[go: up one dir, main page]

RS58620B1 - Metodi pripremanja konjugata - Google Patents

Metodi pripremanja konjugata

Info

Publication number
RS58620B1
RS58620B1 RS20190394A RSP20190394A RS58620B1 RS 58620 B1 RS58620 B1 RS 58620B1 RS 20190394 A RS20190394 A RS 20190394A RS P20190394 A RSP20190394 A RS P20190394A RS 58620 B1 RS58620 B1 RS 58620B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
carbon atoms
optionally substituted
group
branched
linear
Prior art date
Application number
RS20190394A
Other languages
English (en)
Inventor
Nathan Fishkin
Michael Miller
Wei Li
Rajeeva Singh
Original Assignee
Immunogen Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=45755579&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS58620(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Immunogen Inc filed Critical Immunogen Inc
Publication of RS58620B1 publication Critical patent/RS58620B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A61K31/5513—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine
    • A61K31/5517—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine condensed with five-membered rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. imidazobenzodiazepines, triazolam
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/545—Heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68035—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a pyrrolobenzodiazepine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6867—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of a blood cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Low-Molecular Organic Synthesis Reactions Using Catalysts (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Indole Compounds (AREA)

Description

Opis
OBLAST PRONALASKA
[0001] Ovaj pronalazak opisuje upotrebu imin-reaktivnih reagenasa za pripremanje konjugata sredstava koja se vezuju za ćeliju i citotoksičnih lekova koji se vezuju za DNK, a koji sadrže jednu ili više iminskih funkcionalnih grupa.
OSNOV PRONALASKA
[0002] Monoklonska antitela se sve više ispituju kao terapijska sredstva protiv kancera. Nekoliko monoklonskih antitela protiv površinskih antigena kancerskih ćelija već je odobreno za lečenje kancera, i to su na primer rituksimab za ne-Hodgkinov limfom, trastuzumab za kancer dojke, cetuksimab za kancer glave i vrata i kolorektalni kancer, cetuksimab, panitimumab, i bevacizumab za kolorektalni kancer, i alemtuzumab za hroničnu limfocitnu leukemiju (Strome, S. E., Sausville, E. A., and Mann, D., 2007, The Oncologist, 12, 1084-1095). Međutim, citotoksična aktivnost "golih" antitela može biti ograničena na mehanizme inhibicije funkcije receptora, komplement-zavisnu citotoksičnost (complement-dependent cytotoxicity, CDC), i ćelijama posredovanu citotoksičnost zavisnu od antitela (antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC).
[0003] Pristup za pojačanje citotoksične aktivnosti antitela prema ciljnim kancerskim ćelijama je povezivanje antitela sa citotoksičnim efektorima (A. D. Ricart, and A. W. Tolcher, 2007, Nat. Clin. Pract. Oncol. 4, 245-255; Lambert, J., 2010, Drugs of the Future 35, 471-480). Konjugat antitelo-citotoksični lek (antibody-cytotoxic drug conjugate, ADC) specifično se vezuje za kancerske ćelije, posle čega slede internalizacija i degradacija konjugata, što za rezultat ima oslobađanje toksičnog leka unutar ćelije i konačno smrt kancerskih ćelija. Citotoksični lekovi koji su upotrebljavani povezani sa antitelima uključuju antitubulinske lekove kao što su majtanzinoidi i auristatini, DNK-vezujući lekovi kao kalihemicin koji dovodi do sekvenciono specifičnog sečenja dvolančane DNK. Druga klasa DNK-vezujućih citotoksičnih lekova uključuje imin-sadržavajuće pirolobenzodiazepine (pyrrolobenzodiazepine, PBD) kao što su N-2-imidazolil alkil supstituisani 1,2,5-benzotiadiazepin-1,1-dioksid, U.S. pat. br. 6,156,746), benzo-pirido ili dipirido tiadiazepin (WO 2004/069843), pirolo [1,2-b] [1,2,5] benzotiadiazepini i pirol [1,2-b][1,2,5] benzodiazepinski derivati (WO2007/015280), tomajmicinski derivati (npr., pirolo[1,4]benzodiazepini), kao što su oni opisani u WO 00/12508, WO2005/085260, WO2007/085930, EP 2019104, i US patentu br. 6,156,746). Drugi DNK-vezujući benzodiazepinski lekovi opisani su u US patentnoj publikaciji br.
2010/0203007A1. Ovi benzodiazepinski lekovi koji sadrže iminske veze, vezuju se za male žlebove DNK i interferiraju sa funkcijom DNK, što za rezultat ima smrt ćelije.
[0004] Postoji potreba za novim metodima pripremanja konjugata sredstva koje se vezuje za ćeliju i citotoksičnog leka koji nosi iminsku grupu.
KRATAK OPIS PRONALASKA
[0005] Predmetni pronalazak opisuje upotrebu imin-reaktivnih reagenasa za obradu iminsadržavajućeg leka, što rezultuje neočekivanim poboljšanjem reakcije njegove konjugacije sa sredstvima koja se vezuju za ćeliju (cell binding agent, CBA) kao što su antitela. Reagensi su takvi da se osobine leka u vezi sa ubijanjem ćelija ne smanjuju i da integritet CBA (antitelo) ostaje u potpunosti očuvan.
[0006] U prvom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na metod pripremanja konjugata koji sadrži sredstvo koje se vezuje za ćeliju (CBA) konjugovano za citotoksično jedinjenje sa povezujućom grupom, metod uključuje reakciju modifikovanog citotoksičnog jedinjenja sa modifikovanim CBA na pH od oko 4 do oko 9, pri čemu:
a) modifikovano CBA sadrži reziduu bifunkcionalnog unakrsno povezujućeg sredstva vezanu za CBA, i rezidua uključuje povezujuću grupu i tiol-reaktivnu grupu; i b) modifikovano citotoksično jedinjenje sadrži tiol grupu i predstavljeno je jednom od sledećih formula:
ili
ili njenom farmaceutski prihvatljivom solju, gde je modifikovano citotoksično jedinjenje proizvedeno reakcijom imin-sadržavajućeg citotoksičnog jedinjenja koje nosi tiol grupu sa imin-reaktivnim reagensom, i gde je imin-sadržavajuće citotoksično jedinjenje predstavljeno jednom od sledećih formula:
ili njenom farmaceutski prihvatljivom solju, pri čemu:
-C(Y)-N(H)- motiv u formulama (I') i (II') rezultat je reakcije imin-reaktivnog reagensa sa imin-sadržavajućim citotoksičnim jedinjenjem;
X' se bira između -H, amin-protektujuće grupe, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, opciono supstituisanog arila koji ima 6 do 18 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika, i sumpora, i opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P;
Y' se bira između -H, okso grupe, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 6- do 18-članog arila, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezaisno odabranih između azota, kiseonika, i sumpora, i opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma;
R<c>je -H ili supstituisani ili nesupstituisani linearni ili granati alkil koji ima 1 do 4 ugljenikova atoma;
R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3' i R4' se, svaki nezavisno, biraju iz grupe koja se sastoji od -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice (OCH2CH2)n-R<c>, halogena, guanidinijuma [-NH(C=NH)NH2], -OR, -NR'R", -NO2,-NCO, -NR'COR", -SR, sulfoksida predstavljenog -SOR', sulfona predstavljenog -SO2R', sulfonata -SO3-M<+>, sulfata -OSO3-M<+>, sulfonamida predstavljenog -SO2NR'R", cijano, azido, -COR', -OCOR', -OCONR'R";
R, pri svakom pojavljivanju, bira se nezavisno iz grupe koja se sastoji od -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, opciono supstituisanog arila koji ima 6 do 18 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika i sumpora, ili opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P;
R' i R'' se, svaki nezavisno, biraju između -H, -OH, -OR, -NHR, -NR2,-COR, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, i opciono supstituisanog 3-18-članog heterocikličnog prstena koji ima 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P;
n je ceo broj od 1 do 24;
W se bira između C=O, C=S, CH2, BH, SO i SO2;
R6je -H, -R, -OR, -SR, -NR'R", -NO2, ili halogen;
Z i Z' se nezavisno biraju između -(CH2)n'-, -(CH2)n'-CR7R8-(CH2)na',-(CH2)n'-NR9-(CH2)na'-, -(CH2)n'-O-(CH2)na'- i -(CH2)n'-S-(CH2)na'-;
n' i na' su isti ili različiti i biraju se između 0, 1, 2 i 3;
R7i R8su isti ili različiti, i svaki se nezavisno bira između -H, -OH, -SH, -COOH, -NHR', polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-, amino-kiseline, peptidne jedinice koja nosi 2 do 6 amino-kiselina, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila koji ima od 1 do 10 ugljenikovih atoma; R9se nezavisno bira između -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila koji ima od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-;
A i A' su isti ili različiti, i nezavisno se biraju između -O-, okso (-C(=O)-), -CRR'O-, -CRR'-, -S-, -CRR'S-, -N(R5)- i -CRR'N(R5)-,
R5je pri svakom pojavljivanju nezavisno -H ili opciono supstituisani linearni ili granati alkil koji ima 1 do 10 ugljenikovih atoma;
D i D' su isti ili različiti, i nezavisno su odsutni ili se biraju iz grupe koja se sastoji od opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, amino-kiseline, peptida koji nosi 2 do 6 amino-kiselina, i polietilen glikolne jedinice (-OCH2CH2)n-; i L je odsutan ili kada je prisutan, uključuje tiol grupu, ili je polietilen glikolna jedinica (-OCH2CH2)n-, linearni, granati ili ciklični alkil ili alkenil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, fenil grupa, 3- do 18-člani heterociklični prsten ili 5- do 18-člani heteroaril prsten sa 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P, pri čemu su alkil, alkenil, fenil, ili heterociklični ili heteroaril prsten opciono supstituisani; i
imin-reaktivni reagens se bira iz grupe koja se sastoji od sulfita (H2SO3, H2SO2ili so HSO3-, SO3<2->ili HSO2<->formirana sa katjonom), metabisulfita (H2S2O5ili so S2O5<2->formirana sa katjonom) i ditionita (H2S2O4ili so S2O4<2->formirana sa katjonom).
[0007] Modifikovano citotoksično jedinjenje proizvodi se reakcijom imin-sadržavajućeg citotoksičnog jedinjenja koje nosi tiol grupu sa imin-reaktivnim reagensom.
[0008] U drugom aspektu, predmetni pronalazak odnosi se na metod pripremanja konjugata koji uključuje sredstvo koje se vezuje za ćeliju (CBA) konjugovano sa citotoksičnim jedinjenjem sa povezujućom grupom, metod uključuje reakciju CBA sa imin-sadržavajućim citotoksičnim jedinjenjem, imin-reaktivnim sredstvom, i bifunkcionalnim unakrsno povezujućim sredstvom koje uključuje povezujuću grupu da se formira konjugat, pri čemu je imin-sadržavajuće citotoksično jedinjenje predstavljeno nekom od sledećih formula, ili njenom farmaceutski prihvatljivom solju:
gde:
X' se bira između -H, amin-protektujuće grupe, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, opciono supstituisanog arila koji ima 6 do 18 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika, i sumpora, i opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P;
Y' se bira između -H, okso grupe, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, opciono susptituisanog 6- do 18-članog arila, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika i sumpora, opciono supstituisanog 3 do 18-članog heterocikličnog prstena koji ima 1 do 6 heteroatoma;
R<c>je -H ili supstituisani ili nesupstituisani linearni ili granati alkil koji ima 1 do 4 ugljenikova atoma;
R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3' i R4' se, svaki nezavisno, biraju iz grupe koja se sastoji od -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-R<c>, halogena, guanidinijuma [-NH(C=NH)NH2], -OR, -NR'R", -NO2,-NCO, -NR'COR", -SR, sulfoksida predstavljenog -SOR', sulfona predstavljenog -SO2R', sulfonata -SO3-M<+>, sulfata -OSO3-M<+>, sulfonamida predstavljenog -SO2NR'R", cijano, azido, -COR', -OCOR', -OCONR'R";
R, pri svakom pojavljivanju, bira se nezavisno iz grupe koja se sastoji od -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, opciono supstituisanog arila koji ima 6 do 18 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika, i sumpora, ili opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P;
R' i R'' se, svaki nezavisno, biraju između -H, -OH, -OR, -NHR, -NR2, -COR, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, i opciono supstituisanog 3-18-članog heterocikličnog prstena koji ima 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P;
n je ceo broj od 1 do 24;
W se bira između C=O, C=S, CH2, BH, SO i SO2;
R6je -H, -R, -OR, -SR, -NR'R", -NO2, ili halogen;
Z i Z' se nezavisno biraju između -(CH2)n'-, -(CH2)n'-CR7R8-(CH2)na'-,-(CH2)n'-NR9-(CH2)na'-, -(CH2)n'-O-(CH2)na'- i -(CH2)n'-S-(CH2)na'-;
n' i na' su isti ili različiti, i biraju se između 0, 1, 2 i 3;
R7i R8su isti ili različiti, i svaki se nezavisno bira između -H, -OH, -SH, -COOH, -NHR', polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-, amino-kiseline, peptidne jedinice koja nosi 2 do 6 amino-kiselina, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila koji ima od 1 do 10 ugljenikovih atoma;
R9se nezavisno bira između -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-; A i A' su isti ili različiti i nezavisno se biraju između -O-, okso (-C(=O)-), -CRR'O-, -CRR'-, -S-, -CRR'S-, -N(R5)- i -CRR'N(R5)-,
R5je pri svakom pojavljivanju nezavisno -H ili opciono supstituisani linearni ili granati alkil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma;
D i D' su isti ili različiti i nezavisno su odsutni ili se biraju iz grupe koja se sastoji od opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, amino-kiseline, peptida koji nosi 2 do 6 amino-kiselina, i polietilen glikolne jedinice (-OCH2CH2)n-; i
L je odsutan, ili kada je prisutan, sadrži tiol grupu, i polietilen glikolna je jedinica (-OCH2CH2)n-, linearni, granati ili ciklični alkil ili alkenil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, fenil grupa, 3- do 18-člani heterociklični prsten ili 5- do 18-člani heteroaril prsten sa 1 do 6 heteroatoma koji se nezavisno biraju između O, S, N i P, pri čemu su alkil, alkenil, fenil, ili heterociklični ili heteroaril prsten opciono supstituisani; i
imin-reaktivni reagens se bira iz grupe koja se sastoji od sulfita (H2SO3, H2SO2ili so HSO3-, SO3<2->ili HSO2<->formirana sa katjonom), metabisulfita (H2S2O5ili so S2O52-formirana sa katjonom) i ditionita (H2S2O4ili so S2O4<2->formirana sa katjonom).
[0009] U trećem aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na metod pripremanja konjugata koji uključuje sredstvo koje se vezuje za ćeliju (CBA) konjugovano sa citotoksičnim jedinjenjem sa povezujućom grupom, metod uključuje:
a) reakciju modifikovanog citotoksičnog jedinjenja sa bifunkcionalnim unakrsno povezujućim sredstvom koje uključuje povezujuću grupu, grupu reaktivnu sa CBA (kao što je tiol grupa, maleimid grupa, haloacetamid grupa, ili aminska grupa), i grupu reaktivnu sa modifikovanim citotoksičnim jedinjenjem, da se formira sekundarno modifikovano citotoksično jedinjenje kovalentno povezano sa reziduom bifunkcionalnog unakrsno povezujućeg sredstva, pri čemu rezidua uključuje povezujuću grupu i grupu reaktivnu sa CBA; pri čemu je modifikovano citotoksično jedinjenje predstavljeno jednom od sledećih formula:
ili
ili njenom farmaceutski prihvatljivom solju, gde je modifikovano citotoksično jedinjenje proizvedeno reakcijom imin-sadržavajućeg citotoksičnog jedinjenja sa iminreaktivnim reagensom, pri čemu je imin-sadržavajuće citotoksično jedinjenje predstavljeno jednom od sledećih formula, ili njenom farmaceutski prihvatljivom solju:
gde:
-C(Y)-N(H)- motiv u formulama (I') i (II') rezultat je reakcije imin-reaktivnog reagensa sa imin-sadržavajućim citotoksičnim jedinjenjem;
X' se bira između -H, amin-protektujuće grupe, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, opciono supstituisanog arila koji ima 6 do 18 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili vše heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika, i sumpora, i opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P;
Y' se bira između -H, okso grupe, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 6- do 18-članog arila, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika, i sumpora, opciono supstituisanog 3 do 18-članog heterocikličnog prstena koji ima 1 do 6 heteroatoma;
R<c>je -H ili supstituisani ili nesupstituisani linearni ili granati alkil koji ima 1 do 4 ugljenikova atoma;
R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3' i R4' se, svaki nezavisno, biraju iz grupe koja se sastoji od -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -
9
1
(OCH2CH2)n-R<c>, halogena, guanidinijuma [-NH(C=NH)NH2], -OR, -NR'R", -NO2, -NCO, -NR'COR", -SR, sulfoksida predstavljenog -SOR', sulfona predstavljenog -SO2R', sulfonata -SO3-M<+>, sulfata -OSO3-M<+>, sulfonamida predstavljenog -SO2NR'R", cijano, azido, -COR', -OCOR', -OCONR'R";
R, pri svakom pojavljivanju, nezavisno se bira iz grupe koja se sastoji od -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, opciono supstituisanog arila koji ima 6 do 18 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika i sumpora, ili opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P;
R' i R'' se, svaki nezavisno, biraju između -H, -OH, -OR, -NHR, -NR2, -COR, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, i opciono supstituisanog 3-18-članog heterocikličnog prstena koji ima 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P;
n je ceo broj od 1 do 24;
W se bira između C=O, C=S, CH2, BH, SO i SO2;
R6je -H, -R, -OR, -SR, -NR'R", -NO2, ili halogen;
Z i Z' se nezavisno biraju između -(CH2)n'-, -(CH2)n'-CR7R8-(CH2)na'-, -(CH2)n'-NR9-(CH2)na'-, -(CH2)n'-O-(CH2)na'- i -(CH2)n'-S-(CH2)na'-;
n' i na' su isti ili različiti i biraju se između 0, 1, 2 i 3;
R7i R8su isti ili različiti i biraju se svaki nezavisno između -H, -OH, -SH, -COOH, -NHR', polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-, amino-kiseline, peptidne jedinice koja nosi 2 do 6 amino-kiselina, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila koji ima od 1 do 10 ugljenikovih atoma; R9se nezavisno bira između -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-;
A i A' su isti ili različiti i nezavisno se biraju između -O-, okso (-C(=O)-), -CRR'O-, -CRR'-, -S-, -CRR'S-, -N(R5)- i -CRR'N(R5)-,
R5je pri svakom pojavljivanju nezavisno -H ili opciono supstituisani linearni ili granati alkil koji ima 1 do 10 ugljenikovih atoma;
D i D' su isti ili različiti i nezavisno su odsutni ili se biraju iz grupe koja se sastoji od opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, amino-kiseline, peptida koji nosi 2 do 6 amino-kiselina, i polietilen glikolne jedinice (-OCH2CH2)n-;
L je odsutan, ili kada je prisutan, sadrži tiol grupu, ili je polietilen glikolna jedinica (-OCH2CH2)n-, linearni, granati ili ciklični alkil ili alkenil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, fenil grupa, 3- do 18-člani heterociklični prsten ili 5- do 18-člani heteroaril prsten sa 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P, pri čemu su alkil, alkenil, fenil, ili heterociklični ili heteroaril prsten opciono supstituisani; i
imin-reaktivni reagens se bira iz grupe koja se sastoji od sulfita (H2SO3, H2SO2ili so HSO3-, SO3<2->ili HSO2<->formirana sa katjonom), metabisulfita (H2S2O5ili so S2O5<2->formirana sa katjonom) i ditionita (H2S2O4ili so S2O4<2->formirana sa katjonom); i
b) reakciju drugog modifikovanog citotoksičnog jedinjenja sa CBA preko grupe reaktivne sa CBA, na pH od oko 4 do oko 9, da se formira konjugat.
[0010] U određenim primerima izvođenja, modifikovano citotoksično jedinjenje proizvodi se reakcijom imin-reaktivnog reagensa sa imin-sadržavajućim citotoksičnim jedinjenjem koje nosi povezujuću grupu i reaktivnu grupu.
[0011] U bilo kojem od gornjih primera izvođenja, citotoksično jedinjenje i povezujuća grupa konjugata predstavljeni su nekom od sledećih formula:
ili njenom farmaceutski prihvatljivom solju, gde:
-C(Y)-N(H)- motiv je rezultat reakcije imin-reaktivnog reagensa sa imin-sadržavajućim citotoksičnim jedinjenjem;
X' se bira između -H, amin-protektujuće grupe, povezujuće grupe, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, opciono supstituisanog arila koji ima 6 do 18 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili vše heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika, i sumpora, i opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P;
Y' se bira između -H, okso grupe, povezujuće grupe, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 6- do 18-članog arila, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika, i sumpora, opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji ima 1 do 6 heteroatoma;
R<c>je -H ili supstituisani ili nesupstituisani linearni ili granati alkil koji ima 1 do 4 ugljenikova atoma, ili povezujuća grupa;
R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3' i R4' se, svaki nezavisno, biraju iz grupe koja se sastoji od -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-R<c>, halogena, guanidinijuma [-NH(C=NH)NH2], -OR,-NR'R", -NO2, -NCO, -NR'COR", -SR, sulfoksida predstavljenog -SOR', sulfona predstavljenog -SO2R', sulfonata -SO3-M<+>, sulfata -OSO3-M<+>, sulfonamida predstavljenog -SO2NR'R", cijano, azido, -COR', -OCOR',-OCONR'R" i povezujuće grupe;
M je -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon, kao što je Na<+>;
R, pri svakom pojavljivanju, nezavisno se bira iz grupe koja se sastoji od -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, opciono supstituisanog arila koji ima 6 do 18 ugljenikovih atoma, opcino supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika, i sumpora, ili opciono supstituisanog 3- do 18-članog
1
heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P;
R' i R" se, svaki nezavisno, biraju između -H, -OH, -OR, -NHR,-NR2, -COR, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, i opciono supstituisanog 3-18-članog heterocikličnog prstena koji ima 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P;
n je ceo broj od 1 do 24;
W se bira između C=O, C=S, CH2, BH, SO i SO2;
R6je -H, -R, -OR, -SR, -NR'R", -NO2, halogen ili povezujuća grupa;
Z i Z' se nezavisno biraju između -(CH2)n'-, -(CH2)n'-CR7R8-(CH2)na'-, -(CH2)n',-NR9-(CH2)na'-, -(CH2)n'-O-(CH2)na'- i -(CH2)n'-S-(CH2)na'-;
n' i na' su isti ili različiti i biraju se između 0, 1, 2 i 3;
R7i R8su isti ili različiti i biraju se, svaki nezavisno, između -H, -OH, -SH, -COOH, -NHR', polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-, amino-kiseline, peptidne jedinice koja nosi 2 do 6 amino-kiselina, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila koji ima od 1 do 10 ugljenikovih atoma;
R9se nezavisno bira između -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila koji ima od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-;
A i A' su isti ili različiti, i nezavisno se biraju između -O-, okso (-C(=O)-), -CRR'O-, -CRR'-, -S-, -CRR'S-, -N(R5)- i -CRR'N(R5)-,
R5je pri svakom pojavljivanju nezavisno -H ili opciono supstitisani linearni ili granati alkil koji ima 1 do 10 ugljenikovih atoma;
D i D' su isti ili različiti, i nezavisno su odsutni ili se biraju iz grupe koja se sastoji od opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, amino-kiseline, peptida koji nosi 2 do 6 amino-kiselina, i polietilen glikolne jedinice (-OCH2CH2)n-;
L je odsutan, povezujuća grupa, polietilen glikolna jedinica (-OCH2CH2)n-, opciono supstituisani linearni, granati ili ciklični alkil ili alkenil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, fenil grupa, 3- do 18-člani heterociklični prsten ili 5- do 18-člani heteroaril prsten koji ima 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P, pri čemu su alkil ili alkenil opciono supstituisani povezujućom grupom; fenil ili heterociklični ili heteroaril prsten mogu opciono biti supstituisani, pri čemu supstituent može uključivati povezujuću grupu.
[0012] Nekoliko poželjnih konjugata koji mogu da se proizvedu u skladu sa nekim od metoda pronalaska uključuju:
i
1
gde je CBA sredstvo koje se vezuje za ćeliju, kao što je antitelo, i r je ceo broj između 1-20, poželjno između 1-10 ili 1-5.
[0013] Kako se koristi u ovom tekstu, kada se pominje grupa (npr., R<c>, L, X' itd.) "je/jeste" (ili "nije") povezujuća grupa ili povezujuća grupa sa reaktivnom grupom vezanom za nju, znači da grupa "sadrži/uključuje" (ili "ne sadrži/ne uključuje") povezujuću grupu ili povezujuću grupu sa reaktivnom grupom vezanom za nju.
KRATAK OPIS SLIKA
[0014]
SL. 1 prikazuje masene spektre deglikozilovanih huMy9-6-2 konjugata pripremljenih bez i sa bisulfitom, koji sadrže 1.4 DAR (A), odnosno 3.1 DAR (B). DAR: odnos leka prema antitelu.
SL. 2 prikazuje sličnu in vitro citotoksičnost HuMy9-6-Lek 2 konjugata pripremljenih bez i sa natrijum bisulfitom, prema HL60 ćelijama koje eksprimiraju CD33-antigen. SL. 3 prikazuje sličnu in vitro citotoksičnost anti-CD22 Ab-Lek 2 konjugata pripremljenih bez i sa natrijum bisulfitom prema BJAB ćelijama koje eksprimiraju CD22-antigen.
SL. 4 prikazuje reverzno-faznu HPLC analizu leka 2 i leka 2 tretiranog natrijum bisulfitom.
SL. 5 prikazuje MS analizu deglikozilovanog huMy9-6-SPDB-lek 1 pripremljenog sa i bez natrijum bisulfita korišćenjem 7 molarnih ekvivalenata 1 po antitelu. A) Konjugat pripremljen bez natrijum bisulfita sa prosečno 1.4 leka 1/Ab (antibody, antitelo) i vrste antitela sa do tri vezana molekula leka 1. B) Konjugat pripremljen sa natrijumm bisulfitom sa prosečno 2.51/Ab i vrste antitela sa do sedam vezanih molekula leka 1. SL. 6 prikazuje da dodavanje natrijum bisulfita reakciji konjugacije leka 1 ne rezultuje fragmentacijom antitela (neredukujuća SDS-PAGE; gel čip analiza).
1
SL. 7-11 prikazuju primere metoda predmetnog pronalaska za pripremanje konjugata sredstvo koje se vezuje za ćeliju-lek.
SL. 12 prikazuje maseno-spektrometrijsku (mass spectrometry, MS) analizu deglikozilovanog My9-6-SPDB-1 napravljenog konjugovanjem NHS estra koji sadrži jedinjenje 1 (jednostepeni reagens-metod) direktno za lizine antitela, ili konjugovanjem jedinjenja 1d za antitelo modifikovano ditiopiridinom (dvostepeni metod).
SL. 13 prikazuje MS podatke za My9-6-sulfo-SPDB-1 napravljen korišćenjem dvostepenog metoda pod različitim pH uslovima. Izgleda da je produženo vreme reakcije u korelaciji sa povećanom CD33-antigen-nezavisnom in vitro citotoksičnošću, merenom na HL60-QC ćelijama prethodno tretiranim 1 µM nekonjugovanog huMy9-6. Za sve konjugate, antigen-zavisno ubijanje bilo je sličnih visokih vrednosti (∼4 pM IC50). Kratko vreme reakcije (1-3 h) poželjno je da bi se na najmanju moguću meru svelo fragmentisanje antitela i in vitro nespecifično ubijanje ćelija, za My9-6-sulfo-SPDB-1.
SL. 14 prikazuje MS podatke za chKTI-sulfo-SPDB-1 napravljen korišćenjem dvostepenog metoda sa različitim odnosima jedinjenje 1d / linker.
SL. 15 prikazuje upotrebu kovalentnih imin-reaktanata za poboljšanje specifikacija konjugata Ab-lek (% monomera i "natovarenost" lekom).
SL. 16 prikazuje šemu dvostepene sinteze reprezentativnih konjugata antitelo-lek. SL. 17 prikazuje in vitro citotoksičnost i specifičnost konjugata huMy9-6-SPDB-1f prema različitim ćelijskim linijama. Napominje se da je za pravljenje konjugata u reakciju konjugacije dodat natrijum bisulfit.
SL. 18 prikazuje da konjugacija dimera ne smanjuje vezujući afinitet antitela. Napominje se da je za pravljenje konjugata u reakciju konjugacije dodat natrijum bisulfit.
SL. 19 prikazuje in vivo antitumorsku aktivnost huMy9-6 konjugata. Napominje se da je za pravljenje konjugata u reakciju konjugacije dodat natrijum bisulfit.
SL. 20 prikazuje in vitro citotoksičnost huMy9-6-SPDB-1f konjugata prema antigenpozitivnim ćelijama. Napominje se da je za pravljenje konjugata u reakciju konjugacije dodat natrijum bisulfit.
SL. 21 prikazuje in vitro citotoksičnost huMy9-6-SPDB-1f (A), huMy9-6-sulfoSPDB-1f (B) i huMy9-6-BMPS-1f (C) prema HL60/QC (Ag<+>) ćelijama, sa i bez blokiranja
1
antigen-vezujućih mesta. Napominje se da je u sva tri eksperimenta (34A, 34B, i 34C), za pravljenje konjugata u reakciju konjugacije dodat natrijum bisulfit.
SL. 22 prikazuje in vitro citotoksičnost chB38.1-SPDB-1f (A), i chB38.1-sulfoSPDB-1f (B) prema COLO205 (Ag<+>) ćelijama. Napominje se da je u oba eksperimenta, za pravljenje konjugata u reakciju konjugacije dodat natrijum bisulfit.
Sl. 23 prikazuje in vivo efikasnost huMy9-6-SPDB-1f, kod miševa koji nose HL60/QC. Napominje se da je u reakciju konjugacije dodat natrijum bisulfit.
SL. 24 prikazuje antiproliferativnu aktivnost upoređivanjem (A) huMy9-6-SPDB-1f, (B) huMy9-6-sulfoSPDB-1f, i (C) huMy9-6-BMPS-1f, prema OCI-AML3 (Ag<+>) ćelijama, sa i bez blikoranja antigen-vezujućih mesta. Napominje se da je u sva tri eksperimenta, za pravljenje konjugata u reakciju konjugacije dodat natrijum bisulfit. SL. 25 prikazuje in vivo efikasnost huMy9-6-BMPS-1f kod miševa koji nose MOLM-13 tumor. Napominje se da je za pravljenje konjugata u reakciju konjugacije dodat natrijum bisulfit.
SL. 26 prikazuje reprezentativnu šemu sinteze konjugata sulfonisani folat / citotoksično jedinjenje. Napominje se da je za pravljenje konjugata u reakciju konjugacije dodat natrijum bisulfit.
SL. 27 prikazuje in vivo efikasnost huMy9-6-lek 2 kod miševa koji nose MOLM-13 tumor. Napominje se da je za pravljenje konjugata u reakciju konjugacije dodat natrijum bisulfit.
SL. 28 prikazuje pripremanje huMy9-6-sulfo-SPDB-1d korišćenjem visoko reaktivnog 4-nitroPy-sulfo-SPDB povezivača.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0015] Sledi detaljan opis određenih primera izvođenja pronalaska, čiji su primeri ilustrovani u pridruženim strukturama i formulama.
Definicije
[0016] "Linearni ili granati alkil" kako se koristi u ovom tekstu odnosi se na zasićeni monovalentni ugljovodonični radikal linearnog ili granatog lanca, sa jednim do dvadeset ugljenikovih atoma. Primeri alkila uključuju metil, etil, 1-propil, 2-propil, 1-butil, 2-metil-1-propil, -CH2CH(CH3)2, 2-butil, 2-metil-2-propil, 1-pentil, 2-pentil 3-pentil, 2-metil-2-butil, 3-metil-2-butil, 3-metil-1-butil, 2-metil-1-butil, 1-heksil, 2-heksil, 3-heksil, 2-metil-2-pentil, 3-
1
metil-2-pentil, 4-metil-2-pentil, 3-metil-3-pentil, 2-metil-3-pentil, 2,3-dimetil-2-butil, 3,3-dimetil-2-butil, 1-heptil i 1-oktil. Poželjno, alkil ima jedan do deset ugljenikovih atoma. Poželjnije, alkil ima jedan do četiri ugljenikova atoma.
[0017] "Linearni ili granati alkenil" odnosi se na monovalentni ugljovodonični radikal linearnog ili granatog lanca, sa dva do dvadeset ugljenikovih atoma i najmanje jednim mestom nezasićenja, tj., dvostrukom vezom ugljenik-ugljenik, pri čemu alkenil radikal uključuje radikale sa "cis" i "trans" orijentacijom, ili alternativno, "E" i "Z" orijentacijom. Primeri uključuju etilenil ili vinil (-CH=CH2) i alil (-CH2CH=CH2). Poželjno, alkenil ima dva do deset ugljenikovih atoma. Poželjnije, alkil ima dva do četiri ugljenikova atoma.
[0018] "Linearni ili granati alkinil" odnosi se na monovalentni ugljovodonični radikal linearnog ili granatog lanca, sa dva do dvadeset ugljenikovih atoma i najmanje jednim mestom nezasićenja, tj., trostrukom vezom ugljenik-ugljenik. Primeri uključuju etinil, propinil, 1-butinil, 2-butinil, 1-pentinil, 2-pentinil, 3-pentinil i heksinil. Poželjno, alkinil ima dva do deset ugljenikovih atoma. Poželjnije, alkinil ima dva do četiri ugljenikova atoma.
[0019] Izrazi "karbocikl", "karbociklil" i "karbociklični prsten" odnose se na monovalentni nearomatični, zasićeni ili delimično nezasićeni prsten koji ima 3 do 12 ugljenikovih atoma kao monociklični prsten, ili 7 do 12 ugljenikovih atoma kao biciklični prsten. Biciklični karbocikli koji imaju 7 do 12 atoma mogu biti uređeni, na primer, kao biciklo [4,5], [5,5], [5,6], ili [6,6] sistem, a biciklični karbocikli koji imaju 9 ili 10 atoma u prstenu mogu biti uređeni kao biciklo [5,6] ili [6,6] sistemi, ili kao premošćeni sistemi kao što su biciklo[2.2.1]heptan, biciklo[2.2.2]oktan i biciklo[3.2.2]nonan. Primeri monocikličnih karbocikala uključuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, 1-ciklopent-1-enil, 1-ciklopent-2-enil, 1-ciklopent-3-enil, cikloheksil, 1-cikloheks-1-enil, 1-cikloheks-2-enil, 1-cikloheks-3-enil, cikloheksadienil, cikloheptil, ciklooktil, ciklononil, ciklodecil, cikloundecil i ciklododecil.
[0020] Izrazi "ciklični alkil" i "cikloalkil" mogu da se koriste naizmenično. Odnose se na monovalentni zasićeni karbociklični prstenasti radikal. Poželjno, ciklični alkil je 3 do 7-člani monociklični prstenasti radikal. Poželjnije, ciklični alkil je cikloheksil.
[0021] Izraz "ciklični alkenil" odnosi se na karbociklični prstenasti radikal koji ima najmanje jednu dvostruku vezu u strukturi prstena.
[0022] Izraz "ciklični alkinil" odnosi se na karbociklični prstenasti radikal koji ima najmanje jednu trostruku vezu u strukturi prstena.
[0023] "Aril" označava monovalentni aromatični ugljovodonični radikal sa 6-18 ugljenikovih atoma izveden uklanjanjem jednog vodonikovog atoma sa jednog ugljenikovog atoma matičnog
1
aromatičnog prstenastog sistema. Neke aril grupe predstavljene su u strukturama primera kao "Ar". Aril uključuje biciklične radikale koji sadrže aromatični prsten fuzionisan sa zasićenim, delimično nezasićenim prstenom, ili aromatičnim karbocikličnim ili heterocikličnim prstenom. Tipične aril grupe uključuju radikale izvedene iz benzena (fenil), supstituisanih benzena, naftalena, antracena, indenila, indanila, 1,2-dihidronaftalena i 1,2,3,4-tetrahidronaftila. Poželjno, aril je fenil grupa.
[0024] Izrazi "heterocikl", "heterociklil" i "heterociklični prsten" koriste se naizmenično u ovom tekstu i odnose se na zasićeni ili delimično nezasićeni (tj., koji ima jednu ili više dvostrukih i/ili trostrukih veza u prstenu) karbociklični radikal sa 3 do 18 atoma u prstenu gde je najmanje jedan atom u prstenu heteroatom odabran između azota, kiseonika, fosfora i sumpora, preostali atomi u prstenu su C, pri čemu su jedan ili više atoma u prstenu opciono nezavisno supstituisani jednim ili većim brojem supstituenata opisanih kasnije u ovom tekstu. Heterocikl može biti monocikl sa 3 do 7 članova u prstenu (2 do 6 ugljenikovih atoma i 1 do 4 heteroatoma odabranih između N, O, P, i S) ili bicikl sa 7 do 10 članova u prstenu (4 do 9 ugljenikovih atoma i 1 do 6 heteroatoma odabranih između N, O, P, i S), na primer: biciklo [4,5], [5,5], [5,6], ili [6,6] sistem. Heterocikli su opisani u Paquette, Leo A.; "Principles of Modern Heterocyclic Chemistry" (W. A. Benjamin, New York, 1968), posebno poglavlja 1, 3, 4, 6, 7, i 9; "The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs" (John Wiley & Sons, New York, 1950 do danas), posebno sveske 13, 14, 16, 19, i 28; i J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566. "Heterociklil" uključuje i radikale pri čemu su heterociklični radikali fuzionisani sa zasićenim, delimično nezasićenim prstenom, ili aromatičnim karbocikličnim ili heterocikličnim prstenom. Primeri heterocikličnih prstenova uključuju pirolidinil, tetrahidrofuranil, dihidrofuranil, tetrahidrotienil, tetrahidropiranil, dihidropiranil, tetrahidrotiopiranil, piperidino, morfolino, tiomorfolino, tioksanil, piperazinil, homopiperazinil, azetidinil, oksetanil, tietanil, homopiperidinil, oksepanil, tiepanil, oksazepinil, diazepinil, tiazepinil, 2-pirolinil, 3-pirolinil, indolinil, 2H-piranil, 4H-piranil, dioksanil, 1,3-dioksolanil, pirazolinil, ditianil, ditiolanil, dihidropiranil, dihidrotienil, dihidrofuranil, pirazolidinilimidazolinil, imidazolidinil, 3-azabiciklo[3.1.0]heksanil, 3-azabiciklo[4.1.0]heptanil, i azabiciklo[2.2.2]heksanil. Spiro komponente su takođe obuhvaćene ovom definicijom. Primeri heterociklične grupe u kojoj su atomi prstena supstituisani okso (=O) komponentama su pirimidinonil i 1,1-diokso-tiomorfolinil.
[0025] Izraz "heteroaril" odnosi se na monovalentni aromatični radikal od 5- ili 6-članih prstenova i uključuje fuzionisane prstenaste sisteme (od kojih je najmanje jedan aromatičan) od
2
5-18 atoma, koji sadrže jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika, i sumpora. Primeri heteroaril grupa su piridinil (uključujući, na primer, 2-hidroksipiridinil), imidazolil, imidazopiridinil, pirimidinil (uključujući, na primer, 4-hidroksipirimidinil), pirazolil, triazolil, pirazinil, tetrazolil, furil, tienil, izoksazolil, tiazolil, oksazolil, izotiazolil, pirolil, hinolinil, izohinolinil, indolil, benzimidazolil, benzofuranil, cinolinil, indazolil, indolizinil, ftalazinil, piridazinil, triazinil, izoindolil, pteridinil, purinil, oksadiazolil, triazolil, tiadiazolil, furazanil, benzofurazanil, benzotiofenil, benzotiazolil, benzoksazolil, hinazolinil, hinoksalinil, naftiridinil, i furopiridinil.
[0026] Heterociklične ili heteroaril grupe mogu biti prikačene preko ugljenika (ugljenikpovezane) ili azota (azot-povezane) kada je to moguće. Na primer, heterocikli ili heteroarili vezani preko ugljenika vezani su na poziciji 2, 3, 4, 5, ili 6 piridina, poziciji 3, 4, 5, ili 6 piridazina, poziciji 2, 4, 5, ili 6 pirimidina, poziciji 2, 3, 5, ili 6 pirazina, poziciji 2, 3, 4, ili 5 furana, tetrahidrofurana, tiofurana, tiofena, pirola ili tetrahidropirola, poziciji 2, 4, ili 5 oksazola, imidazola ili tiazola, poziciji 3, 4, ili 5 izoksazola, pirazola ili izotiazola, poziciji 2 ili 3 aziridina, poziciji 2, 3, ili 4 azetidina, poziciji 2, 3, 4, 5, 6, 7, ili 8 hinolina ili poziciji 1, 3, 4, 5, 6, 7, ili 8 izohinolina.
[0027] Na primer, heterocikli ili heteroarili vezani preko azota vezani su na poziciji 1 aziridina, azetidina, pirola, pirolidina, 2-pirolina, 3-pirolina, imidazola, imidazolidina, 2-imidazolina, 3-imidazolina, pirazola, pirazolina, 2-pirazolina, 3-pirazolina, piperidina, piperazina, indola, indolina, 1H-indazola, poziciji 2 izoindola, ili izoindolina, poziciji 4 morfolina, i poziciji 9 karbazola, ili O-karbolina.
[0028] Heteroatomi prisutni u heteroarilu ili heterociklilu uključuju oksidisane oblike kao što su NO, SO, i SO2.
[0029] Izraz "halo" ili "halogen" odnosi se na F, Cl, Br ili I.
[0030] Alkil, alkenil, alkinil, ciklični alkil, ciklični alkenil, ciklični alkinil, karbociklil, aril, heterociklil i heteroaril opisani gore mogu opciono biti supstituisani jednim ili većim brojem (npr., 2, 3, 4, 5, 6 ili više) supstituenata.
[0031] Ako se supstituent opisuje kao da je "supstituisan", nevodonični supstituent je na mestu vodoničnog susptituenta na ugljeniku, kiseoniku, sumporu ili azotu supstituenta. Prema tome, na primer, supstituisani alkil supstituent je alkil supstituent u kojem je najmanje jedan nevodonični supstituent na mestu vodoničnog supstituenta na alkil supstituentu. Radi ilustracije, monofluoroalkil je alkil supstituisan fluoro supstituentom, a difluoroalkil je alkil supstituisan sa dva fluoro supstituenta. Podrazumeva se da ako na supstituentu ima više od jedne supstituicije, svaki od nevodoničnih supstituenata može biti identičan ili različit (ukoliko nije drugačije navedeno).
[0032] Ako se supstituent opisuje kao da je "opciono supstituisan", supstituent može biti (1) nesupstituisan, ili (2) supstituisan. Ako je ugljenik supstituenta opisan kao da je opciono supstituisan jednim ili većim brojem navedenih supstituenata, jedan ili više vodonika na ugljeniku (u meri u kojoj ih ima) mogu zasebno i/ili zajedno biti zamenjeni nezavisno odabranim opcionim supstituentom. Ako je azot supstituenta opisan kao opciono supstituisan jednim ili većim brojem navedenih supstituenata, jedan ili više vodonika na azotu (u meri u kojoj ih ima) mogu biti, svaki, zamenjeni nezavisno odabranim opcionim supstituentom. Jedan primer supstituenta može biti opisan kao -NR'R'', gde R' i R'' zajedno sa atomom azota za koji su prikačeni, mogu formirati heterociklični prsten. Heterociklični prsten koji formiraju R' i R'' zajedno sa atomom azota za koji su prikačeni može biti delimično ili potpuno zasićen. U jednom primeru izvođenja, heterociklični prsten sastoji se od 3 do 7 atoma. U drugom primeru izvođenja, heterociklični prsten se bira iz grupe koja se sastoji od pirolila, imidazolila, pirazolila, triazolila, tetrazolila, izoksazolila, piridila i tiazolila.
[0033] U ovom opisu izrazi "supstituent", "radikal" i "grupa" koriste se naizmenično.
[0034] Ako su supstituenti u grupi zajednički opisani kao opciono supstituisani jednim ili većim brojem navedenih supstituenata, grupa može uključivati: (1) nesupstitutabilne supstituente, (2) supstitutabilne supstituente koji nisu supstituisani opcionim supstituentima, i/ili (3) supstitutabilne supstituente koji su supstituisani jednim ili većim brojem opcionih supstituenata.
[0035] Ako je supstituent opisan kao opciono supstituisan brojem supstituenata do određenog broja nevodoničnih supstituenata, taj supstituent može biti (1) nesupstituisan; ili (2) supstituisan brojem nevodoničnih supstituenata do tog navedenog broja ili brojem supstituenata do maksimalnog broja supstitutabilnih pozicija na supstituentu, zavisno od toga šta je manje. Tako, na primer, ako je supstituent opisan kao heteroaril opciono supstituisan sa do 3 nevodonična supstituenta, onda je svaki heteroaril sa manje od 3 supstitutabilne pozicije opciono supstituisan sa toliko nevodoničnih supstituenata koliko heteroaril ima supstitutabilnih pozicija. Takvi supstituenti, u neograničavajućim primerima, mogu da se odaberu između linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, arila, heteroarila, heterociklila, halogena, guanidinijuma [-NH(C=NH)NH2], -OR<100>, NR<101>R<102>, -NO2,-NR<101>COR<102>, -SR<100>, sulfoksida predstavljenog -SOR<101>, sulfona predstavljenog -SO2R<101>, sulfonata -SO3M, sulfata -OSO3M, sulfonamida predstavljenog -SO2NR<101>R<102>, cijano, azido, -COR<101>, -OCOR<101>, -OCONR<101>R<102>i polietilen glikolne jedinice (-OCH2CH2)nR<101>gde je M H ili farmaceutski prihvatljivi katjon (kao Na<+>ili K<+>); R<101>, R<102>i R<103>su svaki nezavisno odabrani između H, linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice (-OCH2CH2)n-R<104>, gde je n ceo broj od 1 do 24, arila sa od 6 do 10 ugljenikovih atoma, heterocikličnog prstena sa od 3 do 10 ugljenikovih atoma i heteroarila sa 5 do 10 ugljenikovih atoma; i R<104>je H ili linearni ili granati alkil sa 1 do 4 ugljenikova atoma, gde su alkil, alkenil, alkinil, aril, heteroaril i heterociklil u grupama predstavljeni sa R<100>, R<101>, R<102>, R<103>i R<104>opciono supstituisani jednim ili većim brojem (npr., 2, 3, 4, 5, 6 ili više) supstituenata nezavisno odabranih između halogena, -OH, -CN, -NO2i nesupstituisanog linearnog ili granatog alkila sa 1 do 4 ugljenikova atoma. Poželjno, supstituenti za opciono susptituisani alkil, alkenil, alkinil, ciklični alkil, ciklični alkenil, ciklični alkinil, karbociklil, aril, heterociklil i heteroaril opisane gore uključuju halogen, -CN, -NR<102>R<103>, -CF3, -OR<101>, aril, heteroaril, heterocikl, -SR<101>, -SOR<101>, -SO2R<101>i -SO3M.
[0036] Izraz "jedinjenje" ili "citotoksično jedinjenje", "citotoksični dimer" i "citotoksično dimerno jedinjenje" koriste se naizmenično. Oni treba da obuhvate jedinjenja čije su struktura ili formula ili neki njihov biološki aktivni derivat objavljeni u predmetnom pronalasku. Izraz takođe obuhvata stereoizomere, geometrijske izomere, tautomere, solvate, metabolite, soli (npr., farmaceutski prihvatljive soli) i prolekove, i soli prolekova jedinjenja svih formula objavljenih u predmetnom pronalasku. Izraz takođe obuhvata sve solvate, hidrate, i polimorfe svakog od napred navedenih. Specifično navođenje "stereoizomer", "geometrijski izomer", "tautomer", "solvat", "metabolit", "so", "prolek", "so proleka", "konjugat", "so konjugata", "solvat", "hidrat" ili "polimorf" u određenim aspektima pronalaska opisanim u ovoj patentnoj prijavi ne treba tumačiti kao nameru da se ove forme ograniče u drugim aspektima pronalaska gde se izraz "jedinjenje" koristi bez navođenja ovih drugih formi. U jednom primeru izvođenja, citotoksično jedinjenje uključuje povezujuću grupu ili povezujuću grupu sa reaktivnom grupom vezanom za nju. Alternativno, citotoksično jedinjenje ne uključuje povezujuću grupu ili povezujuću grupu sa reaktivnom grupom vezanom za nju.
[0037] Izraz "konjugat" kako se koristi u ovom tekstu odnosi se na jedinjenje opisano u ovom tekstu ili njegov derivat, koji su povezani sa sredstvom koje se vezuje za ćeliju.
[0038] Izraz "može se povezati sa sredstvom koje se vezuje za ćeliju" kako se koristi u ovom tekstu odnosi se na ovde opisana jedinjenja ili njihove derivate, koji sadrže najmanje jednu povezujuću grupu ili njen prekursor, koji su pogodni za vezivanje ovih jedinjenja ili njihovih derivata za sredstvo koje se vezuje za ćeliju.
2
[0039] Izraz "prekursor" date grupe odnosi se na bilo koju grupu koja može dati tu grupu deprotektovanjem, hemijskom modifikacijom ili reakcijom kuplovanja.
[0040] Izraz "povezan sa sredstvom koje se vezuje za ćeliju" odnosi se na molekul konjugata koji uključuje najmanje jedno od jedinjenja opisanih u ovom tekstu (npr., jedinjenja i lek-linker jedinjenja opisana u ovom tekstu), ili njegov derivat, vezane za sredstvo koje se vezuje za ćeliju preko pogodne povezujuće grupe ili njenog prekursora.
[0041] Izraz "hiralni" odnosi se na molekule koji imaju osobinu da se ne preklapaju sa svojim partnerom koji im je sika u ogledalu, dok se izraz "ahiralni" odnosi na molekule koji se preklapaju sa svojim partnerom koji im je slika u ogledalu.
[0042] Izraz "stereoizomer" odnosi se na jedinjenja koja imaju identičnu hemijsku konstituciju i konektivnost, ali različite orijentacije atoma u prostoru, koja ne mogu da se interkonvertuju rotiranjem oko pojedinačnih veza.
[0043] "Dijastereomer" odnosi se na stereoizomer sa dva ili više centara hiralnosti i čiji molekuli nisu jedan drugome slika u ogledalu. Dijastereomeri imaju različite fizičke osobine, npr. tačku topljenja, tačku ključanja, spektralna svojstva, i reaktivnosti. Mešavine dijastereomera mogu da se razdvoje analitičkim postupcima visoke rezolucije kao što su kristalizacija, elektroforeza i hromatografija.
[0044] "Enantiomeri" odnosi se na dva stereoizomera jedinjenja, koji su jedan drugome nepreklapajuće slike u ogledalu.
[0045] Stereohemijske definicije i konvencije upotrebljene u ovom tekstu uopšteno prate S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; i Eliel, E. and Wilen, S., "Stereochemistry of Organic Compounds," John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994. Jedinjenja korisna u pronalasku mogu sadržati asimetrične ili hiralne centre, i tako postojati u različitim stereoizomernim formama. Namera je da sve stereoizomerne forme jedinjenja korisnih u pronalasku, uključujući dijastereomere, enantiomere i atropizomere, kao i njihove mešavine kao što su racemske mešavine, čine deo predmetnog pronalaska. Mnoga organska jedinjenja postoje u optički aktivnim formama, tj., imaju sposobnost da rotiraju ravan planarno polarizovane svetlosti. U opisivanju optički aktivnog jedinjenja, prefiksi D i L, ili R i S, koriste se da označe apsolutnu konfiguraciju molekula oko njegovog hiralnog centra/centara. Prefiksi d i I ili (+) i (-) koriste se da označe smer rotacije planarno polarizovane svetlosti jedinjenjem, pri čemu (-) ili 1 znači da je jedinjenje levorotatorno. Jedinjenje sa prefiksom (+) ili d je dekstrorotatorno. Za datu hemijsku strukturu, ovi stereoizomeri su identični osim što jedan drugome predstavljaju slike u ogledalu.
Specifični stereoizomer može da se označi i kao enantiomer, a mešavina takvih izomera se često naziva enantiomerna mešavina. Mešavina koja sadrži enantiomere u odnosu 50:50 označava se kao racemska mešavina ili racemat, koji se može sresti kada u hemijskoj reakciji ili procesu nije bilo stereoselekcije ili stereospecifičnosti. Izrazi "racemska mešavina" i "racemat" odnose se na ekvimolarnu mešavinu dve enantiomerne vrste, lišenu optičke aktivnosti.
[0046] Izrazi "tautomer" ili "tautomerna forma" odnose se na strukturne izomere različitih energija, koji su interkonvertibilni preko niskoenergetske barijere. Na primer, protonski tautomeri (poznati i kao prototropni tautomeri) uključuju interkonverzije putem migracije protona, kao što su keto-enol izomerizacija i imin-enamin izomerizacija. Valentni tautomeri uključuju interkonverzije reorganizacijom nekih od elektrona veze.
[0047] Izraz "prolek" kako se koristi u ovoj patentnoj prijavi odnosi se na prekursorsku ili derivatizovanu formu jedinjenja korisnog za pronalazak, sposobnu da se enzimski ili hidrolitički aktivira ili konvertuje u aktivniju matičnu formu. Vidi, npr., Wilman, "Prodrugs in Cancer Chemotherapy" Biochemical Society Transactions, 14, pp. 375-382, 615th Meeting Belfast (1986) i Stella et al., "Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery," Directed Drug Delivery, Borchardt et al., (ed.), pp.247-267, Humana Press (1985). Prolekovi ovog pronalaska uključuju estar-sadržavajuće prolekove, fosfat-sadržavajuće prolekove, tiofosfat-sadržavajuće prolekove, sulfat-sadržavajuće prolekove, peptid-sadržavajuće prolekove, D-amino-kiselinski modifikovane prolekove, glikozilovane prolekove, β-laktamsadržavajuće prolekove, opciono supstituisane fenoksiacetamid-sadržavajuće prolekove, opciono supstituisane fenilacetamid-sadržavajuće prolekove, 5-fluorocitozin i druge 5-fluorouridinske prolekove koji mogu da se konvertuju u aktivnije citotoksične slobodne lekove. Primeri citotoksičnih lekova koji mogu da se derivatizuju u formu proleka za upotrebu u ovom pronalasku uključuju jedinjenja korisna u pronalasku i hemioterapijska sredstva kao što su gore opisana.
[0048] Izraz "prolek" treba da uključi i derivat jedinjenja koji može da se hidrolizuje, oksidiše ili na drugi način reaguje pod biološkim uslovima (in vitro ili in vivo) da bi dao jedinjenje korisno u ovom pronalasku. Prolekovi mogu postati aktivni samo posle takvih reakcija u biološkim uslovima, ili mogu biti aktivni i u svojim neodreagovalim formama. Primeri prolekova koji se razmatraju u vezi sa ovim pronalaskom uključuju analoge ili derivate jedinjenja bilo koje od formula objavljenih u ovom tekstu, koje uključuju biohidrolizabilne komponente kao što su biohidrolizabilni amidi, biohidrolizabilni estri, biohidrolizabilni karbamati, biohidrolizabilni karbonati, biohidrolizabilni ureidi, i biohidrolizabilni fosfatni
2
analozi. Drugi primeri prolekova uključuju derivate jedinjenja bilo koje od formula objavljenih u ovom tekstu, koje uključuju -NO, -NO2, -ONO, ili -ONO2komponente. Prolekovi mogu tipično da se pripreme korišćenjem dobro poznatih metoda kao što su oni opisani u Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery (1995) 172-178, 949-982 (Manfred E. Wolff ed., 5th ed); vidi i Goodman and Gilman's, The Pharmacological basis of Therapeutics, 8th ed., McGraw-Hill, Int. Ed.1992, "Biotransformation of Drugs".
[0049] Jedna poželjna forma proleka pronalaska uključuje jedinjenja (sa ili bez povezujućih grupa) i konjugate pronalaska koji podrazumevaju adukt formiran između iminske veze jedinjenja / konjugata i imin-reaktivnog reagensa.
