DE2828302A1

DE2828302A1 - Chenodeoxycholic acid recovery from porcine bile - useful for dissolving gall stones in vivo

Info

Publication number: DE2828302A1
Application number: DE19782828302
Authority: DE
Inventors: Michael Charles Attwell; Thomas Frederick Massiah; Roberta Andres Vergottini; Peter Ziegler
Original assignee: Canada Packers Inc
Current assignee: Maple Leaf Foods Inc
Priority date: 1978-06-28
Filing date: 1978-06-28
Publication date: 1980-02-28

Abstract

Chenodeoxycholic acid(I) is isolated from porcine bile by first saponifying to give a mixture of bile acids, separating these bile acids from the residues, esterifying these acids, and forming a complex of the chenodeoxycholate ester constituent of these mixed bile acid esters with benzene or toluene. The remaining bile acid esters are acetylated, the hyocholic acid ester triacetate and chenodeoxycholic acid ester diacetate are isolated the chenodeoxycholic acid ester diacetate saponified and the chenodeoxycholic acid isolated and purified. (I) is used to dissolve gall stones in vivo.

Description

Verfahren zum Isolieren und Reinigen von ChenodesoxycholsäureMethod of isolating and purifying chenodeoxycholic acid

aus Schweinegalle Die Erfindung betrifft ein Verfahren zum Isolieren und Reinigen von Chenodesoxycholsäure aus Schweinegalle. from pig bile The invention relates to a method of isolation and purifying chenodeoxycholic acid from pig bile.

Chenodesoxycholsäure oder 3S,7i-Dihydroxy-5ffi-Cholansäure ist eine der Gallensäuren, die man in der Galle von Ochsen, Schweinen, Meerschweinchen, Bären, Hühnern, Gänsen und anderem Geflügel sowie beim Menschen findet. Die Isolierung von Chenodesoxycholsäure aus Gänsegalle ist zum ersten Mal von Windhaus und anderen, Z. Physiol. Chem. 140, 177-185 (1924) erwähnt worden. Obgleich Verfahren zur Isolierung on Ghenodesoxycholsäure bekannt sind, handelt es sich bei diesen Verfahren um Laborverfahren von nur akademischem Interesse, die für den gewerblichen Einsatz im großen Maßstab unbrauchbar sind, insbesondere auch deshalb, weil die angegebenen Ausbeuten gering sind. Als Folge davon wird Chenodesoxycholsäure üblicherweise durch die Synthese aus Cholsäure erzeugt, die wiederum aus Rindergalle isoliert werden kann. (Siehe beispielsweise Fieser & Rajagopalan, J. Am. Chem. Soc. 72, 5530 (1950)).Chenodeoxycholic acid or 3S, 7i-dihydroxy-5ffi-cholanic acid is one the bile acids found in the bile of oxen, pigs, guinea pigs, bears, Found in chickens, geese and other poultry, as well as in humans. The isolation of chenodeoxycholic acid from goose whales is for the first time by Windhaus and others, Z. Physiol. Chem. 140, 177-185 (1924). Although method of isolation on ghenodeoxycholic acid are known, these procedures are laboratory procedures Of academic interest only, intended for large-scale commercial use are unusable, in particular, too because of the specified Yields are low. As a result, chenodeoxycholic acid is commonly used synthesized from cholic acid, which in turn is isolated from bovine bile can. (See, for example, Fieser & Rajagopalan, J. Am. Chem. Soc. 72, 5530 (1950)).

Bis vor kurzem ist Chenodesoxycholsäure lediglich eine Laborkuriosität gewesen, Anfang der 1970er Jahre ist festgestellt worden, daß die Säure die überraschende Fähigkeit hat, Gallensteine im lebenden Organismus aufzulösen. Siehe beispielsweise: DISSOLUDION OF CHOLESTEROL GALLSTONES BY CHENODEOXYCHOLIC ACID, DANZINGER R. G. und andere, New England Journal of Medicine 286, 1 (1972). Es wurde dann wichtig, zuverlässige Verfahren für die Erzeugung von Chenodesoxycholsäure im großen Maßstab zu entwickeln, die ein Produkt in ausreichender Reinheit zur Verwendung als Arznei entstehen lassen.Until recently, chenodeoxycholic acid was just a laboratory curiosity In the early 1970s it has been found that the acid is the most surprising Has the ability to dissolve gallstones in the living organism. See for example: DISSOLUDION OF CHOLESTEROL GALLSTONES BY CHENODEOXYCHOLIC ACID, DANZINGER R. G. and others, New England Journal of Medicine 286, 1 (1972). It then became important reliable processes for large-scale production of chenodeoxycholic acid to develop a product in sufficient purity for use as a medicament let arise.

Die weitgehend verwendete Quelle für die Isolierung von Ghenodesoxycholsäure ist nach den bisherigen Veröffentlichungen Gänsegalle. Gänsegalle ist jedoch nicht in ausreichenden Mengen vorhanden, um eine wirtschaftliche kommerzielle Erzeugung von -Chenodesoxycholsäure zu ermöglichen, und selbst wenn sie das wäre, würden die geringen Mengen an Galle, die man aus jeder Gänsegallenblase erhält, das Sammeln von ausreichenden Mengen der Galle inprahikabel machen.The widely used source for the isolation of ghenodeoxycholic acid is, according to previous publications, Gänsegalle. However, goose bail is not available in sufficient quantities to enable economic commercial production of phenodeoxycholic acid, and even if it were, they would collecting small amounts of bile obtained from each goose gall bladder Invisible of sufficient amounts of bile.

Eine bisher wenig benutzte Quelle für Chenodesoxycholsäure ist Schweinegalle, die sich nun als Quelle für Chenodesoxycholsäure erwiesen hat, die sich zur Verwendung für die kommerzielle Massenerzeugung dieser Gallensäure eignet, weil sie ohne weiteres und leicht zur Verfügung gestellt werden kann und sonst wenige andere Nutzungsmöglichkeiten hat.A previously little used source of chenodeoxycholic acid is pig bile, which has now been shown to be the source of chenodeoxycholic acid that has become suitable for use suitable for the commercial mass production of this bile acid because it is readily available and can be easily made available and few other uses Has.

Schweinegalle ist ein viel komplexeres Gemisch als die Galle anderer Tiere und enthält erhebliche Mengen von vier Gallensäuren, während Rinder, Geflügel und der Mensch in der Galle nennenswerte Mengen von nur zwei Gallensäuren enthalten. Die vier Gallensäuren, die sich in der Schweinegalle finden, sind Chenodesoxycholsäure, Hyodesoxychol-(3α,6α-Dihydroxy-5ß-Cholan-) säure, Hyochol- ( , 6 7Trihydroxy-5Cholan-) )Säure und 3α-Hydroxy-6-Oxo-Rt-Gholansäure.Pig bile is a much more complex mixture than the bile of others Animals and contains significant amounts of four bile acids, while cattle, poultry and humans contain significant amounts of only two bile acids in the bile. The four bile acids found in pig bile are chenodeoxycholic acid, Hyodeoxycholic (3α, 6α-dihydroxy-5β-cholanoic) acid, hyocholic (, 6 7trihydroxy-5cholanoic) ) Acid and 3α-hydroxy-6-oxo-Rt-gholanic acid.

Wegen des komplexen Aufbaus der Schweinegalle ist die Isolierung der einzelnen Gallensäuren viel schwieriger als die Isolierung einer Komponente z.B. der Rindergalle, besonders dann, wenn die Komponenten mit hohem Wirkungsgrad und mit dem hohen Maß an Reinheit isoliert werden müssen, die erforderlich ist, um die Verwendung als Arznei zu ermöglichen.Because of the complex nature of pig bile, isolation is difficult single bile acids much more difficult than isolating a component e.g. of beef bile, especially if the components are highly efficient and must be isolated with the high level of purity that is required to obtain the To enable use as a medicine.

Der Erfindung liegt deshalb die Aufgabe zugrunde, ein verbessertes Verfahren zum Isolieren und Reinigen von Chenodesoxycholsäure aus Schweinegalle zu schaffen.The invention is therefore based on the object of an improved Method for isolating and purifying chenodeoxycholic acid from pig bile to accomplish.

Es ist festgestellt worden, daß Chenodesoxycholsäure aus der Schweinegalle unter Verwendung des für den gewerblichen Gebrauch einrichtbaren Verfahrens isoliert werden kann, das nachstehend beschrieben wird. Die Chenodesoxycholsäure, die nach dem erfindungsgemäßen Verfahren isoliert wird, hat eine überragend hohe Reinheit und ist ohne weiteres als ein medizinisches Mittel für die Behandlung von Gallensteinen akzeptabel.It has been found that chenodeoxycholic acid is derived from pig bile isolated using the process that can be established for commercial use which will be described below. The chenodeoxycholic acid, which after the process according to the invention is isolated, has an outstandingly high purity and is readily available as a medicinal agent for the treatment of gallstones acceptable.

Erfindungsgemäß ist ein Verfahren zum Isolieren und Reinigen von Chenodesoxycholsäure aus Schweinegalle vorgesehen, das durch folgende Verfahrensschritte gekennzeichnet ist: 1. Behandlung der Schweinegalle unter verseifenden Bedingungen; 2. Trennung der Gallensäuren von den wasserlöslichen Bestandteilen der verseiften Galle; 3. Verestern der Gallensäuren zum Entstehenlassen eines Gemisches aus Gallensäureestern; 4. Isolierung des Hyodesoxycholsäureesters aus dem Gemisch aus Gallensäureestern; 5. Behandlung der übrigen Gallensäureester unter acetylierenden Bedingungen; 6. Isolierung des Hyocholsäureester-Triacetats; 7. Isolierung des Chenodesoxycholsäureester-Diacetats ;-8. Behandlung des Chenodesoxycholsäureester-Diacetats unter verseifenden Bedingungen und y . Isolierung der dadurch erhaltenen Chenodesoxycholsäure.According to the invention is a method for isolating and purifying chenodeoxycholic acid made from pig bile, characterized by the following process steps is: 1. Treatment of pig bile under saponifying conditions; 2. Separation of the bile acids from the water-soluble components of the saponified bile; 3. Esterifying the bile acids to form a mixture of bile acid esters; 4. Isolation of the hyodeoxycholic acid ester from the mixture of bile acid esters; 5. Treatment of the remaining bile acid esters under acetylating conditions; 6th Isolation of the hyocholic acid ester triacetate; 7. Isolation of the chenodeoxycholic acid ester diacetate ;-8th. Treatment of the chenodeoxycholic acid ester diacetate under saponifying conditions and y. Isolation of the chenodeoxycholic acid thus obtained.

