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DE3030107C2 - - Google Patents

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DE3030107C2
DE3030107C2 DE3030107A DE3030107A DE3030107C2 DE 3030107 C2 DE3030107 C2 DE 3030107C2 DE 3030107 A DE3030107 A DE 3030107A DE 3030107 A DE3030107 A DE 3030107A DE 3030107 C2 DE3030107 C2 DE 3030107C2
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DE
Germany
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polysaccharide
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stromatoid
substance
culture medium
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DE3030107A
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DE3030107A1 (de
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Kazuo Kyoto Jp Nakajima
Yoshiaki Hirata
Hiroyuki Otsu Jp Uchida
Yoshie Kimizuka
Tsutomu Kyoto Jp Taniguchi
Akira Obayashi
Osamu Uji Jp Tanabe
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TAKARA SHUZO CO Ltd KYOTO JP
Original Assignee
TAKARA SHUZO CO Ltd KYOTO JP
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Description

Die Erfindung betrifft ein Polysaccharid mit einer antikarzinogenen Aktivität gemäß Anspruch 1 sowie ein Verfahren zu ihrer Herstellung gemäß Anspruch 2.
Erfindungsgemäß wird ein Stamm von Isaria atypicola Yasuda K-2583 eingesetzt, der durch Züchten eines Stromatoids (Gewebes) einer Pilzspezies erhalten worden ist, die in "Kiyotaki" in der Präfektur Kyoto in Japan im Sommer 1965 gesammelt worden ist. Die Identifizierung dieser Spezies erfolgt gemäß der folgenden Literaturstellen: "Icones of Japanes Fungi", herausgegeben von Seiichi Kawamura (veröffentlicht von Kazama-shobo, Tokyo, Japan), 8, 854-857, 1968; "Colored Illustrations of Fungi of Japan", herausgegeben von Rokuya Imazeki und Tsugio Hongo (veröffentlicht von Hoiku-sha, Osaka, Japan) 1965.
Die charakteristischen Eigenschaften dieses Stammes sind folgende: dieser Stamm ist ein Parasit auf Kishinouyeus typicus Kishida (eine Spinnenart), wobei der tote Körper dieser Spinne unter der Erde mit Myzeln dieses Stammes bedeckt ist und sich daraus Stromatoid entwickelt. Das Stromatoid besitzt eine Höhe von 5 bis 8 cm und eine weiße zylindrische fleischige Form. An der Oberseite des Stengels mit einem Durchmesser von 2,5 bis 4,0 mm mit einer glatten Oberfläche befindet sich ein tragender Teil, der etwas dicker und länger als der Stengel ist. Der tragende Teil weist leicht samtartige violette Sporen auf, die zylindrisch, halbglatt und farblos sind und eine Größe von 4 bis 5×1,5 bis 2,0 µm besitzen.
Aus diesen Charakteristika sowie unter Heranziehung der vorstehend erwähnten Literaturstellen wurde dieser Stamm als Isaria atypicola Yasuda identifiziert. Der Stamm wurde bei der American Type Culture Collection unter der Registriernummer ATCC 20603 hinterlegt.
Das erfindungsgemäße antikarzinogene Polysaccharid kann aus einem flüssigen Stromatoid- und/oder Myzelextrakt des Stammes, der bebrütet worden ist, oder aus einer filtrierten Kulturbrühe, in der ein derartiges Myzel bebrütet worden ist, erhalten werden (vgl. Anspruch 2).
