RS60261B1

RS60261B1 - Pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il derivativi kao jak-inhibitori

Info

Publication number: RS60261B1
Application number: RS20200584A
Authority: RS
Inventors: Matthew Frank Brown; Alpay DERMENCI; Andrew Fensome; Brian Stephen Gerstenberger; Matthew Merrill Hayward; Dafydd Rhys Owen; Stephen Wayne Wright; Li Huang Xing; Xiaojing Yang
Original assignee: Pfizer
Priority date: 2016-02-24
Filing date: 2017-02-10
Publication date: 2020-06-30
Also published as: DOP2018000187A; JP2019510003A; EP3419978B1; RU2018130547A3; PT3419978T; PL3419978T3; EP3712153A1; US20230045252A1; UY37133A; IL260923B; MD3419978T2; TN2018000295A1; ZA201804972B; CR20180372A; CY1122949T1; EA201891463A1; DK3419978T3; MY189118A; ME03743B; NI201800080A

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Predmetni pronalazak daje farmaceutski aktivna jedinjenja i analoge pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il TYK2 liganda i analoge. Takva jedinjenja su korisna za inhibiciju Janus kinaza (JAKs). Ovaj pronalazak je takođe usmeren na kompozicije koje sadrže postupke za stvaranje takvih jedinjenja. Takođe su opisani postupci za tretiranje i prevenciju stanja posredovanih sa JAK.

OSNOVA PRONALASKA

[0002] Protein kinaze su familije enzima koji katalizuju fosforilaciju specifičnih ostataka u proteinima, široko klasifikovane u tirozin i serin/treonin kinaze. Neodgovarajuća aktivnost kinaze, koja je rezultat mutacije, prekomerne ekspresije, ili neodgovarajuće regulacije, disregulacije ili de-regulacije, kao i prekomerne ili premale proizvodnje faktora rasta ili citokina je uključena u mnoge bolesti, uključujući, ali bez ograničenja na kancer, kardiovaskularne bolesti, alergije, astmu i druge respiratorne bolesti, autoimune bolesti, inflamatorne bolesti, bolest kostiju, metaboličke poremećaje i neurološke i neurodegenerativne poremećaje kao što je Alzheimer-ova bolest. Neodgovarajuća aktivnost kinaze pokreće različite biološke ćelijske odgovore koji se odnose na ćelijski rast, ćelijsku diferencijaciju, ćelijsku funkciju, preživljavanje, apoptozu i ćelijsku pokretljivost uključene u gore navedene i srodne bolesti.

[0003] Na taj način, protein kinaze su se pojavile kao značajna klasa enzima kao ciljna mesta za terapeutsku intervenciju. Naročito, JAK familija ćelijskih protein tirozin kinaza (JAK1, JAK2, JAK3 i Tyk2) ima centralnu ulogu u prenosu signala preko citokina (Kisseleva et al., Gene, 2002, 285, 1; Yamaoka et al. Genome Biology 2004, 5, 253)). Posle vezivanja za svoje receptore, citokini aktiviraju JAK koji zatim fosforiliše citokinski receptor, na taj način stvarajući vezujuća mesta za molekule preko kojih se prenose signali, naime, članove familije prenosnika signala i aktivatora transkripcije (STAT) što konačno dovodi do ekspresije gena. Poznati su brojni citokini koji aktiviraju JAK familiju. Ovi citokini obuhvataju, familiju interferona (IFN) (IFN-alfa, IFN-beta, IFN-omega, Limitin, IFN-gama, IL-10, IL-19, IL-20, IL-22), gp130 familiju (IL-6, IL-11, OSM, LIF, CNTF, NNT-1/BSF-3, G-CSF, CT-1, Leptin, IL-12, IL-23), gama C familiju (IL-2, IL-7, TSLP, IL-9, IL-15, IL-21, IL-4, IL-13), IL-3 familiju (IL-3, IL-5, GM-CSF), jednolančanu familiju (EPO, GH, PRL, TPO), receptor tirozin kinaze (EGF, PDGF, CSF-1, HGF), i receptore spojene za G-protein (AT1).

[0004] Ostaje potreba za novim jedinjenjima koja efikasno i selektivno inhibiraju specifične JAK enzime: naročito TYK2. TYK2 je član familije JAK kinaza, i važna je za signalizaciju interferona tipa I (uključujući IFNalfa, INFbeta), IL-6, IL-10, IL-12 i IL-23 (Liang, Y. et al., Expert Opinion on Terapeutic Targets, 18, 5, 571-580 (2014)). Kao takva, TYK2 signalizuje sa drugim članovima familije JAK kinaza u sledećim kombinacijama: TYK2/JAK1, TYK2/JAK2, TYK2/JAK1/JAK2. Pokazano je da je TYK2 važna u diferencijaciji i funkciji više ćelijskih tipova važnih u inflamatornoj bolesti i autoimunoj bolesti uključujući tipove ćelija prirodnih ubica, B ćelija, i T pomoćnih ćelija. Aberantna TYK2 ekspresija je povezana sa više autoimunih ili inflamatornih stanja. Modulacija imune aktivnosti preko inhibicije aktivnosti TYK2 može se pokazati korisnom u tretmanu različitih imunih poremećaja (O’Shea JJ, Plenge R, Immunity, 36, 542-50 (2012); Murray, P.J., J. Immunol., 178, 2623-2629 (2007); Kisseleva, T., et al., Gene, 285, 1-24 (2002)) uz izbegavanje JAK2 zavisne eritropoetin (EPO) i trombopoetin (TPO) signalizacije (Neubauer H., et al., Cell, 93(3), 397-409 (1998); Parganas E., et al., Cell, 93(3), 385-95 (1998)).

[0005] WO2011/130146 opisuje određene 5,7-supstituisane-imidazo[1,2-c]pirimidin JAK inhibitore i WO2016/090285 opisuje određene 4,6-supstituisane-pirazolo[1,5-a]pirazin JAK inhibitore.

REZIME PRONALASKA

[0006] Predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I koje ima strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili farmaceutski prihvatljive soli, gde: A, A’ i A" su nezavisno O, C=O, C-R’ ili N-R", gde R’ i R" mogu nezavisno biti H, amino, -NR7COR6, COR6, -CONR7R8, C1-C6alkil, ili hidroksi(C1-C6alkil), i R" može biti prisutan ili odsutan, i prisutan je gde to dozvoljavaju pravila valence, i gde ne više od jednog od A, A’ i A" je O ili C=O; R0i R su nezavisno H, Br, Cl, F, ili C1-C6alkil; R1is H, C1-C6alkil, ili hidroksi(C1-C6alkil); R2je izabran iz grupe koja se sastoji od H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, hidroksi(C1-C6alkil), fenil(C1-C6alkil), formil, heteroaril, heterociklični, -COR6, -OCOR6, -COOR6, -NR7COR6, -CONR7R8, i -(CH2)n-W, gde W je cijano, hidroksi, C3-C8cikloalkil, -SO2NR7R8, i -SO2-R9, gde R9je C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, heteroaril, ili heterociklični; gde svaki od pomenutih alkil, cikloalkil, heterociklični, ili heteroaril može biti nesupstituisan ili supstituisan sa halo, cijano, hidroksi, ili C1-C6alkil; X je C-R3ili N, gde R3može biti H ili C1-C6alkil; R4i R5su nezavisno H, amino, C1-C6alkil, ili hidroksi(C1-C6alkil); R6, R7i R8su svaki nezavisno H, C1-C6alkil, C1-C4alkoksi(C1-C6alkil), ili C3-C8cikloalkil, pomenuti C1-C6alkil je izborno supstituisan sa halo, CN ili hidroksi; ili, R7i R8zajedno sa atomom za koji su vezani formiraju 5- ili 6-člani prsten, pomenuti prsten je izborno supstituisan sa halo, hidroksi, CN, ili C1-C6alkil; i, n je 0, 1, 2 ili 3.

[0007] U drugim aspektima, predmetni pronalazak takođe obezbeđuje:

farmaceutske kompozicije koje sadrže farmaceutski prihvatljivi nosač i jedinjenje formule I;

jedinjenje formule I ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u tretiranju stanja ili poremećaja uključujući inflamaciju, autoimunu bolest, sistemski eritemski lupus, lupus nefritis, diskoidni lupus, kožni lupus, lupus centralnog nervnog sistema, reumatoidni artritis, psorijazni artritis, inflamatornu bolest creva, Crohn-ovu bolest, ulcerativni kolitis, astmu, alergijsku astmu, dijabetes tipa I, polimiozitis, dermatomiozitis, tip I interferonopatije uključujući Aicardi-Goutières sindrom i druge mendelovske bolesti prekomerne ekspresije interferona tipa I, multiplu sklerozu, primarnu progresivnu multiplu sklerozu, relapsnu remisionu multiplu sklerozu, primarnu bilijarnu cirozu takođe poznatu kao primarni bilijarni holangitis, primarni sklerozni holangitis, autoimuni hepatitis, bolest ne-alkoholne masne jetre, nealkoholni steatohepatitis, psorijazu, dermatomiozitis, sklerodermu, atopijski dermatitis, vitiligo, alopecia areata, spondilopatiju, ankilozni spondilitis, Alzheimerovu bolest, neuro-inflamatorni miozitis, vaskulitis, pemfigus, Crohn-ovu bolest, lupus, nefritis, psorijazu, multiplu sklerozu, poremećaj teške depresije, alergiju, astmu, Sjogren-ovu bolest, sindrom suvog oka, odbacivanje transplanta, kancer, inflamatornu bolest creva, septički šok, kardiopulmonalnu disfunkciju, vitiligo, alopeciju, akutnu respiratonu bolest, ankilozni spondilitis, autoimuni hepatitis, primarni sklerozni holangitis, primarnu bilijarnu cirozu, Alzheimer-ovu bolest, ili kaheksiju;

jedinjenje formule I ili njegova farmaceutski prihvatljiva za upotrebu u tretiranju stanja ili poremećaja uključujući atopijski dermatitis, ekcem, psorijazu, sklerodermu, lupus, pruritus, umili, druga pruritusna stanja, alergijske reakcije uključujući alergijski dermatitis kod sisara, alergijske bolesti kod konja uključujući preosetljivost na ujed, letnji ekcem, letnji svrab kod konja, inflamatornu bolest disajnih puteva, rekurentnu opstrukciju vazdušnih puteva, hiperresponsivnost disajnih puteva, i hroničnu opstruktivnu bolest pluća; i, postupke za pripremu jedinjenja prema predmetnom pronalasku.

[0008] Predmetni pronalazak će se dodatno razjasniti sledećim opisom datim samo kao primer. Predmetni pronalazak je usmeren na klasu pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il derivata. Naročito, predmetni pronalazak je usmeren na pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il jedinjenja korisna kao inhibitori JAKs, i naročito TYK2. Shvatanje različitih aspekata pronalaska postići će se putem sledeće diskusije i primera.

[0009] Termin "alkil", pojedinačno ili u kombinaciji, označava acikličnu, zasićenu ugljovodoničnu grupu formule CnH2n+1koja može biti linearna ili granata. Primeri takvih grupa obuhvataju metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, izobutil, sek-butil, terc-butil, pentil, izo-amil i heksil. Osim ukoliko je drugačije naznačeno, alkil grupa sadrži od 1 do 6 atoma ugljenika. Sadržaj atoma ugljenika alkila i različitih drugih grupa koje sadrže ugljovodonik je naznačen prefiksom koji označava donji i gornji broj atoma ugljenika u grupi, to jest, prefiks Ci-Cjoznačava grupu sa celim brojem "i" do celim brojem "j" atoma ugljenika, uključujući navedene. Na taj način, na primer, C1-C6alkil označava alkil od jedan do šest atoma ugljenika, uključujući navedene brojeve.

[0010] Termin "hidroksi," kao što je ovde korišćeno, označava OH grupu. Termin "heterociklični" odnosi se na zasićeni ili delimično zasićeni (tj., nearomatični) heterociklus koji sadrži tri do deset atoma prstena gde su jedan ili više, poželjno, jedan, dva ili tri atoma prstena, heteroatom(i) izabrani od N, O i S, pri čemu je preostali atom ugljenik, i koji može biti vezan za preko atoma azota prstena ili ugljenikovog atoma prstena. Jednako tome, kada je supstituisan, supstituent se može nalaziti na atomu azota prstena (ukoliko je supstituent vezna preko ugljenikovog atoma) ili ugljenikovog atoma prstena (u svim slučajevima). Specifični primeri uključuju oksiranil, aziridinil, oksetanil, azetidinil, tetrahidrofuranil, pirolidinil, tetrahidropiranil, piperidinil, 1,4-dioksanil, morfolinil, piperazinil, azepanil, oksepanil, oksazepanil i diazepinil.

[0011] Termin "aril" odnosi se na aromatični monociklični ili biciklični ugljovodonik koji sadrži šest do deset atoma ugljenika prstena koji se mogu vezati preko jednog od ugljenikovih atoma prstena. Jednako tome, kada je supstituisan, supstituent se može nalaziti na ugljenikovom atomu prstena. Specifični primeri uključuju, ali nisu ograničeni na, fenil, tolil, ksilil, trimetilfenil, i naftil. Primeri aril supstituenata uključuju, ali nisu ograničeni na, alkil, hidroksil, halo, nitril, alkoksi, trifluorometil, karboksamido, SO2Me, benzil, i supstituisani benzil.

[0012] Termin "heteroaril" odnosi se na monovalentni aromatični monociklični ili biciklični heterociklus od pet do deset atoma prstena gde jedan ili više, poželjno, jedan, dva ili tri atoma prstena, su heteroatom(i) izabrani od N, O, i S, pri čemu je preostali atom ugljenik, i koji može biti vezan preko ugljenikovog atoma prstena ili azotovog atoma prstena sa odgovarajućom valencom. Jednako tome, kada je supstituisan, supstituent se može nalaziti na atomu ugljenika prstena ili azotovom atomu prstena sa odgovarajućom valencom. Specifični primeri uključuju, ali nisu ograničeni na, tienil, furanil, pirolil, pirazolil, imidazolil, oksazolil, izoksazolil, tiazolil, izotiazolil, triazolil, oksadiazolil, tiadiazolil, tetrazolil, piridil, piridazinil, pirimidinil i pirazinil. Termin "cikloalkil" označava monocikličnu, zasićenu ugljovodoničnu grupu formule CnH2n-1. Primeri uključuju, ali nisu ograničeni na, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, i cikloheptil. Ukoliko nije drugačije naznačeno, cikloalkil grupa sadrži od 3 do 8 atoma ugljenika.

[0013] Termini "halo" i "halogen" označavaju fluorid (F), hlorid (CI), bromid (Br) ili jodid (I).

[0014] Termin "sisar" označava čoveka, stoku ili životinje za druženje.

[0015] Termin " životinje za druženje" ili "prateće životinje" označava životinje koje se drže kao kućni ljubimci ili kućne životinje. Primeri životinje za druženje obuhvataju pse, mačke i glodare uključujući hrčke, zamorčiće, gerbile i slično, zečeve, feretke i ptice.

[0016] Termin "stoka" označava životinje gajene ili uzgajane u poljoprivrednom okruženju za pripremu proizvoda kao što su hrana ili vlakna, ili zbog njihovog rada. U nekim primerima izvođenja, stoka je pogodna za hranu sisara, na primer ljudi. Primeri stočnih životinja obuhvataju goveda, koze, konje, svinje, ovce, uključujući jagnjad i zečeve, kao i ptice, kao što su kokoške, patke i ćurke.

[0017] Termin "tretman" ili "lečenje" označava ublažavanje simptoma povezanih sa bolešću, poremećajem ili stanjem, ili zadržavanje daljeg napredovanja ili pogoršavanje tih simptoma. U zavisnosti od bolesti i stanja pacijenta, termin "lečenje" kao što je ovde korišćen može da obuhvata jedan ili više kurativnih, palijativnih i profilaktičkih tretmana. Lečenje može takođe da obuhvata primenu farmaceutske formulacije prema predmetnom pronalasku u kombinaciji sa drugim terapijama.

[0018] Termin "terapeutski efikasan" označava sposobnost sredstva da spreči, ili poboljša težinu poremećaja. Izraz "terapeutski efikasan" trebalo bi razumeti da je ekvivalentan izrazu "efikasan za lečenje, prevenciju ili poboljšanje", i oba su namenjeni za kvalifikaciju količine sredstva koje će postići cilj poboljšanja težine kancera, kardiovaskularne bolesti ili bola i inflamacije i učestalost incidence u odnosu na lečenje svakim sredstvom pojedinačno.

[0019] "Farmaceutski prihvatljiv" označava pogodan za upotrebu kod sisara, pratećih životinja ili stočnih životinja.

[0020] Ako su supstituenti opisani kao "nezavisno izabrani" iz grupe, svaki supstituent je izabran nezavisno od ostalih. Svaki supstituent prema tome može biti identičan ili različit od drugog supstituenta (supstituenata).

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0021] Predmetni pronalazak se odnosi na nova jedinjenja koja su TYK2 modulatori korisni u tretmanu bolesti i stanja povezanih sa disregulacijom TYK2. Predmetni pronalazak dodatno obezbeđuje farmaceutske kompozicije koje sadrže takve modulatore JAK enzima. Takođe su opisani postupci za tretiranje i/ili sprečavanje takvih bolesti i stanja. Shodno tome, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I kao što je prethodno predstavljeno koje ima strukturu (I):

Pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje koje ima strukturu (Ia):

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili farmaceutski prihvatljive soli, gde: A, A’ i A" su nezavisno O, C=O, C-R’ ili N-R", gde R’ i R" mogu nezavisno biti H, amino, -NR7COR6, COR6, -CONR7R8, C1-C6alkil-, ili hidroksi(C1-C6alkil)-, i R" može biti prisutan ili odsutan, i prisutan je tamo gde pravila valence dozvoljavaju, i gde ne više od jednog od A, A’ i A" je O ili C=O; R0i R su nezavisno H, Br, Cl, F, ili C1-C6alkil; R1je H, C1-C6alkil, ili hidroksi(C1-C6alkil)-; R2je izabran iz grupe koja se sastoji od H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi-, hidroksi(C1-C6alkil)-, fenil(C1-C6alkil)-, formil, heteroaril, heterociklični, -COR6, -OCOR6, -COOR6, -NR7COR6, -CONR7R8, i -(CH2)n-W, gde W je cijano, hidroksi, C3-C8cikloalkil, -SO2NR7R8, i -SO2-R9, gde R9je C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, heteroaril, ili heterociklični; gde svaki od pomenutih alkil, cikloalkil, heterociklični, ili heteroaril može biti nesupstituisan ili supstituisan sa halo, cijano, hidroksi, ili C1-C6alkil; R3može biti H ili C1-C6alkil; R4i R5su nezavisno H, amino, C1-C6alkil, ili hidroksi(C1-C6alkil); R6, R7i R8su svaki nezavisno H, C1-C6alkil, C1-C4alkoksi(C1-C6alkil), ili C3-C8cikloalkil, pomenuti C1-C6alkil je izborno supstituisan sa halo, CN ili hidroksi; ili, R7i R8zajedno sa atomom za koji su vezani formiraju 5- ili 6- člani prsten, pomenuti prsten je izborno supstituisan sa halo, hidroksi, CN, ili C1-C6alkil; i, n je 0, 1, 2 ili 3.

[0022] Pronalazak dodatno obezbeđuje jedinjenje koje ima strukturu (Ib):

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili farmaceutski prihvatljive soli, gde: R" je H, -COR6, -CONR7R8, C1-C6alkil-, ili hidroksi(C1-C6alkil)-; R0i R su nezavisno H, Br, Cl, F, ili C1-C6alkil; R1je H, C1-C6alkil, ili hidroksi(C1-C6alkil); R2je izabran iz grupe koja se sastoji od H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, hidroksi(C1-C6alkil), fenil(C1-C6alkil), formil, heteroaril, heterociklični, -COR6, -OCOR6, -COOR6, - NR7COR6, -CONR7R8, i -(CH2)n-W, gde W je cijano, hidroksi, C3-C8cikloalkil, -SO2NR7R8, i -SO2-R9, gde R9je C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, heteroaril, ili heterociklični; gde svaki od pomenutih alkil, cikloalkil, heterociklični, ili heteroaril može biti nesupstituisan ili supstituisan sa halo, cijano, hidroksi, ili C1-C6alkil; R3može biti H ili C1-C6alkil; R8je H, amino, C1-C6alkil, ili hidroksi(C1-C6alkil); R6, R7i R8su svaki nezavisno H, C1-C6alkil, C1-C4alkoksi(C1-C6alkil), ili C3-C8cikloalkil, pomenuti C1-C6alkil je izborno supstituisan sa halo, CN ili hidroksi; ili, R7i R8zajedno sa atomom za koji su vezani formiraju 5- ili 6-člani prsten, pomenuti prsten može biti izborno supstituisan sa halo, hidroksi, CN, ili C1-C6alkil; i, n je 0, 1, 2 ili 3.

[0023] Pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje koje ima strukturu (Ic):

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili farmaceutski prihvatljive soli, gde: R" je H, -COR6, -CONR7R8, C1-C6alkil, ili hidroksi(C1-C6alkil); R2je izabran iz grupe koja se sastoji od H, C1-C6alkil-, C1-C6alkoksi-, hidroksi(C1-C6alkil)-, fenil(C1-C6alkil)-, formil, heteroaril, heterociklični, -COR6, -OCOR6, -COOR6, -NR7COR6, -CONR7R8, i -(CH2)n-W, gde W je cijano, hidroksi, C3-C8cikloalkil, -SO2NR7R8, i -SO2-R9, gde R9je C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, heteroaril, ili heterociklični; gde svaki od pomenutih alkil, cikloalkil, heterociklični, ili heteroaril može biti nesupstituisan ili supstituisan sa halo, cijano, hidroksi, ili C1-C6alkil; R3je H ili C1-C6alkil; R5je H, amino, C1-C6alkil-, ili hidroksi(C1-C6alkil)-; R6, R7i R8su svaki nezavisno H, C1-C6alkil-, C1-C4alkoksi(C1-C6alkil)-, ili C3-C8cikloalkil, pomenuti C1-C6alkil je izborno supstituisan sa halo, CN ili hidroksi; ili, R7i R8zajedno sa atomom za koji su vezani formiraju 5- ili 6-člani prsten, pomenuti prsten je izborno supstituisan sa halo, hidroksi, CN, ili C1-C6alkil; i, n je 1, 2 ili 3. U naročitom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje pomenuto jedinjenje gde R" je C1-C6alkil i R5je H.

[0024] Pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje koje ima strukturu (Id):

1

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili farmaceutski prihvatljive soli, gde: R" je H, -COR6, -CONR7R8, C1-C6alkil, ili hidroksi(C1-C6alkil); R2je izabran iz grupe koja se sastoji od H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, hidroksi(C1-C6alkil), fenil(C1-C6alkil), formil, heteroaril, heterociklični, -COR6, -OCOR6, -COOR6, - NR7COR6, -CONR7R8, i -(CH2)n-W, gde W je cijano, hidroksi, C3-C8cikloalkil, -SO2NR7R8, i -SO2-R9, gde R9je C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, heteroaril, ili heterociklični; gde svaki od pomenutih alkil, cikloalkil, heterociklični, ili heteroaril može biti nesupstituisan ili supstituisan sa halo, cijano, hidroksi, ili C1-C6alkil; R5je H, amino, C1-C6alkil-, ili hidroksi(C1-C6alkil)-; R6, R7i R8su svaki nezavisno H, C1-C6alkil, C1-C4alkoksi(C1-C6alkil), ili C3-C8cikloalkil, pomenuti C1-C6alkil je izborno supstituisan sa halo, CN ili hidroksi; ili, R7i R8zajedno sa atomom za koji su vezani formiraju 5- ili 6-člani prsten, pomenuti prsten je izborno supstituisan sa halo, hidroksi, CN, ili C1-C6alkil; i, n je 1, 2 ili 3. U naročitom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje pomenuto jedinjenje gde R" je C1-C6alkil i R5je H.

[0025] Pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje koje ima strukturu (Ie):

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili farmaceutski prihvatljive soli, gde: R2je izabran iz grupe koja se sastoji od H, C1-C6alkil-, C1-C6alkoksi-, hidroksi( C1-C6alkil)-, fenil(C1-C6alkil)-, formil, heteroaril, heterociklični, -COR6, -OCOR6, -COOR6, -CONR7R8, i -(CH2)n-W, gde W je cijano, hidroksi, C3-Cs cikloalkil, -SO2NR7R8, i -SO2-R’, gde R’ je C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, heteroaril, ili heterociklični; gde svaki od pomenutih alkil, cikloalkil, heterociklični, ili heteroaril može biti nesupstituisan ili supstituisan sa halo, cijano, hidroksi, ili C1-C6alkil; R6, R7i R8su svaki nezavisno H, C1-C6alkil-, C1-C4alkoksi(C1-C6alkil)- ili C3-C8cikloalkil pomenuti C1-C6alkil je izborno supstituisan sa halo, CN ili hidroksi; ili, R7i R8zajedno sa atomom za koji su vezani formiraju 5- ili 6-člani prsten, pomenuti prsten je izborno supstituisan sa halo, hidroksi, CN, ili C1-C6alkil; i, n je 1, 2 ili 3. U naročitom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje pomenuto jedinjenje gde R2je -(CH2)n-W, gde W je cijano i n je 1, 2 ili 3.

[0026] Pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje koje ima strukturu (If):

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili farmaceutski prihvatljive soli, gde: R" je H, -COR6, -CONR7R8, C1-C6alkil-, ili hidroksi(C1-C6alkil)-; R5je H, amino, C1-C6alkil-, ili hidroksi(C1-C6alkil)-; R6, R7i R8su svaki nezavisno H, C1-C6alkil-, C1-C4alkoksi(C1-C6alkil)-, ili C3-C8cikloalkil, pomenuti C1-C6alkil je izborno supstituisan sa halo, CN ili hidroksi; ili, R7i R8zajedno sa atomom za koji su vezani formiraju 5- ili 6-člani prsten, pomenuti prsten je izborno supstituisan sa halo, hidroksi, CN, ili C1-C6alkil; i, n je 0, 1, 2 ili 3. U naročitom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje pomenuto jedinjenje gde R" je C1-C6alkil. U sledećem naročitom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje pomenuto jedinjenje gde R" je metil.

[0027] U određenim poželjnim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje jedinjenje izabrano iz grupe koja se sastoji od:

(1r,3r)-3-(4-(6-(3-amino-1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-(cijanometil) ciklobutan-1-karbonitril;

2,2’-(3-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)azetidin-1,3-diil)diacetonitril;

2-((1s,3r)-1-(4-(6-(5-(hidroksimetil)-1H-pirazol-3-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil) acetonitril;

5-(4-(1-((1s,3r)-1-(cijanometil)-3-metoksiciklobutil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-6-il)-1H-pirazol- 3-karboksamid;

(1s,3s)-3-(cijanometil)-3-(4-(6-(5-(hidroksimetil)izoksazol-3-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan- 1-karbonitril;

(1r,3r)-3-(cijanometil)-3-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan- 1-karbonitril;

1

(1s,3s)-3-(cijanometil)-3-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan- 1-karbonitril;

(1r,3r)-3-(cijanometil)-3-(4-(3-metil-6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1- il)ciklobutan-1-karbonitril;

2-((1r,3s)-1-(4-(6-(3-amino-1H-pirazol-5-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil)acetonitril;

(1r,3r)-3-(cijanometil)-3-(4-(6-(1-(hidroksimetil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1- il)ciklobutan-1-karbonitril; i,

2-(1-etil-3-(4-(6-(5-(hidroksimetil)-1H-pirazol-3-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)azetidin-3- il)acetonitril, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0028] U određenom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je (1r,3r)-3-(4-(6-(3-amino-1-metil-1Hpirazol- 4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-(cijanometil)ciklobutan-1-karbonitril, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0029] U određenom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je 2,2’-(3-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4- il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)azetidin-1,3-diil)diacetonitril, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0030] U određenom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je 2-((1s,3r)-1-(4-(6-(5-(hidroksimetil)- 1H-pirazol-3-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil)acetonitril, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0031] U određenom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je 5-(4-(1-((1s,3r)-1-(cijanometil)-3-metoksiciklobutil)- 1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-6-il)-1H-pirazol-3-karboksamid, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0032] U određenom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je (1s,3s)-3-(cijanometil)-3-(4-(6-(5-(hidroksimetil) izoksazol-3-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan-1-karbonitril, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0033] U određenom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je (1r,3r)-3-(cijanometil)-3-(4-(6-(1-metil- 1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan-1-karbonitril, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0034] U sledećem određenom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je (1s,3s)-3-(cijanometil)-3-(4-(6-(1- metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan-1-karbonitril, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0035] U sledećem primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je (1r,3r)-3-(cijanometil)-3-(4-(3-metil- 6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan-1-karbonitril, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0036] U određenom drugom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je 2-((1r,3s)-1-(4-(6-(3-amino-1Hpirazol- 5-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil)acetonitril, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0037] U sledećem određenom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je 2-(1-etil-3-(4-(6-(5-(hidroksimetil)- 1H-pirazol-3-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)azetidin-3-il)acetonitril, ili, njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0038] Pronalazak dodatno obezbeđuje farmaceutsku ili veterinarsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje formule I i la-f ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač.

[0039] Pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje formule I ili la-f, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili soli za upotrebu u tretiranju bolesti ili stanja za koje je indikovan Tyk2 inhibitor.

[0040] Pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje formule I ili la-f, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili soli, za upotrebu u tretiranju ili prevenciji poremećaja ili stanja izabranog od alergijskog rinitisa, nazalne kongestije, rinoreje, sezonskog rinitisa, nazalne inflamacije, astme svih tipova, hronične opstruktivne plućne bolesti, hronične ili akutne bronhokonstrikcije, hroničnog bronhitisa, opstrukcije malih disajnih puteva, emfizema, hronične eozinofilne upale pluća, adultnog respiratornog distres sindroma, pogoršanja hiperreaktivnosti disajnih puteva kao posledica terapije drugim lekom, plućne vaskularne bolesti, plućne arterijske hipertenzije, akutne povrede pluća, bronhiektazije, sinusitisa, alergijskog konjuktivitisa, idiopatske plućne fibroze ili atopijskog dermatitisa.

[0041] Pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje formule I ili la-f, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili soli, za upotrebu u tretiranju primarne bilijarne ciroze.

[0042] Pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje formule I ili la-f, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili soli, za upotrebu u tretiranju bolesti ili stanja izabranog od inflamacije, autoimune bolesti, sistemskog eritemskog lupusa, lupus nefritisa, diskoidnog lupusa, kožnog lupusa, lupusa centralnog nervnog sistema, reumatoidnog artritisa, psorijaznog artritisa, inflamatorne bolesti creva, Crohn-ove bolesti, ulcerativnog kolitisa, astme, alergijske astme, dijabetesa tipa I, polimiozitisa, dermatomiozitisa, interferonopatija tipa I uključujući Aicardi-Goutières sindrom i druge i mendelovske bolesti prekomerne ekspresije interferona tipa I, multiple skleroze, primarne progresivne multiple skleroze, relapsne remisione multiple skleroze, primarne bilijarne ciroze

1

takođe poznate kao primarni bilijarni holangitis, primarnog skleroznog holangitisa, autoimunog hepatitisa, bolesti nealkoholne masne jetre, nealkoholnog steatohepatitisa, psorijaze, dermatomiozitisa, skleroderme, atopijskog dermatitisa, vitiliga, alopecia areata, spondilopatije, ankiloznog spondilitisa, Alzheimer-ove bolesti, i neuro-inflamacije.

[0043] Takođe je opisan i postupak za tretiranje simptoma inflamatorne ili autoimune bolesti, uključujući pruritis i umor.

[0044] U određenim primerima izvođenja, terapijski efikasna količina korišćena u skladu sa postupkom je od 0.01 mg/kg telesne težine/dan do 100 mg/kg telesne težine/dan. U određenim drugim primerima izvođenja, terapeutski efikasna količina korišćena u skladu sa postupkom je gde je terapeutski efikasna količina od 0.1 mg/kg telesne težine/dan do 10 mg/kg telesne težine/dan.

[0045] Jedinjenja prema pronalasku koja imaju istup molekulsku formulu ali se razlikuju u prirodi ili sekvenci vezivanja njihovih atoma ili rasporeda njihovih atoma u prostoru označeni su kao "izomeri". Izomeri koji se razlikuju u rasporedu njihovih atoma u prostoru označeni su kao "stereoizomeri". Stručnjaci će shvatiti da jedinjenja formule I mogu postojati kao cis- i trans-ahiralni diastereomeri.

[0046] Unutar obima opisanih jedinjenja su svi izomeri (npr., cis-, trans-, ili diastereomeri) jedinjenja opisanih ovde pojedinačno, kao i bilo koje smeše. Svi ovi oblici, uključujući enantiomere, diastereomere, cis, trans, sin, anti, solvate (uključujući hidrate), tautomere i njihove smeše, su uključeni u opisana jedinjenja. Stereoizomerne smeše, npr. smeše diastereomera, mogu biti pripremljene u njihove odgovarajuće izomere na poznat način pomoću pogodnog postupka razdvajanja. Diastereomerne smeše na primer mogu biti razdvojene u njihove pojedinačne diastereomere pomoću frakcione kristalizacije, hromatografije, raspodele rastvarača i sličnih postupaka. Ovo razdvajanje se može izvesti ili na nivou jednog od početnih jedinjenja ili u samom jedinjenju formule I. Enantiomeri mogu biti razdvojeni preko formiranja diastereomernih soli, na primer formiranjem soli sa enantiomerno-čistom hiralnom kiselinom ili pomoću hromatografije, na primer pomoću HPLC, upotrebom hromatografskih supstrata sa hiralnim ligandima. Predmetni pronalazak uključuje sva farmaceutski prihvatljiva izotopski obeležena jedinjenja formule I gde su jedan ili više atoma zamenjeni sa atomima koji imaju isti atomski broj, ali im je atomska masa ili maseni broj različit od atomske mase ili masenog broja koji je pretežno zastupljen u prirodi.

[0047] Primeri izotopa pogodnih za uključivanje u jedinjenja prema pronalasku uključuju izotope vodonika, kao što su<2>H i<3>H, ugljenika, kao što su<11>C,<13>C i<14>C, hlora, kao što su

1

<36>Cl, fluora, kao što su<18>F, joda, kao što su<123>I i<125>I, azota, kao što su<13>N i<15>N, kiseonika, kao što su<15>O,<17>O i<18>O, fosfora, kao što je<32>P, i sumpora, kao što je<35>S.

[0048] Određena izotopski-obeležena jedinjenja formule I, na primer, ona koja inkorporiraju radioaktivni izotop, su korisna u studijama distribucije leka i/ili supstratnog tkiva. Radioaktivni izotopi tricijum, tj.,<3>H, i ugljenik-14, tj.,<14>C, su naročito korisni za ovu svrhu u odnosu na lakoću njihove inkorporacije i lake detekcije.

[0049] Supstitucija sa težim izotopima kao što je deuterijum, tj.,<2>H, može pružiti određene terapeutske prednosti koje su rezultat veće metaboličke stabilnosti, na primer, povećanog u vivo polu-života ili smanjenja potrebne doze, i stoga može biti poželjno u nekim situacijama. Supstitucija sa pozitron emitujućim izotopima, kao što su<11>C,<18>F,<15>O i<13>N, može biti korisna u studijama pozitron emisione topografije (PET) za istraživanje zauzeća supstratnog receptora. Izotopski-obeležena jedinjenja formule I se mogu generalno pripremiti konvencionalnim tehnikama poznatim stručnjacima ili sa procesima analognim onima opisanim u pratećim Primerima i Pripremama korišćenjem odgovarajuće izotopski obeleženog reagensa umesto prethodno upotrebljenog neobeleženog reagensa.

[0050] U terapeutskoj upotrebi za lečenje poremećaja kod sisara, jedinjenje prema predmetnom pronalasku ili njegove farmaceutske kompozicije mogu biti primenjeni oralno, parenteralno, topikalno, rektalno, transmukozno, ili intestinalno. Parenteralne primene obuhvataju indirektne injekcije za generisanje sistemskog efekta ili direktne injekcije na pogođenu oblast. Topikalne primene obuhvataju tretman kože ili organa lako dostupne lokalnom primenom, na primer, na oči ili uši. One takođe obuhvataju transdermalnu primenu za generisanje sistemskog efekta. Rektalna primena obuhvata oblik supozitorija. Poželjni putevi primene su oralni i parenteralni.