[0050] Izraz "imin-reaktivni reagens" odnosi se na reagens koji je sposoban da reaguje sa iminskom grupom. Primeri imin-reaktivnog reagensa uključuju sulfite (H2SO3, H2SO2ili so HSO3-, SO3<2->ili HSO2<->formirana sa katjonom), metabisulfit (H2S2O5ili so S2O5<2->formirana sa katjonom), mono, di, tri, i tetra- tiofosfate (PO3SH3, PO2S2H3, POS3H3, PS4H3ili so PO3S<3->, PO2S2<3->, POS3<3->ili PS4<3->formirana sa katjonom), tiofosfatne estre ((R<i>O)2PS(OR<i>), R<i>SH, R<i>SOH, R<i>SO2H, R<i>SO3H), različite amine (hidroksil amin (npr., NH2OH), hidrazin (npr., NH2NH2), NH2O-R<i>, R<i>NH-R<i>, NH2-R<i>), NH2-CO-NH2, NH2-C(=S)-NH2'tiosulfat (H2S2O3ili so S2O3<2->formirana sa katjonom), ditionit (H2S2O4ili so S2O4<2->formirana sa katjonom), fosforoditioat (P(=S)(OR<k>)(SH)(OH) ili njegova so formirana sa katjonom), hidroksamsku kiselinu (R<k>C(=O)NHOH ili so formirana sa katjonom), hidrazid (R<k>CONHNH2), formaldehid sulfoksilat (HOCH2SO2H ili so HOCH2SO2<->formirana sa katjonom, kao što je HOCH2SO2-Na<+>), glikovani nukleotid (kao što je GDP-manoza), fludarabin ili njihovu mešavinu, gde su R<i>i R<i'>svaki nezavisno, linearni ili granati alkil koji ima 1 do 10 ugljenikovih atoma i supstituisani su najmanje jednim supstituentom odabranim između -N(R<j>)2, -CO2H, -SO3H, i -PO3H; R<i>i R<i'>mogu opciono biti supstituisani još i supstituentom za alkil opisanim u ovom tekstu; R<j>je linearni ili granati alkil koji ima 1 do 6 ugljenikovih atoma; i R<k>je linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, aril, heterociklil ili heteroaril (poželjno, R<k>je linearni ili granati alkil koji ima 1 do 4 ugljenikova atoma; poželjnije, R<k>je metil, etil ili propil). Poželjno, katjon je monovalentni katjon, kao što je Na<+>ili K<+>. Poželjno, imin-reaktivni reagens bira se između sulfita, hidroksil amina, uree i hidrazina. Poželjnije, imin-reaktivni reagens je NaHSO3ili KHSO3.
[0051] Kako se koristi u ovom tekstu i ako nije drugačije navedeno, izrazi "biohidrolizabilni amid", "biohidrolizabilni estar", "biohidrolizabilni karbamat", "biohidrolizabilni karbonat", "biohidrolizabilni ureid" i "biohidrolizabilni fosfatni analog" označavaju amid,
2
estar, karbamat, karbonat, ureid, odnosno fosfatni analog koji: 1) ne uništavaju biološku aktivnost jedinjenja i doprinose pogodnim osobinama tog jedinjenja in vivo, kao što su preuzimanje, trajanje dejstva, ili uspostavljanje dejstva; ili 2) sami su biološki neaktivni, ali se konvertuju in vivo u biološki aktivna jedinjenja. Primeri biohidrolizabilnih amida uključuju niže alkil amide, α-amino-kiselinske amide, alkoksiacil amide, i alkilaminoalkilkarbonil amide. Primeri biohidrolizabilnih estara uključuju niže alkil estre, alkoksiaciloksi estre, alkil acilamino alkil estre, i holin estre. Primeri biohidrolizabilnih karbamata uključuju, ali se ne ograničavaju na niže alkilamine, supstituisane etilendiamine, amino-kiseline, hidroksialkilamine, heterociklične i heteroaromatične amine, i polietarske amine. Posebno su poželjni prolekovi i soli prolekova koji povećavaju bioraspoloživost jedinjenja korisnih u ovom pronalasku kada se ta jedinjenja primene kod sisara.
[0052] Izraz "farmaceutski prihvatljiva so" kako se koristi u ovom tekstu, odnosi se na farmaceutski prihvatljive organske ili neorganske soli jedinjenja korisnog u pronalasku. Primeri soli uključuju sulfatne, citratne, acetatne, oksalatne, hloridne, bromidne, jodidne, nitratne, bisulfatne, fosfatne, kisele fosfatne, izonikotinatne, laktatne, salicilatne, kisele citratne, tartaratne, oleatne, tanatne, pantotenatne, bitartaratne, askorbatne, sukcinatne, maleatne, gentisinatne, fumaratne, glukonatne, glukuronatne, saharatne, formatne, benzoatne, glutamatne, metansulfonatne "mezilatne", etansulfonatne, benzensulfonatne, p-toluensulfonatne, pamoatne (tj., 1,1'-metilen-bis-(2-hidroksi-3-naftoatne)) soli, soli alkalnih metala (npr., natrijuma i kalijuma), soli zemno-alkalnih metala (npr., magnezijum), i amonijum soli. Farmaceutski prihvatljiva so može uključivati učešće još nekog molekula kao što je acetatni jon, sukcinatni jon ili drugi kontra jon. Kontra jon može biti bilo koja organska ili neorganska komponenta koja stabiliše naelektrisanje na matičnom jedinjenju. Pored toga, farmaceutski prihvatljiva so može u svojoj strukturi imati više od jednog naelektrisanog atoma. U slučajevima u kojima više naelektrisanih atoma čine deo farmaceutski prihvatljive soli, kontra jona može biti više. Prema tome, farmaceutski prihvatljiva so može imati jedan ili više naelektrisanih atoma i/ili jedan ili više kontra jona.
[0053] Ako je jedinjenje korisno u pronalasku baza, željena farmaceutski prihvatljiva so može se pripremiti bilo kojim pogodnim metodom poznatim u struci, na primer, tretiranjem slobodne baze neorganskom kiselinom kao što su hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, sumporna kiselina, azotna kiselina, metansulfonska kiselina i fosforna kiselina, ili organskom kiselinom kao što su sirćetna kiselina, maleinska kiselina, sukcinska kiselina, mandelična kiselina, fumarna kiselina, malonska kiselina, piruvinska kiselina, oksalna kiselina, glikolna
2
kiselina, salicilna kiselina, piranozidilna kiselina, kao što su glukuronska kiselina ili galakturonska kiselina, alfa-hidroksi kiselina, kao što su liminska kiselina ili tartarna kiselina, amino-kiselina, kao što su asparaginska kiselina ili glutaminska kiselina, aromatična kiselina kao što su benzoeva kiselina ili cinaminska kiselina, sulfonska kiselina, kao što su ptoluensulfonska kiselina ili etansulfonska kiselina.
[0054] Ako je jedinjenje korisno u pronalasku kiselina, željena farmaceutski prihvatljiva so može da se pripremi bilo kojim pogodnim metodom, na primer, tretmanom slobodne kiseline neorganskom ili organskom bazom kao što je amin (primarni, sekundarni ili tercijarni), hidroksidom alkalnog metala ili hidroksidom zemno-alkalnog metala. Ilustrativni primeri pogodnih soli uključuju organske soli izvedene iz amino-kiselina kao što su glicin i arginin, amonijak, primarni, sekundarni ili tercijarni amini, i ciklični amini, kao piperidin, morfolin i piperazin, i neorganske soli izvedene iz natrijuma, kalcijuma, kalijuma, magnezijuma, mangana, gvožđa, bakra, cinka, aluminijuma i litijuma.
[0055] Kako se koristi u ovom tekstu, izraz "solvat" označava jedinjenje koje uključuje i stehiometrijsku ili nestehiometrijsku količinu rastvarača kao što su voda, izopropanol, aceton, etanol, metanol, DMSO, etil acetat, sirćetna kiselina, i etanolamin dihlorometan ili 2-propanol, spojene nekovalentnim međumolekulskim silama. Solvati ili hidrati jedinjenja lako se pripremaju dodavanjem jedinjenju najmanje jednog molarnog ekvivalenta hidroksilnog rastvarača kao što su metanol, etanol, 1-propanol, 2-propanol ili voda, što rezultuje solvatacijom ili hidratacijom iminske komponente.
[0056] "Metabolit" je proizvod proizveden metabolisanjem u telu specifikovanog jedinjenja, njegovog derivata, ili njegovog konjugata, ili njegove soli. Metaboliti jedinjenja, njegovog derivata, ili njegovog konjugata, mogu se identifikovati korišćenjem rutinskih tehnika poznatih u struci i njihove aktivnosti se mogu odrediti korišćenjem testova kao što su oni opisani u ovom tekstu. Takvi proizvodi mogu se dobiti na primer oksidacijom, hidroksilacijom, redukcijom, hidrolizom, amidacijom, deamidacijom, esterifikacijom, deesterifikacijom i enzimskim isecanjem, primenjenog jedinjenja. Prema tome, pronalazak uključuje metabolite jedinjenja, njihovih derivata ili njihovih konjugata, pronalaska, uključujući jedinjenja, njihove derivate ili njihove konjugate proizvedene procesom koji uključuje dovođenje u kontakt jedinjenja, njegovog derivata ili njegovog konjugata ovog pronalaska, sa sisarom, tokom vremenskog perioda dovoljnog za dobijanje njegovog metaboličkog proizvoda.
2
[0057] Izraz "farmaceutski prihvatljiv" ukazuje na to da supstanca ili kompozicija moraju biti hemijski i/ili toksikološki kompatibilne sa drugim sastojcima formulacije i/ili sastojcima kojima je sisar tretiran.
[0058] Izraz "protektujuća grupa" ili "protektujuća komponenta" odnosi se na supstituent koji se obično koristi za blokiranje ili protekciju (zaštitu) određene funkcionalnosti dok druge funkcionalne grupe na jedinjenju, njegovom derivatu ili njegovom konjugatu reaguju. Na primer, "amin-protektujuća grupa" ili "amino-protektujuća komponenta" je supstituent prikačen za amino grupu, koji blokira ili štiti amino funkcionalnost jedinjenja. Takve grupe su dobro poznate u struci (vidi na primer P. Wuts and T. Greene, 2007, Protective Groups in Organic Synthesis, Chapter 7, J. Wiley & Sons, NJ) i njihovi primeri su karbamati kao metil i etil karbamat, FMOC, supstituisani etil karbamati, karbamati isečeni 1,6-β-eliminacijom (označeni i kao "samožrtvujući"), uree, amidi, peptidi, alkil i aril derivati. Pogodne aminoprotektujuće grupe uključuju acetil, trifluoroacetil, t-butoksikarbonil (butoxycarbonyl, BOC), benziloksikarbonil (benzyloxycarbonyl, CBZ) i 9-fluorenilmetilenoksikarbonil (fluorenylmethylenoxycarbonyl, Fmoc). Za opšti opis protektujućih grupa i njihovo korišćenje, vidi P. G.M. Wuts & T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 2007.
[0059] Izraz "odlazeća grupa" odnosi se na grupu naelektrisane ili nenaelektrisane komponente koja se odvaja tokom supstitucije ili izmeštanja. Takve odlazeće grupe dobro su poznate u struci i uključuju halogene, estre, alkoksi, hidroksil, tozilate, triflate, mezilate, nitrile, azid, karbamat, disulfide, tioestre, tioetre i diazonijum jedinjenja.
[0060] Izraz "bifunkcionalno unakrsno povezujuće sredstvo", "bifunkcionalni linker" ili "unakrsno povezujuća sredstva" odnosi se na modifikujuća sredstva koja poseduju dve reaktivne grupe povezane sa "povezujućom grupom"; jedna od njih je sposobna da reaguje sa sredstvom koje se vezuje za ćeliju, dok druga reaguje sa citotoksičnim jedinjenjem da poveže dve komponente jednu sa drugom. Takva bifunkcionalna unakrsno povezujuća sredstva dobro su poznata u struci (vidi, na primer, Isalm and Dent in Bioconjugation chapter 5, p218-363, Groves Dictionaries Inc. New York, 1999). Na primer, bifunkcionalna unakrsno povezujuća sredstva koja omogućavaju povezivanja preko tioetarske veze uključuju N-sukcinimidil-4-(N-maleimidometil)-cikloheksan-1-karboksilat (N-succinimidyl-4-(N-maleimidomethyl)-cyclohexane-1-carboxylate, SMCC) za uvođenje maleimido grupa, ili N-sukcinimidil-4-(jodoacetil)-aminobenzoat (N-succinimidyl-4-(iodoacetyl)-aminobenzoate, SIAB) za uvođenje jodoacetil grupa. Druga bifunkcionalna unakrsno povezujuća sredstva koja uvode maleimido
2
grupe ili haloacetil grupe u sredstvo koje se vezuje za ćeliju dobro su poznate u struci (vidi US patentna prijava 2008/0050310, 20050169933, dostupno od Pierce Biotechnology Inc., P.O. Box 117, Rockland, IL 61105, USA) i uključuju bis-maleimidopolietilenglikol (bismaleimidopolyethyleneglycol, BMPEO), BM(PEO)2, BM(PEO)3, N-(βmaleimidopropiloksi)sukcinimid estar (N-(β-maleimidopropyloxy)succinimide ester, BMPS), N-sukcinimidil estar γ-maleimidobuterne-kiseline (γ-maleimidobutyric acid N-succinimidyl ester, GMBS), N-hidroksisukcinimid estar ε-maleimidokapronske kiseline (εmaleimidocaproic acid N-hydroxysuccinimide ester, EMCS), 5-maleimidovalerinska kiselina NHS, HBVS, N-sukcinimidil-4-(N-maleimidometil)-cikloheksan-1-karboksi-(6-amidokaproat), koji je "dugolančani" analog SMCC (LC-SMCC), m-maleimidobenzoil-N-hidroksisukcinimid estar (m-maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester, MBS), 4-(4-N-maleimidofenil)-buterna kiselina hidrazid ili HCl so (4-(4-N-maleimidophenyl)-butyric acid hydrazide, MPBH), N-sukcinimidil 3-(bromoacetamido)propionat (N-succinimidyl 3-(bromoacetamido)propionate, SBAP), N-sukcinimidil jodoacetat (N-succinimidyl iodoacetate, SIA), N-sukcinimidil estar κ-maleimidoundekanske kiseline (κ-maleimidoundecanoic acid N-succinimidyl ester, KMUA), N-sukcinimidil 4-(p-maleimidofenil)-butirat (N-succinimidyl 4-(p-maleimidophenyl)-butyrate, SMPB), sukcinimidil-6-(β-maleimidopropionamido)heksanoat (succinimidyl-6-(β-maleimidopropionamido)hexanoate, SMPH), sukcinimidil-(4-vinilsulfonil)benzoat (succinimidyl-(4-vinylsulfonyl)benzoate, SVSB), ditiobis-maleimidoetan (dithiobis-maleimidoethane, DTME), 1,4-bis-maleimidobutan (1,4-bis-maleimidobutane BMB), 1,4 bismaleimidil-2,3-dihidroksibutan (1,4 bismaleimidyl-2,3-dihydroxybutane, BMDB), bis-maleimidoheksan (bis-maleimidohexane, BMH), bis-maleimidoetan (bismaleimidoethane, BMOE), sulfosukcinimidil 4-(N-maleimido-metil)cikloheksan-1-karboksilat (sulfosuccinimidyl 4-(N-maleimido-methyl)cyclohexane-1-carboxylate, sulfo-SMCC), sulfosukcinimidil(4-jodo-acetil)aminobenzoat (sulfosuccinimidyl(4-iodoacetyl)aminobenzoate, sulfo-SIAB), m-maleimidobenzoil-N-hidroksisulfosukcinimid estar (mmaleimidobenzoyl-N-hydroxysulfosuccinimide ester, sulfo-MBS), N-(γmaleimidobutiriloksi)sulfosukcinimid estar (N-(γ-maleimidobutryloxy)sulfosuccinimde ester, sulfo-GMBS), N-(ε-maleimidokaproiloksi)sulfosukcimido estar (N-(ε-maleimidocaproyloxy) sulfosuccimido ester, sulfo-EMCS), N-(κ-maleimidoundekanoiloksi) sulfosukcinimid ester (N-(κ-maleimidoundecanoyloxy) sulfosuccinimide ester, sulfo-KMUS), i sulfosukcinimidil 4-(pmaleimidofenil)butirat (sulfosuccinimidyl 4-(p-maleimidophenyl)butyrate, sulfo-SMPB).
[0061] Heterobifunkcionalna unakrsno povezujuća sredstva su bifunkcionalna unakrsno povezujuća sredstva koja imaju dve različite reaktivne grupe. Heterobifunkcionalna unakrsno povezujuća sredstva koja sadrže amin-reaktivnu N-hidroksisukcinimid grupu (N-hydroxysuccinimide, NHS grupa) i karbonil-reaktivnu hidrazinsku grupu takođe mogu da se koriste za povezivanje citotoksičnih jedinjenja opisanih u ovom tekstu sa sredstvom koje se vezuje za ćeliju (npr., antitelo). Primeri takvih komercijalno raspoloživih heterobifunkcionalnih unakrsno povezujućih sredstava uključuju sukcinimidil 6-hidrazinonikotinamid aceton hidrazon (succinimidyl 6-hydrazinonicotinamide acetone hydrazone, SANH), sukcinimidil 4-hidrazidotereftalat hidrohlorid (succinimidyl 4-hydrazidoterephthalate hydrochloride, SHTH) i sukcinimidil hidrazinijum nikotinat hidrohlorid (succinimidyl hydrazinium nicotinate hydrochloride, SHNH). Konjugati koji nose vezu labilnu na dejstvo kiselina mogu se pripremiti i korišćenjem benzodiazepinskog derivata koji nosi hidrazin, predmetnog pronalaska. Primeri bifunkcionalnih unakrsno povezujućih sredstava koja se mogu koristiti uključuju sukcinimidilp-formil benzoat (succinimidyl-p-formyl benzoate, SFB) i sukcinimidil-p-formilfenoksiacetat (succinimidyl-p-formylphenoxyacetate, SFPA).
[0062] Bifunkcionalna unakrsno povezujuća sredstva sposobna da povežu sredstvo koje se vezuje za ćeliju sa citotoksičnim jedinjenjima preko disulfidnih veza uključuju N-sukcinimidil-4-(4-nitropiridil-2-ditio)butanoat, i druga sredstva poznata u struci koja obuhvataju N-sukcinimidil-3-(2-piridilditio)propionat (N-succinimidyl-3-(2-pyridyldithio)propionate, SPDP), N-sukcinimidil-4-(2-piridilditio)pentanoat (N-succinimidyl-4-(2-pyridyldithio)pentanoate, SPP), N-sukcinimidil-4-(2-piridilditio)butanoat (N-succinimidyl-4-(2-pyridyldithio)butanoate, SPDB), N-sukcinimidil-4-(2-piridilditio)2-sulfo butanoat (N-succinimidyl-4-(2-pyridyldithio)2-sulfo butanoate, sulfo-SPDB), za uvođenje ditiopiridil grupa. Druga bifunkcionalna unakrsno povezujuća sredstva koja mogu da se koriste za uvođenje disulfidnih grupa poznata su u struci i objavljena su u U.S. patentima 6,913,748, 6,716,821 i US patentnim publikacijama 20090274713 i 20100129314. Alternativno, mogu se koristiti i unakrsno povezujuća sredstva kao što su 2-iminotiolan, homocistein tiolakton ili S-acetilsukcinski anhidrid, koja uvode tiol grupe.
[0063] "Povezivač/linker", "povezujuća/linkerska komponenta" ili "povezujuća/linkerska grupa" kako je definisano u ovom tekstu odnosi se na komponentu koja povezuje jednu sa drugom dve komponente, kao što su sredstvo koje se vezuje za ćeliju i citotoksično jedinjenje. Bifunkcionalno unakrsno povezujuće sredstvo može sadržati dve reaktivne grupe, po jednu na svakom kraju povezujuće komponente, tako da jedna reaktivna grupa može prva da reaguje sa
1
citotoksičnim jedinjenjem dajući jedinjenje koje nosi povezujuću komponentu i druga reaktivna grupa tada može da reaguje sa sredstvom koje se vezuje za ćeliju. Alternativno, jedan kraj bifunkcionalnog unakrsno povezujućeg sredstva može prvo da reaguje sa sredstvom koje se vezuje za ćeliju da se dobije sredstvo koje se vezuje za ćeliju koje nosi povezujuću komponentu i druga reaktivna grupa tada može da reaguje sa citotoksičnim jedinjenjem. Povezujuća komponenta može sadržati hemijsku vezu koja omogućava oslobađanje citotoksične komponente na određenom mestu. Pogodne hemijske veze dobro su poznate u struci i uključuju disulfidne veze, tioetarske veze, veze labilne na dejstvo kiselina, fotolabilne veze, veze labilne na dejstvo peptidaza i veze labilne na dejstvo esteraza (vidi na primer US patente 5,208,020; 5,475,092; 6,441,163; 6, 716,821;6,913,748; 7,276,497; 7,276,499; 7,368,565; 7,388,026 i 7,414,073). Poželjne su disulfidne veze, tioetarske veze i veze labilne na dejstvo peptidaza. Drugi linkeri koji mogu da se koriste u predmetnom pronalasku uključuju neisecajuće linkere kao što su oni detaljno opisani u U.S. publikaciji broj 20050169933, ili naelektrisani linkeri ili hidrofilni i opisani su u US 2009/0274713, US 2010/01293140 i WO 2009/134976.
[0064] U jednom primeru izvođenja, povezujuća grupa sa reaktivnom grupom prikačenom na jednom kraju, kao što je reaktivni estar, bira se sa sledećeg "Spiska 1":
-O(CR20R21)m(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y"(CR24R25)q(CO)tX", -O(CR20R21)m(CR26=CR27)m'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y"(CR24R25)q(CO)tX", -O(CR20R21)m(alkinil)n'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y"(CR24R25)q(CO)tX", -O(CR20R21)m(piperazino)t'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y"(CR24P25)q(CO)tX", -O(CR20R21)m(pirolo)t'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y"(CR24R25)q(CO)tX", -O(CR20R21)mA"m"(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y"(CR24R25)q(CO)tX", -S(CR20R21)m(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y"(CR24R25)q(CO)tX", -S(CR20R21)m(CR26=CR27)m'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y"(CR24R25)q(CO)tX", -S(CR20R21)m(alkinil)n'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y"(CR24R25)q(CO)tX", -S(CR20R21)m(piperazino)t'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y"(CR24R25)q(CO)tX", -S(CR20R21)m(pirolo)t'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y"(CR24R25)q(CO)tX", -S(CR20R21)mA"m"(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y"(CR24R25)q(CO)tX", -NR33(C=O)p"(CR20R21)m(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y"(CR24R25)q(CO)tX", NR33(C=O)p"(CR20R21)m(CR26=CR27)m'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y"(CR24R25)q(CO)tX",
2
-NR33(C=O)p"(CR20R21)m(alkinil)n'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y"(CR24R25)q-(CO)tX", NR33(C=O)p"(CR20R21)m(piperazino)t'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y"(CR24R25)q(CO)tX",
-NR33(C=O)p"(CR20R21)m(pirolo)t'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y"(CR24R25)q(CO)
tX",
-NR33(C=O)p"(CR20R21)mA"m"(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y"(CR24R25)q(CO)tX" ,
-(CR20R21)m(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CF40R41)p"Y"(CR24P25)q(CO)tX", -(CR20R21)m(CR26=CR27)m'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y"(CR24R25)q(CO)tX", -(CR20R21)m(alkinil)n'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y"(CR24R25)q(CO)tX", -(CR20R21)m(piperazino)t'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y"(CR24R25)q(CO)tX", -(CR20R21)mA"m"(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y"(CR24R25)q(CO)tX", -(CR20R21)m(CR29=N-NR30)n"(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y"(CR24R25)q(CO)tX", -(CR20R21)m(CR29=N-NR30)n"(CR26=CR27)m'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y" (CR24R25)q(CO)tX",
-(CR20R21)m(CR29=N-NR30)n"(alkinil)n'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40P41)p"Y"(CR24R25)q(CO)tX", -(CR20R21)m(CR29=N-NR30)n"A"m"(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y"(CR24R25)q(CO)tX", gde:
m, n, p, q, m', n', t' su celi brojevi od 1 do 10, ili su opciono 0;
t, m'', n'' i p'' su 0 ili 1;
X" se bira između OR36, SR37, NR38R39, gde su R36, R37, R38, R39H, ili linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa od 1 do 20 ugljenikovih atoma i, ili, polietilen glikolna jedinica -(OCH2CH2)n, R37, je opciono tiol-protektujuća grupa kada t = 1, COX'' formira reaktivni estar koji se bira između N-hidroksisukcinimid estara, N-hidroksiftalimid estara, N-hidroksi sulfosukcinimid estara, para-nitrofenil estara, dinitrofenil estara, pentafluorofenil estara i njihovih derivata, pri čemu pomenuti derivati olakšavaju formiranje amidne veze;
Y'' je odsutan ili se bira između O, S, S-S ili NR32, gde R32ima definiciju kao što je data gore za R, ili
kada Y'' nije S-S i t = 0, X'' se bira između maleimido grupe, haloacetil grupe ili SR37, gde R37ima istu definiciju kao gore;
A'' je amino-kiselina koja se bira između glicina, alanina, leucina, valina, lizina, citrulina i glutamata ili polipeptid koji sadrži između 2 i 20 aminokiselinskih jedinica;
R20, R21, R22, R23, R24, R25, R26, i R27su isti ili različiti, i to su H ili linearni ili granati alkil koji ima od 1 do 5 ugljenikovih atoma;
R29i R30su isti ili različiti, i to su H ili alkil koji ima od 1 do 5 ugljenikovih atoma;
R33je H ili linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa od 1 do 12 ugljenikovih atoma, polietilen glikolna jedinica -(OCH2CH2)n, ili R33je -COR34, -CSR34, -SOR34, ili -SO2R34, gde je R34H ili linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa od 1 do 20 ugljenikovih atoma ili polietilen glikolna jedinica -(OCH2CH2)n; i
jedan od R40i R41je opciono negativno ili pozitivno naelektrisana funkcionalna grupa, a drugi je H ili alkil, alkenil, alkinil sa 1 do 4 ugljenikova atoma.
[0065] Izraz "amino-kiselina" označava amino-kiseline koje se sreću u prirodi ili aminokiseline koje se ne sreću u prirodi, predstavljene kao NH2-C(R<aa'>R<aa>)-C(=O)OH, gde su R<aa>i R<aa'>svaki nezavisno H, opciono supstituisani linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, aril, heteroaril ili heterociklil. Izraz "amino-kiselina" odnosi se i na odgovarajuću reziduu u kojoj je jedan vodonikov atom uklonjen sa amino- i/ili karboksi kraja amino-kiseline, na primer -NH-C(R<aa'>R<aa>)-C(=O)O-.
[0066] Izraz "katjon" odnosi se na jon sa pozitivnim naelektrisanjem. Katjon može biti monovalentan (npr., Na<+>, K<+>, itd.), bivalentan (npr., Ca<2+>, Mg<2+>, itd.) ili multivalentan (npr., Al<3+>itd.). Poželjno, katjon je monovalentan.
[0067] Izraz "terapijski efikasna količina" označava količinu aktivnog jedinjenja ili konjugata koja kod subjekta izaziva željeni biološki odgovor. Taj odgovor uključuje ublažavanje simptoma oboljenja ili poremećaja koji se leče, prevenciju, inhibiciju ili odlaganje vraćanja simptoma bolesti ili same bolesti, produžetak životnog veka subjekta u poređenju sa onim u odsustvu lečenja, ili prevenciju, inhibiciju ili odlaganje napredovanja simptoma bolesti ili same bolesti. Određivanje efikasne količine u okvirima je osposobljenosti stručnjaka u oblasti,
4
posebno u svetlu detaljnog opisa datog u ovom tekstu. Toksičnost i terapijska efikasnost jedinjenja I može se odrediti standardnim farmaceutskim postupcima, na kulturama ćelija i eksperimentalnim životinjama. Efikasna količina jedinjenja ili konjugata predmetnog pronalaska ili drugog terapijskog sredstva, koja će se primeniti kod subjekta zavisiće od stadijuma, kategorije i statusa multiplog mijeloma i karakteristika subjekta kao što su opšte zdravstveno stanje, starost, pol, telesna težina i tolerancija prema leku. Efikasna količina jedinjenja ili konjugata predmetnog pronalaska ili drugog terapijskog sredstva, koja će se primeniti zavisiće i od puta primene i dozne forme. Dozna količina i interval mogu se individualno prilagođavati da bi se obezbedili nivoi aktivnog jedinjenja u plazmi dovoljni za održavanje željenih terapijskih efekata.
[0068] Izraz "tiol-reaktivna grupa" odnosi se na funkcionalnu grupu koja će reagovati sa tiolnom komponentom. Primeri tiol-reaktivne grupe uključuju maleimido, vinilpiridin, vinil sulfon, vinil sulfonamid, haloacetil-baziranu grupu (npr., haloacetamido) ili disulfid (npr., -SSR<d>, gde je R<d>linearni ili granati alkil koji ima 1 do 4 ugljenikova atoma, fenil, nitrofenil, dinitrofenil, karboksinitrofenil, piridil, 2-nitropiridil, 4-nitropiridil, ili 3-karboksi-4-nitropiridil).
[0069] Izraz "reaktivni estar" označava estar koji sadrži odlazeću grupu koja se lako izmešta amino grupom ili hidroksilnom grupom. Primeri reaktivnog estra uključuju N-hidroksisukcinimid estar, N-hidroksi sulfosukcinimid estar, nitrofenil estar, dinitrofenil estar, tetrafluorofenil estar, sulfo-tetraflurofenil estar, i pentafluorofenil estar. Poželjno, reaktivni estar je N-hidroksisukcinimid (N-hydroxysuccinimide, NHS) estar.
[0070] Izraz "imin-sadržavajući lek" ili "imin-sadržavajuće citotoksično jedinjenje" odnosi se na jedinjenje opisano u ovom tekstu (bez povezujuće grupe), koje ima najmanje jednu iminsku funkcionalnu grupu. Poželjno, imin-sadržavajući lek sadrži jednu iminsku funkcionalnu grupu.
Metodi predmetnog pronalaska
[0071] U prvom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na metod kako je definisano u patentnom zahtevu 1.
[0072] U određenim primerima izvođenja, metod može uključivati još i prečišćavanje citotoksičnog jedinjenja pre reakcije sa modifikovanim CBA.
[0073] U određenim primerima izvođenja, deo konjugata sa citotoksičnim jedinjenjem i povezujućom grupom predstavljen je jednom od sledećih formula:
gde:
-C(Y)-N(H)- motiv u formulama (Ib') i (IIb') rezultat je reakcije imin-reaktivnog reagensa sa imin-sadržavajućim citotoksičnim jedinjenjem;
X' se bira između -H, amin-protektujuće grupe, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, opciono supstituisanog arila sa 6 do 18 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika i sumpora, i opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P;
Y' se bira između -H, okso grupe, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 6- do 18-članog arila, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika i sumpora, opciono supstituisanog 3 do 18-članog heterocikličnog prstena koji ima 1 do 6 heteroatoma;
R<c>je -H ili supstituisani ili nesupstituisani linearni ili granati alkil koji ima 1 do 4 ugljenikova atoma;
R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3' i R4' se, svaki nezavisno, biraju iz grupe koja se sastoji od -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-R<c>, halogena, guanidinijuma [-NH(C=NH)NH2], -OR,-NR'R", -NO2, -NCO, -NR'COR", -SR, sulfoksida predstavljenog -SOR', sulfona predstavljenog -SO2R', sulfonata -SO3-M<+>, sulfata -OSO3-M<+>, sulfonamida predstavljenog -SO2NR'R", cijano, azido, -COR', -OCOR',-OCONR'R";
R se, pri svakom pojavljivanju, bira nezavisno iz grupe koja se sastoji od -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, opciono supstituisanog arila koji ima 6 do 18 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika i sumpora, ili opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P;
R' i R'' se, svaki nezavisno, biraju između -H, -OH, -OR, -NHR, -NR2, -COR, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, i opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P;
n je ceo broj od 1 do 24;
W se bira između C=O, C=S, CH2, BH, SO i SO2;
R6je -H, -R, -OR, -SR, -NR'R'', -NO2, ili halogen;
Z i Z' se nezavisno biraju između -(CH2)n'-, -(CH2)n'-CR7R8-(CH2)na'-, -(CH2)n'-NR9-(CH2)na'-, -(CH2)n'-O-(CH2)na'- i -(CH2)n'-S-(CH2)na'-;
n' i na' su isti ili različiti i biraju se između 0, 1, 2 i 3;
R7i R8su isti ili različiti i biraju se, svaki se nezavisno, između -H, -OH, -SH, -COOH, -NHR', polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-, amino-kiseline, peptidne jedinice koja nosi 2 do 6 amino-kiselina, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličng alika koji ima od 1 do 10 ugljenikovih atoma;
R9se nezavisno bira između -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-; A i A' su isti ili različiti i nezavisno se biraju između -O-, okso (-C(=O)-), -CRR'O-, -CRR'-, -S-, -CRR'S-, -N(R5)- i -CRR'N(R5)-,
R5je pri svakom pojavljivanju nezavisno -H ili opciono supstituisani linearni ili granati alkil koji ima 1 do 10 ugljenikovih atoma;
D i D' su isti ili različiti i nezavisno su odsutni ili se biraju iz grupe koja se sastoji od opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, amino-kiseline, peptida koji nosi 2 do 6 amino-kiselina, i polietilen glikolne jedinice (-OCH2CH2)n-;
L je odsutan ili, kada je prisutan, sadrži tiol grupu, ili je polietilen glikolna jedinica (-OCH2CH2)n-, linearni, granati ili ciklični alkil ili alkenil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, fenil grupa, 3- do 18-člani heterociklični prsten ili 5- do 18-člani heteroaril prsten koji ima 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P, pri čemu su alkil, alkenil, fenil, ili heterociklični ili heteroaril prsten opciono supstituisani;
pri čemu je najmanje jedan od X', Y', R6, R<c>, R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3', R4', L (npr., preko opciono supstituisane grupe), vezan za povezujuću grupu u formulama (Ib') ili (IIb').
[0074] U određenim primerima izvođenja, modifikovani CBA se priprema reakcijom CBA sa bifunkcionalnim unakrsno povezujućim sredstvom, pomenuto bifunkcionalno unakrsno povezujuće sredstvo sadrži tiol-reaktivnu grupu i grupu koja je reaktivna sa CBA, obe vezane za povezujuću grupu.
[0075] U određenim primerima izvođenja, grupa reaktivna sa CBA reaguje sa amino grupom CBA (kao što je amino grupa bočnog lanca Lys), ili sa tiol grupom CBA (kao što je tiol grupa bočnog lanca Cys).
[0076] U određenim primerima izvođenja, tiol-reaktivna grupa se bira iz grupe koja se sastoji od maleimido, vinilpiridin, vinil sulfon, vinil sulfonamid, haloacetil-bazirane grupe i disulfidne grupe.
[0077] alternativno, tiol-reaktivna grupa može biti maleimido, haloacetamido ili -SSR<d>, pri čemu je R<d>linearni ili granati alkil koji ima 1 do 4 ugljenikova atoma, fenil, nitrofenil, dinitrofenil, karboksinitrofenil, piridil, 2-nitropiridil, 4-nitropiridil, ili 3-karboksi-4-nitropiridil.
[0078] U određenim primerima izvođenja, modifikovani CBA je:
[0079] Šema reakcije za primer prikazana je na SL.8, gde se u "koraku jedan" imin-reaktivni reagens (prikazan na šemi reakcije kao nukleofil (Nuc:)) dodaje leku koji sadrži tiol i ostavlja da reaguje i da se formira modifikovani lek koji nosi tiol grupu. Modifikovani lek se opciono prečisti da bi se uklonio višak imin-reaktivnog reagensa. U "koraku dva", antitelo se modifikuje povezivačem koji sadrži tiol-reaktivnu grupu X (maleimid, SSPy, vinil sulfon, itd), i reaguje sa modifikovanim lekom koji nosi tiol grupu, na pH 6-9 da bi nastala stabilna disulfidna ili tioetarska veza između leka i antitela. U "koraku tri" sporedni proizvodi (kao što su višak iminreaktivnog reagensa, modifikovani lek koji ne reaguje sa antitelom, itd.) se uklanjaju i formuliše se konjugat. Broj molekula leka konjugovanih sa antitelom jednak je n, što može iznositi, na primer, 1-10.
[0080] Reprezentativni primer metoda konjugacije u dva koraka opisan je na SL. 16, gde se antitelo prvo modifikuje bifunkcionalnim unakrsno povezujućim sredstvom što za rezultat ima antitelo koje poseduje željeni broj povezivača pogodnih za reakciju sa dimernim jedinjenjem koje ima slobodnu tiol komponentu. U ovom primeru antitelo huMy9-6 se prvo modifikuje pomoću SPDB da se dobije antitelo sa povezivačima koji sadrže ditiopiridil komponentu. Modifikovano antitelo se zatim izlaže slobodnom tiolu, kao što je 2a, stvarajući željeni konjugat huMy9-6-SPDB-2a. Dodatni pogodni tiol-reaktivni povezivači koji se mogu iskoristiti u sličnim reakcijama uključeni su u SL.16.
[0081] Imin-reaktivni reagens može da se meša sa lekom koji nosi tiol grupu, u organskom rastvaraču (npr., dimetilacetamid, dimetilformamid, dimetilsulfoksid, acetonitril, etanol, metanol, metilen hlorid, hloroform, dioksan, ili njihova mešavina) ili mešavini vode (npr., dejonizovana voda) i jednog ili više organskih rastvarača. Kada se koristi samo organski rastvarač, imin-reaktivni reagens može da se meša sa lekom na sobnoj temperaturi, 30 min ili duže (na primer, oko 1 sat, oko 2 sata, oko 3 sata, oko 4 sata, oko 5 sati, oko 10 sati, oko 24 sata ili dok se reakcija ne završi). Poželjno, vreme inkubacije/reakcije iznosi oko 0-4 h, ili 1-3 h. Dobijena mešavina može odmah da se koristi da reaguje sa sredstvom koje se vezuje za ćeliju (npr., antitelo) modifikovanim tiol-reaktivnom grupom, puferisanim na pH oko 4 do oko 9, poželjno oko 6 do oko 9. Alternativno, mešavina može da se zamrzne i uskladišti, na primer, na -20°C ili -80°C, i koristi kasnije, pri čemu zadržava svoju reaktivnost sa sredstvom koje se vezuje za ćeliju (npr., antitelo). Ako se mešavina vode i jednog ili više organskih rastvarača koristi kao sistem korastvarača koji se međusobno mešaju (npr., voda i dimetilacetamid), reakciona mešavina leka i imin-reaktivnog reagensa se koristi odmah ili se drži zamrznuta do upotrebe, posle mešanja, da bi reagovala sa sredstvom koje se vezuje za ćeliju, koje nosi tiolreaktivnu grupu. Ako se mešavina vode i jednog ili više organskih rastvarača koristi kao sistem korastvarača koji se međusobno ne mešaju (npr., voda i metilen hlorid), lek i imin-reaktivni reagens se mešaju 10 min ili duže (na primer oko 30 min, oko 1 sat, oko 2 sata, oko 5 sati, oko 10 sati, oko 24 sata ili dok se reakcija ne završi), i vodeni sloj se sakupi, kvantifikuje u pogledu sadržaja leka i reaktivnog tiola (npr., UV spektroskopijom i Ellmanovim testom sa DTNB (5,5'-ditiobis-(2-nitrobenzoeva kiselina)) reagensom) i doda sredstvu koje se vezuje za ćeliju (npr.,
4
antitelo), koje nosi tiol-reaktivnu grupu, puferisanom na pH od oko 4 do oko 9, poželjno oko 6 do oko 9.
[0082] U drugom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje metod kako je definisano u patentnom zahtevu 2.
[0083] U određenim primerima izvođenja, sredstvo koje se vezuje za ćeliju (npr., antitelo) dovodi se u kontakt sa lekom (npr., imin-sadržavajuće citotoksično jedinjenje) i iminreaktivnim reagensom da bi se formirala prva mešavina; i prva mešavina se zatim dovodi u kontakt sa bifunkcionalnim unakrsno povezujućim sredstvom da se formira konjugat sredstvo koje se vezuje za ćeliju-lek. Poželjno, bifunkcionalno unakrsno povezujuće sredstvo se dovodi u kontakt sa prvom mešavinom neposredno posle formiranja prve mešavine. Alternativno, prva mešavina se ostavi da odstoji neko vreme (npr., oko 1-10 min, oko 10-30 min, oko 30 min do 1 h, oko 1 do 5 h, oko 5 do 24 h, ili oko 1 do 2 dana) pre nego što se dovede u kontakt sa bifunkcionalnim unakrsno povezujućim sredstvom.
[0084] U određenim primerima izvođenja, metod može uključivati još i prečišćavanje konjugata.
[0085] Šema reakcije za primer prikazana je na SL. 10, gde se u "koraku 1" imin-reaktivni reagens (prikazan na šemi reakcije kao nukleofil (Nuc:)) dodaje na CBA (npr., antitelo), lek koji sadrži tiol, bifunkcionalno unakrsno povezujuće sredstvo koje sadrži i tiol reaktivnu grupu X (maleimid, SSPy, vinil sulfon, itd.) i reaktivnu estarsku grupu, i dopušta se da se reakcija nastavi na pH 6-9 da bi nastao stabilan konjugat lek-antitelo. U "koraku dva" sporedni proizvodi (kao što je višak imin-reaktivnog reagensa, modifikovani lek koji ne reaguje sa antitelom, itd.) se uklanjaju i formuliše se konjugat. Broj molekula leka konjugovanih sa antitelom jednak je n, što može iznositi, na primer, 1-10.
[0086] U trećem aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje metod kako je definisano u patentnom zahtevu 3.
[0087] U određenim primerima izvođenja, citotoksično jedinjenje se proizvodi reakcijom iminsadržavajućeg citotoksičnog jedinjenja koje nosi tiol grupu sledećih formula, sa iminreaktivnim reagensom u reakcionoj mešavini
[0088] U određenim primerima izvođenja, metod može uključivati još i prečišćavanje citotoksičnog jedinjenja, pre koraka a).
[0089] U određenim primerima izvođenja, metod može uključivati još i prečišćavanje modifikovanog citotoksičnog jedinjenja, pre koraka b).
[0090] U određenim primerima izvođenja, reakciona mešavina se skladišti zamrznuta pre otapanja zamrznute mešavine i izvođenja koraka a).
[0091] U određenim primerima izvođenja, metod može uključivati još i skladištenje reakcione mešavine iz koraka a), zamrznute, pre otapanja i pre izvođenja koraka b).
[0092] U određenim primerima izvođenja, bifunkcionalno unakrsno povezujuće sredstvo je bismaleimidoheksan ili BMPEO.
[0093] Šema reakcije za primer prikazana je na SL. 11, gde se u "koraku 1" imin-reaktivni reagens (prikazan na šemi reakcije kao nukleofil (Nuc:)) dodaje citotoksičnom jedinjenju koje sadrži tiol. Dobijeno citotoksično jedinjenje se opciono prečišćava, pre nego što u "koraku dva" citotoksično jedinjenje reaguje sa bifunkcionalnim unakrsno povezujućim sredstvom (kao što je bismaleimidoheksan ili BMPEO) da se proizvede drugi modifikovani lek koji nosi tiolreagujuću grupu. Zatim se u "koraku tri" doda tiol-sadržavajuće CBA (kao što je antitelo), i pusti se da se reakcija odvija (na pH 6-9) da bi se stvorio stabilni konjugat lek-antitelo. U "koraku četiri" sporedni proizvodi (kao što su višak imin-reaktivnog reagensa, modifikovani lek koji ne reaguje sa antitelom, itd.) se uklanjaju i formuliše se konjugat. Broj molekula leka konjugovanih sa antitelom jednak je n, što može iznositi, na primer, 1-10.
[0094] Imin-reaktivni reagens može da se pomeša sa lekom koji nosi tiol-reaktivnu grupu u organskom rastvaraču (npr., dimetilacetamid, dimetilformamid, dimetilsulfoksid, acetonitril, etanol, metanol, metilen hlorid, hloroform, dioksan, ili njihova mešavina) ili mešavini vode (npr., dejonizovana voda) i jednog ili više organskih rastvarača. Kada se koristi samo organski rastvarač, imin-reaktivni reagens može da se meša sa lekom na sobnoj temperaturi 30 min ili duže (na primer, oko 1 sat, oko 2 sata, oko 3 sata, oko 4 sata, oko 5 sati, oko 10 sati, oko 24 sata ili dok se reakcija ne završi). Poželjno,vreme inkubacije/reakcije je oko 0-4 h, ili 1-3 h. Nastala mešavina može da se koristi odmah u reakciji sa sredstvom koje se vezuje za ćeliju (npr., antitelo modifikovano tiol-reaktivnom grupom, puferisanim na pH oko 4 do oko 9, poželjno oko 6 do oko 9. Alternativno, mešavina može da se zamrzne i uskladišti, na primer, na -20°C ili -80°C i koristi kasnije, pri čemu zadržava reaktivnost sa sredstvom koje se vezuje za ćeliju (npr., antitelo). Ako se mešavina vode i jednog ili više organskih rastvarača koristi kao sistem korastvarača koji se mešaju jedan sa drugim (npr., voda i dimetilacetamid), reakciona mešavina leka i imin-reaktivnog reagensa se koristi neposredno posle mešanja ili drži zamrznuta do upotrebe u reakciji sa sredstvom koje se vezuje za ćeliju, koje nosi tiol-reaktivnu grupu. Ako se mešavina vode i jednog ili više organskih rastvarača koristi kao sistem korastvarača koji se ne mešaju jedan sa drugim (npr., voda i metilen hlorid), lek i imin-reaktivni ragens se mešaju tokom 10 min ili duže (na primer oko 30 min, oko 1 sat, oko 2 sata, oko 5 sati, oko 10 sati, oko 24 sata ili dok se reakcija ne završi), i vodeni sloj se sakupi, kvantifikuje se u pogledu sadržaja leka (npr., UV spektroskopija) i doda sredstvu koje se vezuje za ćeliju (npr., antitelo), koje nosi tiol grupu, puferisanom na pH od oko 4 do oko 9, poželjno oko 6 do oko 9.
[0095] U četvrtom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na metod pripremanja konjugata koji sadrži sredstvo koje se vezuje za ćeliju (CBA) konjugovano sa citotoksičnim jedinjenjem sa povezujućom grupom, metod uključuje reagovanje drugog modifikovanog citotoksičnog jedinjenja sa CBA na pH od oko 4 do oko 9, pri čemu drugo modifikovano citotoksično jedinjenje uključuje: reziduu bifunkcionalnog unakrsno povezujućeg sredstva vezanu za citotoksično jedinjenje, i rezidua sadrži povezujuću grupu i reaktivnu grupu koja se bira između reaktivnog estra i tiolreaktivne grupe i predstavljeno je jednom od sledećih formula:
4
ili njenom farmaceutski prihvatljivom solju, pri čemu se drugo modifikovano citotoksično jedinjenje proizvodi reakcijom imin-reaktivnog reagensa sa imin-sadržavajućim citotoksičnim jedinjenjem koje nosi povezujuću grupu i reaktivnu grupu i gde je imin-sadržavajuće citotoksično jedinjenje predstavljeno jednom od sledećih formula:
ili njihovom farmaceutski prihvatljivom solju,
gde:
-C(Y)-N(H)- motiv u formulama (Ia') i (IIa') rezultat je reakcije the imin-reaktivnog reagensa sa imin-sadržavajućim citotoksičnim jedinjenjem;
X' se bira između -H, amin-protektujuće grupe, povezujuće grupe sa reaktivnom grupom vezanom za nju, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, opciono supstituisanog arila koji ima 6 do 18 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika, i sumpora, opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P;
Y' se bira između -H, okso grupe, povezujuće grupe sa reaktivnom grupom vezanom za nju, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 6- do 18-članog arila, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika, i sumpora, opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma;
R<c>je -H ili supstituisani ili nesupstituisani linearni ili granati alkil koji ima 1 do 4 ugljenikova atoma, ili povezujuća grupa sa reaktivnom grupom koja je za nju vezana; R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3' i R4' se, svaki nezavisno, biraju iz grupe koja se sastoji od -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkunila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-R<c>, halogena, guanidinijuma [-NH(C=NH)NH2], -OR, -NR'R", -NO2, -NCO, -NR'COR", -SR, sulfoksida predstavljenog -SOR', sulfona predstavljenog -SO2R', sulfonata -SO3-M<+>, sulfata -OSO3-M<+>, sulfonamida predstavljenog -SO2NR'R", cijano, azido, -COR', -OCOR', -OCONR'R", i povezujuće grupe sa reaktivnom grupom koja je za nju vezana; R se pri svakom pojavljivanju, nezavisno bira iz grupe koja se sastoji od -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, opciono supstituisanog arila sa 6 do 18 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika, i sumpora, ili opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P;
R' i R'' se, svaki nezavisno, biraju između -H, -OH, -OR, -NHR, -NR2, -COR, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, i opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P;
n je ceo broj od 1 do 24;
W se bira između C=O, C=S, CH2, BH, SO i SO2;
R6je -H, -R, -OR, -SR, -NR'R'', -NO2, halogen ili povezujuća grupa sa reaktivnom grupom vezanom za nju;
Z i Z' se nazavisno biraju između -(CH2)n'-, -(CH2)n'-CR7R8-(CH2)na"-,-(CH2)n'-NR9-(CH2)na'-, -(CH2)n'-O-(CH2)na'- i -(CH2)n'-S-(CH2)na'-;
n' i na' su isti ili različiti i biraju se između 0, 1, 2 i 3;
R7i R8su isti ili različiti i biraju se, svaki nezavisno, između -H, -OH, -SH, -COOH, -NHR', polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-, amino-kiseline, peptidne jedinice koja nosi 2 do 6 amino-kiselina, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila koji iima od 1 do 10 ugljenikovih atoma;
R9se nezavisno bira između -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-;
4
A i A' su isti ili različiti i biraju se nezavisno između -O-, okso (-C(=O)-), -CRR'O-, -CRR'-, -S-, -CRR'S-, -NR5i -CRR'N(R5)-;
R5je pri svakom pojavljivanju nezavisno -H ili opciono supstituisani linearni ili granati alkil koji ima 1 do 10 ugljenikovih atoma;
D i D' su isti ili različiti, i nezavisno su odsutni ili se biraju iz grupe koja se sastoji od opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, amino-kiseline, peptida koji nosi 2 do 6 amino-kiselina, i polietilen glikolne jedinice (-OCH2CH2)n-;
L je odsutan, povezujuća grupa sa reaktivnom grupom vezanom za nju, polietilen glikolna jedinica (-OCH2CH2)n-, linearni, granati ili ciklični alkil ili alkenil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, fenil grupa, 3- do 18-člani heterociklični prsten ili 5- do 18-člani heteroaril prsten koji ima 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P, gde su alkil ili alkenil opciono supstituisani povezujućom grupom sa reaktivnom grupom vezanom za nju; fenil ili heterociklični ili heteroaril prsten može opciono biti supstituisan, pri čemu supstituent može biti povezujuća grupa sa reaktivnom grupom koja je za nju vezana; i
imin-reaktivni reagens se bira iz grupe koja sadrži sulfit (H2SO3, H2SO2ili so HSO3-, SO3<2->ili HSO2-formirana sa katjonom), metabisulfit (H2S2O5ili so S2O5<2->formirana sa katjonom) i ditionit (H2S2O4ili so S2O4<2->formirana sa katjonom).
[0096] U određenim primerima izvođenja, metod može uključivati još i prečišćavanje modifikovanog citotoksičnog jedinjenja, pre reakcije sa CBA.
[0097] U određenim primerima izvođenja, reaktivni estar može da se bira iz grupe koja sadrži N-hidroksisukcinimid estar, N-hidroksi sulfosukcinimid estar, nitrofenil estar, dinitrofenil estar, tetrafluorofenil estar, sulfo-tetraflurofenil estar, i pentafluorofenil estar. Poželjno, reaktivni estar je N-hidroksisukcinimid estar.
[0098] U određenim primerima izvođenja, tiol-reaktivna grupa može da se bira iz grupe koja sadrži maleimido, vinilpiridin, vinil sulfon, vinil sulfonamid, haloacetil-baziranu grupu i disulfidnu grupu.
[0099] U određenim primerima izvođenja, tiol-reaktivna grupa može da bude maleimido, haloacetamido ili -SSR<d>, gde je R<d>linearni ili granati alkil sa 1 do 4 ugljenikova atoma, fenil, nitrofenil, dinitrofenil, karboksinitrofenil, piridil, 2-nitropiridil, 4-nitropiridil, ili 3-karboksi-4-nitropiridil.
4
[0100] Šema reakcije za primer prikazana je na SL.7, gde se u "koraku jedan" imin-reaktivni reagens (prikazan u reakcionoj šemi kao nukleofil (Nuc:)) dodaje leku koji sadrži reaktivni estar (1c) i pusti se da reaguje da bi se formirao modifikovani lek. Modifikovani lek može opciono da se prečisti da bi se uklonio višak imin-reaktivnog reagensa. U "koraku dva" modifikovani lek sa reaktivnim estrom reaguje sa antitelom puferisanim na pH 6-9. U "koraku tri" sporedni proizvodi (kao što su višak imin-reaktivnog reagensa, modifikovani lek koji ne reaguje sa antitelom, itd.) se uklanjaju i formuliše se konjugat. Broj molekula leka konjugovanih sa antitelom jednak je n, što može iznositi, na primer, 1-10.
[0101] Sledeća reakciona šema koja prikazuje primer metoda predmetnog pronalaska pokazana je na SL.9. U "koraku jedan" imin-reaktivni reagens dodaje se leku koji sadrži tiol-reaktivnu grupu (gde je R maleimid grupa, SSPy, itd.) i ostavi se da reaguje i da se formira modifikovani lek. Modifikovani lek se opciono prečišćava da bi se uklonio višak imin-reaktivnog reagensa. U "koraku dva" modifikovani lek reaguje sa antitelom koje sadrži reaktivni tiol da se formira konjugat antitelo-lek u kojem je antitelo kovalentno povezano sa lekom preko stabilne disulfidne ili tioetarske veze. Antitela sa reaktivnom tiol grupom mogu da se naprave metodima opisanim u ovom tekstu, na primer, redukcijom interlančanih disulfida, genetičkim kodiranjem cisteina ili modifikovanjem antitela linkerima koji sadrže tiole ili hemijski maskirane tiole. U "koraku tri" uklanja se lek koji ne reaguje sa antitelom i formuliše se konjugat. Broj molekula leka konjugovanih sa antitelom jednak je n, što može iznositi, na primer, 1-10.
[0102] Imin-reaktivni reagens može da se meša sa lekom koji nosi aktivirani estar (npr., N-hidroksisukcinimidil estar, pentafluorofenol estar, sulfo N-hidroksisukcinimidil estar) u organskom rastvaraču (npr., dimetil acetamid, etanol, metilen hlorid, hloroform, dioksan, ili njihova mešavina) ili mešavini vode (npr., dejonizovana voda) i jednog ili više organskih rastvarača. Kada se koristi samo organski rastvarač, imin-reaktivni reagens može da se meša sa lekom na temperaturi od 0 do 100 °C, poželjno na temperaturi od 0 do 30 °C, poželjnije na sobnoj temperaturi 5 min ili duže (na primer, oko 30 min, 1 sat, oko 2 sata, oko 3 sata, oko 4 sata, oko 5 sati, oko 10 sati, oko 24 sata ili dok se reakcija ne završi). Poželjno, vreme inkubacije/reakcije je oko 0-4 h, ili 1-3 h. Dobijena reakciona mešavina može da se koristi odmah za reakciju sa sredstvom koje se vezuje za ćeliju (npr., antitelo) puferisanim na pH od oko 4 do oko 9, poželjno oko 6 do oko 9. Alternativno, reakciona mešavina može da se zamrzne i uskladišti, na primer, na oko -20°C ili -80°C i da se koristi kasnije pri čemu zadržava reaktivnost sa antitelom. Poželjno, prečišćavanje intermedijarnog proizvoda nije potrebno. Kada se mešavina vode i organskog rastvarača koristi kao sistem rastvarača koji se međusobno
4
mešaju (npr., voda i dimetilacetamid), lek i imin-reakciona mešavina se koriste neposredno posle mešanja, ili se drži zamrznuta do upotrebe, za reakciju sa sredstvom koje se vezuje za ćeliju (npr., antitelo). Kada se mešavina vode i organskog rastvarača koristi kao sistem rastvarača koji se međusobno ne mešaju (npr., voda i metilen hlorid), lek i imin-reaktivni reagens se mešaju 10 min ili duže, i vodeni sloj se sakupi, kvantifikuje u pogledu sadržaja leka i doda sredstvu koje se vezuje za ćeliju (npr., antitelo) puferisanom na pH oko 4 do oko 9, poželjno oko 6 do ko 9.
[0103] U bilo kojem od gornjih aspekata, može se koristiti pogodna količina imin-reaktivnog reagensa. Na primer, može se koristiti oko 0.1 do oko 30 molarnih ekvivalenata imin-reaktivnog reagensa u odnosu na lek. Poželjno, može se koristiti oko 1 do oko 10 molarnih ekvivalenata, poželjnije, oko 1 do oko 5 molarnih ekvivalenata, i još poželjnije oko 3 do oko 5 molarnih ekvivalenata imin-reaktivnog reagensa.
[0104] Korišćenjem opšte procedure, u bilo kojem od gornjih aspekata, može se koristiti bilo koji od sledećih imin-reaktivnih reagenasa: sulfiti (H2SO3, H2SO2ili so HSO3-, SO3<2->ili HSO2<->formirana sa katjonom), metabisulfit (H2S2O5ili so S2O5<2->formirana sa katjonom), mono, di, tri, i tetra- tiofosfati (PO3SH3, PO2S2H3, POS3H3, PS4H3ili so PO3S<3->, PO2S2<3->, POS3<3->ili PS4<3->formirana sa katjonom), tio fosfatni estri ((R<i>O)2PS(OR<i>), R<i>SH, R<i>SOH, R<i>SO2H, R<i>SO3H), različiti amini (hidroksil amin (npr., NH2OH), hidrazin (npr., NH2NH2), NH2O-R<i>, R<i>NH-R<i>, NH2-R<i>), NH2-CO-NH2, NH2-C(=S)-NH2, tiosulfat (H2S2O3ili so S2O3<2->formirana sa katjonom), ditionit (H2S2O4ili so S2O4<2->formirana sa katjonom), fosforoditioat (P(=S)(OR<k>)(SH)(OH) ili njegova so formirana sa katjonom), hidroksamska kiselina (R<k>C(=O)NHOH ili so formirana sa katjonom), hidrazid (R<k>CONHNH2), formaldehid sulfoksilat (HOCH2SO2H ili so HOCH2SO2<->formirana sa katjonom, kao HOCH2SO2-Na<+>), glikovani nukleotid (kao GDP-manoza), fludarabin ili njihova mešavina, gde su R<i>i R<i>' svaki nezavisno linearni ili granati alkil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma i supstituisani su najmanje jednim supstituentom odabranim između -N(R<j>)2, -CO2H, -SO3H, i -PO3H; R<i>i R<i'>mogu biti dodatno opciono supstituisani supstituentom za alkil opisanim u ovom tekstu; R<j>je linearni ili granati alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma; i R<k>je linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, aril, heterociklil ili heteroaril (poželjno, R<k>je linearni ili granati alkil koji ima 1 do 4 ugljenikova atoma; poželjnije, R<k>je metil, etil ili propil). Poželjno, katjon je monovalentan katjon kao Na<+>ili K<+>.