Es ist jedoch nicht einfach, ein derartiges Stromatoid in einer ausreichend großen Menge in der Natur zu sammeln. Daher ist es vorteilhaft, den Stamm zur Gewinnung einer großen Stromatoidmenge zu bebrüten. Die Bebrütung kann in einer für die Bebrütung von Pilzen der Klasse Hyphomycetes bekannten Weise durchgeführt werden, beispielsweise auf einem Holzmehl- oder Sägemehlmedium. Beispielsweise kann man 200 g Sägemehl, 100 g Reiskleie und 300 ml Wasser gut zur Herstellung eines Kulturmediums vermischen, das in ein geeignetes Gefäß eingefüllt und sterilisiert wird. Der Stamm, der getrennt in einem Schrägkulturmedium gezüchtet worden ist, wird auf dem in der vorstehenden Weise hergestellten Kulturmedium in herkömmlicher Weise bei 25 bis 27°C während ungefähr 1 Monat zum ausreichenden Myzelwachstum bebrütet. Das Kulturmedium läßt man dann ungefähr 1 Monat bei 20 bis 25°C zum Stromatoidwachstum stehen. Das auf diese Weise gewachsene Stromatoid wird gesammelt und als Ausgangsmaterial für die Erfindung eingesetzt.
Die erfindungsgemäß eingesetzten Myzelien können nach einer herkömmlichen Züchtungsmethode hergestellt werden, beispielsweise unter Einsatz einer festen oder flüssigen Kultur. Im Falle einer festen Kultur kann beispielsweise Agar, Gelatine, Stärke, Holzmehl, Pulpe oder ein anderes herkömmliches festes Kulturmedium oder eine Kombination davon verwendet werden. Im Falle einer flüssigen Kultur kann man auf ein flüssiges Kulturmedium zurückgreifen, das verschiedene Nährmittel enthält, die auf dem Gebiet des Züchtens von Mikroorganismen bekannt sind. So kann das flüssige Kulturmedium Kohlenstoffquellen, wie Glucose, Maltose, Lactose, Rohrzucker, Stärke, Melassen etc., eine Stickstoffquelle (organisches oder anorganisches Stickstoffmaterial), wie Pepton, Hefeextrakt, Hefe, Maisquellwasser, Harnstoff, Ammoniumsalze etc., oder eines oder mehrere organische oder anorganische Salze, wie Phosphate oder Magnesiumsalze etc., enthalten. Gegebenenfalls können andere Materialien zugesetzt werden, die für das Wachstum erforderlich sind, wie beispielsweise Vitamine. Diese Materialien für feste und flüssige Kulturmedien sind auf dem Gebiet des Züchtens von Pilzen bekannt, so daß keine weiteren Erläuterungen erforderlich sind. Das Züchten der flüssigen Kultur kann in herkömmlicher Weise durchgeführt werden, beispielsweise in Form einer stationären Kultur, einer Schüttelkultur oder einer Submerskultur. Aus wirtschaftlichen Erwägungen sowie im Hinblick auf die Handhabung ist eine flüssige Kultur vorteilhafter als eine feste Kultur.
Bei einem Züchten einer flüssigen Kultur können folgende Bedingungen eingehalten werden:
Anfangs-pH2 bis 9 Bebrütungstemperatur15 bis 33°C Bebrütungszeitspanne3 bis 30 Tage
Im Falle einer Submerskultur wird das Medium mit einer Geschwindigkeit von 0,1 bis 2,0 l/l/min unter Rühren bei 30 bis 500 Upm belüftet.
Die durch die feste oder flüssige Kultur erzeugten Myzelien werden in herkömmlicher Weise gesammelt und als Ausgangsmaterial für die Erfindung verwendet.
Beispielsweise können im Falle einer flüssigen Kultur die Myzelien dadurch gesammelt werden, daß das angefallene flüssige Kulturmedium einer herkömmlichen Trennmethode unterzogen wird, beispielsweise einem Zentrifugieren, Filtrieren etc.. Das nach dieser Trennmethode erhaltene Filtrat wird als filtrierte Brühe bezeichnet, die ebenfalls als Ausgangsmaterial für die Erfindung eingesetzt werden kann.
Erfindungsgemäß werden das Stromatoid und/oder die Myzelien, die in der vorstehend beschriebenen Weise gesammelt worden sind, mit einem wäßrigen Lösungsmittel extrahiert. In diesem Falle können das Stromatoid und/oder die Myzelien als solche direkt der Extraktion unterzogen werden. Gegebenenfalls kann man vor einer derartigen Extraktion das Stromatoid und/oder die Myzelien einer Vorbehandlung unterziehen, beispielsweise einem Waschen mit Wasser, einem Trocknen mit Luft, einem Zerstoßen (Pulverisation) oder einer Extraktion mit einem nicht-polaren Lösungsmittel.
