RU2018109375A - Варианты химозина с улучшенными свойствами - Google Patents
Варианты химозина с улучшенными свойствами Download PDFInfo
- Publication number
- RU2018109375A RU2018109375A RU2018109375A RU2018109375A RU2018109375A RU 2018109375 A RU2018109375 A RU 2018109375A RU 2018109375 A RU2018109375 A RU 2018109375A RU 2018109375 A RU2018109375 A RU 2018109375A RU 2018109375 A RU2018109375 A RU 2018109375A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- chymosin
- polypeptide
- variant
- seq
- polypeptide according
- Prior art date
Links
- 108090000746 Chymosin Proteins 0.000 title claims 31
- 229940080701 chymosin Drugs 0.000 title claims 31
- GNOLWGAJQVLBSM-UHFFFAOYSA-N n,n,5,7-tetramethyl-1,2,3,4-tetrahydronaphthalen-1-amine Chemical compound C1=C(C)C=C2C(N(C)C)CCCC2=C1C GNOLWGAJQVLBSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims 31
- 102220344315 rs1236509896 Human genes 0.000 claims 102
- 102220493691 HLA class II histocompatibility antigen, DRB1 beta chain_I96L_mutation Human genes 0.000 claims 92
- 102220238200 rs1238996324 Human genes 0.000 claims 76
- 102220214770 rs1060500599 Human genes 0.000 claims 50
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims 41
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims 41
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims 39
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims 14
- 102200049608 rs863223414 Human genes 0.000 claims 14
- 102220171239 rs150051467 Human genes 0.000 claims 12
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims 11
- 102220083031 rs746990000 Human genes 0.000 claims 10
- 102000009366 Alpha-s1 casein Human genes 0.000 claims 8
- 108050000244 Alpha-s1 casein Proteins 0.000 claims 8
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 claims 8
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 8
- 102220536072 Lysophospholipase_R61S_mutation Human genes 0.000 claims 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims 6
- 102200116820 rs1554263625 Human genes 0.000 claims 6
- 102220560203 Stromal cell-derived factor 1_N50K_mutation Human genes 0.000 claims 5
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims 5
- 102220476931 Interleukin-1 receptor-associated kinase 3_D98V_mutation Human genes 0.000 claims 4
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 claims 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims 4
- 102200010170 rs786205859 Human genes 0.000 claims 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims 4
- 102220600074 Succinate dehydrogenase [ubiquinone] cytochrome b small subunit, mitochondrial_I96V_mutation Human genes 0.000 claims 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 3
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 claims 3
- 102200119355 rs312262812 Human genes 0.000 claims 3
- 102220576604 HLA class I histocompatibility antigen, A alpha chain_K19S_mutation Human genes 0.000 claims 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims 2
- 238000001437 electrospray ionisation time-of-flight quadrupole detection Methods 0.000 claims 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 claims 2