[0105] Poželjno, imin-reaktivni reagens se bira između sulfita (npr., NaHSO3ili KHSO3). Poželjnije, imin-reaktivni reagens je NaHSO3ili KHSO3.
4
[0106] U jednom primeru izvođenja, modifikovani lekovi opisani u bilo kojem od gornjih aspekata prečiste se pre reakcije sa sredstvom koje se vezuje za ćeliju. Za prečišćavanje modifikovanog leka može se koristiti svaki pogodan metod poznat u struci. Na primer, modifikovani lek može da se prečisti hromatografijom na koloni (npr., hromatografija na silika gelu) ili HPLC.
[0107] U sledećem primeru izvođenja, konjugat sredstvo koje se vezuje za ćeliju-lek, pripremljen prema bilo kojem od gornjih aspekata, prečišćava se filtracijom sa tangencijalnim protokom, adsorptivnom hromatografijom, adsorptivnom filtracijom, selektivnom precipitacijom, neapsorptivnom filtracijom, ili njihovom kombinacijom. Poželjno, za prečišćavanje konjugata koriste se filtracija sa tangencijalnim protokom (tangential flow filtration, TFF, poznata i kao filtracija sa poprečnim protokom, ultrafiltracija i dijafiltracija) i/ili adsorptivne hromatografske smole.
[0108] Mogu se koristiti svi pogodni TFF sistemi, uključujući sistem tipa Pellicon (Millipore, Billerica, Mass.), sistem Sartocon Cassette (Sartorius AG, Edgewood, N.Y.), i sistem tipa Centrasette (Pall Corp., East Hills, N.Y.).
[0109] Može se koristiti svaka pogodna smola za adsorptivnu hromatografiju. Poželjne smole za adsorptivnu hromatografiju uključuju smole za hromatografiju na hidroksiapatitu, hromatografiju sa hidrofobnom indukcijom naelektrisanja (hydrophobic charge induction chromatography, HCIC), hromatografiju hidrofobnih interakcija (hydrophobic interaction chromatography, HIC), jonoizmenjivačku hromatografiju, jonoizmenjivačku hromatografiju mešovitog modaliteta, afinitetnu hromatografiju sa imobilisanim metalom (immobilized metal affinity chromatography, IMAC), hromatografiju sa bojom-ligandom, afinitetnu hromatografiju, reverzno-faznu hromatografiju i njihove kombinacije. Primeri pogodnih hidroksiapatitnih smola uključuju keramički hidroksiapatit (CHT tip I i tip II, Bio-Rad Laboratories, Hercules, Calif.), HA Ultrogel hidroksiapatit (Pall Corp., East Hills, N.Y.), i keramički fluoroapatit (ceramic fluoroapatite, CFT tip I i tip II, Bio-Rad Laboratories, Hercules, Calif.). Primer pogodne HCIC smole je MEP Hypercel smola (Pall Corp., East Hills, N.Y.). Primeri pogodnih HIC smola uključuju smole butil-sefaroza, heksil-sefaroza, fenil-sefaroza i oktil-sefaroza (sve: GE Healthcare, Piscataway, N.J.), kao i Macro-prep Methyl i Macro-Prep t-butil smole (Biorad Laboratories, Hercules, Calif.). Primeri pogodnih jonoizmenjivačkih smola uključuju smole SP-sefaroza, CM-sefaroza, i Q-sefaroza (sve: GE Healthcare, Piscataway, N.J.), i Unosphere S smolu (Bio-Rad Laboratories, Hercules, Calif.). Primeri pogodnih jonoizmenjivača mešovitog modaliteta uključuju Bakerbond ABx smolu (JT Baker,
4
Phillipsburg N.J.). Primeri pogodnih IMAC smola uključuju helirajuću sefaroznu smolu (GE Healthcare, Piscataway, N.J.) i Profinity IMAC smolu (Bio-Rad Laboratories, Hercules, Calif.). Primeri pogodnih boja-ligand smola uključuju Blue Sepharose smolu (GE Healthcare, Piscataway, N.J.) i Affi-gel Blue smolu (Bio-Rad Laboratories, Hercules, Calif.). Primeri pogodnih afinitetnih smola uključuju Protein A sefaroza smolu (npr., MabSelect, GE Healthcare, Piscataway, N.J.), gde je sredstvo koje se vezuje za ćeliju antitelo, i lektin-afinitetne smole, npr. Lentil Lectin Sepharose smola (GE Healthcare, Piscataway, N.J.), gde sredstvo koje se vezuje za ćeliju nosi odgovarajuća lektin-vezujuća mesta. Alternativno može se koristiti antitelo specifično za sredstvo koje se vezuje za ćeliju. Takvo antitelo može da se imobiliše na primer za Sepharose 4 Fast Flow smolu (GE Healthcare, Piscataway, N.J.). Primeri pogodnih reverzno-faznih smola uključuju C4, C8, i C18 smole (Grace Vydac, Hesperia, Calif.).
[0110] U metodima predmetnog pronalaska može se koristiti svaka pogodna neapsorptivna hromatografska smola. Primeri pogodnih hromatografskih smola uključuju SEPHADEX™ G-25, G-50, G-100, SEPHACRYL™ smole (npr., S-200 i S-300), SUPERDEX™ smole (npr., SUPERDEX™ 75 i SUPERDEX™ 200), BIO-GEL<®>smole (npr., P-6, P-10, P-30, P-60, i P-100), i druge, poznate prosečno obučenim stručnjacima u oblasti.
Lekovi koji nose povezujuću komponentu
[0111] Lekovi koji mogu da se koriste u predmetnim metodima uključuju jedinjenja opisana u US2010/0316656, US 2010/003641, US2010/0203007.
[0112] U određenim primerima izvođenja, citotoksična jedinjenja koja mogu biti konjugovana sa sredstvima koja se vezuju za ćeliju preko povezujuće grupe ne sadrže povezujuću grupu. Umesto toga, može biti potreban bifunkcionalni unakrsno povezujući reagens (koji uključuje povezujuću grupu) da bi se citotoksično jedinjenje bez linkera konjugovalo sa CBA preko povezujuće grupe.
[0113] Prema tome, u prvom specifičnom primeru izvođenja, lek kovalentno vezan za povezujuću grupu sa reaktivnom grupom vezanom za nju, koji može da se koristi u metodima predmetnog pronalaska (kao što je u 1-stepenom reagens-metodu, kako je opisano u četvrtom aspektu pronalaska gore), ili koji može biti intermedijarni proizvod metoda pronalska (kao što je metod opisan u trećem aspektu pronalaska), je citotoksično jedinjenje koje nosi reaktivnu grupu, kao što su reaktivni estar ili tiol-reaktivna grupa (zajedno "reaktivna grupa"), koje sadrži povezujuću grupu sa reaktivnom grupom vezanom za nju, sposobnom da kovalentno poveže citotoksično jedinjenje sa CBA, pri čemu je citotoksično jedinjenje predstavljeno jednom od sledećih formula (kako je definisano u patentnom zahtevu 1):
ili
ili farmaceutski prihvatljivom solju istog. Posle reakcije sa imin-reaktivnim reagensom, citotoksična jedinjenja mogu biti predstavljena bilo kojom od sledećih formula (kako je definisano u patentnom zahtevu 9):
ili
[0114] Poželjno, L je odsutan ili se bira između opciono supstituisane fenil grupe i opciono supstituisane piridil grupe, pri čemu fenil i piridil grupa nose povezujuću grupu sa reaktivnom grupom vezanom za nju, ili je L amino grupa koja nosi povezujuću grupu sa reaktivnom grupom vezanom za nju (tj., -N(povezujuća grupa)-), ili je L linearni, granati ili ciklični alkil ili alkenil sa od 1 do 6 ugljenikovih atoma i nosi povezujuću grupu sa reaktivnom grupom vezanom za nju.
[0115] Nekoliko reprezentativnih jedinjenja formula (Ia') i (IIa') navedeno je dole:
1
[0116] U određenim primerima izvođenja,
X' se bira iz grupe koja sadrži -H, -OH, opciono supstituisani linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, fenil, povezujuća grupa sa reaktivnom grupom koja je za nju vezana, i amin-protektujuća grupa. Poželjno, X' je -H, -OH, -Me ili povezujuća grupa sa reaktivnom grupom koja je vezana za nju. Poželjnije, X' je -H;
Y' se bira iz grupe koja sadrži -H, okso grupu, supstituisani ili nesupstituisani linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma. Poželjno, Y' se bira između -H ili okso. Poželjnije, Y' je -H;
W je C=O;
R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3', i R4' se, svaki nezavisno, biraju između -H, -NR'R'', -NR'(C=O)R, -OR, -SR, -NO2i povezujuće grupe sa reaktivnom grupom vezanom za nju. Poželjno, jedan od R2, R3, R2', i R3' je povezujuća grupa sa reaktivnom grupom vezanom za nju, a ostali su -H;
2
R, se pri svakom pojavljivanju, nezavisno bira iz grupe koja se sastoji od -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma ili fenila;
R' i R'' su isti ili različiti i nezavisno se biraju između -H, -OH, -OR, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma ili fenila;
R6je -OR<c>ili -SR<c>, pri čemu je R<c>-H, linearni ili granati alkil koji ima 1 do 4 ugljenikova atoma. Poželjno, R6je -OMe ili -SMe. Još poželjnije, R6je -OMe;
Z i Z' su -CH2-;
A i A' su isti ili različiti i biraju se između -O-, -S-, -NR5i okso (C=O). Poželjno, A i A' su isti ili različiti i biraju se između -O- i -S-. Poželjnije, A i A' su -O-;
D i D' su isti ili različiti i biraju se nezavisno između polietilen glikolne jedinice (-OCH2CH2)n, gde je n ceo broj od 1 do 24, amino-kiseline, peptida koji nosi 2 do 6 amino-kiselina, ili linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, pri čemu su alkil, alkenil i alkinil opciono supstituisani jednim ili većim brojem (npr., 2, 3, 4, 5, 6 ili više) supstituenata nezavisno odabranih iz grupe koja sadrži halogen, -OR, -NR'COR'', -SR, i -COR';
Poželjno, D i D' su isti ili različiti i biraju se nezavisno između linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma. Poželjnije, D i D' su linearni ili granati alkil koji nosi 1 do 4 ugljenikova atoma. Još poželjnije, D i D' su isti ili različiti i biraju se između linearnog alkila koji ima 1 do 4 ugljenikova atoma;
L je odsutan ili se bira između opciono supstituisane fenil grupe i opciono supstituisane piridil grupe, gde fenil i piridil grupa nose povezujuću grupu sa reaktivnom grupom vezanom za nju, ili je L aminska grupa koja nosi povezujuću grupu sa reaktivnom grupom vezanom za nju (tj., -N (povezujuća grupa)-), ili je L linearni, granati ili ciklični alkil ili alkenil sa od 1 do 6 ugljenikovih atoma i nosi povezujuću grupu sa reaktivnom grupom vezanom za nju.
[0117] U drugom specifičnom primeru izvođenja, za citotoksične dimere (Ia) ili (IIa), varijable su opisane dole:
W je C=O;
R1, R2, R1', R2', R4, i R4' su -H;
jedan od R3ili R3' je opciono povezujuća grupa sa reaktivnom grupom vezanom za nju i drugi je -H;
R6je -OMe;
Z i Z' su -CH2-;
X' je -H;
Y' je -H;
A i A' su -O-; i ostale varijable su kako je opisano u prvom specifičnom primeru izvođenja.
[0118] U trećem specifičnom primeru izvođenja, citotoksični dimeri (vezani za povezujuću grupu sa reaktivnom grupom koja je za nju prikačena) formule (Ia') i (IIa') predstavljeni su sledećim formulama:
gde:
X' se bira iz grupe koja se sastoji od -H, -OH, supstituisanog ili nesupstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alknila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, fenila, i amin-protektujuće grupe. Poželjno, X' je -H, -OH ili -Me. Poželjnije, X' je -H; Y' se bira iz grupe koja se sastoji od -H, okso grupe, supstituisanog ili nesupstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma. Poželjno, Y' se bira između -H ili -Me. Poželjnije, Y' je -H;
L', L'', i L''' su isti ili različiti i nezavisno se biraju između -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkla, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikvih atoma, polietilne glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-R<c>, halogena, guanidinijuma [-NH(C=NH)NH2], -OR, -NR'R", -NO2, -NR'COR", -SR, sulfoksida predstavljenog -SOR', sulfona predstavljenog -SO2R', sulfonata -SO3-M<+>, sulfata -OSO3<+>M-,
4
sulfonamida predstavljenog -SO2NR'R", cijano, azido, -COR', -OCOR', -OCONR'R'' i povezujuće grupe sa reaktivnom grupom vezanom za nju, uz uslov da samo jedan od L', L'' i L''' bude povezujuća grupa sa reaktivnom grupom vezanom za nju. Poželjno, L' je povezujuća grupa sa reaktivnom grupom vezanom za nju. Alternativno, jedan od L', L'', ili L''' je povezujuća grupa sa reaktivnom grupom vezanom za nju, dok su drugi -H. Poželjnije, L' je povezujuća grupa sa reaktivnom grupom vezanom za nju, i L'' i L''' su -H;
R6je -OR<c>ili -SR<c>, gde je R<c>linearni ili granati alkil sa 1 do 4 ugljenikova atoma. Poželjno, R6je -OMe ili -SMe. Još poželjnije, R6je -OMe;
A i A' se biraju između -O- i -S-. Poželjno, A i A' su -O-;
R je -H, opciono supstituisani linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma ili PEG grupa (CH2CH2O)n-R<c>;
n je ceo broj od 1 do 24; i,
R<c>je linearni ili granati alkil koji ima 1 do 4 ugljenikova atoma;
R' i R'' su isti ili različiti i biraju se između -H, -OH, -OR, -NRR<g'>, -COR, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog arila koji ima od 6 do 18 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji ima 1 do 6 heteroatoma odabrana između O, S, N i P, PEG grupe -(CH2CH2O)n-R<c>, gde je n ceo broj od 1 do 24, poželjno n je 2, 4 ili 8; i R<g'>je -H, opciono supstituisani linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma ili PEG grupa (CH2CH2O)n-R<c>;
G se bira između -CH- ili -N-; i ostale varijable su kako je opisano u prvom specifičnom primeru izvođenja.
[0119] U četvrtom specifičnom primeru izvođenja, za citotoksične dimere formule (IAa') ili (IIAa'), L' je predstavljen formulom:
-W'-R<x>-V-R<y>-J,
gde:
W' i V su isti ili različiti i svaki je nezavisno odsutan ili se bira između -CR<e>R<e'>-, -O-, -O-C(=O)-, -C(=O)-O-, -S-, -SO-, -SO2-, -CH2-S-, -CH2O-, -CH2NR<e>-, -O-(C=O)O-, -O-(C=O)N(R<e>)-, -N(R<e>)-, -N(R<e>)-C(=O)-, -C(=O)-N(R<e>)-, -N(R<e>)-C(=O)O-, N(C(=O)R<e>)C(=O)-, -N(C(=O)R<e>)-, -(O-CH2-CH2)n-, -SS-, ili -C(=O)-, ili aminokiseline, ili peptida sa 2 do 8 amino-kiselina;
R<x>i R<y>su isti ili različiti i svaki je nezavisno odsutan ili je opciono supstituisani linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, aril koji nosi 6 do 10 ugljenikovih atoma ili 3- do 8-člani hetereociklični prsten koji nosi 1 do 3 heteroatoma odabrana između O, N ili S;
R<e>i R<e'>su isti ili različiti i biraju se između -H, linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma ili -(CH2-CH2-O)n-R<k>, gde je R<k>-H, linearni, granati ciklični alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma, koji opciono nosi sekundarnu (npr., -NHR<101>) ili tercijarnu amino (-NR<101>R<102>) grupu ili 5- ili 6-člani azotsadržavajući heterocikl, kao piperidin ili morfolin, gde su R<101>i R<102>svaki nezavisno linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma; poželjno, R<101>i R<102>su svaki nezavisno linearni ili granati alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma;
n je ceo broj od 1 do 24; i
J uključuje reaktivnu grupu koja je za njega vezana, i bira se između maleimida, haloacetamido, -SH, -SSR<d>, -CH2SH, -CH(Me)SH, -C(Me)2SH, i -COE, gde -COE predstavlja reaktivni estar koji se bira između N-hidroksisukcinimid estra, N-hidroksi sulfosukcinimid estra, nitrofenil (npr., 2 ili 4-nitrofenil) estra, dinitrofenil (npr., 2,4-dinitrofenil) estra, sulfo-tetraflurofenil (npr., 4-sulfo-2,3,5,6-tetrafluorofenil) estra, i pentafluorofenil estra, i gde je R<c1>-H ili supstituisani ili nesupstituisani linearni ili granati alkil koji ima 1 do 4 ugljenikova atoma, i,
R<d>se bira između fenila, nitrofenila (npr., 2 ili 4-nitrofenil), dinitrofenila (npr., 2 ili 4-nitrofenil), karboksinitrofenila (npr., 3-karboksi-4-nitrofenil), piridila ili nitropiridila (npr., 4-nitropiridil).
[0120] Poželjno, J je -SH, -SSR<d>, maleimid, ili N-hidroksisukcinimid estar.
[0121] Poželjno, R<e'>je -H ili -Me; R<e>je linearni ili granati alkil koji ima 1 do 6 ugljenikovih atoma ili -(CH2-CH2-O)n-R<k>; n je ce broj od 2 do 8; poželjno R<k>je -H, -Me ili -CH2CH2-NMe2, i ostale varijable su kako je gore opisano za treći specifični primer izvođenja.
[0122] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, V je amino-kiselina ili peptid sa 2 do 8 amino-kiselina. Poželjnije, V je valin-citrulin, gly-gly-gly ili ala-leu-ala-leu.
[0123] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, W' je -O-, -N(R<e>)- ili -N(R<e>)-C(=O)-; R<e>je -H, linearni ili granati alkil sa 1 do 4 ugljenikova atoma, ili -(CH2-CH2-O)n-R<k>; R<x>je linearni ili granati alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma; V je odsutan, -(O-CH2-CH2)-, -C(=O)-NH-, -S-, -NH-C(=O)-; R<y>je odsutan ili je linearni ili granati alkil sa 1 do 4 ugljenikova atoma; i J je -SH, -SSR<d>ili -COE (poželjno, N-hidroksisukcinimid estar). Ostale varijable su kako je gore opisano u četvrtom specifičnom primeru izvođenja.
[0124] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, W' je -O-, -N(R<e>)- ili -N(R<e>)-C(=O)-; R<e>je H, -Me, ili -(CH2-CH2-O)n-Me; n je ceo broj od 2 do 6; R<x>je linearni ili granati alkil koji nosi 1 do 6 ugljenikovih atoma; V i R<y>su odsutni; i J je -COE, poželjno N-hidroksisukcinimid estar.
[0125] U petom specifičnom primeru izvođenja, L' je predstavljen sledećom formulom:
-W'-[CR1"R2"]a-V-[Cy]0-1-[CR3"R4"]b-COE,
gde:
R1", R2", i R3"su svaki nezavisno -H ili -Me;
R4"je -H, -Me, -SO3H, ili -SO3-M<+>, gde je M<+>farmaceutski prihvatljivi katjon;
a je ceo broj od 0 do 2, b je ceo broj od 0 do 3; i,
Cy je opciono supstituisani 5-člani heterociklični prsten sa N heteroatomom, poželjno Cy je
[0126] U određenim primerima izvođenja, kao u četvrtom ili petom specifičnom primeru izvođenja, W' je -N(R<e>)-.
[0127] U određenim primerima izvođenja, kao u četvrtom ili petom specifičnom primeru izvođenja, R<e>je -(CH2-CH2-O)2-6- R<k>, gde je R<k>-H, linearni, granati ili ciklični alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma.
[0128] U određenim primerima izvođenja, kao u četvrtom ili petom specifičnom primeru izvođenja, V je -S- ili -SS-.
[0129] U šestom specifičnom primeru izvođenja, L' je, kao u četvrtom ili petom specifičnom primeru izvođenja, predstavljen sledećom formulom:
- NR<e>-[CR1"R2"]a-S-[CR3"R4"]b-COE.
[0130] U određenim primerima izvođenja, citotoksično jedinjenje vezano za povezujuću grupu sa reaktivnom grupom koja je za nju vezana, kao u 4, 5. i 6. specifičnom primeru izvođenja je:
ili
gde je Y -SO3M, M je -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon.
[0131] U sedmom specifičnom primeru izvođenja, L', kao u četvrtom, petom ili šestom specifičnom primeru izvođenja, predstavljen je sledećom formulom:
- NR<e>-[CR1"R2"]a-S-Cy-[CR3"R4"]b-COE.
[0132] U određenim primerima izvođenja, citotoksično jedinjenje vezano za povezujuću grupu sa reaktivnom grupom koja je za nju vezana, kao u 4, 5. i 7. specifičnom primeru izvođenja je:
ili
gde je Y -SO3M, i M je -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon.
[0133] U osmom specifičnom primeru izvođenja, citotoksična jedinjenja formula (Ia) i (IIa) predstavljena su sledećim formulama:
gde:
W' je odsutan ili se bira između -O-, -N(R<e>)-, -N(R<e>)-C(=O)-, -N(C(=O)R<e>)-, -S- ili -CH2-S-, -CH2NR<e>-;
R<x>je odsutan ili se bira između linearnog, granatog ili cikličnog alkila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma;
R<e>je -H, linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma ili -(CH2-CH2-O)n-R<k>, gde je R<k>-H, linearni, granati ciklični alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma, koji opciono nosi sekundarnu amino (npr., -NHR<101>) ili tercijarnu amino (-NR<101>R<102>) grupu ili 5 ili 6-člani azot-sadržavajući heterocikl, kao piperidin ili morfolin, gde su R<101>i R<102>svaki nezavisno linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma. Poželjno, R<101>i R<102>su svaki nezavisno linearni ili granati alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma;
Z<s>je -H, -SR<m>;
R<m>je R<d>ili supstituisani ili nesupstituisani linearni ili granati alkil sa 1 do 4 ugljenikova atoma koji nosi reaktivni estar, odabran između N-hidroksisukcinimid estara, N-hidroksiftalimid estara, N-hidroksi sulfosukcinimid estara, para-nitrofenil estara, dinitrofenil estara, pentafluorofenil estara;
R<d>se bira između fenila, nitrofenila, dinitrofenila, karboksinitrofenila, piridila ili nitropiridila;
n je ceo broj od 1 do 24; i ostale varijable su kao što je opisano gore u četvrtom specifičnom primeru izvođenja.
[0134] Poželjno, R<k>je -H ili -Me i n je ceo broj od 2 do 8. Poželjno, R<x>je linearni ili granati alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma; i ostale varijable su kako je gore opisano u petom specifičnom primeru izvođenja.
[0135] U određenim primerima izvođenja, za jedinjenja formule (IBa) i (IIBa) opisana u osmom specifičnom primeru izvođenja, varijable su kako je opisano dole:
X' i Y' su oba -H;
A i A' su oba -O-;
R6je -OMe;
R<x>je linearni ili granati alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma; i ostale varijable su kako je gore opisano u osmom specifičnom primeru izvođenja.
[0136] Poželjno, R<x>je -(CH2)p-(CR<f>R<g>)-, gde se R<f>i R<g>svaki nezavisno biraju između H ili linearnog ili granatog alkila sa 1 do 4 ugljenikova atoma; p je 0, 1, 2 ili 3. Poželjnije, R<f>i R<g>su isti ili različiti i biraju se između -H i -Me; i p je 1.
[0137] U devetom specifičnom primeru izvođenja, citotoksično jedinjenje vezano za povezujuću grupu sa reaktivnom grupom koja je za nju prikačena predstavljeno je bilo kojom od sledećih formula:
ili
gde:
Y se bira između -SO3M, -SO2M ili -OSO3M;
M je -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon kao što su Na<+>ili K<+>;
X' se bira iz grupe koja se sastoji od -H, -OH, supstituisanog ili nesupstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, fenila, i amin-protektujuće grupe;
Y' se bira iz grupe koja se sastoji od -H, okso grupe, supstituisanog ili nesupstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma;
A i A' se biraju između -O- i -S-;
W' je odsutan ili se bira između -O-, -N(R<e>)-, -N(R<e>)-C(=O)-, -N(C(=O)R<e>)-, -S- ili -CH2-S-, -CH2NR<e>-;
R<x>je odsutan ili se bira između linearnog, granatog ili cikličnog alkila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma;
R<e>je -H, linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma ili -(CH2-CH2-O)n-R<k>, gde je R<k>-H, linearni, granati ciklični alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma, koji opciono nosi sekundarnu amino (npr., -NHR<101>) ili tercijarnu amino (-NR<101>R<102>) grupu ili 5- ili 6-člani azot-sadržavajući heterocikl, kao piperidin ili morfolin, gde su R<101>i R<102>svaki nezavisno linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma;
G se bira između -CH- ili -N-;
Z<s>je -H, ili se bira između bilo koje od sledećih formula:
1
gde:
q je ceo broj od 1 do 5; poželjno q je 2; n je ceo broj od 2 do 6; poželjno n je 4;
2
D je -H ili -SO3M;
M je -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon kao Na<+>ili K<+>.
[0138] U određenim primerima izvođenja, Z<s>je predstavljen bilo kojom od sledećih formula:
[0139] U određenim primerima izvođenja, kao u devetom specifičnom primeru izvođenja, W' je -N(R<e>)-.
[0140] U određenim primerima izvođenja, R<e>je -(CH2-CH2-O)n-R<k>, gde je R<k>-H, linearni, granati ciklični alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma.
[0141] U određenim primerima izvođenja, R<k>je -H ili -Me, n je 4, i q je 2.
[0142] U određenim primerima izvođenja, R<x>je linearni ili granati alkil sa 1 do 6 ugljenikovh atoma.
[0143] U određenim primerima izvođenja, R<x>je -(CH2)p-(CR<f>R<g>)-, gde se R<f>i R<g>svaki nezavisno biraju između -H ili linearnog ili granatog alkila sa 1 do 4 ugljenikova atoma; i p je 0, 1, 2 ili 3.
[0144] U određenim primerima izvođenja, R<f>i R<g>su isti ili različiti i biraju se između -H i -Me; i p je 1.
[0145] U desetom specifičnom primeru izvođenja, varijable devetog specifičnog primera izvođenja predstavljene su dole: Y je -SO3M; M je -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon (npr., Na<+>); X' i Y' su oba -H; A i A' su oba -O-; R6je -OMe; i R<x>je linearni ili granati alkil koji ima 1 do 6 ugljenikovih atoma.
[0146] U bilo kojem od gornjih primera izvođenja, na primer od 1. do 9. specifičnog primera izvođenja, Y se bira između -SO3M, -SO2M i sulfata -OSO3M. Poželjno, Y je -SO3M, gde je M poželjno -H, Na<+>ili K<+>.
[0147] U bilo kojem od gornjih primera izvođenja, na primer od 1. do 10. specifičnog primera izvođenja, W je, kada je prisutno, C=O.
[0148] U bilo kojem od gornjih primera izvođenja, na primer od 1. do 10. specifičnog primera izvođenja, Z i Z' su, kada su prisutni, -CH2-.
[0149] U bilo kojem od gornjih primera izvođenja, na primer od 1. do 10. specifičnog primera izvođenja, X' se bira iz grupe koja se sastoji od -H, -OH, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, fenila, povezujuće grupe sa reaktivnom grupom koja je za nju vezana, i amin-protektujuće grupa. Poželjno, X' je -H, -OH, -Me ili povezujuća grupa sa reaktivnom grupom koja je za nju vezana. Poželjnije, X' je -H.
[0150] U bilo kojem od gornjih primera izvođenja, na primer od prvog do desetog specifičnog primera izvođenja, Y' se bira iz grupe koja sadrži -H, okso grupu, supstituisani ili nesupstituisani linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma. Poželjno, Y' je -H ili okso. Poželjnije, Y' je -H.
[0151] U bilo kojem od gornjih primera izvođenja, na primer od 1. do 10. specifičnog primera izvođenja, A i A' su isti ili različiti i biraju se između -O-, -S-, -NR5-, i okso -(C=O)-. Poželjno, A i A' su isti ili različiti i biraju se između -O- i -S-. Poželjnije, A i A' su -O-.
[0152] U bilo kojem od gornjih primera izvođenja, na primer od 1. do 10. specifičnog primera izvođenja, D i D' su, kada su prisutni, isti ili različiti, i nezavisno se biraju između polietilen
4
glikolne jedinice (-OCH2CH2)n, gde je n ceo broj od 1 do 24, amino-kiseline, peptida koji nosi 2 do 6 amino-kiselina, ili linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, gde su alkil, alkenil i alkinil opciono supstituisani jednim ili većim brojem supstituenata koji se nezavisno biraju iz grupe koja se sastoji od halogena, -OR, -NR'COR", -SR i -COR'. Poželjno, D i D' su linearni ili granati alkil sa 1 do 4 ugljenikova atoma.
[0153] U jedanaestom specifičnom primeru izvođenja, različite grupe citotoksičnih jedinjenja prvog, trećeg i devetog specifičnog primera izvođenja, predstavljene su dole: W je C=O; R1, R2, R1', R2', R4i R4' su -H; jedan od R3, ili R3' je opciono povezujuća grupa sa reaktivnom grupom vezanom za nju i drugi je -H; R6je -OMe; Z i Z' su -CH2-; X' je -H; Y' je -H; i A i A' su -O-.
[0154] U sledećem primeru izvođenja, povezujuća grupa sa reaktivnom grupom koja je za nju prikačena je, kao u bilo kojem od specifičnih primera izvođenja gore, bilo koja od navedenih u Spisku 1.
[0155] U sledećem primeru izvođenja, citotoksični dimeri bez povezujućih komponenti (kao što su povezujuće komponente opisane gore) prikačenih za njih mogu dalje reagovati sa bifunkcionalnim unakrsno povezujućim reagensom da bi se formirao lek koji nosi povezujuću komponentu sa reaktivnom grupom prikačenom za nju, sa ciljem korišćenja u metodima predmetnog pronalaska (npr., za dalju reakciju sa sredstvom koje se vezuje za ćeliju da se formira konjugat lek-CBA). Alternativno, citotoksični dimeri bez povezujućih komponenti (kao što su povezujuće komponente opisane gore) prikačenih za njih mogu dalje reagovati sa bifunkcionalnim unakrsno povezujućim reagensom i reagensom koji se vezuje za ćeliju u jednostepenoj reakciji da bi se direktno formirao konjugat lek-CBA. U oba slučaja, u reakcionu mešavinu se može dodati imin-reaktivni reagens da se formira adukt lek-imin-reaktivni reagens (kao što je bisulfitni adukt) pre reakcije stvaranja konjugata lek-CBA. Poželjno, citotoksični dimeri bez povezujućih komponenti (kao što su povezujuće komponente opisane gore) prikačenih za njih mogu prvo da se preinkubiraju sa imin-reaktivnim reagensom da se formira adukt, pre nego što se reakciona mešavina upotrebi u narednim reakcijama da se formira konjugat lek-CBA.
[0156] Prema tome, u dvanaestom specifičnom primeru izvođenja, imin-sadržavajuće citotoksično jedinjenje predstavljeno je bilo kojom od formula (I) i (II), kako je definisano u patentnom zahtevu 1, ili farmaceutski prihvatljivom solju istog:
i, posle reakcije sa imin-reaktivnim reagensom, citotoksično jedinjenje je predstavljeno sledećim formulama (I') i (II'), kako je definisano u patentnom zahtevu 1, ili farmaceutski prihvatljivom solju istog:
[0157] Poželjno, X' je -H, ili -Me. Poželjnije, X' je -H.
[0158] Poželjno, Y' se bira između -H ili okso. Poželjnije, Y' je -H;
Poželjno, 1, 2, 3, ili svi od R2, R3, R2' i R3' su -H;
M je -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon;
Poželjno, R6je -OMe ili -SMe. Još poželjnije, R6je -OMe.
[0159] Poželjno, A i A' su isti ili različiti i biraju se između -O- i -S-. Poželjnije, A i A' su -O-.
[0160] Reprezentativne strukture takvih imin-sadržavajućih citotoksičnih jedinjenja prikazane su u Tabeli 15. Vidi jedinjenja 1, 3, 4, 5, i 1d.
[0161] U određenim primerima izvođenja,
W je C=O;
R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3', i R4'su -H;
Z i Z' su -CH2-;
A i A' su oba -O-;
W je -(C=O)-;
G je -CH-;
R6je -H, ili opciono supstituisani C1-C10 linearni, C1-C10 granati, ili C3-C7 ciklični alkil, -O-alkil, ili -O-halo-alkil, kao -OMe;
X' se bira iz grupe koja se sastoji od -H, -OH, supstituisanog ili nesupstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, fenila, i amin-protektujuće grupea; i
Y' se bira iz grupe koja koja se sastoji od -H, okso grupe, supstituisanog ili nesupstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma.
[0162] Poželjno, Y se bira između -SO3M, -SO2M, ili -OSO3M, i gde je M -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon kao Na<+>ili K<+>.
[0163] Poželjno, Y je -SO3M; M je -H ili Na<+>.
[0164] U određenim primerima izvođenja, imin-sadržavajuće citotoksično jedinjenje predstavljeno je bilo kojom od sledećih formula:
ili
gde:
L', L'', i L''' su isti ili različiti, i biraju se nezavisno između -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-R<c>, halogena, guanidinijuma [-NH(C=NH)NH2], -OR, -NR'R'', -NO2, -NR'COR'', -SR, sulfoksida predstavljenog SOR', sulfona predstavljenog -SO2R', sulfonata -SO3M, sulfata -OSO3M, sulfonamida predstavljenog -SO2NR'R'', cijano, azido, -COR', -OCOR', -OCONR'R'';
M je -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon; i,
G se bira između -CH- ili -N-.
[0165] U određenim primerima izvođenja, citotoksično jedinjenje, kada je prisutno, predstavljeno je jednom od sledećih formula, ili njenom farmaceutski prihvatljivom solju:
ili
[0166] U određenim primerima izvođenja, jedan od L', L'', ili L''' nosi tiol grupu, dok su drugi -H. Poželjno, L' nosi tiol grupu, i L'' i L''' su -H.
[0167] U određenim primerima izvođenja, A i A' su oba -O-; R6je -OMe; i G je -CH-.
[0168] U određenim primerima izvođenja, imin-sadržavajuće citotoksično jedinjenje može biti predstavljeno bilo kojom od sledećih formula:
ili
gde:
W' je odsutan ili, kada je prisutan, bira se između -CR<e>R<e'>-, -O-, -O-C(=O)-, -C(=O)-O-, -S-, -SO-, -SO2-, -CH2-S-, -CH2O-, -CH2NR<e>-, -O-(C=O)O-, -O-(C=O)N(R<e>)-, -N(R<e>)-, -N(R<e>)-C(=O)-, -C(=O)-N(R<e>)-, -N(R<e>)-C(=O)O-, -N(C(=O)R<e>)C(=O)-, -N(C(=O)R<e>)-, -(O-CH2-CH2)n-, -SS-, ili -C(=O)-, ili amino-kiseline, ili peptida koji ima 2 do 8 aminokiselina;
R<x>je odsutan ili, kada je prisutan, predstavlja opciono supstituisani linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, aril koji nosi 6 do 10 ugljenikovih atoma ili 3- do 8-člani hetereociklični prsten koji nosi 1 do 3 heteroatoma odabrana između O, N ili S;
R<e>i R<e'>su isti ili različiti i biraju se između -H, linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma ili -(CH2-CH2-O)n-R<k>, gde je R<k>-H, linearni, granati ciklični alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma, koji opciono nosi sekundarnu amino (npr., -NHR<101>) ili tercijarnu amino (-NR<101>R<102>) grupu ili 5- ili 6-člani azot-sadržavajući heterocikl, kao piperidin ili morfolin, gde su R<101>i R<102>svaki nezavisno linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma; poželjno, R<101>i R<102>su svaki nezavisno linearni ili granati alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma;
n je ceo broj od 1 do 24.
[0169] U određenim primerima izvođenja, citotoksično jedinjenje, kada je prisutno, može biti predstavljeno jednom od sledećih formula, ili njenom farmaceutski prihvatljivom solju:
ili
[0170] U određenim primerima izvođenja,
Y se bira između -SO3M, -SO2M ili -OSO3M;
M je -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon kao Na<+>ili K<+>;
X' se bira iz grupe koja se sastoji od -H, -OH, supstituisanog ili nesupstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, fenila, i amin-protektujuće grupe;
Y' se bira iz grupe koja se sastoji od -H, okso grupe, supstituisanog ili nesupstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma;
A i A' se biraju između -O- i -S-;
W' je odsutan ili se bira između -O-, -N(R<e>)-, -N(R<e>)-C(=O)-, -N(C(=O)R<e>)-, -S- ili -CH2-S-, -CH2NR<e>-;
R<x>is je odsutan ili se bira između linearnog, granatog ili cikličnog alkila koji ima 1 do 10 ugljenikovih atoma;
R<e>je -H, linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma ili -(CH2-CH2-O)n-R<k>, gde je R<k>-H, linearni, granati ciklični alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma, koji opciono nosi sekundarnu amino (npr., -NHR<101>) ili tercijarnu amino (-NR<101>R<102>) grupu ili 5- ili 6-člani azot-sadržavajući heterocikl, kao piperidin ili morfolin, gde su R<101>i R<102>svaki nezavisno linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma;
G se bira između -CH- ili -N-.
[0171] U određenim primerima izvođenja, W' je -N(R<e>)-.
[0172] U određenim primerima izvođenja, R<e>je -(CH2-CH2-O)n-R<k>, gde je R<k>-H, linearni, granati ciklični alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma.
[0173] U određenim primerima izvođenja, R<k>je -H ili -Me, n je 4, i q je 2.
[0174] U određenim primerima izvođenja, R<x>je linearni ili granati alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma.
[0175] U određenim primerima izvođenja, R<x>je -(CH2)p-(CR<f>R<g>)-, gde se R<f>i R<g>svaki nezavisno biraju između -H ili linearnog ili granatog alkila sa 1 do 4 ugljenikova atoma; i p je 0, 1, 2 ili 3.
[0176] U određenim primerima izvođenja, R<f>i R<g>su isti ili različiti i biraju se između -H i -Me; i p je 1.
[0177] U određenim primerima izvođenja,
Y je -SO3M, -SO2M, ili sulfat -OSO3M; poželjno -SO3M;
M je -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon (npr., Na<+>);
X' i Y' su oba -H;
A i A' su oba -O-;
R6je -OMe; i
R<x>je linearni ili granati alkil koji ima 1 do 6 ugljenikovih atoma.
[0178] U određenim primerima izvođenja, bifunkcionalno unakrsno povezujuće sredstvo je:
na maleimidu bazirana komponenta koja se bira između: N-sukcinimidil 4-(maleimidometil)cikloheksankarboksilata (SMCC), N-sukcinimidil-4-(N-maleimidometil)-cikloheksan-1-karboksi-(6-amidokaproata) (LC-SMCC), N-sukcinimidil estra κ-maleimidoundekanske kiseline (KMUA), N-sukcinimidil estra γmaleimidobuterne kiseline (GMBS), N-hidroksisukcinimid estra εmaleimidokapronske kiseline (EMCS), m-maleimidobenzoil-N-hidroksisukcinimid estra (MBS), N-(α-maleimidoacetoksi)-sukcinimid estra (AMAS), sukcinimidil-6-(βmaleimidopropionamido)heksanoata (SMPH), N-sukcinimidil 4-(p-maleimidofenil)-butirata (SMPB), N-(p-maleimidofenil)izocijanata (PMPI), N-sukcinimidil-4-(4-nitropiridil-2-ditio)butanoata; ili,
na haloacetilu bazirana komponenta koja se bira između: N-sukcinimidil-4-(jodoacetil)-aminobenzoata (SIAB), N-sukcinimidil jodoacetata (SIA), N-sukcinimidil bromoacetata (SBA), i
N-sukcinimidil 3-(bromoacetamido)propionata (SBAP), bismaleimidopolietilenglikola (BMPEO), BM(PEO)2, BM(PEO)3, N-(βmaleimidopropiloksi)sukcinimid estra (BMPS), 5-maleimidovalerinske kiseline NHS, HBVS, 4-(4-N-maleimidofenil)-buterna kiselina hidrazid•HCl (MPBH), sukcinimidil-(4-vinilsulfonil)benzoata (SVSB), ditiobis-maleimidoetana (DTME), 1,4-bismaleimidobutana (BMB), 1,4-bismaleimidil-2,3-dihidroksibutana (BMDB), bismaleimidoheksana (BMH), bis-maleimidoetana (BMOE), sulfosukcinimidil 4-(N-maleimido-metil)cikloheksan-1-karboksilata (sulfo-SMCC), sulfosukcinimidil(4-jodoacetil)aminobenzoata (sulfo-SIAB), m-maleimidobenzoil-N-hidroksisulfosukcinimid estra (sulfo-MBS), N-(γ-maleimidobutiriloksi)sulfosukcinimid estra (sulfo-GMBS), N-(ε-maleimidokaproiloksi)sulfosukcimido estra (sulfo-EMCS), N-(κmaleimidoundekanoiloksi)sulfosukcinimid estra (sulfo-KMUS), sulfosukcinimidil 4-(p-maleimidofenil)butirata (sulfo-SMPB), CX1-1, sulfo-Mal i PEGn-Mal.
1
[0179] U određenim primerima izvođenja, bifunkcionalno unakrsno povezujuće sredstvo bira se iz grupe koja se sastoji od SMCC, sulfo-SMCC, BMPS, GMBS, SIA, SIAB, N-sukcinimidil-4-(4-nitropiridil-2-ditio)butanoata, bis-maleimidoheksana ili BMPEO.
[0180] U određenim primerima izvođenja, modifikovano CBA, kada je prisutno, je:
2
[0181] U trianestom specifičnom primeru izvođenja, imin-sadržavajuće citotoksično jedinjenje je:
[0182] Bifunkcionalna unakrsno povezujuća sredstva mogu biti svako od bifunkcionalnih povezujućih sredstava poznatih u struci. Na primer, bifunkcionalna povezujuća sredstva koja mogu da se koriste za spravljanje jedinjenja lek-povezujuće sredstvo su ona koja formiraju disulfidne veze, tioetarske veze, veze labilne na dejstvo kiselina, fotolabilne veze, veze labilne na dejstvo peptidaza i veze labilne na dejstvo esteraza, sa citotoksičnim jedinjenjima (vidi na primer, US patente 5,208,020; 5,475,092; 6,441,163; 6,716,821; 6,913,748; 7,276,497; 7,276,499; 7,368,565; 7,388,026 i 7,414, 073). Poželjno, bifunkcionalna unakrsno povezujuća sredstva su ona koja formiraju disulfidne veze, tioetarske veze i veze labilne na dejstvo peptidaza, sa citotoksičnim jedinjenjima. Druga bifunkcionalna unakrsno povezujuća sredstva koja mogu da se koriste u predmetnom pronalasku uključuju neisecajuće linkere kao što su oni opisani u U.S. publikaciji broj US 2005/0169933, ili naelektrisani linkeri ili hidrofilni linkeri i opisani su u US 2009/0274713, US 2010/01293140 i WO 2009/134976. Bifunkcionalna unakrsno povezujuća sredstva koja mogu da se koriste za spravljanje jedinjenja lek-linker, korisna u predmetnom pronalasku uključuju ona opisana u Thermo Scientific Pierce Crosslinking Technical Handbook.
[0183] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, lek (sa ili bez povezujuće grupe sa reaktivnom grupom prikačenom za nju) koji može da se koristi u predmetnom pronalasku je bilo koje od jedinjenja prikazanih u Tabelama 1-7. U sledećem poželjnom primeru izvođenja, konjugat sredstvo koje se vezuje za ćeliju-lek, koji može da se napravi predmetnim pronalaskom je bilo koji od konjugata prikazanih u Tabeli 8.
Tabela 1. Strukture reprezentativnih jedinjenja u predmetnom pronalasku.
4
Tabela 2. Strukture reprezentativnih jedinjenja u predmetnom pronalasku (nastavak).
Tabela 3. Strukture reprezentativnih jedinjenja u predmetnom pronalasku (nastavak).
Tabela 4. Strukture reprezentativnih jedinjenja u predmetnom pronalasku (nastavak).
Tabela 5. Strukture reprezentativnih jedinjenja u predmetnom pronalasku.
Tabela 6. Strukture reprezentativnih jedinjenja u predmetnom pronalasku (nastavak).
Tabela 7. Strukture reprezentativnih jedinjenja u predmetnom pronalasku (nastavak).
Tabela 8. Strukture reprezentativnih konjugata predmetnog pronalaska.
1
[0184] U bilo kojem od jedinjenja ili konjugata opisnih gore u Tabelama 1-8, iminska dvostruka veza može reagovati/reagovala je sa nekim od imin-reaktivnih reagenasa (kao što su oni opisani u ovom tekstu) prema metodima pronalaska da bi se formirali adukti, uključujući bisulfitne adukte. Takvi imin-protektovani adukti u jedinjenjima iz Tabela 1-7 mogu se koristiti u daljim reakcijama u skladu sa metodima pronalaska da bi se proizveli konjugati pronalaska. Slično tome, jedinjenja koja sadrže imin-protektovane adukte mogu da se koriste u metodima pronalaska da se proizvedu konjugati iz Tabele 8.
[0185] U ovom tekstu opisani su i lekovi koji opciono nose povezujuću komponentu (npr., povezujuća grupa sa reaktivnom grupom prikačenom za nju), koji mogu da se koriste u metodima opisanim u ovom tekstu, i predstavljeni su kao formule (A1) ili (A2):
2
gde:
dvostruka linija između N i C predstavlja jednostruku vezu ili dvostruku vezu, uz uslov da najmanje jedno od između N i C predstavlja dvostruku vezu, i kada je to dvostruka veza, X je odsutan i Y je -H, i kada je to jednostruka veza, X je -H ili aminprotektujuća komponenta koja konvertuje jedinjenje u prolek; poželjno, kada je to dvostruka veza, X je odsutan i Y je -H, i dvostruka veza može reagovati sa iminreaktivnim reagensom pronalaska da se formira adukt (kao što je bisulfitni adukt) pre upotrebe adukta u metodima pronalaska za proizvodnju konjugata lek-CBA;
Y se bira između -H, -OR, estra predstavljenog -OCOR', karbonata predstavljenog -OCOOR', karbamata predstavljenog -OCONR'R'', amina ili hidroksil amina predstavljenog -NR'R'', amida predstavljenog -NRCOR', peptida predstavljenog -NRCOP, gde je P amino-kiselina ili polipeptid koji sadrži između 2 i 20 aminokiselinskih jedinica, tioetra predstavljenog -SR', sulfoksida predstavljenog -SOR', sulfona predstavljenog -SO2R', sulfita -SO3, bisulfita -OSO3, -SO2M, -SO3M, -OSO3M, halogena, cijano, azido, tiola; pri čemu je M -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon (kao Na<+>); ili,
Y je sulfit (HSO3, HSO2ili so HSO3-, SO3<2->ili HSO2<->formirana sa katjonom), metabisulfit (H2S2O5ili so S2O5<2->formirana sa katjonom), mono-, di-, tri-, i tetratiofosfat (PO3SH3, PO2S2H2, POS3H2, PS4H2ili so PO3S<3->, PO2S2<3->, POS3<3->ili PS4<3->formirana sa katjonom), tio fosfatni estar (R<i>O)2PS(OR<i>), R<i>S-, R<i>SO, R<i>SO2, R<i>SO3, tiosulfat (HS2O3ili so S2O3<2->formirana sa katjonom), ditionit (HS2O4ili so S2O4<2->formirana sa katjonom), fosforoditioat (P(=S)(OR<k'>)(S)(OH) ili njegova so formirana sa katjonom), hidroksamska kiselina (R<k'>C(=O)NOH ili so formirana sa katjonom), formaldehid sulfoksilat (HOCH2SO2- ili so HOCH2SO2<->formirana sa katjonom, kao HOCH2SO2-Na<+>) ili njihova mešavina, gde je R<i>linearni ili granati alkil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma i supstituisan je sa najmanje jednim supstituentom odabranim između -N(R<j>)2, -CO2H, -SO3H, i -PO3H; R<i>može dodatno biti opciono supstituisan supstituentom za alkil opisanim u ovom tekstu; R<j>je linearni ili granati alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma; R<k'>je linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, aril, heterociklil ili heteroaril;
R, R', i R'' su isti ili različiti i biraju se između -H, supstituisanog ili nesupstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice (-OCH2CH2)n, gde je n ceo broj od 1 do 2000 (poželjno 1-200, ili 1-20), 5- ili 6-člani heteroaril prsten koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika i sumpora, 5- do 18-člani fuzionisani prstenasti sistem, pri čemu je najmanje jedan od prstenova aromatičan, koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika i sumpora, aril sa od 6 do 18 ugljenikovih atoma, 3- do 18-člani heterociklični prsten koji ima 1 do 6 heteroatoma odabranih između O, S, N i P, pri čemu se supstituent bira između halogena, -OR7, -NR8R9, -NO2, -NRCOR', -SR10, sulfoksida predstavljenog -SOR', sulfona predstavljenog -SO2R', sulfita -SO3, bisulfita -OSO3, sulfonamida predstavljenog -SO2NRR', cijano, azido, -COR11, -OCOR11ili -OCONR11R12;
R7, R8, R9, R10, R11i R12se svaki nezavisno biraju između -H, linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice (-OCH2CH2)n, gde je n ceo broj od 1 do 2000 (poželjno 1-200, ili 1-20), 5- ili 6-člani heteroaril prsten koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika i sumpora, 5- do 18-člani fuzionisani prstenasti sistem, pri čemu je najmanje jedan od prstenova aromatičan, koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika i sumpora, aril sa od 6 do 18 ugljenikovih atoma, 3- do 10-člani heterociklični prsten sa 3- do 18-članim heterocikličnim prstenom sa 1 do 6 heteroatoma odabranih između O, S, N i P, i R10je opciono SR13ili COR13; R13se bira između linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, 5- ili 6-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika i sumpora, 5- do 18-članog fuzionisanog prstenastog sistema, pri čemu je najmanje jedan od prstenova aromatičan, koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika i sumpora, arila sa od 6 do 18 ugljenikovih atoma, 3- do 18-članog heterocikličnog
4
prstena sa 1 do 6 heteroatoma odabranih između O, S, N i P, opciono R11je OR14, gde R14ima istu definiciju kao R, opciono R" je -OH;
W je C=O, C=S, CH2, BH, SO ili SO2;
R1, R2, R3, R4, R1' R2', R3', i R4' se, svaki nezavisno, biraju između -H, supstituisanog ili nesusptituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice (-OCH2CH2)n, gde je n ceo broj od 1 do 2000 (poželjno 1-200, ili 1-20), ili supstituenta koji se bira između halogena, guanidinijuma [-NH(C=NH)NH2], -OR7, -NR8R9, -NO2, -NRCOR', -SR10, sulfoksida predstavljenog -SOR', sulfona predstavljenog -SO2R', sulfita -SO3, bisulfita -OSO3, sulfonamida predstavljenog -SO2NRR', cijano, azido, -COR11, -OCOR11ili -OCONR11R12, pri čemu su R7, R8, R9, R10, R11i R12kako je definisano gore, opciono, svaki od R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3', ili R4' je povezujuća grupa sa reaktivnom grupom koja je za nju prikačena (ako je prisutna), koja može da se bira između polipirolo, poliindolil, poli-imidazolil, polipirolo-imidazolil, poli-pirolo-indolil ili poliimidazoloindolil jedinice koja opciono nosi povezujuću grupu sa reaktivnom grupom prikačenom za nju;
Z se bira između -(CH2)n-, gde je n 1, 2 ili 3, -CR15R16, -NR17, -O- ili -S-, gde se R15, R16i R17, svaki nezavisno, biraju između -H, linearnog, granatog ili cikličnog alkila, sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice (-OCH2CH2)n, gde je n ceo broj od 1 do 2000 (poželjno 1-200, ili 1-20);
R6je -OR, -SR ili -NRR', gde R i R' imaju definiciju istu kao što je data gore, opciono R6je povezujuća grupa sa reaktivnom grupom koja je za nju prikačena (ako je prisutna); X' se bira između -CH2, -NR, -CO, -BH, -SO ili -SO2gde R ima definiciju istu kao što je data gore;
Y' je -O-, -CH2-, -NR ili -S, gde R ima definiciju istu kao što je data gore;
Z' je -CH2ili -(CH2)n, pri čemu je n 2, 3 ili 4, uz uslov da X', Y' i Z' nisu svi u isto vreme CH2;
A i A' su isti ili različiti i biraju se između -O-, -CRR'O, S, -CRR'S, -NR15ili -CRR'NHR15, pri čemu R i R' imaju definiciju istu kao što je data gore i pri čemu R15ima istu definiciju kao R;
D i D' su isti ili različiti i biraju se nezavisno između linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanih bilo kojim od halogena, -OR7, -NR8R9, -NO2, -NRCOR', -SR10, sulfoksida predstavljenog SOR', sulfona predstavljenog -SO2R', sulfita -SO3, bisulfita -OSO3, sulfonamida predstavljenog -SO2NRR', cijano, azido, -COR11, -OCOR11ili -OCONR11R12, pri čemu su definicije za R7, R8, R9, R10, R11i R12kako je definisano gore, ili polietilen glikolne jedinice (-OCH2CH2)n, pri čemu je n ceo broj od 1 do 2000 (poželjno 1-200, ili 1-20); L je opciona fenil grupa ili 3- do 18-člani heterociklični prsten sa 1 do 6 heteroatoma koji se biraju između O, S, N i P, koji je opciono supstituisan, pri čemu je supstituent povezujuća grupa sa reaktivnom grupom koja je za nju prikačena (ako je prisutna), ili se bira između linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanih bilo kojim od halogena, -OR7, -NR8R9, -NO2, -NRCOR', -SR10, sulfoksida predstavljenog -SOR', sulfona predstavljenog -SO2R', sulfita -SO3, bisulfita -OSO3, sulfonamida predstavljenog -SO2NRR', cijano, azido, -COR11, -OCOR11ili -OCONR11R12, pri čemu R7, R8, R9, R10, R11i R12imaju iste definicije kao što su gore date, polietilen glikolna jedinica (-OCH2CH2)n, pri čemu je n ceo broj od 1 do 2000 (poželjno 1-200, ili 1-20); opciono, samo L je povezujuća grupa sa reaktivnom grupom koja je za nju prikačena; ili njihovi farmaceutski prihvatljivi solvati, soli, hidrati ili hidratisane soli, njihovi optički izomeri, racemati, dijastereomeri, enantiomeri ili polimorfne kristalne strukture ovih jedinjenja; uz uslov da jedinjenje ima ne više od jedne povezujuće grupe sa reaktivnom grupom prikačenom za nju.
[0186] U nekim lekovima formule (A1) ili (A2):
dvostruka linija između N i C predstavlja jednostruku vezu ili dvostruku vezu, uz uslov da kada je to dvostruka veza X bude odsustno i Y je -H, i kada je to jednostruka veza, X je -H ili amin-protektujuća grupa koja konvertuje jedinjenje u prolek;
Y se bira između -H, -OR, NR'R", sulfita -SO3M, ili bisulfita -OSO3M, pri čemu je M -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon (kao Na<+>);
R se bira između -H, linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice (-OCH2CH2)n, pri čemu je n ceo broj od 1 do 2000 (poželjno 1-200, ili 1-20), arila sa od 6 do 10 ugljenikovih atoma, heterocikličnog prstena sa od 3 do 10 ugljenikovih atoma;
W je C=O, CH2ili SO2;
R1, R2, R3, R4, R1'. R2'. R3' i R4' se, svaki nezavisno, biraju između -H, -NO2ili povezujuće grupe sa reaktivnom grupom prikačenom za nju (ako je prisutna);
R6je -OR18, pri čemu R18ima istu definiciju kao R;
Z se bira između -(CH2)n, pri čemu je n 1, 2 ili 3, -CR15R16, -NR17, -O- ili -S-, pri čemu se R15, R16i R17svaki nezavisno biraju između -H, linearnog, granatog ili cikličnog alkila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice (-OCH2CH2)n, gde je n ceo broj od 1 do 2000 (poželjno 1-200, ili 1-20);
X' se bira između -CH2, ili C=O;
Y' je -O-, -NR, ili -S, gde je R kako je definisano gore;
Z' je -CH2- ili -(CH2)2-;
A i A' su svaki -O-;
D i D' su isti ili različiti i nezavisno se biraju između linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma;
L je opciona fenil grupa ili heterociklični prsten sa od 3 do 10 ugljenikovih atoma, koji je opciono supstituisan, pri čemu je supstituent povezujuća grupa sa reaktivnom grupom prikačenom za nju (ako je prisutna), ili se bira između linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanih bilo kojim od halogena, -OR7, -NR8R9, -NO2, -NRCOR', -SR10, sulfoksida predstavljenog -SOR', sulfona predstavljenog -SO2R', sulfita -SO3, bisulfita -OSO3, sulfonamida predstavljenog -SO2NRR', cijano, azido, -COR11, -OCOR11ili -OCONR11R12, polietilen glikolne jedinice (-OCH2CH2)n, pri čemu je n ceo broj od 1 do 2000 (poželjno 1-200, ili 1-20); opciono, samo L je povezujuća grupa sa reaktivnom grupom koja je za nju prikačena; ili njihovi farmaceutski prihvatljivi solvati, soli, hidrati ili hidratisane soli, njihovi optički izomeri, racemati, dijastereomeri, enantiomeri ili polimorfne kristalne strukture ovih jedinjenja.
[0187] U drugim lekovima, formule (A1) ili (A2) predstavljene su kao formule (A4) ili (A5):
gde:
dvostruka linija između N i C predstavlja jednostruku vezu ili dvostruku vezu, uz uslov da kada je to dvostruka veza, X bude odsutno i Y je -H, i kada je to jednostruka veza, X je -H ili amin-protektujuća grupa koja konvertuje jedinjenje u prolek;