Das für die Extraktion eingesetzte wäßrige Lösungsmittel ist Wasser oder eine Mischung aus Wasser und wenigstens einem wasserlöslichen Material, wobei als wasserlösliche Materialien beispielsweise Säuren, Basen, Salze oder organische Lösungsmittel in Frage kommen.
Zur Durchführung der Extraktion werden das vorbehandelte oder nicht-vorbehandelte Stromatoid oder die Myzelien mit dem wäßrigen Lösungsmittel vermischt. Die Temperatur des Lösungsmittels ist nicht kritisch, falls sie unter 120°C gehalten wird. Die bevorzugte Temperatur kann unter wirtschaftlichen Gesichtspunkten ausgewählt werden. Die Extraktion wird während einer Zeitspanne durchgeführt, die dazu ausreicht, die gewünschte Extraktion zu bewirken. Im allgemeinen nimmt mit höherer Temperatur die Extraktionszeit ab. Innerhalb des vorstehend geschilderten bevorzugten Temperaturbereiches wird die Extraktion vorzugsweise in einer Zeitspanne von 30 Minuten bis 10 Stunden durchgeführt. Die Extraktion wird vorzugsweise unter Rühren in einem Gefäß durchgeführt, das aus Glas besteht oder mit Glas oder Email ausgekleidet ist. Ferner kann es sich um ein Gefäß aus rostfreiem Stahl handeln. Die Menge des Lösungsmittels kann innerhalb eines breiten Bereiches variieren, beträgt jedoch im allgemeinen das 10- bis 100fache des Gewichts (auf Trockenbasis) des Stromatoids und/oder der Myzelien. Die Verwendung von pulverisiertem Stromatoid oder Myzel wird für die Extraktion bevorzugt. Nach der Extraktion werden das Myzel oder Stromatoid sowie andere feste Materialien von der Flüssigkeit durch herkömmliche Maßnahmen entfernt, beispielsweise durch Zentrifugieren oder Filtrieren. Der flüssige Extrakt wird für eine weitere Behandlung konzentriert, beispielsweise durch Vakuumeindampfen oder dgl. Im allgemeinen wird der wäßrige Extrakt auf das 1/3- bis 1/10fache seines ursprünglichen Volumens konzentriert.
Der in der vorstehend beschriebenen Weise erhaltene Extrakt wird dann in der nachfolgend beschriebenen Weise gereinigt, was eine Ausfällung und Gewinnung des gesuchten Polysaccharids bedingt. Der Begriff "flüssiger Extrakt", wie er im vorliegenden Falle verwendet wird, bedeutet ein Filtrat oder Zentrifugat, das bei der Entfernung des Myzels und/oder des Stromatoids sowie anderer fester Materialien aus dem Extrakt anfällt.
Die filtrierte Brühe kann ebenfalls für die nachfolgend erläuterte Reinigung verwendet werden, was ein Ausfällen und eine Gewinnung des gesuchten Polysaccharids ermöglicht. Unter dem Begriff "filtrierte Brühe" ist ein Filtrat zu verstehen, das den aktiven Bestandteil, d. h. das Polysaccharid, enthält und durch Entfernung des Myzels sowie anderer fester Materialien von der Kulturbrühe, d. h. dem Kulturmedium, in dem der Stamm in der vorstehend beschriebenen Weise in flüssiger Kultur bebrütet worden ist, erhalten worden ist. Die filtrierte Brühe wird zur weiteren Behandlung konzentriert, beispielsweise durch Verdampfen im Vakuum. Im allgemeinen wird die filtrierte Brühe auf ein Drittel bis ein Zehntel des ursprünglichen Volumens konzentriert. Die konzentrierte filtrierte Brühe wird dann gereinigt.
