DE2828302A1

DE2828302A1 - Verfahren zum isolieren und reinigen von chenodesoxycholsaeure aus schweinegalle

Info

Publication number: DE2828302A1
Application number: DE19782828302
Authority: DE
Inventors: Michael Charles Attwell; Thomas Frederick Massiah; Roberta Andres Vergottini; Peter Ziegler
Original assignee: Canada Packers Inc
Current assignee: Maple Leaf Foods Inc
Priority date: 1978-06-28
Filing date: 1978-06-28
Publication date: 1980-02-28

Description

Verfahren zum Isolieren und Reinigen von Chenodesoxycholsäure
aus Schweinegalle Die Erfindung betrifft ein Verfahren zum Isolieren und Reinigen von Chenodesoxycholsäure aus Schweinegalle.
Chenodesoxycholsäure oder 3S,7i-Dihydroxy-5ffi-Cholansäure ist eine der Gallensäuren, die man in der Galle von Ochsen, Schweinen, Meerschweinchen, Bären, Hühnern, Gänsen und anderem Geflügel sowie beim Menschen findet. Die Isolierung von Chenodesoxycholsäure aus Gänsegalle ist zum ersten Mal von Windhaus und anderen, Z. Physiol. Chem. 140, 177-185 (1924) erwähnt worden. Obgleich Verfahren zur Isolierung on Ghenodesoxycholsäure bekannt sind, handelt es sich bei diesen Verfahren um Laborverfahren von nur akademischem Interesse, die für den gewerblichen Einsatz im großen Maßstab unbrauchbar sind, insbesondere auch deshalb, weil die angegebenen Ausbeuten gering sind. Als Folge davon wird Chenodesoxycholsäure üblicherweise durch die Synthese aus Cholsäure erzeugt, die wiederum aus Rindergalle isoliert werden kann. (Siehe beispielsweise Fieser & Rajagopalan, J. Am. Chem. Soc. 72, 5530 (1950)).
Bis vor kurzem ist Chenodesoxycholsäure lediglich eine Laborkuriosität gewesen, Anfang der 1970er Jahre ist festgestellt worden, daß die Säure die überraschende Fähigkeit hat, Gallensteine im lebenden Organismus aufzulösen. Siehe beispielsweise: DISSOLUDION OF CHOLESTEROL GALLSTONES BY CHENODEOXYCHOLIC ACID, DANZINGER R. G. und andere, New England Journal of Medicine 286, 1 (1972). Es wurde dann wichtig, zuverlässige Verfahren für die Erzeugung von Chenodesoxycholsäure im großen Maßstab zu entwickeln, die ein Produkt in ausreichender Reinheit zur Verwendung als Arznei entstehen lassen.
Die weitgehend verwendete Quelle für die Isolierung von Ghenodesoxycholsäure ist nach den bisherigen Veröffentlichungen Gänsegalle. Gänsegalle ist jedoch nicht in ausreichenden Mengen vorhanden, um eine wirtschaftliche kommerzielle Erzeugung von -Chenodesoxycholsäure zu ermöglichen, und selbst wenn sie das wäre, würden die geringen Mengen an Galle, die man aus jeder Gänsegallenblase erhält, das Sammeln von ausreichenden Mengen der Galle inprahikabel machen.
Eine bisher wenig benutzte Quelle für Chenodesoxycholsäure ist Schweinegalle, die sich nun als Quelle für Chenodesoxycholsäure erwiesen hat, die sich zur Verwendung für die kommerzielle Massenerzeugung dieser Gallensäure eignet, weil sie ohne weiteres und leicht zur Verfügung gestellt werden kann und sonst wenige andere Nutzungsmöglichkeiten hat.
Schweinegalle ist ein viel komplexeres Gemisch als die Galle anderer Tiere und enthält erhebliche Mengen von vier Gallensäuren, während Rinder, Geflügel und der Mensch in der Galle nennenswerte Mengen von nur zwei Gallensäuren enthalten. Die vier Gallensäuren, die sich in der Schweinegalle finden, sind Chenodesoxycholsäure, Hyodesoxychol-(3α,6α-Dihydroxy-5ß-Cholan-) säure, Hyochol- ( , 6 7Trihydroxy-5Cholan-) )Säure und 3α-Hydroxy-6-Oxo-Rt-Gholansäure.
Wegen des komplexen Aufbaus der Schweinegalle ist die Isolierung der einzelnen Gallensäuren viel schwieriger als die Isolierung einer Komponente z.B. der Rindergalle, besonders dann, wenn die Komponenten mit hohem Wirkungsgrad und mit dem hohen Maß an Reinheit isoliert werden müssen, die erforderlich ist, um die Verwendung als Arznei zu ermöglichen.
Der Erfindung liegt deshalb die Aufgabe zugrunde, ein verbessertes Verfahren zum Isolieren und Reinigen von Chenodesoxycholsäure aus Schweinegalle zu schaffen.
Es ist festgestellt worden, daß Chenodesoxycholsäure aus der Schweinegalle unter Verwendung des für den gewerblichen Gebrauch einrichtbaren Verfahrens isoliert werden kann, das nachstehend beschrieben wird. Die Chenodesoxycholsäure, die nach dem erfindungsgemäßen Verfahren isoliert wird, hat eine überragend hohe Reinheit und ist ohne weiteres als ein medizinisches Mittel für die Behandlung von Gallensteinen akzeptabel.
Erfindungsgemäß ist ein Verfahren zum Isolieren und Reinigen von Chenodesoxycholsäure aus Schweinegalle vorgesehen, das durch folgende Verfahrensschritte gekennzeichnet ist: 1. Behandlung der Schweinegalle unter verseifenden Bedingungen; 2. Trennung der Gallensäuren von den wasserlöslichen Bestandteilen der verseiften Galle; 3. Verestern der Gallensäuren zum Entstehenlassen eines Gemisches aus Gallensäureestern; 4. Isolierung des Hyodesoxycholsäureesters aus dem Gemisch aus Gallensäureestern; 5. Behandlung der übrigen Gallensäureester unter acetylierenden Bedingungen; 6. Isolierung des Hyocholsäureester-Triacetats; 7. Isolierung des Chenodesoxycholsäureester-Diacetats ;-8. Behandlung des Chenodesoxycholsäureester-Diacetats unter verseifenden Bedingungen und y . Isolierung der dadurch erhaltenen Chenodesoxycholsäure.