[0051] Farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja formule I i Ia-f obuhvataju njihove kisele adicione i bazne soli. Pogodne kisele adicione soli su formirane od kiselina koje formiraju netoksične soli. Primeri obuhvataju acetat, adipat, aspartat, benzoat, bezilat, bikarbonat/karbonat, bisulfat/sulfat, borat, kamsilat, citrat, ciklamat, edizilat, ezilat, format, fumarat, gluceptat, glukonat, glukuronat, heksafluorofosfat, hibenzat, hidrohlorid/hlorid, hidrobromid/bromid, hidrojodid/jodid, izetionat, laktat, malat, maleat, malonat, mezilat, metilsulfat, naftilat, 2-napsilat, nikotinat, nitrat, orotat, oksalat, palmitat, pamoat, fosfat/hidrogen fosfat/dihidrogen fosfat, piroglutamat, saharat, stearat, sukcinat, tanat, tartrat, tozilat, trifluoroacetat i ksinofoat soli.

1

[0052] Pogodne bazne soli su formirane od baza koje formiraju netoksične soli. Primeri obuhvataju soli aluminijuma, arginina, benzatina, kalcijuma, holina, dietilamina, diolamina, glicina, lizina, magnezijuma, meglumina, olamina, kalijuma, natrijuma, trometamina i cinka.

[0053] Hemisoli kiselina i baza takođe mogu biti formirane, na primer, hemisulfatne i hemikalcijum soli. Za prikaz pogodnih soli, videti Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use od Stahl i Wermut (Wiley-VCH, 2002).

[0054] Farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja formule I i Ia-f mogu biti pripremljene, respektivno, pomoću jednog ili više od tri postupka: (i) reakcijom jedinjenja formule I i Ia-f sa željenom kiselinom ili bazom; (ii) uklanjanjem zaštitne grupe osetljive na kiselinu ili bazu iz pogodnog prekursora jedinjenja formule I i Ia-f ili otvaranjem prstena pogodnog cikličnog prekursora, na primer, laktona ili laktama, upotrebom željene kiseline ili baze; ili (iii) prevođenjem jedne soli jedinjenja formule I ili Ia-f u drugu reakcijom sa odgovarajućom kiselinom ili bazom ili pomoću pogodne jono-izmenjivačke kolone. Sve tri reakcije su tipično izvedene u rastvoru. Rezultujuća so može da se istaloži i da se sakupi filtracijom ili može biti dobijena isparavanjem rastvarača. Stepen jonizacije u rezultujućoj soli može da varira od potpuno jonizovanog do skoro nejonizovanog.

[0055] Farmaceutske kompozicije prema predmetnom pronalasku mogu biti proizvedene pomoću postupaka dobro poznatim u stanju tehnike, npr., pomoću konvencionalnog mešanja, rastvaranja, granulacije, pripreme dražeja, pretvaranja u prah, emulgovanja, inkapsulacije, hvatanja, postupaka liofilizacije ili sušenja raspršivanjem.

[0056] Farmaceutske kompozicije za upotrebu u skladu sa predmetnim pronalaskom mogu biti formulisane na konvencionalan način upotrebom jednog ili više farmaceutski prihvatljivih nosača koji sadrže ekscipijense i pomoćna sredstva, koji olakšavaju obradu aktivnog jedinjenja u preparate, koji mogu biti korišćeni farmaceutski. Pogodna formulacija je zavisna od izabranog puta primene. Farmaceutski prihvatljivi ekscipijensi i nosači su generalno poznati stručnjacima iz date oblasti tehnike i na taj način su uključeni u ovaj pronalazak. Takvi ekscipijensi i nosači su opisani, na primer, u Remington’s Pharmaceutical Sciences Mack Pub. Co., New Jersey (1991). Formulacije prema pronalasku mogu biti dizajnirane tako da imaju kratko delovanje, brzo oslobađanje, dugotrajno delovanje i produženo oslobađanje. Na taj način, farmaceutske formulacije takođe mogu biti formulisane za kontrolisano oslobađanje ili za sporo oslobađanje.

[0057] Farmaceutske kompozicije pogodne za upotrebu u predmetnom pronalasku obuhvataju kompozicije u kojima su aktivni sastojci sadržani u količini koja je dovoljna da se postigne nameravana svrha, tj., kontrola ili lečenje poremećaja ili bolesti. Specifičnije, terapeutski

1

efikasna količina označava količinu jedinjenja efikasnu za prevenciju, olakšanje ili poboljšanje simptoma/znakova bolesti ili produženje preživljavanja subjekta koji se leči.

[0058] Količina aktivne komponente, koja je jedinjenje prema ovom pronalasku, u farmaceutskoj kompoziciji i njegovog jediničnog oblika doze, može biti varirana ili podešena široko u zavisnosti od načina primene, potencije određenog jedinjenja i željene koncentracije. Određivanje terapeutski efikasne količine je unutar sposobnosti stručnjaka iz date oblasti tehnike. Generalno, količina aktivne komponente će biti u opsegu između 0.01% do 99% prema težini kompozicije.

[0059] Generalno, terapeutski efikasna količina doze aktivne komponente biće u opsegu od oko 0.01 do oko 100 mg/kg telesne težine/dan, poželjno oko 0.1 do oko 10 mg/kg telesne težine/dan, poželjnije oko 0.3 do 3 mg/kg telesne težine/dan, čak poželjnije oko 0.3 do 1.5 mg/kg telesne težine/dan. Trebalo bi razumeti da doze mogu da variraju u zavisnosti od potreba svakog subjekta i težine poremećaja ili bolesti koje se leče.

[0060] Željena doza može povoljno biti predstavljena u jednoj dozi ili kao podeljene doze primenjene u odgovarajućim intervalima, na primer, kao dve, tri, četiri ili više pod-doza na dan. Sama pod-doza može biti dalje podeljena, npr., u određeni broj posebnih primena sa malim razmakom; kao što su višestruke inhalacije iz insuflatora ili primenom većeg broja kapi u oko.

[0061] Takođe, potrebno je razumeti da početna primenjena doza može biti povećana preko gore navedenog gornjeg nivoa u cilju brzog postizanja željene koncentracije u plazmi. Sa druge strane, početna doza može biti manja od optimalne i dnevna doza može biti progresivno povećavana u toku lečenja u zavisnosti od određene situacije. Ako je poželjno, dnevna doza može takođe biti podeljena u višestruke doze za primenu, npr., dva do četiri puta na dan.

[0062] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje bilo koju od upotreba, postupaka ili kompozicija kao što je prethodno definisano gde su jedinjenje formule I ili Ia-f, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili soli, korišćeni u kombinaciji sa drugim farmakološki aktivnim jedinjenjem, naročito jednim od funkcionalno-definisanih klasa ili specifičnih jedinjenja navedenih u nastavku. Ova sredstva mogu biti primenjena kao deo istih ili zasebnih doznih oblika, preko istog ili različitih puteva primene, i na istom ili različitom rasporedu primene prema standardnoj farmaceutskoj praksi poznatoj stručnjaku.

[0063] Pogodna sredstva za upotrebu u kombinovanoj terapiji sa jedinjenjem formule I ili la-f, ili njihovom farmaceutski prihvatljivom soli, ili farmaceutski prihvatljivim solvatom pomenutog jedinjenja ili soli, sulfasalazin, mesalazin, prednizon, azatioprin, infliksimab,

1

adalimumab, belimumab, becertolizumab, natalizumab, vedolizumab, hidrokortizon, budesonid, ciklosporin, takrolimus, feksofenadin, 6-merkaptopurin, metotreksat, ursodezoksiholna kiselina, obetiholna kiselina, antihistamini, rifampin, prednizon, metotreksat, azatioprin, ciklofosfamid, hidroksihlorohin, mofetil, natrijum mikofenolat, takrolimus, leflunomid, hlorohine i hinakrin, talidomid, rituksan, NSAIDs, solumedrol, depomedrol i deksametazon.

[0064] Druga pogodna sredstva za upotrebu u kombinovanoj terapiji sa jedinjenjem formule I ili Ia-f, ili njihovom farmaceutski prihvatljivom soli, ili farmaceutski prihvatljivim solvatom pomenutog jedinjenja ili soli, uključuju: antagonist aktivirajućeg proteina 5-lipoksigenaze (FLAP); leukotrien antagonist (LTRA) kao što je LTB4, LTC4, LTD4, LTE4, CysLT1 ili CysLT2, npr., montelukast ili zafirlukast; antagonist histaminskog receptora, kao što je histaminski tip 1 receptor antagonist ili histaminski tip 2 receptor antagonist, npr., loratidin, feksofenadin, desloratidin, levocetirizin, metapirilen ili cetirizin; α1-adrenoceptor agonist ili α2-adrenoceptor agonist, npr., fenilefrin, metoksamin, oksimetazolin ili metilnorefrin; muskarinski M3 receptor antagonist, npr. tiotropium ili ipratropium; dvostruki muskarinski M3 receptor antagonist/β2 agonist; PDE inhibitor, kao što je PDE3 inhibitor, PDE4 inhibitor ili PDE5 inhibitor, npr., teofilin, sildenafil, vardenafil, tadalafil, ibudilast, cilomilast ili roflumilast; natrijum hromoglikat ili natrijum nedokromil; inhibitor ciklooksigenaze (COKS), kao što je ne-selektivni inhibitor (npr., aspirin ili ibuprofen) ili selektivni inhibitor (npr. celekoksib ili valdekoksib); glukokortikosteroid, npr., flutikazon, mometazon, deksametazon, prednizolon, budezonid, ciklezonid ili beklametazon; anti-inflamatorno monoklonsko antitelo, npr., infliksimab, adalimumab, tanezumab, ranibizumab, bevacizumab ili mepolizumab; β2 agonist, npr., salmeterol, albuterol, salbutamol, fenoterol ili formoterol, naročito β2 agonist sa dugotrajnim dejstvom; intigrin antagonist, npr., natalizumab; inhibitor adhezionog molekula, kao što je VLA-4 antagonist; kinin B1 ili B2 receptor antagonist; imunosupresivno sredstvo, kao što je inhibitor IgE puta (npr., omalizumab) ili ciklosporin; inhibitor matriks metaloproteaze (MMP), kao što je inhibitor MMP-9 ili MMP-12; tahikinin NK1, NK2 ili NK3 receptor antagonist; inhibitor proteaze, kao što je inhibitor elastaze, himaze ili kateopsin G; adenozin A2a receptor agonist; adenozin A2b receptor antagonist; inhibitor urokinaze; dopamin receptor agonist (npr., ropinirol), naročito dopamin D2 receptor agonist (npr., bromokriptin); modulator NFκB puta, kao što je IKK inhibitor; dodatni modulator signalnog puta citokina kao što je inhibitor JAK kinaze, syk kinaze, p38 kinaze, SFK-1 kinaze, Rho kinaze, EGF-R ili MK-2; mukolitik, mukokinetik ili anti-tusivno sredstvo; antibiotik; antivirusno sredstvo; vakcina; hemokin; blokator epitelnog natrijumskog kanala (ENaC) ili

2

inhibitor epitelnog natrijumskog kanala (ENaC); agonist nukleotidnog receptora, kao što je P2Y2 agonist; tromboksan inhibitor; niacin; inhibitor 5-lipoksigenaze (5-LO), npr., Zileuton; adhezioni faktor, kao što je VLAM, ICAM ili ELAM; CRT2 receptor (DP2) antagonist; prostaglandin D2 receptor (DP1) antagonist; inhibitor hematopoetske sintaze prostaglandina D2 (HPGDS); interferon-β; rastvorljivi humani TNF receptor, npr., Etanercept; HDAC inhibitor; inhibitor fosfoinozitotid 3-kinaze gama (PI3Kγ); fosfoinozitid 3-kinaza delta (PI3Kδ) inhibitor; CKSCR-1 ili CKSCR-2 receptor antagonist; IRAK-4 inhibitor; i, TLR-4 ili TLR-9 inhibitor, uključujući farmaceutski prihvatljive soli specifično navedenih jedinjenja i farmaceutski prihvatljive solvate pomenutih specifično navedenih jedinjenja i soli.

[0065] Shodno tome, takođe su opisani postupci za lečenje ili prevenciju bolesti, stanja ili poremećaja povezanog sa JAK kod subjekta, kao što je čovek ili sisar koji nije čovek, koji sadrže primenu efikasne količine jednog ili više jedinjenja koja su ovde opisana na subjekta. Pogodni subjekti koji mogu biti lečeni obuhvataju domaće ili divlje životinje, prateće životinje, kao što su psi, mačke, konji i slično; stoka uključujući, krave i druge preživare, svinje, živinu, zečeve i slično; primate, na primer majmune, kao što su rezus majmuni i makaki (takođe poznati kao majmuni koji se hrane krabama ili dugorepi) majmuni, marmozeti, tamarini, šimpanze, makaki i slično; i glodare, kao što su pacovi, miševi, gerbili, zamorci i slično. U jednom primeru izvođenja, jedinjenje je primenjeno u farmaceutski prihvatljivom obliku, izborno u farmaceutski prihvatljivom nosaču.

[0066] Stanja kod kojih je razmatrano selektivno ciljno delovanje JAK puta ili modulacija JAK kinaza, naročito TYK2, su razmatrana kao terapeutski efikasna i obuhvataju, pored ostalih, artritis, astmu, autoimune bolesti, kancere ili tumore, dijabetes, određene bolesti oka, poremećaje ili stanja, inflamaciju, intestinalne inflamacije, alergije ili stanja, neurodegenerativne bolesti, psorijazu i odbacivanje transplanta. Stanja koja mogu imati korist od selektivne inhibicije TYK2 su razmatrana detaljnije u daljem tekstu.

[0067] Prema tome, jedinjenje formule I ili Ia-f ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i solvati, i njihove farmaceutski prihvatljive kompozicije mogu biti korišćeni za lečenje različitih stanja ili bolesti kao što su sledeći: Artritis, uključujući reumatoidni artritis, juvenilni artritis i psorijazni artritis; Autoimune, na primer Hashimoto-ov tiroiditis, autoimuna hemolitička anemija, autoimuni atrofični gastritis perniciozne anemije, autoimuni encefalomijelitis, autoimuni orhitis, Goodpasture-ova bolest, autoimuna trombocitopenija, simpatička oftalmija, mijastenija gravis, Graves-ova bolest, primarna bilijarna ciroza, autoimuni hepatitis, primarni sklerotizujući holangitis, hronični agresivni hepatitis, nealkoholna bolest masne jetre, nealkoholni steatohepatitis, ulcerozni kolitis i membranozna glomerulopatija, sistemski lupus eritematozis, reumatoidni artritis, psorijazni artritis, Sjogrenov sindrom, Reiter-ov sindrom, polimiozitis, dermatomiozitis, interferonopatije tipa I uključujući Aicardi-Goutières sindrom i druge monogenske bolesti prekomerne ekspresije interferona tipa I, sistemska skleroza, poliarteritis nodoza, multipla skleroza, relapsirajuća remitujuća mutipla skleroza, sekundarna progresivna multipla skleroza i bulozni pemfigoid, i dodatne autoimune bolesti, koje mogu biti na bazi O-ćelija (humoralni) ili na bazi T-ćelija, uključujući Cogan-ov sindrom, ankilozni spondilitis, Wegener-ov granulomatozis, autoimuna alopecija, dijabetes tipa I ili juvenilni, ili tiroiditis; Kanceri ili tumori, uključujući kancer alimentarnog/gastrointestinalnog trakta, kancer debelog creva, kancer jetre, kancer kože uključujući tumor mastocita i karcinom skvamoznih ćelija, kancer dojke i mlečne žlezde, kancer jajnika, kancer prostate, limfom, leukemiju, uključujući akutnu mijelogenu leukemiju i hroničnu mijelogenu leukemiju, kancer bubrega, kancer pluća, kancer mišića, kancer kosti, kancer bešike, kancer mozga, melanom uključujući oralni i metastatski melanom, Kaposi-ev sarkom, mijelomi uključujući multipli mijelom, mijeloproliferativne poremećaje, proliferativnu dijabetičku retinopatiju ili poremećaji povezani sa angiogenezom uključujući solidne tumore; Dijabetes, uključujući dijabetes tipa I ili komplikacije od dijabetesa; Bolesti, poremećaji ili stanja oka, uključujući autoimune bolesti oka, keratokonjuktivitis, prolećni konjuktivitis, uveitis uključujući uveitis povezan sa Behcet-ovom bolešću i uveitis indukovan sočivom, keratitis, herpetički keratitis, konusni keratitis, kornealnu epitelijalnu distrofiju, keratoleukom, okularni pemfigus, Mooren-ov ulcer, skleritis, Grave-ovu oftalmopatiju, Vogt-Koyanagi-Harada sindrom, keratokonjuktivitis sika (suvo oko), fliktenul, iridociklitis, sarkoidozu, endokrinu oftalmopatiju, simpatički oftalmus, alergijski konjuktivitis, ili okularnu neovaskularizaciju; Crevne inflamacije, uključujući Crohn-ovu bolest, ulcerozni kolitis, inflamatornu bolest creva, celijačne bolesti, proktitis, eozinofilni gastroenteritis ili mastocitozu; Neurodegenerativne bolesti uključujući motornu neuronsku bolest, Alzheimerovu bolest, Parkinson-ovu bolest, amiotrofičnu lateralnu sklerozu, Huntington-ovu bolest, cerebralnu ishemiju ili neurodegenerativnu bolest uzrokovanu traumatskom povredom, udar, neurotoksičnost glutamata ili hipoksiju; ishemičnu/reperfuzionu povredu kod šloga, miokardijalnu ishemiju, ishemiju bubrega, srčane napade, srčanu hipertrofiju, aterosklerozu i arteriosklerozu, hipoksiju organa ili agregaciju trombocita; Bolesti, stanja ili poremećaji kože uključujući atopijski dermatitis, ekcem, psorijazu, sklerodermu, pruritus ili druga pruritička stanja, vitiligo, alopeciju; Alergijske reakcije uključujući alergijski dermatitis kod sisara (uključujući alergijske bolesti konja kao što je preosetljivost na ujed), letnji ekcem, sladak svrab kod konja, bolest sličnu astmi kod konja, inflamatornu bolest disajnih puteva, rekurentnu opstrukciju disajnih puteva, hiper-responsivnost disajnih puteva ili hroničnu opstruktivnu bolest pluća; Astma i druge opstruktivne bolesti disajnih puteva, uključujući hroničnu ili inveteratnu astmu, kasnu astmu, bronhitis, bronhijalnu astmu, alergijsku astmu, intrinzičnu astmu, ekstrinzičnu astmu, ili astmu od prašine; Odbacivanje transplanta, uključujući odbacivanje transplanta ostrvca pankreasa, odbacivanje transplanta koštane srži, bolest grafta protiv domaćina, odbacivanje transplantiranog organa i ćelije kao što je koštana srž, hrskavica, rožnjača, srce, intervertebralni disk, ostrvce, bubreg, ud, jetra, pluća, mišić, mioblast, nerv, pankreas, koža, tanko crevo ili traheja, ili kseno-transplantaciju.

Hemijska sinteza

[0068] Stručnjaku će biti jasno da eksperimentalni uslovi dati na sledećim šemama su ilustrativni za pogodne uslove za izvođenje prikazanih transformacija, i može biti neophodno ili poželjno varirati tačne uslove upotrebljene za pripremu jedinjenja formule (I). Dodatno će se shvatiti da može biti neophodno ili poželjno izvesti transformacije različitim redosledom od onoga koji je opisan u šemama, ili da se modifikuju jedna ili više transformacija, da bi se obezbedilo željeno jedinjenje pronalaska.

[0069] Svi derivati formule (I) mogu se pripremiti sa procedurama opisanim u generalnim postupcima prikazanim u nastavku ili sa njihovom rutinskom modifikacijom. Predmetni pronalazak takođe obuhvata bilo koji ili više od ovih postupaka za pripremu derivata formule (I), dodatno bilo kojim novim intermedijerima koji su tu korišćeni. Stručnjak će shvatiti da sledeće reakcije se mogu zagrevati termalno ili mikrotalasnim zračenjem.

[0070] Dodatno će se shvatiti da može biti neophodno ili poželjno izvesti transformacije različitim redosledom od onog opisanog u šemama, ili modifikovati jednu ili više od transformacija, da bi se odredilo željeno jedinjenje pronalaska.

[0071] Putevi u nastavku, uključujući one pomenute u Primerima i Pripremama, ilustruju postupke sinteze jedinjenja formule (I). Stručnjak će shvatiti da jedinjenja prema pronalasku, i njihovi intermedijeri, mogu biti napravljeni sa postupcima različitim u odnosu na one ovde specifično opisane, na primer sa prilagođavanjem postupaka opisanih ovde, na primer sa postupcima poznatim u tehnici. Pogodna uputstva za sintezu, interkonverzije funkcionalnih grupa, upotrebu zaštitnih grupa, itd., su na primer: "Comprehensive Organic Transformations" od RC Larock, VCH Publishers Inc. (1989); Advanced Organic Chemistry" od J. March, Wiley Interscience (1985); "Designing Organic Syntesis" od S Warren, Wiley Interscience (1978); "Organic Syntesis – The Disconnection Approach" od S Warren, Wiley Interscience

2

(1982); "Guidebook to Organic Syntesis" od RK Mackie i DM Smit, Longman (1982); "Protective Groups u Organic Syntesis" od TW Greene i PGM Wuts, John Wiley i Sons, Inc. (1999); i "Protecting Groups" sa PJ, Kocienski, Georg Tieme Verlag (1994); i bilo koje ažurirane verzije pomenutih standardnih radova.

[0072] Dodatno, stručnjak će shvatiti da može biti neophodno ili poželjno na bilo kom stadijumu sinteze jedinjenja prema pronalasku da se zaštiti jedna ili više senzitivnih grupa, da bi se sprečile neželjene sporedne reakcije. Naročito, može biti neophodno ili poželjno zaštititi amino ili karboksilne grupe. Zaštitne grupe korišćene u pripremi jedinjenja prema pronalasku mogu biti korišćene na konvencionalan način. Videti, na primer, one opisane u ’Greene’s Protective Groups u Organic Syntesis’ od Teodora W Greene i Peter G M Wuts, third edition, (John Wiley i Sons, 1999), naročito poglavlje 7 ("Protection for the Amino Group") i 5 ("Protection for the Carboxyl Group"), koje takođe opisuje postupke za uklanjanje takvih grupa.

[0073] U opštim sintetičkim postupcima u nastavku, ukoliko nije drugačije naznačeno, supstituenti su kao što je prethodno definisano u odnosu na jedinjenja formule (I) prethodno.

[0074] Gde su dati odnosi rastvarača, odnosi su zapreminski.

[0075] Jedinjenja pronalasku mogu se pripremiti sa bilo kojim postupkom poznatim u tehnici za pripremu jedinjenja analogne strukture. Naročito, jedinjenja prema pronalasku mogu se pripremiti sa procedurama opisanim u odnosu na Šeme koje slede, ili sa specifičnim postupcima u Primerima, ili sa postupcima sličnim sa bilo kojim of njih.

[0076] Stručnjak će shvatiti da eksperimentalni uslovi dati u šemama koje slede su ilustrativni u odnosu na pogodne uslove za izvođenje prikazanih transformacija, i da može biti neophodno ili poželjno varirati tačne uslove upotrebljene za pripremu jedinjenja formule (I).

[0077] Svi derivati formule (I) mogu se pripremiti sa procedurama opisanim u generalnim postupcima predstavljenim u nastavku ili sa njihovom rutinskom modifikacijom. Predmetni pronalazak takođe obuhvata bilo koji ili više od ovih postupaka za pripremu derivata formule (I), dodatno bilo kojim novim intermedijerima koji su tu korišćeni. Stručnjak će shvatiti da sledeće reakcije mogu biti zagrevane termalno ili mikrotalasnim zračenjem.

[0078] Dodatno će se shvatiti da može biti neophodno ili poželjno izvesti transformacije različitim redosledom od onog opisanog u šemama, ili modifikovati jednu ili više od transformacija, da bi se obezbedilo željeno jedinjenje pronalaska. Šeme su reprezentativne u odnosu na postupke korisne u sintezi jedinjenja prema predmetnom pronalasku. One ne ograničavaju obim pronalaska ni na koji način.

[0079] Prema prvom postupku, jedinjenja formule I mogu se pripremiti od jedinjenja formula (A), (B), (C) i (D), kao što je ilustrovano na Šemi 1.

Šema 1

Na šemi 1, jedinjenje Formule Bi (gde Y=Hal) je konvertovano u jedinjenje formule Bii (Y=B(OR*)2) tretmanom sa pogodnim boratom kao što je B2(Pin)2, u prisustvu pogodne baze, kao što je K2CO3, i pogodnog katalizatora, kao što je Pd(dppf)Cl2u pogodnom rastvaraču, kao što je dioksan. Stručnjak takođe zna da se mogu koristiti alternativne strategije organometalnog kuplovanja koje uključuju alternativne kombinacije kuplujućih partnera, metala i rastvarača. Jedinjenje Formule Bii je pripremljeno i izolovano kao što je prethodno opisano ili pripremljeno u situ bez izolacije sekvencijalnom strategijom unakrsnog kuplovanja koja je dobro poznata stručnjaku. Stoga, jedinjenje formule Bii je unakrsno kuplovano sa jedinjenjem formule A u prisustvu pogodnog katalizatora, kao što je Pd(dppf)Cl2, sa pogodnom bazom, kao što je K2CO3u pogodnom rastvaraču kao što je dioksan na pogodnoj temperaturi od sobne temperature refluksa. Rezultujuće jedinjenje Formule C je unakrsno kuplovano sa jedinjenjem Formule D koje sadrži pogodnu odlazeću grupu, kao što je Bu3Sn

2

ili (Pin)2B, sa pogodnim metalnim katalizatorom, kao što je Pd(PF3)4, u pogodnom rastvaraču, kao što je MeCN na sobnoj ili povišenim temperaturama.

[0080] Prema drugom postupku jedinjenje Formule I se takođe može pripremiti sa reakcijom organometalnog unakrsnog kuplovanja jedinjenja Formule F sa jedinjenjem Formule B, Šema 2.

Šema 2

Jedinjenje Formule Bi (gde Y=Hal) je konvertovano u jedinjenje formule Bii (Y=B(OR*)2) sa tretmanom sa pogodnim boratom kao što je B(Pin)2, u prisustvu pogodne baze, kao što je K2CO3, i pogodnog katalizatora, kao što je Pd(dppf)Cl2u pogodnom rastvaraču, kao što je dioksan. Stručnjak takođe zna da se mogu koristiti alternativne strategije organometalnog kuplovanja koje uključuju alternativne kombinacije kuplujućih partnera, metala i rastvarača. Jedinjenje Formule Bii je pripremljeno i izolovano kao što je prethodno opisano ili pripremljeno u situ bez izolacije sekvencijalnom strategijom unakrsnog kuplovanja koja je dobro poznata stručnjaku. Stoga, jedinjenje formule Bii je unakrsno kuplovano sa jedinjenjem formule F u prisustvu pogodnog katalizatora, kao što je Pd(dppf)Cl2, sa pogodnom bazom, kao što je K2CO3u pogodnom rastvaraču kao što je dioksan na pogodnoj temperaturi od sobne temperature refluksa.

[0081] Prema trećem postupku, jedinjenje Formule I je pripremljeno alkilacijom, acilacijom, sulfonilacijom itd., jedinjenja formule G, Šema 3.

Alkilacija i acilacija slobodnog NH

2

(G) (I)

Šema 3

Prema četvrtom procesu, jedinjenje Formule I je pripremljeno sa Michael adicijom jedinjenja formule H sa jedinjenjem formule J u prisustvu pogodne ne-nukleofilne baze, kao što je DBU u pogodnom rastvaraču, kao što je MeCN na pogodnoj temperaturi, šema 4.

(H) (J) (I)

Šema 4

Šema 5 ilustruje postupak za pripremu jedinjenja Formule F. Diestar Formule Ei je tretiran sa alkilujućim sredstvom Formule K i bazom kao što je K2CO3u pogodnom rastvaraču kao što je MeCN. Rezultujući diestar Formule Eii je zatim ciklizovan u prisustvu NH4OAc u pogodnom rastvaraču kao što je EtOH na povišenoj temperaturi da bi se dobilo biciklično heterociklično jedinjenje Formule Eiii. Jedinjenje Formule Eiii je hidrolizovano u jedinjenje Formule Eiv sa pogodnom bazom, kao što je LiOH, u pogodnom rastvaraču kao što je MeOH. Rezultujuća karboksilna kiselina Formule Eiv je termalno dekarboksilovana u pogodnom rastvaraču, kao što je sulfolan na povišenoj temperaturi kao što je 280°C. Rezultujuće jedinjenje Formule Ev je hlorovano tretmanom sa pogodnim reagensom, kao što je POCl3, u

2

pogodnom rastvaraču, kao što je MeCN, na pogodnoj temperaturi kao što je refluks da bi se pripremila jedinjenja Formule F.

Šema 5

[0082] Sledeće šeme i opisi obezbeđuju generalne detalje u odnosu na pripremu jedinjenja prema pronalasku. Jedinjenja prema pronalasku mogu biti pripremljena bilo kojim postupkom poznatim u tehnici za pripremu jedinjenja analogne strukture. Naročito, jedinjenja prema pronalasku mogu se pripremiti postupcima opisanim u odnosu na šeme koje slede, ili specifične postupke opisane u primerima, ili postupcima koji su slični bilo kom od njih.

[0083] Stručnjak će shvatiti da eksperimentalni uslovi dati u šemama koje slede su ilustrativni u odnosu na pogodne uslove za izvođenje prikazanih transformacija, i da može biti neophodno ili poželjno varirati tačne upotrebljene uslove za pripremu jedinjenja formule (I).

[0084] Dodatno, stručnjak će shvatiti da može biti neophodno ili poželjno na bilo kom stadijumu sinteze jedinjenja prema pronalasku zaštiti jednu ili više senzitivnih grupa, da bi se sprečile neželjene sporedne reakcije. Naročito, može biti neophodno ili poželjno zaštititi amino ili karboksilnu grupu. Zaštitne grupe korišćene u pripremi jedinjenja prema pronalasku mogu se koristiti na konvencionalni način. Videti, na primer, one opisane u Protective Groups u Organic Syntesis od Teodora W. Greene i Peter G. M. Wuts, 3rd edition, (John Wiley i

2

Sons, 1999), naročito poglavlje 7 ("Protection for the Amino Group") i 5 ("Protection for the Carboxyl Group"), koje takođe opisuje postupke za uklanjanje takvih grupa.

[0085] Svi derivati formule I i la-f mogu se pripremiti postupcima opisanim u opštim postupcima prikazanim u nastavku ili sa njihovim rutinskim modifikacijama. Predmetni pronalazak takođe obuhvata bilo koji ili više od ovih postupaka za pripremanje derivata formule (I), dodatno bilo kojim novim intermedijerima tu korišćenim. Stručnjak će shvatiti da sledeće reakcije mogu biti zagrevane termalno ili mikrotalasnim zračenjem.

[0086] U izvođenju sinteze jedinjenja prema pronalasku, stručnjak iz date oblasti tehnike će prepoznati potrebu za uzorkovanjem i analiziranjem reakcionih smeša pre obrade u cilju praćenja napredovanja reakcija i odlučivanja o tome da li bi reakciju trebalo nastaviti ili da li je spremna za obradu za dobijanje željenog proizvoda. Uobičajeni postupci za analiziranje reakcionih smeša obuhvataju hromatografiju na tankom sloju (TLC), tečnu hromatografiju/masenu spektroskopiju (LCMS), i nuklearnu magnetnu rezonancu (NMR).

[0087] Stručnjak iz date oblasti tehnike će takođe prepoznati da jedinjenja prema pronalasku mogu biti pripremljena kao smeše diastereomera ili geometrijskih izomera (npr., cis i trans supstitucija na prstenu cikloalkana). Ovi izomeri mogu biti razdvojeni pomoću standardnih hromatografskih tehnika, kao što su hromatografija na normalnim fazama na silika gelu, reverzno-fazna preparativna tečna hromatografija pod visokim pritiskom ili superkritična tečna hromatografija. Stručnjak iz date oblasti tehnike će takođe prepoznati da su izvesna jedinjenja prema pronalasku hiralna i na taj način mogu biti pripremljena kao racemske ili neracemske smeše enantiomera. Nekoliko postupaka je dostupno i dobro poznato stručnjaku iz date oblasti tehnike za razdvajanje enantiomera. Poželjan postupak za rutinsko razdvajanje enantiomera je superkritična tečna hromatografija upotrebom hiralne stacionarne faze.

EKSPERIMENTALNI DEO

[0088] Osim gde je drugačije navedeno, reakcije su izvođene pod atmosferom azota. Hromatografija na silika gelu je izvedena upotrebom silika gela veličine okaca 250-400 upotrebom azota pod pritiskom (~10-15 psi) da bi se rastvarač proveo kroz kolonu ("flash“ hromatografija). Tamo gde je naznačeno, rastvori i reakcione smeše su koncentrovani pomoću rotacionog isparavanja pod vakuumom.

[0089] Nomenklatura u ovom patentnu je napisana kao što je opisano sa IUPAC (International Union of Pure and Applied Chemistry i korišćenjem ChemBioDraw Ultra 13.0, Perkin Elmer za stvaranje naziva.

2

[0090] Sledeće neograničavajuće Pripreme i Primeri ilustruju pripremu jedinjenja i soli prema predmetnom pronalasku. U Primerima i Pripremama koji su date u nastavku, i u prethodno pomenutim Šemama, može se pozivati na sledeće skraćenice, definicije i analitičke procedure. Druge skraćenice uobičajene u tehnici se takođe mogu koristiti. Standardna IUPAC nomenklatura je korišćena.

AcOH je sirćetna kiselina;

aq. je vodeni;

Boc je terc-butoksikarbonil;

br je širok;

fiziološkim rastvorom je zasićeni rastvor natrijum hlorida u vodi;

t-Bu je terc-butil;

n-BuLi je n-butillitijum;

°C je stepeni Celzijusa;

Cbz je karbobenziloksi;

CDCl3je deutero-hloroform;

CDI je 1,1’-karbonildiimidazol;

konc. je koncentrovano (u odnosu na reagense);

Cs2CO3je cezijum karbonat;

δ je hemijsko pomeranje;

d je dublet;

DBU je 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en;

DCM je dihlorometan;

DHP je 3,4-dihidro-2H-piran;

DIPEA je N,N-diizopropiletilamin;

DMAP je 4-dimetilaminopiridin;

DMF je N,N-dimetilformamid;

DMSO je dimetil sulfoksid;

Et2O je dietil eter;

EtOAc je etil acetat;

EtOH je etanol;

(EtO)2P(O)CH2CN je dietil (cijanometil)fosfonat;

g je gram;

GCMS je gasna hromatografija masena spektrometrija HCI je hlorovodonična kiselina;

HCO2H je mravlja kiselina;

HPLC je tečna hromatografija visoke performanse; h je časovi;

H2SO4je sumporna kiselina;

K2CO3je kalijum karbonat;

KH2PO4je kalijum dihidrogen fosfat

K2HPO4je kalijum monohidrogen fosfat;

K3PO4je kalijum fosfat (trobazni);

KOAc je kalijum acetat

L je litar;

LCMS je tečna hromatografija masena spektrometrija; LiBr je litijum bromid;

LiOH je litijum hidroksid;

m je multiplet;

M je molarno;

MeCN je acetonitril;

MeOH je metanol;

mg je miligram;

MgSO4je magnezijum sulfat;

MHz je megaHerc;

min je minuti;

mL je mililitar;

mmol je milimol;

mol je mol;

MS m/z je jonski pik masenog spektra;

MTBE je metil t-butil etar

NaBH(OAc)3je natrijum triacetoksiborohidrid;

Na2CO3je natrijum karbonat;

NaHCO3je natrijum hidrogen karbonat;

NaH2PO4je natrijum dihidrogen fosfat;

Na2HPO4je natrijum monohidrogen fosfat;

NaI je natrijum jodid;

1 NaIO4je natrijum perjodat;

NaOAc je natrijum acetat;

NaOCl je natrijum hipohlorit;

NaOH je natrijum hidroksid;

NH3je amonijak;

NH4Cl je amonijum hlorid;

NH4OH je amonijum hidroksid;

NH4OAc je amonijum acetat;

NMR je nuklearna magnetna rezonanca;

OsO4je osmijum tetroksid;

Pd/C je paladijum na ugljeniku;

Pd(dppf)Cl2je 1,1-bis(difenilfosfino)ferocen paladijum(II)dihlorid (CAS: 72287-26-4);

Pd(dppf)Cl2.DCM je 1,1-bis(difenilfosfino)ferocen paladijum(II)dihlorid; kompleks sa dihlorometanom (CAS: 95464-05-4);

Pd(OAc)2je paladijum acetat;

Pd(PF3)4je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum;

PMB-Cl je (4-metoksi)benzil hlorid;

POCl3je fosfor(V) oksihlorid;

ppm je delova na milion;

psi je funti po kvadratnom inču;

PTSA je para-toluensulfonska kiselina

PyHBr3je piridin hidrobromid perbromid

PyHCl je piridin hidrohlorid

q je kvartet;

Rt je retenciono vreme;

Rh2(OAc)4je rodijum (II) acetat dimer;

RuCl3hidrat je rutenijum(II) hlorid hidrat;

s je singlet;

SOCl2je tionil hlorid;

t je triplet;

TBAB je tetrabutilamonijum bromid

TEA je trietilamin;

TFA je trifluorosirćetna kiselina;

TF je tetrahidrofuran;

2

TMSCl je horotrimetilsilan;

µL je mikrolitar;

µmol je mikromol

KSFos Pd G2 je hloro(2-dicikloheksilfosfino-2’,4’,6’-triizopropil-1,1’-bifenil)[2-(2’-amino-1,1’-bifenil)]paladijum(II); CAS 1310584-14-5.

