DE60002187T2

DE60002187T2 - N-[2-hydroxy-3-(1-piperidinyl)propoxy]pyridin-1-oxid-3-carboximidoyl chlorid und seine verwendung als mittel zur behandlung von insulinresistenz

Info

Publication number: DE60002187T2
Application number: DE60002187T
Authority: DE
Inventors: H-6090 Kunszentmiklos; Mihaly Barabas; Katalin Biro; Zita Csakai; Mihalyne Kardos; Andras Komaromi; Laszlo Koranyi; Maria Kuerthy; Ede Marvanyos; Tamas Mogyorosi; Karoly Nagy; Melinda Nagy; Zoltan Nagy; Jeno Szilbereky; Magdolna Toeroek; Laszlo Ueroegdi
Original assignee: Biorex Kutato Fejleszto Kft
Current assignee: LadRx Corp
Priority date: 1999-02-26
Filing date: 2000-02-24
Publication date: 2003-12-11
Anticipated expiration: 2020-02-25
Also published as: ZA200106488B; HUP9900475D0; CZ20013053A3; EE04961B1; SI1163224T1; KR20010102410A; CA2360451A1; DK1163224T3; PT1163224E; ATE237590T1; UA72495C2; YU60301A; IL144866A0; NO319793B1; ES2193055T3; SK287063B6; RS50083B; PL350915A1; DE60002187D1; HRP20010584B1

Description

Technisches Gebiet der Erfindung

Die Erfindung betrifft ein O-(3-Piperidin-2-hydroxy-1-propyl)-hydroxymsäurehalogenidderivat, dessen pharmazeutische Verwendung und die pharmazeutischen Produkte, die dieses Derivat als Wirkstoff enthalten. Genauer betrifft die Erfindung N-[2- Hydroxy-3-(1-piperidinyl)propoxy]-pyridin-1-oxid-3-carboximidoylchlorid, seine Stereoisomere sowie deren Säureadditionssalze. Ferner betrifft die Erfindung die Verwendung dieser Verbindungen bei der Herstellung eines Medikaments zur Verwendung bei der Behandlung von Insulinresistenz und pharmazeutische Produkte, die diese Derivate als Wirkstoff enthalten.

Hintergrund der Erfindung

O-(3-Piperidin-2-hydroxy-1-propyl)-hydroxymsäurehalogenidderivate sind bereits aus der europäischen Patentschrift 0 417 210 B1 bekannt. Laut dieser Patentschrift haben diese Verbindungen einen selektiven Betablockereffekt und eignen sich daher für die Behandlung der diabetischen Angiopathie, genauer der diabetischen Retinopathie und Nephropathie.
Laut der PCT-Schrift WO 98/06400 sind die O-(3-Piperidin-2-hydroxy-1-propyl)- hydroxymsäurehalogenidderivate und andere Verbindungen ähnlicher Struktur effektiv beim Schutz und der Regeneration vaskulärer Endothelzellen und sind daher geeignete Wirkstoffe bei der Behandlung von Erkrankungen, die durch eine Fehlfunktion des Endothels hervorgerufen werden.
Der die Aufsichts-Expression erhöhende Effekt verschiedener Hydroxylaminderivate, darunter die O-(3-Piperidin-2-hydroxy-1-propyl)-hydroxymsäurehalogenide, und die Verwendung dieser Verbindungen bei der Behandlung von Erkrankungen, die mit der Funktion des Aufsichtssystems im Zusammenhang stehen, sind aus WO 97/16439 bekannt. In dieser Patentanmeldung sind O-(3-Piperidin-2-hydroxy-1-propyl)-3-pyridylhydroxymsäurechlorid-N-oxidderivate definiert und als neue Produkte beansprucht, aber das Produktionsverfahren ist nur für Piperidin-N-oxid und für die Verbindung, die N-Oxidgruppen sowohl in den Piperidin- als auch den Pyridinringen enthält, beschrieben. Die erfindungsgemäße Verbindung ist in der vorstehenden Anmeldung nicht erwähnt.
Insulinresistenz ist ein pathologischer Zustand, der die Wirkung von Insulin blockiert. Im allgemeinen wird er mit Diabetes in Zusammenhang gebracht, obwohl er auch unabhängig davon entstehen kann. Aufgrund der Insulinresistenz braucht der Körper immer höhere Insulinkonzentrationen für den Kohlehydrat-, Lipid- und Proteinstoffwechsel, was zu einer extrem hohen Insulinkonzentration führt. Es ist erwiesen, dass eine langanhaltende hohe Insulinkonzentration ein unabhängiger Risikofaktor für die Herz- und Gehirngefäße ist.
Die Senkung der Insulinresistenz ist für beide Diabetestypen von wesentlicher Bedeutung: bei Diabetes vom Typ 2 ist sie ein großer ätiologischer Faktor, während die Insulinresistenz im Falle von Diabetes vom Typ 1 durch Glucosetoxizität sowie übermäßige Mengen von Insulin verursacht wird, die für therapeutische Zwecke exogen verabreicht werden.
Für die Verringerung der Insulinresistenz sind bereits verschiedene Wirkstoffe zur Verfügung gestellt worden. Die wichtigsten davon sind die Insulinsensibilisierungsprodukte, von denen Troglitazon, ein Mitglied der Thiazolidin-Dion-Gruppe, das bekannteste ist (A. R. Saltiel et al., Diabetes 45/12/1996, S. 1661 bis 1669, und S. Kumar et al., Diabetologia 1996/39/6, S. 701 bis 709). Der Haupteffekt dieser Verbindung ist die Verringerung der Insulinresistenz durch Senkung der peripheren Insulinkonzentrationen sowohl im Grundzustand als auch nach Glucosestimulation. Im Ergebnis verbessert sie den Kohlehydratstoffwechsel und korrigiert verschiedene pathologische Abweichungen, die als sekundäre Auswirkung des hohen Insulinspiegels entstehen, wie z. B. Hyperlipidämie und pathologische Hämostase. Letztendlich besteht ihre positive Wirkung in der Verringerung des kardiovaskulären Risikos. Ein Nachteil besteht allerdings darin, dass sie ernsthafte, hauptsächlich hepatotoxische Nebenwirkungen hervorrufen kann; daher ist ihre Anwendung begrenzt und erfordert große Vorsicht.

