[go: up one dir, main page]

EE05719B1 - L-karnitiini või alkanoüül-L-karnitiinide estrite kasutamine katioonsete lipiididena farmakoloogiliselt aktiivsete komponentide intratsellulaarseks kohaletoimetamiseks - Google Patents

L-karnitiini või alkanoüül-L-karnitiinide estrite kasutamine katioonsete lipiididena farmakoloogiliselt aktiivsete komponentide intratsellulaarseks kohaletoimetamiseks

Info

Publication number
EE05719B1
EE05719B1 EEP201100028A EEP201100028A EE05719B1 EE 05719 B1 EE05719 B1 EE 05719B1 EE P201100028 A EEP201100028 A EE P201100028A EE P201100028 A EEP201100028 A EE P201100028A EE 05719 B1 EE05719 B1 EE 05719B1
Authority
EE
Estonia
Prior art keywords
carnitine
use according
group
hydrogen
liposomes
Prior art date
Application number
EEP201100028A
Other languages
English (en)
Inventor
Claudio Pisano
Maria Ornella Tinti
MOSè SANTANIELLO
Luciana Critelli
Giovanni Salvatori
Original Assignee
Sigma-Tau Industrie Farmaceutiche Riunite S.P.A.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sigma-Tau Industrie Farmaceutiche Riunite S.P.A. filed Critical Sigma-Tau Industrie Farmaceutiche Riunite S.P.A.
Publication of EE201100028A publication Critical patent/EE201100028A/et
Publication of EE05719B1 publication Critical patent/EE05719B1/et

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C229/02—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C229/02—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
    • C07C229/04—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C229/22—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated the carbon skeleton being further substituted by oxygen atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/22—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin
    • A61K31/225—Polycarboxylic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
    • A61K8/14—Liposomes; Vesicles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/40—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing nitrogen
    • A61K8/44—Aminocarboxylic acids or derivatives thereof, e.g. aminocarboxylic acids containing sulfur; Salts; Esters or N-acylated derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers
    • A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers comprising non-phosphatidyl surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids or non-phosphatidyl liposomes coated or grafted with polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
    • A61K9/1277—Preparation processes; Proliposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

Kirjeldatakse L-karnitiini või alkanoüül-L-karnitiinide estreid, mida saab kasutada katioonsete lipiididena farmakoloogiliselt aktiivsete ühendite kohaletoimetamiseks. Avalikustatakse L-karnitiini või alkanoüül-L-karnitiinide uued estrid ülaltoodud valemiga, kusjuures R-rühmad vastavad kirjelduses määratletule.