Y se bira između -H, -OH, etra predstavljenog -OR, -NR'R'', sulfita -SO3M, ili bisulfita -OSO3M;
M je -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon (kao Na<+>);
R, R', i R'' se biraju između linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma;
jedan od R2, R3, R2' i R3' je povezujuća grupa sa reaktivno grupom koja je za nju prikačena (ako je prisutna) i drugi su -H, -NRCOR' ili -NO2;
R6je -OR, pri čemu R ima istu definiciju kao gore;
Z je -CH2- ili -NR, pri čemu R ima istu definiciju kao gore;
A je -O- ili -NR15;
L je -(CH2)nn-, pri čemu je nn 0 ili ceo broj između 1 i 5, ili supstituisani ili nesupstituisani alkil ili alkenil sa od 2 do 4 ugljenikova atoma, pri čemu se supstituent bira između halogena, -OR7, -NR8R9, -NO2, -NRCOR', -SR10, sulfoksida predstavljenog -SOR', sulfona predstavljenog -SO2R', sulfita -SO3, bisulfita -OSO3, sulfonamida predstavljenog -SO2NRR', cijno, azido, -COR11, -OCOR11, ili -OCONR11R12;
R7, R8, R9, R10, R11, R12i R15imaju istu definiciju kao što je data gore;
opciono, sam L je povezujuća grupa sa reaktivnom grupom koja je za nju prikačena (ako je prisutna);
jedan od L', L'', ili L''' je povezujuća grupa sa reaktivnom grupom koja je za nju prikačena (ako je prisutna), dok su drugi -H; poželjno L' je povezujuća grupa sa reaktivnom grupom koja je za nju prikačena (ako je prisutna); i
G je -CH- ili -N-, ili njihovi farmaceutski prihvatljivi solvati, soli, hidrati ili hidratisane soli, njihovi optički izomeri, racemati, dijastereomeri, enantiomeri ili polimorfne kristalne strukture ovih jedinjenja.
[0188] Ponekad, jedinjenje formule (A1) ili (A2) poželjno su predstavljena kao jedinjenja formula (A6) ili (A7):
gde:
dvostruka linija između N i C predstavlja jednostruku vezu ili dvostruku vezu, uz uslov da kada je to dvostruka veza, X je odsustno i Y je -H, i kada je to jednostruka veza, X je -H ili amin-protektujuća grupa koja konvertuje jedinjenje u prolek;
Y se bira između -H, -OH, etra predstavljenog -OR, sulfita -SO3, ili bisulfita -OSO3; R se bira između linearnog, granatog ili cikičnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma;
nn je 0 ili ceo broj od 1 do 5;
jedan od R2, R3, R2' i R3' je povezujuća grupa sa reaktivnom grupom prikačenom za nju (ako je prisutna) i drugi su -H, -NRCOR', ili -NO2;
jedan od L', L'' ili L''' je povezujuća grupa sa reaktivnom grupom prikačenom za nju (ako je prisutna) uz uslov da kada je jedan od L', L'' ili L''' povezujuća grupa sa reaktivnom grupom prikačenom za nju, drugi budu -H (npr., ako je L' povezujuća grupa sa reaktivnom grupom koja je za nju prikačena, onda su L'' i L''' -H);
G je -CH- ili -N-, ili njihovi farmaceutski prihvatljivi solvati, soli, hidrati ili hidratisane soli, njihovi optički izomeri, racemati, dijastereomeri, enantiomeri ili polimorfne kristalne strukture ovih jedinjenja.
[0189] Ponekad, jedan od R2, R3, R2' i R3' iz formula (A4) i (A6) je povezujuća grupa sa reaktivnom grupom prikačenom za nju (ako je prisutna), i predstavljen je formulom -W'-R<x>-V-R<y>-J, i ostali su -H; L'' i L''' iz formula (A5) i (A7) su -H, i L' je povezujuća grupa sa reaktivnom grupom koja je za nju prikačena (ako je prisutna), i predstavljen je formulom
-W'-R<x>-V-R<y>-J
gde:
W' je odsutan, -CR<c>R<e>-, -O-, -O-C(=O)-, -S-, -CH2-S-, -O-(C=O)O-, -O-(C=O)N(R<e>)-, -N(R<e>)-, -N(R<e>)-C(=O)-, -N(R<e>)-C(=O)O-, ili -C(=O)-;
R<x>je odsutan ili je opciono supstituisani linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma;
V je odsutan, -(CH2-CH2-O)n-, -O-, -O-C(=O)-, -S-, -O-(C=O)O-, O-(C=O)N(R<e>)-, -N(R<e>)-, -N(R<e>)-C(=O)-, -N(R<e>)-C(=O)O-, -C(=O)-, amino-kiselina, ili peptid sa 2 do 8 amino-kiselina;
R<y>je odsutan ili je linearni, granati ili ciklični alkil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma; R<c>je -H ili linearni ili granati alkil sa 1 do 4 ugljenikova atoma;
R<e>je -H, linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma ili -(CH2-CH2-O)n-R<c>,
n je ceo broj od 1 do 24; i
J je kao što je opisano gore u četvrtom specifičnom primeru izvođenja.
[0190] R<c>je poželjno -H ili -Me; R<e>je linearni ili granati alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma ili -(CH2-CH2-O)n-R<c>; n je ceo broj od 2 do 8; i ostale varijable su kako je opisano gore u četvrtom specifičnom primeru izvođenja.
[0191] Ponekad, V je poželjno amino-kiselina ili peptid sa 2 do 8 amino-kiselina. Poželjnije, V je valin-citrulin, gly-gly-gly ili ala-leu-ala-leu.
[0192] Poželjno, J je -SH, -SSR<d>ili -COE kako je gore opisano.
[0193] Ponekad, jedan od R2, R3, R2' i R3' iz formule (A4) i (A6) je povezujuća grupa sa reaktivnom grupom koja je za nju prikačena (ako je prisutna), i predstavljen je formulom -W'-R<x>-S-Z<s>; L'' i L''' iz formula (A5) i (A7) su -H, i L' je predstavljen -W'-R<x>-S-Z<s>, pri čemu su varijable kao što je opisano u osmom i devetom specifičnom primeru izvođenja.
[0194] Ponekad, jedinjenje formule (A1)-(A7) (sa ili bez preinkubacije sa imin-reaktivnim reagensom), ako povezujuća grupa sa reaktivnom grupom koja je za nju prikačena nije već prisutna, može dodatno da reaguje sa bifunkcionalnim unakrsno povezujućim reagensom opisanim gore da se formira imin-sadržavajući lek koji nosi povezujuću grupu sa reaktivnom grupom koja je za nju prikačena, koji može da se koristi u metodima predmetnog pronalaska.
[0195] U određenim primerima izvođenja, imin-sadržavajući lek koji nosi povezujuću grupu sa reaktivnom grupom koja je za nju prikačena, koji može da se koristi u metodima predmetnog pronalaska, predstavljen je bilo kojom od sledećih formula:
gde:
"Povezivač" je predstavljen formulama (a1), (a2), (a3), (a4), (a5), (a6), (a7) ili (a8) opisanim gore (u devetom specifičnom primeru izvođenja);
q je ceo broj od 1 do 5;
n je ceo broj od 2 do 6;
D je -H ili -SO3M;
M je -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon, kao Na<+>ili K<+>; i ostale varijable su kako je opisano u osmom ili devetom specifičnom primeru izvođenja.
[0196] Poželjno, q je 2 i n je 4.
[0197] Povezivač je poželjno predstavljen formulom (a1), (a4), (a5), (a9) ili (a10), opisanom gore.
[0198] Za jedinjenja formule (A8) opisano neposredno gore, varijable mogu biti kao što je opisano u nastavku:
W' je -O-, -N(R<e>)-, -N(R<e>)-C(=O)-, -N(COR<e>)-, -S- ili -CH2-S-;
R<x>je odsutan ili se bira između linearnog, granatog ili cikličnog alkila sa 1 do 6 ugljenikovih atoma;
R<e>je -H, linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma ili -(CH2-CH2-O)n-R<k>, gde je R<k>-H, linearni, granati ciklični alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma, koji opciono nosi primarnu, sekundarnu ili tercijarnu amino grupu ili 5- ili 6-člani azot-sadržavajući heterocikl, kao što su piperidin ili morfolin;
n je ceo broj od 1 do 24; i ostale varijable su kako je opisano gore u primeru izvođenja neposredno iznad.
[0199] Poželjno, R<k>je -H ili -Me i n je ceo broj od 2 do 8. Poželjno, R<x>je linearni ili granati alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma.
1
[0200] Ponekad, povezivač je poželjno predstavljen bilo kojom formulom koja se bira između formula (a1), (a4), (a5), (a10) i (a11) prikazanih gore; i ostale varijable su kako je opisano gore u devetom specifičnom primeru izvođenja.
[0201] Za jedinjenja formule (A8) opisana u primerima izvođenja gore, varijable mogu biti kao što je opisano u nastavku:
X' i Y' su oba -H;
A i A' su oba -O-;
R6je -OMe;
R<x>je linearni ili granati alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma; i ostale varijable su kako je opisano gore.
[0202] Poželjno, R<x>je -(CH2)p-(CR<f>R<g>)-, pri čemu se R<f>i R<g>svaki nezavisno biraju između -H ili linearnog ili granatog alkila sa 1 do 4 ugljenikova atoma; p je 0, 1, 2 ili 3. Poželjnije, R<f>i R<g>su isti ili različiti i biraju se između -H i -Me; i p je 1.
[0203] Ponekad, povezivač je poželjno predstavljen bilo kojom formulom koja se bira između formula (a1), (a4), (a5), (a10) i (a11) prikazanih gore; i ostale varijable su kako je opisano gore.
[0204] Ponekad, lek formula (A1), (A2) ili (A3) je poželjno bilo koje od jedinjenja prikazanih u Tabelama 11-13 i konjugat koji može da se napravi metodom predmetnog pronalaska je bilo koji od konjugata prikazanih u Tabeli 14.
Tabela 11. Strukture reprezentativnih lekova koji mogu da se koriste u metodima predmetnog pronalaska.
2
Napomena: Z'' = H, SMe, SPy, SPy-NO2, Ac; X"' = NHS;
Tabela 12. Strukture reprezentativnih lekova koji mogu da se koriste u metodima predmetnog pronalaska (nastavak).
4
Tabela 13. Strukture reprezentativnih lekova koji mogu da se koriste u metodima predmetnog pronalaska (nastavak).
Tabela 14. Strukture reprezentativnih konjugata koji mogu da se naprave metodima predmetnog pronalaska.
[0205] Svako od jedinjenja iz Tabela 11-13 i svaki od konjugata iz Tabele 14 mogu imati najmanje jednu od svojih iminskih veza odreagovalu sa subjekatskim imin-reaktivnim reagensom, čime formiraju adukt, kao što je bisulfitni adukt.
[0206] U jednom primeru izvođenja, imin-sadržavajući lek koji nosi povezujuću komponentu je onaj koji ima reaktivnu estarsku grupu, tiol ili tiol-reaktivnu grupu, opisane gore.
[0207] Alternativno, gore opisani lek može reagovati još i sa bifunkcionalnim unakrsno povezujućim sredstvom da se formira lek koji nosi povezujuću komponentu. Može se koristiti bilo koje opisano bifunkcionalno unakrsno povezujuće sredstvo.
[0208] Ponekad, lek koji može da se koristi u predmetnom pronalasku je poželjno bilo koje od jedinjenja prikazanih u Tabeli 15.
Tabela 15. Reprezentativna lekovita jedinjenja koja mogu da se koriste u predmetnim metodima.
SREDSTVO KOJE SE VEZUJE ZA ĆELIJU
[0209] Efikasnost konjugata pronalaska kao terapijskih sredstava zavisi od pažljivog izbora odgovarajućeg sredstva koje se vezuje za ćeliju. Sredstva koja se vezuju za ćeliju mogu biti bilo koje trenutno poznate vrste, ili vrste koja će postati poznata i uključuju peptide i nepeptide. Obično, to mogu biti antitela (posebno monoklonska antitela), limfokini, hormoni, faktori rasta, vitamini (kao što je folat itd., koji mogu da se vežu za svoj receptor na površini ćelije, npr., folatni receptor), molekuli koji transportuju nutrijente (kao transferin), ili bilo koji drugi molekul ili supstanca koji se vezuju za ćeliju.
[0210] U određenim primerima izvođenja, sredstva koja se vezuju za ćeliju su proteini ili polipetidi, ili jedinjenja koja uključuju proteine ili polipetide. Poželjno, proteini ili polipeptidi uključuju jednu ili više Lys rezidua sa -NH2grupama bočnog lanca. Alternativno ili dodatno, proteini ili polipeptidi uključuju jednu ili više Cys rezidua. -SH grupe bočnog lanca Cys rezidua mogu biti intaktne ili mogu biti u disulfidnoj vezi koja može biti redukovana. Poželjno, redukcija disulfidne veze/veza ne utiče bitno negativno na funkciju vezivanja proteina ili polipeptida za ćeliju (npr., u slučaju antitela ili njegove antigen-vezujuće porcije, redukcija disulfidnih veza ne povećava suštinski disocijaciju lakih lanaca/teških lanaca).
[0211] -NH2grupe Lys bočnog lanca i/ili -SH grupe Cys bočnog lanca mogu biti kovalentno povezane sa povezivačima koji su sa svoje strane vezani za dimerna jedinjenja korisna u pronalasku, konjugujući tako sredstva koja se vezuju za ćeliju sa dimernim jedinjenjima korisnim u pronalasku. Svako sredstvo koje se vezuje za ćeliju bazirano na proteinu može sadržati višestruke -NH2grupe Lys bočnog lanca i/ili -SH grupe Cys bočnog lanca raspoložive za povezivanje jedinjenja korisnih u pronalasku preko bifunkcionalnih unakrsno povezujućih povezivača.
[0212] Preciznji primeri sredstava koja se vezuju za ćeliju, koja se mogu koristiti uključuju:
poliklonska antitela;
monoklonska antitela;
fragmente antitela kao što su Fab, Fab', i F(ab')2, Fv, minitela, dijatela, tritela, tetratela (Parham, J. Immunol. 131:2895-2902 (1983); Spring et al. J. Immunol. 113:470-478 (1974); Nisonoff et al. Arch. Biochem. Biophys. 89:230-244 (1960), Kim et al., Mol, Cancer Ther., 7 : 2486-2497 (2008), Carter, Nature Revs., 6 : 343-357 (2006));
interferone (npr. α, β, γ);
limfokine kao što su IL-2, IL-3, IL-4, IL-6;
hormone kao što su insulin, TRH (thyrotropin releasing hormone, tirotropni oslobađajući hormon), MSH (melanocyte-stimulating hormone, melanocit-stimulirajući hormon), steroidne hormone, kao što su androgeni i estrogeni;
faktore rasta i faktore koji stimulišu kolonije kao što su EGF, TGF-alfa, FGF, VEGF, G-CSF, M-CSF i GM-CSF (Burgess, Immunology Today 5:155-158 (1984));
transferin (O'Keefe et al. J. Biol. Chem.260:932-937 (1985));
vitamine, kao što je folat;
Proteinske skafolde bazirane na ponovcima konsenzusne sekvence fibronektina tipa III (FN3) (poznati i kao centirini; vidi U.S. patentnu publikaciju 2010/0255056);
Dizajnirane proteine sa ankirinskim ponovcima (designer ankyrin repeat proteins (DARPins; U.S. patentne prijave br. 20040132028; 20090082274; 20110118146; 20110224100), C. Zahnd et al.2010, Cancer Res., 70; 1595-1605); i,
Fibronektin-domen skafold proteine (adnektini: US patentne prijave br.20070082365; 20080139791).
[0213] Tehnike monoklonskih antitela omogućile su proizvodnju izuzetno specifičnih sredstava koja se vezuju za ćeliju u formi specifičnih monoklonskih antitela. U struci su naročito dobro
1
poznate tehnike kreiranja monoklonskih antitela proizvedenih imunizovanjem miševa, pacova, hrčaka ili nekih drugih sisara, antigenom od interesa kao što su intaktne ciljne ćelije od interesa, antigeni izolovani iz ciljnih ćelija, ceo virus, atenuisani ceo virus, i virusni proteini kao što su proteini omotača virusa. Senzitizovane humane ćelije takođe mogu da se koriste. Drugi metod kreiranja monoklonskih antitela je korišćenje fagnih biblioteka scFv (single chain variable region, jednolančani varijabilni region), specifično humani scFv (vidi npr., Griffiths et al., U.S. patenti br. 5,885,793 i 5,969,108; McCafferty et al., WO 92/01047; Liming et al., WO 99/06587). Pored toga, mogu se koristiti i antitela sa zamenjenim površinskim reziduama, objavljena u U.S. patentu br.5,639,641, kao i himerna antitela i humanizovana antitela. Izbor odgovarajućeg sredstva koje se vezuje za ćeliju je pitanje odluke koja zavisi od date ćelijske populacije na koju se cilja, ali obično su poželjna humana monoklonska antitela, ako je odgovarajuće dostupno.
[0214] Na primer, monoklonsko antitelo MY9 je mišje IgG1antitelo koje se specifično vezuje za CD33 antigen {J.D. Griffin et al 8 Leukemia Res., 521 (1984)} i može da se koristi ako ciljne ćelije eksprimiraju CD33, kao u akutnoj mijelogenoj leukemiji (acute myelogenous leukemia, AML). Sredstvo koje se vezuje za ćeliju može biti svako jedinjenje koje može da se veže za ćeliju, na specifičan ili nespecifičan način. Obično, ovo mogu biti antitela (posebno monoklonska antitela i fragmenti antitela), interferoni, limfokini, hormoni, faktori rasta, vitamini, molekuli koji transportuju nutrijente (kao transferin), ili bilo koji drugi molekul ili supstanca koji se vezuju za ćelije.
[0215] Kada je sredstvo koje se vezuje za ćeliju antitelo, ono se vezuje za antigen koji je polipeptid i može biti transmembranski molekul (npr. receptor) ili ligand kao što je faktor rasta. Primeri antigena uključuju molekule kao što su renin; hormon rasta, uključujući humani hormon rasta i goveđi hormon rasta; oslobađajući faktor hormona rasta; paratiroidni hormon; tiroid-stimulišući hormon; lipoproteini; alfa-1-antitripsin; insulin A-lanac; insulin B-lanac; proinsulin; folikulo-stimulirajući hormon; kalcitonin; luteinizirajući hormon; glukagon; faktori zgrušavanja krvi kao što su faktor vmc, faktor IX, tkivni faktor (tissue factor, TF), i von Willebrandov faktor; faktori protiv zgrušavanja krvi kao što je protein C; atrijalni natriuretički faktor; plućni surfaktant; plazminogen aktivator, kao urokinaza ili plazminogen aktivator iz humanog urina ili plazminogen aktivator tkivnog tipa (tissue-type plasminogen activator, t-PA); bombezin; trombin; hemopoetski faktor rasta; faktor nekroze tumora-alfa i -beta; enkefalinaza; RANTES (regulated on activation normally T-cell expressed and secreted, protein koji se reguliše posle aktivacije i T-ćelija ga normalno eksprimira i sekretuje); zapaljenski protein
1 1
humanog makrofaga (human macrophage inflammatory protein, MIP-1-alpha); serum albumin, kao humani serum albumin; Muellerian-inhibirajuća supstanca; relaksin A-lanac; relaksin B-lanac; prorelaksin; mišji gonadotropin-asocirani peptid; mikrobni protein, kao beta-laktamaza; DNaza; IgE; antigen asociran sa citotoksičnim T-limfocitom (cytotoxic T-lymphocyte associated antigen, CTLA), kao CTLA-4; inhibin; aktivin; faktor rasta vaskularnog endotela (vascular endothelial growth factor, VEGF); receptori za hormone ili faktore rasta; protein A ili D; reumatoidni faktori; neurotrofični faktor kao neurotrofični faktor poreklom iz kosti (bonederived neurotrophic factor, BDNF), neurotrofin-3, -4, -5, ili -6 (NT-3, NT4, NT-5, ili NT-6), ili faktor rasta nerava kao NGF-β; faktor rasta poreklom iz krvnih pločica (platelet-derived growth factor, PDGF); faktor rasta fibroblasta kao aFGF i bFGF; faktor rasta fibroblastareceptor 2 (fibroblast growth factor receptor 2, FGFR2); faktor rasta epiderma (epidermal growth factor, EGF); transformišući faktor rasta (transforming growth factor, TGF) kao TGF-alfa i TGF-beta, uključujući TGF-β1, TGF-β2, TGF- β3, TGF-β4, ili TGF- β5; insulinu sličan faktor rasta-I i -II (insulin-like growth factor-I i -II, IGF-I i IGF-II); des(1-3)-IGF-I (moždani IGF-I), proteini koji se vezuju za insulinu sličan faktor rasta, EpCAM, GD3, FLT3, PSMA, PSCA, MUC1, MUC16, STEAP, CEA, TENB2, EphA receptori, EphB receptori, folatni receptor, FOLR1, mezotelin, kripto, alfavbeta6, integrini, VEGF, VEGFR, EGFR, transferinski receptor, IRTA1, IRTA2, IRTA3, IRTA4, IRTA5; CD proteini kao CD2, CD3, CD4, CD5, CD6, CD8, CD11, CD14, CD19, CD20, CD21, CD22, CD25, CD26, CD28, CD30, CD33, CD36, CD37, CD38, CD40, CD44, CD52, CD55, CD56, CD59, CD70, CD79, CD80. CD81, CD103, CD105, CD134, CD137, CD138, CD152 ili antitelo koje se vezuje za jedan ili više antigena udruženih sa tumorom ili ćelijske površinske receptore, opisano u US publikacji br.
20080171040 ili US publikaciji br. 20080305044; eritropoetin; osteoinduktivni faktori; imunotoksini; protein morfogeneze kosti (bone morphogenetic protein, BMP); interferon, kao interferon-alfa, -beta, i -gama; faktori stimulacije kolonija (colony stimulating factors, CSF), npr., M-CSF, GM-CSF, i G-CSF; interleukini (IL), npr., IL-1 do IL-10; superoksid dismutaza; receptori na T-ćelijama; površinski membranski proteini; faktor koji ubrzava raspadanje; virusni antigen kao, na primer, deo omotača HIV; transportni proteini; "udomljavajući" receptori; adresini; regulatorni proteini; integrini, kao CD11a, CD11b, CD11c, CD18, ICAM, VLA-4 i VCAM; antigen udružen sa tumorom kao HER2, HER3 ili HER4 receptor; endoglin, c-Met, 1GF1R, PSGR, NGEP, PSMA, PSCA, LGR5, B7H4, i fragmenti bilo kojeg od gore navedenih polipeptida.
1 2
[0216] Dodatno, GM-CSF, koji se vezuje za mijeloidne ćelije može da se koristi kao sredstvo koje se vezuje za ćelije u slučaju ćelija obolelih od akutne mijelogene leukemije. IL-2 koji se vezuje za aktivirane T-ćelije može da se koristi za prevenciju odbacivanja transplantiranog kalema, za lečenje i prevenciju bolesti kalema protiv domaćina, i za lečenje akutne leukemije T-ćelija. MSH, koji se vezuje za melanocite, može da se koristi za lečenje melanoma, kao što mogu i antitela usmerena prema melanomima. Folna kiselina može da se koristi za ciljanje folatnog receptora koji se eksprimira na tumorima ovarijuma i drugim tumorima. Faktor rasta epiderma može da se koristi za ciljanje kancera pločastih ćelija kao što su kanceri pluća i glave i vrata. Somatostatin može da se koristi za ciljanje neuroblastomas i drugih tipova tumora.
[0217] Kanceri dojke i testisa mogu uspešno da se ciljaju estrogenom (ili analozima estrogena) odnosno androgenima (ili analozima androgena), kao sredstvima koja se vezuju za ćeliju.
[0218] U jednom primeru izvođenja, sredstva koja se vezuju za ćeliju su humanizovana monoklonska antitela. U drugom primeru izvođenja, sredstvo koje se vezuje za ćeliju je huMy9-6, ili su to druga srodna antitela, opisana u U.S. pat. br. 7,342,110 i 7,557,189. U sledećem primeru izvođenja, sredstvo koje se vezuje za ćeliju je antifolatno receptorsko antitelo opisano u U.S. privremenim patentnim prijavama br. 61/307,797, 61/346,595, 61/413,172 i U.S. patentnoj prijavi br.13/033,723 (publikovana kao US 2012-0009181 A1).
[0219] U određenim primerima izvođenja, sredstvo koje se vezuje za ćeliju može biti monoklonsko antitelo ili njegov antigen-vezujući deo koji imaju zajedničke sekvence kritične za vezivanje sa antigenom sa antitelom objavljenim u ovom tekstu, kao na primer huMy9-6 ili njemu srodna antitela objavljena u U.S. pat. br. 7,342,110 i 7,557,189. Ova izvedena antitela mogu imati sušstinski iste ili identične (1) lakolančane i/ili teškolančane CDR3 regione; (2) lakolančane i/ili teškolančane CDR1, CDR2, i CDR3 regione; ili (3) lakolančane i/ili teškolančane regione, u poređenju sa antitelom opisanim u ovom tekstu. Sekvence u ovim regionima mogu sadržati konzervirane aminokiselinske supstituicije, uključujući supstitucije unutar CDR regiona. Poželjno, nema više od 1, 2, 3, 4, ili 5 konzerviranih supstitucija. U određenim primerima izvođenja, izvedena antitela imaju region lakog lanca i/ili region teškog lanca koji je najmanje oko 90%, 95%, 99% ili 100% identičan sa antitelom opisanim u ovom tekstu. Ova izvedena antitela mogu imati suštinski istu vezujuću specifičnost i/ili afinitet za ciljni antigen kao antitelo opisano u ovom tekstu. Poželjno, Kdi/ili koffvrednosti izvedenih antitela su unutar 10-strukih (više ili niže), 5-strukih (više ili niže), 3-strukih (više ili niže), ili 2-strukih (više ili niže) vrednosti antitela opisanog u ovom teksu. Ova izvedena antitela mogu
1
biti potpuno humana antitela, ili humanizovana antitela, ili himerna antitela. Izvedena antitela mogu se proizvesti prema bilo kojem od metoda poznatih u struci.
[0220] U jednom primeru izvođenja, antifolatno receptorsko antitelo je humanizovano antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, koji se specifično vezuju za humani folatni receptor 1, pri čemu antitelo sadrži: (a) CDR1 teškog lanca koji uključuje GYFMN (SEQ ID NO: 1); CDR2 teškog lanca koji uključuje RIHPYDGDTFYNQXaa1FXaa2Xaa3(SEQ ID NO: 2); i CDR3 teškog lanca koji uključuje YDGSRAMDY (SEQ ID NO: 3); i (b) CDR1 lakog lanca koji uključuje KASQSVSFAGTSLMH (SEQ ID NO: 4); CDR2 lakog lanca koji uključuje RASNLEA (SEQ ID NO: 5); i CDR3 lakog lanca koji uključuje QQSREYPYT (SEQ ID NO: 6); pri čemu se Xaa1bira između K, Q, H, i R; Xaa2se bira između Q, H, N, i R; i Xaa3se bira između G, E, T, S, A, i V. Poželjno, CDR2 sekvenca teškog lanca uključuje RIHPYDGDTFYNQKFQG (SEQ ID NO: 7).
[0221] U sledećem primeru izvođenja, antifolatno receptorsko antitelo je humanizovano antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, koji se specifično vezuju za humani folatni receptor 1, koji sadrže teški lanac sa aminokiselinskom sekvencom
[0222] U sledećem primeru izvođenja, antifolatno antitelo je humanizovano antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, koji su kodirani plazmidnom DNK deponovanom u ATCC 7. aprila 2010. sa ATCC brojevima depozita PTA-10772 i PTA-10773 ili 10774.
[0223] U sledećem primeru izvođenja, antifolatno receptorsko antitelo je humanizovano antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, koji se specifično vezuju za humani folatni receptor 1, koji sadrže laki lanac sa aminokiselinskom sekvencom
1 4
[0224] U sledećem primeru izvođenja, antifolatno receptorsko antitelo je humanizovano antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, koji se specifično vezuju za humani folatni receptor 1, koji sadrže teški lanac sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 8, i laki lanac sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 9 ili SEQ ID NO: 10. Poželjno, antitelo uključuje teški lanac sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 8 i laki lanac sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 10 (hu FOLR1).
[0225] U sledećem primeru izvođenja, antifolatno receptorsko antitelo je humanizovano antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, koji su kodirani plazmidnom DNK deponovanom u ATCC 7. aprila 2010. sa ATCC brojevima depozita PTA-10772 i PTA-10773 ili 10774.
[0226] U sledećem primeru izvođenja, antifolatno receptorsko antitelo je humanizovano antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, koji sadrže varijabilni domen teškog lanca koji je najmanje oko 90%, 95%, 99% ili 100% identičan
QVQLVQSGAEVVKPGASVKISCKASGYTFTGYFMNWVKQSPGQSLEWIGRIHP YDGDTFYNQKFQGKATLTVDKSSNTAHMELLSLTSEDFAVYYCTRYDGSRAM DYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 11), i varijabilni domen lakog lanca koji je najmanje oko 90%, 95%, 99% ili 100% identičan sa
1
[0227] Sredstvo koje se vezuje za ćeliju, kao što je antitelo, može da se modifikuje heterobifunkcionalnim unakrsnim povezivačem koji nosi amin-reaktivnu grupu, kao što su N-hidroksisukcinimidna grupa (NHS group), tiol-reaktivna maleimido, vinilpiridin, vinil sulfon, vinil sulfonamid ili haloacetil-bazirana grupa ili tiol grupa.
[0228] Tiolne rezidue mogu da se uvedu u antitelo brojnim metodima poznatim u struci, uključujući: a) modifikaciju antitela tiol-generišućim reagensima kao što su 2-iminotiolan ili homocistein tiolakton, ili b) reakcijom sa disulfid-sadržavajućim heterobifunkcionalnim unakrsnom povezujućim sredstvom kao što su SPP, SPDP, SPDB, sulfo-SPDB, praćeno redukcijom disulfidne veze pomoću DTT ili TCEP da nastane slobodni tiol, c) mutagenezom za ugrađivanje nenativnih cisteinskih rezidua, kao što su cistein-inženjerisana antitela (US2007/0092940 A1, US 2010/0003766 A1, US 7723485 B2), ili d) redukcijom nativnih disulfidnih veza (del Rosario, R. B. et al., Cancer Res. Suppl.1990, 50, 804s-808s).
[0229] Tiol-reaktivna grupa, kao maleimido, vinilpiridin, vinil sulfon, vinil sulfonamid ili haloacetil-bazirana grupa, može se uvesti u antitelo modifikovanjem antitela heterobifunkcionalnim unakrsnom povezujućim sredstvom koje nosi tiol-reaktivnu grupu (uključujući SPDB, N-sukcinimidil-4-(4-nitropiridil-2-ditio)butanoat, sulfo-SMCC, SMCC, LC-SMCC, KMUA, BMPS, GMBS, sulfo-GMBS, EMCS, sulfo-EMCS, AMAS, SVSB, SPP, NHS-(PEG)n-mal, gde je n = 1 do 24, poželjno 2, 4, 8, 12, i 24). Unakrsno povezujuća sredstva koja sadrže maleimido-baziranu komponentu uključuju N-sukcinimidil 4-(maleimidometil)cikloheksan-karboksilat (SMCC), N-sukcinimidil-4-(N-maleimidometil)-cikloheksn-1-karboksi-(6-amidokaproat), koji je "dugolančani" analog SMCC (LC-SMCC), N-sukcinimidil estar κ-maleimidoundekanske kiseline (KMUA), N-sukcinimidil estar γmaleimidobuterne kiseline (GMBS), N-hidroksisukcinimid estar ε-maleimidokapronske kiseline (EMCS), m-maleimidobenzoil-N-hidroksisukcinimid estar (MBS), N-(αmaleimidoacetoksi)-sukcinimid estar (AMAS), sukcinimidil-6-(βmaleimidopropionamido)heksanoat (SMPH), N-sukcinimidil 4-(p-maleimidofenil)-butirat (SMPB), i N-(p-maleimidofenil)izocijanat (PMPI). Opisana su tiol reaktivna jedinjenja koja sadrže vinilpiridin (Friedman M. et. Al. Int. J. Peptide Protein Res. 1974, 6, 183-185; Mak A. et. Al. Anal. Biochem.1978, 84, 432-440). Opisana su tiol reaktivna jedinjenja koja sadrže vinil sulfonsku komponentu (Masri M. S. J. Protein Chem., 1988, 7, 49-54; Morpurgo, M. et. Al. Bioconjugate Chem. 1996, 7, 363-368) Unakrsno povezujući reagensi koji sadrže haloacetilbaziranu komponentu uključuju N-sukcinimidil-4-(jodoacetil)-aminobenzoat (SIAB), N-
1
sukcinimidil jodoacetat (SIA), N-sukcinimidil bromoacetat (SBA), i N-sukcinimidil 3-(bromoacetamido)propionat (SBAP).
[0230] Modifikovano antitelo može da se prečisti bilo kojim pogodnim metodom poznatim u struci, na primer, gel filtracijom, TFF ili jonoizmenjivačkom hromatografijom ili afinitetnom hromatografijom.
KONJUGATI SREDSTVO KOJE SE VEZUJE ZA ĆELIJU-LEK
[0231] Predmetni pronalazak obezbeđuje poboljšane metode proizvodnje konjugata sredstvo koje se vezuje za ćeliju-lek, koji uključuju sredstvo koje se vezuje za ćeliju povezano sa jednim ili više citotoksičnih jedinjenja korisnih u predmetnom pronalasku, putem različitih povezivača uključujući disulfidne povezivače, tioetarske povezivače, amid-spojene povezivače, povezivače labilne na dejstvo peptidaza, povezivače labilne na dejstvo kiselina, povezivače labilne na dejstvo esteraza.
[0232] Reprezentativni konjugati koji mogu da se naprave korišćenjem metoda pronalaska uključuju antitelo / citotoksično jedinjenje, fragment antitela / citotoksično jedinjenje, faktor rasta epiderma (EGF) / citotoksično jedinjenje, melanocit-stimulirajući hormon (MSH) / citotoksično jedinjenje, tirotid-stimulirajući hormon (TSH) / citotoksično jedinjenje, somatostatin/ citotoksično jedinjenje, folat / citotoksično jedinjenje, estrogen / citotoksično jedinjenje, analog estrogena / citotoksično jedinjenje, androgen / citotoksično jedinjenje, i analog androgena / citotoksično jedinjenje. Reprezentativni konjugat folat / citotoksično jedinjenje prikazan je dole, sa opcionim -SO3Na aduktom na iminskoj vezi jednog od dva monomera leka. Reprezentativna šema sinteze ovog konjugata prikazana je na SL.26.
[0233] U poželjnom primeru izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje metode proizvodnje konjugata koji uključuju indolinobenzodiazepinsko dimerno jedinjenje (npr., formule (Ib'), (IIb'), (lab'), (IIAb'), (IBb'), (IIBb'), (XIIIb'), (Xb'), itd.) i sredstvo koje se vezuje za ćeliju,
1
povezane kovalentnom vezom. Povezivač može da se, na veći broj načina, iseče na mestu tumora/neželjenih proliferišućih ćelija da bi se citotoksično sredstvo dostavilo svom cilju. Povezivač može da se iseče, na primer, niskim pH (hidrazon), reduktivnim okruženjem (disulfid), proteolizom (amid/peptid veza), ili enzimskom reakcijom (esteraza/glikozsidaza).
[0234] U poželjnom aspektu, reprezentativni citotoksični konjugati koji mogu da se proizvedu metodima pronalaska su antitelo / indolinobenzodiazepinsko dimerno jedinjenje, fragment antitela / indolinobenzodiazepinsko dimerno jedinjenje, faktor rasta epiderma (EGF) / indolinobenzodiazepinsko dimerno jedinjenje, melanocit-stimulirajući hormon (MSH) / indolinobenzodiazepinsko dimerno jedinjenje, tiroid-stimulirajući hormon (TSH) / indolinobenzodiazepinsko dimerno jedinjenje, somatostatin/ indolinobenzodiazepinsko dimerno jedinjenje, folat / indolinobenzodiazepinsko dimerno jedinjenje, estrogen / indolinobenzodiazepinsko dimerno jedinjenje, analog estrogena / indolinobenzodiazepinsko dimerno jedinjenje, inhibitor prostata-specifičnog membranskog antigena (PSMA) / indolinobenzodiazepinsko dimerno jedinjenje, inhibitor matriptaze / indo linobenzodiazepinsko dimerno jedinjenje, dizajnirani proteini sa ankirinskim ponovcima (DARPini) / indolinobenzodiazepinsko dimerno jedinjenje, androgen / indolinobenzodiazepinsko dimerno jedinjenje, i analog androgena / indolinobenzodiazepinsko dimerno jedinjenje.
[0235] Prema tome, u četrnaestom specifičnom primeru izvođenja, metodi pronalaska proizvode konjugat koji sadrži: citotoksično jedinjenje i sredstvo koje se vezuje za ćeliju (CBA), pri čemu je citotoksično jedinjenje kovalentno povezano sa CBA preko povezujuće grupe, i pri čemu je deo konjugata koji sadrži citotoksično jedinjenje i povezujuću grupu predstavljen bilo kojom od sledećih formula:
ili njenom farmaceutski prihvatljivom solju, pri čemu:
1
-C(Y)-N(H)- motiv u formulama (Ib') i (IIb') rezultat je reakcije imin-reaktivnog reagensa i imin-sadržavajućeg citotoksičnog jedinjenja;
X' se bira između -H, amin-protektujuće grupe, povezujuće grupe, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, opciono supstituisanog arila sa 6 do 18 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma koji se nezavisno biraju između azota, kiseonika, i sumpora, i opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P;
Y' se bira između -H, okso grupe, povezujuće grupe, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 6- do 18-članog arila, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma koji se nezavisno biraju između azota, kiseonika, i sumpora, i opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma;
R<c>je -H ili supstituisani ili nesupstituisani linearni ili granati alkil sa 1 do 4 ugljenikova atoma, ili povezujuća grupa;
R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3' i R4' se, svaki nezavisno, biraju iz grupe koja se sastoji od -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-R<c>, halogena, guanidinijuma [-NH(C=NH)NH2], -OR, -NR'R'', -NO2,-NCO, -NR'COR'', -SR, sulfoksida predstavljenog -SOR', sulfona predstavljenog -SO2R', sulfonat -SO3-M<+>, sulfat -OSO3-M<+>, sulfonamida predstavljenog -SO2NR'R'', cijano, azido, -COR', -OCOR', -OCONR'R'' i povezujuće grupe;
M je -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon, kao Na<+>;
R se, pri svakom pojavljivanju nezavisno bira iz grupe koja se sastoji od -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)nR<c>, opciono supstituisanog arila sa 6 do 18 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika i sumpora, ili opciono supstituisanog 3- do 18-članog
1
heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P;
R' i R'' se, svaki nezavisno, biraju između -H, -OH, -OR, -NHR, -NR2,-COR, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, i opciono supstituisanog 3-18-članog heterocikličnog prstena koji ima 1 do 6 heteroatoma koji se nezavisno biraju između O, S, N i P;
R<c>je -H ili supstituisani ili nesupstituisani linearni ili granati alkil sa 1 do 4 ugljenikova atoma, ili povezujuća grupa;
n je ceo broj od 1 do 24;
W se bira između C=O, C=S, CH2, BH, SO i SO2;
R6je -H, -R, -OR, -SR, -NR'R'', -NO2, halogen ili povezujuća grupa;
Z i Z' se nezavisno biraju između -(CH2)n'-, -(CH2)n'-CR7R8-(CH2)na'-,-(CH2)n'-NR9-(CH2)na'-, -(CH2)n'-O-(CH2)na'- i -(CH2)n'-S-(CH2)na'-;
n' i na' su isti ili različiti i biraju se između 0, 1, 2 i 3;
R7i R8su isti ili različiti i biraju se, svaki nezavisno, između -H, -OH, -SH, -COOH, -NHR', polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-, amino-kiseline, peptidne jedinice sa 2 do 6 amino-kiselina, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma;
R9se nezavisno bira između -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-; A i A' su isti ili različiti i biraju se nezavisno između -O-, okso (-C(=O)-), -CRR'O-, -CRR'-, -S-, -CRR'S-, -N(R5)- i -CRR'N(R5)-,
R5je pri svakom pojavljivanju nezavisno -H ili opciono supstituisani linearni ili granati alkil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma;
D i D' su isti ili različti i nezavisno se biraju iz grupe koja se sastoji od opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, amino-kiseline, peptida koji nosi 2 do 6 amino-kiselina, i polietilen glikolne jedinice (-OCH2CH2)n-;
L je odsutan, povezujuća grupa, polietilen glikolna jedinica (-OCH2CH2)n-, opciono supstituisani linearni, granati ili ciklični alkil ili alkenil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, fenil grupa, 3- do 18-člani heterociklični prsten ili 5- do 18-člani heteroaril prsten koji ima 1 do 6 heteroatoma koji se nezavisno biraju između O, S, N i P, pri čemu su alkil ili
11
alkenil opciono supstituisani povezujućom grupom; fenil ili heterociklični ili heteroaril prsten mogu opciono biti supstituisani, pri čemu supstituent može uključivati povezujuću grupu.
[0236] Reprezentativni konjugat je prikazan u nastavku ("Ab" označava CBA, kao što je antitelo):
[0237] U određenim primerima izvođenja, Y je -SO2M, -SO3M, ili -OSO3M.
[0238] U određenim primerima izvođenja, konjugati koji mogu da se sintetišu metodima pronalaska uključuju sledeće:
gde:
CBA je sredstvo koje se vezuje za ćeliju, r je ceo broj od 1 do 10, Y je -H, adukt bisulfita, hidrosulfita, metabisulfita, ili soli istog, ili -SO3M, i M je -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon.
[0239] U određenim primerima izvođenja, L je odsutan ili se bira između opciono supstituisane fenil grupe i opciono supstituisane piridil grupe, pri čemu fenil i piridil grupa nose povezujuću grupu, ili je L aminska grupa koja nosi povezujuću grupu (tj., -N(povezujuća grupa)-), ili je L linearni, granati ili ciklični alkil ili alkenil sa od 1 do 6 ugljenikovih atoma i nosi povezujuću grupu.
[0240] U petnaestom specfičnom primeru izvođenja, citotoksično jedinjenje vezano za povezujuću grupu predstavljeno je bilo kojom od sledećih formula:
ili
gde:
L', L'', i L''' su isti ili različiti, i nezavisno se biraju između -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-R<c>, halogena, guanidinijuma [-NH(C=NH)NH2], -OR, -NR'R'', -NO2, -NR'COR'', -SR, sulfoksida predstavljenog -SOR', sulfona predstavljenog -SO2R', sulfonata -SO3M, sulfata -OSO3M, sulfonamida predstavljenog -SO2NR'R'', cijano, azido, -COR', -OCOR', -OCONR'R'' i povezujuće grupe, uz uslov da je samo jedan od L', L'', i L''' povezujuća grupa; i
G se bira između -CH- ili -N-. Preostale grupe su kao što je opisano gore u četrnaestom specifičnom primeru izvođenja.
[0241] U određenim primerima izvođenja, jedan od L', L'', ili L''' je povezujuća grupa, dok su drugi -H. Poželjno, L' je povezujuća grupa, i L'' i L''' su -H.
[0242] U određenim primerima izvođenja, A i A' su, oba, -O-, R6je -OMe, i G je -CH-.
[0243] U šesnaestom specifičnom primeru izvođenja, L' je predstavljen sledećom formulom:
-W'-R<x>-V-R<y>-J,
gde:
11
W' i V su isti ili različiti u svaki je nezavisno odsutan, ili se bira između -CR<e>R<e>'-, -O-, -O-C(=O)-, -C(=O)-O-, -S-, -SO-, -SO2-, -CH2-S-, -CH2O-, -CH2NR<e>-, -O-(C=O)O-, -O-(C=O)N(R<e>)-, -N(R<e>)-, -N(R<e>)-C(=O)-, -C(=O)-N(R<e>)-, -N(R<e>)-C(=O)O-, -N(C(=O)R<e>)C(=O)-, -N(C(=O)R<e>)-, -(O-CH2-CH2)n-, -SS-, ili -C(=O)-, ili aminokiseline, ili peptida koji ima 2 do 8 amino-kiselina;
R<x>i R<y>su isti ili različiti i svaki je nezavisno odsutan ili je opciono supstituisani linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil, ili alkinil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, aril sa 6 do 10 ugljenikovih atoma ili 3- do 8-člani heterociklični prsten koji nosi 1 do 3 heteroatoma koji se biraju između O, N ili S;
R<e>i R<e'>su isti ili različiti i, biraju se između -H, linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma ili -(CH2-CH2-O)n-R<k>, pri čemu je R<k>-H, linearni, granati ciklični alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma, koji opciono nosi sekundarnu amino (npr., -NHR<101>) ili tercijarnu amino (-NR<101>R<102>) grupu ili 5- ili 6-člani azot-sadržavajući heterocikl, kao piperidin ili morfolin, pri čemu su R<101>i R<102>svaki nezavisno linearni, granati, ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma; poželjno, R<101>i R<102>su svaki nezavisno linearni ili granati alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma;
n je ceo broj od 1 do 24; i
J je kovalentno povezan sa CBA, i bira se između sukcinimida, acetamido, -S-, -SS-, -CH2S-, -CH(Me)S-, -C(Me)2S-, -NR<c1>-, -CH2NR<c1>-,-NR<c1>N-, i -C(=O)-, pri čemu je R<c1>-H ili supstituisani ili nesupstituisani linearni ili granati alkil sa 1 do 4 ugljenikova atoma.
[0244] U određenim primerima izvođenja, J je -S-, -SS-, sukcinimid, ili -C(=O)-.
[0245] U određenim primerima izvođenja, R<e'>je -H ili -Me; R<e>je linearni ili granati alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma ili -(CH2-CH2-O)n-R<k>; n je ceo broj od 2 do 8; i R<k>je -H, -Me ili -CH2CH2-NMe2, i ostale varijable su kao što je opisano gore u petnaestom specifičnom primeru izvođenja.
[0246] U određenim primerima izvođenja, V je amino-kiselina ili peptid sa 2 do 8 aminokiselina.
[0247] U određenim primerima izvođenja, V je valin-citrulin, gly-gly-gly, ili ala-leu-ala-leu.
[0248] U određenim primerima izvođenja,
W' je -O-, -N(R<e>)- ili -N(R<e>)-C(=O)-;
R<e>je H, linearni ili granati alkil koji ima 1 do 4 ugljenikova atoma, ili -(CH2-CH2-O)n-R<k>;
R<x>je linearni ili granati alkil koji ima 1 do 6 ugljenikovih atoma;
V je odsutan, -(O-CH2-CH2)n-, -C(=O)-NH-, -S-, -NH-C(=O)-;
R<y>je odsutan ili je linearni ili granati alkil koji ima 1 do 4 ugljenikova atoma; i J je -S-, -SS-, ili -C(=O)-, i ostale grupe su kao što je definisano u šesnaestom specifičnom primeru izvođenja.
[0249] U određenim primerima izvođenja,
W' je -O-, -N(R<e>)- ili -N(R<e>)-C(=O)-;
R<e>je -H, -Me, ili -(CH2-CH2-O)n-Me;
n je ceo broj od 2 do 6;
R<x>je linearni ili granati alkil koji nosi 1 do 6 ugljenikovih atoma;
V i R<y>su odsutni; i
J je -C(=O)-. Ostale grupe su kao što je definisano u šesnaestom specifičnom primeru izvođenja.
[0250] U sedamnaestom specifičnom primeru izvođenja, L' u šesnaestom specifičnom primeru izvođenja predstavljeno je sledećom formulom:
-W'-[CR1"R2"]a-V-[Cy]0-1-[CR3"R4"]b-C(=O)-,
gde:
R1", R2", i R3"su, svaki nezavisno -H ili linearni ili granati alkil koji nosi 1 do 4 ugljenikova atoma, poželjno -Me;
R4"je -H, linearni ili granati alkil koji nosi 1 do 4 ugljenikova atoma (poželjno -Me), -SO3H, ili -SO3-M<+>, pri čemu je M<+>farmaceutski prihvatljivi katjon;
a je ceo broj od 0-5 (npr., od 0 do 2, 3, 4, ili 5), i b je ceo broj od 0-6 (npr., od 0 do 3, 4, 5, ili 6); i,
Cy je opciono supstituisani 5-člani heterociklični prsten koji nosi N heteroatom, poželjno Cy je
11
[0251] U određenim primerima izvođenja, na primer u šesnaestom ili sedamnaestom specifičnom primeru izvođenja, W' je -N(R<e>)-.
[0252] U određenim primerima izvođenja, na primer u šesnaestom ili sedamnaestom specifičnom primeru izvođenja, R<e>je -(CH2-CH2-O)2-6-R<k>, pri čemu je R<k>linearni ili granati alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma.
[0253] U određenim primerima izvođenja, na primer u šesnaestom ili sedamnaestom specifičnom primeru izvođenja, V je -S- ili -SS-.
[0254] U osamnaestom specifičnom primeru izvođenja, L' u šesnaestom ili sedamnaestom specifičnom primeru izvođenja predstavljeno je sledećom formulom:
- NR<e>-[CR1"R2"]a-S-[CR3"R4"]b-C(=O)-.
[0255] U određenim primerima izvođenja, na primer u šesnaestom do sedamnaestom specifičnom primeru izvođenja, konjugat je:
ili
gde je r ceo broj od 1 do 10, Y je -SO3M, i M je -H ili
farmaceutski prihvatljivi katjon.
11
[0256] U određenim primerima izvođenja, na primer u šesnaestom do osamnaestom specifičnom primeru izvođenja, antitelo je huMy9-6.
[0257] U devetnaestom specifičnom primeru izvođenja, L' u šesnaestom ili sedamnaestom specifičnom primeru izvođenja predstavljeno je sledećom formulom:
-NR<e>-[CR1"R2"]a-S-Cy-[CR3"R4"]b-C(=O)-.
[0258] U određenim primerima izvođenja, na primer u šesnaestom, sedamnaestom ili devetnaestom specifičnom primeru izvođenja, konjugat je:
ili
pri čemu je r ceo broj od 1 do 10, Y je -SO3M, i M je -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon.
[0259] U određenim primerima izvođenja, na primer u šesnaestom, sedamnaestom i devetnaestom specifičnom primeru izvođenja, antitelo je huMy9-6.
[0260] U dvadesetom specifičnom primeru izvođenja, citotoksično jedinjenje vezano za povezujuću grupu predstavljeno je sledećom formulom:
11
gde:
W' je odsutan ili se bira između -O-, -N(R<e>)-, -N(R<e>)-C(=O)-,-N(C(=O)R<e>)-, -S-, -CH2-S-, ili -CH2NR<e>-;
R<x>je odsutan ili se bira između linearnog, granatog ili cikličnog alkila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma;
R<e>je -H, linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma ili -(CH2-CH2-O)n-R<k>, pri čemu je R<k>-H, linearni, granati ciklični alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma, koji opciono nosi sekundarnu amino (npr., -NHR<101>) ili tercijarnu amino (-NR<101>R<102>) grupu ili 5 ili 6-člani azot-sadržavajući heterocikl, kao piperidin ili morfolin, pri čemu su R<101>i R<102>svaki nezavisno linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma;
Z<s>je povezan sa CBA, i on je veza ili -SR<m>-;
R<m>je R<d>ili supstituisani linearni ili granati alkil sa 1 do 4 ugljenikova atoma, koji nosi reaktivni estar odabran između N-hidroksisukcinimid estara, N-hidroksiftalimid estara, N-hidroksi sulfo-sukcinimid estara, para-nitrofenil estara, dinitrofenil estara, i pentafluorofenil estara;
R<d>se bira između fenil, nitrofenil, dinitrofenil, karboksinitrofenil, piridil ili nitropiridil; i
n je ceo broj od 1 do 24; i ostale varijable su kao što je opisano gore u osmom ili petnaestom specifičnom primeru izvođenja.
[0261] U dvadeset prvom specifičnom primeru izvođenja, citotoksično jedinjenje vezano za povezujuću grupu predstavljeno je sledećom formulom:
11
gde:
W' je odsutan ili se bira između -O-, -N(R<e>)-, -N(R<e>)-C(=O)-,-N(C(=O)R<e>)-, -S-, -CH2-S-, ili -CH2NR<e>-;
R<x>je odsutan ili se bira između linearnog, granatog ili cikličnog alkila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma;
R<e>je -H, linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma ili -(CH2-CH2-O)n-R<k>, pri čemu je R<k>-H, linearni, granati ciklični alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma, koji opciono nosi sekundarnu amino (npr., -NHR<101>) ili tercijarnu amino (-NR<101>R<102>) grupu ili 5 ili 6-člani azot-sadržavajući heterocikl, kao piperidin ili morfolin, pri čemu su R<101>i R<102>svaki nezavisno linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma;
n je ceo broj od 2 do 6;
Z<s>je povezan sa CBA, i bira se između:
veze;
11
��
gde:
q je ceo broj od 1 do 5; i,
M je -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon, kao Na<+>ili K<+>.
[0262] U određenim primerima izvođenja, Z<s>je predstavljen bilo kojom od sledećih formula:
[0263] U određenim primerima izvođenja, kao što je 21. specifični primer izvođenja, W' je -N(R<e>)-.
[0264] U određenim primerima izvođenja, kao što je 21. specifični primer izvođenja, R<e>je -(CH2-CH2-O)n-R<k>, pri čemu je R<k>-H, linearni, granati ciklični alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma.
[0265] U određenim primerima izvođenja, kao što je 21. specifični primer izvođenja, R<k>je -H ili -Me, n je 4, i q je 2.
[0266] U određenim primerima izvođenja, kao što je 21. specifični primer izvođenja, R<x>je linearni ili granati alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma.
[0267] U određenim primerima izvođenja, kao što je 21. specifični primer izvođenja, R<x>je -(CH2)p-(CR<f>R<g>)-, pri čemu se R<f>i R<g>, svaki nezavisno, biraju između H ili linearnog ili granatog alkila sa 1 do 4 ugljenikova atoma; i p je 0, 1, 2 ili 3.
[0268] U određenim primerima izvođenja, kao što je 21. specifični primer izvođenja, R<f>i R<g>su isti ili različiti, i biraju se između -H i -Me; i p je 1.
[0269] U dvadeset drugom specifičnom pimeru izvođenja, konjugat formule (VIIIb') i (Xb') opisanih u dvadeset prvom specifičnom primeru izvođenja, varijable su kako je opisano dole:
Y je -SO3M;
M je -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon (npr., Na<+>);
X' i Y' su oba -H;
A i A' su oba -O-;
R6je -OMe; i
R<x>je linearni ili granati alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma.
[0270] U određenim primerima izvođenja, kao što su 14. do 21. specifični primer izvođenja, Y se bira između -SO3M, -SO2M i sulfata -OSO3M. Poželjno, Y je -SO3M. Poželjno, M je -H, Na<+>ili K<+>.
[0271] U određenim primerima izvođenja, kao što su 14. do 22. specifični primer izvođenja, W je, kada je prisutan, C=O.
[0272] U određenim primerima izvođenja, kao što su 14. do 22. specifični primer izvođenja, Z i Z' su, kada su prisutni, -CH2-.
[0273] U određenim primerima izvođenja, kao što su 14. do 22. specifični primer izvođenja, X' se bira iz grupe koja se sastoji od -H, -OH, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, fenila, povezujuće grupe, i amin-protektujuće grupe. U određenim primerima izvođenja, X' je -H, -OH, -Me ili povezujuća grupa. Poželjno, X' je -H.
[0274] U određenim primerima izvođenja, kao što su 14. do 22. specifični primer izvođenja, Y' se bira iz grupe koja sadrži -H, okso grupu, supstituisani ili nesupstituisani linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma. Poželjno, Y' je -H ili okso. Poželjnije, -H.
[0275] U određenim primerima izvođenja, kao što su 14. do 22. specifični primer izvođenja, A i A' su isti ili različiti, i biraju se između -O-, -S-, -N(R5)-, i okso (C=O). Poželjno, A i A' su isti ili različiti, i biraju se između -O- i -S-. Poželjnije, A i A' su -O-.
[0276] U određenim primerima izvođenja, kao što su 14. do 22. specifični primer izvođenja, D i D' su, kada su prisutni, isti ili različiti, i nezavisno se biraju između polietilen glikolne jedinice (-OCH2CH2)n, gde je n ceo broj od 1 do 24, amino-kiseline, peptida koji nosi 2 do 6 aminokiselina, ili linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, pri čemu su alkil, alkenil i alkinil opciono supstituisani jednim ili većim brojem supstituenata koji se nezavisno biraju iz grupe koja se sastoji od halogena, -OR, -NR'COR", -SR i -COR'. Poželjno, D i D' su linearni ili granati alkil sa 1 do 4 ugljenikova atoma.
[0277] U dvadeset trećem specifičnom primeru izvođenja, za jedinjenja formule (Ibb') ili (IIBb'), opisana u dvadesetom specifičnom primeru izvođenja, varijable su kako je opisano dole:
Y je -SO3M;
M je -H ili Na<+>;
X' i Y' su oba -H;
A i A' su oba -O-;
R6je -OMe;
R<x>je linearni ili granati alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma.
[0278] Poželjno, R<x>je -(CH2)p-(CR<f>R<g>)-, pri čemu se R<f>i R<g>svaki nezavisno biraju između -H ili linearnog ili granatog alkila sa 1 do 4 ugljenikova atoma; p je 0, 1, 2 ili 3. Poželjnije, R<f>i R<g>su isti ili različiti, i biraju se između -H i -Me; i p je 1.
[0279] U dvadeset četvrtom specifičnom primeru izvođenja, konjugat predmetnog pronalaska kako je opisano u četrnaestom, petnaestom, ili dvadeset prvom specifičnom primeru izvođenja predstavljen je sledećim:
Y je -SO3M, pri čemu je M -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon (npr., Na<+>);
W je C=O;
R1, R2, R1', R2', R4i R4' su -H;
12
jedan od R3, ili R3' je opciono povezujuća grupa i drugi je -H;
R6je -OMe;
Z i Z' su -CH2;
X' je -H;
Y' je -H; i
A i A' su -O-.
[0280] U bilo kojem od specifičnih primera izvođenja za konjugate pronalaska, gore, kao što su 14. do 24. specifični primer izvođenja, Y se bira između -SO3M, -SO2M i sulfata -OSO3M. Poželjno, Y je -SO3M.
[0281] U određenim primerima izvođenja, kao što su 14. do 24. specifični primer izvođenja, M je -H, Na<+>ili K<+>.
[0282] U bilo kojem od specifičnih primera izvođenja za konjugate pronalaska, gore, kao što su 14. do 24. specifični primer izvođenja, W je, kada je prisutan, C=O.
[0283] U bilo kojem od specifičnih primera izvođenja za konjugate pronalaska, gore, kao što su 14. do 24. specifični primer izvođenja, Z i Z' su, kada su prisutni, -CH2-.
[0284] U bilo kojem od specifičnih primera izvođenja za konjugate pronalaska, gore, kao što su 14. do 24. specifični primer izvođenja, X' se bira iz grupe koja se sastoji od -H, -OH, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, fenila, povezujuće grupe, i amin-protektujuće grupe. U određenim primerima izvođenja, X' je -H, -OH, -Me ili povezujuća grupa. U određenim primerima izvođenja, X' je -H.
