín AHi	H	H	CN	OH^a	H^a	ch₃
saframicín AHiAc	H	H	CN	OAc	H	ch₃
saframicín AR₃	H	H	H	H	OH	ch₃

navzájom zameniteľné kde skupina Q má všeobecný vzorec IX:

Aromatické kruhy typu I sa nachádzajú v saframycínoch A, B, C, G, H a S , ktoré je možno izolovať zo Straptomyces lavendulae v malom množstve. Kyano derivát saframycínu A, ktorý sa nazýva kyanochinonamín, je známy z japonského kokai JP-A2 59/225 189 a 60/084 288. Saframycíny Y₃, Ydi, Adj a Yd₂ boli pripravené z organizmu S. lavendulae procesom priamej biosyntézy pri vhodnej suplementácii média, v ktorom organizmus rástol. Rovnako boli vytvorené diméry saframycínov Y_2b a Y_2b._d vytvorené naviazaním dusíka na C-25 jednej podjednotky na C-14 druhé podjednotky. Tieto zlúčeniny pochádzajú z kultúr S. lavendulae rastúcich v suplementovaných médiách. Saframycín ARi(=AH₂), mikrobiálny produkt redukcie saframycínu A na C-25, vytvorený mikroorganizmom Rhodococcus amidohpilus bol tiež pripravený nonstereoselektívnou chemickou redukciou saframycínu A pomocou borohydrátu sodného ako zmes epimérov 1:1, za ktorou nasledovala chromatografická separácia (druhý AHi izomér je menej polárny).

Produkt ďalšej redukcie, saframycín AR₃, 21-dekyano-25-dihydrosaframycín A, (t.j. 25-dihydrosaframycín B) bol vytvorený rovnakou mikrobiálnou konverziou. Iným typom mikrobiálnej konverzie saframycínu A pomocou Nocardia spec. bol vytvorený saframycín B a ďalšou redukciou mikroorganizmom Mycobacterium spec. bol vytvorený saframycín AH¹Ac. Pre biologické experimenty boli tak isto pripravené 25-O-acetáty saframycínu AH₂ a AHi.

-8Zlúčeniny typu I podľa všeobecného vzorca X boli izolované z morských sasaniek viď. tab. 2

Tab.2

Štruktúry zlúčenín typu I pochádzajúcich z morských sasaniek

	Substituent
R^14a	_R14b _R21	R
renieramicín A	OH	H	H	-C(CH₃)=CH-CH₃
renieramicín B	OC₂H₅	H	H	-C(CH₃)=CH-CH₃
renieramicín C	OH	0	0	-C(CH₃)=CH-CH₃
renieramicín D	OC₂H₅	0	0	-C(CH₃)=CH-CH₃
renieramicín E	H	H	OH	-C(CH₃)=CH-CH₃
renieramicín F	OCH₃	H	OH	-C(CH₃)=CH-CH₃
xestomycín	och₃	H	H	-ch₃

-9Renieramycíny A až D boli izolované z antimikrobiálneho extraktu huby Reniera spec., pochádzajúcej z Mexika, spoločne s biogeneticky príbuznými monomerickými izochinolínmi, ako sú renieron a príbuzné zlúčeniny.

Štruktúra renieramycínu A bola pôvodne stanovená pomocou invertovanej stereochémie na C-3, C-11 a C-13. Dôkladným rozborom dát získaných pomocou ¹H NMR analýzy príbuzných zlúčenín renieramycínu E a F, izolovaných z rovnakej sasanky nájdenej v Palau, bolo zistené, že spojenie kruhov renieramycínov je identické so spojením kruhov nájdených u saframycínov. Toto zistenie viedlo k záveru, že pôvodne stanovená stereochémia renieramycínov A až D musí byť rovnaká ako u saframycínov.

Xestomycín bol nájdený v sasanke Xestospongia spec., žijúca vo vodách Srí

Lanky.

Zlúčeniny typu II podľa všeobecného vzorca XI nesúci redukovaný hydrochinónový kruh zahrňujú saframycíny D a F, izolované zo S.lavendulae a saframycíny Mx-1 a Mx-2 izolované z Myxococcus xanthus. Viď. tab.3.

Tab.3

Zlúčeniny typu II

-10Substituenty

Zlúčenina	_R14a	_R14b	R²¹	_R25a	R^25b	_r25c
saframicín D	0	0	H	0	0	ch₃
saframicín F	0	0	CN	0	0	ch₃
saframicín Mx-1	H	och₃	OH	H	ch₃	nh₂
saframicín Mx-2	H	och₃	H	H	ch₃	nh₂

Kostra typu III bola nájdená v antibiotikách safracín A a B, izolovaných z kultúry Pseudomonas fluorescens.

Tieto antibiotiká podľa všeobecného vzorca XII sa skladajú z tetrahydroizochinolínchinonovej a tetrahydroizochinolínfenolovej podjednotky,

kde

R²¹ je -H v safracíne A a -OH v safiacíne B.

Saftamycín R, jediná zlúčenina, klasifikovaná ako zlúčenina nesúca kostru typu IV, bol rovnako izolovaný zo S.lavendulae. Táto zlúčenina podľa všeobecného vzorca XIII, pozostávajúca z hydrochinónového kruhu s postranným glykolesterovým reťazcom na jednom z fenolických kyslíkov je pravdepodobne výhodnejší ako saframycín A, a to vďaka jej miernej toxicite.

-11 OCH

Ό

CH (XIII) o

Všetky tieto známe zlúčeniny majú systém fuzovaných piatich kruhov A až E, ako je to znázornené na nasledovnej štruktúre všeobecného vzorca XIV;

(XIV)

V ekteinascidínoch a niektorých ďalších zlúčeninách sú kruhy A a E fenolické, zatiaľ čo v iných zlúčeninách, najmä v saframycínoch sú kruhy A a E chinolické. V známych zlúčeninách sú kruhy B a D tetrahydro, pokým kruh C je perhydro.

Predmetom vynálezu je potreba výroby aktívnych zlúčenín so systémom fuzovaných piatich kruhov zo zlúčenín dnes známych. Tak isto je predmetom potreba vývoja alternatívnych ciest na syntézu ekteinascidínov a príbuzných zlúčenín. Takéto spôsoby syntézy znamenajú omnoho ekonomickejší prístup k už známym protinádorovým latkám, a tiež dovoľujú prípravu nových aktívnych zlúčenín.

- 12Podstata vynálezu

Vynález je zameraný na použitie známej zlúčeniny safracín B, nazývanou tiež chinonamín, v polosyntetickej syntéze.

Všeobecnejšie, vynález je podobný polosyntetickému procesu prípravy medziproduktov, derivátov a príbuzných štruktúr ekteinascidínu alebo iných zlúčenín tetrahydroizochinolínfenolu, počínajúc z prírodných bis(tetrahydroizochinolín)-ových alkaloidov. Vhodný východzí materiál polosyntetického procesu obsahuje triedy saframycínových a safracínových antibiotík, nachádzajúcich sa v kultivačných médiách rôznych mikroorganizmov, ako aj triedy zlúčenín reineramycínu a xestomycínu , nachádzajúcich sa v morských sasankách.

Všeobecný vzorec XV východzích zlúčenín je nasledovný:

(XV) kde R¹ je amidometylová skupina ako napríklad -CH2-NH-CO-CR^25aR^25bR^25c, kde R^25btvorí keto- skupina alebo jedna je -OH, -NH2 alebo -OCOCH₃ a druhá je -CH₂COCH_3i -H, -OH alebo -OCOCH_3l keď R^25a je -OH alebo -NH2, potom R^25b nie je -OH a R^25c je -H, -CH3 alebo -CH₂CH₃, alebo R¹ je acyloxymetylénová skupina ako napríklad -CH₂-O-CO-R, kde R je -C(CH₃)=CH-CH₃ alebo -CH_3l kde R⁵ a R⁸ sú vybrané nezávisle z -H, -OH alebo -OCOCH₂OH, alebo R⁵ a R⁸ sú obidva keto a kruh A je p-benzochinónový r14_{3 g} pi4b _S(z Qj-jjjyg _a[ebo jeden je -H a druhý je -OH, -OCH₃ alebo -OCH₂CH₃, alebo R^14a a R^14b tvoria spoločne keto skupinu

- 13R¹⁵ a R¹⁸ sú vybrané nezávisle z -H, alebo -OH, alebo R⁵ a R⁸ sú obidva keto a kruh A je p-benzochinónový a kde R²¹ je -OH alebo -CN

Všeobecnejší vzorec tejto triedy zlúčenín je znázornený nižšie:

kde substitučné skupiny definované ako R_h R₂, R₃, R₄, R₅, R₆₎ R₇₎ R₈, R₉, R₁₀ sú nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -H, -OH, OCH₃, CN, =0, CH₃; kde X predstavuje rôzne amidové alebo esterové funkčné skupiny obsiahnuté v prírodných produktoch;

kde každý bodkovaný kruh predstavuje jednu, dve alebo tri prípadné dvojité väzby.

V predkladanom vynáleze sa definujú polosyntetické postupy na prípravu medziproduktov obsahujúcich medziprodukt 11, a teda na prípravu zlúčenín ekteinascidínu, ako aj ftalascidínu a prídavných zlúčenín. Polosyntetické postupy vynálezu obsahujú veľký počet krokov potrebných na dosiahnutie žiadaného produktu. Každý samostatný krok je proces súvisiaci s predkladaným vynálezom. Vynález nie je obmedzený len na postupy tu uvedené; alternatívne postupy, ako napríklad zmena poradia jednotlivých krokov, sú tak isto možné.

- 14 Tento vynález je založený na dostatočnom množstve 21- kyano reaktantu ako východzej zlúčeniny všeobecného vzorca XVI:

(XVI) kde R¹, R⁵, R⁸, R^14a, R^14b, R¹⁵ a R¹⁸ sú opísané vyššie.

Iné zlúčeniny všeobecného vzorca XVI s rôznymi substituentami v polohe 21 tak isto predstavujú možný východzí materiál. Všeobecne, akýkoľvek derivát, ktorý je možné vyrobiť nukleofilným nahradením 21- hydroxylovej skupiny zlúčenín všeobecného vzorca XV, kde R²¹ je hydroxylová skupina, je derivátom kandidátnym. Príklady vhodných 21- substituentov obsahujú nasledovné funkčné skupiny, avšak nie sú na ne obmedzené:

merkapto-skupina;

alkyltio skupina (alkylová skupina s 1 až 6 uhlíkovými atómami);

aryltio skupina (arylová skupina so 6 až 10 uhlíkovými atómami, nesubstltuovaná nebo substituovaná 1 až 5 substituentami, vybranými napríklad z: alkylová skupina s 1 až 6 atómami uhlíka, alkoxy skupiny s 1 až 6 atómami uhlíka, halogénové atómy, merkapto skupiny a nitro skupiny);

amino-skupina;

mono alebo dialkylamino-skupina (táto alebo každá alkylová skupina má 1 až 6 uhlíkových atómov);

mono alebo diarylamino-skupina (táto alebo každá arylo skupina definovaná rovnako ako vyššie spomenuté aryltio skupiny);

α-karbonylalkyl skupina všeobecného vzorca -C(R^a)(R^b)-C(=O)R^c, kde

R^a a R^b sú vybrané z atómov vodíka, alkylových skupín s 1 až 20 atómami uhlíka, arylových skupín (ako je definované vyššie v súvislosti s aryltio skupinami) a aralkylskupín (v ktorých alkylová skupina s 1 až 4 atómami uhlíka je nahradená

-15arylovovu skupinou, definovanou, vyššie v súvislosti s aryltio-skupinami), s podmienkou, že jeden z R^a a R^bje atóm vodíka;

R^c je vybraný z atómov vodíka, alkylové skupiny s 1 až 20 atómami uhlíka, arylových skupín (ako je definované vyššie v súvislosti s aryltio skupinami), aralkylové skupiny (v ktorých alkylová skupina s 1 až 4 atómami uhlíka je nahradená arylovovu skupinou, definovanou vyššie v súvislosti s aryltio skupinami), alkoxy-skupiny s 1 až 6 atómami uhlíka, amino-skupiny a mono- alebo dialkylamino skupiny ako je uvedené vyššie.

Zo všeobecnejšieho hľadiska súvisí predkladaný vynález s procesmi, v ktorých je prvým krokom príprava 21-derivátu pri použití nukleofilného činidla. Zlúčeniny tohto druhu sa nazývajú 21-Nuc zlúčeniny.

Prítomnosť 21-kyano-skupiny je potrebná pre niektoré konečné produkty, predovšetkým ekteinascidín 770 a ftalascidín, pokiaľ pre iné konečné produkty pôsobí ako ochranná skupina, ktorá môže byť okamžite premenená na iný substituent, ako napríklad 21-hydroxy skupinu ekteinascidínu 743 alebo 21hydroxyftalascidínu. Zavedenie 21- kyano zlúčeniny ako východzieho materiálu výrazne stabilizuje molekulu počas ďalších syntetických krokov, než je prípadne odstránená. Iné 21-Nuc zlúčeniny ponúkajú túto a iné výhody.

Z jedného dôležitého hľadiska spočíva predkladaný vynález v použití 21kyano zlúčeniny so všeobecným vzorcom XVI ph príprave bis- alebo tris(tetrahydroizochinolínfenol)ových zlúčenín. Produkty, ktoré sa pripravia, zahrňujú medziprodukty, ako napríklad medziprodukt 11a ekteinascidíny a ftalascidín, ako aj nové a známe zlúčeniny príbuznej štruktúry.

Výhodným východzím materiálom sú zlúčeniny podľa všeobecného vzorca XV alebo XVI, kde R^14a a R^14b sú obidva atómy vodíka. Vhodným východzím materiálom sú také zlúčeniny podľa všeobecného vzorca XV alebo XVI, kde R¹⁵ je atóm vodíka. Ďalším výhodným východzím materiálom sú zlúčeniny podľa všeobecného vzorca XV alebo XVI, kde kruh E je fenolový. Výhodným východzím materiálom sú zlúčeniny podľa všeobecného vzorca XV alebo XVI, kde aspoň jeden, lepšie aspoň dva alebo tri z R⁵, R⁸, R¹⁵ a R¹⁸ nie sú atómy vodíka.

- 16 Príklady vhodného východzieho materiálu pre tento vynález zahrnujú saframycín A, saframycín B, saframycín C, saframycín G, saframycín H, saframycín S, saframycín Y3, saframycín Y_d1, saframycín A_db saframycín Y_d2, saframycín AH₂, saframycín AH₂Ac, saframycín AHi, saframycín AHiAc, saframycín AR₃, renieramycín A, renieramycín B, renieramycín C, renieramycín D, renieramycín E, renieramycín F, xestomycín, saframycín D, saframycín F, saframycín Mx-1, saframycín Mx-2, safracín A, safracín B a saframycín R.

Vhodný východzí materiál má kyano skupinu v polohe 21 (pre skupinu R²¹).

Zvlášť významnou okolnosťou je, že vynález zahrnuje polosyntetický proces, v ktorom sa transformačné kroky týkajú safracínu B.

Safracín B predstavuje kruhový systém priamo príbuzným s ekteinascidínmi. Táto zlúčenina má rovnakú pentacyklovú štruktúru a rovnaký substitučný vzorec aromatického kruhu E. Tak isto je safracín B veľmi podobný niektorým syntetickým medziproduktom celkovej syntézy ET-743, predovšetkým medziproduktu 11.

Medziprodukt tohto druhu sa mení na ET-743 pomocou dobre uplatnenej metódy. Syntetická konverzia safracínu B v medziprodukte 11 totiž predstavuje polosyntetickú metódu na získanie ET-743.

Týmto spôsobom sa zo safracínu B pripraví medziprodukt 11 a zlúčeniny odvodené od medziproduktu 11, konkrétne zlúčeniny ekteinascidínu. Ďalej sa zo safracínu B pripraví ftalascidín. Predkladaný vynález súvisí s použitím safracínu B v

- 17 príprave medziproduktu 11, ftalascidínu, zlúčenín ekteinascidínu a iných medziproduktov vynálezu. Vynález tak isto súvisí so zlúčeninami opísanými v predkladanom vynáleze a so zlúčeninami odvodenými od iných uvedených vhodných východzích materiálov, ako aj s použitím týchto zlúčenín pri príprave týchto zlúčenín.

Výhodnejšie východzie produkty tohoto vynálezu majú 21-kyano skupinu. V súčasnej dobe najvýhodnejšou zlúčeninou predkladaného vynálezu je zlúčenina podľa všeobecného vzorca (2). Tento produkt sa získa priamo zo safracínu B a je považovaný za kľúčový medziprodukt v polosyntetickom procese.

(2)

Kyanosafracín B sa pripravuje kvasením safracínu B produkujúceho kmeňa Pseudomonas fluorescens a spracovaním kultivačného média pomocou kyanidového iónu. Výhodným kmeňom Pseudomonas fluorescens je kmeň A2-2, FERM BP-14, ktorý sa využíva pri príprave EP 055, 299. Vhodným zdrojom kyanidového iónu je kyanid draselný. Kultivačné médium sa prefiltruje a pridá sa nadbytok kyanidového iónu. Po jednej hodine trepania sa upraví pH na hodnotu 9,5 a po organickej extrakcii sa získa hrubý bunkový extrakt. Následnou purifikáciou hrubého extraktu sa získa kyanosafracín B.

Stereochémia uvedená v tomto patente je založená na poznatkoch správnej stereochémie prírodných produktov. V prípade, že by bola odhalená chyba v použitej stereochémii, je potrebné urobiť potrebné opravy vo vzorkách v rozsahu celého patentu.

Z dôvodu, že uvedené syntézy je možné modifikovať, sa tento vynález rozširuje o stereoizoméry.

- 18Produkty tohto vynálezu sú typické podľa všeobecného vzorca XVII:

(XVII) alebo podľa všeobecného vzorca XVIIb:

kde

R¹ je prípadne chránená alebo derivatizovaná aminometylénová skupina, ako napríklad skupina R¹ definovaná pre vzorec XV;

R⁴ je-H;

- 19alebo

R¹ a R⁴ spoločne tvoria skupinu podľa všeobecného vzorca IV, V, VI alebo VII:

R⁵ je -H alebo -OH;

R⁷ je -OCH3 a R⁸ je -OH alebo R⁷ a R⁸ spoločne tvoria skupinu -O-CH2-O;

r14_{3 g} pi4b _sq Qbjdva _h _a|ebo jeden je -H a druhý je -OH, - OCH₃ alebo OCH₂OCH_3l alebo

R^14a a R^14b spoločne tvoria keto skupinu; a R¹⁵ je -H alebo -OH;

R²¹ je -H, -OH alebo -CN;

a deriváty zahrňujúce acyl deriváty, hlavne tie, kde R⁵ je acetyloxy alebo iná acyloxy skupina s maximálne 4 atómami uhlíka, a zahrňujúca deriváty, v ktorých skupina -NCH₃ v polohe 12 je nahradená skupinou -NH alebo -NCH₂CH₃ a deriváty, v ktorých -NH₂ skupina v zlúčenine podľa všeobecného vzorca VI je prípadne derivatizovaná,

V zlúčeninách podľa všeobecného vzorca XVIIa alebo XVIIb je R¹ typicky aminometylén, amidometylén, alebo R¹ spoločne s R⁴ tvoria skupinu IV alebo V. Vhodné amidometylénové skupiny zahrňujú skupiny podľa všeobecného vzorca -CH2-NH-CO-CHCH3-NH2 odvodené od alanínu a podobné skupiny odvodené od iných aminokyselín, najmä D- a L- glycín, valín, leucín, izoleucín, fenylalanín, tyrozín, tryptofán, metionín, cysteín, aspartát, asparagín, kyselina glutamová, glutamín, lyzín, arginín, prolín, serín, treonín, histidín a hydroxyprolín. Všeobecný vzorec skupiny R¹ je potom -CH₂-NH-aa, kde aa predstavuje aminoacyl.

-20Skupina R¹ môže byť acylovaná na skupine NH_2> a napríklad N-acylové deriváty sa pripravia zo skupín -CH2-NH2 a -CH₂-NH-aa. Acyl deriváty môžu byť N-acyl deriváty alebo z nich N-tioacyl deriváty, rovnako ako cyklické amidy.

Na ilustráciu, acyl skupiny môžu byť alkanoyl, haloalkanoyl, arylalkanoyl, alkenoyl, heteocyklylacyl, aroyl, arylaroyl, haloaroyl, nitroaroyl alebo iné acyl skupiny. Acyl skupiny majú všeobecný vzorec -C0-R³, kde R^a predstavuje rôzne skupiny ako napríklad alkyl, alkoxy, alkylén, arylalkyl, arylalkylén, aminoacyl alebo heterocyklyl, každý prípadne substituovaný halo, kyano, nitro, carboxyalkyl, alkoxy, aryl, aryloxy, heterocyklyl, heterocyklyloxy, alkyl, amino alebo substituovanú amino skupinu.

Iné alkylujúce látky zahrnujú izotiokyanáty, ako napríklad aryl izotiokyanáty, najmä fenyl izokyanát. Alkyl, alkoxy alebo alkylénová skupina R^a má s výhodou 1 až 6 až 12 atómov uhlíka a môže byť lineárna, vetvená alebo cyklická. Arylové skupiny sú typicky fenyl, bifenyl alebo naftyl.

Heterocyklylové skupiny môžu byť aromatické alebo čiastočne alebo úplne nenasýtené a s výhodou majú 4 až 8 kruhových atómov, najvýhodnejšie 5 alebo 6 kruhových atómov, s jedným alebo viacerými heteroatómami, ktorými sú buď dusík, síra alebo kyslík.

Aby bol zoznam kompletný, typické R^a skupiny zahrnujú alkyl, haloalkyl, alkoxyalkyl, haloalkoxyalkyl, arylalkylén, haloalkylarylalkylén, acyl, haloacyl, arylalkyl, alkenyl a aminokyselinu.

Napríklad R^a-CO môže byť acetyl, trifluoroacetyl, 2,2,2trichloroetoxykarbonyl, izovalerylkarbonyl trans-3-(trifluorometyl)cinamoylkarbonyl, heptafluorobutyryl-carbonyl, dekanoylkarbonyl, trans-cinamoylkaronyl, butyrylkarbonyl, 3-chloro-propyonylkarbonyl, cinamoylkarbonyl, 4metylcinamoylkarbonyl, hydrocinamoyl-karbonyl alebo trans-hexenoylkarbonyl alebo alanyl, arginyl, aspartyl, asparagyl, cystyl, glutamyl, glutaminyl, glycyl, histidyl, hydroxyprolyl, izoleucyl, leucyl, lyzyl, metionyl, fenylalanyl, prolyl, seryl, treonyl, tyronyl, tryptofyl, tyrosyl, valyl, ako aj iné menej známe amino acyl skupiny, ako aj ftalimido a iné cyklické amidy. Iné príklady je možné nájsť v zozname chrániacich skupín.

-21 Zlúčeniny, kde -C0-R³ je odvodený od aminokyseliny a obsahuje amino skupinu, môžu samé tvoriť acylové deriváty. Vhodné N-acylové zlúčeniny zahrnujú dipeptidy, ktoré sú obratom schopné tvoriť N-acylové deriváty.

V jednej modifikácii, ktorá sa týka medziproduktov, je kruh A zmenený tak, že inkorporuje podštruktúru, uvedenú ako zlúčenina podľa všeobecného vzorca XX alebo XXI, ako bude uvedené nižšie.

V inej modifikácii, ktorá sa týka medziproduktov, môže byť skupina R¹ «

CH2O-CO-Cfu-CH₂-S-Prot³ odvodená od zlúčeniny podľa všeobecného vzorca XIX, kde Prot³ a Fu majú naznačené významy. V takom prípade, R⁷ a R⁸ tvoria oxymetylénoxy skupinu. Skupina R¹⁸ je obvykle chránená. R²¹ je obvykle kyano.

R^14a a R^14b sú s výhodou atómy vodíka. R¹⁵ je s výhodou atóm vodíka. 0acylové deriváty sú výhodne alifatické O-acyl deriváty, hlavne acylové deriváty veľkostí 1 až 4 uhlíkových atómov, a typicky je to O-acetylová skupina, predovšetkým na pozícii 5.

Vhodné chrániace skupiny pre fenoly a hydroxy skupiny zahrnujú étery a estery, ako sú alkyl, alkoxyalkyl, aryloxyalkyl, alkoxyalkoxylalkyl, alkylsilylalkoxylalkyl, alkyltioalkyl, aryltioalkyl, azidoalkyl, cyanoalkyl, chloroalkyl heterocyklyl, arylacyl, haloarylacyl, cycloalkylalkyl, alkenyl, cykloalkyl, alkylarylalkyl, alkoxyarylalkyl, nitroarylalkyl, haloarylalkyl, alkylaminokarbonylarylalkyl; alkylsulfinylarylalkyl, alkylsilyl a iné étery, rovnako ako arylacyl, arylalkylkarbonát, alifatický karbonát, alkylsulfínylary lalkyl karbonát, alkyl karbonát, arylhaloaíkyl karbonát, arylalkenyl karbonát, aryl karbamát, alkyl fosfinyl, alkylfosfmotioyl, aryl fosfinotioyl, arylalkyl sulfonát a iné estery. Tieto skupiny sa prípadne môžu nahradiť vyššie uvedenými skupinami v R¹.

Vhodné chrániace skupiny amínov zahrnujú karbamáty, amidy a iné chrániace skupiny, ako napríklad alkyl, arylaldyl, sulfo-alebo halo-arylalkyl, haloalkyl, alkylsilylalkyl,arylalkyl, cykloalklylalkyl, alkylarylalkyl, heterocyklylalkyl,

-22nitroarylalkyl, acylaminoalkyl, nitroarylditioarylalkyl, dicylkoalkylkarboxamidoalkyl, cykloalkyl, alkenyl, arylalkenyl, nitroarylalkenyl, heterocyklylalkenyl, heterocyklyl, hydroxyheterocyklyl, alkylditio, alkoxy - alebo halo- alebo alkylsulfinyl arylalkyl, heterocyklylacyl, aroyl, arylaroyl, haloaroyl, nitroalroyl a iné amidy, ako aj alkyl, aldenyl, alkylsilylalkoxyalkyl, alkoxyalkyl, kyanoalkyl, haetrocyklyl, alkoxyarylalkyl, cykloalkyl, nitroaryl, arylalkyl, alkoxy- alebo hydroxy- arylalkyl a mnoho iných skupín. Tieto skupiny sa prípadne môžu nahradiť vyššie uvedenými skupinami v R¹.