Description

Käesolev leiutis käsitleb L-karnitiini ning atsüül-L-karnitiinide uute estrite klassi ning nende kasutamist katioonsete lipiididena, mis sobivad farmakoloogiliselt aktiivsete ühendite intratsellulaarse kohaletoimetamise soodustamiseks, nende transmembraanse transpordi kiirendamiseks või nende vastastikuse toime soodustamiseks rakumembraani spetsiifiliste kohtadega (retseptoritega) .
Siin kirjeldatud leiutise käsitleb lisaks ka L-karnitiini ning atsüül-L-karnitiinide tuntud estreid, mida saab kasutada samadel eesmärkidel kui ülalmainitud uusi ühendeis.
Siin mõistetakse termini "intratsellulaarne kohaletoimetamine" all raku transfektsiooni looduslike või modifitseeritud polünukleotiidide või plasmiididega, mis omavad terapeutilist aktiivsust (geeni kohaletoimetamine) või ravimite või immunogeensete peptiidide sisseviimist rakkudesse.
Mitmed farmakoloogiliselt aktiivsed ühendid, näiteks polüpeptiidid ja valgud või ravimid vajavad tavaliselt rakkudesse sissetungimist, et esile tuua oma efekte raku funktsioonide mõjutamisel subtsellulaarsel või molekulaarsel tasemel. Nende molekulide jaoks kujutab
rakumembraan selektiivset läbimatut barjääri. Raku¬membraani ülesandeks on õigupoolest kaitsefunktsioon, vältida potentsiaalselt toksiliste ainete sissepääsu, aga ka terapeutiliselt aktiivsete ühendite läbipääsu. Rakumembraani kompleksne koostis hõlmab fosfolipiide, glükolipiide ning valke; nende funktsioon on mõjutatud tsütoplasma komponentide nagu näiteks Ca++ ning muud ioonid, ATP, mikrofilamentide, mikrotuubulite, ensüümide ning Ca++-siduvate valkude poolt. Raku struktuursete ning tsütoplasmaliste komponentide vaheline vastastiktoime ning reaktsioonid välistele signaalidele on vastutatavad erinevat tüüpi rakkude poolt ilmneva selektiivsuse eest. Membraanide barjäärefekti saab vältida ainete kombi¬neerimisega kompleksides selliste lipiidsete formulat¬sioonidega, mis reprodutseerivad looduslikult esinevate membraanlipiidide koostist. Need lipiidid on võimelised membraanidega ühte sulama ning viima nendega kombineeritud aineid rakkudesse. Lipiidkompleksid on võimelised mitte ainult soodustama intratsellulaarset ülekannet tänu membraanidega ühtesulamisele, vaid võivad vähendada membraani ning rakku sissetungiva molekuli vahelist laengulist tõukumist. Amfipaatsed lipiidid, näiteks membraani fosfolipiidid, moodustavad vesisüsteemides lipiidseid vesiikuleid või liposoome.
Liposoomid on vesiikulid, milles vesi on täielikult ümbritsetud ühe või mitme lipiidsetest molekulidest, reeglina fosfolipiididest koosneva membraaniga. Fosfolipiidid, mis koosnevad hüdrofiilsest peast ning süsinikahelate paarist (hüdrofoobsest sabast) on bioloogiliste membraanide peamisteks komponentideks. Hüdrofoobsed sabad autoassotsieeruvad vesilahustes vee elimineerimiseks, kuna hüdrofiilsed pead interakteeruvad keskkonnaga, moodustades spontaanselt erineva läbimõõduga vesiikulite populatsioone. Lipiidid on reeglina tsvitterioonsed, neutraalsed või anioonsed. Neid vesiikuleid võib kasutada ravimite, väikeste molekulide, valkude, nukleotiidide ning plasmiidide kandjatena.
Viimaste aastate jooksul laialdaselt kasutatud katioonseid liposoome, sünteetilistest lipiididest valmistatud positiivselt laetud vesiikulite klassi, geneetilise materjali ülekandmiseks rakkudesse. DNA negatiivne laeng saab interakteeruda katioonset lipiidide positiivsete laengutega, moodustades stabiilse kompleksi DNA-liposoom. Selle tehnoloogia lihtsus ning mitmekülgsus on teinud liposoomid oluliseks vahendiks geenide kohaletoimetamiseks inimeste geeniteraapias. Praegusel ajal sisaldab enamus geeniteraapias kasutatavaid ning NIH Recombinant Advisory Committee poolt heakskiidetud vektoreid, viraalseid ning sünteetilisi süsteeme.
Viiruslikud infektsioonid hõlmavad seeria kompleksseid mehhanisme eemärgiga olla võimelised rünnata spetsiifilist rakku ning viima DNA-d selle tuuma. Viraalsete vektorite kasutamise ratsionaalsus geeni¬teraapias põhineb võimaluses asendada viiruslik geen geeniga, mis kodeerib terapeutilist funktsiooni, kus¬juures ei elimineerita viiruseosakese võimet rakku nakatada. Viirusliku teraapia piirid on tingitud sellistest viiruslikest elementidest, mis võivad olla immunogeensed, tsütopaatilised ning rekombinogeensed.
Suured lootused on seotud katioonsete lipiidide kasutamisega geeniteraapias. Sellistel vektoritel on suur potentsiaal bioloogilise päritoluga vektoritega võrreldes, kuna need on ohutumad, vähem toksilised ning on samuti võimelised sisestama suuremoõtmelisi geene. Võrreldes bioloogilist tüüpi vektoritega on neil siiski madal efektiivsus intratsellulaarse geeni transkript¬siooni suhtes. Tuleb silmas pidada, et selliste transfektsioonisüsteemide kasutamine on alles uurimiste algetapis. Katioonsed lipiidid mängivad väga olulist osa kompleksi DNA-lipiid tekkel, interaktsioonis rakk-kompleks, ühtesulamise membraaniga, DNA rakusisesel vabanemisel ning trankriptsioonis.
Need on katioonsete liposoomide in-vivo rakenduste olulised näited. Geeniteraapia esimene kliiniline katse viidi läbi melanoomi raviks inimese liposoomiga kompleksi viidud HLA-B7 geeni sisaldava ekspressioonivektori sisseviimisega - Teine oluline rakendus puudutab kopsu tsüstilise fibroosi ravi liposoom-kompleksse vektori SV-4 0C-FTR manustamisega kas pulmonaarselt või nina-aerosoolina. Momendil on käimas ka teisi kliinilisi katsetusi liposoomide kasutamisel geeniteraapias.
Katioonsete lipiidide struktuuris on kindlaks tehtud neli põhilist komponenti: Positiivselt laetud katioonne pea, tüvi, ankurlipiid ning ühenduslüli.
Katioonne pea on vastutav vastatastiktoimete eest katioonsete liposoomide ning DNA vahel, DNA-liposoomkompleksi ning rakumembraani ja raku muude komponentide vahel. See koosneb mono- või polükatioonsetest rühmadest (olenevalt laenguarvust), mida saab mitmeti asendada.
Tüvi on molekuli osa, mis eralda katioonset pead hüdrofoobsest sabast ning mis osaleb optimaalse kontakti tagamises katioonse pea ning DNA-fosfaatide negatiivsete laengute vahel.
Ankurlipiid on molekuli mittepolaarne süsivesinikosa ning see määrab lipiidse kaksikkihi füüsikalised omadused, näiteks jäikuse ning vahetuskiiruse membraani lipiididega.
"Ühenduslüli" all mõistetakse sidet süsivesinikahela ning molekuli ülejäänud osa vahel. See lüli määrab katioonse lipiidi keemilise püsivuse ning biolagunduvuse.
Viimastel aastatel on pidevalt kasvanud liposoomide kasutamine kosmeetikasektoris. Liposoomide edukus selles valdkonnas on tingitud asjaolust, et nahk talub neid ühendeid väga hästi. Neid kasutatakse nii vehiikulitena toimeainete jaoks kui ka viimaste ühendite absorptsiooni soodustajatena.
Teaduslikus ning patendialases kirjanduses on rikkalikult viiteid liposoomide valmistamise ning kasutamise kohta; siiski on olemas vaid üksikuid viiteid karnitiini derivaatide kasutamise kohta geenide kohaletoimetamises, kuna ravimite kohaletoimese kohta ei ole teada ühtki dokumenti, kus käsitletaks tuntud meetodeid ühendite valmistamiseks, mis ligikaudugi meenutaks käesolevas leiutises kirjeldatuid.
Patenditaotluses EP0279887 kirjeldatakse karnitiini derivaadi, s.o fosfatidüülkarnitiini, kasutamist vaja¬dusel segus koos teiste fosfolipiidide ning lipiididega (kolesterool, fosfatidüülkoliin, fosfatidüülseriin) liposoomide valmistamiseks.
Liposoomide valmistamise kohta toodud näites valmistati fosfatidüülkarnitiini liposoomid, mis sisaldasid propranolooli, ülitundlikkuse, angiini ning rütmihäirete vastase ühendina tuntud ravimit. Sel juhul kasutati karnitiini derivaati lähtudes karnitiini tugevalt väljendunud müokardilisest tropismist. See tropism võimaldab vältida liposoomide metabolismi maksas ning võimaldab neil jõuda soovitud sihtkohta.
Fosfatidüülkarnitiini manulus võimaldab samuti liposoo¬mide peroraalset manustamist, kuna need on resistentsed soolestikus olevate lipaaside suhtes.
Ajakirjas J. Med. Chem. 1998 juuni 18; 41 (13) :2207-15 on kirjeldatud rida L-karnitiini estreid, mis on kasulikud geenide kohaletoimetamiseks, kuid neid ei ole kirjeldatud või neid ei ole soovitatud kasutada ravimite kohale¬toimetamiseks mõeldud kasulike agentidena. EP 559625 B1-s kirjeldatakse rida L-karnitiini ning
atsüül-L-karnitiinide estreid, millel on selektiivne mao-soolkonna lihaseid lõdvestav toime.
Viimastel aastatel on molekulaarbioloogid identifitsee¬rinud kromosoomide tasemel arvukalt defekte, mis põhjustavad inimestel pärilikke haigusi.
Kaasaegse meditsiini oluline sektor tegeleb nende geneetikal põhinevate pärilike haigustega geeniteraapia vahenditega.
Nagu juba mainitud, kasutatakse katioonseid liposoome laialdaselt farmakoloogiliselt aktiivsete ühendite intratsellulaarseks kohaletoimetamiseks, transmembraanse transpordi soodustamiseks või nende vastastiktoime soodustamiseks rakumembraani spetsiifiliste kohtadega (retseptoritega).
Nendel vektoritel on suur potentsiaal võrreldes bioloogilise päritoluga vektoritega, kuna need on palju ohutumad, vähem toksilised ning neisse on võimalik sisestada suuri geene. Bioloogilist tüüpi vektoritega võrreldes on neil siiski madal intratsellulaarne geeni transkribeerimise võime.
Enamgi veel, tavaliste katioonsete lipiididega vahendatud geeniülekande korral on vajalik plasmiidse DNA ning katioonse lipiidi eraldi hoidmine ning nende segamine peab toimuma vahetult enne geeniülekannet.
Püüded selliste polünukleotiidkomplekside stabilisee¬rimisel saada lootustandvaid tulemusi on siiani ebaõnnestunud; kompleksid jäid stabiilseks üksnes lühikeseks perioodiks.
Seetõttu on geeniteraapia või geenide kohaletoimetamise ning ravimite kohaletoimetamise valdkonnas olemas selgelt tajutav vajadus stabiilsete, reprodutseeruvate kohtspetsiifiliste süsteemide järele, mis oleksid aktiivsed ka sobiva ajavahemiku jooksul.
Nüüd leiti, et farmakoloogiliselt aktiivsete ühendite intratsellulaarse kohaletoimetamise soodustamisel tugevalt aktiivsete katioonsete lipiidide klass hõlmab L-karnitiini ning atsüül-L-karnitiinide uusi estreid. Need uued ühendid on stabiilsed ning üliselektiivsed, kuna need on sihtorganini jõudmisel kohtspetsiifilised.
See omadus teeb need eelkõige kasulikuks aktiivsete ühendite transpordil vahetult sinna kohta, kus need saavad avaldada oma farmakoloogilist aktiivsust. Siinkirjeldatud leiutis käsitleb samuti täiendavaid katioonseid lipiide üldvalemiga (II), mis on juba tuntud erineva kasutusala poolest (ülalmainitud EP 559625). Vastavalt käesolevale leiutisele on valemiga (II) ühendid L-karnitiini estrid, mis on kasulikud liposoomide valmistamiseks, mis omavad potentset aktiivsust ravimite kohaletoimetamiseks ning omavad püsivusT ning sihtorganini jõudmise selektiivsust. Samad soodsad omadused on rakendatavad kosmeetika korral.
Neil ühenditel on üldvalem (II):
milles:
R3 on küllastunud või küllastumatu, hargnemata või hargnenud ahelaga atsüülrühm, milles on 4-26
süsinikuaatomit; R4 on küllastunud või küllastumatu, hargnemata või hargnenud ahelaga alküülrühm, milles on 4-2 6 süsinikuaatomit; ning
X- on farmakoloogiliselt vastuvõetava happe anioon.
R3 eelistatavad näited on nonanoüül-, dodekanoüül-, müristoüül-, palmitoüül-, stearoüül- või oleoüülrühm.
R4 eelistatavad näited on nonüül-, undetsüül-, tetra- detsüül-, heksadetsüül- või oleüülrühm.
Siinkirjeldatud leiutisele vastavate valemiga (II) spetsiifiliste ühendite näited on:
- palmitoüül-L-karnitiinkloriidi undetsüülester (ST 983);
- stearoüül-L-karnitiinkloriidi undetsüülester (ST 1055) ;
- stearoüül-L-karnitiinkloriidi tetradetsüülester (ST 1351);