[0091] Spektri<1>H nuklearne magnetne rezonance (NMR) su u svim slučajevima bili konzistentni sa pretpostavljenim strukturama. Karakteristična hemijska pomeranja (δ) su dat a u delovima na milion nishodno od tetrametilsilana korišćenjem konvencionalnih skraćenica za obeležavanje glavnih pikova: npr. s, singlet; d, dublet; t, triplet; q, kvartet; m, multiplet; br, široki. Sledeće skraćenice su korišćene za uobičajene NMR rastvarače: CD3CN, deuteroacetonitril; CDCl3, deuterohloroform; DMSO-d6, deuterodimetilsulfoksid; i CD3OD, deuterometanol. Gde je odgovarajuće, tautomeri mogu biti zabeleženi unutar NMR podataka; i neki izmenjivi protoni ne moraju biti vidljivi.

[0092] Maseni spektri su snimljeni korišćenjem elektronske udarne jonizacije (EI), elektrosprej jonizacije (ESI) ili hemijske jonizacije na atmosferskom pritisku (APCI). Uočeni joni su zabeleženi kao MS m/z i mogu biti pozitivni joni jedinjenja [M]+, jedinjenja plus proton [MH]+, ili jedinjenja plus natrijum jon [MNa]+. U nekim slučajevima jedini uočeni joni mogu biti joni fragmenta zabeleženi kao [MH-(izgubljeni fragment)]+. Gde je relevantno, zabeleženi joni su dodeljeni izotopima hlora (<35>Cl i/ili<37>Cl), broma (<79>Br i/ili<81>Br) i kalaja (<120>Sn).

[0093] Gde je TLC, hromatografija, ili HPLC korišćena za prečišćavanje jedinjenja, stručnjak može izabrati bilo koji odgovarajući rastvarač ili kombinaciju rastvarača za prečišćavanje željenog jedinjenja. Hromatografska razdvajanja (isključujući HPLC) izvedena su korišćenjem silika gel adsorbenta ukoliko nije drugačije naznačeno.

[0094] Sve reakcije su izvedene korišćenjem konstantnog mešanja pod atmosferom gasovitog azota ili argona ukoliko nije drugačije naznačeno. U nekim slučajevima, reakcije su prečišćene sa gasovitim azotom ili argonom pre početka reakcije. U ovim slučajevima, gasoviti azot ili argon barbotirani su kroz tečnu fazu smeše u približnom naznačenom vremenu. Korišćeni rastvarači bili su komercijalnih anhidrovanih gradusa. Svi početni materijali su komercijalno dostupni proizvodi. U nekim slučajevima, Chemical Abstracts Service (CAS) identification number je obezbeđen radi jasnoće. U nekim slučajevima, početni materijali su pripremljeni u skladu sa procedurama objavljenim u literaturi što je naznačeno sa asteriskom (*). Stručnjaku će biti jasno da je reč "koncentrovan" kao što je ovde korišćeno generalno donosi na izvođenje uparavanja rastvarača pod sniženim pritiskom, tipično postignuta sa upotrebom rotacionog uparivača.

GCMS uslovi

[0095] Kolona: 12m x 0.2mm, HP-1 Metil Siloksan, 0.33 µm film, 1.0 ml/min Protok kolone. Postupci: 7.6 min: Inicijalna temp peći 105 °C; 0.1 min zadržavanje; 30 °C/min rampa do 300 °C završetak na 7.6 min; ili 7.6 min: Inicijalna temp peći 60 °C; 0.1 min zadržavanje; 40 °C/min rampa do 320 °C završetak na 7.6 min; ili 5.1 min: Inicijalna temp peći 40 °C; 0.1min zadržavanje; 30 °C/min rampa do 150 °C završetak na 5.1min. GC Parametri ulaznog ventila: prednji ulazni ventil, split 30:1, He, 8 psi pritisak, 250 °C injektor, 33.9 ml/min ukupan protok. MSD Tune: 230 °C Izvorna temp, 150 °C kvad temp, 280 °C Auks2 temp injekciona zapremina: 1.0 µL Sistemske komponente: Agilent 5890 GC peć sa Agilent 5973 maseno selektivnim detektorom

LCMS uslovi

[0096] Kiselina: Waters Acquity HSS T3, 2.1 mm x 50 mm, C18, 1.7 mm; temperatura kolone 60 °C Baza: Waters Acquity UPLC BEH, 2.1 mm x 50 mm, C18, 1.8 µm; Temperatura kolone 60 °C Pokretna faza: A: 0.1% mravlja kiselina u vodi (zapr/zapr); Pokretna faza B: 0.1% mravlja kiselina u acetonitrilu (zapr/zapr). Pokretna faza A: 0.1% amonijak u vodi (zapr/zapr); Pokretna faza B: 0.1% amonijak u acetonitrilu (zapr/zapr) Profili gradijenta: 1.5 min izvođenje: Inicijalni uslovi: A-95%:B-5%; zadržavanje na početnom nivou od 0.0-0.1 min; linerana rampa do A- 5%:B-95% tokom 0.1-1.0 min; zadržavanje na A-5%:B-95% od 1.0-1.1min; vraćanje na inicijalne uslove 1.1-1.5 min

Postupci prečišćavanja (PM)

[0097] Jedinjenja iz Primera su prečišćena u skladu sa jednim od postupaka prečišćavanja (PM) koji su dati u nastavku ukoliko nije drugačije naznačeno:

Postupak prečišćavanja A: Preparativna HPLC korišćenjem [Agella venusil ASB C18150 x 21.2 mm x 5 µm, od 16% MeCN u vodi (0.225% mravlja kiselina) do 36% MeCN u vodi (0.225% mravlja kiselina)]

4

Postupak prečišćavanja B: Preparativna HPLC korišćenjem [Fenomenex Gemini C18250 x 21.2 mm x 8um ili 150 mm x 25 mm x 5 µm; od 16-55% MeCN u vodi (0.1% amonijak) do 36-60% MeCN u vodi (0.1% amonijak)]

Postupak prečišćavanja C: [YMC -Actus Triart C18150 x 30mm, od 24% MeCN u vodi (0.1 % amonijak) do 44% MeCN u vodi (0.1 % amonijak)]

Postupak prečišćavanja D: Preparativna HPLC korišćenjem [Fenomeneks Gemini C18250 x 21.2mm x 8 µm, od 25% MeCN u vodi (amonijak f=10) to 45% MeCN u vodi (amonijak f=10)] praćeno sa hiralnom hromatografijom korišćenjem AS 250 x 25 mm I.D. 20 µM Kolone, sa superkritičnim CO2: EtOH ili IPA (0.05% vodeni rastvor amonijaka) 70:30 od 50-80 mL/min

Postupak prečišćavanja E: Preparativna HPLC korišćenjem [Fenomeneks Gemini C18 250 x 21.2mm x 8 µm, od 25% MeCN u vodi (0.225% amonijak) do 45% MeCN u vodi (0.225% amonijak) praćeno sa hiralnom hromatografijom korišćenjem AD 250 mm x 30 mm x 20 µm Kolona sa pokretnom fazom A: superkritični CO2i pokretna faza B MeOH sa 0.1% amonijak A:B 50:50 na 180 mL/min

Postupak prečišćavanja F: Hromatografija na koloni silika gela sa eluiranjem sa 100% DCM do 12% MeOH sa 1% NH4OH.

Postupak prečišćavanja G: Hromatografija na koloni silika gela sa eluiranjem sa 97:2:1 DCM:MeOH:NH3praćeno sa preparativnom HPLC.

Postupak prečišćavanja H: Preparativna HPLC korišćenjem kolone: Waters XBridge C18 19 mm x 100 mm, 5 µ; Pokretna faza A: 0.03% amonijum hidroksid u vodi (zapr/zapr); Pokretna faza B: 0.03% amonijum hidroksid u acetonitrilu (zapr/zapr); od 5-20% B do 40-100% B na 25 mL/min stopi protoka.

Postupak prečišćavanja I: Preparativna HPLC korišćenjem kolone: Waters Sunfire C1819 mm x100 mm, 5µ; Pokretna faza A: 0.05% TFA u vodi (zapr/zapr); Pokretna faza B: 0.05% TFA u acetonitrilu (zapr/zapr); od 20% B do 40% B na 6.75 minuta, deset do 100% B na 7 minuta na 30 mL/min stopi protoka.

Specifična rotacija

[0098] Specifične rotacije zasnovane su na jednačini [a] = (100·α)/(l·c) i zabeležene su kao brojevi bez jedinice gde koncentracija c je u g/100 mL i dužina puta I je u decimetrima.

Jedinice specifične rotacije, (deg·mL)/(g·dm), su implicitne i nisu uključene sa zabeleženom vrednošću.

Priprema 1

Etil 1-(cijanometil)-1H-pirazol-3-karboksilat

[0099]

i

Etil 1-(cijanometil)-1H-pirazol-5-karboksilat

[0100]

[0101] U suspenziju Cs2CO3(2100 g, 6.44 mol) u DMF (12 L) dodat je etil 1H-pirazol-3-karboksilat (750 g, 5.36 mol), a zatim 2-hloroacetonitril (450 g, 5.96 mol) i smeša je mešana na oko 25°C u trajanju od oko 16 h. Reakcija je sipana u vodu (12 L) i ekstrahovana sa EtOAc (5 x 5L). Kombinovani ekstrakti EtOAc su isprani fiziološkim rastvorom (2 x 5L), sušeni (Na2SO4) i koncentrovani da bi se dobio ostatak koji je prečišćen hromatografijom da bi se dobio etil 1-(cijanometil)-1H-pirazol-3-karboksilat (398 g, 39%) kao žuto ulje i etil 1-(cijanometil)-1H-pirazol-5-karboksilat (680 g). Etil 1-(cijanometil)-1H-pirazol-5-karboksilat je rastvoren u MTBE (15 L) i ispran fiziološkim rastvorom (3 x 5 L), sušen (Na2SO4) i koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje kao žuto ulje (489 g, 51%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.49 (s, 1 H), 6.82 (s, 1 H), 5.45 (s, 2 H), 4.29 (q, 2 H), 1.29 (t, 3 H). LCMS m/z = 180.1 [MH]<+>

Priprema 2

Etil 1-(2-amino-2-oksoetil)-1H-pirazol-5-karboksilat

[0102]

[0103] dve identične reakcije su izvedene paralelno.

[0104] U rastvor etil 1-(cijanometil)-1H-pirazol-5-karboksilata (Priprema 1, 235.5 g, 1.32 mol) u TFA (1.2 L) dodata je konc. H2SO4(377 mL, 7.04 mol) na oko 25°C. Reakciona smeša je mešana na oko 25°C u trajanju od oko 16 h pre kombinovanja sa paralelnom reakcijom i koncentrovana da bi se uklonila većina TFA. Ostatak je sipan u ledenu-vodu (5 L) i ekstrahovan sa EtOAc (5 L). Vodena faza je dalje ekstrahovana sa EtOAc (10 x 5 L) i kombinovani EtOAc ekstrakti su isprani zasićenim vodenom rastvorom NaHCO3(2 x 10 L), sušeni (Na2SO4) i koncentrovani da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (477 g, 92%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.60 (s, 1 H), 6.93 (s, 1 H), 5.90 (br. s, 1 H), 5.71 (br. s, 1 H), 5.27 (s, 2 H), 4.35 (q, 2 H), 1.37 (t, 3 H). LCMS m/z = 198.2 [MH]<+>

Priprema 3

Pirazolo[1,5-a]pirazin-4,6(5H,7H)-dion

[0105]

[0106] U rastvor etil 1-(2-amino-2-oksoetil)-1H-pirazol-5-karboksilata (Priprema 2, 466 g, 2.17 mol) u EtOH (56 L) dodat je NaOtBu (498 g, 5.20 mol) u THF (4 L) na oko 25°C. Tokom dodavanja razvijena je bela suspenzija i smeša je zatim zagrevana do oko 70°C u trajanju od oko 16 h. Reakciona smeša je hlađena do oko 25°C i zakišeljena do oko pH 6 sa 12 M vodenim rastvorom HCI (500 mL), rezultujući u formiranju bele suspenzije. Smeša je koncentrovana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (pomešano sa natrijum hloridom) kao žuta čvrsta supstanca (783 g). Ovo je korišćeno bez dodatnog prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.82 (s, 1 H), 7.74 (s, 1 H), 6.97 (s, 1 H), 5.19 (s, 2 H). LCMS m/z = 152.1 [MH]<+>

Priprema 4

4,6-Dihloropirazolo[1,5-a]pirazin

[0107]

[0108] Tri identične reakcije su izvedene paralelno.

[0109] Pirazolo[1,5-a]pirazin-4,6(5H,7H)-dion (Priprema 3, 278 g, 1.14 mol) dodat je u POCl3(1.84 kg, 12 mol) na oko 25°C, a zatim PyHCl (131 g, 1.14 mol). Reakciona smeša je zagrevana na oko 120°C u trajanju od oko 16 h. Reakcije su hlađene do oko 25°C i koncentrovane da bi se uklonila većina POCl3. Svaki ostatak je razblažen sa EtOAc (2 L) i tri ekstrakta EtOAc su kombinovana i sipana u 1 M vodeni rastvor NaH2PO4(7.5 L) na oko 25°C i filtrirani kroz čep od Celite®. Filter kolač je ispran sa EtOAc (3 x 2 L) i svi filtrati su kombinovani i odvojeni od vodene faze. Vodena faza je ekstrahovana sa MTBE (10 L). Kombinovani ekstrakti EtOAc i MTBE su isprani fiziološkim rastvorom (2 x 5 L), sušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom i proizvod je triturisan petrol etrom (300 mL) i filtriran. Filter kolač je sušen da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (110 g, 22%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.42 (s, 1 H), 8.06 (s, 1 H), 6.93 (s, 1 H). LCMS m/z = 189.8 [MH]<+>(<37>Cl izotop)

Priprema 5

1-(1-Metil-1H-pirazol-4-il)etan-1-on

[0110]

[0111] Dve identične reakcije su izvedene paralelno.

[0112] U smešu 1-metilpirazola (750 g, 9.16 mol) i anhidrida sirćetne kiseline (1.7 kg, 16.67 mol) dodata je koncentrovana H2SO4(75 g, 0.75 mol) na oko 20°C. Reakciona smeša je zagrevana na oko 150°C u trajanju od oko 3 h. Posle hlađenja, dve smeše su spojene, sipane u ledenu-vodu (15 L), podešene do oko pH 10 sa 20% vodenim rastvorom NaOH i ekstrahovane sa DCM (4 x 10 L). Kombinovani ekstrakti DCM su sušeni (Na2SO4) i koncentrovani da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao braon ulje (1240 g, 72%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.86 (s, 1 H), 7.84 (s, 1 H), 3.92 (s, 3 H), 2.40 (s, 3 H). GCMS m/z = 109.0 [M-CH3]+

Priprema 6

2-Bromo-1-(1-metil-1H-pirazol-4-il)etan-1-on

[0113]

[0114] Dve identične reakcije su izvedene paralelno.

[0115] U rastvor 1-(1-metil-1H-pirazol-4-il)etan-1-ona (Priprema 5, 620 g, 5 mol) u DCM (12 L) i etanolu (3 L) dodat je PyHBr3(1.6 kg, 5 mol) na oko 15 °C. Smeša je mešana na oko 15°C u trajanju od oko 18 h. Dve reakcione smeše su kombinovane, ugašene vodom (10 L), odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa DCM (4 x 10 L). Kombinovani ekstrakti DCM su sušeni (Na2SO4) i koncentrovani da bi se uklonilo oko 69 L rastvarača. Ostatak je razblažen petrol etrom (5 L), mešan na oko 15°C u trajanju od oko 30 min i smeša je filtrirana. Talog je sušen da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (1.73 kg, 85%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.97 (s, 1 H), 7.91 (s, 1 H), 4.17 (s, 2 H), 3.93 (s, 3 H). LCMS m/z = 203.1 [MH]<+>(<79>Br izotop)

Priprema 7

Dietil 1-(2-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-2-oksoetil)-1H-pirazol-3,5-dikarboksilat

[0116]

[0117] Dve reakcije su izvedene paralelno.

[0118] U smešu 2-bromo-1-(1-metil-1H-pirazol-4-il)etan-1-ona (Priprema 6; 500 g, 2.46 mol) i dietil- 1H-pirazol-3,5-dikarboksilata (580 g, 2.73 mol) u DMF (8 L) dodat je Cs2CO3(1050 g, 3.23 mol) na oko 20°C. Posle oko 18 h, dve reakcione smeše su kombinovane, razblažene vodom (10 L) i ekstrahovane sa DCM (3 x 10 L). Kombinovani ekstrakti DCM su sušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (1.53 kg, 93%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.96 (s, 2 H), 7.46 (s, 1 H), 5.86 (s, 2 H), 4.45 (q, 2 H), 4.32 (q, 2 H), 3.99 (s, 3 H), 1.44 (t, 3 H), 1.36 (t, 3 H). LCMS m/z = 335.0 [MH]<+>

Priprema 8

Etil 4-hidroksi-6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-2-karboksilat

[0119]

4

[0120] Tri identične reakcije su izvedene paralelno.

[0121] U rastvor dietil 1-(2-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-2-oksoetil)-1H-pirazol-3,5-dikarboksilata (Priprema 7; 510 g, 1.52 mol) u etanolu (6 L) dodat je NH4OAc (352 g, 4.57 mol) na oko 20°C. Smeša je zagrevana u autoklavu na oko 130°C u trajanju od oko 24 h. Reakcione smeše su hlađene do oko 50°C i kombinovane i filtrirane. Talog je sušen da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1090 g, 83%) kao prljavo-bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.35 (br. s, 1 H), 8.31 (s, 1 H), 8.20 (s, 1 H), 8.05 (s, 1 H), 7.38 (s, 1 H), 4.34 (q, 2 H), 3.89 (s, 3 H), 1.33 (t, 3 H). LCMS m/z = 288.0 [MH]<+>

Priprema 9

4-Hidroksi-6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-2-karboksilna kiselina

[0122]

[0123] Dve identične reakcije su izvedene paralelno.

[0124] U suspenziju etil 4-hidroksi-6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-2-karboksilata (Priprema 8, 545 g, 1.9 mol) u MeOH (10 L) dodat je 1 M vodeni rastvor NaOH (5.75 L) na oko 20°C. Posle oko 30 min, suspenzija je postala bistar rastvor i mešanje je nastavljeno na oko 20°C u trajanju od oko 18 h. Reakcione smeše su podešene do oko pH 2 sa 12 M vodenim rastvorom HCl (650 mL), kombinovanei koncentrovane da bi se uklonila većina MeOH. Ostatak je filtriran i talog je sušen da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao prljavo-bela čvrsta supstanca (1040 g, 100%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 13.25 (br. s, 1 H), 11.67 (s, 1 H), 8.34 (s, 1 H), 8.16 (s, 1 H), 8.06 (s, 1 H), 7.32 (s, 1 H), 3.88 (s, 3 H). LCMS m/z = 260.0 [MH]<+>

Priprema 10

6-(1-Metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-ol

[0125]

[0126] Pet identičnih reakcija je izvedeno paralelno.

[0127] 4-Hidroksi-6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-2-karboksilna kiselina (Priprema 9, 85 g, 0.328 mol) dodata je u porcijama u prethodno zagrejani sulfolan (800 mL) na oko 280°C. Pet reakcionih smeša je mešano na oko 280°C u trajanju od oko 2 h, hlađeno do oko 25°C i mešano u trajanju od oko 18 h. Reakcione smeše su kombinovane i smeša je prečišćena hromatografijom eluiranjem sa petrol etrom-EtOAc (10:1 do 0:1), a zatim DCM:MeOH (10:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (490 g, 75%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.45 (s, 1 H), 8.28 (s, 1 H), 8.10 (s, 1 H), 8.04 (s, 1 H), 7.88 (s, 1 H), 6.99 (s, 1 H), 3.88 (s, 3 H). LCMS m/z = 216.0 [MH]<+>

Priprema 11

4-Hloro-6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin

[0128]

[0129] Dve identične reakcije su izvedene paralelno.

[0130] U suspenziju 6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-ola (Priprema 10, 307 g, 1.43 mol) u MeCN (7.5 L) dodat je POCl3(2006 g, 13 mol) na oko 25°C. Smeša je zagrevana na oko 85°C u trajanju od oko 48 h. Reakcione smeše su kombinovane i filtrirane. Talog je ispran sa EtOAc i sušen pod vakuumom. Sušeni talog je prečišćen hromatografijom da bi se dobila žuta čvrsta supstanca koja je rastvorena u DCM (15 L) i isprana sa 1 M vodenim rastvorom NaHCO3(5 L). DCM je koncentrovan da bi se uklonilo oko 13 L rastvarača i ostatak je razblažen sa MTBE (2 L) i petrol etrom (2 L). Smeša je filtrirana i talog je sušen da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (385 g, 58%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 9.22 (s, 1 H), 8.27 (s, 1 H), 8.21 (s, 1 H), 8.04 (s, 1 H), 7.02 (s, 1 H), 3.88 (s, 3 H). LCMS m/z = 233.8 [MH]<+>(<35>Cl izotop)

Priprema 12

1-(4-Metoksibenzil)-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina

[0131]

[0132] Deo 1: Tri identične reakcije su izvedene paralelno.

[0133] U mešani rastvor etil 1H-pirazol-4-karboksilata (16 g, 110 mmol) u MeCN (160 mL) dodat je PMBCl (85.8 g, 548 mmol) i K2CO3(23.7 g, 171 mmol) i smeša je zagrevana pod refluksom u trajanju od oko 18 h. Tri serije su hlađene, kombinovane i filtrirane. Filtrat je

4

koncentrovan da bi se dobio etil 1-(4-metoksibenzil)- 1H-pirazol-4-karboksilat kao žuto ulje koji je korišćen bez dodatnog prečišćavanja.

[0134] Deo 2: Tri identične reakcije su izvedene paralelno.

[0135] U mešani rastvor sirovog etil 1-(4-metoksibenzil)-1H-pirazol-4-karboksilata (Deo 1, 50.0 g, 96 mmol) u THF (150 mL) i MeOH (150 mL) dodat je rastvor LiOH (10 g, 238 mmol) u vodi (75 mL). Smeša je zagrevana na oko 60°C u trajanju od oko 18 h. Tri serije su kombinovane i isparavane do sušenja. Ostatak je razblažen vodom (800 mL) i MeOH (150 mL) i ispran sa EtOAc (2 x 500 mL). Ekstrakti EtOAc su odbačeni i vodeni rastvor je zakišeljen do oko pH 2 sa 6 M vodenim rastvorom HCI i ekstrahovan sa EtOAc (2 x 800 mL). Kombinovani ekstrakti EtOAc su isprani fiziološkim rastvorom (500 mL), sušeni (Na2SO4) i koncentrovani da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (33.0 g, 83% za dva koraka).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.34 (br. s, 1 H), 8.32 (s, 1 H), 7.79 (s, 1 H), 7.23 (m, 2 H), 6.89 (m, 2 H), 5.26 (s, 2 H), 3.72 (s, 3 H).

Priprema 13

1-(4-Metoksibenzil)-1H-pirazol-4-karbonil hlorida

[0136]

[0137] Rastvor 1-(4-metoksibenzil)-1H-pirazol-4-karboksilne kiseline (Priprema 12, 25.0 g, 110 mmol) u SOCl2(40 mL) je mešan na oko 60°C u trajanju od oko 5 h. Rastvor je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao braon ulje (27.0 g, 100%) koje je korišćeno bez dodatnog prečišćavanja ili karakterizacije.

Priprema 14

N-Metoksi-1-(4-metoksibenzil)-N-metil-1H-pirazol-4-karboksamid

[0139] U rastvor N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (26.3 g, 269 mmol) i TEA (131.0 g, 1.29 mol) u DCM (200 mL) lagano je dodavan rastvor 1-(4-metoksibenzil)-1H-pirazol-4-karbonil hlorida (Priprema 13, 27.0 g, 108 mmol) u DCM (50 mL). Pošto je dodavanje završeno, reakciona smeša je mešana na oko 20°C u trajanju od oko 5 h. Smeša je razblažena sa DCM (150 mL) i vodom (300 mL). Kombinovani ekstrakti DCM su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni (Na2SO4) i koncentrovani da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (20.0 g, 67%) kao braon ulje koje je korišćeno bez dodatnog prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.99 (s, 1 H), 7.90 (s, 1 H), 7.22 (d, 2 H), 6.89 (d, 2 H), 5.25 (s, 2 H), 3.81 (s, 3 H), 3.69 (s, 3 H), 3.31 (s, 3 H). LCMS m/z = 275.0 [MH]<+>

Priprema 15

1-(1-(4-Metoksibenzil)-1H-pirazol-4-il)etan-1-on

[0140]

[0141] Dve identične reakcije su izvedene paralelno.

[0142] U rastvor N-metoksi-1-(4-metoksibenzil)-N-metil-1H-pirazol-4-karboksamida (Priprema 14, 10.0 g, 36.3 mmol) u THF (120 mL) ukapavanjem je dodavan 3 M metilmagnezijum bromid u etru (24.2 mL) na oko 0°C. Reakciona smeša je zagrevana do oko

4

25°C i mešana u trajanju od oko 5 h. Reakcija je ugašena dodavanjem zasićenog vodenog rastvora NH4Cl (100 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 x 200 mL). Kombinovani ekstrakti EtOAc su sušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Koncentrovani ostaci oba eksperimenta su spojeni i prečišćeni hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (10.0 g, 60%) kao braon čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.47 (s, 1 H), 7.91 (s, 1 H), 7.25 (m, 2 H), 6.90 (m, 2 H), 5.27 (s, 2 H), 3.72 (s, 3 H), 2.34 (s, 3 H). LCMS m/z = 231.7 [MH]<+>

Priprema 16

2-Bromo-1-(1-(4-metoksibenzil)-1H-pirazol-4-il)etan-1-on

[0143]

[0144] Dve identične reakcije su izvedene paralelno.

[0145] U rastvor 1-(1-(4-metoksibenzil)-1H-pirazol-4-il)etan-1-ona (Priprema 15, 8.0 g, 34.7 mmol) u DCM (96 mL) i EtOH (24 mL) dodat je PyHBr3(13.3 g, 41.7 mmol) na oko 20°C. Reakcione smeše su održavane na oko 25°C u trajanju od oko 18 h i ugašene vodom (100 mL) pre kombinovanja i ekstrahovane sa EtOAc (2 x 300 mL). Kombinovani ekstrakti EtOAc su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobila žuta čvrsta supstanca. Ovo je triturisano sa MTBE (100 mL) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (15.0 g, 70%) kao žuta čvrsta supstanca. Dodatni uzorak (5.0 g, 23%) neznatno nečistog proizvoda je dobijen kao žuta čvrsta supstanca koncentrovanjem trituracionih tečnosti.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.99 (s, 1 H), 7.89 (s, 1 H), 7.23 (m, 2 H), 6.92 (m, 2 H), 6.92 (m, 2 H), 5.25 (s, 2 H), 4.15 (s, 2 H), 3.81 (s, 3 H). LCMS m/z = 333.0 [MNa]<+>(<81>Br izotop)

Priprema 17

4

Dimetil 1-(2-(1-(4-metoksibenzil)-1H-pirazol-4-il)-2-oksoetil)-1H-pirazol-3,5-dikarboksilat

[0146]

[0147] U smešu dimetil 1H-pirazol-3,5-dikarboksilata (1 g, 5 mmol) i 2-bromo-1-(1-(4-metoksibenzil)-1H-pirazol-4-il)etan-1-ona (Priprema 16, 2.18 g, 7.06 mmol) u DMF (20 mL) dodat je Cs2CO3(2.3 g, 7.06 mmol) na oko 20°C. Posle oko 2 dana, smeša je koncentrovana do sušenja. Ostatak je rastvoren u DCM i ispran jednom zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl. DCM je koncentrovan i ostatak je prečišćen hromatografijom. Proizvod je mešan u EtOAc (20 mL) na oko 20°C u trajanju od oko 18 h. Formirana čvrsta supstanca je filtrirana i sušena da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.38 g, 60%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.96 (s, 1 H), 7.82 (s, 1 H), 7.42 (s, 1 H), 7.24 (d, 2 H), 6.93 (d, 2 H), 5.80 (s, 2 H), 5.27 (s, 2 H), 3.95 (s, 3 H), 3.84 (s, 3 H), 3.83 (s, 3 H). LCMS m/z = 413.1 [MH]<+>

Priprema 18

Metil 4-hidroksi-6-(1-(4-metoksibenzil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-2-karboksilat

[0148]

4

Etil 4-hidroksi-6-(1-(4-metoksibenzil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-2-karboksilat

[0149]

[0150] Šest identičnih reakcija je izvedeno paralelno.

[0151] U svaku od šest bočica dodat je dimetil 1-(2-(1-(4-metoksibenzil)-1H-pirazol-4-il)-2-oksoetil)-1H-pirazol-3,5-dikarboksilat (Priprema 17, 300 mg, 0.73 mmol), NH4OAc (336 mg, 4.37 mmol) i EtOH (6 mL). Smeše su zagrevane pod mikrotalasnim zračenjem na oko 150°C u trajanju od oko 2 h, zatim hlađene do oko 20°C, mešane u trajanju od oko 1 h i filtrirane. Kombinovane čvrste supstance su sušene da bi se dobila smeša oba jedinjenja iz naslova koja je korišćena bez dodatnog prečišćavanja u sledećem koraku (1.61 g).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.65 (br. s., 1 H), 8.38 (s, 1 H), 8.17 (s, 1 H), 8.07 (s, 1 H), 7.36 (s, 1 H), 7.26 (d, 2 H), 6.93 (d, 2 H), 5.75 (s, 1 H), 5.28 (s, 2 H), 3.86 (s, 3 H), 3.74 (s, 3 H). Ovo je metil ester koji je bio glavna komponenta. LCMS m/z = 380.1 [MH]<+>, 394.1 [MH]<+>

Priprema 19

4-Hidroksi-6-(1-(4-metoksibenzil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-2-karboksilne kiseline

[0152]

4

[0153] U rastvor smeše metil 4-hidroksi-6-(1-(4-metoksibenzil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-2-karboksilata i etil 4-hidroksi-6-(1-(4-metoksibenzil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-2-karboksilata (Priprema 18, 524 mg, oko 1.38 mmol) u MeOH (10 mL) dodat je 1 M vodeni rastvor NaOH (4.83 mL). Smeša je održavana na oko 20°C u trajanju od oko 18 h pre dodavanja nove količine 1 M vodenog rastvora NaOH (1.38 mL). Smeša je održavana na oko 20°C u trajanju od oko 24 dodatna časa. MeOH je isparavan i ostatak je razblažen vodom (2 mL) i mešan na oko 40°C sve dok sva čvrsta supstanca nije rastvorena. Rastvor je zakišeljen sa 12 M vodenim rastvorom HCI i mešan na oko 0°C u trajanju od oko 10 min. Dobijeni talog je filtriran i talog je ispran vodom. Čvrsta supstanca je sušena pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (487 mg, 96%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.65 (s, 1 H), 8.38 (s, 1 H), 8.18 (m, 1 H), 8.10 (s, 1 H), 7.25 - 7.32 (m, 4 H), 6.95 (m, 2 H), 5.28 (s, 2 H), 3.78 (s, 3 H). LCMS m/z = 366.0 [MH]<+>

Priprema 20

6-(1-(4-Metoksibenzil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-ol

[0154]

[0155] Tri reakcije su izvedene paralelno.

Uzorak 1:

4

[0156] 4-Hidroksi-6-(1-(4-metoksibenzil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-2-karboksilna kiselina (Priprema 19, 40 mg, 0.11 mmol) je zagrevana na oko 350 °C oko 10 sekundi do topljenja prljavo bele čvrste supstance i pretvaranja u tamno braon tečnost.

Uzorak 2:

[0157] 4-hidroksi-6-(1-(4-metoksibenzil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-2-karboksilna kiselina (Priprema 19, 120 mg, 0.33 mmol) je zagrevana na oko 350 °C oko 15 sekundi do topljenja prljavo bele čvrste supstance i pretvaranja u tamno braon tečnost.

Uzorak 3:

[0158] 4-hidroksi-6-(1-(4-metoksibenzil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-2-karboksilna kiselina (Priprema 19, 310 mg, 0.85 mmol) je zagrevana na oko 350 °C oko 15 sekundi do topljenja prljavo bele čvrste supstance i pretvaranja u tamno braon tečnost.

