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DE96900894T1 - Amylasevarianten - Google Patents

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DE96900894T1
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amylase
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DE96900894T
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Henrik Bisgard-Frantzen
Allan Svendsen
Torben Vedel Borchert
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Novo Nordisk AS
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Novo Nordisk AS
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Abstract

Variante einer Ursprungs-α-amylase, wobei die Ursprungs-α-amylase (i) eine Aminosäuresequenz hat, die ausgewählt ist aus den in SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 2, SEQ ID No. 3 bzw. SEQ ID No. 7 gezeigten Aminosäuresequenzen; oder (ii) wenigstens 80% homolog zu einer oder mehrerer der Aminosäuresequenzen ist; und/oder immunologische Kreuzreaktivität mit einem Antikörper zeigt, der gegen eine α-Amylase mit einer der Aminosäuresequenzen erzeugt wurde; und/oder durch eine DNA-Sequenz kodiert wird, die mit der gleichen Sonde hybridisiert wie eine DNA-Sequenz, die eine α-Amylase mit einer der Aminosäuresequenzen kodiert; wobei in der Variante:
(a) wenigstens ein Aminosäurerest der Ursprungs-α-amylase deletiert worden ist; und/oder
(b) wenigstens ein Aminosäurerest der Ursprungs-α-amylase durch einen anderen Aminosäurerest ersetzt worden ist; und/oder
(c) wenigstens ein Aminosäurerest in Bezug zu der Ursprungs-α-amylase inseriert worden ist;
wobei die Variante α-Amylase Aktivität aufweist und wenigstens eine der nachstehenden Eigenschaften in Bezug auf die Ursprungs-α-amylase aufweist:...

Claims (29)