Nach einem bevorzugten Ausführungsbeispiel der Erfindung ist ein Verfahren zum Isolieren und zum Reinigen von Chenodesoxycholsäure aus Schweinegalle vorgesehen, das durch die folgenden Verfahrensschritte gekennzeichnet ist; 1. Behandlung der Galle unter verseifenden Bedingungen durch Rückfließenlassen der Galle in Gegenwart einer wässrigen Lösung einer geeigneten Base; 2. Versäuern der verseiften Galle mit einer geeigneten Säure während der Extraktion der Gallensäuren daraus mit einem im wesentlichen mit Wasser unvermischbaren organischen Lösungsmittel mit geringer Löslichkeit in der verseiften und versäuerten Galle und Ausübung einer bevorzugten Lösungsmittelwirkung zu den darin befindlichen Gallensäuren hin, verglichen mit den übrigen Bestandteilen der Galle, Trennung der entstehenden wässrigen Phase und der Lösungsmittelphase und Trennung der Gallensäuren von der Lösungsmittelphase; 3. Reagierenlassen der Gallensäuren mit einem geeigneten Alkohol in Gegenwart eines geeigneten Säurekatalysators; 4.- Neutralisieren des Reaktionsgemisches, das in dieser Weise entstanden ist, mit einer geeigneten Base; 5. Isolieren der veresterten Gallensäuren, die in dieser Weise se entstanden sind; 6. Auflösung der Gallensäureester in einem geeigneten Lösungsmittel, bestehend aus einer Verbindung aus der Gruppe aus Benzol und Toluol; 7. Behandlung der in dieser Weise erhaltenen Lösung zum Ausfällen von Peststoff daraus, der einen hohen Gehalt eines Addukts von Hyodesoxycholsäureester enthält, mit einer Verbindung aus der aus Benzol und Toluol bestehenden Gruppe; 8. Trennung der in dieser Weise behandelten Lösung in einen im wesentlichen festen Teil und in einen im wesentlichen flüssigen Teil; 9. Trennung des Lösungsmittels aus dem im wesentlichen flüssigen Teil zum Erhalten eines im wesentlichen trockenen Gemisches der übrigen veresterten Gallensäuren; 10. Reagierenlassen der übrigen Gallensäureester mit Essigsäureanhydrid und einer Substanz aus der Gruppe aus Natriumacetat und Pyridin; 11. Trennung von überschüssigem Essigsäureanhydrid aus dem in dieser Weise erhaltenen Reaktionsgemisch, um einen im wesentlichen trockenen Rückstand zu erhalten; 12. Auflösung des Rückstands, der einen hohen Gehalt aus acetylierten Gallensäureestern hat, in einem geeigneten Lösungsmittel; 13. Behandlung der in dieser Weise erhaltenen Lösung zum Ausfällen eines Feststoffs daraus, der einen hohen Gehalt an acetyliertem Hyocholsäureester hat; 14. Trennung der in dieser Weise behandelten Lösung in einen im wesentlichen festen Teil und in einen im wesentlichen flüssigen Teil; 15. Trennung des Lösungsmittels aus dem im wesentlichen flüssigen Teil, um einen im wesentlichen trockenen Feststoff zu erhalten; 16. Auflösung des im wesentlichen trockenen Peststoffs, der einen hohen Gehalt der übrigen acetylierten Gallensäureester hat, in einem geeigneten Lösungsmittel; 17. Behandlung der in dieser Weise erhaltenen Lösung zum Ausfällen eines Feststoffs daraus, der einen hohen Gehalt an Chenodesoxycholsäureester-Diacetat hat; 18. Trennung der in dieser Weise behandelten Lösung in einen im wesentlichen festen Teil und in einen im wesentlichen flüssigen Teil; 19. Wiederauflösen des im wesentlichen festen Teils in einem geeigneten Lösungsmittel; 20. Behandlung der in dieser Weise erhaltenen Lösung zum Ausfällen eines Feststoffs daraus, der einen hohen Gehalt an Chenodesoxycholsäureester-Diacetat hat; 21. Trennung der in dieser Weise behandelten Lösung in einen im wesentlichen festen Teil und in einen im wesentlichen flüssigen Teil; 22. Behandlung des im wesentlichen festen Teils unter verseifenden Bedingungen in einem wässrigen Medium durch Rückfließenlassen mit einer geeigneten Base; 23. Versäuern des verseiften Materials mit einer geeigneten Säure während der Extraktion mit einem im wesentlichen mit Wasser unvermischbaren organischen Lösungsmittel, das eine bevorzugte Lösungsmittelwirkung zur Chenodesoxycholsäure hin ausübt, die im verseiften und versäuerten Material enthalten ist, verglichen mit den restlichen Bestandteilen des verseiften und versäuerten Materials, und Trennung der dabei entstehenden Lösungsmittelphase und wässrigen Phase; 24. Behandlung der Lösungsmittelphase, die die Chenodesoxycholsäure enthält, durch Konzentration und Kühlung, bis Feststoff, der einen hohen Gehalt an Chenodesoxycholsäure enthält, daraus ausgefällt wird; 25. Trennung der in dieser Weise behandelten Lösung in einen im wesentlichen flüssigen Teil und in einen im wesentlichen festen Teil; und 26. Behandlung des im wesentlichen festen Teils durch Trocknen.According to a preferred embodiment of the invention is a method intended to isolate and purify chenodeoxycholic acid from pig bile, which is characterized by the following process steps; 1. Treatment of the Bile under saponifying conditions by refluxing the bile in the presence an aqueous solution of a suitable base; 2. Acidification of the saponified bile with a suitable acid during the extraction of the bile acids therefrom with a substantially water-immiscible organic solvents with less Solubility in the saponified and acidified bile and exercising a preferred Solvent action towards the bile acids contained therein, compared to the remaining components of the bile, separation of the resulting aqueous phase and the solvent phase and separation of the bile acids from the solvent phase; 3. Reacting the bile acids with an appropriate alcohol in the presence of an suitable acid catalyst; 4.- Neutralizing the reaction mixture in this way, with a suitable base; 5. Isolate the esterified Bile acids produced in this way; 6. Dissolution of the bile acid esters in a suitable solvent consisting of a compound selected from the group from benzene and toluene; 7. Treatment of the obtained in this way Solution for the precipitation of pesticides from it, which has a high content of an adduct of hyodeoxycholic acid ester, with a compound of that of benzene and Toluene existing group; 8. Separation of the solution treated in this way in a substantially solid part and a substantially liquid part; 9. Separation of the solvent from the essentially liquid part to obtain a substantially dry mixture of the remaining esterified bile acids; 10. React the remaining bile acid esters with acetic anhydride and one Substance from the group consisting of sodium acetate and pyridine; 11. Separation of excess Acetic anhydride from the reaction mixture obtained in this way to a to obtain an essentially dry residue; 12. Resolution of the arrears that has a high content of acetylated bile acid esters, in a suitable solvent; 13. Treatment of the solution thus obtained to precipitate a solid from it, which has a high content of acetylated hyocholic acid ester; 14. Separation the solution treated in this way into an essentially solid part and into a substantially liquid part; 15. Separation of the solvent from the essentially liquid Part to an essentially dry one To obtain solid; 16. Dissolution of the essentially dry pesticide that has a high content of the remaining acetylated bile acid esters, in a suitable one Solvent; 17. Treatment of the solution obtained in this way for precipitation a solid thereof which has a high content of chenodeoxycholic acid ester diacetate Has; 18. Separation of the thus treated solution into a substantial one solid part and into a substantially liquid part; 19. Resolving the substantially solid part in a suitable solvent; 20. Treatment of the solution obtained in this way to precipitate a solid therefrom, the one has a high content of chenodeoxycholic acid ester diacetate; 21. Separation of in this Way treated solution into a substantially solid part and a substantially liquid part; 22. Treatment of the essentially solid part under saponification Conditions in an aqueous medium by refluxing with a suitable Base; 23. Acidification of the saponified material with a suitable acid during extraction with an organic which is essentially immiscible with water Solvent that has a preferred solvent action to chenodeoxycholic acid there exercises contained in the saponified and acidified material compared to the remaining components of the saponified and acidified material, and separation the resulting solvent phase and aqueous phase; 24. Treatment of the Solvent phase containing the chenodeoxycholic acid by concentration and Cooling until solid, which contains a high content of chenodeoxycholic acid, is precipitated from it; 25. Separation of the solution treated in this way into one substantially liquid part and into a substantially solid part; and 26. Treatment of the substantially solid part by drying.

Die Schweinegalle, die in diesem Verfahren zu verwenden ist, kann frisch oder verdickt sein, und sie kann ganz oder entfettet sein. Die Galle kann vor oder nach der Verseifung der Galle entfettet sein oder werden.The pig bile to be used in this procedure can fresh or thickened, and it can be whole or defatted. The bile can be or become defatted before or after saponification of the bile.

Die Verseifung von Galle ist in der CAN-PS 533.769 beschrieben.The saponification of bile is described in CAN-PS 533.769.

Wenn frische Galle verwendet wird, ist keine Vorbehandlung dieser Galle erforderlich. Wenn verdickte Galle verwendet wird, kann sie verdünnt werden, so daß deren Gesamtfeststoffgehalt sich demjenigen frischer Galle annähert (10-14), Die Galle wird verseift, indem ein Rückfluß derselben mit 5% bis 20% einer geeigneten Base erfolgt, beispielsweise Kaliumhydroxid oder Natriumhydroxid, und zwar zwischen 16 und 24 Stunden lang, obgleich die Rückflußzeit variieren kann, je nach dem Druck, mit dem gearbeitet wird, und je nach der Konzentration der Base. Normalerweise wird die Verseifung bei oder etwas über atmosphärischem Druck vorgenommen. Das verseifte Gemisch wird dann auf einen pH-Wert von etwa 8 mit einer geeigneten Mineralsäure wie Salzsäure oder Schwefelsäure gebracht, die gewöhnlich in konzentrierter Form zugesetzt wird, um den Wassergehalt so wenig wie möglich zu erhöhen.If fresh bile is used, there is no pretreatment of this Bile required. If thickened bile is used, it can be diluted, so that their total solids content approaches that of fresh bile (10-14), The bile is saponified by refluxing it at 5% to 20% one suitable base takes place, for example potassium hydroxide or sodium hydroxide, and between 16 and 24 hours, although the reflux time can vary, depending on the pressure used and on the concentration of the base. Usually saponification is carried out at or slightly above atmospheric pressure. The saponified mixture is then adjusted to a pH of about 8 with an appropriate pH Mineral acid such as hydrochloric acid or sulfuric acid, usually brought in concentrated Form is added in order to increase the water content as little as possible.

Falls erwünscht, kann die 3i-Hydroxy-6-Oxo-5-Cholansäure als ihr Salz vor der Extraktion der übrigen Gallensäuren aus der verseiften Galle isoliert werden. Diese Isolierung erfolgt durch Kristallisation des Rohsalzes aus der verseiften Galle nach einer Verdünnung der Galle auf etwa das 2- bis 3-fache ihres ursprünglichen Volumens mit kaltem Wasser und Halten einer Temperatur von 5 - 200C für einen Zeitraum von 16 - 24 Stunden. Das Ausscheiden der i&-Hydroxy-6-Oxo-56~Cholansäure an dieser Stelle kann die Ausbeute von Chenodesoxycholsäure im Verfahren verbessern, ohne den Rest des Verfahrens wesentlich zu beeinträchtigen.If desired, the 3i-hydroxy-6-oxo-5-cholanic acid can be used as its salt must be isolated from the saponified bile prior to the extraction of the remaining bile acids. This isolation takes place by crystallization of the crude salt from the saponified Bile after diluting the bile to about 2 to 3 times its original Volume with cold water and maintain a temperature of 5 - 200C for a period of time from 16 - 24 hours. The excretion of the i & -hydroxy-6-oxo-56 ~ cholanic acid this point can improve the yield of chenodeoxycholic acid in the process, without significantly affecting the rest of the process.