Der flüssige Extrakt und die filtrierte Brühe können getrennt gereinigt werden, der flüssige Extrakt und die filtrierte Brühe können jedoch auch miteinander vereinigt werden, worauf die Mischung gereinigt wird.
Die Reinigung kann nach jeder der folgenden Methoden durchgeführt werden:
  • (A) Ausfällung der gesuchten Substanz durch Zugabe eines hochpolaren organischen Lösungsmittels (beispielsweise eines niederen Alkohols oder Ketons, beispielsweise Methanol, Äthanol, Propanol, Butanol, Aceton etc.) oder durch Aussalzen (durch Zugabe von wasserlöslichen anorganischen Salzen, wie Ammoniumsulfat, Natriumchlorid, Kaliumchlorid etc.)
  • (B) Entfernen von Säuren, Ionen sowie Substanzen mit niederem Molekulargewicht durch Dialyse, Gelfiltration (durch Einsatz von Dextran oder Polyacrylamidgel, wie Sephadex, Bio-Gel etc.), Ionenaustauscherharzbehandlung (durch Einsatz von beispielsweise verschiedenen im Handel erhältlichen Anionen- und Kationenaustauscherharzen, wie Amberlite, Dowex, Duolite etc.), Ultrafiltration sowie eine Kombination davon, zur Gewinnung einer im wesentlichen reinen Lösung, aus der die gewünschte aktive Substanz gewonnen wird;
  • (C) Behandlung zur Entfernung von freien Proteinen, beispielsweise unter Anwendung der Sevag-Methode, der Trifluortrichlormethanmethode, durch Proteasebehandlung etc.
Diese Methoden sind bekannt. Gegebenenfalls können zwei oder mehrere dieser Methoden zusammengefaßt werden. Im allgemeinen wird jedoch der flüssige Extrakt oder die filtrierte Brühe nach der Konzentration einer Ionenaustauscherharzbehandlung, einer Dialyse, einer Gelfiltration, Ultrafiltration oder einer Kombination davon zur Bewirkung einer Entfärbung, Entsäuerung sowie Entfernung von Substanzen mit niederen Molekulargewichten unterzogen. Aus einer derartig gereinigten Lösung kann die gesuchte Wirksubstanz nach einer geeigneten Methode entfernt werden, beispielsweise durch Gefriertrocknen. Gegebenenfalls kann man eine oder mehrere der vorstehend angegebenen Methoden zur Erzielung des gewünschten Reinigungsgrades wiederholen.
Die auf diese Weise erhaltene Substanz besitzt folgende charakteristische Eigenschaften:
  • (1) Diese Substanz ist ein weißes oder hellbraunes Pulver und nichtdialysierbar
  • (2) Die Molisch-Reaktion, die Anthron-Reaktion sowie die Ninhydrin-Reaktion sind positiv
  • (3) Die Elson-Morgain-Reaktion ist schwachpositiv oder negativ
  • (4) Die Jodreaktion sowie die Bialreaktion sind negativ
  • (5) Diese Substanz ist in Wasser und in einer wäßrigen Lösung einer Substanz, die in Wasser löslich ist, beispielsweise eines organischen Lösungsmittels, einer Säure, einer Base, eines Salzes oder dgl., löslich, jedoch unlöslich in einem organischen Lösungsmittel, wie Petroläther, Äthyläther, Benzol, Aceton, Äthanol, Methanol etc.
  • (6) Diese Substanz besitzt keinen scharfen Schmelzpunkt und wird beim starken Erhitzen verkohlt.
  • (7) Das Hydrolysat dieser Substanz, das durch Auflösen dieser Substanz in 0,1 n wäßriger Schwefelsäure und Erhitzen der Lösung (die 0,5 Gew.-% dieser Substanz enthält) auf 100°C während 5 Stunden erhalten worden ist, enthält wenigstens eine oder mehrere der Komponenten Glukose, Galactose und Mannose, wobei die Art des Zuckers von der Art und dem Ausmaß der Reinigung abhängt.