Príklady chrániacich skupín sú uvedené v nasledujúcich tabuľkách;

-23Ochrana -OH skupiny Éter

Skratka metyl metoxymetyl benzyloxymetyl metoxyetoxymetyl

2-(trimetylsilyl)etoxymetyl metyltiometyl phenyltiometyl azidometyl cyanometyl

2,2-dichloro-1,1 -difluoroetyl

2-chloroetyl

2-bromoetyl tetrahydropyranyl

-etoxyetyl phenacyl

4-bromophenacyl cyklopropylmetyl allyl propargyl izopropyl cyklohexyl t -butyl benzyl

2.6- dimetylbenzyl

4-metoxybenzyl o-nitrobenzyl

2.6- dichlorobenzyl

3,4-dichlorobenzyl

4-(dimetyiamino)carbonylbenzyl

4-mety!suflinylbenzyl

9-antrylmetyl

4-picolyl heptafluoro-p-tolyl tetrafluoro-4-pyridyl trimetylsilyl ŕ-butyldimetylsilyl ŕ-butyldiphenylsilyl triizopropylsilyl

MOM

BOM

MEM

SEM

MTM

PTM

THP

EE

MPM / PMB

Msib

TMS

TBDMS

TBDPS

TIPS

-24Estery aryl formiát aryl acetát

aryl levulinát aryl pivaloát aryl benzoát aryl 9-fluorocarboxylát	ArOPv
aryl metyl carbonát 1-adamantyl carbonát ŕ-butyl carbonát 4-metylsulfinylbenzyl carbonát 2,4-dimetylpent-3-yl carbonát aryl 2,2,2-trichloroetyl carbonát aryl vinyl carbonát uryl benzyl carbonát uryl carbamát	BOC-OAr Msz-Oar Doc-Oar
dimetylphosphinyl dimetylphosphinotioyl diphenylphosphinotioyl	Dmp-OAr Mpt-OAr Dpt-Oar
aryl metanesulfonát aryl toluénesulfonát aryl 2-formylbenzenesulfonát

Karbamáty	Ochrana -NH₂ skupiny Skratka
metyl etyl 9-fluorenylmetyl 9-(2-sulfo)fluroenylmetyl 9-(2,7-dibromo)fluorenylmetyl 17-tetrabenzol[a,c_lg,i]fluorenylmetyl 2-chloro-3-indenylmetyl	Fmoc Tbfmoc Climoc

benz[f]inden-3-ylmetyl Bimoc

2,7-di-ŕ-buty l[9-( 10,10-dioxo-10,10,10,10-

tetrahydrotioxantyl)]metyl 2,2,2 -trichloroetyl 2-trimetylsilyletyl 2-fenyletyl 1 -(1 -adamantyl)-1 -metyletyl 2-chloroetyl 1,1 -dimetyl-2-chloroetyl 1,1 -dimetyl-2-bromoetyl

DBD-Tmoc Troc Teoc hZ Adpoc

-251,1 -dimetyl-2,2-dibromoetyl 1,1 -di mety I-2,2,2_trich I oroety I

1- metyl-1-(4-bifenyl)etyl

-(3,5-di-ŕ-buty Ifeny l)-1 -1 -metyletyl

2- (2'-and 4'-pyridyl)etyl

2,2-bis(4’-nitrofenyl)etyl n-(2-pivaloylamino)-1,1 -di mety lety I

2-[(2-nitrofenyl)ditio]-1-fenyletyl 2-(n,n-dicyklohexylcarboxamido)etyl ŕ-butyl

-adamantyl

2- adamantyl vinyl allyl

-izopropylallyl cinnamyl

4-nitrocinnamyl

3- (3'-pyridyl)prop-2-enyl

8- chinolyl n-hydroxypiperidinyl alkylditio benzyl p-metoxybenzyl p-nitrobenzyl p-bromobenzyl p-chlorobenzyl

2,4-dichlorobenzyl

4- metylsulfinylbenzyl

9- antry lmety I difenylmetyl phenotiazinyl-(10)-carbonyl n - p-toluenesulfonylaminocarbonyl n'- p-fenylaminotiocarbonyl

Amidy formamid acetamid chloroacetamid trifluoroacetamid fenylacetamid

3- fenylpropanamid pent-4-enamid picolinamid pyridylcarboxamid benzamid p-fenylbenzamid n-phtalimid n-tetrachlorophtalimid

4- nitro-n-phtalimid

DB-ŕ-BOC

TCBOC

Bpoc ŕ-Burmeoc

Pyoc

Bnpeoc

NpSSPeoc

BOC 1 -Adoc 2-Adoc Voc

Aloc or Alloc

Ipaoc

Coc

Noc

Paloc

Cbz/Z

Moz

PNZ

Msz

TFA

TCP

-26/7-ditiasuccinimid n-2,3-difenylmaleimid n-2,5-dimetylpyrrol n-2,5-bis(triizopropylsiloxyl)pyrrol n-1,1,4,4-tetrametyldisiliazacyclopentant addukt 1,1,3,3-tetrametyl-1,3-d isilaisoindol ín

Zvláštne -NH chrániace skupiny n-metylamín n-í-butylamín /7-allylamín n-[2 trimetylsilyl)etoxy]metylamín n-3-acetoxypropylamín n-cyanometylamín n-(1-izopropyl-4-nitro-2-oxo-3-pyrrolin-3-yl)amín n-2,4-dimetoxybenzylamín

2-azanorbornenes n-2,4-dinitrofenylamín n-benzylamín n-4-metoxybenzylamín n-2,4-dimetoxybenzylamín n-2-hydroxybenzylamín n-(difenylmetyl)amino n-bis(4-metoxyfenyl)rnetylamín n-5-dibenzosuberylamín n-trifenylmetylamín n-[(4-metoxyfenyl)difenylmetyl]amino n-9-fenylflurenylamín n-ferrocenylmetylamín n-2-picolylamine n’-oxid n-1,1 -dimetyltiometylénamín n-benzylideneamín n-p-metoxybenzylideneamín n-difenylmetyleneamín n-(5,5-dimetyl-3-oxo-1-cyklohexenyl)amín n-nitroamín n-nitrosoamín difenylfosfinamid dimetyltiofosfinamid difenyltiofosfinamid dibenzyl fosforamidát

2- nitrobenzenesulfenamid n-1 -(2,2,2-trif I uoro-1,1 -difenyl)etylsufenamid.

3- nítro-2-pyridinesulfenamid p-toluenesulfonamid benzenesulfonamid

Dts

BIPSOP

STABASE

BSB

SEM

Dmb

Bn

MPM

DMPM

Hbn

DPM

DBS

Tr

MMTr

Pf

Fcm

DPP

Mpt

Ppt

Nps

TDE

Npys

Ts

-27 Safracín B obsahuje alanylový postranný reťazec. Bolo zistené, že chránenie voľnej amino skupiny Boe skupinou je velmi osožné.

Konkrétne ekteinascidínové produkty tohoto vynálezu zahrnujú zlúčeniny podľa všeobecného vzorca XVIII:

(XVIII) kde R¹ a R⁴ tvoria skupinu podľa všeobecného vzorca IV, V, VI alebo VII:

zriedkavo skupinu podľa všeobecného vzorca IV nebo V;

R²¹ je -H, -OH alebo -CN, zriedkavo -OH alebo -CN;

a ich acylové deriváty, zriedkavo 5-acyl deriváty zahrnujúce 5-acyl derivát.

-28Príklady uskutočnenia vynálezu

Príprava ekteinascidínu 743 a príbuzných zlúčenín

Všeobecne, premena 21-kyano východzej zlúčeniny na ekteinascidín napríklad podľa všeobecného vzorca XVIII - zahrnuje:

a) v prípade potreby premenu E kruhu chinónového systému na systém fenolový

b) v prípade potreby premenu A kruhu chinónového systému na systém fenolový

c) premenu A kruhu fenolového systému na metyléndioxyfenolový kruh

d) tvorbu premosteného spiro kruhového systému podľa všeobecného vzorca IV, VI alebo VII cez pozíciu 1 a 4 kruhu B; a

e) derivatizáciu, podľa potreby, ako napríklad acylácia

Krok (a) - v prípade potreby premena E kruhu chinónového systému na systém fenolový, sa uskutoční obvyklým redukčným procesom. Vhodným reakčným systémom je vodík s paládiovo-uhlíkovým katalyzátorom, aj keď je možné použiť akýkoľvek iný redukčný systém.

Krok (b) - v prípade potreby premena A kruhu chinónového systému na systém fenolový, je analogický kroku (a).

Krok (c) - premena A kruhu fenolového systému na metyléndioxyfenolový kruh, môže byť ovplyvnený rôznymi spôsobmi, pravdepodobne spoločne s krokom (b). Napríklad, chinónový kruh môže byť demetylovaný na metoxy skupine na pozíciu 7 a redukovaný na dihydrochinón a zachytený vhodnou elektrofilnou látkou ako napríklad CH₂Br₂, BrCH₂CI alebo podobnou dvojmocnou látkou, čím sa priamo získa metyléndioxy kruhový systém, alebo pomocou dvojmocného reagentu ako napríklad tiokarbonyldiimidazol, čím sa získa substituovaný metyléndioxy kruhový systém, ktorý sa môže konvertovať na želaný kruh.

-29 Krok (d) je typicky ovplyvnený vhodnou substitúciou na pozíciu 1 pomocou premosťovacieho reagentu, ktorý napomáha formovaniu želaného mostíka tým, že tvorí exendo chinónmetid na pozícii 4 a dovoľuje metidu reagovať s 1- substituentom pri tvorbe premostenej štruktúry. S výhodou používané premosťovacie reagenty sú podľa všeobecného vzorca XIX;

Prot

(XIX) kde Fu predstavuje chránenú funkčnú skupinu, ako napríklad -NHProt⁴³ alebo OProt^4b;

Prot³ je chrániaca skupina a bodkovaná čiara naznačuje prípadnú dvojitú väzbu.

Metid sa s výhodou pripraví vnesením hydroxy skupiny v polohe 10 v oblasti spoja kruhov A a B čím vznikne produkt so všeobecným vzorcom XX:

alebo výhodnejšie produkt so všeobecným vzorcom XXI;

(XXI)

-30kde skupina R“ je zvolená tak, aby vznikla zlúčenina podľa všeobecného vzorca IV, V, VI alebo VII. Pre prvé dve takéto zlúčeniny má skupina R“ obvykle tvar -CHFu-CH₂=SProt³.

Chrániace skupiny môžu byť potom odstránené a modifikované podľa potreby tak, aby vznikla želaná zlúčenina.

Typický postup pre krok (d) je uvedený v US Patente 5 721 362, ktorý je tu citovaný. Zvláštne odkazy sú k pasáži stĺpca 8, krok (1) a príklad 33 US Patentu, a k príbuzným oblastiam.

Derivatizácia v kroku (e) zahrnuje acyláciu, napríklad pomocou skupiny R^a-CO, ako aj premenu 12-NCH₃ skupiny na 12-NH alebo 12-NCH₂CH₃. Táto reakcia môže predchádzať alebo nasledovať iné kroky.

Na ilustráciu, teraz je možné premeniť zlúčeninu kyanosafracínu B podľa všeobecného vzorca 2 na ET-743. Tento spôsob prípravy ET-743 je omnoho priamejší a kratší, ako ponúkali skôr známe metódy. Kyanosafracín B sa mení na medziprodukt 25;

a z tohoto derivátu je možné pripraviť veľké množstvo cysteínových derivátov, ktoré sa potom premenia na ET-743. S výhodou používané cysteínové deriváty sú znázornené pomocou týchto zlúčenín podľa všeobecného vzorca:

lnt-29

Retrosyntetická analýza na znázornená na schéme I.

prípravu ET-743 použitím zlúčeniny je

cA^S^Fm

NHTroc

Schéma I

-32Podľa schémy I je možné získať ET-743 v 21 lineárnych krokoch. Táto metóda premieňa kyanosfracín B na medziprodukt 25, a to pomocou postupnosti reakcií, ktoré zahrnujú (1) odstránenie metoxy skupiny umiestnenej v kruhu A, (2) redukciu kruhu A a formáciu metyléndioxy skupiny; to všetko v jednej reakčnej nádobe, (3) hydrolýzu amidovej funkčnej skupiny na uhlíku 1, (4) premenu vzniknutej amino skupiny na hydroxylovú skupinu. Reakčný postup nechráni primárnu alkoholovú funkčnú skupinu v polohe 1 v kruhu B zlúčeniny 25; reakcia priamo využíva cysteínový zvyšok 29 na prípravu medziproduktu 27. Derivát cysteínu 29 je chránený na amino skupine s β-β-βtrichloroetoxykarbonylovou chrániacou skupinou, aby sa zachovala kompatibilita s existujúcou allylovou a MOM skupinou. Medziprodukt 27 je okamžite oxidovaný a zacyklovaný. Tieto okolnosti, spolu s rôznou deprotektívnou stratégiou v neskorších štádiách reakcie znamenajú nové cesty syntézy, prístupnejšie priemyselnému vývoju než proces vedený pod názvom US 5 721 362.

Premena zlúčeniny 2-kyano na medziprodukt 25 obvykle zahrnuje tieto kroky (viď schéma II):

• prípravu chránenej zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 14, vytvorenej reakciou 2 s anhydridom ferc-butoxykarbonylu;

• premenu zlúčeniny 14 na chránenú zlúčeninu podľa všeobecného vzorca 15, vytvorenej reakciou s bromometylmetyl étherom a diizopropyletylamínom v acetónitrile;

• selektívne odstránenie metoxy skupiny chinónového systému v zlúčenine 15, čím sa získa zlúčenina podľa všeobecného vzorca 16, vytvorená reakciou s metanolovým roztokom hydroxidu sodného;

• premenu zlúčeniny 16 na zlúčeninu dioxymetylénovú podľa všeobecného vzorca 18 tak, že sa využije táto potupnosť reakcií:

(1) chinónová skupina zlúčeniny 16 sa redukuje 10% Pd/C vo vodíkovej atmosfére;

-33(2) hydrochinónový medziprodukt sa premení na metyléndioxy zlúčeninu podľa všeobecného vzorca 17 tak, že reaguje s bromochlorometánom a cézium karbonátom vo vodíkovej atmosfére;

(3) zlúčenina 17 sa premení na zlúčeninu podľa všeobecného vzorca 18 tým, že sa chráni voľná hydoxylová skupina pri vzniku OCH₂R. Táto reakcia prebieha s BrCH₂R a cézium karbonátom, kde R môže byť aryl, CH=CH₂, OR' atď.

• odstránenie ŕerc-butoxykarbonylu a metyloxymetylových chrániacich skupín zlúčeniny 18 dovoľuje prípravu zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 19 tým, že reaguje s roztokom HCI v dioxáne. Táto reakcia sa tiež uskutoční zmiešaním zlúčeniny 18 s roztokom trifluórooctovej kyseliny v dichlorometáne;

• prípravu zlúčeniny tiourey podľa všeobecného vzorca 20 tým, že reaguje zlúčenina 19 s fenylizotiokyanátom;

» konverziu zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 20 na amino zlúčeninu podľa všeobecného vzorca 21 tým, že reaguje s roztokom HCI v dioxáne;

« premenu zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 21 na N-Troc derivát 22 tým, že reaguje s trichloretyl chloroformiátom a pyridínom;

• prípravu chránenej hydroxy zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 23 tým, že reaguje 22 s bromometylmetyl éterom a diizopropyletylamínom;

• premenu zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 23 na -NH derivát 24 tým, že reaguje s kyselinou octovou a zinkom;

• premenu zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 24 na hydroxy zlúčeninu podľa všeobecného vzorca 25 tým, že reaguje s nitritom sodným a kyselinou octovou. Inou možnosťou je použitie nitrogén tetroxidu v kombinácii s kyselinou octovou a acetonitrilom, s následnou aplikáciou hydroxidu sodného. Je možné tiež použiť nitrit sodný v kombinácii s acetanhydridom kyseliny octovej, s následnou aplikáciou hydroxidu sodného.

NaNOj

Schéma II;

-35Premena medziproduktu 25 na ET-743 pomocou derivátu cysteínu 29 obvykle zahrnuje tieto kroky (viď. schéma III):

• premenu zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 24 na derivát 30 tým, že sa ochráni primárna hydroxylová funkčná skupina (S)-N-2,2,2trichloroetoxykarbonyl-S-(9H-fluorén-9-ylmetyl)cysteínom 29;

• konverzia chránenej zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 30 na derivát fenolu 31 tým, že sa odštiepi allylová skupina tributyltín hydridom a dichloropaládium-bis(trifenylfosfín)om;

• premena fenolovej zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 31 na zlúčeninu podľa všeobecného vzorca 32 tým, že sa oxiduje anhydridom benzénselenínu pri nízkej teplote;

• premena hydroxy zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 32 na laktón 33 nasledovným postupom:

(1) Zlúčenina podľa všeobecného vzorca 32 reaguje s dvomi ekvivalentami triflic anhydridu a piatimi ekvivalentami DMSO (2) pridá sa osem ekvivalentov diizopropyletylamínu;

(3) pridajú sa štyri ekvivalenty t-butyl alkoholu;

(4) pridá sa sedem ekvivalentov 2-tert-butyl-1,1,3,3,tetrametylguanidínu;

(5) pridá sa desaťt ekvivalentov acetanhydrídu;

• premenu laktónovej zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 33 na hydroxylovú zlúčeninu 34 tým, že sa odstráni MOM chrániaca skupina pomocou TMSI;

• štiepenie N-trichloroetoxykarbonylovej skupiny zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 34 na zlúčeninu 35 tým, že reaguje s Zn/AcOH;

• premenu aminozlúčeniny 35 na odpovedajúcu α-keto laktónovú zlúčeninu 36 tým, že reaguje s N-metylpyridinium karboxaldehyd chloridom, s následným DBU;

• prípravu ET-770 tým, že zlúčenina podľa všeobecného vzorca 36 reaguje s 3-hydroxy-4-metoxyfenyletylamínom;

-36premenu ET-770 na ET-743 tým, že reaguje s dusičnanom strieborným v zmesi s AcN/H₂O

Zn

AcOHaq

CHO

Sat»Q«i. BOH

Et-7TO

Schéma

AQNO,

CKjCN. HjO

Postup syntézy znázornenej vyššie, smerujúci k premene medziproduktu 25 v ET-743, môžu byť výhodne modifikované pomocou iných derivátov cysteínu, napríklad zlúčeniny 37, s názvom 2-metoxymetoxyloxy-3-(9H-fluoren9-ylmetyl)propenová kyselina. Táto zlúčenina má už keto skupinu vo forme enoléteru, pokým iné analôgy obsahujú aminoskupinu, ktorá má byť

-37 premenená na keto skupinu procesom transaminácie. Táto reakcia má výťažok 55-60 %. Použitím zlúčeniny 37 je možné podstatne zvýšiť výťažok lineárnej syntézy, pretože je možné sa vyhnúť transaminačnému kroku.

Konverzia medziproduktu 25 v ET-743 použitím derivátu cysteínu 37 môže byť uskutočnená podobným spôsobom a s rovnakými reagentami, na rozdiel od derivátu cysteínu 29, s výnimkou premien (f) a (g). Reakčný postup je znázornený v schéme IV:

-Me EDC HCI (PhSeOfeO

OMe

1) OMSO. Τί,Ο

2) DIPEA Jj'BuOH

Νβυ o ⁴’ X v_ó

Me/I KMe,

S) ACjO. CHjCl,

Schéma IV

Zlúčenina 38 sa pripraví tak isto tým, že reaguje medziprodukt 12 opísaný v US patente N 5 721 362 s medziproduktom 37. Táto reakcia znamená výrazné zlepšenie reakčnej schémy uvedenej v US patente.

-38 Príprava ftalascidínu a príbuzných zlúčenín

V predkladanom vynáleze zahrnuje kľúčová skupina produktov ftalascidín s nasledovným všeobecným vzorcom XX

kde R¹ je amidometylénová skupina; R⁵ je krátky oxy-postranný reťazec; a R²¹je kyano skupina alebo hydroxy skupina. V prípade ftalascidínu, R¹ je ftalimidometylénová skupina; R⁵ je acetoxy skupina; R²¹ je kyano skupina. Iné skupiny predstavujúce R¹ zahrnujú mono-a di-N-amidometylény ako aj iné cyklické amidometylény, a iné skupiny predstavujúce R⁵ zahrnujú C¹ až C⁴acylovej skupiny, ako aj C¹ až C⁴ alkylovej skupiny.

Konverzia 21 kyano zlúčeniny vo ftalascidíne alebo príbuznej zlúčenine podľa všeobecného vzorca XX obvykle obsahuje nasledovné kroky:

a) v prípade potreby konverziu E kruhu chinónového systému na systém fenolový;

b) tvorbu R⁵ skupiny na pozícii 5 v kruhu A;

c) tvorbu R¹ skupiny na pozícii 1 v kruhu B;

d) v prípade potreby konverziu A kruhu chinónového systému na systém fenolový;

e) v prípade potreby konverziu A kruhu fenolového systému na kruh metyléndioxyfenolový.

Uvedené kroky sú veľmi podobné tým, ktoré boli uvedené pri príprave ekteinascidínov. Krok (c) obvykle zahrnuje tvorbu -CH2NH2 skupiny v polohe 1 a jej acyláciu.

-39Ftalascidín sa pripraví pomocou medziproduktov opísaných v častí pojednávajúcej o premene kyanosafracínu B na medziprodukt 25. Napríklad medziprodukty 21 a 17 sú vhodné východzie zlúčeniny na prípravu ftalascidínu.

Ako bolo uvedené vyššie v schéme V, proces syntetickej prípravy ftalascidínu začínajúci medziproduktom 21 zahrnuje tieto za sebou nasledujúce kroky:

• premenu zlúčeniny 21 na zlúčeninu podľa všeobecného vzorca 27 tým, že reaguje s ftalát anhydridom v dichlórmetáne a karbonylimidazole.

• konverziu zlúčeniny 27 na ftalascidín tým, že reaguje s tributyltín hydridom a dichloropaládium-bis(trifenylfosfin)om alebo zásaditým médiom, nasledovaná reakciou s acetyl chloridom.

Schéma V

Ako bolo uvedené vyššie v schéme VI, proces syntetickej prípravy ftalascidínu začínajúci medziproduktom 17 zahrnuje tieto za sebou nasledujúce kroky:

• Acetyláciu hydroxylovej skupiny zlúčeniny podľa všeobecného vzorce 17 pomocou acetyl chloridu a pyridínu tak, že vznikne acetylovaný medziprodukt podľa všeobecného vzorce 42;

-40• Odstránenie terc-butoxykarbonylu a ochrannej metyloxymetylovej skupiny zlúčeniny 42 na prípravu zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 43 tým, že reaguje s roztokom HCI v dioxáne. Táto reakcia sa tak isto dosiahne zmiešaním zlúčeniny 42 s roztokom trifluórooctovej kyseliny v dichlórmetáne;

• Prípravu zlúčeniny tiourey podľa všeobecného vzorca 44 tým, že reaguje 43 s fenylizotiokyanátom;

• Konverziu zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 44 na emino zlúčeninu podľa všeobecného vzorca 45 tým, že reaguje s roztokom HCI v dioxáne:

• Premenu 45 na flalascidín tým, že reaguje s ftalát anhydridom v dichlórmetáne a karbonylimidazole.

lubiHáii

Schéma VI

-41 Príprava medziproduktu 11a príbuzných medziproduktov

Retrosyntetická analýza je opísaná v nasledujúcej schéme.

V predkladanom vynáleze obsahuje kľúčová skupina medziproduktov medziprodukt 11 a má všeobecný vzorec XXI

(XXI) kde Prot¹ a Prot² sú hydroxy chrániace skupiny, podľa možnosti rozdielne. Prot¹ je obvykle......Prot² je obvykle.......Čo sa týka samotného medziproduktu 11, je Prot¹ skupina predstavovaná metoxymetylovou skupinou, Prot² je t-butyldifenylsílylová skupina.

Konverzia 21- kyano zlúčeniny na medziprodukt 11 alebo príbuzné medziprodukty podľa všeobecného vzorca XXI obvykle zahrnuje tieto za sebou idúce kroky:

a) v prípade potreby konverziu E kruhu chinónového systému na systém fenolový

-42b) tvorbu -Oprot¹ skupiny v polohe 18 v kruhu E;

c) tvorbu -CH₂-Oprot² skupiny v polohe 1 v kruhu B;

d) v prípade potreby konverziu kruhu A chinónového systému na fenolový systém;

e) konverziu fenolového systému kruhu A na metyléndioxyfenolový kruh.

Krok (b), tvorba -Oprot¹ skupiny v polohe 18 kruhu E, je typickou chrániacou reakciou fenolovej skupiny. Reakčné podmienky sa vyberú podľa charakteru chrániacej skupiny. Ďalšie kroky sú podobné iným reakciám.

Krok (c), tvorba -CH₂-Oprot² skupiny v polohe 1 kruhu B, sa obvykle uskutočňuje tvorbou -CH2NH2 na pozícii 1 a potom premenou amínovej funkčnej skupiny na hydroxy a chránením. Reaktant s funkčnou skupinou R¹ v tvare -CH2-NH-CO-CR^25aR^25bR^25z stratí N-acylovú skupinu. V prípade, že východzí produkt má skupinu R¹ v tvare -CH₂-O-CO-R, nie je potrebné ekteinascidín nijako upravovať, pretože jeho R¹ substitučná skupina je rovnaká.

Čo sa týka iných produktov, je potrebné odstrániť O-acylovúu skupinu. Na tieto deacylácie sú k dispozícii rôzne metódy. V jednej z nich je deacylácia a konverzia na hydroxylovú funkčnú skupinu uskutočnená v jednom kroku. Potom je hydroxylová skupina acetylovaná alebo akokoľvek inak upravovaná tak, aby vznikla vhodná R¹ funkčnáí skupina.

US patent 5 721 362 opisuje syntetickú metódu na prípravu ET-743 pozostávajúcu z mnohých krokov. Jeden z medziproduktov syntézy je medziprodukt 11. Použitím kyanosafracínu B ako východzej zlúčeniny je možné dosiahnuť medziprodukt 11 oveľa jednoduchším spôsobom a teda vylepšiť metódu na prípravu ET-743.

Kyanosafracíin B je premenený na medziprodukt 25 pomocou vyššie opísanej metódy. Medziprodukt 11 sa z medziproduktu 25 získa pomocou týchto krokov (viď. schéma VII).

• tvorba chránenej hydroxy zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 26 tým, že reaguje 25 s ŕerc-butyIdifenyIsilyl chloridom za prítomnosti báze;

-43• konečné odštiepenie allyovej skupiny pomocou tributyltín hydridu a dichloropaládium-bis(trifenylfosfín)om na zlúčeninu 26, ktorá vedie k tvorbe medziproduktu 11.

Schéma VII

Predstava syntetického procesu, uvedená v predkladanom vynáleze a zameraná na premenu safracínu B na medziprodukt 11, je modifikáciou schémy VIII a pozostáva z týchto krokov:

• stereošpecifické premeny zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 1 (safracín B) na zlúčeninu podľa všeobecného vzorca 2 tým, že sa selektívne nahradí -OH skupina -CN skupinou tým, že reaguje s KCN v kyslom prostredí;

• tvorby zlúčeniny tiourey podľa všeobecného vzorca 3 tým, že reaguje zlúčenina podľa všeobecného vzorca 2 s fenyl izotiokyanátom;

• premeny zlúčeniny tiourey podľa všeobecného vzorca 3 na acetamid podľa všeobecného vzorca 5 tým, že sa hydrolyzuje v kyslom prostredí a je nasledovaný pridaním acetanhydridu; medziprodukt amino zlúčenina podľa všeobecného vzorca 4 sa pripraví ukončením hydrolýzy v kyslom prostredí s bikarbonátom sodným. Tento medziprodukt je ale značne nestabilný a je okamžite premenený na päťčlenný cyklický imín 6;

-44• tvorby chránenej zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 7 tým, že reaguje s bromometyl metyléterom a diizopropyletylamínom v dichlórmetáne;

• selektívnu demetyláciu metoxy skupiny chinónového systému zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 7 na zlúčeninu podľa všeobecného vzorca 8 tým, že reaguje s roztokom metanolu a hydroxidu sodného;

• premeny zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 8 na metyléndioxy zlúčeninu podľa všeobecného vzorca 9 tým, že dôjde k:

(1) chinónová skupina zlúčeniny 8 sa redukuje 10% Pd/C vo vodíkovej atmosfére;

(2) hydrochinónový medziprodukt je premenený na metyléndioxy zlúčeninu podľa všeobecného vzorca 9 tým, že reaguje s bromochlorometánom a cézium karbonátom vo vodíkovej atmosfére;

(3) zlúčenina podľa všeobecného vzorca 9 je premenená na zlúčeninu podľa všeobecného vzorca 10 tým, že sa chráni voľná hydroxylová skupina ako OCH₂R skupina tým, že reaguje s BrCH₂R a cézium karbonátom, kde R predstavuje aryl, CH=CH₂, OR' atď.;

(4) premene acetamidovej skupiny zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 10 na odpovedajúcu hydroxylovú skupinu podľa všeobecného vzorca 11 tým, že reaguje s nitrogén tetroxidom v zmesi s kyselinou octovou a octanu sodného, nasledovaná pridaním hydroxidu sodného;

(5) prípadne sa acetamidová skupina zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 10 premení na primárnu amínovú skupinu tým, že reaguje s hydrazínom alebo s Boc^O, DMAP nasledovaná pridaním hydrazínu; tento primárny amín sa premení na odpovedajúcu hydroxylovú skupinu (zlúčenina podľa všeobecného vzorca 11) tým, že sa primárny amín oxidatívne premení na odpovedajúci aldehyd so 4-formyl-1-metylpýridínium sulfonátom alebo iným pyridíniovým iónom, nasledovaným DBU alebo inou zásadou a ďalšou hydrolýzou a nasledovaný redukciou aldehydu na odpovedajúcu hydroxylovú skupinu pomocou hydridu litnohlinitého alebo inej redukujúcej látky;

-45(6) tvorbe chránenej zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 26 tým, že reaguje s t-butyldifenylsilyl chloridom a dimetylaminopyridinom v dichlórmetáne;

(7) premene silylovanej zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 26 na medziprodukt 11 tým, že sa odkryje -OCH₂R ochranná skupina tým, že reaguje v kyslom alebo zásaditom prostredí.

Typické reakcie zahrnujú paládiovú čerň vo vodíkovej atmosfére, alebo vodný roztok TFA, alebo tributyltín hydrid a dichloro bis(trifenyIfosfín paládium).

V ešte inej úprave reakčného postupu dochádza k premene kyano zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 2 na medziprodukt 11 pomocou rozšírenej schémy II, ktorá zahrnuje tieto kroky:

• tvorbu chránenej hydroxy zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 26 tým, že reaguje 25 s ferc-butyldifenylsilyl chloridom za prítomnosti zásady;

o záverečné odštiepenie allylovej skupiny pomocou tributyltín hydridu a dichloropaládium-bis(trifenylfosfín) na zlúčeninu 26, ktorá vedie ku príprave medziproduktu 11.

Príprava aktívnych zlúčenín

Kyanosafracín B sa premieňa na veľký počet medziproduktov a derivátov s potenciálnou protinádorovou terapeutickou aktivitou. Tieto medziprodukty sa dajú vytvoriť z už opísaných zlúčenín, alebo použitím alternatívnych reakčných postupov.

Medziprodukty tu opísané zahrnujú zlúčeninu 47 a mnoho ďalších amidových derivátov, ktoré sa pripravia pomocou zlúčenín 45 alebo 43.