Allgemein wird die Trennung der Gallensäuren aus der neutralisierten verseiften Galle durch Lösungsmittelextraktion bevorzugt. Wenn so vorgegangen wird, werden ein Bleichmittel wie Natriumhydrosulfit und ein organisches Lösungsmittel, das eine geringe Löslichkeit in Wasser in der versäuerten Galle haben muß und in der die Gallensäuren eine hohe Löslichkeit haben, bei Halten der verseiften Galle auf einer erhöhten Temperatur zugesetzt. Nachdem das Lösungsmittel und das Bleichmittel zugesetzt worden sind, wird die verseifte Galle auf einen pH-Wert von ca. 5 durch Zusetzen einer geeigneten Mineralsäure versäuert.Generally, the separation of the bile acids from the neutralized saponified bile by solvent extraction is preferred. If this is done become a bleach like Sodium hydrosulfite and an organic one Solvent that have a low solubility in water in the acidified bile must and in which the bile acids have a high solubility, while keeping the saponified Bile added at an elevated temperature. After the solvent and the Bleach has been added to the saponified bile to a pH of about 5 acidified by adding a suitable mineral acid.

Geeignete organische Lösungsmittel sind Äthylacetat, Methglisobutylketon, n-Hexanol, Toluol und halogenisierte Kohlenwasserstoffe wie Äthylendichlorid. Ein bevorzugtes Lösungsmittel ist äthylacetat, und mit diesem bevorzugten Lösungsmittel ist ein Temperaturbereich von 50 bis 550 optimal, Das Zusetzen der Mineralsäure und des Lösungsmittels bewirkt, daß das Gemisch aus verseifte und versäuerter Galle und Lösungsmittel sich in eine wässrige Phase und in eine organische Phase trennt. Das Zusetzen einer kleinen Menge Bleichmittel hellt die wässrige Phase auf und unterstützt die anschließende visuelle Trennung von Wässrigen Schichten und Lösungsmittelschichten, weil es keinen nennenswerten Entfärbungseffekt auf die Lösungsmittellösung der Gallensäuren hat. Ca. 0,5% des Bleichmittels wie Natriumhydrosulfit, bezogen auf das Gewicht der Ausgangsgalle, hat sich für diesen Zweck als angemessen erwiesen.Suitable organic solvents are ethyl acetate, methglisobutyl ketone, n-hexanol, toluene and halogenated hydrocarbons such as ethylene dichloride. A the preferred solvent is ethyl acetate, and with this preferred solvent a temperature range of 50 to 550 is optimal, adding the mineral acid and the solvent causes the mixture of saponified and acidified bile and solvent separates into an aqueous phase and an organic phase. Adding a small amount of bleach brightens and supports the aqueous phase the subsequent visual separation of aqueous layers and solvent layers, because there is no significant discoloration effect on the solvent solution of the bile acids Has. About 0.5% of the bleach, such as sodium hydrosulfite, by weight the parent bile, has been found appropriate for this purpose.

Die wässrige Schicht und die organische Schicht werden getrennt, und wässrige Schichten und Grenzschichten, die die in Wasser löslichen organischen Verunreinigungen enthalten, ferner die anorganischen Verbindungen und die unlöslichen Substanzen, werden abgesondert. Die organische Phase kann dann mit einem Entfärber wie Bleicherde und Holzkohle behandelt werden, gefolgt von einer Filtrierung der organischen Phase und einem Waschen der filtrierten Feststoffe mit einer frischen Menge Lösungsmittel.The aqueous layer and the organic layer are separated, and aqueous layers and boundary layers containing the water-soluble organic impurities contain, furthermore the inorganic compounds and the insoluble substances, are segregated. The organic phase can then be treated with a decolorizer such as fuller's earth and charcoal, followed by filtration of the organic phase and washing the filtered solids with a fresh amount of solvent.

Das Filtrat und die Spülung werden dann kombiniert und bis zur Trockenheit verdampft; ein Rückstand entsteht, der einen hohen Gehalt an Gallensäuren enthält.The filtrate and rinse are then combined and dried until dry evaporates; a residue is created that contains a high content of bile acids.

Als Alternative zum Lösungsmittelextraktionsverfahren kann die verseifte und versäuerte Galle mit einer geeigneten Mineralsäure behandelt werden, bis ein Feststoff ausgefällt wird, der einen hohen Gehalt an Gallensäuren enthält. Dieser Feststoff wird durch Filtrierung aus der Lösung ausgesehieden und dann weiter durch azeotropes Trocknen oder Ofentrocknen behandelt.As an alternative to the solvent extraction process, the saponified and acidified bile can be treated with a suitable mineral acid until a Solid is precipitated which contains a high content of bile acids. This Solid is separated from the solution by filtration and then passed through treated azeotropic drying or oven drying.

Die Lösungsmittelextraktion wird jedoch bevorzugt, weil die gefällten Gallensäuren oft klebrig und sehr schwer zufriedenstellend durch Filtrierung abzutrennen sind.However, solvent extraction is preferred because the precipitated Bile acids often sticky and very difficult to separate satisfactorily by filtration are.

In Anschluß an die Trennung der Gallensäuren ist der nächste Schritt im Verfahren die Veresterung dieser Säuren. Die Veresterung wird mit einem geeigneten Alkohol unter Verwendung eines geeigneten sauren Katalystators erreicht. Vorzugsweise werden die niedrigeren aliphatischen Alkohole für die Veresterung verwendet, vorzugsweise dabei Methanol. Als sauerer Katalysator wird vorzugsweise Schwefelsäure oder Salzsäure verwendet, jedoch kann auch p-Toluol-Sulfosäure verwendet werden.Following the separation of the bile acids is the next step in the process the esterification of these acids. The esterification will with a suitable alcohol using a suitable acidic catalyst achieved. Preferably the lower aliphatic alcohols are used for the esterification used, preferably methanol. The acidic catalyst is preferred Sulfuric acid or hydrochloric acid is used, but p-toluene sulfonic acid can also be used will.

Die Veresterung wird durch Auflösen des aus dem Verseifungsschritt erhaltenen Rückstands im Alkohol und Zusetzen der erforderliohen Menge des sauren Katalysators vorgenommen. Die in dieser Weise erhaltene Lösung wird etwa bei Raumtemperatur mehrere Stunden lang gerührt. Das Reaktionsgemisch wird dann auf einen pH-Wert von etwa 7 neutralisiert, indem eine geeignete Base verwendet wird. Zu den Basen, die verwendet werden können, gehören Natriumbicarbonat, Natriumcarbonat, Natriumhydroxid und geeignete organische Basen wie griäthyleamin.The esterification is done by dissolving the from the saponification step obtained residue in the alcohol and adding the required amount of the acidic Catalyst made. The solution obtained in this way is about room temperature stirred for several hours. The reaction mixture is then to a pH of about 7 neutralized using an appropriate base. To the bases that Can be used include sodium bicarbonate, sodium carbonate, sodium hydroxide and suitable organic bases such as griäthyleamin.

Die Lösung kann dann filtriert werden, um eventuelle anorganische Salze zu entfernen, die vorhanden sind und die durch die Neutralisierung ausgefällt worden sein können. Das Filtrat wird dann bis zur Trockenheit verdampft, um die veresterten Gallensäuren vom übrigen Alkohol zu trennen. Man. erhält einen trockenen Rückstand.The solution can then be filtered to remove any inorganic Remove salts that are present and that precipitated through neutralization may have been. The filtrate is then evaporated to dryness to remove the to separate esterified bile acids from the rest of the alcohol. Man. gets a dry Residue.

Der-Hyodesoxycholsäureester wird dann von den anderen Gallensäureestern wie folgt isoliert, Der nach dem Veresterungsschritt verbleibende Rückstand wird in einem geeigneten Lösungmittel aufgelöst, das eine Verbindung wie Benzol oder Toluol enthält, welche ein Addukt oder einen Komplex mit dem Hyodesoxycholsäureester bildet. Vorzugsweise wird Benzol verwendet, weil Benzol sowohl als das Lösungsmittel als auch als der Komplexbildner wirken kann. Um die Auflösung des Rückstands zu unterstützen, wird das Lösungsmittel gewöhnlich auf ca. 60-700C erhitzt. Das Volumen des verwendeten Lösungsmittels basiert auf dem Gewicht der gesamten Gallensäuren zu Beginn des Verfahrens; es werden ca. 1 bis 4 Liter Lösungsmittel pro Kilogramm Gallensäuren verwendet.The hyodeoxycholic acid ester is then separated from the other bile acid esters isolated as follows, The residue remaining after the esterification step is in a suitable solvent resolved that a connection such as benzene or toluene, which contains an adduct or a complex with the hyodeoxycholic acid ester forms. Preferably benzene is used because benzene is both the solvent as well as acting as the complexing agent. To resolve the arrears too the solvent is usually heated to around 60-700C. The volume of the solvent used is based on the weight of the total bile acids at the beginning of the procedure; there will be about 1 to 4 liters of solvent per kilogram Bile acids used.

Die in dieser Weise erhaltene Lösung wird konzentriert, indem ein Teil des Lösungsmittels verdampft wird, und zwar auf etwa 40 bis 60% ihres ursprünglichen Volumens, und sie wird dann gekühlt und vorzugsweise 10-24 Stunden lang auf einer Temperatur von 5-15°O gehalten. Man erhält einen dicken Brei, der dann filtriert wird. Der in dieser Weise erhaltene Filterkuchen wird mit dem benutzten Lösungsmittel gewaschen, und die Spülungen werden mit dem Filtrat kombiniert. Das Filtriert und die damit kombinierten Spülungen werden dann bis zur Trockenheit verdampft. Der durch Filtrierung getrennte Feststoff kann getrocknet werden, und er besteht hauptsächlich aus dem Komplex oder Addukt des Esters von Hyodesoxycholsäure.The solution obtained in this way is concentrated by adding a Part of the solvent is evaporated to about 40 to 60% of its original Volume, and it is then refrigerated, and preferably on one for 10-24 hours Maintained temperature of 5-15 ° O. A thick paste is obtained which is then filtered will. The filter cake obtained in this way is mixed with the solvent used washed and the rinses combined with the filtrate. That filtered and the rinses combined with it are then evaporated to dryness. Of the Solid separated by filtration can be dried, and it mainly consists from the complex or adduct of the ester of hyodeoxycholic acid.

Nach einem bevorzugten Ausführungsbeispiel der Erfindung werden die Gallensäuren mit Met1iol verestert, wobei SchweSel-oder Salzsäure als der Katalystator verwendet werden. Die Methylester der Gallensäuren werden auf diese Weise erhalten.According to a preferred embodiment of the invention, the Bile acids esterified with Met1iol, with sulfur or hydrochloric acid can be used as the catalyst. The methyl esters of the bile acids are on get this way.