[0285] U bilo kojem od specifičnih primera izvođenja za konjugate pronalaska, gore, kao što su 14. do 24. specifični primer izvođenja, Y' se bira iz grupe koja sadrži -H, okso grupu, supstituisani ili nesupstituisani linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma. U određenim primerima izvođenja, Y' je -H ili okso. U određenim primerima izvođenja, Y' je -H.
[0286] U bilo kojem od specifičnih primera izvođenja za konjugate pronalaska, gore, kao što su 14. do 24. specifični primer izvođenja, A i A' su isti ili različiti i biraju se između -O-, -S-, -N(R5)-i okso (C=O). U određenim primerima izvođenja, A i A' su isti ili različiti i biraju se između -O- i -S-. U određenim primerima izvođenja, A i A' su -O-.
[0287] U bilo kojem od specifičnih primera izvođenja za konjugate pronalaska, gore, kao što su 14. do 24. specifični primer izvođenja, D i D' su, kada su prisutni, isti ili različiti i nezavisno se biraju između polietilenglikolne jedinice (-OCH2CH2)n, pri čemu je n ceo broj od 1 do 24, amino-kiseline, peptida koji nosi 2 do 6 amino-kiselina, ili linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, pri čemu su alkil, alkenil i alkinil opciono supstituisani jednim ili većim brojem supstituenata koji se nezavisno biraju iz grupe koja sadrži halogen, -OR, -NR'COR", -SR i -COR'. U određenim primerima izvođenja, D i D' su linearni ili granati alkil koji nosi 1 do 4 ugljenikova atoma.
[0288] U određenim primerima izvođenja, konjugat iz bilo kojeg od opisanih primera izvođenja, kao što su 14. do 24. specifični primer izvođenja, može uključivati 1-10 citotoksičnih jedinjenja, 2-9 citotoksičnih jedinjenja, 3-8 citotoksičnih jedinjenja, 4-7 citotoksičnih jedinjenja, ili 5-6 citotoksičnih jedinjenja, svako citotoksično jedinjenje uključuje povezujuću grupu koja povezuje citotoksično jedinjenje sa CBA, i svako citotoksično jedinjenje na konjugatu je isto.
[0289] U određenim primerima izvođenja, konjugat iz bilo kojeg od opisanih primera izvođenja, kao što su 14. do 24. specifični primer izvođenja, može uključivati 1-10 citotoksičnih jedinjenja, 2-9 citotoksičnih jedinjenja, 3-8 citotoksičnih jedinjenja, 4-7 citotoksičnih jedinjenja, ili 5-6 citotoksičnih jedinjenja, svako citotoksično jedinjenje uključuje povezujuću grupu koja povezuje citotoksično jedinjenje sa CBA, i svako citotoksično jedinjenje na konjugatu je isto.
[0290] U određenim primerima izvođenja, konjugat iz bilo kojeg od opisanih primera izvođenja, kao što su 14. do 24. specifični primer izvođenja, može uključivati ukupno 1-10 citotoksičnih jedinjenja i (nemodifikovanih) imin-sadržavajućih citotoksičnih jedinjenja, ukupno 2-9 citotoksičnih jedinjenja i (nemodifikovanih) imin-sadržavajućih citotoksičnih jedinjenja, ukupno 3-8 citotoksičnih jedinjenja i (nemodifikovanih) imin-sadržavajućih citotoksičnih jedinjenja, ukupno 4-7 citotoksičnih jedinjenja i (nemodifikovanih) iminsadržavajućih citotoksičnih jedinjenja, ili ukupno 5-6 citotoksičnih jedinjenja i (nemodifikovanih) imin-sadržavajućih citotoksičnih jedinjenja, svako citotoksično jedinjenje ili (nemodifikovano) imin-sadržavajuće citotoksično jedinjenje sadrži povezujuću grupu koja povezuje citotoksično jedinjenje ili (nemodifikovano) imin-sadržavajuće citotoksično jedinjenje sa CBA, i svako citotoksično jedinjenje ili (nemodifikovano) imin-sadržavajuće citotoksično jedinjenje na konjugatu je isto (osim po (bisulfitnoj) modifikaciji).
[0291] U svakom od primera izvođenja konjugata, kao što su 14. do 24. specifični primer izvođenja, sredstvo koje se vezuje za ćeliju može da se vezuje za ciljne ćelije koje se biraju između tumorskih ćelija, virusom zaraženih ćelija, ćelija zaraženih mikroorganizmima, ćelija zaraženih parazitima, autoimunskih ćelija, aktiviranih ćelija, mijeloidnih ćelija, aktiviranih T-
12
ćelija, B ćelija, ili melanocita; ćelija koje eksprimiraju CD4, CD6, CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD37, CD38, CD40, CD44, CD56, EpCAM, CanAg, CALLA, ili Her-2 antigene; Her-3 antigene; ili ćelija koje eksprimiraju receptor za insulinski faktor rasta, receptor za faktor rasta epiderma i folatni receptor.
[0292] U bilo kojem od primera izvođenja konjugata, kao što su 14. do 24. specifični primer izvođenja, sredstvo koje se vezuje za ćeliju može biti antitelo, jednolančano antitelo, fragment antitela koji se specifično vezuje za ciljnu ćeliju, monoklonsko antitelo, jednolančano monoklonsko antitelo, ili fragment monoklonskog antitela koji se specifično vezuje za ciljnu ćeliju, himerno antitelo, fragment himernog antitela koji se specifično vezuje za ciljnu ćeliju, domensko antitelo, fragment domenskog antitela koji se specifično vezuje za ciljnu ćeliju, limfokin, hormon, vitamin, faktor rasta, faktor koji stimuliše kolonije, ili molekul koji transportuje nutrijent.
[0293] Antitelo može biti antitelo sa zamenjenim površinskim reziduama, jednolančano antitelo sa zamenjenim površinskim reziduama, ili fragment antitela sa zamenjenim površinskim reziduama.
[0294] Antitelo može biti monoklonsko antitelo, jednolančano monoklonsko antitelo, ili fragment monoklonskog antitela.
[0295] Antitelo može biti humanizovano antitelo, humanizovano jednolančano antitelo, ili fragment humanizovanog antitela.
[0296] U bilo kojem od specifičnih primera izvođenja datih u ovom tekstu, kao što su specifični primeri izvođenja 1-24, imin-reaktivni reagens se bira iz grupe koja se sastoji od sulfita (H2SO3, H2SO2ili so HSO3-, SO3<2->ili HSO2<->formirana sa katjonom), metabisulfita (H2S2O5ili so S2O52-formirana sa katjonom), mono, di, tri, i tetra-tiofosfata (PO3SH3, PO2S2H3, POS3H3, PS4H3ili so PO3S<3->, PO2S2<3->, POS3<3->ili PS4<3->formirana sa katjonom), tio fosfatnih estara ((R<i>O)2PS(OR<i>), R<i>SH, R<i>SOH, R<i>SO2H, R<i>SO3H), različitih amina (hidroksil amin (npr., NH2OH), hidrazina (npr., NH2NH2), NH2O-R<i>, R<i,>NH-R<i>, NH2-R<i>), NH2-CO-NH2, NH2-C(=S)-NH2'tiosulfata (H2S2O3ili so S2O3<2->formirana sa katjonom), ditionita (H2S2O4ili so S2O4<2->formirana sa katjonom), fosforoditioata (P(=S)(OR<k>)(SH)(OH) ili njegova so formiran sa katjonom), hidroksamske kiseline (R<k>C(=O)NHOH ili so formiran sa katjonom), hidrazida (R<k>CONHNH2), formaldehid sulfoksilata (HOCH2SO2H ili so HOCH2SO2<->formirana sa katjonom, kao HOCH2SO2-Na<+>), glikovanog nukleotida (kao GDP-manoza), fludarabina ili njihove mešavine, pri čemu su R<i>i R<i'>svaki nezavisno linearni ili granati alkil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma i supstituisani su sa najmanje jednim supstituentom koji se bira između -
12
N(R<j>)2, -CO2H, -SO3H, i -PO3H; R<i>i R<i'>mogu biti dodatno supstituisani supstituentom za alkil opisanim u ovom tekstu; R<j>je linearni ili granati alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma; R<k>je linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, aril, heterociklil ili heteroaril.
[0297] Poželjno, imin-reaktivni reagens je sulfit. Poželjnije, imin-reaktivni reagens je NaHSO3ili KHSO3.
[0298] U bilo kojem od specifičnih primera izvođenja datih u ovom tekstu, kao što su specifični primeri izvođenja 1-24, koristi se oko 0.1 do oko 30 molarnih ekvivalenata imin-reaktivnog reagensa prema imin-sadržavajućem citotoksičnom jedinjenju. U određenim primerima izvođenja, koristi se oko 1 do oko 10 molarnih ekvivalenata imin-reaktivnog reagensa prema imin-sadržavajućem citotoksičnom jedinjenju. U određenim primerima izvođenja, koristi se oko 3 do oko 5 molarnih ekvivalenata imin-reaktivnog reagensa prema imin-sadržavajućem citotoksičnom jedinjenju.
[0299] U bilo kojem od specifičnih primera izvođenja datih u ovom tekstu, kao što su specifični primeri izvođenja 1-24, bifunkcionalno unakrsno povezujuće sredstvo povezuje citotoksično sredstvo sa sredstvom koje se vezuje za ćeliju preko tioetarske veze, i može imati maleimidoili haloacetil-baziranu komponentu, pri čemu se bifunkcionalno unakrsno povezujuće sredstvo koje ima maleimido-baziranu komponentu bira između: N-sukcinimidil 4-(maleimidometil)cikloheksankarboksilata (SMCC), N-sukcinimidil-4-(N-maleimidometil)-cikloheksan-1-karboksi-(6-amidokaproata) (LC-SMCC), N-sukcinimidil estra κmaleimidoundekanske kiseline (KMUA), N-sukcinimidil estra γ-maleimidobuterne kiseline (GMBS), N-hidroksisukcinimid estra ε-maleimidokapronske kiseline (EMCS), mmaleimidobenzoil-N-hidroksisukcinimid estra (MBS), N-(α-maleimidoacetoksi)-sukcinimid estra (AMAS), sukcinimidil-6-(β-maleimidopropionamido)heksanoata (SMPH), N-sukcinimidil 4-(p-maleimidofenil)-butirata (SMPB), N-(p-maleimidofenil)izocijanata (PMPI), N-sukcinimidil-4-(4-nitropiridil-2-ditio)butanoata; i, pri čemu se bifunkcionalno unakrsno povezujuće sredstvo koje ima haloacetil-baziranu komponentu bira između: N-sukcinimidil-4-(jodoacetil)-aminobenzoata (SIAB), N-sukcinimidil jodoacetata (SIA), N-sukcinimidil bromoacetata (SBA), i N-sukcinimidil 3-(bromoacetamido)propionata (SBAP), bis-maleimidopolietilenglikola (BMPEO), BM(PEO)2, BM(PEO)3, N-(βmaleimidopropiloksi)sukcinimid estra (BMPS), 5-maleimidovalerinske kiseline NHS, HBVS, 4-(4-N-maleimidofenilbuterna kiselina hidrazid•HCl (MPBH), sukcinimidil-(4-vinilsulfonil)benzoata (SVSB), ditiobis-maleimidoetana (DTME), 1,4-bis-maleimidobutana
12
(BMB), 1,4-bismaleimidil-2,3-dihidroksibutana (BMDB), bis-maleimidoheksana (BMH), bismaleimidoetana (BMOE), sulfosukcinimidil 4-(N-maleimido-metil)cikloheksan-1-karboksilata (sulfo-SMCC), sulfosukcinimidil(4-jodo-acetil)aminobenzoata (sulfo-SIAB), mmaleimidobenzoil-N-hidroksisulfosukcinimid estra (sulfo-MBS), N-(γmaleimidobutiriloksi)sulfosukcinimid estra (sulfo-GMBS), N-(εmaleimidokaproiloksi)sulfosukcimido estra (sulfo-EMCS), N-(κmaleimidoundekanoiloksi)sulfosukcinimid estra (sulfo-KMUS), sulfosukcinimidil 4-(pmaleimidofenil)butirata (sulfo-SMPB), CX1-1, sulfo-Mal i PEGn- Mal.
[0300] U određenim primerima izvođenja, bifunkcionalno unakrsno povezujuće sredstvo bira se iz grupe koja se sastoji od SMCC, sulfo-SMCC, BMPS, GMBS, SIA, SIAB, N-sukcinimidil-4-(4-nitropiridil-2-ditio)butanoata, bis-maleimidoheksana ili BMPEO.
[0301] U bilo kojem od primera izvođenja, kao što su specifični primeri izvođenja 1-24, konjugat se prečišćava filtracijom sa tangencijalnim protokom, adsorptivnom hromatografijom, adsorptivnom filtracijom, selektivnom precipitacijom, neapsorptivnom filtracijom ili njihovom kombinacijom. Poželjno, konjugat se prečišćava filtracijom sa tangencijalnim protokom i/ili adsorptivnom hromatografijom.
[0302] U određenim primerima izvođenja, kao što su specifični primeri izvođenja 1-24, sredstvo koje se vezuje za ćeliju (CBA), koje nosi tiol-reaktivnu grupu je:
12
[0303] Jedinjenja ili konjugati napravljeni metodima pronalaska specifično uključuju:
12
�
gde je r ceo broj od 1 do 10, Y je -H ili -SO3M, i M je -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon.
[0304] U 25. specifičnom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje metod pripremanja konjugata sledeće formule:
1 1
ili
metod uključuje reakciju citotoksičnog jedinjenja sledeće formule,
sa modifikovanim CBA sledeće formule, respektivno, na pH od oko 4 do oko 9,
1 2
gde:
r je ceo broj od 1 do 10;
Y je odlazeća grupa, i to je sulfit (HSO3, HSO2ili so HSO3-, SO3<2->ili so HSO2<->formirana sa katjonom), metabisulfit (H2S2O5ili so S2O5<2->formirana sa katjonom), mono-, di-, tri-, i tetra- tiofosfat (PO3SH3, PO2S2H2, POS3H2, PS4H2ili so PO -3S<3>, PO2S2<3->, POS3<3->ili PS4<3->formirana sa katjonom), tio fosfatni estar (R<i>O)2PS(OR<i>), R'S-, R<i>SO, R<i>SO2, R<i>SO3, tiosulfat (HS2O3ili so S2O3<2->formirana sa katjonom), ditionit (HS2O4ili so S2O4<2->formirana sa katjonom), fosforoditioat (P(=S)(OR<k'>)(S)(OH) ili njegova so formirana sa katjonom), hidroksamska kiselina (R<k'>C(=O)NOH ili so formirana sa katjonom), formaldehid sulfoksilat (HOCH2SO2<->ili so HOCH2SO2<->formirana sa katjonom, kao HOCH2SO2-Na<+>) ili njihova mešavina, pri čemu je R<i>linearni ili granati alkil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma i supstituisan je najmanje jednim supstituentom koji se bira između -N(R<j>)2, -CO2H, -SO3H, i -PO3H; R<i>može dodatno biti supstituisan supstituentom za alkil opisanim u ovom tekstu; R<j>je linearni ili granati alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma; R<k'>je linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, aril, heterociklil ili heteroaril; poželjno Y je -SO3M; i M je -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon.
[0305] U određenim primerima izvođenja, Y je -SO3M; i M je -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon.
[0306] U određenim primerima izvođenja, citotoksično jedinjenje se proizvodi reakcijom iminreaktivnog reagensa sa imin-sadržavajućim citotoksičnim jedinjenjem sledeće formule:
1
[0307] U određenim primerima izvođenja, CBA je huMy9-6.
[0308] U 26. specifičnom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje metod pripremanja konjugata sledeće formule:
ili
1 4
metod uključuje reakciju CBA sa imin-sadržavajućim citotoksičnim jedinjenjem, iminreaktivnim reagensom, i bifunkcionalnim unakrsno povezujućim sredstvom koje sadrži povezujuću grupu, da se formira konjugat, gde:
imin-sadržavajuće citotoksično jedinjenje je:
bifunkcionalno unakrsno povezujuće sredstvo je:
(X = -H ili -NO2),
ili
respektivno, i,
imin-reaktivni reagens se bira između: sulfita (H2SO3, H2SO2ili so HSO3-, SO3<2->ili HSO2<->formirana sa katjonom), metabisulfita (H2S2O5ili so S2O5<2->formirana sa katjonom), mono, di, tri, i tetra-tiofosfata (PO3SH3, PO2S2H3, POS3H3, PS4H3ili so PO3S<3->, PO2S2<3->, POS3<3->ili PS4<3->formirana sa katjonom), tio fosfatnih estara ((R<i>O)2PS(OR<i>), R<i>SH, R<i>SOH, R<i>SO2H, R<i>SO3H), različitih amina (hidroksil amin (npr., NH2OH), hidrazin (npr., NH2NH2), NH2O-R<i>, R<i,>NH-R<i>, NH2-R<i>), NH2-CO-NH2, NH2-C(=S)-NH2'tiosulfata (H2S2O3ili so S2O3<2->formirana sa katjonom), ditionita (H2S2O4ili so S2O4<2->formirana sa katjonom), fosforoditioata (P(=S)(OR<k>)(SH)(OH) ili
1
njegova so formirana sa katjonom), hidroksamske kiseline (R<k>C(=O)NHOH ili so formirana sa katjonom), hidrazida (R<k>CONHNH2), formaldehid sulfoksilata (HOCH2SO2H ili so HOCH2SO2<->formirana sa katjonom, kao HOCH2SO2-Na<+>), glikovanog nuklelotida (kao GDP-manoza), fludarabina ili njihove mešavine, gde su R<i>i R<i'>svaki nezavisno, linearni ili granati alkil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma i supstituisani su najmanje jednim supstituentom koji se bira između -N(R<j>)2, -CO2H, -SO3H, i -PO3H; R<i>i R<i'>mogu dodatno biti opciono supstituisani supstituentom za alkil opisanim u ovom tekstu; R<j>je linearni ili granati alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma; R<k>je linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, aril, heterociklil ili heteroaril.
[0309] U određenim primerima izvođenja, Y je -SO3M; i M je -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon.
[0310] U određenim primerima izvođenja, CBA je huMy9-6.
IN VITRO CITOTOKSIČNOST JEDINJENJA I KONJUGATA
[0311] Citotoksična jedinjenja i konjugati sredstvo koje se vezuje za ćeliju-lek, proizvedeni metodima pronalaska mogu se procenjivati u pogledu sposobnosti da suprimiraju proliferaciju različitih kancerskih ćelijskih linija in vitro. Na primer, ćelijske linije kao što su ćelijska linija humanog karcinoma kolona COLO 205, ćelijska linija rabdomiosarkoma RH-30, i ćelijska linija multiplog mijeloma MOLP-8 mogu se koristiti za procenu citotoksičnosti ovih jedinjenja i konjugata. Ćelije koje će se procenjivati mogu se izložiti delovanju jedinjenja ili konjugata tokom 1-5 dana i frakcije preživelih ćelija se zatim mere u direktnim testovima, poznatim metodima. Iz rezultata testova mogu zatim da se izračunaju IC50vrednosti. Alternativno ili dodatno, in vitro pretraga senzitivnosti ćelijske linije, kao što je ona koju je opisao U.S. National Cancer Institute (vidi Voskoglou-Nomikos et al., 2003, Clinical Cancer Res. 9: 4227-4239) može se koristiti kao jedan od vodiča za određivanje tipova kancera koji mogu biti osetljivi na tretman jedinjenjima ili konjugatima proizvedenim metodima pronalaska.
[0312] Primeri in vitro potencije i ciljne specifičnosti konjugata antitela i citotoksičnog sredstva, proizvedenog metodima predmetnog pronalaska, prikazani su na SL 17. Svi konjugati su izuzetno citotoksični za antigen-pozitivne kancerske ćelije, sa IC50u niskom pikomolarnom opsegu. Antigen-negativne ćelijske linije ostaju vijabilne kada se izlože istim konjugatima. Indolinobenzodiazepinski dimeri pokazali su ciljno specifično potenciju tako što su bili 160 puta manje potentni kada su bili blokirani nekonjugovanim antitelom huMy9-6 (anti-CD33)
1
(SL. 17) i 40 manje potentni kada su bili blokirani nekonjugovanim antitelom FOLR1 (antifolat-receptorsko antitelo) (rezultat nije prikazan). Na primer, huMy9-6-SPDB-1f konjugat koji nosi bisulfitne adukte ubijao je antigen-pozitivne HL60/QC ćelija sa IC50vrednošću od 10.5 pM, dok je dodavanje nekonjugovanog huMy9-6 antitela smanjilo ovaj citotoksični efekat (IC50= 1.69 nM), čime se pokazala specifičnost prema antigenu (SL.17A). Pored toga, huMy9-6-SPDB-1f konjugat je visoko potentan i prema HL60/ATCC ćelijskoj liniji, sa IC50vrednošću od 21 pM i NB-4 ćelijskoj liniji, sa IC50vrednošću od 190 pM (SL.17B i 17C).
[0313] Efekat konjugacije na vezivanje antitela meren je upoređivanjem vezivanja nekonjugovanog huMy9-6 antitela i huMy9-6-SPDB-1f konjugata za HL60/QC ćelijsku liniju (SL. 18). FACS analiza pokazala je da nema promene u sposobnosti vezivanja konjugata u odnosu na "golo" antitelo, što ukazuje da vezivanje nije kompromitovano konjugacijom citotoksičnog sredstva sa antitelom.
[0314] U jednom primeru, meri se in vivo efikasnost konjugata sredstvo koje se vezuje za ćeliju/citotoksično sredstvo. "Nude" miševi koji nose humane HL60/QC tumore tretirani su huMy9-6-SPDB-1f konjugatom i zapažena je značajna regresija tumora pri većem broju doza, dok su tumori u netretiranim životinjama brzo rasli (SL. 19). Aktivnost je zapažena u tako malim dozama kao što su doze od 20 µg/kg, što je najmanje 35 puta niža doza od maksimalne tolerisane doze.
[0315] Efekat iminskog zasićenja na tolerabilnost prikazan je u Tabeli 9. Di-imin huFOLR1-lek1 testiran je pri većem broju doza za koje je nađeno da su sve visoko toksične, uz ostavljanje preživelih samo u grupi testiranoj najnižom dozom od 50 µg/kg. Nasuprot tome, nađeno je da su delimično redukovani mono-imin huFOLR1-lek2 i huFOLR1-SPDB-IGN (huFOLR1-SPDB-1f) konjugati imali značajno poboljšanu tolerabilnost, pri čemu je huFOLR1-SPDB-IGN (huFOLR1-SPDB-1f) konjugat pokazao 100% preživljavanja životinja pri najvišim ispitivanim dozama od 560 µg/kg.
PRIMERI
PRIMER 1
[0316] Humanizovano My9-6 antitelo u dozi od 2 mg/ml konjugovano je sa 9 molarnih ekvivalenata 2-NHS estra (jedinjenje 2), 3 h na 25°C u 85% PBS, pH 7.4, koji sadrži 15% DMA (v/v) i zatim prečišćeno na G25 desalinizujućoj koloni u PBS, pH 7.4, da bi se uklonio neodreagovali ili hidrolizovani, nekonjugovani lek. Konjugat se dijalizira u puferu sa 10 mM histidina, 250 mM glicina, pH 6.5, koji sadrži 1% saharozu. Odnos lek/antitelo (drug/antibody
1
ratio, DAR) u konjugatu određen je kao 1.4 DAR na osnovu UV apsorbance na 280 i 320 nm i izračunavanja uz korišćenje ekstinkcionih koeficijenata leka i antitela na 280 nm i 320 nm.
[0317] Konjugat je analiziran u pogledu % monomera korišćenjem hromatografije zasnovane na veličini čestica (size exclusion chromatography, SEC), na TSK-Gel G300SWXL koloni (7.8 mm x 300 mm, 5 µm veličina čestica) korišćenjem izokratske mobilne faze od 400 mm natrijum perhlorata, 150 mM kalijum fosfatnog pufera, pH 7.0, pri 1 ml/min. Procenti monomera (% monomera) i agregata određivani su praćenjem UV apsorbance svih vrsta antitela na 280 nm i merenjem područja ispod krive (area-under-the-curve, AUC) pika svakog antitela. Pored toga, procenti (%) 2 leka na monomeru i agregatu određivani su praćenjem UV apsorbance svih vrsta antitela na 320 nm i 280 nm i merenjem AUC pika svakog antitela. % monomera huMy9-6-2 konjugata koji sadrži 1.4 DAR bio je 91%. % 2 na monomeru bio je 80%.
[0318] Za test slobodnog (nekonjugovanog) leka, konjugat se ekstrahuje acetonom da se ukloni protein, osuši i rekinstituiše u mobilnoj fazi i injektira na VYDAC 208TP C8 reverzno-faznu HPLC kolonu (4.6 x 250 mm, 7 µm veličina čestica) korišćenjem linearnog gradijenta 20% acetonitrila i 80% dejonizovane vode, do 100% acetonitrila, sve sadrži 0.025% sirćetne kiseline, pri 1 ml/min tokom 48 min i poredi sa lek-metil estar standardima. Procenat slobodnog, nekonjugovanog leka u konjugatu određen je kao <1% u odnosu na konjugovani lek.
[0319] huMy9-6-2 konjugat sa odnosom lek/antitelo 1.4 (DAR) analizira se masenom spektrometrijom (mass spectrometry, MS) posle deglikozilacije (SL. 1A). MS konjugata pokazala je nekonjugovano antitelo (D0) kao najveći pik, uz manji D1 pik (antitelo sa 1 vezanim lekom), i mnogo manjim D2 i D3 pikovima za 2 i 3 vezana leka po antitelu. Efikasnost konjugacije bila je niska sa konjugatom DAR 1.4 posle konjugacije sa devetostrukim molarnim viškom 2-NHS estra u odnosu na antitelo.
PRIMER 2
[0320] Za konjugaciju 2-NHS estra (jedinjenje 2) korišćenjem natrijum bisulfita, 2-NHS estar (jedinjenje 2) se preinkubira sa 0.9 molarnih ekvivalenata natrijum bisulfita (sveže pripremljeni NaHSO3u dejonizovanoj vodi) u 66% DMA (dimetilacetamid) u vodi, 30 min na 25°C. HuMy9-6 antitelo, 2 mg/ml konjuguje se sa 9 molarnih ekvivalenata 2-NHS estra (uz dodati NaHSO3), 3 h na 25°C u 85% PBS, pH 7.4, 15% DMA (v/v) i zatim prečisti na G25 desalinizujućoj koloni u PBS, pH 7.4 da se ukloni neodreagovali ili hidrolizovani lek. Konjugat se dijalizira u puferu sa 10 mM histidina, 250 mM glicina, 1% suharoze, pH 6.5.
1
[0321] DAR huMy9-6-2 konjugata pripremljenog korišćenjem natrijum bisulfita meren je UV spektrofotometrijom na 280 i 320 nm i izračunat da iznosi 3.1 DAR. % monomera konjugata bio je 95% i % 2 na monomeru bio je 91%. MS konjugata pripremljenog korišćenjem natrijum bisulfita posle deglikozilacije pokazao je najveći pik D1 sa jednim vezanim lekom, kao i D2, D3, D4, D5, D6 pikove sa 2-6 vezanih lekova po antitelu (SL.1B).
[0322] huMy9-6-2 konjugat pripremljen sa natrijum bisulfitom pokazao je mnogo veću ugradnju leka od 3.1 DAR nego konjugat sa 1.4 DAR, pripremljen bez natrijum bisulfita. MS 3.1 DAR konjugata pripremljenog sa natrijum bisulfitom pokazala je pikove konjugata za 1-6 vezanih lekova sa najvišim D1 pikom sa 1 vezanim lekom. Nasuprot tome, MS 1.4 DAR konjugata pripremljenog bez natrijum bisulfita pokazao je najviši pik nekonjugovanog antitela (D0) i mnogo manje D1, D2 i D3 pikove za konjugate sa vezanim lekom. % leka na monomeru za huMy9-6-2 konjugat pripremljen sa natrijum bisulfitom bio je 91%, što je bilo više od 80% leka na monomeru za huMy9-6-2 konjugat pripremljen bez natrijum bisulfita. Ukupan kvalitet konjugata, za huMy9-6-2 konjugat pripremljen sa natrijum bisulfitom, dakle, bio je mnogo bolji od tradicionalne procedure konjugovanja bez natrijum bisulfita.
[0323] Konjugacija NHS estara nekoliko lekova (1, 2, 3, i 4) sa antitelom obavljena je u prisustvu natrijum bisulfita (NaHSO3) i upoređivana je sa tradicionalnim metodom konjugacije bez NaHSO3. Rezultati su prikazani Tabeli 16. U svim slučajevima, dodavanje natrijum bisulfita u konjugaciju pokazuje konjugate sa značajno boljim kvalitetom višeg DAR i višim % leka na monomeru nego za konjugate pripremljene bez dodavanja natrijum bisulfita.
1
[0324] huMy9-6-2 konjugat pripremljen sa natrijum bisulfitom pokazao je sličnu in vitro citotoksičnost kao konjugat pripremljen bez natrijum bisulfita (SL.2). Prema tome, bolji kvalitet konjugata sa višim DAR i višim % leka na monomeru bio je pripremljen korišćenjem natrijum bisulfita, bez gubitka citotoksične moći. Konjugat anti-CD22 antitelo-2 pripremljen sa natrijum bisulfitom pokazao je sličnu in vitro citotoksičnost kao konjugat pripremljen bez natrijum bisulfita (SL.3).
[0325] huMy9-6-2 konjugat pripremljen korišćenjem natrijum bisulfita analiziran je korišćenjem neredukujuće SDS-PAGE korišćenjem gel-čip analizatora. Konjugat je pokazao samo traku intaktnog antitela; nisu zapažene trake za teške i lake lance, što je ukazalo na neočekivanu prednost da dodati natrijum bisulfit ne dovodi do neželjene redukcije nativnih međulančanih disulfidnih veza u antitelu.
[0326] 2-NHS estar ili SPDB-NHS estri 3, 4, 1, i 5 bili su preinkubirani sa 0.5 do 3 molarna ekvivalenta natrijum bisulfita (sveže pripremljen NaHSO3u dejonizovanoj vodi) u 66-98% DMA (dimetilacetamid) u vodi od 15 min do 4 h na 25°C. Neke od ovih reakcija ostavljene su i preko noći na 4°C i korišćene za konjugacije 20 h kasnije.
[0327] 2-NHS estar u DMA tretiran natrijum bisulfitom ili bez dodatog natrijum bisulfita analiziran je pomoću HPLC korišćenjem VYDAC C8 reverzno-fazne kolone sa linearnim gradijentom od 20% acetonitrila i 80% dejonizovane vode do 100% acetonitrila, sve je sadržalo
14
0.025% sirćetne kiseline, pri 1 ml/min tokom 48 min. Kako je pokazano na SL. 4, matični 2-NHS estar eluiran je na ∼23 min. Posle 30 min tretmana 0.9 molarnim ekvivalentima NaHSO3u 66% DMA u vodi na 25°C, najveći deo 2-NHS konvertuje se u sulfonisanu, polarniju formu koja se eluira na ∼14 min. Neočekivano, nije zapažen neželjeni pik sulfonisanog hidrolizovanog 2. Prema tome, zapažena je neočekivano povoljna reakcija natrijum bisulfita prema dodavanju iminskoj vezi bez reakcije sa NHS estrom.
[0328] Slično, lek-NHS estri tretirani su imin-reaktivnim reagensima različitim od natrijum bisulfita pre konjugacije sa antitelom. Alternativni konjugacioni pristup je tretirati mešavinu lek-NHS estar i antitelo natrijum bisulfitom ili drugim imin-reaktivnim reagensom.
PRIMER 3
[0329] Konjugat disulfid-vezano antitelo-SPDB-1 pripremljen je korišćenjem sintetizovanog 1-SPDB-NHS estra (jedinjenje 1c). 1-SPDB-NHS estar bio je prethodno tretiran 3 molarnim ekvivalentima natrijum bisulfita (korišćenjem sveže pripremljenog rastvora NaHSO3u vodi) u 96-98% DMA u vodi, 4-5 h na 25°C. Natrijum bisulfitom tretirani 1-SPDB-NHS estar u DMA analiziran je korišćenjem VYDAC C8 reverzno-fazne HPLC kolone sa linearnim gradijentom od 20% acetonitrila i 80% dejonizovane vode sa 0.025% sirćetne kiseline, pri 1 ml/min tokom 48 min. Reverzno-fazna HPLC analiza pokazala je samo željenu reakciju dodavanja bisulfita na iminsku vezu bez neželjene reakcije bisulfita sa NHS estrom.
[0330] Za konjugaciju, humanizovano antitelo u koncentraciji od 2 mg/ml reagovalo je sa 5-7 molarnih ekvivalenata 1-SPDB-NHS estra (prethodno tretiranog sa NaHSO3), 6 h na 25°C u 85% PBS, pH 7.4, vodenom puferu koji sadrži 15% N,N-dimetilacetamid (DMA) i zatim prečišćeno preko G25 gel-filtracione kolone u PBS, pH 7.4, da se ukloni neodreagovali ili hidrolizovani lek. Konjugati humanizovano antitelo -SPDB-1 dijalizuju se u puferu koji sadrži 10 mM histidin, 250 mM glicin, 1% saharozu, pH 6.5. Pomoću merenja UV apsorbance na 280 i 320 nm i korišćenjem ekstinkcionih koeficijenata leka i antitela na 280 nm i 320 nm, izmereno je da odnosi lek/antitelo (DAR) konjugata iznose 2.2-2.9,. Procenat monomera u preparatu konjugata određen je pomoću SEC (hromatografija zasnovana na veličini čestica) kao 90%. Na osnovu UV apsorbance pika monomera u SEC bilo je takođe pokazano da pik monomernog konjugata ima vezane molekule leka. Ekstrakcijom acetonom i reverzno-faznom HPLC pokazano je da je % nekonjugovanog leka bio manji od 1%
[0331] MS konjugata deglikozilovano antitelo-SPDB-1 pripremljenog sa natrijum bisulfitom dodatim pre konjugacije pokazala je mnogo superiorniji konjugat od onog koji je dobijen bez natrijum-bisulfitne konjugacije (SL. 5). MS konjugata pripremljenog bez natrijum bisulfita imao je prosečno 1.41/Ab i vrste antitela sa do tri vezana molekula 1 (SL.5A). Nasuprot tome, MS konjugata pripremljenog sa natrijum bisulfitom pokazala je prosek od 2.51/Ab i vrste antitela sa do sedam vezanih molekula 1 (SL.5B).
[0332] Neredukujućom SDS-PAGE gel-čip analizom, konjugat disulfid-vezano antitelo-SPDB-1 pripremljen korišćenjem natrijum bisulfita pokazao je samo traku intaktnih antitela. Gel-čip test obavljen je korišćenjem Agilent Protein 230 Protein Chip i analiziran je korišćenjem Agilent 2300 Bioanalyzer. Nisu zapažene trake teških ni lakih lanaca, što je pokazalo neočekivanu prednost da dodavanje natrijum bisulfita nije dovelo do neželjene redukcije međulančanih disulfidnih veza nativnog antitela (SL. 6). Povezani lek dobijen u konjugatu antitelo-SPDB-1 pripremljenom korišćenjem natrijum bisulfita pokazao je, iznenađujuće, i to da je disulfidni povezivač u konjugatu stabilan prema dodavanju natrijum bisulfitu.
PRIMER 4
[0333] Za pripremanje konjugata, 1f-SPDB-NHS estar (jedinjenje 1c, SL.7) preinkubira se sa 3 molarna ekvivalenta natrijum bisulfita (sveže pripremljeni NaHSO3u dejonizovanoj vodi) u 96% DMA (dimetilacetamid) u vodi, 5 h na 25°C i zatim inkubira preko noći na 4°C dok ne bude potreban za konjugovanje. Humanizovano antitelo, 2-3 mg/ml derivatizuje se sa 8 molarnih ekvivalenata 1f-SPDB-NHS estra u odsustvu ili prisustvu natrijum bisulfita (-/+ NaHSO3), 4 h na 25°C u 95% 50 mM HEPES, pH 8.5, vodenom puferu sa 5% DMA (v/v) i zatim se oba prečiste preko G25 desalinizujućih kolona u PBS, pH 7.4, da se ukloni neodreagovali, hidrolizovani lek. Konjugati se dijaliziraju u puferu koji sadrži 10 mM histidin, 250 mM glicin, 1% saharozu, pH 6.5. DAR konjugata meri se UV spektrofotometrijom na 280 i 320 nm. Procenat monomera i procenat leka na monomeru u konjugatu određuje se pomoću SEC. Nekonjugovani lek u konjugatu određuje se reverzno-faznom HPLC posle ekstrahovanja acetonom. Ove konjugacije se obavljaju sa nekoliko humanizovanih antitela.
PRIMER 5
[0334] Da bi se konjugovali tioli leka sa reaktivnim disulfidnim povezivačem inkorporisanim u antitelo, humanizovano mAb u koncentraciji od 8 mg/ml derivatizuje se sa 4-6 molarnih ekvivalenata SPDB heterobifunkcionalnog linkera 1.5 h na 25 °C u 90% PBS, pH 7.5, vodeni pufer sa 5% DMA (v/v) i zatim prečisti preko G25 desalinizujuće kolone, u pufer koji sadrži 35 mM citrat, 2 mM EDTA, 150 mM NaCl, pH 5.5, da se ukloni neodreagovali hidrolizovani linker. LAR (odnos linker prema antitelu) meri se UV apsorbancom na 280 i 343 nm bez i sa dodatim 50 mM ditiotreitolom (da se izmeri ukupno antitelo i oslobođeni SPy). SPDB-modifikovano antitelo u koncentraciji od 2 mg/ml reaguje sa 2 molarna ekvivalenta natrijum bisulfitom tretiranog tiola leka po povezivaču, 2 do 20 h na 25°C u 85-90% 50 mM kalijum fosfata, 50 mM NaCl, pH 7.5 puferu i zatim prečisti preko G25 desalinizujuće kolone u PBS, pH 7.4, da se ukloni neodreagovali hidrolizovani lek. DAR konjugata antitelo-SPDB-lek meri se UV apsorbancom na 280 i 320 nm i procenat monomera i procenat leka na monomeru u preparatu konjugata određuju se korišćenjem SEC.
PRIMER 6 Pripremanje huMy9-6-sulfo-SPDB-1 (2-stepeni metod)
[0335]
[0336] Reakcija koja sadrži 6 mg/mL huMy9-6 antitela i 9 molarnih ekvivalenata sulfo-SPDB povezivača (20 mM stok u DMA) inkubira se 3 h na 25°C u 50 mM EPPS puferu pH 8. Neodreagovali povezivač se ukloni korišćenjem NAP desalinizujuće kolone (Illustra Sephadex G-25 DNK kvalitet, GE Healthcare) i određeno je da odnos povezivača prema antitelu (LAR) iznosi 3.7, bazirano na koncentraciji antitela i koncentraciji DTT-oslobođenog tiopiridona, pomoću UV-Vis (ε343 nm= 8,080 cm<-1>M<-1>za 2-tiopiridon).
[0337] Sulfo-SPDB modifikovano huMy9-6 razblaži se do 2 mg/ml u 50 mM EPPS pH 8.5, 10% v/v DMA, i reaguje sa 2 molarna ekvivalenta jedinjenja 1d po povezivaču (5 mM stok u DMA; 7.4 ekvivalenta po antitelu), 3 h na 25°C.
[0338] Posle reakcije, konjugat se prečisti i pufer zameni puferom sa 250 mM glicina, 10 mM histidina, 1% saharoze, 0.01% Tween-20, 50 µM natrijum bisulfita na pH 6.2 korišćenjem desalinizujuće kolone (G-25 Sephadex, visoki kvalitet, GE Healthcare).
[0339] Nađeno je da prečišćeni konjugat ima prosečno 2.9 molekula jedinjenja 1 vezanih po antitelu (pokazano pomoću UV-Vis korišćenjem molarnih ekstinkcionih koeficijenata ε330 nm= 15 484 cm<-1>M<-1>i ε280nm= 30115 cm<-1>M<-1>za jedinjenje 1, i ε280 nm= 207000 cm<-1>M<-1>za My9-6 antitelo), 97.8% monomera (prema hromatografiji zasnovanoj na veličini čestica), <1% nekonjugovanog jedinjenja 1 (prema ekstrakciji acetonom/reverzno-faznoj HPLC), 60% prinos
14
baziran na količini upotrebljenog antitela, i 18% ukupan prinos baziran na količini upotrebljenog jedinjenja Id. Konjugat napravljen koirišćenjem ovog metoda može da se koncentruje (mešanjem ćelija ili Amicon centrifugirajućim filter uređajem) do >3 mg/ml bez precipitacije konjugata.
PRIMER 7 Pripremanje huMy9-6-SPDB-1
[0340]
Metod 1 (jednostepeni reagens-metod):
[0341] Reakcija koja sadrži 2 mg/mL huMy9-6 antitela i 7 molarnih ekvivalenata 1-SPDB-NHS (prethodno tretiranog 5-strukim viškom natrijum bisulfita u 90:10 DMA:voda, v/v, 1 h na 25°C i zatim preko noći na 4°C) u 50 mM HEPES (4-(2-hidroksietil)-1-piperazin etansulfonska kiselina) pH 8.5 pufer i 10% v/v DMA (N,N-dimetilacetamid) kosolventu inkubira se 3 h na 25 °C.
[0342] Posle reakcije, konjugat se prečisti i pufer zameni puferom za formulisanje sa 250 mM glicina, 10 mM histidina, 1% saharoze, 0.01% Tween-20, 50 µM natrijum bisulfita korišćenjem NAP desalinizujućih kolona (Illustra Sephadex G-25 DNK kvalitet, GE Healthcare). Dijaliza se izvodi u istom puferu, 4 sata na sobnoj temperaturi uz korišćenjem Slide-α-Lyzer kaseta za dijalizu (ThermoScientific 20,000 MWCO).
[0343] Nađeno je da prečišćeni konjugat ima prosečno 4.0 molekula jedinjenja 1 vezana za antitelo (prema UV-Vis korišćenjem molarnih ekstinkcionih koeficijenata ε330 nm= 15484 cm<-1>M<-1>i ε280 nm= 30115 cm<-1>M<-1>za jedinjenje 1, i ε280 nm= 207000 cm<-1>M<-1>za My9-6 antitelo), 92% monomera (prema hromatografiji zasnovanoj na veličini čestica, TSK3000, TOSOH Biosciences), <1% nekonjugovanog jedinjenja 1 (prema ekstrakciji acetonom/reverzno-faznoj HPLC) 72% prinos baziran na količini upotrebljenog antitela, 40% ukupan prinos baziran na količini upotrebljenog 1-SPDB-NHS, i finalna koncentracija proteina iznosi 1.0 mg/ml.
Metod 2 (dvostepeni metod):
[0344] Reakcija koja sadrži 4.8 mg/mL huMy9-6 antitela i 6 molarnih ekvivalenata SPDB povezivača (18.5 mM stok u etanolu) inkubirana je 3 h na 25°C u PBS pH 7.4. Neodreagovali povezivač je uklonjen korišćenjem NAP desalinizujuće kolone (Illustra Sephadex G-25 DNK kvalitet, GE Healthcare) i određeno je da je odnos povezivača prema antitelu (LAR) bio 4.0, bazirano na koncentraciji antitela i koncentraciji DTT-oslobođenog 2-tiopiridona, pomoću UV-Vis (ε343 nm= 8,080 cm<-1>M<-1>za 2-tiopiridon).
[0345] SPDB modifikovano huMy9-6 razblaženo je do 2 mg/ml u 50 mM EPPS pH 8.5, 10% v/v DMA i reagovalo je sa 1.75 molarnih ekvivalenata jedinjenja 1d po linkeru (5 mM stok u DMA; 7 ekvivalenata po antitelu), 3 h na 25°C.
[0346] Posle reakcije, konjugat se prečisti i pufer zameni puferom koji sadrži 250 mM glicina, 10 mM histidina, 1% saharoze, 0.01% Tween-20, 50 µM natrijum bisulfita na pH 6.2 korišćenjem desalinizujuće kolone (Illustra Sephadex G-25 DNK kvalitet, GE Healthcare).
[0347] Nađeno je da prečišćeni konjugat ima prosek od 3.8 molekula jedinjenja 1 vezanih za antitelo (prema UV-Vis korišćenjem molarnih ekstinkcionih koeficijenata ε330 nm= 15484 cm<-1>M<-1>i ε280 nm= 30115 cm<-1>M<-1>za jedinjenje 1, i ε280 nm= 207000 cm<-1>M<-1>za My9-6 antitelo), 91.6% monomera (prema hromatografiji zasnovanoj na veličini čestica, TSK3000, TOSOH Biosciences), <1% nekonjugovanog jedinjenja 1 (prema ekstrakciji acetonom/reverzno-faznoj HPLC) 40% prinos baziran na količini upotrebljenog antitela, 22% ukupan prinos baziran na količini upotrebljenog jedinjenja Id, i finalna koncentracija proteina iznosi 0.5 mg/ml.
PRIMER 8 Pripremanje huMy9-6-CX1-1-1
[0348]
Metod 1 (in-situ jednostepeni reagens-metod):
[0349] Rastvor DMA koji sadrži 1.9 mM jedinjenje 1d, 1 mM CX1-1 heterobifunkcionalni linker sa N-hidroksisukcinimid (NHS) i maleimid grupama, i 20 mM diizopropil etil amin (DIPEA) ostavi se da reaguje na ambijentalnoj temperaturi, 8 min. Zatim se doda 3 mM
14
maleimido propionska kiselina (MPA) da "ugasi" višak jedinjenja 1d.1-CX1-1-NHS reakciona mešavina se ostavi zamrznuta na -80°C, i kasnije se posle odmrzavanja doda u dve porcije puferisanom rastvoru huMy9-6 at 25 °C (2 mg/ml, 100 mM EPPS, pH 8.0, 10% v/v DMA); 4.8 molarnih ekvivalenata po antitelu (bazirano na koncentraciji povezivača) praćeno sa 4.2 ekvivalenta 30 min kasnije. Posle 2 h reakcije, konjugat se prečisti i pufer zameni puferom koji sadrži 250 mM glicina, 10 mM histidina, 1% saharoze, 0.01% Tween-20, 50 µM natrijum bisulfita na pH 6.2 korišćenjem desalinizujuće kolone (Quick-spin protein, G-25 fina smola, Roche), dijalizira, i na kraju sterilno filtrira kroz 0.22 µm-sko sito.
[0350] Nađeno je da prečišćeni konjugat ima prosečno 3.3 molekula jedinjenja 1 vezanih za antitelo (prema UV-Vis korišćenjem molarnih ekstinkcionih koeficijenata ε330 nm= 15484 cm<-1>M<-1>i ε280 nm= 30115 cm<-1>M<-1>za jedinjenje 1, i ε280 nm= 207000 cm<-1>M<-1>za My9-6 antitelo), 95% monomera (prema hromatografiji zasnovanoj na veličini čestica, TSK3000, TOSOH Biosciences), <1% nekonjugovanog jedinjenja 1 (prema ekstrakciji acetonom/reverzno-faznoj HPLC) 45% prinos baziran na količini upotrebljenog antitela, 17% ukupan prinos baziran na količini upotrebljenog jedinjenja 1d, i finalna koncentracija proteina iznosi 0.7 mg/ml.
Metod 2 (jednostepeni metod):
[0351] U puferisani rastvor huMy9-6 antitela (2 mg/ml, 50 mM EPPS, pH 8.5, 8% v/v DMA) doda se 14 molarnih ekvivalenata jedinjenja 1d (5 mM stok u DMA) praćeno sa 7 molarnih ekvivalenata CX1-1 povezivača (15 mM stok rastvor u etanolu) i inkubira 3 h na 25 °C.
[0352] Posle reakcije, konjugat se prečisti i pufer zameni puferom koji sadrži 250 mM glicina, 10 mM histidina, 1% saharoze, 0.01% Tween-20, 50 µM natrijum bisulfita na pH 6.2 korišćenjem desalinizujuće kolone (Illustra Sephadex G-25 DNK kvalitet, GE Healthcare), što je praćeno dijalizom 2× na 4 °C u slide-α-lyzer kasetama za dijalizu (ThermoScientific 20,000 MWCO).
[0353] Nađeno je da prečišćeni konjugat ima prosečno 3.4 molekula jedinjenja 1 vezanih za antitelo (prema UV-Vis korišćenjem molarnih ekstinkcionih koeficijenata ε330 nm= 15484 cm<-1>M<-1>i ε280 nm= 30115 cm<-1>M<-1>za jedinjenje 1, i ε280 nm= 207000 cm<-1>M<-1>za My9-6 antitelo), 90% monomera (prema hromatografiji zasnovanoj na veličini čestica, TSK3000, TOSOH Biosciences), <1% nekonjugovanog jedinjenja 1 (prema ekstrakciji acetonom/reverzno-faznoj HPLC) 44% prinos baziran na količini upotrebljenog antitela, 11% ukupan prinos baziran na količini upotrebljenog jedinjenja 1d, i finalna koncentracija proteina iznosi 1.48 mg/ml.
PRIMER 9 MS analiza deglikozilovanog My9-6-SPDB-1f
14
[0354] My9-6-SPDB-1f napravi se konjugacijom NHS estra koji sadrži jedinjenje 1f direktno sa lizinima antitela (tj., jednostepeni reagens-metod kako je gore opisano), ili konjugovanjem jedinjenja 1d sa ditiopiridinom modifikovanim antitelom (tj., dvostepeni metod kako je opisano gore). Analiza masenom spektrometrijom (MS) deglikozilovanog My9-6-SPDB-1f obavljena je zatim kako je gore opisano.
[0355] Jednostepeni reagens-metod dao je konjugat sa 0-9 modifikacija jedinjenja 1f, asimetričnu distribuciju konjugovanog leka, i značajnu količinu nekonjugovanog antitela. Sa druge strane, konjugat napravljen dvostepenim metodom imao je MS profil sa 0-6 jedinjenje If modifikacija, a simetričnu distribuciju konjugovanog leka, i veoma malo nekonjugovanog antitela. Vidi SL. 12. Oba konjugata imala su prosečan odnos jedinjenje 1f/antitelo od ∼4, prema UV-vis analizi.
PRIMER 10 Efekat pH na dvostepenu sintezu My9-6-sulfo-SPDB-1
[0356] MS podaci za My9-6-sulfo-SPDB-1f napravljen korišćenjem dvostepenog metoda pod različitim uslovima pH pokazani su na SL.13. Ukratko, My9-6-sulfoSPDB (3.7 linker/antitelo) reaguje sa 3 ekvivalenta jedinjenja Id po linkeru (ili oko 11.1 ekvivalenata po antitelu) 18 h na pH 6, 7, 8, i 8.5. MS podaci pokazuju smanjenje neodreagovalog linkera (260 amu satelitski pikovi) sa povećanjem pH reakcije. Prema tome, izgleda da pH utiče na reakciju konjugacije u sintezi My9-6-sulfo-SPDB-1f konjugata. Specifično, pH od >8 je potreban da jedinjenje Id u potpunosti reaguje sa sulfo-SPDB povezivačem na antitelu.
PRIMER 11 Efekat odnosa jedinjenje / povezivač na dvostepenu sintezu chKTI-sulfo-SPDB-1
[0357] SL. 14 prikazuje MS podatke za chKTI-sulfo-SPDB-1 napravljen korišćenjem dvostepenog metoda sa različitim odnosima jedinjenje 1d / povezivač. chKTI-sulfoSPDB (3.7 povezivač/antitelo) reaguje sa 1.1, 1.3, 1.5 ili 2 ekvivalenta jedinjenja 1d po linkeru, 3 h, na 25 °C, pH 8.5. MS pokazuje smanjenje neodreagovalog povezivača (260 amu satelitski pikovi) sa porastom ekvivalenata jedinjenja 1d po povezivaču. Izgleda da je pod ovim uslovima, odnos jedinjenje 1d / povezivač od >1.3 potreban za potpunu reakciju sa sulfo-SPDB povezivačem na antitelu. Povećanje ekvivalenata jedinjenja Id iznad 1.5 po linkeru dovelo je do porasta fragmentacije antitela (14-19%) dok 1.1-1.3 jedinjenje 1d / linker nije prouzrokovalo značajnu fragmentaciju antitela.
PRIMER 12 Pripremanje konjugata antitelo-SPDB-lek
14
[0358] Jedinjenje lc se prethodno tretira sa 3 molarna ekvivalenta natrijum bisulfita (koristi se sveže pripremljeni rastvor NaHSO3u vodi) u 96-98% DMA u vodi, 4-5 h na 25 °C. Za konjugaciju, humanizovano antitelo u koncentraciji od 2 mg/mL reaguje sa 5-7 molarnih ekvivalenata jedinjenja lc (prethodno tretiranog sa NaHSO3), 6 h na 25 °C u 85-90% PBS, pH 7.4, vodenom puferu, ili 50 mM HEPES, pH 8.5, vodenom puferu, sa 10-15% N,N-dimetilacetamida (DMA) i zatim prečisti preko G25 gel-filtracione kolone u PBS, pH 7.4, da se ukloni neodreagovalo ili hidrolizovano lekovito jedinjenje. Konjugati humanizovano antitelo-SPDB-lek dijaliziraju se u puferu koji sadrži 10 mM histidin, 250 mM glicin, 1% saharozu, pH 6.5. Izmereno je da odnos leka prema antitelu (DAR) u konjugatu iznosi 2.2-2.9 merenjima UV apsorbance na 280 i 320 nm i korišćenjem ekstinkcionih koeficijenata leka i antitela na 280 nm (215 000 M<-1>cm<-1>) i 320 nm (9137 M<-1>cm<-1>). Određeno je da procenat monomera u konjugatima iznosi >90%, prema SEC (hromatografija zasnovana na veličini čestica) korišćenjem TSK-Gel G300SWXL kolone (7.8 mm × 300 mm, 5 µm veličina čestica). Na osnovu UV apsorbance pika monomera u SEC pokazano je i to da pikovi monomernog konjugata imaju vezane molekule leka. Za test slobodnog (nekonjugovanog) leka, konjugat se ekstrahuje acetonom da se ukloni protein, suši i rekonstituiše u mobilnoj fazi i injektira na VYDAC 208TP C8 reverzno-faznu HPLC kolonu (4.6 × 250 mm, 7 µm veličina čestica) i upoređuje sa standardima. Određeno je da procenat slobodnog lekovitog jedinjenja u konjugatu iznosi <0.5% konjugovanog lekovitog jedinjenja.
Pripremanje konjugata humanizovano Ab-SPDB-2a:
[0359] Humanizovano Ab u koncentraciji od 8 mg/mL derivatizuje se sa 4-6 molarnih ekvivalenata SPDB hetrobifunkcionalnog povezivača 1.5 h na 25°C u 95% PBS, PH 7.4, sa 5% DMA (v/v), i zatim prečisti preko G25 desalinizujuće kolone, u citratni pufer (35 mM citratni pufer, pH 5.5, sa 2 mM EDTA, 150 mM NaCl) da se ukloni neodreagovali linker. LAR (odnos linkera prema antitelu) meren je korišćenjem UV apsorbance na 280 i 343 nm bez i sa dodavanjem 50 mM ditiotreitola (da bi se merilo ukupno antitelo i ditiotreitol-oslobođeno SPy) i određeno je da iznosi 2.7-4.1 LAR. SPDB-modifikovano antitelo u koncentraciji od 2 mg/mL reaguje sa 2 molarna ekvivalenta jedinjenja 2a (HC1 so) po vezanom SPDB, 20 h na ambijentalnoj temperaturi u 85% citratnom puferu, 15 % DMA (v/v) i zatim prečisti preko G25 desalinizujuće kolone u PBS, pH 7.4 da bi se uklonilo nekonjugovano lekovito jedinjenje. DAR finalnog konjugata humanizovano Ab-SPDB-2a meren je UV spektrofotometrijom na 280 i 350 nm i izračunato je da iznosi ∼1.7-2.1 DAR. Procenat monomera i vezanog lekovitog
14
jedinjenja na monomeru u konjugatu određen je pomoću HPLC korišćenjem SEC (hromatografija zasnovana na veličini čestica) kolone. Vidi SL.16.
PRIMER 13 Upotreba kovalentnih iminskih reaktanata za poboljšanje specifikacija konjugata Ab-lek (% monomera i sadržaj leka)
[0360] Formiranje adukta obavlja se sa 5 molarnih ekvivalenata iminskog reaktanta preko NHS-BMPS-1 u 90% DMSO/ 10% PBS pH 7.4, 4 h na 25 °C. Reakciona mešavina se tada doda huMy9-6 antitelu (4 molarna ekvivalenta leka, 2 mg/ml, 10% v/v DMSO, 50 mM HEPES pufer, pH 8.5, 5 h, 25 °C). Konjugati napravljeni korišćenjem natrijum hidrosulfita, natrijum bisulfita, ili natrijum metabisulfita imaju slične odnose lek/Ab i % monomera, dok konjugati napravljeni bez tretmana aditivom imaju veoma nisku inkorporaciju leka.
PRIMER 14 In vivo studija tolerabilnosti konjugata huFOLR-1
[0361] In vivo tolerabilnost konjugata huFOLR-1 ispitivana je kod ženki CD-1 miševa. Životinje su posmatrane sedam dana pre početka studije i utvrđeno je da nisu bolesne. Miševima je data jedna i.v. injekcija konjugata koji nosi bisulfit i životinje su posmatrane na dnevnoj bazi u pogledu gubitka telesne težine, morbiditeta ili mortaliteta. Tabela 9 pokazuje da je konjugat huFOLR1-lek1, tolerisan samo pri najnižoj testiranoj dozi od 50 µg/kg. Nasuprot tome, nađeno je da se mono-iminski konjugati huFOLR1-lek2 i huFOLR1-SPDB-1f bolje tolerišu, sa maksimalnom tolerisanom dozom od <198 µg/kg odnosno >560 µg/kg.
Tabela 9. Podaci o upoređivanju tolerabilnosti za konjugate (A) huFOLR1-lek1, (B) huFOLR1-lek2, i (C) huFOLR1-SPDB-1f.
14
PRIMER 15 Efekat propilen glikola u formulaciji i konjugaciji
[0362] Ovaj primer pokazuje da u predmetnim reakcijama konjugacije izvedenim u prisustvu propilen glikola kao korastvarača ne dolazi do precipitacije konjugata, i da čak 40% (moguće i više) propilen glikola može da se upotrebi bez smanjenja % monomera rezultujućeg konjugata (u prisustvu 2% dimetilacetamida - podaci nisu prikazani).
[0363] Što je još važnije, prisustvo propilen glikola tokom prečišćavanja dovodi do značajnog porasta prinosa (Tabela 10).
[0364] Bez želje da se ograniče nekom posebnom teorijom, podnosioci veruju da je jedan od osnovnih uzroka problema tokom konjugacije predmetnih konjugata inherentna hidrofobnost molekularnih komponenti konjugata. Ovim se može bar delimično objasniti nizak prinos pri prečišćavanju, i ponekad aberantni profili distribucije mase zapaženi pri predmetnim konjugacijama.
1
[0365] Isto tako treba pomenuti da dodavanje izopropanola tokom hromatografije zasnovane na veličini čestica predmetnih konjugata u velikoj meri smanjuje vidljivu populaciju agregata. Ovo zapažanje ukazuje na to da mala hidrofobnost korastvarača može povećati rastvorljivost leka i konjugata pronalaska.
[0366] Prema tome, predmetne reakcije konjugacije, koraci prečišćavanja posle reakcije, i/ili formulisanje formiranih konjugata poželjno se obavljaju u prisustvu malih hidrofobnih korastvarača, kao što je propilen glikol (npr., 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45%).
[0367] Antitelo-sulfo-SPDB priprema se prema ranije opisanim metodima dodavanjem N-hidroksisukcinimidil (NHS) estarske forme sulfo-SPDB antitelu (huMy9-6) u vodi koja sadrži 3% DMA, i puferisana je na pH 8.5, 3 sata. Dobijeni intermedijar (antitelo-sulfo-SPDB) prečisti se preko G25 Sephadex da se ukloni višak povezivača. Antitelo i povezivač se kvantifikuju pomoću UV-vis spektrosoopije merenjem apsorbance na 280 nm u odsustvu reduktanta, i na 343 nm u prisustvu ∼50 mM DTT da se izmeri oslobađanje 2-tiopiridina iz konjugovanog linkera.
[0368] Da bi se konjugovao lek, antitelo-sulfo-SPDB pripremljen gore reaguje pri 2 mg/mL antitela, sa 2-strukim molarnim viškom jedinjenja 1d u prisustvu navedenih korastvarača, i uz održavanje pH na 8.5 pomoću EPPS pufera (finalna koncentracija 60 mM). Dimetilacetamid (SAFC) i propilen glikol (Alfa Aesar) koriste se kako su dobijeni bez dodatnog prečišćavanja. Svi puferi se sterilišu propuštanjem kroz 0.22 mikronski filter (Corning) i voda se prečišćava reverznom osmozom / dejonizacijom. Reakcije se inkubiraju na 25°C, 3 h i zatim se prečišćavaju korišćenjem jednokratnih G25 Sephadex kolona (Nap 25, GE Healthcare) u formulacioni pufer koji se sastoji od 10 mM histidina, 250 glicina, 1% saharoze, 0.01% polisorbata 20, 50 µM natrijum bisulfita, puferisan na pH 6.2, kao i navedeni procenat propilen glikola (v/v).
[0369] Prinos reakcije i sadržaj leka određuju se apsorpcionom spektroskopijom. Po analitičkoj hromatografiji zasnovanoj na veličini čestica, svi uzorci pokazali su >96% monomera.
[0370] Tabela 10 dole prikazuje % prinosa konjugacije u funkciji propilen glikola u reakcionoj mešavini ili formulaciji. Antitelo-sulfo-SPDB-1 pripremljeno je reakcijom jedinjenja 1d sa antitelo-sulfo-SPDB, u trajanju od 4 sata na pH 8.5 (nevodene komponente kako je naznačeno) praćeno prečišćavanjem preko G25 Sephadex.
Tabela 10
1 1
* Gusti beli precipitat zapaža se na vrhu Sephadex kolone posle prečišćavanja
PRIMER 16 Pripremanje huMy9-6-sulfo-SPDB-1d korišćenjem visoko reaktivnog 4-nitroPysulfo-SPDB linkera
[0371] Reakcija koja sadrži 6 mg/mL huMy9-6 antitela i 5 molarnih ekvivalenata visoko rekativnog N-sukcinimidil-4-(4-nitropiridil-2-ditio)butanoatnog povezivača (20 mM stok u etanolu) inkubira se 3 h na 25 °C u 50 mM EPPS puferu na pH 8. Neodreagovali povezivač se ukloni korišćenjem NAP desalinizujuće kolone (Illustra Sephadex G-25 DNK kvalitet, GE Healthcare). Određeno je da odnos povezivača prema antitelu (LAR) iznosi oko 2.3 bazirano na koncentraciji antitela i koncentraciji DTT-oslobođenog nitropiridin-2-tiona, pomoću UV-Vis (ε394 nm= 14205 cm<-1>M<-1>za 2-tio-4-nitropiridon).
[0372] Linkerom modifikovano huMy9-6 razblaži se do 2 mg/mL u 50 mM HEPES puferu na pH 8.5, 10% v/v DMA, i reaguje sa 2 molarna ekvivalenta jedinjenja 1d po linkeru (5 mM stok u DMA; 4.6 ekvivalenata po antitelu), 30 min na 25°C. Završetak reakcije disulfidne razmene određuje se praćenjem porasta apsorbance na 394 nm, pomoću UV. Posle reakcije, konjugat se prečisti i pufer zameni 250 mM glicinom, 10 mM histidinom, 1% saharozom, 0.01% Tween-20, 50 µM natrijum bisulfitom na pH 6.2 korišćenjem desalinizujuće kolone (G-25 Sephadex, visoki kvalitet, GE Healthcare).
[0373] Nađeno je da prečišćeni konjugat ima prosečno 2.1 molekul 1d vezan po antitelu (prema UV-Vis korišćenjem molarnih ekstinkcionih koeficijenata ε330 nm= 15484 cm<-1>M<-1>i ε280 nm= 30 115 cm<-1>M<-1>za 1d, i ε280 nm= 207 000 cm<-1>M<-1>za huMy9-6), 98% monomera (prema hromatografiji zasnovanoj na veličini čestica), <1% nekonjugovanog 1d (prema ekstrakciji acetonom/reverzno-faznoj HPLC), 70% prinos proteina, i 32% ukupan prinos 1d. Vidi SL.28.
LISTA SEKVENCI
[0374]
<110> IMMUNOGEN, INC.
1 2
1
14
1
1
�
1
1
1
11
12