Na schéme VIII je znázornená príprava zlúčeniny 47 použitím týchto krokov:

• príprava zlúčeniny tiourey podľa všeobecného vzorca 3 tým, že reaguje zlúčenina podľa všeobecného vzorca 2 s fenylizotiokyanátom;

-46• premena zlúčeniny tiourey podľa všeobecného vzorca 3 na acetamid podľa všeobecného vzorca 5 tým, že dochádza k hydrolýze v kyslom prostredí a následnému pridávaniu acetanhydridu. Medziproduktom je amínová zlúčenina podľa všeobecného vzorca 4, ktorá sa izoluje ukončením hydrolýzy v kyslom prostredí pomocou bikarbonátu sodného. Medziprodukt je veľmi nestabilný a okamžite sen mení na päťčlenný cyklický imín 6;

• príprava chránenej zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 7 tým, že reaguje s bromometylmetyl éterom a diizopropyletylamínom v dichlórmetáne;

• selektívna demetylácia metoxy skupiny chinónového systému zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 7 na zlúčeninu podľa všeobecného vzorca 8 tým, že reaguje s metanolovým roztokom hydroxidu sodného;

• premena zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 8 na metyléndioxy zlúčeninu podľa všeobecného vzorca 10 pomocou týchto reakčných krokov:

(1) chinónová skupina zlúčeniny 8 sa redukuje pomocou 10% Pd/C vo vodíkovej atmosfére;

(2) hydrochinónový medziprodukt sa premení na metyléndioxy zlúčeninu podľa všeobecného vzorca 9 tým, že reaguje s bromochlorometánom a cézium karbonátom vo vodíkovej atmosfére;

(3) zlúčenina podľa všeobecného vzorca 9 sa premieňa na zlúčeninu podľa všeobecného vzorca 10 tým, že sa chráni voľná hydroxylová skupina akou je allyloxy skupina tým, že reaguje s allylbromidom a cézium karbonátom;

• premena zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 9 na acetyl derivát 46 tým, že reaguje s acetylchloridom v pyridíne;

• premena zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 46 na nechránenú zlúčeninu 47 tým, že reaguje s kyselinou chlorovodíkovou v dioxáne.

Schéma VIII

Iné užitočné deriváty amidových medziproduktov sa vytvorí z už opísaného medziproduktu 45 pomocou následovnej schémy:

θ 7 \_o

-48Druhý krok nie je bezprostredne potrebný. Tento proces predstavuje dôležitú časť vynálezu, obzvlášť tam, kde skupina R je skupinou R^a, ako to bolo uvedené skôr. Schému VIII je možné ľahko rozšíriť tak, že umožní prípravu zlúčenín podľa všeobecného vzorca XXIII tým, že sa vo východzej zlúčenine v polohe 5 umiestni iná funkčná skupina, a to buď skupina priamo potrebná pre produkt, alebo skupina, ktorú je možné odstrániť alebo inak modifikovať tak, že vznikne želaná funkčná skupina.

Schéma IX

Zo zlúčeniny 45 sa pripraví skupina analógov pomocou nasledovných reakčných krokov:

• acylácia amino skupiny zlúčeniny všeobecného vzorca 45 pomocou veľkej skupiny acylových derivátov, ktoré poskytnú zodpovedajúce amidy, kde preferovanými acylovými skupinami , sú acetyl, cinnamoylchlorid, p-trifluorocinnamoylchlorid, izovalerylchlorid-fenylizotiokyanát alebo aminokyseliny, alebo iné vyššie uvedené skupiny R^aCO-.

• transformácia -CN skupiny na -OH skupinu tým, že reaguje s nitrátom strieborným v zmesi s AcN/H₂O.

Iné užitočné deriváty amidového medziproduktu sa pripravia použitím už opísaného medziproduktu 43 podľa následovnej schémy:

NH

Schéma X

Me O

-49Použitím nasledujúceho postupu sa zo zlúčeniny 43 získa iná skupina zaujímavých derivátov.

a) acylácia amino skupiny zlúčeniny podľa všeobecného vzorce 43 pomocou veľkej škály acylových derivátov, ktoré poskytnú zodpovedajúce amidy, kde preferovanými acylovými skupinami sú acetyl, cinnamoylchlorid, ptrifluorocinnamoylchlorid, izovalerylchlorid alebo aminokyseliny, alebo iné vyššie uvedené zlúčeniny skupiny

b) transformácia -CN skupiny na -OH skupinu tým, že reaguje s nitrátom striebra v zmesi AcN/H₂O.

Nové medziprodukty

Vzhľadom na v predošlom uvedené je zrejmé, že v predkladanom vynáleze sa vyskytuje mnoho medziproduktov. Podľa charakteru kruhu A, majú tieto medziprodukty všeobecný vzorec XXIla

OCH

(XXIIa) alebo všeobecný vzorec XXIIb och₃

o (XXIIb)

-50kde R¹ je -CH₂NH₂ alebo -CH₂OH, chránený, alebo derivatizovaný variant takejto skupiny a R⁴ je -H;

alebo

R¹ a R⁴ spoločne tvoria skupinu podľa všeobecného vzorca IV, VI alebo VII

CH;

R⁵ je -OH, chránený alebo derivatizovaný variant takejto skupiny;

R^14a a R^14b sú obidve -H alebo jedna je -H a druhá je -OH, chránený alebo derivatizovaný variant takejto skupiny, -OCH₃ alebo -OCH₂CH3, alebo R^14aa R^14b spoločne tvoria keto skupinu.

R¹² je -NH, NCH₃- alebo -NCH₂CH₃-;

R¹⁵ je -OH, chránený alebo derivatizovaný variant takejto skupiny; a R¹⁸ je -OH, chránený alebo derivatizovaný variant takejto skupiny.

V jednom usporiadaní, aspoň R¹, R⁵, R^14a, R^14b, R¹⁵ alebo R¹⁸ je chránená alebo derivatizovaná skupina.

V jednej modifikácii tohto vynálezu nepredstavuje R¹ skupina 3,5-tbutyldifenylsilyl a/alebo skupina R¹⁸ nie je metoxymetylová.

-51 R¹ je s výhodou -CH₂NH₂ alebo -CH₂OH, chránený alebo derivatizovaný variant takejto skupiny a R⁴ je -H;

alebo

R^1a a R⁴ spoločne tvoria skupinu:

Ri4a _a pi4b _sý _{g v}ýf-,_oc|_ou obidva -H.

Jedna dôležitá kategória medziproduktov obsahuje zlúčeninu, nazvanou ako zlúčenina 25, ktorá má všeobecný vzorec:

Vo všeobecnom vzorci uvedenej kategórie zlúčenín je skupina MOM nahraditeľná akoukoľvek chrániacou skupinou.

Iné dôležité medziprodukty zahrnujú zlúčeniny nazvané ako zlúčeniny 45 a 47. Zo zlúčeniny 45 sa jednoduchým spôsobom pripravia N-acyl deriváty, ktoré sú dôležitou súčasťou predkladaného vynálezu. Vhodné acylové skupiny

-52už boli uvedené vyššie. Zodpovedajúce aktívne 21-hydroxy zlúčeniny sú tiež dôležité a sú súčasťou tohto vynálezu.

Nové aktívne zlúčeniny

Bolo zistené, že zlúčeniny tohto vynálezu, ktoré boli pôvodne pripravené ako medziprodukty, majú výrazné účinky pri liečbe malígnych nádorov, ako napríklad leukémie, nádory pľúc, čreva, ľadvín a melanómu.

Predkladaný vynález teda ponúka možnosť liečby karcinómov cicavcov, predovšetkým človeka, terapeuticky efektívnou dávkou zlúčeniny podľa vynálezu, ako aj ich farmakologických zlúčenín.

Predkladaný vynález sa tiež týka farmaceutických prípravkov, ktoré ako aktívnu zložku obsahujú zlúčeninu alebo zlúčeniny podľa vynálezu, ako aj proces ich prípravy.

Príklady farmaceutických prípravkov zahrnujú akékoľvek pevné (tablety, pilulky, kapusle, granule) alebo kvapalné (roztoky, suspenzie alebo emulzie) prípravky s vhodným zložením, alebo prípravky pre orálne, miestne alebo parenterálne podávanie. Tieto prípravky obsahujú buď čistú zlúčeninu alebo v kombinácii s nosičom alebo inou farmakologicky aktívnou látkou. Tieto prípravky musia byť sterilné, v prípade, že sa podávajú parenterálne.

Podávanie zlúčenín alebo prípravkov predkladaného vynálezu je buď vo forme intravenóznych infúzií, orálnych preparátov, alebo sú podávané intraperitoneálne. S výhodou sa použije 24 hodinová infúzia, ešte výhodnejšie infúzia 1 až 12 hodín, najlepšie 2 až 6 hodín. Krátke infúzne časy, ktoré dovoľujú krátku nemocničnú hospitalizáciu, sú obzvlášť výhodné. V prípade potreby je však možné nastaviť čas infúzie na 12 až 24 hodín. Infúzie sa opakujú vo vhodných intervaloch 2 až 4 týždňov. Farmakologické prípravky, ktoré obsahujú zlúčeniny uvedené v predkladanom vynáleze, sa do tela chorého dopravia vo forme lipozómov alebo nanosférových mechúrikov vo forme umožňujúcej uvoľnenie aktívnych látok, alebo použitím iných štandartných prostriedkov dodania účinnej látky na miesto pôsobenia.

-53Vhodná dávka zlúčenín sa líši podľa konkrétneho prípravku, spôsobu aplikácie, konkrétneho stavu nemocného a nádoru, ktorý je potrebné liečiť. Iné faktory, ako napríklad vek, telesná hmotnosť, pohlavie, diéta, doba podávania, pomer vylučovania aktívnej látky, stav pacienta, kombinácia liekov, citlivosť na podávané látky a závažnosť ochorenia sa musí tiež zohľadniť. Podávanie môže prebiehať kontinuálne alebo periodicky s maximálnou tolerovateľnou dávkou.

Zlúčeniny a prípravky podľa predkladaného vynálezu môžu byť použité v kombinácii s inými liekmi vo forme kombinovanej terapie. Iné lieky môžu byť súčasťou rovnakého prípravku, alebo môžu byť podávané ako samostatný prípravok súčasne alebo s časovým odstupom. Iné lieky nie sú špeciálne obmedzené a vhodnými kandidátmi sú:

a) lieky s antimitotickým účinkom, predovšetkým tie, ktoré sú zacielené proti cytoskeletu bunky, zahrnujúce modulátory mikrotubulov, ako napríklad taxanové látky (taxol, paclitaxel, taxoter, docetaxel), podofylotoxíny alebo vinea alkaloidy (vineristín, vinblastín);

b) antimetabolity, ako napríklad 5-fluorouracil, cytarabín, gemcitabín, purínové analógy (ako napríklad pentostatín, metotrexát);

c) alkylujúce látky ako napríklad cyklofosfamid alebo ifosfamid;

d) látky, ktorých cieľom je DNA, ako napríklad antracyklíny adriamycín, doxorubicín, farmorubicín alebo epirubicín;

e) látky, ktorých cieľom je topoizomeráza ako napríklad etoposid;

f) hormóny alebo antagonisti hormónov ako napríklad estrogény, antiestrogény (tamoxifen a príbuzné zlúčeniny) a androgény, flutamid, leuprorelín, goserelín, cyprotron alebo octreotid;

g) látky, ktorých cieľom je prenos signálov v malígnej bunke, obsahujúce deriváty protilátok ako napríklad herceptín;

h) alkylujúce látky ako napríklad deriváty platiny (cis-platina, karbónplatina, oxaliplatina, paraplatina) alebo nitrosourea;

i) látky potenciálne ovplyvňujúce metastázy tumorov ako napríklad inhibítory matrixových metaloproteáz;

-54j) génová terapia a antisenze-látky;

k) proti látková terapia;

l) iné bioaktívne zlúčeniny morského pôvodu, hlavne didemníny ako napríklad aplidín;

m) steroidné analógy, konkrétne dexametazon;

n) antiemetické látky, konkrétne dexametazon.

Predkladaný vynález sa tiež týka zlúčenín podľa vynálezu použiteľných v metodike liečby a použitia zlúčenín pri príprave prípravkov na liečbu rakoviny.

Cytotoxická aktivita

Bunkové kultúry.

Bunky boli udržované v logaritmickej fáze rastu v EMEM (Earle's Minimum Essential Médium) s EBS (Earle's Balanced Salts), s 2, mM L-glutamínom, neesenciálnymi aminokyselinami, bez bikarbonátu sodného (EMEM/neaa).

Médium bolo doplnené o 10% fetálneho teľacieho séra /FCS/, 10-2 M bikarbonátu sodného a 0,1 g/l penicilín-G a streptomycín sulfátu.

Pomocou jednoduchej modifikovanej metódy (Bergeron et.al., 1984) bola testovaná a porovnávaná protinádorové aktivita zlúčenín. V experimentoch boli použité tieto línie: P-388 (suspenzná kultúra malígnych lymfoidných buniek pochádzajúcich z DBA/2 myši ), A-549 (kultúra ľudského pľúcneho karcinómu rastúceho v jednej vrstve), HT-29 (ľudská kultúra karcinómu čreva rastúceho v jednej vrstve) a MEL-28 (ľudská kultúra maligneho melanómu rastúceho v jednej vrstve).

P-388 boli vysiate do 16 mm komôrok s hustotou 1x10⁴ buniek na jednu komôrku v 1 ml MEM 5 FCS média, ktoré obsahovalo presnú koncentráciu testovanej látky. Na kontrolu exponenciálneho rastu buniek boli oddelene

-55vysiate rovnaké bunky, rastúce však v médiu bez prídavku testovanej látky. Všetky experimenty boli uskutočnené duplicitne. Po troch dňoch inkubácie pri 37 °C, 10% CO₂ vo vlhkej atmosfére (98%) boli komôrky zafarbené 0,1 % kryštálovou violetou. Približná IC50 bola stanovená porovnaním rastu buniek v komôrkach s testovanou látkou s bunkami v komôrkach rastúcich bez prítomnosti testovanej látky.

1. Raymond J. Bergeron, Paul F. Cavanaugh, Jr., Steven J. Kline: Róbert G. Hughes, Jr., Gary T. Elliot a Carl W. Porter. Antineoplastic and antiherpetic activity of spermidine catecholarnide iron chelators. Biochem.Bioph. Res. Comm. 1984, 121 (3), 848-854

2. Alan C. Schroeder, Róbert G. Hughes, Jr. a Alexander Bloch. Effects of Acyclic Pyrimidine Nucleoside Analoges. J.Med.Chem. 1981, 24, 10781083.

-56 Cytotoxická aktivita

Zlúčenina	ICso(gM)
	P-388	A-549	HT-29	MEL-28	CV-1	DU-145
0 Μιο'γ	OM· HO^Jx^M· Υ'Ύ^μ-Τ-μ· ΑχΝ^χ	0,009	0,018	0,018	0,018	0,023
0	Γ fcw

0	OM* ^’seA-**·
ΐΜΟ'γ' 0	^Sx*>xX^ YLM- •V 14	0,15	>0,15	0,15	>0,15
0	f ?“* M.
ΜΟ'γ 0	^SX-^-wX^ V ν^Δ. “V 15	1,44	1,44	1,44	1,44
o	1 om· Ovx°x₁>k_y>^u·
Ηο'ητ'* 0	V.M- ’H“ 16	>1,5	>1,5	>1,5	>1,5
OM	1 ľ* θ^ΧθΧ-ΛγΖ*·
CT \-o	Y*· Vo-l· Ύ 17	1,4	M	1,4	b⁴
\	i ľ“*
o jT \_o	'''‘Y^M-J-M· ' 18	0,01	0,01	0,01	0,01
\	OM· MO^Jk^M·
o <r Vo	Ύ^η-Τ-μ· X L	0,08	0,16	0,01	0,16
	Λ- ₁₉

χ T 1 Ov-Ay·“· \— o L ČX ·*« °\ 20	0₇01	0,01	0,01	0,01
TXaJjZ“·	0,019	0,019	0,019	0,019
°^Vo Ό* 21
<s <·* L ^^Jx^**·
^xÁ, y-s, ΊΓ^ιι y* 0 V Čn	0,014	0,014	0,014	0,014	0,014	0,014
₀Α>-°”«> 22
\
uT^t*	0,13	0,13	0,13	0,13	0,13	0,13
_οΛ₀.€Η^ο, 23
x ?“ 1 ^O^O^Js^u· x Τ'ŕ	0,18	1,8	1,8	1,8	1,8	1,8
\—O L ČN «»X 24
X ¹ Γ* J °-^oJy“· ***Ύι—ιΐί“¹ ^4 25	04	0,2	0,2	0,2		04
X r- ^OT^V\| e°\ « JT J u· 1 O Jl	0,008	0,008	0,008	0,008
‘Co i* 35
1 o· ^{0 W}sA/ i jHjT “· Ύ^ί\] γ“*	0,01	0,01	0,01	0,01
'-o ii, 36
Cfcto HO.1 * V-o J ' Cm vr O 28	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001
1 ?~ O^O^Js^U. O*e Έ Γ
VX> y , “V 42	0,13	0,13	0,13	0,13		0jl3

Ο* OJ \-o	OH hO^JL^h· t i í ^Χ~^ΧΎ^Χ^Ν·-\|-Ν· κ,Κχ/^ L, čh NH ⁰ ' 43	0,008	0,016	0,008	0,008		0,016
O*	OH OvJk,“* J I
OJ \-o	N-J-AN L é« 1*1 ° ' 44	0,001	0,001	0,001	0,001		0,001
H·	OH HQ jJL N· OAŕ Jľ 1 1 ^,'^\|^Z^Y*^W^J-kN	0,01	0,01	0,01	0,01		0,01
o J \| z V-O Ch 4^ 45
Ν·_ kMO rw»aoiM	OH HO^Jx^,·*· o T J ^z^^sV^>^^Sr^x^ m-J-IH ΟΓ ČN NH T⁴·“ 3	0,015	0,015	0,015	0,015	0,018
	OH 1 Xť
;	w\	2,171	2,171	2,171	2,171	2,171
o Μβ^Λχ •éfO'^Y o	OH· ^χ-Ηχ^,Ζ^ «Α 5	0,005	0,005	0,005	0,005
0 M·. -A.	* ľ~ °^^,°>^V^U·
o	^ΧχΖ^Μχ»Ζ^ »£* <A 7	0,22	0,22	0,22	0,22	0,22
o	' ?“· Ο,.Ο, Js.l«*
ho'^T o	^Z*^SV^ H-J* H· •x^H^A^ V Cx •x _OA 8	>9	>18,1	>18,1	>18,1	>18,1

' ľ“· Om J •m JL -zs. oVvV A⁰* o^ 9	>1,77	>1,77	>1,77	>1,77	>1,77
% ¹ ľ“ f ⁰^°sX-“· W/ V-O k ô* •4M <A 10	>1,65	>1,65	>1,65	>1,65	>1,65
1 O*· Ο^Ο-^Λγ⁴ 04 1 í ** 'V^r^Z'^Sr^Z^ M J-M · °V-o 1_Cm <A 46	0,016	0,016	0,016	0,016	0,016
OM °>^^sy'* Oe ' T M·, -i. ’γ ίΓ iT m-J-m <A 47	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001
OM* MQ _\|JL -M· OAC Γ T \—O I. ČM oXA 48	0,0008	0,001	0,0008	0,0008	0,001
OM· Η0>^χ-Μ· °** jT T W« -JA -zs. -z^^r YíT 7“« oMfr^ v-o CM H «Α<~». ₄₉	0,007	0,007	0,007	0,007	0,007
OM· lO^Á,·· o« J7 j M·. -eL ^1 jT ΊΓ ]“·· o L^fc A/»	0,0001	0/)001	0,0001	0,0001	0,0001
Om· ΜΟ-Α,Ιί· 04 J J AA^-Y o t i ; '—O * CN im o-S** 51	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001
OM· HO^Js^U· 04 j7 J M· A. ->. ΓΪ^Τ 4· MS \—O \ tn yv*· “ΑΤμ	0,001	0,001	0/)01	0,001	0,001

OMr mo_>As¹* Oe j ÝťYS —0 \ č* u. o 53	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001
0» ηο^Χ,ι*. 0 ·! oVyv >-O \ ČN .. m· o 54	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001
OM· om ΊΓ J Mt Jk ₀W/ \—O V ČN m. o 55	0,01	0,01	0,01	0,01	0,01
ΟΜβ •%A^“· Ma -k j·: Tr <nr rf” 56	0,18	0,9	0,18	0,8	0,9
OM· mO-As-“· M·^ >^>Λ T ?!iľ í 7J-m· \-o k £n ^^>^UCWRi ⁰ ' 57	0,14	0,14	0,14	0,14	0,14
OM· ^Ay* OAC J2 J *· <-o k Žn MM „A/»* ' « 58	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001
OM· HO^J^M· 0*e _JT J U. 0 - 60	0,001	0,001	0,0005	0/)01	0,0005
CCM MO^kyM· CMC JT T u·. ^*v. i< XpCO⁷“ V-O * CN Ml <Ac/. 61	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001
OM· MO,Jl im OAC T_ T ΊΓ7Τ^^η·7“· o'M't-’v^ rf-O * fcN H _, m. ° 62	0,001	0,001	0,0005	0/)005	0,001

OM· O*C OCO <Π έΝ U 63	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001
0*· OAC j j\| o'yW '-O ČK r h _a «. ⁰ 64	0,001	0/)01	0,001	0,001	0,001
OM· ΜΟ^Ο-γ.¹·· 0A« jT í oOv '-O x ČN *4 65	0,0001	0,0005	0,0001	0,0001	0,0005
OMe HOvÁ/H* OAc T J θ'-⁰ I °» Χ\ W-γ^ΧΛ^ o OD	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001
OM· HOnOv“· OAe jC j o'SO^MY>^> '—O v 0« cOy· _ ·» o 67	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001

Z týchto údajov je možno vidieť, že aktívne zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu zahrnujú zaujímavú triedu zlúčenín podľa všeobecného vzorca XXIII

o'

-62kde R¹ je ako bolo definované vyššie pre všeobecný vzorec XVIlb a je s výhodou stredne veľká derivatizovaná aminometylénová skupina R⁵ je ako bolo definované vyššie pre všeobecný vzorec XVIlb a je s výhodou menšia derivatizovaná hydroxy skupina

R¹² je ako je uvedené vyššie, a je s výhodou NCH₃- a

R²¹ je hydroxy nebo kyano skupina.

R¹ je s výhodou hydrofóbna skupina, ktorá teda nemá voľnú emino, hydroxy alebo inú hydrofilnú funkčnú skupinu. R¹ je typicky skupina -CH₂-NH₂CO-R^a, kde R^a je ako bolo uvedené, s výhodou má však lineárny reťazec kratší ako 20 atómov, ešte výhodnejšie menej než 15 alebo 10 atómov, kde 1,4-fenyl sa ráta ako reťazec s dĺžkou 4 atómov a podobne je to aj s inými cyklickými skupinami (napríklad 1,2-cyklohexyl je reťazec s dĺžkou 2 atómov). Lineárny reťazec kratší než 10, 15 alebo 20 atómov môže byť nahradený. Podľa týchto údajov je potrebné nájsť rovnováhu medzi zlúčeninou, ktorá nemá žiadnu skupinu R^a-CO- a zlúčeninou ktorá má objemnú skupinu.

V jednej modifikácii sa uprednostňuje R¹ bez cyklických skupín, hlavne bez skupín aromatických. V príbuznom variante nie je predkladaný vynález zameraný na prípravu zlúčenín opísaných v článku Proc. Natl. Acad.Sci USA, 96, 3 496-3 501, 1999, ktorý sa nachádza v citovanej literatúre. Naše s výhodou používané skupiny R¹ nezahrnujú zodpovedajúce substituenty CH₂R₂, ktoré sa nachádzajú v tabuľke 1 citovaného článku, obzvlášť skupiny A, B, C a D pre R₂.

R⁵ je s výhodou acetylová skupina.

-63V mimoriadne dôležitých zlúčeninách je skupina R¹ acetylovaná na -NH₂skupine a napríklad N-acyl deriváty je možné pripraviť zo skupín -CN₂NH₂ a -CH₂-NH-aa. Acylové deriváty sú ich N-acylové alebo N-tioacylové deriváty. Acylová skupina má všeobecný vzorec -CO-R^a, kde R^a je vybraný tak, aby spĺňal uvedené kritériá. Vhodné acyl skupiny zahrnujú alanyl, arginyl, aspartyl, asparagyl, cystyl, glutamyl, glutaminyl, glycyl, histidyl, hydroxyprolyl, izoleucyl, leucyl, lysyl, metionyl, fenylalanyl, prolyl, seryl, treonyl, tyronyl, tryptofyl, tyrosyl, valyl, ako aj iné aminokyselinové zvyšky. Tieto aminokyselinové zvyšky sú s výhodou derivatizované na amino skupine, čím zlúčenine dodávajú hydrofobicitu.

V jednej modifikácii je R¹ derivatizované hydroxymetylénová skupina. Podobné je to s derivatizovanou aminometylénovou skupinou.

S ohľadom na spomenuté aktívne zlúčeniny, predkladaný patent zahrnuje tento proces:

kde skupina R⁵ vo výslednom produkte je rovnaká ako pre zlúčeninu XXXII a môže sa líšiť vo východzej zlúčenine a byť konvertovaná do nej ako súčasť procesu,

R¹⁸ je hydroxy skupina vo výslednom produkte, ale môže byť chránenou hydroxy skupinou vo východzej zlúčenine a byť konvertovaná do nej ako súčasť procesu,

R¹² skupina vo východzej zlúčenine je rovnaká ako vo výslednom produkte, alebo je v nej premenená ako súčasť procesu,

-64R²¹ vo výslednom produkte je ako už bolo uvedené a v prípade, že hydroxy skupina je tvorená z kyano skupiny ako súčasť procesu,

R^a je ako už bolo uvedené a je acylovaná ako súčasť procesu pri vzniku konečného produktu ktorý má acylovanú R^a skupinu.

R⁵ je vo východzej zlúčenine s výhodou acetyl alebo iná malá acylová skupina a počas reakcie sa nemení. R¹⁸ je vo východzej zlúčenine s výhodou hydroxy skupina a počas reakcie sa nemení. R¹² je vo východzej zlúčenine s výhodou -NCH₃- a počas reakcie sa nemení. R²¹¹ vo výslednom produkte je ako už bolo uvedené a hydroxy skupina je tvorená z kyano skupiny ako súčasť procesu. R^a sa nachádza vo výslednom produkte a je definovaný vo vzťahu k zlúčenine podľa všeobecného vzorca XXXIII.

Iná dôležitá metóda predkladaného vynálezu zahrnuje reakciu;

Iná dôležitá metóda predkladaného vynálezu zahrnuje reakciu, kde R¹, predstavujúcu aminometylén sa mení na hydroxymetylénovú skupinu.

-65Iná dôležitá metóda predkladaného vynálezu zahrnuje reakciu, kde zlúčenina ktorá má skupinu R¹, predstavujúcu hydroxymetylén reaguje so zlúčeninou podľa všeobecného vzorca XIX

OH^O (XIX)

Prot kde Fu predstavuje chránenú funkčnú skupinu, Prot3 je chrániaca skupina a bodkovaná čiara predstavuje prípadnú dvojitú väzbu.

Iná dôležitá metóda predkladaného vynálezu zahrnuje reakciu na prípravu 21-kyano zlúčeniny podľa všeobecného vzorca XVI, ktorá zahrnuje reakciu zlúčeniny podľa všeobecného vzorca XV

(XV) kde R¹, R⁵, R^14a, R^14b, R¹⁵ a R¹⁸ boli už definované a R²¹ je hydroxy skupina, so zdrojom kyanidového iónu pri vzniku 21-kyano zlúčeniny.

Možné je využiť aj procesy, ktoré využívajú zlúčeniny obsahujúce nukleofil na prípravu podobných zlúčenín podľa všeobecného vzorca XVI, v ktorých poloha 21 je chránená inou nukleofilnou skupinou (21-Nuc skupinou). Napríklad 21-Nuc zlúčenina podľa všeobecného vzorca XVI s alkylamino substituentom v polohe 21 sa pripraví reakciou zlúčeniny podľa všeobecného vzorca XV, kde R²¹ je hydroxy skupina, s vhodným alkylamínom. 21-Nuc zlúčenina podľa všeobecného vzorca XVI s substituentom v polohe 21 sa pripraví reakciou zlúčeniny podľa všeobecného vzorca XV, kde R²¹ je hydroxy skupina, s vhodným alkantiolom. Prípadne, 21-Nuc zlúčenina podľa všeobecného vzorca XVI s α-karbonylalkylom ako substituentom v polohe 21 sa pripraví reakciou zlúčeniny podľa všeobecného vzorca XV, kde R²¹ je

-66hydroxy skupina, s vhodnou karbonylovou zlúčeninou, typicky v prítomnosti zásady. Na prípravu iných 21-Nuc zlúčenín je možné použiť aj alternatívne spôsoby.

Iná dôležitá metóda predkladaného vynálezu zahrnuje reakciu 21-kyano produktu predkladaného vynálezu, v ktorej vzniká 21-hydroxy zlúčenina. Tieto zlúčeniny majú zaujímavé in vivo vlastnosti.

-67 Príklady

Príklad 1

OMe

Me (Boc)jO

EtOH. 7h. 23’C

OMe

NH

Me O ¹

K roztoku 2 (21,53 g, 39,17 ml) v etanole (200ml) bol pridaný tercbutoxykarbonyl anhydrid (7,7 g, 35,25 ml) a zmes sa miešala 7 hod pri teplote 23 °C. Potom bola reakcia koncentrovaná in vacuo a zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, hexán:etylacetát 6:4) pri vzniku 14 (20,6 g, 81%) vo forme žltej pevnej látky.