Das bevorzugte Lösungsmittel für die Isolierung des Methylhyodesoxycholats ist Benzol, und der Ester wird als das Benzoladdukt von Methylhyodesoxycholat isoliert.The preferred solvent for the isolation of the methyl hyodeoxycholate is benzene and the ester is isolated as the benzene adduct of methyl hyodeoxycholate.

In Anschluß an die Isolierung des Hyodesoxycholsäureesters werden die übrigen Gallensäureester durch eine einer Reihe bekannter Methoden acetyliert. Beispielsweise wird der Feststoffrückstand, den man bei Verdampfung des Lösungsmittels erhält, in Essigsäureanhydrid ausgelöst, und Natriumacetat oder Pyridin wird der Lösung zugesetzt, die dann zwischen 3 und 100 Stunden lang, vorzugsweise 5 Stunden lang, im Rückfluß bleibt.Following the isolation of the hyodeoxycholic acid ester the remaining bile acid esters are acetylated by any of a number of known methods. For example, the solid residue that is left on evaporation of the solvent gets, dissolved in acetic anhydride, and sodium acetate or pyridine gets the Solution added, then for between 3 and 100 hours, preferably 5 hours long, remains in reflux.

Die Lösung wird dann behandelt, um eventuell vorhandenes überschüssiges Essigsäureanhydrid beispielsweise durch Verdampfung zu entfernen. Das Zusetzen eines geeigneten Alkohols wie Methanol zum Rückstand zur Bildung eines Acetats mitdem Anhydrid oder das Zusetzen eines Lösungsmittels wie Toluol zum Rückstand unterstützt die Entfernung dieses Überschusses bei Destillation.The solution is then treated to remove any excess To remove acetic anhydride, for example by evaporation. The addition of a suitable alcohol such as methanol to the residue to form an acetate with the Anhydride or the addition of a solvent such as toluene to the residue the removal of this excess upon distillation.

Alternativ können die acetylierten Gallensäureester durch Kristallisation aus dem Essigsäureanhydrid ausgeschieden wert den. Die Lösung wird nach dem Rückfluß etwas konzentriert und dann auf einer Temperatur von etwa 5 0C für die Dauer von etwa 10 bis 20 Stunden gehalten. Der in dieser Weise erhaltene Brei wird filtriert, der Filterkuchen wird mit frischem Essigsäureanhydrid gewaschen, und das Filtrat und die Spülungen werden kombiniert. Das Essigsäureanhydrid wird von der filtrierten Lösung beispielsweise durch Verdampfung getrennt, wobei die Trennung durch das Zusetzen eines geeigneten Alkohols oder/Toluol unterst.ützt wird, wie das vorstehend /von beschrieben worden ist. Falls erwünscht oder erforderlich, kann der nach der Destillierung verbleibende Rückstand im Lösungsmittel wiederaufgelöst und nachdestilliert werden.Alternatively, the acetylated bile acid esters can be obtained by crystallization excreted from the acetic anhydride worth the. The solution is after reflux slightly concentrated and then at a temperature of about 5 0C for the duration of approximately Held for 10 to 20 hours. The one obtained in this way Slurry is filtered, the filter cake is washed with fresh acetic anhydride, and the filtrate and rinses are combined. The acetic anhydride will separated from the filtered solution, for example by evaporation, the Separation is supported by adding a suitable alcohol or / toluene, as described above / by. If desired or required, the residue remaining after the distillation can be redissolved in the solvent and redistilled.

In Anschluß an die Isolierung der acetylierten Gallensäureester wird der Hyocholsäureester als sein Triacetat getrennt.Following the isolation of the acetylated bile acid ester the hyocholic acid ester separated as its triacetate.

Der Rückstand aus dem einen oder dem anderen der vorstehend beschriebenen Verfahren wird in einem geeigneten Lösungsmittel aufgelöst, vorzugsweise einem nicht polaren Lösungsmittel, bestehend aus n-Heptan, Hexan, n-Octan, Iso-Octan, n-Pentan, Cyclohexan, Cyclopentan oder Cyclopenten, aoch besser n-Heptan, Hexan oder n-Octan. Das Hyocholsäureester-Driacetat wird aus der in dieser Weise erhaltenen Lösung durch Kristallisation bei einer Temperatur zwischen 15 und 3O0C, vorzugsweise 2O0C, getrennt. Das Volumen an Lösungsmittel, das verwendet wird, ist nicht von Bedeutung, vorzugsweise werden aber 2-4 Liter pro Kilogramm Gallensäureester-Acetate benutzt, die vorhanden sind. Der Demw raturbereich ist jedoch wichtig. Bei Temperaturen über 30 0C bleibt ein größerer Teil des Hyocholsäureestertriacetat in Lösung und verunreinigt das Produkt später, während bei Temperaturen unter 15 0C das Chenodesocycholsäureester-Diacetat mit dem hyocholsäureester-Uriacetat zusammenkristallisiert, was die Gewinnung schwieriger gestaltet.The residue from one or the other of those described above Process is dissolved in a suitable solvent, preferably one not polar solvent, consisting of n-heptane, hexane, n-octane, iso-octane, n-pentane, Cyclohexane, cyclopentane or cyclopentene, even better n-heptane, hexane or n-octane. The hyocholic acid ester triacetate is made from the solution obtained in this way Crystallization at a temperature between 15 and 30 ° C, preferably 20 ° C, separately. The volume of solvent that is used is not important, preferably but 2-4 liters per kilogram of bile acid ester acetates are used, which are available are. However, the demw rature area is important. Remains at temperatures above 30 ° C a larger part of the hyocholic acid ester triacetate in solution and contaminates the product later, while at temperatures below 15 0C the chenodesocycholic acid ester diacetate Crystallized together with the hyocholic acid ester uriacetate, which makes the extraction more difficult designed.

Als Alternative zum vorstehenden Kristallisationsverfahren läßt sich in bestimmten Fällen eine höhere Ausbeute durch eine erste Kristallisation bei niedriger Temperatur, vorzugsweise etwa 50" erreichen, der sich eine Erwärmung der Lösung und des Niederschlags anschließt, um eventuelles Cchenodesoxycholsäureester-Diacetat wieder aufzulösen, das sich bei der niedrigen Temperatur niedergeschlagen hat, um dann die Kristallisation des Hyocholsäureester-Triacetats bei 20-25 0C abzuschließen.As an alternative to the above crystallization process, in certain cases a higher yield due to a first crystallization at a lower one Reach temperature, preferably about 50 ", resulting in heating of the solution and the precipitate is followed by any cchenodeoxycholic acid ester diacetate to dissolve again, which has precipitated at the low temperature, in order to then complete the crystallization of the hyocholic acid ester triacetate at 20-25 ° C.

In Anschluß an die Kristallisation des Hcholsäureester-Triacetats wird die Lösung filtriert, und der Filterkuchen wird mit einem geeigneten Lösungsmittel wie Hexan gewaschen. Der gewaschene Filterkuchen wird dann getrocknet und besteht aus einem Feststoff, der einen hohen Gehalt an Hyocholsäureester-Uriacetat hat. Das Filtrat und die Spülungen werden kombiniert und bis zur Trockenheit verdampft.Following the crystallization of the Hcholic acid ester triacetate the solution is filtered and the filter cake is washed with a suitable solvent washed like hexane. The washed filter cake is then dried and insisted from a solid that has a high content of hyocholic acid ester uriacetate. The filtrate and rinses are combined and evaporated to dryness.

Nach einem bevorzugten Ausführungsbeispiel der Erfindung, bei dem Methanol zum Verestern der Gallensäuren benutzt wird, hat der ausgefällte und ausgeschiedene Feststoff einen hohen Gehalt an Methylhyocholat-Triacatat.According to a preferred embodiment of the invention, in which Methanol is used to esterify the bile acids, which has precipitated and excreted Solids have a high content on methyl hyocholate triacatate.

Das Chenodesoxycholsäureester-Diacetat wird dann isoliert.The chenodeoxycholic acid ester diacetate is then isolated.

Der nach Verdampfung des Filtrats und der Spülungen bis zur Trockenheit verbleibende Rückstand wird in einem geeigneten Lösungsmittel aufgelöst, vorzugsweise einem polaren Lösungsmittel, am besten Methanol, Äthanol oder Isopropanol, noch besser Äthanol. Das Lösungsmittel kann erhitzt werden, um die Auflösung des Rückstands zu unterstützen. Das Volumen der benutzten Lösung beträgt vorzugsweise 0,5 bis 2,0 Liter pro Kilogramm Gallensäureester-Acetate.The one after evaporation of the filtrate and the rinses to dryness remaining residue is dissolved in a suitable solvent, preferably a polar solvent, preferably methanol, ethanol or isopropanol, nor better ethanol. The solvent can be heated to dissolve the residue to support. The volume of the solution used is preferably 0.5 to 2.0 Liters per kilogram of bile acid ester acetates.

Die in dieser Weise erhaltene Lösung wird gekühlt, vorzugsweise auf einer Temperatur von O-1O0C für die Dauer von 16-48 Stunden gehalten und dann filtriert. Das Filtrat wird aufbewahrt, und der in dieser Weise getrennte Feststoff, der einen hohen Gehalt an Chenodesoxycholsäureester-Diacetat hat, wird mit einem geeigneten Lösungsmittel gewaschen, beispielsweise Äthanol, und dann getrocknet, Der getrocknete Feststoff wird dann in einem geeigneten Lösungsmittel wiederaufgelöst, beispielsweise Methanol, Äthanol, Isopropganol und Hexan, vorzugsweise Äthanol oder Methanol, und dann aus diesem Lösungsmittel rekristallisiert. Das Volumen an Lösungsmittel, das in der Rekristallisation benutzt wird, beträgt vorzugsweise 2-6 Liter pro Kilogramm Chenodesoxycholsäureester-Acetat.The solution obtained in this way is cooled, preferably to a temperature of 0-10 ° C for a period of 16-48 hours and then filtered. The filtrate is saved, and the solid separated in this way, the one has a high content of chenodeoxycholic acid ester diacetate is used with a suitable Washed solvent, for example ethanol, and then dried, the dried Solid is then redissolved in a suitable solvent, for example Methanol, ethanol, isopropganol and hexane, preferably ethanol or methanol, and then recrystallized from this solvent. The volume of solvent that used in recrystallization is preferably 2-6 Liters per kilogram of chenodeoxycholic acid ester acetate.