  • (8) Die Elementaranalyse dieser Substanz ist wie folgt:
    C 35,78%, H 6,28%; N 0,65%
Aus den vorstehenden Charakteristika nimmt man an, daß diese Substanz ein Polysaccharid mit hohem Molekulargewicht ist, das sich aus dem vorstehend erwähnten Zucker zusammensetzt und ein Molekulargewicht von wenigstens 8000 und ein durchschnittliches Molekulargewicht von ungefähr 2×10⁵ besitzt.
Das erfindungsgemäße Polysaccharid besitzt weder eine Cytotoxizität noch Nebenwirkungen, wie sie in herkömmlicher Weise im Zusammenhang mit dem Einsatz von herkömmlichen Mitteln auftreten, beispielsweise wird keine Abnahme der Anzahl der Leukocyten, keine Anämie der Leber sowie anderer Organe, keine Atrophie der Milz, kein Körpergewichtsverlust sowie ein Appetitverlust festgestellt. Die akute Toxizität (LD₅₀) dieses Polysaccharids in Mäusen beträgt mehr als 2000 mg/kg bei einer intraperitonealen Injektion.
Das erfindungsgemäße Polysaccharid besitzt eine antikarzinogene Aktivität. Die antikarzinogene Aktivität wurde nach folgendem Test bestätigt und ermittelt:
Eine Maus des ICR-JCL-Stamms mit einem Gewicht von 20 ± 2 g wurde intraperitoneal mit Sarcoma-180 Krebszellen oder Ehrlich-Krebszellen beimpft. 1 Woche nach der Beimpfung wurde eine ausreichende Zunahme der Ascitesflüssigkeit in der Maus festgestellt. Die darin enthaltenen Krebszellen wurden subkutan auf Achselflächen von anderen Mäusen in einer Menge von 4 000 000 Zellen pro Maus transplantiert. Diese Mäuse wurden in verschiedene Gruppen eingeteilt, wobei jede Gruppe aus fünf bis acht Individuen bestand. An die erste Gruppe (Vergleichsgruppe) wurde nur eine Kochsalzlösung verabreicht, während an jede der anderen Gruppen das erfindungsgemäße Polysaccharid verabreicht wurde. Die erste Verabreichung der Kochsalzlösung oder des Polysaccharids erfolgte intraperitoneal 1 Tag nach der Transplantation, während die anschließenden Verabreichungen fünfmal an jedem anderen Tag wiederholt wurden. Der feste auf die Mäuse transplantierte Krebs wurde beobachtet. Am 18. Tag nach der letzten Verabreichung wurde die durchschnittliche Zunahme des Körpergewichts gemessen, worauf die Mäuse zur Untersuchung von Nebenwirkungen und zur Bestimmung des Gewichts der Tumore, die aus der Vergleichsgruppe entnommen wurden, sowie der Tumore, die aus den mit Polysaccharid behandelten Gruppen herausgeschnitten worden sind, anatomisiert. Das "Inhibierungsverhältnis (IR)" in den folgenden Tabellen wird gemäß der Formel
IR (%)=(-)/ ×100
wobei das Durchschnittsgewicht der Tumore wiedergibt, die aus jeder Vergleichsgruppe der Mäuse entnommen worden sind, und das Durchschnittsgewicht der Tumore wiederspiegelt, die aus den mit Polysaccharid behandelten Mäusegruppen entfernt worden sind.
Die antikarzinogene Aktivität gegenüber einem syngenetischen Tumor in den Mäusen wurde ebenfalls bestimmt. Die Testmethode ist die gleiche, wie sie vorstehend beschrieben worden ist, mit der Ausnahme des Tumors, des Mäusematerials sowie der Verabreichungsmethode. Es wurde das 3-Methylcholanthren-induzierte Sarkom (Meth A) des BALB/C-Ursprungs in fester Form in syngenetischen Mäusen verwendet. Das eingesetzte Mäusematerial war BALB/C aus den Charles River Breeding Laboratories in Japan. Die Verabreichungsmethode war Intratumoral (i. t.).