Nach einem bevorzugten Ausführungsbeispiel der Erfindung ist ein Verfahren zum Isolieren und zum Reinigen von Chenodesoxycholsäure aus Schweinegalle vorgesehen, das durch die folgenden Verfahrensschritte gekennzeichnet ist; 1. Behandlung der Galle unter verseifenden Bedingungen durch Rückfließenlassen der Galle in Gegenwart einer wässrigen Lösung einer geeigneten Base; 2. Versäuern der verseiften Galle mit einer geeigneten Säure während der Extraktion der Gallensäuren daraus mit einem im wesentlichen mit Wasser unvermischbaren organischen Lösungsmittel mit geringer Löslichkeit in der verseiften und versäuerten Galle und Ausübung einer bevorzugten Lösungsmittelwirkung zu den darin befindlichen Gallensäuren hin, verglichen mit den übrigen Bestandteilen der Galle, Trennung der entstehenden wässrigen Phase und der Lösungsmittelphase und Trennung der Gallensäuren von der Lösungsmittelphase; 3. Reagierenlassen der Gallensäuren mit einem geeigneten Alkohol in Gegenwart eines geeigneten Säurekatalysators; 4.- Neutralisieren des Reaktionsgemisches, das in dieser Weise entstanden ist, mit einer geeigneten Base; 5. Isolieren der veresterten Gallensäuren, die in dieser Weise se entstanden sind; 6. Auflösung der Gallensäureester in einem geeigneten Lösungsmittel, bestehend aus einer Verbindung aus der Gruppe aus Benzol und Toluol; 7. Behandlung der in dieser Weise erhaltenen Lösung zum Ausfällen von Peststoff daraus, der einen hohen Gehalt eines Addukts von Hyodesoxycholsäureester enthält, mit einer Verbindung aus der aus Benzol und Toluol bestehenden Gruppe; 8. Trennung der in dieser Weise behandelten Lösung in einen im wesentlichen festen Teil und in einen im wesentlichen flüssigen Teil; 9. Trennung des Lösungsmittels aus dem im wesentlichen flüssigen Teil zum Erhalten eines im wesentlichen trockenen Gemisches der übrigen veresterten Gallensäuren; 10. Reagierenlassen der übrigen Gallensäureester mit Essigsäureanhydrid und einer Substanz aus der Gruppe aus Natriumacetat und Pyridin; 11. Trennung von überschüssigem Essigsäureanhydrid aus dem in dieser Weise erhaltenen Reaktionsgemisch, um einen im wesentlichen trockenen Rückstand zu erhalten; 12. Auflösung des Rückstands, der einen hohen Gehalt aus acetylierten Gallensäureestern hat, in einem geeigneten Lösungsmittel; 13. Behandlung der in dieser Weise erhaltenen Lösung zum Ausfällen eines Feststoffs daraus, der einen hohen Gehalt an acetyliertem Hyocholsäureester hat; 14. Trennung der in dieser Weise behandelten Lösung in einen im wesentlichen festen Teil und in einen im wesentlichen flüssigen Teil; 15. Trennung des Lösungsmittels aus dem im wesentlichen flüssigen Teil, um einen im wesentlichen trockenen Feststoff zu erhalten; 16. Auflösung des im wesentlichen trockenen Peststoffs, der einen hohen Gehalt der übrigen acetylierten Gallensäureester hat, in einem geeigneten Lösungsmittel; 17. Behandlung der in dieser Weise erhaltenen Lösung zum Ausfällen eines Feststoffs daraus, der einen hohen Gehalt an Chenodesoxycholsäureester-Diacetat hat; 18. Trennung der in dieser Weise behandelten Lösung in einen im wesentlichen festen Teil und in einen im wesentlichen flüssigen Teil; 19. Wiederauflösen des im wesentlichen festen Teils in einem geeigneten Lösungsmittel; 20. Behandlung der in dieser Weise erhaltenen Lösung zum Ausfällen eines Feststoffs daraus, der einen hohen Gehalt an Chenodesoxycholsäureester-Diacetat hat; 21. Trennung der in dieser Weise behandelten Lösung in einen im wesentlichen festen Teil und in einen im wesentlichen flüssigen Teil; 22. Behandlung des im wesentlichen festen Teils unter verseifenden Bedingungen in einem wässrigen Medium durch Rückfließenlassen mit einer geeigneten Base; 23. Versäuern des verseiften Materials mit einer geeigneten Säure während der Extraktion mit einem im wesentlichen mit Wasser unvermischbaren organischen Lösungsmittel, das eine bevorzugte Lösungsmittelwirkung zur Chenodesoxycholsäure hin ausübt, die im verseiften und versäuerten Material enthalten ist, verglichen mit den restlichen Bestandteilen des verseiften und versäuerten Materials, und Trennung der dabei entstehenden Lösungsmittelphase und wässrigen Phase; 24. Behandlung der Lösungsmittelphase, die die Chenodesoxycholsäure enthält, durch Konzentration und Kühlung, bis Feststoff, der einen hohen Gehalt an Chenodesoxycholsäure enthält, daraus ausgefällt wird; 25. Trennung der in dieser Weise behandelten Lösung in einen im wesentlichen flüssigen Teil und in einen im wesentlichen festen Teil; und 26. Behandlung des im wesentlichen festen Teils durch Trocknen.
Die Schweinegalle, die in diesem Verfahren zu verwenden ist, kann frisch oder verdickt sein, und sie kann ganz oder entfettet sein. Die Galle kann vor oder nach der Verseifung der Galle entfettet sein oder werden.
Die Verseifung von Galle ist in der CAN-PS 533.769 beschrieben.
Wenn frische Galle verwendet wird, ist keine Vorbehandlung dieser Galle erforderlich. Wenn verdickte Galle verwendet wird, kann sie verdünnt werden, so daß deren Gesamtfeststoffgehalt sich demjenigen frischer Galle annähert (10-14), Die Galle wird verseift, indem ein Rückfluß derselben mit 5% bis 20% einer geeigneten Base erfolgt, beispielsweise Kaliumhydroxid oder Natriumhydroxid, und zwar zwischen 16 und 24 Stunden lang, obgleich die Rückflußzeit variieren kann, je nach dem Druck, mit dem gearbeitet wird, und je nach der Konzentration der Base. Normalerweise wird die Verseifung bei oder etwas über atmosphärischem Druck vorgenommen. Das verseifte Gemisch wird dann auf einen pH-Wert von etwa 8 mit einer geeigneten Mineralsäure wie Salzsäure oder Schwefelsäure gebracht, die gewöhnlich in konzentrierter Form zugesetzt wird, um den Wassergehalt so wenig wie möglich zu erhöhen.
Falls erwünscht, kann die 3i-Hydroxy-6-Oxo-5-Cholansäure als ihr Salz vor der Extraktion der übrigen Gallensäuren aus der verseiften Galle isoliert werden. Diese Isolierung erfolgt durch Kristallisation des Rohsalzes aus der verseiften Galle nach einer Verdünnung der Galle auf etwa das 2- bis 3-fache ihres ursprünglichen Volumens mit kaltem Wasser und Halten einer Temperatur von 5 - 200C für einen Zeitraum von 16 - 24 Stunden. Das Ausscheiden der i&-Hydroxy-6-Oxo-56~Cholansäure an dieser Stelle kann die Ausbeute von Chenodesoxycholsäure im Verfahren verbessern, ohne den Rest des Verfahrens wesentlich zu beeinträchtigen.
Allgemein wird die Trennung der Gallensäuren aus der neutralisierten verseiften Galle durch Lösungsmittelextraktion bevorzugt. Wenn so vorgegangen wird, werden ein Bleichmittel wie Natriumhydrosulfit und ein organisches Lösungsmittel, das eine geringe Löslichkeit in Wasser in der versäuerten Galle haben muß und in der die Gallensäuren eine hohe Löslichkeit haben, bei Halten der verseiften Galle auf einer erhöhten Temperatur zugesetzt. Nachdem das Lösungsmittel und das Bleichmittel zugesetzt worden sind, wird die verseifte Galle auf einen pH-Wert von ca. 5 durch Zusetzen einer geeigneten Mineralsäure versäuert.
Geeignete organische Lösungsmittel sind Äthylacetat, Methglisobutylketon, n-Hexanol, Toluol und halogenisierte Kohlenwasserstoffe wie Äthylendichlorid. Ein bevorzugtes Lösungsmittel ist äthylacetat, und mit diesem bevorzugten Lösungsmittel ist ein Temperaturbereich von 50 bis 550 optimal, Das Zusetzen der Mineralsäure und des Lösungsmittels bewirkt, daß das Gemisch aus verseifte und versäuerter Galle und Lösungsmittel sich in eine wässrige Phase und in eine organische Phase trennt. Das Zusetzen einer kleinen Menge Bleichmittel hellt die wässrige Phase auf und unterstützt die anschließende visuelle Trennung von Wässrigen Schichten und Lösungsmittelschichten, weil es keinen nennenswerten Entfärbungseffekt auf die Lösungsmittellösung der Gallensäuren hat. Ca. 0,5% des Bleichmittels wie Natriumhydrosulfit, bezogen auf das Gewicht der Ausgangsgalle, hat sich für diesen Zweck als angemessen erwiesen.
Die wässrige Schicht und die organische Schicht werden getrennt, und wässrige Schichten und Grenzschichten, die die in Wasser löslichen organischen Verunreinigungen enthalten, ferner die anorganischen Verbindungen und die unlöslichen Substanzen, werden abgesondert. Die organische Phase kann dann mit einem Entfärber wie Bleicherde und Holzkohle behandelt werden, gefolgt von einer Filtrierung der organischen Phase und einem Waschen der filtrierten Feststoffe mit einer frischen Menge Lösungsmittel.