[0159] Sve tri serije su ohlađene, kombinovane i koncentrovane dva puta sa toluenom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova koje je korišćeno bez dodatnih prečišćavanja u sledećem koraku.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.43 (s, 1 H), 8.37 (s, 1 H), 8.11 (s, 1 H), 8.08 (s, 1 H), 7.88 (d, 1 H), 7.28 (d, 2 H), 6.99 (d, 1 H), 6.94 (d, 2 H), 5.28 (s, 2 H), 3.76 (s, 3 H). LCMS m/z = 322.1 [MH]+

Priprema 21 4-Hloro-6-(1-(4-metoksibenzil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin

[0160]

[0161] 6-(1-(4-Metoksibenzil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-ol (Priprema 20, 390 mg, 1.21 mmol), Py- HCl (143 mg, 1.21 mmol) i POCl3(10 mL) su zagrejani na oko 120 °C oko 18 h. Smeša je koncentrovana i ostatak je tretiran sa aq. NaH2PO4rastvorom da bi se zadržala pH 4. Rezultujući rastvor je mešana na oko 20 °C oko 10 min i ekstrahovana tri puta sa DCM. Kombinovani DCM ekstrakti su osušeni i koncentrovani da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao braon čvrsta supstanca (300 mg, 72%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.74 (s, 1 H), 8.50 (s, 1 H), 8.22 (m, 2 H), 7.45 (m, 2 H), 6.92 - 7.02 (m, 3 H), 3.88 (s, 2 H), 2.15 (s, 3 H). LCMS m/z = 340.0 [MH]+

Priprema 22 terc-Butil 4-(6-hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-karboksilat

[0162]

[0163] Rastvor 4,6-dihloropirazolo[1,5-a]pirazin (Priprema 4, 700 mg, 3.72 mmol), tercbutil 4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-karboksilata (1100 mg, 3.72 mmol), 2 M aq. K3PO4(3 mL, 6 mmol) u 1,4-dioksanu (10.0 mL) je prečišćen sa argonom oko 5 min. Ovome je dodat bis(tri-t-butilfosfin)paladijum(0) (96.1 mg, 0.19 mmol) i reakcija je održavana na oko 20 °C oko 18 h. Rastvarač je koncentrovan da bi se dobio ćilibarni ostatak koji je prenet u DCM i prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (710 mg, 60%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.82 (m, 1 H), 8.44 (m, 3 H), 8.14 (s, 1 H), 1.60 (s, 9 H). LCMS m/z = 220.1 [MH-BOC]+

Priprema 23

terc-Butil 4-(6-vinilpirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-karboksilat

[0164]

1

[0165] Rastvor terc-butil 4-(6-hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-karboksilata (Priprema 22, 700 mg, 2.19 mmol) i tributil(vinil)stanan (694 mg, 2.19 mmol) u 1,4-dioksanu (30 mL) je pročišćen sa argonom oko 5 min praćeno sa dodavanjem KSFos Pd G2 (344 mg, 0.44 mmol). Smeša je zagrevana do oko 55 °C oko 18 h. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (449 mg, 66%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.79 (s, 1 H), 8.46 (s, 1 H), 8.26 (s, 1 H), 8.07 (d, 1 H), 6.95 (dd, 1 H), 6.77 (dd, 1 H), 6.43 (dd, 1 H), 5.52 (dd, 1 H), 1.74 (s, 9 H). LCMS m/z = 312.3 [MH]+

Priprema 24 terc-Butil 4-(6-formilpirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-karboksilat

[0166]

[0167] Rastvor terc-butil 4-(6-vinilpirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-karboksilata (Priprema 23; 446 mg, 1.43 mmol) i 2,6-lutidina (767 mg, 7.16 mmol) u 1,4-dioksanu (9 mL) i vodi (3 mL) ohlađen je do oko 0 °C, i dodati su NaICO4(1530 mg, 7.16 mmol) i 4% aq. OsO4rastvor (0.54 mL). Smeši je dozvoljeno da se zagreje do oko 20 °C oko 3 h. Čvrste supstance su uklonjene filtracijom i isprane sa etrom. Kombinovani 1,4-dioksan i etar su koncentrovani i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao prljavo bela čvrsta supstanca (289 mg, 65%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 10.20 (s, 1 H),

2

9.01 (s, 1 H), 8.85 (s, 1 H), 8.50 (s, 1 H), 8.30 (d, 1 H), 7.08 - 7.12 (m, 1 H), 1.73 (s, 9 H). LCMS m/z = 314.2 [MH]+

Priprema 25 terc-Butil (E)-4-(6-((hidroksiimino)metil)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-karboksilat

[0168]

[0169] Hidroksilamin HCl (112 mg, 1.58 mmol) je dodata smeši terc-butil 4-(6-formilpirazolo[1,5-a]pirazin- 4-il)-1H-pirazol-1-karboksilata (Priprema 24, 450 mg, 1.44 mmol), i Na2CO3(196 mg, 1.58 mmol) u MeOH (20 mL). Smeša je držana na oko 20 °C oko 1.5 h. Smeša je koncentrovana, dodata je voda (30 mL), i smeša je mešana oko 5 min pre filtriranja čvrstih supstanci i sušenja da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao prljavo bela čvrsta supstanca (325 mg, 69%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 10.46 (br. s., 1 H), 9.53 (s, 1 H), 8.81 (s, 1 H), 8.46 (s, 1 H), 8.41 (s, 1 H), 8.19 (d, 1 H), 7.03 (d, 1 H), 1.73 (s, 9 H). LCMS m/z = 329.2 [MH]+

Priprema 26 (3-(4-(1H-Pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-6-il)izoksazol-5-il)metanol

[0170]

[0171] Rastvor natrijum hipohlorita (oko 12% to 15%, 0.19 mL oko 3.0 mmol) dodat je u kapima rastvoru terc-butil (E)-4-(6-((hidroksiimino)metil)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-karboksilata (Priprema 25, 200 mg, 0.61 mmol) i propargil alkohola (171 mg, 3.05 mmol) u DCM (5 mL) na oko 0 °C. Smeši je dozvoljeno da se zagreje do oko 20 °C oko 18 h. Rezultujući ostatak je filtriran da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (115 mg, 67%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 9.14 (s, 1 H), 8.56 (s, 2 H), 8.31 (d, 1 H), 7.50 (d, 1 H), 7.09 (s, 1 H), 4.57 - 4.75 (m, 2 H). LCMS m/z = 283.1 [MH]+

Priprema 27 3-(Cijanometilen)ciklobutan-1-karbonitril

[0172]

[0173] Rastvor 3-oksociklobutan-1-karbonitrila* (CAS: 20249-16-5, 14.5 g, 152 mmol) u TF (250 mL) dodat je smeši (EtO)2P(O)CH2CN (31.1 g, 175 mmol), LiBr (19.9 g, 229 mmol) i TEA (30.9 g, 305 mmol) u TF (300 mL) na oko 25 °C. Nakon oko 16 h, smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kap svetlo žuto ulje (16.01 g, 89%). *Videti Syntetic Communications 2005, 35, 657 - 662.<1>H NMR (400 MHz, CD3CN) δ: 5.38 (s, 1 H), 3.30 - 3.43 (m, 2 H), 3.16 - 3.30 (m, 3 H). LCMS m/z = 119.1 [MH]+

Primer 1

(1s,3s)-3-(Cijanometil)-3-(4-(6-(5-(hidroksimetil)izoksazol-3-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1- il)ciklobutan-1-karbonitril (cis izomer)

[0174]

4

[0175] DBU (89.0 mg, 0.58 mmol) je dodat rastvor (3-(4-(1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-6-il)izoksazol- 5-il)metanol (Priprema 26; 55.0 mg, 0.19 mmol) i 3-(cijanometilen)ciklobutan-1-karbonitril (Priprema 27; 23.0 mg, 0.19 mmol) u MeCN (4 mL). Reakcija je pročišćena sa azotom i mešana na oko 20 °C oko 20 h. Smeša je podeljena između EtOAc (5 mL) i 1 M aq. NaH2PO4(5 mL). EtOAc je razdvojen, osušen (Na2SO4), i koncentrovana. Ostatak prečišćen hromatografijom dao je jedinjenje iz naslova (5 mg, 6%).

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 9.26 (m, 1 H), 8.92 (m, 1 H), 8.54 (m, 1 H), 8.40 (m, 1 H), 7.52 (m, 1 H), 7.14 (m, 1 H), 5.55 (br s, 1 H), 4.70 (s, 2 H), 3.60 (m, 3 H), 3.42 - 3.45 (m, 2 H), 2.78 - 2.83 (m, 2 H). LCMS m/z = 401.4 [MH]+

Priprema 28

terc-Butil 3-(cijanometil)-3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)azetidin-1-karboksilat

[0176]

[0177] Rastvoru terc-butil 3-(cijanometilen)azetidin-1-karboksilata (CAS 1153949-11-1, 7.00 g, 36.1 mmol) u MeCN (100 mL) dodat je pinakol estar 4-pirazolborne kiseline (7.71 g, 39.7 mmol) i DBU (2.75 g, 18.0 mmol) na oko 25 °C. Nakon oko 18 h, smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (11 g, 78%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.92 (s, 1 H), 7.86 (s, 1 H), 4.40 (m, 2 H), 4.21 (m, 2 H), 3.52 (s, 2 H), 1.44 (s, 9 H), 1.32 (s, 12 H). LC-MS m/z = 333.0 [MH-C4H8]+

Priprema 29

terc-Butil3-(4-(6-hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-(cijanometil)azetidin-1-karboksilat

[0178]

[0179] Rastvoru terc-butil 3-(cijanometil)-3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1- il)azetidin-1-karboksilata (Priprema 28, 362 mg, 0.93 mmol) i 4,6-dihloropirazolo[1,5-a]pirazina (Priprema 4; 167 mg, 0.89 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) dodat je 2 M aq. K3PO4(1.40 mL) na oko 25 °C. Smeša je pročišćena sa argonom oko 2 min i dodat je bis(tri-t-butilfosfin)paladijum(0) (94.3 mg, 0.184 mmol). Smeša je mešana na oko 20 °C oko 2 h. Smeša je razblažena sa DCM, razdvojena, i vodena faza je ekstrahovana dva puta sa DCM. Kombinovani DCM ekstrakti su osušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (295 mg, 75%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.42 (s, 1 H), 8.41 (s, 1 H), 8.31 (s, 1 H), 8.10 (d, 1 H), 7.02 (d, 1 H), 4.54 (d, 2 H), 4.31 (d, 3 H), 3.33 (s, 2 H), 1.49 (s, 9 H). LCMS m/z = 358.1 [MH-C4H8]+

Priprema 30

2-(3-(4-(6-Hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-1-(ciklopropilmetil)azetidin-3-il)acetonitril

[0180]

Deo 1

[0181] Rastvoru terc-butil 3-(4-(6-hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-(cijanometil)azetidin- 1-karboksilata (Priprema 29, 0.56 g, 1.35 mmol) u DCM (13.5 mL) dodat je TFA (7 mL) na oko 25 °C. Nakon oko 4 h, smeša je koncentrovana do sušenja da bi se dobio 2-(3-(4-(6-hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1- il)azetidin-3-il)acetonitril kao žuta čvrsta supstanca (578 mg, oko 100%) koja je korišćena bez dodatnog prečišćavanja.

Deo 2

[0182] Rastvoru 2-(3-(4-(6-hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)azetidin-3-il)acetonitrila (Deo 1, 1.35 mmol) i bromometilciklopropana (365 mg, 2.71 mmol) u DMF (13.5 mL) dodat je TEA (548 mg, 5.41 mmol) na oko 25 °C. Smeša je zagrevana na oko 50 °C oko 14 h. Ohlađeni rastvor je razblažen sa vodom (20 mL) i ekstrahovan sa EtOAc (3 x 20 mL). Kombinovani EtOAc ekstrakti su isprani sa fiziološkim rastvorom (30 mL), osušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (314 mg, 63%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.39 (s, 1 H), 8.37 (s, 1 H), 8.27 (s, 1 H), 8.08 (d, 1 H), 7.02 (d, 1 H), 3.78 - 3.84 (m, 2 H), 3.59 (d, 2 H), 3.42 (s, 2 H), 2.45 (d, 2 H), 0.77 - 0.87 (m, 1 H), 0.48 - 0.55 (m, 2 H), 0.14 (q, 2 H). LCMS m/z = 367.9 [MH]+ (35Cl izotop)

Priprema 31

Etil 3-(tributilstanil)-1H-pirazol-5-karboksilat

[0183]

[0184] Etiniltributilstanan (50 g, 158 mmol) dodat je rastvoru etildiazoacetata (19.9 g, 175 mmol) u toluenu (500 mL) na oko 25 °C. Rastvor je zagrevan oko 16 h na oko 100 °C, zatim je koncentrovan da bi se dobio sirovi proizvod kao žuto ulje (110 g). Ovo je kombinovano sa sirovim proizvodom iz ekvivalentne reakcije izvedene sa etiniltributilstananom (22 g, 70 mmol) i etildiazoacetat (8.76 g, 77 mmol), i kombinovani ostaci su prečišćeni sa Hromatografijom na koloni aluminijum oksida da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuto ulje (42 g, 61%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 10.28 (br. s., 1 H), 6.84 - 6.99 (m, 1 H), 4.41 (q, 2 H), 1.47 - 1.67 (m, 6 H), 1.41 (t, 3 H), 1.28 - 1.39 (m, 6 H), 1.04 - 1.24 (m, 6 H), 0.90 (t, 9 H). LCMS m/z 431.2 [MH]+(120Sn izotop).

Priprema 32

(3-(Tributilstanil)-1H-pirazol-5-il)metanol

[0185]

[0186] Etil 3-(tributilstanil)-1H-pirazol-5-karboksilat (Priprema 31, 6000 mg, 13.98 mmol) u TF (200 mL) dodat je mešanoj suspenziji litijum aluminijum hidrida (3108 mg, 83.9 mmol) u TF (200 mL) na oko -10 °C. Nakon oko 4 h, smeša je ugašena sa Na2SO4dekahidrata na oko -10 °C do prestanka penušanja. Smeša je filtrirana i filter kolač je ispran sa TF (500 mL) i DCM (5 x 500 mL). Kombinovani filtrati su koncentrovani da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (4460 mg, 82%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 10.35 (br. s., 1 H), 6.28 - 6.43 (m, 1 H), 4.75 (s, 2 H), 1.49 - 1.60 (m, 6 H), 1.29 - 1.39 (m, 6 H), 1.08 -1.15 (m, 6 H), 0.87 - 0.93 (m, 9 H). LCMS m/z = 388.9 [MH]+ (120Sn izotope)

Primer 2

2-(1-(Ciklopropilmetil)-3-(4-(6-(5-(hidroksimetil)-1H-pirazol-3-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1- il)azetidin-3-il)acetonitril

[0187]

[0188] Rastvoru 2-(3-(4-(6-hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-1-(ciklopropilmetil)azetidin-3- il)acetonitrila (Priprema 30, 204 mg, 0.55 mmol) i 3(tributilstanil)-1H-pirazol-5-il)metanola (Priprema 32, 215 mg, 0.55 mmol) dodat je KSFos Pd G2 (43.6 mg, 0.055 mmol) u 1,4-dioksanu (5.5 mL). Smeša je zagrevana na oko 110 °C oko 4 h. Smeša je uparavana do sušenja i ostatak je kombinovan sa ostatkom iz ekvivalentne reakcije korišćenjem 2-(3-(4-(6-hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-1-(ciklopropilmetil) azetidin-3-il)acetonitrila (Priprema 30, 110 mg, 0.27 mmol) i 3-(tributilstanil)-1H-pirazol-5-il)metanol (Priprema 32, 105 mg, 0.27 mmol). Kombinovani ostaci su prečišćeni sa HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (112 mg, 31%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.66 (s, 1 H), 8.64 - 8.69 (m, 1 H), 8.38 (s, 1 H), 8.23 (s, 1 H), 8.06 (d, 1 H), 6.94 (d, 1 H), 6.67 (s, 1 H), 4.80 (s, 2 H), 3.80 (d, 2 H), 3.62 (d, 2 H), 3.41 (s, 2 H), 2.44 (d, 2 H), 0.76 - 0.86 (m, 1 H), 0.46 - 0.53 (m, 2 H), 0.10 - 0.16 (m, 2 H). LCMS m/z 430.1 [MH]+

Priprema 33

2-(3-(4-(6-Hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)azetidin-3-il)acetonitril

[0189]

[0190] Rastvoru terc-butil 3-(4-(6-hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-(cijanometil)azetidin- 1-karboksilata (Priprema 29, 485 mg, 1.17 mmol) u DCM (20 mL) dodat je TFA (6 mL) na oko 0 °C. Smeša je mešana na oko 25 °C oko 4 h. Rastvor je koncentrovan. Ostatak je podešen do oko pH 9 sa konc. NH4OH (oko 0.5 mL) i podeljen između vode (10 mL) i DCM (30 mL). Vodeni rastvor je ekstrahovan sa DCM (3 x 30 mL). Kombinovani DCM ekstrakti su osušeni (Na2SO4) i koncentrovani da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (300 mg, 81%).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 8.91 (s, 1 H), 8.72 (s, 1 H), 8.53 (s, 1 H), 8.20 (d, 1 H), 7.40 (d, 1 H), 4.90 (d, 2 H), 4.66 (d, 2 H), 3.72 (s, 2 H). LCMS m/z 313.9 [MH]+ (35Cl izotop)

Priprema 34

2-(3-(4-(6-Hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-1-etilazetidin-3-il)acetonitril

[0191]

[0192] Natrijum acetat (314 mg, 3.82 mmol) i acetaldehid (842 mg, 19.1 mmol) su dodati rastvoru 2-(3-(4-(6-hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)azetidin-3-il)acetonitrila (Priprema 33, 120 mg, 0.38 mmol) u MeOH (6 mL) i smeša je mešana oko 4 h. Zatim je dodat NaBH(OAc)3(243 mg, 1.15 mmol) i smeša je mešana oko 16 h duže na oko 25 °C. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (115 mg, 88%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.41 (s, 1 H), 8.39 (s, 1 H), 8.29 (s, 1 H), 8.10 (d, 1 H), 7.04 (d, 1 H), 3.79 (d, 2 H), 3.59 (d, 2 H), 3.43 (s, 2 H), 2.65 (q, 2 H), 1.06 (t, 3 H). LCMS m/z = 342.1 [MH]+ (35Cl izotope)

Primer 3 2-(1-Etil-3-(4-(6-(5-(hidroksimetil)-1H-pirazol-3-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)azetidin-3- il)acetonitril

[0193]

1

[0194] Rastvoru 2-(3-(4-(6-hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-1-etilazetidin-3-il)acetonitrila (Priprema 34, 100 mg, 0.29 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) dodat je 3-(tributilstanil)-1H-pirazol-5-il)metanol (Priprema 32, 136 mg, 0.35 mmol) i KSFos Pd G2 (23.0 mg, 0.029 mmol). Smeša je zagrevana na oko 110 °C oko 16 h. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom. Proizvod je dodatno prečišćen sa HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (59 mg, 46%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 13.21 (s, 0.5 H), 12.93 (s, 0.5 H), 9.23 (s, 0.5 H), 9.07 (s, 1 H), 8.6 - 8.89 (m, 1 H), 8.69 (s, 0.5 H), 8.47 (s, 0.5 H), 8.26 (s, 1 H), 7.47 - 7.53 (m, 1 H), 6. - 9-6.94 (m, 1 H), 5.35 (s, 0.5 H), 5.35 (s, 0.5 H), 4.50 - 4.57 (m, 2 H), 3.68 - 3.71 (m, 2 H), 3.57 - 3.54 (m, 4 H), 3.17 - 3.16 (m, 0.5 H), 2.57 - 2.54 (m, 2 H), 0.96 - 0.93 (m, 3 H). Ovaj spektar je bio konzistentan sa prisustvom tautomera koji se mogu razlikovati. LCMS m/z = 404.3 [MH]+

Priprema 35

2-Ciklobutilidenacetonitril

[0195]

[0196] Smeša (EtO)2P(O)CH2CN (4.48 g, 25.2 mmol), LiBr (1.96 g, 22.6 mmol) i TEA (2.28 g, 22.6 mmol) u suvom TF (40 mL) je mešana na oko 25 °C oko 2 h. Ovome je dodat rastvor ciklobutanona (1.58 g, 22.6 mmol) u TF (5 mL) na oko 25 °C. Nakon oko 16 h, smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bezbojno ulje (1.2 g, 57%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.11 (kvin), 2.93 - 3.05 (m), 2.82 -2.92 (m), 2.04 - 2.17 (m).

2

Priprema 36

2-(1-(4-(4,4,5,5-Tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutil)acetonitril

[0197]

[0198] Smeši 2-ciklobutilidenacetonitrila (Priprema 35, 200 mg, 2.15 mmol) i pinakol estra 4-pirazolborne kiseline (458 mg, 2.36 mmol) u MeCN (15 mL) dodat je DBU (981 mg, 6.44 mmol). Reakcija je mešana na oko 25 °C oko 16 h i i zatim zagrevana do oko 50 °C oko 24 h. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bezbojno ulje (150 mg, 24%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: m 7.89 (s, 1 H), 7.86 (s, 1 H), 3.09 (s, 2 H), 2.68 - 2.80 (m, 2 H), 2.45 - 2.55 (m, 2 H), 2.01 - 2.10 (m, 2 H), 1.33 (s, 12 H). LCMS m/z = 287.9 [MH]+

Primer 4

2-(1-(4-(6-(1-Metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutil)acetonitril

[0199]

[0200] Smeši 2-(1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutil)acetonitrila (Priprema 36, 129 mg, 0.45 mmol) i 4-hloro-6-(1-metil-1H-pirazol4-il)pirazolo[1,5-a]pirazina (Priprema 11, 100 mg, 0.43 mmol) u 1,4-dioksanu (4.3 mL) dodat je 2 M aq. K3PO4(0.85 mL) i PdCl2(dppf) (15.7 mg, 0.021 mmol). Smeša je pročišćena sa azotom oko 1 min i mešana na oko 80 °C oko 16 h. Reakciona smeša je kombinovana sa ekvivalentnom reakcijom izvedenom korišćenjem 2-(1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2- il)-1 H-pirazol-1-il)ciklobutil)acetonitrila (Priprema 36, 20 mg, 0.07 mmol) i 4-hloro-6-(1-metil-1H-pirazol-4- il)pirazolo[1,5-a]pirazin (Priprema 11, 19. mg, 0.083 mmol), 2 M aq. K3PO4(0.14 mL) i PdCl2(dppf) (2.5 mg, 0.0035 mmol) u 1,4-dioksanu (2 mL). Kombinovane reakcione smeše su koncentrovane i ostatak je prečišćen hromatografijom. Jedinjenje je dodatno prečišćeno sa HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (22 mg, 12%).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 8.68 (s, 1 H), 8.63 (s, 1 H), 8.39 (s, 1 H), 8.22 (s, 1 H), 8.07 (d, 1 H), 8.06 (s, 1 H), 7.21 (d, 1 H), 3.97 (s, 3 H), 3.94 - 3.99 (m, 1 H), 3.37 (s, 2 H), 3.35 - 3.39 (m, 1 H), 2.84 - 2.95 (m, 2 H), 2.54 (ddd, 2 H), 2.05 - 2.21 (m, 2 H). LCMS m/z = 358.9 [MH]+

Priprema 37

2-((1r,3s)-1-(4-Bromo-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil)acetonitril (trans izomer)

[0201]

I

2-((1s,3r)-1-(4-Bromo-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil)acetonitril (cis izomer).

[0202]

[0203] DBU (4.25 mL, 28.4 mmol) dodat je rastvoru 2-(3-metoksiciklobutiliden)acetonitrila (Priprema 90, 3.50 g, 28.4 mmol) i 4-bromopirazola (4.18 g, 28.4 mmol) u MeCN (80 mL)

4

na oko 25 °C. Nakon oko 18 h, smeša je sipana u NaH2PO4(17.04 g, 142 mmol) u vodi i faze su razdvojene. Vodeni sloj je ekstrahovan dva puta sa EtOAc i kombinovani EtOAc ekstrakti su koncentrovani. Višak 4-bromopirazola je uklonjen hromatografijom eluiranjem sa DCM:TF (100:0 do 95:5). materijal je dodatno prečišćen hromatografijom eluiranjem sa eter:heptan da bi se dobio 2-((1r,3s)-1-(4-bromo-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil)acetonitril kao bela čvrsta supstanca (trans izomer, 2.19 g, 28%)<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.62 (s, 1 H), 7.55 (s, 1 H), 3.99 (tt, 1 H), 3.30 (s, 3 H), 3.12 (s, 2 H), 2.96 - 3.04 (m, 2 H), 2.44 - 2.51 (m, 2 H). LCMS m/z = 270.0 [MH]+ (<79>Br izotop) i 2-((1s,3r)-1-(4-bromo-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil)acetonitril kao bezbojno ulje (cis izomer, 5.00 g, 65%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.60 (s, 1 H), 7.53 (s, 1 H), 4.00 (kvin, 1 H), 3.29 (s, 3 H), 2.99 (s, 2 H), 2.85 - 2.96 (m, 2 H), 2.56 - 2.67 (m, 2 H). LCMS m/z = 270.0 [MH]+ (<79>Br izotop)

Priprema 38

2-((1r,3s)-3-Metoksi-1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutil)acetonitril.

[0204]

[0205] Smeša 2-((1r,3s)-1-(4-bromo-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil)acetonitril (Priprema 37, trans izomer, 3399 mg, 12.58 mmol), bis(pinakolato)dibor (3510 mg, 13.8 mmol) i kalijum acetata (3700 mg, 37.7 mmol) u 1,4-dioksanu (33 mL) je pročišćena sa argonom oko 5 min, praćeno sa dodavanjem KSFos Pd G2 (1980 mg, 2.52 mmol) na oko 25 °C. Smeša je zagrevana na oko 65 °C oko 4 h. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobila čvrsta supstanca. Ovoj čvrstoj supstanci dodat je EtOAc (10 mL) i heptan (40 mL) i smeša je mešana na oko 25 °C oko 30 min. Čvrsta supstanca je filtrirana i osušena pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (1.95 g, 49%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ: 7.91 (s, 1 H), 7.87 (s, 1 H), 3.98 (tt, 1 H), 3.28 (s, 3 H), 3.17 (s, 2 H), 2.98 - 3.07 (m, 2 H), 2.45 - 2.53 (m, 2 H), 1.31 (s, 12 H). LCMS m/z = 318.0 [MH]+

Priprema 39

2-((1r,3s)-1-(4-(6-Hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil)acetonitril

[0206]

[0207] Rastvor 2-((1r,3s)-3-metoksi-1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutil) acetonitrila (Priprema 38, 1950 mg, 6.15 mmol), 4,6-dihloropirazolo[1,5-a]pirazina (Priprema 4, 1160 mg, 6.15 mmol) i 2 M aq. K3PO4(9.22 mL) u 1,4-dioksanu (25 mL) je pročišćen sa argonom oko 5 min praćeno sa dodavanjem bis(tri-t-butilfosfin)paladijuma(0) (157 mg, 0.31 mmol) na oko 25 °C. Nakon oko 2 h, smeša je razblažena sa EtOAc, faze su razdvojene i vodena faza je ekstrahovana dva puta sa DCM. Kombinovani EtOAc i DCM ekstrakti su osušeni (Na2SO4) i koncentrovani da bi se dobila čvrsta supstanca koja je rekristalizovala iz tople (oko 40 °C) smeše DCM i heptana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao prljavo bela čvrsta supstanca (1.12 g, 53%). Filtrat je koncentrovan i prečišćen hromatografijom da bi se dobilo dodatno jedinjenje iz naslova (1.01 g, 47%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ: m 8.39 (d, 1 H), 8.38 (s, 1 H), 8.28 (s, 1 H), 8.09 (d, 1 H), 7.03 (dd, 1 H), 4.04 - 4.10 (m, 1 H), 3.33 (s, 3 H), 3.25 (s, 2 H), 3.09 - 3.17 (m, 2 H), 2.53 - 2.61 (m, 2 H). LCMS m/z = 343.1 [MH]+ (<35>Cl izotop)

Priprema 40

3,5-Dibromo-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol

[0208]

[0209] Rastvoru 3,5-dibromopirazola* (CAS: 67460-86-0, 18.0 g, 79.7 mmol) i DHP (30 mL) dodata je CF3COOH (73 mg, 0.64 mmol). Smeša je zagrevana na oko 95 °C oko 12 h. Reakcija je ugašena sa NaOH (96 mg, 2.4 mmol) i zatim koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (11.5 g, 46%). *Videti: Justus Liebigs Annalen der Chemie 1959, 625, 55 - 65.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 6.35 (s, 1 H), 5.42 (d, 1 H), 4.05 (m, 1 H), 3.65 (m, 1 H), 2.38 - 2.48 (m, 1 H), 2.11 (m, 1 H), 1.90 (m, 1 H), 1.62 -1.77 (m, 3 H). LCMS m/z = 226.7 [MH-TP]+ (<79>Br,<81>Br izotop)

Priprema 41

3-Bromo-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol-5-karboksilna kiselina

[0210]

[0211] n-BuLi (2.5 M, 15.8 mL, 39.5 mmol) dodat je u kapima rastvoru 3,5-dibromo-1-(tetrahidro-2H-piran- 2-il)-1H-pirazola (Priprema 40, 9.4 g, 30.0 mmol) u TF (87 mL) na oko -78 °C. Smeša je držana na oko -78 °C oko 2 h. Rastvor CO2(pripremljen barbotiranjem CO2u anhidrovanom TF (100 mL) 20 min na oko -70 °C i mešanjem na toj temperaturi oko 1.5 h) dodat je u kapima uz održavanje unutrašnje temperature reakcije ispod oko -65 °C. Smeša je zatim mešana na oko -70 °C oko 1 hr. Smeša je podešena do oko pH 4 sa 1 M aq. HCI na oko 0 °C i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 100 mL). Kombinovani EtOAc ekstrakti su isprani sa fiziološkim rastvorom (2 x 50 mL), osušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (5.0 g, 60%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 6.99 (s, 1 H), 6.17 (dd, 1 H), 3.90 (d, 1 H), 3.49 3.66 (m, 2 H), 2.12 - 2.28 (m, 1 H), 1.91 - 2.04 (m, 1 H), 1.83 - 1.92 (m, 1 H), 1.58 - 1.70 (m, 1 H), 1.45 - 1.57 (m, 2 H).

Priprema 42

terc-Butil (3-bromo-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol-5-il)karbamat

[0212]

[0213] Difenilfosforil azid (10 g, 36.4 mmol) dodat je rastvoru 3-bromo-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)- 1H-pirazol-5-karboksilne kiseline (Priprema 41, 5 g, 18.17 mmol) i DIPEA (6.4 mL, 37.0 mmol) u t-butanolu (60.6 mL). Smeša je zagrevana na oko 45 °C oko 30 min, i zatim zagrevana pod refleksom oko 5 h. Smeša je razblažena sa EtOAc (300 mL) i isprana sa zasićenim aq. NaHCO3(3 x 100 mL), fiziološkim rastvorom (2 x 100 mL), osušena (Na2SO4) i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kap svetlo žuto ulje (3.36 g, 53%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 9.64 (br. s., 1 H), 6.26 (s, 1 H), 5.44 (dd, 1 H), 3.84 (d, 1 H), 3.55 - 3.70 (m, 1 H), 2.08 - 2.20 (m, 1 H), 1.91 - 2.00 (m, 1 H), 1.75 (dd, 1 H), 1.54 - 1.64 (m, 1 H), 1.48 - 1.53 (m, 2 H), 1.46 (s, 9 H). LCMS m/z = 367.9 [MNa]+ (<79>Br izotop)

Priprema 43

3-Bromo-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-5-(diBoc)-amino-1H-pirazol

[0214]

[0215] DMAP (27 mg, 0.22 mmol) dodat je rastvoru terc-butil (3-bromo-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1Hpirazol- 5-il)karbamata (Priprema 42, 390 mg, 1.13 mmol), di-terc-butil dikarbonata (492 mg, 2.25 mmol) i TEA (0.47 mL, 3.38 mmol) u DCM (4 mL) na oko 20 °C. Nakon oko 18 h, smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (450 mg, 89%)<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 6.42 (s, 1 H), 5.15 (m, 1 H), 4.02 (m, 1 H), 3.60 (m, 1 H), 2.40 (m, 1 H), 2.15 (m, 1 H), 1.88 (m, 1 H), 1.58 -1.76 (m, 3 H), 1.48 (s, 18 H). LCMS m/z = 467.9 [MNa]+ (<79>Br izotop)

Priprema 44 2-((1r,3s)-1-(4-(6-(5-(DiBoc)-amino-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-pirazol-3-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1Hpirazol- 1-il)-3-metoksiciklobutil)acetonitril

[0216]

[0217] Smeša KOAc (110 mg, 1.06 mmol), bis(pinakolato)dibora (164 mg, 0.64 mmol), 3-bromo-1-(tetrahidro- 2H-piran-2-il)-5-(diBoc)-amino-1H-pirazola (Priprema 43, 191 mg, 0.43 mmol) i KSFos Pd G2 (55 mg, 0.07 mmol) u 1,4-dioksanu (3.5 mL) je zagrevana do oko 65 °C oko 3.5 h. Smeša je ohlađena do oko 25 °C i dodat je 2-((1r,3s)-1-(4-(6hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-metoksi-ciklobutil)acetonitril (Priprema 39, 68 mg, 0.20 mmol) i smeša je pročišćena sa azotom pre dodavanja 2 M aq. K3PO4 (0.53 mL, 1.06 mmol) i KSFos Pd G2 (55 mg, 0.07 mmol). Smeša je zagrevana na oko 80 °C oko 3 h. Reakcija je ugašena sa fiziološkim rastvorom i ekstrahovana sa EtOAc. EtOAc ekstrakt je koncentrovan i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (91 mg, 32%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 9.08 (s, 1 H), 8.39 (s, 1 H), 8.33 (s, 1 H), 8.09 (d, 1 H), 6.97 (d, 1 H), 6.90 (s, 1 H), 5.26 (dd, 1 H), 4.02 - 4.11 (m, 2 H), 3.64 (t, 1 H), 3.34 (s, 3 H), 3.25 (s, 2 H), 3.12 - 3.20 (m, 2 H), 2.55 - 2.62 (m, 2 H), 2.17 -2.25 (m, 1 H), 1.93 (dd, 1 H), 1.58 - 1.82 (m, 4 H), 1.45 (s, 18 H). LCMS m/z = 674.5 [MH]+

Priprema 45

2-((1r,3s)-1-(4-(6-(5-Amino-1H-pirazol-3-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil) acetonitril

[0218]

[0219] TFA (2 mL) je dodat 2-((1r,3s)-1-(4-(6-(5-(diBoc)-amino-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-pirazol-3-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil)-acetonitrilu (Priprema 44, 91 mg, 0.13 mmol) u anhidrovanom DCM (1 mL) na oko 20 °C. Nakon oko 1 h, smeša je koncentrovana. Dodat je DCM, praćeno sa zasićenim aq. NaHCO3dok pH rastvora ne postane bazna. Faze su razdvojene i vodena faza je ekstrahovana dva puta sa DCM. Kombinovani DCM ekstrakti su osušeni (Na2SO4), koncentrovani, i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (50 mg, 95%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.53 (s, 1 H), 8.40 (s, 1 H), 8.25 (s, 1 H), 8.06 (s, 1 H), 6.96 (br. s., 1 H), 6.01 (br. s., 1 H), 4.33 (br. s., 1 H), 4.05 (m, 1 H), 3.31 (s, 3 H), 3.25 (s, 2 H), 3.11 (dd, 2 H), 2.55 (dd, 2 H). LCMS m/z = 390.3 [MH]+

Primer 5

N-(3-(4-(1-((1r,3s)-1-(Cijanometil)-3-metoksiciklobutil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-6-il)-1H-pirazol- 5-il)acetamid

[0220]

[0221] 2-((1r,3s)-1-(4-(6-(5-Amino-1H-pirazol-3-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-metoksi-ciklobutil) acetonitril (Priprema 45, 39 mg, 0.1 mmol) je stavljen u reakcionu epruvetu, koja je zatim evakuisana i povratno napunjena tri puta sa azotom. Ovome je dodat anhidrovani DCM (1 mL). Epruveta je ohlađena do oko 0 °C pre dodavanja N-metilmorfolina (11 mg, 0.11 mmol) i acetil hlorida (8.6 mg, 0.11 mmol). Smeši je dozvoljeno da se zagreje do oko 25 °C tokom oko 18 h. Smeša je koncentrovana i ostatak je rastvoren u MeOH (2 mL). K2CO3(30 mg, 0.22 mmol) dodat je na oko 0 °C. Nakon oko 3 h, smeša je filtrirana kroz Celite®. Filtrat je koncentrovan i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (30 mg, 63%).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 8.80 (s, 1 H), 8.75 (s, 1 H), 8.40 (s, 1 H), 8.09 (d, 1 H), 7.23 (d, 1 H), 6.88 (s, 1 H), 4.02 - 4.12 (m, 1 H), 3.81 (s, 3 H), 3.34 (s, 2 H), 3.15 - 3.24 (m, 2 H), 2.48 - 2.59 (m, 2 H), 2.21 (s, 3 H). LCMS m/z = 432.2 [MH]+

Priprema 46

1

Etil 5-(4-(1-((1r,3s)-1-(cijanometil)-3-metoksiciklobutil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-6-il)-1Hpirazol- 3-karboksilat

[0222]

[0223] Rastvor 2-((1r,3s)-1-(4-(6-hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil)acetonitrila (Priprema 39, 200 mg, 0.58 mmol) i etil 3-(tributilstanil)-1H-pirazol-5-karboksilata (Priprema 31, 300 mg, 0.70 mmol) u 1,4-dioksanu (5.8 mL) je pročišćen sa azotom i KSFos Pd G2 (45.9 mg, 0.058 mmol) je dodat na oko 25 °C. Reakcija je zagrevana na oko 80 °C oko 16 h. Ohlađena smeša je prečišćena hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (220 mg, 84%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 14.09 (s, 1 H), 9.39 (s, 1 H), 9.10 (s, 1 H), 8.72 (s, 1 H), 8.30 (d, 1 H), 7.59 (d, 1 H), 7.53 (d, 1 H), 4.33 (q, 2 H), 4.01 (dd, 1 H), 3.44 (s, 3 H), 3.22 (s, 2 H), 3.14 - 3.20 (m, 2 H), 2.43 - 2.48 (m, 2 H), 1.34 (t, 3 H). LCMS m/z = 447.2 [MH]+