  1. Variante einer Ursprungs-α-amylase, wobei die Ursprungs-α-amylase (i) eine Aminosäuresequenz hat, die ausgewählt ist aus den in SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 2, SEQ ID No. 3 bzw. SEQ ID No. 7 gezeigten Aminosäuresequenzen; oder (ii) wenigstens 80% homolog zu einer oder mehrerer der Aminosäuresequenzen ist; und/oder immunologische Kreuzreaktivität mit einem Antikörper zeigt, der gegen eine α-Amylase mit einer der Aminosäuresequenzen erzeugt wurde; und/oder durch eine DNA-Sequenz kodiert wird, die mit der gleichen Sonde hybridisiert wie eine DNA-Sequenz, die eine α-Amylase mit einer der Aminosäuresequenzen kodiert; wobei in der Variante: (a) wenigstens ein Aminosäurerest der Ursprungs-α-amylase deletiert worden ist; und/oder (b) wenigstens ein Aminosäurerest der Ursprungs-α-amylase durch einen anderen Aminosäurerest ersetzt worden ist; und/oder (c) wenigstens ein Aminosäurerest in Bezug zu der Ursprungs-α-amylase inseriert worden ist; wobei die Variante α-Amylase Aktivität aufweist und wenigstens eine der nachstehenden Eigenschaften in Bezug auf die Ursprungs-α-amylase aufweist: erhöhte Thermostabilität; erhöhte Stabilität gegenüber Oxidation; und reduzierte Ca2+-Abhängigkeit; mit der Maßgabe, dass die Aminosäuresequenz der Variante nicht identisch ist mit den in SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 2, SEQ No. 3 bzw. SEQ ID No. 7 angegebenen Aminosäuresequenzen.
  2. Variante gemäß Anspruch 1, wobei wenigstens ein oxidierbarer Aminosäurerest der Ursprungs-α-amylase deletiert oder ersetzt worden ist durch einen anderen Aminosäurerest, der weniger oxidationsempfindlich ist als der oxidierbare Aminosäurerest.
  3. Variante gemäß Anspruch 2, wobei der oxidierbare Aminosäurerest ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Methionin, Tryptophan, Cystein und Tyrosin.
  4. Variante gemäß Anspruch 2 oder 3, wobei der oxidierbare Aminosäurerest ein Methionin-Rest ist, der M9, M10, M105, M202, M208, M261, M309, M382, M430 oder M440 der in SEQ ID No. 1 gezeigten Aminosäuresequenz entspricht oder äquivalent dazu ist.
  5. Variante gemäß Anspruch 4, die eine Methionin-Substitution umfasst, die einer der nachstehenden Substitutionen in der in SEQ ID No. 1 gezeigten Aminosäuresequenz: M9L; M10L; M105L; M202L,T,F,I,V; M208L; M261L; M309L; M382L; M430L; M440L entspricht oder äquivalent dazu ist.
  6. Variante gemäß einem der Ansprüche 3 bis 5, wobei ein Methionin-Rest durch Threonin ersetzt worden ist.
  7. Variante gemäß einem der vorstehenden Ansprüche, wobei wenigstens eine Aminosäure, die F180, R181, G182, T183, G184 oder K185 der in SEQ ID No. 1 gezeigten Aminosäuresequenz entspricht oder äquivalent dazu ist, deletiert worden ist.
  8. Variante gemäß Anspruch 7, wobei die deletierten Aminosäuren zwei der Aminosäurereste entsprechen oder dazu äquivalent sind.
  9. Variante gemäß Anspruch 8, wobei die Deletionen R181* + G182*; oder T183* + G184* entsprechen oder äquivalent dazu sind.
  10. Variante nach einem der vorstehenden Ansprüche, die eine Aminosäure-Substitution umfasst, die einer der nachstehenden Substitutionen in der SEQ ID No. 1 gezeigten Aminosäure-Sequenz: K269R; P260E; R124P; M105F,I,L,V; M208F,W,Y; L217I; V206I,L,F entspricht oder dazu äquivalent ist.
  11. Variante gemäß einem der vorstehenden Ansprüche, die eine Aminosäure-Substitution umfasst, die einer der nachstehenden Substitutionen in der SEQ ID No. 1 gezeigten Aminosäuresequenz: Y243F; K108R; K179R; K239R; K242R; K269R; D163N; D188N; D192N; D199N; D205N; D207N; D209N; E190Q; E194Q; N106D entspricht oder dazu äquivalent ist.
  12. DNA-Konstrukt, das eine DNA-Sequenz umfasst, die eine α-Amylase-Variante gemäß einem der Ansprüche 1 bis 11 kodiert.
  13. Rekombinanter Expressionsvektor, der ein DNA-Konstrukt gemäß Anspruch 12 enthält.
  14. Zelle, die mit einem DNA-Konstrukt gemäß Anspruch 12 oder einem Vektor gemäß Anspruch 13 transformiert ist.
  15. Zelle gemäß Anspruch 14, die ein Mikroorganismus ist.
  16. Zelle gemäß Anspruch 15, die ein Bakterium oder ein Pilz ist.
  17. Zelle gemäß Anspruch 16, die ein grampositives Bakterium wie Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Bacillus lentus, Bacillus brevis, Bacillus stearothermophilus, Bacillus alkalophilus, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus coagulans, Bacillus circulans, Bacillus lautus, Bacillus thuringiensis oder Streptomyces lividens oder Streptomyces murinus, oder ein gramnegatives Bakterium wie E.coli.
  18. Verfahren zum Herstellen einer α-Amylase-Variante gemäß einem der Ansprüche 1 bis 11, wobei eine Zelle gemäß einem der Ansprüche 14 bis 17 unter zur Herstellung der α-Amylase-Variante geeigneten Bedingungen kultiviert und die α-Amylase-Variante nachfolgend aus der Kultur erhalten wird.
  19. Verwendung einer α-Amylase-Variante gemäß einem der Ansprüche 1 bis 11 zum Waschen und/oder Geschirrspülen.
  20. Reinigerzusatz, der eine α-Amylase-Variante gemäß einem der Ansprüche 1 bis 11, gegebenenfalls in Form eines nicht-staubenden Granulates, einer stabilisierten Flüssigkeit oder eines geschützten Enzyms umfasst.
  21. Reinigerzusatz gemäß Anspruch 20, der 0,02–200 mg Enzymprotein pro Gramm Zusatz enthält.
  22. Reinigerzusatz gemäß Anspruch 20 oder 21, der ferner ein weiteres Enzym wie eine Protease, eine Lipase, eine Peroxidase, ein weiteres amylolytisches Enzym und/oder eine Cellulase umfasst.
  23. Reinigungszusammensetzung, die eine α-Amylase-Variante gemäß einem der Ansprüche 1 bis 11 und ein Tensid umfasst.
  24. Reinigungszusammensetzung gemäß Anspruch 23, die ferner ein weiteres Enzym wie eine Protease, eine Lipase, eine Peroxidase, ein weiteres amylolytisches Enzym und/oder eine Cellulase umfasst.
  25. Hand- oder Maschinen-Spülmittelzusammensetzung, die eine α-Amylase-Variante gemäß einem der Ansprüche 1 bis 11 und ein Tensid umfasst.
  26. Spülmittelzusammensetzung gemäß Anspruch 25, die ferner ein weiteres Enzym wie eine Protease, eine Lipase, eine Peroxidase, ein weiteres amylolytisches Enzym und/oder eine Cellulase umfasst.
  27. Hand- oder Maschinen-Waschmittelzusammensetzung, die eine α-Amylase-Variante gemäß einem der Ansprüche 1 bis 11 und ein Tensid umfasst.
  28. Waschmittelzusammensetzung gemäß Anspruch 27, die ferner ein weiteres Enzym wie eine Protease, eine Lipase, eine Peroxidase, ein amylolytisches Enzym und/oder eine Cellulase umfasst.
  29. Verwendung einer α-Amylase-Variante gemäß einem der Ansprüche 1 bis 11 zum Entschlichten von Textilien.
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