Claims (3)

  1. PATENTNI ZAHTEVI 1. Metod pripremanja konjugata, naznačen time, što konjugat sadrži sredstvo koje se vezuje za ćeliju (CBA) konjugovano za citotoksično jedinjenje sa povezujućom grupom, metod uključuje reakciju modifikovanog citotoksičnog jedinjenja sa modifikovanim CBA na pH od oko 4 do oko 9, gde: a) modifikovano CBA sadrži reziduu bifunkcionalnog unakrsno povezujućeg sredstva vezanu za CBA, i rezidua uključuje povezujuću grupu i tiol-reaktivnu grupu; i b) modifikovano citotoksično jedinjenje sadrži tiol grupu i predstavljeno je jednom od sledećih formula:
    ili
    ili njenom farmaceutski prihvatljivom solju, gde je modifikovano citotoksično jedinjenje proizvedeno reakcijom imin-sadržavajućeg citotoksičnog jedinjenja koje nosi tiol grupu sa imin-reaktivnim reagensom, i gde je imin-sadržavajuće citotoksično jedinjenje predstavljeno jednom od sledećih formula:
    ili njenom farmaceutski prihvatljivom solju, pri čemu: -C(Y)-N(H)- motiv u formulama (I') i (II') rezultat je reakcije imin-reaktivnog reagensa sa imin-sadržavajućim citotoksičnim jedinjenjem; X' se bira između -H, amin-protektujuće grupe, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, opciono supstituisanog arila koji ima 6 do 18 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika, i sumpora, i opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P; Y' se bira između -H, okso grupe, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 6- do 18-članog arila, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezaisno odabranih između azota, kiseonika, i sumpora, i opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma; R<c>je -H ili supstituisani ili nesupstituisani linearni ili granati alkil koji ima 1 do 4 ugljenikova atoma; R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3' i R4' se, svaki nezavisno, biraju iz grupe koja se sastoji od -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-R<c>, halogena, guanidinijuma [-NH(C=NH)NH2], -OR, -NR'R", -NO2,-NCO, -NR'COR", -SR, sulfoksida predstavljenog -SOR', sulfona predstavljenog -SO2R', sulfonata -SO3-M<+>, sulfata -OSO3-M<+>, sulfonamida predstavljenog -SO2NR'R", cijano, azido, -COR', -OCOR', -OCONR'R"; R, pri svakom pojavljivanju, bira se nezavisno iz grupe koja se sastoji od -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, opciono supstituisanog arila koji ima 6 do 18 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika i sumpora, ili opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P; 1 4 R' i R" se, svaki nezavisno, biraju između -H, -OH, -OR, -NHR, -NR2,-COR, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, i opciono supstituisanog 3-18-članog heterocikličnog prstena koji ima 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P; n je ceo broj od 1 do 24; W se bira između C=O, C=S, CH2, BH, SO i SO2; R6je -H, -R, -OR, -SR, -NR'R", -NO2, ili halogen; Z i Z' se nezavisno biraju između -(CH2)n'-, -(CH2)n'-CR7R8-(CH2)na'-,-(CH2)n'-NR9-(CH2)na'-, -(CH2)n'-O-(CH2)na'- i -(CH2)n'-S-(CH2)na'-; n' i na' su isti ili različiti, i biraju se između 0, 1, 2 i 3; R7i R8su isti ili različiti i biraju se, svaki nezavisno, između -H, -OH, -SH, -COOH, -NHR', polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-, amino-kiseline, peptidne jedinice koja nosi 2 do 6 amino-kiselina, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma; R9se nezavisno bira između -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-; A i A' su isti ili različiti i nezavisno se biraju između -O-, okso (-C(=O)-), -CRR'O-, -CRR'-, -S-, -CRR'S-, -N(R5)- i -CRR'N(R5)-, R5pri svakom pojavljivanju je nezavisno -H ili opciono supstituisani linearni ili granati alkil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma; D i D' su isti ili različiti i nezavisno su odsutni ili se biraju iz grupe koja se sastoji od opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, amino-kiseline, peptida koji nosi 2 do 6 amino-kiselina, i polietilen glikolne jedinice (-OCH2CH2)n-; i L je odsutan ili kada je prisutan, sadrži tiol grupu, ili je polietilen glikolna jedinica (-OCH2CH2)n-, linearni, granati ili ciklični alkil ili alkenil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, fenil grupa, 3- do 18-člani heterociklični prsten ili 5- do 18-člani heteroaril prsten koji ima 1 do 6 heteroatoma koji se nezavisno biraju između O, S, N i P, pri čemu su alkil, alkenil, fenil, ili heterociklični ili heteroaril prsten opciono supstituisani; i 1 imin-reaktivni reagens se bira iz grupe koja se sastoji od sulfita (H2SO3, H2SO2ili so HSO3-, SO3<2->ili HSO2-formirana sa katjonom), metabisulfita (H2S2O5ili so S2O5<2->formirana sa katjonom) i ditionita (H2S2O4ili so S2O42-formirana sa katjonom).
  2. 2. Metod pripremanja konjugata, naznačen time, što konjugat sadrži sredstvo koje se vezuje za ćeliju (CBA) konjugovano za citotoksično jedinjenje sa povezujućom grupom, metod uključuje reakciju CBA sa imin-sadržavajućim citotoksičnim jedinjenjem, imin-reaktivnim reagensom, i bifunkcionalnim unakrsno povezujućim sredstvom koje sadrži povezujuću grupu da bi se formirao konjugat, gde je imin-sadržavajuće citotoksično jedinjenje predstavljeno bilo kojom od sledećih formula, ili njenom farmaceutski prihvatljivom solju:
    pri čemu: X' se bira između -H, amin-protektujuće grupe, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, opciono supstituisanog arila koji ima 6 do 18 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika, i sumpora, i opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P; Y' se bira između -H, okso grupe, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 6- do 18-članog arila, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezaisno odabranih između azota, kiseonika, i sumpora, opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma; 1 R<c>je -H ili supstituisani ili nesupstituisani linearni ili granati alkil koji ima 1 do 4 ugljenikova atoma; R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3' i R4' se, svaki nezavisno, biraju iz grupe koja se sastoji od -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-R<c>, halogena, guanidinijuma[-NH(C=NH)NH2], -OR, -NR'R", -NO2,-NCO, -NR'COR", -SR, sulfoksida predstavljenog -SOR', sulfona predstavljenog -SO2R', sulfonata -SO3-M<+>, sulfata -OSO3-M<+>, sulfonamida predstavljenog -SO2NR'R", cijano, azido, -COR', -OCOR', -OCONR'R"; R se, pri svakom pojavljivanju, bira nezavisno iz grupe koja se sastoji od -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, opciono supstituisanog arila koji ima 6 do 18 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika i sumpora, ili opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P; R' i R" se, svaki nezavisno, biraju između -H, -OH, -OR, -NHR, -NR2,-COR, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, i opciono supstituisanog 3-18-članog heterocikličnog prstena koji ima 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranihizmeđu O, S, N i P; n je ceo broj od 1 do 24; W se bira između C=O, C=S, CH2, BH, SO i SO2; R6je -H, -R, -OR, -SR, -NR'R", -NO2, ili halogen; Z i Z' se nezavisno biraju između -(CH2)n'-, -(CH2)n'-CR7R8-(CH2)na'-,-(CH2)n'-NR9-(CH2)na'-, -(CH2)n'-O-(CH2)na'- i -(CH2)n'-S-(CH2)na'-; n' i na' su isti ili različiti, i biraju se između 0, 1, 2 i 3; R7i R8su isti ili različiti i svaki se nezavisno bira između -H, -OH, -SH, -COOH, -NHR', polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-, amino-kiseline, peptidne jedinice koja nosi 2 do 6 amino-kiselina, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila koji ima od 1 do 10 ugljenikovih atoma; 1 R9se nezavisno bira između -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila koji ima od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-; A i A' su isti ili različiti i nezavisno se biraju između -O-, okso (-C(=O)-), -CRR'O-, -CRR'-, -S-, -CRR'S-, -N(R5)- i -CRR'N(R5)-, R5pri svakom pojavljivanju je nezavisno -H ili opciono supstituisani linearni ili granati alkil koji ima 1 do 10 ugljenikovih atoma; D i D' su isti ili različiti i nezavisno su odsutni ili se biraju iz grupe koja se sastoji od opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, amino-kiseline, peptida koji nosi 2 do 6 amino-kiselina, i polietilen glikolne jedinice (-OCH2CH2)n-; i L je odsutan ili, kada je prisutan, sadrži tiol grupu, i on je polietilen glikolna jedinica (-OCH2CH2)n-, linearni, granati ili ciklični alkil ili alkenil koji ima 1 do 10 ugljenikovih atoma, fenil grupa, 3- do 18-člani heterociklični prsten ili 5- do 18-člani heteroaril prsten koji ima 1 do 6 heteroatoma koji se nezavisno biraju između O, S, N i P, pri čemu su alkil, alkenil, fenil, ili heterociklični ili heteroaril prsten opciono supstituisani; i imin-reaktivni reagens se bira iz grupe koja se sastoji od sulfita (H2SO3, H2SO2ili so HSO3-, SO3<2->ili HSO2-formirana sa katjonom), metabisulfita (H2S2O5ili so S2O52-formirana sa katjonom) i ditionita (H2S2O4ili so S2O4<2->formirana sa katjonom).
  3. 3. Metod pripremanja konjugata naznačen time, što konjugat sadrži sredstvo koje se vezuje za ćeliju (CBA) konjugovano za citotoksično jedinjenje sa povezujućom grupom, metod uključuje: a) reakciju modifikovanog citotoksičnog jedinjenja sa bifunkcionalnim unakrsno povezujućim sredstvom koje uključuje povezujuću grupu, grupu reaktivnu sa CBA (kao što je tiol grupa, maleimid grupa, haloacetamid grupa ili aminska grupa) i grupu reaktivnu sa modifikovanim citotoksičnim jedinjenjem, da se formira drugo modifikovano citotoksično jedinjenje kovalentno vezano za reziduu bifunkcionalnog unakrsno povezujućeg sredstva, pri čemu rezidua uključuje povezujuću grupu i grupu reaktivnu sa CBA; pri čemu je modifikovano citotoksično jedinjenje predstavljeno jednom od sledećih formula: 1
    ili
    ili njenom farmaceutski prihvatljivom solju, gde je modifikovano citotoksično jedinjenje proizvedeno reakcijom imin-sadržavajućeg citotoksičnog jedinjenja sa iminreaktivnim reagensom, pri čemu je imin-sadržavajuće citotoksično jedinjenje predstavljeno jednom od sledećih formula, ili njenom farmaceutski prihvatljivom solju:
    gde: -C(Y)-N(H)- motiv u formulama (I') i (II') rezultat je reakcije imin-reaktivnog reagensa sa imin-sadržavajućim citotoksičnim jedinjenjem; X' se bira između -H, amin-protektujuće grupe, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, opciono supstituisanog arila koji ima 6 do 18 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika, i sumpora, i opciono 1 supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P; Y' se bira između -H, okso grupe, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 6- do 18-članog arila, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezaisno odabranih između azota, kiseonika, i sumpora, opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma; R<c>je -H ili supstituisani ili nesupstituisani linearni ili granati alkil koji ima 1 do 4 ugljenikova atoma; R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3' i R4' se, svaki nezavisno, biraju iz grupe koja se sastoji od -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-R<c>, halogena, guanidinijuma [-NH(C=NH)NH2], -OR, -NR'R", -NO2,-NCO, -NR'COR", -SR, sulfoksida predstavljenog -SOR', sulfona predstavljenog -SO2R', sulfonata -SO3-M<+>, sulfata -OSO3-M<+>, sulfonamida predstavljenog -SO2NR'R", cijano, azido, -COR', -OCOR', -OCONR'R"; R se, pri svakom pojavljivanju, bira nezavisno iz grupe koja se sastoji od -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, opciono supstituisanog arila koji ima 6 do 18 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika i sumpora, ili opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P; R' i R" se, svaki nezavisno, biraju između -H, -OH, -OR, -NHR, -NR2,-COR, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, i opciono supstituisanog 3-18-članog heterocikličnog prstena koji ima 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P; n je ceo broj od 1 do 24; W se bira između C=O, C=S, CH2, BH, SO i SO2; R6je -H, -R, -OR, -SR, -NR'R", -NO2, ili halogen; 1 Z i Z' se nezavisno biraju između -(CH2)n'-, -(CH2)n'-CR7R8-(CH2)na'-,-(CH2)n'-NR9-(CH2)na'-, -(CH2)n'-O-(CH2)na'- i -(CH2)n'-S-(CH2)na'-; n' i na' su isti ili različiti, i biraju se između 0, 1, 2 i 3; R7i R8su isti ili različiti i svaki se nezavisno bira između -H, -OH, -SH, -COOH, -NHR', polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-, amino-kiseline, peptidne jedinice koja nosi 2 do 6 amino-kiselina, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila koji ima od 1 do 10 ugljenikovih atoma; R9se nezavisno bira između -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila koji ima od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolen jedinice -(OCH2CH2)n-; A i A' su isti ili različiti i nezavisno se biraju između -O-, okso (-C(=O)-), -CRR'O-, -CRR'-, -S-, -CRR'S-, -N(R5)- i -CRR'N(R5)-, R5je pri svakom pojavljivanju nezavisno -H ili opciono supstituisani linearni ili granati alkil koji ima 1 do 10 ugljenikovih atoma; D i D' su isti ili različiti i nezavisno su odsutni ili se biraju iz grupe koja se sastoji od opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, amino-kiseline, peptida koji nosi 2 do 6 amino-kiselina, i polietilen glikolne jedinice (-OCH2CH2)n-; L je odsutan ili kada je prisutan, sadrži tiol grupu, ili je polietilen glikolna jedinica (-OCH2CH2)n-, linearni, granati ili ciklični alkil ili alkenil koji ima 1 do 10 ugljenikovih atoma, fenil grupa, 3- do 18-člani heterociklični prsten ili 5- do 18-člani heteroaril prsten koji ima 1 do 6 heteroatoma koji se nezavisno biraju između O, S, N i P, pri čemu su alkil, alkenil, fenil, ili heterociklični ili heteroaril prsten opciono supstituisani; i imin-reaktivni reagens se bira iz grupe koja se sastoji od sulfita (H2SO3, H2SO2ili so HSO3-, SO3<2->ili HSO2<->formirana sa katjonom), metabisulfita (H2S2O5ili so S2O5<2->formirana sa katjonom) i ditionita (H2S2O4ili so S2O42-formirana sa katjonom) i b) reakciju drugog modifikovanog citotoksičnog jedinjenja sa CBA preko grupe reaktivne sa CBA, na pH od oko 4 do oko 9, da se formira konjugat. 1 1 4. Metod iz patentnog zahteva 3, naznačen time, što modifikovano citotoksično jedinjenje sadrži tiol grupu, i grupa reaktivna sa modifikovanim citotoksičnim jedinjenjem je tiolreaktivna grupa. 5. Metod iz bilo kojeg od patentnih zahteva 1 do 4, naznačen time, što je imin-sadržavajuće citotoksično jedinjenje predstavljeno bilo kojom od sledećih formula:
    ili
    gde: L', L", i L"' su isti ili različiti, i nezavisno se biraju između -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-R<c>, halogena, guanidinijum [-NH(C=NH)NH2], -OR, -NR'R", -NO2, -NR'COR", -SR, sulfoksida predstavljenog -SOR', sulfona predstavljenog -SO2R', sulfonata -SO3M, sulfata -OSO3M, sulfonamida predstavljenog -SO2NR'R", cijano, azido, -COR', -OCOR', -OCONR'R"; M je -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon; i, G se bira između -CH- ili -N-. 6. Metod iz patentnog zahteva 5, naznačen time, što je imin-sadržavajuće citotoksično jedinjenje predstavljeno bilo kojom od sledećih formula:
    ili 1 2
    gde: W' je odsutno, ili kada je prisutno, bira se između -CR<e>R<e'>-, -O-, -O-C(=O)-, -C(=O)-O-, -S-, -SO-, -SO2-, -CH2-S-, -CH2O-, -CH2NR<e>-, -O-(C=O)O-, -O-(C=O)N(R<e>)-, -N(R<e>)-, -N(R<e>)-C(=O)-, -C(=O)-N(R<e>)-, -N(R<e>)-C(=O)O-, -N(C(=O)R<e>)C(=O)-, -N(C(=O)R<e>)-, -(O-CH2-CH2)n-, -SS-, ili -C(=O)-, ili amino-kiseline, ili peptida sa 2 do 8 aminokiselina; R<x>je odsutno, ili kada je prisutno, opciono je supstituisani linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, aril koji nosi 6 do 10 ugljenikovih atoma ili 3- do 8-člani hetereociklični prsten koji nosi 1 do 3 heteroatoma odabrana između O, N ili S; R<e>i R<e'>su isti ili različiti, i biraju se između -H, linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma ili -(CH2-CH2-O)n-R<k>, pri čemu je R<k>-H, linearni, granati ciklični alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma, koji opciono nosi sekundarnu amino (npr., -NHR<101>) ili tercijarnu amino (-NR<101>R<102>) grupu ili 5- ili 6-člani azot-sadržavajući heterocikl, kao piperidin ili morfolin, pri čemu su R<101>i R<102>svaki nezavisno linearni, granati, ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma; poželjno, R<101>i R<102>su svaki nezavisno linearni ili granati alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma; n je ceo broj od 1 do 24. 7. Metod iz patentnog zahteva 6, naznačen time, što: X' se bira iz grupe koja se sastoji od -H, supstituisanog ili nesupstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, fenila, i amin-protektujuće grupe; Y' se bira iz grupe koja se sastoji od -H, okso grupe, supstituisanog ili nesupstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma; A i A' se biraju između -O- i -S-; 1 W' je odsutan, ili se bira između -O-, -N(R<e>)-, -N(R<e>)-C(=O)-, -N(C(=O)R<e>)-, -S- ili -CH2-S-, -CH2NR<e>-; R<x>je odsutan ili se bira između linearnog, granatog ili cikličnog alkila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma; R<e>je -H, linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma ili -(CH2-CH2-O)n-R<k>, gde je R<k>-H, linearni, granati ciklični alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma, koji opciono nosi sekundarnu amino (npr., -NHR<101>) ili tercijarnu amino (-NR<101>R<102>) grupu ili 5- ili 6-člani azot-sadržavajući heterocikl, kao piperidin ili morfolin, gde su R<101>i R<102>svaki nezavisno linearni, granati, ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma; G se bira između -CH- ili -N-. 8. Metod iz bilo kojeg od patentnih zahteva 1-7, naznačen time, što se bifunkcionalno unakrsno povezujuće sredstvo bira između: N-sukcinimidil 4-(maleimidometil)cikloheksankarboksilata (SMCC), N-sukcinimidil-4-(N-maleimidometil)-cikloheksan-1-karboksi-(6-amidokaproata) (LC-SMCC), N-sukcinimidil estra κ-maleimidoundekanske kiseline (KMUA), N-sukcinimidil estra γ-maleimidobuterne kiseline (GMBS), N-hidroksisukcinimid estra ε-maleimidokapronske kiseline (EMCS), m-maleimidobenzoil-N-hidroksisukcinimid estra (MBS), N-(αmaleimidoacetoksi)-sukcinimid estra (AMAS), sukcinimidil-6-(βmaleimidopropionamido)heksanoata (SMPH), N-sukcinimidil 4-(p-maleimidofenil)-butirata (SMPB), N-(p-maleimidofenil)izocijanata (PMPI), N-sukcinimidil-4-(4-nitropiridil-2-ditio)butanoata; N-sukcinimidil-4-(jodoacetil)-aminobenzoata (SIAB), N-sukcinimidil jodoacetata (SIA), N-sukcinimidil bromoacetata (SBA), i N-sukcinimidil 3-(bromoacetamido)propionata (SBAP), bis-maleimidopolietilenglikola (BMPEO), BM(PEO)2, BM(PEO)3, N-(β-maleimidopropiloksi)sukcinimid estra (BMPS), 5-maleimidovalerinske kiseline NHS, HBVS, 4-(4-N-maleimidofenil)-buterne kiseline hidrazid•HCl (MPBH), sukcinimidil-(4-vinilsulfonil)benzoata (SVSB), ditiobis-maleimidoetana (DTME), 1,4-bismaleimidobutana (BMB), 1,4-bismaleimidil-2,3-dihidroksibutana (BMDB), bismaleimidoheksana (BMH), bis-maleimidoetana (BMOE), sulfosukcinimidil 4-(N-maleimidometil)cikloheksan-1-karboksilata (sulfo-SMCC), sulfosukcinimidil(4-jodoacetil)aminobenzoata (sulfo-SIAB), m-maleimidobenzoil-N-hidroksisulfosukcinimid estra (sulfo-MBS), N-(γ-maleimidobutriloksi)sulfosukcinimid estra (sulfo-GMBS), N-(εmaleimidokaproiloksi)sulfosukcimido estra (sulfo-EMCS), N-(κmaleimidoundekanoiloksi)sulfosukcinimid estra (sulfo-KMUS), sulfosukcinimidil 4-(p- 1 4 maleimidofenil)butirata (sulfo-SMPB), CX1-1, sulfo-Mal, PEGn-Mal, N-sukcinimidil-4-(4-nitropiridil-2-ditio)butanoata, N-sukcinimidil-3-(2-piridilditio)propionata (SPDP), N-sukcinimidil-4-(2-piridilditio)pentanoata (SPP), N-sukcinimidil-4-(2-piridilditio)butanoata (SPDB), i N-sukcinimidil-4-(2-piridilditio)2-sulfo butanoata (sulfo-SPDB). 9. Metod pripremanja konjugata, naznačen time, što konjugat sadrži sredstvo koje se vezuje za ćeliju (CBA) konjugovano za citotoksično jedinjenje sa povezujućom grupom, metod uključuje reakciju drugog modifikovanog citotoksičnog jedinjenja sa CBA na pH od oko 4 do oko 9, pri čemu drugo modifikovano citotoksično jedinjenje uključuje: reziduu bifunkcionalnog povezujućeg sredstva vezanu za citotoksično jedinjenje, i rezidua uključuje povezujuću grupu i reaktivnu grupu koja se bira između reaktivnog estra i tiolreaktivne grupe i predstavljeno je jednom od sledećih formula:
    ili
    ili njenom farmaceutski prihvatljivom solju, pri čemu se drugo modifikovano citotoksično jedinjenje proizvodi reakcijom imin-reaktivnog reagensa sa imin-sadržavajučim citotoksičnim jedinjenjem koje nosi povezujuću grupu i reaktivnu grupu i gde je imin-sadržavajuće citotoksično jedinjenje predstavljeno jednom od sledećih formula:
    ili
    1 ili njenom farmaceutski prihvatljivom solju, gde: -C(Y)-N(H)- motiv u formulama (Ia') i (IIa') rezultat je reakcije imin-reaktivnog reagensa sa imin-sadržavajućim citotoksičnim jedinjenjem; X' se bira između -H, amin-protektujuće grupe, povezujuće grupe sa reaktivnom grupom vezanom za nju, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, opciono supstituisanog arila koji ima 6 do 18 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika, i sumpora, opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P; Y' se bira između -H, okso grupe, povezujuće grupe sa reaktivnom grupom vezanom za nju, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 6- do 18-članog arila, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih između azota, kiseonika, i sumpora, opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma; R<c>je -H ili supstituisani ili nesupstituisani linearni ili granati alkil koji ima 1 do 4 ugljenikova atoma, ili povezujuća grupa sa reaktivnom grupom vezanom za nju; R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3' i R4' se, svaki nezavisno, biraju iz grupe koja se sastoji od -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-R<c>, halogena, guanidinijuma [-NH(C=NH)NH2], -OR, -NR'R", -NO2, -NCO, -NR'COR", -SR, sulfoksida predstavljenog -SOR', sulfona predstavljenog -SO2R', sulfonata -SO3-M<+>, sulfata -OSO3-M<+>, sulfonamida predstavljenog -SO2NR'R", cijano, azido, -COR', -OCOR', -OCONR'R", i povezujuće grupe sa reaktivnom grupom vezanom za nju; R se, pri svakom pojavljivanju, nezavisno bira iz grupe koja se sastoji od -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, opciono supstituisanog arila sa 6 do 18 ugljenikovih atoma, opciono supstituisanog 5- do 18-članog heteroaril prstena koji sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih 1 između azota, kiseonika, i sumpora, ili opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P; R' i R" se svaki nezavisno biraju između -H, -OH, -OR, -NHR, -NR2,-COR, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(CH2CH2O)n-R<c>, i opciono supstituisanog 3- do 18-članog heterocikličnog prstena koji sadrži 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P; n je ceo broj od 1 do 24; W se bira između C=O, C=S, CH2, BH, SO i SO2; R6je -H, -R, -OR, -SR, -NR'R", -NO2, halogen ili povezujuća grupa sa reaktivnom grupom vezanom za nju; Z i Z' se nazavisno biraju između -(CH2)n'-, -(CH2)n'-CR7R8-(CH2)na'-,-(CH2)n'-NR9-(CH2)na'-, -(CH2)n'-O-(CH2)na'- i -(CH2)n'-S-(CH2)na'-; n' i na' su isti ili različiti i biraju se između 0, 1, 2 i 3; R7i R8su isti ili različiti i biraju se svaki nezavisno između -H, -OH, -SH, -COOH, -NHR', polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-, amino-kiseline, peptidne jedinice koja nosi 2 do 6 amino-kiselina, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila koji iima od 1 do 10 ugljenikovih atoma; R9se nezavisno bira između -H, opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, polietilen glikolne jedinice -(OCH2CH2)n-; A i A' su isti ili različiti i biraju se nezavisno između -O-, okso (-C(=O)-), -CRR'O-, -CRR'-, -S-, -CRR'S-, -NR5i -CRR'N(R5)-; R5je pri svakom pojavljivanju nezavisno -H ili opciono supstituisani linearni ili granati alkil koji ima 1 do 10 ugljenikovih atoma; D i D' su isti ili različiti, i nezavisno su odsutni ili se biraju iz grupe koja se sastoji od opciono supstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, amino-kiseline, peptida koji nosi 2 do 6 amino-kiselina, i polietilen glikolne jedinice (-OCH2CH2)n-; L je odsutan, povezujuća grupa sa reaktivnom grupom vezanom za nju, polietilen glikolna jedinica (-OCH2CH2)n-, linearni, granati ili ciklični alkil ili alkenil sa 1 do 10 ugljenikovih atoma, fenil grupa, 3- do 18-člani heterociklični prsten ili 5- do 18-člani heteroaril prsten koji ima 1 do 6 heteroatoma nezavisno odabranih između O, S, N i P, 1 gde su alkil ili alkenil opciono supstituisani povezujućom grupom sa reaktivnom grupom vezanom za nju; fenil ili heterociklični ili heteroaril prsten može opciono biti susptituisan, pri čemu supstituent može biti povezujuća grupa sa reaktivnom grupom koja je za nju vezana; i imin-reaktivni reagens se bira iz grupe koja se sastoji od sulfita (H2SO3, H2SO2ili so HSO3-, SO3<2->ili HSO2<->formirana sa katjonom), metabisulfita (H2S2O5ili so S2O52-formirana sa katjonom) i ditionita (H2S2O4ili so S2O4<2->formirana sa katjonom). 10. Metod iz patentnog zahteva 3 ili patentnog zahteva 9, naznačen time, što je drugo modifikovano citotoksično jedinjenje predstavljeno bilo kojom od sledećih formula:
    ili
    gde: Y se bira između -SO3M, -SO2M ili -OSO3M; M je -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon kao što su Na<+>ili K<+>; X' se bira iz grupe koja se sastoji od -H, supstituisanog ili nesupstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma, fenila, i amin-protektujuće grupe; Y' se bira iz grupe koja se sastoji od -H, okso grupe, supstituisanog ili nesupstituisanog linearnog, granatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma; A i A' se biraju između -O- i -S-; W' je odsutan ili se bira između -O-, -N(R<e>)-, -N(R<e>)-C(=O)-, -N(C(=O)R<e>)-, -S- ili -CH2-S-, -CH2NR<e>-; 1 R<x>je odsutan ili se bira između linearnog, granatog ili cikličnog alkila sa 1 do 10 ugljenikovih atoma; R<e>je -H, linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma ili -(CH2-CH2-O)n-R<k>, gde je R<k>-H, linearni, granati ciklični alkil sa 1 do 6 ugljenikovih atoma, koji opciono nosi sekundarnu amino (npr., -NHR<101>) ili tercijarnu amino (-NR<101>R<102>) grupu ili 5- ili 6-člani azot-sadržavajući heterocikl, kao piperidin ili morfolin, gde su R<101>i R<102>svaki nezavisno linearni, granati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa od 1 do 10 ugljenikovih atoma; G se bira između -CH- ili -N-; Z<s>se bira između bilo koje od sledećih formula:
    1
    gde: q je ceo broj od 1 do 5; poželjno q je 2; n je ceo broj od 2 do 6; poželjno n je 4; D je -H ili -SO3M; M je -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon, kao što su Na<+>ili K<+>. 11. Metod iz bilo kojeg od patentnih zahteva 1-10, naznačen time, što je konjugat: 1
    ili
    gde je r ceo broj od 1 do 10, Y je -SO3M, i M jes -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon. 12. Metod iz bilo kojeg od patentnih zahteva 1-11, naznačen time, što je sredstvo koje se vezuje za ćeliju antitelo, jednolančano antitelo, fragment antitela koji se specifično vezuje za ciljnu 1 1 ćeliju, monoklonsko antitelo, jednolančano monoklonsko antitelo, ili fragment monoklonskog antitela koji se specifično vezuje za ciljnu ćeliju, himerno antitelo, fragment himernog antitela koji se specifično vezuje za ciljnu ćeliju, domensko antitelo, fragment domenskog antitela koji se specifično vezuje za ciljnu ćeliju, limfokin, hormon, vitamin, faktor rasta, faktor stimulacija kolonija, ili molekul za transport nutrijenta. 13. Metod iz patentnog zahteva 1, naznačen time, što je to metod za pripremanje konjugata sledeće formule:
    ili 1 2
    i metod uključuje reakciju modifikovanog citotoksičnog jedinjenja proizvedenog reakcijom imin-reaktivnog reagensa sa imin-sadržavajućim citotoksičnim jedinjenjem sledeće formule:
    sa modifikovanim CBA sledeće formule, respektivno, na pH od oko 4 do oko 9,
    X = -H ili -NO2,
    gde: 1 r je ceo broj od 1 do 10; i gde je -C(Y)-N(H)- motiv u konjugatu rezultat reakcije imin-reaktivnog reagensa sa imni-sadržavajućim citotoksičnim jedinjenjem. 14. Metod iz patentnog zahteva 13, naznačen time, što modifikovano citotoksično jedinjenje ima sledeću formulu:
    gde je Y -SO3M i M je -H ili farmaceutski prihvatljivi katjon. 15. Metod iz patentnog zahteva 2, naznačen time, što je to metod za pripremanje konjugata sledeće formule:
    1 4 ili
    i metod uključuje reakciju CBA sa imin-sadržavajućim citotoksičnim jedinjenjem, iminreaktivnim reagensom, i bifunkcionalnim unakrsno povezujućim sredstvom koje sadrži povezujuću grupu da se formira konjugat, gde: imin-sadržavajuće citotoksično jedinjenje je:
    bifunkcionalno unakrsno povezujuće sredstvo je:
    (X = -H ili -NO2),
    1 ili
    respektivno i gde je -C(Y)-N(H)- motiv u konjugatu rezultat reakcije imin-reaktivnog reagensa sa imin-sadržavajućim citotoksičnim jedinjenjem. 16. Metod iz bilo kojeg od prethodnih patentnih zahteva, naznačen time, što je imin-reaktivno sredstvo NaHSO3ili KHSO3. 1
RS20190394A 2011-02-15 2012-02-15 Metodi pripremanja konjugata RS58620B1 (sr)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161443092P 2011-02-15 2011-02-15
US201161443062P 2011-02-15 2011-02-15
US201161483499P 2011-05-06 2011-05-06
EP12705761.0A EP2675480B1 (en) 2011-02-15 2012-02-15 Methods of preparation of conjugates
PCT/US2012/025257 WO2012112687A1 (en) 2011-02-15 2012-02-15 Methods of preparation of conjugates