Primer 6

5-(4-(1-((1r,3s)-1-(Cijanometil)-3-metoksiciklobutil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-6-il)-N-metil- 1H-pirazol-3-karboksamid

[0224]

2

[0225] Rastvor etil 5-(4-(1-((1r,3s)-1-(cijanometil)-3-metoksiciklobutil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5- a]pirazin-6-il)-1H-pirazol-3-karboksilata (Priprema 46, 100 mg, 0.22 mmol) u 30% MeNH2u EtOH rastvoru (35 mL) je zapečaćen u epruvetu za mikrotalasnu na oko 20 °C. Nakon oko 16 h, smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen sa HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (62 mg, 58%).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 9.00 (s, 1 H), 8.91 (s, 1 H), 8.57 (s, 1 H), 8.18 (s, 1 H), 7.37 (br. s., 1 H), 7.26 (s, 1 H), 4.61 (s, 1 H), 4.04 - 4.15 (m, 1 H), 3.37 (s, 3 H), 3.33 (s, 2 H), 3.18 - 3.26 (m, 2 H), 2.95 (s, 3 H), 2.56 (dd, 2 H). LCMS m/z = 432.1 [M+H]+

Priprema 47

terc-Butil 3-(cijanometil)-3-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)azetidin- 1-karboksilat

[0226]

[0227] U vijalicu su dodati 4-hloro-6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin (Priprema 11, 150 mg), terc-butil 3-(cijanometil)-3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)azetidin-1-karboksilat (Priprema 28, 374 mg, 0.96 mmol), 2 M aq. Na2CO3(0.96 mL) i 1,4-dioksan (4 mL). Smeša je pročišćena sa argonom oko 5 min, praćeno sa dodavanjem PdCl2(dppf) (93.7 mg, 0.13 mmol). Smeša je zagrevana na oko 120 °C oko 1 h pod mikrotalasnim zračenjem. Smeša je razblažena sa EtOAc, isprana u vodi, sušen (Na2SO4), i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (233 mg, 79%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 9.03 (s, 1 H), 8.95 (s, 1 H), 8.53 (s, 1 H), 8.37 (s, 1 H), 8.20 (d, 1 H), 8.16 (s, 1 H), 7.46 (s, 1 H), 4.54 (d, 2 H), 4.25 (d, 3 H), 3.91 (s, 3 H), 3.67 (s, 2 H), 1.42 (s, 9 H). LCMS m/z = 460.2 [MH]+

Priprema 48

2-(3-(4-(6-(1-Metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)azetidin-3-il)acetonitril

[0228]

[0229] TFA (1 mL) dodat je terc-butil 3-(cijanometil)-3-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin- 4-il)-1H-pirazol-1-il)azetidin-1-karboksilatu (Priprema 47, 233 mg, 0.51 mmol) u DCM (5 mL) na oko 25 °C. Nakon oko 90 min, smeša je koncentrovana. Ostatak je koncentrovan dva puta sa toluenom, zatim osušen pod vakuumom. Ostatk je rastvoren u MeOH i propušten kroz sloj karbonatne smole sa polimernom podlogom. Eluirani rastvor je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (200 mg, oko 100%) koje je korišćeno bez dodatnog prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 9.12 (s, 1 H), 9.06

4

(s, 1 H), 8.58 (s, 1 H), 8.39 (s, 1 H), 8.22 (d, 1 H), 8.17 (s, 1 H), 7.50 (d, 1 H), 4.68 - 4.77 (m, 2 H), 4.35 - 4.40 (m, 2 H), 3.93 (s, 2 H), 3.91 (s, 3 H). LCMS m/z = 360.5 [MH]+

Primer 7

2,2’-(3-(4-(6-(1-Metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)azetidin-1,3-diil)diacetonitril

[0230]

[0231] DIPEA (132 mL, 0.76 mmol) dodat je rastvoru 2-(3-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5- a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)azetidin-3-il)acetonitrila (Priprema 48, 91 mg, 0.25 mmol) u DMF (2 mL). Bromoacetonitril (36 mg, 0.30 mmol) dodat je na oko 25 °C. Nakon oko 18 h, reakcija je ugašena sa konc. NH4OH i mešana na oko 25 °C oko 10 min. Smeša je koncentrovana i ostatak je razblažen sa DCM. DCM je ispran dva puta sa zasićenim aq. NH4Cl, zatim dva puta sa zasićenim aq. Na2CO3. DCM je osušen (Na2SO4) i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao prljavo bela čvrsta supstanca (68 mg, 68%).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 8.77 (s, 1 H), 8.74 (s, 1 H), 8.45 (s, 1 H), 8.25 (s, 1 H), 8.08 - 8.10 (m, 2 H), 7.25 (d, 1 H), 4.01 (d, 2 H), 3.98 (s, 3 H), 3.86 (d, 2 H), 3.78 (s, 2 H), 3.54 (s, 2 H). LCMS m/z = 399.3 [MH]+

Primer 8

2-(3-(4-(6-(1-Metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-1-(metilsulfonil)azetidin-3- il)acetonitril

[0233] Rastvoru 2-(3-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)azetidin-3- il)acetonitrila (Priprema 48, 120 mg, 0.27 mmol) i TEA (331 mg, 3.27 mmol) u DCM (20 mL) dodat je metansulfonil hlorid (313 mg, 2.73 mmol) na oko 0 °C. Smeša je zatim mešana na oko 10 °C oko 1 h pre koncentrovanja. Ostatak je prečišćen korišćenjem HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (39 mg, 33%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 9.05 (s, 1 H), 8.99 (s, 1 H), 8.57 (s, 1 H), 8.37 (s, 1 H), 8.21 (d, 1 H), 8.17 (s, 1 H), 7.47 (d, 1 H), 4.65 (d, 2 H), 4.30 (d, 2 H), 3.91 (s, 3 H), 3.70 (s, 2 H), 3.14 (s, 3 H). LCMS m/z = 437.9 [MH]+

Primer 9

2-(1-(Ciklopropilsulfonil)-3-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)azetidin- 3-il)acetonitril

[0234]

[0235] Smeši 2-(3-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)azetidin-3- il)acetonitrila (Priprema 48, 100 mg, 0.25 mmol) u DCM (10 mL) dodati su TEA (153 mg, 1.52 mmol) i ciklopropansulfonil hlorid (107 mg, 0.76 mmol) na oko 0 °C. Smeša je mešana na oko 20 °C oko 16 h, zatim koncentrovana. Ostatak je prečišćen sa HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (60 mg, 46%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 9.05 (s, 1 H), 9.00 (s, 1 H), 8.57 (s, 1 H), 8.37 (s, 1 H), 8.21 (d, 1 H), 8.16 (s, 1 H), 7.46 (d, 1 H), 4.69 (d, 2 H), 4.32 (d, 2 H), 3.91 (s, 3 H), 3.70 (s, 2 H), 2.85 (m, 1 H), 0.96 - 1.09 (m, 4 H). LCMS m/z = 464.0 [MH]+

Primer 10

2-(3-(4-(6-(1-Metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-1-propionilazetidin-3-il)acetonitril

[0236]

[0237] Rastvoru 2-(3-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)azetidin-3- il)acetonitrila (Priprema 48, 90 mg, 0.23 mmol) u DCM (5 mL) dodati su TEA (69 mg, 0.68 mmol) i anhidrid propionske kiseline (59 mg, 0.45 mmol). Reakcija je mešana na oko 20 °C oko 30 min, zatim koncentrovana i ostatak je prečišćen sa HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (28 mg, 30%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 9.05 (s, 1 H), 8.97 (s, 1 H), 8.55 (s, 1 H), 8.37 (s, 1 H), 8.21 (d, 1 H), 8.16 (s, 1 H), 7.46 (d, 1 H), 4.80 (d, 1 H), 4.52 (dd, 2 H), 4.23 (d, 1 H), 3.91 (s, 3 H), 3.70 (s, 2 H), 2.16 (q, 2 H), 0.99 (t, 3 H). LCMS m/z 416.0 [MH]+

Priprema 49

2-(3-(Benziloksi)ciklobutiliden)acetonitril

[0238]

[0239] LiBr (0.270 g, 3.12 mmol) je postavljen pod vakuum, zatim povratno napunjen sa azotom i dodat je TF (28 mL), praćeno sa (EtO)2POCH2CN (0.53 mL, 3.12 mmol) i TEA (0.79 mL, 5.67 mmol). Rezultujući rastvor je mešana na oko 20 °C oko 45 min, zatim je dodat rastvor 3-(benziloksi)ciklobutanona (500 mg, 2.84 mmol) u suvom TF (3 mL). Nakon oko 5 h, smeša je sipana u EtOAc (100 mL) i EtOAc je ispran tri puta sa zasićenim aq. NH4Cl (3 x 50 mL) i sa fiziološkim rastvorom (25 mL). EtOAc ekstrakt je osušen (MgSO4) i koncentrovan. Ostatak je hromatografisan da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (480 mg, 85%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.29 - 7.43 (m, 5 H), 5.24 (kvin, 1 H), 4.45 - 4.53 (m, 2 H), 4.19 (kvin, 1 H), 3.18 - 3.29 (m, 1 H), 3.03 - 3.13 (m, 1 H), 2.86 - 3.00 (m, 2 H).

Priprema 50

2-(3-Hidroksiciklobutil)acetonitril

[0240]

[0241] Paladijum hidroksid na ugljeniku (20% Pd, vlažan, 430 mg) dodat je rastvoru 2-(3-(benziloksi)ciklobutiliden) acetonitrila (Priprema 49, 430 mg, 2.16 mmol) u TF (6.5 mL). Smeša je stavljena pod pritisak vodonika (100 psi) u čeličnom reaktoru i mešana na oko 20 °C oko 1 h. Dodato je još paladijum hidroksida na ugljeniku (20% Pd, vlažno, 430 mg) i smeša je ponovo stavljena pod pritisak vodonika (100 psi) i mešana oko 1.5 h duže. Smeša je razblažena sa EtOAc, filtirana kroz Celite®, i filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bezbojno ulje (240 mg, 100%) kao smeša cis i trans izomera. Izomer 1:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 4.52 (kvin, 1 H), 2.63 - 2.74 (m, 2 H), 2.19 - 2.28 (m, 4 H), 2.07 2.17 (m, 1 H), 1.83 (br. s, 1 H). Izomer 2:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 4.14 - 4.25 (m, 1 H), 2.55 - 2.64 (m, 2 H), 2.48 (dd, 4 H), 1.83 (br. s, 1 H), 1.67 - 1.79 (m, 1 H).

Priprema 51

2-(3-Oksociklobutil)acetonitril

[0242]

[0243] Rastvoru 2-(3-hidroksiciklobutil)acetonitrila (Priprema 50, 50 mg, 0.45 mmol) u suvom TF (1.8 mL) dodat je Dess-Martin perjodinan (CAS: 87413-09-0, 216 mg, 0.49 mmol). Vijalica je zapečaćena pod atmosferom sredine i mešana na oko 50 °C oko 2 h. Smeša je razblažena sa Et2O (10 mL) praćeno sa zasićenim aq. NaHCO3(4 mL). Dodat je natrijum tiosulfat pentahidrat (954 mg, 3.82 mmol) i smeša je snažno mešana oko 10 min do rastvaranja svih čvrstih supstanci. Faze su razdvojene i vodena faza je ekstrahovana još jednom sa Et2O. Kombinovani Et2O ekstrakti su osušeni (MgSO4) i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bezbojno ulje (27 mg, 55%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 3.23 - 3.37 (m, 2 H), 2.89 - 3.01 (m, 2 H), 2.75 - 2.89 (m, 1 H), 2.69 (d, 2 H).<13>C NMR (101 MHz, CDCl3) δ: 203.6, 117.6, 52.3, 23.1, 20.6.

Priprema 52

2-(3-(Cijanometil)ciklobutiliden)acetonitril

[0244]

[0245] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno (75mg, 89%) korišćenjem postupka iz Pripreme 35 korišćenjem 2-(3-oksociklobutil)acetonitrila (Priprema 51, 70 mg, 0.64 mmol), (EtO)2POCH2CN (213 mg, 1.15 mmol), LiBr (100 mg, 1.15 mmol) i TEA (0.27 mL, 1.92 mmol). Jedinjenje iz naslova je korišćeno direktno u sledećoj reakciji (Primer 11 i 12).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.25 (m, 1 H), 3.10 - 3.30 (m, 2 H), 2.80 (m, 3 H), 2.60 (m, 2 H). GCMS m/z = 132 [M]+

Priprema 53

6-(1-Metil-1H-pirazol-4-il)-4-(1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin

[0246]

[0247] Pd(dppf)Cl2(5.01 g, 6.85 mmol) dodata je smeša 4-hloro-6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5- a]pirazina (Priprema 11, 8 g, 34 mmol), terc-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1- karboksilata (12.1 g, 41.1 mmol) i 2 M aq. K2CO3(34.2 mL) u 1,4-dioksanu (30 mL) i toluenu (30 mL) na oko 10 °C dok je struja azota barbotirana kroz rastvor. Smeša je mešana na oko 100 °C oko 16 h, zatim držana na oko 10 °C oko 48 h. Smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao sivo ulje (6.3 g, 69%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.97 (s, 1 H), 8.72 (s, 1 H), 8.40 (s, 1 H), 8.35 (s, 1 H), 8.15 (d, 1 H), 8.12 (s, 1 H), 7.36 (d, 1 H), 3.91 (s, 3 H). LCMS m/z = 265.8 [MH]+

Primer 11

2,2’-((1s,3s)-1-(4-(6-(1-Metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan-1,3-diil) diacetonitril (cis izomer)

[0248]

Primer 12

2,2’-((1r,3r)-1-(4-(6-(1-Metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan-1,3-diil) diacetonitril (trans izomer)

[0249]

[0250] DBU (34 mg, 0.22 mmol) dodat je gustoj suspenziji 2-(3-(cijanometil)ciklobutiliden)acetonitrila (Priprema 52, 32 mg, 0.24 mmol) i 6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-4-(1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazina (Priprema 53, 53 mg, 0.20 mmol) u MeCN (4.8 mL). Smeša je zagrevana na oko 50 °C oko 16 časova, zatim koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobila smeša jedinjenja iz naslova kao 1:1 smeša cis/trans izomera (80 mg, 83%). Izomeri su razdvojeni sa HPLC da bi se dobio 2,2’-((1s,3s)-1-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[ 1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan-1,3-diil)diacetonitril kao čvrsta supstanca (cis izomer, 27 mg, 36%).<1>H NMR (500 MHz, 9:1 CDCl3-CD3OD) δ: 8.45 (s, 1 H), 8.35 (s, 1 H), 8.25 (s, 1 H), 7.99 (d, 1 H), 7.95 (s, 1 H), 7.92 (s, 1 H), 6.93 (s, 1 H), 3.95 (s, 3 H), 3.72 (s, 2 H), 3.18 (s, 2 H), 2.81 - 2.91 (m, 2 H), 2.72 - 2.81 (m, 1 H), 2.72 - 2.81 (m, 1 H), 2.64 - 2.72 (m, 2 H), 2.61 (d, 2 H). LCMS

1

m/z = 399.1 [MH]+ i 2,2’-((1r,3r)-1-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan-1,3-diil) diacetonitril kao čvrsta supstanca (trans izomer, 14 mg, 18%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ: 8.49 (s, 1 H), 8.46 (s, 1 H), 8.32 (s, 1 H), 8.05 (d, 1 H), 7.96 (m, 2 H), 6.95 (d, 1 H), 4.00 (s, 3 H), 3.75 (br. s., 1 H), 3.15 - 3.25 (m, 2 H), 3.11 (s, 2 H), 2.88 (tt, 1 H), 2.64 (d, 2 H), 2.48 - 2.59 (m, 2 H). LCMS m/z = 399.1 [MH]+

Priprema 54

2-(3-(Benziloksi)ciklobutiliden)acetonitril

[0251]

[0252] Rastvoru (EtO)2P(O)CH2CN (24.1 g, 136 mmol) u suvom TF (500 mL) dodat je LiBr (11.8 g, 136 mmol) i TEA (18.4 g, 182 mmol) i rezultujuća smeša je mešana na oko 20 °C oko 1 h. Ovome je dodat 3-(benziloksi)ciklobutan-1-on (16.00 g, 90.8 mmol). Smeša je mešana na oko 20 °C oko 20 h. Smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bledo žuta tečnost (18 g, 99%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.29 - 7.40 (m, 5 H), 5.24 (dt, 1 H), 4.45 - 4.53 (m, 2 H), 4.19 (kvin, 1 H), 3.19 - 3.29 (m, 1 H), 3.03 - 3.13 (m, 1 H), 2.86 - 3.00 (m, 2 H). LCMS m/z = 200.1 [MH]+

Priprema 55

2-(3-(Benziloksi)-1-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutil)acetonitril (smeša cis i trans izomera)

[0253]

2

[0254] DBU (1.448 g, 9.4 mmol) dodat je Rastvoru 6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-4-(1H-pirazol-4-il)pirazolo[ 1,5-a]pirazina (Priprema 53, 313 mg, 1.18 mmol) i 2-(3-(benziloksi)ciklobutiliden)acetonitrila (Priprema 54, 470 mg, 2.36 mmol) u MeCN (6.38 mL). Smeša je mešana na oko 20 °C oko 18 h, zatim je sipana u aq. NaH2PO4rastvor da bi se održala pH od oko 5. Smeša je ekstrahovana tri puta sa DCM. Kombinovani DCM ekstrakti su koncentrovani i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (474 mg, 86%).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 8.67 - 8.72 (m, 2 H), 8.63 (s, 1 H), 8.39 (s, 1 H), 8.22 (s, 1 H), 8.04 - 8.10 (m, 2 H), 7.25 - 7.42 (m, 5 H), 4.53 (s, 2 H), 4.24 - 4.34 (m, 1 H), 3.97 (s, 3 H), 3.29 (s, 2 H), 2.92 - 3.02 (m, 2 H), 2.77 - 2.88 (m, 2 H). LCMS m/z = 465.3 [MH]+

Primer 13

2-((1s,3r)-3-Hidroksi-1-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutil) acetonitril (cis izomer)

[0255]

Primer 14

2-((1r,3s)-3-Hidroksi-1-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutil) acetonitril (trans izomer)

[0256]

[0257] Natrijum jodid je osušen sa zagrejanim vazduhom iz pištolja na maksimalnoj toploti 5 min zatim ohlađen do oko 25 °C pod azotom pre upotrebe. Osušeni NaI (1.21 g, 8.1 mmol) dodat je na oko 20 °C mešanom rastvoru (2-(3-(benziloksi)- 1-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutil)acetonitrila (Priprema 55, 377 mg, 0.81 mmol) u MeCN (12 mL), praćeno sa TMSCI (1.05 mL, 8.1 mmol). Smeša je mešana na oko 50 °C oko 18 h. Dodatni deo i NaI i TMSCI su dodati i smeša je održavana dodatno na oko 50 °C oko 8 h. Ohlađena smeša je sipana u ledeno hladni zasićeni aq. NaHCO3koji sadrži natrijum tiosulfat pentahidrat (10.1 g, 40.6 mmol) i ekstrahovana tri puta sa EtOAc. Kombinovani EtOAc ekstrakti su koncentrovani da bi se dobila smeša dva jedinjenja iz

4

naslova. Ova smeša je prečišćena hromatografijom da bi se dobio 2-((1s,3r)-3-hidroksi-1-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutil)acetonitril (trans izomer, 80 mg, 26%)<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 8.72 (s, 1 H), 8.71 (s, 1 H), 8.42 (s, 1 H), 8.24 (s, 1 H), 8.05 - 8.10 (m, 2 H), 7.24 (d, 1 H), 4.34 - 4.44 (m, 1 H), 3.98 (s, 3 H), 3.35 (s, 2 H), 3.22 - 3.28 (m, 2 H), 2.49 (dd, 2 H). LCMS m/z = 375.4 [MH]+ i 2-((1r,3s)-3-hidroksi-1-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutil)acetonitril (cis izomer, 180 mg, 59%).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 8.67 (s, 1 H), 8.62 (s, 1 H), 8.38 (s, 1 H), 8.21 (s, 1 H), 8.07 (d, 1 H), 8.05 (s, 1 H), 8.04 - 8.06 (m, 1 H), 7.21 (d, 1 H), 4.41 (kvin, 1 H), 3.97 (s, 3 H), 3.28 (s, 2 H), 2.95 - 3.04 (m, 2 H), 2.68 - 2.78 (m, 2 H). LCMS m/z = 375.4 [MH]+

Primer 15

2-((1r,3s)-3-Metoksi-1-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutil) acetonitril (trans izomer)

[0258]

i

Primer 16

2-((1s,3r)-3-Metoksi-1-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutil) acetonitril (cis izomer)

[0259]

[0260] Rastvor smeše 2-((1s,3r)-3-hidroksi-1-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)- 1H-pirazol-1-il)ciklobutil)acetonitril i 2-((1r,3s)-3-Hidroksi-1-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5- a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutil)acetonitrila (Primeri 13 i 14, smeša cis i trans izomera, 48 mg, 0.13 mmol) u TF (0.2 mL) je sekvencijalno tretirana sa tetrabutilamonijum bromidom (TBAB, 126 mg, 0.38 mmol), 1 M aq. NaOH (1.02 mL) i dimetil sulfatom (6 mL). Reakciona vijalica je zapečaćena i snažno mešana na oko 20 °C oko 1 h. Dodato je još dimetil sulfata (14 mL) i TBAB (10 mg) i reakcija je održavana na oko 20 °C oko 2 h. Smeša je ekstrahovana tri puta sa EtOAc i kombinovani EtOAc ekstrakti su osušeni (Na2SO4) i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobila smeša cis i trans izomera. Dodatno prečišćavanje sa HPLC dalo je 2-((1r,3s)-3-metoksi-1-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4- il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutil)acetonitril kao čvrstu supstancu (trans izomer, 10 mg, 20%)<1>H NMR (400 MHz, CD3CN) δ: 8.61 (d, 1 H), 8.55 (s, 1 H), 8.38 (s, 1 H), 8.12 (s, 1 H), 8.05 (d, 1 H), 7.99 (s, 1 H), 7.13 (d, 1 H), 3.99 -4.08 (m, 1 H), 3.93 (s, 3 H), 3.27 (s, 5 H), 3.13 - 3.21 (m, 2 H), 2.45 - 2.53 (m, 2 H). LCMS m/z = 389.1 [MH]+ i 2-((1s,3r)-3-metoksi-1-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutil)acetonitril kao čvrstu supstancu (cis izomer, 17 mg, 33%).<1>H NMR (400 MHz, CD3CN) δ: 8.60 (d, 1 H), 8.49 (s, 1 H), 8.36 (s, 1 H), 8.12 (s, 1 H), 8.04 (d, 1 H), 7.98 (s, 1 H), 7.12 (dd, 1 H), 4.03 (kvin, 1 H), 3.92 (s, 3 H), 3.26 (s, 3 H), 3.19 (s, 2 H), 2.89 - 2.97 (m, 2 H), 2.65 - 2.74 (m, 2 H). LCMS m/z = 389.1 [MH]+

Priprema 56

Benzil (R)-2-metil-3-oksoazetidin-1-karboksilat

[0261]

Deo 1

[0262] Rastvor N,4-dimetil-N-nitrozobenzensulfonamida (Diazald®, 21.25 g, 99.19 mmol) u Et2O (150 mL) dodat je u kapima rastvoru KOH (6 g, 106.9 mmol) i 2-(2-etoksietoksi)etanola (30 mL) i vode (10 mL) na oko 70 °C. Smeša je zagrevana na oko 70 °C i eterični rastvor diazometana je sakupljen destilacijom kao žuta tečnost (100 mL, procenjeno da sadrži 66 mmol diazometana) korišćenjem suvi-led/aceton kondenzatora i korišćen neposredno u Delu 2.

Deo 2

[0263] Etil hloroformat (2.430 g, 22.4 mmol) dodat je u kapima rastvoru Cbz-D-alanina (5.00 g, 22.4 mmol) i TEA (2.27 mg, 22.4 mmol) u TF (50 mL) na oko -15 °C. Reakciona smeša je zagrevana do oko 0 °C i u kapima je dodat rastvor diazometana iz Dela 1 (100 mL, oko 66 mmol) i mešan je na oko 20 °C oko 16 h. Reakciona smeša je ugašena sa vodom (10 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 x 30 mL). Kombinovani EtOAc ekstrakti su osušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobio diazo-keton intermedijer (4.5 g, 81%) kao bela čvrsta supstanca. Materijal je korišćen u Delu 3.

Deo 3

[0264] Rastvoru diazo-keton intermedijera iz Dela 2 (4.50 g, 18.2 mmol) u DCM (450 mL) dodati su TEA (18 mg, 0.18 mmol) i Rh2(OAc)4 (40 mg, 0.091 mmol) na oko 0 °C. Smeša je mešana oko 16 h na oko 25 °C. Smeša je ugašena sa vodom (50 mL) i DCM faza je razdvojena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (1.20 g, 30%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.34 - 7.38 (m, 5 H), 5.18 (m, 2 H), 5.03 (m, 1 H), 4.65 - 4.81 (m, 2 H), 1.49 (d, 3 H). GCMS m/z = 219 [M]+

Priprema 57

Benzil (R)-3-(cijanometilen)-2-metilazetidin-1-karboksilat

[0265]

[0266] Smeši LiBr (166 mg, 1.92 mmol) i TEA (277 mg, 2.74 mmol) u TF (10 mL) dodat je (EtO)2P(O)CH2CN (339 mg, 1.92 mmol) na oko 25 °C. Nakon oko 2.5 h, benzil (R)-2-metil-3-oksoazetidin-1- karboksilat (Priprema 56, 300 mg, 1.37 mmol) u TF (2 mL) dodat je na oko 25 °C i Smeša je mešana oko 16 h. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao smeša E/Z olefin izomera kao bezbojno ulje (290 mg, 87%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.33 - 7.40 (m, 5 H), 5.36 (m, 1 H), 5.10 - 5.17 (m, 2 H), 4.97 (m, 1 H), 4.63 - 4.77 (m, 2 H), 1.50 - 1.67 (m, 3 H).

Priprema 58

Benzil (2R)-3-(cijanometil)-2-metil-3-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol- 1-il)azetidin-1-karboksilat

[0267]

[0268] Rastvoru 6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-4-(1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin (Priprema 53, 268 mg, 1.01 mmol) u MeCN (15 mL) dodati su benzil (R)-3-(cijanometilen)-2-metilazetidin-1-karboksilat (Priprema 57, 294 mg, 1.21 mmol) i DBU (77 mg, 0.51 mmol) na oko 15 °C. Smeša je mešana na oko 25 °C oko 7 h pre razblaživanja sa EtOAc (50 mL) i isprana sa 1 M aq. limunske kiseline (15 mL) praćeno sa fiziološkim rastvorom (15 mL). EtOAc ekstrakt je koncentrovan i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta guma (500 mg, 97%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.49 (s, 1 H), 8.33 (s, 1 H), 8.32 (s, 1 H), 8.05 (d, 1 H), 7.96 (s, 1 H), 7.95 (s, 1 H), 7.33 - 7.40 (m, 5 H), 6.93 (d, 2 H), 5.15 (s, 2 H), 4.87 (m, 1 H), 4.61 (d, 1 H), 4.26 (d, 1 H), 4.01 (s, 3 H), 3.27 (s, 2 H), 1.69 (d, 3 H). LCMS m/z = 530.1 [M+Na]+

Priprema 59

2-((2R)-2-Metil-3-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)azetidin-3-il)acetonitril

[0269]

[0270] Smeši NaI (2.36 g, 15.8 mmol) u MeCN (16 mL) dodat je TMSCI (2 mL, 15.8 mmol) na oko 0 °C. Smeša je mešana na oko 15 °C oko 4 h. Rastvor benzil (2R)-3-(cijanometil)-2-metil-3-(4-(6-(1- metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)azetidin-1-karboksilata (Priprema 58, 400 mg, 0.79 mmol) u MeCN (4 mL) dodat je na oko 0 °C. Mešanje je nastavljeno na oko 15 °C oko 3 h. Smeša je ohlađena do oko 10 °C i ugašena sa dodavanjem TEA (2 mL). Smeša je koncentrovana. Ostatak je rastvoren u EtOAc (20 mL) i MeOH (2 mL) i prisutne čvrste supstance su uklonjene sa filtracijom. Filtrat je koncentrovan i ostatak je prečišćen sa TLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (200 mg, 68%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 9.06 (s, 1 H), 9.03 (s, 1 H), 8.59 (s, 1 H), 8.39 (s, 1 H), 8.22 (d, 1 H), 8.16 (s, 1 H), 7.47 (s, 1 H), 5.09 (m, 1 H), 4.74 (d, 1 H), 4.24 (d, 1 H), 3.91 (s, 3 H), 2.99 (s, 2 H), 1.65 (d, 3 H). LCMS m/z = 374.0 [MH]+

Primer 17

2-((2R,3S)-2-Metil-3-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-1-(2,2,2-trifluoroetil) azetidin-3-il)acetonitril

[0271]

[0272] Rastvoru 2-((2R)-2-metil-3-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1- il)azetidin-3-il)acetonitrila (Priprema 59, 200 mg, 0.43 mmol) u DMF (5 mL) dodati su 2,2,2-trifluoroetil trifluorometansulfonat (298 mg, 1.29 mmol) i DIPEA (332 mg, 2.57 mmol). Smeša je mešana na oko 10 °C oko 36 h pre rastvaranja sa EtOAc (30 mL) i isprana sa fiziološkim rastvorom (15 mL). EtOAc ekstrakt je koncentrovan i ostatak je prečišćen sa HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao smeša diastereomera (80 mg, 41%) kao bela čvrsta supstanca. Dodatno HPLC prečišćavanje dalo je jedinjenje iz naslova kao belu čvrstu supstancu (41.8 mg, 21%, 94.7% ee).<1>H NMR (400 MHz, CD3CN) δ: 8.59 (s, 1 H), 8.45 (s, 1 H), 8.36 (s, 1 H), 8.10 (s, 1 H), 8.04 (d, 1 H), 7.98 (s, 1 H), 7.09 - 7.13 (m, 1 H), 3.92 - 3.96 (m, 1 H), 3.91 (s, 3 H), 3.84 - 3.89 (m, 1 H), 3.77 - 3.84 (m, 1 H), 3.38 (s, 2 H), 3.28 - 3.43 (m, 1 H), 3.15 (dq, 1 H), 1.36 (d, 3 H). LCMS m/z = 456.2 [MH]+

Primer 18

2-((1r,3r)-1-(4-(6-(1-Metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-(1H-pirazol-5-il)ciklobutil) acetonitril

[0273]

[0274] Rastvoru LiBr (70 mg, 0.81 mmol), TEA (205 mL, 1.47 mmol) u TF (10 mL), dodat je (EtO)2P(O)CH2CN (143 mg, 0.81 mmol). Smeša je mešana na oko 20 °C oko 30 min. Dodat je 3-(1H-Pirazol-5-il)ciklobutan-1-on (Priprema 99, 100 mg, 0.74 mmol) i smeša je držana na oko 20 °C oko 18 h. Oko 30% reakcionog rastvora je uzeto i dodato je 6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-4-(1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin (Priprema 53, 58 mg, 0.22 mmol) i DBU (110 mL, 0.73 mmol) u MeCN (5 mL). Mešanje na oko 20 °C je održavano oko 20 h. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (6 mg, 6%).<1>H NMR (500 MHz, CD3OD) δ: 8.85 (s, 1 H), 8.73 (s, 1 H), 8.46 (s, 1 H), 8.26 (s, 1 H), 8.10 (s, 2 H), 7.60 (br. s., 1 H), 7.28 (d, 1 H), 6.32 (d, 1 H), 3.95 - 4.04 (m, 3 H), 3.69 - 3.78 (m, 1 H), 3.33 - 3.43 (m, 2 H), 2.77 - 2.89 (m, 2 H). LCMS m/z = 425.4 [MH]+

Primer 19

(1s,3s)-3-(Cijanometil)-3-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan- 1-karbonitril

[0275]

1

[0276] Rastvoru (1s,3s)-3-(cijanometil)-3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan- 1-karbonitrila (Priprema 91, 539 mg, 1.72 mmol) i 4-hloro-6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5- a]pirazina (Priprema 11, 350 mg, 1.5 mmol) u 1,4-dioksanu (7.5 mL) dodat je 2 M aq. K3PO4(2.25 mL) na oko 25 °C. Smeša je stavljena pod azot, zatim je dodat KSFos Pd G2 (11.8 mg, 0.0150 mmol). Smeša je zagrevana na oko 40 °C oko 6 h, zatim je zagrejana do oko 80 °C da bi se rastvorio istaloženi proizvod. Vodeni sloj je uklonjen uz održavanje temperature na oko 80 °C, zatim je faza sa 1,4-dioksanom dodata u EtOH (70 mL, prethodno zagrejan do oko 50 °C). Smeša je mešana oko 10 min na oko 50 °C pre uklanjanja sa zagrevanja. Mešanje na oko 25 °C je nastavljeno oko 18 h. Čvrsta supstanca je filtrirana i isprana sa EtOH (2 x 25 mL) i osušena pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (483 mg, 84%). mp 217 - 220 °C<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 9.02 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.65 - 3.59 (m, 1H), 3.57 (s, 2H), 3.26 - 3.16 (m, 2H), 2.88 (m, 2H).

<13>C NMR (101 MHz, DMSO-d6) δ: 145.21, 142.50, 140.09, 137.15, 133.80, 131.39, 129.54, 129.24, 121.94, 121.03, 120.33, 117.69, 114.55, 99.94, 59.62, 39.28, 36.90, 27.42, 14.64. LCMS m/z = 384.2 [MH]+

Primer 20

(1r,3r)-3-(Cijanometil)-3-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan- 1-karbonitril

[0277]

2

[0278] Rastvoru (1r,3r)-3-(cijanometil)-3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan- 1-karbonitrila (Priprema 91, 3.38 g, 10.8 mmol) i 4-hloro-6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5- a]pirazina (Priprema 11, 2.20 g, 9.4 mmol) u 1,4-dioksanu (47.1 mL) dodat je 2 M aq. K3PO4(14.1 mL). Azot je barbotiran kroz smešu oko 5 min na oko 25 °C, zatim je dodat KSFos Pd G2 (37.0 mg, 0.047 mmol). Smeša je zagrevana na oko 40 °C oko 18 h, zatim je zagrejana do oko 80 °C da bi se rastvorio istaloženi proizvod. Vodeni sloj je uklonjen uz održavanje temperature na oko 80 °C, zatim je faza sa 1,4-dioksanom dodata u EtOH (471 mL, prethodno zagrejan do oko 50 °C). Smeša je mešana oko 10 min na oko 50 °C pre uklanjanja sa zagrevanja. Mešanje na oko 25 °C je nastavljeno oko 6 h. Čvrsta supstanca je filtrirana i isprana sa EtOH (2 x 25 mL), vodom (2 x 50 mL), i EtOH (2 x 25 mL). Talog je osušen pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (3.61 g, 74%).

[0279] Jedinjenje iz naslova (500 mg, 1.30 mmol) je zagrejano u 1,4-dioksanu (6.5 mL) na oko 80 °C dok se sav materijal rastvorio. Dodat je 1,2-Bis(difenilfosfino)etan (7.8 mg, 0.019 mmol) i zagrevanje na oko 80 °C je nastavljeno oko 4 h, zatim je faza sa 1,4-dioksanom dodata u EtOH (58.7 mL, prethodno zagrejanom do oko 50 °C). Dodatnih 6.5 mL zagrejanog EtOH je korišćeno za ispiranje reakcionog suda. Smeša je uklonjena sa zagrevanja. Mešanje na oko 25 °C je nastavljeno oko 18 h. Čvrsta supstanca je filtrirana i isprana sa EtOH (2 x 5 mL), vodi (5 mL), zatim EtOH (3 x 5 mL). Talog je osušen pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (450 mg, 90%). Tačka topljenja 213 - 215 °C<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 9.02 (s, 1 H) 8.92 (s, 1 H) 8.52 (s, 1 H) 8.37 (s, 1 H) 8.19 (s, 1 H) 8.16 (s, 1 H) 7.45 (s, 1 H) 3.91 (s, 3 H) 3.55 - 3.65 (m, 1 H) 3.52 (s, 2 H) 3.22 - 3.38 (m, 2 H) 2.85 - 3.00 (m, 2 H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ: 145.17, 142.46, 140.20, 137.13, 133.78, 131.38, 129.82, 129.51, 122.28, 121.13, 120.33, 117.30, 114.54, 99.91, 61.51, 39.26, 36.26, 29.65, 16.05. LCMS m/z = 384.1 [MH]+.