Das Filtrat und die Spülung werden dann kombiniert und bis zur Trockenheit verdampft; ein Rückstand entsteht, der einen hohen Gehalt an Gallensäuren enthält.
Als Alternative zum Lösungsmittelextraktionsverfahren kann die verseifte und versäuerte Galle mit einer geeigneten Mineralsäure behandelt werden, bis ein Feststoff ausgefällt wird, der einen hohen Gehalt an Gallensäuren enthält. Dieser Feststoff wird durch Filtrierung aus der Lösung ausgesehieden und dann weiter durch azeotropes Trocknen oder Ofentrocknen behandelt.
Die Lösungsmittelextraktion wird jedoch bevorzugt, weil die gefällten Gallensäuren oft klebrig und sehr schwer zufriedenstellend durch Filtrierung abzutrennen sind.
In Anschluß an die Trennung der Gallensäuren ist der nächste Schritt im Verfahren die Veresterung dieser Säuren. Die Veresterung wird mit einem geeigneten Alkohol unter Verwendung eines geeigneten sauren Katalystators erreicht. Vorzugsweise werden die niedrigeren aliphatischen Alkohole für die Veresterung verwendet, vorzugsweise dabei Methanol. Als sauerer Katalysator wird vorzugsweise Schwefelsäure oder Salzsäure verwendet, jedoch kann auch p-Toluol-Sulfosäure verwendet werden.
Die Veresterung wird durch Auflösen des aus dem Verseifungsschritt erhaltenen Rückstands im Alkohol und Zusetzen der erforderliohen Menge des sauren Katalysators vorgenommen. Die in dieser Weise erhaltene Lösung wird etwa bei Raumtemperatur mehrere Stunden lang gerührt. Das Reaktionsgemisch wird dann auf einen pH-Wert von etwa 7 neutralisiert, indem eine geeignete Base verwendet wird. Zu den Basen, die verwendet werden können, gehören Natriumbicarbonat, Natriumcarbonat, Natriumhydroxid und geeignete organische Basen wie griäthyleamin.
Die Lösung kann dann filtriert werden, um eventuelle anorganische Salze zu entfernen, die vorhanden sind und die durch die Neutralisierung ausgefällt worden sein können. Das Filtrat wird dann bis zur Trockenheit verdampft, um die veresterten Gallensäuren vom übrigen Alkohol zu trennen. Man. erhält einen trockenen Rückstand.
Der-Hyodesoxycholsäureester wird dann von den anderen Gallensäureestern wie folgt isoliert, Der nach dem Veresterungsschritt verbleibende Rückstand wird in einem geeigneten Lösungmittel aufgelöst, das eine Verbindung wie Benzol oder Toluol enthält, welche ein Addukt oder einen Komplex mit dem Hyodesoxycholsäureester bildet. Vorzugsweise wird Benzol verwendet, weil Benzol sowohl als das Lösungsmittel als auch als der Komplexbildner wirken kann. Um die Auflösung des Rückstands zu unterstützen, wird das Lösungsmittel gewöhnlich auf ca. 60-700C erhitzt. Das Volumen des verwendeten Lösungsmittels basiert auf dem Gewicht der gesamten Gallensäuren zu Beginn des Verfahrens; es werden ca. 1 bis 4 Liter Lösungsmittel pro Kilogramm Gallensäuren verwendet.
Die in dieser Weise erhaltene Lösung wird konzentriert, indem ein Teil des Lösungsmittels verdampft wird, und zwar auf etwa 40 bis 60% ihres ursprünglichen Volumens, und sie wird dann gekühlt und vorzugsweise 10-24 Stunden lang auf einer Temperatur von 5-15°O gehalten. Man erhält einen dicken Brei, der dann filtriert wird. Der in dieser Weise erhaltene Filterkuchen wird mit dem benutzten Lösungsmittel gewaschen, und die Spülungen werden mit dem Filtrat kombiniert. Das Filtriert und die damit kombinierten Spülungen werden dann bis zur Trockenheit verdampft. Der durch Filtrierung getrennte Feststoff kann getrocknet werden, und er besteht hauptsächlich aus dem Komplex oder Addukt des Esters von Hyodesoxycholsäure.
Nach einem bevorzugten Ausführungsbeispiel der Erfindung werden die Gallensäuren mit Met1iol verestert, wobei SchweSel-oder Salzsäure als der Katalystator verwendet werden. Die Methylester der Gallensäuren werden auf diese Weise erhalten.
Das bevorzugte Lösungsmittel für die Isolierung des Methylhyodesoxycholats ist Benzol, und der Ester wird als das Benzoladdukt von Methylhyodesoxycholat isoliert.
In Anschluß an die Isolierung des Hyodesoxycholsäureesters werden die übrigen Gallensäureester durch eine einer Reihe bekannter Methoden acetyliert. Beispielsweise wird der Feststoffrückstand, den man bei Verdampfung des Lösungsmittels erhält, in Essigsäureanhydrid ausgelöst, und Natriumacetat oder Pyridin wird der Lösung zugesetzt, die dann zwischen 3 und 100 Stunden lang, vorzugsweise 5 Stunden lang, im Rückfluß bleibt.
Die Lösung wird dann behandelt, um eventuell vorhandenes überschüssiges Essigsäureanhydrid beispielsweise durch Verdampfung zu entfernen. Das Zusetzen eines geeigneten Alkohols wie Methanol zum Rückstand zur Bildung eines Acetats mitdem Anhydrid oder das Zusetzen eines Lösungsmittels wie Toluol zum Rückstand unterstützt die Entfernung dieses Überschusses bei Destillation.
Alternativ können die acetylierten Gallensäureester durch Kristallisation aus dem Essigsäureanhydrid ausgeschieden wert den. Die Lösung wird nach dem Rückfluß etwas konzentriert und dann auf einer Temperatur von etwa 5 0C für die Dauer von etwa 10 bis 20 Stunden gehalten. Der in dieser Weise erhaltene Brei wird filtriert, der Filterkuchen wird mit frischem Essigsäureanhydrid gewaschen, und das Filtrat und die Spülungen werden kombiniert. Das Essigsäureanhydrid wird von der filtrierten Lösung beispielsweise durch Verdampfung getrennt, wobei die Trennung durch das Zusetzen eines geeigneten Alkohols oder/Toluol unterst.ützt wird, wie das vorstehend /von beschrieben worden ist. Falls erwünscht oder erforderlich, kann der nach der Destillierung verbleibende Rückstand im Lösungsmittel wiederaufgelöst und nachdestilliert werden.
In Anschluß an die Isolierung der acetylierten Gallensäureester wird der Hyocholsäureester als sein Triacetat getrennt.
Der Rückstand aus dem einen oder dem anderen der vorstehend beschriebenen Verfahren wird in einem geeigneten Lösungsmittel aufgelöst, vorzugsweise einem nicht polaren Lösungsmittel, bestehend aus n-Heptan, Hexan, n-Octan, Iso-Octan, n-Pentan, Cyclohexan, Cyclopentan oder Cyclopenten, aoch besser n-Heptan, Hexan oder n-Octan. Das Hyocholsäureester-Driacetat wird aus der in dieser Weise erhaltenen Lösung durch Kristallisation bei einer Temperatur zwischen 15 und 3O0C, vorzugsweise 2O0C, getrennt. Das Volumen an Lösungsmittel, das verwendet wird, ist nicht von Bedeutung, vorzugsweise werden aber 2-4 Liter pro Kilogramm Gallensäureester-Acetate benutzt, die vorhanden sind. Der Demw raturbereich ist jedoch wichtig. Bei Temperaturen über 30 0C bleibt ein größerer Teil des Hyocholsäureestertriacetat in Lösung und verunreinigt das Produkt später, während bei Temperaturen unter 15 0C das Chenodesocycholsäureester-Diacetat mit dem hyocholsäureester-Uriacetat zusammenkristallisiert, was die Gewinnung schwieriger gestaltet.