Rf: 0,52 (etyl acetát :CHCI₃ 5:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 6,49 (s,1H), 6,32 (bs,1H), 5,26 (bs,1H), 4,60 (bs,1H), 4,14 (d, J= 2,4 Hz,1H), 4,05 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,81 (d, J= 4,8 Hz,1H), 3,7 (s, 3H), 3,34 (br d, J= 7,2 Hz,1H), 3,18-3,00 (m, 5H), 2,44 (d, J=18,3 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 1,82 (s, 3H), 1,80-1,65 (m, 1H), 1,48 (s, 9H), 0,86 (d, J= 5,7 Hz, 3H) ¹³C NMR (75 MHz, CDCI₃): δ 185,5, 180,8, 172,7, 155,9, 154,5, 147,3, 143,3,

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃4H₄₃N₅O₈: 649,7. Zistené (M+H)⁺: 650,3

-68 Príklad 2

Za stáleho miešania roztoku 14 (20,6 g, 31,75 ml v CH₃CN (159 ml) pri 0°C sa pridal diizopropyletylamín (82,96 ml, 476,2 ml), metoxymetylénbromid (25,9 ml, 317,5 ml) a dimetylaminopyridín (155 mg, 1,27 ml). Zmes sa miešala pri 23 °C 24 hod. Reakcia bola ukončená pri 0 °C pomocou vodného roztoku 0,1 N HCI (750 ml) (pH=5), a extrahovaná CH2CI2 (2x 400 ml). Organická fáza bola usušená (sulfát sodný) a koncentrovaná in vacuo. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, gradient hexán:etylacetát 4:1 až hexán:etylacetát 3:2) pri vzniku 15 (17,6 g, 83%) vo forme žltej pevnej látky.

Rf: 0,38 (hexán:etylacetát 3:7), ¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 8 6,73 <s,1 H), 5,35 (bs,1H), 5,13 (s, 2H), 4,50 (bs,

1H), 4,25 (d, J= 2,7 Hz, 1 H), 4,03 (d, J= 2,7 Hz, 1 H), 3,97 (s, 3H), 3,84 (bs, 1H), 3,82-3,65 (m, 1 H), 3,69 (s, 3H), 3,56 (s, 3H), 3,39-3,37 (m, 1 H), 3,20-3,00 (m, 5H), 2,46 (d, J= 18 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 1,85 (s, 3H), 1,73-1,63 (m,1 H), 1,29 (s, 9H), 0,93 (d, J= 5, 1 Hz, 3H)

C NMR (75 MHz, CDCb): δ 185,4, 180,9, 172,4, 155,9, 154,5, 149,0, 148,4,

141.6, 135,1, 131,0, 129,9, 127,6, 124,4, 123,7, 117,3, 58,4, 57,5, 56,2, 55,9, 55,0, 54,2, 50,0, 41,5, 39,9,

15.6, 8,5.

99,1, 79,3, 28,0, 25,2,

60,7, 59,7, 24,0, 18,1,

ESI-MS m/z: vyrátané pre C36H47N5O9 : 693,8 . Zistené (M+H)⁺: 694,3

-69 Príklad 3

Do nádoby obsahujúcej roztok 15 (8 g, 1,5 ml) v metanole (1,6 I) bol pri teplote 0 °C pridaný vodný roztok 1 M hydroxidu sodného (3,2 I). Zmes bola 2 hod. miešaná pri teplote 0 °C a potom nastavená 6 M HCI na pH=5. Zmes bola extrahovaná etylacetátom (3x1 I) a zmiešané organické vrstvy boli usušené (sulfát sodný) a skoncentrované in vacuo. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, gradient CHCI₃ k CHCI₃: etylacetát 2:1) pri vzniku 16 (5,3 mg, 68%).

Rf: 0,48 (CH₃CN:H₂O 7:3, RP-C18) ¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 6,73 (s, 1H), 5,43 (bs, 1H), 5,1 b (s, 2H), 4,54 (bs, 1H), 4,26 (d, J=1.8 Hz,1H), 4,04 (d, J= 2,7 Hz 1H), 3,84 (bs,1 H), 3,80-3,64 (m, 1H), 3,58 (s, 3H), 3,41-3,39 (m,1H), 3,22-3,06 (m, 5H), 2,49 (d, J= 18,6 Hz 1H), 2,35 (s, 3H), 2,30-2,25 (m, 1H), 2,24 (s, 3H), 1,87 (s, 3H), 1,45-1,33 (m, 1H), 1,19 (s, 9H), 1,00 (br d, J= 6,6 Hz 3H) ¹³C NMR (75 MHz, CDCI₃): δ 184,9, 180,9, 172,6, 154,7, 151,3, 149,1, 148,6, 144,7, 132,9, 131,3, 129,8, 124,5, 123,7, 117,3, 116,8, 99,1, 79,4, 59,8, 58,6,

57,7, 56,2, 55,6, 54,9, 54,5, 50,1,41,6, 40,1, 28,0,25,3,24,4,18,1,15,7, 8,0.

ESI-MS m/z vyrátané pre C35H45N5O9: 679,7. Zistené (M+H)⁺ : 680,3

Me q<L^NHBoc

Me

2) dCHjBr/CsjCOjnOO’C

K odplynenému roztoku zlúčeniny 16 (1,8 g, 2,64 ml) v DMF (221 ml) bolo pridané 10% Pd/C (360 mg) a roztok sa miešal vo vodíkovej atmosfére (atmosférický tlak) 45 min. Zmes bola prefiltrovaná cez celit v argónovej atmosfére do nádoby obsahujúcej bezvodý Cs₂CO₃ (2,58 g, 7,92 ml). Potom bol pridaný brómchlórmetán (3,40 ml, 52,8 ml). Nádoba s reakčnou zmesou bola uzatvorená a zmes bola miešaná pri 100 °C 2 hod. Reakčná zmes bola ochladená, filtrovaná cez vrstvu celitu a premytá CH2CI2. Organická vrstva bola skoncentrovaná a vysušená (sulfát sodný) pri vzniku 17 vo forme hnedej olejovitej látky, ktorá bola použitá v ďalšom kroku bez akejkoľvek purifikácie.

Rf: 0,36 (hexán :etyl acetát 1:5, SiO₂).

'H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 6,68 (s, 1 H), 6,05 (bs, 1H), 5,90 (s, 1H), 5,79 (s, 1H), 5,40 (bs, 1H), 5,31-5,24 (m, 2H), 4,67 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 4,19 (d, J= 2,7 Hz, 1H), 4,07 (bs, 1H), 4,01 (bs,1H), 3,70 (s, 3H), 3,67 (s, 3H), 3,64-2,96 (m, 5H), 2,65 (d, J=18,3 Hz,1H), 2,33 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 2,01-1,95 (m,1H), 1,28 (s, 9H), 0,87 (d, J= 6,3 Hz, 3H)

C NMR (75 MHz, CDCI₃): δ 172,1, 162,6, 154,9, 149,1,145,7, 135,9, 130,8,

130.7.125.1, 123,1, 117,8, 100,8, 99,8, 76,6, 59,8, 59,2, 57,7, 57,0, 56,7, 55,8, 55,2, 49,5, 41,6, 40,1, 36,5, 31,9, 31,6, 29,7, 28,2, 26,3, 25,0, 22,6, 18,2, 15,8,

14.1, 8,8.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃6H₄₇N₅O9: 693,34. Zistené (M+H)⁺: 694,3

Do nádoby obsahujúcej roztok 17 (1,83 g, 2,65 ml) v DMF (13 ml), bol pridaný Cs₂CO₃ (2,6 g, 7,97 ml) a allylbromid (1,15 ml, 13,28 ml) pri teplote 0 °C. Výsledná zmes bola miešaná pri 23 °C 1 hod. Reakčná zmes bola filtrovaná cez vrstvu celitu a premytá CH₂CI₂. Organická vrstva bola vysušená a skoncentrovaná (sulfát sodný). Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, CHCI₃; etylacetát 1:4) pri vzniku 18 (1,08 mg, 56%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,36 (CHCI₃: etyl acetát: 1:3).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 6,70 (s,1H), 6,27-6,02 (m, 1H), 5,94 (s, 1H), 5,83 (s, 1H), 5,37 (dd, J= 1,01 Hz, J₂= 16,8 Hz, 1 H), 5,40 (bs, 1H), 5,25 (dd, J,= 1,0 Hz, J₂= 10,5 Hz, 1H), 5,10 (s, 2H), 4,91 (bs, 1H), 4,25-4,22 (m,1H), 4,21 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 4,14-4,10 (m, 1 H), 4,08 (d, J=2,4 Hz, 1 H), 4,00 (bs,1H), 3,70 (s, 3H), 3,59 (s, 3H), 3,56-3,35 (m, 2H), 3,26-3,20 (m, 2H), 3,05-2,96 (dd, J,= 8,1 Hz, J₂=18 Hz, 1H), 2,63 (d, J=18 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,09 (s, 3H), 1,91-1,80 (m, 1 H). 1,24 (s, 9H), 0,94 (d, J= 6,6 Hz, 3H) ¹³C NMR (75 MHz, CDCI₃): δ 172,0, 154,8, 148,8, 148,6, 148,4, 144,4, 138,8,

133,7, 130,9, 130,3, 125,1, 124,0, 120,9, 117,8, 117,4, 112,8, 112,6, 101,1,

99,2, 73,9, 59,7, 59,3, 57,7, 56,9, 56,8, 56,2, 55,2, 40,1, 34,6, 31,5, 28,1, 26,4,25,1, 22,6,18,5,15,7,14,0,9,2.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃9H₅₁NsO₉: 733,4. Zistené (M+H)⁺: 734,4

-72Príklad 6

K roztoku 18 (0,1 g, 0,137 ml) v dioxáne (2 ml) bol pridaný 4,2 M HCI/dioxán (1,46 ml) a zmes bola miešaná pri 23 °C 1,2 hod.. Reakcia bola zastavená pri 0 °C pomocou nasýteného vodného roztoku bikarbonátu sodného (60 ml) a extrahovaná s etylacetátom (2x 70 ml). Organické vrstvy boli spojené a vysušené (sulfát sodný) a skoncentrovaný in vacuo pri vzniku 19 (267 mg, 95%) vo forme bielej pevnej látky, ktorá bola v ďalších reakciách použitá bez akejkoľvek purifikáce

Rf: 0,17 (etyl acetát :metanol 10:1, SiO₂) ¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 6,49 (s, 1H), 6,12-6,00 (m, 1 H), 5,94 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 5,34 (dd, J= 1,0 Hz, J= 17,4 Hz, 1 H), 5,25 (dd, . 7=1,0 Hz, 7=10,2 Hz 1H), 4,18-3,76 (m, 5H), 3,74 (s, 3H), 3,71-3,59 (m, 1H), 3,36-3,20 (m, 4H), 3,01-2,90 (m, 1H), 2,60 (d, 7=18,0 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,97-1,86 (m, 1H), 0,93 (d, 7=8,7 Hz, 3H) ¹³C NMR (75 MHz, CDCI₃): δ 175,5, 148,4, 146,7, 144,4, 142,4, 138,9, 133,7, 131,3, 128,3, 120,8, 117,9, 117,4, 113,8, 112,4, 101,1, 74,2, 60,5, 59,1, 56,5, 56,1, 56,3, 56,0, 55,0, 50,5, 41,6, 39,5, 29,5, 26,4, 24,9, 21,1, 15,5, 9,33.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₂H₃₉N₅O6: 589. Zistené (M+H)⁺: 5 90

-73Príkiad 7

K roztoku 19 (250 mg, 0,42 ml) v CH₂CI₂ (1,5 ml) bol pridaný fenylizotiokyanát (0,3 ml, 2,51 ml) a zmes sa miešala pri 23 °C 1 hod. Reakčná zmes bola skoncentrovaná in vacuo a zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, gradient hexán až 5:1 hexán: etylacetát) pri vzniku zlúčeniny 20 (270 mg, 87%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf; 0,56 (CHCI₃: etyl acetát 1:4).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 8,00 (bs, 1H), 7,45-6,97(m, 4H), 6,10(s,1H), 6,086,00 (m, 1H), 5,92 (s, 1 H), 5,89 (s, 1H), 5,82 (s, 1 H), 5,40 (dd, J=1,5 Hz, J=17,1 Hz, 1 H), 3,38 (bs, 1H), 5,23 (dd, J=1,5 Hz, J=10,5 Hz, 1H), 4,42-4,36 (m, 1H), 4,19-4,03 (m, 5H), 3,71 (s, 3H), 3,68-3,17 (m, 4H), 2,90 (dd, J=7,8 Hz, J=18,3 Hz, 1H), 2,57 (d, J=18,3 Hz, 1H), 2,25 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 2,10 (s, 3H),1,90 (dd, J=12,3 Hz, J=16,5 Hz, 1H), 0,81 (d, J=6,9 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI₃): δ 178,4, 171,6, 148,6, 146,8, 144,3, 142,7, 138,7,

136,2, 133,6, 130,7, 129,8, 126,6, 124,2, 124,1, 120,9, 120,5, 117,7, 117,4,

116.7, 112,6, 112,5, 101,0, 74,0, 60,6, 59,0, 57,0, 56,2, 56,1, 55,0, 53,3, 41,4,

39.7, 26,3, 24,8,18,3,15,5, 9,2.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₉H₄₄N₆O₆S: 724,8. Zistené (M+H)⁺: 725,3

-74 Príklad 8

Me

K roztoku 20 (270 mg, 0,37 ml) v dioxáne (1 ml) bol pridaný 4,2 N CCI/dioxán (3,5 ml) a reakčná zmes sa miešala pri 23 °C 30 min. Potom sa pridal etylacetát (20 ml) a H₂O (20 ml) a organická vrstva bola centrifugovaná. Vodná fáza bola bazifikovaná pomocou saturovaného vodného roztoku bikarbonátu sodného (60 ml) (pH = 8) pri 0 °C a potom extrahovaná CH₂CI₂ (2 x 50 ml). Organické extrakty boli spojené a vysušené (sulfát sodný) a skoncentrované in vacuo. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, etylacetát; metanol) pri vzniku zlúčeniny 21 (158 mg, 82%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,3 (etyl acetát: metanol 1:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 6,45 (s,1 H), 6,12-6,03 (m, 1H), 5,91 (s, 1 H), 5,85 (s,1H), 5,38 (dd, J,=1,2 Hz, J₂=17,1 Hz, 1H), 5,24 (dd, J,=1,2 Hz, J₂=10,5 Hz, 1H), 4,23-4,09 (m, 4H), 3,98 (d, J=2,1 Hz, 1H), 3,90 (bs, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,363,02 (m, 5H), 2,72-2,71 (m, 2H), 2,48 (d, J=18,0 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,85 (dd, J,=11,7 Hz, J₂=15,6 Hz 1H).

C NMR (75 MHz, CDCI₃): δ 148,4, 146,7, 144,4, 142,8, 138,8, 133,8, 130,5,

128.8, 121,5, 120,8, 118,0, 117,5, 116,9, 113,6, 112,2, 101,1, 74,3, 60,7, 59,9,

58.8, 56,6, 56,5, 55,3, 44,2, 41,8, 29,7, 26,5, 25,7, 15,7, 9,4.

ESI-MS m/z vyrátané pre 0₂₉Η₃4Ν4θ₅: 518,3. Zistené (M+H)⁺: 519,2

-75Príklad 9

NH₂

TrocCI. py. CHjClj

CN

NHTroc

K roztoku 21 (0,64 g, 1,22 ml) v CH₂CI₂ (6,13 ml) bol pridaný pyridín (0,104 ml, 1,28 ml) a 2,2,2-trichloretylchloroformiát (0,177 ml, 1,28 ml) pri teplote -10 °C. Reakčná zmes bola miešaná pri tejto teplote 1 hod., a potom bola reakcia zastavená pridaním 0,1 N HCI (10 ml) a extrahovaná CH₂CI₂ (2x10 ml). Organická vrstva bola vysušená (sulfát sodný) a skoncentrovaná in vacuo. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, hexán:etylacetát 1:2) pri vzniku 22 (0,84 g, 98%) vo forme bielej penovej pevnej látky.

Rf: 0,57 (etyl acetát :metanol 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCb): δ 6,50 (s, 1H), 6,10-6,00 (m, 1 H), 6,94 (d, J=1,5 Hz, 1H), 5,87 (d, J=1,5 Hz, 1H), 5,73 (bs, 1H), 5,37 (dq, J,=1,5 Hz, J₂=17,1 Hz, 1H), 5,26 (dq, J,=1,8 Hz, J₂=10,2 Hz, 1H), 4,60 (d, J=12 Hz, 1H), 4,22-4,10 (m, 4H),

4,19 (d, J=12 Hz, 1H), 4,02 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,37-3,18 (m, 5H), 3,04 (dd, J,=8,1 Hz, J₂=18 Hz, 1H), 2,63 (d, J=18 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,85 (dd, J,=12,3 Hz, J₂=15,9 Hz, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCb): δ 154,3, 148,5, 146,7, 144,5, 142,8, 139,0, 133,8,

ESI-MS m/z vyrátané pre C32H35CI3N4O7: 694,17. Zistené (M+H)⁺: 695,2

-76Príklad 10

Me

K roztoku 22 (0,32 g, 0,46 ml) v CH₃CN (2,33 ml) bol pridaný diizopropyletylamín (1,62 ml, 9,34 ml), brometylmetyléter (0,57 ml, 7,0 ml) a dimetylaminopyridín (6 mg, 0,046 ml) pri teplote 0 °C. Reakčná zmes bola ohrievaná pri 30 ’C 10 hod. Potom bola reakčná zmes zriedená dichlorometánom (30 ml) a pridaná do vodného roztoku HCI, pH5 (10 ml). Organická vrstva bola vysušená (sulfát sodný) a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom pri vzniku zvyšku, ktorý bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, hexán : etylacetát 2:1) pri vzniku 23 (0,304 g, 88%) vo forme bielej penovej pevnej látky.

Rf: 0,62 (hexán :etylacetát 1:3)..

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 6,73 (s, 1H), 6,10 (m, 1H), 5,94 (d, J=1,5 Hz, 1H), 5,88 (d, J=1,5 Hz, 1H), 5,39 (dq, J,=1,5 Hz, J₂=17,1 Hz, 1H), 5,26 (dq, J,=1,8 Hz, Λ=10,2 Hz, 1H), 5,12 (s, 2H), 4,61 (d, J=12 Hz, 1H), 4,55 (t, J= 6,6 Hz, 1H), 4,25 (d, J=12 Hz, 1H), 4,22-4,11 (m, 4H), 4,03 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,383,21 (m, 5H), 3,05 (dd, J,=8,1 Hz, J₂=18 Hz, 1H), 2,65 (d, J=18 Hz, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 1,79 (dd, J,=12,3 Hz, J₂=15,9 Hz, 1H);

¹³C NMR (75 MHz, CDCI₃): δ 154,3, 148,6, 148,4, 144,5, 139,0, 133,6, 130,6,

130,1, 125,07, 124,7, 124,0, 121,1, 117,7, 112,6, 101,2, 99,2, 77,2, 74,4, 74,1,

59,8, 59,8, 57,7, 57,0, 56,8, 56,68, 55,3, 43,2, 41,5, 26,4, 25,2, 15,9, 9,3,

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃4H₃9CI₃N₄O₈: 738,2. Zistené (M+H)⁺: 739,0

-77 Príklad 11

K suspenzii 23 (0,304 g, 0,41 ml) v 90% vodnom roztoku kyseliny octovej (4 ml) bol pridaný zinkový prášok (0,2 g, 6,17 ml) a reakčná zmes bola miešaná pri 23 °C 7 hod. Zmes bola filtrovaná cez vrstvu celitu, ktorá bola premytá CH₂CI₂. Organická vrstva bola premytá saturovaným vodným roztokom bikarbonátu sodného (pH 9) ( I 5 ml) a vysušená (sulfát sodný). Rozpúšťadlo bolo odparené podtlakom pri vzniku 24 (0,191 g, 83%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,3 (etylacetát :metanol 5:1 ).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 6,68 (s,1 H), 6,09 (m, 1H), 5,90 (d, J=1,5 Hz, 1H), 5,83 (d, J=1,5 Hz, 1H), 5,39 (dq, J,=1,5 Hz, J₂=17,1 Hz, 1H), 5,25 (dq, J,=1,5 Hz, J₂=10,2 Hz, 1 H), 5,10 (s, 2H), 4,22-4,09 (m, 3H), 3,98 (d, J=2,4 Hz, 1H), 3,89 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,57 (s, 3H), 3,37-3,17 (m, 3H), 3,07 (dd, J,=8,1 Hz, J₂=18 Hz, 1H), 2,71 (m, 2H), 2,48 (d, J=18 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 21,7 (s, 3H), 1,80 (dd, J,=12,3 Hz, J₂=15,9 Hz, 1H) ¹³C NMR (75 MHz, CDCI₃): δ 148,5, 148,2, 144,3, 138,7,133,7, 130,7, 129,9, 125,0, 123,9, 121,3, 117,9, 117,5, 113,6, 112,0, 101,0, 99,2, 74,0, 59,8, 59,7,

58,8, 57,6, 57,0, 56,2, 55,2, 44,2, 41,5, 31,5, 26,4, 25,6, 22,5, 16,7, 14,0, 9,2.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃iH₃₈N₄O₆: 562,66. Zistené (M+H)⁺: 563,1

-78Príklad 12

K roztoku 24 (20 mg, 0,035 ml) v H₂O (0,7 ml) a THF (0,7 ml) bol pridaný NaNO₂ (12 mg, 0,17 ml) a 90% volný roztok AcOH (0,06 ml) pri teplote 0’Ca pri tejto teplote sa reakčná zmes miešala 3 hod. Po zriedení CH₂CI₂ (5 ml) bola organická vrstva premytá vodou (1 ml), vysušená cez sulfát sodný a skoncentrovaná in vacuo. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, hexán: etylacetát 2:1) pri vzniku 25 (9,8 mg, 50%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,34 (hexán :etylacetát 1:1 ).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 6,71 (s, 1 H), 6,11 (m, 1H), 5,92 (d, J=1,5 Hz, 1H), 5,87 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,42 (dq, J,=1,5 Hz, J₂=17,1 Hz, 1H), 5,28 (dq, J,=1,5 Hz, J₂=10,2 Hz, 1 H), 5,12 (s, 2H), 4,26-4,09 (m, 3H), 4,05 (d, J=2,4 Hz, 1H), 3,97 (t, J=3,0 Hz, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,67-3,32 (m, 4H), 3,58 (s, 3H), 3,24 (dd, J,=2,7 Hz, J₂=15,9 Hz, 1H), 3,12 (dd, J,=8,1 Hz, J₂=18 Hz, 1H), 2,51 (d, J= 18,0 Hz, 1H), 2,36 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 1,83 (dd, J,=12,3 Hz, J₂=15,9 Hz, 1H) ¹³C NMR (75 MHz, CDCI₃): δ 148,7, 148,4, 138,9, 133,7, 131,1, 129,4, 125,1,

123,9, 120,7, 117,6, 117,5, 113,2, 112,3, 101,1, 99,2, 74,0, 63,2, 59,8, 59,7, 57,9,

57,7, 57,0, 56,5, 55,2, 41,6, 29,6, 26,1, 25,6, 22,6,15,7, 9,2.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃iH₃7N₃O?: 563,64. Zistené (M+H)⁺: 564,1

-79Príklad 13

Východzia zlúčenina (2,0 g, 5,90 ml) sa pridala k suspenzii hydridu sodného (354 mg, 8,68 ml) v THF (40 ml) pri teplote 23 °C. Potom bol k suspenzii pridaný allylchloroformiát (1,135 ml, 8,25 ml) pri teplote 23 °C a tato reakcia prebiehala 3 hod. Suspenzia bola ochladená, odfiltrovaná, pevná látka bola premytá etylacetátom (100 ml) a filtrát bol skoncentrovaný. Olejovitý hrubý produkt sa rozotrel s hexánom (100 ml) a cez noc uložený do 4 °C. Potom sa rozpúšťadlo odstredilo a ku svetlo žltej riedkej hmote sa pridal CH₂CI₂ (20 ml). Reakčná zmes bola precipitovaná hexánom (100 ml). Po 10 minútach sa rozpúšťadlo opäť odstredilo. Táto procedúra bola opakovaná do tej doby, až sa objavila biela pevná látka. Biela pevná látka bola odfiltrovaná a vysušená pri vzniku zlúčeniny 29 (1,80 g, 65%) vo forme bielej pevnej látky.

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 7,74 (d, J=7,5 Hz, 2H), 7,62 (d, J=6,9 Hz, 2H), 7,33 (t, J=7,5 Hz, 2H), 7,30 (t, J=6,3 Hz, 2H), 5,71 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 4,73 (d, J= 7,8 Hz, 2H), 4,59 (m, 1H), 4,11 (t, J= 6,0 Hz, 1 H), 3,17 (dd, J= 6,0 Hz, J= 2,7 Hz, 2H), 3,20 (dd, J= 5,4 Hz, J= 2,1 Hz, 2H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCb): δ 173,6, 152,7, 144,0, 139,7, 137,8, 126,0, 125,6,

123,4, 118,3, 73,4, 52,4, 45,5, 35,8, 33,7.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₂₀H₁₈C₁₃NO₄S: 474,8. Zistené (M+H)⁺: 497,8

-80Príklad 14

Zmes zlúčeniny 25 (585 mg, 1,03 ml) a zlúčeniny 29 (1,47 mg, 3,11 ml) bola azeotropovaná bezvodým toluénom (3x10 ml). K roztoku 25 a 29 v bezvodom CH₂CI₂ (40 ml) sa pridal DMAP (633 mg, 5,18 ml) a EDC.HCI (994 mg, 5,18 ml) pri teplote 23 °C. Reakčná zmes bola miešaná 3 hod pri 23 °C. Zmes bola rozdelená pomocou nasýteného vodného roztoku bikarbonátu sodného (50 ml) a vrstvy boli oddelené. Vodná fáza bola premytá CH₂CI₂ (50 ml). Organické fáze boli spojené a vysušené cez sulfát sodný, filtrované a skoncentrované. Hrubý produkt bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (etylacetát/hexán 1:3) pri vzniku 30 (1,00g, 95%) vo forme svetlo smotanovej žltej pevnej látky.

¹H NMR (300 MHz, CDCb): δ 7,72 (m, 2H), 7,52 (m, 2H), 7,38 (m, 2H), 7,28 (m, 2H), 6,65 (s, 1H), 6,03 (m, 1H), 5,92 (d, 7=1,5 Hz, 1H), 5,79 (d, J=1,5 Hz, 1H), 5,39 (m, 1H), 5,29 (dq, 7=10,3 Hz, J= 1,5 Hz, 1H), 5,10 (s, 2H), 4,73 (d, 7=11,9 Hz, 1H), 4,66 (d, 7=11,9 Hz, 1H), 4,53 (m, 1H), 4,36-3,96 (m, 9H), 3,89 (t, 7= 6,4 Hz, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,55 (s, 3H), 3,33 (m, 1H), 3,20 (m, 2H), 2,94 (m, 3H), 2,59 (m, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,83 (dd, 7=16,0 Hz, 7=11,9 Hz,

1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCb): δ 169,7, 154,0, 148,8, 148,4, 145,7, 144,5, 140,9, 139,0, 133,7, 130,9, 130,6, 127,6, 127,0, 124,8, 124,6, 124,1, 120,8, 119,9,

118,2, 117,7, 117,3, 112,7, 112,1, 101,3, 99,2, 74,7, 73,9, 64,4, 59,8, 57,7, 57,0,

56,8, 55,4, 53,3, 46,7, 41,4, 36,5, 34,7, 31,5, 26,4, 24,9, 22,6, 15,7, 14,0, 9,1.

ESI-MS m/z vyrátané pre CsiHs₃Ci₃N₄O₁₀S: 1020,4. Zistené (M+Hf: 1021,2

31

K roztoku 30 (854 mg, 0,82 ml) sa pri teplote 23 °C pridala kyselina octová (500 mg, 8,28 ml), (PPh₃)₂PdCI₂ (29 mg, 0,04 ml) v bezvodom CH₂CI₂ (20 ml) a po kvapkách Bu₃SnH (650 mg, 2,23 ml). Reakčná zmes bola miešaná pri tejto teplote 15 min. Reakcia bola zastavená vodou (50 ml) a extrahovaná CH₂CI₂ (3x50 ml). Spojené organické fázy boli vysušené cez sulfát sodný, filtrované a skoncentrované. Hrubý produkt bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (etylacetát/hexán s gradientom od 1:5 až po 1:3) pri vzniku zlúčeniny 31 (730 mg, 90%) vo forme svetlo smotanovej žltej pevnej látky.

'H-NMR (300 MHz, CDCb): δ 77,2 (m, 2H), 7,56 (m, 2H), 7,37 (m, 2H), 7,30 (m, 2H), 6,65 (s, 1 H), 5,89 (s, 1H), 5,77 (s, 1H), 5,74 (s, 1H), 5,36 (d, J=5,9 Hz, 1H), 5,32 (d, J= 5,9 Hz, 1 H), 5,20 (d, J= 9,0,1 H), 4,75 (d, J= 12,0 Hz, 1H), 4,73 (m, 1H), 4,48 (d, J=11,9 Hz, 1H), 4,08 (m, 4H), 3,89 (m, 1H), 3,86, (t, J= 6,2 Hz, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,69 (s, 3H), 3,38 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 3,02-2,89 (m, 4H), 2,67 (s, 1 H), 2,61 (s, 1H), 2,51 (dd, J=14,3 Hz, J= 4,5 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 1,95 (s, 3H), 1,83 (m, 1H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDCb): δ 168,2, 152,5, 148,1, 146,2, 144,4, 144,3, 143,3

139.6, 134,6, 129,7, 129,6, 126,2, 125,6, 123,4, 123,3, 121,6, 118,5, 116,3

110.7, 110,2, 105,1, 99,4, 98,5, 75,2, 73,3, 61,7, 58,4, 57,9, 56,3, 56,1, 55,1

54.7, 53,9, 51,9, 45,2, 40,1, 35,6, 33,3, 24,8, 23,3, 14,5, 7,3.