Priprema 60

(1r,3r)-3-(Cijanometil)-3-(3-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan- 1-karbonitril (trans izomer)

[0280]

i

(1s,3s)-3-(Cijanometil)-3-(3-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan- 1-karbonitril (cis izomer)

[0281]

[0282] Rastvoru 3-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (600 mg, 2.88 mmol) i 3-(cijanometilen)ciklobutan-1-karbonitrila (Priprema 27, 341 mg, 2.88 mmol) u MeCN (28.8 mL) dodat je DBU (439 mg, 2.88 mmol) na oko 20 °C. Nakon oko 18 h na oko 20 °C, smeša je sipana u EtOAc i 10% aq. K2HPO4. EtOAc je razdvojena i vodena faza je

4

ekstrahovana još dva puta sa EtOAc. Kombinovani EtOAc ekstrakti su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Ostatak je prečišćen sa hromatografijom na koloni da bi se dobio (1r,3r)-3-(cijanometil)-3-(3-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1- il)ciklobutan-1-karbonitril (trans izomer, 325 mg, 35%)<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.79 (s, 1 H), 3.17 - 3.28 (m, 3 H), 3.16 (s, 2 H), 2.81 - 2.89 (m, 2 H), 2.39 (s, 3 H), 1.32 (s, 12 H). LCMS m/z = 327.2 [MH]+ i (1s,3s)-3-(cijanometil)-3-(3-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan- 1-karbonitril (cis izomer, 171 mg, 18%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.75 (s, 1 H), 3.18 - 3.28 (m, 1 H), 3.08 - 3.18 (m, 2 H), 3.05 (s, 2 H), 2.93 - 3.02 (m, 2 H), 2.39 (s, 3 H), 1.32 (s, 12 H). LCMS m/z = 327.2 [MH]+

Primer 21

(1r,3r)-3-(Cijanometil)-3-(3-metil-4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1- il)ciklobutan-1-karbonitril

[0283]

[0284] Rastvoru (1r,3r)-3-(cijanometil)-3-(3-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol- 1-il)ciklobutan-1-karbonitrila (Priprema 60, trans izomer, 209 mg, 0.64 mmol) u 1,4-dioksanu (4.3 mL) dodat je 4-hloro-6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin (Priprema 11, 150 mg, 0.64 mmol) i 2 M aq. K3PO4(0.96 mL). Smeša je pročišćena sa azotom oko 5 min, zatim je dodat KSFos Pd G2 (101 mg, 0.13 mmol). Smeša je zagrevana na oko 40 °C oko 2 h, zatim koncentrovana. Ostatak je rastvoren u EtOAc i EtOAc je ispran sa vodom. Vodena faza je ekstrahovana još dva puta sa EtOAc, zatim jednom sa DCM. Kombinovani EtOAc i DCM ekstrakti su osušeni (Na2SO4), koncentrovani, i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobila čvrsta supstanca koja je rekristalizovana od MeCN da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (120 mg, 47%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 9.00 (s, 1 H), 8.74 (s, 1 H), 8.26 (s, 1 H), 8.18 (s, 1 H), 8.08 (s, 1 H), 7.32 (s, 1 H), 3.91 (s, 3 H), 3.55 (kvin, 1 H), 3.48 (s, 2 H), 3.22 - 3.30 (m, 2 H), 2.84 - 2.93 (m, 2 H), 2.63 (s, 3 H). LCMS m/z = 398.3 [MH]+

Priprema 61

4-Bromo-1-metil-3-(((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)metil)-1H-pirazol

[0285]

[0286] Rastvoru 4-bromo-1-metil-1H-pirazol-3-metanol (720 mg, 3.77 mmol) u TF (30 mL) dodat je DHP (951 mg, 11.3 mmol) i PTSA (14 mg, 0.075 mmol). Rastvor je mešan na oko 50 °C oko 16 h. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bezbojno ulje (1.0 g, 84%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.37 (s, 1 H), 4.81 (t, 1 H), 4.74 (d, 1 H), 4.46 (d, 1 H), 3.96 - 4.03 (m, 1 H), 3.88 (s, 3 H), 3.56 - 3.63 (m, 1 H), 1.80 - 1.93 (m, 1 H), 1.59 - 1.78 (m, 3 H), 1.48 - 1.57 (m, 2 H). LCMS m/z = 190.7 [MH-TP]+

Priprema 62

(1s,3s)-3-(Cijanometil)-3-(4-(6-(1-metil-3-(((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)metil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[ 1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan-1-karbonitril

[0287]

Deo 1

[0288] Rastvoru 4-bromo-1-metil-3-(((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)metil)-1H-pirazola (Priprema 61, 200 mg, 0.73 mmol) u 1,4-dioksanu (10 mL) dodati su KOAc (313 mg, 3.19 mmol), i bis(pinakolato)dibor (405 mg, 1.59 mmol). Smeša je pročišćena sa azotom oko 5 min pre dodavanja Pd(dppf)Cl2(78 mg, 0.11 mmol). Smeša je zagrevana na oko 90 °C oko 18 h. Smeša je koncentrovana da bi se dobio nečisti uzorak 1-metil-3-(((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)metil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola kao crno ulje (234 mg), koji je korišćen u Delu 2 u nastavku bez dodatnog prečišćavanja.

Deo 2

[0289] Smeša (1r,3r)-3-(4-(6-hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-(cijanometil)ciklobutan-1- karbonitrila (Priprema 75, 85 mg, 0.25 mmol), 1-metil-3-(((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)metil)-4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol (Deo 1, 81 mg, 0.25 mmol), i 2 M aq. K3PO4(1.0 mL) u 1,4-dioksanu (3.0 mL) je pročišćena sa argonom oko 2 min, nakon čega je dodat KSFos Pd G2 (39 mg, 0.050 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na oko 45 °C oko 45 min. Faza u 1,4-dioksanu je razdvojena od vodene faze, koja je ekstrahovana dodatno sa EtOAc (5 mL). Kombinovani 1,4-dioksan i EtOAc ekstrakti su osušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (50 mg, 40%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.92 (s, 1 H), 8.45 (s, 1 H), 8.33 (s, 1 H), 8.07 - 8.10 (m, 1 H), 8.00 (s, 1 H), 6.96 (d, 1 H), 5.02 (d, 1 H), 4.87 - 4.91 (m, 1 H), 4.70 (m, 1 H), 4.59 (d, 1 H), 4.51 (d, 1 H), 3.99 (s, 3 H), 3.51 - 3.62 (m, 2 H), 3.34 - 3.44 (m, 1 H), 3.29 (s, 2 H), 2.99 (m, 2 H), 1.80 - 1.96 (m, 3 H), 1.68 - 1.80 (m, 3 H). LCMS m/z = 498.3 [MH]+

Primer 22

(1r,3r)-3-(Cijanometil)-3-(4-(6-(3-(hidroksimetil)-1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1Hpirazol- 1-il)ciklobutan-1-karbonitril

[0290]

[0291] PTSA (10 mg, 0.052 mmol) je dodat rastvoru (1s,3s)-3-(cijanometil)-3-(4-(6-(1-metil-3-(((tetrahidro- 2H-piran-2-il)oksi)metil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan-1-karbonitrila (Priprema 62, 50 mg, 0.10 mmol) u MeOH (10 mL). Reakciona smeša je držana na oko 20 °C oko 18 h. Istaložena čvrsta supstanca je filtrirana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (20 mg, 48%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 9.00 (s, 1 H), 8.91 (s, 1 H), 8.48 (s, 1 H), 8.35 (s, 1 H), 8.22 (d, 1 H), 7.47 (d, 1 H), 5.41 (br. s., 1 H), 4.66 (s, 2 H), 3.88 (s, 3 H), 3.54 - 3.62 (m, 1 H), 3.52 (s, 2 H), 3.28 - 3.34 (m, 2 H), 2.90 -2.98 (m, 2 H). LCMS m/z = 414.4 [MH]+

Priprema 63

(1r,3r)-3-(Cijanometil)-3-(4-(6-(1-metil-3-nitro-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1- il)ciklobutan-1-karbonitril

[0292]

Deo 1

[0293] Rastvoru 4-bromo-1-metil-3-nitro-1H-pirazola (200 mg, 0.97 mmol) u 1,4-dioksanu (10 mL) dodati su KOAc (285 mg, 2.90 mmol), i bis(pinakolato)dibor (368 mg, 1.45 mmol). Smeša je pročišćena sa azotom oko 5 min, nakon čega je dodat Pd(dppf)Cl2 (70.8 mg, 0.097 mmol). Smeša je zagrevana na oko 90 °C oko 18 h. Smeša je koncentrovana da bi se dobio nečisti 1-metil-3-nitro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan- 2-il)-1H-pirazol kao crno ulje, koje je korišćeno bez dodatnog prečišćavanja u Delu 2.

Deo 2

[0294] Smeša (1r,3r)-3-(4-(6-hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-(cijanometil)ciklobutan-1- karbonitrila (Priprema 75, 130 mg, 0.38 mmol), 1-metil-3-nitro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1Hpirazola (Deo 1, 97 mg, 0.38 mmol), i 2 M aq. K3PO4(2.0 mL) u 1,4-dioksanu (6.0 mL) je pročišćena sa argonom oko 2 min, nakon čega je dodat KSFos Pd G2 (60.6 mg, 0.077 mmol). Smeša je zagrevana na oko 45 °C oko 45 min. Faza u 1,4-dioksanu je razdvojena od vodene faze, koja je dodatno ekstrahovana sa EtOAc (10 mL). Kombinovani 1,4-dioksan i EtOAc ekstrakti su osušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (120 mg, 72%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 9.10 (s, 1 H), 8.90 (s, 1 H), 8.56 (s, 1 H), 8.43 (s, 1 H), 8.32 (d, 1 H), 7.56 (br. s., 1 H), 4.05 (s, 3 H), 3.54 - 3.60 (m, 1 H), 3.51 (s, 2 H), 3.18 - 3.29 (m, 2 H), 2.88 - 2.98 (m, 2 H). LCMS m/z = 429.4 [MH]+

Primer 23 (1r,3r)-3-(4-(6-(3-Amino-1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-(cijanometil) ciklobutan-1-karbonitril

[0296] Rastvoru (1r,3r)-3-(cijanometil)-3-(4-(6-(1-metil-3-nitro-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)- 1H-pirazol-1-il)ciklobutan-1-karbonitrila (Priprema 63, 120 mg, 0.28 mmol) u EtOH (3 mL) i vodi (0.5 mL) dodati su NH4Cl (90 mg, 1.68 mmol) i gvožđe u prahu (50 mg, 0.90 mmol). Reakcija je mešana na oko 60 °C oko 18 h, nakon čega su dodati dodatni delovi gvožđa u prahu i NH4CI. Smeša je zagrevana na oko 100 °C oko 3 h. Smeša je koncentrovana i dodat je vrući EtOH (20 mL). Nerastvorene čvrste supstance su uklonjene sa filtracijom. Filtrat je koncentrovan i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (10 mg, 9%).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 8.74 (s, 1 H), 8.67 (s, 1 H), 8.40 (s, 1 H), 8.08 (d, 1 H), 7.94 (s, 1 H), 7.24 (d, 1 H), 3.77 (s, 3 H), 3.47 - 3.55 (m, 1 H), 3.43 (s, 2 H), 3.34 - 3.41 (m, 2 H), 2.98 (dd, 2 H). LCMS m/z = 399.4 [MH]+

Priprema 64

3,5-Dibromo-1-metil-1H-pirazol

[0297]

[0298] Rastvor 3,5-dibromopirazola (6.5 g, 28.7 mmol) u TF (30 mL) dodat je u kapima ledeno hladnoj suspenziji NaH (2.88 g, 60% u mineralnom ulju, 71.9 mmol) u TF (45 mL).

1

Smeša je mešana na oko 0 °C oko 1 h. Dodat je jodo metan (5.37 mL, 86.3 mmol) i smeša je mešana na oko 0 °C oko 3 h, zatim je mešanje nastavljeno na oko 15 °C oko 2 h. Smeša je sipana u zasićeni aq. NH4Cl (20 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (40 mL). EtOAc ekstrakt je ispran sa fiziološkim rastvorom (20 mL), osušen (Na2SO4), i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bezbojno ulje (5.5 g, 79%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 6.31 (s, 1 H), 3.87 (s, 3 H). LCMS m/z = 240.6 [MH]+ (<79>Br,<81>Br izotop)

Priprema 65

3-Bromo-1-metil-1H-pirazol-5-karboksilna kiselina

[0299]

[0300] Rastvor 3,5-dibromo-1-metil-1H-pirazol (Priprema 64, 3.0 g, 12.5 mmol) u TF (30 mL) je tretiran u kapima sa n-BuLi (2.5 M, 6.25 mL, 15.6 mmol) na oko -70 °C. Nakon oko 30 min na ovoj temperaturi, rastvor CO2u TF (30 mL) dodat je u kapima uz održavanje unutrašnje temperature ispod oko -65 °C. Smeša je mešana na ovoj temperaturi oko 1 h. Reakciona smeša je zatim sipana u 1 M aq. HCI (50 mL) i smeša je delimično koncentrovana da bi se uklonila većina TF. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (50 mL). DCM ekstrakt je osušen (Na2SO4) i koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (2.1 g, 81%).<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 13.70 (brs, 1H), 6.95 (s, 1H), 4.04 (s, 3H). LCMS m/z = 206.9 [MH]+ (<81>Br izotop)

Priprema 66

terc-Butil (3-bromo-1-metil-1H-pirazol-5-il)karbamat

[0301]

1 1

[0302] Difenilfosforil azid (18.8 g, 68.5 mmol) dodat je rastvoru 5-bromo-2-metil-2H-pirazol-3- karboksilne kiseline (Priprema 65, 7.02 g, 34.2 mmol) i DIPEA (11.9 mL, 68.5 mmol) u tbutanolu (114 mL). Smeša je mešana na oko 45 °C oko 30 min, zatim zagrevana pod refleksom oko 5 h. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc (60 mL) i isprana sa zasićenim aq. NaHCO3(2 x 30 mL) i fiziološkim rastvorom (20 mL). EtOAc ekstrakt je koncentrovan i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (4.80 g, 51%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 6.28 (br s, 1 H), 6.18 (s, 1 H), 3.73 (s, 3H), 1.50 (s, 9H). LCMS m/z = 221.7 [MH-C4H8]+ (<81>Br izotop)

Priprema 67

3-Bromo-1-metil-5-(diBoc)-amino-1H-pirazol

[0303]

[0304] Di-terc-butil dikarbonat (1.58 g, 7.24 mmol) dodat je rastvoru terc-butil (3-bromo-1-metil-1H-pirazol- 5-il)karbamata (Priprema 66, 2.0 g, 7.24 mmol), TEA (4.04 mL, 29.0 mmol), i DMAP (177 mg, 1.45 mmol) u DCM (40 mL). Smeša je mešana na oko 20 °C oko 18 h. Dodata je voda (25 mL) i smeša je ekstrahovana sa DCM (2 x 30 mL). Kombinovani DCM ekstrakti su koncentrovani i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.85 g, 67)%.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 6.06 - 6.20 (m, 1 H), 3.64 (s, 3 H), 1.44 (s, 18 H). LCMS m/z = 378.2 [MH]+ (<81>Br izotop)

Primer 24

1 2

2-((1r,3s)-1-(4-(6-(5-Amino-1-metil-1H-pirazol-3-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil) acetonitril

[0305]

Deo 1

[0306] Smeša 3-bromo-1-metil-5-(diBoc)-amino-1H-pirazola (Priprema 67, 1200 mg, 3.19 mmol), KOAc (988 mg, 9.57 mmol) i bis(pinakolato)dibora (1210 mg, 4.78 mmol) u 1,4-dioksanu (15 mL) je pročišćena sa argonom oko 5 minuta pre dodavanja KSFos Pd G2 (502 mg, 0.64 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na oko 65 °C oko 3.5 h, zatim su dodati 2-((1s,3r)-1-(4-(6-hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil) acetonitril (Priprema 100, 1090 mg, 3.19 mmol), 2 M aq. K3PO4 (4.78 mL) i KSFos Pd G2 (502 mg, 0.64 mmol). Smeša je ponovo pročišćena sa argonom, zatim zagrejana na oko 80 °C oko 1 h. EtOAc je dodat i faze su razdvojene. Vodena faza je ekstrahovana još dva puta sa EtOAc i kombinovani EtOAc ekstrakti su koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobila smeša mono- i di- BOC intermedijera (710 mg, 36%) koja je korišćena u Delu 2.

Deo 2

[0307] TFA (6 mL, 80 mmol) je dodat rastvoru mono- i di-BOC intermedijera iz Dela 1 (710 mg, 1.18 mmol) u DCM (6 mL) na oko 20 °C. Nakon oko 1 h, smeša je koncentrovana. Dodat je DCM, praćeno sa dovoljno zasićenog aq. NaHCO3da bi se pH rastvora načinila baznom. Faze su razdvojene i vodena faza je ekstrahovana još dva puta sa DCM. Kombinovani DCM ekstrakti su osušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Ekvivalentna reakcija korišćenjem jedinjenja

1

iz Dela 1 (220 mg, 0.36 mmol) i TFA (2 mL, 30 mmol) u DCM (2 mL) je kombinovana sa materijalom iz prethodne reakcije i kombinovani uzorci su prečišćeni hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao providna guma (470 mg, 99%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.81 (s, 1 H), 8.73 (s, 1 H), 8.40 (s, 1 H), 8.21 (d, 1 H), 7.44 (d, 1 H), 5.33 (br. s, 2 H), 3.94 - 4.02 (m, 1 H), 3.62 (s, 3 H), 3.44 (s, 2 H), 3.21 (s, 3 H), 3.14 - 3.20 (m, 2 H), 2.39 - 2.45 (m, 2 H). LCMS m/z = 404.5 [MH]+

Priprema 68

Dietil 4-bromo-1H-pirazol-3,5-dikarboksilat

[0308]

[0309] Smeša dietil estra 1H-pirazol-3,5-dikarboksilne kiseline (4.0 g, 18.85 mmol) i N-bromosukcinimida (4.03 g, 22.6 mmol) u smeši konc. azotne kiseline i glacijalne sirćetne kiseline (12.0 mL, 5:95 zapr/zapr) zagrevana je mikrotalasnim zračenjem na oko 120 °C oko 20 minuta. Ukupno 13.0 g (61.26 mmol) početnog materijala dietil estra 1H-pirazol-3,5-dikarboksilne kiseline je obrađeno na ovaj način u paralelnim serijama. Rezultujuće braon sirove reakcione smeše su kombinovane, sipane u vodu (260 mL), i tretirane sa dovoljno NaHCO3da bi pH rastvora bila bazna. Smeša je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 300 mL). Kombinovani EtOAc ekstrakti su osušeni (Na2SO4) i koncentrovani da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao prljavo bela čvrsta supstanca (17.0 g, 95%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.79 (br. s., 1 H), 4.44 (q, 4 H), 1.42 (t, 6 H). LCMS m/z = 290.7 [MH]+ (<79>Br izotop)

Priprema 69

Dietil 4-bromo-1-(2-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-2-oksoetil)-1H-pirazol-3,5-dikarboksilat

[0310]

1 4

[0311] Rastvor dietil estra 4-bromo-1H-pirazol-3,5-dikarboksilne kiseline (Priprema 68, 9.66 g, 33.18 mmol) i 2-bromo-1-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-etanona (Priprema 6, 6.0 g, 29.55 mmol) u MeCN (140 mL) tretiran je sa K2CO3(5.31 g, 38.40 mmol) i reakciona smeša je mešana na oko 25 °C oko 16 h. Dodata je voda (100 mL) i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 100 mL). Kombinovani EtOAc ekstrakti su osušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (10.0 g, 82%).<1>HNMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.95 (s, 1 H), 7.92 (s, 1 H), 5.82 (s, 2 H), 4.43 (q, 2 H), 4.36 (q, 2 H), 3.96 (s, 3 H), 1.45 (t, 3 H), 1.35 (t, 3 H). LCMS m/z = 436.8 [MNa]+ (<81>Br izotop)

Priprema 70 Dietil 4-metil-1-(2-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-2-oksoetil)-1H-pirazol-3,5-dikarboksilat

[0312]

[0313] Smeša K2CO3(11.0 g, 79.9 mmol) i dietil estra 4-bromo-1H-[2-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-2-okso-etil]-1H-pirazol- 3,5-dikarboksilne kiseline (Priprema 69, 11.0 g, 26.62 mmol) u DMF (133.0 mL) je pročišćena sa azotom na oko 25 °C, nakon čega su dodati Pd(dppf)Cl2(1950 mg, 2.66 mmol) i trimetilboroksin (10.0 g, 79.9 mmol) i rastvor je zagrevan na oko 110 °C oko 5 h. Ohlađena reakcija je razblažena sa EtOAc (100 mL) i rezultujuća smeša je isprana sa fiziološkim rastvorom (2 x 100 mL), osušena (Na2SO4), i koncentrovana. Ostatak je

1

prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (5.45 g, 50%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.92 (s, 1 H), 7.90 (s, 1 H), 5.78 (s, 2 H), 4.41 (q, 2 H), 4.28 (q, 2 H), 3.95 (s, 3 H), 2.58 (s, 3 H), 1.39 (t, 3 H), 1.31 (t, 3 H). LCMS m/z = 348.9 [MH]+

Priprema 71

Etil 4-hidroksi-3-metil-6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-2-karboksilat

[0314]

[0315] Dietil ester 4-Metil-[2-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-2-okso-etil]-1H-pirazol-3,5-dikarboksilne kiseline (Priprema 70, 5.35 g, 15.36 mmol) je pomešana sa suvim EtOH (15 mL) i koncentrovana. Rezultujući ostatak je rastvoren u EtOH (40 mL) i dodat je NH4OAc (3.55 g, 46.1 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na oko 130 °C u autoklavu oko 8 h. Nakon hlađenja, smeša je filtrirana i talog je osušen da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao prljavo bela čvrsta supstanca (3.40 g, 73%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.45 (br. s., 1 H), 8.27 (s, 1 H), 8.08 (s, 1 H), 8.02 (s, 1 H), 4.31 (m, 2 H), 3.87 (s, 3 H), 2.61 (s, 3 H), 1.24 -1.40 (m, 3 H). LCMS m/z = 301.8 [MH]+

Priprema 72

4-Hidroksi-3-metil-6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-karboksilna kiselina

[0316]

1

[0317] Litijum hidroksid monohidrat (1.42 g, 33.9 mmol) dodat je suspenziji etil estra 4-hidroksi-3-metil-6-(1- metil-1H-pirazol-4-il)-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-karboksilne kiseline (Priprema 71, 3.40 g, 11.3 mmol) u TF (50 mL), MeOH (50 mL) i vode (25 mL). Smeša je mešana na oko 60 °C oko 4 h. Ohlađena smeša je koncentrovana i dodata je voda (50 mL). pH smeše je podešena do oko 2 sa dodavanjem 12 M aq. HCl. Rezultujući talog je filtriran i ispran sa vodom (50 mL), zatim osušen pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca.<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.90 - 13.20 (br. s, 1 H), 11.40 (s, 1 H), 8.30 (s, 1 H), 8.02 (m, 2 H), 3.90 (s, 3 H), 2.60 (s, 3 H). LCMS m/z = 301.8 [MH]+, 323.8 [MNa]+

Priprema 73

3-Metil-6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-pirazolo[1,5-a]pirazin-4-ol

[0318]

[0319] 4-Hidroksi-3-metil-6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-karboksilna kiselina (Priprema 72, 2.58 g, 9.44 mmol) dodata je u delovima prethodno zagrejanom sulfolanu (18.9 mL) na oko 280 °C. Kada je završeno dodavanje, smeša je mešana dodatnih 1 h na oko 280 °C. Ohlađena smeša je prečišćena direktno hromatografijom na silika gelu (eluiranjem sa petroleum eter:EtOAc (100:0 to 50:50), zatim DCM:MeOH (91:9)) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (1.50 g, 69%). 1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.20 (s, 1 H), 8.38 (s, 1 H), 8.02 (s, 1 H), 7.96 (s, 1 H), 7.70 (s, 1 H), 3.85 (s, 3 H), 2.40 (s, 3 H).

Priprema 74

4-Hloro-3-metil-6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-pirazolo[1,5-a]pirazin

[0320]

1

[0321] Suspenziji 3-metil-6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-pirazolo[1,5-a]pirazin-4-ola (Priprema 73, 1.40 g, 6.11 mmol) u MeCN (60.0 mL) dodat je POCl3(4.68 g, 30.5 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na oko 80 °C oko 16 h. Nakon hlađenja, smeša je sipana u vodu (200 mL) na oko 25 °C. Smeša je podešena do oko pH 9 sa dodavanjem zasićenog aq. NaHCO3(200 mL), zatim ekstrahovana sa EtOAc (5 x 100 mL). Kombinovani EtOAc ekstrakti su osušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom, zatim dodatno prečišćen sa HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (163 mg, 11%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.37 (s, 1 H), 7.89 (s, 1 H), 7.85 (s, 1 H), 7.80 (s, 1 H), 3.96 (s, 3 H), 2.57 (s, 3 H). LCMS m/z = 247.7 [MH]+ (<35>Cl izotop)

Primer 25 (1r,3r)-3-(Cijanometil)-3-(4-(3-metil-6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1- il)ciklobutan-1-karbonitril

[0322]

[0323] Rastvoru 4-hloro-3-metil-6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-pirazolo[1,5-a]pirazina (Priprema 74, 98 mg, 0.40 mmol) i (1r,3r)-3-(cijanometil)-3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan- 1-karbonitrila (Priprema 91, 247 mg, 0.79 mmol) u 1,4-dioksanu (9 mL) dodat je 2 M aq. K3PO4(0.59 mL) na oko 25 °C i smeša je pročišćena sa azotom oko 2 min pre dodavanja KSFos Pd G2 (62.3 mg, 0.079 mmol). Smeša je pročišćena sa azotom oko 3 min, zatim zagrevana na oko 80 °C oko 16 h. Smeša je filtrirana i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom, zatim dodatno prečišćen sa

1

HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao svetlo žuta čvrsta supstanca (56 mg, 36%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ: 8.98 (s, 1 H), 8.94 (s, 1 H), 8.60 (s, 1 H), 8.27 (s, 1 H), 8.22 (s, 1 H), 8.10 (s, 1 H), 7.98 (s, 1 H), 3.90 (s, 3 H), 3.52 - 3.57 (m, 3 H), 3.19 - 3.26 (m, 2 H), 2.91 - 2.97 (m, 2 H), 3.06 (s, 3 H). LCMS m/z = 398.0 [MH]+

Priprema 75

(1r,3r)-3-(4-(6-Hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-(cijanometil)ciklobutan-1-karbonitril

[0324]

[0325] Smeša 4,6-dihloropirazolo[1,5-a]pirazina (Priprema 4, 350 mg, 1.86 mmol), (1r,3r)-3-(cijanometil)- 3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1 H-pirazol-1-il)ciklobutan-1-karbonitrila, (Priprema 91, trans izomer, 581 mg, 1.86 mmol), i 2 M aq. K3PO4(2.79 mL) u 1,4-dioksanu (10 mL) je pročišćena sa argonom oko 5 min, nakon čega je dodat bis(tri-tbutilfosfin)paladijum(0) (48.0 mg, 0.093 mmol). Smeša je držana na oko 25 °C oko 2 h zatim filtrirana. Talog je ispran sa Et2O i osušen. Filtrat je koncentrovan, triturisan sa Et2O, filtriran, ispran sa Et2O i osušen. Dva taloga su kombinovana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (605 mg, 96%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 9.05 (d, 1 H), 8.93 (s, 1 H), 8.46 (s, 1 H), 8.32 (d, 1 H), 7.61 (d, 1 H), 3.55 - 3.62 (m, 1 H), 3.54 (s, 2 H), 3.24 -3.32 (m, 2 H), 2.89 - 3.00 (m, 2 H). LCMS m/z = 338.2 [MH]+

Primer 26

1

(1r,3r)-3-(Cijanometil)-3-(4-(6-(5-metil-1H-pirazol-3-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan- 1-karbonitril

[0326]

[0327] Smeša (1r,3r)-3-(4-(6-hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-(cijanometil)ciklobutan-1- karbonitrila (Priprema 75, 85 mg, 0.25 mmol), 3-metil-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (Priprema 93, 73 mg, 0.25 mmol), i 2 M aq. K3PO4(1.0 mL) u 1,4-dioksanu (3.0 mL) je pročišćena sa argonom oko 2 min, nakon čega je dodat KSFos Pd G2 (39.6 mg, 0.050 mmol). Smeša je zagrevana na oko 45 °C oko 45 min pre hlađenja i koncentrovanja. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobio (1r,3r)-3-(cijanometil)-3-(4-(6-(5-metil-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1 H-pirazol-3-il)pirazolo[ 1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan-1-karbonitril (26 mg, 22%), koji je direktno korišćen u Delu 2. LCMS m/z = 384.3 [MH-TP]+

Deo 2

[0328] TFA (1 mL) je dodat rastvoru (1r,3r)-3-(cijanometil)-3-(4-(6-(5-metil-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)- 1H-pirazol-3-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan-1-karbonitrila (26 mg, 0.055 mmol) u DCM (2 mL). Reakciona smeša je zagrejana do oko 50 °C oko 1 h. Smeša je koncentrovana i ostatak je koncentrovan dva puta sa toluenom (5 mL svaki put). Ostatak je zatim prečišćen hromatografijom da bi se dobila čvrsta supstanca, koja je dodatno triturisana sa etrom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (8 mg, 38%).<1>H NMR (400 MHz, CD3CN) δ: 8.87 (s, 1 H), 8.66 (s, 1 H), 8.48 (s, 1 H), 8.15 (d, 1 H), 7.23 (s, 1 H), 6.73 (s, 1 H), 3.46 (dd, 1 H), 3.36 (s, 2 H), 3.32 - 3.41 (m, 2 H), 2.98 (dd, 2 H), 2.37 (s, 3 H). LCMS m/z = 384.4 [MH]+

11

Primer 27

2-((1s,3r)-1-(4-(6-(5-(Hidroksimetil)-1H-pirazol-3-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil) acetonitril

[0329]

[0330] Rastvor 2-((1s,3r)-1-(4-(6-hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil)acetonitrila (Priprema 82, 100 mg, 0.29 mmol), i (3-(tributilstanil)-1H-pirazol-5-il)metanola (Priprema 32, 113 mg, 0.29 mmol) u 1,4-dioksanu (2 mL) je pročišćen sa argonom 5 min, praćeno sa dodavanjem KSFos Pd G2 (45.9 mg, 0.058 mmol). Smeša je zagrevana na oko 80 °C oko 18 h. Rezultujući talog je filtriran, ispran sa 1,4-dioksanom i Et2O, i osušen da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (62 mg, 53%).

<1>H NMR (400 MHz, CD3CN) δ: 8.86 (s, 1 H), 8.58 (s, 1 H), 8.44 (s, 1 H), 8.13 (d, 1 H), 7.21 (d, 1 H), 6.85 (s, 1 H), 4.65 (d, 2 H), 4.05 (kvin, 1 H), 3.27 (s, 3 H), 3.21 (s, 2 H), 2.90 - 2.99 (m, 2 H), 2.67 - 2.76 (m, 2 H). LCMS m/z = 405.3 [MH]+

Primer 28

2-((1r,3s)-1-(4-(6-(5-(Hidroksimetil)-1H-pirazol-3-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil) acetonitril

[0331]

[0332] Rastvor 2-((1r,3s)-1-(4-(6-hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil)acetonitrila (Priprema 39; 1000 mg, 2.92 mmol) i (3-(tributilstanil)-1H-pirazol-5-il)metanola (Priprema 32, 1130 mg, 2.92 mmol) u 1,4-dioksanu (2 mL) je pročišćen sa argonom 5 min, praćeno sa dodavanjem KSFos Pd G2 (45.9 mg, 0.058 mmol). Smeša je zagrevana na oko 80 °C oko 18 h. Talog je filtriran i zatim prečišćen hromatografijom da bi se dobila prljavo bela čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je zagrevana u dovoljno ključalog EtOH dok se nije potpuno rastvorila, i zatim mešana oko 18 h na oko 20 °C. Talog je filtriran i osušen pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao kristalna čvrsta supstanca (507 mg, 43%).<1>H NMR (400 MHz, CD3CN) δ: 11.48 (br. s.), 8.89 (s), 8.65 (s), 8.46 (s), 8.15 (d), 7.23 (s), 6.87 (s), 4.67 (d), 4.08 (kvin), 3.31 (s), 3.30 (s), 3.15 -3.25 (m), 2.53 (dd). LCMS m/z = 405.3 [MH]+

Priprema 76

Etil 5-(tributilstanil)izoksazol-3-karboksilat

[0333]

[0334] TEA (0.69 mL, 4.95 mmol) dodat je u kapima ledeno hladnom rastvoru etil 2-hloro-2-(hidroksiimino)acetata (500 mg, 3.30 mmol) i etiniltributilstanana (1040 mg, 3.30 mmol) u Et2O (10 mL). Reakciona smeša je zagrejana do oko 20 °C i držana oko 18 h. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bezbojno ulje (810 mg, 57%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 6.80 (s, 1 H), 6.77 - 6.84 (m, 1 H), 4.45 (q, 2 H), 1.51 - 1.63 (m, 6 H), 1.43 (t, 3 H), 1.34 (dq, 6 H), 1.15 - 1.26 (m, 6 H), 0.90 (t, 9 H). LCMS m/z = 454.2 [MNa]+ (<120>Sn izotop)

Priprema 77

Etil 5-(4-(1-((1r,3r)-3-cijano-1-(cijanometil)ciklobutil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-6-il)izoksazol- 3-karboksilat

[0335]

[0336] Rastvor (1r,3r)-3-(4-(6-hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-(cijanometil)ciklobutan- 1-karbonitrila (Priprema 75, 110 mg, 0.33 mmol) i etil 5-(tributilstanil)izoksazol-3-karboksilata (Priprema 76, 140 mg, 0.33 mmol) u 1,4-dioksanu (3 mL) je pročišćen sa argonom oko 5 min, praćeno sa dodavanjem KSFos Pd G2 (51.2 mg, 0.065 mmol). Smeša je zagrevana na oko 100 °C oko 5 h. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao svetlo žuta čvrsta supstanca (66 mg, 45%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 9.44 (s, 1 H), 9.02 (s, 1 H), 8.60 (s, 1 H), 8.42 (d, 1 H), 7.65 (d, 1 H), 7.62 (s, 1 H), 4.44 (q, 2 H), 3.54 - 3.63 (m, 1 H), 3.53 (s, 2 H), 3.26 - 3.36 (m, 2 H), 2.90 - 2.98 (m, 2 H), 1.37 (t, 3 H). LCMS m/z = 443.3 [MH]+

Primer 29

5-(4-(1-((1r,3r)-3-Cijano-1-(cijanometil)ciklobutil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-6-il)izoksazol-3- karboksamid

11

[0338] Rastvor etil 5-(4-(1-((1r,3r)-3-cijano-1-(cijanometil)ciklobutil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin- 6-il)izoksazol-3-karboksilata (Priprema 77, 54 mg, 0.12 mmol) u metanolu (3 mL) tretiran je sa 7 M rastvorom gasovitog amonijaka u metanolu (2 mL, 14 mmol). Reakcioni sud je čvrsto zaptiven i smeša je zagrevana na oko 95 °C oko 18 h. Nakon hlađenja, talog je filtriran, ispran sa EtOAc praćeno sa Et2O, i osušeno da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (45 mg, 89%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 9.36 (s, 1 H), 9.01 (s, 1 H), 8.58 (s, 1 H), 8.41 (d, 1 H), 8.21 (br. s, 1 H), 7.91 (br. s, 1 H), 7.64 (d, 1 H), 7.50 (s, 1 H), 3.55 - 3.62 (m, 1 H), 3.53 (s, 2 H), 3.26 - 3.35 (m, 2 H), 2.90 -2.98 (m, 2 H). LCMS m/z = 414.3 [MH]+

Priprema 78

2-((1r,3s)-1-(4-(6-(5-(DiBoc)-amino-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-pirazol-3-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1Hpirazol- 1-il)-3-metoksiciklobutil)acetonitril

[0339]

[0340] Smeša 3-bromo-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-5-(diBoc)-amino-1H-pirazola (Priprema 43, 233 mg, 0.52 mmol), KOAc (162 mg, 1.57 mmol), i bis(pinakolato)dibora (199 mg, 0.78 mmol) u 1,4-dioksanu (4 mL) je pročišćena sa argonom oko 5 min, nakon čega je dodat KSFos Pd G2 (82.1 mg, 0.10 mmol). Smeša je zagrevana na oko 65 °C oko 3.5 h. Nakon hlađenja do oko 20 °C, dodati su 2-((1r,3s)-1-(4-(6-hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1Hpirazol- 1-il)-3-metoksiciklo-butil)acetonitril (Priprema 39, 125 mg, 0.36 mmol), 2 M aq. K3PO4(0.783 mL) i KSFos Pd G2 (82.1 mg, 0.10 mmol). Smeša je ponovo pročišćena sa argonom, zatim zagrejana na oko 80 °C oko 1 h. Nakon hlađenja, smeša je razblažena sa EtOAc i faze su razdvojene. Vodena faza je ekstrahovana dva puta sa EtOAc i kombinovani EtOAc ekstrakti su koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bistro ulje (220 mg, 62%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 9.08 (s, 1 H), 8.39 (s, 1 H), 8.33 (s, 1 H), 8.09 (d, 1 H), 6.97 (d, 1 H), 6.90 (s, 1 H), 5.26 (dd, 1 H), 4.03 - 4.11 (m, 2 H), 3.64 (t, 1 H), 3.34 (s, 3 H), 3.25 (s, 2 H), 3.11 - 3.19 (m, 2 H), 2.55 - 2.63 (m, 2 H), 2.21 (m, 1 H), 1.93 (dd, 1 H), 1.59 - 1.84 (m, 4 H), 1.45 (s, 18 H). LCMS m/z = 674.5 [MH]+

Primer 30

2-((1r,3s)-1-(4-(6-(3-Amino-1H-pirazol-5-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil) acetonitril

[0341]

11

[0342] TFA (3 mL) je dodat rastvoru 2-((1r,3s)-1-(4-(6-(5-(diBoc)-amino-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-pirazol- 3-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil)acetonitrila (Priprema 78, 220 mg, 0.33 mmol) u DCM (2 mL) na oko 20 °C. Nakon oko 1 h na ovoj temperaturi, smeša je koncentrovana i ostatak je rastvoren u DCM i zasićenom aq. NaHCO3, obezbeđujući baznu pH. DCM je razdvojen i vodena faza je ekstrahovana dva puta sa DCM. Kombinovani DCM ekstrakti su osušeni (Na2SO4), koncentrovani, i ostatak je prečišćen hromatografijom praćenom sa HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (17 mg, 13%).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 8.89 (s, 1 H), 8.84 (s, 1 H), 8.54 (s, 1 H), 8.17 - 8.18 (m, 1 H), 7.34 (s, 1 H), 6.22 (s, 1 H), 4.09 - 4.12 (m, 1 H), 3.39 (s, 3 H), 3.22 - 3.27 (m, 2 H), 2.56 - 2.60 (m, 2 H). LCMS m/z = 390.3 [MH]+

Priprema 79

(4-Bromo-1-metil-1H-pirazol-3-il)metanol

[0343]

[0344] Natrijum borohidrid (3.4 g, 90 mmol) dodat je rastvoru etil 4-bromo-1-metil-1H-pirazol-3-karboksilata (4.2 g, 18 mmol) u anhidrovanom EtOH (150 mL) na oko 5 °C. Smeša je zatim zagrejana na oko 50 °C oko 16 h, nakon čega su dodati EtOAc (100 mL) i voda (100 mL). EtOAc je razdvojen, osušen (Na2SO4), i koncentrovan. Ostatak je prečišćen

11

hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (1.05 g, 31%).