Als Alternative zum vorstehenden Kristallisationsverfahren läßt sich in bestimmten Fällen eine höhere Ausbeute durch eine erste Kristallisation bei niedriger Temperatur, vorzugsweise etwa 50" erreichen, der sich eine Erwärmung der Lösung und des Niederschlags anschließt, um eventuelles Cchenodesoxycholsäureester-Diacetat wieder aufzulösen, das sich bei der niedrigen Temperatur niedergeschlagen hat, um dann die Kristallisation des Hyocholsäureester-Triacetats bei 20-25 0C abzuschließen.
In Anschluß an die Kristallisation des Hcholsäureester-Triacetats wird die Lösung filtriert, und der Filterkuchen wird mit einem geeigneten Lösungsmittel wie Hexan gewaschen. Der gewaschene Filterkuchen wird dann getrocknet und besteht aus einem Feststoff, der einen hohen Gehalt an Hyocholsäureester-Uriacetat hat. Das Filtrat und die Spülungen werden kombiniert und bis zur Trockenheit verdampft.
Nach einem bevorzugten Ausführungsbeispiel der Erfindung, bei dem Methanol zum Verestern der Gallensäuren benutzt wird, hat der ausgefällte und ausgeschiedene Feststoff einen hohen Gehalt an Methylhyocholat-Triacatat.
Das Chenodesoxycholsäureester-Diacetat wird dann isoliert.
Der nach Verdampfung des Filtrats und der Spülungen bis zur Trockenheit verbleibende Rückstand wird in einem geeigneten Lösungsmittel aufgelöst, vorzugsweise einem polaren Lösungsmittel, am besten Methanol, Äthanol oder Isopropanol, noch besser Äthanol. Das Lösungsmittel kann erhitzt werden, um die Auflösung des Rückstands zu unterstützen. Das Volumen der benutzten Lösung beträgt vorzugsweise 0,5 bis 2,0 Liter pro Kilogramm Gallensäureester-Acetate.
Die in dieser Weise erhaltene Lösung wird gekühlt, vorzugsweise auf einer Temperatur von O-1O0C für die Dauer von 16-48 Stunden gehalten und dann filtriert. Das Filtrat wird aufbewahrt, und der in dieser Weise getrennte Feststoff, der einen hohen Gehalt an Chenodesoxycholsäureester-Diacetat hat, wird mit einem geeigneten Lösungsmittel gewaschen, beispielsweise Äthanol, und dann getrocknet, Der getrocknete Feststoff wird dann in einem geeigneten Lösungsmittel wiederaufgelöst, beispielsweise Methanol, Äthanol, Isopropganol und Hexan, vorzugsweise Äthanol oder Methanol, und dann aus diesem Lösungsmittel rekristallisiert. Das Volumen an Lösungsmittel, das in der Rekristallisation benutzt wird, beträgt vorzugsweise 2-6 Liter pro Kilogramm Chenodesoxycholsäureester-Acetat.
(Das Filtrat aus der ersten Kristallisation kann weggeworfen oder zu anschließenden Chargen von Schweinegalle zugesetzt werden, um einen Teil der Chenodesoxycholsäure aus dem Biltrat zurückzugewinnen. Alternativ können mehrere Chargen des Filtrats gesammelt und in der gleichen Weise behandelt werden, wie das mit der Schweinegalle geschieht, um das Chenodesoxycholsäureester-Diacetat daraus zurückzugewinnen.) Die Chenodesoxycholsäure wird dann nach einer von mehreren versohiedenen, jedoch bekannten Methoden extrahiert. Beispielsweise wird ein geeignetes, im wesentlichen mit Wasser unvermischbares Lösungsmittel wie Äthylacetat, Methylisobutylketon, Äthylendichlorid, n-Butylacetat, vorzugsweise Äthylacetat, dem verdünnten und versäuerten Verseifungsgemisch zugesetzt und gründlich gerührt, Das Gemisch trennt sich in eine wässrige und in eine organische Phase, und diese Phasen werden dann getrennt. Die wässrige Phase wird weggegossen. Die organische Phase wird beispielsweise mit einer 1%Oigen Natriumchloridlösung gewaschen und dann teilweise verdampft, um die Lösung zu konzentrieren. Die Lösung wird gekühlt, bis eine Ausfällung eintritt, und die Lösung wird mit einer Verdünnung verdünnt, in der Chenodesoxycholsäure unlöslich ist, vorzugsweise Hexan oder Cyclohexan. Der verdünnte Brei wird dann 10 bis 20 Stunden Lang gekühlt und dann filtriert , wobei die Feststoffe zurückgehalten und mit frischem Lösungsmittel oder einem Gemisch aus Lösungsmitteln gewaschen werden. Der gewaschene Feststoff wird dann getrocknet, und man erhält im wesentlichen reine Chenodesocycholsäure.
Die folgenden Beispiele dienen zur Veranschaulichung, jedoch nicht zur Beschrankung der Erfindung.
BEISPIEL 1 Natriumhydroxid (100 g) wurde frischer Schweinegalle (1 Liter) zugesetzt, und das Gemisch wurde 24 Stunden lang im Rückfluß gehalten. Die Lösung wurde auf Raumtemperatur gekühlt und auf einen pH-Wert von 8 mit konzentriert er Schwefelsäure eingestellt. Natriumhydrosulphit (5,3 g) wurde zugesetzt, und das Gemisch wurde 15 min lang umgerührt. Nach dem Zusetzen von Äthylacetat (450 ml) wurde der pH-Wert des Gemisches auf einen Wert von 5 mit verdünnter Schwefelsäure eingestellt. Das Gemisch wurde 30 min lang gerührt, und dann ließ man es sich trennen. Die untere wässrige Schicht wurde abgelassen und weggegossen. Filtrol (Warenzeichen) (10 g) und Holzkohle (10 g) wurden der oberen organischen Phase zugesetzt. Das Gemisch wurde 30 min lang umgerührt, filtriert, und der Filterkuchen wurde mit Äthylacetat (50 ml) gewaschen. Das Filtrat und die Spülungen wurden bis zur Trockenheit verdampft.
Der Rückstand wurde in Methanol (300 ml) aufgelöst, es wurde konzentrierte Schwefelsäure (4,0 ml rzugesetzt,und die Lösung wurde bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Nach Neutralisierung (auf ca. pH 7) mit festem Natriumbicarbonat (ca.
28 g) wurde das Gemisch filtriert und dann unter Vakkum bis zur Trockenheit verdampft. Der Rückstand wurde in heißem Benzol (320 ml) aufgelöst. Die Lösung wurde auf ca. 225 ml konzentriert und über Nacht gekühlt. Der Brei wurde filtriert, und der Pilterkuchen (Methyl-Hyodesoxycholat-Benzol-Addukt) wurde mit Benzol gewaschen.
Das Benzolfiltrat und die Spülungen wurden bis zur Trockenheit verdampft. Essigsäureanhydrid (75 ml) und wasserfreies Natriumacetat (7,5 g) wurden dem Rückstand zugesetzt, und das Gemisch wurde 5 Stunden lang im Rückfluß gehalten. Ein Teil des Lösungsmittels (25 ml) wurde destilliert, und der Restbrei wurde über Nacht gekühlt. Das Gemisch wurde filtriert, und der Filterkuchen wurde mit kalten Essigsäureanhydrid (30 ml) gewaschen.
Das Filtrat und die Spülungen wurden unter Vakuum bis zur Trockenheit verdampft. Rückständiges Essigsäureanhydrid wurde durch Zuschlagen und Destillieren von Toluol (2 x 30 ml) entfernt. Der Rückstand wurde in Hexan (200 ml) aufgelöst, und die Lösung wurde über Nacht gekühlt. Das Gemisch wurde bis zum Rückfluß erhitzt, 1o min lang im Rückfluß gehalten, auf Raumtemperatur abgekühlt und bei Raumtemperatur 3 Stunden lang gerührt. Der Brei wurde filtriert, und der Filterkuchen wurde mit Hexan gewaschen.
Das Filtrat wurde unter Vakuum bisur Trockenheit verdampft.