- 102220260761 rs1554096786 Human genes 0.000 claims 2
- 102220075532 rs568479156 Human genes 0.000 claims 2
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 claims 2
- 102220482045 Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL1_F66Y_mutation Human genes 0.000 claims 1
- 240000002129 Malva sylvestris Species 0.000 claims 1
- 235000006770 Malva sylvestris Nutrition 0.000 claims 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 claims 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 claims 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims 1
- 238000000132 electrospray ionisation Methods 0.000 claims 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 claims 1
- 102220120056 rs77539990 Human genes 0.000 claims 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 235000008983 soft cheese Nutrition 0.000 claims 1
- 238000001269 time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 claims 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6478—Aspartic endopeptidases (3.4.23)
- C12N9/6483—Chymosin (3.4.23.4), i.e. rennin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING OR TREATMENT THEREOF
- A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
- A23C19/02—Making cheese curd
- A23C19/032—Making cheese curd characterised by the use of specific microorganisms, or enzymes of microbial origin
- A23C19/0326—Rennet produced by fermentation, e.g. microbial rennet; Rennet produced by genetic engineering
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING OR TREATMENT THEREOF
- A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
- A23C19/02—Making cheese curd
- A23C19/04—Making cheese curd characterised by the use of specific enzymes of vegetable or animal origin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING OR TREATMENT THEREOF
- A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
- A23C19/02—Making cheese curd
- A23C19/045—Coagulation of milk without rennet or rennet substitutes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/23—Aspartic endopeptidases (3.4.23)
- C12Y304/23004—Chymosin (3.4.23.4), i.e. rennin
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Dairy Products (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Claims (219)
1. Выделенный вариант полипептида химозина, отличающийся тем, что:
(а) этот выделенный вариант полипептида химозина имеет значение С/Р (удельная активность свертывания/протеолитическая активность), составляющее по меньшей мере 200% от значения С/Р выделенного верблюжьего химозина, характеризующегося зрелым полипептидом SEQ ID NO: 2; и
(б) этот выделенный вариант полипептида химозина расщепляет αS1-казеин с частотой менее 80% от частоты расщепления αS1-казеина выделенным верблюжьим химозином, характеризующимся зрелым полипептидом SEQ ID NO: 2, где расщепление αS1-казеина определяют посредством количественного определения пептидов αS1-казеина, полученных путем инкубации обезжиренного молока с вариантом химозина или с верблюжьим химозином, где количественное определение проводят с помощью RP-HPLC (обращенно-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография) в сочетании с масс-спектрометром ESI-Q-TOF (времяпролетная масс-спектрометрия с ионизацией электрораспылением).