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 7.84 (s, 1 H), 5.01 (td, 1 H), 4.33 (d, 2 H), 3.77 (s, 3 H). LCMS m/z = 192.7 [MH]+(<81>Br izotop)

Priprema 80

4-Bromo-1-metil-3-(((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)metil)-1H-pirazol

[0345]

[0346] Rastvoru (4-bromo-1-metil-1H-pirazol-3-il)metanol (Priprema 79, 1.00 mg, 5.23 mmol) u TF (30 mL) dodati su DHP (1.32 g, 15.7 mmol) i PTSA (19.9 mg, 0.10 mmol). Rastvor je zagrevan na oko 50 °C oko 16 h. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bezbojno ulje (1.02 g, 71%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.36 (s, 1 H), 4.80 (t, 1 H), 4.73 (d, 1 H), 4.45 (d, 1 H), 3.95 -4.03 (m, 1 H), 3.87 (s, 3 H), 3.53 - 3.64 (m, 1 H), 1.78 - 1.93 (m, 1 H), 1.60 - 1.77 (m, 3 H), 1.45 - 1.60 (m, 2 H). LCMS m/z = 174.6 [MH-TP]+

Priprema 81

1-Metil-3-(((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)metil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol

[0347]

11

[0348] Rastvoru 4-bromo-1-metil-3-(((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)metil)-1H-pirazola (Priprema 80, 330 mg, 1.20 mmol) u DMF (12 mL) dodati su bis(pinakolato)dibor (457 mg, 1.8 mmol) i KOAc (353 mg, 3.6 mmol). Smeša je pročišćena sa azotom oko 2 min, nakon čega je dodat Pd(dppf)Cl2(87.8 mg, 0.12 mmol). Smeša je zagrevana na oko 90 °C oko 16 h. Ohlađena smeša je filtrirana preko jastučića od Celite® i filter je ispran sa metanolom (15 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo nečisto jedinjenje iz naslova kao tamna guma (1.17 g), koja je korišćena u Primeru 31 sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.61 (s, 1 H), 4.75 - 4.77 (m, 1 H), 4.50 - 4.57 (m, 2 H), 4.03 -4.10 (m, 1 H), 3.91 - 3.98 (m, 1 H), 3.89 (s, 3 H), 1.81 - 1.90 (m, 1 H), 1.61 - 1.76 (m, 3 H), 1.49 - 1.56 (m, 2 H), 1.30 (s, 12 H). LCMS m/z = 239.1 [MH-TP]+

Primer 31

2-((1r,3s)-1-(4-(6-(3-(Hidroksimetil)-1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3- metoksiciklobutil)acetonitril

[0349]

Deo 1

11

[0350] Smeša 2-((1r,3s)-1-(4-(6-hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil)acetonitrila (Priprema 39, 80 mg, 0.23 mmol), 1-metil-3-(((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)metil)-4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (Priprema 81, 376 mg, 1.17 mmol), i 2 M aq. K3PO4(0.35 mL) u 1,4-dioksanu (2.5 mL) tretirana je sa KSFos Pd G2 (18.4 mg, 0.023 mmol) i smeša je pročišćena sa azotom. Smeša je zagrevana na oko 60 °C oko 20 h. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta guma. Ovaj uzorak je kombinovan sa proizvodom iz ekvivalentne reakcije izvedene korišćenjem 2-((1r,3s)-1-(4-(6-hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil)acetonitrila (Priprema 39, 120 mg, 0.35 mmol), 1-metil-3-(((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)metil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol (Priprema 81, 564 mg, 1.75 mmol), 2 M aq. K3PO4(0.525 mL), i KSFos Pd G2 (13.8 mg, 0.023 mmol) u 1,4-dioksanu (3.5 mL) da bi se dobio 2-((1r,3s)-3-metoksi-1-(4-(6-(1-metil-3-(((tetrahidro-2H-piran- 2-il)oksi)metil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutil)acetonitril u ukupnom prinosu od 150 mg (51%), koji je korišćen u Delu 2 bez dodatnog prečišćavanja.

Deo 2

[0351] TFA (1 mL) dodat je ledeno hladnom rastvoru 2-((1r,3s)-3-metoksi-1-(4-(6-(1-metil-3-(((tetrahidro-2Hpiran- 2-il)oksi)metil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutil)acetonitrila (Deo 1, 150 mg, 0.30 mmol) u DCM (3 mL). Smeša je mešana sa hlađenjem u ledu oko 2 h, zatim koncentrovana. Ostatak je prečišćen sa HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao svetlo žuta čvrsta supstanca (53 mg, 38%).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 8.87 (s, 1 H), 8.69 (s, 1 H), 8.40 (s, 1 H), 8.21 (s, 1 H), 8.13 (d, 1 H), 7.28 (d, 1 H), 4.83 (s, 2 H), 4.05 - 4.14 (m, 1 H), 3.96 (s, 3 H), 3.37 (s, 2 H), 3.34 (s, 3 H), 3.18 - 3.27 (m, 2 H), 2.53 - 2.62 (m, 2 H). LCMS m/z = 419.1 [MH]+

Priprema 82

2-((1s,3r)-1-(4-(6-Hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil)acetonitril

11

Deo 1

[0353] Rastvoru 2-((1s,3r)-1-(4-bromo-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil)acetonitrila (Priprema 37, cis izomer, 400 mg, 1.48 mmol) u toluenu (9 mL) dodati su bis(pinakolato)dibor (564 mg, 2.22 mmol) i KOAc (436 mg, 4.44 mmol). Smeša je pročišćena sa azotom oko 3 min, nakon čega je dodat Pd(dppf)Cl2(108 mg, 0.15 mmol). Smeša je ponovo prečišćena sa azotom oko 3 min, zatim zagrejana na oko 110 °C oko 16 h. Ohlađena smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobio nečisti 2-((1s,3r)-3- metoksi-1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutil)acetonitril kao bledo žuto ulje (500 mg), koje je korišćeno u Delu 2.

Deo 2

[0354] Rastvor 2-((1s,3r)-3-metoksi-1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutil) acetonitrila (Deo 1, 470 mg, 1.48 mmol) i 4,6-dihloropirazolo[1,5-a]pirazina (Priprema 4, 279 mg, 1.48 mmol), i 2 M aq. K2CO3(2.22 mL) u 1,4-dioksanu (10 mL) je pročišćen sa azotom oko 2 min, nakon čega je dodat Pd(dppf)Cl2(108 mg, 0.15 mmol). Smeša je ponovo pročišćena sa azotom oko 3 min, zatim zagrejana na oko 90 °C oko 16 h. Ohlađena smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (130 mg, 26%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.40 (s, 1 H), 8.35 (s, 1 H), 8.27 (s, 1 H), 8.08 (d, 1 H), 7.00 (s, 1 H), 4.05 (kvin, 1 H), 3.30 (s, 3 H), 3.10 (s, 2 H), 3.00 (m, 2 H), 2.75 (m, 2 H). LCMS m/z = 343.2 [MH]+ (<35>Cl izotop)

Priprema 83

12

Etil 5-(4-(1-((1s,3r)-1-(cijanometil)-3-metoksiciklobutil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-6-il)-1Hpirazol- 3-karboksilat

[0355]

[0356] Rastvor 2-((1s,3r)-1-(4-(6-hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil)acetonitrila (Priprema 82, 120 mg, 0.35 mmol) i etil 5-(tributilstanil)-1H-pirazol-3-karboksilata (Priprema 31, 150 mg, 0.35 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) tretiran je sa KSFos Pd G2 (13.8 mg, 0.017 mmol) i smeša je pročišćena sa azotom oko 2 min. Smeša je zagrevana na oko 110 °C oko 2 h. Ohlađena smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (180 mg).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 9.05 (br. s., 1 H), 8.39 (s, 1 H), 8.32 (s, 1 H), 8.14 (s, 1 H), 7.65 (s, 1 H), 7.02 (s, 1 H), 6.88 (s, 1 H), 4.44 - 4.50 (m, 2 H), 4.08 (t, 1 H), 3.80 (s, 3 H), 3.13 (s, 2 H), 3.00 - 3.08 (m, 2 H), 2.75 - 2.83 (m, 2 H), 1.46 (t, 3 H). LCMS m/z = 447.1 [MH]+

Primer 32

5-(4-(1-((1s,3r)-1-(Cijanometil)-3-metoksiciklobutil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-6-il)-1H-pirazol- 3-karboksamid

[0357]

[0358] Rastvor etil 5-(4-(1-((1s,3r)-1-(cijanometil)-3-metoksiciklobutil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5- a]pirazin-6-il)-1H-pirazol-3-karboksilat (Priprema 83, 100 mg, 0.22 mmol) u MeOH (2 mL) je tretiran sa 4 M rastvorom gasovitog amonijaka u metanolu (1 mL). Reakcioni sud je snažno zaptiven i smeša je zagrevana na oko 60 °C oko 16 h. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen sa HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (23 mg, 25%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 13.79 (br. s., 1 H), 9.31 (br. s., 1 H), 9.00 (br. s., 1 H), 8.67 (br. s., 1 H), 8.28 (d, 1 H), 7.56 (br. s., 2 H), 7.39 (br. s., 1 H), 7.25 - 7.35 (m, 1 H), 4.08 (kvin, 1 H), 3.44 (s, 2 H), 3.21 (s, 3 H), 2.79 - 2.90 (m, 2 H), 2.63 - 2.73 (m, 3 H). LCMS m/z = 440.1 [MNa]+

Priprema 84

2-(Tetrahidro-2H-piran-2-il)-2H-1,2,3-triazol

[0359]

[0360] Smeši 1H-1,2,3-triazola (15 g, 220 mmol) u DCM (724 mL) dodati su DHP (21.9 g, 261 mmol) i PTSA (0.374 g, 2.17 mmol). Smeša je držana na oko 25 °C oko 18 h, nakon čega je dodat NaOH (96 mg, 2.39 mmol). Smeša je mešana na oko 25 °C oko 1 h zatim filtrirana. Filtrat je koncentrovan i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bezbojno ulje (18 g, 54%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.68 (s, 2 H), 5.74 (dd, 1 H), 4.00 - 4.08 (m, 1 H), 3.69 - 3.81 (m, 1 H), 2.36 - 2.51 (m, 1 H), 2.02 - 2.20 (m, 2 H), 1.61 - 1.81 (m, 3 H).

Priprema 85

2-(Tetrahidro-2H-piran-2-il)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-2H-1,2,3-triazol

[0361]

[0362] Rastvoru 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolana (24 g, 129 mmol) u pentanu (200 mL) dodati su 4,4’-di-terc-butil-2,2’-bipiridin (0.315 g, 1.18 mmol) i (1,5-ciklooktadien)(metoksi)iridijum(I) dimer (234 mg, 0.35 mmol). Rastvor je brzo postao crvene boje i uočeno je razvijanje gasa. Nakon oko 15 min, dodat je 2-(tetrahidro-2Hpiran- 2-il)-2H-1,2,3-triazol (Priprema 84, 18 g, 117 mmol). Smeša je mešana na oko 25 °C oko 6 h. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bezbojna čvrsta supstanca (26 g, 79%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.99 (s, 1 H), 5.81 (dd, 1 H), 4.07 (d, 1 H), 3.67 - 3.78 (m, 1 H), 2.41 - 2.55 (m, 1 H), 2.02 - 2.16 (m, 2 H), 1.60 -1.80 (m, 3 H), 1.37 (s, 12 H). LCMS m/z = 113.9 [MH-C2H2N]+

Priprema 86

(1r,3r)-3-(Cijanometil)-3-(4-(6-(2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-2H-1,2,3-triazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)- 1H-pirazol-1-il)ciklobutan-1-karbonitril

[0363]

12

[0364] Smeša (1r,3r)-3-(4-(6-hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-(cijanometil)ciklobutan-1- karbonitrila (Priprema 75, 300 mg, 0.89 mmol), 2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan- 2-il)-2H-1,2,3-triazola (Priprema 85, 248 mg, 0.89 mmol), i 2 M aq. K3PO4(1 mL) u 1,4-dioksanu (4 mL) je pročišćena sa argonom oko 5 min, nakon čega je dodat KSFos Pd G2 (140 mg, 0.18 mmol). Smeša je zagrevana na oko 50 °C oko 1 h, zatim ohlađena i razblažena sa EtOAc. Faze su razdvojene i vodena faza je ekstrahovana dva puta sa DCM. Kombinovani EtOAc i DCM ekstrakti su osušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao providna guma (384 mg, 95%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 9.02 (s, 1 H), 8.41 (s, 1 H), 8.35 (s, 1 H), 8.28 (s, 1 H), 8.13 (d, 1 H), 7.00 (d, 1 H), 5.81 (dd, 1 H), 4.06 - 4.12 (m, 1 H), 3.77 - 3.87 (m, 1 H), 3.35 - 3.47 (m, 3 H), 3.30 (s, 2 H), 2.95 - 3.04 (m, 2 H), 2.45 - 2.59 (m, 1 H), 2.12 - 2.24 (m, 2 H), 1.69 - 1.87 (m, 3 H). LCMS m/z = 455.3 [MH]+

Priprema 87 (1r,3r)-3-(4-(6-(2H-1,2,3-Triazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-(cijanometil)ciklobutan- 1-karbonitril

[0365]

[0366] Suspenzija (1r,3r)-3-(cijanometil)-3-(4-(6-(2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-2H-1,2,3-triazol-4-il)pirazolo[ 1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan-1-karbonitrila (Priprema 86, 384 mg, 0.84 mmol) u MeOH (5 mL) tretirana je sa PTSA (16.1 mg, 0.084 mmol). Smeša je zagrevana na oko 60 °C oko 3.5 h. Čvrste supstance su rastvorene da bi formirale homogeni rastvor, nakon čega se istaložila bela čvrsta supstanca. Zagrevanje je nastavljeno još oko 1 h. Smeša je ohlađena do oko 0 °C oko 30 min i filtrirana. Talog je ispran sa MeOH i osušen pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (204 mg, 65%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 9.05 (s, 1 H), 8.97 (s, 1 H), 8.72 (br. s., 1 H), 8.57 (s, 1 H), 8.46 (s, 1 H), 8.30 (s, 1 H), 7.56 (s, 1 H), 3.55 - 3.62 (m, 1 H), 3.53 (s, 2 H), 3.22 - 3.30 (m, 2 H), 2.89 - 3.00 (m, 2 H). LCMS m/z = 371.3 [MH]+

Primer 33

(1r,3r)-3-(Cijanometil)-3-(4-(6-(1-metil-1H-1,2,3-triazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan- 1-karbonitril

[0367]

12

[0368] Smeši (1r,3r)-3-(4-(6-(2H-1,2,3-triazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-(cijanometil) ciklobutan-1-karbonitrila (Priprema 87, 100 mg, 0.27 mmol) i K2CO3(75 mg, 0.54 mmol) u DMF (1 mL) dodat je jodometan (0.034 mL, 0.540 mmol). Smeša je mešana oko 2 h na oko 25 °C. Smeša je filtrirana i filter kolač je ispran dva puta sa DCM. Filtrat je koncentrovan i ostatak je prečišćen hromatografijom praćeno sa HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (40 mg, 39%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 9.19 (s, 1 H), 8.51 (s, 1 H), 8.33 (s, 1 H), 8.30 (s, 1 H), 8.15 (d, 1 H), 7.03 (s, 1 H), 4.22 (s, 3 H), 3.35 - 3.46 (m, 3 H), 3.30 (s, 2 H), 2.99 (d, 2 H). LCMS m/z = 385.4 [MH]+

Primer 34

(1s,3s)-3-(Cijanometil)-1-metil-3-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1- il)ciklobutan-1-karbonitril

[0369]

i

Primer 35

(1r,3r)-3-(Cijanometil)-1-metil-3-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1- il)ciklobutan-1-karbonitril

[0370]

12

[0371] DBU (327 mg, 2.15 mmol) dodat je Rastvoru 6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-4-(1H-pirazol-4-il)pirazolo[ 1,5-a]pirazin (Priprema 53, 190 mg, 0.72 mmol) i 3-(cijanometilen)-1-metilciklobutan-1-karbonitril (Priprema 89, 142 mg, 1.07 mmol) u MeCN (15 mL) i Smeša je mešana na oko 50 °C oko 4 h. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobio ostatak koji je dodatno prečišćen sa TLC da bi se dobila smeša dva jedinjenja iz naslova (200 mg, 70%) kao braon čvrsta supstanca. Smeša izomera je razdvojena sa HPLC da bi se dobio (1r,3r)-3-(cijanometil)-1-metil-3-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5- a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan-1-karbonitril kao svetlo ružičasta čvrsta supstanca (trans izomer, 24 mg 8%)<1>H NMR (400 MHz, CD3CN) δ: 8.36 (s, 1 H), 8.28 (s, 1 H), 8.26 - 8.31 (m, 1 H), 8.14 (s, 1 H), 7.86 (s, 1 H), 7.79 (d, 1 H), 7.73 (s, 1 H), 6.87 (d, 1 H), 3.66 (s, 3 H), 3.10 (s, 2 H), 2.80 - 2.92 (m, 4 H), 1.25 (s, 3 H). LCMS m/z = 398.0 [MH]+ i 420.0 [MNa]+ i (1s,3s)-3-(cijanometil)-1-metil-3-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1- il)ciklobutan-1-karbonitril (cis izomer, 24 mg, 8%).<1>H NMR (400 MHz, CD3CN) δ: 8.68 (s, 1 H), 8.63 (s, 1 H), 8.44 (s, 1 H), 8.14 (s, 1 H), 8.05 (d, 1 H), 8.00 (s, 1 H), 7.15 (d, 1 H), 3.92 (s, 3 H), 3.47 - 3.55 (m, 2 H), 3.19 (s, 2 H), 2.74 - 2.82 (m, 2 H), 1.63 (s, 3 H). LCMS m/z = 398.0 [MH]+ i 419.9 [MNa]+

Priprema 88

1-Metil-3-oksociklobutan-1-karbonitril

[0372]

Deo 1

12

[0373] Rastvoru diizopropilamina (1.30 g, 12.9 mmol) u TF (30 mL) dodat je 2.5 M n-BuLi (5.15 mL) na oko 0 °C. Rastvor je mešan oko 30 min na oko 0 °C pre nego što je ohlađen do oko -78 °C. 3-Metilenciklobutan- 1-karbonitril (1.00 g, 10.74 mmol) dodat je i rastvor je mešan oko 1 h na oko -78 °C. Dodat je jodometan (1.98 g, 14.0 mmol) rastvoru na oko -78 °C, zatim je smeši dozvoljeno da se zagreje do oko 20 °C i držana je na ovoj temperaturi oko 0.5 h. Dodat je zasićeni aq. NH4Cl (30 mL) i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 30 mL). Kombinovani EtOAc ekstrakti su koncentrovani da bi se dobio 1-metil-3-metilenciklobutan-1-karbonitril kao bledo žuto ulje (1.1 g, 96%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 4.90 - 4.98 (m, 2 H), 3.23 - 3.35 (m, 2 H), 2.64 - 2.75 (m, 2 H), 1.55 (s, 3 H).

Deo 2

[0374] Smeši 1-metil-3-metilenciklobutan-1-karbonitrila (1.10 g, 10.3 mmol) i RuCl3hidrata (50.9 mg, 0.23 mmol) u smeši DCM (20 mL), MeCN (20 mL) i vodi (40 mL) dodat je NaIO4(8.78 g, 41.1 mmol) u malim delovima na oko 5 °C. Smeša je zatim mešana na oko 25 °C oko 17 h. Vodena faza je razdvojena i ekstrahovana sa DCM (2 x 50 mL). DCM ekstrakti su kombinovani sa DCM - MeCN fazom i osušeni (Na2SO4), zatim filtrirani kroz oko 10 g silika gela. Silika gel je ispran sa DCM (50 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao braon ulje (0.80 g, 71%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 3.71 (m, 2 H), 3.14 (m, 2 H), 1.71 (s, 3 H).

Priprema 89

3-(Cijanometilen)-1-metilciklobutan-1-karbonitril

[0375]

[0376] Smeša 1-metil-3-oksociklobutan-1-karbonitrila (Priprema 88, 0.80 g, 7.0 mmol), (EtO)2P(O)CH2CN (1.43 g, 8.06 mmol), LiBr (0.955 g, 11.0 mmol) i TEA (1.48 g, 14.7 mmol) u TF (20 mL) je mešana na oko 25 °C oko 16 h. Dodata je voda (30 mL) i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 50 mL). Kombinovani EtOAc ekstrakti su osušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao

12

bezbojno ulje (0.65 g, 70%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.34 (m, 1 H), 3.47 (m, 2 H), 2.98 (m, 2 H), 1.60 (s, 3 H). GCMS m/z = 131 [M-H]+

Priprema 90

2-(3-Metoksiciklobutiliden)acetonitril

[0377]

Deo 1

[0378] Paralelno je izvedeno je dvanaest identičnih reakcija kao što sledi:

Za svaku reakciju, začepljena epruveta od 100 mL je napunjena sa metoksietenom (37 g, 637 mmol), DIPEA (9.88 g, 76.4 mmol), i acetil hloridom (5 g, 60 mmol) na oko -30 °C. Smeša je zatim zagrevana na oko 70 °C oko 5 h. Dvanaest reakcija je kombinovano i isprano sa 1 M aq. HCl (2 x 100 mL), zasićenim aq. NaHCO3(2 x 100 mL), osušeno (Na2SO4) i koncentrovano da bi se dobio sirovi uzorak 3-metoksiciklobutan-1-ona kao crno ulje (27 g, 37%). Ovaj materijal je bio oko 50% čist što je procenjeno sa<1>H NMR i korićen je bez dodatnog prečišćavanja u Delu 2.

Deo 2

[0379] Dve identične reakcije su izvedene paralelno.

[0380] Smeši LiBr (13.4 g, 154 mmol) i TEA (39 mL, 280 mmol) u TF (200 mL) dodat je (EtO)2P(O)CH2CN (26 g, 147 mmol) na oko 0 °C. Mešanje je nastavljeno na oko 25 °C oko 2 h. Ovoj smeši dodat je rastvor sirovog 3-metoksiciklobutan-1-ona pripremljenog u Delu 1 (13 g, oko 70 mmol) u TF (40 mL) na oko 0 °C. Smeša je zatim mešana na oko 25 °C oko 16 h. Dve reakcione smeše su kombinovane i koncentrovane. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kap svetlo žuto ulje (9.2 g, 56%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.25 (m, 1 H), 4.05 (m, 1 H), 3.30 (s, 3 H), 3.25 (m, 1 H), 3.10 (m, 1 H), 2.85 (m, 2 H). LCMS m/z = 124.08 [MH]+

12

Priprema 91

(1r,3r)-3-(Cijanometil)-3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan-1-karbonitril (trans izomer)

[0381]

i

(1s,3s)-3-(cijanometil)-3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan-1-karbonitril (cis izomer)

[0382]

[0383] Rastvoru 4-(4,4,5,5,-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (1.3 kg, 6.67 mol) u MeCN (43 L) dodat je 3-cijanometilen)ciklobutan-1-karbonitril (Priprema 27, 953 g, 8 mol) i DBU (3.06 kg, 20.1 mol) na oko 20 °C. Mešanje je nastavljeno na oko 20 °C oko 16 h. Smeša je sipana u 1 M aq. KH2PO4(10 L) i ekstrahovana sa EtOAc (5 x 5 L). Kombinovani EtOAc ekstrakti su koncentrovani i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobio (1r,3r)-3-(cijanometil)-3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1- il)ciklobutan-1-karbonitril kao bela čvrsta supstanca (trans izomer, 610 g, 30%) tačka

1

topljenja 137 - 140 °C<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.90 (s, 1 H), 7.88 (s, 1 H), 3.21 - 3.28 (m, 3 H), 3.19 (s, 2 H), 2.86 - 2.94 (m, 2 H), 1.33 (s, 12 H).13C NMR (101 MHz, CD3OD) δ: 147.54, 136.49, 122.49, 117.11, 84.96, 61.93, 37.52, 30.47, 25.28, 25.18, 17.21. LCMS m/z = 313.1 [MH]+ i (1s,3s)-3-(cijanometil)-3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan-1-karbonitril kao prljavo bela čvrsta supstanca (cis izomer, 250 g, 12%). tačka topljenja 95 - 98 °C<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.86 (s, 2 H), 3.24 - 3.31 (m, 1 H), 3.13 - 3.21 (m, 2 H), 3.07 (s, 2 H), 2.96 - 3.04 (m, 2 H), 1.34 (s, 12 H).13C NMR (101 MHz, CD3OD) δ: 147.43, 135.94, 121.94, 117.37, 84.98, 75.96, 60.10, 37.95, 28.42, 25.29, 16.16. LCMS m/z = 313.1 [MH]+

Priprema 92

5-Metil-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol

[0384]

I

3-Metil-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol

[0385]

[0386] Smeša 3-metilpirazola (1.00 g, 12.18 mmol), DHP (1.54 g, 18.3 mmol) i TFA (0.007 mL, 0.089 mmol) je zagrevana na oko 85 °C oko 4 h. Smeša je ohlađena do oko 20 °C i dodat je NaH (60% u ulju, 20 mg, 0.5 mmol). Mešanje na oko 20 °C je nastavljeno oko 18 h. Smeša je koncentrovana ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobio 5-metil-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol kao ulje (400 mg, 20%)<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.45 (d, 1 H), 6.05 (d, 1 H), 5.24 - 5.30 (m, 1 H), 4.00 - 4.08 (m, 1 H), 3.61 - 3.70 (m, 1 H), 2.41 - 2.55 (m, 1 H), 2.35 (s, 3 H), 2.08 - 2.18 (m, 1 H), 1.93 - 2.02 (m, 1 H), 1.65 - 1.77 (m, 2 H), 1.55 -

1 1

1.64 (m, 1 H). GCMS m/z = 166.1 [M]+ i 3-metil-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol kao ulje (352 mg, 15%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.48 (d, 1 H), 6.08 (d, 1 H), 5.29 (dd, 1 H), 4.08 (dt, 1 H), 3.64 - 3.74 (m, 1 H), 2.30 (s, 3 H), 2.07 - 2.18 (m, 1 H), 1.98 - 2.07 (m, 2 H), 1.64 - 1.77 (m, 3 H). GCMS m/z = 166.1 [M]+

Priprema 93

3-Metil-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol

[0387]

[0388] 2.5 M rastvor n-BuLi u heksanu (0.44 mL, 1.10 mmol) dodat je rastvoru 3-metil-1-(tetrahidro- 2H-piran-2-il)-1H-pirazol (Priprema 92, 200 mg, 1.10 mmol) u TF (2 mL) na oko -70 °C. Smeša je mešana na ovoj temperaturi oko 10 min pre dodavanja 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolana (214 mg, 1.15 mmol). Smeša je držana na oko -70 °C još oko 1 h, zatim zagrejana do oko 20 °C i koncentrovana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova pomešano sa oko 65% neizreagovanog 3-metil-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazola. Ova smeša je korišćena bez dodatnog prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 6.51 (s, 1 H), 5.76 (dd, 1 H), 4.01 - 4.12 (m, 1 H), 3.59 - 3.74 (m, 1 H), 2.37 - 2.51 (m, 2 H), 2.29 (s, 3 H), 1.97 - 2.18 (m, 1 H), 1.62 - 1.76 (m, 2 H), 1.47 - 1.62 (m, 1 H), 1.33 (s, 12 H). GCMS m/z = 292.2 [M]+

Priprema 94

3-(Benziloksi)-N-metoksi-N-metilciklobutankarboksamid

[0389]

1 2

[0390] Rastvoru 3-(benziloksi)ciklobutankarboksilne kiseline (324 g, 1.57 mol) u DCM (1.5 L) dodat je CDI (280 g, 1.73 mol) u delovima. Smeša je zagrevana na refluksu oko 2 h, nakon čega je dodat N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorid (183.7 g, 1.88 mol) i TEA (261 mL, 1.88 mol). Smeša je zagrevana na refluksu još oko 3 h, zatim mešana na oko 25 °C oko 16 h. DCM je ispran sa zasićenim aq. K2CO3, osušen (K2CO3), i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (298 g, 76%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 7.24-7.38 (m, 5 H), 4.37 (s, 2 H), 4.06 - 4.15 (m, 1 H), 3.61 (s, 3 H), 3.09 (s, 3 H), 2.96 (s, 1 H), 2.30 - 2.40 (m, 2 H), 2.09 - 2.22 (m, 1 H), 1.95 - 2.07 (m, 1 H).

Priprema 95

1-[3-(Benziloksi)ciklobutil]etanon

[0391]

[0392] Rastvoru 3-(benziloksi)-N-metoksi-N-metilciklobutankarboksamida (Priprema 94, 298 g, 1.2 mol) u TF (1.5 L) dodat je u kapima rastvor metilmagnezijum bromida (1.3 mol) na oko -20 °C. Nakon što je završeno dodavanje metilmagnezijum bromida, hladno kupatilo je uklonjeno i smeši je dozvoljeno da se zagreje do oko 25 °C. Zatim je dodat 0.5 M aq. HCI (2.5 L), i smeša je ekstrahovana sa Et2O (1 L 500 mL). Kombinovani Et2O ekstrakti su isprani sa vodom, osušeni (Na2SO4), i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (194 g, 79%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 7.24 -7.38 (m, 5 H), 4.35 (s, 2 H), 3.90 - 3.99 (m, 0.5 H), 3.16 - 3.24 (m, 0.5 H), 2.75 - 2.87 (m, 1

1

H), 2.31 - 2.40 (m, 2 H), 2.06 - 2.15 (m, 1 H), 2.04 (s, 1.5 H), 1.99 (s, 1.5 H), 1.87 - 1.97 (m, 1 H).

Priprema 96

1-[3-(Benziloksi)ciklobutil]-3-(dimetilamino)prop-2-en-1-on

[0393]

[0394] Rastvoru 1-[3-(benziloksi)ciklobutil]etanona (Priprema 95,194 g, 0.95 mol) u DMF (500 mL) dodat je dimetilformamid dimetil acetal (285 g, 2.4 mol). Smeša je zagrevana na oko 110 °C oko 12 h. Smeša je koncentrovana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (258 g), koja je korišćena bez dodatnog prečišćavanja ili dodatne karakterizacije.

Priprema 97

5-[3-(Benziloksi)ciklobutil]-1H-pirazol

[0395]

[0396] Rastvoru 1-[3-(benziloksi)ciklobutil]-3-(dimetilamino)prop-2-en-1-ona (Priprema 96, 110 g, 0.42 mol) u MeOH (500 mL) dodat je hidrazin hidrat (30 g, 0.6 mol). Smeša je zagrevana na refluksu oko 12 h, zatim koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom

1 4

da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (79 g, 82%), koje je korišćeno bez prečišćavanja ili dodatne karakterizacije.

Priprema 98

3-(1H-Pirazol-5-il)ciklobutanol

[0397]

[0398] Rastvoru 5-[3-(benziloksi)ciklobutil]-1H-pirazol (Priprema 97, 79 g, 0.35 mol) u metanolu (800 mL) u 2 L boci za hidrogenovanje dodat je paladijum na ugljeniku (10% Pd, 16 g). Smeša je stavljena pod pritisak vodonika (30 psi) i smeša je šejkirana na oko 60°C oko 12 h. Dodatno je još paladijuma na ugljeniku (10% Pd, 16 g), i hidrogenacija je nastavljena oko 10 h. Smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (46 g, 96%), koje je korišćeno bez prečišćavanja ili dodatne karakterizacije.