- palmitoüül-L-karnitiinklorüdi tetradetsüülester (ST 1379);
- müristoüül-L-karnitiinklorüdi tetradetsüülester (ST 1380);
- palmitoüül-L-kärni tünbromüdi he ksade t süüle st er (ST 1390) ;
- oleoüül-L-karnitünklorüdi oleoüülester (ST 1392) . Rida valemiga (II) ühendeid, nimelt ST 1380, ST 1390 ning ST 1392, on tuntud ning kirjeldatud ülaltsiteeritud ajakirjas J. Med. Chem. 1998 Juuni 18;41 (13):2207-15 kui kasulikud ained tsellulaarseks transfektsiooniks mõeldud terapeutilist aktiivsust omavate üposoomide valmis¬tamiseks, kuid neid ei ole kunagi kirjeldatud kui kasulikke aineid ravimite kohaletoimetamiseks mõeldud liposoomide valmistamiseks.
Keskmiselt kogenud spetsialist farmatseutiliste formulatsioonide valdkonnas on hästi teadlik liposoom-ravim kompleksi valmistamisel kohatavatest raskustest; tõepoolest, aprioorselt on võimatu kindlaks teha, kas geeni kohaletoimetamiseks kasulikku liposoomi saab kasutada ravimi kohaletoimetamiseks arvukate probleemide tõttu, mida tuleb ületada selleks, et saada ravimiga kompleksi moodustavat liposoomi, mis toimetaks ravimi eelistatavalt organini, kus see peab avaldama oma ravivat toimet.
Liposoomi kujul olevad ühendid valemiga (II) on kasulikud agendid ravimite kohaletoimetamiseks, näiteks vähivastased, antiangiogeensed, vürusevastased, antibak¬teriaalsed, antifungaalsed, algloomadevastased ained või kardiovaskulaarsete haiguste raviks kasulikud ravimid, või immunogeensed peptiidid ning muud teraaapias kasulikud ravimid*
Liposoomi kujul olevad ühendid valemiga (II) on samuti kasulikud kosmeetiliste kompositsioonide valmistamisel kui per se kosmeetilised ained või kui ained, mida kasutatakse kosmeetilist toimet omavate ainete, näiteks niisutavad ained, toitained, näopuhastusvahendid ning kortsudevastased, tselluliidivastased ning rebendi-jälgede vastased ained, kohaletoimetamiseks. Need liposoomid võivad vajaduse korral sisaldada abilipiide nagu see on ühendeid valemiga (II) hõlmavate liposoomide korral.
Ühendeid valemiga (II) sisaldavaid liposoome saab manustada peroraalselt või parenteraalselt, intravenoos-selt, intramuskulaarselt, subkutaanselt, transdermaalselt või nina- või suuõõneaerosoolide kujul.
Samuti käsitleb siinkirjeldatud leiutis täiendavaid katioonseid lipiide üldvalemiga (III), mis on juba tuntud erineva kasutamise poolest (ülalmainitud EP 559625). Vastavalt käesolevale leiutisele on ühendid valemiga (III) L-karnitiini estrid, mis on kasulikud liposoomide valmistamiseks, mis omavad suurt aktiivsust ravimi kohaletoimetamise soodustamisel ning püsivust ning selektiivsust sihtorganini jõudmisel.
Need ühendid on üldvalemiga (III):
milles:
R5 on küllastunud või küllastumatu, hargnemata või hargnenud ahelaga atsüülrühm, milles on 4-2 6 süsinikuaatomit;
R6 on küllastunud või küllastumatu, hargnemata või hargnenud ahelaga alküülrühm, milles on 4-26 süsinikuaatomit; ning
X- on farmakoloogiliselt vastuvõetava happe anioon; eritingimusel, et:
kui R5 on stearoüülrühm, siis R6 ei ole stearüülrühm,
kui R5 on oleüülrühm, siis R6 ei ole stearüülrühm,
kui R5 on palmitoüülrühm, siis R6 ei ole palmitüülrühm,
kui R5 on müristoüülrühm, siis R6 ei ole müristüülrühm,
kui R5 on lauroüülrühm, siis R6 ei ole laurüülrühm,
kui R5 on oleoüülrühm, siis R6 ei ole oleüülrühm. Nõudluses esitatud ühendid liposoomide kujul on avalikustatud ajakirjas J. Med. Chem. 1988, 41, 2207-2215 eranditult geeni kohaletoimetajatena.
R5 eelistatavad näited on nonanoüül-, dodekanoüül-, müristoüül-, palmitoüül-, stearoüül- või oleoüülrühm. R6 eelistatavad näited on nonüül-, undetsüül-, tetradetsüül-, heksadetsüül- või oleüülrühm. Ühendite valemiga (III) eelistatavad näited vastavalt siinkirjeldatud leiutisele on:
- palmitoüül-L-karnitiinkloriidi undetsüülester (ST 983);
- stearoüül-L-karnitiinkloriidi undetsüülester (ST 1055);
- stearoüül-L-karnitiinkloriidi tetradetsüülester (ST 1351);
- palmitoüül-L-karnitiinkloriidi tetradetsüülester (ST 1379);
Ühendid valemiga (III) on kasulikud ained geeniteraapias kasutatavate looduslikult esinevate või modifitseeritud plasmiidide või nukleotüdide kohaletoimetamiseks või mille peptiidi või valgu kood on vaktsiinina kasulik.
Ühendeid valemiga (III) võib manustada manustada peroraalselt või parenteraalselt, intravenoosselt, intramuskulaarselt, subkutaanselt, transdermaalselt või nina- või suuõõneaerosoolide kujul.
LIPOSOOMIDE VALMISTAMISE NÄITED
Palmitoüül-L-karnitiinkloriidi undetsüülestri (ST 983) liposoomide valmistamine järgmisel kujul:
a) lüofiliseeritud pulbrid 65 mg, 0,11 millimooli palmitoüül-L-karnitiinkloriidi undetsüülestrit lahustati 20 ml kloroformis 100 ml kolvis.
Lahust aurutati kuni lipiidkile moodustumiseni, mida kuivatati vaakumis 3 tundi. Sel viisil saadud produkt lahustati tert-butanoolis ning see lahus jahutati kiiresti temperatuurini -70 °C vedele lämmastikuga ning lüofiliseeriti 24 tunni jooksul.
Saadi käsnjas valge tahke aine.
b) Adsorbeerunud pulbrid
143 mg, 0,231 millimooli palmitoüül-L-karnitiinkloriidi undetsüülestrit lahustati 10 ml kloroformid. El viisil saadud lahus valati väikeste portsjonitena 100 ml kolbi, mis sisaldas 750 mg sorbitooli. Pärast kloroformlahuse portsjonite lisamise lõppu aurustati kloroform kiiresti.
Sel viisil saadud tahket ainet kuivatati vaakumis 3 tundi.
Saadi 893 mg tahket valget produkti.
Enne kasutamist hüdraaditi produkt kiiresti sobiv koguse veega isotoonilise lahuse saamiseks.
c) MLV suspensioonid
65 mg, 0,11 millimooli palmitoüül-L-karnitiinkloriidi undetsüülestrit lahustati 20ml kloroformis 100 ml kolvis. Sel viisil saadud lahus aurutati kokku kuni lipiidkile moodustumiseni, mida kuivatati vaakumis 3 tundi.
Lipiidkile hüdraaditi 10 ml veega temperatuuril 30 °C 3 tundi, saades MLV suspensiooni.
Sobivalt lahjendatud MLV suspensioon viidi kompleksi polünukleotiidid või ravimiga ning kasutati bioloogilistes katsetes.
e) SUV suspensioonid
65 mg, 0,11 millimooli palmitoüül-L-karnitiinkloriidi undetsüülestrit lahustati 20 ml kloroformis 100 ml kolvis.
Sel viisil saadud lahus aurutati kokku kuni lipiidkile moodustumiseni, mida kuivatati vaakumis 3 tundi.
Lipiidkile hüdraaditi 10 ml veega temperatuuril 30 °C 3 tundi, saades MLV suspensiooni.
MLV suspensioon pressiti 10 korda läbi 200 nm pooridega polükarbonaatfiltri. Sel viisil saadud unilamellaarne suspensioon viidi kompleksi polünukleotiidi või ravimiga ning kasutati bioloogilistes katsetes.
f) Liposoomide füüsikalise püsivuse testimine
Liposoomsuspensiooni füüsikalist püsivust testiti turbidimeetriliselt 30-päevase perioodi jooksul -Iga testitava suspensiooni korral mõõdeti teatud ajavahemiku tagant neeldumist lainepikkusel 600 nm. Kõikide testitud formulatsioonide korral jäi ajamomendil 0 mõõdetud keskmine neeldumine konstantseks. Vaadeldavatel molekulidel olid vaatlusaja vältel muutuvad omadused.
MLV-ning SUV-liposoomide suspensioone saab valmistada leiutisele vastavate ühendite kombineerimisel abilipiididega, näiteks kolesterool, 1-palmitoüül-2-oleoüülfosfatidüülkoliin (POPC) või dioleüülfosfati-düülkoliin (DOPE).
MLVI-
Ühendeid kombineeritakse abilipiididega eesmärgiga saada stabiilsete membraanidega liposoome. Alljärgnevalt on liposoomide valmistamist kirjeldavas lõigus toodud näide valmistisest, milles leiutisele vastav ühend on kombineeritud abilipiidiga, näiteks kolesterool või POPC.
RAVIMITE KOHALETOIMETAMISEKS MÕELDUD LIPOSOOMIDE VALMISTAMISE NÄITED
NÄIDE 1
Taksool-ST 983 MLV liposoomide (1:40) valmistamine
20 mg, 0,0234 millimooli taksooli ning 556 mg, 0,9417 millimooli ST 983 lahustati 20 ml kloroformis -
Lahust kontsentreeriti kuni klaaskolvi pinnal täheldati lipiidkile moodustumist.
Pärast viimaste kloroformijälgede eemaldamist vaakumpumbaga lisati lipiidkilele 20 ml tert-butanooli ning sel viisil saadud lahus jagati 19 fraktsiooni, mis külmutati kohe temperatuuril -70 °C vedela lämmastikuga ning lüofiliseeriti 24 tundi. Iga tahke aine fraktsioon sisaldas taksooli (1,05 mg) ning ST 98 (29,2 mg) .
Liposoomide lõpliku suspensiooni saamiseks hüdraaditi lüofiliseeritud produkti kasutusajal veega (450 ml) või muu soolalahusega, segati 10 minutit ning jäeti seisma 30 minutiks pundumis-(hüdraatumis-)protsessi lõpulejõudmi-seks .
Saadi MLV-liposoomid. Valmistise stabiilsuse testimine
Valmistise füüsikalist stabiilsust testiti turbidimeetriliselt TDC (ajalise muutuse kõverate) registreerimisega lainepikkusel 800 nm 2 0 tunni jooksul temperatuuril 20 °C.
Registreeriti konstantse hägususe suundumus, mis näitas valmistise stabiilsust ilma sadenemisnähtudeta. Taksooli keemilise püsivuse testimine valmistises
Taksooli keemilist püsivust testiti HPLC-ga. Kromatograafilised tingimused olid järgmised:
Kolonn: mBondapack C-18
Eluent: atsetonitriil:vesi 70:30
Detektor UV-nähtav: 227 nm
Voolutuskiirus: 1 ml/min
Retentsiooniaeg: 4,5 min
Standardi suhtes määratud taksooli kontsentratsioon oli 2,13 mg/ml.
Suletistes oleva taksooli protsendiline sisaldus oli 98%.
NÄIDE 2
Taksool-ST 983 SUV-liposoomide valmistamine
20 mg, 0,0234 millimooli taksooli ning 556 mg, 0,9417 millimooli ST 983 lahustati 20 ml kloroformis.
Lahust kontsentreeriti kuni klaaskolvi pinnal täheldatilipiidkile moodustumist.
Pärast viimaste kloroformijälgede eemaldamist kõrgvaakumpumbaga lisati lipiidkilele 20 ml tert-
butanooli ning sel viisil saadud lahus jagati 19 fraktsiooni, mis külmutati kohe temperatuuril -70 °C vedela lämmastikuga ning lüofiliseeriti 24 tundi. Iga tahke aine fraktsioon sisaldas taksooli (1,05 mg) ning ST 98 (29,2 mg).
SUV-liposoomide lõpliku suspensiooni saamiseks hüdraaditi lüofiliseeritud produkti PBS-lahusega (1 ml) ning kiiritati ultraheliga temperatuuril 0 °C 20 minutit.
Seejärel filtriti 400 nm filtriga ultrahehelikiirgurist vabanenud titaani jälgede eemaldamiseks.
Valmistise stabiilsuse testimine
Valmistise füüsikalist stabiilsust testiti turbidimeetriliselt TDC (ajalise muutuse kõverate) registreerimisega lainepikkusel 800 nm 20 tunni jooksul temperatuuril 20 °C.
Registreeriti konstantse hägususe suundumus, mis näitas valmistise stabiilsust ilma sadenemisnähtudeta.
Taksooli keemilise püsivuse testimine valmistises
Taksooli keemilist püsivust testiti HPLC-ga. Kromatograafilised tingimused olid järgmised:
Kolonn: mBondapack C-18
Eluent: atsetonitriil:vesi 70:30
Detektor UV-nähtav: 227 nm
Voolutuskiirus: 1 ml/min
Retentsiooniaeg: 4,5 min
SUV-liposoomide suspensiooni HPLC-analüüs andis sama tulemuse kui vastav MLV-liposoomide suspensioon ning ka sel juhul oli suletistes oleva taksooli protsendiline sisaldus 98%.
24 tunni pärast korratud HPLC-analüüsis ei ilmnenud uusi piike lisaks taksooli piigile, mis näitab toimeaine stabiilsust.
NÄIDE 3
Taksool-ST 983-kolesterool-liposoomide (1:15) valmistamine
Seda tüüpi liposoomid valmistati eesmärgiga saada komplekse stabiilsemate membraanidega.
6 mg, 0,0101 millimooli taksooli, 62,2 mg, 0,105 millimooli ST 983 ning 40 mg kolesterooli lahustati 10 ml kloroformis.
Sel viisil saadud lahus kontsentreeriti kuni klaaskolvi pinnal lipiidkilemoodustumiseni.
Pärast viimaste kloroformijälgede eemaldamist kõrgvaakumpumbaga lisati lipiidkilele 6,3 ml tert- butanooli ning sel viisil saadud lahus jagati 5 fraktsiooniks, mis külmutati kohe temperatuuril -70 °C vedela lämmastikuga ning lüofiliseeriti 24 tundi. Iga tahke aine fraktsioon sisaldas taksooli (1,2 mg) ning kolesterooli (8 mg).
Liposoomide lõpliku suspensiooni saamiseks hüdraaditi lüofiliseeritud produkti kasutusajal veega (1000 ml) või muu soolalahusega, segati 10 minutit ning jäeti seisma 30 minutiks pundumis-(hüdraatumis-)protsessi lõpulejõudmiseks.