(Das Filtrat aus der ersten Kristallisation kann weggeworfen oder zu anschließenden Chargen von Schweinegalle zugesetzt werden, um einen Teil der Chenodesoxycholsäure aus dem Biltrat zurückzugewinnen. Alternativ können mehrere Chargen des Filtrats gesammelt und in der gleichen Weise behandelt werden, wie das mit der Schweinegalle geschieht, um das Chenodesoxycholsäureester-Diacetat daraus zurückzugewinnen.) Die Chenodesoxycholsäure wird dann nach einer von mehreren versohiedenen, jedoch bekannten Methoden extrahiert. Beispielsweise wird ein geeignetes, im wesentlichen mit Wasser unvermischbares Lösungsmittel wie Äthylacetat, Methylisobutylketon, Äthylendichlorid, n-Butylacetat, vorzugsweise Äthylacetat, dem verdünnten und versäuerten Verseifungsgemisch zugesetzt und gründlich gerührt, Das Gemisch trennt sich in eine wässrige und in eine organische Phase, und diese Phasen werden dann getrennt. Die wässrige Phase wird weggegossen. Die organische Phase wird beispielsweise mit einer 1%Oigen Natriumchloridlösung gewaschen und dann teilweise verdampft, um die Lösung zu konzentrieren. Die Lösung wird gekühlt, bis eine Ausfällung eintritt, und die Lösung wird mit einer Verdünnung verdünnt, in der Chenodesoxycholsäure unlöslich ist, vorzugsweise Hexan oder Cyclohexan. Der verdünnte Brei wird dann 10 bis 20 Stunden Lang gekühlt und dann filtriert , wobei die Feststoffe zurückgehalten und mit frischem Lösungsmittel oder einem Gemisch aus Lösungsmitteln gewaschen werden. Der gewaschene Feststoff wird dann getrocknet, und man erhält im wesentlichen reine Chenodesocycholsäure.(The filtrate from the first crystallization can be thrown away or to be added to subsequent batches of pig bile to make up part of the Recover chenodeoxycholic acid from the biltrate. Alternatively, several Batches of the filtrate are collected and treated in the same manner as that happens with the pork bile to make the chenodeoxycholic acid ester diacetate from it The chenodeoxycholic acid is then after one of several different, but known methods extracted. For example, a suitable, essentially Solvents that cannot be mixed with water such as ethyl acetate, methyl isobutyl ketone, ethylene dichloride, n-butyl acetate, preferably ethyl acetate, the diluted and acidified saponification mixture added and stirred thoroughly, the mixture separates into an aqueous and in an organic phase, and these phases are then separated. The aqueous phase is poured away. The organic phase is, for example, with a 1% sodium chloride solution washed and then partially evaporated to concentrate the solution. The solution is cooled until precipitation occurs, and the solution becomes with a dilution diluted, in which chenodeoxycholic acid is insoluble, preferably hexane or cyclohexane. The diluted pulp is then 10 to 20 hours Long chilled and then filtered, with the solids retained, and rinsed with fresh solvent or a mixture of solvents. The washed solid is then dried and essentially pure chenodesocycholic acid is obtained.

Die folgenden Beispiele dienen zur Veranschaulichung, jedoch nicht zur Beschrankung der Erfindung.The following examples serve to illustrate but not to limit the invention.

BEISPIEL 1 Natriumhydroxid (100 g) wurde frischer Schweinegalle (1 Liter) zugesetzt, und das Gemisch wurde 24 Stunden lang im Rückfluß gehalten. Die Lösung wurde auf Raumtemperatur gekühlt und auf einen pH-Wert von 8 mit konzentriert er Schwefelsäure eingestellt. Natriumhydrosulphit (5,3 g) wurde zugesetzt, und das Gemisch wurde 15 min lang umgerührt. Nach dem Zusetzen von Äthylacetat (450 ml) wurde der pH-Wert des Gemisches auf einen Wert von 5 mit verdünnter Schwefelsäure eingestellt. Das Gemisch wurde 30 min lang gerührt, und dann ließ man es sich trennen. Die untere wässrige Schicht wurde abgelassen und weggegossen. Filtrol (Warenzeichen) (10 g) und Holzkohle (10 g) wurden der oberen organischen Phase zugesetzt. Das Gemisch wurde 30 min lang umgerührt, filtriert, und der Filterkuchen wurde mit Äthylacetat (50 ml) gewaschen. Das Filtrat und die Spülungen wurden bis zur Trockenheit verdampft.EXAMPLE 1 Sodium hydroxide (100 g) was added to fresh pig bile (1 Liter) was added and the mixture was refluxed for 24 hours. the Solution was cooled to room temperature and concentrated to pH 8 with he adjusted sulfuric acid. Sodium hydrosulphite (5.3 g) was added and that Mixture was stirred for 15 minutes. After adding ethyl acetate (450 ml) the pH of the mixture was adjusted to a value of 5 with dilute sulfuric acid set. The mixture was stirred for 30 minutes and then allowed to separate. The lower aqueous layer was drained and discarded. Filtrol (trademark) (10 g) and charcoal (10 g) were added to the top organic phase. The mixture was stirred for 30 minutes, filtered, and the filter cake was washed with ethyl acetate (50 ml). The filtrate and rinses were evaporated to dryness.

Der Rückstand wurde in Methanol (300 ml) aufgelöst, es wurde konzentrierte Schwefelsäure (4,0 ml rzugesetzt,und die Lösung wurde bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Nach Neutralisierung (auf ca. pH 7) mit festem Natriumbicarbonat (ca.The residue was dissolved in methanol (300 ml), it was concentrated sulfuric acid (4.0 ml r added, and the solution was stirred at room temperature overnight. After neutralization (to approx. pH 7) with solid sodium bicarbonate (approx.

28 g) wurde das Gemisch filtriert und dann unter Vakkum bis zur Trockenheit verdampft. Der Rückstand wurde in heißem Benzol (320 ml) aufgelöst. Die Lösung wurde auf ca. 225 ml konzentriert und über Nacht gekühlt. Der Brei wurde filtriert, und der Pilterkuchen (Methyl-Hyodesoxycholat-Benzol-Addukt) wurde mit Benzol gewaschen.28 g) the mixture was filtered and then under vacuum to dryness evaporates. The residue was dissolved in hot benzene (320 ml). The solution was concentrated to approx. 225 ml and cooled overnight. The pulp was filtered, and the pilter cake (methyl-hyodeoxycholate-benzene adduct) was washed with benzene.

Das Benzolfiltrat und die Spülungen wurden bis zur Trockenheit verdampft. Essigsäureanhydrid (75 ml) und wasserfreies Natriumacetat (7,5 g) wurden dem Rückstand zugesetzt, und das Gemisch wurde 5 Stunden lang im Rückfluß gehalten. Ein Teil des Lösungsmittels (25 ml) wurde destilliert, und der Restbrei wurde über Nacht gekühlt. Das Gemisch wurde filtriert, und der Filterkuchen wurde mit kalten Essigsäureanhydrid (30 ml) gewaschen.The benzene filtrate and rinses were evaporated to dryness. Acetic anhydride (75 ml) and anhydrous sodium acetate (7.5 g) were added to the residue was added and the mixture was refluxed for 5 hours. Part of the Solvent (25 ml) was distilled and the residual slurry was refrigerated overnight. The mixture was filtered and the filter cake was filled with cold acetic anhydride (30 ml).

Das Filtrat und die Spülungen wurden unter Vakuum bis zur Trockenheit verdampft. Rückständiges Essigsäureanhydrid wurde durch Zuschlagen und Destillieren von Toluol (2 x 30 ml) entfernt. Der Rückstand wurde in Hexan (200 ml) aufgelöst, und die Lösung wurde über Nacht gekühlt. Das Gemisch wurde bis zum Rückfluß erhitzt, 1o min lang im Rückfluß gehalten, auf Raumtemperatur abgekühlt und bei Raumtemperatur 3 Stunden lang gerührt. Der Brei wurde filtriert, und der Filterkuchen wurde mit Hexan gewaschen.The filtrate and rinses were vacuumed to dryness evaporates. Residual acetic anhydride was added by adding and distilling removed from toluene (2 x 30 ml). The residue was dissolved in hexane (200 ml), and the solution was chilled overnight. The mixture was heated to reflux, Refluxed for 10 minutes, to room temperature cooled down and stirred at room temperature for 3 hours. The pulp was filtered, and the Filter cake was washed with hexane.

Das Filtrat wurde unter Vakuum bisur Trockenheit verdampft.The filtrate was evaporated to dryness in vacuo.

Der Rückstand wurde in heißem Äthanol (46 ml) aufgelöst. Die Lösung wurde gekühlt und überNacht im Kühlschrank aufbewahrt.The residue was dissolved in hot ethanol (46 ml). The solution was refrigerated and stored in the refrigerator overnight.

Der Brei wurde filtriert. Der Pilterkuchen wurde mit Äthanol (27 ml bei 5°C) gewaschen und unter Vakuum bei 50-600C getrocknet. Das rohe Methylchenodesoxvcholat-Diacetat wog 19,95 g.The slurry was filtered. The pilter cake was washed with ethanol (27 ml at 5 ° C) and dried under vacuum at 50-600C. The crude methylchenodeoxylcholate diacetate weighed 19.95 g.

Dieses wurde aus 4 Volumina Äthanol rekristallisiert, was ein Produkt von 17,4 g ergab: Schmelzpunkt 112-114OG (erweicht bei 11O0C);[) 2D5 + 10,50 (c=1, Dioxan);6 2D5 + 15,4°(c=1, CHCl3).This was recrystallized from 4 volumes of ethanol to give a product of 17.4 g resulted in: melting point 112-114OG (softens at 110 ° C.); [) 2D5 + 10.50 (c = 1, Dioxane); 6 2D5 + 15.4 ° (c = 1, CHCl3).

Das Methylchenodesoxycholat-Diacetat (17,4 g) wurde einer Lösung aus Natriumhydroxid (17 g) in Wasser (170 ml) zugesetzt, Nach Rückfließenlassen des Gemisches für die Dauer von 14 Stunden wurde die Lösung mit Wasser (350 ml) verdünnt und mit Schwefelsäure auf einen pH-Wert von 4,5 eingestellt, Das Gemisch wurde mit Äthylacetat (225 ml) extrahiert. Der Äthylacetat-Extrakt wurde mit 1 obigem wässrigen Natriumchlorid (50 ml) gewaschen und dann auf etwa 70 ml verdampft. Die Lösung wurde gekühlt, und es wurde Hexan (70 ml) zugesetzt. Das Gemisch wurde über Nacht kuhl gehalten und dann filtriert. Der Filterkuchen wurde mit Äthylacetat-Hexan (40 ml; 1/1) gewaschen und unter Vakuum bei 60 0C getrocknet, Die Chenodesoxycholsäure 25 wog 11,5 g; Schmelzpuntk 141-1440C; [α] D + 10,50 (C=1, Dioxan); [α]D25 + 11,20 (c=2, Äthanol).The methylchenodeoxycholate diacetate (17.4 g) became a solution Sodium hydroxide (17 g) in water (170 ml) was added, after refluxing the Mixing for 14 hours, the solution was diluted with water (350 ml) and adjusted to pH 4.5 with sulfuric acid. The mixture was with Ethyl acetate (225 ml) extracted. The ethyl acetate extract was washed with 1 of the above aqueous Sodium chloride (50 ml) and then evaporated to about 70 ml. The solution was cooled and hexane (70 ml) was added. The mixture became cool overnight held and then filtered. The filter cake was washed with ethyl acetate-hexane (40 ml; 1/1) washed and dried under vacuum at 60 0C, the chenodeoxycholic acid 25th weighed 11.5 g; Melting point 141-1440C; [α] D + 10.50 (C = 1, dioxane); [α] D25 + 11.20 (c = 2, ethanol).