Priprema 99

3-(1H-pirazol-5-il)ciklobutan-1-on

[0399]

[0400] Rastvoru oksalil hlorida (7.8 mL, 0.09 mol) u DCM (50 mL) na oko -78 °C dodat je u kapima rastvor DMSO (12.7 mL, 0.18 mol) u DCM (50 mL). Smeša je mešana oko 30 min, zatim je u kapima dodat 3-(1H-pirazol- 5-il)ciklobutanol (Priprema 98, 13.7 g, 0.09 mol) na ovoj temperaturi. Rezultujuća smeša je držana oko 30 min, nakon čega je u kapima dodat TEA (25 mL, 0.18 mol). Hladno kupatilo je uklonjeno i smeši je dozvoljeno da se zagreje do oko 25 °C i držana je na toj temperaturi oko 3 h. Zatim je dodat vodeni rastvor K2CO3(100 mL). DCM je razdvojen, i vodena faza je ekstrahovana sa DCM. Kombinovani DCM ekstrakti su isprani sa vodom, osušeni (Na2SO4), i koncentrovani. Ostatak je prečišćen

1

hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (7.4 g, 55%) kao bela čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.56 (s, 1 H), 7.61 (s, 1 H), 6.21 (d, 1 H), 3.46 - 3.68 (m, 1 H), 3.37 - 3.46 (m, 2 H), 3.15 - 3.25 (m, 2 H). LCMS m/z = 137.1 [MH]+

Priprema 100

2-((1r,3s)-1-(4-(6-hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil)acetonitril (trans izomer)

[0401]

Deo 1

[0402] Rastvoru 2-((1r,3s)-1-(4-bromo-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil)acetonitrila (Priprema 37, trans izomer, 3399 mg, 12.58 mmol) u 1,4-dioksanu (33 mL) dodati su bis(pinakolato)dibor (3510 mg, 13.8 mmol) i KOAc (3700 mg, 37.7 mmol). Smeša je pročišćena sa argonom oko 5 min, nakon čega je dodat KSFos Pd G2 (1980 mg, 2.52 mmol). Smeša je zagrevana na oko 65 °C oko 4 h. Ohlađena smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom. Proizvod je mešan sa EtOAc (10 mL) na oko 25 °C, zatim je dodat heptan (40 mL) i dozvoljeno je da se odigra kristalizacija oko 30 min. Talog je filtriran i osušen da bi se dobio 2-((1r,3s)-3-metoksi-1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutil)acetonitril kao bela čvrsta supstanca (1950 mg, 49%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.91 (s, 1 H), 7.87 (s, 1 H), 3.98 (tt, 1 H), 3.29 (s, 3 H), 3.17 (s, 2 H), 2.97 - 3.07 (m, 2 H), 2.44 - 2.53 (m, 2 H), 1.33 (s, 12 H). LCMS m/z = 318.0 [MH]+

Deo 2

1

[0403] Rastvor 2-((1r,3s)-3-metoksi-1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutil) acetonitrila (Deo 1, 1950 mg, 6.15 mmol) i 4,6-dihloropirazolo[1,5-a]pirazina (Priprema 4, 1160 mg, 6.15 mmol), i 2 M aq. K3PO4 (9.22 mL) u 1,4-dioksanu (25 mL) je pročišćen sa argonom oko 5 min, nakon čega je dodat bis(tri-tbutilfosfin)paladijum(0) (157 mg, 0.31 mmol) Smeša je mešana na oko 25 °C oko 2 h. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc i faze su razdvojena. Vodena faza je ekstrahovana dva puta sa DCM. Kombinovani EtOAc i DCM ekstrakti su osušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Ostatak je rastvoren u DCM (20 mL) i zagrejan na oko 40 °C dok se sve nije rastvorilo, zatim je dodat heptan (10 mL) dozvoljeno je da se odigra kristalizacija oko 30 min. Talog je filtriran i osušen da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao prljavo bela čvrsta supstanca (1120 mg, 53%). Filtrat je koncentrovan i ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo dodatno jedinjenje iz naslova (640 mg, 30%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ: 8.39 (d, 1 H), 8.38 (s, 1 H), 8.28 (s, 1 H), 8.08 (d, 1 H), 7.03 (dd, 1 H), 4.03 - 4.10 (m, 1 H), 3.34 (s, 3 H), 3.25 (s, 2 H), 3.08 - 3.16 (m, 2 H), 2.53 - 2.60 (m, 2 H). LCMS m/z = 343.3 [MH]+ (<35>Cl izotop)

Priprema 101

Etil 5-metil-1-(2-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-2-oksoetil)-1H-pirazol-3-karboksilat

[0404]

[0405] Etil 3-metil-1H-pirazol-5-karboksilat (92 mg, 0.6 mmol), 2-bromo-1-(1-metil-1H-pirazol-4-il)etan-1-on (Priprema 6, 134 mg, 0.66mmol) i K2CO3(104 mg, 0.75 mmol) su kombinovani u MeCN (2 mL) i suspenzija je mešana na oko 40 °C oko 16 h. Čvrste supstance su filtrirane i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuto ulje (125 mg, 5.5%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.86 (s, 2 H), 6.73 (s, 1 H), 5.65 (s, 2 H), 4.26 (q, 2 H), 3.95 (s, 3 H), 2.32 (s, 3 H), 1.31 (t, 3 H). LCMS m/z = 277.1 [MH]+

1

Priprema 102

2-Metil-6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-ol

[0406]

[0407] Rastvoru etil 5-metil-1-(2-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-2-oksoetil)-1H-pirazol-3-karboksilata (Priprema 101, 125 mg, 0.45 mmol) u EtOH (5 mL) dodat je NH4OAc (105 mg, 1.06 mmol). Smeša je zagrevana mikrotalasnim zračenjem na oko 105 °C oko 4 h. Smeša je koncentrovana i ostatak je rastvoren u EtOH i koncentrovan ponovo da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (110 mg, 85%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.25 (s, 1 H), 8.01 (s, 1 H), 7.97 (s, 1 H), 6.76 (s, 1 H), 3.87 (s, 3 H), 2.34 (s, 3 H). LCMS m/z = 230.0 [MH]+

Priprema 103

4-Hloro-2-metil-6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin

[0408]

[0409] 2-Metil-6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-ol (Priprema 102) je suspendovan u POCl3i zagrejan na oko 120 °C oko 6 h. Rastvor je koncentrovan da bi se dobio nečisti uzorak jedinjenja iz naslova koji je korišćen u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. LCMS m/z = 248.0 [MH]+ (<35>Cl izotop)

Primer 36

1

(1r,3r)-3-(Cijanometil)-3-(4-(2-metil-6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1- il)ciklobutan-1-karbonitril (trans izomer)

[0410]

[0411] Smeša sirovog 4-hloro-2-metil-6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazina (Priprema 103, 100 mg, 0.40 mmol), (1r,3r)-3-(cijanometil)-3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan- 1-karbonitrila (Priprema 91, 132 mg, 0.42 mmol), Pd(dppf)Cl2DCM (16.5 mg, 0.02 mmol), i K2CO3(167 mg, 1.21 mmol) kombinovani su u smeši 1,4-dioksana (2.5 mL) i vode (0.5 mL). Smeša je pročišćena sa azotom oko 5 min, zatim zagrejana na oko 90 °C oko 3 h. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom i HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (5.6 mg, 3% preko dva koraka).

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.37 (s, 1 H), 8.33 (s, 1 H), 8.30 (s, 1 H), 7.92 (s, 1 H), 7.90 (s, 1 H), 6.68 (s, 1 H), 3.99 (s, 3 H), 3.32 - 3.42 (m, 3 H), 3.27 (s, 2 H), 2.93 - 3.02 (m, 2 H), 2.56 (s, 3 H). LCMS m/z = 398.0 [MH]+

Priprema 104

3-((4-Metoksibenzil)oksi)-1-metil-1H-pirazol

[0412]

1

[0413] U 100 mL posudu sa okruglim dnom dodati su 1-metil-1H-pirazol-3-ol (1.40 g, 14.3 mmol), DMF (30 mL), i K2CO3(3.94 g, 28.5 mmol). Na kraju smeši je dodat 4-metoksibenzil hlorid (2.32 mL, 17.1 mmol). Smeša je zagrevana na oko 60 °C oko 8 časova. Smeša je zatim razblažena sa vodom (80 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (60 mL x 3). Kombinovani EtOAc ekstrakti su isprani sa fiziološkim rastvorom (60 mL x 2), osušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bezbojno ulje (2.6 g, 83%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.38 (d, 2 H), 7.13 (d, 1 H), 6.91 (d, 2 H), 5.64 (d, 1 H), 5.11 (s, 2 H), 3.82 (s, 3 H), 3.76 (s, 3 H). LCMS m/z = 218.9 [MH]+

Priprema 105

4-Jodo-3-((4-metoksibenzil)oksi)-1-metil-1H-pirazol

[0414]

[0415] U 100 mL posudu sa okruglim dnom dodati su 3-((4-metoksibenzil)oksi)-1-metil-1H-pirazol (Priprema 104, 1.0 g, 4.58 mmol) i MeCN (20 mL), nakon čega su smeši dodati cerni amonijum nitrat (1.51 g, 2.75 mmol) i jod (698 mg, 2.75 mmol). Braon smeša je mešana na oko 20 °C oko 1 h. Smeša je ugašena sa 5% vodenim rastvorom natrijum bisulfita (50 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (40 mL x 3). Kombinovani EtOAc ekstrakti su osušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao zeleno ulje (800 mg, 51%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.40 (d, 2 H), 7.19 (s, 1 H), 6.91 (d, 2 H), 5.18 (s, 2 H), 3.82 (s, 3 H), 3.77 (s, 3 H).

Priprema 106

3-((4-Metoksibenzil)oksi)-1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol

14

[0417] U 100 mL posudu sa okruglim dnom dodati su 4-jodo-3-((4-metoksibenzil)oksi)-1-metil-1H-pirazol (Priprema 105, 800 mg, 2.32 mmol) i TF (16 mL), što je praćeno sa dodavanjem smeši u kapima izopropilmagnezijum hlorida (1.3 M u TF, 2.15 mL, 2.79 mmol) na oko -10 °C. Smeša je mešana na temperaturi između oko -18 °C i 10 °C oko 45 min. 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (649 mg, 3.49 mmol) dodat je smeši na oko -10 °C i smeši je dozvoljeno da se zagreje do oko 15 °C oko 1.5 h. Dodato je još izopropilmagnezijum hlorida (1.3 M u TF, 0.72 mL, 0.93 mmol) i 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolana (216 mg, 1.16 mmol) na oko -15 °C. Smeši je dozvoljeno da se zagreje do oko 15 °C oko 1 h. Smeša je razblažena sa EtOAc (40 mL) i isprana sa zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl (30 mL), fiziološkim rastvorom (30 mL), osušena (Na2SO4), i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (600 mg, 75%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.40 - 7.45 (m, 3 H), 6.88 (d, 2 H), 5.24 (s, 2 H), 3.81 (s, 3 H), 3.73 (s, 3 H), 1.31 (s, 12 H). LCMS m/z = 345.1 [MH]+

Priprema 107

(1r,3r)-3-(Cijanometil)-3-(4-(6-(3-((4-metoksibenzil)oksi)-1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4- il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan-1-karbonitril

[0418]

[0419] U 25 ml bocu sa okruglim dnom dodati su (1r,3r)-3-(4-(6-hloropirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)- 3-(cijanometil)ciklobutan-1-karbonitril (Priprema 75, 300 mg, 0.88 mmol), 3-((4-metoksibenzil)oksi)-1-metil- 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol (Priprema 106, 367 mg, 1.07 mmol), dioksan (16 mL), KSFos Pd G2 (140 mg, 0.178 mmol) i 2 M aq. K3PO4(3.55 mL, 7.11 mmol). Smeša je stavljena pod azot, zatim zagrejana na oko 60 °C oko 4 h. Smeša je razblažena sa vodom (70 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (50 mL x 3). Kombinovani EtOAc ekstrakti su osušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (450 mg, 98%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.92 (s, 1 H), 8.57 (s, 1 H), 8.52 (s, 1 H), 8.31 (s, 1 H), 8.16 (d, 1 H), 7.50 (d, 2 H), 7.45 (s, 1 H), 7.00 (d, 2 H), 5.29 (s, 2 H), 3.95 (s, 3 H), 3.82 (s, 3 H), 3.55 - 3.59 (m, 1 H), 3.52 (s, 2 H), 3.25 - 3.32 (m, 2 H), 2.94 (dd, 2 H). LCMS m/z = 542.1 [MNa]+

Primer 37

(1r,3r)-3-(Cijanometil)-3-(4-(6-(1-metil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1Hpirazol- 1-il)ciklobutan-1-karbonitril (trans izomer)

[0420]

[0421] (1r,3r)-3-(Cijanometil)-3-(4-(6-(3-((4-metoksibenzil)oksi)-1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin- 4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan-1-karbonitril (Priprema 107, 450 mg, 0.86 mmol) i TFA (13 mL) su mešani na oko 10 °C oko 4 h. Smeša je koncentrovana i ostatak je razblažen sa DCM (40 mL) i MeOH (40 mL) i neutralisan sa čvrstim NaHCO3. Smeša je filtrirana. Filtrat je koncentrovan i ostatak je prečišćen sa HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (54 mg, 16%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 10.76 (br. s., 1 H), 8.92 (s, 1 H), 8.71 (s, 1 H), 8.51 (s, 1 H), 8.18 (d, 1 H), 8.16 (s, 1 H), 7.45 (d, 1 H), 3.73 (s, 3 H), 3.55 - 3.62 (m, 1 H), 3.53 (s, 2 H), 3.25 - 3.33 (m, 2 H), 2.90 -2.99 (m, 2 H). LCMS m/z = 400.1 [MH]+

Biološka evaluacija

[0422] Jedinjenja prema pronalasku su procenjena sa in vitro postupcima da bi se odredila njihova respektivna sposobnost da inhibiraju JAK kinaze (TYK2, JAK1, JAK2, JAK3).

Format testa

[0423] Inhibitorna aktivnost u odnosu na humanu JAK određena je korišćenjem mikrofluidne analize za praćenje fosforilacije sintetičkog peptida sa rekombinantnim domenom humane kinaze svakog od četiri člana JAK familije, JAK1, JAK2, JAK3 i TYK2. reakcione smeše su sadržale 1 µM fluorescentno obeleženog sintetičkog peptida, koncentracije manje od uočenog Km, i 1 mM ATP. Svaki uslov testa je optimizovan za koncentraciju enzima i inkubaciono vreme na sobnoj temperaturi da bi se dobila stopa konverzije od 20% do 30% fosforilisanog peptidnog proizvoda. Reakcije su terminirane dodavanjem stop pufera koji sadrži EDTA.

14

Korišćenjem LabChip 3000 mobility shift technology (Caliper Life Science), svaka test reakcija je uzorkovana da bi se odredio nivo fosforilacije. Ova tehnologija je bazirana na razdvajanju, omogućavajući direktnu detekciju fluorescentno obeleženih supstrata i proizvoda. Razdvajanja su kontrolisana sa kombinacijom vakuumskog pritiska i jačine električnog polja optimizovanih za svaki peptidni supstrat.

Protokol testa JAK Caliper Enzyme Assay na 1mM ATP

[0424] Jedinjenja su dodata u ploče sa 384 bunarčića. Reakcione smeše su sadržale 10 mM HEPES, pH7.4, 10 mM MgCl2, 0.01% BSA, 0.0005% Tween 20, 1 mM ATP i 1 µM peptidnog supstrata. JAK1 i TYK2 testovi su sadržali 1 µM IRStide peptida (5FAM-KKSRGDYMTMQID) i JAK2 i JAK3 testovi su sadržali 1 µM JAKtide peptida (FITC-KGGEEEEYFELVKK). Analize su inicirane dodavanjem 20 nM JAK1, 1 nM JAK2, 1 nM JAK ili 1 nM TYK2 enzima i inkubirane su na sobnoj temperaturi tri časa za JAK1, 60 minuta za JAK2, 75 minuta za JAK3 ili 135 minuta za TYK2. Koncentracije enzima i vremena inkubacije su optimizovana za svaku novu pripremu enzima i blago su modifikovane tokom vremena da bi se osiguralo 20% do 30% fosforilacije. Testovi su zaustavljeni sa 15 mL of 180 mM HEPES, pH7.4, 20 mM EDTA, i 0.2% Coating Reagent 3. Test ploče su stavljene na Caliper Life Science LC3000 instrument, i svaki bunarčić je uzorkovan korišćenjem odgovarajućih uslova za razdvajanje da bi se izmerio nefosforilisani i fosforilisani peptid.

Analiza podataka

[0425] Podaci su sakupljeni korišćenjem HTS Well Analyzer software od Caliper Life Sciences. Izlaz za analizu podataka je procenat konvertovanog proizvoda izračunat na visini pika (Jednačina 1).

Jednačina 1: %konvertovanog proizvoda = 100*((proizvod)/(proizvod+supstrat))

[0426] Efekat procenta na koncentraciju svakog jedinjenja izračunat je na osnovu pozitivnog i negativnog kontrolnog bunarčića koji se nalazio unutar svake test ploče (Jednačina 2). Bunarčići sa pozitivnom kontrolom sadržali su zasićujuću koncentraciju kontrolnog jedinjenja koje je proizvodilo nivo fosforilacije uporediv sa bazalnom vrednošću (tj., potpuno inhibiranom JAK1, JAK2, JAK3 ili TYK2). Bunarčići sa negativnom kontrolom sadržali su samo DMSO (u istoj koncentraciji kao bunarčići sa jedinjenjima) koja je korišćena da bi se postavila bazalna aktivnost u testu (tj., neinhibirane JAK1, JAK2, JAK3 ili TYK2).

Jednačina 2: %efekta = 100*((bunarčić sa uzorkom-negativna kontrola)/(pozitivna kontrolanegativna kontrola))

[0427] Procenat efekata je plotovan nasuprot koncentracije jedinjenja. Neograničena sigmoidna kriva je fitovana korišćenjem 4 parametarskog logističkog modela i određena je koncentracija jedinjenja neophodna za 50% inhibicije (IC50) (Jednačina 3).

Jednačina 3: y = ((max-min)/(1+((x/IC50)^s)))+min

[0428] gde max je maksimum asimptote (kompletna inhibicija), min je minimum asimptote (bez inhibicije) i s je faktor nagiba. IC50vrednosti su date u nM za svako jedinjenje:

Tabela I. JAK Caliper Podaci

14

[0429] Izabrana jedinjenja su procenjena u odnosu na njihovu sposobnost da inhibiraju IL-12 signalizaciju u testu protočne citometrije na celoj humanoj krvi. IL-12 signali preko TYK2 i JAK2.

Test STAT4 fosforilacije indukovane IL-12 u celoj humanoj krvi

[0430] Test artikli su pripremljeni kao 30 mM stokovi u DMSO. 11-tačaka 2.5 serijska razblaženja u 11 tačaka stvoreno je u DMSO sa najvećom koncentracijom od 10 mM. Dodatno razblaženje je urađeno sa dodavanjem 4 µL uzorka rastvora prethodnog test artikla u 96 µL PBS sa najvećom koncentracijom od 400 µM. Cela humana krv je sakupljena od

14

zdravih donora preko venske punkture u Vacutainer kolektorske epruvete koje sadrže natrijum heparin (Catalog No. 366480; Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ). Krv je zagrevana do 37°C pre upotrebe. Cela humana krv je alikvotirana (90 mL/bunarčiću) u 96-bunarčića, dubokim bunarčićima, pločama sa V-dnom i tretirana sa jedinjenjima na 11 različitih koncentracija (0.2% DMSO finalno) na 37°C 60 minuta. Ovo je praćeno sa provokacijom sa IL-12 (5 mL/bunarčiću; finalno, 5 ng/mL) 15 minuta. Uzorci su tretirani sa toplim 1KS Lyse/Fiks puferom (700 mL/bunarčiću) za terminaciju aktivacije i dodatno inkubirani na 37°C 20 minuta za liziranje crvenih krvnih ćelija. Ploče su centrifugirane na 300 x g 5 minuta, supernatant je aspiriran, i ćelije su isprane sa 800 mL po bunarčiću pufera za bojenje (PBS koji sadrži 0.5% fetalni goveđi serum i 0.01% natrijum azid). Isprani ćelijski pelet je resuspendovan sa 350 mL/bunarčiću prethodno ohlađenog 90% metanola, i inkubiran na 4°C 30 minuta. Ploče su centrifugirane na 300 x g 5 minuta, supernatant koji sadrži 90% metanola je aspiriran, i ćelije su isprane sa 800 mL /bunarčiću pufera za bojenje. Ćelijski pelet je resuspendovan u puferu za bojenje koji je sadržao anti-pSTAT4-AleksaFluor647 (1 do 150 razblaženje, 150 mL/bunarčiću), i inkubiran na sobnoj temperaturi u mraku preko noći.

[0431] Uzorci su preneti na ploče sa 96 bunarčića sa U-dnom i protočno citometrijska analiza je izvedena na FACSCalibur ili LSRFortessa opremljenim sa HTS plate loader (BD Biosciences). Populacija limfocita je gejtovana za analizu histograma pSTAT4. Bazalna fluorescencija je definisana korišćenjem nestimulisanih ćelija i gejt je postavljen na podnožje pika da bi obuhvatio -0.5% gejtovanu populaciju. Histogramska statistička analiza je izvedena korišćenjem CellQuestÔ Pro verzija 5.2.1 (BD Biosciences) ili FACSDiva verzija 6.2 (BD Biosciences) softvera. Jedinica relativne fluorescencije (RFU), koja meri nivo fosfo STAT4, izračunata je množenjem procenta pozitivne populacije i njene srednje vrednosti fluorescencije. Podaci od 11 koncentracija jedinjenja (pojedinačno na svakoj koncentraciji) su normalizovani kao procenat kontrole na osnovu formule:

%kontrole = 100x(A-B)/(C-B)

gde A je RFU bunarčića koji sadrže jedinjenje i IL-12, B je RFU bunarčića bez IL-12 i jedinjenja (minimalna fluorescencija) i C je RFU bunarčića koji sadrže samo IL-12 (maksimalna fluorescencija). Krive inhibicije i IC50vrednosti su određene korišćenjem Prism verzije 5 softvera (GrafPad, La Jolla, CA).

14

Tabela II. Podaci za IL-12 humanu celu krv.

14

Claims

Patentni zahtevi 1. Jedinjenje koje ima strukturu (I):

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili farmaceutski prihvatljive soli, naznačeno time da: A, A’ i A" su nezavisno O, C=O, C-R’ ili N-R", gde R’ i R" mogu nezavisno biti H, amino, -NR7COR6, COR6, -CONR7R8, C1-C6alkil, ili hidroksi(C1-C6alkil)-, i R" može biti prisutan ili odsutan, i prisutan je gde to dozvoljavaju pravila valence, i gde ne više od jednog od A, A’ i A" je O ili C=O; R0i R su nezavisno H, Br, Cl, F, ili C1-C6alkil; R1je H, C1-C6alkil, ili hidroksi(C1-C6alkil)-; R2je izabran iz grupe koja se sastoji od H, C1-C6alkil-, C1-C6alkoksi-, hidroksi(C1-C6alkil)-, fenil(C1-C6alkil)-, formil, heteroaril, heterociklični, -COR6, -OCOR6, -COOR6, -NR7COR6, CONR7R8, i -(CH2)n-W, gde W je cijano, hidroksi, C3-C8cikloalkil, -SO2NR7R8, i -SO2-R9, gde R9je C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, heteroaril, ili heterociklični; gde svaki od pomenutih alkil, cikloalkil, heterociklični, ili heteroaril može biti nesupstituisan ili supstituisan sa halo, cijano, hidroksi, ili C1-C6alkil; X je C-R3ili N, gde R3može biti H ili C1-C6alkil; R4i R5su nezavisno H, amino, C1-C6alkil, ili hidroksi(C1-C6alkil)-; R6, R7i R8su svaki nezavisno H, C1-C6alkil, C1-C4alkoksi(C1-C6alkil) ili C3-C8cikloalkil, pomenuti C1-C6alkil je izborno supstituisan sa halo, CN ili hidroksi; ili, R7i R8zajedno sa atomom za koji su vezani formiraju 5- ili 6-člani prsten, pomenuti prsten je izborno supstituisan sa halo, hidroksi, CN, ili C1-C6alkil; i, n je 0, 1, 2 ili 3.
2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje ima strukturu (Ia):

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili farmaceutski prihvatljive soli, naznačeno time da: A, A’ i A" su nezavisno O, C=O, C-R’ ili N-R", gde R’ i R" mogu nezavisno biti H, amino, -NR7COR6, COR6, -CONR7R8, C1-C6alkil, ili hidroksi(C1-C6alkil), i R" može biti prisutan ili odsutan, i prisutan je gde to dozvoljavaju pravila valence, i gde ne više od jednog od A, A’ i A" je O ili C=O; R0i R su nezavisno H, Br, Cl, F, ili C1-C6alkil; R1je H, C1-C6alkil, ili hidroksi(C1-C6alkil); R2je izabran iz grupe koja se sastoji od H, C1-C6alkil-, C1-C6alkoksi-, hidroksi(C1-C6alkil)-, fenil(C1-C6alkil)-, formil, heteroaril, heterociklični, -COR6, -OCOR6, -COOR6, -NR7COR6,-CONR7R8, i -(CH2)n-W, gde W je cijano, hidroksi, C3-C8cikloalkil, -SO2NR7R8, i -SO2-R9, gde R9je C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, heteroaril, ili heterociklični; gde svaki od pomenutih alkil, cikloalkil, heterociklični, ili heteroaril može biti nesupstituisan ili supstituisan sa halo, cijano, hidroksi, ili C1-C6alkil; R3može biti H ili C1-C6alkil; R4i R5su nezavisno H, amino, C1-C6alkil, ili hidroksi(C1-C6alkil)-; 1 R6, R7i R8su svaki nezavisno H, C1-C6alkil, C1-C4alkoksi(C1-C6alkil)-, ili C3-C8cikloalkil, pomenuti C1-C6alkil je izborno supstituisan sa halo, CN ili hidroksi; ili, R7i R8zajedno sa atomom za koji su vezani formiraju 5- ili 6-člani prsten, pomenuti prsten je izborno supstituisan sa halo, hidroksi, CN, ili C1-C6alkil; i, n je 0, 1, 2 ili 3.
3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje ima strukturu (Ib):

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili farmaceutski prihvatljive soli, naznačeno time da: R" je H, -COR6, -CONR7R8, C1-C6alkil, ili hidroksi(C1-C6alkil)-; R0i R su nezavisno H, Br, Cl, F, ili C1-C6alkil; R1je H, C1-C6alkil, ili hidroksi(C1-C6alkil); R2je izabran iz grupe koja se sastoji od H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, hidroksi(C1-C6alkil), fenil(C1-C6alkil), formil, heteroaril, heterociklični, -COR6, -OCOR6, -COOR6, -NR7COR6,-CONR7R8, i -(CH2)n-W, gde W je cijano, hidroksi, C3-C8cikloalkil, -SO2NR7R8, i -SO2-R9, gde R9je C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, heteroaril, ili heterociklični; gde svaki od pomenutih alkil, cikloalkil, heterociklični, ili heteroaril može biti nesupstituisan ili supstituisan sa halo, cijano, hidroksi, ili C1-C6alkil; R3može biti H ili C1-C6alkil; R5je nezavisno H, amino, C1-C6alkil, ili hidroksi(C1-C6alkil); 1 1 R6, R7i R8su svaki nezavisno H, C1-C6alkil, C1-C4alkoksi(C1-C6alkil), ili C3-C8cikloalkil, pomenuti C1-C6alkil je izborno supstituisan sa halo, CN ili hidroksi; ili, R7i R8zajedno sa atomom za koji su vezani formiraju 5- ili 6-člani prsten, pomenuti prsten je izborno supstituisan sa halo, hidroksi, CN, ili C1-C6alkil; i, n je 0, 1, 2 ili 3.
4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 3 naznačeno time da R" je C1-C6alkil i R5je H.
5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje ima strukturu (Ic):

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili farmaceutski prihvatljive soli, naznačeno time da: R" je H, -COR6, -CONR7R8, C1-C6alkil-, ili hidroksi(C1-C6alkil)-; R2je izabran iz grupe koja se sastoji od H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi-, hidroksi(C1-C6alkil)-, fenil(C1-C6alkil-), formil, heteroaril, heterociklični, -COR6, -OCOR6, -COOR6, -NR7COR6,-CONR7R8, i -(CH2)n-W, gde W je cijano, hidroksi, C3-C8cikloalkil, -SO2NR7R8, i -SO2-R9, gde R9je C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, heteroaril, ili heterociklični; gde svaki od pomenutih alkil, cikloalkil, heterociklični, ili heteroaril može biti nesupstituisan ili supstituisan sa halo, cijano, hidroksi, ili C1-C6alkil; R3je H, C1-C6alkil, amino, cijano, ili C1-C6alkoksi-; R5je H, amino, C1-C6alkil, ili hidroksi(C1-C6alkil)-; 1 2 R6, R7i R8su svaki nezavisno H, C1-C6alkil, C1-C4alkoksi(C1-C6alkil)-, ili C3-C8cikloalkil, pomenuti C1-C6alkil je izborno supstituisan sa halo, CN ili hidroksi; ili, R7i R8zajedno sa atomom za koji su vezani formiraju 5- ili 6-člani prsten, pomenuti prsten je izborno supstituisan sa halo, hidroksi, CN, ili C1-C6alkil; i, n je 0, 1, 2 ili 3.
6. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 5 naznačeno time da R" je C1-C6alkil i R5je H.
7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje ima strukturu (Id):

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili farmaceutski prihvatljive soli, naznačeno time da: R" je H, -COR6, -CONR7R8, C1-C6alkil, ili hidroksi(C1-C6alkil)-; R2je izabran iz grupe koja se sastoji od H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi-, hidroksi(C1-C6alkil)-, fenil(C1-C6alkil)-, formil, heteroaril, heterociklični, -COR6, -OCOR6, -COOR6, -CONR7R8, and-(CH2)n-W, gde W je cijano, hidroksi, C3-C8cikloalkil-, -SO2NR7R8, i -SO2-R9, gde R9je C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, heteroaril, ili heterociklični; gde svaki od pomenutih alkil, cikloalkil, heterociklični, ili heteroaril može biti nesupstituisan ili supstituisan sa halo, cijano, hidroksi, ili C1-C6alkil; R5je H, amino, C1-C6alkil-, ili hidroksi(C1-C6alkil)-; R6, R7i R8su svaki nezavisno H, C1-C6alkil, C1-C4alkoksi(C1-C6alkil), ili C3-C8cikloalkil, pomenuti C1-C6alkil je izborno supstituisan sa halo, CN ili hidroksi; ili, R7i R8zajedno sa 1 atomom za koji su vezani formiraju 5- ili 6-člani prsten, pomenuti prsten je izborno supstituisan sa halo, hidroksi, CN, ili C1-C6alkil; i, n je 0, 1, 2 ili 3.
8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 7 naznačeno time da R" je C1-C6alkil i R5je H.
9. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje ima strukturu (Ie):

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili farmaceutski prihvatljive soli, naznačeno time da: R2je izabran iz grupe koja se sastoji od H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi-, hidroksi(C1-C6alkil)-, fenil(C1-C6alkil)-, formil, heteroaril, heterociklični -COR6, -OCOR6, -COOR6, -CONR7R8, and-(CH2)n-W, gde W je cijano, hidroksi, C3-C8cikloalkil, -SO2NR7R8, i -SO2-R9, gde R9je C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, heteroaril, ili heterociklični; gde svaki od pomenutih alkil, cikloalkil, heterociklični, ili heteroaril može biti nesupstituisan ili supstituisan sa halo, cijano, hidroksi, ili C1-C6alkil; R6, R7i R8su svaki nezavisno H, C1-C6alkil, C1-C4alkoksi(C1-C6alkil), ili C3-C8cikloalkil, pomenuti C1-C6alkil je izborno supstituisan sa halo, CN ili hidroksi; ili, R7i R8zajedno sa atomom za koji su vezani formiraju 5- ili 6-člani prsten, pomenuti prsten je izborno supstituisan sa halo, hidroksi, CN, ili C1-C6alkil; i, n je 0, 1, 2 ili 3. 1 4
10. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 9 naznačeno time da R2je -(CH2)n-W, gde W je cijano i n je 1, 2 ili 3.
11. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje ima strukturu (If):

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili farmaceutski prihvatljive soli, naznačeno time da: R" je H, C1-C6alkil, ili hidroksi(C1-C6alkil)-; i, R5je H, amino, C1-C6alkil, ili hidroksi(C1-C6alkil)-.
12. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 11 naznačeno time da R" je C1-C6alkil i R5je H.
13. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 izabrano od grupe koja se sastoji od: (1r,3r)-3-(4-(6-(3-amino-1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-(cijanometil) ciklobutan-1-karbonitril; 2,2’-(3-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)azetidin-1,3-diil)diacetonitril; 2-((1s,3r)-1-(4-(6-(5-(hidroksimetil)-1H-pirazol-3-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil) acetonitril; 5-(4-(1-((1s,3r)-1-(cijanometil)-3-metoksiciklobutil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-6-il)-1H-pirazol- 3-karboksamid; 1 (1s,3s)-3-(cijanometil)-3-(4-(6-(5-(hidroksimetil)izoksazol-3-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1- il)ciklobutan-1-karbonitril; (1r,3r)-3-(cijanometil)-3-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan- 1-karbonitril; (1s,3s)-3-(cijanometil)-3-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan- 1-karbonitril; (1r,3r)-3-(cijanometil)-3-(4-(3-metil-6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1- il)ciklobutan-1-karbonitril; 2-((1r,3s)-1-(4-(6-(3-amino-1H-pirazol-5-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-metoksiciklobutil) acetonitril; 2-(1-etil-3-(4-(6-(5-(hidroksimetil)-1H-pirazol-3-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)azetidin-3- il)acetonitril; (1r,3r)-3-(Cijanometil)-3-(4-(6-(1-metil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H pirazol-1-il)ciklobutan-1-karbonitril (trans izomer); (1r,3r)-3-(cijanometil)-3-(4-(6-(1-(hidroksimetil)-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1- il)ciklobutan-1-karbonitril; i, ili, njihova farmaceutski prihvatljiva so.
14. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 naznačeno time da jedinjenje je (1r,3r)-3-(cijanometil)-3-(4-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirazin-4-il)-1H-pirazol-1-il)ciklobutan-1-karbonitril, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
15. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili soli, i farmaceutski prihvatljiv ekscipijent.
16. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili soli, za upotrebu kao medikament.
17. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili soli, za upotrebu u tretiranju bolesti ili stanja za koje je indikovan Tyk2 inhibitor. 1
18. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili soli, za upotrebu prema patentnom zahtevu 17 naznačeno time da je bolest ili stanje inflamatorno ili autoimuno stanje.
19. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili soli, za upotrebu prema patentnom zahtevu 17 naznačeno time da bolest ili stanje je izabrano od inflamacije, autoimune bolesti, sistemskog eritemskog lupusa, lupus nefritisa, diskoidnog lupusa, kožnog lupusa, lupusa centralnog nervnog sistema, reumatoidnog artritisa, psorijaznog artritisa, inflamatorne bolesti creva, Crohn-ove bolesti, ulcerativnog kolitisa, astme, alergijske astme, dijabetesa tipa I, polimiozitisa, dermatomiozitisa, interferonopatija tipa I uključujući Aicardi-Goutières sindrom i druge mendelovske bolesti prekomerne ekspresije interferona tipa I, multiple skleroze, primarne progresivne multiple skleroze, relapsirajuće remisione multiple skleroze, primarne bilijarne ciroze takođe poznate kao primarni bilijarni holangitis, primarnog skleroznog holangitisa, autoimunog hepatitisa, bolesti ne-alkoholne masne jetre, nealkoholnog steatohepatitisa, psorijaze, dermatomiozitisa, skleroderme, atopijskog dermatitisa, vitiliga, alopecia areata, spondilopatije, ankiloznog spondilitisa, Alzheimer-ove bolesti, i neuro-inflamacije.
20. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili soli, u kombinaciji sa drugim farmakološki aktivnim jedinjenjem.
21. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili soli, za upotrebu prema patentnom zahtevu 19 naznačeno time da je bolest ili stanje inflamatorna bolest creva.
22. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili soli, za upotrebu prema patentnom zahtevu 19 naznačeno time da je bolest ili stanje Crohn-ova bolest.
23. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili soli, za upotrebu prema patentnom zahtevu 19 naznačeno time da je bolest ili stanje ulcerativni kolitis. 1
24. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili soli, za upotrebu prema patentnom zahtevu 19 naznačeno time da je bolest ili stanje psorijaza.
25. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili soli, za upotrebu prema patentnom zahtevu 19 naznačeno time da je bolest ili stanje je dijabetes Tip I. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5 1