Saadi MLV-liposoomid.
Valmistise füüsikalise stabiilsuse testimine
Valmistise füüsikalist stabiilsust testiti turbidimeetriliselt TDC (ajalise muutuse kõverate) registreerimisega lainepikkusel 800 nm 6 tunni jooksul temperatuuril 20 °C.
Registreeriti konstantse hägususe suundumus, mis näitas valmistise stabiilsust ilma sadenemisnähtudeta
NÄIDE 4
CPT 83-ST 983 liposoomide (1:40) valmistamine
6,3 mg, 0,0168 millimooli CPT 83 (7-karbonitriilkamptotetsiin, kirjeldatud WO 97/31003) ning 400 mg, 0,667 millimooli ST 983 lahustati 20 ml kloroformis.
Sel viisil saadud lahus kontsentreeriti kuni klaaskolvi pinnal lipiidkilemoodustumiseni.
Pärast viimaste kloroformijälgede eemaldamist kõrgvaakumpumbaga lisati lipiidkilele 26 ml tert-butanooli ning sel viisil saadud lahus jagati 12 fraktsiooniks, mis külmutati kohe temperatuuril -70 °C vedela lämmastikuga ning lüofiliseeriti 24 tundi. Iga tahke aine fraktsioon sisaldas CPT 83 (0,525 mg) ning ST 983 (33,33 mg).
Liposoomide lõpliku suspensiooni saamiseks hüdraaditi lüofiliseeritud produkti kasutusajal veega (1000 ml) või muu soolalahusega ning segati 10 minutit.
Saadi MLV-liposoomid.
Valmistise füüsikalise stabiilsuse testimine
Valmistise füüsikalist stabiilsust testiti turbidimeetriliselt TDC (ajalise muutuse kõverate) registreerimisega lainepikkusel 8 00 nm 2 0 tunni jooksul temperatuuril 20 °C.
Registreeriti konstantse hägususe suundumus, mis näitas valmistise stabiilsust ilma sadenemisnähtudeta
CPT 83 keemilise püsivuse testimine valmistises
CPT 83 keemilist püsivust testiti HPLC-ga.
Kromatograafilised tingimused olid järgmised:
Kolonn: Supelcosil LC-ABZ
Eluent: fosfaatpuhver 20 mM:metanool 40:60, pH = 7,3
Detektor UV-nähtav: 360 nm
Voolutuskiirus: 1 ml/min
Retentsiooniaeg: 4,033 min
Standardi suhtes määratud CPT 83 kontsentratsioon oli 0,502 mg/ml.
Suletistes oleva CPT 83 protsendiline sisaldus oli 99%.
NÄIDE 5
CPT 83-ST 983 SUV-liposoomide (1:40) valmistamine
6,3 mg, 0,0168 millimooli CPT 83 ning 400 mg, 0,667 millimooli ST 983 lahustati 20 ml kloroformis.
Sel viisil saadud lahus kontsentreeriti kuni klaaskolvi pinnal lipiidkilemoodustumiseni.
Pärast viimaste kloroformijälgede eemaldamist kõrgvaakumpumbaga lisati lipiidkilele 26 ml tert-
butanooli ning sel viisil saadud lahus jagati 12 fraktsiooniks, mis külmutati kohe temperatuuril -70 °C vedela lämmastikuga ning lüofiliseeriti 24 tundi. Iga tahke aine fraktsioon sisaldas CPT 83 (0,525 mg) ning ST 983 (33,33 mg).
SUV-liposoomide lõpliku suspensiooni saamiseks kiiritati veega (1000 ml) hüdraaditud lüofiliseeritud produkti 40 minutit ultraheliga temperatuuril 0 °C.
Seejärel filtriti 400 nm filtriga ultrahehelikiirgurist vabanenud titaani jälgede eemaldamiseks.
CPT 83 keemilise püsivuse testimine valmistises
CPT 83 keemilist püsivust testiti HPLC-ga.
Kromatograafilised tingimused olid järgmised:
Kolonn: Supelcosil LC-ABZ
Eluent: fosfaatpuhver 20 mM:metanool 40:60, pH = 7,3
Detektor UV-nähtav: 360 nm
Voolutuskiirus: 1 ml/min
Retentsiooniaeg: 4,033 min
Standardi suhtes määratud CPT 83 kontsentratsioon oli 0,502 mg/ml.
Suletistes oleva CPT 83 protsendiline sisaldus oli 59%.
24 tunni pärast korratud HPLC-analüüsis ei ilmnenud uusi piike lisaks CPT 83 piigile, mis näitab toimeaine stabiilsust.
Valmistise füüsikalise stabiilsuse testimine
Valmistise füüsikalist stabiilsust testiti turbidimeetriliselt TDC (ajalise muutuse kõverate) registreerimisega lainepikkusel 600 nm 20 tunni jooksul temperatuuril 20 °C.
Registreeriti konstantse hägususe suundumus, mis näitas valmistise stabiilsust ilma sadenemisnähtudeta.
NÄIDE 6
CPT 184-ST 983 MLV-liposoomide (1:40) valmistamine
7,29 mg, 0,0168 millimooli CPT 184 ning 400 mg, 0,667 millimooli ST 983 lahustati 20 ml kloroformis.
Sel viisil saadud lahus kontsentreeriti kuni klaaskolvi pinnal lipiidkilemoodustumiseni.
Pärast viimaste kloroformijälgede eemaldamist kõrgvaakumpumbaga lisati lipiidkilele 2 6 ml tert- butanooli ning sel viisil saadud lahus jagati 12 fraktsiooniks, mis külmutati kohe temperatuuril -70 °C vedela lämmastikuga ning lüofiliseeriti 24 tundi. Iga tahke aine fraktsioon sisaldas CPT 184 (0,607 mg) ning ST 983 (33,33 mg).
SUV-liposoomide lõpliku suspensiooni saamiseks hüdraaditi lüofiliseeritud produkti kasutusajal veega (1000 ml) või muu soolalahusega ning segati 10 minutit
Saadi MLV-liposoomid
Valmistise füüsikalise stabiilsuse testimine
Valmistise füüsikalist stabiilsust testiti turbidimeetriliselt TDC (ajalise muutuse kõverate) registreerimisega lainepikkusel 600 nm 20 tunni jooksul temperatuuril 20 °C.
Registreeriti konstantse hägususe suundumus, mis näitas valmistise stabiilsust ilma sadenemisnähtudeta.
CPT 184 keemilise püsivuse testimine valmistises
CPT184 keemilist püsivust testiti HPLC-ga.
Kromatograafilised tingimused olid järgmised:
Kolonn: Supelcosil LC-ABZ
Eluent: fosfaatpuhver 20 mM:metanool 40:60, pH = 7,3
Detektor UV-nähtav: 360 nm
Voolutuskiirus: 1 ml/min
Retentsiooniaeg: 25,5 min
Standardi suhtes määratud CPT 184 kontsentratsioon oli 0,600 mg/ml.
Suletistes oleva CPT 184 protsendiline sisaldus oli 99%.
NÄIDE 7
CPT 184-ST 983 SUV-liposoomide (1:40) valmistamine
7,2 9 mg, 0,0168 millimooli CPT 18 4 ning 400 mg, 0, 667 millimooli ST 983 lahustati 20 ml kloroformis.
Sel viisil saadud lahus kontsentreeriti kuni klaaskolvi pinnal lipiidkilemoodustumiseni.
Pärast viimaste kloroformijälgede eemaldamist kõrgvaakumpumbaga lisati lipiidkilele 2 6 ml tert-butanooli ning sel viisil saadud lahus jagati 12 fraktsiooniks, mis külmutati kohe temperatuuril -70 °C vedela lämmastikuga ning lüofiiiseeriti 24 tundi. Iga tahke aine fraktsioon sisaldas CPT 184 (0,607mg) ning ST 983 (33,33 mg).
SUV-liposoomide lõpliku suspensiooni saamiseks kiiritati veega (1000 ml) hüdraaditud lüofiliseeritud produkti 40 minutit ultraheliga temperatuuril 0 °C.
Seejärel filtriti 400 nm filtriga ultrahehelikiirgurist vabanenud titaani jälgede eemaldamiseks.
CPT 83 keemilise püsivuse testimine valmistises
CPT 184 keemilist püsivust testiti HPLC-ga.
Kromatograafilised tingimused olid järgmised:
Kolonn: Supelcosil LC-ABZ
Eluent: fosfaatpuhver 20 mM:metanool 40:60, pH = 7,3
Detektor UV-nähtav: 360 nm
Voolutuskiirus: 1 ml/min
Retentsiooniaeg: 25,5 min
Standardi suhtes määratud CPT 83 kontsentratsioon oli 0,36 mg/ml.
Suletistes oleva CPT 184 protsendiline sisaldus oli 70%.
24 tunni pärast korratud HPLC-analüüsis ei ilmnenud uusi piike lisaks CPT 184piigile, mis näitab toimeaine stabiilsust.
Valmistise füüsikalise stabiilsuse testimine
Valmistise füüsikalist stabiilsust testiti turbidimeetriliselt TDC (ajalise muutuse kõverate) registreerimisega lainepikkusel 600 nm 2 0 tunni jooksul temperatuuril 20 °C.
Registreeriti konstantse hägususe suundumus, mis näitas valmistise stabiilsust ilma sadenemisnähtudeta. Järgnevates näidetes valmistati liposoomid abilipiide ja/või külmumisvastaste ainete kasutamisega.
NÄIDE 8
CPT 184-ST 983 liposoomide valmistamine
2 1 kolvis lisati 20 mg CPT 184-le ning 600 mg ST 983-le 100 ml metüülkloroformi ning segu soojendati nõrgalt kuni täieliku lahustumiseni. Saadud lahust kontsentreeriti rotaatoraurutis kuni lipiidkile moodustumiseni, mida kuivatati täiendavalt kõrgvaakumpumbaga kaks tundi. Lipiidkile hüdraaditi temperatuuril 45 °C laktoosilahusega (6 g / 300 ml vett) ning jäeti rotaatoraurutis segamisel seisma ligikaudu 2 tunniks. Seejärel kiiritati suspensiooni ultraheliga 2 tundi, iga tsükli kestus oli pool tundi. Järgnevalt filtriti produkt 200 nm filtriga ning lüofiiseeriti. CPT 184 keemilise püsivuse testimine valmistises
CPT 18 4 keemilist püsivust hinnati HPLC-ga. Produkt oli püsiv 24-tunnilise testi vältel.
Valmistise füüsikalise stabiilsuse testimine
Valmistise füüsikalist püsivust testiti turbidimeetriliselt. Produkt oli stabiilne 24-tunnilise testi vältel Ka osakeste suurus oli stabiilne (keskmine väärtus 100 nm).
NÄIDE 9
CPT 184- ST 983 liposoomide valmistamine
1 ml liposoomse formulatsiooni (POPC - l-palmitoüül-2-oleoüülfosfatidüülkoliin 5 mM; ST 983 1,24 mM; CPT 184 0,25 ning trehaloos 150 mM) jaoks kasutati järgmist protseduuri:
0,11 mg, 0,25 mikromooli CPT 184 lahustati 250 ml etüületanaadis, 3,79 mg, 4,89 mikromooli POPC lahustati 100 ml etanoolis ning 0,74 mg, 1,25 mikromooli ST 983 lahustati 100 ml etanoolis. Kolm lahust segati kokku ning segati tugevalt. Lahustid aurustati ära rotaatoraurutiga toatemperatuuril rõhul 80 mbar. Lipiidkile kuivatati 2 tundi pimedas. Lipiidkile suspendeeriti 1 ml D(+)-trehaloosdihüdraadi (Fluka, HPLC 99%) 150 mM lahuses, steriliseeriti 0,22 nm filtriga ning segati tugevalt 2 minutit. Suspensioon suruti 21 korda läbi 200 nm polükarbonaatfiltrite. Läbisurutud liposoomide suspensioon külmutati vedela lämmastikuga ning lüofiliseeriti 2 ööpäeva. Saadi valge tahke aine.
NÄIDE 10
CPT 184- S 983 LIPOSOOMIDE VALMISTAMINE
Kasutati sama protseduuri kui näites 9, kuid kasutati 500 mM trehaloosi.
ST 983 LIPOSOOM - VÄHIVASTASE AINE KOMPLEKSI VÄHIVASTANE TOIME
Nagu ilmneb allpool, oli st 983 liposoomidele iseloomulik akumuleerumine valdavalt pulmonaarsel tasemel. See iseloomulik kohaspetsiifilisus soodustab selle kasutamistpulmonaarse kartsinogeneesi hiiremudelis.
Selles eksperimendis kasutatud vähivastaseks aineks oli taksool.
Tuumori indutseerimiseks in vivo tingimustes süstiti anesteseerimata Balb/c hiirele parema tagakäpa
quadriceps femoris'se 0,1 ml RPMI-1840 (Sigma) hiire kopsukartsinoomi 3x105 rakku.
Kümme päeva pärast tuumori implantatsiooni lahjendati liposoom-taksool-kompleks fosfaatpuhverdatud soolalahusega (PBS, SIGMA; P-1447) ning süstiti intravenoosselt kontsentratsioonis 2, 5 mg7ml ST 983 ning 75 mg7ml taksooli.
Kontrolliks kasutatud taksool (paklitakseel INDENA) lahustati kemofoorvehiikulis EL (BASF) kontsentratsioonis 20 mg/ml ning säilitati valguse eest kaitstult temperatuuril +4 °C järgmised 24 tundi. Kasutusajal lahjendati seda fosfaatpuhverdatud soolalahusega (PBS, SIGMA) ning süstiti intravenoosselt samas koguses ning samadel tingimustel kui ST 983 liposoomiga transporditav taksool.
Kremofoor valmistati 1:1 lahjendamisel etanooliga. Manustamist tehti seitsmel järjestikulisel päeval alates 10 päeva pärast tuumori inokuleerimist. Loom vaadeldi kui 17. inokuleerimisjärgse päevani ning surmati siis 5 tservikaalluksatsiooniga ning nende kopsud eemaldati metastaaside arvu määramiseks. Kopsude värvimine metastaaside avastamiseks inkubeeriti kopse 10 päeva 5 ml Bouin'i lahuses, mis koosnes 71% pikriinhappe küllastunud lahusest, 4,8% jää-äädikhappest (Merck) ning 24% 10%- lisest formaldehüüdist (Fluka). Bouin'I lahuses toimunud inkubatsiooniperioodi lõpul loendati metastaaside arv. Võrreldes ravi mittesaanud kontrollrühma hiirtega ei omanud kremofoortransporditud taksool pulmonaarsete metastaaside arvu vähendavat toimet, kuigi viimane oli 15 väiksem ravi mittesaanud kontrollrühmaga võrreldes, kuna ST 98 3 liposoomidega kompleksis olev taksooli korral ilmnes märgatav vähenemine nii pulmonaarsete metastaaside arvus kui ka suuruses. Andmete statistiline analüüs kopsumetastaaside arvu kohta
20 teostati Mann-Whitney mitteparameetrilise testi põhjal sõltumatute andmete korral. Saadud tulemused on esitatud alltoodud tabelis 1.
TABEL 1
25 Kopsumetastaasid 17.päeval pärast M109 tuumori inokuleerimist BALB/c hiirtel pärast ravi taksooli ning taksool/liposoon ST 983-ga
In-vltro tsütotoksilisuse -testid