Zusammenfassung der Erfindung

Bei Studien auf dem Gebiet von O-(3-Piperidin-2-hydroxy-1-propyl)-hydroxymsäurehalogeniden wurde eine detaillierte Untersuchung des Maleats von O-(3-Piperidin-2- hydroxy-1-propyl)-3-pyridinhydroxymsäurechlorid, das als Bimoclomol bekannt ist, durchgeführt. Dabei stellte sich heraus, dass es die größte Wirkung auf die pathologischen Folgen chronischer Neuropathie hat: es verbesserte die Defizite in der Geschwindigkeit der motorischen und sensorischen Nervenleitung bei Diabetes und hat außerdem eine günstige Wirkung auf die pathologischen Abweichungen, die durch autonome Neuropathie entstehen. Darüber hinaus verringerte es sowohl in Tierexperimenten als auch in Tests der Phase II an Menschen die pathologische diabetische histologische Albuminausscheidung im Urin und in Tierexperimenten die pathologische histologische und elektrophysiologische Veränderungen aufgrund diabetischer Retinopathie. Jedoch war Bimoclomol bei der Verringerung der Insulinresistenz nicht wirksam.
Derzeit stehen keine medizinischen Produkte zur Verfügung, die die Insulinresistenz senken und gleichzeitig Abweichungen, die sich aus allen drei chronischen diabetischen Komplikationen ergeben könnten, effektiv heilen könnten.
Auf der Suche nach geeigneten Wirkstoffen wurden N-Oxidderivate von Bimoclomol auf ihre biologische Wirkung getestet. In einem ersten Test wurde die Effektivität der drei N- Oxidderivate von Bimoclomol auf die motorische und sensorische Neuropathie bei STZ- diabetischen Wistar-Ratten untersucht. Die Effektivität der drei Bimoclomol-N- oxidderivate bei der Verbesserung des durch Steptozotocin-induzierten Diabetes verursachten Geschwindigkeitsdefizits in der peripheren motorischen und sensorischen Nervenleitung wurde durch das in Experiment 2 detailliert beschriebene Verfahren bestimmt. Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle zusammengefasst.
* p < 0,05 bezogen auf Bimoclomol
** p < 0,01 bezogen auf Bimoclomol
Wie man aus den vorstehenden Ergebnissen sieht, ist das Pyridin-N-oxidderivat von Bimoclomol gleichwertig mit Bimoclomol, während die beiden anderen N-Oxidderivate eine signifikant schwächere Wirkung auf die motorische und sensorische Neuropathie haben. Auf der Grundlage dieser Erfahrung wurden die Untersuchungen mit dem Pyridin- N-oxidderivat von Bimoclomol, nämlich N-[2-Hydroxy-3-(1-piperidinyl)-1-propoxy]- pyridin-1-oxid-3-carboximidoylchlorid fortgesetzt.
Unsere Untersuchungen lieferten das unerwartete Ergebnis, dass N-[2-Hydroxy-3-(1- piperidinyl)propoxy]-pyridin-1-oxid-3-carboximidoylchlorid abgesehen davon, dass es bei der Behandlung der vorstehend aufgeführten drei Hauptkomplikationen von Diabetes die gleiche und in einigen Fällen sogar eine größere Wirkung als Bimoclomol zeigt, die periphere Insulinresistenz senkt. Aufgrund dieser Eigenschaft eignet sich die Verbindung für die Behandlung chronischer Komplikationen des Diabetes, vor allem der Retinopathie, Neuropathie und Nephropathie und die gleichzeitige Senkung der peripheren Insulinresistenz, ist jedoch auch für die Behandlung einer nicht diabetischen pathologischen Insulinresistenz und aller damit zusammenhängenden pathologischen Zustände geeignet.
Die günstigen biologischen Eigenschaften von N-[2-Hydroxy-3-(1-piperidinyl)propoxy]- pyridin-1-oxid-3-carboximidoylchlorid wurden durch folgende Experimente bewiesen. Für diese Untersuchungen wurde das Maleat von N-[2-Hydroxy-3-(1-piperidinyl)propoxy]- pyridin-1-oxid-3-carboximidoylchlorid oder das Maleat der entsprechenden optisch aktiven Verbindung als Testverbindungen verwendet. In der Beschreibung dieser Experimente wird das Maleat der racemischen Verbindung als Verbindung A bezeichnet, während das Maleat des optisch aktiven Stereoisomers jeweils spezifisch angegeben ist.

Experiment 1

Wirkung der Behandlung mit der Verbindung A und Bimoclomol auf den Kohlehydratstoffwechsel in fettleibigen, insulinresistenten, hyperinsulinämischen Zucker fa/fa-Ratten mit beeinträchtigter Glucosetoleranz nach zweimonatiger Behandlung

Materialien und Methoden:

In den Experimenten wurden so genannte Zucker fa/fa-Ratten (Charles River Laboratories Inc.) verwendet. Bei monozygotischen Tieren resultieren Fettleibigkeit, Insulinresistenz, einer hoher Insulinspiegel im Blut, eine beeinträchtigte Glucosetoleranz und Hypertriglyceridämie aus einer Mutation des Leptinrezeptors im Hypothalamus. Aufgrund dieser Eigenschaften ist dies ein akzeptiertes Modell eines frühen Diabetes vom Typ II.
Die Tiere wurden zu Beginn der Studie und nach 1 oder 2 Monaten Behandlung je 24 Stunden in einzelne Stoffwechselkäfige gesetzt, um Urin zu sammeln.
Die Tiere erhielten zur Kontrollein den Wochen 14 bis 22 einmal täglich entweder die Testsubstanzen oder physiologische Salzlösung durch eine Sonde.
Die biochemischen Parameter von Blut und Urin wurden durch das automatische Analysegerät Kodak Ectachem 700 gemessen. Der Gesamtproteinspiegel im Urin wurde spektrophotometrisch durch Einsatz des Bradford-Färbeverfahrens (Hitachi U-3200) bei 595 nm gemessen. Die Insulinkonzentration des Serums wurde durch das RIA-Verfahren unter Einsatz von Ratten-anti-Insulin-Antikörpern gemessen.
Der systolische und diastolische Blutdruck und der Herzschlag wurden wöchentlich an den. Schwänzen der Ratten (nach dem so genannten "Schwanzmanschettenverfahren") durch das automatische Analysegerät Letica 200 gemessen. Nach zwei Monaten Behandlung wurde die Glucosetoleranz durch den intraperitonealen Glucosetoleranztest (2 g/kg ip) gemessen.

Ergebnisse:

Bimoclomol, das in Tagesdosen von 20 mg/kg p. os verabreicht wurde, verringerte den Blutzuckerspiegel bei leerem Magen signifikant, hatte jedoch keine Auswirkung auf die Insulinkonzentration bei leerem Magen.
Im Vergleich mit den vorherigen Daten war es das unerwartete Ergebnis, dass die in Tagesdosen von 20 mg/kg p. os verabreichte Dosis der Verbindung A sowohl den Blutzuckerspiegel bei leerem Magen als auch die Insulinkonzentrationen senkte, und zwar letztere um etwa 50%. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 und Fig. 1 aufgeführt. Tabelle 1 Wirkung der Verbindung A und von Bimoclomol auf die Blutzucker- und Insulinkonzentrationen bei leerem Magen
**p < 0,001 ***p < 0,0001, im Vergleich zur fettleibigen Kontrolle
Bein intraperitonealen Glucosetoleranztest wirkte sich weder Bimoclomol noch die Verbindung A auf die Bereiche unter der Blutzuckerkurve (areas under the curve = AUC) aus. Allerdings gibt es bei der AUC von Insulin einen Unterschied zwischen den beiden Verbindungen: Bimoclomol zeigte keine Wirkung, während die Verbindung A den Wert signifikant auf das gleiche Niveau wie bei der schlanken Kontrolle senkte. Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 und Fig. 2 zu sehen.
Die Tabelle enthält die AUC-Werte zwischen 0 und 60 Minuten. Tabelle 2 Wirkung der Behandlung mit Bimoclomol und der Verbindung A auf die Glucosetoleranz von fettleibigen insulinresistenten, hyperinsulinämischen Zucker fa/fa- Ratten mit beeinträchtigter Glucosetoleranz nach zweimonatiger Behandlung
***p < 0,0001, im Vergleich zur fettleibigen Kontrolle

Zusammenfassung:

Die Verbindung A senkt die periphere Insulinresistenz signifikant, Bimoclomol dagegen nicht.