Es wurde festgestellt, daß das erfindungsgemäße Polysaccharid eine starke antikarzinogene Aktivität gegenüber Sarkom-180, Ehrlich-Karzinom und Meth A ausübt.
Die Erfindung wird unter Bezugnahme auf die folgenden Beispiele erläutert, wobei Bezug genommen wird auf die Fig. 1, 2 und 3, welche Infrarotspektren von erfindungsgemäßen Polysacchariden (als KBr-Tabletten) wiedergeben.
Beispiel 1
Der Stamm ATCC 20603 Isaria atypicola Yasuda wird in dem folgenden flüssigen Kulturmedium bebrütet:
Glukose20 g Polypepton 5 g Hefeextrakt 1 g Kaliumphosphat (primäres) 1 g Magnesiumsulfat (7H₂O) 0,5 g Wasser 1 l Anfangs-pH 5,6-5,8 (ohne Einstellung)
Die Bebrütung erfolgt durch Einfüllen von 100 ml des vorstehend beschriebenen Kulturmediums in jeweils 500 ml Erlenmeyer-Kolben. Die Kolben werden mit Baumwolle verschlossen und 30 min bei 120°C sterilisiert. Nach dem Abkühlen erfolgt ein Beimpfen mit dem Stamm in herkömmlicher Weise, der getrennt in einem Schrägkulturmedium gezüchtet worden ist, das 2% Glukose, 0,5% Ebios und 1,5% Agar enthält. Nach 7 Tagen dauerndem Bebrüten unter Schütteln bei 27°C werden die Kolbeninhalte für die anschließende Bebrütung verwendet. 20 l des vorstehend beschriebenen flüssigen Kulturmediums in einem Stahlgärgefäß mit einem Fassungsvermögen von 30 l werden bei 120°C 30 Minuten sterilisiert und abgekühlt. Dann werden die Inhalte der vorstehend beschriebenen Kolben auf das Kulturmedium in der Gärvorrichtung aufgeimpft. Das Medium wird aerob unter Rühren (250 Upm) 16 Tage bei 27°C bebrütet, wobei die Belüftungsgeschwindigkeit 0,5 l/l/min beträgt. Die auf diese Weise erhaltene Kulturbrühe wird zur Gewinnung von 1700 g Myzelien (feucht) und 15 l Kulturbrühe filtriert. Das Myzel wird mit 1 l Wasser gewaschen, worauf die Waschflüssigkeit mit der filtrierten Brühe vereinigt wird. Das gewaschene Myzel wird mit 2 l Wasser vermischt und die Mischung auf 120°C 30 Minuten in einem geschlossenen Gefäß erhitzt. Dann läßt man die Mischung auf Zimmertemperatur abkühlen und filtriert, worauf sich eine Konzentrierung des Filtrats auf 1 l anschließt. Der konzentrierte Flüssigkeitsextrakt wird gegen Wasser dialysiert und dann zur Gewinnung von 4,0 g einer weißen bis leicht bräunlichen pulverförmigen Substanz gefriergetrocknet. Das Infrarotspektrum dieser Substanz geht aus Fig. 1 hervor.
Die filtrierte Brühe (16 l) wird auf 2 l konzentriert und gegen Wasser dialysiert und gefriergetrocknet, wobei 26,5 g einer weißen bis hellbraunen pulverförmigen Substanz erhalten werden. Das Infrarotspektrum dieser Substanz geht aus Fig. 2 hervor.
Die antikarzinogenen Aktivitäten dieser Polysaccharidsubstanzen gehen aus den folgenden Tabellen I und II hervor.