Toksilisuse hindamine viidi läbi HeLa ning M109 rakkudega 96-süvendiga plaatidel. Üks päev pärast plaatidele paigutamist töödeldi rakke järgmise 4 8 tunni jooksul testitavate molekulidega. Seejärel pesti rakke PBS-ga ning jäeti normaalsetesse kasvutingimustesse 48-ks tunniks. Pärast kasvukeskkonnast eemaldamist inkubeeriti rakke jääl 16% TCA-ga, pesti 3 korda H20. ga, töödeldi 30 minutit sulforodamiin B-ga (SRB)1% etaanhappes, pesti 3 korda 1% etaanhappega, inkubeeriti 20 minutit 10 mM TRIS-is pH 10,5 juures ning viimaks võeti lugemid lainepikkusel 540 nm.
Tsütotoksilisuse testid CPT 83-ga
In-vitro tsütotoksilisuse testid CPT 83-ga viidi läbi eesmärgiga hinnata liposoomiga kompleksis oleva vähivastase aine tsütotoksilisust kui efektiivse toime esialgset näitajat.
Liposoomi võime hindamiseks transportida CPT 83 in viro M 109 rakkudesse kasutati ülalkirjeldatus sulforodamiin B testi.
Lisaks hinnati samuti dimetüülsulfoksüdis (DMSO) lahustatud CPT tsütotoksilisust võrrelduna ST 983 liposoomiga kompleksis oleva sama molekuli suhtes. Liposoom -CPT 83 kompleksi kasutati tsütotoksilisuse hindamisel alltoodud tabelites 2.1, 2.2 ning 2.3 toodud kontsentratsioonidel nii SUV- kui MLV-konfiguratsioonides. Kasutatud moolsuhe liposoom:CPT 83 oli 40:1. Alltoodud tabelites 2.1, 2.2 ning 2.3 toodud ST 983-CPT 83 kompleksi keskmised tsütotoksilisuse väärtused nii SUV- kui MLV-konfiguratsiooni korral näitavad, et ST 98 3 liposoom on võimeline transportima CPT 83 niisama hästi kui DMSO, ilmutades samas suurusjärgus olevaid tsütotoksilisuse tasemeid.
TABEL 2.1
ST 983 SUV-CPT 83 tsütotoksilisus (SRB) kontsentratsioon mikromoolides
Tabelis toodud väärtused vastavad optilise tiheduse lugemitele lainepikkusel 540 nm.
TABEL 2.2
ST 983 MLV-CPT 83 tsütotoksilisus (SRB) kontsentratsioon mikromoolides
Tabelis toodud väärtused vastavad optilise tiheduse lugemitele lainepikkusel 540 nm.
TABEL 2.3
DMSO-CPT 83 tsütotoksilisus (SRB): kontsentratsioon mikromoolides
Tabelis toodud väärtused vastavad optilise tiheduse lugemitele lainepikkusel 540 nm.
Liposoom ST 983 - CPT 184 kompleksi bioloogiline aktiivsus
Testiti näite 8 (alljärgnevalt nimetatud liposoom A) ning näite 10 (alljärgnevalt nimetatud liposoom B) liposoomide bioloogilist aktiivsust.
Toksilisus tervete hiirte korral
Liposoomid A ning B manustati peroraalselt, intravenoosselt, võrdluses vaba CPT 184-ga, annuses 1,2 mg/kg vastavalt skeemile q4dx4. Need kaks liposoomi ei avaldanud märkimisväärset mõju keha massile, kopsudele, sapile ning neerudele. Intravenoosselt manustatud liposoom B ning peroraalselt manustatud liposoom A mõjutasid harknäärme massi analoogiliselt vaba CPT 184-ga. Intravenoosselt manustatud liposoom A omas üksnes minimaalset toimet. Mõlema liposoomi korral ei ilmnenud hematolooilistes parameetrites 24 tunni pärast olulisi variatsioone. Liposoom A intravenoossel manustamisel vastavalt skeemile qd5 ilmnes toksilisus vaba CPT 18 4-ga võrreldes,
Liposoomide kopsutropism
Liposoomide A ning B akumuleerumine ilmnes valdavalt kopsude tasemel. Liposoome manustati intravenoosselt annuses 1,2 mg/kg. Vaba CPT 184 manustati peroraalselt annuses 1,2 mg/kg DMSO-s. Loomad, terved hiired surmati 24 tundi pärast viimast manustamist. Kopsud eemaldati kehast ning külmutati vedelas lämmastikus. Ülessulatatud organid ühendati ning homogeniseeriti segus 0,1% etaanhape/atsetonitriil 1:5. Homogenisaat jagati kolme võrdsesse ossa, kahele listai CPT 184 taastumise arvutamiseks. Kolm proovi tsentrifuugiti 16 000 g juures 5 minutit. Surnatandid koguti kokku ning ekstraheerit diklorometaaniga. Orgaaniline faas kuivatati kiirvaakurniga ning jääk lahustati uuesti atsetonitriilis eesmärgiga saada HPLC viimiseks ühele loomale vastav kogus 50 ml-s. HPLC tehti Waters Symmetry C 18 3,5 mm (4,6x7,5 mm). Detektoriks oli Merck fluorimeeter 370 nm ergastuse ning 510 nm emissiooniga. Eluendiks oli isokraatne segu vesi/atsetonitriil 60:40.Proovi maht oli 50 ml. CPT 184 taastumine oli ligikaudu 70%. Mõlema liposoomi A ning B korral oli CPT 18 akumuleerimise tase suurem kui vaba CPT 184 korral DMSO-s nagu nähtub jooniselt fig.
GEENIDE KOHALETOIMETAMINE
Liposoom-DNA kompleksi valmistamine
Liposoom ning plasmiidne DNA lahjendati sobivalt eraldi PBS-is. Seejärel lisati DNA liposoomile ning liposoom-DNA kompleksid jäeti seisma ligiakudu 30 minutiks temperatuuril 4 °C stabiilse liposoom-DNA vastastiktoime tekke soodustamiseks.
In-vitro eksperimentides kasutati katioonse võrdluslipiidina 1,2-dioleüüloksü-3-trimetüülammoonium-propaani (DOTAP). 2,5x105 HeLa raku kohta kasutati 2,5 (mg plasmiidset DNA-d ning liposoomi kontsentratsioon oli 9 mM.
In-vivo eksperimentides kasutati katioonsete võrdluslipiididena nii DOTAP-I kui ka [2,3-(dioleüül) proopüül]trimetüülammooniumi (DOTMA) .
Tulemustes määratud moolsuhted on toodud vastavate katioonsete lipiidide vastavad kontsentratsioonidele nanomoolides DNA mg kohta.
In-vivo transfektsioonieksperimentides kasutati 25 mg plasmiidset DNA-d looma kohta.
Eksperimentides kasutatud plasmiid pCMVluc sisaldas lutsiferaasgeeni cDNA-d tsütomegaloviiruse (CMV) promootori transkriptsiooni kontrolli all.
Lutsiferaasi aktiivsuse kvantitatiivne määramine.
Valguslise lutsiferaasi aktiivsus rakkudes ning kudedes määrati Boehringer Mannheimi komplkti (kataloogi nr 1669 893) abil.
Rakke pesti 3 korda PBS-iga ning seejärel eemaldati plaadilt kaabitsaga lüüsipuhvrisse (100 mM kaaliumfofaati pH 7,8. 1 mM ditiotreitool-DTT) ning allutati kolmele järjestikulisele tsüklile külmutamine-sulatamine. Pärast tsentrifuugimist 1,5 ml Eppendorfi klaaside kasutati supernatanti luminestsentstestismitte hiljem kui 5 tundi pärast valkude ekstraheerimist. Luminestsentskiirguse mõõtmised viidi läbi luminomeetriga lainepikkusel 562 nm. Pärast esimest külmutamist vedelas N2, millele järgnes peenekshõõrumine pulbriks, resuspendeeriti koed lüüsipuhvris ning inkubeeriti jääl 10-15 minutit. Seejärel tsentrifuugiti proovid 2 ml Eppendorfi klaasides ning supernatanti testiti lutsiferaasi aktiivsuse suhtes.
Analüüs tilkpealekande meetodil
Rakuline DNA ekstraheeriti vastavalt Sanbrooki, Fritsehi ning Maniatise poolt raamatud Molecular Cloning, 1989 kirjeldatud leelislüüsi protseduurile.
5 mg rakkudest ekstraheeritud DNA-d eelabsorbeeriti nailonfiltritel (Boehringer), kasutades Biorad tilkpealekande seadist. Seejärel prehübridiseeriti filtrid 4 tundi temperatuuril 65 °C lahusega, mis sisaldas 0,5 M naatriumpürofosfaati (NaPi), 1 mM EDTA, 7% SDS. Valmistati 32P(alfa) märgistusega proov, kasutades abloonina plasmiidid pCMV luc DNA-d ning juhusliku ettevalmistusega Amersham Kit'i.Filter hübridiseeriti sama eelhübridiseerimispuhvris 12 tundi temperatuuril 42 °C, kasutades 1x106 CPM/ml. Seejärel allutati filter 3 10-min pesemisele temperatuuril 65 °C puhvriga, mis sisaldas 40 mM NaPI, 1% SDS. Autoradiograafiline analüüs viidi läbi luminofoormuunduriga, mis kasutas beetakiirgusega aktiveeritud luminestsents ekraani, mida loeti ning kvantifitseeriti fotokordistit sisaldava süsteemiga koos kujutis analüüsi programmiga. Tilkpealekande meetodis läbiviidud densitomeetria jaoks kasutati IP-LabGel kujutis analüüsi programmi.
Plasmiidse DNA transfektsiooni testid
Rida plasmiidse DNA transfektsiooni teste viidi läbi nii in vitro kui ka in vivo.
Katioonsete võrdluslipiididena kasutati nii DOTAP kui DOTMA, mille transfektsioonivõimet on piisavalt iseloomustatud ning kirjeldatud Abkenet jt poolt ajakirjas Proc. Nati. Acad. Sci. USA 1993, 90, 6518. In-vivo eksperimentides analüüsiti katioonse lipiidi ning plasmiidse DNA rida erinevaid moolsuhteid eesmärgiga määrata katioonse lipiidi aktiivsus ning seega vastavad kõige efektiivsemad kontsentratsioonid geeni ülekandmiseks. Erinevat liposoomide transfektisoonivõimet hinnati nii in vitro kui ka in vivo tingimustes, kasutades pCMVluc plasmiidis sisalduvat lutsiferaasgeeni transportijat, mille aktiivsus luminestsentsi suhtelistes ühikutes (RLU) (eelnevalt kirjeldatud) allus lihtsale kvantifitseerimisele.
Alternatiivina hinnati rea katioonsete liposooide transfektsioonilist efektiivsust densitomeetrilise analüüsi alusel (luminofoormuundur), kasutades DNA proove, mis olid ekstraheeritud transfekteeritud rakkudest, mis olid eelabsorbeeritud nitrotselluloos-filtritel (tilkpealekande meetod) ning hübridiseeritud 32P-märgistusega plasmiidse DNA markeritega vastavalt eelnevale kirjeldusele.
In-vivo-transfektsiooni testid
In-vivo transfektsiooni efektiivsuse olenevus moolsuhtest ST 983 liposoom : DNA
Selles eksperimendis hinnati maksa, kopsu ning südame transfektsiooni efektiivsuse olenevust moolsuhtest ST 983 liposoom : plasmiidne DNA. Testiti järgmisi nanomoolseid
suhteid liposoomi jag DNA kohta: 12:1, 24:1, 36:1 ning 48:1.
6 Balb/c hiirest, massiga ligikaudu 20 g, koosnevaid gruppe raviti intravenoosselt liposoom-DNA kompleksiülalmainitud kogustega 200 ml PBS-is ning loomad surmati 24 tundi pärast komleksi manustamist.
Kopsude, südame ning maksa koest ekstraheeritud lutsiferaasi aktiivsus ilmnes valdavalt lutsiferaasi jaotumisena kopsudes kõikide analüüsitud moolsuhete korral. Tõepoolest, ligikaudu 99% kolmest koest ekstraheeritud lutsiferaasist paiknes kopsudes. Tõestati, et parim liposoom: DNA moolsuhe oli 12:1. Saadud tulemused on esitatud alltoodud tabelis 3.
TABEL 3
ST 983 in-vivo transfektsiooni efektiivsus funktsioonina moolsuhtest ST 983:DNA (mg DNA)
In-vlvo transfektsiooniefektiivsuse olenevus erinevustest SRT 983 liposoomide valmistamisel
Tabelis 4 on toodud liposoom:DNA moolsuhtega 12:1 erinevate SRT 983 liposoomide valmististega intravenoosselt ravitud Balb/c hiire kopsudest ekstraheeritud lutsiferaasi aktiivsuse väärtused luminestsentsi suhtelistes ühikutes (RLU).
Saadud andmed näitavad lisaks sellele, et TS 98 3 liposoom on võimeline transportima plasmiidset DNA-d in vivo sellise efektiivsusega, mis on suurem ja/või võrreldav DOTMA puhul täheldatuga, ka teatavat varieeruvuse astet ST 983 erinevate valmististe hulgas. See võib olla tingitud reast füüsikalis-keemilistest karakteristikutest nagu liposoomse vesiikuli suurus või vesiikulite suhteline suurus ST 98 3 erinevat valmististe unilamellaarse (SUV) või multilamellaarse struktuuri suhtes. Mis puutub sellesse tõsiasja, siis on ülalloetletud füüsikalis-keemilised parameetrid piisavalt kirjeldatud määravatena optimaalse in-vivo ning in-vitro transfektsiooniefektiivsuse saavutamisel R. I. Mahato jt poolt ajakirjas Human Gene Therapy 9. 1998: 2083.
TABEL 4
ST 983 in-vivo transfektsiooniefektiivsus (erinevad valmistised)
ST 983-DNA liposoomkompleksi in-vivo transfektsiooniefektiivsuse olenevus eelinkubeerimisajast
Tabelis 5 on toodud luminestsentsi suhtelised ühikud, mis vastavad 30 minutit või 3 tundi enne manustamist plasmiidse DNA-ga eelinkubeeritud ST 983 liposoomiga intravenoosselt ravitud maksast, kopsust ning südamest ekstraheeritud proovile. 3 tundi DNA-ga eelinkubeeritud ST 983 ravitud loomadel ilmneb kopsu ning südame lutsiferaasi aktiivsuse ligikaudu 5-kordne kasv võrreldes nendega, keda raviti sama liposoomiga, mida oli eelinkubeeritud 30 minutit- See tulemus viitab, et stabiilse liposoom:DNA kompleksi teke on ajast sõltuv nähtus ning see mängib kriitilist osa in-vivo transfektsiooniefektiivsuse määramisel.
ST 983 in-vivo transfektsiooniefektiivsus funktsioonina liposoom/DNA eelinkubatsiooniajast
JOONISTE LÜHIKIRJELDUS
Joonis fig - joonisel on esitatud andmed kudede (kops) ST14 81-liposoomide sisalduse kohta, mis on saadud intravenoosselt süstitud hiirte korral (q4dx4).