Experiment 2

Wirkung der Behandlung mit der Verbindung A und Bimoclomol auf die pathologischen Abweichungen auf rund peripherer Neuropathie in STZ-diabetischen Wistar-Ratten nach einmonatiger Behandlung

Materialien und Methoden:

In den Experimenten wurden männliche Wistar-Ratten verwendet (Charles River Laboratories Inc.). Zu Beginn des Experiments wogen die Tiere 340 bis 370 g. Diabetes wurde durch die intravenöse Verabreichung einer einzigen Dosis von 45 mg/kg in physiologischer Salzlösung gelöstem Streptozotocin (STZ, Sigma, St. Louis, MO) ausgelöst. Die Entwicklung des Diabetes wurde nach einem Tag durch einen Blutzuckertest überprüft, wobei ein Wert über 15 mMol/l akzeptiert wurde.
Die Test- und Referenzsubstanzen wurden den Tieren einmal pro Tag p. os verabreicht.
Um die Geschwindigkeit der Nervenleitung (nerve conduction velocity = NCV) zu bestimmen, wurde die von De Konig und Gispen modifizierte Methode von Stanley verwendet. Die Tiere wurden durch die gleichzeitige Verabreichung von Hyponorm (1 mg/kg ip, Janssen, Tilburg, Dänemark), Fluanison (10 mg/ml) und Phentanylcitrat (0,2 mg/ml) betäubt. Anschließend wurden die linken Hüft- und Schienbeinnerven an Standardpunkten stimuliert. Man setzte einen supramaximalen Reiz (quadratischer Impuls, 0,03 ms) mit einer Platinnadelelektrode durch einen Nihon-Kohden-Stimulator (Modell SEN-1104, Japan). Das Elektromyogramm (EMG), das von den Sohlenmuskeln übertragen und durch einen Myographen (Elema-Schönander, Stockholm, Schweden) intensiviert wurde, wurde durch das Programm "Matlab for Windows" (Mathwork Inc., Großbritannien) weiter analysiert. Das Ausmaß der durch Diabetes verursachten NCV- Schäden wurde in m/s ausgedrückt. Die Effektivität der Behandlung wurde prozentual damit verglichen. Die statistischen Berechnungen wurden durch einen ungepaarten t-Test oder den ANOVA-Test mit einem Kriterium (zusammen mit dem Newman-Keuls posthoc-Test) durchgeführt (Graphpad Instat, San Diego, CA).

Ergebnisse:

Bimoclomol, das einmal täglich in einer Dosis von 20 mg/kg verabreicht wurde, und die Verbindung A, die einmal täglich in einer Dosis von 5 mg/kg verabreicht wurde, verbesserten die Geschwindigkeit der motorischen (MNCV) und sensorischen (SNCV) Nervenleitung bei diabetischen Tieren im gleichen signifikanten Ausmaß. Eine Erhöhung der Dosis von Verbindung A über 10 mg/kg steigerte die Wirkung nicht. Die Ergebnisse sind in Tabelle 3 aufgeführt. Tabelle 3 Wirkung der Behandlung mit der Verbindung A und Bimoclomol auf das Defizit in der Geschwindigkeit der Nervenleitung (NCV) von STZ-diabetischen (STZ-DB) Wistar-Ratten
*** p < 0,001

Experiment 3

Wirkung der Behandlung mit der Verbindung A und Bimoclomol auf die pathologischen Abweichungen aufgrund diabetischer autonomer Neuropathie bei STZ- diabetischen Wistar-Ratten nach einmonatiger Behandlung

Materialien und Methoden:

In den Experimenten wurden männliche Wistar-Ratten verwendet (Charles River Laboratories Inc.). Zu Beginn des Experiments wogen die Tiere 340 bis 370 g. Diabetes wurde durch die intravenöse Verabreichung einer einzigen Dosis von 45 mg/kg in physiologischer Salzlösung gelöstem Streptozotocin (STZ, Sigma, St. Louis, MO) ausgelöst. Die Entwicklung des Diabetes wurde nach einem Tag durch einen Blutzuckertest überprüft, wobei ein Wert über 15 mMol/l akzeptiert wurde.
Die Test- und Referenzsubstanzen wurden den Tieren einmal pro Tag p. os verabreicht.
Die Experimente wurden unter Anästhesie durchgeführt, die durch Verabreichung von 60 mg/kg ip. Pentobarbitalnatrium (Nembutal, Sanofi, Phylaxia) erreicht wurde. Anschließend wurde ein intratrachealer Tubus oder eine Polyethylenkanüle in die Oberschenkelarterie und Vene eingeführt. Der arterielle Katheter wurde an einen Druckwandler für die gleichzeitige Messung des systolischen und diastolischen Blutdrucks angeschlossen (automatisches Mess- und Weitergabesystem mit einem Haemosys-Computerprogramm). Nach 20 Minuten der Äquilibrierung würden intravenös folgende Substanzen verabreicht: Noradrenalin, 5 ug/kg iv., Isoproterenol 0,4 ug/kg iv., N. vagus-Stimulation (2 V, Dauer 500 usec, Verzögerung: 1 msec). Die Auswirkungen der Substanzen wurden 10 Minuten überwacht.

Ergebnisse:

Die autonome Neuropathie ist eine der häufigsten Ursachen für den plötzlichen Herztod sowohl im Falle von Diabetes als auch von anderen Erkrankungen (z. B. Lebererkrankungen). Daher sind alle Produkte, die durch autonome Neuropathie bedingte pathologische Abweichungen effektiv verringern können, sehr wichtig.
In den Experimenten verringerte eine Einzeltagesdosis von 20 mg/kg entweder Bimoclomol oder Verbindung A verschiedene durch autonome Neuropathie bedingte pathologische Abweichungen signifikant.
Tabelle 4 zeigt eine Zusammenfassung und einen Vergleich unserer Ergebnisse.
Der doppelte Pfeil in der Tabelle zeigt an, dass die Testsubstanz statistisch effektiver ist als die andere. Tabelle 4
NA: Noradrenalin ↑: korrigiert
IS: Isoproterenol -:ineffektiv

Experiment 4

Wirkung der Behandlung mit der Verbindung A und Bimoclomol auf die pathologischen histologischen Abweichungen aufgrund früher diabetischer Retinopathie bei STZ-diabetischen Wistar-Ratten nach einmonatiger Behandlung

Materialien und Methoden:

In den Experimenten wurden männliche Wistar-Ratten verwendet (Charles River Laboratories Inc.). Zu Beginn des Experiments wogen die Tiere 340 bis 370 g. Diabetes wurde durch die intravenöse Verabreichung einer einzigen Dosis von 45 mg/kg in physiologischer Salzlösung gelöstem Streptozotocin (STZ, Sigma, St. Louis, MO) ausgelöst. Die Entwicklung des Diabetes wurde nach einem Tag durch einen Blutzuckertest überprüft, wobei ein Wert über 15 mMol/l akzeptiert wurde.
Die Test- und Referenzsubstanzen wurden den Tieren einmal pro Tag p. os verabreicht.
Nach der Betäubung (Calypsovet, 125 mg/kg, ip., Richter Rt., Ungarn) wurden die Augen ausgeschält und in 4%igem, in einem Phosphatpuffer (pH: 7,4) gelösten Formaldehyd fixiert.
Anschließend wurden sie in Paraffin eingebettet (Medim DDM P800, Einbettungszentrum: Lignifer L-120-92-014, Färber: Shandon Elliott, Mikrotom: Leica SM 2000 R, Mikroskop: Jenaval Carl Zeiss Jena). Mehrere Schnitte der Augen von 6 um wurden präpariert und mit Hämatoxilyn/Eosin (Fluka) und PAS (periodic acid-Schiff, Fluka) gefärbt. Die Bewertung unter dem Lichtmikroskop erfolgte bei einer 40- und 100-fachen Vergrößerung. Von den repräsentativen Proben wurden Photographien und Diapositive gemacht.
Die histologische Bewertung erfolgte anhand codierter Proben; die Gruppenaufteilung war dem prüfenden Wissenschafter nicht bekannt. Pathologische Abweichungen der Retina wurden auf einer Skala von 0 bis 20 und die der Linse auf einer Skala von 0 bis 3 bewertet.
Die statistischen Berechnungen erfolgten mit dem Programm Statistica 4.5 (SatSoft, USA). Der vorgegebene Wert für negative Fälle war 0,1. Auch eine Box & Whisker Kurve wurde erstellt.
Für jede Gruppe im Experiment wurden die Werte Mittel ±SE (standard error = Standardfehler) berechnet. Der Vergleich wurde mit Hilfe eines nicht parametrischen Mann-Whitney U-Tests durchgeführt (Graphpad Instat, San Diego, CA).

Ergebnisse:

Eine Einzeltagesdosis von 5 mg/kg der Verbindung A und eine Einzeltagesdosis von 20 mg/kg Bimoclomol verbesserten die durch diabetische Retinopathie induzierten pathologischen histologischen Veränderungen nach einem Behandlungsmonat signifikant. Von diesen beiden Verbindungen war die Verbindung A im Vergleich mit den diabetischen unbehandelten Tieren effektiver. Die Ergebnisse sind in Tabelle 5 aufgeführt. Tabelle 5 Wirkung der Behandlung mit der Verbindung A und Bimoclomol auf durch frühe STZ-diabetische Retinopathie verursachte pathologische histologische Veränderungen
* p < 0,05 ** p > 0,01 verglichen mit diabetischen unbehandelten Tieren

Experiment 5

Wirkung der Behandlung mit der Verbindung A und Bimoclomol auf den pathologischen urinären Proteinverlust aufgrund diabetischer Nephropathie in STZ- diabetischen Wistar-Ratten nach einmonatiger Behandlung

Materialien und Methoden:

In den Experimenten wurden männliche Wistar-Ratten verwendet (Charles River Laboratories Inc.). Zu Beginn des Experiments wogen die Tiere 340 bis 370 g. Diabetes wurde durch die intravenöse Verabreichung einer einzigen Dosis von 45 mg/kg in physiologischer Salzlösung gelöstem Streptozotocin (STZ, Sigma, St. Louis, MO) ausgelöst. Die Entwicklung des Diabetes wurde nach einem Tag durch einen Blutzuckertest überprüft, wobei ein Wert über 15 mMol/l akzeptiert wurde.
Die Test- und Referenzsubstanzen wurden den Tieren einmal pro Tag p. os verabreicht.
Für den 24-Stunden-Zeitraum der Urinsammlung wurden die Tiere in metabolische Einzelkäfige gesetzt. Während dieses Zeitraums erhielten sie Wasser ad libitum, aber kein Futter. Die letztere Maßnahme war notwendig, um eine mögliche Kontamination durch den Proteingehalt des Futters zu verhindern. Der Urin wurde in geeichten Glasbehältern gesammelt, in die man Thymol-Kristalle (Reanal 3135-1-08-38) gelegt hatte, um eine bakterielle Verunreinigung zu verhindern.
Vor dem Messen wurden die Urinproben zentrifugiert (2500 U/min) und durch einen Papierfilter (Whatman 1) filtriert. Bei Bedarf wurden sie bis zum Messen bei -20ºC gelagert.
Der Proteingesamtgehalt des Urins wurde nach dem Bradford-Färbeverfahren (Sigma B- 6916, St. Louis, MO) bestimmt und die Farbintensität durch Spektrophotometrie (Hitachi- U-3200) nachgewiesen.

Ergebnisse:

Bimoclomol, das in einer Einzeltagesdosis von 20 mg/kg verabreicht wurde, verringerte den durch STZ-Diabetes induzierten erhöhten urinären Proteinverlust signifikant. Die Verbindung A, die in einer Einzeltagesdosis von 10 mg/kg verabreicht wurde, verringerte den Proteinverlust nicht signifikant. Jedoch verringerte das (+)-Enantiomer der Verbindung A, das in einer Einzeltagesdosis von 5 mg/kg verabreicht wurde, den diabetischen Proteinverlust signifikant. Die Ergebnisse sind in Tabelle 6 aufgeführt.

Tabelle 6

Auswirkung der Behandlung mit dem (+)-Enantiomer der Verbindung A und mit Bimoclomol auf den durch diabetische Nephropathie bei STZ-diabetischen Wistar-Ratten verursachten urinären Proteinverlust

Urinärer Proteinverlust in 24 Stunden (mg/24) Mittel ± SE
Gruppe 1 STZ-Diabetes 8,302 ± 2,40
STZ-Diabetes + Bimoclomol, 20 mg/kg 3,66 ± 1,39*
*p < 0,05
Gruppe 2 STZ-Diabetes 13,03 ± 2,63
STZ-Diabetes + Verbindung A, 10 mg/kg 12,06 ± 1,70
STZ-Diabetes + (+)-Enantiomer der Verbindung A, 5 mg/kg 5,61 ± 1,08*
*p < 0,02

Experiment 6

Auswirkung der Verbindung A und ihrer (+)- und (-)-Enantiomere auf pathologische Veränderungen peripherer Neuropathie bei STZ-diabetischen Wistar-Ratten nach einmonatiger Behandlung

Materialien und Methoden:

Es wurden die gleichen Versuchstiere verwendet, und alle Methoden sind die gleichen wie für Experiment 2 beschrieben.