Der Rückstand wurde in heißem Äthanol (46 ml) aufgelöst. Die Lösung wurde gekühlt und überNacht im Kühlschrank aufbewahrt.
Der Brei wurde filtriert. Der Pilterkuchen wurde mit Äthanol (27 ml bei 5°C) gewaschen und unter Vakuum bei 50-600C getrocknet. Das rohe Methylchenodesoxvcholat-Diacetat wog 19,95 g.
Dieses wurde aus 4 Volumina Äthanol rekristallisiert, was ein Produkt von 17,4 g ergab: Schmelzpunkt 112-114OG (erweicht bei 11O0C);[) 2D5 + 10,50 (c=1, Dioxan);6 2D5 + 15,4°(c=1, CHCl3).
Das Methylchenodesoxycholat-Diacetat (17,4 g) wurde einer Lösung aus Natriumhydroxid (17 g) in Wasser (170 ml) zugesetzt, Nach Rückfließenlassen des Gemisches für die Dauer von 14 Stunden wurde die Lösung mit Wasser (350 ml) verdünnt und mit Schwefelsäure auf einen pH-Wert von 4,5 eingestellt, Das Gemisch wurde mit Äthylacetat (225 ml) extrahiert. Der Äthylacetat-Extrakt wurde mit 1 obigem wässrigen Natriumchlorid (50 ml) gewaschen und dann auf etwa 70 ml verdampft. Die Lösung wurde gekühlt, und es wurde Hexan (70 ml) zugesetzt. Das Gemisch wurde über Nacht kuhl gehalten und dann filtriert. Der Filterkuchen wurde mit Äthylacetat-Hexan (40 ml; 1/1) gewaschen und unter Vakuum bei 60 0C getrocknet, Die Chenodesoxycholsäure 25 wog 11,5 g; Schmelzpuntk 141-1440C; [α] D + 10,50 (C=1, Dioxan); [α]D25 + 11,20 (c=2, Äthanol).
BEISPIEL 2 Verdickte Schweinegalle (334 g) wurde in heißem Wasser (1700 ml) aufgelöst und mit Natriumhydroxid (200 g) wie im Beispiel 1 verseift. Das Hydrolysat wurde wie im Beispiel 1 weiterbehandelt, jedoch unter Verwendung der doppelten Menge an Reaktionsmitteln.
Nach der Rekristallisation betrug die Ausbeute an Methylchenodesoxycholat-Diacetat 32,5 g [Schmelzpunkt 113-115°C; r1 2D5 + 14,50 (c=1, CHCl3)) , was 21,3 g Chenodesoxycholsäure ergab. Schmelzpunkt 139-142°C; [α] D25 + 10,00 (c=2, Äthanol); )2D5 + 9,50 (c=1, Dioxan).
BEISPIEL 3 Ein Verfahren wurde entsprechend Beispiel 1 durchgeführt, außer daß die Kristallisation aus Essigsäureanhydrid nach der Acetylierung weggelassen wurde, Methanol anstelle von Toluol benutzt wurde, um rückständiges Essigsäureanhydrid zu entfernen und die Hexankristallisation bei Raumtemperatur (240C) für die Dauer von 3 Stunden durchgeführt wurde. Die Ausbeute an Methyl-Chenodesoxycholat-Diacetat betrug 15,5 g: Schmelzpuntk 113-115°C;[α] D25 + 13,50 (c=1, CHCl3).
BEISPIEL 4 Ein Verfahren entsprechend Beispiel 1 wurde durchgeführt, außer daß Toluol anstelle von Benzol zum Trennung des Methylhyodesoxycholats als ein Addukt mit Toluol benutzt wurde. Das Methylchenodesoxycholat-Diacetat 17,1 g Schmelzpunkt 112-115°C; [α] D25 + 18,50 (c=1, CHCl3))ergab 10,7 g einer etwas unreinen Chenodesoxycholsäure: Schmelzpunkt 148-1650C; 25 + 90 (c=1, Dioxan);[α] D25 + 6w7° (c=2, Äthanol).
BEISPIEL 5 Frische Schweinegalle (330 ml) wurde wie im Beispiel 1 behandelt, außer daß Methylisobutylketon (200 ml) anstelle von Äthylacetat zur Extraktion der Gallensäuren nach der Verseifung der Galle benutzt wurde. Die Ausbeute an Methylchenodesoxycholat-Diacetat betrug 3,5 g; Schmelzpunkt 116-119°C; rs 25 + 13,20 (c=1, CHCl3).
BEI SPIEL 6 Methylchenodesoxycholat-Diacetat (15 g), das wie im Beispiel 2 erhalten wurde, wurde wie im Beispiel 2 verseift, außer daß Methylisobutylketon für die Extraktion anstelle von Äthylacetat verwendet wurde, und die Chenodesoxycholsäure wurde aus einem Gemisch aus Methylisobutylketon und Hexan kristallisiert. Die Chenodesoxycholsäure wog 9,2 g; Schmelzpunkt 141-1440C; Ci 23 + 13,10 (c=1, CHCl3); [α] D23 + 9,90 (c=1, Dioxan).
Verdickte Schweinegalle (30 g) wurde wie im Beispiel 2 behandelt, außer daß n-Hexanol anstelle von Äthylacetat für die Extraktion der Gallensäuren nach der Verseifung der Galle benutzt wurde. Die Gewinnung von Methylchenodesoxycholat-Diacetat betrug-2,2 g: Schmelzpunkt 1i2-114°C; [α] D25 + 16,5° (c=1, CHCl3).
BEISPIEL 8 Schweinegalle (500 ml) wurde wie im Beispiel 1 verseift. Das Hydrolysat wurde auf 10°C gekühlt, eine Filterhilfe (12g ) wurde zugesetzt, und das Gemisch wurde mit Schwefelsäure auf einen pH-Wert von 4,5 neutralisiert. Die ausgefällten rohen Gallensäuren wurden filtriert, Benzol (400 ml) zugesetzt und azeotrop durch Destillation des Benzols getrocknet. Nachdem das System trocken war, wurde das rückständige Benzol destilliert. Der Rückstand wurde verestert und wie im Beispiel 3 weiterbehandelt. Das rekristallisierte Methylchenodesoxycholat-Diacetat [ 8,5 g; Schmelzpunkt 110-111°C; [α]D25 + 14,20 (c=1, CHCl3)i wurde wie im Beispiel 1 in Chenodesoxycholsäure weiterverarbeitet 5,8 g; Schmelzpunkt 141-144°C:[α] 2D5 + 15,60 (c=1, CHCl3)).
BEISPIEL 9 Schweinegalle (500 ml) wurde wie im Beispiel 1 verseift. Toluol (500 ml) wurde dem teilweise gekühlten Hydrolysat (etwa 85 0C) zugesetzt, und das Gemisch wurde auf einen pH-Wert von 4,5 mit Schwefelsäure neutralisiert, wobei die Temperatur auf 80 bis 85 0C gehalten wurde. Beim Stehen trennte sich das Gemisch in drei Schichten. Die untere wässrige Schicht wurde weggegossen, Die oberen beiden Schichten (Öl und Toluol) wurden azeotrop durch Destillation des Toluols unter Verwendung eimsDean-Stark-Apparats getrocknet. Nach dem Trocknen wurde das Lösungsmittel destilliert, und der Rückstand wurde verestert und wie im Beispiel 3 weiterbehandelt. Das rekristallisierte Methylchenodesoxycholat-Diacetat[ 7,2 g; Schmelzpunkt 111-112°C;tX 25 + 13,80 (c=1, CHCl3)] wurde wie im Beispiel 1 in Chenodesoxycholsäure weiterverarbeitet [4,9 g; Schmelzpunkt 143-1460C; [α] D25 + 13,60 (c=1, CHCl3) BEISPIEL 10 Verdickte Schweinegalle (560 g) wurde in heißem Wasser (3,2 1) aufgelöst. Natriumhydroxid (400 g) wurde zugesetzt, und die Lösung wurde 22 Stunden lang im Rückfluß gehalten und dann auf 15 0C abgekühlt. Pilterhilfe (100 g, z.B. HyElo-Super-cel) wurde zugesetzt, und das Gemisch wurde auf einen pH-Wert von 2 mit Schwefelsäure versäuert, indem die Temperatur auf 10-150C gehalten wurde. Das Gemisch wurde filtriert. Der Pilterkuchen wurde mit Wasser gewaschen und in einem Vakuumofen bei 45-50°C getrocknet. Das rohe Gallensäurengemisch wog 510 g. Ein Teil fl28 g) des Feststoffs wurde mit warmem Aceton (400 ml) extrahiert. Die Lösung wurde mit Holzkohle behandelt und dann bei 5 0G über Nacht kühltgelagert. Die Kristalle wurden filtriert. Das Biltrat wurde bis zur Trockenheit verdampft, und der Rückstand wurde verestert, acetyliert und weiterbehandelt wie im Beispiel 1. Das Methylchenodesoxycholat-Diacetat F 15,4 g; Schmelzpunkt 1O9-11O0C; 2 D24 + 12,70 (c=1, CHCl3)] ergab 10,2 g Chenodesoxycholsäure: Schmelzpunkt 141-144°C;[α]D23 + 12,50 (c=1, CHCl3); [α] D23 + 9,70 (c=1, Dioxan).