Claims (11)

1. Ühendit valemiga (II) milles: R3 on küllastunud või küllastumatu, hargnemata või hargnenud ahelaga atsüülrühm, milles on 4-26 süsinikuaatomit; R4 on küllastunud või küllastumatu, hargnemata või hargnenud ahelaga alküülrühm, milles on 4-26 süsinikuaatomit; ning X- on farmakoloogiliselt vastuvõetava happe anioon, sisaldava liposoomi kasutamine ravimi valmistamiseks ravitoimega ainete transpordiks.
2. Kasutamine vastavalt punktile 1, mis erineb selle poolest, et R3 on eelistatavalt valitud rühmast, kuhu kuuluvad nonanoüül-, dodekanoüül-, müristoüül-, palmitoüül-, stearoüül või oleoüülrühm.
3. Kasutamine vastavalt punktile 1, mis erineb selle poolest, et R4 on eelistatavalt valitud rühmast, kuhu kuuluvad nonüül-, undetsüül-, tetradetsüül-, heksadetsüül- või oleüülrühm,
4. Kasutamine vastavalt punktile 2, mis erineb selle poolest, et X" on valitud rühmast, kuhu kuuluvae kloriid; bromiid; jodiid; aspartaat; vesinikaspartaat; tsitraat; vesiniktsitraat; tartraat; vesiniktartraat; fosfaat, vesinikfosfaat; fümaraat; vesinikfumaraat; glütserofosfaat; glükoosfosfaat; laktaat; maleaat; vesinikmaleaat; mukaat; orotaat; oksalaat; vesinikoksalaat; sulfaat; vesiniksulfaat; trikloroetanaat; trifluoroetanaat; metaansulfonaat; pamoaat ning vesinikpamoaat.
5. Kasutamine vastavalt punktidele 1-4, mis erineb selle poolest, et ühend on valitud rühmast, kuhu kuuluvad: - palmitoüül-L-karnitiinkloriidi undetsüülester; - stearoüül-L-karnitiinkloriidi undetsüülester; - stearoüül-L-karnitiinkloriidi tetradetsüülester; - palmitoüül-L-karnitiinkloriidi tetradetsüülester; - müristoüü -L-karnitiinkloriidi tetradetsüülester; - palmitoüül-L-karnitiinbromiidi heksadetsüülester; - oleoüül-L-karnitiinklorüdi oleoüülester.
6. Kasutamine vastavalt punktile 1, mis erineb selle poolest, et ravim on valitud rühmast, kuhu kuuluvad vähivastased, antiangiogeensed, viirusevastased, antibakteriaalsed, seenhaigustevastased, ainuraksetevastased ained, kardiovaskulaarssüsteemi toimivad ühendid või immunogeensed peptiidid.
7. Kasutamine vastavalt punktile 6, mis erineb selle poolest, et ravim on vähivastane või antiangiogeenne aine.
8. Kasutamine vastavalt punktile 7, mis erineb selle poolest, et vähivastane aine on valitud rühmast, kuhu kuulub taksool või kamptotetsiiniderivaat.
9. Kasutamine vastavalt punktile 8, mis erineb selle poolest, et kamptotetsiiniderivaat on valitud rühmast, kuhu kuulub - 7-bensüüloksüiminometüülkamptotetsiin või - 7-butoksüiminimetüülkamptotetsiin.
10. Kasutamine vastavalt punktile 1, mis erineb selle poolest, et liposoom sisaldab täiendavalt abilipiide.
11. Kasutamine vastavalt punktile 10, mis erineb selle poolest, et abilipiid on valitud rühmast, kuhu kuuluvad kolesterool, 1-palmitoüül-2-oleoüülfosfatidüül-koliin või dioleüülfosfatidüül-koliin.
EEP201100028A 1999-04-13 2000-04-11 L-karnitiini või alkanoüül-L-karnitiinide estrite kasutamine katioonsete lipiididena farmakoloogiliselt aktiivsete komponentide intratsellulaarseks kohaletoimetamiseks EE05719B1 (et)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IT1999RM000220A IT1306129B1 (it) 1999-04-13 1999-04-13 Esteri della l-carnitina o di alcanoil l-carnitine utilizzabili comelipidi cationici per l'immissione intracellulare di composti
EEP200100518A EE05514B1 (et) 1999-04-13 2000-04-11 L karnitiini v i alkanol L karnitiinide estrid katioonsete lipiididena farmakoloogiliselt aktiivsete komponentidena intratsellulaarseks kohaletoimetamiseks