2. Выделенный вариант полипептида химозина по п. 1, где родительский полипептид имеет по меньшей мере 80%, такую как, например, по меньшей мере 80%, 85%, 95%, 97%, 98%, 99% идентичность последовательности со зрелым полипептидом SEQ ID NO: 2 (верблюжий химозин).
3. Выделенный вариант полипептида химозина по п. 1 или 2, который содержит одну или более следующих замен, где замена указана по отношению к аминокислотной последовательности зрелого полипептида SEQ ID NO: 2: Y11I, Y11V, L12M, K19T, V51L, R61S, H76Q, E83S, I96L, L105E, D144Q, Q162S, S164G, M165E, L166V, L180I, V203A, L221I, S226T, T239S, R242E, G251D, G251W, L253I, V260T, I263L, R266V, S273Y, Q288E, G289S, E294Q, Y307F, V309I, R316L и/или V317L.
4. Выделенный вариант полипептида химозина по любому из пп. 1-3, который содержит одну или более комбинаций следующих замен, и где каждая замена указана по отношению к аминокислотной последовательности зрелого полипептида SEQ ID NO: 2:
Y21S+H76Q+Y307F+V317L,
R61S+L166V+T239S,
V32L+E294Q+R316L+V317L,
S226T+G244D+I263L+G289S,
V203A+V248I+G251W+L253I+Y268F,
D59N+L222I+G251D+E83S+Q162S,
D59N+L222I+G251D+Y21S+L215V+L105E,
D59N+L222I+G251D+H76Q+L105E+V260T,
D59N+L222I+G251D+V203A+R266V+F223A,
L12M+D59N+H76Q+S154A+M165E+V203A+L222I+G251D+V309I,
L12M+V51L+H76Q+M165E+G251D,
L12M+V51L+D59N+H76Q+L166V+L222I+G251D,
L12M+D59N+H76Q+D144Q+M165E+V203A+L222I,
L12M+K19T+D59N+H76Q+S154A+M165E+V198I+L222I+G251D,
L12M+V51L+D59N+F66Y+H76Q+M165E+V203A+L222I+G251W,
V51L+D59N+H76Q+M165E+L180I+L222I+G251D+E262T,
L12M+D59N+H76Q+M165E+G251D+Q288E+V309I+K321P,
D59N+H76Q+I96L+L130I+S164G+L222I+R242E+G251D,
H76Q+I96L+S164G+L222I+R242E+G251D+S273Y,
K19T+D59N+H76Q+I96L+S164G+L166V+L222I+G251D+S273Y,
H76Q+S164G+L166V+L222I+R242E+G251D+S273Y,
Y21S+H76Q+S164G+L222I+R242E+G251D+S273Y,
D59N+H76Q+I96L+S132A+S164G+L222I+S226T+G251D+S273Y,
D59N+H76Q+I96L+S132A+S164G+L166V+L222I+G251D+S273Y,
K19T+D59N+H76Q+S164G+L222I+N249D+S273Y,
H76Q+S164G+L222I+N249D+G251D+S273Y+V309I,
H76Q+I96L+S164G+G251D+S273Y+V309I,
K19T+D59N+H76Q+S164G+R242E+N249D+G251D+S273Y,
Y21S+D59N+H76Q+S164G+L222I+S226T+G251D+S273Y+V309I
D59N+H76Q+I96L+S164G+L222I+S226T+N249D+G251D+S273Y,
H76Q+S164G+L166V+L222I+S226T+S273Y,
D59N+H76Q+L130I+S164G+L166V+L222I+G251D+S273Y+V309I,
D59N+H76Q+S164G+L222I+S226T+R242E,
K19T+D59N+I96L+S164G+L222I+G251D,
D59N+H76Q+I96L+S164G+L222I+S226T+G251D+S273Y+V309I,
D59N+H76Q+L130I+S164G+G251D+V309I,
D59N+H76Q+L130I+L166V+L222I+N249D+G251D+S273Y,
Y21S+D59N+H76Q+I96L+S164G+L222I+N249D+G251D+S273Y,
K19T+D59N+S164G+L166V+L222I+S226T+G251D+S273Y,
D59N+H76Q+L130I+S132A+S164G+L222I+R242E+G251D+S273Y,
K19T+Y21S+H76Q+S164G+L222I+G251D+S273Y,
D59N+H76Q+S164G+L222I+R242E+S273Y+V309I,
K19T+Y21S+D59N+H76Q+S132A+S164G+L222I+G251D+S273Y,
K19T+D59N+H76Q+L130I+S164G+L222I+S226T+G251D+S273Y,
D59N+H76Q+S164G+L166V+L222I+N249D+G251D+S273Y+V309I,
K19T+Y21S+D59N+H76Q+L130I+S164G+L222I+S273Y,
Y21S+D59N+S164G+L222I+R242E+G251D+S273Y+V309I,
K19T+D59N+H76Q+L166V+L222I+R242E+G251D+S273Y,
D59N+S132A+S164G+L222I+R242E+N249D+G251D+S273Y,
D59N+H76Q+I96L+L130I+S164G+L222I+N249D+G251D+S273Y,
Y21S+D59N+H76Q+S164G+L166V+N249D+G251D+S273Y,