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS58620B1 true RS58620B1 (sr) 2019-05-31

Family

ID=45755579

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20190394A RS58620B1 (sr) 2011-02-15 2012-02-15 Metodi pripremanja konjugata
RS20160186A RS54667B1 (sr) 2011-02-15 2012-02-15 Citotoksični benzodiazepinski derivati

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20160186A RS54667B1 (sr) 2011-02-15 2012-02-15 Citotoksični benzodiazepinski derivati

Country Status (29)

Country Link
US (12) US8765740B2 (sr)
EP (6) EP2675480B1 (sr)
JP (8) JP5826863B2 (sr)
KR (6) KR20190051081A (sr)
CN (5) CN113896731A (sr)
AU (5) AU2012231640B2 (sr)
BR (2) BR112013020540B1 (sr)
CA (4) CA2824864C (sr)
CY (2) CY1117340T1 (sr)
DK (2) DK2675479T3 (sr)
ES (2) ES2717657T3 (sr)
HR (2) HRP20160164T1 (sr)
HU (2) HUE028736T2 (sr)
IL (6) IL279304B (sr)
LT (1) LT2675480T (sr)
ME (1) ME02381B (sr)
MX (3) MX384514B (sr)
MY (2) MY183977A (sr)
PL (2) PL2675480T3 (sr)
PT (1) PT2675480T (sr)
RS (2) RS58620B1 (sr)
RU (4) RU2631498C2 (sr)
SG (4) SG191965A1 (sr)
SI (2) SI2675480T1 (sr)
SM (2) SMT201900181T1 (sr)
TW (1) TWI617555B (sr)
UA (1) UA120696C2 (sr)
WO (3) WO2012112687A1 (sr)
ZA (2) ZA201305386B (sr)