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EE201100028A EE201100028A (et) 2011-08-15
EE05719B1 true EE05719B1 (et) 2014-08-15

Family

ID=11406659

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EEP201100028A EE05719B1 (et) 1999-04-13 2000-04-11 L-karnitiini või alkanoüül-L-karnitiinide estrite kasutamine katioonsete lipiididena farmakoloogiliselt aktiivsete komponentide intratsellulaarseks kohaletoimetamiseks
EEP200100518A EE05514B1 (et) 1999-04-13 2000-04-11 L karnitiini v i alkanol L karnitiinide estrid katioonsete lipiididena farmakoloogiliselt aktiivsete komponentidena intratsellulaarseks kohaletoimetamiseks

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EEP200100518A EE05514B1 (et) 1999-04-13 2000-04-11 L karnitiini v i alkanol L karnitiinide estrid katioonsete lipiididena farmakoloogiliselt aktiivsete komponentidena intratsellulaarseks kohaletoimetamiseks

Country Status (34)

Country Link
US (4) US6797281B1 (et)
EP (3) EP1435232A1 (et)
JP (2) JP4703855B2 (et)
KR (2) KR100684378B1 (et)
CN (2) CN100402017C (et)
AT (2) ATE317257T1 (et)
AU (2) AU776301B2 (et)
BG (3) BG65501B1 (et)
BR (2) BRPI0017460B1 (et)
CA (2) CA2650202C (et)
CZ (1) CZ302628B6 (et)
DE (2) DE60025961T2 (et)
DK (2) DK1426044T3 (et)
EA (2) EA004459B1 (et)
EE (2) EE05719B1 (et)
ES (2) ES2234591T3 (et)
HK (1) HK1045145B (et)
HR (1) HRP20010740B1 (et)
HU (1) HU229366B1 (et)
IL (4) IL145765A0 (et)
IS (2) IS2476B (et)
IT (1) IT1306129B1 (et)
ME (2) ME00113B (et)
MX (1) MXPA01010359A (et)
NO (2) NO327742B1 (et)
NZ (2) NZ528874A (et)
PL (2) PL211710B1 (et)
PT (2) PT1183228E (et)
RS (3) RS50911B (et)
SI (2) SI1183228T1 (et)
SK (2) SK288246B6 (et)
TR (2) TR200202358T2 (et)
WO (1) WO2000061543A2 (et)
ZA (1) ZA200109291B (et)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7151191B2 (en) * 2000-01-13 2006-12-19 Emisphere Technologies, Inc. Compounds and compositions for delivering active agents
DE10113446A1 (de) † 2001-03-19 2002-09-26 Schwarzkopf Gmbh Hans Haarbehandlungsmittel mit Betainen
DK2286795T3 (en) * 2002-06-26 2017-02-06 Syncore Biotechnology Co Ltd PROCEDURE FOR PREPARING A Cationic LIPOSOMAL PREPARATION INCLUDING A LIPOPHIL COMPOUND
DK2108362T3 (da) * 2002-06-26 2013-09-02 Medigene Ag Kationisk liposomal-fremstilling omfattende en taxan
ITRM20040288A1 (it) * 2004-06-11 2004-09-11 Sigma Tau Ind Farmaceuti Uso della 7-t-butossiimminometilcamptotecina per la preparazione di un medicamento per il trattamento delle neoplasie dell'utero.
GT200500310A (es) * 2004-11-19 2006-06-19 Compuestos organicos
US20080095834A1 (en) * 2005-03-02 2008-04-24 Volkmar Weissig Mitochondriotropic Phospholipid Vesicles
SA06270147B1 (ar) 2005-06-09 2009-12-22 نوفارتيس ايه جي عملية لتخليق 5-(مثيل–1h–إيميدازول–1-يل )–3-(ثلاثي فلـورو مثيل)–بنزامـين
MX2008001965A (es) * 2005-08-10 2008-03-26 Novartis Ag Composiciones en microparticulas del inhibidor de topoisomerasa i 7-ter-butoxiiminometilcamptotecina.
JP2009504615A (ja) * 2005-08-10 2009-02-05 ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト ７−（ｔ−ブトキシ）イミノメチルカンプトテシンのための製剤
US20100178325A1 (en) * 2006-08-23 2010-07-15 Biodelivery Sciences International, Inc. Amphiphilic nucleotide cochleate compositions and methods of using the same
EP2107903A1 (en) * 2007-02-01 2009-10-14 SIGMA-TAU Industrie Farmaceutiche Riunite S.p.A. Pharmaceutical composition comprising a campothecin derivative
WO2008101173A2 (en) * 2007-02-16 2008-08-21 Cornell University Biodegradable compositions and materials
US20100204432A1 (en) * 2007-05-28 2010-08-12 Husam Younes Biodegradable elastomers prepared by the condensation of an organic di-, tri- or tetra-carboxylic acid and an organic diol
JP4827986B2 (ja) 2007-06-08 2011-11-30 マンカインド コーポレ−ション ＩＲＥ−１αインヒビター
CA2718276A1 (en) * 2008-03-13 2009-09-17 Perkinelmer Las, Inc. Enzymatic substrates for multiple detection systems
EP2532649B1 (en) * 2011-06-07 2015-04-08 Incella GmbH Amino lipids, their synthesis and uses thereof
WO2013032643A2 (en) * 2011-08-31 2013-03-07 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Lipids capable of conformational change and their use in formulations to deliver therapeutic agents to cells
US20140274798A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 University Of Washington Through Its Center For Commercialization Compounds and methods relating to lysosomal storage disorders
JP2019511483A (ja) 2016-03-02 2019-04-25 ザ ボード オブ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ テキサス システム 免疫療法のためのｓｔｉｎｇ活性化ナノワクチン
JP2020522534A (ja) * 2017-06-06 2020-07-30 ウェイン ステート ユニバーシティＷａｙｎｅ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ カルニチン由来材料に関する方法および組成物
CN115177608B (zh) * 2022-07-26 2023-12-05 南方医科大学南方医院 长链酰基肉碱类化合物在制备预防和/或治疗肝癌的药物中的应用