BEISPIEL 11 Verdickte Schweinegalle (150 g, ca. 110 g Reststoffe enthaltend; äquivalent zu 1 Liter frischer Galle) wurde in heißem Wasser (1000 ml) aufgelöst. Natriumhydroxid (100 g) wurde zugesetzt, und das Gemisch wurde 20 Stunden lang im Rückfluß gehalten.
Die Lösung wurde auf etwa 25 0C gekühlt, kaltes Leitungswasser (1500 ml) wurde zugesetzt, und die Lösung wurde über Nacht im Kühlschrank gehalten. Filterhilfe (10 g) wurde zugesetzt, und der Brei wurde filtriert, um das ausgefällte rohe Natrium-3 -Hydroxy- 6-Ket 0 cholanat zu entfernen.
Das Filtrat wurde mit konzentriert er Schwefelsäure auf einen pH-Wert von 8 eingestellt. Natriumhydrosulphit (5 g) wurde zugesetzt, und die Lösung wurde 15 Minuten lang gerührt. Nach dem Zusetzen von Äthylacetat (400 ml) wurde der pH-Wert des Gemisches auf 5 mit verdünnter Schwefelsäure eingestellt. Das Gemisch wurde 30 Minuten lang gerührt,und dann ließ man es sich trennen. Die untere wässrige Schicht wurde abgezogen und weggegossen. Piltrol (Warenzeichen) (7 g) und Holzkohle (7 g) wurden der oberen organischen Phase zugesetzt. Das Gemisch wurde 30 Minuten lang gerührt, filtriert, und der Filterkuchen wurde mit Äthylacetat (50 ml) gewaschen. Das Filtrat und die Spülungen wurden bis zur Trockenheit verdampft.
Der Rückstand wurde in Methanol (300 ml) aufgelöst, konzentrierte Schwefelsäure (4,0 ml) wurde zugesetzt, und die Lösung wurde bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Nach der Neutralisierung (auf ca. pH-Wert 7) mit Natriumbicarbonat wurde das Gemisch filtriert und bis zur Trockenheit verdampft. Der Rückstand wurde in heißem Benzol (320 ml) aufgelöst. Die Lösung wurde auf etwa 225 ml konzentriert und über nacht im Kühlschrank gehalten.
Der Brei wurde filtriert, und der Filterkuchen (Methylhyodesoxycholat-Benzol-Addukt) wurde mit Benzol gewaschen.
Das Benzolfiltrat und die Spülungen wurden bis zur Trockenheit verdampft. Essigsäureanhydrid (75 ml) und wasserfreies Natriumacetat (7,5 g) wurden dem Rückstand zugesetzt, und das Gemisch wurde 5 Stunden lang im Rückfluß gehalten. Das überschüssige Essigsäureanhydrid wurde destilliert. Methanol (35 ml) wurde dem Rückstand zugesetzt, das Gemisch wurde 15 Minuten lang im Rückfluß gehalten, und dann wurde es bis zur Trockenheit verdampft, um rückständiges Essigsäureanhydrid zu entfernen.
Der Rückstand wurde in Hexan (200 ml) unter Rückfluß aufgelöst, und die Lösung wurde über Nacht bei 20 0C gerührt. Der Brei wurde filtriert, und der Filterkuchen (rohes Methylhyocholat-Triacetat) wurde mit Hexan gewaschen.
Das Filtrat wurde bis zur Trockenheit verdampft. Der Rückstand wurde in heißem Äthanol (46 ml) aufgelöst, und die Lösung wurde über Nacht im Kühlschrank gehalten. Der Brei wurde filtriert.
Der Filterkuchen wurde mit kaltem Äthanol (27 ml) gewaschen und unter Vakuum bei 60 0C getrocknet. Das rohe Methylohenodesoxycholat-Diacetat (21,5 g) wurde aus 3 Volumina Äthanol rekristallisiert, was ein Produkt von 18,5 g ergab: Schmelzpunkt 119-1210C (Erweichung bei 110°C);[α] D25 + 10,40 (c=1, Dioxan); [α] D25 + 13,80 (c=1, CHCl3).
Das Methylchenodesoxycholat-Diacetat (18,5 g) wurde einer Lösung aus Natriumhydroxid (18,5 g) in Wasser (185 ml) zugesetzt.
Nach einem Rückfluß von 14 Stunden wurde die Lösung auf einen pH-Wert von 4,5 mit Schwefelsäure neutralisiert und mit Äthylacetat extrahiert. Die wässrige Schicht wurde weggegossen. Der Äthylacetat-Extrakt wurde mit 6%igem wässrigem Natriumchlorid gewaschen, gefolgt von Wasser, und dann wurde er auf etwa 90 ml verdampft-. Die Lösung wurde gekühlt, und Hexan (90 ml) wurde zugesetzt. Nach einer Kühlhaltung über Nacht wurde der Brei filtriert. Der Filterkuchen wurde mit Hexan (20 ml) gewaschen und im Vakuum bei 600C getrocknet. Das Produkt, Chenodesoxycholsäure, wog 12,7 g: Schmelzpunkt 142-145°C;5°(z25 + 13,00 (c=1, CHCl3).

Claims

Patentansprüche 1. Verfahren zum Isolieren und Reinigen von Chenodesoxycholsaure aus Schweinegalle, g e k e n n z e i c h n e t d u r c h die folgenden Verfahrensschritte: 1. Behandlung der Schweinegalle unter verseifenden Bedingungen; 2. trennung der Gallenss.uren von den wasserlöslichen Bestandteilen der verseiften Galle; 3. Verestern der Gallensäuren zum Entstehenlassen eines Gemisches aus Gallensäureestern; 4, Isolierung des Hyodesoxycholsäureesters aus dem Gemisch aus Gallensäureestern; 5. Behandlung der übrigen Gallensäureester unter acetylierenden Bedingungen; 6. Isolierung des Hyocholsäureester-riacetats; 7. Isolierung des Chenodesoxycholsäureester-Diacetats; 8. Behandlung des Chenodesoxycholsäureester-Diacetats unter verseifenden Bedingungen; und 9. Isolierung der dadurch erhaltenen Chenodesoxycholsäure.
2. Verfahren nach Anspruch 1, d a d u r c h g e k e n n -z e i c h n e t , daß in Anschluß an die Behandlung der Galle unter verseifenden Bedingungen die 3-Eydroxy-6-Oxo-5d-Chelansäure als ein Salz derselben isoliert wird, ehe die Trennung der übrigen Gallensäuren aus der verseiften Galle erfolgt.