H76Q+S132A+S164G+L222I+N249D+G251D,
D59N+H76Q+S132A+S164G+L166V+S273Y,
K19T+D59N+H76Q+S132A+L222I+G251D+S273Y+V309I,
H76Q+L130I+L222I+S226T+G251D+S273Y,
Y21S+D59N+H76Q+I96L+L222I+S273Y,
Y11I+K19T+D59N+E83S+I96L+S164G+L222I+N249D,
Y11I+K19T+I96L+S164G+L222V+R242E+G251D,
Y11V+K19T+I96L+S164G+L166V+L222I+R242E,
Y11V+E83S+I96L+S164G+L222I+R242E+G251D+L253I+I263L,
Y11V+I96L+S164G+L222I+R242E+N249D+L253I+I263L,
K19S+I96L+S164G+L166V+L222I+R242E,
K19T+I96L+S164G+L166V+L222I+R242E+N249D+I263L,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164N+L166I+L222I+G251D,
H76Q+I96L+S164G+L222I+R242E+G251D+S273Y,
Y11V+K19T+E83S+I96L+S164G+L166V+L222I+R242E+G251D,
Y11V+E83S+I96L+S164G+L222I+R242E+L253I+I263L,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L166V+L222I+R242E+G251D+L253I,
K19T+D59N+I96V+S164G+L166V+L222I+R242E+I263L,
Y11V+D59N+I96L+S164G+L222I+G251D+L253V,
I96L+S164G+L166V+L222I+R242E+N249D+I263L,
K19S+D59N+I96L+S164G+L222I+R242E+N249E+G251D,
H76Q+I96L+S164G+L222I+R242E+G251D,
Y11I+K19T+D59N+S164G+L222I+G251D+I263V,
K19T+I96L+S164G+L166V+L222I+R242E+N249D+G251D+1263V,
K19T+E83S+I96L+S164G+L222I+R242E+G251D+L253I,
I96L+S164G+L222I+R242E+N249D+G251D+I263L,
K19T+D59N+I96L+S164G+L166V+L222I+R242D+G251D+L253I,
D59N+I96L+S164G+L222I+R242E+L253I+I263L,
K19T+I96L+S164G+L166V+L222I+N249D+I263L,
K19T+D59N+I96L+S164G+L166I+L222I+R242D+G251D+I263V,
K19T+D59N+I96L+S164G+L222V+R242E+N249D+L253I,
K19T+D59N+I96L+S164G+L166I+L222I+R242E+N249D,
K19T+E83S+I96L+S164G+L222I+R242E+N249D+G251D+L253I,
I96L+S164G+L222I+R242E+G251D+S273Y,
K19T+E83T+I96L+S164G+L222I+R242E+L253V,
K19T+I96L+S164G+R242E+L253I,
K19T+D59N+I96L+S164G+L222I+N249E+G251D+L253V+I263L,
K19T+D59N+I96L+S164G+L222V+N249E+G251D+1263V,
I96L+S164G+L222I+R242E+G251D,
K19T+I96L+S164N+L222I+R242E+I263L,
K19T+E83S+I96L+S164G+L166V+L222I+R242E+N249D+G251D+L253I,
K19T+D59N+E83T+S164G+L166V+L222I+R242D+G251D,
K19T+D59N+I96L+S164G+L222I+G251D,
D59N+I96L+L166V+L222I+R242E+G251D,
Y11I+K19T+D59N+I96V+L222I+R242D+G251D,
K19T+I96V+S164G+L222I+N249D+G251D+L253I,
H76Q+N100Q+N291Q,
R67Q+L130I+M157L+D158S+R242E+N291Q,
V32L+R67Q+L130I+M157L+K231N+M256L,
R67Q+V136I+M157L+L222I+V248I,
Y11V+R67Q+L130I+M157L+L222I+R242E,
R67Q+I96L+N100Q+L130I+M157L+N292H.
Y11I+D59N+I96L+S164G+L166V+L222V+R242E+G251D+L253I,
Y11I+D59N+I96L+S164G+L166V+L222V+R242E+G251D,
Y11I+D59N+I96L+S164G+L166V+L222V+R242E+N249E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L166V+L222V+R242E+N249E+G251D,
Y11I+I96L+S164G+L166V+L222V+R242E+N249E+G251D,
Y11V+K19T+I96L+L166V+L222V+R242E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L166I+L222V+R242E+N249E+G251D+L253I,
Y11I+K19T+D59N+I96L+S164G+L166V+L222V+R242E+N249E+G251D,
Y11I+K19T+D59N+I96L+S164G+L166V+L222I+R242E+N249E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L166V+L222V+R242E+N249E+L253I,
Y11V+K19T+D59N+I96L+L166V+L222V+R242E+N249E+G251D+L253I,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L166V+L222I+R242E+N249E,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L166V+L222V+R242E+G251D,
Y11I+K19T+D59N+I96L+S164G+L166V+R242E+G251D,
Y11I+K19T+D59N+I96L+S164G+L166I+L222I+R242E+G251D,
Y11V+K19T+I96L+S164G+L166V+L222V+R242E+N249E+G251D,