Ergebnisse:

Verbindung A in einer Einzeltagesdosis von 10 mg/kg und Verbindung A(+) in einer Einzeltagesdosis von 5 mg/kg waren gleich wirksam und verbesserten die Defekte in der Geschwindigkeit sowohl der motorischen (MNCV) als auch der sensorischen (SNCV) Nervenleitung bei diabetischen Tieren. Verbindung A(-) dagegen bewirkte bei beiden Parametern keine signifikante Verbesserung. Die Ergebnisse sind in Tabelle 7 aufgeführt. Tabelle 7 Wirkung der Verbindung A und ihrer A(+) und A(-)-Enantiomere auf Defizite in der Nervenleitungsgeschwindigkeit (NCV) bei STZ-diabetischen Wistar-Ratten
*** p < 0,001 im Vergleich zu unbehandelten STZ-Diabetikern

Experiment 7

Auswirkung der Verbindung A und ihrer (+)- und (-)-Enantiomere auf histologische pathologische Veränderungen früher diabetischer Retinopathie bei STZ-diabetischen Ratten nach zweimonatiger Behandlung

Materialien und Methoden:

Es wurden die gleichen Versuchstiere verwendet, und alle Methoden sind die gleichen wie für Experiment 4 beschrieben.

Ergebnisse:

Das A(+)-Enantiomer in einer Einzeltagesdosis von 5 mg/kg verbesserte die durch diabetische Retinopathie verursachten pathologischen histologischen Veränderungen sowohl an der Linse als auch an der Netzhaut nach zweimonatiger Behandlung signifikant, während die Wirkung der Verbindung A in einer Einzeltagesdosis von 10 mg/kg nicht signifikant war und das A(-)-Enantiomer in einer Einzeltagesdosis von 5 mg/kg nicht wirkte. Was nur die histologischen Veränderungen an der Netzhaut angeht, waren sowohl die Verbindung A als auch ihr A(+)-Enantiomer wirksam, während die Wirkung des A(-)- Enantiomers nicht signifikant war. Die Ergebnisse sind in Tabelle 8 aufgeführt: Tabelle 8 Wirkung der Verbindung A und ihrer A(+) und A(-)-Enantiomere auf histologische Veränderungen bei früher diabetischer Retinopathie bei STZ-diabetischen Ratten
* p < 0,05 im Vergleich zu unbehandelten Diabetikern
** p < 0,01 im Vergleich zu unbehandelten Diabetikern

Experiment 8

Auswirkung der Verbindung A und ihrer (+)- und (-)-Enantiomere auf die insulinabhängige Glucoseaufnahme in vivo in einem dietätisch induzierten insulinresistenten Tiermodell

Materialien und Methoden:

In den Experimenten wurden männliche Wistar-Ratten (Charles River Laboratories) mit einem anfänglichen Körpergewicht von 300 bis 350 g verwendet.
Die Insulinresistenz wurde durch dietätische Manipulation ausgelöst: Die Tiere erhielten 3 Wochen lang eine Diät mit hohem Fettanteil (HF). In der HF-Diät überwog der Anteil gesättigter Fette und lieferte 70% der gesamten Kalorienzufuhr pro Tag. Die A(+)- und A(-)-Enantiomere wurden präventiv einmal pro Tag in einer Dosis von 20 mg/kg/Tag verabreicht.
Am Ende der dreiwöchigen Behandlung wurden folgende Parameter untersucht: 1. Kohlehydrate- und Lipidparameter aus dem Serum und 2. durch Insulin beeinflusste Glucoseaufnahme in vivo durch das euglykämische Glucoseklammerverfahren, das derzeit das genaueste Verfahren für die quantitative Bestimmung der Glucoseaufnahme ist (DeFronzo et al., American Journal of Physiology, 1979/237/S. E214-223). Kurz gesagt muss die Glucosekonzentration im Blut bei leerem Magen bei verschiedenen Tiergruppen identisch sein. Experimente wurden an Ratten durchgeführt, die bei Bewusstsein waren, sich frei bewegen konnten und eine Dauerkanüle trugen. Zuerst wurde eine Insulininfusion (6,4 mE/kg/min) in Gang gesetzt, gefolgt von einer parallel laufenden kontinuierlichen Glucoseinfusion zur Aufrechterhaltung der Blutzuckerkonzentrationen im euglykämischen Bereich. Nach dem Stabilisieren wurde die Menge der per Infusion verabreichten Glucose für einen Zeitraum von 90 Minuten gemessen (Glucoseinfusionsgeschwindigkeit = GIR, mg/kg/min). Das ist der quantitative Parameter der Insulinempfindlichkeit.

Ergebnisse:

Die A(+) und A(-)-Enantiomere in einer Tagesdosis von 20 mg/kg/min beeinträchtigten das Körpergewicht, den Futterverbrauch und den Blutzuckerspiegel der Ratten bei leerem Magen nicht.
Im Gegenteil, beide Verbindungen normalisierten den durch die HF-Diät induzierten erhöhten Insulinspiegel bei leerem Magen und die Triglyceridkonzentrationen und senkten auch den erhöhten Triglyceridgehalt in den Muskeln. Der euglykämische Glucoseklammertest zeigte, dass die HF-Diät die durch Insulin beeinflusste Glucoseaufnahme in vivo signifikant unterdrückte: Kontrolle: 26,7 + 0,68 mg/kg/min; HF- Diät: 15,0 + 0,39 mg/kg/min.
Diese unterdrückte durch Insulin beeinflusste Glucoseaufnahme wird durch beide Enantiomere erhöht: HF + A(+): 20,5 + 0,89 mg/kg/min und HF + A(-): 19,7 + 1,38 mg/kg/min (eine signifikante Erhöhung in beiden Fällen auf dem Niveau von p < 0,01).
Nach diesen Ergebnissen erhöhten beide Enantiomere die durch Insulin beeinflusste Glucoseaufnahme, was die die Insulinresistenz verringernde Wirkung der erfindungsgemäßen Verbindungen aus einer neuen Perspektive beweist.

Experiment 9

Antidiabetische Wirkung des A(+)-Enantiomers in diabetischen fetten Zucker-Ratten (ZDF) nach chronischer Verabreichung

Materialien und Verfahren:

Man wählte ein genetisch diabetisches Tiermodell und verwendete die ZDF-Ratten in den Experimenten. Dieses Modell ist eine diabetische Variante des insulinresistenten, fettleibigen, aber nicht diabetischen Zucker fa/fa-Tiermodells (siehe Experiment 1). Bei den ZDF-Ratten entwickelte sich im Alter von 6 bis 8 Wochen Diabetes, dem eine insulinresistente Phase voranging.
Die Wirkung des A(+)-Enantiomers wurde in einer Behandlung mit einer Dosis von 2 · 20 mg/kg/Tag untersucht, die in der nicht diabetischen Phase im Alter von 7 Wochen begann und 6 Wochen andauerte.
Die klinischen Chemieparameter wurden durch Standardverfahren gemessen. Die Insulinkonzentrationen im Serum wurden durch ein kürzlich entwickeltes Verfahren (ELISA-Verfahren, DRG International, Inc., USA) gemessen.