3. Verfahren um Isolieren und Reinigen von Chenodesoxycholsäure aus Schweinegalle, g e k e n n z e i c h n e t d u r c h die folgenden Verfahrensschritte: 1. Behandlung der Galle unter verseifenden Bedingungen durch Rückfließenlassen der Galle in Gegenwart einer wässrigen Lösung einer geeigneten Base; 2. Versäuern der verseiften Galle mit einer geeigneten Säure während der Extraktion der Gallensäuren daraus mit einem im wesentlichen mit Wasser unvermischbaren organischen Lösungsmittel mit geringer Löslichkeit in der verseiften und versäuerten Galle und Ausübung einer bevorzugten Lösungsmittelwirkung zu den darin befindlichen Gallensäuren hin, verglichen mit den übrigen Bestandteilen der Galle, Trennung der entstehenden wässrigen Phase und der Xösungsmittelphase und Trennung der Gallensäuren von derLösungs-mittelphase; 3. Reagierenlassen der Gallensäure mit einem geeigneten Alkohol in Gegenwart eines geeigneten Säurekatalysators; 4. Neutralisieren des Reaktionsgemisches, das in dieser Weise entstanden ist, mit einer geeigneten Base; 5. Isolieren der veresterten Gallensäuren, die in dieser Weise entstanden sind; 6, Auflösung der Gallensäureester in einem geeigneten Lösungsmittel, bestehend aus einer Verbindung aus der Gruppe aus Benzol und- Toluol; 7. Behandlung der in dieser Weise erhaltenen Lösung zum Ausfällen von Feststoff daraus, der einen hohen Gehalt eines Addukts von Hyodesoxycholsäureester enthält, mit einer Verbindung aus der aus Benzol und Toluol bestehenden Gruppe; 8. Trennung der in dieser Weise behandelten Lösung in einen im wesentlichen festen Teil und in einen im wesentlichen flüssigen Teil; 9. Trennung des Lösungsmittels aus dem im wesentlichen flüssigen Teil zum Erhalten eines im wesentlichen trockenen Gemisches der übrigen veresterten Gallensäuren; 10. Reagierenlassen der übrigen Gallensäureester mit Essigsäureanhydrid und einer Substanz aus der Gruppe aus Natriumacetat und- Pyridin; ii. Trennung von überschüssigem Essigsäureanhydrid aus dem.in dieser Weise erhaltenen Reaktionsgemisch, um einen im wesentlichen trockenen Rückstand zu erhalten; 12. Auflösung des Rückstands, der einen hohen Gehalt aus acetylierten Gallensäureestern hat, in einem geeigneten Lösungsmittel; 13. Behandlung der in dieser Weise erhaltenen Lösung zum Ausfällen eines Feststoffs daraus, der einen hohen Gehalt an acetyliertem Hyocholsäureester hat; 14. Trennung der in dieser Weise behandelten Lösung in einen im wesentlichen festen Teil und in einen im wesentlichen flüssigen Teil; 15. Trennung des Lösungsmittels aus dem im wesentlichen flüssigen Teil, um einen im wesentlichen trockenen Feststoff zu erhalten; 16. Auflösung des im wesentlichen trockenen Feststoffs, der einen hohen Gehalt der übrigen acetylierten Gallensäureester hat, in einem geeigneten Lösungsmittel; 17. Behandlung der in dieser Weise erhaltenen Lösung zum Aw fällen eines Feststoffs daraus, der einen hohen Gehalt an Chenodesoxycholsäureester-Diacetat hat; 18. Trennung der in dieser Weise behandelten Lösung in einen im wesentlichen festen Teil und in einen im wesentlichen flüssigen Teil; 19. Wiederauflösung des im wesentlichen festen Teils in einem geeigneten Lösungsmittel; 20, Behandlung der in dieser Weise erhaltenen Lösung zum Ausfällen eines Feststoffs daraus, der einen hohen Gehalt an Chenodesoxycholsäureester-Diacetat hat; 21. Trennung der in dieser Weise behandelten Lösung in einen im wesentlichen festen Teil und in einen im wesentlichen flüssigen Teil; 22. Behandlung des im wesentlichen festen Teils unter verseifenden Bedingungen in einem wässrigen Medium durch Rückfließenlassen mit einer geeigneten Base; 23. Versäuern des verseiften Materials mit einer geeigneten Säure während der Extraktion mit einem im wesentlichen mit Wasser unvermischbaren organischen Lösungsmittel, das eine bevorzugte Lösungsmittelwirkung zur Chenodesoxycholsäure hin ausübt, die im verseiften und versäuterten Material enthalten ist, verglichen mit den restlichen Bestandteilen des verseiften und versäuterten Materials, und Trennung der dabei entstehenden Lösungsmittelphase und wässrigen Phase; 24. Behandlung der Lösungsmittelphase, die die Chenodesoxycholsäure enthält, durch Konzentration und Kühlung, bis Feststoff, der einen hohen Gehalt an Chenodesoxycholsäure enthält, daraus ausgefällt wird; 25. Trennung der in dieser Weise behandelten Lösung in einen im wesentlichen flüssigen Teil und in einen im wesentlichen festen Teil; und 26. Behandlung des im wesentlichen festen Teils durch Trocknen.
4. Verfahren nach Anspruch 3, d a d u r c h g e k e n n -z e i c h n e t , daß in Anschluß an die Behandlung der Galle unter verseifenden Bedingungen und vor der Versäuerung und Extratkion der verseiften Galle: (a) die verseifte Galle so behandelt wird, daß daraus ein Feststoff ausgefällt wird, der einen hohen Gehalt eines Salzes von 3$-Xydroxy-6-Oxo- * Cholansäure hat; (b) die in dieser Weise behandelte Galle in einen im wesentlichen festen Teil und in einen im wesentlichen flüssigen Teil getrennt wird; und (c) der flüssige Teil den sich daran anschließenden Verfahrensschritten nach Anspruch 3 unterzogen wird.