Y11I+K19T+D59N+I96L+S164G+L166I+L222V+R242E+N249E+G251D,
Y11V+D59N+I96L+S164G+L166I+L222I+R242E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L166I+L222V+R242E+N249E+G251D,
Y11I+K19T+D59N+I96L+S164G+L222I+R242E,
Y11I+K19T+I96L+S164G+L166V+R242E+N249E+G251D,
Y11I+I96L+S164G+L222I+R242E,
Y11I+K19T+D59N+I96L+S164G+L222I+R242E+N249E+G251D,
Y11V+D59N+I96L+S164G+L166I+L222V+R242E+G251D+L253I,
Y11I+K19T+D59N+I96L+L222V+R242E+N249E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L166I+L222I+R242E+N249E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L222I+R242E+N249E+G251D,
Y11I+D59N+I96L+S164G+L222I+R242E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L1661+R242E+N249E+G251D+L253I,
Y11I+D59N+I96L+S164G+L222V+R242E+N249E+G251D,
Y11I+K19T+S164G+L166I+L222V+R242E+N249E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+S164G+L166 V+L222I+R242E+N249E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L166V+R242E,
Y11I+K19T+D59N+I96L+S164G+L222V+R242E+N249E,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L222V+R242E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+R242E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L166I+L222V+R242E+G251D,
Y11I+I96L+L222V+R242E+N249E+G251D,
Y11I+K19T+D59N+S164G+L166I+L222V+R242E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L222V+R242E+N249E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+I96L+L222V+R242E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+S164G+L166I+L222I+R242E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+L166V+L222I+R242E+N249E+G251D+L253I,
Y11V+K19T+I96L+L222V+R242E+N249E+G251D или
Y11I+K19T+L222V+R242E+N249E+G251D.
5. Выделенный вариант полипептида химозина, отличающийся тем, что
(а) этот выделенный вариант полипептида химозина имеет значение С/Р, составляющее по меньшей мере 200% от значения С/Р выделенного верблюжьего химозина, характеризующегося зрелым полипептидом SEQ ID NO: 2; и
(б) этот выделенный вариант полипептида химозина расщепляет αS1-казеин с частотой более 115% от частоты расщепления αS1-казеина выделенным верблюжьим полипептидом химозином, характеризующимся зрелым полипептидом SEQ ID NO: 2, где расщепление αS1-казеина определяют посредством количественного определения пептидов αS1-казеина, полученных путем инкубации обезжиренного молока с вариантом химозина или с верблюжьим химозином, где количественное определение проводят с помощью RP-HPLC в сочетании с масс-спектрометром ESI-Q-TOF.
6. Выделенный вариант полипептида химозина по п. 5, где родительский полипептид имеет по меньшей мере 80%, такую как, например, по меньшей мере 80%, 85%, 95%), 97%, 98%, 99% идентичность последовательности со зрелым полипептидом SEQ ID NO: 2 (верблюжий химозин).
7. Выделенный вариант полипептида химозина по п. 5 или 6, который содержит одну или более следующих замен, где замена указана по отношению к аминокислотной последовательности зрелого полипептида SEQ ID NO: 2: V32L, I45V, N50K, G70D, G70N, D98V, N100Q, V136I, M142I, H146R, S154A, V155F, M157L, D158S, V198I, I200V, F223V, K231N, G244D, V248I, R254S, M256L, V259I, Е262Т, D267Q, D279E, T284S, N291Q N292H, L295K и/или K321P.