BEISPIEL 2 Verdickte Schweinegalle (334 g) wurde in heißem Wasser (1700 ml) aufgelöst und mit Natriumhydroxid (200 g) wie im Beispiel 1 verseift. Das Hydrolysat wurde wie im Beispiel 1 weiterbehandelt, jedoch unter Verwendung der doppelten Menge an Reaktionsmitteln.EXAMPLE 2 Thickened pork bile (334 g) was added to hot water (1700 ml) and saponified with sodium hydroxide (200 g) as in Example 1. The hydrolyzate was treated as in Example 1, but using twice the amount of reactants.

Nach der Rekristallisation betrug die Ausbeute an Methylchenodesoxycholat-Diacetat 32,5 g [Schmelzpunkt 113-115°C; r1 2D5 + 14,50 (c=1, CHCl3)) , was 21,3 g Chenodesoxycholsäure ergab. Schmelzpunkt 139-142°C; [α] D25 + 10,00 (c=2, Äthanol); )2D5 + 9,50 (c=1, Dioxan).After recrystallization, the yield of methylchenodeoxycholate diacetate was 32.5 g [melting point 113-115 ° C; r1 2D5 + 14.50 (c = 1, CHCl3)), which equates to 21.3 g of chenodeoxycholic acid revealed. Melting point 139-142 ° C; [α] D25 + 10.00 (c = 2, ethanol); ) 2D5 + 9.50 (c = 1, dioxane).

BEISPIEL 3 Ein Verfahren wurde entsprechend Beispiel 1 durchgeführt, außer daß die Kristallisation aus Essigsäureanhydrid nach der Acetylierung weggelassen wurde, Methanol anstelle von Toluol benutzt wurde, um rückständiges Essigsäureanhydrid zu entfernen und die Hexankristallisation bei Raumtemperatur (240C) für die Dauer von 3 Stunden durchgeführt wurde. Die Ausbeute an Methyl-Chenodesoxycholat-Diacetat betrug 15,5 g: Schmelzpuntk 113-115°C;[α] D25 + 13,50 (c=1, CHCl3).EXAMPLE 3 A procedure was carried out according to Example 1, except that crystallization from acetic anhydride after acetylation is omitted methanol was used instead of toluene to remove residual acetic anhydride to remove and the hexane crystallization at room temperature (240C) for the duration of 3 hours was carried out. The yield of methyl chenodeoxycholate diacetate was 15.5 g: melting point 113-115 ° C; [α] D25 + 13.50 (c = 1, CHCl3).

BEISPIEL 4 Ein Verfahren entsprechend Beispiel 1 wurde durchgeführt, außer daß Toluol anstelle von Benzol zum Trennung des Methylhyodesoxycholats als ein Addukt mit Toluol benutzt wurde. Das Methylchenodesoxycholat-Diacetat 17,1 g Schmelzpunkt 112-115°C; [α] D25 + 18,50 (c=1, CHCl3))ergab 10,7 g einer etwas unreinen Chenodesoxycholsäure: Schmelzpunkt 148-1650C; 25 + 90 (c=1, Dioxan);[α] D25 + 6w7° (c=2, Äthanol).EXAMPLE 4 A procedure according to Example 1 was carried out, except that toluene is used instead of benzene to separate the methyl hyodeoxycholate an adduct with toluene was used. The methylchenodeoxycholate diacetate 17.1 g Melting point 112-115 ° C; [α] D25 + 18.50 (c = 1, CHCl3)) gave 10.7 g of something impure chenodeoxycholic acid: melting point 148-1650C; 25 + 90 (c = 1, dioxane); [α] D25 + 6f7 ° (c = 2, ethanol).

BEISPIEL 5 Frische Schweinegalle (330 ml) wurde wie im Beispiel 1 behandelt, außer daß Methylisobutylketon (200 ml) anstelle von Äthylacetat zur Extraktion der Gallensäuren nach der Verseifung der Galle benutzt wurde. Die Ausbeute an Methylchenodesoxycholat-Diacetat betrug 3,5 g; Schmelzpunkt 116-119°C; rs 25 + 13,20 (c=1, CHCl3).EXAMPLE 5 Fresh pig bile (330 ml) was prepared as in Example 1 treated except that methyl isobutyl ketone (200 ml) instead of ethyl acetate for extraction the bile acids was used after the saponification of the bile. The yield of methylchenodeoxycholate diacetate was 3.5 g; Melting point 116-119 ° C; rs 25 + 13.20 (c = 1, CHCl3).

BEI SPIEL 6 Methylchenodesoxycholat-Diacetat (15 g), das wie im Beispiel 2 erhalten wurde, wurde wie im Beispiel 2 verseift, außer daß Methylisobutylketon für die Extraktion anstelle von Äthylacetat verwendet wurde, und die Chenodesoxycholsäure wurde aus einem Gemisch aus Methylisobutylketon und Hexan kristallisiert. Die Chenodesoxycholsäure wog 9,2 g; Schmelzpunkt 141-1440C; Ci 23 + 13,10 (c=1, CHCl3); [α] D23 + 9,90 (c=1, Dioxan).EXAMPLE 6 Methylchenodeoxycholate diacetate (15 g) prepared as in Example 2 was saponified as in Example 2 except that methyl isobutyl ketone was used for the extraction instead of ethyl acetate, and the chenodeoxycholic acid was crystallized from a mixture of methyl isobutyl ketone and hexane. Chenodeoxycholic acid weighed 9.2 g; Melting point 141-1440C; Ci 23 + 13.10 (c = 1, CHCl3); [α] D23 + 9.90 (c = 1, dioxane).

Verdickte Schweinegalle (30 g) wurde wie im Beispiel 2 behandelt, außer daß n-Hexanol anstelle von Äthylacetat für die Extraktion der Gallensäuren nach der Verseifung der Galle benutzt wurde. Die Gewinnung von Methylchenodesoxycholat-Diacetat betrug-2,2 g: Schmelzpunkt 1i2-114°C; [α] D25 + 16,5° (c=1, CHCl3).Thickened pork bile (30 g) was treated as in Example 2, except that n-hexanol instead of ethyl acetate for the extraction of the bile acids was used after the saponification of the bile. The extraction of methylchenodeoxycholate diacetate was -2.2 g: melting point 121-114 ° C; [α] 25 D + 16.5 ° (c = 1, CHCl3).

BEISPIEL 8 Schweinegalle (500 ml) wurde wie im Beispiel 1 verseift. Das Hydrolysat wurde auf 10°C gekühlt, eine Filterhilfe (12g ) wurde zugesetzt, und das Gemisch wurde mit Schwefelsäure auf einen pH-Wert von 4,5 neutralisiert. Die ausgefällten rohen Gallensäuren wurden filtriert, Benzol (400 ml) zugesetzt und azeotrop durch Destillation des Benzols getrocknet. Nachdem das System trocken war, wurde das rückständige Benzol destilliert. Der Rückstand wurde verestert und wie im Beispiel 3 weiterbehandelt. Das rekristallisierte Methylchenodesoxycholat-Diacetat [ 8,5 g; Schmelzpunkt 110-111°C; [α]D25 + 14,20 (c=1, CHCl3)i wurde wie im Beispiel 1 in Chenodesoxycholsäure weiterverarbeitet 5,8 g; Schmelzpunkt 141-144°C:[α] 2D5 + 15,60 (c=1, CHCl3)).EXAMPLE 8 Pig bile (500 ml) was saponified as in Example 1. The hydrolyzate was cooled to 10 ° C, a filter aid (12g) was added, and the mixture was neutralized to pH 4.5 with sulfuric acid. The precipitated crude bile acids were filtered, benzene (400 ml) added and dried azeotropically by distilling the benzene. After the system dry was, the residual benzene was distilled. The residue was esterified and treated further as in Example 3. The recrystallized methylchenodeoxycholate diacetate [8.5 g; Melting point 110-111 ° C; [α] D25 + 14.20 (c = 1, CHCl3) i was as im Example 1 further processed in chenodeoxycholic acid 5.8 g; Melting point 141-144 ° C: [α] 2D5 + 15.60 (c = 1, CHCl3)).

BEISPIEL 9 Schweinegalle (500 ml) wurde wie im Beispiel 1 verseift. Toluol (500 ml) wurde dem teilweise gekühlten Hydrolysat (etwa 85 0C) zugesetzt, und das Gemisch wurde auf einen pH-Wert von 4,5 mit Schwefelsäure neutralisiert, wobei die Temperatur auf 80 bis 85 0C gehalten wurde. Beim Stehen trennte sich das Gemisch in drei Schichten. Die untere wässrige Schicht wurde weggegossen, Die oberen beiden Schichten (Öl und Toluol) wurden azeotrop durch Destillation des Toluols unter Verwendung eimsDean-Stark-Apparats getrocknet. Nach dem Trocknen wurde das Lösungsmittel destilliert, und der Rückstand wurde verestert und wie im Beispiel 3 weiterbehandelt. Das rekristallisierte Methylchenodesoxycholat-Diacetat[ 7,2 g; Schmelzpunkt 111-112°C;tX 25 + 13,80 (c=1, CHCl3)] wurde wie im Beispiel 1 in Chenodesoxycholsäure weiterverarbeitet [4,9 g; Schmelzpunkt 143-1460C; [α] D25 + 13,60 (c=1, CHCl3) BEISPIEL 10 Verdickte Schweinegalle (560 g) wurde in heißem Wasser (3,2 1) aufgelöst. Natriumhydroxid (400 g) wurde zugesetzt, und die Lösung wurde 22 Stunden lang im Rückfluß gehalten und dann auf 15 0C abgekühlt. Pilterhilfe (100 g, z.B. HyElo-Super-cel) wurde zugesetzt, und das Gemisch wurde auf einen pH-Wert von 2 mit Schwefelsäure versäuert, indem die Temperatur auf 10-150C gehalten wurde. Das Gemisch wurde filtriert. Der Pilterkuchen wurde mit Wasser gewaschen und in einem Vakuumofen bei 45-50°C getrocknet. Das rohe Gallensäurengemisch wog 510 g. Ein Teil fl28 g) des Feststoffs wurde mit warmem Aceton (400 ml) extrahiert. Die Lösung wurde mit Holzkohle behandelt und dann bei 5 0G über Nacht kühltgelagert. Die Kristalle wurden filtriert. Das Biltrat wurde bis zur Trockenheit verdampft, und der Rückstand wurde verestert, acetyliert und weiterbehandelt wie im Beispiel 1. Das Methylchenodesoxycholat-Diacetat F 15,4 g; Schmelzpunkt 1O9-11O0C; 2 D24 + 12,70 (c=1, CHCl3)] ergab 10,2 g Chenodesoxycholsäure: Schmelzpunkt 141-144°C;[α]D23 + 12,50 (c=1, CHCl3); [α] D23 + 9,70 (c=1, Dioxan).EXAMPLE 9 Pig bile (500 ml) was saponified as in Example 1. Toluene (500 ml) was added to the partially cooled hydrolyzate (about 85 ° C.) added, and the mixture was neutralized to pH 4.5 with sulfuric acid, the temperature was kept at 80 to 85 0C. It separated when standing Mix in three layers. The lower aqueous layer was poured away, the upper Both layers (oil and toluene) were azeotroped by distilling the toluene dried using eimsDean-Stark apparatus. After drying, that became Solvent distilled and the residue was esterified and as in the example 3 further treated. The recrystallized methylchenodeoxycholate diacetate [7.2 g; Melting point 111-112 ° C; tX 25 + 13.80 (c = 1, CHCl3)] was as in Example 1 in chenodeoxycholic acid further processed [4.9 g; Melting point 143-1460C; [α] D25 + 13.60 (c = 1, CHCl3) EXAMPLE 10 Thickened pig bile (560 g) was dissolved in hot water (3.2 liters). Sodium hydroxide (400 g) was added and the solution was imbibed for 22 hours Held reflux and then cooled to 15 0C. Pilter aid (100 g, e.g. HyElo-Super-cel) was added and the mixture was adjusted to pH 2 with sulfuric acid acidified by keeping the temperature at 10-150C. The mixture was filtered. The pilter cake was washed with water and placed in a vacuum oven at 45-50 ° C dried. The crude bile acid mixture weighed 510 g. A portion (28 g) of the solid was extracted with warm acetone (400 ml). The solution was treated with charcoal and then at 5 0G Chilled overnight. The crystals were filtered. The biltrate was evaporated to dryness and the residue became esterified, acetylated and further treated as in Example 1. The methylchenodeoxycholate diacetate F 15.4 g; Melting point 109-1100C; 2 D24 + 12.70 (c = 1, CHCl3)] yielded 10.2 g of chenodeoxycholic acid: Mp 141-144 ° C; [α] D23 + 12.50 (c = 1, CHCl3); [α] D23 + 9.70 (c = 1, Dioxane).