ESI-MS m/z vyrátané pre C48H49C13N4O10: 980,3. Zistené (M+H)⁺: 981,2

K roztoku 31 (310 mg, 0,32 ml) v bezvodom CH2CI2 (15 ml) pri teplote 10 °C bol pomocou kanyly pridaný roztok 70% anhydridu benzénselénu (165 mg, 0,32 ml) v bezvodom CH₂CI₂ (7 ml). Teplota reakčnej zmesi bola udržiavaná na -10 °C a miešaná 5 min. Pri tejto teplote sa pridal nasýtený roztok bikarbonátu sodného (30 ml). Vodná fáza bola premytá nadbytkom CH₂CI₂ (40 ml). Spojené organické vrstvy boli vysušené pomocou sulfátu sodného, filtrované a skoncentrované. Hrubý extrakt bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (etylacetát/hexán s gradientom od 1:5 až po 2:1) pri vzniku zlúčeniny 32 (287 mg, 91%) vo forme zmesi dvoch izomérov (65:35) svetlo smotanovej žltej pevnej látky, ktoré boli použité v nasledujúcom kroku.

¹H-NMR (300 MHz, CDCI₃): δ (zmes izomérov ) 7,76 (m, 4H), 7,65 (m, 4H), 7,39 (m, 4H), 7,29 (m, 4H), 6,62 (s, 1H), 6,55 (s, 1H), 5,79-5,63 (m, 6H), 5,09 (s, 1H), 5,02 (d, J= 6,0 Hz, 1H), 4,99 (d, J= 6,0 Hz, 1H), 4,80-4,63 (m, 6H), 4,60 (m, 1H), 4,50 (m, 1H), 4,38 (d, J= 128 Hz, J= 7,5 Hz, 1H), 4,27 (dd, J= 12,8 Hz, J= 7,5 Hz, 1H), 4,16-3,90 (m, 10H), 3,84 (s, 3H), 3,62 (s, 3H), 3,50 (s, 3H), 3,49 (s, 3H), 3,33-2,83 (m, 14H), 2,45-2,18 (m, 2H), 2,21 (s, 6H), 2,17 (s, 6H),1,77 (s, 6H),1,67 (m, 2H).

-83¹³C-NMR (75 MHz, CDCb): δ (zmes izomérov) 168,6, 168,4, 158,6, 154,8,

152,8, 152,5, 147,3, 147,2, 146,8, 144,1, 144,0, 140,8, 139,7, 137,1, 129,8,

129.3, 128,4, 128,7,126,5, 125,5, 123,7, 123,6, 123,5, 123,4, 122,2, 121,3,

118.3, 115,8, 115,5, 110,2, 106,9, 103,5, 103,2, 100,1, 99,6, 97,9, 97,7, 93,8,

73,4, 70,9, 69,2, 64,9, 62,5, 59,3, 58,9, 58,4, 56,7, 56,3, 56,2, 55,4, 55,2, 55,1, 54,9, 54,7, 54,3, 54,1, 53,8, 52,8, 45,5, 40,5, 40,0, 39,8, 35,8, 35,5, 33,9, 33,7, 30,1, 28,8, 24,2, 24,1, 21,2, 14,5, 14,4, 12,7, 6,0, 5,7.

ESI-MS m/z vyrátané pre C48H49C13N4O11S: 996,3. Zistené (M+H)⁺: 997,2

Príklad 17

4)

1) DMSO.Tí₂O

2) DIPEA

3) *BuOH

Me₂N

NBu

X

NMe₂

5) AcjO, CH₂GI₂

Reakčná nádoba bola dva razy vypálená plameňom, viac ráz na ňu pôsobilo vákuum/argón a uskladnená v argónovej atmosfére. K roztoku DMSO (39,1 ml, 0,55 ml, 5 ekvivalentov) v bezvodom CH2CI2 (4,5 ml) bol po kvapkách pridaný triflic anhydrid (37,3 ml, 0,22 ml, 2 ekvivalent), pri teplote -78 °C. Reakčná zmes bola miešaná pri -78 °C 20 min., potom sa kanylou pridal roztok 32 (110 mg, 0,11 ml, HPLC: 91,3%) v bezvodom CH₂CI₂ (1 ml ako hlavný prídavok, 0,5 ml na premývanie), pri -78 °C. Počas pridávania reaktantov bola

-84teplota reakčnej zmesi udržiavaná na -78 °C v obidvoch nádobách a farba zmesi sa zmenila zo žltej na hnedú. Reakčná zmes sa miešala 35 min pri teplote -40 °C. Farba roztoku sa zmenila zo žltej na tmavo zelenú. Potom sa po kvapkách pridal 'Pr₂NEt (153 ml, 0,88 ml, 8 ekvivalentov) a teplota reakčnej zmesi bola udržiavaná na 0 °C počas 45 min. a farba roztoku sa zmenila na hnedú. Potom sa po kvapkách pridal t-butanol (41,6 ml, 0,44 ml, 4 ekvivalenty) a 2-tButyl-1,1,3,3-tetrametylguanidín (132,8 ml, 0,77 ml, 7 ekvivalentov). Reakčná zmes sa miešala 40 min pri teplote 23 °C. Potom sa po kvapkách pridal acetanhydrid (104,3 ml, 1,10 ml, 10 ekvivalentov) a reakční zmes sa ďalšiu hodinu udržiavala pri teplote 23 °C. Potom sa reakčná zmes zriedila CH2CI2 (20 ml) a premyla vodným nasýteným roztokom NH₄CI (50 ml), bikarbonátu sodného (50 ml) a chloridu sodného (SO ml). Spojené organické fázy boli usušené pomocou sulfátu sodného, filtrované a skoncentrované. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (elučné činidlo: etylacetát/hexánový gradient od 1:3 až po 1:2) pri vzniku zlúčeniny 33 (54 mg, 58%) vo forme svetlo žltej pevnej látky.

¹H-NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 6,85 (s, 1H), 6,09 (s, 1H), 5,99 (s, 1H), 5,20 (d, J= 5,8 Hz, 1H), 5,14 (d, J= 5,3 Hz, 1H), 5,03 (m, 1H), 4,82 (d, J=12,2, 1H), 4,63 (d, J=12,0 Hz, 1H), 4,52 (m, 1H), 4,35-4,17 (m, 4H), 3,76 (s, 3H), 3,56 (s, 3H), 3,45 (m, 2H), 2,91 (m, 2H), 2,32 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,12 (m, 2H), 2,03 (s, 3H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDCI₃): δ 168,5, 167,2, 152,7, 148,1, 147,1, 144,5, 139,6,

139,1, 130,5, 129,0, 123,7, 123,5, 123,3, 1188, 116,5, 112,1, 100,6, 97,8, 73,3,

60,5, 59,4, 59,2, 58,3, 57,6, 57,4, 56,1, 53,3, 53,1, 40,6, 40,0, 31,0, 22,2, 18,9,

14,4, 8,1.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₆H₃₉Ci₃N₄OnS: 842,1. Zistené (M+H)⁺: 843,1

-85Príklad 18

TMSCI. Nal ch₂ci₂, ch₃cn

K roztoku 33 (12 mg, 0,014 ml) v suchom dichlorometáne (1,2 ml) a HPLC čistom acetonitrile (1,2 ml) sa pridal pri teplote 23 °C jodid sodný (21 mg, 0,14 ml) a čerstvo destilovaný (cez kalciumhydrid pod atmosférickým tlakom) trimetylsilylchlorid (15,4 mg, 0,14 ml). Farba reakčnej zmesi sa zmenila na oranžovú. Po 15 min bol roztok zriedený dichlórmetánom (10 ml) a premytý čerstvým, vodou nasýteným roztokom Na₂S₂O₄ (3x10 ml). Organická fáza bola vysušená pomocou sulfátu sodného, filtrovaná a skoncentrovaná. Získaná bola zlúčenina 34 (13 mg, kvantitatívnych) vo forme svetlo žltej pevnej látky, ktorá sa ďalej použila bez akejkoľvek purifikácie.

¹H-NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 6,85 (s, 1H), 6,09 (s, 1H), 5,99 (s, 1H), 5,27 (d, J= 5,8 Hz,1H), 5,14 (d, J= 5,3 Hz,1H), 5,03 (d, J=11,9 Hz, 1H), 4,82 (d, J= 12,2 Hz,1H), 4,63 (d, J= 13,0 Hz,1H), 4,52 (m, 1H), 4,34 (m, 1H), 4,27 (bs, 1H), 4,18 (m, 2H), 3,76 (s, 3H), 3,56 (s, 3H), 3,44 (m, 1H), 3,42 (m, 1H), 2,91 (m, 2H), 2,32 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,03 (s, 3H).

ESI-MS m/z vyrátané pre Cs^-LsNxiOwS: 798,1. Zistené (M+H)⁺: 799,1

-86Príklad 19

K roztoku 34 (13 mg, 0,016 ml) v zmesi kyseliny octovej vo vode (90:1, 1 ml) bol pridaný zinkový prášok (5,3 mg, 0,081 ml) pri teplote 23 °C. Reakčná zmes bola ohrievaná 6 hod. na teplotu 70 °C. Potom bola reakčná zmes ochladená na 23 ’C, zriedená CH₂CI₂ (20 ml) a premytá vodným nasýteným roztokom bikarbonátu sodného (15 ml) a vodným roztokom Et₃N (15 ml). Organická fáza bola vysušená pomocou sulfátu sodného, filtrovaná a skoncentrovaná. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (elučné činidlo; etylacetát/hexánový gradient od 0;100 až po 50:50) pri vzniku zlúčeniny 35 (6,8 mg, 77% - 2 kroky) vo forme svetlo žltej pevnej látky.

¹H-NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 6,51 (s, 1H), 6,03 (dd, >1,3 Hz, J= 26,5 Hz, 2H), 5,75 (bs, 1H), 5,02 (d, >11,6 Hz, 1H), 4,52 (m, 1H), 4,25 (m, 2H), 4,18 (d, J= 2,5 Hz, 1H), 4,12 (dd, >1,9 Hz, >11,5 Hz, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,40 (m, 2H),

30-2,10 (m, 2H), 2,30 (s, 3H), 2,28 (s,

3,26 (t, > 6,4 Hz, 1H), 2,88 (m, 2H), 2,

3H), 2,18 (s, 3H), 2,02 (s, 3H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDCI₃): δ 174,1, 168,4, 147,8, 145,4, 142,9, 140,8, 140,1, 131,7, 130,2, 129,1, 128,3, 120,4, 118,3, 117,9, 113,8, 111,7, 101,7, 61,2,

59,8, 59,2, 589, 544, 53,8, 54,4, 41,3, 41,5, 34,1, 23,6, 20,3, 15,5, 9,4.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₁H₃₄N₄O₈S: 622,7 Zistené (M+H)⁺: 623,2

-87 Príklad 20

K roztoku 36 (49 mg, 0,08 ml) a 2-/3-hydroxy-4-metoxyfenyl/etylamínu (46,2 mg, 0,27 ml) v etanole (2,5 ml) bol pridaný silikágel (105 mg) pri teplote 23 °C. Reakčná zmes bola miešaná 14 hod. pri teplote 23 °C. Reakční zmes bola zriedená hexánom a naliata do chromatografickej kolóny (etylacetát/hexán od 1:3 až do 1:1 ) pri vzniku Et-770 (55 mg, 90%) vo forme svetlo žltej pevnej látky.

¹H-NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 6,60 (s, 1H), 6,47 (s, 1H), 6,45 (s, 1 H), 6,05 (s, 1H), 5,98 (s, 1H), 5,02 (d, J=11,4 Hz, 1H), 4,57 (bs, 1H), 4,32 (bs, 1H), 4,28 (d, J= 5,3 Hz, 1H), 4,18 (d, J=2,5 Hz, 1H), 4,12 (dd, J= 2,1 Hz, J= 11,5 Hz, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,62 (s, 3H), 3,50 (d, J= 5,0 Hz, 1H), 3,42 (m, 1H), 3,10 (ddd, J= 4,0 Hz, J= 10,0 Hz, J= 11,0 Hz, 1H), 2,94 (m, 2H), 2,79 (m, 1H), 2,61 (m, 1H), 2,47 (m, 1H), 2,35 (m, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,09 (m, 1H), 2,04 (s, 3H).

ESI-MS m/z vyrátané pre C40H42N4O10S: 770,7. Zistené (M+H)⁺: 771,2

K roztoku 21 (22 mg, 0,042 ml) v CH₂CI₂ (0,8 ml) bol pridaný ftalát anhydrid (6,44 mg, 0,042 ml) a reakčná zmes bola miešaná 2 hod. pri 23 °C. Potom bol pridaný karbonyldiimidazol (1 mg, 0,006 ml) a reakčná zmes bola miešaná 7 hod. pri teplote 23 °C. Potom bol pridaný karbonyldiimidazol (5,86 mg, 0,035 ml) a reakčná zmes bola miešaná ďalších 17 hod. pri teplote 23 °C. Roztok bol zriedený CH₂CI₂ (15 ml) a premytý 0,1 N HCI (15 ml). Organická fáza bola vysušená pomocou sulfátu sodného, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, hexán :etylacetát 2:1) pri vzniku 27 (26,4 mg, 96%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,58 (etylacetát).

¹H-NMR (300 MHz, CDCb): 7,73-7,64 (m, 4H), 6,40 (s, 1H), 6,12-6,01 (m, 1H), 5,63 (s, 1H), 5,58 (d, J=1,5 Hz, 1H), 5,37 (dd, J,=1,8 Hz, 7₂=17,4 Hz), 5,23 (dd, J,= 1,8 Hz, J₂= 10,5 Hz, 1 H), 5,12 (d, 7=1,5 Hz, 1H), 4,22-4,15 (m, 3H), 4,08 (d, J=1,8 Hz, 1 H), 3,68 (s, 3H), 3,59-3,55 (m, 2H), 3,35 (d, J=Q, 1 Hz, 1H), 3,273,16 (m, 2H), 3,05 (dd, 7,= 8,1 Hz, 7₂=18,3 Hz, 1 H), 2,64 (d, 7=18,0 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,09 (s, 3H), 1,80 (dd, 7,= 11,4 Hz, J₂= 15 Hz, 1 H); ¹³C-NMR (75 MHz, CDCb): δ 167,7, 148,9, 146,4, 144,2, 142,6, 139,5, 134,0,

133,5, 132,0, 131,0, 128,3, 123,0, 121,3, 120,9, 118,1, 117,5, 116,8, 113,6,

112,4, 100,8, 74,5, 60,6, 60,5, 57,7, 56,6, 55,6, 55,5, 42,3, 41,7, 26,6, 25,5,

15,9, 9,46.

ESI-MS m/z vyrátané pre C37H35N4O7: 648,79. Zistené (M+H)⁺: 649,3

-89Príklad 23

OMe

PdCI₂(PPh₃)₂. Bu₃SnH

AcOH;CH₂CI₂. 2h

K roztoku 27 (26 mg, 0,041 ml) v CH2CI2 (11 ml) bola pridaná kyselina octová (11 ml), (PPh3)PdCI₂ (2,36 mg) a Bu₃SnH (28 ml, 0,10 ml) pri teplote 23 °C. Po dvojhodinovom miešaní pri tejto teplote sa reakčná zmes naliala do separačnej kolóny (SiO₂, gradient po hexán .'etylacetát 2:1) pri vzniku 28 (24,7 mg, 99%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,33 (hexán :etylacetát. 2:1).

¹H-NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 7,75-7,70 (m, 2H), 7,69-7,65 (m, 2H), 6,39 (s, 1H), 5,82 (bs, 1H), 5,50 (á, 7=1,5 Hz, 1H), 5,0 (d, 7=1,5 Hz, ÍH), 4,45 (bs, 1 H), 4,23-4,19 (m, 2H), 4,10-4,09 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,60-3,48 (m, 2H), 3,36-3,33 (m, 1H), 3,26-3,20 (m, 1H), 3,14-3,08 (m, 1H), 3,98 (d, 7=14,4 Hz, 1H), 2,61 (d, 7=18,3 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,06 (s, 3H),1,85 (dd, 7,=12 Hz, 7₂=

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₄H₃₂N₄O₇: 608,6. Zistené (M+H)⁺: 609,2

-90Príklad 24

K roztoku 28 (375 mg, 0,058 ml) v CH₂CI₂ (3 ml) bol pridaný acetylchlorid (41,58 ml. 0,58 ml) a pyridín (47,3 ml, 0,58 ml) pri teplote 0 °C. Reakčná zmes sa miešala 1 hod. a potom bol roztok zriedený CH₂CI₂ (15 ml) a prepláchnutý 0,1 N HCI (15 ml). Organická fáza bola vysušená pomocou sulfátu sodného, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (RP-18, CH₃CN :H₂O 60:40) pri vzniku ftalascidínu (354 mg, 94%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,37 (CH₃CN : H₂O 7:3, RP-18).

¹H-NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 7,72-7,68 (m, 2H), 7,67-7,63 (m, 2H), 6,38 (s, 1H), 5,69 (d, J=1,2 Hz, 1H), 5,64 (d, J=1,2 Hz, 1 H), 5,30 (bs, 1 H), 4,25-4,21 (m, 2H), 4,02 (d, J=2,1 Hz, 1H), 3,64-3,62 (m, 5H), 3,33 (d, J=8,4 Hz, 1 H), 3,213,16 (m, 1H), 3,02 (dd, J,= 8,1 Hz, J₂=18 Hz, 1 H), 2,76 (dd, J,= 1,8 Hz, J₂=15,6 Hz, 1 H), 2,63 (d, J=17,7 Hz, 1H), 2,29 (s, 3 H), 2,28 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,0 (s, 3H), 1,73 (dd, J,= 12,0 Hz, J₂=15,3 Hz, 1 H) ¹³C-NMR (75 MHz, CDCI₃): δ 168,5, 167,6, 146,2, 144,2, 142,5, 141,0, 140,5,

133,4, 131,8, 130,7, 128,2, 120,9, 120,8, 117,9, 116,4, 113,6, 101,1, 60,4, 60,0, 57,0, 56,3, 55,6, 55,4, 41,6, 41,5, 26,5, 25,2, 20,2,15,7, 9,4.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃6H₃4N₄O₈: 650. Zistené (M+H)⁺: 651,2

-91 Príklad 25

42

K roztoku 17 (300 mg, 0,432 ml)v CH2CI2 (2 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný acetylchlorid (30,7 ml, 0,432 ml) a pyridín (34,9 ml, 0,432 ml). Reakčná zmes bola miešaná 2 hod. pri teplote 0 °C a potom sa roztok zriedil pomocou CH2CI2 (15 ml) a prepláchol 0,1 N HCI (15 ml). Organická vrstva bola vysušená cez vrstvu sulfátu sodného, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom pri vzniku zlúčeniny 42 (318 mg, 100%) v podobe bielej pevnej látky, ktorá bola použitá v nasledujúcich reakciách bez ďalšej purifikácie.

Rf: 0,5 (etylacetát :metanol 5:1).

¹H-NMR (300 MHz, CDCb): δ 6,66 (s, 1H), 5,93 (d, 7=1,2 Hz, 1H), 5,83 (d, J=1,2 Hz, 1H), 5,42 (t, 7=6,6 Hz, 1H), 5,07 (d, 7=5,7 Hz, 1H), 4,98 (d, J=5,7 Hz, 1H),

4,16 (d, 7=1,8 Hz, 1H), 4,11 (d, 7=2,7 Hz, 1H), 3,98 (bs, 1 H), 3,73-3,61 (m, 2H), 3,64 (s, 3H), 3,52-3,48 (m, 1 H), 3,50 (s, 3H), 3,33 (d, 7=9,6 Hz, 1H), 3,17-3,14 (m, 1H), 2,97-2,87 (m, 1H), 2,75-2,70 (d, 7=16,8 Hz, 1H), 2,26 (s, 6H), 2,16 (s, 3H), 1,96 (s, 3H), 1,70 (dd, 7,=11,7 Hz, 7₂= 15,6 Hz, 1H), 1,33 (s, 9H), 0,59 (d, 7=6,0 Hz, 3H).

C-NMR (75 MHz, CDCb): δ 172,0, 168,3, 162,3, 148,2, 144,4, 140,4, 140,2,

130,9, 130,5, 125,3, 123,4, 120,8, 117,6, 112,7, 111,7, 101,4, 99,1, 79,2, 59,5,

58,8, 57,5, 57,4, 56,4, 55,5, 55,0, 41,3, 39,0, 28,2, 26,4, 24,6, 19,9, 18,4, 15,4,

9,1.

ESI-MS m/z vyrátané pre C36H49N5O10·' 735,82. Zistené (M+H)⁺: 736,3

-92 Príklad 26

Me

K roztoku 42 (318 mg, 0,432 ml) v CH2CI2 (2,16 ml) bola pridaná trifluorooctová kyselina (1,33 ml, 17,30 ml) a reakčná zmes bola miešaná pri teplote 23 °C 3,5 hod. Reakcia bola zastavená pri teplote 0 °C pomocou nasýteného vodného roztoku bikarbonátu sodného (60 ml) a extrahovaná CH₂CI₂(2x 70 ml). Spojené organické vrstvy boli vysušené (sulfát sodný) a skoncentrované in vacuo Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, etylacetát :metanol 20:1) pri vzniku zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 43 (154 mg, 60%) v podobe bielej pevnej látky.

Rf: 0,22 (etylacetát :metanol 5:1).

¹H-NMR (300 MHz, CDCb): δ 6,47 (s, 1H), 6,22 (bs, 1H), 5,95 (d, J=1,2 Hz, 1H), 5,88 (d, J=1,2 Hz, 1H), 4,08-4,06 (m, 2H), 4,01 (bs, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,49 (d, J=3,6 Hz, 1 H), 3,33 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 3,26-3,22 (m, 1H), 2,95 (dd, J,=8,1 Hz, J₂= 18 Hz, 1H), 2,80-2,76 (m, 2H), 2,58 (d, J=18 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 1,96 (s, 3H), 1,77 (dd, J,=12,3 Hz, J₂= 15,6 Hz, 1H), 0,90 (d, J= 6,9 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI₃): δ 174,8, 169,0, 146,8, 144,4, 142,8, 140,5, 140,2.

131.1, 128,8,120,8,120,5, 117,1, 112,9, 111,6, 101,5, 60,3, 59,0, 56,5, 56,3, 55,6,

55.1, 50,2, 41,6, 39,5, 26,8, 26,3, 24,9, 20,2, 15,4, 9,2.

ESI-MS m/z vyrátané pre C31H37N5O7: 591,65. Zistené (M+H)*: 592,3

-93Príklad 27

Me

K roztoku 43 (154 mg, 0,26 ml) v CH2CI2 (1,3 ml) bol pridaný fenylizotiokyanát (186 ml, 1,56 ml) a reakčná zmes bola pri teplote 23 °C miešaná 2 hod. Reakčná zmes bola skoncentrovaná in vacuo a zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, gradient hexán až po hexán: etylacetát 1:1) pri vzniku zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 44 (120 mg, 63%) v tvare bielej pevné látky.

Rf: 0,41 (etylacetát :metanol 5:1 ).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 8,17 (s, 1H), 7,49-7,44 (m, 3H), 7,31-7,24 (m, 3H), 7,05 (d, J= 6,9 Hz, 1H), 5,98 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,87 (d, 7=1,2 Hz, 1H), 5,52 (bs, 1H), 4,54 (t, 7=6,6 Hz, 1H), 4,15 (d, 7=2,1 Hz, 1H), 4,03 (d, 7= 2,7 Hz, 2H), 3,80 (bs, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,40 (bs, 1H), 3,32 (d, 7=7,8 Hz, 1H), 3,16 {d, 7=11,7 Hz, 1H), 2,82-2,61 (m, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,01 (s, 3H), 1,99 (s, 3H),1,80 (dd, 7_f= 12,0 Hz, 7₂=15,9 Hz, 1H), 0,62 (d, 7=6,0 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI₃) 8 178,5, 171,9, 168,7, 146,7, 144,5, 142,6, 140,6, 140,3, 136,3, 131,0, 129,9, 128,9, 126,7, 124,4, 120,9, 120,6, 117,7, 116,6, 112,7, 111,9, 101,4 60,4, 58,7, 57,5, 56,1, 55,7, 55,1, 53,3, 4Ί ,4, 38,8, 26,3, 24,4,20,2, 18,1, 15,3,9,2.

ESI-MS m/z vyrátané pre CmH^NsOzS: 726,3. Zistené (M+H)⁺: 727,3

-94Príklad 28

K roztoku 44 (120 mg, 0,165 ml) v dioxáne (0,9 ml) sa pridal 5,3 N HCI/dioxán (1,8 ml) a reakčná zmes bola pri teplote, 23 °C miešaná 2,5 hod. Potom sa k reakčnej zmesi pridal CH₂CI₂ (10 ml) a H₂O (5 ml) a organická fáza bola odstredená. Vodná fáza bola alkalizovaná pomocou roztoku saturovaného bikarbonátu sodného (20 ml) (pH 8) pri teplote 0 °C a potom extrahovaná pomocou CH₂CI₂ (2x15 ml). Spojené organické extrakty boli vysušené (sulfát sodný) a skoncentrované in vacuo pri vzniku zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 45 (75 mg, 87%) vo forme bielej pevnej látky, ktorá bola použitá v nasledujúcich reakciách bez ďalšej purifikácie.

Rf: 0,23 (etylacetát :metanol 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 6,43 (s, 1H), 5,94 (d, 7=1,2 Hz, 1H), 5,87 (d, 7=1,2Hz, 1H), 4,10 (d, 7=2,1 Hz, 1H), 3,98 (d, 7=2,4 Hz, 1H), 3,91 (bs, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,34-3,25 (m, 2H), 3,05 (dd, 7,= 1,8 Hz, 7₂=8,1 Hz, 1H), 2,80-2,73 (m, 3H), 2,46 (d, 7=18 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,28 (s,3H), 2,20 (s, 3H),1,98 (s, 3H), 1,79 (dd, 7,= 12,6 Hz, 7₂=16,2 Hz, 1H);

¹³C NMR (75 MHz, CDCI₃): δ 168,7, 146,7, 144,4, 142,9, 140,4, 130,4, 128,9,

121,1, 120,8, 117,8, 116,8, 113,6, 111,5, 101,4, 67,6, 60,5, 59,8, 58,4, 56,6,

55,8, 55,3, 43,6, 41,8, 31,3, 25,6, 20,2, 15,6, 9,2.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₂₈H₃₂N₄O₆: 520,58. Zistené (M+H)⁺: 521,3

K roztoku 45 (10 mg, 0,02 ml) v CH₂CI₂ (0,4 ml) bol pridaný ftalát anhydrid (2,84 mg, 0,02 ml) a reakčná zmes bola pri teplote 23 °C miešaná 2 hod. Potom sa pridal karbonylimidazol (0,5 mg, 0,003 ml) a reakčná zmes bola pri teplote 23 °C miešaná 7 hod. Potom sa pridal karbonylimidazol (2,61 mg, 0,016 ml) a reakčná zmes bola pri teplote 23 °C miešaná ďalších 7 hod. Roztok bol zriedený pomocou CH₂CI₂ ( 10 ml) a premytý 0,1 N HCI (5 ml). Organická vrstva bola vysušená pomocou sulfátu sodného, filtrovaná a rozpúšťadlo sa odstránilo podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (RP-18, CH₃CN:H₂O 60:40) pri vzniku ftalascidínu (11,7 mg, 93%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,37 (CH₃CN:H₂O 7:3, RP-18).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 7,72-7,68 (m, 2 h), 7,67-7,63 (m, 2 h), 6,38 (s, 1H), 5,69 (d, J=1,2 Hz, 1H), 5,64 (d, J=1,2 Hz, 1H), 5,30 (bs, 1H), 4,25-4,21 (m, 2 h), 4,02 (d, J=2,1 Hz, 1H), 3,64-3,62 (m, 5H), 3,33 (d, J=8,4 Hz, 1H), 3,213,16 (m, 1H), 3,02 (dd, J,= 8,1 Hz, J₂= 18 Hz, 1H), 2,76 (dd, J,= 1,8 Hz, J₂= 15,6 Hz, 1H), 2,63 (d, J=17,7 Hz, 1 H), 2,29 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,0 (s, 3H), 1,73 (dd, J,=12,0 Hz, J₂= 15,3 Hz, 1H);

¹³C NMR (75 MHz, CDCI₃ ): δ 168,5, 167,6, 146,2, 144,2, 142,5, 141,0, 140,5,

133,4, 131,8, 130,7, 128,2, 120,9, 120,8, 117,9, 116,4, 113,6, 101,1, 60,4,

64,0, 57,0, 56,3, 55,6, 55,4, 41,6, 41,5, 26,5, 25,2, 20,2, 15,7, 9,4.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₆H₃4N₄O₈: 650. Zistené (M+H)⁺: 651,2

K roztoku 25 (18 mg, 0,032 ml) v DMF (0,05 ml) sa pri teplote 0 °C pridal DMAP (0,5 mg, 0,004 ml), imidazol (5 mg, 0,08 ml) a terc-butyldifenylsilylchlorid (12,5 ml, 0,048 ml) a reakčná zmes bola pri teplote 23 °C miešaná 6 hod. Pri teplote 0 °C sa pridala voda (10 ml) a vodná fáza sa extrahovala pomocou hexán :etylacetát 1:10 (2x10 ml). Organická vrstva bola vysušená (sulfát sodný), filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené vo vákuu. Hrubý extrakt bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, hexán : etylacetát 3:1) pri vzniku zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 26 (27 mg, 88%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,29 (hexán .etylacetát 3:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃) δ 7,61-7,58 (m, 2 h), 7,42-7,28 (m, 8H), 6,71 (s,

1H), 6,19-6,02 (m, 1H), 5,78 (d, J=1,2 Hz, 1 H), 5,64 (d, J=1,2 Hz, 1H), 5,44 (dd, J,= 1,2 Hz, J₂= 17,1 Hz, 1 H). 5,27 (dd, J,= 1,2 Hz, J₂- 10,2 Hz, 1H), 5,13 (s, 2h), 4,45 (d, J=2,4 Hz, 1H), 4,24 (d, J=2,1 Hz, 1H), 4,17-4,06 (m, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,64 (dd, 2,4 Hz, J₂=9,9 Hz, 1H), 3,59 (s, 3H), 3,42-3,21 (m, 4H), 3,10 (dd, Ji= 8,1 Hz, J₂= 17,7 Hz, 1H), 2,70 (d, J=17,7 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 2,08-1,89 (m, 1H), 0,87 (s, 9H);

¹³C NMR (75 MHz, CDCI₃): δ 148,5, 148,3, 148,1, 144,0, 139,0, 135,6, 135,4,

133,8, 133,1, 132,6, 130,5, 130,3, 129,6, 129,4, 127,5, 127,4, 125,1, 124,3, 121,6, 118,5, 117,5, 112,9, 111,7, 100,8, 99,2, 74,0, 67,7, 61,5, 59,6, 59,0, 57,7, 57,1, 55,4, 41,6, 29,6, 26,6, 25,5, 18,8, 15,8, 9,2.