Tabelle I
Tabelle II
Beispiel 2
Der Stamm ATCC 20603 wird in einem Gärgefäß nach der in Beispiel 1 beschriebenen Methode bebrütet. Dann wird die filtrierte Brühe (16 l) in der folgenden Weise gereinigt: die filtrierte Brühe wird auf 2 l durch Vakuumeindampfen konzentriert und das Konzentrat 24 Stunden in fließendem Wasser dialysiert. Das Dialysat (2,5 l) wird auf einen pH von 8,0 durch wäßriges NaOH eingestellt und einer DEAE-Sephadex-Behandlung unterzogen. Die Flüssigkeit, die durch das DEAE-Sephadex-Material hindurchläuft, wird auf einen pH von 3,5 durch HCl eingestellt und dann einer SP-Sephadex-Behandlung unterzogen. Die Flüssigkeit, die durch das SP-Sephadex-Material hindurchgeht, wird mit Äthanol zur Einstellung einer 50%igen Alkoholkonzentration unter Bildung eines Niederschlags eingestellt, der dann in 1 l Wasser aufgelöst und erneut einer Dialyse in fließendem Wasser während 24 Stunden unterzogen wird. Das Dialysat wird gefriergetrocknet, wobei man 24,9 g einer festen Substanz (Polysaccharid) erhält, bei der es sich um eine weiße bis hellbraune pulverförmige Substanz handelt, die sich aus Glukose, Galaktose und Mannose zusammensetzt. Das Infrarotspektrum dieser Substanz geht aus Fig. 3 hervor.
Die antikarzinogenen Eigenschaften dieser Substanz in Mäusen sind wie folgt:
(A) Antikarzinogene Aktivität in Mäusen (Sarkom-180)
Krebszellen:Sarkom-180 4×10⁶ Zellen/Maus Tiermaterial:ICR-JCL 20 ± 2 g Behandlung:Intraperitoneale Verabreichung 1 Tag nach der Transplantation
(Vergleich: Kochsalzlösung) fünfmal Bestimmung:Tumorgewicht des festen Tumors
(IR Inhibierungsverhältnis)=(-)/ ×100 : durchschnittliches Gewicht der Tumore, die aus der Vergleichsgruppe entfernt worden sind
: durchschnittliches Gewicht der Tumore, die aus der mit Polysaccharid behandelten Gruppe entfernt worden sind
(B) Antikarzinogene Aktivität in Mäusen (Sarkom-180)
Behandlung:Intravenös verabreicht 1 Tag nach der Transplantation (Vergleich: Kochsalzlösung) fünfmal
Krebszellen, Tiermaterial und Bestimmung sind die gleichen wie unter (A)
(C) Antikarzinogene Aktivität in Mäusen (Meth A)
Krebszellen:Meth A 2×10⁴ Zellen/Maus Tiermaterial:BALB/C 20 g ± 2 g Behandlung:intratumorale Verabreichung jeden Tag nach der Transplantation (Vergleich: Kochsalzlösung) zehnmal Bestimmung:wie unter (A) beschrieben
Tabelle III (A)
Tabelle III (B)
Tabelle III (C)

Claims (2)

1. Polysaccharid mit antikarzinogener Aktivität, dadurch gekennzeichnet, daß es aus einem flüssigen Stromatoid- und/oder Myzel-Extrakt von Isaria atypicola Yasuda ATCC 20603 oder aus einem Kulturmedium isoliert worden ist, in welchem der Stamm bebrütet worden ist, bezüglich der Molisch-, Anthron- und Ninhydrinreaktion positiv und negativ bezüglich der Jod- und Bial-Reaktion sowie schwach positiv oder negativ gegenüber der Elson-Morgain-Reaktion ist, wobei sein Hydrolysat wenigstens eine der Komponenten Galactose, Glukose und Mannose enthält.
2. Verfahren zur Herstellung eines Polysaccharids gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß eine filtrierte Brühe aus einem Kulturmedium oder einem flüssigen Stromatoid- oder Myzelextrakt von Isaria atypicola Yasuda ATCC 20603 gebildet wird und das Polysaccharid aus der filtrierten Brühe oder dem flüssigen Extrakt durch Ausfällen und Gewinnen des Polysaccharids erhalten wird.
DE19803030107 1979-08-08 1980-08-08 Polysaccharid mit antikarzinogener aktivitaet und verfahren zu seiner herstellung Granted DE3030107A1 (de)

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