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5008288A (en) * 1986-01-06 1991-04-16 Alfred Stracher Carnitine directed pharmaceutical agents
US4866040A (en) * 1986-01-06 1989-09-12 Alfred Stracher Aminocarnitine directed pharmaceutical agents
IT1230142B (it) * 1989-05-03 1991-10-14 Fidia Spa Derivati della carnitina, processo per la loro preparazione e impiego in terapia umana
JPH05507929A (ja) * 1990-06-15 1993-11-11 ウェイク　フォレスト　ユニバーシティー エーテル脂質―ヌクレオシド共有結合体
IT1248321B (it) * 1991-05-15 1995-01-05 Sigma Tau Ind Farmaceuti Uso di esteri di acil l-carnitine con l'acido gamma-idrossibutirrico per produrre composizioni farmaceutiche per il trattamento di epatopatie
IT1258370B (it) * 1992-03-02 1996-02-26 Sigma Tau Ind Farmaceuti Esteri della l-carnitina e di acil l-carnitine dotati di attivita' miorilassante selettiva sull'apparato gastro-intestinale e composizioni farmaceutiche che li contengono.
US5972600A (en) * 1992-04-03 1999-10-26 The Regents Of The University Of California Separation of active complexes
IT1263013B (it) * 1992-10-20 1996-07-23 Avantgarde Spa Esteri della l-carnitina e di alcanoil l-carnitine con l'acido glicolico o suoi esteri e composizioni farmaceutiche contenenti tali per il trattamento di affezioni cutanee.
US5552156A (en) * 1992-10-23 1996-09-03 Ohio State University Liposomal and micellular stabilization of camptothecin drugs
US5512671A (en) * 1993-02-16 1996-04-30 Wake Forest University Ether lipid-nucleoside covalent conjugates
IT1261984B (it) * 1993-06-22 1996-06-11 Avantgarde Spa Uso di esteri della l-carnitina o di acil l- carnitine con idrossiacidi per produrre composizioni farmaceutiche per il trattamento di affezioni cutanee.
JPH08512056A (ja) * 1993-06-30 1996-12-17 ジェネンテク・インコーポレイテッド リポソームの製造法
IT1273987B (it) * 1994-09-29 1997-07-14 Sigma Tau Ind Farmaceuti Uso di esteri ftalidilidenici della carnitina e di alcanoil carnitine per il trattamento dello shock endotossico
US6008202A (en) * 1995-01-23 1999-12-28 University Of Pittsburgh Stable lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production
US6316652B1 (en) * 1995-06-06 2001-11-13 Kosta Steliou Drug mitochondrial targeting agents
WO1996040265A1 (en) * 1995-06-07 1996-12-19 The Regents Of The University Of California Stabilization of polynucleotide complexes
US5811406A (en) * 1995-06-07 1998-09-22 Regents Of The University Of California Dry powder formulations of polynucleotide complexes
IT1283955B1 (it) * 1996-03-20 1998-05-07 Sigma Tau Ind Farmaceuti Bis alcanoil esteri della carnitina ad attivita' antibatterica, antimicotica ed antiprotozoaria.
US6294378B1 (en) * 1996-07-26 2001-09-25 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Method and reagents for genetic immunization
US6056973A (en) * 1996-10-11 2000-05-02 Sequus Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic liposome composition and method of preparation
US6071532A (en) * 1996-10-15 2000-06-06 Emory University Synthesis of glycophospholipid and peptide-phospholipid conjugates and uses thereof
IT1299172B1 (it) * 1998-05-06 2000-02-29 Sigma Tau Ind Farmaceuti Esteri perfluorurati di alcanoil l-carnitine utilizzabili quali lipidi cationici per l'immissione intracellulare di composti

Also Published As

Publication number Publication date
ES2234591T3 (es) 2005-07-01
HK1092732A1 (en) 2007-02-16
SI1426044T1 (sl) 2006-04-30
BG65312B1 (bg) 2008-01-31
CZ302628B6 (cs) 2011-08-10
SI1183228T1 (en) 2005-04-30
BG105971A (en) 2002-08-30
IS2476B (is) 2008-12-15
CA2370143C (en) 2011-06-21
JP5420507B2 (ja) 2014-02-19
HK1045145B (en) 2006-01-27
IS8719A (is) 2008-03-07
HUP0201446A3 (en) 2002-11-28
NZ515270A (en) 2004-02-27
PL351112A1 (en) 2003-03-24
KR100798499B1 (ko) 2008-01-28
ATE286873T1 (de) 2005-01-15
SK14312001A3 (sk) 2002-02-05
MEP24008A (en) 2010-06-10
EP1183228A2 (en) 2002-03-06
EE200100518A (et) 2002-12-16
DE60017388D1 (de) 2005-02-17
IL175366A (en) 2010-12-30
ATE317257T1 (de) 2006-02-15
EA200300745A1 (ru) 2003-12-25
PT1183228E (pt) 2005-04-29
CN100402017C (zh) 2008-07-16
ZA200109291B (en) 2002-08-16
SK287253B6 (sk) 2010-04-07
DK1183228T3 (da) 2005-05-17
EE201100028A (et) 2011-08-15
SK288246B6 (sk) 2015-03-03
IL185486A0 (en) 2008-01-06
HU229366B1 (en) 2013-11-28
YU70201A (sh) 2004-07-15
CZ20013617A3 (cs) 2002-02-13
DE60025961D1 (de) 2006-04-20
NO20085413L (no) 2001-10-12
EP1435232A1 (en) 2004-07-07
IT1306129B1 (it) 2001-05-30
DK1426044T3 (da) 2006-06-12
NZ528874A (en) 2005-09-30
RS50911B (sr) 2010-08-31
IL175366A0 (en) 2006-09-05
ES2258688T3 (es) 2006-09-01
RS20090448A (sr) 2010-06-30
US20070190128A1 (en) 2007-08-16
EP1426044A1 (en) 2004-06-09
DE60025961T2 (de) 2006-08-17
HK1045145A1 (en) 2002-11-15
KR20060113799A (ko) 2006-11-02
JP4703855B2 (ja) 2011-06-15
ITRM990220A1 (it) 2000-10-13
RS52682B (sr) 2013-08-30
WO2000061543A2 (en) 2000-10-19
US7629003B2 (en) 2009-12-08
EA006021B1 (ru) 2005-08-25
EE05514B1 (et) 2012-02-15
HUP0201446A2 (en) 2002-08-28
US7585519B2 (en) 2009-09-08
BRPI0017460B1 (pt) 2016-04-19
TR200202358T2 (tr) 2002-12-23
AU776301B2 (en) 2004-09-02
JP2002541238A (ja) 2002-12-03
KR20010113794A (ko) 2001-12-28
BR0009765B1 (pt) 2013-11-05
NO20014985D0 (no) 2001-10-12
EP1183228B1 (en) 2005-01-12
IS6095A (is) 2001-09-28
IL145765A (en) 2007-07-04
PL204418B1 (pl) 2010-01-29
CA2370143A1 (en) 2000-10-19
BG65501B1 (bg) 2008-10-31
CN1359370A (zh) 2002-07-17
US20050079209A1 (en) 2005-04-14
EP1426044B1 (en) 2006-02-08
IL145765A0 (en) 2002-07-25
CA2650202A1 (en) 2000-10-19
NO327742B1 (no) 2009-09-14
ME00113B (me) 2010-10-10
AU4312300A (en) 2000-11-14
KR100684378B1 (ko) 2007-02-20
CN1263730C (zh) 2006-07-12
PL211710B1 (pl) 2012-06-29
BG109876A (en) 2008-02-29
BR0009765A (pt) 2002-01-02
WO2000061543A3 (en) 2001-01-11
AU2004224958A1 (en) 2004-11-25
EA200101076A1 (ru) 2002-04-25
DE60017388T2 (de) 2006-03-30
HRP20010740A2 (en) 2002-10-31
MXPA01010359A (es) 2002-05-06
US20040186175A1 (en) 2004-09-23
NO20014985L (no) 2001-10-12
CN1823731A (zh) 2006-08-30
JP2011042657A (ja) 2011-03-03
US6797281B1 (en) 2004-09-28
NO336949B1 (no) 2015-11-30
TR200102941T2 (tr) 2002-05-21
AU2004224958B2 (en) 2007-11-22
PT1426044E (pt) 2006-06-30
CA2650202C (en) 2012-12-11
IS2539B (is) 2009-09-15
EA004459B1 (ru) 2004-04-29
HRP20010740B1 (en) 2005-08-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EE05719B1 (et) L-karnitiini või alkanoüül-L-karnitiinide estrite kasutamine katioonsete lipiididena farmakoloogiliselt aktiivsete komponentide intratsellulaarseks kohaletoimetamiseks
JP2021502346A (ja) 生物学的活性分子を送達するための融合性化合物
AU2007214359B2 (en) Esters of L-carnitine or alkanoyl L-carnitines useful as cationic lipids for the intracellular delivery of pharmacologically active compounds
HK1092732B (en) Esters of l-carnitine or alkanoyl l-carnitines useful as cationic lipids for the intracellular delivery of pharmacologically active compounds
KR20070023826A (ko) 미용 활성 화합물의 세포 내 전달을 위한 양이온성지질로서 유용한 ｌ-카르니틴 또는 알카노일 ｌ-카르니틴의에스테르함유 리포솜이

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapsed by not paying the annual fees

Effective date: 20170411