BEISPIEL 11 Verdickte Schweinegalle (150 g, ca. 110 g Reststoffe enthaltend; äquivalent zu 1 Liter frischer Galle) wurde in heißem Wasser (1000 ml) aufgelöst. Natriumhydroxid (100 g) wurde zugesetzt, und das Gemisch wurde 20 Stunden lang im Rückfluß gehalten.EXAMPLE 11 Thickened pork bile (150 g, containing approx. 110 g residues; equivalent to 1 liter of fresh bile) was dissolved in hot water (1000 ml). Sodium hydroxide (100 g) was added and the mixture was left to cool for 20 hours Held at reflux.

Die Lösung wurde auf etwa 25 0C gekühlt, kaltes Leitungswasser (1500 ml) wurde zugesetzt, und die Lösung wurde über Nacht im Kühlschrank gehalten. Filterhilfe (10 g) wurde zugesetzt, und der Brei wurde filtriert, um das ausgefällte rohe Natrium-3 -Hydroxy- 6-Ket 0 cholanat zu entfernen.The solution was cooled to about 25 ° C., cold tap water (1500 ml) was added and the solution was kept in the refrigerator overnight. Filter aid (10 g) was added and the slurry was filtered to remove the precipitated crude sodium-3 -Hydroxy- 6-ket 0 to remove cholanate.

Das Filtrat wurde mit konzentriert er Schwefelsäure auf einen pH-Wert von 8 eingestellt. Natriumhydrosulphit (5 g) wurde zugesetzt, und die Lösung wurde 15 Minuten lang gerührt. Nach dem Zusetzen von Äthylacetat (400 ml) wurde der pH-Wert des Gemisches auf 5 mit verdünnter Schwefelsäure eingestellt. Das Gemisch wurde 30 Minuten lang gerührt,und dann ließ man es sich trennen. Die untere wässrige Schicht wurde abgezogen und weggegossen. Piltrol (Warenzeichen) (7 g) und Holzkohle (7 g) wurden der oberen organischen Phase zugesetzt. Das Gemisch wurde 30 Minuten lang gerührt, filtriert, und der Filterkuchen wurde mit Äthylacetat (50 ml) gewaschen. Das Filtrat und die Spülungen wurden bis zur Trockenheit verdampft.The filtrate was concentrated to pH with sulfuric acid set from 8. Sodium hydrosulphite (5 g) was added and the solution became Stirred for 15 minutes. After adding ethyl acetate (400 ml), the pH was lowered the mixture adjusted to 5 with dilute sulfuric acid. The mixture was Stirred for 30 minutes and then allowed to separate. The lower aqueous layer was peeled off and poured away. Piltrol (Trademark) (7 g) and Charcoal (7 g) was added to the top organic phase. The mixture was Stirred for 30 minutes, filtered and the filter cake was washed with ethyl acetate (50%) ml) washed. The filtrate and rinses were evaporated to dryness.

Der Rückstand wurde in Methanol (300 ml) aufgelöst, konzentrierte Schwefelsäure (4,0 ml) wurde zugesetzt, und die Lösung wurde bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Nach der Neutralisierung (auf ca. pH-Wert 7) mit Natriumbicarbonat wurde das Gemisch filtriert und bis zur Trockenheit verdampft. Der Rückstand wurde in heißem Benzol (320 ml) aufgelöst. Die Lösung wurde auf etwa 225 ml konzentriert und über nacht im Kühlschrank gehalten.The residue was dissolved in methanol (300 ml), concentrated Sulfuric acid (4.0 ml) was added and the solution was at room temperature stirred overnight. After neutralization (to approx. PH 7) with sodium bicarbonate the mixture was filtered and evaporated to dryness. The residue was dissolved in hot benzene (320 ml). The solution was concentrated to approximately 225 ml and kept in the refrigerator overnight.

Der Brei wurde filtriert, und der Filterkuchen (Methylhyodesoxycholat-Benzol-Addukt) wurde mit Benzol gewaschen.The slurry was filtered and the filter cake (methyl hyodeoxycholate-benzene adduct) was washed with benzene.

Das Benzolfiltrat und die Spülungen wurden bis zur Trockenheit verdampft. Essigsäureanhydrid (75 ml) und wasserfreies Natriumacetat (7,5 g) wurden dem Rückstand zugesetzt, und das Gemisch wurde 5 Stunden lang im Rückfluß gehalten. Das überschüssige Essigsäureanhydrid wurde destilliert. Methanol (35 ml) wurde dem Rückstand zugesetzt, das Gemisch wurde 15 Minuten lang im Rückfluß gehalten, und dann wurde es bis zur Trockenheit verdampft, um rückständiges Essigsäureanhydrid zu entfernen.The benzene filtrate and rinses were evaporated to dryness. Acetic anhydride (75 ml) and anhydrous sodium acetate (7.5 g) were added to the residue was added and the mixture was refluxed for 5 hours. The excess Acetic anhydride was distilled. Methanol (35 ml) was added to the residue, the mixture was refluxed for 15 minutes and then it was boiled until Dryness evaporates to remove residual acetic anhydride.

Der Rückstand wurde in Hexan (200 ml) unter Rückfluß aufgelöst, und die Lösung wurde über Nacht bei 20 0C gerührt. Der Brei wurde filtriert, und der Filterkuchen (rohes Methylhyocholat-Triacetat) wurde mit Hexan gewaschen.The residue was dissolved in hexane (200 ml) under reflux, and the solution was stirred at 20 ° C. overnight. The pulp was filtered, and the Filter cake (crude methyl hyocholate triacetate) was washed with hexane.

Das Filtrat wurde bis zur Trockenheit verdampft. Der Rückstand wurde in heißem Äthanol (46 ml) aufgelöst, und die Lösung wurde über Nacht im Kühlschrank gehalten. Der Brei wurde filtriert.The filtrate was evaporated to dryness. The residue was dissolved in hot ethanol (46 ml) and the solution was left in the refrigerator overnight held. The slurry was filtered.

Der Filterkuchen wurde mit kaltem Äthanol (27 ml) gewaschen und unter Vakuum bei 60 0C getrocknet. Das rohe Methylohenodesoxycholat-Diacetat (21,5 g) wurde aus 3 Volumina Äthanol rekristallisiert, was ein Produkt von 18,5 g ergab: Schmelzpunkt 119-1210C (Erweichung bei 110°C);[α] D25 + 10,40 (c=1, Dioxan); [α] D25 + 13,80 (c=1, CHCl3).The filter cake was washed with cold ethanol (27 ml) and taken under Vacuum dried at 60 0C. The crude methylohenodeoxycholate diacetate (21.5 g) was recrystallized from 3 volumes of ethanol to give a product of 18.5 g: Melting point 119-1210C (softening at 110 ° C); [α] D25 + 10.40 (c = 1, dioxane); [α] 25 D + 13.80 (c = 1, CHCl3).

Das Methylchenodesoxycholat-Diacetat (18,5 g) wurde einer Lösung aus Natriumhydroxid (18,5 g) in Wasser (185 ml) zugesetzt.The methylchenodeoxycholate diacetate (18.5 g) became a solution Added sodium hydroxide (18.5 g) in water (185 ml).

Nach einem Rückfluß von 14 Stunden wurde die Lösung auf einen pH-Wert von 4,5 mit Schwefelsäure neutralisiert und mit Äthylacetat extrahiert. Die wässrige Schicht wurde weggegossen. Der Äthylacetat-Extrakt wurde mit 6%igem wässrigem Natriumchlorid gewaschen, gefolgt von Wasser, und dann wurde er auf etwa 90 ml verdampft-. Die Lösung wurde gekühlt, und Hexan (90 ml) wurde zugesetzt. Nach einer Kühlhaltung über Nacht wurde der Brei filtriert. Der Filterkuchen wurde mit Hexan (20 ml) gewaschen und im Vakuum bei 600C getrocknet. Das Produkt, Chenodesoxycholsäure, wog 12,7 g: Schmelzpunkt 142-145°C;5°(z25 + 13,00 (c=1, CHCl3).After refluxing for 14 hours, the solution was brought to pH of 4.5 neutralized with sulfuric acid and extracted with ethyl acetate. The watery Layer was poured away. The ethyl acetate extract was washed with 6% aqueous sodium chloride washed, followed by water, and then evaporated to about 90 ml. the Solution was cooled and hexane (90 ml) was added. After keeping it cool The slurry was filtered overnight. The filter cake was washed with hexane (20 ml) and dried in vacuo at 600C. The product, chenodeoxycholic acid, weighed 12.7 g: Melting point 142-145 ° C; 5 ° (z25 + 13.00 (c = 1, CHCl3).

Claims

Claims 1. A method for isolating and purifying chenodeoxycholic acid made from pork bile, g e k e n n n z e i c h n e t d u r c h the following process steps: 1. Treatment of pig bile under saponifying conditions; 2. Separation of Bile acids from the water-soluble components of saponified bile; 3. Esterify the bile acids to form a mixture of bile acid esters; 4, insulation of the hyodeoxycholic acid ester from the mixture of bile acid esters; 5. Treatment the remaining bile acid esters under acetylating conditions; 6. Isolation of the Hyocholic acid ester riacetats; 7. Isolation of the chenodeoxycholic acid ester diacetate; 8th. Treatment of the chenodeoxycholic acid ester diacetate under saponifying conditions; and 9. Isolation of the chenodeoxycholic acid obtained thereby.