Ergebnisse:

In diesem Experiment wurde als neues Ergebnis entdeckt, dass das A(+)-Enantiomer eine stark antidiabetische Wirkung bei diabetischen Tieren hat. Die nach 3 und 5 Wochen Behandlung erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle 9 aufgeführt. Tabelle 9 Glucosekonzentrationen im Serum gefütterter Ratten (mMol/l)
* p < 0,02, ** p < 0,005 im Vergleich zu unbehandelten ZDF
Obwohl die Behandlung mit dem A(+)-Enantiomer die Glucosekonzentrationen im Blut nicht normalisierte, verleiht der kombinierte Effekt einer starken antidiabetischen Wirkung und die bereits vorstehend identifizierte signifikante Heilwirkung bei chronischen Komplikationen des Diabetes der Verbindung einen einzigartigen Charakter.
Der therapeutische Indikationsbereich des A(+)-Enantiomers kann auf der Basis dieser neuen kombinierten Effizienz signifikant erweitert werden.
Weitere Experimente haben zu dem Schluss geführt, dass die erfindungsgemäßen Verbindungen neben ihrer Wirkung auf die pathologischen Komplikationen des Diabetes auch nützlich bei der Behandlung anderer durch den Diabetes verursachter Schädigungen der peripheren Nerven ist. Diese Schlussfolgerung wird durch die Ergebnisse des folgenden Neuroregenerationsexperiments gestützt.

Experiment 10

Therapeutischer Effekt der Verbindung A und des A(+)-Enantiomers auf die Neuroregeneration bei STZ-diabetischen Wistar-Ratten

Materialien und Methoden:

Die Experimente wurden an Wistar-Ratten mit einem Körpergewicht von 320 bis 350 g durchgeführt. Diabetes wurde wie in Beispiel 2 beschrieben induziert und überprüft. Bei den Versuchstieren, die schon seit 3 Wochen diabetisch waren, wurde der linke Hüftnerv durch Einfrieren verletzt und der rechte als nicht verletzte Kontrolle verwendet. Die Regeneration wurde durch Überwachung der Signale des Beugemuskelreflexes durch Reizung der Sohle beobachtet, d. h. der AUC des vom vorderen Schienbeinmuskel übertragenen Elektromyogramms. Für die Stimulierung und den Nachweis wurde das in Experiment 2 beschriebene System verwendet.
Fünf Wochen nach der Verletzung durch Einfrieren wurden Einzeltagesdosen von 10 mg/kg der Verbindung A und 5 mg/kg des A(+)-Enantiomers verabreicht.

Ergebnisse:

Am Ende von 3 Wochen Diabetes entwickelte sich noch vor der Verletzung durch Einfrieren eine Sensorneuropathie und bewirkte einen Rückgang der AUC von 23 bis 25% in beiden Beinen. Während der zwei Wochen nach der Verletzung durch Einfrieren war keine Reaktion zu beobachten. In der fünften Woche hatten sich die Nerven zu 63% regeneriert. Die Regeneration wurde durch die Verbindung A auf 73% gesteigert, das A(+)-Enantiomer bewirkte 93%. Neuroregenerationen von 83% und nur 44% der nicht eingefrorenen Nerven wurden als Ergebnis der Behandlung mit dem A(+)-Enantiomer bzw. der Verbindung A beobachtet. Folglich hat das A(+)-Enantiomer eine starke neuroregenerative Wirkung.
N-[2-Hydroxy-3-(1-piperidinyl)propoxy]-pyridin-1-oxid-3-carboximidoylchlorid kann durch folgendes Verfahren hergestellt werden, das im Stand der Technik nicht bekannt ist.
Nach dem in WO 97/16349 beschriebenen Oxidationsverfahren kann ein am Stickstoffatom beider Ringe oxidiertes Derivat oder - mit weniger Reagenz - ein am alicyclischen Ring oxidiertes Derivat aus O-(3-Piperidin-2-hydroxy-1-propyl)-3- pyridinhydroxymsäurechlorid hergestellt werden, da das alicyclische Stickstoffatom bei der Oxidationsreaktion bevorzugt wird. Die Regioselektivität der Oxidation musste für die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindung auf den Pyridinring gelenkt werden; daher wurde das Verfahren modifiziert. Der wichtigste Punkt der Modifikation besteht darin, dass zur Erleichterung der selektiven Oxidation des Pyridinrings die Persäureoxidation in Gegenwart einer starken Säure, vorzugsweise Methansulfonsäure, durchgeführt wird, die den alicyclischen Stickstoff protoniert und daher seine Oxidation verhindert. Daher erfolgt primär die Oxidation des Pyridins. Als Oxidationsmittel kann jeder Typ Persäure, vorzugsweise Peressigsäure verwendet werden.
Die optisch aktiven Enantiomere der erfindungsgemäßen Verbindung werden durch Verwendung des entsprechenden optisch aktiven O-(3-Piperidin-2-hydroxy-1-propyl)-3- pyridinhydroxymsäurechloridenantiomers als Ausgangsmaterial, das beispielsweise gemäß EP 0 417 210 B1 durch Aufspaltung der racemischen Verbindung hergestellt werden kann. Im Laufe der Reaktion wird die Chiralität des Moleküls nicht beschädigt, und das resultierende Produkt hat die gleiche optische Reinheit wie die Ausgangssubstanz.
Auf Wunsch kann das erhaltene N-[2-Hydroxy-3-(1-piperidinyl)propoxy]-pyridin-1-oxid- 3-carboximidoylchlorid oder eines seiner optisch aktiven Enantiomere mit einer Mineral- oder organischen Säure durch bekannte Verfahren in ein Säureadditionssalz umgewandelt werden.
N-[2-Hydroxy-3-(1-piperidinyl)propoxy]-pyridin-1-oxid-3-carboximidoylchlorid, sein optisch aktives (+) oder (-)-Enantiomer, ein Gemisch der Enantiomere in einem beliebigen Verhältnis, die racemische Verbindung sowie die mit Mineral- oder organischen Säuren aus einer der vorstehenden Verbindungen gebildeten Säureadditionssalze sind Gegenstand der Erfindung. Alle möglichen geometrischen Isomerformen von N-[2-Hydroxy-3-(1- piperidinyl)propoxy]-pyridin-1-oxid-3-carboximidoylchlorid fallen in den Rahmen der Erfindung. Der Begriff "die Stereoisomere von N-[2-Hydroxy-3-(1-piperidinyl)propdxy]- pyridin-1-oxid-3-carboximidoylchlorid" bezeichnet alle möglichen optischen und geometrischen Isomere der Verbindung.
Erfindungsgemäß werden diese Verbindungen für die Herstellung eines Medikaments für die Behandlung einer pathologischen Insulinresistenz sowie zur Behandlung und Prophylaxe damit zusammenhängender pathologischer Zustände verwendet.
Eine spezielle Ausführungsform der Erfindung besteht darin, dass diese Verbindung zur Herstellung eines Medikaments für die gleichzeitige Behandlung oder Prophylaxe von durch Diabetes ausgelösten chronischen Komplikationen, insbesondere Retinopathie, Neuropathie und Nephropathie, pathologischer Insulinresistenz und/oder damit zusammenhängenden pathologischen Zustände verwendet werden.
Nach einer anderen besonderen Ausführungsform der Erfindung werden das N-[2- Hydroxy-3-(1-piperidinyl)propoxy]-pyridin-1-oxid-3-carboximidoylchlorid, seine Stereoisomere und Säureadditionssalze davon bei der Herstellung einer pharmazeutischen Zubereitung für die Behandlung pathologischer Insulinresistenz sowie für die Behandlung von damit zusammenhängenden pathologischen Zuständen und für die gleichzeitige Steigerung einer durch Diabetes verursachten, pathologisch verminderten Regeneration peripherer Nerven verwendet.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können sowohl in der Human- als auch der Veterinärmedizin eingesetzt werden.
Die Dosis der Verbindungen hängt vom Zustand und der Erkrankung des Patienten ab; die Tagesdosis beträgt 0,1 bis 400 mg/kg, vorzugsweise 0,1 bis 100 mg/kg. Bei der Humantherapie beträgt die orale Dosis vorzugsweise 10 bis 300 mg, bei rektaler Verabreichung 1 bis 15 mg und 1 bis 15 mg bei parenteraler Verabreichung an einen erwachsenen Patienten. Diese Dosen werden vorzugsweise in Einheitsdosisformen verabreicht, die in bestimmten Fällen, insbesondere bei der oralen Behandlung, in 2 bis 3 kleinere Dosen geteilt werden können.
Vorzugsweise wird das Stereoisomer der racemischen Verbindung, am meisten bevorzugt das (+)-Enantiomer verwendet. In diesem Fall reicht eine kleinere Menge des Wirkstoffs innerhalb der vorstehenden Grenzen für die Behandlung aus.
Pharmazeutische Zubereitungen, die sich für die Behandlung eignen, sind ebenfalls Gegenstand der Erfindungen. Diese pharmazeutischen Zubereitungen enthalten zusätzlich zu den üblichen Hilfsstoffen und Trägern N-[2-Hydroxy-3-(1-piperidinyl)propoxy]- pyridin-1-oxid-3-carboximidoylchlorid, eines seiner Stereoisomere oder ein Säureadditionssalz davon als Wirkstoffe.
Die erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zubereitungen können in Form einer festen oder flüssigen Zubereitung hergestellt werden, wie sie im Allgemeinen zur Therapie in der Human- oder Veterinärmedizin eingesetzt werden. Einfache Tabletten, Tabletten mit Überzug, Dragées, Granulate, Kapseln, Lösungen oder Sirups können für die orale Verabreichung, Zäpfchen für die rektale Verabreichung und lyophilisierte oder nicht lyophilisierte Injektions- oder Infusionslösungen für die parenterale Verabreichung hergestellt werden. Die Herstellung kann nach den üblichen Verfahren erfolgen. Die Produkte für die orale Verwendung können Füllmaterialien wie mikrokristalline Cellulose, Stärke oder Lactose, Gleitmittel wie Stearinsäure oder Magnesiumstearat, Beschichtungsmaterialien wie Zucker, filmbildende Materialien wie Hydroxymethylcellulose, Aromen und Süßstoffe wie Methylparaben oder Saccharin oder Farbsubstanzen enthalten. Die Zäpfchen können Kakaobutter oder Polyethylenglycol als Hilfsstoff aufweisen. Die parenteralen Produkte können zusätzlich zum Wirkstoff Salzlösung oder in bestimmten Fällen dispergierende und anfeuchtende Substanzen wie Propylenglycol enthalten.
Die Erfindung wird durch folgende Beispiele näher veranschaulicht.