ESI-MS m/z vyrátané pre C47H₅5N₃O₇Si: 801,3. Zistené (M+H)⁺: 802,3

-97Príklad 31

K roztoku 26 (7 mg, 0,0087 ml) v CH2CI2 (0,15 ml) bola pri teplote 23 °C pridaná kyselina octová (2,5 ml, 0,044 ml), (PPh₃)₂PdCI₂ (0,5 mg, 6,96 x10'⁴ ml) a Bu₃SnH (3,5 ml, 0,013 ml). Pri tejto teplote sa reakčná zmes miešala 1 hod. Roztok bol zriedený zmesou hexán : etylacetát 5:1 (0,5 ml) a naliaty na stĺpec separačnej kolóny (SiO₂, gradient 5:1 až po 1:1 hexán : etylacetát) pri vzniku zlúčeniny podľa všeobecného vzorca ET-11 (5 mg, 75%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,36 (hexán : etylacetát 1:5, silica).

¹H NMR (300 MHz, CDCb): δ 7,56 (m, 2 h), 7,41-7,25 (m, 8H), 6,67 (s, 1H), 5,72 (d, 7=1,0 Hz, 1H), 5,58 (d, , 7=1,0 Hz, 1H), 5,51 (s,1 H), 5,38 (d, , 7=5,75 Hz, 1H), 5,16 (d, 7=5,7 Hz, 1H), 4,57 (d, 7=2,9 Hz, 1H), 4,21 (m, 1H), 4,09 (m, 1IH), 3,72 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 3,68 (dd, 7,= 2,1 Hz, J₂= 10,4 Hz, 1H), 3,383,26 (m, 3H), 3,11 (dd, 7,= 2,5 Hz, 7₂= 15,7 Hz, 1H), 3,01 (dd, 7,= 8,9 Hz, 7₂=

17,9 Hz, 1H), 2,70 (d, 7=17,9 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 1,89 (dd, 7,= 12,1 Hz, 7₂= 15,7 Hz, 1H), 0,9 (s, 9H);

¹³C NMR (75 MHz, CDCb): δ 149,0, 147,4, 145,3, 144,3, 136,3, 135,7, 135,4,

133.2, 130,9, 130,5, 129,6, 129,5, 127,5, 125,0, 118,6, 112,5, 112,1, 105,7, 100,5, 99,8, 68,5, 61,5, 59,7, 58,8, 57,7, 56,9, 56,5, 55,4, 41,7, 26,6, 26,2,

25.5.18.9.15.8.14.2, 8,7.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₄4H₅iN₃O₇Si: 761. Zistené (M+H)⁺: 762

-98Príklad 32

Roztok, zložený z roztoku 2 (3,0 g, 5,46 ml) a fenylizotiokyanátu (3,92 ml, 32,76 ml) v CH2CI2 (27 ml) sa pri teplote 23 °C miešal 1,5 hod. Reakčná zmes bola rozdelená medzi CH₂CI₂ (10 ml) a H₂O (5 ml). Organická vrstva bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a skoncentrovaná. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, gradient hexán až hexán: etylacetát 2:3) pri vzniku zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 3 (3,29 g, 99%) vo forme žltej pevnej látky.

Rf: 0,27 (ACN:H₂O 3:2, RP-C18);

¹H NMR (300 MHz, CDCb): δ 7,77 (bs, 1H), 7,42-7,11 (m, 5H), 6,65 (d, 1H), 6,29 (s, 1H), 5,6-5,5 (m, 1H), 4,19-4,14 (m, 2h), 4,08 (d, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,873,65 (m, 6H), 3,77 (s, 3H), 3,37-2,98 (m, 8H), 2,50 (d, 1 H), 2,31 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 1,96 (d,1 H), 1,87 (s, 3H), 1,81-1,75 (m, 1H), 0,96 (d, 3H);

¹³C NMR (75 MHz, CDC13): δ 185,7, 180,9, 178,9, 172,0, 155,7, 147,1, 143,2,

142.4, 136,0, 135,1, 130,5, 129,9, 129,3, 128,5, 126,9, 124 4, 120 2, 117,4, 116,3, 77,1, 60,9, 58,6, 56,2, 55,8, 55,0, 54,6, 53,5, 41,7, 40,3, 25,1, 24,5,

18.4, 15,8, 8,7

ESI-MS m/z vyrátané pre CaeH^NeOeS: 684,8. Zistené (M+H)⁺: 685,2

-99Príklad 33

Roztok 3 (0,143 g, 0,208 ml) v 6,5 M roztoku HCI/dioxán (I50 ml) sa pri teplote 23 °C miešal 6 hod. Potom sa k reakčnej zmesi pridal toluén (3 ml) a organická vrstva bola odstredená. Zvyšok bol rozdelený medzi nasýtený roztok bikarbonátu sodného (3 ml) a CHCI₃ (3x3 ml). Organické vrstvy boli vysušené a skoncentrované pri vzniku zlúčeniny ako zmesi zlúčenín 4 a 6 (4:6 90:10), ktorá pomaly státím cyklizuje na zlúčeninu 6.

Rf: 0,4 (etylacetát: metanol 5:l, silica);

¹H NMR (300 MHz CDCI₃): δ 6,45 (s, 1H), 4,16 (m, 1H), 4,02 (d, 1H), 3,96 (s, 3H), 3,79 (m, 2h), 3,75 (s, 3H), 3,35 (m, 1H), 3,20-3,00 (m, 3H), 2,87 (d, 1H), 2,75 (d, 1H), 2,43 (d, 1H), 2,34 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 1,93 (s, 3H), 1,72-1,5 (m, 3H);

ESI-MS m/z vyrátané pre C₂6H₃oN₄05: 478,5. Zistené (M+H)⁺: 479,2

-100 Príklad 34

Roztok 3 (0,143 g, 0,208 ml) v 6,5 M HCI v dioxáne (150 ml) sa pri teplote 23 °C miešal 1 hod. Odparením rozpúšťadla vznikol zvyšok, ktorý bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (etylacetát: metanol: trietylamín 100:25:0,1) pri vzniku zlúčeniny 6 (80 mg, 83%) vo forme žltej pevnej látky.

Rf: 0,26 (ACN : H₂O 3:2, RP-C18);

¹H NMR (500 MHz, CDCI₃): δ 6,46 (s, 1H), 5,9 (bs, 1H) 4,67 (dd, J=18,3 Hz, J= 7,8 Hz, 1H), 4,24 (d, 1H), 4,16 (s, 3H), 3,93 (d, J=2,7 Hz, 1H), 3,8 (m, 2 h), 377 (s, 3H), 3,45 (m, 2h), 3,08 (dd, J=17,9 Hz, J=3,6 Hz, 1H), 2,78 (m, 1H), 2,55 (d, 1H), 2,3 (m, 1H), 2,3 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 1,90 (s, 3H);

¹³C NMR (75 MHz,CDCb): δ 186,2, 162,1, 154,9, 146,9, 145,3, 143,0, 130,1,

129,4, 128,1, 125,0, 121,4, 116,4, 116,2, 66,6, 60,7, 60,7, 60,1, 59,6, 58,8, 55,6, 54,9,41,9,25,3,24,7, 15,7,8,9

ESI-MS m/z vyrátané pre C26H28N4O4: 460,5. Zistené (M+H)⁺: 461,1

- 101 Príklad 35

K roztoku 3 (2,38 g, 3,47 ml) v dioxáne (5 ml) sa pridal 5,3 M HCI v dioxáne (34 ml) a reakčná zmes sa miešala pri teplote 23 °C 45 min. Potom sa pridal AcO₂ (51 ml, 539,5 ml) a reakčná zmes sa miešala 4 hod. Reakční zmes bola ochladená na 0 °C a pri tejto teplote rozdelená medzi vodný nasýtený roztok Na₂CO₃ (300 ml) a etyl acetát (300 ml). Organická fáza bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a skoncentrovaná. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO_2l gradient CH2CI2 až CH₂Cl2:etylacetát 1:2) pri vzniku zlúčeniny 5 (1,75 g, 97%) vo forme žltej pevnej látky.

Rf: 0,53 (ACN:H₂O 3:2, RP-C18);

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 6,51 (s, 1H), 5,98 (bs, 1H), 4,84 (dd, 1H), 4,17 (d, 1H), 4,00 (d, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,85 (bs, 1H), 3,81 (m, 1 H), 3,74 (s, 3H), 3,70 (d, 1H), 3,23 (m, 1H), 3,11 (dd, 1H), 3,09 (m, 1H), 2,93 (m, 2 h), 2,44 (d, 1H),

3,67 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 1,70 (s, 3H), 1,60-1,50 (m, 2h), 1,29 (s, 3H);

¹³C NMR (75 MHz, CDCI₃): δ 185,9, 180,8, 169,9, 160,2, 156,2, 147,0, 143,1,

140,4, 136,1, 130,6, 129,6, 127,9, 120,4, 117,2, 61,0, 60,7, 58,6, 56,1, 55,7, 55,1, 54,3, 41,8, 41,1, 25,7, 23,9, 22,2, 15,7, 8,7.

ESI-MS m/z vyrátané pre C28H₃₂N₄O6: 520,6. Zistené (M+H)⁺: 521,1

-102 Príklad 36

K roztoku 5 (1,75 g, 3,36 ml) v CH₂CI₂ (17 ml) sa pri teplote 0 °C pridal diizopropyletylamín (11,71 ml, 67,23 ml), DMAP (20 mg, 0,17 ml) a bromometylmetyléter (4,11 ml, 50,42 ml). Po 6 hod. pri teplote 23 °C bola reakčná zmes rozdelená medzi CH₂CI₂ (50 ml) a nasýtený vodný roztok bikarbonátu sodného (25 ml). Organická fáza bola vysušená cez sulfát sodný a rozpúšťadlo bolo odstránené vo vákuu. Hrubý extrakt bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (RP-18, CH₃CN : H₂O 1:1) pri vzniku zlúčeniny 7 (1,32 g, 70%) vo forme žltej pevnej látky.

Rf: 0,34 (ACN:H₂O 2:3, RP-C I 8);

¹H NMR {300 MHz, CDCb): δ 6,74 (s, 1H), 5,14 (s, 2h), 4,82 (m, 1H), 4,22 (d, 1H),

4,00 (s, 3H), 4,0 (m, 1 H), 3,83 (m, 2h), 3,7 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,4 (m, 1H), 3,22,95 (m, 6H), 2,43 (d, 1 H), 2,37 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 1,89 (s, 3H), 1,5-1,4 (m, 2 h),1,31 (s, 3H);

¹³C NMR (75 MHz, CDCb): δ 185,9, 180,7, 169,6, 156,2, 148,9, 148,5, 140,3,

136,2, 131,3, 130,1, 127,7, 124,6, 123,7, 117,3, 99,5, 99,2, 60,9, 59,7, 58,8, 57,7,

56,4, 55,7, 55,0, 54,2, 51,0, 41,6, 41,0, 40,5, 25,5, 23,9, 22,3, 19,3, 15,6, 14,6,

8,6.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃oH₃₆N₄0₇: 564,6. Zistené (M+H)⁺: 565,3

- 103 Príklad 37

K roztoku 7 (0,37 g, 0,65 ml) v metanoie (74 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný 1M hydroxíd sodný (130 ml). Reakčná zmes bola miešaná 15 min. a potom bola nastavená pri teplote 0 °C pomocou 6M HCI na pH 5. Reakčná zmes bola extrahovaná etylacetátom (3 x 50 ml) a spojené organické vrstvy boli vysušené pomocou sulfátu sodného a skoncentrované vo vákuu. Zvyšokk bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (RP-18, CH₃CN : H₂O 1:11) pri vzniku zlúčeniny 8 (232 mg, 65%) vo forme žltej olejovitej látky.

Rf: 0,5 (ACN : H₂O 3:2, RP-C18);

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 6,75 (s, 1H), 5,15 (s, 2 h), 4,86 (m, 1H), 4,26 (d, 1 H), 4,01 (d, 1H), 3,88-3,81 (m, 2h), 3,70 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,39 (m, 1H), 3,27-3,21 (m, 1H), 3,18-3,08 (m, 2h), 3,03-2,97 (m, 1H), 2,47 (d, 1H), 2,37 (s,

3H), 2,22 (s, 3H), 1,90 (s, 3H), 1,57-1,46 (m, 2h), 1,33 (s, 3H);

¹³C NMR (75 MHz, CDCb): δ 185,3, 180,6, 175,9, 170,1, 151,5, 148,9, 148,6,

143.3, 133,7, 131,5, 129,9, 124,7, 123,5, 117,1, 117,0, 99,2, 59,8, 58,7, 57,8,

56.3, 55,3, 54,9, 54,3, 41,5, 40,7, 29,6, 25,5, 24,4, 22,2, 20,7, 15,7, 8,0.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₂₉H34N4O₇: 550,6. Zistené (M+H)*: 551,2

-104-

A

K odplynenému roztoku zlúčeniny 8 (240 mg, 0,435 ml) v DMF (30 ml) bol pridaný 10% Pd/C (48 mg) a reakčná zmes bola miešaná vo vodíkovej atmosfére (atmosférický tlak) 1 hod. Reakčná zmes bola filtrovaná cez vrstvu celitu pod argónom do Schlenkovej skúmavky ako bezfarebný roztok, obsahujúci bezvodý Cs₂CO₃ (240 mg, 0,739 ml). Potom bol pridaný bromochlorometán (0,566 ml, 8,71 ml). Skúmavka bola uzatvorená a reakčná zmes bola miešaná 3 hod. pri teplote 90 °C. Reakčná zmes bola ochladená a filtrovaná cez vrstvu celitu a premytá CH₂CI₂. Organická vrstva bola skoncentrovaná a vysušená (sulfát sodný) pri vzniku zlúčeniny 9 vo forme hnedej olejovitej látky, ktorá bola použitá v nasledujúcom kroku bez ďalšej purifikácie.

Rf: 0,36 (SiO₂, hexán :etylacetát 1:5) ¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 6,71 (s, 3H), 5,89 (d, 1H), 5,81 (d, 1H), 5,63 (bs, 1H), 5,33 (d, 1H), 5,17 (d, 1H), 4,97 (m, 1 H), 4,20 (d, 1H), 4,09 (m, 1H), 3,99 (m, 1H), 3,68 (m, 1 H), 3,65 (s, 6H), 3,59-3,47 (m, 4H), 3,37-3,27 (m, 2 h), 3,142,97 (m, 2h), 2,62 (d, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 1,72 (m, 1H), 1,36 (s, 3H);

¹³C NMR (75 MHz, CDCI₃): δ 169,8, 149,1, 147,4, 145,5, 136,2, 130,9, 130,8, 125,0, 122,9, 117,7, 112,6, 111,8, 106,4, 100,8, 99,8, 59,8, 58,9, 57,7, 56,6,

56,4, 55,5, 55,2, 41,6, 40,1, 29,6, 25,9, 25,0, 22,5,15,6, 8,8.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₀H₃₆SiN₄O7: 564,6. Zistené (M+H) : 565,3

-105 -

Do nádoby obsahujúcej zlúčeninu 9 (245 mg, 0,435 ml) v DMF (4 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný cézium karbonát (425 ml, 1,30 ml) a allyl bromid (376 ml, 4035 ml) a zmes bola miešaná 1 hod. pri 23 °C. Reakčná zmes bola filtrovaná cez vrstvu celitu a rozdelená medzi CH2CI2 (25 ml) a H₂O (10 ml). Organická fáza bola usušená (sulfát sodný) a skoncentrovaná podtlakom pri vzniku zvyšku, ktorý bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, CHCI₃:etylacetát 1:2) pri vzniku zlúčeniny 10 (113 mg, 43%) vo forme žltej olejovitej látky.

Rf: 0,36 (hexán : etylacetát 1:5) ⁴H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 6,74 (s, 1H), 6,3-6,0 (m, 1H), 5,94 (d, 1H), 5,87 (d, 1H), 5,43-5,36 (m, 2h), 5,22 (s, 2h), 5,00 (m, 1H), 4,22 (m, 1H), 4,17-4,01 (m,1 H), 3,98 (m, 2h), 3,71-3,67 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,62-3,51 (m, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,39-3,37 (m, 1H), 3,31-3,26 (m, 3H), 3,09 (dd, 1H), 2,56 (d, 1H), 2,36 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 2,24-2,10 (m, 1H), 1,82-1,73 (m, 1H), 1,24 (bs, 3H) ¹³C NMR (75 MHz, CDCI₃): δ 169,4, 148,8, 148,3, 139,1, 133,7, 130,9, 130,3,

125,2, 120,2, 117,7, 113,1, 112,6, 101,3, 99,3, 74,1, 59,7, 59,3, 57,8, 57,0, 56,1, 56,1,55,2, 41,6, 41,0, 40,9, 29,7, 26,3, 22,5,,15,6, 9,3

ESI-MS m/z vyrátané pre Ο₃₃Η₄₀Ν₄Ο₇: 604,7. Zistené (M+H)⁺: 605,3

-106Me

Príklad 40

□A

K roztoku 9 (22 mg, 0,039 ml) v CH2CI2 (0,2 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný acetylchlorid (2,79 ml, 0,039 ml) a pyridín (3,2 ml, 0,039 ml). Reakčná zmes bola miešaná 1 hod. a potom bol roztok zriedený CH₂CI₂ (10 ml) a prepláchnutý 0,1 N HCI (5 ml). Organická fáze bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom pri vzniku zlúčeniny 46 (22 mg, 93%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,4 (hexán : etylacetát 1:5) ¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 6,74 (s, 1 H), 5,97 (d, >0,9 Hz, 1H), 5,91 (d, > 0,9 Hz, 1H), 5,12 (d, >5,7 Hz, 2 h), 5,04 (d, > 5,7 Hz, 1H), 4,90 (t, >6 Hz, 1 H), 4,17 (d, >2,7 Hz, 1H), 4,05 (d, >2,7 Hz, 1H), 4,01 (bs, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,57 (s, 3H), 3,50-3,44 (m, 2 h), 3,38-3,36 (m, 1H), 3,30-3,26 (m, 1H), 3,00 (dd, J,= 7,8 Hz, J₂= 18,0 Hz, 1 H), 2,79 (d, >12,9 Hz, 1H), 2,60 (d, >18,0 Hz, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,32 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,68 (dd, J,= 11,7 Hz, J₂= 15,6 Hz, 1 H).

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₂H₃₈N₄O₈: 606,67. Zistené (M+H)⁺: 607,3

-107-

K roztoku 46 (8 mg, 0,013 ml) v dioxáne (0,1 ml) bol pridaný 5,3 N roztok HCI v dioxáne (0,5 ml) a zmes bola miešaná 1 hod. pri teplote 23 °C. Potom bol roztok zriedený pomocou CH₂CI₂ (5 ml) a prepláchnutý 0,1 N HCI (3 ml). Organická vrstva bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom pri vzniku zlúčeniny 47 (5 mg, 70%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,4 (hexán : etylacetát 1:5), ¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 6,51 (s, 1H), 5,97 (d, J=1,2 Hz, 1H), 5,91 (d, J=1,2 Hz, 1H), 4,97 (bs, 1H), 4,11 (bs, 1H), 4,04-4,02 (m, 2 h), 3,75 (s, 3H), 3,65 (d, J=2,1 Hz, 2 h), 3,56-3,30 (m, 2h), 3,04 (dd, J,= 7,5 Hz, J₂= 18 Hz, 1 H), 2,80 (d, J=14,4 Hz, 1H), 2,59 (d, J=18,3 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,00 (s, 3H); 1,76 (dd, J,= 12,0 Hz, J₂= 15,9 Hz, 1 H), 1,33 (s, 3H), 1,25 (s, 3H).

EŠI-MS m/z vyrátané pre C₃oH₃4N₄0₇: 562,61. Zistené (M+H)⁺: 563,3

-108-

K roztoku 45 (10 mg, 0,0192 ml) v CH₂CI₂ (0,3 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný izovalerylchlorid (2,34 ml, 0,00192 ml) a pyridín (1,55 ml, 0,0192 ml). Reakčná zmes bola miešaná 1 hod. a pot bol roztok zriedený pomocou CH₂CI₂(5ml) a prepláchnutý 0,1 N HCI (3m1). Organická vrstva bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, hexán:etylacetát 1:2) pri vzniku zlúčeniny 48 (11 mg, 95%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,12 (Hex: etylacetát 1:2).

’H NMR (300 MHz, CDCb): δ 6,50 (s, 1H), 5,98 (d, 7=1,5 Hz,1H), 5,91 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,75 (s, 1H), 5,02 (t, 7= 5,4 Hz, 1H), 4,10 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 4,06 (d, 7=2,7 Hz, 1H), 4,02 (d, 7=2,7 Hz, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,76-3,71 (m, 1H), 3,863,28 (m, 3H), 3,04 (dd, 7,= 8,1 Hz, J₂= 18,3 Hz, 1 H), 2,78 (d,. 7=15,9 Hz, 1H), 2,55 (d, 7=18 Hz, 1H), 2,32 (s, 6H), 2,26 (s, 3H), 1,98 (s, 3H),1,84-1,68 (m, 2h), 1,36 (d, 7= 7,12 Hz, 2h), 0,69 (d, 7=6,6 Hz, 3H), 0,62 (d, 7=6,6 Hz, 3H).

ESI-MS m/z vyrátané pre C33H40N4O7: 604,69. Zistené (M+H)⁺: 605,3

- 109 Príklad 43

49

K roztoku 45 (10 mg, 0,0192 ml) v CH₂CI₂ (0,3 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný izovalerylchlorid (3,98 ml, 0,0192 mi) a pyridín (1,55 ml, 0,0192 ml). Reakčná zmes bola miešaná 1 hod. a potom bol roztok zriedený CH₂CI₂ (5ml) a prepláchnutý 0,1 N HCI (3 ml). Organická vrstva bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, hexán:etylacetát 1:2) pri vzniku zlúčeniny 49 (12,4 mg, 96%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,7 (etylacetát :metanol 10:1 ).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 6,50 (s, 1H), 5,98 (d, J=1,5 Hz, 1H), 5,91 (d, J=1,5 Hz 1H), 5,73 (s, 1H), 5,08 (t, J=5,4 Hz, 1H), 4,10 (d, J=1,5 Hz, 1H), 4,05 (m, 1H), 4,01 (m, 1 H), 3,76 (s, 3H), 3,65-3,61 (m, 1H), 3,40-3,27 (m, 3H), 3,03 (dd, J,= 8,1 Hz, J₂= 18,6 Hz, 1H), 2,78 (d, J=13,2 Hz, 1H), 2,57(d, J=18,3 Hz, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,25 (s, 3H),1,99 (s, 3H), 1,79 (dd, Jf= 12,0 Hz, J₂= 16,5 Hz, 1 H), 1,73-1,42 (m, 4H), 1,33-1,18 (m, 10H), 1,03 (m, 2h), 087 (t, J= 6,6 Hz, 3H).

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₈H₅oN40₇: 674,83. Zistené (M+H)*: 675,5

-110Príklad 44

K roztoku 45 (14,5 mg, 0,0278 ml) v CH₂CI₂ (0,3 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný trans-3-trifluorometylcinnamoylchlorid (4,76 ml, 0,0278 ml) a pyridín (2,25 ml, 0,0278 ml). Reakčná zmes bola miešaná 1 hod. a potom sa roztok zriedil CH₂CI₂ (5 ml) a prepláchol 0,1 N HCI (3ml). Organická fáza bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, hexán:etylacetát 1:1) pri vzniku zlúčeniny 50 (18,7 mg, 94%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,64 (etylacetát: metanol 15:1 ).

¹H NMR (300 MHz, CH₃OD) δ 7,74-7,55 (m, 4H), 7,23 (d, J=16,0 Hz, 1H), 6,34 (s, 1H), 6,12 (d, J=16,0 Hz, 1H), 6,07 (d, J=0,9 Hz, 1H), 5,96 (d, J=0,9 Hz, 1H), 4,39 (d, J=2,4 Hz, 1H), 4,07-4,05 (m,1 H), 3,81 (bs, 1H), 3,46-3,51 (m, 3H), 3,42 (s, 3H), 3,09 (br d, J=12,0 Hz, 1H), 2,94-2,85 (m, 2h), 2,74 (d, J=18,3 Hz, 1H), 2,38 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,80 (s, 3H), 1,84-1,75 (m, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI₃) ): δ 168,7, 165,3, 146,5, 144,7, 142,6, 140,6, 138,0, 135,9, 131,0, 130,9, 129,1, 128,6, 125,8, 125,7, 124,5, 124,4, 122,7, 121,2,

117,8, 116,5, 113,0, 112,0, 101,7, 60,4, 59,1, 56,5, 56,4, 55,6, 55,3, 41,8, 40,3, 26,6, 25,1,20,3, 15,4, 9,3.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₈H₃₇F₃N₄O₇: 718,72. Zistené (M+H)⁺: 719,3

-111 -

K roztoku 43 (33 mg, 0,0557 ml) v CH₂CI₂ (0,4 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný izovalerylchlorid (6,79 ml, 0,0557 ml) a pyridín (4,5 ml, 0,0557 ml). Reakčná zmes bola miešaná 1 hod. a potom bol roztok zriedený CH₂CI₂ (5ml) a prepláchnutý 0,1 N HCI (3 ml). Organická fáza bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, hexán:etylacetát 1:2) pri vzniku zlúčeniny 51 (34 mg, 91%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf; 0,09 (Hex: etylacetát 1:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 6,46 (s, 1H), 6,10 (bs, 1H), 5,99 (d, J= 0,9 Hz, 1H), 5,90 (d, J=0,9 Hz, 1H), 5,30(t, J=6,0 Hz, 1H), 4,10-4,05 (m, 3H), 3,81 (bs, 1H), 3,74 (s, 3H), 3,54 (bs, 1H), 3,38-3,36 (m, 1H), 3,29-3,21 (m, 1H), 3,00 (dd, J,= 8,0 Hz, J₂= 18,0 Hz, 1H), 2,25 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,95-1,90 (m, 3H), 0,87 (d, J=6,6 Hz, 6H), 0,76 (d, J=6,0 Hz, 3H).

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₆H₄₅N₅O8: 675,77. Zistené (M+H)*: 676,3

-112 -

K roztoku zlúčeniny 43 (33 mg, 0,0557) v CH₂CI₂ (0,4 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný trans-3-trifluorometylcinnamoylchlorid (9,52 ml, 0,0557 ml) a pyridín (4,5 ml, 0,0557 ml). Reakčná zmes bola miešaná 1 hod. a potom bol roztok zriedený CH₂CI₂ (5ml) a prepláchnutý 0,1 N HCI (3 ml). Organická fáza bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, hexán.etylacetát 1:2) pri vzniku zlúčeniny 52 (40 mg, 92%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,21 (hexán :etylacetát 1:2).

¹H NMR (300 MHz, CD₃OD), δ 7,74-7,47 (m, 4H), 6,49 (s, 1H), 6,40 (d, 7=15,6 Hz, 1H), 6,00 (d, 7=1,5 Hz, 1H), 5,90 (d, 7=1,5 Hz, 1H), 5,47 (t, 7=6 Hz, 1H), 4,12-4,09 (m, 3H), 3,93 (bs, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,59-3,58 (m, 1H), 3,38 (d, 7=7,8 Hz, 1H), 3,29 (d, 7=12,0 Hz, 1 H), 3,00 (dd, 7,= 8,1 Hz, J₂= 18,3 Hz, 1 H), 2,792,78 (m, 1 H), 2,65 (d, 7=18,3 Hz, 1H), 2,29 (s, 6H), 2,28 (s, 3H), 2,22 (s, 3H),1,84-1,80 (m, 1H), 0,85-0,84 (m, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI₃) δ 171,9, 168,8, 164,4, 146,9, 144,6, 143,0, 140,5,

140,5, 139,3, 135,7, 131,1, 131,0, 129,4, 129,1, 126,0, 124,1, 124,0, 122,4,

121,1, 120,7, 120,6, 117,7, 116,9 112,8, 112,0, 101,6, 60,6, 59,3, 57,1, 56,3, 55,9, 55,2, 49,0, 41,7, 49,9, 26,5, 25,1, 20,2, 18,4, 15,7, 9,3.