8. Выделенный вариант полипептида химозина по любому из пп. 5-7, который содержит одну или более комбинаций следующих замен, и где каждая замена указана по отношению к аминокислотной последовательности зрелого полипептида SEQ ID NO: 2:
G70D+S74F+D158S+R254S+S277N,
L130I+M142I+I200V+V259I+E294Q,
Y21S+R61S+H146R,
R61S+G163E+M256L+S277N,
D59N+S271P+T284S,
V248I+S226T+E294Q,
S74F+G244D+S271P,
V221K+V248I+S255Y,
V183I+G251W+M256L,
R61Q+V136I+Y268F+T284S+Y307F,
N50K+D158S+V203A+E294Q,
D98V+G251D+M256L+V259I,
V183I+V248I+G244D+T284S,
N50K+R61S+Y127F+G244D+G251D,
I96L+F223V+G244D+R254S+M256L,
H146R+D158S+S273Y,
S74F+V259I+Y268F,
G70N+D98V+V136I,
I96L+M142I+R145Q+H146R,
V32L+G163E+T186S+Q188E+L295K,
R61Q+V136I+Y268F+T284S+Y307F,
S132A+Q188E+F223V,
I200V+G251D+G289S,
N50K+D158S+V203A+E294Q,
F223V+G251W+S273Y+D279E,
D59N+L222I+G251D+V32L+L12M+T284S,
D59N+L222I+G251D+V155F+Е262Т+V32L,
D59N+L222I+G251W+S154A+V203A,
D59N+L222I+G251D+V32L+K321P+V260T,
D59N+L222I+G251D+V198I+V203A+K321P,
D59N+L222I+G251D+S273Y+T284S+D267Q
V32L+N100Q+N291Q,
N292H+N100Q+N291Q,
V221K+N100Q+N291Q,
I297A+N100Q+N291Q,
R67Q+N100Q+L130I+M157L+L222I+K231N,
R67Q+L130I+V248I+M256L+N292H,
V32L+R67Q+L130I+K231N+N292H,
L130I+M157L+V248I+M256L+N291Q,
V32L+R67Q+V136I+M157L+N291Q,
R67Q+L130I+K231N+V248I+N291Q,
V32L+R67Q+G70D+N100Q+M157L,
R67Q+N100Q+L130I+D158S+V248I,
R67Q+N100Q+L130I+M157L+K231N+N291Q,
R67Q+N100Q+L130I+M157L+V248I+N291Q и/или
N100Q+L130I+S132A+M157L+K231.
9. Способ получения выделенного варианта полипептида химозина по любому из пп. 1-4, включающий следующие стадии:
(а) осуществление модификации в одном или более положениях в последовательности ДНК, кодирующей зрелый полипептид SEQ ID NO: 2, где изменение включает замену, удаление или вставку по меньшей мере в одном аминокислотном положении;
(б) получение и выделение модифицированного полипептида со стадии (а).
10. Способ получения выделенного варианта полипептида химозина по п. 9, где: (а) этот вариант содержит одну или более следующих замен, где замена указана по отношению к аминокислотной последовательности зрелого полипептида SEQ ID NO: 2: Y11I, Y11V, L12M, K19T, V51L, R61S, H76Q, E83S, I96L, L105E, D144Q, Q162S, S164G, M165E, L166V, L180I, V203A, L222I, S226T, R242E, G251W, L253I, V260T, I263L, R266V, S273Y, T239S, G251D, Q288E, G289S, E294Q, Y307F, V309I, R316L, V317L.
11. Способ получения выделенного варианта полипептида химозина по любому из пп. 5-8, включающий следующие стадии:
(а) осуществление модификации в одном или более положениях в последовательности ДНК, кодирующей зрелый полипептид SEQ ID NO: 2, где изменение включает замену, удаление или вставку по меньшей мере в одном аминокислотном положении;
(б) получение и выделение модифицированного полипептида со стадии (а).
12. Способ получения выделенного варианта полипептида химозина по п. 11, где вариант содержит одну или более следующих замен, где замена указана по отношению к аминокислотной последовательности зрелого полипептида SEQ ID NO: 2: V32L, I45V, N50K, G70D, G70N, D98V, N100Q, V136I, M142I, H146R, S154A, V155F, M157L, D158S, V198I,I200V, F223V, K231N, G244D, V248I, R254S, M256L, V259I, Е262Т, D267Q, D279E, T284S, N291Q N292H, L295K, K321P.
13. Способ получения пищевого или кормового продукта, включающий добавление эффективного количества выделенного варианта полипептида химозина по любому из пп. 1-8 к пищевому(ым) или кормовому(ым) ингредиенту(ам) и осуществление дальнейших стадий производства с получением пищевого или кормового продукта.
14. Способ по п. 13, где пищевой или кормовой продукт представляет собой продукт на основе молока.
15. Пищевой или кормовой продукт, содержащий вариант полипептида химозина по любому из пп. 1-8.
16. Применение варианта полипептида химозина по любому из пп. 1-8 в способе получения сыра.