Families Citing this family (167)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1789391B1 (en) 2004-07-23 2017-06-28 Endocyte, Inc. Bivalent linkers and conjugates thereof
HRP20120794T1 (hr) 2005-08-24 2012-11-30 Immunogen, Inc. Postupak za pripremu proäśišä†enih konjugata lijeka
US9877965B2 (en) 2007-06-25 2018-01-30 Endocyte, Inc. Vitamin receptor drug delivery conjugates for treating inflammation
WO2009002993A1 (en) 2007-06-25 2008-12-31 Endocyte, Inc. Conjugates containing hydrophilic spacer linkers
CA2750519C (en) 2009-02-05 2018-09-25 Immunogen, Inc. Benzodiazepine derivatives
RS58810B1 (sr) 2009-06-03 2019-07-31 Immunogen Inc Metodi konjugacije
CN107019804A (zh) 2010-04-15 2017-08-08 西雅图基因公司 靶向吡咯并苯并二氮杂卓结合物
BR112012026410B8 (pt) 2010-04-15 2023-01-31 Spirogen Dev Sarl Composto e conjugado de pirrolobenzodiazepinas e usos dos mesmos
SG191965A1 (en) 2011-02-15 2013-08-30 Immunogen Inc Methods of preparation of conjugates
CN103717262B (zh) 2011-03-29 2017-09-15 伊缪诺金公司 通过一步法制备类美登素抗体缀合物
CN103987718A (zh) 2011-09-20 2014-08-13 斯皮罗根有限公司 作为非对称二聚体pbd化合物用于内含在靶向结合物中的吡咯并苯并二氮杂卓
AU2012322932B2 (en) 2011-10-14 2016-11-10 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines
KR101961976B1 (ko) 2011-10-14 2019-03-25 시애틀 지네틱스, 인크. 피롤로벤조디아제핀 및 표적 접합체
CA2850103C (en) 2011-10-14 2019-09-10 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines
CN103987384A (zh) 2011-10-14 2014-08-13 西雅图基因公司 吡咯并苯并二氮杂卓和靶向结合物
US9764038B2 (en) 2011-12-23 2017-09-19 Innate Pharma Enzymatic conjugation of antibodies
EP2848686B1 (en) * 2012-04-04 2024-12-25 Perseus Proteomics Inc. Conjugate of anti-cdh3 (p-cadherin) antibody and drug
SG10201608904YA (en) 2012-05-15 2016-12-29 Seattle Genetics Inc Self-Stabilizing Linker Conjugates
US9504756B2 (en) 2012-05-15 2016-11-29 Seattle Genetics, Inc. Self-stabilizing linker conjugates
US10132799B2 (en) 2012-07-13 2018-11-20 Innate Pharma Screening of conjugated antibodies
WO2014031566A1 (en) * 2012-08-22 2014-02-27 Immunogen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives
MX359599B (es) 2012-10-04 2018-09-12 Immunogen Inc Uso de una membrana de pvdf para purificar conjugados de agentes de unión celular y agentes citotóxicos.
RS57694B1 (sr) 2012-10-12 2018-11-30 Adc Therapeutics Sa Pirolobenzodiazepin - anti-psma konjugati antitela
WO2014057120A1 (en) * 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
WO2014057114A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-anti-psma antibody conjugates
SMT202100265T1 (it) 2012-10-12 2021-07-12 Medimmune Ltd Pirrolobenzodiazepine e loro coniugati
SMT201800346T1 (it) * 2012-10-12 2018-09-13 Medimmune Ltd Coniugati pirrolobenzodiazepina-anticorpo
PL2906251T3 (pl) 2012-10-12 2018-02-28 Adc Therapeutics Sa Koniugaty pirolobenzodiazepina-przeciwciało anty-CD22
EP2839860B1 (en) 2012-10-12 2019-05-01 MedImmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
KR101995619B1 (ko) 2012-10-12 2019-07-03 에이디씨 테라퓨틱스 에스에이 피롤로벤조디아제핀-항체 컨주게이트
JP6367204B2 (ja) 2012-10-12 2018-08-01 メドイミューン・リミテッドＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ 結合用のピロロベンゾジアゼピン誘導体の合成および中間体
WO2014057118A1 (en) * 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sarl Pyrrolobenzodiazepine-anti-cd22 antibody conjugates
EP3564259A3 (en) 2012-11-09 2020-02-12 Innate Pharma Recognition tags for tgase-mediated conjugation
WO2014074218A1 (en) * 2012-11-12 2014-05-15 Redwood Bioscience, Inc. Compounds and methods for producing a conjugate
US9353150B2 (en) 2012-12-04 2016-05-31 Massachusetts Institute Of Technology Substituted pyrazino[1′,2′:1 ,5]pyrrolo[2,3-b]-indole-1,4-diones for cancer treatment
CN110452242A (zh) 2012-12-21 2019-11-15 麦迪穆有限责任公司 吡咯并苯并二氮杂卓及其结合物
CN110627797A (zh) * 2012-12-21 2019-12-31 麦迪穆有限责任公司 用于治疗增殖性和自身免疫疾病的非对称吡咯并苯并二氮杂卓二聚物
AU2013364065B2 (en) 2012-12-21 2018-10-04 Altrubio Inc. Hydrophilic self-immolative linkers and conjugates thereof
KR20210024245A (ko) * 2013-03-13 2021-03-04 시애틀 지네틱스, 인크. 사이클로덱스트린 및 항체-약물 포합체 제형
CA2904044C (en) 2013-03-13 2020-03-31 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
ES2702181T3 (es) 2013-03-13 2019-02-27 Seattle Genetics Inc Filtración con carbono activado para la purificación de ADC de benzodiazepina
EA027910B1 (ru) * 2013-03-13 2017-09-29 Медимьюн Лимитед Пирролобензодиазепины и их конъюгаты
US10611824B2 (en) 2013-03-15 2020-04-07 Innate Pharma Solid phase TGase-mediated conjugation of antibodies
WO2014202773A1 (en) 2013-06-20 2014-12-24 Innate Pharma Enzymatic conjugation of polypeptides
CA2914189C (en) 2013-06-21 2023-03-14 Innate Pharma Enzymatic conjugation of polypeptides
US10208125B2 (en) 2013-07-15 2019-02-19 University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education Anti-mucin 1 binding agents and uses thereof
CA2922529A1 (en) 2013-08-28 2015-03-05 Stemcentrx, Inc. Novel sez6 modulators and methods of use
CN105873612A (zh) * 2013-08-28 2016-08-17 施特姆森特克斯股份有限公司 改造的抗-dll3缀合物以及应用方法
WO2015031698A1 (en) 2013-08-28 2015-03-05 Stem Centrx, Inc. Site-specific antibody conjugation methods and compositions
CN107074879B (zh) * 2013-09-02 2022-04-15 杭州多禧生物科技有限公司 应用于细胞结合分子-药物共轭体的新型细胞毒性分子
EP3054983B1 (en) 2013-10-11 2019-03-20 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
GB201317981D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
US9950078B2 (en) 2013-10-11 2018-04-24 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
EP3054986B1 (en) 2013-10-11 2019-03-20 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
AU2014337555C1 (en) 2013-10-15 2021-01-28 Seagen Inc. PEGylated drug-linkers for improved Ligand-Drug Conjugate pharmacokinetics
CN106456725B9 (zh) 2014-02-11 2022-08-09 西雅图基因公司 蛋白质的选择性还原
KR20170008202A (ko) 2014-02-21 2017-01-23 애브비 스템센트알엑스 엘엘씨 흑색종에 사용하기 위한 항-ｄｌｌ3 항체 및 약물 접합체
WO2015153401A1 (en) * 2014-04-04 2015-10-08 Merck Sharp & Dohme Corp Phosphate based linkers for intracellular delivery of drug conjugates
WO2015179400A2 (en) * 2014-05-20 2015-11-26 Immunogen,Inc. Methods for characterizing and treating acute myeloid leukemia
US9950077B2 (en) * 2014-06-20 2018-04-24 Bioalliance C.V. Anti-folate receptor alpha (FRA) antibody-drug conjugates and methods of using thereof
WO2016008112A1 (en) 2014-07-16 2016-01-21 Medshine Discovery Inc. Linkers and application towards adc thereof
US20160058884A1 (en) * 2014-09-02 2016-03-03 Immunogen, Inc. Methods for formulating antibody drug conjugate compositions
MA40415A (fr) * 2014-09-03 2016-03-10 Immunogen Inc Conjugués comprenant des agents de liaison cellulaire et des agents cytotoxiques
TW201613930A (en) 2014-09-03 2016-04-16 Immunogen Inc Cytotoxic benzodiazepine derivatives
KR20240023671A (ko) 2014-09-03 2024-02-22 이뮤노젠 아이엔씨 세포독성 벤조다이아제핀 유도체
GB201416112D0 (en) 2014-09-12 2014-10-29 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
MX2017003126A (es) 2014-09-12 2017-08-28 Genentech Inc Anticuerpos anti-her2 e inmunoconjugados.
RU2727663C2 (ru) * 2014-09-17 2020-07-22 Дженентек, Инк. Иммуноконъюгаты, содержащие антитела против her2 и пирролбензодиазепины
GB201419108D0 (en) 2014-10-27 2014-12-10 Glythera Ltd Materials and methods relating to linkers for use in antibody drug conjugates
KR20170088905A (ko) * 2014-11-19 2017-08-02 이뮤노젠 아이엔씨 세포 결합 작용제-세포독성 작용제 접합체를 제조하기 위한 공정
CN107148285B (zh) 2014-11-25 2022-01-04 Adc治疗股份有限公司 吡咯并苯并二氮杂䓬-抗体缀合物
EP3735990A1 (en) * 2014-12-09 2020-11-11 Abbvie Inc. Antibody drug conjugates with cell permeable bcl-xl inhibitors
SI3333191T1 (sl) 2014-12-11 2021-03-31 Pierre Fabre Medicament Proti C10ORF54 protitelesa in uporaba le-teh
TW201632532A (zh) 2015-01-14 2016-09-16 必治妥美雅史谷比公司 伸雜芳基－橋聯苯并二氮呯二聚體，其共軛物及製造及使用方法
WO2016115191A1 (en) 2015-01-14 2016-07-21 Bristol-Myers Squibb Company Benzodiazepine dimers, conjugates thereof, and methods of making and using
CN107847609A (zh) * 2015-03-13 2018-03-27 恩多塞特公司 用于治疗疾病的缀合物
EP3270903B1 (en) 2015-03-17 2020-05-06 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Disulfide-containing alkyne linking agents
US9504694B2 (en) 2015-03-19 2016-11-29 Cellerant Therapeutics, Inc. Isoquinolidinobenzodiazepines
GB201506402D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506411D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Bergenbio As Humanized anti-axl antibodies
EA039619B1 (ru) * 2015-05-20 2022-02-17 Иммуноджен, Инк. Способ получения индолинобензодиазепиновых соединений
GB201510010D0 (en) 2015-06-09 2015-07-22 King S College London PDD and BPD compounds
BR112017027258A2 (pt) 2015-06-23 2018-08-28 Bristol-Myers Squibb Company dímeros de benzodiazepina macrocíclicos, conjugados dos mesmos, preparação e usos
DK3313884T3 (da) * 2015-06-29 2021-02-22 Immunogen Inc Anti-cd123-antistoffer og konjugater og derivater deraf
MA42250B1 (fr) * 2015-06-29 2020-11-30 Immunogen Inc Conjugués d'anticorps à cystéine modifiée
IL283355B (en) 2015-07-21 2022-08-01 Immunogen Inc Methods for the preparation of cytotoxic benzodiazepine compounds
US20180339985A1 (en) 2015-08-21 2018-11-29 Femtogenix Limited Pdd compounds
GB201514928D0 (en) 2015-08-21 2015-10-07 King S College London PDD compounds
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation
DK3380525T3 (da) 2015-11-25 2024-01-29 Immunogen Inc Farmaceutiske formuleringer og fremgangsmåder til anvendelse deraf
CN108713026B (zh) 2016-01-08 2023-01-06 美国全心医药生技股份有限公司 四价抗psgl-1抗体及其用途
GB201601431D0 (en) 2016-01-26 2016-03-09 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines
KR20180105233A (ko) * 2016-02-05 2018-09-27 이뮤노젠 아이엔씨 세포 결합제-세포독성제 접합체를 제조하기 위한 효율적인 방법
WO2017136693A1 (en) * 2016-02-05 2017-08-10 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Gcc-targeted antibody-drug conjugates
GB201602356D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
GB201602359D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
EP3433278A4 (en) 2016-03-25 2019-11-06 Seattle Genetics, Inc. METHOD FOR THE PRODUCTION OF PEGYLATED ACTIVE LINKERS AND INTERMEDIATE PRODUCTS THEREOF
US20200323991A1 (en) * 2016-03-29 2020-10-15 Endocyte, Inc. Pbd conjugates for treating diseases
SG11201807652SA (en) * 2016-04-20 2018-10-30 Hangzhou Dac Biotech Co Ltd Derivatives of amanita toxins and their conjugation to a cell binding molecule
AU2017254674A1 (en) 2016-04-21 2018-11-01 Abbvie Stemcentrx Llc Novel anti-BMPR1B antibodies and methods of use
GB201607478D0 (en) 2016-04-29 2016-06-15 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
US10918627B2 (en) 2016-05-11 2021-02-16 Massachusetts Institute Of Technology Convergent and enantioselective total synthesis of Communesin analogs
TW201808936A (zh) 2016-05-18 2018-03-16 美商梅爾莎納醫療公司 吡咯并苯并二氮呯類及其共軛物
EP3475284B1 (en) 2016-06-24 2022-11-02 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
BR112019001945A2 (pt) 2016-08-09 2019-05-07 Seattle Genetics, Inc. composição de conjugado de fármaco aglutinante, formulação farmaceuticamente aceitável, métodos para tratar uma doença ou afecção hiperproliferativa, para inibir a multiplicação de uma célula tumoral ou célula cancerígena e para preparar uma composição de conjugado de fármaco aglutinado, e, composto
GB201617466D0 (en) 2016-10-14 2016-11-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
WO2018085359A1 (en) * 2016-11-02 2018-05-11 Immunogen, Inc. Combination treatment with antibody-drug conjugates and parp inhibitors
JP7039582B2 (ja) * 2016-11-03 2022-03-22 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 活性化可能な抗ｃｔｌａ－４抗体およびその使用
CN116813690A (zh) 2016-11-23 2023-09-29 伊缪诺金公司 苯并二氮䓬衍生物的选择性磺化
JP7244987B2 (ja) 2016-12-14 2023-03-23 シージェン インコーポレイテッド 多剤抗体薬物コンジュゲート
CN110234348B (zh) 2016-12-16 2024-06-25 蓝鳍生物医药公司 抗-含cub结构域蛋白1(cdcp1)抗体、抗体药物缀合物及其使用方法
CN110267685B (zh) 2016-12-23 2023-06-20 伊缪诺金公司 靶向adam9的免疫缀合物及其使用方法
US20180230218A1 (en) 2017-01-04 2018-08-16 Immunogen, Inc. Met antibodies and immunoconjugates and uses thereof
WO2018138032A2 (en) 2017-01-24 2018-08-02 Innate Pharma NKp46 BINDING AGENTS
SI3573948T1 (sl) 2017-01-25 2023-03-31 Immunogen, Inc. Postopki za pripravo citotoksičnih derivatov benzodiazepina
US20200023071A1 (en) 2017-02-06 2020-01-23 Innate Pharma Immunomodulatory antibody drug conjugates binding to a human mica polypeptide
JP6671555B2 (ja) 2017-02-08 2020-03-25 アーデーセー セラピューティクス ソシエテ アノニム ピロロベンゾジアゼピン抗体複合体
GB201702031D0 (en) 2017-02-08 2017-03-22 Medlmmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
SG11201908325PA (en) 2017-03-24 2019-10-30 Seattle Genetics Inc Process for the preparation of glucuronide drug-linkers and intermediates thereof
WO2018183494A1 (en) 2017-03-31 2018-10-04 Immunogen, Inc. Cd19-targeting antibody-drug conjugates
CN110582505B (zh) 2017-04-18 2021-04-02 免疫医疗有限公司 吡咯并苯并二氮杂*缀合物
CN106841192B (zh) * 2017-04-18 2019-05-03 乐凯（沈阳）科技产业有限责任公司 一种二氮杂卓结构指示剂检测甲醛方法及其应用
MX2019012464A (es) 2017-04-20 2019-12-11 Adc Therapeutics Sa Terapia combinada con un conjugado de anticuerpo y farmaco anti-axl.
KR20230154089A (ko) * 2017-04-20 2023-11-07 이뮤노젠 아이엔씨 인돌리노벤조다이아제핀 유도체를 제조하는 방법
US20180346488A1 (en) * 2017-04-20 2018-12-06 Immunogen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives and conjugates thereof
WO2018209239A1 (en) 2017-05-11 2018-11-15 Massachusetts Institute Of Technology Potent agelastatin derivatives as modulators for cancer invasion and metastasis
AU2018285562B2 (en) 2017-06-14 2024-01-18 Adc Therapeutics Sa Dosage regimes for the administration of an anti-CD19 ADC
AU2018305726B2 (en) * 2017-07-26 2022-09-15 The University Of Queensland Disulfide bond containing compounds and uses thereof
ES2906965T3 (es) 2017-08-18 2022-04-21 Medimmune Ltd Conjugados de pirrolobenzodiazepina
TWI820044B (zh) 2017-09-29 2023-11-01 日商第一三共股份有限公司 抗體－吡咯并苯二氮呯衍生物複合體
US10640508B2 (en) 2017-10-13 2020-05-05 Massachusetts Institute Of Technology Diazene directed modular synthesis of compounds with quaternary carbon centers
TW201922294A (zh) 2017-10-31 2019-06-16 美商伊繆諾金公司 抗體-藥物結合物與阿糖胞苷之組合治療
WO2019092148A1 (en) 2017-11-10 2019-05-16 Innate Pharma Antibodies with functionalized glutamine residues
US11638760B2 (en) 2017-11-27 2023-05-02 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates
JP2021508714A (ja) 2017-12-28 2021-03-11 イミュノジェン・インコーポレーテッド ベンゾジアゼピン誘導体
CN111587125A (zh) * 2018-01-12 2020-08-25 伊缪诺金公司 抗体药物缀合、纯化和调配的方法
GB201803342D0 (en) 2018-03-01 2018-04-18 Medimmune Ltd Methods
US12060427B2 (en) 2018-03-28 2024-08-13 Mitsubishi Tanabe Pharma Corporat Drug conjugates of cMET monoclonal binding agents, and uses thereof
GB201806022D0 (en) 2018-04-12 2018-05-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
TW202003048A (zh) 2018-05-15 2020-01-16 美商伊繆諾金公司 用抗體-藥物偶聯物及flt3抑制劑之組合治療
TWI897855B (zh) * 2018-10-26 2025-09-21 美商免疫遺傳股份有限公司 Ｅ ｐ Ｃ Ａ Ｍ 抗體、可活化抗體及免疫偶聯物以及其用途
EP3880681B1 (en) 2018-11-12 2024-03-13 ImmunoGen, Inc. Methods of preparing cytotoxic benzodiazepine derivatives
US10913713B2 (en) 2018-11-12 2021-02-09 Immunogen, Inc. Methods of preparing cytotoxic benzodiazepine derivatives
CN111393502B (zh) * 2019-01-03 2022-04-29 北京京东方技术开发有限公司 一种类肽及其制备方法和用途
GB201901197D0 (en) 2019-01-29 2019-03-20 Femtogenix Ltd G-A Crosslinking cytotoxic agents
SG11202108312PA (en) 2019-02-08 2021-08-30 Ac Immune Sa Method of safe administration of phosphorylated tau peptide vaccine
ES2967878T3 (es) 2019-03-15 2024-05-06 Medimmune Ltd Dímeros de azetidobenzodiazepina y conjugados que los comprenden para uso en el tratamiento del cáncer
CN113661172A (zh) * 2019-03-29 2021-11-16 伊缪诺金公司 用于抑制异常细胞生长或治疗增生性疾病的细胞毒性双苯并二氮杂䓬衍生物及其与细胞结合剂的缀合物
CA3137125A1 (en) 2019-04-26 2020-10-29 Immunogen, Inc. Camptothecin derivatives
WO2020247054A1 (en) 2019-06-05 2020-12-10 Massachusetts Institute Of Technology Compounds, conjugates, and compositions of epipolythiodiketopiperazines and polythiodiketopiperazines and uses thereof
EP4132588A1 (en) 2020-04-10 2023-02-15 Seagen Inc. Charge variant linkers
AU2021387795A1 (en) 2020-11-25 2023-06-01 Innate Pharma Treatment of cancer
WO2022182415A1 (en) 2021-02-24 2022-09-01 Massachusetts Institute Of Technology Himastatin derivatives, and processes of preparation thereof, and uses thereof
EP4308171A1 (en) 2021-03-18 2024-01-24 Seagen Inc. Selective drug release from internalized conjugates of biologically active compounds
US12036286B2 (en) 2021-03-18 2024-07-16 Seagen Inc. Selective drug release from internalized conjugates of biologically active compounds
WO2023018960A1 (en) 2021-08-13 2023-02-16 Immunogen, Inc. Improved methods for preparing cytotoxic benzodiazepine derivatives
JP7707942B2 (ja) * 2022-01-25 2025-07-15 株式会社三洋物産 遊技機
JP7707943B2 (ja) * 2022-01-25 2025-07-15 株式会社三洋物産 遊技機
JP7707941B2 (ja) * 2022-01-25 2025-07-15 株式会社三洋物産 遊技機
JP7707940B2 (ja) * 2022-01-25 2025-07-15 株式会社三洋物産 遊技機
JP2025517476A (ja) 2022-05-25 2025-06-05 イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニム ネクチン－４結合剤
AU2023298568A1 (en) 2022-06-30 2025-01-09 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for cancer treatment and/or prevention
CA3258658A1 (en) 2022-07-12 2024-01-18 Immunogen, Inc. Immunoconjugates, EPCAM, and their uses
TW202409080A (zh) * 2022-07-26 2024-03-01 美商沙塔克實驗室股份有限公司 用於治療卵巢癌之組合療法
WO2024076973A1 (en) * 2022-10-04 2024-04-11 Brown University Compositions and methods of delivering large proteins
WO2024129756A1 (en) 2022-12-13 2024-06-20 Seagen Inc. Site-specific engineered cysteine antibody drug conjugates
WO2025149947A1 (en) 2024-01-12 2025-07-17 Seagen Inc. Antibody-drug conjugates

Family Cites Families (128)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU11248A1 (ru) 1927-03-29 1929-09-30 В.С. Григорьев Способ очистки антрацена
US3453266A (en) 1966-03-14 1969-07-01 American Home Prod 1,2,5-benzothiadiazepine 1,1-dioxides
US3506646A (en) 1966-06-27 1970-04-14 American Home Prod Process for the preparation of 7h-pyrido (1,2-b)(1,2,5)benzothiadiazepine 5,5 - dioxides and pyrrolo(1,2-b)(1,2,5)benzothiadiazepine 5,5-dioxides
US3860600A (en) 1972-07-10 1975-01-14 Sterling Drug Inc Octahydropyrrido{8 2,1-c{9 {8 1,4{9 benzodiazepines
US3763183A (en) 1972-07-10 1973-10-02 Sterling Drug Inc 1,2,3,10,11,11a-hexahydro-5h-pyrrolo (2,1-c)(1,4)benzodiazepines
US3875162A (en) 1973-07-26 1975-04-01 Squibb & Sons Inc Certain 6H-pyrimido{8 1,2-c{9 {8 1,3,5{9 benzothiadiaza compounds
US4003905A (en) 1974-12-11 1977-01-18 E. R. Squibb & Sons, Inc. Diels-alder adducts of benzdiazepines
US4342771A (en) 1981-01-02 1982-08-03 Pfizer Inc. Hypoglycemic 5-substituted oxazolidine-2,4-diones
JPS57131791A (en) 1980-12-31 1982-08-14 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd Benzodiazepine derivative and its preparation
US4444688A (en) 1981-05-11 1984-04-24 Ciba-Geigy Corporation Imidazobenzothiadiazepines
US4678784A (en) 1984-04-11 1987-07-07 Mcneilab, Inc. Method for the treatment of LHRH diseases and conditions
JP2920385B2 (ja) 1988-08-18 1999-07-19 武田薬品工業株式会社 １，２，５‐ベンゾチアジアゼピン誘導体，その製造法および用途
GB8827305D0 (en) 1988-11-23 1988-12-29 British Bio Technology Compounds
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
ES2341666T3 (es) 1991-12-02 2010-06-24 Medimmune Limited Produccion de autoanticuerpos de repertorios de segmentos de anticue rpos expresados en la superficie de fagos.
GB9205051D0 (en) 1992-03-09 1992-04-22 Cancer Res Campaign Tech Pyrrolobenzodiazepine derivatives,their preparation,and compositions containing them
CA2076465C (en) 1992-03-25 2002-11-26 Ravi V. J. Chari Cell binding agent conjugates of analogues and derivatives of cc-1065
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
US5455258A (en) 1993-01-06 1995-10-03 Ciba-Geigy Corporation Arylsulfonamido-substituted hydroxamic acids
JPH08175990A (ja) 1994-12-19 1996-07-09 Mitsubishi Chem Corp Ｐｉ３キナーゼ阻害剤とその製造法
JPH08176070A (ja) 1994-12-19 1996-07-09 Mitsubishi Chem Corp ジデプシド誘導体及びｐｉ３キナーゼ阻害剤
US5863949A (en) 1995-03-08 1999-01-26 Pfizer Inc Arylsulfonylamino hydroxamic acid derivatives
DE69519751T2 (de) 1995-04-20 2001-04-19 Pfizer Inc., New York Arylsulfonamido-substituierte hydroxamsäure derivate als inhibitoren von mmp und tnf
GB9521987D0 (en) 1995-10-26 1996-01-03 Ludwig Inst Cancer Res Phosphoinositide 3-kinase modulators
GB9624482D0 (en) 1995-12-18 1997-01-15 Zeneca Phaema S A Chemical compounds
PT780386E (pt) 1995-12-20 2003-02-28 Hoffmann La Roche Inibidores de metaloprotease de matriz
CN1125817C (zh) 1996-02-13 2003-10-29 曾尼卡有限公司 作为vegf抑制剂的喹唑啉衍生物
JP4464466B2 (ja) 1996-03-05 2010-05-19 アストラゼネカ・ユーケイ・リミテッド ４―アニリノキナゾリン誘導体
EP0818442A3 (en) 1996-07-12 1998-12-30 Pfizer Inc. Cyclic sulphone derivatives as inhibitors of metalloproteinases and of the production of tumour necrosis factor
JP3299975B2 (ja) 1996-07-18 2002-07-08 ファイザー・インク マトリックスメタロプロテアーゼのホスフィン酸塩ベース阻害薬
EA199900139A1 (ru) 1996-08-23 1999-08-26 Пфайзер, Инк. Производные арилсульфониламиногидроксамовой кислоты
GB9718972D0 (en) 1996-09-25 1997-11-12 Zeneca Ltd Chemical compounds
EP0950059B1 (en) 1997-01-06 2004-08-04 Pfizer Inc. Cyclic sulfone derivatives
NZ336840A (en) 1997-02-03 2001-01-26 Pfizer Prod Inc Arylsulfonylamino hydroxamic acid derivatives useful in the treatment of tumor necrosis factor and matrix metalloproteinase mediated diseases
EP0966438A1 (en) 1997-02-07 1999-12-29 Pfizer Inc. N-hydroxy-beta-sulfonyl-propionamide derivatives and their use as inhibitors of matrix metalloproteinases
AU722784B2 (en) 1997-02-11 2000-08-10 Pfizer Inc. Arylsulfonyl hydroxamic acid derivatives
US20020192228A1 (en) 1997-02-12 2002-12-19 Samir M. Hanash Protein markers for lung cancer and use thereof
WO1999006587A2 (en) 1997-08-01 1999-02-11 Morphosys Ag Novel method and phage for the identification of nucleic acid sequences encoding members of a multimeric (poly)peptide complex
HUP0002960A3 (en) 1997-08-08 2001-12-28 Pfizer Prod Inc Aryloxyarylsulfonylamino hydroxamic acid derivatives
GB9725782D0 (en) 1997-12-05 1998-02-04 Pfizer Ltd Therapeutic agents
GB9801690D0 (en) 1998-01-27 1998-03-25 Pfizer Ltd Therapeutic agents
JP4462654B2 (ja) 1998-03-26 2010-05-12 ソニー株式会社 映像素材選択装置及び映像素材選択方法
PA8469501A1 (es) 1998-04-10 2000-09-29 Pfizer Prod Inc Hidroxamidas del acido (4-arilsulfonilamino)-tetrahidropiran-4-carboxilico
PA8469401A1 (es) 1998-04-10 2000-05-24 Pfizer Prod Inc Derivados biciclicos del acido hidroxamico
US6156746A (en) 1998-08-25 2000-12-05 Bristol-Myers Squibb Company 1,2,5-benzothiadiazepine-1,1-dioxides with n-2 imidazolylalkyl substituents
EP1413582B1 (en) 1998-08-27 2006-03-15 Spirogen Limited Dimeric pyrrolobenzodiazepines
GB9818731D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Compounds
ATE260255T1 (de) 1998-11-05 2004-03-15 Pfizer Prod Inc 5-oxo-pyrrolidine-2-carbonsäure- hydroxamidderivate
US7115396B2 (en) 1998-12-10 2006-10-03 Compound Therapeutics, Inc. Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins
SK288365B6 (sk) 1999-02-10 2016-07-01 Astrazeneca Ab Medziprodukty pre chinazolínové deriváty ako inhibítory angiogenézy
FR2800507B1 (fr) 1999-10-27 2002-01-04 Valeo Systemes Dessuyage Commutateur electrique rotatif, notamment pour un moteur d'essuie-glace de vehicule automobile
JP3287409B2 (ja) 1999-10-28 2002-06-04 日本精工株式会社 ロック機構付シートベルト用リトラクターを備えたシートベルト装置
IL149034A0 (en) 1999-11-05 2002-11-10 Astrazeneca Ab Quinazoline derivatives as vegf inhibitors
AU765588C (en) 1999-11-24 2004-12-16 Immunogen, Inc. Cytotoxic agents comprising taxanes and their therapeutic use
CO5280092A1 (es) 2000-02-15 2003-05-30 Sugen Inc Indolinas susutituidas con pirroles inhibidoras de proteinquinasas
JP2001247477A (ja) 2000-03-03 2001-09-11 Teikoku Hormone Mfg Co Ltd 抗腫瘍剤
US6403588B1 (en) 2000-04-27 2002-06-11 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. Imidazopyridine derivatives
US6608053B2 (en) 2000-04-27 2003-08-19 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. Fused heteroaryl derivatives
CA2410453A1 (en) * 2000-05-26 2001-12-06 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Neuroprotective peptides
EP1332209B1 (en) 2000-09-08 2009-11-11 Universität Zürich Collections of repeat proteins comprising repeat modules
ES2236481T3 (es) 2001-01-16 2005-07-16 Glaxo Group Limited Combinacion farmaceutica que contiene una 4-quinazolinamina y paclitaxel, carboplatino o vinorelbina para el tratamiento de cancer.
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
EP1417976A4 (en) 2001-07-26 2004-09-15 Santen Pharmaceutical Co Ltd AGENT FOR TREATING GLAUKOM WITH A COMPOUND WITH PI3-KINASE INHIBITING EFFECT
US6703414B2 (en) 2001-09-14 2004-03-09 Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona Device and method for treating restenosis
AU2002357667A1 (en) 2001-10-24 2003-05-06 Iconix Pharmaceuticals, Inc. Modulators of phosphoinositide 3-kinase
AU2002349912A1 (en) 2001-10-24 2003-05-06 Iconix Pharmaceuticals, Inc. Modulators of phosphoinositide 3-kinase
WO2003037886A2 (en) 2001-10-30 2003-05-08 Pharmacia Corporation Heteroaromatic carboxamide derivatives for the treatment of inflammation
US6716821B2 (en) 2001-12-21 2004-04-06 Immunogen Inc. Cytotoxic agents bearing a reactive polyethylene glycol moiety, cytotoxic conjugates comprising polyethylene glycol linking groups, and methods of making and using the same
US6756397B2 (en) 2002-04-05 2004-06-29 Immunogen, Inc. Prodrugs of CC-1065 analogs
GB0209467D0 (en) 2002-04-25 2002-06-05 Astrazeneca Ab Chemical compounds
US7538195B2 (en) * 2002-06-14 2009-05-26 Immunogen Inc. Anti-IGF-I receptor antibody
RS115904A (sr) 2002-07-10 2006-12-15 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Derivati benzena fuzionisani sa azolidinon vinilom
EP1531813A1 (en) 2002-07-10 2005-05-25 Applied Research Systems ARS Holding N.V. Use of compounds for increasing spermatozoa motility
US20040092561A1 (en) 2002-11-07 2004-05-13 Thomas Ruckle Azolidinone-vinyl fused -benzene derivatives
AU2003247587B2 (en) * 2002-08-02 2009-07-09 Immunogen, Inc. Cytotoxic agents containing novel potent taxanes and their therapeutic use
JP2006500364A (ja) 2002-08-16 2006-01-05 イムノージェン インコーポレーテッド 高い反応性と溶解度を有する架橋剤および小分子薬物の標的化送達用コンジュゲートの調製におけるそれらの使用
WO2004017950A2 (en) 2002-08-22 2004-03-04 Piramed Limited Phosphadidylinositol 3,5-biphosphate inhibitors as anti-viral agents
MXPA05004712A (es) 2002-11-07 2005-11-23 Immunogen Inc Anticuerpos anti-cd33 y metodo para tratamiento de leucemia mieloide aguda utilizando los mismos.
FR2850654A1 (fr) 2003-02-03 2004-08-06 Servier Lab Nouveaux derives d'azepines tricycliques, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
EP1608664B1 (en) 2003-03-31 2009-01-28 Council of Scientific and Industrial Research Non-cross-linking pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepines as potential antitumour agents and process thereof
RU2314309C2 (ru) 2003-03-31 2008-01-10 Каунсил Оф Сайентифик Энд Индастриал Рисерч Пирроло [2.1-c][1.4] бензодиазепины, способ их получения и фармацевтическая композиция на их основе
RU2338747C2 (ru) * 2003-03-31 2008-11-20 Каунсил Оф Сайентифик Энд Индастриал Рисерч ДИМЕРЫ ПИРРОЛО [2, 1-c][1, 4] БЕНЗОДИАЗЕПИНА В КАЧЕСТВЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ СРЕДСТВ И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ
WO2004087716A1 (en) 2003-03-31 2004-10-14 Council Of Scientific And Industrial Research Pyrrolo[(2,1-c)(1,4) benzodiazepines dimers as antitumour agents and process thereof
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
US7276497B2 (en) 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
WO2005040170A2 (en) 2003-10-22 2005-05-06 Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Pyrrolobenzodiazepine derivatives, compositions comprising the same and methods related thereto
GB0404578D0 (en) 2004-03-01 2004-04-07 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
US7528126B2 (en) 2004-03-09 2009-05-05 Spirogen Limited Pyrrolobenzodiazepines
GB0410725D0 (en) 2004-05-13 2004-06-16 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepine therapeutic agents
BRPI0510883B8 (pt) 2004-06-01 2021-05-25 Genentech Inc composto conjugado de droga e anticorpo, composição farmacêutica, método de fabricação de composto conjugado de droga e anticorpo e usos de uma formulação, de um conjugado de droga e anticorpo e um agente quimioterapêutico e de uma combinação
BRPI0516284A (pt) 2004-09-23 2008-09-02 Genentech Inc anticorpo construìdo com cisteìna, método de selecionar anticorpos, compostos conjugados de droga-anticorpo, composição farmacêutica, método para matar ou inibir a proliferação de células de tumor, métodos de inibir a proliferação celular e o crescimento de células de tumor, artigo manufaturado e método para produzir um composto
GB0423653D0 (en) 2004-10-25 2004-11-24 Piramed Ltd Pharmaceutical compounds
JP2008521828A (ja) 2004-11-29 2008-06-26 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド 操作された抗体およびイムノコンジュゲート
US7301019B2 (en) 2005-01-21 2007-11-27 Immunogen, Inc. Method for the preparation of maytansinoid esters
EP2468304A3 (en) 2005-02-11 2012-09-26 ImmunoGen, Inc. Process for preparing stable drug conjugates
EP1902131B1 (en) 2005-07-08 2009-11-11 University of Zurich Phage display using cotranslational translocation of fusion polypeptides
US7772485B2 (en) 2005-07-14 2010-08-10 Konarka Technologies, Inc. Polymers with low band gaps and high charge mobility
ITRM20050416A1 (it) 2005-08-03 2007-02-04 Uni Degli Studi Di Roma Tor Vergata Derivati delle benzodiazepine e loro usi in campo medico.
WO2007021674A2 (en) 2005-08-09 2007-02-22 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Method of acylating maytansinol with chiral amino acids
HRP20120794T1 (hr) 2005-08-24 2012-11-30 Immunogen, Inc. Postupak za pripremu proäśišä†enih konjugata lijeka
EP1931671B1 (en) 2005-10-05 2009-04-08 Spirogen Limited Alkyl 4- [4- (5-oxo-2, 3, 5, 11a-tetrahyd0-5h-pyrr0l0 [2, 1-c][1, 4]benzodiazepine-8-yloxy) -butyrylamino]-1h-pyrrole-2-carboxylate derivatives and related compounds for the treatment of a proliferative disease
GB0520657D0 (en) 2005-10-11 2005-11-16 Ludwig Inst Cancer Res Pharmaceutical compounds
PT1813614E (pt) 2006-01-25 2012-01-09 Sanofi Sa Agentes citotóxicos compreendendo novos derivados de tomaimicina
GB2453402B (en) 2006-02-13 2010-12-22 Council Scient Ind Res Novel bis-pyrrolo[2,1.-c] [1,4] benzodiazepine-anthraquinone conjugates and a process for the preparation thereof
BRPI0711249A2 (pt) 2006-05-30 2012-03-13 Genentech, Inc. Anticorpos, polinucleotídeos, vetores, células hospedeira, métodos para fabricar um anticorpo, para detectar a presença de cd2 em uma amostra biológica, para tratar uma disfunção proliferativa de células b, para inibir proliferaçõa de células b, para tratar câncer, para fabricar um composto conjugado anti-corpo-droga. imunoconjugados,composições farmacêuticas, formulações farmacêuticas, conjugado anticorpo-droga, compostos conjugados anti-corpo-droga, teste para detectar células b e artigo de fabricação
EP1864682A1 (en) 2006-06-09 2007-12-12 Sanofi-Aventis Leptomycin derivatives
EP2144628B1 (en) 2007-05-08 2012-10-17 Genentech, Inc. Cysteine engineered anti-muc16 antibodies and antibody drug conjugates
ES2435779T3 (es) 2007-07-19 2013-12-23 Sanofi Agentes citotóxicos que comprenden nuevos derivados de tomaimicina y su uso terapéutico
WO2009016647A1 (en) 2007-08-01 2009-02-05 Council Of Scientific & Industrial Research Pyrrolo [2,1-c][1, 4] benzodiazepine-glycoside prodrugs useful as a selective anti tumor agent
US20100003641A1 (en) 2007-08-15 2010-01-07 Hansen John P Dental crown system
CA2700391A1 (en) 2007-09-24 2009-04-02 University Of Zuerich Designed armadillo repeat proteins
AU2009243009B2 (en) 2008-04-30 2014-09-11 Immunogen, Inc Potent conjugates and hydrophilic linkers
CA2722696C (en) 2008-04-30 2021-08-10 Immunogen, Inc. Cross-linkers and their uses
GB0819095D0 (en) 2008-10-17 2008-11-26 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
CA2750519C (en) 2009-02-05 2018-09-25 Immunogen, Inc. Benzodiazepine derivatives
CA2752211C (en) 2009-02-12 2020-03-24 Janssen Biotech, Inc. Fibronectin type iii domain based scaffold compositions, methods and uses
ES2513915T3 (es) * 2009-04-24 2014-10-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Inhibidores de la tirosina quinasa de Bruton
WO2010126551A1 (en) * 2009-04-30 2010-11-04 Immunogen, Inc. Potent conjugates and hydrophilic linkers
AU2010250536A1 (en) 2009-05-18 2012-01-19 Shuhei Nishiyama Meta-information sharing distributed database system in virtual single memory storage
MY197016A (en) 2010-02-24 2023-05-20 Immunogen Inc Folate receptor 1 antibodies and immunoconjugates and uses thereof
BR112012026410B8 (pt) 2010-04-15 2023-01-31 Spirogen Dev Sarl Composto e conjugado de pirrolobenzodiazepinas e usos dos mesmos
TWI540136B (zh) 2010-04-15 2016-07-01 梅迪繆思有限公司 吡咯并苯并二氮呯及其共軛物
CN107019804A (zh) 2010-04-15 2017-08-08 西雅图基因公司 靶向吡咯并苯并二氮杂卓结合物
US20120121615A1 (en) 2010-11-17 2012-05-17 Flygare John A Alaninyl maytansinol antibody conjugates
SG191965A1 (en) 2011-02-15 2013-08-30 Immunogen Inc Methods of preparation of conjugates
WO2014031566A1 (en) 2012-08-22 2014-02-27 Immunogen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives
JP2015202619A (ja) * 2014-04-14 2015-11-16 独立行政法人 国立印刷局 凹版版面

Also Published As

Publication number Publication date
ZA201704808B (en) 2020-11-25
US20140088089A1 (en) 2014-03-27
US9534000B2 (en) 2017-01-03
CN107050468A (zh) 2017-08-18
AU2016200752B2 (en) 2017-08-31
DK2675479T3 (en) 2016-04-11
SG10201601046QA (en) 2016-03-30
KR20140010076A (ko) 2014-01-23
CN103702686A (zh) 2014-04-02
UA120696C2 (uk) 2020-01-27
AU2012217719B2 (en) 2015-11-05
US9868791B2 (en) 2018-01-16
US9169272B2 (en) 2015-10-27
AU2016200752A1 (en) 2016-02-25
TWI617555B (zh) 2018-03-11
NZ613162A (en) 2015-10-30
PT2675480T (pt) 2019-04-15
BR112013019913B1 (pt) 2021-01-05
EP2675481A1 (en) 2013-12-25
US10364294B2 (en) 2019-07-30
CN107335061A (zh) 2017-11-10
BR112013020540A2 (pt) 2017-03-21
EP2675480A1 (en) 2013-12-25
AU2019264595A1 (en) 2019-12-05
RU2017117634A3 (sr) 2020-08-26
DK2675480T3 (en) 2019-04-15
KR20190089048A (ko) 2019-07-29
CY1117340T1 (el) 2017-04-26
EP3053600A1 (en) 2016-08-10
IL254055A0 (en) 2017-10-31
JP6703632B2 (ja) 2020-06-03
MX343337B (es) 2016-11-01
US20160324980A1 (en) 2016-11-10
WO2012128868A1 (en) 2012-09-27
US8765740B2 (en) 2014-07-01
LT2675480T (lt) 2019-04-10
JP2022009073A (ja) 2022-01-14
JP2018027966A (ja) 2018-02-22
JP6526138B2 (ja) 2019-06-05
JP2014506892A (ja) 2014-03-20
HRP20190576T1 (hr) 2019-05-17
CN103702686B (zh) 2016-11-23
RU2017131902A3 (sr) 2020-11-05
US20180037659A1 (en) 2018-02-08
BR112013020540B1 (pt) 2020-12-29
ES2717657T3 (es) 2019-06-24
SG191955A1 (en) 2013-08-30
RU2631498C2 (ru) 2017-09-25
AU2012231640B2 (en) 2015-07-09
US8889669B2 (en) 2014-11-18
IL293365A (en) 2022-07-01
RU2748733C2 (ru) 2021-05-31
CA2824864C (en) 2019-04-09
EP2675479B1 (en) 2016-01-13
RU2621035C2 (ru) 2017-05-31
MX2013009420A (es) 2013-12-16
MX384514B (es) 2025-03-14
US20160108129A1 (en) 2016-04-21
HUE028736T2 (en) 2017-01-30
JP2016040298A (ja) 2016-03-24
EP2675480B1 (en) 2018-12-26
RS54667B1 (sr) 2016-08-31
MY183977A (en) 2021-03-17
US9434748B2 (en) 2016-09-06
HUE043976T2 (hu) 2019-09-30
CA2825919A1 (en) 2012-08-23
SI2675480T1 (sl) 2019-05-31
RU2017131902A (ru) 2019-02-06
CA3034596A1 (en) 2012-09-27
PL2675480T3 (pl) 2019-07-31
US10570212B2 (en) 2020-02-25
AU2017268554B2 (en) 2019-08-15
SMT201900181T1 (it) 2019-05-10
US20190263924A1 (en) 2019-08-29
US9840564B2 (en) 2017-12-12
AU2012231640A1 (en) 2013-05-02
EP2675479A1 (en) 2013-12-25
MX346635B (es) 2017-03-27
US20130302359A1 (en) 2013-11-14
SG191965A1 (en) 2013-08-30
IL254128A0 (en) 2017-10-31
US10179818B2 (en) 2019-01-15
PL2675479T3 (pl) 2016-09-30
WO2012112708A1 (en) 2012-08-23
IL227963A (en) 2017-08-31
RU2013142179A (ru) 2015-03-27
CN103687623B (zh) 2017-06-09
ZA201305386B (en) 2015-11-25
CN107335061B (zh) 2021-09-07
AU2012217719A1 (en) 2013-04-18
JP6049642B2 (ja) 2016-12-21
RU2013141829A (ru) 2015-03-27
KR20140010067A (ko) 2014-01-23
USRE49918E1 (en) 2024-04-16
ME02381B (me) 2016-06-20
JP2020143102A (ja) 2020-09-10
IL279304A (en) 2021-01-31
JP2019142928A (ja) 2019-08-29
US9353127B2 (en) 2016-05-31
KR20200140939A (ko) 2020-12-16
MX2013009417A (es) 2014-08-21
KR20200141534A (ko) 2020-12-18
IL227964A (en) 2017-09-28
CY1121532T1 (el) 2020-05-29
WO2012112687A1 (en) 2012-08-23
IL227963A0 (en) 2013-09-30
SMT201600099B (it) 2016-04-29
SG10202007640VA (en) 2020-09-29
AU2017268554A1 (en) 2017-12-21
US20120244171A1 (en) 2012-09-27
EP3666289A1 (en) 2020-06-17
ES2567418T3 (es) 2016-04-22
CN113896731A (zh) 2022-01-07
TW201309674A (zh) 2013-03-01
IL279304B (en) 2022-07-01
CA2825919C (en) 2018-05-01
IL227964A0 (en) 2013-09-30
NZ613121A (en) 2015-05-29
US20150099874A1 (en) 2015-04-09
BR112013019913A2 (pt) 2017-10-17
JP2014521591A (ja) 2014-08-28
US20120238731A1 (en) 2012-09-20
US20180002440A1 (en) 2018-01-04
MY169448A (en) 2019-04-11
CA3034596C (en) 2021-05-25
HK1186686A1 (zh) 2014-03-21
JP6216356B2 (ja) 2017-10-18
HRP20160164T1 (hr) 2016-03-11
CA2824864A1 (en) 2012-09-27
JP5826863B2 (ja) 2015-12-02
CN103687623A (zh) 2014-03-26
KR20190051081A (ko) 2019-05-14
RU2017117634A (ru) 2018-11-01
SI2675479T1 (sl) 2016-04-29
US20170044266A1 (en) 2017-02-16
CA3110544A1 (en) 2012-09-27
JP2024026207A (ja) 2024-02-28
EP3498303A1 (en) 2019-06-19
EP3053600B1 (en) 2020-01-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2675480B1 (en) Methods of preparation of conjugates
EP3778601A1 (en) Cytotoxic benzodiazepine derivatives
AU2017363237A1 (en) Selective sulfonation of benzodiazepine derivatives
HK40009850A (en) Methods of preparation of conjugates
HK1186685A (en) Methods of preparation of conjugates
HK1186685B (en) Methods of preparation of conjugates
NZ613162B2 (en) Methods of preparation of conjugates
HK1236943A1 (en) Cytotoxic benzodiazepine derivatives
HK1236943B (en) Cytotoxic benzodiazepine derivatives