ESI-MS m/z vyrátané pre C4iH4₂F₃N₅O_B: 789,8. Zistené (M+H)⁺: 7903

-113-

K roztoku zlúčeniny 43 (10 mg, 0,0169) v CH2C12 (0,2 ml) bol pri teplote 23 °C pridaný anhydrid trifluórooctovej kyseliny (2,38 pl, 0,0169 ml). Reakčná zmes bola miešaná 5 hod. a potom bol roztok zriedený CH2CI2 (5ml) a prepláchnutý 0,1 N HCI (3 ml). Organická vrstva bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, hexán:etylacetát 1:2) pri vzniku zlúčeniny 53 (10,7 mg, 92%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,57 (etylacetát .metanol 5:1 ).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,45 (s, 1H), 6,00 (d, J=1,2 Hz, 1H), 5,90 (d, J=1,2 Hz, 1H), 5,87 (bs, 1H), 5,32 (bs, 1H), 4,12(d, J=2,1 Hz, 1H), 4,08 (d, J=1,8 Hz, 1H), 3,78-3,56i (m, 3H), 3,72 (s, 3H), 3,40 (d, J=8,1 Hz, 1 H), 3,25 (d, J= 9,3

Hz, 1H), 3,00 (dd, J_?= 8,4 Hz, J₂=18,0 Hz, 1H), 2,77(dd, J,=2,1 Hz, J₂=15,9 Hz, 1H), 2,68 (d, J=18,6 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,75 (dd, J,= 11,4 Hz, J₂=15,9 Hz, 1H), 0,69 (d, J=6,3 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 170,1, 168,6, 156,0, 147,0, 144,6, 143,0, 140,6,

140,4, 131,0, 129,4, 120,9, 120,7, 117,6, 116,8, 112,4, 112,1, 101,6, 60,5, 59,0, 57,1, 56,3, 55,6, 55,2, 48,7, 41,6, 39,4, 26,5, 24,9, 20,2, 17,8, 15,4, 9,2.

ESI-MS m/z vyrátané pre C33H36F3N5O8: 687,63. Zistené (M+H)⁺: 688,66

-114-

K roztoku zlúčeniny 19 (11 mg, 0,0169) v CH₂CI₂ (0,2 ml) bol pri teplote 23 °C pridaný anhydrid trifluorooctovej kyseliny (2,38 ml, 0,0169 ml). Reakčná zmes bola miešaná 5 hod. a potom bol roztok zriedený CH₂CI₂ (5ml) a prepláchnutý 0,1 N HCI (3 ml). Organická vrstva bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, hexán:etylacetát 3:2) pri vzniku zlúčeniny 54 (107 mg, 93%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,6 (etylacetát :metanol 5:1 ).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃) δ 7,33 (d, J= 6,3 Hz, 1H), 6,45 (s, 1H), 6,04 (m, 1H),

5,95 (d, 7=1,5 Hz, 1H), 5,84 (d, 7=1,5 Hz, 1H), 5,32 (m, 2h), 5,21 (m, 1H), 4,11 (m, 4H), 3,73 (s, 3H), 3,64 (m, 2h), 3,51 (m, 1H), 3,37 (d, 7=7,8 Hz, 1H), 3,22 (m, 2h), 3,03 (dd, 1H, 7,=8,1 Hz, 7₂=18,3 Hz, 1H), 2,60 (d, 7=18,3 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 1,86 (dd, 7,=12 Hz, 7₂=16,2 Hz, 1H), 0,82 (d, 7= 7,2 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCb) δ 170,0, 156,0, 148,4, 147,1, 144,3, 143,0, 138,7,

133,8, 130,5, 129,4, 120,6, 120,4, 117,6, 117,5, 117,0, 113,5, 112,5, 112,4,

101,1, 74,1, 66,8, 60,4, 59,3, 56,9, 56,6, 56,3, 55,4, 48,7, 41,6, 40,1, 26,2, 25,0, 17,6, 15,4, 9,1.

ESI-MS m/z vyrátané pre C35H3gF3N₅O₇: 685,69. Zistené (M+H)⁺: 686,3

-115Príklad 49

⁵⁴ 55

K roztoku 54 (100 mg, 0,415 mi) v CH2CI2 (4 ml) bola pri teplote 23 °C pridaná kyselina octová (40 ml), (PPh₃)₂PdCI₂ (8,4 mg, 0,012 ml) a Bu₃SnH (157 ml, 0,56 ml). Pri tejto teplote bola reakčná zmes miešaná 2 hod. a potom naliata na stĺpec separačnej kolóny (SiO2, gradient hexán :etylacetát 2:1) pri vzniku zlúčeniny 55 (90 mg, 96%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,6 (hexán .etylacetát 1:2).

’H NMR (300 MHz, CDCI₃) δ 7,55 (d, 7=7,2 Hz, 1H), 6,45 (s, 1 H), 5,90 (d, 7=1,2 Hz, 1H), 5,82 (d, 7=1,2 Hz, 1H), 5,37 (t, 7=6,0 Hz, 1H), 4,15 (d, 7=2,1 Hz, 1H), 4,04 (d, 7=1,8 Hz, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,66-3,53 (m, 2h), 3,37-3,31(m, 2h), 3,19-3,15 (d, 7=11,7 Hz, 1H), 3,08-3,00 (m, 2h), 2,56 (d, 7=18,3 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 1,91 (dd, 7,= 12,0 Hz, 7₂=15,6 Hz, 1H), 0,84 (d, 7=6,9 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI₃) δ 170,1, 156,3, 147,3, 144,9, 144,4, 143,3, 136,7,

130,7, 129,3, 120,6, 117,6, 117,4, 114,4, 112,1, 107,7, 101,0, 85,8, 60,5, 59,3,

56,5, 56,4, 56,2, 55,2, 48,9, 41,6, 40,9, 25,7, 25,3, 18,0, 15,6, 8,7.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₂H₃5F₃N5O₇: 645,63. Zistené (M+H)⁺: 646,2

-116 Príklad 50

56

K roztoku 17 (200 mg, 0,288 ml) v CH2CI2 (1,44 ml) bola pridaná trifluórooctová kyselina (888 ml, 11,53 ml) a reakčná zmes bola miešaná 4 hod. pri teplote 23 °C. Reakcia bola zastavená pri teplote 0 °C pomocou nasýteného vodného roztoku bikarbonátu sodného (60 ml) a extrahovaná etylacetátom (2x70 ml). Spojené organické vrstvy boli vysušené (sulfát sodný) a skoncentrované in vacuo pri vzniku zlúčeniny 56 ( 147 mg, 93%) vo forme bielej pevnej látky, ktorá bola použitá v nasledujúcich reakciách bez ďalšej purifikácie.

Rf: 0,19 (etylacetát .'metanol 15:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃) δ 6,48 (s, 1H), 5,88, (d, 7=0,9 Hz, 1H), 5,81 (d, 7=0,9 Hz, 1H), 4,35 (d, 7=2,4 Hz, 1H), 4,15 (d, 7=1,8 Hz, 1H), 3,99-3,98 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,52-2,96 (m, 7H), 2,68 (d, 7=18,3 Hz, 1H), 2,24 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,06 (s, 3H),1,85 (dd, 7,=11,7 Hz, 7₂=15,6 Hz, 1H), 0,91 (d, 7=6,6 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CD₃OD) δ 173,2, 149,1, 145,6, 144,9, 138,0, 132,2, 130,6, 121,4, 119,6, 117,4, 114,3, 109,2, 102,5, 82,3, 60,4, 58,4, 58,3, 57,8, 56,6,

50,1, 42,3, 41,6, 27,8, 26,2, 19,5, 15,5, 9,8.

ESI-MS m/z vyrátané pre θ29Η₃₅Ν5θ₆: 549,62. Zistené (M+H)⁺ : 550,3

-117Príklad 51

K roztoku 56 (10 mg, 0,018 ml) v CH₂CI₂ (0,4 ml) bol pridaný fenylizotiokyanát (13 ml, 0,109 ml) a reakční zmes bola miešaná 1,5 hod. pri teplote 23 °C. Reakčná zmes bola skoncentrovaná in vacuo a zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, gradient hexán až po hexán'.etylacetát 1:1) pri vzniku zlúčeniny 57 (8 mg, 65%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,57 (etylacetát :metanol 10:1 ).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃) δ 7,88 (bs, 1 H), 7,41-7,36 (m, 2h), 7,27-7,22 (m, 1H), 7,02-7,00 (d, 7=7,8 Hz, 2h), 6,71 (d, J=7,2 Hz, 1H), 6,31 (s, 1H), 6,17 (bs, 1H), 5,93 (d, 7=1,2 Hz, 1H), 5,83 (d, 7=1,2 Hz, 1H), 5,55 (bs, 1H), 5,20-5,17 (m, 1H), 4,16 (d, 7=1,8 Hz, 1H), 4,05 (bs, 1H), 4,02 (d, 7=2,4 Hz, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,75-3,71 (m, 1H), 3,35 (d, 7=7,8 Hz, 1H), 3,28-3,19 (m, 2h), 3,12-2,97 (m, 2h), 2,50 (d, 7=18,3 Hz, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,15-2,09 (dd, 7,=11,4 Hz, 7₂=15,9 Hz, 1H), 1,95 (s, 3H), 0,88 (d, 7=6,9 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI₃) δ 178,5, 171,7, 147,2, 145,0, 144,3, 143,3, 137,0,

135,7, 130,6, 130,4, 129,6, 127,5, 124,3, 120,6, 117,7, 117,2, 115,3, 112,1, 108,3, 100,9, 60,9, 59,5, 56,7, 56,5, 56,2, 55,2, 54,1, 41,7, 41,1, 26,3, 25,4,

18,5, 15,8, 9,0.

ESI-MS m/z vyrátané pre C36H₄oN₆0₆S: 684,81. Zistené (M+H)⁺: 685,3

-118 Príklad 52

Me Me

58

K roztoku 57 (45 mg, 0,065 ml) v CH2CI2 (0,5 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný acetylchlorid (4,67 ml, 0,065 ml) a pyridín (5,3 ml, 0,065 ml). Reakčná zmes bola miešaná 3 hod. a potom bol roztok zriedený CH2CI2 (10 ml) a prepláchnutý 0,1 NHCI (5 ml). Organická vrstva bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (RP-18, CH3CN.H2O 40:60) pri vzniku zlúčeniny 58 (14 mg, 28%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,34 (CH3CN.H2O 7:15).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃) δ 11,90 (d, 7=6,6 Hz, 1H), 7,45-7,40 (m, 3H), 7,187,15 (m, 2h), 6,58 (s, 1H), 6,0 (d, 7=1,2 Hz, 1H), 5,89 (d, 7=1,2 Hz, 1H), 5,70 (s, 1H), 5,37 (t, 7=4,8 Hz, 1H), 4,48 (m, 1H), 4,23 (bs, 1H), 4,07 (bs, 2h), 3,85-3,75 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,46-3,41 (m, 2h), 3,24-3,20 (m, 1H), 3,00-2,95 (m, 1H), 2,87-2,75 (m, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,00 (s, 3H),1,85 (dd, 7/=11,4 Hz, 72=15,9 Hz, 1H), 1,66 (s, 3H), 0,82 (d, 7=6,0 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI₃) δ 182,6, 174,3, 171,0, 146,6, 144,6, 142,7,142,3,

140.7, 140,2, 131,3, 129,8, 129,3, 128,9, 128,8, 121,5, 120,4, 117,3, 116,6,

112.8, 112,0, 111,3, 101,5, 60,5, 59,0, 57,6, 56,2, 55,9, 55,3, 55,1, 41,6, 39,4,

27.8, 26,5, 24,8, 20,2, 17,1, 15,5, 9,3.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₄oH₄4N60₈S: 768,88. Zistené (M+H)* : 769,2

- 119Príklad 53

Me

K roztoku 57 (130 mg, 0,189 ml) v dioxáne (1 ml) bol pridaný 5,3 N HCI/dioxán (1,87 ml) a reakčná zmes bola miešaná 4 hod. pri teplote 23 °C. Potom sa k reakčnej zmesi pridal CH2CI2 (15 ml) a H₂O (10 ml) a organická fáza bola odstredená. Vodná fáza bola alkalízovaná pomocou roztoku saturovaného bikarbonátu sodného (60 ml) (pH 8) pri teplote 0 °C a potom extrahovaná pomocou etylacetátu (2x50 ml). Spojené organické extrakty boli vysušené (sulfát sodný) a skoncentrované in vacuo pri vzniku zlúčeniny 59 (63 mg, 70%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,15 (etylacetát :metanol 5:1 ).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃) δ 6,67 (s, 1H), 5,99 (d, J= 0,9 Hz, 1H), 5,91 (d, J=

1,2 Hz, 1 H), 5,10 (bs, 1H), 4,32 (d, 7=7,2 Hz, 1H), 4r25 (dd, 7,=3,6 Hz, 7₂=9,3 Hz, 1H), 3,7 (s, 3H), 3,71-3,64 (m, 2h), 3,50 (dd, 7,=2,4 Hz, 7₂=15,9 Hz, 1H), 3,42-3,37 (m, 2h), 3,16 (dd, 7,=3,6 Hz, 7₂=12,9 Hz, 1H), 2,57 (dd, 7,=9,3 Hz, 7₂=12,9 Hz, 1H), 2,27 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,91 (dd, 7,=12,0 Hz, 7₂=15,9 Hz, 1H).

ESI-MS m/z vyrátané pre C26H30N4OS: 478,5. Zistené (M+H)⁺ : 479,3

-120Príklad 54

K roztoku 43 (20 mg, 0,0338 mmol) v CH2CI2 (0,3 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný cinnamoylchlorid (5,63 ml, 0,0338 mmol) a pyridín (2,73 ml, 0,0338 mmol). Reakčná zmes bola miešaná 1 hod. a potom bol roztok zriedený CH2CI2 (10 ml) a prepláchnutý 0,1 N HCI (5 ml). Organická fáza bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, EtOAc:MeOH 20:1) pri vzniku zlúčeniny 60 (22 mg, 90%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,56 (EtOAc:MeOH 5:1 ).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃) δ 7,51 (s, 1H), 7,50-7,47 (m, 2H), 7,36-7,35 (m, 2H), 6,43 (s, 1H), 6,36 (brd, 7=15,9 Hz, 2H), 6,01 (d, 7=1,5 Hz, 1H), 5,90 (brd, 7=1,5 Hz, 2H), 5,42 (t, 7=6,0 Hz, 1H), 4,12-4,07 (m, 3H), 3,96-3,95 (m, 1H), 3,73 (bs, 3H), 3,58 (bs, 2H), 3,39 (d, 7=8,7 Hz, 1H), 3,25 (d, 7=11,7 Hz, 1H), 3,0 (dd, 7?=7,5 Hz, 7₂=17,7 Hz, 1H), 2,78 (d, 7=15,9 Hz, 1H), 2,67 (d, 7=16,5 Hz, 1H), 2,29 (s, 6H), 2,23 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,82 (dd, 7,=11,4 Hz, 7₂=15,6 Hz, 1H), 0,83 (d, 7=6,0 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 172,0, 165,0, 146,9, 144,6, 143,1, 141,0, 140,5,

134,8, 131,0, 129,7, 129,1, 128,8, 127,8, 125,5, 123,8, 123,0, 121,1, 120,5,

117,7, 116,9, 112,8, 112,0, 101,9, 60,6, 59,2, 57,1, 56,4, 55,9, 55,3, 48,8, 41,7, 40,0, 26,5, 25,1, 20,3, 18,5, 15,7, 9,3.

ESI-MS m/z vyrátané pre C40H43N5O8: 721,8. Zistené (M+Hf : 722,3

- 121 Príklad 55

K roztoku 45 (19 mg, 0,0364 mmol) v CH2CI2 (0,3 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný heptafluorobutyrylchlorid (5,44 ml, 0,0364 mmol) a pyridín (2,95 ml, 0,0364 mmol). Reakčná zmes bola miešaná 1 hod. a potom bol roztok zriedený CH2CI2 (10 ml) a prepláchnutý 0,1 N HCI (5 ml). Organická vrstva bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, EtOAc:MeOH 20:1) pri vzniku zlúčeniny 61 (11,7 mg, 45%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,76 (EtOAc:MeOH 5:1 ).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃) δ 6,46 (s, 1H), 6,12 (bs, 1H), 5,98 (d, 7=1,2 Hz, 1H), 5,93 (d, 7=1,2 Hz, 1H), 5,72 (bs, 1H), 4,13-4,11 (m, 2H), 4,0 (d, 7=2,4 Hz, 1H), 3,98-3,96 (m, 1 H), 3,73 (s, 3H), 3,39 (d, 7=7,5 Hz, 1H), 3,39-3,28 (m, 2H), 3,09 (dd, 7₇=8,1 Hz, 7₂=18,0 Hz, 1 H), 2,80 (d, 7=16,2 Hz, 1H), 2,46 (d, 7=18,3 Hz, 1H), 2,32 (s, 6H), 2,21 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,80 (dd, 7,=12,0 Hz, 7₂=16,2 Hz, 1H),

ESI-MS m/z vyrátané pre C32H₃₁F₇N₄O₇: 716,6. Zistené (M+H)⁺ : 717,2

-122 Príklad 56

Me

C₄H₇OCI. Py ch₂ci₂. ιΐι,οτ

K roztoku 43 (24 mg, 0,04 mmol) v CH2CI2 (0,3 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný butyrylchlorid (4,15 ml, 0,04 mmol) a pyridín (3,28 ml, 0,04 mmol). Reakčná zmes bola miešaná 1 hod, a potom bol roztok zriedený CH2CI2 (10 ml) a prepláchnutý 0,1 N HCI (5 ml). Organická vrstva bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, AtOAc:MeOH 20:1) pri vzniku zlúčeniny 62 (24 mg, 90%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,35 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃) δ 6,47 (s, 1H), 6,10 (d, J=Q,5 Hz, 1H), 6,0 (d, 7=1,5 Hz, 1H), 5,91 (d, 7=1,5 Hz, 1H), 5,86 (bs, 1H), 5,31 (d, 7=6,9 Hz, 1H), 4,11-4,06 (m, 3H), 3,85-3,81 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,59-3,53 (m, 2H), 3,38 (d, 7=7,5 Hz, 1H), 3,27-3,22 (m, 1H), 3,0 (dd, 7,=7,8 Hz, 7₂=17,4 Hz, 1H), 2,79 (d, 7=15,3 Hz, 1H), 2,63 (d, 7=17,7 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,80 (dd, 7,=12,0 Hz, 72=15,9 Hz, 1H), 1,58 (q, 7=7,2 Hz, 2H), 0,89 (t, 7=7,2 Hz, 3H), 0,76 (d, 7=6,6 Hz, 3H).

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₃H₄₃N₅O₈: 716,6. Zistené (M+H)*: 717,2

- 123-

K roztoku 45 (19 mg, 0,0364 mmol) v CH₂CI₂ (0,3 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný cinnamoylchlorid (6,06 mg, 0,0364 mmol) a pyridín (2,95 ml, 0,0364 mmol). Reakčná zmes bola miešaná 1 hod. a potom bol roztok zriedený CH₂CI₂(10 ml) a prepláchnutý 0,1 N HCI (5 ml). Organická vrstva bola vysušená cez sulfát sodný a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, AtOAc:MeOH 20:1) pri vzniku zlúčeniny 63 (24 mg, 90%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,65 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃) δ 7,39-7,29 (m, 5H), 6,42, (s, 1H), 6,01 (d, J=1,5 Hz, 1 H), 5,92 (d, J=1,5 Hz, 1H), 5,73 (bs, 1 H), 5,24 (t, J=6,8 Hz, 1H), 4,12-4,08 (m, 3H), 3,66-3,64 (m, 2H), 3,58 (bs, 3H), 3,36 (d, J=8,7 Hz, 1H), 3,29 (d, J=12,0 Hz, 1H), 2,98 (dd, Λ=8,1 Hz, J₂=18 Hz, 1H), 2,33 (s, 6H), 2,29 (s, 3H), 2,01 (s, 3H), 1,84 (dd, J_}=12,0 Hz, J₂=15,9 Hz, 1H).

ESI-MS m/z vyrátané pre C3₇H₃8N₄O7: 650,72. Zistené (M+H)⁺: 651,2

-124 Príklad 58

K roztoku 43 (20 mg, 0,0338 mmol) v CH₂CI₂ (0,3 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný 3-chloropropionylchlorid (3,22 ml, 0,0338 mmol) a pyridín (2,73 ml, 0,0338 mmol). Reakčná zmes bola miešaná 1 hod. a potom bol roztok zriedený CH₂CI₂ (10 ml) a prepláchnutý 0,1 N HCI (5 ml). Organická vrstva bola vysušená cez sulfát sodný a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, AtOAc:MeOH 20:1) pri vzniku zlúčeniny 64 (20,5 mg, 89%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 032 (EtOAc:Hexan 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃) 6,48 (s, 3H), 6,28 (m, 1H), 5,99 (d, J=1,2 Hz, 1H), 5,91 (d, J=1,2 Hz, 1H), 5,86 (bs, 1H), 5,31 (m, 1H), 4,08-4,07 (m, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,72-3,53 (m, 5H), 3,39 (d, J=8,1 Hz, 1H), 3,24 (d, J=12,0 Hz, 1H), 3,00 (dd, Λ=8,1 Hz, J₂=18 Hz, 1 H), 2,79 (d, J=13,5 Hz, 1H), 2,50 (t, J=6,3 Hz, 2H), 2,32 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,0 (s, 3H), 1,79 (dd, ^=12,3 Hz, J₂=14,8 Hz, 1 H), 0,81 (d, J=6,3 Hz, 3H).

- 1257»

Príklad 59

K roztoku 43 (19 mg, 0,0364 mmol) v v CH2CI2 (0,3 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný butyrylchlorid (3,78 ml, 0,0364 mmol) a pyridín (2,95 ml, 0,0364 mmol). Reakčná zmes bola miešaná 1 hod. a potom bol roztok zriedený CH2CI2 (10 ml) a prepláchnutý 0,1 N HCI (5 ml). Organická vrstva bola vysušená cez sulfát sodný a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, AtOAc:MeOH 20:1) pri vzniku zlúčeniny 65 (19 mg, 87%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,60 (EtOAc:MeOH 5:1 ).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃) 6,50(s, 1H), 5,98 (d, 7=1,5 Hz, 1H), 5,91 (d, 7=1,5 Hz, 1 H), 5,75 (s, 1H), 5,01 (t, 7=6,4 Hz, 1H), 4,10-4,09 (m,1H), 4,06 (d, 7=2,1 Hz, 1H), 4,03-4,02 (m, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,67-3,60 (m, 1H), 3,42-3,35 (m. 2H), 3,29 (d, 7=12,0 Hz, 1H), 3,02 (dd, 7,=7,8 Hz, 7₂=17,7 Hz, 1H), 2,79 (d, 7=14,1 Hz, 1H), 2,56 (d, 7=18,3 Hz, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 1,78 (dd, 7,=12,0 Hz, 7₂=15,9 Hz, 1H), 1,63 (s, 3H), 1,53-1,46 (m, 2H), 1,28-1,16 (m, 2H), 0,68 (t, 7=7,2 Hz, 3H).

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₂H₃₈N₄O₇: 590,67. Zistené (M+H)⁺ : 591,2

- 126 Príklad 60

K roztoku 50 (31,7 mg, 0,044 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/0,5 ml) bol pridaný AgNO₃ (225 mg, 1,32 mmol) a reakčná zmes bola miešaná 17 hod. pri teplote 23 °C. Potom bol pridaný soľný roztok (10 ml) a vodou saturovaný roztok NaHCO₃ (10 ml) a reakčná zmes bola miešaná 15 min., prefiltrovaná cez vrstvu celitu a premytá CH₂CI₂ (20 ml). Roztok bol odstredený a organická fáza bola vysušená a skoncentrovaná in vacuo. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, AtOAc:MeOH 5:1) pri vzniku zlúčeniny 66 (16 mg, 51%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,26 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃) δ 7,66-7,42 (m, 4H), 7,20 (bs, 1H), 6,44 (s, 1H), 5,97 (b, 7=1,2 Hz, 1H), 5,90 (d, 7=1,2 Hz, 1H), 5,76 (bs, 1H), 5,28 (bs, 1H), 4,54 (bs, 1H), 4,43 (bs, 1H), 4,00 (bs, 1H), 3,68-3,57 (m, 4H), 3,47 (d, 7=3,3 Hz, 1H), 3,40 (d, 7=11,7 Hz, 1H), 3,17 (d, 7=6,9 Hz, 1H), 2,92 (dd, 7,=8,1 Hz, 7₂=17,7 Hz, 1H), 2,74 (d, 7=17,1 Hz, 1H), 2,48 (d, 7=18,6 Hz, 1H), 2,32 (s, 6H), 2,28 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,76 (dd, 7,= 12,0 Hz, 7₂=16,2 Hz, 1H).

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃7H₃₈F₃N₃O₈: 709. Zistené (M+H)*: 692,3

- 127Priklad 61

Me o

AgNO₃, CH₃CN/H2O 24h, 23 °C

Me 0

K roztoku 53 (57 mg, 0,0828 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/0,5 ml) bol pridaný AgNO₃ (650 mg, 3,81 mmol) a reakčná zmes bola miešaná 24 hod. pri teplote 23 °C. Potom bol pridaný soľný roztok (10 ml) a vodou saturovaný roztok NaHCO₃ (10 ml) a reakčná zmes bola miešaná 15 min., prefiltrovaná cez vrstvu celitu a premytá CH₂CI₂ (20 ml). Roztok bol odstredený a organická fáza bola vysušená a skoncentrovaná in vacuo. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, AtOAc:MeOH 5:1) pri vzniku zlúčeniny 67 (28 mg, 50%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,28 (EtOAc:MeOH 10: 1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃) d

6,47 (s, 1H), 5,97 (s, 1H), 5,88 (s, 1H), 5,35 (bs, 1H), 4,51 (bs, 1H), 4,41 (bs, 1H), 4,12-4,05 (m, 1H), 4,00 (d, 7=2,7 Hz, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,64 (bs, 1H), 3,46 (d, 7=3,3 Hz, 1H), 3,34 (d, 7=11,4 Hz, 1H), 3,18 (d, 7=7,5 Hz, 1H), 2,95 (dd, 7,=8,4 Hz, 7₂=18,3 Hz, 1H), 2,70 (d, 7=15,6 Hz, 1H), 2,48 (d, 7=17,7 Hz, 1H), 2,28 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 1,98 (s, 3H), 1,68 (dd, 7,=12 Hz, 7₂=15,6 Hz, 1H), 0,86 (d, 7=6,3 Hz, 3H).

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₂H₃₇F₃N₄O₉: 678,66. Zistené (M+H)⁺: 661,2

-128Príklad 62

K roztoku 48 (32 mg, 0,0529 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/0,5 ml) bol pridaný AgNO₃ (270 mg, 1,58 mmol) a reakčná zmes bola miešaná 24 hod. pri teplote 23 °C. Potom bol pridaný soľný roztok (10 ml) a vodou saturovaný roztok NaHCO₃ (10 ml) a reakčná zmes bola miešaná 15 min., prefiltrovaná cez vrstvu celitu a premytá CH2CI2 (20 ml). Roztok bol odstredený a organická fáza bola vysušená a skoncentrovaná in vacuo. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, AtOAc:MeOH 5:1) pri vzniku zlúčeniny 68 (18 mg, 56%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,40 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃) d 6,50 (s, 1H), 5,95 (d, 7=1,2 Hz, 1H), 5,88 (d, 7=1,2 Hz, 1H), 5,23 (d, 7=6,9 Hz, 1H), 4,45 (d, 7=3,3 Hz, 1H), 4,38 (s, 1H), 4,01 (d, 7=2,4 Hz, 1H), 3,78 (m, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,41-3,37 (m, 1H), 3,17-3,15 (m, 1H),

2,96 (dd, 7,=7,8 Hz, 7₂=18,0 Hz, 1H), 2,70 (d, 7=15,3 Hz, 1H), 2,40 (d, 7=18,0 Hz, 1H), 2,30 (s, 6H), 2,27 (s, 3H), 1,76-1,65 (m, 1H), 1,35-1,25 (m, 2H), 0,890,82 (m, 1H), 0,69 (d, 7=6,6 Hz, 3H), 0,58 (d, 7=6,6 Hz, 3H)

129 -

K roztoku 51 (27 mg, 0,04 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/0,5 ml) bol pridaný AgNO₃ (204 mg, 1,19 mmol) a reakčná zmes bola miešaná 24 hod. pri teplote 23 °C. Potom bol pridaný soľný roztok (10 ml) a vodou saturovaný roztok NaHCO₃ (10 ml) a reakčná zmes bola miešaná 15 min., prefiltrovaná cez vrstvu celitu a premytá CH₂CI₂ (20 ml). Roztok bol odstredený a organická fáza bola vysušená a skoncentrovaná in vacuo. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, AtOAc:MeOH 5:1) pri vzniku zlúčeniny 69 (10 mg, 38%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,38 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃) d 6,48 (s, 1 H), 6,16 (bs, 1H), 5,98 (d, 7=1,5 Hz, 1H), 5,89 (d, 7=1,5 Hz, 1H), 5,33 (t, 7=6,0 Hz, 1H), 4,50 (m, 1H), 4,40 (m, 1H), 4,11-4,09 (m, 1H), 4,00 (d, 7=2,6 Hz, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,41-3,32 (m, 3H), 3,18 (d, 7=8,4 Hz, 1H), 2,94 (dd, 7,=8,4 Hz, 7₂=18,3 Hz, 1 H). 2,70 (d, 7=14,4 Hz, 1H), 4,45 (d, 7=18,3 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 2,00-1,86 (m, 3H), 1,73 (m, 1H), 0,87 (d, 7=6,3 Hz, 6H).