17. Применение варианта полипептида химозина по п. 16 в способе получения вытяжного сыра, чеддера, сыров континентального типа, мягкого сыра или белого рассольного сыра.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP15183205.2 | 2015-08-31 | ||
| EP15183205 | 2015-08-31 | ||
| PCT/EP2016/070468 WO2017037092A1 (en) | 2015-08-31 | 2016-08-31 | Variants of chymosin with improved properties |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2018109375A true RU2018109375A (ru) | 2019-10-03 |
| RU2018109375A3 RU2018109375A3 (ru) | 2020-03-02 |
| RU2764544C2 RU2764544C2 (ru) | 2022-01-18 |
| RU2764544C9 RU2764544C9 (ru) | 2022-05-20 |
Family
ID=
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR102699499B1 (ko) | 2024-08-30 |
| RU2018109375A3 (ru) | 2020-03-02 |
| JP2018525996A (ja) | 2018-09-13 |
| WO2017037092A1 (en) | 2017-03-09 |
| US20180251747A1 (en) | 2018-09-06 |
| CN108135193A (zh) | 2018-06-08 |
| ZA201801030B (en) | 2018-12-19 |
| BR112018003493A2 (pt) | 2018-09-18 |
| CA2995755A1 (en) | 2017-03-09 |
| KR20180038569A (ko) | 2018-04-16 |
| US10941389B2 (en) | 2021-03-09 |
| RU2764544C2 (ru) | 2022-01-18 |
| MX2018002366A (es) | 2018-04-11 |
| AU2016315269A1 (en) | 2018-03-08 |
| AR105867A1 (es) | 2017-11-15 |
| AU2016315269B2 (en) | 2021-09-23 |
| EP3344049A1 (en) | 2018-07-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2017144572A (ru) | Варианты химозина с улучшенными свойствами | |
| RU2016132974A (ru) | Варианты химозина с улучшенными молокосвертывающими свойствами | |
| AR105867A1 (es) | VARIANTES DE QUIMOSINA CON PROPIEDADES MEJORADAS DE a-S1-CASEÍNA | |
| RU2019108268A (ru) | Варианты химозина с улучшенными молокосвертывающими свойствами | |
| MX2021005254A (es) | Produccion recombinante de una preparacion de peptido de colageno y uso de la misma. | |
| MY202885A (en) | Cream substitute comprising pulse protein | |
| EA201791588A1 (ru) | Свежий йогуртный сыр плотной консистенции с живой бактериальной флорой и изготовленные из него глазированные шоколадом йогуртные десерты, а также способ их изготовления | |
| MX2016005204A (es) | Bebida con sabor a fruta, rica en proteina; preparacion de fruta y vegetal, rica en proteína; y métodos relacionados y productos alimentarios. | |
| WO2022239000A8 (en) | Dairy analogues comprising beta-lactoglobulin | |
| HK1206765A1 (en) | Nutritive fragments, proteins and methods | |
| MX2023001595A (es) | Proteinas de fusion que comprenden proteinas de leche y composiciones de las mismas. | |
| RU2017125923A (ru) | Концентрат белка молочной сыворотки, кисломолочный продукт, содержащий концентрат, и способы | |
| MY199071A (en) | Process for producing infant formula products and acidic dairy products from milk | |
| AR108526A1 (es) | Variantes de quimosina con propiedades mejoradas de coagulación de la leche | |
| MX2020000288A (es) | Cromatografia. | |
| PH12021552636A1 (en) | Dairy product and process | |
| Öztürk et al. | Proteolysis pattern and functional peptides in artisanal Tulum cheeses produced from Mut province in Turkey | |
| MX376332B (es) | Endoproteasa especifica para prolina y usos de la misma. | |
| MY182519A (en) | Method for producing lipid using acyl-acp thioesterase | |
| EA202092216A1 (ru) | Способ получения иммуногенной композиции | |
| EA201501120A2 (ru) | Способ производства сыра типа швейцарского | |
| NZ738238B2 (en) | Variants of chymosin with improved properties | |
| MX2018000613A (es) | Procedimiento para la preparacion de un producto fermentado de la leche. | |
| RU2020140600A (ru) | Варианты химозина с улучшенными молокосвертывающими свойствами | |
| EA201590275A1 (ru) | Способ получения концентрата сывороточных белков |