5. Verfahren zum Isolieren und Reinigen von Chenodesoxycholsäure aus Schweinegalle, g e k e n n z e i c h n e t d u r c h die folgenden Verfahrensschritte: 1, Behandlung der Galle unter verseifenden Bedingungen durch Rückfließenlassen der Galle in Gegenwart einer wässrigen Lösung einer Verbindung aus der Gruppe, die aus Natriumhydroxid und Kaliumhydroxid besteht; 2. Versäuern der verseiften Galle mit einer Säure aus der Gruppe, die aus Schwefelsäure und Salzsäure besteht, bei Extraktion der Galle mit einem organischen Lösungsmittel aus der Gruppe, die aus Äthylacetat, Methylisobutylketon, n-Hexanol, Toluol und halogenierte Kohlenwasserstoffen besteht, Trennung der in dieser Weise entstandenen Lösungsmittelphase von der wässrigen Phase und Trennung der Gallensäuren von der Lösungsmittelphase; 3. Reagierenlassen der Gallensäuren mit einem niedrigeren aliphatischen Alkohol in Gegenwart eines Säurekatalysators aus der Gruppe die aus Schwefelsäure, Salzsäure und p-Tolen-Sulfosäure besteht; 42 Neutralisieren des in dieser Weise erhaltenen Reaktionsgemisches mit einer Base, die aus der Gruppe stammt, welche aus Natriumcarbonat, Natriumbicarbonat, Natriumhydroxid und Triäthylamin besteht; 5. Isolierung der in dieser Weise erhaltenen veresterten Gallensäuren; 6. Auflösung der Gallensäureester in einem Lösungsmittel aus einer Verbindung aus der aus Benzol und Toluol bestehenden Gruppe; 7. Behandlung der in dieser Weise erhaltenen Lösung zum Ausfällen eines Feststoffs daraus, der einen hohen Gehalt an einem Addukt von Hyodesoxycholsäureester hat, mit einer Verbindung aus der aus Benzol und Toluol bestehenden Gruppe; 8. Trennung der in dieser Weise behandelten Lösung in einen im wesentlichen festen Teil und in einen im wesentlichen flüssigen Teil; 9. Trennung des Lösungsmittels aus dem im wesentlichen flüssigen Teil zum Erhalten eines im wesentlichen trockenen Gemisches der übrigen veresterten Gallensäuren; 10. Reagierenlassen der übrigen Gallensäureester mit Essigsäureanhydrid und einer Verbindung aus der Gruppe, die aus Natr;Lum acetat und Pyridin besteht; 11. Verdsmfen des in dieser Weise erhaltenen Gemisches bis zur Trockenheit; 12. Auflösen des verbleibenden Peststoffs, der einen hohen Gehalt von acetylierten Gallensäureestern hat, in einem nicht polaren Lösungsmittel, bestehend aus n-Heptan, Hexan, n-Octan, Iso-Octan, n-Pentan, Cyclohexan, Cyclopentan oder Cyclopenten; 13. Behandlung der in dieser Weise erhaltenen Lösung zum Ausfällen eines Feststoffs daraus mit einem hohen Gehalt an acetyliertem Hyocholsäureester; 14. Trennung der in dieser Weise behandelten Lösung in einen im wesentlichen festen Teil und in einen im wesentlichen flüssigen Teil; 15. Trennung des Lösungsmittels aus dem im wesentlichen flüssigen Teil, derart, daß man einen im wesentlichen trockenen Peststoff erhält; 16. Auflösung des im wesentlichen trockenen Feststoffs, der einen hohen Gehalt der übrigen acetylierten Gallensäureester hat, in einem polaren Lösungsmittel, bestehend aus Methanol, Äthanol oder Propanol; 17. Behandlung der in dieser Weise erhaltenen Lösung zum Ausfällen eines Feststoffs daraus, der einen hohen Gehalt von Chenodesoxycholsäureester-Diacetat hat; 18. Trennung der in dieser Weise behandelten Lösung in einen im wesentlichen festen Teil und in einem im wesentlichen flüssigen Teil; 19. Wiederauflösen des im wesentlichen festen Teils in einem Lösungsmittel aus der Gruppe, die aus Methanol, Äthanol, Isopropanol und Hexan besteht; 20. Behandlung der in dieser Weise erhaltenen Lösung zum Ausfällen eines Feststoffs daraus, der einen hohen Gehalt an Chenodesoxycholsäureester-Diacetat hat; 21. Trennung der in dieser Weise behandelten Lösung in einen im wesentlichen festen Teil und in einen im wesentlichen flüssigen Teil; 22. Behandlung des im wesentlichen festen Teils unter verseifenden Bedingungen in einem wässrigen Medium durch Rückfließenlassen mit einer Base aus der Gruppe, die aus Natriumhydroxid oder Kaliumhydroxid besteht; 23. Versäuern des verseiften Materials mit einer Säure aus der Gruppe, die aus Schwefelsäure-und Salzsäure besteht, unter Extraktion des Materials mittels eines Lösungsmittels aus der Gruppe, die aus Äthylacetat, Methylisobutylketon, ithylendiohloridw und n-3utylacetat besteht, und Trennung der dabei entstandenen Lösungsmittelphase von der wässrigen Phase; 24. Behandlung der Lösungsmittelphase, die die Chenodesoxycholsäure enthält, durch Konzentration und Kühlung, bis Feststoff, der einen hohen Gehalt an Chenodesoxycholsäure enthält, daraus ausgefällt wird; 25. Trennung der in dieser Weise behandelten Lösungsmittelphase in einem im wesentlichen flüssigen Teil und in einem im wesentlichen festen Teil; und 26. Behandlung des im wesentlichen festen Teils durch Trocknen.
6. Verfahren nach Anspruch 5, d a d u r c h g e k e n n -z e i c h n e t , daß die Lösungsmittelphase, die die ausgefällte Chenodesoxycholsäure enthält, mit einer Verdünnung verdünnt wird, die aus der Gruppe stammt, die aus Hexan und Cyclohexan besteht, ehe eine Trennung der ausgefällten Chenodesoxycholsäure daraus erfolgt.
7. Verfahren zum Isolieren und Reinigen von Chenodesoxycholsäure aus Schweinegalle, g e k e n n z e i c h n e t d u r c h die folgenden Verfahrensschritte: 1. Behandlung der Galle unter verseifenden Bedingungen durch Rückfließenlassen der Gallein einer wässrigen Lösung aus Natriumhydroxid; 2. Versäuern der verseiften Galle mit Schwefelsäure bei Extraktion der Galle mit Äthylacetat, Trennung der entstandenen Lösungsmittelphase von der wässrigen Phase und Trennung der Gallensäuren von der Lösungsmittelphase; 3. Reagierenlassen der Gallensäuren mit Methanol in Gegenwart von Schwefelsäure; 4. Neutralisieren des in dieser Weise erhaltenen Reaktion gemisches mit Natriumbicarbonat; 5. Isolieren der Gallensäure-Methylester, die in dieser Weise erhalten sind; 6. Auflösen der Gallensäure-Methylester in Benzol; 7. Behandlung der in dieser Weise erhaltenen Lösung zum Ausfällen von Feststoff daraus, der einen hohen Gehalt des Benzoladdukts von Methylhypdesoxycholat hat;
8. Trennung der in dieser Weise behandelten Lösung in einen im wesentlichen festen Teil und einen im wesentlichen flüssigen Teil;
9. Trennung des Lösungsmittels aus dem im wesentlichen flüssigen Teil, derart, daß ein im wesentlichen trockenes Gemisch der verbleibenden Gallensäure-Methylester erhalten wird;
10. Reagierenlassen der verbleibenden Gallensäure-Methylester mit Natriumacetat und Bssigsäurennzydrid;
11. Verdampfen des in dieser Weise erhaltenen Produkts bis zur Trockenheit;
12. Auflösen des verbleibenden Peststoffs, der einen hohen Gehalt an acetylierten Gallensäure-Methylestern hat, in Hexan;
13. Behandlung der in dieser Weise erhaltenen Lösung zum Ausfällen eines Feststoffs daraus, der einen hohen Gehalt an Methylhyodolat-Triacetat hat;
14. Trennung der in dieser Weise behandelten Lösung in einen im/festen Teil und in einen im wesentlichen /wesentlichen flüssigen Teil;
15. Trennung des Lösungsmittels aus dem im wesentlichen flüssigen Teil, derart, daß ein im wesentlichen trockener Feststoff erhalten wird;
16. Auflösung des im wesentlichen trockenen Feststoffs, der einen hohen Gehalt der verbleibenden acetylierten Gallensäure -Methylester hat, in Äthanol;
17. Behandlung der in dieser Weise erhaltenen Lösung zum Ausfällen eines Feststoffs daraus, der einen hohen Gehalt an Methylchenodesoxycholat-Diacetat hat;
18. Trennung der in dieser Weise behandelten Lösung in einen im wesentlichen festen Teil und in einen im wesentlichen flüssigen Teil;
19. Wiederauflösen des im wesentlichen festen Teils in Äthanol;
20. Behandlung der in dieser Weise erhaltenen Lösnng zum Ausfällen eines Feststoffs daraus, der einen hohen Gehalt an Methyl-Cehnodesoxycholat-Diacetat hat;
21. Trennung der in dieser Weise behandelten Lösung in einen im wesentlichen festen Teil und in einen im wesentlichen flüssigen Teil;
22. Behandlung des im wesentlichen festen Teils unter verseifenden Bedingungen durch Rückfließenlassen in einer wässrigen Lösung aus Natriumhydroxid;
23. Versäuern des verseiften Materials mit Schwefelsäure unter Extraktion mit Äthylacetat und Trennung der entstehenden organischen Phase von der wässrigen Phase;
24. Behandlung der Lösungsmittelphase, die die Chenodesoxycholsäure enthält, durch Konzentration und Kühlung, bis Feststoff, der einen hohen Gehalt an Ghenodes oxycholsäure enthält, daraus ausgefällt wird;
25. Verdünnung der in dieser Weise behandelten Lösung mit einer Verdünnung aus der Gruppe, die aus Hexan und Cyclohexan besteht;
26. Trennung der in dieser Weise behandelten Lösung in einen im wesentlichen flüssigen Teil und in einen im wesentlichen festen Teil; und 27, Behandlung des im wesentlichen festen Teils durch Trocknen.