- 130Príklad 64

K roztoku 63 (15 mg, 0,023 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/0,5 ml) bol pridaný AgNO₃ (118 mg, 0,691 mmol) a reakčná zmes bola miešaná 24 hod. pri teplote 23 °C. Potom bol pridaný soľný roztok (10 ml) a vodou saturovaný roztok NaHCO₃ (10 ml) a reakčná zmes bola miešaná 15 min., prefiltrovaná cez vrstvu celitu a premytá CH₂CI₂ (20 ml). Roztok bol odstredený a organická fáza bola vysušená a skoncentrovaná in vacuo. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, AtOAc.MeOH 5:1) pri vzniku zlúčeniny 70 (20,1 mg, 85%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,43 (EtOAc:MeOH 5:1 ).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃) d 7,38-7,28 (m, 5H), 6,48 (s, 1H), 5,98 (d, 7=1,5 Hz, 1H), 5,91 (d, 7=1,5 Hz, 1H), 5,75 (bs, 1H), 5,38 (brd, 1H), 5,30 (bs, 1H), 4,53 (m, 1H), 4,42 (m, 1H), 4,02 (d, 7=2,7 Hz, 1H), 3,78-3,65 (m, 5H), 3,46-3,40 (m, 2H), 3,17 (d, 7=7,8 Hz, 1H), 2,94 (dd, 7,=7,8 Hz, 7₂=17,7 Hz, 1H), 2,73 (d, 7=16,8 Hz, 1H), 2,45 (d, 7=18,0 Hz, 1H), 2,31 (s, 6H), 2,28 (s, 3H), 1,97 (s, 3H), 1,77 (dd, 7,= 12,0 Hz, 7₂=15,3 Hz, 1H).

- 131 Príklad 65

K roztoku 65 (25 mg, 0,042 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/0,5 ml) bol pridaný AgNC>3 (215,56 mg, 1,269 mmol) a reakčná zmes bola miešaná 24 hod. pri teplote 23 °C. Potom bol pridaný soľný roztok (10 ml) a vodou saturovaný roztok NaHCO₃ (10 ml) a reakčná zmes bola miešaná 15 min., prefiltrovaná cez vrstvu celitu a premytá CH2CI2 (20 ml). Roztok bol odstredený a organická fáza bola vysušená a skoncentrovaná in vacuo. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (S1O2, AtOAc.MeOH 5:1) pri vzniku zlúčeniny 71 (16 mg, 65%) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,05 (EtOAc.MeOH 5:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) d 6,50 (s, 1H), 5,95 (d, 7=1,5 Hz, 1H), 5,78 (s, 1H),

5,19 (bs, 1H), 4,45 (d, 7=3,3 Hz, 1H), 4,37 (bs, 1H), 4,11 (brd, 7=4,8 Hz, 1H), 4,01 (d, 7=2,1 Hz, 1H), 3,76 (s, 1H), 3,71-3,69 (m, 1H), 3,49-3,35 (m, 1H), 3,24 (d, 7=13,5 Hz, 1H), 3,15 (d, 7=9,3 Hz, 1H), 2,95 (dd, 7,=8,1 Hz, 7₂=17,7 Hz, 1H), 2,70 (d, 7=15,6 Hz, 1 H),.2,40 (d, 7=18,0 Hz, 1 H), 2,31 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 1,96 (s, 3H), 1,75-1,66 (m, 1H), 1,52-1,17 (m, 2H), 0,66 (t, 7=7,2 Hz, 3H).

- 132 Kvasné procesy

Príklad A

Kultivačné médium ZMP3 obsahujúce 1% glukózu, 0,25% hovädzí vývar, 0,5% bakto-pepton, 0,25% NaCl a 0,8% CaCO₃ bolo naočkované 0,1% zmrazenou vegetatívnou kultúrou mikroorganizmu Pseudomonas fluorescens, kmeň A2-2. Bakteriálna kultúra bola inkubovaná na rotačnej trepačke (250 ot/min) pri teplote 27 °C. Po 30 hod. inkubácii bola kultúra prenesená do fermentora, kde za stáleho trepania prebiehala ďalšia inkubácia v produkčnom médiu obsahujúcom 2% dextrózu, 4% manitol, 2% sušené pivovarnícke kvasnice (vitalevor R Biolux, Belgicko), 1 % (NH₄)₂SO₄, 0,04% K₂HPO₄, 0,8% KCI, 0,001 % FeCI₃, 0,1 % L-Tyr, 0,8% CaCO₃, 0,05% PPG-200, 0,2% protipenivého silikónu (ASSAF-100, RHODIA UK). Sterilizácia prebiehala pri teplote 122 °C 30 min. Zaočkovaný objem bol 2% (v/v). Teplota bola 27 °C (0 až 16 hod.) a 24 °C od 16 hod. až po konečné spracovanie (41 hod.). Kultúra rástla v kyslíkovej atmosfére 25%. pH bolo udržované na hodnote 6,0 pomocou kyseliny sírovej od 28 hod. inkubácie až po konečné spracovanie. Pretlak bol 0,5 bar. Od 16. hod. kultivácie bol do kultivačného média pridaný 1 % manitol alebo sorbol (na 2 dni) a 2% manitol alebo sorbol na 3 dni počas fermentačného procesu.

Po 41 alebo 64 hodinách sa extrahuje fermentačné médium na získanie safracínu B, alebo po pridaní KCN do kultivačného média je možné z vyčereného média získať kyanosafracín B.

Príklad B

Získanie kyanosafracínu B z hrubého extraktu

Vyčerenie alebo filtrácia fermentačného média pri pH 6 odstráni pevné časti. Vyčerené kultivačné médium bolo nastavené na pH 9,5 pomocou zriedeného hydroxidu sodného a dvakrát extrahované pomocou 2:1 (v/v)

-133 etylacetátu, metylénchloridu alebo butylacetátu. Extrakcia prebiehala za stáleho trepania 20 min., teplota zmesi bola udržiavaná v rozsahu 8 až 10 °C. Obidve fázy boli odstreďovaním oddelené a organická fáza bola vysušená pomocou bezvodého sulfátu sodného. Iným spôsobom separácie je zmrazenie a potom filtrácie na odstránenie kryštálov ľadu. Organická fáza (etylacetátová vrstva) bola odparovaná dovtedy, pokým sa získal olejovitý hrubý extrakt.

Príklad C

Vyčerenie alebo filtrácia fermentačného média pri pH 6 odstráni pevné časti. Vyčerené kultivačné médium bolo nastavené na pH 3,9 pomocou koncentrovanej kyseliny octovej. Do vyčereného extraktu sa pridal KCN v koncentrácii 0,5 g na liter média a reakčná zmes bola za stáleho miešania inkubované pri teplote 20 °C 1 hod. Potom bola teplota znížená na 15 °C a pH bolo pomocou zriedeného hydroxidu sodného nastavené na hodnotu 9,5. Reakčná zmes bola extrahovaná pomocou 2:1,5 (v/v) etylacetátu. Extrakcia prebiehala za stáleho trepania 20 min., teplota zmesi bola udržiavaná v rozsahu 8 až 10 °C. Odstredením boli oddelené obidve fáze. Organická fáza bola vysušená pomocou bezvodého sulfátu sodného. Organická fáza (etylacetátová vrstva) bola odparovaná dovtedy, pokým sa získal olejovitý hrubý extrakt. Tento extrakt bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (S1O2, gradient 20:1 cez 10:1 až po 5:1 etylacetát: metanol) pri kvantitatívnom vzniku zlúčeniny 2 vo forme svetlo žltej pevnej látky.

Rf: 0,55 (etylacetát :metanol 5:1); t_R= 19,9 min [HPLC, Delta Park C4, 5pm, 300 A, 150x3 mm, λ=2Ι5 nm, flow= 0,7 ml/min., temp= 50°C, grád: CH₃CN-aq. NaOAc (100mM) 85% - 70% (20')];

¹H NMR (300 Mhz, CDCI₃): δ 6,54 (dd, 7^=4,4Hz, J₂= 8,4 Hz, 1H), 6,44 (s, 1H), 4,12 (d, 7=2,4 Hz, 1H), 4,04 (d, 7=2,4 Hz, 1H), 4,00 (s, 3H), 3,87 (bs, 1H), 3,65 (ddd, 7,=1,5Hz, J₂= 8,7 Hz, J₃ = 9,9 Hz, 1H), 3,35 (br.D, 7=8,4 Hz, 1H), 3,152,96 (m, 4H), 2,92 (q, 7=7,2 Hz, 1H), 2,47 (d, 7=18,3 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,18

- 134(s, 3H)1,83 (s, 3H), 1,64 (ddd, 7,=2,7Hz, 7₂=11,1 Hz, J₃ =14,1 Hz, 1H), 0,79 (d, 7=7,2 Hz, 3H);

¹³C NMR (75 Mhz, CDCI₃): δ 186,0 (q), 175,9 (q), 156,2 (q), 146,8 (q), 142,8 (q), 140,7 (q), 136,6 (q), 130,5 (q), 128,8 (q), 127,0 (q), 120,5 (s), 117,4 (q), 116,5 (q), 60,8 (t), 60,4 (s), 58,7 (t), 56,2 (s), 55,7 (s), 54,8 (s), 54,8 (s), 54,4 (s), 50,0 (s), 41,6 (t), 39,8 (d), 25,2 (d), 24,4 (d), 21,2 (1),15,5 (t), 8,4 (t).

ESI-MS m/z vyrátané pre C29H35N5O6: 549,6. Zistené (M+H)⁺: 572,3

Príklad D

Médium (50 I) zložené z 2% dextrózy, 4% manitolu, 2% sušených pivovarníckych kvasníc, 1% sulfátu amónneho, 0,04% hydrogénfosforečňanu draselného, 0,8% chloridu draselného, 0,001 % chloridu železitého, 0,1 % L-tyrozínu, 0,8% uhličitanu vápenatého, 0,05% polypropylénglykolu 2000 a 0,2% protipenivej zlúčeniny ASSAF 1000 sa nalialo do fermentačnej nádoby objemu 75 I a po sterilizácii naočkované 2% kultúrou kmeňa A2-2 (FERM BP14). Kultivácia prebiehala za prístupu vzduchu pri teplote od 27 do 24 °C počas 64 hod. (prevzdušňovanie 75 I za minútu a trepanie 350 až 500 obrátok za minútu). pH bolo kontrolované pomocou automatického pridávania riedenej kyseliny sírovej od 27. hodiny kultivácie až po finálne spracovanie. Od 16. hodiny kultivácie bol pridaný 2% manitol. Po odstredení buniek sa získalo médium (45 I) a pomocou riedeného hydroxidu sodného bolo pH nastavené na 9,5. Potom bolo dvakrát extrahované 25 litrami etylacetát. Extrakcia prebiehala pri stálom trepaní 20 min. pri teplote 8 °C. Odstredením boli oddelené obidve fázy. Organické fázý boli zmrazené na teplotu -20 °C a prefiltrované kvôli odstráneniu kryštálikov ľadu a odparované až do okamihu, pokým sa získalo 40 g olejovito tmavého hrubého extraktu. Po zavedení kyanidovej skupiny a purifikácii sa získalo 3,0 g kyanosafracínu B.

- 135 Príklad E

Médium (SO I) zložené z 2% dextrózy, 4% manitolu, 2% sušených pivovarníckych kvasníc, 1 % sulfátu amónneho, 0,02% hydrogénfosforečnanu draselného, 0,2% chloridu draselného, 0,001 % chloridu železitého, 0,1 % L-tyrozínu, 0,8% uhličitanu vápenatého, 0,05% polypropylénglykolu 2000 a 0,2% protipenivej zlúčeniny ASSAF 1000 sa nalialo do fermentačnej nádoby objemu 75 I a po sterilizácii naočkované 2% kultúrou kmeňa A2-2 (FERM BP14). Kultivácia prebiehala za prístupu vzduchu pri teplote od 27 do 24 °C počas 64 hod. (prevzdušňovanie 75 I za minútu a trepanie 350 až 500 obrátok za minútu). pH bolo kontrolované pomocou automatického pridávania riedenej kyseliny sírovej od 28. hodiny kultivácie až po finálne spracovanie. Od 16. hodiny kultivácie bol pridaný 1% manitol. Po odstredení buniek sa získalo médium (45 I) a pomocou 200 ml koncentrovanej kyseliny octovej bolo pH nastavené na 3,9. Pridaných bolo 25 g 97% KCN a po 1 hod. trepania bolo pH média pomocou 1500 ml 10% roztoku hydroxidu sodného nastavené na hodnotu 9,5. Potom bolo médium extrahované 35 litrami etylacetátu. Extrakcia prebiehala pri stálom trepaní 20 min. pri teplote 8 °C. Odstredením boli oddelené obidve fázy. Organická fáza bola vysušená pomocou bezvodého sulfátu sodného a odparovaná až do okamihu, pokým sa získalo 60 g olejovito tmavého hrubého extraktu.

Po chromatografickej separácii sa získalo 4,9 g kyanosafracinu B.

-136Citovaná literatúra

European Patent 309,477.

US Patent 5,721,362.

Sakai, R., Jares-Erijman, E.A., Manzanares, I., Elipe, M.V.S., and Rinehart, K.L. J. Am. Chem. Soc. (1996) 118, 9017-9023

Martinez, E.J., Owa, T., Schreiber, S.L. and Corey, E.J. Proc. Natl. Acad Sci. USA,1999, 96, 3496-3501.

Japanese Kokai JP-A2 59/225189.

Japanese Kokai JP-A2 60/084288.

Arai, T,; Kubo, A. In The Alkaloids, Chemistry and Pharmacology: Brossi, A. Ed.; Academic: New York, 1983, Vol 21; pp 56-110.

Remers, W. A.: In The Chemistry of Antitumor Antibiotics: Vol. 2; Wiley; New York. 1988, pp 93-118.

Gulavita N. K.; Scheuer, P. J.: Desilva, E. D. Abst. Indo-United States Symp. on Bioactive Compounds from Marine Organisms, Goa, India, Feb. 23-27,1989, p 28.

Arai, T; Takahashi, K; Kubo, A. J. Antibiot, 1977, 30,1015-1018.

Arai. T.; Takahashi, K.; Nakahara, S.; Kubo, A. Experientia 1980, 36, 1025-1028. Mikami, Y.; Takahashi, K; Yazawa, K.; Hour-Young, C.; Arai, T.; Saito, N.; Kubo, A. J. Antibiot.1988, 41, 734-740.

Arai, T.; Takahashi, K.; Ishiguro, K.; Yazawa, K. J. AntibiotA98Q, 33, 951-960.

Yazawa, K.; Takahashi, K.; Mikami, Y.; Arai, T.; Saito, N.; Kubo, A. J. Antibiot. 1986, 39, 1639-1650.

Arai, T.; Yazawa, K.; Takahashi, K.; Maeda, A.; Mitrami, Y. Antimicrob. Agent Chemother. 1985,28, 5-11.

Takahashi, K.; Yazawa, K.; Kishi, K.; Mikami, Y.; Arci, T.; Kubo, A. J. Antibiot. 1982, 35, 196-201.

Yazawa, K.; Asaoka, T.; Takahashi, K.; Mitrami, Y.; Arai, T. J. Antibiot. 1982, 35, 915917.

Frincke, J. M.; Faulkner, D. J. J. Am. Chem. Soc. 1982, 104, 265-269.

- 137He, H. -Y.; Faulkner, D. J. J. Org. Chem. 1989, 54, 5822-5824.

Kubo, A.; Saito, N.; Kitahara, Y.; Takahashi, K.; Tazawa, K.; Arci, T. Chem Pharm. Bull. 1987,35,440-442.

Trowitzsch-Kienast, W.; Irschik, H.; Reichenback, H.; Wray, V.; Hôfle, G. Liebigs Ann. Chem. 1988,475-481.

Ikeda, Y.; Idemoto, H.; Hirayama, F.; Yamamoto, K.; Iwao, K.; Asano, T.; Munakata, T. J. Antibiot. 1983, 36,1279-1283.

Asaoka, T.; Yazawa, K.; Mitrami, Y. Arai, T.; Takahashi, K. J. Antibiot. 1982, 35, 1708-1710.

Lown, J. W.; Hanstock, C. C.; Joshua, A. V.; Arci, T; Takahashi, K. J. Antibiot. I 983, 36,1184-1194.

Munakata et al. United States Patent 4, 400, 752,1984.

Y.Ikeda et al. The Journal of Antibiotics. VOL XXXVI, N°10, 1284,1983.

R Cooper, S. Unger. The Journal of Antibiotics. VOL XXXVIII, N°l, 1985.

Corey et al. United States Patent 5, 721, 362. 1998.

Corey et al. J. Am. Chem. Soc. vol 118 pp 9202-92034,1996.

Proc. Natl. Acad. Sci. USA. Vol. 96, pp 3496-3501,1999.

-138?Ρ 465ΐ>-2ΤΟ9

Claims

1. Použitie ako východaa zlúčenina^ v syntéze 21-Nuc zlúčeniny podľa všeobecného vzorca XIV, kde aspoň jeden kruh A alebo E je chinolový zahrnujúci jednu alebo viacero reakcií, vyznačujúci sa tým, že sa ako východzia zlúčenina použije 21-kyano zlúčenina podľa všeobecného vzorca XVI kde

R¹ je amidometylénová skupina alebo acyloxymetylénová skupina;

R⁵ a R⁸ sú vybrané nezávisle z -H, -OH, alebo -OCOCH₂OH, alebo R⁵ a R⁸ sú obidva keto a kruh A je kruh p-benzochinónový;

- 139 R^14a a R^14b sú obidva -H alebo jeden je -H a druhý je -OH, -OCH3, alebo -OCH

2CH3 alebo R^14a a R^14b spoločne tvoria keto skupinu;

R¹⁵ a R¹⁸ sú vybrané nezávisle z -H alebo -OH, alebo R¹⁵ a R¹⁸ sú obidva keto a kruh A j e kruh p-benzochinónový.

3. Spôsob prípravy podľa nároku 2, vyznačujúci sa tým, že sa použije zlúčenina, kde R¹ je -CH2-NH-CO-CR^25aR^25bR^25c, kde R^25a a R^25btvoria keto skupinu alebo jeden je -OH, -NH2, alebo -OCOCH3 a druhý je -CH₂COCH₃, -H, -OH alebo -OCOCH3, v prípade, že R^25a je -OH alebo NH2, potom R^25b nie je -OH a R^25c je -H, -CH3 alebo -CH₂CH₃ alebo R¹ je -CH₂0- CO-R, kde R je -C(CH₃)=CH-CH₃ alebo -CH₃;

4. Spôsob prípravy podľa nároku 2, vyznačujúci sa tým, že sa ako 21-kyano zlúčenina podľa všeobecného vzorca XVI použije kyanosafracín B.

5. Spôsob prípravy podľa nároku 1 až 4, vyznačujúci sa tým, že sa ako zlúčenina s fúzovaným kruhovým systémom podľa všeobecného vzorca XIV použije zlúčenina podľa všeobecného vzorca XVIIa (XVIIb)

- 140kde

R¹ je s výhodou chránená alebo derivatizovaná aminometylénová skupina, s výhodou chránená alebo derivatizovaná hydroxymetylénová skupina R⁴ je -H alebo

R¹ a R⁴ spoločne tvoria skupinu podľa všeobecného vzorca IV, V, VI alebo VII

R⁵ je -H alebo -OH

R^{Sp 7} je -OCH3 a R^{8 * *} je -OH alebo R⁷ a R⁸ spoločne tvoria skupinu -0-CH2-0 R^14a a R^14b sú obidva -H alebo jeden je -H a druhý je -OH, -OCH3, alebo -OCH2CH3 alebo R^14a a R^14b spoločne tvoria keto skupinu

R¹⁵ je -H alebo -OH

R²¹ je -H, -OH alebo -CN a odvodené zlúčeniny zahrnujúce ich acyl deriváty a zahrnujúce deriváty, kde skupina -NCH₃ v polohe 12 je nahradená skupinou -NH- alebo -NCH₂CH₃- a deriváty, kde -NH₂ skupina v zlúčenine podľa všeobecného vzorca VI je prípadne derivatizovaná.

6.

Spôsob prípravy podľa nároku 5, vyznačujúci sa použije zlúčenina, kde R⁵ je alkanoyloxy skupina tvorená 1 uhlíka.

Spôsob prípravy podľa nároku 5, vyznačujúci sa použije zlúčenina, kde R⁵ je acetyloxy skupina t ý m, že sa až 5 atómami t ý m, že sa

7.

- 141

8. Spôsob prípravy podľa nárokov 5, 6 alebo 7, vyznačujúci sa tým, že sa použije zlúčenina, kde R^14a a R^14b sú atómy vodíka

9. Spôsob prípravy podľa nárokov 5 až 8, vyznačujúci sa tým, že sa použije zlúčenina, kde R^{14 15 * *} je atóm vodíka

10. Spôsob prípravy podľa nárokov 5 až 9, vyznačujúci sa tým, že sa použije zlúčenina, kde R²¹ je -OH alebo -CN

11. Spôsob prípravy podľa nárokov 5 až 10, vyznačujúci sa tým, že sa použije zlúčenina, podľa všeobecného vzorca XVIlb

Spôsob prípravy podľa nároku 11,vyznačujúci sa tým, že sa použije zlúčenina, kde R⁷ a R⁸ spoločne tvoria skupinu -0-CH₂-0

13. Spôsob prípravy podľa nárokov 4 až 11, v y z n a č u j ú c í sa t ý m, že sa použije zlúčenina, kde R¹ a R⁴ spoločne tvoria skupinu podľa všeobecného vzorca IV, V, VI alebo VII

14. Spôsob prípravy podľa nárokov 5 až 12, v y z n a č u j ú c i sa t ý m, že sa použije zlúčenina, kde R¹ je s výhodou chránená alebo derivatizované aminometylénová skupina, s výhodou chránená alebo derivatizovaná hydroxymetylénová skupina a R⁴ je -H.

-14215. Spôsob prípravy podľa nároku 14, v y z n a č u j ú c i sa t ý m, že sa použije zlúčenina, kde R¹ je skupina -ΟΗ₂ΝΗ₂ alebo -CH₂-NH-aa, kde aa je acyl aminokyseliny.

16. Spôsob prípravy podľa nároku 15, vyznačujúci sa tým, že sa použije zlúčenina vo forme N-acyl derivátu skupiny -CH2NH2 alebo -CHz-NH-aa

17.Spôsob prípravy podľa nároku 16, v y z n a č u j ú c i sa t ý m, že sa použije zlúčenina, kde R¹ je N-acyl derivát, kde acylová skupina má všeobecný vzorec -CO-R³, kde R^a je alkyl, alkoxy, alkylén, arylalkyl, arylalkylén, acyl aminokyseliny alebo heterocyklyl, každý prípadne subsituovaný halo, kyano, nitro, karboxyalkyl, alkoxy, aryl, aryloxy, heterocyklyl, heterocyklyloxy, alkyl, amino alebo substituovaná amino, alebo R^a je aa

18. Spôsob prípravy podľa nárokov 15 až 17, v y z n a č u j ú c i sa tým, že sa použije zlúčenina, ktorá obsahuje jednu nebo viacero aminokyselinových skupín, a sú to alanyl, arginyl, aspartyl, asparagyl, cystyl, glutamyl, glutaminyl, glycyl, histidyl, hydroxyprolyl, izoleucyl, leucyl, lysyl, metionyl, fenylalanyl, prolyl, seryl, treonyl, tyronyl, tryptofyl, tyrosyl, valyl alebo iná aminoacylová skupina

19. Spôsob prípravy podľa nárokov 5 až 18, vyznačujúci sa tým, že sa použije zlúčenina, kde jedna alebo viacero substitučných skupín je chránených chrániacou skupinou

20. Spôsob prípravy podľa nárokov 1 až 19, vyznačujúci sa tým, že vznikne výsledný produkt podľa všeobecného vzorca XXIla

-143 -

R¹ je -CH₂NH₂ alebo -CH₂OH alebo chránený alebo derivatizovaný variant takejto skupiny a skupina R⁴ je -H a alebo

R^1a a R⁴ spoločne tvoria skupinu podľa všeobecného vzorca IV, VI alebo VII

R⁵ je -OH alebo chránený aiebo derivatizovaný variant tejto skupiny R^14a a R^14b sú obidve -H alebo jedna je -H a druhá je -OH alebo chránený alebo derivatizovaný variant tejto skupiny, -OCH₃ alebo -OCH₂CH₃, alebo R^14a a R^14bspoločne tvoria keto skupinu

R¹² je -NH, -NCH₃ alebo -NCH₂CH₃

R¹⁵ je -OH alebo chránený alebo derivatizovaný variant tejto skupiny

- 144sa t ý m, že

R¹⁸ je -OH alebo chránený alebo derivatizovaný variant tejto skupiny

21. Spôsob prípravy podľa nárokov 1 až 20, v y z n a č u j ú c i vznikne výsledný produkt podľa všeobecného vzorca XXIII (XXIII) kde

R¹ je, ako bolo uvedené vyššie pre produkt podľa všeobecného vzorca XVIIb a je s výhodou derivatizovaná, stredne objemná aminometylénová skupina R⁵ je, ako bolo uvedené vyššie pre produkt podľa všeobecného vzorca XVIIb a je s výhodou derivatizovaná, málo objemná hydroxy skupina R je ako bolo uvedené vyššie a je s výhodou -NCH3R²¹ je hydroxy alebo kyano skupina.

22.Spôsob prípravy podľa nároku 21, v y z n a č u j ú c i sa t ý m, že sa použije zlúčenina, kde R¹ je hydrofóbna skupina

23.Spôsob prípravy podľa nároku 22, v y z n a č u j ú c i sa t ý m, že sa použije zlúčenina, kde R¹ je -CH₂-NH-CO-R^a skupina a kde R^a predstavuje lineárny reťazec kratší než 20 atómov, s výhodou kratší než 15 alebo 10 atómov.

24. Spôsob prípravy podľa nárokov 20, 21 a 22, v y z n a č u j ú c i sa tým, že sa použije zlúčenina, kde R⁵ je acetylová skupina.

14525. Spôsob prípravy podľa nárokov 1 až 24, v y z n a č u j ú c i sa t ý m, že kde

R⁵ skupina konečného produktu je ako bolo uvedené vyššie pre zlúčeninu podľa všeobecného vzorca XXXII a líši sa od R⁵ vo východzej zlúčenine a je v R⁵ konečného produktu premenená ako súčasť procesu,

R¹⁸ je hydroxy skupina v konečnom produkte ale môže byť chránenou hydroxy skupinou vo východzej zlúčenine a na hydroxy skupinu je premenená ako súčasť procesu,

R¹² skupina konečného produktu je rovnaká ako vo východzej zlúčenine alebo je na ňu premenená ako súčasť procesu

R²¹ skupina konečného produktu je ako bolo definované a tiež keď sa hydroxy skupina tvorí z kyano skupiny ako súčasť procesu

R^a je ako bolo definované a je ďalej acylovaná ako súčasť procesu pri vzniku konečného produktu s acylovanou Ra skupinou.

26. Spôsob prípravy podľa nárokov 1 až 25, v y z n a č u j ú c i sa t ý m, že sa použije zlúčenina, kde aa je alanyl.

27.Spôsob prípravy podľa nároku 26, v y z n a č u j ú c i sa t ý m, že sa použije východzia zlúčenina, ktorá obsahuje alanylovú skupinu, chránenú Boe skupinou.

28. Spôsob prípravy podľa nárokov 1 až 27, v y z n a č u j ú c i sa t ý m, že zahrnuje reakciu:

- 146-

29. Spôsob prípravy podľa nárokov 1 až 28, v y z n a č u j ú c i sa zahrnuje reakciu:

t ý m, že

30. Spôsob prípravy podľa nárokov 1 až 29, v y z n a č u j ú c i sa t ý m, že zahrnuje reakciu, kde sa aminometylénová skupina R¹ premieňa na hydroxymetylénovú skupinu.

31. Spôsob prípravy podľa nárokov 1 až 30, v y z n a č u j ú c i sa t ý m, že zlúčenina s hydoxymetylénovou skupinou R¹ reaguje so zlúčeninou podľa všeobecného vzorca XIX kde (XIX)

- 147Fu predstavuje chránenú funkčnú skupinu, Prot³ je chrániaca skupina a bodkovaná čiara predstavuje prípadnú dvojitú väzbu.

32. Spôsob prípravy 21-kyano zlúčeniny podľa všeobecného vzorca XVI podľa nároku 1,vyznačujúci sa tým, že zahrnuje reakciu so zlúčeninou podľa všeobecného vzorce XV kde

R¹, R⁵, R⁸, R^14a, R^14b, R¹⁵ a R¹⁸ sú ako bolo definované a R²¹ je hydroxy skupina obsahujúca zdroj kyanidového iónu, pri vzniku požadovanej 21-kyano zlúčeniny.

33. Spôsob prípravy 21-kyano zlúčeniny podľa všeobecného vzorca XVI (XVI) kde

R¹ je amidometylénová skupina alebo acyloxymetylénová skupina

- 148 R⁵ a R⁸ sú vybrané nezávisle z -H, -OH, alebo -OCOCH₂OH, alebo R⁵ a R⁸ sú obidve keto a kruh A je kruh p-benzochinónový

R^14a a R^14b sú obidva -H alebo jeden je -H a druhý je -OH, -OCH₃ alebo -OCH2CH3 alebo R^14a a R^14b spoločne tvoria keto skupinu R¹⁵ a R¹⁸ ssú vybrané nezávisle z -H alebo -OH alebo R⁵ a R⁸ sú obidva keto a kruh A je kruh p-benzochinónový s výnimkou safracínu B.