Beispiel 1

Herstellung von N-[2-Hydroxy-3-(1-piperidinyl)propoxy]-pyridin-1-oxid-3- carboximidoylchlorid-(Z)-2-butendioat (1 : 1)

40,4 g (0,136 Mol) N-[2-Hydroxy-3-(1-piperidinyl)propoxy]-3-pyridincarboximidoylchlorid wurde in einem Gemisch aus 238 ml Eisessigsäure und 13,0 g (0,136 Mol) Methansulfonsäure gelöst. Bei 60ºC gab man 61,5 ml (0,591 Mol) 30%iger Wasserstoffperoxidlösung zu. Das Reaktionsgemisch wurde bei 60ºC 3,5 bis 4 Stunden gerührt. Die Lösung wurde auf 10ºC abgekühlt und dann mit 91 ml 0,5 M Na&sub2;S&sub2;O&sub5;- Lösung versetzt. 315 ml des Wasser-Essigsäure-Gemischs wurden aus der Lösung abdestilliert, dem Rückstand (pH = 10,55) 250 ml 4 N NaOH-Lösung zugesetzt und mit Chloroform geschüttelt. Die Chloroformphase wurde mit Wasser gewaschen, getrocknet, mit Holzkohle behandelt und dann verdampft. Dem Rückstand wurde Wasser zugesetzt und mit Isopropylether und dann mit Chloroform extrahiert. Die Chloroformphase wurde getrocknet, mit Holzkohle behandelt, filtriert und verdampft. Der Rückstand wurde in Aceton gelöst und mit Maleinsäure in ein Salz umgewandelt. Der Niederschlag wurde filtriert, mit Aceton gewaschen und getrocknet. Das Produkt wurde aus siedendem Ethanol kristallisiert.
Ausbeute: 20 g (35%)
Schmelzpunkt: 150,5-154,5ºC
¹H-NMR (Lösungsmittel: DMSO; Referenz: DMSO; ν = 300 MHz) [ppm]: 8,55 (s, 1H, 2-Pyridin); 8,35 (d, 1H, 6-Pyridin); 7,68 (d, 1H, 4-Pyridin); 7,55 (m, 1H, 5-Pyridin); 6,00 (s, 2H, CH=CH); 4,23-4,48 (m, 3H, CH-OH und NOCH&sub2;); 2,95-3,50 (m, 6H, 3 · NCH&sub2;); 1,20-1,90 (m, 6H, Piperidin: 3 · CH&sub2;).
¹³C-NMR (Lösungsmittel: DMSO; Referenz: DMSO; ν = 300 MHz) [ppm]: 167,6 (2C, 2 COOH); 141,0 (2-Pyridin); 136,8 (6-Pyridin); 136,4 (2C, CH=CH); 133,4 (CCI); 131,9 (3-Pyridin); 127,2 (4-Pyridin); 123,6 (5-Pyridin); 77,9 (NOCH&sub2;); 63,6 (CH&sub2; N); 58,3 (CHOH); 52,0-55,0 (2C, Piperidin: 2 · NCH&sub2;); 22,6, und 21,7 (3C, Piperidin: 3 · CH&sub2;),

Beispiel 2

Herstellung von (+)-/R/-N-[2-Hydroxy-3-(1-piperidinyl)-propoxy]-pyridin-1- oxid-3-carboximidoylchlorid (Z)-2-butendioat (1 : 1)

Das Verfahren von Beispiel 1 wurde wiederholt mit dem Unterschied, dass man anstelle des racemischen N-[2-Hydroxy-3-(1-piperidinyl)propoxy]-3- pyridincarboximidoylchlorids sein R-Enantiomer verwendete. Die reine Form der Verbindung wurde durch Kristallisation mit Hexan aus der rohen Base isoliert.
Ausbeute: 31%
Schmelzpunkt: 91-93ºC
IR (KBr, cm&supmin;¹): 3167 (br); 2840; 2710; 1575; 1560; 1480; 1443 (br); 1293 (s); 1279 (s); 1093; 1053; 1043; 1023 (s); 834 (s); 810; 688
Auf Wunsch kann wie in Beispiel 1 beschrieben auch ein Maleatsalz aus der Rohen Base in Acetonlösung hergestellt werden.
Ausbeute: 33%
Schmelzpunkt: 132,0-133,0ºC
Enantiomerverhältnis: 98/2 (HPLC Messung auf einer Chiral AGP 100 · 4 mm Säule).
¹H-NMR und ¹³C-NMR: die gleichen wie die Spektren der racemischen Verbindung.