2. The method according to claim 1, d a d u r c h g e k e n n -z e i c h n e t that following the treatment of the bile under saponifying conditions 3-hydroxy-6-oxo-5d-chelanic acid is isolated as a salt thereof before the The remaining bile acids are separated from the saponified bile.

3. Procedure to isolate and purify chenodeoxycholic acid from Pork bile, not shown, do the following: 1. Treatment of the bile under saponifying conditions by refluxing the Bile in the presence of an aqueous solution of a suitable base; 2. Acidify the saponify bile with an appropriate acid during extraction of the bile acids therefrom with an organic solvent which is essentially immiscible with water with poor solubility in the saponified and acidified bile and exercising a preferred solvent action compared to the bile acids contained therein with the other components of the bile, separation of the resulting aqueous phase and the solvent phase and separating the bile acids from the solvent phase; 3. Reacting the bile acid with a suitable alcohol in the presence of a suitable acid catalyst; 4. Neutralizing the reaction mixture that is in this Manner arose with a suitable base; 5. isolating the esterified bile acids, created in this way; 6, Dissolution of the bile acid esters in one suitable solvent consisting of a compound selected from the group consisting of benzene and toluene; 7. Treatment of the solution obtained in this way to precipitate Solid from it, which has a high content of an adduct of hyodeoxycholic acid ester contains, with a compound selected from the group consisting of benzene and toluene; 8. Separation of the solution treated in this way into a substantially solid one Part and into a substantially liquid part; 9. Separation of the solvent from the substantially liquid part to obtain a substantially dry one Mixture of the other esterified bile acids; 10. Let the rest of them react Bile acid esters with acetic anhydride and a substance from the group consisting of sodium acetate and pyridine; ii. Separation of excess acetic anhydride from the .in this Manner obtained reaction mixture to an essentially dry residue to obtain; 12. Dissolution of the residue, which has a high content of acetylated Bile acid esters has, in a suitable solvent; 13. Treatment of the obtained in this way Solution for precipitating a solid therefrom, which has a high content of acetylated Has hyocholic acid ester; 14. Separation of the solution treated in this way into one an essentially solid part and an essentially liquid part; 15. Separation of the solvent from the substantially liquid part to substantially one to obtain dry solid; 16. Dissolution of the essentially dry solid, which has a high content of the other acetylated bile acid esters, in a suitable one Solvent; 17. Treatment of the solution thus obtained to precipitate aw a solid thereof which has a high content of chenodeoxycholic acid ester diacetate Has; 18. Separation of the thus treated solution into a substantial one solid part and into a substantially liquid part; 19. Re-dissolution of the substantially solid part in a suitable solvent; 20, treatment of the solution obtained in this way to precipitate a solid therefrom, the one has a high content of chenodeoxycholic acid ester diacetate; 21. Separation of in this Way treated solution into one essentially solid part and into a substantially liquid part; 22. Treatment of the essentially solid Partly under saponifying conditions in an aqueous medium by refluxing with a suitable base; 23. Acidification of the saponified material with a suitable one Acid during extraction with an essentially immiscible with water organic solvent that has a preferred solvent action to chenodeoxycholic acid out, which is contained in the saponified and acidified material, compared with the remaining components of the saponified and acidified material, and Separation of the resulting solvent phase and aqueous phase; 24. Treatment the solvent phase containing the chenodeoxycholic acid by concentration and cooling until solid, which contains a high content of chenodeoxycholic acid, is precipitated from it; 25. Separation of the solution treated in this way into one substantially liquid part and into a substantially solid part; and 26. Treatment of the substantially solid part by drying.

4. The method according to claim 3, d a d u r c h g e k e n n -z e i c h n e t that following the treatment of the bile under saponifying conditions and before acidification and extraction of the saponified bile: (a) the saponified bile is treated in such a way that a solid is precipitated from it, which has a high content of a salt of 3 $ -Xydroxy-6-Oxo- * cholanic acid; (b) the bile treated in this way into an essentially solid part and in separating a substantially liquid portion; and (c) the liquid part den is subjected to subsequent process steps according to claim 3.

5. Method of Isolating and Purifying Chenodeoxycholic Acid from Pork bile, not shown, do the following: 1, treating the bile under saponifying conditions by refluxing the Bile in the presence of an aqueous solution of a compound selected from the group consisting of Composed of sodium hydroxide and potassium hydroxide; 2. Acidify the saponified bile with an acid selected from the group consisting of sulfuric acid and hydrochloric acid upon extraction the bile with an organic solvent from the group consisting of ethyl acetate, Consists of methyl isobutyl ketone, n-hexanol, toluene and halogenated hydrocarbons, Separation of the resulting solvent phase from the aqueous phase and separating the bile acids from the solvent phase; 3. Let the Bile acids with a lower aliphatic Alcohol in the presence an acid catalyst from the group consisting of sulfuric acid, hydrochloric acid and p-tolene sulfonic acid consists; 42 Neutralizing the reaction mixture obtained in this way with a base that comes from the group consisting of sodium carbonate, sodium bicarbonate, Consists of sodium hydroxide and triethylamine; 5. Isolation of the obtained in this way esterified bile acids; 6. Dissolve the bile acid esters in a solvent from a compound selected from the group consisting of benzene and toluene; 7. Treatment the solution obtained in this way to precipitate a solid therefrom, the has a high content of an adduct of hyodeoxycholic acid ester with a compound from the group consisting of benzene and toluene; 8. Separation in this way treated solution into a substantially solid part and a substantially liquid part; 9. Separation of the solvent from the essentially liquid Partly to obtain a substantially dry mixture of the remaining esterified Bile acids; 10. Allow the remaining bile acid esters to react with acetic anhydride and a compound selected from the group consisting of sodium lum acetate and pyridine; 11. Verdsmfen the mixture obtained in this way up to Dryness; 12. Dissolve the remaining pesticide which is high in acetylated content Bile acid esters, in a non-polar solvent, consisting of n-heptane, Hexane, n-octane, iso-octane, n-pentane, cyclohexane, cyclopentane or cyclopentene; 13th Treating the solution thus obtained to precipitate a solid therefrom with a high content of acetylated hyocholic acid ester; 14. Separation of thus treated solution into an essentially solid part and into one substantially liquid part; 15. Separation of the solvent from the essentially liquid part such that a substantially dry pesticide is obtained; 16. Dissolution of the essentially dry solid which has a high content of the remaining acetylated bile acid ester, consisting in a polar solvent from methanol, ethanol or propanol; 17. Treatment of the obtained in this way Solution for precipitating a solid therefrom which has a high content of chenodeoxycholic acid ester diacetate Has; 18. Separation of the thus treated solution into a substantial one solid part and in a substantially liquid part; 19. Resolving the essentially solid part in one Solvent from the group which consists of methanol, ethanol, isopropanol and hexane; 20. Treatment of the in solution obtained in this way to precipitate a solid therefrom, the one has a high content of chenodeoxycholic acid ester diacetate; 21. Separation of in this Way treated solution into a substantially solid part and a substantially liquid part; 22. Treatment of the essentially solid part under saponification Conditions in an aqueous medium by refluxing with a base the group consisting of sodium hydroxide or potassium hydroxide; 23. Acidification of the saponified material with an acid selected from the group consisting of sulfuric acid and hydrochloric acid consists, with extraction of the material by means of a solvent from the group, which consists of ethyl acetate, methyl isobutyl ketone, ithylenediochloride and n-3utyl acetate, and separation of the resulting solvent phase from the aqueous phase; 24. Treatment of the solvent phase containing the chenodeoxycholic acid by Concentrate and cool until solid that has a high content of chenodeoxycholic acid contains, is precipitated from it; 25. Separation of the solvent phase treated in this way in a substantially liquid part and in a substantially solid part; and 26. Treatment of the substantially solid part by drying.

6. The method according to claim 5, d a d u r c h g e k e n n -z e i c h n e t that the solvent phase containing the precipitated chenodeoxycholic acid, is diluted with a dilution derived from the group consisting of hexane and Cyclohexane exists before the precipitated chenodeoxycholic acid is separated from it he follows.

7. Method of Isolating and Purifying Chenodeoxycholic Acid from Pork bile, not shown, do the following: 1. Treatment of the bile under saponifying conditions by refluxing the Bile from an aqueous solution of sodium hydroxide; 2. Acidify the saponified Bile with sulfuric acid upon extraction of the bile with ethyl acetate, separation of the resulting Solvent phase from the aqueous phase and separation of the bile acids from the Solvent phase; 3. Allow the bile acids to react with methanol in the presence of sulfuric acid; 4. Neutralize the reaction mixture obtained in this way with sodium bicarbonate; 5. Isolate the bile acid methyl ester in this way are preserved; 6. Dissolve the bile acid methyl esters in benzene; 7th Treatment of the solution obtained in this way to precipitate solid therefrom, which has a high content of the benzene adduct of methyl hypdeoxycholate;

8. Separation the solution treated in this way into an essentially solid part and a substantially liquid portion;

9. Separation of the solvent from the im substantially liquid part, such that a substantially dry mixture of the remaining bile acid methyl ester is obtained;

10. Allow the remaining ones to react Bile acid methyl ester with sodium acetate and acetic acid nzydride;

11. Evaporation the product thus obtained to dryness;

12. Dissolve the remaining Pesticide that has a high content of acetylated bile acid methyl esters, in hexane;

13. Treatment of the solution obtained in this way to precipitate a Solid from it, which has a high content of methyl hyodolate triacetate;

14. Separation the solution treated in this way into an im / solid part and an essentially / essential liquid part;

15. Separation of the solvent from the essentially liquid portion such that a substantially dry solid is obtained;

16. Dissolution of the essentially dry solid which has a high content of the remaining acetylated bile acid -Methyl ester in ethanol;

17. Treatment of the solution thus obtained to precipitate a solid from it, which has a high content of methylchenodeoxycholate diacetate;

18. Separation the solution treated in this way into an essentially solid part and into a substantially liquid part;

19. Resolve the essentially solid part in ethanol;

20. Treatment of the solution obtained in this way for Precipitation of a solid therefrom which has a high content of methyl cehnodeoxycholate diacetate Has;

21. Separation of the thus treated solution into an essentially solid part and into a substantially liquid part;

22. Treatment of the essentially solid part under saponifying conditions by refluxing in an aqueous Solution of sodium hydroxide;

23. Acidification of the saponified material with sulfuric acid with extraction with ethyl acetate and separation of the resulting organic phase from the aqueous phase;

24. Treatment of the solvent phase containing the chenodeoxycholic acid contains, through concentration and cooling, until solid, which has a high content contains in Ghenodes oxycholic acid, is precipitated therefrom;

25. Dilution of the in This way treated solution with a dilution from the group consisting of hexane and cyclohexane;

26. Separation of those treated in this way Solution into an essentially liquid part and an essentially solid part Part; and 27, treating the substantially solid part by drying.