Beispiel 3

Herstellung von (-)-/S/-N-[2-Hydroxy-3-(1-piperidinyl)-propoxyl]-pyridin-1- oxid-3-carboximidoylchlorid (Z)-2-butendioat (1 : 1)

Man führte das Verfahren von Beispiel 1 durch mit dem Unterschied, dass man anstelle des racemischen N-[2-Hydroxy-3-(1-piperidinyl)-propoxy]-3-pyridincarboximidoylchlorids das S-Enantiomer verwendete.
Ausbeute: 34%
Schmelzpunkt: 132,0-133,0ºC
Enantiomerverhältnis: 98/2 (HPLC Messung auf einer Chiral AGP 100 · 4 mm Säule).
¹H-NMR und ¹³C-NMR: die gleichen wie die Spektren der racemischen Verbindung.

Beispiel 4

Tablette

(+)-N-[2-Hydroxy-3-(1-piperidinyl)-propoxy]-pyridin-1-oxid-3- carboximidoylchlorid 20,0 mg
Maisstärke 100,0 mg
Lactose 95,0 mg
Talkum 4,5 mg
Magnesiumstearat 0,5 mg
Der fein gemahlene Wirkstoff wurde mit den Hilfsmaterialien vermischt und das Gemisch homogenisiert und granuliert. Das Granulat wurde dann zu Tabletten verpresst.

Beispiel 5 - Kapsel

(+ )-N-[2-Hydroxy-3-(1-piperidinyl)-propoxy]-pyridin-1-oxid-3-carboximidoylchloridmaleat 20,0 mg
Mikrokristalline Cellulose 99,0 mg
Amorphes Siliciumdioxid 1,0 mg
Der Wirkstoff wurde mit den Hilfsmaterialien vermischt, das Gemisch homogenisiert und in Gelatinekapseln gefüllt.

Beispiel 6 - Dragee

N-[2-Hydroxy-3-(1-piperidinyl)-propoxy]-pyridin-1-oxid-3-carboximidoylchloridmaleat 25,0 mg
Lactose 82,5 mg
Kartoffelstärke 33,0 mg
Polyvinylpyrrolidon 4,0 mg
Magnesiumstearat 0,5 mg
Der Wirkstoff und das Polyvinylpyrrolidon wurden in Ethanol gelöst. Ein Gemisch aus Lactose und Kartoffelstärke wurde gleichmäßig mit der Granulierungslösung des Wirkstoffs benetzt. Nach dem Filtrieren wurde das Granulat bei 50ºC getrocknet und gesiebt. Das Magnesiumstearat wurde zugesetzt und in Tablettenform gepresst, dann mit einer Zuckerschicht überzogen und mit Bienenwachs poliert.

Beispiel 7 - Zäpfchen

(+ )-N-[2-Hydroxy-3-(1-piperidinyl)-propoxy]-pyridin-1-oxid-3-carboximidoylchlorid 4,0 mg
Kakaobutter 3,5 g
Zäpfchenmasse aus festem Fett 15,0 g
Die Kakaobutter und die Zäpfchenmasse wurden auf 40ºC erwärmt und der Wirkstoff in dem geschmolzenen Gemisch dispergiert. Dann wurde die Masse in Zäpfchenformen gefüllt.

Beispiel 8 - Lösung

(+)-N-[2-Hydroxy-3-(1-piperidinyl)-propoxy]-pyridin-1-oxid-3- carboximidoylchloridhydrochlorid 500 mg
Sorbit 10 g
Saccharinnatrium 0,05 g
Doppelt destilliertes Wasser q, s, ad 100 ml

Beispiel 9 - Injektionslösung

(+)-N-[2-Hydroxy-3-(1-piperidinyl)-propoxy]-pyridin-1-oxid-3- carboximidoylchloridmaleat 2 mg
Physiologische Salzlösung, pyrogenfrei, steril q, s, ad 2,0 ml Die Lösung wurde in 2 ml Phiolen gegossen und versiegelt.

Beispiel 10 - Infusionslösung

Man stellte 500 ml Infusionslösung mit folgender Zusammensetzung her: N-[2-Hydroxy-3-(1-piperidinyl)-propoxy]-pyridin-1-oxid-3-carboximidoylchloridmaleat 20,0 mg
Physiologische Salzlösung, pyrogenfrei, steril q, s, ad 500 ml

Claims

1. N-[2-Hydroxy-3-(1-piperidinyl)propoxy]-pyridin-1-oxid-3-carboximidoylchlorid, seine Stereoisomere und Säureadditionssalze davon.

2. Verwendung von N-[2-Hydroxy-3-(1-piperidinyl)propoxy]-pyridin-1- oxid-3-carboximidoylchlorid, seiner Stereoisomere und Säureadditionssalzen davon bei der Herstellung einer pharmazeutischen Zubereitung für die Behandlung pathologischer Insulinresistenz sowie filz die Behandlung von damit zusammenhängenden pathologischen Zuständen.

3. Verwendung von N-[2-Hydroxy-3-(1-piperidinyl)propoxy]-pyridin-1- oxid-3-carboximidoylchlorid, seiner Stereoisomere und Säureadditionssalzen davon bei der Herstellung einer pharmazeutischen Zubereitung für die Behandlung pathologischer Insulinresistenz sowie für die Behandlung damit zusammenhängender pathologischer Zustände durch gleichzeitige Behandlung und Prophylaxe von durch Diabetes ausgelösten chronischen Komplikationen, insbesondere Retinopathie, Neuropathie und Nephropathie und/oder durch gleichzeitige Steigerung einer durch Diabetes verursachten, pathologisch verminderten Regeneration peripherer Nerven.

4. Pharmazeutische Zubereitung, die N-[2-Hydroxy-3-(1-piperidinyl)propoxy]-pyridin-1-oxid-3-carboximidoylchlorid oder eines seiner Stereoisomere oder ein Säureadditionssalz davon als Wirkstoff in einer Mischung mit mindestens einem pharmazeutisch verträglichen, allgemein verwendeten Hilfsstoff und Träger enthält.